JP6733993B2 - スルファミドリンカー、スルファミドリンカーのコンジュゲート、及び調製の方法 - Google Patents

スルファミドリンカー、スルファミドリンカーのコンジュゲート、及び調製の方法 Download PDF

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Description

［発明の技術分野］
本発明はバイオコンジュゲーションの分野におけるものである。本発明は、スルファミドリンカー及びスルファミドリンカーのコンジュゲート、並びにそれらの調製のための方法に関する。さらに特に、本発明は、アシルスルファミド基及び／又はカルバモイルスルファミド基を含むリンカー、並びに上記リンカーを含むコンジュゲートに関する。本発明は、リンカーを含むバイオコンジュゲートの調製のためのプロセスにさらに関し、上記リンカーはアシルスルファミド基及び／又はカルバモイルスルファミド基を含む。
［発明の背景］
バイオコンジュゲーションは、少なくとも１つが生体分子である２つ以上の分子を連結するプロセスである。生体分子（単数又は複数）は、「目的の生体分子（単数又は複数）」と称されることもあり、他の分子（単数又は複数）は、「標的分子」又は「目的の分子」と称されることもある。典型的に、目的の生体分子（ＢＯＩ）は、タンパク質（又はペプチド）、グリカン、核酸（又はオリゴヌクレオチド）、脂質、ホルモン又は天然薬物（又はその断片若しくは組合せ）からなる。目的の他の分子（ＭＯＩ）は生体分子であってもよく、それゆえに、ホモ若しくはヘテロ二量体（又は高級オリゴマー）の形成に至るか、又は他の分子は、コンジュゲーションプロセスによって目的の生体分子に付与される特定の特色を有することができる。例えば、検出及び／又は単離のための化学プローブを用いる共有結合修飾によるタンパク質構造及び機能の変調は、プロテオームベースの研究調査及び生体医用用途における強力なツールとして発展してきた。タンパク質の蛍光性又は親和性タグ付けは、タンパク質の天然生育地におけるタンパク質の輸送を研究する上での鍵となる。タンパク質−炭水化物コンジュゲートに基づくワクチンは、ＨＩＶ、癌、マラリア及び病原性細菌との闘いにおいて活躍してきた。一方、マイクロアレイに固定されている炭水化物は、グライコームの解明に役立っている。合成のＤＮＡ及びＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＮ）は、診断及び治療用途、例えばマイクロアレイ科学技術、アンチセンス及び遺伝子サイレンシング治療、ナノテクノロジー、並びに様々な材料科学用途のための適当な官能性基の導入を必要とする。例えば、細胞透過性リガンドの結合は、オリゴヌクレオチドベースの治療（アンチセンス、ｓｉＲＮＡ）中に遭遇するＯＮの低い内部移行速度に取り組むために、最も一般的に適用される戦略である。同様に、オリゴヌクレオチドベースのマイクロアレイの調製は、適当な固体表面、例えばガラスへのＯＮの選択的固定化を必要とする。
２つ（以上）の分子構造を共有結合的に連結するのに適当な化学反応の多数の例がある。しかしながら、生体分子の標識化は、適用することができる反応条件（溶媒、濃度、温度）に高い制限を課し、一方で、化学選択的標識化を所望の場合は、反応性基の選択が制限される。当然の理由により、生物系は一般に水性環境において最も良く機能し、これは、バイオコンジュゲーションの試薬が水性系における適用に適当であるべきであることを意味している。一般に、２つの戦略的概念がバイオコンジュゲーション科学技術の分野において認識され得る：（ａ）例えばチオール、アミン、アルコール若しくはヒドロキシフェノール単位などの目的の生体分子にすでに存在する官能基に基づくコンジュゲーション、又は（ｂ）実際のコンジュゲーションプロセスの前に１個（又は複数）の独特の反応性基をＢＯＩに改変することを伴う２段階プロセス。
第１の手法は、タンパク質（例えばシステイン、リシン、セリン及びチロシン）における反応性アミノ酸側鎖、又はグリカン（例えばアミン、アルデヒド）若しくは核酸（例えばプリン若しくはピリミジン官能性基又はアルコール）における官能基を典型的に伴う。とりわけ、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３に要約されている通り、ここ何年かの間に、これらの官能基のうちの１つの化学選択的標的化に、多数の反応性官能基、例えばマレイミド、ハロアセトアミド、活性化エステル、活性化カーボネート、ハロゲン化スルホニル、活性化チオール誘導体、アルケン、アルキン、アレンアミドなどが利用できるようになってきており、その各々がコンジュゲーションのそれ自体の特定の条件（ｐＨ、濃度、化学量論、光、など）を必要とする。最も顕著には、システイン−マレイミドコンジュゲーションは、高い反応速度及び化学選択性のおかげで、タンパク質コンジュゲーションで卓越している。しかしながら、多くのタンパク質、そして無論他の生体分子における場合のように、システインがコンジュゲーションに利用可能でないと、他の方法がしばしば必要とされ、各々が独自の欠点に悩まされている。
バイオコンジュゲーションのための的確な及び広く適用可能な解決策は、上記２段階手法に関与する。より面倒ではあるが、改変された官能性基を介する２段階コンジュゲーションは、天然官能性基におけるコンジュゲーションよりも高い選択性（部位特異性）が典型的には得られる。その上、完全な安定性は、コンストラクトの適切な選択によって達成することができる。この点は、特にシステイン−マレイミドコンジュゲーションの場合、未変性の官能性基における１段階コンジュゲーションの重要な欠点であり得る。ＢＯＩに付与することができる官能基の典型例としては、（歪み）アルキン、（歪み）アルケン、ノルボルネン、テトラジン、アジド、ホスフィン、ニトリルオキシド、ニトロン、ニトリルイミン、ジアゾ化合物、カルボニル化合物、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミン及びヒドラジンが挙げられ、これらは、化学的又は分子生物学手法のいずれかによって達成することができる。上の官能基の各々は、少なくとも１つの反応パートナーを有することが知られており、多くの場合に完全な相互反応性を伴う。例えば、シクロオクチンは１，３−双極子と、歪みアルケンはテトラジンと、及びホスフィンはアジドと選択的及び排他的に反応し、完全に安定な共有結合に至る。しかしながら、上の官能基のいくつかは、高親油性であるという不利な点を有し、このことは、特に目的の親油性分子との組合せでコンジュゲーション効率を損なうおそれがある（下記を参照されたい）。
生体分子と目的の他の分子との間の最終連結単位は、優先的に、可溶性、安定性及び生体適合性の点から水性環境と完全に適合性であるべきでもある。例えば、高親油性リンカーは、凝集（コンジュゲーション中又は後）に至ることがあり、凝集は、特にＭＯＩが疎水性性質でもある場合、反応時間を著しく増加させる及び／又はコンジュゲーション収率を低減することがある。同様に、高親油性リンカー−ＭＯＩ組合せは、同じ又は他の生体分子の表面又は特定の疎水性パッチへの非特異的結合に至ることがある。リンカーが水性加水分解又は他の水誘発切断反応に感受性であるならば、元のバイオコンジュゲートを含む構成成分は拡散によって分離する。例えば、ある特定のエステル部分はケン化されるため適当でなく、一方、β−ヒドロキシカルボニル又はγ−ジカルボニル化合物は、それぞれレトロアルドール反応又はレトロマイケル反応に至り得る。最終的に、リンカーは、バイオコンジュゲートに存在する官能性基に対して、又はバイオコンジュゲートの適用中に遭遇し得る任意の他の官能性基に対して不活性であるべきであり、これにより、特に、例えばケトン部分若しくはアルデヒド部分（イミン形成に至ることがある）、α，β−不飽和カルボニル化合物（マイケル付加）、チオエステル若しくは他の活性化エステル（アミド結合形成）を特色とするリンカーの使用は除外される。
エチレングリコールの直鎖オリゴマーで作製されている化合物、いわゆるＰＥＧ（ポリエチレングリコール）リンカーは、最近、生体分子コンジュゲーションプロセスにおいて特に普及している。ＰＥＧリンカーは、高水溶性、非毒性、非抗原性であり、凝集をごくわずかにしか又は全く生じない。この理由により、目的の（生体）分子を用いていずれかの端部で選択的に修飾することができる多種多様な直鎖の二官能性ＰＥＧリンカーが、様々な供給元から市販されている。ＰＥＧリンカーは、酸化エチレンの重合プロセスの生成物であり、そのため、１ｋＤａ、２ｋＤａ、４ｋＤａ又はそれ以上（最大６０ｋＤａ）を中心とする平均重量分布を有するＰＥＧコンストラクトに部分的に分解することができる鎖長の確率的混合物として典型的に得られる。最大４ｋＤａの分子量を有する均質の個別ＰＥＧ（ｄＰＥＧ）も知られており、その分枝バージョンは最大１５ｋＤａになる。興味深いことに、ＰＥＧ単位それ自体は、生体分子に特別な特徴を付与する。特に、タンパク質ＰＥＧ化は、インビボにおける滞留の延長、代謝酵素による分解の減少、及びタンパク質免疫原性の低減又は消失に至ることがある。いくつかのＰＥＧ化タンパク質はＦＤＡ承認されており、現在市場に出ている。
ＰＥＧリンカーは、高い極性のおかげで、水性条件下で小さい部分及び／又は水溶性部分のバイオコンジュゲーションに全く適当である。しかしながら、目的の疎水性の非水溶性分子のコンジュゲーションの場合において、ＰＥＧ単位の極性は、疎水性を相殺するのに不十分で、反応速度の著しい低減、より低い収率及び凝集誘発の課題に至り得る。こうした場合において、長いＰＥＧリンカー及び／又はかなりの量の有機共溶媒が、試薬を可溶化するために必要とされることがある。例えば、抗体−薬物コンジュゲートの分野において、モノクローナル抗体への別々の数の毒性ペイロードの結合の制御が鍵であり、ペイロードはオーリスタチンＥ若しくはＦ、メイタンシノイド、デュオカルマイシン、カリケアマイシン又はピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）の群から典型的に選択され、多くの他のものも検討中である。オーリスタチンＦを除いて、全ての毒性ペイロードは非水溶性に乏しく、成功コンジュゲーションを達成するために２５％のジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）又は５０％のプロピレングリコール（ＰＧ）などの有機共溶媒を必要とする。疎水性ペイロードの場合において、上述の共溶媒の使用にもかかわらず、大化学量論の試薬がコンジュゲーション中に必要とされることがあり、一方で、効率及び収率は、例えば、参照により組み込まれるＮａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎ．２０１４、２４、１２５６〜１２６３においてＳｅｎｔｅｒらによって記載されている通り、（プロセス中又は生成物単離後）凝集により著しく損なわれることがある。長いＰＥＧスペーサー（１２単位以上）の使用は、可溶性及び／又はコンジュゲーション効率を部分的に増強することができるが、長いＰＥＧスペーサーは、より急速なインビボクリアランスに至ることがあり、それゆえにＡＤＣの薬物動態プロファイルに負の影響を及ぼすことが示されている。
上記から、疎水性部分の速い及び効果的なコンジュゲーションを可能にする短い極性スペーサーの需要があることが明らかになる。後者が、例えば歪みアルキン、アルケン及びホスフィン（上を参照されたい）などの疎水性反応性部分が用いられるコンジュゲーション反応のレベルを高めることにも関係することは明らかである。
リンカーは当技術分野において知られており、例えば、参照により組み込まれる国際公開第２００８／０７０２９１号に開示されている。国際公開第２００８／０７０２９１号は、アンカリング構成成分への標的剤のカップリングのためのリンカーを開示している。上記リンカーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）によって代表される親水性領域、及び標的化剤へカップリングされるキラル中心を欠如している伸長を含有している。
参照により組み込まれる国際公開第０１／８８５３５号は、バイオコンジュゲーションのための表面用のリンカー系、特に、新規な親水性スペーサー基を有するリンカー系を開示している。上記リンカー系における使用のための親水性原子又は親水性基は、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ（ケト基）、Ｏ−Ｃ＝Ｏ（エステル基）及びＣＲ３Ｒ４からなる群から選択され、ここでＲ３及びＲ４は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ及びＣ１〜Ｃ４アシルオキシからなる群から独立して選択される。
参照により組み込まれる国際公開第２０１４／１００７６２号は、適切な条件下で切断可能であるとともに親水性基を組み込むことで化合物のより良好な可溶性を提供する親水性自己犠牲リンカーを有する化合物を記載している。上記化合物は、薬物部分、選択された細胞集団を標的化できる標的化用部分、並びにアシル単位、薬物部分と標的化用部分との間の距離を提供するための任意選択のスペーサー単位を含有するリンカー、適切な条件下で切断可能であり得るペプチドリンカー、親水性自己犠牲リンカー、及び任意選択の第２の自己犠牲スペーサー又は環化自己脱離リンカーを含む。親水性自己犠牲リンカーは、例えばベンジルオキシカルボニル基である。
本発明は、アルファ端部及びオメガ端部を含む化合物（リンカー−コンジュゲートとも称される）に関し、上記化合物は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基Ｑ１をアルファ端部に、及び標的分子をオメガ端部に含み、上記化合物は、式（１）で表される基又はその塩：
Figure 0006733993
（式中：
ａは、０若しくは１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに接続されていてもよい）をさらに含み、
ここで、式（１）で表される基又はその塩は、上記化合物の上記アルファ端部と上記オメガ端部との間に位置する。
さらに特に、本発明は、式（４ａ）若しくは（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲート又はその塩に関する：
Figure 0006733993
（式中：
ａは、独立して０又は１であり；
ｂは、独立して０又は１であり；
ｃは、０又は１であり；
ｄは、０又は１であり；
ｅは、０又は１であり；
ｆは、１〜１５０の範囲における整数であり；
ｇは、０又は１であり；
ｉは、０又は１であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｓｐ１は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ２は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ３は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ４は、スペーサー部分であり；
Ｚ１は、Ｑ１又はＳｐ３を、Ｓｐ２、Ｏ若しくはＣ（Ｏ）又はＮ（Ｒ１）に接続する接続基であり、；
Ｚ２は、Ｄ又はＳｐ４を、Ｓｐ１、Ｎ（Ｒ１）、Ｏ又はＣ（Ｏ）に接続する接続基であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される；又はＲ１は、Ｄ、−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］若しくは−［（Ｓｐ２）ｃ−（Ｚ１）ｄ−（Ｓｐ３）ｇ−Ｑ１］であり、ここでＳｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｄ、Ｑ１、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｇ及びｉは、上で定義されている通りである）。
本発明は、バイオコンジュゲートの調製のためのプロセスにも関し、上記プロセスは、リンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１を生体分子の官能基Ｆ１と反応させるステップを含み、ここでリンカー−コンジュゲートは、アルファ端部及びオメガ端部を含む化合物であり、上記化合物は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基Ｑ１をアルファ端部に、及び標的分子をオメガ端部に含み、上記化合物は、式（１）で表される基又はその塩：
Figure 0006733993
（式中、ａ及びＲ１は、上で定義されている通りである）をさらに含み、ここで式（１）で表される基又はその塩は、上記化合物の上記アルファ端部と上記オメガ端部との間に位置する。
さらに特に、本発明は、バイオコンジュゲートの調製のためのプロセスに関し、上記プロセスは、上で定義されている通りの式（４ａ）又は（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１を生体分子の官能基Ｆ１と反応させるステップを含む。好ましい実施形態において、本発明は、（４＋２）−付加環化（例えば、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応）又は（３＋２）−付加環化（例えば、１，３−双極子付加環化）、好ましくは１，３−双極子付加環化、より好ましくはアルキン−アジド付加環化などの付加環化を介するバイオコンジュゲートの調製のためのプロセスに関し、ここで、Ｑ１はシクロアルキン基などのアルキン基である又はアルキン基を含み、Ｆ１はアジド基であるのが最も好ましい。さらに好ましい実施形態において、本発明は、標的分子が疎水性であり（即ち、水に弱可溶性）、最も好ましくは、標的分子が水中で多くとも０．１％（ｗ／ｗ）の水溶性（２０℃及び１００ｋＰａ）を有するバイオコンジュゲートの調製のためのプロセスに関する。殊に好ましい実施形態において、本発明は、付加環化、好ましくは１，３−双極子付加環化、より好ましくはアルキン−アジド付加環化を介するバイオコンジュゲートの調製のためのプロセスに関し、ここで、Ｑ１はアルキン基である又はアルキン基を含み、Ｆ１はアジド基であるのが最も好ましく、標的分子は疎水性であり、標的分子は水中で多くとも０．１％（ｗ／ｗ）の水溶性（２０℃及び１００ｋＰａ）を有するのが最も好ましい。
本発明は、本発明によるプロセスによって得ることができるバイオコンジュゲートにさらに関する。
生体分子のコンジュゲーションの一般概念を記載する図であり：１個又は複数の官能基Ｆ１を含有する目的の生体分子（ＢＯＩ）は、特定のリンカーを介して反応性基Ｑ１に共有結合している（過剰の）標的分子Ｄ（目的の分子又はＭＯＩとも称される）とともにインキュベートされる。バイオコンジュゲーションのプロセスにおいて、Ｆ１とＱ１との間の化学反応が起き、それによって、ＢＯＩとＭＯＩとの間の共有結合的接続を含むバイオコンジュゲートを形成する。ＢＯＩは、例えばペプチド／タンパク質、グリカン又は核酸であり得る。 例えば３−メルカプトプロピオニル基（１１ａ）、アジドアセチル基（１１ｂ）若しくはアジドジフルオロアセチル基（１１ｃ）を用いて修飾することができる、ガラクトサミンのＵＤＰ糖類の誘導体のいくつかの構造を示す図である。 ＵＤＰ−糖類１１ａ〜ｄの任意のものが、ガラクトシルトランスフェラーゼ突然変異体又はＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼの作用下で、ＧｌｃＮＡｃ部分１２（例えば、グリカンがエンドグリコシダーゼによってトリミングされているモノクローナル抗体）を含む糖タンパク質に結合することができ、それによって、ＧａｌＮＡｃ誘導体とＧｌｃＮＡｃ（それぞれ、化合物１３ａ〜ｃ）との間にβ−グリコシド１−４連結を生成させる方法を概略的に表示する図である。 修飾抗体１３ａ〜ｃが、マレイミドへの求核付加の手段によって（チオエーテルコンジュゲート１４に至る１３ａに関する）、又はシクロオクチン試薬を用いる歪み促進付加環化で（それぞれ、トリアゾール１５又は１６に至る１３ｂ又は１３ｃに関する）バイオコンジュゲーションプロセスを受けることができる方法を示す図である。 Ｎ−マレイミジル反応性基Ｑ１が、リンカー単位を介してピレン基（Ｄ）に接続されている、いくつかの化合物の構造を示す図である。 ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル反応性基Ｑ１（ＢＣＮ基とも称される）が、リンカー単位を介してベンジルアミン（Ｄ）に接続されている、いくつかの化合物の構造を示す図である。 ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル反応性基Ｑ１（ＢＣＮ基とも称される）又はジベンゾアゾシクロオクチン反応性基Ｑ１（ＤＩＢＡＣ基又はＤＢＣＯ基とも称される）が、リンカー単位を介してピレンに接続されている、いくつかの化合物の構造を示す図である。 ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル反応性基Ｑ１（ＢＣＮ基とも称される）が、リンカー単位を介してメイタンシンに接続されている、いくつかの化合物の構造を示す図である。 ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル反応性基Ｑ１（ＢＣＮ基とも称される）が、リンカー単位を介してＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−デュオカルマイシンコンストラクトに接続されている、いくつかの化合物の構造を示す図である。 ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル反応性基Ｑ１（ＢＣＮ基とも称される）が、リンカー単位を介してＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−Ａｈｘ−メイタンシンにコンジュゲートされている、本発明によるいくつかの化合物の構造を示す図である。 ０．１％のＴＦＡを用いる又は緩衝液ｐＨ７．４における化合物１９〜２３及び３０〜３８のＨＰＬＣ保持時間を示すグラフである。 スルファミドリンカー（化合物２６）又は短いＰＥＧリンカー（化合物２４若しくは２５）を介して、トラスツズマブ−Ｎ３（化合物１３ｂ）とコンジュゲートされるＢＣＮ−ピレン誘導体のコンジュゲーション効率を示すグラフである。 スルファミドリンカー（化合物２９）又は短いＰＥＧリンカー（化合物２７若しくは２８）を介して、トラスツズマブ−Ｎ３（化合物１３ｂ）とコンジュゲートされるＤＩＢＡＣ−ピレン誘導体のコンジュゲーション効率を示すグラフである。 スルファミドリンカー（化合物３３）又は短いＰＥＧリンカー（化合物３０−３２）を介して、トラスツズマブ−Ｎ３（化合物１３ｂ）とコンジュゲートされるＢＣＮ−メイタンシン誘導体のコンジュゲーション効率を示すグラフである。 スルファミドリンカー（化合物３３）又は短いＰＥＧリンカー（化合物３０〜３２、化合物３０は３３と重複している）を介して、トラスツズマブ−Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ（化合物１３ｃ）とコンジュゲートされるＢＣＮ−メイタンシン誘導体のコンジュゲーション効率を示すグラフである。 スルファミドリンカー（化合物３５）又は短いＰＥＧリンカー（化合物３４）を介して、トラスツズマブ−Ｎ３（化合物１３ｂ）とコンジュゲートされるＢＣＮ−デュオカルマイシン誘導体のコンジュゲーション効率を示すグラフである。 スルファミドリンカー（化合物３５）又は短いＰＥＧリンカー（化合物３４）を介して、トラスツズマブ−Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ（化合物１３ｃ）とコンジュゲートされるＢＣＮ−デュオカルマイシン誘導体のコンジュゲーション効率を示すグラフである。 イソシアン酸クロロスルホニル（ＣＳＩ）及びアミンを用いる連続処理によって、アルコール（４０）をカルバモイルスルファミド誘導体（４２）に変換するための一般の合成スキームを示す図である。カルバモイルスルファミド４２は、出発物質のアルコールがｔｅｒｔ−ブタノールであるならば、アシル化されることで４４を生ずるスルファミド４３を、酸を用いるｔｅｒｔ−ブチル脱保護によって得ることで、アシルスルファミド（４４）に変換することができる。 Ｑ１がＮ−マレイミジル基であり、Ｄがピレンである、いくつかのリンカー−コンジュゲートの合成を示す図である。化合物１８は本発明によるが、化合物１７は比較例である。 Ｑ１がビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基（ＢＣＮ基とも称される）であり、Ｄがベンジル基である、いくつかのリンカー−コンジュゲートの合成を示す図である。 Ｑ１がビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基（ＢＣＮ基とも称される）であり、Ｄがベンジル基である、リンカーに２個のスルファミド基を保有するリンカー−コンジュゲートの合成を示す図である。 Ｑ１がビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基（ＢＣＮ基とも称される）であり、Ｄがピレン基である、いくつかのリンカー−コンジュゲートの合成を示す図である。 Ｑ１がヘテロシクロアルキニル基（ＤＩＢＡＣ）であり、Ｄがピレン基である、いくつかのリンカー−コンジュゲートの合成を示す図である。 Ｑ１がビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基（ＢＣＮ基とも称される）であり、Ｄが細胞毒（メイタンシン）である、２つの標的分子Ｄを含むリンカー−コンジュゲートの合成を示す図である。 天然に存在する又は改変することによって導入されるのいずれかの生体分子における代表的なセットの官能基（Ｆ１）を示す図であり、上記官能基（Ｆ１）は、反応性基Ｑ１との反応で接続基Ｚ３に至る。接続基Ｚ３は、Ｆ２とＱ２との間の反応の結果であってもよい。官能基Ｆ１は、選択の任意の位置で生体分子に人工的に導入（改変）することもできる。 本発明によるバイオコンジュゲート３６〜３８について、凝集の程度を示すグラフである。 スルファミドリンカー（１３ａにコンジュゲートされている３６）を用いる本発明によるバイオコンジュゲート対ＰＥＧリンカー（１３ａにコンジュゲートされている３０）を用いる比較用バイオコンジュゲート、並びにトラスツズマブについて、２週の期間にわたる凝集の進行を示すグラフである。
［発明の詳細な説明］
定義
「含むこと」という動詞、及びそれの活用は、本明細書及び請求項において使用される場合、上記単語に追従する項目が含まれるが、具体的に記述されてない項目が除かれないことを意味する非限定的な意味において使用される。
加えて、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」による要素への言及は、要素のうちの１つ及び１つだけがあることを文脈が明確に必要としていない限り、要素のうちの１つ超が存在するという可能性を除かない。不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」は、したがって「少なくとも１つ」を通常意味する。
本明細書及び請求項に開示されている化合物は、１つ又は複数の不斉中心を含むことができ、上記化合物の異なるジアステレオマー及び／又はエナンチオマーが存在し得る。本明細書及び請求項における任意の化合物の記載は、別段に明記されていない限り、全てのジアステレオマー及びその混合物が含まれると意味される。加えて、本明細書及び請求項における任意の化合物の記載は、別段に明記されていない限り、個々のエナンチオマー、並びにエナンチオマーの任意の混合物、ラセミ又はそうでないものの両方が含まれると意味される。化合物の構造が、特定のエナンチオマーとして図示されている場合、本出願の発明は、その特定のエナンチオマーに限定されないと理解されるべきである。
化合物は、異なる互変異性体形態であることがある。本発明による化合物は、別段に明記されていない限り、全ての互変異性体形態が含まれると意味される。化合物の構造が特定の互変異性体として図示されている場合、本出願の発明は、その特定の互変異性体に限定されないと理解されるべきである。
本明細書及び請求項に開示されている化合物は、エキソ及びエンドジアステレオ異性体としてさらに存在することがある。別段に明記されていない限り、本明細書及び請求項における任意の化合物の記載は、化合物個々のエキソ及び個々のエンドジアステレオ異性体の両方、並びにその混合物が含まれると意味される。化合物の構造が特定のエンド又はエキソジアステレオマーとして図示されている場合、本出願の発明は、その特定のエンド又はエキソジアステレオマーに限定されないと意味される。
さらに、本明細書及び請求項に開示されている化合物は、シス及びトランス異性体として存在することがある。別段に明記されていない限り、本明細書及び請求項における任意の化合物の記載は、化合物の個々のシス及び個々のトランス異性体の両方、並びにその混合物が含まれると意味される。例として、化合物の構造がシス異性体として図示されている場合、対応するトランス異性体又はシス及びトランス異性体の混合物は、本出願の発明から除かれないと理解されるべきである。化合物の構造が特定のシス又はトランス異性体として図示されている場合、本出願の発明は、その特定のシス又はトランス異性体に限定されないと理解されるべきである。
非置換アルキル基は一般式ＣｎＨ２ｎ＋１を有し、直鎖又は分枝であり得る。アルキル基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｔ−ブチル、１−ヘキシル、１−ドデシルなどが挙げられる。
シクロアルキル基は環状アルキル基である。非置換シクロアルキル基は少なくとも３個の炭素原子を含み、一般式ＣｎＨ２ｎ−１を有する。シクロアルキル基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられる。
アルケニル基は、１個又は複数の炭素−炭素二重結合を含み、直鎖又は分枝であり得る。１個のＣ−Ｃ二重結合を含む非置換アルケニル基は、一般式ＣｎＨ２ｎ−１を有する。２個のＣ−Ｃ二重結合を含む非置換アルケニル基は、一般式ＣｎＨ２ｎ−３を有する。アルケニル基は、末端炭素−炭素二重結合及び／又は内部炭素−炭素二重結合を含むことがある。末端アルケニル基は、炭素−炭素二重結合が炭素鎖の末端位置に位置するアルケニル基である。アルケニル基は、２個以上の炭素−炭素二重結合を含むこともある。アルケニル基の例としては、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ｔ−ブテニル、１，３−ブタジエニル、１，３−ペンタジエニルなどが挙げられる。別段に明記されていない限り、アルケニル基は、下記に定義されている通りの１個又は複数の独立して選択される置換基で任意選択で置換されていてもよい。別段に明記されていない限り、アルケニル基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から独立して選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されることがある。
アルキニル基は、１個又は複数の炭素−炭素三重結合を含み、直鎖又は分枝であり得る。１個のＣ−Ｃ三重結合を含む非置換アルキニル基は、一般式ＣｎＨ２ｎ−３を有する。アルキニル基は、末端炭素−炭素三重結合及び／又は内部炭素−炭素三重結合を含むことがある。末端アルキニル基は、炭素−炭素三重結合が炭素鎖の末端位置に位置するアルキニル基である。アルキニル基は、２個以上の炭素−炭素三重結合を含むこともある。別段に明記されていない限り、アルキニル基は、下記に定義されている通りの１個又は複数の独立して選択される置換基で任意選択で置換されていてもよい。アルキニル基の例としては、エチニル、プロピニル、イソプロピニル、ｔ−ブチニルなどが挙げられる。別段に明記されていない限り、アルキニル基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から独立して選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されていることがある。
アリール基は、６〜１２個の炭素原子を含み、単環式及び二環式構造が含まれ得る。任意選択で、アリール基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。アリール基の例はフェニル及びナフチルである。
アリールアルキル基及びアルキルアリール基は、少なくとも７個の炭素原子を含み、単環式及び二環式構造が含まれ得る。任意選択で、アリールアルキル基及びアルキルアリールは、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。アリールアルキル基は例えばベンジルである。アルキルアリール基は例えば４−ｔ−ブチルフェニルである。
ヘテロアリール基は、少なくとも２個の炭素原子（即ち、少なくともＣ２）及び１個又は複数のヘテロ原子Ｎ、Ｏ、Ｐ又はＳを含む。ヘテロアリール基は、単環式又は二環式構造を有することがある。任意選択で、ヘテロアリール基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。適当なヘテロアリール基の例としては、ピリジニル、キノリニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、ピロリル、フラニル、トリアゾリル、ベンゾフラニル、インドリル、プリニル、ベンゾオキサゾリル、チエニル、ホスホリル及びオキサゾリルが挙げられる。
ヘテロアリールアルキル基及びアルキルヘテロアリール基は、少なくとも３個の炭素原子（即ち、少なくともＣ３）を含み、単環式及び二環式構造が含まれ得る。任意選択で、ヘテロアリール基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。
アリール基が（ヘテロ）アリール基として示される場合、表記は、アリール基及びヘテロアリール基が含まれると意味される。同様に、アルキル（ヘテロ）アリール基は、アルキルアリール基及びアルキルヘテロアリール基が含まれると意味され、（ヘテロ）アリールアルキルは、アリールアルキル基及びヘテロアリールアルキル基が含まれると意味される。したがって、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基は、Ｃ２〜Ｃ２４ヘテロアリール基及びＣ６〜Ｃ２４アリール基を含むと解釈されるべきである。同様に、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基は、Ｃ７〜Ｃ２４アルキルアリール基及びＣ３〜Ｃ２４アルキルヘテロアリール基が含まれると意味され、Ｃ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキルは、Ｃ７〜Ｃ２４アリールアルキル基及びＣ３〜Ｃ２４ヘテロアリールアルキル基が含まれると意味される。
シクロアルキニル基は環状アルキニル基である。１個の三重結合を含む非置換シクロアルキニル基は、一般式ＣｎＨ２ｎ−５を有する。シクロアルキニル基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。シクロアルキニル基の例はシクロオクチニルである。
ヘテロシクロアルキニル基は、酸素、窒素及び硫黄の群から選択されるヘテロ原子によって中断されているシクロアルキニル基である。ヘテロシクロアルキニル基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。ヘテロシクロアルキニル基の例はアザシクロオクチニルである。
（ヘテロ）アリール基は、アリール基及びヘテロアリール基を含む。アルキル（ヘテロ）アリール基は、アルキルアリール基及びアルキルヘテロアリール基を含む。（ヘテロ）アリールアルキル基は、アリールアルキル基及びヘテロアリールアルキル基を含む。（ヘテロ）アルキニル基は、アルキニル基及びヘテロアルキニル基を含む。（ヘテロ）シクロアルキニル基は、シクロアルキニル基及びヘテロシクロアルキニル基を含む。
（ヘテロ）シクロアルキン化合物は、本明細書において、（ヘテロ）シクロアルキニル基を含む化合物として定義されている。
本明細書及び請求項に開示されている化合物のいくつかは、縮合（ヘテロ）シクロアルキン化合物、即ち、第２の環構造が（ヘテロ）シクロアルキニル基に縮合されている、即ち環状化されている（ヘテロ）シクロアルキン化合物として記載することができる。例えば、縮合（ヘテロ）シクロオクチン化合物において、シクロアルキル（例えばシクロプロピル）又はアレーン（例えばベンゼン）は、（ヘテロ）シクロオクチニル基に環状化され得る。縮合（ヘテロ）シクロオクチン化合物における（ヘテロ）シクロオクチニル基の三重結合は、３つの可能な位置、即ち、シクロオクチン部分の２位、３位又は４位（「ＩＵＰＡＣ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｒｕｌｅ Ａ３１．２に従った番号付け）のうちのいずれか１つに位置し得る。本明細書及び請求項における任意の縮合（ヘテロ）シクロオクチン化合物の記載は、シクロオクチン部分の全ての３つの個々の位置異性体が含まれると意味される。
別段に明記されていない限り、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、（ヘテロ）アリール基、（ヘテロ）アリールアルキル基、アルキル（ヘテロ）アリール基、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、（ヘテロ）アリーレン基、アルキル（ヘテロ）アリーレン基、（ヘテロ）アリールアルキレン基、（ヘテロ）アリールアルケニレン基、（ヘテロ）アリールアルキニレン基、アルケニル基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、（ヘテロ）アリールオキシ基、アルキニルオキシ基及びシクロアルキルオキシ基は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ５〜Ｃ１２シクロアルケニル基、Ｃ８〜Ｃ１２シクロアルキニル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基、ハロゲン、アミノ基、オキソ及びシリル基からなる群から独立して選択される１個又は複数の置換基で置換されていてもよく、ここでシリル基は、式（Ｒ２０）３Ｓｉ−によって表すことができ、ここでＲ２０は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基及びＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基からなる群から独立して選択され、ここで、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基及びシクロアルキルオキシ基は、置換されていてもよく、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルコキシ基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよい。
「糖」という一般用語は、本明細書において、単糖、例えばグルコース（Ｇｌｃ）、ガラクトース（Ｇａｌ）、マンノース（Ｍａｎ）及びフコース（Ｆｕｃ）を示すために使用される。「糖誘導体」という用語は、本明細書において、単糖の糖の誘導体、即ち、置換基及び／又は官能基を含む単糖の糖を示すために使用される。糖誘導体の例としては、アミノ糖類及び糖酸、例えばグルコサミン（ＧｌｃＮＨ２）、ガラクトサミン（ＧａｌＮＨ２）Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＮｅｕＮＡｃ）及びＮ−アセチルムラミン酸（ＭｕｒＮＡｃ）とも称されるシアル酸（Ｓｉａ）、グルクロン酸（ＧｌｃＡ）並びにイズロン酸（ＩｄｏＡ）が挙げられる。
「ヌクレオチド」という用語は、本明細書において、通常の科学的意味で使用される。「ヌクレオチド」という用語は、ヌクレオベース、５炭素糖（リボース又は２−デオキシリボースのいずれか）、及び１個、２個又は３個のホスフェート基で構成される分子を指す。ホスフェート基なしで、ヌクレオベース及び糖がヌクレオシドを構成する。したがって、ヌクレオチドは、ヌクレオシド一リン酸、ヌクレオシド二リン酸又はヌクレオシド三リン酸と呼ぶこともできる。ヌクレオベースは、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシル又はチミンであり得る。ヌクレオチドの例としては、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）、グアノシン二リン酸（ＧＤＰ）、チミジン二リン酸（ＴＤＰ）、シチジン二リン酸（ＣＤＰ）及びシチジン一リン酸（ＣＭＰ）が挙げられる。
「タンパク質」という用語は、本明細書において、通常の科学的意味で使用される。本明細書において、約１０以上のアミノ酸を含むポリペプチドは、タンパク質と考えられる。タンパク質は、天然だけでなく非天然のアミノ酸を含むことがある。
「糖タンパク質」という用語は、本明細書において、通常の科学的意味で使用され、タンパク質に共有結合した１種又は複数の単糖又はオリゴ糖鎖（「グリカン」）を含むタンパク質を指す。グリカンは、タンパク質のヒドロキシル基（Ｏ連結グリカン）に、例えばセリン、トレオニン、チロシン、ヒドロキシリシン若しくはヒドロキシプロリンのヒドロキシル基に、又はタンパク質（Ｎ−糖タンパク質）、例えばアスパラギン若しくはアルギニンのアミド官能基に、又はタンパク質（Ｃ−糖タンパク質）、例えばトリプトファンの炭素に結合していることがある。糖タンパク質は、１つ超のグリカンを含むことがあり、１種又は複数の単糖及び１種又は複数のオリゴ糖グリカンの組合せを含むことがあり、Ｎ連結グリカン、Ｏ連結グリカン及びＣ連結グリカンの組合せを含むことがある。全てのタンパク質の５０％超は、グリコシル化のある形態を有し、そのため、糖タンパク質として認定されることが推定される。糖タンパク質の例としては、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＣＡＬ（カンジダアンタルチリパーゼ）、ｇｐ４１、ｇｐ１２０、ＥＰＯ（エリスロポエチン）、不凍タンパク質及び抗体が挙げられる。
「グリカン」という用語は、本明細書において、通常の科学的意味で使用され、タンパク質に連結されている単糖鎖又はオリゴ糖鎖を指す。したがって、グリカンという用語は、糖タンパク質の炭水化物部分を指す。グリカンは、さらなる置換がないことがある（単糖）又は糖のヒドロキシル基のうちの１つ又は複数においてさらに置換されていてもよい（オリゴ糖）１種の糖のＣ−１炭素を介してタンパク質に結合している。自然発生グリカンは、１〜約１０の糖類部分を典型的に含む。しかしながら、より長い多糖類鎖がタンパク質に連結されている場合、上記多糖類鎖は、本明細書においてグリカンとも考えられる。糖タンパク質のグリカンは単糖であり得る。典型的に、糖タンパク質の単糖グリカンは、タンパク質に共有結合している単一のＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、グルコース（Ｇｌｃ）、マンノース（Ｍａｎ）又はフコース（Ｆｕｃ）からなる。グリカンはオリゴ糖でもあり得る。糖タンパク質のオリゴ糖鎖は、直鎖又は分枝であり得る。オリゴ糖において、タンパク質に直接結合している糖は、コア糖と呼ばれる。オリゴ糖において、タンパク質に直接結合しておらず、少なくとも２種の他の糖類に結合している糖は、内部糖と呼ばれる。オリゴ糖において、タンパク質に直接結合していないが単一の他の糖に直接結合している糖、即ちその糖の他のヒドロキシル基のうちの１個又は複数にさらなる糖置換基を保有しない糖は、末端糖と呼ばれる。疑いを回避するため、糖タンパク質のオリゴ糖において複数の末端糖類だが、ただ１つのコア糖が存在することがある。グリカンは、Ｏ連結グリカン、Ｎ連結グリカン又はＣ連結グリカンであり得る。Ｏ連結グリカンにおいて、単糖又はオリゴ糖グリカンは、典型的にセリン（Ｓｅｒ）又はトレオニン（Ｔｈｒ）のヒドロキシル基を介して、タンパク質のアミノ酸におけるＯ原子に結合している。Ｎ連結グリカンにおいて、単糖又はオリゴ糖グリカンは、タンパク質のアミノ酸におけるＮ原子を介して、典型的にはアスパラギン（Ａｓｎ）又はアルギニン（Ａｒｇ）の側鎖におけるアミド窒素を介して、タンパク質に結合している。Ｃ連結グリカンにおいて、単糖又はオリゴ糖グリカンは、タンパク質のアミノ酸におけるＣ原子に、典型的にはトリプトファン（Ｔｒｐ）のＣ原子に結合している。
「抗体」という用語は、本明細書において、通常の科学的意味で使用される。抗体は、特定の抗原を認識及び結合できる免疫系によって生成されたタンパク質である。抗体は糖タンパク質の例である。抗体という用語は、本明細書において、最も広い意味において使用され、具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、抗体断片、並びに二重鎖抗体及び単鎖抗体が挙げられる。「抗体」という用語は、本明細書において、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び癌抗原を特異的に結合する抗体が含まれるとも意味される。「抗体」という用語は、抗体全体だけでなく抗体の断片、例えば抗体Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２、切断された抗体からのＦｖ断片若しくはＦｃ断片、ｓｃＦｖ−Ｆｃ断片、ミニ体、二特異性抗体又はｓｃＦｖが含まれると意味される。さらに、上記用語には、遺伝的に改変された抗体及び抗体の誘導体が含まれる。抗体、抗体の断片及び遺伝的に改変された抗体は、当技術分野において知られている方法によって得ることができる。抗体の典型例としては、中でも、アブシキシマブ、リツキシマブ、バシリキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、アダリムマブ、トシツモマブ−Ｉ１３１、セツキシマブ、イブリツキシマブチウキセタン、オマリズマブ、ベバシズマブ、ナタリズマブ、ラニビズマブ、パニツムマブ、エクリズマブ、セルトリズマブペゴール、ゴリムマブ、カナキヌマブ、カツマキソマブ、ウステキヌマブ、トシリズマブ、オファツムマブ、デノスマブ、ベリムマブ、イピリムマブ及びブレンツキシマブが挙げられる。
リンカーは、本明細書において、化合物の２つ以上の要素を接続する部分として定義されている。例えば、バイオコンジュゲートにおいて、生体分子及び標的分子は、リンカーを介して互いに共有結合的に接続されており；リンカー−コンジュゲートにおいて、反応性基Ｑ１は、リンカーを介して標的分子に共有結合的に接続されており；リンカー−コンストラクトにおいて、反応性基Ｑ１は、リンカーを介して反応性基Ｑ２に共有結合的に接続されている。リンカーは、１つ又は複数のスペーサー部分を含むことができる。
スペーサー部分は、本明細書において、間隔をあける（即ち、間に距離を提供する）とともにリンカーの２つ（以上）の部分を一緒に共有結合的に連結する部分として定義されている。リンカーは、下記に定義されている通り、例えばリンカー−コンストラクト、上記リンカー−コンジュゲート又はバイオコンジュゲートの一部であり得る。
リンカー−コンストラクトは、本明細書において、反応性基Ｑ１がリンカーを介して反応性基Ｑ２に共有結合的に接続されている化合物として定義されている。リンカー−コンストラクトは、生体分子に存在する反応性基と反応できる反応性基Ｑ１、及び標的分子に存在する反応性基と反応できる反応性基Ｑ２を含む。Ｑ１及びＱ２は、同じ又は異なっていてもよい。リンカー−コンストラクトは、１個超の反応性基Ｑ１及び／又は１個超の反応性基Ｑ２を含むこともできる。リンカー−コンストラクトは、Ｑ１−Ｓｐ−Ｑ２として示すこともでき、ここで、Ｑ１は、生体分子に存在する反応性基Ｆ１と反応できる反応性基であり、Ｑ２は、標的分子に存在する反応性基Ｆ２と反応できる反応性基であり、Ｓｐはスペーサー部分である。リンカー−コンストラクトが１個超の反応性基Ｑ１及び／又は１個超の反応性基Ｑ２を含む場合、リンカー−コンストラクトは（Ｑ１）ｙ−Ｓｐ−（Ｑ２）ｚとして示すことができ、ここで、ｙは１〜１０の範囲における整数であり、ｚは１〜１０の範囲における整数である。ｙは１、２、３又は４であることが好ましく、ｙは１又は２であるのがより好ましく、ｙは１であるのが最も好ましい。ｚは１、２、３、４、５又は６であることが好ましく、ｚは１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｚは１、２又は３であるのがいっそう好ましく、ｚは１又は２であるのがなおいっそう好ましく、ｚは１であるのが最も好ましい。ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２又は３であるのがなおいっそう好ましく、ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１又は２であるのがなおいっそう好ましく、ｙは１であり、ｚは１であるのが最も好ましい。
リンカー−コンジュゲートは、本明細書において、標的分子がリンカーを介して反応性基Ｑ１に共有結合的に接続されている化合物として定義されている。リンカー−コンジュゲートは、リンカー−コンストラクトに存在する反応性基Ｑ２と標的分子に存在する反応性基との反応を介して得ることができる。リンカー−コンジュゲートは、生体分子に存在する反応性基と反応できる反応性基Ｑ１を含む。リンカー−コンジュゲートは、１つ又は複数のスペーサー部分を含むことができる。リンカー−コンジュゲートは、１個超の反応性基Ｑ１及び／又は１つ超の標的分子を含むことができる。
バイオコンジュゲートは、本明細書において、生体分子がリンカーを介して標的分子に共有結合的に接続されている化合物として定義されている。バイオコンジュゲートは、１つ若しくは複数の生体分子及び／又は１つ若しくは複数の標的分子を含む。リンカーは、１つ又は複数のスペーサー部分を含むことができる。
化合物が、本明細書において、アルファ端部及びオメガ端部を含む化合物と称される場合、上記化合物は２つ（以上）の端部を含み、第１の端部はアルファ端部と称され、第２の端部はオメガ端部と称される。上記化合物は２つ超の端部を含むことができ、即ち第３、第４などの端部が上記化合物に存在し得る。
生体分子は、本明細書において、自然から単離することができる任意の分子として、又は自然から誘導される巨大分子構造の構成要素、特に核酸、タンパク質、グリカン及び脂質である、より小さい分子構築ブロックで構成される任意の分子として定義されている。生体分子の例としては、酵素、（非触媒）タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、アミノ酸、オリゴヌクレオチド、単糖、オリゴ糖、多糖類、グリカン、脂質及びホルモンが挙げられる。
目的の分子（ＭＯＩ）とも称される標的分子は、本明細書において、コンジュゲーションで生体分子に付与される所望の特性を有する分子構造として定義されている。
「その塩」という用語は、酸性プロトン、典型的には酸のプロトンが、金属カチオン又は有機カチオンなどのカチオンによって置き換えられる場合に形成される化合物を意味する。適用可能な場合、塩は薬学的に許容される塩であるが、これは患者への投与が意図されない塩には必要とされない。例えば、化合物の塩において、化合物は、無機酸又は有機酸によってプロトン化されることでカチオンを形成することができ、塩のアニオン性構成成分として無機酸又は有機酸の共役塩基を用いる。
「薬学的に認容されている」塩という用語は、哺乳動物などの患者への投与に許容される塩（所与の投与計画に対する許容される哺乳動物の安全性を有する対イオンとの塩）を意味する。こうした塩は、薬学的に許容される無機塩基又は有機塩基から及び薬学的に許容される無機酸又は有機酸から誘導することができる。「薬学的に許容される塩」は、化合物の薬学的に許容される塩を指し、上記塩は、当技術分野において知られている様々な有機及び無機の対イオンから誘導され、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなど、及び分子が塩基性官能性基を含有する場合には有機酸又は無機酸の塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ギ酸塩、酒石酸塩、ベシル酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩などが挙げられる。
リンカー−コンジュゲート
本明細書において、スルファミドリンカー及び上記スルファミドリンカーのコンジュゲートが開示されている。「スルファミドリンカー」という用語は、スルファミド基、より詳細にはアシルスルファミド基［−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ１）−］及び／又はカルバモイルスルファミド基［−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ１）−］を含むリンカーを指す。
本発明は、バイオコンジュゲートの調製のためのプロセスにおける、本発明によるスルファミドリンカーの使用に関する。本発明は、バイオコンジュゲートの調製のためのプロセス、及び上記プロセスによって得ることができるバイオコンジュゲートにさらに関する。バイオコンジュゲートの調製のための上記プロセスは、より詳細に下で記載されている。
第１の態様において、本発明は、アルファ端部及びオメガ端部を含む化合物に関し、上記化合物は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基Ｑ１をアルファ端部に、及び標的分子Ｄをオメガ端部に含み、上記化合物は、式（１）で表される基又はその塩：
Figure 0006733993
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに接続されていてもよい）をさらに含み、
ここで、式（１）で表される基又はその塩は、上記化合物の上記アルファ端部と上記オメガ端部との間に位置する。
上記化合物は、リンカー−コンジュゲートとも称される。リンカー−コンジュゲートは、本明細書において、標的分子がリンカーを介して反応性基Ｑ１に共有結合的に接続されている化合物として定義されている。上記化合物はアルファ端部及びオメガ端部を含み、言い換えると、上記化合物は第１の端部及び第２の端部を含む。上記化合物の第１の端部はアルファ端部と称することもでき、第２の端部は上記化合物のオメガ端部と称することもできる。「アルファ端部」及び「オメガ端部」という用語は当業者に知られている。本発明は、したがって、第１の端部及び第２の端部を含む化合物にも関し、上記化合物は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基Ｑ１を第１の端部に、及び標的分子Ｄを第２の端部に含み、上記化合物は式（１）で表される基又はその塩をさらに含み、ここで、式（１）で表される基又はその塩は、上記化合物の上記第１の端部と上記第２の端部との間に位置し、式（１）で表される基は上で定義されている通りである。
本発明による化合物において、式（１）で表される基又はその塩は、上記化合物の上記アルファ端部と上記オメガ端部との間に位置する。反応性基Ｑ１は、上記化合物のアルファ端部に共有結合しており、標的分子Ｄは、上記化合物のオメガ端部に共有結合している。
本発明による化合物は、リンカー−コンジュゲートと称することもできる。本発明によるリンカー−コンジュゲートにおいて、標的分子Ｄは、リンカーを介して反応性基Ｑ１に共有結合しており、上記リンカーは、上で定義されている通りの、式（１）で表される基又はその塩を含む。
本発明によるリンカー−コンジュゲートが式（１）で表される基の塩を含む場合、塩は、好ましくは薬学的に許容される塩である。
本発明によるリンカー−コンジュゲートは、１つ超の標的分子Ｄを含むことができる。その結果として、リンカー−コンジュゲートは、したがって、１つ超のオメガ端部、例えば第２（第３、第４、第５など）のオメガ端部を含むことができ、第２（第３、第４、第５など）のオメガ端部は標的分子に共有結合することができる。同様に、リンカー−コンジュゲートは１個超の反応性基Ｑ１を含むことができ、即ち、リンカー−コンジュゲートは１つ超のアルファ端部を含むことができる。１個超の反応性基Ｑ１が存在する場合、Ｑ１基は同じ又は異なっていてもよく、１つ超の標的分子Ｄが存在する場合、標的分子はＤ同じ又は異なっていてもよい。
本発明によるリンカー−コンジュゲートは、そのため、（Ｑ１）ｙ−Ｓｐ−（Ｄ）ｚとして示すことができ、ここで、ｙは１〜１０の範囲における整数であり、ｚは１〜１０の範囲における整数である。
本発明は、したがって、式：
（Ｑ１）ｙ−Ｓｐ−（Ｄ）ｚ
（式中：
ｙは、１〜１０の範囲における整数であり；
ｚは、１〜１０の範囲における整数であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｓｐは、スペーサー部分であり、ここでスペーサー部分は、反応性基Ｑ１及び標的分子Ｄの間隔をあける（即ち、間にある特定の距離を提供する）とともに反応性基Ｑ１及び標的分子Ｄを共有結合的に連結する部分として定義されている）で表される化合物にも関し、ここで上記スペーサー部分は、式（１）で表される基又はその塩を含み、ここで式（１）で表される基は、上で定義されている通りである。
ｙは１、２、３又は４であることが好ましく、ｙは１又は２であるのがより好ましく、ｙは１であるのが最も好ましい。ｚは１、２、３、４、５又は６であることが好ましく、ｚは１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｚは１、２又は３であるのがいっそう好ましく、ｚは１又は２であるのがなおいっそう好ましく、ｚは１であるのが最も好ましい。ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２又は３であるのがなおいっそう好ましく、ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１又は２であるのがなおいっそう好ましく、ｙは１であり、ｚは１であるのが最も好ましい。好ましい実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、式Ｑ１−Ｓｐ−（Ｄ）４、Ｑ１−Ｓｐ−（Ｄ）３、Ｑ１−Ｓｐ−（Ｄ）２又はＱ１−Ｓｐ−Ｄで表される。
本発明によるリンカー−コンジュゲートは、上で定義されている通りの式（１）で表される基又はその塩を含む。好ましい実施形態において、本発明によるリンカー−コンジュゲートは、ａが０である式（１）で表される基又はその塩を含む。この実施形態において、上記化合物は、したがって、式（２）で表される基又はその塩：
Figure 0006733993
（式中、Ｒ１は上で定義されている通りである）を含む。
別の好ましい実施形態において、本発明によるリンカー−コンジュゲートは、ａが１である式（１）で表される基又はその塩を含む。この実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、したがって、式（３）で表される基又はその塩：
Figure 0006733993
（式中、Ｒ１は上で定義されている通りである）を含む。
式（１）、（２）及び（３）で表される基において、Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに接続されていてもよい）を含むように調製するステップを含む。
好ましい実施形態において、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ２０アルキル基であり、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ１６アルキル基であるのがより好ましく、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ１０アルキル基であるのがいっそう好ましく、ここでアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯから選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される。好ましい実施形態において、Ｒ１は水素である。別の好ましい実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル基、より好ましくはＣ１〜Ｃ１６アルキル基、いっそう好ましくはＣ１〜Ｃ１０アルキル基であり、ここでアルキル基は、１個又は複数のＯ原子によって中断されていてもよく、アルキル基は、−ＯＨ基、好ましくは末端−ＯＨ基で置換されていてもよい。この実施形態において、Ｒ１は、末端−ＯＨ基を含む（ポリ）エチレングリコール鎖であることがさらに好ましい。別の好ましい実施形態において、Ｒ１は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル及びｔ−ブチルからなる群から、より好ましくは水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル及びｉ−プロピルからなる群、並びにいっそう好ましくは水素、メチル及びエチルからなる群から選択される。Ｒ１は水素又はメチルであるのがなおいっそう好ましく、Ｒ１は水素であるのが最も好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｒ１は標的分子Ｄである。標的分子Ｄは、１つ又は複数のスペーサー−部分を介してＮに接続されていてもよい。スペーサー−部分は、存在するならば、標的分子Ｄ及びＮの間隔をあける、即ち、標的分子ＤとＮとの間にある特定の距離を提供するとともに標的分子Ｄ及びＮを共有結合的に連結する部分として定義されている。標的分子Ｄ及び標的分子Ｄの好ましい実施形態は、より詳細に下で記載されている。
本発明によるリンカー−コンジュゲートが２つ以上の標的分子Ｄを含む場合、標的分子Ｄは互いに異なっていてもよい。
本発明によるリンカー−コンジュゲートの好ましい実施形態において、標的分子は、活性物質、レポーター分子、ポリマー、固体表面、ヒドロゲル、ナノ粒子、微小粒子及び生体分子からなる群から選択される。
本発明者らは、本発明によるスルファミドリンカーの使用がリンカー−コンジュゲートの可溶性を改善し、上記リンカー−コンジュゲートが順じてコンジュゲーションの効力を著しく改善することを見出した。従来のリンカーを使用する場合、有効なコンジュゲーションは、殊に相対的な水不溶性又は疎水性標的分子が使用される場合、水性媒体におけるリンカー−コンジュゲートの相対的に低い可溶性によってしばしば妨げられる。特に好ましい実施形態において、非コンジュゲート形態における標的分子は疎水性であり、２０℃及び１００ｋＰａで決定される多くとも１％（ｗ／ｗ）、好ましくは多くとも０．１％（ｗ／ｗ）、最も好ましくは多くとも０．０１％（ｗ／ｗ）の水溶性を典型的に有する。こうした水不溶性標的分子でさえも、本発明によるスルファミドリンカーで官能化される場合にはコンジュゲーションに有効にかけられる。本明細書において、「非コンジュゲート形態」は、本発明によるリンカーで官能化されていない又は本発明によるリンカーにコンジュゲートされていない標的分子を指す。標的分子のこうした非コンジュゲート形態は、当技術者に知られている。
「活性物質」という用語は、本明細書において、薬理学的及び／又は生物学的物質、即ち、生物学的に及び／又は薬学的に活性である物質、例えば薬物、プロドラッグ、診断剤、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、ペプチドタグ、アミノ酸、グリカン、脂質、ビタミン、ステロイド、ヌクレオチド、ヌクレオシド、ポリヌクレオチド、ＲＮＡ又はＤＮＡに関する。ペプチドタグの例としては、ヒトのラクトフェリン又はポリアルギニンのような細胞透過性ペプチドが挙げられる。グリカンの例はオリゴマンノースである。アミノ酸の例はリシンである。
標的分子が活性物質である場合、活性物質は、薬物及びプロドラッグからなる群から好ましくは選択される。活性物質は、薬学的に活性な化合物、特に低〜中分子量化合物（例えば約２００〜約２５００Ｄａ、好ましくは約３００〜約１７５０Ｄａ）からなる群から選択されるのがより好ましい。さらに好ましい実施形態において、活性物質は、細胞毒、抗ウイルス剤、抗細菌剤、ペプチド及びオリゴヌクレオチドからなる群から選択される。細胞毒の例としては、コルヒチン、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、カンプトテシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、タキサン、カリケアマイシン、ツブリシン、イリノテカン、阻害性ペプチド、アマニチン、ｄｅＢｏｕｇａｎｉｎ、デュオカルマイシン、メイタンシン、オーリスタチン又はピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）が挙げられる。活性物質の難水溶性を勘案して、好ましい活性物質としては、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、カンプトテシン、タキサン、ツブリシン、アマニチン、デュオカルマイシン、メイタンシン、オーリスタチン及びピロロベンゾジアゼピン、特にビンカアルカロイド、アントラサイクリン、カンプトテシン、タキサン、ツブリシン、アマニチン、メイタンシン及びオーリスタチンが挙げられる。
「レポーター分子」という用語は、本明細書において、存在が容易に検出される分子、例えば診断剤、色素、フルオロフォア、放射性同位元素標識、コントラスト剤、磁気共鳴画像剤又は質量標識を指す。
蛍光プローブとも称される多種多様なフルオロフォアは、当業者に知られている。いくつかのフルオロフォアが、例えば、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３、１０章：「Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｂｅｓ」、３９５〜４６３ページにより詳細に記載されている。フルオロフォアの例としては、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒの全ての種類（例えばＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５）、シアニン色素（例えばＣｙ３又はＣｙ５）及びシアニン色素誘導体、クマリン誘導体、フルオレセイン及びフルオレセイン誘導体、ローダミン及びローダミン誘導体、ホウ素ジピロメテン誘導体、ピレン誘導体、ナフタルイミド誘導体、フィコビリンタンパク質誘導体（例えばアロフィコシアニン）、クロモマイシン、ランタニドキレート、並びに量子ドットナノ結晶が挙げられる。フルオロフォアの難水溶性を勘案して、好ましいフルオロフォアとしては、シアニン色素、クマリン誘導体、フルオレセイン及びその誘導体、ピレン誘導体、ナフタルイミド誘導体、クロモマイシン、ランタニドキレート、並びに量子ドットナノ結晶、特にクマリン誘導体、フルオレセイン、ピレン誘導体及びクロモマイシンが挙げられる。
放射性同位元素標識の例としては、例えばＤＴＰＡ（ジエチレントリアミンペンタ酢酸無水物）、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ’’’−四酢酸）、ＮＯＴＡ（１，４，７−トリアザシクロノナンＮ，Ｎ’，Ｎ”−三酢酸）、ＴＥＴＡ（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ’’’−四酢酸）、ＤＴＴＡ（Ｎ１−（ｐ−イソチオシアナトベンジル）−ジエチレントリアミン−Ｎ１，Ｎ２，Ｎ３，Ｎ３−四酢酸）、デフェロキサミン又はＤＦＡ（Ｎ’−［５−［［４−［［５−（アセチルヒドロキシアミノ）ペンチル］アミノ］−１，４−ジオキソブチル］ヒドロキシアミノ］ペンチル］−Ｎ−（５−アミノペンチル）−Ｎ−ヒドロキシブタンジアミド）又はＨＹＮＩＣ（ヒドラジノニコチンアミド）などのキレート化性部分を介して接続されていてもよい９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１１４ｍＩｎ、１１５Ｉｎ、１８Ｆ、１４Ｃ、６４Ｃｕ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、２１２Ｂｉ、８８Ｙ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、１８６Ｒｈ、１８８Ｒｈ、６６Ｇａ、６７Ｇａ及び１０Ｂが挙げられる。同位体標識化技法は当業者に知られており、例えば、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３、１２章：「Ｉｓｏｔｏｐｉｃ ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、５０７〜５３４ページに、より詳細に記載されている。
本発明による化合物における標的分子Ｄとしての使用に適当なポリマーは、当業者に知られており、いくつかの例が、例えば、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３、１８章：「ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐｏｌｙｍｅｒ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、７８７〜８３８ページに、より詳細に記載されている。標的分子Ｄがポリマーである場合、標的分子Ｄは、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）、１，ｘ−ジアミノアルカンポリマー（ここでｘは、アルカンにおける炭素原子の数であり、好ましくは、ｘは、２〜２００、好ましくは２〜１０の範囲における整数である）、（ポリ）エチレングリコールジアミン（例えば、１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサオクタン、及びより長いエチレングリコール鎖を含む同等物）、多糖類（例えばデキストラン）、ポリ（アミノ酸）（例えばポリ（Ｌ−リシン））及びポリ（ビニルアルコール）からなる群から好ましくは独立して選択される。ポリマーの難水溶性を勘案して、好ましいポリマーとしては、１，ｘ−ジアミノアルカンポリマー及びポリ（ビニルアルコール）が挙げられる。
標的分子Ｄとしての使用に適当な固体表面は、当業者に知られている。固体表面は、例えば官能性表面（例えば、ナノ物質、炭素ナノチューブ、フラーレン又はウイルスカプシドの表面）、金属表面（例えば、チタン、金、銀、銅、ニッケル、スズ、ロジウム又は亜鉛の表面）、金属合金表面（ここで合金は、例えばアルミニウム、ビスマス、クロミウム、コバルト、銅、ガリウム、金、インジウム、鉄、鉛、マグネシウム、水銀、ニッケル、カリウム、プルトニウム、ロジウム、スカンジウム、銀、ナトリウム、チタン、スズ、ウラン、亜鉛及び／又はジルコニウム由来である）、ポリマー表面（ここでポリマーは、例えばポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（ジメチルシロキサン）又はポリメチルメタクリレート、ポリアクリルアミドである）、ガラス表面、シリコーン表面、クロマトグラフィー支持体表面（ここでクロマトグラフィー支持体は、例えばシリカ支持体、アガロース支持体、セルロース支持体又はアルミナ支持体である）などである。標的分子Ｄが固体表面である場合、Ｄは、官能性表面又はポリマー表面からなる群から独立して選択されることが好ましい。
ヒドロゲルは当業者に知られている。ヒドロゲルは、ポリマー性構成要素間の架橋によって形成される水膨張ネットワークである。例えば、参照により組み込まれるＡ．Ｓ．Ｈｏｆｆｍａｎ、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．２０１２、６４、１８を参照されたい。標的分子がヒドロゲルである場合、ヒドロゲルは、ポリマー基準としてポリ（エチレン）グリコール（ＰＥＧ）で構成されていることが好ましい。
標的分子Ｄとしての使用に適当なミクロ及びナノ粒子は、当業者に知られている。様々な適当なミクロ及びナノ粒子は、例えば、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３、１４章：「Ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｎｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ」、５４９〜５８７ページに記載されている。ミクロ又はナノ粒子は、任意の形状、例えば球体、ロッド、チューブ、立方体、三角形及び円錐であり得る。ミクロ又はナノ粒子は球状形状であることが好ましい。ミクロ−及びナノ粒子の化学組成は変動し得る。標的分子Ｄがミクロ又はナノ粒子である場合、ミクロ又はナノ粒子は、例えば、ポリマー性ミクロ若しくはナノ粒子、シリカミクロ若しくはナノ粒子、又は金ミクロ若しくはナノ粒子である。粒子がポリマー性ミクロ又はナノ粒子である場合、ポリマーは、好ましくはポリスチレン、又はスチレンのコポリマー（例えば、スチレン及びジビニルベンゼン、ブタジエン、アクリレート及び／又はビニルトルエンのコポリマー）、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリビニルトルエン、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート（ｐＨＥＭＡ）又はポリ（エチレングリコールジメタクリレート／２−ヒドロキシエチルメタクリレート）［ポリ（ＥＤＧＭＡ／ＨＥＭＡ）］である。ミクロ又はナノ粒子の表面は、二次ポリマーのグラフト重合によって、又は別のポリマー若しくはスペーサー部分などの共有結合によって、例えば洗剤で修飾されていてもよい。
標的分子Ｄは生体分子でもあり得る。生体分子及びその好ましい実施形態は、より詳細に下記に記載されている。標的分子Ｄが生体分子である場合、生体分子は、タンパク質（糖タンパク質及び抗体を含む）、ポリペプチド、ペプチド、グリカン、脂質、核酸、オリゴヌクレオチド、多糖類、オリゴ糖類、酵素、ホルモン、アミノ酸及び単糖類からなる群から選択されることが好ましい。
本発明によるリンカー−コンジュゲートは、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基Ｑ１を含む。官能基は当業者に知られており、官能基を持つ分子に特定の特性を付与する任意の分子的実体として定義することができる。例えば、生体分子における官能基は、アミノ基、チオール基、カルボン酸、アルコール基、カルボニル基、ホスフェート基又は芳香族基を構成することができる。生体分子における官能基は、天然に存在し得るか、又は特定の技法、例えば（生）化学若しくは遺伝子技法によって生体分子に入れることができる。生体分子に入れられる官能基は、本来天然に存在する官能基であり得るか、又は化学合成、例えばアジド、末端アルキン若しくはホスフィン部分によって調製される官能基であり得る。本明細書において、「反応性基」という用語は、官能基を含むある特定の基を指すが、官能基それ自体を指すこともできる。例えば、シクロオクチニル基は、官能基、すなわちＣ−Ｃ三重結合を含む反応性基である。同様に、Ｎ−マレイミジル基は、官能基としてＣ−Ｃ二重結合を含む反応性基である。しかしながら、官能基、例えばアジド官能基、チオール官能基又はアミノ官能基は、本明細書において、反応性基とも称することができる。
リンカー−コンジュゲートは、１個超の反応性基Ｑ１を含むことができる。リンカー−コンジュゲートが２個以上の反応性基Ｑ１を含む場合、反応性基Ｑ１は、互いに異なっていてもよい。リンカー−コンジュゲートは、１個の反応性基Ｑ１を含むことが好ましい。
リンカー−コンジュゲートに存在する反応性基Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応することができる。言い換えると、反応性基Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１に相補的であることが必要である。本明細書において、反応性基は、任意選択で他の官能基の存在下で、官能基と選択的に反応する場合、官能基に「相補的」と示される。相補的反応性基及び官能基は、当業者に知られており、より詳細に下で記載されている。
好ましい実施形態において、反応性基Ｑ１は、置換されていてもよく、Ｎ−マレイミジル基、ハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基、スルホニルオキシＮ−アルキルアミド基、エステル基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基若しくはその誘導体、アルケニル基、アルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリルオキシド基、ニトロン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化Ｎ−マレイミジル基、１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基若しくはその脱離誘導体、ハロゲン化カルボニル基、アレンアミド基、１，２−キノン基、又はトリアジン基からなる群から選択される。
好ましい実施形態において、Ｑ１はＮ−マレイミジル基である。Ｑ１がＮ−マレイミジル基である場合、Ｑ１は、好ましくは非置換である。Ｑ１はしたがって、好ましくは下記に示されている通りの式（９ａ）で表される。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基である。Ｑ１がハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基である場合、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｂ）で表されることが好ましく、ここでｋは、１〜１０の範囲における整数であり、Ｒ４は、−Ｃｌ、−Ｂｒ及び−Ｉからなる群から選択される。ｋは、１、２、３又は４であることが好ましく、ｋは１又は２であるのがより好ましく、ｋは１であるのが最も好ましい。Ｒ４は−Ｉ又は−Ｂｒであることが好ましい。ｋは１又は２であり、Ｒ４は−Ｉ又は−Ｂｒであるのがより好ましく、ｋは１であり、Ｒ４は−Ｉ又はＢｒであるのが最も好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はスルホニルオキシＮ−アルキルアミド基である。Ｑ１がスルホニルオキシＮ−アルキルアミド基である場合、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｂ）で表されることが好ましく、ここで、ｋは１〜１０の範囲における整数であり、Ｒ４は、−Ｏ−メシル、−Ｏ−フェニルスルホニル及び−Ｏ−トシルからなる群から選択される。ｋは１、２、３又は４であることが好ましく、ｋは１又は２であるのがより好ましく、ｋは１であるのがいっそう好ましい。ｋは１であり、Ｒ４は、−Ｏ−メシル、−Ｏ−フェニルスルホニル及び−Ｏ−トシルからなる群から選択されるのが最も好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はエステル基である。Ｑ１がエステル基である場合、エステル基は活性化エステル基であることが好ましい。活性化エステル基は、当業者に知られている。活性化エステル基は、本明細書において、良好な脱離基を含むエステル基として定義されており、ここでエステルカルボニル基は、上記良好な脱離基に結合している。良好な脱離基は、当業者に知られている。活性化エステルは、下記で示されている通りの式（９ｃ）で表されるのがさらに好ましく、ここでＲ５は、−Ｎ−スクシンイミジル（ＮＨＳ）、−Ｎ−スルホ−スクシンイミジル（スルホ−ＮＨＳ）、−（４−ニトロフェニル）、−ペンタフルオロフェニル又は−テトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）からなる群から選択される。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はカーボネート基である。Ｑ１がカーボネート基である場合、カーボネート基は活性化カーボネート基であることが好ましい。活性化カーボネート基は、当業者に知られている。活性化カーボネート基は、本明細書において、良好な脱離基を含むカーボネート基として定義されており、ここでカーボネートカルボニル基は、上記良好な脱離基に結合している。カーボネート基は、下記で示されている通りの式（９ｄ）で表されるのがさらに好ましく、ここでＲ７は、−Ｎ−スクシンイミジル、−Ｎ−スルホ−スクシンイミジル、−（４−ニトロフェニル）、−ペンタフルオロフェニル又は−テトラフルオロフェニルからなる群から選択される。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｅ）で表されるハロゲン化スルホニル基であり、ここでＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群から選択される。ＸはＣｌ又はＢｒであることが好ましく、Ｃｌであるのがより好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、チオール基（９ｆ）又はチオール基の誘導体若しくは前駆体である。チオール基はメルカプト基とも称され得る。Ｑ１がチオール基の誘導体又は前駆体である場合、チオール誘導体は、好ましくは、下記で示されている通りの式（９ｇ）、（９ｈ）又は（９ｚｂ）で表されており、ここでＲ８は、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１２アルキル基又はＣ２〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基であり、ＶはＯ又はＳであり、Ｒ１６は、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１２アルキル基である。Ｒ８は、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基又はＣ２〜Ｃ６（ヘテロ）アリール基であるのがより好ましく、Ｒ８はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル又はフェニルであるのがいっそう好ましい。Ｒ８は、メチル又はフェニルであるのがいっそう好ましく、メチルであるのが最も好ましい。Ｒ１６は、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基であるのがより好ましく、Ｒ１６は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル又はｔ−ブチルであるのがいっそう好ましく、メチルであるのが最も好ましい。Ｑ１が式（９ｇ）又は（９ｚｂ）で表されるチオール−誘導体であり、Ｑ１が生体分子の反応性基Ｆ１と反応させる場合、上記チオール−誘導体は、プロセス中にチオール基に変換される。Ｑ１が式（９ｈ）で表される場合、Ｑ１は−ＳＣ（Ｏ）ＯＲ８又は−ＳＣ（Ｓ）ＯＲ８、好ましくはＳＣ（Ｏ）ＯＲ８であり、ここで、Ｒ８及びその好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はアルケニル基であり、ここでアルケニル基は直鎖又は分枝であり、アルケニル基は置換されていてもよい。アルケニル基は、末端又は内部アルケニル基であり得る。アルケニル基は、１個超のＣ−Ｃ二重結合を含むことができ、そうであるならば、２個のＣ−Ｃ二重結合を好ましくは含む。アルケニル基がジエニル基である場合、２個のＣ−Ｃ二重結合は１個のＣ−Ｃ単結合によって隔てられていることがさらに好ましい（即ち、ジエニル基は、共役ジエニル基であることが好ましい）。上記アルケニル基は、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基であることが好ましく、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基であるのがより好ましく、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基であるのがいっそう好ましい。アルケニル基は末端アルケニル基であることがさらに好ましい。アルケニル基は、下記で示されている通りの式（９ｉ）で表されるのがより好ましく、ここでｌは、０〜１０の範囲、好ましくは０〜６の範囲における整数であり、ｐは、０〜１０の範囲、好ましくは０〜６における整数である。ｌは０、１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｌは０、１又は２であるのがより好ましく、ｌは０又は１であるのが最も好ましい。ｐは０、１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｐは０、１又は２であるのがより好ましく、ｐは０又は１であるのが最も好ましい。ｐは０であり、ｌは０若しくは１であるのが、又はｐは１であり、ｌは０若しくは１であることが特に好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はアルキニル基であり、ここでアルキニル基は直鎖又は分枝であり、アルキニル基は置換されていてもよい。アルキニル基は、末端又は内部アルキニル基であり得る。上記アルキニル基はＣ２〜Ｃ２４アルキニル基であることが好ましく、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基であるのがより好ましく、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基であるのがいっそう好ましい。アルキニル基は末端アルキニル基であることがさらに好ましい。アルキニル基は、下記で示されている通りの式（９ｊ）で表されるのがより好ましく、ここでｌは、０〜１０の範囲、好ましくは０〜６の範囲における整数である。ｌは０、１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｌは０、１又は２であるのがより好ましく、ｌは０又は１であるのが最も好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はシクロアルケニル基である。シクロアルケニル基は、置換されていてもよい。上記シクロアルケニル基は、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルケニル基であることが好ましく、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル基であるのがより好ましく、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル基であるのがいっそう好ましい。好ましい実施形態において、シクロアルケニル基はｔｒａｎｓ−シクロアルケニル基、より好ましくはｔｒａｎｓ−シクロオクテニル基（ＴＣＯ基とも称される）であり、最も好ましくは下記で示されている通りの式（９ｚｉ）又は（９ｚｊ）で表されるｔｒａｎｓ−シクロオクテニル基である。別の好ましい実施形態において、シクロアルケニル基はシクロプロペニル基であり、ここでシクロプロペニル基は、置換されていてもよい。別の好ましい実施形態において、シクロアルケニル基はノルボルネニル基、オキサノルボルネニル基、ノルボルナジエニル基又はオキサノルボルナジエニル基であり、ここで、ノルボルネニル基、オキサノルボルネニル基、ノルボルナジエニル基又はオキサノルボルナジエニル基は、置換されていてもよい。さらに好ましい実施形態において、シクロアルケニル基は、下記で示されている通りの式（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）又は（９ｚｃ）で表され、ここでＴはＣＨ２又はＯであり、Ｒ９は、水素、直鎖若しくは分枝のＣ１〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基からなる群から独立して選択され、Ｒ１９は、水素及びフッ素化炭化水素からなる群から選択される。Ｒ９は独立して水素又はａＣ１〜Ｃ６アルキル基であることが好ましく、Ｒ９は独立して水素又はＣ１〜Ｃ４アルキル基であるのがより好ましい。Ｒ９は独立して水素又はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル又はｔ−ブチルであるのがいっそう好ましい。Ｒ９は独立して水素又はメチルであるのがなおいっそう好ましい。さらに好ましい実施形態において、Ｒ１９は、水素並びに−ＣＦ３、−Ｃ２Ｆ５、−Ｃ３Ｆ７及び−Ｃ４Ｆ９、より好ましくは水素及び−ＣＦ３の群から選択される。さらに好ましい実施形態において、シクロアルケニル基は、式（９ｋ）で表され、ここで一方のＲ９は水素であり、他方のＲ９はメチル基である。別のさらに好ましい実施形態において、シクロアルケニル基は、式（９ｌ）で表され、ここで両Ｒ９は水素である。これらの実施形態において、ｌは０又は１であることがさらに好ましい。別のさらに好ましい実施形態において、シクロアルケニル基は、式（９ｍ）で表されるノルボルネニル（ＴはＣＨ２である）基若しくはオキサノルボルネニル（ＴはＯである）基又は式（９ｚｃ）で表されるノルボルナジエニル（ＴはＣＨ２である）基若しくはオキサノルボルナジエニル（ＴはＯである）基であり、ここでＲ９は水素であり、Ｒ１９は水素又は−ＣＦ３、好ましくは−ＣＦ３である。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は（ヘテロ）シクロアルキニル基である。（ヘテロ）シクロアルキニル基は、置換されていてもよい。（ヘテロ）シクロアルキニル基は、（ヘテロ）シクロオクチニル基、即ちヘテロシクロオクチニル基又はシクロオクチニル基であることが好ましく、ここで（ヘテロ）シクロオクチニル基は、置換されていてもよい。さらに好ましい実施形態において、（ヘテロ）シクロオクチニル基は、ＤＩＢＯ基とも称される式（９ｎ）、ＤＩＢＡＣ基とも称される式（９ｏ）、又はＢＡＲＡＣ基とも称される（９ｐ）、又はＣＯＭＢＯ基とも称される（９ｚｋ）で表され、全て下記で示されている通りであり、ここでＵはＯ又はＮＲ９であり、及びＲ９の好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。（９ｎ）における芳香族環は、１つ又は複数の位置でＯ−スルホニル化されていてもよく、一方で、（９ｏ）及び（９ｐ）の環は、１つ又は複数の位置でハロゲン化されていてもよい。
殊に好ましい実施形態において、化合物（４ｂ）におけるＲ１に結合している窒素原子は、ヘテロシクロアルキン基の環の窒素原子、例えば９ｏにおける窒素原子である。言い換えると、ｃ、ｄ及びｇは、化合物（４ｂ）において０であり、Ｒ１及びＱ１は、それらが結合している窒素原子と一緒に、ヘテロシクロアルキン基、好ましくはヘテロシクロオクチン基、最も好ましくは式（９ｏ）又は（９ｐ）で表されるヘテロシクロオクチン基を形成する。本明細書において、（９ｏ）のカルボニル部分は、式（１）で表される基のスルホニル基によって置き換えられている。代替として、Ｒ１が結合している窒素原子は、式（９ｎ）においてＵと指定される原子と同じ原子である。言い換えると、Ｑ１が式（９ｎ）で表される場合、Ｕは式（１）で表される基の右の窒素原子であり得るか、又はＵ＝ＮＲ９であり、Ｒ９は式（１）で表される基の残部であり、Ｒ１はシクロオクチン部分である。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、ＢＣＮ基とも称される、置換されていてもよいビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基である。ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基は、下記で示されている通りの式（９ｑ）で表されることが好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応において反応できる共役（ヘテロ）ジエン基である。好ましい（ヘテロ）ジエン基としては、置換されていてもよいテトラジニル基、置換されていてもよい１，２−キノン基及び置換されていてもよいトリアジン基が挙げられる。上記テトラジニル基は、下記で示されている通りの式（９ｒ）で表されることがより好ましく、ここでＲ９は、水素、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基からなる群から選択される。Ｒ９は水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基又はＣ４〜Ｃ１０（ヘテロ）アリール基であることが好ましく、Ｒ９は水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基又はＣ４〜Ｃ６（ヘテロ）アリール基であるのがより好ましい。Ｒ９は水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル又はピリジルであるのがいっそう好ましい。Ｒ９は水素、メチル又はピリジルであるのがなおいっそう好ましい。上記１，２−キノン基は、式（９ｚｌ）又は（９ｚｍ）で表されることがより好ましい。上記トリアジン基は、任意の位置異性体であり得る。上記トリアジン基は、式（９ｚｎ）において示されている位置など、任意の可能な位置を介して結合することができる１，２，３−トリアジン基又は１，２，４−トリアジン基であるのがより好ましい。１，２，３−トリアジンはトリアジン基として最も好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｓ）で表されるアジド基である。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒライゲーション反応を受けるのに適当である、置換されていてもよいトリアリールホスフィン基である。ホスフィン基は、下記で示されている通りの式（９ｔ）で表されることが好ましく、ここでＲ１０は水素又は（チオ）エステル基である。Ｒ１０が（チオ）エステル基である場合、Ｒ１０は−Ｃ（Ｏ）−Ｖ−Ｒ１１であることが好ましく、ここで、ＶはＯ又はＳであり、Ｒ１１はＣ１〜Ｃ１２アルキル基である。Ｒ１１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基であることが好ましく、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であるのがより好ましい。Ｒ１１は、メチル基であるのが最も好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｕ）で表されるニトリルオキシド基である。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はニトロン基である。ニトロン基は、下記で示されている通りの式（９ｖ）で表されることが好ましく、ここでＲ１２は、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ６〜Ｃ１２アリール基からなる群から選択される。Ｒ１２はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることが好ましく、Ｒ１２はＣ１〜Ｃ４アルキル基であるのがより好ましい。Ｒ１２はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル又はｔ−ブチルであるのがいっそう好ましい。Ｒ１２はメチルであるのがなおいっそう好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はニトリルイミン基である。ニトリルイミン基は、下記で示されている通りの式（９ｗ）又は（９ｚｄ）で表されることが好ましく、ここでＲ１３は、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ６〜Ｃ１２アリール基からなる群から選択される。Ｒ１３はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることが好ましく、Ｒ１３はＣ１〜Ｃ４アルキル基であるのがより好ましい。Ｒ１３はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル又はｔ−ブチルであるのがいっそう好ましい。Ｒ１３はメチルであるのがなおいっそう好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はジアゾ基である。ジアゾ基は、下記で示されている通りの式（９ｘ）で表されることが好ましく、Ｒ１４は、水素又はカルボニル誘導体からなる群から選択される。Ｒ１４は水素であるのがより好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はケトン基である。ケトン基は、下記で示されている通りの式（９ｙ）で表されることがより好ましく、ここでＲ１５は、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ６〜Ｃ１２アリール基からなる群から選択される。Ｒ１５はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることが好ましく、Ｒ１５はＣ１〜Ｃ４アルキル基であるのがより好ましい。Ｒ１５はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル又はｔ−ブチルであるのがいっそう好ましい。Ｒ１５はメチルであるのがなおいっそう好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基である。（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基は、下記で示されている通りの式（９ｚ）で表されることがより好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はヒドラジン基である。ヒドラジン基は、下記で示されている通りの式（９ｚａ）で表されることが好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はハロゲン化Ｎ−マレイミジル基又はスルホニル化Ｎ−マレイミジル基である。Ｑ１がハロゲン化又はスルホニル化Ｎ−マレイミジル基である場合、Ｑ１は、好ましくは下記で示されている通りの式（９ｚｅ）で表され、ここでＲ６は、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ及び−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１８からなる群から独立して選択され、ここでＲ１８は、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基からなる群から選択されるが、少なくとも１つのＲ６が水素ではないことを条件とする。Ｒ６がハロゲンである場合（即ち、Ｒ６がＦ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩである場合）、Ｒ６はＢｒであることが好ましい。Ｒ６が−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１８である場合、Ｒ１８はＣ１〜Ｃ６アルキル基又はＣ４〜Ｃ６（ヘテロ）アリール基、好ましくはフェニル基であることが好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｚｆ）で表されるハロゲン化カルボニル基であり、ここでＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群から選択される。ＸはＣｌ又はＢｒであることが好ましく、ＸはＣｌであるのが最も好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ｚｇ）で表されるアレンアミド基である。
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ｚｈ）で表される１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基、又はその脱離誘導体であり、ここでＲ１８は、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基からなる群から選択される。Ｒ１８は、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル基又はＣ４〜Ｃ６（ヘテロ）アリール基であるのがより好ましく、フェニル基であるのが最も好ましい。
Figure 0006733993
Figure 0006733993
Figure 0006733993
（式中、ｋ、ｌ、Ｘ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８及びＲ１９は、上で定義されている通りである。）
本明細書において下に記載されている通りの本発明によるコンジュゲーションプロセスの好ましい実施形態において、コンジュゲーションは、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応又は１，３−双極子付加環化、好ましくは１，３−双極子付加環化などの付加環化を介して達成される。この実施形態によると、反応性基Ｑ１（並びに生体分子のＦ１）は、付加環化反応において反応性の基から選択される。本明細書において、反応性基Ｑ１及びＦ１は相補的であり、即ち、反応性基Ｑ１及びＦ１は付加環化反応において互いと反応できる。
Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応について、Ｆ１及びＱ１のうちの一方はジエンであり、Ｆ１及びＱ１のうちの他方はジエノフィルである。当技術者によって理解されている通り、「ジエン」という用語は、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応の文脈において、１，３−（ヘテロ）ジエンを指し、共役ジエン（Ｒ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＲ＝ＣＲ２）、イミン（例えばＲ２Ｃ＝ＣＲ−Ｎ＝ＣＲ２又はＲ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＲ＝ＮＲ、Ｒ２Ｃ＝Ｎ−Ｎ＝ＣＲ２）及びカルボニル（例えばＲ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＲ＝Ｏ又はＯ＝ＣＲ−ＣＲ＝Ｏ）が含まれる。Ｎ及びＯ含有ジエンとのヘテロ−Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応は、当技術分野において知られている。Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応に適当であると当技術分野において知られている任意のジエンは、反応性基Ｑ１又はＦ１として使用することができる。好ましいジエンとしては、上に記載されている通りのテトラジン、上に記載されている通りの１，２−キノン、及び上に記載されている通りのトリアジンが挙げられる。Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応に適当であると当技術分野において知られている任意のジエノフィルは、反応性基Ｑ１又はＦ１として使用することができるが、ジエノフィルは、好ましくは、上に記載されている通りのアルケン基又はアルキン基、最も好ましくはアルキン基である。Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応を介するコンジュゲーションについて、Ｆ１はジエンであり、Ｑ１はジエノフィルであることが好ましい。本明細書において、Ｑ１がジエンである場合、Ｆ１はジエノフィルであり、Ｑ１がジエノフィルである場合、Ｆ１はジエンである。Ｑ１はジエノフィルであるのが最も好ましく、Ｑ１はアルキニル基である又はアルキニル基を含むことが好ましく、Ｆ１はジエン、好ましくはテトラジン基、１，２−キノン基又はトリアジン基である。
１，３−双極子付加環化について、Ｆ１及びＱ１のうちの一方は１，３−双極子であり、Ｆ１及びＱ１のうちの他方は親双極子である。１，３−双極子付加環化に適当であると当技術分野において知られている任意の１，３−双極子は、反応性基Ｑ１又はＦ１として使用することができる。好ましい１，３−双極子としては、アジド基、ニトロン基、ニトリルオキシド基、ニトリルイミン基及びジアゾ基が挙げられる。１，３−双極子付加環化に適当であると当技術分野において知られている任意の親双極子は、反応性基Ｑ１又はＦ１として使用することができるが、親双極子は、好ましくは、アルケン基又はアルキン基、最も好ましくはアルキン基である。１，３−双極子付加環化を介するコンジュゲーションについて、Ｆ１は１，３−双極子であり、Ｑ１は親双極子であることが好ましい。本明細書において、Ｑ１が１，３−双極子である場合、Ｆ１は親双極子であり、Ｑ１が場合親双極子であり、Ｆ１は１，３−双極子である。Ｑ１は親双極子であるのが最も好ましく、Ｑ１はアルキニル基である又はアルキニル基を含むことが好ましく、Ｆ１は１，３−双極子、好ましくはアジド基である。
したがって、好ましい実施形態において、Ｑ１は、親双極子及びジエノフィルから選択される。Ｑ１はアルケン又はアルキン基であることが好ましい。殊に好ましい実施形態において、Ｑ１はアルキン基を含み、上に記載されている通りのアルキニル基、上に記載されている通りのシクロアルケニル基、上に記載されている通りの（ヘテロ）シクロアルキニル基、及びビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基から選択されることが好ましく、Ｑ１は、上で定義されているとともに下記に図示されている通りの式（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）及び（９ｚｋ）から選択されるのがより好ましく、式（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）及び（９ｚｋ）から選択されるのがより好ましい。Ｑ１は、好ましくは式（９ｑ）のビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基であるのが最も好ましい。これらの基は、本明細書に記載されている通りのアジド官能化生体分子とのコンジュゲーションにおいて高度に有効であると知られており、本発明によるスルファミドリンカーが、こうしたリンカー−コンジュゲート及びバイオコンジュゲートにおいて用いられる場合、任意の凝集は、有益には、最小に低減される。本発明によるスルファミドリンカーは、Ｑ１のこうした疎水性反応性基について及びコンジュゲートされているバイオコンジュゲートについて殊に、凝集における著しい低減を提供する。
本発明による化合物において、上に記載された通り、Ｑ１は、生体分子に存在する反応性基Ｆ１と反応できる。反応性基Ｑ１に対する相補的反応性基Ｆ１は、当業者に知られており、より詳細に下で記載されている。Ｆ１とＱ１との間の反応、及びその対応する生成物の一部の代表例は、図２２に図示されている。
上に記載されている通り、標的分子Ｄ及び反応性基Ｑ１は、本発明によるリンカー−コンジュゲートにおけるリンカーに共有結合している。リンカーへの標的分子Ｄの共有結合は、例えば、標的分子に存在する官能基Ｆ２とリンカーに存在する反応性基Ｑ２との反応を介して生じることができる。リンカーへの標的分子Ｄの結合のための適当な有機反応は、反応性基Ｑ２に相補的である官能基Ｆ２であるとして当業者に知られている。その結果として、Ｄは、接続基Ｚを介してリンカーに結合することができる。
「接続基」という用語は、本明細書において、化合物の１つの部分及び同じ化合物の別の部分を接続する構造要素を指す。当業者によって理解される通り、接続基の性質は、上記化合物の部分間の接続が得られた有機反応の型に依存する。例として、Ｒ−Ｃ（Ｏ）−ＯＨのカルボキシル基をＨ２Ｎ−Ｒ’のアミノ基と反応させてＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−Ｒ’を形成する場合、Ｒは接続基Ｚを介してＲ’に接続されており、Ｚは−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−基によって表すことができる。
反応性基Ｑ１は、同様の方式でリンカーに結合することができる。その結果として、Ｑ１は、接続基Ｚを介してスペーサー部分に結合することができる。
リンカーへの標的分子の結合について、及びリンカーへの反応性基Ｑ１の結合について、多数の反応が当技術分野において知られている。その結果として、多種多様な接続基Ｚが本発明によるリンカー−コンジュゲートに存在することができる。
本発明は、したがって、式：
（Ｑ１）ｙ−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｄ）ｚ
（式中：
ｙは、１〜１０の範囲における整数であり；
ｚは、１〜１０の範囲における整数であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｓｐは、間隔をあける（即ち、間にある特定の距離を提供する）とともに反応性基Ｑ１及び標的分子Ｄを共有結合的に連結する部分として定義されているスペーサー部分であり；
Ｚｗは、上記スペーサー部分に反応性基Ｑ１を接続する接続基であり；
Ｚｘは、上記スペーサー部分に標的分子Ｄを接続する接続基であり、並びに；
上記スペーサー部分は、式（１）で表される基又はその塩を含み、ここで式（１）で表される基は、上で定義されている通りである）で表される化合物にも関する。
好ましい実施形態において、式（１）で表される基におけるａは０である。別の好ましい実施形態において、式（１）で表される基におけるａは１である。
ｙ及びｚについての好ましい実施形態は、（Ｑ１）ｙ−Ｓｐ−（Ｄ）ｚについて上で定義されている通りである。上記化合物は、式Ｑ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｄ）４、Ｑ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｄ）３、Ｑ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｄ）２又はＱ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−Ｄ、より好ましくはＱ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｄ）２又はＱ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）Ｄ及び最も好ましくはＱ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−Ｄで表されることがさらに好ましく、ここでＺｗ及びＺｘは、上で定義されている通りである。
Ｚｗ及びＺｘは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＮＲ２−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−及びそれらの２つ以上の組合せからなる群から独立して選択されることが好ましく、ここでＲ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。
Ｄ及びＱ１についての好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
より詳細には、本発明は、式（４ａ）又は（４ｂ）：
Figure 0006733993
（式中：
ａは、独立して０又は１であり；
ｂは、独立して０又は１であり；
ｃは、０又は１であり；
ｄは、０又は１であり；
ｅは、０又は１であり；
ｆは、１〜１５０の範囲における整数であり；
ｇは、０又は１であり；
ｉは、０又は１であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｓｐ１は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ２は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ３は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ４は、スペーサー部分であり；
Ｚ１は、Ｑ１又はＳｐ３をＳｐ２、Ｏ若しくはＣ（Ｏ）又はＮ（Ｒ１）に接続する接続基であり；
Ｚ２は、Ｄ若しくはＳｐ４をＳｐ１、Ｎ（Ｒ１）、Ｏ若しくはＣ（Ｏ）に接続する接続基であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３−Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ１〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択されるか；又は
Ｒ１は、Ｄ、−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］若しくは−［（Ｓｐ２）ｃ−（Ｚ１）ｄ−（Ｓｐ３）ｇ−Ｑ１］であり、ここで、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｄ、Ｑ１、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｇ及びｉは、上で定義されている通りである）で表される化合物、又はその塩に関する。
式（４ａ）又は（４ｂ）で表される化合物又はその塩は、リンカー−コンジュゲートと称することもできる。
好ましい実施形態において、ａは、式（４ａ）又は（４ｂ）で表される化合物において１である。別の好ましい実施形態において、ａは、式（４ａ）又は（４ｂ）で表される化合物において０である。
上で定義されている通り、Ｚ１は、Ｑ１又はＳｐ３をＳｐ２、Ｏ若しくはＣ（Ｏ）又はＮ（Ｒ１）に接続する接続基であり、Ｚ２は、Ｄ又はＳｐ４をＳｐ１、Ｎ（Ｒ１）、Ｏ又はＣ（Ｏ）に接続する接続基である。より詳細に上で記載されている通り、「接続基」という用語は、化合物の１つの部分及び同じ化合物のうちの別の部分を接続する構造要素を指す。
式（４ａ）で表される化合物において、接続基Ｚ１は、存在する場合（即ち、ｄが１である場合）、Ｑ１を（スペーサー部分Ｓｐ３を介してもよい）、式（４ａ）で表される化合物のＯ原子又はＣ（Ｏ）基に、スペーサー部分Ｓｐ２を介して接続してもよい。より詳細には、Ｚ１が存在する場合（即ち、ｄは１である）、並びにＳｐ３及びＳｐ２が存在しない場合（即ち、ｇは０であり、ｃは０である）、Ｚ１は、Ｑ１を、式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートのＯ原子（ａは１である）に又はＣ（Ｏ）基（ａは０である）に接続する。Ｚ１が存在し（即ち、ｄが１である場合）、Ｓｐ３が存在し（即ち、ｇは１である）、Ｓｐ２が存在しない（即ち、ｃは０である）場合、Ｚ１は、スペーサー部分Ｓｐ３を、式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートのＯ原子（ａはである１）に又はＣ（Ｏ）基（ａはである０）に接続する。Ｚ１が存在する場合（即ち、ｄは１である）、並びにＳｐ３及びＳｐ２が存在する場合（即ち、ｇは１であり、ｃは１である）、Ｚ１は、スペーサー部分Ｓｐ３を、式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ２に接続する。Ｚ１が存在し（即ち、ｄが１である場合）、Ｓｐ３が存在せず（即ち、ｇは０である）、Ｓｐ２が存在する（即ち、ｃは１である）場合、Ｚ１は、Ｑ１を、式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ２に接続する。
式（４ｂ）で表される化合物において、接続基Ｚ１は、存在する場合（即ち、ｄが１である場合）、Ｑ１を（スペーサー部分Ｓｐ３を介してもよい）、式（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートにおけるＮ（Ｒ１）基のＮ原子に、スペーサー部分Ｓｐ２を介して接続してもよい。より詳細には、Ｚ１が存在する場合（即ち、ｄは１である）、並びにＳｐ３及びＳｐ２が存在しない場合（即ち、ｇは０であり、ｃは０である）、Ｚ１は、Ｑ１を、式（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に接続する。Ｚ１が存在し（即ち、ｄが１である場合）、Ｓｐ３が存在し（即ち、ｇは１である）、Ｓｐ２が存在しない（即ち、ｃは０である）場合、Ｚ１は、スペーサー部分Ｓｐ３を、式（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートＮ（Ｒ１）基のＮ原子に接続する。Ｚ１が存在する場合（即ち、ｄは１である）、並びにＳｐ３及びＳｐ２が存在する場合（即ち、ｇは１であり、ｃは１である）、Ｚ１は、スペーサー部分Ｓｐ３を、式（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ２に接続する。Ｚ１が存在し（即ち、ｄが１である場合）、Ｓｐ３が存在せず（即ち、ｇは０である）、Ｓｐ２が存在する（即ち、ｃは１である）場合、Ｚ１は、Ｑ１を、式（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ２に接続する。
式（４ａ）で表される化合物において、ｃ、ｄ及びｇが全て０である場合、Ｑ１は、式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートのＯ原子に（ａが１である場合）又はＣ（Ｏ）基に（ａが０である場合）直接的に結合している。
式（４ｂ）で表される化合物において、ｃ、ｄ及びｇが全て０である場合、Ｑ１は、式（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に直接的に結合している。
式（４ａ）で表される化合物において、接続基Ｚ２は、存在する場合（即ち、ｅが１である場合）、Ｄを（スペーサー部分Ｓｐ４を介してもよい）、式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に、スペーサー部分Ｓｐ１を介して接続してもよい。より詳細には、Ｚ２が存在する場合（即ち、ｅは１である）、並びにＳｐ１及びＳｐ４が存在しない場合（即ち、ｂは０であり、ｉは０である）、Ｚ２は、Ｄを、式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に接続する。Ｚ２が存在し（即ち、ｅが１である場合）、Ｓｐ４が存在し（即ち、ｉは１である）、Ｓｐ１が存在しない（即ち、ｂは０である）場合、Ｚ２は、スペーサー部分Ｓｐ４を、式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に接続する。Ｚ２が存在する場合（即ち、ｅは１である）、並びにＳｐ１及びＳｐ４が存在する場合（即ち、ｂは１であり、ｉは１である）、Ｚ２は、スペーサー部分Ｓｐ１を、式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ４に接続する。Ｚ２が存在し（即ち、ｅが１である場合）、Ｓｐ４が存在しせず（即ち、ｉは０である）、Ｓｐ１が存在する（即ち、ｂは１である）場合、Ｚ２は、Ｄを、式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ１に接続する。
式（４ａ）で表される化合物において、ｂ、ｅ及びｉが全て０である場合、Ｄは、式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に直接的に結合している。
式（４ｂ）で表される化合物において、ｂ、ｅ及びｉが全て０である場合、Ｄは、式（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートのＯ原子に（ａが１である場合）又はＣ（Ｏ）基に（ａが０である場合）直接的に結合している。
当業者によって理解される通り、接続基の性質は、上記化合物の特定の部分間の接続が得られた有機反応の型に依存する。多数の有機反応が、反応性基Ｑ１をスペーサー部分に接続するのに、及び標的分子をスペーサー部分に接続するのに利用可能である。その結果として、多種多様な接続基Ｚ１及びＺ２がある。
式（４ａ）及び（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートの好ましい実施形態において、Ｚ１及びＺ２は、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＮＲ２−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＮＲ２−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−及びそれらの２つ以上の組合せからなる群から独立して選択され、ここでＲ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。
上に記載されている通り、式（４ａ）又は（４ｂ）で表される化合物において、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４はスペーサー部分である。Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、独立して、存在しない又は存在することがある（ｂ、ｃ、ｇ及びｉは、独立して、０又は１である）。存在するならばＳｐ１は、存在するならばＳｐ２と、存在するならばＳｐ３及び／又はＳｐ４と異なっていてもよい。
スペーサー部分は、当業者に知られている。適当なスペーサー部分の例としては、（ポリ）エチレングリコールジアミン（例えば、１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサオクタン、又はより長いエチレングリコール鎖を含む同等物）、ポリエチレングリコール鎖又はポリエチレンオキシド鎖、ポリプロピレングリコール鎖又はポリプロピレンオキシド鎖、及びｘがアルカンにおける炭素原子の数である１，ｘ−ジアミノアルカンが挙げられる。
適当なスペーサー部分の別のクラスは、切断可能なスペーサー部分、又は切断可能なリンカーを含む。切断可能なリンカーは、当技術分野においてよく知られている。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＳｈａｂａｔら、Ｓｏｆｔ Ｍａｔｔｅｒ ２０１２、６、１０７３は、生物学的トリガー、例えば酵素的切断又は酸化事象で放出される自己犠牲部分を含む切断可能なリンカーを開示している。適当な切断可能なリンカーの一部の例は、還元で切断されるジスルフィド−リンカー、プロテアーゼ、例えばカテプシン、プラスミン若しくはメタロプロテアーゼによる特異的認識で切断されるペプチド−リンカー、又はグリコシダーゼ、例えばグルクロニダーゼ、若しくは酸素の乏しい低酸素性部域で低減されるニトロ芳香族による特異的認識で切断されるグリコシドベースのリンカーである。本明細書において、適当な切断可能なスペーサー部分としては、アミノ酸の特定の切断可能な配列を含むスペーサー部分も挙げられる。例としては、例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔ（バリン−シトルリン）部分を含むスペーサー部分が挙げられる。切断可能なリンカー、例えばＶａｌ−Ｃｉｔリンカー、特にＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣを含有するバイオコンジュゲートは、それらの限定水溶性のため、凝集にかなり悩まされる。こうしたバイオコンジュゲートについて、本発明によるスルファミドリンカーを組み込むことは特に有益である。その上、切断可能なリンカーを含むリンカー−コンジュゲートとのコンジュゲーション反応は、リンカー−コンジュゲートの限定水溶性によって妨げられる。それゆえに、切断可能なリンカー、例えばＶａｌ−Ｃｉｔリンカー、特にＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ、及び本発明によるスルファミドリンカーを含むリンカー−コンジュゲートは、こうした切断可能なリンカーを含むが生体分子へのコンジュゲーションにこうしたスルファミドリンカーが欠如しているリンカー−コンジュゲートよりも性能がすぐれている。
したがって、式（４ａ）及び（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートの好ましい実施形態において、スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及び／又はＳｐ４は、存在するならば、アミノ酸の配列を含む。アミノ酸の配列を含むスペーサー部分は、当技術分野において知られており、ペプチドリンカーと称することもできる。例としては、Ｖａｌ−Ｃｉｔ部分を含むスペーサー部分、例えばＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣなどが挙げられる。Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ部分が、上記リンカー−コンジュゲートにおいて用いられることが好ましい。
式（４ａ）及び（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートの好ましい実施形態において、スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２００アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ２００アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択され、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基が、上で定義されている通りの１個又は複数のヘテロ原子によって中断されている場合、上記基は、１個若しくは複数のＯ原子によって、及び／又は１個若しくは複数のＳ−Ｓ基によって中断されていることが好ましい。
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ１００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ１００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ１００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ１００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ１００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ１００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ１００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ１００アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ１００アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがより好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は置換されていてもよい。
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ５０アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ５０アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ５０アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ５０シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ５０シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ５０シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ５０アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ５０アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ５０アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ５０アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがいっそう好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２０シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２０シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２０シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２０アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２０アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２０アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ２０アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがなおいっそう好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。
これらの好ましい実施形態において、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、非置換であるとともにＯ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯの群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基、好ましくは水素又はメチルからなる群から独立して選択されるのがさらに好ましい。
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から独立して選択されるのが最も好ましく、アルキレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。この実施形態において、アルキレン基は、非置換であるとともにＯ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯ及び／又はＳ−Ｓの群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基、好ましくは水素又はメチルからなる群から独立して選択されるのがさらに好ましい。
好ましいスペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４としては、したがって、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−が挙げられ、ここでｎは、１〜５０の範囲、好ましくは１〜４０の範囲、より好ましくは１〜３０の範囲、いっそう好ましくは１〜２０の範囲及びなおいっそう好ましくは１〜１５の範囲における整数である。ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であるのがより好ましく、１、２、３、４、５、６、７又は８であるのがより好ましく、１、２、３、４、５又は６であるのがいっそう好ましく、１、２、３又は４であるのがなおいっそう好ましい。
Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は独立して選択されるので、Ｓｐ１は、存在するならば、存在するならばＳｐ２と、存在するならばＳｐ３及び／又はＳｐ４と異なっていてもよい。
反応性基Ｑ１は、より詳細に上で記載されている。式（４ａ）及び（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートにおいて、反応性基Ｑ１は、置換されていてもよいＮ−マレイミジル基、ハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基、スルホニルオキシＮ−アルキルアミド基、エステル基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基又はその誘導体、アルケニル基、アルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリルオキシド基、ニトロン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化Ｎ−マレイミジル基、ハロゲン化カルボニル基、アレンアミド基及び１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基、又はそれらの脱離誘導体からなる群から選択されることが好ましい。さらに好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）又は（９ｚｎ）で表され、ここで（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）、（９ｚｎ）及びそれらの好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｆ）、（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）、（９ｒ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）又は（９ｚｎ）で表される。いっそうさらに好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｑ）、（９ｐ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｓ）で表され、特に好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｔ）又は（９ｚｈ）で表され、それらの好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
式（４ａ）及び（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートにおける標的分子Ｄ及び標的分子Ｄのための好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。式（４ａ）及び（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートの好ましい実施形態において、Ｄは、活性物質、レポーター分子、ポリマー、固体表面、ヒドロゲル、ナノ粒子、微小粒子及び生体分子からなる群から選択される。活性物質、レポーター分子、ポリマー、ヒドロゲル、固体表面、ナノ及び微小粒子並びに生体分子、並びにそれらの好ましい実施形態は、より詳細に上で記載されている。
上に記載されている通り、Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、Ｄ、−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］若しくは−［（Ｓｐ２）ｃ−（Ｚ１）ｄ−（Ｓｐ３）ｇ−Ｑ１］であり、ここで、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｄ、Ｑ１、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｇ及びｉは、上で定義されている通りである。
好ましい実施形態において、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ２０アルキル基であり、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ１６アルキル基であるのがより好ましく、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ１０アルキル基であるのがいっそう好ましく、ここでアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯから選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される。さらに好ましい実施形態において、Ｒ１は水素である。別のさらに好ましい実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル基、より好ましくはＣ１〜Ｃ１６アルキル基、いっそう好ましくはＣ１〜Ｃ１０アルキル基であり、ここでアルキル基は、１個又は複数のＯ原子によって中断されていてもよく、アルキル基は、−ＯＨ基、好ましくは末端−ＯＨ基で任意選択で置換されていてもよい。この実施形態において、Ｒ１は、末端−ＯＨ基を含むポリエチレングリコール鎖であることがさらに好ましい。別のさらに好ましい実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、より好ましくはＣ１〜Ｃ６アルキル基、いっそう好ましくはＣ１〜Ｃ４アルキル基であり、Ｒ１は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル及びｔ−ブチルからなる群から選択されるのがなおいっそう好ましい。
別の好ましい実施形態において、Ｒ１は、標的分子Ｄ、−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］又は−［（Ｓｐ２）ｃ−（Ｚ１）ｄ−（Ｓｐ３）ｇ−Ｑ１］であり、ここでＳｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｄ、Ｑ１、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｇ及びｉは、上で定義されている通りである。Ｒ１がＤ又は−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］である場合、リンカー−コンジュゲートは、式（４ａ）で表されることがさらに好ましい。この実施形態において、リンカー−コンジュゲート（４ａ）は、同じ又は異なっていてもよい２個の標的分子Ｄを含む。Ｒ１が−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］である場合、−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］におけるＳｐ１、ｂ、Ｚ２、ｅ、Ｓｐ４、ｉ及びＤは、Ｎ（Ｒ１）のＮ原子に結合している他の−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］におけるＳｐ１、ｂ、Ｚ２、ｅ、Ｓｐ４、ｉ及びＤと同じ又は異なっていてもよい。好ましい実施形態において、Ｎ（Ｒ１）のＮ原子の両方の−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］基は同じである。
Ｒ１が−［（Ｓｐ２）ｃ−（Ｚ１）ｄ−（Ｓｐ３）ｇ−Ｑ１］である場合、リンカー−コンジュゲートは、式（４ｂ）で表されることがさらに好ましい。この実施形態において、リンカー−コンジュゲート（４ｂ）は、同じ又は異なっていてもよい２個の標的分子Ｑ１を含む。Ｒ１が−［（Ｓｐ２）ｃ−（Ｚ１）ｄ−（Ｓｐ３）ｇ−Ｑ１］である場合、−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］におけるＳｐ２、ｃ、Ｚ１、ｄ、Ｓｐ３、ｇ及びＤは、Ｎ（Ｒ１）のＮ原子に結合している他の−［（Ｓｐ２）ｃ−（Ｚ１）ｄ−（Ｓｐ３）ｇ−Ｑ１］におけるＳｐ１、ｂ、Ｚ２、ｅ、Ｓｐ４、ｉ及びＱ１と同じ又は異なっていてもよい。好ましい実施形態において、Ｎ（Ｒ１）のＮ原子の−［（Ｓｐ２）ｃ−（Ｚ１）ｄ−（Ｓｐ３）ｇ−Ｑ１］基は同じである。
式（４ａ）及び（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートにおいて、ｆは１〜１５０の範囲における整数である。リンカー−コンジュゲートは、したがって、１つ超の式（１）で表される基を含むことができ、式（１）で表される基は、上で定義されている通りである。１つ超の式（１）で表される基が存在する場合、即ち、ｆが２以上である場合、ａ、ｂ、Ｓｐ１及びＲ１は、独立して選択される。言い換えると、ｆが２以上である場合、各ａは独立して０又は１であり、各ｂは独立して０又は１であり、各Ｓｐ１は同じ又は異なっていてもよく、各Ｒ１は同じ又は異なっていてもよい。好ましい実施形態において、ｆは、１〜１００の範囲、好ましくは１〜５０の範囲、より好ましくは１〜２５の範囲、及びいっそう好ましくは１〜１５の範囲における整数である。ｆは１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であるのがより好ましく、ｆは１、２、３、４、５、６、７又は８であるのがいっそう好ましく、ｆは１、２、３、４、５又は６であるのがなおいっそう好ましく、ｆは１、２、３又は４であるのがなおいっそう好ましく、ｆは、この実施形態において１であるのが最も好ましい。別の好ましい実施形態において、ｆは、２〜１５０の範囲、好ましくは２〜１００の範囲、より好ましくは２〜５０の範囲、より好ましくは２〜２５の範囲、及びいっそう好ましくは２〜１５の範囲における整数である。ｆは２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であるのがより好ましく、ｆは２、３、４、５、６、７又は８であるのがいっそう好ましく、ｆは２、３、４、５又は６であるのがなおいっそう好ましく、ｆは２、３又は４であるのがなおいっそう好ましく、ｆは、この実施形態において２であるのが最も好ましい。
上に記載されている通り、好ましい実施形態において、ａは、式（４ａ）又は（４ｂ）で表される化合物において０である。本発明は、そのため、式（６ａ）又は（６ｂ）で表される化合物又はその塩：
Figure 0006733993
（式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｉ、Ｄ、Ｑ１、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２及びＲ１、並びにそれらの好ましい実施形態は、（４ａ）及び（４ｂ）について上で定義されている通りである）にも関する。
上に記載されている通り、別の好ましい実施形態において、ａは、式（４ａ）又は（４ｂ）で表される化合物において１である。本発明は、そのため、式（７ａ）又は（７ｂ）で表される化合物、又はその塩：
Figure 0006733993
（式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｉ、Ｄ、Ｑ１、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２及びＲ１、並びにそれらの好ましい実施形態は、（４ａ）及び（４ｂ）について上で定義されている通りである）にも関する。
Ｓｐ４が式（４ａ）で表されるリンカー−コンジュゲートに存在しない場合、即ち、ｉが０である場合、標的分子Ｄは、Ｚ２（ｅが１である場合）、Ｓｐ１（ｅが０であり、ｂが１である場合）又はＮ（Ｒ１）（ｅが０であり、ｂが０である場合）に連結される。Ｓｐ４が式（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートに存在しない場合、即ち、ｉが０である場合、標的分子Ｄは、Ｚ２（ｅが１である場合）、Ｓｐ１（ｅが０であり、ｂが１である場合）、Ｏ原子（ａが１であり、ｂ及びｅが０である場合）又はＣ（Ｏ）基（ａが０であり、ｂ及びｅが０である場合）に連結される。本発明は、そのため、式（４ｃ）又は（４ｄ）で表されるリンカー−コンジュゲート、又はその塩：
Figure 0006733993
（式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、Ｄ、Ｑ１、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｚ１、Ｚ２及びＲ１、並びにそれらの好ましい実施形態は、（４ａ）及び（４ｂ）について上で定義されている通りである）にも関する。
好ましい実施形態において、式（４ｃ）又は（４ｄ）で表されるリンカー−コンジュゲートにおいて、ａは０である。別の好ましい実施形態において、式（４ｃ）又は（４ｄ）で表されるリンカー−コンジュゲートにおいて、ａは１である。
本発明によるリンカー−コンジュゲート、特に、式（４ａ）、（４ｂ）、（４ｃ）、（４ｄ）、（６ａ）、（６ｂ）、（７ａ）又は（７ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートの特定の実施形態において、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から独立して選択され、アルキレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３からなる群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択され、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）又は（９ｚｎ）で表され、ここで（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）、（９ｚｎ）及びそれらの好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｆ）、（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｓ）（９ｔ）、（９ｚｈ）、（９ｒ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）又は（９ｚｎ）で表される。いっそうさらに好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｓ）で表され、特に好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｐ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｏ）で表され、それらの好ましい実施形態は上で定義されている通りである。
リンカーは、本明細書において、化合物の２つ以上の要素を接続する部分として定義されている。
その結果として、上で定義されている通りの式（４ａ）、（４ｂ）、（４ｃ）、（４ｄ）、（６ａ）、（６ｂ）、（７ａ）又は（７ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートにおいて、上で定義されている通りのリンカーは、それぞれ式（８ａ）及び（８ｂ）：
Figure 0006733993
によって表すことができる。
当業者によって理解される通り、スペーサー部分（８ａ）及び（８ｂ）の好ましい実施形態は、例えば、リンカー−コンジュゲートにおける反応性基Ｑ１及びＤの性質、リンカー−コンジュゲートを調製するための合成方法（例えば標的分子の相補的官能基Ｆ２の性質）、リンカー−コンジュゲートを使用して調製されるバイオコンジュゲートの性質（例えば、生体分子の相補的官能基Ｆ１の性質）に依存し得る。
Ｑ１が、例えば、上で定義されている通りの式（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）又は（９ｚｋ）で表されるシクロオクチニル基である場合、Ｓｐ３は存在する（ｇは１である）ことが好ましい。
例えば、リンカー−コンジュゲートが、式（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）又は（９ｚｋ）で表されるシクロオクチニル基である反応性基Ｑ２とアジド官能基Ｆ２との反応を介して調製された場合、Ｓｐ４は存在する（ｉは１である）ことが好ましい。
さらに、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４のうちの少なくとも１つは存在する、即ち、ｂ、ｃ、ｇ、及びｉのうちの少なくとも１つは０でないことが好ましい。別の好ましい実施形態において、Ｓｐ１及びＳｐ４のうちの少なくとも１つ並びにＳｐ２及びＳｐ３のうちの少なくとも１つは存在する。
ｆが２以上である場合、Ｓｐ１は存在することが好ましい（ｂは１である）。
リンカー部分（８ａ）及び（８ｂ）のこれらの好ましい実施形態は、より詳細に下で記載されている通りの本発明によるバイオコンジュゲートにおける、リンカー部分にも成り立つ。
Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４の好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
リンカー−コンストラクト
リンカー−コンストラクトは、本明細書において、反応性基Ｑ１が、リンカーを介して反応性基Ｑ２に共有結合的に接続されている化合物として定義されている。リンカー−コンストラクトは、生体分子に存在する反応性基Ｆ１と反応できる反応性基Ｑ１、及び標的分子に存在する反応性基Ｆ２と反応できる反応性基Ｑ２を含む。Ｑ１及びＱ２は同じ又は異なっていてもよい。リンカー−コンストラクトは、１個超の反応性基Ｑ１及び／又は１個超の反応性基Ｑ２を含むことができる。１個超の反応性基Ｑ１が存在する場合、Ｑ１基は同じ又は異なっていてよく、１個超の反応性基Ｑ２が存在する場合、Ｑ２基は同じ又は異なっていてもよい。
本発明は、化合物、さらに特にリンカー−コンストラクトにも関し、上記化合物はアルファ端部及びオメガ端部を含み、上記化合物は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる官能基Ｑ１をアルファ端部に、及び標的分子に存在する官能基Ｆ２と反応できる官能基Ｑ２をオメガ端部に含み、上記化合物は式（１）で表される基又はその塩をさらに含み、式（１）で表される基は上で定義されている通りであり、ここで式（１）で表される基又はその塩は、上記化合物の上記アルファ端部と上記オメガ端部との間に位置する。
反応性基Ｑ１は、上記化合物のアルファ端部に共有結合しており、反応性基Ｑ２は、上記化合物のオメガ端部に共有結合している。
本発明によるこの化合物は、リンカー−コンストラクトと称することもできる。本発明によるリンカー−コンストラクトにおいて、反応性基Ｑ２は、リンカーを介して反応性基Ｑ１に共有結合的に接続されており、上記リンカーは、上で定義されている通りの、式（１）で表される基又はその塩を含む。本発明によるリンカー−コンストラクトが式（１）で表される基の塩を含む場合、塩は、好ましくは薬学的に許容される塩である。
本発明によるリンカー−コンストラクトは、１個超の反応性基Ｑ２を含むことができる。その結果として、リンカーは、したがって、例えば、ｐｓｉ、ｃｈｉ、ｐｈｉなどの端部と称することができる第３（第４、第５など）の端部を含むことができ、第３（第４、第５など）の端は反応性基Ｑ２を含む。同様に、リンカー−コンジュゲートは１個超の反応性基Ｑ１を含むことができる。
本発明によるリンカー−コンストラクトは、そのため、（Ｑ１）ｙ−Ｓｐ−（Ｑ２）ｚとして示すこともでき、ここで、ｙは１〜１０の範囲における整数であり、ｚは１〜１０の範囲における整数である。
本発明は、したがって、式：
（Ｑ１）ｙ−Ｓｐ−（Ｑ２）ｚ
（式中：
ｙは、１〜１０の範囲における整数であり；
ｚは、１〜１０の範囲における整数であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｑ２は、標的分子に存在する官能基Ｆ２と反応できる反応性基であり；
Ｓｐは、スペーサー部分であり、ここでスペーサー部分は、反応性基Ｑ１及び反応性基Ｑ２の間隔をあける（即ち、間にある特定の距離を提供する）とともに反応性基Ｑ１及び反応性基Ｑ２を共有結合的に連結する部分として定義されている）で表されるリンカー−コンストラクトにも関し、
ここで上記スペーサー部分は、式（１）で表される基又はその塩を含み、ここで式（１）で表される基は、上で定義されている通りである。
ｙは１、２、３又は４であることが好ましく、ｙは１又は２であるのがより好ましく、ｙは１であるのが最も好ましい。ｚは１、２、３、４、５又は６であることが好ましく、ｚは１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｚは１、２又は３であるのがいっそう好ましく、ｚは１又は２であるのがなおいっそう好ましく、ｚは１であるのが最も好ましい。ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２又は３であるのがなおいっそう好ましく、ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１又は２であるのがなおいっそう好ましく、ｙは１であり、ｚは１であるのが最も好ましい。好ましい実施形態において、リンカー−コンストラクトは、式Ｑ１−Ｓｐ−（Ｑ２）４、Ｑ１−Ｓｐ−（Ｑ２）３、Ｑ１−Ｓｐ−（Ｑ２）２又はＱ１−Ｓｐ−Ｑ２で表される。
本発明によるリンカー−コンストラクトは、上で定義されている通りの式（１）で表される基又はその塩を含む。好ましい実施形態において、本発明によるリンカー−コンストラクトは、ａが０である式（１）で表される基又はその塩を含む。この実施形態において、リンカー−コンストラクトは、したがって、式（２）で表される基又はその塩：
Figure 0006733993
（式中、Ｒ１は上で定義されている通りである）を含む。
別の好ましい実施形態において、本発明によるリンカー−コンストラクトは、ａが１である式（１）で表される基又はその塩を含む。この実施形態において、リンカー−コンストラクトは、したがって、式（３）で表される基又はその塩：
Figure 0006733993
（式中、Ｒ１は上で定義されている通りである）を含む。
本発明によるリンカー−コンストラクトにおいて、Ｒ１及びＲ１の好ましい実施形態は上で定義されている通りである。さらに、反応性基Ｑ１及びスペーサー部分Ｓｐ、並びにそれらの好ましい実施形態は、本発明によるリンカー−コンジュゲートについて上で定義されている通りである。
より特別には、本発明は、式：
（Ｑ１）ｙ−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｑ２）ｚ
（式中：
ｙは、１〜１０の範囲における整数であり；
ｚは、１〜１０の範囲における整数であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｑ２は、生体分子に存在する官能基Ｆ２と反応できる反応性基であり；
Ｓｐは、スペーサー部分であり、ここでスペーサー部分は、反応性基Ｑ１及びＱ２の間隔をあける（即ち、間にある特定の距離を提供する）とともに反応性基Ｑ１及びＱ２を共有結合的に連結する部分として定義されており；
Ｚｗは、反応性基Ｑ１を上記スペーサー部分に接続する接続基であり；
Ｚｘは、反応性基Ｑ２を上記スペーサー部分に接続する接続基である）で表される化合物に関し、
ここで上記スペーサー部分は、式（１）で表される基又はその塩を含み、ここで式（１）で表される基は、上で定義されている通りである。
好ましい実施形態において、式（１）で表される基におけるａは０である。別の好ましい実施形態において、式（１）で表される基におけるａは１である。
ｙ及びｚについての好ましい実施形態は、（Ｑ１）ｙ−Ｓｐ−（Ｑ２）ｚについて上で定義されている通りである。上記化合物は、式Ｑ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｑ２）４、Ｑ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｑ２）３、Ｑ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｑ２）２又はＱ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−Ｑ２、より好ましくはＱ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｑ２）２又はＱ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−Ｑ２、及び最も好ましくはＱ１−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−Ｑ２で表されることがさらに好ましく、ここでＺｗ及びＺｘは、上で定義されている通りである。
本発明によるリンカー化合物において、Ｚｗ及びＺｘは、好ましくは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＮＲ２−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−及びそれらの２つ以上の組合せからなる群から独立して選択され、ここでＲ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。
Ｑ１についての好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
本発明によるリンカー−コンストラクトにおいて、Ｑ２は、標的分子に存在する官能基Ｆ２と反応できる反応性基である。こうした官能基Ｆ２と反応できる反応性基Ｑ２は、当業者に知られている。好ましい実施形態において、Ｑ２は、置換されていてもよいＮ−マレイミジル基、ハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基、スルホニルオキシＮ−アルキルアミド基、エステル基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基又はその誘導体、アルケニル基、アルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリルオキシド基、ニトロン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化Ｎ−マレイミジル基、１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基又はその脱離誘導体、ハロゲン化カルボニル基及びアレンアミド基、ｑが１〜２００の範囲である−［Ｃ（Ｒ１７）２Ｃ（Ｒ１７）２Ｏ］ｑ−Ｒ１７、−ＣＮ、−ＮＣＶ、−ＶＣＮ、−ＶＲ１７、−Ｎ（Ｒ１７）２、−＋Ｎ（Ｒ１７）３、−Ｃ（Ｖ）Ｎ（Ｒ１７）２、−Ｃ（Ｒ１７）２ＶＲ１７、−Ｃ（Ｖ）Ｒ１７、−Ｃ（Ｖ）ＶＲ１７、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１７、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１７、−Ｓ（Ｏ）ＯＲ１７、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１７、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１７）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１７）２、−ＯＳ（Ｏ）Ｒ１７、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１７、−ＯＳ（Ｏ）ＯＲ１７、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ１７、−Ｐ（Ｏ）（Ｒ１７）（ＯＲ１７）、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１７）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１７）２、−Ｓｉ（Ｒ１７）３、−ＶＣ（Ｖ）Ｒ１７、−ＶＣ（Ｖ）ＶＲ１７、−ＶＣ（Ｖ）Ｎ（Ｒ１７）２、−Ｎ（Ｒ１７）Ｃ（Ｖ）Ｒ１７、−Ｎ（Ｒ１７）Ｃ（Ｖ）ＶＲ１７及び−Ｎ（Ｒ１７）Ｃ（Ｖ）Ｎ（Ｒ１７）２からなる群から選択される反応性基であり、ここで、ＶはＯ又はＳであり、Ｒ１７は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択される。
さらに好ましい実施形態において、Ｑ２は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）又は（９ｚｎ）で表され、ここで（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）、（９ｚｎ）及びそれらの好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。この実施形態において、Ｑ２は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｆ）、（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）、（９ｒ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）又は（９ｚｎ）で表され、より好ましくは式（９ａ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｓ）で表されることがさらに好ましく、Ｑ２は、式（９ａ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｏ）、及び上で定義されている通りのそれらの好ましい実施形態に従っているのがいっそう好ましい。Ｑ２は、式（９ａ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｏ）、及び上で定義されている通りのそれらの好ましい実施形態に従っているのが最も好ましい。
別のさらに好ましい実施形態において、Ｑ２は、ｑが１〜２００の範囲である−［Ｃ（Ｒ１７）２Ｃ（Ｒ１７）２Ｏ］ｑ−Ｒ１７、−ＣＮ、−ＮＣＶ、−ＶＣＮ、−ＶＲ１７、−Ｎ（Ｒ１７）２、−＋Ｎ（Ｒ１７）３、−Ｃ（Ｖ）Ｎ（Ｒ１７）２、−Ｃ（Ｒ１７）２ＶＲ１７、−Ｃ（Ｖ）Ｒ１７、−Ｃ（Ｖ）ＶＲ１７、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１７、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１７、−Ｓ（Ｏ）ＯＲ１７、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１７、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１７）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１７）２、−ＯＳ（Ｏ）Ｒ１７、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１７、−ＯＳ（Ｏ）ＯＲ１７、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ１７、−Ｐ（Ｏ）（Ｒ１７）（ＯＲ１７）、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１７）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１７）２、−Ｓｉ（Ｒ１７）３、−ＶＣ（Ｖ）Ｒ１７、−ＶＣ（Ｖ）ＶＲ１７、−ＶＣ（Ｖ）Ｎ（Ｒ１７）２、−Ｎ（Ｒ１７）Ｃ（Ｖ）Ｒ１７、−Ｎ（Ｒ１７）Ｃ（Ｖ）ＶＲ１７及び−Ｎ（Ｒ１７）Ｃ（Ｖ）Ｎ（Ｒ１７）２からなる群から選択され、ここでＶ及びＲ１７は、上で定義されている通りである。この実施形態において、Ｑ２は、−ＯＲ１７、−ＳＲ１７、−Ｎ（Ｒ１７）２、−＋Ｎ（Ｒ１７）３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１７）２、−Ｃ（Ｒ１７）２ＯＲ１７、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１７、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１７、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１７、−Ｓ（Ｏ）ＯＲ１７、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１７、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１７）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ１７）２、−ＯＳ（Ｏ）Ｒ１７、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１７、−ＯＳ（Ｏ）ＯＲ１７、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ１７、−Ｐ（Ｏ）（Ｒ１７）（ＯＲ１７）、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１７）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１７）２、−Ｓｉ（Ｒ１７）３、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１７、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ１７、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１７）２、−Ｎ（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）Ｒ１７、−Ｎ（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１７及び−Ｎ（Ｒ１７）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１７）２からなる群から選択されることがさらに好ましく、ここでＲ１７は、上で定義されている通りである。
本発明によるリンカー−コンストラクトの特定の態様において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）又は（９ｚｎ）で表され、ここで（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）、（９ｚｎ）及びそれらの好ましい実施形態は、上で定義されている通りであり；スペーサー部分Ｓｐは、直鎖又は分岐のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から選択され、アルキレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３からなる群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択され；ここでスペーサー部分Ｓｐは、式（１）で表される１個若しくは複数の基又はその塩によって中断されており；ここで（１）は、上で定義されている通りである。
好ましい実施形態において、上記スペーサー部分Ｓｐは、式（２）で表される１個若しくは複数の基又はその塩によって中断されており、ここで（２）は、上で定義されている通りである。別の好ましい実施形態において、上記スペーサー部分Ｓｐは、式（３）で表される１個又は複数の基又はその塩によって中断されており、ここで（３）は、上で定義されている通りである。
さらに好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｆ）、（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）、（９ｚｋ）、（９ｒ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）又は（９ｚｎ）で表される。またさらに好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｓ）で表され、特に好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）、（９ｚｋ）又は（９ｏ）、及び上で定義されている通りのそれらの好ましい実施形態に従っている。Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｏ）、及び上で定義されている通りのそれらの好ましい実施形態に従っているのが最も好ましい。
リンカー−コンジュゲートの調製のためのプロセス
本発明は、本発明によるリンカー−コンジュゲートの調製のためのプロセスにも関する。特に、本発明は、本発明によるリンカー−コンジュゲートの調製のためのプロセスに関し、上記プロセスは、リンカー−コンストラクトの官能基Ｑ２を標的分子の官能基Ｆ２と反応させるステップを含み、ここで上記リンカー−コンストラクトは、アルファ端部及びオメガ端部を含む化合物であり、上記化合物は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる官能基Ｑ１をアルファ端部に、及び上記標的分子に存在する官能基Ｆ２と反応できる官能基Ｑ２をオメガ端部に含み、上記化合物は、式（１）で表される基又はその塩をさらに含み、ここで式（１）で表される基は、上で定義されている通りであり、式（１）で表される基又はその塩は、上記化合物の上記アルファ端部と上記オメガ端部との間に位置する。
リンカー−コンストラクト及びその好ましい実施形態は、Ｑ１、Ｑ２及び標的分子Ｄの好ましい実施形態を含めて、詳細に上で記載されている。
リンカー−コンジュゲートの調製のためのプロセスの好ましい実施形態において、リンカー−コンストラクトは、上で定義されている通りの（Ｑ１）ｙ−Ｓｐ−（Ｑ２）ｚで表される。リンカー−コンジュゲートの調製のためのプロセスのさらに好ましい実施形態において、リンカー−コンストラクトは、上で定義されている通りの（Ｑ１）ｙ−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｑ２）ｚで表される。
本発明は、バイオコンジュゲーションプロセスにおける、本発明によるスルファミドリンカー−コンストラクトの使用にさらに関する。本発明によるリンカー−コンストラクト及び本発明によるリンカー−コンストラクトの好ましい実施形態は、詳細に上で記載されている通りである。本発明は、特に、バイオコンジュゲーションプロセスにおける式（Ｑ１）ｙ−Ｓｐ−（Ｑ２）ｚで表されるリンカー−コンストラクトの使用、及びバイオコンジュゲーションプロセスにおける式（Ｑ１）ｙ−（Ｚｗ）−Ｓｐ−（Ｚｘ）−（Ｑ２）ｚで表されるリンカー−コンストラクトの使用に関する。
本発明は、バイオコンジュゲーションプロセスにおける本発明によるリンカー−コンジュゲートの使用にも関する。本発明によるリンカー−コンジュゲート及び本発明によるリンカー−コンジュゲートの好ましい実施形態は、詳細に上で記載されている。本発明は特に、バイオコンジュゲーションプロセスにおける式（４ａ）、（４ｂ）、（４ｃ）、（４ｄ）、（６ａ）、（６ｂ）、（７ａ）又は（７ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートの使用に関する。
バイオコンジュゲート
バイオコンジュゲートは、本明細書において、生体分子がリンカーを介して標的分子に共有結合的に接続されている化合物として定義されている。バイオコンジュゲートは、１つ又は複数の生体分子及び／又は１つ又は複数の標的分子を含む。上記リンカーは、１つ又は複数のスペーサー部分を含むことができる。本発明によるバイオコンジュゲートは、好都合には、本発明によるバイオコンジュゲートの調製のためのプロセスによって調製され、ここで、反応性基Ｑ１を含むリンカー−コンジュゲートは、反応性基Ｆ１を含む生体分子にコンジュゲートされている。このコンジュゲーション反応において、反応性基Ｑ１及びＦ１は互いと反応することで、リンカー−コンジュゲートを生体分子と接合するリンカー部分を形成する。リンカー−コンジュゲート及び生体分子について本明細書に記載されている全ての好ましい実施形態は、したがって、Ｑ１及びＦ１についての全ての上記を除いて本発明によるバイオコンジュゲートに同等に適用し、ここで本発明によるバイオコンジュゲートは、本明細書において定義されている通りのＱ１及びＦ１の反応生成物を含有する。
本発明は化合物にも関し、上記化合物はアルファ端部及びオメガ端部を含み、上記化合物は、生体分子をアルファ端部に、及び標的分子をオメガ端部に含み、上記化合物は、式（１）で表される基又はその塩：
Figure 0006733993
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される；又は
Ｒ１は、標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに接続されていてもよい）をさらに含み、
ここで、式（１）で表される基又はその塩は、上記アルファ端部と上記オメガ端部との間に位置する。
好ましい実施形態において、上記化合物は、付加環化反応、好ましくは１，３−双極子付加環化反応によって得ることができる部分、最も好ましくは上記アルファ端部と式（１）で表される基との間に位置する１，２，３−トリアゾール環をさらに含む。本明細書において、上記化合物は、したがって、アルファ端部からオメガ端部へと見て、生体分子、付加環化反応によって得ることができる部分、式（１）で表される基、及び標的分子を含む。
さらに好ましい実施形態において、標的分子は、本明細書において上で定義されている通りに疎水性である。
本発明によるこの化合物は、バイオコンジュゲートと称することもできる。本発明によるバイオコンジュゲートが、式（１）で表される基の塩を含む場合、塩は、好ましくは薬学的に許容される塩である。
生体分子はアルファ端部に共有結合しており、標的分子は、本発明によるバイオコンジュゲートのオメガ端部に共有結合している。
本発明によるバイオコンジュゲートは、１つ超の標的分子を含むことができる。同様に、バイオコンジュゲートは、１つ超の生体分子を含むことができる。生体分子Ｂ及び標的分子Ｄ並びにそれらの好ましい実施形態は、より詳細に上で記載されている。本発明によるバイオコンジュゲートにおけるＤに関する好ましい実施形態は、より詳細に上で記載された通りの本発明によるリンカー−コンジュゲートにおけるＤの好ましい実施形態に対応する。本発明によるバイオコンジュゲートにおけるリンカー（８ａ）又は（８ｂ）に関する好ましい実施形態は、より詳細に上で記載された通りの本発明によるリンカー−コンジュゲートにおけるリンカーの好ましい実施形態に対応する。
本発明によるバイオコンジュゲートにおいて、生体分子Ｂは、タンパク質（糖タンパク質及び抗体を含む）、ポリペプチド、ペプチド、グリカン、脂質、核酸、オリゴヌクレオチド、多糖類、オリゴ糖類、酵素、ホルモン、アミノ酸及び単糖類からなる群から好ましくは選択される。生体分子Ｂは、タンパク質（糖タンパク質及び抗体を含む）、ポリペプチド、ペプチド、グリカン、核酸、オリゴヌクレオチド、多糖類、オリゴ糖類及び酵素からなる群から選択されるのがより好ましい。生体分子Ｂは、糖タンパク質及び抗体を含むタンパク質、ポリペプチド、ペプチド及びグリカンからなる群から選択されるのが最も好ましい。
本発明によるバイオコンジュゲートは、生体分子がスペーサー部分を介して標的分子にコンジュゲートされているバイオコンジュゲートとして定義することもでき、ここでスペーサー部分は、式（１）で表される基又はその塩を含み、ここで式（１）で表される基は、上で定義されている通りである。
本発明によるバイオコンジュゲートは、（Ｂ）ｙ−Ｓｐ−（Ｄ）ｚとして示すこともでき、ここで、ｙは１〜１０の範囲における整数であり、ｚは１〜１０の範囲における整数である。
本発明は、したがって、式：
（Ｂ）ｙ−Ｓｐ−（Ｄ）ｚ
（式中：
ｙは、１〜１０の範囲における整数であり；
ｚは、１〜１０の範囲における整数であり；
Ｂは、生体分子であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｓｐは、スペーサー部分であり、ここでスペーサー部分は、間隔をあける（即ち、間にある特定の距離を提供する）とともに生体分子Ｂ及び標的分子Ｄを共有結合的に連結する部分として定義されており；
上記スペーサー部分は、式（１）で表される基又はその塩を含み、ここで式（１）で表される基は、上で定義されている通りである）で表されるバイオコンジュゲートにも関する。
好ましい実施形態において、上記スペーサー部分は、付加環化反応、好ましくは１，３−双極子付加環化反応、最も好ましくはＢと式（１）で表される基との間に位置する１，２，３−トリアゾール環によって得ることができる部分をさらに含む。
ｙは１、２、３又は４であることが好ましく、ｙは１又は２であることがより好ましく、ｙは１であることが最も好ましい。ｚは１、２、３、４、５又は６であることが好ましく、ｚは１、２、３又は４であることがより好ましく、ｚは１、２又は３であることがいっそう好ましく、ｚは１又は２であることがなおいっそう好ましく、ｚは１であることが最も好ましい。ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２、３又は４であることがより好ましく、ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２又は３であることがなおいっそう好ましく、ｙは１又は２、好ましくは１であり、ｚは１又は２であることがなおいっそう好ましく、ｙは１であり、ｚは１であることが最も好ましい。好ましい実施形態において、バイオコンジュゲートは、式Ｂ−Ｓｐ−（Ｄ）４、Ｂ−Ｓｐ−（Ｄ）３、Ｂ−Ｓｐ−（Ｄ）２又はＢ−Ｓｐ−Ｄで表される。
上に記載されている通り、本発明によるバイオコンジュゲートは、上で定義されている通りの式（１）で表される基又はその塩を含む。好ましい実施形態において、バイオコンジュゲートは、ａが０である式（１）で表される基又はその塩を含む。この実施形態において、バイオコンジュゲートは、したがって、式（２）で表される基又はその塩を含み、ここで（２）は、上で定義されている通りである。
別の好ましい実施形態において、バイオコンジュゲートは、ａが１である式（１）で表される基又はその塩を含む。この実施形態において、バイオコンジュゲートは、したがって、式（３）で表される基又はその塩を含み、ここで（３）は、上で定義されている通りである。
本発明によるバイオコンジュゲートにおいて、Ｒ１、スペーサー部分Ｓｐ、並びにＲ１及びＳｐの好ましい実施形態は、本発明によるリンカー−コンジュゲートについて上で定義されている通りである。
好ましい実施形態において、バイオコンジュゲートは、式（５ａ）若しくは（５ｂ）又はその塩：
Figure 0006733993
（式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、Ｄ、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３及びＲ１、並びにそれらの好ましい実施形態は、リンカー−コンジュゲート（４ａ）及び（４ｂ）について上で定義されている通りであり；
ｈは、０又は１であり；
Ｚ３は、ＢをＳｐ３、Ｚ１、Ｓｐ２、Ｏ又はＣ（Ｏ）に接続する接続基であり；
Ｂは、生体分子である）で表される。
ｈは１であることが好ましい。
生体分子Ｂの好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
本発明によるバイオコンジュゲートが（５ａ）又は（５ｂ）の塩である場合、上記塩は、好ましくは薬学的に許容される塩である。
Ｚ３は接続基である。上に記載されている通り、「接続基」という用語は、本明細書において、化合物の１つの部分及び同じ化合物の別の部分を接続する構造要素を指す。典型的に、バイオコンジュゲートは、リンカー−コンジュゲートに存在する反応性基Ｑ１と生体分子に存在する官能基Ｆ１との反応を介して調製される。当業者によって理解される通り、接続基Ｚ３の性質は、生体分子とリンカー−コンジュゲートとの間の接続を確立するために使用された有機反応の型に依存する。言い換えると、Ｚ３の性質は、リンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１の性質及び生体分子における官能基Ｆ１の性質に依存する。生体分子とリンカー−コンジュゲートとの間の接続を確立するのに利用可能な多数の異なる化学反応があるので、その結果として、Ｚ３について多数の可能性がある。
Ｑ１を含むリンカー−コンジュゲートが相補的官能基Ｆ１を含む生体分子にコンジュゲートされている場合にバイオコンジュゲートに存在するＦ１及びＱ１の適当な組合せ並びに接続基Ｚ３のいくつかの例は、図２２に示されている。
Ｆ１が例えばチオール基である場合、相補的基Ｑ１としては、Ｎ−マレイミジル基及びアルケニル基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図２２に示されている通りである。Ｆ１がチオール基である場合、相補的基Ｑ１としては、アレンアミド基も挙げられる。
Ｆ１が例えばアミノ基である場合、相補的基Ｑ１としては、ケトン基、活性化エステル基及びアジド基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図２２に示されている通りである。
Ｆ１が例えばケトン基である場合、相補的基Ｑ１としては、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基及びヒドラジン基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図２２に示されている通りである。
Ｆ１が例えばアルキニル基である場合、相補的基Ｑ１としては、アジド基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図２２に示されている通りである。
Ｆ１が例えばアジド基である場合、相補的基Ｑ１としては、アルキニル基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図２２に示されている通りである。
Ｆ１が例えばシクロプロペニル基、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン基又はシクロオクチン基である場合、相補的基Ｑ１としては、テトラジニル基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図２２に示されている通りである。これらの特別な場合において、Ｚ３は中間体構造だけであり、Ｎ２を排出し、それによって、ジヒドロピリダジン（アルケンとの反応から）又はピリダジン（アルキンとの反応から）を生ずる。
Ｆ１及びＱ１の追加の適当な組合せ、並びに結果として得られる接続基Ｚ３の性質は、当業者に知られており、例えば、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３（ＩＳＢＮ：９７８−０−１２−３８２２３９−０）、特に３章、２２９〜２５８ページに記載されている。バイオコンジュゲーションプロセスに適当な相補的反応性基のリストは、Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３（ＩＳＢＮ：９７８−０−１２−３８２２３９−０）の３章の２３０〜２３２ページ、表３．１に開示されており、この表の内容は、参照により本明細書に明確に組み込まれる。
（５ａ）及び（５ｂ）で表されるバイオコンジュゲートにおいて、Ｚ３、Ｓｐ３、Ｚ１及びＳｐ２のうちの少なくとも１つは存在すること、即ち、ｈ、ｇ、ｄ及びｃのうちの少なくとも１つは０でないことが好ましい。Ｓｐ１、Ｚ２及びＳｐ４のうちの少なくとも１つは存在すること、即ち、ｂ、ｅ及びｉのうちの少なくとも１つは０でないことも好ましい。Ｚ３、Ｓｐ３、Ｚ１及びＳｐ２のうちの少なくとも１つは存在し、Ｓｐ１、Ｚ２及びＳｐ４のうちの少なくとも１つは存在することがより好ましい、即ち、ｂ、ｅ及びｉのうちの少なくとも１つは０でなく、ｈ、ｇ、ｄ及びｃのうちの少なくとも１つは０でないことが好ましい。
バイオコンジュゲートの調製のためのプロセス
本発明は、バイオコンジュゲートの調製のためのプロセスにも関し、上記プロセスは、本発明によるリンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１を生体分子の官能基Ｆ１と反応させるステップを含む。本発明によるリンカー−コンジュゲート及びその好ましい実施形態は、より詳細に上で記載されている。
図１は、生体分子のコンジュゲーションの一般概念を示している：１個又は複数の官能基Ｆ１を含む目的の生体分子（ＢＯＩ）は、特定のリンカーを介して反応性基Ｑ１に共有結合している（過剰の）標的分子Ｄ（目的の分子又はＭＯＩとも称される）とともにインキュベートされる。バイオコンジュゲーションの上記プロセスにおいて、Ｆ１とＱ１との間の化学反応が起き、それによって、ＢＯＩとＭＯＩとの間の共有結合を含むバイオコンジュゲートを形成する。ＢＯＩは、例えば、ペプチド／タンパク質、グリカン又は核酸であり得る。本発明によるプロセスにおいて、上記リンカーはスルファミドリンカーである。
本発明は、したがって、バイオコンジュゲートの調製のためのプロセスに関し、上記プロセスは、リンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１を生体分子の官能基Ｆ１と反応させるステップを含み、ここでリンカー−コンジュゲートは、アルファ端部及びオメガ端部を含む化合物であり、上記化合物は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基Ｑ１をアルファ端部に、及び標的分子をオメガ端部に含み、上記化合物は、式（１）で表される基又はその塩：
Figure 0006733993
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに接続されていてもよい）をさらに含み、
ここで式（１）で表される基又はその塩は、リンカーコンジュゲートの上記アルファ端部と上記オメガ端部との間に位置する。
好ましい実施形態において、本発明は、付加環化、例えば（４＋２）−付加環化（例えばＤｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応）又は（３＋２）−付加環化（例えば、１，３−双極子付加環化）を介したバイオコンジュゲートの調製のためのプロセスに関する。コンジュゲーションは、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応又は１，３−双極子付加環化であることが好ましい。好ましいＤｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応は、逆電子要請Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ付加環化である。別の好ましい実施形態において、１，３−双極子付加環化、より好ましくはアルキン−アジド付加環化が使用され、最も好ましくはここで、Ｑ１はアルキン基であるか又はアルキン基を含み、Ｆ１はアジド基である。Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応及び１，３−双極子付加環化などの付加環化は、当技術分野において知られており、当技術者は、付加環化をどのように実施するかを知っている。さらに好ましい実施形態において、本発明は、バイオコンジュゲートの調製のためのプロセスに関し、ここで標的分子は、疎水性（即ち、水に弱可溶性）であり、標的分子は、水において多くとも０．１％（ｗ／ｗ）の水溶性（２０℃及び１００ｋＰａ）を有するのが最も好ましい。殊に好ましい実施形態において、本発明は、付加環化、好ましくは１，３−双極子付加環化、より好ましくはアルキン−アジド付加環化を介するバイオコンジュゲートの調製のためのプロセスに関し、ここで、Ｑ１はアルキン基である又はアルキン基を含み、Ｆ１はアジド基であり、標的分子は疎水性であるのが最も好ましく、標的分子は水において多くとも０．１％（ｗ／ｗ）の水溶性（２０℃及び１００ｋＰａ）を有するのが最も好ましい。
本発明によるプロセスにおいて、Ｑ１はＦ１と反応して、生体分子とリンカー−部分との間に共有結合接続を形成する。相補的反応性基Ｑ１及び官能基Ｆ１は、より詳細に上及び下で記載されている。
本発明によるプロセスの好ましい実施形態において、ａは、式（１）で表される基において０である。この実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、したがって、上で定義されている通りの式（２）で表される基を含む。本発明によるプロセスの別の好ましい実施形態において、ａは、式（１）で表される基において１である。この実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、したがって、上で定義されている通りの式（３）で表される基を含む。
生体分子は、より詳細に上で記載されている。本発明によるプロセスにおいて、生体分子は、タンパク質（糖タンパク質及び抗体を含む）、ポリペプチド、ペプチド、グリカン、脂質、核酸、オリゴヌクレオチド、多糖類、オリゴ糖類、酵素、ホルモン、アミノ酸及び単糖類からなる群から選択されることが好ましい。生体分子Ｂは、タンパク質（糖タンパク質及び抗体を含む）、ポリペプチド、ペプチド、グリカン、核酸、オリゴヌクレオチド、多糖類、オリゴ糖類及び酵素からなる群から選択されるのがより好ましい。生体分子Ｂは、糖タンパク質及び抗体を含むタンパク質、ポリペプチド、ペプチド及びグリカンからなる群から選択されるのが最も好ましい。
標的分子は、より詳細に上で記載されている。本発明によるプロセスの好ましい実施形態において、標的分子は、活性物質、レポーター分子、ポリマー、固体表面、ヒドロゲル、ナノ粒子、微小粒子及び生体分子からなる群から選択される。活性物質、レポーター分子、ポリマー、固体表面、ヒドロゲル、ナノ粒子及び微小粒子は、それらの好ましい実施形態であるとして、詳細に上で記載されている。本発明によるスルファミドリンカーが用いられる場合のリンカー−コンジュゲートの著しく改善された水溶性を勘案して、バイオコンジュゲートの調製のためのプロセスの好ましい実施形態は、疎水性標的分子を用いる。非コンジュゲート形態における疎水性標的分子は、２０℃及び１００ｋＰａで決定される多くとも１％（ｗ／ｗ）、好ましくは多くとも０．１％（ｗ／ｗ）、最も好ましくは多くとも０．０１％（ｗ／ｗ）の水溶性を典型的に有する。
本発明によるプロセスにおいて、反応性基Ｑ１は、置換されていてもよいＮ−マレイミジル基、ハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基、スルホニルオキシＮ−アルキルアミド基、エステル基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基又はその誘導体、アルケニル基、アルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリルオキシド基、ニトロン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化Ｎ−マレイミジル基、１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基又はその脱離誘導体、ハロゲン化カルボニル基及びアレンアミド基からなる群から選択されることが好ましい。
さらに好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）又は（９ｚｎ）で表され、ここで、（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）、（９ｚｎ）及びそれらの好ましい実施形態は、本発明によるリンカー−コンジュゲートについて上で定義されている通りである。Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｆ）、（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）、（９ｒ）、（９ｚｌ）、（９ｚｍ）又は（９ｚｎ）で表されることがより好ましい。Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｓ）で表されることがいっそう好ましく、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｏ）で表されることが最も好ましく、それらの好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
殊に好ましい実施形態において、Ｑ１は、上に記載されている通りのアルキニル基、上に記載されている通りのシクロアルケニル基、上に記載されている通り（ヘテロ）シクロアルキニル基及びビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基から好ましくは選択されるアルキン基を含み、Ｑ１は、上で定義されている通りの式（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）及び（９ｚｋ）から選択されるのがより好ましい。Ｑ１は、好ましくは式（９ｑ）のビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基であるのが最も好ましい。
本発明によるプロセスのさらに好ましい実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、式（４ａ）若しくは（４ｂ）、又はその塩：
Figure 0006733993
（式中：
ａは、独立して０又は１であり；
ｂは、独立して０又は１であり；
ｃは、０又は１であり；
ｄは、０又は１であり；
ｅは、０又は１であり；
ｆは、１〜１５０の範囲における整数であり；
ｇは、０又は１であり；
ｉは、０又は１であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｓｐ１は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ２は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ３は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ４は、スペーサー部分であり；
Ｚ１は、Ｑ１又はＳｐ３を、Ｓｐ２、Ｏ若しくはＣ（Ｏ）又はＮ（Ｒ１）に接続する接続基であり；
Ｚ２は、Ｄ又はＳｐ４を、Ｓｐ１、Ｎ（Ｒ１）、Ｏ又はＣ（Ｏ）に接続する接続基であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される；又はＲ１は、Ｄ、−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］若しくは−［（Ｓｐ２）ｃ−（Ｚ１）ｄ−（Ｓｐ３）ｇ−Ｑ１］であり、ここで、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｄ、Ｑ１、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｇ及びｉは、上で定義されている通りである）で表される。
Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、独立して、スペーサー部分であり、言い換えると、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、互いに異なっていてもよい。Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在する又は存在しないことがある（ｂ、ｃ、ｇ及びｉは、独立して、０又は１である）。しかしながら、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４のうちの少なくとも１つは存在することが好ましい、即ち、ｂ、ｃ、ｇ及びｉのうちの少なくとも１つが０でないことが好ましい。
存在するならば、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２００アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ２００アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されることが好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基が、上で定義されている通りの１個又は複数のヘテロ原子によって中断されている場合、上記基は、１個若しくは複数のＯ原子によって及び／又は１個若しくは複数のＳ−Ｓ基によって中断されていることが好ましい。
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ１００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ１００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ１００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ１００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ１００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ１００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ１００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ１００アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ１００アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがより好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ５０アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ５０アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ５０アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ５０シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ５０シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ５０シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ５０アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ５０アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ５０アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ５０アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがいっそう好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２０シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２０シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２０シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２０アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２０アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２０アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ２０アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがなおいっそう好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。
これらの好ましい実施形態において、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、非置換であるとともにＯ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯの群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されていることがさらに好ましく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基、好ましくは水素又はメチルからなる群から独立して選択される。
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から独立して選択されるのが最も好ましく、アルキレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。この実施形態において、アルキレン基は非置換であるとともにＯ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯ及び／又はＳ−Ｓの群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されていることがさらに好ましく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基、好ましくは水素又はメチルからなる群から独立して選択される。
特に好ましいスペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４としては、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−が挙げられ、ここでｎは、１〜５０の範囲、好ましくは１〜４０の範囲、より好ましくは１〜３０の範囲、いっそう好ましくは１〜２０の範囲及びなおいっそう好ましくは１〜１５の範囲における整数である。ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であるのがより好ましく、１、２、３、４、５、６、７又は８であるのがより好ましく、１、２、３、４、５又は６であるのがいっそう好ましく、１、２、３又は４であるのがなおいっそう好ましい。
本発明によるプロセスの別の好ましい実施形態において、式（４ａ）及び（４ｂ）で表されるリンカー−コンジュゲートにおいて、スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及び／又はＳｐ４は、存在するならば、アミノ酸の配列を含む。アミノ酸の配列を含むスペーサー部分は、当技術分野において知られており、ペプチドリンカーと称することもできる。例としては、Ｖａｌ−Ｃｉｔ部分を含むスペーサー部分、例えばｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢＣ、ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｆｍｏｃ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢなどが挙げられる。
上に記載されている通り、Ｚ１及びＺ２は接続基である。本発明によるプロセスの好ましい実施形態において、Ｚ１及びＺ２は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＮＲ２−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−及びそれらの２つ以上の組合せからなる群から独立して選択され、ここでＲ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、置換されていてもよい。
本発明による特に好ましいプロセスにおいて、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から独立して選択され、アルキレン基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３からなる群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択され、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｏ）：
Figure 0006733993
（式中：
Ｒ１０は、水素又は（チオ）エステル基であり；
Ｒ１８は、置換されていてもよい、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基からなる群から選択される）で表される。
上に記載されている通り、バイオコンジュゲートの調製のためのプロセスにおいて、リンカー−コンジュゲートに存在する反応性基Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応される。本発明によるプロセスにおいて、１個超の官能基が生体分子に存在することができる。２個以上の官能基が存在する場合、上記基は同じ又は異なっていてもよい。同様に、１個超の反応性基がリンカー−コンジュゲートに存在することができる。２個以上の反応性基が存在する場合、上記基は同じ又は異なっていてもよい。本発明によるプロセスの好ましい実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、１個の反応性基Ｑ１、及び同じ又は異なっていてもよい１つ又は複数の標的分子Ｄを含む。リンカー−コンジュゲートは、例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つ、好ましくは１つ、２つ、３つ又は４つ、より好ましくは１つ、２つ又は３つ、いっそう好ましくは１又は２つの標的分子Ｄを含む。特に好ましい実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、１つの標的分子Ｄを含む。別の特に好ましい実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、同じ又は異なっていてもよい２つの標的分子Ｄを含む。別の好ましい実施形態において、生体分子は、同じ又は異なっていてもよい２個以上の官能基Ｆを含み、２個以上の官能基は、リンカー−コンジュゲートの相補的反応性基Ｑと反応する。例えば、２個の官能基Ｆ、即ちＦ１及びＦ２を含む生体分子は、同じ又は異なっていてもよい官能基Ｑ１を含む２つのリンカー−コンジュゲートと反応することでバイオコンジュゲートを形成することができる。
生体分子における官能基Ｆ１の例は、アミノ基、チオール基、カルボン酸、アルコール基、カルボニル基、ホスフェート基、又は芳香族基を含む。生体分子における官能基は天然に存在することがあるか、又は特定の技法、例えば（生）化学的技法若しくは遺伝子的技法によって生体分子に入れることができる。生体分子に入れられた官能基は、本来天然に存在する官能基であり得るか、又は化学合成によって調製される官能基、例えばアジド、末端アルキン、シクロプロペン部分若しくはホスフィン部分であり得る。付加環化によるコンジュゲーションの好ましいモードを勘案して、Ｆ１は、ジエン、ジエノフィル、１，３−双極子又は親双極子など、付加環化において反応できる基であることが好ましく、Ｆ１は、１，３−双極子（典型的にはアジド基、ニトロン基、ニトリルオキシド基、ニトリルイミン基又はジアゾ基）又は親双極子（典型的にはアルケニル基又はアルキニル基）から選択されることが好ましい。本明細書において、Ｆ１は、Ｑ１が親双極子である場合に１，３−双極子であり、Ｆ１は、Ｑ１が１，３−双極子である場合に親双極子であり、又はＦ１は、Ｑ１がジエノフィルである場合にジエンであり、Ｆ１は、Ｑ１がジエンである場合にジエノフィルである。Ｆ１は１，３−双極子であるのが最も好ましく、Ｆ１はアジド基であるか又はアジド基を含むことが好ましい。
生体分子に入れられる官能基のいくつかの例は、図２に示されている。図２は、例えばチオプロピオニル基（１１ａ）、アジドアセチル基（１１ｂ）若しくはアジドジフルオロアセチル基（１１ｃ）を用いて修飾することができる、ガラクトサミンのＵＤＰ糖類の誘導体のいくつかの構造を示している。
図３は、ＵＤＰ−糖類１１ａ〜ｃのうちのいずれかが、どのようにしてＧｌｃＮＡｃ部分１２（例えば、グリカンがエンドグリコシダーゼによってトリミングされるモノクローナル抗体）を含む糖タンパク質に、ガラクトシルトランスフェラーゼ突然変異体又はＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼの作用下で結合することができ、それによって、ＧａｌＮＡｃ誘導体とＧｌｃＮＡｃ（それぞれ化合物１３ａ〜ｃ）との間にβ−グリコシドの１〜４連結を生ずるのかを概略的に表示している。
天然に存在する官能基Ｆ１の好ましい例としては、チオール基及びアミノ基が挙げられる。生体分子への組込みのための化学合成によって調製される官能基の好ましい例としては、ケトン基、末端アルキン基、アジド基、シクロ（ヘテロ）アルキン基、シクロプロペン基又はテトラジン基が挙げられる。
上に記載された通り、相補的反応性基Ｑ１及び官能基Ｆ１は当業者に知られており、Ｑ１及びＦ１のいくつかの適当な組合せは上に記載されており、図２２に示されている。相補的基Ｑ１及びＦ１のリストは、Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３（ＩＳＢＮ：９７８−０−１２−３８２２３９−０）の３章の２３０〜２３２ページ、表３．１に開示されており、この表の内容は参照により本明細書に明確に組み込まれる。
本発明によるプロセスの実施形態は、図４に図示されている。図４は、修飾抗体１３ａ〜ｃが、マレイミドとの求核付加の手段によって（チオエーテルコンジュゲート１４に至る１３ａに関する）、又はシクロオクチン試薬との歪み促進付加環化で（それぞれトリアゾール１５又は１６に至る１３ｂ又は１３ｃに関する）、バイオコンジュゲーションプロセスをどのように受けるかを示している。
本発明は、バイオコンジュゲートの調製のための本発明によるプロセスによって得ることができるバイオコンジュゲートにさらに関する。
バイオコンジュゲートの調製のための本発明によるプロセスの、並びに本発明によるリンカー−コンジュゲート及びスルファミドリンカーの利点は、スルファミドリンカーが典型的なポリエチレングリコール（ＰＥＧ）スペーサーの代わりに使用される場合においてコンジュゲーション効率が増加することである。例えば、実施例５８において実証されている通り、マレイミド１７（比較用リンカーを含む）及び１８（本発明によるスルファミドリンカーを含む）の化学量論的混合物との、単一の改変遊離システインを含有するトラスツズマブのインキュベーションを伴う競合実験は、スルファミド含有マレイミド１８のコンジュゲーション効率が、１７を用いるよりも高いことを実証した。
図５は、リンカー−コンジュゲート１７及び１８の構造を示しており、ここで、Ｑ１はＮ−マレイミジル基であり、Ｄはピレンである。化合物１８は本発明によるが、化合物１７は比較例である。図１６は、１７及び１８の合成を示している。
同様に、トラスツズマブ−Ｎ３を用いる、図６〜９に図示されている１９〜３５のコンジュゲーションは、アジド−シクロオクチン付加環化に基づくコンジュゲーションプロセスが、伝統的ＰＥＧ含有リンカーコンジュゲートと比較して、スルファミド含有リンカー−コンジュゲートについて常により速く、大抵の場合劇的により早いこと（表１及び２並びに図１２〜１４を参照されたい）を示している。
トラスツズマブ−Ｎ３を用いる２０、２１、２３、２６、２９、３３及び３５のコンジュゲートは本発明により、１９、２２、２４、２５、２７、２８、３０、３１、３２及び３４のコンジュゲートは比較例である。さらに、いくつかの例において、ＰＥＧベースのコンストラクトを用いるコンジュゲーションは、長時間のインキュベーションの後でさえも完全な変換に達せず、例えば図１２ａ、１２ｂ、１３ｂ及び１４ａである。
Figure 0006733993
Figure 0006733993
図１２ａは、スルファミドリンカー（化合物２６）又は短いＰＥＧリンカー（化合物２４又は２５）を介して、トラスツズマブ−Ｎ３（化合物１３ｂ）とコンジュゲートされるＢＣＮ−ピレン誘導体のコンジュゲーション効率を示している。
図１２ｂは、スルファミドリンカー（化合物２９）又は短いＰＥＧリンカー（化合物２７又は２８）を介して、トラスツズマブ−Ｎ３（化合物１３ｂ）とコンジュゲートされるＤＩＢＡＣ−ピレン誘導体のコンジュゲーション効率を示している。
図１３ａは、スルファミドリンカー（化合物３３）又は短いＰＥＧリンカー（化合物３０−３２）を介して、トラスツズマブ−Ｎ３（化合物１３ｂ）とコンジュゲートされるＢＣＮ−メイタンシン誘導体のコンジュゲーション効率を示している。
図１３ｂは、スルファミドリンカー（化合物３３）又は短いＰＥＧリンカー（化合物３０〜３２、化合物３０は３３と重複している）を介して、トラスツズマブ−Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ（化合物１３ｃ）とコンジュゲートされるＢＣＮ−メイタンシン誘導体のコンジュゲーション効率を示している。
図１４ａは、スルファミドリンカー（化合物３５）又は短いＰＥＧリンカー（化合物３４）を介して、トラスツズマブ−Ｎ３（化合物１３ｂ）とコンジュゲートされるＢＣＮ−デュオカルマイシン誘導体のコンジュゲーション効率を示している。
図１４ｂは、スルファミドリンカー（化合物３５）又は短いＰＥＧリンカー（化合物３４）を介して、トラスツズマブ−Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ（化合物１３ｃ）とコンジュゲートされるＢＣＮ−デュオカルマイシン誘導体のコンジュゲーション効率を示している。
スルファミド基、特にアシルスルファミド基又はカルバモイルスルファミド基の追加の利点は、こうした基を含むリンカーの可溶性に対して、並びにコンジュゲーションの前、最中及び後における全体としてのコンストラクトに対してプラス効果を付与するスルファミド基の高い極性である。スルファミドスペーサーの極性の増加は、ＲＰ−ＨＰＬＣでの化合物１９〜２３及び３０〜３８の保持時間を要約している表３（図１１にグラフとして図示されている）から明らかになる。この増加された極性を勘案して、本発明によるスルファミドリンカーを含有するリンカー−コンジュゲートを用いるコンジュゲーションは、疎水性標的化合物を生体分子にコンジュゲートするのに特に適当である。
図１１は、０．１％のＴＦＡを用いる又は緩衝液ｐＨ７．４における化合物１９〜２３及び３０〜３８のＨＰＬＣ保持時間を示している。
図６は、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル反応性基Ｑ１（ＢＣＮ基とも称される）が、リンカー単位を介してベンジルアミン（Ｄ）に接続されている、いくつかの化合物の構造を示している。化合物２０、２１及び２３は本発明によるが、化合物１９及び２２は比較例である。図１７は、１９〜２２（実施例２１〜２８も参照されたい）の合成を示し、図１８は、２３（実施例２９〜３１も参照されたい）の合成を示す。
図７は、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル反応性基Ｑ１（ＢＣＮ基とも称される）又はジベンゾアゾシクロオクチン反応性基Ｑ１（ＤＩＢＡＣ基又はＤＢＣＯ基とも称される）が、リンカー単位を介してピレンに接続されている、いくつかの化合物の構造を示している。化合物２６及び２９は本発明によるが、化合物２４、２５、２７及び２８は比較例である。図１９は、化合物２４〜２６に至る合成経路を示し、図２０は、化合物２７〜２９に至る合成経路を示す。
図８は、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル反応性基Ｑ１（ＢＣＮ基とも称される）が、リンカー単位を介してメイタンシンに接続されている、いくつかの化合物の構造を示している。化合物３３は本発明によるが、化合物３０、３１及び３２は比較例である。
図９は、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル反応性基Ｑ１（ＢＣＮ基とも称される）が、リンカー単位を介してＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−デュオカルマイシンコンストラクトに接続されている、いくつかの化合物の構造を示している。化合物３５は本発明によるが、化合物３４は比較例である。
図１０は、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル反応性基Ｑ１（ＢＣＮ基とも称される）が、リンカーを介してＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−Ａｈｘ−メイタンシンにコンジュゲートされている、本発明による化合物３６〜３８の構造を示している。
実施例４３〜４９に記載されている化合物３０〜３５の合成及び化合物３６〜３８のための合成経路は、図２１にグラフとして図示されており、実施例５０〜５５に記載されている。
Figure 0006733993
より極性の化合物は保持時間の低減を示すので、ｐＨ７．４での（効果は低いｐＨで不可視である）化合物１９及び２２に対する化合物２０、２１及び２３のより低い値は、通常のアミド−リンカーコンストラクト（化合物１９）と比較したスルファミドスペーサーの極性を明らかに反映している。メチル化化合物２２は、厳密な意味ではスルファミドでもあるが、アシル化窒素での酸性プロトンの欠如により極性の増強を示さない。０．１％のＴＦＡ（脱プロトン化が行われないｐＨで）を用いて、保持時間における明らかな差異が不可視であるという事実も、酸性プロトンが、極性を定義する際に鍵となる役割を果たすことの表れである。ビススルファミド化合物２２は、最終的に、単一のリンカーにおける追加のスルファミド単位（即ち、ｆが本発明による化合物及びプロセスにおいて２つ以上である場合）が極性をさらに増加させることを強調している。後者の観察は、その上、ビススルファミド化合物３８及び３９における通り、アジド−ｍＡｂへの２つの親油性毒素（メイタンシン）を保有するＢＣＮ−コンストラクトの円滑なコンジュゲーションを容易にした。
スルファミドの高い極性は、疎水性部分が、コンジュゲーション中に多量の有機共溶媒を必要とすること及び／又はバイオコンジュゲートの凝集を誘発することが知られている目的の生体分子に付与される場合においてもプラスの影響を持つ。共溶媒の高いレベル（ＤＭＡ、プロピレングリコール若しくはＤＭＳＯの最大５０％）は、コンジュゲーションプロセス中にタンパク質変性を誘発することがある、及び／又は製造プロセスにおいて特殊装置を必要とすることがある。バイオコンジュゲートの安定性の例は、一旦トラスツズマブにコンジュゲートされると、これはモノスルファミド３７にも実際に当てはまることであったが、長期間貯蔵しても認められる凝集はゼロから無視できる程度であった高極性ビススルファミド含有化合物３８を含む。
この低減された凝集傾向を勘案すると、本発明によるスルファミドリンカーは、コンジュゲーション反応、即ち反応性基Ｑ１とＦ１との間の反応の反応生成物が、弱水溶性である連結する部分を与えるバイオコンジュゲートを調製するために使用されるのが特に有益である。殊に好ましい実施形態において、コンジュゲーションは、付加環化、好ましくは１，３−双極子付加環化、より好ましくはアルキン−アジド付加環化を介して達成される。実施例に示されている通り、本明細書における任意の凝集は、凝集傾向を低減することによって生成物の安定性を大きく改善する本発明によるスルファミドリンカーを使用して有益に低減される。したがって、バイオコンジュゲートにおける疎水性の連結する部分と関連する凝集の問題は、バイオコンジュゲートの形成において、リンカー−コンジュゲートにおける標的分子と反応性基Ｑ１との間のスペーサーに、本発明によるスルファミドリンカーを使用することによって、効果的に解決される。
本発明によるスルファミドリンカー及びバイオコンジュゲーションプロセスにおけるスルファミドリンカーの使用の追加の利点は、合成の簡便さ及び高収率である。図１５にスキーム的に図示されている通り、カルバモイルスルファミドスペーサーの合成は、第１級アルコール４０と市販試薬ＣＳＩ（イソシアン酸クロロスルホニル）との反応を伴い、後処理なしでアミンと反応される中間体スルホニルクロリド４１に至り、それによって、安定なカルバモイルスルファミド４２を与える。後者の化合物は、Ｒ１がｔｅｒｔ−ブチルである場合において、酸処理で第一次スルファミド生成物４３を与えるアシルスルファミドに簡便に変換することができる。同様に、Ｒ１＝ベンジルの場合において、脱保護は水素化に影響され得る。第一次スルファミド４３は、好都合には、通常の手順を用いて活性化エステルでアシル化されることで、アシルスルファミド４４を与えることができる。
本発明によるスルファミドリンカーの合成の簡便さ、及びバイオコンジュゲーションプロセスにおける本発明によるスルファミドリンカーの優れた性能は、化合物２３及び３８の合成及び有用性においても明らかである。いずれの化合物も、上で要約されている事象の反復により容易に生成する。即ち、ＣＳＩを用いるアルコールの処理、続いて、アミノアルコールを用いる反応によって容易に生成する両ビススルファミドコンストラクトは、アルコールを引き換えに生成し、上記アルコールは一連の事象を再び経ることでビススルファミドを生成する。これらの一連の事象のさらなる反復は、反復の数に依存してスルファミドのトリ−、テトラ−及び高級オリゴマーを生成する。
最終コンジュゲートにおけるスルファミドリンカーが短いという事実は、細胞毒などの標的分子の疎水性特徴を均衡させるために必要とされる特に長いＰＥＧスペーサー（例えばＰＥＧ２４）が、特に高薬物負荷での抗体−薬物コンジュゲートについて知られている通り、最終タンパク質コンジュゲートの薬物動態に対して負の影響を有することがあると知られているという意味において、追加の利点を有することができる。
実施例１．α−２−アジド−２−デオキシ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトース１−ホスフェートの合成
α−２−アジド−２−デオキシ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトース１−ホスフェートを、参照により組み込まれるＬｉｎｈａｒｄｔら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１２、７７、１４４９〜１４５６におけるＤ−グルコサミンについて記載されている手順に従ってＤ−ガラクトサミンから調製した。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ（ｐｐｍ）５．６９（ｄｄ，Ｊ＝７．２，３．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．４３〜５．４２（ｍ，１Ｈ）、５．３５（ｄｄ，Ｊ＝１１．１，３．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．５３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．２１〜４．１３（ｍ，１Ｈ）、４．０７〜４．００（ｍ，１Ｈ）、３．８２（ｄｔ，Ｊ＝１０．８，２．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．１２（ｓ，３Ｈ）、２．００（ｓ，３Ｈ）、１．９９（ｓ，３Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ Ｃ１２Ｈ１７Ｎ３Ｏ１１Ｐ（Ｍ−Ｈ＋）の計算値＝４１０．０６；実測値４１０．００。
実施例２．α−ＵＤＰ−２−アジド−２−デオキシ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトースの合成
実施例１において調製された通りのα−２−アジド−２−デオキシ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトース１−ホスフェートを、Ｂａｉｓｃｈら Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９９７、５、３８３〜３９１に従ってＵＭＰに結合させた。
したがって、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）中のＤ−ウリジン−５’−一リン酸ニナトリウム塩（１．４９ｇ、４．０５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＯＷＥＸ ５０Ｗｘ８（Ｈ＋形態）で３０分間処理し、濾過した。濾液を激しく室温で撹拌する一方で、トリブチルアミン（０．９７ｍＬ、４．０５ｍｍｏｌ）を滴下により添加した。３０分のさらなる撹拌後、反応混合物を凍結乾燥させ、Ｐ２Ｏ５上にて真空下で５時間の間さらに乾燥させた。
結果として得られたトリブチルアンモニウムウリジン−５’−モノホスフェートを、乾燥ＤＭＦ（２５ｍＬ）中にアルゴン雰囲気で溶解させた。カルボニルジイミダゾール（１．３８ｇ、８．５１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。次に、乾燥ＭｅＯＨ（１８０μＬ）を添加し、１５分間撹拌することで、過剰のカルボニルジイミダゾールを除去した。残りのＭｅＯＨを高真空下で１５分間除去した。結果として得られた化合物（２．０ｇ、４．８６ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２５ｍＬ）中に溶解させ、滴下により反応混合物に添加した。反応物を室温で２日間撹拌させておいた後、真空中で濃縮した。イミダゾール−ＵＭＰ中間体の消費をＭＳによってをモニタリングした。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（７：２：１→５：２：１のＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ）で、α−ＵＤＰ−２−アジド−２−デオキシ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトースが得られた（１．０８ｇ、１．５１ｍｍｏｌ、３７％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）７．９６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．９８〜５．９４（ｍ，２Ｈ）、５．８１〜５．７９（ｍ，１Ｈ）、５．７０（ｄｄ，Ｊ＝７．１，３．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．４９（ｄｄ，Ｊ＝１５．２，２．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．３０（ｄｄｄ，Ｊ＝１８．５，１１．０，３．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．５７（ｑ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．３５〜４．１６（ｍ，９Ｈ）、４．０７〜３．９５（ｍ，２Ｈ）、２．１７（ｓ，３Ｈ）、２．０８（ｓ，３Ｈ）、２．０７（ｓ，３Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ Ｃ２１Ｈ２９Ｎ５Ｏ１９Ｐ２（Ｍ−Ｈ＋）の計算値＝７１６．０９；実測値７１６．３。
実施例３．α−ＵＤＰ−２−アジド−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトースの合成
実施例２において調製された通りのα−ＵＤＰ−２−アジド−２−デオキシ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトースの脱アセチル化を、Ｋｉｓｏら、Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ．Ｊ．、２００６、２３、５６５に従って実施した。
したがって、α−ＵＤＰ−２−アジド−２−デオキシ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトース（２２２ｍｇ、０．３０９ｍｍｏｌ）を、Ｈ２Ｏ（２．５ｍＬ）中に溶解させ、Ｅｔ３Ｎ（２．５ｍＬ）及びＭｅＯＨ（６ｍＬ）を添加した。反応混合物を３時間の間撹拌し、次いで真空中で濃縮することで、粗製のα−ＵＤＰ−２−アジド−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトースが得られた。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）７．９９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．０２〜５．９８（ｍ，２Ｈ）、５．７３（ｄｄ，Ｊ＝７．４，３．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．４２〜４．３７（ｍ，２Ｈ）、４．３０〜４．１８（ｍ，４Ｈ）、４．１４〜４．０４（ｍ，２Ｈ）、３．８０〜３．７０（ｍ，２Ｈ）、３．６５〜３．５８（ｍ，１Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ Ｃ１５Ｈ２３Ｎ５Ｏ１６Ｐ２（Ｍ−Ｈ＋）の計算値＝５９０．０５；実測値５９０．２０。
実施例４．α−ＵＤＰ−Ｄ−ガラクトサミン（ＵＤＰ−ＧａｌＮＨ２）の合成
１：１のＨ２Ｏ−ＭｅＯＨ混合物（４ｍＬ）中の、実施例３において調製された通りのα−ＵＤＰ−２−アジド−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトースの溶液に、リンドラー触媒（５０ｍｇ）を添加した。反応物を水素雰囲気下で５時間の間撹拌し、セライトで濾過した。フィルターをＨ２Ｏ（１０ｍｌ）で濯ぎ、濾液を真空中で濃縮することで、α−ＵＤＰ−Ｄ−ガラクトサミン（ＵＤＰ−ＧａｌＮＨ２）が得られた（１６９ｍｇ、０．２８６ｍｍｏｌ、２つのステップで９２％の収率）。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）７．９３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．９９〜５．９０（ｍ，２Ｈ）、５．７６〜５．６９（ｍ，１Ｈ）、４．３９〜４．３４（ｍ，２Ｈ）、４．３１〜４．１７（ｍ，５Ｈ）、４．０５〜４．０１（ｍ，１Ｈ）、３．９４〜３．８６（ｍ，１Ｈ）、３．８２〜３．７０（ｍ，３Ｈ）、３．３０〜３．１６（ｍ，１Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ Ｃ１５Ｈ２５Ｎ３Ｏ１６Ｐ２（Ｍ−Ｈ＋）の計算値＝５６４．０６；実測値５６４．１０。
実施例５．ＵＤＰ−ＧａｌＮＰｒｏＳＡｃの合成
ＵＤＰ−α−Ｄ−ガラクトサミン（４４ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）を０．１ＭのＮａＨＣＯ３（１ｍＬ）中に溶解させた。３−ＡｃＳ−プロピオン酸スクシンイミジルエステル（３８ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（１ｍＬ）を添加し、反応物を終夜室温で撹拌し、続いて、減圧下で濃縮した。勾配フラッシュクロマトグラフィー（７：２：１→５：２：１のＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ）で、ＵＤＰ−ＧａｌＮＰｒｏＳＡｃ（６ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ、１１％）＋ＵＤＰ−ＧａｌＮＡｃ混入物が得られた。
ＬＲＭＳ（ＥＳＩ−）Ｃ２０Ｈ３１Ｎ３Ｏ１８Ｐ２Ｓ（Ｍ−）の計算値６９４．０８ 実測値６９４．１。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）７．７９（ｍ，１Ｈ）、５．８３〜５．８０（ｍ，２Ｈ）、５．４８〜５．４５（ｍ，１Ｈ）、４．２８〜４．０５（ｍ，６Ｈ）、３．８８〜３．８５（ｍ，２Ｈ）、３．６３〜３．５５（ｍ，３Ｈ）、３．１７〜３．１６（ｍ，２Ｈ）、２．６０〜２．５５（ｍ，２Ｈ）２．５０（ｓ，３Ｈ）。
実施例６．ＵＤＰ−ＧａｌＮＰｒｏＳＨ（１１ａ）の合成
ＵＤＰ−ＧａｌＮＰｒｏＳＡｃ（３ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）を、脱ガスされた１ＭのＮａＯＨ（１ｍＬ）中に溶解させ、１．５時間の間撹拌し、続いて、真空中で濃縮した。上記生成物をグリコシル化実験において粗製で使用した。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）７．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．８８〜５．８６（ｍ，２Ｈ）、５．４８〜５．４５（ｍ，１Ｈ）、４．２０〜４．０５（ｍ，８Ｈ）、３．９５〜３．８５（ｍ，１Ｈ）、３．６８〜３．６５（ｍ，２Ｈ）、２．６９〜２．６７（ｍ，２Ｈ）、２．６０〜２．５５（ｍ，２Ｈ）。
実施例７．エチル２−アジド−２，２−ジフルオロアセテートの合成
乾燥ＤＭＳＯ（５ｍＬ）中のエチル２−ブロモ−２，２−ジフルオロアセテート（９５０ｍｇ、４．６８ｍｍｏｌ）の溶液に、アジ化ナトリウム（３６５ｍｇ、５．６２ｍｍｏｌ）を添加した。終夜室温で撹拌した後、反応混合物を水（１５０ｍＬ）に注ぎ入れた。層を分離させ、ジクロロメタンを有機層に添加し、層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させた。濾過後、溶媒を減圧下で（３００ｍｂａｒ）３５℃で除去して、粗製のエチル２−アジド−２，２−ジフルオロアセテートが得られた（２５０ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ、３２％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）４．４１（ｑ，Ｊ＝７．２ｈｚ，２Ｈ）、１．３８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）。
実施例８．α−２−アミノ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトース１−ホスフェートの合成
ＭｅＯＨ（３ｍＬ）中の、実施例１において調製された通りのα−２−アジド−２−デオキシ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトース−１−ホスフェート（１０５ｍｇ、０．２５５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（２０ｍｇ）を添加した。反応物を水素雰囲気下で２時間の間撹拌し、セライトで濾過した。フィルターをＭｅＯＨ（１０ｍＬ）で濯ぎ、濾液を真空中で濃縮することで、遊離アミンが得られた（９４ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ、９６％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）５．８７〜５．７６（ｍ，１Ｈ）、５．４４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、５．３０〜５．２０（ｍ，１Ｈ）、４．５５（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．２８〜４．００（ｍ，３Ｈ）、２．１１（ｓ，３Ｈ）、２．０３（ｓ，３Ｈ）、２．００（ｓ，３Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ Ｃ１２Ｈ１９ＮＯ１１Ｐ（Ｍ−Ｈ＋）の計算値＝３８４．０７；実測値３８４．１０。
実施例９．α−（２’−アジド−２’，２’−ジフルオロアセトアミド）−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトース１−ホスフェートの合成
乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）中の、実施例８において調製された通りのα−２−アミノ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトース１−ホスフェート（９４ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）の溶液に、エチル２−アジド−２，２−ジフルオロアセテート（４８ｍｇ、０．２９３ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（６８μＬ、０．４８８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６時間の間撹拌し、続いて、真空中で濃縮することで、粗製生成物が得られた。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（１００：０→５０：５０のＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ）で、α−（２’−アジド−２’，２’−ジフルオロアセトアミド）−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトース１−ホスフェートが得られた（６３ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、５１％）。
実施例１０．ＵＤＰ−α−（２’−アジド−２’，２’−ジフルオロアセトアミド）−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトースの合成
実施例９において調製された通りのα−（２’−アジド−２’，２’−ジフルオロアセトアミド）−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトース１−ホスフェートを、参照により組み込まれるＢａｉｓｃｈら Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９９７、５、３８３〜３９１に従って、ＵＭＰにカップリングした。
したがって、Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）中のＤ−ウリジン−５’−一リン酸ニナトリウム塩（９８ｍｇ、０．２６６ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＯＷＥＸ ５０Ｗｘ８（Ｈ＋形態）で４０分間処理し、濾過した。濾液を激しく室温で撹拌する一方で、トリブチルアミン（６３μＬ、０．２６６ｍｍｏｌ）を滴下により添加した。３０分のさらなる撹拌後、反応混合物を凍結乾燥させ、Ｐ２Ｏ５上にて真空下で５時間の間さらに乾燥させた。結果として得られたトリブチルアンモニウムウリジン−５’−モノホスフェートを乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）中にアルゴン雰囲気下で溶解させた。カルボニルジイミダゾール（３５ｍｇ、０．２１９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌した。次に、乾燥ＭｅＯＨ（４．６３μＬ）を添加し、１５分間撹拌することで、過剰のカルボニルジイミダゾールを除去した。残留しているＭｅＯＨを高真空下で（１５分）除去した。引き続いて、Ｎ−メチルイミダゾール．ＨＣｌ（６１ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加し、結果として得られた化合物（６３ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）中に溶解させ、滴下により反応混合物に添加した。反応物を終夜室温で撹拌した後、混合物を減圧下で濃縮した。イミダゾール−ＵＭＰ中間体の消費を、ＭＳ分析によってモニタリングした。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（７：２：１→５：２：１のＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ）で、ＵＤＰ−α−（２’−アジド−２’，２’−ジフルオロアセトアミド）−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトースが得られた。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）７．８７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．９１３〜５．８５（ｍ，２Ｈ）、５．６７（ｄｄ，Ｊ＝６．６，２．７Ｈｚ，１Ｈ）、５．５６〜５．５０（ｍ，１Ｈ）、５．４７〜５．４３（ｍ，１Ｈ）、５．３１〜５．２５（ｍ，２Ｈ）、４．６１〜４．４３（ｍ，２Ｈ）、４．３１〜４．０５（ｍ，５Ｈ）、２．１６（ｓ，３Ｈ）、２．０２（ｓ，３Ｈ）、１．９４（ｓ，３Ｈ）。
ＬＲＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ Ｃ２３Ｈ２９Ｆ２Ｎ６Ｏ２０Ｐ２（Ｍ−Ｈ＋）の計算値＝８０９．０９；実測値８０９．１。
実施例１１．α−ＵＤＰ−２−（２’−アジド−２’，２’−ジフルオロアセトアミド）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトース（ＵＤＰ−Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ、１１ｃ）の合成
ＵＤＰ−α−（２’−アジド−２’，２’−ジフルオロアセトアミド）−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトースの脱アセチル化を、参照により組み込まれるＫｉｓｏら、Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ．Ｊ．、２００６、２３、５６５に従って実施した。
したがって、実施例１０において調製された通りのＵＤＰ−α−（２’−アジド−２’，２’−ジフルオロアセトアミド）−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−ガラクトースをＨ２Ｏ（１ｍＬ）中に溶解させ、トリエチルアミン（１ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２．４ｍＬ）を添加した。反応混合物を２時間の間撹拌し、次いで、真空中で濃縮した。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（７：２：１→５：２：１のＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ）で、α−ＵＤＰ−２−（２’−アジド−２’，２’−ジフルオロアセトアミド）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトース（１１ｃ）が得られた。
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ（ｐｐｍ）７．８６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．９１〜５．８５（ｍ，２Ｈ）、５．５４（ｄｄ，Ｊ＝６．６，３．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．３１〜３．９５（ｍ，９Ｈ）、３．７４〜３．６２（ｍ，２Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ Ｃ１７Ｈ２３Ｆ２Ｎ６Ｏ１７Ｐ２（Ｍ−Ｈ＋）の計算値＝６８３．０６；実測値６８３．１０。
１２を調製するための、ｅｎｄｏＳを用いるトラスツズマブのトリミング
モノクローナル抗体の質量スペクトル分析
およそ７０μＬの総体積における、５０μｇの（修飾）ＩｇＧ、１Ｍのトリス−ＨＣｌ ｐＨ８．０、１ｍＭのＥＤＴＡ及び３０ｍＭのＤＴＴの溶液を、２０分間３７℃でインキュベートすることでジスルフィド架橋を還元して、軽鎖及び重鎖の両方を分析することを可能にした。存在するならば、アジド官能性基も、これらの条件下でアミンに還元される。Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−０．５、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１０膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してｍｉｌｌｉＱで３回、還元試料を洗浄し、１０μＭの（修飾）ＩｇＧに濃縮した。還元ＩｇＧを、エレクトロスプレーイオン化飛行時間（ＥＳＩ−ＴＯＦ）によってＪＥＯＬ ＡｃｃｕＴＯＦで分析した。Ｍａｇｔｒａｎソフトウェアを使用して、デコンボリューションされたスペクトルを得た。
実施例１２．トリミングされたトラスツズマブ１２の調製。
トラスツズマブのグリカントリミングを、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のｅｎｄｏＳ（Ｇｅｎｏｖｉｓ、Ｌｕｎｄ、Ｓｗｅｄｅｎから市販されている）で実施した。したがって、トラスツズマブ（１０ｍｇ／ｍＬ）をｅｎｄｏＳ（４０Ｕ／ｍＬ）とともに、２５ｍＭのトリスｐＨ８．０中にて、およそ１６時間の間３７℃でインキュベートした。脱グリコシル化ＩｇＧを濃縮し、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−０．５、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１０膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して１０ｍＭのＭｎＣｌ２及び２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ ｐＨ８．０で洗浄した。
試料をＭＳ分析にかけ、ピークのデコンボリューション後、質量スペクトルは、軽鎖の１つのピーク及び重鎖の２つのピークを示した。重鎖の２つのピークは、コアＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）置換トラスツズマブから生じる１種の主要な生成物（４９４９６Ｄａ、総重鎖の９０％）及び脱グリコシル化トラスツズマブから生じる副次的生成物（４９３５１Ｄａ、総重鎖の±１０％）に属していた。
ＣＨＯにおけるトラスツズマブ突然変異体及びグリコシルトランスフェラーゼ酵素の一過性発現
タンパク質（酵素及びトラスツズマブ突然変異体）を、２０〜２５ｍＬスケールでＥｖｉｔｒｉａ（Ｚｕｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）によってＣＨＯ Ｋ１細胞において一過性に発現させた。
配列番号１によって同定されたＧａｌＴ二重突然変異体（Ｙ２８９Ｌ、Ｃ３４２Ｔ）
ＲＤＬＲＲＬＰＱＬＶＧＶＨＰＰＬＱＧＳＳＨＧＡＡＡＩＧＱＰＳＧＥＬＲＬＲＧＶＡＰＰＰＰＬＱＮＳＳＫＰＲＳＲＡＰＳＮＬＤＡＹＳＨＰＧＰＧＰＧＰＧＳＮＬＴＳＡＰＶＰＳＴＴＴＲＳＬＴＡＣＰＥＥＳＰＬＬＶＧＰＭＬＩＥＦＮＩＰＶＤＬＫＬＶＥＱＱＮＰＫＶＫＬＧＧＲＹＴＰＭＤＣＩＳＰＨＫＶＡＩＩＩＰＦＲＮＲＱＥＨＬＫＹＷＬＹＹＬＨＰＩＬＱＲＱＱＬＤＹＧＩＹＶＩＮＱＡＧＥＳＭＦＮＲＡＫＬＬＮＶＧＦＫＥＡＬＫＤＹＤＹＮＣＦＶＦＳＤＶＤＬＩＰＭＮＤＨＮＴＹＲＣＦＳＱＰＲＨＩＳＶＡＭＤＫＦＧＦＳＬＰＹＶＱＬＦＧＧＶＳＡＬＳＫＱＱＦＬＳＩＮＧＦＰＮＮＹＷＧＷＧＧＥＤＤＤＩＹＮＲＬＡＦＲＧＭＳＶＳＲＰＮＡＶＩＧＫＴＲＭＩＲＨＳＲＤＫＫＮＥＰＮＰＱＲＦＤＲＩＡＨＴＫＥＴＭＬＳＤＧＬＮＳＬＴＹＭＶＬＥＶＱＲＹＰＬＹＴＫＩＴＶＤＩＧＴＰＳ
配列番号２によって同定されたＣｅＧａｌＮＡｃＴ［３０−３８３］
ＫＩＰＳＬＹＥＮＬＴＩＧＳＳＴＬＩＡＤＶＤＡＭＥＡＶＬＧＮＴＡＳＴＳＤＤＬＬＤＴＷＮＳＴＦＳＰＩＳＥＶＮＱＴＳＦＭＥＤＩＲＰＩＬＦＰＤＮＱＴＬＱＦＣＮＱＴＰＰＨＬＶＧＰＩＲＶＦＬＤＥＰＤＦＫＴＬＥＫＩＹＰＤＴＨＡＧＧＨＧＭＰＫＤＣＶＡＲＨＲＶＡＩＩＶＰＹＲＤＲＥＡＨＬＲＩＭＬＨＮＬＨＳＬＬＡＫＱＱＬＤＹＡＩＦＩＶＥＱＶＡＮＱＴＦＮＲＧＫＬＭＮＶＧＹＤＶＡＳＲＬＹＰＷＱＣＦＩＦＨＤＶＤＬＬＰＥＤＤＲＮＬＹＴＣＰＩＱＰＲＨＭＳＶＡＩＤＫＦＮＹＫＬＰＹＳＡＩＦＧＧＩＳＡＬＴＫＤＨＬＫＫＩＮＧＦＳＮＤＦＷＧＷＧＧＥＤＤＤＬＡＴＲＴＳＭＡＧＬＫＶＳＲＹＰＴＱＩＡＲＹＫＭＩＫＨＳＴＥＡＴＮＰＶＮＫＣＲＹＫＩＭＧＱＴＫＲＲＷＴＲＤＧＬＳＮＬＫＹＫＬＶＮＬＥＬＫＰＬＹＴＲＡＶＶＤＬＬＥＫＤＣＲＲＥＬＲＲＤＦＰＴＣＦ
配列番号３によって同定されたＣｅＧａｌＮＡｃＴ（３０−３８３）−Ｈｉｓ６）
ＫＩＰＳＬＹＥＮＬＴＩＧＳＳＴＬＩＡＤＶＤＡＭＥＡＶＬＧＮＴＡＳＴＳＤＤＬＬＤＴＷＮＳＴＦＳＰＩＳＥＶＮＱＴＳＦＭＥＤＩＲＰＩＬＦＰＤＮＱＴＬＱＦＣＮＱＴＰＰＨＬＶＧＰＩＲＶＦＬＤＥＰＤＦＫＴＬＥＫＩＹＰＤＴＨＡＧＧＨＧＭＰＫＤＣＶＡＲＨＲＶＡＩＩＶＰＹＲＤＲＥＡＨＬＲＩＭＬＨＮＬＨＳＬＬＡＫＱＱＬＤＹＡＩＦＩＶＥＱＶＡＮＱＴＦＮＲＧＫＬＭＮＶＧＹＤＶＡＳＲＬＹＰＷＱＣＦＩＦＨＤＶＤＬＬＰＥＤＤＲＮＬＹＴＣＰＩＱＰＲＨＭＳＶＡＩＤＫＦＮＹＫＬＰＹＳＡＩＦＧＧＩＳＡＬＴＫＤＨＬＫＫＩＮＧＦＳＮＤＦＷＧＷＧＧＥＤＤＤＬＡＴＲＴＳＭＡＧＬＫＶＳＲＹＰＴＱＩＡＲＹＫＭＩＫＨＳＴＥＡＴＮＰＶＮＫＣＲＹＫＩＭＧＱＴＫＲＲＷＴＲＤＧＬＳＮＬＫＹＫＬＶＮＬＥＬＫＰＬＹＴＲＡＶＶＤＬＬＥＫＤＣＲＲＥＬＲＲＤＦＰＴＣＦＨＨＨＨＨＨ
配列番号４によって同定されたトラスツズマブ（重鎖Ｎ３００Ｃ）
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配列番号５によって同定されたトラスツズマブ（軽鎖）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
実施例１３−１．ＣｅＧａｌＮＡｃＴの精製
精製プロトコールは、ＳＰカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのカチオン交換、続いてサイズ排除クロマトグラフィーに基づく。
典型的な精製実験において、発現されたＣｅＧａｌＮＡｃＴを含有するＣＨＯ生成上澄みを、２０ｍＭのトリス緩衝液、ｐＨ７．５に対して透析した。０．４５μＭ−孔径フィルターを介して、上澄み（典型的に２５ｍＬ）を濾過し、引き続いて、使用の前に２０ｍＭのトリス緩衝液、ｐＨ７．５で平衡化したカチオン交換カラム（ＳＰカラム、５ｍＬ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。外部フラクションコレクターが備えられているＡＫＴＡ Ｐｒｉｍｅクロマトグラフィーシステムで、精製を実施した。試料をシステムポンプＡからロードした。１０カラム体積（ＣＶ）の２０ｍＭトリス緩衝液、ｐＨ７．５でカラムを洗浄することによって、非結合タンパク質をカラムから溶出した。保持されたタンパク質を溶出緩衝液（２０ｍＭのトリス、１ ＮａＣｌ、ｐＨ７．５；１０ｍＬ）で溶出した。回収された画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによってポリアクリルアミドゲル（１２％）で分析し、標的タンパク質を含有する画分を合わせ、スピン濾過を使用して０．５ｍＬの体積に濃縮した。次に、タンパク質を、分取用Ｓｕｐｅｒｄｅｘサイズ排除カラムにてＡＫＴＡ精製器システム（ＵＮＩＣＯＲＮ ｖ６．３）で精製した。この精製ステップは、標的タンパク質の二量体及び単量体画分の同定及び分離に至った。両画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析し、さらなる使用の前に−８０℃で貯蔵した。
実施例１３−２．ＣｅＧａｌＮＡｃＴ−Ｈｉｓ６の精製
典型的な精製実験において、０．４５μＭ−孔径フィルターを介して、ＣＨＯ上澄みを濾過し、使用の前に緩衝液Ａ（２０ｍＭのトリス緩衝液、２０ｍＭのイミダゾール、５００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５）で平衡化したＮｉ−ＮＴＡカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、５ｍＬ）に適用した。濾過の前に、イミダゾールをＣＨＯ上澄みに、２０ｍＭの最終濃度まで添加することで、カラムへの非特異的な結合を最小化した。カラムを緩衝液Ａ（５０ｍＬ）で最初に洗浄した。保持されたタンパク質を、緩衝液Ｂ（２０ｍＭのトリス、５００ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ７．５、１０ｍＬ）で溶出した。画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥによってポリアクリルアミドゲル（１２％）で分析し、精製された標的タンパク質を含有した画分を合わせ、終夜４℃で実施された透析によって、緩衝液を２０ｍＭのトリス（ｐＨ７．５）に対して交換した。精製されたタンパク質を、さらなる使用の前に−８０℃で貯蔵した。注記：単量体及び二量体のＣｅＧａｌＮＡｃＴ−Ｈｉｓ６種の同定のため、追加のＳＥＣ精製を実施した（上に記載されている通り）。
１３ａ〜ｃを調製するための、１１ａ〜ｃから１２への転移
実施例１４．トラスツズマブ（ＧａｌＮＰｒｏＳＨ）２ １３ａの調製。
脱グリコシル化トラスツズマブ（１０ｍｇ／ｍＬ）を、１０ｍＭのＭｎＣｌ２及び５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ ｐＨ６．０中のＵＤＰ−ガラクトース誘導体１１ａ（１．３ｍＭ）及びβ（１，４）−Ｇａｌ−Ｔ１（Ｙ２８９Ｌ，Ｃ３４２Ｔ）（２ｍｇ／ｍＬ）とともに１６時間の間３０℃でインキュベートした。
次に、官能化トラスツズマブをタンパク質Ａアガロース（１ｍｇのＩｇＧ当たり４０μＬ）とともに１時間の間室温でインキュベートした。タンパク質ＡアガロースをＴＢＳ（ｐＨ６．０）で３回洗浄し、ＩｇＧを１００ｍＭのグリシン−ＨＣｌ ｐＨ２．５で溶出した。溶出ＩｇＧを１Ｍのトリス−ＨＣｌ ｐＨ７．０で中和し、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ ｐＨ６．０を用いて、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−０．５、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１０膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して１５〜２０ｍｇ／ｍＬの濃度に濃縮及び洗浄した。Ｆａｂｒｉｃａｔｏｒを用いる消化後のスペクトル分析、及びＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−０．５、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１０膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用するＭｉｌｉＱでの後続の洗浄は、２種の生成物、導入されたＧａｌＮＰｒｏＳＨを有する主要な生成物（２４３８７Ｄａ）及び導入されたＧａｌＮＰｒｏＳＨ＋ジスルフィドとしてのＵＤＰＧａｌＮＰｒｏＳＨを有する副次的生成物（２５０３７Ｄａ）の形成を示した。生成物間の比は、約６０：４０である。
Ｇａｌ−Ｔ１（Ｙ２８９Ｌ，Ｃ３４２Ｔ）を用いるＵＤＰ−ガラクトース誘導体の糖転移、一般のプロトコール
ウシβ（１，４）−ガラクトシルトランスフェラーゼ［β（１，４）−Ｇａｌ−Ｔ１（Ｙ２８９Ｌ，Ｃ３４２Ｔ）］の二重突然変異体を用いて、脱グリコシル化トラスツズマブへのＵＤＰ−ガラクトース誘導体の酵素的導入を達成した。脱グリコシル化トラスツズマブ（１０ｍｇ／ｍＬ）を、１０ｍＭのＭｎＣｌ２及び２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ ｐＨ８．０中の適切なＵＤＰ−ガラクトース誘導体（０．４ｍＭ）及びＧａｌ−Ｔ二重突然変異体（１ｍｇ／ｍＬ）とともに１６時間の間３０℃でインキュベートした。
次に、官能化トラスツズマブをタンパク質Ａアガロース（１ｍｇのＩｇＧ当たり４０μＬ）とともに２時間の間４℃でインキュベートした。タンパク質ＡアガロースをＰＢＳで３回洗浄し、ＩｇＧを１００ｍＭのグリシン−ＨＣｌ ｐＨ２．７で溶出した。溶出ＩｇＧを１Ｍのトリス−ＨＣｌ ｐＨ８．０で中和し、ＰＢＳを用いて、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−０．５、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１０膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して１５〜２０ｍｇ／ｍＬの濃度に濃縮及び洗浄した。
ＣｅＧａｌＮＡｃＴを用いるＵＤＰ−ＧａｌＮＡｃ誘導体の糖転移（一般のプロトコール）
ＣｅＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼを用いて、ＩｇＧへのＧａｌＮＡｃ誘導体の酵素的導入を達成した。脱グリコシル化ＩｇＧ（上に記載されている通りに調製された、１０ｍｇ／ｍＬ）を、１０ｍＭのＭｎＣｌ２及び２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ ｐＨ８．０中の修飾ＵＤＰ−ＧａｌＮＡｃ誘導体（例えば、アジド修飾糖−ＵＤＰ誘導体）（０．４ｍＭ）及びＣｅＧａｌＮＡｃ−Ｔ（１ｍｇ／ｍＬ）とともに１６時間の間３０℃でインキュベートした。官能化ＩｇＧ（例えばアジド官能化ＩｇＧ）を、タンパク質Ａアガロース（１ｍｇのＩｇＧ当たり４０μＬ）とともに２時間の間４℃でインキュベートした。タンパク質ＡアガロースをＰＢＳで３回洗浄し、ＩｇＧを１００ｍＭのグリシン−ＨＣｌ ｐＨ２．７で溶出した。溶出ＩｇＧを１Ｍのトリス−ＨＣｌ ｐＨ８．０で中和し、ＰＢＳを用いて、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ−０．５、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１０膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、１５〜２０ｍｇ／ｍＬの濃度に濃縮及び洗浄した。
実施例１５．ＧａｌＴ二重突然変異体を用いるトラスツズマブ（ＧａｌＮＡｚ）２ １３ｂの調製。
ＵＤＰ−Ｎ−アジドアセチルガラクトサミン（ＵＤＰ−ＧａｌＮＡｚ）及びＧａｌ−Ｔ二重突然変異体を用いて、トラスツズマブを糖転移プロトコールにかけた。タンパク質Ａ親和性精製の後、質量分析は、コアＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）置換トラスツズマブへのＧａｌＮＡｚ転移から生じる主要な生成物（４９７１３Ｄａ、総重鎖の９０％）、及びコアＧｌｃＮＡｃ置換トラスツズマブへのＧａｌＮＡｚ転移から生じる副次的生成物（４９５６６Ｄａ、総重鎖の±１０％）の形成を示した。
これは、式（１３ｂ）で表されるアジド修飾糖タンパク質の例である。
実施例１６−１．ＣｅＧａｌＮＡｃ−Ｔを用いるトラスツズマブ（ＧａｌＮＡｚ）２ １３ｂの調製。
ＵＤＰ−Ｎ−アジドアセチルガラクトサミン（ＵＤＰ−ＧａｌＮＡｚ）及びＣｅＧａｌＮＡｃ−Ｔを用いて、トリミングされたトラスツズマブを糖転移プロトコールにかけた。タンパク質Ａ親和性精製の後、小さい試料をＤＴＴで還元し、引き続いてＭＳ分析にかけて、コアＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）置換トラスツズマブへのＧａｌＮＡｚ転移から生じる１種の主要な生成物（４９７１３Ｄａ、総重鎖の９０％）、及びＧａｌＮＡｚ転移から生じるコアＧｌｃＮＡｃ置換トラスツズマブへの副次的生成物（４９５６６Ｄａ、総重鎖の±１０％）の形成を示した。
実施例１６−２．ＣｅＧａｌＮＡｃ−Ｔを用いるトラスツズマブ（Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ）２ １３ｃの調製
ＵＤＰ−Ｎ−アジドジフルオロアセチルガラクトサミン（ＵＤＰ−Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ、１３ｃ）及びＣｅＧａｌＮＡｃＴ又はＣｅＧａｌＮＡｃＴ−Ｈｉｓ６を用いて、トリミングされたトラスツズマブを糖転移プロトコールにかけた。タンパク質Ａ親和性精製の後、小さい試料をＤＴＴで還元し、引き続いてＭＳ分析にかけて、試料調製中にＤＴＴと反応したコアＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）置換トラスツズマブへのＦ２−ＧａｌＮＡｚ転移から生じる１種の主要な重鎖生成物（４９８６５Ｄａ、総重鎖のおよそ９０％）の形成を示した。
これは、式（１３ｃ）で表されるアジド修飾糖タンパク質の例である。
１７〜６８の合成
実施例１７．１−ピレンカルボン酸ＯＳｕエステル（４５）の合成
ＤＣＭ／ＤＭＦ（各２ｍＬ）中の１−ピレンカルボン酸（６５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（３４ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ．ＨＣｌ（７０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を２時間の間撹拌し、引き続いてＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、クエン酸水溶液（１０％、５ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３（３×５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮することで、粗製の４５を得た。
実施例１８．（４６）の合成
化合物４５（４８０ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５ｍＬ）中に溶解させ、ｔｅｒｔ−ブチル（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エチル）カルバメート（３４８ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ及びＥｔ３Ｎ（２８６μＬ、２．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を終夜撹拌し、水（１５ｍＬ）でクエンチし、有機層を水（１×１５ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９５：５）を介する精製で、生成物４６を得た（４６０ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ、７０％）。
実施例１９．（１７）の合成
Ｂｏｃ保護ピレンアミン４６（４６０ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）中に溶解させ、塩化アセチル（１４０μＬ、１．９ｍｍｏｌ）を添加し、１時間後及び３時間後、追加の塩化アセチル（２×１４０μＬ、１．９ｍｍｏｌ）を添加した。４時間の間撹拌した後、混合物を減圧下で濃縮した。次に、粗製生成物（１００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３ｍＬ）中に溶解させ、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ブタノエート（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（７３μＬ、０．５２ｍｍｏｌ）を添加した。終夜撹拌した後、溶液を水（３ｍＬ）でクエンチし、水（２×３ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９５：５）を介する精製で、生成物１７を得た（６９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、７５％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、８．１２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、８．０４〜７．９３（ｍ，６Ｈ）、６．５９（ｂｓ，１Ｈ）、６．３８（ｓ，２Ｈ）、５．９９（ｂｓ，１Ｈ）、３．７６〜３．７１（ｍ，４Ｈ）、３．６２〜３．６０（ｍ，２Ｈ）、３．５４〜３．５２（ｍ，２Ｈ）、３．３７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．２３〜３．１７（ｍ，４Ｈ）、１．８２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．６３（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）。
実施例２０−１．マレイミドアルコール誘導体（４７）の合成
飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１６ｍＬ）中の５−アミノペンタン−１−オール（１００ｍｇ、０．９７μｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液に、Ｎ−メトキシカルボニルマレイミド（１５０ｍｇ、０．６４μｍｏｌ）を添加した。混合物を１．５時間の間撹拌し、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。生成物４７が無色の油として得られた（１３７ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、７５％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）６．６９（ｓ，２Ｈ）、３．７０〜３．６７（ｍ，１Ｈ）、３．６７〜３．６０（ｍ，２Ｈ）、３．５３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）、１．６８〜１．５４（ｍ，４Ｈ）、１．４２〜１．３１（ｍ，２Ｈ）。
実施例２０−２．マレイミド−ピレン誘導体（１８）の合成
ＤＣＭ（１ｍＬ）中アルコール４７（７．７ｍｇ、４２μｍｏｌ）の溶液に、イソシアン酸クロロスルホニル（ＣＳＩ、３．９μＬ、５．９ｍｇ、４２μｍｏｌ）を添加した。溶液を１５分間撹拌した後、Ｅｔ３Ｎ（１８μＬ、１３ｍｇ、１２６μｍｏｌ）、並びに１−ピレンメチルアミン．ＨＣｌ（４９、１１ｍｇ、４２μｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１８μＬ、１３ｍｇ、１２６μｍｏｌ）の溶液を添加した。８０分後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）及びＤＣＭ（２０ｍＬ）を添加した。分離後、有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＤＣＭ中２％のＭｅＯＨ）の後、生成物１８がわずかに黄色の固体として得られた（７．４ｍｇ、１４．２μｍｏｌ、３４％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３／ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）８．３２〜８．２６（ｍ，１Ｈ）、８．２０〜７．９０（ｍ，８Ｈ）、６．６１（ｓ，２Ｈ）、４．９０（ｓ，２Ｈ）、３．６５（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）、３．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）。１．４０〜１．２０（ｍ，４Ｈ）、１．０８〜０．９７（ｍ，２Ｈ）。
実施例２１．ＢＣＮ−ヘプタン酸（５２）の合成
ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中のＢＣＮ−ＯＳｕ誘導体５１の溶液に、０．１ＭのＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍＬ）中の７−アミノヘプタン酸５０（１４５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＭｅＣＮ（２５ｍＬ）を添加した。混合物を４時間の間撹拌し、部分濃縮した。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（３０ｍＬ）を添加し、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）を用いる抽出後、合わせた有機物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。生成物５２を、さらに精製することなく上記ステップにおいて使用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）４．６８（ｂｓ，１Ｈ）、４．１４（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ）、３．１７（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，６．３Ｈｚ，２Ｈ）、２．３５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）、２．３２〜２．０９（ｍ，６Ｈ）、１．７０〜１．２５（ｍ，１１Ｈ）、０．９４（ｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，２Ｈ）。
実施例２２．ＢＣＮ−ヘプタン酸ベンジルアミド（１９）の合成
ＤＣＭ（２５ｍＬ）中の５１（２９１ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の混合物に、７−アミノヘプタン酸５０及びＥｔ３Ｎ（４１７μｌ、３０３ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＭＦ（１０ｍＬ）を添加した。ＤＣＭの蒸発（４０℃）後、結果として得られた混合物を１０分間撹拌し、ＮａＨＣＯ３の水溶液（０．１Ｍ）を添加した。反応混合物をさらに３時間に間撹拌した後、上記反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（５０ｍＬ）中に注ぎ、ＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をＤＣＭ（２５ｍＬ）中に溶かし、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ．ＨＣｌ、２４９ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１５０、１．３０ｍｍｏｌ）を添加し、結果として得られた混合物を１８時間の間撹拌した。水（５０ｍＬ）の添加後、層を分離させ、水性相をＤＣＭ（２×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。カラムクロマトグラフィーで、５２の中間体ＮＨＳエステル誘導体を無色の濃厚な油として得た（２３３ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ、５６％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）４．６９（ｓ，１Ｈ）、４．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．１７（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，６．９Ｈｚ，２Ｈ）、２．９１〜２．７７（ｍ，４Ｈ）、２．６１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．３７〜２．１２（ｍ，６Ｈ）、１．８３〜１．６９（ｍ，２Ｈ）、１．６６〜１．１７（ｍ，９Ｈ）、１．０１〜０．９０（ｍ，２Ｈ）。次に、ＤＣＭ（１２ｍＬ）中の中間体ＢＣＮ−アミノヘプタン酸ＮＨＳエステル（４９ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の溶液に、ベンジルアミン（１９μＬ、１９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（５０μＬ、３６ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１９時間の間撹拌し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）及び飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）を添加した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。勾配カラムクロマトグラフィー（ヘプタン中２５％→５０％のＥｔＯＡｃ）の後、化合物１９を白色の固体として得た（３１ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ、６３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）７．３８〜７．２７（ｍ，５Ｈ）、５．７２（ｂｓ，１Ｈ）、４．６４（ｂｓ，１Ｈ）、４．４５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．１３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．１６（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，６．３Ｈｚ，２Ｈ）、２．３８〜２．１３（ｍ，８Ｈ）、１．７５〜１．１１（ｍ，１１Ｈ）、１．００〜０．８８（ｍ，２Ｈ）。
実施例２３．ｔｅｒｔ−ブチルＮ−ベンジルスルファモイルカルバメート（５３）の合成
Ｎ２の雰囲気下で、Ｅｔ２Ｏ（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブタノールの冷却溶液（−７８℃）に、イソシアン酸クロロスルホニル（ＣＳＩ）添加し、混合物を室温に達するままにした。４５分後、混合物を濃縮し、結果として得られたｔｅｒｔ−ブチルクロロスルホニルカルバメートを、さらに精製することなく次のステップにおいて使用した（６８％純粋と考えられる）。したがって、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の粗製のｔｅｒｔ−ブチルクロロスルホニルカルバメート（１９９ｍｇ粗製＝１３５ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（２６３μＬ、１９１ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）及びベンジルアミン（８２μＬ、８１ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２時間の間撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチした。ＤＣＭ（１０ｍＬ）を添加し、層を分離させた。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。勾配カラムクロマトグラフィー（ヘプタン中２５％→５０％のＥｔＯＡｃ）の後、化合物５３を白色の固体として得た（１６９ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）７．４１〜７．２９（ｍ，５Ｈ）、５．４１〜５．３０（ｍ，１Ｈ）、４．３０〜４．２０（ｍ，２Ｈ）、１．４６（ｓ，９Ｈ）。
実施例２４．Ｎ−ベンジルスルファミド（５４）の合成
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−ベンジルスルファモイルカルバメート５３（１０８ｍｇ、０．３８）の溶液に、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を添加した。反応混合物を１．５時間の間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬ）中に注ぎ入れた。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液をさらに５０ｍＬ添加後、水性混合物をＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。生成物５４を白色の固体として得た（３６ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、５０％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）７．４１〜７．３０（ｍ，５Ｈ）、４．３２（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ）。
実施例２５．（２０）の合成
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の５２（４４ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（３９ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２．９ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）及びＮ−ベンジルスルファミド５４（１３ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２２時間の間室温で撹拌させておいた後、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）及び飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）を添加した。分離後、水性相をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。勾配カラムクロマトグラフィー（ヘプタン中２５％→５０％のＥｔＯＡｃ）の後、生成物２０を、標題化合物及びＮ−ベンジルスルファミド５４（３．２／１の質量比）（１４．４ｍｇ）の分離不可能な混合物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）７．３８〜７．２７（ｍ，５Ｈ）、５．９９（ｂｓ，１Ｈ）、５．０１（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．２０（ｓ，２Ｈ）、４．８５〜４．７０（ｍ，２Ｈ）、４．１３（ｄ，Ｊ＝８．１２Ｈｚ，２Ｈ）、３．１５（ｑ，Ｊ＝６．５０，２Ｈ）、２．３５〜２．１５（ｍ，６Ｈ）、２．０９（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、１．６５〜０．７５（ｍ，１３Ｈ）。
実施例２６．（５６）の合成
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の５１（４３０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ（４ｍＬ）中の５−アミノペンタン−１−オール５５（１５２ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）の溶液及びＥｔ３Ｎ（６１９μＬ、４４９ｍｇ、４．４４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１．５時間の間室温で撹拌した後に、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液（４０ｍＬ）を添加した。分離後、有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣を勾配カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘプタン １／１→３／１）によって精製した。生成物５６を無色の粘性液体として得た（３５６ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ、８１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）４．６８（ｓ，１Ｈ）、４．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．６５（ｄｄ，Ｊ＝１１．７，６．３Ｈｚ，２Ｈ）、３．１９（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，６．７Ｈｚ，２Ｈ）、２．３５〜２．１５（ｍ，６Ｈ）、１．６６〜１．３０（ｍ，７Ｈ）、１．０２〜０．８８（ｍ，２Ｈ）。
実施例２７．（２１）の合成
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の５６（５１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、イソシアン酸クロロスルホニル（１６μｌ、２５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を４０分間撹拌した後、Ｅｔ３Ｎ（７５μｌ、５５ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）及びベンジルアミン（１９μｌ、１９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をさらに１．５時間の間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌの水溶液（飽和）の添加を介してクエンチした。分離後、水層をＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣を勾配カラムクロマトグラフィー（ペンタン中の２０％→５０％のＥｔＯＡｃ）によって精製し、生成物２１を無色の濃厚な油として得た（５７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、６７％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）７．４１〜７．２８（ｍ，５Ｈ）、５．５５（ｓ，１Ｈ）、４．７５（ｓ，１Ｈ）、４．２９〜４．２４（ｍ，２Ｈ）、４．２０〜４．０８（ｍ，２Ｈ）、３．１９（ｄｄ，Ｊ＝１３．４，６．６Ｈｚ，２Ｈ）、２．３７〜２．１６（ｍ，６Ｈ）、１．７４〜１．３１（ｍ，９Ｈ）、０．９４（ｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，２Ｈ）。
実施例２８．（２２）の合成
不活性雰囲気下で、２１（９３ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解させた。ＰＰｈ３（４９ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（５０μＬ、１．２３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃に冷却した。無水ＴＨＦ（５ｍＬ）中のＤＩＡＤ（３７μＬ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくり添加し、混合物を室温に達するままにした後、反応物を１８時間の間撹拌し、引き続いて濃縮した。勾配カラムクロマトグラフィー（ヘプタン中２０％→５０％のＥｔＯＡｃ）で、生成物２２を無色の濃厚な油として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）７．３９〜７．２６（ｍ，５Ｈ）、５．９４〜５．８４（ｍ，１Ｈ）、４．８０〜４．６４（ｍ，１Ｈ）、４．１９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ，）、４．１３（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．０８（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）、３．１７（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）、３．１２（ｓ，３Ｈ）、２．３５〜２．１４（ｍ，６Ｈ）、１．８０〜１．６５（ｍ，１３Ｈ）。
実施例２９．（５８）の合成
ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の５７（１．５ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ２雰囲気下で、ＣＳＩ（０．８７ｍＬ、１．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２．８ｍＬ、２．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）及び２−（２−アミノエトキシ）エタノール（１．２ｍＬ、１．２６ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１０分間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（飽和、１５０ｍＬ）の添加を介してクエンチした。分離後、水層をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーで精製した。生成物５８を、わずかに黄色の濃厚な油として得た（２．０６ｇ、５．７２ｍｍｏｌ、５７％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）６．０（ｂｓ，１Ｈ）、４．２８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．７８〜３．７３（ｍ，２Ｈ）、３．６６〜３．６１（ｍ，２Ｈ）、３．６１〜３．５５（ｍ，２Ｈ）、３．３４（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ）、２．３７〜２．１５（ｍ，６Ｈ）、１．６４〜１．４８（ｍ，２Ｈ）、１．４０（五重線，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．０５〜０．９２（ｍ，２Ｈ）。
実施例３０．（５９）の合成
５８（１３０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＳＩ（３１μＬ、５１ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（１５１μＬ）及び２−（２−アミノエトキシ）エタノール（３６μＬ、３８ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を引き続いて添加した。１５分後、水（２０ｍＬ）を添加し、分離後、水層を１ＭのＨＣｌ水溶液でｐＨ３に酸性化し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。ＤＣＭ層を乾燥させ、濃縮した。カラムクロマトグラフィーの後、生成物５９を無色の油として得た（８７ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、４２％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）６．１５〜５．９５（ｍ，２Ｈ）、４．４０〜４．３２（ｍ，２Ｈ）、４．３１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、３．８５〜３．５５（ｍ，１０Ｈ）、３．４５〜３．２５（ｍ，４Ｈ）、２．４０〜２．１５（ｍ，６Ｈ）、１．６５〜１．４７（ｍ，２Ｈ）、１．４０（五重線，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．０６〜１．９２（ｍ，２Ｈ）。
実施例３１．（２３）の合成
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の５９（６３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（２２ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（４６μＬ、３３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を引き続いて添加した。２０時間後、ベンジルアミン（２２μＬ、２１．６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。混合物をさらに２４時間の間撹拌した後、混合物を濃縮し、残渣を勾配カラムクロマトグラフィー（第１のカラムＤＣＭ中０％→２０％のＭｅＯＨ、第２のカラムＤＣＭ中０％→８％のＭｅＯＨ）によって精製した。生成物２３を無色の膜として得た（１８ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、２３％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）７．３８〜７．１８（ｍ，５Ｈ）、４．３１〜４．２２（ｍ，６Ｈ）、４．２２〜４．１６（ｍ，２Ｈ）、３．７０〜３．６３（ｍ，４Ｈ）、３．６３〜３．５４（ｍ，４Ｈ）、３．３４（ｓ，１Ｈ）、３．２４〜３．１５（ｍ，４Ｈ）、２．３０〜２．１０（ｍ，６Ｈ）、１．６８〜１．５２（ｍ，２Ｈ）、１．４２（五重線，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．０２〜０．９０（ｍ，２Ｈ）。
実施例３２．ＢＣＮ−ｄＰＥＧ４−Ｃ（Ｏ）ＯＳｕ（６０ａ）の合成
無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）中のアミノ−ｄＰＥＧ４−酸（１．２３ｇ、４．２３ｍｍｏｌ）の溶液に、５１（１．０２ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．６０ｍＬ、１１．５３ｍｍｏｌ）を引き続いて添加した。反応混合物を３時間の間室温で撹拌した後、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（０．８８４ｇ、４．６１ｍｍｏｌ）及びＮＨＳ（８８ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を添加した。結果として得られた溶液を終夜室温で撹拌し、１００ｍＬのＮａＨＣＯ３（飽和）及び１５０ｍＬのＥｔＯＡｃに注ぎ入れた。層を分離させ、有機相を飽和ＮａＨＣＯ３（９０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（７５ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空中で濃縮した。勾配フラッシュクロマトグラフィー（ＭｅＣＮ→ＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ ３０：１）で、生成物６０ａが無色の油として得られた（８００ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ、４０％）。
実施例３３．ＢＣＮ−ｄＰＥＧ４−ピレン（２４）の合成
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の６０ａ（５０ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）の溶液に、４９（３０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１７μＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加した。終夜室温で撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９：１）を介する後続の精製で、生成物２４を得た（３８ｍｇ、６１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．２９〜８．２６（ｍ，２Ｈ）、８．１９〜８．１１（ｍ，４Ｈ）、８．０６〜７．９７（ｍ，４Ｈ）、７．０４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、５．２４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、５．１６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ）、４．０６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ）、３．７６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、３．５０（ｍ，２Ｈ）、３．３９〜３．２２（ｍ，１４Ｈ）、２．５６〜２．５３（ｍ，２Ｈ）、２．２７〜２．１３（ｍ，７Ｈ）、１．２９〜１．２５（ｍ，２Ｈ）、０．８７〜０．８３（ｍ，２Ｈ）。
実施例３４．ＢＣＮ−ＰＥＧ８−Ｃ（Ｏ）ＯＳｕ（６０ｂ）の合成
無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中のアミノ−ｄＰＥＧ８−酸（２１７ｍｇ、０．４９２ｍｍｏｌ）の溶液に、５１（１４３ｍｇ、０．４９２ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（２０４μＬ、１．４７ｍｍｏｌ）を引き続いて添加した。反応混合物を３時間の間室温で撹拌した後、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（０．８８ｇ、４．６１ｍｍｏｌ）及びＮＨＳ（８８ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を添加した。結果として得られた溶液を終夜室温で撹拌し、５０ｍＬのＮａＨＣＯ３（飽和）及び５０ｍＬのＥｔＯＡｃに注ぎ入れた。層を分離させ、有機相を飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（３０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空中で濃縮した。勾配フラッシュクロマトグラフィー（ＭｅＣＮ→ＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ ３０：１）で、生成物６０ｂが無色の油として得られた（２１２ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、６０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）４．１３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．８４（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）、３．６８〜３．５９（ｍ，２８Ｈ）、３．５４（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．３６（ｑ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．８９（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ）、２．８２（ｓ，４Ｈ）、２．３５〜２．１５（ｍ，６Ｈ）、１．６８〜１．４８（ｍ，２Ｈ）、１．４４〜１．２３（ｍ，１Ｈ）、１．００〜０．８６（ｍ，２Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ３４Ｈ５４Ｎ２Ｏ１４（Ｍ＋Ｎａ＋）の計算値＝７３７．８；実測値７３７．３。
実施例３５．ＢＣＮ−ＰＥＧ８−ピレン（２５）の合成
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の６０ｂ（１００ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液に、１−アミノメチルピレン．ＨＣｌ４９（５０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（４７μＬ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加した。３時間の間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９５：５）を介する後続の精製で、生成物２５を得た（３５ｍｇ、３０％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．３０〜８．２８（ｍ，１Ｈ）、８．２１〜８．１３（ｍ，４Ｈ）、８．０５〜７．９９（ｍ，４Ｈ）、７．２２（ｂｓ，１Ｈ）、５．１６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ）、４．１２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、３．７６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）、３．６５〜３．４９（ｍ，２１Ｈ）、３．４５〜３．４２（ｍ，２Ｈ）、３．３６〜３．３２（ｍ，４Ｈ）、２．５９〜２．５４（ｍ，４Ｈ）、２．２８〜２．２０（ｍ，４Ｈ）、１．５９〜１．５４（ｍ，２Ｈ）、１．３８〜１．２５（ｍ，２Ｈ）、０．９３〜０．９１（ｍ，２Ｈ）。
実施例３６．（６１）の合成
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の５７（０．１５ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＳＩ（８７μＬ、０．１４ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２７９μＬ、２０２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、及びＤＣＭ（１ｍＬ）中のＨ２Ｎ−ＰＥＧ３−ＯＨ（２５１ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。２．５時間の間撹拌した後、反応混合物をＮＨ４Ｃｌ（飽和、２０ｍＬ）の溶液の添加を介してクエンチした。分離後、水層をＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣を勾配カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０％→１０％のＭｅＯＨ）によって精製した。生成物６１を無色の濃厚な油として得た（２５４ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ、５７％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）６．８１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、４．２６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．８０〜３．７０（ｍ，４Ｈ）、３．７０〜３．５８（ｍ，１０Ｈ）、３．３６（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，２Ｈ）、２．３６〜２．１６（ｍ，６Ｈ）、１．６４〜１．４９（ｍ，２Ｈ）、１．４０（五重線，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．０４〜０．９２（ｍ，２Ｈ）。
実施例３７．（６２）の合成
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の６１（２４２ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（２１８ｍｇ；１．０８ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（２２６μＬ、１６４ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１７時間の間撹拌し、水（２０ｍＬ）でクエンチした。分離後、有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣を勾配カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ペンタン １／１→ＥｔＯＡｃ）によって精製することで、生成物６２が得られた（２５９ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ Ｃ３３Ｈ４２Ｎ５Ｏ１６Ｓ（Ｍ＋ＮＨ４ ＋）の計算値＝７９６．２３；実測値７９６．５２。
実施例３８．ＢＣＮ−スルファミド−ピレン（２６）の合成
化合物６２（４０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）中に溶解させ、４９（３４ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３０μＬ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４時間の間撹拌し、減圧下で濃縮し、勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９６：４）で精製した。上記生成物を含有する画分を、飽和ＮａＨＣＯ３（３×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮することで、２６を得た（２５ｍｇ、３６％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．２９〜８．２６（ｍ，２Ｈ）、８．１９〜８．１１（ｍ，４Ｈ）、８．０６〜７．９７（ｍ，４Ｈ）、６．８７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２Ｈｚ）、５．７８（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）、５．１２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）、４．３１〜４．２６（ｍ，２Ｈ）、３．９７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、３．６９〜３．６２（ｍ，４Ｈ）、３．２８（ｍ，２Ｈ）、２．１８〜１．９６（ｍ，７Ｈ）、１．２８（ｍ，１Ｈ）、０．７９〜０．７４（ｍ，２Ｈ）。
実施例３９．ＤＩＢＡＣ−ＰＥＧ４−ピレン（２７）の合成
化合物４５（７５ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３ｍＬ）中に溶解させ、続いて、アミノ−ＰＥＧ４−カルボン酸（５３ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（８３μＬ、０．６ｍｍｏｌ）を添加した。終夜撹拌した後、追加の４５（２５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をさらに１時間の間撹拌した。完全変換（ＴＬＣ分析に基づく）の後、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ．ＨＣｌ（７０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を終夜室温で撹拌した。反応混合物に、６４（６０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加し、Ｅｔ３Ｎ（５０μＬ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加し、１時間後、反応混合物を減圧下で濃縮した。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９：１）を介する精製で、生成物２７を得た（１２ｍｇ、８％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、８．２３〜８．２１（ｍ，２Ｈ）、８．１７〜８．１０（ｍ，４Ｈ）、８．０７〜８．０２（ｍ，３Ｈ）、７．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、７．３８〜７．１８（ｍ，７Ｈ）、７．０６（ｂｓ，１Ｈ）、６．４５（ｍ，１Ｈ）、５．００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．６）、３．８６〜３．７９（ｍ，３Ｈ）、３．７０〜３．１９（ｍ，１４Ｈ）、２．４２〜２．３８（ｍ，１Ｈ）、２．１９〜２．１５（ｍ，２Ｈ）、１．８９〜１．８５（ｍ，１Ｈ）。
実施例４０．ＤＩＢＡＣ−ＰＥＧ８−ピレン（２８）の合成
化合物４５（２４ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１ｍＬ）中に溶解させ、続いて、アミノ−ＰＥＧ８−カルボン酸（２７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１４μＬ、０．１０ｍｍｏｌ）を添加した。２時間の間撹拌した後、追加の４５（１０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を終夜の間撹拌した。引き続いて、ＮＨＳ（１０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ．ＨＣｌ（１７ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を２時間の間撹拌した。次に、６４（２１ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１４μＬ、０．１０ｍｍｏｌ）を添加し、４時間後、反応物を水（３ｍＬ）の添加によってクエンチした。有機層を水（２×３ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９３：７）を介する精製で、生成物を得た（８ｍｇ、１４％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、８．１９〜７．８６（ｍ，７Ｈ）、７．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、７．３３〜７．１８（ｍ，８Ｈ）、６．９９（ｍ，１Ｈ）、６．４５（ｍ，１Ｈ）、５．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．０）、３．７８〜３．７４（ｍ，３Ｈ）、３．６５〜３．２９（ｍ，２９Ｈ）、２．４３〜２．３７（ｍ，１Ｈ）２．２５〜２．２１（ｍ，２Ｈ）、１．９１〜１．８４（ｍ，１Ｈ）。
実施例４１．（６５）の合成
化合物４５（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３ｍＬ）中に溶解させ、続いて、２−アミノエタノール（１０μＬ、０．１６ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３０μＬ、０．２２ｍｍｏｌ）を添加した。２時間後、追加の２−アミノエタノール（１０μＬ、０．１６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を終夜室温で撹拌した。引き続いて、水（５ｍＬ）を添加し、有機層を水（３×５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９７：３）を介する精製で、生成物６５を得た（３２ｍｇ、７９％）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ１９Ｈ１６ＮＯ２（Ｍ＋Ｈ＋）の計算値＝２９０．１２；実測値２９０．３０。
実施例４２．ＤＩＢＡＣ−スルファミド−ピレン（２９）の合成
化合物６５（２６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２ｍＬ）中に溶解させ、続いて、ＣＳＩ（８μＬ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、Ｅｔ３Ｎ（３７μＬ、０．２７ｍｍｏｌ）及び６４（２６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を２時間の間室温で撹拌した後、反応物を、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（飽和、５ｍＬ）の添加を介してクエンチした。有機層を水（３×５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＤＣＭ：ＭｅＯＨ ９５：５）を介する精製で、生成物２９を得た（１０ｍｇ、１７％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．４９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ）、８．２５〜８．１８（ｍ，３Ｈ）、８．１１〜７．９５（ｍ，５Ｈ）、７．３８〜７．００（ｍ，８Ｈ）、６．０５（ｍ，１Ｈ）、５．９６（ｍ，１Ｈ）、４．６２〜４．５８（ｍ，１Ｈ）。４．５２〜４．４７（ｍ，１Ｈ）、４．１１〜４．０８（ｍ，１Ｈ）、３．８１〜３．７８（ｍ，１Ｈ）、３．６４〜３．６０（ｍ，１Ｈ）、３．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４Ｈｚ）、２．９０〜２．８７（ｍ，２Ｈ）、２．１７〜２．０９（ｍ，１Ｈ）、１．６２〜１．５６（ｍ，２Ｈ）。
実施例４３−１．（３０）の合成
１ｍＬのＤＭＦ中のＢＣＮ−ＰＥＧ４−Ｃ（Ｏ）ＯＳｕ（６０ａ、７．１ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（９．１μＬ、６．６ｍｇ、６５．５μｍｏｌ）の溶液を、Ｈ−Ａｈｘ−メイタンシン．ＴＦＡ（１０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）に添加した。反応物を２０時間の間室温で撹拌し、引き続いて、減圧下で濃縮した。逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ（１％のＡｃＯＨ）中３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ））を介して、残渣を精製した。生成物３０を無色の液体として得た（８．９ｍｇ、７．５μｍｏｌ、６８％）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ６０Ｈ８７ＣｌＮ５Ｏ１６（Ｍ＋−Ｈ２Ｏ）の計算値＝１１６８．５８；実測値１１６８．８７。
実施例４３−２．ＢＣＮ−ＰＥＧ１２−Ｃ（Ｏ）ＯＳｕの合成
無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中のアミノ−ｄＰＥＧ１２−酸（４３ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）の溶液に、５１（２２ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン２４μＬ、０．１７４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５時間の間室温で撹拌した後、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（２７ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）及びＮＨＳ（８ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）を添加した。結果として得られた溶液を終夜室温で撹拌し、１０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３及び１０ｍＬのＤＣＭに注ぎ入れた。層を分離させ、有機相をＨ２Ｏ（２×１０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水層をＤＣＭ（１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空中で濃縮した。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＣＮ→ＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ ２０：１、１０：１）で、ＢＣＮ−ＰＥＧ１２−Ｃ（Ｏ）ＯＳｕが得られた。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）４．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．８５（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．６９〜３．６０（ｍ，４４Ｈ）、３．５６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．３６（ｑ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．９１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．８４（ｓ，４Ｈ）、２．３６〜２．１７（ｍ，６Ｈ）、１．６５〜１．５１（ｍ，２Ｈ）、１．４４〜１．２３（，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、１．００〜０．８８（ｍ，２Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ４２Ｈ７０Ｎ２Ｏ１８（Ｍ＋Ｈ＋）の計算値＝８９２．０；実測値８９１．６。
実施例４４．（３１）の合成
１．１ｍＬのＤＭＦ中のＢＣＮ−ＰＥＧ１２−Ｃ（Ｏ）ＯＳｕ（１４ｍｇ、１５．７μｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（９．１μＬ、６．６ｍｇ、６５．５μｍｏｌ）の溶液を、Ｈ−Ａｈｘ−メイタンシン．ＴＦＡ（１０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）に添加した。１８時間後、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（２．３μＬ、２．３ｍｇ、１６μｍｏｌ）を添加し、混合物を濃縮した。逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ（１％のＡｃＯＨ）中３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ））を介して、残渣を精製した。生成物３１を無色の膜として得た（６．６ｍｇ、４．３μｍｏｌ、３９％）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ７５Ｈ１１８ＣｌＮ５Ｏ２５（Ｍ＋−Ｈ２Ｏ）の計算値＝１５２０．７９；実測値１５２０．９６。
実施例４５．ＢＣＮ−ＰＥＧ２４−Ｃ（Ｏ）ＯＳｕの合成
無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中のアミノ−ｄＰＥＧ２４−酸（４８ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）の溶液に、５１（１４ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１７μＬ、０．１２５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した後、ＤＣＭ（１０ｍＬ）及びクエン酸（１０％水溶液、５ｍＬ）を添加した。水相をＤＣＭ（１５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。濾過後、溶媒を真空中で除去した。粗製生成物を無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中に再溶解させ、ＥＤＣＩ．ＨＣｌ（１７ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）及びＮＨＳ（８ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）を添加した。結果として得られた溶液を終夜室温で撹拌した後、添加当量のＥＤＣＩ．ＨＣＬ（１６ｍｇ）及びＮＨＳ（７ｍｇ）を添加した。６時間後、反応混合物を１０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３及び１５ｍＬのＥｔＯＡｃに注ぎ入れた。層を分離させ、有機相を飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空中で濃縮した。勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＣＮ→ＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ ２０：１、１０：１、５：１）で、ＢＣＮ−ＰＥＧ２４−Ｃ（Ｏ）ＯＳｕが無色の油として得られた（３２ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、５４％）。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ（ｐｐｍ）４．０８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．７８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．６３〜３．５４（ｍ，９２Ｈ）、３．４９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．３０（ｑ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．８４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．７８（ｓ，４Ｈ）、２．２９〜２．０８（ｍ，６Ｈ）、１．５９〜１．４３（ｍ，２Ｈ）、１．３５〜１．２３（ｍ，１Ｈ）、０．９３〜０．８０（ｍ，２Ｈ）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ６６Ｈ１１８Ｎ２Ｏ３０（Ｍ＋Ｈ＋）の計算値＝１４２０．６６；実測値１４２０．０。
実施例４６．（３２）の合成
０．７８ｍＬのＤＭＦ中のＢＣＮ−ＰＥＧ２４−Ｃ（Ｏ）ＯＳｕ（２５ｍｇ、１７．６μｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（９．１μＬ、６．６ｍｇ、６５．５μｍｏｌ）の溶液を、Ｈ−Ａｈｘ−メイタンシン．ＴＦＡ（１０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）に添加した。１８時間後、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（２．３μＬ、２．３ｍｇ、１６μｍｏｌ）を添加し、混合物を濃縮した。逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ（１％のＡｃＯＨ）中３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ））を介して、残渣を精製した。生成物を無色の膜として得た（１１．４ｍｇ、５．５μｍｏｌ、５０％）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ１００Ｈ１７１ＣｌＮ５Ｏ３７ ３＋（Ｍ＋３Ｈ＋）／３の計算値＝６９０．０５；実測値６９０．０５。
実施例４７．（３３）の合成
ＤＭＦ（２ｍＬ）中のＨ−Ａｈｘ−メイタンシン．ＴＦＡ（２０ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の６２（１４ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（９．５μＬ、６．９ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、結果として得られた反応混合物を２４時間の間撹拌した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（２９ｍｇ、＋９９％）の後で、標題化合物３３を定量的収量で得た。同一性のプルーフをＡＤＣ段階で実施した。
実施例４８．（３４）の合成
１ｍＬのＤＭＦ中の６０ａ（６．６ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（６．８μＬ、４．９ｍｇ、４８．５μｍｏｌ）の溶液を、Ｈ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−デュオカルマイシン（１０ｍｇ、０．００９７ｍｍｏｌ）に添加した。１８時間後、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（１．８μＬ、１．８ｍｇ、１２μｍｏｌ）を添加し、混合物を減圧下で濃縮した。逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ（１％のＡｃＯＨ）中３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ））を介して、残渣を精製した。生成物３４を無色の膜として得た（７．５ｍｇ、５．１μｍｏｌ、５３％）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ７１Ｈ９４ＣｌＮ１０Ｏ２１（Ｍ＋Ｈ＋）の計算値＝１４５７．６３；実測値１４５６．８９。
実施例４９．（３５）の合成
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の６２（６．０ｍｇ、９．８μｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（６．８μＬ、４．９ｍｇ、４８．５μｍｏｌ）の溶液を、Ｈ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−デュオカルマイシン（１０ｍｇ、０．００９７ｍｍｏｌ）に添加した。２２時間後、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（２．８μＬ、２．８ｍｇ、１９μｍｏｌ）を添加した。１時間後、反応混合物を減圧下で濃縮し、逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ（１％のＡｃＯＨ）中の３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ））を介して、残渣を精製した。生成物３５を白色の固体として得た（６．４ｍｇ、４．２μｍｏｌ。４４％）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ６９Ｈ９２ＣｌＮ１２Ｏ２２Ｓ（Ｍ＋Ｈ＋）の計算値＝１５０７．５９；実測値１５０８．００。
実施例５０．（３６）の合成
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の５８（２２９ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（１２８ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（２６８μＬ、１９４ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を終夜室温で撹拌し、引き続いて減圧下で濃縮した。勾配カラムクロマトグラフィー（ヘプタン（１％のＡｃＯＨ）中２０％→７０％のＥｔＯＡｃ）を介して、残渣を精製することで、５８のＰＮＰカーボネート誘導体が白色の固体として得られた（２０６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、６１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．３１〜８．２６（ｍ，２Ｈ）、７．４５〜７．４０（ｍ，２Ｈ）、５．５６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．４８〜４．４０（ｍ，２Ｈ）、４．２７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．８１〜３．７５（ｍ，２Ｈ）、３．６８（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．３８〜３．３０（ｍ，２Ｈ）、２．３６〜２．１４（ｍ，６Ｈ）、１．６１〜１．４５（ｍ，２Ｈ）、１．３８（五重線，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．０４〜０．９４（ｍ，２Ｈ）。
次に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の５８のＰＮＰ−誘導体（４．１ｍｇ、７．８μｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３．３μＬ、２．４ｍｇ、２３．４μｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＦ（１００μＬ）中のＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−Ａｈｘ−メイタンシン（１０ｍｇ、８．６μｍｏｌ）の溶液を添加した。２０時間後、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（５．７μＬ、５．６ｍｇ、３８μｍｏｌ）を添加し、混合物を減圧下で濃縮した。逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ（１％のＡｃＯＨ）中の３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ））を介して、残渣を精製することで、３６を得た（２．２ｍｇ、１．４μｍｏｌ、１８％）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ７３Ｈ１０３ＣｌＮ１１Ｏ２１Ｓ（Ｍ−１８＋Ｈ＋）の計算値＝１５３６．６７；実測値１５３７．０８。
実施例５１．（６６）の合成
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の５７（５００ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ＣＳＩ（２９０μＬ、４７１ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ）を添加した。２０分後、Ｅｔ３Ｎ（１．４ｍＬ、１．０ｇ、１０ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（５ｍＬ）中のジエタノールアミン．ＨＣｌ（５７１ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液を、引き続いて添加した。さらに４５分後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を勾配カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０％→１５％のＭｅＯＨ）によって精製した。生成物６６を無色の濃厚な油として得た（７６７ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ、６４％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）４．２６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．８７（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，４Ｈ）、３．５５（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，４Ｈ）、２．３７〜２．１６（ｍ，６Ｈ）、１．６５〜１．４５（ｍ，２Ｈ）、１．３９（五重線，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、１．０５〜０．９２（ｍ，２Ｈ）
実施例５２．（６７）の合成
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の６６（２０６ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｅｔ３Ｎ（３１８μＬ、２３１ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ）及びｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（２３０ｍｇ、１．１４ｍｍｏＬ、２当量）を添加した。反応混合物を２８時間の間室温で撹拌し、引き続いて濃縮した。勾配カラムクロマトグラフィー（ヘプタン中２０％→７５％のＥｔＯＡｃ）を介して残渣を精製して、６７をわずかに黄色の濃厚な油として得た（８３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、２１％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．３１〜８．２４（ｍ，４Ｈ）、７．４３〜７．３４（ｍ，４Ｈ）、４．５３（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．２２（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．８７（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，４Ｈ）、２．３５〜２．１５（ｍ，６Ｈ）、１．５５〜１．４０（ｍ，２Ｈ）、１．３５（五重線，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、１．０３〜０．９２（ｍ，２Ｈ）。
実施例５３．（３７）の合成
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の６７（２．７ｍｇ、３．９μｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（２．７μＬ、２．０ｍｇ、１９．５μｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ（１００μＬ）中のＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−Ａｈｘ−メイタンシン（１０ｍｇ、０．００８６ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を終夜室温で反応させておき、引き続いて濃縮した。ＤＭＦ（１ｍＬ）中の２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（２．８μＬ、２．８ｍｇ、１９μｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を濃縮し、逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ（１％のＡｃＯＨ）中の３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ））を介して、残渣を精製することで、化合物３７を得た（４．８ｍｇ、１．７μｍｏｌ、４５％）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ１３１Ｈ１８６Ｃｌ２Ｎ２０Ｏ３８Ｓ（Ｍ＋２Ｈ＋）／２の計算値＝１３７５．１２；実測値１３７５．５１。
実施例５４．（６８）の合成
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の５８（４７ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ＣＳＩ（１１μＬ、１８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、Ｅｔ３Ｎ（９１μＬ、６６ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のジエタノールアミン（１６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。３０分後、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（５２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（５４μＬ、３９ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を添加した。さらに４．５時間後、反応混合物を濃縮し、残渣を勾配カラムクロマトグラフィー（３３％→６６％のＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１％のＡｃＯＨ））によって精製することで、６８が無色の油として得られた（８８ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ、７５％）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．２８〜８．２３（ｍ，４Ｈ）、７．４２〜７．３５（ｍ，４Ｈ）、４．５２（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，４Ｈ）、４．３０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、４．２７〜４．２２（ｍ，２Ｈ）、３．８６（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，４Ｈ）、３．６９〜３．６５（ｍ，２Ｈ）、３．６４〜３．５９（ｍ，２Ｈ）、３．３０〜３．２２（ｍ，２Ｈ）、２．３４〜２．１４（ｍ，６Ｈ）、１．６２〜１．４６（ｍ，２Ｈ）、１．３８（五重線，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．０４〜０．９２（ｍ，２Ｈ）。
実施例５５．（３８）の合成
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の６８（３．９ｍｇ、４．３μｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３．０μＬ、２．２ｍｇ、２１．５μｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ（１００μＬ）中のＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−Ａｈｘ−メイタンシン（１０ｍｇ、８．６μｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を終夜反応させておき、濃縮した。逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ（１％のＡｃＯＨ）中３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ））を介して、残渣を精製することで、生成物３８を得た（３．９ｍｇ、１．３２μｍｏｌ、３１％）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ１３６Ｈ１９６Ｃｌ２Ｎ２２Ｏ４３Ｓ２（Ｍ＋２Ｈ＋）／２の計算値＝１４８０．１３；実測値１４８０．３５。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ８５Ｈ１１９ＣｌＮ１４Ｏ３１Ｓ２（Ｍ＋２Ｈ＋）／２の計算値＝９６５．３６；実測値９６５．５４。
副生成物として、６８の一置換Ａｈｘ−メイタンシン誘導体を単離した（図示されていない）。Ｃ８５Ｈ１１９ＣｌＮ１４Ｏ３１Ｓ２ ２＋について計算されたＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）はｍ／ｚ ９６５．３６、実測値は９６５．５４。
実施例５６．（３９）の合成
実施例５５において副生成物として単離された６８の一置換Ａｈｘ−メイタンシン誘導体に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＥｔ３Ｎ（０．７μＬ、０．５ｍｇ、５μｍｏｌ）の溶液、及び１．２ｍｇ（１．１μｍｏｌ）のＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−ＭＭＡＦの溶液を添加した。混合物を終夜反応させておき、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（１μＬ、１．０ｍｇ、６．７μｍｏｌ）を添加した。１５分後、反応混合物を濃縮した。逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ（１％のＡｃＯＨ）中３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ））で、所望の生成物１．０ｍｇが得られた。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ Ｃ１３７Ｈ２０６ＣｌＮ２３Ｏ４１Ｓ２（Ｍ＋２Ｈ＋）／２の計算値＝１４６４．６９；実測値１４６５．６６。
実施例５７．ＨＰＬＣ保持時間の決定
化合物１９〜３８の試料を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２） ５μ、１５０×４．６ｍｍ、１００Åカラムが備えられているＨＰＬＣシステムに注入し、１０％のＭｅＣＮ（０．１％のＴＦＡ）／９０％水（０．１％のＴＦＡ）から９０％のＭｅＣＮ（０．１％のＴＦＡ）／１０％水（０．１％のＴＦＡ）の勾配、又は１０％のＭｅＣＮ／９０％の１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．４から９０％のＭｅＣＮ／１０％の１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．４の勾配のいずれかで溶出した。これらの化合物について得られた保持時間は、表３に図示されている。
時間プログラム：
０〜１２分：１０％のＭｅＣＮから９０％のＭｅＣＮ
１２〜１４分：９０％のＭｅＣＮ
１４〜１５分：９０％のＭｅＣＮから１０％のＭｅＣＮ
１５〜１７分：１０％のＭｅＣＮ
Figure 0006733993
実施例５８．トラスツズマブ（Ｎ３００Ｃ）への１７対１８の競合コンジュゲーション
トラスツズマブ（Ｎ３００Ｃ）（１００μＭ）を、２時間の間室温でＰＢＳ中にて３０ｍＭのＥＤＴＡ及び１ｍＭＴＣＥＰ（１０当量）とともにインキュベートした。緩衝液をＰＢＳに対して交換した後、部分還元トラスツズマブ（Ｎ３００Ｃ）（６６．７μＭ）を、１．３３ｍＭのデヒドロアスコルビン酸（２０当量）とともにインキュベートした。再酸化トラスツズマブ（Ｎ３００Ｃ）（６６．７μＭ）を、０．４ｍＭのマレイミド１７（６当量）及び０．４ｍＭのマレイミド１８（６当量）とともにインキュベートした。室温での１時間のインキュベーション後、５倍モル過剰のＮ−アセチルシステインを添加することによって、反応物をクエンチした。反応生成物をファブリケーター（Ｆａｂｒｉｃａｔｏｒ）（商標）（Ｇｅｎｏｖｉｓから購入した）で消化し、ＭＳ分析（ＡｃｃｕＴＯＦ）によって分析した。Ｆｃ−断片のおよそ４５％がマレイミド１８（２４２９７Ｄａ、予想質量＝２４２９９）にコンジュゲートされており、Ｆｃ−断片のおよそ３５％がマレイミド１７（２４３１９Ｄａ、予想質量＝２４３２３）にコンジュゲートされていた。Ｆｃ−断片の残りの２０％は、様々な非コンジュゲート形態からなる（２３７７６Ｄａ〜２３８７４Ｄａを範囲とする）。
実施例５９．１３ｂ又は１３ｃへの１９〜３９のコンジュゲーション
適切なトラスツズマブ（アジド）２の溶液（８．８μＬ、０．２ｍｇ、トリス緩衝液ｐＨ７．５ １０ｍＭにおいて２２．７ｍｇ／ｍｌ）に、トリス緩衝液ｐＨ７．５ １０ｍＭ（４μＬ）及び基質（２μＬ、ＭｉｌｉＱ＋５％のＤＭＡ中２ｍＭの溶液）を添加した。反応物を室温でインキュベートし、試料（２μＬ）を予設定時点で採取した。これらの試料をＤＴＴ（２μＬ０．２Ｍ）とともにインキュベートし、ＭｉｌｉＱ（３０μＬ）で希釈し、ＭＳ分析（ＡｃｃｕＴｏｆ）にかけることで、コンジュゲーション効率を決定した（表１及び２を参照されたい）。
実施例６０．凝集
実施例５９に従って調製されたトラスツズマブ（Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ）２（１３ｃ）と３６、３７及び３８のコンジュゲートについて、凝集する傾向を調査した。ＡＤＣをＰＢＳ ｐＨ７．４において１ｍｇ／ｍＬの濃度にて３７℃でインキュベートした。０週、１週及び２週後にＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ ＰＣ ３．２／３０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、凝集のレベルを分析した。結果は図２３に図示されている。凝集は、コンジュゲート３６の２（ＤＡＲ２）の薬物対抗体比からコンジュゲート３７の４（ＤＡＲ４）の薬物対抗体比に行くと１％を下回ったままであり、ペイロードの数を倍にすることによって付与される親油性の増加を補償するためのスルファミドスペーサーの能力を示した。３８のビス−スルファミドリンカーについて、凝集は全く観察されなかった。これらの結果は、アルキン−アジド付加環化ライゲーションによって調製される従来のバイオコンジュゲートを超える顕著な改善である。
実施例６１．凝集
実施例５９に従って調製されたトラスツズマブ（Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ）２（１３ｃ）と３０及び３６のコンジュゲートについて並びにトラスツズマブそれ自体について、凝集する傾向を、１４日の期間にわたりモニタリングした。上記コンジュゲートを２週間４０℃でｐＨ５にて貯蔵し、０日目、２日目、７日目、１０日目及び１４日目に、凝集の程度を決定した。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ ＰＣ ３．２／３０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、凝集のレベルを分析した。結果は図２４に図示されている。実施例６１と比較して、応力が増加された状態（Ｔの増加、より低いｐＨ）は、凝集の増加に至る。それでもなお、凝集は、ＰＥＧ４スペーサーを利用するトラスツズマブ（Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ）２（１３ｃ）と３０の比較用バイオコンジュゲートと比較して、本発明によるコンジュゲート（トラスツズマブ（Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ）２（１３ｃ）と３６のコンジュゲート）に関して有意に低減された。注目すべきことに、トラスツズマブそれ自体は、シクロオクタンに縮合されている１，２，３−トリアゾール部分及びメイタンシノイド部分などの疎水基がないため、凝集へのいかなる傾向も示さなかった。

Claims (26)

  1. バイオコンジュゲートの調製のためのプロセスであって、前記プロセスが、リンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１を糖タンパク質（Ｂ）の官能基Ｆ１と反応させるステップを含み、前記リンカー−コンジュゲートが、アルファ端部及びオメガ端部を含む化合物であり、前記化合物が、糖タンパク質（Ｂ）に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基Ｑ１をアルファ端部に、及び標的分子（Ｄ）をオメガ端部に含み、Ｑ １ が、置換されていてもよい、Ｎ−マレイミジル基、ハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基、スルホニルオキシＮ−アルキルアミド基、エステル基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基、アルケニル基、アルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリルオキシド基、ニトロン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化Ｎ−マレイミジル基、１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基、ハロゲン化カルボニル基、アレンアミド基、共役（ヘテロ）ジエン基、１，２−キノン基及びトリアジン基からなる群から選択され、前記化合物が、式（１）で表される基又はその塩をさらに含み：
    Figure 0006733993
    （式中：
    ａは、０若しくは１であり；
    Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、第２の標的分子Ｄであり、ここで第２の標的分子は、スペーサー部分を介してＮに接続されていてもよい）、
    ここで、式（１）で表される基又はその塩は、前記化合物の前記アルファ端部と前記オメガ端部との間に位置し、
    ここで、前記標的分子が、活性物質、レポーター分子、ポリマー、固体表面、ヒドロゲル、ナノ粒子、微小粒子及び生体分子からなる群から選択される、プロセス。
  2. 式（１）で表される基において、ａが０である、請求項１に記載のプロセス。
  3. 式（１）で表される基において、ａが１である、請求項１に記載のプロセス。
  4. 前記標的分子が、活性物質、レポーター分子又はポリマーである、請求項１に記載のプロセス。
  5. 前記反応が、反応性基Ｑ１と官能基Ｆ１との間に完全な相互反応性を伴う、請求項１〜４のいずれか一項に記載のプロセス。
  6. 前記反応が、付加環化である、請求項５に記載のプロセス。
  7. 前記付加環化が、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応又は１，３−双極子付加環化である、請求項６に記載のプロセス。
  8. Ｑ１がアルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基又はビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基であり、Ｆ１がアジド基である、請求項１に記載のプロセス。
  9. 前記リンカー−コンジュゲートが、式（４ａ）若しくは（４ｂ）で表される又はその塩である：
    Figure 0006733993
    （式中：
    ａは、独立して０又は１であり；
    ｂは、独立して０又は１であり；
    ｃは、０又は１であり；
    ｄは、０又は１であり；
    ｅは、０又は１であり；
    ｆは、１〜１５０の範囲における整数であり；
    ｇは、０又は１であり；
    ｉは、０又は１であり；
    Ｄは、標的分子であり；
    Ｑ１は、糖タンパク質（Ｂ）に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；Ｑ １ は、置換されていてもよい、Ｎ−マレイミジル基、ハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基、スルホニルオキシＮ−アルキルアミド基、エステル基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基、アルケニル基、アルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリルオキシド基、ニトロン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化Ｎ−マレイミジル基、１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基、ハロゲン化カルボニル基、アレンアミド基、共役（ヘテロ）ジエン基、１，２−キノン基及びトリアジン基からなる群から選択され；
    Ｓｐ１は、スペーサー部分であり；
    Ｓｐ２は、スペーサー部分であり；
    Ｓｐ３は、スペーサー部分であり；
    Ｓｐ４は、スペーサー部分であり；
    Ｚ１は、Ｑ１又はＳｐ３をＳｐ２、Ｏ又はＣ（Ｏ）又はＮ（Ｒ１）に接続する接続基であり；
    Ｚ２は、Ｄ又はＳｐ４をＳｐ１、Ｎ（Ｒ１）、Ｏ又はＣ（Ｏ）に接続する接続基であり；
    Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される；又は
    Ｒ１は、Ｄ、−［（Ｓｐ１）ｂ−（Ｚ２）ｅ−（Ｓｐ４）ｉ−Ｄ］若しくは−［（Ｓｐ２）ｃ−（Ｚ１）ｄ−（Ｓｐ３）ｇ−Ｑ１］であり、ここで、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｄ、Ｑ１、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｇ及びｉは、上で定義されている通りである）、請求項１に記載のプロセス。
  10. Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４が、直鎖又は分岐のＣ１〜Ｃ２００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２００アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ２００アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択され、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基が、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基が置換されていてもよい、請求項９に記載のプロセス。
  11. Ｚ１及びＺ２が、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｃ（Ｓ）−ＮＲ２−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−ＮＲ２−Ｏ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−Ｏ−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−ＮＲ２−、−Ｏ−ＮＲ２−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｏ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−Ｓ−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＮＲ２−Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−及びそれらの２つ以上の組合せからなる群から独立して選択され、ここでＲ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は置換されていてもよい、請求項９に記載のプロセス。
  12. Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４が、存在するならば、直鎖又は分岐のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から独立して選択され、アルキレン基が、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３からなる群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択され、Ｑ１は、ｔｒａｎｓ−シクロオクテニル基又は式（９ａ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｏ）若しくは（９ｐ）で表される：
    Figure 0006733993
    （式中、ｐは０〜１０の範囲における整数であり、ｌは０〜１０の範囲における整数であり、ＵはＯ又はＮＲ９であり、Ｒ９は水素、直鎖又は分岐のＣ１〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基であり、（９ｎ）における芳香族環は、１つ又は複数の位置でＯ−スルホニル化されていてもよく、（９ｏ）及び（９ｐ）の環は、１つ又は複数の位置でハロゲン化されていてもよい）、請求項９に記載のプロセス。
  13. 前記ｔｒａｎｓ−シクロオクテニル基が、式（９ｚｉ）又は（９ｚｊ）で表される、請求項１２に記載のプロセス。
    Figure 0006733993
  14. 前記糖タンパク質が、抗体である、請求項１に記載のプロセス。
  15. 前記抗体が、癌関連抗原に特異的に結合する、請求項１４に記載のプロセス。
  16. 前記コンジュゲートが、抗体−薬物コンジュゲートである、請求項１に記載のプロセス。
  17. アルファ端部及びオメガ端部を含む化合物であって、前記化合物が、糖タンパク質に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基Ｑ１をアルファ端部に、及び標的分子（Ｄ）をオメガ端部に含み、前記化合物が、式（１）で表される基又はその塩をさらに含み：
    Figure 0006733993
    （式中：
    ａは、０又は１であり；
    Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、第２の標的分子Ｄであり、ここで前記第２の標的分子は、スペーサー部分を介してＮに接続されていてもよく）、
    Ｑ１は、置換されていてもよい、Ｎ−マレイミジル基、ハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基、スルホニルオキシＮ−アルキルアミド基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基、内部炭素−炭素三重結合を含むアルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル基、内部炭素−炭素二重結合を含むアルケニル基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリルオキシド基、ニトロン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化Ｎ−マレイミジル基、１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基、ハロゲン化カルボニル基及びアレンアミド基からなる群から選択される、
    ここで、式（１）で表される基又はその塩は、前記化合物の前記アルファ端部と前記オメガ端部との間に位置し、
    ここで、前記標的分子が、活性物質、レポーター分子、ポリマー、固体表面、ヒドロゲル、ナノ粒子、微小粒子及び生体分子からなる群から選択される、化合物。
  18. Ｑ１が、シクロアルケニル基又はシクロアルキニル基を含む、請求項１７に記載の化合物。
  19. Ｑ１が、（ヘテロ）シクロアルキニル基、請求項１７に記載の化合物。
  20. 前記化合物が、式（４ａ）又は（４ｂ）で表される又はその塩である：
    Figure 0006733993
    （式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｉ、Ｄ、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２及びＲ１は、請求項１０に定義されている通りである）、請求項１７に記載の化合物。
  21. Ｑ１が、ｔｒａｎｓ−シクロオクテニル基又は式（９ａ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｏ）若しくは（９ｔ）で表される基であり：
    Figure 0006733993
    （式中、ｐは０〜１０の範囲における整数であり、ｌは０〜１０の範囲における整数であり、ＵはＯ又はＮＲ９であり、Ｒ９は水素、直鎖又は分岐のＣ１〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基であり、（９ｎ）における芳香族環は、１つ又は複数の位置でＯ−スルホニル化されていてもよく（９ｏ）及び（９ｐ）の環は、１つ又は複数の位置でハロゲン化されていてもよい）、請求項１７に記載の化合物。
  22. 前記ｔｒａｎｓ−シクロオクテニル基が、式（９ｚｉ）又は（９ｚｊ）で表される、請求項２１に記載の化合物。
    Figure 0006733993
  23. Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４が、存在するならば、直鎖又は分岐のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から独立して選択され、アルキレン基が、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３からなる群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、請求項２０に記載の化合物。
  24. アルファ端部及びオメガ端部を含む化合物であって、前記化合物が、糖タンパク質（Ｂ）をアルファ端部に、及び標的分子（Ｄ）をオメガ端部に含み、前記化合物が、式（１）で表される基又はその塩をさらに含み：
    Figure 0006733993
    （式中：
    ａは、０又は１であり；
    Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、置換されていてもよく、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって中断されていてもよく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される；又は
    Ｒ１は、第２の標的分子Ｄであり、ここで前記第２の標的分子は、スペーサー部分を介してＮに接続されていてもよい）、
    ここで、式（１）で表される基又はその塩は、前記化合物の前記アルファ端部と前記オメガ端部との間に位置し、
    ここで、前記標的分子が、活性物質、レポーター分子、ポリマー、固体表面、ヒドロゲル、ナノ粒子、微小粒子及び生体分子からなる群から選択される、化合物。
  25. 前記糖タンパク質が、抗体である、請求項２４に記載の化合物。
  26. 前記標的分子が、活性物質、レポーター分子又はポリマーである、請求項２４に記載の化合物。
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