JP5960598B2 - Her3結合ポリペプチド - Google Patents
Her3結合ポリペプチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP5960598B2 JP5960598B2 JP2012536757A JP2012536757A JP5960598B2 JP 5960598 B2 JP5960598 B2 JP 5960598B2 JP 2012536757 A JP2012536757 A JP 2012536757A JP 2012536757 A JP2012536757 A JP 2012536757A JP 5960598 B2 JP5960598 B2 JP 5960598B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- her3
- seq
- binding polypeptide
- binding
- her2
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 title claims description 316
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 title claims description 315
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims description 311
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 246
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 239
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 239
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 76
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 26
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 24
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 24
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 20
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 14
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 12
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 12
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 8
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 6
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 claims description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 6
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037845 Cutaneous squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims description 3
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 claims description 3
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 claims description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029986 neuroepithelioma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 3
- 201000010106 skin squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 claims description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 claims description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 3
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014070 Vestibular schwannoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000004064 acoustic neuroma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 11
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims 9
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims 9
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 claims 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 133
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 56
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 40
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 37
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 description 30
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 28
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 27
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 27
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 27
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 27
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 102000048238 Neuregulin-1 Human genes 0.000 description 25
- 108090000556 Neuregulin-1 Proteins 0.000 description 25
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 25
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 23
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 21
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 21
- 230000006870 function Effects 0.000 description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 20
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 19
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 18
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 17
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 13
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 13
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 13
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 12
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 11
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 11
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 10
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 9
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 9
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 8
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 8
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 7
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 6
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 5
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 5
- 241000191965 Staphylococcus carnosus Species 0.000 description 5
- -1 X 20 Chemical compound 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 5
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 4
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 4
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 4
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 4
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 4
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 4
- 108010025221 plasma protein Z Proteins 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101001010819 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 3
- 108010088160 Staphylococcal Protein A Proteins 0.000 description 3
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 3
- 108700011201 Streptococcus IgG Fc-binding Proteins 0.000 description 3
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 3
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 2
- 102100022524 Alpha-1-antichymotrypsin Human genes 0.000 description 2
- 102100033312 Alpha-2-macroglobulin Human genes 0.000 description 2
- 101100067974 Arabidopsis thaliana POP2 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 2
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 102000013271 Hemopexin Human genes 0.000 description 2
- 108010026027 Hemopexin Proteins 0.000 description 2
- 101100118549 Homo sapiens EGFR gene Proteins 0.000 description 2
- 101001109800 Homo sapiens Pro-neuregulin-1, membrane-bound isoform Proteins 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 description 2
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 2
- 206010033701 Papillary thyroid cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 102000007584 Prealbumin Human genes 0.000 description 2
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 description 2
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101100123851 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) HER1 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 108010091628 alpha 1-Antichymotrypsin Proteins 0.000 description 2
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 2
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 2
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 102000055650 human NRG1 Human genes 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 108010087904 neutravidin Proteins 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 230000009131 signaling function Effects 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000030045 thyroid gland papillary carcinoma Diseases 0.000 description 2
- IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N trisodium vanadate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[O-][V]([O-])([O-])=O IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100021935 C-C motif chemokine 26 Human genes 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 108010028780 Complement C3 Proteins 0.000 description 1
- 102000016918 Complement C3 Human genes 0.000 description 1
- 108010028778 Complement C4 Proteins 0.000 description 1
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000012545 EGF-like domains Human genes 0.000 description 1
- 108050002150 EGF-like domains Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- 101000897493 Homo sapiens C-C motif chemokine 26 Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101100501693 Mus musculus Erbb3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 241001481166 Nautilus Species 0.000 description 1
- 101800000675 Neuregulin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000609499 Palicourea Species 0.000 description 1
- 102100022668 Pro-neuregulin-2, membrane-bound isoform Human genes 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191982 Staphylococcus hyicus Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 108700025695 Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- VWQVUPCCIRVNHF-OUBTZVSYSA-N Yttrium-90 Chemical compound [90Y] VWQVUPCCIRVNHF-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 238000009529 body temperature measurement Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000015861 cell surface binding Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 231100000481 chemical toxicant Toxicity 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 231100000196 chemotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002604 chemotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000013154 diagnostic monitoring Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 101150023575 fer3 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 239000012520 frozen sample Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 108010045676 holotransferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000057750 human ERBB3 Human genes 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 101150026046 iga gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 238000004989 laser desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002898 library design Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- OHSVLFRHMCKCQY-NJFSPNSNSA-N lutetium-177 Chemical compound [177Lu] OHSVLFRHMCKCQY-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 238000012514 protein characterization Methods 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000017572 squamous cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M tetrabutylammonium bromide Chemical compound [Br-].CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC JRMUNVKIHCOMHV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZSLUVFAKFWKJRC-FTXFMUIASA-N thorium-227 Chemical compound [227Th] ZSLUVFAKFWKJRC-FTXFMUIASA-N 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- LSGOVYNHVSXFFJ-UHFFFAOYSA-N vanadate(3-) Chemical class [O-][V]([O-])([O-])=O LSGOVYNHVSXFFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003273 vestibular nerve Anatomy 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/305—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Micrococcaceae (F)
- C07K14/31—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Micrococcaceae (F) from Staphylococcus (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2318/00—Antibody mimetics or scaffolds
- C07K2318/20—Antigen-binding scaffold molecules wherein the scaffold is not an immunoglobulin variable region or antibody mimetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
- C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/705—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a protein-A fusion
Description
例えばHER3を発現する細胞の標的化、このようなHER3を発現する細胞の分子画像化及びHER3関連状態の処置において使用され得る新規なHER3結合剤を提供することが本発明の目的である。
i) EX2X3X4A X6X7EIW X11LPNL X16X17X18QX20 X21AFIX25 X26LX28D、
[ここで、互いに独立して、
X2はR、K、L、W及びVから選択され;
X3はR、H、K、M、S、W、Y及びVから選択され;
X4はA、R、N、D、Q、E、G、H、I、L、K、M、S、T、W及びVから選択され;
X6はA、R、Q、M、S、T及びYから選択され;
X7はA、E、G、H、K、F、S、T、W、Y及びVから選択され;
X11はA、N、D、Q、E、I、L及びTから選択され;
X16はN及びTから選択され;
X17はA、R、N、Q、K、P、S、T及びVから選択され;
X18はA、R、N、E、F、D、Q、G、H、I、L、K、S、T、W、Y及びVから選択され;
X20はA、R及びKから選択され;
X21はA、R、N、G、H、S及びVから選択され;
X25はA、R、E、G、I、K、S、T及びVから選択され;
X26はS及びKから選択され;
X28はA、D、Q、E、F、P、S、T、W及びYから選択される];
及び
ii) i)において定義された配列に対して少なくとも90%の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列からなり、
ここでポリペプチドはHER3の細胞外ドメイン(HER3−ECD)に結合する。
i) EX2X3X4A YX7EIW X11LPNL X16X17X18QX20 X21AFIX25 X26LX28D、
[ここで、互いに独立して、
X2はK、R及びWから選択され;
X3はK、R、及びYから選択され;
X4はA、D、E、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V及びWから選択され;
X7はA、E、F、G、H、K、S、T、V、W及びYから選択され;
X11はE及びQから選択され;
X16はN及びTから選択され;
X17はR、T及びVから選択され;
X18はR、T及びVから選択され;
X20はK及びRから選択され;
X21はA及びGから選択され;
X25はA、G、K、R及びSから選択され;
X26はS及びKから選択され;
X28はA、D、E、F、P、Q、S、T、W及びYから選択される];
及び
ii) i)において定義される配列に対して少なくとも93%の同一性を有するアミノ酸配列、から選択されるアミノ酸配列からなり、ここで該ポリペプチドは、HER3の細胞外ドメインに結合する。
I) X2X3はKY及びRYから選択される;
II) X11はQである;
III) X20はKである;
IV) X21はAである、
の少なくとも1つを満たす。
i) K−[BM]−DPSQS XaXbLLXc EAKKL NDXdQ;
[ここで
[BM]は上で定義されたHER3結合モチーフであり;
XaはA及びSから選択され;
XbはN及びEから選択され;
XcはA、S及びCから選択され;
XdはA及びSから選択される];
及び
ii) 上で定義される配列のいずれか1つに対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列を含み得る。上記アミノ酸配列は、上で定義された配列のいずれか1つに対して少なくとも82%、例えば少なくとも84%、例えば少なくとも86%、例えば少なくとも88%、例えば少なくとも90%、例えば少なくとも92%、例えば少なくとも94%、例えば少なくとも96%、例えば少なくとも98%の同一性を有し得る。
i) YAK−[BM]−DPSQS SELLXc EAKKL NDSQA P;
[ここで[BM]は上で定義されたHER3結合モチーフであり、そして
XcはS及びCから選択される];及び
ii) i)において定義される配列のいずれか1つに対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列を含むHER3結合ポリペプチドが提供される。
i) FNK−[BM]−DPSQS ANLLXc EAKKL NDAQA P;
[ここで[BM]は上で定義されたHER3結合モチーフであり、そして
XcはA及びCから選択される];及び
ii) 上記i)において定義された配列のいずれか1つに対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列を含むHER3結合ポリペプチドが提供される。
i) 配列番号1003に対応する、
YAKEM RNAYW EIALL PNLTN QQKRA FIRKL YDDPS QSSEL LSEAK KLNDS Q;及び
ii) i)において定義される配列に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列を含む。
i) 配列番号1005で示される、
LAEAK VLANR ELDKY GVSDF YKRLI NKAKT VEGVE ALKLH ILAAL P;及び
ii) i)において定義された配列に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列を含むアルブミン結合部分のような、連鎖球菌プロテインGのドメインGA3から誘導された改変タンパク質であり得る。
i) 配列番号1004に相当する、
YAKEM WIAWE EIRNL PNLNG WQMTA FIAKL LDDPS QSSEL LSEAK KLNDS Q;及び
ii) i)において定義される配列に対して少なくとも80%の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるEGFR結合ポリペプチドを含み得る。
材料及び方法
HER3及びHSAの標識: 組み換えヒトHER3/Fcキメラ(R&D Systems、#348−RB−050)(本明細書ではHER3−Fcと示される)のビオチン化を、Biotin−XXマイクロスケールタンパク質標識キット(Invitrogen、#B30010)を使用して供給業者の推奨にしたがって行った。HER3の細胞外ドメイン(配列番号1007)(本明細書ではHER3−ECDと示される)を、EZ−LinkTM−Sulfo−NHS−LC−LC−Biotin(Pierce、#21338)を使用して供給業者の推奨にしたがってビオチン化した。ヒト血清アルブミン(HSA; Sigma、#A−3782)を、Alexa Fluor(R) 647スクシンイミジルエステル(Invitrogen、#A20006)を使用して供給業者の推奨にしたがって蛍光標識した。タンパク質緩衝液をPBS(10mMホスフェート、137mM NaCl、2.68mM KCl、pH7.4)又は過剰のビオチン若しくはフルオロフォアを除去するために0.1%Pluronic(R)F108 NF界面活性剤(PBSP; BASF Corporation、#30085231)を補充したPBSに変更した。
HER3結合ポリペプチドのファージディスプレイ選択: Groenwall et al、J Biotechnol 128:162−183(2007)に記載されるように、ファージミドpAffi1/pAY00065において構築されたバクテリオファージで提示されるZ分子のランダム変異体のライブラリー(Zlib2002と示される)を、HER3−ECD−結合ポリペプチドの選択のために使用した。ファージミドライブラリーから、さらには選択ラウンドの間に、ファージストックの製造を以前に記載された手順(Nord et al、Nat Biotech 15:772−777(1997); Hansson et al、Immunotechnology 4:237−252(1999))にしたがってヘルパーファージM13K07(New England Biolabs、#NO315S)を使用して行った。大腸菌(Escherichia coli)アンバー抑圧遺伝子系統RR1ΔM15(Ruether、Nucleic Acids Res 10:5765−5772、1982)を全てのクローニング手順のために、そしてファージ産生のための宿主として使用した。
HER3結合ポリペプチドのファージディスプレイ選択: 4ラウンドのファージディスプレイ選択を、ビオチン化又は非ビオチン化ヒトHER3−ECDに対して行った。4回の選択サイクルを、2つの異なる標的濃度でビオチン化標的を含む溶液で、又は非ビオチン化標的を含む固相で行った。溶液では、ファージ粒子標的複合体がストレプトアビジン被覆ビーズに捕捉された。各選択サイクルについて、洗浄回数を増やした。ファージ粒子力価及び収率を、各選択サイクル後に計算した。ファージ粒子収率(選択された(out)ファージ粒子/導入した(in)ファージ粒子)は、3回目又は最後のサイクルで増加し、標的結合クローンの濃縮を示していた。
材料及び方法
タンパク質発現及び精製:実施例1においてサブクローニングした形質転換したE.coli BL21(DE3)培養物を、TSB−YEで約1の光学密度まで増殖させた。次いで1M IPTGを最終濃度0.5mMまで加えることによりタンパク質発現を誘導した。培養物を誘導の5時間後に遠心分離により採取した。上清を廃棄し、そして細胞ペレットを集めて−20℃で貯蔵した。
含めた。
タンパク質発現及び精製: 15の二量体Z変異体分子(His6−(Z#####)2−Cysの形態)は許容しうる産生レベルの可溶性タンパク質を生じ、そして産生されたバッチの純度は、基準を満たさなかった2つのZ変異体(His6−(Z01826)2−Cys及びHis6−(Z02009)2−Cys)を除いて、SDS−PAGE分析により90%を超えると見積もられた。LC/MS分析により、全ての純粋なZ変異体分子について正確な分子量が確認された。
CD分析: CDスペクトルは、Z変異体分子がα−ヘリックス構造を20℃で有していることを示した。この結果は融点(Tm)を決定した温度可変測定(表1)でも確認された。
この実施例において、成熟ライブラリーを構築した。このライブラリーをHER3結合ポリペプチドの選択のために使用した。成熟ライブラリーからの選択は通常、増加した親和性を有するバインダーを生じると期待される(Orlova et al、Cancer Res 66(8):4339−48(2006)。しかしモノヌクレオチド及び縮重コドンを使用する伝統的なオリゴヌクレオチド合成技術は、ブドウ球菌系統がアンバー停止コドンを抑制することができないために設計を制限し得る。この研究において、無作為化二本鎖リンカーをSlonomics(R)技術により代わりに生成し、これはその後に構成される二本鎖DNAのライゲーション及び制限を使用したトリヌクレオチドビルディングブロックの無作為化セットの組み込みを可能にする。
ライブラリー設計: ライブラリーは、実施例1及び2に記載されるHER3結合Z変異体の配列に基づくものであった。新しいライブラリーにおいて、Z分子骨格における13の可変位置は、配列番号1〜21において定義されるZ変異体配列の結合モチーフに基づいたストラテジーにしたがって、特定のアミノ酸残基に偏っていた。制限部位XhoI及びNheIが隣接した、HER3結合ポリペプチドのヘリックス1及び2において部分的に無作為化された位置をコードする131bpの二本鎖リンカー、例えば5’−GAA NNN NNN NNN GCG NNN NNN GAG ATC TGG NNN TTA CCT AAC TTA AAC NNN NNN CAA NNN NNN GCC TTC ATC NNN AGT TTA NNN GAT GAC CCA AGC CAA AGC GCT AAC TT−3’(無作為化コドンはNNNと示される)の混合物を含有するSlonoMax(R)ライブラリーをSloning BioTechnology GmbHに発注した。13の可変Z位置についての新しいライブラリーにおけるアミノ酸残基の理論的分布を表3に示す:
ライブラリー構築及びクローニング: 新しいライブラリーを、確認された結合特性(実施例1及び2)を有する一組のHER3結合Z変異体(配列番号669〜689)に基づいて設計した。設計されたライブラリーの理論的なサイズは7.4×108のZ変異体であった。DNAフラグメントのライブラリーをブドウ球菌発現ベクター中にクローニングし、そしてS.カルノーサス(S.carnosus)に形質転換して約1.3×107の個々のクローンを含有する細胞提示ライブラリーを生成した。個々のライブラリーメンバーの配列分析により、理論的設計に従ったコドンの分布、並びに予期しないコドン、多重挿入及びフレームシフトの低い比率が示された。
ライブラリー品質分析: Z変異体成熟ライブラリーが細菌表面に機能的に提示されたことを確認するために、ライブラリーからのブドウ球菌細胞を蛍光標識したHSAと共にインキュベートし、そしてフローサイトメトリーを使用して分析した。結果は、ライブラリーの約72%が細胞表面で機能的ABP融合を有する全長タンパク質を発現したことを示した(データは示されていない)。従ってHER3結合ポリペプチドの成熟ライブラリーは首尾よく構築された。
材料及び方法
細胞標識及びFACSを使用したブドウ球菌細胞選別: Sc:ZHER3LIBのアリコート(ライブラリーサイズの少なくとも10倍、すなわち1.3×108より多い)を、20μg/mlクロラムフェニコールを含むTSB−YE 100mlに播種し、そして終夜37℃及び150rpmで増殖させた。16時間後、細胞(その後のサンプリング数の少なくとも4倍)を1ml PBSPで洗浄した。細胞を遠心分離(3500×g、4℃、6分)でペレット化し、そしてビオチン化HER3−Fcを含有するPBSP中に再懸濁し、そして室温で穏やかに混合しながら2時間インキュベートして平衡結合に到達させた。その後細胞を氷冷PBSPで洗浄し、続いて1.25μg/ml Alexa Fluor(R)488結合体化ストレプトアビジン(Invitrogen)及び225nM Alexa Fluor(R)647結合体化HSAを含有する1ml PBSP中で1時間氷上で暗所にてインキュベートした。氷冷PBSP1mlでの最終洗浄工程の後、細胞を選別前に氷冷PBSPに再懸濁した。細胞をFACSVantage SE(BD Biosciences)フローサイトメーターを使用して選別した。ソートゲートは 最も高いAlexa Fluor(R)488対Alexa Fluor(R)647蛍光強度比を示すZ変異体提示細胞の上部(top)フラクション(典型的に0.1%)を選別するように設定した。細胞を直接0.5ml TSB−YE培地中に選別し、そしてその後10μg/mlクロラムフェニコールを含有するTSBに播種し、そして37℃で16時間、標識及びFACSの次のラウンドのため、増殖により単離された細胞を増幅するためにインキュベートした。この手順を4回繰り返した。
改善されたZ変異体の単離のためのフローサイトメトリー選別: 成熟HER3結合Z変異体の単離のために、ブドウ球菌ライブラリーを、細胞増殖による増幅の交互のラウンドを含むラウンドの蛍光細胞分析分離にかけた。
配列決定: 576の個々のクローンを配列決定し、結果として443の配列が可読であり、そのうち45のクローンは同じ選別ラウンドにおいて1回以上出現した(配列番号690〜734)。各変異体に固有の識別番号#####を付与し、そして個々の変異体をZ#####と呼ぶ。58量体Z変異体のアミノ酸配列を図1及び配列表に配列番号690〜1002として載せる。これらのZ変異体の推定HER3結合モチーフを図1及び配列表に配列番号22〜334として載せる。これらの各Z変異体内で完全3ヘリックスバンドルを構成すると予測される49量体ポリペプチドのアミノ酸配列を図1及び配列表に配列番号356〜668として載せる。
材料及び方法
表面プラズモン共鳴分析: 表面プラズモン共鳴(SPR)分析をHER3結合Z変異体Z05405、Z05413、Z05416及びZ05417についてBIAcoreTM 2000機器(GE Healthcare)で行った。ヒトHER3−Fc(R&D Systems)及びマウスHER3−Fc(R&D systems)をCM−5センサーチップ(GE Healthcare)上でNHS/ECDアミンカップリング化学により固定化した。固定化は10mM NaAc(pH4.5)中で30μl/分の流量で、そして10μg/mlの濃度で行い、4000RUの固定化レベルを目標とした。ランニングバッファーとしてPBSPを20μl/分(別の記載がなければ)の流量で、そして再生のために5mM NaOHを使用した。
表面プラズモン共鳴分析: 4つのZ変異体Z05405、Z05413、Z05416及びZ05417の解離平衡定数(KD)をSPR技術により決定した。1部位結合モデルに対する非線形回帰を使用してZ変異体の会合速度及び解離速度から親和性を決定し、Z05405について1.61nM、Z05413について0.78nM、Z05416について0.78nM、そしてZ05417について0.69nMの解離定数を得た(図7、表4)。表4において、全ての値は同日に行われた各濃度の二つ組の平均である。
この実施例において、HER3結合Z変異体がリガンドヘレグリンのHER3に対する結合をブロックする能力を競合アッセイにおいてSPRにより調べた。
天然リガンドヘレグリン(HRG1−β1、EGF様ドメイン、R&D Systems)と4つのHER3特異的Z変異体Z05405、Z05413、Z05416及びZ05417との間の競合を、SPRを使用して2つの異なるアッセイで分析した。
HER3特異的Z変異体Z05405、Z05413、Z05416及びZ05417の天然HER3リガンドヘレグリンとのHER3に対する競合をSPR技術により調べた。
この実施例では、HER3結合Z変異体のヘレグリン誘導HER3リン酸化を妨害する能力を細胞アッセイで調べた。
刺激: MCF−7(ACC115、DSMZ)乳がん細胞を、L−グルタミン(BE17−605E、Cambrex)、非必須アミノ酸(BE13−114E、Cambrex)、ピルビン酸ナトリウム(BE13−115E、Cambrex)及び10%ウシ胎児血清(FBS、10108−165、Gibco)を補充したRPMI培地(BE12−167F、Lonza)で培養した。刺激の前日に、1×106の細胞を6mmペトリ皿(430168、BD Biosciences)に上記の培地5ml中で播種した。
HER3特異的Z変異体Z05416及びZ05417を、ネガティブコントロール(taqポリメラーゼ特異的Z01155)と一緒に、HER3のヘレグリン誘導リン酸化をブロックするそれらの能力について評価した。pHER3の相対含有量(%)を、ヘレグリン刺激培養物(ヘレグリン刺激培養物から得られたOD値)に対するブロックされた培養物(Z変異体を含有する培養物から得られたOD値)の関係として決定した。図9は、HER3結合変異体Z05416及びZ05417が用量依存的様式でヘレグリン誘導リン酸化を阻害し、一方でtaqポリメラーゼ結合変異体Z01155はいずれの効果も有していなかったことを示す。
背景の項に記載したように、HER3はHER2にとって好ましいヘテロ二量体化パートナーであり、そしてHER2はリガンド誘導シグナル伝達に関してHERファミリーの他の受容体に依存している。二重特異性HER3及びHER2標的化リガンド(例えばHER3−HER2結合Z変異体)は、両方の受容体を発現している腫瘍において受容体シグナル促進腫瘍成長をブロックするかもしれない。
二量体二重特異性Z変異体分子を、Friedman et al、Biotechnol Appl Biochem、54(2):121−31(2009)に以前に報告されたように操作した。FriedmanらはHERファミリーの2つのメンバーに対して特異的な四量体Z変異体の製造について記載しているが、HER3及びHER2二重特異性Z変異体の構築は、原理上は同じプロトコルに従う。当業者は、Friedmanらに基づく手順を適用する方法を用意に理解するだろう。HER3及びHER2に結合するヘテロ二量体Z変異体の構築については、Jonssonらにより記載される手順(前出)に従うことにより、2つの結合ポリペプチドの間に40アミノ酸のペプチドリンカーを使用してHER3結合変異体をコードする遺伝子フラグメントを、HER2結合Z変異体をコードする遺伝子フラグメントとインフレームで遺伝子融合した。
導入部に記載したように、HER3はHER2にについての好ましいヘテロ二量化パートナーである。しかし、特定の条件では、EGF受容体(EGFR又はHER1)に対する重要な二量化パートナーでもある。二重特異性HER3及びEGFR標的化リガンドを使用することにより、両方の受容体を発現している腫瘍が標的にされ、そして腫瘍促進受容体シグナル伝達がブロックされ得る。
Claims (23)
- HER3結合モチーフ(BM)を含むHER3結合ポリペプチドであって、該モチーフは、
i) EX2X3X4A YX7EIW X11LPNL X16X17X18QX20 X21AFIX25 X26LX28D、
[ここで、互いに独立して、
X2はK、R及びWから選択され;
X3はK、R、及びYから選択され;
X4は、A、D、E、G、H、I、K、L、M、Q、R、S、T、V及びWから選択され;
X7はA、E、F、G、H、K、S、T、V、W及びYから選択され;
X11はE及びQから選択され;
X16はN及びTから選択され;
X17はR、T及びVから選択され;
X18はR、T及びVから選択され;
X20はK及びRから選択され;
X21はA及びGから選択され;
X25はA、G、K、R及びSから選択され;
X26はS及びKから選択され;
X28はA、D、E、F、P、Q、S、T、W及びYから選択される];
及び
ii) i)において定義された配列に対して少なくとも93%の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列からなり、ここで該ポリペプチドは、相互作用のKD値が多くとも1×10-6MであるようにHER3の細胞外ドメインに結合する、上記HER3結合ポリペプチド。 - アミノ酸配列が、配列番号22〜334のいずれか1つから選択される、請求項1に記載のHER3結合ポリペプチド。
- アミノ酸配列が、配列番号23〜25、配列番号27〜28、配列番号32、配列番号35〜36、配列番号40、配列番号42、配列番号44〜45、配列番号53〜54及び配列番号56のいずれか1つから選択される、請求項2に記載のHER3結合ポリペプチド。
- 前記HER3結合モチーフが、3ヘリックスバンドルタンパク質ドメインの一部を形成する、請求項1〜3のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド。
- i) K−[BM]−DPSQS XaXbLLXc EAKKL NDXdQ;
[ここで、
[BM]は、請求項1〜3のいずれか1項において定義されるHER3結合モチーフであり;
XaはA及びSから選択され;
XbはN及びEから選択され;
XcはA、S及びCから選択され;
XdはA及びSから選択される]
及び
ii) 上で定義された配列のいずれか1つに対して少なくとも94%の同一性を有するアミノ酸配列、
から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド。 - アミノ酸配列が、配列番号356〜668のいずれか1つから選択される、請求項5に記載のHER3結合ポリペプチド。
- アミノ酸配列が、配列番号357〜359、配列番号361〜362、配列番号366、配列番号369〜370、配列番号374、配列番号376、配列番号378〜379、配列番号387〜388及び配列番号390のいずか1つから選択される、請求項6に記載のHER3結合ポリペプチド。
- アミノ酸配列が、配列番号690〜1002から選択される、請求項1〜4のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド。
- アミノ酸配列が、配列番号691〜693、配列番号695〜696、配列番号700、配列番号703〜704、配列番号708、配列番号710、配列番号712〜713、配列番号721、配列番号722及び配列番号724から選択される、請求項8に記載のHER3結合ポリペプチド。
- 相互作用のKD値が多くとも1×10-7MであるようにHER3に結合する、請求項1
〜9のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド。 - 相互作用のKD値が多くとも1×10-8MであるようにHER3に結合する、請求項1
〜9のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド。 - さらなるC末端アミノ酸及び/又はN末端アミノ酸を含む、請求項1〜11のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチドであって、ここでさらなるC末端アミノ酸及び/又はN末端アミノ酸の各々が、ポリペプチドの生産、精製、インビボ若しくはインビトロでの安定化、カップリング又は検出を改善する、HER3結合ポリペプチド。
- アミノ酸配列が同じであっても異なっていてもよい、少なくとも2つのHER3結合ポリペプチド単量体単位を含む、多量体形態である、請求項1〜12のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド。
- 請求項1〜13のいずれか1項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
- 請求項1〜13のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド;HER2結合ポリペプチド;及びHER3結合ポリペプチドとHER2結合ポリペプチドとを連結するための連結部分を含む、HER3及びHER2に対する結合親和性を有するリガンド。
- HER2結合ポリペプチドは、相互作用のKD値が多くとも1×10-6Mであるように
HER2に結合する、請求項15に記載のリガンド。 - HER2結合ポリペプチドは、相互作用のKD値が多くとも1×10-7Mであるように
HER2に結合する、請求項15に記載のリガンド。 - HER2結合ポリペプチドは、相互作用のKD値が多くとも1×10-8Mであるように
HER2に結合する、請求項15に記載のリガンド。 - 請求項1〜13のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド;EGFR結合ポリペプチド;及びHER3結合ポリペプチドをEGFR結合ポリペプチドと連結するための連結部分を含む、HER3及びEGFRに対する結合親和性を有するリガンド。
- インビボでリガンド半減期を延長させるための半減期延長部分をさらに含む、請求項1〜13のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド、又は請求項15〜19のいずれか1項に記載のリガンド。
- 請求項1〜13のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド又は請求項15〜20のいずれか1項に記載のリガンドと治療剤との組み合わせ。
- 治療における使用のための、請求項1〜13のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド、請求項15〜20のいずれか1項に記載のリガンド又は請求項21に記載の組み合わせ。
- 結腸がん、子宮内膜がん、胃がん、神経膠腫、乳がん、膵臓がん、頭頸部扁平上皮がん、肺がん、黒色種、髄芽腫、神経上皮腫、卵巣がん、パジェット病、乳頭様甲状腺がん、前立腺がん、皮膚扁平上皮がん、移行上皮がん及び前庭神経鞘腫から選択されるHER3関連状態の処置のための、請求項1〜13のいずれか1項に記載のHER3結合ポリペプチド、請求項15〜20のいずれか1項に記載のリガンド又は請求項21に記載の組み合わせ。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP09175025.7 | 2009-11-04 | ||
EP09175025 | 2009-11-04 | ||
PCT/SE2010/051164 WO2011056124A1 (en) | 2009-11-04 | 2010-10-27 | Her3 binding polypeptides |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013509861A JP2013509861A (ja) | 2013-03-21 |
JP2013509861A5 JP2013509861A5 (ja) | 2013-12-05 |
JP5960598B2 true JP5960598B2 (ja) | 2016-08-02 |
Family
ID=43302000
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012536757A Expired - Fee Related JP5960598B2 (ja) | 2009-11-04 | 2010-10-27 | Her3結合ポリペプチド |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10208128B2 (ja) |
EP (1) | EP2496598B1 (ja) |
JP (1) | JP5960598B2 (ja) |
WO (1) | WO2011056124A1 (ja) |
Families Citing this family (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2190863B1 (en) | 2007-07-31 | 2015-09-02 | Affibody AB | New albumin binding compositions, methods and uses |
US20120165650A1 (en) * | 2010-12-22 | 2012-06-28 | General Electric Company | Her2 binders |
JP5680671B2 (ja) | 2009-12-22 | 2015-03-04 | ロシュ グリクアート アーゲー | 抗her3抗体及びその使用 |
PL2635607T3 (pl) | 2010-11-05 | 2020-05-18 | Zymeworks Inc. | Projekt stabilnego przeciwciała heterodimerowego z mutacjami w domenie FC |
WO2012116453A1 (en) | 2011-03-03 | 2012-09-07 | Zymeworks Inc. | Multivalent heteromultimer scaffold design and constructs |
WO2013063702A1 (en) | 2011-11-04 | 2013-05-10 | Zymeworks Inc. | Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain |
US9499634B2 (en) | 2012-06-25 | 2016-11-22 | Zymeworks Inc. | Process and methods for efficient manufacturing of highly pure asymmetric antibodies in mammalian cells |
JP6498601B2 (ja) | 2012-07-13 | 2019-04-10 | ザイムワークス,インコーポレイテッド | 多価ヘテロ多量体足場設計および構築物 |
WO2014053586A1 (en) | 2012-10-05 | 2014-04-10 | Affibody Ab | Her3 binding polypeptides |
EP2912054B1 (en) | 2012-10-25 | 2017-06-21 | Affibody AB | Albumin binding polypeptide |
PL2912051T3 (pl) | 2012-10-25 | 2018-08-31 | Affibody Ab | Sposób rozdzielania białek zawierających domenę wiążącą albuminę |
US9914785B2 (en) | 2012-11-28 | 2018-03-13 | Zymeworks Inc. | Engineered immunoglobulin heavy chain-light chain pairs and uses thereof |
EP2935335B1 (en) * | 2012-12-19 | 2020-10-28 | Affibody AB | New polypeptides |
US9180185B2 (en) | 2013-01-11 | 2015-11-10 | Hoffman-La Roche Inc. | Combination therapy of anti-HER3 antibodies |
WO2014140366A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Affibody Ab | New polypeptides |
CN116987154A (zh) * | 2013-08-28 | 2023-11-03 | 阿菲博迪公司 | 具有突变的支架的结合多肽 |
AU2014357292B2 (en) | 2013-11-27 | 2020-06-25 | Zymeworks Bc Inc. | Bispecific antigen-binding constructs targeting HER2 |
CN106459212B (zh) * | 2014-02-28 | 2021-07-13 | 美勒斯公司 | 结合erbb-2和erbb-3的抗体 |
AU2015223566B2 (en) | 2014-02-28 | 2020-10-08 | Merus N.V. | Antibodies that bind EGFR and ErbB3 |
WO2015173248A1 (en) * | 2014-05-14 | 2015-11-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Her3/her2 bispecific antibodies binding to the beta-hairpin of her3 and domain ii of her2 |
BR112017004189A2 (pt) * | 2014-09-17 | 2017-12-12 | Affibody Ab | dímero de ligação ao fcrn, proteína de fusão ou conjugado, e, composição |
CN113512122A (zh) * | 2014-12-22 | 2021-10-19 | 西雅图免疫公司 | 双特异性四价抗体及其制造和使用方法 |
EP3322735A4 (en) | 2015-07-15 | 2019-03-13 | Zymeworks Inc. | BISPECIFIC ANTIGEN-BINDING CONSTRUCTS CONJUGATED TO A MEDICINAL PRODUCT |
NZ742290A (en) | 2015-10-23 | 2019-11-29 | Merus Nv | Binding molecules that inhibit cancer growth |
JP2020511993A (ja) | 2017-03-31 | 2020-04-23 | メルス ナムローゼ フェンノートシャップ | NRG1融合遺伝子を有する細胞の処置における使用のためのErbB−2及びErbB3結合二重特異性抗体 |
MA49846A (fr) | 2017-08-09 | 2020-06-17 | Merus Nv | Anticorps qui se lient à l'egfr et à cmet |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE509359C2 (sv) | 1989-08-01 | 1999-01-18 | Cemu Bioteknik Ab | Användning av stabiliserade protein- eller peptidkonjugat för framställning av ett läkemedel |
US7332580B2 (en) * | 2002-04-05 | 2008-02-19 | The Regents Of The University Of California | Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof |
US7332585B2 (en) * | 2002-04-05 | 2008-02-19 | The Regents Of The California University | Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof |
DE602004018141D1 (de) * | 2003-07-04 | 2009-01-15 | Affibody Ab | Polypeptide mit bindungsaffinität für her2 |
JP5634008B2 (ja) | 2004-04-06 | 2014-12-03 | アフィボディ・アーベー | 新規の使用および方法 |
US8008453B2 (en) * | 2005-08-12 | 2011-08-30 | Amgen Inc. | Modified Fc molecules |
GB0524788D0 (en) | 2005-12-05 | 2006-01-11 | Affibody Ab | Polypeptides |
JP5564266B2 (ja) * | 2007-02-16 | 2014-07-30 | メリマック ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド | Erbb3に対する抗体およびその使用 |
US8426557B2 (en) | 2007-08-03 | 2013-04-23 | Affibody Ab | IGF-1R binding polypeptides and their use |
EP2072525A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-24 | Affibody AB | New polypeptides having affinity for HER2 |
WO2014053586A1 (en) | 2012-10-05 | 2014-04-10 | Affibody Ab | Her3 binding polypeptides |
CN117442748A (zh) * | 2014-10-02 | 2024-01-26 | 希望之城公司 | 多价中间表位、中间表位结合抗体及其用途 |
-
2010
- 2010-10-27 EP EP10775936.7A patent/EP2496598B1/en active Active
- 2010-10-27 WO PCT/SE2010/051164 patent/WO2011056124A1/en active Application Filing
- 2010-10-27 US US13/505,493 patent/US10208128B2/en active Active
- 2010-10-27 JP JP2012536757A patent/JP5960598B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2496598A1 (en) | 2012-09-12 |
JP2013509861A (ja) | 2013-03-21 |
WO2011056124A1 (en) | 2011-05-12 |
US10208128B2 (en) | 2019-02-19 |
US20120270801A1 (en) | 2012-10-25 |
EP2496598B1 (en) | 2017-08-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5960598B2 (ja) | Her3結合ポリペプチド | |
EP2231860B1 (en) | Polypeptide derived from protein a and able to bind pdgf | |
EP1973934B1 (en) | Polypeptides | |
Kronqvist et al. | Combining phage and staphylococcal surface display for generation of ErbB3-specific Affibody molecules | |
EP2183275B1 (en) | Igf-1r binding polypeptides and their use | |
AU2016295024B2 (en) | Her2 binding proteins based on di-ubiquitin muteins | |
EP1641818A1 (en) | Polypeptides having binding affinity for her2 | |
US9187535B2 (en) | Polypeptide derived from protein A and able to bind PDGF | |
CN106488930B (zh) | 新型多肽 | |
JP6440618B2 (ja) | Her3結合ポリペプチド | |
WO2014076179A1 (en) | New polypeptide | |
WO2016059057A1 (en) | Vegfr-2 binding polypeptides | |
JP2022504472A (ja) | Her2結合四量体ポリペプチド | |
EP3325515B1 (en) | Novel binding proteins based on di-ubiquitin muteins and methods for generation | |
EP3325514B1 (en) | Her2 binding proteins based on di-ubiquitin muteins | |
WO2016059068A1 (en) | Vegfr-2 binding polypeptides |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131018 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20131018 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150113 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150413 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150511 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20151027 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160226 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20160415 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160614 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160623 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5960598 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |