TW202328191A - 使用her3抗原結合分子的癌症之治療及預防 - Google Patents
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Abstract
本揭露內容提供用於治療或預防癌症之與HER3結合的抗原結合分子、包含所述分子的組成物、以及使用所述分子之治療及預防方法。
Description
本申請案主張2021年9月3日申請之SG 10202109667X的優先權，其內容及元件就所有目的藉由參照併入本文中。
本發明係有關於分子生物學領域，更具體地為抗體技術及醫學治療與預防之方法。
增高的HER3表現於多種實性腫瘤，包括乳癌、胃癌(gastric cancer)、頭頸部癌、胰臟癌、卵巢癌及肺癌中與預後不良有關聯。HER3-媒介的訊息傳導對於腫瘤進程有不良後果；HER3向上調節與對於抗-HER2及抗-EGFR療法之抗性相關聯，以及對於抗-PD-1療法具難治性之實性腫瘤與對於抗-PD-1療法的反應者相比顯示出較高的HER3表現。
HER3-結合抗體係說明於，例如Zhang et al., Acta Biochimica et Biophysica Sinica (2016) 48(1): 39–48。抗-HER3抗體LJM-716與HER3細胞外域之子域II及IV上的一表位結合，將HER3鎖定於非活性構形(Garner et al., Cancer Res (2013) 73: 6024–6035)。MM-121 (亦已知為塞里班土單抗(seribantumab))已顯示出會藉由阻斷希調蛋白(HRG)與HER3的結合而抑制HER3-媒介的訊息傳導(Schoeberl et al., Sci. Signal. (2009) 2(77): ra31)。帕圖單抗(patritumab)(亦已知為U-1287及AMG-888)亦阻斷希調蛋白(heregulin)與HER3的結合(參見例如Shimizu et al. Cancer Chemother Pharmacol. (2017) 79(3):489–495。RG7116 (亦已知為路瑞妥珠單抗(lumretuzumab)及RO-5479599)辨識HER3細胞外域之子域I上的一表位(參見例如Mirschberger et al. Cancer Research (2013) 73(16) 5183-5194)。KTN3379通過與子域III的胺基酸殘基(對應於SEQ ID NO：1之下列位置：Gly476、Pro477、Arg481、Gly452、Arg475、Ser450、Gly420、Ala451、Gly419、Arg421、Thr394、Leu423、Arg426、Gly427、Lys356、Leu358、Leu358、Lys356、Ala330、Lys329及Gly337)，以及子域II之Met310、Glu311及Pro328 (參見Lee et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 Oct 27; 112(43):13225)的交互作用來結合HER3。AV-203 (亦已知為CAN-017)已顯示出會阻斷NRG1與HER3的結合且促進HER3降解(參見Meetze et al., Eur J Cancer 2012; 48:126)。REGN1400亦抑制配體與HER3的結合(參見Zhang et al., Mol Cancer Ther (2014) 13:1345–1355)。RG7597 度立妥珠單抗(duligotuzumab)為雙重作用的Fab (DAF)，其能與HER3及EGFR兩者結合，以及與HER3之子域III結合(參見Schaefer et al., Cancer Cell (2011) 20(4):472-486)。MM-111及MM-141係雙特異性抗體，其具有會抑制HRG配體與HER3之結合的HER3-結合臂(參見McDonagh et al. Mol Cancer Ther (2012) 11:582–593以及Fitzgerald et al., Mol Cancer Ther (2014) 13:410-425)。
本揭露內容部分地關於包含能夠與HER3結合之抗原結合分子的組成物。該等組成物係可用於治療表現HER3的癌症及癌細胞。
因此，在一態樣中，本揭露內容提供一種組成物，其包含能與HER3結合之一抗原結合分子。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-CDR3。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：48的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
在一些實施態樣中，該組成物包含：
(i) 2 mM至200 mM組胺酸、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或
(ii) 2 mM至200 mM組胺酸、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0；或
(iii) 2 mM至200 mM組胺酸、1 mM至250 mM氯化鈉、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或
(iv) 2 mM至200 mM組胺酸、1 mM至250 mM氯化鈉、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0；或
(v) 2 mM至200 mM組胺酸、1 mM至250 mM精胺酸、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或
(vi) 2 mM至200 mM組胺酸、1 mM至250 mM精胺酸、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0；或
(vii) 2 mM至200 mM乙酸鹽、1 mM至250 mM氯化鈉、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0。
在一些實施態樣中，該組成物包含：
(i) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有pH 5.8；或
(ii) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有pH 5.1；或
(iii) 20 mM組胺酸、4% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有pH 5.8；或
(iv) 20 mM組胺酸、2% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有pH 5.3；或
(v) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有pH 6.1；或
(vi) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有pH 5.8；或
(vii) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有pH 5.5；或
(viii) 20 mM組胺酸、150 mM氯化鈉；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有pH 6.5；或
(ix) 20 mM乙酸鹽、150 mM氯化鈉；0.05% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有pH 5.5。
在一些實施態樣中，該組成物包含20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02%(w/v)聚山梨醇酯-80，及具有pH 5.8。
在一些實施態樣中，該組成物包含至少1.2 mg/mL之抗原結合分子。在一些實施態樣中，該組成物包含高達50 mg/mL之抗原結合分子。在一些實施態樣中，該組成物包含1.2 mg/mL至50 mg/mL之抗原結合分子。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：
一VH區，其包含與SEQ ID NO：36的胺基酸序列有至少70%序列同一性的一胺基酸序列；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：83的胺基酸序列有至少70%的序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：
併含有下列框架區(FR)之一VH區：
具有SEQ ID NO：53的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：59的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：66的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：71的胺基酸序列之HC-FR4。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：
併含有下列框架區(FR)之一VL區：
具有SEQ ID NO：104的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：110的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：120的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：125的胺基酸序列之LC-FR4。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：171之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：177之胺基酸序列。
亦提供一種根據本揭露內容之組成物，其係用作為一藥劑。
亦提供一種根據本揭露內容之組成物，其係用於一治療或預防一主體中之一癌症的方法中。
亦提供了根據本揭露內容之一組成物在製造一供治療或預防一主體中之一癌症之藥劑的用途。
亦提供了一種治療或預防一主體中之一癌症的方法，該方法包含投與一治療或預防有效量之本揭露內容的一組成物。
在一些實施態樣中，癌症包含表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2及/或一HER3配體的細胞。在一些實施態樣中，癌症包含具有導致一HER3配體之增高表現的一突變的細胞。在一些實施態樣中，癌症包含具有一NRG基因融合體的細胞。在一些實施態樣中，該NRG基因融合體係選自於CLU-NRG1、CD74-NRG1、DOC4-NRG1、SLC3A2-NRG1、RBPMS-NRG1、WRN-NRG1、SDC4-NRG1、RAB2IL1-NRG1、VAMP2-NRG1、KIF13B-NRG1、THAP7-NRG1、SMAD4-NRG1、MDK-NRG1、TNC-NRG1、DIP2B-NRG1、MRPL13-NRG1、PARP8-NRG1、ROCK1-NRG1、DPYSL2-NRG1、ATP1B1-NRG1、CDH6-NRG1、APP-NRG1、AKAP13-NRG1、THBS1-NRG1、FOXA1-NRG1、PDE7A-NRG1、RAB3IL1-NRG1、CDK1-NRG1、BMPRIB-NRG1、TNFRSF10B-NRG1、MCPH1-NRG1及SLC12A2-NRG2。
在一些實施態樣中，該癌症衍生自肺臟、乳房、頭、頸、腎臟、卵巢、子宮頸、胰臟、胃、肝臟、食道、前列腺、子宫、膽囊、結腸、直腸、膀胱、軟組織或鼻咽。
在一些實施態樣中，該癌症係選自於肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、侵襲性黏液性肺腺癌、肺鱗狀細胞癌瘤、乳癌、三重陰性乳癌、乳癌瘤、乳侵襲性癌瘤、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤、腎臟癌、腎臟透明細胞癌瘤、卵巢癌、卵巢漿液性囊腺癌、胰臟癌、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、去勢抗性前列腺癌、子宮內膜癌、子宮癌肉瘤、膽囊癌、膽管癌、結腸直腸癌、RAS野生型結腸直腸癌、胃癌(gastric cancer)、肝細胞癌瘤(HCC)、食道癌(oesophageal cancer)、膀胱癌、膀胱尿路上皮癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、肉瘤、軟組織肉瘤、神經內分泌腫瘤及鼻咽之神經內分泌腫瘤。
在一些實施態樣中，該方法包含偵測在該主體中之表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2、一HER3配體及/或一NRG基因融合體的癌細胞的一步驟。在一些實施態樣中，該方法包含從該主體獲得細胞的一步驟。在一些實施態樣中，該等細胞已從該主體獲得。在一些實施態樣中，偵測步驟係在一活體外樣本上施行及/或在活體外施行。
在一些實施態樣中，當偵測到表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2、一HER3配體及/或一NRG基因融合體的癌細胞時，該主體被選擇來以該組成物治療。
在一些實施態樣中，該組成物係與以下中之一或多者組合來投與：一HER2-標靶療法、一EGFR-標靶療法及/或一雄性素受體-標靶療法。在一些實施態樣中，該組成物係與西妥昔單抗(cetuximab)、恩雜魯胺(enzalutamide)及/或曲妥珠單抗(trastuzumab)中之一或多者組合投與。
亦提供作為本揭露內容之一部分的是一種抗原結合分子，其能夠與HER3結合以供於治療或預防一主體中之一癌症的一方法中使用，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-CDR3。
亦提供能夠與HER3結合之一抗原結合分子於製造一藥劑之用途，該藥物供用於治療或預防一主體中之一癌症，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-CDR3。
亦提供一種治療或預防一主體中之一癌症的方法，其中該方法包含：對該主體投與一治療或預防有效量之能與HER3結合之一抗原結合分子，且其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-CDR3。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：48的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：
併含有下列框架區(FR)之一VH區：
具有SEQ ID NO：53的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：59的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：66的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：71的胺基酸序列之HC-FR4。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含：
併含有下列框架區(FR)之一VL區：
具有SEQ ID NO：104的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：110的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：120的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：125的胺基酸序列之LC-FR4。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：171之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：177之胺基酸序列。
在一些實施態樣中，癌症包含表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2及/或一HER3配體的細胞。在一些實施態樣中，癌症包含具有導致一HER3配體之增高表現的一突變的細胞。在一些實施態樣中，癌症包含具有一NRG基因融合體的細胞。在一些實施態樣中，該NRG基因融合體係選自於CLU-NRG1, CD74-NRG1, DOC4-NRG1, SLC3A2-NRG1, RBPMS-NRG1, WRN-NRG1, SDC4-NRG1, RAB2IL1-NRG1, VAMP2-NRG1, KIF13B-NRG1, THAP7-NRG1, SMAD4-NRG1, MDK-NRG1, TNC-NRG1, DIP2B-NRG1, MRPL13-NRG1, PARP8-NRG1, ROCK1-NRG1, DPYSL2-NRG1, ATP1B1-NRG1, CDH6-NRG1, APP-NRG1, AKAP13-NRG1, THBS1-NRG1, FOXA1-NRG1, PDE7A- NRG1, RAB3IL1-NRG1, CDK1-NRG1, BMPRIB-NRG1, TNFRSF10B-NRG1, MCPH1-NRG1及SLC12A2-NRG2。
在一些實施態樣中，該癌症衍生自肺臟、乳房、頭、頸、腎臟、卵巢、子宮頸、胰臟、胃、肝臟、食道、前列腺、子宫、膽囊、結腸、直腸、膀胱、軟組織或鼻咽。
在一些實施態樣中，該癌症係選自於肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、侵襲性黏液性肺腺癌、肺鱗狀細胞癌瘤、乳癌、三重陰性乳癌、乳癌瘤、乳侵襲性癌瘤、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤、腎臟癌、腎臟透明細胞癌瘤、卵巢癌、卵巢漿液性囊腺癌、胰臟癌、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、去勢抗性前列腺癌、子宮內膜癌、子宮癌肉瘤、膽囊癌、膽管癌、結腸直腸癌、RAS野生型結腸直腸癌、胃癌(gastric cancer)、肝細胞癌瘤(HCC)、食道癌(oesophageal cancer)、膀胱癌、膀胱尿路上皮癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、肉瘤、軟組織肉瘤、神經內分泌腫瘤及鼻咽之神經內分泌腫瘤。
在一些實施態樣中，該方法包含偵測在該主體中之表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2、一HER3配體及/或一NRG基因融合體的癌細胞的一步驟。在一些實施態樣中，該方法包含從該主體獲得細胞的一步驟。在一些實施態樣中，該等細胞已從該主體獲得。在一些實施態樣中，偵測步驟係在一活體外樣本上施行及/或在活體外施行。在一些實施態樣中，當偵測到表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2、一HER3配體及/或一NRG基因融合體的癌細胞時，該主體被選擇來用該抗原結合分子治療。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與以下中之一或多者組合來投與：一HER2-標靶療法、一EGFR-標靶療法及/或一雄性素受體-標靶療法。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與西妥昔單抗(cetuximab)、恩雜魯胺(enzalutamide)及/或曲妥珠單抗(trastuzumab)中之一或多者組合投與。
在一些實施態樣中，根據本揭露內容之一組成物或抗原結合分子係每7天投與一次、每14天一次、每21天一次或每28天一次。
在一些實施態樣中，根據本揭露內容之組成物或抗原結合分子係每28天投與一次、每28天兩次、或每21天三次，例如歷時一或多個21或28天之時段。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之一組成物或抗原結合分子係投與經歷1、2、3、4、5、6或更多個21或28天之時段。
在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含在每次投與及/或在每一個21或28天之時段內，投與150 mg至3000 mg之抗原結合分子。
在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每次投與1800-2500 mg之抗原結合分子。
在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含在例如每21或28天之每次投與循環中，總共投與至少600 mg、至少900 mg、至少1200 mg、至少1500 mg、至少1800 mg、至少2100 mg、至少2400 mg、至少2700 mg、至少3000 mg、至少3300 mg、至少3600 mg、至少3900 mg、至少4200 mg、至少4500 mg、至少4800 mg、至少5100 mg、至少5400 mg、至少5700 mg、至少6000 mg、至少6300 mg、至少6600 mg、至少6900 mg、至少7200 mg、至少7500 mg、至少7800 mg、至少8100 mg、至少8400 mg、至少8700 mg、至少9000 mg、至少9300 mg、至少9600 mg、至少9900 mg、至少10200 mg、至少10500 mg、至少10800 mg、至少11100 mg、至少11400 mg、至少11700 mg或至少12000 mg之抗原結合分子。
在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每21天總共投與約3600 mg之抗原結合分子，或每28天總共投與約4800 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每21天總共投與約5400 mg之抗原結合分子，或每28天總共投與約7200 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每21天總共投與約6300 mg之抗原結合分子，或每28天總共投與約8400 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每21天總共投與約9000 mg之抗原結合分子，或每28天總共投與約12000 mg之抗原結合分子。
抗原結合分子能以多劑量(例如，每週一次)投與，以在每21或28天達到抗原結合分子的一總量。
在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每7或14天(每週一次或每2週一次)投與至少150 mg、至少300 mg、至少600 mg、至少900 mg、至少1200 mg、至少1500 mg、至少1800 mg、至少2100 mg、至少2400或至少2800 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每7或14天(每週一次或每2週一次)投與1500 mg至3000 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每7或14天(每週一次或每2週一次)投與1800 mg至2500 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每7或14天(每週一次或每2週一次)投與約1200 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每7或14天(每週一次或每2週一次)投與約1500 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每7或14天(每週一次或每2週一次)投與約1800 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，根據本揭露內容之治療包含每7或14天(每週一次或每2週一次)投與約2100 mg之抗原結合分子。
在一些實施態樣中，每7天投與抗原結合分子(例如，如上文)係施行至少21或至少28天。在一些實施態樣中，每7天投與抗原結合分子(例如，如上文)係施行4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30或更多週，或者3、6、9、12、15、18、21、24、27、30或更多週。
說明
已知的抗-HER3抗體概括地分為兩類。第一類抗體與HER3之域I及/或III結合，且藉此競爭性抑制配體與HER3之結合。塞里班土單抗(Seribantumab) (MM-121)是此類中的一代表成員，且其他成員包括帕圖單抗(patritumab) (U3–1287或AMG-888)、路瑞妥珠單抗(lumretuzumab) (RG-7116)、AV-203、GSK2849330及REGN1400。第二類抗體透過與域II及IV之間、或域II及III之間的界面結合，來將HER3鎖定於一非活性構形。LJM-716是此類的一代表實例，KTN3379亦然。
HER3之過度表現經常在多種腫瘤類型中觀察到且與一較不良臨床結果相關聯。HER3之提升表現係發現於結腸直腸癌瘤、頭頸部鱗狀細胞癌瘤、黑色素瘤及乳癌、胃癌(gastric cancer)、卵巢癌、前列腺癌及膀胱癌中。HER3過度表現的影響係更大於在HER2亦過度表現的癌症，例如乳癌、胃癌及卵巢癌。黑色素瘤及胰臟癌瘤中HER3為EGFR較佳的異質二聚體伙伴。向上調節HER3表現及活性係與多重途徑抑制劑之抗性相關聯，且與不良預後相關聯。
本發明係有關於新穎的HER3-結合分子，其與已知的抗-HER3抗體相比具有改良的性質。
本案發明人對與HER3之細胞外區中屬意之特定區結合之抗原結合分子進行靶定生產。本發明之HER3-結合分子與先前技術揭露之抗原結合分子相比，提供所期望的生物物理及/或功能性質組合。
在本發明的實施態樣中，該等抗原結合分子能與HER3之細胞外區的子域II結合(SEQ ID NO：16)，且抑制結合的HER3分子與交互作用伙伴的締合。
特別地，本文所述之HER3-結合抗原結合分子證實會與HER3的一表位結合、提供：(i)對於HER3與交互作用伙伴(例如，EGFR、HER2)之締合的有力抑制，以及(ii)於NRG配體存在及不存在兩者均與HER3高親和力結合。該性質之獨特組合提供了下游訊息傳導之強力抑制以及對抗範圍廣泛的癌症之優異抗癌活性。
HER3
HER3 (亦已知為例如ERBB3 LCCS2，MDA-BF-1)係識別為UniProt P21860的蛋白質。人類ERBB3基因所編碼之mRNA之選擇式剪接係產出五種不同的同功異型體：同功異型體1 (UniProt：P21860-1，v1；SEQ ID NO：1)；同功異型體2 (UniProt：P21860-2；SEQ ID NO：2)，其包含位置141與SEQ ID NO：1不同的一序列，且其缺少對應於SEQ ID NO：1之位置183至1342的胺基酸序列；同功異型體3 (UniProt：P21860-3；SEQ ID NO：3)，其相對於SEQ ID NO：1包含取代C331F，且其缺少對應於SEQ ID NO：1之位置332至1342的胺基酸序列；同功異型體4 (UniProt：P21860-4；SEQ ID NO：4)，其缺少對應於SEQ ID NO：1之位置1至59的胺基酸序列；及同功異型體5 (UniProt：P21860-5；SEQ ID NO：5)，其缺少對應於SEQ ID NO：1之位置1至643的胺基酸序列。
SEQ ID NO：1至3之N端19胺基酸係構成一訊息胜肽，所以HER3同功異型體1、2及3的成熟形式(亦即，在加工移除訊息胜肽之後)係分別具有SEQ ID NO：6、7及8中所示的胺基酸序列。
HER3之結構及功能係說明於例如Cho and Leahy Science (2002) 297 (5585):1330-1333、Singer et al.,Journal of Biological Chemistry (2001) 276, 44266-44274、Roskoski et al., Pharmacol. Res. (2014) 79: 34–74、Bazley and Gullick Endocrine-Related Cancer (2005) S17-S27以及Mujoo et al., Oncotarget (2014) 5(21):10222-10236中，其每一者係藉由參照全文併入本文。HER3為一單程的跨膜ErbB受體酪胺酸激酶，其具有一N-端細胞外區(SEQ ID NO：9)，其包含二個富含白胺酸子域(域I及III，分別顯示於SEQ ID NO：15及17)以及二個富含半胱胺酸子域(域II及IV，分別顯示於SEQ ID NO：16及18)。域II包含一β髮夾二聚化環(SEQ ID NO：19)，其涉及與其他HER受體分子之分子間交互作用。細胞外區係經由一跨膜區(SEQ ID NO：10)與一細胞質區(SEQ ID NO：11)鏈結。細胞質區包含一近膜節段(SEQ ID NO：12)、一蛋白質激酶域(SEQ ID NO：13)及一C-端節段(SEQ ID NO：14)。
透過HER3之訊息傳導係涉及了受體同質二聚化作用(亦即，與其他HER3受體)或異質二聚化(與其他HER受體，例如HER2)，以及結果由蛋白質激酶域所為的細胞質區之酪胺酸的自我磷酸化。磷酸化之酪胺酸殘基招募轉接/作用蛋白(例如，Grb2及磷脂酶Cγ (PLCγ)，其含有
src同源域2 (SH2)或磷酸酪胺酸結合(PTB)域。
透過HER3之訊息傳導能以一配體依賴型或非配體依賴型方式予以活化。在缺少配體的情況下，HER3受體分子通常以單體、具一防止受體二聚化的構形表現於細胞表面，於該構形中子域II的二聚化環與子域IV上的一袋會有分子內接觸。一HER3配體，諸如一神經調節蛋白(NRG)，例如NRG1 (亦已知為希調蛋白，HRG)或NRG2，與細胞外區的子域I及III的結合係造成一構形變化，此導致子域II之二聚化環暴露，而促進受體二聚化及訊息傳導。HER3的一些癌症相關聯的突變可能破壞形成非活性「封閉式」構形所需要之子域II及IV的交互作用，且藉此致使二聚化環之組成性呈現(constitutive presentation)以及在缺少配體結合之情況下活化HER3-媒介的訊息傳導(參見例如Jaiswal et al., Cancer Cell (2013) 23(5): 603-617)。
在此說明書中，「HER3」係指來自任何物種之HER3，且包括來自任何物種之HER3同功異型體、片段、變異體(包括突變體)或同源物。
於本文使用時，一蛋白質的「片段」、「變異體」或「同源物」可任擇地定特徵為與參考蛋白(例如，一參考同功異型體)的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者，的胺基酸序列同一性。在一些實施態樣中，一參考蛋白之片段、變異體、同功異型體及同源物之特徵可在於能夠施行該參考蛋白所施行之一功能。
一「片段」通常係指參考蛋白的一區段部分(fraction)。一「變異體」通常係指一蛋白質其所具有之一胺基酸序列相對於參考蛋白的胺基酸序列包含一或多個胺基酸取代、插入、缺失或其他修飾，但保留與參考蛋白的胺基酸序列相當程度的序列同一性(例如，至少60%)。一「同功異型體」通常係指參考蛋白的一變異體，其係由相同於該參考蛋白之物種的物種所表現(例如，HER3同功異型體1至5都是彼此的同功異型體)。一「同源物」通常係指參考蛋白的一變異體，其係由與參考蛋白物種相比，不同的物種所生產者。舉例而言，人類HER3同功異型體1 (P21860-1，v1；SEQ ID NO：1)及恆河獼猴HER3 (UniProt：F7HEH3-1，v2；SEQ ID NO：20)為彼此的同源物。同源物包括異種同源物。
一參考蛋白之一「片段」可為任何長度(按胺基酸之數量計)，雖然可任擇地為參考蛋白(亦即，衍生出該片段之蛋白)長度之至少20%，且可具有參考蛋白長度之50%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%中之一者的一最大長度。
HER3之一片段可具有10、20、30、40、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900、1000、1100、1200個胺基酸中之一者的一最小長度，且可具有20、30、40、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900、1000、1100、1200或1300個胺基酸中之一者的一最大長度。
在一些實施態樣中，HER3為來自一哺乳動物的HER3 (例如，一靈長類動物(恆河猴(rhesus)、食蟹獼猴(cynomolgus)、非人類靈長類動物或人類)及/或一嚙齒動物(例如，大鼠或鼠類)HER3)。HER3之同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地定特徵為與來自一給定物種，例如人類之一未成熟或成熟的HER3同功異型體的胺基酸序列，有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
同功異型體、片段、變異體或同源物可任擇地為功能同功異型體、片段、變異體或同源物，例如以一該功能性質/活性合適的檢定法予以分析判定時，具有參考HER3 (例如，人類HER3同功異型體1)的一功能性質/活性。舉例而言，HER3之同功異型體、片段、變異體或同源物可展現與：HER2、NRG1 (第I、II、III、IV、V或VI型)或NRG2 (α或β)中之一或多者締合。
在一些實施態樣中，HER3包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：1至8中之一者有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，HER3之一片段包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：9至19中之一者，例如9、16或19中之一者有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的胺基酸序列同一性。
目標分子上特別屬意之區
本發明之抗原結合分子經特定設計來靶向特別屬意之HER3區。在二步驟的作法中，在預測抗原性、功能及安全性的分析後，選擇所要靶向的HER3區。接著使用對應靶定區的胜肽作為免疫原來製備對HER3目標區具有特異性的抗體，以引發特異性單株抗體，且隨後篩選能結合原生狀態之HER3的經識別抗體。此作法提供抗體表位精湛的掌握。
本發明之抗原結合分子可藉由參照其等結合的HER3區予以定義。本發明之抗原結合分子可與特定感興趣的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子可結合由一相連的胺基酸序列組成(亦即，一胺基酸一級序列)之HER3的一線形表位。在一些實施態樣中，該抗原結合分子可結合由胺基酸序列之一不連續的胺基酸序列組成之HER3的一構形表位。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係與HER3結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與HER3的細胞外區(例如，SEQ ID NO：9所示的區)結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與HER3之細胞外區的子域II (例如，SEQ ID NO：16所示的區)結合。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：229所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：229所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：230及231所示之HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：230及231所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：230所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：230所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：231所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：231所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：23所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：23所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：21所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：21所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：19所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：19所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：22所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：22所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子不與對應於SEQ ID NO：1之位置260至279之HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不與對應於SEQ ID NO：1之位置260至279之HER3區之一胺基酸殘基接觸。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不與SEQ ID NO：23所示之HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不與SEQ ID NO：23所示之HER3區的一胺基酸殘基接觸。
一抗體與一胜肽/多肽結合的區可藉由熟習此藝者使用本技藝中已知的各種方法來判定，包括抗體-抗原複合物之X射線共結晶學分析、胜肽掃描、誘變測繪、由質譜法進行之氫-氘交換分析、噬菌體顯示、競爭ELISA及蛋白質水解為基的「保護」法。此等方法係於例如Gershoni et al., BioDrugs, 2007, 21(3):145-156中所述，其在此藉由參照全文併入本文。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合至一抗體所結合HER3區的相同HER3區或一重疊HER3區，該抗體包含本文所述之抗體殖株10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93、10A6、4-35-B2或4-35-B4中之一者的VH及VL序列。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合至一抗體所結合HER3區的相同HER3區或一重疊HER3區，該抗體包含抗體殖株10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91中之一者的VH及VL序列。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合至一抗體所結合HER3區的相同HER3區或一重疊HER3區，該抗體包含抗體殖株10D1_c89的VH及VL序列。
於本文使用時，一「胜肽」係指一種由肽鍵所鏈結之二或更多胺基酸單體之鏈。一胜肽一般在該區具有約2至50個胺基酸的長度。一「多肽」為二或更多胜肽的一聚合物鏈。多肽一般具有超過約50個胺基酸的長度。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠與一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：1、3、4、6或8中之一者的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：229的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：230及231的胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：230的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：231的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能夠與對應於SEQ ID NO：1之位置260至279之胺基酸序列所組成的一胜肽結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能夠與SEQ ID NO：23之胺基酸序列所組成的一胜肽結合。
抗原結合分子與給定胜肽/多肽結合的能力可以藉由熟習此藝者熟知的方法來分析，包括藉由ELISA、免疫墨點法(例如，西方墨點法)、免疫沉澱法、表面電漿子共振(SPR；參見例如Hearty et al., Methods Mol Biol (2012) 907:411-442)或生物層干涉術(參見例如Lad et al., (2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507)之分析。
在該抗原結合分子能夠與包含一參考胺基酸序列之一胜肽/多肽結合的實施態樣中，該胜肽/多肽可包含一或多個額外的胺基酸於該參考胺基酸序列之一或兩端處。在一些實施態樣中，該胜肽/多肽包含例如1-5、1-10、1-20、1-30、1-40、1-50、5-10、5-20、5-30、5-40、5-50、10-20、10-30、10-40、10-50、20-30、20-40或20-50個額外的胺基酸於該參考胺基酸序列的一或兩端處。
在一些實施態樣中，該參考序列之一或兩端(亦即，N-端及C-端末端)所提供之額外的胺基酸，在HER3胺基酸序列的情況下係對應於該參考序列之末端位置。舉例而言，在該抗原結合分子能夠與包含SEQ ID NO：23的序列及在SEQ ID NO：23之C-端末端的額外二個胺基酸的胜肽結合的情況下，該等額外二個胺基酸可為蘇胺酸及離胺酸，對應於SEQ ID NO：1的位置278及279。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合至一抗體所結合的一胜肽/多肽，該抗體包含本文所述之抗體殖株10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93、10A6、4-35-B2或4-35-B4中之一者的VH及VL序列。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合至一抗體所結合的一胜肽/多肽，該抗體包含抗體殖株10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91中之一者的VH及VL序列。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合至一抗體所結合的一胜肽/多肽，該抗體包含抗體殖株10D1_c89之VH及VL序列。
抗原結合分子
本發明提供能夠與HER3結合之抗原結合分子。
一「抗原結合分子」係指能夠結合至一目標抗原的一分子，且含括單株抗體、多株抗體、單特異性及多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、及抗體片段(例如，Fv、scFv、Fab、scFab、F(ab')
2、Fab
2、雙聯體(diabody)、三聯體(triabody)、scFv-Fc、迷你體(minibodies)、單域抗體(例如，VhH)等)，只要其等展現出結合至相關的目標分子。
本發明之抗原結合分子包含能夠與一目標抗原結合的一部分。在一些實施態樣中，能夠與一目標抗原結合的該部分係包含能夠與該目標抗原特異性結合之一抗體的一抗體重鏈可變區(VH)及一抗體輕鏈可變區(VL)。在一些實施態樣中，能夠與一目標抗原結合的該部分係包含能夠與該目標抗原結合的一適體或由其組成，例如一核酸適體(回顧於例如，Zhou and Rossi Nat Rev Drug Discov. 2017 16(3):181-202)。在一些實施態樣中，能夠與一目標抗原結合之該部分係包含一抗原結合胜肽/多肽或其組成，例如一胜肽適體、硫氧化還原蛋白、單擬抗體(monobody)、抗卡林(anticalin)、孔尼茲域(Kunitz domain)、厄維體(avimer)、打結素(knottin)、菲諾體(fynomer)、艾萃體(atrimer)、DARPin、親和體(affibody)、奈體(nanobody) (亦即，單域抗體(sdAb))阿菲林(affilin)、犰狳重複蛋白(armadillo repeat protein) (ArmRP)、Obody或纖維接合素(fibronectin)──例如回顧於Reverdatto et al., Curr Top Med Chem. 2015; 15(12): 1082–1101中，其在此藉由參照全文併入本文(亦可參見例如Boersma et al., J Biol Chem (2011) 286:41273-85以及Emanuel et al., Mabs (2011) 3:38-48)。
本發明之抗原結合分子大致上包含一抗原結合域，其包含能與目標抗原特異性結合之一抗體的一VH及一VL。由一VH及一VL形成的抗原結合域在本文中亦可稱為一Fv區。
一抗原結合分子可為或可包含一抗原結合多肽或一抗原結合多肽複合物。一抗原結合分子可包含一起形成一抗原結合域之多於一之多肽。多肽可以共價或非共價地締合。在一些實施態樣中，該等多肽係形成包含該等多肽之一較大多肽的部分(例如，於scFv之例中包含VH及VL，或於scFab之例中包含VH-CH1及VL-CL)。
一抗原結合分子可指多於一之多肽(例如，2、3、4、6或8多肽)之一非共價或共價複合物，例如包含二重鏈多肽及二輕鏈多肽的一IgG樣抗原結合分子。
本發明之抗原結合分子可經設計且使用能夠與HER3結合之單株抗體(mAbs)的序列來製備。亦可使用/提供抗體之抗原結合區，諸如單鏈可變片段(scFv)、Fab及F(ab')
2片段。一「抗原結合區」是一抗體的任何片段，其能夠與該給定抗體對其具特異性的目標結合。
抗體通常包含六個互補決定區CDR；三者於重鏈可變(VH)區：HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，以及三者於輕鏈可變(VL)區：LC-CDR1、LC-CDR2及LC-CDR3。六個CDR一起定義抗體之對位(paratope)，其為抗體與目標抗原結合的部分。
VH區及VL區於每一CDR之任一側係包含框架區(FR)，其為CDR提供一支架。從N-端至C-端，VH區包含下列結構：N term-[HC-FR1]-[HC-CDR1]-[HC-FR2]-[HC-CDR2]-[HC-FR3]-[HC-CDR3]-[HC-FR4]-C term；且VL區包含下列結構：N term-[LC-FR1]-[LC-CDR1]-[LC-FR2]-[LC-CDR2]-[LC-FR3]-[LC-CDR3]-[LC-FR4]-C term。
存在若干用於定義抗體CDR及FR之不同慣例，諸如Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)、Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)中所說明者；及VBASE2，如Retter et al., Nucl. Acids Res. (2005) 33 (suppl 1): D671-D674中所說明。本文所述之抗體殖株之VH區及VL區的CDR及FR之定義係根據國際IMGT (ImMunoGeneTics)資訊系統(LeFranc et al., Nucleic Acids Res. (2015) 43 (Database issue):D413-22)，其使用Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. (2003) 27:55-77中所述之IMGT V-DOMAIN編碼規則。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一能夠與HER3結合之抗原結合分子的CDR。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一能夠與HER3結合之抗原結合分子的FR。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一能夠與HER3結合之抗原結合分子的CDR及FR。亦即，在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一能夠與HER3結合之抗原結合分子的VH區及VL區。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一VH區及一VL區，其係為或其係衍生自本文所述之一HER3-結合抗體殖株的VH/VL區(亦即，抗-HER3抗體殖株10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93、10D1、10A6、4-35-B2或4-35-B4；例如10D1_c89、10D1_c90或
10D1_c91；例如10D1_c89)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(1)至(10)中之一者的一VH區：
(1) (10D1衍生的) 併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之HC-CDR3，
或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(2) (10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c87、10D1_c92、10D1_c93) 併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：44的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之HC-CDR3，
或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(3) (10D1_c85v1、10D1_c85v2) 併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之HC-CDR3，
或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(4) (10D1_c85o1) 併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：49的胺基酸序列之HC-CDR3，
或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(5) (10D1_c85o2) 併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：50的胺基酸序列之HC-CDR3，
或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(6) (10D1_c89、10D1_c90) 併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：48的胺基酸序列之HC-CDR3，
或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(7) (10D1_c91) 併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：42的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：48的胺基酸序列之HC-CDR3，
或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(8) (10A6) 併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：158的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：159的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：160的胺基酸序列之HC-CDR3，
或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(9) (4-35-B2) 併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：128的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：129的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：130的胺基酸序列之HC-CDR3，
或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(10) (4-35-B4) 併含有下列CDR之一VH區：
具有SEQ ID NO：144的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：145的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：146的胺基酸序列之HC-CDR3，
或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(11)至(24)中之一者的一VH區：
(11) (10D1) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：55的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：58的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：69的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：73的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(12) (10D1_c75、10D1_c92) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：52的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：56的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：61的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：70的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(13) (10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：52的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：56的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：62的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：70的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(14) (10D1_c78v2) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：52的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：57的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：62的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：70的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(15) (10D1_11B) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：224的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：60的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：63的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：70的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(16) (10D1_c85v1) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：52的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：56的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：64的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：70的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(17) (10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：52的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：57的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：64的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：70的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(18) (10D1_c87、10D1_c93) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：52的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：56的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：65的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：70的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(19) (10D1_c89) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：53的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：59的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：66的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：71的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(20) (10D1_c90) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：54的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：59的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：67的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：71的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(21) (10D1_c91) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：53的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：59的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：68的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：72的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(22) (10A6) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：161的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：162的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：163的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：73的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(23) (4-35-B2) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：131的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：132的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：133的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：134的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(24) (4-35-B4) 併含有下列FR之一VH區：
具有SEQ ID NO：147的胺基酸序列之HC-FR1
具有SEQ ID NO：148的胺基酸序列之HC-FR2
具有SEQ ID NO：149的胺基酸序列之HC-FR3
具有SEQ ID NO：73的胺基酸序列之HC-FR4，
或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一VH區，該VH區包含根據以上(1)至(10)中之一者的CDR以及根據以上(11)至(24)中之一者的FR。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(25)至(41)中之一者的一VH區：
(25) 包含化如(1)之CDR以及如(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、(18)、(19)、(20)或(21)之FR的一VH區。
(26) 包含如(2)之CDR以及如(11)之FR的一VH區。
(27) 包含如(2)之CDR以及如(12)之FR的一VH區。
(28) 包含根據(2)之CDR以及根據(13)之FR的一VH區。
(29) 包含如(2)之CDR以及如(14)之FR的一VH區。
(30) 包含如(2)之CDR以及如(15)之FR的一VH區。
(31) 包含如(2)之CDR以及如(18)之FR的一VH區。
(32) 包含如(3)之CDR以及如(16)之FR的一VH區。
(33) 包含如(3)之CDR以及如(17)之FR的一VH區。
(34) 包含如(4)之CDR以及如(17)之FR的一VH區。
(35) 包含如(5)之CDR以及如(17)之FR的一VH區。
(36) 包含如(6)之CDR以及如(19)之FR的一VH區。
(37) 包含如(6)之CDR以及如(20)之FR的一VH區。
(38) 包含如(7)之CDR以及如(21)之FR的一VH區。
(39) 包含如(8)之CDR以及如(22)之FR的一VH區。
(40) 包含如(9)之CDR以及如(23)之FR的一VH區。
(41) 包含如(10)之CDR以及如(24)之FR的一VH區。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(42)至(61)中之一者的一VH區：
(42) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：24之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(43) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：25之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(44) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：26之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(45) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：27之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(46) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：28之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(47) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：29之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(48) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：30之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(49) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：31之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(50) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：32之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(51) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：33之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(52) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：34之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(53) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：35之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(54) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：36之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(55) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(56) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：38之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(57) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：39之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(58) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：40之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(59) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：127之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(60) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：143之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(61) 一VH區，其包含與SEQ ID NO：157之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(62)至(71)中之一者的一VL區：
(62) (10D1衍生的) 併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-CDR3；
或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(63) (10D1、10D1_c75、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c91、10D1_c93) 併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3；
或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(64) (10D1_c76) 併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：89的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3；
或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(65) (10D1_c77) 併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：90的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：96的胺基酸序列之LC-CDR3；
或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(66) (10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2) 併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：93的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3；
或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(67) (10D1_c90) 併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：97的胺基酸序列之LC-CDR3；
或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(68) (10D1_c92) 併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：98的胺基酸序列之LC-CDR3；
或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(69) (10A6) 併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：165的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：166的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：167的胺基酸序列之LC-CDR3；
或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(70) (4-35-B2) 併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：136的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：137的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：138的胺基酸序列之LC-CDR3；
或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(71) (4-35-B4) 併含有下列CDR之一VL區：
具有SEQ ID NO：151的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：152的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：153的胺基酸序列之LC-CDR3；
或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(72)至(86)中之一者的一VL區：
(72) (10D1) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：106的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：113的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：123的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：126的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(73) (10D1_c75) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：100的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：107的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：114的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：124的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(74) (10D1_c76) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：101的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：108的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：115的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：124的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(75) (10D1_c77) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：102的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：108的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：116的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：124的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(76) (10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：103的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：108的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：117的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：124的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(77) (10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：103的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：108的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：118的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：124的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(78) (10D1_c87) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：103的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：109的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：119的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：124的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(79) (10D1_c89) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：104的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：110的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：120的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：125的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(80) (10D1_c90) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：105的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：110的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：121的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：124的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(81) (10D1_c91) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：104的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：111的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：122的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：125的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(82) (10D1_c92) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：100的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：112的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：114的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：124的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(83) (10D1_c93) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：103的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：108的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：119的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：124的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(84) (10A6) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：168的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：169的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：170的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：142的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(85) (4-35-B2) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：139的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：140的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：141的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：142的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(86) (4-35-B4) 併含有下列FR之一VL區：
具有SEQ ID NO：154的胺基酸序列之LC-FR1
具有SEQ ID NO：155的胺基酸序列之LC-FR2
具有SEQ ID NO：156的胺基酸序列之LC-FR3
具有SEQ ID NO：142的胺基酸序列之LC-FR4，
或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4中之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一VL區，該VL區包含根據以上(62)至(71)中之一者的CDR以及根據以上(72)至(86)中之一者的FR。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(87)至(102)中之一者的一VL區：
(87) 包含如(62)之CDR以及如(72)、(73)、(74)、(75)、(76)、(77)、(78)、(79)、(80)、(81)、(82)或(83)之FR的一VL區。
(88) 包含如(63)之CDR以及如(72)之FR的一VL區。
(89) 包含如(63)之CDR以及如(73)之FR的一VL區。
(90) 包含如(63)之CDR以及如(76)之FR的一VL區。
(91) 包含如(63)之CDR以及如(78)之FR的一VL區。
(92) 包含如(63)之CDR以及如(79)之FR的一VL區。
(93) 包含如(63)之CDR以及如(81)之FR的一VL區。
(94) 包含如(63)之CDR以及如(83)之FR的一VL區。
(95) 包含如(64)之CDR以及如(74)之FR的一VL區。
(96) 包含如(65)之CDR以及如(75)之FR的一VL區。
(97) 包含如(66)之CDR以及如(77)之FR的一VL區。
(98) 包含如(67)之CDR以及如(80)之FR的一VL區。
(99) 包含如(68)之CDR以及如(82)之FR的一VL區。
(100) 包含如(69)之CDR以及如(84)之FR的一VL區。
(101) 包含如(70)之CDR以及如(85)之FR的一VL區。
(102) 包含如(71)之CDR以及如(86)之FR的一VL區。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含根據以下(103)至(119)中之一者的一VL區：
(103) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：74之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(104) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：75之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(105) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：76之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(106) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：77之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(107) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：78之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(108) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：79之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(109) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：80之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(110) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：81之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(111) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：82之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(112) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：83之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(113) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：84之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(114) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：85之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(115) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：86之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(116) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：87之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(117) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：135之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(118) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：150之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
(119) 一VL區，其包含與SEQ ID NO：164之胺基酸序列有至少70%的序列同一性的一胺基酸序列，更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含如以上(1)至(61)中之任一者之一VH區，以及如以上(62)至(119)中之任一者之一VL區。
在根據本發明之一或多個胺基酸係由另一個胺基酸取代的實施態樣中，該等取代可為例如根據下表之保留式取代。在一些實施態樣中，中間欄位同一塊內的胺基酸為經取代的。在一些實施態樣中，最右邊的欄位中同一行的胺基酸為經取代的：
| ALIPHATIC | 非極性 | G A P |
| I L V | ||
| 極性 - 不帶電 | C S T M | |
| N Q | ||
| 極性 - 帶電 | D E | |
| K R | ||
| AROMATIC | H F W Y |
在一些實施態樣中，取代可為功能上保留型。亦即，在一些實施態樣中，該取代可能不影響(或可能不實質影響)包含該取代的抗原結合分子的一或多種功能性質(例如，標靶結合)，其係與等效未經取代的分子相比。
一抗體之一抗原結合區的VH及VL區係一起構成Fv區。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係包含結合至HER3的一Fv區或由該Fv區組成。在一些實施態樣中，該Fv的VH及VL區係提供由一連接子區連結的單個多肽，亦即一單鏈Fv (scFv)。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一免疫球蛋白重鏈恆定序列的一或多個區。在一些實施態樣中，該免疫球蛋白重鏈恆定序列係為，或衍生自一IgG (例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA (例如，IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM之重鏈恆定序列。
在一些實施態樣中，該免疫球蛋白重鏈恆定序列為人類免疫球蛋白G1恆定(IGHG1；UniProt：P01857-1，v1；SEQ ID NO：171)。SEQ ID NO：171之位置1至98形成CH1區(SEQ ID NO：172)。SEQ ID NO：171之位置99至110形成CH1與CH2區之間的一鉸鏈區(SEQ ID NO：173)。SEQ ID NO：171之位置111至223形成CH2區(SEQ ID NO：174)。SEQ ID NO：171之位置224至330形成CH3區(SEQ ID NO：175)。
製備實例性抗原結合分子可使用pFUSE-CHIg-hG1，其於CH3區包含取代D356E、L358M (根據EU編號所編號的位置)。pFUSE-CHIg-hG1所編碼之CH3區的胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO：176中。將可以理解的是，CH3區可提供有根據本文所述之抗原結合分子的一Fc區之修飾的進一步取代。
在一些實施態樣中，一CH1區包含下列或由下列組成：SEQ ID NO：172的序列，或與SEQ ID NO：172的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性的一序列。在一些實施態樣中，一CH1-CH2鉸鏈區包含下列或由下列組成：SEQ ID NO：173的序列，或與SEQ ID NO：173的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性的一序列。在一些實施態樣中，一CH2區包含下列或由下列組成：SEQ ID NO：174的序列，或與SEQ ID NO：174的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性的一序列。在一些實施態樣中，一CH3區包含下列或由下列組成：SEQ ID NO：175或176的序列，或與SEQ ID NO：175或176的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性的一序列。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一免疫球蛋白輕鏈恆定序列之一或多個區。在一些實施態樣中，免疫球蛋白輕鏈恆定序列為人類免疫球蛋白κ恆定(IGKC；Cκ；UniProt：P01834-1，v2；SEQ ID NO：177)。在一些實施態樣中，免疫球蛋白輕鏈恆定序列為一人類免疫球蛋白λ恆定(IGLC；Cλ)，例如IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6或IGLC7。在一些實施態樣中，一CL區包含下列或由下列所組成：SEQ ID NO：177的序列，或與SEQ ID NO：177的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性的一序列。
一抗體之一抗原結合區的VL及輕鏈恆定(CL)區，以及VH區及重鏈恆定1 (CH1)區係一起構成Fab區。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fab區，其包含一VH、一CH1、一VL及一CL (例如，Cκ或Cλ)。在一些實施態樣中，該Fab區包含一包括一VH及一CH1之多肽(例如，一VH-CH1融合多肽)，以及一包括一VL及一CL之多肽(例如，一VL-CL融合多肽)。在一些實施態樣中，該Fab區包含一包括一VH及一CL之多肽(例如，一VH-CL融合多肽)，以及一包括一VL及一CH之多肽(例如，一VL-CH1融合多肽)；亦即在一些實施態樣中，該Fab區為一CrossFab區。在一些實施態樣中，該Fab或CrossFab之VH、CH1、VL及CL區係提供為由連接子區連結的單一多肽，亦即為一單鏈Fab (scFab)或一單鏈CrossFab (scCrossFab)。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含與HER3結合之一Fab區或由該區組成。
在一些實施態樣中，本文所述之抗原結合分子包含與HER3結合之一整個抗體或由該抗體組成。於本文使用時，「整個抗體」係指具有與一免疫球蛋白(Ig)之結構實質相似之一結構的一抗體。不同種類的免疫球蛋白及其結構係說明於例如，Schroeder and Cavacini J Allergy Clin Immunol. (2010) 125(202): S41-S52中，其全文在此藉由參照併入本文中。
類型G的免疫球蛋白(亦即，IgG)為~150 kDa醣蛋白，其包含兩個重鏈及兩個輕鏈。從N-至C-端，重鏈包含一VH接著為包含三個恆定域 (CH1、CH2及CH3)之一重鏈恆定區，並且相似地，輕鏈包含一VL接著為一CL。取決於重鏈，免疫球蛋白可分類為IgG (例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA (例如，IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM。輕鏈可為κ或λ。
在一些實施態樣中，本文所述之抗原結合分子包含下列或由下列組成：一種與HER3結合之IgG (例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA (例如，IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子對於HER3為至少單價的結合。結合價係指對於一給定抗原決定位，一抗原結合分子中之結合位點的數目。據此，在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含至少一個HER3結合位點。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含多於一之HER3結合位點，例如2、3或4個結合位點。該等結合位點可為相同或不同的。在一些實施態樣中，該抗原結合分子對於HER3為例如二價、三價或四價的。
本發明之態樣係有關於多特異性抗原結合分子。按「多特異性」其係意謂該抗原結合分子顯現出特異性結合多於一個的目標。在一些實施態樣中，該抗原結合分子是雙特異性的抗原結合分子。在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含至少二個不同的抗原結合域(亦即，例如包含非同一的VH及VL的至少二個抗原結合域)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子結合至HER3及另一目標(例如，HER3以外的一抗原)，所以至少是雙特異性的。用語「雙特異性」意指該抗原結合分子能對至少兩種不同的抗原決定位特異性地結合。
將可理解的是，本發明之抗原結合分子(例如，多特異性抗原結合分子)可包含能夠結合至抗原結合分子對其具特異性的目標的抗原結合分子。舉例而言，能夠結合至HER3及HER3以外的一抗原之一抗原結合分子可包含：(i)能夠與HER3結合的一抗原結合分子，以及(ii)能夠與HER3以外的一抗原結合的一抗原結合分子。
亦將可理解的是，本發明之抗原結合分子(例如，一多特異性抗原結合分子)可包含能夠結合至抗原結合分子對其具特異性的目標的抗原結合多肽或抗原結合多肽複合物。舉例而言，本發明之一抗原結合分子可包含：例如(i)能夠與HER3結合的一抗原結合多肽複合物，其包含一輕鏈多肽(包含結構VL-CL)及一重鏈多肽(包含結構VH-CH1-CH2-CH3)，以及(ii)能與HER3以外的一抗原結合的一抗原結合多肽複合物，其包含一輕鏈多肽(包含結構VL-CL)及一重鏈多肽(包含結構VH-CH1-CH2-CH3)。
在一些實施態樣中，一較大的抗原結合分子(例如，一多特異性抗原結合分子)之一組分抗原結合分子，可稱為該較大的抗原結合分子之例如一「抗原結合域」或「抗原結合區」。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含能夠與HER3結合的一抗原結合分子，以及能夠與一HER3以外的抗原結合的一抗原結合分子。在一些實施態樣中，該HER3以外的抗原為一免疫細胞表面分子。在一些實施態樣中，該HER3以外的抗原為一癌細胞抗原。在一些實施態樣中，該HER3以外的抗原為一受體分子，例如一細胞表面受體。在一些實施態樣中，HER3以外的抗原為一細胞訊息傳導分子，例如一細胞激素、趨化激素、干擾素、介白素或淋巴激素。在一些實施態樣中，該HER3以外的抗原為一生長因子或一荷爾蒙。
一癌細胞抗原為由一癌細胞所表現或過度表現的一抗原。一癌細胞抗原可為任何胜肽/多肽、醣蛋白、脂蛋白、聚醣、醣脂、脂質，或其片段。一癌細胞抗原之表現可與一癌症相關聯。一癌細胞抗原可由一癌細胞所異常表現(例如，該癌細胞抗原可異常定位所表現)，或可由一癌細胞以一異常結構所表現。一癌細胞抗原可能能夠引發一免疫反應。在一些實施態樣中，該抗原係在癌細胞之細胞表面表現(亦即，該癌細胞抗原為一癌細胞表面抗原)。在一些實施態樣中，本文所述之抗原結合分子所結合之抗原的部份，係顯示於癌細胞之外表面上(亦即，細胞外的)。癌細胞抗原可為一癌症相關聯抗原。在一些實施態樣中，癌細胞抗原為其表現關聯於一癌症之發展、進程或症狀嚴重性的抗原。該癌症相關聯之抗原可能與該癌症之病因或病理相關聯，或可能由於該癌症導致異常表現。在一些實施態樣中，該癌細胞抗原為一種其表現係為一癌症之細胞所向上調節(例如，於RNA及/或蛋白位準)的抗原，例如與可比較之非癌細胞(例如，衍生自相同組織/細胞類型的非癌細胞)表現的位準相比。在一些實施態樣中，癌症相關聯抗原可能優先由癌細胞表現，且可比較的非癌細胞(例如，衍生自相同組織/細胞類型的非癌細胞)不表現。在一些實施態樣中，該癌症相關聯抗原可為一突變致癌基因或突變抑瘤基因的產物。在一些實施態樣中，癌症相關聯抗原可為一過度表現的細胞蛋白質之產物、一致癌病毒生產的一癌抗原、一致癌胎兒抗原或一細胞表面醣脂或醣蛋白。
在一些實施態樣中，HER3以外的抗原為一HER3-相關聯癌症的細胞所表現的一抗原。一HER3-相關聯癌症可為表現HER3的一癌症(例如，在細胞表面表現HER3蛋白)；此等癌症可稱為「HER3-陽性」癌症。HER3-相關聯癌症包括HER3基因/蛋白質表現就癌症之發作、發展、進程或症狀嚴重性及/或轉移為一風險因子，及/或與其等有正相關聯的癌症。HER3-相關聯癌症係包括在Zhang et al., Acta Biochimica et Biophysica Sinica (2016) 48(1):39–48及Sithanandam and Anderson Cancer Gene Ther (2008) 15(7):413-448中所述的那些，其兩者在此藉由參照全文併入本文。在一些實施態樣中，HER3-相關聯癌症可為一肺癌(例如，NSCLC)、黑色素瘤、乳癌、胰臟癌、前列腺癌、卵巢癌、胃癌(gastric cancer)、結腸癌或口腔癌。
一免疫細胞表面分子可為在一免疫細胞之細胞表面處或上表現之任何胜肽/多肽、醣蛋白、脂蛋白、聚醣、醣脂、脂質或其片段。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子所結合之免疫細胞表面分子的部分，係位於免疫細胞之外表面上(亦即，細胞外的)。免疫細胞表面分子可表現於任何免疫細胞之細胞表面。在一些實施態樣中，免疫細胞可為造血來源的一細胞，例如一嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突細胞、淋巴球或單核球。淋巴球可為例如，一T細胞、B細胞、自然殺手(NK)細胞、NKT細胞或先天性淋巴細胞(ILC)，或其之一前驅細胞(例如，一胸腺細胞或前B細胞(pre-B cell))。在一些實施態樣中，免疫細胞表面分子可為一共刺激分子(例如，CD28、OX40、4-1BB、ICOS或CD27)或其配體。在一些實施態樣中，免疫細胞表面分子可為一免疫查核點分子(例如，PD-1、CTLA-4、LAG-3、TIM-3、VISTA、TIGIT或BTLA)或其配體。
本發明之多特異性抗原結合分子可呈任何合適之型式提供，諸如Brinkmann and Kontermann MAbs (2017) 9(2): 182-212中所述的那些型式，其在此藉由參照全文併入本文。適合之型式包括Brinkmann and Kontermann MAbs (2017) 9(2): 182-212之圖2中所示之那些：抗體共軛物，例如IgG
2、F(ab')
2或CovX-Body；IgG或IgG樣分子，例如IgG、嵌合IgG、κλ-體共同HC；CH1/CL融合蛋白，例如scFv2-CH1/CL、VHH2-CH1/CL；「唯可變域」雙特異性抗原結合分子，例如串連(tandem) scFv (taFV)、三聯體(triplebody)、雙聯體(diabody)(Db)、dsDb、Db(kih)、DART、scDB、dsFv-dsFv、tandAbs、三頭(triple head)、串連dAb/VHH、四價dAb.VHH；非Ig融合蛋白，例如scFv
2-白蛋白、scDb-白蛋白、taFv-白蛋白、taFv-毒素、迷你抗體(miniantibody)、DNL-Fab
2、DNL-Fab
2-scFv、DNL-Fab
2-IgG-細胞激素
2、ImmTAC (TCR-scFv)；經修飾的Fc及CH3融合蛋白，例如scFv-Fc(kih)、scFv-Fc(CH3電荷對(charge pair))、scFv-Fc (EW-RVT)、scFv-fc (HA-TF)、scFv-Fc (SEEDbody)、taFv-Fc(kih)、scFv-Fc(kih)-Fv、Fab-Fc(kih)-scFv、Fab-scFv-Fc(kih)、Fab-scFv-Fc(BEAT)、Fab-scFv-Fc(SEEDbody)、DART-Fc、scFv-CH3(kih)、TriFab；Fc融合體，例如二-雙聯體(diabody)、scDb-Fc、taFv-Fc、scFv-Fc-scFv、HCAb-VHH、Fab-scFv-Fc、scFv
4-Ig、scFv
2-Fcab；CH3融合體，例如Dia-雙聯體、scDb-CH3；IgE/IgM CH2融合體，例如scFv-EHD2-scFv、scFvMHD2-scFv；Fab融合蛋白，例如Fab-scFv (二擬抗體(bibody))、Fab-scFv
2(三擬抗體(tribody))、Fab-Fv、Fab-dsFv、Fab-VHH、正交的Fab-Fab；非Ig融合蛋白，例如DNL-Fab
3、DNL-Fab
2-scFv、DNL-Fab
2-IgG-細胞激素
2；不對稱IgG或IgG樣分子，例如IgG(kih)、IgG(kih)共同LC、ZW1 IgG共同LC、Biclonics共同LC、CrossMab、CrossMab(kih)、scFab-IgG(kih)、Fab-scFab-IgG(kih)、正交的Fab IgG(kih)、DuetMab、CH3電荷對+CH1/CL電荷對、鉸鏈/CH3電荷對、SEED-體、Duobody、四合一-CrossMab(kih)、LUZ-Y共同LC；LUZ-Y scFab-IgG、FcFc*；附加及Fc-經修飾的IgG，例如IgG(kih)-Fv、IgG HA-TF-Fv、IgG(kih)scFab、scFab-Fc(kih)-scFv2、scFab-Fc(kih)-scFv、半DVD-Ig、DVI-Ig(四合一)、CrossMab-Fab；經修飾的Fc及CH3融合蛋白，例如Fab-Fc(kih)-scFv、Fab-scFv-Fc(kih)、Fab-scFv-Fc(BEAT)、Fab-scFv-Fc-SEEDbody、TriFab；附加的IgG - HC融合體，例如IgG-HC、scFv、IgG-dAb、IgG-taFV、IgG-CrossFab、IgG-正交的Fab、IgG-(CαCβ) Fab、scFv-HC-IgG、串連Fab-IgG (正交的Fab) Fab-IgG(CαCβ Fab)、Fab-IgG(CR3)、Fab-鉸鏈-IgG(CR3)；附加的IgG - LC融合體，例如IgG-scFv(LC)、scFv(LC)-IgG、dAb-IgG；附加的IgG - Hc及LC融合體，例如DVD-Ig、TVD-Ig、CODV-Ig、scFv
4-IgG、Zybody；Fc融合體，例如Fab-scFv-Fc、scFv
4-Ig；F(ab')2融合體，例如F(ab')
2-scFv
2；CH1/CL融合蛋白，例如scFv
2-CH1-鉸鏈/CL；經修飾的IgG，例如DAF (二合一-IgG)、DutaMab、Mab
2；及非Ig融合體，例如DNL-Fab
4-IgG。
熟習此藝者能設計及製備雙特異性抗原結合分子。生產雙特異性抗原結合分子的方法包括例如，用可還原的雙硫或非可還原的硫醚鍵進行抗原結合分子或抗體片段之化學交聯作用，例如，如Segal and Bast, 2001. Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1–2.13.16中所述者，其在此藉由參照全文併入本文。舉例而言，可以使用N-琥珀醯亞胺基-3-(-2-吡啶基二硫基)-丙酸酯(SPDP)、經由鉸鏈區SH-基團予以化學交聯例如Fab片段，以生成雙硫鍵聯的雙特異性F(ab)
2異質二聚體。
其他生產雙特異性抗原結合分子的方法包括融合生產抗體的融合瘤，例如用聚乙二醇來生產能分泌雙特異性抗體的四源雜交瘤細胞(quadroma cell)，例如，如D. M. and Bast, B. J. 2001. Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1–2.13.16中所述者。
根據本發明之雙特異性抗原結合分子亦可從例如一編碼抗原結合分子之多肽的核酸建構物予以表現而重組地生產，例如，如Antibody Engineering: Methods and Protocols, Second Edition (Humana Press, 2012), at Chapter 40: Production of Bispecific Antigen-binding molecules: Diabodies and Tandem scFv (Hornig and Färber-Schwarz), 或者French, How to make bispecific antigen-binding molecules, Methods Mol. Med. 2000; 40:333-339中所述者，兩者之全部內容在此藉由參照併入本文。舉例而言，編碼二個抗原結合片段之輕及重鏈可變域(亦即，能夠結合HER3之抗原結合片段的輕及重鏈可變域，以及能夠結合另一目標蛋白之抗原結合片段的輕及重鏈可變域)、且在抗原結合片段之間包括編碼一合適的連接子或二聚化域之序列的一DNA建構物，係可藉由分子選殖技術予以製備。重組型雙特異性抗體之後能藉由於一合適的宿主細胞(例如，一哺乳動物宿主細胞)內之建構物表現(例如，在活體外)來生產，以及表現的重組型雙特異性抗體接著可任擇地予以純化。
Fc區
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區。
在IgG、IgA及IgD同型中，一Fc區包含有來自一多肽的CH2及CH3區，以及來自另一多肽的CH2及CH3區。來自該二多肽的CH2及CH3區係一起形成Fc區。在IgM及IgE同型中，Fc區含有三恆定域(CH2、CH3及CH4)，且來自該二多肽的CH2至CH4係一起形成該Fc區。
在根據本揭露內容的各種態樣之較佳實施態樣中，一Fc區包含二多肽，每一多肽包含一CH2區及一CH3區。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含在CH2及CH3區中之一者或多者中的修飾，促進Fc區的締合。一抗原結合分子之組成多肽的重組型共同表現以及隨後的締合，係導致若干可能的組合。在重組型生產上為了改良抗原結合分子中所欲多肽組合的產量，於Fc區導入修飾而促進所欲重鏈多肽組合的締合是有利的。修飾可促進例如不同的多肽鏈之CH2及/或CH3區之間的疏水性及/或靜電交互作用。合適的修飾係例如於Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394說明，其在此藉由參照全文併入本文。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含根據下列型式中之一者之於Fc區之CH3區的成對取代，如Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394之表1所示：KiH、KiH
s-s、HA-TF、ZW1、7.8.60、DD-KK、EW-RVT、EW-RVT
s-s、SEED或A107。
在一些實施態樣中，Fc區包含「圓頭-入-洞(knob-into-hole)」或「KiH」修飾，例如，如於例如US 7,695,936及Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)中所述。在此等實施態樣中，Fc區的CH3區中之一者包含一「圓頭」修飾，且另一CH3區包含一「洞」修飾。「圓頭」及「洞」修飾定位於各別CH3區內，使得「圓頭」可定位於「洞」中，以便促進多肽之異質二聚化(且抑制同質二聚化)且/或穩定異質二聚體。圓頭係藉由以具有較大側鏈的胺基酸(例如，酪胺酸或色胺酸)來取代那些具有較小鏈者來建構。洞係藉由以具有較小側鏈的胺基酸(例如，丙胺酸或蘇胺酸)來取代那些具有較大側鏈者來生成。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子之Fc區的CH3區中之一者包含取代(本文Fc、CH2及CH3區中位置/取代的編號係根據如Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991中所述的EU編號系統) T366W，且Fc區的另一CH3區包含取代Y407V。在一些實施態樣中，該抗原結合分子之Fc區的CH3區中之一者包含取代T366W，且Fc區的另一CH3區包含取代T366S及L368A。在一些實施態樣中，該抗原結合分子之Fc區的CH3區中之一者包含取代T366W，且Fc區的另一CH3區包含取代Y407V、T366S及L368A。
在一些實施態樣中，Fc區包含如於例如WO 2014/131694 A1中所述的「DD-KK」修飾。在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代K392D及K409D，且Fc區之另一CH3區包含取代E356K及D399K。該等修飾促進CH3區之間的靜電交互作用。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含如Labrijn et al., Proc Natl Acad Sci U S A. (2013) 110(13):5145-50中所述予以修飾的一Fc區，稱為「Duobody」型式。在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代K409R，且Fc區之另一CH3區包含取代K405L。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含如Strop et al., J Mol Biol. (2012) 420(3):204-19中所述的「EEE-RRR」修飾。在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代D221E、P228E及L368E，且Fc區之另一CH3區包含取代D221R、P228R及K409R。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含Choi et al., Mol Cancer Ther (2013) 12(12):2748–59中所述的「EW-RVT」修飾。在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代K360E及K409W，且Fc區之另一CH3區包含取代Q347R、D399V及F405T。
在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代S354C，且Fc區之另一CH3區包含取代Y349C。導入這些半胱胺酸殘基係導致Fc區的二個CH3區之間形成雙硫橋，進一步穩定異質二聚體(Carter (2001), J Immunol Methods 248, 7-15)。
在一些實施態樣中，Fc區包含「KiH
S-S」修飾。在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代T366W及S354C，且Fc區之另一CH3區包含取代T366S、L368A、Y407V及Y349C。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含如Davis et al., Protein Eng Des Sel (2010) 23(4):195–202中所述的「SEED」修飾，其中人類IgG1 CH3及IgA CH3的β-股節段被交換。
在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代S364H及F405A，且Fc區之另一CH3區包含取代Y349T及T394F (參見例如Moore et al., MAbs (2011) 3(6):546–57)。
在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代T350V、L351Y、F405A及Y407V，且Fc區之另一CH3區包含取代T350V、T366L、K392L及T394W (參見例如Von Kreudenstein et al., MAbs (2013) 5(5):646–54)。
在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代K360D、D399M及Y407A，且Fc區之另一CH3區包含取代E345R、Q347R、T366V及K409V (參見例如Leaver-Fay et al., Structure (2016) 24(4):641–51)。
在一些實施態樣中，CH3區中之一者包含取代K370E及K409W，且Fc區之另一CH3區包含取代E357N、D399V及F405T (參見例如Choi et al., PLoS One (2015) 10(12):e0145349)。
Fc媒介的功能包括Fc受體結合、抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞媒介的吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、形成膜攻擊複合物(MAC)、細胞去顆粒作用、生產細胞激素及/或趨化激素，以及抗原加工與呈現。
影響Fc媒介的功能之抗體Fc區之修飾係為本技藝所已知，諸如那些例如於Wang et al., Protein Cell (2018) 9(1):63-73中所述者，其在此藉由參照全文併入本文。已知會影響抗體作用功能的實例性Fc區修飾係摘要於Wang et al., Protein Cell (2018) 9(1):63-73之表1中。
Stavenhagen et al. Cancer Res. (2007)中說明取代F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L的組合可增強對FcγRIIIa的結合，且藉此提升ADCC。Lazar et al., Proc Natl Acad Sci USA. (2006)103:4005–4010中說明取代組合S239D/I332E或S239D/I332E/A330L的組合可增強對FcγRIIIa的結合，且藉此增強ADCC。亦說明取代S239D/I332E/A330L的組合可減少對FcγRIIb的結合，且藉此增強ADCC。Shields et al., J Biol Chem. (2001) 276:6591–6604中說明取代S298A/E333A/K334A的組合可增強對FcγRIIIa的結合，且藉此增強ADCC。Mimoto et al., MAbs. (2013): 5:229–236中說明一重鏈中取代L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A的組合及另一重鏈中取代D270E/K326D/A330M/K334E的組合可增強對FcγRIIIa的結合，且藉此增強ADCC。Richards et al., Mol Cancer Ther. (2008) 7:2517–2527中說明取代G236A/S239D/I332E的組合可增強對FcγRIIa的結合及增強對FcγRIIIa的結合，且藉此增強ADCP。
Idusogie et al. J Immunol. (2001) 166(4):2571-5中說明取代K326W/E333S的組合可增強對C1q的結合，且藉此增強CDC。主取代S267E/H268F/S324T的組合係於Moore et al. MAbs. (2010) 2(2):181-9中說明為增強對C1q的結合，且藉此增強CDC。Natsume et al., Cancer Res. (2008) 68(10):3863-72中所說明之取代的組合，據報導會增強對C1q的結合，且藉此增強CDC。取代E345R/E430G/S440Y的組合係於Diebolder et al. Science (2014) 343(6176):1260-3中說明為增強六聚合作用，且藉此增強CDC。
Dall’Acqua et al. J Immunol. (2002) 169:5171–5180中說明取代M252Y/S254T/T256E的組合可增強於pH 6.0對FcRn的結合，且藉此增強抗原結合分子半生期。Zalevsky et al. Nat Biotechnol. (2010) 28:157–159中說明取代M428L/N434S的組合可增強於pH 6.0對FcRn的結合，且藉此增強抗原結合分子半生期。
在本文說明一重鏈恆定區/Fc區/CH2-CH3區/CH2區/CH3區為包含「對應於」參考位置/取代的位置/取代的情況，同源重鏈恆定區/Fc區/CH2-CH3區/CH2區/CH3區中之等效位置/取代係可被思及。
在說明一Fc區為包含特定的位置/取代的情況，位置/取代可存在於一起形成Fc區之多肽鏈的一或兩者中。
除非另有指明，否則於本文中位置係指人類免疫球蛋白恆定區胺基酸序列根據如下列所述之EU編號系統所編號的位置：Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991。作為例示，人類IgG1中之取代L242C及K334C係對應於根據SEQ ID NO：171所編號之人類IgG1恆定區之位置125之L＞C取代、以及位置217之K＞C取代。
同源重鏈恆定區為包含一胺基酸序列之重鏈恆定區，該胺基酸序列與人類IgG1的重鏈恆定區(亦即，SEQ ID NO：171中所示之胺基酸序列)有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。同源Fc區為包含有多肽之Fc區，該等多肽包含一胺基酸序列，其與人類IgG1的CH2-CH3區(亦即，SEQ ID NO：174及175中所示之胺基酸序列)有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。同源CH2區為包含一胺基酸序列之CH2區，該胺基酸序列與人類IgG1的CH2區(亦即，SEQ ID NO：174中所示之胺基酸序列)有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。同源CH3區為包含一胺基酸序列之CH3區，該胺基酸序列與人類IgG1的CH3區(亦即，SEQ ID NO：175中所示之胺基酸序列)有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
對應於人類IgG1中所識別位置的對應位置可藉由序列排比來識別，其可例如使用序列排比軟體，諸如ClustalOmega (Söding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)來施行。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含修飾以增強一Fc-媒介的功能。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強ADCC。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強ADCP。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強CDC。一種包含包括會增強一Fc-媒介的功能(例如，ADCC、ADCP、CDC)之修飾的一Fc區之抗原結合分子，與包括對應的未修飾的Fc區之抗原結合分子相比，會誘發增高位準的相關作用功能。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含修飾以增強對一或多個Fc受體(例如，FcγRIIa、FcγRIIIa)的親和力。增強對Fc受體之親和力的修飾係可增強Fc媒介的作用功能，諸如抗體依賴型細胞細胞毒性(ADCC)及/或抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含修飾以降低對C1q的親和力；此等修飾降低補體依賴型細胞毒性(CDC)，其可為所期望的。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含修飾以增強六聚體的形成。能增強對一或多個Fc受體之親和力、降低對C1q之親和力及/或增強六聚體形成之Fc區的修飾，係說明於例如Saxena and Wu Front Immunol. (2016) 7:580中，其在此藉由參照全文併入本文。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，該Fc區包含CH2/CH3，其包含在Saxena and Wu Front Immunol. (2016) 7:580之表1中所示的一或多個取代。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc，其包含修飾以增強與一Fc受體的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強與一Fcγ受體的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強與FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb中之一或多者的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強與FcγRIIIa的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強與FcγRIIa的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強與FcγRIIb的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強與FcRn的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強與一補體蛋白的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強或降低與C1q的結合。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以促進抗原結合分子之六聚合作用。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增加抗原結合分子半生期。在一些實施態樣中，該Fc區包含修飾以增強共接合(co-engagement)。
在本說明書中，一「Fcγ受體」可來自任何物種，且包括來自任何物種之同功異型體、片段、變異體(包括突變體)或同源物。相似地，「FcγRI」、「FcγRIIa」、「FcγRIIb」、「FcγRIIc」、「FcγRIIIa」及「FcγRIIIb」分別指來自任何物種之FcγRI/FcγRIIa/FcγRIIb/FcγRIIc/FcγRIIIa/FcγRIIIb，且包括來自任何物種之同功異型體、片段、變異體(包括突變體)或同源物。人類有六個不同類別的Fc γ受體(括號內顯示小鼠異種同源物)：FcγRI (mFcγRI)、FcγRIIa (mFcγRIII)、FcγRIIb (mFcγRIIb)、FcγRIIc、FcγRIIIa (mFcγRIV)及FcγRIIIb。
變異體Fc γ受體包括例如人類FcγRIIIa的158V及158F多型體以及人類FcγRIIa的167H及167R多型體。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區或一CH2-CH3區，其包含)下列中之一或多(例如1、2、3、4、5、6、7或8)者：C於對應於位置242的位置處；C於對應於位置334的位置處；A於對應於位置236的位置處；D於對應於位置239的位置處；E於對應於位置332的位置處；L於對應於位置330的位置處；K於對應於位置345的位置處；以及G於對應於位置430的位置處。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區或一CH2-CH3區，其包含)下列取代(或對應取代)中之一或多(例如1、2、3、4、5、6、7或8)者：L242C、K334C、G236A、S239D、I332E、A330L、E345K及E430G。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一C於對應於位置242的位置處。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一C於對應於位置334的位置處。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一C於對應於位置242的位置處以及一C於對應於位置334的位置處。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一A於對應於位置236的位置處。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一D於對應於位置239的位置處。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一A於對應於位置236的位置處以及一D於對應於位置239的位置處。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一E於對應於位置332的位置處。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一A於對應於位置236的位置處、一D於對應於位置239的位置處以及一E於對應於位置332的位置處。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一L於對應於位置330的位置處。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一A於對應於位置236的位置處、一D於對應於位置239的位置處、一E於對應於位置332的位置處以及一L於對應於位置330的位置處。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH3區，其包有)一K於對應於位置345的位置處。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH3區，其包含)一G於對應於位置430的位置處。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含有)一K於對應於位置345的位置處以及一G於對應於位置430的位置處。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一C於對應於位置242的位置處、一C於對應於位置334的位置處、一A於對應於位置236的位置處、以及一D於對應於位置239的位置處。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一C於對應於位置242的位置處、一C於對應於位置334的位置處、一A於對應於位置236的位置處、一D於對應於位置239的位置處、以及一E於對應於位置332的位置處。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)一C於對應於位置242的位置處、一C於對應於位置334的位置處、一A於對應於位置236的位置處、一D於對應於位置239的位置處、一E於對應於位置332的位置處、以及一L於對應於位置330的位置處。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區域或一CH2-CH3區，其包含)一C於對應於位置242的位置處、一C於對應於位置334的位置處、一K於對應於位置345的位置處、以及一G於對應於位置430的位置處。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代L242C (或一等效取代)。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代K334C (或一等效取代)。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代L242C (或一等效取代)及取代K334C (或一等效取代)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代G236A (或一等效取代)。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代S239D (或一等效取代)。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代G236A (或一等效取代)及取代S239D (或一等效取代)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代I332E (或一等效取代)。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代G236A (或一等效取代)、取代S239D (或一等效取代)及取代I332E (或一等效取代)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代A330L (或一等效取代)。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代G236A (或一等效取代)、取代S239D (或一等效取代)、取代I332E (或一等效取代)及取代A330L (或一等效取代)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH3區，其包含)取代E345K (或一等效取代)。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH3區，其包含)取代E430G (或一等效取代)。在一些實施態樣中，該Fc區包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代E345K (或一等效取代)及取代E430G (或一等效取代)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代L242C (或一等效取代)、取代K334C (或一等效取代)、取代G236A (或一等效取代)、及取代S239D (或一等效取代)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代L242C (或一等效取代)、取代K334C (或一等效取代)、取代G236A (或一等效取代)、取代S239D (或一等效取代)、以及取代I332E (或一等效取代)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區、一CH2-CH3區或一CH2區，其包含)取代L242C (或一等效取代)、取代K334C (或一等效取代)、取代G236A (或一等效取代)、取代S239D (或一等效取代)、取代I332E (或一等效取代)、以及取代A330L (或一等效取代)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區或一CH2-CH3區，其包含)取代L242C (或一等效取代)、取代K334C (或一等效取代)、取代E345K (或一等效取代)、以及取代E430G (或一等效取代)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區或一CH2-CH3區，其包含)下列中之一或多者(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12)：L於對應於位置243的位置處、P於對應於位置292的位置處、L於對應於位置300的位置處、I於對應於位置305的位置處及L於對應於位置396的位置處；D於對應於位置239的位置處及E於對應於位置332的位置處；D於對應於位置239的位置處、E於對應於位置332的位置處及L於對應於位置330的位置處；A於對應於位置298的位置處、A於對應於位置333的位置處及A於對應於位置334的位置處；Y於對應於位置234的位置處、Q於對應於位置235的位置處、W於對應於位置236的位置處、M於對應於位置239的位置處、D於對應於位置268的位置處、E於對應於位置270的位置處及A於對應於位置298的位置處；E於對應於位置270的位置處、D於對應於位置326的位置處、M於對應於位置330的位置處及E於對應於位置334的位置處；A於對應於位置236的位置處、D於對應於位置239的位置處及E於對應於位置332的位置處；W於對應於位置326的位置處及S於對應於位置333的位置處；E於對應於位置267的位置處、F於對應於位置268的位置處及T於對應於位置324的位置處；R於對應於位置345的位置處、G於對應於位置430的位置處及Y於對應於位置440的位置處；Y於對應於位置252的位置處、T於對應於位置254的位置處及E於對應於位置256的位置處；及L於對應於位置428的位置處及S於對應於位置434的位置處。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一Fc區，其包含(例如，包含一或多個多肽，其包含一重鏈恆定區或一CH2-CH3區，其包含)下列取代(或對應取代)組合之一或多(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12)者：F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L；S239D/I332E；S239D/I332E/A330L；S298A/E333A/K334A；L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A；D270E/K326D/A330M/K334E；G236A/S239D/I332E；K326W/E333S；S267E/H268F/S324T；E345R/E430G/S440Y；M252Y/S254T/T256E；及M428L/N434S.。
多肽
本發明亦提供抗原結合分子之多肽組成。該多肽可以單離或實質純化之形式提供。
本發明之抗原結合分子可為或可包含多肽之一複合物。
本說明書中，在一多肽包含多於一域或區之情況，將被理解成有複數域/區係較佳存在相同的多肽鏈中。亦即，包含多於一域或區之多肽係為包含該等域/區之一融合多肽。
在一些實施態樣中，根據本發明之一多肽係包含如本文所述之一VH或由其組成。在一些實施態樣中，根據本發明之一多肽係包含如本文所述之一VL或由其組成。
在一些實施態樣中，該多肽額外包含一或多個抗體重鏈恆定區(CH)。在一些實施態樣中，該多肽額外包含一或多個抗體輕鏈恆定區(CL)。在一些實施態樣中，該多肽包含一免疫球蛋白(Ig)之一CH1、CH2區及/或一CH3區。
在一些實施態樣中，該多肽包含一免疫球蛋白重鏈恆定序列的一或多個區。在一些實施態樣中，該多肽包含如本文所述之一CH1區。在一些實施態樣中，該多肽包含如本文所述之一CH1-CH2鉸鏈區。在一些實施態樣中，該多肽包含如本文所述之一CH2區。在一些實施態樣中，該多肽包含如本文所述之一CH3區。在一些實施態樣中，該多肽包含如本文所述之一CH2-CH3區。
在一些實施態樣中，該多肽包含一CH3區，其包含下列胺基酸取代/胺基酸取代組合中之任一者(顯示於例如Ha et al., Front. Immnol (2016) 7:394之表1中，其藉由參照併入上文中)：T366W；T366S、L368A及Y407V；T366W及S354C；T366S、L368A、Y407V及Y349C；S364H及F405A；Y349T及T394F；T350V、L351Y、F405A及Y407V；T350V、T366L、K392L及T394W；K360D、D399M及Y407A；E345R、Q347R、T366V及K409V；K409D及K392D；D399K及E356K；K360E及K409W；Q347R、D399V及F405T；K360E、K409W及Y349C；Q347R、D399V、F405T及S354C；K370E及K409W；以及E357N、D399V及F405T。
在一些實施態樣中，該多肽之CH2及/或CH3區係包含一或多個胺基酸取代，用於促進該多肽與包含一CH2及/或CH3區之另一多肽的締合。
在一些實施態樣中，該多肽包含一免疫球蛋白輕鏈恆定序列之一或多個區。在一些實施態樣中，該多肽包含如本文所述之一CL區。
在一些實施態樣中，本發明之多肽包含如下列中之一者從N-至C-端的一結構：
(i) VH
(ii) VL
(iii) VH-CH1
(iv) VL-CL
(v) VL-CH1
(vi) VH-CL
(vii) VH-CH1-CH2-CH3
(viii) VL-CL-CH2-CH3
(ix) VL-CH1-CH2-CH3
(x) VH-CL-CH2-CH3
本發明亦提供包含本發明之多肽的抗原結合分子。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含下列多肽組合中之一者：
(A) VH + VL
(B) VH-CH1 + VL-CL
(C) VL-CH1 + VH-CL
(D) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL
(E) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1
(F) VL-CH1-CH2-CH3 + VH-CL
(G) VL-CL-CH2-CH3 + VH-CH1
(H) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL-CH2-CH3
(I) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1-CH2-CH3
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含多於一者的以上(A)至(I)中所示組合的一多肽。舉例而言，參照上述(D)，在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含二個包含結構VH-CH1-CH2-CH3的多肽，以及二個包含結構VL-CL的多肽。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子包含下列多肽組合中之一者：
(J) VH (抗-HER3) + VL (抗-HER3)
(K) VH (抗-HER3)-CH1 + VL (抗-HER3)-CL
(L) VL (抗-HER3)-CH1 + VH (抗-HER3)-CL
(M) VH (抗-HER3)-CH1-CH2-CH3 + VL (抗-HER3)-CL
(N) VH (抗-HER3)-CL-CH2-CH3 + VL (抗-HER3)-CH1
(O) VL (抗-HER3)-CH1-CH2-CH3 + VH (抗-HER3)-CL
(P) VL (抗-HER3)-CL-CH2-CH3 + VH (抗-HER3)-CH1
(Q) VH (抗-HER3)-CH1-CH2-CH3 + VL (抗-HER3)-CL-CH2-CH3
(R) VH (抗-HER3)-CL-CH2-CH3 + VL (抗-HER3)-CH1-CH2-CH3
其中：「VH(抗-HER3)」係指一種如本文所述能夠與HER3結合之抗原結合分子的VH，例如上述(1)至(61)中之一者所定義；「VL(抗-HER3)」係指一種如本文所述能與HER3結合之抗原結合分子的VL，例如上述(62)至(119)中之一者所定義。
在一些實施態樣中，該多肽包含一胺基酸序列或由其所組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：187至223中之一者的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
連接子及額外的序列
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子及多肽包含一鉸鏈區。在一些實施態樣中，一鉸鏈區係在一CH1區與一CH2區之間提供。在一些實施態樣中，一鉸鏈區係在一CL區與一CH2區之間提供。在一些實施態樣中，該鉸鏈區域包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：173之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子及多肽在胺基酸序列之間係包含一或多個連接子序列。可在該抗原結合分子/多肽的一VH、VL、CH1-CH2鉸鏈區、CH2區及CH3區中之一者或多者的一或兩端處提供一連接子序列。
連接子序列為熟習此藝者已知的，且係於例如Chen et al., Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369中所述，其在此藉由參照全文併入本文。在一些實施態樣中，一連接子序列可為一撓性連接子序列。撓性連接子序列係允許該連接子序列所連接之胺基酸序列的相對移動。可撓性連接子為熟習此藝者已知的，且若干連接子於Chen et al., Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369中被識別。撓性連接子序列常包含高比例之甘胺酸及/或絲胺酸殘基。
在一些實施態樣中，該連接子序列包含至少一甘胺酸殘基及/或至少一絲胺酸殘基。在一些實施態樣中，該連接子序列係由甘胺酸及絲胺酸殘基組成。在一些實施態樣中，連接子序列具有1-2、1-3、1-4、1-5或1-10個胺基酸的一長度。
本發明之抗原結合分子及多肽可額外包含另外的胺基酸或胺基酸序列。舉例而言，該等抗原結合分子及多肽可包含用以促進該抗原結合分子/多肽之表現、折疊、運輸、加工、純化或偵測的胺基酸序列。舉例而言，該抗原結合分子/多肽可包含編碼一His、(例如，6XHis)、Myc、GST、MBP、FLAG、HA、E或生物素標籤的一序列，任擇地於該抗原結合分子/多肽之N-或C-端處。在一些實施態樣中，該抗原結合分子/多肽包含一可偵測的部分，例如一螢光、發光、免疫可偵測的、放射、化學、核酸或酵素標記。
本發明之抗原結合分子及多肽可額外包含一訊息胜肽(亦稱為一前導序列或訊息序列)。訊息胜肽通常由5-30個疏水性胺基酸的一序列組成，其形成一單個α螺旋。分泌的蛋白質及細胞表面表現的蛋白質通常包含訊息胜肽。
訊息胜肽可存在於抗原結合分子/多肽的N-端，以及可存在於新合成的抗原結合分子/多肽中。訊息胜肽為抗原結合分子/多肽提供有效的運輸及分泌。訊息胜肽通常藉由裂解來移除，且因此係不包含於從表現抗原結合分子/多肽的細胞所分泌的成熟抗原結合分子/多肽中。
已知許多蛋白質的訊息胜肽，且記錄於資料庫中，諸如GenBank、UniProt、Swiss-Prot、TrEMBL、Protein Information Resource、Protein Data Bank、Ensembl及InterPro，及/或可以被識別/預測，例如使用胺基酸序列分析工具，諸如SignalP (Petersen et al., 2011 Nature Methods 8: 785-786)或Signal-BLAST (Frank and Sippl, 2008 Bioinformatics 24: 2172-2176)。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子/多肽的訊息胜肽係包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：178至186中之一者的胺基酸序列有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之序列同一性。
標記及共軛物
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子額外地包含一可偵測的部分。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含一可偵測的部分，例如一螢光標記、磷光標記、發光標記、免疫可偵測的標記(例如，一表位標籤)、放射性標記、化學、核酸或酵素標記。該抗原結合分子可用該可偵測的部分予以共價或非共價地標記。
螢光標記包括例如螢光素、羅丹明(rhodamine)、別藻藍蛋白、曙紅及NDB、諸如銪(Eu)、鋱(Tb)及釤(Sm)之稀土族的綠色螢光蛋白(GFP)螯合物、四甲基羅丹明、德克薩斯紅(Texas Red)、4-甲基繖形酮、7-胺基-4-甲基香豆素、Cy3及Cy5。放射性標記包括放射同位素，諸如碘
123、碘
125、碘
126、碘
131、碘
133、溴
77、 鎝
99m、銦
111、銦
113m、鎵
67、鎵
68、釕
95、釕
97、釕
103、釕
105、汞
207、汞
203、錸
99m、錸
101、錸
105、鈧
47、碲
121m、碲
122m、碲
125m、銩
165、銩
167、銩
168、銅
67、氟
18、釔
90、鈀
100、鉍
217及銻
211。發光標記包括如輻射發光、化學發光(例如，吖錠酯(acridinium ester)、發光胺(luminol)、異發光胺)及生物發光標記。免疫可偵測標記包括半抗原、胜肽/多肽、抗體、受體及配體，諸如生物素、抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白或地谷新配質(digoxigenin)。核酸標記包括適體。酵素標記包括例如過氧化酶、鹼性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶及螢光素酶。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子與一化學部分軛接。該化學部分可為用以提供一治療效應的一部分。抗體-藥物共軛物於Parslow et al., Biomedicines. 2016 Sep; 4(3):14中被回顧。在一些實施態樣中，該化學部分可為一藥物部分(例如，一細胞毒性劑)。在一些實施態樣中，該藥物部分可為一化學治療劑。在一些實施態樣中，該藥物部分係選自於卡奇黴素(calicheamicin)、DM1、DM4、單甲基奧瑞他汀E (monomethylauristatin E) (MMAE)、單甲基奧瑞他汀F (monomethylauristatin F) (MMAF)、SN-38、多柔比星(doxorubicin)、倍癌黴素(duocarmycin)、D6.5及PBD。
抗原結合分子之特定實例性實施態樣
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：187之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：188的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：189之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：190的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：191之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：192的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：193之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：195的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：194之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：195的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：196之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：195的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：197之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：199的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：198之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：199的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：200之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：201的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：202之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：203的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：204之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：205的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：206之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：207的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：208之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：209的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：210之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：211的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：212之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：213的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：214之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：215的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：216之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：217的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：218之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：219的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：220之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：221的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：222之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：223的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：225之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：207的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：226之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：207的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：227之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：217的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子包含下列或由下列組成：
(i)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：228之胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性；及
(ii)二個多肽，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與NO：217的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，抗原結合分子係由2021年5月7日所寄存為ATCC專利寄存號PTA-127062的細胞株生產，例如，如GB 2108449.6中所述，其在此藉由參照全文併入本文。
抗原結合分子之功能性質
本文所述之抗原結合分子可參考某些功能性質予以特徵化。在一些實施態樣中，本文所述之抗原結合分子可擁有一或多種下列性質：
與HER3 (例如，人類、小鼠、大鼠或食蟹獼猴(cynomolgus macaque) HER3)結合；
不與EGFR及/或HER2結合；
與HER3-表現細胞結合；
與HER3之細胞外區的子域II結合；
於HER3呈開放式及封閉式構形時會與HER3結合；
獨立於NRG而與HER3結合；
不與MM-121及/或LJM-716競爭與HER3之結合；
不與M-05-74及/或M-08-11競爭與HER3之結合；
抑制HER3與一HER3交互作用伙伴(例如，HER3、HER2、EGFR、HER4、HGFR、IGF1R及/或cMet)之間的交互作用；
抑制HER3-媒介的訊息傳導；
抑制HER3-表現細胞之增殖(例如，回應於用NRG之刺激)；
抑制HER3-表現細胞之PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導(例如，回應於用NRG之刺激)；
在存在及/或不存在NRG1下抑制HER3及/或AKT之磷酸化；
與一活化性Fcγ受體(例如，FcγRIIIa)結合；
與一活化性Fcγ受體結合增加；
與具有包含有具SEQ ID NO：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的一Fc區之一等效抗原結合分子相比之下，與一活化性Fcγ受體之結合增加；
與具有包含有具SEQ ID NO：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的一Fc區之一等效抗原結合分子相比之下，與一抑制性Fcγ受體之結合減少；
與具有包含有具SEQ ID NO：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的一Fc區之一等效抗原結合分子相比之下，與一活化性Fcγ受體之結合增加超過一抑制性Fcγ受體；
與具有包含有具SEQ ID NO：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的一Fc區之一等效抗原結合分子相比之下，與一補體蛋白(例如，C1q)的結合增加或減少；
與具有包含有具SEQ ID NO：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的一Fc區之一等效抗原結合分子相比之下，六聚合作用增加；
與具有包含有具SEQ ID NO：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的一Fc區之一等效抗原結合分子相比之下，ADCC活性增加；
與具有包含有具SEQ ID NO：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的一Fc區之一等效抗原結合分子相比之下，ADCP活性增加；
與具有包含有具SEQ ID NO：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的一Fc區之一等效抗原結合分子相比之下，CDC活性增加或減少；
與具有包含有具SEQ ID NO：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的一Fc區之一等效抗原結合分子相比之下，熱穩定性相似或增加；
增高HER3-表現細胞之殺滅；
降低HER3-表現細胞之數目/比例；
抑制腫瘤細胞增殖(例如，與MM-121及/或LJM-716相比有一更大程度)；
以及
活體內抑制癌症的發展及/或進程。
本文所述之抗原結合分子較佳展現出與HER3特異性結合。於本文使用時，「特異性結合」係指就抗原具選擇性的結合，且其與對非目標抗原之非特異性結合係可區別的。對一目標分子特異性結合的一抗原結合分子，比起它與其他非目標分子結合，係以更大的親和力、及/或更長的持續時間較佳地與該目標結合。
一給定多肽與一給定分子特異性結合的能力，係可藉由本技藝中已知方法的分析，諸如藉由ELISA、表面電漿子共振(SPR；參見例如Hearty et al., Methods Mol Biol (2012) 907:411-442)、生物層干涉術(參見例如Lad et al., (2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507)、流式細胞分析術，或藉由一放射性標記抗原結合檢定法(RIA)酵素聯結免疫吸附檢定法來判定。與一給定分子的結合係可透過此等分析來量測及定量。在一些實施態樣中，結合可為在一給定檢定法中所偵測到的反應。
在一些實施態樣中，當例如藉由ELISA、SPR、生物層干涉術或藉由RIA量測時，該抗原結合分子與一非目標分子結合的程度係小於該抗體與該目標分子結合的程度之約10%。替選地，結合特異性可反映在結合親和力上，其中該抗原結合分子係以比該抗原結合分子對一非目標分子的解離常數(K
D)更大至少0.1量級(亦即，0.1 x 10
n，n為表示量級的整數)之K
D進行結合。此可任擇地為至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0中之一者。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子與人類HER3、小鼠HER3、大鼠HER3及/或食蟹獼猴(cynomolgus macaque) (食蟹獼猴(Macaca fascicularis)) HER3展現出結合作用。亦即，在一些實施態樣中，該抗原結合分子為對人類HER3、小鼠HER3、大鼠HER3及/或食蟹獼猴(cynomolgus macaque) HER3有交叉反應性。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係與一非人類靈長類動物的HER3展現出交叉反應性。HER3於模型物種之交叉反應性，係允許能以同基因模型在活體內探索功效而不倚賴代用分子。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與人類HER3、小鼠HER3、大鼠HER3及/或食蟹獼猴HER3結合；且不與HER2及/或EGFR (例如，人類HER2及/或人類EGFR)結合。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係沒有展現與EGFR (例如人類EGFR)特異性結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係沒有展現與HER2 (例如人類HER2)特異性結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係沒有展現與HER3以外的一EGFR蛋白家族成員特異性結合(亦即，沒有交叉反應)。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係沒有展現與EGFR、HER2及/或HER4特異性結合。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係以10 µM或更小的一K
D與HER3 (例如人類HER3)結合，較佳為≤5 µM、≤2 µM、≤1 µM、≤500 nM、≤400 nM、≤300 nM、≤200 nM、≤100 nM、≤95 nM、≤90 nM、≤85 nM、≤80 nM、≤75 nM、≤70 nM、≤65 nM、≤60 nM、≤55 nM、≤50 nM、≤45 nM、≤40 nM、≤35 nM、≤30 nM、≤25 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM、≤3 nM、≤2 nM、≤1 nM、≤900 pM、≤800 pM、≤700 pM、≤600 pM、≤500 pM、≤400 pM、≤300 pM、≤200 pM、≤100 pM、≤90 pM、≤80 pM、≤70 pM、≤60 pM、≤50 pM、≤40 pM、≤30 pM、≤20 pM、≤10 pM、≤9 pM、≤8 pM、≤7 pM、≤6 pM、≤5 pM、≤4 pM、≤3 pM、≤2 pM、≤1 pM中之一者之K
D。
本發明之抗原結合分子可與特定感興趣的HER3區結合。根據本發明之一抗原結合分子的抗原結合區，係可結合由一相連的胺基酸序列組成(亦即，一胺基酸一級序列)的HER3之一線形表位。在一些實施態樣中，該抗原結合分子可結合由胺基酸序列之一不連續的胺基酸序列組成之HER3的一構形表位。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係與HER3結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與HER3的細胞外區(例如，SEQ ID NO：9所示的區)結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與HER3之細胞外區的子域II (例如，SEQ ID NO：16所示的區)結合。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：229所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：229所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：230及231所示之HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：230及231所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：230所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：230所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：231所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：231所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：23所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：23所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：21所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：21所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：19所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：19所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係與SEQ ID NO：22所示的HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係接觸SEQ ID NO：22所示之HER3區的一或多個胺基酸殘基。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠與一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：1、3、4、6或8中之一者的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：229的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：230及231的胺基酸序列或由該等胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：230的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：231的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列或由該胺基酸序列組成。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子不與對應於SEQ ID NO：1之位置260至279之HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不與對應於SEQ ID NO：1之位置260至279之HER3區之一胺基酸殘基接觸。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不與SEQ ID NO：23所示之HER3區結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不與SEQ ID NO：23所示之HER3區的一胺基酸殘基接觸。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能夠與對應於SEQ ID NO：1之位置260至279之胺基酸序列所組成的一胜肽結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不能夠與SEQ ID NO：23之胺基酸序列所組成的一胜肽結合。
於本文使用時，一「胜肽」係指一種由肽鍵所鏈結之二或更多胺基酸單體之鏈。一胜肽一般在該區具有約2至50個胺基酸的長度。一「多肽」為二或更多胜肽的一聚合物鏈。多肽一般具有超過約50個胺基酸的長度。
一抗原結合分子與一給定之胜肽/多肽結合的能力，係可藉由熟習此藝者所熟知的方法來分析，包括藉由ELISA、免疫墨點法(例如，西方墨點法)、免疫沉澱法、表面電漿子共振法及生物層干涉術的分析。
配體對HER3結合係促進構形變化，其使HER3能夠同質或異質二聚化，導致下游途徑之活化。HER3展示「封閉式」及「開放式」構形。按封閉式構形，其係意指HER3呈一繫鏈構形且無法用於受體同質或異質二聚化。按開放式構形，其係意指HER3呈一延伸構形且可用於同質或異質二聚化。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子在HER3呈開放式構形時能夠與HER3結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子在HER3呈封閉式構形時能夠與HER3結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子在HER3呈開放式及/或封閉式構形時能夠與HER3結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子在HER3呈開放式及/或封閉式構形時能夠與HER3胞外域(ectodomain)結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子在HER3呈開放式及/或封閉式構形時能與HER3二聚化臂結合。與二聚化臂結合係使抗原結合分子能夠防止HER3與一HER3交互作用伙伴之間的交互作用，例如如本文所述。
在一些實施態樣中，抗原結合分子能夠在一HER3配體存在及/或不存在的情況下與HER3結合。在一些實施態樣中，抗原結合分子能夠獨立於一HER3配體來與HER3結合。在一些實施態樣中，該配體為NRG、NRG-1及/或NRG-2。HER3係藉由配體對其細胞外域結合而被活化，該結合促進構形變化，其使HER3能夠同質或異質二聚化。一抗原結合分子與HER3之結合獨立於配體結合，係允許該抗原結合分子於配體不存在及配體存在構形狀態兩者下均能夠抑制HER3的作用。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不與配體競爭與HER3的結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子不在配體結合位點處與HER3結合。
在一些實施態樣中，於HER3配體存在或不存在下(亦即，無論是否HER3以配體結合形式或未結合形式被提供)，該抗原結合分子對HER3同樣良好地結合。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子在一HER3配體存在下以一親和力對HER3結合，該親和力係相似於該抗原結合分子在該HER3配體不存在下對HER3結合的親和力。本揭露內容之實施例8.10以及圖78A及78B證實， 當HER3係在NRG1結合形式及於不存在NRG1兩者下提供時，10D1F係以亞皮莫耳親和力對人類HER3結合。
在本文中，「相似」於一參考結合親和力的一結合親和力意謂：一結合親和力其在可比較之條件下所判定係在該參考結合親和力之50%內，例如在40%、45%、30%、25%、20% 19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%中之一者內。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子在一HER3配體(例如，NRG1或NRG2)存在之情況下，以一K
D對HER3結合，該K
D係為在該配體不存在之情況下抗原結合分子對HER3結合之K
D的50%內(在可比較之條件下所判定)，例如在40%、45%、30%、25%、20% 19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%中之一者內。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子於一HER3配體(例如，NRG1或NRG2)存在下，以一K
on對HER3結合，該K
on係為於配體不存在下抗原結合分子對HER3結合之K
on的50%內(在可比較之條件下所判定)，例如在40%、45%、30%、25%、20% 19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%中之一者內。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子於一HER3配體(例如，NRG1或NRG2)存在下，以一K
off對HER3結合，該K
off係為於配體不存在下抗原結合分子對HER3結合之K
off的50%內(在可比較之條件下所判定)，例如在40%、45%、30%、25%、20% 19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%中之一者內。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合至一抗體所結合HER3區的相同HER3區或一重疊HER3區，該抗體包含殖株10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93、10A6、4-35-B2或4-35-B4中之一者的VH及VL序列。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合至一抗體所結合HER3區的相同HER3區或一重疊HER3區，該抗體包含殖株10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91中之一者的VH及VL序列。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠結合至一抗體所結合HER3區的相同HER3區或一重疊HER3區，該抗體包含殖株10D1_c89之VH及VL序列。
一抗體與一胜肽/多肽結合的區可藉由熟習此藝者使用本技藝中已知的各種方法來判定，包括抗體-抗原複合物之X射線共結晶學分析、胜肽掃描、誘變測繪、由質譜法進行之氫-氘交換分析、噬菌體顯示、競爭ELISA及蛋白質水解為基的「保護」法。此等方法係於例如Gershoni et al., BioDrugs, 2007, 21(3):145-156中所述，其在此藉由參照全文併入本文。此等方法亦可用來判定一抗原結合分子是否能與不同構形的蛋白質結合。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子不會如一包含抗-HER3抗體殖株MM-121 (說明於例如Schoeberl et al., Sci. Signal. (2009) 2(77): ra31)及/或LJM-716 (說明於例如Garner et al., Cancer Res (2013) 73: 6024–6035)之VH及VL序列的抗體、對HER3結合於相同的HER3區或一重疊的HER3區中。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子，例如以SPR分析所判定者，不會就對HER3的結合展現出與一包含抗-HER3抗體殖株MM-121及/或LJM-716之VH及VL序列的抗體有競爭。
在一些實施態樣中，當HER3表現於細胞表面(亦即，在細胞膜中或在細胞膜處)時，本發明之抗原結合分子係對HER3結合在一抗原結合分子(亦即，一細胞外抗原結合分子)可接近的區中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能與表現HER3之一細胞的細胞表面處所表現的HER3結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能與HER3-表現細胞(例如HER3+細胞，例如HER3+癌細胞)結合。
可以分析抗原結合分子與一給定細胞類型結合的能力，其係藉由接觸帶有抗原結合分子的細胞，以及例如在移除未結合之抗原結合分子的一清洗步驟之後，偵測與細胞結合的抗原結合分子。一抗原結合分子與表現免疫細胞表面分子的細胞及/或表現癌細胞抗原的細胞結合的能力，可以藉由諸如流式細胞分析術及免疫螢光顯微鏡術的方法予以分析。
本發明之抗原結合分子可為HER3之一拮抗劑。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠抑制HER3及/或一HER3結合伙伴(例如HER3 (亦即，在同質二聚化作用之情況下)、HER2、EGFR、HER4、HGFR、IGF1R及/或cMet)所媒介的一功能或過程(例如，交互作用、訊息傳導或其他活性)。本文中，「抑制」係指相對於一控制條件的一降低、減少或減輕。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠抑制HER3與一HER3交互作用伙伴之間的交互作用。一HER3交互作用伙伴可由表現HER3相同的細胞所表現。一HER3交互作用伙伴可表現於細胞表面處(亦即，在細胞膜中或在細胞膜處)。在一些實施態樣中，一HER3交互作用伙伴可為EGFR蛋白家族的一成員，例如HER3、HER2、EGFR、HER4、HGFR、IGF1R及/或cMet。在一些實施態樣中，一HER3交互作用伙伴可為IGF1R及/或cMet。HER3與一HER3交互作用伙伴之間的交互作用可能導致一多肽複合物之形成。HER3與一HER3交互作用伙伴之間的交互作用以形成一多肽複合物，係可稱為多聚化(multimerisation)。多肽單體之間多聚化的多聚化狀況可稱為二聚化。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠抑制HER3單體之間的交互作用。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠抑制HER3與HER2之間的交互作用。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠抑制HER3與EGFR之間的交互作用。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠抑制HER3與HER4之間的交互作用。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠抑制HER3與HGFR之間的交互作用。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠抑制HER3與IGF1R之間的交互作用。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能夠抑制HER3與cMet之間的交互作用。
該抗原結合分子可藉由HER3與一HER3交互作用伙伴間之交互作用所需要的一HER3區(例如，SEQ ID NO：19所示之HER3的二聚化環)的結合來達成交互作用之抑制。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係和HER3與一HER3交互作用伙伴間之交互作用所需要的一或多個HER3殘基接觸；該抗原結合分子透過此方式使該區無法使用，藉此抑制交互作用。在一些實施態樣中，該抗原結合分子以抑制/妨礙HER3與一HER3交互作用伙伴間之交互作用的方式來與HER3結合。在一些實施態樣中，該抗原結合分子抑制/妨礙了該HER3交互作用伙伴接近HER3與該HER3交互作用伙伴間之交互作用所需要的HER3區；此甚至可在該抗原結合分子沒有接觸HER3與該HER3交互作用伙伴間之交互作用所需要的HER3區的情況被達成，例如透過立體抑制HER3交互作用伙伴接近HER3與該交互作用伙伴間之交互作用所需要的HER3區。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子能抑制HER3單體的同質二聚化作用。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能抑制HER3與HER2之間的二聚化。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能抑制HER3與EGFR之間的二聚化。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能抑制HER3與HER4之間的二聚化。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能抑制HER3與HGFR之間的二聚化。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能抑制HER3與IGF1R之間的二聚化。在一些實施態樣中，該抗原結合分子能抑制HER3與cMet之間的二聚化。
一抗原結合分子抑制二因子間之交互作用的能力，可例如在該抗體/片段存在下，或用該抗體/片段培育該等交互作用伙伴中之一或兩者之後，藉由分析交互作用來判定。判定一給定抗原結合分子是否能夠抑制二交互作用伙伴間之交互作用的檢定法，係包括競爭ELISA檢定法及藉由SPR之分析。在一些實施態樣中，該抗原結合分子為HER3及一HER3交互作用伙伴間的交互作用之一競爭性抑制劑。
在一些實施態樣中，於一合適的檢定法中，本發明之抗原結合分子能夠抑制HER3與一HER3交互作用伙伴(例如，HER3、HER2、EGFR、HER4、HGFR、IGF1R及/或cMet)間之交互作用，達到比抗原結合分子不存在下(或在一適當的控制抗原結合分子存在下) HER3與一HER3交互作用伙伴間之交互作用位準更低小於1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。
抗原結合分子抑制交互作用伙伴間之交互作用的能力，亦可藉由分析此等交互作用之下游功能性結果來判定。舉例而言，HER3與HER3交互作用伙伴間之交互作用的下游功能性結果，係包括PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導。舉例而言，抗原結合分子抑制HER3與一HER3交互作用伙伴的交互作用的能力，係可在抗原結合分子存在下用NRG處理之後，藉由分析PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導來判定。PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導可被偵測及定量，例如使用能偵測訊號轉導途徑之磷酸化成員的抗體。
一抗原結合分子抑制HER3與一HER3交互作用伙伴間的交互作用之能力，亦可在該抗原結合分子存在下用NRG處理之後，藉由分析表現HER3的細胞之增殖來判定。細胞增殖可例如藉由偵測細胞數目隨著時間的變化，或藉由
3H-胸苷的併入之活體外分析或藉由CFSE稀釋檢定法予以判定，例如說明於Fulcher and Wong, Immunol Cell Biol (1999) 77(6): 559-564中，其在此藉由參照全文併入本文。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠抑制帶有BRAF V600E突變之細胞的增殖，例如包含BRAF V600E或V600K突變之細胞的增殖(參見實施例10)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子抑制HER3-媒介的訊息傳導。HER3-媒介的訊息傳導可例如使用下列之互相關聯的一檢定法來分析：HER3-媒介的訊息傳導，例如細胞增殖，及/或PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息轉導途徑中之一或多個訊息傳導分子的磷酸化。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠抑制HER3-表現細胞的PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導。PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導之位準可例如在用NRG刺激後，偵測及定量PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK途徑中之一或多組分的磷酸化位準(參見實施例4.3)。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠，例如回應於用NRG刺激，抑制HER3-表現細胞之增殖。在一些實施態樣中，在一合適的檢定法中，本發明之抗原結合分子能夠抑制HER3-表現細胞之增殖，達到比在抗原結合分子不存在下(或在一適當的控制抗原結合分子存在下)HER3-表現細胞之增殖位準更低小於1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。
在一些實施態樣中，在一合適的檢定法中，本發明之抗原結合分子能夠抑制HER3-表現細胞之PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導，達到比抗原結合分子不存在下(或在一適當的控制抗原結合分子存在下) HER3-表現細胞之訊息傳導位準更低小於1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。
HER3-媒介的訊息傳導能夠在活體外研究，例如如實施例8.9所述，或者在活體內研究，例如如實施例11所述。
ADCC活性可例如根據在Yamashita et al., Scientific Reports (2016) 6:19772 (其在此藉由參照全文併入本文)中所述的方法，或藉由例如在Jedema et al., Blood (2004) 103: 2677–82 (其在此藉由參照全文併入本文)中所述的
51Cr釋放檢定法來分析。ADCC活性亦可使用Pierce LDH細胞毒性檢定套組，根據製造商的指示(如本文實施例5所述)來分析。
ADCP可例如根據在Kamen et al., J Immunol (2017) 198 (1 Supplement) 157.17 (其在此藉由參照全文併入本文)中所述的方法來分析。
誘發CDC的能力可例如，使用如Schlothauer et al., Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457–466 (其在此藉由參照全文併入本文)中所述之一C1q結合檢定法來分析。
抗原結合分子之熱穩定性可藉由熟習此藝者熟知的方法來分析，包括微差掃描螢光分析法(Differential Scanning Fuorimetry)及微差掃描熱量測定法(DSC)，其等係說明於例如He et al., J Pharm Sci. (2010)中，其在此藉由參照全文併入本文。熱穩定性可反映在一熔化溫度(T
m)、解折疊溫度或拆分溫度(例如，以°C或F°表現)。
在一些實施態樣中，如本文所述之包含一Fc區的一抗原結合分子與一活化性Fcγ受體(例如hFcγRIIa (例如hFcγRIIa167H、hFcγRIIa167R)、hFcγRIIIa (例如hFcγRIIIa158V、hFcγRIIIa158F)、mFcγRIV、mFcγRIII)結合的一結合親和力，係比具有包含有具SEQ ID NO：174-175之胺基酸序列之CH2-CH3之一Fc區的一等效抗原結合分子對該活化性Fcγ受體的結合親和力的1倍更大，例如比2、3、4、5、6、7、8、9、10、15倍更大或比20倍更大。在一些實施態樣中，本文所述之包含一Fc區的抗原結合分子與活化性Fcγ受體結合之K
D，係比具有包含有具SEQ ID NO：174-175之胺基酸序列之CH2-CH3之一Fc區的一等效抗原結合分子與該活化性Fcγ受體之K
D的1倍更小，例如比0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06倍更小或比0.05倍更小。
在一些實施態樣中，如本文所述之包含一Fc區之抗原結合分子係以1000 nM或更小的一K
D，較佳為≤500 nM、≤100 nM、≤75 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM、≤3 nM、≤2 nM或≤1 nM中之一者之K
D，來與一活化性Fcγ受體(例如，hFcγRIIa (例如，hFcγRIIa167H、hFcγRIIa167R)、hFcγRIIIa(例如，hFcγRIIIa158V、hFcγRIIIa158F)、mFcγRIV、mFcγRIII)結合。
在一些實施態樣中，如本文所述之包含一Fc區之一抗原結合分子，係以比具有包含有具SEQ ID NO：174-175之胺基酸序列之CH2-CH3之一Fc區的一等效抗原結合分子與FcRn (例如，hFcRn、mFcRn)之結合親和力的1倍更大，例如比2、3、4、5、6、7、8、9、10、15倍更大或比20倍更大的一結合親和力，來與FcRn結合。在一些實施態樣中，本文所述之包含一Fc區之抗原結合分子與FcRn結合之K
D，係比具有包含有具SEQ ID NO：174-175之胺基酸序列之CH2-CH3之一Fc區的一等效抗原結合分子對於FcRn之K
D的1倍更小，例如比0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06倍更小或比0.05倍更小。
在一些實施態樣中，如本文所述之包含一Fc區之抗原結合分子係以1000 nM或更小之一K
D，較佳為≤500 nM、≤100 nM、≤75 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM、≤3 nM、≤2 nM或≤1 nM中之一者之K
D，來與一FcRn (例如，hFcRn、mFcRn)結合。
在一些實施態樣中，如本文所述之包含一Fc區之一抗原結合分子係以比具有包含有具SEQ ID NO：174-175之胺基酸序列之CH2-CH3之一Fc區的一等效抗原結合分子與一抑制性Fcγ受體(例如，hFcγRIIb mFcγRIIb)之結合親和力的1倍更小，例如比0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2倍更小或比0.1倍更小之一結合親和力與該抑制性Fcγ受體結合。在一些實施態樣中，本文所述之包含一Fc區之抗原結合分子與抑制性Fcγ受體結合之K
D，係比具有包含有具SEQ ID NO：174-175之胺基酸序列之CH2-CH3之一Fc區的一等效抗原結合分子對於該抑制性Fcγ受體之K
D的1倍更大，例如比2、3、4、5、6、7、8、9倍更大或比10倍更大。
在一些實施態樣中，如本文所述之包含一Fc區之抗原結合分子係以一K
D1 nM或更大，較佳為≥ 5 nM、≥ 10 nM、≥ 50 nM、≥ 100 nM、≥ 500 nM、≥ 1000 nM、≥ 2000 nM、≥ 3000 nM、≥ 4000 nM或≥ 5000 nM中之一者，來與一抑制性Fcγ受體(例如，hFcγRIIb mFcγRIIb)結合。
在一些實施態樣中，如本文所述之包含一Fc區之一抗原結合分子對於一活化性Fcγ受體(例如hFcγRIIa)相對於一抑制性Fcγ受體(例如hFcγRIIb)之結合選擇性，係比具有包含有具SEQ ID NO：174-175之胺基酸序列之CH2-CH3之一Fc區的等效抗原結合分子所展現的結合選擇性的1倍更大，例如比2、3、4、5、6、7、8、9、10、15倍更大或比20倍更大。
在一些實施態樣中，如本文所述之包含一Fc區之抗原結合分子係展現出比具有包含有具SEQ ID NO：174-175之胺基酸序列之CH2-CH3之一Fc區的一等效抗原結合分子所展現的ADCC的1倍更大，例如比2、3、4、5、6、7、8、9、10、15倍更大或20倍更大的ADCC。
在一些實施態樣中，如本文所述之包含一Fc區之一抗原結合分子於一ADCC活性檢定法中測得的EC50 (ng/ml)，係比具有包含有具SEQ ID NO：174-175之胺基酸序列之CH2-CH3之一Fc區的一等效抗原結合分子測得的EC50 (ng/ml)的1倍更小，例如比0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2倍更小或比0.1倍更小。
在一些實施態樣中，於一ADCC活性檢定法中如本文所述之包含一Fc區之一抗原結合分子的EC50 (ng/ml)為500 ng/ml或更小，較佳為≤400 ng/ml、≤300 ng/ml、≤200 ng/ml、≤100 ng/ml、≤90 ng/ml、≤80 ng/ml、≤70 ng/ml、≤60 ng/ml、≤50 ng/ml、≤40 ng/ml、≤30 ng/ml、≤20 ng/ml或≤10 ng/ml中之一者。
在一些實施態樣中，如本文所述之包含一Fc區之一抗原結合分子，係可具有一熔化溫度、解折疊溫度或拆分溫度，其為具有包含有具SEQ ID NO：174-175之胺基酸序列之CH2-CH3之一Fc區的一等效抗原結合分子的熔化溫度、解折疊溫度或拆分溫度之≥ 0.75倍且≤ 1.25倍，例如≥ 0.8倍且≤ 1.2倍、≥ 0.85倍且≤ 1.15倍、≥ 0.9倍且≤ 1.1倍、≥ 0.91倍且≤ 1.09倍、≥ 0.92倍且≤ 1.08倍、≥ 0.93倍且≤ 1.07倍、≥ 0.94倍且≤ 1.06倍、≥ 0.95倍且≤ 1.05倍、≥ 0.96倍且≤ 1.04倍、≥ 0.97倍且≤ 1.03倍、≥ 0.98倍且≤ 1.02倍、或≥ 0.99倍且≤ 1.01倍。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠增強HER3-表現細胞之殺滅。可透過該抗原結合分子之一作用功能來增強HER3-表現細胞之殺滅。在抗原結合分子包含一Fc區的實施態樣中，該抗原結合分子可透過下列中之一或多者來增高HER3-表現細胞的殺滅：補體依賴型細胞毒性(CDC)、抗體依賴型細胞媒介細胞毒性(ADCC)及抗體依賴型細胞吞噬作用(ADCP)。
在一適當的檢定法中，能夠增高HER3-表現細胞之殺滅的一抗原結合分子係能在該抗原結合分子存在下──或用該抗原結合分子培育HER3-表現細胞之後──，藉由觀察到HER3-表現細胞之一增高的殺滅位準來識別，如相較於該抗原結合分子不存在下(或在一適當的控制抗原結合分子存在下)所偵測到的細胞殺滅位準。CDC、ADCC及ADCP之分析法為熟習此藝者熟知的。HER3-表現細胞之殺滅位準亦可在暴露於不同的處理條件後，藉由量測活的及/或非活的HER3-表現細胞的數目/比例來判定。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子能夠增高HER3-表現細胞(例如，HER3-表現癌細胞)之殺滅，達到比抗原結合分子不存在下(或在一適當之控制抗原結合分子存在下)觀察到的殺滅位準的1倍更大，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。
在一些實施態樣中，在一可比配的檢定法中，本發明之抗原結合分子能夠降低HER3-表現細胞之數目(例如，HER3-表現癌細胞)，比在該抗原結合分子不存在下培育之後(或在一適當的控制抗原結合分子存在下培育之後)所偵測到的HER3-表現細胞(諸如，HER3-表現癌細胞)之數目更少小於1倍，例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係活體內抑制癌症的發展及/或進程。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子例如藉由作用免疫細胞，造成殺滅癌細胞之一增強。在一些實施態樣中，例如在與一適當的控制條件相比之下，該抗原結合分子係活體內造成癌細胞之數目的降低。在一些實施態樣中，該抗原結合分子抑制了腫瘤生長，例如，藉由量測腫瘤隨著時間的大小/體積所判定。
能以一適當的活體內模型，例如細胞株衍生的異種移植模式，分析本發明之抗原結合分子抑制癌症發展及/或進程之能力。細胞株所衍生的異種移植模型可衍生自HER3-表現癌細胞。在一些實施態樣中，該模型為一N87細胞所衍生的模型、一SNU16細胞所衍生的模型、一FaDu細胞所衍生的模型、一OvCAR8細胞所衍生的模型、一HCC95細胞所衍生的模型、一A549細胞所衍生的模型、一ACHN細胞所衍生的模型或一HT29細胞所衍生的模型。
癌症可為本文所述之一HER3-相關聯癌症(亦即，HER3基因/蛋白質表現為該等癌症之一風險因子，及/或與該等癌症之發作、發展、進程或症狀的嚴重性及/或轉移有正關聯的癌症)。該癌症可包含HER3-表現細胞。在一些實施態樣中，該癌症包含一HER3+腫瘤。
在一些實施態樣中，投與本發明之一抗原結合分子可造成下列中之一或多者：抑制癌症發展/進程、延遲/預防癌症發作、減少/延遲/預防腫瘤生長、減少/延遲/預防轉移、降低癌症症狀的嚴重性、減少癌細胞的數目、減少腫瘤大小/體積，及/或提高存活(例如，無進程存活期)，例如，如一適當的HER3-表現癌細胞株衍生的異種移植模型所判定。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子在HER3-表現癌細胞株衍生的異種移植模型中，能抑制腫瘤生長，達到比不存在該抗原結合分子之治療下(或在一適當的陰性對照抗原結合分子之處理後)所觀察到的腫瘤生長更少小於1倍，例如 ≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。
在一些實施態樣中，用本文所揭露之一抗原結合分子或其他製品(例如，組成物、核酸等)來治療一主體，例如其中該抗原結合分子/製品係以一劑量及/或根據本文所說明之一劑量時程對一主體投與，該治療可與下列結果中之一或多者相關聯：
● 不存在不良事件(AE)；
● 不存在嚴重不良事件(SAE)；
● 最小或降低頻率之不良事件(AE)，例如與其他抗-HER3治療性抗體相比；
● 最小或降低頻率之嚴重不良事件(SAE)，例如與其他抗-HER3治療性抗體相比；
● 不存在劑量限制毒性(DLT)；
● 最小或降低頻率之劑量限制毒性(DLT)，例如與諸如易利珠單抗及AV-203的其他抗-HER3治療性抗體相比；
● 治療後之循環腫瘤標誌(例如，游離(cf) DNA改變對偶基因區段部分/腫瘤區段部分、ctDNA、可溶性HER3及/或可溶性NRG1)減少，例如相較於治療前的相同主體；
● 例如與治療前的相同主體相比，治療後的pHER3、pERK、p-70S6K、Ki67及裂解的半胱天冬酶3降低；
● 不存在、最小或降低頻率之輸注相關反應，例如細胞激素釋放症候群；
● 例如與其他抗-HER3治療性抗體，諸如易利珠單抗(elgemtumab)及AV-203相比，不存在、最小或降低頻率的胃腸毒性；
● 例如與其他抗-HER3治療性抗體相比，不存在、最小或降低頻率的低鉀血症及/或低鎂血症；
● 例如與其他抗-HER3治療性抗體相比，不存在、最小或降低頻率的皮疹或皮膚炎；
● 例如與其他抗-HER3治療性抗體相比，不存在、最小或降低頻率的血液學上之變化；
● 例如與其他抗-HER3治療性抗體相比，不存在、最小或降低頻率的心毒性；及/或
● 例如與其他抗-HER3治療性抗體，諸如GSK2849330相比，不存在、最小或降低頻率的白蛋白增高。
一不良事件(AE)為投與一試驗藥品(IMP)、一比對產品或一許可藥物之一患者中的任何不順遂、非所欲或非計劃的醫療事故。一AE可為與IMP或比對物可能相關或可能不相關的一徵象、症狀、疾病及/或實驗室或生理觀測。一AE包括但不限於以下清單中之那些者。
●既存病況之臨床上顯著的惡化。這包括可能完全消解且接著再次變得異常的病況。
● 由一IMP之過量引起之AE，無論係意外的或有意的。
● 由缺乏一IMP功效引起之AE，例如，若調查員懷疑一藥物批次並不有效，或若調查員懷疑該IMP已促成疾病進程。
一嚴重不良事件(SAE)為無論劑量、因果或預期性之任何下列的AE：
● 導致死亡；
● 危及生命，亦即，在不良事件發生時患者處於顯著的死亡風險，或持續使用裝置或其他醫藥品時可能導致患者死亡的事件；
●需要住院病人住院治療或延長現有住院治療(一些住院治療係豁免SAE報導，例如在患者進入試驗之前所計劃的入院；為諸如輸血之計劃的程序的過夜停留)；
● 導致持續性或顯著的無能力或失能；
● 為一先天性異常或出生缺陷；
● 為任何其他醫療上重大之事件，亦即，任何可危及患者或可能需要介入以防止上文列出之結果中之一者的事件。
在一些實施態樣中，對本揭露內容之治療的反應係可藉由參考腫瘤/病變反應來特徵化。在一些實施態樣中，腫瘤/病變反應係根據實性腫瘤反應評鑑準則(RECIST)之準則來評鑑，例如Eisenhauer et al., Eur J Cancer. 2009 Jan;45(2):228-47中所述之RECIST 1.1準則，其在此藉由參照全文併入本文。在一些實施態樣中，腫瘤/病變反應係根據前列腺癌工作組3 (PCWG3)準則來評鑑，例如，如Scher et al., J Clin Oncol. 2016 Apr 20; 34(12):1402-18中所述，其在此藉由參照全文併入本文。
在一些實施態樣中，以本文所述之一抗原結合分子或物件治療一主體，例如，其中該抗原結合分子/物件係以一劑量及/或根據本文所述之一劑量時程對一主體投與，可關聯於以下結果中之一或多者(在適當時，如根據RECIST 1.1或PCWG3準則所評估；參見實施例16.10之細節及評估方法)，例如在治療開始之後12及/或24個月：
● 一抗腫瘤反應；
● 一完整反應(CR)。一CR係指所有目標及/或非目標腫瘤的一巨觀尺度完全消失。一CR可涉及腫瘤標誌位準之正規化；
● 對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之一主體，增加一完全反應(CR)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中CR的可能性相比；
● 展現一完全反應(CR)之主體的比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之主體展現一CR的比例相比；
● 整體存活期(OS)。OS係定義為從開始治療到任何原因所致死亡的時間；
● 對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之一主體，增加整體存活期(OS)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中OS的可能性相比；
● 展示整體存活期(OS)之主體之比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之主體展現OS的比例相比；
● 無進程存活(PFS)。PFS係指從治療開始到疾病進程或死亡的時間。
● 對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之一主體，增加無進程存活(PFS)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中PFS的可能性相比；
● 展示無進程存活(PFS)之主體的比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之主體展現PFS的比例相比；
● 一部分反應(PR)。PR係指與治療之前所計算的基線總和相比，所有目標腫瘤直徑的總和至少有30%的降低；
● 對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之一主體，增加一部分反應(PR)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中一PR的可能性相比；
● 展現一部分反應(PR)之主體的比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之主體展現一PR的比例相比；
● 一混合反應(MR)。MR係指一或多個腫瘤病變滿足PR之準則，且其他腫瘤病變滿足進行性疾病之準則(所有腫瘤直徑之總和自最小腫瘤大小增加至少20%及/或出現一新的腫瘤病變)；
● 對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之一主體，增加一混合反應(MR)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中一MR的可能性相比；
● 展現一混合反應(MR)之主體的比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之主體展現一MR的比例相比；
● 穩定的疾病(SD)。SD係指與開始治療時之腫瘤負荷相比，既非部分反應亦非進行性疾病。
● 對未接受該抗原結合分子之一主體、或與已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之一主體，增加穩定的疾病(SD)的可能性，例如與未經該抗原結合分子治療之相同主體中SD的可能性相比；
● 展示穩定的疾病(SD)之主體之比例增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之主體展現SD的比例相比；
● 一整體反應(OR)。OR係定義為達成完全反應(CR)或部分反應(PR)；
● 一整體反應率(ORR)。ORR定義為已達成完全反應(CR)或部分反應(PR)之患者的比例；
● ORR增加，例如與未經該抗原結合分子治療或已用一不同抗-HER3抗原結合分子治療之主體展現一OR的比例相比；
● 在腫瘤組織中HER3磷酸化之降低；
● 腫瘤組織中下游途徑活化之降低，例如如藉由下游標誌物的變化所證明，諸如pERK及p-70SK6；
● 系列cfDNA樣品中腫瘤區段部分之減少；
● 腫瘤細胞增殖之降低，如Ki67表現之變化所證明；
● 腫瘤細胞死亡的增加，如裂解的胱天蛋白酶3之變化所證明；
● 抗腫瘤活性的展露，如通過判定總反應率所證明者，如適用於所選腫瘤類型，整體反應率係基於實性腫瘤反應評鑑準則(RECIST) v1.1或前列腺癌工作組3 (PCWG3)之準則、定義為達成完全反應或部分反應之患者的比例。
腫瘤反應可根據腫瘤及其位置使用適當成像技術來評鑑，例如CT掃描、MRI掃描及FDG-PET。適當技術將為熟習此藝者所熟悉且說明於Eisenhauer et al, supra及/或本文實施例16.10中。
該主體可為本文所定義之一主體，例如，其患有或已判定為患有例如根據本揭露內容之一癌症或實性腫瘤。
嵌合抗原受體(CAR)
本發明亦提供包含本發明之抗原結合分子或多肽之嵌合抗原受體(CAR)。
CAR為重組型受體，其提供抗原結合及T細胞活化功能兩者。CAR結構及工程改造係回顧例如於Dotti et al., Immunol Rev (2014) 257(1)中，其在此藉由參照全文併入本文。CAR包含一抗原結合區，其與一細胞膜錨定區及一訊息傳導區鏈結。一任擇的鉸鏈區可在抗原結合區與細胞膜錨定區之間提供分隔，以及可作用為一撓性連接子。
本發明的CAR包含一抗原結合區，其包含本發明之抗原結合分子或由本發明之該抗原結合分子組成，或者其包含本發明之一多肽或由其組成。
細胞膜錨定區提供於CAR之抗原結合區與訊息傳導區之間，且提供CAR錨定至表現一CAR之一細胞的細胞膜，其中抗原結合區在細胞外空間中，且訊息傳導區在細胞內部。在一些實施態樣中，該CAR包含一細胞膜錨定區，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列組成，該胺基酸序列包含CD3-ζ、CD4、CD8或CD28中之一者的跨膜區胺基酸序列、由其所組成、或是自其衍生。於本文使用時，一種「衍生自」一參考胺基酸序列之一區包含一胺基酸序列，其與參考序列有至少60%的序列同一性，例如至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%中之一者。
一CAR的訊息傳導區係允許T細胞之活化。CAR的訊息傳導區可包含CD3-ζ之細胞內域之胺基酸序列，其提供免疫受體酪胺酸為基之活化模體(ITAM)，供用於CAR-表現T細胞之磷酸化及活化。包含其他含ITAM蛋白的序列之訊息傳導區，諸如FcγRI，亦已經運用於CAR (Haynes et al., 2001 J Immunol 166(1):182-187)。CAR的訊息傳導區亦可包含衍生自共刺激分子之訊息傳導區的共刺激序列，以促進CAR-表現T細胞一旦與目標蛋白結合後的活化。合適的共刺激分子包括CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27。在一些情況中，CAR係經工程改造以提供不同細胞內訊息傳導途徑的共刺激。舉例而言，與CD28共刺激相關聯的訊息傳導優先活化磷脂醯肌醇3-激酶(P13K)的途徑，而4-1BB-媒介之訊息傳導係經由TNF受體關聯因子(TRAF)轉接蛋白。CAR之訊息傳導區因此有時含有衍生自多於一個的共刺激分子之訊息傳導區的共刺激序列。在一些實施態樣中，本發明的CAR包含一或多個共刺激序列，其包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列包含CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27中之一或多者之細胞內域的胺基酸序列、由其所組成、或自其衍生。
一任擇的鉸鏈區可於抗原結合域與跨膜域之間提供分隔，以及可作用為一撓性連接子。鉸鏈區可衍生自IgG1。在一些實施態樣中，本發明的CAR包含一鉸鏈區，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列組成，該胺基酸序列包含IgG1之鉸鏈區的胺基酸序列、由其組成、或自其衍生。
亦提供一種包含根據本發明之一CAR的細胞。根據本發明之CAR可使用來產生CAR-表現免疫細胞，例如CAR-T或CAR-NK細胞。使CAR進入免疫細胞中的工程改造係可在活體外培養的期間施行。
本發明之CAR的抗原結合區能以任何合適之型式提供，例如scFv、scFab等。
核酸及載體
本發明提供一核酸或複數核酸，其編碼根據本發明之一抗原結合分子、多肽或CAR。
在一些實施態樣中，該核酸係例如從其他核酸或天然存在的生物材料來純化或分離的。在一些實施態樣中，核酸包含DNA及/或RNA或由其組成。
本發明亦提供一載體或複數載體，其包含根據本發明之核酸或複數核酸。
核苷酸序列可被含有在例如一表現載體的一載體中。於本文使用時，一「載體」為一核酸分子，其使用作為將外來核酸轉移至一細胞中的一載媒(vehicle)。載體可為用於在細胞中表現核酸的一載體。此等載體可包括一種啟動子序列，其可操作地鏈結至編碼待表現序列之核苷酸序列。一載體亦可包括一終止密碼子及表現強化子。本技藝中已知的任何合適的載體、啟動子、強化子及終止密碼子係可用於從本發明之一載體來表現一胜肽或多肽。
用語「可操作地連接」可包括一選定核酸序列及調節性核酸序列(例如，啟動子及/或強化子)、以一種使核酸序列表現受調節序列影響或控制(藉此形成一表現匣)之方式共價鏈結的情況。因此，若一調節序列能夠實現核酸序列轉錄，則該調節序列可操作地鏈結至選定核酸序列。形成的轉錄本接著可轉譯成一所欲的胜肽/多肽。
合適的載體包括質體、二元載體、DNA載體、mRNA載體、病毒載體(例如，γ反轉錄病毒載體(例如，鼠類白血病病毒(MLV)-衍生載體)、慢病毒(lentiviral)載體、腺病毒載體、腺病毒相關聯病毒載體、牛痘病毒載體及疱疹病毒載體)、轉位子為基載體以及人工染色體(例如，酵母人工染色體)。
在一些實施態樣中，載體可為一真核載體，例如包含於一真核細胞中從該載體表現蛋白所需之元素的一載體。在一些實施態樣中，載體可為一哺乳動物載體，例如包含一巨細胞病毒(CMV)或SV40啟動子以驅動蛋白質表現。
根據本發明之一抗原結合分子的組成多肽，係可由複數核酸中之不同核酸或由複數載體中之不同載體編碼。
包含/表現該抗原結合分子及多肽的細胞
本發明亦提供一種包含或表現本發明之一抗原結合分子、多肽或CAR的細胞。亦提供一種包含或表現本發明之一核酸、複數核酸、一載體或複數載體的細胞。
細胞可為一真核細胞，例如一哺乳動物細胞。哺乳動物可為靈長類動物(恆河猴、食蟹獼猴、非人類靈長類動物或人類)或非人類哺乳動物(例如兔、天竺鼠、大鼠、小鼠或其他嚙齒動物(包括嚙齒目中之任何動物)、貓、狗、豬、綿羊、山羊、牛(包括母牛(cow)，例如乳用母牛(dairy cow)，或牛目(order Bos)中之任何動物)、馬(包括馬目(order Equidae)中之任何動物)、驢及非人類靈長類動物)。
本發明亦提供一種用於生產一細胞之方法，該細胞包含本發明之核酸或載體，該方法包含將本發明之一核酸、複數核酸、一載體或複數載體導入至一細胞中。在一些實施態樣中，將本發明之一單離的核酸或載體導入至一細胞內，係包含轉形、轉染、電穿孔或轉導(例如，反轉錄病毒轉導)。
本發明亦提供一種用於生產一細胞之方法，該細胞表現/包含本發明之一抗原結合分子、多肽或CAR，該方法包含導入本發明之一核酸、複數核酸、一載體或複數載體至一細胞中。在一些實施態樣中，該等方法額外包含在合適於由該細胞表現核酸或載體的條件下培養該細胞。在一些實施態樣中，該等方法係在活體外施行。
本發明亦提供藉由本發明之方法所獲得或可獲得的細胞。
生產抗原結合分子及多肽
本發明之抗原結合分子及多肽可根據熟習此藝者已知的生產多肽的方法製備。
多肽可藉由化學合成法來製備，例如液相或固相合成法。舉例而言，肽/多肽可藉由使用例如Chandrudu et al., Molecules (2013), 18: 4373-4388中所述之方法合成，其在此藉由參照全文併入本文。
替選地，抗原結合分子及多肽可藉由重組型表現來生產。合適於多肽之重組型生產的分子生物學技術為本技藝中所熟知的，諸如於Green and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4th Edition), Cold Spring Harbor Press, 2012，以及於Nat Methods. (2008); 5(2): 135-146中所闡述者，其等兩者在此藉由參照全文併入本文。抗原結合分子之重組型生產的方法亦說明於Frenzel et al., Front Immunol. (2013); 4: 217以及Kunert and Reinhart, Appl Microbiol Biotechnol. (2016) 100: 3451–3461中，其等兩者在此藉由參照全文併入本文。
在一些情況中，本發明之抗原結合分子包含有多於一的多肽鏈。在此等情況中，該抗原結合分子之生產可包含多於一之多肽的轉錄及轉譯，以及多肽鏈隨後締合以形成該抗原結合分子。
可使用合適於多肽表現的任何細胞，用於本發明之重組型生產。細胞可為一原核細胞或真核細胞。在一些實施態樣中，細胞為一原核細胞，諸如古菌或細菌的一細胞。在一些實施態樣中，細菌可為革蘭氏陰性細菌，諸如腸細菌科的細菌，例如大腸桿菌。在一些實施態樣中，細胞可為一種真核細胞，諸如一酵母細胞、植物細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞，例如CHO、HEK (例如HEK293)、HeLa或COS細胞。在一些實施態樣中，該細胞為暫時或穩定表現多肽的一CHO細胞。
在一些情況中，細胞不是一原核細胞，因為一些原核細胞不允許如真核細胞一般地折疊或轉譯後修飾。此外，真核細胞可有非常高的表現位準，以及能使用適當的標籤而容易地從真核細胞純化蛋白質。亦可利用增強蛋白質分泌至培養基中的特異性質體。
在一些實施態樣中，多肽可以藉由游離蛋白質合成法(CFPS)來製備，例如根據使用Zemella et al. Chembiochem (2015) 16(17): 2420-2431中所述的系統，其在此藉由參照全文併入本文。
生產可涉及培養或發酵經修飾以表現感興趣的多肽的一真核細胞。培養或發酵可於一生物反應器中施行，該生物反應器提供適當之營養、空氣/氧及/或生長因子的供應。分泌的蛋白質可藉由以下方式收集：將培養基/發酵液自細胞分區、萃取蛋白質內含物，及單離個別蛋白質以單離分泌的多肽。培養、發酵及分離的技術為熟習此藝者熟知的，且說明於例如Green and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual中(第4版；藉由參照併入上文)。
生物反應器包括一或多個可培養細胞的器皿。藉著反應物持續流入反應器，及所培養的細胞持續流出反應器，可在生物反應器中持續進行培養。替選地，培養可批次進行。生物反應器監測且控制環境條件，諸如器皿內的pH、氧氣、進出流率及攪拌，以使得係提供最適的細胞培養條件。
在培養表現抗原結合分子/多肽的細胞之後，可單離感興趣的多肽。可使用本技藝中已知的從細胞分離蛋白質之任何合適的方法。為了單離多肽，可能必須使細胞與營養培養基分離。若多肽係從細胞分泌，則可藉由離心來使細胞與含有分泌的感興趣的多肽之培養基分開。若感興趣的多肽聚集於細胞內，則蛋白質單離可包含：離心以從細胞培養基分離細胞；以溶解緩衝劑處理細胞丸粒；及例如藉由超聲處理(sonification)、快速凍-融或滲透溶解來進行細胞破碎。
接著可能可期望從上清液或培養基單離感興趣的該(等)多肽，該上清液或培養基可能含有其他的蛋白質及非蛋白質組分。從上清液或培養基分離蛋白質組分的一般作法係藉由沉澱。不同溶解度的蛋白質係在不同濃度之諸如硫酸銨的沉澱劑下沉澱。舉例而言，在低濃度的沉澱劑下，萃取出水溶性蛋白質。因此，藉由添加不同增高濃度的沉澱劑，可以區分出不同溶解度的蛋白質。隨後可使用透析以從分離的蛋白質移除硫酸銨。
其他區分不同蛋白質的方法為本技藝中所知的，例如離子交換層析法及大小層析法。這些方法可使用作為沉澱之一替代，或是可於沉澱後施行。
一旦已經自培養物單離感興趣的多肽，則可能期望或需要濃縮該(等)多肽。一些濃縮蛋白質的方法為本技藝中所知的，諸如超過濾或凍乾。
組成物
本發明亦提供包含本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸、表現載體及細胞之組成物。
本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸、表現載體及細胞可調配為供臨床使用之藥學組成物或藥劑，以及可包含一藥學上可接受的載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。組成物可經調配用於局部、腸胃外、全身性、腔內、靜脈內、動脈內、肌內、鞘內、眼內、結膜內、腫瘤內、皮下、皮內、鞘內、口服或經皮投與途徑，經皮投與途徑可包括注射或輸注。
合適的調配物可包含一無菌或等張介質中的抗原結合分子。藥劑及藥學組成物能以包括凝膠之流體形式調配。流體調配物可經調配用於藉由注射或輸注(例如，經由導管)投與至人類或動物身體之一選定區。
在一些實施態樣中，該組成物經調配用於注射或輸注至例如一血管或腫瘤中。
根據本文所述之本發明亦提供用於生產藥學上有用之組成物的方法，此等生產方法可包含選自下列中之一或多個步驟：生產本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)或細胞；單離本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)或細胞；及/或混合本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)或細胞以及一藥學上可接受的載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑。
舉例而言，本文所述之發明的一另外之態樣係有關於一種調配或生產一藥劑或藥學組成物的方法，該藥劑或藥學組成物係供用於治療一疾病/病況(例如，一癌症)，該方法包含藉由混合本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)或細胞，與一藥學上可接受的載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑來調配一藥學組成物或藥劑。
在本揭露內容之態樣及實施態樣中，該抗原結合分子能以特定濃度/比例在包含特定化學組成的一組成物中提供。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一緩衝劑中。在本文中使用時，一「緩衝劑」係指一種緩衝溶液，其藉由其酸-鹼共軛組分之作用來抵抗pH改變。本揭露內容的一緩衝劑較佳具有由約4.5至約7.0之範圍內的一pH，較佳在約5.0至約6.5之範圍內。將控制pH在此範圍內之緩衝劑之實例係包括乙酸鹽、組胺酸、組胺酸-精胺酸、組胺酸-甲硫胺酸以及其他的有機酸緩衝劑。
在一些實施態樣中，包含該抗原結合分子之組成物係具有4.0至7.0中之一pH，例如pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2、或pH 5.0至pH 6.2中之一者。在一些實施態樣中，該組成物具有~5.5的一pH。在一些實施態樣中，該組成物具有~5.8的一pH。在一些實施態樣中，該組成物具有~6.5的一pH。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一乙酸鹽緩衝劑，亦即包含乙酸離子的一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含乙酸鹽，最終濃度為2 mM至200 mM乙酸鹽，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM乙酸鹽。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組胺酸緩衝劑，亦即包含組胺酸離子的一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含組胺酸，最終濃度為2 mM至200 mM組胺酸，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM組胺酸。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一磷酸鈉緩衝劑，亦即包含鈉及磷酸離子的一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含磷酸鈉，最終濃度為2 mM至200 mM磷酸鈉，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM磷酸鈉。
在一些實施態樣中，抗原結合分子係提供於一乙酸鈉緩衝劑，亦即包含鈉及乙酸離子之一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含乙酸鈉，最終濃度為2 mM至200 mM乙酸鈉，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM乙酸鈉。
在一些實施態樣中，抗原結合分子係提供於一精胺酸緩衝劑，亦即包含精胺酸離子之一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含精胺酸，最終濃度為1 mM至250 mM精胺酸，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM精胺酸。
在一些實施態樣中，抗原結合分子係提供於一組胺酸-精胺酸緩衝劑，亦即包含組胺酸及精胺酸離子之一緩衝劑中。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，該組成物包含：組胺酸，最終濃度為2 mM至200 mM組胺酸，例如5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM或18至22 mM中之一者；以及精胺酸，最終濃度為1 mM至300 mM精胺酸，例如10 mM至250 mM、50 mM至200 mM、75 mM至200 mM、100 mM至180 mM或125至175 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~20 mM組胺酸及~150 mM精胺酸。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於包含氯化鈉之組合物中。該組成物之氯化鈉組分能以1 mM至250 mM氯化鈉的一最終濃度提供，例如10 mM至250 mM、50 mM至200 mM、75 mM至200 mM、100 mM至180 mM或125至175 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~150 mM氯化鈉。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於包含甲硫胺酸的一組成物中。該組成物之甲硫胺酸組分能以1 mM至250 mM甲硫胺酸的一最終濃度提供，例如10 mM至250 mM、50 mM至200 mM、75 mM至200 mM、100 mM至180 mM或125至175 mM中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~150 mM甲硫胺酸。
在一些實施態樣中，包含抗原結合分子之組成物係包含一等張劑。等張劑可用以提供等張調配物。等張劑之實例包括例如鹽(例如，氯化鈉、氯化鉀)及糖(例如，蔗糖、葡萄糖、海藻糖)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於包含蔗糖之一組成物中。該組成物之蔗糖組分能以2%至20%的一最終濃度(以重量/體積計)提供，例如2%至15%、3%至12%、或4%至10%中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~2、~4、~6、或~8% (w/v)蔗糖。組成物之蔗糖組分能以200至300 nM的一最終濃度提供，例如~240 mM。
在一些實施態樣中，包含該抗原結合分子之組成物係包含一界面活性劑。於本文使用時，一「界面活性劑」係指降低表面張力之一製劑。界面活性劑較佳為一非離子界面活性劑。界面活性劑之實例包括聚山梨醇酯(聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-80)、泊洛沙姆(poloxamer) (泊洛沙姆-188)及曲拉通X-100。該界面活性劑較佳以約0.001% (w/v)至約0.5% (w/v)之範圍存在於該組成物中。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於包含聚山梨醇酯-20之一組成物中。該組成物之聚山梨醇酯-20組分能以0.001%至0.1%的一最終濃度(以重量/體積計)提供，例如0.002%至0.08%、0.006%至0.05%、或0.008%至0.04%中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-20。在一些實施態樣中，該組成物可包含~0.05% (w/v)聚山梨醇酯-20。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於包含聚山梨醇酯-80之一組成物中。該組成物之聚山梨醇酯-80組分能以0.001%至0.1%的一最終濃度(以重量/體積計)提供，例如0.002%至0.08%、0.006%至0.05%、或0.008%至0.04%中之一者。在一些實施態樣中，該組成物可包含~0.01% (w/v)聚山梨醇酯-80。在一些實施態樣中，該組成物可包含~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%、或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳地~8% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%、或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~5.8。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%、或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳地~8% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%、或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~5.1。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
1%至20% (例如，1%至15%、2%至10%、或3%至8%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳地~4% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%、或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~5.8。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
0.5%至10% (例如，1%至8%、1.5%至5%、或1.8%至3%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳地~2% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%、或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~5.3。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%、或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳地~8% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%、或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~6.1。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%、或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳地~8% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%、或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-20 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-20；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~5.8。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%、或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳地~8% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%、或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-20 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-20；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~5.5。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)磷酸鹽，例如磷酸鈉，更佳~20 mM磷酸鹽；
2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳~8% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~6.5。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)乙酸鹽，例如乙酸鈉，更佳~20 mM乙酸鹽；
2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳~8% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~5.5。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)乙酸鹽，更佳~20 mM乙酸鹽；
1 mM至250 mM (例如，10 mM至250 mM、50 mM至200 mM、75 mM至200 mM、100 mM至180 mM，或125至175 mM中之一者)氯化鈉，更佳~150 mM氯化鈉；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.09%、0.006%至0.08%或0.008%至0.07%中之一者)聚山梨醇酯-20 (w/v)，更佳~0.05% (w/v)聚山梨醇酯-20；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~5.5。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
1 mM至250 mM (例如，10 mM至250 mM、50 mM至200 mM、75 mM至200 mM、100 mM至180 mM，或125至175 mM中之一者)精胺酸，更佳~150 mM精胺酸；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.09%、0.006%至0.08%或0.008%至0.07%中之一者)聚山梨醇酯-20 (w/v)，更佳~0.05% (w/v)聚山梨醇酯-20；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~6.5。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
1 mM至250 mM (例如，10 mM至250 mM、50 mM至200 mM、75 mM至200 mM、100 mM至180 mM，或125至175 mM中之一者)精胺酸，更佳~150 mM精胺酸；
00.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~6.5。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
1 mM至250 mM (例如，10 mM至250 mM、50 mM至200 mM、75 mM至200 mM、100 mM至180 mM，或125至175 mM中之一者)氯化鈉，更佳~150 mM氯化鈉；
00.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~6.5。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%，或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳~8% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~5.5。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)組胺酸，更佳~20 mM組胺酸；
2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%，或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳~8% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~6.5。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係提供於一組成物中，其包含：
2 mM至200 mM (例如，5 mM至100 mM、10 mM至40 mM、12 mM至30 mM、15至25 mM，或18至22 mM中之一者)琥珀酸鹽，例如琥珀酸鈉，更佳~20 mM琥珀酸鹽；
2%至20% (例如，2%至15%、3%至12%，或4%至10%中之一者)蔗糖(w/v)，更佳~8% (w/v)蔗糖；
0.001%至0.1% (例如，0.002%至0.08%、0.006%至0.05%或0.008%至0.04%中之一者)聚山梨醇酯-80 (w/v)，更佳~0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80；以及
pH 4.0至7.0 (例如，pH 4.5至pH 6.8、pH 4.6至pH 6.4、pH 4.8至pH 6.2，或pH 5.0至pH 6.2中之一者)，更佳pH ~5.5。
該組成物可包含約0.5 mg/mL至約100 mg/mL抗原結合分子。該組成物可包含約0.5 mg/mL至約80 mg/mL抗原結合分子。該組成物可包含約0.75 mg/mL至約70 mg/mL抗原結合分子。該組成物可包含約1 mg/mL至約60 mg/mL抗原結合分子。該組成物可包含約1.2 mg/mL至約50 mg/mL抗原結合分子。
該抗原結合分子能以約30 mg/mL、約35 mg/mL、約40 mg/mL、約45 mg/mL、約50 mg/mL、約55 mg/mL、約60 mg/mL、約65 mg/mL或約70 mg/mL或其中之任何範圍的一濃度，調配於例如根據本揭露內容之組成物中。該抗原結合分子能以約50 mg/mL之一濃度，調配於例如根據本揭露內容之組成物中。
該抗原結合分子能以約0.5 mg/mL、0.6 mg/mL、0.7 mg/mL、0.8 mg/mL、0.9 mg/mL、1.0 mg/mL、1.1 mg/mL、1.2 mg/mL、1.3 mg/mL、1.4 mg/mL、1.5 mg/mL、1.6 mg/mL、1.7 mg/mL、1.8 mg/mL、1.9 mg/mL或2.0 mg/mL之一濃度，調配於例如根據本揭露內容之組成物中。該抗原結合分子能以約1.2 mg/mL之一濃度，調配於例如根據本揭露內容之組成物中。
50 mg/mL之抗原結合分子溶液可在投與之前，使用任何合適的賦形劑稀釋。在一些實施態樣中，50 mg/mL之抗原結合分子溶液係以0.9%氯化鈉(NaCl)稀釋以供投與。在一些實施態樣中，50 mg/mL抗原結合分子溶液係稀釋在例如100至250 mL的一體積中達至少1.2 mg/mL的一濃度以供投與。在一些實施態樣中，經稀釋之抗原結合分子溶液係接著投與至一主體，例如經由靜脈內投與，例如使用根據本揭露內容之一劑量/用劑方案，以例如治療本揭露內容之疾病/病況。在一些實施態樣中，經稀釋之抗原結合分子溶液在初始稀釋步驟之48小時內投與至該主體。
治療及預防應用
本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸、表現載體、細胞及組成物於治療及預防方法上得到應用。
本發明提供本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物，其供使用於醫學治療或預防的一方法中。亦提供本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物於製備供用於治療或預防一疾病或病況的藥物之用途。亦提供一種治療或預防一疾病或病況之方法，其包含投與一治療或預防有效量之本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物至一主體。
該等方法可有效降低一疾病/病況的發展或進程、緩解一疾病/病況的症候群或減少一疾病/病況的病理。該等方法可有效地預防疾病/病況之進程，例如以預防疾病/病況惡化，或減緩疾病/病況之發展速率。在一些實施態樣中，該方法可導致該疾病/病況的一改善，例如減少該疾病/病況的症候群或減少該疾病/病況的嚴重性/作用的一些其他互相關聯。在一些實施態樣中，該方法可預防該疾病/病況發展一晚期(例如，一慢性階段或轉移)。
應瞭解，本發明之物件可用於治療/預防能從表現HER3的細胞之數目及/或活性下降而得到治療或預防之益處的任何疾病/病況。舉例而言，該疾病/病況可為病理上牽涉表現HER3的細胞的一種疾病/病況，例如表現HER3的細胞之數目/比例的增高與該疾病/病況之發作、發展或進程，及/或該疾病/病況之一或多種症狀的嚴重性有正相關，或是表現HER3的細胞數目/比例增高為該疾病/病況之發作、發展或進程之一風險因子的一種疾病/病況。
在一些實施態樣中，根據本發明要治療/預防的疾病/病況係一種特徵在於表現HER3之細胞之數目/比例/活性增高的疾病/病況，例如與沒有該疾病/病況之表現HER3之細胞的數目/比例/活性相比之下。
在一些實施態樣中，該要治療/預防的疾病/病況係一癌症。
該癌症可為任何不想要的細胞增殖(或其自身顯現為不想要的細胞增殖的任何疾病)、贅生物或腫瘤。癌症可能是良性或惡性的以及可能為原發性或是次發性(轉移性)的。一贅生物或腫瘤可為任何異常的細胞生長或增殖，且可位於任何組織中。癌症可衍生自下列之組織/細胞，例如腎上腺、腎上腺髓質、肛門、闌尾、膀胱、血液、骨骼、骨髓、腦、乳房、盲腸、中樞神經系統(包括或不包括腦)小腦、子宮頸、結腸、十二指腸、子宮內膜、上皮細胞(例如，腎臟上皮)、膽囊、食道、神經膠細胞、心臟、迴腸、空腸、腎臟、淚腺(lacrimal glad)、喉、肝臟、肺臟、淋巴、淋巴結、淋巴母細胞、上頜骨、縱膈、腸繫膜、子宮肌層、鼻咽、網膜、口腔、卵巢、胰臟、腮腺、周邊神經系統、腹膜、胸膜、前列腺、唾腺、乙狀結腸、皮膚、小腸、軟組織、脾臟、胃、睪丸、胸腺、甲狀腺、舌、扁桃腺、氣管、子宮、女陰及/或白血球細胞。
要治療的腫瘤可為神經或非神經系統腫瘤。神經系統腫瘤可起源於中樞或周邊神經系統，例如神經膠質瘤、髓母細胞瘤、腦脊髓膜瘤、神經纖維瘤、室管膜瘤、神經鞘瘤(Schwannoma)、神經纖維肉瘤、星細胞瘤及寡樹突神經膠質瘤中。非神經系統癌症/腫瘤可起源於任何其他非神經組織，實例包括黑色素瘤、間皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、非何杰金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphoma) (NHL)、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(myelodysplastic syndrome) (MDS)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、肝癌、表皮樣癌瘤、前列腺癌瘤、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、胰臟癌、胸腺癌瘤、NSCLC、血液癌症及肉瘤。
HER3及其與癌症的關聯及角色例如於Karachaliou et al., BioDrugs. (2017) 31(1):63-73及Zhang et al., Acta Biochimica et Biophysica Sinica (2016) 48(1): 39–48內被回顧，其等兩者在此藉由參照全文併入本文。
在一些實施態樣中，一癌症係選自於：包含表現HER3之細胞的一癌症、一實性腫瘤、乳癌、乳癌瘤、管癌瘤、胃癌(gastric cancer)、胃癌瘤、胃腺癌、結腸直腸癌、結腸直腸癌瘤、結腸直腸腺癌、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤(SCCHN)、肺癌、肺腺癌、鱗狀細胞肺癌瘤、卵巢癌、卵巢癌瘤、卵巢漿液性腺癌、腎癌(kidney cancer)、腎臟細胞癌瘤、腎臟透明細胞癌瘤、腎臟細胞腺癌、腎臟乳突細胞癌瘤、胰臟癌、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、子宮頸癌、子宮頸鱗狀細胞癌瘤、皮膚癌、黑色素瘤、食道癌(esophageal cancer)、食道腺癌、肝臟癌、肝細胞癌瘤、膽管癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌瘤、甲狀腺癌(thyroid cancer)、甲狀腺癌瘤、嗜鉻細胞瘤、副神經節瘤、膀胱癌、膀胱泌尿上皮細胞癌瘤、前列腺癌、前列腺腺癌、肉瘤及胸腺瘤。
在一些實施態樣中，本發明要治療的癌症係選自於：一HER3-表現癌症、胃癌(gastric cancer) (例如，胃癌瘤、胃腺癌、胃腸腺癌)、頭頸部癌(例如，頭頸部鱗狀細胞癌瘤)、乳癌(例如，三重陰性乳癌)、卵巢癌(例如，卵巢癌瘤)、肺癌(例如，NSCLC、肺腺癌、鱗狀肺細胞癌瘤)、黑色素瘤、前列腺癌(例如，去勢抗性前列腺癌)、口腔癌(例如，口咽癌)、腎臟癌(例如，腎臟細胞癌瘤)或結腸直腸癌(例如，結腸直腸癌瘤；RAS野生型結腸直腸癌)、食道癌(oesophageal cancer)、胰臟癌、一實性癌症及/或一液態癌症(liquid cancer)。
在一些實施態樣中，本發明要治療的癌症係為表現/過度表現HER3的一實性癌症，其選自於：胃癌(gastric cancer) (例如，胃癌瘤、胃腺癌、胃腸腺癌)、頭頸部癌(例如，頭頸部鱗狀細胞癌瘤)、乳癌(例如，三重陰性乳癌)、卵巢癌(例如，卵巢癌瘤)、肺癌(例如，NSCLC、肺腺癌、鱗狀肺細胞癌瘤、侵襲性黏液性腺癌)、黑色素瘤、前列腺癌(例如，去勢抗性前列腺癌)、口腔癌(例如，口咽癌)、結腸直腸癌(例如，結腸直腸癌瘤；RAS野生型結腸直腸癌)、食道癌(oesophageal cancer)、胰臟癌、膀胱癌、子宮頸癌、子宮內膜癌或肝細胞癌瘤(HCC)。癌症可為轉移性的。
治療/預防可係針對下列中之一或更多者：延遲/預防該癌症症狀的發作/進程、減少該癌症的症狀嚴重性、減少該癌症細胞的存活/生長/侵襲/轉移、減少該癌症細胞的數目及/或增高主體的存活。
在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含表現一EGFR家族成員(例如，HER3、EGFR、HER2或HER4)的細胞，及/或表現一EGFR家族成員之一配體的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症為一EGFR家族成員陽性的一癌症。在一些實施態樣中，該癌症過度表現一EGFR家族成員及/或一EGFR家族成員的一配體。過度表現能藉由偵測到一表現位準係更大於當等之非癌細胞/非腫瘤組織的表現位準來判定。
在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含表現HER3及另一EGFR家族成員(例如，EGFR、HER2或HER4)的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含過度表現HER3及過度表現另一EGFR家族成員(例如，EGFR、HER2或HER4)的細胞。過度表現HER3/EGFR家族成員能藉由偵測到HER3/另一EGFR家族成員的一表現位準更大於當等之非癌細胞/非腫瘤組織的表現位準來判定。
可藉由任何合適的手段來判定表現。表現可為基因表現(例如，轉錄向上調節)或蛋白質表現。基因表現可藉由例如偵測編碼HER3的mRNA來判定，例如藉由定量即時PCR (qRT-PCR)來判定。蛋白質表現可藉由舉例而言，例如以抗體為基的方法來判定，例如藉由西方墨點法、免疫組織化學法、免疫細胞化學法、流式細胞分析術或ELISA。
在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含表現HER3的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症為HER3陽性的一癌症。在一些實施態樣中，該癌症過度表現HER3。過度表現HER3能藉由偵測到一HER3表現位準更大於當等之非癌細胞/非腫瘤組織的表現位準來判定。
在一些實施態樣中，就本文所述之治療，一患者被選擇，係可基於例如在從該患者獲得之一樣本中偵測到表現HER3或過度表現HER3的一癌症。
在一些實施態樣中，就本文所述之治療，一患者被選擇，係可基於在從該患者獲得的一樣本中偵測到表現HER3及另一EGFR家族成員(例如EGFR、HER2或HER4)或過度表現HER3及另一EGFR家族成員(例如EGFR、HER2或HER4)的一癌症。
在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症包含表現一HER3配體(例如，NRG1及/或NRG2)的細胞。在一些實施態樣中，要治療/預防的癌症所包含的細胞，其等表現的NRG1及/或NRG2的一表現位準係更大於當等之非癌細胞/非腫瘤組織的表現位準。癌症可說明為包含過度表現NRG1及/或NRG2之細胞。
本文所述之HER3-結合抗原結合分子證實係以極高親和力與HER3結合，此係於HER3與NRG結合時(亦即，當HER3是以「開放式」構形提供時)，且亦於HER3沒有與NRG結合時(亦即，當HER3是以「封閉式」提供構形時)。
因此本發明之抗原結合分子係特別有益於治療/預防藉HER3配體表現/過度表現來特徵化的癌症上，例如包含表現/過度表現一HER3配體之細胞的癌症/腫瘤。
在一些實施態樣中，就本文所述之治療，一患者被選擇，係可基於例如在從主體獲得的一樣本中偵測到由HER3配體表現/過度表現所特徵化的一癌症，諸如包含表現/過度表現NRG1及/或NRG2之細胞的一癌症。基於偵測到HER3配體表現/過度表現的選擇係可組合基於偵測到HER3及/或另一EGFR家族成員(例如，EGFR、HER2或HER4)的選擇。
在一些實施態樣中，根據本發明要治療的癌症係包含帶有一基因變異體(例如，一突變)的細胞，且相對於可比較細胞而言，其造成一HER3配體之增高的(基因及/或蛋白)表現，該可比較細胞帶有不包含該基因變異體的一參考對偶基因(例如，一未突變或「野生型」對偶基因)。該基因變異體可為或包含在相對於參考對偶基因之核苷酸序列上的插入、缺失、取代或大規模易位/重排。
「導致」一HER3配體之增高表現的突變，可為已知或預測會造成、或者可相關聯於一HER3配體之增高的基因/蛋白質表現。導致一HER3配體之增高表現的突變可稱為「活化」突變。
造成一HER3配體之增高表現的一突變，可導致一不被未帶該突變之一當等細胞之基因體核酸所表現及/或編碼的HER3配體的基因或蛋白質表現。亦即，該HER3配體可為該突變結果所產生的一新生抗原，且因此「增高表現」可從無表現開始。作為例示，相對於缺乏CD74-NRG1基因融合體的細胞，一包含CD74-NRG1基因融合體之細胞係展現出該基因融合體所編碼之CD74-NRG1融合多肽的增高表現。
造成一HER3配體增高表現的一突變，可導致一會被未包含該突變之當等細胞所表現、及/或被當等細胞之基因體核酸所編碼的HER3配體的增高基因或蛋白質表現。作為例示，一細胞可包含會導致編碼NRG1之核酸之轉錄位準增高的一突變，其係相對於未包含該突變之一當等細胞其編碼NRG1之核酸的轉錄位準。
在一些實施態樣中，相對於未包含突變之一當等細胞，造成一HER3配體之增高表現的一突變係可造成一HER3配體之基因表現增高。在一些實施態樣中，相對於未包含突變之一當等細胞，造成一HER3配體之增高表現的一突變係可造成一HER3配體之蛋白質表現增高。
在一些實施態樣中，相對於未包含突變之一當等細胞，造成一HER3配體之增高表現的一突變係可造成一HER3配體在包含該突變之一細胞的細胞表面上或處之位準增高。在一些實施態樣中，相對於未包含突變之一當等細胞，造成一HER3配體之增高表現的一突變係可造成來自包含該突變之一細胞的一HER3配體之一分泌位準增高。
相對於一參考細胞之HER3配體之表現位準，具有增高之一HER3配體表現的細胞(例如，作為突變之結果)，係可說明為「過度表現」該HER3配體、或有HER3配體「向上調節表現」。舉例而言，一癌症，其包含帶一突變之細胞而會導致一HER3配體相對於缺乏該突變之當等細胞有增高表現，則該癌症可說明為包含了會展現該HER3配體之過度表現/向上調節表現之細胞的一癌症。在一些實施態樣中，缺乏該突變之參考細胞可為(例如當等細胞類型之)一非癌細胞、或(例如當等細胞類型之)一癌細胞。
本文中，一「HER3配體」通常意欲指能夠透過HER3之域I及III所形成的HER3配體結合區來結合HER3的分子。在一些實施態樣中，一HER3配體經由與HER3之域I及/或III交互作用來與HER3結合。實例性HER3配體包括諸如NRG1及NRG2的神經調節蛋白，其係經由其EGF樣域與HER3配體結合區之間的交互作用來與HER3結合。
該HER3配體較佳係能夠透過HER3受體及/或包含HER3之受體複合物來結合及觸發訊息傳導。由本揭露內容將顯知，包含HER3之受體複合物係可進一步包含本文所述之一HER3交互作用伙伴，例如，HER3、HER2、EGFR、HER4、HGFR、IGF1R及/或cMet)。
在一些實施態樣中，HER3配體能夠結合至由具有該HER3配體之增高表現的細胞以外的一細胞所表現的HER3受體/受體複合物。舉例而言，在一些實施態樣中，該HER3配體能夠與一HER3-表現癌細胞結合。
在一些實施態樣中，HER3配體能夠結合至由具有HER3配體之增高表現的一細胞所表現的HER3受體/受體複合物。
在一些實施態樣中，要治療的癌症包含(i)表現HER3的細胞，及(ii)表現一HER3配體之細胞(例如，具有一HER3配體之增高表現，例如，係導致一HER3配體之增高表現之突變的一結果)。
在一些實施態樣中，要治療的癌症包含(i)表現HER3及(ii)亦表現一HER3配體之細胞(例如，其具有一HER3配體之增高表現者，例如係導致一HER3配體之增高表現之突變的一結果)。
在一些實施態樣中，HER3配體包含下列或由下列組成：一HER3配體之一HER3-結合區之胺基酸序列；或衍生自一HER3配體之一HER3-結合區的一胺基酸序列。衍生自一HER3配體之一HER3-結合區的一胺基酸序列與衍生出該序列的胺基酸序列可含有至少60% (例如70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，HER3配體包含能與HER3結合之一EGF樣域、或其一HER3-結合片段。在一些實施態樣中，一HER3-結合EGF樣域/片段係為或衍生自一EGF家族成員(例如，肝素結合性EGF樣生長因子(HB-EGF)、轉化生長因子-α (TGF-α)、雙調蛋白(AR), 上皮調節素(epiregulin) (EPR)、表原(epigen)、β細胞素(BTC)、NRG1、NRG2、NRG3或NRG4)。
EGF家族成員含有SEQ ID NO：240所顯示之保留胺基酸序列之一或多個重覆，其含有六個半胱胺酸殘基，該等殘基形成三個分子間雙硫鍵，其提供與同源受體結合之高親和力所需的三個結構環(參見Harris et al. Experimental Cell Research (2003) 284(1): 2-13)。在一些實施態樣中，一HER3配體包含一胺基酸序列之一或多個拷貝，該胺基酸序列符合SEQ ID NO：240所示之一致性序列。
實例性HER3配體包括神經調節蛋白(NRG)。神經調節蛋白包括NRG1、NRG2、NRG3及NRG4。SEQ ID NO：232顯示人類NRG1之胺基酸序列(α同功異型體)。人類NRG1之α同功異型體及若干其他同功異型體(包括α1a同功異型體(見UnitProt：Q02297-2)、α2b同功異型體(見UnitProt：Q02297-3)及α3同功異型體(見UnitProt：Q02297-4))係包含SEQ ID NO：233中所示之EGF樣域，其等通過該域與HER3結合。SEQ ID NO：234顯示人類NRG2之胺基酸序列(同功異型體1)。人類NRG2之同功異型體1及若干其他同功異型體(包括同功異型體3 (見UniProt：O14511-3)、同功異型體5 (見UniProt：O14511-5)及同功異型體6 (見UniProt：O14511-6)及同功異型體DON-1B (見UniProt：O14511-7)及同功異型體DON-1R (見UniProt：O14511-8))係包含SEQ ID NO：235中所示之EGF樣域，其等通過該域與HER3結合。SEQ ID NO：236顯示人類NRG3之胺基酸序列；且SEQ ID NO：237顯示人類NRG3之EGF樣域。SEQ ID NO：238顯示人類NRG4之胺基酸序列；且SEQ ID NO：239顯示人類NRG3之EGF樣域。在一些實施態樣中，一NRG係選自於NRG1、NRG2、NRG3及NRG4。在一些實施態樣中，一NRG係選自於NRG1及NRG2。
在一些實施態樣中，一EGF樣域/片段係包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與一NRG (NRG1、NRG2、NRG3或NRG4)之EGF樣域有至少60% (例如，70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)的胺基酸序列同一性。在一些實施態樣中，一EGF樣域/片段係包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與SEQ ID NO：233、235、237或239中之一者有至少60% (例如70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)的胺基酸序列同一性。
在一些實施態樣中，HER3配體為一NRG (例如，NRG1、NRG2、NRG3或NRG4；例如，NRG1或NRG2)、或是包含衍生自一NRG之胺基酸序列的一胺基酸序列(亦即，包含與一NRG之一胺基酸序列有至少60%的胺基酸序列同一性(例如70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)的一胺基酸序列)。
在一些實施態樣中，HER3配體包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與該HER3配體(例如一NRG，例如NRG1、NRG2、NRG3或NRG4；例如，NRG1或NRG2)之HER3-結合區有至少60%的胺基酸序列同一性(例如，70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)。在一些實施態樣中，一HER3配體包含一胺基酸序列或由其組成，該胺基酸序列與一NRG (例如，NRG1、NRG2、NRG3或NRG4；例如，NRG1或NRG2)之EGF樣域有至少60%的胺基酸序列同一性(例如，70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)。
在一些實施態樣中，一HER3配體並非一EGFR家族蛋白(例如，HER3、HER2、EGFR、HER4、HGFR、IGF1R、cMet)。
在一些實施態樣中，導致一HER3配體之增高表現的突變係為一NRG基因融合體。在一些實施態樣中，HER3配體是一NRG基因融合體的產物(亦即，由其所編碼之一多肽)。在一些實施態樣中，該癌症包含具有一NRG基因融合體的細胞。
於本文使用時，一「NRG基因融合體」係指編碼一多肽之基因變異體且其包含(i)一NRG蛋白(例如，NRG1、NRG2、NRG3或NRG4；例如，NRG1或NRG2)之一胺基酸序列；及(ii)該NRG蛋白以外之一蛋白質的一胺基酸序列。
將可理解的是，一NRG基因融合體較佳係編碼如本文所述之一HER3配體。在一些實施態樣中，一NRG基因融合體係編碼包含一NRG蛋白之一HER3-結合區的一多肽。在一些實施態樣中，一NRG基因融合體係編碼一多肽，其包含一NRG蛋白之EGF樣域、或能與HER3結合且與一NRG蛋白之EGF樣域有至少60%之胺基酸序列同一性的一胺基酸序列 (例如，70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)。
在一些實施態樣中，一NRG基因融合體係編碼包含一跨膜域的一融合多肽。在一些實施態樣中，一NRG基因融合體係編碼一融合多肽，其包含該NRG蛋白以外的一蛋白質的跨膜域。
在一些實施態樣中，一NRG基因融合體係一NRG1基因融合體。在一些實施態樣中，該NRG1基因融合體係編碼一多肽，其包含NRG1之EGF樣域、或能與HER3結合且與NRG1之EGF樣域有至少60%之胺基酸序列同一性的一胺基酸序列(例如，70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)。
NRG1基因融合體係說明於例如，WO 2018/182422 A1、WO 2019/051155 A1、Dhanasekaran et al., Nat Commun. (2014) 5: 5893、Drilon et al., Cancer Discov. (2018) 8(6):686-695、Nagasaka et al., Journal of Thoracic Oncology (2019) 14(8):1354-1359以及Jonna et al., Clin Cancer Res. (2019) 25(16):4966-4972，其在此藉由參照全文併入本文。NRG1基因融合體之多樣性可能起因於NRG1位於染色體8，其特別易受基因體易位事件影響(Adélaïde et al., Genes Chromosomes Cancer. (2003) 37(4):333-45)。
在一些實施態樣中，一NRG1基因融合體係選自於CLU-NRG1、CD74-NRG1、DOC4-NRG1、SLC3A2-NRG1、RBPMS-NRG1、WRN-NRG1、SDC4-NRG1、RAB2IL1-NRG1、VAMP2-NRG1、KIF13B-NRG1、THAP7-NRG1、SMAD4-NRG1、MDK-NRG1、TNC-NRG1、DIP2B-NRG1、MRPL13-NRG1、PARP8-NRG1、ROCK1-NRG1、DPYSL2-NRG1、ATP1B1-NRG1、CDH6-NRG1、APP-NRG1、AKAP13-NRG1、THBS1-NRG1、FOXA1-NRG1、PDE7A- NRG1、RAB3IL1-NRG1、CDK1-NRG1、BMPRIB-NRG1、TNFRSF10B-NRG1以及MCPH1-NRG1。在一些實施態樣中，一NRG1基因融合體係CLU-NRG1。
CD74-NRG1基因融合體係說明於例如，Fernandez-Cuesta et al. Cancer Discov. (2014) 4:415–22以及Nakaoku et al., Clin Cancer Res (2014) 20:3087-93。DOC4-NRG1基因融合體係說明於例如，Liu et al., Oncogene. (1999) 18(50):7110-4以及Wang et al., Oncogene. (1999) 18(41):5718-21。SLC3A2-NRG1基因融合體係說明於例如，Nakaoku et al., Clin Cancer Res (2014) 20:3087-93, Shin et al., Oncotarget (2016) 7:69450–65以及Shin et al., Mol Cancer Ther. (2018) 17(9):2024-2033。RBPMS-NRG1, WRN-NRG1, RAB2IL1-NRG1及SDC4-NRG1基因融合體係說明於例如，Dhanasekaran et al., Nat Commun. (2014) 5: 5893。VAMP2-NRG1基因融合體係說明於例如，Jung et al., J Thorac Oncol. (2015) 10(7):1107-11以及Shim et al., J Thorac Oncol. (2015) 10(8):1156-62。KIF13B-NRG1基因融合體係說明於例如，Xia et al., Int J Surg Pathol. (2017) 25(3):238-240。SMAD4-NRG1、AKAP13-NRG1、THBS1-NRG1、FOXA1-NRG1、PDE7A- NRG1、RAB3IL1-NRG1及THAP7-NRG1基因融合體係說明於例如，Drilon et al., Cancer Discov. (2018) 8(6):686-695。MDK-NRG1、TNC-NRG1、DIP2B-NRG1、MRPL13-NRG1、PARP8-NRG1、ROCK1-NRG1及DPYSL2-NRG1基因融合體係說明於例如，Jonna et al., Clin Cancer Res. (2019) 25(16):4966-4972。ATP1B1-NRG1基因融合體係說明於例如，Drilon et al., Cancer Discov. (2018) 8(6):686-695以及Jones et al., Annals of Oncology (2017) 28:3092–3097。CLU-NRG1基因融合體係說明於例如，Drilon et al., Cancer Discov. (2018) 8(6):686-695以及Nagasaka et al., Journal of Thoracic Oncology (2019) 14(8):1354-1359。
在一些實施態樣中，一NRG基因融合體係一NRG2基因融合體。在一些實施態樣中，該NRG2基因融合體係編碼一多肽，其包含NRG2之EGF樣域、或能與HER3結合且與NRG2之EGF樣域有至少60%之胺基酸序列同一性的一胺基酸序列(例如，70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)。
NRG2基因融合體包括SLC12A2-NRG2，其係說明於例如，WO 2015/093557 A1；以及ZNF208-NRG2，其係說明於Dupain et al., Mol Ther. (2019) 27(1):200-218中。
一包含具有一導致一HER3配體之增高表現的突變之細胞(例如包含具有一NRG基因融合體之細胞，例如一NRG1基因融合體或一NRG2基因融合體)的癌症可為任何本文所述之癌症。在一些實施態樣中，此等癌症可衍生自肺臟、乳房、頭、頸、腎臟、卵巢、胰臟、前列腺、子宫、膽囊、結腸、直腸、膀胱、軟組織或鼻咽的組織/細胞。
在一些實施態樣中，包含具有一導致一HER3配體之增高表現的突變之細胞(例如包含具有一NRG基因融合體之細胞，例如一NRG1基因融合體或一NRG2基因融合體)的癌症係選自於：肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、侵襲性黏液性肺腺癌、肺鱗狀細胞癌瘤、乳癌、乳癌瘤、乳侵襲性癌瘤、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤、腎臟癌、腎臟透明細胞癌瘤、卵巢癌、卵巢漿液性囊腺癌、胰臟癌、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、前列腺腺癌、前列腺癌、子宮內膜癌、子宮癌肉瘤、膽囊癌、膽管癌、結腸直腸癌、膀胱癌、膀胱尿路上皮癌、肉瘤、軟組織肉瘤、神經內分泌腫瘤及鼻咽之神經內分泌腫瘤。
在特定之實施態樣中，根據本發明要治療的癌症係為包含具有一NRG1基因融合體之細胞的肺癌(例如，非小細胞肺癌、肺腺癌、侵襲性黏液性肺腺癌及肺鱗狀細胞癌瘤)。
將可理解的是，在本文之實施態樣中，包含具特定特徵之細胞的癌症可為包含具有那些特徵之細胞的腫瘤或包含該等腫瘤。
如本技藝中常見，包含具特定特徵之細胞的一癌症/腫瘤於本文可簡稱為具該等特徵之癌症/腫瘤。作為例示，包含具有NRG1基因融合體之細胞的一癌症/腫瘤係可簡稱為「包含NRG1基因融合體之一癌症/腫瘤」或「一NRG1基因融合體癌症/腫瘤」。
本發明之物件較佳係以一「治療有效」或「預防有效」量來投與，此係足以對主體顯示治療或預防益處。所投與之實際量及投與速率及時間過程(time-course)將取決於疾病/病況之性質及嚴重性以及所投與之特定物件。治療的處方，例如決定劑量等，係在全科醫師及其他醫療醫生的責任範圍內，並且一般要考慮要治療的疾病/病症、個別主體之病況、遞送位點、投與方法以及執業人員已知的其他因素。上文所提及之技術及規程的實例係可見於Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20th Edition, 2000, pub. Lippincott, Williams & Wilkins中。
投與可取決於所要治療之病況同時抑或是依序地單獨或與其他治療組合進行。本文所述之抗原結合分子或組成物及一治療劑可同時或依序投與。
在一些實施態樣中，該方法包含額外的治療或預防性介入，例如用於治療/預防一癌症。在一些實施態樣中，該治療或預防性介入係選自於化學療法、免疫療法、放射療法、手術、疫苗接種及/或荷爾蒙療法。在一些實施態樣中，該治療或預防性介入包含白血球分離術(leukapheresis)。在一些實施態樣中，該治療或預防性介入包含幹細胞移植。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係組合能夠抑制一EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。
據此，本發明提供組成物，其包含根據本發明之一物件(例如，本發明之一抗原結合分子)及能夠抑制一EGFR家族成員(例如，EGFR、HER2、HER3或HER4)所媒介之訊息傳導的另一製劑。亦提供此等組成物於本文所述之疾病/病況之醫學治療及預防方法上的用途。
亦提供用於治療/預防本文所述之疾病/病況之方法，其包含投與根據本發明之一物件的本發明物件(例如，本發明之一抗原結合分子)、以及能夠抑制一EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的另一製劑。
能夠抑制EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的製劑係為本技藝中已知的，且包括小分子抑制劑(例如，酪胺酸激酶抑制劑)、單株抗體(及其抗原結合片段)、胜肽/多肽抑制劑(例如，誘餌配體/受體或胜肽適體)及核酸(例如，反義核酸、剪接轉換(splice-switching)核酸或核酸適體)。EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的抑制劑，係包括透過對於一EGFR家族成員的一直接效應來抑制訊息傳導的製劑、其一交互作用伙伴、及/或涉及該EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的一下游因子。
在一些實施態樣中，一EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的一拮抗劑，係抑制EGFR、HER2、HER4及HER3中之一者或多者所媒介的訊息傳導。EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的抑制劑係說明於例如Yamaoka et al., Int. J. Mol. Sci. (2018), 19, 3491中，其在此藉由參照全文併入本文。在一些實施態樣中，該拮抗劑為一泛-ErbB抑制劑。在一些實施態樣中，該拮抗劑為EGFR所媒介之訊息傳導的一抑制劑(例如，西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)、吉菲替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、拉帕替尼(lapatinib)、阿法替尼(afatinib)、布里格替尼(brigatinib)、埃克替尼(icotinib)、奥希替尼(Osimertinib)、扎妥木單抗(zalutumumab)、凡德他尼(vandetanib)、耐昔妥單抗(necitumumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、達克替尼(dacomitinib)、度立妥珠單抗(duligotuzumab)或馬妥珠單抗(matuzumab)。在一些實施態樣中，該拮抗劑為HER2所媒介之訊息傳導的一抑制劑(例如，曲妥珠單抗(trastuzumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、拉帕替尼(lapatinib)、奈拉替尼(neratinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、MM-111、MCLA-128或馬吉妥昔單抗(margetuximab))。在一些實施態樣中，該拮抗劑為HER3所媒介之訊息傳導的一抑制劑(例如，塞里班土單抗(seribantumab)、路瑞妥珠單抗(lumretuzumab)、易利珠單抗(elgemtumab)、KTN3379、AV-203、GSK2849330、REGN1400、MP-RM-1、EV20、度立妥珠單抗(duligotuzumab)、MM-111、異妥拉明單抗(istiratumab)、MCLA-128、帕圖單抗(patritumab)、EZN-3920、RB200或U3-1402)。在一些實施態樣中，該拮抗劑為HER4所媒介之訊息傳導的抑制劑(例如，拉帕替尼(lapatinib)、依魯替尼(ibrutinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)或奈拉替尼(neratinib))。
在一些實施態樣中，一EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的拮抗劑係抑制一EGFR家族成員之訊息傳導的一下游作用子。藉由一EGFR家族成員之訊息傳導的下游作用子係包括例如，PI3K、AKT、KRAS、BRAF、MEK/ERK及mTOR。在一些實施態樣中，一EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的拮抗劑係為MAPK/ERK途徑的一抑制劑。在一些實施態樣中，一EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的拮抗劑係為PI3K/ATK/mTOR途徑的一抑制劑。在一些實施態樣中，該拮抗劑為一PI3K抑制劑(例如，哌替利司(pictilisib)、布帕利司(buparlisib)、艾代拉利司(idelalisib)、庫潘利司(copanlisib)或杜維利司(duvelisib))。在一些實施態樣中，該拮抗劑為一AKT抑制劑(例如，MK-2206、AZD5363、伊帕塔色替(ipatasertib)、VQD-002、哌立福辛(perifosine)或米替福新(miltefosine))。在一些實施態樣中，該拮抗劑為一BRAF抑制劑(例如，威羅菲尼(vemurafenib)、達拉菲尼(dabrafenib)、SB590885、XL281、RAF265、恩拉非尼(encorafenib)、GDC-0879、PLX-4720、索拉非尼(sorafenib)或LGX818)。在一些實施態樣中，該拮抗劑為一MEK/ERK抑制劑(例如，曲美替尼(trametinib)、克美替尼(cobimetinib)、比美替尼(binimetinib)、司美替尼(selumetinib)、PD-325901、CI-1040、PD035901或TAK-733)。在一些實施態樣中，該拮抗劑為一mTOR抑制劑(例如，雷帕黴素(rapamycin)、地伏莫司(deforolimus)、替西羅莫司(temsirolimus)、依維莫司(everolimus)、利達夫里莫斯(ridaforolimus)或沙帕色替(sapanisertib))。
在一些實施態樣中，根據本發明之一態樣要治療的癌症(包括單一療法或組合療法)，係對一EGFR家族成員(例如，EGFR、HER2、HER4及/或HER3)媒介之訊息傳導的一拮抗劑(例如，前面三個段落所述的一拮抗劑)治療有抗性的一癌症。在一些實施態樣中，要治療的主體具有對一EGFR家族成員媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療有抗性的一癌症。在一些實施態樣中，要治療的主體具有已經發展出對一EGFR家族成員媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療有抗性的一癌症。在一些實施態樣中，要治療的主體具有先前曾對一EGFR家族成員媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療有反應、但現在對該拮抗劑治療有抗性的一癌症。在一些實施態樣中，要治療的主體具有在一EGFR家族成員媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療後已經復發及/或進程的一癌症。在一些實施態樣中，要治療的主體具有最初對一EGFR家族成員媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療有反應、但後來在所述治療中進程的一癌症。
在一些實施態樣中，根據本發明要治療的一主體可為已判定具有(亦即，已診斷出具有)一癌症，該癌症包含具有造成(例如，本文所述之)一HER3配體增強表現之一突變的細胞。在一些實施態樣中，本發明之方法可包含判定一主體是否具有一包含下列細胞之癌症：具有造成一HER3配體增強表現之一突變的細胞。在一些實施態樣中，該方法包含分析來自一癌症之細胞的核酸。在一些實施態樣中，該方法包含偵測造成一HER3配體之增強表現的一突變。
熟習此藝者能夠容易地識別本文所述之癌症及主體。此等癌症及主體可例如透過監測癌症隨著時間的發展/進程(及/或其相關性)來識別，例如在一EGFR家族成員媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療過程期間。在一些實施態樣中，識別此等主體/癌症可包含例如活體外之一分析樣本(例如，一生檢)。在一些實施態樣中，該癌症可被判定包含具有與該拮抗劑治療感受性降低及/或有抗性相關聯之一突變的細胞。在一些實施態樣中，該癌症可被判定包含具有一EGFR家族成員之向上調節表現的細胞。
在特定實施態樣中，要治療的癌症係對EGFR及/或HER2媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療有抗性的一癌症。在一些實施態樣中，要治療的主體具有對EGFR及/或HER2媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療有抗性的一癌症。在一些實施態樣中，要治療的主體具有已經發展出對EGFR及/或HER2媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療有抗性的一癌症。在一些實施態樣中，要治療的主體具有先前曾對EGFR及/或HER2媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療有反應、但現在對該拮抗劑治療有抗性的一癌症。在一些實施態樣中，要治療的主體具有在EGFR及/或HER2媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療後、已經復發及/或進展的一癌症。在一些實施態樣中，要治療的主體具有最初對EGFR及/或HER2媒介之訊息傳導的一拮抗劑治療有反應、但後來在所述治療中進程的一癌症。在一些實施態樣中，要治療的主體具有與例如EGFR及/或HER2之一EGFR家族成員之訊息傳導的擴增相關聯的一癌症。
在特定實施態樣中，要治療的癌症包含賦予對一BRAF抑制劑治療有抗性的突變。在一些實施態樣中，該突變為位於BRAF V600之突變。在一些實施態樣中，該突變為BRAF V600E或V600K。該癌症可為甲狀腺癌(thyroid cancer)或結腸癌，例如RAS野生型結腸直腸癌。
在特定實施態樣中，要治療的癌症包含賦予對一BRAF抑制劑治療抗性的突變(例如，位於BRAF V600之突變)，以及治療包含投與威羅菲尼(vemurafenib)或達羅菲尼(darafenib)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係組合能夠抑制一免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。在一些實施態樣中，該免疫查核點分子係例如PD-1、CTLA-4、LAG-3、VISTA、TIM-3、TIGIT或BTLA。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係組合能夠促進一共刺激受體所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。在一些實施態樣中，該共刺激受體係例如CD28、CD80、CD40L、CD86、OX40、4-1BB、CD27或ICOS。
據此，本發明提供包含下列之組成物：根據本發明之一物件(例如，根據本發明之一抗原結合分子)及能夠抑制一免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的一製劑。亦提供包含下列之組成物：本發明之物件及能夠促進一共刺激受體所媒介之訊息傳導的一製劑。亦提供此等組成物於本文所述之疾病/病況之醫學治療及預防方法上的用途。
亦提供用於治療/預防本文所述之疾病/病況之方法，其包含投與根據本發明之一物件的本發明物件(例如，本發明之一抗原結合分子)、以及能夠抑制一免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的一製劑。亦提供用於治療/預防本文所述之疾病/病況之方法，其包含投與根據本發明之一物件的本發明物件(例如，本發明之一抗原結合分子)、以及能夠促進一共刺激受體所媒介之訊息傳導的一製劑。
能夠抑制免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的製劑係為本技藝中已知的，且包括例如能夠與免疫查核點分子或其等之配體結合並抑制免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的抗體。其他能夠抑制一免疫查核點分子所媒介之訊息傳導的製劑，係包括能夠降低該免疫查核點分子或該免疫查核點分子之一配體的基因/蛋白質表現的製劑(例如，透過抑制編碼該免疫查核點分子/配體之基因的轉錄、抑制編碼該免疫查核點分子/配體之RNA的轉錄後加工、降低編碼該免疫查核點分子/配體之RNA的穩定性、促進編碼該免疫查核點分子/配體之RNA的降解、抑制該免疫查核點分子/配體之轉譯後加工、降低該免疫查核點分子/配體的穩定性、或促進該免疫查核點分子/配體的降解)，以及小分子抑制劑。
能夠促進共刺激受體所媒介之訊息傳導的製劑為本技藝中所知的，且包括例如能夠與共刺激受體結合並觸發或增高該共刺激受體所媒介之訊息傳導的促效劑抗體。其他能夠促進共刺激受體所媒介之訊息傳導的製劑包括能夠增高共刺激受體或共刺激受體之一配體的基因/蛋白質表現的製劑(例如，透過促進編碼共刺激受體/配體之基因的轉錄、促進編碼共刺激受體/配體之RNA的轉錄後加工、增高編碼共刺激受體/配體之RNA的穩定性、抑制編碼共刺激受體/配體之RNA的降解、促進共刺激受體/配體的轉譯後加工、增高共刺激受體/配體的穩定性或抑制共刺激受體/配體的降解)，以及小分子促效劑。
在特定實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制PD-1所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能夠抑制PD-1-媒介之訊息傳導的製劑可為PD-1-或PD-L1-靶定製劑。能夠抑制PD-1-媒介之訊息傳導的製劑可為例如能夠與PD-1或PD-L1結合並抑制PD-1-媒介之訊息傳導的一抗體。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制CTLA-4所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能夠抑制CTLA-4所媒介之訊息傳導的該製劑可為一CTLA-4-靶定製劑，或靶定諸如CD80或CD86之一CTLA-4配體的一製劑。在一些實施態樣中，能夠抑制CTLA-4所媒介之訊息傳導的製劑可為，例如能與CTLA-4、CD80或CD86結合且抑制CTLA-4所媒介之訊息傳導的一抗體。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制LAG-3所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能夠抑制LAG-3所媒介之訊息傳導的製劑可為一LAG-3-靶定製劑，或靶定諸如MHC第二型之一LAG-3配體的一製劑。在一些實施態樣中，能夠抑制LAG-3所媒介之訊息傳導的製劑可為，例如能夠與LAG-3或MHC第二型結合且抑制LAG-3所媒介之訊息傳導的一抗體。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制VISTA所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能夠抑制VISTA所媒介之訊息傳導的製劑可為一VISTA-靶定製劑，或靶定諸如VSIG-3或VSIG-8之一VISTA配體的一製劑。在一些實施態樣中，能夠抑制VISTA所媒介之訊息傳導的製劑可為，例如能夠與VISTA、VSIG-3或VSIG-8結合且抑制VISTA所媒介之訊息傳導的一抗體。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制TIM-3所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能夠抑制TIM-3所媒介之訊息傳導的製劑可為一TIM-3-靶定製劑，或靶定諸如半乳凝集素9之一TIM-3配體的一製劑。在一些實施態樣中，能抑制TIM-3所媒介之訊息傳導的製劑可為，例如能夠與TIM-3或半乳凝集素9結合且抑制TIM-3所媒介之訊息傳導的一抗體。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制TIGIT所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能抑制TIGIT所媒介之訊息傳導的製劑可為一TIGIT-靶定製劑，或標定諸如CD113、CD112或CD155之一TIGIT配體的一製劑。在一些實施態樣中，能夠抑制TIGIT所媒介之訊息傳導的製劑可為，例如能夠與TIGIT、CD113、CD112或CD155結合且抑制TIGIT所媒介之訊息傳導的一抗體。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合能夠抑制BTLA所媒介之訊息傳導的一製劑來投與。能抑制BTLA所媒介之訊息傳導的製劑可為一BTLA-靶定製劑，或標定諸如HVEM之一BTLA配體的一製劑。在一些實施態樣中，能夠抑制BTLA所媒介之訊息傳導的一製劑可為，例如能夠與BTLA或HVEM結合且抑制BTLA所媒介之訊息傳導的一抗體。
在一些實施態樣中，運用本發明之抗原結合分子與一種能夠抑制免疫查核點分子(例如，PD-1)所媒介之訊息傳導的製劑之組合的方法，與任一製劑使用作為單一療法時觀察到的效應相比，提供了改良的治療效應。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子與一種能夠抑制免疫查核點分子(例如，PD-1)所媒介之訊息傳導的製劑之該組合提供了增效性(亦即，優加性(super-additive))治療效應。
同時投與係指一起投與該抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物及治療劑，例如作為一種含有二製劑的藥學組成物(組合製備物)，或是彼此緊密相連地投與以及任擇地經由相同的投與途徑，例如至相同的動脈、靜脈或其他血管。相繼投與係指投與該抗原結合分子/組成物或治療劑中之一者，隨後於一給定時間間隔之後分開投與另一製劑。二製劑不需要以相同的途徑投與，雖然在一些實施態樣中是此種情況。時間間隔可為任何的時間間隔。
化學療法及放射療法分別指用一藥物或用游離輻射所進行之一癌症治療(例如，使用X射線或γ射線所進行之放射療法)。藥物可為一化學實體，例如小分子製藥、抗生素、DNA嵌插劑(intercalator)、蛋白質抑制劑(例如，激酶抑制劑)，或一生物製劑，例如抗體、抗體片段、適體、核酸(例如，DNA、RNA)、胜肽、多肽或蛋白質。該藥物可調配成一藥學組成物或藥劑。調配物可包含一或更多藥物(例如，一或更多活性製劑)連同一或多個藥學上可接受的稀釋劑、賦形劑或載劑。
一治療可涉及多於一藥物的投與。一藥物可取決於所要治療之病況而同時抑或是依序地單獨或與其他治療組合投與。舉例而言，化學療法可為涉及投與二藥物的一共療法，其等中之一或多者可能要用以治療癌症。
化學療法可藉由一或多種投與途徑來投與，例如腸胃外、靜脈注射、口服、皮下、皮內或腫瘤內。
化學療法可根據一治療方案來投與。治療方案可為化學療法投與的一預定時間表、計劃、規劃或時程，其可由醫師或醫療執業人員製備且可經調整以合適於需要治療之患者。治療方案可指示下列中之一或多者：向患者投與之化學療法的類型；每一種藥物或輻射的劑量；投藥之間的時間間隔；每一治療的長度；若存在，則任何治療假期之數目及性質等。對於一共療法，可提供指示如何投與每一藥物的單個治療方案。
化學療法藥物可選自於：阿貝西利(Abemaciclib)、醋酸阿比特龍(Abiraterone Acetate)、必除癌(Abitrexate) (胺甲喋呤(Methotrexate))、亞伯杉(Abraxane) (太平洋紫杉醇(Paclitaxel)白蛋白穩定的奈米粒子調配物)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、阿卡替尼(Acalabrutinib)、AC-T、雅詩力(Adcetris) (貝倫妥單抗維多汀(Brentuximab vedotin))、ADE、阿多-曲妥珠單抗艾坦辛(Ado-Trastuzumab Emtansine)、阿德力黴素(Adriamycin) (鹽酸多柔比星(Doxorubicin Hydrochloride))、二馬來酸阿法替尼(Afatinib Dimaleate)、癌伏妥(Afinitor) (依維莫司(Everolimus))、嘔可舒(Akynzeo) (奈妥吡坦和鹽酸帕洛諾司瓊(Netupitant and Palonosetron Hydrochloride))、樂得美(Aldara) (咪喹莫特(Imiquimod))、阿地介白素(Aldesleukin)、安立適(Alecensa) (阿雷替尼(Alectinib))、阿雷替尼(Alectinib)、阿來組單抗(Alemtuzumab)、愛寧達(Alimta) (培美曲塞二鈉(Pemetrexed Disodium))、安列庫帕(Aliqopa) (鹽酸庫潘利司(Copanlisib Hydrochloride))、注射用威克瘤(Alkeran) (鹽酸黴法蘭(Melphalan Hydrochloride))、威克瘤錠(Alkeran Tablets) (美法侖(melphalan))、嘔立舒(Aloxi) (鹽酸帕洛諾司瓊(Palonosetron Hydrochloride))、阿倫布里格(Alunbrig) (布里格替尼(Brigatinib))、安波氯林(Ambochlorin) (氯芥苯丁酸(Chlorambucil))、苯丁酸氮芥(Amboclorin) (氯芥苯丁酸(Chlorambucil))、阿米福汀(Amifostine)、胺基乙醯丙酸(Aminolevulinic Acid)、阿那曲唑(Anastrozole)、阿瑞吡坦(Aprepitant)、雷狄亞(Aredia) (帕米膦酸二鈉(Pamidronate Disodium))、安美達(Arimidex) (阿那曲唑(Anastrozole))、諾曼癌素(Aromasin) (依西美坦(Exemestane))、阿倫恩(Arranon) (奈拉濱(nelarabine))、三氧化砷、亞舍拉(Arzerra) (奧法木單抗(Ofatumumab))、天冬醯胺酸酶菊伊文氏桿菌(Asparaginase Erwinia chrysanthemi)、阿替珠單抗(Atezolizumab)、癌思停(Avastin) (貝伐珠單抗(Bevacizumab))、阿維魯單抗(Avelumab)、西卡思羅(Axicabtagene Ciloleucel)、阿西替尼(Axitinib)、阿扎胞苷(Azacitidine)、巴文西歐(Bavencio) (阿維魯單抗(Avelumab))、BEACOPP、貝克努(Becenum) (卡莫司汀(Carmustine))、貝利達(Beleodaq) (貝林司他(Belinostat))、貝林司他(Belinostat)、鹽酸苯達莫司汀(Bendamustine Hydrochloride)、BEP、沛斯博(Besponsa) (伊諾珠單抗奥佐米星(Inotuzumab Ozogamicin))、貝伐珠單抗(Bevacizumab)、貝瑟羅汀(Bexarotene)、百克沙(Bexxar) (托西莫單抗(Tositumomab)及碘I 131托西莫單抗(Tositumomab))、比卡魯胺(Bicalutamide)、BiCNU (卡莫司汀(Carmustine))、博萊黴素(Bleomycin)、博納吐單抗(Blinatumomab)、百利妥(Blincyto) (博納吐單抗(Blinatumomab))、硼替佐米(Bortezomib)、伯舒里(Bosulif) (博舒替尼(Bosutinib))、博舒替尼(Bosutinib)、貝倫妥單抗維多汀(Brentuximab vedotin)、布里格替尼(Brigatinib)、BuMel、白消安(Busulfan)、補束剋(Busulfex) (白消安(Busulfan))、卡巴他賽(Cabazitaxel)、癌必定(Cabometyx) (卡博替尼-S-蘋果酸(Cabozantinib-S-Malate))、卡博替尼-S-蘋果酸(Cabozantinib-S-Malate)、CAF、克瘤康(Calquence) (阿卡替尼(Acalabrutinib))、坎帕斯(Campath) (阿來組單抗(Alemtuzumab))、開普拓(Camptosar) (鹽酸伊立替康(Irinotecan Hydrochloride))、卡培他濱(Capecitabine)、CAPOX、卡樂(Carac) (氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用)、卡鉑、CARBOPLATIN-TAXOL、卡非佐米(Carfilzomib)、卡姆布里斯(Carmubris) (卡莫司汀(Carmustine))、卡莫司汀(Carmustine)、卡莫司汀植入劑(Carmustine Implant)、可蘇多(Casodex) (比卡魯胺(Bicalutamide))、CEM、色瑞替尼(Ceritinib)、司比定(Cerubidine) (鹽酸道諾黴素(Daunorubicin Hydrochloride))、保蓓(Cervarix) (重組型HPV二價疫苗(Recombinant HPV Bivalent Vaccine))、西妥昔單抗(Cetuximab)、CEV、氯芥苯丁酸(Chlorambucil)、CHLORAMBUCIL-PREDNISONE、CHOP、順鉑、克拉屈濱(Cladribine)、克拉芬(Clafen) (環磷醯胺)、氯伐拉濱(Clofarabine)、氯伐瑞斯(Clofarex) (氯伐拉濱(Clofarabine))、可羅拉(Clolar) (氯伐拉濱(Clofarabine))、CMF、克美替尼(Cobimetinib)、克美曲(Cometriq) (卡博替尼-S-蘋果酸(Cabozantinib-S-Malate))、鹽酸庫潘利司(Copanlisib Hydrochloride)、COPDAC、COPP、COPP-ABV、可美淨(Cosmegen) (放線菌素D (Dactinomycin))、可泰利(Cotellic) (克美替尼(Cobimetinib))、里唑蒂尼(Crizotinib)、CVP、環磷醯胺、賽福斯(Cyfos) (依弗醯胺)、欣銳擇(Cyramza) (雷莫司單抗(Ramucirumab))、賽德拉濱(Cytarabine)、賽德拉濱(Cytarabine)脂質體、賽德薩-U (Cytosar-U) (賽德拉濱(Cytarabine))、賽妥生(Cytoxan) (環磷醯胺)、達拉菲尼(Dabrafenib)、達卡巴嗪(Dacarbazine)、達克金(Dacogen) (地西他濱(Decitabine))、放線菌素D (Dactinomycin)、達雷木單抗(Daratumumab)、達則列斯(Darzalex) (達雷木單抗(Daratumumab))、達沙替尼(Dasatinib)、鹽酸道諾黴素(Daunorubicin Hydrochloride)、鹽酸道諾黴素和賽德拉濱脂質體(Daunorubicin Hydrochloride and Cytarabine Liposome)、地西他濱(Decitabine)、去纖苷鈉(Defibrotide Sodium)、去纖維鈉(Defitelio) (去纖苷鈉(Defibrotide Sodium))、加瑞克(Degarelix)、地尼介白素迪夫托斯(Denileukin Diftitox)、德諾單抗(Denosumab)、DepoCyt (賽德拉濱(Cytarabine)脂質體)、地塞米松(Dexamethasone)、鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride)、丹尼托昔單抗(Dinutuximab)、多西他賽(Docetaxel)、多柔(Doxil) (鹽酸多柔比星脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome))、鹽酸多柔比星(Doxorubicin Hydrochloride)、鹽酸多柔比星脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome)、Dox-SL (鹽酸多柔比星脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome))、DTIC-Dome (達卡巴嗪(Dacarbazine))、德瓦魯單抗(Durvalumab)、艾欣宜膚(Efudex) (氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用)、埃立特(Elitek) (拉布立酶(Rasburicase))、艾倫斯(Ellence) (鹽酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride))、埃羅妥珠單抗(Elotuzumab)、益樂鉑(Eloxatin) (奧沙利鉑(Oxaliplatin))、艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine)、止敏吐(Emend) (阿瑞吡坦(Aprepitant))、恩必喜(Empliciti) (埃羅妥珠單抗(Elotuzumab))、甲磺酸恩西地尼(Enasidenib Mesylate)、恩雜魯胺(Enzalutamide)、鹽酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride)、EPOCH、愛必妥(Erbitux) (西妥昔單抗(Cetuximab))、甲磺酸艾日布林(Eribulin Mesylate)、愛維德(Erivedge) (維莫德吉(Vismodegib))、鹽酸厄洛替尼(Erlotinib Hydrochloride)、歐文酶(Erwinaze) (天冬醯胺酸酶菊伊文氏桿菌(Asparaginase Erwinia chrysanthemi))、益護爾氨磷汀(Ethyol) (阿米福汀(Amifostine))、依託泊(Etopophos) (依託泊苷磷酸(Etoposide Phosphate))、依託泊苷(Etoposide)、依託泊苷磷酸(Etoposide Phosphate)、艾維絲(Evacet) (鹽酸多柔比星脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome))、依維莫司(Everolimus)、鈣穩(Evista) (鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride))、優維寧(Evomela) (鹽酸黴法蘭(Melphalan Hydrochloride))、依西美坦(Exemestane)、5-FU (氟尿嘧啶(Fluorouracil)注射)、5-FU (氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用)、弗瑞斯(Fareston) (托瑞米芬(Toremifene))、髓力達(Farydak) (帕比司他(Panobinostat))、法洛德(Faslodex) (氟維司群(Fulvestrant))、FEC、復乳納(Femara) (來曲唑(Letrozole))、非格司亭(Filgrastim)、福達樂(Fludara) (磷酸氟達拉濱(Fludarabine Phosphate))、磷酸氟達拉濱(Fludarabine Phosphate)、氟普列斯(Fluoroplex) (氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用)、氟尿嘧啶(Fluorouracil)注射、氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用、氟他胺(Flutamide)、福列斯(Folex) (胺甲喋呤(Methotrexate))、福列斯PFS (Folex PFS) (胺甲喋呤(Methotrexate))、FOLFIRI、FOLFIRI-BEVACIZUMAB、FOLFIRI-CETUXIMAB、FOLFIRINOX、FOLFOX、服瘤停(Folotyn) (普拉曲沙(Pralatrexate))、FU-LV、氟維司群(Fulvestrant)、嘉喜(Gardasil) (重組型HPV四價疫苗)、嘉喜9 (Gardasil 9) (重組型HPV九價疫苗)、癌即瓦(Gazyva) (奥濱尤妥珠單抗(Obinutuzumab))、吉菲替尼(Gefitinib)、鹽酸吉西他濱(Gemcitabine Hydrochloride)、GEMCITABINE-CISPLATIN、GEMCITABINE-OXALIPLATIN、吉妥珠單抗奥佐米星(Gemtuzumab Ozogamicin)、健擇(Gemzar) (鹽酸吉西他汀(Gemcitabine Hydrochloride))、妥復克(Gilotrif) (二馬來酸阿法替尼(Afatinib Dimaleate))、基利克(Gleevec) (甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate))、格立得(Gliadel) (卡莫司汀植入劑(Carmustine Implant))、格立得晶圓(Gliadel wafer) (卡莫司汀植入劑(Carmustine Implant))、谷卡匹酶(Glucarpidase)、醋酸戈舍瑞林(Goserelin Acetate)、賀樂維(Halaven) (甲磺酸艾日布林(Eribulin Mesylate))、普潘奈(Hemangeol) (鹽酸普潘奈(Propranolol Hydrochloride))、賀癌平(Herceptin) (曲妥珠單抗(Trastuzumab))、HPV二價疫苗、重組型、HPV九價疫苗、重組型、HPV四價疫苗、重組型、癌康定(Hycamtin) (鹽酸托普迪肯(Topotecan Hydrochloride))、愛治(Hydrea) (羥基尿素)、羥基尿素、Hyper-CVAD、愛乳適(Ibrance) (帕博西利(Palbociclib))、替伊莫單抗(Ibritumomab tiuxetan)、依魯替尼(Ibrutinib)、ICE、英可欣(Iclusig) (鹽酸普納替尼(Ponatinib Hydrochloride))、伊達黴素(Idamycin) (鹽酸伊達比星(Idarubicin Hydrochloride))、鹽酸伊達比星(Idarubicin Hydrochloride)、艾代拉利司(Idelalisib)、艾地法(Idhifa) (甲磺酸恩西地尼(Enasidenib Mesylate))、艾菲斯(Ifex) (依弗醯胺)、依弗醯胺、伊弗斯法旦(Ifosfamidum) (依弗醯胺)、IL-2 (阿地介白素(Aldesleukin))、甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate)、億珂(Imbruvica) (依魯替尼(Ibrutinib))、抑癌寧(Imfinzi) (德瓦魯單抗(Durvalumab))、咪喹莫特(Imiquimod)、伊姆利基(Imlygic) (拉他莫金(Talimogene Laherparepvec))、抑癌特(Inlyta) (阿西替尼(Axitinib))、伊諾珠單抗奥佐米星(Inotuzumab Ozogamicin)、干擾素α-2b、重組型、介白素-2 (阿地介白素(Aldesleukin))、因治隆A (Intron A) (重組型干擾素α-2b)、碘I 131托西莫單抗(Tositumomab)及托西莫單抗(Tositumomab)、伊派利單抗(Ipilimumab)、艾瑞莎(Iressa) (吉菲替尼(Gefitinib))、鹽酸伊立替康(Irinotecan Hydrochloride)、鹽酸伊立替康脂質體(Irinotecan Hydrochloride Liposome)、羅米地辛(Istodax) (羅米地辛(Romidepsin))、伊沙匹隆(Ixabepilone)、檸檬酸埃沙佐米(Ixazomib Citrate)、易莎平(Ixempra) (伊沙匹隆(Ixabepilone))、捷可衛(Jakafi) (磷酸鹽魯索利替尼(Ruxolitinib Phosphate))、JEB、去癌達(Jevtana) (卡巴他賽(cabazitaxel))、賀癌寧(Kadcyla) (阿多-曲妥珠單抗艾坦辛(Ado-Trastuzumab Emtansine))、可莫昔芬(Keoxifene) (鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride))、凱望斯(Kepivance) (帕利夫明(Palifermin))、吉舒達(Keytruda) (派立珠單抗(Pembrolizumab))、擊癌利(Kisqali) (瑞博西利(Ribociclib))、祈萊亞(Kymriah) (地莎金雷流索(Tisagenlecleucel))、凱博斯(Kyprolis) (卡非佐米(Carfilzomib))、蘭雷歐肽乙酯(Lanreotide Acetate)、二甲苯磺酸拉帕替尼(Lapatinib Ditosylate)、拉特沃(Lartruvo) (奥拉妥單抗(Olaratumab))、來那度胺(Lenalidomide)、甲磺酸樂伐替尼(Lenvatinib Mesylate)、樂衛瑪(Lenvima) (甲磺酸樂伐替尼(Lenvatinib Mesylate))、來曲唑(Letrozole)、留可佛林鈣鹽(Leucovorin Calcium)、瘤克寧(Leukeran) (氯芥苯丁酸(Chlorambucil))、醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate)、祿斯得停(Leustatin) (克拉屈濱(Cladribine))、聚果糖(Levulan) (胺基乙醯丙酸(Aminolevulinic Acid))、淋福力增(Linfolizin) (氯芥苯丁酸(Chlorambucil))、力得微脂體(LipoDox) (鹽酸多柔比星脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome))、洛莫司汀(Lomustine)、朗斯弗(Lonsurf) (三氟胸苷和鹽酸替比拉西(Trifluridine and Tipiracil Hydrochloride))、柳菩隆(Lupron) (醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate))、柳菩隆緩釋倉針劑(Lupron Depot) (醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate))、柳菩隆兒科緩釋倉針劑(Lupron Depot-Ped) (醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate))、利普卓(Lynparza) (奧拉帕(Olaparib))、馬奇博(Marqibo) (硫酸長春新鹼脂質體(Vincristine Sulfate Liposome))、馬土練(Matulane) (鹽酸丙卡巴肼(Procarbazine Hydrochloride))、鹽酸甲基二(氯乙基)胺(Mechlorethamine Hydrochloride)、醋酸甲地孕酮(Megestrol Acetate)、麥欣霓(Mekinist) (曲美替尼(Trametinib))、美法侖(Melphalan)、鹽酸黴法蘭(Melphalan Hydrochloride)、巰基嘌呤、美司鈉(Mesna)、美司聶(Mesnex) (美司鈉(Mesna))、甲唑拉通(Methazolastone) (替莫唑胺(Temozolomide))、胺甲喋呤(Methotrexate)、胺甲喋呤(Methotrexate) LPF (胺甲喋呤(Methotrexate))、溴化甲基納曲酮(Methylnaltrexone Bromide)、米薩德(Mexate) (胺甲喋呤(Methotrexate))、米薩德-AQ (Mexate-AQ) (胺甲喋呤(Methotrexate))、米哚妥林(Midostaurin)、絲裂黴素C (Mitomycin C)、鹽酸雙羥蒽醌(Mitoxantrone Hydrochloride)、米托利垂(Mitozytrex) (絲裂黴素C (Mitomycin C))、MOPP、總動原(Mozobil) (普樂沙福(Plerixafor))、氮芥(Mustargen) (鹽酸甲基二(氯乙基)胺(Mechlorethamine Hydrochloride))、排多癌(Mutamycin) (絲裂黴素C (Mitomycin C))、邁樂寧(Myleran) (白消安(Busulfan))、麥羅蕯(Mylosar) (阿扎胞苷(Azacitidine))、麥羅塔(Mylotarg) (吉妥珠單抗奥佐米星(Gemtuzumab Ozogamicin))、奈米粒子太平洋紫杉醇(Paclitaxel) (太平洋紫杉醇(Paclitaxel)白蛋白穩定的奈米粒子調配物)、溫諾平(Navelbine) (酒石酸長春瑞濱(Vinorelbine Tartrate))、耐昔妥單抗(Necitumumab)、奈拉濱(Nelarabine)、新薩(Neosar) (環磷醯胺)、馬來酸奈拉替尼(Neratinib Maleate)、來那替尼(Nerlynx) (馬來酸奈拉替尼(Neratinib Maleate))、奈妥吡坦和鹽酸帕洛諾司瓊(Netupitant and Palonosetron Hydrochloride)、倍血添(Neulasta) (培非格司亭(Pegfilgrastim))、優保津(Neupogen) (非格司亭(Filgrastim))、蕾莎瓦(Nexavar) (甲苯磺酸索拉非尼(Sorafenib Tosylate))、尼魯米特(Nilandron) (尼魯他胺(Nilutamide))、尼羅替尼(Nilotinib)、尼魯他胺(Nilutamide)、免瘤諾(Ninlaro) (檸檬酸埃沙佐米(Ixazomib Citrate))、甲苯磺酸尼拉帕日單水合物(Niraparib Tosylate Monohydrate)、尼沃魯單抗(Nivolumab)、諾瓦得士(Nolvadex) (檸檬酸他莫昔芬(Tamoxifen Citrate))、恩沛板(Nplate) (羅米司亭(Romiplostim))、奥濱尤妥珠單抗(Obinutuzumab)、歐丹佐(Odomzo) (索尼得吉(Sonidegib))、OEPA、奧法木單抗(Ofatumumab)、OFF、奧拉帕(Olaparib)、奥拉妥單抗(Olaratumab)、高三尖杉酯鹼(Omacetaxine Mepesuccinate)、昂卡司帕(Oncaspar) (培門冬酶(Pegaspargase))、鹽酸昂丹司瓊(Ondansetron Hydrochloride)、安能得(Onivyde) (鹽酸伊立替康脂質體(Irinotecan Hydrochloride Liposome))、昂他克(Ontak) (地尼介白素迪夫托斯(Denileukin Diftitox))、保疾伏(Opdivo) (尼沃魯單抗(Nivolumab))、OPPA、奥希替尼(Osimertinib)、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(Paclitaxel)、太平洋紫杉醇(Paclitaxel)白蛋白穩定的奈米粒子調配物、PAD、帕博西利(Palbociclib)、帕利夫明(Palifermin)、鹽酸帕洛諾司瓊(Palonosetron Hydrochloride)、鹽酸帕洛諾司瓊(Palonosetron Hydrochloride)及奈妥吡坦(Netupitant)、帕米膦酸二鈉(Pamidronate Disodium)、帕尼單抗(Panitumumab)、帕比司他(Panobinostat)、佳鉑(Paraplat) (卡鉑)、佳鉑帝(Paraplatin) (卡鉑)、鹽酸帕唑帕尼(Pazopanib Hydrochloride)、PCV、PEB、培門冬酶(Pegaspargase)、培非格司亭(Pegfilgrastim)、培格干擾素α-2b (Peginterferon Alfa-2b)、PEG-因治隆(PEG-Intron) (培格干擾素α-2b (Peginterferon Alfa-2b))、派立珠單抗(Pembrolizumab)、培美曲塞二鈉(Pemetrexed Disodium)、賀疾妥(Perjeta) (帕妥珠單抗(Pertuzumab))、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、普拉汀諾(Platinol) (順鉑)、普拉汀諾-AQ (Platinol-AQ) (順鉑)、普樂沙福(Plerixafor)、泊馬度胺(Pomalidomide)、鉑美特(Pomalyst) (泊馬度胺(Pomalidomide))、鹽酸普納替尼(Ponatinib Hydrochloride)、搏癌莎(Portrazza) (耐昔妥單抗(Necitumumab))、普拉曲沙(Pralatrexate)、強體松(Prednisone)、鹽酸丙卡巴肼(Procarbazine Hydrochloride)、普留淨(Proleukin) (阿地介白素(Aldesleukin))、保骼麗(Prolia) (德諾單抗(Denosumab))、波瑪塔(Promacta) (艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine))、鹽酸普潘奈(Propranolol Hydrochloride)、普羅文奇(Provenge) (西普魯塞-T (Sipuleucel-T))、嘌呤硫醇(Purinethol) (巰基嘌呤)、普利生(Purixan) (巰基嘌呤)、[無輸入]、二氯化鐳223 (Radium 223 Dichloride)、鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride)、雷莫司單抗(Ramucirumab)、拉布立酶(Rasburicase)、R-CHOP、R-CVP、重組型人類乳突病毒(HPV)二價疫苗、重組型人類乳突病毒(HPV)九價疫苗、重組型人類乳突病毒(HPV)四價疫苗、重組型干擾素α-2b、瑞格菲尼(Regorafenib)、雷利斯特(Relistor) (溴化甲基納曲酮(Methylnaltrexone Bromide))、R-EPOCH、瑞復美(Revlimid) (來那度胺(Lenalidomide))、如美曲斯(Rheumatrex) (胺甲喋呤(Methotrexate))、瑞博西利(Ribociclib)、R-ICE、利妥生(Rituxan) (利妥昔單抗(Rituximab))、利妥生海希拉(Rituxan Hycela) (利妥昔單抗及人類玻尿酸酶(Rituximab及Hyaluronidase Human))、利妥昔單抗(Rituximab)、利妥昔單抗和人類玻尿酸酶(Rituximab and Hyaluronidase Human)、鹽酸羅拉吡坦(Rolapitant Hydrochloride)、羅米地辛(Romidepsin)、羅米司亭(Romiplostim)、紅比黴素(Rubidomycin) (鹽酸道諾黴素(Daunorubicin Hydrochloride))、瑞布卡(Rubraca) (瑞卡帕日樟腦磺酸鹽(Rucaparib Camsylate))、瑞卡帕日樟腦磺酸鹽(Rucaparib Camsylate)、磷酸鹽魯索利替尼(Ruxolitinib Phosphate)、雷德帕斯(Rydapt) (米哚妥林(Midostaurin))、司蘭索胸腔內氣霧劑(Sclerosol Intrapleural Aerosol) (Talc)、司妥昔單抗(Siltuximab)、西普魯塞-T (Sipuleucel-T)、舒得寧(Somatuline Depot) (蘭瑞肽乙酯(Lanreotide Acetate))、索尼得吉(Sonidegib)、甲苯磺酸索拉非尼(Sorafenib Tosylate)、柏萊(Sprycel) (達沙替尼(Dasatinib))、STANFORD V、無菌滑石粉(Sterile Talc Powder) (Talc)、無菌滑石(Steritalc) (Talc)、癌瑞格(Stivarga) (瑞格菲尼(Regorafenib))、蘋果酸舒尼替尼(Sunitinib Malate)、紓癌特(Sutent) (蘋果酸舒尼替尼(Sunitinib Malate))、希拉特隆(Sylatron) (培格干擾素α-2b (Peginterferon Alfa-2b))、薩溫珂(Sylvant) (司妥昔單抗(Siltuximab))、高三尖杉酯鹼(Synribo) (高三尖杉酯鹼(Omacetaxine Mepesuccinate))、特布羅德(Tabloid) (硫鳥嘌呤(Thioguanine))、TAC、泰伏樂(Tafinlar) (達拉菲尼(Dabrafenib))、泰格莎(Tagrisso) (奥希替尼(Osimertinib))、Talc、拉他莫金(Talimogene Laherparepvec)、檸檬酸泰莫西芬(Tamoxifen Citrate)、答拉濱PFS (Tarabine PFS) (賽德拉濱(Cytarabine))、得舒緩(Tarceva) (鹽酸厄洛替尼(Erlotinib Hydrochloride))、塔革雷汀(Targretin) (貝瑟羅汀(Bexarotene))、泰息安(Tasigna) (尼羅替尼(Nilotinib))、紫杉醇(Taxol) (太平洋紫杉醇(paclitaxel))、剋癌易(Taxotere) (多西他賽(Docetaxel))、癌自禦(Tecentriq) (阿替珠單抗(Atezolizumab))、泰道(Temodar) (替莫唑胺(Temozolomide))、替莫唑胺(Temozolomide)、替西羅莫司(Temsirolimus)、沙立度胺(Thalidomide)、沙羅米(Thalomid) (沙立度胺(Thalidomide))、硫鳥嘌呤(Thioguanine)、塞替派(Thiotepa)、地莎金雷流索(Tisagenlecleucel)、托拉克(Tolak) (氟尿嘧啶(Fluorouracil)--局部用)、鹽酸托普迪肯(Topotecan Hydrochloride)、托瑞米芬(Toremifene)、特癌適(Torisel) (替西羅莫司(Temsirolimus))、托西莫單抗(Tositumomab)及碘I 131托西莫單抗(Tositumomab)、多德特(Totect) (鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride))、TPF、他比特定(Trabectedin)、曲美替尼(Trametinib)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)、普癌汰(Treanda) (鹽酸苯達莫司汀(Bendamustine Hydrochloride))、三氟胸苷及鹽酸替比拉西(Trifluridine及Tipiracil Hydrochloride)、萃克森(Trisenox) (三氧化砷)、泰嘉(Tykerb) (二甲苯磺酸拉帕替尼(Lapatinib Ditosylate))、丹尼托辛(Unituxin) (丹尼托昔單抗(Dinutuximab))、尿苷三乙酸酯(Uridine Triacetate)、VAC、伐柔比星(Valrubicin)、瓦爾斯塔爾(Valstar) (伐柔比星(Valrubicin))、凡德他尼(Vandetanib)、VAMP、瓦如畢(Varubi) (鹽酸羅拉吡坦(Rolapitant Hydrochloride))、維必施(Vectibix) (帕尼單抗(Panitumumab))、VeIP、維卞(Velban) (硫酸長春鹼(Vinblastine Sulfate))、萬科(Velcade) (硼替佐米(Bortezomib))、維薩(Velsar) (硫酸長春鹼(Vinblastine Sulfate))、威羅菲尼(Vemurafenib)、唯可來(Venclexta) (維奈克拉(Venetoclax))、維奈克拉(Venetoclax)、捷癌寧(Verzenio) (阿貝西利(Abemaciclib))、威亞得(Viadur) (醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate))、委丹扎(Vidaza) (阿扎胞苷(Azacitidine))、硫酸長春鹼(Vinblastine Sulfate)、安克薩(Vincasar) PFS (硫酸長春新鹼(Vincristine Sulfate))、硫酸長春新鹼(Vincristine Sulfate)、硫酸長春新鹼脂質體(Vincristine Sulfate Liposome)、酒石酸長春瑞濱(Vinorelbine Tartrate)、VIP、維莫德吉(Vismodegib)、維斯多卡(Vistogard) (尿苷三乙酸酯(Uridine Triacetate))、伏拉札(Voraxaze) (谷卡匹酶(Glucarpidase))、伏立諾他(Vorinostat)、福退癌(Votrient) (鹽酸帕唑帕尼(Pazopanib Hydrochloride))、菲佐斯(Vyxeos) (鹽酸道諾黴素和賽德拉濱脂質體(Daunorubicin Hydrochloride and Cytarabine Liposome))、爾可福(Wellcovorin) (留可佛林鈣鹽(Leucovorin Calcium))、截剋瘤(Xalkori) (里唑蒂尼(Crizotinib))、截瘤達(Xeloda) (卡培他濱(Capecitabine))、XELIRI、XELOX、癌骨瓦(Xgeva) (德諾單抗(Denosumab))、鐳治骨(Xofigo) (二氯化鐳223 (Radium 223 Dichloride))、安可坦(Xtandi) (恩雜魯胺(Enzalutamide))、益伏(Yervoy) (伊派利單抗(Ipilimumab))、耶克他(Yescarta) (西卡思羅(Axicabtagene Ciloleucel))、友待(Yondelis) (他比特定(Trabectedin))、柔癌捕(Zaltrap) (Ziv-阿柏西普(Ziv-Aflibercept))、薩而吉(Zarxio) (非格司亭(filgrastim))、則樂(Zejula) (甲苯磺酸尼拉帕日單水合物(Niraparib Tosylate Monohydrate))、日沛樂(Zelboraf) (威羅菲尼(Vemurafenib))、澤娃靈(Zevalin) (替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan))、津內卡(Zinecard) (鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride))、Ziv-阿柏西普(Ziv-Aflibercept)、卓弗蘭(Zofran) (鹽酸昂丹司瓊(Ondansetron Hydrochloride))、諾雷德(Zoladex) (醋酸戈舍瑞林(Goserelin Acetate))、唑來膦酸(Zoledronic acid)、柔林則(Zolinza) (伏立諾他(Vorinostat))、卓骨祂(Zometa) (唑來膦酸(Zoledronic acid))、思得適(Zydelig) (艾代拉利司(Idelalisib))、立克癌(Zykadia) (色瑞替尼(Ceritinib))以及澤珂(Zytiga) (醋酸阿比特龍(Abiraterone Acetate))。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合下列中之一或多者投與：一HER2抑制劑(例如，一抗-HER2抗體)、一EGFR抑制劑(例如，一抗EGFR抗體)、一烷化劑、一嘧啶類似物、一胸苷酸合成酶抑制劑(或其前驅物)及/或一雄性素受體抑制劑。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合下列中之一者或多者來投與：曲妥珠單抗、西妥昔單抗、順鉑、5-FU或卡培他濱。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合曲妥珠單抗及順鉑，以及5-FU或卡培他濱來投與。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合一抗-EGFR抗體來投與。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係與西妥昔單抗(cetuximab)組合投與。與西妥昔單抗組合的投與係經深思，特別是供用於治療頭頸部癌(例如，頭頸部鱗狀細胞癌瘤)或結腸直腸癌(例如，RAS野生型結腸直腸癌)。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合恩雜魯胺(enzalutamide)或另一雄性素受體抑制劑(例如，阿帕魯胺(apalutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、氟他胺(flutamide)、尼魯他胺(Nilutamide)或達洛魯胺(darolutamide))來投與。與恩雜魯胺(enzalutamide)或其他雄性素受體抑制劑組合的投與係經深思，特別是供用於治療前列腺癌(例如，去勢抗性前列腺癌)。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合一抗-HER2抗體來投與。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合曲妥珠單抗(trastuzumab)來投與。與曲妥珠單抗組合的投與係經深思，特別是供用於治療乳癌(例如，三重陰性乳癌)或胃癌。
在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合另一抗-HER3抗體來投與。在一些實施態樣中，本發明之抗原結合分子係組合下列中之一或多者來投與：MM121 (SAR256212/塞里班土單抗；NCT04383210、NCT04790695)、LJM-716 (易利珠單抗；NCT02167854)、AV203 (Sarantopoulos. J et al. 2014, Journal of Clinical Oncology, 32: 11113-13)、CDX-3379/ KTN3379 (NCT03254927，Duvvuri et al. Clin Cancer Res. 2019 Oct 1;25(19):5752-5758，NCT03254927)、RG7116 (路瑞妥珠單抗；Meulendijks et al. 2016, Clin Cancer Res, 22: 877-85)、RG7597 (度立妥珠單抗；JJuric et al. 2015, Clin Cancer Res, 21: 2462-70)、U3-1287 (帕圖單抗/AMG888；LoRusso et al. 2013, Clin Cancer Res, 19: 3078-87)、GSK2849330 (NCT01966445)、ISU-104 (Kim et al. 2019, Annals of Oncology, 30；NCT03552406)、REGN-1400 (Papadopoulos et al. 2014, Journal of Clinical Oncology, 32: 2516-16)、MCLA-128 (賽諾庫珠單抗(zenocutuzumab)；Alsina et al. 2018 Annals of Oncology, 29；Calvo et al. AACR 107th Annual Meeting 2016; April 16-20, 2016、NCT03321981、NCT02912949)、MM-111、MM-141 (Calvo et al. 2016
supra, Kundranda et al. 2020, Ann Oncol, 31: 79-87)、瓦里替尼(Varlitinib) (NCT02992340、NCT03499626)或BDTX-189 (NCT04209465)，全部參考資料係在此藉由參照全文併入本文。
用劑/劑量方案
可提供多次用劑的抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物。以下段落中對「抗原結合分子」之參考亦涵蓋一或多個根據本揭露內容之其他物件(多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物)，且反之亦然。一或多、或是每一用劑可伴隨著另一種治療劑之同時或循序投與。
多次用劑之間可藉由一預定的時間間隔分開，該時間間隔可選自下列中之一者：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31天，或者1、2、3、4、5或6個月。舉例而言，可每7、14、21或28天(加或減3、2或1天：諸如4、5、6、8、9或10天；11、12、13、15、16或17天；18、19、20、22、23或24天；或25、26、27、29、30或31天)給予一次用劑。亦即，每7天、每14天、每21天或每28天可有一個治療事件。在約7天(加或減3、2或1天)、約14天(加或減3、2或1天)、約21天(加或減3、2或1天)或約28天(加或減3、2或1天)之用劑/投與之間，可有一治療假期。
在本揭露內容之一些態樣中，該抗原結合分子係每週投與一次(例如，每7天加或減3、2或1天投與一次)、每兩週投與一次(例如，每14天加或減3、2或1天投與一次)、每三週投與一次(例如，每21天加或減3、2或1天投與一次)、或每四週投與一次(例如，每28天加或減3、2或1天投與一次)。亦即，每一週、每兩週、每3週或每4週可存在一個治療事件/投與。
在一些實施態樣中，每一週、每兩週、每三週或每四週可有該抗原結合分子的多次投與。在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每28天/4週投與四次、每28天/4週投與兩次、每28天/4週投與三次、或每21天/3週投與3次。治療可持續1、2、3、4、5、6或更多個月。治療可持續4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30或更多週，或持續3、6、9、12、15、18、21、24、27、30或更多週。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每四週間、每週投與一次(亦即，每四周總共四劑)。亦即，該抗原結合分子可在28天之一時段內每7天(加/減3、2或1天)投與一次。此可稱為一個投與「循環」。一個循環可為28天(加/減3、2或1天)或一個月。每個循環可有四劑。該抗原結合分子可每週投與一次持續一、二、三、四、五、六或更多個循環(亦即，每週一次持續1、2、3、4、5、6或更多個月，或數28天週期；或每週一次持續4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30或更多週)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每四週間每兩週(例如雙週式)投與一次(亦即，每四週期間總共二劑)。亦即，該抗原結合分子可在28天之一時段內每14天(加/減3、2或1天)投與一次。此可稱為一個投與「循環」。一個循環可為28天(加/減3、2或1天)或一個月。每次循環可有二劑。該抗原結合分子可每二週投與一次持續一、二、三、四、五、六或更多個循環(亦即，在1、2、3、4、5、6或更多個月、或數28天週期內，每2週一次持續；或者每2週一次持續4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30或更多週)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每三週投與一次。亦即，該抗原結合分子可每21天(加/減3、2或1天)投與一次。此可稱為一個投與「循環」。一個循環可為21天(加/減3、2或1天)。每次循環可有一劑。該抗原結合分子可每週投與一次持續一、二、三、四、五、六或更多個循環(亦即，每1、2、3、4、5、6或者多個21天週期一次；或每三週一次持續3、6、9、12、15、18、21、24、27、30或更多週)。
在一些實施態樣中，該抗原結合分子係每四週投與一次。亦即，該抗原結合分子可每28天(加/減3、2或1天)投與一次。此可稱為一個投與「循環」。一個循環可為28天(加/減3、2或1天)或一個月。每次循環可有一劑。該抗原結合分子可每週投與一次持續一、二、三、四、五、六或更多個循環(亦即，每1、2、3、4、5、6或更多個月、或數個28天週期一次；或每4週一次持續4、8、12、16、20、24、28或更多週)。
在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中，例如每7、14、21或28天一次的投與，及/或例如一或多個21或28天週期的總投與)，係包含投與至少150 mg之該抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與包含投與至少175 mg、至少200 mg、至少225 mg、至少250 mg、至少275 mg、至少300 mg、至少325 mg、至少350 mg、至少375 mg、至少400 mg、至少425 mg、至少450 mg、至少475 mg、至少500 mg、至少525 mg、至少550 mg或至少575 mg之該抗原結合分子。在一些實施態樣中，每次投與包含投與至少600 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每次投與包含投與不超過3000 mg之抗原結合分子。
在一些實施態樣中，投與(例如，在以上時程中，例如每7、14、21或28天一次的投與，及/或例如一或多個21或28天週期的總投與)，係包含投與至少600 mg之該抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與包含投與至少625 mg、至少650 mg、至少675 mg、至少700 mg、至少725 mg、至少750 mg、至少775 mg、至少800 mg、至少825 mg、至少850 mg、至少875 mg、至少900 mg、至少925 mg、至少950 mg、至少975 mg、至少1000 mg、至少1050 mg、至少1100 mg、至少1150 mg、至少1200 mg、至少1250 mg、至少1300 mg、至少1350 mg、至少1400 mg、至少1450 mg、至少1500 mg、至少1550 mg、至少1600 mg、至少1650 mg、至少1700 mg、至少1750 mg、至少1800 mg、至少1850 mg、至少1900 mg、至少1950 mg、至少2000 mg、至少2050 mg、至少2100 mg、至少2150 mg、至少2200 mg、至少2250 mg、至少2300 mg、至少2350 mg、至少2400 mg、至少2450 mg、至少2500 mg、至少2550 mg、至少2600 mg、至少2650 mg、至少2700 mg、至少2750 mg、至少2800 mg、至少2850 mg、至少2900 mg或至少2950 mg之該抗原結合分子。
在一些實施態樣中，每一投與(例如，在上述時程中，例如每7、14、21或28天一次的一投與)，係包含投與150-600 mg之該抗原結合分子。在一些實施態樣中，每次投與包含投與600-3000 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每次投與包含投與900-3000 mg抗原結合分子。在一些實施態樣中，每次投與包含投與900-2400 mg抗原結合分子。在一些實施態樣中，每次投與包含投與1500-3000 mg抗原結合分子。在一些實施態樣中，每次投與包含投與1500-2400 mg抗原結合分子。在一些實施態樣中，每次投與包含投與1500-2100 mg抗原結合分子。在一些實施態樣中，每次投與包含投與約1800 mg的抗原結合分子。在一些實施態樣中，每次投與包含投與約2100 mg的抗原結合分子。
在一些實施態樣中，一投與包含每7或14天(亦即，每週一次或每2週一次)投與約1800 mg之該抗原結合分子。在一些實施態樣中，一投與包含每7或14天(亦即，每週一次或每2週一次)投與約2100 mg之該抗原結合分子。
包含在如上文所說明之在一21或28天週期內一或多次投與抗原結合分子的每一個投與循環，係導致所投與之抗原結合分子的一總量。在一些實施態樣中，每一投與循環(亦即，包含在一21或28天週期內一或多次投與抗原結合分子，如上文所述)，係包含投與至少150 mg之抗原結合分子(亦即，經由一次投與、或在兩次或更多次投與之後的總和)。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與至少300 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與至少600 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與至少900 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與至少1500 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與至少1800 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與至少2100 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與至少2400 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與至少2700 mg之抗原結合分子。
在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與150-600 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與600-3000 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與900-3000 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與900-2400 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與1500-3000 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與1500-2400 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與1500-2100 mg之抗原結合分子。
在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與3000-12000 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與5400-12000 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與3600-8400 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與4800-7200 mg之抗原結合分子。
在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與約4800 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與約7200 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與約8400 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與約12000 mg之抗原結合分子。抗原結合分子能以多劑(例如，每週一次)投與，以達到每投與循環所投與抗原結合分子之一總量。
在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與不超過2100 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與不超過2400 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與不超過3000 mg之抗原結合分子。在一些實施態樣中，每一投與循環係包含投與不超過5000 mg之抗原結合分子。
一「投與循環」於本文中使用時，係指一21或28天(例如，3或4週)週期。本文所述之治療可根據本文所提供之一或多個用劑時程，在1、2、3、4、5、6或更多投與循環內投與。在一投與循環說明為「包含投與x mg之抗原結合分子」時，此可於替代方案中寫為「每21或28天投與x mg之該抗原結合分子」，或者「每21或28天以x mg之一劑量投與該抗原結合分子」。
抗原結合分子能以例如，如本文所述之組成物來投與。抗原結合分子或組成物之投與係可為局部、腸胃外、全身性、腔內、靜脈內、動脈內、肌內、鞘內、眼內、結膜內、腫瘤內、皮下、皮內、鞘內、經口或經皮投予途徑，經皮投予途徑可包括注射或輸注。
在一些實施態樣中，投與該抗原結合分子係靜脈注射或輸注。該抗原結合分子可經120分鐘靜脈內投與。該抗原結合分子可經60分鐘靜脈內投與。該抗原結合分子可經45-150分鐘、50-135分鐘或60-120分鐘、或在那些限值內之任何時段內靜脈內投與。
偵測方法
本發明亦提供本發明之物件以供用於偵測、定位或成像HER3或表現HER3的細胞之方法。
本文所述之抗原結合分子可使用於涉及對HER3之抗原結合分子的方法中。此等方法可涉及偵測該抗原結合分子與HER3之結合複合物。
如此一來，提供一種方法，其包含接觸一含有或懷疑含有HER3的樣本，以及偵測該抗原結合分子與HER3之複合物的形成。亦提供一種方法，其包含接觸一含有或懷疑含有表現HER3的一細胞的樣本，以及偵測該抗原結合分子與表現HER3的一細胞之複合物的形成。
合適的方法形式為本技藝中所熟知，包括免疫檢定法，諸如夾心式檢定法，例如ELISA。該方法可以涉及用如本文所述之可偵測的部分，例如螢光標記、磷光標記、發光標記、免疫可偵測的標記、放射性標記、化學、核酸或酵素標記來標記抗原結合分子或目標，或是兩者。偵測技術為熟習此藝者熟知的且可對應於標記劑來選擇。
此種方法可提供用以診斷及/或預後評估例如一癌症之一疾病或病況的方法基礎。此等方法可於一患者樣本或在處理一患者樣本後，於活體外施行。一旦收集樣本，在活體外方法施行時並不需要患者在場，且因此該方法可為一種不於人類或動物體實施的方法。在一些實施態樣中，該方法係於活體內施行。
偵測一樣本可用於診斷一疾病/病況(例如，癌症)、一疾病/病況的傾向或提供一疾病/病況的預後(預示(prognosticating))的目的，例如本文所述之疾病/病況。診斷或預後可能有關於一現存的(先前診斷的)疾病/病況。
此等方法可涉及偵測或定量，例如一患者樣本中之HER3或表現HER3的細胞。在該方法包含定量相關因子之情況中，該方法可進一步包含將所判定量與一標準或參考值相比，來作為診斷或預後評估的部分。可使用其他的診斷/預後測試來與本文所述之該等結合使用，以提升診斷或預後的準確度，或用於證實使用本文所述之測試所獲得的結果。
一樣本可取自於任何組織或身體流體。該樣本可包含或可衍生自：一定量的血液；自該個體血液所衍生之一定量的血清，其可包含在移除血纖維蛋白凝塊與血液細胞之後所得之血液的液體部分；一組織樣本或生檢；胸膜積液；腦脊髓液(CSF)；或從該個體單離的細胞。在一些實施態樣中，該樣本可取得自或衍生自受該疾病/病況影響的一或多種組織(例如，顯現該疾病之症狀的一或多個組織，或涉及該疾病/病況之致病機制的一或多個組織)。
本發明亦提供用於選擇/取選(stratify)一主體以供用於以一HER3-靶定製劑治療的方法。在一些實施態樣中，一主體被選擇來根據本發明治療/預防、或識別為能從此種治療/預防獲益的一主體，係基於例如在從該個體獲得的一樣本中偵測/定量到HER3或表現HER3的細胞。
主體
根據本文所述之本發明之態樣的主體可為任何動物或人類。主體較佳為哺乳動物，更佳為人類。主體可為一非人類哺乳動物，但更佳為人類。主體可為雄性或雌性。主體可為一患者。一主體可能已診斷有需要治療的一疾病或病況(例如，一癌症)、可能懷疑具有此一疾病/病況，或可能處於發展/感染此一疾病/病況的風險中。
在根據本發明之實施態樣中，主體較佳為一人類主體。在一些實施態樣中，根據本文之發明的一治療或預防方法要治療的主體為具有或處於一發展癌症之風險中的一主體。在根據本發明之實施態樣中，可基於此等疾病/病況之某些標誌的特徵化來選擇根據該方法治療的一主體。
根據本揭露內容之主體可包含表現或過度表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2及/或一HER3配體的一癌症(例如癌細胞)，例如如本文所述。本揭露內容之主體可包含表現一NRG基因融合體的細胞，例如如本文所述。根據本揭露內容之主體可包含表現或過度表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2及/或一HER3配體、及/或包含一NRG基因融合體之腫瘤細胞，例如如本文所述。
主體可包含晚期或轉移性實性腫瘤，例如於組織學上確認(例如，經由對腫瘤生檢之免疫組織化學法)。腫瘤可對習知治療具有抗性或難治性，或可不存在習知療法。主體可具有已知或經測試表現HER3的一癌症，例如膀胱癌、三重陰性乳癌、去勢抗性前列腺癌、子宮頸癌、RAS野生型結腸直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、胃癌、肝細胞癌瘤(HCC)、黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、食道癌、卵巢癌、胰臟癌及/或頭頸部鱗狀細胞癌(例如HNSCC)。
本揭露內容之方法可包含在例如從主體獲得之樣本中，偵測表現或過度表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2、一HER3配體及/或一NRG基因融合體的一癌症/癌細胞，例如如本文所述。本揭露內容之方法可包含基於所述癌症/癌細胞/表現之偵測來選擇一主體之治療。舉例而言，表現或過度表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2、一HER3配體及/或一NRG基因融合體中之一或多者的癌症/癌細胞之存在，係可指示一主體為合適於使用本文所揭露之一抗原結合分子來治療。
本揭露內容之方法可包含偵測其他生物標誌，例如磷酸化HER3 (pHER3)、p70S6K活性、Ki67表現、裂解的胱天蛋白酶3的存在、包括游離DNA (cfDNA)改變對偶基因區段部分/腫瘤區段部分(例如腫瘤衍生之cfDNA，諸如ctDNA)的循環腫瘤標誌、可溶性HER3、可溶性NRG1、PI3/MAPK途徑活性及/或PI3/MAPK途徑突變。在一些實施態樣中，在一主體中(例如，在從該主體獲得之一樣本中)之pHER3、p70S6K、Ki67、裂解的胱天蛋白酶3、ctDNA、可溶性HER3、可溶性NRG1、PI3/MAPK途徑活性及/或PI3/MAPK途徑突變的表現/存在/活性，係指示該主體合適於使用本文所揭露之一抗原結合分子進行治療。在一些實施態樣中，降低在一主體中(例如，在從該主體獲得之一樣本中；例如與從該主體獲得之一先前樣本相比)之pHER3、p70S6K、Ki67、裂解的胱天蛋白酶3、ctDNA、可溶性HER3、可溶性NRG1、PI3/MAPK途徑活性及/或PI3/MAPK途徑突變之表現/存在/活性，係指示一癌症之發展、進程或病理或另一陽性結果(例如，如本文所述之一結果)的一降低/改善。
HER3、pHER3、另一EGFR家族成員、一HER3配體(例如NRG1)、p70S6K、Ki67及/或裂解的胱天蛋白酶3之表現，係可使用例如標準免疫組織化學法技術來於藉由生檢所獲得的腫瘤組織上偵測。在細胞中之一NRG基因融合體、在血漿中之cfDNA/ctDNA位準、或在腫瘤組織中之PI3/MAPK途徑活性及/或突變，係可使用例如次世代定序來偵測。循環可溶性HER3及/或可溶性NRG1可使用例如標準ELISA技術來於血漿/血清樣本中偵測。
在主體接受治療之前、期間及之後可受評鑑之一或多種腫瘤血清標誌(或標誌列組)，針對主體之腫瘤類型適當時，包括但不限於：卵巢癌中之CA-125、HE4及OVA1；結腸直腸癌中之CEA；胰臟癌及胃癌中之CA19-9；前列腺癌中之PSA、PAP、PCA3、Oncotype DX GPS印記及Prolaris印記；膀胱癌中之BTA、FGFR2及/或FGFR3基因突變、NMP22以及染色體3、7、17及9p21；NSCLC中之ALK基因重排及過度表現、EGFR基因突變、NSE、PD-L1及ROS1基因重排；卵巢癌及乳癌中之BRCA1及/或BRCA2；例如在結腸直腸癌及NSCLC中之BRAF V600 (例如，BRAF V600E/)及KRAS突變；乳癌中之CA15-3/CA27.29、ER/PR、uPA、PAI-1及Mammaprint印記；肺癌中之細胞角蛋白片段21-1；乳癌、結腸直腸癌、胃癌及胰臟癌中之HCC中之DCP、DPD突變；甲狀腺癌中之甲狀腺球蛋白；以及任何實性腫瘤中之NTRK基因融合體。
本文所述之任何生物標誌可在治療之前、期間及/或之後使用本文所揭露之方法來偵測，例如以選擇供治療之合適主體及/或監測治療過程或成效。治療後偵測到的生物標誌可與治療前測到的生物標誌作比較。
套組
在本文所述之本發明的一些態樣中提供一套組的部件(a kit of parts)。在一些實施態樣中，該套組可具有至少一容器，其具有一預定量之本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物。
在一些實施態樣中，該套組包含例如根據本揭露內容之一組成物中的一50 mg/mL之抗原結合分子溶液。在一些實施態樣中，該套組包含呈一組成物之50 mg/mL的抗原結合分子，該組成物包含20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖、0.02% (w/v)聚山梨醇酯 80，在pH 5.8。
包含50 mg/mL之抗原結合分子的組成物可在使用之前稀釋。該套組可包含稀釋指南。該套組可包含0.9%之氯化鈉(NaCl)，用以稀釋該組成物，例如以得到合適於靜脈內投與之一組成物。該套組可包含該經稀釋之組成物必須在初始稀釋時間之48小時內投與至一患者的指南。
該套組可包含一種包含一濃度為至少1.2 mg/mL之抗原結合分子的組成物，例如按原樣、或如上述用NaCl稀釋後提供。
本揭露內容之抗原結合分子或其他物件可經凍乾(亦即，容器可包含凍乾之抗原結合分子或其他物件)。經凍乾製劑可例如根據本揭露內容重構於一組成物緩衝劑中。該套組可包含用於重構抗原結合分子/其他物件之指南。
該容器可為任何合適的容器，例如一玻璃小瓶。
在一些實施態樣中，該套組可包含供用於生產本文所述之一抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物的材料。
該套組可提供該抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或複數核酸)、表現載體(或複數表現載體)、細胞或組成物與投與指南一起給一患者，以治療一特定的疾病/病況，例如使用如本文所述之一劑量/用劑方案，及/或治療本文所述之一疾病/病況。
在一些實施態樣中，該套組可進一步包含至少一容器，其具有一預定量的另一治療劑(例如，抗感染劑或化學療法劑)。在此等實施態樣中，該套組亦可包含一第二藥劑或藥學組成物，以使得該等兩種藥劑或藥學組成物可同時或分開投與，以使得其等針對該特定疾病或病況提供一組合治療。該治療劑亦可予以調配以便合適於注射或輸注至一腫瘤或至血液中。該治療劑可為本文所述之任何此等製劑，諸如西妥昔單抗、恩雜魯胺或另一雄性素受體抑制劑，或曲妥珠單抗。
序列同一性
於本文使用時，「序列同一性」係指一主體序列的核苷酸/胺基酸殘基與一參考序列的核苷酸/胺基酸殘基，在排比序列之後的序列同一性百分比，且若需要，則導入間隙以達到序列之間最大的序列同一性百分比。可按熟習此藝者已知的各種方法，來達到用於判定二或更多個胺基酸或核酸序列之間的序列同一性百分比之成對與多重序列排比，例如使用可公開取得的電腦軟體，諸如ClustalOmega (Söding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)、T-coffee (Notredame et al. 2000, J. Mol. Biol. (2000) 302, 205-217)、Kalign (Lassmann and Sonnhammer 2005, BMC Bioinformatics, 6(298))及MAFFT (Katoh and Standley 2013, Molecular Biology and Evolution, 30(4) 772-780之軟體。當使用此軟體時，較佳採用內定參數，例如間隙罰分或延長罰分。
序列
編號段落
下列編號段落(paras)提供與本發明關連於所思量之特徵及特徵組合的進一步陳述：
| SEQ ID NO： | 說明書 | 序列 |
| 1 | 人類HER3同功異型體1 (UniProt：P21860-1，v1) | MRANDALQVLGLLFSLARGSEVGNSQAVCPGTLNGLSVTGDAENQYQTLYKLYERCEVVMGNLEIVLTGHNADLSFLQWIREVTGYVLVAMNEFSTLPLPNLRVVRGTQVYDGKFAIFVMLNYNTNSSHALRQLRLTQLTEILSGGVYIEKNDKLCHMDTIDWRDIVRDRDAEIVVKDNGRSCPPCHEVCKGRCWGPGSEDCQTLTKTICAPQCNGHCFGPNPNQCCHDECAGGCSGPQDTDCFACRHFNDSGACVPRCPQPLVYNKLTFQLEPNPHTKYQYGGVCVASCPHNFVVDQTSCVRACPPDKMEVDKNGLKMCEPCGGLCPKACEGTGSGSRFQTVDSSNIDGFVNCTKILGNLDFLITGLNGDPWHKIPALDPEKLNVFRTVREITGYLNIQSWPPHMHNFSVFSNLTTIGGRSLYNRGFSLLIMKNLNVTSLGFRSLKEISAGRIYISANRQLCYHHSLNWTKVLRGPTEERLDIKHNRPRRDCVAEGKVCDPLCSSGGCWGPGPGQCLSCRNYSRGGVCVTHCNFLNGEPREFAHEAECFSCHPECQPMEGTATCNGSGSDTCAQCAHFRDGPHCVSSCPHGVLGAKGPIYKYPDVQNECRPCHENCTQGCKGPELQDCLGQTLVLIGKTHLTMALTVIAGLVVIFMMLGGTFLYWRGRRIQNKRAMRRYLERGESIEPLDPSEKANKVLARIFKETELRKLKVLGSGVFGTVHKGVWIPEGESIKIPVCIKVIEDKSGRQSFQAVTDHMLAIGSLDHAHIVRLLGLCPGSSLQLVTQYLPLGSLLDHVRQHRGALGPQLLLNWGVQIAKGMYYLEEHGMVHRNLAARNVLLKSPSQVQVADFGVADLLPPDDKQLLYSEAKTPIKWMALESIHFGKYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGAEPYAGLRLAEVPDLLEKGERLAQPQICTIDVYMVMVKCWMIDENIRPTFKELANEFTRMARDPPRYLVIKRESGPGIAPGPEPHGLTNKKLEEVELEPELDLDLDLEAEEDNLATTTLGSALSLPVGTLNRPRGSQSLLSPSSGYMPMNQGNLGESCQESAVSGSSERCPRPVSLHPMPRGCLASESSEGHVTGSEAELQEKVSMCRSRSRSRSPRPRGDSAYHSQRHSLLTPVTPLSPPGLEEEDVNGYVMPDTHLKGTPSSREGTLSSVGLSSVLGTEEEDEDEEYEYMNRRRRHSPPHPPRPSSLEELGYEYMDVGSDLSASLGSTQSCPLHPVPIMPTAGTTPDEDYEYMNRQRDGGGPGGDYAAMGACPASEQGYEEMRAFQGPGHQAPHVHYARLKTLRSLEATDSAFDNPDYWHSRLFPKANAQRT |
| 2 | 人類HER3同功異型體2 (UniProt：P21860-2) | MRANDALQVLGLLFSLARGSEVGNSQAVCPGTLNGLSVTGDAENQYQTLYKLYERCEVVMGNLEIVLTGHNADLSFLQWIREVTGYVLVAMNEFSTLPLPNLRVVRGTQVYDGKFAIFVMLNYNTNSSHALRQLRLTQLTGQFPMVPSGLTPQPAQDWYLLDDDPRLLTLSASSKVPVTLAAV |
| 3 | 人類HER3同功異型體3 (UniProt：P21860-3) | MRANDALQVLGLLFSLARGSEVGNSQAVCPGTLNGLSVTGDAENQYQTLYKLYERCEVVMGNLEIVLTGHNADLSFLQWIREVTGYVLVAMNEFSTLPLPNLRVVRGTQVYDGKFAIFVMLNYNTNSSHALRQLRLTQLTEILSGGVYIEKNDKLCHMDTIDWRDIVRDRDAEIVVKDNGRSCPPCHEVCKGRCWGPGSEDCQTLTKTICAPQCNGHCFGPNPNQCCHDECAGGCSGPQDTDCFACRHFNDSGACVPRCPQPLVYNKLTFQLEPNPHTKYQYGGVCVASCPHNFVVDQTSCVRACPPDKMEVDKNGLKMCEPCGGLCPKAF |
| 4 | 人類HER3同功異型體4 (UniProt：P21860-4) | MGNLEIVLTGHNADLSFLQWIREVTGYVLVAMNEFSTLPLPNLRVVRGTQVYDGKFAIFVMLNYNTNSSHALRQLRLTQLTEILSGGVYIEKNDKLCHMDTIDWRDIVRDRDAEIVVKDNGRSCPPCHEVCKGRCWGPGSEDCQTLTKTICAPQCNGHCFGPNPNQCCHDECAGGCSGPQDTDCFACRHFNDSGACVPRCPQPLVYNKLTFQLEPNPHTKYQYGGVCVASCPHNFVVDQTSCVRACPPDKMEVDKNGLKMCEPCGGLCPKACEGTGSGSRFQTVDSSNIDGFVNCTKILGNLDFLITGLNGDPWHKIPALDPEKLNVFRTVREITGYLNIQSWPPHMHNFSVFSNLTTIGGRSLYNRGFSLLIMKNLNVTSLGFRSLKEISAGRIYISANRQLCYHHSLNWTKVLRGPTEERLDIKHNRPRRDCVAEGKVCDPLCSSGGCWGPGPGQCLSCRNYSRGGVCVTHCNFLNGEPREFAHEAECFSCHPECQPMEGTATCNGSGSDTCAQCAHFRDGPHCVSSCPHGVLGAKGPIYKYPDVQNECRPCHENCTQGCKGPELQDCLGQTLVLIGKTHLTMALTVIAGLVVIFMMLGGTFLYWRGRRIQNKRAMRRYLERGESIEPLDPSEKANKVLARIFKETELRKLKVLGSGVFGTVHKGVWIPEGESIKIPVCIKVIEDKSGRQSFQAVTDHMLAIGSLDHAHIVRLLGLCPGSSLQLVTQYLPLGSLLDHVRQHRGALGPQLLLNWGVQIAKGMYYLEEHGMVHRNLAARNVLLKSPSQVQVADFGVADLLPPDDKQLLYSEAKTPIKWMALESIHFGKYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGAEPYAGLRLAEVPDLLEKGERLAQPQICTIDVYMVMVKCWMIDENIRPTFKELANEFTRMARDPPRYLVIKRESGPGIAPGPEPHGLTNKKLEEVELEPELDLDLDLEAEEDNLATTTLGSALSLPVGTLNRPRGSQSLLSPSSGYMPMNQGNLGESCQESAVSGSSERCPRPVSLHPMPRGCLASESSEGHVTGSEAELQEKVSMCRSRSRSRSPRPRGDSAYHSQRHSLLTPVTPLSPPGLEEEDVNGYVMPDTHLKGTPSSREGTLSSVGLSSVLGTEEEDEDEEYEYMNRRRRHSPPHPPRPSSLEELGYEYMDVGSDLSASLGSTQSCPLHPVPIMPTAGTTPDEDYEYMNRQRDGGGPGGDYAAMGACPASEQGYEEMRAFQGPGHQAPHVHYARLKTLRSLEATDSAFDNPDYWHSRLFPKANAQRT |
| 5 | 人類HER3同功異型體5 (UniProt：P21860-5) | MALTVIAGLVVIFMMLGGTFLYWRGRRIQNKRAMRRYLERGESIEPLDPSEKANKVLARIFKETELRKLKVLGSGVFGTVHKGVWIPEGESIKIPVCIKVIEDKSGRQSFQAVTDHMLAIGSLDHAHIVRLLGLCPGSSLQLVTQYLPLGSLLDHVRQHRGALGPQLLLNWGVQIAKGMYYLEEHGMVHRNLAARNVLLKSPSQVQVADFGVADLLPPDDKQLLYSEAKTPIKWMALESIHFGKYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGAEPYAGLRLAEVPDLLEKGERLAQPQICTIDVYMVMVKCWMIDENIRPTFKELANEFTRMARDPPRYLVIKRESGPGIAPGPEPHGLTNKKLEEVELEPELDLDLDLEAEEDNLATTTLGSALSLPVGTLNRPRGSQSLLSPSSGYMPMNQGNLGESCQESAVSGSSERCPRPVSLHPMPRGCLASESSEGHVTGSEAELQEKVSMCRSRSRSRSPRPRGDSAYHSQRHSLLTPVTPLSPPGLEEEDVNGYVMPDTHLKGTPSSREGTLSSVGLSSVLGTEEEDEDEEYEYMNRRRRHSPPHPPRPSSLEELGYEYMDVGSDLSASLGSTQSCPLHPVPIMPTAGTTPDEDYEYMNRQRDGGGPGGDYAAMGACPASEQGYEEMRAFQGPGHQAPHVHYARLKTLRSLEATDSAFDNPDYWHSRLFPKANAQRT |
| 6 | 成熟人類HER3同功異型體1 (UniProt：P21860-1，v1位置20至1342) | SEVGNSQAVCPGTLNGLSVTGDAENQYQTLYKLYERCEVVMGNLEIVLTGHNADLSFLQWIREVTGYVLVAMNEFSTLPLPNLRVVRGTQVYDGKFAIFVMLNYNTNSSHALRQLRLTQLTEILSGGVYIEKNDKLCHMDTIDWRDIVRDRDAEIVVKDNGRSCPPCHEVCKGRCWGPGSEDCQTLTKTICAPQCNGHCFGPNPNQCCHDECAGGCSGPQDTDCFACRHFNDSGACVPRCPQPLVYNKLTFQLEPNPHTKYQYGGVCVASCPHNFVVDQTSCVRACPPDKMEVDKNGLKMCEPCGGLCPKACEGTGSGSRFQTVDSSNIDGFVNCTKILGNLDFLITGLNGDPWHKIPALDPEKLNVFRTVREITGYLNIQSWPPHMHNFSVFSNLTTIGGRSLYNRGFSLLIMKNLNVTSLGFRSLKEISAGRIYISANRQLCYHHSLNWTKVLRGPTEERLDIKHNRPRRDCVAEGKVCDPLCSSGGCWGPGPGQCLSCRNYSRGGVCVTHCNFLNGEPREFAHEAECFSCHPECQPMEGTATCNGSGSDTCAQCAHFRDGPHCVSSCPHGVLGAKGPIYKYPDVQNECRPCHENCTQGCKGPELQDCLGQTLVLIGKTHLTMALTVIAGLVVIFMMLGGTFLYWRGRRIQNKRAMRRYLERGESIEPLDPSEKANKVLARIFKETELRKLKVLGSGVFGTVHKGVWIPEGESIKIPVCIKVIEDKSGRQSFQAVTDHMLAIGSLDHAHIVRLLGLCPGSSLQLVTQYLPLGSLLDHVRQHRGALGPQLLLNWGVQIAKGMYYLEEHGMVHRNLAARNVLLKSPSQVQVADFGVADLLPPDDKQLLYSEAKTPIKWMALESIHFGKYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGAEPYAGLRLAEVPDLLEKGERLAQPQICTIDVYMVMVKCWMIDENIRPTFKELANEFTRMARDPPRYLVIKRESGPGIAPGPEPHGLTNKKLEEVELEPELDLDLDLEAEEDNLATTTLGSALSLPVGTLNRPRGSQSLLSPSSGYMPMNQGNLGESCQESAVSGSSERCPRPVSLHPMPRGCLASESSEGHVTGSEAELQEKVSMCRSRSRSRSPRPRGDSAYHSQRHSLLTPVTPLSPPGLEEEDVNGYVMPDTHLKGTPSSREGTLSSVGLSSVLGTEEEDEDEEYEYMNRRRRHSPPHPPRPSSLEELGYEYMDVGSDLSASLGSTQSCPLHPVPIMPTAGTTPDEDYEYMNRQRDGGGPGGDYAAMGACPASEQGYEEMRAFQGPGHQAPHVHYARLKTLRSLEATDSAFDNPDYWHSRLFPKANAQRT |
| 7 | 成熟人類HER3同功異型體2 (UniProt： P21860-2位置20至183) | SEVGNSQAVCPGTLNGLSVTGDAENQYQTLYKLYERCEVVMGNLEIVLTGHNADLSFLQWIREVTGYVLVAMNEFSTLPLPNLRVVRGTQVYDGKFAIFVMLNYNTNSSHALRQLRLTQLTGQFPMVPSGLTPQPAQDWYLLDDDPRLLTLSASSKVPVTLAAV |
| 8 | 成熟人類HER3同功異型體3 (UniProt： P21860-3位置20至331) | SEVGNSQAVCPGTLNGLSVTGDAENQYQTLYKLYERCEVVMGNLEIVLTGHNADLSFLQWIREVTGYVLVAMNEFSTLPLPNLRVVRGTQVYDGKFAIFVMLNYNTNSSHALRQLRLTQLTEILSGGVYIEKNDKLCHMDTIDWRDIVRDRDAEIVVKDNGRSCPPCHEVCKGRCWGPGSEDCQTLTKTICAPQCNGHCFGPNPNQCCHDECAGGCSGPQDTDCFACRHFNDSGACVPRCPQPLVYNKLTFQLEPNPHTKYQYGGVCVASCPHNFVVDQTSCVRACPPDKMEVDKNGLKMCEPCGGLCPKAF |
| 9 | 人類HER3同功異型體1細胞外區(UniProt：P21860-1，v1位置20至643) | SEVGNSQAVCPGTLNGLSVTGDAENQYQTLYKLYERCEVVMGNLEIVLTGHNADLSFLQWIREVTGYVLVAMNEFSTLPLPNLRVVRGTQVYDGKFAIFVMLNYNTNSSHALRQLRLTQLTEILSGGVYIEKNDKLCHMDTIDWRDIVRDRDAEIVVKDNGRSCPPCHEVCKGRCWGPGSEDCQTLTKTICAPQCNGHCFGPNPNQCCHDECAGGCSGPQDTDCFACRHFNDSGACVPRCPQPLVYNKLTFQLEPNPHTKYQYGGVCVASCPHNFVVDQTSCVRACPPDKMEVDKNGLKMCEPCGGLCPKACEGTGSGSRFQTVDSSNIDGFVNCTKILGNLDFLITGLNGDPWHKIPALDPEKLNVFRTVREITGYLNIQSWPPHMHNFSVFSNLTTIGGRSLYNRGFSLLIMKNLNVTSLGFRSLKEISAGRIYISANRQLCYHHSLNWTKVLRGPTEERLDIKHNRPRRDCVAEGKVCDPLCSSGGCWGPGPGQCLSCRNYSRGGVCVTHCNFLNGEPREFAHEAECFSCHPECQPMEGTATCNGSGSDTCAQCAHFRDGPHCVSSCPHGVLGAKGPIYKYPDVQNECRPCHENCTQGCKGPELQDCLGQTLVLIGKTHLT |
| 10 | 人類HER3同功異型體1跨膜域(UniProt：P21860-1，v1位置644至664) | MALTVIAGLVVIFMMLGGTFL |
| 11 | 人類HER3同功異型體1細胞質域(UniProt：P21860-1，v1位置665至1342) | YWRGRRIQNKRAMRRYLERGESIEPLDPSEKANKVLARIFKETELRKLKVLGSGVFGTVHKGVWIPEGESIKIPVCIKVIEDKSGRQSFQAVTDHMLAIGSLDHAHIVRLLGLCPGSSLQLVTQYLPLGSLLDHVRQHRGALGPQLLLNWGVQIAKGMYYLEEHGMVHRNLAARNVLLKSPSQVQVADFGVADLLPPDDKQLLYSEAKTPIKWMALESIHFGKYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGAEPYAGLRLAEVPDLLEKGERLAQPQICTIDVYMVMVKCWMIDENIRPTFKELANEFTRMARDPPRYLVIKRESGPGIAPGPEPHGLTNKKLEEVELEPELDLDLDLEAEEDNLATTTLGSALSLPVGTLNRPRGSQSLLSPSSGYMPMNQGNLGESCQESAVSGSSERCPRPVSLHPMPRGCLASESSEGHVTGSEAELQEKVSMCRSRSRSRSPRPRGDSAYHSQRHSLLTPVTPLSPPGLEEEDVNGYVMPDTHLKGTPSSREGTLSSVGLSSVLGTEEEDEDEEYEYMNRRRRHSPPHPPRPSSLEELGYEYMDVGSDLSASLGSTQSCPLHPVPIMPTAGTTPDEDYEYMNRQRDGGGPGGDYAAMGACPASEQGYEEMRAFQGPGHQAPHVHYARLKTLRSLEATDSAFDNPDYWHSRLFPKANAQRT |
| 12 | 人類HER3同功異型體1近膜節段(UniProt：P21860-1，v1位置665至708) | YWRGRRIQNKRAMRRYLERGESIEPLDPSEKANKVLARIFKETE |
| 13 | 人類HER3同功異型體1蛋白質激酶域(UniProt：P21860-1，v1位置709至966) | LRKLKVLGSGVFGTVHKGVWIPEGESIKIPVCIKVIEDKSGRQSFQAVTDHMLAIGSLDH AHIVRLLGLCPGSSLQLVTQYLPLGSLLDHVRQHRGALGPQLLLNWGVQIAKGMYYLEEH GMVHRNLAARNVLLKSPSQVQVADFGVADLLPPDDKQLLYSEAKTPIKWMALESIHFGKY THQSDVWSYGVTVWELMTFGAEPYAGLRLAEVPDLLEKGERLAQPQICTIDVYMVMVKCW MIDENIRPTFKELANEFT |
| 14 | 人類HER3同功異型體1 C端節段(UniProt：P21860-1，v1位置967至1342) | RMARDPPRYLVIKRESGPGIAPGPEPHGLTNKKLEEVELEPELDLDLDLEAEEDNLATTTLGSALSLPVGTLNRPRGSQSLLSPSSGYMPMNQGNLGESCQESAVSGSSERCPRPVSLHPMPRGCLASESSEGHVTGSEAELQEKVSMCRSRSRSRSPRPRGDSAYHSQRHSLLTPVTPLSPPGLEEEDVNGYVMPDTHLKGTPSSREGTLSSVGLSSVLGTEEEDEDEEYEYMNRRRRHSPPHPPRPSSLEELGYEYMDVGSDLSASLGSTQSCPLHPVPIMPTAGTTPDEDYEYMNRQRDGGGPGGDYAAMGACPASEQGYEEMRAFQGPGHQAPHVHYARLKTLRSLEATDSAFDNPDYWHSRLFPKANAQRT |
| 15 | 人類HER3細胞外區子域I (UniProt：P21860-1，v1位置20至183) | SEVGNSQAVCPGTLNGLSVTGDAENQYQTLYKLYERCEVVMGNLEIVLTGHNADLSFLQWIREVTGYVLVAMNEFSTLPLPNLRVVRGTQVYDGKFAIFVMLNYNTNSSHALRQLRLTQLTEILSGGVYIEKNDKLCHMDTIDWRDIVRDRDAEIVVKDNGRSC |
| 16 | 人類HER3細胞外區子域II (UniProt：P21860-1，v1位置184至329) | PPCHEVCKGRCWGPGSEDCQTLTKTICAPQCNGHCFGPNPNQCCHDECAGGCSGPQDTDCFACRHFNDSGACVPRCPQPLVYNKLTFQLEPNPHTKYQYGGVCVASCPHNFVVDQTSCVRACPPDKMEVDKNGLKMCEPCGGLCPK |
| 17 | 人類HER3細胞外區子域III (UniProt：P21860-1，v1位置330至495) | ACEGTGSGSRFQTVDSSNIDGFVNCTKILGNLDFLITGLNGDPWHKIPALDPEKLNVFRTVREITGYLNIQSWPPHMHNFSVFSNLTTIGGRSLYNRGFSLLIMKNLNVTSLGFRSLKEISAGRIYISANRQLCYHHSLNWTKVLRGPTEERLDIKHNRPRRDCVA |
| 18 | 人類HER3細胞外區子域IV (UniProt：P21860-1，v1位置496至643) | EGKVCDPLCSSGGCWGPGPGQCLSCRNYSRGGVCVTHCNFLNGEPREFAHEAECFSCHPECQPMEGTATCNGSGSDTCAQCAHFRDGPHCVSSCPHGVLGAKGPIYKYPDVQNECRPCHENCTQGCKGPELQDCLGQTLVLIGKTHLT |
| 19 | 人類HER3細胞外區子域II二聚化環 (UniProt：P21860-1，v1位置261至278) | QPLVYNKLTFQLEPNPH |
| 20 | 恆河獼猴HER3 (UniProt：F7HEH3-1，v2) | MGNLEIVLTGHNADLSFLQWIREVTGYVLVAMNEFSTLPLPNLRVVRGTQVYDGKFAIFVMLNYNTNSSHALRQLRLTQLTEILSGGVYIEKNDKLCHMDTIDWKDIVRDQDAEIVVKDNGRSCPLCHEVCKGRCWGPGPEDCQTLTKTICAPQCNGHCFGPNPNQCCHDECAGGCSGPQDTDCFACRHFNDSGACVPRCPQPLVYNKLTFQLEPNPHTKYQYGGVCVASCPHNFVVDQTSCVRACPPDKMEVDKNGLKMCEPCGGLCPKACEGTGSGSRFQTVDSSNIDGFVNCTKILGNLDFLITGLNGDPWHKIPALDPEKLNVFRTVREITGYLNIQSWPPHMYNFSVFSNLTTIGGRSLYNRGFSLLIMKNLNVTSLGFRSLKEISAGRIYISANRQLCYHHSLNWTKVLRGPTEERLDIKHNRPRRDCVAEGKVCDPLCSSGGCWGPGPGQCLSCRNYSRGGVCVTHCNFLNGEPREFAHEAECFSCHPECQPMEGTATCNGSGSDTCAQCAHFRDGPHCVSSCPHGVLGAKGPIYKYPDVQNECRPCHENCTQGCKGPELQDCLGQTLVLIGKTHLTMALTVIAGLVVIFMMLGGTFLYWRGRRIQNKRAMRRYLERGESIEPLDPSEKANKVLARIFKETELRKLKVLGSGVFGTVHKGVWIPEGESIKIPVCIKIIEDKSGRQSFQAVTDHMLAIGSLDHAHIVRLLGLCPGSSLQLVTQYLPLGSLLDHVRQHRGALGPQLLLNWGVQIAKGMYYLEEHGMVHRNLAARNVLLKSPSQVQVADFGVADLLPPDDKQLLYSEAKTPIKWMALESIHFGKYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGAEPYAGLRLAEVPDLLEKGERLAQPQICTIDVYMVMVKCWMIDENIRPTFKELANEFTRMARDPPRYLVIKRESGPGIAPGPEPHGLTNKKLEEVELEPELDLDLDLEAEEDNLATTTLGSALSLPVGTLNRPRGSQSLLSPSSGYMPMNQGNLGEAFQESAVSGSSEWCPRPVSLHPMPRGCLASESSEGHVTGSEAELQEKVSTCRSRSRSRSPRPRGDSAYHSQRHSLLTPVTPLSPPGLEEEDVNGYVMPDTHLKGTPSSREGTLSSVGLSSVLGTEEEDEDEEYEYMNRRRRHSPPRPPRPSSLEELGYEYMDVGSDLSASLGSTQSCPLHPVPVMPTAGTTPDEDYEYMNRQRGGSGPGGDYAAMGACPASEQGYEEMRAFQGPGHQAPHVHYAHLKTLRSLEATDSAFDNPDYWHSRLFPKANAQRT |
| 21 | 抗-HER3抗體殖株10A6所辨識的表位 | YNKLTFQLEPNPH |
| 22 | 抗-HER3抗體殖株4-35-B2及4-35-B4所辨識的表位 | PRCPQPLVYNKLTF |
| 23 | 抗-HER3抗體殖株4-35-B2、4-35-B4及10A6所辨識之表位的複合序列 | PRCPQPLVYNKLTFQLEPNPH |
| 24 | 10D1重鏈可變區 | DVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNKLEWMGSIHYSGGTNYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTTLTVSS |
| 25 | 10D1_c75重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNGLEWIGSIHYSGGTNYNPTLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 26 | 10D1_c76重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNGLEWIGSIHYSGGTNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 27 | 10D1_c77重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNGLEWIGSIHYSGGTNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 28 | 10D1_c78v1重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNGLEWIGSIHYSGGTNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 29 | 10D1_c78v2重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGkGLEWIGSIHYSGGTNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 30 | 10D1_11B重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVYGYSITSGYSWHWIRQPPGKGLEWIGSIHYSGGTNYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 31 | 10D1_c85v1重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNGLEWIGSIRYSGGTNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLGSVTAADTAVYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 32 | 10D1_c85v2重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGKGLEWIGSIRYSGGTNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLGSVTAADTAVYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 33 | 10D1_c85o1重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGKGLEWIGSIRYSGGTNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLGSVTAADTAVYFCARETTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 34 | 10D1_c85o2重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGKGLEWIGSIRYSGGTNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLGSVTAADTAVYFCARGTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 35 | 10D1_c87重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNGLEWIGSIHYSGGTNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 36 | 10D1_c89重鏈可變區 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYSITSGYSWHWIRQHPGKGLEWIGSIRYSGGTDYNPSLKSLVTISADTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMTTAPWYPFDYWGQGTTVTVSS |
| 37 | 10D1_c90重鏈可變區 | QVQLQESGPGLVKPSQTLFLTCTVSGYSITSGYSWHWIRQHPGKGLEWIGSIRYSGGTDYNPSLKSLVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMTTAPWYPFDYWGQGTTVTVSS |
| 38 | 10D1_c91重鏈可變區 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYYITSGYSWHWIRQHPGKGLEWIGSIRYSGGTDYNPSLKSLATISADTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMTTAPWYPFDYWGQGTAVTVSS |
| 39 | 10D1_c92重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNGLEWIGSIHYSGGTNYNPTLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 40 | 10D1_c93重鏈可變區 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNGLEWIGSIHYSGGTNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTLVTVSS |
| 41 | 10D1、 10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、 10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、 10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c92、10D1_c93重鏈CDR1 | GYSITSGYS |
| 42 | 10D1 _ c91重鏈CDR1 | GYYITSGYS |
| 43 | 10D1衍生的一致性重鏈CDR1 | GYX 1ITSGYS 其中X 1= S 或 Y |
| 44 | 10D1、 10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、 10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c87、10D1_c92、10D1_c93重鏈CDR2 | IHYSGGT |
| 45 | 10D1_c85v1、 10D1_c85v2、 10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c89、10D1_c90、 10D1_c91重鏈CDR2 | IRYSGGT |
| 46 | 10D1衍生的一致性重鏈CDR2 | IX 2YSGGT 其中X 2= H 或 R |
| 47 | 10D1、 10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、 10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、 10D1_c85v2、10D1_c87、10D1_c92、10D1_c93重鏈CDR3 | ARMTTAPRYPFDY |
| 48 | 10D1_c89、10D1_c90、 10D1_c91重鏈CDR3 | ARMTTAPWYPFDY |
| 49 | 10D1_c85o1重鏈CDR3 | ARETTAPRYPFDY |
| 50 | 10D1_c85o2重鏈CDR3 | ARGTTAPRYPFDY |
| 51 | 10D1衍生的一致性重鏈CDR3 | ARX 3TTAPX 4YPFDY 其中X 3= M、E 或 G； X 4= R 或 W |
| 52 | 10D1_c75 10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、 10D1_c78v2、 10D1_c85v1、 10D1_c85v2、 10D1_c85o1、 10D1_c85o2、 10D1_c87、10D1_c92、10D1_c93重鏈FR1 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVT |
| 53 | 110D1_c89、 10D1_c91重鏈FR1 | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVS |
| 54 | 10D1_c90重鏈FR1 | QVQLQESGPGLVKPSQTLFLTCTVS |
| 55 | 10D1重鏈FR1 | DVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVT |
| 56 | 10D1_c75 10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、 10D1_c85v1、 10D1_c87、 10D1_c92、10D1_c93重鏈FR2 | WHWIRQFPGNGLEWIGS |
| 57 | 10D1_c78v2、 10D1_c85v2、 10D1_c85o1、 10D1_c85o2重鏈FR2 | WHWIRQFPGKGLEWIGS |
| 58 | 10D1重鏈FR2 | WHWIRQFPGNKLEWMGS |
| 59 | 10D1_c89、10D1_c90、 10D1_c91重鏈FR2 | WHWIRQHPGKGLEWIGS |
| 60 | 10D1_11B重鏈FR2 | WHWIRQPPGKGLEWIGS |
| 61 | 10D1_c75、10D1_c92重鏈FR3 | NYNPTLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYFC |
| 62 | 10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、 10D1_c78v2重鏈FR3 | NYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYFC |
| 63 | 10D1_11B重鏈FR3 | NYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC |
| 64 | 10D1_c85v1、 10D1_c85v2、 10D1_c85o1、 10D1_c85o2重鏈FR3 | NYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLGSVTAADTAVYFC |
| 65 | 10D1_c87、 10D1_c93重鏈FR3 | NYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYFC |
| 66 | 10D1_c89重鏈FR3 | DYNPSLKSLVTISADTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC |
| 67 | 10D1_c90重鏈FR3 | DYNPSLKSLVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC |
| 68 | 10D1_c91重鏈FR3 | DYNPSLKSLATISADTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC |
| 69 | 10D1重鏈FR3 | NYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYFC |
| 70 | 10D1_c75、 10D1_c76、 10D1_c77、 10D1_c78v1、 10D1_c78v2、 10D1_11B、 10D1_c85v1、 10D1_c85v2、 10D1_c85o1、 10D1_c85o2、 10D1_c87、 10D1_c92、 10D1_c93重鏈FR4 | WGQGTLVTVSS |
| 71 | 10D1_c89、 10D1_c90重鏈FR4 | WGQGTTVTVSS |
| 72 | 10D1_c91重鏈FR4 | WGQGTAVTVSS |
| 73 | 10D1、4-35-B4、10A6重鏈FR4 | WGQGTTLTVSS |
| 74 | 10D1輕鏈可變區 | DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKASQIVGSNVAWYQQKPGQSPKPLIYSASYRYSGVPDRFTASGSGTDFTLTITNVQSEDLAEYFCQQYSSHPLTFGAGTKLELK |
| 75 | 10D1_c75輕鏈可變區 | DIVMTQSPSSLSASVGDLVTITCKASQIVGSNVAWYQMKPGKSPKPLIYSASYLYFGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVAEYFCQQYSSHPLTFGPGTKVEIK |
| 76 | 10D1_c76輕鏈可變區 | DIVMTQSPSSLSASGGDRVTITCKASQIVGYNVAWYQQKPGKSPKPLIYSASYLYSDVPSRFSASGSGTDFTLTISSLQPEDVAEYFCQQYSSHPLTFGPGTKVEIK |
| 77 | 10D1_c77輕鏈可變區 | VIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQIVGPNVAWYQQKPGKSPKPLIYSASYGYSDVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVAEYFCQQYSTHPLTFGPGTKVEIK |
| 78 | 10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B輕鏈可變區 | DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQIVGSNVAWYQQKPGKSPKPLIYSASYGYSDVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLRPEDVATYYCQQYSSHPLTFGPGTKVEIK |
| 79 | 10D1_c85v1、10D1_c85v2輕鏈可變區 | DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQIVGSNVAWYQQKPGKSPKPLIYSARYQYSGVPFRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYSSHPLTFGPGTKVEIK |
| 80 | 10D1_c85o1輕鏈可變區 | DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQIVGSNVAWYQQKPGKSPKPLIYSARYQYSGVPFRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYSSHPLTFGPGTKVEIK |
| 81 | 10D1_c85o2輕鏈可變區 | DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQIVGSNVAWYQQKPGKSPKPLIYSARYQYSGVPFRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYSSHPLTFGPGTKVEIK |
| 82 | 10D1_c87輕鏈可變區 | DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQIVGSNVAWYQQMPGKSPEPLIYSASYLYSDVPSRFSGSGSGTDFTMTISSLQPEDVATYYCQQYSSHPLTFGPGTKVEIK |
| 83 | 10D1_c89輕鏈可變區 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASQIVGSNVAWYQQKPGKAPEPLIYSASYLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSHPLTFGQGTKLEIK |
| 84 | 10D1_c90輕鏈可變區 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTFTCKASQIVGSNVAWYQQKPGKAPEPLIYSASYLYSSVPSRFSGSGSGTEFTMTISSLEPEDFATYYCQQYTTHPLTFGPGTKVEIK |
| 85 | 10D1_c91輕鏈可變區 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKASQIVGSNVAWYQQKPGKAPMPLIYSASYGYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSSHPLTFGQGTKLEIK |
| 86 | 10D1_c92輕鏈可變區 | DIVMTQSPSSLSASVGDLVTITCKASQIVGSNVAWYQMKLGKSPKPLIYSASYLYFGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVAEYFCQQYFSHPLTFGPGTKVEIK |
| 87 | 10D1_c93輕鏈可變區 | DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQIVGSNVAWYQQKPGKSPKPLIYSASYLYSDVPSRFSGSGSGTDFTMTISSLQPEDVATYYCQQYSSHPLTFGPGTKVEIK |
| 88 | 10D1、 10D1_c75、10D1_c78v1、 10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、 10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2, 10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、 10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93輕鏈CDR1 | QIVGSN |
| 89 | 10D1_c76輕鏈CDR1 | QIVGYN |
| 90 | 10D1_c77輕鏈CDR1 | QIVGPN |
| 91 | 10D1衍生的一致性輕鏈CDR1 | QIVGX 5N 其中X 5= S、Y 或 P |
| 92 | 10D1、 10D1_c75、 10D1_c76、 10D1_c77、 10D1_c78v1、 10D1_c78v2、10D1_11B、 10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、 10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93 輕鏈CDR2 | SAS |
| 93 | 10D1_c85v1、 10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2輕鏈CDR2 | SAR |
| 94 | 10D1衍生的一致性輕鏈CDR2 | SAX 6其中X 6= S or R |
| 95 | 10D1、 10D1_c75、 10D1_c76、10D1_c78v1、 10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、 10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、 10D1_c91、10D1_c93輕鏈CDR3 | QQYSSHPLT |
| 96 | 10D1_c77輕鏈CDR3 | QQYSTHPLT |
| 97 | 10D1_c90輕鏈CDR3 | QQYTTHPLT |
| 98 | 10D1_c92輕鏈CDR3 | QQYFSHPLT |
| 99 | 10D1衍生的一致性輕鏈CDR3 | QQYX 7X 8HPLT 其中X 7= S, T 或 F；X 8= S 或 T |
| 100 | 10D1_c75、 10D1_c92輕鏈FR1 | DIVMTQSPSSLSASVGDLVTITCKAS |
| 101 | 10D1_c76輕鏈FR1 | DIVMTQSPSSLSASGGDRVTITCKAS |
| 102 | 10D1_c77輕鏈FR1 | VIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKAS |
| 103 | 10D1_c78v1、10D1_c78v2、 10D1_11B、 10D1_c85v1、10D1_c85v2、 10D1_c85o1、 10D1_c85o2、 10D1_c87、 10D1_c93輕鏈FR1 | DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCKAS |
| 104 | 10D1_c89、 10D1_c91輕鏈FR1 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCKAS |
| 105 | 10D1_c90輕鏈FR1 | DIQMTQSPSSVSASVGDRVTFTCKAS |
| 106 | 10D1輕鏈FR1 | DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTCKAS |
| 107 | 10D1_c75輕鏈FR2 | VAWYQMKPGKSPKPLIY |
| 108 | 10D1_c76、 10D1_c77、 10D1_c78v1、10D1_c78v2、 10D1_11B、 10D1_c85v1、10D1_c85v2、 10D1_c85o1、 10D1_c85o2、 10D1_c93輕鏈FR2 | VAWYQQKPGKSPKPLIY |
| 109 | 10D1_c87輕鏈FR2 | VAWYQQMPGKSPEPLIY |
| 110 | 10D1_c89、 10D1_c90輕鏈FR2 | VAWYQQKPGKAPEPLIY |
| 111 | 10D1_c91輕鏈FR2 | VAWYQQKPGKAPMPLIY |
| 112 | 10D1_c92輕鏈FR2 | VAWYQMKLGKSPKPLIY |
| 113 | 10D1輕鏈FR2 | VAWYQQKPGQSPKPLIY |
| 114 | 10D1_c75、 10D1_c92輕鏈FR3 | YLYFGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVAEYFC |
| 115 | 10D1_c76輕鏈FR3 | YLYSDVPSRFSASGSGTDFTLTISSLQPEDVAEYFC |
| 116 | 10D1_c77輕鏈FR3 | YGYSDVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVAEYFC |
| 117 | 10D1_c78v1、10D1_c78v2、 10D1_11B輕鏈FR3 | YGYSDVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLRPEDVATYYC |
| 118 | 10D1_c85v1、10D1_c85v2、 10D1_c85o1、 10D1_c85o2輕鏈FR3 | YQYSGVPFRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC |
| 119 | 10D1_c87、 10D1_c93輕鏈FR3 | YLYSDVPSRFSGSGSGTDFTMTISSLQPEDVATYYC |
| 120 | 10D1_c89輕鏈FR3 | YLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC |
| 121 | 10D1_c90輕鏈FR3 | YLYSSVPSRFSGSGSGTEFTMTISSLEPEDFATYYC |
| 122 | 10D1_c91輕鏈FR3 | YGYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC |
| 123 | 10D1輕鏈FR3 | YRYSGVPDRFTASGSGTDFTLTITNVQSEDLAEYFC |
| 124 | 10D1_c75、 10D1_c76、 10D1_c77、 10D1_c78v1、 10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、 10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、 10D1_c90、 10D1_c92、 10D1_c93輕鏈FR4 | FGPGTKVEIK |
| 125 | 10D1_c89、 10D1_c91輕鏈FR4 | FGQGTKLEIK |
| 126 | 10D1輕鏈FR4 | FGAGTKLELK |
| 127 | 4-35-B2重鏈可變區 | EIQLQQSGPELVKPGASVKVSCKASGYSFTDYNMYWVKQSHGKSLEWIGHINPYNGGTTYNQKFKGRATLTVDKSSSTAFMHLNSLTSEDSAVYFCVSLRWGAMDYWGQGTSVTVSS |
| 128 | 4-35-B2重鏈CDR1 | GYSFTDYN |
| 129 | 4-35-B2重鏈CDR2 | INPYNGGT |
| 130 | 4-35-B2重鏈CDR3 | VSLRWGAMDY |
| 131 | 4-35-B2重鏈FR1 | EIQLQQSGPELVKPGASVKVSCKAS |
| 132 | 4-35-B2重鏈FR2 | MYWVKQSHGKSLEWIGH |
| 133 | 4-35-B2重鏈FR3 | TYNQKFKGRATLTVDKSSSTAFMHLNSLTSEDSAVYFC |
| 134 | 4-35-B2重鏈FR4 | WGQGTSVTVSS |
| 135 | 4-35-B2輕鏈可變區 | QIVLTQSPALMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQKPRSSPKPWIYLTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWNSNPYTFGGGTKLEIK |
| 136 | 4-35-B2輕鏈CDR1 | SSVSY |
| 137 | 4-35-B2輕鏈CDR2 | LTS |
| 138 | 4-35-B2輕鏈CDR3 | QQWNSNPYT |
| 139 | 4-35-B2輕鏈FR1 | QIVLTQSPALMSASPGEKVTMTCSAS |
| 140 | 4-35-B2輕鏈FR2 | MYWYQQKPRSSPKPWIY |
| 141 | 4-35-B2輕鏈FR3 | NLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYC |
| 142 | 4-35-B2、4-35-B4、10A6輕鏈FR4 | FGGGTKLEIK |
| 143 | 4-35-B4重鏈可變區 | EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDTYIHWVKQRPDQGLEWIGKIIDPANGNTNYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLSSLSSEDTAVYFCARGLHWGQGTTLTVSS |
| 144 | 4-35-B4重鏈CDR1 | GFNIKDTY |
| 145 | 4-35-B4重鏈CDR2 | IDPANGNT |
| 146 | 4-35-B4重鏈CDR3 | ARGLH |
| 147 | 4-35-B4重鏈FR1 | EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTAS |
| 148 | 4-35-B4重鏈FR2 | IHWVKQRPDQGLEWIGK |
| 149 | 4-35-B4重鏈FR3 | NYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLSSLSSEDTAVYFC |
| 150 | 4-35-B4輕鏈可變區 | DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPYTFGGGTKLEIK |
| 151 | 4-35-B4輕鏈CDR1 | KSVSTSGYSY |
| 152 | 4-35-B4輕鏈CDR2 | LAS |
| 153 | 4-35-B4輕鏈CDR3 | QHSRELPYT |
| 154 | 4-35-B4輕鏈FR1 | DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRAS |
| 155 | 4-35-B4輕鏈FR2 | MHWYQQKPGQPPKLLIY |
| 156 | 4-35-B4輕鏈FR3 | NLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYC |
| 157 | 10A6重鏈可變區 | DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGNFITSGYFWNWIRQFPGNKLEWMGFISYDGSNNYKPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYYCARENYGFGFDYWGQGTTLTVSS |
| 158 | 10A6重鏈CDR1 | GNFITSGYF |
| 159 | 10A6重鏈CDR2 | ISYDGSN |
| 160 | 10A6重鏈CDR3 | ARENYGFGFDY |
| 161 | 10A6重鏈FR1 | DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVT |
| 162 | 10A6重鏈FR2 | WNWIRQFPGNKLEWMGF |
| 163 | 10A6重鏈FR3 | NYKPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVTTEDTATYYC |
| 164 | 10A6輕鏈可變區 | DIVLTQSPSSLPVSIGEKVTMSCKSSQSLLYSDNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTWKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYFTFPWTFGGGTKLEIK |
| 165 | 10A6輕鏈CDR1 | QSLLYSDNQKNY |
| 166 | 10A6輕鏈CDR2 | WAS |
| 167 | 10A6輕鏈CDR3 | QQYFTFPWT |
| 168 | 10A6輕鏈FR1 | DIVLTQSPSSLPVSIGEKVTMSCKSS |
| 169 | 10A6輕鏈FR2 | LAWYQQKPGQSPKLLIY |
| 170 | 10A6輕鏈FR3 | TWKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYC |
| 171 | 人類IgG1恆定區(IGHG1；UniProt：P01857-1，v1) | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 172 | CH1 IgG1 (P01857-1，v1之位置1-98) | ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV |
| 173 | 鉸鏈IgG1 (P01857-1，v1之位置99-110) | EPKSCDKTHTCP |
| 174 | CH2 IgG1 (P01857-1，v1之位置111-223) | PCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK |
| 175 | CH3 IgG1 (P01857-1，v1之位置224-330) | GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 176 | CH3 (D356E、L358M；根據EU編號之編號位置) | GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 177 | Cκ CL (IGCK；UniProt：P01834-1，v2) | RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC |
| 178 | 10A6重鏈SignalP | MKVLSLLYLLTAIPGILS |
| 179 | 10D1重鏈SignalP | MRVLILLCLFTAFPGILS |
| 180 | 10D1輕鏈SignalP | MESQTQVFVYMLLWLSGVDG |
| 181 | 4-35-B2重鏈SignalP | MEWSWIFLFLLSGTTGVHS |
| 182 | 4-35-B2輕鏈SignalP | MDFQVQIFSFLLMSASVMMSRG |
| 183 | 4-35-B4重鏈SignalP | MKCSWVIFFLMAVVTGVNS |
| 184 | 4-35-B4輕鏈SignalP | METDTLLLWVLLLWVPGSTG |
| 185 | 10D1_c75、 10D1_c76、 10D1_c77、 10D1_c78v1、 10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、 10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、 10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93重鏈SignalP | MELGLRWVFLIATLAGARC |
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| 224 | 10D1_11B重鏈FR1 | DVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAVY |
| 225 | 10D1F VH-CH1-CH2-CH3 (GASDALIE；LCKC) (10D1F.FcB) | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYSITSGYSWHWIRQHPGKGLEWIGSIRYSGGTDYNPSLKSLVTISADTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMTTAPWYPFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLAGPDVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEECTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 226 | 10D1F VH-CH1-CH2-CH3 (N297Q) | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYSITSGYSWHWIRQHPGKGLEWIGSIRYSGGTDYNPSLKSLVTISADTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMTTAPWYPFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 227 | 10D1 VH-CH1-CH2-CH3 (GASDALIE；LCKC) | DVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNKLEWMGSIHYSGGTNYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLAGPDVFCFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEECTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 228 | 10D1 VH-CH1-CH2-CH3 (GASD) | DVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSGYSWHWIRQFPGNKLEWMGSIHYSGGTNYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYFCARMTTAPRYPFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLAGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 229 | 10D1衍生之殖株的HER3結合位點 | CFGPNPNQCCHDECAGGC |
| 230 | 結合位點模體1 | PNPNQ |
| 231 | 結合位點模體2 | DECAG |
| 232 | 人類NRG1 (UniProt：Q02297-1，v3) | MSERKEGRGKGKGKKKERGSGKKPESAAGSQSPALPPRLKEMKSQESAAGSKLVLRCETSSEYSSLRFKWFKNGNELNRKNKPQNIKIQKKPGKSELRINKASLADSGEYMCKVISKLGNDSASANITIVESNEIITGMPASTEGAYVSSESPIRISVSTEGANTSSSTSTSTTGTSHLVKCAEKEKTFCVNGGECFMVKDLSNPSRYLCKCQPGFTGARCTENVPMKVQNQEKAEELYQKRVLTITGICIALLVVGIMCVVAYCKTKKQRKKLHDRLRQSLRSERNNMMNIANGPHHPNPPPENVQLVNQYVSKNVISSEHIVEREAETSFSTSHYTSTAHHSTTVTQTPSHSWSNGHTESILSESHSVIVMSSVENSRHSSPTGGPRGRLNGTGGPRECNSFLRHARETPDSYRDSPHSERYVSAMTTPARMSPVDFHTPSSPKSPPSEMSPPVSSMTVSMPSMAVSPFMEEERPLLLVTPPRLREKKFDHHPQQFSSFHHNPAHDSNSLPASPLRIVEDEEYETTQEYEPAQEPVKKLANSRRAKRTKPNGHIANRLEVDSNTSSQSSNSESETEDERVGEDTPFLGIQNPLAASLEATPAFRLADSRTNPAGRFSTQEEIQARLSSVIANQDPIAV |
| 233 | 人類NRG1 EGF樣域(UniProt：Q02297-1之位置178-222) | HLVKCAEKEKTFCVNGGECFMVKDLSNPSRYLCKCQPGFTGARCT |
| 234 | 人類NRG2 (UniProt：O14511-1，v1) | MRQVCCSALPPPPLEKGRCSSYSDSSSSSSERSSSSSSSSSESGSSSRSSSNNSSISRPAAPPEPRPQQQPQPRSPAARRAAARSRAAAAGGMRRDPAPGFSMLLFGVSLACYSPSLKSVQDQAYKAPVVVEGKVQGLVPAGGSSSNSTREPPASGRVALVKVLDKWPLRSGGLQREQVISVGSCVPLERNQRYIFFLEPTEQPLVFKTAFAPLDTNGKNLKKEVGKILCTDCATRPKLKKMKSQTGQVGEKQSLKCEAAAGNPQPSYRWFKDGKELNRSRDIRIKYGNGRKNSRLQFNKVKVEDAGEYVCEAENILGKDTVRGRLYVNSVSTTLSSWSGHARKCNETAKSYCVNGGVCYYIEGINQLSCKCPNGFFGQRCLEKLPLRLYMPDPKQKAEELYQKRVLTITGICVALLVVGIVCVVAYCKTKKQRKQMHNHLRQNMCPAHQNRSLANGPSHPRLDPEEIQMADYISKNVPATDHVIRRETETTFSGSHSCSPSHHCSTATPTSSHRHESHTWSLERSESLTSDSQSGIMLSSVGTSKCNSPACVEARARRAAAYNLEERRRATAPPYHDSVDSLRDSPHSERYVSALTTPARLSPVDFHYSLATQVPTFEITSPNSAHAVSLPPAAPISYRLAEQQPLLRHPAPPGPGPGPGPGPGPGADMQRSYDSYYYPAAGPGPRRGTCALGGSLGSLPASPFRIPEDDEYETTQECAPPPPPRPRARGASRRTSAGPRRWRRSRLNGLAAQRARAARDSLSLSSGSGGGSASASDDDADDADGALAAESTPFLGLRGAHDALRSDSPPLCPAADSRTYYSLDSHSTRASSRHSRGPPPRAKQDSAPL |
| 235 | 人類NRG2 EGF樣域(UniProt：O14511-1之位置341-382) | HARKCNETAKSYCVNGGVCYYIEGINQLSCKCPNGFFGQRCL |
| 236 | 人類NRG3 (UniProt：B9EGV5-1，v1) | MSEGAAAASPPGAASAAAASAEEGTAAAAAAAAAGGGPDGGGEGAAEPPRELRCSDCIVWNRQQTWLCVVPLFIGFIGLGLSLMLLKWIVVGSVKEYVPTDLVDSKGMGQDPFFLSKPSSFPKAMETTTTTTSTTSPATPSAGGAASSRTPNRISTRLTTITRAPTRFPGHRVPIRASPRSTTARNTAAPATVPSTTAPFFSSSTLGSRPPVPGTPSTQAMPSWPTAAYATSSYLHDSTPSWTLSPFQDAASSSSSSSSSATTTTPETSTSPKFHTTTYSTERSEHFKPCRDKDLAYCLNDGECFVIETLTGSHKHCRCKEGYQGVRCDQFLPKTDSILSDPNHLGIEFMESEEVYQRQVLSISCIIFGIVIVGMFCAAFYFKSKKQAKQIQEQLKVPQNGKSYSLKASSTMAKSENLVKSHVQLQNYSKVERHPVTALEKMMESSFVGPQSFPEVPSPDRGSQSVKHHRSLSSCCSPGQRSGMLHRNAFRRTPPSPRSRLGGIVGPAYQQLEESRIPDQDTIPCQGYSSSGLKTQRNTSINMQLPSRETNPYFNSLEQKDLVGYSSTRASSVPIIPSVGLEETCLQMPGISEVKSIKWCKNSYSADVVNVSIPVSDCLIAEQQEVKILLETVQEQIRILTDARRSEDYELASVETEDSASENTAFLPLSPTAKSEREAQFVLRNEIQRDSALTK |
| 237 | 人類NRG3 EGF樣域(UniProt：B9EGV5-1之位置286-329) | HFKPCRDKDLAYCLNDGECFVIETLTGSHKHCRCKEGYQGVRCD |
| 238 | 人類NRG4 (UniProt：Q8WWG1-1，v1) | MPTDHEEPCGPSHKSFCLNGGLCYVIPTIPSPFCRCVENYTGARCEEVFLPGSSIQTKSNLFEAFVALAVLVTLIIGAFYFLCRKGHFQRASSVQYDINLVETSSTSAHHSHEQH |
| 239 | 人類NRG4 EGF樣域(UniProt：Q8WWG1-1之位置5-46) | HEEPCGPSHKSFCLNGGLCYVIPTIPSPFCRCVENYTGARCE |
| 240 | EGF家族一致性模體 | C(X) 7C(X) 4-5C(X) 10-13CXC(X) 8GXRC 其中「X」為任何胺基酸，且其中數字指示前述括號之殘基數(亦即，「(X) 7」=「XXXXXXX」) |
1.一種抗原結合分子，其任擇地為經單離的，其能夠與HER3結合於細胞外區子域II。
2.如段落1之抗原結合分子，其中該抗原結合分子係抑制HER3與一HER3交互作用伙伴之間的交互作用。
3.如段落1或段落2之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠與一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列或由其組成。
4.如段落1至3中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠與一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：229之胺基酸序列。
5.如段落1至4中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠與一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：229之胺基酸序列。
6.如段落1至5中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-CDR3。
7.如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：44的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
8.如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：44的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：89的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
9.如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：44的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：90的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：96的胺基酸序列之LC-CDR3。
10.如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：44的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：98的胺基酸序列之LC-CDR3。
11.如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：47的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：93的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
12.如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：49的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：93的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
13.如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：50的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：93的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
14.如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：48的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
15.如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：48的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：97的胺基酸序列之LC-CDR3。
16.如段落1至6中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：42的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：48的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
17.如段落1至5中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：158的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：159的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：160的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：165的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：166的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：167的胺基酸序列之LC-CDR3。
18.如段落1至4中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠與一多肽結合，該多肽包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列。
19.如段落1至4或段落18中任一段之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：128的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：129的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：130的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：136的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：137的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：138的胺基酸序列之LC-CDR3。
20.如段落1至4或段落18中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：144的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：145的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：146的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：151的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：152的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：153的胺基酸序列之LC-CDR3。
21.如段落1至4中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：24之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：74的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(ii)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：25之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：75的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(iii)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：26之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：76的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(iv)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：27之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：77的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(v)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：28之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：78的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(vi)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：29之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：78的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(vii)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：30之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：78的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(viii)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：31之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：79的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(ix)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：32之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：79的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(x)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：33之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：80的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(xi)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：34之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：81的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(xii)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：35之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：82的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(xiii)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：36之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：83的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(xiv)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：37之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：84的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(xv)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：38之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：85的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(xvi)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：39之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：86的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(xvii)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：40之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：87的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(xviii)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：127之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：135的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(xix)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：143之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：150的胺基酸序列有至少70%序列同一性；
或
(xx)一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：157之胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：164的胺基酸序列有至少70%的序列同一性。
22.如段落1至21中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能與人類HER3，以及小鼠HER3、大鼠HER3及食蟹獼猴HER3中之一或多者結合。
23.一種抗原結合分子，其任擇地經單離，其包含(i)如段落1至22中任一者之一抗原結合分子，及(ii)能夠與HER3以外的一抗原結合之一抗原結合分子。
24.如段落1至23中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠與在該細胞表面處表現HER3的細胞結合。
25.如段落1至24中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能夠抑制HER3-媒介的訊息傳導。
26.如段落1至25中任一者之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含一Fc區，該Fc區包含一多肽，該多肽具有：(i) C於對應於位置242的該位置處，及C於對應於位置334的該位置處，以及(ii)下列中之一者或多者：A於對應於位置236的該位置處、D於對應於位置239的該位置處、E於對應於位置332的該位置處、L於對應於位置330的該位置處、K於對應於位置345的該位置處，以及G於對應於位置430的該位置處。
27.如段落26之抗原結合分子，其中該Fc區包含一多肽，該多肽具有C於對應於位置242的該位置處、C於對應於位置334的該位置處、A於對應於位置236的該位置處、D於對應於位置239的該位置處、E於對應於位置332的該位置處，以及L於對應於位置330的該位置處。
28.一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如段落1至27中任一者之一抗原結合分子。
29.一種核酸或複數種核酸，其任擇地為經單離的，其編碼如段落1至27中任一者之一抗原結合分子或如段落28之一CAR。
30.一種表現載體或複數種表現載體，其包含如段落29之一核酸或複數核酸。
31.一種細胞，其包含如段落1至27中任一者之一抗原結合分子、如段落28之一CAR、如段落29之一核酸或複數核酸、或如段落30之一表現載體或複數表現載體。
32.一種方法，其包含培養包含如段落29之一核酸或複數核酸、或如段落30之一表現載體或複數表現載體的一細胞，在合適於從該(等)核酸或該(等)表現載體表現該抗原結合分子或CAR的條件下。
33.一種組成物，其包含如段落1至27中任一者之一抗原結合分子、如段落28之一CAR、如段落29之一核酸或複數核酸、如段落30之一表現載體或複數表現載體，或如段落31之一細胞。
34.一種如段落1至27中任一者之抗原結合分子、一種如段落28之CAR、一種或複數如段落29之核酸、一種或複數如段落30之表現載體、一種如段落31之細胞，或一種如段落33之組成物，其供使用於醫療治療或預防的一方法中。
35.一種如段落1至27中任一者之抗原結合分子、一種如段落28之CAR、一種如段落29之核酸或複數核酸、一種如段落30之表現載體或複數表現載體、一種如段落31之細胞，或一種如段落33之組成物，其供使用於治療或預防一癌症的一方法中。
36.一種如段落1至27中任一者之抗原結合分子、一種如段落28之CAR、一種如段落29之核酸或複數核酸、一種如段落30之表現載體或複數表現載體、一種如段落31之細胞，或一種如段落33之組成物於製備一藥劑之用途，該藥劑供使用於一癌症之治療或預防的一方法中。
37.一種治療或預防一癌症之方法，其包含投與一治療或預防有效量之一種如段落1至27中任一者之抗原結合分子、一種如段落28之CAR、一種如段落29之核酸或複數核酸、一種如段落30之表現載體或複數表現載體、一種如段落31之細胞，或一種如段落33之組成物至一主體。
38.如段落34或段落35之供使用之該抗原結合分子、CAR、核酸或複數種核酸、表現載體或複數種表現載體、細胞或組成物、如段落36之用途或如段落37之方法，其中該方法額外地包含投與由一EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的一抑制劑，任擇地其中由一EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的該抑制劑係為一HER2及/或EGFR所媒介之訊息傳導的抑制劑。
39.如段落34至38中任一者之供使用的抗原結合分子、CAR、核酸或複數核酸、表現載體或複數表現載體、細胞或組成物、用途或方法，其中該癌症係選自於：包含表現一EGFR家族成員之細胞的一癌症、包含表現HER3之細胞的一癌症、一實性腫瘤、乳癌、乳癌瘤、管癌瘤、胃癌(gastric cancer)、胃癌瘤、胃腺癌、結腸直腸癌、結腸直腸癌瘤、結腸直腸腺癌、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤(SCCHN)、肺癌、肺腺癌、鱗狀細胞肺癌瘤、卵巢癌、卵巢癌瘤、卵巢漿液性腺癌、腎癌(kidney cancer)、腎臟細胞癌瘤、腎臟透明細胞癌瘤、腎臟細胞腺癌、腎臟乳突細胞癌瘤、胰臟癌、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、子宮頸癌、子宮頸鱗狀細胞癌瘤、皮膚癌、黑色素瘤、食道癌(esophageal cancer)、食道腺癌、肝臟癌、肝細胞癌瘤、膽管癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌瘤、甲狀腺癌(thyroid cancer)、甲狀腺癌瘤、嗜鉻細胞瘤、副神經節瘤、膀胱癌、膀胱泌尿上皮細胞癌瘤、前列腺癌、前列腺腺癌、肉瘤及胸腺瘤。
40.一種抑制HER3-媒介之訊息傳導的方法，其包含使HER3-表現細胞與如段落1至27中任一者之一抗原結合分子接觸。
41.一種降低HER3-表現細胞之數目或活性的方法，該方法包含使HER3-表現細胞與如段落1至27中任一者之一抗原結合分子接觸。
42.一種活體外複合物，其任擇地經單離，其包含與HER3結合之如段落1至27中任一者的一抗原結合分子。
43.一種方法，其包含使一含有或懷疑含有HER3的樣本接觸如段落1至27中任一者的一抗原結合分子，以及偵測該抗原結合分子與HER3之一複合物的形成。
44.一種選擇或取選(stratify)一主體來以HER3-靶定製劑治療的方法，該方法包含於活體外使來自該主體的一樣本接觸如段落1至27中任一者之一抗原結合分子，以及偵測該抗原結合分子與HER3之一複合物的形成。
45.一種如段落1至27中任一者之一抗原結合分子作為一活體外或活體內診斷劑或預後劑之用途。
46.一種如段落1至27中任一者之抗原結合分子於用於偵測、定位或成像一癌症之方法上的用途，任擇地其中該癌症係選自於：包含表現一EGFR家族成員之細胞的一癌症、包含表現HER3之細胞的一癌症、一實性腫瘤、乳癌、乳癌瘤、管癌瘤、胃癌(gastric cancer)、胃癌瘤、胃腺癌、結腸直腸癌、結腸直腸癌瘤、結腸直腸腺癌、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤(SCCHN)、肺癌、肺腺癌、鱗狀細胞肺癌瘤、卵巢癌、卵巢癌瘤、卵巢漿液性腺癌、腎癌(kidney cancer)、腎臟細胞癌瘤、腎臟透明細胞癌瘤、腎臟細胞腺癌、腎臟乳突細胞癌瘤、胰臟癌、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、子宮頸癌、子宮頸鱗狀細胞癌瘤、皮膚癌、黑色素瘤、食道癌(esophageal cancer)、食道腺癌、肝臟癌、肝細胞癌瘤、膽管癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌瘤、甲狀腺癌(thyroid cancer)、甲狀腺癌瘤、嗜鉻細胞瘤、副神經節瘤、膀胱癌、膀胱泌尿上皮細胞癌瘤、前列腺癌、前列腺腺癌、肉瘤及胸腺瘤。
47.一種抗原結合分子，其任擇地為經單離的，其能夠與HER3結合，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-CDR3。
48.如段落47之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
(i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區：
具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1
具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2
具有SEQ ID NO：48的胺基酸序列之HC-CDR3；及
(ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區：
具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1
具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2
具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
49.如段落47或段落48之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：
一VH區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：36的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及
一VL區，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與SEQ ID NO：83的胺基酸序列有至少70%的序列同一性。
50.一種抗原結合分子，其任擇地經單離，其包含(i)如段落47至49中任一者之一抗原結合分子，及(ii)能夠與HER3以外的一抗原結合之一抗原結合分子。
51.一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如段落47至50中任一者之一抗原結合分子。
52.一種核酸或複數種核酸，其任擇地經單離，其編碼如段落47至50中任一者之一抗原結合分子或如段落51之一CAR。
53.一種表現載體或複數種表現載體，其包含如段落52之一核酸或複數核酸。
54.一種細胞，其包含如段落47至50中任一者之一抗原結合分子、如段落51之一CAR、如段落52之一核酸或複數核酸、或如段落53之一表現載體或複數表現載體。
55.一種方法，其包含培養包含如段落52之一核酸或複數核酸、或如段落53之一表現載體或複數表現載體的一細胞，在合適於從該(等)核酸或該(等)表現載體表現該抗原結合分子或CAR的條件下。
56.一種組成物，其包含如段落47至50中任一者之一抗原結合分子、如段落51之一CAR、如段落52之一核酸或複數核酸、如段落53之一表現載體或複數表現載體，或如段落54之一細胞。
57.一種如段落47至50中任一者之抗原結合分子、一種如段落51之CAR、一種或複數如段落52之核酸、一種或複數如段落53之表現載體、一種如段落54之細胞，或一種如段落56之組成物，其供使用於醫療治療或預防的一方法中。
58.一種如段落47至50中任一者之抗原結合分子、一種如段落51之CAR、一種如段落52之核酸或複數核酸、一種如段落53之表現載體或複數表現載體、一種如段落54之細胞，或一種如段落56之組成物，其供用於治療或預防一癌症的一方法中。
59.一種如段落47至50中任一者之抗原結合分子、一種如段落51之CAR、一種如段落52之核酸或複數核酸、一種如段落53之表現載體或複數種表現載體、一種如段落54之細胞，或一種如段落56之組成物於製備一藥劑之用途，該藥劑供使用於一癌症之治療或預防的一方法中。
60.一種治療或預防一癌症之方法，其包含投與一治療或預防有效量之一種如段落47至50中任一者之抗原結合分子、一種如段落51之CAR、一種如段落52之核酸或複數核酸、一種如段落53之表現載體或複數表現載體、一種如段落54之細胞，或一種如段落56之組成物至一主體。
61.如段落57或段落58之供使用之該抗原結合分子、CAR、核酸或複數核酸、表現載體或複數表現載體、細胞或組成物、如段落59之用途或如段落60之該方法，其中該方法額外地包含投與由一EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的一抑制劑，任擇地其中由一EGFR家族成員所媒介之訊息傳導的該抑制劑係為一HER2及/或EGFR所媒介之訊息傳導的抑制劑。
62.如段落57至61中任一者之供使用的抗原結合分子、CAR、核酸或複數核酸、表現載體或複數表現載體、細胞或組成物、用途或方法，其中該癌症係選自於：包含表現一EGFR家族成員之細胞的一癌症、包含表現HER3之細胞的一癌症、一實性腫瘤、乳癌、乳癌瘤、管癌瘤、胃癌(gastric cancer)、胃癌瘤、胃腺癌、結腸直腸癌、結腸直腸癌瘤、結腸直腸腺癌、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤(SCCHN)、肺癌、肺腺癌、鱗狀細胞肺癌瘤、卵巢癌、卵巢癌瘤、卵巢漿液性腺癌、腎癌(kidney cancer)、腎臟細胞癌瘤、腎臟透明細胞癌瘤、腎臟細胞腺癌、腎臟乳突細胞癌瘤、胰臟癌、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、子宮頸癌、子宮頸鱗狀細胞癌瘤、皮膚癌、黑色素瘤、食道癌(esophageal cancer)、食道腺癌、肝臟癌、肝細胞癌瘤、膽管癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌瘤、甲狀腺癌(thyroid cancer)、甲狀腺癌瘤、嗜鉻細胞瘤、副神經節瘤、膀胱癌、膀胱泌尿上皮細胞癌瘤、前列腺癌、前列腺腺癌、肉瘤及胸腺瘤。
63.一種抑制HER3-媒介之訊息傳導的方法，其包含使HER3-表現細胞與如段落47至50中任一者之一抗原結合分子接觸。
64.一種降低HER3-表現細胞之數目或活性的方法，該方法包含使HER3-表現細胞與如段落47至50中任一者之一抗原結合分子接觸。
65.一種活體外複合物，其任擇地經單離，其包含與HER3結合之如段落47至50中任一者的一抗原結合分子。
66.一種方法，其包含使一含有或懷疑含有HER3的樣本接觸如段落47至50中任一者的一抗原結合分子，以及偵測該抗原結合分子與HER3之一複合物的形成。
67.一種選擇或取選(stratify)一主體來以HER3-靶定製劑治療的方法，該方法包含於活體外使來自該主體的一樣本接觸如段落47至50中任一者之一抗原結合分子，以及偵測該抗原結合分子與HER3之一複合物的形成。
68.一種如段落47至50中任一者之一抗原結合分子作為一活體外或活體內診斷劑或預後劑之用途。
69.一種如段落47至50中任一者之抗原結合分子於用於偵測、定位或成像一癌症之方法上的用途，任擇地其中該癌症係選自於：包含表現一EGFR家族成員之細胞的一癌症、包含表現HER3之細胞的一癌症、一實性腫瘤、乳癌、乳癌瘤、管癌瘤、胃癌(gastric cancer)、胃癌瘤、胃腺癌、結腸直腸癌、結腸直腸癌瘤、結腸直腸腺癌、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤(SCCHN)、肺癌、肺腺癌、鱗狀細胞肺癌瘤、卵巢癌、卵巢癌瘤、卵巢漿液性腺癌、腎癌(kidney cancer)、腎臟細胞癌瘤、腎臟透明細胞癌瘤、腎臟細胞腺癌、腎臟乳突細胞癌瘤、胰臟癌、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、子宮頸癌、子宮頸鱗狀細胞癌瘤、皮膚癌、黑色素瘤、食道癌(esophageal cancer)、食道腺癌、肝臟癌、肝細胞癌瘤、膽管癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌瘤、甲狀腺癌(thyroid cancer)、甲狀腺癌瘤、嗜鉻細胞瘤、副神經節瘤、膀胱癌、膀胱泌尿上皮細胞癌瘤、前列腺癌、前列腺腺癌、肉瘤及胸腺瘤。
***
本發明包括所說明之態樣及較佳特徵之組合，除非此一組合係顯然不允許或明確表示需避免者。
本文中所使用之節標題僅出於組織目的且不應理解為限制所說明之標的。
現將參照隨附圖式，藉助於實施例來例示本發明之態樣及實施態樣。其他態樣及實施例對於熟習此藝者將為顯易可見的。此文中所提及的全部文件係藉由參照併入本文中。
在貫穿此說明書，包括隨後之申請專利範圍中，除非上下文另外要求，否則「包含」一詞及其變化形(諸如「包含有」及「包括」)應理解為暗示含括一所陳述整體或步驟、或是整體或步驟之群組，但不排除任何其他整體或步驟、或是整體或步驟之群組。
必須注意到，當使用於本說明書及隨附的申請專利範圍中，除非上下文另外明確指定，否則單數形式「一」、「一個」以及「該」包括複數的指示對象。範圍於本文中可表達為從「約」一特定值及/或至「約」另一特定值。當表示此一範圍時，另一實施態樣包括從該一特定值及/或至該另一特定值。相似地，當值藉由使用前述「約」來表示為近似值時，應理解該特定值係形成另一實施態樣。
當在本文中揭露一核酸序列時，亦明確考量其反向互補。
本文所述之方法較佳可在活體外施行。用語「活體外」意欲涵蓋用培養中之細胞施行的程序，而用語「活體內」意欲涵蓋以/於完整的多細胞生物施行的程序。
在下列實施例中，本案發明人說明靶定HER3分子中感興趣之特定區的新穎抗-HER3抗體殖株的生產，以及這些抗原結合分子在生物物理上及功能上之特徵化以及治療評鑑。
實施例1：HER3標靶設計及抗-HER3抗體融合瘤生產
本案發明人選擇人類HER3之細胞外區(SEQ ID NO：9)中的兩個區，用於引發HER3-結合單株抗體。
1.1 融合瘤生產
從InVivos (新加坡)獲得大約6週大的雌性BALB/c小鼠。動物安置於無特定病原條件下且遵照實驗動物照護及使用委員會(IACUC)的指導方針來對待。
於融合瘤生產方面，用抗原胜肽、重組型目標蛋白或表現目標蛋白的細胞之專有的混合物來免疫小鼠。
在收穫脾臟供融合之前，小鼠用抗原混合物來追加連續三天抑或是只有一天。在最後追加後24 h，單離所有的脾細胞且根據製造商指南(Stemcell Technologies，加拿大)，使用ClonaCell-HY融合瘤選殖套組，用PEG來與骨髓瘤細胞株P3X63.Ag8.653 (ATCC，USA)融合。
在37°C下於5% CO
2培育器中以ClonaCell-HY培養基C (Stemcell Technologies，加拿大)培養融合細胞過夜。隔天，融合細胞係經離心且再懸浮於10 ml之ClonaCell-HY培養基C中，接著與90 ml含HAT組分之半固體甲基纖維素為基的ClonaCell-HY培養基D (StemCell Technologies，加拿大)溫和地混合，其將融合瘤選擇與選殖結合成一個步驟。
融合細胞接著佈入於96孔平盤中且允許在37℃下於一5% CO
2培育器中生長。7–10天後，單離單個融合瘤殖株並藉由以酵素聯結免疫吸附檢定法(ELISA)及螢光激發細胞分選(FAC)篩選上清液來選擇生產抗體的融合瘤。
1.2 抗體可變區擴增及定序
使用TRIzol試劑(Life Technologies,Inc.，USA)用製造商之規程從融合瘤細胞萃取出總RNA。使用SMARTer RACE 5'/3'套組(Clontech™，USA)按照製造商指南來合成雙股cDNA。簡而言之，根據製造商指南，1 µg之總RNA被用來使用5'-RACE CDS引子(以套組提供)生產全長cDNA，且接著使5'轉接子(SMARTer II A引子)併入每一cDNA中。cDNA合成反應含有：5X第一股緩衝劑、DTT (20 mM)、dNTP混合物(10 mM)、RNase抑制劑(40 U/µl)及SMARTScribe反轉錄酶(100 U/µl)。
使用SeqAmp DNA聚合酶(Clontech™，USA)來擴增race-ready cDNA。擴增反應含有SeqAmp DNA聚合酶、2X Seq AMP緩衝劑、與轉接子序列互補之5' SMARTer Race套組所提供的5'通用引子，以及與個別之重鏈或輕鏈恆定區引子黏合的3'引子。基於先前由Krebber et al. J. Immunol. Methods 1997; 201: 35-55、Wang et al. Journal of Immunological Methods 2000, 233; 167–177或Tiller et al. Journal of Immunological Methods 2009; 350:183–193所報導的引子混合物來設計5'恆定區。使用下列熱規程：94℃歷時1 min的預變性循環；35個循環的94°C，30 s、55°C，30 s及72°C，45 s；72°C歷時3 min的最終延長。
生成的VH及VL PCR產物，大約550 bp，係使用CloneJET PCR選殖套組(Thermo Scientific，USA)來選殖進pJET1.2/鈍端載體中，且用來轉形高度勝任的大腸桿菌DH5α。使用Miniprep套組(Qiagene，德國)從生成的轉形體來製備質體DNA且定序。藉由AITbiotech來進行DNA定序。使用國際IMGT (ImMunoGeneTics)資訊系統來分析這些定序資料(LeFranc et al., Nucleic Acids Res. (2015) 43 (Database issue):D413-22)，以特徵化個別的CDR及框架序列。藉由SignalP (v 4.1; Nielsen, in Kihara, D (ed): Protein Function Prediction (Methods in Molecular Biology vol. 1611) 59-73, Springer 2017)來識別VH及VL之5'端的訊息胜肽。
選擇四種單株抗-HER3抗體殖株以供進一步發展：10D1、10A6、4-35 B2及4-35-B4。
10D1之人源化版本係藉由移植互補決定區(CDR)至包含人類抗體框架區的VH及VL中以電腦模擬(
in silico)來設計，且藉由酵母顯示法方法來進一步最適化抗原結合作用。
於酵母顯示法方面，人源化序列係藉由聚合酶連鎖反應(PCR)而轉換成單鏈片段可變(scFv)型式且用作為模板以透過隨機突變誘發來產生突變體庫。突變體PCR庫接著與線性化pCTcon2載體一起電穿孔至酵母中來產生酵母庫。用人類HER3抗原來染色該等庫且分選頂尖的結合者。在4-5輪分選之後，定序個別的酵母殖株以識別獨特的抗體序列。
實施例2：抗體生產及純化
2.1 選殖VH及VL進表現載體中：
| 抗體殖株 | VH/VL 序列 | |
| 10A6 | VH = SEQ ID NO：157 | |
| VL = SEQ ID NO：164 | ||
| 10D1 | VH = SEQ ID NO：24 | |
| VL = SEQ ID NO：74 | ||
| 10D1_c75 | VH = SEQ ID NO：25 | |
| VL = SEQ ID NO：75 | ||
| 10D1_c76 | VH = SEQ ID NO：26 | |
| VL = SEQ ID NO：76 | ||
| 10D1_c77 | VH = SEQ ID NO：27 | |
| VL = SEQ ID NO：77 | ||
| 10D1_c78v1 | VH = SEQ ID NO：28 | |
| VL = SEQ ID NO：78 | ||
| 10D1_c78v2 | VH = SEQ ID NO：29 | |
| VL = SEQ ID NO：78 | ||
| 10D1_11B | VH = SEQ ID NO：30 | |
| VL = SEQ ID NO：78 | ||
| 10D1_c85v1 | VH = SEQ ID NO：31 | |
| VL = SEQ ID NO：79 | ||
| 10D1_c85v2 | VH = SEQ ID NO：32 | |
| VL = SEQ ID NO：79 | ||
| 10D1_c85o1 | VH = SEQ ID NO：33 | |
| VL = SEQ ID NO：80 | ||
| 10D1_c85o2 | VH = SEQ ID NO：34 | |
| VL = SEQ ID NO：81 | ||
| 10D1_c87 | VH = SEQ ID NO：35 | |
| VL = SEQ ID NO：82 | ||
| 10D1_c89 | VH = SEQ ID NO：36 | |
| VL = SEQ ID NO：83 | ||
| 10D1_c90 | VH = SEQ ID NO：37 | |
| VL = SEQ ID NO：84 | ||
| 10D1_c91 | VH = SEQ ID NO：38 | |
| VL = SEQ ID NO：85 | ||
| 10D1_c92 | VH = SEQ ID NO：39 | |
| VL = SEQ ID NO：86 | ||
| 10D1_c93 | VH = SEQ ID NO：40 | |
| VL = SEQ ID NO：87 | ||
| 4-35-B2 | VH = SEQ ID NO：127 | |
| VL = SEQ ID NO：135 | ||
| 4-35-B4 | VH = SEQ ID NO：143 | |
| VL = SEQ ID NO：150 |
編碼抗-HER3抗體殖株之重及輕鏈可變區的DNA序列，係被亞選殖至pmAbDZ_IgG1_CH及pmAbDZ_IgG1_CL (InvivoGen，USA)真核表現載體中，以供建構人類-小鼠嵌合抗體。
替選地，編碼抗-HER3抗體殖株之重及輕鏈可變區的DNA序列，係被亞選殖至pFUSE-CHIg-hG1及pFUSE2ss-CLIg-hk (InvivoGen，USA)真核表現載體中，以供建構人類-小鼠嵌合抗體。相對於人類IgG1恆定區(IGHG1；UniProt：P01857-1，v1；SEQ ID NO：176)，pFUSE-CHIg-hG1所編碼的人類IgG1恆定區於CH3區中包含取代D356E、L358M (根據EU編號所編號的位置)。pFUSE2ss-CLIg-hk編碼人類IgG1輕鏈κ恆定區(IGCK；UniProt：P01834-1，v2)。
可變區連同訊息胜肽係使用SeqAmp酵素(Clontech™，USA)遵循製造商的規程從選殖載體來擴增。使用與VH或VL內適當區具有15-20bp重疊、加上5'端之6 bp作為限制位的順向及反向引子。用製造商推薦的限制酵素來消化DNA插入物及載體，以確保不會有框移導入並使用T4連接酶酵素(Thermo Scientific，USA)連接進其個別質體。莫耳比3:1之DNA插入物對載體係被使用於接合。
2.2 在哺乳動物細胞中抗體的表現
遵循製造商指南，使用1) Expi293暫時表現系統套組(Life Technologies，USA)、抑或是2) HEK293-6E暫時表現系統(CNRC-NRC，加拿大)來表現抗體。
1) Expi293暫時表現系統：
細胞株維持：
從Life Technologies, Inc (USA)獲得HEK293F細胞(Expi293F)。在具搖動平台、37℃、8% CO
2及80%增濕的培育器中，細胞培養於增補50 IU/ml青黴素及50 µg/ml鏈黴素(Gibco，USA)的無血清、無蛋白質、化學性界定培養基(Expi293表現培養基；Thermo Fisher，USA)中。
轉染：
根據其製造商的規程、使用ExpiFectamine 293試劑套組(Gibco，USA)以表現質體來轉染Expi293F細胞。簡而言之，維持中的細胞係藉由旋轉降沉培養物來替換一培養基以移除抗生素，於轉染前1天將細胞丸粒再懸浮於沒有抗生素的新鮮培養基中。在轉染當天，每一轉染係播種2.5 x 10
6/ml之活細胞於搖動器燒瓶中。在添加給細胞之前，在室溫下於血清減少的培養基(Opti-MEM (Gibco，USA))中歷時25 min形成DNA-ExpiFectamine複合物。在轉染後16-18 h，添加強化子至經轉染的細胞。在轉染後第4天，將一等量的培養基加添至轉染體以防止細胞聚集。在第7天，轉染體藉由4000 x g離心15 min來收穫，且過濾通過0.22 µm無菌過濾器單元。
2) HEK293-6E 暫時表現系統
細胞株維持：
從加拿大國家研究委員會(National Research Council Canada)獲得HEK293-6E細胞。在具搖動平台、37°C、5% CO
2及80%增濕的培育器中，細胞被培養於增補0.1% Kolliphor-P188及4 mM L-麩醯胺酸(Gibco，USA)、及25 µg/ml G-418之無血清、無蛋白質、化學性界定的Freestyle F17培養基(Invitrogen，USA)中。
轉染：
根據其製造商的規程、使用PEIproTM (Polyplus，USA)以表現質體來轉染HEK293-6E細胞。簡而言之，維持中的細胞係藉由離心來替換一培養基以移除抗生素，於轉染前1天將細胞丸粒再懸浮於沒有抗生素的新鮮培養基中。在轉染當天，每一轉染係播種1.5-2 x 10
6細胞/ml的活細胞於搖動器燒瓶中。混合DNA與PEIproTM至一1:1的比率且於添加給細胞之前，在RT下歷時5 min以允許複合物於F17培養基中形成。在轉染後24-48 h，提供0.5% (w/v)胰化蛋白(Tryptone) N1給轉染體。在第6-7天，藉由4000 x
g離心15 min來收穫轉染體，且上清液係過濾通過0.22 µm無菌濾器單元。
用編碼下列多肽之組合的載體來轉染細胞：
2.3 抗體純化
親和力純化、緩衝劑交換及儲存：
| 抗原結合分子 | 多肽 | 抗體 |
| [1] | 10D1 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：216) + 10D1 VL-Cκ (SEQ ID NO：217) | 抗-HER3殖株10D1 IgG1 |
| [2] | 10A6 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：222) + 10A6 VL-Cκ (SEQ ID NO：223) | 抗-HER3殖株10A6 IgG1 |
| [3] | 4-35-B2 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：218) + 4-35-B2 VL-Cκ (SEQ ID NO：219) | 抗-HER3殖株4-35-B2 IgG1 |
| [4] | 4-35-B4 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：220) + 4-35-B4 VL-Cκ (SEQ ID NO：221) | 抗-HER3殖株4-35-B4 IgG1 |
| [5] | 10D1_c75 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：187) + 10D1_c75 VL-Cκ (SEQ ID NO：188) | 抗-HER3殖株10D1_c75 IgG1 |
| [6] | 10D1_c76 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：189) + 10D1_c76 VL-Cκ (SEQ ID NO：190) | 抗-HER3殖株10D1_c76 IgG1 |
| [7] | 10D1_c77 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：191) + 10D1_c77 VL-Cκ (SEQ ID NO：192) | 抗-HER3殖株10D1_c77 IgG1 |
| [8] | 10D1_c78v1 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：193) + 10D1_c78v1 VL-Cκ (SEQ ID NO：195) | 抗-HER3殖株10D1_c78v1 IgG1 |
| [9] | 10D1_c78v1 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：194) + 10D1_c78v2 VL-Cκ (SEQ ID NO：195) | 抗-HER3殖株10D1_c78v2 IgG1 |
| [10] | 10D1_11B VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：196) + 10D1_11B VL-Cκ (SEQ ID NO：195) | 抗-HER3殖株10D1_11B IgG1 |
| [11] | 10D1_c85v1 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：197) + 10D1_c85v1 VL-Cκ (SEQ ID NO：199) | 抗-HER3殖株10D1_c85v1 IgG1 |
| [12] | 10D1_c85v2 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：198) + 10D1_c85v2 VL-Cκ (SEQ ID NO：199) | 抗-HER3殖株10D1_c85v2 IgG1 |
| [13] | 10D1_c85o1 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：200) + 10D1_c85o1 VL-Cκ (SEQ ID NO：201) | 抗-HER3殖株10D1_c85o1 IgG1 |
| [14] | 10D1_c85o2 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：202) + 10D1_c85o2 VL-Cκ (SEQ ID NO：203) | 抗-HER3殖株10D1_c85o2 IgG1 |
| [15] | 10D1_c87 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：204) + 10D1_c87 VL-Cκ (SEQ ID NO：205) | 抗-HER3殖株10D1_c87 IgG1 |
| [16] | 10D1_c89 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：206) + 10D1_c89 VL-Cκ (SEQ ID NO：207) | 抗-HER3殖株10D1_c89 IgG1 |
| [17] | 10D1_c90 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：208) + 10D1_c90 VL-Cκ (SEQ ID NO：209) | 抗-HER3殖株10D1_c90 IgG1 |
| [18] | 10D1_c91 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：210) + 10D1_c91 VL-Cκ (SEQ ID NO：211) | 抗-HER3殖株10D1_c91 IgG1 |
| [19] | 10D1_c92 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：212) + 10D1_c92 VL-Cκ (SEQ ID NO：213) | 抗-HER3殖株10D1_c92 IgG1 |
| [20] | 10D1_c93 VH-CH1-CH2-CH3 (SEQ ID NO：214) + 10D1_c93 VL-Cκ (SEQ ID NO：215) | 抗-HER3殖株10D1_c93 IgG1 |
由轉染細胞分泌到培養物上清液中的抗體係使用液相層析法系統AKTA Start (GE Healthcare，UK)來純化。具體而言，以一結合速率5 ml/min裝載上清液至HiTrap蛋白G管柱(GE Healthcare，UK)上，隨後用10倍管柱體積的清洗緩衝劑(20 mM 磷酸鈉，pH 7.0)來清洗該管柱。經結合的mAb係用溶析緩衝劑(0.1 M甘胺酸，pH 2.7)來洗提，且將溶析液份化至含適量中和緩衝劑(1 M Tris，pH 9)之收集管。含純化mAb之經中和的溶析緩衝劑係使用30K MWCO蛋白質濃縮器(Thermo Fisher，USA)或3.5K MWCO透析夾(Thermo Fisher，USA)交換至PBS中。單株抗體係藉由通過0.22 µm過濾器予以無菌化、等分且快速冷凍於-80°C以供儲存。
2.4 抗體純度分析
粒徑篩析層析法(SEC)：
藉由粒徑篩析層析法(SEC)分析抗體純度，其使用Superdex 200 10/30 GL管柱(GE Healthcare，UK)、以PBS泳動緩衝劑，於一AKTA Explorer液相層析法系統(GE Healthcare，UK)上進行。pH 7.2的500 µl PBS中之150 µg的抗體係在室溫下以0.75 ml/min的一流速注入至該管柱。蛋白質根據其等之分子量洗提。
抗-HER3抗體殖株10D1 (實施例2.2之[1])的結果係顯示於圖12中。
不同的10D1變異體殖株所獲得的結果係顯示於圖34中。
十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)：
抗體純度亦根據標準方法、藉由還原及非還原條件之SDS-PAGE來分析。簡而言之，4%-20% TGX蛋白質凝膠(Bio-Rad，USA)被用來使用Mini-Protean電泳系統(Bio-Rad，USA)解析蛋白。在非還原條件方面，蛋白樣本藉由混合2x Laemmli樣本緩衝劑(Bio-Rad，USA)來變性，且於裝載至凝膠之前，95°C煮沸5-10 min。在還原條件方面，使用含5%的β-巰乙醇(βME)或40 mM DTT (二硫蘇糖醇)的2x樣本緩衝劑。電泳係以SDS泳動緩衝劑(25 mM Tris，192 mM甘胺酸，1% SDS，pH 8.3)，在150V恆電壓下進行1 h。
西方墨點法：
蛋白質樣本(30 µg)係如以上所述藉由SDS-PAGE予以份化且轉移至硝化纖維素膜。接著將膜封阻且用抗體於4°C下進行免疫轉漬過夜。以PBS-Tween清洗三次之後，接著用辣根過氧化酶(HRP)-軛接的二級抗體於室溫下培育膜1 h。經由一化學發光Pierce ECL受質西方墨點偵測系統(Thermo Scientific，USA)及自動放射攝影術底片(Kodak XAR底片)暴光來使結果視覺化。
用於偵測的初級抗體係山羊抗-人類IgG-HRP (GenScript Cat No. A00166)及山羊抗-人類κ-HRP (SouterhnBiotech Cat No. 2060-05)。
抗-HER3抗體殖株10D1 (實施例2.2之[1])的結果係顯示於圖13中。10D1容易以高濃度表現、純化及加工。
實施例3：生物物理上的特徵化
3.1 藉由流式細胞分析術分析細胞表面抗原-結合
野生型HEK293細胞(沒有表現高位準的HER3)及用編碼人類HER3之載體所轉染的HEK293細胞(亦即，HEK 293 HER O/E細胞)係與20 µg/ml之抗-HER3抗體或同型對照抗體於4°C一起培育1.5 hr。抗-HER3抗體殖株LJM716 (例如說明於Garner et al., Cancer Res (2013) 73: 6024–6035中)係包括於分析中作為一陽性對照。
細胞用FACS緩衝劑(PBS加上5mM EDTA及0.5% BSA)清洗三次，且再懸浮於2-8°C之FITC-軛接的抗-FC抗體(Invitrogen，USA)歷時40 min。再次清洗細胞且再懸浮於200 µL之FACS流動緩衝劑(PBS加上5mM EDTA)中，用於使用MACSQuant 10 (Miltenyi Biotec，德國)之流式細胞量測術分析。取得後，使用Flowlogic軟體來分析所有的原始資料。使用前與側散射剖析來圈選細胞，就天然及過度表現細胞族群判定陽性細胞百分比。
結果顯示於圖1至4及30至32中。抗-HER3抗體顯示係以高特異性與人類HER3結合。10D1及LJM716係顯示以一相似的程度與人類HER3-表現細胞結合。
3.2 判定抗體特異性及交叉反應性的ELISA
使用ELISA來判定抗體之結合特異性。針對對人類HER3多肽以及個別的小鼠、大鼠及猴子之HER3同源物的結合(Sino Biological Inc.，中國)分析抗體。亦針對其等與人類EGFR及人類HER2 (Sino Biological Inc.，中國)結合的能力分析抗體。
根據標準規程來進行ELISA。簡而言之，用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之0.1 µg/ml之目標多肽在4°C下塗覆96孔平盤(Nunc，丹麥)16 h。在室溫下用Tris緩衝鹽水(TBS)中之1 % BSA阻斷1 h之後，抗-HER3抗體以最高濃度10 µg/ml進行系列地稀釋，並且添加至該平盤。在室溫下培育1 h後，用含有0.05% Tween 20之TBS (TBS-T)清洗平盤三次，且接著與一HRP-軛接的抗-His抗體(Life Technologies,Inc.，USA)於室溫下培育1 h。在清洗之後，平盤用比色偵測受質3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(Turbo-TMB；Pierce，USA)顯色10 min。用2M H
2SO
4來停止反應，並且量測450 nM的OD。
ELISA結果顯示於圖5至7及圖33中。
發現抗-HER3抗體殖株10D1不會與人類HER2或人類EGFR結合，即使是在高抗體濃度下(圖5A)。亦發現抗-HER3抗體殖株10D1展現出與小鼠HER3、大鼠HER3及食蟹獼猴HER3有實質交叉反應性(圖5B)。
發現抗-HER3抗體殖株4-35-B2會與人類HER2及人類EGFR結合(圖6A)。抗-HER3抗體殖株4-35-B2亦展現出與小鼠HER3、大鼠HER3及食蟹獼猴HER3有實質交叉反應性(圖6B)。
發現抗-HER3抗體殖株4-35-B4會與人類HER2及人類EGFR結合(圖7A)。抗-HER3抗體殖株4-35-B4亦展現出與小鼠HER3、大鼠HER3及食蟹獼猴HER3有實質交叉反應性(圖7B)。
10D1變異體全都被證實會與人類HER3結合(圖33A及33B)。
3.3 使用Octet QK384系統之總體親和力研究
分析呈IgG1型式之抗-HER3抗體殖株與人類HER3的結合親和力。
生物層干涉術(BLI)實驗係使用Octet QK384系統(ForteBio)施行。抗-人類IgG Capture (AHC) Octet感測器尖(Pall ForteBio，USA)被用於抗-HER3抗體(25 nM)。所有的量測均在25°C下伴隨1000 rpm之攪拌施行。藉由裝載不同濃度之帶有His標籤的人類HER3抗原120 s、接著藉由將生物感測器轉移至含有檢定緩衝劑的孔內一120 s的解離時間，來施行抗原結合之動力學量測。感應圖譜係參照緩衝效應，接著使用Octet QK384使用者軟體(Pall ForteBio，USA)予以擬合。動力學反應係使用一位點結合模型進行一總體擬合，以獲得締合(K
on)、解離(K
off)速率常數及平衡解離常數(K
D)之值。該分析僅包括能與軟體可靠擬合的曲線(R
2＞0.90)。
圖8顯示殖株10D1分析的一代表感應圖譜。發現殖株10D1係以K
D= 9.58 nM的親和力與人類HER3結合。
人源化/最適化10D1變異體係以非常高的親和力與人類HER3結合。圖36A至36M顯示代表感應圖譜。
所判定之10D1殖株變異體的親和力顯示如下：
| 抗體殖株 | 親和力(K D) |
| 10D1_c89 | 72.6 pM |
| 10D1_c90 | ＜ 1 pM |
| 10D1_c91 | 176 pM |
| 10D1_11B | 0.41 nM |
| 10D1_c85o | 17.3 nM |
| 10D1_c87 | ＜ 1 pM |
| 10D1_c93 | ＜ 1 pM |
| 10D1_c76 | ＜ 1 pM |
| 10D1_c77 | 1.93 nM |
| 10D1_c78 | ＜ 1 pM |
| 10D1_c75 | ＜ 1 pM |
| 10D1_c85 | 7.58 nM |
| 10D1_c85o1 | 18.2 nM |
發現殖株4-35-B2係以K
D= 80.9 nM的親和力與人類HER3結合(圖9)，以及發現殖株4-35-B4係以K
D= 50.3 nM的親和力與人類HER3結合(圖10)。
3.4 以微差掃描螢光分析法進行之熱穩定性分析
簡而言之，三複本的0.2 mg/mL抗體與SYPRO Orange染料(ThermoFisher)之反應混合物係製備於25 µL的PBS中，轉移至MicroAmp光學96孔反應平盤(ThermoFisher)的孔中，且用MicroAmp光學黏著膜(ThermoFisher)來密封。熔化曲線係以一7500快速即時PCR系統(Applied Biosystems)進行，其選擇TAMRA作為報導者及ROX作為被動對照。熱剖析包括25°C之一起始步驟2 min及99°C之一最終步驟2 min，以1.2%之一斜坡率。原始資料之第一階導數係繪製為溫度之一函數以獲得導數熔化曲線。從導數曲線峰提取抗體的熔化溫度(Tm)。
圖11顯示抗體殖株10D1之熱穩定性微差掃描螢光分析法所獲得的原始資料的第一階導數。分析三個不同的抗體樣本。判定Tm為70.3°C。
亦施行10D1變異體殖株及LJM716之分析。圖35A至35C顯示原始資料之第一階導數及所判定的Tm。
3.5 抗-HER3抗體10D1表位之分析
分析抗-HER3抗體10D1以判定其是否會與抗-HER3抗體MM-121及/或LJM-716競爭對HER3的結合。MM-121的表位已經測繪於HER3的域I中；其阻斷NRG配體結合位點。LJM-716的表位已經測繪至跨域II及IV分佈的構形表位，且其以一非活性構形阻斷HER3。
生物層干涉術(BLI)實驗係使用Octet QK384系統(ForteBio)來施行。抗-Penta-HIS (HIS1K)塗覆的生物感測器尖(ForteBio，USA)係使用來捕獲帶有His標籤的人類HER3 (75 nM；300 s)。偵測由飽和抗體之結合(400 nm；600 s)，隨後一解離步驟(120s)，隨後偵測用競爭抗體之結合(300 nM；300 s)，隨後一解離步驟(120s)。MM-121抗體之可變區被選殖於具有人類IgG2及IgKappa Fc主幹的PDZ載體中。LJM-716抗體之可變區被選殖於具有人類IgG1及IgKappa Fc主幹的PDZ載體中。
分析結果係顯示於圖14A及14B中。發現抗-HER3抗體不會與MM-121及/或LJM-716競爭對HER3之結合。
發現10D1結合的HER3表位，比起MM-121及/或LJM-716是相異的且拓撲上遙遠的。
10D1之表位係使用重疊15-mer胺基酸予以測繪，以涵蓋整個HER3細胞外域。每一個獨特的15-mer係藉由在C及N-端的一GS連接子來伸長，軛接至384孔平盤中之一獨特的孔中，以及用0.1、1、10及100 ug/ml之10D1抗體於4°C下培育該等平盤16hr。清洗平盤，且接著用POD-軛接的山羊抗-人類IgG於20°C培育1hr。在使用一LI-COR Odyssey成像系統在425nm之化學發光量測結果來評估結合、以及使用PepSlide Analyzer套裝軟體來施行定量及分析之前，最終添加POD受質溶液至該等孔歷時20 min。重複施行實驗。
發現10D1表位不是直接位在域II的HER3二聚化臂之一β-髮夾結構處，而是在與β-髮夾之二聚化介面N-端處。
經判定10D1及10D1-衍生的殖株所與HER3結合的位點，係對應於人類HER3之胺基酸序列的位置218至235 (如例如顯示於SEQ ID NO：1中者)；HER3的此區之胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO：229中。此區內，識別出二個一致性結合位點模體，以及顯示於SEQ ID NO：230及231內。
對此HER3位置之結合係作用為阻礙HER家族異質二聚化以及由此引起的下游訊息傳導途徑(參見實施例4)。結合為非配體(NRG)依賴型的。10D1結合位點於開放式及封閉式HER3構形兩者中均為溶劑可接觸的、於HER3與其他HER家族成員之間並非保留的，且於人類、小鼠、大鼠及猴子HER3異種同源物之間為100%保留的。
實施例4：功能特徵化
4.1 HER2與HER3二聚化之抑制
分析抗-HER3抗體其等抑制HER3與HER2之異質二聚化的能力。
簡而言之，用0.1 µg/ml於PBS中之帶有His標籤的HER2蛋白，於4°C塗覆96孔平盤(Nunc，丹麥)歷時16 h。在室溫下以1 %於PBS中之BSA阻斷1 h之後，於不同濃度的抗-HER3抗體殖株10D1存在下，添加重組型生物素化人類HER3蛋白，並且在室溫下培育平盤1 h。隨後清洗平盤三次，接著與HRP-軛接的二級抗體在室溫下培育1 h。在清洗之後，平盤用比色偵測受質3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(Turbo-TMB；Pierce，USA)顯色10 min。用2M H
2SO
4來停止反應，並且量測450 nM的OD。
結果顯示於圖15中。發現抗-HER3抗體殖株10D1係以劑量依賴的方式來抑制HER2與HER3之間的交互作用。
在另外的實驗中，分析HER2:HER3二聚化的抑制。
在另外的實驗中，使用PathHunter帕妥珠單抗生物檢定套組(DiscoverX)、根據製造商指南來評鑑HER2:HER3二聚化的抑制。
簡而言之，用1 ml之預熱的CP5培養基來解凍過度表現HER2及HER3的U2OS細胞，且每孔播種5,000個細胞並在37°C下於5% CO
2氛圍中培養4 hr。接著用從25 µg/ml開始、採一8點連續稀釋的10D1F.FcA或帕妥珠單抗來處理細胞。
在4 hr培育之後，添加30 ng/ml之希調蛋白-β2至每一孔且進一步培育細胞16 hr。10 µL之PathHunter生物檢定偵測試劑1係被添加至該等孔，且在黑暗中於室溫下培育15 min。隨後，40 µL之PathHunter生物檢定偵測試劑2係被添加，且在黑暗中於室溫下培育60 min。接著使用Synergy4 Biotek以1秒延遲來讀取平盤。
結果顯示於圖65中。發現10D1F.FcA抑制HER2:HER3二聚化的效率比帕妥珠單抗更好，如由其較低的IC50反映出來。
4.2 識別供用於分析的癌細胞株
本案發明人特徵化癌細胞株之EGFR蛋白家族成員的表現，以識別研究HER3抑制的適當細胞。
圖16A顯示根據癌細胞株百科全書(CCLE；Barretina et al., Nature (2012) 483: 603-607以及The Cancer Cell Line Encyclopedia Consortium & The Genomics of Drug Sensitivity in Cancer Consortium, Nature (2015) 528: 84-87)之N87、SNU16、HT29、FaDu、A549、HCC95、OvCAR8及AHCN細胞之EGFR家族成員及配體的mRNA表現資料。圖16A亦顯示如FlowLogic所判定之EGFR、HER2及HER3的蛋白質表現資料。
實驗使用的細胞株係購自ATCC且依建議予以培養。簡而言之，細胞株維持於所指示的細胞培養基中，增補10% FBS及1% Pen/Strep。在37°C、5% CO
2培育器內培養細胞。培養的細胞以適當的播種密度佈入於一96孔平盤中：HT29、HCC95、FADU及OvCar8細胞以2000個細胞/孔播種，NCl-N87細胞以5000個細胞/孔播種，SNU-16、ACHN及細胞以1500個細胞/孔播種，及A549細胞以1200個細胞/孔播種。
圖16B顯示流式細胞分析術所判定之EGFR、HER2及HER3的表面表現。簡而言之，500,000個細胞係於含有0.5% BSA及2mM EDTA的染色緩衝劑中用初級抗體(20 µg/ml)於4°C染色1.5 h。使用的二級抗體為抗-人類Alexafluor488，以10 µg/ml於4°C歷時20 min。
4.3 HER3-媒介之訊息傳導的抑制
分析抗-HER3抗體10D1其活體外抑制HER3-媒介之訊息傳導的能力。
簡而言之，N87及FaDu細胞播種於一6孔平盤的孔中，其在37℃、5% CO
2下、具有10%血清。在16 hr之後，於1% FBS細胞培養基內培養過夜，來使細胞飢餓(以降低血清中之生長因子所引發的訊息傳導)。次日細胞用50 µg/ml之抗-HER3抗體10D1處理4 hr，隨後用NRG (100 ng/ml)刺激15 min。蛋白質接著被萃取、使用標準布萊德福蛋白質檢定法來定量、藉由SDS-PAGE來份化，且轉移至硝化纖維素膜。接著將膜封阻且於4°C用下列抗體進行免疫轉漬過夜：抗-pHER3、抗-pAKT、泛抗-HER3、泛抗-AKT及抗-β-肌動蛋白。經由Bio-Rad Clarity Western ECL受質使墨點視覺化，且使用密度測量分析來定量條帶；對β肌動蛋白對照進行資料正規化。
結果顯示於圖17中。發現抗-HER3抗體10D1係抑制HER3之磷酸化及下游的訊息傳導。
在另外的實驗中，本案發明人研究受抗-HER3抗體媒介HER3抑制所影響的細胞內訊息傳導途徑。
FaDu細胞播種於一6孔平盤的孔中，在37℃、5% CO
2下、具10%血清。在16 hr之後，細胞於1% FBS細胞培養基中培養過夜來使飢餓。次日細胞用50 µg/ml之抗-HER3抗體10D1處理4 hr，隨後用NRG (100 ng/ml)刺激15 min。蛋白質接著被萃取、使用標準布萊德福蛋白質檢定法來定量，且於4°C下用預封阻的磷蛋白抗體陣列膜(Ray Biotech)培育過夜。接著用清洗緩衝劑清洗該膜，且用偵測抗體雞尾酒於室溫下培育2 hr，隨後清洗及與HRP-軛接的抗-IgG培育。在2 hr之後，清洗膜且使用該套組偵測緩衝劑來探測。用Syngene Gbox成像系統來捕捉影像，量測每一點/磷蛋白的密度，且藉由與缺少抗體、以相同方式處理之細胞所量測的密度進行比較來計算抑制百分比。
結果顯示於圖18中。發現抗-HER3抗體10D1係抑制PI3K/AKT/mTOR及MAPK的訊息傳導。
本案發明人在另外的實驗中研究，用抗-HER3抗體10D1處理對於HER3-表現細胞增殖的效應。
簡而言之，N87及FaDu細胞用從100 µg/ml開始、採一9點的半對數稀釋之系列地稀釋濃度的抗-HER3抗體10D1予以處理。細胞增殖係在5天的一期間之後，根據製造商指南、使用CCK-8增殖分析(Dojindo、Japan)來量測。簡而言之，每一孔添加1x CCK-8溶液，隨後在37°C培育2 h。接著量測450 nm的OD。
圖19A及19B顯示相對於未處理對照細胞的細胞匯集百分比(資料點為三個重複的平均)。
就N87及FaDu細胞的細胞增殖，抗-HER3抗體10D1展現出劑量依賴型之抑制。
實施例5：活體內分析
5.1 藥物動力學分析
大約6-8週大的雌性NCr裸鼠係安置於無特定病原條件下，且遵照實驗動物照護及使用委員會(IACUC)的指導方針來處理。
投與500 µg之抗-HER3抗體，且在基線(- 2 hr)、投與後0.5 hr、6 hr、24 hr、96 hr、168 hr及336 hr由心臟穿刺從3隻小鼠取得血液。藉由ELISA來定量血清內的抗體。
結果顯示於圖50中。發現抗-HER3抗體殖株10D1於NCr裸鼠的半生期為16.3天。
5.2 安全性免疫毒性
使用IMGT DomainGapAlign (Ehrenmann et al., Nucleic Acids Res., 38, D301-307 (2010))及IEDB去免疫化(Dhanda et al., Immunology. (2018) 153(1):118-132)工具，來電腦模擬分析抗-HER3抗體殖株10D1的安全性及免疫原性。
抗-HER3抗體殖株10D1具有之潛在免疫原性胜肽之數目少到足以認為是低免疫原性風險，且沒有可能造成潛在可發展性問題之任何其他的性質。
圖37的表提供10D1變異體殖株有關安全性及可發展性的性質概述。
監測實施例5.3所述實驗中用抗-HER3抗體治療的小鼠之重量變化及大體屍體鏡檢。這些小鼠與僅用載媒處理的小鼠相比係沒有偵測到差異。
以腹膜內注射單一劑量1000 µg之抗-HER3 10D1抗體或一等體積之PBS至6-8週大的雌性BALB/c小鼠(20-25 g)的一實驗來研究血液毒性。在注射後96小時取得血液樣本，且分析流式細胞分析術之不同類型白血球細胞的數目以及NA
+、K
+及Cl
-之電解質指標。
圖51A及51B顯示不同細胞類型之數目，且發現電解質指標落在查爾斯河(Charles River)對照範圍(3隻小鼠)內，且與PBS治療組(3隻小鼠)沒有顯著差異。左邊長條代表載媒，右邊長條代表10D1處理，虛線表示查爾斯河對照範圍的終點。不同組之間所偵測到的臨床徵象、大體屍體鏡檢或重量係沒有差異。
亦分析小鼠於注射後96小時之肝毒性、腎毒性及胰毒性的互相關聯。發現單一劑1000 µg抗-HER3抗體投與後所偵測到之丙胺酸轉胺酶(ALT)、天冬胺酸轉胺酶(AST)、血尿素氮(BUN)、肌酸酐(CREA)、鹼性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、鈣(CAL)、總膽紅素(BIL)、總蛋白質(TPR)及白蛋白(ALB)的位準，係落在查爾斯河對照範圍內且與PBS治療組中之這些標誌的位準沒有顯著差異。這些係顯示於圖51C至51F中。左邊長條代表載媒，右邊長條代表10D1處理，虛線表示查爾斯河對照範圍的終點。10D1治療對於腎、肝或胰指數沒有效應且因此不影響正常的腎、肝或胰功能。
5.3 活體內分析治療癌症之功效
大約6-8週大的雌性NCr裸鼠係購自InVivos (新加坡)。動物安置於無特定病原條件下且遵照實驗動物照護及使用委員會(IACUC)的指導方針來處理。
所使用的細胞株包括N87細胞(胃癌)、FaDu細胞(頭頸部癌)、OvCAR8細胞(卵巢癌)、SNU16細胞(胃癌)、HT29細胞(結腸直腸癌)、A549細胞(肺癌)、HCC95細胞(肺癌)及AHCN細胞(腎癌)。
使用一數位卡尺量測腫瘤體積一週3次，且用公式[L x W2/2]來計算。一旦對照組腫瘤長度經量測＞1.5 cm時，則認為已達到研究終點。
5.3.1 N87模型
圖20顯示一實驗所獲得的結果，其中係在一N87細胞株衍生的小鼠胃癌瘤模型中研究抗-HER3抗體10D1 (實施例2.2之[1])的抗癌效應。藉由皮下注射1 x 10
6個N87細胞至右脇來建立該模型(每治療組n = 6隻小鼠)。
每兩週以每劑500 µg (總共10劑) IP投與10D1；一對照治療組接受一等體積的PBS。
此模型中發現抗-HER3抗體殖株10D1為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~76%。
圖21顯示一相似實驗所獲得的結果，其中抗-HER3抗體殖株4-35-B4係以11 mg/kg之一劑(總共4劑)每週IP投與一次。此模型中同樣發現抗-HER3抗體殖株4-35-B4為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~60%。
5.3.2 SNU16模型
圖22顯示一實驗所獲得的結果，其中係在一SNU16細胞株衍生的小鼠胃癌瘤模型中研究抗-HER3抗體10D1 (實施例2.2之[1])的抗癌效應。藉由皮下注射1 x 10
6個SNU16細胞至右脇來建立該模型(每治療組n = 6隻小鼠)。
每兩週以每劑500 µg (總共9劑) IP投與10D1；一對照治療組接受一等體積的PBS。
此模型中發現抗-HER3抗體殖株10D1為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~68%。
5.3.3 FaDu模型
圖23顯示一實驗所獲得的結果，其中係在一FaDu細胞株衍生之小鼠頭頸部鱗狀細胞癌瘤模型中研究抗-HER3抗體10D1 (實施例2.2之[1])的抗癌效應。藉由皮下注射1 x 10
6個FaDu細胞至雌性NPG小鼠右脇(NOD scid γ表現型；每治療組n = 6隻小鼠)來建立該模型。
每周以每劑500 µg (總共4劑) IP投與10D1。對照治療組接受一等體積的PBS或相同劑量的一同型對照抗體。
此模型中發現抗-HER3抗體殖株10D1為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~85%。
圖24顯示一實驗所獲得的結果，其中係在一FaDu細胞株衍生之小鼠頭頸部鱗狀細胞癌瘤模型中研究抗-HER3抗體10D1 (實施例2.2之[1])的抗癌效應。藉由皮下注射1 x 10
6個FaDu細胞至雌性NCr裸鼠右脇(每治療組n = 6隻小鼠)來建立該模型。
每兩週以每劑500 µg (總共8劑) IP投與10D1；一對照治療組接受一等體積的PBS。
此模型中發現抗-HER3抗體殖株10D1為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~86%。
5.3.4 OvCAR8模型
圖25顯示一實驗所獲得的結果，其中係在一OvCAR8細胞株衍生之小鼠卵巢癌瘤模型中研究抗-HER3抗體10D1 (實施例2.2之[1])的抗癌效應。藉由皮下注射1 x 10
6個OvCAR8細胞至雌性NCr裸鼠右脇(每治療組n = 6隻小鼠)來建立該模型。
每兩週以每劑500 µg (總共9劑) IP投與10D1；一對照治療組接受一等體積的PBS。
此模型中發現抗-HER3抗體殖株10D1為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~74%。
5.3.5 HCC-95模型
圖26顯示一實驗所獲得的結果，其中係在一HCC-95細胞株衍生之小鼠鱗狀細胞肺癌瘤模型中研究抗-HER3抗體10D1 (實施例2.2之[1])的抗癌效應。藉由皮下注射1 x 10
6個HCC-95細胞至雌性NCr裸鼠右脇(每治療組n = 6隻小鼠)來建立該模型。
每兩週以每劑500 µg (總共4劑) IP投與10D1；一對照治療組接受一等體積的PBS。
此模型中發現抗-HER3抗體殖株10D1為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~90%。
5.3.6 A549模型
圖27顯示一實驗所獲得的結果，其中係在一A549細胞株衍生之小鼠肺腺癌模型中研究抗-HER3抗體10D1 (實施例2.2之[1])的抗癌效應。藉由皮下注射1 x 10
6個A549細胞至雌性NCr裸鼠右脇(每治療組n = 6隻小鼠)來建立該模型。
每兩週以每劑500 µg (總共10劑) IP投與10D1；一對照治療組接受一等體積的PBS。
此模型中發現抗-HER3抗體殖株10D1為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~91%。
圖28顯示一相似實驗所獲得的結果，其中係在一A549細胞株衍生的模型中研究抗-HER3抗體殖株4-35-B2之抗癌效應，該模型係藉由注射1 x 10
6個A549細胞進入雌性NPG小鼠右脇(NOD scid γ表現型)來建立。每週以每劑500 µg (總共4劑量)來IP投與抗-HER3抗體殖株4-35-B2。一對照治療組接受一等體積的PBS (每治療組6隻小鼠)。
此模型中同樣發現抗-HER3抗體殖株4-35-B2為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~63%。
5.3.6 ACHN模型
圖29顯示一實驗所獲得的結果，其中係在一ACHN細胞株衍生之小鼠腎臟細胞癌瘤模型中研究抗-HER3抗體10D1 (實施例2.2之[1])的抗癌效應。藉由皮下注射1 x 10
6個ACHN細胞雌性NCr裸鼠右脇(每治療組n = 6隻小鼠)來建立該模型。
每兩週以每劑500 µg (總共7劑) IP投與10D1；一對照治療組接受一等體積的PBS。
此模型中發現抗-HER3抗體殖株10D1為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~61%。
5.4 胃癌瘤之治療
首次於人類
患有HER2+晚期胃癌、接受曲妥珠單抗(trastuzumab)已經失敗或無法接受曲妥珠單抗的患者係以按照經安全性調整的「最小期望生物效應位準」(MABEL)作法所計算出的一劑量、藉由靜脈注射選自於下列的抗-HER3抗體來治療：10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92及10D1_c93。投與後監測患者28天。
接著根據不良事件通用術語標準(CTCAE)來評鑑患者，以判定治療之安全及可耐受性，且判定分子之藥物動力學。
發現以抗-HER3抗體治療是安全且可耐受的。
劑量遞增 – 單一療法
12-48位患有HER2+晚期胃癌、接受曲妥珠單抗(trastuzumab)已經失敗或無法接受曲妥珠單抗的患者之治療，係藉由靜脈注射選自於下列的抗-HER3抗體：10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92及10D1_c93 (例如，10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91；例如，10D1_c89)，按照一3+3模式為基的過量控制下遞增(EWOC)之劑量遞增。
接著根據不良事件通用術語標準(CTCAE)來評鑑患者以判定治療之安全及可耐受性，以及評鑑分子之藥物動力學與治療之功效。亦判定最大耐受劑量(MTD)及最大投與劑量(MAD)。
劑量遞增-組合療法
9-18位患有HER2+晚期胃癌、接受曲妥珠單抗(trastuzumab)已經失敗或無法接受曲妥珠單抗的患者之治療係藉由靜脈注射選自於下列的抗-HER3抗體：10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92及10D1_c93 (例如，10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91；例如，10D1_c89)與曲妥珠單抗組合，按照用抗-PD-L1抗體(3 mg/kg)之一3+3模型為基的遞增。
接著根據不良事件通用術語標準(CTCAE)來評鑑患者，以判定治療之安全及可耐受性，以及評鑑分子之藥物動力學與治療之功效。
劑量擴增
患有HER2+晚期胃癌、最近曲妥珠單抗已經失敗且其腫瘤於遺傳學及組織學上已表徵良好的患者，係用選自於下列的抗-HER3抗體：10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93 (例如，10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91；例如，10D1_c89)與曲妥珠單抗、順鉑及5-FU抑或是卡培他濱(capecitabine)組合來治療。
發現抗-HER3抗體是安全且可耐受的、能降低癌細胞的數目/比例、降低腫瘤細胞標誌表現、增加無進程存活及增加整體存活期。
實施例6：親和力成熟及人源化殖株
親代小鼠抗體10D1P之可變區的人源化係藉由CDR移植來完成。供移植之人類框架序列係藉由將親代胺基酸序列對人類V域資料庫進行序列比對(blasting)來識別，並且選出與親代序列同一性最高的基因。一旦移植小鼠CDR至所選的人類框架，使在框架之一正準位置的殘基回復突變成親代小鼠序列，以保留抗原結合。設計了總共9種10D1P之人源化變異體。
對人類HER3之親和力係藉由使用酵母顯示進行兩輪親和力成熟作用而增強。在第一輪，9種經設計之變異體的一混合庫係藉由隨機突變誘發來建構，且藉由使用生物素化抗原之流式細胞分析術來篩選。在第二輪，第一輪中所單離的一重鏈及一輕鏈殖株係被使用作為模板，來產生及篩選一第二庫。單離出總共10株人源化且親和力成熟的殖株。
使用電腦模擬預測工具來評估所設計及單離之人源化10D1P變異體之可變區潛在不利條件(免疫原性、醣基化位點、暴露的反應性殘基、聚集可能性)。使用IEDB去免疫化工具使序列去免疫化。10D1F最終序列係基於其可發展性特徵、以及活體外物理化學及功能性質，來從最適化之變異體中選出。
殖株10D1F包含SEQ ID NO：36之VH及SEQ ID NO：83之VL。10D1F展現出與人類重鏈89.9%的同源性及與人類輕鏈85.3%的同源性。
包含10D1F可變區及人類IgG1恆定區之抗原結合分子，且其包含SEQ ID NO：206及207之多肽，係命為10D1F.FcA (本文有時亦稱為「10D1F.A」或「抗-HER3殖株10D1_c89 IgG1」──參見例如實施例2.2之[16])。
實施例7：Fc工程改造
10D1及10D1變異體經工程改造以包含CH2及/或CH3區之突變，以增加抗體的效力，例如最適化Fc作用功能、提升抗體依賴型細胞的細胞毒性(ADCC)及/或抗體依賴型細胞吞噬作用(ADCP)，以及改良半生期。
修飾殖株10D1及10D1F.FcA之Fc區以將修飾「GASDALIE」(G236A、S239D、A330L、I332E)及「LCKC」(L242C、K334C)包括於CH2區中。發現GASDALIE取代會增加FcγRIIa (GA)及FcγRIIIa (SDALIE)受體的親和力，且提升ADCP及NK-媒介的ADCC (參見實施例8.8)，同時減少對C1q (AL)之親和力且降低CDC。發現LCKC取代可藉由創造一新的分子內雙硫橋來增加Fc區之熱穩定性。
包含GASDALIE及LCKC突變之10D1F.FcA重鏈多肽的修飾版本係顯示於SEQ ID NO：225。包含SEQ ID NO：225及207的多肽之抗原結合分子係命為10D1F.FcB (在本文中有時亦稱為「10D1F.B」)。
製備CH2區中包含GASDALIE及LCKC取代之一修飾版本10D1，且藉由生物層干涉術來分析其與Fc受體FcγRIIIa的結合能力。包含對應於G236A、S239D、A330L、I332E及L242C、K334C之取代GASDALIE及LCKC的10D1 VH-CH1-CH2-CH3之序列係顯示於SEQ ID NO：227。
簡而言之，使用抗-五-HIS (HIS1K)所塗覆的生物感測器尖(Pall ForteBio，USA)來捕獲帶有His標籤的FcγRIIIa (V158) (270 nM)歷時120 s。所有的量測均在25°C下伴隨1000 rpm之攪拌施行。藉由培育不同濃度之抗-HER3抗體(500 nM至15.6 nM)歷時60 s，隨後將生物感測器轉移至含有檢定緩衝劑(pH 7.2)的孔內歷時120 s的解離時間，來施行抗原結合之締合動力學量測。感應圖譜係參照緩衝效應，接著使用Octet QK384使用者軟體(Pall ForteBio，USA)予以擬合。動力學反應係使用一位點結合模型進行一總體擬合，以獲得締合(K
on)、解離(K
off)速率常數及平衡解離常數(K
D)之值。該分析僅包括能與軟體可靠擬合的曲線(R
2＞0.90)。
變異體之熱穩定性亦係如實施例3.4所述地藉由微差掃描螢光分析法來分析。
圖38A及38B分別顯示包含GASDALIE及LCKC Fc取代之10D1的BLI分析及熱穩定性分析。與熱穩定性維持在60°C上之非Fc工程改造的10D1 (參見圖39A)相比，Fc工程改造的10D1變異體係顯示顯著改良對FcγRIIIa的結合(親和力增加~9倍)。
亦製備CH2區中包含GASD取代的一10D1建構物；包含對應於G236A及S239D之取代的10D1 VH-CH1-CH2-CH3之一序列係顯示於SEQ ID NO：228中。
抗-HER3抗體殖株10D1 (實施例2.2之[1])及其GASD變異體之親和力，係藉由生物層干涉術來分析對於FcγRIIIa的結合親和力。BLI係如上述地施行。
圖39A及39B顯示代表感應圖譜、K
on、K
off及K
D值。如預期，相較於10D1 (39A)，10D1 GASD變異體(39B)係展現出對FcγRIIIa之大幅度增加的親和力。
10D1 GASD變異體的熱穩定性係如實施例3.4所述、藉由微差掃描螢光分析法來分析。結果顯示於圖40中。
另外的10D1F Fc變異體
生成CH2區中包含一N297Q取代的另一抗體變異體。包含N297Q取代的一10D1F VH-CH1-CH2-CH3代表序列係顯示於SEQ ID NO：226。此「靜默形式」防止Fc區之N-鏈結醣基化及Fc與Fcγ受體的結合兩者，並且使用作為一陰性對照。
圖41A及41B顯示10D1F hIgG1 Fc變異體10D1F.FcA及10D1F.FcB與人類及小鼠Fc受體的結合親和力，如上述所判定。與未修飾的10D1F.FcA或可購得的抗體相比，發現10D1F.FcB對人類及小鼠Fcγ及FcRn受體的結合係顯示出有顯著的改良。ND = K
D由於結合親和力低而未判定。
實施例8：人源化及經修飾殖株的特徵化
8.1 藉由流式細胞分析術分析細胞表面抗原-結合
野生型(WT) HEK293細胞(其沒有表現高位準的HER3)及以編碼人類HER3之載體所轉染的HEK293細胞(亦即，HEK293 HER O/E細胞)，係用10 µg/ml人源化的抗-HER3抗體10D1F.FcA (10D1F)、抗-HER3抗體10D1 (10D1P)或同型對照抗體於4°C下培育1.5 hr。抗-HER3抗體殖株LJM716 (說明於例如，Garner et al., Cancer Res (2013) 73: 6024–6035, and Example 3.5)被包括於分析中作為一陽性對照。
用緩衝劑(PBS加上2mM EDTA及0.5% BSA)清洗細胞，且再懸浮於10 µg/ml之FITC-軛接的抗-FC抗體(Invitrogen、USA)，在4°C歷時20 min。再次清洗細胞且再懸浮於200 µL之FACS流動緩衝劑(PBS加上5mM EDTA)中，用於使用MACSQuant 10 (Miltenyi Biotec，德國)之流式細胞量測術分析。分析中包含未染色的WT及經轉染的HEK293細胞作為陰性對照。取得後，使用Flowlogic軟體來分析所有的原始資料。使用前與側散射剖析來圈選細胞，就天然及過度表現細胞族群判定陽性細胞百分比。
結果顯示於圖42A及42B中。抗-HER3抗體10D1F.FcA顯示出以高特異性與人類HER3結合(42A)。10D1F.FcA、10D1P及LJM716係顯示以相似程度與人類HER3-表現細胞結合(42B)。
8.2 判定抗體特異性及交叉反應性的ELISA
使用ELISA來確認10D1F.FcA抗體之結合特異性。分析抗體對人類HER3多肽以及人類HER1 (EGFR)及人類HER2 (Sino Biological Inc.，中國)之結合能力。人類IgG同型及一不相干抗原被包括作為陰性對照。
根據標準規程來進行ELISA。用磷酸鹽緩衝型鹽水(PBS)中0.1 µg/ml的目標多肽在4℃下塗覆平盤16 h。在室溫下用Tris緩衝鹽水(TBS)中之1 % BSA阻斷1 h之後，抗-HER3抗體以最高濃度10 µg/ml進行系列地稀釋，並且添加至該平盤。在室溫下培育1 h後，用含有0.05% Tween 20之TBS (TBS-T)清洗平盤三次，且接著與一HRP-軛接的抗-His抗體(Life Technologies,Inc.，USA)於室溫下培育1 h。在清洗之後，平盤用比色偵測受質3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(Turbo-TMB；Pierce，USA)顯色10 min。用2M H
2SO
4來停止反應，並且量測450 nM的OD。
結果顯示於圖43中。發現抗-HER3抗體10D1F.FcA不會與人類HER2或人類HER1 (EGFR)結合，即使是高濃度的抗體。
使用流式細胞分析術來分析10D1F.FcA與HER4結合的能力。野生型(WT) HEK293細胞(其沒有表現高位準的HER4)及用編碼人類HER4之載體所轉染之HEK293細胞(亦即，HEK293 HER O/E細胞)，係用10 µg/ml之抗-HER3抗體10D1F.FcA (10D1F)或同型對照抗體(陰性對照)於4°C培育1.5 hr。抗-HER3抗體殖株LJM716 (例如說明於Garner et al., Cancer Res (2013) 73: 6024–6035中)以及如實施例3.5所述之MM-121 (塞里班土單抗)，係包括在分析中作為陽性對照。亦包括一市售抗-HER4抗體(Novus、Cat：FAB11311P)。未染色的HEK293細胞係包括在分析中作為陰性對照。
HEK293細胞係用每一抗體10 µg/ml、在4°C培育1小時。流式細胞分析術係如上所述地來施行。細胞在4°C下與FITC-軛接的抗-FC抗體(Invitrogen、USA)接觸歷時30 min。
結果顯示於圖44中。發現抗-HER3抗體10D1F.FcA不會與細胞表面表現的HER4結合。
此外，分析抗體10D1F.FcA對來自小鼠、大鼠及猴子的HER3多肽同源物(Sino Biological Inc.，中國)之結合能力。小鼠(M. musculus)、溝鼠(R. norvegicus)及食蟹獼猴(M. cynomolgus) HER3同源物分別與人類HER3共享91.1、91.0及98.9%的序列同一性，且HER3訊息傳導途徑於四種物種之間是保留的。
如上所述地施行ELISA。
結果顯示於圖45中。發現10D1F.FcA抗體以高親和力與HER3食蟹獼猴(cyno)、小鼠、大鼠及人類異種同源物結合，因此在物種之間展現出實質的交叉反應性。
8.3 使用Octet QK384系統之總體親和力研究
分析抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB對人類HER3之結合親和力。
生物層干涉術(BLI)實驗係使用Octet QK384系統(ForteBio)來施行。抗體(25 nM)塗覆於抗-人類IgG Capture (AHC) Octet感測器尖(Pall ForteBio，USA)。在基線(60 s)、裝載(120 s)、基線2 (60 s)、締合(120 s)、解離(FcA 120 s、FcB 600 s)及再生(15 s)的步驟中，使用經滴定之帶有His標籤的人類HER3來偵測結合。抗原濃度係顯示於圖46A及46B之表中。感應圖譜係如實施例3.3所述地分析。獲得締合(K
on)、解離(K
off)速率常數及平衡解離常數(K
D)之數值。
殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB分析之代表感應圖譜係顯示於圖46A及46B。10D1F.FcA以K
D= 72.6 pM之一高親和力與人類HER3結合(46A)。10D1F.FcB以K
D= 22.2 pM之一高親和力與人類HER3結合(46B)。
8.4 以微差掃描螢光分析法進行之熱穩定性分析
抗體10D1F.FcA及10D1F.FcB的微差掃描螢光分析法係如實施例3.4中所述予以施行。
圖47A顯示抗體殖株10D1F.FcA之熱穩定性之微差掃描螢光分析法所獲得的原始資料之第一階導數。分析三個不同的抗體樣本且判定Tm為70.0°C。
圖47B顯示抗體殖株10D1F.FcB之熱穩定性之微差掃描螢光分析法所獲得的原始資料之第一階導數。分析三個不同的抗體樣本且判定Tm為62.7°C。
8.5 抗體純度分析
藉由粒徑篩析層析法(SEC)進行抗體10D1F.FcA及10D1F.FcB之純度分析。於室溫下將500 µl PBS pH 7.2之150 µg的10D1F.FcA或500 µl PBS pH 7.45之150 µg的10D1F.FcB，分別以0.75 min/ml或0.5 min/ml的一流率、注入於PBS泳動緩衝劑中的一Superdex 200 10/30 GL管柱，且紀錄流通物(flow through)的A280。
結果顯示於圖48A (10D1F.FcA)及48B (10D1F.FcB)中。
8.6 抗-HER3抗體10D1F.FcA表位之分析
分析抗-HER3抗體10D1F.FcA來判定其是否會與抗-HER3抗體M-05-74或M-08-11 (Roche)競爭對HER3的結合。M-05-74及M-08-11兩者之表位係測繪至位在域II之HER3二聚化臂的β-髮夾結構。M-08-11不會與HER4結合，而M-05-74識得HER4二聚化臂。M-05-74及M-08-11對HER3的結合係為非配體(NRG)依賴型的。
BLI實驗係如實施例3.5所述地來施行，附一變化：使用400 nM的競爭抗體。M-05-74及M-08-11抗體之可變區被選殖到具有人類IgG1及IgKappa Fc主幹的PDZ載體中。
分析結果係顯示於圖49A及49B中。發現抗-HER3 10D1F.FcA抗體不會與M-05-74或M-08-11競爭對HER3的結合。發現10D1F.FcA結合的HER3表位，相較於M-05-74及M-08-11，是相異的且拓撲上遙遠的。10D1F.FcA對HER3的結合係為非配體(NRG)依賴型的。
結論：
● 10D1F.FcA對人類HER3之結合能以一非配體依賴型方式達成。
● 10D1F.FcA結合表位與M-05-74及M-08-11的結合表位是不同的且拓撲上遙遠的。
8.7 HER2-HER3與EGFR-HER3二聚化之抑制
分析抗-HER3抗體10D1F.FcA其抑制HER3與HER2之異質二聚化的能力。
根據標準規程來進行以平盤為基的ELISA二聚化檢定法。用1 µg/ml之HER2-Fc蛋白塗覆平盤。在封阻及清洗之後，用不同濃度之候選抗體10D1F.FcA、MM-121、LJM716、帕妥珠單抗、Roche M05、Roche M08或同型對照及恆定的HER3 His 2 µg/ml及NRG 0.1 µg/ml培育該平盤1小時。接著清洗平盤且用二級抗-HIS HRP抗體培育1小時。清洗平盤，用TMB處理10 min且使用2M H
2SO
4停止溶液來停止反應。讀取450 nm之吸光度。
結果顯示於圖52中。發現抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA係以一劑量依賴的方式直接抑制HER2與HER3之間的交互作用。
在另一檢定法中，使用PathHunter®帕妥珠單抗來偵測二聚化之抑制
生物檢定套組(DiscoverX，San Francisco，USA)。過度表現HER2及HER3的U20S細胞係使用1 ml之預熱的CP5培養基來解凍，且每孔播種5K細胞於37°C、5% CO
2下歷時4 hr。細胞係用從25 µg/ml開始採一8點系列地稀釋之系列地稀釋濃度的10D1F.FcA、塞里班土單抗或帕妥珠單抗來處理。在4 hr培育之後，添加30 ng/ml之希調蛋白-β2至每一孔且進一步培育該等平盤16 hr。培育後，添加10 µL之PathHunter生物檢定偵測試劑1，且於黑暗中在室溫下培育15 min，隨後添加40 µL之PathHunter生物檢定偵測試劑2，其接著於黑暗中在室溫下培育60 min。使用Synergy4 Biotek以1秒延遲讀取平盤。
發現10D1F.FcA對於HER2-HER3異質二聚化之抑制的EC
50值為3.715e-11。在相同的檢定法中，發現塞里班土單抗/MM-121之比較EC
50值為6.788e-10，且發現帕妥珠單抗之比較EC
50值為2.481e-10。
分析抗-HER3抗體10D1F.FcA其抑制EGFR與HER3之異質二聚化的能力。
根據標準規程來施行以平盤為基的ELISA二聚化檢定法。用1 µg/ml的人類EGFR-His塗覆平盤。在封阻及清洗之後，該平盤係與不同濃度之候選抗體10D1F.FcA、MM-121、LJM716、帕妥珠單抗或同型對照及恆定的HER3-生物素4 µg/ml及NRG 0.1 µg/ml一起培育1小時。平盤接著被清洗且用二級抗-抗生物素蛋白HRP抗體培育1小時。清洗平盤，用TMB處理10 min且使用2M H
2SO
4停止溶液來停止反應。讀取450 nm之吸光度。
結果顯示於圖53中。發現抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA係以一劑量依賴的方式，來直接抑制EGFR與HER3之間的交互作用。
8.8 誘發ADCC能力之分析
分析抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB其等誘發抗體依賴型細胞媒介細胞毒性(ADCC)之能力。
目標細胞(HEK293過度表現HER3)係以20,000個細胞/孔的一密度佈入於U底96孔平盤中。細胞用10D1F.FcA、10D1F.FcB、10D1F.FcA _ N297Q (靜默形式)、LJM-716、塞里班土單抗(MM-121)中之一者之一稀釋系列(50,000 ng/ml – 0.18 ng/ml)處理，或者留著未處理，且在37°C及5% CO
2下培育30 min。
以60,000個細胞/孔的一密度添加作用細胞(人類自然殺手細胞株No-GFP-CD16.NK-92；176V)至含有目標細胞的平盤。
包括下列對照：目標細胞最大LDH釋出(僅目標細胞)、自發性釋出(目標細胞及作用細胞，沒有抗體)、背景(僅培養基)。對平盤進行旋轉降沉且於37°C及5% CO
2培育21 hr。
LDH釋放檢定法(Pierce LDH細胞毒性檢定套組)：在檢定之前，對目標細胞最大LDH釋出對照予以添加10 µl之溶解緩衝劑(10X)，且於37°C及5% CO
2下培育20 min。在培育之後，對平盤進行旋轉降沉且將50 µL之上清液轉移至清澈平底的96孔平盤。藉由對上清液添加50 µl之含有受質的LDH檢定混合物來開始反應，且於37°C下培育30 min。添加50 µl之停止溶液來停止反應，且用BioTek Synergy HT微量平盤讀數器來紀錄490 nm及680 nm之吸光度。
關於資料分析，測試樣本的吸光度係校正至背景、及來自目標細胞及作用細胞的自發性釋出。相對於目標細胞最大LDH釋出對照及作為抗體濃度的一函數之繪圖，計算測試樣本的細胞毒性百分比。
結果顯示於圖54中。發現抗-HER3抗體10D1F.FcB係以一劑量依賴型的方式，來誘發針對HER3過度表現細胞的有力ADCC活性。
8.9 HER3-媒介之訊息傳導的抑制
分析抗-HER3抗體10D1F.FcA其活體外抑制癌細胞株之HER3-媒介之訊息傳導的能力。
在37°C及5% CO
2下於具有10%血清的一6孔平盤的孔內，播種N87、FaDu或OvCAR8細胞過夜。細胞係以0.2% FBS培養基飢餓16 hr，且接著用不同的抗體以對應於細胞株之IC50處理0.5小時。所測試的抗體為：10D1F.FcA (10D1)、塞里班土單抗(SBT)、易利珠單抗(Elegemtumab) (LJM)、帕妥珠單抗(PTM)、西妥昔單抗(CTX)及曲妥珠單抗(TZ)。
在收穫之前，先用100 ng/ml之NRG1刺激細胞。從細胞株萃取的蛋白質係使用標準布萊德福蛋白質檢定法來定量。蛋白質樣本(50 µg)係藉由SDS-PAGE來份化且轉移至硝化纖維素膜。接著將膜阻斷且用所指示的抗體進行免疫轉漬。經由Bio-Rad Clarity Western ECL受質來使結果視覺化。使用密度測量分析來定量墨點且對β肌動蛋白進行資料正規化。
結果顯示於圖55A至55C中。發現抗-HER3抗體10D1F.FcA抑制N87 (55A)、FaDu (55B)、OvCar8 (55C)及A549 (55D)細胞株中的HER3磷酸化及下游的訊息傳導。
關於使用N87細胞、A549細胞、OvCar8細胞及FaDu細胞的實驗，於抗體處理後16 hr萃取總RNA來分析，以藉由基因集富集分析基於關鍵訊息轉導途徑蛋白質的表現位準來判定途徑活化。
分析結果係顯示於圖63A至63D中。10D1F.FcA為最有效的下游訊息傳導抑制劑。
在使用A549細胞之另外的實驗中，如上所述來施行活體外磷酸化檢定法，除了是用不同的抗體來治療細胞0.5小時或4小時之外。結果顯示於圖64中。
8.10 與以「開放式」及「封閉式」構形提供之HER3結合的分析
在另外的實驗中，抗-HER3抗體係經分析以判定在人類HER3之一情境下：人類NRG1複合物(亦即，以結合配體所提供之HER3，「開放式」構形)，其對人類HER3之結合親和力，相較於不存在NRG1複合物下對人類HER3之結合親和力(亦即，以未結合所提供之HER3，「封閉式」構形)。
抗-HER3抗體與人類HER3之結合係以BLI評鑑。簡而言之，抗-人類IgG Capture (AHC)感測器(ForteBio)係裝載有抗-HER3 IgG抗體(25 nM)。於存在或不存在NRG1下施行動力學量測。NRG1與HER3以1:1莫耳比使用其中允許該複合物於RT下形成2 h。帶有His標籤之人類HER3或HER3-NRG1複合物係以不同濃度裝載於塗覆有抗體之AHC感測器歷時120 s，隨後歷經120 s之解離時間。所有的量測均在25°C下伴隨1000 rpm之攪拌施行。感應圖譜係參照緩衝效應，接著使用Octet QK384-軟體(ForteBio)來分析。動力學反應係使用一位點結合模型來總體擬合，以獲得締合(K
on)、解離(K
off)速率常數及平衡解離常數(K
D)之值。
在實驗中分析下列抗-HER3抗體：10D1F.A (實施例2.2之[16])、MM-121以及LJM-716。
結果顯示於圖78A至78F中。發現10D1F.A於存在或不存在NRG1下係以亞皮莫耳親和力與人類HER3結合(圖78A及78B)。MM-121於存在或不存在NRG1下係以奈米莫耳與人類HER3結合(圖78C及78D)。LJM-716於不存在NRG1下係以亞皮莫耳親和力與人類HER3結合(圖78E)。然而，於存在NRG1下與HER3的結合係急劇降低(圖78F)。
8.11 結論
綜以觀之，該等結果識別出10D1F係為與一HER3表位結合的一抗-HER3抗體，其提供下列獨特的性質組合：(i)其競爭性抑制HER3與EGFR或HER2之異質二聚化(參見實施例8.7及圖52及53)，以及(ii)於存在或不存在NRG1下皆相似地與HER3良好結合(圖78A及78B)。
實施例9：人源化及經修飾殖株於活體外及活體內的分析
9.1 藥物動力學分析
在小鼠及大鼠中評估靜脈內投與抗-HER3抗體10D1F.FcA或10D1F.FcB之藥物動力學。10D1F.FcA在本文中亦稱為HMBD-001。於大鼠及小鼠中之藥物動力學分析的參數係衍生自一非隔間模型：最大濃度(C
max)、AUC (0-336hr)、AUC (0-無限大)、半生期(t
½)、清除率(CL)、穩態分佈體積(V
d)。所有動物研究均已在嚴格遵守當地倫理委員會要求、行業標準及可適用的法律施行。
小鼠
投與500 µg之抗-HER3抗體10D1F.FcA或10D1F.FcB，且在基線(- 2 hr)、投與後6 hr、24 hr、96 hr、168 hr及336 hr取得血液。藉由ELISA來定量血清內的抗體。
結果顯示於圖56A及56B中。發現抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA於NCr裸鼠的半生期為253小時(56A)，且發現抗-HER3抗體殖株10D1F.FcB於NCr裸鼠的半生期為273小時(56B)。
大鼠
分析10D1F變異體以判定雌性史道二氏大鼠的一單一劑量藥物動力學剖析。
經由尾靜脈慢速i.v.注射來投與單一劑量4 mg (∼10 mg/kg)、10 mg (∼25 mg/kg)、40 mg (∼100 mg/kg)或100 mg (∼250 mg/kg)的抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB。投與載媒作為一陰性對照。在基線(- 24 hr)、投與後6 hr、24 hr、96 hr、168 hr及336 hr取得血液。藉由ELISA來定量血清內的抗體。
結果顯示於圖57A (10 mg/kg)、57B (25 mg/kg)、57C (100 mg/kg)及57D (250 mg/kg)中。
9.2 安全性免疫毒性
分析10D1F.FcA及10D1F.FcB之毒物學效應。
小鼠
BALB/c小鼠以腹膜內注射一單劑的10D1F.FcA及10D1F.FcB，以下列劑量中之一者：200 ug (∼10 mg/kg)、500 ug (∼25 mg/kg)、2 mg (∼100 mg/kg)或5 mg (∼250 mg/kg)，抑或是一等體積的PBS。每一治療注射3隻小鼠，PBS對照注射4隻小鼠。於注射後96小時獲得血液樣本且分析RBC指數(總RBC計數、血容比、血紅素、血小板計數、平均紅血球體積、平均紅血球血紅素、平均紅血球血紅素濃度)及WBC指數(總WBC計數、淋巴球計數、嗜中性球計數、單核球計數)。使用一HM5血液分析器來施行分析。
結果顯示於圖58A、58B (RBC指數)及58C (WBC指數)中。抗-HER3抗體10D1F.FcA及10D1F.FcB對於RBC指數沒有效應，但發現較高劑量(10D1F.FcA 250 mg/kg、10D1F.FcB 100 mg/kg、10D1F.FcB 250 mg/kg)對於WBC指數有一效應。
亦分析注射後96小時之肝毒性、腎毒性及胰毒性。10D1F.FcA及10D1F.FcB對於丙胺酸轉胺酶、鹼性磷酸酶、白蛋白、總蛋白質(肝指數；圖58D)、肌酸、血尿素氮、葡萄糖或澱粉酶(腎及胰指數；圖58E)的位準係沒有效應。10D1F.FcA及10D1F.FcB對於電解質指標鈉、鉀、鈣或磷酸鹽都沒有效應(圖58F)。
用10D1F.FcA或10D1F.FcB治療的小鼠在96小時後於重量、行為、皮膚狀況、口腔檢查、糞便及尿液檢查或眼睛檢查都沒有顯示出異常。用較高劑量：10D1F.FcA 250 mg/kg、10D1F.FcB 100 mg/kg、10D1F.FcB 250 mg/kg治療的小鼠係被觀察到大約正常尺寸1.5倍之擴大的脾臟(脾腫大)。
於BALB/c小鼠施行一進一步研究以評估500 µg (∼25 mg/kg) 10D1F.FcA或10D1F.FcB之重複劑的毒物學效應。一週投與一次抗體，歷四週。在第一次投與後28天取得血液。觀察到任一抗體對於RBC、肝、腎、胰指數或電解質指標都沒有效應；沒有臨床異常的徵象；以及大體屍體鏡檢沒有偵測到差異。觀察到用10D1F.FcA或10D1F.FcB處理之小鼠的總WBC計數、淋巴球計數及嗜中性球計數減少但此不被認為是不良的。
在另一研究中，以一單劑10D1F.FcA或一等體積的PBS (載媒對照)投與BALB/c小鼠，且在96小時(載媒)或336小時(10D1F.FcA)之後分析。代表性結果顯示於圖69A至69C中。
大鼠
史道二氏大鼠以腹膜內注射下列劑量中之一者的一單劑10D1F.FcA抑或是10D1F.FcB抗體：4 mg (∼10 mg/kg)、10 mg (∼25 mg/kg)、40 mg (∼100 mg/kg)、100 mg (∼ 250 mg/kg)。在-24小時、6小時、24小時、96小時、168小時及336小時取得血液。注射後達366小時對於RBC指數沒有效應、對於WBC指數沒有毒性效應，且對於肝、腎、胰指數或電解質指標都沒有效應。沒有臨床異常的徵象且大體屍體鏡檢沒有偵測到差異。
從大鼠投與250 mg/kg 10D1F.FcA所獲得的代表結果係顯示於圖70A至70C中。
在嚙齒動物毒理學模型中毒性訊息的缺乏，係為這些抗體在臨床有效劑量下之可耐受性的一預測指標。
另外的毒性動力學研究係說明於實施例16.4中。
9.3 活體外分析治療癌症之功效
分析抗-HER3抗體10D1F.FcA在一些腫瘤模型中於活體外抑制腫瘤生長的能力：N87細胞(胃癌)、HCC95細胞(肺癌)、FaDu細胞(頭頸部癌)、SNU-16細胞(胃癌)、A549細胞(肺癌)、OvCar8細胞(卵巢癌)、ACHN細胞(腎癌)及HT29細胞(結腸直腸癌)。10D1F.FcA之功效係與其他抗-HER3抗體塞里班土單抗(MM-121)及LJM-716，以及其他EGFR家族療法西妥昔單抗、曲妥珠單抗及帕妥珠單抗作比較。
用從1500 µg/ml開始採一9點系列地稀釋之系列地稀釋濃度的治療抗體來處理細胞。在處理後3-5天使用CCK-8細胞增殖檢定法來量測細胞生存力。所示的細胞抑制百分比係相對於僅用緩衝劑(PBS)處理的細胞。資料點指示三個重複的平均。
結果顯示於圖59A至59D中。相較於其他HER3抗體(59A & 59B)及EGFR家族療法(59C & 59D)，抗-HER3抗體10D1F.FcA在多個腫瘤模型中展示出優異的活體外腫瘤抑制。
圖77A及77B顯示在IP投與25 mg/kg相關抗體給小鼠於其等達到C
max濃度時，不同抗-ErbB抗體之活體外抑制不同癌細胞株增殖的能力。10D1F.FcA展現出優異的抑制廣泛多種不同的癌細胞類型生長的能力。
9.4 活體內分析治療癌症之功效
評估抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB其等在活體內癌症模型中對於腫瘤生長的效應。
9.4.1 A549模型
腫瘤細胞係經皮下插入至雌性NCr裸鼠右脇。兩週一次投與抗體(25 mg/kg 10D1F.FcA、10D1F.FcB、西妥昔單抗、LJM-716或MM-121)或載媒，歷六週。
結果顯示於圖60中。抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB兩者在肺癌瘤A549模型中係展現出有力的功效。發現10D1F.FcB為特別有力的且使腫瘤消退。
9.4.2 FaDu模型
腫瘤細胞係與基質膠一起經皮下插入至雌性NCr裸鼠右脇。一週一次投與抗體(10及25 mg/kg 10D1F.FcA及10D1F.FcB，或25 mg/kg西妥昔單抗、曲妥珠單抗、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、LJM-716或MM-121)或載媒，歷六週。
結果顯示於圖61中。發現抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB兩者在頭頸部癌FaDu模型中係有效可預防腫瘤生長。
9.4.3 OvCar8模型
腫瘤細胞係與基質膠一起經皮下插入至雌性NCr裸鼠右脇。一週一次投與抗體(10及25 mg/kg 10D1F.FcA，或25 mg/kg西妥昔單抗、LJM-716或MM-121)或載媒，歷六週。
結果顯示於圖62中。發現高劑量的抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA在降低腫瘤體積上係有效。
9.4.4 N87模型
腫瘤細胞係與基質膠一起經皮下插入至雌性NCr裸鼠右脇。兩週一次投與抗體(25 mg/kg之10D1F.FcA、或50 mg/kg之曲妥珠單抗、LJM-716或MM-121)或載媒，歷六週。
結果顯示於圖74中。發現抗-HER3抗體10D1F.FcA及於胃癌N87模型中係有效可預防腫瘤生長。
實施例10：BRAFV600E突變甲狀腺癌細胞株之增殖抑制分析
研究下列細胞株：
| 細胞株 | 癌症類型 | 突變 |
| SW1736 | 退行性甲狀腺癌 | BRAF V600E |
| BHT101 | 退行性甲狀腺癌 | BRAF V600E |
| BCPAP | 乳突甲狀腺癌 | BRAF V600E及p53突變 |
藉由流式細胞分析術來研究細胞之EGFR家族成員的表面表現。簡而言之，300,000個細胞係與20 µg/ml之10D1F.FcA、西妥昔單抗或曲妥珠單抗於4°C培育歷時1 hr。使用10 µg/ml之Alexafluor 488-軛接的抗-人類抗體作為二級抗體(於4°C下歷時40 min)。
結果顯示於圖66A至66C中。SW1736、BHT101及BCPAP細胞顯示出有表現EGFR、HER2及HER3。
本案發明人研究不同的HER3-結合抗體可活體外抑制帶有V600E BRAF突變之不同甲狀腺癌細胞株增殖的能力。
簡而言之，以1.5 x 10
5個細胞/孔的一密度來播種不同細胞株的細胞，且隔天用從1000 µg/ml開始、採一10點連續稀釋的10D1F.FcA、塞里班土單抗、LJM-716、帕妥珠單抗或同型對照抗體來處理。在3天之後，使用一CCK-8細胞增殖檢定法來量測增殖。增殖之抑制百分比係相對於用一等體積之PBS而非抗體所處理的細胞來計算出。
結果顯示於圖67A至67C中。發現10D1F.FcA在抑制帶有BRAF V600E突變之細胞株增殖方面，係比所分析的任何其他抗-HER3抗體更為有效。
在另外的實驗中，研究10D1F.FcA及威羅菲尼(vemurafenib)之一組合活體外抑制帶有V600E BRAF突變之不同甲狀腺癌細胞株增殖的能力。
以1.5 x 10
5個細胞/孔的一密度播種細胞，且隔天於200 nM威羅菲尼(vemurafenib)存在或不存在下，用從1000 µg/ml開始、採一10點連續稀釋的10D1F.FcA或同型對照抗體來處理。在3天之後，使用一CCK-8細胞增殖檢定法來量測增殖。增殖之抑制百分比係相對於用一等體積之PBS而非抗體所處理的細胞來計算出。
結果顯示於圖68A至68C中。發現10D1F.FcA會提升威羅菲尼(vemurafenib)去抑制易受威羅菲尼影響之SW1736及BHT101細胞之增殖的能力。亦發現10D1F.FcA是威羅菲尼(vemurafenib)-抗性BCPAP細胞的一有力增殖抑制劑。
實施例11：活體內抑制HER3-媒介之訊息傳導的分析
本案發明人係研究10D1F.FcA活體內抑制HER3-媒介之訊息傳導的能力。
皮下導入1 x10
6個FaDu或OvCar8細胞至NCr裸鼠中，來建立異位的異種移植腫瘤。
一旦腫瘤已達到超過100mm
3的體積，則以兩週一次腹膜內注射一25 mg/kg劑量之10D1F.FcA或一等體積的載媒(控制)來治療小鼠。在4週之後，收穫腫瘤。從腫瘤製備蛋白萃取物且經由布萊德檢定法來定量，50 µg樣本係藉由SDS-PAGE來份化，且使用抗體藉由西方墨點法來分析俾以判定HER3及AKT之活體內磷酸化，如實施例4.3所述。
結果顯示於圖71中。發現10D1F.FcA係活體內抑制腫瘤細胞之HER3及AKT的磷酸化。
實施例12：抗-HER3抗體之內化分析
本案發明人係研究HER3-表現細胞之抗-HER3抗體的內化。
簡而言之，100,000個經工程改造之表現HER3的HEK293細胞、HCC95、N87或OVCAR8細胞，係播種於96孔組織培養平盤的孔中，且在37°C於5% CO
2下培養過夜。接著用120 nM之10D1F.FcA、LJM-716、塞里班土單抗或曲妥珠單抗，以及360 nM之pHrodo iFL Green試劑來處理細胞，且在37°C於5% CO
2下培育。培養中的細胞，於每一孔之4個不同的場域，每30 min成像一次，歷時24小時。以24小時定量每一場域的FITC通道中的最大信號強度。
結果顯示於圖72中。在OvCar8細胞中觀察到LJM-716及塞里班土單抗適度至中等的內化，而在N87細胞中觀察到曲妥珠單抗適度的內化。
在HCC95、N87或OvCar8細胞中沒有觀察到10D1F.FcA顯著的內化。
如預期，在過度表現HER3的HEK293細胞中，觀察到10D1F.FcA、LJM-716及塞里班土單抗顯著的內化。
在另外的實驗中，藉由流式細胞分析術來研究抗體內化。
N87細胞以50,000個細胞/孔的一密度播種於96孔組織培養平盤的孔中，且允許黏著過夜(37°C，5% CO
2)。混合10D1F.FcA或曲妥珠單抗及標記試劑，且添加經標記的複合物給細胞。於0 min、10 min、30 min、1小時、2小時及4.5小時的時間點收穫樣本，其係藉由抽吸細胞培養基，用PBS清洗且用細胞分離酶(accutase)處理。中和細胞分離酶活性，並將細胞再懸浮在FAC緩衝劑中且藉由流式細胞分析術分析。
結果顯示於圖73A及73B中。細胞展現出10D1F.FcA最小的內化。相比之下，觀察到抗-HER2抗體曲妥珠單抗的實質內化。
實施例13：HER3-結合抗體於免疫組織化學法之用途
評鑑呈mIgG2a型式之抗-HER3抗體10D1F其要被用於免疫組織化學法供偵測人類HER3蛋白的能力。
使用Bond試劑(Leica Biosystems)來施行切片加工。獲得可購得的冷凍組織切片陣列。載玻片於乾燥器內乾燥10 min接著經受下列處理，伴隨於步驟之間水清洗及/或TBS-T沖洗：(i)藉由室溫下以100%丙酮處理10 min以進行固定；(ii)藉由室溫下用3% (v/v) H
2O
2處理15 min以進行內生過氧化酶阻斷；(iii)藉由室溫下用10%山羊血清處理30 min以進行阻斷，(iv)於4°C下用一6.2 mg/ml溶液之1:250稀釋的10D1F-mIgG2a培育過夜，(v)於室溫下與HRP-聚合物軛接的山羊抗-小鼠抗體培育30 min，以及(vi)於室溫下用Bond Mixed DAB Refine顯影5 min，隨後用去離子水潤洗及1x Bond Wash來停止反應。
接著使載玻片脫水、封固於合成封固介質中以及以高解析度掃描。
結果顯示於圖75A及75B中。10D1F優先染色惡性人類組織切片，與正常組織有低的交叉反應性。
在另外的實驗中，於冷PBS中收穫一A549異種移植腫瘤，包埋於OCT冷凍包埋介質中、冷凍於乾冰中且儲存於-80℃。使用一低溫恆溫器(cryostat)來獲得10 µm切片。
載玻片於一乾燥器內乾燥10 min且接著經受下列處理，伴隨於步驟之間水清洗及/或TBS-T沖洗：(i)藉由於室溫下以100%丙酮處理10 min以進行固定；(ii)藉由於室溫下用3% (v/v) H
2O
2處理15 min以進行內生的過氧化酶封阻；(iii)藉由於室溫下用10%山羊血清處理30 min以進行封阻，(iv)於4°C下用8.8 mg/ml溶液之1:50稀釋的10D1F.FcA，或用Sino Biological兔抗-HER3 (Cat. No. 10201-T24)的1:200稀釋培育過夜，(v)於室溫下與Invitrogen F(ab')2-山羊抗-人類IgG (H+L) HRP (A24470) (1:500)，或HRP-聚合物軛接的山羊抗-兔抗體培育30 min，以及(vi)於室溫下用Bond Mixed DAB Refine顯影5 min，隨後用去離子水潤洗及1x Bond Wash來停止反應。
載玻片接著用蘇木素複染(counterstain)、脫水、封固於合成封固介質中以及以高解析度掃描。
結果顯示於圖76中。10D1F.FcA展現出A549腫瘤異種移植冷凍切片之特定膜及細胞質染色。
實施例14：HER3-結合抗體於包含CLU-NRG1融合體之卵巢癌的患者衍生異種移植模型的治療功效
本案發明人研究了10D1F於包含CLU-NRG1融合體之卵巢癌的患者衍生異種移植模型的治療功效。
大約5-7週大的雌性BALB/c裸鼠係安置於無特定病原條件下，且遵照實驗動物照護及使用委員會(IACUC)的指導方針來處理。
藉由於小鼠右脇皮下接種四個命為OV6308 (Crown Bioscience Inc.)之患者衍生異種移植的丸粒，來建立包含CLU-NRG1融合體之卵巢癌的一模型。OV6308係為衍生自一51歲女性患者之卵巢高惡性度漿液性腺癌，且包含CLU-NRG1基因融合體。
使用一數位卡尺量測腫瘤體積一週3次，且用公式[L x W2/2]來計算。一旦對照組腫瘤長度量測為＞1.5 cm時，則認為已達到研究終點。
兩週一次以腹膜內注射投與小鼠(i) 25 mg/kg之10D1F.FcA(亦即，實施例2.2之[16])、或(ii) 25 mg/kg之hIgG1同型對照抗體(每一治療組n = 10)。
結果顯示於圖79中。發現以10D1F.FcA治療極為有力，相對於同型對照治療組，其抑制腫瘤生長達111%。
實施例15：抗體調配物開發
就包含10D1F可變區及人類IgG1恆定區的一抗原結合分子施行調配物開發，且其包含有SEQ ID NO：206及207的多肽。抗原結合分子係由2021年5月7日所寄存之細胞株的一細胞生產，如ATCC專利寄存號PTA-127062。
15.1 初始調配物生產
包含該抗體之九種液態調配物係如下列產生：
| 調配物 | pH | 緩衝劑 20 mM | 蔗糖(%) | 聚山梨醇酯20 (%) | 聚山梨醇酯80 (%) |
| F1 | 5.1 | 組胺酸 | 8 | 0 | 0.02 |
| F2 | 5.8 | 組胺酸 | 8 | 0 | 0.02 |
| F3 | 5.8 | 組胺酸 | 4 | 0 | 0.02 |
| F4 | 5.3 | 組胺酸 | 2 | 0 | 0.02 |
| F5 | 6.1 | 組胺酸 | 8 | 0 | 0.02 |
| F6 | 5.8 | 組胺酸 | 8 | 0.02 | 0 |
| F7 | 5.5 | 組胺酸 | 8 | 0.02 | 0 |
| F8 | 6.5 | 磷酸鈉 | 8 | 0 | 0.02 |
| F9 | 5.5 | 乙酸鈉 | 8 | 0 | 0.02 |
調配物F10包含抗體及PBS。評鑑調配物其等在不同病況下的穩定性。
在40°C下儲存1個月之後，評鑑不同調配物中抗體的穩定性。所有調配物包含8.4 mg/mL之蛋白質。
圖80A顯示所有蛋白質濃度係在40°C下1個月為穩定的。
圖80B顯示調配物F8及F9於40°C下在1個月期間展示出最小的pH變化。
圖80C顯示調配物F1至F7展示出最小的聚集傾向，其藉由HPLC-SEC所量測。
圖80D顯示酸性變異體在第0天至第30天展示了的一顯著增加趨勢，其藉由HPLC-CEX所量測。特別是在調配物F8、F9及F10觀察到酸性變異體的一明顯廓形變化。
圖80E顯示於40°C下培育第20天起，所有抗體調配物的HER3抗原結合增高，如藉由ELISA所量測。
以高蛋白質濃度評鑑不同調配物中之抗體的穩定性。
可見聚集體或粒子之目視檢查顯示，在10 mg/mL、50 mg/mL、100 mg/mL或200 mg/mL下任何調配物中沒有誘生出可見粒子(圖81A)。
圖81B顯示，調配物F8至F10在濃度增加至200 mg/mL時，可溶性聚集形成顯示一輕微增加，如藉由HPLC-SEC所量測。
每3+天進行-80°C及室溫之凍-融循環。圖82顯示調配物F1至F9展示出良好的凍-融穩定性。F10顯示從循環2有0.6%聚集增加且循環5有0.9%增加。
結論是，相較於調配物F8至F10，該抗體在調配物F1至F7中更穩定。
15.2 另外的調配物生產
使用下列緩衝劑交換產生五種另外的調配物：
| 調配物 | pH | 緩衝劑 20 mM | 精胺酸(mM) | NaCl (mM) | 蔗糖(%) | 聚山梨醇酯20 (%) | 聚山梨醇酯80 (%) |
| 1 | 5.5 | 乙酸鹽 | 0 | 150 | 0 | 0.05 | 0 |
| 2 | 6.5 | 組胺酸 | 150 | 0 | 0 | 0.05 | 0 |
| 3 | 6.5 | 組胺酸 | 150 | 0 | 0 | 0 | 0.02 |
| 4 | 6.5 | 組胺酸 | 0 | 150 | 0 | 0 | 0.02 |
| 5 | 5.8 | 組胺酸 | 0 | 0 | 8 (240 mM) | 0 | 0.02 |
調配物5包含相同於實施例15.1中之調配物F2的組成分。
15.2.1 初步壓力篩選
五種調配物係經受由凍融及攪拌之機械應力以及注射器抽吸所作的初步壓力篩選。
凍-融：進行三個-70°C下冷凍且在室溫下解凍的循環。將小瓶分開置放於-70°C冷凍庫中，且在冷凍庫中儲存90 hr。使該等小瓶在室溫下解凍，避光保護且分開置放。將該等小瓶每小時溫和旋轉二次，直至完全解凍。在三個凍/融循環之後，將該等經解凍的小瓶儲存於2-8°C下直至進行分析為止。
注射器及針抽吸：樣本被抽吸且通過一注射器及針分配10次。針盡可能小，以便於誘發聚集體及粒子形成。使用具有一針之5 mL注射器，手動抽吸且以大約1.5 mL/s之一速率分配。
攪拌：將樣本安裝在一搖動桌上且在2-8°C下攪拌72 hr。一多旋轉器(Multi RS-60 BioSan)使用於包括振動的翻滾轉動旋轉。
樣本係藉由外觀及微流成像(MFI)分析粒子形成、藉由SE-HPLC分析聚集、藉由CE-SDS分析純度及降解，以及藉由A280分析蛋白質含量。結果顯示如下。藉由目視檢查在任何調配物中沒有偵測到可見粒子。
藉由A280之蛋白質含量。相較於參考樣本，受壓的樣本中沒有見到蛋白質濃度上的顯著變化。
Ref = 參考調配物，F/T = 凍/融，SNA = 注射器及針抽吸，Ag = 攪拌。
| 樣本 | 蛋白質濃度 (mg/mL) | 樣本 | 蛋白質濃度 (mg/mL) | 樣本 | 蛋白質濃度 (mg/mL) | 樣本 | 蛋白質濃度 (mg/mL) | |||
| 測試前 | 測試後 | 測試前 | 測試後 | 測試前 | 測試後 | |||||
| 1-Ref | 52 | 1-F/T | 52 | 53 | 1-SNA | 52 | 52 | 1-Ag | 52 | 53 |
| 2-Ref | 53 | 2-F/T | 53 | 53 | 2-SNA | 53 | 52 | 2-Ag | 53 | 52 |
| 3-Ref | 50 | 3-F/T | 50 | 50 | 3-SNA | 50 | 50 | 3-Ag | 50 | 51 |
| 4-Ref | 52 | 4-F/T | 52 | 53 | 4-SNA | 52 | 52 | 4-Ag | 52 | 52 |
| 5-Ref | 52 | 5-F/T | 52 | 53 | 5-SNA | 52 | 53 | 5-Ag | 52 | 53 |
單體純度。在任何調配物中，沒有觀察到壓力測試後在單體純度上的變化。
Ref = 參考調配物，F/T = 凍/融，SNA = 注射器及針抽吸，Ag = 攪拌。
1) %聚集體，2) %主峰，3) %片段；n.d.，沒有偵測到
| 樣本 | 相對面積% | 樣本 | 相對面積% | 樣本 | 相對面積% | 樣本 | 相對面積% | ||||||||
| 1) | 2) | 3) | 1) | 2) | 3) | 1) | 2) | 3) | 1) | 2) | 3) | ||||
| 1-Ref | 1.3 | 98.7 | n.d. | 1-F/T | 2.9 | 97.1 | n.d. | 1-SNA | 1.3 | 98.7 | n.d. | 1-Ag | 1.3 | 98.7 | n.d. |
| 2-Ref | 1.2 | 98.8 | n.d. | 2-F/T | 1.2 | 98.7 | n.d. | 2-SNA | 1.2 | 98.8 | n.d. | 2-Ag | 1.1 | 98.9 | n.d. |
| 3-Ref | 1.2 | 98.8 | n.d. | 3-F/T | 1.3 | 98.7 | n.d. | 3-SNA | 1.1 | 98.8 | n.d. | 3-Ag | 1.1 | 98.8 | n.d. |
| 4-Ref | 1.3 | 98.7 | n.d. | 4-F/T | 1.2 | 98.7 | n.d. | 4-SNA | 1.1 | 98.9 | n.d. | 4-Ag | 1.1 | 98.9 | n.d. |
| 5-Ref | 1.1 | 98.9 | 0.1 | 5-F/T | 1.8 | 98.2 | n.d. | 5-SNA | 1.1 | 98.9 | n.d. | 5-Ag | 1.3 | 98.7 | n.d. |
藉由微流成像所進行之次可見(subvisible)粒子/mL的數目。
| 樣本 | 次可見 粒子/mL | 樣本 | 次可見 粒子/mL | 樣本 | 次可見 粒子/mL | 樣本 | 次可見 粒子/mL | |||||||||
| 10-25μm | ＞25 μm | 10-25μm | ＞25 μm | 10-25μm | ＞25 μm | 10-25μm | ＞25 μm | |||||||||
| 1-Ref | 163 | 12 | 1-F/T | 39 | 0 | 1-SNA | 43 | 1 | 1-Ag | 12 | 0 | |||||
| 2-Ref | 11 | 3 | 2-F/T | 5 | 0 | 2-SNA | 75 | 3 | 2-Ag | 13 | 1 | |||||
| 3-Ref | 54 | 5 | 3-F/T | 2 | 1 | 3-SNA | 46 | 2 | 3-Ag | 22 | 1 | |||||
| 4-Ref | 7 | 0 | 4-F/T | 13 | 4 | 4-SNA | 26 | 3 | 4-Ag | 51 | 3 | |||||
| 5-Ref | 4 | 2 | 5-F/T | 7 | 0 | 5-SNA | 5 | 0 | 5-Ag | 126 | 7 | |||||
在壓力測試之後，用CE-SDS分析每一樣品。圖83A至83D中之結果指示在重或輕鏈中沒有肽鍵之破壞(還原條件)，且在全長IgG中被破壞之雙硫鍵上沒有顯著差異(非還原條件)。
調配物1、4及5前進至一調配物穩定性研究。
15.3 調配物穩定性研究
於+5°C下及在+25°C下，以50 mg/mL評鑑調配物1、4及5在12週內之穩定性。在0、4、8及12週時，使用以下技術分析樣品之穩定性：
1.藉由A280之蛋白質含量：藉由UV光吸光度之量測判定蛋白質含量，係基於蛋白質中所存在之芳香族胺基酸之特定特性。根據比爾-朗伯定律(Beer-Lambert law)，在280 nm下之吸光度與蛋白質濃度直接成正比。HMBD-001理論的消光係數為1.64 mL·mg
-1·cm
-1.
2.可見粒子之目視檢查。
3.藉由SE-HPLC之純度及聚集體含量：用高效液相層析法來量測抗體之純度。純度係判定為主峰相對於偵測到之所有峰的總面積的面積百分比。分析係用來偵測產物相關的雜質，諸如抗體區段部分、二聚體及聚集體。
4.IE-HPLC之電荷異質性：抗體之帶電分佈係藉由離子交換層析法進行。電荷變異體係根據其與固定相之離子的相互作用而分開、藉由一梯度來洗提，以及藉由280 nm之UV偵測。
5.藉由微流成像進行之次可見粒子分析：藉由微流成像(MFI)研究大小、量、大小分佈及粒子類型。此方法偵測1-2288 µm範圍內的粒子，且可基於大小、形態及透明度區分粒子亞型。
6.背景膜成像之次可見粒子分析：藉由背景膜成像(BMI)研究大小、量及大小分佈。此方法偵測在2 μm至4 mm範圍內的粒子，且可基於大小、形態及透明度區分粒子亞型。
7.藉由CE-SDS之純度：該方法係用來偵測產物及非產物相關的雜質，諸如產物降解物及其他來自細胞及培養基之蛋白質相關的雜質。在還原及非還原條件下進行分析。
8. pH：pH量測係在用可購得的、適當pH範圍中的溶液來校準pH計之後施行。
9.滲透壓：藉由Nova Flex量測滲透壓，且藉由檢查與純水比較之凍結點減少來判定。
10.結合ELISA：該方法為一種夾心式ELISA，其中該抗體結合至塗覆於ELISA平盤上的人類抗原HER3。HRP-軛接的山羊抗-人類IgG係使用作為偵測抗體。3、3'、5、5'-四甲基聯苯胺(TMB)係用以偵測。
15.3.1 由A280 所得之蛋白質含量
在0週及12週分析每一樣本。相較於T12，在T0沒有見到蛋白質濃度有顯著的差異。
15.3.2 可見顆粒之目視檢查
| 樣本 | 蛋白質濃度(mg/mL) | ||
| T0 | T12 | ||
| +5℃ | +25℃ | ||
| 1 | 51 | 50 | 52 |
| 4 | 50 | 48 | 50 |
| 5 | 46 | 47 | 46 |
每4週檢查樣本之可見粒子。任一溫度均未在任何調配物中誘生可見粒子。
15.3.3 由SE-HPLC 所得之純度及聚集體含量
每四週藉由SE-HPLC來分析樣本歷時12週。
結果顯示於圖84A至84C中。不同調配物之起始值係相差1.3%且終點結果需要據此處理。12週內之單體IgG純度，調配物1在+5°C下降1.1%，調配物4在+5°C下降1.1%，且調配物5在+5°C下降1.8%。片段可能為解離次單元，因為CE-SDS資料未指示有任何肽鍵破壞。
圖84D及84E顯示當在+5°C及+25°C下培育時，調配物1、4及5之單體IgG純度(來自圖84A)外插至第29週，亦即至大約95%之單體IgG純度。
15.3.4 由IE-HPLC 所得之電荷異質性
來自IE-HPLC之帶電分佈資料係顯示於圖85A至85C中。
15.3.5 由背景膜成像之次可見粒子分析
次可見粒子計數在樣本之間及隨著時間推移係不同的，但歸因於方法變化而非為緩衝劑類型或溫度的一效應。隨著時間推移在任何調配物中係沒有次可見粒子的明顯增加趨勢。
15.3.6 由CE-SDS 所得之純度
圖86A及86B分別顯示非還原及還原樣本之CE-SDS結果。「非還原」資料係代表所有的雙硫鍵完整之IgG的相對量。「降低的」資料係代表游離型輕鏈與重鏈的匯總相對量。
資料沒有指示由於肽鍵破壞而形成任何低分子量物種。在T4之後，可偵測到一非還原重鏈/輕鏈硫醚鍵，其考慮了在T8及T12還原條件在匯總資料上的缺失百分比。
15.3.7 pH
調配物1、4或5在12週培育中沒有偵測到pH變化。
15.3.8 滲透壓
| 樣本 | pH | ||
| T0 | T12 | ||
| +5℃ | +25℃ | ||
| 1 | 5.8 | 5.8 | 5.8 |
| 4 | 6.5 | 6.5 | 6.5 |
| 5 | 5.9 | 5.9 | 5.9 |
調配物1、4或5在12週培育中沒有偵測到滲透壓變化。
15.3.9 結合ELISA
| 樣本 | 滲透壓 (mOsmol/kg H 2O) | ||
| T0 | T12 | ||
| +5℃ | +25℃ | ||
| 1 | 325 | 326 | 325 |
| 4 | 310 | 309 | 308 |
| 5 | 308 | 309 | 309 |
抗原結合ELISA資料係呈現於下文。差異係與方法變化有關，且沒有觀測到結合能力之顯著變化。調配物1 (T0及T12 +5℃)在ELISA平盤之間用作內部對照。
1)一複本的平均值，如指定樣本於個別平盤中用作為內部對照
15.3.10 結論
| 樣本 | T0 | T12 | ||||
| +5℃ | +25℃ | |||||
| EC50 | R2 | EC50 | R2 | EC50 | R2 | |
| 1 | 2.78E-11 1) | 0.998 1) | 4.08E-11 1) | 0.997 1) | 2.86E-11 | 0.996 |
| 4 | 3.39E-11 | 0.998 | 2.50E-11 | 0.996 | 4.46E-11 | 0.994 |
| 5 | 2.66E-11 | 0.999 | 3.42E-11 | 0.998 | 2.04E-11 | 0.999 |
在+5℃抑或是+25℃下培育12週後，由A280所得之蛋白質含量量測結果係沒有指示藥物產品之任何損失。在+5℃抑或是+25℃下培育12週後，由目視檢查之評估係沒有指示任何可見粒子形成。
在+5℃抑或是+25℃下培育12週後，由BMI之評估係沒有指示次可見粒子之任何顯著的形成。在+5℃是或是+25℃下培育12週後，CE-SDS結果係沒有指示肽鍵或雙硫鍵之任何破壞。在+5℃抑或是+25℃下培育12週後，帶電變異體之評估係顯示帶電同功異型體的極小變化。在+5℃抑或是+25℃下培育12週後，抗原結合能力之評估係沒有指示任何變化。在+5℃抑或是+25℃下培育12週後，pH及滲透壓之評估係沒有指示任何改變。
藉由SE-HPLC來評估單體IgG純度係指示調配物1及4之相對純度下降1.1%，以及調配物5下降1.8%。個別調配物之結果係繪製且下推至95%單體IgG純度，以估算不同調配物中藥物產品之一最長貯藏壽命。對於所有調配物，在+5℃下之預測貯藏壽命為28-29週，
且調配物5具有最陡的下降斜率。在+25℃下，調配物1係顯示出14週之最短預測貯藏壽命，且調配物4及5之預測貯藏壽命係分別為18週及21週。
發現調配物5 (50 mg/mL HMBD-001、20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖(240 mM)、0.02% (w/v)聚山梨醇酯80、最終pH 5.8)係為最合適的調配物，且被選擇來作為一液體填充藥物產品之臨床製造。聚山梨醇酯80係以0.02% (w/v)之一濃度被添加作為一界面活性劑，以預防蛋白質潛在機械應力所誘發(攪拌)的不穩定性及聚集。
15.4 進一步評估包含HMBD-001的組成物
調配於20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖(240 mM)、0.02% (w/v)聚山梨醇酯80，pH 5.8之HMBD-001，係進一步評估：
● 凍-融穩定性(粒徑篩析層析法)
● 純度(聚集/降解分析)，藉由SDS-PAGE (非還原，每道5 µg)之抗體完整性、pH、抗體濃度、生物活性hHER3結合、Fc反應性– hCD16a結合及於40°C、80%相對濕度下在7及15天後之外觀
● 在200 mg/ml下之純度(聚集/降解分析)
該調配物的pH及外觀在40°C、80%相對濕度下7或15天後沒有變化。15天之培育後沒有偵測到可溶性聚集。抗體完整性在任一長度培育之後不受損。
使用生物層干涉術來量測HER3結合及Fc反應性。在培育7或15天之後，抗體之生物反應性係保留著，如下所述。
| 10D1F | 長度 | 逆境條件 | 與HER3 結合 | 與hCD16a 結合 | |||||
| 調配物 | 天數 | 溫度/RH | Kd | Kon | Koff | Kd | Kon | Koff | |
| HST5.8 | 0 | 40°C/80% | ＜ 1 pM | 1.36E5 | ＜1E-7 | 294 nM | 8.78E4 | 2.58E-2 | |
| 7 | 40°C/80% | ＜ 1 pM | 1.32E5 | ＜1E-7 | 302 nM | 9.67E4 | 2.92E-2 | ||
| 15 | 40°C/80% | ＜ 1 pM | 2.17E5 | ＜1E-7 | 265 nM | 9.89E4 | 2.62E-2 | ||
圖87A顯示調配物5中之抗體在8個凍-融循環之後保持高單體純度。
將抗體於20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖(240 mM)、0.02% (w/v)聚山梨醇酯80、pH 5.8中濃縮至200 mg/mL，且評估聚集。圖87B顯示沒有觀察到不溶或顯著的聚集。
在40°C以80%相對濕度的15天培育後，抗體的pH、外觀、溶解度、蛋白完整性及生物反應性係良好的保留於上述之調配物中。在沒有聚集傾向之情況下亦達到200 mg/ml之一濃度。
15.5 長期穩定性研究
評估HMBD-001藥物物質在≤ -65°C下歷時24個月及在+5 (± 3)°C下歷時6個月的穩定性。評估HMBD-001藥物產品在-20°C下歷時6個月及在+5 (± 3)°C下歷時6個月。將50 mg/mL之HMBD-001調配於pH 5.8的20 mM組胺酸、8% (w/v) (240 mM)蔗糖及0.02%聚山梨醇酯80中(批號HBO721-P5)。
評鑑包括顏色、可見粒子、pH、滲透壓、化學不穩定性(分析式HPLC-IEC及針對電荷變異(脫醯胺作用及氧化作用)之等電聚焦(IEF)，以及針對片段化的SDS-PAGE及HPLC-SEC)、蛋白質濃度(A280 (ε=1.64)
2)、聚集(HPLC-SEC)、結合活性之損失(ELISA)，及產物完整性/污染物(內毒素LAL及生物負荷量測試)。
結果顯示於圖88A (在≤-65°C下之藥物物質)及88B (在-20°C下之藥物產品)中。在6個月之後，藥物物質及藥物產品係滿足所需規格/接受準則。在+5 (± 3)°C下儲存6個月之後，針對藥物物質及藥物產品觀察到相似結果。
穩定性評估持續長達60個月，例如在12、18、24、36、48及60個月時。
實施例16：以單一製劑及組合，靜脈內給予患有晚期HER3陽性實性腫瘤之患者的HMBD-001 (一抗-HER3單株抗體)，其第I/IIa期開放標記、劑量遞增及擴展試驗
於本文使用時，HMDB-001係指一IgG1人源化單株抗原結合分子，其包含10D1F可變區及人類IgG1恆定區，且其包含有SEQ ID NO：206及207之多肽。
16.1 介紹
HER3為一受體家族(「HER家族」)中之一者，其透過PI3K/AKT/mTOR及MAPK/ERK途徑來訊息傳導以促進細胞存活及增殖。異常活化或過度表現可因此促進致癌作用及癌症進程。HER3在家族中為獨特的，因其缺少激酶活性，所以必須藉由與一激酶活性伙伴(通常為表皮生長因子受體(EGFR)或HER2，其等為其他的HER家族成員)二聚化來活化，以供訊息轉導發生(Berger, Mendrola, and Lemmon 2004; Kim et al. 1998)。
HER3細胞外域係於一「封閉式」非活性構形與可形成二聚體的一「開放式」活性構形之間以一可逆轉平衡存在著(Roskoski 2004；Cho and Leahy 2002)。在傳統的活化模型中，由於「配體依賴型」穩定化作用(由HER3配體神經調節蛋白1，[NRG1]所媒介)，所以平衡偏移至開放構形。然而，任何有足夠濃度之二聚化伙伴的存在亦可偏移平衡，因伙伴對暫時呈開放構形之HER3結合且穩定化HER3。此已知為「非配體依賴型」的活化(Burgess et al. 2003；Lee-Hoeflich et al. 2008；Alimandi et al. 1995)。
HER3之過度表現經常在多種腫瘤類型中觀察到且與一較不良臨床結果相關聯。HER3之增強表現係發現於結腸直腸癌瘤、頭頸部鱗狀細胞癌瘤(HNSCC)、NSCLC、黑色素瘤及乳癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌及膀胱癌。HER3過度表現的影響係更大於在HER2亦過度表現的癌症，例如乳癌、胃癌及卵巢癌。黑色素瘤及胰臟癌瘤中HER3為EGFR較佳的異質二聚體伙伴。
對於HER3驅動的腫瘤及HER-療法抗性腫瘤之治療，HER3代表一很有希望的治療目標。向上調節HER3表現及活性係與多重途徑抑制劑之抗性相關聯，且與不良預後相關聯。HER3在致癌基因EGFR家族訊息傳導上扮演一關鍵性角色。當HER3與EGFR或HER2異質二聚化時，其除了MAPK途徑之外，係透過PI3K/AKT/mTOR途徑來觸發訊息傳導。HER3活化因此已經涉及所獲得的對於EGFR/ HER2療法及諸如BRAF抑制劑的其他MAPK途徑療法的抗性，其中PI3K途徑代表腫瘤的一共同脫逃途徑。雖然典型地藉由配體結合驅動，但HER3異質二聚化亦可藉由高位準的EGFR或HER2結合伙伴驅動。
數個抗-HER3療法，包括生物及小分子製劑，已臨床上研究迄今(Mishra et al. 2018)。除了銜接免疫細胞的療法之外，所有的HER3療法皆具有抑制HER3下游訊息傳導之目標。HER3訊息傳導在各種癌症療法的藥物抗性上扮演一重要角色。對EGFR或HER2所導向之療法有抗性的情況中，機制包括(i) HER3的轉錄向上調節(Abel et al. 2013；Wang et al. 2013)、(ii)增高的NRG1位準(Gwin and Spector 2014；Xia et al. 2013)、及(iii) HER2擴增(Vlacich and Coffey 2011; Yonesaka et al. 2011)。
SLC3A2、CD74或VAMP2對NRG1同功異型體的致癌基因融合體業經識別，其促進NRG1之EGF樣域的分泌或細胞外表現且藉此增加HER3活化。NRG1融合體首先被識別且最常見於侵襲性黏液性腺癌(IMA)中，其中該融合體存在於20-30%之病例中，但亦以較低頻率(＜1%)存在於其他類型之實性腫瘤中。基於臨床前及有限的臨床資料，HER3-標靶療法在NRG1融合體驅動的IMA中，顯示為高度有效的(Nakaoku et al. 2014)。靶向下游傳訊級聯反應中諸如在甲狀腺癌瘤及結腸癌瘤中賦予TKI抗性的BRAF V600E之組成性活化突變的努力成果，亦可透過HER3活化而失敗(Di Nicolantonio et al. 2008；Piscazzi et al. 2012；Frasca et al. 2013)。特別地，藉由NRG1所為之HER3活化係促進對特定BRAF V600E抑制劑威羅菲尼(Prasetyanti et al. 2015)的抗性。
在支持HER3於藥物抗性的角色方面上，抗-HER3抗體係在BRAF-V600E突變型結腸癌中恢復對威羅菲尼的敏感度(Prasetyanti et al. 2015)，並且組合療法對HER2:HER3訊息傳導的阻斷係在HER2-陽性乳癌中克服曲妥珠單抗的抗性(Watanabe et al. 2019)。因此，對於HER3驅動的腫瘤及HER-療法抗性腫瘤之治療，HER3代表一很有希望的治療目標。
由於HER3與對HER-靶定療法的敏感性或抗性之間的關係，為了完全轉導訊息傳導，關於HER3必須與其他受體酪胺酸激酶形成異質二聚體或異質三聚體複合物(Holbro et al. 2003；Lee-Hoeflich et al. 2008)，HER3與EGFR/HER2-靶定製劑之組合可為一種有效廢除藥物抗性且因此增強許多實性腫瘤中之抗腫瘤活性的方式。舉例而言，多個臨床前模型已顯示抗-HER3單株抗體與抗-EGFR療法之組合，係導致提升的抗腫瘤活性(Gaborit, Lindzen, and Yarden 2016)。抗-HER3抗體帕圖單抗(patritumab)係廢除結腸直腸癌細胞中由希調蛋白所媒介的西妥昔單抗之抗性(Kawakami H. et al. 2014)，且R3表現已顯示在曲妥珠單抗抗性腫瘤細胞中被向上調節(Narayan M et al. 2009)。潛在的組合包括，但不限於：西妥昔單抗、恩雜魯胺或其他雄性素受體抑制劑，以及曲妥珠單抗。
多數個抗-HER3療法，包括生物及小分子製劑，已在臨床上研究迄今；作法上係藉由下列機制中之一者以靶向HER3為基：i)阻斷配體結合位點；ii)將HER3鎖定於繫鏈構形；iii)捕獲其主要配體NRG1；iv)觸發HER3受體之內化；或v)運用免疫細胞來殺死過度表現HER3的癌細胞(Elenius et al. 1999)。
發展抗-HER3抗體之先前嘗試在臨床試驗中顯示出有限的功效，可能是因為它們無法完全阻斷配體與EGFR或HER2之結合或異質二聚化兩者。從可見到高HER3表現的腫瘤類型到對其他EGFR/HER2療法有抗性的腫瘤類型，仍有相當多未滿足的需求。需要額外的非交叉抗性療法。
抗體HMBD-001經由一不同機制靶向HER3。HMBD-001經設計來直接阻斷HER3之異質二聚化表面，且因此防止配體依賴型及非依賴型異質二聚化兩者，藉此防止癌細胞免於變得對諸如西妥昔單抗及曲妥珠單抗的治療有抗性。最相似於HMBD-001的製劑為LJM716 (易利珠單抗)及CDX3379 (KTN3379)，因為這些會抑制配體依賴型及非依賴型訊息傳導兩者，儘管是藉由不同機制。
此外，臨床前資料係支持在對前列腺癌中之抗-雄性素療法有抗性存在下探索一抗-HER3抗體。Zhang et al. 2020已顯示癌症相關聯的纖維母細胞可透過增加小鼠模型中及前列腺類器官培養物中之NRG1位準來促進抗雄性素抗性、透過HER3之活化來促進。此外，抗-NRG1及HER3抗體兩者，在活體外及活體內，於抗雄性素之抗性存在下，已顯示出抗腫瘤活性，為組合HMBD-001與一雄性素受體抑制性之探索提供一理論基礎。
16.2 試驗設計
此係一開放標記、多中心、首次於人體(FIH)、第I/IIa階段適應性設計試驗，以初始為患者內劑量遞增接著為患者間劑量遞增，以判定建議的第II階段劑量(RP2D)及作為單一製劑之HMBD-001投與時程。
隨後，將探究HMBD-001與其他抗癌組合劑的組合。對於每一新穎組合，將存在一劑量遞增組及劑量擴增組群，以進一步特徵化HMBD-001的安全性、藥物動力學(PK)及藥效學剖析以及評估初步功效。
部分A：研究之第一部分為以2組進行的一劑量遞增階段。
● 部分A：組1：HMBD-001單一療法、劑量遞增：單一製劑(HMBD-001)劑量遞增研究，以判定RP2D (建議第II階段劑量)及HMBD-001之時程。劑量遞增階段最初追蹤單一患者、患者內的劑量遞增組群，接著為使用一單階貝氏(Bayesian)連續重評估方法(CRM)所評鑑的多患者、患者間劑量遞增組群。在此階段，招募具有已知過度表現HER3之腫瘤的患者。
● 部分A：組2：組合製劑劑量遞增：在視查來自試驗之單一療法(部分A、組A)之可用臨床資料以及可用臨床前及公開資料之後，施行HMBD-001伴隨所選組合製劑的一第Ia階段劑量遞增組。臨床前資料支持HMBD-001組合西妥昔單抗於結腸直腸癌中的探索、以及HMBD-001組合恩雜魯胺於前列腺癌的探索。組合製劑組群使用一起始劑量，其係低於HMBD-001單一製劑RP2D (建議第II階段劑量)的一劑量位準，於不存在毒性之情況下遞增給RP2D。替選地，HMBD-001單一製劑RP2D可直接研究，用經許可之組合製劑的建議劑量，且就一特定組合省略劑量遞增階段。
部分B：該研究之第二部分由二組組成，HMBD-001作為單一療法、以及組合於多種組合組群中。
● 部分B：組1：HMBD-001單一療法，劑量擴增：患者係基於高HER3表現狀態或確認NRG1融合體重排，從以下腫瘤亞型選定：RAS野生型結腸直腸癌、去勢抗性前列腺癌、三重陰性乳癌、及頭頸部鱗狀細胞癌瘤。高HER3表現係使用健康機構之體外診斷(IVD)豁免準則(通常稱為廠內製造)下的一研究檢定法來判定。NRG1融合體重排係使用在各地方健康照護所內施行的一研究檢定法來評估，且因此落入健康機構之IVD廠內製造豁免。若由所取得的資料指示，則新鮮生檢中之磷酸化HER3之表現及/或高NRG1表現係可評鑑作為預測性生物標誌。
● 部分B：組2：組合製劑劑量擴增：多至三個組合擴增組群。
16.3 試驗藥品
HMBD-001為特異地靶向HER3之一IgG1人源化單株抗體，其為在某些腫瘤中高度表現於癌細胞上的一受體。
HMBD-001係對HER3之域II二聚化介面上的一表位結合。其藉由直接抑制與EGFR或HER2之異質二聚化來發揮其藥理學效應，藉此透過PI3K/AKT/mTOR途徑抑制HER3及下游訊息傳導的後續磷酸化，且抑制腫瘤細胞增殖。HMBD-001能夠結合其表位，無論HER3呈「開放式」或「封閉式」構形，見例如上文實施例3.5及8.10。此意謂著其係具藥理活性的，不論HER3活化係以一配體依賴型方式藉由NRG1結合驅動、或以一非配體依賴型方式(通常藉由HER2或EGFR之過度表現)驅動。
臨床前藥理學研究已證實，HMBD-001係藉由下列來發揮其藥理效應：1)與HER3之受體二聚化介面結合且阻斷與HER2或EGFR之異質二聚化；2)透過PI3K/AKT/mTOR途徑來抑制HER3及下游訊息傳導之隨後的磷酸化；3)抑制腫瘤細胞增殖。參見例如上述之實例4.1、4.3、5.3、8、9及11)。
HMBD-001係與HER3以亞奈米莫耳親和力特異性結合，且抑制HER3與HER2及EGFR兩者之二聚化。其在NRG1驅動及NRG1非依賴型細胞株模型兩者中均完全地抑或是實質地抑制HER3及AKT之磷酸化。HMBD-001之腫瘤細胞增殖的抑制係在一範圍之表型上不同之細胞株中證明，且效力係優於其他所包括的抗-HER3比對物抗體，其為MM-121 (塞里班土單抗)及LJM716 (易利珠單抗)。在為NRG1驅動、高HER2/EGFR驅動、NRG1及HER2/EGFR兩者驅動的細胞中，以及在具有賦予酪胺酸激酶抑制劑(TKI)抗性之BRAF V600E突變的細胞中，HMBD-001係具有活性。在自然殺手(NK)細胞所媒介之抗體依賴型細胞媒介細胞毒性檢定法(ADCC)以及補體依賴型細胞毒性(CDC)檢定法中，HMBD-001具有可忽略的活性，表示這些不是預期的作用機制。
使用小鼠細胞株所衍生之異種移植(CDX)模型來施行鼠類腫瘤功效研究。將N87、A549、FaDu、OvCAR8細胞皮下植入雌性NCr裸鼠(5-8週大，21-29 g)。當腫瘤達到大約100至200 mm
3時開始治療。於所指示的時間點(每週一次FaDu及OvCAR8，每週二次N87及A549)腹膜內(IP)投與載媒(PBS)或治療抗體(25 mg/kg)。每週使用測徑器量測腫瘤兩次，且計算腫瘤體積(mm
3)。每一資料點係代表平均腫瘤體積± SEM (n=8隻小鼠)。
結果顯示於圖89A至89D中。
作為單一療法的HMBD-001，其在高NRG1驅動的A549 (肺癌瘤)及FaDu (下咽癌瘤)以及高NRG1及HER2/EGFR驅動的OvCAR8 (卵巢癌)模型中，係以25 mg/kg IP完全抑制腫瘤生長。在A549及FaDu模型中，HMBD-001分別顯示比西妥昔單抗及曲妥珠單抗更優異的功效。HMBD-001於所有模型中係等效抑或是優於比對物抗-HER3抗體。在N87模型(NRG1非依賴型)中，HMBD-001對比於沒有顯示效應之比對物抗-HER3抗體，係顯示顯著的抗腫瘤功效(64% TGI)。HMBD-001的功效亦於來自非小細胞肺(NSCLC)、食道及卵巢腫瘤之患者衍生之異種移植(PDX)模型中證實、包括具有NRG1融合體之一腫瘤。
HMBD-001劑量反應之探索係於A549模型中施行。兩週一次投與抗體(10 mg/kg、5 mg/kg或2 mg/kg)或載媒。結果顯示於圖90中。在所有劑量下都觀察到對腫瘤生長的影響，但在10 mg/kg及5 mg/kg下最大，且在2 mg/kg下僅一部分作用。
16.3.1 HMBD-001 之調配物
HMBD-001係以用於稀釋及IV輸注之一50 mg/mL濃縮溶液的形式供應。
調配物緩衝劑：20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖、0.02% (w/v)聚山梨醇酯80、在pH 5.8。
HMBD-001係以-20 °C (± 5 °C)冷凍且避光儲存。
用於輸注之HMBD-001濃縮溶液50 mg/mL係稀釋於0.9%氯化鈉(NaCl)中，達不低於1.2 mg/mL之一濃度、達100 mL之一最小體積及250 mL之一最大體積。用於輸注之所製備溶液可在投與之前於2與8°C之間的一冰箱中儲存最多40小時，且必須在初始稀釋之48小時內投與。
16.4臨床前藥物動力學
為了判定要給予人類患者的HMBD-001的劑量，使用來自荷瘤及非荷瘤之小鼠及大鼠之研究的HMBD-001之藥物動力學、藥理學及毒理學資料，以供縮放成人類劑量。為了判定預期的生物活性劑量，來自其中見到最大抗腫瘤效應之腫瘤功效研究的PK資料，係被使用來定義HMBD-001的目標低谷位準，參見例如圖90及實施例16.3。估計之藥物動力學參數係概括於表1中。
HMBD-001之活體內研究，已包括於小鼠及大鼠中的一單一劑量IV毒性研究，及於大鼠中高達28天持續時間(每週用劑)之重複劑量IV毒性與恢復28天的研究(亦參見實施例9.1)。所有動物研究均已在嚴格遵守當地倫理委員會要求、行業標準及可適用的法律施行。
在毒性動力學研究中，維斯塔大鼠經由IV注射以25、100及250 mg/kg的HMBD-001用劑，四週地投與。在第1天及第22天抑或是第29天之後的一系列時間點獲取血液。藉由免疫檢定法來定量血清中的抗體。
在第1天估算排除半衰期範圍為178至251小時。藉由HMBD-001 C
max及AUC
0-168評估，暴露係隨著HMBD-001劑量位準從25至250 mg/kg/劑的增加而增加，且整體在25與250 mg/kg/劑之間係大約劑量成比例的。
兩個研究之TK剖析顯示了HMBD-001的平均C
max，且AUC0-168值在第22或29天比第1天更高，指示在大鼠中多劑HMBD-001後有HMBD-001之累積。在任何PK參數中，在雄性與雌性大鼠之間沒有顯著差異。
在NCr裸鼠(25 mg/kg HMBD-001，IV)中施行一單一劑量PK研究。在A549荷瘤小鼠中執行一單一劑量PK研究，包括一範圍之劑量位準(2、5、10及25 mg/kg HMBD-001，IP)。表1中包括藥物動力學參數。
在使用HMBD-001之一GLP毒性研究中，在大鼠中最高非嚴重毒性劑量(HNSTD)且未觀察到不良作用劑量(NOAEL)為250 mg/kg/劑(所測試之最高劑量位準)。此劑量對應於8490 µg/mL之C
max值及在主要用劑階段之第29天之423,000 h*μg/mL之AUC
0-168值。此基於異速縮放(allometric scaling)及對已經臨床投與之其他抗-HER3抗體的暴露分析，係等效於一66 mg/kg人類等效劑量(60 kg人類)。
針對大鼠及小鼠兩者所觀察到的藥物動力學參數係與健康動物中之單株抗體的典型值一致，亦即，分佈體積略高於總血漿體積、在若干天範圍內的生物半衰期及每天若干毫升的清除率(Oitate et al. 2011；Liu 2018)。
表1。HMBD-001之臨床前藥物動力學及毒性動力學的概要。
1有關於藥物動力學/毒性動力學參數的用劑天數。
2分母指定「t」(時間)。
3雄性及雌性資料被合併，因為沒有顯著的差異。
縮寫：AUC=曲線下面積，Cl=清除率，C
max= 最大濃度，NR= 無可報告，IP=腹膜內，IV=靜脈內，PK=藥物動力學，t
1/2- 最終半衰期
| 物種 ( 品系 ) | 途徑 | 性別 | 第 1 天 | 劑量 (mg/kg) | AUC 0-t 2 (µg/ml.h) | C max (µg/ml) | Cl (ml/h/kg) | t 1/2 ( 小時 ) |
| 小鼠 (NCr裸鼠) | IP | F | 1 | 25 | 64,677 336 | 257 | 0.1864 | 253 |
| 小鼠 (NCr裸鼠，荷瘤) | IP | F | 1 | 2 | 168 24 | 8.1 | NR | NR |
| F | 1 | 5 | 1,726 96 | 37.5 | 2.228 | 29 | ||
| F | 1 | 10 | 5,743 168 | 77.6 | 1.552 | 50 | ||
| F | 1 | 25 | 30,886 336 | 201.6 | 0.644 | 46 | ||
| 大鼠 (史道二氏) | IV | F | 1 | 10 | 19,764 336 | 160 | 0.293 | 178 |
| F | 1 | 25 | 34,680 168 | 396 | 0.256 | 211 | ||
| F | 1 | 100 | 134,198 336 | 679 | 0.446 | 177 | ||
| F | 1 | 250 | 209,684 336 | 1308 | 0.640 | 251 | ||
| 大鼠 (維斯塔漢) | IV | MF | 1 | 25 | 28,900 168 | 399 | NR | NR |
| 22 | 25 | 52,400 168 | 688 | 0.477 | NR | |||
| MF | 1 | 100 | 80,300 168 | 986 | NR | NR | ||
| 22 | 100 | 135,000 168 | 2,580 | 0.743 | NR | |||
| MF | 1 | 250 | 245,000 168 | 5,380 | NR | NR | ||
| 22 | 250 | 349,000 168 | 4,940 | 0.716 | 146 | |||
| 大鼠 (維斯塔漢) | IV | MF | 1 | 25 | 35,800 168 | 596 | NR | NR |
| 29 | 25 | 95,500 168 | 1,140 | 0.262 | NR | |||
| MF | 1 | 100 | 129,000 168 | 2,450 | NR | NR | ||
| 29 | 100 | 237,000 168 | 3,880 | 0.422 | NR | |||
| MF | 1 | 250 | 266,000 168 | 5,220 | NR | NR | ||
| 29 | 250 | 423,000 168 | 8,490 | 0.591 | NR |
一活體外細胞激素釋放檢定法係使用來自10位健康捐贈者之PBMC及呈一平盤固定化型式之HMBD-001進行。在檢定法中由固定化之HMBD-001誘發的所有測試分析物(TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-6及IL-10)之濃度，係等效於或低於陰性對照所誘發者。
在免疫組織化學法(IHC)研究中，HMBD-001弱度、或弱度至中度地染色了報導少數經檢查之人類組織(包括闌尾(黏膜)、乳腺(腺、管)、胰臟(管)及子宮(表面、腺))中的罕見至偶見、或者偶見的上皮細胞之膜及細胞質，與所之正常組織中的上皮細胞低位準之HER3表現一致。在所檢查之任何人類組織中，對HMBD-001沒有觀測到非預期的反應性。亦藉由篩選表現＞5000種人類蛋白質之重組型細胞來證實HMBD-001的特異性。
其他靶向HER3之單株抗體之藥物動力學資訊：
來自可獲得相關資訊之其他HER3靶向單株之藥物動力學資料係呈現於表3中。對於可獲得資訊之先前抗-HER3抗體而言，一旦藥物動力學呈線性階段，排除半衰期範圍即從大約8至14天，但在低劑量觀測到較短半衰期，其可能歸因於目標媒介的藥物動向(TMDD)之貢獻。其他抗-HER3製劑之劑量正規化C
max位準係變化高達2倍(每mg/kg用劑19-41 µg/ml)。抗-HER3抗體，因為其阻斷機制，傾向於遞增靶向一預定義之藥理活性「低谷」位準，其可伴隨使用生物標誌直接分析目標銜接，及/或建立「飽和」或「線性」PK剖析作為目標飽和之一間接標誌。
表3。其他抗-HER3單株抗體之劑量及藥物動力學資訊。
縮寫：QW=每週一次，Q2W=每2週一次，Q3W=每3週一次，T½=最終半衰期
16.5 試驗目標及終點
主要目標及終點：
次要目標及終點：
探索性目標及終點：
| 分子 | 參考文獻 | 第 I 階段用劑範圍 | T½ 天數 | Cmax (µg/ml) 正規化至每 mg/kg 用劑 | 觀察到飽和 PK 的劑量 | 擴增或 RP2D 準則 | 擴增劑量或 RP2D mg/kg |
| CDX3379 | (Duvvuri et al. 2019) | 5 mg/kg Q3W to 20 mg/kg Q3W | 11.5 | 31 | 不可獲得資訊 | 目標通過50µg/ml | 12 to 20 Q3W |
| LJM716 (易利珠單抗) | (Reynolds et al. 2017; Takahashi et al. 2017) | 3 mg/kg QW to 40 mg/kg QW & 20mg/kg Q2W | 9-14 | 19-22 | 10-40mg/kg | 目標通過500µg/ml | 40 QW |
| U3-1287 (帕圖單抗) | (LoRusso et al. 2013 | 0.3 mg/kg Q2W to 20 mg/kg Q2W | 8 | 21-27 | 6-20mg/kg | 目標通過50µg/ml | 20 Q3W |
| RG7116 (路瑞妥珠單抗) | (Meulendijks et al. 2016; Meulendijks et al. 2013) | 100 - 2000 mg Q2W | 9-12 | 24-41 | 400-2000mg | 目標通過6.6µg/ml及PK飽和 | 26 Q2W |
| MM-121 (塞里班土單抗/SAR256212) | (Abramson et al. 2017) | 3.2- 20mg/kg QW | 10.5 | 24-25 | 不可獲得資訊 | 未公開目標通過位準 | 20 QW |
| 主要目標 | 終點 |
| 部分A 劑量遞增 | |
| 組1 ：針對HMBD-001 作為一單一製劑之第II 階段評鑑(RP2D) 的建議劑量及時程： | |
| i)建立HMBD-001在作為靜脈內輸注被給予時的最大耐受劑量(MTD)或最大投與劑量(MAD)。 | 使用一單階貝氏連續重評估方法(CRM)、用最接近25%之一估算的劑量限制毒性(DLT)率來判定一劑量及時程。 在不存在DLT的情況下，單一製劑建議第II階段劑量(RP2D)及時程係將基於MAD及所有可用安全性、藥物動力學及藥效學資料來判定。 |
| ii) 評估HMBD-001以靜脈內輸注給予患有晚期HER3陽性實性腫瘤之患者的安全性及可耐受性剖析。 | 根據國立癌症研究所就不良事件之共同準則(NCI CTCAE)版本5.0，判定每一不良事件(AE)對HMBD-001的頻率及因果以及嚴重等級。 |
| 組2 ：組合其他抗癌療法之HMBD-001 (RP2D) 第II 階段評鑑之建議劑量及時程： | |
| i)建立要與所選之組合製劑一起給予之HMBD-001的MTD或MAD。 | 用使用一單階CRM、用最接近25%的一估算的DLT (高度可能或可能的HMBD-001或組合劑相關)率來判定HMBD-001之一劑量及時程。 在不存在DLT的情況下，組合所選組合製劑之HMBD-001的RP2D及時程，係基於MAD及所有可獲得的安全性、藥物動力學及藥效學資料來判定。 |
| ii) 評估HMBD-001組合所選製劑給予患有晚期HER3陽性實性腫瘤之患者的安全性及可耐受性剖析。 | 根據NCI CTCAE版本5.0判定每一AE對HMBD-001及所選組合製劑之頻率及因果以及嚴重等級。 |
| 部分B 組1 & 2 劑量擴增期 | |
| 評估HMBD-001於患有晚期HER3陽性實性腫瘤的患者，作為單一製劑、及組合另一抗癌藥物給予之安全性及可耐受性剖析，如在部分A中所判定。 | 根據NCI CTCAE版本5.0判定每一AE對HMBD-001及適當下之所選組合製劑的頻率及因果以及嚴重等級。 |
| 藉由判定整體反應率(ORR)來評鑑HMBD-001，作為一單一製劑及組合，於所選之擴增腫瘤類型的抗腫瘤活性。 | 如適用於所選腫瘤類型，ORR基於實性腫瘤反應評鑑準則(RECIST) v1.1或前列腺癌工作組3 (PCWG3)準則，定義為達成完全反應(CR)或部分反應(PR)之患者的比例。 |
| 次要目標 | 終點 |
| 部分 A 劑量遞增 | |
| 評鑑HMBD-001之初步的抗腫瘤活性。 | 如適用於所選腫瘤類型，根據RECIST v1.1或前列腺癌工作組3 (PCWG3)標準來評估抗腫瘤反應。 |
| 部分 A & B 劑量遞增 & 劑量擴增 | |
| 特徵化作為單一製劑及組合給予之HMBD-001的PK剖析。 | 判定HMBD-001之Cmax、Tmax、曲線下方面積、血漿半生期、分佈體積及清除率。 |
| 判定無進程存活期(PFS)、及整體存活期(OS)，包括在所選腫瘤類型中。 | 估算在第12及24個月的PFS及OS。 |
| 探索性目標 | 終點 |
| 部分A & B 劑量遞增& 劑量擴增 | |
| 評估患者中HMBD-001之免疫原性 | 量測抗藥物抗體(ADA)對HMBD-001之反應。 |
| 評鑑HMBD-001對循環腫瘤標誌的效應。 | 在連續血液測試中，循環腫瘤標誌之量測包括但不限於游離(cf) DNA改變對偶基因區段部分/腫瘤區段部分、循環可溶性HER3及循環可溶性NRG1。 |
| 部分B 組1 & 2 劑量擴增 | |
| 得證HMBD-001，作為單一劑及組合，在腫瘤組織中藉由展現對下游目標的抑制之機制。 | 使用免疫組織化學法(IHC)，量測治療前及治療後腫瘤生檢中之pHER3、pERK、p-70S6K、Ki67及裂解的胱天蛋白酶3。 |
| 定量腫瘤生檢中抗腫瘤活性之預測生物標誌，包括NRG1免疫組織化學法、NRG1重排、磷酸化HER3以及總HER3。 | 藉由IHC量測總HER3及pHER3。 藉由IHC量測NRG1表現。 所選患者中存在或不存在NRG1重排(使用NGS)。 |
| 探索治療前HER3或HER3/NRG1腫瘤之間的表現位準及臨床結果關係。 | 治療前HER3或HER3及NRG1位準與抗腫瘤活性(RECIST，循環生物標誌變化，包括循環DNA分析)之間的互相關聯性。 |
HMBD-001係投與給人類主體，例如使用如本文所提供之用劑、劑量方案、調配物及患者選擇準則，且觀察到下列結果中之一或多者：
a)腫瘤組織中HER3磷酸化之降低；
b)腫瘤組織中之下游途徑活化的降低，如藉由下游標誌上之變化所證明，諸如pERK及p-70SK6；
c) 連續cfDNA樣本中腫瘤區段部分之減小；
d) 腫瘤細胞增殖之降低，如Ki67表現之改變所證明；
e) 腫瘤細胞死亡之增加，如裂解的胱天蛋白酶3之改變所證明；
f) 抗腫瘤活性的展露，如通過判定整體反應率所證明者，如適用於所選腫瘤類型，整體反應率係基於實性腫瘤反應評鑑準則(RECIST) v1.1或前列腺癌工作組3 (PCWG3)之準則、定義為達成完全反應或部分反應之患者的比例。
16.6 投與、劑量及用劑時程
16.6.1 部分A 組1 ：單一療法劑量遞增
HMBD-001係每週一次、每2週一次、每3週一次或每4週一次以靜脈內輸注投與。主體已投與150 mg、300 mg、600 mg、1200 mg及1800 mg之HMBD-001。
HMBD-001之每一循環取決於劑量頻率係由21與28之間的天數組成。每一循環所接收之劑數亦將取決於用劑頻率，且患者最初可持續高達6個循環。參照表4之初始用劑時程及循環持續時間。
治療可持續超過6個循環，其中一患者受益於用HMBD-001作為單一療法抑或是組合的治療(亦即，具有如由RECIST 1.1所量測之穩定或有反應的疾病，且該患者並非正在經受任何第3級或更大之IMP相關不良事件)。
表4。用劑時程及循環持續時間
| 用劑頻率 | 循環持續時間(天) | 每一循環之劑量數 |
| 每週 | 28 | 4 |
| 每2週 | 28 | 2 |
| 每3週 | 21 | 1 |
| 每4週 | 28 | 1 |
HMBD-001在循環1之120分鐘的一固定間隔中，係使用一輸注泵以一緩慢的靜脈內輸注投與，從早期單一患者組群中以一每週時程開始。若患者沒有經受任何輸注相關反應，則輸注率可在循環1完成之後降低至60分鐘。
施用單一患者、患者內的劑量遞增規劃。在患者內之劑量遞增階段期間，一循環係定義為28天，且由4個HMBD-001之每週用劑組成。
表5。劑量遞增組群之用劑方案
| 組群 | 第 1 週 ( 第 1 天 ) | 第 2 週 ( 第 8 天 ) | 第 3 週 ( 第 15 天 ) | 第 4 週 ( 第 22 天 ) |
| 患者內劑量遞增 | ||||
| 1 (n=1) | 150mg | 150mg | 300mg | 300mg |
| 2 (n=1) | 300mg | 300mg | 600mg | 600mg |
| 3 (n=3) | 600mg | 600mg | 600mg | 600mg |
| 4 (n=3) | 1200mg | 1200mg | 1200mg | 1200mg |
| 5 (n=3) | 1800mg | 1800mg | 1800mg | 1800mg |
假設HMBD-001之出現的藥物動力學性質係與預期一致(參見例如實施例17)。將考慮替代的、較不頻繁的用劑時程(亦即每2或3週)。任何替代的用劑時程之頻率將不超過每週一次用劑或低於每28天一次。
在患者內之劑量遞增階段之後，係探索多患者組群、患者間之劑量遞增規劃。在單一製劑劑量遞增階段中要投與之預期最大劑量為2100 mg (例如，每週)。
一組群中之第一患者在第二及第三患者可接受HMBD-001之前，從循環1之第1天投與HMBD-001開始觀察毒性7天。顯出受益於HMBD-001之患者(穩定的疾病或完全或部分反應)以及並非正在經受任何嚴重不良反應者，係可繼續接受進一步之循環。
預期的最大臨床劑量為每50 kg患者60 mg/kg，其等效於每患者3000 mg。
16.6.2 部分A 組2 ：組合製劑劑量遞增
每一組合劑量遞增組群之HMBD-001起始劑量，係基於所選組合製劑以及來自單一療法劑量遞增階段的資料來選擇。
16.6.3 部分B 組1 ：HMBD-001 單一療法劑量擴增
在判定部分A之組1中單一製劑之 HMBD-001的RP2D及時程上，患者被招募到一單一療法劑量擴增組群(部分B之第1組)，以便於為藥效學分析提供成對的腫瘤生檢。一3階段貝氏(Bayesian)適應性設計係用以評估抗腫瘤活性，其中10%的一真實反應率被視為非所期望的，且至少25%為所期望的。招募最少10名且最多25名可評鑑的患者。
患者係基於高腫瘤細胞HER3表現狀態或確認NRG1融合體重排，從以下腫瘤亞型選定：RAS野生型結腸直腸癌、去勢抗性前列腺癌、三重陰性乳癌、及頭頸部鱗狀細胞癌瘤。若由所取得的資料指示，則新鮮生檢中之磷酸化HER3之表現及/或高NRG1表現亦可評鑑作為預測性生物標誌。
16.6.4 部分B 組2 ：組合製劑劑量擴增
徵召了使用HMBD-001之RP2D的多個組合組群，其可與在選定適應症中於組合製劑劑量遞增(部分A之組2)中所判定的選定組合劑一起給予。一3階貝氏適應性設計用來評估抗腫瘤活性，允許在介入無效時提早停止。
16.6.5 起始劑量、用劑位準及方案之原理考慮化合物之類型(靶定生物上)、作用機制(競爭性受體阻斷)及可獲得之臨床前藥理學及毒性資料，本案發明人判定抗腫瘤活性及毒性兩者係將由曲線下方面積(AUC)、及由將HMBD-001血漿位準維持高於一藥理活性位準所驅動。
由於HMBD-001不是促效劑且HER3不是高風險目標，本案發明人選擇以具有一些生物活性之位準開始，以最小化患者對亞治療劑量位準的暴露。因此使用一藥理活性劑量(PAD)作法。臨床前活體外及活體內藥理學資料被用來針對藥理活性及功效定義目標血漿位準，且這些已分別被用來告知起始劑量及預期有效位準。
FIH臨床試驗使用固定的劑量位準而非基於體重者。這是基於包括所投與抗體之模擬及臨床藥理學的研究，該等研究已顯示，在體重及固定用劑之後在暴露上的患者間變化為可比配的，且藥物動力學變異相對於通常在藥效學、功效及安全性中所觀察到的變異係為緩和的(Bai et al. 2012；Hendrikx et al. 2017)。已在mg/kg基礎上進行物種之間的劑量計算/縮放以及隨後用於轉換之人類60 kg體重。
1)起始劑量：
使用臨床前活體外藥理學資料來針對起始劑量定義相關目標血漿位準；6個細胞株中增殖檢定法中的平均IC50為108 µg/mL (範圍19-168 µg/ml，每細胞株n=3)。大鼠PK參數之異速縮放被用來預測人類PK參數以及模型化劑量，其將導致在第一用劑時刻之後人類血漿位準在所欲範圍內歷時有限時段(＞19 µg/ml小於1週)。從此分析，選擇2.5 mg/kg作為適當劑量位準以達成此廓形。
此外，在設定起始劑量時，下列因素被考慮來確保以PAD為基之作法已產生一起始劑量，其係在活體外及活體內毒理學研究所建立的非不良範圍內，且與臨床上其他抗-HER3抗體之起始劑量比較。
來自大鼠研究之毒理學及暴露資料被使用來提供起始劑量之上限。NOAEL(未觀察到不良作用劑量)係設定為250 mg/kg (每週用劑)，因為此為在大鼠GLP重複劑研究中所包括的頂點劑量。出自此劑量位準之大鼠資料的模型化係以2隔間模型收斂，其針對清除率及分佈體積產生人類預測，且預測出等效人類暴露將以66 mg/kg (基於60 kg人類)之一劑量達成，該劑量比起所提議之臨床起始劑量係更高大約26倍且為所提議之人類最大劑量的兩倍。此支持所提議之2.5 mg/kg之起始劑量的合適性，考量到HMBD-001對HER3的親和力以及該目標的表現及位置係在人類及大鼠中廣泛地為等效的。
活體外細胞激素釋放檢定法指出，HMBD-001並未引發高於陰性對照及其他低風險mAb比對物之細胞激素釋放。雖然因為該固定化之抗體型式而無法直接使血液濃度與該檢定相等，但基於其他抗-HER3抗體的假設可被用來估算，第一次投與2.5 mg/kg起始劑量將導致50-70 µg/mL之一C
max，其顯著低於活體外測試之100 µg/mL的頂點濃度。
除了HMBD-001臨床前數據的模型化之外，HMBD-001起始劑量的計算還考量了來自其他抗-HER3抗體之藥物動力學資料(表3)，包括所預期之半衰期及C
max範圍，及目標媒介的藥物動向在早期組群中驅動更快清除的概念。對於已在臨床中的抗-HER3抗體，起始劑量範圍為18-360 mg (0.25-5.1 mg/kg) (全部的試驗由Mishra, 2018總結)。
最相似於HMBD-001之機制的抗-HER3抗體之起始劑量係為KTN3379 (5 mg/kg)及LJM716 (3 mg/kg)。
基於以上因素之考量，選擇2.5 mg/kg之起始劑量。此劑量在第一用劑時刻導致50-75 µg/mL的一預測C
max，基於正常人類血漿體積。此起始劑量將預期具有一些藥理學活性，但此將限於在每次投與後少於一週的持續時間，因此將不預期為一治療劑量。目標媒介之動向於早期組群中將被預期，且將導致比預測更短的暴露在高於目標位準之上，但因為此為無法準確地模型化，所以此起始劑量位準被視為適當的。
2.5 mg/kg之起始劑量位準係已基於一60 kg體重被轉化，以在組群1中達到150 mg固定劑量的一起始劑量。
基於跨所使用模型之活體內資料，150 µg/mL為可被預期於人類中有功效的血漿位準，即使腫瘤穿透之差異可能導致人類中所需之較高血漿位準才能達成等效腫瘤內濃度。基於PK參數之分析，預期的是，針對HMBD-001，此C
min血漿位準將用10與30 mg/kg之間的劑量來維持，其中取決於排除半衰期，用劑間隔為在每週與三週之間。因此，預期最大人類劑量為一2100 mg固定劑量，其處於此範圍之上端。
為了識別HMBD-001單一療法之最大耐受劑量(MTD)，利用一單階貝氏CRM，其基於5劑經驗的劑量-毒性模型，組群大小為3、在劑量位準1之起始劑量以及在劑量位準3之MTD的先前猜測。使用具有β-二項共軛分析之貝氏安全性監測架構，若存在足夠的證據證明最低劑量過毒，亦即，若DLT率在最低劑量為＞25%的事後機率係大於85%，則貝氏CRM將允許提早停止。
16.6.6 劑量限制毒性、最大耐受劑量/ 最大投與劑量之定義
一DLT係定義為在循環1、第1天投藥前28天期間發生之也許、可能或高度可能之與HMBD-001相關的AE，其滿足下列準則中之一或多者：
● 持續＞五天之第4級嗜中性球減少症*
● 發熱性嗜中性球減少症(未知起因之發燒，沒有臨床或微生物學記錄之感染)，有第3或4級嗜中性球減少症(絕對嗜中性球計數[ANC] ＜1.0 ×109/L)，以及發燒≥38.5ºC)。
*註解：在第4級嗜中性球減少症事件中，在事件發作後第5天必須施行全血細胞計數以判定DLT是否已發生。調查員必須持續密切監測患者直到解決至第1級或低於第1級。
● 與出血相關聯之第4級血小板減少症或第3級血小板減少症。
● 第3或4級非血液學毒性。此包括第3及4級生物化學AE作為DLT，不包括：
o 第3級噁心；患者尚未接受最適的止吐劑治療的第3級
o 患者尚未接受最適的止吐劑治療的第3或4級嘔吐；或
o 患者尚未接受最適的止瀉劑治療的第3或4級腹瀉。
o 暫時、無症狀第3級生物化學異常，若贊助者及研究團隊包括首席調查員同意。
● 致命事件
● 左心室射出分率(LVEF)第3或4級降低。
● 第3或4級細胞激素釋放症候群或輸注相關反應。
● 導致循環1第1天的28天內之治療中斷、或導致＞7天之用劑延遲(不包括因為時程而非臨床決定之＞7天的延遲)的任何其他相關毒性可被視為DLT，如贊助者、CI及PI同意。
單一劑量最大投與劑量(MAD)將定義為在不存在定義該MTD之情況下所投與的最高劑量位準。
16.6.7 伴隨的藥物及治療
在試驗時、或在循環1第1天的2週內係不容許每天＞ 10 mg之普賴蘇穠(prednisolone)劑量(或其他皮質類固醇之等效力劑量)，除了作為療前用藥，其中CI及贊助者已批准它作為一替代療前用藥、或若需要替代的類固醇、或若臨床指示以治療輸注相關的反應。
容許每天使用＜10 mg之普賴蘇穠(prednisolone)劑量(或其他皮質類固醇之等效力劑量)且允許吸入皮質類固醇。
16.7 患者群體
入選HMBD-001單一療法劑量遞增組的患者係將具有已知會過度表現HER3的腫瘤類型。高HER3表現已經於腫瘤組織學中證實，包括於胃癌、結腸直腸癌、前列腺癌、乳癌、肺癌、卵巢癌及頭頸部癌。
所有招募至單一療法擴增及組合劑量遞增及組合劑量擴增組之患者，係將在試驗入選之前基於確認的高HER3表現狀態來選擇。具有確認NRG1融合體重排之患者亦可入選。
將招募高達135名可評鑑患者進行試驗。最終數目將取決於達到最大耐受劑量(MTD)/最大投與劑量(MAD)所需的劑量遞增數目、所探索之擴增階段群的數目、及可能需要被替代之患者的數目。
在一些腫瘤類型中，主要臨床使用係將與其他訊息傳導途徑抑制劑組合。
在單一療法劑量遞增階段中，HER3腫瘤表現將分別地量測；將選擇患有所預期具有一高HER3表現之腫瘤的患者。
具有確認的高HER3表現的患者將被選擇於單一療法擴增、組合劑量遞增以及組合擴增組群，且因此其形成合格準則的部分。高HER3表現將使用健康機構之體外診斷(IVD)豁免準則(通常稱為廠內製造)的一研究檢定法來判定。根據所需的資料，新鮮生檢磷酸化HER3表現及/或高NRG1表現亦可變成規定的。確認帶有NRG1融合體重排的患者亦將視為符合條件。NRG1融合體重排將使用在每一健康照護所內所施行的一研究檢定法來評估。
16.7.1 納入準則
1.組織學上確認晚期或轉移的實性腫瘤對傳統治療具有抗性或難治性、或者傳統療法對之而言不存在、或不被調查員認為適當或為患者所拒絕。
部分A 組1 單一療法劑量遞增：
患者患有已知過度表現HER3之腫瘤類型，包括：
● 膀胱癌
● 三重陰性乳癌
● 去勢抗性前列腺癌
● 子宮頸癌
● RAS野生型結腸直腸癌
● 子宮內膜癌
● 胃癌
● 肝細胞癌瘤(HCC)
● 黑色素瘤
● 非小細胞肺癌(NSCLC)
● 食道癌
● 卵巢癌
● 胰臟癌
● 頭頸部鱗狀細胞癌瘤
部分B 組1 單一療法劑量擴增：
患有去勢抗性前列腺癌、RAS野生型結腸直腸癌、三重陰性乳癌或頭頸部鱗狀細胞癌的患者，其：
● 在試驗實驗室手冊中所規定的研究入選之前，藉由免疫組織化學法(IHC)在預篩選生檢上經確認高HER3表現，或確認存在NRG1融合體重排。高HER3表現將使用健康機構之體外診斷(IVD)豁免準則(通常稱為廠內製造)的一研究檢定法來判定。NRG1融合體重排將使用在各地方健康照護所內施行的一研究檢定法來評估，且因此落入健康機構之IVD廠內製造豁免。根據所需的資料，新鮮生檢磷酸化HER3表現及/或高NRG1表現亦可變成規定的。
● 疾病位點肯接受生檢。
● 同意治療前及治療後的腫瘤生檢。
● 除了最近被生檢之病變外，根據實性腫瘤反應評鑑準則(RECIST)版本1.1有至少一個可量測病變。注意：可在篩選時及第15天進行一可量測病變的生檢，然而根據RECIST v1.1，該病變不能選擇作為疾病評估的一目標病變。
2.至少12週之預期壽命。
3.美國東岸癌症臨床研究合作組織(ECOG)表現狀態0或1。(附錄2)。
4.血液學及生物化學指數係在下文所示之範圍內。應施行這些量測以確認患者的合格性。
5.患有晚期前列腺癌的患者必須具有去勢位準之睪固酮，且已接受次世代荷爾蒙劑(阿比特龍(abiraterone)、恩雜魯胺(enzalutamide)、阿帕魯胺(apalutamide)或達洛魯胺(darolutamide)中之至少一者)。
6.在給出同意時，年滿16歲或以上。
| 實驗室測試 | 所需之值 |
| 血紅素(Hb) | ≥ 9.0 g/dL / 90 g/L (最近2週內沒有事先輸血) |
| 絕對嗜中性球計數(ANC) | ≥1.5×109/L |
| 血小板計數 | ≥100×109/L |
| 膽紅素 | ≤1.5 x正常值上限(ULN) |
| 丙胺酸轉胺酶(ALT)及天冬胺酸胺基轉移酶(AST) | ≤2.5 x ULN (或≤5 x ULN，出現肝轉移) |
| 腎功能 任一者： (i)血清肌酸酐 或 (ii)所計算之肌酸酐清除率(使用Cockcroft & Gault [C&G]公式) | (i) ≤1.5 × ULN (ii) ≥45 mL/min (未訂正值) |
| 凝固 國際標準化比值(INR)或活化部分凝血激酶時間(aPTT) | ＜1.5 x ULN 治療INR值(2.0-3.0)對於服用華法林(warfarin)之患者為可接受的。 |
針對部分A組2、部分B組1及2：藉由IHC及其他藥效學分析獲得新鮮腫瘤生檢以供HER3及NRG1表現分析。此必須來自一轉移性位點。高HER3表現之確認必須於試驗入選之前獲得。
就患者的腫瘤類型適當量測例如CA-125、CEA、CA19-9或PSA之腫瘤血清標誌。
16.7.2 排除準則
1.在試驗循環1第1天之前的前4週期間之放射療法(姑息原因例外)、化學療法、內分泌療法(除了終生荷爾蒙抑制之外，諸如在前列腺癌中之黃體化荷爾蒙釋素(LHRH)劑)、免疫療法或試驗藥品。
2.先前治療之持續毒性呈現比NCI-CTCAE第1級更大的患者。此之例外為，任何等級之脫毛症、第2級周邊神經病變以及調查員及贊助者的意見認為不應排除患者的任何其他持續毒性呈現
3.應排除具有症狀的腦或軟腦膜轉移之患者。用穩定類固醇劑量≤10 mg普賴蘇穠(prednisolone)或等效力劑量之其他皮質類固醇的無症狀患者，係將符合試驗條件。
4.具生育能力(或者已懷孕或泌乳)之女性。然而，符合以下點的患者被認為是合格的：
• 在入選之前具有一陰性的血清或尿液驗孕且；
• 同意使用兩種避孕形式：
i. 一高效形式，包括但不限於：經口、注射、植入、經皮或陰道內之與排卵之抑制相關聯的荷爾蒙避孕、子宮內裝置、子宮內荷爾蒙釋放系統或經輸精管切除術的配偶；
ii. 加上一阻障方法(例如，保險套加上殺精劑)
iii. 或同意性禁慾，從第一次投與HMBD-001生效、貫穿該試驗且在最後一次投與製劑之後六個月。
5.有具生育能力配偶的男性患者。然而，符合以下點的患者被認為是合格的：
• 同意採取措施不生小孩，藉由使用一阻障避孕方法[保險套加上殺精劑]或性禁慾，從第一次投與HMBD-001生效、貫穿試驗及在最後一次投與IMP之後六個月。
• 有具生育能力配偶之未經輸精管切除術的男性必須亦願意確保其配偶在相同持續時間中使用高度有效的避孕方法，例如與排卵之抑制相關聯的荷爾蒙避孕、子宮內裝置、子宮內荷爾蒙釋放系統或性禁慾。
• 有懷孕或泌乳配偶的男性必須被建議使用阻障避孕方法(例如，保險套加上殺精劑)以預防胎兒或新生兒暴露。
6.主要手術而患者尚未從其恢復。
7.因為非惡性系統性疾病而處於高醫療風險，包括活性未受控制之感染。先前暴露於C型肝炎中但目前沒有感染之患者係適格參與。
8.已知為B型肝炎、C型肝炎或人類免疫缺乏病毒(HIV)感染呈血清學陽性。先前暴露於C型肝炎中但目前沒有感染之患者係適格參與。
9.已知或懷疑對先前生物療法有過敏性反應，調查員之意見認為其係參與此研究之禁忌。
10.並行的鬱血性心臟衰竭、＞第II類心臟疾病(紐約心臟學會[NYHA]──附錄3)的先前病史、臨床上顯著心臟缺血的病史或臨床上顯著心律不整的先前病史。有顯著心血管疾病的患者係被排除在外，如下列所定義者：
a. 在進入試驗前六個月內之不穩定心絞痛或心肌梗塞病史
b. 當前臨床上顯著不受控制的心律不整之病史或跡象。在進入試驗前有＞ 30天之受控制心房顫動的患者係適格的。
c. 在試驗進入之前6個月內的冠狀動脈血管成形術或施放支架。
d. 需要治療之心室性不整脈之存在
e. LVEF ＜50%
f. QTcF ≥ 480毫秒(對於有束支阻斷之患者≥500毫秒)
11.患有活動性自體免疫疾病之患者，包括但不限於：重症肌無力、肌炎、自體免疫肝炎、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、發炎性腸道疾病、與抗磷脂質症候群相關聯之血管血栓形成、華格納氏肉芽病(Wegener’s granulomatosis)、休格倫氏症候群(Sjögren’s syndrome)、格林-巴利(Guillain-Barré)症候群、多發性硬化症、血管炎或腎絲球腎炎。患有受控第I型糖尿病、使用穩定劑量之胰島素的患者，以及患有甲狀腺機能低下症、僅需要甲狀腺荷爾蒙替代物且使用穩定劑量的患者將為合格的。具有不需要系統性治療之皮膚症狀(諸如，白斑病、乾癬或脫毛症)、或在缺乏外部觸發時不預期會復發之病況的患者將被容許參與，前提是符合下列所有準則：
• 皮疹必須覆蓋＜10%之身體表面積
• 疾病在基線時被良好控制且僅需要低效力的局部皮質類固醇。
• 在先前12個月內，沒有發生需要補骨脂素加上紫外線A輻射、胺甲喋呤(methotrexate)、類視色素(retinoid)、生物製劑、口服鈣調磷酸酶抑制劑或高效力或口服皮質類固醇的潛在病況之急性惡化。
12.在第一劑研究藥物前7天內每天接受＞10 mg之普賴蘇穠(prednisolone)(或其他皮質類固醇之等效力劑量)的患者係不適格，除非作為療前用藥投與。
13.在第一劑HMBD-001前4週內接受一活疫苗接種的患者。
14.一參與者係為或計畫參與另一介入性臨床試驗，同時參加此HMBD-001之第I/IIa階段試驗。不涉及IMP投與的觀察性試驗或介入性臨床試驗、且調查員及醫療顧問認為其不會給患者帶來不可接受之負擔的參與將為可接受的。
15.依調查員之見解不會使患者成為臨床試驗的良好候選人的任何其他情況。
16.當前或先前惡性疾病，其可能影響IMP之安全性或功效評估、或者規程之遵守或結果之解釋。患有治癒性治療之非黑色素瘤皮膚癌、非肌肉侵襲性膀胱癌或原位癌的患者通常係適格的。
16.8 安全性考量
作為單一療法，HER3單株抗體係已在高達每週IV40 mg/kg的劑量下被良好耐受且沒有達到一最大耐受劑量。大多數不良事件已是NCI-CTCAE第1-2級。基於HMBD-001的臨床前經歷以及其他HER3單株抗體報導的臨床資料，預期的毒性可能包括但不限於下列：
● 包括細胞激素釋放症候群之輸注相關反應係為人源化單株抗體之一經承認的副作用。症狀可包括皮疹、發燒、僵直、支氣管痙攣及低血壓。所有患者將視需要接受包括療前用藥的支持照護，且將在輸注之前、期間以及之後被監測。對單株抗體及/或其賦形劑有嚴重過敏/過敏性之病史的患者，不應被投與HMBD-001且從此試驗被排除。
● 胃腸道毒性。第1及2級腹瀉已與其他HER3靶向製劑被報導。就易利珠單抗及AV-203兩者報導DLT。根據地方治療指南應投與支持療法，且對於臨床顯著毒性，應制止用HMBD-001之治療。
● 低鉀血症及低鎂血症：對於其他HER3靶向製劑已報導出第1及2級電解質異常。在腹瀉存在下就易利珠單抗報導DLT。根據局部治療指南應投與替代療法，且對於臨床顯著毒性，應制止用HMBD-001之治療。若在腹瀉存在下發生電解質異常，則亦應遵循腹瀉管理的地方治療指南。
● 皮疹/皮膚炎：在用其他HER3抗體及其他HER/EGFR靶向製劑的已完成試驗中，已報導皮疹。應投與根據地方治療準則的支持療法。
● 血液學：在使用其他HER靶向製劑的試驗中，已有血液學發現，諸如血紅素值、白血球細胞計數及淋巴球計數的變化。標準血液學含括準則將被應用，以確保患有既存骨髓抑制的患者不包括在試驗中。將進行標準第I階段血液學評鑑作為臨床安排之部分。
● 心毒性。根據贊助者的知識，其他HER3抗體並未報導有心毒性，然而HER2抗體及泛HER抗體係與心毒性相關聯。由於HMBD-001的作用機制及二聚化的抑制，心電圖(ECG)、肌鈣蛋白I及一心臟超音波圖(ECHO)/多門控擷取法(MUGA)掃描，係將形成篩選研究之部分及研究中之監測。
● 白蛋白增加：白蛋白增加已在臨床前毒理學研究中及在GSK2849330之試驗中報導。貫穿試驗，白蛋白位準將被監測作為標準生物化學評鑑的部分。
● 生殖風險。在此發展階段，尚沒有用HMBD-001施行之具體生殖毒理學研究。由於生殖風險係未知的，患者將被告知 HMBD-001可能對生育力有影響，且將被要求遵守臨床試驗的避孕措施。在可能考慮組成或擴大家庭的適當男性患者的情況下，將討論精子保存的可能性。此試驗將在預後及生育力可能受限的患者中進行，因此在此情境下，具生育能力的女性、或有使用高度有效生育控制之具生育能力配偶的男性患者的納入，係被視為一可接受之風險。
● 組合效應。組合劑之潛在非所期望的效應係將在一實質修正後被更新於規程內。
一不良事件(AE)為投與一試驗藥品(IMP)、一比對產品或一許可藥物之一患者中的任何不順遂、非所欲或非計劃的醫療事故。一AE可為與IMP或比對物可能相關或可能不相關的一徵象、症狀、疾病及/或實驗室或生理觀測。一AE包括但不限於以下清單中之那些者。
●既存病況之臨床上顯著的惡化。這包括可能完全消解且接著再次變得異常的病況。
● 由一IMP之過量引起之AE，無論係意外的或有意的。
● 由缺乏一IMP功效引起之AE，例如，若調查員懷疑一藥物批次並不有效，或若調查員懷疑該IMP已促成疾病進程。
一嚴重不良事件(SAE)為無論劑量、因果或預期性之任何下列的AE：
● 導致死亡；
● 係危及生命的*；
●需要住院病人住院治療或延長現有住院治療(一些住院治療係豁免SAE報導，例如在患者進入試驗之前所計劃的入院；為諸如輸血之計劃的程序的過夜停留)；
● 導致持續性或顯著的無能力或失能；
● 為一先天性異常或出生缺陷；
● 為任何其他醫療重要事件。**
*一危及生命的事件係定義為，在不良事件發生時患者處於顯著的死亡風險，或持續使用裝置或其他醫藥品時可能導致患者死亡的事件；
**一醫療重要事件係定義為任何可危及患者或可能需要介入以防止上文列出之結果中之一者的事件。實例包括需要在急診室治療之過敏性支氣管痙攣(具有呼吸之嚴重問題)、嚴重血液惡質(血液病症)或不會導致住院治療之癲癎/抽搐。藥物依賴性或藥物濫用的發展亦將為重要醫療事件的實例。
輸注相關反應(IRR)通常與單株抗體及其他治療劑的投與相關聯。
16.9 藥物動力學及藥效學評估
評估患者之生物標誌表現，其包括：
● HER3表現，例如藉由使用腫瘤生檢樣本之免疫組織化學法(IHC)
● 磷酸化HER3 (pHER3)，例如藉由免疫組織化學法(IHC)
● EGFR/HER2表現，例如藉由免疫組織化學法(IHC)
● 磷酸化ERK (pERK)，例如藉由免疫組織化學法(IHC)
● p70S6K活性，例如藉由免疫組織化學法(IHC)
● NRG1表現，例如藉由免疫組織化學法(IHC)
● Ki67表現，例如藉由免疫組織化學法(IHC)
● 裂解的胱天蛋白酶3，例如藉由免疫組織化學法(IHC)
● cfDNA位準(治療後，腫瘤區段部分降低)，例如藉由次世代定序
● 抗-藥物抗體，例如藉由ELISA
● 可溶性HER3，例如藉由ELISA
● 可溶性NRG1，例如藉由ELISA
● PI3/MAPK途徑活性，例如藉由次世代定序，Nanostring
● PI3/MAPK途徑突變，例如藉由次世代定序。
血漿中的HMBD-001位準係藉由ELISA來量測。使用非隔間方法來分析血漿/濃度/時間資料。HMBD-001的藥物動力學(PK)參數包括：最大觀察到的血漿濃度(C
max)、達到C
max的時間(T
max)、血漿濃度時間曲線下方面積(AUC)、最終排除半衰期(t
1/2)、分佈穩態體積(V
SS)及總身體清除率(CL)。
在單一製劑劑量遞增階段(部分A組1)中，循環1至3期間在高達20個時間點從患者收集大約5mL之血液。從每一患者所抽取之大約血液總體積係為120 mL。在擴增階段(部分B組1及2)及組合製劑遞增階段(部分A組2)中，針對每一患者在用劑前以及循環1及3之輸注後1小時獲取5 mL之血液樣本。從每一患者所抽取之大約血液總體積係為45 mL。
為了量測循環生物標誌(例如，NRG1、可溶性HER3)，收集大約6 mL之血液以供在劑量遞增及擴增階段期間於治療前及後之特定時間點分析HMBD-001活性之潛在替代標誌，其係根據商定之SOP及經驗證之方法來探索可溶性HER3及配體NRG1之位準。為了這些分析從每一患者所抽取之大約血液總體積係為96 mL。
在治療前、期間及在非研究訪問時，在高達6個時間點從患者收集大約20 mL之血液，以獲得血漿及量測cfDNA。量測來自患者之血漿中的cfDNA，以偵測腫瘤區段部分及基因變化的改變。cfDNA分析係藉由基因體及腫瘤DNA分析來補充，以對比於來自於其他細胞來源之片段而識別源自於腫瘤之片段，且展現在系列cfDNA樣本中之腫瘤區段部分的減小。為了此分析從每一患者所抽取之血液的大約總體積係為120 mL。
16.10 抗腫瘤活性之評估
疾病係根據如所適用之實性腫瘤反應評鑑準則(RECIST) v1.1或前列腺癌工作組3 (PCWG3)臨床試驗準則來量測。
無進程存活期(PFS)係定義為從本試驗投與第一劑之HMBD-001或第一劑組合治療到任何原因之疾病進程或死亡的時間。若一患者尚無進程且仍活著，則將在最後的適當疾病評估日期審查該患者。
整體存活期(OS)係定義為從本試驗投與第一劑之HMBD-001或第一劑組合治療到任何原因之死亡日期的時間。若一患者尚未死亡，則將在已知為活著之最近日期審查患者。
整體反應率(ORR)定義為已達成完全反應(CR)或部分反應(PR)之患者的比例。
新實性腫瘤反應評鑑準則(RECIST 準則) ：經修訂之RECIST 指南( 版本1.1) 。E.A. Eisenhauer et al. (2009).uropean Journal of Cancer 45: 228-247
1. 腫瘤在基線時之可量測性
1.1. 定義
在基線時，腫瘤病變/淋巴結將分類為可量測或非可量測，如下列：
1.1.1.可量測
腫瘤病變：必須準確地量測至少一個維度(量測平面中之最長直徑將被記錄)，具下列之最小的尺寸：
● 10 mm，藉由CT掃描(CT掃描切片厚度不超過5 mm；見附錄II在成像指導上)。
● 藉由臨床檢查之10 mm測徑器量測(無法用測徑器準確量測之病變應記錄為非可量測的)。
● 20 mm，藉由胸部X光
惡性淋巴結：為了被視為病理上增大及可量測的，當藉由CT掃描(所建議的CT掃描切片厚度不大於5 mm)評估時，一淋巴結之短軸必須為15 mm。在基線時及追蹤時，將僅量測及追蹤短軸。
1.1.2.非可量測
所有其他病變，包括小病變(最長直徑＜10 mm或具有10至＜15 mm短軸之病理淋巴結)以及真正的非可量測的病變。被視為真正非可量測的病變包括：無法藉由可再現之成像技術量測的體檢所識別的軟腦膜疾病、腹水、胸膜或心包膜積液、發炎性乳疾病、皮膚或肺臟之淋巴管炎侵犯、腹部腫塊/腹部器官腫大。
1.1.3.關於病變可量測性之特別考量
先前用局部療法治療之骨骼病變、囊性病變及病變需要特定註解：
骨骼病變：
● 骨骼掃描、PET掃描或平片不被視為用以量測骨病變的充分成像技術。然而，這些技術可用來確認骨骼病變之存在或消失。
● 具有可識別軟組織組分之溶解性骨骼病變或混合溶解性芽殖病變，其可藉由諸如CT或MRI之截面成像技術來評鑑，若軟組織組分滿足上述可量測性之定義，則該病變係可被視為可量測病變。
● 芽殖骨骼病變為非可量測的。
囊性病變：
● 符合放射線攝影所定義之單純囊腫之準則的病變，不應被視為惡性病變(既不是可量測的，亦不是非可量測的)，因為它們根據定義係為單純囊腫。
● 被認為代表囊腫轉移的「囊性病變」可視為可量測病變，若其滿足上文所述之可量測性的定義。然而，若非囊性病變存在於同一患者中，則較佳地選擇這些作為目標病變。
先前局部治療之病變：
● 位於先前所照射之區域中或於經受其他局部區療法的腫瘤病變，係通常不被視為可量測的，除非在該病變中已展現出進程。試驗規程應詳述條件，其中此等病變將被視為可量測的。
1.2.藉由量測之方法的說明書
1.2.1.病變之量測
所有量測應以公制符號記錄，若臨床評估，則使用測徑器。所有基線評鑑應盡可能接近於治療開始時施行，且不得超過治療開始前4週施行。
1.2.2.評估之方法
相同評估方法及相同技術應使用來特徵化在基線時及追蹤期間的每一個所識別及所報導的病變。應永遠進行以成像為基的評鑑而不是臨床檢查，除非正追蹤之病變無法被成像而是僅可藉由臨床檢查來評估的。
臨床病變：
臨床病變將僅在使用測徑器評估且有≥10 mm之直徑時被視為可量測的(例如，皮膚結節)。對於皮膚病變之情況，建議彩色攝影的證明文件，其包括尺以估算病變大小。如上所述，當病變可藉由臨床檢查及成像兩者來評鑑時，應做成像評鑑，因為其更客觀且亦可在試驗結束時審查。
胸部X光：
胸部CT係優於胸部X光，特別是在進程為一重要終點時，因為CT比X射線更敏感，特別是在識別新的病變時。然而，若胸部X光上的病變被明確地界定且被充氣的肺臟包圍，則其可被視為可量測的。
CT、MRI：
CT為用以量測經選擇用於反應評估之病變的最佳當前可用且可再現的方法。此指南基於CT切片厚度為5 mm或更小之假設而已經定義CT掃描之病變可量測性。當CT掃描具有大於5 mm之切片厚度時，則一可量測病變之最小的大小應為該切片厚度的兩倍。MRI在某些情形下亦為可接受的(例如，用於身體掃描)。關於CT及MRI兩者用於評估客觀腫瘤反應評鑑之使用的更多細節係提供於來自Eisenhauer et al.之公開案中。
超音波：
超音波在評估病變大小上為沒用的，且不應被使用作為一種量測方法。超音波檢查不能全面地再現以供日後獨立審查，因為其等為操作者依賴的，所以無法保證從一個評估到下一者將採取相同的技術及量測(更詳細地說明於附錄II中)。若新的病變在試驗過程中藉由超音波識別，則建議藉由CT或MRI來確認。若擔心CT之輻射暴露，則在選定情況下可使用MRI代替CT。
內視鏡檢查、腹腔鏡檢查：
這些技術對客觀腫瘤評鑑的利用係不被建議的。然而，它們可為可用的，來在獲得生檢時確認完全的病理反應，或判定在試驗中的復發，其中在完全反應或外科切除後的復現係為一終點。
腫瘤標誌：
單單腫瘤標誌係不能用於評估客觀腫瘤反應。然而，若標誌最初高於正常極限，則其必須正常化以使患者被視為完全反應。
細胞學、組織學：
若規程所需，則這些技術可用以在罕見情況下區分PR與CR (例如，腫瘤類型中之殘存病變，諸如生殖細胞腫瘤，其中已知殘存良性腫瘤可保留)。當積液已知為治療之一潛在不良效應(例如，用某些紫杉烷化合物或血管新生抑制劑)時，若可量測腫瘤已滿足反應或穩定性疾病之準則，則可考量在治療期間出現或惡化的任何積液之贅生來源的細胞學確認，以便於區分反應(或穩定的疾病)與進行性疾病。
2.腫瘤反應評鑑
2.1 整體腫瘤負荷及可量測疾病的評估
為了評估客觀反應或未來進程，有必要在基線時估算整體腫瘤負荷且使用此作為一比對物以供後續量測。可量測疾病係藉由存在至少一種可量測病變(如上文詳述)來定義。
2.2.「目標」及「非目標」病變之基線說明
當於基線時存在多於一個可量測病變、所有病變高達最多共五個病變(且每個器官最多二個病變)，所有涉及器官之代表應識別為目標病變，且將在基線時被記錄及量測(此意謂在患者只有一或二個器官位點涉及之情況，最多兩個及四個病變將被分別記錄)。針對支持僅五個目標病變之選擇的證據，見Bogaerts et al.之論文中對大型前瞻性資料庫之分析。目標病變應以其等大小(具有最長直徑之病變)的基礎來選擇、應為所有涉及器官的代表，但此外，應為那些自身提供可再現的重複量測結果者。偶爾，最大病變自身沒有提供可再現的量測結果，在該情況下應選擇可被可再現地量測之次大的病變。根據Eisenhauer et al在公開案之圖3中的實例。
淋巴結值得特別提及，因為它們是正常解剖結構，所以其即使不涉及腫瘤，亦可透過成像可見。病理結點係定義為可量測的且可識別為目標病灶，其必須滿足CT掃描≥15 mm之一短軸的準則。這些結點之短軸將有助於基線總和。結點之短軸為通常由放射科醫師使用以判定一結點是否受實性腫瘤侵犯的直徑。結點的大小通常報導為獲得影像之平面中的二維(對於CT掃描，此幾乎始終為軸向平面；對於MRI，獲取平面可為軸向、矢狀或冠狀)。這些量測中之相似者為短軸。舉例而言，報導為20 mm x 30 mm之一腹部結點的係具有20 mm之一短軸且有資格作為一惡性、可量測的結點。在此實例中，20 mm應記錄為結量測值。所有其他病理結點(具有≥10 mm但＜15 mm之短軸者)應視為非目標病變。具有＜10 mm之一短軸的結點被視為非病理性的且不應記錄或追蹤。
所有目標病變之直徑(非結點病變為最長，結點病變為短軸)的總和將被計算且報導為基線總和直徑。若淋巴結要被包括在總和中，則如上文所述，僅添加短軸至總和中。基線總和直徑將用作參考，以進一步特徵化疾病可量測尺寸中之任何目標腫瘤消退。
包括病理淋巴結之所有其他病變(或疾病位點)應識別為非目標病變，且亦應在基線記錄。不需要量測且將這些病變追蹤為「存在」、「不存在」或在罕見情況下之「明確進程」(更詳細如下)。另外，在個案記錄表上有可能將涉及同一器官的多個非目標病變記錄為單個項目(例如，「多個增大的骨盆淋巴結」或「多個肝轉移」)。
2.3.反應準則
2.3.1.目標病變之評估
完全反應(CR)：所有目標病變的消失。任何病理學淋巴結(無論是目標或非目標)必須在短軸上減小至＜10 mm。
部分反應(PR)：目標病變直徑的總和有至少30%降低，採用參考基線總和直徑。
進行性疾病(PD)：目標病變直徑的總和有至少20%增加，採用參考試驗中最小的總和(此包括基線總和，若其為試驗中最小的)。除了20%之相對增加之外，總和亦必須展現至少5 mm之絕對增加(註解：一或多個新的病變之出現亦被視為進程)。
穩定的疾病(SD)：既沒有足夠收縮來符合 PR，亦沒有足夠增加來符合PD，採用參考試驗中最小的總和。
2.3.2.目標病變之評估的特別注意
淋巴結：
識別為目標病變之淋巴結應始終記錄實際短軸量測(在相同於基線檢查之解剖平面中量測)，即使結點在試驗中消退至低於10 mm。此意謂當淋巴結被包括為目標病變時，即使滿足完全反應準則，病變之「總和」可不為零，因為正常淋巴結係定義為具有＜10 mm之短軸。個案報導表或其他資料收集方法可因此經設計，來在分開的區段中記錄目標結點病變，其中為了符合CR條件，每一結點必須達到＜10 mm之短軸。針對PR、SD及PD，結點之實際短軸量測係要包括在目標病變之總和中。
變得「太小以至於無法量測」的目標病變：
雖然在試驗上，在基線時記錄的所有病變(結點和非結點)應在每次後續評鑑時記錄其實際量測，即使非常小(例如，2 mm)。然而，有時在基線時記錄為目標病變的病變或淋巴結在CT掃描上變得如此微小，使得放射科醫師可能對於指定一確切量測感到不放心，且可能將其報導為「太小以至於無法量測」。當此發生時，重要的是將一數值記錄在個案報導表上。若放射科醫師之意見為病變很可能已經消失，則量測結果應記錄為0 mm。若認為存在病變且為隱約可見、但太小以至於無法量測，則應指定5 mm之一內定值。(註解：此規則將不太可能用於淋巴結，因為它們在正常時通常具有可界定的大小，且經常由脂肪包圍，諸如在腹膜後位中；然而，若相信存在一淋巴結且為隱約可見的、但太小以至於無法量測，則在此情形中亦應指定5 mm之內定值)。此內定值係衍生自5 mm之CT切片厚度(但應不會隨著變化的CT切片厚度而改變)。這些病變之量測為可能是不可再現的，因此提供此內定值係將基於量測誤差來預防錯誤反應或進程。然而換言之，若放射科醫師能夠提供一實際量測，則應記錄該量測，即使其低於5 mm。
治療時分裂或聚結之病變：
當非結點病變「片段化」時，經片段化之部分的最長直徑應一起添加以計算目標病變總和。相似地，當病變聚結，可維持它們之間的一平面，其將有助於獲得每一個別病變的最大直徑量測。若病變已真正合併以使得它們不再為可分開的，則在此情況下，最長直徑之向量應為「合併病變」之最大最長直徑。
2.3.3.非標靶病變之評估
儘管一些非目標病變實際上可為可量測的，但它們無需被量測，反之應僅在規程中規定的時間點定性評估。
完全反應(CR)：所有非目標病變的消失及腫瘤標誌位準的正規化。所有淋巴結的大小必須是非病理性的(＜10 mm短軸)。
非CR/非PD：一或多個非目標病變之持久性及/或腫瘤標誌位準之維持高於正常極限。
進行性疾病(PD)：現存非目標病變之明確進程(見下方註釋)。(註解：一或多個新的病變之出現亦被視為進程)。
2.3.4.非標靶疾病進程之評估的特別註解
非標靶疾病進程之概念需要如下的額外解釋：
當患者亦患有可量測的疾病時：
在此設定下，為了以非目標疾病為基礎來達成「明確進程」，必須有非目標疾病中實質上惡化的一整體位準，以使得即使在目標疾病中存在SD或PR之情況下，整體腫瘤負擔已充分增加以應受療法之中止。在一或多個非目標病變之大小上的適度「增加」通常不足以符合明確的進程狀態。面對目標疾病之SD或PR卻單單以非目標疾病之變化為基礎的整體進程的指定，係將因此為極罕見的。
當患者僅具有不可量測之疾病時：
當具有可量測疾病不是試驗進入的一準則時，此情形在一些第III階段試驗中出現。相同於上文所述的一般概念在此適用，然而在此情況下，沒有可量測疾病評估作為因素計入非可量測疾病負擔增加的解釋中。因為非目標疾病惡化無法容易地定量(根據定義：若所有病變為真正不可量測的)，在評估患者之明確進程時可施用的一有用測試係要考量：是否基於非可量測疾病之改變的整體疾病負擔的增加，係在大小上為可比對於就可量測疾病宣告PD所將需要的增加：亦即代表「體積」上之額外73%增加(其等效於可量測病變中之20%直徑增加)的一腫瘤負擔增加。實例包括從「微量」至「大量」之胸膜積液的增加、從局部至廣布的淋巴管發炎疾病之增加，或可在規程中說明為「足以需要改變療法的」。若看到「明確進程」，則患者應被視為在該時點已具有整體PD。雖然使目標準則應用於非可量測的疾病將會是理想的，但該疾病的本質使它不可能如此；因此，該增加必須係顯著的。
2.3.5.新病變
新的惡性病變之出現表示疾病進程；因此，一些用於偵測新病變之註釋係重要的。沒有特別準則來識別新的放射線攝影的病變；然而，新病變之發現應為明確的：亦即，不是由於掃描技術的差異、 成像模態的變化、被認為是代表腫瘤以外之東西的發現(例如，一些「新的」骨骼病變可簡單地為療癒或既存病變之復發)。當患者的基線病變顯示部分或完全反應時，此係特別重要的。舉例而言，一肝臟病變的壞死可能在一CT掃描報導中為一「新」囊性病變，但其並非如此。
在基線時未掃描之解剖位置中於追蹤試驗上所識別的一病變，係被視為一新病變且將指示疾病進程。此一實例為患者在基線時患有內臟疾病且其在試驗中安排有一CT或MRI大腦而顯現轉移。患者之腦轉移被視為PD之證據，即使他/她尚未在基線時進行腦成像。
若一新病變為不確定的，例如因為它的小尺寸，則持續的療法及評鑑將澄清它是否代表真正的新疾病。若重複掃描確認確實有一新病變，則進程應使用初始掃描日期來宣告。
雖然FDG-PET反應評估需要額外的研究，但在評估進程上，有時合併使用FDG-PET掃描以補充CT掃描是合理的(特別是可能「新」疾病)。以FDG-PET成像為基礎之新病變可根據以下演算法來識別：
a. 在基線時之陰性FDG-PET，追蹤時之陽性FDG-PET為基於一新病變之PD的一徵象。
b. 在基線時沒有FDG-PET，且在追蹤時有一陽性FDG-PET：
● 若追蹤時陽性FDG-PET對應於由CT確認之新疾病位點，則此係PD。
● 若追蹤時陽性FDG-PET在CT上並未被確認作為新疾病位點，則需要額外的追蹤CT掃描以判定在該位點是否發生真正的進程(若如此，PD之日期將為初始異常FDG-PET掃描之日期)。「陽性」FDG-PET掃描病變係意謂為一FDG渴望者，在衰減校正影像上具有大於周圍組織兩倍的一吸收。
● 若追蹤時陽性FDG-PET對應於CT上以解剖影像之基礎而言非進程之既存疾病位點，則此並非PD。
臨床試驗中之前列腺癌工作組3 (PCWG3) 準則(Scher et al. 2016)
根據前列腺癌工作組3 (PCWG3)指南，成像為基的腫瘤反應評估將利用胸廓、腹部及骨盆之CT掃描或MRI及骨骼閃爍造影術進行。
包括PCWG3之經修改的RECIST 1.1準則係要被用於軟組織病變評估，且骨骼掃描係要被用於骨骼疾病評估。PCWG3建議對骨骼外疾病遵循RECIST 1.1，但提議下列修改：每個轉移擴散位點要記錄達五個病變(例如，肺臟、肝臟、淋巴結、腎上腺及腦為分開的位點)，以處理疾病異質性且追蹤轉移進程模式。
根據RECIST 1.1，就淋巴結中之可量測疾病，僅報導短軸≥ 1.5 cm之病變變化；就內臟可量測的病變，僅報導最長尺寸≥ 1 cm之病變變化。骨骼疾病將不被視為RECIST v1.1所評估的非目標病變，但將由PCWG3來評估進行性疾病。應使用骨骼掃描來分開記錄骨骼病變。
根據RECIST 1.1準則之軟組織反應類型：
● 完全反應(CR)：腫瘤(目標及非目標兩者)之所有臨床及放射學證據的消失。任何病理學淋巴結(無論是目標或非目標)必須在短軸上減小至＜10 mm。
● 部分反應(PR)：參考基線總和下，目標病變直徑總和有至少30%減小，沒有現存非目標病變之明確進程且沒有新病變出現。
● 穩定的疾病：疾病之穩態。既沒有足夠收縮來符合PR，亦沒有足夠增加來符合進行性疾病，採用研究中最小總和直徑為參考。沒有現存非目標病變之明確進程且沒有新病變出現。
● 進行性疾病：目標病變直徑的總和有至少20%增加，採用研究中最小總和 = 最低點(此包括基線總和，若其為研究中之最小者)為參考。除了20%之相對增加之外，總和亦必須展現至少5 mm之絕對增加。現存非目標病變之明確進程或一或多個新病變的出現亦將構成進行性疾病。
依據PCWG3之骨骼病變反應類型：
● 骨骼掃描將用以評估不存在有新病變(穩定)或惡化(新病變)
● 僅有攝取強度之變化並不構成進程或消退。
● 在不存在其他進程徵象(例如，上述由RECIST 1.1之軟組織的進程)下，沒有新病變係將指示療法的持續。
● 對於新病變及進程，使用2x2規則：在第一個治療後掃描中有至少兩個新病變，在次一個掃描中有至少兩個額外的病變。若在該次一個(確認)掃描中見到至少兩個額外的新病變，則進程日期為第一個治療後掃描的日期。
● 對於在第一個治療後掃描之後的掃描，相對於該第一個治療後掃描有至少兩個新病變且在一後續掃描中確認，係提供一確認的進程狀態(見參考論文中之圖2)。
參考文獻
實例16中所說明之所有參考文獻係在此藉由參照全文併入。
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實施例17：來自首次於人類試驗的PK及AE資料
人類主體如實施例16中所述地投與HMBD-001。
八名主體接受HMBD-001單一療法作為劑量遞增階段的部分(部分A、組1)。在第1天及第15天獲得的完整PK剖析(1
st及3
rd用劑時刻)，且使用Phoenix WinNonLin進行原始資料之分析。PK參數係與此類別之一單株抗體所預期一致(見表6)。平均濃度-時間廓形顯示，HMBD-001的平均濃度大體上隨著劑量位準的增加而增加。在HMBD-001Cmax及AUC0-168值上的增加，大體上與劑量成比例。
表6。HMBD-001在人類主體中之PK參數。
| 患者組群 | 劑量位準(mg) | 數目 | 天數 | Cmax (µg/ml) | AUC (µg/ml.h) | T1/2 (hr) | CI (Ml/h) | ||||
| 平均 | 範圍 | 平均 | 範圍 | 平均 | 範圍 | 平均 | 範圍 | ||||
| 1 | 150 | n=1 | 1 | 33.0 | 33 | 4499 | 4499 | 107.5 | 107.5 | 33.3 | 33.3 |
| 2 | 300 | n=1 | 1 | 98.3 | 98.3 | 11822 | 11822 | 138.7 | 138.7 | 25.4 | 25.4 |
| 3 | 600 | n=3 | 1 | 137.0 | 113.9-177.2 | 29251 | 21390-39163 | 152.9 | 135.6-164.6 | 21.8 | 15.3-28.1 |
| 4 | 1200 | n=3 | 1 | 296.2 | 252.0-364.8 | 77099 | 68413-82059 | 205.3 | 144.8-244.4 | 15.6 | 14.6-17.5 |
| 1 | 300 | n=1 | 15 | 121.8 | 121.8 | 14942 | 14942 | 122.3 | 122.3 | 20.1 | 20.1 |
| 2 | 600 | n=1 | 15 | 281.8 | 281.8 | 64449 | 64449 | 181.8 | 181.8 | 9.3 | 9.3 |
| 3 | 600 | n=3 | 15 | 219.9 | 157.3-307 | 55766 | 32419-77530 | 170.1 | 134-216.3 | 12.2 | 7.7-18.5 |
| 4 | 1200 | n=3 | 15 | 457.4 | 433.2-471.7 | 129115 | 102660-15570 | 194.5 | 159.1-229.9 | 9.7 | 7.7-11.7 |
| 斜體字 = 從2個主體估算，因為一個樣本沒有採用 |
根據不良事件通用術語標準(NCI-CTCAE)來觀察患者在治療出現的不良事件。在4或5級時沒有觀察到AE，且沒有觀察到DLT (如實施例16.6.6中所闡述)。所觀察到的AE有超過85%被分級為輕度或中度(1-2級)。
(無)
現將參照隨附圖式論述例示本發明之原理的實施態樣及實驗。
圖1A 及1B 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-HER3抗體所作的細胞染色。直方圖顯示(1A，1B)抗-HER3抗體殖株10D1及(1B)抗-HER3抗體殖株LJM716所作HEK293細胞(其沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)的染色。
圖2A 及2B 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-HER3抗體所作的細胞染色。直方圖顯示(2A，2B)抗-HER3抗體殖株4-35-B2及(2B)抗-HER3抗體殖株LJM716所作HEK293細胞(其沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)的染色。
圖3A 及3B 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-HER3抗體所作的細胞染色。直方圖顯示(3A，3B)抗-HER3抗體殖株4-35-B4及(3B)抗-HER3抗體殖株LJM716所作HEK293細胞(其沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)的染色。
圖4 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-HER3抗體所作的細胞染色。直方圖顯示由抗-HER3抗體殖株10A6所作的HEK293細胞(其沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)染色。
圖5A 及5B 。圖形顯示抗-HER3抗體殖株10D1與(5A)人類、小鼠、大鼠及食蟹獼猴HER3，以及(5B)人類EGFR及人類HER2之結合的ELISA分析結果。顯示EC
50值。
圖6A 及6B 。圖形顯示抗-HER3抗體殖株4-35-B2與(6A)人類、小鼠、大鼠及食蟹獼猴HER3，以及(6B)人類EGFR及人類HER2之結合的ELISA分析結果。
圖7A 及7B 。圖形顯示抗-HER3抗體殖株4-35-B4與(7A)人類HER3、人類EGFR及人類HER2，以及(7B)人類、小鼠、大鼠及食蟹獼猴HER3結合的ELISA分析結果。
圖8 。代表感應圖譜顯示抗-HER3抗體殖株10D1與人類HER3之結合親和力分析結果。顯示Kon、Koff及K
D。
圖9 。代表感應圖譜顯示抗-HER3抗體殖株4-35-B2與人類HER3之結合親和力分析結果。
圖10 。代表感應圖譜顯示抗-HER3抗體殖株4-35-B4與人類HER3之結合親和力分析結果。
圖11 。圖形顯示以微差掃描螢光分析法進行之抗-HER3抗體殖株10D1之穩定性的分析結果。
圖12 。圖形顯示以粒徑篩析層析法進行之重組表現之抗-HER3抗體殖株10D1的分析結果。
圖13 。影像顯示藉由SDS-PAGE及西方墨點法所進行之抗-HER3抗體殖株10D1表現的分析結果。道：M1 = TaKaRa蛋白質標誌Cat. No. 3452；M2 = GenScript蛋白質標誌Cat. No. M00521；1 = 還原條件；2 = 非還原條件；P = 陽性對照：人類IgG1，κ (Sigma Cat. No. I5154)。就西方墨點法，使用的初級抗體為山羊抗-人類IgG-HRP (GenScript Cat No. A00166)及山羊抗-人類κ-HRP (SouterhnBiotech Cat No. 2060-05)。
圖14A 及14B 。代表感應圖譜及表係顯示不同的抗-HER3抗體殖株之間競爭與HER3結合的分析結果。
圖15 。圖形顯示由ELISA所判定之抗-HER3抗體殖株10D1抑制HER3與HER2之間的交互作用的分析結果。
圖16A 及16B 。表及直方圖係顯示不同的癌細胞株之EGFR蛋白家族成員及其等之配體的基因及蛋白質表現。
圖17 。影像顯示以磷-西方墨點法所進行之抗-HER3抗體殖株10D1處理對於N87及FaDu細胞中之HER3-媒介的訊息傳導效應的分析結果。UN = 未處理的；T = 以抗-HER3抗體殖株10D1處理的。
圖18 。影像及圖形顯示使用磷蛋白質抗體陣列檢定套組所進行之抗-HER3抗體殖株10D1處理對於FaDu細胞中之HER3-媒介的訊息傳導效應的分析結果。未處理的 = 未處理的FaDu細胞；處理的 = 以抗-HER3抗體殖株10D1處理的FaDu細胞。
圖19A 及19B 。圖形顯示由CCK8檢定法判定之所示細胞株在抗-HER3抗體殖株10D1存在下予以培育後，相對於一未處理對照條件(100%)之細胞匯集百分比。(19A)顯示N87細胞獲得的結果，以及(19B)顯示FaDu細胞獲得的結果。
圖20 。圖形顯示一N87細胞株衍生之小鼠胃癌瘤模型中腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗-HER3抗體殖株10D1採雙週方式以每劑500 µg總共10劑來IP投與。對照治療組接受一等體積的PBS (載媒)。
圖21 。圖形顯示一N87細胞株衍生之小鼠胃癌瘤模型中腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗-HER3抗體殖株4-35-B2採每週方式以每劑11 mg/kg總共4劑來IP投與。一對照治療組接受一等量的同型對照抗體(同型)。
圖22 。圖形顯示一SNU16細胞株衍生之小鼠胃癌瘤模型中腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗-HER3抗體殖株10D1採雙週方式以每劑500 µg總共9劑來IP投與。對照治療組接受一等體積的PBS (載媒)。
圖23 。圖形顯示一FaDu細胞株衍生之小鼠頭頸部鱗狀細胞癌瘤模型中腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗-HER3抗體殖株10D1採每週方式以每劑500 µg總共4劑來IP投與。對照治療組接受一等體積的PBS (載媒)或相同劑量的同型對照抗體(同型)。
圖24 。圖形顯示一FaDu細胞株衍生之小鼠頭頸部鱗狀細胞癌瘤模型中腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗-HER3抗體殖株10D1採雙週方式以每劑500 µg總共8劑來IP投與。對照治療組接受一等體積的PBS (載媒)。
圖25 。圖形顯示一OvCAR8細胞株衍生之小鼠卵巢癌瘤模型中腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗-HER3抗體殖株10D1採雙週方式以每劑500 µg總共9劑來IP投與。對照治療組接受一等體積的PBS (載媒)。
圖26 。圖形顯示一HCC-95細胞株衍生之小鼠鱗狀肺細胞癌瘤模型中腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗-HER3抗體殖株10D1採雙週方式以每劑500 µg總共4劑來IP投與。對照治療組接受一等體積的PBS (載媒)。
圖27 。圖形顯示一A549細胞株衍生之小鼠肺腺癌模型中腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗-HER3抗體殖株10D1採雙週方式以每劑500 µg總共10劑來IP投與。對照治療組接受一等體積的PBS (載媒)。
圖28 。圖形顯示一A549細胞株衍生之小鼠肺腺癌模型中腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗-HER3抗體殖株4-35-B2採雙週方式以每劑500 µg總共4劑來IP投與。對照治療組接受一等體積的PBS (載媒)。
圖29 。圖形顯示一ACHN細胞株衍生之小鼠腎臟細胞癌瘤模型中腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗-HER3抗體殖株10D1採雙週方式以每劑500 µg總共7劑來IP投與。對照治療組接受一等體積的PBS (載媒)。
圖30 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-HER3抗體殖株10D1_c89所作的細胞染色。直方圖顯示HEK293細胞(其沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)之染色。
圖31 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-HER3抗體殖株10D1_c90所作的細胞染色。直方圖顯示HEK293細胞(其沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)之染色。
圖32 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-HER3抗體殖株10D1_c91所作的細胞染色。直方圖顯示HEK293細胞(其沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)之染色。
圖33A 及33B 。圖形顯示抗-HER3抗體殖株10D1變異體殖株與人類HER3之結合的ELISA分析結果。(33A)顯示抗-HER3抗體殖株10D1 (稱為10D1P)、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78、10D1_11B (稱為v11b78L)、10D1_c85、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c93、LJM716及hIgG (陰性對照)的結合作用。(33B)顯示相同於33A的資料，但是殖株僅有10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91及LJM716。
圖34A 及34B 。圖形顯示藉由粒徑篩析層析法所進行之重組表現之抗-HER3抗體10D1變異體殖株的分析結果。(34A)顯示抗-HER3抗體殖株10D1_c93、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78、10D1_11B (稱為C78 v11b)、10D1_c85、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91及10D1_c93的結果。(34B)顯示相同於33A的資料，但殖株僅有10D1_c89、10D1_c90及10D1_c91。
圖35A 至35C 。圖形顯示藉由微差掃描螢光分析法所進行之抗-HER3抗體10D1變異體殖株的穩定性分析的結果。(35A)顯示抗-HER3抗體殖株LJM716 (亦稱為易利珠單抗)、10D1 (稱為10D1 (親代))、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77及10D1_c78的結果。(35B)顯示10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_11B (稱為c78_V11B)、10D1_c85及10D1_c85o1的結果。
(35C)顯示 10D1_c90、10D1_c91及10D1_c93的結果。
圖36A 至36M 。代表感應圖譜顯示抗-HER3抗體10D1變異體殖株對人類HER3的親和力分析的結果。顯示Kon、Koff及K
D。(36A)顯示殖株10D1_c89的結果、(36B)顯示殖株10D1_c90的結果、(36C)顯示殖株10D1_c91的結果、(36D)顯示殖株10D1_c11B的結果、(36E)顯示殖株10D1_c85o2的結果、(36F)顯示殖株10D1_c87的結果、(36G)顯示殖株10D1_c93的結果、(36H)顯示殖株10D1_c76的結果、(36I)顯示殖株10D1_c77的結果、(36J)顯示殖株10D1_c78的結果、(36K)顯示殖株10D1_c75的結果、(36L)顯示殖株10D1_c85的結果以及(36M)顯示殖株10D1_c85o1的結果。
圖37 。表總結與抗-HER3抗體10D1變異體殖株有關之安全性及可發展性的性質。
圖38A 及38B 。CH2區中包含GASDALIE及LCKC取代的Fc-修飾的抗-HER3抗體殖株10D1之生物層干涉術(38A)及熱穩定性(38B)分析。(38A) BLI顯示一代表感應圖譜，其顯示出Fc-修飾之抗-HER3抗體殖株10D1對FcγRIIIa之結合親和力的分析結果。顯示Kon、Koff及K
D。
圖39A 及39B 。代表感應圖譜顯示(39A)非-Fc-修飾的抗-HER3抗體殖株10D1及(39B) CH2區中包含GASD取代的Fc-修飾的抗-HER3抗體殖株10D1之結合親和力分析的結果。顯示Kon、Koff及K
D。
圖40 。圖形顯示藉由微差掃描螢光分析法所進行之抗-HER3抗體殖株10D1 GASD變異體的穩定性的分析結果。
圖41A 及41B 。表顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB (GASDALIE-LCKC變異體)之小鼠及人類Fc受體的結合親和力，與沉默變異體N297Q、同功異型體變異體及可購得的抗體比較。ND = K
D由於結合親和力低而未判定。
圖42A 及42B 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-HER3抗體所作的細胞染色。直方圖顯示(42A)抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及(42B)抗-HER3抗體殖株10D1及LJM-716染色的HEK293細胞(沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)之染色。
圖43 。圖形顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA與人類EGFR (HER1)及人類HER2的結合之ELISA分析結果。顯示EC
50值。
圖44 。直方圖顯示流式細胞分析術所判定由抗-HER3及抗-HER4抗體所作的細胞染色。直方圖顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA、抗-HER3抗體LJM-716及MM-121及市售抗-HER4抗體所作的HEK293 HER4過度表現細胞染色。
圖45 。圖形顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA與人類、小鼠、大鼠及食蟹獼猴HER3的結合之ELISA分析結果。顯示EC
50值。
圖46A 及46B 。代表感應圖譜顯示抗-HER3抗體殖株(46A) 10D1F.FcA及(46B) 10D1F.FcB與人類HER3之結合親和力分析的結果。顯示Kon、Koff及K
D。
圖47A 及47B 。圖形顯示以微差掃描螢光分析法進行之抗-HER3抗體殖株(47A) 10D1F.FcA及(47B) 10D1F.FcB的穩定性分析的結果。
圖48A 及48B 。圖形顯示以粒徑篩析層析法進行之抗-HER3抗體殖株(48A) 10D1F.FcA及(48B) 10D1F.FcB的純度分析結果。
圖49A 及49B 。代表感應圖譜及表係顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA與抗-HER3抗體M-05-74及M-08-11之間競爭對HER3之結合的分析結果。
圖50 。圖形及表係顯示抗-HER3抗體殖株10D1於小鼠之藥物動力學分析的結果。
圖51A 至51F 。圖形顯示抗-HER3抗體殖株10D1治療對於小鼠的血液細胞計數(51A)、電解質指標(51B)及肝毒性、腎毒性及胰毒性指數(51C-51F)的效應。左邊長條代表載媒對照，右邊長條代表10D1處理。虛線指示查爾斯河(Charles River)參考範圍的終點。肝毒性、腎毒性及胰毒性指數包括丙胺酸轉胺酶(ALT)、天冬胺酸轉胺酶(AST)、血尿素氮(BUN)、肌酸酐(CREA)、鹼性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、鈣(CAL)、總膽紅素(BIL)、總蛋白質(TPR)及白蛋白(ALB)。
圖52 。圖形及表顯示ELISA判定由抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA以及抗體MM-121、LJM-716及Roche M05所抑制HER2與HER3之間的交互作用之分析結果。
圖53 。圖形及表顯示ELISA判定由抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA以及抗體MM-121及LJM-716所抑制EGFR與HER3之間的交互作用之分析結果。
圖54 。圖形及表顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA (10D1F.A)、10D1F.FcB (10D1F.B)、10D1F-hIgG1(N297Q)及抗-HER3抗體LJM-716及塞里班土單抗(MM-121)誘發抗體依賴型細胞媒介細胞毒性(ADCC)之能力分析結果。顯示EC
50值。
圖55A 至55C 。影像顯示以磷-西方墨點法進行之抗-HER3抗體處理對於(55A) N87、(55B) FaDu及(55C) OvCar8細胞內HER3-媒介的訊息傳導效應的分析結果。
圖56A 及56B 。圖形及表顯示抗-HER3抗體殖株(56A) 10D1F.FcA及(56B) 10D1F.FcB於小鼠之藥物動力學分析的結果。參數：最大濃度(
C max)、T
max、AUC (0-336hr)、AUC (0-無限大)、半生期(t
½)、清除率(CL)、穩態分佈體積(V
ss)。
圖57A 至57D 。圖形及表顯示(57A) 10 mg/kg、(57B) 25 mg/kg、(57C) 100 mg/kg及(57D) 250 mg/kg的抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB於大鼠之藥物動力學分析的結果。參數：最大濃度(
C max)、T
max、AUC (0-336hr)、AUC (0-無限大)、半生期(t
½)、清除率(CL)、穩態分佈體積(V
ss)。
圖58A 至58F 。圖形顯示200 ug (∼10 mg/kg)、500 ug (∼25 mg/kg)、2 mg (∼100 mg/kg)或5 mg (∼250 mg/kg)之抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA或10D1F.FcB治療對於(58A、58B)紅血球細胞指數、(58C)白血球細胞指數、(58D)肝毒性、(58E)腎臟及胰臟指數及(58F)電解質指標的效應。
圖59A 至59D 。圖形顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA處理對於使用N87細胞(胃癌)、HCC95細胞(肺癌)、FaDu細胞(頭頸部癌)、SNU-16細胞(胃癌)、A549細胞(肺癌)、OvCAR8細胞(卵巢癌)、ACHN細胞(腎癌)及HT29細胞(結腸直腸癌)之活體外小鼠癌症模型中腫瘤抑制百分比，其係與(59A & 59B)抗-HER3抗體塞里班土單抗及LJM-716及(59C & 59D) EGFR家族療法西妥昔單抗、曲妥珠單抗及帕妥珠單抗作比較。
圖60 。圖形顯示A549細胞株衍生的小鼠肺腺癌模型，在兩週一次以所指示濃度之抗體治療歷時六週(n=6，載媒對照組n=8)後之腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗體投與係以沿著x軸的三角形指示。
圖61 。圖形顯示一FaDu細胞株衍生的小鼠頭頸部鱗狀細胞癌瘤模型，在每週一次以所指示濃度之抗體治療歷時六週(n=6)後之腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗體投與係以沿著x軸的三角形指示。
圖62 。圖形顯示一OvCAR8細胞株衍生的小鼠卵巢癌瘤模型，在每週一次以所指示濃度之抗體治療歷時六週(n=6)後之腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗體投與係以沿著x軸的三角形指示。
圖63A 至63D 。箱形圖顯示活體外磷酸化檢定法中用10D1F.FcA、LJM-716或塞里班土單抗處理之癌細胞株由基因組富集分析之途徑活化的分析結果。63A顯示N87細胞所得結果，63B顯示A549細胞所得結果，63C顯示OvCar8細胞所得結果，以及63D顯示FaDu細胞所得結果。
圖64 。影像顯示於所指示之時間點，抗-HER3抗體處理對於A549細胞內HER3-媒介之訊息傳導效應由磷-西方墨點法進行之分析結果。
圖65 。圖形顯示如PathHunter帕妥珠單抗生物檢定法所判定、由10D1F.FcA或帕妥珠單抗所抑制HER2:HER3交互作用的分析結果。顯示IC50 (M)值。
圖66A 至66C 。直方圖顯示(66A) BCPAP (66B) BHT101及(66C) SW1736細胞的EGFR、HER2及HER3表現的分析結果。1 = 未染色的細胞，2 = 同型對照，3 = 西妥昔單抗，4 = 曲妥珠單抗，及5 = 10D1F.FcA。
圖67A 至67C 。圖形顯示不同的抗-ErbB抗體活體外抑制BRAF
V600E突變甲狀腺癌細胞株之增殖能力的分析結果。67A顯示BHT101細胞獲得的結果，687顯示BCPAP細胞獲得的結果，以及67C顯示SW1736細胞獲得的結果。
圖68A 至68C 。圖形顯示10D1F.FcA單獨或與威羅菲尼(vemurafenib)組合時活體外抑制BRAF
V600E突變甲狀腺癌細胞株之增殖之能力的分析結果。68A顯示BHT101細胞所得結果，68B顯示SW1736細胞所得結果，以及68C顯示BCPAP細胞所得結果。
圖69A 至69C 。表顯示投與10 mg/kg、25 mg/kg、100 mg/kg或250 mg/kg之10D1F.FcA或一等體積的PBS之後，BALB/c小鼠的代表血液剖析。69A顯示紅血球細胞隔間的分析結果，69B顯示白血球細胞隔間的分析結果，以及69C顯示肝臟、腎臟及胰臟功能關聯值、及電解質位準的分析結果。RBC = 紅血球細胞，MVC = 平均紅血球體積，MCH = 平均紅血球血紅素，MCHC = 平均紅血球血紅素濃度，WBC = 白血球細胞，ALB = 白蛋白，ALT = 丙胺酸轉胺酶，ALP = 鹼性磷酸酶，CREA = 肌酸酐，BUN = 血尿素氮，GLU = 升糖素，AMY = 澱粉酶，NA = 鈉，K = 鉀，P = 磷及CA = 鈣。
圖70A 至70C 。表顯示在投與250 mg/kg之10D1F.FcA或一等體積的PBS之後，SD大鼠於所指示的時間點的代表血液剖析。70A顯示紅血球細胞隔間的分析結果，70B顯示白血球細胞隔間的分析結果，以及70C顯示肝臟、腎臟及胰臟功能關聯值、及電解質位準的分析結果。RBC = 紅血球細胞，MVC = 平均紅血球體積，MCH = 平均紅血球血紅素，MCHC = 平均紅血球血紅素濃度，WBC = 白血球細胞，ALB = 白蛋白，ALP = 鹼性磷酸酶，CREA = 肌酸酐，BUN = 血尿素氮，GLU = 升糖素，AMY = 澱粉酶，NA = 鈉，K = 鉀，P = 磷及CA = 鈣。
圖71 。影像顯示10D1F.FcA治療對於活體內於FaDu或OvCar8細胞衍生腫瘤的細胞中HER3-媒介之訊息傳導效應由磷-西方墨點法所判定的分析結果。
圖72 。箱形圖顯示所指示之細胞株內化不同的抗-ErbB抗體的分析結果。
圖73A 及73B 。直方圖及表顯示流式細胞分析術所判定之所示細胞株在不同的時間點內化10D1F.FcA或曲妥珠單抗的分析結果。73B顯示從73A所示之直方圖來判定的中位數螢光強度及PE-陽性細胞的百分比。
圖74 。圖形顯示一N87細胞株所衍生之小鼠胃癌模型，在兩週一次以所示濃度的所示抗-ErbB抗體治療歷時六週(n=6)後之腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗體投與係以沿著x軸的三角形指示。
圖75A 及75B 。影像顯示使用10D1F.FcA之惡性及正常人類組織的免疫組織化學染色。75A及75B係顯示不同組織的染色。
圖76 。影像顯示在所示的放大倍數下，A549腫瘤異種移植冷凍切片由10D1F或一兔多株抗-HER3抗體所作之免疫組織化學染色。顯示只有二級對照的染色。
圖77A 及77B 。長條圖顯示在IP投與25 mg/kg給小鼠後抗體達到C
max之血清濃度下、所指示之抗-ErbB抗體活體外抑制所指示之癌細胞株之增殖能力的分析結果。77A及77B顯示使用不同的細胞株所獲得的結果。
圖78A 至78F 。代表感應圖譜顯示在人類NRG1 (78A、78C、78E)不存在之情況下以及在人類NRG1 (78B、78D、78F)存在之情況下，抗-HER3抗體10D1F.A (78A、78B)、MM-121 (78C、78D)及LJM-716 (78E、78F)與人類HER3之結合親和力分析的結果。顯示Kon、Koff及K
D。
圖79 。圖形顯示包含CLU-NRG1融合之卵巢癌的一患者衍生異種移植模型中、在兩週一次以25 mg/kg之10D1F或同型配對對照抗體(每治療組n=10)治療後之腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗體投與係以沿著x軸的三角形指示。
圖80A 至80E 。圖形顯示在40°C下儲存1個月之後不同液體調配物中之抗體穩定性：(80A)蛋白質濃度，(80B) pH，(80C)藉由HPLC-SEC之聚集形成，(80D)電荷變異體中之改變，(80E)抗原結合能力。
圖81A 及81B 。表及圖形顯示不同液體調配物中之高濃度抗體的穩定性：(81A)可見聚集體或粒子之目視檢查，(81B)HPLC-SEC之可溶性聚集形成。
圖82 。圖形顯示在不同液體調配物中抗體的凍-融穩定性。
圖83A 至83D 。圖形及表顯示在藉由(83A)凍/融、(83B)注射器及針抽吸、(83C)攪拌、(83D)所有測試的壓力測試之後，藉由CE-SDS之抗體調配物的相對純度。「降低的」係指輕鏈、非醣化重鏈及重鏈的組合相對量。「非降低的」係指完整IgG之相對量。
圖84A 至84E 。圖形顯示在十二週內IgG抗體調配物1、4及5的(84A)單體純度、(84B)聚集及(84C)片段。圖形顯示IgG抗體調配物1、4及5，於(84D) +5°C及(84E) +25°C下之單體純度外插至29週(~95%單體IgG純度)。
圖85A 至85C 。圖形顯示藉由IE-HPLC量測之調配物1、4及5在+5°C及+25°C下培育12週之(85A)主要、(85B)酸性及(85C)鹼性同功異型體的相對量。
圖86A 及86B 。圖形顯示在+5°C及+25°C下歷時12週之調配物1、4及5之(86A)非還原及(86B)還原樣本之CD-SDS資料。
圖87A 及87B 。(87A)圖形顯示於20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖(240 mM)、0.02% (w/v)聚山梨醇酯80、pH 5.8中之抗原結合分子在8個凍-融循環之後的單體純度，如藉由粒徑篩析層析法(SEC)所量測。(87B) 圖形顯示以200 mg/mL調配之抗原結合分子不存在聚集，如SEC所量測。
圖88A 及88B 。表顯示(88A)儲存在≤ -65°C下之藥物物質及(88B)儲存於-20°C下之藥物產品的穩定性結果。
圖89A 至89D 。圖形顯示NCr裸鼠在用25 mg/kg之所示的抗體治療之後，(89A) N87、(89B) A549、(89C) FaDu及(89D) OvCAR8細胞株衍生之異種移植模型中腫瘤體積分析結果。抗體投與係以沿著x軸的三角形指示。
圖90 。圖形顯示A549模型中2、5及10 mg/kg HMBD-001之劑量反應。抗體投與係以沿著x軸的三角形指示。
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Claims (45)
- 一種組成物，其包含能夠對HER3結合之一抗原結合分子。
- 如請求項1之組成物，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區： 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區： 具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-CDR3。
- 如請求項1或請求項2之組成物，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一VH區： 具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：48的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一VL區： 具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
- 如請求項1至3中任一項之組成物，其中該組成物包含： (i) 2 mM至200 mM組胺酸、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或 (ii) 2 mM至200 mM組胺酸、2%至20% (w/v)蔗糖、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0；或 (iii) 2 mM至200 mM組胺酸、1 mM至250 mM氯化鈉、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或 (iv) 2 mM至200 mM組胺酸、1 mM至250 mM氯化鈉、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0；或 (v) 2 mM至200 mM組胺酸、1 mM至250 mM精胺酸、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 4.0至7.0；或 (vi) 2 mM至200 mM組胺酸、1 mM至250 mM精胺酸、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0；或 (vii) 2 mM至200 mM乙酸鹽、1 mM至250 mM氯化鈉、0.001%至0.1% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 4.0至7.0。
- 如請求項1至4中任一項之組成物，其中該組成物包含： (i) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.8；或 (ii) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.1；或 (iii) 20 mM組胺酸、4% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.8；或 (iv) 20 mM組胺酸、2% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.3；或 (v) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 6.1；或 (vi) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖、0.02% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 5.8；或 (vii) 20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 5.5；或 (viii) 20 mM組胺酸、150 mM氯化鈉；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 6.5；或 (ix) 20 mM乙酸鹽、150 mM氯化鈉；0.05% (w/v)聚山梨醇酯-20，及具有一pH 5.5。
- 如請求項1至5中任一項之組成物，其中該組成物包含20 mM組胺酸、8% (w/v)蔗糖；0.02% (w/v)聚山梨醇酯-80，及具有一pH 5.8。
- 如請求項1至6中任一項之組成物，其中該組成物包含至少1.2 mg/mL之該抗原結合分子。
- 如請求項1至7中任一項之組成物，其中該組成物包含高達50 mg/mL之該抗原結合分子。
- 如請求項1至8中任一項之組成物，其中該抗原結合分子包含： 一VH區，其包含與SEQ ID NO：36的胺基酸序列有至少70%之序列同一性的一胺基酸序列；及 一VL區，其包含與SEQ ID NO：83的胺基酸序列有至少70%之序列同一性的一胺基酸序列。
- 如請求項1至9中任一項之組成物，其中該抗原結合分子包含： 併含有下列框架區(FR)之一VH區： 具有SEQ ID NO：53的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：59的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：66的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：71的胺基酸序列之HC-FR4。
- 如請求項1至10中任一項之組成物，其中該抗原結合分子包含： 併含有下列框架區(FR)之一VL區： 具有SEQ ID NO：104的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：110的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：120的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：125的胺基酸序列之LC-FR4。
- 如請求項1至11中任一項之組成物，其中該抗原結合分子包含一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：171的胺基酸序列。
- 如請求項1至12中任一項之組成物，其中該抗原結合分子包含一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：177的胺基酸序列。
- 如請求項1至13中任一項之組成物，其供使用為一藥劑。
- 如請求項1至13中任一項之組成物，其供使用於治療或預防一主體中之一癌症的一方法中。
- 一種如請求項1至13中任一項之組成物於製造藥劑之用途，該藥劑供用於治療或預防一主體中之一癌症。
- 一種治療或預防一主體中之一癌症的方法，該方法包含投與一治療或預防有效量之如請求項1至13中任一項之組成物。
- 如請求項15之供使用之組成物、如請求項16之用途或如請求項17之方法，其中該癌症包含表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2及/或一HER3配體的細胞。
- 如請求項15至18中任一項之供使用之組成物、用途或方法，其中該癌症包含具有導致一HER3配體之增強表現的一突變的細胞。
- 如請求項15至19中任一項之供使用之組成物、用途或方法，其中該癌症包含具有一NRG基因融合體的細胞。
- 如請求項20之供使用之組成物、用途或方法，其中該NRG基因融合體係選自於CLU-NRG1、CD74-NRG1、DOC4-NRG1、SLC3A2-NRG1、RBPMS-NRG1、WRN-NRG1、SDC4-NRG1、RAB2IL1-NRG1、VAMP2-NRG1、KIF13B-NRG1、THAP7-NRG1、SMAD4-NRG1、MDK-NRG1、TNC-NRG1、DIP2B-NRG1、MRPL13-NRG1、PARP8-NRG1、ROCK1-NRG1、DPYSL2-NRG1、ATP1B1-NRG1、CDH6-NRG1、APP-NRG1、AKAP13-NRG1、THBS1-NRG1、FOXA1-NRG1、PDE7A- NRG1、RAB3IL1-NRG1、CDK1-NRG1、BMPRIB-NRG1、TNFRSF10B-NRG1、MCPH1-NRG1以及SLC12A2-NRG2。
- 如請求項15至21中任一項之供使用之組成物、用途或方法，其中該癌症衍生自肺臟、乳房、頭、頸、腎臟、卵巢、子宮頸、胰臟、胃、肝臟、食道、前列腺、子宫、膽囊、結腸、直腸、膀胱、軟組織或鼻咽。
- 如請求項15至22中一者之供使用之組成物、用途或方法，其中該癌症係選自於肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、侵襲性黏液性肺腺癌、肺鱗狀細胞癌瘤、乳癌、三重陰性乳癌、乳癌瘤、乳侵襲性癌瘤、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤、腎臟癌、腎臟透明細胞癌瘤、卵巢癌、卵巢漿液性囊腺癌、胰臟癌、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、去勢抗性前列腺癌、子宮內膜癌、子宮癌肉瘤、膽囊癌、膽管癌、結腸直腸癌、RAS野生型結腸直腸癌、胃癌(gastric cancer)、肝細胞癌瘤(HCC)、食道癌(oesophageal cancer)、膀胱癌、膀胱尿路上皮癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、肉瘤、軟組織肉瘤、神經內分泌腫瘤及鼻咽之神經內分泌腫瘤。
- 如請求項15至23中任一項之供使用之組成物、用途或方法，其中該方法包含偵測該主體中表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2、一HER3配體及/或一NRG基因融合體之癌細胞的一步驟。
- 如請求項24之供使用之組成物、用途或方法，其中當偵測到表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2、一HER3配體及/或一NRG基因融合體之癌細胞時，該主體被選擇來以該組成物治療。
- 如請求項15至25中任一項之供使用之組成物、用途或方法，其中該組成物係組合下列中之一者或多者來投與：一HER2-靶定療法、一EGFR-靶定療法，及/或一雄性素受體-靶定療法。
- 如請求項15至26中任一項之供使用之組成物、用途或方法，其中該組成物係與西妥昔單抗(cetuximab)、恩雜魯胺(enzalutamide)及/或曲妥珠單抗(trastuzumab)中之一者或多者組合來投與。
- 一種能夠與HER3結合之抗原結合分子，供使用於治療或預防一主體中之一癌症的一方法中，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區： 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區： 具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-CDR3。
- 一種能夠與HER3結合之一抗原結合分子於製造一藥劑之用途，該藥劑用於治療或預防一主體中之一癌症，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區： 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區： 具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-CDR3。
- 一種治療或預防一主體中之一癌症的方法，其中該方法包含：對該主體投與一治療或預防有效量之能夠與HER3結合的一抗原結合分子，且其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一重鏈可變(VH)區： 具有SEQ ID NO：43的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：46的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：51的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一輕鏈可變(VL)區： 具有SEQ ID NO：91的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：94的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：99的胺基酸序列之LC-CDR3。
- 如請求項28之供使用之抗原結合分子、如請求項29之用途或如請求項30之方法，其中該抗原結合分子包含： (i)併含有下列CDR之一VH區： 具有SEQ ID NO：41的胺基酸序列之HC-CDR1 具有SEQ ID NO：45的胺基酸序列之HC-CDR2 具有SEQ ID NO：48的胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)併含有下列CDR之一VL區： 具有SEQ ID NO：88的胺基酸序列之LC-CDR1 具有SEQ ID NO：92的胺基酸序列之LC-CDR2 具有SEQ ID NO：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
- 如請求項28至31中任一項之供使用之抗原結合分子、用途或方法，其中該抗原結合分子包含： 併含有下列框架區(FR)之一VH區： 具有SEQ ID NO：53的胺基酸序列之HC-FR1 具有SEQ ID NO：59的胺基酸序列之HC-FR2 具有SEQ ID NO：66的胺基酸序列之HC-FR3 具有SEQ ID NO：71的胺基酸序列之HC-FR4；及/或 其中該抗原結合分子包含： 併含有下列框架區(FR)之一VL區： 具有SEQ ID NO：104的胺基酸序列之LC-FR1 具有SEQ ID NO：110的胺基酸序列之LC-FR2 具有SEQ ID NO：120的胺基酸序列之LC-FR3 具有SEQ ID NO：125的胺基酸序列之LC-FR4。
- 如請求項28至32中任一項之供使用之抗原結合分子、用途或方法，其中該抗原結合分子包含一重鏈，該重鏈包含SEQ ID NO：171的胺基酸序列，及/或其中該抗原結合分子包含一輕鏈，該輕鏈包含SEQ ID NO：177的胺基酸序列。
- 如請求項28至33中任一項之供使用之抗原結合分子、用途或方法，其中： (i)該癌症包含表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2及/或一HER3配體的細胞； (ii)該癌症包含具有導致一HER3配體之增高表現之一突變的細胞；及/或 (iii)其中該癌症包含具有一NRG基因融合體的細胞，任擇地其中該NRG基因融合體係選自於CLU-NRG1、CD74-NRG1、DOC4-NRG1、SLC3A2-NRG1、RBPMS-NRG1、WRN-NRG1、SDC4-NRG1、RAB2IL1-NRG1、VAMP2-NRG1、KIF13B-NRG1、THAP7-NRG1、SMAD4-NRG1、MDK-NRG1、TNC-NRG1、DIP2B-NRG1、MRPL13-NRG1、PARP8-NRG1、ROCK1-NRG1、DPYSL2-NRG1、ATP1B1-NRG1、CDH6-NRG1、APP-NRG1、AKAP13-NRG1、THBS1-NRG1、FOXA1-NRG1、PDE7A- NRG1、RAB3IL1-NRG1、CDK1-NRG1、BMPRIB-NRG1、TNFRSF10B-NRG1、MCPH1-NRG1以及SLC12A2-NRG2。
- 如請求項28至34中任一項之供使用之抗原結合分子、用途或方法，其中該癌症衍生自肺臟、乳房、頭、頸、腎臟、卵巢、子宮頸、胰臟、胃、肝臟、食道、前列腺、子宫、膽囊、結腸、直腸、膀胱、軟組織或鼻咽。 任擇地其中，該癌症係選自於肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、侵襲性黏液性肺腺癌、肺鱗狀細胞癌瘤、乳癌、三重陰性乳癌、乳癌瘤、乳侵襲性癌瘤、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌瘤、腎臟癌、腎臟透明細胞癌瘤、卵巢癌、卵巢漿液性囊腺癌、胰臟癌、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、前列腺癌、前列腺腺癌、去勢抗性前列腺癌、子宮內膜癌、子宮癌肉瘤、膽囊癌、膽管癌、結腸直腸癌、RAS野生型結腸直腸癌、胃癌(gastric cancer)、肝細胞癌瘤(HCC)、食道癌(oesophageal cancer)、膀胱癌、膀胱尿路上皮癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、肉瘤、軟組織肉瘤、神經內分泌腫瘤及鼻咽之神經內分泌腫瘤。
- 如請求項28至35中任一項之供使用之抗原結合分子、用途或方法，其中該方法包含偵測表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2、一HER3配體及/或一NRG基因融合體之癌細胞的一步驟；任擇地其中，當偵測到表現HER3、EGFR、HER2、HER4、NRG1、NRG2、一HER3配體及/或一NRG基因融合體之癌細胞時，該主體被選擇來以該抗原結合分子治療。
- 如請求項28至36中任一項之供使用之抗原結合分子、用途或方法，其中該抗原結合分子係組合下列中之一者或多者來投與：一HER2-靶定療法、一EGFR-靶定療法，及/或一雄性素受體-靶定療法。
- 如請求項28至37中任一項之供使用之抗原結合分子、用途或方法，其中該抗原結合分子係與西妥昔單抗(cetuximab)、恩雜魯胺(enzalutamide)及/或曲妥珠單抗(trastuzumab)中之一者或多者組合來投與。
- 如請求項14至38中任一項之供使用之組成物或抗原結合分子、用途或方法，其中該組成物或抗原結合分子係每7天投與一次、每14天投與一次、每21天投與一次、或每28天投與一次。
- 如請求項14至39中任一項之供使用之組成物或抗原結合分子、用途或方法，其中該組成物或抗原結合分子係每28天投與四次、每28天投與兩次、或每21天投與三次。
- 如請求項14至40中任一項之供使用之組成物或抗原結合分子、用途或方法，其中該組成物或抗原結合分子係投與1、2、3、4、5、6或更多個21或28天週期。
- 如請求項14至41中任一項之供使用之組成物或抗原結合分子、用途或方法，其中該治療包含每投與及/或每21或28天週期投與150 mg至3000 mg之抗原結合分子。
- 如請求項14至42中任一項之供使用之組成物或抗原結合分子、用途或方法，其中該治療包含每投與係投與1500-2500 mg之抗原結合分子。
- 如請求項14至43中任一項之供使用之組成物或抗原結合分子、用途或方法，其中該治療包含每21或28天投與總共至少600 mg、至少900 mg、至少1200 mg、至少1500 mg、至少1800 mg、至少2100 mg、至少2400 mg、至少2700 mg、至少3000 mg、至少3300 mg、至少3600 mg、至少3900 mg、至少4200 mg、至少4500 mg、至少4800 mg、至少5100 mg、至少5400 mg、至少5700 mg、至少6000 mg、至少6300 mg、至少6600 mg、至少6900 mg、至少7200 mg、至少7500 mg、至少7800 mg、至少8100 mg、至少8400 mg、至少8700 mg、至少9000 mg、至少9300 mg、至少9600 mg、至少9900 mg、至少10200 mg、至少10500 mg、至少10800 mg、至少11100 mg、至少11400 mg、至少11700 mg或至少12000 mg之抗原結合分子。
- 如請求項14至44中任一項之供使用之組成物或抗原結合分子、用途或方法，其中該治療包含每7天投與1800-3000 mg之抗原結合分子，任擇地經歷至少21或至少28天。
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