CN114410776B - 一种nrg1融合基因的检测方法及试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种基于NGS测序的NRG1融合基因的检测方法,NGS设计DNA探针库可以一次性全面覆盖包括罕见融合伴侣、罕见断裂位点在内的NRG1基因融合。本方法能够在低样本量的情况下,准确地检测出NRG1融合基因的发生,不仅能够检测得到已报道的融合形式,还能检测得到未报道的新的融合。
Description
技术领域
本发明涉及一种NRG1融合基因的检测方法、试剂盒以及探针库,属于基因测序技术领域。
背景技术
NRG1基因编码的神经调节蛋白1是表皮生长因子配体家族的一员,结构主要包括:胞内区、跨膜区、近膜序列、胞外的EGF样结构域和免疫球蛋白样结构域。EGF样受体结合域是ERBB受体酪氨酸激酶活化的必要条件,位于胞外结构域的近膜区。NRG1基因与其他基因发生融合突变时,会导致NRG1融合蛋白在细胞表面过度表达积累,与细胞表面的ERBB3或ERBB4结合,而后ERBB3与ERBB2可形成异二聚体,进而激活下游的MAPK及mTOR等信号通路,导致细胞增殖分化,从而促进肿瘤的形成和发生。NRG1基因的融合突变尽管发生率较低(~0.2%),但在多种癌种中均被检出肺癌、胰腺癌、胆管癌、结直肠癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、肾细胞癌和甲状腺癌等,尤其在肺浸润性粘液腺癌中发生率可达10%-30%左右,胰腺导管腺癌中发生率约为6%。NRG1基因的融合伴侣异质性较大,CD74是最常见的伴侣(29%),其次是ATP1B1(10%)、SDC4(7%)和RBPMS(5%),其他的伴侣基因也在各个不同的癌种中被报道过。携带有NRG1融合的患者通常对标准化疗、化疗免疫疗法或新型免疫检查点抑制剂(如PD-1/L1单抗等)的治疗反应不佳。目前尚没有获批的NRG1靶向药物,根据其致癌原理目前主要有两大类的潜在治疗方案,一类是针对HER2的小分子TKI药物,比如阿法替尼、拉帕替尼、来那替尼,tarloxotinib(NCT03805841)等。阿法替尼对于NRG1融合的癌症患者获益情况在肺癌、卵巢癌及胆管癌患者中均有报道,且前瞻性的TAPUR(NCT02693535)和DRUP(NCT02925234)试验正在对阿法替尼在NRG1基因融合阳性肿瘤中的获益进行研究。另一种是针对HER2或ERBB3的大分子单抗类药物,抗ERBB3抗体lumretuzumab、patritumab(U3-1287;AMG-888),双特异性人源化单克隆抗体Zenocuzumab(MCLA-128,NCT02912949)及GSK2849330等都在进行相关的临床实验。此外NRG1融合突变可能是其它靶向治疗(如EGFR,ALK及HER2抑制剂等)耐药原因之一。
NRG1基因的融合伴侣多样,目前已报道的融合伴侣基因为CD74、ATP1B1、SDC4、SLC3A2、TNC和PARP8等基因,且断裂位点分布于零散。目前常用的融合检测方法为免疫组织化学(IHC)和荧光原位杂交(FISH)。FISH检测根据荧光探针颜色位置进行判定,仅能检测已知的融合类型,对于染色体内微小倒位常规难以检出。IHC通过检测ERBB3的磷酸化能够筛选NRG1融合阳性患者,但结果依赖于高质量的抗体,评判主观性强,容易出现假阳性或假阴性。这两种传统的检测技术均不能检测罕见的融合类型以及明确断裂位点。目前临床常用的传统检测技术FISH及IHC很可能出现漏检,此外,传统FISH和IHC检测融合,无法判别融合伴侣基因及融合形式。
发明内容
本发明提供了一种基于NGS测序的NRG1融合基因的检测方法,本方法能够在低样本量的情况下,准确地检测出NRG1融合基因的发生,不仅能够检测得到已报道的融合形式,还能检测得到未报道的新的融合。
一种NRG1融合基因的检测方法,包括:
步骤1,获得待检测样本的DNA;
步骤2,对待测样本的DNA与探针进行杂交,并进行捕获,进行NGS测序后,下机数据比对至参考基因组数据进行分析,获得NRG1融合基因的信息;
其中的探针具有如SEQ ID 1-149任意一条中所示的核苷酸序列。
所述的待测样本来源于细胞、组织或体液样本。
所述的待测样本的DNA是经直接提取得到的,或者经提取mRNA后合成得到的cDNA。
所述的待测样本的DNA经过了片段化处理,并具有150-600bp的长度。
所述的探针是指全部由SEQ ID 1-149所示的核苷酸序列的探针组成。
所述的检测方法是用于非治疗与诊断用途。
一种NRG1融合基因的检测试剂盒,其中包括有如SEQ ID 1-149任意一条中所示的核苷酸序列的探针。
所述的试剂盒中还包括:DNA提取试剂,用于对待测样本的DNA进行提取。
所述的试剂盒中还包括:RNA提取试剂,用于对待测样本的mRNA进行提取;反转录试剂盒,用于对提取得到的mRNA反转录为cDNA。
所述的探针上经过了生物素修饰。
所述的试剂盒中还包括:经过了链霉亲和素修饰的磁珠,用于对探针进行杂交捕获。
有益效果
利用NGS检测融合的优势在于,NGS检测起始量低,可以进行不同样本类型的检测,除了组织样本外,同时可以利用血浆等体液样本进行融合检测,其检测灵敏度也远高于目前传统检测技术。且NGS技术不仅能够检测出目前报道的各种NRG1基因融合形式,还能够检出未报道的融合类型,明确伴侣基因,助力这类肿瘤患者的精准诊疗。
附图说明
图1为本发明技术方案的示例性工艺流程图,其中富集得到目标基因群,并用于基于下一代测序技术的基因融合检测。
图2为本发明的外显子临近内含子探针设计示意图。
图3是内含子区域探针设计与传统探针设计测序结果对比图。
图4是外显子临近内含子设计与传统探针设计测序结果对比图。
图5 NRG1融合伴侣分布情况
图6 NRG1基因融合断点分布
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
在本文中所使用的术语“DNA”为脱氧核糖核酸(英文:Deoxyribonucleicacid,缩写为DNA)是一种由脱氧核糖核苷酸组成的双链分子。可组成遗传指令,引导生物发育与生命机能运行,其碱基排列顺序构成了遗传信息,所以在遗传病的诊断中具有重要的作用。
在本文中所使用的术语“高通量测序技术”指的是第二代高通量测序技术及之后发展的更高通量的测序方法。第二代高通量测序平台包括但不限于Illumina-Solexa(Miseq、Hiseq-2000、Hiseq-2500、Hiseq X ten等)、ABI-Solid和Roche-454测序平台等。随着测序技术的不断发展,本领域技术人员能够理解的是还可以采用其他方法的测序方法和装置进行本检测。根据本发明的具体示例,可以将根据本发明实施例的核酸标签用于Illumina-Solexa、ABI-Solid和Roche-454测序平台等的至少一种进行测序。高通量测序技术,例如Miseq测序技术具有以下优势:(1)高灵敏度:高通量测序,例如Miseq的测序通量大,目前一个实验流程下来可以产生最多15G碱基数据,高的数据通量可以再测序序列数确定的情况下,使得每条序列获得高的测序深度,所以可以检测到含量更低的突变,同时因其测序深度高,其测序结果也更为可靠。(2)高通量,低成本:利用根据本发明实施例的标签序列,通过一次测序可以检测上万份样本,从而大大降低了成本。
本发明中的“突变”、“核酸变异”、“基因变异”可通用,本发明中的“SNP”(SNV)、“CNV”、“插入缺失”(indel)和“结构变异”(SV)同通常定义,但本发明中对各种变异的大小不作特别限定,这样这几种变异之间有的有交叉,比如当插入/缺失的为大片段甚至整条染色体时,也属于发生拷贝数变异(CNV)或是染色体非整倍性,也属于SV。这些类型变异的大小交叉并不妨碍本领域人员通过上述描述执行实现本发明的方法和/或装置并且达到所描述的结果。
NRG1基因的融合伴侣多样,目前已报道的融合伴侣基因为CD74、ATP1B1、SDC4、SLC3A2、TNC和PARP8等基因,且断裂位点分布于零散。目前临床常用的传统检测技术FISH及IHC很可能出现漏检,此外,传统FISH和IHC检测融合,无法判别融合伴侣基因及融合形式。而通过NGS设计DNA探针库可以一次性全面覆盖包括罕见融合伴侣、罕见断裂位点在内的NRG1基因融合。
本发明中所采用的样本进行处理的步骤如下:
DNA样本的提取和片段化
采用商品化的DNA提取试剂盒对组织样本、血浆样本、腹水样本或者胸水样本进行DNA的提取,通过Nanodrop和Qubit进行定量质控,对于组织和胸腹水DNA样本,由于DNA片段较长,需要采用超声破碎。
DNA样本的纯化及末端修复
将上述步骤得到的DNA样本加无酶水补齐至100ul,再加入150ul的Axygen beads磁珠,重悬后磁力分离除上清,并加入200ul的80%乙醇洗涤于磁力架上孵育后去乙醇,干燥至所有乙醇挥发干净;加入28ul无酶水混合均匀,将DNA从磁珠上洗脱下来,取1ug进入末端修复,加无水酶补至25ul。加入末端修复试剂于适当条件下进行末端修复。
接头连接及产物纯化
使用浓度为15uM的通用接头,并根据进入末端修复的DNA总量进行接头稀释工作。向接头连接反应液中加入如下试剂:
将上述反应液短暂离心后,至于PCR仪上于20℃孵育15分钟后,在上述反应液加入9.5ulAxygen beads重悬,磁力分离后除上清,再加入200ul的80%乙醇清洗,于室温下孵育后去乙醇,晾干,加20ul无酶水洗脱磁珠。
文库扩增
上述的纯化产物采用如下所示的反应体系进行PCR扩增,使产物达到测序要求。
扩增条件为:98℃预变性45秒,98℃变性15秒,65℃退火30秒,72℃延伸30秒,循环12次;72℃延伸1分钟。
探针设计
除了所有基因探针设计涉及共性因素外,NRG1融合基因自身的特征导致了其探针设计的过程需要进行更多的考量:NRG1基因即使与同一个基因发生融合,也可能存在多个断裂位点。例如,NRG1可能在第1号外显子、5外显子或6号外显子,可以与CD74基因发生融合。因此,在探针设计的时候,充分参考了大量已知文献报道,对于NRG1基因常见及罕见融合发生的断裂位置进行全外显子以及重要内含子覆盖,确保各种类型及不同位点的融合发生时都可以成功捕获。
将DNA样本库与杂交缓冲液(10mMTris-HCl,2%牛血清白蛋白,pH8.0)混合(混合后,DNA样本库浓度至多不超过50ng/ul),反应条件为95℃5分钟,之后保持在65℃。反应在PCR扩增仪中进行。然后以DNA样本库:探针库为1:100的摩尔比,将探针库加入上述混合物,反应条件为65℃5分钟。将杂交反应置于PCR扩增仪中,65℃孵育24小时。
将50ul的Dynabeads磁珠与200ul结合缓冲液(含10mM Tris-HCl、2%BSA)进行混合,并通过磁选机分离出磁珠,重复3次;再将杂交反应产物与链霉亲和素磁珠混合,在磁选机中分离后,向磁珠中加入500ul的洗涤缓冲液(含有0.1%Tween-20、0.1%SDS),并于60℃下孵育15min,重复3次;将磁珠与50ul的洗脱缓冲液(含有10mM的NaOH)混合,20℃下孵育15min,通过磁选机分离出磁珠,上清液中获得检测文库。
上述的文库采用如下所示的反应体系进行PCR扩增,使产物达到测序要求。
扩增条件为:98℃预变性45秒,98℃变性20秒,65℃退火30秒,72℃延伸25秒,循环5次;72℃延伸3分钟。
测序与分析
使用Illumina HiSeq2000下一代测序系统进行测序,并进行数据分析,获得基因突变信息。
一、不同探针长度检测数据对比
探针长度对检测的特异性和中靶率影响较大,因此,我们设计了4种不同长度的探针,探针长度分别是80bp、100bp、120bp和140bp,使用上述探针分别进行NGS捕获测序,并对测序数据进行质控,通过中靶率、目标区域覆盖率及经济性来确定不同探针长度对测序结果的影响。具体质控结果见下表:
根据上述测序结果可以看出,120bp的探针中靶率和目标区域覆盖率显著高于80bp和100bp的探针。继续增加探针长度至140bp,中靶率和目标区域覆盖率未见明显提高,然而探针长度的增加势必会引起探针合成成本的提高,综合考虑选用了120bp长度探针。
二、不同探针overlap长度对比
相邻探针间的相连方式可能与探针覆盖均一性相关,因此我们设计了三种相连形式,分别为10bp gap、5bp overlap和20bp overlap,捕获后进行NGS测序,质控结果如下:
相邻探针间存在5bp overlap相比于10bp gap时50%覆盖率显著升高,与20bpoverlap无显著差异,综合考虑选用了5bp overlap。
三、检测灵敏度的验证
现有技术中,对于融合基因检测存在着检测灵敏度不高的问题,通常灵敏度为约为10%以上,因此如何提高检测灵敏度是一个亟需解决的问题。
针对CD74-NRG1融合突变构建了突变型和野生型的质粒,按照突变型在野生型中拷贝数比例混合而不同丰度的样品,采用上述的探针库进行捕获、测序考察灵敏性,将SEQID NO.150-151的探针作为SEQ ID NO.135探针的对照,考察检测灵敏度,每个样本重复测试3次,取平均值,结果如下:
从表中可以看出,本发明提供的检测探针库和检测方法能够对低丰度的样本也具有较好的检测灵敏度,能够达到0.5%左右的检测灵敏度水平。
四、探针检测准确性验证
采用优化后的探针库分别对8过FISH和IHC检测NRG1融合均阳性的患者肿瘤组织样本进行NRG1基因融合检测,并通过本发明优选的探针和方法进行测序,结果中显示,通过本发明提供的检测探针库和检测方法能够较好地对NRG1基因融合进行检测,并且检测结果与FISH和IHC检测结果相同,证明了本方法的可靠性,同时通过NGS检测能够明确融合伴侣基因及具体融合形式。
综上可以看出,本发明的检测试剂盒可以有效地对NRG1融合基因进行检测。
从本专利申请人的检测数据库中获取到了使用该探针检测到NRG1融合的患者53例,样本58份。检测的样本类型中组织样本占比81%(47/58),另外还在体液样本中也检测到了NRG1融合,包括血浆17.2%(10/58)以及胸水1.7%(1/58)。与传统融合检测方法仅限于组织样本相比,使用该探针结合NGS技术进行检测,检测样本更加多元化,对于临床上无法或者组织样本难以获得的患者来说,更具可操作性和包容性,也能使得这部分患者获益于后续治疗。
从53例患者中共检出36个NRG1融合,涉及的融合伴侣基因包含BMP1,CD74,CDH1,CEBPD,FGFR1,MAP3K9,MYC,PDLIM2,SDC4,SHISA9,SLC3A2,SNTG1,VAMP2和WRN,还有41.6%患者(15/36)融合伴侣基因的断裂点发生在基因间区(IGR),具体各个伴侣基因分布情况见图5。检测到的融合伴侣除了已报道的CD74、SDC4、SLC3A2、VAMP2及WRN基因外,还检测到了文献未报道的融合形式,BMP1:exon18~NRG1:exon2、PDLIM2:exon10~NRG1:exon9、FGFR1:exon9~IGR(downstream NRG1)、MYC:exon1~NRG1:exon6、MYC:exon2~NRG1:exon6、CEBPD:exon1~NRG1:exon2、NRG1:exon5~MAP3K9:exon8、SHISA9:exon4~NRG1:exon10、NRG1:exon5~SNTG1:5'UTR及NRG1:exon7~CDH1:exon6,占所有检出融合的27.8%。NRG1基因融合断点发生的位置也分布在各个基因区域,具体融合位点,见图6所示。其中检测到了此前未曾报道到的断裂位点exon10,占所有检出位点的11.1%,其他88.9%的断裂位点未经研究报道。
序列表
<110> 南京世和医疗器械有限公司
<120> 一种NRG1融合基因的检测方法及试剂盒
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<210> 18
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
caactcatct tagatcttct tccattcccc atttgggctt cattctctaa gaccccttgg 60
cctttaggaa ggtatagtat ttaagtaata cttctttccc ttccgaatcc ctgagccttg 120
<210> 19
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
gtgcctctta ttgcaccaca cttatgcagg gtattctgtg ctcacacagg tatgtgtcag 60
ccatgaccac cccggctcgt atgtcacctg tagatttcca cacgccaagc tcccccaaat 120
<210> 20
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
aactcatctt agatcttctt ccattcccca tttgggcttc attctctaag accccttggc 60
ctttaggaag gtatagtatt taagtaatac ttctttccct tccgaatccc tgagccttgg 120
<210> 21
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
gaggcagggg cgtggggcgg cgatcgcgag ccgccagccg cgggcccacg ggcgctgggg 60
ccgcccgccg aggagccgct gctcgccgcc aacgggaccg tgccctcttg gcccaccgcc 120
<210> 22
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
actttgattt tgtagttgct aggagctttt cttcccccct tgcatctttc tgaactcttc 60
ttgattttaa taatggcctt ggacttggac gatttatcga tttccccctg taagatgctg 120
<210> 23
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
cgcccccttc ggaaatgtct ccacccgtgt ccagcatgac ggtgtccatg ccttccatgg 60
cggtcagccc cttcatggaa gaagagagac ctctacttct cgtgacacca ccaaggctgc 120
<210> 24
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
ccggtgccca gcgccggcga gcccggggag gaggcgccct atctggtgaa ggtgcaccag 60
gtgtgggcgg tgaaagccgg gggcttgaag aaggactcgc tgctcaccgt gcgcctgggg 120
<210> 25
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
tatcatttgg ttgggggggc ctctgcgtgg taatggaccg tgagagcggc caggccttct 60
tctggaggtg agccgatgga gatttattcc ccagacatgt ctgaggtcgc cgccgagagg 120
<210> 26
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
gggagaagaa gtttgaccat caccctcagc agttcagctc cttccaccac aaccccgcgc 60
atgacagtaa cagcctccct gctagcccct tgaggatagt ggaggatgag gagtatgaaa 120
<210> 27
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
acctggggcc accccgcctt cccctcctgc gggaggctca aggaggacag caggtacatc 60
ttcttcatgg agcccgacgc caacagcacc agccgcgcgc cggccgcctt ccgagcctct 120
<210> 28
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
tcctccagcc cctccactca gctgagtgca gacccatctc ttgatgggct tccggcagca 60
gaagacatgc cagagcccca gactgaagat gggagaaccc ctggactcgt gggcctggcc 120
<210> 29
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
cgacccaaga gtacgagcca gcccaagagc ctgttaagaa actcgccaat agccggcggg 60
ccaaaagaac caagcccaat ggccacattg ctaacagatt ggaagtggac agcaacacaa 120
<210> 30
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
tctttccccc ctctggagac gggccggaac ctcaagaagg aggtcagccg ggtgctgtgc 60
aagcggtgcg gtaagttcct cgcccttggg ggcgcgaacc cgcggcgagg agggcgcatc 120
<210> 31
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
gcgtgtccgc gcctcggggt gggggtgtgg tggggaagag ggagggggcg aggccagggg 60
agggtgcgaa ggaggcgcct gcctccaacc tgcgggcggg aggtgggtgg ctgcggggca 120
<210> 32
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
gtgccctgct gtgcgtgcct agaagctgag cgcctgagag gttgcctcaa ctcagagaaa 60
atctgcattg tccccatcct ggcttgcctg gtcagcctct gcctctgcat cgccggcctc 120
<210> 33
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
gctcccagag cagtaactca gagagtgaaa cagaagatga aagagtaggt gaagatacgc 60
ctttcctggg catacagaac cccctggcag ccagtcttga ggcaacacct gccttccgcc 120
<210> 34
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
attgaaaaag agccggcgag gagttccccg aaacttgttg gaactccggg ctcgcgcgga 60
ggccaggagc tgagcggcgg cggctgccgg acgatgggag cgtgagcagg acggtgataa 120
<210> 35
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
aagtgggtat ttgtggacaa gatctttgaa tatgactctc ctactcacct tgaccctggg 60
gggttaggcc aggaccctat tatttctctg gacgcaactg ctgcctcagc tgtgtgggtg 120
<210> 36
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
tggctgacag caggactaac ccagcaggcc gcttctcgac acaggaagaa atccaggcca 60
ggctgtctag tgtaattgct aaccaagacc ctattgctgt ataaaaccta aataaacaca 120
<210> 37
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
cctctccccg atcgggttgc gagggcgccg ggcagaggcc aggacgcgag ccgccagcgg 60
tgggacccat cgacgacttc ccggggcgac aggagcagcc ccgagagcca gggcgagcgc 120
<210> 38
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
tcgtctgagg catacacttc acctgtctct agggctcaat ctgaaagtga ggttcaagtt 60
acagtgcaag gtgacaaggc tgttgtctcc tttgaaccat cagcggcacc gacaccgaag 120
<210> 39
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
tagattcacc tgtaaaactt tattttatat aataaagtat tccaccttaa attaaacaat 60
ttattttatt ttagcagttc tgcaaataga aaacaggaaa aaaactttta taaattaaat 120
<210> 40
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
ccgttccagg tggccggacc gcccgccgcg tccgcgccgc gctccctgca ggcaacggga 60
gacgcccccg cgcagcgcga gcgcctcagc gcggccgctc gctctccccc tcgagggaca 120
<210> 41
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
aatcgtattt ttgccttttc tttcttgccg tccactgcgc catccttccc ttcacccacc 60
cggaaccctg aggtgagaac gcccaagtca gcaactcagc cacaaacaac agaaactaat 120
<210> 42
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
atatgtatgt aaaaatgtgt tatgtgccat atgtagcaat tttttacagt atttcaaaac 60
gagaaagata tcaatggtgc ctttatgtta tgttatgtcg agagcaagtt ttgtacagtt 120
<210> 43
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
aacttttccc aaacccgatc cgagcccttg gaccaaactc gcctgcgccg agagccgtcc 60
gcgtagagcg ctccgtctcc ggcgagatgt ccgagcgcaa agaaggcaga ggcaaaggga 120
<210> 44
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
ctccaaactg ctcctaaact ttgtaagtag agagagagag agagacgatg atgatgatga 60
ataaaagggg tgggtttgag gtccccaaag gacatttccc tttcttcttg cattttagtt 120
<210> 45
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
acagtgattg cttttccaca gtatttctgc aaaacctctc atagattcag tttttgctgg 60
cttcttgtgc attgcattat gatgttgact ggatgtatga tttgcaagac ttgcaactgt 120
<210> 46
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
gggaagggca agaagaagga gcgaggctcc ggcaagaagc cggagtccgc ggcgggcagc 60
cagagcccag gtgggtgcgc agcgcggccc gggccccacg atcctcctcc tgctcctcct 120
<210> 47
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
aaagattgcc tggtgatcag agttgttttt cattctcttt tcttctttta gccttgcctc 60
cccgattgaa agagatgaaa agccaggaat cggctgcagg ttccaaacta gtccttcggt 120
<210> 48
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
gcctggtttt gtttaagcaa agcctatgtt tgagatgctt gggatggcat tgaagggccg 60
agtaaaatga tcttgcaaac tccggatctg aaccagtgtt gtaacagcag ctctctctag 120
<210> 49
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
ccctctgttt gcttgtagta gcacccgatc agtatgtctt gtaatggcac atccatccag 60
atatgcctct cttgtgtatg aagttttctt tgctttcaga atatgaaatg agttgtgtct 120
<210> 50
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
gtgaaaccag ttctgaatac tcctctctca gattcaagtg gttcaagaat gggaatgaat 60
tgaatcgaaa aaacaaacca caaaatatca agatacaaaa aaagccaggg taagtataat 120
<210> 51
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
ggttcaagaa tgggaatgaa ttgaatcgaa aaaacaaacc acaaaatatc aagatacaaa 60
aaaagccagg gtaagtataa tgcataaaat agtagagact gcccccagca ataagataac 120
<210> 52
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
ttggatttct gtgatatata ctgacaccac tttggtcctg atcttatagg aagtcagaac 60
ttcgcattaa caaagcatca ctggctgatt ctggagagta tatgtgcaaa gtgatcagca 120
<210> 53
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
ccacatggct caatctggta ccgggaatga aaaacttcag catctgcaag tcatgcttga 60
atttaagtta aattcaattt atttctaaca cattttaaaa ttaaaacatc acgccatctc 120
<210> 54
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
actctgccag ccaaaggttt gcctcattgg gctctgagat aatagtagat ccaacagcat 60
gctactatta aatacagcaa gaaactgcat taagtaatgt taaatattag gaagaaagta 120
<210> 55
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
atgtgcaaag tgatcagcaa attaggaaat gacagtgcct ctgccaatat caccatcgtg 60
gaatcaaacg gtaagagata cctacggtat tctgttcctc aatctgtaac aagagtaatc 120
<210> 56
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
ccggcctcct gtttatatat cataatgtcc tatcaccttt ttttttcaga gatcatcact 60
ggtatgccag cctcaactga aggagcatat gtgtcttcag gtaaggaaaa taagcctggc 120
<210> 57
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
ttatgtttta tagaaatgtg actttcatat accagtgagt attattttgt gtctttctct 60
tccccatcat agatttcctg tcatctctct gttaccctct acctctcagc gaccccaagc 120
<210> 58
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
atactgtgat ttaaaaaaaa ctatattatt aatcagaaga cagcttgctc ttactaaaag 60
gagctctcat ttactttatt tgattttatt tttcttgaca aaaagcaaca gttttaggga 120
<210> 59
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
tatcaccttt ttttttcaga gatcatcact ggtatgccag cctcaactga aggagcatat 60
gtgtcttcag gtaaggaaaa taagcctggc aaattttact aaccagaatg acaaccataa 120
<210> 60
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
ccaagcagca tgactcaata aagcctcatt ccacttttat gttttataga gtctcccatt 60
agaatatcag tatccacaga aggagcaaat acttcttcat gtaagtatac ttaaatattc 120
<210> 61
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
ccacttttat gttttataga gtctcccatt agaatatcag tatccacaga aggagcaaat 60
acttcttcat gtaagtatac ttaaatattc tattcactgg tttttaaccc aaggcactat 120
<210> 62
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
cccaaggaaa gtcctggaat gagaccatgg aagagctcat ttgatttaaa tgataaatag 60
acagtattta aatggcctat gcttaattct tataatttct aaaaattatt aggcaaaatt 120
<210> 63
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
tgcctgttgt ctctctctcc ttcccgttcc ctaaccactt ctccctactt ttgtatctta 60
attggttctt tgagattaca gcaagtctta agacatttac ggtgctagcc tctcactagc 120
<210> 64
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
tagcttagaa aatgggttct ggcttgctat cagggtaaat ctaacacctt acaagaggac 60
tgagtgtcac tttctctctg ggggaatgat ccagcagctt atctagttga caatcaaaac 120
<210> 65
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
gtagaagtct tattttggaa actagatcct tttaagtttg tttacaaatt atattaaggt 60
aataattcct atttcattgt tacatattct ggttctcata gtctctcctt gaagtggtat 120
<210> 66
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
ttgagacgac tgctgtcctg cccagatggc actttcagtt agtgagcact tactagtggc 60
agctttattt tgtccaggac acagtaggat tctgcatgaa ggattttccc aaattagttt 120
<210> 67
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
acggctgata aaggtgcaat catttctgac atgtattttt cactgatttt gaagctagtg 60
attggttgtg tcttcttggc tcaaaaagaa gcatattacg gcacaaaaag cccagcccag 120
<210> 68
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
gtaatcaata atataatcaa atgcaccctt ttgatgaaat aacaaaagca gtatttttca 60
gcagaaatag gatgaatcag aacgtactca aatcttggcc acatagctat gtgtccatgg 120
<210> 69
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
tgtcttctat aatcaaatgt ttaaatagct tccttggcag ttgttaaaaa gtacaagatc 60
cattagtgag gtacatcttt tttttttttt ttttttttga tgtatgtcat cttagtctgg 120
<210> 70
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
acagcacatg cagcattttg tctgaaatac ttctagagtc aaacgtgcct gctgtacata 60
gcgatgactt gtcatcatag ggaagtattt ccatcgtaga gtgttcagaa ggagtgactg 120
<210> 71
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
caaaattacc taagctgcct gggccaatga aataaaaaaa aaatttaaga taaatatgga 60
ctgtatggga ttagtgaaga tcagaaataa tgtatattat gaacctagca gagtgcctgt 120
<210> 72
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
cagattgcag cggcccagtt taataacctg tgatgtgcag agagcccacg ctcttaaaaa 60
caatacattc ctgtttgcat tgcgtaattg caatagcttt agagtggaaa gttgacagga 120
<210> 73
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
tataggtgga gagaagctta gtgactccgt tgaaatttta aaatgtggat gaccacccct 60
ttctccccct tatttttctt ttatctttcc atgttgcctt gatcaggtca taactatgca 120
<210> 74
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
cacctgggtg gaactcaaca aaggtagctt ttattattgt gagggagatg gtgataaaag 60
gttaggtagt aaaaaattgt gtagtttatt tttctaagag gacatggaaa tggggtgttc 120
<210> 75
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
atgaaagcat gactgttcta aatatcaata tagaagggag gagttttctg tagcctttta 60
aaaatgtttc tagtttattt ttgttgtctc tatctcctat cactttttac catgaggaat 120
<210> 76
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
tgaacatttt ttatcaggaa tggccgatgt gtatgtgatt tgtaatcaca agtaatgatt 60
catcaggaaa tgtcaatcct gttggaaaga ttgcaccttt acttgcagaa gtgaccccca 120
<210> 77
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
ctgggcttta ctggggtgga gcttaaaggg ttaaaatgat atatccttgc agtttttcct 60
acaaacatgc atgttttatc caaaggaaat tctgacctct aaccccattc acactttcct 120
<210> 78
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
atttacttag tagaaaagta caagatcaga aaatttggtt cttaataact tgcatgaaag 60
ctcttagggt taaaagagag ttgacaattt ctctgacgaa atgcctcttg tttttcctct 120
<210> 79
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
cctgtgtcct gacctctcca tttacaggct ctctcaccca tttcccccac ctcctttaat 60
ttttgcttta ctgtcataaa gtaggactaa gattggtcta agcattgcat gttcttttgt 120
<210> 80
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
ttcttactct tttattgcta tagaggattt gatgaaggca gaaaggcaac ttctgggtcc 60
tagtcccaag ggtagaacta atggagaatt cttttattct tcacctccca tccttctcca 120
<210> 81
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
ggacagtaat gaagaataaa gaataccttt tccagacatc atgttcagtg tgaagtagtg 60
cagcatgctg tagaaacaca gaaaaacttg atttgtgctt gtaactcccg atcatttcac 120
<210> 82
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
gatggtaaat ccaaaggaag gcctataagt attaacattt gaaataactg ctaattcagg 60
aaaatggaag aaaaaaaatt atttgaaaca cagaacccat ttcatggcct gcctgatatc 120
<210> 83
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
tttccccatt tacattcttt ttccaatttg gcggaaaaaa agcaatgtta taggaagctg 60
gctgtctgca gattagtctt agcaccaagg tggaatgact tttgggggaa aaacagacac 120
<210> 84
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
gaacaccaga ttcagtggca aagatttaaa gaaaaaaaaa gtcttgtttt ctaggtgcaa 60
ttagggaaaa cctccttcat gcagacgctg ctttgtatct ttatcaaatc cctgaagcat 120
<210> 85
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
tgtgaaatca gggctggagc tttacttagg attcacatgg cctcctagga accatgggac 60
aaatgggaaa caggttatcg ggggattcat gaagtcagtg agagtaattg cttctttttt 120
<210> 86
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
atcccaaagt ctggctcatg tagtccaagg gaaagagtac ttgtggcagt ccataggatt 60
ctctctctga tgtgttgtcc tagtctttgt ataaaatgtt ggttttctct gtaagtgttg 120
<210> 87
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 87
cattaaaggt ctgacagaca tcactgcctt tgctgcctct tcccacctgg caaagtgact 60
gggaaataat acccagatga aatgacaggc tataaaaagc aagtacagat cctgcaaaaa 120
<210> 88
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
gcgggtgaac tgaatgtatt tcttcaccaa atcttgatgt taacaattaa aaagaagaaa 60
tgacatgcaa gtaggtctta gcagaaaaat gcaggctggg catgagtcat gttgttaccc 120
<210> 89
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 89
ggtattttca gtgtaacagc tagagcaatg cccagtaact tttttttttt tttctgctga 60
atatgtttgc tcttaatggt tgaggtaagg tgaataattg ctcttggtgt aagttaaaga 120
<210> 90
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 90
gaagcgaaat tcaccaggag gacaaggtta cttgatcatt ttaaacttgt ctttaattga 60
aatctgcttg aacaggtttc attgtccaga gaaagaaaaa aatgcccttt gaaaaacact 120
<210> 91
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
tcccacatgc tcctacaatc cacagagatg cctgtctgca ggttcttgaa gttattgtta 60
gtatttggta tctcaaattt ttcgtcactg ttcacatgcc actttctctg tgcacagtgg 120
<210> 92
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
ccacttttct aaactatggg ttatcatgct tggtattttc tcctatctgc ctgacttgag 60
gccacctgaa ccccattttg gtctttgaaa tttagctgac cttggccttg gatgaaatgc 120
<210> 93
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
tcaactaaat tctataattt tgtcatctga ggaaatcagg aaaacaaaga aacatctaac 60
acattttcct gatctaagac catgtcagaa agtatgttgt gaagttttga taaattattt 120
<210> 94
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
tatcctcatt tgctttttaa cctacactga ggagtctttg tcaggttgca ctgattttcc 60
aattctgcag taatgagtaa gctcacggca tggggaagaa gacagtcagt ccaatgaagt 120
<210> 95
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 95
tggtgtattg agtataatag ttttggttta ggtcaaaatt ggggaattca gtgccgtata 60
tttcaactgg gtgctttttg aagaaatcat aaattaccct agtttagcat aaacacctgc 120
<210> 96
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 96
tataaagtaa atttttctac taagtgtttt agtagattac atattcctta tcagtttttt 60
tttccccaag ccagggcatt gatattgtgg catctgcaat aaatgggaaa gatttactgc 120
<210> 97
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 97
tctctaaatt attttaacat tgcctttgaa ggccttgact catccttagc tatttcaatg 60
aagaaattcc taccatgaat ttaaaaccct aaaaattctg tttcaaattc tttgggcatt 120
<210> 98
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
tgatattgtt tctgaatatt tacatgaata ttgatcattg agatcttact atctttcaat 60
ttgaatgctt taaatgcttc aatagatgtt ttctacaccg tgaaattgta tgtcctttgc 120
<210> 99
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
tgcctaaaag catcattgtg gccagtttga ccagatgcac agctgcaacg ttttgaagtg 60
catcggagat aagcctagag aagcagtctg ggaagtagtt ttctcctgaa aagttagggg 120
<210> 100
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 100
ggggtactca gatatcccat tgtggaagaa ttttaagaat aaatagaagt ttctgttgag 60
aaccatgagc aacatgtttc ttacaatgag aattgctatg cattttaaaa ttgcaaatat 120
<210> 101
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 101
tagaatcttt gtaagagagg tctcactgct ttgaagtcaa ataaacctag aaaataagca 60
taggaattat ttttaaacac catttactgt gcagattata gagagatgaa ctcaaggata 120
<210> 102
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 102
tagacagtta gttggttaag actttgaaac ctataaggaa actctgttaa ttttttagac 60
tagttcctta aaaaaacatc aaatcttgta ttgtaaaaat tgtgagacta ctttttttgg 120
<210> 103
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 103
atatgaaaat tgaagacaag aggaaattgt atttctaact tgattctgat cactcacaga 60
ggtggcatat tattatagtt gggacatcct ttgcaccctt cataaaaaag gccagctgac 120
<210> 104
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 104
actcatgttg ctcataaact tgtcatagtc atggttacat ttatgcaaat tggcacaggc 60
ttttgttgtt gttagttata gtactgcaaa cacagtttaa gatgttaaga ccctttaaat 120
<210> 105
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 105
gggtggggag aggttgttgt ggggagagta gtgtttgaaa gggattggtc caggcagctt 60
tgtttttaga gacttgtaag tggttgtttt tgttgttgtt taaaaaggtt gtaaccacta 120
<210> 106
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 106
tgctcagcat cacctgccaa ggccactaga tttgtgttta caggggtatc tctgtgatgc 60
ttgtcacatc actcttgacc acctctgtta ataaattccg acagtgcagt ggcgatcgga 120
<210> 107
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 107
catgtataat tatggactaa tttcatcttg aaggaagaag tgataatatt cttatctcct 60
gccgtttaaa gctgaaacat acctcaaagt agtggagatt gtgccctaca aaatataatg 120
<210> 108
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 108
attaatggaa agcaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaag cttacaaagg gattgtattt 60
ttcaactaag aaagtattgt ttagtcacag aaagaactgg gacgttcctt ttcccgtgca 120
<210> 109
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 109
gtgtgaactt atgttcccag catatggaaa gctatcttag gttttaaggt agtagaaatt 60
gcccaggagt ttgacagcaa ctttgtttcc cgggtctaaa atcgtatccc actgaggtgt 120
<210> 110
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 110
tgcttaaagc ggattttctc aggacttgaa ttctaaattt tactgcttca gggactcata 60
tgatggctat gtagtataga tttagagaga gttttacaga ctcctattga cataagtgaa 120
<210> 111
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 111
tgtttttgac ataaactaag ctgtcatggc ttatatttga aaatgacatt atcatatgtg 60
aaacatgctc ttcagtggtt ttaggacttt attctcccgt ttccattttt ttttctgtct 120
<210> 112
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 112
atgcagtgga gcataataca tgcaaataca tgcaaaactc cttttgtttc acctaagatt 60
cactttctat cttactttcc cttcctgcct agtgtgactt ttgcccccaa gagtgcctgg 120
<210> 113
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 113
caaaatggtt ccttggaaac cgtttagatg tccaatcaca gtaagtgtgg attacaggtt 60
cagatgcata ttgtgtgcag tgatgtgcag cacagtgctt ggggaagcct gtggtctgta 120
<210> 114
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 114
cagcatattc agcacattat gcacagagct gtagccttca aggtcataga ctgttgaagg 60
ctaattgatt cttctttatc ctggagcctg agagagtaga agagagacaa tcccagtaat 120
<210> 115
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 115
acagcattct agtttctaca aaatggtcct ctgtgtaggt gaatgtgtcc caaacctgct 60
atcactttct tgtttcagtg tgactgtctt gttagaggtg aagtttatcc agggtaactt 120
<210> 116
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 116
ttaagaacag tgcatttctt ctagtgtttt aatgactgtt gttttaaaag aaaaaaacag 60
tcagcattga aactactgaa aggtaaagct cctgaaacct aacccaaaag gcatgctctc 120
<210> 117
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 117
tgtgtctgca gcgttgctcc ccaaaccaat ctacctacta atgttagagt tttattttat 60
aaatactaga attactccct cactgactct tgtcaaatta caacattctt tgtctttgtt 120
<210> 118
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 118
gctcactaac tattcctttt tatggcctgg ggttaaaggg cgcatggctc acactggtga 60
aaataaggaa ggcctggtct tatcttgtat taataatact ggctgcattc caccagccag 120
<210> 119
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 119
atagaaaact cttcttagta ctttcagtgc ggtgatagct gaggacatgt ggtatatatt 60
acagtgccag ggaatccaaa cctctgcagt gtggagtcac catgaaaggc taatctaaaa 120
<210> 120
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 120
ataataaaag gcaaaatatg acattttaaa ttgccttaag gtatagtggc tatgtcgaat 60
tttctaaaat gggtatttct ttcataaagt aatatttcat attttcatga tattaatcta 120
<210> 121
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 121
agatttctat ctgcgaagac ctatgaaaca ctgaagagaa atgtaggcag aaggaaatgg 60
ccacatatca caagttctat tatatattct tttgtaaata catattgtat attacttgga 120
<210> 122
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 122
atgaagtggt agctttgctc gcatcataac tctgttactt actggtgctt cctattagct 60
tgacattatt agtcttcttt gggtgagata gaataaatgg aaattcaaag gggaccacag 120
<210> 123
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 123
tgcattcatg taggtcttaa gaagtccaat gcagaattgg aatgaaagta tataagtata 60
tatttttatt ctaaagtatt tctaaatatg gttaatggtt tcccactacc acaatgatta 120
<210> 124
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 124
tgttttctta tatcatttac tgtctttttg agttaatgtc agtttttact ctctcaactt 60
actatgtaac attgtaaata acataatgtc ctttattatt tatatttaag catctaacat 120
<210> 125
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 125
caggggatat atgggctgcc aacccctccc ctagcactcc cttcctccag cctgtactca 60
gcatttctcc ctgggcatga caaacaaagt cttacatagt cattgcaaaa agggctaaag 120
<210> 126
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 126
aaaaaatgcc aacccagaat gacaaggctt ccgtggttct gagcctggct ctgaaccttt 60
cctttggaaa actaatgact ccacctatca ttcccttggc atctagagaa gctacattag 120
<210> 127
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 127
aaagtatttc taaatatggt taatggtttc ccactaccac aatgattata ttgtcatgat 60
actaattaag tttttacttc tcaatgagtc acataatact tgcactattc atttgttttg 120
<210> 128
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 128
atagagttgt tttcatataa gtttaagata aatgtcaaaa atatatgttc ttttgttttt 60
ctttgcttta aaattatgta tcttttcctt ttcttttttt taagaataat ttattgttca 120
<210> 129
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 129
gcagagctgt ccatggttag gaaaaaaatg ttcaaactgt tggttgaaaa tcaggtaata 60
acagtcctct tagtgaacaa aacttattag agggctaggg aaggaatgct atctctcagc 120
<210> 130
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 130
gtggcacagc tctttctgct cagcttctgc tccagagctt catcttcagg aaccacctaa 60
gcattttttt ccccagtagg agttcagtct gctcattata cctaattgca aaggagctat 120
<210> 131
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 131
ggagaaagaa tgtatatgta actgaaacta tctgaagaat gcacattgaa ggccgtgagg 60
tactgataaa ctaaagaatt tattattcaa aatactaagc aataagtaat tgtgatttat 120
<210> 132
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 132
agcaggcagg aagaaattgc tgttgaaaag cttacctctc tagggaggaa tcagatagca 60
gacttcaagc ctcaggtcca acccataagg tcccacctac accacccccc accccatccc 120
<210> 133
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 133
attcagagca agaataataa tttcagattt tttaactgga cttcaaagag caggaaagta 60
tgcagattcc taaacacata agcattgaag atattacagg taaggttaaa aaaaatctgt 120
<210> 134
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 134
ttttaactgg acttcaaaga gcaggaaagt atgcagattc ctaaacacat aagcattgaa 60
gatattacag gtaaggttaa aaaaaatctg taattttgta gtgactagca gtttaatatt 120
<210> 135
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 135
agggggaaaa aaagtccatg ttaacctttc tcctttctct cctcttcagc tacatctaca 60
tccaccactg ggacaagcca tcttgtaaaa tgtgcggaga aggagaaaac tttctgtgtg 120
<210> 136
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 136
ttgtgattta tttaaagttt tgtccatttt ccatgaaaga catactgcaa taaaaatgct 60
actctgtgga gacctgggag tgttgctcag cagactacag cttcagtctg ttagaccagc 120
<210> 137
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 137
catcccagct ttgttagatt gctagcatcg atcgctggct ttctctgacc caacagtggg 60
tgaaggaaag agactgaaag ctggcaaggt gggggtggaa gaagactggg acagcttttg 120
<210> 138
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 138
ctttctgtgt gaatggaggg gagtgcttca tggtgaaaga cctttcaaac ccctcgagat 60
acttgtgcaa gtaagaaaag aaatcctgtg tgtcgcttat gtctataact ccttgtttca 120
<210> 139
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 139
tcagtgtctt tagcattttt tttttgctta ccacattttt gccctctagg tgccaacctg 60
gattcactgg agcaagatgt actgagaatg tgcccatgaa agtccaaaac caagaaagta 120
<210> 140
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 140
aggtgccaac ctggattcac tggagcaaga tgtactgaga atgtgcccat gaaagtccaa 60
aaccaagaaa gtatgtcaaa ataatctgaa atttgctttc tcccccaact acagcaacaa 120
<210> 141
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 141
tctctttttc tctgtttttc taccattgtt tttttgtttc ttctctcagg tgcccaaatg 60
agtttactgg tgatcgctgc caaaactacg taatggccag cttctacagt acgtccactc 120
<210> 142
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 142
tagagaaaga aagaaaaagg aggaaaacgg gtgggggcca tggggactag gcttaactga 60
tgcctgcctg cctctctttg atttgatggc ctttattcct tctaattgga taaaatagga 120
<210> 143
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 143
tcttctctca ggtgcccaaa tgagtttact ggtgatcgct gccaaaacta cgtaatggcc 60
agcttctaca gtacgtccac tccctttctg tctctgcctg aataggagca tgctcagttg 120
<210> 144
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 144
aaactttttc cctttctttc ttttttttgt caactttctg cattggcaga gcatcttggg 60
attgaattta tgggtatgga ccaatcatca ttccttttag cctgcagaat ttagagccta 120
<210> 145
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 145
ctttttccct ttctttcttt tttttgtcaa ctttctgcat tggcagagca tcttgggatt 60
gaatttatgg gtatggacca atcatcattc cttttagcct gcagaattta gagcctatga 120
<210> 146
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 146
tggcaagtgg aagtgacctg tgatgacatc tgctctcatc cctttccaga ggcggaggag 60
ctgtaccaga agagagtgct gaccataacc ggcatctgca tcgccctcct tgtggtcggc 120
<210> 147
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 147
agtcactggc agtcctgtgt ggctggggat actgatttta ctcagaccag cctgcagctc 60
tagagtgtgg gtagagagcg gggagtgggg gttgggagag ggggaggaaa gagagagagg 120
<210> 148
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 148
ccataaccgg catctgcatc gccctccttg tggtcggcat catgtgtgtg gtggcctact 60
gcaaaaccaa gtaaaccttc tttctccatg cctttctctc tccttcatgc agagacagct 120
<210> 149
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 149
gaaatgaaaa taatcaaaaa aaaataaatg ctccctttct tatgtccagg aaacagcgga 60
aaaagctgca tgaccgtctt cggcagagcc ttcggtctga acgaaacaat atgatgaaca 120
<210> 150
<211> 100
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 150
cctttctctc ctcttcagct acatctacat ccaccactgg gacaagccat cttgtaaaat 60
gtgcggagaa ggagaaaact ttctgtgtga atggagggga 100
<210> 151
<211> 140
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 151
gtttagtgaa atctgtacct tatatgaact cttcctttta ggataattta agattaaagg 60
ctgcttagaa gggggaaaaa aagtccatgt taacctttct cctttctctc ctcttcagct 120
acatctacat ccaccactgg 140
Claims (9)
1.探针库在制备检测NRG1融合基因的试剂盒中的应用,其特征在于,所述的探针库中包括有核苷酸序列如SEQ ID NO . 1~149所示的全部探针。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的应用中还包括以下步骤:步骤1,获得待检测样本的DNA;步骤2,对待测样本的DNA与探针进行杂交,并进行捕获,进行NGS测序后,下机数据比对至参考基因组数据进行分析,获得NRG1融合基因的信息。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的应用中,待测样本来源于细胞、组织或体液样本。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述的待测样本的DNA是经直接提取得到的,或者经提取mRNA后合成得到的cDNA。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述的待测样本的DNA经过了片段化处理,并具有150-600bp的长度。
6.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述的试剂盒中还包括:DNA提取试剂,用于对待测样本的DNA进行提取。
7.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,还包括:RNA提取试剂,用于对待测样本的mRNA进行提取;
还包括:反转录试剂盒,用于对提取得到的mRNA反转录为cDNA。
8.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的探针上经过了生物素修饰。
9.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的试剂盒中还包括:经过了链霉亲和素修饰的磁珠,用于对探针进行杂交捕获。
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