BR112019020508A2

BR112019020508A2 - anticorpos biespecíficos de ligação a erbb-2 e erbb3 para utilização no tratamento de células que possuem um gene de fusão nrg1

Info

Publication number: BR112019020508A2
Application number: BR112019020508-0A
Authority: BR
Inventors: Mark Throsby; Cecilia Anna Wilhelmina Geuijen; David Andre Baptiste Maussang-Detaille; Ton Logtenberg
Original assignee: Merus N.V.
Priority date: 2017-03-31
Filing date: 2018-04-03
Publication date: 2020-08-04
Also published as: IL269656A; JP2020511993A; PH12019550202A1; EP3600413A1; AU2018246873B2; US20240199747A1; AU2018246873A1; MX2019011660A; US11780925B2; IL269656B2; EA201992063A1; WO2018182422A8; CA3058343A1; KR20190140945A; IL269656B1; WO2018182422A1; CN110650752A; SG11201908971RA; US20200102393A1; IL310223A

Abstract

invenção se refere ao campo de anticorpos. Em particular, se refere ao campo de anticorpos terapêuticos (humanos) para o tratamento de células positivas para ErbB- 2 / ErbB-3. Mais especificamente, se refere ao tratamento de células compreendendo um gene de fusão NRG1 compreendendo pelo menos uma porção do gene NRG1 fundida com uma sequência de uma localização cromossômica diferente.

Description

ANTICORPOS BIESPECÍFICOS DE LIGAÇÃO A ERBB-2 E ERBB3 PARA

UTILIZAÇÃO NO TRATAMENTO DE CÉLULAS QUE POSSUEM UM GENE DE FUSÃO NRG1.

[001] Este pedido reivindica a prioridade ao Pedido EP No. 17164292,9, depositado em 31 de março de 2017, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência.

CAMPO DA INVENÇÃO

[002] A invenção se relaciona com o campo dos anticorpos. Em particular, refere-se ao campo dos anticorpos terapêuticos (humanos) para o tratamento de uma célula positiva de ErbB-2 / ErbB-3. Mais, em particular, refere-se ao tratamento de tumores que compreendem um gene de fusão NRG1 compreendendo pelo menos uma porção do gene fundido- NRG1 a uma sequência a partir de uma localização cromossômica diferente.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[003] A neuregulina-1 (NRG1) tem sido proposto como um oncogene e candidato como um gene supressor de tumor candidato. Ela é susceptível de ser envolvida em cânceres epiteliais, porque ela codifica ligantes que podem se ligar ao -família de receptores ErbB. Até à data, existem mais de 16 proteínas solúveis e transmembranares derivadas do gene NRG1. O processamento proteolítico do domínio extra-celular das isoformas de transmembrana NRG1 liberam fatores solúveis. HRG1-β é uma das proteínas codificadas pelo gene. Ela contém um domínio de Ig e um domínio do tipo EGF que é necessário para a ligação direta ao receptor tirosina- quinases ErbB-3 e ErbB-4. O gene NRG1 e as isoformas são conhecidos sob vários nomes alternativos diferentes, tais como: Neuregulina 1; Pro-NRG1; HRGA; SMDF; HGL; GGF; NDF; NRG1 Intronic Transcrição 2 (codificantes de não-proteína); Heregulina, Alfa (45 kD, ERBB2 P185-Activator); Atividade acetilcolina Receptor de indução; Pro-Neuregulin-1, de isoformas ligada à membrana; Sensoriais e motoras Neuron fator derivado; Factor de diferenciação neu; Fator de Crescimento Glial 2; NRG1-IT2; MSTP131; MST131; ÁRIA; GGF2; HRG1; e HRG. IDs externos para Gene NRG1 são HGNC: 7997; Gene Entrez: 3084; Ensembl: ENSG00000157168; OMIM: 142.445 e UniProtKB: Q02297.

[004] Isoformas de NRG1 são feitas por processamento alternativo, e inclui formas que são transmembrana, externamente ligada à membrana, verter, segregados ou intracelulares (Falls, 2003; Hayes e Gullick, 2008). Eles ligam-se a ErbB-3 ou ErbB-4, o que provavelmente sinalizar como heterodímeros com erbB-2 (HER2). Embora as proteínas codificadas pelo NRG1 são normalmente pensadas como mitôgenos, elas também podem ser poderosamente pro- apoptótica: (Weinstein et al, 1998), em particular, expressar NRG1 em células podem causar apoptose da célula que expressa.

[005] O gene NRG1 foi identificado como um potencial gene de câncer-crítico em dois contextos, aparentemente contraditório,. Em primeiro lugar, é o principal candidato para o gene principal supressor de tumores que se pensa ser no cromossoma 8p, o braço curto do cromossoma 8. Perda de 8p cromossoma é um dos acontecimentos genômicos mais frequentes em cânceres epiteliais, incluindo da mama, do cólon, da bexiga e próstata. Isto tem sido demonstrado sucessivamente por perda de heterozigosidade, hibridação genômica comparativa (CGH) e estudos de matriz-CGH (para referências, ver Birnbaum et ai, 2003;. Pólo et al., 2006). A interpretação clássica desta perda de cromossoma8p seria que não é um gene supressor de tumor lá. Perdas cromossômica 8p em linhagens celulares de carcinoma foram mapeadas utilizando hibridização de fluorescência in situ e de hibridação genômica de matriz comparativa (matriz-CGH). Verificou-se que a maioria das rupturas eram proximal ao, ou na verdade, dentro NRG1, tornando NRG1 e genes imediatamente teloméricos a NRG1 os principais candidatos para um tal supressor de tumor (pólo et al, 2006;. Cooke et al., 2008). Em segundo lugar, NRG1 poderia ser um oncogene porque parece ser o alvo de translocações cromossômica no câncer da mama (para revisão ver Chua et al 2009).

[006] Na presente invenção, verificou-se que os tumores com modificações cromossoma 8p exibem a inibição do crescimento em resposta a exposição a um anticorpo biespecífico que compreende um primeiro local de ligação ao antígeno que se podem ligar a uma parte extracelular de ErbB- 2 e um segundo local de ligação ao antígeno que pode ligar- se uma parte extracelular de ErbB-3.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[007] Em um aspecto, é fornecido um método para o tratamento de um indivíduo que tem uma célula positiva ErbB- 2 e ErbB-3, o método compreendendo a administração de um anticorpo biespecífico que compreende um primeiro local de ligação ao antígeno que pode se ligar uma parte extracelular de ErbB-2 e um segundo local de ligação ao antígeno que pode se ligar a uma parte extracelular de ErbB-3 ao indivíduo em necessidade do mesmo, sendo o método caracterizado pelo fato de células que compreende um gene de fusão NRG1 compreendendo pelo menos uma porção do gene fundido-NRG1 a uma sequência a partir de uma localização cromossômica diferente. Normalmente, a célula compreende um gene de fusão que compreende pelo menos um gene fundido-NRG1 compreendendo pelo menos a extremidade 3’ do gene NRG1 fundido a uma sequência 5’ de uma localização cromossômica diferente.

[008] A referida célula pode ser uma célula de câncer. A referida célula de câncer pode ser uma célula de câncer associado com um gene NRG1-fundido, tal como uma célula de câncer acionado por um fusaõ-NRG1.

[009] Em outro aspecto, é proporcionado um método para o tratamento de um indivíduo que tem um tumor positivo ErbB-2 e tumor positivo de ErbB-3 ou está em risco de ter o referido tumor, o método compreendendo a administração de um anticorpo biespecífico que compreende um primeiro local de ligação ao antígeno que pode se ligar uma parte extracelular de ErbB-2 e um segundo local de ligação ao antígeno que pode se ligar uma parte extracelular de ErbB-3 ao indivíduo em necessidade do mesmo, sendo o método caracterizado pelo fato das células de tumor compreende um gene de fusão NRG1 compreendendo um porção da fusão NRG1, tais como extremidade 3’ do gene-NRG1, fundido com uma sequência, tal como uma sequência 5’, a partir de uma localização cromossômica diferente.

[0010] Um indivíduo em risco de ter um tumor positivo de ErbB-2 e ErbB-3 pode ser um indivíduo que está em remissão.

[0011] De um modo preferido, o gene de fusão NRG1- expressa uma proteína que compreende um domínio do tipo EGF NRG1. De preferência, a NRG-fusão é uma fusão de NRG1 e um gene no cromossoma humano 8. De preferência, o gene do cromossoma 8 humano codifica uma proteína excretada ou uma proteína associada a membrana celular. De um modo preferido, o gene de fusão é uma fusão NRG1 de extremidade 3’ da NRG1- gene com a sequência 5' de um dos genes selecionados do grupo consistindo de CD74; DOC4; TNFRSF10B; CLU; VAMP2; SLC3A2; RBPMS; WRN; SDC4; KIF13B; SLECA2; PDE7A; ATP1B1; CDK1; BMPR1B; MCPH1 e RAB2IL1.

[0012] De preferência, a célula é uma célula epitelial. De preferência, a célula é uma célula de câncer da mama, uma célula de câncer dos ovários, uma célula de câncer do pulmão, tal como o câncer do pulmão de células não-pequenas ou uma metástase do mesmo.

[0013] De um modo preferido, o tumor é de origem epitelial. De um modo preferido, o tumor é um câncer da mama, câncer do ovário, câncer do pulmão, ou uma metástase do mesmo.

[0014] A célula pode ser uma célula de câncer, por exemplo, um câncer do ovário que compreende, por exemplo, a fusão CLU-NRG1 ou a RAB2IL1-NRG1

[0015] A célula pode ser uma célula de câncer, por exemplo, uma célula de câncer da mama que compreende, por exemplo, fusão a DOC4-NRG1

[0016] A célula pode ser uma célula cancerosa, por exemplo, um câncer (pulmão) NSCLC, tal como o subtipo denominado invasivo adenocarcinoma mucinoso, compreendendo, por exemplo, VAMP2-NRG1, RBPMS-NRG1, WRN-NRG1, SDC4-NRG1, SLEC3A2-NRG1, KIF13B-NRG1 ou CD74-NRG1.

[0017] De preferência, o indivíduo sofreu uma terapia que alvejou para inibição de EGFR, de preferência, com um anticorpo de ligação a EGFR, que é, preferencialmente, o cetuximab.

[0018] De preferência, o método compreende ainda a determinação da densidade do receptor de superfície celular de ErbB-1; densidade do receptor de superfície celular erbB- 2; a densidade do receptor de superfície celular ErbB-3; a densidade do receptor de superfície celular de ErbB-4 ou uma sua combinação sobre as células tumorais. De preferência, a célula ou tumor tem menos de 400.000 receptores de superfície celular ErbB-1 por célula, de preferência, menos do que

200.000 receptores de superfície celular ErbB-1 por célula.

[0019] De preferência, o método compreende ainda a administração ao indivíduo de um inibidor de ErbB-1, preferencialmente, cetuximab.

[0020] De preferência, nos métodos aqui descritos, a célula positiva de ErbB-2 / ErbB-3 ou tumor tem menos do que

50.000 receptores de superfície celular ErbB-3 por célula.

[0021] De preferência, nos métodos aqui descritos, a célula ou as células do referido tumor têm um nível de expressão heregulina que é maior do que o nível de expressão heregulina de células MCF7.

[0022] Como é evidente para um técnico versado no assunto os anticorpos biespecíficos aqui descritos são também para a utilização na preparação de um medicamento e para a utilização em terapia, tal como aqui divulgado.

[0023] Em particular, um anticorpo biespecífico que compreende um primeiro local de ligação ao antígeno que pode se ligar uma parte extracelular de ErbB-2 e um segundo local de ligação ao antígeno que pode se ligar uma parte extracelular de ErbB-3 para utilização no tratamento de um indivíduo que tem uma célula positiva de ErbB-2 e ErbB-3, a qual a célula que compreende um gene de fusão que compreende pelo menos a extremidade 3’ do NRG1-gene fundido a uma sequência 5' a partir de uma localização cromossômica diferente.

[0024] A referida célula pode ser uma célula de câncer. A referida célula de câncer pode ser uma célula de câncer associado com uma fusão-NRG1, tal como uma célula de câncer acionado por uma fusão-NRG1.

[0025] Além disso, os anticorpos biespecíficos são para utilização no tratamento de um tumor positivo de ErbB- 2 / ErbB-3, em que as células de tumor compreendem uma fusão NRG1 de genes compreendendo a extremidade 3’ do gene NRG1 fundido a uma sequência 5' a partir de uma localização cromossômica diferente.

[0026] De preferência, nos métodos e utilizações aqui descritos, o referido primeiro local de ligação ao antígeno liga-se ao domínio I de ErbB-2 e o referido segundo local de ligação ao antígeno liga-se o domínio III de ErbB- 3, de um modo preferido, em que a afinidade do primeiro local de ligação ao antígeno para ErbB-2 é menor do que a afinidade do segundo local de ligação ao antígeno para ErbB-3. De um modo preferido, em que o referido anticorpo biespecífico compreende i) pelo menos as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de uma região variável de ErbB-2 específico de cadeia pesada selecionada a partir do grupo que consiste de MF2926, MF2930, MF1849; MF2973, MF3004, MF3958, MF2971, MF3025, MF2916, MF3991, MF3031, MF2889, MF2913, MF1847, MF3001, MF3003 e MF1898 ou em que o referido anticorpo compreende sequências de CDR que diferem entre si em, no máximo, 3 aminoácidos, de um modo preferido em, no máximo, 2 aminoácidos , de um modo preferido em, no máximo, um aminoácido a partir das sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de MF2926, MF2930, MF1849; MF2973, MF3004, MF3958, MF2971, MF3025, MF2916, MF3991, MF3031, MF2889, MF2913, MF1847, MF3001, MF3003 ou MF1898; e / ou ii) pelo menos a CDR1, CDR2 e CDR3 de uma região variável de ErbB-3 específico de cadeia pesada selecionado a partir do grupo que consiste de MF3178; MF3176; MF3163; MF3099; MF3307; MF6055; MF6056; MF6057; MF6058; MF6059; MF6060; MF6061; MF6062; MF6063; MF6064; MF 6065; MF6066; MF6067; MF6068; MF6069; MF6070; MF6071; MF6072; MF6073 e MF6074, ou em que o referido anticorpo compreende sequências de CDR que diferem entre si em, no máximo, 3 aminoácidos, de um modo preferido em, no máximo, 2 aminoácidos, de um modo preferido em, no máximo, um aminoácido a partir das sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de MF3178; MF3176; MF3163; MF3099; MF3307; MF6055; MF6056; MF6057; MF6058; MF6059; MF6060; MF6061; MF6062; MF6063; MF6064; MF 6065; MF6066; MF6067; MF6068; MF6069; MF6070; MF6071; MF6072; MF6073 ou MF6074. De preferência, o anticorpo compreende iii) uma sequência de região variável de cadeia pesada de ErbB-2 específico selecionado a partir do grupo que consiste nas sequências de região variável de cadeia pesada de MF2926, MF2930, MF1849; MF2973, MF3004, MF3958, MF2971, MF3025, MF2916, MF3991, MF3031, MF2889, MF2913, MF1847, MF3001, MF3003 e MF1898, ou em que o referido anticorpo compreende uma sequência de região variável de cadeia pesada que difere em pelo menos 15 aminoácidos das sequências de região variável de cadeia pesada de MF2926, MF2930, MF1849; MF2973, MF3004, MF3958, MF2971, MF3025, MF2916, MF3991, MF3031, MF2889, MF2913, MF1847, MF3001, MF3003 ou MF1898; e / ou iv) uma sequência de de ErbB-3 de região variável de cadeia pesada específico selecionado a partir do grupo que consiste nas sequências de região variável de cadeia pesada de MF3178; MF3176; MF3163; MF3099; MF3307; MF6055; MF6056; MF6057; MF6058; MF6059; MF6060; MF6061; MF6062; MF6063; MF6064; MF 6065; MF6066; MF6067; MF6068; MF6069; MF6070; MF6071; MF6072; MF6073 e MF6074, ou em que o referido anticorpo compreende uma sequência de região variável de cadeia pesada que difere em pelo menos 15 aminoácidos das sequências de região variável de cadeia pesada de MF3178; MF3176; MF3163; MF3099; MF3307; MF6055; MF6056; MF6057; MF6058; MF6059; MF6060; MF6061; MF6062; MF6063; MF6064; MF 6065; MF6066; MF6067; MF6068; MF6069; MF6070; MF6071; MF6072; MF6073 ou MF6074.

[0027] De preferência, o anticorpo compreende pelo menos uma sequência da CDR1, CDR2 e CDR3 de uma região variável de cadeia pesada de ErbB-2 específico de MF3958 e o anticorpo compreende pelo menos a sequência CDR1, CDR2 e CDR3 de região variável da cadeia pesada específica de ErbB- 3 de MF3178. De preferência, o anticorpo biespecífico compreende a "cadeia pesada de ligação a ErbB-2", como representado na parte da Listagem das Sequências ID e a "cadeia pesada para ligação a ErbB-3 ", como representado na parte de Listagem de Sequências ID.

[0028] De preferência, o local de ligação do primeiro antígeno e o referido segundo local de ligação de antígeno compreendem uma região variável de cadeia leve que compreende o segmento de gene IgVKl-39, mais preferencialmente, a linhagem germinal rearranjada de cadeia leve Kapa humana IgVKl-39*01/IGJKl*01 ou IgVκ1-39*01/IGJκ5*01. De preferência, a região variável da cadeia leve compreende uma CDR1 tendo a sequência (RASQSISSYLN), uma CDR2 tendo a sequência (AASSLQS), e uma CDR3 tendo a sequência (QQSYSTPPT).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0029] Um gene de fusão NRG1 compreende pelo menos uma porção do Gene fundido-NRG1 a uma sequência a partir de uma localização cromossômica diferente. "Pelo menos uma porção de" indica que o gene completo NRG-1 pode estar presente em uma fusão ou uma porção do mesmo. A fusão tem, de preferência, pelo menos, a sequência de codificação de éxons 6, 7 e 8. Outra forma de definir a parte NRG1 no gene NRG1-fusão é que ele compreende o tipo EGFdomínio de NRG1. A pelo menos uma porção do gene NRG1 pode ser fundida a uma sequência a partir de uma localização cromossômica diferente, de tal modo que a referida sequência está localizada a 5' ou 3' para a pelo menos uma porção do gene NRG1.

[0030] De um modo preferido, a extremidade 3' do NRG1-gene pode ser fundida com uma sequência 5' a partir de uma localização cromossômica diferente. Os NRG1-genes codifica para as várias isoformas da NRG1. Várias isoformas e a sua função esperada são descritos em Adelaide et al (2003). As isoformas GGF e GGF2 contêm uma sequência de kringle semelhante a Ig e mais domínios EGF-semelhantes; e as partes de isoformas SMDF apenas o domínio do tipo EGF com as outras isoformas. O domínio do tipo EGF são codificados por extremidade 3' do gene. O domínio do tipo EGF está presente em todos os genes de fusão NRG1 da presente invenção. As fusões foram encontradas em que o 5' de diferente localização cromossômica compreende um sinal de excreção e / ou um domínio transmembranar de uma proteína da membrana celular com pelo menos um domínio extracelular. Um exemplo é a fusão GD74-NRG1. A sequência 5' de diferente localização cromossômica também pode inserir uma sequência que ativa a transcrição de NRG1, exemplos são promotores ou intensificadores. A sequência 5' é tipicamente uma sequência de um gene diferente do que NRG1. A sequência pode compreender uma região de codificação, uma sequência reguladora da expressão, tal como um promotor ou um intensificador, ou uma combinação dos mesmos. A NRG-fusão compreende uma sequência 5' a partir de um local diferente pode ser a partir de um cromossoma diferente ou de outra parte do cromossoma 8. Em uma concretização preferida, o a sequência 5' é a partir de um gene no cromossoma 8 humano.

[0031] O NRG1-gene, por exemplo a extremidade 3' do gene NRG1, na fusão tem, de preferência, pelo menos, a sequência de codificação de éxons 6, 7 e 8. Outra forma de definir a parte NRG1 no gene de fusão é NRG1- que compreende o domínio semelhante a EGF de NRG1. Este domínio é codificado pelo gene a fim de NRG1 a 3' (éxons 6-8) e é necessária para a ligação a ErbB-3. NRG1-fusões retêm um quadro de região de codificação para o domínio do tipo EGF na extremidade 3' da fusão. Um domínio do tipo EGF é uma sequência de, tipicamente, cerca de trinta a quarenta resíduos de aminoácidos de comprimento, dos quais o protótipo é encontrado na sequência de fator de crescimento epidérmico (EGF) [PMID: 2288911, PMID: 6334307, PMID: 1522591, PMID: 6607417, PMID: 3282918, PMID: 11498013]. É conhecido por estar presente, em uma forma mais ou menos conservadas, em um grande número de outras proteínas, a maioria dos animais. Uma característica comum dos domínios EGF-semelhantes é que eles são encontrados no domínio extracelular da membrana de limite proteínas ou em proteínas que se sabe ser secretada (excepção: prostaglandina G / H sintase). O domínio EGF inclui, tipicamente, seis resíduos de cisteína que foram mostrados (em EGF) para ser envolvidos em ligações dissulfeto. A estrutura principal é uma folha beta e duas de cadeia seguido por um ciclo para uma folha de duas cadeia C- terminal curto. Subdomínios entre as cisteínas conservadas variar em comprimento.

[0032] O gene de fusão NRG1 é, preferencialmente, uma fusão da extremidade 3’ do NRG1-gene com a sequência 5' de um dos genes selecionados do grupo consistindo de CD74;

DOC4; TNFRSF10B; CLU; VAMP2; SLC3A2; RBPMS; WRN; SDC4; KIF13B; SLECA2; PDE7A; ATP1B1; CDK1; BMPRIB; MCPH1 e RAB2IL1.

[0033] O gene de fusão NRG1 pode ser uma fusão de pelo menos uma porção do NRG1-gene com uma sequência a partir de uma localização cromossômica diferente, localizado a 3' da mesma. um gene de fusão NRG1 tal pode ser uma fusão de pelo menos uma porção do NRG1-gene com uma sequência a partir de uma localização cromossômica diferente CD74, STMN2, PMEPA1, PROSC ou PSAP localizado 3' neste. Os receptores para todas as isoformas NRG1 são a família ErbB de receptores transmembranares de tirosina-quinase. A família é também referida como a família do receptor do fator de crescimento epidérmico humano (EGF) (HER). A família tem quatro membros: ErbB (eritroblastoma) -1, ErbB-2, ErbB-3 e ErbB-4. O receptor de fator de crescimento epidérmico (EGF) (EGFR, ErbB1 ou HER1). Os receptores (revisto em Yarden e Pines 2012) são amplamente expressos em células epiteliais. A super- regulação de receptores HER ou os seus ligantes, tais como a heregulina (HRG) ou fator de crescimento epidérmico (EGF), é um acontecimento frequente em câncer humano (Wilson, Fridlyand et al. 2012). A super-expressão de ErbB-1 e ErbB- 2, em particular, ocorre em tumores epiteliais e está associada com a invasão do tumor, metástase, resistência à quimioterapia, e prognóstico pobre (Zhang, Berezov et al., 2007). Em mama normal, ErbB-3 tem mostrado ser importante para o crescimento e diferenciação do epitélio luminal. Por exemplo, a perda / inibição de ErbB-3 resulta na expansão selectiva do basal ao longo do epitélio luminal (Balko, Miller et al. 2012). A ligação do ligante ao domínio extracelular do RTKs induz a dimerização do receptor, tanto entre a mesma (homodimerização) e subtipos diferentes de receptores (heterodimerização). A dimerização pode ativar os domínios intracelulares da tirosina quinase, que se submetem a autofosforilação e, por sua vez, pode ativar um número de vias de sinalização pró-proliferativas a jusante, incluindo as mediadas por quinases de proteína ativada por mitogénio (MAPK) e a prosurvivalAkt (revisto em Yarden e Pines, 2012). Nenhum ligante endógeno específico foi identificado por ErbB-2, o qual é assumido, por conseguinte, para sinalizar normalmente através heterodimerização (Sergina, Rausch et al., 2007). ErbB-3 pode ser ativado pelo engate dos seus ligantes. Estes ligantes incluem, mas não estão limitados a neuregulina (NRG) e heregulina (HRG).

[0034] ErbB-1 é conhecido sob vários sinônimos, a mais comum das quais é o EGFR. EGFR tem um domínio extracelular (ECD) que é constituído por quatro sub- domínios, dois dos quais estão envolvidos na ligação do ligante e dois dos quais estão envolvidos na homodimerização e heterodimerização. EGFR integra sinais extracelulares a partir de uma variedade de liganes, para se obter diversas respostas intracelulares. A principal via de transdução de sinal ativada por EGFR é composta de Ras-ativada por mitogênese da proteína quinase (MAPK) mitogénica cascata de sinalização. A ativação desta via é iniciada pelo recrutamento de Grb2 em tirosina do EGFR fosforilado. Isto leva à ativação de Ras por meio da Grb2-bound Ras-guanina fator de troca de nucleotídeos de Filho Sevenless (SOS). Além disso, a via de transdução de sinal de PI3-quinase Akt também é ativada por EGFR, embora esta ativação é muito mais forte no caso da co-expressão de ErbB-3 (HER3). O EGFR est implicada em várias doenças malignas epiteliais humanas, nomeadamente, os cânceres da mama, da bexiga, do pulmão não pequenas do câncer do pulmão de células, cólon, cabeça e pescoço e do ovário cérebro. As mutações de ativação do gene ter sido encontrado, bem como a super-expressão do receptor e dos seus ligantes, dando origem às linhas de ativação autócrina. Este RTK Por conseguinte, foi extensivamente utilizada como alvo para a terapia do câncer. Ambos os inibidores de pequenas moléculas dirigidas a RTK e anticorpos monoclonais (mAbs) dirigido para os domínios de ligação ao ligando extracelular, foram desenvolvidos e mostraram até agora vários sucessos clínicos, embora principalmente para um grupo selecionado de pacientes. O número de acesso da base de dados para a proteína de EGFR humano e o gene que codifica é (GenBank NM_005228.3). Este número de acesso é dado primariamente para proporcionar um outro método de identificação de proteínas EGFR como um alvo, a sequência real da proteína EGFR ligado por um anticorpo podem variar, por exemplo devido a uma mutação no gene que codifica tais como os que ocorrem em alguns cânceres ou semelhantes.

[0035] As palavras câncer e tumor são aqui tipicamente utilizadas e ambas referem-se ao câncer, a menos que de outro modo especificamente indicado.

[0036] Sempre que aqui seja feita referência a EGFR, a referência refere-se ao EGFR humano, a menos que indicado de outra forma. O local de ligação ao antígeno que se liga a EGFR, se liga à EGFR e uma variedade de variantes deste,

tal como os expressos em alguns tumores EGFR positivas.

[0037] O termo 'ErbB-3', tal como aqui utilizado refere-se à proteína que em seres humanos é codificada pelo gene ErbB3. Nomes alternativos para o gene ou proteína está HER3; LCCS2; MDA-BF-1; c-erbB-3; c-ErbB3; ErbB3-S; p 180- ErbB3; p45-sErbB3; e p85-sErbB3. Sempre que é feita aqui referência a ErbB-3, a referência refere-se a ErbB-3 humana. Um anticorpo que compreende um local de ligação ao antígeno que se liga de ErbB-3, liga-se a ErbB-3 humano. O ErbB-3 sítio de ligação ao antígeno pode, devido a sequência e estrutura terciária similaridade entre outros ortólogos de mamífero humano e, também se ligam um ortólogo tal, mas não é necessariamente assim. Os números de acesso base de dados para a proteína ErbB-3 humana e o gene que a codifica são (NP_001005915.1, NP_001973.2, NC_000012.11, NC_018923.2, NT_029419.12). Os números de acesso são indicados principalmente para proporcionar um outro método de identificação de ErbB-3 como um alvo, a sequência real da proteína de ErbB-3 ligada por um anticorpo podem variar, por exemplo devido a uma mutação no gene que codifica tais como aqueles que ocorre em alguns cânceres ou semelhantes. O local de ligação ao antígeno de ErbB-3 liga-se ErbB-3 e uma variedade de variantes destes, tais como os expressos por algumas células tumorais positivas de ErbB-3. O local de ligação ao antígeno que se liga ErbB-3 liga-se de preferência o domínio III de ErbB-3.

[0038] O termo 'ErbB-2', tal como aqui utilizado refere-se à proteína que em seres humanos é codificada pelo gene erbB-2. Nomes alternativos para o gene ou proteína incluem CD340; HER-2; HER-2 / neu; MLN 19; NEU; NGL; TKR1. O gene erbB-2 é frequentemente chamado de HER2 (receptor do fator de crescimento epidérmico humano 2). Sempre que é feita aqui referência a ErbB-2, a referência se refere ao erbB-2 humano. Um anticorpo que compreende um local de ligação ao antígeno que se liga de ErbB-2, se liga humano de ErbB-2. O ErbB-2 local de ligação ao antígeno pode, devido à sequência e estrutura terciária de similaridade entre outros ortólogos de mamífero humano e, também se ligam um ortólogo tal, mas não é necessariamente assim. Os números de acesso base de dados para a proteína erbB-2 humano e o gene que a codifica são (NP_001005862.1, NP_004439.2 NC_000017.10 NT_010783.15 NC_018928.2). Os números de acesso são indicados principalmente para proporcionar um outro método de identificação de erbB-2 como um alvo, a sequência real da proteína erbB-2 ligado ao anticorpo pode variar, por exemplo devido a uma mutação no gene que codifica tais como aqueles que ocorrem em alguns cânceres ou semelhantes. O local de ligação ao antígeno de ErbB-2 liga-se de ErbB-2 e uma variedade de variantes destes, tais como os expressos por algumas células tumorais positivas de ErbB-2. O local de ligação ao antígeno que se liga de ErbB-2 liga-se de preferência o domínio I de ErbB-2.

[0039] CD74 é conhecido sob o número de nomes alternativos. Alguns destes são molécula CD74; CD74 Antigen (Invariant Poliptido de Complexo Major de Histocompatibilidade, Classe II Antigen-associados); molécula CD74, Complexo Principal de Histocompatibilidade, Classe II cadeia invariante; Os antígenos HLA-DR-associated invariante cadeia; Gama de Cadeia II antígenos da classe; Ia-Associated cadeia invariante; Cadeia de MHC HLA-DR Gama; HLA-DR-gama; DHLAG; P33; Cadeia de HLA de classe II de histocompatibilidade Antigen Gama; antígeno La-Associated cadeia invariante; Ia-GAMA e HLADG. IDs externos para CD74 são HGNC: 1697; Gene Entrez: 972; Ensembl: ENSG00000019582; OMIM: 142790 e UniProtKB: P04233.

[0040] Doc4 ou Teneurin proteína transmembranar 4 (TENM4) é conhecido sob vários nomes diferentes, tais como Proteína impar Oz / Dez-H Homogo 4; Tenascina-M4; Dez-M4; Dez-4; ODZ4; TNM4; ODZ, impar Oz / Dez-H Homogo 4 (de Drosophila); ODZ, impar Oz / en-H Homogo 4; Teneurin-4; KIAA1302; doc4; e ETM5. IDs externos para doc4 são HGNC: 29945; Gene Entrez: 26011; Ensembl: ENSG00000149256; OMIM:

610.084 e UniProtKB: Q6N022.

[0041] TNFRSF10B ou Receptor de TNF da superfamília dos membros 10b é conhecido sob vários nomes diferentes de Necrose Tumoral Receptor do Factor de superfamília, Estados 10b; -TNF Related Apoptosis Inducing Ligand-Receptor 2; Morte Receptor 5; TRAIL-R2; TRAILR2; ASSASSINO; TRICK2; ZTNFR9; DR5; DNA regulado por p53

[0042] Receptor de morte celular de Danos induzível (assassino); Factor de Necrose Tumoral Receptor superfamília dos membros 10B; Fator de Necrose Tumoral Receptor-Like Protein ZTNFR9; Morte de domínio contendo receptor para TRAIL / Apo-2L; poptosis Indutor TRICK2A Proteína / 2B; Indução de Apoptose receptor de TRAIL-R2; Citotóxica TRAIL receptor-2; Fas-Like Protein; TRAIL Receptor 2; CD262 Antigen; KILLER / DR5; TRICK2A; TRICK2B; TRICKB; e CD262. IDs externos para

TNFRSFIOB são HGNC: 11905; Gene Entrez: 8795; Ensembl: ENSG00000120889; OMIM: 603612; e UniProtKB: O14763.

[0043] O gene CLU ou clusterina é conhecido sob vários nomes diferentes, tais como reprimida-testosterona próstata Mensagem 2; A apolipoproteína J; Complementam- proteína associada SP-40,40; Complementar citólise Inhibitor; Inibidor de lise do complemento; Sulfatado Glicoproteína 2; Proteína 1 de Ligação a Ku70; NA1 / NA2; TRPM-2; APO-J; APOJ; KUB1; CLI; Clusterina (lise do complemento Inhibitor, SP-40,40, sulfatadas Glicoproteína 2, próstata reprimida-testosterona Mensagem 2, A apolipoproteína J); Envelhecimento-Associated Gene 4 Proteína; Envelhecimento-proteína associada a 4; PEC-2; SP- 40; TRPM2; AAG4; CLU1; CLU2; e SGP2.External IDS para CLU são HGNC: 2095; Gene Entrez: 1191; Ensembl: ENSG00000120885; OMIM: 185430; e UniProtKB: P10909.

[0044] VAMP2 ou vesículas Associated Membrane Protein 2 é conhecido sob vários nomes diferentes, tais como sinaptobrevina 2; SYB2; Associada à Vesícula de Membrana de Proteína 2; e sinaptobrevina-2. IDs externos para VAMP2 são HGNC: 12643; Gene Entrez: 6844; Ensembl: ENSG00000220205; OMIM: 185881; e UniProtKB: P63027.

[0045] SLCA3A2 ou Soluto portador Família 3 Membro 2 é conhecido sob vários nomes diferentes, tais como Ativação Linfocítica Antígeno 4F2 Subunidade Grande; Soluto portador Família 3 (ativadores de dibásico e neutra do Transporte de Aminoácidos), membro 2; Antígeno identificado por anticorpos monoclonais 4F2, TRA1.10, TROP4, ET43; Soluto portador Família 3 (Aminoácidos Transportador cadeia pesada), os dois; 4F2 da superfie celular Cadeia Pesada Antigen; CD98 de Cadeia Pesada; 4F2HC; MDU 1; Antigen Defined por anticorpo monoclonal 4F2, cadeia pesada; Antígeno Definido porAnticorpo Monoclonal 4F2; 4F2 pesado Cham Antigen; Cadeia Pesada 4F2; CD98 Antigen; CD98HC; 4T2HC; NACAE; CD98 e 4F2. IDs externos para SLC3A2 são HGNC: 11026; Gene Entrez: 6520; Ensembl: ENSG00000168003; OMIM: 158070; e UniProtKB: P08195.

[0046] RBPMS ou proteína de ligação a RNA com Splicing múltipla é conhecido sob vários nomes diferentes, tais como ARN proteína com Splicing a ligação múltipla; Coração E RRM Expressed Sequence; HERMES; ARN-Binding Protein Com Splicing múltipla; e RBP-MS. IDs externos para RBPMS são HGNC: 19097; Gene Entrez: 11030; Ensembl: ENSG00000157110; OMIM: 601558; e UniProtKB: Q93062.

[0047] Síndrome WRN ou Werner RecQ Como Helicase é conhecido sob vários nomes diferentes, tais como Werner Síndrome RecQ Como Helicase; DNA helicase, RecQ-Like Tipo 3; RecQ Protein-like 2; Exonuclease WRN; RECQL2; RECQ3; Helicase Werner Síndrome dependente de ATP; Síndrome de Werner, RecQ Helicase-Like; Síndrome de Werner; CE 3.6.4.12; CE 3.1-.-.; CE 3.6.1; e RECQL3. IDs externos para WRN são HGNC: 12791; Gene Entrez: 7486; Ensembl: ENSG00000165392; OMIM: 604.611 e UniProtKB: Q14191.

[0048] SDC4 ou sindecano 4 é conhecido sob vários nomes diferentes, tais como sindecano 4 (Amphiglycan, Ryudocan); Sindecano proteoglicanos 4; Proteína do núcleo Ryudocan; Amphiglycan; SYND4; Ryudocan Amphiglycan; e sindecano-4. IDs externos para SDC4 são HGNC: 10661; Gene Entrez: 6385; Ensembl: ENSG00000124145; OMIM: 600017; e

UniProtKB: P31431.

[0049] Vários genes de fusão NRG1 são descritos em Dhanasekaran et al (2014).

[0050] A invenção proporciona métodos de um indivíduo que tem uma célula ou tumor positivo de ErbB-2 e ErbB-3. Alternativamente, o indivíduo pode estar em risco de ter um tumor. O método compreende a administração de um anticorpo biespecífico que compreende um primeiro local de ligação ao antígeno que pode se ligar uma parte extracelular de ErbB-2 e um segundo local de ligação ao antígeno que pode se ligar uma parte extracelular de ErbB-3 ao indivíduo em necessidade do mesmo. O método é caracterizado pela célula ou as células do tumor compreende um gene de fusão que compreende a extremidade 3’ de gene NRG1 fundido a uma sequência 5' a partir de uma localização cromossômica diferente.

[0051] A célula pode ser uma célula de câncer. A referida célula de câncer pode ser uma célula de câncer associado com um NRG1-fusão, por exemplo, uma célula de câncer acionado por um NRG1-fusão.

[0052] Os locais de ligação ao antígeno num anticorpo estão tipicamente presentes nos domínios variáveis. Os domínios variáveis compreendem uma região variável da cadeia pesada e uma região variável da cadeia leve.

[0053] O indivíduo foi submetido, de preferência, uma terapia que alvejou para a inibição do EGFR, de preferência, com um anticorpo de ligação a EGFR, que é preferencialmente, cetuximab.

[0054] Um método de tratamento da invenção compreende ainda, preferencialmente, a determinação do número de receptor de superfície celular ErbB-1; receptor de superfície celular ErbB-2; receptor de superfície celular ErbB-3; receptor de superfície celular de ErbB-4 ou uma sua combinação sobre a célula ou células de tumor.

[0055] Um método de tratamento da invenção compreende ainda, de preferência, determinar se a célula compreende uma fusão-NRG1 ou se o tumor compreende as células com uma fusão-NRG1. Isto pode, por exemplo, ser feita em células de uma biópsia. Vários métodos estão disponíveis e são conhecidos muitos na técnica. Conhecido que a região em que a quebra de cromossoma ocorre no caso de NRG1-fusões é de rotina para o técnico versado no assunto para determinar se um tumor compreende um tal NRG1-fusão. Uma maneira é por meio de PGR- amplificação com iniciadores que abrangem a junção na fusão NRG1. Isso pode ser facilmente implementado para NRG1-fusões que são conhecidos para ocorrer. Novas fusões também podem ser detectadas facilmente. Uma maneira adequada é, por exemplo, por técnicas de clonagem de junção utilizadas para encontrar, por exemplo, o local de integração de genomas retrovirais. Um método adequado é por meio de LAM-PCR ver Schmidt et al Nature Methods 4, 1051-1057 (2007) doi: 10.1038 / nmeth1103 e específicos referências ao LAM- tecnologia aí.

[0056] Um método de tratamento da invenção é de preferência caracterizada pelo fato da célula ou tumor tem menos do que 400.000 receptores de superfície celular ErbB- 1 por célula, de preferência menos do que 200.000 receptores de superfície celular ErbB-1 por célula.

[0057] Em uma concretização preferida, o método de tratamento da invenção compreende adicionalmente a administração ao indivíduo de um inibidor de ErbB-1, preferencialmente, cetuximab.

[0058] O método de tratamento, tal como aqui definido também pode ser definido como um composto ou combinação de compostos para utilização no tratamento da. A combinação adequada de compostos é um anticorpo biespecífico, tal como aqui definido e um inibidor de ErbB-1.

[0059] Para determinar se uma célula ou tumor é positivo para ErbB-2 e ErbB-3, o técnico versado no assunto pode determinar, por exemplo, a amplificação de ErbB-2 e ErbB-3 e / ou coloração de imuno-histoquímica. Em células tumorais pelo menos 10% em uma biópsia deverá ser positiva para ambas ErbB-2 e para ErbB-3. A biópsia também pode conter 20%, 30% 40% 50% 60% 70% ou mais células positivas. Os tumores positivos ErbB-1 podem ser identificados de modo semelhante.

[0060] De um modo preferido o referido câncer positivo é um câncer da mama, tal como câncer da mama em fase precoce. No entanto, a invenção pode ser aplicada a uma vasta gama de cânceres positivos ErbB-2, ErbB-3 ou ErbB-2 / erbB-3, como o câncer gástrico, o câncer colorretal, câncer do cólon, câncer gastroesofágico, câncer do esófago, câncer do endométrio , câncer do ovário, câncer da mama, câncer do fígado, câncer do pulmão, incluindo o câncer do pulmão de não pequenas células, do sarcoma de células claras, câncer da glândula salivar, câncer da cabeça e pescoço, câncer do cérebro, câncer da bexiga, câncer do pâncreas, câncer da próstata, câncer do rim, câncer de pele, melanoma, e outros semelhantes. A célula é, de preferência, uma célula epitelial. Alternativamente, a célula ou tumor é de preferência uma célula de tumor ou de uma origem epitelial. Em uma concretização preferida, a célula ou tumor é um câncer da mama, um câncer do ovário, um câncer do pulmão, ou uma metástase do mesmo. De preferência, o tumor é de origem epitelial. De um modo preferido, o tumor é um câncer da mama, um câncer do ovário, um câncer do pulmão, ou uma metástase do mesmo.

[0061] Pacientes com células positivas ErbB-2 ou células tumorais podem ser classificados com base no número de receptores de ErbB-2 na superfície da célula tumoral. Os tumores com mais de i) receptores erbB-2 na sua superfície celular são tipicamente classificadas como ErbB-2 [+++], aqueles com entre 150.000 e 1.000.000 são classificados como ErbB-2 [++], e aqueles com menos de 150.000 são classificados como ErbB- 2 [+]. De preferência, o paciente é classificado como ErbB- 2 [++] ou ErbB-2 [+++]. De um modo preferido, o tumor positivo de ErbB-2 / ErbB-3 tem pelo menos 1.000.000 de receptores de superfície celular ErbB-2 por célula.

[0062] De preferência, são proporcionados métodos em que a célula positiva de ErbB-2 / ErbB-3 ou tumor tem, pelo menos, 150.000 receptores de superfície celular ErbB-2 por célula e menos do que 50.000 receptores da superfície celular ErbB-3 por célula. De preferência, são proporcionados métodos, em que a célula positiva de ErbB-2 / ErbB-3 ou tumor tem pelo menos 1,00,000 receptores de superfície celular

ErbB-2 por célula e menos do que 50.000 receptores da superfície celular ErbB-3 por célula.

[0063] Em algumas concretizações, os métodos aqui descritos são vantajosos na medida em que as populações específicas de pacientes são primeiramente determinadas com base em, por exemplo, a ErbB-1, erbB-2, e a densidade do receptor / ou ErbB-3 da superfície celular. Por conseguinte, os métodos aqui divulgados compreendem, de preferência, a determinação da densidade do receptor de superfície celular de ErbB-1, densidade de receptores da superfície celular ErbB-2, densidade de receptores da superfície celular ErbB- 3 e / ou densidade do receptor de superfície celular ErbB-4 para a referida célula ou tumor. Tal como aqui utilizado, o termo “densidade de receptores de superfície celular” refere-se ao número de receptores presentes na superfície celular por célula.

[0064] De preferência, os métodos divulgados aqui ainda compreendem a determinação da densidade do receptor de superfície celular ErbB-2 para a referida célula ou tumor. Os pacientes podem ser classificados usando imunohistoquímica ou hibridação fluorescente. O HercepTest™ e / ou HER2 FISH (Pharm Dx ™), comercializados tanto por Dako Denmark A / S, e / ou utilizando um ensaio de HERmark®, comercializado pela Biosciences monograma são exemplos de ensaios adequados para a determinação da densidade do receptor superfície da célula ErbB-2 ou ErbB-3. Outros métodos para determinar a densidade celular do receptor de erbB-2 são bem conhecidos para um técnico versado no assunto. Os métodos in vivo para a determinação de ErbB-2 são também conhecidos, ver, por exemplo, Chernomoridik et al. Mol Imaging. Agosto 2010; 9 (4): 192-200 e Ardeshirpour et al. Tratar Technol Câncer Res. 2014 Oct; 13 (5): 427-434.

[0065] De preferência, os métodos divulgados aqui compreendem ainda a determinação da densidade do receptor de ErbB-2 na superfície celular para a referida célula ou tumor. Tais métodos são conhecidos para um técnico versado no assunto (ver, por exemplo, van der Woning e van Zoelen Biochem Biophys Res Commun 2009 Jan 9; 378 (2): 285-9). De preferência, os métodos divulgados aqui compreendem ainda determinar a densidade do receptor de superfície celular de ErbB-1 para a referida célula ou tumor. Tais métodos são conhecidos para um técnico versado no assunto (ver, por exemplo, Kit de EGFR pharmDx ™ (Dako)) amd McDonagh et al. Mol Cancer Ther 2012; 11: 582). Métodos semelhantes podem ser utilizados para determinar densidade do receptor de superfície celular ErbB-4.

[0066] Em algumas concretizações, os ErbB-1, ErbB- 2, ErbB-3, e densidades de receptores de superfície celular de ErbB-4 são determinadas por análise FACS em células tumorais de biópsias.

[0067] De preferência, as células da célula positiva de ErbB-2 / ErbB-3 ou do tumor ter níveis relativamente elevados de expressão de heregulina. Heregulina é um fator de crescimento que está envolvido no crescimento de células tumorais ou células positivas ErbB 3. Tipicamente, quando as células tumorais ou células expressam níveis elevados de heregulina (referido como estresse de heregulina), as terapias atualmente conhecidas como trastuzumab, pertuzumab e lapatinib já não são capazes de inibir o crescimento de células ou do tumor. Este fenômeno é chamado de resistência de heregulina. Em particular, o nível de expressão de heregulina que é maior do que o nível de expressão de células MCF7 heregulina. Os níveis de expressão de heregulina são, por exemplo, medida utilizando qPCR com a célula ou o RNA do tumor (tal como, por exemplo, descritos em Shames et al. PLoS ONE, fevereiro de 2013, vol.8, Issue 2, pp 1-10 e em Yonesaka et al., Sci .transl.Med, Vol.3, Edição 99 (2011); pp. 1-11), ou utilizando métodos de detecção de proteína, como, por exemplo, ELISA, de preferência, utilizando-se amostras de sangue, de plasma ou de soro (como descrito por exemplo em Yonesaka et . al., Sci.transl. Med, Vol.3, Edição 99 (2011); pp 1-11).

[0068] Altos níveis de heregulina estão tipicamente presentes durante a formação de metástases (isto é, a migração, invasão, crescimento e / ou diferenciação de uma célula de tumor ou células de tumor ou células de início). Tipicamente, as células tumorais que inicia são identificados com base em marcadores de células-tronco, tais como, por exemplo, CD44, CD24, CD 133 e / ou ALDH1. Estes processos podem, por conseguinte, apenas ser neutralizada com terapias correntemente conhecidos como trastuzumab e pertuzumab. Os anticorpos biespecíficos aqui descritos são capazes de contrariar a formação de metástases em indivíduos com células de tumores que compreendem um gene de fusão que compreende NRG1 final do Gene fundido-NRG1 a uma 5' a 3' sequência a partir de uma localização cromossômica diferente.

[0069] É ainda proporcionado, por conseguinte, um método para neutralizar a formação de uma metástase de um sujeito tendo uma célula positiva ErbB-2, ErbB-3 ou ErbB-2 / ErbB-3 ou tumor, em que a referida célula positiva ou tumor positivo ErbB-2, ErbB-3 ou ErbB- 2 ou / ErbB-3 tem um nível de expressão de heregulina que é pelo menos 60%, de preferência, pelo menos 70%, mais de preferência, pelo menos 80%, mais preferencialmente, pelo menos 85%, mais preferencialmente, pelo menos 90% ou 95% do nível de expressão de heregulina de células BxPC3 ou MCF7, compreendendo a administração ao indivíduo de um anticorpo biespecífico que compreende um primeiro local de ligação ao antígeno que se liga ErbB-2 e um segundo local de ligação ao antígeno que se liga de ErbB-3. Também é fornecido um anticorpo biespecífico que compreende um primeiro local de ligação ao antígeno que se liga de ErbB-2 e um segundo local de ligação ao antígeno que se liga de ErbB-3 para utilização no tratamento ou prevenção da formação de metástases, em que a referida célula positiva ou tumor positivo ErbB-2, ErbB-3 ou ErbB-2 / ErbB-3 tem um nível de expressão de heregulina que é pelo menos 60%, de preferência, pelo menos 70%, mais preferencialmente, pelo menos 80%, mais preferencialmente pelo menos 85%, mais preferencialmente, pelo menos, 90% ou 95% do nível de expressão heregulina de células MCF7 ou BxPC3. Ainda proporcionada uma utilização de um anticorpo biespecífico de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção da formação de metástases, em que a referida célula positiva ou tumor positivo erbB-2, ErbB-3 ou ErbB-2 / ErbB-3 tem um nível de expressão de heregulina que é pelo menos 60%, de preferência, pelo menos 70%, mais preferencialmente, pelo menos 80%, mais preferencialmente pelo menos 85%, mais preferencialmente, pelo menos 90% ou 95% do nível de expressão de heregulina de células MCF7 ou BxPC3.

[0070] O indivíduo é, de preferência, um sujeito humano. O indivíduo é, de preferência, um indivíduo elegível para terapia de anticorpo monoclonal utilizando um anticorpo específico de ErbB-2, tais como trastuzumab.

[0071] A quantidade de biespecífico para ser administrada a um doente é tipicamente na janela terapêutica, o que significa que uma quantidade suficiente seja utilizada para a obtenção de um efeito terapêutico, enquanto que a quantidade não exceda um valor limiar que leva a um grau inaceitável de efeitos secundários. Quanto menor a quantidade de anticorpo necessária para obter o efeito terapêutico desejado, maior será a janela terapêutica. O nível de dosagem selecionado dependerá de uma variedade de fatores incluindo a via de administração, o tempo de administração, a taxa de excreção do composto particular a ser utilizado, a duração do tratamento, outras drogas, compostos e / ou materiais utilizados em combinação , a idade, sexo, peso, condição, saúde geral e história médica anterior do paciente a ser tratado, e fatores similares bem conhecidos nas artes médicas. A dosagem pode estar no intervalo do regime de dosagem para o trastuzumab ou inferior.

[0072] Os anticorpos biespecíficos podem ser formulados como uma composição farmacêutica compreendendo um transportador, diluente, ou excipiente farmaceuticamente aceitável, e, agentes ativos opcionais adicionais. Os anticorpos e composições que compreendem os anticorpos podem ser administrados por qualquer via, incluindo parentérica, entérica e tópica. A administração parentérica é usualmente por injeção, e inclui, por exemplo, intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intraventricular, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intratécnico versado no assuntoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intra- articular, sub-capsular, subaracnóide, intraespinal, intracerebro espinal, intratumoral, e intraesternal e infusão.

[0073] Em concretizações preferenciais, um inibidor de ErbB-1 pode ser combinado com o tratamento com os anticorpos biespecíficos aqui revelados. O inibidor de ErbB- 1 pode ser administrado simultaneamente ou sequencialmente com o anticorpo biespecífico. O tratamento com o inibidor de ErbB-1 pode ser separado por vários minutos, horas ou dias após o tratamento com o anticorpo biespecífico. De preferência, a célula ou tumor ErbB-2 / ErbB3 é também positiva para ErbB-l. De um modo preferido, o tratamento de combinação é adequado para células ou tumores ErbB-2 / ErbB3 com mais de 5.000 receptores de superfície celular por, de preferência, pelo menos 20.000 receptores de superfície celular, por um modo mais preferido mais do que 50.000 receptores da superfície por célula.

[0074] Os inibidores adequados de ErbB-1 são conhecidos no estado da técnica e referem-se a compostos que inibem, pelo menos, uma atividade biológica de ErbB-1 (EGFR), em particular, um composto que diminui a expressão ou a atividade de sinalização de ErbB-1. Os inibidores preferidos de ErbB-1 ligam-se ao local de ligação extracelular da molécula de receptor de tirosina quinase e bloqueiam a ligação dos ligantes naturais, tais como EGF. Tais inibidores incluem anticorpos, porções de anticorpos e peptídeos compreendendo epítopos que têm como alvo este domínio de ligação extracelular do receptor do EGF. De preferência, o inibidor de ErbB-1 é um anticorpo anti-ErbB-1, de um modo preferido selecionado a partir de cetuximab, matuzumabe, necitumumab, nimotuzumabe, panitumumab ou zalutumumabe. A invenção está ainda relacionado com inibidores de ErbB-1 que podem se ligar ou interagir com o local de fosforilação intracelular ou domínio da molécula de receptor de tirosina quinase, tais impedir ou se diminuir a fosforilação por tirosina-quinase. Isto pode ser conseguido por pequenas (químicos) fármacos de moléculas. Os inibidores preferidos incluem afatinib, erlotinib, gefitinib, lapatinib, osimertinib e neratinib.

[0075] A divulgação fornece anticorpos biespecíficos para utilização nos métodos e tratamentos aqui descritos. anticorpos biespecíficos adequados compreendem um primeiro local de ligação ao antígeno que se liga de ErbB-2 e um segundo local de ligação ao antígeno que se liga de ErbB-3, em que o anticorpo biespecífico reduz ou pode reduzir uma função do receptor induzida pelo ligante de ErbB-3 em uma célula positiva ErbB- 2 e ErbB-3. Os anticorpos preferidos e a sua preparação são revelados no documento WO 2015/130173,

o qual é aqui incorporado por referência. Os exemplos no WO 2015/130173 descrevem ainda um certo número de propriedades dos anticorpos, tais como mapeamento de epítopo e ligação de ligante.

[0076] Tal como aqui utilizado, o termo "local de ligação ao antígeno" refere-se a um local e derivados de, e, de preferência, como presente em um anticorpo biespecífico que é capaz de se ligar ao antígeno. Um local de ligação ao antígeno não modificado é tipicamente formado por e presente no domínio variável do anticorpo. O domínio variável contém o referido local de ligação ao antígeno. Um domínio variável que se liga a um antígeno é um domínio variável que compreende um local de ligação ao antígeno que se liga ao antígeno.

[0077] Em uma concretização de um domínio variável de anticorpo compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL). O local de ligação ao antígeno pode estar presente no domínio variável VH / VL combinada, ou em apenas a região VH ou da região VL única. Quando o local de ligação ao antígeno está presente em apenas uma das duas regiões de domínio variável, a região variável de homólogo pode contribuir para o enrolamento e / ou estabilidade da região variável de ligação, mas não contribui significativamente para a ligação do antígeno em si.

[0078] Tal como aqui utilizado, ligação ao antígeno refere-se à capacidade de ligação típica de um anticorpo para o seu antígeno. Um anticorpo que compreende um local de ligação ao antígeno que se liga a ErbB-2, se liga a ErbB-2 e, sob condições de outro modo idênticas, pelo menos 100 vezes mais baixa para os receptores homólogos de ErbB-1 e ErbB-4 da mesma espécie. Um anticorpo que compreende um local de ligação ao antígeno que se liga a ErbB-3, ErbB-liga-se a 3 e, sob condições de outro modo idênticas, não para os receptores homólogos ErbB-1 e ErbB-4 da mesma espécie. Considerando que a ErbB-família é uma família de receptores de superfície celular, a ligação é tipicamente avaliada em células que expressam o receptor (s). A ligação de um anticorpo a um antígeno pode ser avaliada de várias maneiras. Uma maneira é a incubar o anticorpo com o antígeno (de preferência células que expressam o antígeno), remover o anticorpo não ligado (de preferência, por um passo de lavagem) e a detecção de anticorpo ligado, através de um anticorpo marcado que se liga ao anticorpo ligado.

[0079] Ligação ao antígeno a um anticorpo é tipicamente mediada através das regiões de complementaridade do anticorpo e a estrutura tridimensional específicas de ambos o antígeno e o domínio variável permitindo que estas duas estruturas para se ligarem em conjunto com precisão (uma interação semelhante a uma chave e fechadura), em oposição a colagem aleatória, não específica de anticorpos. Como um anticorpo geralmente reconhece um epítopo de um antígeno, e, como tal epítopo pode estar presente em outros compostos, bem como, anticorpos de acordo com a presente invenção que se ligam de ErbB-2 e / ou ErbB-3 pode reconhecer outras proteínas, bem como, se tal outros compostos contêm o mesmo epítopo. Assim, o termo "ligação" não exclui a ligação dos anticorpos a uma outra proteína ou proteína (s)

que contêm o mesmo epítopo. Tal outra proteína (s) não é de preferência uma proteína humana. Um ErbB-2 local de ligação ao antígeno e um local de ligação ao antígeno ErbB-3 como aqui definido, tipicamente não se ligam a outras proteínas na membrana de células em um post-natal, de preferência, humano adulto. Um anticorpo biespecífico, tal como aqui descrito é tipicamente capaz de se ligar de ErbB-2 e ErbB-3 com uma afinidade de ligação de pelo menos 1 x 10e-6, como descrito em mais detalhe abaixo.

[0080] O termo "interfere com a ligação" como aqui utilizado, significa que o anticorpo é dirigido para um epítopo no ErbB-3 e o anticorpo compete com o ligando para a ligação a ErbB-3. O anticorpo pode diminuir a ligação do ligando, deslocar o ligando quando este já está ligado à ErbB-3 ou pode ser, por exemplo, através de impedimento espacial, pelo menos parcialmente, prevenir que o ligando pode ligar-se a ErbB-3.

[0081] O termo "anticorpo" tal como aqui utilizado, significa uma molécula proteica, de preferência pertencentes à classe de imunoglobulinas de proteínas, contendo um ou mais domínios variáveis que se ligam a um epítopo num antígeno, em que esses domínios são derivados de ou partes de homologia de sequência com o domínio variável de um anticorpo. Os anticorpos para utilização terapêutica são preferivelmente tão próximos de anticorpos naturais do sujeito a ser tratado quanto possível (por exemplo, anticorpos humanos para sujeitos humanos). A ligação do anticorpo pode ser expressa em termos de especificidade e afinidade. A especificidade que determina o antígeno ou seu epítopo está especificamente ligada pelo domínio de ligação. A afinidade é uma medida para a resistência de ligação a um antígeno ou epítopo específico. A ligação específica, é definida como a ligação com afinidades (KD) de, pelo menos, 1x10e-6M, mais preferencialmente, 1x10e-7 M, mais preferencialmente maior do que 1x10e-9 M. Tipicamente, os anticorpos para aplicações terapêuticas têm afinidades de até 1x10e-10 M ou superior. Tais anticorpos os anticorpos biespecíficos da presente invenção compreendem os domínios constantes (porção Fc) de um anticorpo natural. Um anticorpo da presente invenção é tipicamente um anticorpo de comprimento completo biespecífico, preferencialmente, da subclasse de IgG humana. De preferência, um anticorpo tal como aqui divulgado é da subclasse de IgG1 humana. Tais anticorpos têm boas propriedades de ADCC, tem uma meia vida favorável após administração in vivo a seres humanos e tecnologia de engenharia CH3 existe que pode fornecer para cadeias pesadas modificadas que formam preferencialmente heterodímeros mais de homodímeros por co-expressão em células clonais.

[0082] Um anticorpo tal como aqui divulgado um modo preferido, um anticorpo "de comprimento total". O termo 'comprimento total' é definido como um anticorpo que compreende essencialmente completa, o que, no entanto, não têm necessariamente todas as funções de um anticorpo intacto. Para evitar dúvidas, um anticorpo de comprimento completo contém duas cadeias pesadas e duas leves. Cada cadeia contém constante (C) e regiões variáveis (V), que pode ser dividido em domínios designados CH1, CH2, CH3, VH, CL e, VL. Um anticorpo liga-se ao antígeno através dos domínios variáveis contidas na porção Fab, e após a ligação podem interagir com moléculas e células do sistema imune através dos domínios constantes, sobretudo através da parcela Fe. Os termos 'domínio variável', 'de VH / VL par', 'de VH / VL' são aqui utilizados indiferentemente. de anticorpos de comprimento completo, de acordo com a invenção englobam os anticorpos em que as mutações possam estar presentes que fornecem as características desejadas. Tais mutações não deve ser deleções de porções substanciais de qualquer uma das regiões. No entanto, os anticorpos em que um ou vários resíduos de aminoácidos são eliminados, sem, essencialmente, que altera as características de ligação do anticorpo resultante estão abrangidas no termo "anticorpo de comprimento total". Por exemplo, um anticorpo de IgG podem ter inserções de resíduos de ácido 1-20 aminoácidos, deleções ou uma sua combinação, na região constante. Por exemplo, a atividade de ADCC de um anticorpo pode ser melhorado quando o próprio anticorpo tem uma baixa atividade de ADCC, por modificar ligeiramente a região constante do anticorpo (Junttila, T. T., K. Parsons, et al. (2010). "Superior In vivo Efficacy of Afucosylated Trastuzumab in the Treatment of HER2-Amplified Breast Cancer." Cancer Research 70(11): 4481-4489).

[0083] Os anticorpos IgG de comprimento total são preferidos devido à sua meia-vida favorável e a necessidade de manter a plena autólogas moléculas tão próximo (humanos), por razões de imunogenicidade. Um anticorpo tal como aqui divulgado um modo preferido, um anticorpo IgG biespecífico, preferivelmente, um anticorpo IgG1 de comprimento completo biespecífico. IgG1 é favorecido com base em sua longa meia- vida circulatório no homem. A fim de evitar qualquer imunogenicidade em seres humanos, é preferível que o anticorpo IgG biespecífico seja uma IgG1 humana.

[0084] O termo 'biespecífico' (sl) significa que uma parte do anticorpo (como definido acima) se liga a um epítopo num antígeno ao passo que uma segunda parte se liga a um epítopo diferente. O epítopo diferente é, tipicamente, presente em um antígeno diferente. Os primeiro e segundo antígenos são, de fato, duas proteínas diferentes. Um anticorpo biespecífico preferido é um anticorpo que compreende partes de dois anticorpos monoclonais diferentes e consequentemente se liga a dois tipos diferentes de antígeno. Um braço do anticorpo biespecífico, tipicamente, contém o domínio variável de um anticorpo e o outro braço contém o domínio variável de um outro anticorpo. As regiões variáveis da cadeia pesada do anticorpo biespecífico são tipicamente diferentes um do outro, enquanto que a cadeia leve de regiões variáveis são, de preferência, a mesma. Um anticorpo biespecífico, em que as diferentes regiões variáveis da cadeia pesada estão associados com o mesmo, ou um comum, de cadeia leve também é referido como um anticorpo biespecífico com uma cadeia de luz comum.

[0085] Os anticorpos biespecíficos preferidos pode ser obtidos por co-expressão de duas diferentes cadeias pesadas e uma cadeia leve em comum uma única célula. Quando os domínios CH3 tipo selvagem são usados, a co-expressão de duas diferentes cadeias pesadas e uma cadeia leve comum vai resultar em três espécies diferentes, AA, AB e BB. Para aumentar a percentagem do produto de engenharia CH3 biespecífico desejado (AB) pode ser empregada ou, por outras palavras, pode-se usar cadeias pesadas com domínios de heterodimerização compatíveis, como aqui definido adiante.

[0086] O termo 'domínios de heterodimerização compatíveis', tal como aqui utilizado refere-se a domínios de proteínas que são modificados, de tal modo que domínio modificado A irá formar preferencialmente heterodímeros com domínio B concebido e vice-versa, ao passo que a homodimerização entre A'-A' e B'-B' é diminuída.

[0087] O termo 'cadeia leve comum' refere-se a cadeias leves que podem ser iguais ou têm algumas diferenças na sequência de aminoácidos, enquanto a especificidade de ligação do anticorpo de comprimento completo não é afetada. É possível, por exemplo, para preparar ou encontrar cadeias leves que não são idênticos, mas ainda funcionalmente equivalente, por exemplo, por introdução e testar as alterações de aminoácidos conservativas, alterações de aminoácidos nas regiões que não ou só contribuem, em parte, a especificidade de ligação quando emparelhado coma cadeia pesada, e similares. Os termos 'cadeia leve comum', 'VL comum', 'cadeia leve única', 'VL única', com ou sem a adição do termo 'rearranjado' são todos utilizados aqui indiferentemente.

[0088] Uma cadeia leve comum (região variável) tem de preferência uma sequência da linhagem germinativa. A sequência da linha germinal preferido é uma região variável da cadeia leve que é frequentemente usado no repertório humano e tem boa estabilidade termodinâmica, rendimento e solubilidade. Em uma concretização preferida, a cadeia leve compreende uma região de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos de um O12 / IgV K segmento de gene 1-39 * 01 como representado nas sequências 1C "cadeia leve comum IGKV1-39 / JK1" com 0-10 , de preferência 0-5 inserções de aminoácidos, deleções, substituições, adições ou uma combinação dos mesmos. IgV K 1-39 é curto para Kappa 1-39 gene da imunoglobulina variável. O gene também é conhecido como imunoglobulina Kapa Variável 1-39; IGKV139; IGKV1-39; O12a ou O12. Ids externos para o gene são HGNC: 5740; Gene Entrez: 28930; Ensembl: ENSG00000242371. A região variável de IGKV1-39 está listado nas sequências 1C. A região V pode ser combinado com um de cinco J-regiões.

[0089] Sequências 1C descrevem duas sequências preferidas para IgV K 1-39 em combinação com um J-região. As sequências unidas são indicados como IGKV1-39 / JK1 e IGKV1- 39 / jk5; nomes alternativos são IgV K 1-39 * 01 / IGJ K 1 * 01 ou IgVK1-39 * 01 / IGJ K 5 * 01 (nomenclatura de acordo com a rede mundial de computadores do banco de dados IMGT em imgt.org).

[0090] Prefere-se que O12 / IgV o K 1-39 * 01 compreendendo a região variável da cadeia leve é uma sequência da linha germinal. É ainda preferido que a IGJ K 1 * 01 ou / IGJ K 5 * 01 compreendendo a região variável da cadeia leve é uma sequência da linha germinal. Em uma concretização preferida, as regiões variáveis IGKV1-39 / JK1 ou IGKV1-39 / jk5 cadeia leve são sequências da linhagem germinativa.

[0091] Em uma concretização preferida, a região variável da cadeia leve compreende uma linhagem germinal O12 / IgV K 1-39 * 01. Em uma concretização preferida, a região variável de cadeia leve compreende a cadeia leve kapa IgV K 1-39 * 01 / IGJ K 1 * 01 ou IgV K 1-39 * 01 / IGJ K 5 * 01. Em uma concretização preferida um IgV K 1-39 * 01 / IGJ K 1 * 01. A região variável de cadeia leve compreende de preferência uma cadeia leve de linha germinal kappa IgV K 1- 39 * 01 / IGJ K 1 * 01 ou da linhagem germinativa de cadeia leve kappa IgV K 1-39 * 01 / IGJ K 5 * 01, de preferência uma linha germinal IgV K 1 -39 * 01 / IGJ K 1 * 01.

[0092] Obviamente, os técnicos versados no assunto reconhecerão que "comum" também se refere-se a equivalentes funcionais da cadeia leve do que a sequência de aminoácidos não for idêntica. Muitas variantes das ditas existir cadeia leve, em que as mutações (deleções, substituições, adições) estão presentes que não influenciam substancialmente a formação de regiões de ligação funcionais. A cadeia leve pode também ser uma cadeia leve, tal como especificado aqui acima, possuindo 1-5 inserções de aminoácidos, deleções, substituições ou uma combinação dos mesmos.

[0093] De preferência, tanto o primeiro local de ligação ao antígeno e o referido local de ligação do segundo antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo uma CDR1 tendo a sequência (RASQSISSYLN), uma CDR2 tendo a sequência (AASSLQS), e uma CDR3 tendo a sequência (QQSYSTPPT).

[0094] O termo 'ErbB-1', tal como aqui utilizado refere-se à proteína que em seres humanos é codificada pelo gene erbB-1. Nomes alternativos para o gene ou proteína incluem complexos EGFR, ERBB, HER1, Erb-B2 tirosina-quinase do receptor 1. Quando aqui é feita referência a ErbB-l, a referência refere-se a ErbB-1 humano.

[0095] O termo 'ErbB-2', tal como aqui utilizado refere-se à proteína que em seres humanos é codificada pelo gene erbB-2. Nomes alternativos para o gene ou proteína incluem CD340; HER-2; HER-2 / neu; MLN 19; NEU; NGL; TKR1. O gene erbB-2 é frequentemente chamado de HER2 (receptor do factor de crescimento epidérmico humano 2). Sempre que é feita aqui referência a ErbB-2, a referência se refere ao erbB-2 humano. Um anticorpo que compreende um local de ligação ao antígeno que se liga de ErbB-2, se liga humano de ErbB-2. O ErbB-2 local de ligação ao antígeno pode, devido a sequência e estrutura terciária similaridade entre outros ortólogos de mamero humano e, também se ligam um ortólogo tal, mas não é necessariamente assim. neros de acesso base de dados para a proteína erbB-2 humano e o gene que a codifica são (NP_001005862.1, NP_004439.2 NC_000017.10 NT_010783.15 NC_018928.2). Os números de acesso são indicados principalmente para proporcionar um outro método de identificação de erbB-2 como um alvo, a sequência real da proteína erbB-2 ligado ao anticorpo pode variar, por exemplo devido a uma mutação no gene que codifica tais como aqueles que ocorrem em alguns cânceres ou semelhantes. O local de ligação ao antígeno de ErbB-2 liga-se de ErbB-2 e uma variedade de variantes destes, tais como os expressos por algumas ErbB-2 células positivas ou células tumorais.

[0096] O termo 'ErbB-3', tal como aqui utilizado refere-se à proteína que em seres humanos é codificada pelo gene erbB-3. Nomes alternativos para o gene ou proteína está HER3; LCCS2; MDA-BF-1; c-erbB-3; c-erbB-3; erbB-3-S; PL80- erbB-3; p45-sErbb-3; e p85-sErbb-3. Sempre que é feita aqui referência a ErbB-3, a referência refere-se a ErbB-3 humana. Um anticorpo que compreende um local de ligação ao antígeno que se liga de ErbB-3, ErbB humano liga-3. O ErbB-3 sítio de ligação ao antígeno, pode, devido a sequência e estrutura terciária similaridade entre outros ortólogos de mamífero humano e, também se ligam um ortólogo tal, mas não é necessariamente assim. neros de acesso base de dados para a protea ErbB-3 humana e o gene que a codifica são (NP_001005915.1 NP_001973.2, NC_000012.11 NC_018923.2 NT_029419.12). Os números de acesso são indicados principalmente para proporcionar um outro método de identificação de ErbB-3 como um alvo, a sequência real da proteína de ErbB-3 ligada por um anticorpo podem variar, por exemplo devido a uma mutação no gene que codifica tais como aqueles que ocorre em alguns cânceres ou semelhantes. O local de ligação ao antígeno de ErbB-3 liga-se ErbB-3 e uma variedade de variantes destes, tais como os expressos por algumas células positivas ou células tumorais ErbB-2.

[0097] O termo 'ErbB-4', tal como aqui utilizado refere-se à proteína que em seres humanos é codificada pelo gene erbB-4. Nomes alternativos para o gene ou proteína incluem HER4, Erb-B2 tirosina-quinase do receptor 4, e do receptor do fator de crescimento epidérmico Humano 4. Sempre que aqui seja feita referência a ErbB-1, a referência refere- se a ErbB-4 humana.

[0098] Os anticorpos aqui descritos podem reduzir a função do receptor induzida pelo ligante de ErbB-3 em uma célula positiva de ErbB-2 e ErbB-3. Na presença de excesso de heterodímeros ErbB-2, ErbB-2 / ErbB-3 podem fornecer um sinal de crescimento para a célula que expressa na ausência de ligando detectável para a cadeia de ErbB-3 no heterodímeros. Esta função de receptor ErbB-3 é aqui referida como uma função do receptor independente de ligando de ErbB-

3. O heterodímeros ErbB-2 / ErbB-3 também proporcionar um sinal de crescimento para a célula que expressa, na presença de um ligante de ErbB-3. Esta função de receptor ErbB-3 é aqui referida como uma função do receptor induzida pelo ligante de ErbB-3.

[0099] O termo "ligante ErbB-3", tal como aqui utilizado refere-se a polipeptídeos que se ligam e ativam ErbB-3. Exemplos de ligantes ErbB-3 incluem, mas não estão limitados a neuregulina 1 (NRG) e neuregulina 2, betacelulina, factor de crescimento epidérmico de ligação de heparina e epirregulina. O termo inclui fragmentos biologicamente ativos e / ou variantes de um polipeptídeo que ocorre naturalmente.

[00100] De preferência, a função do receptor induzida pelo ligante de ErbB-3 é ErbB-3 crescimento induzida pelo ligante de uma célula positiva de ErbB-2 e ErbB-3. Em uma concretização preferida, a referida célula é uma célula MCF- 7 (ATCC HTB-22 ™); um (ATCC HTB-30 ™) de células SKBR3; um NCI-87 (ATCC CRL-5822 ™) celular; uma célula BxPC-3-Luc2 (Perkin Elmer 125058), uma célula BT-474 (ATCC HTB-20 ™) ou uma célula JIMT-1 (DSMZ ACC não .: 589).

[00101] Tal como aqui utilizado a função do receptor induzida pelo ligante é reduzida em pelo menos 20%, de preferência, pelo menos 30, 40, 50 60, ou pelo menos 70% em uma concretização particularmente preferida, a função do receptor induzida pelo ligante é reduzida em cerca de 80, mais preferencialmente por 90%. A redução é, de preferência, determinado por uma determinação da função do receptor induzida pelo ligante, na presença de um anticorpo biespecífico aqui divulgado, e comparando-o com a mesma função na ausência do anticorpo, sob condições de outro modo idênticas. As condições compreendem, pelo menos, a presença de um ligando de ErbB-3. A quantidade de ligando presente é de preferência uma quantidade que induz metade do crescimento máximo de uma linha de células ErbB-2 e ErbB-3 positiva. O ErbB-2 e linhagem celular positiva ErbB-3 para este ensaio é de preferência a linhagem celular MCF-7 de células (ATCC HTB-22 ™), a linha de células SKBR3 (ATCC HTB-30 ™), a célula JIMT-1 a linha (DSMZ ACC 589) ou a linhagem celular NCI-87 (ATCC CRL-5822 ™). O teste e / ou o ligando para a determinação da função do receptor induzida pelo ligante de ErbB-3 é de preferência um teste para a redução do crescimento de ErbB-3 induzida pelo ligante, tal como especificado nos exemplos.

[00102] A proteína erbB-2 contém vários domínios (ver, por referência a figura 1 dos Landgraf, câncer da mama R Res 2007; 9 (1):. 202-). Os domínios extracelulares são referidos como domínios I-IV. O local de ligação para os respectivos domínios de locais de ligação ao antígeno dos anticorpos aqui descritos, tem sido mapeada. Um anticorpo biespecífico com um local de ligação ao antígeno (primeiro local de ligação ao antígeno) que se liga ao domínio I ou domínio IV de ErbB-2 (primeiro local de ligação ao antígeno) compreende uma região variável de cadeia pesada que mantém a especificidade de ligação e afinidade significativa para ErbB-2, quando combinado com diferentes cadeias leves. anticorpos biespecíficos, com um sítio de ligação ao antígeno (primeiro local de ligação ao antígeno) que se liga ao domínio I ou domínio IV de ErbB-2 (primeiro local de ligação ao antígeno) e um local de ligação ao antígeno para ErbB-3 (segundo local de ligação ao antígeno) são mais eficazes na redução da função do receptor induzida pelo ligante de ErbB- 3, quando em comparação com um anticorpo biespecífico que compreende um local (primeiro local de ligação ao antígeno) de ligação ao antígeno que se liga a outro domínio extra- celular de ErbB-2. Um anticorpo biespecífico, compreendendo um local de ligação ao antígeno (primeiro local de ligação ao antígeno) que se liga de ErbB-2, em que o referido local de ligação ao antígeno liga-se ao domínio I ou domínio IV de erbB-2 é preferido. De preferência, o referido local de ligação ao antígeno liga-se ao domínio IV de ErbB-2. Os anticorpos preferidos compreendem um primeiro local de ligação ao antígeno que se liga de domínio I de ErbB-2 e um segundo local de ligação ao antígeno que se liga o domínio III de ErbB-3.

[00103] Em uma concretização preferida, o referido anticorpo compreende um local de ligação ao antígeno que se liga a pelo menos um aminoácido de domínio I de ErbB-2 selecionado a partir do grupo que consiste de T144, T164, R166, P172, G179, S180 e R181, e a resíduos de aminoácidos expostos na superfície que estão localizados dentro de cerca de cinco posições de aminoácidos a partir de T144, T164, R166, P172, G179, S180 ou R181.

[00104] Em uma concretização preferida, o referido anticorpo compreende, preferencialmente, um local de ligação ao antígeno que se liga a pelo menos um ácidoamino do domínio III de ErbB-3 selecionado a partir do grupo constituído por R426 e resíduos de aminoácidos expostos à superfície que estão localizados dentro de 11,2 Å de R426 na proteína nativa ErbB-3.

[00105] Um anticorpo biespecífico com um local de ligação ao antígeno (primeiro local de ligação ao antígeno) que se liga de ErbB-2, e que compreende ainda ADCC são mais eficazes do que outros anticorpos que se ligam de ErbB-2, que não têm atividade de ADCC significativa, particularmente in vivo. Por conseguinte, prefere-se um anticorpo biespecífico que apresenta ADCC. Verificou-se que os anticorpos em que o referido primeiro local de ligação ao antígeno liga-se ao domínio IV de ErbB-2 tinham atividade ADCC intrínseca. Um domínio I de ligação do anticorpo de ligação de ErbB-2 que tem uma baixa atividade de ADCC intrínseca pode ser manipulada para aumentar a atividade de ADCC regiões Fe medeiam a função de anticorpo ligando-se a diferentes receptores das células efetoras imunitárias, tais como macrófagos, células assassinas naturais, células B e neutrófilos. Alguns destes receptores, como CD16A (Fc? RIIIA) e CD32A (FcyRIIA), ativam as células para construir uma resposta contra antígenos.

[00106] Outros receptores, tais como CD32B, inibem a ativação de células imunes. Por regiões Fc concebidas (através de substituições de aminoácidos que introduzem) que se ligam a ativação dos receptores com maior seletividade, os anticorpos podem ser criadas que têm uma maior capacidade para mediar atividades citotóxicas desejadas por um agente Mab anti-câncer.

[00107] Uma técnica para aumentar ADCC de um anticorpo é afucosilação. (Ver, por exemplo Junttila, TT, K. Parsons, et al. (2010). "In vivo Superior Eficácia de. Trastuzumab afucosilado no tratamento de câncer da mama amplificado- HER2" Câncer Research 70 (11): 4481-4489) ainda proporcionado, por conseguinte, um anticorpo biespecífico, tal como aqui divulgado, que é afucosilado. Alternativamente, ou adicionalmente, várias outras estratégias podem ser utilizadas para alcançar aperfeiçoamento ADCC, por exemplo, incluindo glico-concepção (Kyowa Hakko / Biowa, GlycArt (Roche) e Eureka Therapeutics) e mutagénese (Xencor e MacroGenics), todos os quais procuram melhorar Fc se ligar a baixa afinidade activação FcyRIIIa e / ou para reduzir a ligação à baixa afinidade inibidora FcyRIIB.

[00108] Vários métodos in vitro existem para a determinação da eficácia de anticorpos ou de células efetoras em induzir ADCC. Entre estas são de ensaios de liberação de cromo-51 [Cr51], ensaios de liberação de európio [eu], e ensaios de liberação de enxofre 35 [S35]. Normalmente, uma linhagem de células alvo marcada que expressam um determinado antígeno exposta à superfície é incubada com um anticorpo específico para esse antígeno. Após a lavagem, as células efetoras que expressam receptor de Fc CD16 são tipicamente co-incubadas com as células alvo marcadas com anticorpo. A lise celular alvo é subsequentemente tipicamente medida pela liberação de marcador intracelular, por exemplo, por um contador de cintilação ou espectrofotometria.

[00109] Em anticorpos biespecíficos preferidos, a afinidade do referido segundo local de ligação a antígeno para uma célula positiva ErbB-3 é igual a, ou preferencialmente maior do que, a afinidade do que o referido primeiro local de ligação ao antígeno para uma célula positiva de ErbB-2. A afinidade (KD) do referido segundo local de ligação a antígeno para uma célula positiva ErbB-3 é de preferência inferior ou igual a 2,0 nM, mais preferencialmente, inferior ou igual a 1,5 nM, mais preferivelmente, menor do que ou igual a 1,39 nM, mais de preferência, menor do que ou igual a 0,99 nM. Em uma concretização preferida, a afinidade do referido segundo local de ligação ao antígeno para ErbB-3 em SK BR-3 células é inferior ou igual a 2,0 nM, mais preferencialmente inferior ou igual a 1,5 nM, mais preferivelmente menor do que ou igual para 1,39 nM, de preferência inferior ou igual a 0,99 nM. Em uma concretização, a referida afinidade está dentro da faixa de 1,39-0,59 nM. Em uma concretização preferida, a afinidade do referido segundo local de ligação ao antígeno para ErbB- 3 em células BT-474 é inferior ou igual a 2,0 nM, mais preferencialmente, inferior ou igual a 1,5 nM, mais preferencialmente, inferior ou igual a 1,0 nM, mais preferencialmente, inferior a 0,5 nM, de um modo mais preferido, menor do que ou igual a 0,31 nM, mais preferivelmente, menor do que ou igual a 0,23 nM. Em uma concretização, a referida afinidade está dentro da faixa de 0,31-0,15 nM. As afinidades acima mencionadas são, de preferência, conforme medido por meio de medidas de afinidade de células em estado estacionário, em que as células são incubadas a 4 ° C, utilizando o anticorpo marcado radioativamente, onde depois a radioatividade ligada à célula é medida, como descrito nos Exemplos do documento WO 2015/130173.

[00110] A afinidade (KD) do referido primeiro local de ligação ao antígeno para uma célula positiva de ErbB-2 é de preferência, inferior ou igual a 5,0 nM, mais preferencialmente, inferior ou igual a 4,5 nM, mais preferencialmente, inferior ou igual a 3,9 nM. Em uma concretização preferida, a afinidade do que o referido primeiro local de ligação ao antígeno para ErbB-2 em celulas SK BR-3 é inferior ou igual a 5,0 nM, de preferência, inferior ou igual a 4,5 nM, de um modo mais preferido menor do que ou igual a 4,0 nM, mais preferencialmente, inferior ou igual a 3,5 nM, mais preferencialmente inferior ou igual a 3,0 nM, mais preferencialmente, inferior ou igual a 2,3 nM. Em uma concretização, a referida afinidade está dentro da faixa de 3,0-1,6 nM. Em uma concretização preferida, a afinidade do que o referido primeiro local de ligação ao antígeno para ErbB-2 em BT-474 de células é inferior ou igual a 5,0 nM, de preferência inferior ou igual a 4,5 nM, mais preferencialmente inferior ou igual a 3,9 nM. Em uma concretização, a referida afinidade está dentro da faixa de 4,5-3,3 nM. As afinidades acima mencionadas são, de preferência, conforme medido por meio de medidas de afinidade de células em estado estacionário, em que as células são incubadas a 4 ° C, utilizando o anticorpo marcado radioativamente, onde depois a radioatividade ligada à célula é medida, como descrito nos Exemplos do documento WO 2015/130173.

[00111] De um modo preferido, os anticorpos biespecíficos utilizados nos modos divulgados não afetam significativamente a sobrevivência dos cardiomiócitos. Cardiotoxicidade é um fator de risco conhecido na ErbB-2 e as terapias dirigidas a frequência de complicações é aumentada quando o trastuzumab é utilizado em conjunto com antraciclinas induzindo desse modo o esforço cardíaco.

[00112] Os anticorpos biespecíficos aqui descritos são de preferência utilizados em seres humanos. Assim, os anticorpos preferidos são anticorpos humanos ou humanizados. Tolerância de um ser humano a um polipeptídeo é governada por muitos aspectos diferentes. Imunidade, seja mediada, B- célula mediada por células T ou outro é uma das variáveis que são englobadas na tolerância do humano para um polipeptídeo. A região constante de um anticorpo biespecífico é de preferência uma região constante humana. A região constante pode conter um ou mais, preferencialmente não mais do que 10, de preferência, não mais do que cinco diferenças de aminoácidos com a região constante de um anticorpo humano de ocorrência natural. Prefere-se que a parte constante é inteiramente derivado de um anticorpo humano de ocorrência natural. Vários anticorpos aqui produzidos são derivados de uma biblioteca de anticorpo humano de domínio variável. Como tal, estes domínios variáveis são humanos. As regiões de CDR originais podem ser derivadas a partir de seres humanos, ser sintéticas ou derivadas de um outro organismo. A região variável é considerada uma região variável humana quando ela tem uma sequência de aminoácidos que é idêntica a uma sequência de aminoácidos da região variável de um anticorpo humano de ocorrência natural, mas para a região CDR. A região variável de uma ErbB-2 de VH de ligação, um ErbB-3 de ligação de VH, ou uma cadeia leve de um anticorpo pode conter uma ou mais, preferencialmente não mais do que 10, de preferência, não mais do que cinco diferenças de aminoácidos com a região variável de um anticorpo humano de ocorrência natural, não contando possíveis diferenças na sequência de aminoácidos das regiões CDR. Tais mutações ocorrem também na natureza, no contexto de hipermutação somática.

[00113] Os anticorpos podem ser derivados de várias espécies animais, pelo menos no que diz respeito à região variável da cadeia pesada. É prática comum para humanizar tais, por exemplo, regiões variáveis de cadeia pesada de murino. Existem várias maneiras pelas quais isto pode ser conseguido entre os quais há enxerto de CDR para uma região variável de cadeia pesada humana com um 3D-estrutura que coincide com a estrutura 3D da região variável de cadeia pesada de murino; deimunização da região variável de cadeia pesada de murino, de preferência feito através da remoção conhecida ou suspeita de tipo T ou epítopos de células B- da região variável da cadeia pesada murina. A remoção é tipicamente por substituição de um ou mais dos aminoácidos no epítopo para o outro (tipicamente conservadora) aminoácido, de tal forma que a sequência do epítopo é modificado de tal modo que ele não é mais um epítopo de células T ou de células B.

[00114] Tais regiões variáveis de cadeia pesada de murino desimunizados são menos imunogênicos em humanos do que a região variável de cadeia pesada de murino inicial. De preferência, uma região variável ou de domínio é ainda humanizada, tal como, por exemplo, folheados. Ao utilizar técnicas de revestimento, resíduos exteriores que são prontamente encontrados pelo sistema imune são seletivamente substituídos com resíduos humanos para fornecer uma molécula híbrida que compreende quer uma superfície folheados fracamente imunogênica, ou substancialmente não imunogênica. Um animal, tal como utilizado na invenção é, preferencialmente, um mamífero, mais preferivelmente, um primata, com maior preferência um humano.

[00115] Um anticorpo biespecífico aqui divulgado um modo preferido compreende uma região constante de um anticorpo humano. De acordo com diferenças nos domínios constantes de cadeia pesada, os anticorpos são agrupados em cinco classes ou isotipos: IgG, IgA, IgM, IgD e IgE. Estas classes ou isotipos de compreender pelo menos uma das referidas cadeias pesadas que é nomeado com uma letra grega correspondente. De um modo preferido a regi constante compreende uma regi constante de IgG, mais preferencialmente, uma região constante de IgGl, de preferência, uma região constante de IgG1 mutante. Alguma variação na região constante de IgG1 ocorre na natureza,

tais como, por exemplo, o alotipo Glml, 17 e Glm3, e / ou é permitido sem alterar as propriedades imunológicas do anticorpo resultante. Tipicamente, entre cerca de 1 - 10 inserções, deleções, substituições de aminoácidos ou uma combinação dos mesmos são permitidos na região constante.

[00116] Os anticorpos biespecíficos preferidos como aqui descritos compreendem: - pelo menos a sequência CDR3, de um modo preferido, pelo menos, a CDR1, CDR2 e CDR3, ou pelo menos a sequência da região variável da cadeia pesada, de uma região variável de ErbB-2 específico de cadeia pesada selecionado a partir do grupo que consiste de MF2926, MF2930, MF1849; MF2973, MF3004, MF3958, MF2971, MF3025, MF2916, MF3991, MF3031, MF2889, MF2913, MF1847, MF3001, MF3003 e MF1898, ou uma sequência de região variável de cadeia pesada que difere em pelo maioria dos ácidos 15 amino, de um modo preferido em, no máximo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos, mais de preferência, no máximo 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, a partir das sequências da região variável da cadeia pesada recitado; e / ou - pelo menos a sequência CDR3, de um modo preferido, pelo menos, a CDR1, CDR2 e CDR3, ou pelo menos a sequência da região variável da cadeia pesada, de uma região variável de ErbB-3 específico de cadeia pesada selecionado a partir do grupo que consiste de MF3178; MF3176; MF3163; MF3099; MF3307; MF6055; MF6056; MF6057; MF6058; MF6059; MF6060; MF6061; MF6062; MF6063; MF6064; MF 6065; MF6066; MF6067; MF6068; MF6069; MF6070; MF6071; MF6072; ácidos MF6073 e MF6074, ou uma sequência de região variável de cadeia pesada que difere em pelo menos 15 aminoácidos, de um modo preferido em, no máximo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 aminoácidos, mais preferivelmente em pelo a maioria dos ácidos 1, 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, a partir das sequências da região variável da cadeia pesada recitados.

[00117] As sequências CDR são, por exemplo, variadas para fins de otimização, de um modo preferido, a fim de melhorar a eficácia da ligação ou a estabilidade do anticorpo. A optimização é realizada por exemplo por meio de procedimentos de mutagênese, onde após a estabilidade e / ou afinidade de ligação dos anticorpos resultantes são de preferência testados e uma sequência CDR ErbB-2 ou ErbB-3 específica melhorada é de preferência selecionada. Um técnico versado no assunto é bem capaz de gerar variantes de anticorpos compreendendo pelo menos uma sequência de CDR alterado. Por exemplo, a substituição de aminoácidos conservativa é aplicada. Exemplos de substituição de aminoácidos conservativas incluem a substituição de um resíduo hidrófobo, tal como isoleucina, valina, leucina ou metionina por um outro resíduo hidrofóbico, e a substituição de um resíduo polar por outro resíduo polar, tal como a substituição de arginina por lisina, ácido glutâmico para o ácido aspártico, ou glutamina por asparagina.

[00118] Os anticorpos preferidos compreendem um domínio variável que se liga de ErbB-2, em que a cadeia VH do referido domínio variável compreende a sequência de aminoácidos da cadeia VH de MF2926; MF2930; MF1849; MF2973; MF3004; MF3958 (MF2971 é humanizado); MF2971; MF3025; MF2916; MF3991 (MF3004 é humanizado); MF3031; MF2889;

MF2913; MF1847; MF3001, MF3003 ou MF1898; ou compreende a sequência de aminoácidos de VH de cadeia MF2926; MF2930; MF1849; MF2973; MF3004; MF3958 (MF2971 é humanizado); MF2971; MF3025; MF2916; MF3991 (MF3004 é humanizado); MF3031; MF2889; MF2913; MF1847; MF3001, MF3003 ou MF1898 como tendo, no máximo, 15, de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, mais preferencialmente no máximo 1, 2, 3, 4 ou 5, inserções de aminoácidos, deleções , substituições ou uma combinação dos mesmos no que diz respeito à sequência de cadeia VH acima mencionadas.

A cadeia VH do domínio variável que se liga de ErbB-2 compreende de preferência a sequência de aminoácidos de: - MF1849; ou - MF2971 ou uma versão humanizada do mesmo, em que a referida versão humanizada compreende, preferencialmente, a sequência de aminoácidos de MF3958; ou - MF3004 ou uma versão humanizada do mesmo, em que a referida versão humanizada compreende preferencialmente a sequência de aminoácidos de MF3991. Em uma concretização, a cadeia VH do domínio variável que se liga de ErbB-2 compreende a sequência de aminoácidos de cadeia VH de MF1849; ou MF2971 ou uma versão humanizada do mesmo, em que a referida versão humanizada compreende preferencialmente a sequência de aminoácidos de MF3958; ou MF3004 ou uma versão humanizada do mesmo, em que a referida versão humanizada compreende preferencialmente a sequência de aminoácidos de MF3991, em que as sequências VH recitados ter, no máximo, 15, de preferência, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, mais preferencialmente no máximo 1, 2, 3, 4 ou 5, inserções,

deleções, substituições de aminoácidos ou uma combinação dos mesmos no que diz respeito à respectiva sequência. Em uma concretização preferida, a cadeia VH do domínio variável que se liga de ErbB-2 compreende a sequência de aminoácidos de MF3958; ou compreende a sequência de aminoácidos de MF3958 tendo, no máximo, 15, de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, mais preferencialmente no máximo 1, 2, 3, 4 ou 5, inserções, deleções, substituições de aminoácidos ou uma combinação dos mesmos no que diz respeito à sequência de cadeia VH.

[00119] A cadeia VH do domínio variável que se liga Erb-B3 compreende preferencialmente a sequência de aminoácidos de cadeia VH de MF3178; MF3176; MF3163; MF3099; MF3307; MF6055; MF6056; MF6057; MF6058; MF6059; MF6060; MF6061; MF6062; MF6063; MF6064; MF 6065; MF6066; MF6067; MF6068; MF6069; MF6070; MF6071; MF6072; MF6073 ou MF6074; ou compreende a sequência de aminoácidos de VH de cadeia MF3178; MF3176; MF3163; MF3099; MF3307; MF6055; MF6056; MF6057; MF6058; MF6059; MF6060; MF6061; MF6062; MF6063; MF6064; MF 6065; MF6066; MF6067; MF6068; MF6069; MF6070; MF6071; MF6072; MF6073 ou MF6074 tendo, no máximo, 15, de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, mais preferencialmente, no máximo 1, 2, 3, 4 ou 5, inserções de aminoácidos, deleções, substituições ou uma combinação dos mesmos no que diz respeito à sequência de cadeia VH. A cadeia VH do domínio variável que se liga Erb-B3, preferencialmente, compreende a sequência de aminoácidos de MF3178, MF3176, MF3163, MF6058, MF6061 ou MF6065; ou compreende a sequência de aminoácidos de MF3178, MF3176, MF3163, MF6058, MF6061 ou MF6065 tendo,

no máximo, 15, de preferência, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, mais preferencialmente, no máximo 1, 2, 3, 4 ou 5, inserções, deleções, substituições de aminoácidos ou uma combinação dos mesmos no que diz respeito à respectiva sequência da cadeia VH. Em uma concretização preferida, a cadeia VH do domínio variável que se liga ErbB-3 compreende a sequência de aminoácidos de MF3178; ou compreende a sequência de aminoácidos de MF3178 tendo, no máximo, 15, de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, mais preferencialmente no máximo 1, 2, 3, 4 ou 5, inserções, deleções, substituições de aminoácidos ou uma combinação dos mesmos no que diz respeito à sequência de cadeia VH. De preferência, as acima mencionadas de aminoácidos inserções, deleções e substituições não estão presentes na região do CDR3. Os acima mencionados inserções, deleções, substituições de aminoácidos também, de preferência, não estão presente nas regiões CDR1 e CDR2. Os acima mencionados inserções, deleções, substituições de aminoácidos não estão também, de preferência, presente na região de FR4.

[00120] De preferência, o anticorpo compreende pelo menos as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de MF1849, MF2971, MF3958, MF3004 ou MF3991, mais preferencialmente, pelo menos, a CDR1, CDR2 e CDR3 de MF3958. O referido anticorpo compreende, preferencialmente, pelo menos, as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de MF3178, MF3176, MF3163, MF6058, MF6061 ou MF6065, mais preferencialmente, pelo menos, a CDR1, CDR2 e CDR3 da sequência de MF3178.

[00121] De um modo preferido, a região variável da cadeia pesada ErbB-2-específica compreende a sequência de aminoácidos da cadeia VH de MF3958 tendo, no máximo, 15, de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, mais preferencialmente, pelo a maioria das 1, 2, 3, 4 ou 5, inserções, deleções, substituições de aminoácidos ou uma combinação dos mesmos com respeito referida VH (de preferência, em que as referidas inserções, deleções, substituições não estão em CDR1, CDR2 ou CDR3). De preferência, a região variável de cadeia pesada ErbB-3- específico compreende a sequência de aminoácidos da cadeia VH de MF3178 tendo, no máximo, 15, de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, mais preferencialmente, pelo a maioria das 1, 2, 3, 4 ou 5, inserções de aminoácidos, deleções, substituições ou uma combinação dos mesmos com respeito referida VH. As inserções de um ou mais aminoácidos, deleções, substituições ou uma combinação dos mesmos não são, de preferência na região de CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia VH. Eles também não estão, de preferência, presentes na região de FR4. Uma substituição de aminoácidos é de preferência uma substituição de aminoácidos conservadora.

[00122] De um modo preferido, a região variável da cadeia pesada ErbB-2-específico compreende a sequência de aminoácidos da cadeia VH de MF3991 tendo, no máximo, 15, de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, mais preferencialmente pelo a maioria das 1, 2, 3, 4 ou 5, inserções, deleções, substituições de aminoácidos ou uma combinação dos mesmos com respeito referida VH (de preferência, em que as referidas inserções, deleções, substituições não estão nas CDR1, CDR2 ou CDR3). De preferência, a região variável de cadeia pesada de ErbB-3 específico compreende a sequência de aminoácidos da cadeia VH de MF3178 tendo, no máximo, 15, de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, mais preferencialmente, pelo a maioria das 1, 2, 3, 4 ou 5, inserções, deleções, substituições de aminoácidos ou uma combinação dos mesmos com respeito referida VH. As inserções, deleções, substituições de um ou mais aminoácidos, ou uma combinação dos mesmos não são, de preferência, na região de CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia VH. Eles também não estão, de preferência presente na região de FR4. Uma substituição de aminoácidos é, de preferência, uma substituição de aminoácidos conservadora.

[00123] De um modo preferido, o primeiro local de ligação ao antígeno do anticorpo compreende pelo menos as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de MF3958, ou sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 que diferem em no máximo três, de um modo preferido em, no máximo, dois, de um modo preferido em, no máximo, um aminoácido a partir das sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de MF3958, e em que o referido segundo local de ligação ao antígeno compreende pelo menos a sequência de CDR1, CDR2 e CDR3 de MF3178, ou sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 que diferem em no máximo três, de preferência em pelo mais de dois, de um modo preferido em, no máximo, um aminoácido a partir das sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de MF3178.

[00124] De preferência, o anticorpo biespecífico compreende i) um local de ligação ao primeiro antígeno compreendendo uma região variável de ErbB-2 específico de cadeia pesada compreendendo a CDR1, CDR2, e a sequência de CDR3 de MF3958 e uma região variável da cadeia leve e ii) um local de ligação ao segundo antígeno compreendendo uma região variável de cadeia pesada ErbB-3 compreendendo a sequência específica de CDR1, CDR2, e CDR3 de MF3178 e uma região variável da cadeia leve.

[00125] De um modo preferido, a região variável da cadeia pesada ErbB-2 tem a sequência específica MF3958 e a região variável de cadeia pesada de ErbB-3-específico tem a sequência de MF3178. Esta combinação é também referida como o anticorpo PB4188. De preferência, o anticorpo é PB4188 afucosilado.

[00126] De preferência, o anticorpo biespecífico compreende a "cadeia pesado para ligação a ErbB-2", como representado na Listagem das Sequências ID parte e a "cadeia pesada para ligação a ErbB-3", como representado na parte de Listagem de Sequências ID.

[00127] De um modo preferido, os locais do anticorpo biespecífico de ligação ao antígeno compreendem uma cadeia leve de linhagem germinal de O12, de preferência, a linhagem germinativa de cadeia leve kappa humana rearranjada IgV K 1- 39 * 01 / IGJ K 1 * 01 ou um fragmento ou um seu derivado funcional (nomenclatura de acordo com a o banco de dados IMGT web em todo o mundo em imgt.org). Os termos rearranjada de linha germinal humana de cadeia leve kapa IgV K 1-39 * 01 / IGJ K 1 * 01, IGKV1-39 / IGKJ1, HUV K 1-39 cadeia leve ou em curto HUV K 1-39 são utilizados. A cadeia leve pode ter 1, inserções 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, deleções, substituições ou uma combinação dos mesmos. O mencionado 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições de aminoácidos são substituições, preferivelmente, conservativas de aminoácidos, inserções,

deleções, substituições ou uma combinação dos mesmos não são, de preferência na região CDR3 da cadeia VL, de um modo preferido não em CDR1, CDR2 ou a região CDR3 ou região FR4 da cadeia VL. De preferência, o local de ligação do primeiro antígeno e o segundo local de ligação a antígeno compreende a mesma região variável de cadeia leve, ou em vez disso, uma cadeia leve comum. De preferência, a região variável da cadeia leve compreende uma CDR1 tendo a sequência (RASQSISSYLN), uma CDR2 tendo a sequência (AASSLQS), e uma CDR3 tendo a sequência (QQSYSTPPT). De preferência, a região variável de cadeia leve compreende a sequência de cadeia leve comum representada na parte 1C da listagem de sequências.

[00128] Estão disponíveis vários métodos para produzir anticorpos biespecíficos e são discutidos no documento WO 2015/130173. Um método envolve a expressão de duas diferentes cadeias pesadas e duas diferentes cadeias leves em uma célula e o anticorpo coletado que é produzido pela célula. Anticorpo produzido desta maneira irá conter tipicamente um conjunto de anticorpos com diferentes combinações de cadeias pesada e leve, alguns dos quais são o anticorpo biespecífico desejado. O anticorpo biespecífico pode posteriormente ser purificado a partir da coleção.

[00129] A proporção de biespecífico para outros anticorpos que são produzidos pela célula pode ser aumentado de diversos modos. De preferência, a proporção é aumentada por não expressar duas cadeias leves diferentes, mas duas cadeias leves essencialmente idênticas na célula. Este conceito é no estado da técnica também referido como o método

"cadeia leve comum". Quando as cadeias leve essencialmente idêntica funcionam em conjunto com as duas cadeias pesadas diferentes permitindo a formação de domínios variáveis com diferentes locais de ligação ao antígeno e as propriedades de ligação diferentes concomitantes, a razão de anticorpo biespecífico para outro anticorpo que é produzido pela célula é significativamente melhorado ao longo a expressão de duas cadeias leves diferentes. A razão de anticorpo biespecífico que é produzido pela célula pode ser ainda melhorada por estimulação do emparelhamento de duas cadeias pesadas diferentes uns com os outros através do emparelhamento de duas cadeias pesadas idênticas. O estado da técnica descreve várias maneiras em que podem ser alcançados, tais heterodimerização das cadeias pesadas. Uma maneira é a de gerar 'botão no furo' anticorpos biespecíficos. Ver Pedido de Patente US 20030078385 (Arathoon et al. Genentech). Outro e preferido método é descrito no pedido PCT No. PCT/NL2013/050294 (WO 2013/157954 A1), que são aqui incorporadas por referência. Os métodos e meios são revelados para a produção de anticorpos biespecíficos a partir de uma única célula, através do qual são fornecidos meios que favorecem a formação de anticorpos biespecíficos através da formação de anticorpos monoespecíficos.

[00130] Sequências referidas na divulgação são apresentados a seguir e na Figura 1.

[00131] Sequências 1A (ErbB-2 específico)

[00132] MF2926: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação de ErbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade de peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTCCAGCT GCAGCAGTCT GGACCTGAGC TGGTGAAACC 61 TGGGGCTTCA GTGATGATTT CCTGCAAGGC TTCTGGTTAC TCATTCACTG GCTACCACAT 121 GAACTGGGTG AAGCAAAGTC CTGAAAAGAG CCTTGAGTGG ATTGGAGACA TAAATCCTAG 181 CATTGGTACG ACTGCCCACA ACCAGATTTT CAGGGCCAAG GCCACAATGA CTGTTGACAA 241 ATCCTCCAAC ACAGCCTACA TGCAGCTCAA GAGCCTGACA TCTGAAGACT CTGGAGTCTT 301 TTACTGTGTT AGAAGAGGGG ACTGGTCCTT CGATGTCTGG GGCACAGGGA CCACGGTCAC 361 CGTCTCCAGT

[00133] Sequência de aminoácidos:

QVQLQQSGPELVKPGASVMISCKASGYSFTGYHMNWVKQSPEKSLEWIGDINPSIGTTAHNQIFRAKATM

TVDKSSNTAYMQLKSLTSEDSGVFYCVRRGDWSFDVWGTGTTVTVSS CDR1: GYHMNWVKQSPEKSLE CDR2: NQIFRA CDR3: RGDWSFDV

[00134] MF2930: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação de ErbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade de peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCG AGGTCCAGCT GCAGCAGTCT GGGGCTGAAC TGGTGAAGCC 61 TGGAGCCTCA GTGATGATGT CCTGTAAGGT TTCTGGCTAC ACCTTCACTT CCTATCCTAT 121 AGCGTGGATG AAGCAGGTTC ATGGAAAGAG CCTAGAGTGG ATTGGAAATT TTCATCCTTA 181 CAGTGATGAT ACTAAGTACA ATGAAAACTT CAAGGGCAAG GCCACATTGA CTGTAGAAAA 241 ATCCTCTAGC ACAGTCTACT TGGAGCTCAG CCGATTAACA TCTGATGACT CTGCTGTTTA 301 TTACTGTGCA AGAAGTAACC CATTATATTA CTTTGCTATG GACTACTGGG GTCAAGGAAC 361 CTCGGTCACC GTCTCCAGT

[00135] Sequência de aminoácidos:

EVQLQQSGAELVKPGASVMMSCKVSGYTFTSYPIAWMKQVHGKSLEWIGNFHPYSDDTKYNENFKGKATL TVEKSSSTVYLELSRLTSDDSAVYYCARSNPLYYFAMDYWGQGTSVTVSS

CDR1: SYPIAWMKQVHGKSLE CDR2: NENFKG CDR3: SNPLYYFAMDY

[00136] MF1849: sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação de erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade de peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GGTGGAGTCT GGGGGAGGCG TGGTCCAGCC 61 TGGGAGGTCC CTGAGACTCT CCTGTGCAGC CTCTGGATTC ACCTTCAGTA GCTATGGCAT 121 GCACTGGGTC CGCCAGGCTC CAGGCAAGGG GCTGGAGTGG GTGGCAGTTA TATCATATGA 181 TGGAAGTAAT AAATACTATG CAGACTCCGT GAAGGGCCGA TTCACCATCT CCAGAGACAA 241 TTCCAAGAAC ACGCTGTATC TGCAAATGAA CAGCCTGAGA GCTGAGGACA CGGCCGTGTA 301 TTACTGTGCA AAAGGTGACT ACGGTTCTTA CTCTTCTTAC GCCTTTGATT ATTGGGGCCA 361 AGGTACCCTG GTCACCGTCT CCAGT

[00137] Sequência de aminoácidos:

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTI

SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGDYGSYSSYAFDYWGQGTLVTVSS CDR1: SYGMH CDR2: VISYDGSNKYYADSVKG CDR3: GDYGSYSSYAFDY

[00138] MF2973: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação de erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GAAGCAGTCT GGGGCTGAGC TGGTGAGGCC 61 TGGGGCTTCA GTGAAGTTGT CCTGCAAGGC TTCTGGCTAC ATTTTCACTG GCTACTATAT 121 AAACTGGTTG AGGCAGAGGC CTGGACAGGG ACTTGAATGG ATTGCAAAAA TTTATCCTGG 181 AAGTGGTAAT ACTTACTACA ATGAGAAGTT CAGGGGCAAG GCCACACTGA CTGCAGAAGA 241 ATCCTCCAGC ACTGCCTACA TGCAGCTCAG CAGCCTGACA TCTGAGGACT CTGCTGTCTA

301 TTTCTGTGCA AGAGGGCCCC ACTATGATTA CGACGGCCCC TGGTTTGTTT ACTGGGGCCA 361 AGGGACTCTG GTCACCGTCT CCAGT

[00139] Sequência de aminoácidos:

QVQLKQSGAELVRPGASVKLSCKASGYIFTGYYINWLRQRPGQGLEWIAKIYPGSGNTYYNEKFRGKATL

TAEESSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARGPHYDYDGPWFVYWGQGTLVTVSS CDR1: GYYINWLRQRPGQGLE CDR2: NEKFRG CDR3: GPHYDYDGPWFVY

[00140] MF3004: sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação de erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GAAGCAGTCT GGGGCTGAGC TGGTGAGGCC 61 TGGGGCTTCA GTGAAGCTGT CCTGCAAGGC TTCTGGCTAC ACTTTCACTG GCTACTATAT 121 AAACTGGGTG AAGCAGAGGC CTGGACAGGG ACTTGAGTGG ATTGCAAGGA TTTATCCTGG 181 AAGTGGTTAT ACTTACTACA ATGAGAAGTT CAAGGGCAAG GCCACACTGA CTGCAGAAGA 241 ATCCTCCAGC ACTGCCTACA TGCACCTCAG CAGCCTGACA TCTGAGGACT CTGCTGTCTA 301 TTTCTGTGCA AGACCCCACT ATGGTTACGA CGACTGGTAC TTCGGTGTCT GGGGCACAGG 361 CACCACGGTC ACCGTCTCCA GT

[00141] Sequência de aminoácidos:

QVQLKQSGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTGYYINWVKQRPGQGLEWIARIYPGSGYTYYNEKFKGKATL

TAEESSSTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARPHYGYDDWYFGVWGTGTTVTVSS CDR1: GYYINWVKQRPGQGLE CDR2: NEKFKG CDR3: PHYGYDDWYFGV

[00142] MF2971: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação de ErbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GAAGCAGTCT GGGGCTGAGC TGGTGAGGCC

61 TGGGGCTTCA GTGAAACTGT CCTGCAAGGC TTCTGGCTAC ACTTTCACTG CCTACTATAT 121 AAACTGGGTG AAGCAGAGGC CTGGACAGGG ACTTGAGTGG ATTGCAAGGA TTTATCCTGG 181 AAGTGGCTAT ACTTACTACA ATGAGATTTT CAAGGGCAGG GCCACACTGA CTGCAGACGA 241 ATCCTCCAGC ACTGCCTACA TGCAACTCAG CAGCCTGACA TCTGAGGACT CTGCTGTCTA 301 TTTCTGTGCA AGACCTCCGG TCTACTATGA CTCGGCCTGG TTTGCTTACT GGGGCCAAGG 361 GACTCTGGTC ACCGTCTCCA GT

[00143] Sequência de aminoácidos:

QVQLKQSGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTAYYINWVKQRPGQGLEWIARIYPGSGYTYYNEIFKGRATL

TADESSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARPPVYYDSAWFAYWGQGTLVTVSS CDR1: AYYINWVKQRPGQGLE CDR2: NEIFKG CDR3: PPVYYDSAWFAY

[00144] MF3025: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação de erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GAAGCAGTCT GGGGCTGAGC TGGTGAGGCC 61 TGGGACTTCA GTGAAGCTGT CCTGCAAGGC TTCTGGCTAC ACTTTCACTG GCTACTATAT 121 AAACTGGGTG AAGCAGAGGC CTGGACAGGG ACTTGAGTGG ATTGCAAGGA TTTATCCTGG 181 AAGTGGTTAT ACTTACTACA ATGAGAAGTT CAAGGGCAAG GCCACACTGA CTGCAGAAGA 241 ATCCTCCAAC ACTGCCTATA TGCACCTCAG CAGCCTGACA TCTGAGGACT CTGCTGTCTA 301 TTTCTGTGCA AGGCCCCACT ATGGTTACGA CGACTGGTAC TTCGCTGTCT GGGGCACAGG 361 GACCACGGTC ACCGTCTCCA GT

[00145] Sequência de aminoácidos:

QVQLKQSGAELVRPGTSVKLSCKASGYTFTGYYINWVKQRPGQGLEWIARIYPGSGYTYYNEKFKGKATL

TAEESSNTAYMHLSSLTSEDSAVYFCARPHYGYDDWYFAVWGTGTTVTVSS CDR1: GYYINWVKQRPGQGLE CDR2: NEKFKG CDR3: PHYGYDDWYFAV

[00146] MF2916: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação de erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTCCAGCT GCAGCAGTCT GGGGCTGAGC TGGTGAGGCC 61 TGGGGCTTCA GTGAAGCTGT CCTGCAAGGC TTCTGGCTAC ACTTTCACTG GCTACTATAT 121 AAACTGGGTG AAGCAGAGGC CTGGACAGGG ACTTGAGTGG ATTGCAAGGA TTTATCCTGG 181 CAGTGGTCAT ACTTCCTACA ATGAGAAGTT CAAGGGCAAG GCCACACTGA CTACAGAAAA 241 ATCCTCCAGC ACTGCCTACA TGCAGCTCAG CAGCCTGACA TCTGAGGACT CTGCTGTCTA 301 TTTCTGTGCA AGACCTATCT ACTTTGATTA CGCAGGGGGG TACTTCGATG TCTGGGGCAC 361 AAGAACCTCG GTCACCGTCT CCAGT

[00147] Sequência de aminoácidos:

QVQLQQSGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTGYYINWVKQRPGQGLEWIARIYPGSGHTSYNEKFKGKATL

TTEKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYFCARPIYFDYAGGYFDVWGTRTSVTVSS CDR1: GYYINWVKQRPGQGLE CDR2: NEKFKG CDR3: PIYFDYAGGYFDV

[00148] MF3958: sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação de erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GGTGCAGTCT GGCGCCGAAG TGAAGAAACC 61 TGGCGCCAGC GTGAAGCTGA GCTGCAAGGC CAGCGGCTAC ACCTTCACCG CCTACTACAT 121 CAACTGGGTC CGACAGGCCC CAGGCCAGGG CCTGGAATGG ATCGGCAGAA TCTACCCCGG 181 CTCCGGCTAC ACCAGCTACG CCCAGAAGTT CCAGGGCAGA GCCACCCTGA CCGCCGACGA 241 GAGCACCAGC ACCGCCTACA TGGAACTGAG CAGCCTGCGG AGCGAGGATA CCGCCGTGTA 301 CTTCTGCGCC AGACCCCCCG TGTACTACGA CAGCGCTTGG TTTGCCTACT GGGGCCAGGG

361 CACCCTGGTC ACCGTCTCCA GT

[00149] Sequência de aminoácidos:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFTAYYINWVRQAPGQGLEWIGRIYPGSGYTSYAQKFQGRATL

TADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARPPVYYDSAWFAYWGQGTLVTVSS CDR1: AYYIN CDR2: RIYPGSGYTSYAQKFQG CDR3: PPVYYDSAWFAY

[00150] MF3031: sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação de erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTCCAGCT GCAGCAGTCT GGGGCTGAGC TGGTGAGGCC 61 TGGGGCTTCA GTGAAGCTGT CCTGCAAGGC TTCTGGCTAC ACTTTCACTG CCTACTATAT 121 AAACTGGGTG AAGCAGAGGC CTGGACAGGG ACTTGAGTGG ATTGCAAAGA TTTATCCTGG 181 AAGTGGTTAT ACTTACTACA ATGAGAATTT CAGGGGCAAG GCCACACTGA CTGCAGAAGA 241 ATCCTCCAGT ACTGCCTACA TACAACTCAG CAGCCTGACA TCTGAGGACT CTGCTGTCTA 301 TTTCTGTGCA AGAGGCGTCT ATGATTACGA CGGGGCCTGG TTTGCTTACT GGGGCCAAGG 361 GACTCTGGTC ACCGTCTCCA GT

[00151] Sequência de aminoácidos:

QVQLQQSGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTAYYINWVKQRPGQGLEWIAKIYPGSGYTYYNENFRGKATL

TAEESSSTAYIQLSSLTSEDSAVYFCARGVYDYDGAWFAYWGQGTLVTVSS CDR1: AYYINWVKQRPGQGLE CDR2: NENFRG CDR3: GVYDYDGAWFAY

[00152] MF3991: sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação de erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GGTGCAGTCT GGCGCCGAAG TGAAGAAACC 61 TGGCGCCAGC GTGAAGCTGA GCTGCAAGGC CAGCGGCTAC ACCTTCACCG CCTACTACAT

121 CAACTGGGTC CGACAGGCCC CAGGCCAGGG CCTGGAATGG ATCGGCAGAA TCTACCCCGG 181 CTCCGGCTAC ACCAGCTACG CCCAGAAGTT CCAGGGCAGA GCCACCCTGA CCGCCGACGA 241 GAGCACCAGC ACCGCCTACA TGGAACTGAG CAGCCTGCGG AGCGAGGATA CCGCCGTGTA 301 CTTCTGCGCC AGACCCCACT ACGGCTACGA CGACTGGTAC TTCGGCGTGT GGGGCCAGGG 361 CACCCTGGTC ACCGTCTCCA GT

[00153] Sequência de aminoácidos:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFTAYYINWVRQAPGQGLEWIGRIYPGSGYTSYAQKFQGRATL

TADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARPHYGYDDWYFGVWGQGTLVTVSS CDR1: AYYIN CDR2: RIYPGSGYTSYAQKFQG CDR3: PHYGYDDWYFGV

[00154] Sequências 1B (ErbB-3 específico)

[00155] MF3178: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação a erbB-3 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GGTGCAGTCT GGGGCTGAGG TGAAGAAGCC 61 TGGGGCCTCA GTGAAGGTCT CCTGCAAGGC TTCTGGATAC ACCTTCACCG GCTACTATAT 121 GCACTGGGTG CGACAGGCCC CTGGACAAGG GCTTGAGTGG ATGGGATGGA TCAACCCTAA 181 CAGTGGTGGC ACAAACTATG CACAGAAGTT TCAGGGCAGG GTCACGATGA CCAGGGACAC 241 GTCCATCAGC ACAGCCTACA TGGAGCTGAG CAGGCTGAGA TCTGACGACA CGGCTGTGTA 301 TTACTGTGCA AGAGATCATG GTTCTCGTCA TTTCTGGTCT TACTGGGGCT TTGATTATTG 361 GGGCCAAGGT ACCCTGGTCA CCGTCTCCAG T

[00156] Sequência de aminoácidos:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTM

TRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDHGSRHFWSYWGFDYWGQGTLVTVSS CDR1: GYYMH CDR2: WINPNSGGTNYAQKFQG CDR3: DHGSRHFWSYWGFDY

[00157] MF3176: sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-3 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCG AGGTGCAGCT GTTGGAGTCT GGGGGAGGCT TGGTACAGCC 61 TGGGGGGTCC CTGAGACTCT CCTGTGCAGC CTCTGGATTC ACCTTTAGCA GCTATGCCAT 121 GAGCTGGGTC CGCCAGGCTC CAGGGAAGGG GCTGGAGTGG GTCTCAGCTA TTAGTGGTAG 181 TGGTGGTAGC ACATACTACG CAGACTCCGT GAAGGGCCGG TTCACCATCT CCAGAGACAA 241 TTCCAAGAAC ACGCTGTATC TGCAAATGAA CAGCCTGAGA GCCGAGGACA CGGCTGTGTA 301 TTACTGTGCA AGAGATTGGT GGTACCCGCC GTACTACTGG GGCTTTGATT ATTGGGGCCA 361 AGGTACCCTG GTCACCGTCT CCAGT

[00158] Sequência de aminoácidos:

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTI

SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDWWYPPYYWGFDYWGQGTLVTVSS CDR1: SYAMS CDR2: AISGSGGSTYYADSVKG CDR3: DWWYPPYYWGFDY

[00159] MF3163: sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-3 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GGTGCAGTCT GGGGCTGAGG TGAAGAAGCC 61 TGGGGCCTCA GTGAAGGTCT CCTGCAAGGC TTCTGGATAC ACCTTCACCG GCTACTATAT 121 GCACTGGGTG CGACAGGCCC CTGGACAAGG GCTTGAGTGG ATGGGATGGA TCAACCCTAA 181 CAGTGGTGGC ACAAACTATG CACAGAAGTT TCAGGGCAGG GTCACGATGA CCAGGGACAC 241 GTCCATCAGC ACAGCCTACA TGGAGCTGAG CAGGCTGAGA TCTGACGACA CGGCCGTGTA 301 TTACTGTGCA AAAGATTCTT ACTCTCGTCA TTTCTACTCT TGGTGGGCCT TTGATTATTG 361 GGGCCAAGGT ACCCTGGTCA CCGTCTCCAG T

[00160] Sequência de aminoácidos:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTM

TRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAKDSYSRHFYSWWAFDYWGQGTLVTVSS CDR1: GYYMH CDR2: WINPNSGGTNYAQKFQG CDR3: DSYSRHFYSWWAFDY

[00161] MF3099: sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-3 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCG AGGTCCAGCT GCAGCAGCCT GGGGCTGAGC TGGTGAGGCC 61 TGGGACTTCA GTGAAGTTGT CCTGCAAGGC TTCTGGCTAC ACCTTCACCA GCTACTGGAT 121 GCACTGGGTA AAGCAGAGGC CTGGACAAGG CCTTGAGTGG ATCGGAATTC TTGATCCTTC 181 TGATAGTTAT ACTACCTACA ATCAAAAGTT CAAGGGCAAG GCCACATTAA CAGTAGACAC 241 ATCCTCCAGC ATAGCCTACA TGCAGCTCAG CAGCCTGACA TCTGAGGACT CTGCGCTCTA 301 TTACTGTGCA AGAGGGGGAG ATTACGACGA GGGAGGTGCT ATGGACTACT GGGGTCAAGG 361 AACCTCGGTC ACCGTCTCCA GT

[00162] Sequência de aminoácidos:

EVQLQQPGAELVRPGTSVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGILDPSDSYTTYNQKFKGKATL

TVDTSSSIAYMQLSSLTSEDSALYYCARGGDYDEGGAMDYWGQGTSVTVSS CDR1: SYWMH CDR2: ILDPSDSYTTYNQKFKG CDR3: GGDYDEGGAMDY

[00163] MF3307: sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-3 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GGTGCAGTCT GGGGCTGAGG TGAAGAAGCC 61 TGGGGCCTCA GTGAAGGTCT CCTGCAAGGC TTCTGGATAC ACCTTCACCG GCTACTATAT 121 GCACTGGGTG CGACAGGCCC CTGGACAAGG GCTTGAGTGG ATGGGATGGA TCAACCCTAA

181 CAGTGGTGGC ACAAACTATG CACAGAAGTT TCAGGGCAGG GTCACGATGA CCAGGGACAC 241 GTCCATCAGC ACAGCCTACA TGGAGCTGAG CAGGCTGAGA TCTGACGACA CGGCCGTGTA 301 TTACTGTGCA AGAGGTTCTC GTAAACGTCT GTCTAACTAC TTCAACGCCT TTGATTATTG 361 GGGCCAAGGT ACCCTGGTCA CCGTCTCCAG T

[00164] Sequência de aminoácidos:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTM

TRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARGSRKRLSNYFNAFDYWGQGTLVTVSS CDR1: GYYMH CDR2: WINPNSGGTNYAQKFQG CDR3: GSRKRLSNYFNAFDY

[00165] Sequências 1C

[00166] Cadeia leve comum

[00167] A região variável de IGKV1-39A

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTD

FTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTP CDR 1: RASQSISSYLN CDR 2: AASSLQS CDR 3: QQSYSTPPT

[00168] IGKV1-39/jk1

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKVEIK

[00169] cadeia leve comum IGKV1-39 / JK1 (região constante é sublinhada

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGEC

[00170] Domínio variável de cadeia leve comum IGKV1- 39/jk5

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGS GTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPITFGQGTRLEIK

[00171] Sequências 1D (erbB-2 específicos)

[00172] Cadeia pesada para ligação a erbB-2

QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFTAYYINWVRQAPGQGLEWIGRIYPGSGYTSYAQKFQGRATL TADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARPPVYYDSAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP SNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN WYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTDPPSREEMTKNQVSLTCEVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

[00173] Cadeia pesada para ligação a erbB-3

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKF QGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDHGSRHFWSYWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTKPPSREEMTKNQVSLKCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

[00174] Sequências 1E

[00175] Sequências Ab HER2-específicas

[00176] MF2889: sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCG AGGTCCAGCT GCAGCAGTCT GGAGCTGAGC TGGTAAGGCC 61 TGGGACTTCA GTGAAGGTGT CCTGCAAGGC TTCTGGATAC GCCTTCACTA ATTATTTGAT 121 AGAGTGGGTA AAGCAGAGGC CTGGCCAGGG CCTTGAGTGG ATTGGAGTGA TTTATCCTGA 181 AGGTGGTGGT ACTATCTACA ATGAGAAGTT CAAGGGCAAG GCAACACTGA CTGCAGACAA 241 ATCCTCCAGC ACTGCCTACA TGCAGCTCAG CGGCCTGACA TCTGAGGACT CTGCGGTCTA 301 TTTCTGTGCA AGAGGAGACT ATGATTACAA ATATGCTATG GACTACTGGG GTCAAGGAAC 361 CTCGGTCACC GTCTCCAGT

[00177] Sequência de aminoácido:

EVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIEWVKQRPGQGLEWIGVIYPEGGGTIYNEKFKGKATL

TADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARGDYDYKYAMDYWGQGTSVTVSS CDR1: NYLIE CDR2: VIYPEGGGTIYNEKFKG CDR3: GDYDYKYAMDY

[00178] MF2913: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCG AGGTCAAGCT GCAGCAGTCT GGACCTGAGC TGGTGAAGCC 61 TGGCGCTTCA GTGAAGATAT CCTGCAAGGC TTCTGGTTAC TCATTCACTG ACTACAAAAT 121 GGACTGGGTG AAGCAGAGCC ATGGAAAGAG CCTCGAATGG ATTGGAAATA TTAATCCTAA 181 CAGTGGTGGT GTTATCTACA ACCAGAAGTT CAGGGGCAAG GTCACATTGA CTGTTGACAG 241 GTCCTCCAGC GCAGCCTACA TGGAGCTCCG CAGCCTGACA TCTGAGGACA CTGCAGTCTA 301 TTATTGTTCA AGAGGACTGT GGGATGCTAT GGACTCCTGG GGTCAAGGAA CCTCGGTCAC 361 CGTCTCCAGT

[00179] Sequência de aminoácido:

EVKLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTDYKMDWVKQSHGKSLEWIGNINPNSGGVIYNQKFRGKVTL

TVDRSSSAAYMELRSLTSEDTAVYYCSRGLWDAMDSWGQGTSVTVSS CDR1: DYKMDWVKQSHGKSLE CDR2: NQKFRG CDR3: GLWDAMDS

[00180] MF1847: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GGTGGAGTCT GGGGGAGGCG TGGTCCAGCC 61 TGGGAGGTCC CTGAGACTCT CCTGTGCAGC CTCTGGATTC ACCTTCAGTA GCTATGGCAT 121 GCACTGGGTC CGCCAGGCTC CAGGCAAGGG GCTGGAGTGG GTGGCAGTTA TATCATATGA

181 TGGAAGTAAT AAATACTATG CAGACTCCGT GAAGGGCCGA TTCACCATCT CCAGAGACAA 241 TTCCAAGAAC ACGCTGTATC TGCAAATGAA CAGCCTGAGA GCTGAGGACA CGGCCGTGTA 301 TTACTGTGCA AAAGGTTGGT GGCATCCGCT GCTGTCTGGC TTTGATTATT GGGGCCAAGG 361 TACCCTGGTC ACCGTCTCCA GT

[00181] Sequência de aminoácido:

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTI

SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGWWHPLLSGFDYWGQGTLVTVSS CDR1: SYGMH CDR2: VISYDGSNKYYADSVKG CDR3: GWWHPLLSGFDY

[00182] MF3001: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCG AGGTCCAGCT GCAGCAGTCT GGGGCTGAAC TGGCAAAACC 61 TGGGGCCTCA GTGAAGCTGT CCTGCAAGAC TTCTGGCTAC AACTTTCCTA TCTACTGGAT 121 GCACTGGGTA AAACAGAGGC CTGGACGGGG TCTGGAATGG ATTGGATACA TTAATCCTAG 181 TACTGGTTAT ATTAAGAACA ATCAGAAGTT CAAGGACAAG GCCACCTTGA CTGCAGACAA 241 ATCCTCCAAC ACAGCCTACA TGCAGCTGAA CAGCCTGACA TATGAGGACT CTGCAGTCTA 301 TTACTGTACA AGAGAAGGGA TAACTGGGTT TACTTACTGG GGCCAAGGGA CTCTGGTCAC 361 CGTCTCCAGT

[00183] Sequência de aminoácido:

EVQLQQSGAELAKPGASVKLSCKTSGYNFPIYWMHWVKQRPGRGLEWIGYINPSTGYIKNNQKFKDKATL

TADKSSNTAYMQLNSLTYEDSAVYYCTREGITGFTYWGQGTLVTVSS CDR1: IYWMHWVKQRPGRGLE CDR2: NQKFKD CDR3: EGITGFTY

[00184] MF1898: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GGTGGAGTCT GGGGGAGGCG TGGTCCAGCC 61 TGGGAGGTCC CTGAGACTCT CCTGTGCAGC CTCTGGATTC ACCTTCAGTA GCTATGGCAT 121 GCACTGGGTC CGCCAGGCTC CAGGCAAGGG GCTGGAGTGG GTGGCAGTTA TATCATATGA 181 TGGAAGTAAT AAATACTATG CAGACTCCGT GAAGGGCCGA TTCACCATCT CCAGAGACAA 241 TTCCAAGAAC ACGCTGTATC TGCAAATGAA CAGCCTGAGA GCTGAGGACA CGGCCGTGTA 301 TTACTGTGCA AAAGATGGTT TCCGTCGTAC TACTCTGTCT GGCTTTGATT ATTGGGGCCA 361 AGGTACCCTG GTCACCGTCT CCAGT

[00185] Sequência de aminoácido:

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTI

SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGFRRTTLSGFDYWGQGTLVTVSS CDR1: SYGMH CDR2: VISYDGSNKYYADSVKG CDR3: DGFRRTTLSGFDY

[00186] MF3003: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-2 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GAAGCAGTCT GGACCTGAGC TGGTGAAGCC 61 TGGGGCCTCA GTGAAGATTT CCTGCAAGGC TTCTGGCGAC GCATTCAGTT ACTCCTGGAT 121 GAACTGGGTG AAGCAGAGGC CTGGAAAGGG TCTTGAGTGG ATTGGACGGA TTTATCCTGG 181 AGATGGAGAT ATTAACTACA ATGGGAAGTT CAAGGGCAAG GCCACACTGA CTGCAGACAA 241 ATCCTCCAGC ACAGCCCACC TGCAACTCAA CAGCCTGACA TCTGAGGACT CTGCGGTCTA 301 CTTCTGTGCA AGAGGACAGC TCGGACTAGA GGCCTGGTTT GCTTATTGGG GCCAGGGGAC 361 TCTGGTCACC GTCTCCAGT

[00187] Sequência de aminoácido:

QVQLKQSGPELVKPGASVKISCKASGDAFSYSWMNWVKQRPGKGLEWIGRIYPGDGDINYNGKFKGKATL

TADKSSSTAHLQLNSLTSEDSAVYFCARGQLGLEAWFAYWGQGTLVTVSS CDR1: YSWMNWVKQRPGKGLE CDR2: NGKFKG CDR3: GQLGLEAWFAY

[00188] Sequências Ab HER3-específicas

[00189] MF6058: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-3 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GGTGCAGTCT GGGGCTGACG TGAAGAAGCC 61 TGGGGCCTCA GTGAAGGTCA CGTGCAAGGC TTCTGGATAC ACCTTCACCG GCTACTATAT 121 GCACTGGGTG CGACAGGCCC CTGGACAAGC TCTTGAGTGG ATGGGATGGA TCAACCCTCA 181 AAGTGGTGGC ACAAACTATG CAAAGAAGTT TCAGGGCAGG GTCTCTATGA CCAGGGAGAC 241 GTCCACAAGC ACAGCCTACA TGCAGCTGAG CAGGCTGAGA TCTGACGACA CGGCTACGTA 301 TTACTGTGCA AGAGATCATG GTTCTCGTCA TTTCTGGTCT TACTGGGGCT TTGATTATTG 361 GGGCCAAGGT ACCCTGGTCA CCGTCTCCAG T

[00190] Sequência de aminoácido:

QVQLVQSGADVKKPGASVKVTCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQALEWMGWINPQSGGTNYAKKFQGRVSM

TRETSTSTAYMQLSRLRSDDTATYYCARDHGSRHFWSYWGFDYWGQGTLVTVSS CDR1: GYYMH CDR2: WINPQSGGTNYAKKFQG CDR3: DHGSRHFWSYWGFDY

[00191] MF6061: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-3 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GGTGCAGTCT GGGGCTGAGG TGAAGAAGCC 61 TGGGGCCTCA GTGAAGGTCT CCTGCAAGGC TTCTGGATAC ACCTTCACCG GCTACTATAT

121 GCACTGGGTG CGACAGGCCC CTGGACAAGG GCTTGAGTGG ATGGGATGGA TCAACCCTCA 181 GAGTGGTGGC ACAAACTATG CACAGAAGTT TAAGGGCAGG GTCACGATGA CCAGGGACAC 241 GTCCACCAGC ACAGCCTACA TGGAGCTGAG CAGGCTGAGA TCTGACGACA CGGCTGTGTA 301 TTACTGTGCA AGAGATCATG GTTCTCGTCA TTTCTGGTCT TACTGGGGCT TTGATTATTG 361 GGGCCAAGGT ACCCTGGTCA CCGTCTCCAG T

[00192] Sequência de aminoácido:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPQSGGTNYAQKFKGR

VTMTRDTSTSTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDHGSRHFWSYWGFDYWGQGTLVTVSS CDR1: GYYMH CDR2: WINPQSGGTNYAQKFKG CDR3: DHGSRHFWSYWGFDY

[00193] MF6065: Sequência da região variável da cadeia pesada de uma sequência de ácido nucleico do anticorpo de ligação erbB-3 (sequência sublinhada codifica a extremidade do peptídeo líder): 1 GGCCCAGCCG GCCATGGCCC AGGTGCAGCT GGTGCAGTCT GGGGCTGAGG TGAAGAAGCC 61 TGGGGCCTCA GTGAAGGTCT CCTGCAAGGC TTCTGGATAC ACCTTCACCT CTTACTATAT 121 GCACTGGGTG CGACAGGCCC CTGGACAAGG GCTTGAGTGG ATGGGATGGA TCAACCCTCA 181 GGGGGGTTCT ACAAACTATG CACAGAAGTT TCAGGGCAGG GTCACGATGA CCAGGGACAC 241 GTCCACCAGC ACAGTGTACA TGGAGCTGAG CAGGCTGAGA TCTGAGGACA CGGCTGTGTA 301 TTACTGTGCA AGAGATCATG GTTCTCGTCA TTTCTGGTCT TACTGGGGCT TTGATTATTG 361 GGGCCAAGGT ACCCTGGTCA CCGTCTCCAG T

[00194] Sequência de aminoácido:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPQGGSTNYAQKFQGR

VTMTRDTSTSTVYMELSRLRSEDTAVYYCARDHGSRHFWSYWGFDYWGQGTLVTVSS CDR1: SYYMH CDR2: WINPQGGSTNYAQKFQG CDR3: DHGSRHFWSYWGFDY

[00195] Para efeitos de clareza e de forma concisa características da descrição são aqui descritos como parte da mesma ou concretizações separadas, no entanto, será apreciado que o escopo da presente invenção pode incluir concretizações que têm combinações de todas ou algumas das características descritas.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[00196] A Figura 1 mostra o alinhamento de aminoácidos de variantes MF3178.

[00197] Os pontos indicam o mesmo aminoácido que em MF3178 nessa posição. As sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de MF3178 estão em negrito e sublinhado.

[00198] A Figura 2 mostra o alvejamento tumoral aumentado in vivo de anticorpo monoclonal sobre biespecífico. A imagiologia micro-PET demonstra que a variante PB4188 acumula mais eficaz em tumores em comparação com o anticorpo monoclonal de HER3 (Fig. 2A). Contador gama da quantificação da radioatividade presente em tumores confirmou que os níveis de variante PB4188 nos tumores eram 2,5 vezes maior do que para a -anticorpo parental anti-HER3 (Fig. 2B). A biodistribuição quantitativa para a absorção de tumor nos grupos de quatro mAb às 48 horas. Os resultados são expressos como uma percentagem da dose injetada por grama de tecido (% ID / g), as barras de erro indicam ± S (Fig. 2C)

[00199] A Figura 3 mostra curvas de resposta à dose do modo de antagonista de anticorpo em ensaios EGFR: HER2, HER2: HER3 e HER2: HER4. As células repórter foram semeadas durante 4 h a 37 ° C a 2,5K / poço no caso de EGFR: HER2 ou 5K / poço no caso de HER2:HER3 e HER2:HER4. Os anticorpos foram diluídos em série e incubou-se durante 3 h a 37 ° C antes da estimulação de 16 horas com 10 ng / mL de EGF ou de 30 ng / ml HRG-2 no caso de EGFR: HER2 ou HER2: HER3 e HER2: HER4, respectivamente. As curvas de estimulação de referência de agonistas foram obtidas por incubação de titulações de ligantes sozinho durante 24 horas. Cada ponto de dados representa a média e desvio padrão de quatro repetições por dose. Os dados foram representados graficamente em GraphPad Prism e ajustes de curvas foram realizadas utilizando um log (inibidor) v.s. resposta variável resposta- (4 parâmetros) apto a calcular o IC50.

[00200] A Figura 4 mostra as mudanças dos Pesos Corporais de ratos nos diferentes grupos. As alterações do peso corporal após a administração MCLA-128, e anticorpos PG2863 PG2869 para BALB / c ratos nus fêmeas de rolamento OV-10-0050 tumores estabelecidos. Os pontos de dados representam média do grupo de peso do corpo. As barras de erro representam o erro padrão da média (SEM).

[00201] A Figura 5 mostra as Mudanças Relativa de pesos (%). A mudança BW foi calculada com base no peso do animal no primeiro dia de dosagem. Os pontos de dados representam grupo cento significa mudança no BW. As barras de erro representam o erro padrão da média (SEM).

[00202] A Figura 6: mostra a curva de crescimento tumoral. O traço de volume do tumor após a administração de MCLA-128, e anticorpos PG2863 PG2869 para BALB / c ratos nus fêmeas de rolamento OV-10-0050 tumores estabelecidos. Os pontos de dados representam o grupo significativo, as barras de erro representam o erro padrão da média (SEM).

[00203] A Figura 7 mostra a inibição do crescimento da linhagem de tumor MDA-MB-175 e OV-10-0050 in vitro e in vivo.

[00204] As fusões de genes doc4-NRG1 e CLU-NRG1 são expressas na linhagem de células MDA-MB-175 (mama) e no PDX OV-10-0050 (ovário), respectivamente. Painel esquerdo: tratamento in vitro MCLA-128 inibe a proliferação de células MDA-MB-175. Painel da direita: In vivo, o tratamento MCLA- 128 (25 mg / kg semanalmente até ao dia 28) reduziu o crescimento do tumor e tumores eliminados em 6/8 animais.

EXEMPLOS Exemplo 1: Alvejamento de ErbB-2-guiado

[00205] Um experimento de imagiologia foi realizada comparando o anticorpo biespecífico HER2xHER3 (PB4188) para o anticorpo monoclonal bivalente HER3. Variantes de Bab PB4188 e anti-HER3 MF3178 (anticorpo parental) foram marcados com 64Cu e injetado por via intravenosa no rato xenoenxertados com tumores HER2 JIMT-1 amplificadas de genes. imagiologia micro-PET demonstrou que a variante mais eficaz PB4188 acumulada em tumores em comparação com o anticorpo monoclonal de HER3 (Fig. 2A). Contador gama da quantificação da radioatividade presente em tumores confirmou que os níveis de variante PB4188 nos tumores eram 2,5 vezes maior do que para o anticorpo parental anti-HER3 (Fig. 2B). No geral, dados in vitro e in vivo demonstram que alvejamento-HER2 é responsável pelo aumento da ligação de PB4188 em células tumorais. Estudos adicionais foram realizadas utilizando um anticorpo anti-HER2 (MF3958). A Figura 2C resume os resultados dos respectivos anticorpos marcados com 64Cu e injetado em xenoenxerto de camundongo com JIMT-1 tumores amplificado-gene HER2 (n = 4 ratos para cada tratamento com o anticorpo). Métodos

[00206] Estudo de biodistribuição. Variantes de Bab PB4188, anti-HER2 MF3958, e anti-HER3 MF3178 foram conjugados com um agente quelante bifuncional [Transações Paterson 2014 Dalton]. características de ligação dos produtos conjugados para o alvo foram confirmadas utilizando fluir ensaios baseados em citometria. As proteínas foram então marcadas com 64Cu e camundongos portadores JIMT-1 xenoenxertos de mama foram administrados os anticorpos marcados radioativamente via veia da cauda (Figura 2A-B e "IV" para a Figura 2C) ou intratécnico versado no intraperitoneal ("IP" para a Figura 2C). As imagens MicroPET / CT foram adquiridos 48 h pós-injeção, após o que tumoral foram excisadas e a radioatividade foi medida num contador gama. Os resultados foram expressos como percentagem de dose injetada por grama de tecido. Exemplo 2 - Inibição da formação de heterodímero

[00207] Foram utilizados ensaios de heterodimerização com base na tecnologia de complementação fragmento de enzima. A enzima β-galactosidase pode ser artificialmente dividido em dois fragmentos inativos, o doador de enzima e o receptor de enzima, que combinam em uma enzima ativa apenas quando em estreita proximidade. Cada sequência que codifica tanto o doador de enzima ou o aceitador de enzima está relacionada com os domínios extracelulares e transmembranares de cada parceiro de heterodimerização. Ambos os genes são, em seguida, co-transfectados em células U2OS de expressar os domínios extracelulares de receptores RTK ligados a um domínio de β-galactosidase (ED ou EA). Após estimulação agonista de um receptor RTK, tanto RTK receptores dimerizam, induzindo a formação de uma enzina ativa β-galactosidase completamente reconstituída. Em última análise, a atividade β-galactosidase é medida através da adição de um substrato que após a hidrólise irá conduzir a emissão de luz.

[00208] Anticorpos onde testados em EGFR: HER2, HER2: HER3 e HER3: linhagens de células repórteres HER4 heterodimerização. Os ensaios foram executados heterodimerização RTKcom o anticorpo biespecífico MCLA-128 (MF3178 braço e braço MF3958); anti-HER3 anticorpos MF3178 / PG3178 e PG3793 / AMG-888 / patritumab; e anticorpos anti- HER2 MF3958 / PG3958, PG2867 / trastuzumab, PG2869 / pertuzumab, e Perjeta (lote clínico de pertuzumab). EGF e HRG titulações em EGFR: HER2 e HER2: HER3, HER2: ensaios HER4 mostraram respostas dependentes da dose de agonista (Figura 3). MCLA-128 mostrou uma inibição completa de HER2: HER3 especificamente a formação de dímeros e não teve efeito sobre o EGFR: HER2 ou HER2: HER4 heterodimerização. Em contraste, o trastuzumab (PG2867) comportou-se como antagonista parcial em EGFR: HER2 e HER2: HER3 ensaios.

[00209] MCLA-128 e PG3178 totalmente inibiu HER2 HRG- mduced: dimerização HER3 com a potência mais elevada (Quadro 1).

[00210] Tabela 1: Resumo dos Resultados de EC50 de anticorpos testados em ensaios de heterodimerização RTK. CE50 foram determinados de regressões não-lineares (4 parâmetros) em prisma. IC50 (nM) EGFR:HER2 HER2:HER3 HER2:HER4 PG1337 - - - PB4188 - 1.12 - PG3187 - 1.27 - PG3958 - - 1.69 PG2867 0.30 4.91 0.63 PG2869 0.47 4.22 2.91 PG3793 - 3.23 - Perjeta 0.61 6.26 5.44 Agonist 0.02 0.22 0.08

[00211] A potência de trastuzumab foi cerca de 4 vezes mais baixa do que MCLA-128 ou PG3178 no HER2: HER3 ensaio. Perjeta (pertuzumab clínico) comportou-se como um antagonista completo em todos os três ensaios e deu um perfil semelhante como PG2867 (pertuzumab). Em HER2: ensaios HER4, ambos os anticorpos anti-HER2 e PG3958 PG2867 (pertuzumab) mostraram diminuições menores em dimerização que parecem ser dependentes da dose. Pequenas respostas não específicas em ensaios de EGFR: HER2 foram observados em altas concentrações de PG1337, MCLA-128, e PG3178 PG3958.

[00212] MCLA-128 apresentou uma inibição específica de HER2: HER3 apenas dos heterodímeros. Isto indica que a ligação no receptor HER2, MCLA-128 não deve prejudicar estericamente interação de HER2 com EGFR após estimulação EGF, nem prejudicar a heterodimerização de HER2 com HER4 após estimulação HRG.

[00213] Este último está em conformidade com a observação no ensaio de proliferação baseado no ciclo celular induzida por HRG de células T47D. Os ensaios que utilizam estas células não conseguiram demonstrar atividade inibidora de MCLA-128 ou PG3178, o qual foi, presumivelmente, atribuído à expressão mais elevada de HER4 em comparação com a sua. HRG é pensado para sinalizar de preferência através de HER2: HER4 em células T47D em vez de HER2: HER3, explicar a falta de eficácia de MCLA-128 e indicando uma especificidade de MCLA-128 para HRG-induzida HER2: dímeros HER3 e não para HRG-induzida HER2: dímeros HER4.

[00214] No estudo atual, trastuzumab bloqueado EGF e heterodimerização induzida por HRG de EGFR: HER2 e HER2: HER3, respectivamente. Trastuzumab e pertuzumab comportou- se como antagonista parcial e total, respectivamente, que está em linha com a reivindicação geralmente aceite que bloqueia trastuzumab ligando independente de ativação ofHER2 enquanto pertuzumab inibe a sinalização dependente do ligando. O facto de que uma resposta inibitória trastuzumab é observado nestes ensaios pode ser devido à super-expressão de ambos os alvos. Isso pode permitir uma leitura mais sensível do que as experiências de imunoprecipitação tradicionais.

[00215] Finalmente, enquanto PG3793 mostrou uma afinidade de ligação inferior a PG3178 em células MCF-7, a sua baixa potência em HER2: HER3 ensaio heterodimerização é menos severa (diferença de 2,5 vezes na potência ensaio de dimerização contra diferença de 30 vezes na afinidade de ligação ao ensaio). Esta discrepância entre a afinidade de ligação e a potência de antagonismo foi anteriormente observada no caso de MCLA-128 e PG3178. Enquanto PG3178 liga- se células MCF-7 com uma afinidade ligeiramente melhor do que MCLA-128, MCLA-128 supera PG3178 num ensaio de proliferação baseado no ciclo celular. Exemplo 3 Objetivo do estudo e Conformidade Regulamentar

[00216] O objetivo da investigação é o de avaliar a eficácia antitumoral in vivo de MCLA-128, e anticorpos PG2863 PG2869 no tratamento do câncer do ovário humano modelo subcutâneo PDX de OV-10-0050 em camundongos BALB / c nus. Design Experimental

[00217] A concepção experimental é indicada na Tabela

2. Em todos os grupos, o sangue foi amostrado em 4 animais no dia 2 (24 horas pós-dose em primeiro lugar) e nas restantes 4 animais no dia 6 (5 dias após a primeira dose). No ponto de tempo designado, 50-100 µl de sangue foi recolhidopara tubos de recolha estéreis (Microvette CB300Z ativadores coagulação / soro, Sarstedt BV gato # 16.440.100), permitindo que as amostras a coagular à temperatura ambiente durante 45 minutos, centrifugando durante 10 minutos a 3000 rpm e tomando-se a camada aquosa (cerca de 20 µl soro) em mais 1,5 ml de Eppendorf estéril para armazenamento imediato a -80 ° C. As amostras são enviadas em gelo seco. Tabela 2: Descrição do Projeto Experimental Dose volume Dose mg/kg b Conc. Grupo Na Tratamento ml/kg mg/ml Veículo controle 1 8 -- 10 .-- 2 8 MCLA-128 25 10 2.5 3 8 PG2863 25 10 2.5 4 8 PG2869 25 10 2.5 a. N: número de animais por grupo; b. volume de dose: ajustar o volume de dosagem baseada no peso corporal 10 µl / g.

[00218] Todos os animais foram tratados nos dias 1, 8, 15, 22, 29 (o tratamento semanalmente durante 5 semanas) Rota foi IP para todos os grupos.

[00219] As amostras de tumor foram colhidas às 48 h pós a última dose (dia 31). Os tumores foram fixados em formalina neutra tamponada (tecido: proporção fixador de pelo menos 01:20) durante 24 horas, e, em seguida, convertido em blocos FFPE.

[00220] Preparação de neutro de formalina tampão: Coloque um saco de pó PBS num balão volumétrico 5L-clara, adicionado 4,5 L de água desionizada e agitou-se para dispersar o pó para se obter uma solução clara. Em seguida, adicionaram-se 500 ml de formaldeído a agitar até se obter uma solução homogênea. Materiais

[00221] Animais: Espécie: Mus musculus: Cepa: BALB / c nu; Idade: 6-8 semanas; Sexo: feminino peso corporal: 18- 22 g; Número de animais: 32 ratos mais reposição

[00222] Fornecedor de animais: Shanghai SIPPR Sino- Britânica / BK Laboratório animal Co., LTD. Dieta: Os animais tiveram livre acesso a irradiação de alimentos esterilizados grânulo seco durante o período entirestudy; Água: Os animais tiveram livre acesso à água potável estéril.

[00223] Anticorpo empacotamento e armazenamento condição:

[00224] MCLA-128; criotubos, 10 × 1,5 ml / frasco a 2,5 mg / ml, armazenada a 4 ° C.

[00225] PG2863; criotubos, 10 × 1,5 ml / frasco a 2,5 mg / ml, armazenada a 4 ° C

[00226] PG2869; criotubos, 10 × 1,5 ml / frasco a 2,5 mg / ml, armazenada a 4 ° C Geração do modelo PDX

[00227] O câncer do ovário humano modelo PDX de OV- 10-0050 foi originalmente estabelecido a partir de um paciente de 48 anos do sexo feminino apresentando grau 3 de adenocarcinoma dos ovários. Uma amostra clínica cirurgicamente ressecado foi implantado em camundongos nus (definida como a passagem 0, P0) e os seguintes implantes em série foram definidos como P1, P2, etc. O tecido de tumor P6 foi utilizado para este estudo. Implantação do tumor

[00228] Cada rato foi implantado por via subcutânea no flanco direito com os OV-10-0050 P6 fatias de tumor que cortam por tesoura (~ 30 mm3) para o desenvolvimento do tumor. Os tratamentos foram iniciados no dia 30 após a implantação do tumor, quando o tamanho médio do tumor atingiu aproximadamente 152 mm3. 32 ratos portadores de tumor foram distribuídos aleatoriamente em 4 grupos, com um método de randomização estratificada e cada grupo consistiu em 8 ratos portadores de tumor. O dia de randomização foi observado como um dia, e foi dia de início do tratamento. Os artigos de teste foram administrados aos camundongos de acordo com o predeterminado regime como mostrado na tabela a concepção experimental (Tabela 2). Observações

[00229] Todos os procedimentos relacionados com o manuseamento animal, cuidado e o tratamento do estudo foram realizados de acordo com as orientações aprovados pelo Comité Institutional de Animal Care and Use (IACUC) de WuXi AppTec seguintes a orientação da Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care (AAALAC). No momento da monitoração de rotina, os animais foram diariamente verificada para todos os efeitos do crescimento do tumor e tratamentos sobre o comportamento normal, tal como a mobilidade, alimentos e o consumo de água (apenas por inspeção visual), o peso corporal ganho / perda (pesos corporais foram medidos duas vezes por semana ), olho / esteiras cabelo e qualquer outro efeito anormal como referido no protocolo. A morte e sinais clínicos observados foram registados com base no número de animais dentro de cada subconjunto. Medidas do tumor

[00230] Testado era se o crescimento do tumor pode ser atrasado ou se camundongos podia ser curado. O tamanho do tumor foi medido duas vezes por semana em duas dimensões, utilizando um paquímetro, e o volume foi expressa em mm 3, utilizando a fórmula: V = 0,5 machado b2 onde ume b são os longos e curtos diâmetros do tumor, respectivamente. O tamanho do tumor foi, em seguida, utilizado para os cálculos de valores de TC, T / C e TGI. TC foi calculada com T como o tempo médio (em dias) necessário para os tumores do grupo de tratamento atingirem um tamanho pré-determinado (por exemplo, 500 mm3), e C, tal como o tempo médio (em dias) para os tumores do grupo de controlo atingirem a mesma Tamanho. O valor de T / C (em por cento) é uma indicação da eficácia antitumoral; T e C foram os volumes médios dos grupos tratados e de controlo, respectivamente, num determinado dia. TGI foi calculado para cada grupo utilizando a fórmula: TGI (%) = [1- (Ti-T0) / (Vi-V0)] x 100; Ti foi o volume médio do tumor de um grupo de tratamento, num determinado dia, T0 foi o volume médio do tumor do grupo de tratamento no primeiro dia de tratamento, Vi era o volume médio do tumor do grupo de controlo de veículo no mesmo dia com o Ti, e V0 foi o volume médio do tumor do grupo do veículo no primeiro dia de tratamento. Análise estatística

[00231] A estatística resumida, incluindo a média e o erro padrão da média (SEM), são fornecidos para o volume do tumor de cada grupo em cada ponto de tempo (detalhado na tabela 3). A análise estatística da diferença no volume do tumor entre os grupos e a análise da interação de droga foram realizados com os dados obtidos com o melhor ponto de tempo terapêutico após a última dose (no dia 29 após o agrupamento).

[00232] Um ANOVA de uma via foi realizada para comparar o volume do tumor entre os grupos, e quando uma significativa -Estatísticas F (P <0,001, uma razão de variância tratamento para a variância do erro) foi obtida, as comparações entre grupos foram realizadas com Games- Howell. Todos os dados foram analisados usando o programa SPSS 17.0. p <0,05 foi considerado como sendo estatisticamente significativo. Resultados

Mortalidade, morbidade, e ganho ou perda do Peso Corporal Ganho ou perda

[00233] o peso corporal dos animais foi monitorado regularmente como uma medida indireta de toxicidade. Não foram observadas perda de peso por grupo como um resultado da administração do teste de artigo (Figura 4) e não houve mortes ou morbidade. Assim, não parece ser evidente a toxicidade associada com a administração de anticorpos MCLA- 128, PG2863 e PG2869 a camundongos BALB / c nus portadores de tumor.

[00234] Alteração do peso corporal em camundongos nus / c do sexo feminino BALB rolamento OV-10-0050 xenoenxertos doseados com MCLA-128, e anticorpos PG2863 PG2869 são mostrados na Figura 4 e Figura 5. Volume médio do tumor ao longo do tempo em camundongos Balb / c nus fêmeas de rolamento OV- 10-0050 xenoenxertos doseados com MCLA-128, e anticorpos PG2863 PG2869 são mostrados na Tabela 3. A Figura 6 mostra o crescimento do tumor. Tabela 3: O volume do tumor ao longo do tempo (mm3)a Dias Veículo MCLA-128 PG2863 PG2869 b (DPBS) 25 mg/kg 25 mg/kg 25 mg/kg 1 152 ± 151 ± 21 152 ± 152 ± 21 5 239 ± 75 ± 12 87 ± 41 ± 8 8 18 ± 332 69 ± 15 10 ± 115 12 ± 1 12 26 ± 434 47 ± 11 10 ± 98 9 ± 1 15 50 ± 520 36 ± 10 13 ± 108 6 ± 1 19 63 ± 598 26 ± 8 16 ± 92 4 ± 1 22 64 ± 718 23 ± 8 16 ± 106 3 ± 1 26 91188 ± 21 ± 9 21 ± 91 2 ± 1 29 118 ± 1,161 23 ± 11 16 ± 108 1 ± 0 a. Média ± 182 SEM; b. dia de estudo 22

Resultados e discussão

[00235] No estudo, a eficácia terapêutica de MCLA- 128, foi avaliado anticorpos PG2863 andPG2869 como um agente único para o tratamento do modelo de xenoenxerto de câncer do ovário humano OV-10-0050. Os resultados dos tamanhos do tumor nos diferentes grupos em diferentes pontos de tempo após a inoculação do tumor são mostrados na Tabela 3, Tabela 4, e Figura 4.

[00236] O tamanho médio do tumor dos camundongos de controlo tratados com veículo atingiu 1,161 mm3 no dia 29 após o agrupamento. O tratamento com os artigos de teste MCLA-128, PG2863 e anticorpos PG2869 a 25 mg / kg (QW x 5 semanas) produziu atividade antitumoral significativa: os seus tamanhos médios dos tumores eram 23, 108 e 1 mm3, respectivamente, ao mesmo tempo (T / C valor = 1,95%, 9,28% e 0,06%; valor TGI = 112,78%, 104,37% e 114,96%; valor p = 0,002, 0,003 e 0,002, respectivamente) o crescimento do tumor todos os atrasos mais do que 14 dias, no tamanho do tumor de 500 mm3 em comparação com o grupo de veículo. Tratamento provoca a regressão parcial ou completa regressão do tumor. Um rato foi considerado como tendo uma regressão parcial (PR), quando o volume do tumor foi reduzido de 50% ou mais do seu volume um dia para três medições consecutivas durante o curso do estudo e ≥ 13,5 mm3 para uma ou mais destas três medições. E para ter uma regressão completa (CR) quando < 13,5 mm3 para três medições consecutivas durante o curso do estudo. Sobrevida livre de tumor foi considerado como sem tumor palpável foi detectada no fim do estudo.

[00237] O tratamento com MCLA-128, PG2863 e PG-2869 resultou proporção diferente do PR, e CR TFS. A quantidade do rato em cada grupo, que mostra PR, CR TFS e são apresentadas no quadro 5. Todos os artigos de ensaio foram bem tolerados pelos animais portadores de tumor. Sem perda de peso corporal foi observada em todos os grupos de tratamento.

[00238] Em resumo, os três anticorpos de teste como agente único todas produziu atividade antitumoral significativa contra o modelo de xenoenxerto de câncer humano OV-10-0050 ovário neste estudo. Foi bem tolerada pelos animais portadores de tumor. Os resultados indicaram que os anticorpos são agentes anticancerígenos seguros e eficazes. Tabela 4: cálculo do crescimento de inibição tumoral para anticorpos MCLA-128; PG2863 PG2869 injetados e no modelo de OV-10-0050 calculado com base nas medições de volume de tumor no dia 29 após o agrupamento. Tratamento Tamanho b TGI T-C p T/C do tumor (%) (%) (dias) valorc 3 a At (mm ) 500mm3 Veículo (DPBS) 1,161 ± - 0 - 182 MCLA-128 (25 mg/kg) 23 ± 11 112.78 >14 0.002

1.95 PG2863 (25 mg/kg) 108 ± 22 9.28 104.37 >14 0.003 PG2869 (25 mg/kg) 1 ± 0 0.06 114.96 >14 0.002 a. Média ± DP. b. A inibição de crescimento do tumor é calculada dividindo o volume de tumor médio de grupo para o grupo tratado com o volume do tumor média do grupo para o grupo de controlo (T / C). Para um artigo de teste para ser considerado como tendo atividade antitumoral, T / C deve ser de 50% ou menos. TGI é calculado usando a fórmula TGI (%) = [1- (Ti-T0) / (Vi- V0)] x 100. c. valor de p é calculado com base no tamanho do tumor, em comparação com o grupo de veículo.

[00239] Tabela 5: PR, CR TFS e estatísticas para diferentes tratamentos Tratamento PR CR TFS MCLA-128 (25 3 5 0 PG2863 (25 3 0 0 PG2869 (25 0 8 3 Exemplo 4

[00240] MCLA-128 é um anticorpo biespecífico de alvejamento HER2 e HER3 tirosina-quinases receptoras (RTK), que estão envolvidos na proliferação e sobrevivência de células cancerosas. MCLA-128 tem sido extensivamente estudado no contexto de heregulina (HRG) induzida por sinalização HER3 e proliferação. Ela demonstrou forte potência in vitro de: a combinação de anticorpos anti-HER2 pertuzumab (PG2869) + trastuzumab (PG2867), que pode bloquear o ligando-dependente e independente do ligante HER2-: sinalização HER3, respectivamente [agus 2002; Juntilla 2009]; o anticorpo anti-HER3 MM-121 (PG2863), que bloqueia a HRG induzida por activação HER3 [Schoeberl 2010].

[00241] MCLA-128 também mostra a atividade anti-tumor em células que expressam fusão de genes que envolvem o gene de HRG. A linhagem celular MDA-MB-175 contém o gene de fusão doc4-NRG1, o que resulta em um loop autócrino proliferativa devido à expressão NRG1. Este gene de fusão tem até esta data não foram descobertas em uma configuração paciente de câncer [Sanchez- Valdivieso 2002].

[00242] A partir de um painel de linhagens celulares de câncer da mama, células MDA-MB-175 foram sensíveis ao agente único MCLA-128, demonstrando a importância do eixo de sinalização HER3 / HRG nesta linhagem celular (figura 7 à esquerda do painel). A ativação do HER2 nesta linhagem celular também foi demonstrada in vivo, em que uma única dose de pertuzumab, mas não trastuzumab, inibiu o crescimento do tumor ortotico MDA-MB-175. Apesar da relevância do gene de fusão doc4-NRG1 em pacientes de câncer da mama tem sido debatida [Sánchez-Valdivieso 2002], outras fusões de genes ganharam recentemente interesse. Em particular, a fusão CD74-NRG1 tem sido relatada por grupos independentes de adenocarcinoma mucinoso invasivo, uma subpopulação de câncer do pulmão de células não pequenas [Fernandez-Cuesta 2014, Duruisseaux 2016]. Várias outras fuss de genes NRG1 também ter sido detectado, ou seja, VAMP? 2-NRG1, RBPMS-NRG1 e WRN- NRG1 no câncer do pulmão, bem como RAB2IL1-NRG1 em câncer do ovário [Jung 2015, Dhanasekaran, 2014]. Esta diversidade de fusões de genes pode estar relacionada com a localização NRG de um gene no cromossoma 8, que é susceptível de translocações [Adelaide 2003].

[00243] OV-10-0050 verificou-se ser HER-dependente. O tratamento com afatinib (um inibidor irreversível de EGFR e HER2, que também inibe transfosforilação de HER3) conduziu à inibição do crescimento do tumor. A eficácia anti-tumoral de MCLA-128 foi comparado com PBS (Figura 7, painel da direita).

[00244] Os ratos NOD-SCID:, Crl: NU (NCr) -Foxn1nu e camundongos BALB / c nus. Os anticorpos foram doseados a 25 mg / kg durante 4 semanas. Os volumes dos tumores são medidos com um compasso duas vezes por semana. Exemplo 5: Estudo de fase I / II de MCLA-128, um anticorpo biespecífico de comprimento total de IgG1 alvejando HER2 e HER3, em pacientes com tumores sólidos Duração do estudo:

[00245] Provisão para a parte de escalonamento de dose do estudo (Parte 1, primeiro paciente doseado em 3 de fevereiro, 2015), foi concluída após o recrutamento de 28 pacientes. O primeiro paciente na Parte 2 do estudo, a fase de expansão de dose, foi administrado em 15 de janeiro de 2016 no Europa. A duração total da parte 2 é de aproximadamente 25 - 32 meses; no entanto, a duração real foi influenciada por várias variáveis, por exemplo, taxa global de recrutamento de pacientes. Número de locais:

[00246] Até 13 locais são estimados para estar envolvido durante o estudo. Locais adicionais podem ser adicionados para garantir que há uma taxa de inscrição aceitável ou de substituir / sites retirados não registo. Número de pacientes:

[00247] Vinte e oito (28) pacientes foram inscritos na Parte 1. Para a parte 2, pelo menos, 20 pacientes avaliáveis, e até, aproximadamente, 40, pode ser inscrito no grupo avançado do câncer do pulmão de células não pequenas / metastático com adenocarcinoma mucinoso invasivo ou documentado fusão NRG1; NSCLC).

[00248] Os pacientes que não completaram pelo menos dois ciclos de tratamento em estudo devido a outras razões que não progressão da doença, não são avaliáveis para eficácia e são substituídos no respectivo grupo.

[00249] Este Exemplo descreve Parte 2. Enquanto o exemplo descreve a administração de MCLA-128, um Erb-2, Erb- 3 de ligação do anticorpo biespecífico, o exemplo não pretende ser limitativo para o uso desta concretização específica e aplica-se a outros anticorpos biespecíficos aqui divulgado.

[00250] Objetivos do Estudo: Parte 1 Objective Primário: • Determinação de MTD e/ou MRD • Avaliação de eventos de MCLA-128. adversos (EAs) e toxicidades limitantes da dose (DLT). Secundário: • Para caracterizar a segurança e • Frequência e natureza tolerabilidade do MCLA-128. de EAs / eventos adversos graves (SAEs). • Perfil PK de MCLA-128. • Avaliação das variáveis PK, incluindo exposição total, depuração da concentração máxima (Cmax), volume de distribuição (V), volume de distribuição em estado estacionário (Vss), meia-vida (t1 / 2), AUC0-t (área sob a curva de concentração versus tempo do tempo zero ao tempo t), AUC0-∞ (área sob a curva de concentração versus tempo), tmax (tempo para atingir a concentração máxima). • Imunogenicidade de MCLA-128. • Incidência e títulos séricos de anticorpos antidrogas contra o MCLA-128. • Avaliação da resposta anti-tumor • Atividade antitumoral e CBR. e benefício clínico avaliados pelo RECIST v1.1, determinando a taxa de resposta global objetiva (ORR), duração da resposta (DOR), sobrevida livre de progressão (PFS) e sobrevida; A RBC é definida como a proporção de pacientes nos quais uma resposta completa (RC) ou resposta parcial (RP) ou doença estável (DP) é observada (onde a duração da DP é no mínimo 12 semanas). Exploratório (inclue avaliações opcionais):

• Presença de biomarcadores e • Avaliação de respostas farmacodinâmicas (DP) biomarcadores tumorais ao MCLA-128 relevantes e marcadores da atividade do MCLA-128 no material de arquivo e / ou biópsia tumoral e no sangue frescos.

Os seguintes biomarcadores candidatos são avaliados: o HER2, HER3, pHER2, pHER3 & heregulina; o Status de mutação KRAS, NRAS, PIK3CA, BRAF (apenas pacientes com câncer colorretal metastático (mCRC); o o ácido desoxirribonucléico (DNA) do tumor circulante e mutações nos genes associados à sinalização HER2 / HER3; o Moléculas fosforiladas na via de sinalização MAPK e AKT.

Parte 2

Objetico Primário (segurança): • Para caracterizar a segurança e • Frequência e natureza tolerabilidade de MCLA-128. dos AEs.

Primário (eficácia): • Explorar as relações entre a Taxa de resposta atividade antitumoral do MCLA- geral (ORR), DOR, 128 e os biomarcadores CBR (definida como relacionados a doenças a proporção de pacientes nos quais um CR ou PR é observado ou SD com uma duração mínima de 12 semanas) por RECIST 1.1, conforme avaliação do investigador local.

São exploradas as relações entre a atividade antitumoral e os biomarcadores, incluindo a expressão de HER2, HER3 e heregulina, e biomarcadores séricos como CA-125 (ovário, endometrial) e CA- 19-9 (gástrico) Secundário:

• Perfil PK do MCLA-128. • Avaliação das variáveis PK, incluindo exposição total, Cmax, V, Vss, t1 / 2, AUC0-t, AUC0- ∞, tmax. • Analise de População

PK • Imunogenicidade de MCLA-128. • Incidência e títulos séricos de anticorpos antidrogas contra. • Avaliação do PFS e sobrevida geral, duração de resposta Exploratório (inclue avaliações opcionais): • Avaliação de outros Os seguintes biomarcadores tumorais biomarcadores relevantes e marcadores da candidatos são atividade do MCLA-128 em material avaliados se houver de biópsia / amostra de tumor / amostra suficiente de preferência fresco ou em disponível: arquivo e sangue. Amostra de tumor o Dimerização pHER2, pHER3, HER2:HER3; o Heregulin e (Mutações nos genes de câncer, incluindo aqueles associados a HER2 e HER3 o Moléculas fosforiladas na rota de sinalização MAPK e AKT. o Fusões Heregulin- gene Sangue o Receptor e polimorfismo Fcgamma o o DNA circulante de tumor e análise de mutações em genes de câncer, incluindo aqueles associados à sinalização HER2 / HER3; o Circulando células tumorais e status HER2 Design de estudo:

[00251] Este é um estudo de Fase II, de marcação aberta, de multi-centro, o escalonamento da dose, estudo de I / multinacional grupo único de atribuição para avaliar a seguran, a tolerabilidade, PK, PD, imunogenicidade e atividade anti-tumoral de MCLA-128.

[00252] O estudo foi concebido em 2 partes: Parte 1

[00253] Competência para a Parte 1 do estudo foi recebida em 24 de novembro de 2015 e a partir de 24 de janeiro de 2017 todos os pacientes da Parte 1 completaram o estudo. Nove níveis de dose foram investigados: 40 mg, 80 mg, 160 mg em coortes de um paciente e 240 mg, 360 mg, 480 mg, 600 mg, 750 mg e 900 mg, em coortes de 3 pacientes. MCLA- 128 foi inicialmente dada ao longo de aproximadamente 60 minutos no dia 1 de um ciclo de tratamento de 3 semanas. Durante a Parte 1, a duração da infusão foi alargada a 2 horas, com a opção de aumentá-la até 4 horas para mitigar reacções relacionadas com a perfusão (IRRS).

[00254] Sem limitação de dose (DLTs) toxicidades foram experimentados em qualquer um dos níveis de dose. Três pacientes adicionais foram doseados em cada uma das 600 mg e 750 mg coortes, a fim de ter informação suficiente PK.

[00255] Como um MTD não foi atingido o nível de dose de 900 mg, o Comité de Revisão de dados (DRC) para MCLA-128- CL01 decidiram designar o nível de dose de 750 mg como o RP2D do estudo, com base na segurança cumulativa, disponíveis dados farmacocinéticos e simulações de PK. Parte 2

[00256] Parte 2 inclui uma caracterização adicional da segurança e tolerabilidade do nível de dose selecionado de MCLA-128, bem como a avaliação de RBC, definida como a proporção de pacientes com um CR, PR SD ou durável (SD de, pelo menos, 12 semanas em duração), em grupos de expansão de populações de pacientes selecionados.

[00257] Um regime de dosagem semanal, com um ciclo de 4 semanas é avaliada em pacientes recrutados consistindo de uma dose fixa de 400 mg por semana para os primeiros 2 ciclos, com uma dose de carga de 800 mg para a administração inicial. A partir de ciclo 3, MCLA-128 é dado a uma dose de 400 mg por semana, durante 3 semanas, seguidas por uma semana fora. pré-medicação obrigatória é administrada para atenuar

TIR. No entanto, os corticosteróides são apenas obrigatório antes da dose de carga de Dia 1 do ciclo 1 e só deverá ser usada para infusões subsequentes como por discrição do investigador para gerir TIR.

[00258] Segurança do calendário semanal foi avaliada durante um período de run-in após os primeiros 5 pacientes tratados completaram pelo menos 2 ciclos de tratamento. A RDC analisa todos os dados de segurança com foco na incidência de grau 3-4 toxicidades, incidência e gravidade da TIR e conformidade. Se a avaliação RDC conclui que a toxicidade é inaceitável, o Patrocinador continua inscrição doente com o regime de dose ciclo de 3 semanas até que um número suficiente de pacientes tem sido feito por coorte.

[00259] Nenhum escalonamento de dose intra-paciente é permitido na Parte 2.

[00260] populações de pacientes de interesse para ser apreciado na Parte 2 do estudo são os seguintes: • NSCLC com NRG1 documentado fusions- aberto apenas para o recrutamento na Ásia

[00261] Pelo menos 20 e até cerca de 40 pacientes podem ser incluídos em cada grupo (CF), incluindo um mínimo de 10 pacientes por grupo tratado com o semanal

[00262] a dose recomendada. Anteriormente coortes fechadas pode ser reaberto. Duração do tratamento

[00263] Os pacientes em ambos Parte 1 e 2 do estudo podem permanecer em tratamento até progressão da doença, morte, toxicidade inaceitável ou a suspensão por qualquer outro motivo.

Comitê de Revisão de Dados (RDC):

[00264] Todas as decisões de escalonamento de dose na Parte 1 foram feitas por um RDC que convocada para rever todos os dados disponíveis de segurança e dados de FC. Os participantes da RDC incluiram os Investigadores Principais (ou seus representantes), diretor médico do Patrocinador, o estudo monitor médico, estudo de Farmacovigilância Médico, Gerente de Projetos estudo, estudo estatístico, e especialistas convidados como exigido (como especialista farmacologia clínica).

[00265] Na Parte 2, a RDC analisa os dados após a conclusão da segurança rodado no período para a dose semanal antes de expandir o regime de dose semanal em todos os pacientes subsequentes. Avaliação do Estudo:

[00266] O estudo consiste em uma avaliação de pré- rastreio molecular de até um período de rastreio de 4 semanas (28 dias), seguido por ciclos sequenciais de tratamento até a suspensão do tratamento ou terminação, por qualquer motivo. A duração do ciclo de tratamento é de 3 semanas (21 dias) para os pacientes tratados com a dose inicial recomendada na Parte 2, e 4 semanas (28 dias) para os pacientes tratados com a dose recomendada semanal na Parte 2. Todos os pacientes devem participar de uma Final do Tratamento visitar dentro de 1 semana após a interrupção do tratamento e uma visita de estudo final 30 dias após o fim do tratamento ou descontinuação do estudo.

[00267] Pacientes que não tenham progredido ou retirados consentimento após a conclusão do final Visita de

Estudo são acompanhados a cada 3 meses até 2 anos (aproximadamente) para verificar a sua progressão da doença e / ou status de sobrevivência até ao início da sua próxima tratamento anticâncer.

[00268] Quando a avaliação contínua de dados de segurança e PK, PD e atividade antitumoral de dados disponíveis durante o ensaio sugerem que as frequências de dosagem alternativos deve ser avaliado, ou que outras populações de pacientes devem ser avaliadas na Parte 2, estas modificações são clarificadas em uma alteração protocolo prévia do início destas avaliações. Pré-rastreio molecular e reciclagem:

[00269] pré-rastreio molecular é realizada em laboratórios locais qualificados para realizar o rastreio molecular para fuss NRG1. Para iniciar a pré-triagem, o paciente deve cumprir um dos seguintes critérios: • O diagnóstico histológico da IMA e ausência documentado de alterações EGFR / ALK. Nota: pacientes IMA que não realizaram o teste de pré-triagem para a fusão NRG1 pode entrar no julgamento.

[00270] OU • O exame anatomopatológico não permite diagnóstico IMA mas o investigador suspeita que o IMA com base em sintomas, características de imagem (por exemplo, localizada consolidação, múltiplos nódulos bilaterais ou consolidações), não-fumante e ausência documentado de alterações EGFR / ALK.

[00271] O Formulário de Consentimento Informado pré- rastreio molecular (ICF) deve ser assinado por pacientes com

NSCLC identificadas para o potencial de participação no estudo antes de o tecido de tumor fresco ou de arquivo é submetida a análise para determinação do estado de fusão NRG1. O teste pode ser realizado em qualquer momento, da história natural da doença (por exemplo, no momento do diagnóstico, durante a primeira linha de terapia, em progressão, etc.) até um máximo de um ano antes do Ciclo 1 Dia 1. Uma amostra fresca do tumor ( -fixadas com formalina incluídos em parafina; FFPE) ou uma amostra de tumor de arquivo não mais de 1 ano, é necessário para a avaliação da presença da fusão NRG1. A amostra deve ser enviado para um laboratório local qualificado para testes por perfis moleculares (PGR, próxima geração sequenciação [DNA ou RNA] ou FISH) de estado de fusão NRG1. Os pacientes com resultado de fusão NRG1 locais positivos são então elegíveis para assinar o principal estudo ICF se eles estão dispostos e capazes de entrar no estudo principal. Principal Formulário de consentimento informado

[00272] O principal estudo ICF deve ser assinado por todos os pacientes antes de quaisquer procedimentos de triagem ou avaliações sendo conduzida. As avaliações de rastreio são realizadas dentro de 4 semanas antes do Ciclo 1 Dia 1, com a excepção do teste de gravidez no soro que deve ser realizado no prazo de 7 dias do ciclo 1 Dia 1. Para ser considerado para rastreio, uma amostra de tumor obrigatório linha de base, de preferência, uma quadra, a partir de tecido fresco ou de arquivo é solicitado. O patrocinador indica a preferência por tecido fresco. Filme de arquivo é aceitável e deveria ter sido tomada no prazo de

2 anos a partir de triagem exceto para NSCLC que deve estar dentro de 1 ano. Deve notar-se que, para pacientes com NSCLC, a biópsia da linha de base para o rastreio é ainda necessária, mesmo se uma amostra de biópsia pré-rastreio é fornecida para o pré-rastreio de testes locais de NRG1. Após a conclusão de todas as avaliações de triagem necessários e confirmação de todos os critérios de elegibilidade do paciente pode começar a dosagem no Ciclo 1 Dia 1. Avaliações de segurança

[00273] As doenças simultâneas são capturadas na linha de base; AES e concomitantes terapias são monitorados ao longo da participação no estudo. avaliações de segurança incluem a revisão Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) status de desempenho, exame físico (incluindo altura e peso), sinais e eletrocardiogramas vitais (ECG). Um teste de função cardíaca da Fracção de ejecção ventricular esquerda (FEVE) está também ser realizado no Rastreio, o fim do ciclo 4 (ou 5 Ciclo Dia 1), Fim da Visita de Estudo, e em qualquer momento durante o estudo, se clinicamente indicado. Estas avaliações laboratoriais incluem química clínica, hematologia, testes de coagulação, de urina e teste de gravidez. Note-se que uma análise de painel de citocinas foi realizada até 01 de agosto de 2017.

[00274] Em todos os dias de administração MCLA-128, os pacientes devem permanecer na clínica durante pelo menos 60 minutos a partir do momento do final da infusão (mais onde existam amostras PK necessárias) para a observação e repetir os sinais vitais antes da descarga a partir da clínica. Outras avaliações de segurança adicionais devem ser realizados conforme indicação clínica e, se necessário, a duração da estadia na clínica deve ser aumentado com base no julgamento do Investigador. Avaliação imunogenicidade

[00275] Os títulos séricos de anticorpos anti-MCLA- 128 são medidos no Dia 1 em pré-dose para cada um dos ciclos 1, 2, 3, 4 e, em seguida, a cada quarto ciclo posteriormente (Ciclo 8, 12, 16, etc), e no final de Visita tratamento e o final Visita de Estudo com uma janela de -3 dias anteriores à administração MCLA-128. Avaliação farmacocinética

[00276] Os esquemas da Parte 1 e Parte 2 de dose inicial recomendada: No ciclo 1, amostras de sangue são recolhidas para análise PK no Dia 1 em pré-dosagem, no final da infusão (MDI), e a 1, 2, 4, 8, 24 horas pós EOI, em seguida, no Dia 4 (Dia ou 3), Dia 8 e Dia 15. nos ciclos 2- 4, é recolhida apenas uma pré-dose de amostra de sangue e MDI.

[00277] Parte 2 esquema de dose semanal recomendada: No ciclo 1, amostras de sangue são recolhidas para análise PK no dia 1 antes da dose, MDI, 2, 4, 24 horas após a EOI, em seguida, pré-dose nos dias 8 e 15, e pré-dose e em EOI dia 22. nos ciclos 2 e 3, uma pré-dose de amostra de sangue e EOI é recolhido no dia 15. no ciclo de 4 amostras de sangue são colhidas pré-dose no dia 1, e antes da dose e EOI no dia

15. a cada 2 ciclos posteriormente (Ciclos de 6, 8, 10, etc), uma amostra de sangue pré-dose é recolhido no dia 15. Avaliação do tumor

[00278] A avaliação do tumor é avaliada de acordo com

RECIST versão 1.1 por investigador local. Imagiologia é obtido na Triagem e no fim de cada 2 ciclos de tratamento para os pacientes que receberam o regime ciclo de 3 semanas e a cada 6 semanas para os pacientes que receberam o regime ciclo de 4 semanas. Biomarcador e Avaliação farmacodinâmica

[00279] Uma série de testes de biomarcadores e farmacodinâmicos são realizados em material de arquivo e / ou fresca amostra de tumor e / ou de sangue (biópsia líquido), dependendo da disponibilidade de tecido arquivada ou existente do tumor, o consentimento para outras amostras de tumores, e o consentimento para testes biomarcador específico.

[00280] Os seguintes biomarcadores candidatos são avaliadas no caso de amostra suficiente disponível é: • dimerização HER2, HER3, HER2:HER3, HER2 fosforilado (pHER2) e HER3 (pHER3) e heregulina; • Circulação DNA do tumor no plasma (ctDNA) e o DNA da amostra de tumor (dependendo da disponibilidade) são utilizados para examinar as mutações em genes do câncer, incluindo aqueles associados com a sinalização de HER2 e HER3 • Moléculas fosforiladas na via de sinalização MAPK e AKT; • polimorfismo receptor Fcgamma; • Circulação de células tumorais para HER2; • fusões heregulina-gene

[00281] Nenhuma avaliação DNA da linhagem germinal está incluído (exceto para o polimorfismo do receptor

Fcgamma).

[00282] Na linhagem de base do paciente é solicitada para fornecer uma amostra de tecido tumoral obrigatório, de preferência um bloco, o qual pode ser a partir de tecido fresco ou de arquivo. O patrocinador indica a preferência por tecido fresco. Filme de arquivo é aceitável e deveria ter sido tomada no prazo de 2 anos a partir de triagem exceto para NSCLC que deve estar dentro de 1 ano. Além disso, o paciente é opcionalmente solicitado para fornecer uma amostra de tumor / biopsia no final do ciclo 4 e, opcionalmente, na Visita Final do Tratamento.

[00283] As amostras de sangue são também tidas nesses pontos de tempo para efeitos do ensaio de biópsia líquido. Critérios de elegibilidade:

[00284] O estudo matricula pacientes com NSCLC.

[00285] Critérios gerais de inclusão para Part 2

1. Idade 18 anos ou mais;

2. Pelo menos uma lesão mensurável de acordo com a v1.1 RECIST;

3. Estado de Desempenho de ECOG 0 ou 1;

4. expectativa de vida estimada de pelo menos 12 semanas;

5. Toxicidades efetuadas como um resultado de terapia anti-câncer anterior resolveu ≤Grade 1 (tal como definido pela NCI CTCAE v4.03), exceto para a alopecia, linfopenia avaliado como não-clinicamente significativa, Grau 2 neurotoxicidade sensorial;

6. Pelo menos um intervalo de 4 semanas entre o último recebido radioterapia e no primeiro dia de dosagem agendada com MCLA-128 (com a excepção de até 1x8 Gy para alívio da dor);

7. A recuperação completa de uma grande cirurgia (estável e <grau 2 de toxicidade aceitável);

8. Valores laboratoriais no Rastreio:

[00286] a. Contagem absoluta de neutrófilos ≥ 1.5 x 109 / L sem suporte com fator de estimulação de colónias;

[00287] b. As plaquetas ≥ 100 x 109 / L;

[00288] c. Hemoglobina ≥ 9 g / dL ou ≥ 2,2 mmol / L (não dependentes de transfusão); d. bilirrubina total < 1,5 vezes o limite superior do normal (LSN) (a menos devido à síndrome de Gilbert);

[00289] e. AST (SGOT) ≤2.5 x ULN; ALT (SGPT) ≤ 2.5 x ULN; ≤5 x ULN para pacientes com tumores sólidos avançados com metástases hepáticas; pacientes com metástases ósseas confirmados são permitidos em estudo com elevações isoladas em ALP> 5 x ULN;

[00290] f. creatinina sérica ≤1.5 x ULN ou estimativa da taxa de filtração glomerular (TFG) de> 50 mL / min, com base na fórmula de Cockcroft-Gault;

[00291] g. As funções de coagulação (INR e aPTT ≤ 1.5 ULN, a menos que sobre anticoagulantes terapticos)

[00292] h. ≤ proteína urina 2+ (como medido por vareta) ou ≤100 mg / 24 horas de urina;

[00293] 9. Capaz de proporcionar no início do estudo de uma amostra de biopsia do tumor obrigatória (FFPE), de preferência um bloco, a partir de tecido fresco (preferida) ou de arquivo. tecido de arquivo devem ser recolhidas no prazo de 2 anos antes de triagem, exceto para NSCLC que deve estar dentro de 1 ano.

[00294] 10. resultados do teste de gravidez negativo disponíveis definidas pela urina ou sangue gonadotrofina coriônica humana teste (hCG), durante Triagem e no prazo de 7 dias do ciclo 1, Dia 1 em mulheres em idade fértil (definidos como mulheres ≤ 50 anos de idade ou história de amenorréia para ≤ 12 meses antes da entrada no estudo);

[00295] 11. pacientes do sexo masculino e do sexo feminino sexualmente ativas com potencial para engravidar devem concordar em utilizar um método eficaz de controlo da natalidade (por exemplo, os métodos de barreira com espermicidas, orais ou parenterais contraceptivos e / ou dispositivos intra-uterinos) durante toda a duração do estudo e durante 6 meses após a administração final de MCLA-

128. Note-se que a esterilidade em pacientes do sexo feminino devem ser confirmados por registros médicos dos pacientes e ser definida como qualquer um dos seguintes: a histerectomia cirúrgica com ooforectomia bilateral, ligadura tubular bilateral, a menopausa natural com última menstruação> 1 ano atrás; radiação ooforectomia induzida com última menstruação> 1 ano atrás; quimioterapia menopausa induzida com intervalo de 1 ano desde última menstruação; 12. capacidade de dar escrito, o seu consentimento informado antes de quaisquer procedimentos de rastreio específicos de estudo, com o entendimento de que o consentimento pode ser retirado pelo paciente em qualquer momento, sem prejuízo;

[00296] 13. Capaz de compreender os requisitos do protocolo obrigatórios e opcionais, está disposto e capaz de cumprir os procedimentos de protocolo de estudo e assinou o principal documento de consentimento informado. Para qualquer amostra de biópsia opcional (tecido e / ou sangue) e armazenamento de amostras a longo prazo, é necessário consentimento adicional;

[00297] 14. Paciente com câncer metastático que tem progressão da doença depois de ter recebido tratamento com todas as terapias disponíveis conhecidos para transmitir benefício clínico.

[00298] 15. irressecável ou metastático reunião uma das seguintes condições: • comprovada por biópsia invasiva adenocarcinoma mucinoso (IMA). Nota: pacientes IMA que não realizaram o teste de pré-triagem para a fusão NRG1 pode entrar no julgamento.

OU • NSCLC com fusão NRG1 documentado determinado no em um laboratório local qualificado por métodos moleculares de perfis utilizando tal como PCR, sequenciação próxima geração [DNA ou RNA] ou peixe em pacientes sem mutações condutoras conhecidos ou fusão de genes de EGFR / ALK.

[00299] 16. documentada a progressão da doença por avaliação do investigador em, pelo menos, uma linha de terapia padrão na configuração localmente avançado ou metastásico. Análise estatística:

[00300] Parte 1 e Parte 2

[00301] Anti-tumor e variáveis de benefícios clínicos encontram-se resumidos descritiva para cada grupo na Parte

2. Sempre que adequado, as variáveis são apresentados em termos de mudança absoluta e relativa da linha de base. Os dados categóricos são apresentados como percentagens e tabulações de frequência.

[00302] Quando apropriado, os dados de pacientes que recebem o que se identifica como a MTD ou o MRD durante a Parte 1, e os que receberam a mesma dose na Parte 2, podem ser combinados e sintetizados, bem como a ser resumidos de forma independente.

[00303] A frequência e natureza da AEs graves e não graves é avaliada em frequências absolutas e relativas e codificada de acordo com o dicionário médico MedDRA.

[00304] Parte 1

[00305] A avaliação dos dados é de natureza descritiva. dados demográficos do paciente, das características da doença e farmacocinéticas e farmacodinâmicas variáveis encontram-se resumidos em cada nível de dose. A frequência e natureza da DLTs também são resumidas em cada nível de dose. Parte 2

[00306] Com N = 20 por grupo na Parte 2, clinicamente significativos coeficientes de correlação observada de pelo menos 0,38 seria distinguível de zero com 95% de confiança; menores correlações observadas, não clinicamente significativas não seria distinguível de zero. Daí 20 indivíduos por coorte na Parte 2 é considerada suficiente para explorar a relação entre a atividade antitumoral de MCLA-128 e biomarcadores de doenças relacionadas.

[00307] No caso em que sinais de atividade clínica são vistos, os pacientes adicionais, até um total de cerca de 40, podem ser recrutados. Com 40 pacientes, as taxas de resposta clínica verdadeiros de, por exemplo, 10% a 50% pode ser estimada com precisão razoável, de cerca de ± 5% de ± 8%.

[00308] Os parâmetros farmacocinéticos são resumidos para cada coorte na Parte 1 e cada grupo de tumor na Parte

2. Aritmética e médias geométricas são fornecidos para além medianas, faixas, DP e% CV. AUC é calculado de acordo com a regra trapezoidal. os perfis de concentração no soro em função do tempo estão representados graficamente para cada grupo.

REFERÊNCIAS

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Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo biespecífico caracterizado pelo fato de que compreende um primeiro local de ligação ao antígeno que pode se ligar a uma parte extracelular do ErbB-2 e um segundo local de ligação ao antígeno que pode se ligar a uma parte extracelular do ErbB-3 para uso no tratamento de um indivíduo que possui uma célula positiva ErbB-2 e ErbB-3, a qual a célula compreende um gene de fusão NRG1 compreendendo pelo menos uma porção do gene NRG1 fundida com uma sequência de um local cromossômico diferente.

2. Anticorpo para uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o gene de fusão NRG1 compreende pelo menos a extremidade 3' do gene NRG1 fundida com uma sequência 5' de um local cromossômico diferente.

3. Anticorpo para uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula cancerígena.

4. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a célula cancerígena está associada a uma fusão NRG1.

5. Anticorpo para uso, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que a célula cancerígena é acionada pela fusão NRG1.

6. Anticorpo para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula de câncer de mama, uma célula de câncer de ovário, uma célula de câncer de pulmão, como câncer de pulmão de células não pequenas, ou uma metástase do mesmo.

7. Anticorpo biespecífico compreendendo um primeiro local de ligação ao antígeno que pode se ligar a uma parte extracelular do ErbB-2 e um segundo local de ligação ao antígeno que pode se ligar a uma parte extracelular do ErbB- 3 para uso no tratamento de um indivíduo que possui um tumor positivo ErbB-2 e ErbB-3 ou corre o risco de ter o referido tumor, o método caracterizado pelo fato de que as células do tumor expressarem um gene de fusão NRG1 compreendendo pelo menos a extremidade 3' do gene NRG1 fundida a uma 5' sequência de um local cromossômico diferente.

8. Anticorpo para uso, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o tumor é câncer de mama, câncer de ovário, câncer de pulmão, como câncer de pulmão de células não pequenas, ou uma metástase do mesmo.

9. Anticorpo para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o gene de fusão NRG1 expressa uma proteína que compreende um domínio semelhante ao EGF de NRG1.

10. Anticorpo para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que a fusão NRG é uma fusão de NRG1 e um gene no cromossomo humano 8.

11. Anticorpo para uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o gene no cromossomo humano 8 codifica uma proteína excretada ou uma proteína associada à membrana celular.

12. Anticorpo para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o gene de fusão NRG1 é uma fusão da extremidade 3' do gene NRG1 com a sequência 5' de um dos genes selecionados do grupo que consiste em CD74; DOC4; TNFRSF10B; CLU; VAMP2; SLC3A2; RBPMS;

WRN; SDC4; KIF13B; SLECA2; PDE7A; ATP1B1; CDK1; BMPR1B; MCPH1 e RAB2IL1.

13. Anticorpo para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que a célula ou tumor é de origem epitelial.

14. Anticorpo para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o indivíduo foi submetido a uma terapia direcionada à inibição do EGFR, preferencialmente, com um anticorpo de ligação ao EGFR, que é, de preferência, cetuximabe.

15. Anticorpo para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que a densidade do receptor da superfície celular da ErbB-1; densidade do receptor da superfície celular ErbB-2; densidade do receptor da superfície celular ErbB-3; a densidade do receptor da superfície celular ErbB-4 ou uma combinação dos mesmos na célula ou células do tumor é determinada.

16. Anticorpo para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que a célula ou tumor possui menos de 400.000 receptores de superfície celular ErbB-1 por célula, de preferência, menos de 200.000 receptores de superfície celular ErbB-1 por célula.

17. Anticorpo para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração ao indivíduo de um inibidor de ErbB-1, preferencialmente, cetuximabe.

18. Anticorpo para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o referido primeiro local de ligação ao antígeno pode se ligar ao domínio I do ErbB-2 e o referido segundo local de ligação ao antígeno pode se ligar ao domínio III do ErbB-3, de preferência, em que a afinidade do primeiro local de ligação ao antígeno para ErbB-2 é menor que a afinidade do segundo local de ligação ao antígeno para ErbB-3.

19. Anticorpo para uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o referido anticorpo compreende i) pelo menos as sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de uma região variável da cadeia pesada específica de ErbB2 selecionada do grupo que consiste em MF2926, MF2930, MF1849; MF2973, MF3004, MF3958, MF2971, MF3025, MF2916, MF3991, MF3031, MF2889, MF2913, MF1847, MF3001, MF3003 e MF1898 ou em que o referido anticorpo compreende sequências CDR que diferem em no máximo 3 aminoácidos, de preferência, em no máximo 2 aminoácidos, preferencialmente, em no máximo 1 aminoácido das sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de MF2926, MF2930, MF1849; MF2973, MF3004, MF3958, MF2971, MF3025, MF2916, MF3991, MF3031, MF2889, MF2913, MF1847, MF3001, MF3003 ou MF1898; e / ou ii) pelo menos as sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de uma região variável da cadeia pesada específica de ErbB3 selecionada do grupo que consiste em MF3178; MF3176; MF3163; MF3099; MF3307; MF6055; MF6056; MF6057; MF6058; MF6059; MF6060; MF6061; MF6062; MF6063; MF6064; MF 6065; MF6066; MF6067; MF6068; MF6069; MF6070; MF6071; MF6072; MF6073 e MF6074, ou em que o referido anticorpo compreende sequências de CDR que diferem em no máximo 3 aminoácidos, preferencialmente em no máximo 2 aminoácidos, preferencialmente em no máximo 1 aminoácido das sequências CDR1, CDR2 e CDR3 de MF3178; MF3176; MF3163; MF3099; MF3307; MF6055; MF6056; MF6057; MF6058; MF6059; MF6060; MF6061; MF6062; MF6063; MF6064; MF 6065; MF6066; MF6067; MF6068; MF6069; MF6070; MF6071; MF6072; MF6073 ou MF6074; preferencialmente, em que o referido anticorpo compreende i) uma sequência de região variável de cadeia pesada específica de ErbB2 selecionada do grupo que consiste nas sequências de região variável de cadeia pesada de MF2926, MF2930, MF1849; MF2973, MF3004, MF3958, MF2971, MF3025, MF2916, MF3991, MF3031, MF2889, MF2913, MF1847, MF3001, MF3003 e MF1898, ou em que o referido anticorpo compreende uma sequência de região variável da cadeia pesada que difere em no máximo 15 aminoácidos das sequências de regiões variáveis de cadeias pesadas de MF2926, MF2930, MF1849; MF2973, MF3004, MF3958, MF2971, MF3025, MF2916, MF3991, MF3031, MF2889, MF2913, MF1847, MF3001, MF3003 ou MF1898; e / ou ii) uma sequência de região variável de cadeia pesada específica de ErbB3 selecionada do grupo que consiste nas sequências de região variável de cadeia pesada de MF3178; MF3176; MF3163; MF3099; MF3307; MF6055; MF6056; MF6057; MF6058; MF6059; MF6060; MF6061; MF6062; MF6063; MF6064; MF 6065; MF6066; MF6067; MF6068; MF6069; MF6070; MF6071; MF6072; MF6073 e MF6074, ou em que o referido anticorpo compreende uma sequência da região variável da cadeia pesada que difere em no máximo 15 aminoácidos das sequências da região variável da cadeia pesada do MF3178; MF3176; MF3163; MF3099; MF3307; MF6055; MF6056; MF6057; MF6058; MF6059; MF6060; MF6061; MF6062; MF6063; MF6064; MF 6065; MF6066; MF6067; MF6068; MF6069; MF6070; MF6071; MF6072; MF6073 ou MF6074.

20. Anticorpo para uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende pelo menos as sequências CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável da cadeia pesada específica de ErbB22 de MF3958 e o anticorpo compreende pelo menos as sequências CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável da cadeia pesada específica de ErbB-3 de MF3178.

21. Anticorpo para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que o domínio variável que compreende o referido primeiro local de ligação ao antígeno e o domínio variável que compreende o referido segundo local de ligação ao antígeno compreende uma região variável da cadeia leve compreendendo o segmento do gene IgVKl-39, a maioria, de preferência, a cadeia leve kappa humana rearranjada da linhagem germinativa IgVKl- 39*01/IGJKl*01, preferencialmente, em que o domínio variável que compreende o referido primeiro local de ligação ao antígeno e o domínio variável que compreende o referido segundo local de ligação ao antígeno compreende uma região variável da cadeia leve compreendendo uma CDR1 tendo a sequência (RASQSISSYLN), um CDR2 com a sequência (AASSLQS) e um CDR3 com a sequência (QQSYSTPPT).