CN114206358A - T细胞消耗疗法 - Google Patents

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M.库克
S.麦克唐纳
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Abstract

本文提供了消耗T细胞用于治疗用途的方法，其包括施用抗CD2或抗CD5抗体药物缀合物(ADC)用于治疗。提供了抗CD2 ADC或抗CD5 ADC用作治疗干细胞病症、癌症或自身免疫性疾病以及其他血液病和增殖性疾病的药剂。所描述的组合物和方法可用于消耗CD2+或CD5+细胞群，如CD2+或CD5+癌细胞或者CD2+或CD5+免疫细胞，并且还可用于为患者进行造血干细胞移植或实体器官移植做准备。

Description

T细胞消耗疗法
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本申请要求2019年6月5日提交的美国临时申请号62/857,744的优先权，其内容通过引用并入本文。
序列表
本申请含有已通过EFS-Web以ASCII格式电子提交的序列表，并通过引用以其整体并入本文。所述ASCII副本创建于2020年6月3日，名称为M103034_2170WO_SL.txt，大小为91,817字节。
发明背景
T细胞是在胸腺中发育的一种类型的淋巴细胞，在免疫应答中起重要作用。虽然T细胞是免疫系统的重要部分，但异常的T细胞活性会导致患者患病。例如，移植物抗宿主病(GVHD)主要由移植物中的引起免疫应答的供体T细胞导致，导致宿主组织损伤。导致疾病的异常T细胞活性的其他实例包括T细胞相关癌症，如T细胞淋巴瘤。靶向T细胞的疗法在本领域仍然是挑战。
发明概述
目前需要用于治疗造血系统疾病如自身免疫性疾病的T细胞靶向组合物和方法，以及用于促进外源性造血干细胞移植物移植使得在移植后这些细胞的多潜能和造血功能得以保留的组合物和方法。
本文提供了用于直接治疗造血系统的各种病症、代谢病症、癌症和自身免疫性疾病等的T细胞靶向组合物和方法。本文公开的组合物和方法靶向免疫细胞以调理人类患者来进行造血干细胞移植以治疗疾病，如但不限于血癌或自身免疫性疾病。
一方面，本文提供了在患有自身免疫性疾病的受试者中消耗T细胞的方法，所述方法包括向患有自身免疫性疾病的受试者施用有效量的抗CD5抗体药物缀合物(ADC)或抗CD2ADC，其中ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或其抗原结合片段，或抗CD2抗体或其抗原结合片段。
在一个实施方案中，有效量是足以大量消耗受试者胸腺中的内源性CD5+或CD2+T细胞的量。
在一个实施方案中，受试者患有多发性硬化症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)或系统性硬化症(SSc)。
在另一个方面，本文提供了用于治疗患有类固醇难治性移植物抗宿主病(GVHD)或有发展GVHD风险的受试者的方法，所述方法包括向患有类固醇难治性GVHD的受试者施用抗CD2 ADC或抗CD5 ADC，从而治疗类固醇难治性GVHD，其中ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或其抗原结合片段，或抗CD2抗体或其抗原结合片段。
在一个实施方案中，类固醇难治性GVHD是类固醇难治性急性GVHD。
在一个实施方案中，受试者先前接受过同种异体HSC移植。
在一个实施方案中，受试者患有2级至4级类固醇难治性急性GVHD(西奈山急性移植物抗宿主病国际联盟(MAGIC)标准)。在一个实施方案中，在施用抗CD2 ADC或抗CD5 ADC之后，根据MAGIC标准，所述GVHD等级被降低了一级。
在其他方面，本文提供了治疗患有T细胞恶性肿瘤的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的抗CD2 ADC或抗CD5 ADC，其中所述ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或其抗原-结合片段，或抗CD2抗体，或其抗原结合片段。
在一个实施方案中，T细胞恶性肿瘤是淋巴瘤。在某些实施方案中，T细胞恶性肿瘤是T细胞急性成淋巴细胞性淋巴瘤(T-ALL)、T细胞大颗粒淋巴细胞(LGL)白血病、人T细胞白血病病毒1型阳性(HTLV-1+)、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATL)、T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)或外周T细胞淋巴瘤(PTCL)。
在一个实施方案中，T细胞恶性肿瘤是复发性、难治性T细胞恶性肿瘤。
在一个实施方案中，ADC包含人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗体具有选自由以下项组成的组的同种型：IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。在某些实施方案中，IgG同种型是IgG1或IgG4。
在一些实施方案中，ADC是抗CD5 ADC(例如，缀合于鹅膏毒素的5D7)。
在一些实施方案中，ADC是抗CD2 ADC。
在一方面，本文描述了用于在接受造血干细胞移植疗法之前调理患者，如人类患者，以促进造血干细胞移植物的植入的T细胞靶向组合物和方法。患者可以是患有自身免疫性疾病或一种或多种血液病症，如癌症、血红蛋白病或其他造血病理因此需要造血干细胞移植的患者。
如本文所述，造血干细胞能够分化成造血谱系中的众多细胞类型，并且可以被施用于患者以填充或重新填充患者中缺乏的细胞类型。
在某些方面，本文所述的组合物的特点在于结合T细胞特别是CD2或CD5的抗体-药物缀合物(ADC)，以及将其施用于患者的方法，以(i)通过选择性消耗表达CD2或CD5的免疫细胞群，如自身反应性T细胞、B细胞或自然杀伤(NK)细胞来直接治疗血液病症，如自身免疫性疾病，和/或(ii)给患者施用造血干细胞移植前消耗T细胞群、B细胞群或NK细胞群，从而降低造血干细胞移植排斥的可能性。前一种活性能够直接治疗多种自身免疫性疾病，因为CD2或CD5可能由T细胞、B细胞或NK细胞表达，这些细胞与自身抗原发生交叉反应，并针对自身抗原产生不适当的免疫应答。在这种情况下，向患者施用抗CD2抗体-药物缀合物或抗CD5抗体-药物缀合物会导致与一种或多种自身抗原发生交叉反应的CD2+(或CD5+)自身免疫细胞(如T细胞、B细胞或NK细胞)群消耗，从而治疗自身免疫病理。后一种活性促进了有利于造血干细胞植入的环境的产生，因为与由造血干细胞表达的一种或多种非自身抗原(例如，非自身MHC抗原)发生交叉反应的T细胞、B细胞和/或NK细胞可以产生针对移植的造血干细胞的免疫应答从而促进移植排斥。在该后一种情况下，患有病症，如癌症、自身免疫性疾病或其他造血系统病况的患者随后可以被施用造血干细胞移植以例如重新填充患者中有缺陷或耗尽的一个或多个血细胞群。本文还提供了治疗多种造血病况的方法，如镰状细胞性贫血、地中海贫血、范可尼贫血、Wiskott-Aldrich综合征、腺苷脱氨酶缺乏-严重联合免疫缺陷症、异染性脑白质营养不良、Diamond-Blackfan贫血和Schwachman-Diamond综合征、人类免疫缺陷病毒感染和获得性免疫缺陷综合征，以及癌症和自身免疫性疾病等。
在某些方面，本文描述了在有需要的受试者中消耗T细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的抗CD5或抗CD2抗体药物缀合物(ADC)，其中受试者正在接受或在受试者接受造血干细胞(HSC)移植或实体器官移植之前，并且其中ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5或抗CD2抗体。
在一个实施方案中，在受试者接受造血干细胞(HSC)移植物或实体器官移植之前，将有效量的抗CD5或抗CD2抗体药物缀合物(ADC)施用于有需要的受试者的情况下，该方法进一步包括向受试者施用HSC移植物或实体器官移植物。
在一个实施方案中，HSC移植物是自体HSC移植物。
在一个实施方案中，在ADC水平从受试者的血液中基本清除后向受试者施用HSC移植物。
在一个实施方案中，在ADC水平从受试者血液中基本清除后1小时至7天之间向受试者施用HSC或实体器官移植物。在另一个实施方案中，在ADC水平从受试者血液中基本清除后6小时至3天之间向受试者施用HSC或实体器官移植物。在另一个实施方案中，在ADC水平从受试者血液中基本清除后12小时至36天之间向受试者施用HSC或实体器官移植物。
在一个实施方案中，在ADC从受试者的血液中基本清除后约24小时向受试者施用HSC或实体器官移植物，其中ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或抗CD2抗体。
在某些方面，本文提供了在患有自身免疫性疾病的受试者中消耗T细胞的方法，所述方法包括向患有自身免疫性疾病的受试者施用有效量的抗CD5或抗CD2抗体药物缀合物(ADC)，其中ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5或抗CD2抗体。在一个实施方案中，受试者患有多发性硬化症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)或系统性硬化症(SSc)。
在一个实施方案中，有效量是足以大量消耗受试者胸腺中的内源性CD5+或CD2+T细胞的量。
在其他方面，本文提供了治疗患有类固醇难治性移植物抗宿主病(GVHD)的受试者的方法，所述方法包括向患有类固醇难治性GVHD的受试者施用抗CD2 ADC或抗CD5 ADC从而治疗类固醇难治性GVHD，其中ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5或抗CD2抗体。在一个实施方案中，类固醇难治性GVHD是类固醇难治性急性GVHD。在一个实施方案中，受试者先前接受过同种异体HSC移植。在一个实施方案中，受试者患有2级至4级类固醇难治性急性GVHD(西奈山急性移植物抗宿主病国际联盟(MAGIC)标准)。在一个实施方案中，在施用抗CD2 ADC或抗CD5 ADC之后，根据MAGIC标准，GVHD等级被降低了一级。
在其它方面，本文提供了治疗患有T细胞恶性肿瘤的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的抗CD2 ADC或抗CD5 ADC，其中ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或抗CD2抗体。在一个实施方案中，T细胞恶性肿瘤是淋巴瘤。在一个实施方案中，T细胞恶性肿瘤是T细胞急性成淋巴细胞性淋巴瘤(T-ALL)、T细胞大颗粒淋巴细胞(LGL)白血病、人T细胞白血病病毒1型阳性(HTLV-1+)、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATL)、T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)或外周T细胞淋巴瘤(PTCL)。在一个实施方案中，T细胞恶性肿瘤是复发性、难治性T细胞恶性肿瘤。
在一个实施方案中，ADC包含人源化抗体或人抗体。
在另一个实施方案中，抗体具有选自由以下项组成的组的同种型：IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。在一个实施方案中，IgG同种型是IgG1或IgG4。
在一个实施方案中，ADC是抗CD5 ADC。
在一个实施方案中，ADC是抗CD2 ADC。
在一个实施方案中，细胞毒素选自由以下项组成的组：假单胞菌外毒素A、deBouganin、白喉毒素、鹅膏毒素、皂草素、美登素、美登素类化合物、瑞奥西汀、蒽环类药物、卡奇霉素、伊立替康、SN-38、倍癌霉素(duocarmycin)、吡咯并苯二氮卓(pyrrolobenzodiazepine)、吡咯并苯二氮卓二聚体、吲哚并苯二氮卓和吲哚并苯二氮卓二聚体。
在一个实施方案中，细胞毒素是RNA聚合酶抑制剂。在一个实施方案中，RNA聚合酶抑制剂是RNA聚合酶II抑制剂。在一个实施方案中，RNA聚合酶抑制剂是鹅膏毒素。
在一个实施方案中，ADC由式Ab-Z-L-Am表示，其中Ab为抗CD5抗体或抗CD2抗体或其抗原结合片段，L是接头，Z是化学部分，并且Am是式(I)表示的鹅膏毒素
Figure BDA0003495552300000061
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起结合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7各自独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
X是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
RD是任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、任选取代的C2-C6炔基、任选取代的C2-C6杂炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；
L是任选取代的C1-C6亚烷基、任选取代的C1-C6杂亚烷基、任选取代的C2-C6亚烯基、任选取代的C2-C6杂亚烯基、任选取代的C2-C6亚炔基、任选取代的C2-C6杂亚炔基、任选取代的亚环烷基、任选取代的杂亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的杂亚芳基、二肽、-(C＝O)-，或其组合；并且
Z是由存在于L上的反应性取代基和存在于所述抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分，
其中Am正好包含一个RC取代基。
在一个实施方案中，Am-L-Z由式(IA)表示。
Figure BDA0003495552300000071
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起结合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7各自独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
X是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
L是任选取代的C1-C6亚烷基、任选取代的C1-C6杂亚烷基、任选取代的C2-C6亚烯基、任选取代的C2-C6杂亚烯基、任选取代的C2-C6亚炔基、任选取代的C2-C6杂亚炔基、任选取代的亚环烷基、任选取代的杂亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的杂亚芳基、二肽、-(C＝O)-，或其组合；
Z是由存在于L上的反应性取代基和存在于所述抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分，并且
其中Am正好包含一个RC取代基。
在一个实施方案中，Am-L-Z由式(IB)表示。
Figure BDA0003495552300000081
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起结合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7各自独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
X是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
RD是任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、任选取代的C2-C6炔基、任选取代的C2-C6杂炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；
L是任选取代的C1-C6亚烷基、任选取代的C1-C6杂亚烷基、任选取代的C2-C6亚烯基、任选取代的C2-C6杂亚烯基、任选取代的C2-C6亚炔基、任选取代的C2-C6杂亚炔基、任选取代的亚环烷基、任选取代的杂亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的杂亚芳基、二肽、-(C＝O)-、或其组合；以及
Z是由存在于L上的反应性取代基和存在于所述抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分，
其中Am正好包含一个RC取代基。
在一个实施方案中，ADC由式Ab-Z-L-Am表示，其中Ab是抗体或其抗原结合片段，Z是化学部分，L是接头，且Am是鹅膏毒素，鹅膏毒素-接头缀合物Am-L-Z由式(II)、式(IIA)或式(IIB)表示
Figure BDA0003495552300000091
其中X是S、SO或SO2；
R1是H或通过化学部分Z与抗体或其抗原结合片段共价结合的接头，化学部分Z由接头上存在的反应性取代基与抗体或其抗原结合片段中存在的反应性取代基之间的偶联反应形成；以及
R2是H或通过化学部分Z与抗体或其抗原结合片段共价结合的接头，化学部分Z由接头上存在的反应性取代基与抗体或其抗原结合片段中存在的反应性取代基之间的偶联反应形成；
其中当R1是H时，R2是接头，当R2是H时，R1是接头。
在一个实施方案中，ADC的细胞毒素是美登素类化合物，例如，DM1或DM4。
在一个实施方案中，ADC的细胞毒素是瑞奥西汀，例如，单甲基瑞奥西汀E(MMAE)或单甲基瑞奥西汀F(MMAF)。
在一个实施方案中，ADC的细胞毒素是蒽环类药物，例如，柔红霉素、多柔比星、表柔比星或伊达比星。
在一个实施方案中，ADC的细胞毒素是以式(IV)表示的吡咯并苯二氮杂卓二聚体衍生物
Figure BDA0003495552300000101
在一个实施方案中，ADC在施用于患者之后被CD5+或CD2+免疫细胞内化。
在一个实施方案中，受试者是人。
在一个实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:288，该轻链可变区包含重链包含SEQ ID NO:289。
在一个实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:291，该轻链可变区包含SEQ ID NO:290。
附图简要说明
图1图示性地描绘了体外细胞系结合测定的结果，其中每种指定的抗CD2抗体或阴性对照(即mIgG1)与MOLT-4细胞(即人T淋巴母细胞系)温育，然后温育荧光团缀合的抗IgG抗体。通过流式细胞术检测信号并表示为作为抗CD2抗体浓度(x轴)函数的几何平均荧光强度(y轴)。
图2图示性地描绘了体外原代细胞结合测定的结果，其中指定的抗CD2抗体(RPA-2.10)或阴性对照(即mlgG1)与原代人T细胞一起温育，然后温育荧光团缀合的抗IgG抗体。通过流式细胞术检测信号并表示为作为抗CD2抗体浓度(x轴)函数的几何平均荧光强度(y轴)。
图3A和3B图示性地描绘了体外T细胞杀伤测定的结果，其包括抗CD2-鹅膏蕈碱ADC(即RPA-2.10-AM或“CD2 AM”)，该ADC具有平均药物抗体比为6的链间缀合的鹅膏蕈碱(图3A)或具有药物抗体比为2的位点特异性缀合的鹅膏蕈碱(图3B)。在图3A中，抗CD2-ADC T细胞杀伤分析与未缀合的抗CD2抗体(即“CD2裸”)比较显示。在图3B中，显示了抗CD2抗体与具有降低抗体半衰期的H435A突变的抗CD2抗体相比的结果。结果显示活的T细胞的数量(y轴)作为ADC(CD2 RPA-2.10AM、CD2D265C.H435A AM)或未缀合抗体(CD2 RPA-2.10)浓度(x轴)的函数，如使用流式细胞术所评估。
图4图示性地描绘了体外自然杀伤(NK)细胞杀伤测定的结果，其包括抗CD2-鹅膏蕈碱ADC(即RPA-2.10-AM或“CD2 AM”)，其具有药物抗体比为6的链间缀合的鹅膏蕈碱。结果显示活的NK细胞(y轴)的水平作为ADC(CD2-AM)或对照抗体(即hIgG1、hIgG1-鹅膏蕈碱(“hIgG1-AM”))浓度的函数(x轴)，如使用CellTiter Glo测定所评估。
图5A和5B图示性地描绘了体内T细胞消耗测定的结果，其显示了人源化NSG小鼠在单次施用0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg链间药物抗体比为6的抗CD2-鹅膏蕈碱ADC(即RPA-2.10-AM)后7天外周血(图5A)和骨髓(图5B)中T细胞的绝对水平(CD3+细胞；y轴)。为了比较，图5A和5B还显示了用25mg/kg Ab1(未缀合的抗CD2抗体)或用指定对照(即，25mg/kg抗CD52抗体(克隆YTH34.5)；3mg/kg hIgG1-鹅膏蕈碱ADC(“hIgG1-AM”)、25mg/kg hIgG1或PBS)治疗人源化NSG小鼠后T细胞消耗水平。
图6A-6C图示性地描绘了体内T细胞消耗测定的结果，其显示了人源化NSG小鼠在单次施用1mg/kg或3mg/kg位点特异性药物抗体比为2的抗CD2-鹅膏蕈碱ADC(即RPA-2.10-AM)后7天外周血(图6A)、骨髓(图6B)和胸腺(图6C)中T细胞的绝对水平(CD3+细胞；y轴)。为了比较，图6A-6C还显示了用3mg/kg未缀合的抗CD2抗体或用指定对照(即，3mg/kg hIgG1-鹅膏蕈碱-ADC(“hIgG1-AMC”)或PBS)治疗人源化NSG小鼠后T细胞消耗水平。
图7图示性地描绘了体外细胞系结合测定的结果，其中每个指定的抗CD5抗体或阴性对照(即，mIgG1)与MOLT-4细胞(即，人T淋巴母细胞系)一起温育，然后温育荧光团缀合的抗IgG抗体。通过流式细胞术检测信号，并表示为作为抗CD5抗体浓度(x轴)函数的几何平均荧光强度(y轴)。
图8图示性地描绘了体外原代细胞结合测定的结果，其中每个指定的抗CD5抗体或阴性对照(即hIgG1)与原代人T细胞一起温育，然后温育荧光团缀合的抗IgG抗体。通过流式细胞术检测信号，并表示为作为抗CD5抗体浓度(x轴)函数的几何平均荧光强度(y轴)。
图9A和9B图示性地描绘了体外T细胞杀伤测定的结果，其包括抗CD5-鹅膏蕈碱ADC(即5D7-AM或“CD5 AM”)，该ADC具有平均药物抗体比(DAR)为6的链间缀合的鹅膏蕈碱(图9A)或DAR为2的位点特异性缀合的鹅膏蕈碱(图9B)。在图9A中，将抗CD5-ADC T细胞杀伤分析与未缀合的抗CD5 5D7抗体(即“CD5裸”)进行比较。在图9B中，显示了抗CD5抗体与具有降低抗体半衰期的H435A突变的抗CD5 5D7抗体(即“CD5快速半衰期AM”)相比的结果。结果显示活的T细胞的数量(y轴)作为ADC(CD55D7 AM、CD5 5D7 D265C.H435A AM)或未缀合抗体(CD5 5D7)浓度(x轴)的函数，如使用流式细胞术所评估。
图10A和10B图示性地描绘了体内T细胞消耗测定的结果，其显示了人源化NSG小鼠在单次施用0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg的链间DAR为6的抗CD5 5D7鹅膏蕈碱ADC(即CD55D7-AM)后7天外周血(图10A)和骨髓(图10B)中T细胞的绝对水平(CD3+细胞；y轴)。为了比较，图10A-10B还显示了用指定对照(即，25mg/kg抗CD52抗体；3mg/kg hIgG1-鹅膏蕈碱ADC(即hIgG1-AM)、25mg/kg hIgG1或PBS)治疗人源化NSG小鼠后T细胞消耗水平。
图11A-11C图示性地描绘了体内T细胞消耗测定的结果，其显示了人源化NSG小鼠在单次施用1mg/kg或3mg/kg的位点特异性DAR为2的抗CD5 5D7-鹅膏蕈碱ADC(即5D7-AM)后7天外周血(图11A)、骨髓(图11B)和胸腺(图11C)中T细胞的绝对水平(CD3+细胞；y轴)。为了比较，图11A-11C还显示了用3mg/kg未缀合的抗CD5抗体或用指定对照(即，3mg/kg hIgG1-鹅膏蕈碱-ADC(“hIgG1-AMC”)或PBS)治疗人源化NSG小鼠后T细胞消耗水平。
图12A和12B图示性地描绘了消耗测定的结果，其显示抗CD5ADC(CD5-AM)和抗CD2ADC(CD2-AM)都能够在极化条件(polarizing condition)下消耗Th1和Th17细胞亚群。图12A显示抗CD5 ADC(CD5-AM)和抗CD2 ADC(CD2-AM)都能够以2.73pM的IC50消耗Th1细胞，如IFNg信号的下降所示，表明Th1细胞的消耗；同种型对照抗体无法消耗Th1细胞。类似地，图12B显示抗CD5 ADC(CD5-AM)和抗CD2 ADC(CD2-AM)能够以2.53pM的IC50消耗Th17细胞，如IL-17信号的下降所示，表明Th17细胞消耗；同种型对照抗体无法消耗Th17细胞。
图13A至13D图示性地描绘了体内存活研究的结果，其显示抗CD5 ADC(CD5-AM)延长T细胞急性成淋巴细胞性白血病中的存活。如图13A和图13C所示，与同种型和媒介物对照相比，抗CD5 ADC(CD5-AM)或抗CD2 ADC(CD2-AM)分别能够将存活延长20天以上。此外，单剂量的抗CD5 ADC(CD5-AM)或抗CD2 ADC(CD2-AM)赋予的存活率看起来与商业化疗药物(Ara-C)相当(分别为图13A和图13C)。如图13B和图13D所示，与同种型和媒介物对照相比，CD5ADC(CD5-AM)或抗CD2 ADC(CD2-AM)也分别降低了小鼠的肿瘤负载。
图14A和14B图示性地描绘了体内研究的结果，其显示抗CD5 ADC在异种模型中预防急性GvHD。如图14A所示，在用抗CD5-ADC(CD5-AM)治疗的小鼠中观察到轻微的体重减轻，然而，在移植后第13天观察到恢复。如图14B所示，抗CD5-ADC(CD5-AM)在该模型中赋予80％的持续存活率。
发明详述
本文所述的组合物和方法至少部分基于以下发现：结合CD2(也称为T细胞表面抗原、LFA-2和LFA-3受体)或结合CD5(也称为淋巴细胞抗原T1/Leu-1)的抗体药物缀合物(ADC)可用作治疗剂，以(i)直接治疗以CD2+细胞或CD5+细胞为特征的癌症和自身免疫性疾病，以及(ii)在需要移植疗法的患者中促进移植的造血干细胞的植入，其通过消耗与造血干细胞移植物交叉反应并产生针对造血干细胞移植物的免疫应答(例如，通过与造血干细胞移植物表达的非自身MHC抗原发生交叉反应)的免疫细胞群来进行的。例如，这些治疗活性可以通过抗CD2或抗CD5抗体药物缀合物与例如与非自身造血干细胞抗原(例如，非自身MHC抗原)发生交叉反应的癌细胞、自身免疫细胞或免疫细胞的结合而产生，从而诱导结合细胞的死亡。在消耗癌细胞群或自身免疫细胞群的情况下，抗-CD2 ADC或抗-CD5 ADC可用于直接治疗癌症或自身免疫性疾病，如本文所述的癌症自身免疫性疾病。在消耗与非自身造血干细胞抗原交叉反应的免疫细胞群的情况下，抗CD2 ADC或抗CD5 ADC可用于预防或降低患者移植排斥的可能性，该患者患有干细胞病症、癌症或自身免疫性疾病，并且正在接受造血干细胞移植疗法。在此类情况下，与一种或多种非自身造血干细胞抗原(例如，一种或多种非自身MHC抗原)交叉反应的CD2+免疫细胞或CD5+免疫细胞的消耗能够在移植受体内成功植入移植的造血干细胞。随着移植细胞的植入，它们可以归巢到造血组织中，然后可以在那里进行生产性造血。移植的造血干细胞随后可产生移植受体内缺乏或有缺陷的细胞群，如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞。以此方式，抗CD2 ADC或抗CD5 ADC可用于促进造血干细胞成功植入患者，如患有本文所述的干细胞病症的人类患者。
定义
如本文所用，术语“约”是指高于或低于所述值10％以内的值。例如，术语“约5nM”表示4.5nM至5.5nM的范围。
如本文所用，术语“鹅膏毒素”是指由鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)蘑菇产生的鹅膏毒素肽家族成员、合成鹅膏毒素、变体鹅膏毒素或其衍生物，如能够抑制RNA聚合酶II活性的其变体或衍生物。还包括合成的鹅膏毒素(参见，例如，美国专利号9676702，通过引用并入本文)。如本文所述，鹅膏毒素可与抗体或其抗原结合片段缀合，例如，通过接头部分(L)(从而形成缀合物(也称为抗体药物缀合物(ADC))。用于此类过程的鹅膏毒素缀合的示例性方法和接头在下文中描述并且是本领域已知的。根据组合物和方法，用于与抗体或抗原结合片段缀合的示例性的含接头的鹅膏毒素也在本文中描述。
在某些实施方案中，与本文所述的组合物和方法结合使用的鹅膏毒素包括根据以下式(III)的化合物、α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素(amanin)、鹅膏素酰胺(amaninamide)、鹅膏无毒环肽(amanullin)、鹅膏无毒环肽酸(amanullinic acid)和前鹅膏无毒环肽(proamanullin)。式(III)如下：
Figure BDA0003495552300000151
其中R1是H、OH或ORA；
R2是H、OH或ORB；
RA和RB，当存在时，与它们所结合的氧原子一起组合以形成任选取代的5元杂环烷基基团；
R3是H或RD；
R4是H、OH、ORD或RD；
R5是H、OH、ORD或RD；
R6是H、OH、ORD或RD；
R7是H、OH、ORD或RD；
R8是OH、NH2或ORD；
R9是H、OH或ORD；
X是-S-、-S(O)-或-SO2-；和
RD是任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)，任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)，任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)，任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)，任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)，任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)，任选取代的环烷基，任选取代的杂环烷基，任选取代的芳基或任选取代的杂芳基，或肽。
例如，在一个实施方案中，与本文所述的组合物和方法结合使用的鹅膏毒素包括根据式(IIIA)的化合物，如下：
Figure BDA0003495552300000161
其中R1是H、OH或ORA；
R2是H、OH或ORB；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起结合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3为H或RD；
R4为H、OH、ORD或RD；
R5为H、OH、ORD或RD；
R6为H、OH、ORD或RD；
R7为H、OH、ORD或RD；
R8为OH、NH2或ORD；
R9为H、OH或ORD；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；和
RD是任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)，任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)，任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)，任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)，任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)，任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)，任选取代的环烷基，任选取代的杂环烷基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基，或肽。
在一个实施方案中，与本文所述的组合物和方法结合使用的鹅膏毒素还包括根据式(IIIB)的化合物，如下：
Figure BDA0003495552300000171
其中R1是H、OH或ORA；
R2是H、OH或ORB；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起结合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3为H或RD；
R4为H、OH、ORD或RD；
R5为H、OH、ORD或RD；
R6为H、OH、ORD或RD；
R7为H、OH、ORD或RD；
R8为OH、NH2或ORD；
R9为H、OH或ORD；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；和
RD是任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)，任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)，任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)，任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)，任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)，任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)，任选取代的环烷基，任选取代的杂环烷基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基，或二肽。
如本文所述，鹅膏毒素可与抗体或其抗原结合片段缀合，例如，通过接头部分。在标题为“用于化学缀合的接头”的部分以及下表2中描述了用于此类过程的鹅膏毒素缀合的示例性方法和接头。根据本文所述的组合物和方法，可用于缀合至抗CD2抗体、或抗原结合片段或抗CD5抗体、或其抗原结合片段的示例性含有接头的鹅膏毒素显示在结构式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIA)和(IIB)，在本文列举。
如本文所用，术语“抗体”是指与特定抗原特异性结合或免疫反应的免疫球蛋白分子。抗体的实例包括单克隆抗体和其他修饰形式的抗体，包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体、异缀合抗体(例如，双、三和四特异性抗体、双抗体(diabodies)、三抗体(triabodies)和四抗体(tetrabodies))和抗体的抗原结合片段，包括例如Fab′，F(ab′)2，Fab，Fv，rlgG和scFV片段。除非另有说明，术语“抗体”(Ab)意指包括完整的分子，也包括能够与靶蛋白特异性结合的抗体片段(包括，例如，Fab和F(ab′)2片段)。如本文所用，Fab和F(ab′)2片段是指缺少完整抗体的Fc片段的抗体片段。本文描述了这些抗体片段的实例。
通常，抗体包含含有抗原结合区的重链和轻链。每条重链由重链可变区(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(本文缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可以进一步细分为称为互补决定区(CDR)的高变区，其散布有更保守的称为框架区(FR)的区域。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基末端到羧基末端按下列顺序排列：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的多种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。
本文使用的抗体通常是分离的或重组的。“分离的”，当在本文使用时，是指已经从表达它的细胞或细胞培养物中分离和/或回收的多肽，例如抗体。因此，“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体。例如，特异性结合CD2或CD5的分离的抗体基本上分别不含特异性结合CD2或CD5以外抗原的抗体。
如本文所用，术语“抗原结合片段”是指除完整抗体之外的分子，其包含完整抗体的一部分并且结合完整抗体所结合的抗原。抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段来执行。抗体片段可以是，例如，Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2、scFv、双抗体、三抗体、单链抗体分子(例如，scFv)、亲和体(affibody)、纳米抗体、适体、或结构域抗体。包含术语抗体的“抗原结合片段”的结合片段的实例包括但不限于：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含通过铰链区二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)包括VH和VL结构域的dAb；(vi)由VH结构域组成的dAb片段(参见，例如，Ward et al.，Nature 341：544-546，1989)；(vii)由VH或VL结构域组成的dAb；(viii)分离的互补决定区(CDR)；和(ix)两个或更多个(例如，两个、三个、四个、五个或六个)可以任选地通过合成接头连接的分离的CDR的组合。此外，虽然Fv片段的两个域VL和VH是由分离的基因编码的，但它们可以通过接头使用重组方法连接，所述接头使它们作为单个蛋白质链制备，其中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird et al.，Science 242：423-426，1988和Huston etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883，1988)。这些抗体片段可以使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且可以以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。抗原结合片段可以通过重组DNA技术、完整免疫球蛋白的酶促或化学裂解，或者在某些情况下，通过本领域已知的化学肽合成程序来产生。
如本文所用，术语“抗CD2抗体”或“结合CD2的抗体”是指特异性结合CD2的抗体。“结合”感兴趣的抗原(即CD2)的抗体是能够以足以使得该抗体可用于靶向表达该抗原的细胞的亲和力结合该抗原的抗体。在优选的实施方案中，抗体与人CD2(hCD2)特异性结合。CD2被发现于免疫细胞(如T细胞)的细胞表面。与抗-CD2抗体(或抗-CD2缀合物)结合的人CD2的氨基酸序列在下文的SEQ ID NO:13中描述。“抗-CD2抗体药物缀合物”或“抗-CD2 ADC”是指包含抗CD2抗体的ADC。
如本文所用，术语“抗CD5抗体”或“结合CD5的抗体”是指特异性结合CD5的抗体。“结合”感兴趣的抗原(即CD5)的抗体是能够以足以使得该抗体可用于靶向表达该抗原的细胞的亲和力结合该抗原的抗体。在优选的实施方案中，抗体与人CD5(hCD5)特异性结合，该人CD5的氨基酸序列在下文的SEQ ID NO:286中描述。“抗-CD5抗体药物缀合物”或“抗-CD5ADC”是指包含抗CD5抗体的ADC。
如本文所用，术语“双特异性抗体”是指具有两个不同抗原结合位点的杂交抗体。双特异性抗体是一种多特异性抗体，可以通过多种方法产生，包括但不限于杂交瘤的融合或Fab′片段的连接。参见，例如，Songsivilai和Lachmann，1990，Clin.Exp.Immunol.79：315-321；Kostelny et al.，1992，J.Immunol.148：1547-1553。双特异性抗体的两个结合位点将结合两个不同的表位，这些表位可能位于相同或不同的蛋白质靶标上。例如，一个结合特异性可以针对T细胞表面抗原，如CD2或CD5，另一个可以针对不同的T细胞表面抗原或另一种细胞表面蛋白，如涉及促进细胞生长等的信号转导途径的受体或受体亚单位。
如本文所用，术语“互补决定区”(CDR)是指在抗体的轻链和重链可变结构域二者中发现的高变区。可变结构域的更高度保守的部分称为框架区(FR)。描述抗体高变区的氨基酸位置可以变化，这取决于上下文和本领域已知的各种定义。可变结构域内的一些位置可被视为混合高变位置，因为这些位置在一组标准下可被视为在高变区内，而在一组不同的标准组下被视为在高变区外。这些位置中的一个或多个也可以在扩展的高变区中找到。本文所述的抗体可在这些混合高变位置中含有修饰。天然重链和轻链的可变结构域各自包含由三个CDR连接的主要采用β-片层构型的四个框架区，所述CDR形成连接β-片层结构的环，在某些情况下形成β-片层结构的部分的环。每个链中的CDR以FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4顺序由框架区保持紧密在一起，并且与来自其他抗体链的CDR一起有助于抗体靶结合位点的形成(参见Kabat et al.，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，National Institute of Health，Bethesda，MD.，1987)。除非另有说明，如本文所用，免疫球蛋白氨基酸残基的编号是根据Kabat等的免疫球蛋白氨基酸残基编号系统进行的。
如本文所用，术语“调理(condition)”和“调理(conditioning)”是指患者为接受移植物例如造血干细胞(HSC)的移植物作准备的过程。此类程序促进造血干细胞移植物的植入(例如，如从在调理过程和随后的造血干细胞移植后从患者分离的血液样品中活的造血干细胞数量的持续增加所推断的)。根据本文所述的方法，可通过向患者施用能够结合T细胞表达的抗原(如CD2或CD5)的抗体或其抗原结合片段来调理患者用于进行造血干细胞移植物疗法。如本文所述，抗CD2抗体或抗CD5抗体可以与细胞毒素共价缀合，从而形成抗体药物缀合物(ADC)。向需要造血干细胞移植物疗法的患者施用能够结合一种或多种前述抗原的抗体、其抗原结合片段或抗体-药物缀合物可以促进造血干细胞移植物的植入，例如，通过选择性消耗与造血干细胞表达的一种或多种非自身抗原(例如，一种或多种非自身MHC抗原)发生交叉反应的内源性免疫细胞，如CD2+T细胞(例如，CD4+和/或CD8+T细胞)和/或CD2+NK细胞(或CD5+T细胞(例如，CD4+和/或CD8+T细胞、CD5+B细胞和/或CD5+NK细胞)。该选择性消耗免疫细胞反过来防止或降低外源性(例如自体、同种异体或同系的(syngeneic))造血干细胞移植物移植后移植物排斥的可能性。
如本文所用，术语“缀合物”是指通过一个分子(如抗体或其抗原结合片段)的反应性官能团与另一分子的适当反应性官能团(如本文所述的细胞毒素)的化学键合而形成的化合物。缀合物可包括彼此结合的两个分子(例如，抗CD2抗体和细胞毒素；或抗CD5抗体和细胞毒素)之间的接头。可用于形成缀合物的接头的实例包括含肽的接头，如含有天然存在或非天然存在的氨基酸(如D-氨基酸)的那些。接头可以使用本文描述的和本领域已知的多种策略来制备。取决于其中的反应性组分，接头可以被裂解，例如通过酶水解、光解、酸性条件下的水解、碱性条件下的水解、氧化、二硫化物还原、亲核裂解或有机金属裂解(参见，例如，Leriche et al.，Bioorg.Med.Chem.，20：571-582，2012)。值得注意的是，术语“缀合物”(当提及化合物时)在本文中也可互换地称为“药物缀合物”、“抗体药物缀合物”或“ADC”。
如本文所用，术语“偶联反应”是指一种化学反应，其中两个或更多个适合彼此反应的取代基发生反应以形成连接(例如，共价地)与每个取代基结合的分子片段的化学部分。偶联反应包括其中结合于为细胞毒素(如本领域已知或本文所述的细胞毒素)的片段的反应性取代基与结合于为抗体的片段、其抗原结合片段或抗体(如抗体、其抗原结合片段、或本领域已知的或本文所述的对CD2或CD5特异的抗体)的适当反应性取代基反应发生反应的那些。合适的反应性取代基的实例包括亲核体/亲电体对(例如硫醇/卤代烷基对、胺/羰基对、或硫醇/α,β-不饱和羰基对等)、二烯/亲二烯体对(例如，叠氮化物/炔对等)等。偶联反应包括但不限于硫醇烷基化、羟基烷基化、胺烷基化、胺缩合、酰胺化、酯化、二硫化物形成、环加成(例如，[4+2]Diels-Alder环加成、[3+2]Huisgen环加成等)、亲核芳族取代、亲电芳族取代和本领域已知的或本文所述的其他反应形式。
如本文所用，“CRU(竞争性重建单位)”是指可在体内移植后检测的长期植入干细胞的测量单位。
如本文所用，“药物抗体比”或“DAR”是指附着于ADC的抗体的细胞毒素例如鹅膏毒素的数量。ADC的DAR范围为1到8，但是根据抗体上连接位点的数量，更高的负载也是可能的。因此，在某些实施方案中，本文所述的ADC具有约1、2、3、4、5、6、7或8的DAR。
如本文所用，术语“供体”是指在将细胞或其后代施用于受体之前从其中分离出一种或多种细胞的人或动物。例如，所述一种或多种细胞可以是造血干细胞群。
如本文所用，术语“双抗体”是指含有两条多肽链的二价抗体，其中每条多肽链包括由接头连接的VH和VL结构结构域，所述接头太短(例如，由五个氨基酸组成的接头)以至于不能允许同一肽链上的VH和VL结构域分子内结合。这种构造迫使每个结构域与另一个多肽链上的互补结构域配对，从而形成同二聚体结构。因此，术语“三抗体”是指含有三条肽链的三价抗体，每条肽链含有通过接头连接的一个VH结构域和一个VL结构域，所述接头极短(例如，由1-2个氨基酸组成的接头)以至于不允许同一肽链内的VH和VL结构域的分子内结合。为了折叠成其天然结构，以这种方式配置的肽通常三聚体化，以便将相邻肽链的VH和VL结构域放置成在空间上彼此接近(参见例如Holliger et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-48,1993)。
如本文所用，“双可变结构域免疫球蛋白”(“DVD-Ig”)是指抗原结合蛋白，其通过接头结合两个抗体的靶结合可变结构域以产生四价双靶向单剂(参见，例如，Gu et al.,Meth.Enzymol.,502：25-41,2012)。
术语“有效量”是指预防或减轻疼痛的至少一种或多种体征或症状所需的治疗剂(例如抗CD5 ADC或抗CD2 ADC)的量，并且涉及足够量的组合物以提供所需效果，例如治疗患有癌症的受试者。有效量还包括足以预防或延缓疾病症状的发展、改变疾病症状的进程(例如但不限于减缓疾病症状的进展)或逆转疾病的症状的量。
如本文所用，术语“内源性”描述在特定生物体(如人患者，例如本文所述的接受造血干细胞移植物疗法的人类患者)中天然存在的物质，如分子、细胞、组织或器官(例如造血干细胞或造血谱系细胞，如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞(例如，CD4+或CD8+T淋巴细胞)或B淋巴细胞)。
如本文所用，术语“移植潜力”用于指造血干细胞和祖细胞重新填充组织的能力，无论此类细胞是天然循环的还是通过移植提供的。该术语涵盖围绕或导致植入的所有事件，如细胞的组织归巢和感兴趣组织内的细胞定植。可以使用本领域技术人员已知的任何临床上可接受的参数来评估或量化植入效率或植入速率，并且其可以包括例如竞争性重建单位(competitive repopulating units)(CRU)的评估；在干细胞已归巢、定殖或移植到其中的一种或多种组织中标志物的掺入或表达；或通过评估受试者的疾病进展过程、造血干细胞和祖细胞的存活或受体的存活。也可以通过在移植后期间测量外周血中的白血细胞计数来确定植入。也可以通过测量骨髓抽吸样品中的供体细胞对骨髓细胞的恢复来评估植入。
如本文所用，术语“赋形剂”是指与药物的活性成分一起配制的物质。例如，为了长期稳定或赋予最终剂型中的活性成分治疗增强的目的，可以包括它们。
如本文所用，术语“外源性”描述在特定生物体(如人患者中)非天然存在的物质，如分子、细胞、组织或器官(例如T细胞、造血干细胞或造血谱系细胞，如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞或B淋巴细胞)。外源物质包括从外部来源提供给生物体或提供给从其中提取的培养的物质的那些。
如本文所用，术语“框架区”或“FW区”包括与抗体或其抗原结合片段的CDR相邻的氨基酸残基。FW区残基可存在于例如人抗体、人源化抗体、单克隆抗体、抗体片段、Fab片段、单链抗体片段、scFv片段、抗体结构域和双特异性抗体等中。
术语“全长抗体”和“完整抗体”在本文中可互换使用，是指基本上完整形式的抗体，而不是本文定义的抗体片段。在一个实施方案中，本文所述的ADC包含完整抗体，例如抗CD5或抗CD2完整抗体。因此，对于IgG抗体，完整抗体包含两条重链以及两条轻链，每个重链包含可变区、恒定区和Fc区，每个轻链包含可变区和恒定区。更具体地，完整的IgG包含两条轻链，每个轻链包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)，并且包含两条重链，每个重链包含重链可变区(VH)和三个重链恒定区(CH1、CH2和CH3)。CH2和CH3代表重链的Fc区。
如本文所用，术语“造血干细胞”(“HSC”)指具有自我更新和分化为成熟血细胞的能力的未成熟血细胞，其包括多种谱系，包括但不限于粒细胞(例如，早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如，网织红细胞、红细胞)、凝血细胞(如成巨核细胞、血小板生成型巨核细胞、血小板)、单核细胞(如单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(如NK细胞、B细胞和T细胞)。此类细胞可以包括CD34+细胞。CD34+细胞是表达CD34细胞表面标志物的未成熟细胞。在人类中，认为CD34+细胞包括具有上文定义的干细胞特性的细胞亚群，而在小鼠中，HSC是CD34-。此外，HSC也指长期重建HSC(LT-HSC)和短期重建HSC(ST-HSC)。基于功能潜力和细胞表面标志物表达区分LT-HSC和ST-HSC。例如，人HSC是CD34+，CD38-，CD45RA-，CD90+，CD49F+和lin-(对于包括CD2，CD3，CD4，CD7，CD8，CD10，CD11B，CD19，CD20，CD56和CD235A的成熟谱系标志物为阴性)。在小鼠中，骨髓LT-HSC为CD34-，SCA-1+，C-kit+，CD135-，Slamfl/CD150+，CD48-和lin-(对于包括Ter119，CD11b，Gr1，CD3，CD4，CD8，B220，IL7ra的成熟谱系标志物为阴性)，而ST-HSC为CD34+，SCA-1+，C-kit+，CD135-，Slamfl/CD150+，和lin-(对于包括Ter119，CD11b，Gr1，CD3，CD4，CD8，B220，IL7ra的成熟谱系标志物为阴性)。此外，在稳态条件下，ST-HSC比LT-HSC静息性更低且增殖性更高。然而，LT-HSC具有更高的自我更新潜力(即，它们在整个成年期存活，并且可以通过连续的受体连续移植)，而ST-HSC具有有限的自我更新(即，它们仅存活有限的时间段，并且不具有连续移植潜力)。这些HSC中的任一种都可以在本文所述的方法中使用。ST-HSC是特别有用的，因为它们是高度增殖的，因此可以更快地产生分化的后代。
如本文所用，术语“造血干细胞功能潜力”指造血干细胞的功能特性，包括1)多潜能性(指分化成多种不同血液谱系的能力，包括但不限于粒细胞(如早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(如网织红细胞、红细胞)、凝血细胞(如成巨核细胞、血小板生成型巨噬细胞、血小板)、单核细胞(例如单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如NK细胞、T细胞和B细胞)，2)自我更新(指造血干细胞产生子细胞的能力，所述子细胞具有与母细胞等同的潜能，并且进一步此种能力可以在个体的一生中重复出现而不会衰竭)，以及3)造血干细胞或其后代被重新引入移植物受体的能力，此后它们归巢到造血干细胞小生境(niche)并重新建立生产性和持续的造血。
如本文所用，术语“主要组织相容性复合物抗原”(“MHC”，在人类的情况下也称为“人白细胞抗原”(“HLA”))是指在细胞表面表达的赋予细胞以独特抗原性身份的蛋白质。MHC/HLA抗原是被T细胞和NK细胞识别为衍生自与免疫效应细胞(“自身”)相同来源的造血干细胞或衍生自另一个造血重建细胞(“非自身”)来源的靶分子。识别出两大类HLA抗原：HLA I类和HLA II类。HLA I类抗原(人类中的A、B和C)使每个细胞可识别为“自我”，而HLAII类抗原(人类中的DR、DP和DQ)参与淋巴细胞和抗原呈递细胞之间的反应。两者都与移植器官的排斥有关。HLA基因系统的重要方面是它的多态性。每个基因，MHC I类(A、B和C)和MHC II类(DP、DQ和DR)存在于不同的等位基因中。HLA等位基因由数字和下标指定。例如，两个不相关的个体可能分别携带I类HLA-B、基因B5和Bw41。等位基因产物在一个或多个α和/或β结构域中的一个或多个氨基酸有所不同。使用表达I类和II类分子的白细胞，使用大量特异性抗体或核酸试剂对个体的HLA单倍型进行分型。通常用于HLA分型的基因是六个MHCI类和II类蛋白，HLA-A、HLA-B和HLA-DR中的每个都有两个等位基因；。HLA基因聚簇在染色体位置6p21上存在的“超级基因座”中，该超级基因座编码6个经典移植HLA基因和至少132个在免疫系统调节中以及一些其他基本分子和细胞过程中起重要作用的蛋白质编码基因。该完整的基因座大约测量为3.6Mb，具有至少有224个基因座。这种聚簇的一个效果是“单倍型”，即存在于单个染色体上的等位基因组，它是从一个亲本那里继承的，倾向于作为一个组而被遗传。从每个亲本遗传的等位基因组形成单倍型，其中一些等位基因倾向于关联在一起。识别患者的单倍型有助于预测找到匹配供体的概率并有助于开发搜索策略，因为一些等位基因和单倍型比其他的更常见，并且它们在不同种族和民族组中以不同的频率分布。
如本文所用，术语“HLA匹配的”是指供体-受体对，其中供体和受体之间没有任何HLA抗原错配，例如供体向需要造血干细胞移植物疗法的受体提供造血干细胞移植物。HLA匹配(即所有6个等位基因都匹配)的供体-受体对具有降低的移植物排斥风险，因为内源性T细胞和NK细胞不太可能将传入的移植物识别为外来的，因此不太可能对移植物产生免疫反应。
如本文所用，术语“HLA-错配的”是指供体-受体对，其中至少一种HLA抗原，特别是关于HLA-A、HLA-B和HLA-DR，在供体和受体之间错配，例如供体向需要造血干细胞移植物疗法的受体提供造血干细胞移植物。在一些实施方案中，一种单倍型是匹配的，而另一种是错配的。相对于HLA匹配的供体-受体对，HLA错配的供体-受体对可能具有更高的移植物排斥风险，因为在HLA错配的供体-受体对情况下，内源性T细胞和NK细胞更有可能将传入的移植物识别为外来的，因此此类T细胞和NK细胞更有可能对移植物产生免疫应答。
如本文所用，术语“人抗体”是指具有抗体区例如可变和恒定区或结构域的抗体，其基本上对应于人种系免疫球蛋白序列。人抗体可以在人细胞系中产生(例如，通过重组表达)，或由能够表达功能重排的人免疫球蛋白(如重链和/或轻链)基因的非人动物或原核或真核细胞产生。当人抗体是单链抗体时，它可以包括不存在于天然人抗体的接头肽。例如，Fv可以含有连接重链可变区和轻链可变区的接头肽，如2到约8个甘氨酸或其他氨基酸残基。认为此类接头肽是人类来源的。人抗体可以通过本领域已知的多种方法制备，包括使用衍生自人免疫球蛋白序列的抗体文库的噬菌体展示方法。人抗体也可以使用不能表达功能性内源性免疫球蛋白但可以表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠来产生(参见，例如，PCT公开号WO 1998/24893；WO1992/01047；WO1996/34096；WO1996/33735；美国专利号5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；5,885,793；5,916,771；和5,939,598)。在一个实施方案中，使用重组方法制备人抗体，如果它存在于自然界中的话使得该抗体的糖基化模式不同于具有相同序列的抗体。
如本文所用，术语“人源化”抗体是指通常包含来自非人CDR和人框架区的氨基酸序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体是人抗体(受体抗体)，其中来自受体CDR的残基被来自非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的具有所需特异性、亲和力和/或能力的CDR的残疾取代。一般而言，人源化抗体含有基本上所有的至少一个，通常是两个，可变结构域，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区。所有或基本上所有的FW区也可以是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白共有序列的一部分。抗体人源化的方法是本领域已知的并且已经描述于例如Riechmann et al.,Nature 332:323-327,1988；美国专利号:5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；and 6,180,370。
如本文所用，术语“免疫细胞”是指参与启动和维持先天性或适应性免疫应答的免疫系统的细胞。免疫细胞包括含有受体的淋巴细胞，该受体可特异性结合感兴趣的抗原，如自身免疫细胞情况下的自身抗原，并对其产生免疫应答。示例性免疫细胞包括肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞。
如本文所用，“需要”造血干细胞移植物的患者包括在一种或多种血细胞类型中展示出缺陷或不足的患者，以及患有干细胞病症的患者。造血干细胞通常表现出1)多潜能性，因此可以分化成多种不同的血液谱系，包括但不限于粒细胞(例如，早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如，网织红细胞、红细胞)、凝血细胞(例如，成巨核细胞、血小板生成型巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞)，2)自我更新，从而产生与母细胞具有同等潜能的子细胞，以及3)被重新引入移植物受体的能力，此后它们归巢到造血干细胞小生境并重新建立生产性和持续的造血。因此，可以将造血干细胞施用于一种或多种造血谱系细胞类型有缺陷或不足的患者，以便在体内重建缺陷或不足的细胞群体。例如，患者可患有癌症，并且该缺陷可以是由于施用化疗剂或选择性地或非特异性地消减癌细胞群体的其他药物而引起的。此外或可替代的，患者可以患有可导致一种或多种血液细胞类型缺陷或不足的非恶性血红蛋白病，如镰状细胞性贫血、地中海贫血、范科尼贫血和Wiskott-Aldrich综合征。受试者可以是患有腺苷脱氨酶严重联合免疫缺陷症(ADASCID)、HIV/AIDS、异染性脑白质营养不良、Diamond-Blackfan贫血和Schwachman-Diamond综合征的受试者。受试者可以患有遗传性血液病症(例如镰状细胞性贫血)或自身免疫性病症或受其影响。此外或可替代的，受试者可以患有恶性疾病(例如T细胞恶性疾病)或受其影响，如选自由血液系统癌症(例如，白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤或骨髓增生异常综合征)和神经母细胞瘤组成的组的恶性疾病。在一些实施方案中，受试者患有代谢病症或以其他方式受其影响。例如，受试者可患有代谢病症或受其影响，该代谢病症选自由以下项组成的组：糖原贮积病、粘多糖累积病、高歇氏病、赫尔斯病(Hurlers Disease)、鞘脂贮积症(sphingolipidoses)、异染性脑白质营养不良、或可能受益于本文公开的治疗或疗法的任何其他疾病或病症，包括但不限于严重联合免疫缺陷、Wiscott-Aldrich综合征、超免疫球蛋白M(IgM)综合征、Chediak-Higashi病、遗传性淋巴组织细胞增多症、骨硬化症、成骨不全、贮积疾病、重型地中海贫血(thalassemia major)、镰状细胞性贫血、系统性硬化症、系统性红斑狼疮、多发性硬化、幼年类风湿性关节炎以及“Bone Marrow Transplantationfor Non-Malignant Disease,"ASH Education Book,1:319-338(2000)中描述的那些疾病或病症，当其涉及可以通过施用造血干细胞移植物疗法来治疗的病理时其公开内容通过引用完整并入本文。此外或可替代的，“需要”造血干细胞移植物的患者可以是患有或未患有上述病理之一，但仍表现出造血谱系中一种或多种内源性细胞类型水平降低(例如，与其他健康的受试者的水平相比)的患者，所述一种或多种内源性细胞类型例如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、髓母细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞。本领域技术人员可以容易地确定相对于其他健康受试者，一种或多种前述细胞类型或其他血细胞类型的水平是否降低，例如，通过流式细胞术和荧光激活细胞分选(FACS)方法，以及本领域已知的其他程序。
当在蛋白质(例如抗体)的情况下使用时，术语“分离的”是指借由其来源或衍生来源而与在其天然状态下伴随它的天然相关联的组分不相关联；基本上不含来自同一物种的其他蛋白质；由来自不同物种的细胞表达；或自然界中不存在的蛋白质。因此，化学合成或在不同于其天然来源的细胞的细胞系统中合成的蛋白质将与其天然相关联的组分“分离”。也可以使用本领域熟知的蛋白质纯化技术通过分离使蛋白质基本上不含天然相关联的组分。
术语“单克隆抗体”或“mAb”是指从基本上同质的抗体群中获得的抗体，即除了可能的变体抗体，组成该群的个体抗体是相同的和/或结合相同的表位，可能的变体抗体例如，在单克隆抗体制备产生过程中出现的天然发生的突变或变体，其中此类变体可以以少量存在。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，每种mAb都针对该抗原上的单一决定簇。修饰语“单克隆”不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。
如本文所用，术语“有GVHD风险的患者”是指具有一种或多种发展GVHD的因素的患者。风险因素包括但不限于同种异体供体移植物(例如，来自骨髓移植物的造血干细胞的移植)，包括错配的人类白细胞抗原(HLA)供体和性别错配的供体、T细胞充足的干细胞移植物；供体和受体年龄；移植供体或宿主体内存在巨细胞病毒(CMV)或CMV抗体；增加剂量的全身放射治疗(TBI)；调理方案强度；急性GVHD预防；缺乏保护性环境；脾切除术；使用免疫球蛋白；基础疾病；ABO相容性；之前暴露于疱疹病毒；供体输血；表现评分；抗生素肠道去污；和同种异体移植后输血。
如本文所用，术语“具有自身免疫性疾病风险的患者”是指具有一种或多种发展自身免疫性疾病的风险因素的患者。风险因素包括但不限于年龄(年轻到中年)、性别(女性)、种族(非裔美国人、美洲印第安人或拉丁裔)、自身免疫性疾病家族史、暴露至环境病原因子(environmental agents)、既往感染、慢性炎症和供体移植(例如，从骨髓移植物的造血干细胞的移植)。
如本文所用，术语“药学上可接受的”是指适合与受试者如哺乳动物(例如人)的组织接触的那些化合物、材料、组合物和/或剂型，而没有过度毒性、刺激作用、过敏反应和与合理的益处/风险比相称的其他问题并发症。
如本文所用，术语“药物组合物”是指含有治疗性化合物的混合物，该混合物将施用于受试者，如哺乳动物，例如人，以预防、治疗或控制影响哺乳动物的特定疾病或病况，如自身免疫性疾病、癌症或血液病症等，例如，如本文所述的。
如本文所用，术语“受体”是指接受移植物如含有造血干细胞群的移植物的患者。施用于受体的移植的细胞可以是例如自体、同系(syngeneic)或同种异体的细胞。
如本文所用，在移植物如造血干细胞移植物的上下文中，术语“排斥”是指受体对传入的移植物产生免疫应答的过程，从而降低移植物(例如，造血干细胞)在受体体内持续存在的能力。例如通过在移植后不同时间点从患者分离的各种样品中测量移植细胞的数量或浓度，可以量化移植的移植物如造血干细胞移植物的排斥。发现从患者分离的样品中移植细胞的数量或浓度随时间减少，例如减少约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约56％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或更多，表明患者正遭受移植物排斥。相反，发现从患者分离的样品中移植细胞的数量或浓度随时间保持稳定，例如，减少少于约20％、约15％、约10％、约5％或更少，表示患者没有遭受移植物排斥。或者，移植物排斥可以通过测量在移植后与在不同时间点从患者分离的各种样品中的移植细胞表达的MHC抗原发生交叉反应的免疫细胞(如T细胞和/或NK细胞)的数量或浓度来量化。发现与从患者分离的样品中移植细胞表达的MHC抗原发生交叉反应的免疫细胞(如T细胞和/或NK细胞)的数量或浓度随时间增加，例如增加约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约56％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约100％、约200％、约300％或更多，表明患者正遭受移植物排斥。相反，发现与从患者分离的样品中移植细胞表达的MHC抗原发生交叉反应的免疫细胞(如T细胞和/或NK细胞)的数量或浓度随时间减少，例如减少约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约56％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或更多，表明患者没有遭受移植物排斥。
如本文所用，术语“样品”是指取自受试者的样本(例如，血液、血液组分(例如，血清或血浆)、尿液、唾液、羊水、脑脊液、组织(例如，胎盘或皮肤)、胰液、绒毛膜绒毛样品和细胞)。
如本文所用，术语“scFv”是指单链Fv抗体，其中来自抗体的重链和轻链的可变结构域已连接形成一条链。scFv片段含有一条多肽链，该多肽链包括由接头分隔的抗体轻链可变区(VL)(例如，CDR-L1、CDR-L2和/或CDR-L3)和抗体重链的可变区(VH)(例如，CDR-H1、CDR-H2和/或CDR-H3)。连接scFv片段的VL和VH区的接头可以是由蛋白原氨基酸组成的肽接头。可以使用替代接头以增加scFv片段对蛋白水解降解的抗性(例如，含有D-氨基酸的接头)，以提高scFv片段的溶解度(例如，亲水接头，如含有聚乙二醇的接头或含有重复甘氨酸和丝氨酸残基的多肽)，以提高分子的生物物理稳定性(例如，含有形成分子内或分子间二硫键的半胱氨酸残基的接头)，或减弱scFv片段的免疫原性(例如，含有糖基化位点的接头)。本领域普通技术人员还将理解，本文所述的scFv分子的可变区可以被修饰，使得它们的氨基酸序列不同于它们衍生自的抗体分子。例如，可以进行导致氨基酸残基保守取代或改变的核苷酸或氨基酸取代(例如，在CDR和/或框架残基中)，以保持或增强scFv与被相应的抗体识别的抗原结合的能力。
关于抗体或抗体片段与第二种化学物质的相互作用的术语“特异性结合(specific binding)”或“特异性地结合(specifically binds)”是指该相互作用取决于特定结构(例如，抗原决定簇或表位)在化学物质上的存在；例如，抗体识别并结合特定的蛋白质结构，而不是一般的蛋白质。如果抗体对表位“A”具有特异性，则在含有标记的“A”和抗体的反应中，含有表位A的分子(或游离、未标记的A)的存在将减少与抗体结合的标记的A的量。在一个实施方案中，如果抗体对靶的KD为至少约10-4M、约10-5M、约10-6M、约10-7M、约10- 8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M、约10-12M或更少(更少意味着小于10-12，例如10-13的数字)，则抗体特异性结合靶标例如CD2或CD5。在一个实施方案中，如本文所用的术语“与CD2特异性结合”或“特异性结合CD2”是指一种抗体与CD2结合并具有1.0x10-7M或更小的如由表面等离子共振确定的解离常数(KD)。在另一个实施方案中，如本文所用的术语“与CD5特异性结合”或“特异性结合CD5”，是指抗体结合CD5并且具有1.0x10-7M或更小的如由表面等离子共振确定的解离常数(KD)。在一个实施方案中，KD根据标准生物层干涉仪(BLI)测定。然而，应当理解，该抗体可能能够特异性地结合两种或更多种序列相关的抗原。例如，在一个实施方案中，抗体可以特异性地结合CD2的人类和非人类(例如，小鼠或非人灵长类)直系同源物。在另一个实施方案中，抗体可以特异性地结合CD5的人类和非人类(例如，小鼠或非人灵长类)直系同源物。特异性结合也可以指包含抗体的ADC。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”是指接受本文所述的特定疾病或病况的治疗的哺乳动物，如人。例如，患者，如人类患者，可以是患有本文所述的自身免疫性疾病的患者，并且可以施用本文所述的抗CD2抗体-药物缀合物或抗CD5抗体-药物缀合物，以(i)消耗与由造血干细胞表达的非自身抗原(例如，由造血干细胞移植物表达的非自身MHC抗原)交叉反应的自身免疫性细胞群(例如，自身免疫性CD2+T细胞和/或NK细胞的群体；或自身免疫性CD5+T细胞、B细胞和/或NK细胞的群体)和/或(ii)消耗CD2+免疫细胞群(例如，CD2+T细胞和/或NK细胞)或消耗CD5+免疫细胞群(例如，CD5+T细胞、B细胞和/或NK细胞)，从而在造血干细胞移植物疗法之前预防或降低移植物排斥的可能性。
如本文所用，短语“基本上从血液中清除”是指在将治疗剂(如抗CD2 ADC或CD5ADC)施用于患者后的某个时间点，此时从患者分离出的血液样品中治疗剂的浓度使得通过常规方法无法检测到该治疗剂(例如，使得无法在用于检测治疗剂的装置或测定法的噪声阈值以上检测到治疗剂)。本领域已知的多种技术可用于检测抗体或抗体片段，如本领域已知或本文所述的基于ELISA的检测测定法。可用于检测抗体和抗体片段的其他测定法包括免疫沉淀技术和免疫印迹测定法，以及本领域已知的其他测定法。
如本文所用，短语“干细胞病症”广义地指可通过调理受试者的靶组织，例如通过消融靶组织中的内源性干细胞群，和/或通过在受试者的靶组织中植入或移植干细胞来治疗或治愈的任何疾病、病症或病况。例如，已经显示了1型糖尿病通过造血干细胞移植物治愈，并可受益于根据本文所述的组合物和方法进行的调理。可以使用本文所述的组合物和方法治疗的其他病症包括但不限于镰状细胞性贫血、地中海贫血、范科尼贫血、Wiskott-Aldrich综合征、ADA SCID、HIV/AIDS、异染性脑白质营养不良、Diamond-Blackfan贫血和Schwachman-Diamond综合征。受试者可能患有遗传性血液疾病(例如镰状细胞性贫血)或自身免疫性疾病或受其影响。另外或可替代的，受试者可患有恶性疾病或受其影响，如选自由血液癌症(例如白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤或骨髓增生异常综合征)和神经母细胞瘤组成的组的恶性疾病。在一些实施方案中，受试者患有代谢病症或以其他方式受其影响。例如，受试者可以患有代谢病症或以其他方式受其影响，该代谢病症选自由以下项组成的组：糖原贮积病、粘多糖累积病、高歇氏病、赫尔斯病、鞘脂贮积症、异染性脑白质营养不良或可受益于本文公开的治疗和疗法的任何其他疾病或病症，包括但不限于严重联合免疫缺陷、Wiscott-Aldrich综合征、超免疫球蛋白M(IgM)综合征、Chediak-Higashi病、遗传性淋巴组织细胞增多症、骨硬化症、成骨不全、贮积疾病、重型地中海贫血、镰状细胞性贫血、系统性硬化症、系统性红斑狼疮、多发性硬化、幼年类风湿性关节炎和那些在"Bone MarrowTransplantation for Non-Malignant Disease,"ASH Education Book,1:319-338(2000)中描述的疾病或病症，当其涉及可以通过施用造血干细胞移植物疗法来治疗的病理时其公开内容通过引用完整并入本文。
如本文所用，术语“转染”是指通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞的多种技术中的任一种，如电穿孔、脂转染、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。
如本文所用，术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”是指治疗措施，其中目的是预防、治愈、减缓、减轻诊断的病况或病症的不希望的生理变化或停止诊断的病况或病症的进展以促进被治疗患者的有益表型。有益的或期望的临床结果取决于所治疗的疾病并且可以包括但不限于肿瘤负荷的减少、从患者分离的样品中存在的自身免疫细胞的数量减少，如在直接治疗自身免疫性疾病的情况下与自身抗原发生交叉反应的CD2+T细胞和/或NK细胞群，或在通过施用抗CD2 ADC或抗CD5 ADC和造血干细胞移植物治疗自身免疫性疾病的情况下，造血干细胞移植前与由造血干细胞表达的非自身抗原(例如，非自身MHC抗原)发生交叉反应。其他有益结果包括在调理疗法和随后向患者施用外源性造血干细胞移植物后需要造血干细胞移植物的患者中造血干细胞的细胞计数或相对浓度增加。本文所述疗法的有益结果还可以包括在调理疗法和随后造血干细胞移植物疗法后一种或多种造血谱系细胞，如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成肌细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞或B淋巴细胞的细胞计数或相对浓度增加。在某些实施方案中，患者被诊断患有病症，然后用治疗剂(例如抗CD5 ADC)治疗。在其他实施方案中，患者有发展病症例如GVHD的风险，因此将其作为预防措施进行治疗以降低发展病症的风险或减轻病症的症状。
如本文所用，术语“变体”和“衍生物”可互换使用，是指本文所述的化合物、肽、蛋白质或其他物质的天然存在的、合成的和半合成的类似物。本文所述的化合物、肽、蛋白质或其他物质的变体或衍生物可以保留或改进原始材料的生物活性。
如本文所用，术语“载体”包括核酸载体，例如质粒、DNA载体、质粒、RNA载体、病毒或其他合适的复制子。本文所述的表达载体可以含有多核苷酸序列以及例如用于蛋白质表达和/或将这些多核苷酸序列整合到哺乳动物细胞基因组中的额外序列元件。可用于表达本文的抗体和抗体片段的某些载体包括含有调控序列，如启动子和增强子区域的质粒，所述调控序列指导基因转录。用于表达抗体和抗体片段的其他有用载体含有多核苷酸序列，所述多核苷酸序列增强这些基因的翻译速率或改善由基因转录产生的mRNA的稳定性或核输出。这些序列元件可以包括例如5’和3’非翻译区和多聚腺苷酸化信号位点，以指导表达载体上携带的基因的有效转录。本文所述的表达载体还可以包含编码用于选择含有此类载体的细胞的标志物的多核苷酸。合适的标志物的实例包括编码对抗生素如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素和诺尔丝菌素的抗性的基因。
如本文所用，术语“烷基”是指在链中具有例如1至20个碳原子的直链或支链烷基。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、叔戊基、己基、异己基等。
如本文所用，术语“亚烷基”是指直链或支链二价烷基。二价位置可以在烷基链内的相同或不同原子上。亚烷基的实例包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基等。
如本文所用，术语“杂烷基”是指在链中具有例如1至20个碳原子并且在链中进一步含有一个或多个杂原子(例如氧、氮或硫等)的直链或支链烷基。
如本文所用，术语“杂亚烷基”是指直链或支链二价杂烷基。二价位置可以在杂烷基链内的相同或不同原子上。二价位置可以是一个或多个杂原子。
如本文所用，术语“烯基”是指在链中具有例如2至20个碳原子的直链或支烯基。烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、叔丁烯基、己烯基等。
如本文所用，术语“亚烯基”是指直链或支链二价烯基。二价位置可以在烯基链内的相同或不同原子上。亚烯基的实例包括亚乙烯基、亚丙烯基、亚异丙烯基、亚丁烯基等。
如本文所用，术语“杂烯基”是指在链中具有例如2至20个碳原子并且在链中还含有一个或多个杂原子(例如氧、氮或硫等)的直链或支链烯基。
如本文所用，术语“杂亚烯基”是指直链或支链二价杂烯基。二价位置可以在杂烯基链内的相同或不同原子上。二价位置可以是一个或多个杂原子。
如本文所用，术语“炔基”是指在链中具有例如2至20个碳原子的直链或支链炔基。炔基的实例包括丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。
如本文所用，术语“亚炔基”是指直链或支链二价炔基。二价位置可以在炔基链内的相同或不同原子上。
如本文所用，术语“杂炔基”是指在链中具有例如2至20个碳原子并且在链中还含有一个或多个杂原子(例如氧、氮或硫等)的直链或支链炔基。
如本文所用，术语“杂亚炔基”是指直链或支链二价杂炔基。二价位置可以在杂炔基链内的相同或不同原子上。二价位置可以是一个或多个杂原子。
如本文所用，术语“环烷基”是指饱和且具有例如3至12个碳环原子的单环或稠合、桥接或螺多环结构。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、双环[3.1.0]己烷等。
如本文所用，术语“亚环烷基”是指二价环烷基。二价位置可以在环结构内的相同或不同原子上。亚环烷基的实例包括亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基等。
如本文所用，术语“杂环烷基”是指饱和的并且每个环结构具有例如3至12个环原子的单环或稠合、桥接或螺多环结构，所述环结构选自碳原子和杂原子，所述杂原子选自例如氮、氧和硫等。例如，环结构可以在碳、氮或硫环成员上含有一个或多个氧代基。杂环烷基的实例包括例如但不限于二氢吡啶基、四氢吡啶基(哌啶基(piperidyl))、四氢噻吩基、哌啶基(piperidinyl)、4-哌啶基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、双-四氢吡喃基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、哌嗪环基、奎宁环基和吗啉基。
如本文所用，术语“杂亚环烷基”是指二价杂环烷基。二价位置可以在环结构内的相同或不同原子上。
如本文所用，术语“芳基”是指含有，例如6至19个碳原子的单环或多环芳环系统。芳基包括但不限于苯基、芴基、萘基等。二价位置可以是一个或多个杂原子。
如本文所用，术语“亚芳基”是指二价芳基。二价位置可以在相同或不同的原子上。
如本文所用，术语“杂芳基”是指单环杂芳基或双环或三环稠环杂芳基，其中一个或多个环原子是杂原子，例如氮、氧或硫。杂芳基包括吡啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、恶唑基、异恶唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,3,4-恶二唑基、1,3,4-三嗪基、1,2,3-三嗪基、苯并呋喃基、[2,3-二氢]苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并三唑基、异苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、苯并咪唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、喹嗪基、喹唑啉基、酞嗪基(pthalazinyl)、喹喔啉基、噌嗪基(cinnolinyl)、二氮杂萘基(napthyridinyl)、吡啶并[3,4-b]吡啶基、吡啶并[3,2-b]吡啶基、吡啶并[4,3-b]吡啶基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、5,6,7,8-四氢喹啉基、5,6,7,8-四氢异喹啉基、嘌呤基、蝶啶基、咔唑基、呫吨基、苯并喹啉基等。
如本文所用，术语“杂亚芳基”是指二价杂芳基。二价位置可以在相同或不同的原子上。二价位置可以是一个或多个杂原子。
除非个体取代基的定义另有限制，上述化学部分，例如“烷基”、“亚烷基”、“杂烷基”、“杂亚烷基”、“烯基”、“亚烯基”、“杂烯基”、“杂亚烯基”、“炔基”、“亚炔基”、“杂炔基”、“杂亚炔基”、“环烷基”、“亚环烷基”、“杂环烷基”、“杂亚环烷基”、“芳基”、“亚芳基”、“杂芳基”和“杂亚芳基”可以任选地被，例如1-5个选自由以下项组成的组的取代基取代：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷基芳基、烷基杂芳基、烷基环烷基、烷基杂环烷基、氨基、铵、酰基、酰氧基、酰氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、烷氧基、sulfanyl、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、巯基、硝基等。典型的取代基包括但不限于，-X,-R,-OH,-OR,-SH,-SR,NH2,-NHR,-N(R)2,-N+(R)3,-CX3,-CN,-OCN,-SCN,-NCO,-NCS,-NO,-NO2,-N3,-NC(＝O)H,-NC(＝O)R,-C(＝O)H,-C(＝O)R,-C(＝O)NH2,-C(＝O)N(R)2,-SO3-,-SO3H,-S(＝O)2R,-OS(＝O)2OR,-S(＝O)2NH2,-S(＝O)2N(R)2,-S(＝O)R,-OP(＝O)(OH)2,-OP(＝O)(OR)2,-P(＝O)(OR)2,-PO3,-PO3H2,-C(＝O)X,-C(＝S)R,-CO2H,-CO2R,-CO2-,-C(＝S)OR,-C(＝O)SR,-C(＝S)SR,-C(＝O)NH2,-C(＝O)N(R)2,-C(＝S)NH2,-C(＝S)N(R)2,-C(＝NH)NH2,和-C(＝NR)N(R)2；其中每个X在每种情况下独立地选自F、Cl、Br和I；并且每个R在每种情况下独立地选自烷基、芳基、杂环烷基或杂芳基、保护基和前药部分。当基团被描述为“任选地取代”时，在每种情况下独立地该基团可以被一个或多个上述取代基取代。取代可以包括相邻取代基已经发生闭环的情况，如连位功能性取代基的闭环，以形成例如由闭环形成的内酰胺、内酯、环酐、缩醛、半缩醛、硫缩醛、缩醛胺和半缩醛胺，例如，来装设保护基团。
应当理解，某些自由基命名约定可以取决于上下文包括单自由基或双自由基。例如，当一个取代基需要两个与分子其余部分连接的点时，应理解该取代基是双自由基。例如，被识别为需要两个连接点的烷基的取代基包括双自由基，如-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-等。其他自由基命名约定清楚地表明该自由基是双自由基，如“亚烷基”、“亚烯基”、“亚芳基”、“杂亚环烷基”等。
在任何地方取代基被描述为双自由基(即与分子的其余部分具有两个连接点)，应理解取，除非另有说明，该取代基可以以任何方向构型(directional configuration)连接。
抗CD2抗体药物缀合物
本文所述的组合物和方法部分基于以下发现：抗CD2 ADC可用于直接治疗癌症和自身免疫性疾病，例如，由于此类药剂杀死CD2+癌细胞(例如CD2+白血病细胞)和CD2+自身免疫细胞(例如，CD2+自身免疫T细胞和/或NK细胞)的能力。具体而言，抗CD2抗体经由接头与细胞毒素缀合。因此，在描述抗CD2抗体的情况下，除非另有说明，否则也考虑其缀合物。
本文所述的组合物和方法还部分基于以下发现：能够结合CD2的ADC可用作治疗剂，以通过预防或降低免疫细胞介导的移植物排斥的可能性来促进移植的造血干细胞在需要移植疗法的患者中的植入。例如，抗CD2抗体和抗原结合片段可以结合由免疫细胞(如T细胞或NK细胞)表达的细胞表面CD2，这些免疫细胞与一种或多种非自身造血干细胞抗原(如由造血干细胞表达的一种或多种非自身MHC抗原)交叉反应并产生针对其的免疫应答。此类抗体和抗原结合片段与造血干细胞特异性CD2+免疫细胞的结合可诱导结合的免疫细胞死亡，例如，通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性或通过与抗体或其抗原结合片段缀合的细胞毒剂的作用。因此，与非自身造血干细胞发生交叉反应的CD2+免疫细胞群的消耗可以通过减弱受体免疫系统针对转入的移植物产生免疫应答的能力来促进造血干细胞移植物在有需要的患者中的植入。以这种方式，可以治疗患有本文所述的干细胞病症、癌症、自身免疫性疾病或其他血液病症的患者，因为可以向受试者提供造血干细胞移植物以重新填充在受试者内有缺陷和/或不足的细胞谱系。受试者可能缺乏一种细胞群体，因为，例如，已向受试者施用旨在根除癌细胞但在此过程中也消耗健康造血细胞的化疗。
例如，在某些实施方案中，提供了通过施用能够结合由T细胞表达的抗原的抗体或其抗原结合片段来促进移植的造血干细胞植入的组合物和方法。这种施用可导致内源性T细胞群(如CD4+和CD8+T细胞)的选择性消耗，。这种T细胞的选择性消耗转而可以防止移植外源性(例如，自体、同种异体或同系的)造血干细胞移植物后的移植物排斥。例如，使用本文所述的抗CD2抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或抗体-药物缀合物选择性消耗CD4+和/或CD8+T细胞可以减弱可针对移植的造血干细胞移植物发生的T细胞介导的免疫应答。本文所述的组合物和方法还部分基于以下发现：能够结合CD2的抗体及其抗原结合片段可以施用于需要造血干细胞移植物疗法的患者以促进移植的造血干细胞的存活和植入潜力。
由于施用抗CD2抗体或其抗原结合片段而导致的造血干细胞移植物的植入可以在多种经验测量中体现。例如，移植的造血干细胞的植入可以通过评价在施用能够结合CD2的抗体或其抗原结合片段和随后施用造血干细胞移植物后，在患者骨髓中存在的竞争性重建单位(CRU)的量来评价。此外，人们可以通过将报告基因(如催化产生荧光、发色或发光产物的化学反应的酶)并入已转染供体造血干细胞的载体中并随后监测造血干细胞(如骨髓)归巢进入的组织中的相应信号以观察造血干细胞移植物的植入。还可以通过评估造血干细胞和祖细胞的数量和存活来观察造血干细胞的植入，例如，通过本领域已知的荧光激活细胞分选(FACS)分析方法确定。植入也可以通过在移植后期间测量外周血中的白细胞计数和/或通过测量骨髓抽吸样品中供体细胞对骨髓细胞的恢复来确定。
以下部分提供了对可以施用于需要造血干细胞移植物疗法的患者的抗体或其抗原结合片段的描述，以促进造血干细胞移植物的植入，以及在造血干细胞移植之前对患者施用此类疗法的方法。
抗CD2抗体
本文所述的组合物和方法包括特异性地结合人CD2的抗体或其片段。人CD2也称为T细胞表面抗原T11/Leu-5、T11、CD2抗原(p50)和绵羊红细胞受体(SRBC)。CD2在T细胞上表达。已鉴定了两个人类CD2的同种型。同种型1含有351个氨基酸，在Seed,B.et al.(1987)84:3365-69(还参见Sewell et al.(1986)83:8718-22)及以下(NCBI参考序列：NP_001758.2)中描述：
Figure BDA0003495552300000391
第二个CD2同种型是377个氨基酸并在本文中被鉴定为NCBI参考序列：NP_001315538.1。
T细胞和NK细胞已显示表达CD2，CD2是细胞粘附分子并且是此类淋巴细胞的特异性标志物。例如，CD2与其他粘附分子如淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3/CD58)相互作用，以增强T细胞活化。能够结合CD2的抗体及其抗原结合片段可以抑制T细胞活化和针对造血干细胞移植物的T细胞介导的免疫应答，例如，通过抑制CD2和LFA-3之间的相互作用。
与该细胞表面抗原结合的抗体及其抗原结合片段可以使用本领域已知的和本文描述的技术来鉴定，所述技术包括免疫、计算建模技术和体外选择方法，如如下所述的噬菌体展示和基于细胞的展示平台。
本文描述了特异性结合CD2多肽(例如人CD2多肽)的抗体及其抗原结合片段及其用途。在示例性实施方案中，特异性结合CD2多肽的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区。
在一个实施方案中，重链可变区包含一个或多个互补决定区(CDR)。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR1，该VH CDR1包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR2，该VH CDR2包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR3，该VH CDR3包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3组成的组的一个或多个VH CDR。在一个实施方案中，重链可变区包含选自由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3组成的组的两个或更多个VH CDR。在一个实施方案中，重链可变区包含：包含SEQID NO:1的VH CDR1、包含SEQ ID NO:2的VH CDR2和包含SEQ ID NO:3的VH CDR3。
在一个实施方案中，轻链可变区包含一个或多个互补决定区(CDR)。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR1，该VL CDR1包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR2，该VL CDR2包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR3，该VL CDR3其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6组成的组的一个或多个VL CDR。在一个实施方案中，轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6组成的组的两个或更多个VL CDR。在一个实施方案中，轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含SEQ ID NO:5的VL CDR2和包含SEQ ID NO:6的VL CDR3。
在示例性实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：包含SEQ ID NO:1的VH CDR1、包含SEQ ID NO:2的VH CDR2、和包含SEQID NO:3的VH CDR3，所述轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:4的VL CDR1、包含SEQ ID NO:5的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:6的VL CDR3。
在某些实施方案中，所述CDR中的一个或多个(即，一个或多个具有SEQ ID NO:1-3的重链CDR，和/或一个或多个具有SEQ ID NO:4-6的轻链CDR)可以包含一个保守的氨基酸取代(或2、3、4或5个氨基酸取代)，同时保留所述抗体的CD2特异性(即，与包含SEQ ID NO:1至3的重链CDR和SEQ ID NO:4至6的轻链CDR的抗体或其抗原结合片段相似的特异性)。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:7具有至少95％的同一性的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:7具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含重链(HC)可变区，所述修饰的重链(HC)可变区包含：包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:7的变体的HC可变结构域，所述变体(i)在1、2、3、4或5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:7；(ii)在最多5、4、3、2或1个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:7；(iii)在1-5、1-3、1-2、2-5或3-5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:7；和/或(iv)包含与SEQ ID NO:7具有至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，其中在(i)-(iv)的任一个中，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代；并且其中修饰的重链可变区相对于SEQ ID NO:7的重链可变区可以具有增强的生物活性，同时保留抗体的CD2结合特异性，即具有与包含SEQ ID NO:7的抗体或其抗原结合片段相似的结合特异性。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列有一个、两个、三个或四个氨基酸上有所不同的重链可变区。例如，抗体或其抗原结合片段可包含与SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列在位置12、13、28和/或48中的一个、两个、三个或四个有所不同的重链可变区。在一个实施方案中，重链可变区与SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列在位置12、13、28和/或48上有所不同。在一个实施方案中，重链可变区相对于SEQ ID NO:7所示的序列，包含以下取代中的1个、2个、3个或4个：K12Q；K13R；T28I和M48V。在一个实施方案中，重链可变区相对于SEQID NO:7包含取代K12Q；K13R；T28I和M48V。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:8具有至少95％同一性的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:8具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含修饰的轻链(LC)可变区，所述修饰的轻链(LC)可变区包含：包含SEQ IDNO:8或SEQ ID NO:8的变体的LC可变区，所述变体(i)在1、2、3、4或5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:8；(ii)在最多5、4、3、2或1个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:8；(iii)在1-5、1-3、1-2、2-5或3-5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:8；和/或(iv)包含与SEQ ID NO:8具有至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，其中在(i)-(iv)的任一个中，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代；并且其中修饰的轻链可变区相对于SEQ ID NO:8的轻链可变区可以具有增强的生物活性，同时保留抗体的CD2结合特异性，即具有与包含SEQ ID NO:8的抗体或其抗原结合片段相似的结合特异性。
在示例性的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:7具有至少95％同一性的氨基酸序列，例如与SEQ IDNO:7具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:8具有至少约95％同一性的氨基酸序列，例如与SEQ IDNO:8具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:7的重链可变区和包含SEQ IDNO:8的轻链可变区。在一个实施方案中，抗体是Ab1抗体，所述Ab1抗体包含：包含SEQ IDNO:7的重链可变区和包含SEQ ID NO:8的轻链可变区。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:9具有至少95％的同一性的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:9具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％同一性的氨基酸序列。在一个示例性实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:9具有至少95％同一性的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:9具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:10具有至少约95％同一性的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:10具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:9的重链可变区和包含SEQ IDNO:10的轻链可变区。在一个实施方案中，抗体是Ab1a抗体，所述Ab1a抗体包含：包含SEQ IDNO:9的重链可变区和包含SEQ ID NO:10的轻链可变区。
在一个实施方案中，重链可变区包含一个或多个互补决定区(CDR)。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR1，所述VH CDR1包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR2，所述VH CDR2包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR3，所述VH CDR3包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含选自由SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16组成的组的一个或多个VH CDR。在一个实施方案中，重链可变区包含选自由SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:15和SEQ ID NO:16组成的组的两个或更多个VH CDR。在一个实施方案中，重链可变区包含：包含SEQ ID NO:14的VH CDR1、包含SEQ ID NO:15的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:16的VHCDR3。
在一个实施方案中，重链可变区包含一个或多个互补决定区(CDR)。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR1，所述VH CDR1包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR2，所述VH CDR2包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR3，所述VH CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含选自由SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:17组成的组的一个或多个VH CDR。在一个实施方案中，重链可变区包含选自由SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:15和SEQ ID NO:17组成的组的两个或更多个VH CDR。在一个实施方案中，重链可变区包含：包含SEQ ID NO:14的VH CDR1、包含SEQ ID NO:15的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:17的VHCDR3。
在一个实施方案中，轻链可变区包含一个或多个互补决定区(CDR)。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR1，所述VL CDR1包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR2，所述VL CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR3，所述VL CDR3包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20组成的组的一个或多个VL CDR。在一个实施方案中，轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:18、SEQ IDNO:19和SEQ ID NO:20组成的组的两个或更多个VL CDR。在一个实施方案中，轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:18的VL CDR1、包含SEQ ID NO:19的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:20的VLCDR3。
在示例性实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：包含SEQ ID NO:14的VH CDR1、包含SEQ ID NO:15的VH CDR2、和包含SEQ ID NO:16的VH CDR3，并且所述轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:18的VL CDR1、包含SEQ ID NO:19的VL CDR2、和包含SEQ ID NO:20的VL CDR3。
在示例性实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：包含SEQ ID NO:14的VH CDR1、包含SEQ ID NO:15的VH CDR2和包含SEQID NO:17的VH CDR3，并且所述轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:18的VL CDR1、包含SEQ IDNO:19的VL CDR2和包含SEQ ID NO:20的VL CDR3。
在某些实施方案中，所述CDR中的一个或多个(即，具有SEQ ID NO:14-17的一个或多个重链CDR，和/或具有SEQ ID NO:18-19的一个或多个轻链CDR)可以包含一个保守的氨基酸取代(或2、3、4或5个氨基酸取代)，同时保留抗体的CD2特异性(即，与抗体或其抗原结合片段相似的特异性，所述抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:14至16的重链CDR和SEQID NO:18至20的轻链CDR；或包含SEQ ID NO:14、15、17的重链CDR和SEQ ID NO:18至20的轻链CDR)。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:21具有至少约95％的同一性的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:21具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％的同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含修饰的重链(HC)可变区，所述修饰的重链(HC)可变区包含：包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:21的变体的HC可变结构域，所述变体(i)在1、2、3、4或5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:21；(ii)在最多5、4、3、2或1个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:21；(iii)在1-5、1-3、1-2、2-5或3-5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:21；和/或(iv)包含与SEQ ID NO:21具有至少约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％同一性的氨基酸序列，其中在(i)-(iv)的任一个中，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代；并且其中修饰的重链可变区相对于SEQ ID NO:21的重链可变区可以具有增强的生物活性，同时保留抗体的CD2结合特异性，即具有与包含SEQ ID NO:21的抗体或其抗原结合片段类似的结合特异性。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:22具有至少约95％的同一性的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:22具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％的同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含修饰的重链(HC)可变区，所述修饰的重链(HC)可变区包含：包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:22的变体的HC可变结构域，所述变体(i)在1、2、3、4或5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:22；(ii)在最多5、4、3、2或1个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:22；(iii)在1-5、1-3、1-2、2-5或3-5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:22；和/或(iv)包含与SEQ ID NO:22具有至少约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％同一性的氨基酸序列，其中在(i)-(iv)的任一个中，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代；并且其中修饰的重链可变区相对于SEQ ID NO:22的重链可变区可以具有增强的生物活性，同时保留抗体的CD2结合特异性，即具有与包含SEQ ID NO:22的抗体或其抗原结合片段类似的结合特异性。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:23具有至少约95％的同一性的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:23具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％的同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含修饰的轻链(LC)可变区，所述修饰的轻链(LC)可变区包含：包含SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:23的变体的LC可变结构域，所述变体(i)在1、2、3、4或5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:23；(ii)在最多5、4、3、2或1个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:23；(iii)在1-5、1-3、1-2、2-5或3-5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:23；和/或(iv)包含与SEQ ID NO:23具有至少约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同一性的氨基酸序列，其中在(i)-(iv)的任一个中，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代；并且其中修饰的轻链可变区相对于SEQ ID NO:23的轻链可变区可以具有增强的生物活性，同时保留抗体的CD2结合特异性，即具有与包含SEQ ID NO:23的抗体或其抗原结合片段类似的结合特异性。
在示例性实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:21具有至少95％同一性的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:21具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:23具有至少约95％同一性的氨基酸序列，例如与SEQ IDNO:23具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:21的重链可变区和包含SEQID NO:23的轻链可变区。
在示例性实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:22具有至少约95％同一性的氨基酸序列，例如与SEQ IDNO:22具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％同一性的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:23具有至少约95％同一性的氨基酸序列，例如与SEQ IDNO:23具有至少约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:22的重链可变区和包含SEQID NO:23的轻链可变区。
可以与本文所述的组合物和方法结合使用的抗CD2抗体包括具有以下CDR中的一种或多种或全部的那些：
a.具有氨基酸序列EYYMY(SEQ ID NO:1)的CDR-H1；
b.具有氨基酸序列RIDPEDGSIDYVEKFKK(SEQ ID NO:2)的CDR-H2；
c.具有氨基酸序列GKFNYRFAY(SEQ ID NO:3)的CDR-H3；
d.具有氨基酸序列RSSQSLLHSSGNTYLN(SEQ ID NO:4)的CDR-L1；
e.具有氨基酸序列LVSKLES(SEQ ID NO:5)的CDR-L2；和
f.具有氨基酸序列MQFTHYPYT(SEQ ID NO:6)的CDR-L3。
包含前述CDR序列的抗体及其抗原结合片段描述于例如美国专利号6,849,258中，当其涉及抗CD2抗体及其抗原结合片段时，其公开内容以引用方式并入本文。美国专利号5,730,979；5,817,311；5,951,983和7,592,006中公开的抗体及其片段；如LO-CD2a、BTI-322和由保藏为ATCC保藏号HB 11423的杂交瘤细胞系产生的抗体(例如，含有抗体LO-CD2a的一个或多个或所有的CDR序列的抗体或其抗原结合片段，其中抗体LO-CD2a分离自保藏为ATCC保藏号HB 11423的杂交瘤细胞系)可与本文公开的组合物和方法结合使用。可与本文所述的组合物和方法结合使用的示例性抗体包括人源化抗体，其含有抗体的一个或多个或所有CDR序列，所述抗体分离自保藏为ATCC保藏号HB 11423的杂交瘤细胞系，所述抗体如MEDI-507。MEDI-507是人源化抗CD2单克隆抗体，其含有上述(a)至(f)的CDR-H和CDR-L序列，并且描述于Branco et al.,Transplantation 68:1588-1596(1999)。MEDI-507另外描述于WO99/03502A1和WO1994/020619A1；美国专利号US7,592,006、US6,849,258、US5,951,983、US5,817,311和US5,730,979；和美国专利公开号US2011/0280868、US2004/0265315和2011/0091453，当其涉及抗CD2抗体及其抗原结合片段时，其各自的公开内容通过引用并入本文，所述抗CD2抗体及其抗原结合片段如抗CD2抗体MEDI-507。在一个实施方案中，抗CD2抗体是西普利单抗(Siplizumab)或其抗原结合片段。
前述科学期刊文章和美国专利，当其涉及抗CD2抗体及其抗原结合片段时，其公开内容通过引用并入本文。
可与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD2抗体包括，例如，美国专利号6,541,611和7,250,167中描述的抗CD2抗体，当其涉及抗CD2抗体及其抗原结合片段时，其各自的公开内容通过引用并入本文，所述抗CD2抗体及其抗原结合片段如抗CD2抗体LO-CD2b和通过保藏为ATCC保藏号PTA-802的杂交瘤细胞系产生的抗体。可与本文所述的组合物和方法结合使用的示例性抗体包括人源化抗体，其含有抗体的一个或多个或所有的CDR序列，所述抗体分离自保藏为ATCC保藏号PTA-802的杂交瘤细胞系。
可以与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD2抗体包括，例如，美国专利号5,795,572和5,795,572中描述的抗CD2抗体，当其涉及抗CD2抗体及其抗原结合片段时，其各自的公开内容通过引用并入本文，所述抗CD2抗体及其抗原结合片段如由保藏为ATCC保藏号HB 69277的杂交瘤细胞系产生的抗CD2抗体。例如，可与本文所述的组合物和方法结合使用的抗CD2抗体及其抗原结合片段包括含有铰链区的那些，该铰链区具有EPKSSDKTHTSPPSP(SEQ ID NO:287)氨基酸序列，如含有具有EPKSSDKTHTSPPSP(SEQ ID NO:287)氨基酸序列的铰链区的scFv片段。并入具有SEQ ID NO:287氨基酸序列的铰链区可能是有益的，因为该铰链基序相对于野生型铰链区序列已发生突变以消除可能促进单链抗体片段的非预期氧化二聚化的潜在反应性半胱氨酸残基，所述单链抗体片段如scFv片段。
可以与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD2抗体包括，例如，美国专利号6,764,688中描述的抗CD2抗体，所述抗CD2抗体如抗CD2抗体TS2/18和通过保藏为ATCC保藏号HB-195的杂交瘤细胞系产生的抗体。美国专利号6,764,688，当其涉及抗CD2抗体及其抗原结合片段时，其公开内容通过引用并入本文。
可以与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD2抗体包括，例如，美国专利号6,162,432、6,558,662、7,408,039、7,332,157、7,638,121、7,939,062和7,115,259，美国专利申请公开号2006/0084107、2014/0369974、2002/0051784和2013/0183322，当其涉及抗CD2抗体及其抗原结合片段时，其各自的公开内容通过引用并入本文。
与本文所述的方法结合使用的抗体及其片段包括上述那些抗体的变体，如含有或缺乏Fc结构域的抗体片段，以及本文所述的非人抗体的人源化变体和含有本文所述的抗体或抗体片段的一个或多个或所有CDR或其等同区域的抗体样蛋白支架(例如，10Fn3结构域)。前述抗体的示例性抗原结合片段包括双可变免疫球蛋白结构域、单链Fv分子(scFv)、双抗体、三抗体、纳米抗体、抗体样蛋白支架、Fv片段、Fab片段、F(ab')2分子和串联di-scFv等。
在一个实施方案中，抗CD2抗体或其结合片段包含修饰的Fc区，其中所述修饰的Fc区相对于野生型Fc区包含至少一个氨基酸修饰，使得所述分子对FcgammaR(FcγR)具有改变的亲和力或改变的结合。通过晶体学研究已知Fc区内的某些氨基酸位置与FcγR直接接触。特别是氨基酸234-239(铰链区)、氨基酸265-269(B/C环)、氨基酸297-299(C'/E环)和氨基酸327-332(F/G)环。(参见Sondermann et al.,2000Nature,406:267-273)。基于结构和晶体学分析，本文所述的抗体可包含变体Fc区，其包含与FcγR直接接触的至少一个残基的修饰。在一个实施方案中，根据通过引用明确并入本文的Kabat et al.,Sequences ofProteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,NH1,MD(1991)中的EU指数，抗CD2抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸265处包含氨基酸取代。“如Kabat中的EU指数”是指人IgG1 EU抗体的编号。在一个实施方案中，Fc区包含D265A突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C突变。在一些实施方案中，根据如Kabat中的EU指数，抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸234处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含L234A突变。在一些实施方案中，根据如Kabat中的EU指数，抗CD2抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸235处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含L235A突变。在又一个实施方案中，Fc区包含L234A和L235A突变。在进一步的实施方案中，Fc区包含D265C、L234A和L235A突变。在还进一步的实施方案中，Fc区包含D265C、L234A、L235A和H435A突变。在进一步的实施方案中，Fc区包含D265C和H435A突变。
本文使用的抗体可进一步工程化以通过引入额外的Fc突变来进一步调节抗体半衰期，如在例如(Dall'Acqua et al.(2006)J Biol Chem 281:23514-24)、(Zalevsky etal.(2010)Nat Biotechnol 28:157-9)、(Hinton et al.(2004)J Biol Chem 279:6213-6)、(Hinton et al.(2006)J Immunol 176:346-56)、(Shields et al.(2001)J Biol Chem276:6591-604)、(Petkova et al.(2006)Int Immunol 18:1759-69)、(Datta-Mannan etal.(2007)Drug Metab Dispos 35:86-94)、(Vaccaro et al.(2005)Nat Biotechnol 23:1283-8)、(Yeung et al.(2010)Cancer Res 70:3269-77)和(Kim et al.(1999)Eur JImmunol 29:2819-25)中描述的那些，并且包括位置250、252、253、254、256、257、307、376、380、428、434和435。可以单独或组合产生的示例性突变是T250Q、M252Y、1253A、S254T、T256E、P2571、T307A、D376V、E380A、M428L、H433K、N434S、N434A、N434H、N434F、H435A和H435R突变。
在一些实施方案中，抗CD2抗体或其抗原结合片段通过抗体或其抗原结合片段的Fc结构域中的半胱氨酸残基与细胞毒素(例如，鹅膏毒素)缀合。在一些实施方案中，半胱氨酸残基通过抗体或其抗原结合片段的Fc结构域中的突变引入。例如，半胱氨酸残基可以选自由Cys118、Cys239和Cys265组成的组。在一个实施方案中，根据如Kabat中的EU指数，抗CD2抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸265处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含D265C突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C和H435A突变。
因此，在一个实施方案中，Fc区包含导致半衰期减少的突变。具有短半衰期的抗体在抗体预期用作短期治疗剂的某些情况下可能是有利的，例如，本文所述的施用抗体后施用HSC的调节步骤。理想地，与内源性干细胞不同，在递送HSC之前，抗体将被大量清除，HSC通常也表达CD2但不是抗CD2抗体的靶标。在一个实施方案中，Fc区在位置435处(根据Kabat的EU指数)包含突变。在一个实施方案中，突变是H435A突变。
前述抗CD2抗体或其抗原结合片段可用于本文所述的各个方面，包括例如用于消耗人类受试者中的CD2+细胞的方法。如本文所述，前述抗CD2抗体或其抗原结合片段也可缀合至如细胞毒素的药剂，所述药剂例如，鹅膏毒素。
抗CD5抗体药物缀合物
本公开还部分基于以下发现：抗CD5抗体或其抗原结合片段或抗CD5 ADC可用于直接治疗如T细胞恶性肿瘤的癌症和自身免疫性疾病，例如，由于此类药剂杀伤CD5+癌细胞(例如，CD5+白血病细胞)和CD5+自身免疫细胞(例如，CD5+自身免疫T细胞、B细胞和/或NK细胞)的能力。进一步，抗CD5 ADC可用于治疗有移植物抗宿主病(GVHD)风险的患者。
具体而言，本文所述的抗CD5抗体经由接头与细胞毒素缀合。因此，在描述抗CD5抗体的情况下，除非另有说明，否则还考虑其缀合物。
本文描述的本公开的方面另外部分基于以下发现：能够结合CD5的抗体或其抗原结合片段可用作治疗剂，其通过预防或降低免疫细胞介导的移植物排斥的可能性以促进移植的造血干细胞在需要移植疗法的患者中的植入。例如，抗CD5抗体和抗原结合片段可以结合免疫细胞(如T细胞、B细胞或NK细胞)表达的细胞表面CD5，这些免疫细胞与非自身造血干细胞抗原(如由造血干细胞移植物表达的非自身MHC抗原)发生交叉反应并产生针对其的免疫应答。此类抗体和抗原结合片段与造血干细胞特异性CD5+免疫细胞的结合可诱导结合的免疫细胞死亡，例如，通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性或通过与抗体或者抗原结合片段缀合的细胞毒剂的作用，因此，与非自身造血干细胞交叉反应的CD5+免疫细胞群的消耗可以通过减弱受体的免疫系统对进入的移植物产生免疫应答的能力来促进造血干细胞移植物在有需要的患者中的植入。以这种方式，可以治疗患有本文所述的干细胞病症、癌症、自身免疫性疾病或其他血液病症的患者，因为可以向受试者提供造血干细胞移植物以重新填充在受试者中有缺陷和/或不足的细胞谱系。受试者可能缺乏细胞群由于，例如，已向受试者施用旨在根除癌细胞但在此过程中也消耗健康造血细胞的化疗。
例如，本文描述了通过施用抗体或其抗原结合片段或能够结合由T细胞表达的抗原的ADC来促进移植的造血干细胞植入的组合物和方法。这种施用可导致如CD4+和CD8+T细胞的内源性T细胞群的选择性消耗。反过来，这种T细胞的选择性消耗可以防止移植外源性(例如，自体、同种异体或同基因)造血干细胞移植物后的移植物排斥。例如，使用如本文所述的抗CD5抗体、抗原结合片段、抗体-药物缀合物或抗体-药物缀合物的CD4+和/或CD8+T细胞的选择性消耗可以减弱可能发生的针对移植的造血干细胞移植物的T细胞介导的免疫应答。本文公开的组合物和方法部分基于以下发现：可以将能够结合CD5的抗体及其抗原结合片段施用于需要造血干细胞移植物疗法的患者，以促进移植的造血干细胞的存活和植入潜力。
由于施用抗CD5抗体或其抗原结合片段而导致的造血干细胞移植物植入可以在多种经验测量中体现。例如，移植的造血干细胞的植入可以通过评估在施用能够结合CD5的抗体或其抗原结合片段和随后施用造血干细胞移植物后，在患者骨髓中存在的竞争性重建单位(CRU)的数量来评价。此外，人们可以通过将报告基因(如催化化学反应产生荧光、发色或发光产物的酶)并入已转染供体造血干细胞的载体中并随后监测造血干细胞(如骨髓)归巢到的组织中的相应信号以观察造血干细胞移植物的植入。还可以通过评估造血干细胞和祖细胞的数量和存活来观察造血干细胞的植入，例如，通过本领域已知的荧光激活细胞分选(FACS)分析方法确定。植入也可以通过在移植后期间测量外周血中的白细胞计数和/或通过测量骨髓抽吸样品中供体细胞对骨髓细胞的恢复来确定。
以下部分提供了抗体或其抗原结合片段的描述，其可被施用以治疗自身免疫性疾病、癌症、治疗或预防移植物抗宿主病(GVHD)或治疗需要造血干细胞移植物疗法的患者以促进造血干细胞移植物的植入，以及在造血干细胞移植之前对患者施用此类疗法的方法。
抗CD5抗体
本文所述的组合物和方法包括特异性地结合人CD5的抗体或其片段。人CD5也称为LEU1或T1。人CD5是I型跨膜糖蛋白，其存在于胸腺细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞的子集的表面。已识别出两种人CD5的亚型。亚型1含有438个氨基酸，在Jones et al.(1988)Nature323(6086),346-349及以下(NCBI Reference Sequence:NP_001333385.1)中描述：
Figure BDA0003495552300000521
T细胞已显示表达CD5，CD5是细胞粘附分子并且与活化T细胞的增殖反应和T细胞辅助功能有关。CD5还被显示可以作为受体发挥作用，其通过与CD72(B细胞独有的细胞表面蛋白)相互作用将共刺激信号递送给T细胞。结合CD5的抗体或其抗原结合片段可以抑制T细胞活化和T细胞介导的针对造血干细胞移植物的免疫应答，例如，通过抑制CD5和CD72之间的相互作用。结合CD5的抗体及其抗原结合片段也可用于直接杀伤CD5+T细胞，例如，通过将抗体或其抗原结合片段与细胞毒素(如本文所述或本领域已知的细胞毒素)缀合或通过使用能够将补体蛋白募集到T细胞的未缀合抗体或其抗原结合片段。
此外，已显示活化的B细胞子集表达CD5，并且这种表达模式在自身反应性B细胞中尤其常见(Werner-Favre et al.,European Journal of Immunology 19:1209-1231(1989)，其公开的内容通过引用整体并入本文)。CD5也显示由NK细胞子集表达；特别是在患有多发性骨髓瘤的患者中，已显示具有低密度CD5+(CD5低+)NK细胞群，并且该表面抗原与NK细胞活化有关(Ishiyama et al.,Anticancer Research 14:725-730(1994)，其公开内容通过引用整体并入本文)。因此，特异性结合CD5的抗体或其抗原结合片段可用于减弱B细胞和NK细胞的活化。结合CD5的抗体或其抗原结合片段也可用于直接杀死CD5+B细胞和NK细胞，例如，通过将抗体或其抗原结合片段与细胞毒素(如本文所述或本领域已知的细胞毒素)缀合或通过使用能够将补体蛋白募集到B细胞或NK细胞的未缀合抗体或其抗原结合片段。
本文公开了特异性结合例如人CD5多肽的CD5多肽的抗体及其抗原结合片段，及其用途。在示例性实施方案中，特异性结合CD5多肽的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区。
在一个实施方案中，重链可变区包含一个或多个互补决定区(CDR)。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR1，所述VH CDR1包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR2，所述VH CDR2包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含VH CDR3，所述VH CDR3包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含选自由SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44组成的组的一个或多个VH CDR。在一个实施方案中，重链可变区包含选自由SEQ ID NO:42、SEQ IDNO:43和SEQ ID NO:44组成的组的两个或更多个VH CDR。在一个实施方案中，重链可变区包含：包含SEQ ID NO:42的VH CDR1、包含SEQ ID NO:43的VH CDR2和包含SEQ ID NO:44的VHCDR3。
在一个实施方案中，轻链可变区包含一个或多个互补决定区(CDR)。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR1，所述VL CDR1包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR2，所述VL CDR2包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR3，所述VL CDR3包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:47组成的组的一个或多个VL CDR。在一个实施方案中，轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:46和SEQ ID NO:47组成的组的两个或更多个VL CDR。在一个实施方案中，轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:45的VL CDR1、包含SEQ ID NO:46的VL CDR2和包含SEQ ID NO:46的VLCDR3。
在示例性实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：包含SEQ ID NO:42的VH CDR1、包含SEQ ID NO:43的VH CDR2和包含SEQID NO:44的VH CDR3；所述轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:45的VL CDR1、包含SEQ ID NO:46的VL CDR2和包含SEQ ID NO:47的VL CDR3。
在某些实施方案中，一种或多种CDR(即，一种或多种具有SEQ ID NO:42-44的重链CDR，和/或一种或多种具有SEQ ID NO:45-47的轻链CDR)可以包含1个保守的氨基酸取代(或2、3、4或5个氨基酸取代)，同时保留抗体的CD5特异性(即，与包含SEQ ID NO:42至44的重链CDR和SEQ ID NO:45至47的轻链CDR的抗体或其抗原结合片段相似的特异性)。
在某些实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段是鼠抗体5D7或其人源化形式。鼠抗体5D7与人CD5结合并且描述于美国专利公开号20008/0245027中，其与本文公开的抗体序列相关的内容通过引用并入本文。表5中描述的SEQ ID NO:54至59对应于鼠抗CD5抗体5D7的CDR。抗CD5抗体5D7的人源化形式描述于SEQ ID NO:282(人源化重链可变区)和SEQID NO:283(人源化轻链可变区)。在一个实施方案中，本文所述的ADC及其用途包括包含SEQID NO:54至59所示的CDR的抗体。在一个实施方案中，本文所述的ADC及其用途包括包含如SEQ ID NO:282和283分别所示的重链和轻链可变区的抗体。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:282所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:282具有至少95％的同一性的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:282具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含修饰的重链(HC)可变区，所述修饰的重链(HC)可变区包含：包含SEQ ID NO:282或SEQ ID NO:282的变体的HC可变结构域，所述变体(i)在1、2、3、4或5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:282；(ii)在最多5、4、3、2或1个氨基酸的取代、添加或缺失方面与SEQ ID NO:282不同；(iii)在1-5、1-3、1-2、2-5或3-5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:282；和/或(iv)包含氨基酸序列，其与SEQ ID NO:282至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同，其中在(i)-(iv)的任一个中，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代；并且其中修饰的重链可变区相对于SEQ ID NO:282的重链可变区可以具有增强的生物活性，同时保留抗体的CD5结合特异性，即具有与包含SEQ ID NO:282的抗体或其抗原结合片段相似的结合特异性。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:283所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:283具有至少95％的同一性的氨基酸序列，例如与SEQ ID NO:283具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含修饰的轻链(LC)可变区，所述修饰的轻链(LC)可变区包含：包含SEQ ID NO:283或SEQ ID NO:283的变体的LC可变区，所述变体(i)在1、2、3、4或5个氨基酸的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:283；(ii)在最多5、4、3、2或1个氨基酸的取代、添加或缺失方面与SEQ ID NO:283不同；(iii)在1-5、1-3、1-2、2-5或3-5个氨基酸上的取代、添加或缺失方面不同于SEQ ID NO:283；和/或(iv)包含氨基酸序列，其与SEQ ID NO:283至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同，其中在(i)-(iv)的任一个中，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代；并且其中修饰的轻链可变区相对于SEQ ID NO:283的轻链可变区可以具有增强的生物活性，同时保留抗体的CD5结合特异性，即具有与包含SEQ ID NO:283的抗体或其抗原结合片段类似的结合特异性。
在示例性实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:282具有至少95％同一性的氨基酸序列，例如与SEQ IDNO:282具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:283具有至少95％同一性的氨基酸序列的轻链可变区，例如与SEQ IDNO:283具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:282的重链可变区和包含SEQ ID NO:283的轻链可变区。
在一个实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:288的重链可变区和包含SEQ ID NO:289的轻链可变区。
在一个实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:291的重链可变区和包含SEQ ID NO:290的轻链可变区。
在另一个实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段可以含有包含VH CDR1的重链可变区，所述VH CDR1包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述重链可变区包含VH CDR2，所述VH CDR2包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述重链可变区包含VH CDR3，所述VH CDR3包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列。在一个实施方案中，重链可变区包含选自由SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56组成的组的一个或多个VH CDR。在一个实施方案中，重链可变区包含选自由SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55和SEQID NO:56组成的组的两个或更多个VH CDR。在一个实施方案中，重链可变区包含：包含SEQID NO:54的VH CDR1、包含SEQ ID NO:55的VH CDR2和包含SEQ ID NO:56的VH CDR3。
在一个实施方案中，轻链可变区包含一个或多个互补决定区(CDR)。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR1，VL CDR1包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR2，VL CDR1包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含VL CDR3，VL CDR1包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列。在一个实施方案中，轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59组成的组的一个或多个VL CDR。在一个实施方案中，轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:59组成的组的两个或更多个VL CDR。在一个实施方案中，轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:57的VL CDR1、包含SEQ ID NO:58的VL CDR2和包含SEQ ID NO:59的VL CDR3。
在示例性实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：包含SEQ ID NO:54的VH CDR1、包含SEQ ID NO:55的VH CDR2和包含SEQID NO:56的VH CDR3；所述轻链可变区包含：包含SEQ ID NO:57的VL CDR1、包含SEQ ID NO:58的VL CDR2和包含SEQ ID NO:59的VL CDR3。
在某些实施方案中，一种或多种CDR(即，一种或多种具有SEQ ID NO:54-56的重链CDR，和/或一种或多种具有SEQ ID NO:57-59的轻链CDR)可以包含1个保守的氨基酸取代(或2、3、4或5个氨基酸取代)，同时保留抗体的CD5特异性(即，与包含SEQ ID NO:54至56的重链CDR和SEQ ID NO:57至59的轻链CDR的抗体或其抗原结合片段相似的特异性)。
能够结合CD5抗原的抗体及其抗原结合片段可以使用本领域已知和本文描述的技术来识别，如通过免疫、计算建模技术和体外选择方法，如下面描述的噬菌体展示和基于细胞的展示平台。
可与本文所述的组合物和方法结合使用的抗CD5抗体包括具有以下可变区之一或两者的抗体，或具有与其至少85％序列同一性的氨基酸序列(例如，具有与其85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高的序列同一性氨基酸序列)：
具有以下氨基酸序列的VL：
Figure BDA0003495552300000571
Figure BDA0003495552300000572
和
具有以下氨基酸序列的VH：
Figure BDA0003495552300000573
含有前述VL和VH序列的抗体及其抗原结合片段描述于例如美国专利号5,869,619中，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其公开内容通过引用并入本文，所述抗CD5抗体及其抗原结合片段如he1抗体。在一些实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包括SEQID NO:26和SEQ ID NO:27的VL和VH链。在一些实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:27的VL和VH链中含有的CDR。在一些实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:27的VL和VH链中含有的CDR，并且其余的VL和VH序列与SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:27的VL和VH序列具有至少85％的序列同一性(例如，85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高的序列同一性)。
在一些实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包括以下CDR：
具有氨基酸序列GYTFTNY(SEQ ID NO:28)的CDR-H1；
具有氨基酸序列NTHTGE(SEQ ID NO:29)的CDR-H2；
具有氨基酸序列RGYDWYFDV(SEQ ID NO:30)的CDR-H3；
具有氨基酸序列RASQDINSYLS(SEQ ID NO:31)的CDR-L1；
具有氨基酸序列RANRLVD(SEQ ID NO:32)的CDR-L2；和
具有氨基酸序列QQYDESPWT(SEQ ID NO:33)的CDR-L3。
可以与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD5抗体包括具有以下可变区之一或两者的抗体，或具有与其至少85％序列同一性的氨基酸序列(例如，具有与其85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列)：
具有以下氨基酸序列的VL：
Figure BDA0003495552300000581
Figure BDA0003495552300000582
和
具有以下氨基酸序列的VH：
Figure BDA0003495552300000583
含有前述VL和VH序列的抗体及其抗原结合片段描述于例如美国专利号5,869,619中，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其公开内容通过引用并入本文，所述抗CD5抗体及其抗原结合片段如he3抗体。在一些实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包括SEQID NO:28和SEQ ID NO:29的VL和VH链中含有的CDR。在一些实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包括SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29的VL和VH链中含有的CDR，并且其余的VL和VH序列与SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29的VL和VH序列具有至少85％的序列同一性(例如，85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高的序列同一性)。
在一些实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段包括以下CDR：
具有氨基酸序列GYTFTNY(SEQ ID NO:36)的CDR-H1；
具有氨基酸序列NTHYGE(SEQ ID NO:37)的CDR-H2；
具有氨基酸序列RRGYDWYFDV(SEQ ID NO:38)的CDR-H3；
具有氨基酸序列RASQDINSYLS(SEQ ID NO:39)的CDR-L1；
具有氨基酸序列RANRLES(SEQ ID NO:40)的CDR-L2；和
具有氨基酸序列QQYDESPWT(SEQ ID NO:41)的CDR-L3。
含有前述CDR序列的抗体及其抗原结合片段描述于例如美国专利号5,869,619中，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其公开内容通过引用并入本文。
可以与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD5抗体包括，例如，美国专利号5,821,123；5,766,886；5,770,196；7,153,932；5,621,083；6,649,742；6,146,631；5,756,699；5,744,580；6,376,217；5,837,491和6,146,850中描述的抗CD5抗体，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其各自的公开内容通过引用并入本文。
可以与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD5抗体包括，例如，由保藏为ATCC CRL 8000的杂交瘤细胞系产生的那些(抗CD5鼠抗体OKT1)。此类抗体描述于美国专利号4,515,894；4,657,760和4,363,799，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其各自的公开内容通过引用并入本文。
可与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD5抗体包括美国专利号8,679,500和WO 2010/145895中描述的抗CD5抗体，如抗CD5抗体MAT 304。美国专利号8,679,500和WO 2010/145895的公开内容，包括序列，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其通过引用并入本文。
可以与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD5抗体包括，例如，美国专利号4,675,386中描述的抗CD5抗体(由以ATCC登录号CRL-8023保藏的杂交瘤产生)和也在Manske et al.(J Immunol 136:4721-4728(1986))、Shawler et al.(Cancer Res 44:5921-5927(1984))、Royston et al.(Blood54Suppl.1:106a-106a(1979))和Royston etal.(J Immunol 125:725-731(1980))中描述的抗CD5抗体，如抗CD5抗体T-101。美国专利号4,675,386，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其公开内容通过引用并入本文。
可以与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD5抗体包括，例如，由保藏为ATCC HB9285的杂交瘤细胞系产生的那些(抗CD5缀合物阿佐莫单抗(zolimomab aritox)-抗体连接到蓖麻毒素A链)。此类抗体在WO1989006968；Henslee-Downey et al.,Transplantation 61:738-45,1996；Henslee et al.,Transplant.Proc.21:3004-3007,1989；Przepiorka et al.,Ther.Immunol.1:77-82,1994中描述，当其涉及抗-CD5抗体及其抗原结合片段时，其各自的公开内容通过引用并入本文。
可与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD5抗体包括美国申请号US20110250203和WO 2010/022737中描述的抗CD5抗体。还参见Koefoed et al.，Br.J.Haematol，2013(“Koefoed et al.”)的教导。US20110250203和WO 2010/022737以及Koefoed et al.的公开内容，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其通过引用将其并入本文。
可与本文所述的组合物和方法结合使用的抗CD5抗体包括具有以下CDR中的一种或多种或全部的那些：
具有氨基酸序列GYSITSGYY(SEQ ID NO:42)的CDR-H1；
具有氨基酸序列ISYSGFT(SEQ ID NO:43)的CDR-H2；
具有氨基酸序列AGDRTGSWFAY(SEQ ID NO:44)的CDR-H3；
具有氨基酸序列QDISNY(SEQ ID NO:45)的CDR-L1；
具有氨基酸序列ATS(SEQ ID NO:46)的CDR-L2；和
具有氨基酸序列LQYASYPFT(SEQ ID NO:47)的CDR-L3。
含有前述CDR序列的抗体及其抗原结合片段描述于例如美国专利号8,679,500中，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其公开内容通过引用并入本文。
可与本文所述的组合物和方法结合使用的抗CD5抗体包括具有以下CDR中的一种或多种或全部的那些：
具有氨基酸序列GYIFTNYG(SEQ ID NO:48)的CDR-H1；
具有氨基酸序列INTYNGEP(SEQ ID NO:49)的CDR-H2；
具有氨基酸序列ARGDYYGYEDY(SEQ ID NO:50)的CDR-H3；
具有氨基酸序列QGISNY(SEQ ID NO:51)的CDR-L1；
具有氨基酸序列YTS(SEQ ID NO:52)的CDR-L2；和
具有氨基酸序列QQYSKLPWT(SEQ ID NO:53)的CDR-L3。
含有前述CDR序列的抗体及其抗原结合片段描述于例如美国专利号8,679,500中。
可与本文所述的组合物和方法结合使用的抗CD5抗体包括具有以下CDR中的一种或多种或全部的那些：
具有氨基酸序列FSLSTSGMG(SEQ ID NO:54)的CDR-H1；
具有氨基酸序列WWDDD(SEQ ID NO:55)的CDR-H2；
具有氨基酸序列RRATGTGFDY(SEQ ID NO:56)的CDR-H3；
具有氨基酸序列QDVGTA(SEQ ID NO:57)的CDR-L1；
具有氨基酸序列WTSTRHT(SEQ ID NO:58)的CDR-L2；和
具有氨基酸序列YNSYNT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3。
含有前述CDR序列的抗体及其抗原结合片段描述于例如美国专利申请公开号2008/0254027中，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其公开内容通过引用并入本文。
可与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD5抗体包括，例如，PCT申请公开号WO1992/014491中描述的抗CD5抗体，如由1991年1月10日保藏在巴斯德研究所(Institut Pasteur)编号为1-1025的杂交瘤细胞系产生的抗CD5抗体。PCT申请公开号WO1992/014491的公开内容，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其通过引用并入本文。
可与本文所述的组合物和方法结合使用的其他抗CD5抗体包括，例如，描述于美国专利号6,010,902和7,192,736，美国专利申请公开号2011/0250203和2017/0129128，以及PCT申请公开号WO2016/172606；WO1994/023747和WO1996/041608中的抗CD5抗体；当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时，其各自的公开内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，可与本文所述的组合物和方法结合使用的抗CD5抗体包括含有如下表1中所示的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3区的组合的那些。
表1.
Figure BDA0003495552300000621
Figure BDA0003495552300000631
Figure BDA0003495552300000632
含有前述表1的CDR序列的抗体和其抗原结合片段描述于例如美国专利申请公开号2011/0250203中，当其涉及抗CD5抗体及其抗原结合片段时其公开内容通过引用并入本文。
与本文所述的组合物和方法结合使用的抗体及其片段包括上述那些抗体的变体，如含有或缺乏Fc结构域的抗体片段，以及非人抗体的人源化变体和含有本文所述的抗体或抗体片段的CDR或其等同区域中的一个或多个或全部的本文所述的抗体样蛋白支架(例如，10Fn3结构域)。前述抗体的示例性抗原结合片段包括双可变免疫球蛋白结构域、单链Fv分子(scFv)、双抗体、三抗体、纳米抗体、抗体样蛋白支架、Fv片段、Fab片段、F(ab')2分子和串联di-scFv等。
前述抗CD5抗体或其抗原结合片段可用于本文所述的各个方面，包括例如用于消耗人类受试者中的CD5+细胞的方法。如本文所述，前述抗CD5抗体或其抗原结合片段也可缀合至药剂，例如细胞毒素，例如，鹅膏毒素。可用于本文所述的组合物和方法方面的其他抗CD5抗体描述于美国专利号8,679,500、美国专利申请公开号US2011/0250203和美国专利申请公开号US2008/0254027中，其各自的全部内容通过引用并入本文。可用于本文所述的组合物和方法方面的其他抗CD5抗体包括，例如，Dillman et al.,J.Clin.Oncol.(1984),2(8):881-891描述的单克隆抗体T101以及由Miller et al.,Blood(1983),62(5):988-95描述的单克隆抗体Leu-1。
在一个实施方案中，抗CD5抗体或其结合片段包含修饰的Fc区，其中所述修饰的Fc区相对于野生型Fc区包含至少一个氨基酸修饰，使得所述分子对FcgammaR(FcγR)具有改变的亲和力或改变的结合。通过晶体学研究已知Fc区内的某些氨基酸位置与FcγR直接接触。特别是氨基酸234-239(铰链区)、氨基酸265-269(B/C环)、氨基酸297-299(C'/E环)和氨基酸327-332(F/G)环。(参见Sondermann et al.,2000Nature,406:267-273)。基于结构和晶体学分析，本文所述的抗体可包含变体Fc区，该变体Fc区包含至少一个与FcγR直接接触的残基的修饰。在一个实施方案中，根据通过引用明确并入本文的Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,NH1,MD(1991)的EU索引，抗CD5抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸265处包含氨基酸取代。“如Kabat中的EU索引”是指人IgG1 EU抗体的编号。在一个实施方案中，Fc区包含D265A突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C突变。在一些实施方案中，根据如Kabat中的EU索引，抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸234处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含L234A突变。在一些实施方案中，根据如Kabat中的EU索引，抗CD5抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸235处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含L235A突变。在又一个实施方案中，Fc区包含L234A和L235A突变。在进一步的实施方案中，Fc区包含D265C、L234A和L235A突变。在还进一步的实施方案中，Fc区包含D265C、L234A、L235A和H435A突变。在进一步的实施方案中，Fc区包含D265C和H435A突变。
本文所述的组合物和方法中使用的抗体可进一步工程化以通过引入额外的Fc突变来进一步调节抗体半衰期，如在例如(Dall′Acqua et al.(2006)J Biol Chem 281:23514-24),(Zalevsky et al.(2010)Nat Biotechnol 28:157-9),(Hinton et al.(2004)J Biol Chem 279:6213-6),(Hinton et al.(2006)J Immunol176:346-56),(Shields etal.(2001)J Biol Chem 276:6591-604),(Petkova et al.(2006)Int Immunol 18:1759-69),(Datta-Mannan et al.(2007)Drug Metab Dispos35:86-94),(Vaccaro et al.(2005)Nat Biotechnol 23:1283-8),(Yeung et al.(2010)Cancer Res 70:3269-77)and(Kim et al.(1999)Eur J Immunol 29:2819-25)中描述的那些，并且包括位置250、252、253、254、256、257、307、376、380、428、434和435。可以单独或组合产生的示例性突变是T250Q、M252Y、1253A、S254T、T256E、P2571、T307A、D376V、E380A、M428L、H433K、N434S、N434A、N434H、N434F、H435A和H435R突变。
在一些实施方案中，抗CD5抗体或其抗原结合片段通过抗体或其抗原结合片段的Fc结构域中的半胱氨酸残基与细胞毒素(例如，鹅膏毒素)缀合。在一些实施方案中，半胱氨酸残基通过抗体或其抗原结合片段的Fc结构域中的突变引入。例如，半胱氨酸残基可以选自由Cys118、Cys239和Cys265组成的组。在一个实施方案中，根据如Kabat中的EU索引，抗CD5抗体(或其片段)的Fc区在氨基酸265处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含D265C突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C和H435A突变。
因此，在一个实施方案中，Fc区包含导致半衰期缩短的突变。具有短半衰期的抗体在预期抗体作为短寿命治疗剂起作用的某些情况下可能是有利的，例如，本文所述的调理步骤，其中施用抗体后施用HSC。理想地，在递送HSC之前，抗体将被基本上清除，HSC通常也表达CD5，但与内源性干细胞不同，其不是抗CD5抗体的靶标。在一个实施方案中，Fc区在位置435处(根据Kabat的EU索引)包含突变。在一个实施方案中，突变是H435A突变。
前述抗CD5抗体或其抗原结合片段可用于本文所述的各个方面，包括例如用于消耗人类受试者中的CD5+细胞的方法。如本文所述，前述抗CD5抗体或其抗原结合片段也可缀合至药剂，例如细胞毒素，例如，鹅膏毒素。
识别抗CD2和抗CD5抗体的方法
高通量筛选结合CD2或CD5的抗体或抗体片段文库的方法可用于识别和亲和成熟的药剂，该药剂可用于调理需要造血干细胞疗法的患者(例如人类患者)和/或用于直接治疗本文所述的癌症或自身免疫性疾病。此类方法包括本领域已知的体外展示技术，如噬菌体展示、细菌展示、酵母展示、哺乳动物细胞展示、核糖体展示、mRNA展示和cDNA展示等。使用噬菌体展示来分离结合生物学相关分子的抗体或抗原结合片段，例如在Felici et al.,Biotechnol.Annual Rev.1:149-183,1995；Katz,AnnualRev.Biophys.Biomol.Struct.26:27-45,1997；和Hoogenboom et al.,Immunotechnology4:1-20,1998中已被评述，当其涉及体外展示技术时其各自的公开内容通过引用并入本文。已构建随机组合肽文库以选择结合细胞表面抗原的多肽，如Kay,Perspect.DrugDiscovery Des.2:251-268,1995和Kay et al.,Mol.Divers.1:139-140,1996中所述，当其涉及抗原结合分子的发现时，其各自的公开内容通过引用并入本文。蛋白质，如多聚体蛋白质，已经成功地被噬菌体展示为功能性分子(参见，例如，EP 0349578；EP 4527839；和EP0589877,以及Chiswell and McCafferty,Trends Biotechnol.10:80-84 1992，当其涉及使用体外展示技术来发现抗原结合分子时其各自的公开内容通过引用并入本文。此外，功能性抗体片段，如Fab和scFv片段，已以体外展示形式表达(参见，例如，McCafferty etal.,Nature 348:552-554,1990；Barbas et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:7978-7982,1991；和Clackson et al.,Nature 352:624-628,1991，当其涉及用于发现抗原结合分子的体外展示平台时，其各自的公开内容通过引用并入本文)。这些技术和其他技术可用于鉴定和改善结合CD2或CD5的抗体或抗体片段的亲和力，这又可用于消耗需要造血干细胞移植物疗法和/或患有本文所述的癌症或自身免疫性疾病的患者(例如人类患者)中的CD2+T细胞和/或NK细胞(或CD5+T细胞、B细胞和/或NK细胞)。
额外技术可用于鉴定结合细胞(例如，T细胞、B细胞或NK细胞)表面的CD2或CD5并被该细胞内化(例如，通过受体介导的内吞作用)的抗体及其抗原结合片段。例如，上述体外展示技术可适用于筛选与T细胞、B细胞或NK细胞表面的CD2或CD5结合并随后被内化的抗体及其抗原结合片段。噬菌体展示代表了可以与这种筛选范例结合使用的技术。为了识别结合CD2或CD5并随后被T细胞、B细胞和/或NK细胞内化的抗体及其片段，本领域技术人员可以使用Williams et al.，Leukemia 19：1432-1438，2005中描述的噬菌体展示技术，其公开内容通过引用整体并入本文。例如，使用本领域已知的诱变方法，可以产生重组噬菌体文库，其编码抗体、抗体片段，如scFv片段、Fab片段、双抗体、三抗体和10Fn3结构域等，或含有随机氨基酸盒的抗体(例如，在所述CDR或其等同区域中的一个或多个或全部，或抗体或抗体片段)。可以设计抗体或抗体片段的框架区、铰链区、Fc结构域和其他区域，使得它们在人中是非免疫原性的，例如，凭借具有人种系抗体序列或相对人种系抗体仅展示出较小变化的序列。
使用本文所述或本领域已知的噬菌体展示技术，可以将含有与噬菌体颗粒共价结合的随机化抗体或抗体片段的噬菌体文库与CD2抗原或CD5抗原一起温育，例如，通过首先将噬菌体文库与封闭剂温育(例如，如，牛奶蛋白、牛血清白蛋白和/或IgG，以去除编码展示出非特异性蛋白质结合的抗体或其片段的噬菌体和编码结合Fc结构域的抗体或其片段的噬菌体，然后将噬菌体文库与CD2+(或CD5+)的T细胞、B细胞或NK细胞群温育。噬菌体文库可以与T细胞、B细胞或NK细胞温育足够长的时间以允许CD2特异性抗体或其抗原结合片段(或CD5特异性抗体或其抗原结合片段)结合细胞表面CD2或CD5并随后被T细胞、B细胞或NK细胞内化(例如，4℃下30分钟至6小时，如4℃下1小时)。含有对CD2或CD5不展示足以允许与T细胞或NK细胞结合并被T细胞或NK细胞内化的亲和力的抗体或其片段的噬菌体，随后可以通过洗涤细胞而被去除，例如用冷(4℃)的pH2.8的0.1M甘氨酸缓冲液。可以识别与已被T细胞、B细胞和/或NK细胞内化的抗体或其片段结合的噬菌体，例如，通过裂解细胞并从细胞培养基中回收内化的噬菌体。然后可以在细菌细胞中扩增噬菌体，例如，通过使用本领域已知的方法在2xYT培养基中将细菌细胞与回收的噬菌体一起温育。然后可以表征从该培养基回收的噬菌体，例如，通过确定插入噬菌体基因组中的编码抗体或其片段的基因的核酸序列。随后可以通过化学合成(例如，抗体片段，如scFv片段)从头或通过重组表达(例如，全长抗体)制备编码的抗体或其片段。
用于体外进化与本文所述的组合物和方法一起使用的抗CD2抗体或抗CD5抗体的示例性方法是噬菌体展示。噬菌体展示文库可以通过在抗体的CDR或抗体样支架的类似区域(例如10Fn3结构域的BC、CD和DE环)的编码序列内设计一系列突变或变异来创建。引入这些突变的模板抗体编码序列可以是，例如，天然的(naive)人种系序列。这些突变可以使用本领域已知的标准诱变技术实施。因此，除了一个或多个氨基酸变异，每个突变序列编码对应于模板的抗体。可以使用本领域已知的标准载体构建技术来工程化逆转录病毒和噬菌体展示载体。P3噬菌体展示载体以及兼容的蛋白质表达载体可用于生成用于抗体多样化的噬菌体展示载体。
突变的DNA提供了序列多样性，并且每个转化体噬菌体展示了由该DNA编码的初始模板氨基酸序列的一个变体，导致噬菌体群(文库)展示了大量不同但结构相关的氨基酸序列。由于抗体高变区的明确结构，预计在噬菌体展示筛选中引入的氨基酸变异会改变结合肽或结构域的结合特性，而不会显著改变其整体分子结构。
在典型的筛选中，噬菌体文库可以接触并允许结合CD2或CD5或其表位。为了促进结合剂和非结合剂的分离，将靶固定在固体支持物上很方便。带有CD2结合部分或CD5结合部分的噬菌体可以与固体支持物上的靶形成复合物，而非结合的噬菌体保留在溶液中，其可以用过量的缓冲液洗掉。然后可以通过改变缓冲液为极端pH(pH2或pH10)、改变缓冲液的离子强度、添加变性剂或其他已知方式，从靶中释放结合的噬菌体。
然后可以通过感染细菌细胞来扩增回收的噬菌体，并且可以使用新的池重复筛选过程，该池现在已消耗非结合抗体并富含结合CD2或CD5的抗体。回收甚至少量结合噬菌体也足以扩增噬菌体以进行后续的筛选迭代。在几轮选择之后，通过常规方法确定编码衍生自结合库中所选噬菌体克隆的抗体或其抗原结合片段的基因序列，从而揭示赋予噬菌体与靶结合亲和力的肽序列。在淘选过程中，群的序列多样性随着每一轮选择而减少，直到留下所需的肽结合抗体。这些序列可能会集中于少量相关抗体或其抗原结合片段。在每轮选择中回收的噬菌体数量的增加表明文库已经在筛选中收敛。
识别抗CD2抗体或抗CD5抗体的另一种方法包括使用人源化的结合CD2或CD5的非人抗体，例如，根据以下程序。结合CD2或CD5的非人抗体可以被人源化，例如，根据以下程序。共有人抗体重链和轻链序列是本领域已知的(参见，例如“VBASE”人种系序列数据库；Kabat et al.Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242,1991；Tomlinson et al.,J.Mol.Biol.227:776-798,1992；和Cox et al..Eur.J.Immunol.24:827-836,1994，当其涉及共有人抗体重链和轻链序列时其各自的公开内容通过引用并入本文。使用已建立的程序，本领域技术人员可以识别共有抗体序列的可变结构域框架残基和CDR(例如，通过序列对齐)。可以用结合CD2或CD5的非人抗体的一个或多个相应CDR替换共有人抗体的重链和/或轻链可变结构域的一个或多个CDR，以产生人源化抗体。这个CDR交换可以使用本文所述或本领域已知的基因编辑技术实施。
共有人抗体的可变结构域的一个实例含有重链可变结构域EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMSWVRQAPGKGLEWVAVISENGSDTYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGGAVSYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:11)和轻链可变结构域DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSLPYTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO:12)，其在美国专利号6,054,297中被鉴定，当其涉及人抗体共有序列时其公开内容通过引用并入本文。上述序列中的CDR由粗体显示。
为了产生人源化抗体，可以重组表达编码上述共有序列的多核苷酸，其中一个或多个可变区CDR已被替换为结合CD2或CD5的非人抗体的一个或多个可变区CDR序列。由于抗体对CD2或CD5的亲和力主要由CDR序列决定，因此预期所得的人源化抗体对CD2或CD5的亲和力与衍生人源化抗体的非人抗体的亲和力大致相同。确定抗体对靶抗原的亲和力的方法包括，例如本文所述和本领域已知的基于ELISA的技术，以及表面等离子共振、荧光各向异性和等温滴定量热法等。
可以例如使用本领域已知的放射性核素内化测定来评估制备的抗体或其片段的内化能力。例如，使用本文所述或本领域已知的体外展示技术鉴定的抗CD2抗体或其片段(或抗CD5抗体或其片段)可以通过掺入放射性同位素，如18F,75Br,77Br,122I,123I,124I,125I,129I,131I,211At,67Ga,111In,99Tc,169Yb,186Re,64Cu,67Cu,177Lu,77As,72As,86Y,90Y,89Zr,212Bi,213Bi,或225Ac来功能化。例如，放射性卤素，如18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At，可以使用含有亲电卤素试剂的珠子，如聚苯乙烯珠子，(例如，碘化珠，Thermo FisherScientific，Inc.，Cambridge，MA)，掺入抗体或其片段中。放射性标记的抗体或其片段可以与T细胞、B细胞和/或NK细胞一起温育足以允许内化的时间(例如，在4℃下从30分钟到6小时，如在4℃下1小时)。然后可以洗涤细胞以去除未内化的抗体或其片段(例如，使用pH2.8的冷(4℃)0.1M甘氨酸缓冲液)。内化的抗体或其片段可以通过检测产生的T细胞、B细胞和/或NK细胞的发射辐射(例如，γ-辐射)相比于回收的洗涤缓冲液的发射辐射(例如，γ-辐射)来识别。
对于抗CD2抗体或抗CD5抗体的重组产生，分离编码抗体的核酸，例如，如上所述，并将其插入一种或多种载体中以进一步在宿主细胞中克隆和/或表达。使用常规程序(例如，通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)可以容易地分离和测序此类核酸。
用于克隆或表达编码抗体的载体的合适宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中产生抗体，特别是当不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见，例如，美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(还参见Charlton,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,N.J.,2003),pp.245-254，其描述了抗体片段在大肠杆菌中的表达。)表达后，抗体可以从可溶性级分中的细菌细胞糊状物中分离出来，并且可以进一步纯化。
脊椎动物细胞也可以用作宿主。例如，适应于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可以是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是由SV40(COS-7)转化的猴肾CV1细胞系；人胚胎肾系(293或293细胞，如Graham et al.,J.Gen Virol.36:59(1977)中所述)；小仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞托利细胞(TM4细胞，如，例如，Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中描述的)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如，例如Mather et al.,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中描述的；MRC 5细胞和FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，其包括DHFR-CHO细胞(Urlaub et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))以及骨髓瘤细胞系，如Y0、NS0和Sp2/0。对于适用于抗体生产的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见，例如Yazaki and Wu,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,N.J.),pp.255-268(2003)。在一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。
抗体药物缀合物(ADC)
可用于本文所述方法的抗CD5或CD2抗体药物缀合物包括经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5或抗CD2抗体。可用于本文所述的ADC中的抗CD5抗体和抗CD2抗体是本领域已知的并且如上所述。下文描述了细胞毒素、接头和缀合方法。
细胞毒素
本文所述的抗体及其抗原结合片段(例如，识别并结合CD2或CD5的抗体、抗原结合片段)可以缀合至细胞毒素，如假单胞菌外毒素A、deBouganin、白喉毒素、鹅膏毒素(如α-鹅膏蕈碱)、皂草素、美登素、美登素类化合物、瑞奥西汀、蒽环类药物、卡奇霉素、伊立替康、SN-38、倍癌霉素、吡咯并苯二氮卓、吡咯并苯二氮卓二聚体、吲哚并苯二氮卓和吲哚并苯二氮卓二聚体或其变体，或本文所述或本领域已知的另一种细胞毒素化合物，以(i)直接治疗本文所述的癌症或自身免疫性疾病或(ii)消耗内源性免疫细胞以防止或降低造血干细胞在移植到需要造血干细胞移植物疗法的患者(例如人类患者)中后发生造血干细胞排斥反应的可能性。在一些实施方案中，细胞毒性分子与内化抗体或其抗原结合片段缀合，使得在抗体或抗原结合片段被细胞摄取后，细胞毒素可接近其细胞内靶标并杀死内源性T细胞、B细胞和/或NK细胞。适合与本文所述的组合物和方法一起使用的合适的细胞毒素包括DNA嵌入剂(例如蒽环类药物)、能够破坏有丝分裂纺锤体的药剂(例如长春花生物碱、美登素、美登素类化合物及其衍生物)、RNA聚合酶抑制剂(例如，鹅膏毒素，如α-鹅膏蕈碱，及其衍生物)、能够破坏蛋白质生物合成的药剂(例如，展示出rRNA N-糖苷酶活性的药剂，如皂草素和蓖麻毒素A-链)等本领域已知的。
在一些实施方案中，抗体-药物缀合物的细胞毒素是RNA聚合酶抑制剂。在一些实施方案中，RNA聚合酶抑制剂是鹅膏毒素或其衍生物。
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏毒素或其衍生物，如α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素(amanin)、鹅膏素酰胺(amaninamide)、鹅膏无毒环肽(amanullin)、鹅膏无毒环肽酸(amanullinic acid)和前鹅膏无毒环肽(proamanullin)。各种天然存在的鹅膏毒素的结构由式III表示，并且在例如Zanotti et al.,Int.J.PeptideProtein Res.30,1987,450-459中公开。
在一个实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈碱。例如，本文所述的抗体或抗原结合片段可与鹅膏毒素结合以形成由式Ab-Z-L-Am表示的缀合物，其中Ab是抗体或其抗原结合片段，L是接头，Z是化学部分，Am是鹅膏毒素。鹅膏毒素或其衍生物上的许多位置可用作共价结合连接部分L并因此结合抗体或其抗原结合片段的位置。例如，本文所述的抗体和抗原结合片段可以与鹅膏毒素结合以形成由式Ab-Z-L-Am表示的缀合物，其中Ab是抗体或其抗原结合片段，Z是化学部分，L是接头，Am是鹅膏毒素。在一些实施方案中，Am-L-Z由式(I)表示
Figure BDA0003495552300000721
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起结合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3是H、RC或RD；
R4是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
X是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
RD是任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)，任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)，任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)，任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)，任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)，任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)，任选取代的环烷基，任选取代的杂环烷基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；
L是接头，如任选取代的亚烷基(例如，C1-C6亚烷基)、任选取代的杂亚烷基(C1-C6杂亚烷基)、任选取代的亚烯基(例如，C2-C6亚烯基)、任选取代的杂亚烯基(例如，C2-C6杂亚烯基)、任选取代的亚炔基(例如，C2-C6亚炔基)、任选取代的杂亚炔基(例如，C2-C6杂亚炔基)、任选取代的亚环烷基、任选取代的杂亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的杂亚芳基、二肽、-C(＝O)-、肽，或其组合；以及
Z是由存在于L上的反应性取代基与存在于结合CD2或CD5的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分。
在一些实施方案中，Am正好含有一个RC取代基。在一些实施方案中，接头包含-(CH)2n-单元，其中n是2-6的整数。在一些实施方案中，接头包括-((CH2)n，其中n是6。在一些实施方案中，L-Z是
Figure BDA0003495552300000731
其中S是硫原子，其代表存在于结合CD117的抗体或其抗原结合片段中的反应性取代基(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)。
在一些实施例中，L-Z是
Figure BDA0003495552300000732
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab是
Figure BDA0003495552300000741
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab是
Figure BDA0003495552300000742
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)表示
Figure BDA0003495552300000751
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起结合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3是H、RC或RD；
R4是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
X是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
RD是任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)，任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)，任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)，任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)，任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)，任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)，任选取代的环烷基，任选取代的杂环烷基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；
L是接头，如任选取代的亚烷基(例如，C1-C6亚烷基)、任选取代的杂亚烷基(C1-C6杂亚烷基)、任选取代的亚烯基(例如，C2-C6亚烯基)、任选取代的杂亚烯基(例如，C2-C6杂亚烯基)、任选取代的亚炔基(例如，C2-C6亚炔基)、任选取代的杂亚炔基(例如，C2-C6杂亚炔基)、任选取代的亚环烷基、任选取代的杂亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的杂亚芳基、二肽，-C(＝O)-、肽、二硫化物、腙、-(CH2CH2O)p-基团，其中p是1-6的整数、((CH2)mO)n(CH2)m-基，其中n和每个m各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10；或其组合；
Z是由存在于L上的反应性取代基和存在于结合CD2或CD5的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的缀合反应形成的化学部分；并且
其中Am正好包含一个RC取代基。
在一些实施方案中，接头包括-((CH2)n，其中n是6。在一些实施方案中，L-Z是
Figure BDA0003495552300000761
在一些实施方案中，L-Z是
Figure BDA0003495552300000762
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab是
Figure BDA0003495552300000771
在一些施方案中，Am-L-Z-Ab是
Figure BDA0003495552300000772
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IB)表示
Figure BDA0003495552300000781
其中，R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起结合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3是H、RC或RD；
R4是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
X是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
RD是任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)，任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)，任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)，任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)，任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)，任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)，任选取代的环烷基，任选取代的杂环烷基，任选取代的芳基，或任选取代的杂芳基；
L是接头，如任选取代的亚烷基(例如，C1-C6亚烷基)、任选取代的杂亚烷基(C1-C6杂亚烷基)、任选取代的亚烯基(例如，C2-C6亚烯基)、任选取代的杂亚烯基(例如，C2-C6杂亚烯基)、任选取代的亚炔基(例如，C2-C6亚炔基)、任选取代的杂亚炔基(例如，C2-C6杂亚炔基)、任选取代的亚环烷基、任选取代的杂亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的杂亚芳基、二肽，-C(＝O)-、肽、二硫化物、腙、-(CH2CH2O)p-基团，其中p是1-6的整数、((CH2)mO)n(CH2)m-基，其中n和每个m各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10；或其组合；
Z是由存在于L上的反应性取代基和存在于结合CD2或CD5的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的缀合反应形成的化学部分；以及
其中Am正好包含一个RC取代基。
在一些实施方案中，接头L和化学部分Z一起作为L-Z，是
Figure BDA0003495552300000791
在一些实施方案中，L-Z是
Figure BDA0003495552300000792
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab是
Figure BDA0003495552300000801
在一些施方案中，Am-L-Z-Ab是
Figure BDA0003495552300000811
在一些实施方案中，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成下式的5元杂环烷基：
Figure BDA0003495552300000812
其中Y是-C(＝O)-、-C(＝S)-、-C(＝NRE)-或-C(RERE’)-；且RE和RE′各自独立地为任选取代的C1-C6亚烷基-RC、任选取代的C1-C6杂亚烷基-RC、任选取代的C2-C6亚烯基-RC、任选取代的C2-C6杂亚烯基-RC、任选取代的C2-C6亚炔基-RC、任选取代的C2-C6杂亚炔基-RC、任选取代的亚环烷基-RC、任选取代的杂亚环烷基-RC、任选取代的亚芳基-RC、任选取代的杂亚芳基-RC。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成：
Figure BDA0003495552300000821
R3是H或RC；
R4是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD或NHRC；
R9是H或OH；并且
其中X、RC和RD各自如上所定义。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成：
Figure BDA0003495552300000822
R3是H或RC；
R4、R5各自独立地是H、OH、ORC、RC或ORD；
R6、R7各自是H；
R8是OH、NH2、ORC或NHRC；
R9是H或OH；并且
其中X和Rc各自如上所定义。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1是H、OH或ORA；
R2是H、OH或ORB；
RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成：
Figure BDA0003495552300000823
R3、R4、R6和R7各自是H；
R5是ORC；
R8是OH或NH2；
R9是H或OH；并且
其中RC如上所定义。此类鹅膏毒素缀合物描述于，例如，美国专利申请公布号2016/0002298中，其公开内容通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1、R2各自独立地是H或OH；
R3是Rc；
R4、R6和R7各自是H；
R5是H、OH或OC1-C6烷基；
R8是OH或NH2；
R9是H或OH；并且
其中X和Rc如上所定义。此类鹅膏毒素缀合物描述于，例如，美国专利申请公开号2014/0294865中，其公开内容通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1、R2各自独立地是H或OH；
R3、R6和R7各自是H；
R4和R5各自独立地是H、OH、ORc或Rc；
R8是OH或NH2；
R9是H或OH；并且
其中X和Rc如上所定义。此类鹅膏毒素缀合物描述于，例如，美国专利申请公开号2015/0218220中，其公开内容通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1、R2各自独立地是H或OH；
R3、R6和R7各自是H；
R4和R5各自独立地是H或OH；
R8是OH、NH2、ORC或NHRC；
R9是H或OH；并且
其中Rc如上所定义。此类鹅膏毒素缀合物描述于，例如，美国专利号9,233,173和9,399,681以及US 2016/0089450中，其各自的公开内容通过引用整体并入本文。
根据本文所述的组合物和方法，可用于与抗体或其抗原结合片段缀合的另外的鹅膏毒素描述于，例如WO 2016/142049；WO 2016/071856和WO 2017/046658中，其各自的公开内容通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(II)、式(IIA)或式(IIB)表示
Figure BDA0003495552300000841
Figure BDA0003495552300000851
其中X是S、SO或SO2；R1是H或通过化学部分Z与抗体或其抗原结合片段共价结合的接头，所述Z由接头上存在的反应性取代基与抗体或其抗原结合片段中存在的反应性取代基之间的偶联反应形成；R2是H或通过化学部分Z与抗体或其抗原结合片段共价结合的接头，Z由接头上存在的反应性取代基与抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基之间的偶联反应形成；其中，当R1为H时，R2为接头，当R2为H时，R1为接头。
在一些实施方案中，接头包括-(CH2)n-单元，其中n是2-6的整数。在一些实施方案中，R1是接头并且R2是H，接头和化学部分一起作为L-Z是
Figure BDA0003495552300000852
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab是以下之一：
Figure BDA0003495552300000853
在一些实施方案中，细胞毒素是α-鹅膏蕈碱。在一些实施方案中，α-鹅膏蕈碱是式III的化合物。在一些实施方案中，式III的α-鹅膏蕈碱经由接头L与结合CD2或CD5的抗体或其抗原结合片段附接。接头L可以在多个可能位置的任一个(例如，R1-R9的任何)与式III的α-鹅膏蕈碱附接以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB的α-鹅膏蕈碱-接头缀合物。在一些实施方案中，接头连接在位置R1处。在一些实施方案中，接头连接在位置R2。在一些实施方案中，接头连接在位置R3。在一些实施方案中，接头连接在位置R4。在一些实施方案中，接头连接在位置R5。在一些实施方案中，接头连接在位置R6。在一些实施方案中，接头连接在位置R7。在一些实施方案中，接头连接在位置R8。在一些实施方案中，接头连接在位置R9。在一些实施方案中，接头包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施方案中，接头包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，接头包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，接头包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，接头包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，接头包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n是1-6的整数。
在一些实施方案中，接头包括-(CH2)n-单元，其中n是2-6的整数。在一些实施方案中，接头是-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，接头是-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n–。在一些实施方案中，接头L和化学部分Z一起作为LZ是
Figure BDA0003495552300000861
可使用本领域已知的或本文描述的缀合技术将与本文所述的组合物和方法使用的抗体和抗原结合片段缀合至鹅膏毒素，如α-鹅膏蕈碱或其变体。例如，识别并结合CD2或CD5的抗体及其抗原结合片段可以缀合至鹅膏毒素，如α-鹅膏蕈碱或其变体，如US 2015/0218220中所述，当其涉及例如鹅膏毒素如α-鹅膏蕈碱及其变体以及可以用于共价缀合的共价缀合时，其公开内容通过引用并入本文。制备鹅膏毒素的合成方法描述于，例如美国专利号9,676,702中，关于本文公开的合成方法，该专利通过引用并入本文。
可使用本领域已知的或本文描述的缀合技术将与本文所述的组合物和方法使用的抗体和抗原结合片段缀合至鹅膏毒素，如α-鹅膏蕈碱或其变体。例如，识别并结合CD2或CD5的抗体及其抗原结合片段可以缀合至鹅膏毒素，如α-鹅膏蕈碱或其变体，如US 2015/0218220中所述，当其涉及例如鹅膏毒素如α-鹅膏蕈碱及其变体以及可以用于共价缀合的共价缀合时，其公开内容通过引用并入本文。
可用于结合本文所述方法的示例性抗体-药物缀合物可以通过抗体或其抗原结合片段与缀合至接头的鹅膏毒素反应形成，所述接头含有适合与在抗体或其抗原结合片段上的反应性残基反应的取代基。与本文描述的含有适合与抗体或其抗原结合片段上的反应残基反应的取代基的接头缀合的鹅膏毒素包括但不限于，7'C-(4-(6-(马来酰亚胺)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(6-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(2-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(2-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(2-(3-羧酸丙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(2-溴乙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(3-(吡啶-2-基二硫烷基)丙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(2-(4-(马来酰亚胺)丁酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(马来酰亚胺)乙酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(3-(马来酰亚胺)丙酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(4-(马来酰亚胺)丁酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(3-((6-(马来酰亚胺)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(3-((6-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(3-((4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(3-((6-((4-(马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(4-(2-(氨氧基)乙酰胺基)丁酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(4-(2-(氨氧基)乙酰胺基)丁酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(6-(马来酰亚胺)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；(R)-7′C-((3-((6-(马来酰亚胺)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；(S)-7′C-((3-((6-(马来酰亚胺)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)己酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((6-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)己酰胺基)-S-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((6-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)己酰胺基)-R-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((3-((4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)-S-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((3-((4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)-R-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(3-羧酸丙酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(6-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(马来酰亚胺)乙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(3-(马来酰亚胺)丙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(4-(马来酰亚胺)丁酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(2-(马来酰亚胺)乙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(4-(马来酰亚胺)丁酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((6-(马来酰亚胺)己酰胺基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((3-(2-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)乙基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((3-((4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((3-(2-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)乙基)氮杂环丁烷-1基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((3-(2-(6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰胺基)乙基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-(((2-(6-(马来酰亚胺)-N-甲基己酰胺基)乙基)(甲基)氨基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-(((4-(6-(马来酰亚胺)-N-甲基己酰胺基)丁基(甲基)氨基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((2-(2-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)乙基)氮丙啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((2-(2-(6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰胺基)乙基)氮丙啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(6-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)己酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(1-(氨氧基)-2-氧代-6，9，12，15-四氧杂-3-氮杂十七烷基-17-酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(2-(氨氧基)乙酰胺基)乙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(3-(2-(氨氧基)乙酰胺基)丙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(4-(2-(氨氧基)乙酰胺基)丁酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(2-(2-(氨氧基)乙酰胺基)乙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(4-(2-(氨氧基)乙酰胺基)丁酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(20-(氨氧基)-4，19-二氧代-6，9，12，15-四氧杂-3，18-二氮杂二十烷基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-(((2-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)-N-甲基己酰胺基)乙基)(甲基)氨基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-(((4-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)-N-甲基己酰胺基)丁基)(甲基)氨基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)-S-甲基)-鹅膏毒素；7′C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己酰胺基)-R-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(2-溴乙酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(2-溴乙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7′C-((4-(2-(3-(吡啶-2-基二硫烷基)丙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；6′O-(6-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)己基)-鹅膏毒素；6′O-(5-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)戊基)-鹅膏毒素；6′O-(2-((6-(马来酰亚胺)己基)氧基)-2-氧代乙基)-鹅膏毒素；6′O-((6-(马来酰亚胺)己基)氨基甲酰基)-鹅膏毒素；6′O-((6-(4-((马来酰亚胺)甲基)环己烷羧酰胺基)己基)氨基甲酰基)-鹅膏毒素；6'O-(6-(2-溴乙酰胺基)己基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(6-(叠氮基)己酰胺基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(己-5-炔酰基氨基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7′C-(4-(2-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺)己酰胺基)己酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；6'O-(6-(6-(11，12-二脱氢-5，6-二氢-二苯并[b，f]唑啉-5-基)-6-氧代己酰胺基)己基)-鹅膏毒素；6'O-(6-(己-5-炔酰基氨基)己基)-鹅膏毒素；6'O-(6-(2-(氨氧基)乙酰基酰胺基)己基)-鹅膏毒素；6'O-((6-氨氧基)己基)-鹅膏毒素；和6'O-(6-(2-碘乙酰胺基)己基)-鹅膏毒素。与本文所述的组合物和方法结合使用的前述接头等，描述于，例如美国专利申请公开号2015/0218220中，其公开内容通过引用整体并入本文。
抗CD5或CD2抗体及其抗原结合片段，其包括本文所述的那些，可以缀合至为细胞毒素瑞奥西汀(美国专利号5,635,483；5,780,588)。瑞奥西汀是干扰微管动力学、GTP水解以及核和细胞分裂的抗有丝分裂剂(Woyke et al(2001)Antimicrob.Agents andChemother.45(12):3580-3584)并具有抗癌作用(美国专利号5,663,149)和抗真菌活性(Pettit et al(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42:2961-2965)。(美国专利号5,635,483；5,780,588)。瑞奥西汀药物部分可以通过肽药物部分的N(氨基)末端或C(羧基)末端与抗体附接(WO 02/088172)。
示例性的瑞奥西汀实施方案包括N-末端连接的单甲基瑞奥西汀药物部分DE和DF，(分别为MMAE和MMAF)，公开于Senter et al,Proceedings of the American Associationfor Cancer Research,Volume 45,Abstract Number623,presented Mar.28,2004中，其公开内容通过引用整体并入本文。
示例性的瑞奥西汀实施方案是MMAE，其中波浪线表示与抗体-接头缀合物(-L-Z-Ab或-L-Z′，如本文所述)的接头共价连接的点，
Figure BDA0003495552300000901
其中波浪线表示与抗体-药物或药物-接头缀合物(-L-Z-Ab或-L-Z′，如本文所述)的接头共价连接的点。另一个示例性的瑞奥西汀实施方案是MMAF：
Figure BDA0003495552300000902
其中波浪线表示与抗体-接头缀合物(-L-Z-Ab或-L-Z′，如本文所述)的接头共价连接的点，如US 2005/0238649中所公开。
瑞奥西汀可以根据以下方法制备：美国专利号5,635,483；美国专利号5,780,588；Pettit et al(1989)J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465；Pettit et al(1998)Anti-CancerDrug Design 13:243-277；Pettit,G.R.,et al.Synthesis,1996,719-725；Pettit et al(1996)J.Chem.Soc.Perkin Trans.15:859-863；和Doronina(2003)Nat.Biotechnol.21(7):778-784。
美登素类化合物
本文所述的抗CD5或CD2抗体及其抗原结合片段可以与细胞毒素微管结合剂缀合。在一些实施方案中，微管结合剂是美登素、美登素类化合物或美登素类化合物类似物。美登素类化合物是有丝分裂抑制剂，其结合微管并通过抑制微管蛋白聚合起作用。美登素最初是从东非灌木Maytenus serrata中分离出来的(美国专利号3,896,111)。随后，发现某些微生物也产生美登素类化合物，如美登醇和C-3美登醇酯(美国专利号4,151,042)。合成的美登醇及其衍生物和类似物公开于，例如美国专利号4,137,230；4,248,870；4,256,746；4,260,608；4,265,814；4,294,757；4,307,016；4,308,268；4,308,269；4,309,428；4,313,946；4,315,929；4,317,821；4,322,348；4,331,598；4,361,650；4,364,866；4,424,219；4,450,254；4,362,663；和4,371,533。美登素类化合物药物部分是抗体药物缀合物中有吸引力的药物部分，因为它们：(i)相对容易通过发酵或化学修饰、发酵产物的衍生来制备，(ii)易于用适合通过非二硫键的接头缀合至抗体的官能团进行衍生，(iii)在血浆中稳定，和(iv)对多种肿瘤细胞系有效。
合适的美登素类化合物的实例包括美登醇的酯、合成美登醇和美登醇类似物以及衍生物。本文包括抑制微管形成并对哺乳动物细胞具有高毒性的任何细胞毒素，如美登素类化合物、美登醇和美登醇类似物以及衍生物。
合适的美登醇酯的实例包括具有修饰的芳环的那些和在其他位置具有修饰的那些。此类合适的美登素类化合物公开于美国专利号4,137,230；4,151,042；4,248,870；4,256,746；4,260,608；4,265,814；4,294,757；4,307,016；4,308,268；4,308,269；4,309,428；4,313,946；4,315,929；4,317,821；4,322,348；4,331,598；4,361,650；4,362,663；4,364,866；4,424,219；4,450,254；4,322,348；4,362,663；4,371,533；5,208,020；5,416,064；5,475,092；5,585,499；5,846,545；6,333,410；7,276,497；和7,473,796，当其涉及美登素类化合物及其衍生物时其各自的公开内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，本公开的抗体-药物缀合物(ADC)利用正式称为N2′-脱乙酰基-N2′-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素的含硫醇美登素类化合物(DM1)作为细胞毒性剂。DM1由以下结构式VI表示：
Figure BDA0003495552300000921
在另一个实施方案中，本发明的缀合物利用含硫醇的美登素类化合物N2′-脱乙酰基-N2′-(4-甲基-4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(例如DM4)作为细胞毒性剂。DM4由以下结构式VII表示：
Figure BDA0003495552300000922
另一种包含含有空间位阻硫醇键的侧链的美登素类化合物是N2′-脱乙酰基-N2′-′(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(称为DM3)，由以下结构式VII表示：
Figure BDA0003495552300000923
美国专利号5,208,020和7,276,497中教导的每种美登素类化合物也可用于本公开的缀合物中。在这方面，5,208,020和7,276,497的全部公开内容通过引用并入本文。
美登素类化合物上的许多位置可用作共价结合连接部分由此结合抗体或其抗原结合片段(-L-Z-Ab或-L-Z′，如本文所述)的位置。例如，具有羟基的C-3位、用羟甲基修饰的C-14位、用羟基修饰的C-15位和具有羟基的C-20位都预期是有用的。在一些实施方案中，C-3位置用作共价结合接头部分的位置，并且在一些特定实施方案中，美登醇的C-3位置用作共价结合连接部分的位置。本领域已知许多用于制备抗体-美登素类化合物缀合物的连接基团，包括，例如，公开于美国专利号5,208,020,6,441,163,和欧洲专利号0425235B1；Chari et al.,Cancer Research 52:127-131(1992)；和U.S.2005/0169933 A1中的那些，其公开内容通过引用明确并入本文。另外的连接基团在本文中描述和举例说明。
本发明还包括美登素类化合物和缀合物的各种同种型和混合物。本发明的某些化合物和缀合物可以各种立体异构体、对映异构体和非对映异构体形式存在。在美国专利号5,208,020；5,416,064；6,333,410；6,441,163；6,716,821；和7,368,565中提供了用于产生此类抗体-美登素类化合物的若干描述，其每个都整体并入本文。
蒽环类药物
在其他实施方案中，本文所述的抗CD5或CD2抗体及其抗原结合片段可以与细胞毒素蒽环类药物分子缀合。蒽环类药物是展示细胞毒活性的抗生素化合物。研究表明，蒽环类药物可以通过多种不同的机制杀死细胞，包括：1)药物分子嵌入细胞DNA中，从而抑制DNA依赖性核酸合成；2)该药物产生自由基，然后自由基与细胞大分子发生反应对细胞造成损害；或3)该药物分子与细胞膜相互作用[参见，例如，C.Peterson et al.,”Transport AndStorage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia”inAnthracycline Antibiotics In Cancer Therapy；N.R.Bachur,“Free Radical Damage”id.at pp.97-102]。由于它们的细胞毒性潜力，蒽环类药物已被用于治疗多种癌症，如白血病、乳腺癌、肺癌、卵巢腺癌和肉瘤[参见例如P.H-Wiernik,in Anthracycline:CurrentStatus And New Developments p 11]。常用的蒽环类药物包括多柔比星、表柔比星、伊达比星和柔红霉素。在一些实施方案中，细胞毒素是选自由以下项组成的组的蒽环类药物：柔红霉素、多柔比星、表柔比星和伊达比星。蒽环类药物的代表性实例包括但不限于柔红霉素(Cerubidine；Bedford Laboratories)、多柔比星(
Figure BDA0003495552300000941
BedfordLaboratories；也称为盐酸多柔比星、羟基柔红霉素和
Figure BDA0003495552300000942
)、表柔比星(
Figure BDA0003495552300000943
Pfizer)和伊达比星(
Figure BDA0003495552300000944
Pfizer Inc.)。
蒽环类药物类似物多柔比星
Figure BDA0003495552300000945
被认为通过嵌入和抑制拓扑异构酶II的进程与DNA相互作用，该酶会解开DNA进行转录。多柔比星在拓扑异构酶II复合物破坏DNA链进行复制后稳定拓扑异构酶II复合物，防止DNA双螺旋重新密封，从而终止复制过程。多柔比星和柔红霉素(DAUNOMYCIN)是原型细胞毒性天然产物蒽环类化合物化疗药物(Sessa et al.,(2007)Cardiovasc.Toxicol.7:75-79)。
适用于本文的蒽环类药物的一个非限制性实例是PNU-159682(“PNU”)。相对于亲本奈莫柔比星，PNU展示出超过3000倍的细胞毒性(Quintieri et al.,Clinical CancerResearch 2005,11,1608-1617)。PNU由以下结构式表示：
Figure BDA0003495552300000946
蒽环类药物如PNU上的多个位置可以充当共价键合连接部分并由此连接如本文所述的双特异性结合剂的位置。例如，可以通过对羟甲基酮侧链的修饰来引入接头。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的PNU衍生物：
Figure BDA0003495552300000947
其中波浪线表示共价附接到如本文所述的ADC接头的点。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的PNU衍生物：
Figure BDA0003495552300000951
其中波浪线表示共价附接到如本文所述的ADC接头的点。
苯二氮卓细胞毒素
如本文所述的抗CD45抗体及其抗原结合片段(包括例如双特异性和双互补位(biparatopic)抗体)可以与如本文所述的包含苯二氮卓部分(如PBD或IGN)的细胞毒素缀合。
吡咯并苯二氮杂卓(PBD)
PBD具有以下一般结构：
Figure BDA0003495552300000952
它们在取代基的数量、类型和位置、其芳族(“A”)环和吡咯(“C”)环以及C环的饱和度方面不同。在二氮杂桌类B环的N10-C11位置有亚胺(N＝C)、甲醇胺(NH-CH(OH))或甲醇胺甲基醚(NH-CH(OMe))。这个位置是负责DNA烷基化的亲电子部分。所有已知的天然产物PBD在手性C11a位置具有(S)-构型，当从C环向A环观察时，这为它们提供了右手扭曲。这为与B型DNA的小沟的同型螺旋性提供了适当的3维形状，导致结合位点处的紧密配合(Kohn,InAntibiotics III.Springer-Verlag,New York,pp.3-11(1975)；Hurley and Needham-VanDevanter,Acc.Chem.Res.,19,230-237(1986))。PBD在小沟中形成加合物的能力使它们能够干扰DNA加工，从而产生抗肿瘤活性。
先前已经公开，这些分子的生物活性可以通过将两个PBD单元通过它们的C8-羟基官能团经由柔性亚烷基接头连接在一起来增强(Bose,D.S.,et al.,J.Am.Chem.Soc.,114,4939-4941(1992)；Thurston,D.E.,et al.,J.Org.Chem.,61,8141-8147(1996))。PBD二聚体被认为形成序列选择性DNA损伤，如回文5'-Pu-GATC-Py-3'链间交联(Smellie,M.,etal.,Biochemistry,42,8232-8239(2003)；Martin,C.,et al.,Biochemistry,44,4135-4147)，这被认为是其生物活性的主要原因。Gregson et al.(Chem.Commun.1999,797-798；"compound 1",and by Gregson et al.(J.Med.Chem.2001,44,1161-1174；"compound4a")已经描述了有利的二聚吡咯并苯二氮杂卓化合物。这种化合物也称为SG2000，结构式为：
Figure BDA0003495552300000961
通常，对吡咯烷烯烃部分的修饰提供了与连接部分共价键合的手柄，从而连接抗体或其抗原结合片段(如本文所述，分别为-L-Z'和-L-Z-Ab)。或者，可以在位置N10处连接接头。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体：
Figure BDA0003495552300000962
其中n是2至5的整数。其中n为3的该式化合物称为DSB-120(Bose et al.,J.Am.Chem.Soc.1992,114,4939-4941)。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体：
Figure BDA0003495552300000971
其中n是2至5的整数。其中n为3的该式化合物称为SJG-136(Gregson et al.,J.Med.Chem.2001,44,737–748)。其中n为5的该式化合物称为DRG-16(Gregson et al.,Med.Chem.2004；47:1161–1174)。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体：
Figure BDA0003495552300000972
其中波浪线表示与本文所述的ADC的接头共价附接的点。基于此PBD的ADC公开于，例如Sutherland et al.,Blood 2013 122:1455-1463中，其通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的PBD二聚体：
Figure BDA0003495552300000973
其中n是3或5，并且其中波浪线表示共价附接至如本文所述的ADC的接头的点。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式(I)表示的PBD二聚体：
Figure BDA0003495552300000974
其中波浪线表示与本文所述的ADC的接头共价附接的点。
吲哚并苯二氮卓(IGN)
在一些实施方案中，如本文所述结合CD45的抗体或其抗原结合片段可以缀合至为吲哚并苯二氮卓(“IGN”)的细胞毒素或包含IGN的细胞毒素。在一些实施方案中，IGN细胞毒素是吲哚并苯二氮卓二聚体或吲哚并苯二氮卓假二聚体。
吲哚并苯二氮卓二聚体代表相对较新的化学细胞毒素类别，对癌细胞有高体外效力(低pM范围IC50值)。与PBD二聚体SJG-136类似，IGN二聚体与DNA的小沟结合，并经由二聚体中的两个亚胺官能团与鸟嘌呤残基共价结合，导致DNA交联。与SJG-136相比，IGN二聚体(IGN 6；用苯环取代PBD部分的亚甲基)在体外展示出高约10倍的效力，这可能是由于DNAIGN形成加合物的速率更快(参见，例如，Miller et al.,"A New Class of Antibody-DrugConjugates with Potent DNA Alkylating Activity"Mol.Cancer Ther.2016,15(8),1870-1878)。相比之下，IGN假二聚体包含单一的反应性吲哚并苯二氮卓亚胺；二聚体细胞毒素中的第二种吲哚并苯二氮卓以还原(胺)形式存在。因此，IGN假二聚体通过二聚体中存在的单个亚胺部分使DNA烷基化，并且不交联DNA。
在一些实施方案中，细胞毒素是具有下式结构的IGN假二聚体：
Figure BDA0003495552300000981
其中波浪线表示接头的附接点。
在一些实施方案中，缀合至抗体之前的包括反应性取代基Z′的细胞毒素-接头缀合物在一起作为Cy-L-Z′，具有以下结构：
Figure BDA0003495552300000982
这种细胞毒素-接头缀合物在本文中称为DGN549，并且存在于ADC IMGN632中，这两者都公开在，例如国际专利申请公开号WO2017004026中，其通过引用并入本文。
在一些实施方案中，细胞毒素是具有下式结构的吲哚并苯二氮卓假二聚体：
Figure BDA0003495552300000991
其中波浪线表示接头的附接点。这种IGN假二聚体细胞毒素在本文中被称为DGN462，公开于，例如美国专利申请公开号20170080102中，其通过引用并入本文。
在一些实施方案中，缀合至抗体之前的包括化学部分Z的细胞毒素-接头缀合物在一起作为Cy-L-Z，具有以下结构：
Figure BDA0003495552300000992
其中波浪线表示与抗体(例如，抗-CD45抗体或其片段)的附接点。这种细胞毒素-接头缀合物存在于ADC IMGN779中，公开于，例如美国专利申请公开号20170080102中，其之前通过引用并入本文。
卡奇霉素
在其他实施方案中，本文所述的抗体及其抗原结合片段可与细胞毒素缀合，所述细胞毒素为烯二炔抗肿瘤抗生素(例如，卡奇霉素、奥佐米星(ozogamicin))。卡奇霉素抗生素家族能够在亚皮摩尔浓度下产生双链DNA断裂。关于卡奇霉素家族缀合物的制备，参见美国专利号5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001和5,877,296(全部属于美国Cyanamid公司)。可以使用的卡奇霉素的结构类似物包括但不限于，例如Hinman et al.，Cancer Research 53：3336-3342(1993)，Lode et al.，CancerResearch 58：2925-2928(1998)和美国Cyanamid的前述美国专利中公开的那些。
示例性卡奇霉素命名为γ1，其在本文中简称为γ，并且具有结构式：
Figure BDA0003495552300001001
在一些实施方案中，卡奇霉素是γ-卡奇霉素衍生物或N-乙酰基γ-卡奇霉素衍生物。可以使用的卡奇霉素的结构类似物包括但不限于例如Hinman et al.，CancerResearch 53：3336-3342(1993)，Lode et al.，Cancer Research58：2925-2928(1998)和前述美国专利中公开的那些。卡奇霉素含有甲基三硫化物部分，该部分可与合适的硫醇反应形成二硫化物，同时引入官能团，该官能团可用于经由接头将卡奇霉素衍生物连接到如本文所述的双特异性结合剂。关于卡奇霉素家族缀合物的制备，参见美国专利号5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001、和5,877,296(全部属于美国Cyanamid公司)。可以使用的卡奇霉素的结构类似物包括但不限于，例如Hinmanet al.，Cancer Research 53：3336-3342(1993)，Lode et al.，Cancer Research 58：2925-2928(1998)和前述美国专利中公开的那些。
在一些实施方案中，如本文公开的ADC的细胞毒素是由下式表示的卡奇霉素二硫化物衍生物：
Figure BDA0003495552300001011
其中波浪线表示接头的连接点。
可与识别并结合CD2或CD5的抗体或其抗原结合片段缀合以用于直接治疗癌症、自体免疫性疾病或用于调理患者(例如，人类患者)以准备造血干细胞移植物疗法的另外的细胞毒素包括但不限于，5-乙炔基尿嘧啶(5-ethynyluracil)、阿比特龙(abiraterone)、酰基富烯(acylfulvene)、腺环戊醇(adecypenol)、阿多来新(adozelesin)、阿地白介素(aldesleukin)、六甲蜜胺(altretamine)、氨莫司汀(ambamustine)、amidox、氨磷汀、氨基酮戊酸、氨柔比星、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、穿心莲内酯、血管生成抑制剂、安雷利克斯(antarelix)、抗背向形态发生蛋白-1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1)、抗雄激素、前列腺癌、抗雌激素、抗赘生物药(antineoplaston)、反义寡核苷酸、阿非科林甘氨酸盐(aphidicolin glycinate)、凋亡基因调节剂、凋亡调节剂、无嘌呤核酸、asulacrine、阿他美坦、阿莫司汀、axinastatin 1、axinastatin 2、axinastatin 3、阿扎司琼、阿扎毒素(azatoxin)、重氮酪氨酸(azatyrosine)、浆果赤霉素(baccatin)III衍生物、balanol、巴马司他、BCR/ABL拮抗剂、benzochlorins、苯甲酰基星状孢子素(benzoylstaurosporine)、β-内酰胺衍生物、β-alethine、betaclamycin B、白桦酸、bFGF抑制剂、比卡鲁胺、比生群、bisaziridinylspermine、双奈法德、bistratene A、比折来新、breflate、博莱霉素A2、博来霉素B2、溴匹立明、布度钛、丁硫氨酸硫酸亚胺、卡泊三醇、卡弗他丁C(calphostin C)、喜树碱衍生物(例如10-羟基喜树碱)、卡培他滨、甲酰胺-氨基-三唑(carboxamide-amino-triazole)、羧胺三唑(carboxyamidotriazole)、卡折来新、酪蛋白激酶抑制剂、澳粟精胺(castanospermine)、杀菌肽B、西曲瑞克、二氢卟酚(chlorins)、氯喹喔啉氨苯磺胺(chloroquinoxaline sulfonamide)、西卡前列素、顺式卟啉(cis-porphyrin)、克拉屈滨、氯底酚胺及其类似物、克霉唑、collismycin A、collismycin B、考布他汀(combretastatin)A4、考布他汀类似物、conagenin、crambescidin 816、克立那托(crisnatol)、念珠藻素8(cryptophycin 8)、念珠藻素A衍生物、curacin A、cyclopentanthraquinones、cycloplatam、赛普米新(cypemycin)、阿糖胞苷ocfosfate、细胞溶解因子、cytostatin、达昔单抗、地西他滨、dehydrodidemnin B、2’脱氧助间型霉素(deoxycoformycin)(DCF)、地洛瑞林、dexifosfamide、右雷佐生、右维拉帕米、地吖醌、didemnin B、didox、二乙基去甲精胺(diethylnorspermine)、二氢-5-氮杂胞苷、二氢紫杉醇(dihydrotaxol)、dioxamycin、二苯螺莫司汀、discodermolide、二十二碳醇(docosanol)、多拉司琼、去氧氟尿苷、屈洛昔芬、屈大麻酚、多卡米星SA、依布硒、依考莫司汀、依地福新、依决洛单抗、依氟鸟氨酸、榄香烯、乙嘧替氟、埃博霉素(epothilone)、ephilones、爱普列特、雌莫司汀及其类似物、依托泊苷、4’-磷酸依托泊苷(也称为etopofos)、依西美坦、法倔唑、法扎拉滨、芬维A胺(fenretinide)、非格司亭、非那雄胺、夫拉平度(flavopiridol)、氟卓斯汀、fluasterone、氟达拉滨、盐酸fluorodaunorunicin、福酚美克、福美坦、福司曲星、福莫司汀、gadolinium texaphyrin、硝酸镓、加洛他滨、加尼瑞克、明胶酶抑制剂、吉西他滨、谷胱甘肽抑制剂、hepsulfam、高三尖杉酯碱(HHT)、金丝桃素、伊班膦酸、艾多昔芬、伊决孟酮、伊莫福新、伊洛马司他、imidazoacridones、咪喹莫特、免疫刺激肽、异苯胍、碘氧阿霉素、依泊美醇、伊立替康、伊洛普利、伊索格拉定、碘苄胍(iobenguane)、碘阿霉素(iododoxorubicin)、甘薯苦醇(ipomeanol)、伊立替康、伊罗普拉、伊索拉定、isobengazole、jasplakinolide、kahalalide F、lamellarin-N三乙酸盐、兰瑞肽、leinamycin、来格司亭、硫酸香菇多糖、leptolstatin、来曲唑、亲脂性铂化合物、lissoclinamide 7、洛铂、洛美曲索、氯尼达明、洛索蒽醌、洛索里滨、勒托替康、lutetiumtexaphyrin、lysofylline、马索罗酚、maspin、基质金属蛋白酶抑制剂、美诺立尔、rnerbarone、美替瑞林(meterelin)、甲硫氨酸酶、甲氧氯普胺、MIF抑制剂、ifepristone、米替福新、米立司亭、普卡霉素(mithracin)、米托胍腙、二溴卫矛醇、丝裂霉素及其类似物、米托萘胺、米托蒽醌、莫法罗汀、莫拉司亭、mycaperoxide B、myriaporone、N-乙酰基地那林、N-取代苯甲酰胺、那法瑞林、nagrestip、napavin、naphterpin、那托司亭、奈达铂、奈莫柔比星、奈立膦酸、尼鲁米特、nisamycin、nitrullyn、奥曲肽、okicenone、奥那司酮、昂丹司琼、oracin、奥马铂、奥沙霉素、oxaunomycin、紫杉醇及其类似物，palauamine、palmitoylrhizoxin、帕米膦酸、人参三醇、帕诺米芬、parabactin、帕折普汀、培门冬酶、培得星(peldesine)、木聚硫钠(pentosan polysulfate sodium)、喷司他丁、pentrozole、全氟溴烷、培磷酰胺、phenazinomycin、溶链菌制剂(picibanil)、吡柔比星、吡曲克辛、鬼臼毒素、泊非霉素、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂、雷替曲塞、根霉素、罗谷亚胺、rohitukine、rubiginone B1、ruboxyl、沙芬戈、saintopin、sarcophytol A、沙格司亭、索布佐生、索纳明、磷乙天冬氨酸(sparfosic acid)、spicamycin D、螺莫司汀、stipiamide、sulfinosine、他莫司汀、替加氟、替莫唑胺、替尼泊苷、thaliblastine、噻可拉林、替拉扎明、托泊替康、topsentin、曲西立滨、三甲曲沙、veramine、长春瑞滨、vinxaltine、伏氯唑、折尼铂和zilascorb等。
在一些实施方案中，细胞毒素是由式(IV)表示的吡咯并苯二氮卓二聚体：
Figure BDA0003495552300001031
多种接头可用于将本文所述的识别并结合CD2或CD5的抗体和抗原结合片段与细胞毒性分子缀合。
如本文所用，术语“接头”是指包含共价键或原子链的二价化学部分，其使抗CD5或CD2抗体或其片段(Ab)共价连接至药物部分(D)以形成本公开的抗体-药物缀合物(ADC；Ab-Z-L-D，其中D是细胞毒素)。合适的接头具有两个反应性末端，一个用于与抗体缀合，另一个用于与细胞毒素缀合。接头的抗体缀合反应性末端(反应性部分，Z)通常是能够通过抗体上的半胱氨酸巯基或赖氨酸胺基团与抗体缀合的位点，因此其通常是巯基反应性基团，如双键(如在马来酰亚胺中)或离去基团，如氯、溴、碘或R-sulfanyl，或胺反应性基团，如羧基；而接头的抗体缀合反应性末端通常是能够通过与细胞毒素上的碱性胺或羧基形成酰胺键而与细胞毒素缀合的位点，因此其通常是羧基或碱性胺基。当术语“接头”用于描述缀合形式的接头时，由于接头和/或细胞毒素之间以及接头和/或抗体或其抗原结合片段之间的键的形成，一个或两个反应性末端将是不存在的(如反应性部分Z，已经转化为化学部分Z)或不完整的(如仅仅是羧酸的羰基)。此类缀合反应将在下面进一步描述。
多种接头可用于将本文所述的抗体或抗体片段与细胞毒性分子缀合。在一些实施方案中，接头在细胞内条件下是可裂解的，使得接头的裂解在细胞内环境中从抗体中释放药物单元。在其他实施方案中，接头单元是不可裂解的，并且药物通过例如抗体降解而释放。对本发明ADC有用的接头优选在细胞外稳定，防止ADC分子的聚集，并保持ADC在水性介质中自由溶解和处于单体状态。在转运或递送入细胞之前，ADC优选是稳定的并保持完整，即抗体保持与药物部分连接。接头在靶细胞外是稳定的，并且可以在细胞内以某种有效的速率裂解。有效的接头将会：(i)维持抗体的特异性结合特性；(ii)允许缀合物或药物部分的细胞内递送；(iii)保持稳定和完整，即不裂解，直到将缀合物递送或转运到其靶定位点；和(iv)维持细胞毒性部分的细胞毒性、细胞杀伤作用或细胞抑制作用。ADC的稳定性可以通过标准分析技术来测量，如质谱法、HPLC和分离/分析技术LC/MS。抗体和药物部分的共价连接要求接头具有两个反应性官能团，即在反应性意义上的二价性。用于连接两个或更多个功能性或生物活性部分，如肽、核酸、药物、毒素、抗体、半抗原和报告基团的二价接头试剂是已知的，并且已经描述了它们所得的缀合物的方法(Hermanson,G.T.(1996)Bioconjugate Techniques；Academic Press:New York,p.234-242)。
合适的可裂解接头包括那些可以通过例如酶水解、光解、酸性条件下的水解、碱性条件下的水解、氧化、二硫化物还原、亲核裂解或有机金属裂解来裂解的接头(参见，例如Leriche et al.,Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012，当其涉及适合共价缀合的接头时，其公开内容通过引用并入本文)。
在酸性条件下可水解的接头包括例如腙、缩氨基脲、缩氨基硫脲、顺乌头酰胺、原酸酯、缩醛、缩酮等(参见，例如，美国专利号5,122,368；5,824,805；5,622,929；Dubowchik和Walker,1999,Pharm.Therapeutics 83:67-123；Neville et al.,1989,Biol.Chem.264:14653-14661，当其涉及适合共价缀合的接头时其各自公开内容通过引用完整并入本文。此类接头在中性pH条件下相对稳定，如血液中的接头，但在低于pH5.5或5.0(溶酶体的近似pH)时不稳定。
在还原条件下可裂解的接头包括，例如二硫化物。多种二硫化物接头在本领域中是已知的，包括，例如可以使用SATA(N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代乙酸酯)、SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯)、SPDB(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫)丁酸酯)和SMPT(N-琥珀酰亚胺基-氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫)甲苯)、SPDB和SMPT(参见，例如Thorpe et al.,1987,Cancer Res.47:5924-5931；Wawrzynczak et al.,InImmunoconjugates:Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer(C.W.Vogel ed.,Oxford U.Press,1987；还可见美国专利号4,880,935，当其涉及适合共价缀合的接头时其各自的公开内容通过引入完整并入本文)形成的接头。
可用于合成药物-抗体缀合物的接头的实例包括那些含有亲电体，例如迈克尔受体(例如马来酰亚胺)、活化酯、缺电子羰基化合物和醛等的接头，其适合与存在于抗体或抗原结合片段中的亲核取代基，例如胺和硫醇部分反应。例如，适用于合成药物-抗体缀合物的接头包括但不限于琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-L-羧酸酯(SMCC)、N-琥珀酰亚胺基碘乙酸酯(SIA)、sulfo-SMCC、间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、sulfo-MBS和琥珀酰亚胺基碘乙酸酯以及其他描述于例如Liu et al.，18：690-697，1979中的接头，当它涉及用于化学缀合的接头时其公开内容通过引用并入本文。额外的接头包括不可裂解的马来酰亚胺基己酰基接头，其特别适用于微管破坏剂如瑞奥西汀的缀合，其描述于Doronina et al.Bioconjugate Chem.17：14-24.2006，当其涉及用于化学缀合的接头时其公开内容通过引用并入本文。适用于合成如本文所述的药物-抗体缀合物的另外接头包括那些能够通过1，6-消除过程(“自消除”基团)释放细胞毒素的接头，如对氨基苯甲醇(PABC)，6-马来酰亚胺己酸、pH敏感性碳酸盐和Jain et al.，Pharm.Res.32：3526-3540，2015中描述的其他试剂，其公开内容通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，接头包括“自消除”基团，如前述的PAB或PABC(对氨基苄氧羰基)，其在例如Carl et al.，J.Med.Chem.(1981)24：479-480；Chakravarty et al(1983)J.Med.Chem.26：638-644；US6214345；US20030130189；US20030096743；US6759509；US20040052793；US6218519；US6835807；US6268488；US20040018194；W098/13059；US20040052793；US6677435；US5621002；US20040121940；W02004/032828)中公开。能够进行该过程的其他此类化学部分(“自消除接头”)包括亚甲基氨基甲酸酯和杂芳基，如氨基噻唑、氨基咪唑、氨基嘧啶等。例如，在美国专利公开号20160303254和20150079114和美国专利号7，754，681；Hay et al.(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9：2237；US 2005/0256030；de Groot et al(2001)J.Org.Chem.66：8815-8830和US 7223837中公开了含有此类杂环自消除基团的接头。
对酶水解敏感的接头可以是例如被细胞内肽酶或蛋白酶裂解的含肽接头，包括但不限于溶酶体或内体蛋白酶。使用治疗剂的细胞内蛋白水解释放的一个优点是当缀合时药剂通常是减弱的，并且缀合物的血清稳定性通常较高。在一些实施方案中，肽基接头是至少两个氨基酸长或至少三个氨基酸长。示例性氨基酸接头包括二肽、三肽、四肽或五肽。合适的肽的实例包括含有氨基酸如缬氨酸、丙氨酸、瓜氨酸(Cit)、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸和甘氨酸的肽。构成氨基酸接头组分的氨基酸残基包括天然存在的氨基酸残基，以及次要氨基酸和非天然存在的氨基酸类似物，如瓜氨酸。示例性二肽包括缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)和丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)。示例性三肽包括甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。在一些实施方案中，接头包括二肽，例如Val-Cit、Ala-Val或Phe-Lys、Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Phe-Arg或Trp-Cit。含有二肽如Val-Cit或Phe-Lys的接头公开在例如美国专利号6,214,345中，当其涉及适合共价缀合的接头时其公开内容通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，接头包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，二肽与自消除接头组合使用。
适于将本文所述的抗体、抗体片段与细胞毒性分子缀合的接头包括那些能够通过1，6-消除过程释放细胞毒素的接头。能够进行这种消除过程的化学部分包括对氨基苄基(PAB)基团、6-马来酰亚胺基己酸、pH敏感的碳酸盐和Jain et al.，Pharm.Res.32：3526-3540，2015中描述的其他试剂，当其涉及适合共价缀合的接头时其公开内容通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中，接头包括“自消除”基团，如前述的PAB或PABC(对氨基苄氧羰基)，其公开在例如Carl et al.，J.Med.Chem.(1981)24：479-480；Chakravarty et al(1983)J.Med.Chem.26：638-644；US 6214345；US20030130189；US20030096743；US6759509；US20040052793；US6218519；US6835807；US6268488；US20040018194；W098/13059；US20040052793；US6677435；US5621002；US20040121940；W02004/032828)中。能够进行该过程的其他此类化学部分(“自消除接头”)包括亚甲基氨基甲酸酯和杂芳基，如氨基噻唑、氨基咪唑、氨基嘧啶等。在例如，美国专利公开号20160303254和20150079114和美国专利号7，754，681；Hay et al.(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9：2237；US 2005/0256030；de Grootet al(2001)J.Org.Chem.66：8815-8830和US 7223837中公开了含有此类杂环自消除基团的接头。在一些实施方案中，二肽与自消除接头组合使用。
合适的接头可以含有具有溶解性增强性质的基团。例如，包括(CH2CH2O)p单元(聚乙二醇，PEG)的接头可以增强溶解性，用氨基、磺酸、膦酸或磷酸残基取代的烷基链也可以增强溶解性。包括此类部分的接头公开在例如美国专利号8，236，319和9，504，756中，当其它涉及适合共价缀合的接头时其各自的公开内容通过引用并入本文。其他溶解性增强基团包括，例如酰基和氨基甲酰基磺酰胺基团，其具有以下结构：
Figure BDA0003495552300001071
其中a是0或1；和
R10选自氢、C1-C24烷基、C3-C24环烷基、C1-C24(杂)芳基、C1-C24烷基(杂)芳基和C1-C24(杂)芳烷基、C1-C24烷基、C3-C24环烷基、C2-C24(杂)芳基、C3-C24烷基(杂)芳基和C3-C24(杂)芳烷基，其中每个可以被选自O、S和NR11R12的一个或多个杂原子任选地取代和/或任选地中断，其中R11和R12独立地选自氢和C1-C4烷基；或R10是细胞毒素，其中该细胞毒素任选地经由间隔部分连接至N。例如，在美国专利号9，636，421和美国专利申请公开号2017/0298145中描述了含有此类基团的接头，当其涉及适合于与细胞毒素和抗体或其抗原结合片段共价缀合的接头时，其公开内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，接头可包括下列一种或多种：肼、二硫化物、硫醚、二肽、对氨基苄基(PAB)基团、杂环自消除基团、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、任选取代的C2-C6炔基、任选取代的C2-C6杂炔基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、溶解性增强基团、酰基、-(C＝O)-或-(CH2CH2O)p-基团，其中p是1-6的整数。本领域技术人员将认识到，所列的一个或多个基团可以以二价(双自由基)种类的形式存在，例如C1-C6亚烷基等。
在一些实施方案中，接头L包含*-L1L2-**部分，其中：
L1不存在或为-(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)mNR13-、-(CH2)mX3(CH2)m-、
Figure BDA0003495552300001081
L2不存在或为-(CH2)m-、-NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-X4、-(CH2)mNR13C(＝O)X4、-(CH2)mNR13C(＝O)-、-((CH2)mO)n(CH2)m-、-((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-NR13((CH2)mO)nX3(CH2)m-、-NR13((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-X1X2C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)mNR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mNR13(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mO)n(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mNR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-、-(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-((CH2)mO)n(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13-、-(CH2)mX3-、-C(R13)2(CH2)m-、-(CH2)mC(R13)2NR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)NR13-、-(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-C(R13)2(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(R13)2NR13-、-C(R13)2(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(R13)2NR13-、-C(R13)2(CH2)mOC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)O(CH2)mC(R13)2NR13-、-(CH2)mX3(CH2)mNR13-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2)mNR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2CH2O)n(CH2)m-、-(CH2)m(OCH2CH2)n；-(CH2)mO(CH2)m-、-(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mX3(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mX2X1C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mNR13C(＝O)((CH2)mO)n(CH2)m-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)NR13(CH2)m-或-(CH2)mX3(CH2)mNR13C(＝O)-；
其中
X1为
Figure BDA0003495552300001091
X2为
Figure BDA0003495552300001101
X3为
Figure BDA0003495552300001102
和
X4为
Figure BDA0003495552300001103
其中
R13在每种情况下独立地选自H和C1-C6烷基；
m在每种情况下独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10；
n在每种情况下独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14；和
其中单星号(*)表示与细胞毒素(例如，鹅膏毒素)的连接点，并且双星号(**)表示与反应性取代基Z’或化学部分Z的连接点，条件是L1和L2并非都不存在。
在一些实施方案中，接头包括对氨基苄基(PAB)。在一个实施方案中，对氨基苄基置于细胞毒性药物和接头中的蛋白酶裂解位点之间。在一个实施方案中，对氨基苄基是对氨基苄基氧羰基单元的一部分。在一个实施方案中，对氨基苄基是对氨基苄基氨基单元的一部分。
在一些实施方案中，接头包含PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施方案中，接头包含下列一种或多种的组合：肽，寡糖，-(CH2)p-、-(CH2CH2O)p-、PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施方案中，接头包含-(C＝O)(CH2)p-单元，其中p是1-6的整数。
在一个具体的实施方案中，接头包含以下结构：
Figure BDA0003495552300001111
其中波浪线表示与细胞毒素和反应性部分Z’的连接点。在另一个具体实施方案中，接头包含以下结构：
Figure BDA0003495552300001112
其中波浪线表示与细胞毒素和反应性部分Z’的连接点。此类PAB-二肽-丙酰基接头公开在例如专利申请公开号WO2017/149077中，其内容通过引用整体并入本文。进一步，WO2017/149077中公开的细胞毒素通过引用并入本文。
在某些实施方案中，ADC的接头是马来酰亚胺基己酰基-Val-Ala-对氨基苄基(mc-Val-Ala-PAB)。
在某些实施方案中，ADC的接头是马来酰亚胺基己酰基-Val-Cit-对氨基苄基(mc-vc-PAB)。
在一些实施方案中，接头包含
Figure BDA0003495552300001113
在一些实施方案中，接头包含MCC(4-[N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-羧酸酯)。
本领域技术人员将认识到，本文公开的任何一个或多个化学基团、部分和特征可以以多种方式组合，以形成可用于如本文公开的抗体和细胞毒素缀合的接头。例如，在美国专利申请公开号2015/0218220中描述了与本文所述的组合物和方法结合使用的其他接头，其公开内容通过引用整体并入本文。
适于本文使用的接头进一步可包括一种或多种选自以下的基团：C1-C6亚烷基、C1-C6杂亚烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6杂亚烯基、C2-C6亚炔基、C2-C6杂亚炔基、C3-C6亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基、杂亚芳基及其组合，其每个可以是任选取代的。此类基团的非限制性实例包括(CH2)n，(CH2CH2O)n和-(C＝O)(CH2)n-单元，其中n是1-6的整数，在每种情况下独立选择。
在一些实施方案中，接头可包括下列一种或多种：肼、二硫化物、硫醚、二肽、对氨基苄基(PAB)基团、杂环自消除基团、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基，任选取代的C2-C6炔基、任选取代的C2-C6杂炔基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、酰基、-(C＝O)-或-(CH2CH2O)n-基，其中n是1-6中的整数。本领域技术人员将认识到，所列的一个或多个基团可以以二价(双自由基)种类的形式存在，例如C1-C6亚烷基等。
在一些实施方案中，接头包括对氨基苄基(PAB)。在一个实施方案中，对氨基苄基置于细胞毒性药物和接头中的蛋白酶裂解位点之间。在一个实施方案中，对氨基苄基是对氨基苄基氧羰基单元的一部分。在一个实施方案中，对氨基苄基是对氨基苄基氨基单元的一部分。
在一些实施方案中，接头包含PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施方案中，接头包含下列一种或多种的组合：肽，寡糖，-(CH2)n-、-(CH2CH2O)n-、PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施方案中，接头包含-(C＝O)(CH2)n-单元，其中n是1-6的整数。
在一些实施方案中，接头包含-(CH2)n-单元，其中n是2-6的整数。
在某些实施方案中，ADC的接头是N-β-马来酰亚胺丙基-Val-Ala-对氨基苄基(BMP-Val-Ala-PAB)。
可用于将抗体或其抗原结合片段与细胞毒剂缀合的接头包括在接头的一端与细胞毒剂共价结合并且在接头的另一端含有化学部分的那些，该化学部分由接头上存在的反应性取代基与结合CD2或CD5的抗体或其抗原结合片段中存在的反应性取代基之间的偶联反应形成。可存在于结合CD2或CD5的抗体或其抗原结合片段中的反应性取代基包括但不限于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基的羟基部分；赖氨酸残基的氨基部分；天冬氨酸和谷氨酸残基的羧基部分；和半胱氨酸残基的巯基部分，以及非天然存在的氨基酸的炔丙基、叠氮基、卤代芳基(例如，氟芳基)、卤代杂芳基(例如，氟代杂芳基)、卤代烷基和卤代杂烷基部分。
可用于合成药物-抗体缀合物的接头的实例包括含有亲电体，例如迈克尔受体(例如马来酰亚胺)、活化酯、缺电子羰基化合物和醛的那些，以及适合与存在于抗体或抗原结合片段中的亲核取代基，如胺和硫醇部分反应的那些。例如，适用于合成药物-抗体缀合物的接头包括但不限于琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-L-羧酸酯(SMCC)、N-琥珀酰亚胺基碘乙酸酯(SIA)、sulfo-SMCC、间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、sulfo-MBS和琥珀酰亚胺基碘乙酸酯以及其他描述于例如Liu et al.，18：690-697，1979中的接头，当其涉及用于化学缀合的接头时，其公开内容通过引用并入本文。额外的接头包括不可裂解的马来酰亚胺基己酰基接头，其特别适用于微管破坏剂如瑞奥西汀的缀合，其描述于Doronina et al.Bioconjugate Chem.17：14-24，2006中，当其涉及用于化学缀合的接头时其公开内容通过引用并入本文。
本领域技术人员将认识到，本文公开的任何一个或多个化学基团、部分和特征可以以多种方式组合，以形成可用于如本文公开的抗体和细胞毒素缀合的接头。例如，在美国专利申请公开号2015/0218220中描述了与本文所述的组合物和方法结合使用的其他接头，其公开内容通过引用整体并入本文。
可用于与本文所述的抗体-药物缀合物缀合的接头包括但不限于含有通过如下表2中描述的偶联反应形成的化学部分Z的接头。波浪线表示抗体或抗原结合片段和细胞毒性分子的连接点。
表2.在抗体-药物缀合物的形成中通过偶联反应形成的示例性化学部分
Figure BDA0003495552300001131
Figure BDA0003495552300001141
Figure BDA0003495552300001151
Figure BDA0003495552300001161
Figure BDA0003495552300001171
本领域技术人员将认识到，附接到接头上的反应性取代基Z和抗体或其抗原结合片段上的反应性取代基参与共价偶联反应以产生化学部分Z，并将识别反应性取代基Z。因此，可结合本文所述方法使用的抗体-药物缀合物可通过抗体或其抗原结合片段与接头或细胞毒素-接头缀合物的反应形成，如本文所述，接头或细胞毒素-接头缀合物包括反应性取代基Z，适于与抗体或其抗原结合片段上的反应性取代基反应，以形成化学部分Z。
在一些实施方案中，Z’是-NR13C(＝O)CH＝CH2、-N3、-SH、-S(＝O)2(CH＝CH2)、-(CH2)2S(＝O)2(CH＝CH2)、-NR13S(＝O)2(CH＝CH2)、-NR13C(＝O)CH2R14、-NR13C(＝O)CH2Br、-NR13C(＝O)CH2I、-NHC(＝O)CH2Br、-NHC(＝O)CH2I、-ONH2、-C(O)NHNH2、-CO2H、-NH2、-NH(C＝O)、-NC(＝S)
Figure BDA0003495552300001181
Figure BDA0003495552300001191
其中
R13在每种情况下独立地选自H和C1-C6烷基；
R14是-S(CH2)nCHR15NHC(＝O)R13；
R15为R13或-C(＝O)OR13；
R16在每种情况下独立地选自H、C1-C6烷基、F、Cl和-OH；
R17在每种情况下独立地选自H、C1-C6烷基、F、Cl、-NH2、-OCH3、-OCH2CH3、-N(CH3)2、-CN、-NO2和-OH；并且
R18在每种情况下独立地选自H、C1-C6烷基、F、被-C(＝O)OH取代的苄氧基、被-C(＝O)OH取代的苄基、被-C(＝O)OH取代的C1-C4烷氧基和被-C(＝O)OH取代的C1-C4烷基。
m在每种情况下独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10；并且
n在每种情况下独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14。
如表2所示，接头和抗体或其抗原结合片段上合适的反应性取代基的实例包括亲核体/亲电体对(例如硫醇/卤代烷基对、胺/羰基对、或硫醇/α,β-不饱和羰基对等)、二烯/亲二烯体对(例如叠氮化物/炔对、或二烯/α,β-不饱和羰基对等)等。反应性取代基之间形成化学部分Z的偶联反应包括但不限于硫醇烷基化、羟基烷基化、胺烷基化、胺或羟胺缩合、肼形成、酰胺化、酯化、二硫化物形成、环加成(例如，[4+2]Diels-Alder环加成、[3+2]Huisen环加成等)、亲核芳族取代、亲电芳族取代和本领域已知或本文所述的其他反应形式。优选地，接头包含亲电官能团，用于与抗体或其抗原结合片段上的亲核官能团反应。
可以在如本文所公开的抗体或其抗原结合片段中存在的反应性取代基包括但不限于亲核基团，如(i)N-末端胺基，(ii)侧链胺基，例如赖氨酸，(iii)侧链硫醇基，例如半胱氨酸，和(iv)糖羟基或氨基，其中抗体被糖基化。可以在如本文所公开的抗体或其抗原结合片段中存在的反应性取代基包括但不限于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基的羟基部分；赖氨酸残基的氨基部分；天冬氨酸和谷氨酸残基的羧基部分；和半胱氨酸残基的硫醇部分；以及非天然存在的氨基酸的炔丙基、叠氮基、卤代芳基(例如氟代芳基)、卤代杂芳基(例如氟代杂芳基)、卤代烷基和卤代杂烷基部分。在一些实施方案中，可以在如本文公开的抗体或其抗原结合片段中存在的反应性取代基包括胺或硫醇部分。某些抗体具有可还原的链间二硫化物，即半胱氨酸桥。可以通过用还原剂如DTT(二硫苏糖醇)处理而使抗体变为反应性以与接头试剂缀合。因此，理论上，每个半胱氨酸桥将形成两个反应性硫醇亲核体。另外的亲核基团可以通过赖氨酸与2-亚氨基噻吩(Traut试剂)的反应而被引入抗体，导致胺转化为硫醇。可以通过引入一个、两个、三个、四个或更多个半胱氨酸残基(例如，制备包含一个或多个非天然半胱氨酸氨基酸残基的突变抗体)而将反应性硫醇基引入抗体(或其片段)。美国专利号7,521,541教导了通过引入反应性半胱氨酸氨基酸来工程化改造抗体。
在一些实施方案中，附接到接头的反应性部分Z是亲核基团，其与抗体上存在的亲电基团具有反应性。抗体上有用的亲电基团包括但不限于醛和酮羰基。亲核基团的杂原子可以与抗体上的亲电基团反应，并与抗体形成共价键。有用的亲核基团包括但不限于酰肼、肟、氨基、羟基、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯和芳酰肼。在一些实施方案中，Z是抗体或其抗原结合片段中存在的反应性亲核取代基(如胺和硫醇部分)与反应性亲电取代基Z之间的反应的产物。例如，Z可以是麦克尔受体(例如马来酰亚胺)、活化酯、缺电子羰基化合物和醛等。
在一些实施方案中，ADC包含经由接头和化学部分Z与如本文所公开的式I、IA、IB、II、IIA或IIB中任一种的鹅膏毒素缀合的抗CD2抗体或抗CD5抗体。在一些实施方案中，接头包括二肽。在一些实施方案中，接头包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，接头包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，接头包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，接头包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，接头包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n是1-6的整数。在一些实施方案中，接头是-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。
在一些实施方案中，接头包括-(CH2)n-单元，其中n是2-6的整数。在一些实施方案中，接头是-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，接头是-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，接头是-(CH2)n-。在一些实施方案中，接头是-((CH2)n-，其中n是6。
在一些实施方案中，化学部分Z选自表2。在一些实施方案中，化学部分Z是
Figure BDA0003495552300001211
其中S是硫原子，其代表结合CD2或CD5的抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)。
在一些实施方案中，接头L和化学部分Z一起作为L-Z，是
Figure BDA0003495552300001221
本领域技术人员将认识到，在与抗体或其抗原结合片段缀合之前，接头反应性取代基结构包括作为基团Z的马来酰亚胺。可用于本文所述的组合物和方法的缀合的上述接头部分和鹅膏毒素-接头缀合物等描述于例如美国专利申请公开号2015/0218220和专利申请公开号WO2017/149077，其各自公开内容通过引用以其整体并入本文。
在一些实施方案中，在与抗体或其抗原结合片段缀合之前的接头-反应性取代基结构是：
Figure BDA0003495552300001222
抗体-药物缀合物的制备
在如本文公开的式I的ADC中，抗体或其抗原结合片段通过本文公开的接头L和化学部分Z与一个或多个细胞毒性药物部分(D)缀合，例如每个抗体约1至约20个药物部分。本公开的ADC可以通过多种途径制备，采用本领域技术人员已知的有机化学反应、条件和试剂，包括：(1)抗体或其抗原结合片段的反应性取代基与二价连接试剂反应形成如上文描述的Ab-Z-L，随后与药物部分D反应；或(2)药物部分的反应性取代基与二价接头试剂反应以形成D-L-Z，随后与如上文所述的抗体或其抗原结合片段的反应性取代基反应已形成式D-L-Z-Ab的ADC，如Am-Z-L-Ab。本文描述了制备ADC的另外方法。
在另一方面，抗体或其抗原结合片段具有一个或多个赖氨酸残基，其可被化学修饰以引入一个或多个巯基。然后，如上所述，通过经由巯基的硫原子缀合而形成ADC。可用于修饰赖氨酸的试剂包括但不限于N-琥珀酰亚胺基S-乙酰硫代乙酸酯(SATA)和2-亚氨基噻吩盐酸盐(Traut试剂)。在另一方面，抗体或其抗原结合片段可以具有一个或多个碳水化合物基团，其可以被化学修饰以具有一个或多个巯基。然后，如上所述，通过经由巯基的硫原子缀合而形成ADC。
在又一方面，抗体可具有一个或多个可被氧化以提供醛基(-CHO)的碳水化合物基团(参见，例如Laguzza,et al.,J.Med.Chem.1989,32(3),548-55)。然后，如上所述，通过经由相应的醛缀合而形成ADC。用于细胞毒素附接或结合的蛋白质修饰的其他方案记载于Coligan et al.,Current Protocols in Protein Science,vol.2,John Wiley&Sons(2002)，其通过引用并入本文。将接头-药物部分与细胞靶向蛋白如抗体、免疫球蛋白或其片段缀合的方法可参见例如美国专利号5,208,020；美国专利号6,441,163；WO2005037992；WO2005081711；和WO2006/034488，其都通过引用整体并入本文。
或者，可以例如通过重组技术或肽合成来制备包含抗体和细胞毒性剂的融合蛋白。DNA的长度可以包含编码缀合物的两个部分的各自区域，它们彼此相邻或者被编码不破坏缀合物的期望性质的接头肽的区域分开。
治疗方法
抗CD2或抗CD5 ADC可用于靶向患者胸腺中的T细胞，其中T细胞特异性ADC可用于消耗内源性T细胞并“重新启动”受试者的免疫系统。
体内T细胞消耗通常使用化疗来实现，如抗胸腺细胞球蛋白(ATG)。本方法实现了T细胞消耗，同时保持受试者的免疫系统完整。T细胞消耗可用于治疗已经或计划进行造血干细胞(HSC)移植，如自体HSC移植的受试者。
如本文所述，可对需要治疗的受试者施用造血干细胞移植物疗法，以使一种或多种血细胞类型定殖或重建。造血干细胞通常表现出多潜能，并因此可分化成多种不同的血液谱系，包括但不限于粒细胞(例如，早幼粒细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如，网织红细胞、红细胞)、凝血细胞(例如，巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞)。造血干细胞还具有自我更新的能力，因此能够产生子细胞，该子细胞具有与母细胞相同的潜力，并且还具有被重新引入移植受体，随后在移植受体中归巢于造血干细胞小生境并重新建立生产性和持续性造血的能力。
因此，可将造血干细胞施用于造血谱系的一种或多种细胞类型有缺陷或不足的患者，以在体内重建有缺陷或不足的细胞群体，从而治疗与内源性血细胞群体中的缺陷或消耗相关的病状。因此，本文所述的组合物和方法可用于治疗非恶性血红蛋白病(例如，选自下组的血红蛋白病：镰状细胞性贫血、地中海贫血、范科尼贫血、再生障碍性贫血和维斯科特-奥尔德里奇综合征)。另外地或替代地，本文所述的组合物和方法可用于治疗免疫缺陷，如先天性免疫缺陷。另外地或替代地，本文所述的组合物和方法可用于治疗获得性免疫缺陷(例如，选自HIV和AIDS的获得性免疫缺陷)。本文所述的组合物和方法可用于治疗代谢病症(例如，选自下组的代谢病症：糖原贮积病、粘多糖贮积症、戈谢病、Hurlers病、鞘脂沉积症和异染性脑白质营养不良)。
另外地或替代地，本文所述的组合物和方法可用于治疗恶性肿瘤或增殖性疾病，如血液学癌症、骨髓增殖性疾病。在癌症治疗的情况下，本文所述的组合物和方法可在造血干细胞移植物疗法之前施用于患者，以便消耗与非自身造血干细胞(如表达一种或多种非自身MHC抗原的那些)发生交叉反应并产生针对其的免疫应答的免疫细胞群。这用于防止或减少移植的造血干细胞移植物排斥的可能性，从而允许移植的造血干细胞归巢于干细胞小生境并建立生产性造血功能。反过来，这可以重建在癌细胞根除期间如在全身化疗期间消耗的细胞群。可使用本文所述的组合物和方法治疗的示例性血液学癌症包括但不限于急性髓性白血病、急性淋巴样白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴样白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，以及其他癌性病况，包括神经母细胞瘤。
抗CD2或抗CD5抗体药物缀合物(ADC)可用于治疗与异常T细胞活性相关的病症。例如，抗CD2 ADC或抗CD5 ADC可用于治疗T细胞恶性肿瘤(例如，影响T细胞的淋巴瘤)，其中将有效量的抗CD2或抗CD5 ADC施用于具有T细胞恶性肿瘤的受试者以减少恶性T细胞的生长或增殖。“T细胞恶性肿瘤”是在T细胞中形成的癌症。特别地，本文公开的方法可用于治疗患有与CD5+表达相关的T细胞恶性肿瘤的患者。在某些实施方案中，恶性T细胞表达CD5+，因此采用抗CD5 ADC的的治疗靶向并消耗恶性T细胞，从而产生治疗益处。在某些实施方案中，T细胞恶性肿瘤是复发性、难治性T细胞恶性肿瘤。可以使用本文公开的方法治疗的T细胞恶性肿瘤的实例包括T细胞急性成淋巴细胞性淋巴瘤(T-ALL；也称为前体T淋巴细胞白血病或T细胞急性淋巴细胞白血病)、T细胞大颗粒淋巴细胞(LGL)白血病、人T细胞白血病病毒1型阳性(HTLV-1+)、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATL)、T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)和外周T细胞淋巴瘤(PTCL)。
在某些实施方案中，抗CD2 ADC或抗CD5 ADC可用于治疗患有T细胞淋巴瘤的人类患者。可以使用本文公开的方法和组合物治疗的T细胞淋巴瘤的实例包括但不限于儿童T细胞系统性EBV+T细胞淋巴瘤，结外NK-/T-细胞淋巴瘤，鼻型、肠病相关T细胞淋巴瘤，单形性上皮性肠T细胞淋巴瘤，惰性T细胞、胃肠道淋巴组织增生性疾病，肝脾T细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、Sézary综合征、原发性皮肤CD30+T-细胞、淋巴增生性疾病(例如，淋巴瘤样丘疹病、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤)、原发性皮肤γδT细胞淋巴瘤、原发性皮肤CD8+侵袭性嗜表皮细胞毒性T细胞淋巴瘤、原发性皮肤肢端CD8+T细胞淋巴瘤、原发性皮肤CD4+小/中型T细胞淋巴增殖性疾病、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、滤泡性T细胞淋巴瘤、伴有TFH表型的淋巴结外周T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤(ALK+)、间变性大细胞淋巴瘤(ALK-)和乳房植入物相关的间变性大细胞淋巴瘤。
在一些实施方案中，患有T细胞恶性肿瘤的人类患者通过施用抗CD5 ADC，例如经由接头与本文所述的鹅膏毒素缀合的抗CD5抗体来治疗。
在一些实施方案中，患有T细胞恶性肿瘤的人类患者通过施用抗CD2 ADC，例如经由接头与本文所述的鹅膏毒素缀合的抗CD2抗体来治疗。
可以用本文所述的组合物和方法治疗的疾病包括但不限于腺苷脱氨酶缺乏和严重的联合免疫缺陷、高免疫球蛋白M综合征、切迪亚克-东氏病、遗传性淋巴组织细胞增多症、骨硬化症、成骨不全症、储藏疾病、重型地中海贫血、系统性硬化、系统性红斑狼疮、多发性硬化和幼年类风湿性关节炎。
本文所述的抗CD5或CD2 ADC可用于诱导实体器官移植耐受。例如，本文所述的组合物和方法可用于在造血干细胞移植之前消耗或消融免疫细胞群。在从靶组织中消耗此类细胞之后，可以将来自器官供体的干细胞或祖细胞群(例如，来自器官供体的造血干细胞)施用于移植物接受者，并且在此类干细胞或祖细胞植入之后，可以实现暂时或稳定的混合嵌合，从而实现长期的移植器官耐受性，而无需进一步的免疫抑制剂。通过施用抗-CD2 ADC或抗CD5 ADC，可以降低移植物排斥的可能性，或者可以完全防止排斥。这样，本文所述的组合物和方法可用于在实体器官移植物受体(例如，肾移植、肺移植、肝移植和心脏移植等)中诱导移植耐受。本文所述的组合物和方法非常适合用于诱导实体器官移植耐受，例如，因为低百分比的临时或稳定供体移植足以诱导移植器官的长期耐受。
此外，本文所述的组合物和方法可用于直接治疗癌症，如以CD2+或CD5+细胞为特征的癌症。例如，本文所述的组合物和方法可用于治疗白血病，尤其在展示出CD2+或CD5+白血病细胞的患者中。通过消耗CD2+或CD5+癌细胞，如白血病细胞，本文所述的组合物和方法可用于直接治疗各种癌症。可以以这种方式治疗的示例性癌症包括血液学癌症，如急性髓性白血病、急性淋巴样白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴样白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，
此外，本文所述的组合物和方法可用于治疗自身免疫性疾病。本文公开的方法和组合物也可用于显著消耗患有自身免疫性疾病，如但不限于多发性硬化、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)或系统性硬化症(SSc)的受试者胸腺中的内源性CD5+或CD2+T细胞。例如，可以将抗体或其抗原结合片段施用于受试者，如患有自身免疫性疾病的人类患者，以杀伤CD2+或CD5+免疫细胞。CD2+或CD5+免疫细胞可以是自身反应性淋巴细胞，如表达T细胞受体的T细胞，该T细胞受体特异性结合自身抗原并产生针对自身抗原的免疫应答。通过消耗自反应性CD2+或CD5+细胞，本文所述的组合物和方法可用于治疗自身免疫性病理，如下文所述的那些。另外地或替代地，本文所述的组合物和方法可用于通过在造血干细胞移植物疗法之前消耗内源性造血干细胞群来治疗自身免疫性疾病，在这种情况下，移植的细胞可归巢到由内源性细胞消耗步骤产生的小生境并建立生产性造血。这反过来又可以重建在自身免疫细胞清除期间消除的细胞群。
可使用本文所述的组合物和方法治疗的自身免疫性疾病包括但不限于银屑病、银屑病关节炎、1型糖尿病(1型糖尿病)、类风湿性关节炎(RA)、人系统性红斑狼疮(SLE)、多发性硬化(MS)、炎性肠病(IBD)、淋巴细胞性结肠炎、急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、阿狄森病、普秃、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征(APS)、再生障碍性贫血、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病(AIED)、自身免疫性淋巴增生综合征(ALPS)、自身免疫性卵巢炎、Balo病、Behcet病、大疱性类天疱疮、心肌病、Chagas病、慢性疲劳性免疫功能障碍综合征(CFIDS)、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、克罗恩病、瘢痕性类天疱疮、乳糜泻-疱疹样皮炎、冷凝集素病、CREST综合征、Degos病、盘状狼疮、神经异常、子宫内膜异位症、原发性混合冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、古德牧场综合征、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征(GBS)、桥本甲状腺炎、化脓性汗腺炎、特发性和/或急性血小板减少性紫癜、特发性肺纤维化、IgA神经病变、间质性膀胱炎、青少年关节炎、川崎病、扁平苔藓、莱姆病、梅尼埃病、混合结缔组织病(MCTD)、重症肌无力、神经肌强直、视阵挛肌阵挛综合征(OMS)、视神经炎、奥德氏甲状腺炎、寻常型天疱疮、恶性贫血、多发性软骨炎、多发性肌炎和皮肌炎、原发性胆汁性肝硬化、结节性多动脉炎、多腺综合征、风湿性多肌痛、原发性无丙种球蛋白血症、雷诺现象、赖特综合征、风湿热、结节病、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、Takayasu动脉炎、颞动脉炎(也称为“巨细胞动脉炎”)、溃疡性结肠炎、胶原性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜风、外阴痛(“外阴前庭炎”)和Wegener肉芽肿。
例如，使用本文所述的组合物和方法，本领域技术人员可以向患有自身免疫性疾病的受试者施用足以治疗自身免疫性病理的量的抗CD2 ADC或抗CD5 ADC。例如，受试者可能患有硬皮病、多发性硬化症、溃疡性结肠炎、克罗恩病和/或1型糖尿病。为了改善这些病况中的一种或多种，本领域的技术人员可以开出抗CD2 ADC或抗CD5 ADC的处方并向受试者施用。抗CD2 ADC或抗CD5 ADC可用于消耗受试者体内的内源性、自身反应性CD2+T细胞或NK细胞群，或内源性、自身反应性CD5+T细胞、B细胞或NK细胞群。
在一些实施方案中，抗CD5 ADC或抗CD2 ADC用于消耗自身反应性CD5+或CD2+T细胞子集，如Th1或Th17细胞。在一些实施方案中，可使用缀合至鹅膏毒素的抗CD5抗体或其抗原结合部分来消耗患有自身免疫性疾病(如但不限于多发性硬化症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)或系统性硬化症(SSc))的人类受试者中的Th1或Th17细胞。在一些实施方案中，可使用缀合至鹅膏毒素的抗CD2抗体或其抗原结合部分来消耗患有自身免疫性疾病(如但不限于多发性硬化症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)或系统性硬化症(SSc))的人类受试者中的Th1或Th17细胞。T细胞亚群(包括Th1和Th17)在自身免疫中的作用在例如Hirahara和Nakayama,Int.Immunol.28(4):163-171,2016；Raphael et al.,Cytokine 71(1):5-17,2015；以及Sun和Zhang,Adv.Exp.Med.Biol.841:1-13,2014中综述，其教导通过引用整体并入。
在一些实施方案中，将抗CD5 ADC或抗CD2 ADC施用于患有Th1介导的自身免疫性疾病如多发性硬化症的人类患者以进行治疗。“Th1介导的自身免疫性疾病”是其中有害的Th1淋巴细胞活性与该疾病相关的自身免疫性疾病。
在其他实施方案中，将抗CD5 ADC或抗CD2 ADC施用于患有Th17介导的自身免疫性疾病，如多发性硬化症的人类患者以进行治疗。“Th17介导的自身免疫性疾病”是其中有害的Th17淋巴细胞活性与该疾病相关的自身免疫性疾病。此类疾病的实例包括但不限于多发性硬化症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)或系统性硬化症(SSc)。Zambramo-Zambramo-Zaragoza et al.(2014)Int J Inflam.,vol,2014,article ID 651503中描述了Th17细胞在炎症和自身免疫性疾病中的作用。
在准备疗法时，医生可以评估从受试者分离的样品中自身反应性T细胞、B细胞和/或NK细胞的数量或浓度。这可以例如使用本领域已知的FACS分析技术来完成。本领域技术人员然后可以向受试者施用单独的或与细胞毒素缀合的抗体或其片段，以消耗自身反应性T细胞、B细胞和/或NK细胞的群。为了评估疗法的效果，在施用抗CD2 ADC或抗CD5 ADC之后，医生可以确定从患者分离的样品中自身反应性T细胞、B细胞和/或NK细胞的数量或浓度。所确定的疗法后从受试者分离的样品中自身反应性T细胞、B细胞和/或NK细胞的数量或浓度相对于疗法前T细胞、B细胞或NK细胞的数量或浓度指示了患者对抗CD2 ADC或抗CD5 ADC产生响应。
包含抗CD2抗体或其抗原结合片段(或抗CD5抗体或其抗原结合片段)的抗体药物缀合物也可以与CAR T疗法联合使用。具体而言，可以在CAR T治疗之前将有效量的抗CD2抗体药物缀合物(抗CD5抗体药物缀合物)施用于需要其的患者以消耗天然T细胞。使用本文所述的方法和组合物消耗表达CD2或CD5的天然T细胞可以提供用于CAR T疗法的工程化T细胞的更有效转移。
本文所述的方法和组合物还可用于治疗急性和慢性形式的移植物抗宿主病(GVHD)，其包括类固醇难治性GVHD，例如类固醇难治性急性GVHD。GVHD是包括同种异体干细胞移植(SCT)在内的移植的主要并发症之一。本文公开的组合物可用于选择性地靶向已接受、正在接受或将要接受移植物如干细胞移植物的患者中的活化T细胞。本文所述的抗CD5ADC或抗CD2 ADC可用于通过靶向和消耗已经接受、正在接受或将要接受移植物(如但不限于HSC移植物)的人类患者中的CD5+或CD2+阳性细胞来降低GVHD的风险。
在某些实施方案中，本文公开的组合物和方法用于在移植疗法例如同种异体HSC后患者出现GVHD症状之前治疗GVHD。在一些实施方案中，本文所述的方法和组合物可用于治疗类固醇难治性GVHD。虽然许多患者的GVHD可以通过大剂量类固醇得到控制，但一些患者会对类固醇治疗产生耐药性，导致预后不良。通过使用抗原特异性ADC消耗CD5+T细胞或CD2+ T细胞，当类固醇失效时，可以治疗类固醇难治性GVHD。可以使用西奈山急性GVHD国际联盟(MAGIC)标准提供的分级系统来衡量GVHD(例如，急性GVHD或类固醇难治性急性GVHD)的改善。因此，在一个实施方案中，将有效量的抗CD2或抗CD5 ADC施用于患有GVHD(例如，急性GVHD或类固醇难治性急性GVHD)的受试者导致受试者的MAGIC评分提高。
施用途径和剂量
ADC可以以多种剂型施用于患者(例如，需要造血干细胞移植物疗法的人类患者)。例如，ADC可以以水溶液的形式，如含有一种或多种药学上可接受的赋形剂的水溶液施用于需要造血干细胞移植物疗法和/或患有癌症或自身免疫性疾病的患者。用于本文所述的组合物和方法的示例性药学上可接受的赋形剂是粘度调节剂。可以使用本领域已知的技术对水溶液进行灭菌。
ADC可以通过多种途径施用，如口服、经皮、皮下、鼻内、静脉内、肌内、眼内或肠胃外。在任何给定情况下，最合适的施用途径将取决于施用的ADC、患者、药物制剂方法、施用方法(例如施用时间和施用途径)、患者的年龄、体重、性别、所治疗疾病的严重程度、患者的饮食和患者的排泄率。
ADC的有效剂量可以为例如约0.001至约100mg/kg(例如约0.001mg/kg至约0.01mg/kg、约0.01mg/kg至约0.1mg/kg、约0.1mg/kg至约1mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约10mg/kg至约100mg/kg)的体重每单次(例如，推注)施用、多次施用或连续施用，或达到最佳血清浓度(例如，血清浓度为约0.0001至约500001清浓度、约0.0001-0.001食和患者的、约0.001-0.0101食和患、约0.01-0.10101食、约0.1-10.101、约1-1010.10、约10-100.1010、约100-10000101食、约1000-2000101食和、约2000-3000101食和或约3000-5000101食和)的抗体或其抗原结合片段。该剂量可以每天、每周或每月一次或多次(例如，约2-10次)施用于正在接受预处理治疗以准备接受造血干细胞移植物的受试者(例如，人)。ADC可以在最佳促进外源性造血干细胞植入的时间施用于患者，例如，在造血干细胞移植前，在最佳地消耗与非自身造血干细胞抗原(例如，造血干细胞表达的非自身MHC抗原)交叉反应的CD2+(或CD5+)T细胞、B细胞或NK细胞的时间。例如，抗CD2 ADC或抗CD5 ADC可在施用外源性造血干细胞移植物之前约1小时至约1周(例如，约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天，或约7天；或约1至3天；约1至4天；约12小时至3天)或更长时间施用于进行造血干细胞移植物疗法的患者。抗体的半衰期可以在约1小时至约24小时之间(例如，约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时)。
在一个实施方案中，抗CD2 ADC或抗CD5 ADC具有缩短的半衰期(与包含具野生型Fc区的抗体的ADC相比)，其中抗体的Fc区包含H435A突变(根据EU索引编号)。
根据本文公开的方法，本领域技术医生可以调理患者，如人类患者，以便在造血干细胞移植治疗之前促进外源性造血干细胞移植物的植入。为此，本领域技术医生可以向人类患者施用能够结合CD2或CD5的抗体或其抗原结合片段，如本文所述的抗CD2 ADC。抗体或其片段可共价缀合至毒素，如本文所述或本领域已知的细胞毒性分子，或Fc结构域。例如，抗CD2 ADC可以共价缀合至细胞毒素，如假单胞菌外毒素A、deBouganin、白喉毒素、鹅膏毒素(如α-鹅膏蕈碱)、皂草素、美登素、美登素类化合物(maytansinoid)、瑞奥西汀、蒽环类药物、卡奇霉素、伊立替康、SN-38、倍癌霉素、吡咯并苯二氮卓、吡咯并苯二氮卓二聚体、吲哚并苯二氮卓、吲哚并苯二氮卓二聚体或其变体。这种缀合可以使用本文所述或本领域已知的共价键形成技术实施。随后可以在移植外源性造血干细胞(如自体、同源或同种异体造血干细胞)之前将抗体、其抗原结合片段或抗体-药物缀合物施用于患者，例如通过静脉内施用给患者。
抗CD2或抗CD5抗体-药物缀合物可以在造血干细胞移植治疗之前以足以减少内源性T细胞、B细胞和/或NK细胞(如骨髓驻留T细胞)的量施用，例如减少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约10％至90％、约10％至70％、约10％至60％，或更多。例如，抗CD2或抗CD5 ADC可以在造血干细胞移植治疗之前以足以减少内源性T细胞、B细胞和/或NK细胞(如骨髓驻留T细胞)的量施用，例如减少约10％-20％、约20-30％、约30-40％、约40-50％、约50-60％、约60-70％、约70％-80％、约80％-90％、约90％-95％或更多。例如，抗CD2或抗CD5抗体-药物缀合物可以在造血干细胞移植治疗之前以足以减少内源性T细胞、B细胞和/或NK细胞(如骨髓驻留T细胞)的量施用，例如减少至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或更多。可以使用本领域已知的常规技术，如通过对在调理疗法期间以不同的时间间隔从患者抽取的血液样品中的表达特征性T细胞表面抗原的细胞进行FACS分析来监测T细胞计数的减少。例如，本领域技术医生可以在调理疗法期间的不同时间点从患者抽取骨髓样品，并通过使用与T细胞标记物抗原结合的抗体进行FACS分析来确定样品中T细胞的相对浓度，从而确定内源性T细胞减少的程度。根据一些实施方案，当响应于用抗CD2或抗CD5抗体-药物缀合物的调理疗法，T细胞浓度达到最小值时，医生可以结束调理疗法，并且可以开始使患者准备造血干细胞移植物疗法。
抗CD2或抗CD5抗体-药物缀合物可以以含有一种或多种药学上可接受的赋形剂(如粘度调节剂)的水溶液施用于患者。可以使用本文所述或本领域已知的技术对水溶液进行灭菌。抗体-药物缀合物可以在施用造血干细胞移植物至患者之前以例如约0.001mg/kg至约100mg/kg(例如，约0.001mg/kg至约0.01mg/kg、约0.01mg/kg至约0.1mg/kg、约0.1mg/kg至约1mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约10mg/kg至约100mg/kg)的剂量施用于患者。抗体-药物缀合物可以在最佳促进外源性造血干细胞移植的时间施用于患者，例如在施用外源性造血干细胞移植物之前约1小时至约1周(例如约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天)或更长时间施用于患者。
在调理疗法结束后，患者然后可以接受外源性造血干细胞的输注(例如，静脉内输注)，如来自实施调理疗法的同一医生或来自不同医生的输注。医生可以给患者输注自体、同源或同种异体造血干细胞，例如，以约1x103至约1x109造血干细胞/kg(例如，约1x103干细胞至约1x104，约1x104造血干细胞至约1x105，约1x105造血干细胞至约1x106，约1x106造血干细胞至约1x107或约1x108造血干细胞至约1x109)的剂量输注。医生可以监测造血干细胞移植物的植入，例如，在移植物施用后通过从患者抽取血样并确定造血干细胞或造血谱系细胞(如巨核细胞、凝血细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成肌细胞、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞)浓度的增加。例如，可以在造血干细胞移植物疗法后约1小时至约6个月或更长时间(例如，约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约11周、约12周、约13周、约14周、约15周、约16周、约17周、约18周、约19周、约20周、约21周、约22周、约23周、约24周或更长)进行该分析。在移植疗法后相对于移植疗法前相应细胞类型的浓度，造血干细胞或造血谱系细胞的浓度增加(例如，增加约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约200％、约500％或更多)的发现提供了以下指示：用抗CD2或抗CD5抗体-药物缀合物治疗已成功促进了移植的造血干细胞移植物的植入。
实施例
提出以下实施例是为了向本领域普通技术人员提供如何使用、制备和评估本文所述的组合物和方法的描述，并且旨在纯粹是示例性的而不旨在限制发明人认为他们的发明的范围。
实施例1：抗CD2抗体的体外结合分析。
为了确定抗CD2抗体RPA-2.10mIgG1和Ab1 hIgG1的结合特征，在25摄氏度下，使用生物层干涉仪(BLI)使用Pall ForteBio Octet Red96在添加了0.1％w/v牛血清白蛋白的1xPBS中进行抗体结合研究。将指定的纯化的人(Ab1-hIgG1)或鼠(RPA-2.10mIgG1)抗体固定在抗人Fc生物传感器(AHC；Pall ForteBio 18-5063)或抗鼠Fc生物传感器(AMQ；PallForteBio 18-5090)上，并且与50nM纯化的人CD2胞外域(Sigma Aldrich and Catalog#5086)温育。表观单价亲和力(KD)、表观结合率(KON)和表观解离率(KDIS)由1:1结合模型的局部完全拟合确定，如通过ForteBio数据分析软件版本10对每种IgG与纯化的人CD2胞外域的计算，其在表3中显示。
实施例2至6中提供了抗CD2抗体的进一步表征。
表3：指定的IgG与人CD2胞外域的结合动力学
Figure BDA0003495552300001331
实施例2：抗CD2抗体的体外细胞系结合分析
以20,000个细胞/孔将MOLT-4细胞(即永生化人T淋巴母细胞细胞系)铺板，并用滴定的指定的鼠抗CD2抗体(即RPA-2.10、TS1/8、BH1、UMCD2、1E7E8.G4或LT2)在4℃下染色2小时。在4℃下加入恒定量的二级抗小鼠AF488染色剂持续30分钟。洗涤后，板在流式细胞仪上运行，并基于AF488通道中的几何平均荧光强度确定指定抗体(和阴性对照，即mIgG1)的结合。图1提供了这些测定的结果。
如图1所示，鼠抗CD2抗体RPA-2.10、TS1/8、BH1、UMCD2、1E7E8.G4和LT2与人T淋巴母细胞(即MOLT-4细胞)结合，EC50＝160pM(RPA-2.10)、125pM(TS1/8)、639pM(BH1)、151pM(UMCD2)、134pM(1E7E8)和60pM(LT2)。
实施例3：抗CD2抗体的体外原代细胞结合分析
将原代人T细胞以8x104个细胞/孔铺板，并在37℃下用滴定的鼠抗CD23抗体RPA-2.10染色2小时。在4℃以恒定的量加入相对于一抗的二抗抗小鼠或抗人AF488染色剂持续30分钟。洗涤后，板在流式细胞仪上运行，并基于AF488通道中的几何平均荧光强度确定所示抗体(和阴性对照，即mIgG1或hIgG1)的结合。图2提供了这些测定的结果。
如图2所示，鼠抗CD2抗体RPA-2.10与原代人T细胞结合，EC50＝1.84pM(RPA-2.10)。
实施例4.使用体外T细胞杀伤测定对抗CD2鹅膏蕈碱抗体药物缀合物(ADC)进行体外分析
使用可裂解接头将抗CD2抗体RPA 2.10与鹅膏蕈碱缀合以形成抗CD2-ADC。由鼠抗CD2抗体RPA-2.10制备的一种抗CD2-ADC，其平均链间药物抗体比(DAR)为6。使用使用位点特异性缀合与鹅膏蕈碱缀合的RPA-2.10的人嵌合变体制备的第二种抗CD2-ADC，其平均DAR为2。进一步，通过引入H435A突变产生了抗CD2-ADC的快速半衰期变体。使用体外T细胞杀伤测定评估每种抗CD2-ADC。
将冷冻保存的阴性选择的原代人T细胞解冻并用抗CD3抗体和IL-2刺激。在测定开始时，在384孔板的每个孔中接种2x104个T细胞，并以0.003nm和30nm之间的不同浓度将指定的ADC或未缀合抗CD2抗体添加到孔中，然后放入37℃和5％CO2的培育箱。培养五天后，通过流式细胞术分析细胞。细胞用活力标记物7-AAD染色并在体积流式细胞仪上运行。通过FSC对SSC和7-AAD染色确定存活的T细胞的数量(图3A和3B)。未缀合的抗CD2抗体(RPA2.10)用作比较物(图3A)。
如图3A所示，链间药物抗体比为6的抗CD2-ADC展示出对T细胞的强效和特异性杀伤(IC50＝5.0pm)，而T细胞在未缀合(“裸”)的抗CD2抗体的存在下保持存活。如图3B所示，位点特异性药物抗体比为2的人嵌合抗CD2-ADC保留了与DAR 6ADC相似的强效T细胞杀伤水平(IC50＝1.0pm)。进一步，抗CD2-ADC(H435A)的快速半衰期变体展示出与具有WT半衰期的抗CD2-ADC相似的T细胞杀伤水平(IC50＝6.3pm；图3B)。
实施例5.使用体外T细胞杀伤测定对抗CD2-鹅膏蕈碱抗体药物缀合物(ADC)进行体外分析
用可裂解接头将抗CD2抗体RPA 2.10与鹅膏蕈碱缀合以形成平均链间药物抗体比(DAR)为6的链间抗CD2-ADC。使用体外自然杀伤(NK)细胞杀伤测定来评估该抗CD2-ADC。
将原代人CD56+CD3-NK细胞与重组IL-2和IL-15一起培养四天。在测定开始时，将来自健康人类供体的30,000个新鲜分离的NK细胞接种到384孔板的每孔中，并以0.003nm和30nm之间各种浓度将指定的ADC或对照(即IgG1或IgG1-鹅膏蕈碱ADC)添加到孔中，然后放入37℃和5％CO2的培育箱中。培养4天后，通过CellTiter-Glo测定分析NK细胞活力(图4)。
如图4所示，抗CD2-ADC表现出对NK细胞的强效杀伤，IC50为5.2pM。抗CD2-ADC缺乏完全杀伤与CD2仅在约75％的NK细胞上表达这一事实是一致的。
实施例6.使用hNSG小鼠模型分析T细胞消耗
使用人源化NSG小鼠(Jackson Laboratories)进行体内T细胞消耗测定。用可裂解接头将抗CD2抗体RPA 2.10与鹅膏蕈碱缀合以形成抗CD2-ADC。用鼠RPA 2.10制备一种抗CD2-ADC，其平均链间药物抗体比(DAR)为6，而用人嵌合RPA2.10制备另一种抗CD2-ADC，其平均位点特异性DAR为2。每种抗CD2-ADC(DAR6和DAR2)作为单次静脉注射施用于人源化小鼠模型(DAR6 ADC为0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg，和DAR2 ADC为1mg/kg或3mg/kg)。在第7天收集外周血细胞、骨髓或胸腺样品，并通过流式细胞术确定CD3+T细胞的绝对数量(对于DAR2 ADC参见图5A和5B，对于DAR6 ADC参见图6A-6C)。
如图5A-5B所示，用0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg链间DAR6抗CD2-ADC治疗的人源化NSG小鼠在外周血或骨髓中展示出强效的T细胞消耗，而胸腺T细胞在3mg/kg DAR6抗CD2-ADC治疗后被消耗。为了比较，图5A和5B还显示了用25mg/kg Ab1(未缀合的抗CD2抗体)或用指定的对照(即25mg/kg抗CD52抗体(克隆YTH34.5)；3mg/kg hIgG1-鹅膏蕈碱ADC(“hIgG1-AM”)、25mg/kg hIgG1或PBS)治疗人源化NSG小鼠后的T细胞消耗水平。
如图6A-6C所示，用1mg/kg或3mg/kg位点特异性DAR2抗CD2-ADC治疗的人源化NSG小鼠在外周血或骨髓中展示出强效的T细胞消耗，而胸腺T细胞在3mg/kg DAR2抗CD2-ADC治疗后表现出约59％的消耗。为了比较，图6A-6C还显示了用3mg/kg未缀合的抗CD2抗体或用指定的对照(即3mg/kg hIgG1-鹅膏蕈碱-ADC(“hIgG1-AMC”)或PBS)治疗人源化NSG小鼠后的T细胞消耗水平。
实施例7：抗CD5抗体的体外结合分析。
为了确定抗CD5抗体5D7 hIgG1的结合特征，在25摄氏度下，使用生物层干涉仪(BLI)使用Pall ForteBio Octet Red96在补充有0.1％w/v牛血清白蛋白的1xPBS中进行抗体结合研究。将纯化的人抗CD5抗体(5D7)固定在抗人Fc生物传感器(AHC；Pall ForteBio18-5063)上，并与50nM的纯化人CD5胞外域一起温育。抗CD5抗体5D7的结合特征显示在表4中。实施例7至11中使用的抗人CD5抗体5D7是鼠抗体5D7的人源化形式(参见US 2008/0254027)。如本文所用的抗体5D7的序列描述于SEQ ID NO:282和283(重链和轻链可变区氨基酸序列)和SEQ ID NO:54至59(重链和轻链CDR)。
表4：5D7与人CD5胞外域的结合动力学
Figure BDA0003495552300001361
实施例8：抗CD5抗体的体外细胞系结合分析
MOLT-4细胞(即永生化人T淋巴母细胞细胞系)以20,000个细胞/孔铺板，并用滴定的指定的鼠抗CD5抗体(即L17F12、UCHT2、205919和CRIS-1)在4℃下染色2小时。在4℃下加入恒定量的二抗抗小鼠AF488染色剂持续30分钟。洗涤后，板在流式细胞仪上运行，并基于AF488通道中的几何平均荧光强度确定指定的抗体(和阴性对照，即mIgG1)的结合。这些测定的结果在图7中提供。
如图7所示，鼠抗CD5抗体L17F12(Thermo Fisher)、UCHT2(BioLegend)、205919(Novus Biologicals)和CRIS-1(Novus Biologicals)与人T淋巴母细胞(即MOLT-4细胞)结合，EC50＝207pM(L17)、354pM(UCH)、1350pM(205)和43pM(CRIS)。
实施例9：抗CD5抗体的体外原代细胞结合分析
将原代人T细胞以8x104个细胞/孔铺板，并用滴定的人抗CD5抗体5D7在37℃下染色2小时。在4℃下加入恒定量的二抗抗小鼠AF488染色剂持续30分钟。洗涤后，板在流式细胞仪上运行，并基于AF488通道中的几何平均荧光强度确定抗CD5 5D7抗体(和阴性对照，即hIgG1)的结合。这些测定的结果在图8中提供。
如图8所示，抗CD5抗体5D7与原代人T细胞结合，EC50＝3.0pM。
实施例10.使用体外T细胞杀伤测定对抗CD5-鹅膏毒素抗体药物缀合物(ADC)进行体外分析
用可裂解接头将抗CD5抗体5D7与鹅膏毒素(鹅膏蕈碱)缀合以形成抗CD5 5D7ADC。测试了药物抗体比(DAR)为约6(链间DAR6)的抗CD5 5D7 ADC，以及DAR为约2的抗CD55D7-ADC(使用经由D265C突变的位点特异性缀合制备)。进一步，通过在Fc区内引入H435A突变，产生了抗CD5 5D7-ADC的快速半衰期变体。
使用体外人T细胞杀伤测定进行评估每个抗CD5 5D7-ADC。
将冷冻保存的阴性选择的原代人T细胞解冻并用抗CD3抗体和IL-2刺激。在测定开始时，在384孔板的每个孔中接种2x104个T细胞，并以0.003nm和30nm之间的不同浓度将指定的ADC或未缀合抗CD5抗体添加到孔中，然后放入37℃和5％CO2的培育箱。培养五天后，通过流式细胞术分析细胞。细胞用活力标记物7-AAD染色并在体积流式细胞仪上运行。
通过FSC对SSC和7-AAD确定存活的T细胞的数量(图9A和9B)。未缀合的抗CD5抗体(RPA 2.10)用作比较物(图9A)。
如图9A所示，链间药物抗体比约为6的抗CD5 5D7-ADC展示出对人T细胞的强效和特异性杀伤(IC50＝3.7pm)，而T细胞在未缀合(“裸”)的抗CD5 5D7抗体的存在下保持存活。如图9B所示，位点特异性(D265C)DAR为约2的ADC保留了与DAR6 ADC相似的强效T细胞杀伤水平(IC50＝5.0pm)。抗CD5 5D7-ADC(H435A)的快速半衰期变体展示出相似水平的T细胞杀伤(IC50＝4.9pm；图9B)。
实施例11.使用hNSG小鼠模型分析T细胞消耗
使用人源化NSG小鼠(Jackson Laboratories)进行体内T细胞消耗测定。用可裂解接头将抗CD5抗体5D7与鹅膏毒素(鹅膏蕈碱)缀合以形成抗CD5 5D7-ADC。如上所述，将抗CD5 5D7-ADC制备成约6的DAR或约2的DAR。每种抗CD5 5D7 ADC(DAR6或DAR2)作为单次静脉注射施用于人源化小鼠模型(DAR6 ADC为0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg，或DAR2 ADC为1mg/kg或3mg/kg)。在第7天收集外周血细胞、骨髓或胸腺样品，并通过流式细胞术确定CD3+T细胞的绝对数量(对于DAR2 ADC参见图10A和10B，对于DAR6 ADC参见图11A-11C)。
如图10A-10B所示，用0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg DAR6抗CD5 5D7-ADC治疗的人源化NSG小鼠在外周血或骨髓中展示出强烈的T细胞消耗，而胸腺T细胞在1mg/kg或3mg/kgDAR6抗CD5 5D7-ADC治疗后被消耗。在该体内实验中使用的阴性对照包括不特异于CD5的人IgG1(作为裸抗体(huIgG1)并缀合至鹅膏毒素(huIgG1-AM)。如图10A至10B中所述，huIgG1裸和缀合的对照对外周血(图10A)和骨髓(图10B)中的T细胞消耗没有影响，因为这些对照与PBS对照相当。抗CD52抗体(抗体YTH34.5)也用作对照，并且还能够以25mg/kg的剂量消耗外周和骨髓T细胞。
如图11A-11C所示，用1mg/kg位点或3mg/kg位点特异性DAR2抗CD5 5D7-ADC治疗的人源化NSG小鼠在外周血、骨髓和胸腺T细胞中展示出强效的T细胞消耗。在图11A至11C的每一个中，裸抗体5D7也用作对照。如图11A中所述，抗体5D7能够消耗外周T细胞(相对于非特异性人IgG1对照或PBS)，但不能消耗骨髓T细胞或胸腺T细胞，而在如图11B和11C所述，5D7-AM ADC在消耗骨髓和胸腺两方面是有效的。
实施例12.抗CD5 ADC在极化条件下消耗Th1和Th17细胞亚群
Th1和Th17被认为在许多自身免疫性疾病如MS和RA中发挥致病作用。为了测试抗CD2和抗CD5 ADC消耗Th1和Th17细胞的能力，在极化条件下进行了体外测定。
在极化条件下，在存在抗CD2或抗CD5 ADC的情况下，将原代人T细胞培养6天。对于Th1分化，在存在aCD3、aCD28、rhIFNg、IL-12、IL27和aIL-4的情况下培养原代T细胞。对于Th17分化，在存在aCD3、aCD28、rhIL-5、IL-1B、TGF-B1、IL-23、aIL-4和aIFNg的情况下培养原代T细胞。实验中使用的抗CD5 ADC(也称为CD5-AM)是经由不可裂解的马来酰亚胺接头与鹅膏毒素(由式(II)表示)缀合的抗CD5抗体5D7。如本文所用的抗体5D7的序列描述于序列表中(参见5D7 CDR和人源化5D7的表)。实验中使用的抗CD2 ADC(也称为CD2-AM)是经由不可裂解的马来酰亚胺接头与鹅膏毒素(由式(II)表示)缀合的抗体RPA-2.10人IgG。抗CD2抗体和抗CD5抗体都含有突变D265C和H435A(EU索引)。在第6天，用PMA、离子霉素、转运抑制剂刺激细胞持续4小时，并对细胞内IFNg和IL-17进行染色。
如图12A和12B所示，抗CD5 ADC和抗CD2 ADC分别以个位数皮摩尔浓度消耗Th1和Th17细胞。图12A显示抗CD5 ADC和抗CD2 ADC能够以2.73pM的IC50消耗Th1细胞，如IFNg信号下降所表明的，表明Th1细胞消耗。同种型对照抗体不能消耗Th1细胞。类似地，图12B表明，抗CD5 ADC和抗CD2 ADC都能够以2.53pM的IC50消耗Th17细胞，如IL-17信号下降所示，表明Th17细胞消耗。同种型对照抗体不能消耗Th17细胞。
实施例13.抗CD5 ADC延长T-ALL PDX小鼠模型的生存
在这项研究中，前T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)的患者衍生异种移植物(PDX)模型用于检查抗CD5 ADC和抗CD2 ADC对小鼠存活的与同种型和载体对照相比的功效。异种移植物的细胞表达CD5+和CD2+(数据未显示)。本实施例中使用的抗CD5 ADC和抗CD2 ADC均描述于实施例12中。当小鼠的外周肿瘤负荷达到5％时，用单剂量的抗CD2 ADC或抗CD5 ADC以6mg/kg的剂量治疗小鼠。
如图13A和13C所示，与同种型和载体对照相比，抗CD5 ADC和抗CD2 ADC分别能够将存活延长20天以上。此外，单剂量的抗CD5 ADC或抗CD2 ADC所赋予的存活显示出与阳性对照(化疗Ara-C)相当，并且明显比标准治疗(地塞米松)更有效(图13A和图13C)。如图13B和图13D所示，与同种型和载体对照相比，抗CD5 ADC和抗CD2 ADC也分别降低了小鼠的肿瘤负荷。
实施例14.抗CD5 ADC在异种移植物模型中预防急性GvHD
以下实验确定了抗CD5 ADC预防急性移植物抗宿主病(GVHD)的功效。实施例12中提供了抗CD5 ADC的描述。
在移植外周血单核细胞(PBMC)(第0天)前一天(第-1天)对人源化NSG小鼠进行辐照。第二天，用单剂量的抗CD5 ADC(6mg/kg)治疗小鼠。
如图14A所示，在用抗CD5-ADC治疗的小鼠中观察到轻微的体重减轻(BWL)，然而，至移植后第13天观察到恢复。如图14B所示，抗CD5-ADC在该模型中赋予了80％的持续存活。
表5：序列概括
Figure BDA0003495552300001411
Figure BDA0003495552300001421
Figure BDA0003495552300001431
Figure BDA0003495552300001441
Figure BDA0003495552300001451
其他实施方案
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请都通过引用并入本文，其程度与每个独立出版物或专利申请被具体和单独地通过引用并入的程度相同。
尽管本发明已结合其特定实施方案进行了描述，但应当理解，它能够进行进一步修改，并且本申请旨在涵盖本发明的任何变化、使用或改编，通常遵循本发明的原理且包括本发明所属领域内的已知或惯常实践范围内的本发明的此类偏离，并且可以应用于上文阐述的基本特点，并且在权利要求的范围内。
其他实施方案在权利要求范围内。
序列表
<110> 美真达治疗公司
<120> T细胞消耗疗法
<130> M103034 2170WO
<140>
<141>
<150> 62/857,744
<151> 2019-06-05
<160> 287
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 1
Glu Tyr Tyr Met Tyr
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 2
Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Ser Ile Asp Tyr Val Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Lys
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 3
Gly Lys Phe Asn Tyr Arg Phe Ala Tyr
1 5
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 4
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 5
Leu Val Ser Lys Leu Glu Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 6
Met Gln Phe Thr His Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 7
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Ser Ile Asp Tyr Val Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Lys Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Phe Asn Tyr Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 8
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Leu Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Pro Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Glu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Gly Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Phe
85 90 95
Thr His Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 9
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Gln Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Glu Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Leu Val
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Glu Asp Gly Ser Ile Asp Tyr Val Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Lys Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Lys Phe Asn Tyr Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 10
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Leu Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Pro Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Glu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Gly Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Phe
85 90 95
Thr His Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 11
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Glu Asn Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Gly Ala Val Ser Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105
<210> 13
<211> 351
<212> PRT
<213> 智人
<400> 13
Met Ser Phe Pro Cys Lys Phe Val Ala Ser Phe Leu Leu Ile Phe Asn
1 5 10 15
Val Ser Ser Lys Gly Ala Val Ser Lys Glu Ile Thr Asn Ala Leu Glu
20 25 30
Thr Trp Gly Ala Leu Gly Gln Asp Ile Asn Leu Asp Ile Pro Ser Phe
35 40 45
Gln Met Ser Asp Asp Ile Asp Asp Ile Lys Trp Glu Lys Thr Ser Asp
50 55 60
Lys Lys Lys Ile Ala Gln Phe Arg Lys Glu Lys Glu Thr Phe Lys Glu
65 70 75 80
Lys Asp Thr Tyr Lys Leu Phe Lys Asn Gly Thr Leu Lys Ile Lys His
85 90 95
Leu Lys Thr Asp Asp Gln Asp Ile Tyr Lys Val Ser Ile Tyr Asp Thr
100 105 110
Lys Gly Lys Asn Val Leu Glu Lys Ile Phe Asp Leu Lys Ile Gln Glu
115 120 125
Arg Val Ser Lys Pro Lys Ile Ser Trp Thr Cys Ile Asn Thr Thr Leu
130 135 140
Thr Cys Glu Val Met Asn Gly Thr Asp Pro Glu Leu Asn Leu Tyr Gln
145 150 155 160
Asp Gly Lys His Leu Lys Leu Ser Gln Arg Val Ile Thr His Lys Trp
165 170 175
Thr Thr Ser Leu Ser Ala Lys Phe Lys Cys Thr Ala Gly Asn Lys Val
180 185 190
Ser Lys Glu Ser Ser Val Glu Pro Val Ser Cys Pro Glu Lys Gly Leu
195 200 205
Asp Ile Tyr Leu Ile Ile Gly Ile Cys Gly Gly Gly Ser Leu Leu Met
210 215 220
Val Phe Val Ala Leu Leu Val Phe Tyr Ile Thr Lys Arg Lys Lys Gln
225 230 235 240
Arg Ser Arg Arg Asn Asp Glu Glu Leu Glu Thr Arg Ala His Arg Val
245 250 255
Ala Thr Glu Glu Arg Gly Arg Lys Pro His Gln Ile Pro Ala Ser Thr
260 265 270
Pro Gln Asn Pro Ala Thr Ser Gln His Pro Pro Pro Pro Pro Gly His
275 280 285
Arg Ser Gln Ala Pro Ser His Arg Pro Pro Pro Pro Gly His Arg Val
290 295 300
Gln His Gln Pro Gln Lys Arg Pro Pro Ala Pro Ser Gly Thr Gln Val
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His Gln Gln Lys Gly Pro Pro Leu Pro Arg Pro Arg Val Gln Pro Lys
325 330 335
Pro Pro His Gly Ala Ala Glu Asn Ser Leu Ser Pro Ser Ser Asn
340 345 350
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 14
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
1 5
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 15
Ser Gly Gly Gly Phe
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 16
Ser Ser Tyr Gly Glu Ile Met Asp Tyr
1 5
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 17
Ser Ser Tyr Gly Glu Leu Met Asp Tyr
1 5
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 18
Arg Ala Ser Gln Arg Ile Gly Thr Ser Ile His
1 5 10
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 19
Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 20
Gln Gln Ser His Gly Trp Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 21
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 21
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Gly Gly Gly Phe Leu Tyr Tyr Leu Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
His Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Ser Tyr Gly Glu Ile Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 22
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 22
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Gly Gly Gly Phe Leu Tyr Tyr Leu Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
His Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Ser Tyr Gly Glu Leu Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 23
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 23
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Thr Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Gly Trp Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu
100 105
<210> 24
<211> 324
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 24
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro
100 105 110
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
115 120 125
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
130 135 140
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
145 150 155 160
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
165 170 175
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
195 200 205
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
210 215 220
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
225 230 235 240
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
245 250 255
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
260 265 270
Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
275 280 285
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
290 295 300
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
305 310 315 320
Ser Pro Gly Lys
<210> 25
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 25
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
35 40 45
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
65 70 75 80
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100 105
<210> 26
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Glu Ser Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 27
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 27
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Lys Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Val Arg Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Arg Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr His Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Gly Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 28
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 28
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
1 5
<210> 29
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 29
Asn Thr His Thr Gly Glu
1 5
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 30
Arg Gly Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5
<210> 31
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 31
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 32
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 32
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 33
Gln Gln Tyr Asp Glu Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 34
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Glu Ser Pro Trp
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 35
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 35
Glu Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Val Arg Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr His Tyr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Ser Phe
50 55 60
Lys Gly Thr Arg Thr Phe Ser Leu Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Gly Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 36
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
1 5
<210> 37
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 37
Asn Thr His Tyr Gly Glu
1 5
<210> 38
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 38
Arg Arg Gly Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 39
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 39
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 40
Arg Ala Asn Arg Leu Glu Ser
1 5
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 41
Gln Gln Tyr Asp Glu Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 42
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Tyr
1 5
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 43
Ile Ser Tyr Ser Gly Phe Thr
1 5
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 44
Ala Gly Asp Arg Thr Gly Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 45
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 45
Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 46
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 46
Ala Thr Ser
1
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 47
Leu Gln Tyr Ala Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 48
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 48
Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr Gly
1 5
<210> 49
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 49
Ile Asn Thr Tyr Asn Gly Glu Pro
1 5
<210> 50
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 50
Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Tyr Glu Asp Tyr
1 5 10
<210> 51
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 51
Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 52
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 52
Tyr Thr Ser
1
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 53
Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 54
Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly
1 5
<210> 55
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 55
Trp Trp Asp Asp Asp
1 5
<210> 56
<211> 10
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<213> 人工序列
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<220>
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 103
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 104
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 105
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 106
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 107
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 108
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<211> 9
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 109
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<211> 17
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 110
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 111
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 112
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<210> 113
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 113
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 115
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 116
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 117
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 118
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 119
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<223> 人工序列描述：合成肽
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 121
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 122
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 123
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 124
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 125
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<211> 10
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 127
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 128
Cys Ala Arg Asn Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 129
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<210> 130
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 130
Trp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Asn Thr Arg
1 5 10
<210> 131
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 131
Cys Ala Arg Asn Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp
1 5 10
<210> 132
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 132
Ser Gly Asn Thr Phe Thr Asn Phe Tyr Leu
1 5 10
<210> 133
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 133
Cys Ile Tyr Pro Gly Asn Val Lys Thr Lys
1 5 10
<210> 134
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 134
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<210> 135
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 135
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1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 136
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr
1 5 10
<210> 137
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 137
Cys Ala Arg Arg Arg Asp Gly Asn Phe Asp Tyr Trp
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 138
Ser Glu Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 139
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<210> 140
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 140
Cys Val Arg His Gly Tyr Phe Asp Val Trp
1 5 10
<210> 141
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 141
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Arg Met
1 5 10
<210> 142
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 142
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Gly Thr His
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 143
Cys Ala Phe Tyr Asp Gly Ala Tyr Trp
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<212> PRT
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<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 144
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<223> 人工序列描述：合成肽
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Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<223> 人工序列描述：合成肽
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Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Arg
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Ser Gly Tyr Met Phe Thr Asn His Gly Met
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<220>
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<223> 人工序列描述：合成肽
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<223> 人工序列描述：合成肽
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<220>
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<223> 人工序列描述：合成肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<223> 人工序列描述：合成肽
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<223> 人工序列描述：合成肽
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<223> 人工序列描述：合成肽
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 194
Cys Gln Gln Gly Asp Ala Leu Pro Trp Thr Phe
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<211> 5
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 197
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 199
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 200
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 201
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1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 202
Tyr Gly Thr Ser Asn
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 203
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 204
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1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 205
Tyr Gly Thr Ser Asn
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<211> 11
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 206
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1 5 10
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 207
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1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 208
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 209
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<211> 5
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<223> 人工序列描述：合成肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 212
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<223> 人工序列描述：合成肽
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<223> 人工序列描述：合成肽
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Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr Phe
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 219
Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Ile
1 5
<210> 220
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 220
His Tyr Thr Ser Thr
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 221
Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr Phe
1 5 10
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 222
Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 223
Tyr Asn Ala Lys Thr
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 224
Cys Gln His His Tyr Gly Tyr Pro Tyr Thr Phe
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<210> 225
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 225
Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 226
Tyr His Thr Ser Thr
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 227
Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Leu Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 228
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 228
Ser Gln Asp Val Arg Thr Asp Val
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 229
Tyr Ser Ala Ser Phe
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 230
Cys Gln Gln His Tyr Thr Ser Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 231
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 231
Ser Gln Asp Val Ile Thr Ala Val
1 5
<210> 232
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 232
Tyr Ser Ala Ser Tyr
1 5
<210> 233
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 233
Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 234
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 234
Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Ile
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<210> 235
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 235
Lys Ser Ala Ser Glu
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 236
Cys Gln Gln Ser Asn Arg Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 237
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 237
Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10
<210> 238
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 238
Tyr Trp Ala Ser Thr
1 5
<210> 239
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 239
Cys Gln Asn Asp Tyr Asp Tyr Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 240
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 240
Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu
1 5
<210> 241
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 241
Tyr Ser Thr Ser Asn
1 5
<210> 242
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 242
Cys His Gln Tyr His Arg Ser Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 243
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 243
Ser Glu Asn Ile Tyr Tyr Asn Leu
1 5
<210> 244
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 244
Tyr Asn Ala Asn Ser
1 5
<210> 245
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 245
Cys Gln Gln Thr Phe Asp Val Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 246
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 246
Ser Gln Thr Ile Gly Thr Ser Ile
1 5
<210> 247
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 247
Lys Asn Ala Ser Glu
1 5
<210> 248
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 248
Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr Tyr
1 5 10
<210> 249
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 249
Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asp Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10
<210> 250
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 250
Tyr Trp Ala Ser Thr
1 5
<210> 251
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 251
Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Tyr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 252
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 252
Asn Ser Ser Val Ser Tyr Met
1 5
<210> 253
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 253
Tyr Asp Thr Ser Lys
1 5
<210> 254
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 254
Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe
1 5 10
<210> 255
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 255
Ser Glu Asn Ile Tyr Tyr Asn Leu
1 5
<210> 256
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 256
Tyr Asn Ala Asn Ser
1 5
<210> 257
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 257
Cys Lys Gln Ala Tyr Asp Val Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 258
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 258
Ser Ser Ser Leu Ser Tyr Met
1 5
<210> 259
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 259
Tyr Asp Thr Ser Asn
1 5
<210> 260
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 260
Cys Gln Gln Trp Ser Ser Phe Pro Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 261
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 261
Ser Gln Arg Ile Gly Thr Ser Met
1 5
<210> 262
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 262
Lys Ser Ala Ser Glu
1 5
<210> 263
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 263
Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 264
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 264
Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Ile
1 5
<210> 265
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 265
Lys Ser Ala Ser Glu
1 5
<210> 266
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 266
Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 267
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 267
Ser Gln Asn Ile Gly Thr Ser Ile
1 5
<210> 268
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 268
Lys Asp Ala Ser Glu
1 5
<210> 269
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 269
Cys Gln Gln Ser Asp Ser Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 270
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 270
Ile Ser Ser Val Ser Tyr Met
1 5
<210> 271
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 271
Tyr Ala Thr Ser Asn
1 5
<210> 272
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 272
Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Arg Thr Phe
1 5 10
<210> 273
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 273
Ser Gln Thr Ile Ala Thr Ser Ile
1 5
<210> 274
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 274
Lys Asn Ala Ser Glu
1 5
<210> 275
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 275
Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 276
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 276
Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu
1 5 10
<210> 277
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 277
Tyr Lys Val Ser Asn
1 5
<210> 278
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 278
Cys Trp Gln Asn Thr His Phe Pro Gln Thr Phe
1 5 10
<210> 279
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 279
Asn Glu Ser Val Glu Tyr Ser Gly Thr Ser Leu Met
1 5 10
<210> 280
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 280
Ser Ala Ala Ser Asn
1 5
<210> 281
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 281
Cys Gln Gln Ser Arg Gln Val Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 282
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 282
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Val Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Val Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Ala Ser Lys Asp Gln Val
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Val Arg Arg Arg Ala Thr Gly Thr Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 283
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 283
Asn Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Thr Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys His Gln Tyr Asn Ser Tyr Asn Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 284
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 284
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Glu Asn Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Gly Ala Val Ser Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 285
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 285
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105
<210> 286
<211> 438
<212> PRT
<213> 智人
<400> 286
Met Val Cys Ser Gln Ser Trp Gly Arg Ser Ser Lys Gln Trp Glu Asp
1 5 10 15
Pro Ser Gln Ala Ser Lys Val Cys Gln Arg Leu Asn Cys Gly Val Pro
20 25 30
Leu Ser Leu Gly Pro Phe Leu Val Thr Tyr Thr Pro Gln Ser Ser Ile
35 40 45
Ile Cys Tyr Gly Gln Leu Gly Ser Phe Ser Asn Cys Ser His Ser Arg
50 55 60
Asn Asp Met Cys His Ser Leu Gly Leu Thr Cys Leu Glu Pro Gln Lys
65 70 75 80
Thr Thr Pro Pro Thr Thr Arg Pro Pro Pro Thr Thr Thr Pro Glu Pro
85 90 95
Thr Ala Pro Pro Arg Leu Gln Leu Val Ala Gln Ser Gly Gly Gln His
100 105 110
Cys Ala Gly Val Val Glu Phe Tyr Ser Gly Ser Leu Gly Gly Thr Ile
115 120 125
Ser Tyr Glu Ala Gln Asp Lys Thr Gln Asp Leu Glu Asn Phe Leu Cys
130 135 140
Asn Asn Leu Gln Cys Gly Ser Phe Leu Lys His Leu Pro Glu Thr Glu
145 150 155 160
Ala Gly Arg Ala Gln Asp Pro Gly Glu Pro Arg Glu His Gln Pro Leu
165 170 175
Pro Ile Gln Trp Lys Ile Gln Asn Ser Ser Cys Thr Ser Leu Glu His
180 185 190
Cys Phe Arg Lys Ile Lys Pro Gln Lys Ser Gly Arg Val Leu Ala Leu
195 200 205
Leu Cys Ser Gly Phe Gln Pro Lys Val Gln Ser Arg Leu Val Gly Gly
210 215 220
Ser Ser Ile Cys Glu Gly Thr Val Glu Val Arg Gln Gly Ala Gln Trp
225 230 235 240
Ala Ala Leu Cys Asp Ser Ser Ser Ala Arg Ser Ser Leu Arg Trp Glu
245 250 255
Glu Val Cys Arg Glu Gln Gln Cys Gly Ser Val Asn Ser Tyr Arg Val
260 265 270
Leu Asp Ala Gly Asp Pro Thr Ser Arg Gly Leu Phe Cys Pro His Gln
275 280 285
Lys Leu Ser Gln Cys His Glu Leu Trp Glu Arg Asn Ser Tyr Cys Lys
290 295 300
Lys Val Phe Val Thr Cys Gln Asp Pro Asn Pro Ala Gly Leu Ala Ala
305 310 315 320
Gly Thr Val Ala Ser Ile Ile Leu Ala Leu Val Leu Leu Val Val Leu
325 330 335
Leu Val Val Cys Gly Pro Leu Ala Tyr Lys Lys Leu Val Lys Lys Phe
340 345 350
Arg Gln Lys Lys Gln Arg Gln Trp Ile Gly Pro Thr Gly Met Asn Gln
355 360 365
Asn Met Ser Phe His Arg Asn His Thr Ala Thr Val Arg Ser His Ala
370 375 380
Glu Asn Pro Thr Ala Ser His Val Asp Asn Glu Tyr Ser Gln Pro Pro
385 390 395 400
Arg Asn Ser His Leu Ser Ala Tyr Pro Ala Leu Glu Gly Ala Leu His
405 410 415
Arg Ser Ser Met Gln Pro Asp Asn Ser Ser Asp Ser Asp Tyr Asp Leu
420 425 430
His Gly Ala Gln Arg Leu
435
<210> 287
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 287
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Ser Pro Pro Ser Pro
1 5 10 15

Claims (40)

1.消耗患有自身免疫性疾病的受试者中的T细胞的方法，所述方法包括向患有自身免疫性疾病的受试者施用有效量的抗CD5抗体药物缀合物(ADC)或抗CD2 ADC，其中所述ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或其抗原结合片段或者抗CD2抗体或其抗原结合片段。
2.权利要求1的方法，其中所述有效量是足以大量消耗所述受试者的胸腺中的内源性CD5+或CD2+T细胞的量。
3.权利要求1或2的方法，其中所述受试者患有多发性硬化症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)或系统性硬化症(SSc)。
4.治疗患有类固醇难治性移植物抗宿主病(GVHD)或有发展GVHD风险的受试者的方法，所述方法包括向所述患有类固醇难治性GVHD的受试者施用抗CD2 ADC或抗CD5 ADC，从而治疗类固醇难治性GVHD，其中所述ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或其抗原结合片段或者抗CD2抗体或其抗原结合片段。
5.权利要求4的方法，其中所述类固醇难治性GVHD是类固醇难治性急性GVHD。
6.权利要求4或5的方法，其中所述受试者先前接受过同种异体HSC移植。
7.权利要求5或6的方法，其中所述受试者患有2级至4级类固醇难治性急性GVHD(西奈山急性移植物抗宿主病国际联盟(MAGIC)标准)。
8.权利要求7的方法，其中在施用所述抗CD2 ADC或抗CD5 ADC之后，根据所述MAGIC标准所述GVHD等级降低了一级。
9.治疗患有T细胞恶性肿瘤的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的抗CD2 ADC或抗CD5 ADC，其中所述ADC包含经由接头与细胞毒素缀合的抗CD5抗体或其抗原结合片段或者抗CD2抗体或其抗原结合片段。
10.权利要求9的方法，其中所述T细胞恶性肿瘤是淋巴瘤。
11.权利要求9的方法，其中所述T细胞恶性肿瘤是T细胞急性成淋巴细胞性淋巴瘤(T-ALL)、T细胞大颗粒淋巴细胞(LGL)白血病、人T细胞白血病病毒1型阳性(HTLV-1+)、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATL)、T细胞幼淋巴细胞白血病(T-PLL)或外周T细胞淋巴瘤(PTCL)。
12.权利要求10或11的方法，其中所述T细胞恶性肿瘤是复发性、难治性T细胞恶性肿瘤。
13.权利要求1至12中任一项的方法，其中所述ADC包含人源化抗体或人抗体。
14.权利要求1至13中任一项的方法，其中所述抗体具有选自由以下项组成的组的同种型：IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。
15.权利要求14的方法，其中所述IgG同种型是IgG1或IgG4。
16.权利要求1至15中任一项的方法，其中所述ADC是抗CD5 ADC。
17.权利要求1至15中任一项的方法，其中所述ADC是抗CD2 ADC。
18.权利要求1至17中任一项的方法，其中所述细胞毒素选自由以下项组成的组：假单胞菌外毒素A、deBouganin、白喉毒素、鹅膏毒素、皂草素、美登素、美登素类化合物、瑞奥西汀、蒽环类药物、卡奇霉素、伊立替康、SN-38、倍癌霉素、吡咯并苯二氮卓、吡咯并苯二氮卓二聚体、吲哚并苯二氮卓和吲哚并苯二氮卓二聚体。
19.权利要求1至17中任一项的方法，其中所述细胞毒素是RNA聚合酶抑制剂。
20.权利要求19的方法，其中所述RNA聚合酶抑制剂是RNA聚合酶II抑制剂。
21.权利要求19的方法，其中所述RNA聚合酶抑制剂是鹅膏毒素。
22.权利要求1至17中任一项的方法，其中所述ADC由式Ab-Z-L-Am表示，其中Ab为所述抗CD5抗体或其抗原结合片段，L为接头，Z为化学部分，以及Am是由式(I)表示的鹅膏毒素
Figure FDA0003495552290000021
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7各自独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
X是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
RD是任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、任选取代的C2-C6炔基、任选取代的C2-C6杂炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基、或任选取代的杂芳基；
L是任选取代的C1-C6亚烷基、任选取代的C1-C6杂亚烷基、任选取代的C2-C6亚烯基、任选取代的C2-C6杂亚烯基、任选取代的C2-C6亚炔基、任选取代的C2-C6杂亚炔基、任选取代的亚环烷基、任选取代的杂亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的杂亚芳基、二肽、-(C＝O)-、肽，或其组合；以及
Z是由存在于L上的反应性取代基和存在于所述抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分，
其中Am正好包含一个RC取代基。
23.权利要求22的方法，其中Am-L-Z由式(IA)表示，
Figure FDA0003495552290000041
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7各自独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
X是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
RD是任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、任选取代的C2-C6炔基、任选取代的C2-C6杂炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基、或任选取代的杂芳基；
L是任选取代的C1-C6亚烷基、任选取代的C1-C6杂亚烷基、任选取代的C2-C6亚烯基、任选取代的C2-C6杂亚烯基、任选取代的C2-C6亚炔基、任选取代的C2-C6杂亚炔基、任选取代的亚环烷基、任选取代的杂亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的杂亚芳基、二肽、-(C＝O)-、肽，或其组合；
Z是由存在于L上的反应性取代基和存在于所述抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分，
其中Am正好包含一个RC取代基。
24.权利要求23的方法，其中Am-L-Z由式(IB)表示
Figure FDA0003495552290000051
其中R1是H、OH、ORA或ORC；
R2是H、OH、ORB或ORC；
RA和RB当存在时与它们所结合的氧原子一起组合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3是H、RC或RD；
R4、R5、R6和R7各自独立地是H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8是OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9是H、OH、ORC或ORD；
X是-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC是-L-Z；
RD是任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、任选取代的C2-C6炔基、任选取代的C2-C6杂炔基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基、或任选取代的杂芳基；
L是任选取代的C1-C6亚烷基、任选取代的C1-C6杂亚烷基、任选取代的C2-C6亚烯基、任选取代的C2-C6杂亚烯基、任选取代的C2-C6亚炔基、任选取代的C2-C6杂亚炔基、任选取代的亚环烷基、任选取代的杂亚环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的杂亚芳基、二肽、-(C＝O)-、肽，或其组合；以及
Z是由存在于L上的反应性取代基和存在于所述抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分，
其中Am正好包含一个RC取代基。
25.权利要求1至17中任一项的方法，其中所述ADC由式Ab-Z-L-Am表示，其中Ab是所述抗体或其抗原结合片段，Z是化学部分，L是接头，且Am是鹅膏毒素，鹅膏毒素-接头缀合物Am-L-Z由式(II)、式(IIA)或式(IIB)表示
Figure FDA0003495552290000061
Figure FDA0003495552290000071
其中X是S、SO或SO2；
R1是H或通过化学部分Z与所述抗体或其抗原结合片段共价结合的接头，Z由所述接头上存在的反应性取代基与抗体或其抗原结合片段中存在的反应性取代基之间的偶联反应形成；以及
R2是H或通过化学部分Z与所述抗体或其抗原结合片段共价结合的接头，Z由所述接头上存在的反应性取代基与抗体或其抗原结合片段中存在的反应性取代基之间的偶联反应形成；
其中当R1是H时，R2是所述接头，当R2是H时，R1是所述接头。
26.权利要求1至17中任一项的方法，其中所述ADC的细胞毒素是美登素类化合物。
27.权利要求26的方法，其中所述美登素类化合物是DM1或DM4。
28.权利要求1至17中任一项的方法，其中所述ADC的细胞毒素是瑞奥西汀。
29.权利要求28的方法，其中所述瑞奥西汀是单甲基瑞奥西汀E(MMAE)或单甲基瑞奥西汀F(MMAF)。
30.权利要求1至17中任一项的方法，其中所述ADC的细胞毒素是蒽环类药物。
31.权利要求30的方法，其中所述蒽环类药物是柔红霉素、多柔比星、表柔比星或伊达比星。
32.权利要求1至17中任一项的方法，其中所述ADC的细胞毒素是由式(IV)表示的吡咯并苯二氮杂卓二聚体衍生物
Figure FDA0003495552290000081
33.权利要求1至32中任一项的方法，其中所述ADC在施用于所述患者之后被CD5+或CD2+免疫细胞内化。
34.权利要求1-32中任一项的方法，其中所述ADC在施用于所述患者之后被CD5+免疫细胞内化。
35.权利要求1-32中任一项的方法，其中所述ADC在施用于所述患者之后被CD2+免疫细胞内化。
36.权利要求34的方法，其中所述免疫细胞是恶性T细胞。
37.前述权利要求中任一项的方法，其中所述受试者是人。
38.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗CD5抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，所述重链包含如SEQ ID NO:282的氨基酸序列中所示的可变区，所述轻链包含包含SEQ ID NO:283中所示的氨基酸序列的可变区。
39.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗CD5抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，所述重链包含如SEQ ID NO:288的氨基酸序列中所示的可变区，所述轻链包含包含SEQ ID NO:289中所示的氨基酸序列的可变区。
40.前述权利要求中任一项的方法，其中所述抗CD5抗体或其抗原结合部分包含重链和轻链，所述重链包含如SEQ ID NO:291的氨基酸序列中所示的可变区，所述轻链包含包含SEQ ID NO:290中所示的氨基酸序列的可变区。
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