CN117412766A - 抗erbb3(her3)单克隆抗体治疗与神经调节蛋白1(nrg1)基因融合相关肿瘤的剂量和给药 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了使用抗ERBB3抗体在临床上治疗NRG1基因融合相关肿瘤的方法。

Description

抗ERBB3(HER3)单克隆抗体治疗与神经调节蛋白1(NRG1)基因 融合相关肿瘤的剂量和给药
对相关申请的交叉引用
本申请要求2021年3月11日提交的美国临时申请No.63/159,575的权益，该临时申请的全部内容通过引用并入本文。
对序列表的引用
本申请包含序列表，该序列表已以ASCII格式以电子方式提交，并且特此通过引用将其整体并入本文。所述ASCII副本创建于2022年3月9日，名为FNJ-026_Sequence_Listing.txt，大小为24,462字节。
背景技术
神经调节蛋白-1(NRG1)基因融合代表了一种发展初期的、潜在的、跨多种不同癌症类型的致癌驱动因素(Drilon A，et al.(2018)Cancer Discov；8：686-959)。NRG1融合已在多种肿瘤类型中检测到，包括保留NRG1的胞外EGF样结构域和特定融合伴侣的跨膜结构域的蛋白。这些蛋白充当ERBB3(HER3)和ERBB4(HER4)受体的配体(Fernandez-Cuesta L，etal.(2014)Cancer Discov；4：415-22)。然后可以通过来自EGF样结构域的近分泌信号转导和分泌的NRG1的自分泌信号转导来激活ERBB3(Wen D，et al.(1994)Mol Cell Biol 1994；14：1909-199)。随后ERBB3与ERBB2的异二聚化激活了在肿瘤发生中重要的病理下游信号转导，该信号转导由ERK、PI3K、AKT和NFKB等通路介导。
NRG1融合是罕见且复发性的临床上可操作的染色体易位，在所有肿瘤的0.1-0.2％中发现(参见例如Jonna C，et al.(2019)Clin.Cancer Res.25：4966-4972；DrilonA，et al.(2018)Cancer Discov.8：686-695)。1997年，首次在乳腺癌细胞系中发现了涉及神经调节蛋白-1基因(NRG1)的融合(Schaefer G，et al.(1997)Oncogene 15：1385-1394)。随后，几个研究组证明NRG1基因与许多不同的上游伴侣的融合表达于肺癌和其他癌症中(Jonna C，et al.(2019)Clin.Cancer Res.25：4966-4972；Drilon A，et al.(2018)CancerDiscov.8：686-695)。在最大的研究中，研究了NRG1融合在不同癌症类型中的分布，14/21,858个肿瘤存在融合，并且不同肿瘤类型的发生率差异很大——胆囊癌的0.5％、肾透明细胞癌的0.5％、胰腺癌的0.5％、卵巢癌的0.4％和肉瘤的0.2％(Jonna C，et al.(2019)Clin.Cancer Res.25：4966-4972)。在非小细胞肺癌和乳腺癌的发生率约为0.2％(JonnaC，et al.(2019)Clin.Cancer Res.25：4966-4972)。NRG1融合也在子宫癌和头颈癌中被发现(Drilon A，et al.(2018)Cancer Discov.8：686-695)。
尽管肿瘤疗法有所改进，但目前还没有获批的专门针对NRG1融合的疗法来治疗晚期NRG1融合阳性实体瘤患者。现有的化疗、免疫疗法和适应症外疗法无法为这一基因组水平上定义的患者群体(例如NRG1融合阳性的晚期NSCLC)提供有意义的临床益处(参见例如Drilon A，et al.(J.Clin.Oncol.2021 Sep 1；39(25)：2791-2802)。因此，仍然迫切地需要优化现有疗法并开发新的、有前景的疗法，以延长患者的生命，同时保持高质量的生活，特别是在晚期癌症或转移性实体瘤的情况下。因此，本申请的一个目的是提供有效抑制ERBB3信号转导并可用于治疗和诊断与NRG1融合相关的多种肿瘤的方法。
发明内容
本文提供了用于治疗人类患者中的肿瘤的方法，其中所述肿瘤包含NRG1融合基因，所述方法通过根据特定的临床给药方案(即，以特定的剂量并根据具体的给药方案)向患者施用。本文描述的方法的特别益处在于，其实现了抗体的稳态浓度并在携带NRG 1融合基因(已知的与不良预后相关的致癌驱动因素)的患者中造成了ERBB 3通路活性的最大抑制。
在一个实施方案中，人类患者患有肿瘤(例如，局部晚期或转移性实体瘤)。
任何合适的抗ERBB3抗体均可用于本文所述的方法中。
示例性抗ERBB3抗体是瑟瑞妥单抗(Seribantumab)(也称为“FTN001”和“MM-121”)。在一个实施方案中，所述抗体包含由SEQ ID NO.1所示核酸序列编码的重链可变区(VH)。在另一个实施方案中，所述抗体包含由SEQ ID NO.3所示核酸序列编码的轻链可变区(VL)。在另一个实施方案中，所述抗体包含分别由SEQ ID NO.1和3中所示的核酸序列编码的VH和VL。在另一个实施方案中，所述抗体包含VH，所述VH包含SEQ ID NO.2中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO.4中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含VH和VL区，所述VH和VL区分别包含SEQ ID NO.2和4中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含(以氨基端至羧基端顺序)CDRH1、CDRH2和CDRH3序列，所述CDRH1、CDRH2和CDRH3序列包含SEQ ID NO.5(CDRH1)、SEQID NO.6(CDRH2)和SEQ ID NO.7(CDRH3)中所示的氨基酸序列，和/或(以氨基端至羧基端顺序)CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，所述CDRL1、CDRL2和CDRL3序列包含SEQ ID NO.8(CDRL1)，SEQ ID NO.9(CDRL2)和SEQ ID NO.10(CDRL3)中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含重链(HC)，所述重链包含SEQ ID NO.12中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含轻链(LC)，所述轻链包含SEQ ID NO.13中所示氨基酸序列的。在另一个实施方案中，所述抗体包含HC和LC，所述HC和LC分别包含SEQ ID NO.12和13中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，使用与上述抗体竞争结合和/或结合人ERBB3上相同表位的抗体。在特定的实施方案中，表位包含人ERBB3(SEQ ID NO.11)的残基92-104。在另一个实施方案中，所述抗体与上述抗ERBB3抗体竞争结合人ERBB3并且与上述抗ERBB3抗体具有至少90％的可变区氨基酸序列同一性(参见，例如美国专利7,846,440号和美国专利8,691,225号，其内容通过引用明确并入本文)。在另一个实施方案中，所述抗体包含瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的生物类似物。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者(例如，人类患者)的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中抗体以每周一次约2,000mg至约4,000mg之间的剂量施用(例如，以2,000mg、2,250mg、2,500mg、2,750mg、3,000mg、3,250mg、3,500mg、3、750mg或4,000mg的剂量施用)。在一个实施方案中，除非发生疾病进展或不可接受的毒性，所述抗体以每周一次3,000mg的剂量静脉内施用。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体每周施用一次约2,000mg至约4,000mg之间的剂量(例如以2,000mg、2,250mg、2,500mg、2,750mg、3,000mg、3,250mg、3,500mg、3,750mg或4,000mg的剂量)，并且其中抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.8、9和10。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体每周施用一次剂量为3,000毫克。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的3ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用，并且其中所述抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及包含SEQ ID NO.8的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，包含SEQ ID NO.8、9和10。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的3ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用，并且其中所述抗体包含重链可变区氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列，所述重链可变区氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列分别包含SEQ IDNO.2和4。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用，并且其中所述抗体包含重链和轻链氨基酸序列，所述重链和轻链氨基酸序列分别包含SEQ ID NO.12和13。
在某些实施方案中，调整给药方案以提供最佳的预期应答(例如，有效应答)。例如，在一些实施方案中，如果其不足以实现治疗(例如，由临床疾病进展、症状加剧、耐受性增加和/或与基线相比没有临床改善所证明)，则每周一次的抗体施用停止。可以通过任何合适的方式来确定每周一次施用不足以实现治疗。在一个实施方案中，所述确定通过射线照相评价(例如，通过计算机断层扫描(CT)、正电子发射断层扫描(PET)和/或磁共振成像(MRI))进行评估。在另一个实施方案中，所述确定通过“实体瘤中的反应评价标准”(RECIST)1.1版指南进行评估(参见，例如，Eisenhauer，E.et al.，(2009)，“New responseevaluation criteria in solid tumors：prevised RECIST guideline(version 1.1)，”European Journal of Cancer(Oxford，England：1990)，45(2)，228-47))。在另一个实施方案中，所述确定通过肝功能测试(LFT)进行评估。在另一个实施方案中，所述确定通过一种或多种疾病(例如，肿瘤)标志物(例如，糖类抗原(CA19-9)、癌胚胎抗原(CEA)、癌抗原125(CA-125)和癌抗原(CA 15-3)进行评估)。
在另一个实施方案中，如果受试者经历临床显著的不良事件(例如，分级≥3)，则停止治疗长达三周。示例性的临床显著的不良事件包括但不限于血液学毒性(例如，发热性中性粒细胞减少症、中性粒细胞减少症感染、4级中性粒细胞减少症＞7天、≥3级的血小板减少症持续＞7天、≥3级血小板减少症伴临床显著出血、4级血小板减少症和≥3级贫血＞7天)。另一个示例性的临床显著不良事件是非血液毒性(例如，(1)尽管提供了最佳的止吐药或止泻药支持，但仍持续超过72小时的≥3级恶心、呕吐或腹泻，(2)无论持续时间如何的4级(危及生命的)呕吐或腹泻，(3)除≥3级疲劳和厌食持续＜7天或≤2级的输液相关反应以外的任何其他≥3级的不良事件)。
在另一个实施方案中，在受试者经历临床显著的不良事件(例如，分级≥3)后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少。例如，在受试者经历临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少5％、10％、15％、20％、25％或30％。在一个实施方案中，在受试者经历临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少25％。在另一个实施方案中，在受试者经历临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少至2,750mg、2,500mg、2,250mg、2,000mg、1,750mg或1,500mg。在一个实施方案中，在受试者经历临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少至2,250mg。
在另一个实施方案中，在受试者经历两种或更多种临床显著不良事件(例如，分级≥3)后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少50％。例如，在受试者经历两种或多种临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％，或70％。在一个实施方案中，在受试者经历两种或更多种临床显著不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少50％。在另一个实施方案中，在受试者经历两种或更多种临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少至2,250mg、2,000mg、1,750mg、1,500mg、1,250mg、1,000mg、750mg或500mg。在一个实施方案中，在受试者经历两种或更多种临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少至1,500mg。
在一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用，并且其中所述抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列分别如SEQ ID NO.8、9和10所示；并且
其中受试者经历临床显著的不良事件后恢复治疗，每周一次的抗体剂量减少25％或更多(例如，减少至2,750mg、2,500mg、2,250mg、2,000mg、1,750mg或1,500mg)。
在一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用，其中所述抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列分别为SEQ ID NO.8、9和10，并且其中在受试者经历两种或更多种临床显著的不良事件后恢复治疗，每周一次的抗体剂量减少50％或更多(例如，减少至2,250mg、2,000mg、1,750mg、1,500mg、1,250mg、1,000mg、750mg或500mg)。
另一方面，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者(例如，人类患者)的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以约2,000mg至约4,000mg之间的每周一次剂量(例如，以2,000mg、2,250mg、2,500mg、2,750mg、3,000mg、3,250mg、3,500mg、3,750mg或4,000mg的剂量)施用。例如，在一个实施方案中，以每周一次2,000mg的剂量施用抗体。在另一个实施方案中，以每周一次2,250mg的剂量施用抗体。在另一个实施方案中，以每周一次2,500mg的剂量施用抗体。在另一个实施方案中，以每周一次2,750mg的剂量施用抗体。在另一个实施方案中，以每周一次3,000mg的剂量施用抗体。在另一个实施方案中，以每周一次3,250mg的剂量施用抗体。在另一个实施方案中，以每周一次3,550mg的剂量施用抗体。在另一个实施方案中，以每周一次3,750mg的剂量施用抗体。在另一个实施方案中，以每周一次4,000mg的剂量施用抗体。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次约2,000mg至约4,000mg之间的剂量施用(例如，以2,000mg、2,250mg、2,500mg、2,750mg、3,000mg、3,250mg、3,500mg、3,750mg或4,000mg的剂量施用)，直至出现不耐受(例如无法控制的毒性)。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次约2,000mg至约4,000mg之间的剂量施用(例如，以2,000mg、2,250mg、2,500mg、2,750mg、3,000mg、3,250mg、3,500mg、3,750mg或4,000mg的剂量施用)直至疾病进展(PD)。在一个实施方案中，所述抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及包含SEQ ID NO.8、9和10的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含VH和VL区，其分别包含SEQ ID NO.2和4中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含HC和LC，所述HC和LC分别包含SEQ ID NO.12和13中所示的氨基酸序列。
抗ERBB3抗体可以通过任何合适的方式施用于受试者。例如，在一个实施方案中，静脉内施用抗体。在另一个实施方案中，在约一小时内静脉内施用抗体。
只要观察到临床益处或除非发生无法控制的毒性或疾病进展，本文描述的治疗方法就可以持续。例如，在一个实施方案中，治疗持续6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月或三年或更长。
可以使用任何合适的手段对本文提供的治疗方法的功效进行评估。在一个实施方案中，治疗产生至少一种选自以下的治疗效果：随着时间的推移，肿瘤尺寸减小、转移病灶数量减少、完全缓解、部分缓解和疾病稳定。
在另一个实施方案中，已确定受试者患有包含NRG1融合基因的肿瘤，例如通过肿瘤活检或液体活检试验测量。在另一个实施方案中，所述试验包括聚合酶链式反应(PCR)、荧光原位杂交(FISH)或二代测序(NGS)，例如基于RNA或基于DNA的测试。
在另一个实施方案中，受试者患有局部晚期或转移性实体瘤。在另一个实施方案中，受试者患有晚期难治性实体瘤。用于治疗的癌症的非限制性示例包括鳞状细胞癌、肺癌(例如，浸润性粘液腺癌(IMA)、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非鳞状NSCLC)、神经胶质瘤、胃肠道癌、肾癌(例如透明细胞癌)、卵巢癌、肝癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾癌(例如肾细胞癌(RCC))、前列腺癌(例如激素难治性癌症)、甲状腺癌、神经母细胞瘤、胰腺癌、胰腺导管腺癌(PDAC)、胶质母细胞瘤(多形性胶质母细胞瘤)、宫颈癌、胃癌、膀胱癌、胆囊癌(GBC)、肝癌、乳腺癌、结肠癌和头颈癌(或恶性上皮肿瘤)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、鼻咽神经内分泌肿瘤、胃癌、生殖细胞肿瘤、肉瘤、小儿肉瘤、鼻窦自然杀伤细胞、黑色素瘤(例如转移性恶性黑色素瘤，如皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛门癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、子宫癌外阴、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱肿瘤、脑癌、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、胃食管交界处(GEJ)癌、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包括石棉诱发的癌症)、病毒相关癌症或病毒来源的癌症(例如人乳头瘤病毒(HPV-相关或-起源的肿瘤))。在一个实施方案中，受试者患有IMA。在另一个实施方案中，受试者患有卵巢癌。
在另一个实施方案中，NRG1融合包含选自以下的基因：DOC4、CLU、STMN2、PCM1、分化簇74(CD74)；溶质载体家族3成员2(SLC3A2)；Syndecan-4(SDC4)；ATP酶亚基beta-1(ATP1B1)；rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)；叉头盒(forkhead box)蛋白A1(FOXA1)；A-激酶锚定蛋白13(AKAP13)；血小板反应蛋白1(THBS1)；高亲和力cAMP特异性3′，5′-环磷酸二酯酶7A(PDE7A)；含THAP结构域蛋白7(THAP7)；SMAD4；RAB3A互作蛋白样1(RAB3IL1)；前列腺跨膜蛋白，雄激素诱导1(PMEPA1)；stathmin 2(STMN2)；溶质载体家族3成员2(SLC3A2)；囊泡相关膜蛋白2(VAMP2)；多剪接RNA结合蛋白(RBPMS)；整合素复合体亚基9(INTS9)；WRN RecQ样解旋酶(WRN)；RAB2A互作蛋白样1(RAB2IL1)；储存量介导的钙离子内流相关调节因子(SARAF)；淀粉样蛋白前体(APP)；驱动蛋白家族成员13B(KIF13B)；ADAM金属肽酶结构域9(ADAM9)；钙粘蛋白1(CDH1)；COX10反义RNA 1(COX10-AS1)；disco互作蛋白2同源物B(DIP2B)；二氢嘧啶酶相关蛋白2(DPYSL2)；生长/分化因子15(GDF15)；含1同源盒(homeobox containing 1，HMBOX1)；中期因子(MDK)；线粒体核糖体蛋白L13(MRPL13)；Notch受体2(NOTCH2)；聚(ADP-核糖)聚合酶家族成员8(PARP8)；蛋白O-甘露糖激酶(POMK)；含SET结构域蛋白4(SETD4)；腱生蛋白C(TNC)；Teashirt锌指同源盒2(TSHZ2)；含V-set结构域T细胞激活抑制子1(VTCN1)；Wolf-Hirschhom综合征候选物-1(Hirschhorn syndromecandidate-1，WHSC1L1)；和锌指MYM型蛋白2(ZMYM2)。
在另一个实施方案中，抗ERBB3抗体与第二靶向治疗剂一同施用，所述第二靶向治疗剂例如小分子抑制剂或抗体，其针对例如ERBB2(HER2)、ERBB3、ERBB4、表皮生长因子受体(EGFR)、胰岛素样生长因子1受体(IGF1-R)、酪氨酸蛋白激酶Met(C-MET)、路易斯Y、粘蛋白1(MUC-1)、上皮细胞粘附分子(EpCAM)、癌抗原125(CA125)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、血小板源性生长因子受体α(PDGFR-a)、血小板源性生长因子受体β(PDGFR-b)、蛋白癌基因c-kit(C-KIT)或成纤维细胞生长因子(FGF))受体。可选地，在另一个实施方案中，抗ERBB3抗体和第二治疗剂同时施用(例如，在单一制剂中或作为单独的制剂同时施用)。在又一个实施方案中，抗ERBB3抗体和第二治疗剂顺序施用(例如，作为单独的制剂)。在又一个实施方案中，抗ERBB3抗体与第二治疗剂(例如ERBB抑制剂)连接。例如，所述第二治疗剂是靶向治疗剂，例如小分子抑制剂或抗体(其针对例如ERBB2(HER2)、ERBB 3、ERBB4、EGFR、IGF1-R、C-MET、路易斯Y、MUC-1、EpCAM、CA125、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、PDGFR-α、PDGFR-β、C-KIT或FGF受体)，它们与抗ERBB3抗体相连接。
在另一个实施方案中，本文描述的方法可以与另一种治疗组合(例如同时或单独)使用，所述另一种治疗例如为放疗、手术、化疗、免疫疗法(例如单克隆抗体和肿瘤拮抗的治疗(例如检查点抑制剂)，溶瘤病毒疗法、T细胞疗法和/或癌症疫苗)或化学免疫疗法(例如，一种或多种杀死或减缓癌细胞生长的药物与刺激或恢复免疫系统抗癌能力的治疗相结合)。
在另一个实施方案中，本文描述的方法进一步包括MET信号转导通路活性的抑制(拮抗)。因此，在一个实施方案中，本文描述的方法进一步包括施用MET抑制剂。示例性的MET抑制剂包括但不限于：克唑替尼、PHA-665752、SU11274、SGX-523、BMS-777607、JNJ-38877605、蒂凡替尼(Tivantinib)、PF-04217903、MGCD-265、卡马替尼、AMG208、MK-2461、AMG458、NVP-BVU972和特泊替尼。
在另一个实施方案中，本文描述的方法进一步包括抑制(拮抗)mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶标)信号转导通路活性。因此，在一个实施方案中，本文描述的方法进一步包括施用mTOR抑制剂。在一个实施方案中，mTOR抑制剂抑制mTORC1。在另一个实施方案中，mTOR抑制剂抑制mTORC2。在又一个实施方案中，mTOR抑制剂抑制mTORC1和mTORC2两者。示例性的mTOR抑制剂包括但不限于：吉达利塞(gedatolisib)、西罗莫司、依维莫司、替西罗莫司、达克利塞(dactolisib)、AZD8055、ABTL-0812、PQR620、GNE-493、KU0063794、托替尼(torkinib)、利达氟奥司、沙帕色替(sapanisertib)、沃他利塞(voxtalisib)、torin1、torin2、OSI-027、PF-04691502、阿匹妥利塞(apitolisib)、GSK1059615、WYE-354、维妥色替(vistusertib)、WYE-125132、BGT226、帕罗米529(palomid529)、WYE-687、WAY600、GDC-0349、XL388、比米拉利塞(bimiralisib)(PQR309)、奥米利塞(Omipalisib，GSK2126458，GSK458)、昂他塞替(onatasertib)(CC-223)、萨摩托利塞(samotolisib)、奥米利塞(Omipalisib)、RMC-5552和GNE-477。
在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用RET抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用KRAS G12C抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用NTRK抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用ALK抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用MEK抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用ERK抑制剂。在另一实施方案中，本文描述的方法还包括施用AKT抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用PI3K抑制剂。
在另一个实施方案中，本文所述的方法还包括施用一种或多种抗雌激素，包括但不限于氟维司群、芳香酶抑制剂、他莫昔芬、非甾体芳香酶抑制剂(来曲唑、阿那曲唑)、甾体芳香酶抑制剂(依西美坦)、新型选择性雌激素受体降解剂(SERD)和选择性雌激素受体调节剂(SERM)。
另一方面，提供了用于治疗受试者的包含NRG1融合基因的肿瘤的试剂盒，其中所述试剂盒包含：一剂抗ERBB3抗体(例如，FTN001)，其包含CDRH1、CDRH2和CDRH3序列，其分别包含如SEQ ID NO.5(CDRH1)、SEQ ID NO.6(CDRH2)和SEQ ID NO.7(CDRH3)所示的氨基酸序列，以及CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，其分别包含如SEQ ID NO.8(CDRL1)、SEQ ID NO.9(CDRL2)和SEQ ID NO.10(CDRL3)所示的氨基酸序列，以及在本文所述的任何方法中使用抗ERBB3抗体的说明。在一个实施方案中，本发明的试剂盒包含至少3,000mg的抗ERBB3抗体。
附图说明
图1A-1H表明瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抑制携带NRG1改变的细胞的生长。通过RT-PCR测定，DOC4-NRG1(图1A)或SLC3A2-NRG1(图1B)融合分别表达于MDA-MB-175-VII和LUAD-0061AS3细胞中。HBECp53(NRG1融合阴性)和HBECp 53-SLC3A2-NRG1细胞分别用作阴性和阳性对照。用所示浓度的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)或阿法替尼处理细胞96小时，然后用AlamarBlue活力染料估算细胞的相对数量(图1C和图1D)。活力结果代表2-5次独立实验的平均值±SEM，其中每种条件均进行三复本测定。通过非线性回归分析活力数据，并使用GraphPad Prism 8确定生长抑制的IC50值和95％置信区间。如上所示用阿法替尼或瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理细胞，然后每24至48小时计数一次(图1E、图1F、图1G和图1H)。结果代表一项实验的平均值±标准偏差，其中每种条件均进行两复本测定。
图2A-2E显示瑟瑞妥单抗(Seribantumab)特异性阻断NRG 1依赖性生长并诱导细胞凋亡。用所示浓度的NRG1-β1处理MCF-7细胞10分钟，然后制备细胞提取物并针对所示的磷酸化(p)或总(t)蛋白进行Western印迹(图2A)。用渐增剂量的NRG1-β1和瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理MCF-7细胞96小时，然后使用AlamarBlue活力染料测定生长(图2B)。使用GraphPad Prism 8通过非线性回归分析数据。每种条件做四个复本，数据代表平均值±标准偏差。MCF-7细胞在用10ng/mL NRG1-β1刺激之前用2mmol/L瑟瑞妥单抗(Seribantumab)预处理1小时。在如图所示的日期对细胞进行计数。结果代表一个代表性实验中每种条件复本的平均值±标准偏差。用所示浓度的抑制剂处理MDA-MB-175-VII(图2D)和LUAD-0061AS3(图2E)细胞48小时，然后测量细胞匀浆中的半胱天冬酶3/7的酶活性。卡非佐米(Carfilzomib)(20S蛋白酶体抑制剂)用作细胞凋亡的阳性对照。结果为三个独立实验的平均值±SEM，其中每个条件进行三复本测定。任何数据点都没有误差线，表明误差值太小而无法在所使用的刻度上表示。
图3A-3B显示瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抑制携带NRG1融合的肺癌细胞系中的细胞内信号转导。将血清耗尽的LUAD-0061AS3(图3A)和HBECp53-CD74-NRG1(图3B)细胞用所示浓度的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)或阿法替尼处理1小时。所有处理后制备全细胞提取物并进行SDS-PAGE，然后对每张图中显示的磷酸化(p)或总(t)蛋白进行免疫印迹。所有蛋白印迹研究至少进行两次，并显示磷酸化(p)和总(t)蛋白的代表性免疫印迹。
图4A-4D显示瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抑制携带NRG1融合的乳腺癌细胞中的细胞内信号转导。将血清耗尽的MDA-MB-175-VII细胞用所示浓度的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理3小时(图4A)。用2mmol/L的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理血清耗尽的MDA-MB-175-VII细胞至24小时(图4B、图4C和图4D)。所有处理后制备全细胞提取物并进行SDS-PAGE，然后对每块胶中显示的磷酸化(p)或总(t)蛋白进行免疫印迹。所有蛋白印迹研究至少进行两次，并显示磷酸化(p)和总(t)蛋白的代表性免疫印迹。
图5A-5C展示了瑟瑞妥单抗(Seribantumab)在携带NRG1融合的NSCLC PDX模型中的功效。表征LUAD-0063AS1 PDX模型。H&E染色、TTF-1和磷酸化-HER3 IHC(图5A，从左到右)。用所示剂量的阿法替尼[每日一次(QD)]或瑟瑞妥单抗(Seribantumab)[每周两次(BIW)]治疗携带LU AD-0061AS3 PDX肿瘤的小鼠(七只动物/组)(图5B)。每周两次测量肿瘤体积并随时间绘图。结果代表平均值±SEM。放大最后14天的治疗(阴影区域)，显示1mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab)与最高剂量的阿法替尼(右)一样有效。携带LUAD-0061AS3 PDX肿瘤的小鼠接受单次给予溶媒、阿法替尼或瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗，然后在2、24或168小时收集肿瘤。对每种蛋白进行两次蛋白印迹，并显示了磷酸化(p)和总(t)蛋白的代表性免疫印迹(图5C)。
图6A-6C显示了瑟瑞妥单抗(Seribantumab)在携带NRG1融合的卵巢癌PDX模型中的功效。OV-10-0050PDX模型的IHC表征(图6A)。H&E染色、WT1和TP53IHC(从左到右)。携带OV-10-0050PDX肿瘤的小鼠(5-8只动物/组)用溶剂、阿法替尼[5mg/kg，每天一次(QD)]或瑟瑞妥单抗(Seribantumab)[每周两次(BIW)]治疗(图6B)。治疗在第27天终止，并监测动物的肿瘤再生长，直到肿瘤达到最大允许大小或直到治疗开始后90天。结果代表平均肿瘤体积±SEM。在监测瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗组的最后40天期间肿瘤体积的放大视图(右)。最高剂量的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)可阻止治疗停止后的肿瘤再生。各个肿瘤体积的变化(第27天与治疗开始时的体积相比)(图6C)。
图7A-7E证明瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抑制永生化H6C7人胰腺导管上皮细胞中NRG1融合的过表达激活的磷酸-HER3和磷酸-AKT。使用磷酸蛋白组阵列分析H6C7-EV(空载体)和H6C7-ATP1B1-NRG1细胞中活化的细胞内激酶(图7A)。使用磷酸-RTK阵列分析携带所示NRG1融合的H6C7-EV和H6C7细胞的活化受体酪氨酸激酶(RTK)(图7B)。显示磷酸化EGFR、HER2和HER3的定量(图7C)。来自表达NRG1融合的H6C7-EV和H6C7细胞的细胞提取物的蛋白印迹分析(图7D-E)。用所示浓度的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理细胞，然后通过蛋白印迹分析全细胞裂解物中所示的磷酸蛋白和总蛋白。试验前所有细胞均用血清启动24小时。
图8A-8D证明瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抑制NRG1重排的胰腺腺癌PDX模型(CTG-0943、APP-NRG1)的生长。用所示试剂治疗携带CTG-0943 PDX肿瘤的小鼠(每组5-8只小鼠)(图8A)。溶媒处理的肿瘤的代表性H&E染色载玻片(图8B)。肿瘤体积，结果代表平均值±SEM。对于前两个剂量，分别向瑟瑞妥单抗(Seribantumab)5mg和10mg组中的动物施用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)5mg/kg和10mg/kg(图8C)。与第0天相比，各个肿瘤的体积变化(溶媒：第20天；治疗组：第31天)(％)(图8D)。对溶媒以及阿法替尼和瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗的肿瘤进行蛋白印迹分析。溶媒治疗组在第24天提取肿瘤残留物，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗组在第31天提取肿瘤残留物，阿法替尼治疗组在第32天提取肿瘤残留物。显示了抗体与人(H)和/或小鼠(M)蛋白的反应性。
图9A-9E证明靶向重组抑制携带额外的已知驱动改变(CH-17-0068、RBPMS-NRG1)的NRG1重排的胆管癌PDX模型的生长。代表性的H&E染色的CH-17-0068PDX肿瘤(图9A)。通过RNAseq和相应的研究性靶向疗法鉴定的基因组改变(图9B)。用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)或阿法替尼单一疗法治疗携带CH-17-0068PDX肿瘤的小鼠(每组5-6只小鼠)30天(图9C)。然后将阿法替尼(5mg/kg QD)或AG-120(异柠檬酸脱氢酶[IDH]抑制剂，150mg/kg，每天两次[BID])添加到所示组中。结果代表平均值±SEM。第30天(图9D)或研究结束时(图9E)个体肿瘤体积的变化。
图10A-10B是携带ATP1B1-NRG1基因融合的KRAS WT胰腺癌患者的肝转移的代表性计算机断层扫描(CT)图像。该患者接受了瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗。从2020年11月开始使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)之前的肝转移(NTL1肝段826x26mm；图10A)以及2021年6月患者接受瑟瑞妥单抗(Seribantumab)时的相同肝转移(NTL1肝段8消解；图10B)。
图11是使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗的患有KRAS WT胰腺癌的患者的CA19-9肿瘤标志物和靶病灶总和的图，所述胰腺癌携带ATP1B 1-NRG1基因融合。
具体实施方式
I.定义
如本文所用，术语“受试者”或“患者”是患有包含NRG1融合基因的肿瘤的人，例如，确定患有包含NRG1融合基因的肿瘤(例如局部晚期或转移性实体瘤)的人。
术语“神经调节蛋白1”或“NRG1”(也称为神经胶质生长因子(GGF)、HGL、HRG、NDF；乙酰胆碱受体诱导活性(ARIA)、GGF2、HRG1、HRGA、SMDF、MST131、MSTP131或NRG1-IT2)是一种膜糖蛋白，是神经调节蛋白家族中作用于EGFR受体家族的四种蛋白之一。术语“NRG1”包括变体、同种型、同源物、直系同源物和旁系同源物。NRG1介导细胞间信号转导，在多个器官系统的生长和发育中发挥关键作用。NRG1基因通过选择性启动子使用和剪接产生多种不同的亚型。这些亚型以组织特异性方式表达，并且其结构显著不同，并且被分类为I型、II型、III型、IV型、V型和VI型。(Mei and Xiong(2008)Nat Rev Neurosci 9(6)：437-452)。该基因的失调与癌症、精神分裂症、心脏病和双相情感障碍(BPD)等疾病有关。
术语“融合基因”是指包含两个原先分离的基因的杂合基因，即，两个分离的基因融合在一起。融合基因的发生可能是易位、间质缺失或染色体倒位的结果。已知融合基因通过产生(即表达)由该基因编码的蛋白以形成融合蛋白来促进肿瘤形成。
术语“NRG1融合基因”指包含编码NRG1(即神经调节蛋白1)或其部分的基因和编码第二蛋白或其部分(即融合伴侣)的第二基因的融合基因。两个基因的表达导致NRG1融合蛋白(本文也称为“NRG1融合”)的形成。例如，NRG1融合可以包括NRG1的胞外EGF样结构域和融合伴侣的跨膜结构域。在另一个实施方案中，NRG1融合基因缺乏NRG1的EGF样结构域。然后这些蛋白充当ERBB3(HER3)和ERBB4(HER4)受体的配体。然后，ERBB3可以通过来自EGF样结构域的近分泌信号转导和分泌的NRG1的自分泌信号转导被激活。随后ERBB3与ERBB2的异二聚化激活细胞模型中描述的ERK、PI3K、AKT和NFκB等通路介导的肿瘤发生中重要的下游信号转导。
如本文所用，术语“ERBB3”是指ERBB3受体，其是属于ErbB/EGFR受体酪氨酸激酶家族的148kD跨膜受体，但缺乏内在激酶活性。ErbB受体形成同二聚体和异二聚体复合物，通过介导多个信号转导通路的配体依赖性(在某些情况下配体独立性)激活来影响细胞和器官的生理机能。肿瘤细胞中含有ERBB3的异二聚体(例如ERBB2/ERBB3)已被证明是ErbB家族中最具促有丝分裂和致癌性的受体复合物。与其生理配体结合后，ERBB3受体与其他ErbB家族成员(主要是ERBB2)形成二聚体。ERBB3/ERBB2二聚化导致ERBB3在蛋白细胞质尾部包含的酪氨酸残基上转磷酸化。这些位点的磷酸化为含SH2的蛋白(包括PI3激酶)创建了SH2对接位点。因此，含有ERBB3的异二聚体复合物是AKT的有效激活剂，因为ERBB3拥有六个带有YXXM基序的酪氨酸磷酸化位点，当磷酸化时，可作为磷酸肌醇3激酶(PI3K)的优异结合位点，其作用导致随后的AKT通路的下游激活。这六个PI3K位点充当ERBB3信号转导的强大放大器。该通路的激活进一步引发肿瘤发生中涉及的几个重要的生物过程，例如细胞生长、迁移和存活。
如本文所用，“有效治疗”是指产生有益效果的治疗，例如疾病或病症的至少一种症状的改善。有益效果可以采取相对于基线的改善的形式，即，相对于根据所述方法开始治疗之前进行的测量或观察的改善。有益效果还可以采取阻止、减缓、延缓或稳定具有NRG1融合基因的肿瘤的有害进展的形式。有效治疗可以指与肿瘤相关的癌症的至少一种症状的减轻。
这种有效的治疗可以例如减轻患者疼痛、减小病灶的大小和/或数量、可以减少或预防肿瘤的转移、和/或可以减缓肿瘤生长。
术语“有效量”是指提供期望的生物学、治疗和/或预防结果的试剂的量。该结果可以是疾病的一种或多种体征、症状或原因的减少、改善、缓和、减少、延迟和/或缓和，或生物系统的任何其他期望的改变。就癌症而言，有效量包括足以引起肿瘤缩小和/或降低肿瘤生长速率(例如抑制肿瘤生长)或防止或延迟其他不需要的细胞增殖的量。在一些实施方案中，有效量是足以延迟肿瘤发展的量。在一些实施方案中，有效量是足以预防或延迟肿瘤复发的量。有效量可以在一次或多次施用中施用。药物或组合物的有效量可以：(i)减少癌细胞的数量；(ii)减小肿瘤大小；(iii)在一定程度上抑制、延缓、减缓并可能阻止癌细胞浸润到周围器官；(iv)抑制(即在一定程度上减缓并可能阻止肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)预防或延迟肿瘤的发生和/或复发；和/或(vii)在一定程度上缓解一种或多种与癌症相关的症状。在一个示例中，“有效量”是临床证明导致肿瘤生长显著减少和/或癌症进展缓慢的抗ERBB3抗体的量。
如本文所用，术语“固定剂量”、“平剂量(flat dose)”和“平固定剂量(flat-fixeddose)”可互换使用，并且是指给予患者的剂量，而不考虑患者的体重或体表面积(BSA)。因此，固定或平剂量不以mg/kg剂量提供，而是以药剂的绝对量(例如，抗ERBB3抗体)提供。
术语“抗体”描述包含至少一个特异性结合ERBB3的抗体衍生的抗原结合位点(例如，VH/VL区或Fv，或互补决定区-CDR)的多肽。因此，本文所用的术语“抗体”包含完整抗体及其任何抗原结合片段(即，“抗原结合部分”)或其单链。抗体包含已知形式的抗体。例如，抗体可以是人抗体、人源化抗体、双特异性抗体或嵌合抗体。抗体还可以是Fab、Fab′2、ScFv、SMIP、纳米抗体或结构域抗体。抗体还可以是以下任一种同种型：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgAsec、IgD和IgE。抗体可以是天然存在的抗体或可以是经过改变的抗体(例如，通过突变、缺失、取代、与非抗体部分缀合)。例如，抗体可以包括一个或多个变体氨基酸(与天然存在的抗体相比)，其改变抗体的性质(例如，功能性质)。例如，本领域已知许多这样的改变，其影响例如患者体内抗体的半衰期、效应子功能和/或免疫应答。术语抗体还包括包含至少一个抗体衍生的抗原结合位点的人工多肽构建体。
II.抗ERBB3抗体
任何合适的抗ERBB3抗体均可用于本文所述的方法中。适用于本发明的示例性抗ERBB3抗体是瑟瑞妥单抗(Seribantumab)(在US 7,846,440中也称为FTN001、MM-121和“Ab#6”)，以及功能和/或结构上等同的抗体，即变体瑟瑞妥单抗具有与瑟瑞妥单抗(Seribantumab)相同的活性。用于本发明的抗体可以使用本领域熟知的方法产生。
在一个实施方案中，所述抗体包含由SEQ ID NO.1所示核酸序列编码的重链可变区(VH)。在另一个实施方案中，所述抗体包含由SEQ ID NO.3所示的核酸序列编码的轻链可变区(VL)。在另一个实施方案中，所述抗体包含分别由SEQ ID NO.1和3中所示的核酸序列编码的VH和VL。在另一个实施方案中，所述抗体包含VH，所述VH包含SEQ ID NO.2中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含VL，所述VL包含SEQ ID NO.4中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含VH和VL区，其分别包含SEQ ID NO.2和4中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含(以氨基端至羧基端顺序)CDRH1、CDRH2和CDRH3序列，其包含如SEQ ID NO.5(CDRH1)、SEQ ID NO.6(CDRH2)和SEQ ID NO.7(CDRH3)中所示的氨基酸序列，和/或(按氨基至羧基末端顺序)包含CDRL1、CDRL2和CDRL3序列，其包含如SEQ ID NO.8(CDRL1)、SEQ ID NO.9(CDRL2)和SEQ ID NO.10(CDRL3)中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含重链(HC)，所述重链包含SEQ ID NO.12中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含轻链(LC)，所述轻链包含SEQ IDNO.13中所示氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含HC和LC，所述HC和LC分别包含SEQ ID NO.12和13中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的生物类似物。如本文所用，生物类似物是与另一种已批准的生物药物(例如参比药物)高度相似(例如在结构、功能和性质上)的产品。
在其他实施方案中，所述抗体是全人单克隆抗体，例如IgG2，其结合ERBB3并防止HRG和EGF样配体诱导的ERBB3的细胞内磷酸化。
可以使用本领域熟知的方法在例如原核或真核细胞中产生抗ERBB3抗体，例如瑟瑞妥单抗(Seribantumab)。在一个实施方案中，所述抗体在能够糖基化蛋白的细胞系中产生，例如CHO细胞。单克隆抗体可以通过本领域技术人员熟知的各种技术获得。简而言之，来自用所需抗原免疫的动物的脾细胞通常通过与骨髓瘤细胞融合来永生化(参见Kohler &Milstein，Eur.J.Immunol.6：511-519(1976))。永生化的可选方法包括用Epstein Barr病毒、癌基因或逆转录病毒进行转化，或本领域熟知的其他方法。筛选由单个永生化细胞产生的集落，以产生对抗原具有所需特异性和亲和力的抗体，并且可以通过多种技术增强由此类细胞产生的单克隆抗体的产量，包括注射到脊椎动物宿主的腹膜腔中。或者，可以通过根据Huse等人Science 246：1275-1281(1989)概述的一般方案从人B细胞筛选DNA文库来分离编码单克隆抗体或其结合片段的DNA序列。
III.药物组合物
适合施用于患者的药物组合物通常为适合肠胃外施用的形式，例如在液体载体中，或适合重构为液体溶液或悬浮液，用于静脉内施用。
一般而言，组合物通常包含药学上可接受的载体。如本文所用，术语“药学上可接受的”是指经政府监管机构批准或在美国药典或另一普遍认可的药典中列出的用于动物、特别是人类的药物。术语“载体”是指与化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或溶媒。此类药物载体可以是无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，诸如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油、甘油聚乙二醇蓖麻油酸酯等。水或水溶液盐以及葡萄糖水溶液和甘油溶液可以用作载体，特别是对于可注射溶液(例如，包含抗ERBB3抗体)。用于肠胃外施用的液体组合物可以配制用于通过注射或连续输注施用。通过注射或输注的施用途径包括静脉内、腹膜内、肌内、鞘内和皮下。在一个实施方案中，静脉内施用抗ERBB3抗体(例如，在一小时的疗程中)。
瑟瑞妥单抗(Seribantumab)以无菌透明液体溶液形式提供，装在一次性小瓶中，供注射使用，浓度为25mg/mL(每40mL小瓶1,000mg；每10mL小瓶250mg)。
IV.患者群体
本文提供了根据特定给药方案使用抗ERBB3抗体治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者(即人类受试者)的有效方法。
在一个实施方案中，使用本发明方法治疗的人类患者患有包含NRG1融合基因的局部晚期或转移性实体瘤，例如通过肿瘤活检或液体活检试验，包括分子试验，诸如PCR、NGS(RNA或DNA)或FISH检测评估的那些。
在另一个实施方案中，受试者患有局部晚期或转移性实体瘤。在另一个实施方案中，受试者患有晚期难治性实体瘤。用于治疗的癌症的非限制性示例包括鳞状细胞癌、肺癌(例如，浸润性粘液腺癌(IMA)、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非鳞状NSCLC)、神经胶质瘤、胃肠道癌、肾癌(例如透明细胞癌)、卵巢癌、肝癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾癌(例如肾细胞癌(RCC))、前列腺癌(例如激素难治性前列腺癌)、甲状腺癌、神经母细胞瘤、胰腺癌、胰腺导管腺癌(PDAC)、胶质母细胞瘤(多形性胶质母细胞瘤)、宫颈癌、胃癌、膀胱癌、胆囊癌(GBC)、肝癌、乳腺癌、结肠癌、头颈癌(或恶性上皮肿瘤)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、鼻咽神经内分泌肿瘤、胃癌、生殖细胞肿瘤、肉瘤、小儿肉瘤、鼻窦自然杀伤细胞、黑色素瘤(例如转移性恶性黑色素瘤、例如皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛门癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、子宫癌外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、实体瘤儿童、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱轴肿瘤、脑癌、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、胃食管交界处(GEJ)癌、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包括石棉诱发的癌症)、病毒相关癌症或病毒来源的癌症(例如人乳头状瘤病毒(HPV相关或起源的肿瘤))。在一个实施方案中，受试者患有IMA。在另一个实施方案中，受试者患有卵巢癌。
在另一个实施方案中，所述受试者患有包含NRG1融合的肿瘤，其中NRG1融合包含选自但不限于：DOC4、CLU、STMN2、PCM1、CD74、SLC3A2、SDC4、ATP1B1、ROCK1、FOXA1、AKAP13、THBS1、PDE7A、THAP7、SMAD4、RAB3IL1、PMEPA1、STMN2、SLC3A2、VAMP2、RBPMS、WRN、RAB2IL1、SARAF、APP、KIF13B、INTS9、ADAM9、CDH1、COX10-AS1、DIP2B、DPYSL2、GDF15、HMBOX1、MDK、MRPL13、Notch 2、PARP8、POMK、SETD4、TNC、TSHZ2、VTCN1、WHSC1L1、和ZMYM2的基因(即，融合伴侣)。
可以在治疗之前、期间或之后针对一种或多种上述临床属性测试或选择患者。
V.治疗方案
本文提供了用于治疗人类患者中的肿瘤的方法，其中所述肿瘤包含NRG1融合基因，所述治疗通过根据特定的临床给药方案(即，以特定的剂量并根据具体的给药方案)。在一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者(例如，人类患者)的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中抗体以每周一次约2,000mg至约4,000mg之间(例如，以2,000mg、2,250mg、2,500mg、2,750mg、3,000mg、3,250mg、3,500mg、3,750mg或4,000mg)的剂量施用。在一个实施方案中，所述抗体以每周一次3,000mg的剂量静脉内施用。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以约2,000mg至约4,000mg之间的剂量(例如，以2,000mg、2,250mg、2,500mg、2,750mg、3,000mg、3,250mg、3,500mg、3、750mg或4,000mg的剂量)每周施用一次并且其中所述抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.8、9和10。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用，并且其中所述抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.8、9和10。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用，并且其中所述抗体包含重链可变区氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列，所述重链可变区氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列分别包含SEQ ID NO.2和4。
在另一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用，并且其中所述抗体包含重链和轻链氨基酸序列，所述重链和轻链氨基酸序列分别包含SEQ ID NO.12和13。
在某些实施方案中，调整给药方案以提供最佳的预期应答(例如，有效应答)。例如，在一些实施方案中，如果其不足以实现治疗(例如，如临床疾病进展、症状加剧和/或与基线相比没有临床改善所证明)，则每周一次的抗体施用停止。可以通过任何合适的方式来确定每周一次施用不足以实现治疗。在一个实施方案中，所述确定通过射线照相评价(例如，通过计算机断层扫描(CT)、正电子发射断层扫描(PET)和/或磁共振成像(MRI))对所述确定进行评估。在另一个实施方案中，所述确定通过“实体瘤反应评价标准”(RECIST)1.1版指南进行评估。在另一个实施方案中，所述确定通过肝功能测试(LFT)进行评估。在另一个实施方案中，所述确定通过一种或多种疾病(例如，肿瘤)标志物(例如，碳水化合物抗原(CA19-9)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA-125)和/或癌抗原15-3(CA 15-3)进行评估。
在另一个实施方案中，如果受试者经历临床显著不良事件(例如，分级≥3)，则停止治疗长达三周。示例性的临床显著不良事件包括但不限于血液学毒性(例如发热性中性粒细胞减少症、中性粒细胞减少症感染、4级中性粒细胞减少症＞7天、≥3级血小板减少症持续＞7天、≥3级血小板减少症伴临床显著出血、4级血小板减少症和≥3级贫血＞7天)。另一个示例性的临床显著不良事件是非血液毒性的(例如，(1)尽管提供了最佳的止吐药或止泻药支持，但仍持续超过72小时的≥3级恶心、呕吐或腹泻，(2)4级(危及生命的)呕吐或腹泻，无论持续时间如何，(3)任何其他≥3级的不良事件，除了≥3级疲劳和厌食持续＜7天或≤2级的输液相关反应)。
在另一个实施方案中，在受试者经历临床显著的不良事件(例如，分级≥3)后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少。例如，在受试者经历临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少5％、10％、15％、20％、25％，或30％。在一个实施方案中，在受试者经历临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少25％。在另一个实施方案中，在受试者经历临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少至2,750mg、2,500mg、2,250mg、2,000mg、1,750mg或1,500mg。在一个实施方案中，在受试者经历临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少至2,250mg。
在另一个实施方案中，在受试者经历两种或更多种临床显著不良事件(例如，分级≥3)后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少50％。例如，在受试者经历两种或更多种临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％，或70％。在一个实施方案中，在受试者经历两种或更多种临床显著不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少50％。在另一个实施方案中，在受试者经历两种或更多种临床显著不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少至2,250mg、2,000mg、2,000mg、1,750mg、1,500mg、1,250mg、1,000mg、750mg或500mg。在一个实施方案中，在受试者经历两种或更多种临床显著不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少至1,500mg。
在一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用，并且其中所述抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列分别如SEQ ID NO.8、9和10所示，并且其中在受试者经历临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少25％或更多(例如，减少至2,750mg、2,500mg、2,250mg、2,000mg、1,750mg、或1,500mg)。
在一个实施方案中，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用，并且其中所述抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及包含轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列分别如SEQ ID NO.8、9和10所示，并且其中在受试者经历两种或更多种临床显著不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少50％或更多(例如，减少至2,250mg、2,000mg、1,750mg、1,500mg、1,250mg、1,000mg、750mg或500mg)。
另一方面，提供了用于治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者(例如，人类患者)的方法，其中所述方法包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次约2,000mg至约4,000mg之间的剂量施用(例如，以2,000mg、2,250mg、2,500mg的剂量、2,750毫克、3,000毫克、3,250毫克、3,500毫克、3,750毫克或4,000毫克)。例如，在一个实施方案中，所述抗体以每周一次2,000mg的剂量施用。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次2,250mg的剂量施用。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次2,500mg的剂量施用。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次2,750mg的剂量施用。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次3,250mg的剂量施用。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次3,550mg的剂量施用。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次3,750mg的剂量施用。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次4,000mg的剂量施用。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次约2,000mg至约4,000mg之间的剂量施用(例如，以2,000mg、2,250mg、2,500mg、2,750mg、3,000mg、3,250mg、3,500mg、3,750mg或4,000mg的剂量施用)，直至出现不耐受(例如无法控制的毒性)。在另一个实施方案中，所述抗体以每周一次约2,000mg至约4,000mg之间的剂量施用(例如以2,000mg、2,250mg、2,500mg、2,750mg、3,000mg、3,250mg、3,500mg、3,750mg或4,000mg的剂量施用)直至疾病进展(PD)。在一个实施方案中，所述抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.8、9和10。在另一个实施方案中，所述抗体包含VH和VL区，其分别包含SEQ ID NO.2和4中所示的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含HC和LC，所述HC和LC分别包含SEQ ID NO.12和13所示氨基酸序列。
抗ERBB3抗体可以通过任何合适的方式施用于受试者。例如，在一个实施方案中，静脉内施用抗体。在另一个实施方案中，在约一小时内静脉内施用抗体。
只要观察到临床益处或直到发生无法控制的毒性或疾病进展，本文描述的治疗方法就可以持续。例如，在一个实施方案中，治疗持续6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月或三年或更长。
VI.联合疗法
如本文提供的，抗ERBB3抗体(例如，瑟瑞妥单抗(Seribantumab))可以与第二治疗剂共同施用以实现患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的改善。在一个实施方案中，第二治疗剂是靶向治疗剂，例如小分子抑制剂或抗体，其针对例如ERBB2(HER2)、ERBB3、ERBB4、EGFR、IGF1-R、C-MET、路易斯Y、MUC-1、EpCAM、CA125、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、PDGFR-a、PDGFR-b、C-KIT或FGF受体。例如，在一个实施方案中，第二治疗剂是靶向HER2/HER3通路的抗体FTN002(也称为MM-111)(参见例如PCT/US2012/029292，其内容通过引用明确并入本文)。
如本文所用，共同施用(组合施用)包括以相同或不同剂型同时施用化合物，或分开施用化合物(例如顺序施用)。例如，抗ERBB3抗体(例如，瑟瑞妥单抗(Seribantumab))可以与第二治疗剂(例如，小分子抑制剂或第二抗体)同时施用，其中抗体和第二药剂两者配制在一起。或者，抗ERBB3抗体可以与第二药剂组合施用，其中抗体和第二药剂均被配制用于单独施用并且同时或顺序施用。例如，可以首先施用抗体，然后施用第二药剂，或反之亦然。这种同时或顺序施用优选导致瑟瑞妥单抗(Seribantumab)和第二治疗剂同时存在于治疗的患者中。
在另一个实施方案中，本文描述的方法可以与另一种治疗(例如放疗、手术、免疫疗法(例如，单克隆抗体和肿瘤不可知的治疗(例如检查点抑制剂)、溶瘤病毒疗法、T细胞疗法和/或癌症疫苗)、化学免疫疗法(例如，一种或多种杀死或减缓肿瘤生长的药物与刺激或恢复免疫系统抗癌能力的治疗相结合)或化疗(例如喜树碱(CPT-11)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂、阿霉素、伊立替康、紫杉醇、吉西他滨、顺铂、紫杉醇、卡铂紫杉醇(Taxol)、阿霉素、5-fu、或喜树碱+apo21/TRAIL(6X组合))、一种或多种蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米或MG132)、一种或多种Bcl-2抑制剂(例如，BH3I-2′(bcl-xl抑制剂)、吲哚胺双加氧酶-1抑制剂(例如，INCB24360、吲哚莫德、NLG-919或F001287)、AT-101(R-(-)-棉酚衍生物)、ABT-263(小分子)、GX-15-070(obatoclax)或MCL-1(骨髓性白血病细胞分化蛋白-1)拮抗剂)、iAP(凋亡蛋白抑制剂)拮抗剂(例如smac7、smac4、小分子smac模拟物、合成smac肽(参见Fuldaet al.，Nat Med 2002；8：808-15)、ISIS23722(LY2181308)或AEG-35156(GEM-640))、HDAC(组蛋白脱乙酰酶)抑制剂、抗CD20抗体(例如，利妥昔单抗)、血管生成抑制剂(例如，贝伐单抗)、靶向VEGF和VEGFR的抗血管生成剂(例如，阿瓦斯汀)、合成三萜类化合物(参见Hyer etal.，Cancer Research 2005；65：4799-808)，c-FLIP(细胞FLICE抑制蛋白)调节剂(例如，PPARγ(过氧化物酶体增殖物激活受体γ)的天然和合成配体、5809354或5569100)、激酶抑制剂(例如，索拉非尼)、曲妥珠单抗、西妥昔单抗、替西罗莫司、mTOR抑制剂，诸如雷帕霉素和替西罗莫司、硼替佐米、JAK2抑制剂、HSP90抑制剂、PI3K-AKT抑制剂、来那度胺、GSK3P抑制剂、IAP抑制剂和/或基因毒性药物。
本文描述的方法还可与一种或多种抗增殖细胞毒性剂组合使用。可用作抗增殖细胞毒性剂的化合物类别包括但不限于以下：
烷基化剂(包括但不限于氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯)：尿嘧啶芥、氮芥、环磷酰胺(CYTOXANTM)、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三乙烯三聚氰胺、三乙烯硫代磷胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链脲菌素、达卡巴嗪和替莫唑胺。
抗代谢物(包括但不限于叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂)：甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他汀(Pentostatine)和吉西他滨。
用于与本文描述的方法组合的合适的抗增殖剂包括但不限于紫杉烷类、紫杉醇(紫杉醇可作为TAXOLTM商购获得)、多西他赛、圆皮海绵内酯(discodermolide，DDM)、迪妥他汀(dictyostatin，DCT)、Pelomside A、埃博霉素、埃博霉素A、埃博霉素B、埃博霉素C、埃博霉素D、埃博霉素E、埃博霉素F、呋喃埃博霉素D、脱氧埃博霉素B1、[17]-脱氢脱氧埃博霉素B、[18]脱氢脱氧埃博霉素B、C12，13-环丙基埃博霉素A、C6-C8桥联埃博霉素A、反式-9，10-脱氢埃博霉素D、顺式-9，10-脱氢埃博霉素D、16-去甲基埃博霉素B、埃博霉素B10、discoderomide、帕土匹龙(patupilone)(EPO-906)、KOS-862、KOS-1584、ZK-EPO、ABJ-789、XAA296A(圆皮海绵内酯)、TZT-1027(soblidotin)、ILX-651(盐酸他西多丁)、软海绵素B、甲磺酸艾日布林(E-7389)、哈密特林(Hemiasterlin，HTI-286)、E-7974、隐藻素、LY-355703、美登木素生物碱免疫缀合物(DM-1)、MKC-1、ABT-751、T1-38067、T-900607、SB-715992(伊斯平斯(ispinesib))、SB-743921、MK-0731、STA-5312、五加素、17β-乙酸基-2-乙氧基-6-氧-B-人-雌-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-3-醇(17beta-acetoxy-2-ethoxy-6-oxo-B-homo-estra-1，3，5(10)-trieh-3-ol)、环链菌素、异月桂酰内酯、月桂酰内酯、4-epi-7-脱羟基-14，16-二甲基-(+)-圆皮海绵内酯和cryptothilone 1，以及本领域已知的其他微管稳定剂。
在需要在用本文描述的方法治疗的同时或之前使异常增殖的细胞静止的情况下，激素和类固醇(包括合成类似物)，例如17α-炔雌醇、己烯雌酚、睾酮、阿比特龙、恩杂鲁胺、雄激素受体降解剂(ARD)、泼尼松、氟甲睾酮、丙酸屈他雄酮、睾内酯、醋酸甲地孕酮、甲基泼尼松龙、甲基睾酮、泼尼松龙、曲安西龙、氯霉素、羟孕酮、氨鲁米特、雌莫司汀、醋酸甲羟孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、ZOLADEXTM，或抗雌激素(例如，氟维司群)、非甾体芳香酶抑制剂(来曲唑、阿那曲唑)、甾体芳香酶抑制剂(依西美坦)以及新型选择性雌激素受体降解剂(SERD)和选择性雌激素受体调节剂(SERM)。当采用本文所述的方法或组合物时，还可以根据需要施用用于在临床环境中调节肿瘤生长或转移的其他药剂，诸如抗类似物。
安全且有效施用化疗剂的方法是本领域技术人员已知的。此外，标准文献中描述了它们的施用。例如，许多化疗剂的施用描述于Physicians′Desk Reference(PDR)，例如1996版(Medical Economics Company，Montvale，N.J.07645-1742，USA)；其公开内容通过引用并入本文。化疗剂、免疫治疗剂、化学免疫治疗剂和/或放射治疗可以根据本领域熟知的治疗方案施用。对于本领域技术人员显而易见的是，此类药剂和/或放射疗法的施用可以根据所治疗的疾病以及药剂和/或放射疗法对该疾病的已知效果而改变。此外，根据熟练的临床医生的知识，治疗方案(例如，给药剂量和时间)可以根据所观察到的施用的治疗剂对患者的效果以及观察到的疾病对施用的治疗剂的反应而改变。
在另一个实施方案中，本文描述的方法进一步包括对MET信号转导通路活性的抑制(拮抗)。示例性的MET抑制剂包括但不限于：克唑替尼、PHA-665752、SU11274、SGX-523、BMS-777607、JNJ-38877605、蒂凡替尼(Tivantinib)、PF-04217903、MGCD-265、卡马替尼、AMG208、MK-2461、AMG458、NVP-BVU972和特泊替尼。
在另一个实施方案中，本文描述的方法进一步包括抑制(拮抗)mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶标)信号转导通路活性。术语“mTOR”是指哺乳动物的蛋白雷帕霉素靶标，是与PI3K家族相关的丝氨酸/苏氨酸激酶，并且是PI3K/AKT信号通路的下游效应子。mTOR作为细胞生长和代谢的调节剂发挥作用，并且存在于两种复合物mTORC1和mTORC2中。
因此，在一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用mTOR抑制剂。在一个实施方案中，mTOR抑制剂抑制mTORC1。在另一个实施方案中，mTOR抑制剂抑制mTORC2。在又一个实施方案中，mTOR抑制剂抑制mTORC1和mTORC2两者。mTOR抑制剂是本领域公知的并且包括例如吉达利塞(Gedatolisib)、西罗莫司、依维莫司、替西罗莫司、达克利塞、AZD8055、ABTL-0812、PQR620、GNE-493、KU0063794、托替尼(torkinib)、利达氟奥司、沙帕色替(sapanisertib)、沃他利塞(Voxtalisib)、Torin 1、Torin 2、OSI-027、PF-04691502、阿匹妥利塞(Apitolisib)、GSK1059615、WYE-354、维妥色替(Vistusertib)、WYE-125132、BGT226、帕罗米529(Palomid 529)、WYE-687、WAY600、GDC-0349、XL388、比米拉利塞(Bimiralisib)(PQR309)、奥米利塞(Omipalisib，GSK2126458，GSK458)、昂他塞替(Onatasertib)(CC-223)、萨摩托利塞(Samotolisib)、奥米利塞(Omipalisib)、RMC-5552和GNE-477。
在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用RET抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用KRAS G12C抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用NTRK抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用EGFR抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用ALK抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用MEK抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用ERK抑制剂。在另一个实施方案中，本文描述的方法还包括施用AKT抑制剂。在另一实施方案中，本文描述的方法还包括施用PI3K抑制剂。
在另一个实施方案中，本文所述的方法还包括施用一种或多种抗雌激素，包括但不限于氟维司群、非甾体芳香酶抑制剂(来曲唑、阿那曲唑)、甾体芳香酶抑制剂(依西美坦)和新型选择性雌激素受体降解剂(SERD)和选择性雌激素受体调节剂(SERM))。
VII.疗效
对于目标病灶，对治疗的应答可能包括：
完全缓解(CR)：所有目标病灶消失。
任何病理性淋巴结(无论是目标淋巴结还是非目标淋巴结)的短轴必须缩小至＜10mm；
部分缓解(PR)：以基线直径总和为参比，目标病灶直径总和至少减少30％；
进展性疾病(PD)：目标病灶直径总和至少增加20％，以研究中最小总和作为参比(如果其在研究中最小则包括基线总和)。除了20％的相对增量外，总和还必须证明绝对增量至少为5毫米。(注：出现一个或多个新病灶也被视为进展)；和
疾病稳定(SD)：以研究时的最小直径总和为参比，既没有足够的收缩来符合PR资格，也没有足够的增加来符合PD资格。(注：20％或更少的变化且直径增加总和不超5毫米被归为疾病稳定)。要确定疾病稳定状态，进入研究后至少间隔6周进行一次的测量必须满足疾病稳定标准。
对于非目标病灶，对治疗的应答可能包括：
完全缓解(CR)：所有非目标病灶消失，肿瘤标志物水平正常化。所有淋巴结的大小必须是非病理性的(短轴＜10毫米)。如果肿瘤标志物最初高于正常上限，则它们必须恢复正常才能被认为具有完全临床反应；
非CR/非PD：一种或多种非目标病灶持续存在和/或肿瘤标志物水平维持在正常限度以上；和
疾病进展(PD)：出现一个或多个新病灶和/或现有非目标病灶明显进展。明确的进展通常不应胜过目标病灶状态。它必须代表整体疾病状态的变化，而不是单个病灶的增加。
在示例性结果中，根据本文公开的方法治疗的患者可能经历至少一种病征的改善，所述病征的改善是对治疗的应答。例如，在一个实施方案中，如此治疗的患者表现出CR、PR或SD。在另一个实施方案中，如此治疗的患者经历肿瘤缩小和/或生长速率降低，即肿瘤生长的抑制。在另一个实施方案中，有害的细胞增殖被减少或抑制。在又一个实施方案中，可以发生以下一种或多种：癌细胞的数量可以减少；肿瘤大小可以减小；癌细胞向周围器官的浸润可以被抑制、延缓、减慢或停止；可以减缓或抑制肿瘤转移；可以抑制肿瘤的生长；可以预防或延缓肿瘤复发；一种或多种与癌症相关的症状可以在一定程度上得到缓解。
在其他实施方案中，这种改善通过可测量的肿瘤病灶的数量和/或尺寸的减少来测量。可测量的病灶定义为通过CT扫描(CT扫描切片厚度不大于5mm)、临床检查10mm卡尺测量至少一维(记录最长直径)＞10mm的病灶或胸部X光检查＞20毫米。还可以测量非目标病灶(例如病理性淋巴结)的大小看是否改善。在一个实施方案中，可以在胸部X射线或CT或MRI胶片上测量病灶。
在其他实施方案中，细胞学或组织学可用于评估对治疗的反应性。当可测量的肿瘤满足缓解或疾病稳定的标准时，可以考虑对治疗期间出现或恶化的任何溢出的肿瘤来源进行细胞学确认，以区分缓解或疾病稳定(溢出(effusion)可能是治疗的副作用)和进展性疾病。
在一些实施方案中，根据本文提供的任何方法施用有效量的抗ERBB3抗体产生至少一种选自以下的治疗效果：肿瘤尺寸减小、出随时间处现的转移性病灶数量减少、完全缓解、部分缓解、疾病稳定、总体缓解率增加或病理完全缓解。在一些实施方案中，所提供的治疗方法产生比不施用抗ERBB3抗体所实现的相比而言更好的临床获益率(CBR＝CR+PR+SD＞6个月)。在其他实施方案中，临床获益率的改善为约20％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多。
VIII.试剂盒和单位剂型
还提供了包括药物组合物的试剂盒，所述药物组合物含有适合在前述方法中使用的治疗有效量的抗ERBB3抗体(例如瑟瑞妥单抗(Seribantumab))和药学上可接受的载体。试剂盒还可以任选地包括说明书，例如，包括施用时间表，以允许从业者(例如，医师、护士或患者)施用其中包含的组合物，以将组合物施用于患有包含NRG1融合基因的肿瘤的患者。在一个实施方案中，试剂盒进一步包含使用说明书。在另一个实施例中，所述试剂盒包括注射器。
任选地，所述试剂盒包括单剂量药物组合物的多个包装，每个包装含有有效量的抗体(例如，瑟瑞妥单抗(Seribantumab))，用于根据上文提供的方法的单次施用。任选地，施用药物组合物所需的仪器或装置可以包括在试剂盒中。例如，所述试剂盒可以提供一个或多个预填充注射器，其包含瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的量是上述方法中指示施用的剂量(mg/kg)的约100倍。
以下实施例仅是说明性的，并且不应被解释为以任何方式限制本公开的范围，因为在阅读本公开后，许多变化和等同物对于本领域技术人员将变得显而易见。
本文引用的所有专利、专利申请和出版物均通过引用整体并入本文。
实施例
实施例1：
开发了新的源自患者的NRG1重排癌症的同基因模型，并用于检查瑟瑞妥单抗(Seribantumab)对体外和体内生长、细胞凋亡和细胞内信号转导的影响，如下文详细讨论。
1.材料和方法
患者来源的细胞系和异种移植物是根据机构审查委员会批准的生物样本方案开发的，并获得了收集肿瘤材料的患者书面知情同意书。根据纪念斯隆凯特琳癌症中心(纽约州纽约市)机构动物护理和使用委员会和研究动物资源中心批准的方案照料小鼠并进行实验。
LUAD-0061AS3PDX模型是从SLC3A2-NRG1融合驱动的肺癌患者获得的样本生成的。在采集样本时，患者在接受阿法替尼(40mg/天)治疗期间表现出疾病进展。进行胸腔穿刺术并获取胸腔积液(effusion fluid)样本。添加肝素至终浓度为1mg/L液体。通过离心(在台式离心机中，300×g，5分钟)分离所有细胞，并通过在ACK(氯化铵-钾)裂解缓冲液(ThermoFisher Scientific，A1049201)中孵育5分钟去除红细胞。然后将总共20×106个细胞植入6周龄雌性NSG(NOD/SCID gamma)小鼠(Envigo)的皮下侧腹。LUAD-0061AS3细胞系是从七次连续传代后获得的LUAD-0061AS3PDX肿瘤组织产生的。简而言之，将新鲜肿瘤切成小块，然后在从Miltenyi Biotec(130-095-929)获得的存在于5mL无血清DME：F12培养基的肿瘤解离酶混合物中酶解，37℃消化1小时，每5-10分钟涡旋一次。将消化的样品重悬于45mL完全生长培养基中以灭活解离酶，然后通过离心沉淀细胞。最后，将细胞铺在完全生长培养基中，并在没有阿法替尼的情况下繁殖多代，必要时用胰蛋白酶进行传代培养，最终仅保留单个细胞。OV-10-0050PDX模型是由WuXi AppTec根据手术切除的具有CLU-NRG1融合(CLU外显子8融合到NRG1外显子6)的临床样本建立的(Drilon A，et al.，Cancer Discov 2018；8：686-95)。PDX肿瘤在连续移植了3次后，认为模型建成。
乳腺癌上皮细胞系，MDA-MB-175-VII(目录号HTB-25，RRID：CVCL_1400)和MCF-7(目录号HTB-22，RRID：CVCL_0031)获自ATCC。MDA-MB-175-VII细胞表达DOC4-NRG1融合(Drilon A，et al.2018 and Trombetta D，et al.，Oncotarget 2018；9：9661-71)。MCF-7细胞来源于雌激素受体阳性的乳腺癌患者胸腔积液(Bowtell DD，et al.，Nat.Rev.Cancer2015；15：668-79)。该细胞系已由Broad Institute Depmap程序进行了分析，并且没有任何NRG1重排(Mitra AK，et al.，Gynecol.Oncol.2015；138：372-7)。人支气管上皮细胞通过CDK4和TERT(HBEC-3KT细胞系)的过度表达而永生化，并获自John Minna博士(UT SouthWestem，Dallas，TX；Kobel，et al.，Int.J.Gynecol.Pathol.2016；35：430-41)。如先前所述(Ishikawa F，et al.，Blood 2005；106：1565-73)将p53 C末端突变体引入HBEC-3KT(HBECp53)中，并且通过慢病毒介导在这些细胞中表达CD74-NRG1融合cDNA的转导。使用200mg/mL潮霉素选择表达融合的细胞。HBECp53-SLC3A2-NRG1细胞是未经选择的群体，其中SLC3A2-NRG1融合已通过CRISPR-Cas9介导的基因组编辑引入，正如我们之前针对ROS 1和BRAF融合所描述的那样(Cadranel J，et al.，Oncologist 2021；26：7-16 and GeuijenCAW，et al.，Cancer Cell 2018；33：922-36)。HCC-95细胞获自William Lockwood博士(加拿大不列颠哥伦比亚省温哥华BC癌症中心，RRID：CVCL_5137)，通过全外显子组测序发现这些细胞具有NRG1扩增(Drilon A等，2018))。每6个月对细胞系进行一次支原体测试(MycoAltert试剂盒，Lonza)，最近一次测试是在本文所述研究完成前6个月进行的。研究前一年从ATCC购买的经过验证的细胞系被扩大并冷冻。将一瓶新的细胞解冻并传代10-15次(每2个月)，并且每次都通过RT-PCR验证已知的癌基因。通过测试已知的癌基因融合来常规确认所创建的细胞系的一致性。
MDA-MB-175-VII细胞系维持在补充有20％FBS的DMEM：Ham F12(1∶1)培养基中。为进行试验，使MDA-MB-175-VII细胞铺板并在DMEM：含有10％FBS的Ham F12培养基中生长。MCF-7细胞在补充有10％FBS的DMEM中生长。HBECp53细胞在补充有牛垂体提取物和EGF的KSM中生长。表达NRG1融合的同基因HBEC p53细胞系在补充有10％FBS的DMEM：HamF12(1∶1)培养基中生长。HCC-95细胞在补充有10％FBS的RPMI1640培养基中生长。所有生长培养基均添加1％抗生素(青霉素/链霉素混合物)。当储存瓶达到75％融合时，使用胰蛋白酶(0.25％)/EDTA(1mmol/L)传代细胞，并以1∶3稀释度重新铺板。将细胞保存在注入5％CO2的加湿培养箱中并维持在37℃。
对于时程实验，细胞以每孔5,000个(HCC-95)或10,000个(所有其他)细胞的密度接种在12孔组织培养板中，然后在24小时后(时间0)用各自的试剂处理。对于MCF-7生长试验，用1mmol/F瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理细胞1小时，然后与10ng/ml FNRG1-β1共同孵育。在图表所示的相关时间点对细胞进行胰蛋白酶消化并计数。对于剂量反应研究，将细胞以7,500-10,000个细胞的密度(体积为90mL的完全生长培养基中，并以10×浓度(以达到1×浓度)添加10mL化学品，终体积为100mL)接种在白色透明底96孔板中。孵育96小时后，添加10mL AlamarBlue细胞活力试剂以达到10％的终浓度。AlamarBlue是一种可渗透细胞的pH敏感染料，当进入线粒体时会被还原并发出不同波长的荧光(Gloeckner H，J.Immunol.Methods 2001；252：131-8)。按照先前所描述的(Somwar R，J.Biomol.Screen2009；14：1176-84)，在每个实验中，在用1mmol/L 20S蛋白酶体抑制剂(卡非佐米)处理的细胞中测定背景荧光并从所有值中减去(卡非佐米在高浓度下对大多数细胞有毒)。每个条件重复3-4次。相对IC50值和95％置信区间值通过使用GraphPad Prism 8软件的非线性回归分析确定，使用可变斜率模型或在抑制仅部分的情况下，使用三参数拟合。曲线拟合得出数据集的R2＞0.8。每个条件在2-5个独立实验中进行三复本测定。
将粉碎的PDX肿瘤样品与基质胶(50％)混合，注射到6周龄雌性NSG(FUAD-0061AS3)或Balb/c裸鼠(OV-10-0050)小鼠的皮下侧腹。当肿瘤达到约100-150mm3时，将小鼠随机分成5-8只的组，并开始治疗。每组有2只患有双侧胁腹肿瘤的小鼠，用于FUAD-0061AS3PDX模型中的蛋白磷酸化/表达研究。给药一次，然后在治疗后2、24和168小时收集肿瘤。阿法替尼以混悬剂形式(0.5％甲基纤维素-0.4％Tween-80)通过口服管饲法每天一次，施用5天，停药2天。按每周两次给药(BIW)的方案，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)溶于PBS，每3天一次通过腹膜腔注射施用。在整个治疗期间每天观察小鼠的发病和死亡迹象。每周两次测量肿瘤长度和宽度以及动物体重。使用经验公式V＝长度×宽度2×0.52计算肿瘤体积。使用公式[(V2-V1)/V1)]×100计算每个肿瘤的肿瘤体积变化的百分比，其中V1是起始肿瘤体积，V2是最终肿瘤体积。
为了检测SLC3A2-NRG1融合转录本，使用Qiagen RNA Mini Kit提取RNA，并根据制造商的说明使用SuperScript IV VILO(Thermo Fisher Scientific)合成cDNA。使用5′-ATGCTTGCTGGTGC-CGTGGTCA-3′(正向，SLC3A2外显子4)和5′-GGTCTTTCAC-CATGAAGCACTCCCC-3′(反向，NRG1外显子6)引物通过RT-PCR检测SLC3A2-NRG1融合。为了检测CD74-NRG1融合，使用靶向CD74外显子6(5′-AGAGCTGGATGCACCATTGG-3′)的正向引物。为了检测CLU-NRG1融合，使用靶向CLU的正向引物(5′-TGAAGACTCTGCTGCTGTTTGTG-3′)和两个靶向NRG1的反向引物(R1：5′-GTTTTCTCCTTCTCCGCACA-TTT和R2：5′-TATCTCGAGGGGTTTGAAAGGTC-3′)。对于通过qPCR(检测的)NRG 1剪接变体的表达，使用TaqMan基因表达主混物(TaqMan Gene Expression Master Mix，Thermo FisherScientific，4369016)进行以下表达试验：NRG1a(Hs01103794_ml)、NRG1b(Hs00247624_ml)和GAPDH(Hs02786624_G1)。NRG1 mRNA水平以相对于GAPDH mRNA的水平表示。所有细胞系值均根据HBECp53细胞进行归一化。
如前所述进行组织学和IHC(Liu Z，Clin.Cancer Res.2015；21：1752-63)。简而言之，收集异种移植组织，在4％缓冲福尔马林盐水中室温固定24小时，包埋在石蜡块中，然后将4mm厚的切片封片于载玻片上。脱蜡后，组织切片进行苏木精和伊红(H&E)染色，或做抗原修复以进行IHC染色。对于IHC测定，将载玻片浸入3％H2O2中5分钟，清洗，然后在5％BSA中封闭15分钟。将载玻片在一抗中于4℃孵育过夜，洗涤，然后使用二氨基联苯胺(DAB)试剂盒(Dako)在37℃下与生物素化抗兔二抗一起孵育30分钟。根据制造商的说明，使用DAB检测试剂盒检测IHC染色的阳性信号。使用针对WT1(6F-H2，Dako)、p53(318-6-11，Dako)、磷酸化HER3Y1289(21D3，Cell Signaling Technology)和TTF-1(8G7G3/1，Dako)的抗体对载玻片进行染色，并用苏木精复染。
通过双因素方差(two-way ANOVA)分析比较肿瘤数据集，并使用Dunnett或Tukey多重比较检验来确定显著性。P＜0.05被认为是两个值或数据集之间具有统计显著性差异。所有统计分析均使用GraphPad Prism 8软件(RRID：SCR_002798)进行。AUC通过梯形法则计算(Gagnon RC，J.Pharmacokinet.Biopharm.1998；26：87-102)并使用单因素方差(one-wayANOVA)分析对各组进行比较。使用Student-t检验比较半胱天冬酶3/7活性。所有实验均由每条件2-3个复本组成，数据以平均值±标准偏差或SEM表示。
2.结果
a.表达具有NRG1改变的患者来源细胞系中的NRG1α和β亚型
致癌NRG1融合仅保留NRG1的一小部分，并且该部分始终包含EGF样结构域。NRG1中的该结构域以两种形式存在，即α和β亚型。为了比较评估不同细胞系中NRG1的表达水平，EGF样结构域是重点，因为这是转化所必须的，且使用同种型特异性qPCR检测。将具有NRG1融合或NRG1扩增的癌细胞系与没有NRG1改变的细胞进行比较。这是通过使用TaqMan试验进行qPCR分析来实现的，该检测对NRG1的每种α和β剪接变体具有特异性。乳腺癌细胞系MDA-MB-175-VII具有NRG1和DOC4之间的染色体易位，而肺癌细胞系LUAD-0061AS3具有NRG1和SLC3A2之间的染色体易位。DOC4-NRG1和SLC3A2-NRG1融合在细胞系中的表达经RT-PCR证实(图1A和B)。HCC-95细胞系是一种具有NRG1扩增的肺癌细胞系。为了进行比较，使用了MCF-7乳腺癌细胞系和HBECp53细胞系(未转化的永生化人细支气管上皮细胞)；目前尚不清楚这两种细胞系含有任何NRG1改变。所有细胞系均以不同水平表达NRG1α和NRG1βmRNA。每个细胞系中的mRNA水平以相对于HBECp53细胞中相应的mRNA水平表示。发现MCF-7细胞的NRG1亚型表达最低。HCC-95细胞表达非常高水平的NRG1α和NRG1βmRNA，可能是由于NRG1扩增所致。与具有NRG1融合的细胞系和对照细胞相比，HCC-95细胞具有最高水平的NRG1αmRNA表达，而LUAD-0061AS3细胞系具有最高水平的NRG1βmRNA。HCC-95细胞具有比MDA-MB-175-VII细胞多14倍的NRG1βmRNA。这些结果表明具有NRG1改变的细胞系表达两种NRG1同种型。然而，分析的细胞系数量有限，表明在解释这些结果时应谨慎。
b.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抑制具有NRG1改变的细胞生长
表达NRG1融合的细胞依赖于HER3的激活来生长和存活。这里，通过与不携带NRG1融合的肿瘤和非肿瘤细胞系(分别为MCF-7和HBECp53)相比，评价瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抑制携带NRG1重排的两种细胞系(MDA-MB-175-VII、DOC4-NRG1融合和LUAD-0061AS3、SLC3A2-NRG1融合)生长的能力。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)或阿法替尼对两种NRG1融合阳性的细胞系的处理，以剂量依赖性方式减少(所述细胞系)的生长(图1C和D)。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)和阿法替尼对MCF-7乳腺癌细胞或HBECp53细胞的生长影响极小。确定以生长抑制估算的IC50值。MDA-MB-175-VII(IC50＝0.02μmol/L)和LUAD-0061AS3(IC50＝1.4μmol/L)细胞对瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的敏感性分别比MCF-7细胞(IC50＝45.2μmol/L)大约高2，260倍和32.3倍。同样，MDA-MB-175-VII和LUAD-0061AS3细胞对瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的敏感性比非肿瘤HBECp53细胞高约10,000倍和145倍(IC50＝203μmol/L)。
为了进一步探索瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抑制细胞生长的时间性质，用溶媒、瑟瑞妥单抗(Seribantumab)(0.1、1和10μmol/L)或阿法替尼(0.05μmol/L)处理细胞长达12天，然后对增殖进行估算。在这些实验中，使用MDA-MB-175和LUAD-0061AS3细胞系、异位表达CD74-NRG1融合的同基因HBECp53细胞、以及NRG1-扩增的肺癌细胞系HCC-95(图1E-H)。RT-PCR证实HBECp53-CD74-NRG1细胞中存在CD74-NRG1融合。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)早在治疗开始后24小时就减缓了MDA-MB-175-VII细胞的生长，并且在1和10μmol/L浓度的整个抑制实验期间所述生长被阻断(图1E)。用LUAD-0061AS3细胞获得了类似的结果(图1F)。尽管HBECp53-CD74-NRG1细胞对瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的敏感性低于LUAD-0061AS3和MDA-MB-171-VII细胞，但仍然观察到在最高浓度的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)下生长几乎完全抑制(图1G)。HCC-95细胞对瑟瑞妥单抗(Seribantumab)最敏感，在最低抗体浓度下生长完全抑制(图1H)。阿法替尼治疗(0.05μmol/L)也能有效抑制具有NRG1重排的三种细胞系的生长(图1C-G)。本研究未测试HCC-95细胞的阿法替尼敏感性。这些结果表明，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)可有效抑制含有NRG1融合或NRG1扩增的肿瘤细胞系的生长。
c.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)特异性抑制NRG1依赖性细胞生长
第一个目标是确认NRG1可以激活MCF-7细胞中已知的丝裂原激活通路。为此，用增加浓度的NRG1-β1(EGF样结构域)处理细胞10分钟，然后通过Western印迹测定蛋白磷酸化(图2A)。用NRG1-β1处理MCF-7细胞引起EGFR、HER3和HER4磷酸化的剂量依赖性增加。用低至10ng/mL的NRG1-β1观察到三种受体的磷酸化增加，其中EGFR的磷酸化最不敏感。这伴随着AKT、ERK1/2和mTOR通路元件(包括核糖体蛋白S6)磷酸化的增加(图2A)。接下来，测试了瑟瑞妥单抗(Seribantumab)阻断NRG1刺激的MCF-7细胞生长的能力。同时使用不同浓度的NRG1-β1(0-5ng/mL)和瑟瑞妥单抗(Seribantumab)(0-0.5mihoI/L)处理96小时，然后测定活力。用NRG1-β1处理MCF-7细胞导致细胞活力显著增加，可能是由于增殖增加(图2B)。使用的最低浓度的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)(0.125μmol/L)很大程度上抑制了NRG1-β1刺激的MCF-7细胞的生长。在时间研究中对此做了进一步探讨，其在添加10ng/mL NRG1-β1之前将MCF-7细胞用2μmol/L瑟瑞妥单抗(Seribantumab)预处理1小时，持续长达10天并评估生长。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)预处理完全阻止NRG1-β1刺激的生长(图2C)。结果表明，用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抑制HER3可有效阻断NRG1依赖性细胞增殖。
d.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)诱导具有NRG1重排的细胞凋亡
为了测试瑟瑞妥单抗(Seribantumab)是否可以诱导细胞死亡，测量了细胞匀浆中的半胱天冬酶3/7酶活性(作为细胞凋亡的替代物)。MDA-MB-175-VII和LUAD-0061AS3细胞用0-10μmol/L瑟瑞妥单抗(Seribantumab)或阿法替尼处理48小时。作为半胱天冬酶3/7激活的阳性对照，使用了1μmol/L卡非佐米。在用阿法替尼或瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理的细胞中观察到半胱天冬酶3/7活性的剂量依赖性增加(图2D)。在MDA-MB-175-VII中，阿法替尼在较低浓度下比瑟瑞妥单抗(Seribantumab)更有效地激活半胱天冬酶3/7。然而，在10μmol/L浓度下，阿法替尼和瑟瑞妥单抗(Seribantumab)在激活半胱天冬酶3/7方面同样有效(阿法替尼，比对照高14.1±3.6倍，而瑟瑞妥单抗(Seribantumab)，比对照高12.7±4.2倍)，并且与卡非佐米刺激的半胱天冬酶3/7活性水平(比对照高16.6±1.9倍)相当。LUAD-0061AS3中，尽管在阿法替尼和瑟瑞妥单抗(Seribantumab)使用的最高浓度下刺激半胱天冬酶3/7活性达到相似程度(图2E)，但反应的幅度远小于在MDA-MB-175-VII细胞中观察到的反应幅度(阿法替尼，是对照的3.3±0.1倍，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)，是对照的4.0±0.3倍)。这可能反映了LUAD-0061AS3细胞中凋亡通路的活性较低，因为与MDA-MB-175-VII细胞相比，卡非佐米在该细胞系中刺激的半胱天冬酶3/7活性也较低(比对照高5.8±1.3倍)。这些结果表明，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)可以在NRG1融合阳性乳腺癌和肺癌细胞系中以剂量依赖性方式诱导细胞凋亡。
e.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抑制具有NRG1改变的细胞的下游介质的磷酸化。
为了研究瑟瑞妥单抗(Seribantumab)影响的细胞信号网络，在用所示浓度的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理血清饥饿(serum-starved)的LUAD-0061AS3、HBECp53-CD74-NRG1和MDA-MB-175-VII细胞后，通过蛋白印迹法检查EGFR、HER2、HER3、HER4以及PI3K、mTOR和MAPK通路元件的磷酸化状态(图3和4A)。用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理LUAD-0061AS3细胞导致几乎完全抑制EGFR、HER2、HER3、HER4、AKT和STAT3的磷酸化(图3A)。ERK1/2的磷酸化对瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗不太敏感。在大多数情况下，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)对蛋白磷酸化的抑制作用与用阿法替尼获得的抑制作用相似(图3A)。在HBECp53-CD74-NRG1细胞中，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗完全抑制HER3磷酸化并较小程度地减少HER2、EGFR和HER4的磷酸化(图3B)。与LUAD-0061AS3细胞中的观察结果相似，AKT、p70S6K和STAT3的磷酸化几乎被瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗完全抑制(图3B)。在MDA-MB-175-VII细胞中，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)完全抑制HER3、HER2、EGFR和HER4的磷酸化，并在很大程度上减少AKT、ERK1/2和STAT3的磷酸化(图4A)。治疗后，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)和阿法替尼对任何蛋白的表达均没有任何影响，这表明对瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗反应中观察到的磷酸化丧失完全是因为信号转导的阻断。在HCC-95细胞中，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗还抑制HER2、HER3和下游效应子的磷酸化，对EGFR磷酸化影响很小。综上所述，这些结果表明，用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗可以破坏HER3依赖性信号转导，阻断ERBB受体和下游信号转导的磷酸化，减少细胞周期蛋白的表达，并诱导促凋亡蛋白的表达。这些事件可能最终导致生长抑制和生存受损。
为了更全面地理解瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的作用机制，评估了瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗与信号蛋白磷酸化或调节细胞凋亡及细胞周期的蛋白表达之间的时间关系。用2mmol/L瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理去血清的MDA-MB-175-VII细胞至24小时，然后制备全细胞提取物并进行蛋白印迹。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗迅速降低HER3、HER4的磷酸化和下游信号转导，在治疗开始后30分钟观察到完全抑制(图4B)。在整个24小时治疗期间，AKT的磷酸化保持完全抑制，尽管HER3、HER4和p70S6激酶磷酸化在12小时和24小时时间点似乎略有增加。MEK1/2和ERK1/2的磷酸化被迅速抑制，但其重激活比在HER3和HER4观察到的重激活更早(图4B)。促凋亡蛋白、裂解的PARP和PUMA的表达通过瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理以时间依赖性方式升高(图4C)并且在6-24小时内持续升高。这与图2D所示的观察结果一致，凸显在治疗48小时时，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)诱导半胱天冬酶3/7的激活。细胞周期蛋白D1(一种允许通过细胞周期G1期的蛋白)的水平在1小时在瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理的细胞中降低，并且在6小时时无法检测(图4D)。与观察到的一些蛋白的磷酸化一样，细胞周期蛋白D1水平在12小时时开始恢复(图4D)。
f.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗在具有SLC3A2-NRG1重排的NSCL CPDX模型中诱导肿瘤消退
瑟瑞妥单抗(Seribantumab)对具有NRG1融合的细胞系和NRG1刺激的MCF-7细胞生长的抑制支持了对瑟瑞妥单抗(Seribantumab)体内功效的评估。NSCLC PDX模型产生于一名携带SLC3A2-NRG1融合的浸润性粘液腺癌患者。PDX肿瘤的组织学特征如图5A所示。正如预期的那样，肿瘤TTF-1(肺腺癌标记物)呈阳性，并显示出膜状磷酸HER3染色，如先前所证实的那样(Trombetta D，et al.，Oncotarget 2018；9：9661-71)。
将LUAD-0061AS3 PDX肿瘤植入免疫功能不全的小鼠(7只动物/组)的皮下胁腹，两周后开始使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)(每剂0.6、0.75或1mg，每周两次)或阿法替尼(5、10或15mg/kg，每日一次)。阿法替尼每天5mg/kg的剂量相当于每日50mg的人体剂量，这是患者的最大批准剂量。在一项II期临床研究(CRESTONE，NCT04383210)中，以每周3,000mg(相当于小鼠每周两次11.5mg的剂量)评估瑟瑞妥单抗(Seribantumab)。
作为时间函数的肿瘤体积示于图5B中。并确定了为各组计算的AUC，以便于在所有组都有存活动物的最后日期(第35天)比较各组之间的肿瘤体积。5mg/kg阿法替尼剂量引起肿瘤生长小幅但显著的减少(图5B)。然而，较高剂量的阿法替尼和所有测试剂量的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)引起肿瘤体积更大的减小(图5B)。用0.75或1mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗分别导致7个肿瘤中的4个和7个肿瘤中的6个消退。1mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab)组的肿瘤持续缩小，到第42天时肿瘤最大缩小了57.2％±2.6％，并且这种情况又维持了2周。最高剂量的阿法替尼(15mg/kg)也能有效地使七个肿瘤中的六个肿瘤消退。然而，对15mg/kg阿法替尼剂量的最大反应持续时间不超过数天，并且在动物仍在接受治疗时观察到肿瘤缓慢再生。低于人类剂量的1mg BIW瑟瑞妥单抗(Seribantumab)剂量与15mg/kg日剂量的阿法替尼一样有效(图5B，右)。没有任何治疗导致动物体重在统计上显著减少或以任何明显的方式对动物健康产生负面影响。综上所述，这些结果表明瑟瑞妥单抗(Seribantumab)在减少肿瘤生长方面比阿法替尼更有效。
g.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗可在体内阻断已知的生长调节因子磷酸化并诱导细胞凋亡标志物的表达
上述数据表明，无论组织来源或融合伴侣如何，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)都能有效减少NRG1融合癌细胞系的生长并阻断生长促进通路的激活，并消除NRG1融合阳性细胞系和LUAD-0061AS3 PDX肿瘤的生长。测试HER2、HER3、AKT和ERK1/2的磷酸化，以评估瑟瑞妥单抗(Seribantumab)和阿法替尼干扰NRG1依赖性信号转导的能力。携带LUAD-0061AS3 PDX肿瘤的动物单次给予瑟瑞妥单抗(Seribantumab)(0.6、0.75或1mg)或阿法替尼(5、10或15mg/kg)，然后在施用药物2、24或168小时切除肿瘤。然后通过PDX肿瘤裂解物的蛋白印迹检测蛋白磷酸化。
如图5C(左)所示，所有剂量的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)在2小时时间点均导致HER2、HER3、AKT和ERK1/2磷酸化降低，在较长时间点剂量越高，效果越佳。尽管HER3、AKT和ERK1/2的磷酸化在稍后的时间点有一些重新激活，但即使在较高剂量治疗168小时后，HER2磷酸化仍然受到抑制。同样，阿法替尼降低了HER2、HER3、AKT和ERK1/2的磷酸化，且研究的最高剂量(15mg/kg)效果最佳。除了HER2之外，在稍后的时间点观察到蛋白磷酸化的重新激活(图5C，右)。小鼠中5mg/kg的剂量相当于临床使用的剂量(小鼠与人类的剂量当量是使用FDA指南按生长比例估计的)，阿法替尼能够在2小时内完全抑制HER2磷酸化，并导致HER3磷酸化的重大缺失。
随后，测试了瑟瑞妥单抗(Seribantumab)和阿法替尼在前面探测蛋白磷酸化的相同肿瘤裂解物中诱导促凋亡蛋白BIM表达的能力。使用所有剂量的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗24小时后，可以清楚地看到BIM表达的诱导。给药后2小时，用0.75和1mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗的小鼠分离的肿瘤比用溶媒治疗的小鼠肿瘤具有更高的BIM水平。在施用所研究的所有剂量的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)后168小时时间点，BIM均升高。只有较高剂量的阿法替尼能够诱导持续的BIM表达，但程度低于瑟瑞妥单抗(Seribantumab)引发的程度(图5C，右)。重要的是，临床相关剂量的阿法替尼(小鼠每天一次5mg/kg)引起BIM水平小幅但短暂的增加。
h.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗在具有CLU-NRG1重排的HGSOC PDX模型中诱导肿瘤完全消退
高分级的浆液性卵巢癌(HGSOC)占卵巢癌相关死亡的70％-80％，并且总生存率几十年来没有显著变化(Bowtell DD，Nat.Rev.Cancer 2015；15：668-79)。先前已证明瑟瑞妥单抗(Seribantumab)可阻断OVCAR8细胞产生的异种移植肿瘤的生长(Sheng Q，et al.，Cancer Cell 2010；17：298-310)，其表现出HGSOC组织学(Mitra AK，et al.，Gynecol.Oncol.2015；138：372-7)。在此，研究了瑟瑞妥单抗(Seribantumab)在卵巢PDX模型(OV-10-0050)中的疗效，该模型源自手术切除的卵巢肿瘤并含有CLU-NRG1融合。RT-PCR证实了CLU-NRG1融合的存在。异种移植组织形态和IHC标志物(WT1阳性，TP53强核染色)与HGSOC组织学一致(图6A；Kobel M，et al.，Int.J.Gynecol.Pathol.2016；35：430-41)。携带OV-10-0050PDX肿瘤的小鼠(5-8只动物/组)用1、2.5、5或10mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab)(每周两次)或5mg/kg阿法替尼(每天一次)治疗，并评估肿瘤生长。与上述NSCLC PDX模型中的实验一样，此处使用的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)剂量低于患者中使用的剂量。治疗在第27天终止，并继续监测肿瘤生长63天(治疗开始后90天或一旦肿瘤达到最大允许大小)。以时间函数表示的肿瘤体积示于图6B中。计算每组的AUC以比较最后治疗日期各组之间的肿瘤体积。阿法替尼治疗引起肿瘤生长小幅但显著的下降(P＝0.003；图6B)。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的施用快速抑制OV-10-0050PDX肿瘤的生长，导致在所有测试剂量下肿瘤显著缩小(图6B)。最后一次治疗时的平均肿瘤体积为：983.7±254.5(溶媒)；786.4±190.5(阿法替尼)；1.3±0.3(1毫克瑟瑞妥单抗(Seribantumab))；1.9±0.6(2.5mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab))；17.9±14.5(5mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab))；和2.1±0.6(10mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab))，并且如图6C所示为肿瘤大小的百分比变化。治疗停止后，先前用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗的肿瘤持续缩小，而溶媒治疗组和阿法替尼治疗组中的肿瘤持续生长(图6B，右)。治疗开始41天后，由于肿瘤负荷高，携带载体和阿法替尼治疗肿瘤的小鼠被处死。到第73天(治疗终止后46天)，1、2.5和5mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab)组的肿瘤开始重新生长。然而，在研究结束时，两个最高剂量组中只有八个肿瘤中的一个开始重新生长，这表明瑟瑞妥单抗(Seribantumab)可能消除了绝大多数肿瘤细胞。没有任何治疗导致动物整体健康或体重发生任何显著变化。
3.讨论
NRG1融合基因编码嵌合蛋白，无论组织学如何，该嵌合蛋白都能与HER3结合来驱动肿瘤发生，因此以HER3为靶点治疗NRG1融合阳性癌症构成了一种可以利用的合理治疗策略。目前，尚无FDA批准的针对NRG1融合驱动癌症患者的治疗方法。临床试验中针对这组恶性肿瘤的唯一HER3特异性靶向药物是单克隆抗HER3抗体瑟瑞妥单抗(Seribantumab)。
通过利用代表NRG1融合驱动的肺癌、乳腺癌和卵巢癌(每种都有不同的NRG1融合伴侣)的新型疾病模型，分析了瑟瑞妥单抗(Seribantumab)对生长、凋亡、调节增殖的信号分子的激活态、细胞周期进展和生存情况的影响。如本文所证明的，抗HER3抗体(瑟瑞妥单抗(Seribantumab))能够阻断NRG1融合阳性细胞系中所有ERBB家族成员的激活，类似于阿法替尼的观察结果。这种对ERBB家族的显著阻断导致PI3K-AKT、mTOR和ERK通路下游激活的丧失，最终导致增殖显著减少并诱导细胞凋亡。在培养的细胞中，阿法替尼比瑟瑞妥单抗(Seribantumab)更有效地抑制生长。造成这种差异的原因尚不清楚。培养基中其他生长因子的存在可能会削弱瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的体外功效。
在两个体内PDX模型中，给予瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的剂量低于人体试验中使用的剂量，在NSCLC PDX模型中导致肿瘤显著消退超过50％，在含有CLU-NRG1融合的HGSOC PDX模型中导致肿瘤消退100％。HGSOC占卵巢癌相关死亡的70％-80％(Bowtell DD，et al.，Nat.Rev.Cancer，2015；15：668-79)。在HGSOC模型中，治疗停止后63天，肿瘤生长在很大程度上受到抑制，并监测动物的肿瘤再生情况。与瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的有效性相反，每日5mg/kg的阿法替尼剂量(每日50mg的人体等效剂量)是肿瘤生长的不良拮抗剂，尽管它完全抑制HER2磷酸化(表明阿法替尼的肿瘤渗透不是问题)。这些观察结果与体外结果相反，体外结果阿法替尼在阻止细胞生长方面更有效。体内研究中观察到的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)较高功效不太可能是由于任何抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性，因为NSG品系小鼠缺乏成熟的T细胞、B细胞和自然杀伤细胞(Ishikawa F，etal.，Blood 2005；106：1565-73)，排除了任何ADCC介导的作用。相反，与阿法替尼相比，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)更高的体内效力可能部分归因于PDX肿瘤中促凋亡蛋白(例如BIM)表达的持续增加。阿法替尼(5mg/kg，每日一次)给药不会诱导PDX肿瘤中的BIM表达。在本研究的两个PDX模型和临床报告中，缺乏细胞死亡可能导致对阿法替尼的反应不佳，以及临床报告中，疾病稳定、应答持续时间短或在大多数报告的病例中没有应答。这些结果表明，应探索以肿瘤不可知(tumor agnostic)的方式使用单克隆抗体，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)来特异性抑制HER3，作为NRG1融合依赖性癌症的治疗方法。
试图开发NRG1融合驱动的癌症疗法的临床前研究的一个主要不利条件是缺乏源自患者的模型。大多数研究使用小鼠NIH-3T3细胞或人工表达NRG1融合蛋白的癌细胞系。在这项研究中，使用患者来源的乳腺癌、肺癌和卵巢癌细胞系和PDX模型评估瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的疗效。这里提出的临床前结果表明，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)是一种有效治疗由NRG1重排引起的癌症的药物，这可能得益于它能够阻断所有ERBB家族成员的激活，从而抑制细胞周期并诱导细胞凋亡。重要的是，研究表明瑟瑞妥单抗(Seribantumab)可以阻断具有NRG1扩增的肺癌细胞系的生长。随着越来越多的诊断平台开始分析NRG1的改变，NRG1扩增可能会作为分子定义的癌症子集出现。这些新模型可用于充分比较其他潜在的NRG1融合癌症疗法，例如HER2-HER3双特异性抗体、MCLA-128和其他HER3抗体，以便能够更好地识别同类最佳药物。
总之，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)可有效阻断NRG1刺激的MCF-7细胞生长。在具有内源性NRG1融合的细胞中，用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)阻断HER3会减少其他ERBB家族成员(HER2、HER4和EGFR)以及PI3K-AKT-mTOR、RAS-MAPK和STAT3通路的激活。重要的是，在来自乳腺癌、肺癌和卵巢癌的NRG1融合模型中，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)可以在体外和体内阻断生长并诱导细胞凋亡。换而言之，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)，以临床上可实现且低于人类剂量的剂量下，在源自具有NRG1重排的三种不同组织学癌症亚型的疾病模型中减少生长并诱导细胞凋亡。这些结果为瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗NRG1基因融合阳性实体瘤的肿瘤抑制试验提供了明确的临床前原理。
实施例2
致癌的神经调节蛋白1基因(NRG1)重排由与3′NRG1序列融合的5′伴侣组成，保留了表皮生长因子(EGF)样结构域，存在于约0.2％的实体瘤中，包括肺癌、乳腺癌和胃肠道(GI)癌症(Jonna S.et al.，Clin.Cancer Res.2019；25：4865-4867)。胃肠道来源的癌症，包括胰腺癌和胆管癌，约占携带NRG1融合的实体瘤的20％，并且尚未批准针对此类癌症的治疗方法(Jonna S.et al.，J.Clin.Oncol.2020；38(15_supp1)：3113)。嵌合NRG1癌蛋白与人表皮生长因子受体3(HER3/ERBB3)结合，导致其他ERBB家族成员的反式激活，并触发信号级联反应，最终导致肿瘤发生。尽管针对HER3代表了针对含有NRG1融合的癌症的合理治疗策略，但对于具有NRG1改变的胃肠道恶性肿瘤，这仍然相对未经探索。在这项研究中，研究了抗HER3单克隆抗体瑟瑞妥单抗(Seribantumab)在NRG1驱动的胃肠道癌症临床前模型中的功效。
通过在永生化人胰腺导管细胞(H6c7)中表达慢病毒介导的ATP1B1-NRG1和SLC3A2-NRG1融合的cDNA，开发了具有NRG1融合的同基因胰腺癌细胞模型。在等基因细胞系以及胰腺腺癌(CTG-0943，APP-NRG1融合)和肝内胆管癌(CH-07-0068，RBPMS-NRG1融合)患者来源的异种移植(PDX)模型中评估了瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的疗效。用蛋白印迹分析评估蛋白磷酸化和表达。通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和二代测序(NGS)证实了NRG1融合的存在。
与空载体对照细胞(H6c7-EV)相比，H6c7细胞中NRG1融合的表达导致HER3和AKT磷酸化增强。用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)处理H6c7-ATP1B1-NRG1和H6c7-SLC3A2-NRG1胰腺细胞导致HER3和AKT磷酸化的剂量依赖性抑制(图7A-7E)。对具有APP-NRG1重排的胰腺腺癌PDX小鼠模型(CTG-0943)每周两次施用5mg或10mg[BIW]瑟瑞妥单抗(Seribantumab)后，观察到肿瘤生长抑制。在此模型中，两种剂量的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)比泛ERBB抑制剂阿法替尼(5mg/kgQD)更有效，导致肿瘤缩小高达55％(23-77％范围)。阿法替尼治疗的胰腺PDX肿瘤没有消退。治疗后，提取残留的CTG-0943肿瘤进行蛋白印迹分析(溶媒组为第24天，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)组和阿法替尼组分别为第31天或32天)。在研究结束时，用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗的肿瘤中磷酸化和总EGFR、HER2和HER3、细胞周期蛋白D1等的丧失表明异种移植肿瘤中大多数人类肿瘤细胞的丧失。使用人类特异性GAPH抗体证实了这一点。
在具有RPBMS-NRG1融合(图8A-8D)以及ERBB4和IDH1突变(CH-17-0068)(图9A-9E)的肝内胆管癌PDX模型中进一步评估瑟瑞妥单抗(Seribantumab)。虽然在此模型中单药治疗瑟瑞妥单抗(Seribantumab)(每剂5mg和10mg，BIW)与阿法替尼(5mg/kg，每日一次[QD])同样有效，但联合治疗观察到肿瘤消退增强。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)10mg BIW与阿法替尼和AG-120(一种IDH抑制剂)的三重组合导致大多数肿瘤消退。类比法(allometricscaling)(基于FDA指南)表明，小鼠中5mg/kg阿法替尼相当于人体每天约50mg的剂量。
总之，NRG1融合是胃肠道癌症中罕见但反复发生的致癌驱动因素(参见例如JonnaS.et al.，Clin.Cancer Res.2019；25：4865-4867 and Jonna S.et al.，J.Clin.Oncol.2020；38(15_suppl)：3113)。在永生化人胰腺导管上皮H6C7细胞中过度表达NRG1融合可激活HER3和AKT。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)可抑制具有NRG1融合的H6C7细胞中的HER3和AKT磷酸化。用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗NRG1融合阳性胰腺PDX模型可在临床可达到的剂量下抑制肿瘤生长。通过蛋白印迹评估，残留肿瘤异种移植物显示人类肿瘤细胞含量已耗尽。对具有三种基因组改变(NRG1融合、ERBB4和IDH1突变)的胆管癌PDX模型的研究表明，治疗含有其他致癌驱动因素的NRG1融合驱动的肿瘤可能需要联合治疗，以解决每种基因组改变对疾病进展的影响。这些数据支持在正在进行的2期CRESTONE研究(NCT#04383210)中使用单一疗法瑟瑞妥单抗(Seribantumab)来治疗由NRG1融合单独驱动的胃肠道癌症和其他癌症。
实施例3
全面的基因组分析(CGP)可以揭示有针对性的致癌驱动因素，为纯粹基于肿瘤组织学和起源的传统化疗方案之外的治疗选择提供信息。这是癌症分子筛查和治疗(MoST)计划的一个病例系列，该计划对任何组织学的晚期实体瘤患者进行分子筛查，以识别潜在的可操作突变和相应的生物标志物驱动疗法。本研究的目的是阐明基因组研究结果如何为难治性胃肠道(GI)癌症患者提供新的治疗机会并改善预后。
简而言之，任何组织学的晚期实体瘤患者都需要接受分子筛查。分子肿瘤委员会对基因组改变进行审查，以确定适当的生物标志物匹配的治疗学子研究。通过病例审查确定了七名具有持久临床获益的胃肠道癌症患者，其中包括一名携带ATP1B1-NRG1基因融合的KRASWT胰腺癌患者。神经调节蛋白1(NRG1)基因融合蛋白是重要的致癌驱动因素，在KRAS野生型PAC中富集(8-10％)(Aguirre AJ.，Clin.Cancer Res.2019 Aug；25(15))。NRG1是ERBB3的主要配体。这些融合蛋白通过异常的ERBB3激活驱动肿瘤进展。一名38岁女性患有新发KRASwt胰腺导管腺癌(伴有肝转移)且具有ATP1B1-NRG1基因融合，这使得她能够同情使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)。该患者此前已用尽可用疗法，并接受如下治疗：(1)2019年10月至2020年1月，FOLFIRINOX，(2)2020年1月至2020年6月，FOLFIRI，(3)2020年6月至2020年8月，吉西他滨/Abraxane，(4)2020年8月至2020年12月，FOLFIRI。在2020年12月，由于她的肿瘤含有NRG1融合蛋白，她接受了瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗。用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗导致部分缓解并且在呈现数据截止时持续治疗8个月(图10A、图10B和图11)。
总之，CGP可以识别罕见但与治疗相关的基因组改变，并有可能改善晚期胃肠道癌症患者的临床结果。未来的研究应该集中于如何最好地识别将从这种精准肿瘤学方法中获得最大益处的患者。
实施例4
瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的2期临床研究(称为“CRESTONE，方案版本4.0”)在神经调节蛋白-1(NRG1)融合阳性局部晚期或转移性实体瘤成年患者中进行。
1.目标
该研究的主要目的是根据“实体瘤疗效评价标准”(RECIST1.1；参见，例如，Eisenhauer，E.et al.，(2009)，“New response evaluation criteria in solid tumors：revised RECIST guideline(version 1.1)，”European Journal of Cancer(Oxford，England：1990)，45(2)，228-47))通过对单药瑟瑞妥单抗(Seribantumab)在确定为NRG1基因融合阳性的晚期癌症患者中的独立放射学检查确定目标应答率(ORR)。
该研究的次要目标包括(1)通过评估以下临床结果参数(例如，缓解持续时间(DoR)、无进展生存期)，确定单药瑟瑞妥单抗(Seribantumab)对患有各种晚期癌症的NRG1基因融合阳性患者的总体疗效(PFS)、总生存期(OS)和临床获益率(完全缓解(CR)、部分缓解(PR)和疾病稳定(SD)＞24周)和(2)描述NRG1基因融合阳性患者的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的安全性。
探索性目标包括评估(1)NRG1基因融合阳性晚期实体瘤患者中瑟瑞妥单抗(Seribantumab)给药方案的药代动力学，以及(2)来自肿瘤组织或血液样本中机制关联性探索性生物标志物是否与临床结果相关。
2.研究设计
这项研究是一项开放标签、国际、多中心、2期研究，对象是患有复发性局部晚期或转移性实体瘤的成年患者，这些实体瘤具有基于局部测试的NRG1基因融合。患有局部晚期或转移性实体瘤的患者在接受一种或多种既往标准治疗后病情进展，且尚无可用的治疗方法。
在开始进一步的筛查程序之前，根据当地实验室指导分析对肿瘤组织进行局部检测，所有患者均被确定为NRG1基因融合阳性。在完成所有筛选程序和确定研究治疗资格后，根据既往治疗史和当地NRG1基因融合检测结果，符合条件的患者将被分配到适当的队列。患者按如下被分配到治疗队：
第1队：至少55名中心确认的NRG1基因融合的患者，其未进行过ERBB/HER2/HER3治疗，且具有完整EGF样结构域的NRG1基因融合；
第2队：最多10名NRG1基因融合且EGF样结构域完整的患者，在既往标准治疗(包括既往ERBB/HER2/HER3定向治疗)后病情出现进展；
第3队：最多10名具有NRG1融合但不具有EGF样结构域的患者(包括但不限于NRG1-PMEPA1、NRG1-STMN2、PCM1-NRG1和INTS9-NRG1)；具有其他NRG1改变(即重排)的患者；患有NRG1融合和其他分子畸变且缺乏标准治疗选择的患者；以及患者无法提供足够的组织来做NRG1基因融合状态的中心确认。
经批准，超过10名患者可以入组队列2和队列3。
一个治疗周期为28天。给药从第1周期第1周(C1W1)访视开始。分配到队列1、2和3的所有患者的治疗包括每周一次3,000mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab)1-h的静脉注射(IV)，直到患者满足一项或多项方案特定的治疗中止标准。每周给药期间允许调整剂量和/或中断治疗以管理与治疗相关的毒性。
对于在确认资格后分配到某一治疗队列的所有知情同意患者，治疗将在队列分配后7天内开始。预计患者将接受治疗直至疾病进展或出现不可接受的毒性。肿瘤评估由当地放射科医生从第6周(C2W2)、第12(C3W4)、第18(C5W2)和24(C7W2)(+/-2周)开始测量并记录，随后每8周(+/-2周)进行测量和记录到第1年，此后每12周(+/-2周)进行一次，直到疾病进展并使用RECIST指南(1.1版)进行评估。所有因疾病进展(PD)以外的原因停止治疗的患者都会在治疗结束就诊时进行扫描。此外，还会对扫描进行独立的中心审查。为此目的，所有图像均提交至中央成像设施，并由独立评审员进行评估。患者停止瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗后，将收集生存信息和有关后续治疗的信息，直到死亡或研究结束(以先发生者为准)。可选择在疾病进展时进行活检，以探索瑟瑞妥单抗(Seribantumab)耐药机制。
3.研究人群
本研究的目标人群是患有局部晚期或转移性实体瘤的NRG1基因融合阳性患者。此类患者在针对其肿瘤类型进行标准或治愈治疗后病情出现进展。
A.入组标准
为了有资格参与该研完，患者必须满足以下标准。
i.由CLIA认证或类似认可的实验室通过分子检测(例如PCR、NGS(RNA或DNA)或FISH)鉴定的具有NRG1基因融合的局部晚期或转移性实体瘤；
ii.提供新鲜或存档的FFPE肿瘤样本，以提交给中心实验室，以在入组后确认NRG1基因融合状态(仅限队列1；队列2和3不要求)；
iii.患者已接受至少一种适合其肿瘤类型和疾病阶段的既往标准治疗并出现进展，没有进一步可用的治疗选择；
iv.年龄≥18岁
v.美国东部肿瘤协作组(ECOG)表现状态(PS)0、1或2；
vi.患者必须至少有一个可测量的颅外病灶(如RECISTv1.1所定义的)；
vii.足够的肝功能定义为：血清AST和血清ALT＜2.5×正常上限(ULN)，或者如果由于潜在恶性肿瘤导致肝功能异常且总胆红素＜2.0×ULN，则AST和ALT＜5×ULN。已知有吉尔伯茨病(Gilberts Disease)病史且间接胆红素单独升高的受试者符合资格。如果总胆红素＜3.0×ULN，则有肝脏受累记录的受试者符合资格；
viii.足够的血液学状态定义为：绝对中性粒细胞计数(ANC)＞1.5×109/L，筛选前至少7天不需要生长因子支持，血小板计数＞100.0×109/L，筛查前至少7天不需要输血支持，血红蛋白＞8g/dL，筛查前至少7天不需要输血支持；
ix.能够提供知情同意或有一个有能力并愿意这样做的法律代表；
x.能够履行参与研究期间的门诊治疗、实验室监测和所需的临床访视；以及
xi.有生育潜力的男性和女性愿意在治疗期间和研究完成后3个月内进行常规观察以及有效的节育措施。
B.排除标准
符合以下任何标准的患者被排除在本研究之外：
i.已知的、除NRG1融合之外的可执行致癌驱动突变，其中指示了可用的标准治疗(仅限队列1和2；队列3不要求)；
ii.预期寿命＜3个月；
iii.怀孕或哺乳期；
iv.既往接受过ERBB3/HER3定向治疗(仅限队列1)；
v.既往接受过泛ERBB或任何ERBB/HER2/HER3定向治疗(仅限队列1)；
vi.有症状或未经治疗的脑转移。接受放射或手术治疗且在筛查时影像学无进展证据的无症状脑转移患者有资格参加该研究，包括那些接受稳定(例如，相同剂量持续＞2周)低剂量皮质类固醇治疗方案的患者；
vii.在计划开始使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)前28天内或5个半衰期(以较短者为准)接受过其他全身抗癌治疗(研究性或标准化疗、免疫治疗或靶向疗法)；
viii.在开始瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗之前，患者必须已从之前的抗癌或研究性治疗或急性放射毒性引起的临床显著毒性中恢复；
ix.任何其他需要全身治疗的活动性恶性肿瘤；
x.已知对瑟瑞妥单抗(Seribantumab)任何成分过敏，或之前对全人单克隆抗体的“不良事件通用术语标准”(CTCAE)3级或更高过敏反应；
xi.临床显著的心脏病，包括症状性充血性心力衰竭、不稳定型心绞痛、计划首次给药后12个月内的急性心肌梗塞，或需要治疗的不稳定心律失常(包括尖端扭转型室速)；
xii.活动性的不受控制的全身性细菌、病毒或真菌感染；和
xiii.由于研究者认为的任何其他原因不适合参加本临床研究的患者。
C.存档或新鲜肿瘤标本要求
本研究仅招募NRG1基因融合阳性肿瘤患者。患者的肿瘤NRG1状态通过PCR、NGS(RNA或DNA)或FISH等分子检测来确定，这些检测通常由CLIA认证或其他类似许可的实验室进行。对于没有足够存档肿瘤组织可用于测试的患者，如果可以安全地进行，则在参与研究之前获得新鲜的肿瘤活检。局部NRG1融合测试方法，可能因合格局部而异，由CLIA认证或类似认可的实验室进行。
此外，在登记并分配到队列1后，还需要足够的存档或新鲜肿瘤样本由中心实验室进行基于RNA的NGS测试以确认NRG1基因融合。如果可得，从队列2和队列3的患者采集存档和/或新鲜肿瘤样本。
D.研究治疗终止
患者可以随时以任何理由退出研究。在研究过程中，患者可因以下任何原因退出治疗：
i.疾病进展(使用RECIST v1.1进行评估)；除获得临床获益的患者外，可以允许他们继续使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗；
ii.需要超过3周的恢复期的临床上显著的药物相关毒性，除非有令人信服的、客观的放射学反应证据，没有替代治疗，并且继续使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)符合患者的最大利益，并且患者同意；
iii.并发疾病损害了满足方案要求的能力；
iv.要求替代治疗；
v.严重不遵守协议；
vi.患者撤回同意；
vii.患者失访；和
viii.死亡。
当患者因任何原因停止治疗时，他们应在最后一次给药后4周内接受治疗结束访视时的评估。对所有因不良事件而停止治疗的患者进行随访，直至不良事件消退或稳定。当患者退出研究治疗时，将尝试确定停止的原因。
退出治疗后，在完成治疗结束访视后，每3个月继续随访患者的生存情况以及随后的疾病和治疗信息。
4.研究治疗
如果根据当地检测确定患者NRG1基因融合呈阳性，研究人员将确定患者是否符合所有其他资格标准。在患者入组之前，提交经过审查的分子病理学报告副本以供审查，其中确定了用于确定资格的每个局部测试的NRG1基因融合。一旦满足所有研究入组标准，根据先前的ERBB治疗史和NRG1融合检测结果，将患者分配到适当的治疗队列。入组后，研究人员和/或现场工作人员将所需的肿瘤样本提交给中心实验室，以根据实验室手册确认NRG1融合状态。
A.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)
瑟瑞妥单抗(Seribantumab)以25mg/mL的无菌无色液体形式提供用于静脉注射。它采用无菌、一次性、透明硼硅酸盐1型玻璃瓶包装，并用涂层橡胶塞和带凸缘的翻盖封闭。
多个小瓶瑟瑞妥单抗(Seribantumab)包装在一个纸板容器中。各个小瓶以及纸板容器的外部均根据监管要求和按照特定国家/地区的指南进行标记。
瑟瑞妥单抗(Seribantumab)药品避光冷藏(2-8℃)保存。制备或输注过程中不需要避光。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)不得冷冻。
根据现有的稳定性数据，按照临床供应标签中规定的条件储存时，注射用溶液浓缩物可稳定至少36个月。正在生成持续的稳定性数据，并且在研究过程中可能会有更长的稳定性。有效期标注在药品标签上，或根据当地法规的要求通过其他药房通知注明。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)超过有效期后不得使用。施用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)需要多个小瓶，所有小瓶应来自相同的批号。将瑟瑞妥单抗(Seribantumab)恢复至室温，然后与0.9％生理盐水混合。不摇动小瓶。从小瓶中取出适量的研究药物，并用0.9％生理盐水进一步稀释至最终总体积250mL，并使用低蛋白结合的0.20或0.22微米串联过滤器(micron in-linefilter)施用60分钟(±15分钟)以上，在未出现输注相关反应的情况下，所有输注均在60分钟(±15分钟)以上。在研究药物输注之前和之后冲洗串联体。研究药物不以团注或推注的方式施用。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)在前次次施用后不少于7天后施用。
B.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)剂量
入组患者以每周一次3,000mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab)1-h开始静脉输注治疗，直至患者满足一项或多项方案中明确的治疗中止标准。每周给药期间允许调整剂量和/或中断治疗以管理与治疗相关的毒性。
C.管理与瑟瑞妥单抗(Seribantumab)相关的毒性
在每周给药的同时，在28天的周期中(即整个C1W1、C1W2、C1W3和C1W4)监测患者DLT的发生。任何被认为与瑟瑞妥单抗(Seribantumab)相关的3级或4级血液学或非血液学毒性均考虑剂量限制。DLT被定义为在每周使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗期间发生的不能排除与瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的关系的符合下列标准的任何不良事件(AE)。AE的分级基于“不良事件通用术语标准”(CTCAE)5.0版。血液学毒性包括发热性中性粒细胞减少症、中性粒细胞减少性感染、4级中性粒细胞减少症＞7天、≥3级血小板减少症＞7天、≥3级血小板减少症伴临床显著出血、4级血小板减少症和≥3级贫血＞7天。非血液学毒性包括(1)尽管有止吐或止泻药等最佳医疗支持，但仍持续超过72小时，≥3级恶心、呕吐或腹泻，(2)4级(危及生命)呕吐或腹泻，无论持续时间长短，考虑DLT，(3)任何其他≥3级AE，除了≥3级疲劳和厌食持续＜7天或≤2级输注相关反应(对于3级或更高级输注相关反应(IRR)，永久停止瑟瑞妥单抗(Seribantumab))
任何毒性，无论CTCAE级别如何(与疾病进展[PD]相关的症状除外)，凡导致瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗中止或剂量减少，均视为DLT。
D.输注相关反应的处理
与单克隆抗体的其他静脉输注一样，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)给药可能与输注相关反应(IRR)相关。输注相关反应是根据国家癌症研究所CTCAE(5.0版)过敏反应/输注反应和过敏性反应(anaphylaxis)的定义来定义的。在过去的临床研究中(n＝847名接受治疗的患者)，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的IRR很少见，只有＜1％的患者出现IRR，其中全部为1级或2级。表2中列出的研究中心政策或如下表2所示的治疗指南用于输注反应的管理。
表2：治疗指南
对于出现1级或2级输注反应的患者，之后的输注时间可以超过90分钟。此外，对于随后出现1级或2级输注反应的患者，静脉注射地塞米松10mg。所有后续输注均预先静脉注射施用盐酸苯海拉明50mg、静脉注射地塞米松10mg和口服对乙酰氨基酚500-650mg。
对于经历3级或4级输注反应的患者，应尽可能在输注反应发生时测定抗瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抗体滴度。并在事件解决时和事件后28天(+/-2天)获取抗瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抗体滴度。
E.毒性管理指南
当患者出现任何3级或4级血液学或非血液学毒性(不包括与瑟瑞妥单抗(Seribantumab)相关的输注相关反应)时，应遵循以下毒性管理指南：
血液毒性的剂量中断和减少：对于≥3级血液毒性，停止瑟瑞妥单抗(Seribantumab)剂量直至缓解至≤2级或患者基线。一旦血液学毒性恢复到≤2级或患者的基线，则以原始剂量减少25％的剂量重新开始使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)。
对于≥3级血液学毒性的复发，再次暂停瑟瑞妥单抗(Seribantumab)，直到消退为≤2级或患者的基线。一旦血液学毒性恢复到≤2级或患者的基线，则以原始剂量减少50％的剂量重新开始使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)。
对于因血液学毒性而减少瑟瑞妥单抗(Seribantumab)剂量的患者，研究人员可以按原始指定剂量重新启动瑟瑞妥单抗(Seribantumab)，前提是在至少一个治疗周期内，毒性已在减少剂量后缓解至≤1级。
尽管剂量减少了50％，如果患者仍反复出现3级或更高级别的治疗相关血液学毒性，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)仍将永久停用。
非血液毒性的剂量中断和减少：对于≥3级非血液毒性，暂停瑟瑞妥单抗(Seribantumab)施用直至缓解至＜1级或患者基线。一旦非血液学毒性降至≤1级或患者基线，则重新开始使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)，剂量比原始剂量减少25％。
对于≥3级非血液学毒性的复发，再次暂停瑟瑞妥单抗(Seribantumab)，直到缓解为≤1级或患者的基线。一旦非血液学毒性缓解至≤1级或患者基线，则以原始剂量减少50％的剂量重新开始使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)。
对于因非血液学毒性而减少瑟瑞妥单抗(Seribantumab)剂量的患者，可以按原始指定剂量重新开始使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)，前提是在减少剂量至少一个治疗周期后毒性已降至≤1级。
尽管剂量减少了50％，如果患者仍反复出现3级或更高级别的治疗相关非血液学毒性，则瑟瑞妥单抗(Seribantumab)将永久停用。
对于出现以下情况的患者，不允许重新升级剂量：(1)尽管剂量减少，仍反复发生确定为临床显著的3级不良事件，或(2)尽管剂量减少，但仍反复发生4级不良事件。
对于经历危及生命的4级不良事件的患者，将永久停用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)。
F.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的潜在毒性
在之前进行的一项I期剂量递增和扩展研究中，评估了瑟瑞妥单抗(Seribantumab)作为单一疗法治疗43名标准治疗难治性晚期实体瘤患者的效果，最常见报告的不良事件包括1级或2级皮疹、恶心、腹泻和疲劳。还观察到1级低镁血症。总而言之，本研究未达到最大耐受剂量，并且在研究的剂量递增和剂量扩展阶段，在以所研究的最高剂量水平治疗的22名患者中没有观察到剂量限制毒性。研究的最高剂量水平是40/20每周给药方案(40mg/kg负荷剂量，然后每周一次20mg/kg)，被确定为随后进行的1期和2期研究的推荐给药方案，其中瑟瑞妥单抗(Seribantumab)与标准化疗、激素或靶向疗法联用。
这项瑟瑞妥单抗(Seribantumab)单药治疗研究共涉及43名晚期实体瘤患者，最初将不良事件定义为发生率＞20％的任何治疗中出现的不良事件(TEAE)(所有级别，无论关系如何)。根据这一定义，观察到以下不良事件，其中大多数严重程度为轻度至中度：疲劳、恶心、腹泻、呕吐、食欲下降、高血糖、低钾血症和皮疹。
总而言之，在这项单药治疗研究中，22名接受40/20mg/kg每周给药方案水平治疗的患者中，没有观察到与瑟瑞妥单抗(Seribantumab)相关的剂量限制性毒性。在当前的研究中，6名患者在安全磨合阶段接受了治疗。诱导方案包括3,000mg负荷剂量，随后每周2,000mg，持续3周。安全磨合队列中没有患者出现剂量限制性毒性，TEAE主要包括1级腹泻、恶心、疲劳、皮疹和前列腺炎。入组继续采用诱导方案2，每周一次3,000毫克，持续4周。接下来的6名患者接受了诱导方案2的治疗。总而言之，接受诱导方案2治疗的前6名患者均未出现DLT，TEAE主要包括1级腹泻、恶心、疲劳、皮疹和角膜炎。
G.剂量调整
经历临床显著不良事件(等级≥3)的患者，可以将瑟瑞妥单抗(Seribantumab)剂量暂停达3周以便恢复，并在重新开始时将瑟瑞妥单抗(Seribantumab)剂量减少25％(首次发生)或50％(复发)，如下：
表3：剂量修改-每周给药
原始剂量水平 3,000mg
25％剂量减少 2,250mg
50％剂量减少 1,500mg
对于经历危及生命的4级不良事件的患者，永久停用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)。对于经历临床显著的、需要超过3周的恢复期的药物相关不良事件的患者，瑟瑞妥单抗(Seribantumab)将永久停用，除非有令人信服的、客观的放射学缓解证据并且没有替代治疗。
H.临床程序和评估
所有临床程序均按照表4中规定的评估时间表进行。
表4：评估表
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1.系统审查：筛查期间的HEENT、四肢、胃肠/腹部、淋巴结、肌肉骨骼、呼吸/肺以及皮肤、体重和身高。在其他时间点进行针对症状的身体和神经学检查，包括体重测量。筛选后，在第1周期期间每周进行一次体检，此后每个周期的第1周均进行体检。
2.血红蛋白、血细胞比容、红细胞计数、白细胞分类计数(中性粒细胞[计数和百分比]、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞[百分比]和血小板计数。可能会要求临时样品。
3.血清或血浆化学成分(非空腹)，包括碱性磷酸酶、白蛋白、ALT、AST、血尿素氮(BUN)、胆固醇、肌酐、葡萄糖、LDH、尿酸、总胆红素和直接胆红素、总蛋白、钠、钾、钙、氯、碳酸氢盐、镁和磷酸盐。可能会要求临时样品。
4.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)PK采样：在C1W1时，在给药前、输注结束(EOI)时和EOT后1小时采样，在C1W3、C2W1、C2W3、C3W1、C3W3、C4W1、C5W1和C6W1：在每次给药前和输注结束(EOI)时立即收集样本。开始或完成瑟瑞妥单抗(Seribantumab)输注后15分钟内进行采样。可能会要求临时PK样品。
5.筛查ECG做3次重复。仅当EOT访视时的初始读数显示治疗出现异常时，才会重复EOT ECG读数。可以要求临时心电图(ECG)。
6.在预定的时间点给药之前收集免疫原性样品。如果患者在研究中出现输注反应，则在事件发生后24小时内进行抗瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抗体检测。对于经历3级或4级输注反应的患者，应在输注反应缓解后以及事件发生28天(±2天)后尽可能接近输注反应发生时测定抗瑟瑞妥单抗(Seribantumab)抗体滴度。
7.用于cfDNA分析的全血是在C1W1和C2W1治疗之前获得的。即使未进行放射学疾病评估，也会在EOT访视时获取用于cfDNA分析的全血。
8.在施用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)之前进行。
9.瑟瑞妥单抗(Seribantumab)给药包括每周输注1小时，直至达到研究治疗终止标准。瑟瑞妥单抗(Seribantumab)给药间隔不少于7天。
10.所有AE和SAE均从知情同意时通过EOT访视收集和报告。
11.基线疾病评估：使用CT(计算机断层扫描)或CT/PET(正电子发射断层扫描)或磁共振成像(MRI)对胸部、腹部和骨盆以及受疾病影响的其他区域进行放射线肿瘤测量，以及在瑟瑞妥单抗(Seribantumab)(第一剂)给药后28天内进行CT或脑部MRI(如果怀疑脑部受累)。除非有明确的禁忌症(例如，标准预防性治疗无法解决的肾功能下降或过敏)，否则应使用造影剂(不包括胸部CT)。疾病评估采用RECIST v1.1。疾病评估在给药日施用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)之前进行，并在±14天的窗口内进行。
12.所有因疾病进展以外的原因停止治疗的患者都会在EOT访视时进行疾病评估。
13.治疗结束(EOT)访视在最后一次研究药物给药后4周内完成。
14.如果可行，可以在进展时和完成EOT评估之前进行可选的新鲜肿瘤活检，以评估对瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的潜在耐药模式。
15.每次生存随访均应包括收集EOT访视后采取的任何新的抗癌疗法和程序。如果患者拒绝或退出生存随访，应尝试通过公共记录获取任何可用的死亡信息。
16.如果研究者在Q2W给药一段时间后调整为每周一次给药，则应根据每周给药评估时间表执行程序。
I.伴随治疗和禁止治疗
可以根据机构指南和研究者的判断使用标准支持的药物。这些可以包括根据美国临床肿瘤学会(ASCO)指南治疗中性粒细胞减少症、血小板减少症或贫血症的造血生长因子(但不适用于第1周期的预防)、输血、止吐剂、止泻剂、抗生素、退烧药和皮质类固醇(每天最多10mg泼尼松或等效物，除非有令人信服的临床理由说明需要更高剂量；允许的皮质类固醇用途包括局部/皮肤、眼科、鼻腔和吸入类固醇，以及治疗哮喘、慢性阻塞性肺病的短期疗程肺部疾病或其他非癌症相关疾病)。
伴随疗法(非研究产品)包括患者在研究治疗开始前28天和研究治疗停止就诊期间使用的任何处方药、非处方制剂、草药疗法或放射疗法。治疗访视结束后，除了生存信息外，仅收集抗癌疗法。
接受研究治疗期间不允许进行以下治疗：(1)其他抗肿瘤治疗，包括细胞毒素、靶向药物、内分泌治疗或其他抗体(在进入研究之前已使用GnRH类似物超过90天的患者可以继续使用)(2)放射治疗(需要短期姑息性放射治疗的患者可以在研究者和申办者讨论后继续接受研究治疗)，以及(3)任何其他研究性治疗。
J.不良事件和住院评估报告
研究人员完成所有常规和标准护理评估，以评估药物引起的不良事件的毒性和症状。这可以包括但不限于患者和/或护理人员的口头报告、体检和实验室检查结果。在整个研究过程中收集和报告不良事件。
在筛选时和给药瑟瑞妥单抗(Seribantumab)之前的给药访视时收集生命体征，包括身高(仅筛选时)、体重、静息血压、脉搏、呼吸频率和体温。
美国东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态(PS)是通过询问患者的功能能力来获取的。
12导联心电图(ECG)包括心率、节律、间隔持续时间和总体印象的描述。校正的QT间期(QTc)使用Fridericia方法(QTcF)计算。
当地放射科医生根据RECIST 1.1版评估肿瘤反应，通过CT或MRI确定疾病进展。此外，根据研究者认为适当的情况，进行其他放射线照相或闪烁照相程序(诸如放射性核素骨扫描)以评估肿瘤累及的部位。整个研究使用相同的评估方法。除了当地放射科医生进行的检查之外，还可以对所有扫描进行独立的回顾性中心检查。研究人员根据RECISTv 1.1指南选择目标病灶和非目标病灶。后续测量和总体反应也符合这些指南。要指定确认的部分缓解(PR)或完全缓解(CR)状态，必须通过在首次满足缓解标准≥30天后进行的重复评估来确认肿瘤测量值的变化。
从治疗分配到第24周，每6周(±2周)评估一次疾病，然后到第1年结束时每8周(±2周)评估一次，随后每12周(±2周)评估一次，直到患者脱离研究指导的治疗并完成治疗结束访视。所有因疾病进展以外的原因停止治疗的患者都在治疗结束就诊时接受扫描。
K.实验室程序和评估
全血细胞计数(CBC)包括以下内容：血红蛋白、血细胞比容、血小板计数、红细胞、白细胞及分类(中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞等细胞)。
血清化学(非空腹)包括电解质(钠、钾、钙、氯化物、碳酸氢盐、镁和磷酸盐)、BUN、血清肌酐、胆固醇、葡萄糖、总胆红素和直接胆红素、AST、ALT、碱性磷酸酶、LDH、尿酸、总蛋白和白蛋白。
每28天在筛查期间以及治疗结束访视期间对所有育龄女性进行一次尿液或血清妊娠检测。豁免的女性患者包括接受过双侧卵巢切除术或子宫切除术的患者，或绝经期患者(定义为至少连续12个月没有月经周期)。
用于药代动力学(PK)样品的血浆样品取自患者。C1W1采样发生在给药前、输注结束时(EOI)以及EOI后1小时。在C1W3、C2W1、C2W3、C3W1、C3W3、C4W1、C5W1和C6W1：在每次给药前和输注结束(EOI)时立即收集样本。
在预定时间点给药前，以及对于瑟瑞妥单抗(Seribantumab)施用期间经历3级或更高输注反应的任何患者，收集血清样本，以确定是否存在对瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的免疫反应(即人抗人抗体；HAHA)。实验室手册提供了收集、处理和运输这些样本的说明。
从收集的组织(对于接受可选活检的患者，在治疗前和EOT访视时)和全血样本中探索生物标志物数据，以获取游离DNA(cfDNA)，以评估与肿瘤反应的潜在关联。预先指定的机制性生物标志物分析考虑的疗效结果包括但不限于OS、PFS和ORR。
如果存档的肿瘤组织可用，则提交该组织代替获取新鲜的肿瘤活检，以便在分配到队列1的患者入组研究时中心确认NRG1基因融合状态。对于无法获得足够存档组织的患者，根据ASCO最近的指导(Levit et al.，J Clin Oncol.2019；37：2368-2377)，发生重大并发症的风险较低时，在门诊进行肿瘤活检手术，可以由治疗医生根据具体地点的许可和标准程序进行考虑。
对于队列2患者，如果已记录或观察到HER通路治疗(例如阿法替尼、基于HER2的治疗、MCLA128)的近期进展，则根据ASCO指南，在可获得的存档组织的情况下(并且主要并发症风险低)优选可以在门诊进行额外的新鲜肿瘤活检，以便更好地了解先前治疗的进展机制。
Caris Life Sciences利用其基于RNA的NGS测试，MI TranscriptomeTM前瞻性地对NRG1基因融合状态进行中心确认。入组后，研究人员和研究团队需要立即获取、处理和运送所需的存档肿瘤组织以进行中心确认测试。根据基于RNA的NGS测试方法，至少55名患有NRG1基因融合阳性肿瘤的患者被纳入队列1。不需要对最初入组并分配到队列2或队列3的患者进行中心确认测试。
如果中心实验室检测未能确认NRG1融合的存在，或者入组后没有提供足够的肿瘤组织用于中心检测，则只要患者不符合治疗中止标准，研究者就可以酌情允许他们继续参与研究。
在给药前的指定时间点收集全血样本。这些样本用于进行探索性研究，以进一步表征和关联可能的生物标志物，这些生物标志物可能有助于预测或评估NRG1融合阳性晚期实体瘤患者对瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的反应。如果在进行这些分析后仍有剩余样本，则可将其用于未来分析可能与瑟瑞妥单抗(Seribantumab)活性存在机制相关的生物标志物。
5.不良事件和报告
不良事件(AE)是指在给予药品的患者或临床研究患者中发生的任何不良医疗事件，不一定与该治疗有因果关系。因此，不良事件可以是任何不利的和非预期的迹象，包括异常的实验室检查结果、症状或暂时与药品的使用相关的疾病，无论是否被认为与药品相关。
记录从获得书面知情同意书到治疗访视结束期间发生的所有不良事件、投诉或症状(在首次给药研究药物之前发生的事件被视为病史，在第一次给药研究药物时或之后发生的事件被视为治疗紧急不良事件)。患者原始医疗记录中的记录为文件提供支持。在研究期间检测到的临床显著的异常实验室或其他检查(例如心电图)结果，或在筛选时出现并在研究期间显著恶化，均报告为不良事件。对每种不良事件的持续时间、严重程度以及与研究产品、基础疾病或其他因素的因果关系进行评估。
如果先前存在的医疗状况(即糖尿病、偏头痛)的严重程度、频率或病症持续时间增加或与明显更差的结果相关，则该状况的恶化被视为不良事件。疾病进展本身不被视为不良事件或严重不良事件。
在研究入组之前计划的治疗前条件干预(即选择性整容手术)或医疗程序不被视为不良事件。
对于导致死亡的不良事件，结果与导致死亡的事件一起记录。研究结束时或死亡时正在发生的不良事件应标记为“持续”。
研究者运用其医学和科学判断来决定异常实验室发现或其他异常评估是否具有临床意义。跟踪临床研究期间发生的具有临床意义的异常实验室值，直到重复测试恢复正常、稳定或不再具有临床意义。任何被确定为错误的异常测试不需要报告为不良事件。
每个不良事件均根据美国国家癌症研究所(NCI)“不良事件通用术语标准”(CTCAE)5.0版进行分级。对于CTCAE中未列出的事件，严重程度被指定为轻度、中度、重度或危及生命或致命，分别对应于NCI CTCAE的1、2、3、4和5级，定义如下如表5所示：
表5：定义
严重不良事件(SAE)是指在任何剂量下发生的任何不良医疗事件：(1)导致死亡，(2)危及生命，(3)需要住院治疗或延长现有住院时间，(4)结果持续或严重残疾/丧失能力，(5)是先天性异常或出生缺陷，或(6)是重要医疗事件。
虽然“重度(severe)”一词通常用于描述事件的强度(严重程度)，但事件本身可能意义相对较小(例如重度头痛)。这与“严重(serious)”不同，“严重(serious)”基于患者/事件结果或行动标准，通常与对患者生命或功能构成风险的事件相关。
6.统计方法
A.终点
主要终点是根据RECIST 1.1通过独立放射学检查评估的客观缓解率。次要终点包括缓解持续时间(DoR)、NRG1基因融合阳性患者中瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的安全性、无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)和临床受益率(CR、PR、SD＞24周)。探索性终点包括每周、Q2W和Q3W给药后的药代动力学参数，以及探索机制关联性生物标志物与临床结果之间的关联。
B.分析人群
安全人群主要用于安全数据分析，由所有接受1剂或多剂瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的入组患者组成。
意向治疗人群(ITT)包括分配并入组至队列1的所有合格的中心确认的NRG1基因融合患者，这些患者接受至少一剂瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗，采用12周靶标诱导方案(Target Induction Regimen)或每周给药方案。
C.样本量的确定
该试验旨在提供统计上有说服力的证据，证明如果估计ORR的双侧95％精确二项式置信区间(C1)的下限超过30％的最小阈值，则瑟瑞妥单抗(Seribantumab)具有临床意义。该益处证据水平的阈值将与已批准的针对对先前标准疗法停止反应的基因组定义的患者群体的靶向疗法所使用的标准一致。在计划的主要疗效分析下，如果对NRG1基因融合阳性癌症患者给予瑟瑞妥单抗(Seribantumab)时观察到的ORR＞50％，则样本量为55名中心确认的NRG1基因融合状态患者的试验将有超过80％的功效达到预先设定的目标阳性阈值，其中这些已入组的患者接受12周靶标诱导方案治疗并无暂停地过渡到每周给药一次，或从入组时起每周一次给药。
D.统计考虑因素
分类变量通过频率分布(患者数量和百分比)进行汇总，连续变量通过描述性统计(平均值、标准差、中位数、最小值、最大值)进行汇总。
汇总患者的处置情况，包括筛查、治疗和停药的患者。汇总停止的原因。汇总人口统计和基线特征。病史和既往用药情况均以表格形式列出。
由于持续的COVID-19大流行，需要进行额外的分析(例如敏感性分析)以评估COVID-19对临床试验数据的影响。需要记录未能获得方案指定的评估和/或用于收集安全性和有效性数据的替代程序的原因。
客观缓解率(ORR)由RECIST v1.1(CR+PR)确定，并通过独立放射学检查进行评估。计算ORR及其95％CI的估计值。主要疗效分析是针对队列1的ITT人群进行的。反应评估的预定义因素包括：(1)既往局部晚期和/或转移性疾病的全身治疗次数(1、2或3)；(2)肿瘤类型；(3)NRG1基因融合伴侣。
反应持续时间基于独立的放射性检查。DOR是针对达到确认CR或PR的受试者计算的。对于此类受试者，DOR定义为从CR或PR开始的日期(该时间首先观察到反应状态，且所述反应状态随后被确认)到使用RECIST v1.1首次记录疾病放射照相进展或出于任何原因死亡的日期的月数，以先到者为准。所有患者(包括每周接受瑟瑞妥单抗(Seribantumab)再诱导给药的患者)的反应持续时间是在第一次放射学进展时确定的。
无进展生存期(PFS)基于研究者评估。PFS定义为从瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗开始(第1剂)的日期到使用RECIST 1.1首次记录疾病放射学进展或出于任何原因的死亡(以先到者为准)的时间。Kaplan-Meier方法用于估计每个治疗队列的PFS。此外，将开始使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)后的PFS分析与每位患者在开始使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)之前最近一次治疗期间观察到的PFS进行比较。所有患者(包括每周接受瑟瑞妥单抗(Seribantumab)再次诱导给药的患者)的PFS均在第一次放射学进展时确定。
总生存期(OS)定义为从瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗开始(剂量1)之日到出于任何原因的死亡的日期的时间。Kaplan-Meier方法用于估算每个治疗组的OS。除了估算OS的总体分布外，还估算中位生存率、6个月和12个月生存率。
使用不同的研究人群进行额外的OS、PFS、ORR和TTP敏感性分析。此外，分析中还在分析PFS时应用了各种审查规则以评估对规格改变的敏感性。这些在统计分析计划(SAP)中都有明确的详细说明。
使用安全人群进行安全性分析(不良事件和实验室分析)。不良事件使用最新的MedDRA词典进行编码。严重程度根据NCI CTCAE5.0版进行分级。
按频率和百分比对治疗引起的不良事件(TEAE)、3级及以上TEAE、TEAE相关事件、SAE以及因AE导致的停药进行汇总报告。不良事件按系统器官类别和首选术语进行汇总。所有不良事件数据均按患者列出。TEAE被定义为在研究药物首次给药后发生且在研究药物给药前不存在或在研究药物给药后严重程度恶化的任何事件。收集TEAE直至治疗访视结束。
实验室、生命体征和ECG数据根据参数类型进行汇总。
来自收集的组织和血清的生物标志物数据用于寻找具有较高肿瘤反应率潜力的富集群体。这些探索性分析中考虑的疗效结果包括ORR、OS和PFS。这些描述性分析中使用了Kaplan-Meier方法。
在使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)治疗期间的不同时间点获得并记录按受试者、周期、日期和时间划分的血浆浓度。对扫描进行独立回顾性中心审查以评估ORR(主要终点)和反应持续时间(次要终点)。为此目的，所有图像均提交至中央成像设施，并由独立评审员根据成像章程进行评估。
7.之前的CRESTONE给药计划
在批准CRESTONE方案版本4.0(上文详细描述)之前，所有符合条件的患者的治疗包括初始诱导(每周给药一次，持续4周)，然后每两周(Q2W)使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)维持给药。
A.诱导方案1
在C1W1访视时，将静脉输注的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)3,000mg 1-h作为负荷剂量，随后在C1W2、C1W3和C1W4每周进行一次2,000mg 1-h静脉注射。诱导方案1中未观察到DLT。经审查，接下来的6名患者入组并开始接受诱导方案2的治疗。
B.诱导方案2
瑟瑞妥单抗(Seribantumab)3,000mg 1-h静脉输注，每周一次，在C1W1、C1W2、C1W3和C1W4访视时进行。在接受诱导方案2治疗的前6名患者中没有观察到DLT。经审查，所有随后登记的按照方案2.0版接受治疗的患者均开始接受诱导方案2的治疗。
随着方案版本3.0的批准，随后入组的患者开始接受12周靶标诱导方案的治疗。
C.12周靶标诱导方案
静脉输注瑟瑞妥单抗(Seribantumab)3,000mg 1-h，每周一次，共12周(C1W1、C1W2、C1W3、C1W4、C2W1、C2W2、C2W3、C2W4、C3W1、C3W2、C3W3和C3W4访视)。注意，在方案版本3.0批准时，继续每周诱导阶段给药的入组诱导方案2的患者，转为延长的12周靶标诱导方案。
D.Q2周给药：
在方案4.0版获得批准之前，所有完成诱导期给药的诱导方案1、诱导方案2或12周靶标诱导方案的患者中，继续进行研究导向的治疗的那些，随后接受瑟瑞妥单抗(Seribantumab)3,000mg 1-h静脉输注，每2周一次，在最后一次每周诱导给药完成后约14天开始。对于这些患者，每两周继续给药一次，直到患者满足一项或多项方案特异的治疗停止标准。
方案版本2.0包括Q2W给药6剂(巩固给药)，然后是Q3W给药(维持给药)，用于剩余的研究参与者。随着方案版本3.0批准，Q3W给药从方案中删除。没有患者接受Q3W给药治疗。
E.再次诱导给药：
在方案版本4.0获得批准之前，继续接受Q2W给药治疗的患者，其(a)在放射学评估之间表现出疾病恶化或临床进展的迹象，或(b)经历已记录的放射学或临床进展，并根据研究者的意见，患者可能会继续受益，或者(c)因非治疗相关毒性(例如，为了处理COVID-19并发症)经历超过3周的长时间治疗中断，可以重新诱导并在就诊后转回每周给药计划。除非患者在之前每周给药期间需要调整剂量，否则重新诱导包括每周1小时静脉注射3,000mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab)。
随着协议版本3.0的批准，患者必须满足以下标准才能考虑每周重新诱导给药：(1)患者被告知使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)重新诱导的目的、风险和益处以及替代疗法；并且患者口头或书面同意使用瑟瑞妥单抗(Seribantumab)重新诱导，(2)不存在表明临床显著疾病进展的临床症状或体征，(3)体能状态不存在临床显著下降，(4)不存在需要紧急替代医疗干预的疾病快速进展或对重要器官或关键解剖部位(例如，中枢神经系统转移、肿瘤累及导致的呼吸衰竭、脊髓压迫)的威胁，(5)没有与瑟瑞妥单抗(Seribantumab)相关的显著、不可接受或不可逆的毒性，并且(6)如果在之前每周的瑟瑞妥单抗(Seribantumab)给药期间需要减少剂量，每周重新诱导给药以之前施用的最终修改剂量水平开始。
8.将患者转为每周连续给药的指南
方案版本4.0获得批准后，根据先前方案版本入组的患者将按如下方式进行管理。积极接受每周诱导给药(即诱导方案2或12周靶标诱导方案)的患者继续按当前剂量水平每周给药，直至疾病进展或出现不可接受的毒性。已完成每周诱导给药并根据以前版本的方案接受每两周(Q2W)给药的患者，如果满足以下标准，则转为每周给药：(1)告知患者目的、风险和益处，以及每周连续给药瑟瑞妥单抗(Seribantumab)的替代疗法；以及病人口头或书面同意连续每周给药瑟瑞妥单抗(Seribantumab)，(2)不存在表明临床显著疾病进展的临床症状或体征，(3)体力状态不存在临床显著下降，(4)不存在需要紧急替代医疗干预的疾病快速进展或对器官或关键解剖部位(例如，中枢神经系统转移、肿瘤累及导致的呼吸衰竭、脊髓压迫)的威胁，(5)没有与瑟瑞妥单抗(Seribantumab)相关的显著、不可接受或不可逆的毒性，以及(6)如果剂量如果在之前的每周瑟瑞妥单抗(Seribantumab)给药期间需要减少剂量，则以先前施用且患者耐受的最终修改剂量水平重新开始每周给药。
除非患者在之前每周给药期间需要剂量调整，否则重新开始每周给药包括每周1小时静脉注射3,000mg瑟瑞妥单抗(Seribantumab)，当患者经历任何与3级或4级血液学或非血液学毒性相关的治疗时，进行适当的剂量调整和/或中断。
本领域技术人员将认识到并且能够仅使用常规实验来确定和实施本文描述的具体实施例的许多等同物。所附权利要求旨在涵盖这些等同物。从属权利要求中公开的实施例的任何组合都属于本公开的范围。
本文引用的所有专利、专利申请和出版物均通过引用整体并入本文。
序列汇总
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Claims (29)

1.一种治疗患有包含NRG1融合基因的肿瘤的受试者的方法，包括向受试者施用治疗有效量的ERBB3(HER3)抗体，其中所述抗体以每周一次3,000mg的剂量施用，并且其中所述抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ IDNO.8、9和10。
2.根据权利要求1所述的方法，其中如果抗体不足以实现治疗，则停止每周一次的抗体施用。
3.根据权利要求2所述的方法，其中如果与基线相比存在临床疾病进展、症状加剧、耐受性和/或无临床改善，则确定每周一次施用所述抗体不足以实现治疗。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述确定通过射线照相评价进行评估。
5.根据权利要求3所述的方法，其中所述确定通过“实体瘤反应评价标准”(RECIST)1.1版指南进行评估。
6.根据权利要求3所述的方法，其中所述确定通过一种或多种肿瘤标志物进行评估。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述一种或多种肿瘤标志物选自：糖类抗原(CA19-9)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA-125)和癌抗原15-3(CA15-3)。
8.根据权利要求3所述的方法，其中所述确定通过肝功能测试(LFT)进行评估。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在受试者经历临床显著的不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少25％。
10.根据权利要求9所述的方法，其中每周一次的抗体剂量减少至2,250mg。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在受试者经历两种或更多种临床显著不良事件后恢复治疗时，每周一次的抗体剂量减少50％。
12.根据权利要求11的所述方法，其中每周一次的抗体剂量减少至1,500mg。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗体是静脉内施用的。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗体静脉注射约一小时施用。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述治疗产生至少一种选自以下的治疗效果：肿瘤尺寸减小、转移性病灶数量随时间的减少、完全应答、部分应答和疾病稳定。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者通过肿瘤活检或液体活检试验测量，确定患有包含NRG1融合基因的肿瘤。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述试验包括聚合酶链式反应(PCR)、荧光原位杂交(FISH)或二代测序(NGS)。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述NGS是基于RNA或基于DNA的测试。
19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述肿瘤是局部晚期或转移性实体瘤。
20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述肿瘤选自下组：
鳞状细胞癌、肺癌(例如，浸润性粘液腺癌(IMA)、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非鳞状NSCLC、神经胶质瘤、胃肠道癌、卵巢癌、肝癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾癌(例如肾细胞癌(RCC))、前列腺癌(例如激素难治性前列腺腺癌)、甲状腺癌、神经母细胞瘤、胰腺癌、胰管腺癌(PDAC)、胶质母细胞瘤(多形性胶质母细胞瘤)、宫颈癌、胃癌、膀胱癌、胆囊癌(GBC)、胆管癌(胆管细胞型肝癌)、肝癌、乳腺癌、结肠癌、头颈癌(或恶性肿瘤)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、鼻咽神经内分泌肿瘤、胃癌、生殖细胞肿瘤、肉瘤、小儿肉瘤、鼻窦自然杀伤细胞、黑色素瘤(例如，转移性恶性黑色素瘤，诸如皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛门区域癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊柱肿瘤、脑癌、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、胃食管交界处(GEJ)癌、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱发的癌症(包括石棉诱发的癌症)以及与病毒相关的癌症或病毒来源的癌症(例如，人乳头瘤病毒(HPV相关或起源的肿瘤))。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述肿瘤类型是浸润性粘液腺癌(IMA)。
22.根据权利要求20所述的方法，其中所述肿瘤类型是卵巢癌。
23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述NRG1融合基因包含选自下组的基因：DOC4、CLU、STMN2、PCM1、CD74；SLC3A2；SDC4；ATP1B1；ROCK1；FOXA1；AKAP13；THBS1；PDE7A；THAP7；SMAD4；RAB3IL1；PMEPA1；STMN2；SLC3A2；VAMP2；RBPMS；WRN；RAB2IL1；SARAF；APP；KIF13B；ADAM9；CDH1；COX10-AS1；DIP2B；DPYSL2；GDF15；HMBOX1；MDK；MRPL13；NOTCH2；PARP8；POMK；SETD4；TNC；TSHZ2；VTCN1；WHSC1L1；INTS9；和ZMYM2。
24.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗体包含重链可变区氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列，所述重链可变区氨基酸序列和轻链可变区氨基酸序列分别包含SEQ ID NO.2和4。
25.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述抗体包含重链和轻链氨基酸序列，所述重链和轻链氨基酸序列分别包含SEQ ID NO.12和13。
26.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括施用靶向疗法、放疗、化学疗法、免疫疗法和/或化学免疫疗法。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述靶向疗法针对EGFR、ALK、ROS、NTRK、mTOR、PI3K、MEK、ERK或MET。
28.根据前述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括施用抗雌激素。
29.一种用于治疗患有肿瘤的受试者的癌症的试剂盒，所述肿瘤包含NRG1融合基因，所述试剂盒包含：
(a)一剂抗ERBB3抗体，所述抗ERBB3抗体包含重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.5、6和7，以及轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链CDR1、CDR2和CDR3序列分别包含SEQ ID NO.8、9和10；和
(b)在根据前述权利要求中任一项所述的方法中使用所述抗体的说明书。
CN202280020422.8A 2021-03-11 2022-03-10 抗erbb3(her3)单克隆抗体治疗与神经调节蛋白1(nrg1)基因融合相关肿瘤的剂量和给药 Pending CN117412766A (zh)

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