CN101711284A - 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途 - Google Patents

抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN101711284A
CN101711284A CN200880006008A CN200880006008A CN101711284A CN 101711284 A CN101711284 A CN 101711284A CN 200880006008 A CN200880006008 A CN 200880006008A CN 200880006008 A CN200880006008 A CN 200880006008A CN 101711284 A CN101711284 A CN 101711284A
Authority
CN
China
Prior art keywords
egfr
cancer
antibody
tyrosine kinase
sudden change
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN200880006008A
Other languages
English (en)
Inventor
K-K·王
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dana Farber Cancer Institute Inc
Original Assignee
Dana Farber Cancer Institute Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dana Farber Cancer Institute Inc filed Critical Dana Farber Cancer Institute Inc
Priority to CN201310593708.8A priority Critical patent/CN104013956B/zh
Priority to CN201310593730.2A priority patent/CN104043123B/zh
Priority to CN201910635232.7A priority patent/CN110613845A/zh
Publication of CN101711284A publication Critical patent/CN101711284A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies

Abstract

本发明涉及治疗抗酪氨酸激酶抑制剂疗法的EGFR介导的疾病，特别是癌症。提供了用于在具有次级EGFR突变，特别地酪氨酸激酶结构域突变的抗标准疗法的个体中治疗癌症和减少肿瘤生长的方法。本发明提供了使用抗EGFR抗体治疗抗酪氨酸激酶抑制剂的癌症的方法。描述了使用抗体抗EGFR mAb806治疗抗酪氨酸激酶抑制剂的复发性肺癌包括非小细胞肺癌的方法。

Description

抗EGFR抗体在治疗EGFR突变体介导的疾病中的用途
发明领域
本发明涉及治疗抗酪氨酸激酶抑制剂疗法的EGFR介导的疾病，特别是癌症。提供了用于在具有次级EGFR突变，特别地酪氨酸激酶结构域突变的抗标准疗法的个体中治疗癌症和降低肿瘤生长的方法。
发明背景
靶向癌症疗法被设计用来破坏致癌作用和肿瘤生长所需的特定分子的功能，从而杀死或阻止癌细胞的生长(Ji H等人(2006)CellCycle 5(18)：2072-2076 Epub 2006 Sep15)。与常规细胞毒性化学疗法相反，此类靶向癌症疗法更有效并且对正常细胞的伤害更小。靶向癌症疗法领域的主要努力一直以来是开发靶向表皮生长因子受体(EGFR)的试剂。EGFR是密切相关的受体(包括的EGFR(ErbB-1)、Her2/neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)和Her4(ErbB-4))的ErbB家族的成员。EGFR的激活导致受体酪氨酸激酶的激活和一系列下游信号传导事件(所述述信号传导事件介导细胞增殖、运动、粘着、侵入和对化学疗法的抗性以及对细胞凋亡的抑制(2-4))，对于癌细胞的持续增殖和存活至关重要的过程。
迄今为止，两个主要类型的抗EGFR试剂已进入临床环境：抗EGFR抗体和小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)(5，6)。抗EGFR抗体例如西妥昔单抗(cetuximab)经设计以结合EGFR的细胞外结构域并且阻断EGFR下游信号传导的激活(7)。西妥昔单抗(也称为抗体225，美国专利4,943,533)是针对A431细胞产生的，所述细胞表达高水平的野生型EGFR。相反地，小分子TKI例如吉非替尼(化合物ZD 1839，易瑞沙)或厄洛替尼(化合物OSI-774，它赛瓦)与ATP竞争对EGFR酪氨酸激酶的细胞外催化结构域的结合，从而阻止EGFR的自磷酸化作用和下游信号转导(4)。
这两种抗EGFR药物类型都已在患有多种不同类型癌症的患者的亚群中显示一些临床功效。在患有具有EGFR激酶结构域突变的肺癌的患者中使用吉非替尼或厄洛替尼进行的治疗通常产生显著的临床反应(5，8)。然而，吉非替尼或厄洛替尼在具有野生型EGFR的肺腺癌或其他组织学亚型例如鳞状细胞癌中的功效是有限的(9，10)。此外，在临床前和临床试验中已显示吉非替尼或厄洛替尼在抑制EGFRvIII突变体(11)(其中存在外显子II至VII的符合读框的缺失(也称为EGFRde2-7)的不同的激活性EGFR突变)的功能中很大程度上是无效的。EGFRvIII通常见于成胶质细胞瘤(Glioblastoma)，并且最近发现存在于人肺鳞状细胞癌的亚群(12)和大部分头颈癌(13)中。
显示西妥昔单抗在非小细胞肺癌(NSCLC)患者和患有头颈癌的患者以及结肠直肠癌患者的小亚群中是有效的。然而，对西妥昔单抗的反应似乎与EGFR的表达水平无关。因此，不清楚这些患者对西妥昔单抗治疗有反应然而其肿瘤具有高EGFR表达的其他癌症患者对西妥昔单抗治疗不显疗效的原因(14)。
由于EGFR vIII突变受体的表达限定于肿瘤细胞，因此其代表了抗体疗法的高度特异性靶。因此，已产生了对于de2-7EGFR的独特的肽是特异性的多克隆和单克隆抗体。使用独特的de2-7肽免疫后分离的一系列小鼠mAb都显示对于截短的受体和裸小鼠中生长的被靶向的de2-7EGFR阳性异种移植物的选择性和特异性(Wikstrand CJ等人(1995)Cancer Res 55：3140-3148；Okamoto，S等人(1996)Br JCancer 73：1366-1372；Hills D等人(1995)Int J Cancer 63：537-543；Reist CJ等人(1997)Cancer Res 57：1510-1515；Reist CJ等人(1995)Cancer Res 55：4375-4382；美国专利5,401,828)。抗EGFR vIII抗体的实例包括ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A.4和Y10。
MAb806是新型鼠抗体，最初使用表达EGFR vIII突变体的完整细胞作为免疫原产生该抗体以识别独特的截短的突变体EGFRvIII(15-17)。重要地，被mAb806识别的表位在无活性的野生型(wt)EGFR中是不可接近的，但在过表达EGFR和表达EGFRvIII的细胞中暴露于wt EGFR的过渡形式中(18)。表位研究受到免疫组织化学研究支持，后者证明806抗体结合存在于神经胶质瘤以及广泛的上皮癌中的表位但不结合正常人组织(16，19)。这些和其他临床前数据表明mAb806可能具有与西妥昔单抗和其他抗EGFR抗体不同的临床活性谱和副作用特征谱。在异种移植模型中，mAb806已展示出有效的不靶向正常组织的抗肿瘤活性。因此，mAb806的独特的靶向能力代表了癌症特异性分子靶向疗法的新范例。
当过表达时或被突变激活时，酪氨酸激酶(包括EGFR)促成了癌症的发生并且这些突变的酪氨酸激酶(TK)通常为选择性和特异性癌症疗法提供了靶或敏感性。EGFR基因的酶氨酸激酶结构域中的体细胞突变与肺癌对包括吉非替尼和厄洛替尼的某些酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的敏感性有关。外显子19中的符合读框的EGFR缺失(del L747-S752)和密码子858(外显子21)中的常见点突变(L858R)已在非小细胞肺癌和腺癌中得到鉴定，并且与对TKI吉非替尼和厄洛替尼的敏感性相关(Lynch TJ等人(2004)N Engl J Med 350：2129-2139；Paez JG等人(2004)Science  304：1497-1500；Pao W等人(2004)PNAS101(36)：13306-13311)。最近的研究已显示10-30％的NSCLC患者具有EGFR激酶结构域突变，而5％的肺鳞状细胞癌(SCC)患者具有细胞外结构域EGFRvIII突变(12，20)。测定癌症对EGFR靶向治疗的反应性的方法基于对EGFR中，特别是激酶结构域中的突变的估量，患者中预测的抑制剂敏感性描述于Bell等人(WO 2005/094357和US20060147959)。
由继发抗药性(secondary resistance)或补偿性突变(compensatory mutations)介导的、所获得的对化学疗法或靶向癌症疗法的抗性是正在面临的挑战。尽管使用TKI进行持续的治疗，但对TKI(包括吉非替尼或厄洛替尼)敏感的肿瘤最终不断地发展。已在复发性和抗性患者的肿瘤活检组织中鉴定了EGFR的位点790上的次级突变(T790M)(Kobayashi S等人(2005)N Engl J Med352(8)：786-792)。预测该突变导致抑制剂在ATP-激酶-结合口袋中的结合的空间位阻。
考虑到在EGFR介导的疾病中获得的对TKI的抗性的存在和盛行以及显著的癌症复发率，存在对更广的有效的治疗方案的临床需要，所述治疗方案使用EGFR靶向试剂，所述试剂有效地针对，靶向或避免在EGFR突变体和EGFR介导的疾病中获得的抗性。
本文中参考资料的引用不应当解释为这是对于本发明的现有技术的承认。
发明概述
现已在许多EGFR介导的癌症(包括肺癌)中鉴定了激活表皮生长因子受体(EGFR)的突变。已在人非小细胞肺癌(NSCLC)中鉴定了EGFR突变，5％的人肺鳞状细胞癌具有EGFRvIII突变以及10-30％的肺腺癌具有EGFR激酶结构域突变。EGFR靶向性单克隆抗体mAb806识别野生型(wt)EGFR以及截短的EGFRvIII突变体的构象表位。为了进一步表征mAb806对EGFR介导的癌症疗法的应用，将mAb806用于治疗经基因工程改造的、患有肺肿瘤的小鼠，所述肺肿瘤由EGFRvIII或EGFR激酶结构域的突变驱动。本发明验证了抗EGFR vIII抗体，特别是mAb806在阻断EGFRvIII信号传导和诱导肿瘤细胞凋亡，从而在EGFRvIII驱动的鼠类肺癌中导致显著的肿瘤衰退中是非常有效的。针对表达高水平的野生型EGFR的细胞产生的不同的EGFR-靶向性抗体-西妥昔单抗未能在这些遗传上确定的肺肿瘤中显示活性。此外，使用mAb806进行的对由公认的和临床相关的EGFR激酶结构域突变(L858R)驱动的鼠肺肿瘤的治疗诱导了显著的肿瘤衰退。已显示该激酶结构域突变对TKI疗法，特别是吉非替尼或厄洛替尼是敏感的。
获得的对TKI(包括吉非替尼或厄洛替尼)的抗性是正在面临的挑战，并且尽管进行持续的疗法，但对TKI敏感的肿瘤最终继续发展。该获得的抗性可由继发抗药性或补偿性突变，特别包括在EGFR的位点790上的次级突变(T790M)介导。研究者现在证明抗EGFR抗体，特别是mAb806有效地抗T790M突变，从而在EGFR T790M/L858R驱动的鼠肺癌中导致显著的肿瘤衰退。总的说来，这些数据证明抗EGFR抗体，特别是mAb806在具有EGFR激酶结构域突变的患者(包括癌症患者，特别是肺癌患者)的治疗中提供了有效的备选或辅助。
本发明提供了在哺乳动物中治疗酪氨酸激酶抑制剂抗性EGFR介导的疾病的方法，其中所述抗性EGFR介导的疾病是EGFR中次级突变从而产生突变的EGFR的结果并且其中所述突变与EGFR vIII突变不同，该方法包括对所述哺乳动物施用有效量的能够结合并抑制突变的EGFR的抗EGFR抗体。在特定的方面，次级EGFR突变是EGFR酪氨酸激酶结构域突变。在另外的方面，酪氨酸激酶结构域突变是T790M。
在所述方法的特定实施方案中，抗EGFR抗体是mAb806抗体或其活性片段。MAb806包括鼠抗体、重组抗体或人源化抗体。
另外的抗EGFR抗体，包括靶向EGFRvIII突变体的那些抗体，可用于本发明的治疗方法。示例性和已知的抗EGFR抗体可选自ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。
在所述方法中进行治疗的EGFR介导的疾病包括癌症。EGFR介导的癌症包括成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖-泌尿癌和膀胱癌。在特定的方面，EGFR介导的癌症是肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。
本发明提供了用于在癌症患者中降低EGFR介导的肿瘤生长的方法，其中所述癌症患者之前已用一种或多种酪氨酸激酶抑制剂进行了治疗并且已发生了复发性疾病和肿瘤生长，该方法包括对所述患者施用有效量的抗EGFR抗体以使复发性疾病和肿瘤生长被抑制和降低。
在用于降低肿瘤生长的本方法的特定实施方案中，抗EGFR抗体是mAb806抗体或其活性片段。MAb806包括鼠抗体、重组抗体或人源化抗体。
可使用另外的抗EGFR抗体，包括靶向EGFRvIII突变体的那些抗体。示例性和已知的抗EGFR抗体可选自ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。
在特定的临床方面，癌症患者中的复发性疾病和肿瘤生长是次级EGFR突变的结果，所述次级EGFR突变是EGFR酪氨酸激酶结构域突变。特定的次级EGFR突变是酶氨酸激酶结构域突变T790M。
本发明还提供了在哺乳动物中治疗EGFR介导的癌症的方法，该方法包括对所述哺乳动物施用酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR抗体，其中在使用酪氨酸激酶抑制剂作为二线疗法的治疗后施用所述抗EGFR抗体来抑制抗酪氨酸激酶抑制剂的潜在的次级突变的EGFR。
EGFR介导的癌症可选成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖-泌尿癌和膀胱癌。在特定的方面，癌症是肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。
在本方法的一个方面，酶氨酸激酶抑制剂是可逆酪氨酸激酶抑制剂。可逆酪氨酸激酶抑制剂可以是苯胺喹唑啉化合物(aniliniquinazoline)和选自吉非替尼、厄洛替尼、AG1478、ST1571和SU-6668。
在本方法的另外方面，酪氨酸激酶抑制剂是不可逆酪氨酸激酶抑制剂。示例性不可逆酪氨酸激酶抑制剂在本领域内是已知的并且包括但不限于EKB-569、EKI-569、HKI-272、HKI-357和BIBW 2992。
根据参考下列举例说明的附图的下列描述，其他目的和有利方面对于本领域技术人员将变得显而易见。
附图概述
图1描绘由EGFRvIII表达驱动的鼠肺癌肿瘤对mAb806和ch806抗体治疗敏感但抗西妥昔单抗治疗。通过每日一次I.P.注射0.5mg/剂的mAb806或ch806或1mg/剂的西妥昔单抗治疗Tet-op-EGFRvIII/CCSP-rtTA，Ink4A/Arf-/-小鼠。在第一周的治疗后，以相同的剂量每两天给予抗体。在指定的时间点上进行系列MRI，显示各治疗组中代表性小鼠的相应切片。表示为平均值±标准差(SD)的条状图(Bar diagram)示例说明通过MRI测量的肿瘤衰退，并且使用学生氏精确t检验(Studen t′s exact t test)进行统计分析。在整个实验过程中使所有小鼠持续饮食多西环素。H：标示心脏的区域。
图2A和2B描绘了使用mAb806治疗的EGFRvIII驱动的小鼠中的肺腺癌的组织病理学特征。(A)通过EGFRvIII表达进行超过8周驱动的肺腺癌(上方的图框)。在用mAb806治疗1周后，肿瘤开始变小并且具有增加的纤维化(中间的图框)。当在第5周结束mAb806治疗时肺样品总体上正常(下方的图框)。箭头显示纤维化结节(fibroticnodule)，其由成纤维细胞和巨噬细胞组成。在该特定的纤维化区域中未发现肿瘤细胞。左图框：100X，在图框：800X。(B)可在对照小鼠和用mAb806治疗1周的小鼠(分别为左上和左下图框)中观察到总EGFR的免疫组织学染色的相似模式和强度；当与未治疗的肿瘤(右上图框)相比时，在1周的治疗后，肿瘤细胞的phospho-EGFR染色的强度减小(右下图框)。代表性照片在200X放大率下拍摄。(C)TUNEL染色显示当与未治疗的肿瘤(左上图框)相比时，在用mAb806治疗1周后在EGFRvIII驱动的肺肿瘤(左下图框)中凋亡的细胞核(红色箭头)增加。代表性照片在200X放大率下拍摄。表示为平均值±SD的条状图示例说明从至少200倍的高倍视野(HPF)中测定在1周的mAb806治疗前和治疗后肺肿瘤中的细胞凋亡指数。使用学生氏精确t检验(右图框)进行统计分析。
图3显示来自mAb806治疗的Tet-op-EGFRvIII/CCSP-rtTA、Ink4A/Arf-/-小鼠的整个肺裂解物的Western印迹分析。分析来自在mAb806治疗的不同时间点上从小鼠采集的肿瘤的完整肺裂解物。EGFR磷酸化的抑制可在治疗的1周后就观察到，然而总EGFR水平只在治疗的5周后才减少。在mAb806施用的整个过程中，Erk1，2磷酸化被抗体抑制，但AKT磷酸化在两个治疗时间点上都保持在与未治疗的对照相当的水平上，β肌动蛋白用作上样对照。
图4A和4B。EGFR激酶结构域突变L858R驱动的小鼠肺腺癌对ch806治疗有反应。(A)通过每日一次I.P注射0.5mg/剂的ch806来治疗Tet-op-EGFR L858R-IRES-荧光素酶/CCSP-rtTA小鼠，进行4周。在治疗的2和4周后，MRI显示肿瘤体积减少。表示为平均值±SD的条状图示例说明通过MRI测量到的肿瘤衰退，使用学生氏精确t检验进行统计分析(右图框)。H：标示心脏的区域。(B)组织病理学分析显示，当与未治疗对照(左边的两个图框)相比较时，Tet-op-EGFRL858R-IRES-荧光素酶/CCSP-rtTA小鼠(右边的两个图框)中肿瘤皱缩并且具有显著的巨噬细胞浸润。箭头显示残留肿瘤的病灶。来自100X和800X放大率的照片如图中的脚标所标示所示。
图5A和5B描绘了使用mAb806对比西妥昔单抗，对EGFRT790M-L858R肺肿瘤治疗的结果。将持续多西环素饮食超过8周的小鼠进行MRI以记录肿瘤负荷。每日一次通过I.P.注射0.5mg剂量，将mAb806递送至具有肺肿瘤的小鼠，进行4周。每日一次通过I.P.注射1mg/剂对小鼠施用西妥昔单抗，进行4周。使用同窝出生小鼠(Littermate)作为所有治疗研究的对照(未治疗)。(A)在第0、2和4或5周用MRI对小鼠进行成像来测定肿瘤体积的减小。(B)在治疗和MRI成像完成后，杀死小鼠以进行进一步的组织学和生物化学研究。
发明详述
根据本发明，可使用在本领域技术人员的能力之内的常规分子生物学、微生物学和重组DNA技术。此类技术在文献中进行了详尽的说明。参见，例如，Sambrook等人，″Molecular Cloning：A LaboratoryManual″(1989)；″Current Protocols in Molecular Biology″第I-III卷[Ausubel，R.M.，ed.(1994)]；″Cell Biology：ALaboratory Handbook″第I-III卷[J.E.Celis，ed.(1994))]；″Current Protocols in Immunology″第I-III卷[Coligan，J.E.，ed.(1994)]；″Oligonucleotide Synthesis″(M.J.Gait ed.1984)；″Nucleic Acid Hybridization″[B.D.Hames & S.J.Higgins eds.(1985)]；″Transcription And Translation″[B.D.Hames & SJ.Higgins，eds.(1984)]；″Animal Cell Culture″[R.I.Freshney，ed.(1986)]；″Immobilized Cells And Enzymes″[IRL Press，(1986)]；B.Perbal，″A Practical Guide To Molecular Cloning″(1984)。
因此，如果在本文中出现，下列术语将具有下面所示的定义。
术语“抗体”描述了无论是天然还是部分或完全合成产生的免疫球蛋白。抗体包括结合特定表位的任何免疫球蛋白，包括抗体和其片段。该术语包括多克隆、单克隆、重组、人源化以及嵌合抗体。该术语还涵盖具有是抗体结合结构域的或与其同源的结合结构域的任何多肽或蛋白质。该术语也包括CDR移植抗体。
由于抗体可通过许多方法进行修饰，因此，术语“抗体”应当解释为涵盖具有拥有需特异性的结合结构域的任何特定的结合成员或物质。因此，该术语涵盖抗体的抗体片段、衍生物、功能等同物和同源物，其中包括包含免疫球蛋白结合结构域的任何多肽，无论是天然的还是完全或部分合成的多肽。因此包括包含融合至另一个多肽的免疫球蛋白结合结构域或等同物的免疫嵌合分子。嵌合抗体的克隆和表达描述于EP-A-0120694和EP-A-0125023以及美国专利4,816,397和4,816,567中。
已显示，完整抗体的片段可行使结合抗原的功能。结合片段的实例是(i)由VL、VH、CL和CH1结构域组成的Fab片段；(ii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iii)由单个抗体的VL和VH结构域组成的Fv片段；(iv)由VH结构域组成的dAb片段(Ward，E.S.等人.，Nature 341，544-546(1989))；(v)分离的CDR区域；(vi)F(ab′)2片段，包含两个连接的Fab片段的二价片段；(vii)单链Fv分子(scFv)，其中VH结构域和VL结构域通过肽连接体连接，所述肽连接体允许两个结构域结合形成抗原结合部位(Bird等人，Science，242，423-426，1988；Huston等人，PNAS USA，85，5879-5883，1988)；(viii)多价抗体片段(scFv二聚体、三聚体和/或四聚体(Power和Hudson，JImmunol.Methods 242：193-204 9(2000))；(ix)双特异性单链Fv二聚体(PCT/US92/09965)和(x)“双特异抗体(Diabody)”，通过基因融合构建的多价或多特异性片段(WO94/13804；P.Holliger等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90 6444-6448，(1993))。
“抗体结合部位”是由轻链或重链以及轻链可变区和高变区组成的抗体分子的结构部分，其特异性结合抗原。
以其不同语法形式在本文中使用的短语“抗体分子”包括完整的免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分。
示例性抗体分子是完整的免疫球蛋白分子、大体上完整的免疫球蛋白分子和包含互补位(paratope)的免疫球蛋白分子的那些部分，其中包括本领域内称为Fab、Fab′、F(ab′)2和F(v)的那些部分，所述部分优选用于本文中描述的治疗方法。
抗体还可以是双特异性的，其中抗体的一个结合结构域是本发明的特定结合成员，并且另一个结合结构域具有不同的特异性，例如招募效应子功能等。本发明的双特异性抗体包括其中抗体的一个结合结构域是本发明的特定结合成员(以括其片段)，并且另一个结合结构域是不同的抗体或其片段，包括不同的抗EGFR抗体例如抗体528(美国专利4,943,533)、嵌合的和人源化的225抗体(美国专利4,943,533和WO/9640210)、抗de2-7抗体例如DH8.3(Hills，D.等人(1995)Int.J.Cancer 63(4)：537-543)、抗体L8A4和Y10(Reist，CJ等人(1995)Cancer Res.55(19)：4375-4382；Foulon CF等人.(2000)Cancer Res.60(16)：4453-4460)，ICR62(Modjtahedi H等人(1993)Cell Biophys.Jan-Jun；22(1-3)：129-46；Modjtahedi等人(2002)P.A.A.C.R.55(14)：3140-3148或Wikstrand等人的抗体(Wikstrand C.等人(1995)Cancer Res.55(14)：3140-3148)的片段。另一个结合结构域可以是识别或靶向特定细胞类型的抗体，如在神经或胶质细胞特异性抗体中的。在本发明的双特异性的抗体中，本发明的抗体的一个结合结构域可以与其他结合结构域或分子组合，所述其他结合结构域或分子识别特定细胞受体和/或以特定的方式例如作为免疫调节剂(例如，白细胞介素)、生长调节剂或细胞因子(例如肿瘤坏死因子(TNF)，特别地，2002年2月13日提交的U.S.S.N.60/355,838(以其全文通过引用合并入本文)中记载的TNF双特异性形式(modality))或毒素(例如，蓖麻毒素)或抗有丝分裂或细胞凋亡试剂或因子来调控细胞。
抗体分子的Fab和F(ab′)2部分可通过熟知的方法通过木瓜蛋白酶和胃蛋白酶分别对大体上完整的抗体分子进行蛋白水解反应来制备。参见例如，属于Theofilopolous等人的美国专利4,342,566。Fab′抗体分子部分也是熟知的并且从F(ab′)2部分产生，然后用巯基乙醇还原连接两个重链部分的二硫键，然后用试剂例如碘乙酰胺来烷基化所得的蛋白质硫醇来产生。包含完整的抗体分子的抗体在本文中是优选的。
以其不同语法形式显示的短语“单克隆抗体”是指只具有一种能够与特定抗原发生免疫反应的抗体结合部位的抗体。因此单克隆抗体通常展示对于与其发生免疫反应的任何抗原的单一结合亲和力。单克隆抗体还可以包含具有多个抗体结合部位的抗体分子，每一个抗体结合部位对于不同的抗原是免疫特异性的；例如，双特异性(嵌合)的单克隆抗体。
术语“抗原结合结构域”描述了包含特异性结合抗原的部分或全部和与抗原的部分或全部互补的区域的抗体的部分。当抗原很大时，抗体可以只结合抗原的特定部分，该部分称为表位。抗原结合结构域可由一个或多个抗体可变结构域提供。优选，抗原结合结构域包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)。
术语“mAb806”、“806抗体”、“单克隆抗体806”、“ch806”、“人源化806”和未特别列出的任何变体可在本文中互换使用，并且如在整个本申请和权利要求中所使用。因此，同样地包括抗体，其中包括重组的、嵌合的、经遗传修饰的或备选的抗体。这些修饰可以是有意的，例如通过定点诱变获得的修饰，或者可以是偶然的，例如通过在作为抗体或其片段的产生者的宿主中的突变获得的修饰。同样，术语“mAb806”、“806抗体”、“单克隆抗体806”、“ch806”、“人源化806”意欲将本文中明确引用的和本领域技术人员已知的、公共公开的蛋白质和免疫球蛋白以及所有大体上同源的类似物和等位基因变异包括在它们的范围内。mAb806抗体，包括其产生、特定的活性、氨基酸和核酸序列、抗原结合结构域、可变区序列得到了公开并且对于本领域技术人员来说是已知的，包括WO 02/092771；Luwor RB等人(2001)Cancer Res 61：5355-5361；Mishima K等人(2001)CancerRes 61：5349-5354；Johns TG等人(2002)Int J Cancer 98：398-408；Jungbluth AA等人(2003)Proc Natl Acad Sci 100(2)：639-644(其各自以其全文通过引用合并入本文)中所提供的。
本文中描述的氨基酸残基优选以“L”同分异构形式存在。然而，可用以“D”同分异构形式存在的的残基置换任何L氨基酸残基，只要多肽保持期望的免疫球蛋白-结合的功能特性。NH2是指存在于多肽的氨基末端的游离氨基。COOH是指存在于多肽的羧基末端的游离羧基。与标准的多肽命名法，J.Biol.Chem.，243：3552-59(1969)一致，氨基酸残基的缩写示于下列对应表(table of Correspondence)中：
对应表
符号                            氨基酸
1-字母        3-字母
Y             Tyr               酪氨酸
G             Gly               甘氨酸
F             Phe               苯丙氨酸
M             Met               甲硫氨酸
A             Ala               丙氨酸
S             Ser               丝氨酸
I             Ile               异亮氨酸
L             Leu               亮氨酸
T             Thr               苏氨酸
V             Val               缬氨酸
P             Pro               脯氨酸
K             Lys               赖氨酸
H             His               组氨酸
Q             Gln               谷氨酰胺
E             Glu               谷氨酸
W             Trp               色氨酸
R             Arg               精氨酸
D             Asp               天冬氨酸
N             Asn               天冬酰胺
C             Cys               半胱氨酸
应当指出，所有氨基酸残基序列在本文中由其左至右的方向以氨基端至羧基端的常规方向排列的分子式(formulae)表示。此外，应当指出氨基酸残基序列的起始或终止处的短划线(dash)表示连接至一个或多个氨基酸残基的另外序列的肽键。提供上表以使在本文中交替出现的三字母和一字母符号相对应。
应当理解，也在用于本发明的方法的组合物的范围内的是编码和/或表达有效的抗EGFR抗体，特别包括mAb806和ch806的DNA序列，其编码具有与公共公开的和本领域技术人员已知的mAb806抗体相同的氨基酸序列的抗EGFR抗体、其抗原结合结构域或其活性片段，但与已知的mAb806序列简并。“与……简并”是指不同的三字母密码子用于确定特定的氨基酸。本领域内熟知的是，下列密码子可互换用于编码各特定的氨基酸：
苯丙氨酸(Phe或F)        UUU或UUC
亮氨酸(Leu或L)          UUA或UUG或CUU或CUC或CUA或CUG
异亮氨酸(Ile或I)        AUU或AUC或AUA
甲硫氨酸(Met或M)        AUG
缬氨酸(Val或V)          GUU或GUC或GUA或GUG
丝氨酸(Ser或S)          UCU或UCC或UCA或UCG或AGU或AGC
脯氨酸(Pro或P)          CCU或CCC或CCA或CCG
苏氨酸(Thr或T)          ACU或ACC或ACA或ACG
丙氨酸(Ala或A)          GCU或GCG或GCA或GCG
酪氨酸(Tyr或Y)          UAU或UAC
组氨酸(His或H)          CAU或CAC
谷氨酰胺(Gln或Q)        CAA或CAG
天冬酰胺(Asn或N)        AAU或AAC
赖氨酸(Lys或K)          AAA或AAG
天冬氨酸(Asp或D)        GAU或GAC
谷氨酸(Glu或E)          GAA或GAG
半胱氨酸(Cys或C)        UGU或UGC
精氨酸(Arg或R)          CGU或CGC或CGA或CGG或AGA或AGG
甘氨酸(Gly或G)          GGU或GGC或GGA或GGG
色氨酸(Trp或W)          UGG
终止密码子              UAA(赭石)或UAG(琥珀)或UGA(蛋白石)
应当理解，上面指定的密码子是针对RNA序列的。DNA的相应密码子用T替代U。
可在抗EGFR抗体序列，包括在mAb806抗体序列中进行突变以使特定的密码子改变成编码不同氨基酸的密码子。这样的突变通常通过尽可能最少的核苷酸变化来产生。可以以非保守方式(即，通过将密码子从属于具有特定大小或特征的氨基酸类型的氨基酸变成属于另一类型的氨基酸)或以保守方式(即，通过将密码子从以属于具有特定大小或特征的氨基酸类型的氨基酸变成属于相同类型的氨基酸)进行该类置换突变来改变所得蛋白质中的氨基酸。这样的保守变化通常导致所得蛋白质的结构和功能的更少的变化。非保守变化更可能改变所得蛋白质的结构、活性或功能。应当认为本发明包括包含不显著改变所得免疫球蛋白和抗体的活性或结合特征的保守变化的序列。
类似地，预期某些EGFR突变(其可以甚至显著地影响或改变EGFR的活性)，例如本文中描述和利用的EGFR激酶结构域突变，可以不影响抗EGFR抗体(特别地包括抗EGFR vIII突变抗体，特别地包括mAb806抗体)对EGFR的识别、结合或抑制。因此，预期mAb806可相似地有效抗其他迄今未被识别的或迄今未知的EGFR突变，特别地在抗癌疗法中产生的次级突变。这些突变可作为TKI抑制疗法的结果或作为抗性EGFR介导的疾病的其他疗法的结果产生，所述疗法可靶向EGFR的激酶或其他活性。
氨基酸可分类为相似的或不同、保守的或非保守的。氨基酸的分类可基于它们的R基团(例如非极性、不带电荷的极性、带电荷的极性、具有苯基的氨基酸)、基于它们的分子量或它们R基的大小、以及基于分子量。特别优选置换是：Lys对Arg的置换以及反之亦然，这样正电荷可得到保持；Glu对Asp的置换以及反之亦然，这样负电荷可得到保持；Ser对Thr的置换，这样游离-OH可得到保持；以及Gln对Asn的置换，这样游离NH2可得到保持。
还可导入氨基酸置换以置换具有特别优选的性质的氨基酸。例如，可将Cys导入用于与另一个Cys形成二硫键的潜在位置。可导入His作为独特的“催化”位点(即，His可作为酸或碱起作用并且是生物化学催化中最常见的氨基酸)。由于其特殊的平面结构(该结构在蛋白质的结构中诱导β转角)，可导入Pro。
当至少大约70％的氨基酸残基(优选至少大约80％，和最优选至少大约90或95％)是相同的或代表保守置换时，两个氨基酸序列是“大体上同源的”。
短语“药学上可接受的”是指当对人施用时，为生理上可耐受的和通常不产生过敏的或相似的不利反应例如心嘈(gastric upset)、眩晕等的分子实体和组合物。
短语“治疗有效量”在本文中用于指这样的量，该量足以预防和优选减少靶细胞团块的S期活性的临床显著变化或靶细胞团块或肿瘤的大小或尺寸的显著变化或可伴随其存在和活性的其他病理学特征的显著变化的至少大约20％、更优选至少30％、更优选至少50％、更优选至少70％、更优选至少90％。
抗体或活性片段可配制成经中和的药学上可接受的盐形式的治疗性组合物。药学上可接受的盐包括与无机酸例如盐酸或磷酸或者与有机酸例如醋酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成的酸加成盐(与多肽或抗体分子的游离氨基形成的)。从游离羧基形成的盐还可来源于无机碱例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铝、氢氧化钙或氢氧化铁和有机碱例如异丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因(procaine)等。
常规地静脉内例如通过单位剂量的注射施用包含治疗性抗体或活性片段的组合物。术语“单位剂量”，当涉及本发明的治疗性组合物使用时，是指适合作为用于人的单一剂量的物理上分开的单位，每一个单位包含经计算产生期望的治疗效果的与所需的稀释剂(即载体或媒介物)结合的预先确定量的活性物质。
以与剂型相兼容的方式和治疗有效量施用组合物。待施用的量取决于待治疗的受试者、受试者的免疫系统利用活性成份的能力和期望的抑制程度或被靶向的肿瘤块的大小。需要施用的活性成份的精确量取决于医生的判断并且对于每一个体是特有的。然而，合适的剂量可在大约0.1至20，优选大约0.5至大约10，以及更优选1至数毫克的活性成份/千克个体体重/天的范围内，并且取决于施用的途径。用于最初施用和加强注射的合适方案也是可变的，但通常在初始施用后，通过随后的注射或其他施用途径以1小时或数小时的间隔重复给药。备选地，包括使用足以在血液中保持10纳摩尔至10微摩尔的浓度的连续静脉内输注。
如本文中所使用的，“pg”表示皮克，“ng”表示纳克，“ug”或“μg”表示微克，：“mg”表示毫克，“ul”或“μl”表示微升，“ml”表示毫升，“l”表示升。
为了进一步表征mAb806在EGFR介导的癌症疗法中的应用，本发明描述了mAb806用于治疗经基因工程改造的、具有由EGFRvIII或EGFR激酶结构域突变驱动的肺肿瘤的小鼠的用途。这些突变中的每一个突变对于EGFR介导的疾病，特别是癌症(包括肺癌、胰腺癌、结肠直肠癌、头颈癌和成胶质细胞瘤)是临床相关的和重要的(significant)。本发明验证了抗EGFR vIII抗体，特别是mAb806在阻断EGFRvIII信号传导和诱导肿瘤细胞凋亡，从而在EGFRvIII驱动的鼠肺癌中导致显著的肿瘤衰退中是非常有效的。针对表达高水平的野生型EGFR的细胞产生的独特的靶向EGFR的抗体——西妥昔单抗在这些经遗传确定的肺肿瘤中不能显示活性。此外，使用mAb806对由公认的和临床相关的EGFR激酶结构域突变(L858R)驱动的鼠肺肿瘤的治疗诱导了显著的肿瘤衰退。已显示该激酶结构域突变对TKI疗法，特别是吉非替尼或厄洛替尼敏感。获得的对TKI包括吉非替尼或厄洛替尼的抗性是正在面临的挑战，尽管继续治疗，但对TKI敏感的肿瘤最终继续发展。该获得的抗性可通过继发抗性或补偿性突变，特别是在EGFR的位点790上的次级突变(T790M)介导。研究者现在显示抗EGFR抗体，特别是mAb806有效地抗T790M突变，从而在EGFRT790M/L858R驱动的鼠肺癌中导致显著的肿瘤衰退。总的来说，这些数据证明抗EGFR抗体，特别是mAb806在具有EGFR激酶结构域突变的患者，包括癌症患者，特别是肺癌患者的治疗中提供了有效的备选或辅助。
因此，通过证明抗EGFR抗体，特别是mAb806的抗肿瘤活性提供和产生了治疗性和诊断性应用以及方法。如在本文中最初建议的和进一步详细阐述的，本发明包括其中牵涉EGFR的级联反应和信号传导的药物干预，从而调节与EGFR突变包括激酶结构域突变(原发性和次级抗性突变)相关的致瘤能力。
本文中提供的数据证明mkb806抗EGFR激酶结构域突变包括L858R和抗TKI的T790M的活性。预期另外的激酶结构域突变或EGFR次级突变可存在或随着持续的和推进的导向抗EGFR治疗而产生。在半胱氨酸T797(对应于EGFR vIII缺失突变体中的半胱氨酸530)上结合EGFR的不可逆抑制剂HKI272在临床前方案中推行。如果不是预期的，那么在半胱氨酸上具有置换的抗性次级突变也是可能的。这些额外的EGFR二次突变体将是抗EGFR抗体疗法的候选物。
因此，本发明提供了在疗哺乳动物中治疗酪氨酸激酶抑制剂抗性EGFR介导的疾病的方法，其中所述抗性EGFR介导的疾病是EGFR中次级突变从而产生突变的EGFR的结果，并且其中所述突变与EGFR vIII突变不同，所述方法包括对所述哺乳动物施用有效量的能够结合并抑制突变的EGFR的抗EGFR抗体。在特定的方面，次级EGFR突变是EGFR酪氨酸激酶结构域突变。在另外的方面，酪氨酸激酶结构域突变是T790M。在所述方法的特定实施方案中，抗EGFR抗体是mAb806抗体或其活性片段。MAb806包括鼠抗体、重组抗体或人源化抗体。另外的抗EGFR抗体，包括靶向EGFRvIII突变体的抗体，可用于本发明的治疗方法。示例性和已知的抗EGFR抗体可选自ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A4和其活性片段。
用以治疗的EGFR介导的疾病特别地是癌症并且可选自成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖-泌尿癌和膀胱癌。在特定的方面，EGFR介导的癌症是肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。
本发明包括用于在癌症患者中降低EGFR介导的肿瘤生长的方法，其中所述癌症患者之前已用一种或多种酪氨酸激酶抑制剂进行治疗并且已发生了复发性疾病和肿瘤生长，该方法包括对所述患者施用有效量的抗EGFR抗体以使复发性疾病和肿瘤生长被抑制和降低。在用于降低肿瘤生长的本方法的特定实施方案中，抗EGFR抗体是mAb806抗体或其活性片段。MAb806包括鼠抗体、重组抗体或人源化抗体。可使用另外的抗EGFR抗体，其中包括靶向EGFRvIII突变体的那些抗体。示例性和已知的抗EGFR抗体可选自ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。
在特定的临床方面，癌症患者中的复发性疾病和肿瘤生长是次级EGFR突变的结果，所述次级EGFR突变是EGFR酪氨酸激酶结构域突变。特定的次级EGFR突变是酪氨酸激酶结构域突变T790M。
本发明还提供了在哺乳动物中治疗EGFR介导的癌症的方法，该方法包括对所述哺乳动物施用酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR抗体。在一个方面，同时施用酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR抗体。在一个方面，在常规化学疗法之前或之后，同时或顺次地和反复地施用酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR抗体。
本发明还提供了在哺乳动物中治疗EGFR介导的癌症的方法，该方法包括对所述哺乳动物施用酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR抗体，其中在使用酪氨酸激酶抑制剂作为二线疗法的治疗后施用所述抗EGFR抗体来抑制抗酪氨酸激酶抑制剂的潜在的次级突变的EGFR。
酶氨酸激酶抑制剂可以是可逆酪氨酸激酶抑制剂或不可逆酪氨酸激酶抑制剂。可抑制酪氨酸激酶抑制剂可以是苯胺喹唑啉化合物和选自吉非替尼、厄洛替尼、AG 1478、ST1571和SU-6668。示例性不可逆酪氨酸激酶抑制剂在本领域内是已知的并且包括但不限于EKB-569、EKI-569、HKI-272、HKI-357和BIBW 2992(Kwak EL等人(2005)Proc Natl Acad Sci USA 102(21)：7665-70)。
EGFR介导的癌症可选自成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖-泌尿癌和膀胱癌。特别地，癌症是肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。
可在所述方法中单独地或与其他抗EGFR抗体组合施用抗EGFR抗体，特别是mAb806。因此，可连续地或与西妥昔单抗组合施用Mab806。还可连续地或与其他抗EGFR vIII抗体包括ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段组合施用mAb806。
可将抗EGFR抗体与适当的载体一起并且以对于通过不同方法对患者施用是有效的强度制备于药物组合物中。可使用多种施用技术，其中有胃肠外技术例如皮下、静脉内和腹膜内注射、导管插入术(catheterization)等。抗体或它们的活性片段的量可以变化并且特别地应当基于有资格的医生或兽医的推荐和处方，其中包括基于对本文中提供的结果和数据的考虑。
用于本发明的抗EGFR抗体包括mAb806可提供有用的诊断应用，其中包括成像应用或诊断性活组织检查应用，以用于诊断和/或监控癌症患者(包括在TKI治疗后或TKI治疗一有结论后)。
通常用于此类研究的标记物是放射性元素、酶、当暴露于紫外光时发荧光的化学药品和其他物质。许多荧光材料是已知的并且可用作标记物。这些标记物包括例如，荧光素、罗丹明、金胺、德克萨斯红、AMCA蓝和荧光黄。
可用可检测的或功能性的标记物标记本发明的抗体。可检测的标记物包括但不限于放射性标记物例如同位素3H、14C、32P、35S、36Cl、51Cr、57Co、58Co、59Fe、90Y、121I、124I、125I、131I、111In、211At、198Au、67Cu、225Ac、213Bi、99Tc和186Re，可使用抗体成像领域内已知的常规化学作用将其连接至本发明的抗体。标记物还包括荧光标记物和在本领域中常规用于MRI-CT成像的标记物。它们还包括酶标记物，例如辣根过氧化物酶。标记物还包括化学部分例如生物素，其可通过结合至特定的关联(cognate)可检测部分例如经标记的抗生物素蛋白而被检测。
功能性标记物包括经设计用来被靶向肿瘤的位点以引起破坏肿瘤组织的物质。此类功能性标记物包括细胞毒性药物例如5-氟尿嘧啶或蓖麻毒素，以及酶例如细菌羧肽酶或硝基还原酶，其能够在肿瘤的位点将前体药物转化成活性药物。
放射性标记的抗EGFR抗体和其片段用于体外诊断技术和用于体内放射成像(radioimaging)技术和用于放射免疫疗法。在体内成像的情况下，可将本发明的特定结合成员缀合至显像剂(imaging agent)而非放射性同位素，所述显像剂包括磁共振成像增强剂(magneticresonance image enhancing agent)，其中例如通过螯合基用大量的顺磁离子装载抗体分子。螯合基的实例包括EDTA、卟啉、多胺冠醚(polyamines crown ether)和聚肟(polyoxime)。顺磁离子的实例包括钆、铁、锰、铼、铕、镧、钬和ferbium。在本发明的另外方面中，放射性标记的特定结合成员，特别是抗体和其片段，特别是放射免疫缀合物(radioimmunoconjugate)用于放射免疫疗法，特别是作为放射性标记的抗体用于癌症治疗。在另外的方面，放射性标记的特定结合成员，特别是抗体和其片段用于放射免疫导向手术技术(radioimmuno-guided surgery technique)，其中它们可在除去癌细胞、癌前细胞、肿瘤细胞、肿瘤细胞和过度增殖(hyperproliferative)细胞的手术之前、期间或之后鉴定和指示这样的细胞的存在和/或定位。
本发明的免疫缀合物或抗体融合蛋白(其中本发明的特定结合成员，特别是抗体和其片段缀合至或连接至其他分子或试剂)还包括但不限于缀合至化学消融剂(chemical ablation agent)、毒素、免疫调节剂、细胞因子、细胞毒素剂、化学治疗剂或药物的结合成员。
放射免疫疗法(RAIT)已进入临床并且通过使用各种抗体免疫缀合物证明了其功效。已在结肠直肠癌中评估了131I标记的人源化抗癌胚抗原(抗CEA)抗体hMN-14(Behr TM等人(2002)Cancer 94(4Suppl)：1373-81)，和已在甲状腺髓样癌中评估了用90Y标记的相同抗体(SteinR等人(2002)Cancer 94(1)：51-61)。关于何杰金氏淋巴瘤和胰腺癌，也已评估和报导了使用单克隆抗体的放射免疫疗法(Goldenberg DM(2001)Crit Rev Oncol Hematol 39(1-2)：195-201；Gold DV等人(2001)Crit Rev Oncol Hematol 39(1-2)147-54)。使用特定抗体的放射免疫疗法也描述于美国专利6,306,393和6,331,175中。放射免疫导向手术(RIGS)也已进入临床并且证明了功效和有用性，其中包括使用抗CEA抗体和定向针对与肿瘤相关的抗原的抗体(Kim JC等人(2002)Int J Cancer 97(4)：542-7；Schneebaum S等人(2001)WorldJ Surg 25(12)：1495-8；Avital S等人(2000)Cancer 89(8)：1692-8；McIntosh DG等人(1997)Cancer Biother Radiopharm 12(4)：287-94)。
可通过任何适当的途径，通常通过注射入血流或CSF或直接注射入肿瘤的位点来对需要治疗的患者施用本发明的抗体。精确的剂量将取决于许多因素，包括抗体是用于诊断的还是用于治疗的，肿瘤的大小和位置、抗体的精确性质(是完整抗体、片段或者双特异抗体等)以及连接至抗体的可检测的或功能性的标记物的性质。当放射性核素用于治疗时，适当的最大单一剂量是大约45mCi/m2至最大大约250mCi/m2。优选剂量在15至40mCi的范围内，更优选的剂量范围为20至30mCi或10至30mCi。这样的治疗可能需要骨髓或干细胞置换。用于肿瘤成像或肿瘤治疗的常用抗体剂量可在0.5至40mg，优选1至4mg的F(ab′)2形式的抗体的范围内。优选以20至1000mg蛋白质/剂，或20至500mg蛋白质/剂，或20至100mg蛋白质/剂的剂量施用裸抗体。这是用于成年患者的单次治疗的剂量，其可按比例调整用于儿童和婴儿，还可按分子量比例调整用于其他抗体形式。可在医生的指导下以每日一次，每周两次、每周一次或每月一次的间隔重复治疗。
通过参考下列作为本发明的示例提供的非限定性实施例可更好地理解本发明。下列实施例提供用来更详尽地举例说明本发明的优选实施方案，然而绝不应当解释为限定本发明的宽广的范围。
实施例1
治疗性抗EGFR抗体806在具有新生EGFR突变体依赖性肺癌的鼠中 产生反应。
激活性表皮生长因子受体(EGFR)突变发生在人非小细胞肺癌(NSCLC)中，5％的人肺鳞状细胞癌具有EGFRvIII突变，10-30％的肺腺癌具有EGFR激酶结构域突变。靶向EGFR的单克隆抗体mAb806识别野生型(wt)EGFR以及截短的EGFRvIII突变体的构象表位。为了进一步探测该抗体对于EGFR靶向的癌症疗法的抗癌谱，将mAb806用于治疗经基因工程改造的、具有由EGFRvIII或EGFR激酶结构域突变驱动的肺肿瘤的小鼠。我们的结果证明mAb806在阻断EGFRvIII信号传导和诱导肿瘤细胞凋亡，从而在EGFRvIII驱动的鼠肺癌中导致显著的肿瘤衰退中是非常有效的。另一种靶向EGFR的抗体西妥昔单抗在这些经遗传确定的肺肿瘤中不能显示活性。此外，使用mAb806进行的对由EGFR激酶结构域突变驱动的鼠肺肿瘤的治疗诱导了显著的肿瘤衰退，虽然达到比在EGFRvIII驱动的肿瘤中观察到的程度更低的程度。总的来说，这些数据支持假说，即mAb806可在具有这两类EGFR突变的NSCLC患者的群体的治疗中提供显著的活性。
引言
靶向癌症疗法经设计用来破坏致癌作用和肿瘤生长所需的特定分子的功能，从而杀死或阻止癌细胞的生长(1)。与常规化学毒性化学疗法相反，此类靶向癌症疗法可以更有效并且对正常细胞的伤害更小。靶向癌症疗法领域的主要努力一直以来是开发靶向表皮生长因子受体(EGFR)的试剂。EGFR是密切相关的受体(包括的EGFR(ErbB-1)、Her2/neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)和Her4(ErbB-4))的ErbB家族的成员。EGFR的激活导致受体酪氨酸激酶的激活和一系列下游信号传导事件(所述述信号传导事件介导细胞增殖、运动、粘着、侵入和对化学疗法的抗性以及对细胞凋亡的抑制(2-4))、对于癌细胞的持续增殖和存活是至关重要的过程。
迄今为止，两个主要类型的抗EGFR试剂已进入临床环境：抗EGFR抗体和小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)(5，6)。抗EGFR抗体例如西妥昔单抗经设计用来结合EGFR的细胞外结构域并且阻断EGFR下游信号传导的激活(7)。相反，小分子TKI例如吉非替尼或厄洛替尼与ATP竞争对EGFR酪氨酸激酶的细胞外催化结构域的结合，从而阻止EGFR的自磷酸化作用和下游信号转导(4)。
这两种抗EGFR药物类型都已在患有多种不同类型癌症的患者的亚群中显示一些临床功效。在患有具有EGFR激酶结构域突变的肺癌的患者中使用吉非替尼或厄洛替尼进行的治疗通常产生显著的临床反应(5，8)。然而，吉非替尼或厄洛替尼在具有野生型EGFR的肺腺癌或其他组织学亚型例如鳞状细胞癌中的功效是有限的(9，10)。此外，在临床前和临床试验中已显示吉非替尼或厄洛替尼在抑制EGFRvIII突变体(11)(其中存在外显子II至VII的符合读框的缺失的不同的激活性EGFR突变)的功能中是基本无效的。EGFRvIII通常见于成胶质细胞瘤，最近发现存在于人肺鳞状细胞癌的亚型(12)和大部分头颈癌(13)中。显示西妥昔单抗在非小细胞肺癌(NSCLC)患者和患有头颈癌的患者以及结肠直肠癌患者的小亚群中是有效的。然而，对西妥昔单抗的反应似乎与EGFR的表达水平无关。因此，不清楚这些患者对西妥昔单抗治疗有反应然而其肿瘤具有高EGFR表达的其他癌症患者对西妥昔单抗治疗不显疗效的原因(14)。
MAb806是新型鼠类抗体，最初产生用来识别独特的截短突变体EGFRvIII(15-17)。重要地，被mAb806识别的表位在无活性的野生型(wt)EGFR中是不可接近的，但在过表达EGFR和表达EGFRvIII的细胞中暴露于于wt EGFR的过渡形式中(18)。表位研究受到免疫组织化学研究的支持，后者证明806抗体结合存在于神经胶质瘤以及广泛的上皮癌中的表位但不结合正常人组织(16，19)。这些和其他临床前数据表明mAb806可能具有与西妥昔单抗和其他抗EGFR抗体不同的临床活性谱和副作用特征谱。在异种移植模型中，mAb806已展示有效的不靶向正常组织的抗肿瘤活性。因此，mAb806的独特的靶向能力代表了癌症特异性分子靶向疗法的新范例。
最近的研究已显示10-30％的NSCLC患者具有EGFR激酶结构域突变，而5％的肺鳞状细胞癌(SCC)患者具有细胞外结构域EGFRvIII突变(12，20)。为了研究mAb806在具有EGFR突变的NSCLC患者的癌症特异性靶向治疗中的临床潜能，我们使用两个已建立的依赖于EGFRvIII或EGFR激酶结构域突变体的小鼠肺癌模型。我们的数据显示mAb806在由EGFRvIII或EGFR激酶结构域突变的表达驱动的鼠NSCLC的治疗中十分有效，并且表明该抗体可能在其肿瘤具有相似突变的患者中具有临床活性。
结果
使用mAb806而非西妥昔单抗的治疗在具有拥有EGFRvIII突变的肺肿瘤的小鼠中诱导肿瘤衰退。
之前的研究已确定了EGFRvIII突变在由突变驱动的鼠肺肿瘤的维持中的重要作用。阻断EGFRvIII的激活导致在新生鼠肺癌模型中与细胞凋亡相关的显著的肿瘤衰退(12)。Tet-op-EGFRvIII/CCSP-rtTA、Ink4A/Arf-/-小鼠在施用8至10周的多西环素后产生具有细支气管肺泡癌(BAC)特征的肺腺癌，(图1，左图框；图2A，上方的图框)。在通过MRI鉴定具有肿瘤的小鼠后，通过在第一周中每日一次，其后的4周中每2天一次进行腹膜内(I.P.)注射给予0.5mg/剂量的mAb806。在治疗的1、3和5周结束时进行系列MRI来测定肿瘤体积和/或密度的变化。在mAb806治疗1周后通过MRI观察到肿瘤的减小是显著的(在6只小鼠中60％±5％的平均减小，图1，上方的图框)。在治疗3周后肿瘤负荷持续减小(95％±8％的平均减小)，并且所有6只小鼠在治疗5周后具有完全的肿瘤衰退。相反地，使用西妥昔单抗进行的小鼠治疗甚至在使用相同的给药方案以每小鼠1mg进行5周的治疗后，不能在4只Tet-op-EGFRvIII/CCSP-rtTA、Ink4A/Arf-/-小鼠中诱导肿瘤衰退。我们还观察到用西妥昔单抗治疗的小鼠日益变得虚弱并且一些小鼠由于在治疗期间严重的肿瘤负荷而甚至死亡(数据未显示)。
来自这些小鼠的肺的病理检查与MRI发现：在使用mAb806治疗1周后，在腺癌中存在肿瘤细胞构成的减少(图2A，中间的图框)相关。在5周后，肺具有局灶性纤维化和瘢痕化，具有零星的单核细胞浸润；可能代表从退缩的肿瘤持续重塑的区域(图2A，下方的图框)。虽然在这些纤维化结节的几个病灶中仍可罕见地观察到活的癌细胞，但大部分纤维化和瘢痕化区域不包含任何肿瘤细胞。相反地，来自用西妥昔单抗治疗的小鼠的肿瘤，当与未治疗的肿瘤相比较时，似乎未受影响，无可见的组织学差异(数据未显示)。因此，使用mAb806抗体的治疗在EGFRvIII驱动的小鼠肺癌模型中导致快速和显著的肿瘤衰退，而西妥昔单抗治疗基本上是无效的。
MAb806抑制EGFRvIII磷酸化并且在Tet-op-EGFRvIII/CCSP-rtTA、Ink4A/Arf-/-小鼠中诱导肿瘤细胞的细胞凋亡。
为了确定腹膜内施用的mAb806是否在肺肿瘤中识别其靶，我们使用抗总EGFR和phospho-EGFR的抗体在用或不用mAb806治疗的小鼠的肺肿瘤中进行免疫组织化学染色。如所预期的，mAb806治疗对肿瘤细胞中总EGFRvIII的表达没有影响(图2B)。然而，在mAb806治疗1周后，phospho-EGFRvIII的表达减少(图2B)。然后，我们通过使用在使用mAb806的治疗期间在不同时间点上收集的肺裂解物进行的免疫印迹分析来验证这些发现。在mAb806治疗1周后，phospho-EGFRvIII的水平显著降低，然而总EGFRvIII水平与未治疗的对照的总EGFRvIII水平保持相似(图3)，这表明mAb806对EGFRvIII磷酸化的强抑制作用。有趣地，总EGFRvIII水平在mAb806施用5周后最终确实减少。该现象的一个解释可以是有活力的肿瘤细胞的数目的显著减少。与该解释相符的是，在mAb806治疗1周后，与未治疗的肿瘤相比，在肺肿瘤中观察到大大增加的TUNEL染色(图2C)。除了phospho-EGFR水平的改变以外，1周的mAb806治疗还减少phospho-Akt和phospho-Erk1，2的表达，这些EGFR下游信号传导分子在功能上与抗细胞凋亡和增殖通路相关。令人惊讶的是，当与1周的治疗相比较时，在mAb806治疗5周后我们观察到微弱的但可重现的phopho-Akt水平的增加。Akt的该磷酸化不可能由EGFRvIII启动，因为phospho-EGFRvIII在该时间点上非常低。很可能，Akt可通过参与肺重塑过程的其他信号传导事件来激活。这些数据表明mAb806通过阻止EGFR的激活和增加肿瘤细胞的细胞凋亡来在EGFRvIII小鼠中诱导肿瘤的退缩。
Ch806治疗在具有EGFRvIII突变的鼠肺肿瘤中导致显著的肿瘤衰退。
Ch806是mAb806的人源化形式(22)。为了确定人源化抗体在肺腺癌的体内治疗中是否与鼠mAb806一样有效，我们在第一周中每日一次进行通过I.P.注射一个剂量的0.5mg的ch806，然后在另外7周每两天一次施用一个剂量，来治疗荷瘤Tet-op-EGFRvIII/CCSP-rtTA、Ink4A/Arf-/-小鼠。这些小鼠在治疗的第1.5、5和8周经历再成像，然后杀死小鼠以用于组织学分析。我们通过从治疗的1.5周开始的MRI扫描观察到肿瘤体积的显著减小(43％±3％)，在4只用ch806治疗的小鼠的每一只中在治疗8周时获得几乎完全的肿瘤衰退(83％±7％)(图1，下方的图框)。用ch806治疗的小鼠的组织学(数据未显示)与mAb806治疗后的肿瘤的组织学相似并且与MRI数据相符。
Ch806在具有EGFR L858R突变的鼠肺肿瘤的治疗中是有效的
为了阐明ch806是否有效地抗EGFR激酶结构域突变驱动的肺癌，使用EGFR L858R-IRES-荧光素酶/CCSP-rtTA小鼠。每天一次以0.5mg/小鼠施用Ch806，进行4周，在治疗的1、2和4周结束时对所有治疗的小鼠进行系列MRI扫描。在ch806治疗2周后观察到肿瘤的退缩(21％±2％)，在ch806治疗4周时肿瘤的退缩为41％±2％(图4A)。通过显微镜观察，ch806治疗的小鼠的肺显示巨噬细胞，特别地在围绕剩下的有活力的肿瘤的区域中的巨噬细胞的弥散性细胞浸润增加。此外，巨噬细胞存在于肿瘤的多个区域，这表明巨噬细胞介导的细胞毒性可能是抗体诱导的肿瘤衰退(图4B)的背后机制中的一个机制。还应当指出，由于不断增加的与肿瘤细胞相关的巨噬细胞的积累而引起的肺内实变(consolidation)的存在可高估通过MR成像测量的肿瘤体积。
讨论
EGFR突变和激活事件在人恶性肿瘤包括NSCLC中是常见的。EGFR信号传导的激活可通过受体过表达而发生以及通过由于EGFR的功能获得突变形式引起的组成型信号传导而发生。大约10-30％的NSCLC患者在它们的肺肿瘤中具有EGFR激酶结构域突变，大约5％的患者具有鳞状细胞肺癌的患者具有特定的EGFRvIII细胞外结构域突变(12，20)。此处，我们显示mAb806和其人源化形式ch806在治疗具有两种类型的EGFR突变的鼠肺癌中是有效的。观察到的显著的肿瘤衰退与EGFRvIII信号传导的阻断和随后增加的细胞凋亡相关。在具有拥有EGFR激酶结构域突变的肺肿瘤的小鼠中，对ch806的反应没有报导的对厄洛替尼和cetuximab的反应那么明显，尽管它们在放射摄影和组织学上(21，23)确实具有客观的反应(objective response)(41％±2％)。相反地，在用mAb806治疗后，在具有EGFRvIII驱动的肺肿瘤的小鼠中获得几乎完全的肿瘤衰退，然而西妥昔单抗无效。该后一结果可能不令人惊讶，因为西妥昔单抗经设计用来干扰配体和EGFR细胞外结构域之间的相互作用(24)。已确定，EGFRvIII突变导致构象变化并且展示不依赖于配体刺激的组成型激酶活性，这促成了肿瘤形成(25)。虽然西妥昔单抗已被FDA批准用于癌症患者，但不存在用以预测使用该抗体的治疗在个体患者中的功效的明确的生物标记，因为应答率和总存活与通过免疫组织化学测量的EGFR蛋白的表达不相关(14)。
虽然小分子TKI在具有EGFR激酶结构域突变的许多NSCLC患者的治疗中是有效的，但所有患者最终产生与次级突变T790M相关的抗性(10，26)。相一致地，体外研究已显示具有T790M突变的肿瘤细胞使用厄洛替尼的治疗具有抗性(27，28)。来自具有次级T790M突变的EGFR激酶结构域的晶体结构的证据表明T790M突变对受体功能的影响应当很小。T790M突变可能干扰厄洛替尼与ATP酶口袋的结合(27)。然而，T790M突变体的细胞外结构域潜在地提供了基于抗体的癌症治疗(包括西妥昔单抗和mAb806)的良好的靶。这可意味着抗小TKI治疗的具有次级T790M点突变的NSCLC肿瘤可能对mAb806治疗有反应。为了测试该假说，正在进行产生如下小鼠的努力，所述小鼠具有包含激活性激酶结构域突变和T790M突变的复合突变EGFR等位基因。
最近从I期临床试验释放的数据已显示ch806抗体，与西妥昔单抗不同，选择性地结合肺癌包括鳞状细胞肺癌的肿瘤细胞，但不结合正常组织(Scott，ASCO 2006)。在该试验中未观察到ch806抗体的显著毒性。与其他EGFR靶向癌症疗法包括西妥昔单抗和TKI治疗相比较，通过靶向癌细胞上的EGFR的构象依赖性表位然而极少靶向大多数(如果不是全部)正常细胞上的wt EGFR，ch806似乎具有大得多的特异性。我们的结果清楚地表明mAb 806在阻断EGFR信号传导上的功效。因此，ch806的独特的靶向能力代表了癌症特异性分子靶向疗法的新型和令人激动的范例，该疗法可使其癌症依赖于由于过表达或功能获得突变(包括EGFRvIII或EGFR激酶结构域突变)而引起的不受控制的EGFR信号转导的患者受益。
方法
小鼠群(Mouse cohorts)
之前描述了Tet-op-EGFRvIII/CCSP-rtTA、Ink4A/Arf-/-小鼠和Tet-op-EGFR L858R-IRES-荧光素酶/CCSP-rtTA小鼠的产生(12，21)。所有小鼠圈养Harvard School of Public Health的无病原体环境中并且进行的所有小鼠实验获得Institutional Animal Care and UseCommittee，IACUC)批准。同窝出生小鼠在所有实验中用作对照。为了诱导EGFRvIII和EGFR L858R表达，用多西环素饮食(Research Diets，Inc.)饲养小鼠。之前的研究中的多西环素撤回实验(withdrawexperiment)明确地鉴定了来自两个等位基因的肺肿瘤完全依赖于多西环素。
体内使用mAb806或ch806或西妥昔单抗的靶向疗法
将持续进行多西环素饮食超过8周的小鼠经历MRI以记录肺肿瘤负荷。通过I.P.注射，以每日一次0.5mg/剂将MAb806或ch806(由Ludwig Institute for Cancer Research，Melbourne，Australia生产的)递送入具有肺肿瘤的小鼠。在1周的治疗后，以相同的剂量每两天一次施用抗体，进行另外的指定的周数。使用相同的给药方案通过I.P.注射以1mg/剂对小鼠施用西妥昔单抗(从BMSpharmaceuticals商购获得的)。在指定的时间点上使用MRI对小鼠进行成像以确定肿瘤体积的减少，然后杀死小鼠以在完成治疗后进行进一步的组织学和生物化学研究。将所有小鼠在整个实验过程中保持多西环素饮食。同窝出生小鼠用作所有药物治疗研究的对照。
肺肿瘤的病理学评估
在指定的时间上对小鼠实施安乐死，解剖它们的左肺，然后进行快速冷冻以进行生物化学分析。然后在压力(25cm)下用中性缓冲的10％福尔马林使它们的右肺膨胀，进行10分钟，然后固定过夜。在Department of Pathology at Brigham and Women′s Hospital对来自福尔马林固定的、石蜡包埋的肿瘤样品的5μm厚的切片进行苏木精和伊红(H&E)染色。
对福尔马林固定的石蜡切片进行免疫组织化学分析。在二甲苯中对切片脱石蜡，然后在乙醇中进行连续再水化。对于需要抗原修复的抗体，按照厂商说明书使用抗原暴露溶液(antigen-unmaskingsolution)(Vector Laboratories)。在过氧化氢(0.3％-3％)中淬灭载玻片以阻断内源过氧化物酶活性，然后在自动缓冲器(FisherScientific)中洗涤。在室温下在5％正常血清中封闭载玻片1小时，然后在4℃下与稀释于封闭缓冲液中的一抗温育过夜。使用抗生物素蛋白生物素过氧化物酶复合物法(Vector)，使用苏木精对载玻片进行复染。将载玻片在乙醇中进行连续脱水，用二甲苯清洗，然后用Permount(Fisher)进行封片(mount)。以1∶100使用生物素化的DBA凝集素(Vector)。使用的抗体是总EGFR和phospho-EGFR Y1068(1∶50，Cell Signaling Technology)。使用TUNEL测定法(ApopTag试剂盒；Intergen，Inc.)通过计数阳性细胞来测量细胞凋亡。
Western印迹分析。
在含有完全蛋白酶抑制剂混合物(Complete ProteaseInhibitors Cocktail)和磷酸酶抑制剂混合物组I和II(PhosphataseInhibitors Cocktail Set I and II)(EMD Biosciences)的RIPA缓冲(Boston Bioproducts)中匀浆快速冷冻的肺组织样品。通过离心澄清肺裂解物，然后在1x终十二烷基硫酸钠(SDS)样品缓冲液(50mMTris(pH6.8)，10％甘油，0.715M β-巯基乙醇，2％SDS和0.01％溴酚蓝)中煮沸5分钟。然后通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离裂解物，将其转移至硝基纤维素膜，然后使用SuperSignal West PicoChemiluminescent Substrate(Pierce Biotechnology)利用抗体进行免疫印迹来检测。本研究中所使用的抗体为定向针对总EGFR、phospho-EGFR(pY1068)、总Akt、phospho-AKT(pS473)、总Erk1/2和phospho-ERK 1/2(pT202/pY204)(全部来自Cell Signaling)；和β-肌动蛋白(Santa Cruz Biotechnology，Inc.)的抗体。按照厂商推荐的条件使用抗体。
MRI和肿瘤体积的测量
通过鼻锥体(nose cone)使用混合在100％的氧气中的1.5-2％异氟烷(IsoFlo
Figure G2008800060081D00311
，Abbot Laboratories)麻醉动物。为了消除运动问题，给所有MRI研究提供心脏和呼吸门控。因为MR信号的采集与心脏和呼吸循环同步，因此在各心期(cardiac phase)和终末呼出期(end-expiratory phase)获得MR信号，从而使得运动伪差显著减小。
经最优化用于估量正常小鼠(29)中的肺实质和脉管的MRI方案适用于在4.7德斯拉(Biospec 47/40，Bruker BioSpin，Karlsruhe，Germany)下的操作。系统配备有具有30G/cm的最大功率梯度(powergradient)的屏蔽梯度系统和心脏-呼吸触发系统(cardiac-respiratory triggering system，BioTrig，BrukerBioSpin，Karlsruhe，Germany)。然后，将使动物俯卧放置，将用于心脏门控的电极(前垫和左后垫)和呼吸传感器置于它们身体上，头首先进入系统，使胸廓中心对准射频笼式线圈(内径3cm)的中心。为了成像区域的可重复定位，使用快速自旋回波程序(fast spin echosequence)(RARE：使用弛豫增强快速采集，TR/有效TE＝1000/28毫秒，带宽＝50kHz，视野＝30mm，矩阵＝128X128，层面厚度＝1mm，激励次数＝1)首先获得整个肺在横切面和冠状平面上的低分辨率多层图像(用作终末呼出期定位器)。此外，使用心脏-呼吸门控在包括整个肺的多层横截面和冠状平面中进行二维(2D)多层梯度回波成像。选择短于一个心动周期(范围在150至200毫秒内，平均178毫秒)的持续时间的脉冲重复时间(TR)，其中就每一单次脉搏的每一个图像填充一个k-空间线(k-space line)。使用最小回波时间(TE：1.8毫秒)以减少由于空气/骨和组织之间的干扰引起的可减少MR信号的易感性效应。其他扫描参数是：翻转角＝22°，矩阵大小＝256x256，视野(FOV)＝2.56cm2，薄片厚度＝1mm以及激发次数(NEX)＝4，提供100μm2的面内分辨率(in-plane resolution)。在各平面内，总扫描时间为大约6-7分钟，这取决于个体动物的心脏/呼吸率。在每一个MR图像上，手工分割标示肺肿瘤的区域，然后使用ImageJ(ver.1.33，National Institute of Health)进行测量以计算肿瘤体积。
参考文献
1.Ji，H.，Sharpless，N.E.，and Wong，K.K.2006.EGFR Target Therapy：View FromBiological Standpoint.Cell Cycle.5(18)：2072-2076.Epub 2006 Sep15.
2.Hynes，N.E.，and Lane，H.A.2005.ERBB receptors and cancer：the complexity oftargeted inhibitors.Nat.Rev.Cancer.5：341-354.
3.Arteaga，C.L.2003.ErbB-targeted therapeutic approaches in human cancer.Exp.Cell.Res.284：122-130.
4.Mendelsohn，J.，and Baselga，J.2000.The EGF receptor family as targets forcancer therapy.Oncogene.19：6550-6565.
5.Snyder，L.C.，Astsaturov，I.，and Weiner，L.M.2005.Overview of monoclonalantibodies and small molecules targeting the epidermal growth factor receptorpathway in colorectal cancer.Clin.Colorectal Cancer.5 Suppl 2：S71-80.
6.Herbst，R.S.2002.Targeted therapy in non-small-cell lung cancer.Oncology(Williston Park).16：19-24.
7.Groner，B.，Hartmann，C.，and Wels，W.2004.Therapeutic antibodies.Curr.Mol.Med.4：539-547
8.Haber，D.A.，et al.2005.Molecular targeted therapy of lung cancer：EGFRmutations and response to EGFR inhibitors.Cold Spring Harb Symp.Quant.Biol.70：419-426.
9.Park，K.，and Goto，K.2006.A review of the benefit-risk profile of gefitinib inAsian patients with advanced non-small-cell lung cancer.Curr.Med.Res.Opin.22：561-573.
10.Sakurada，A.，Shepherd，F.A.，and Tsao，M.S.2006.Epidermal growth factorreceptor tyrosine kinase inhibitors in lung cancer：impact of primary or secondarymutations.Clin.Lung Cancer.7 Suppl 4：S138-144.
11.Halatsch，M.E.，Schmidt，U.，Behnke-Mursch，J.，Unterberg，A.，and Wirtz，C.R.2006.Epidermal growth factor receptor inhibition for the treatment ofglioblastoma multiforme and other malignant brain tumours.Cancer Treat.Rev.32：74-89.
12.Ji，H.，et al.2006.Epidermal growth factor receptor variant III mutations in lungtumorigenesis and sensitivity to tyrosine kinase inhibitors.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.103：7817-7822.
13.Sok，J.C.，et al.2006.Mutant epidermal growth factor receptor (EGFRvIII)contributes to head and neck cancer growth and resistance to EGFR targeting.Clin.Cancer.Res.12：5064-5073.
14.Italiano，A.2006.Targeting the epidermal growth factor receptor in colorectalcancer：advances and controversies.Oncology.70：161-167.
15.Jungbluth，A.A.，et al.2003.A monoclonal antibody recognizing human cancerswith amplification/overexpression of the human epidermal growth factor receptor.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.100：639-644.
16.Luwor，R.B.，et al.2001.Monoclonal antibody 806 inhibits the growth of tumorxenografts expressing either the de2-7 or amplified epidermal growth.factorreceptor(EGFR)but not wild-type EGFR.Cancer Res.61：5355-5361.
17.Mishima，K.，et al.2001.Growth suppression of intracranial xenograftedglioblastomas overexpressing mutant epidermal growth factor receptors bysystemic administration of monoclonal antibody(mAb)806，a novel monoclonalantibody directed to the receptor.Cancer Res.61：5349-5354.
18.Johns，T.G.，et al.2004.Identification of the epitope for the epidermal growthfactor receptor-specific monoclonal antibody 806 reveals that it preferentiallyrecognizes an untethered form of the receptor.J.Biol.Chem.279：30375-30384.
19.Johns，T.G.，et al.2002.Novel monoclonal antibody specific for the de2-7epidermal growth factor receptor (EGFR)that also recognizes the EGFRexpressed in cells containing amplification of the EGFR gene.Int.J.Cancer.98：398-408.
20.Shigematsu，H.，and Gazdar，A.F.2006.Somatic mutations of epidermal growthfactor receptor signaling pathway in lung cancers.Int.J.Cancer.118：257-262.
21.Ji，H.，et al.2006.The impact of human EGFR kinase domain mutations on lungtumorigenesis and in vivo sensitivity to EGFR-targeted therapies.Cancer Cell.9：485-495.
22.Panousis，C.，et al.2005.Engineering and characterisation of chimericmonoclonal antibody 806(ch806)for targeted immunotherapy of tumoursexpressing de2-7 EGFR or amplified EGFR.Br.J.Cancer.92：1069-1077.
23.Politi，K.，et al.2006.Lung adenocarcinomas induced in mice by mutant EGFreceptors found in human lung cancers respond to a tyrosine kinase inhibitor or todown-regulation of the receptors.Genes.Dev.20：1496-1510.
24.Li，S.，etal.2005.Structural basis for inhibition of the epidermal growth factorreceptor by cetuximab.Cancer Cell.7：301-311.
25.Pedersen，M.W.，and Poulsen，H.S.2006.[Mutations in the epidermal growthfactor receptor：structure and biological function in human tumors].Ugeskr.Laeger.168：2354-2361.
26.Janne，P.A.，Engelman，J.A.，and Johnson，B.E.2005.Epidermal growth factorreceptor mutations in non-small-cell lung cancer：implications for treatment andtumor biology.J Clin.Oncol.23：3227-3234.
27.Kobayashi，S.，et al.2005.EGFR mutation and resistance of non-small-cell lungcancer to gefitinib.N.Engl.J.Med.352：786-792.
28.Kobayashi，S.，et al.2005.An alternative inhibitor overcomes resistance caused bya mutation of the epidermal growth factor receptor.Cancer Res.65：7096-7101.
29.Kubo，S.，et al.2006.Three-dimensional magnetic resonance microscopy ofpulmonary solitary tumors in transgenic mice.Magn.Reson.Med.56：698-703.
实施例2
806抗体在具有EGFR T790M突变的肺肿瘤中导致肿瘤的退缩
产生表达人EGFR次级突变T790M的小鼠。通过I.P.注射以每日一次0.5mg/剂将mAb806递送入具有肺肿瘤的小鼠，进行4周。如下面所描述的，在治疗的2和4周结束时对被治疗的小鼠进行系列MRI扫描。
Tet-op-hEGFR T790M-L858R/CCSP-rtTA小鼠群的产生
为了产生具有人EGFR T790M-L858R突变体的诱导型表达的小鼠，我们构建了4.7-kb DNA区段，其由四环素(tet)-操纵子的7个正向重复，随后EGFR T790M-L858R cDNA和？-珠蛋白polyA组成。将构建体注射入FVB/N胚泡，使用PCR策略筛选后代。鉴定15个Tet-op-hEGFRT790M-L858R创立者(founder)，然后将它们与CCSP-rtTA小鼠(显示等位基因特异性靶向逆四环素反式激活物蛋白(reversetetracycline trans-activator protein)(rtTA)在II型肺泡上皮细胞中的表达(Fisher GH等人(2001)Genes Dev 15(24)：3249-62)杂交来产生具有激活物和应答者转基因的诱导型双转基因小鼠群(Fisher GH等人(2001)Genes Dev 15(24)：3249-62；Perl AK，Tichelaar JW，and Whitsett JA.(2002)Transgenic Res 11(1)：21-9)。通过RT-PCR分析鉴定了4个受密切调控的hEGFRT790M-L858R(#17、#19、#24和#29)创立者，通过定量实时PCR测定来自个体创立者的拷贝数目(Ji H等人(2006)Cancer Cell9(6)：485-95)。
EGFR T790M-L858R在肺组织中在RNA水平上的受密切调控的表达
使用人EGFR特异性引物通过RT-PCR在RNA水平上估计EGFR突变转基因表达在肺隔室中的可诱导性。在8周的多西环素施用之前和之后以及8周的多西环素施用后3天的多西环素撤回后，收集各潜在的创立者的双转基因小鼠Tet-op-hEGFR T790M-L858R/CCSP-rtTA群的肺。未能从非转基因小鼠或未进行多西环素治疗的双转基因小鼠中检测到EGFR突变转录物，然而在8周的多西环系施用后其变得可容易地被检测到；通过在所有品系中进行3天的多西环素撤回完全消除了突变的EGFR的转录。为了进一步验证突变的EGFR转录物是可诱导的并且受多西环素的密切调控，对在多西环素施用和撤回的系列时间点上收集的来自创立者#19的肺样品进行使用上述相同的引物的RT-PCR和定量实时PCR。在1周的多西环素施用后观察到EGFR的表达，其表达在整个8周的施用期间保持在相当的水平；多西环素撤回足以阻止突变的EGFR的表达，在12周的多西环素撤回后未观察到转基因的表达。
EGFR T790M-L858R突变体的过表达驱动肺腺癌的发展，所述肺腺 癌在实质中具有细支气管肺泡特征和在气道中具有乳头状腺癌。
为了确定hEGFR突变体的过表达是否驱动肺肿瘤发生，将进行持续多西环素施用的双转基因hEGFR T790M-L858R/CCSP-rtTA小鼠经历程系列磁共振成像(MRI)，然后在不同的时间点杀死小鼠以进行肺的组织学检查。肿瘤只有在施用多西环素5至6周后才能通过MRI观察到，通过MRI确定的肿瘤体积在延长的多西环素治疗后增加。与未治疗的小鼠相反，在多西环素治疗2至3周后，早期损伤在肺的实质中开始发生。在4至5周后，典型的BAC出现。
在7至9周后，具有细支气管肺泡特征的侵入性腺癌出现，并且在多西环素治疗12周后成为占优势的组织学模式。在我们的小鼠模型中观察到肺实质腺癌在组织学上与之前描述的EGFR L858R小鼠模型的肺实质腺癌相似(Ji，H.，等人.(2006)Cancer Cell 9：485-495；Politi，K.，等人.(2006)Genes Dev.20：1496-1510)，并且也与在最初对厄洛替尼有反应的NSCLC患者的亚群中看到的肺实质腺癌相似。
除了实质腺癌以外，hEGFR T790M-L858R/CCSP-rtTA小鼠还发生支气管乳头状腺癌。在2至3周的连续多西环素施用后在细支气管中观察到早期乳头状瘤形成(papillary neoplasia)，然后在另外的6至8周内其发展成腺癌。所有4个创立者都显示相似的形态学特征和相似的肿瘤发生潜伏期。在所有4只本研究中鉴定的hEGFRT790M-L858R/CCSP-rtTA小鼠的创立者中发现支气管肿瘤，但其不存于所有我们的EGFR L858R小鼠中。偶然地，可在发生EGFRT790M-L858R驱动的肺肿瘤的小鼠但非具有EGFR L858R驱动的肿瘤的小鼠的淋巴结中观察到腺癌的转移灶。使用特定细胞标记支气管和实质肿瘤的IHC染色显示不同的分化模式。Prosurfactant蛋白C(SPC)是肺泡中II型肺细胞的独特的生物标记，而克拉拉细胞分泌蛋白(CCSP)对于细支气管上皮中的克拉拉细胞是特异性的。大多数实质肿瘤显示强烈的SPC染色，暗示着II型的肺细胞来源，如所预期的。相反地，支气管肿瘤对于SPC是阴性的。有趣地，只有支气管肿瘤细胞的小亚群对于CCSP是阳性的。这可能可通过克拉拉细胞起源，然后经历导致CCSP表达标记丢失的不良分化来解释。
hEGFR T790M-L858R突变体的表达对于实质和支气管腺癌的肿瘤 维持是重要的。
来自hEGFR T790M-L858R/CCSP-rtTA小鼠的支气管和实质肺腺癌被总EGFR和phospho-EGFR抗体阳性染色，这表明表达的EGFR突变体具有功能活性。在3天的多西环素撤回后，未观察到来自任一抗体的阳性信号，这表明两种类型的肿瘤由EGFR T790M-L858R驱动并且它们的存活依赖于EGFR T790M-L858R。在多西环素撤回后，我们还观察到末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP-生物素缺口末端标(TUNEL)测定的阳性染色增加，这表明细胞凋亡过程被触发。
与通过TUNEL染色表明的细胞凋亡一致，MRI结果证明EGFRT790M-L858R驱动的肺肿瘤在10天的多西环素撤回后完全退缩。来自通过MRI检查的相同小鼠的肺的显微镜分析显示大体上正常的肺组织学。在12周的多西环素撤回后，在其他具有肿瘤的小鼠的气道和实质中未发现肿瘤损伤。
为了更好地在蛋白质水平上定量突变的EGFR在肿瘤中的表达，我们在多西环素施用的不同时间使用来自双转基因小鼠的完整肺裂解物进行western印迹。虽然存在个体差异，但EGFR磷酸化受到多西环素的密切调控并且与肿瘤的存在同步，这验证了突变的EGFR信号传导在肿瘤维持中的重要作用，如在IHC染色和MRI中观察到的。因此，EGFR仍然是我们的新型小鼠肺癌模型的具有吸引力的治疗靶。
使用mAb806进行的对EGFR T790M-L858R驱动的肺肿瘤的治疗
使用mAb806对比使用西妥昔单抗进行的对EGFR T790M-L858R肺肿瘤的治疗的结果描述于图5中。将持续进行多西环素饮食超过8周的小鼠经历MRI以记录肿瘤负荷。通过I.P.注射每天一次进行4周以0.5mg的剂量将mAab806递送入具有肺肿瘤的小鼠。通过I.P.注射每天一次进行4周以1mg/剂对小鼠施用西妥昔单抗。在第0、2和4或5周使用MRI对小鼠成像，以确定肿瘤体积的减小。通过使用mAb806的治疗，肿瘤体积在第2周减小(超过20％)，在第4周减小更显著减少(超过30％)。虽然通过使用西妥昔单抗治疗2周时，肿瘤体积开始减小，但肿瘤体积在经过使用西妥昔单抗治疗5周后显著增加(在5周的西妥昔单抗治疗时观察到的肿瘤体积比在第0周的初始体积更大)。在治疗和MRI成像完成后，杀死小鼠以进行进一步的组织学和生物化学研究。对于所有治疗研究，同窝出生小鼠用作对照(未治疗)。
本发明可以以其他形式体现或以其他方式进行而不背离其精神和基本特征。因此本公开内容在所有方面被认为是示例说明而非限制性的，本发明的范围由所附权利要求指出，并且在等同的意义和范围内出现的所有变化意在包含在其中。
在整个本说明书中引用了不同的参考资料，其各自以其全文通过引用合并入本文。

Claims (21)

1.在哺乳动物中治疗酪氨酸激酶抑制剂抗性EGFR介导的疾病的方法，其中所述抗性EGFR介导的疾病是EGFR中次级突变从而产生突变的EGFR的结果，并且其中所述突变与EGFR vIII突变不同，该方法包括对所述哺乳动物施用有效量的、能够结合并抑制突变的EGFR的抗EGFR抗体。
2.权利要求1的方法，其中次级EGFR突变是EGFR酪氨酸激酶结构域突变。
3.权利要求2的方法，其中酪氨酸激酶结构域突变是T790M。
4.权利要求1的方法，其中抗EGFR抗体是mAb806抗体或其活性片段。
5.权利要求4的方法，其中mAb806是重组抗体或人源化抗体。
6.权利要求1的方法，其中抗EGFR抗体选自ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。
7.权利要求1的方法，其中EGFR介导的疾病是癌症并且选自成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖-泌尿癌和膀胱癌。
8.权利要求7的方法，其中癌症是肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。
9.用于在癌症患者中降低EGFR介导的肿瘤生长的方法，其中所述癌症患者之前已用一种或多种酪氨酸激酶抑制剂进行治疗并且已发生了复发性疾病和肿瘤生长，该方法包括对所述患者施用有效量的抗EGFR抗体以使复发性疾病和肿瘤生长被抑制和降低。
10.权利要求9的方法，其中抗EGFR抗体是mAb806抗体或其活性片段。
11.权利要求10的方法，其中mAb806是重组抗体或人源化抗体。
12.权利要求9的方法，其中抗EGFR抗体选自ABX-EGF(帕尼单抗)、DH8.3、L8A4和/或其活性片段。
13.权利要求9的方法，其中癌症患者已经发生了为EGFR酪氨酸激酶结构域突变的次级EGFR突变。
14.权利要求13的方法，其中酪氨酸激酶结构域突变是T790M。
15.在哺乳动物中治疗EGFR介导的癌症的方法，该方法包括对所述哺乳动物施用酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR抗体，其中在使用酪氨酸激酶抑制剂作为二线疗法的治疗后施用所述抗EGFR抗体来抑制抗酪氨酸激酶抑制剂的潜在的次级突变的EGFR。
16.权利要求15的方法，其中EGFR介导的癌症选自成胶质细胞瘤、头颈癌、胰腺癌、肺癌、神经系统的癌症、胃肠癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌、视网膜癌、皮肤癌、肝癌、生殖-泌尿癌和膀胱癌。
17.权利要求16的方法，其中癌症是肺腺癌、肺鳞状细胞癌或非小细胞肺癌。
18.权利要求15的方法，其中酪氨酸激酶抑制剂是可逆酪氨酸激酶抑制剂。
19.权利要求18的方法，其中可逆酪氨酸激酶抑制剂是苯胺喹唑啉化合物和选自吉非替尼、厄洛替尼、AG1478、ST1571和SU-6668。
20.权利要求15的方法，其中酪氨酸激酶抑制剂是不可逆酪氨酸激酶抑制剂。
21.权利要求20的方法，其中不可逆酪氨酸激酶抑制剂选自EKB-569、EKI-569、HKI-272、HKI-357和BIBW 2992。
CN200880006008A 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途 Pending CN101711284A (zh)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310593708.8A CN104013956B (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
CN201310593730.2A CN104043123B (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
CN201910635232.7A CN110613845A (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US89738307P 2007-01-25 2007-01-25
US60/897,383 2007-01-25
PCT/US2008/001024 WO2008091701A2 (en) 2007-01-25 2008-01-24 Use of anti-egfr antibodies in treatment of egfr mutant mediated disease

Related Child Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910635232.7A Division CN110613845A (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
CN201310593730.2A Division CN104043123B (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
CN201310593708.8A Division CN104013956B (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101711284A true CN101711284A (zh) 2010-05-19

Family

ID=39645091

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310593708.8A Active CN104013956B (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
CN201910635232.7A Pending CN110613845A (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
CN201310593730.2A Active CN104043123B (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
CN200880006008A Pending CN101711284A (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310593708.8A Active CN104013956B (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
CN201910635232.7A Pending CN110613845A (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
CN201310593730.2A Active CN104043123B (zh) 2007-01-25 2008-01-24 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途

Country Status (8)

Country Link
US (1) US9090693B2 (zh)
EP (1) EP2126127B1 (zh)
JP (1) JP5276017B2 (zh)
CN (4) CN104013956B (zh)
CA (1) CA2676244C (zh)
ES (1) ES2609094T3 (zh)
MX (2) MX2009007987A (zh)
WO (1) WO2008091701A2 (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102735844A (zh) * 2011-04-11 2012-10-17 中国医学科学院肿瘤研究所 蛋白组合物及其在制备肺癌诊断试剂盒中的应用
CN103626871A (zh) * 2013-04-19 2014-03-12 武汉纽斯特生物技术有限公司 特异性识别egfr突变蛋白的单克隆抗体、制备方法及其应用
CN103857340A (zh) * 2011-10-10 2014-06-11 莫纳什大学 心脏成像方法
CN106255510A (zh) * 2014-03-05 2016-12-21 百时美施贵宝公司 使用抗pd‑1抗体与另一抗癌剂的组合治疗肾癌
CN106459200A (zh) * 2014-03-21 2017-02-22 艾伯维公司 抗‑egfr抗体及抗体药物偶联物
CN107889463A (zh) * 2015-04-24 2018-04-06 梅里麦克制药股份有限公司 用三种完全人类单克隆抗egfr抗体的组合治疗具有表皮生长因子受体（egfr）的胞外结构域的突变的患者的方法

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2163256T3 (en) 2001-05-11 2015-12-07 Ludwig Inst For Cancer Res Ltd Specific binding proteins and use thereof
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
US7767792B2 (en) 2004-02-20 2010-08-03 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Antibodies to EGF receptor epitope peptides
CN113952338A (zh) 2005-02-03 2022-01-21 综合医院公司 治疗吉非替尼耐药性癌症的方法
KR101354828B1 (ko) 2005-11-04 2014-02-18 와이어쓰 엘엘씨 ｍＴＯＲ 저해자, 헤르셉틴, 및/또는 ＨＫＩ-272의항신생물성 조합
US8404697B2 (en) 2005-11-11 2013-03-26 Boehringer Ingelheim International Gmbh Quinazoline derivatives for the treatment of cancer diseases
CN104013956B (zh) 2007-01-25 2018-12-18 达娜-法勃肿瘤研究所公司 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
MX2009009782A (es) 2007-03-15 2010-09-10 Ludwig Inst Cancer Res Metodo de tratamiento que utiliza anticuerpos egfr e inhibidores de src y formulaciones relacionadas.
EP2188311B1 (en) 2007-08-14 2016-10-05 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Monoclonal antibody 175 targeting the egf receptor and derivatives and uses thereof
US8022216B2 (en) 2007-10-17 2011-09-20 Wyeth Llc Maleate salts of (E)-N-{4-[3-chloro-4-(2-pyridinylmethoxy)anilino]-3-cyano-7-ethoxy-6-quinolinyl}-4-(dimethylamino)-2-butenamide and crystalline forms thereof
ES2431355T3 (es) 2008-06-17 2013-11-26 Wyeth Llc Combinaciones antineoplásicas que contienen HKI-272 y vinorelbina
LT2326329T (lt) 2008-08-04 2017-05-25 Wyeth Llc 4-anilin-3-cianochinolinų ir kapecitabino antinavikiniai deriniai
JP5992325B2 (ja) 2009-04-06 2016-09-14 ワイス・エルエルシー 乳癌のための、ネラチニブを活用する治療計画
DK2451445T3 (da) 2009-07-06 2019-06-24 Boehringer Ingelheim Int Fremgangsmåde til at tørre bibw2992, dets salte og faste farmaceutiske formuleringer omfattende denne aktive ingrediens
KR101477762B1 (ko) * 2009-09-22 2014-12-30 상하이 캔서 인스티튜트 특이성 결합 단백질 및 용도
WO2011156617A2 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Aveo Pharmaceuticals, Inc. Anti-egfr antibodies
AU2011320314B2 (en) 2010-10-29 2015-08-06 Immunogen, Inc. Novel EGFR-binding molecules and immunoconjugates thereof
AU2011320318B9 (en) 2010-10-29 2015-11-19 Immunogen, Inc. Non-antagonistic EGFR-binding molecules and immunoconjugates thereof
US8828391B2 (en) * 2011-05-17 2014-09-09 Boehringer Ingelheim International Gmbh Method for EGFR directed combination treatment of non-small cell lung cancer
EP2554551A1 (en) * 2011-08-03 2013-02-06 Fundacio Institut mar d'Investigacions Médiques (IMIM) Mutations in the epidermal growth factor receptor gene
KR20140105765A (ko) * 2011-11-21 2014-09-02 이뮤노젠 아이엔씨 EGfr 항체 세포독성제 접합체에 의한 EGfr 치료에 내성을 나타내는 종양의 치료 방법
SI2838998T1 (en) * 2012-04-18 2018-04-30 Cell Signaling Technology, Inc. EGFR AND ROS1 PRI CRAK
US20130343996A1 (en) * 2012-04-25 2013-12-26 Rutgers, The State University Of New Jersey Graphite-coated magnetic nanoparticles
EP2883884A4 (en) * 2012-08-10 2016-08-10 Kanagawa Prefectural Hospital Organization ANTIGENIC PEPTIDE FROM THE T790M PICTURE MUTATION SEQUENCE OF AN EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR
US11913065B2 (en) 2012-09-04 2024-02-27 Guardent Health, Inc. Systems and methods to detect rare mutations and copy number variation
US10041127B2 (en) 2012-09-04 2018-08-07 Guardant Health, Inc. Systems and methods to detect rare mutations and copy number variation
US20160040229A1 (en) 2013-08-16 2016-02-11 Guardant Health, Inc. Systems and methods to detect rare mutations and copy number variation
US10876152B2 (en) 2012-09-04 2020-12-29 Guardant Health, Inc. Systems and methods to detect rare mutations and copy number variation
JP6571665B2 (ja) 2013-12-28 2019-09-04 ガーダント ヘルス， インコーポレイテッド 遺伝的バリアントを検出するための方法およびシステム
US9242965B2 (en) 2013-12-31 2016-01-26 Boehringer Ingelheim International Gmbh Process for the manufacture of (E)-4-N,N-dialkylamino crotonic acid in HX salt form and use thereof for synthesis of EGFR tyrosine kinase inhibitors
WO2015175705A1 (en) * 2014-05-13 2015-11-19 Board Of Regents, The University Of Texas System Gene mutations and copy number alterations of egfr, kras and met
CN104623660B (zh) * 2015-01-21 2017-05-17 广州珂纳偲生物技术有限公司 掺杂铜的金纳米棒在制备抗肿瘤药物中的应用
CN117174167A (zh) 2015-12-17 2023-12-05 夸登特健康公司 通过分析无细胞dna确定肿瘤基因拷贝数的方法
JP2019515035A (ja) * 2016-04-27 2019-06-06 ミラ ディーエックス， インコーポレイテッド Ｋｒａｓバリアントがん患者の免疫ベースの処置
CN107188957A (zh) * 2017-07-06 2017-09-22 江苏迈健生物科技发展股份有限公司 抗原肽t790m‑1及其在制备治疗非小细胞肺癌的药物中的应用
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CN112941177A (zh) * 2021-02-03 2021-06-11 复旦大学附属金山医院(上海市金山区核化伤害应急救治中心、上海市金山区眼病防治所) Cflar作为诊断标志物在构建肺鳞癌预后预测模型中的应用

Family Cites Families (255)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CU22545A1 (es) 1994-11-18 1999-03-31 Centro Inmunologia Molecular Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
US4162940A (en) 1977-03-31 1979-07-31 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing Antibiotic C-15003 by culturing nocardia
US4169888A (en) 1977-10-17 1979-10-02 The Upjohn Company Composition of matter and process
US4137230A (en) 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4265814A (en) 1978-03-24 1981-05-05 Takeda Chemical Industries Matansinol 3-n-hexadecanoate
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
JPS5562090A (en) 1978-10-27 1980-05-10 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55164687A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS5566585A (en) 1978-11-14 1980-05-20 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4263294A (en) 1978-11-20 1981-04-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Maytansinoids, pharmaceutical compositions thereof and method of use thereof
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS55164685A (en) 1979-06-08 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55164686A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4309428A (en) 1979-07-30 1982-01-05 Takeda Chemical Industries, Ltd. Maytansinoids
JPS5622790A (en) 1979-07-31 1981-03-03 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
US4342566A (en) 1980-02-22 1982-08-03 Scripps Clinic & Research Foundation Solid phase anti-C3 assay for detection of immune complexes
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4413132A (en) 1980-11-18 1983-11-01 The Upjohn Company Antibiotic CC-1065 indoline intermediates
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4671958A (en) 1982-03-09 1987-06-09 Cytogen Corporation Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites
US4867973A (en) 1984-08-31 1989-09-19 Cytogen Corporation Antibody-therapeutic agent conjugates
FR2523445A1 (fr) 1982-03-17 1983-09-23 Sanofi Sa Nouveaux conjugues associant, par liaison covalente, une enzyme et un anticorps, et associations medicamenteuses utilisant lesdits conjugues
US4418064A (en) 1982-09-29 1983-11-29 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids: treflorine, trenudine, and N-methyltrenudone
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
ATE97498T1 (de) 1984-01-30 1993-12-15 Imp Cancer Res Tech Verbesserungen an wachstumsfaktoren.
US4943533A (en) 1984-03-01 1990-07-24 The Regents Of The University Of California Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5851526A (en) 1985-04-19 1998-12-22 Ludwig Institute For Cancer Research Methods of treating colon cancer utilizing tumor-specific antibodies
US5776093A (en) 1985-07-05 1998-07-07 Immunomedics, Inc. Method for imaging and treating organs and tissues
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4997913A (en) 1986-06-30 1991-03-05 Oncogen pH-sensitive immunoconjugates and methods for their use in tumor therapy
IN165717B (zh) 1986-08-07 1989-12-23 Battelle Memorial Institute
US5034223A (en) 1986-10-09 1991-07-23 Neorx Corporation Methods for improved targeting of antibody, antibody fragments, hormones and other targeting agents, and conjugates thereof
USRE38008E1 (en) 1986-10-09 2003-02-25 Neorx Corporation Methods for improved targeting of antibody, antibody fragments, hormones and other targeting agents, and conjugates thereof
US5047324A (en) 1986-12-09 1991-09-10 Miles Inc. Substantially pure enzyme-antibody conjugate preparations
US5332837A (en) 1986-12-19 1994-07-26 The Upjohn Company CC-1065 analogs
US4952394A (en) 1987-11-23 1990-08-28 Bristol-Myers Company Drug-monoclonal antibody conjugates
US5563250A (en) 1987-12-02 1996-10-08 Neorx Corporation Cleavable conjugates for the delivery and release of agents in native form
WO1989006692A1 (en) 1988-01-12 1989-07-27 Genentech, Inc. Method of treating tumor cells by inhibiting growth factor receptor function
US4937183A (en) 1988-02-03 1990-06-26 Cytogen Corporation Method for the preparation of antibody-fragment conjugates
IL106992A (en) 1988-02-11 1994-06-24 Bristol Myers Squibb Co Noble hydrazonic history of anthracycline and methods for their preparation
EP0329184A3 (en) 1988-02-19 1990-05-23 Neorx Corporation Antimers and antimeric conjugation
US6010902A (en) 1988-04-04 2000-01-04 Bristol-Meyers Squibb Company Antibody heteroconjugates and bispecific antibodies for use in regulation of lymphocyte activity
US5028697A (en) 1988-08-08 1991-07-02 Eli Lilly And Company Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized methotrexate analogs via simple organic linkers
KR0137959B1 (ko) 1988-09-12 1998-05-15 로버트 에이. 아미테이지 2개의 cpi 소단위를 갖는 신규한 cc-1065 유사화합물
AU4128089A (en) 1988-09-15 1990-03-22 Rorer International (Overseas) Inc. Monoclonal antibodies specific to human epidermal growth factor receptor and therapeutic methods employing same
US5171563A (en) 1988-09-30 1992-12-15 Neorx Corporation Cleavable linkers for the reduction of non-target organ retention of immunoconjugates
JPH04501266A (ja) 1988-10-12 1992-03-05 セントコアー，インコーポレーテッド ヨード―１２５で標識された放射線療法用接合体
US5217713A (en) 1988-12-27 1993-06-08 Takeda Chemical Industries, Ltd. Cytotoxic bispecific monoclonal antibody, its production and use
CA2006408A1 (en) 1988-12-27 1990-06-27 Susumu Iwasa Bispecific monoclonal antibody, its production and use
US5013547A (en) 1989-02-07 1991-05-07 Erbamont, Inc. Anticancer drug - antibody conjugates and method for preparing same
US6020145A (en) 1989-06-30 2000-02-01 Bristol-Myers Squibb Company Methods for determining the presence of carcinoma using the antigen binding region of monoclonal antibody BR96
US5980896A (en) 1989-06-30 1999-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies reactive with human carcinomas
US5332567A (en) 1989-08-24 1994-07-26 Immunomedics Detection and treatment of infections with immunoconjugates
JP2975679B2 (ja) 1989-09-08 1999-11-10 ザ・ジョーンズ・ホプキンス・ユニバーシティ ヒト神経膠腫のｅｇｆ受容体遺伝子の構造変化
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5459061A (en) 1990-01-26 1995-10-17 W. Alton Jones Cell Science Center, Inc. Hybridomas producing monoclonal antibodies which specifically bind to continuous epitope on the human EGF receptor and compete with EGF for binding to the EGF receptor
AU656518B2 (en) 1990-02-20 1995-02-09 Coulter Corporation Improved antibody-enzyme direct conjugates and method of making same
WO1991016350A1 (en) 1990-04-20 1991-10-31 Ludwig Institute For Cancer Research Aberrant, epidermal growth factor receptor dna, rna and protein forms and method
KR100208957B1 (ko) 1990-04-25 1999-07-15 로렌스 티. 마이젠헬더 신규한 cc-1065 유사체
US6248332B1 (en) 1990-10-05 2001-06-19 Medarex, Inc. Targeted immunostimulation with bispecific reagents
JPH04334377A (ja) 1990-12-31 1992-11-20 Akzo Nv 酸−不安定性リンカー分子
DK0531472T3 (da) 1991-03-06 2003-12-01 Merck Patent Gmbh Humaniserede monoklonale antistoffer
ES2134212T3 (es) 1991-04-25 1999-10-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo humano reconstituido contra el receptor de la interleuquina 6 humano.
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
US6797492B2 (en) 1991-05-17 2004-09-28 Merck & Co., Inc. Method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
DE69233528T2 (de) 1991-11-25 2006-03-16 Enzon, Inc. Verfahren zur Herstellung von multivalenten antigenbindenden Proteinen
US5869619A (en) 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
ES2149768T3 (es) 1992-03-25 2000-11-16 Immunogen Inc Conjugados de agentes enlazantes de celulas derivados de cc-1065.
ATE188874T1 (de) 1992-08-18 2000-02-15 Centro Inmunologia Molecular Monoklonale antikörper gegen den epidermalen wachstumsfaktorrezeptor, zellen und verfahren zur ihrer herstellung und sie erhaltende zusammensetzungen
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
ATE199392T1 (de) 1992-12-04 2001-03-15 Medical Res Council Multivalente und multispezifische bindungsproteine, deren herstellung und verwendung
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5674977A (en) 1993-02-05 1997-10-07 The Ontario Cancer Institute Branched synthetic peptide conjugate
US5556623A (en) 1993-03-30 1996-09-17 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5443953A (en) 1993-12-08 1995-08-22 Immunomedics, Inc. Preparation and use of immunoconjugates
DE69527050T2 (de) 1994-03-07 2003-02-13 Medarex Inc Bispezifische moleküle mit klinischer verwendbarkeit
ES2191702T3 (es) 1994-03-17 2003-09-16 Merck Patent Gmbh Fv monocatenarios anti-egfr y anticuerpos anti-egfr.
CU22615A1 (es) 1994-06-30 2000-02-10 Centro Inmunologia Molecular Procedimiento de obtención de anticuerpos monoclonales murinos menos inmunogénicos. anticuerpos monoclonales obtenidos
US5612474A (en) 1994-06-30 1997-03-18 Eli Lilly And Company Acid labile immunoconjugate intermediates
US5911995A (en) 1994-08-19 1999-06-15 Regents Of The University Of Minnesota EGF-genistein conjugates for the treatment of cancer
ATE262586T1 (de) 1994-11-28 2004-04-15 Univ Jefferson Fusion junction typ iii mutant egf rezeptor peptid-tumorvakzin
US6410690B1 (en) 1995-06-07 2002-06-25 Medarex, Inc. Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies
US7060808B1 (en) 1995-06-07 2006-06-13 Imclone Systems Incorporated Humanized anti-EGF receptor monoclonal antibody
US5709156A (en) * 1995-06-07 1998-01-20 Krueger International, Inc. Flip-up electrical and communications device for use in combination with a worksurface
WO1996040210A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Imclone Systems Incorporated Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth of tumors
WO1996040662A2 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Cellpro, Incorporated Aminooxy-containing linker compounds and their application in conjugates
US6548530B1 (en) 1995-10-03 2003-04-15 The Scripps Research Institute CBI analogs of CC-1065 and the duocarmycins
US6699715B1 (en) 1995-11-30 2004-03-02 Bristol-Myers Squibb Co. Modified sFv molecules which mediate adhesion between cells and uses thereof
JP2000503639A (ja) 1995-12-22 2000-03-28 ブリストル―マイヤーズ スクイブ カンパニー 分枝ヒドラゾンのリンカー類
US5760041A (en) 1996-02-05 1998-06-02 American Cyanamid Company 4-aminoquinazoline EGFR Inhibitors
US5708156A (en) 1996-05-31 1998-01-13 Ilekis; John V. Epidermal growth factor receptor-like gene product and its uses
CA2255703A1 (en) 1996-05-31 1997-12-04 Dale L. Boger Analogs of cc-1065 and the duocarmycins
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
US5942602A (en) 1997-02-13 1999-08-24 Schering Aktiengessellschaft Growth factor receptor antibodies
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US20020173629A1 (en) 1997-05-05 2002-11-21 Aya Jakobovits Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
ATE271041T1 (de) 1997-05-22 2004-07-15 Scripps Research Inst Analoga von duocarmycin and cc-1065
IL135616A0 (en) 1997-10-14 2001-05-20 Scripps Research Inst Iso-cbi and iso-ci analogs of cc-1065 and the duocarmycins
CA2313231A1 (en) 1997-12-08 1999-06-17 The Scripps Research Institute Synthesis of cc-1065/duocarmycin analogs
US6417168B1 (en) 1998-03-04 2002-07-09 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods of treating tumors
US20030224001A1 (en) 1998-03-19 2003-12-04 Goldstein Neil I. Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth of tumors
CA2327505A1 (en) 1998-04-28 1999-11-04 Smithkline Beecham Corporation Monoclonal antibodies with reduced immunogenicity
US6962702B2 (en) 1998-06-22 2005-11-08 Immunomedics Inc. Production and use of novel peptide-based agents for use with bi-specific antibodies
US20030215387A1 (en) 1998-09-04 2003-11-20 Peter Harrison Bifunctional antibodies and their use in targeting anti-tumour agents
EE200100603A (et) 1999-05-14 2003-02-17 Imclone Systems Incorporated Inimese refraktaarsete kasvajate ravi epidermaalse kasvufaktori retseptori antagonistidega
US6946129B1 (en) 1999-06-08 2005-09-20 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD40 antibody and uses thereof
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
EP2266607A3 (en) 1999-10-01 2011-04-20 Immunogen, Inc. Immunoconjugates for treating cancer
US7303749B1 (en) 1999-10-01 2007-12-04 Immunogen Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
AU765588C (en) 1999-11-24 2004-12-16 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use
PT1242438E (pt) 1999-12-29 2007-02-28 Immunogen Inc Agentes citotóxicos compreendendo dixorrubicinas e daunorrubicinas modificadas e seu uso terapêutico
KR100812658B1 (ko) 2000-02-25 2008-03-13 더 거번먼트 오브 더 유나이티드 스테이츠, 에즈 레프리젠티드 바이 더 세크러테리 오브 더 디파트먼트 오브 헬스 앤드 휴먼 서비스즈 향상된 세포독성 및 수율의 항-이지에프알브이 3,에스씨에프브이에스, 이에 기초한 면역독소, 및 이의 이용방법
EP1276771A4 (en) 2000-03-10 2003-06-04 Thomas Jefferson Univarsity SENSITIVE DETECTION OF EGFR MUTANTS AND GAME TYPE BY SPECIFIC ELISA DETECTION IN ANY BIOLOGICAL SAMPLE
US7097840B2 (en) 2000-03-16 2006-08-29 Genentech, Inc. Methods of treatment using anti-ErbB antibody-maytansinoid conjugates
AU2001247616B2 (en) 2000-04-11 2007-06-14 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
US7214685B2 (en) 2000-05-02 2007-05-08 Lutz F. Tietze Prodrugs for a selective cancer therapy
HUP0302332A3 (en) 2000-05-19 2010-10-28 Genetech Gene detection method for improving the likelihood of an effective response to an erbb antagoist cancer therapy
AUPQ841800A0 (en) 2000-06-28 2000-07-20 Biomolecular Research Institute Limited Truncated egf receptor
CA2418083A1 (en) 2000-08-09 2002-02-14 Imclone Systems Incorporated Treatment of hyperproliferative diseases with epidermal growth factor receptor antagonists
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
AR030612A1 (es) 2000-09-12 2003-08-27 Smithkline Beecham Corp Procedimiento e intermedios
JP5010089B2 (ja) 2000-09-19 2012-08-29 スピロジェン リミテッド Ｃｃ−１０６５およびデュオカルマイシンのアキラルアナログの組成物およびその使用方法
DE10048417A1 (de) 2000-09-29 2002-04-11 Roche Diagnostics Gmbh Verbindungen mit verzweigtem Linker
WO2002066058A1 (en) 2001-02-19 2002-08-29 Merck Patent Gmbh Modified anti-egfr antibodies with reduced immunogenicity
US20020156274A1 (en) 2001-03-16 2002-10-24 Terfloth Gerald J. Process for preparing maytansinol
US20080008704A1 (en) 2001-03-16 2008-01-10 Mark Rubin Methods of treating colorectal cancer with anti-epidermal growth factor antibodies
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
US7256257B2 (en) 2001-04-30 2007-08-14 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
EP1385546A1 (en) 2001-05-08 2004-02-04 MERCK PATENT GmbH Combination therapy using anti-egfr antibodies and anti-hormonal agents
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
DK2163256T3 (en) 2001-05-11 2015-12-07 Ludwig Inst For Cancer Res Ltd Specific binding proteins and use thereof
NZ529788A (en) 2001-05-31 2003-12-19 Medarex Inc Cytotoxins, prodrugs, linkers and stabilizers useful therefor
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US7595378B2 (en) 2001-06-13 2009-09-29 Genmab A/S Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor (EGFR)
AU2002345673B2 (en) 2001-06-13 2007-04-26 Genmab A/S Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor (EGFR)
US20050107595A1 (en) 2001-06-20 2005-05-19 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US7803915B2 (en) 2001-06-20 2010-09-28 Genentech, Inc. Antibody compositions for the diagnosis and treatment of tumor
JP2005508887A (ja) 2001-08-03 2005-04-07 コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼイション Ｅｇｆ受容体の結晶構造に基づいたスクリーニング方法
US20030109682A1 (en) 2001-09-07 2003-06-12 Daniel Santi Maytansines and maytansine conjugates
JP2005502703A (ja) 2001-09-07 2005-01-27 ザ スクリプス リサーチ インスティテュート Ｃｃ−１０６５およびデュオカルマイシンのｃｂｉ類似体
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
US20060084141A1 (en) 2001-11-21 2006-04-20 Floss Heinz G Biosynthetic gene cluster for the maytansinoid antitumor agent ansamitocin
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
NZ533657A (en) 2002-01-03 2008-01-31 Smithkline Beecham Corp Methods for the preparation of immunoconjugates, in particular maytansinoids conjugated to a monoclonal antibody
US6790954B2 (en) 2002-01-29 2004-09-14 Immunogen, Inc. Mutant Actinosynnema pretiosum strain with increased maytansinoid production
JP2006500905A (ja) 2002-02-13 2006-01-12 ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサー リサーチ ヒト化ｇｍ−ｃｓｆ抗体
EP1490109A4 (en) 2002-03-19 2006-04-19 Penn State Res Found EGFR LIGANDS AND APPLICATION PROCEDURES
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
US6534660B1 (en) 2002-04-05 2003-03-18 Immunogen, Inc. CC-1065 analog synthesis
US20050152913A1 (en) 2002-05-13 2005-07-14 Eldridge Ann M. Process for preapring maytansinol
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
WO2003099205A2 (en) 2002-05-20 2003-12-04 Abgenix, Inc. Treatment of renal carcinoma using antibodies against the egfr
SI1517921T1 (sl) 2002-06-28 2006-10-31 Domantis Ltd Dvojno-specificni ligandi z zvisano serumsko razpolovno dobo
ES2544527T3 (es) 2002-07-31 2015-09-01 Seattle Genetics, Inc. Conjugados de fármacos y su uso para tratar el cáncer, una enfermedad autoinmune o una enfermedad infecciosa
US7390898B2 (en) 2002-08-02 2008-06-24 Immunogen Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
BR0313197A (pt) 2002-08-02 2005-08-09 Immunogen Inc Agentes citotóxicos contendo potentes taxanos e seu uso terapêutico
ATE499116T1 (de) 2002-08-16 2011-03-15 Immunogen Inc Vernetzer mit hoher reaktivität und löslichkeit und ihre verwendung bei der herstellung von konjugaten für die gezielte abgabe von kleinmolekularen arzneimitteln
JP2006510735A (ja) 2002-08-19 2006-03-30 ジェネンテック・インコーポレーテッド 腫瘍の診断と治療のための組成物と方法
RU2354402C2 (ru) 2002-10-10 2009-05-10 Мерк Патент Гмбх ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, НАПРАВЛЕННЫЕ НА РЕЦЕПТОРЫ ErbB1
JP2006507322A (ja) 2002-11-14 2006-03-02 シンタルガ・ビーブイ 多重自己脱離放出スペーサーとして構築されたプロドラッグ
US20040147428A1 (en) 2002-11-15 2004-07-29 Pluenneke John D. Methods of treatment using an inhibitor of epidermal growth factor receptor
US20040142744A1 (en) * 2003-01-08 2004-07-22 Acres Gaming Incorporated Mobile data access
US20040202666A1 (en) 2003-01-24 2004-10-14 Immunomedics, Inc. Anti-cancer anthracycline drug-antibody conjugates
EP1622941A2 (en) 2003-03-20 2006-02-08 ImClone Systems Incorporated Method of producing an antibody to epidermal growth factor receptor
CA2450289A1 (en) 2003-03-20 2005-05-19 Imclone Systems Incorporated Method of producing an antibody to epidermal growth factor receptor
US7432088B2 (en) 2003-05-08 2008-10-07 Immunogen Inc. Methods for the production of ansamitocins
WO2004101767A2 (en) 2003-05-13 2004-11-25 The Scripps Research Institute Cbi analogues of the duocarmycins and cc-1065
CA2930485C (en) 2003-05-14 2018-04-10 Immunogen, Inc. Maytansinoid-antibody conjugate compositions
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
CN102675462A (zh) 2003-06-27 2012-09-19 艾默根佛蒙特有限公司 针对表皮生长因子受体的缺失突变体的抗体及其使用
US8101720B2 (en) 2004-10-21 2012-01-24 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions and substitutions
ES2605443T3 (es) 2003-11-06 2017-03-14 Seattle Genetics, Inc. Conjugados de auristatina con anticuerpos anti-HER2 o anti-CD22 y su uso en terapia
US20050142133A1 (en) 2003-12-03 2005-06-30 Xencor, Inc. Optimized proteins that target the epidermal growth factor receptor
US20050227324A1 (en) 2003-12-19 2005-10-13 Genentech, Inc. Monovalent antibody fragments useful as therapeutics
US20050214310A1 (en) 2004-01-23 2005-09-29 Seattle Genetics, Inc. Melphalan prodrugs
US7767792B2 (en) * 2004-02-20 2010-08-03 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Antibodies to EGF receptor epitope peptides
WO2005082023A2 (en) 2004-02-23 2005-09-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
EP1725586B1 (en) 2004-03-02 2015-01-14 Seattle Genetics, Inc. Partially loaded antibodies and methods of their conjugation
TW200533339A (en) 2004-03-16 2005-10-16 Bristol Myers Squibb Co Therapeutic synergy of anti-cancer compounds
AU2005227326B2 (en) 2004-03-24 2009-12-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the Fc region
CN101501211A (zh) 2004-03-31 2009-08-05 综合医院公司 测定癌症对表皮生长因子受体靶向性治疗反应性的方法
WO2005099754A2 (en) 2004-04-14 2005-10-27 The Ohio State University Research Foundation Maytansinoid analogs as antitumor agents
CA2564076C (en) 2004-05-19 2014-02-18 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
CN102973947A (zh) 2004-06-01 2013-03-20 健泰科生物技术公司 抗体-药物偶联物和方法
AU2005250484B2 (en) * 2004-06-04 2011-08-11 Genentech, Inc. EGFR mutations
US7521541B2 (en) 2004-09-23 2009-04-21 Genetech Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
CA2586909A1 (en) 2004-11-12 2006-12-14 Seattle Genetics, Inc. Auristatins having an aminobenzoic acid unit at the n terminus
WO2006065533A2 (en) 2004-11-29 2006-06-22 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
US20070134243A1 (en) 2004-12-01 2007-06-14 Gazzard Lewis J Antibody drug conjugates and methods
AU2005314127A1 (en) * 2004-12-07 2006-06-15 Genentech, Inc. Selecting patients for therapy with a HER inhibitor
EP1669358A1 (en) 2004-12-07 2006-06-14 Aventis Pharma S.A. Cytotoxic agents comprising new taxanes
EP1688415A1 (en) 2004-12-07 2006-08-09 Aventis Pharma S.A. Cytotoxic agents comprising new C-2 modified taxanes
US7301019B2 (en) 2005-01-21 2007-11-27 Immunogen, Inc. Method for the preparation of maytansinoid esters
CN100342035C (zh) * 2005-01-28 2007-10-10 浙江大学 非吸烟者肺腺癌中表皮生长因子受体突变的检测方法
AU2006213662B2 (en) 2005-02-11 2010-08-05 Immunogen, Inc. Process for preparing stable drug conjugates
KR20070106029A (ko) * 2005-02-24 2007-10-31 암젠 인코포레이티드 상피세포 성장 인자 수용체 돌연변이
EP1869220A2 (en) 2005-04-01 2007-12-26 Amgen, Inc. Epidermal growth factor receptor gene copy number
US7714016B2 (en) 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
US8871720B2 (en) 2005-07-07 2014-10-28 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the C-terminus
EP1917020B1 (en) 2005-07-07 2016-05-25 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the c-terminus
DK3248613T3 (da) 2005-07-18 2022-03-14 Seagen Inc Beta-glucuronid-lægemiddel-linkerkonjugater
PE20070207A1 (es) * 2005-07-22 2007-03-09 Genentech Inc Tratamiento combinado de los tumores que expresan el her
NZ599176A (en) 2005-08-03 2014-04-30 Immunogen Inc Immunoconjugate formulations
CA2617907A1 (en) 2005-08-05 2007-02-15 Syntarga B.V. Triazole-containing releasable linkers and conjugates comprising the same
JP5167130B2 (ja) 2005-08-09 2013-03-21 ミレニアム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド キラルアミノ酸を有するメイタンシノールのアシル化方法
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP1928503B1 (en) 2005-08-24 2012-10-03 ImmunoGen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
ES2283192B1 (es) * 2005-09-16 2008-09-16 GAMESA INNOVATION & TECHNOLOGY, S.L. Metodo de montaje de elementos en el interior de la torre de un aerogenerador.
AU2006294554B2 (en) 2005-09-26 2013-03-21 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Antibody-drug conjugates and methods of use
SI1940789T1 (sl) 2005-10-26 2012-03-30 Medarex Inc Postopki in spojine za pripravo cc analogov
PL1945647T3 (pl) 2005-11-08 2012-04-30 Immunogen Inc Procesy wytwarzania maytansinolu
CA2627190A1 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
PL1948180T3 (pl) 2005-11-11 2013-09-30 Boehringer Ingelheim Int Terapia skojarzona raka polegająca na podawaniu inhibitorów EGFR/HER2
DE602006013029D1 (de) 2005-11-12 2010-04-29 Lilly Co Eli Anti-egfr-antikörper
KR101222957B1 (ko) * 2005-12-29 2013-01-17 엘지디스플레이 주식회사 액정표시장치
EA015173B1 (ru) 2006-01-04 2011-06-30 Мерк Патент Гмбх Комбинированная терапия с использованием антител к egfr и her2
MX2008009956A (es) 2006-02-02 2008-12-12 Syntarga Bv Analogos de cc-1065 solubles en agua y sus conjugados.
US7750116B1 (en) 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
WO2007103288A2 (en) 2006-03-02 2007-09-13 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibody drug conjugates
EP1832577A1 (en) 2006-03-07 2007-09-12 Sanofi-Aventis Improved prodrugs of CC-1065 analogs
JP5372737B2 (ja) 2006-03-13 2013-12-18 オーエスアイ・フアーマシユーテイカルズ・エル・エル・シー Ｅｇｆｒキナーゼ阻害剤およびｅｇｆｒキナーゼ阻害剤の効果に対し腫瘍細胞を感作する薬剤を用いる併用治療
US20090280503A1 (en) 2006-09-15 2009-11-12 James Fiore Method for detecting and treating skin disorders
EP2084527A4 (en) 2006-11-02 2011-07-27 Seattle Genetics Inc METHOD FOR TREATING NEOPLASIA, AUTOIMMUNE AND INFLAMMATORY DISEASES
US7790164B2 (en) 2006-11-14 2010-09-07 Van Andel Research Institute Fragments of antibodies to epidermal growth factor receptor and methods of their use
US8580263B2 (en) 2006-11-21 2013-11-12 The Regents Of The University Of California Anti-EGFR family antibodies, bispecific anti-EGFR family antibodies and methods of use thereof
CN104013956B (zh) 2007-01-25 2018-12-18 达娜-法勃肿瘤研究所公司 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
MX2009009782A (es) 2007-03-15 2010-09-10 Ludwig Inst Cancer Res Metodo de tratamiento que utiliza anticuerpos egfr e inhibidores de src y formulaciones relacionadas.
US20100322939A1 (en) 2007-06-21 2010-12-23 Genmab A/S Novel methods for treating egfr-associated tumors
AU2007357156B2 (en) 2007-08-01 2013-01-10 Syntarga B.V. Substituted CC-1065 analogs and their conjugates
EP2188311B1 (en) 2007-08-14 2016-10-05 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Monoclonal antibody 175 targeting the egf receptor and derivatives and uses thereof
US20090269343A1 (en) 2008-04-11 2009-10-29 Duke University Dual Specific Immunotoxin for Brain Tumor Therapy
MY186725A (en) 2008-04-30 2021-08-13 Immunogen Inc Cross-linkers and their uses
MX2010013236A (es) 2008-06-03 2011-02-24 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
JP5977522B2 (ja) 2009-02-05 2016-08-24 イミュノジェン・インコーポレーテッド 新規ベンゾジアゼピン誘導体
US20110008766A1 (en) 2009-05-01 2011-01-13 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
KR101477762B1 (ko) 2009-09-22 2014-12-30 상하이 캔서 인스티튜트 특이성 결합 단백질 및 용도
US20110076232A1 (en) 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102735844A (zh) * 2011-04-11 2012-10-17 中国医学科学院肿瘤研究所 蛋白组合物及其在制备肺癌诊断试剂盒中的应用
CN102735844B (zh) * 2011-04-11 2016-01-06 中国医学科学院肿瘤医院 蛋白组合物及其在制备肺癌诊断试剂盒中的应用
CN103857340A (zh) * 2011-10-10 2014-06-11 莫纳什大学 心脏成像方法
CN103626871A (zh) * 2013-04-19 2014-03-12 武汉纽斯特生物技术有限公司 特异性识别egfr突变蛋白的单克隆抗体、制备方法及其应用
CN106255510A (zh) * 2014-03-05 2016-12-21 百时美施贵宝公司 使用抗pd‑1抗体与另一抗癌剂的组合治疗肾癌
CN110845616A (zh) * 2014-03-21 2020-02-28 艾伯维公司 抗-egfr抗体及抗体药物偶联物
CN106459200B (zh) * 2014-03-21 2019-12-06 艾伯维公司 抗-egfr抗体及抗体药物偶联物
CN110841074A (zh) * 2014-03-21 2020-02-28 艾伯维公司 抗-egfr抗体及抗体药物偶联物
CN106459200A (zh) * 2014-03-21 2017-02-22 艾伯维公司 抗‑egfr抗体及抗体药物偶联物
CN110845615A (zh) * 2014-03-21 2020-02-28 艾伯维公司 抗-egfr抗体及抗体药物偶联物
CN110841074B (zh) * 2014-03-21 2023-07-18 艾伯维公司 抗-egfr抗体及抗体药物偶联物
CN110845615B (zh) * 2014-03-21 2023-10-20 艾伯维公司 抗-egfr抗体及抗体药物偶联物
CN107889463A (zh) * 2015-04-24 2018-04-06 梅里麦克制药股份有限公司 用三种完全人类单克隆抗egfr抗体的组合治疗具有表皮生长因子受体（egfr）的胞外结构域的突变的患者的方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP2126127B1 (en) 2016-09-28
US9090693B2 (en) 2015-07-28
CA2676244C (en) 2017-01-17
WO2008091701A2 (en) 2008-07-31
MX2009007987A (es) 2010-03-01
CA2676244A1 (en) 2008-07-31
CN104013956B (zh) 2018-12-18
WO2008091701A9 (en) 2008-12-04
WO2008091701A3 (en) 2008-10-09
CN104043123B (zh) 2019-08-13
EP2126127A2 (en) 2009-12-02
CN104043123A (zh) 2014-09-17
CN110613845A (zh) 2019-12-27
MX338185B (es) 2016-04-05
JP5276017B2 (ja) 2013-08-28
CN104013956A (zh) 2014-09-03
US20100166744A1 (en) 2010-07-01
JP2010516770A (ja) 2010-05-20
ES2609094T3 (es) 2017-04-18
EP2126127A4 (en) 2011-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101711284A (zh) 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
KR101280267B1 (ko) Ｅｇｆ 수용체 에피토프 펩타이드 및 이의 용도
ES2611337T3 (es) Uso de anticuerpo anti-VEGF en combinación con quimioterapia para tratar cáncer de mama
US20150218282A1 (en) Compositions and methods for treating cancer
BR112019020508A2 (pt) anticorpos biespecíficos de ligação a erbb-2 e erbb3 para utilização no tratamento de células que possuem um gene de fusão nrg1
JP2009120583A (ja) 上皮成長因子受容体アンタゴニストによる難治性ヒト腫瘍の処理
US20200299394A1 (en) Antibodies against human and canine il-13ra2
Barone et al. Combined VEGF and CXCR4 antagonism targets the GBM stem cell population and synergistically improves survival in an intracranial mouse model of glioblastoma
ES2647568T3 (es) Tratamiento de cáncer
TW202035452A (zh) 靶向ＮａＰｉ２ｂ之聚合物抗體－藥物共軛體和使用彼之方法
US11440959B2 (en) CD226 agonist antibodies
WO2016127220A1 (en) Methods for classifying tumors and uses therefor
KR20190051983A (ko) 암의 치료를 위한 abx196을 포함하는 조합물
TWI609692B (zh) 新穎ｓｔｉｐ１多肽及其用途
US20030206902A1 (en) Ve-cadherin and vegfr-2 antagonists for therapeutic modulation of angiogenesis
Flores-Toro Targeting CCR2-Expressing Myeloid Cells to Overcome Immune Checkpoint Inhibitor Resistance in Glioma
Ginsberg et al. Franco DeMonte, Chrisstopher G. Kalhorn (Houston, TX)

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20100519