JPH03503887A - 自己免疫疾患に対する抗ｔ細胞イムノトキシンの治療的使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 自己免疫疾患に対する抗Ｔ細胞 イムノトキシンの治療的使用 発明の背景 本発明は自己免疫疾患の処置に関する。愕に、本発明は仇Ｔ細胞免疫グロブリン に共役結合している細胞毒薬剤を含有する′ｆｙＬＴ　ｌｄｉ胞イムノトキシン を自己免疫疾患の処置に使用することに関する。

自己の免役学的応答の発現は自己免役と祢され、自己寛容の減損全反映している 。自己免役疾患は自己反応性Ｔリンパ球および宿主組織と反応性の抗体（自己抗 体）の宿ミ産生を特徴とする病的状態でるる。自己抗体は自己免疫疾患が現われ ていない成る正常な人間に見い出される。自己免疫疾患は原器特異的免疫病態ｌ たは複ｅ系ｃ　ｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍ　）免役病態のどちらかで現われる。自 己免疫疾患の例には次の疾患が包百される：全＃注エリトマトーテス、強皮症（ 硬化注苔癖、局限性強皮症および扁平苔癖を言む）、慢性関節リウマチ、慢性甲 状腺炎、尋常注天庖艙、真正糖尿病タイプ１、進行注全身注強皮症、再生不能性 貧血、重症肪無力症、筋炎、７エーグレン病、クローン病、潰瘍注大腸灸、およ び原発性胆汁性肝硬変。″ｔｆｃＸチ発性硬化症、ブドウ属灸およびメニエル病 ならびＫ（−の他の疾患を伴なり自己免役も発現する。種々の自己免疫疾患の一 般的説明は、Ｔｈｅ　Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ　）Ｎ−Ｒ。

Ｒｏｓｅおよび工、Ｒ，Ｍａｃｋｅｙ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　（１ ９８５）に見い６丁ことができる。

自己免疫の発現は通常、自己寛容の破綻もしくは阻菩を３百する。正常なヒ）Ｂ 細Ｉ＠はいくつかの自己抗原（九とえば、テログロプリンノと反応することがで きるが、一つｌ友ａニつ以上の寛容メカニズムによって、自己抗体の産生から抑 圧されている。持続的な低レベルの、循環自己抗原を誘発する、Ｔ細胞だけを冨 む寛容は、内毒累のような物質によって阻否されることがある。このような物質 はＢ細胞ｔ−直接に刺激し、自己抗体ｔ−２１生し、これによって、ヘルパーＴ 細胞の必要性が取り除かれる。サプレッサーＴ細胞活性の減少はｌた、自己抗体 の腫生金４くことができる。

自己免役に、Ｂａ胞活性の過剰およびＴ細胞活性の減少ｔ″もたら丁、異常な免 疫学的ａ４節の障害であることができる。テグレン丈−Ｔａｌｌ施活性の減少Ｉ 几はヘルパーＴ細胞活性の増加は無制御の過度の自己仇体腫生をもたら丁。この 自己免疫の概念に動物モデルおよびヒト自己免疫疾患における研究、すなわちサ プレッサーＴ細胞機能の低下およびＢ細胞抗体産生の増〃Ωｔｉ！ｉＥＦ！Ａす ることができる研究によって支持されている。

遺伝的因子はｌた、自己免疫の病因に役割を演じることができる。ニューシーラ ントブラックマウスは自己免疫性溶血性貧血を顕示する。ＮＺＢ／ＮＺＷ　Ｆｌ 　　ハイグリッドは全身性紅斑注狼厘と同項ｄ疾病ｔ−発症する。

細胞表面抗原にもとづく種々のＴ細胞サブセット間の分化に係るいくつかの系が 開発されている。最も一般に広められている系はクラスター　オプ　ディ７アレ ンシエーシヨン（Ｃ：Ｌｕａｔｅｒ　ｏｆ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　 ）るるいはＣＤ系と称されている。このＣＤ系は工ｎｔｅｒ−ｎａｔｉｏｎａｌ 　Ｗｏｒｋｓｈｏｐ　ｏｎ　Ｈｕｍａｎ　Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　Ｄｉｆｆｅｒｅ ｎｔｉ−ａｔｉｏｎ　Ａｎｔｉｇｅｎｓによって、目皿′Ｒ細胞分化分子の分子 マーカーに関して認められている標準的名称でるる。

Ａ、Ｊ６ＭｃＭｉｃｈａｅｌ　Ｋよって纏果され−ｚ　ＬｅｕｋＯＣ７ｔｅ　Ｔ ｙｐｉＱｉｇＩ　Ｗｈｉｔｅ　Ｃｅ１ｌ　Ｄｉｆｆｅｒａｎｔｉａｌｏｎ　Ａｎ ｔｉｇｅｎＳ　％　Ｏ＋Ｃｆｏｒｄσｎ１Ｗｒｓｉｔ７　Ｐｒｅｓｓ　（１９８ ７）　！照；この記載をここに引用して組入れる。

たとえば、ＣＤ５クラスター抗原は、ヒ）Ｅ熟でリンパ琢の８５〜１ｏｏｓｔｃ 、４在する、パン（ｐａｎＪ　Ｔ抗原の一種でるる。これに６７キロダルトン（ ＫＤ）の分子でろる。この抗原は造血系前駆細胞には存；ＥＥせず、ｌ几如何な るその他の正常底入ｍ織もしくは胎児ヒト組織にも存在しない。流動細胞計測法 、免役バーオキ７ダーゼ染色法および赤血琢浴屏法による広範な研究−によって も、これらの組織へのＮ廿は証Ｆ８ＪＡすれていない。ＣＤ５マーカーに関丁５ もう−りの情報はＭｃＭｉｃｈａｅｌおよびＧＯｔｃｈによる「Ｔｃｅ工１　ａ ｎｔｉｇｅｎｓ　：ｎｅｗ　ａｎｄ、　ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ　ｄｅｆｉｎｅｄ 　ｃｌｕｓｔｅｒｓ　Ｊ　ｈＬｅｕｃｏｃｙｔａＴｙｐｉｎｇ　Ｕｉ　（上記） に見い６丁ことかできる。ＣＤ５分子はｌ几、このよりな名称が与えらｎている 抗体と反応性のものとして文献【記載されて＾るＣたとえば、Ｎａｎｃｙ　Ａ、 　Ｋｅｒｎａｎ等による、ｒ　５ｐｅｃｉｆｉｃ工ｎｈｉｂｉｔｉｏｎＯｆ工ｎ 　Ｖｉｔｒｏ　Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　、Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｂｙ 　ａｎ組入れる〕。

ＣＤ５ポジイティブＢｍ胞は自己免疫性浴血注貧血を示すＮＺＢマウスに極めて 広く見いｌ１ｔｈｌ！される。これらパンＴ細胞抗原のいくつかと反応性で６る 免疫グロブリンのいくつかは、Ｂｌａ胞のよりな他のｍ胞のりらの少数と又さ反 応する。−例として、ＣＤ５はＢリンパ球のうちの少＠什にも存在する。ＣＤ５ 仇原を有するＢｍ胞が、少なくとも若干の自己免疫疾患、九とえく慢性関節リウ マチおよび全身性エリテマトーデスなどの病因として責任がある、広く種々の抗 体を産生することは２〜３の発表され几研兄が示している。たとえば、Ｆ、　Ｙ ｏｕｉｎｏｕ等による、「ＣＤ　５　　Ｐｏ５ｉｔｉｖｅ　Ｂｃｅｌｌ、ｓ　’ ｔｎ　’ｐａｔ１ｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔ ｉｓ　Ｊ、ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ４６　：　１７〜２２（１９８７）　　：Ｒ ，Ｒ，Ｈａｒｄｙ等による「Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｓｅｃｒｅ ｔｉｏｎｆｒｏｍ　Ｈｕｍａｏ、　Ｌｅｕ　−ｉ”　Ｂ　Ｃｅ１ｌｓ　Ｊ、５ｃ ｉｅｎｃｅ　２３６　：８１〜８５（１９８３）；およびＣａ５ａｌｉ　等ＩＣ ，ｌ−ル「Ｈｕｍａｎ　Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅａ　Ｍａｋｉｎｇ　Ｒｈｅｕｍａ ｔｏｉａ　！Ｆａｃｔｏｒ　ａｎ４Ａｎｔｉｂｏａｙ　ｔｏ　５ｓＤＮＡ　Ｂｅ ｌｏｎｇ　ｔｏ　Ｌｅｕ　−ｉ”　Ｂ　−Ｃｅｌ；ＬＳｕｂｓｅｔ　Ｊ　、　　 ５ｃｉｅｎｃｅ　　２３６　　：　　７７〜８１　１９８７）参照；これらの記 載の全部をここに引用して組入れる。

Ｒ，Ｒ，Ｈａｒｄｙ等による研究（上記］によれば、ＣＤ５抗原ｔ−荷するＢ細 胞に、典型８９に、若干の変化を伴ない、正常でｆＭ！Ｉｔな人間の全Ｂ禰胞の りちの２０〜３０％を構成している。この報告によれは、慢性関節リク′７テ、 シエーグレン病および進行注全身注強皮症を患っている患者は、ｔｌＩ！慶な１ −人に比較して、ＣＤ５次原を胃するＢ細Ｎ＆を高レベルで有する。さらに１友 、この抗原を胃するＢ細胞に明らかに、大量の自己抗体を分泌する。

ＣＤ５以外のＴ＠胞仇原が１友、３９７７球のサグポピユレーションに存在する 。たとえば、Ｓｍａｌｌ　’４によるＪ、工ｍｍｕｎｏ（１９８７）、１３８： ２Ｂ６４〜６８には、３９７７球のサブポピユレーションにおけるＣＤ１分子の 甲のＣＤ　ｉｃ部分の見境が記載さｎて（へる。このＣＤ　ｉｃ侃原は、扁桃腺 、末梢血液および膵臓細胞に白米する正常Ｂ細胞の１４〜４６％に発現する。

ＣＤ５抗原に対するモノクローナル抗体は、非自己免疫疾患、たとえば対宿王＃ 植片疾患（ＧＶＨＤ）の処置に使用するために開発されている。たとえば、米ｒ ｓ！許出願５ｅｒｉａｌ　Ａ６９３８，８５５参照；これをここに引用してｍみ 入れる。（ｆｆＨＤの処置においては、このよ５７ｋ　ＭｏＡｂｓをジスルフィ ド結合によって、リボンーム非活性化タンパク質である細胞毒性リシンＡ１！Ｉ ＩＩ（ＲＴＡ）ニ共役結合させる。友とえは、米国待肝出願５ｅｒｉａｌ／１６ ８２２．８９８参照；これをここに引用して組入れる。

ＭｏＡｂは灰熟Ｔリンパ球およびＢ細胞のサブポピユレーションを目標とし、Ｒ ＴＡ−ＭｏＡｂイムノトキシンのインターナリゼーションＣ１ｎｔｅｒｎａｌｉ Ｚａｔｉｏｎ　）　’を生しさせることによって、これらの細胞を分解石せる。

慢性のａｖＨＤ、＠者ににしばしば、成る種の自己免疫疾患と同様の症状および 徴候が存在する。これらの中の主な疾患には、強皮症および原発性胆汁性肝硬変 がめる。慢性対宿主移植片疾患（ｃＧＶＨＤ）を育する人間の恵者繻多くの自己 免疫疾患の研究に関する優れたモデルになる。

モノクローナル抗体は自己免疫疾患の処置に使用されて＾る。たとえば、ＷＯｆ ｓｙ、　Ｄ、およびＳｅａｍａｎ、　Ｗ、’ｌ。

はＬ３Ｔ４（ＣＤ４）に対するモノクローナル抗体（ＭＯＡｂ）を−週一度で注 射するＣとによって、全身性エリテマトーテス（ＳＬＥ）のマウスモデル金処置 した（　Ｊ、　Ｅｘｐｔｌ　Ｍ＋４．１６１．３７−８（１９８５）、ｌ。

ＣＷｏｆｓｙ、　ＤおよびＳｅａｍａｎ、　Ｗ、ＥによるＪ、工ｍｍｕｎｏ　ｌ 。

１６８．３２４７（１９８７）も参照できる〕。

Ｗｏｆｓｙ、　Ｄ、　ｉｊ、Ｔｈｙ　−１，２（全Ｔａ抱土Ｖ８ｆ：））１７’ ｔμＬ３Ｔ４のどちらかに対するラットモノクローナル抗体（ＭｏＡｂ　）を使 用し、ＢｘＳＢマクスにおけるマクスｍｆ’に処置し７ｔ（、Ｔ、工ｍｍｕｎｏ ：ｔ、、　ｉ　３６　（１２）、４５５４（１９８６）　〕、ＭｏＡｂＴｈｙ− １，２は病気の進行を遅らせるが、寿命に一！ｌ＜することはできなかった、　 ’ｒｈｙ　−１，２に対するＭｏＡｂを反慎注射することは、免疫応答が現われ ることによりて妨害ざｎる。Ｉ、３Ｔ４に対するＭＯＡｂは、これらの病気の処 ［ＶＣ！効でめり、１几免疫応答が生じないので、再投与することが可能で６つ 几。米国時１”Ｆ　４，６９５，４５９にはｌ友、冥験的なアレルイー注脳牙髄 炎を抗−Ｌ　３　Ｔ　４　ＭｏＡｂｓで処置し友ことが記１Ｉｌｌｃされてお夕 、ｌ九ＥＰ出頗、％８５３Ｃ１７８７５，６には、工Ｌ−２レセグター（５Ｄ　 ｋｄ　抗原）Ｉ／Ｃ対するＭｏＡｂ　ｔ−便用すると、心臓同種、＃檀および皮 屑移植され几マクスにおけるＴリッツ球が減少されることが記載されている。

Ｒａｎｇｅｓ　’：！はに−Ｌ３Ｔ４モノクローナル抗体金１１゜自己免疫疾患 のａｍのマウスモデルの予防的処置および若干の場合には、治療的処置に使用し 次ことを報告しているｌ：　Ｃｅ１１．工ｍｍｕｎｏ、、１０６：１６３〜１７ ３Ｃ１９８７））。増殖応答は、抗体が免疫感作の荊に投与され几場ｅｔｃたけ 抑制された。仇−り、５Ｔ４抗体による処置は、骨に、これらの抗体が免疫感作 後の一週間Ｉたはそれ以上で投与され九場会には、進行する体液性応答では無効 果てあり友。

Ｂｅｎｊａｍｉｎ、　Ｒ，Ｊ、等は、ＭｏＡｂ療法ｖｃオｔｒｙル仇ｙｏｙリン 応答の副作用を研究し７’ｔ　Ｃ１，Ｅｘｖ、　Ｍｅｄ、　１６３、の面がらる 。第一は、見込ｌれる長期開始Ｍが短縮せねばならないことでめ夕、　＠：はＭ 夜釣な臀否な過敏性反応でおる。これらの著者は、この仇グロブリン応答はＭｏ Ａｂ　９法の主要な副作用でるると結論している。

（この副作用は、憂英として、免役抑側剤ｌ九は仇厘瘍剤として、マウスモノク ローナル抗体（九とえば０ＫＴｓ　）ｔ−治療的に使用することによって、確証 されている（　Ｃｈａｔｅｎｏｕｄ、　Ｌ、　４によるＪ、工ｍｍｕｎｏ１．　 、１５７．８３０（１９８６）１）。

ｐｏｎ８７等によって、末梢Ｔ細胞抗原と反応性でるる２種のＭｏＡｂ　ｆ金回 するＭＯＡｂ組Ｓ１組物１再生不乾性貧血１３；５２０〜５２４（１９８５）、 ｌ。これらの患者の中で、この治療に応答し友者はいなかつ友。

Ｇｏｕｌ、Ｂ等による工ｎｔｅｒｎａｔｉｎａｌ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎイ 圓ｕｎｏｔｏｘｉｎｓ　、　　１９８８年６月９日には、＠移住乳癌の処置にイ ムノトキシンを連硯注入する方法が記載されている。この乳Ｍ腫瘍ＦＬ原に対す るモノクローナル抗体はレシンＡ＠に共役Ｍ曾されている。有意の毒性が見い出 てれた。

米ＩＢ＊ｒＦ　４，５５　Ｄ、、Ｄ　８６　ｉｃは、モ／／＊−ナル［体は予め 定められ九底熟ヒ）Ｔ細胞クローンの表面認識構造ｌＣＮ合でさることが記載さ れている。彼等は、この認識構造がこのクローンを、特定の自己免疫疾患の病固 体として作用でさるものにするといり見Ｓを発表した。この認庫構道体に対する ＭｏＡｂにインビトロでこのクローンを中和し九。

Ｋｉｍ、　Ｙ、Ｗ、およびＭｅｔｚｇａｒ、　Ｒ，Ｓ、によって、腫瘍ヲＮＴる マウスにイムノトキシンが投与さｎた（　Ｉｎｔｅｒ−ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｙ ｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎ　Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ　、　ｉ　９８８年６月９日 〕。このイムノトキシンは、ポークライード抗ウィルスタンパク質に共役Ｍ台さ れている洸膵禮瘍抗体を含有していた。

不発明の目的は、自己免疫疾患を処置するための治療岨匡９１！Ｊを提供するこ とにろる。このよりな自己免疫疾患の例１ｃは、次の疾患が含１れる：全＃注エ リトマトーテス、強皮症（硬化注苔癖、局限性強皮症および扁平苔病を含む〕、 慢性関節リウマチ、慢注甲状腺灸、尋常性天庖渚、臭性糖尿病タイプ１、進行性 全身性強皮症、再生不能性貧血、重症ｙｆＥ無力症、石灸、シューグレン症、ク ローン病、潰瘍性大腸灸、および原発性胆汁性肝硬変。本発明のもう−りの目的 は、０れらの自己免疫疾患の処置方法を提供することにろる。

本発明の要旨 本発明は、抗Ｔ細胞イムノトキシンが自己免疫疾患の処置に、安全にかつｌｆｃ 効呆的に投与できるとムリ、新規で、予想外の発見にもとづ＾て＾る。−態様に おいて、本発明は、抗Ｔ［胞イムノトキシンを含Ｎする医薬ｍ酸物金、自己免疫 疾患を有する患者に投与する０とに関する。自己免疫疾、！！を有する患者に対 する、恍Ｔ細胞イムノトキシンの投与による治療効果は投与時点ｔ−超て、良好 ｖｃＨ現されることが、先ず見い出さｎた。ｔ５−りの態様１ｃ！？いて、不発 ＢＡは自己免役疾患の処置方法に関する。ざらに詳ａＫ言えば、この仇Ｔｍ相イ ムノトキシンは、Ｔ細胞と反応性でろる免役グロブリンに共役Ｍ酋しているレク チン人鎖のよ５な細胞毒分子を含有する。

図面の簡単な説明 第１図は、ｃＧｖＨＤを有する２人の患者において、ｘＭＭＬ”ｌ　−Ｈ６５− ＰＥＡ　ｋ　２　Ｊ’ｆ　レテ、１４　Ｅ３１ｉｉＱ　Ｏｌａ５　Ｋ　生しるＣ Ｄ５マーカーによろリンパ球数の減少を示すものでるる。

第２図は、ｃＧＶＨＤ　ｔ　Ｗする３人の、！！者において、ＸＭＭＬＹ　−Ｈ ６５−ＲＴＡを注射して１４日間の間に生じるＣＤ３マーカーによるリンパ球ｔ ｘの減少を示すものである。

第３図は、第１図および第２図の対象イムノトキシンを投与された患者における リンパ琢細胞減少のＭ米を１とめて示すものである。

好適態様の説明 本明細書に使用ａｈでいるかぎりにおいて、「仇Ｔ細胞イムノトキシン」の用語 は、自己免疫疾患を有する患者の医療状態を治療的に改善することができるイム ノトキシンを量体する。このＫＴＭ胞イムノトキシンは、細胞毒分子とＴリンパ 琢反応性部分とを含有する。細胞毒分子は、代表的に、細胞に対して致死的なも のでるる。Ｔａ胞反応性部分は、Ｔリンパ球に−Ｍ曾し、このＴリンパ球に対し て、細胞毒分子全供給するコトカできる。イムノトキシンの免疫グロブリン部分 は尻−Ｔａ胞と称さｎるが、この場酋に、免役グロブリンはＴ細胞と独占的には 反応しない。

不発明のイムノトキシンのＴリンパ球反応性部分は、多数の起源から得ることか でさ、そしてＴ［胞特異注抗原と反応性でるる免疫グロブリンである。「免役グ ロブリン」の用語に、ポリクローナル肌体、モノクローナル抗体、その反応性断 片、友と、ｔばＦｖ　、　　Ｆａｂ　。

Ｆ（ａｂ）２　、台底免疫グロブリンおよびキメラ免疫グロブリンるるいはそれ らの誘導体を含ひＭ換え免疫グロブリン金包含する。好ｌしくに、免疫グロブリ ンは大部分のＴａＪ＃ｌと、るるいはＴａｌ相およびその他のリンパ細胞、たと えばＢ細胞ｌｆｃはＮＫ＃ｌ胞のサブセットの両方と反応性でるる、マウス、ヒ トｅ７ｔはその他の哺乳動物白米の工ｇＭ’！ｆｃは工ｇＧインタイブのＭｏＡ ｂ　ｇｆ４ｒ６る。すらに好ｌしくは、ＭｏＡｂｉｄＣＤ　２、ＣＤ　３、ＣＤ ５およびＣＤ７を含む、数種のＴ細胞マーカーの一種ｌ几は二種以上と反応性で るる。最も！ｊｆ’！Ｌ（は、ＭｏＡｂはＴ細胞およびＢ細胞の両方に見い出さ れるＣＤ５仇原と反応性である。その他の動物種のＭｏＡｂが類似の非ヒト哨乳 動物マーカー全使用してＢ４衾できることは理解される。

本発明の揚台には、免疫グロブリンに、この免疫グロブリンが抗原と相互反応す る時に、抗原と「反応性」でるる。この相互反応は、２′ＭＭの反応剤が一緒に なって生成物を生成する化学反応と同類でろる。免疫グロブリン抗原相互反応の ４仕には、この相互反応の生成物は′ｖｃ原−免疫グロブリン複甘不せめる。好 ｌしい抗原は、一般に、独自の表面タンパク質でろり、Ｔ細胞ｌ友はＴ細胞のサ ブセントおよび他のリンパ細胞のサブセットによ）Ｍ竺ざｎるか、ろるい扛徒示 される種種のタイプのレセプターを包含する。しかしながら、その他のタンパク 質、糖タンパク質、リポタンパク質、多Ｉ！類等の、これらの細胞によって産生 もしく燻提示され、かつｌた免疫グロブリンによって認識される、多くの種々の ｇＸ原を本発明に従い使用するＣとができる。本発明に有用なＴ細胞愕典注尻ぶ に人間９恵者に存在する、大部分のＴ細胞に典型的に見い出される抗原またにマ ーカーでるる。好適マーカーはＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ５およびＣＤ、　７抗原で るる。その他の抗原クラスター、たとえばＣＤ６もｌた％Ｔａ胞愕異注抗原の九 めの原料源として有用でめタフる。＃も好業しいマーカーはＣＤ５抗原クラスタ ーでろる。

本発明で使用することがでさる、抗Ｔｍ胞免疫グロブリンのりちの若干は、他の リンパ細胞、たとえばＢ細胞のりちの少数と又ざ反応することに貿意丁べきでろ る。たとえば、抗ＣＤ５免疫グロブリンはＴＪａ胞とおよびｌ几小数のＢ？ａａ テブボビュレーショント反応する。ざらにｌた、本発明のイムノトキシンｍ放物 は、２種１之に３種以上の免疫グロブリンよりなることかでさ、この揚台の免疫 グロブリンは七ｎでれ、Ａなるマーカーｌ几は同一マーカーと、めるいｒｃＡな る細胞ボビュレ−７ヨンと反応性でるり、これにより広いスペクトルを胃するＴ Ｍ胞中和が確保嘔ｎる。

ＭｏＡｂのｖ４衾に関しては、糧々の方法が現在知られている。友とえば、Ｇｏ ｄｉｎｇのＭｏｎｏｅｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅ ｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　第２版（ １９８６年）を参照で妊る；この記Ｓ！とここに引用して刈入れる。ろｌＤ好ｌ しくにない形の免疫グロブリンは、当業者に周知の方法、九とえぼポリクローナ ル血清のクロマトグラフィ精製により＊質的に単−特異性抗体ボピュレーション を虫取する方法、によってＷＪ４央することかでさる。不発明で使用するのＩＣ 最も好おり、Ａｃｃｅｓｓｊ、ｏｎ　４　ＨＢ　９２８５が与えらルているノ１ イブリドーマ細胞うインｎ凹：ＪＹ　−Ｈ６５により産生されるものでるる、好 適イムノトキシンの抗体部分は、米国ｓＦＦ出％　ｄｅｒｉａｌ　、４６９７４ ．ｓ　２４の１４貞２５〜３６行に記載されているとお夕にして調製される。こ の抗体は、好ｌしくは、好ｌしい細胞Ｉｔ　ＲＴＡにカップリングさせるために 、５ＰＤＰｉＣより活性化させる（これは、米国籍吐４，５９０，０７１、第４ 欄、５５行〜第５橢５行に記載されているが、緩衝液は７ジドの代りに５チデキ ストロースを含有するようにするン。

本発明のイムノトキシンに使用するには、種々の細胞毒分子が適当でろる。本発 明の意図する細胞毒分子は放射性同位体、九とえばヨー２１３１、イツ）ＩＪク ムー９０、レニウム−１８８およびビスマス−２１２；多くの化学ｍ法用薬剤、 友とえばビンデシン（ｖｌ歯ｓｉ＞入メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｚａ ｔｅ　）　Ｘアドリアマイシン（ａａｒｉａｍｙｃｉｎ　）およびシスプラチニ クム（ｃｉｓｐ−１ａｔｉｎｕｍ　）　ｙおよび細胞毒性タンパク質、友とえは ポークライード抗ウィルスタンパク質、アブリンおよびリシン（ろるいはそｎら のＡｆｓ）ｔ−包含するリボソーム抑制タンパク質を包含することができる。Ａ ＤＰリボシラテン（ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｎｅ　）毒素、九とえはジフテリア青 紫およびプソイドモナスエクソトキシンＡなど、ｂるいはそれ−らの組換え誘導 体も機能的に均等でめる。

一般的に、「Ｃｈｉｍｅｒｉｃ　Ｔｏｘｉｎｓ　Ｊ、ｏｌｓｎｅｓおよびＰｉｈ ｌ、Ｐｈａｒｍａｃ、ＴｉＢｒ４、２５　　：　　５５５〜３８１（１９８２） およびｆ−Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｆｏｒＣａｎｃｅｒ 　Ｐｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎａ　Ｔｈｅｒａｐｙ　Ｊ、ＢａｌａｗｉｎおよびＢ ｙｅｒｓｉｉｌ、１５９〜１７９頁、２２４〜２６６頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐ ｒｅｓｓ　（１９８５）　を参照するＣａ；ｄ”’？？ｉｉ’、これらをここに 引用して組入れる。

本発明において、毒ａ　＋／クチン類は骨に興体深いものでおる。毒性レクチン 類、および轡にリシンおよび７ズリンの細胞毒性作用は、充分子ｃ研死ざｎてい る。

毒性レクチン類は、２つのポリペプチド＠ＡおよびＢよりなρ、これらはジスル フィド架傭によって結合・されている。細Ｎ＆毎性（ｃｙ’ｔｏｔｏｘｉｔ７　 ）　ｉ’；ＣＡ−鎖Ｗｉ汀纏して、おｐ１有核細胞におけるタ／バク！曾取？抑 制する。

Ｂ鎖は実質的【Ｃ１このＡ鎖に対する受渡しベヒクルである。Ｂ鎖はａ胞衣面で 多糖類単位を認識し、この単位と高度ｉｃ親和性の相互反Ｉ６を生じる。Ｂ鎖が 細胞表面で多糖類単位と結什すると、Ａ鎖は＃ｌｌ円内取ρ込°ｆれ、リポソー ムタンパク質曾成七阻止し、最終的に、Ｍ胞の死全導く。不発ＢＪ４においては 、レシンＡ鎖？便用すると好ｌしい。

レシンと同様の構造および機能を有するタイプの毒性レクチン類ＩＣは、アブリ ン、モデクンンおよびミストシト−エト中シンが含Ｉれる。リポソーム不活性化 タンパク質（ＲｘＰ）のもう一つのカテゴリイには、レシンＡ＠ＶＣ類似する機 能上の特徴ｔ−五するークだけのサブユニットを有するトキシンがある。このタ イプのＲｘＰは、レシンＢ鎖に類似するＭ曾所片が固有に存在しないことから、 完全Ｍｉ胞に対する細胞毒性に欠けている。この後者のタイプのＲｘＰの力はｒ ロニンおよびポークライード抗ウィルスタンパク質を包含する。

本発明に従い、Ａポリペプチド鎖とＢポリペプチド鎖とに分裂することがでさる 毒性レクチンはいずれも、待にアブリン、モデクシンおよびミストレトーエトキ シンは、好適態様に使用されるリシンと同一の方法で使用することがでさる。賂 らに、Ｒ工Ｐｌたは均等なＡＤＰ　ｖホモル化トキシンはいずれも、詳ａＫは、 ｒロニン、ポークライード抗ウィルスタンパク質はレシンＡ鎖と同一の方法で使 用することがでさる。ＯｒＬらの物質は本発明の０釣に関して、毎性しクチンＡ 鎖と均等でるる。

不発明において、好ｌしくにレクチンＢ鎖夾ｍ物を実質的に含有していない、毒 性Ａ鎖を使用し、これによって、細胞ｔ＃異性細胞毒性を得る。実質的に純粋な レクチンＡ鎖を得るための好適方法は、米国特許出願５６ｒｉａ１　／％８２９ ，５４４および米国特許出願５ｅｒｉａｌｌｉ６０５５．１８９に記載されてい る；これらの記載を引用してここに組入ねる。毒性レクチン類は組換え手段を使 用してｖ４裂することができる。

本発明に使用するのに最も好適なレシン毒性人鎖は、実質的に純粋なＲＴＡ　− ５０を使用するものである。

「８７人−３０，Ｊの用語は、Ｆｕｌｔｏｎ等によｆ）　、ｒ、　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、２８１　：　５３１４〜５３１９（１９８６）におよびＶｉｄａｌ等 により工ｎｔ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ、　　５６　：　７０５〜７１１（１９８ ５つに、詳細に記載されているよりな、はぼ５０ＫＤの分子量を有する種のリシ ン毒性Ａａを意味する。本発明の目的に対して、約７５％１九はそれ以上の濃度 ０ＲＴＡ　−３Ｑを含有するＲＴＡ　ｖＩ４表物に某質的に純粋でるると考える 。　ＭｏＡｂとの共役結合に使用するための、実質的に純粋なＲＴＡ　−３０（ Ｄ開裂は、米国特肝出頴５ｅｒｉａｌ　Ｎｕｍｂｅｒ　０７４．８２４１ｃ記載 されており、この記載を引用してごこに組入れる。

レクチンＡ鎖への免疫グロブリンの共役Ｍ合方法は’ｙ７ｊ、米１団出願Ｓｅｒ 工ａｌＡ［＋　５３，１８９の７頁１８〜３７行および８頁１〜１０行に記ｔ＃ ｔざｎている。共役結合方法の特に包括的な記載は、ヨーロッパ特許出願公報、 １１６９１１１に見い出丁ことかでき、この記載をここに引用して組入れる。好 ｌしい共役結合方法は、免疫グログリンと苛性レクチンＡｊｉｌとのｒＢＪＫ　 、共役ジスルフィドＭ曾を形成する方法でろる。

これら２種のａ分は、種々の周知の化学的万＆のいずれによっても、−緒に複合 体形成させるか、ｌたは化学的ｌＣＩＭ仕ざぜる。−例として、細胞毒分子がタ ンパク質でろ夕、そして第２の范分かモノクローナル抗体のような完全免役グロ ブリンでろる場合ＩＣは、この結合は、カルボジイミド、グルタルアルデヒド、 ヘテロ２官能注又さＭ合剤〔之とえば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジ ルジテオ〕グロビオネート（５ＰＤＰ　）および誘導体、２−イミノテオラ／お よび誘導体〕、ホモ２′ぎ能注又さ結合剤（たとえば、ビス−マレイミド）を便 用することによって、あるいは外米の交さ結合剤を使用することなく、各タンパ ク質に対し反応性の一基、友とえば炭水化徹、ジスルフィド、カルボキシルまた はアミノ基を使用し、天然タンパク質の酸化ｌ友は還元ｔ−経て、タンパク質ｔ −父さＷＩ仕させることによって、おるいは酵−素などで処理することによって 、行なうことができる。程々のイムノトキシンの産生は、当技′ｇ範囲で充分に 知られて訃り、たとえば、゛「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏａｙ　Ｔｏ ｘｉｎ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ　：Ａｉｍｉｎｇｔｈｅ　Ｍａｇ：Ｌｃ　Ｂｕｌ ｌｅｔ　Ｊ、Ｔｈａｒｐｅ　４　、ＭｏｎｏｅｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏａｉｅｓ 　ｉｎ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　、　、＋ＡＣａａｅｍｉ、ＣＰ ｒｅｓｓ。

１６８〜１９０頁（１９８２）ＶＣ見い出丁ｃとカテサ、この記載ヲ引用してこ こに組入れる。ＲＴＡ浴液と抗体浴液とは、Ｉ８１しくに米国秀肝５ｅｒｉａｌ 　Ａ６９７４，８２４、第１５頁１〜９行に記載されているように一緒に仕せ、 イムノトキ７／茫７ラク７ヨンとして溶出する（これは、米国特許４，５９０． ［，１７１、第５ｍ、１５〜２４行に記載されている］。ＴＷＪＣＫＮ　８０を 最終浴液の０．１優！で、刀ｒｌえることができる。

別様には、Ｘｏｍａ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏ、ｎ　（Ｂｅｒｋｓ、ｌｅｙ、　Ｃ ａ１ｉｆｃ−ｒｎｉａ　）　Ｋより人造されて−る、商業的に生産され九ＸＩＪ ＭＬＸ−Ｈ６５−ＲＴＡ　（ＸＯＭＡＺＹＭＥ　−Ｈ６５−ＲＴＡ）ｔ％杢発明 の好ｌしいイムノトキシン絹製の具体化における一イムノトキシンとして使用す ることもできる。

この調製ｖｌＪはＣＤ５抗Ｊと反応性のＭｏＡｂとＲＴＡとの共役結合物である 。

本発明のイムノトキシンは、これだけ単独で、ろるｖｎ２Ｗ１ｉ九は６種以上の イムノトキシン、別のｆｆｈＭ剤、組成物など（これらＩＣは、免疫抑制剤、免 疫増強剤および副作用４！減剤が含ｌれるが、ｃ′ｆＬらに制限されない）を含 有する配酋物として、患者に投与することができる。これらの中に特に注目され る薬剤は、宿主のアレルギー反応の抑制に宵月な免疫抑制剤でろる。

注目される免疫抑制剤は、グレドニソン、ＤＥＣＡＤＲＯＮ（Ｍｅｒｃｋ、　５ ｈａｒｐ　＆　Ｄｏｈｍｅ、　Ｗｅｓｔ　Ｐｏ１ｎｔ、　ＰＡ　）　、シクロホ ス７アミド、シクロスポリン、６−メルカプトプリン、メントレキセート、アゾ チオプリン２よび１゜Ｖ。

ガンマグロブリンｌたｔｔ−ｅれらの組甘ぜを包含する。

注目さｎる免疫増強剤は、モネンシン、塩化アンモニラＡおよびクロａクインを 包含する。これらの薬剤はいずれも、Ｐｈ７ｓｉｅｉａｎ　Ｄｅｓｋ　Ｒｅｆｅ ｒｅｎｃｅ　、　４１版（１９８７）、発行者Ｆ４ｗａｒｄ　Ｒ，Ｂａｒｎｈａ ｒｔ　、　ＮｅｗＪｅｒｓｅｙに記載の範囲のよ′）な、一般に受は入れら扛る 有効投薬を範囲で投与される。免役抑制剤としてイムノトキシンを投与すること に、一般に譲渡されている米国出願５ｅｒｉａ１４０７　ｉ　１５１＋７４１に 記載サノ１゜ており、ここに引用して組入れる。

本発明で使用する場合には、抗Ｔ細胞イムノトキシンは注射用製剤’Ｉｔは局所 用製剤のどちらかの形に処方することがでさる。非経口製剤は卸られており、不 発明で便用するのに適しており、好１しくは１０ｍ、投与ｌたは１．ｖ、投与す る。治療的有効量の抗ＴＭ胞イムノトキ７ンを含有する裂剤鉱、殺菌液体溶液、 液状懸濁液Ｘ　ｆｉｃ、μ凍結乾燥物のいずれかであり、所望により、安定剤ｌ ｆｃは賦形剤を含有する。凍結乾燥組成物（儂、適当な稀釈剤、九とえば、注射 用水、塩４浴液、０．３％グリシンなどで、約０．［Ｊ１ダ／体菫屋〜１０１１ ９／に９（この場合の生物学幻活性は網状赤血球浴解検定法で測定して、２　Ｌ ｌ　ｎＪ　／ｒｎｌより小ざ（へか、ｌた１２等しい〕のレベル（７Ｃ再構底す る。代表的に、抗Ｔ細胞イムノトキシンを苫胃する医薬岨放物け１、約０．０１ ダ／処置動物のｑ〜約５〃夕／Ｋｇの範囲の治療胃効ｔで投与する。仇ＴＩＮ胞 イム、／トキシン含合医薬Ｍ酸物の好適治療有効量は、埴次的患者投薬童−増魚 処置計画に従い、毎日−回の１時間にわ九る静脈内注入を数日間〜２週間、続ｆ ｆで、約０．（Ｊ　ｉ　ｍ９／処置動物の体ｘ、ＫＩ！〜約０．５１ｎ９／に９ の範囲でおる。

抗で細胞イムノトキシンは局所治療用の局所用製剤に処方することもでさ、この 製剤は蒲僚胃効量の抗Ｔ細胞イムノド中シンを皮膚用担体中に含有する。抗Ｔａ 胞イムノトキクンの投与量および局所用製剤中の抗Ｔ！Ｍイムノトキクン＃１１ 度は、選ばれた担体、患者の１尿症状、全身的毒性およびＭＸ物中の抗Ｔ細胞イ ムノトキシンの女定性に依存する。従って、医者は、却Ｈ，物中に適当な濃度で 抗Ｔ細胞イムノドキシ／を含有する適当な製剤、ならびに対象の患者ｌたは類似 の患者による臨床上の体験によって、製剤の投与量を便用する必要がある。局所 用展剤における抗Ｔａ＃Ｉイムノトキシンの濃度は約０．１”９／ＩＬｅ〜約２ ５ダ／ｄの範囲で芒らに多い範囲にある。抗Ｔ細胞イムノトキシンの固体分散製 剤および可溶化製剤も便用することができる。従って、担体中に使用さ扛る実際 の濃度は、治療的応答を最適にするために、通夏の笑験的処直に従九皮ｌ′ｌｌ 炎症全処置する場合ｉＣは、１優（重重／重重）担体を用いて、約１０ダ抗ＴＭ 胞イムノトキシン／１００ｙ担体より多い麓が有用で６ることがちる。適当な担 体は、デルに力Ｉ］えて、鉱油、ペトロラタムなどを使用する水中油型または油 中水型のエマルジョンでろる。

抗Ｔ細胞イムノドｄＰ７ンは、場合によジ、経皮治療法を使用することによって 、局所ＩＣ投与する（　ＢａｒｒｙによるＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａ、ｌ　Ｆ ｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ　、　　ｉ　８１頁（１９８３）およびこの刊行物Ｖζ 引用きれている刊行’ａ）、Ｃのよりな局所放出系はほとんどが、低分子量薬剤 の経皮投与用にデデインされており、これは、これらの薬剤が経皮放出可能でろ るからでろる。これらの放出系は、抗Ｔ細胞イムノトキシンまたμその誘導体お よび付随する治療的タンパク質の投与に対し、その速度制御微孔質膜を適当に選 択することにより、容易に適合させることができる。

全身的投与ｌｆｃは局所投与に対して、抗Ｔ細胞イムノトキシンの局所用製剤を 使用することができ、これらの局所用製剤は非経口投与に係り前記した賦形剤お よび局所用製剤に使用される、その他の賦形剤、たとえば補助溶剤、界面活性剤 、オイル、湿潤剤、皮膚軟化剤葛保存剤、安定剤および駿化防止剤金言有するこ とがでさる。医薬的に許容される緩衝剤はいずれも使用することができ、たとえ ばトリスｌたはリン酸塩緩衝剤を便用することができる。局所用製剤は１几、所 望により、強化剤、界面活性剤、促進剤、牧収促進剤ｌ九は浸透強化剤と称され る種々の助剤の１種ｌ几は２種以上、たとえば仇Ｔ細胞イムノトキンンｌ友はそ の他の薬剤の経皮浸透を強化するための助剤を含有することかできる。このより な助剤は望Ｍしくは、通常の技術を胃する当業者に知られているように、次の特 徴のうちの若干もしくは全部を百するべきである５：薬理学的に不活性でめる； 体液ｌｆｃは電解質損失全促進しない；抗ＴＭ胞イムノトキシンと適合する（不 活性化しない）、および所望のクリーム、デルＩたは七の他の局所放出系金形底 することができる。

抗Ｔ細胞イムノトキシンはＩた、／Ｊ５に対し、局限的に投与するｔめのエフゾ ルの形で投与することもできる。これには、Ｅ！７１Ｃはその誘導体を含有する 、水性エアゾル、リポソーム剤ｌ九は固形粒子を調製する。通常、水性エアゾル は、抗Ｔａｆ＠イムノトキシンの水性浴ｇフ′ｆｃは懸濁ｇを慣用の医薬的に計 容される担体および安定剤とともに調Ａｒすることによって製造する。

担体および安定剤は特定の抗で細胞イムノトキシンに係る要件に応じて変わるが 、代表的ＩＣに、非イオン注界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ　頌、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ類 またはポリエチレングリコール〕、血清アルブミンのような無毒のメンバク質、 ソルビタンエステル、オレイン酸、レシチン、アミ、！酸（九とえば、ンリシン ノ、緩衡剤、塩瓜糖頌１九は糖アルコール頌が苫ｌれる。これらの製剤はｌた、 ′４ｆｉ液分′Ｓ刑およびｌ几気管支拡張刑を宮ｎするＣともできる。これらの ＪＪ＆刑に無菌でめる。エアゾルは一般に、青張浴履から８ｊＩ４良するつ粒子 Ｃ−１必要に応じて、正常肺界面活性剤を含有する。

エアゾルは、′７に性Ｉたは非水性（たとえばフルオロカーボン推進剤）＠濁液 中の粒子の形態でｂることができる。これらの粒子は、九とえば抗Ｔ？ｔＭｉ胞 イムノトキシンｌたは七の誘導体の分子内凝集体、必るいは抗Ｔ細胞、イムノド 千ンンｌたを２七の誘導体が捕促されているリポソームＩｆｃｌ−１．バクロカ プセル全包含する。ニアゾルはＩｔ、肺の利激剤、′ｊなわち急性気管支けいれ ん、ぜさ、肺浮腫１九は組織鼓壊を生しざぜる物質全含有していてにならない。

しかしながら、この場合に、無ＦＰＪ激件の吸収促進剤全適当に使用丁′ること はできる。エアゾルの詞衷には、音波ネビュライデー金便用すると好ｌしい、ｆ 波ネビュライデーに、抗Ｔ細胞イムノトキシンまたにその誘導体が、恍Ｔ＃１胞 イムノトキシンを分解させることができる剪断下にさらされるのを最少にする。

抗Ｔａ胞イムノトキ７ンは、局所投与よりも、全身的に、筋肉内、皮下、莢属内 ｌたは腹腔内に〜るるいは血管スペース中に、注射することによ夕投与するＯと がでさ、特に関節中に、たとえば関節内注射によって、約１μｍ１／関節体Ｑｃ ｃ／日で、投与することができる。投与量は、医師の技術内に入る、使用される 抗Ｔ細胞イムノトキシンの性質（たとえば、七の活性および生物学的半減期ン、 製剤中の仇Ｔ細胞イムノトキシン濃度、投与の部位および速度、受は入れる患者 の臨床的耐容性、患＠が恵っている自己免疫疾患などに依存する。

本発明の抗１゛ＭＢ／ｊｉ！イムノトキシンは、溶液の形で投与することがでさ る。この溶液の−は、ｐＨ５〜？、５、好ｌしくに−６，５〜７．５の範囲であ るべきである。抗ＴＭ胞イムノトキ７ン１ｆｃは七の誘導体は、適当な医薬的に 野蚕される緩衝剤、たとえばリン酸塩、トリス（ヒドロキシメテルンアミノメタ ンー・ＨＣＩ　またにクエン酸塩ｌどを含有する溶液中ｉ／Ｃ存在ざぜなげれば なうなめ。緩衝剤濃度は１〜ｉＱＱｍＭの範囲にろるべきてるる。抗Ｔ細胞イム ノトキシンの溶液はまた、塩、ｔとえば塩化ナトリウム１之は塩化カリウムを５ ０〜ｉ　５［３ｍＭの濃度で含有することができる。有効量の安定剤、たとえば アルブミン、グロブリン、ゼラチン、プロタミンｌたはプロタミンの塩をｌた含 有することができ、これは抗Ａ細胞イムノトキシンを含有する溶液あるいはこの 溶液から調製された組Ｍ、物に添加することができる。

抗Ｔ細胞イムノトキシンの全身的投与は千日−回、一般に朋肉内注射によって行 なわれるが、助内内潅流も使用できる。投与はｌた、鼻内にるるいは七の他の非 経口経路によって、行なうことができる。抗Ｔ細胞イムノトキシンはｌた、血管 金言ひ、双る組成に配置されている微小球体、リポソームｌ九μその他の微粒子 放出系から投与することもできる。局所用製剤は一日一回、皮膚’！７’Ｃは積 属に＠接菌用し、次いで好ｌしくは）基ぐ、丁なわちバンドエージ、ポリオレフ ィンフィルム’ｆｆ１７２：はその他の局所用製剤に対して不透過性の障壁ＰＦ ｔＪＫよって保護する。

次的は本発明の方法を例示するものでめり、本発明を制限するものと解釈される べきではない。

例　　１ ［Ｔ細胞イムノトキシンの調製 ＲＴＡ　’ｉ基材とするイムノトキシンの好適な調製方法は米国特許、％　４． ５９０．０７１号に記載されており、この記＊’を引用して、ここに組入れる。

１．完全カスタービーンズ（Ｗｈｏｌｅ　Ｃａ５ｔｏｒ　Ｂｅａｎｓ　）からの りシンの抽出 完全カスター　ビーンズを機械的に粉砕し、この粉から０．９チ塩類溶液に；っ で、リシンを抽出した。この溶液を、Ｃｅ１ｉｔｅ　Ｆｉｌｔｅｒ　Ａｉｄおよ びＡｅｒｏｓｉｌ　Ａｃ１５ｏｒ−ｂｅｎｔ　ｃ、　Ｍａｎｖｉｌｌｅ　Ｄｅｎ ｖｅｒ、　　Ｃｏ　；　Ｄｅｇｕｓｓａ　Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ。

ｗ、　ＧｅｒｍａｎＹ　）　を使用し、豆ペレットおよび脂質層から濾別し１文 。この濾液全濃縮し、次いでＴｒｉｓ乳糖、ｐ）１７．８（５１］ｍＭ乳糖、Ｉ 　Ｄ　ｍＭ　Ｔｒｉｓ　ｐＨ７，８，５０ｍＭＮａＣ２）に対しシア濾過しく　 ｄｔａｆｉｌｔｅｒｅｄ　）’、次いでＱＡＥ　ＺＥＴＡ　ｐｒｏｐカートリッ ジ（ＡＭＦ−Ｃｕｎｏ　、　Ｍｅｒｉｄａｎ　−Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ　、　 ＬＫＢ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ　、　Ｐｌｅａｓａｎｔ　Ｈｉｌｌ　。

ＣＡ　）に通した。生成した生成物１Ｔｒｉｓ塩類溶液（１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ　 、　０．９　％　ＮａＣ１、ｐＪＡ　７．８）に対し、シア濾過した。

ｂ、レシン毒性Ａ＠の分離 上記シア濾過物ｆ　５ｅｐｈａｒｏｓｅ　４　Ｂカラム（Ｐｈａｒｍａ−ｃｔａ 　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ　、　Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ　、　ＮＪ　）に 適用し、リシンを含有する、非結合流動物全酸処理した５ｅｐｈａｒｏｓｅカラ ムに採堰し、完全リシンがらりシン毒性Ａ鎖全分離し友（これは、米国特許４， ５９０，０７１、第３橢２６〜５２行に記載されている）。このようにして得ら れ次溶出液’１Ｔｒｉｓ緩衝剤（１［１ｒｒＭ　Ｔｒｉｓ、１０　ｍＭ　ＮａＣ Ｌ　）に対してシア濾過し、生成する濾液全同一緩衝剤で平衡にされているＱ、 ＡＥ　５ｅｐｈａ、ｒｏｓｅ　ＦａｓｔＦｌｏｗカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　 Ｆｉｎｅ　Ｃｂｅｚｉｃａｌｓ　）に通した。

上記で得られ九ＲＴＡのＮａＣ４中の濃度ｔ　Ｏ，９重量優に１ｉＩｉｉ整し、 次いでヤギ抗すシン毒性Ｂ＠抗体？予め結合させ次５ａｐｂａｒｏｓｅカラムに 適用することにより精製し、毒性Ｂｆａ夾雑物を除去し友。

Ｃ，イムノトキシンの調製 マウス　モノクローナル抗体乃ＭＡ−Ｈ６５はヒトＣＤ５抗原と反応性でわる。

この細胞系ＸＭＭＬＹ　−Ｈ６５はＡ、Ｔ、Ｃ，Ｃ，に寄託されておジ、Ａｃｃ ｅｓ、ｃ＋ｉｏｎ　Ａ６　ＨＢ９２８６が与えられている。このモノクローナル 抗体を使用し、イムノトキシンを下記のとおジにして、調製した。

ＸＭＭ、ＬＹ　−Ｈ６５組織培養産物を濃縮し、その−全８．５に！９！整し友 。この溶液金不動化しｆｌ−５ｔａｐｈ　。

Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａカラムに適用し、０．１Ｍクエン酸塩、ｐＨ４，５で溶出し た。この溶出液ｆ　１０　ｍＭ　Ｈｅｐｅｓ緩衝剤、０．２５　Ｍ　ＮａＣＡ　 、　ｐ）１７．３　ニ対ｔ、テシア濾ＪＬ、次イテＱＡＥ　５ｅｐｈａｒｏｓｅ 　Ｆａｓｔ　ＦＩＯＷカラムに通した。抗体はこのカラムを通過した。これｉ　 ＰＢＳ％ｐｉ（７，０，５チデキストロースに対してシア濾過し友。この抗体を 、ＲＴＡとカップリングさせるために、５ＰＤＰで活性化した（これは、米国特 許４，５９０，０７１、第４１１１１５５、第５欄５行に記載のとおりにするが ・緩衝剤はアジドの代夛に、５％デキストロースを含有する）。

濃縮されたＲＴＡ　−３０溶液および上記抗体溶液を、ｉ　ｏ　ｍＭ　ＰＯ，、 ｐＨ７，０，０，１５Ｍ　ＮａＣ！！、および５％デキストロ・−スよりなる配 合緩衝剤中に一緒に入れた。この溶液を５％デキストロース含有ＰＢＳで予め平 衡にされている５ｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ　−２００ＨＲカラム（Ｐｈａｒｍａｃ ｉａＦｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、場所？〕に通し、イムノトキシン全フラ、 クションとして溶出し几（これは、米国特許４．５９０，０７１、第５欄１５〜 ２４行に記載されている）。若干のバッチでは、最終溶液にＴＩＥＮ　８０　’ ｔ＝０．１％まで加えた。

例　２ 慢性対宿主移植片疾患に付随する自己免疫様疾患の処置 ｃＧＶＨＤの患者の処置用の薬剤の臨床実験全承認したＦＤＡの一員として、ｃ （）Ｖ’ＨＤ　、’ｌｊＡ者の処置に抗Ａ細胞イムノトキシンＸＯＭＡＺＹＭＥ 　！（６５（罵ＬＹ　−Ｆｌ　６５−　ＲＴＡ、）を使用した。以下に、強皮症 および厘発性胆汁性肝硬変様の症状を有する。数人のＧＶＦ［Ｄの患者の治療結 果をまとめて示す。尺度基準は正常値上〇とし、４＋の進行した疾患でで累進し て決定した。

改、患者ＦＣ 患者ＦＣは再生不能性貧血症の３５才の男性でおっ九。彼はＨＬＡが同一の姉妹 から骨髄移植（ＢＭＴ　）　を受けていた。彼は移植後の１ケ月以内に急性ＧＶ ＨＤを発症し、慢性ＧＶＨＤ　Ｋまで進行していた。イムノトキシン治療の時点 で、彼は高投与量でメチルプレドニソロンを２および中程度の投与量でシクロス ポリンＡｔ−投与されてい友。彼の慢性Ｃ）ＶＨＤはこの処置に対して応答せず 、皮膚の１００％が蘭放型ンステルでおおわれ、口内炎２工び大形潰瘍化し九硬 い口蓋を有していた。

イムノトキシンによって、この皮膚は明確に軟化し、そして口内膜および硬い口 蓋潰瘍は消退し九。彼は低レベルまで漸減された、シクロスポリンＡおよびメチ ルプレドニソロンを受は入れることができた。慢性Ｃ）ＶＨＤは次いで、６ケ月 で再び再発した。

表１　患者ＦＣに対するイムノトキシン処置の結果日数：Ｑ　　　　　７　　　 　１５　　　　２８−４０皮膚　　　　　　３＋　　　３＋　　　２＋　　　　 ２＋腸　　　　　　　２＋　　　１＋　　　１＋　　　　１＋肝膿　　　　　　 １＋　　　１＋　　　１＋　　　　ｉ＋ｂ、患者ＧＨ 患者ＧＨは慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ　）　ｋ発症している４７オの女性でａつ 之。彼女はＨＬＡが同一の兄弟か、らＢＭＴ　ｉ受けてい几。彼女は、移植後の ３ケ月で急性ＧＶ）（Ｄを発症し、引続いて慢性ＧＶＨＤ　ｋ発症してぃ之。

彼女は、中程度のメチルプレドニソロンおよび中程度のシクロスポリンＡで処置 されていた。彼女の病気はこの処置に対し無反応であり、重篤な鱗屑形成、プリ テイス（ｐｕｒｉｔｉｓ　）および皮膚の増大した色素沈着を有してい九。イム ノトキシン処置の７日間以内に、鱗屑は５０％減少し、そして皮膚は軟化し、か つまた色素沈着は減少した。改善は４０日間を通して持続した。

患者は病気の安定化に従い、３ケ月間、中程度のメチルプレドニソロンで処置さ れたくシクロスポリンＡは使用しない〕。６ケ月以内に、彼女は全ての免疫抑制 剤を漸減され九。

表２：患者（）Ｈに対するイムノトキシン治療の結果日数：　　　０　　　７　 　　１５　　２８−４０皮膚　　　　　　　　３＋　　　２＋　　　１＋　　　 １＋腸　　　　　　　　　　　　　０　　０　　０　　０肝臓　　　　　　　　 ｏ　　　ｓ＋　　　ｉ＋　　　ｉ＋Ｃ１リンパ球減少 ｃ（）ＶＨＤの患者において、りンバ球の数は、イムノトキシン投与治療によっ て減少された。

、患者ＦｃおｚびＢＭｌｄ、１４日間の間に、０．０５ｒｎ９／に９／日〜０． ３３■／ユ／日の順次患者投薬量増加計画により、１４日間のｙＭＭＬＹ　−Ｈ ６５−ＲＴＡの静脈内投与を受けてＶｈｆｔ。各投薬量は１時間の期間にわたっ て投与され九。患者ＦＣの場合には、注入の日から２０日間、そして患者ＢＭの 場合には、２８日間、全血からリンパ球を単離し、流動細胞計測法により細胞全 分析するために、免疫螢光法全使用し、ＣＤ５マーカーの存在に関して分析した 。第１図は、各患者におけるイムノトキシン処置から生じるＣ　Ｄ　５マーカー によるリンパ球の顕著な減少？示している。

上記バラグラフ３（ａ）に記載の方法と同様の方法で、ＣＧＶＥＤ　ｋ　有する 患者Ｆ　Ｃ、Ｍ　ＳおよびＢＭに、ＸＭＭＬＹ−Ｈ（５５−ＲＴＡ　′ｔ−投与 した。ＣＤ５マーカーにょろり；／パ琢細胞数を、注入の初日から２Ｄ日間、２ ４日間１几は２８日間（患者によって変える）にわたり、上記のとおりにして測 定した。第２図は、各患者において、イムノトキシン処置から生じる、ＣＤ５マ ーカーによるリンパ球の顕著な減少を示している。第３図は、患者ＦＣＫおける 、ＣＤ３マーカーによるリンパ球のリンパ球の減少の結果を示し、ている。ＣＤ ５およびＣＤ３マーカー細胞の減少はＯに近いが、リンパ球の総減少数は１５日 目に、約２００細胞／ＩＮＫまで有意に減少する。

例　　３ 関節リウマチ症の抗Ｔ細胞イムノトキシン処置本発明の抗Ｔ細胞イムノトキシン を使用する処置に、関節リウマチ症の患者を選んだ。これらの患者は、少なくと も４年間、明確な関節リウマチを有していなければならない。通常の技１ｖｉ− 有する医師に知られている必須条件を使用し、病気の活性度全推定した。これら には、たとえば多発（１０またはそれ以上）グレード、６個の膨れ几関節（Ｄ〜 １０の尺度で〕；多数の関節（Ｃ痛みと圧痛；６０分以上の朝時硬直；ＲＡのＸ 線検査における腐蝕性変化；漸進的で攻撃的な治療に対する貧弱な応答（経口抗 炎症剤、注射吊金および低用量経ロステロイド治僚は効果がない）；ことが包含 される。これらの患者は、本発明゛の抗Ｔ細胞イムノトキシンによる処置の前の 約１ケ月間、わらゆる病気緩和薬剤の投与を止められていた。

前記のとおジにして調製されたＸｏｍａ−ｚ狗ｅ’　−Ｈ６５を、５〜９日間に わたジ、０．０５．０．１．０．２および０．３３Ｔｎ９／ｋｌｉＦ／日の投薬 量で投与した。４人の患者金各投薬量で処置した。患者は、関節のはれおよび硬 直を含む数種の症状音用いて追跡観察し九。これらの患者は各投薬量レヘルテ応 答ｔ、７ｔ。ＸｏｍＡ、Ｚｙｍｅ”　−Ｈ６５’ｋ　Ｏ，０５■／即／日の量で 投与された患者の１人は、６ケ月間、有意の治療効果金示した。０．１■／ユ／ 日（２人の患者）および０．３３ダ／に９７日（１人の患者で、５〜９日間の単 次処置計画によって、同様の持続し次効果が見い出され九。自己免疫疾患を有す る患者に対する、抗Ｔ細胞イムノトキシンの投与による治療的効果は投与期間奮 起えて、良好に持続することが、先ず見い出され九。

例　　４ 重篤な急性再生不能性貧血症の抗！細胞イムノトキシン処置 再生不能性貧血症は、汎血球減少（ｐａｎｃｙｔｏｐｓｎｉａ）および骨髄低細 胞性（ｈｙｐｏｃｅｌｌｕｌａｒｉｔｙ　）　ｆ特徴とする生命にかかわる疾患 である。多くのデータは、重篤な急性再生不能性貧血が自己免疫疾患であること を支持している。

中程度の、マ之は重篤な再生不能性貧血症金有するものと診断される患者を、処 置のために選ぶ。この診断は次の基準に従う：形成不全を示す骨髄生検（１０チ 細胞充実性の減少）；および拳粒３ｆ（＜５００／−）、血小板（＜２［］、０ ００／ｍ＋＋３）’？＋友は網状赤面３１（＜　９０，０００　／　ｍｎ３）の 検査値。

ｘｏｍａｚｙｉｎｅｏ−Ｈ６５ハ、前記のとおｐｉｃしてＪｆｆする。患者に、 １０日連続期間にわたり、Ｘｏｍａ　、ＺｙｍｅＩｌＢ−Ｈ６５を１時間の注入 ｔ１［）回行なうことによって投与する。この抗Ｔ細胞イムノトキシンは、０． ２　、０．３５および０．５１１１９／に９／日の投薬量で投与する。これらの 患者の治療に対する応答は、処置後の３ケ月目および６ケ月目における顆粒球数 および血小板数の改善または輸血必要度の改善によって、検査する。

例　　５ タイプ１１！尿病の抗Ｔ細胞イムノトキシン処置糟尿病には、２ｆｆｉの主なタ イプがある。タイプ１は古典的に、外部からのイン−シュリン″を要求するもの でおる。タイプ１は、代表的に、４０才よシ前に発病し、インシュリン分泌の不 在全件なう。長期のタイプ１インシュリン依存性塘尿病患者の膵臓は膵臓入口細 胞が欠けている。タイプ１インシユリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ　）の病因が自 己免疫におることは多くの資料で証明されている。

患者は、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｉｏｎによっ て確立されている要件にもとづいて、Ｉ　ＤＤＭでおると診断する。

Ｘｏｍａ、−Ｚｙｍｅ”　−Ｈ６５は、前記のと２りにして調製する。患者には 、５日の連続期間にわ７ｔ！ｌ１１回当り１時間の注入を５回行なってＸｏｍａ 　ｚｙｍｅ　　−Ｈ６５ｆ投与する。この抗Ｔ細胞イムノトキシンは０．１およ び０．２１ｎ９／　ｋ＃　、／日の投薬量で投与する。治療に対する患者の応答 は、正常なもしくは許容される空腹時血塘値の維丹に必要なインシュリンのｔ’ ｉ−測定することによって観察する。

タイプ１糖尿病の発病に係る診断上の予知条件全便用し、予防的処置のための患 者を選択する。患者には、約０．１および約０．２雫／Ｉ’９／日の投薬量で、 抗Ｔ細胞イムノトキシンを投与する。

本発明を明白にし、理解する目的で、例によって、幾分詳細に、本発明を説明し 友が、成る変更および修正が特許請求の範囲内で行なわれうることは明白である 。

ＦＩＧ、ｊ。

ＦＩＧ＝２゜ ＦＩＧ、ｊ。

国際調査報告

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. １．抗Ｔ細胞免疫グロブリンに共役結合している細胞毒分子を含有する抗Ｔ細胞 イムノトキシンの治療有効量を、自己免疫疾患を有する動物に投与することより なる自己免疫疾患の処置方法。
2. ２．上記細胞毒分子がリボン−ム抑制タンパク質（ＲＩＰ）またはＡＤＰリボシ ル化トキシンである、請求の範囲１項の方法。
3. ３．ＲＩＰが毒性レクチンＡ鎖である、請求の範囲２項の方法。
4. ４．毒性レクチンＡ鎖がリシン（ｒｉｃｉｎ）Ａ鎖（ＲＴＡ）である、請求の範 囲３項の方法。
5. ５．ＲＴＡがＲＴＡ−３０である、請求の範囲４項の方法。
6. ６．抗Ｔ細胞免疫グロブリンが少なくとも１個のＴ細胞マーカーと反応性である 、請求の範囲１項の方法。
7. ７．自己免疫疾患が慢性関節リウマチである、請求の範囲１項の方法。
8. ８．自己免疫疾患が真正糖尿病タイプ１である、請求の範囲１項の方法。
9. ９．自己免疫疾患が再生不能性貧血である、請求の範囲１項の方法。
10. １０．自己免疫疾患が炎症性腸疾患である、請求の範囲１項の方法。 一「
11. １１．炎症性腸疾患がクローン病である、請求の範囲１０項の方法。
12. １２．炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎である、請求の範囲１０項の方法。
13. １３．抗Ｔ細胞免疫グロブリンが、抗Ｔ細胞モノクローナル抗体である、請求の 範囲１項の方法。
14. １４．モノクローナル抗体がＡ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．ＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＨＢ９ ２８６を有するハイプリドーマＸＭＭＬＹ−Ｈ６５によって産生されるものであ る、請求の範囲１３項の方法。
15. １５．モノクローナル抗体がマウスである、請求の範囲１３項の方法。
16. １６．上記抗Ｔ細胞イムノトキシンを約０．０１ｍｇ／宿主体重ｋｇ〜約５ｍｇ ／宿主体重ｋｇの治療有効量で投与する、請求の範囲１項の方法。
17. １７．抗Ｔ細胞イムノトキシンを約０．０５ｍｇ／宿主体重ｋｇ〜約０．３３ｍ ｇ／宿主体量ｋｇの治療有効量で投与する、請求の範囲１項の方法。