KR20180101479A - 항체 및 그의 약물 접합체를 위한 제제 - Google Patents

항체 및 그의 약물 접합체를 위한 제제 Download PDF

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Abstract

수성 제제, 동결건조 제제, 및 재구성된 제제를 포함하는, 항-AXL 항체 및 항체-약물-접합체 (ADC)를 위한 계면활성제 무함유 항체 및 ADC 제제뿐만 아니라 관련 방법 및 용도가 본원에 개시된다. 제제는 특히 아우리스타틴 또는 DM1 유도체 또는 다른 유사한 소수성 약물에 기초한 항-AXL ADC에 적합하다. 일부 제제는 히스티딘 및 만니톨을 포함한다.

Description

항체 및 그의 약물 접합체를 위한 제제
본 발명은, 특히 AXL에 결합하는 항체 및 항체 약물 접합체 (ADC)에 적합한 동결건조(lyophilized) 및 수성 제제, 및 예를 들어 암 요법에서의 이러한 제제의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다.
포유동물 수용체 티로신 키나제 (RTK)의 TAM 서브패밀리는 AXL, Tyro3 및 Mer로 이루어지며, AXL은 형질전환 능력을 갖는 104-140 kDa 막횡단 단백질이다 [1]. RTK의 표적화된 억제는 항종양 및/또는 항전이성 요법으로서 효과적일 수 있다. AXL에 대한 리간드 Gas6의 결합을 차단하는 항체를 포함하는, 이들 및 다른 목적을 위한 항-AXL 모노클로날 항체가 문헌에 기재되었다.
ADC는 암 및 다른 상태의 치료를 위한 고도로 강력하고 특이적인 작용제이며, 여기서 항체 부분은 표적 세포 상의 그의 항원에 특이적으로 결합하여 약물이 표적 세포에 대한 그의 세포독성 또는 다른 치료 효과를, 임의로 내재화 후에 발휘할 수 있도록 한다. 그러나, 다른 단백질 제약과 마찬가지로, 항체는 분해 예컨대 산화, 탈아미드화 및 단편화되기 쉬울 뿐만 아니라 입자 및 응집체를 형성하기 쉽다. 따라서, 수송 및 보관 동안 안정한 항체 또는 ADC 제약을 제공하기 위해, 제약 제제 중의 담체, 부형제, 및/또는 안정화제는 조심스럽게 선택되어야 한다. 항체 또는 ADC 제제를 위한 동결건조 또는 동결 건조 제제는 특허 문헌에 기재되었고, 예를 들어 [14]-[28]을 참조한다.
ADC의 경우, 약물 접합 그 자체가 항체의 안정성을 감소시키고 물리화학적 특성을 변경시킬 수 있다는 점에서 추가의 챌린지가 존재한다. 예를 들어, 항-HER2 항체 트라스투주맙에 대한 약물 모이어티 DM1의 접합은 항체의 CH2 도메인의 탈안정화를 일으키는 것으로 보고되었다 [29]. 추가로, 세포독성 약물은 종종 소수성이므로, ADC 접합체는 전체로서 미접합 항체보다 덜 가용성일 수 있고, 따라서 응집, 입자 형성 및 표면 흡착되기 더 쉬울 수 있다. 따라서, 항체 및 ADC 제제 둘 다는 전형적으로 응집 및 흡착을 감소시키기 위해 계면활성제, 빈번하게 폴리소르베이트 20 또는 80을 포함한다 (예를 들어, [14]-[27], [30] 참조). 그러나, 많은 계면활성제는 친양쪽성 성질 및 생체 막과 반응하는 능력으로 인해 거의 독성이다. 추가로, 폴리소르베이트의 자가산화 또는 빛에 대한 노출은 과산화수소의 형성을 일으킬 수 있고, 이는 다시 항체 분자를 산화시켜 불안정한 생성물을 발생시킬 수 있다 [31][32]. 이는 ADC의 효능을 감소시킬 뿐만 아니라, 그의 잠재적으로 유해한 분해 생성물의 형성으로 이어질 수 있다.
따라서, 항체 및 ADC를 위한 계면활성제-무함유 제약 제제에 대한 필요가 여전히 남아있다.
본 발명은 보관 및 수송 동안 안정하고 입자, 응집체 및 분해 생성물이 실질적으로 없는 항-AXL 항체 및 AXL-ADC를 위한 액체 및 동결건조 제제에 관한 것이다.
본 발명자들은 항-AXL 항체-약물 접합체 (또한 "AXL-ADC", "AXL-특이적 ADC" 및 "항-AXL ADC"로 지칭됨)가 안정하게 유지되는 AXL-ADC의 동결건조 제제를 발견하였다. 본 발명자들은 또한 항체가 동결 및 해동 동안 안정하게 유지되는 항-AXL 항체의 수성 제제를 발견하였다. 놀랍게도, 동결건조 및 수성 제제 둘 다는 계면활성제 예컨대 폴리소르베이트 20 또는 80을 포함하지 않고/거나 무기 염 없이 제조될 수 있었다. 더욱이, AXL-ADC를 위한 벌킹제로서 효율적으로 기능하는 만니톨은 상응하는 항-AXL 항체를 위한 안정화제로서 효율적으로 기능하는 것으로 발견되었다.
따라서, 한 측면에서, 본 발명은 1종 이상의 적합한 부형제를 포함하는 AXL-ADC의 안정한, 계면활성제-무함유 동결건조 제제를 제공한다. 임의로, 동결건조 제제는 또한 어떠한 염도 본질적으로 없을 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 AXL-ADC의 동결건조, 임의로 계면활성제-무함유 제제에 관한 것이며, 동결건조 제제는 AXL-ADC; 완충제, 적어도 1종의 벌킹제, 및 고체 상태에서 ADC와 무정형 상을 형성하는 적어도 1종의 비-환원당을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득가능하거나 또는 수득된다.
이러한 동결건조 제제에 대한 예시적인 성분은
(a) 전형적으로 동결건조 전 및/또는 재구성 후 수성 제제에서 약 5 내지 약 7의 pH를 제공하는 완충제 성분 예컨대, 예를 들어, 히스티딘, 시트레이트, 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 (MES), 숙시네이트, 글리콜레이트, 탄산, 포스페이트, 및 그의 조합물;
(b) 1종 이상의 비-환원당 예컨대 수크로스 및/또는 트레할로스;
(c) 1종 이상의 벌킹제 예컨대 만니톨 및/또는 글리신
을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
한 측면에서, 본 발명은 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 항-AXL 항체의 안정한, 계면활성제 무함유 수성 제제를 제공하며, 임의로 여기서 제제는 어떠한 염도 본질적으로 없다.
한 측면에서, 본 발명은 완충제 및 적어도 1종의 안정화제를 포함하는 항-AXL 항체의 수성, 임의로 계면활성제-무함유 제제에 관한 것이며, 여기서 수성 제제의 pH는 약 5 내지 약 7이다.
이러한 수성 제제에 대한 예시적인 성분은
(a) 전형적으로 약 5 내지 약 7의 pH를 제공하는 완충제 성분 예컨대, 예를 들어, 히스티딘, 시트레이트, MES, 숙시네이트, 글리콜레이트, 탄산, 포스페이트, 및 그의 조합물;
(b) 임의로, 1종 이상의 비-환원당 예컨대 수크로스 및/또는 트레할로스;
(c) 1종 이상의 안정화제 예컨대 만니톨
을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
이들 및 다른 측면 및 실시양태가 하기 섹션에 보다 상세하게 기재되어 있다.
도 1은 HuMax-AXL DoE 연구에 대한 SEC (HMW 종) 결과를 나타낸다.
도 2는 HuMax-AXL DoE 연구에 대한 SEC (주요 피크) 결과를 나타낸다.
도 3은 HuMax-AXL DoE 연구에 대한 SEC (LMW 종) 결과를 나타낸다.
도 4는 HuMax-AXL DoE 연구에 대한 cIEF (주요 피크) 결과를 나타낸다.
도 5는 폴리소르베이트를 함유하고 교반 및 동결-해동 사이클에 노출된 HuMax-AXL-ADC 샘플에 대한 cIEF 데이터 (% 주요, 산성, 및 염기성 이소형)를 나타낸다.
도 6은 HuMax-AXL-ADC 완충제 DoE 연구에 대한 SEC (% 주요 피크) 결과를 나타낸다. 샘플을 25℃ 및 40℃에서 1주 및 2주 보관 후 분석하였다.
도 7은 HuMax-AXL-ADC 완충제 DoE 연구에서 25℃ 또는 40℃에서 보관된 샘플에 대해 완충제 유형 (A), 완충제 농도 (B) 및 pH (C)에 의해 SEC % 주요 피크를 비교하는 일원 분산 분석 데이터 (ANOVA)를 나타낸다.
도 8은 HuMax-AXL-ADC 완충제 DoE 연구에서 25℃ 또는 40℃에서 보관된 샘플에 대해 완충제 유형 (A), 완충제 농도 (B) 및 pH (C)에 의해 cIEF % 주요 피크를 비교하는 일원 분산 분석 데이터 (ANOVA)를 나타낸다.
도 9는 HuMax-AXL-ADC 동결건조 부형제 DoE 연구에서 25℃ 또는 40℃에서 보관된 샘플에 대해 당 유형 (A), 당 농도 (B) 및 pH (C)에 의해 SEC % 주요 피크를 비교하는 일원 분산 분석 데이터 (ANOVA)를 나타낸다.
도 10은 HuMax-AXL-ADC 동결건조 부형제 DoE 연구에서 25℃ 및 40℃에서 보관된 샘플에 대한 SEC 데이터 (% 주요 피크)를 나타낸다.
도 11은 HuMax-AXL-ADC 동결건조 부형제 DoE 연구에서 25℃ 또는 40℃에서 보관된 샘플에 대해 당 유형 (A), 당 농도 (B) 및 pH (C)에 의해 cIEF % 주요 피크를 비교하는 일원 분산 분석 데이터 (ANOVA)를 나타낸다.
도 12는 40℃에서 2개월 후 높은, 중간, 및 낮은 수분의 HuMax-AXL-ADC 동결건조 샘플에 대한 DSC 역전 열 유량 데이터를 나타낸다. Tg에 대한 중간점 값은 대략 60℃ 내지 45℃의 범위이다.
도 13은 40℃에서 2개월 후 높은, 중간, 및 낮은 수분 샘플에 대한 cIEF 데이터 (% 주요 피크)를 나타낸다.
정의
용어 "동결건조" 및 "동결-건조"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되고 먼저 동결시킨 다음, 주위 압력을 감소시켜 물질 내의 동결된 물이 승화되도록 함으로써 탈수된 물질을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "완충제"는 제약상 허용되는 완충제를 나타낸다. 용어 "완충제"는 용액의 pH 값을, 예를 들어, 허용되는 범위로 유지시키는 작용제를 포괄하고, 본원에 기재된 바와 같은 히스티딘, 시트레이트, MES, 포스페이트, 트리스(TRIS)® (트리스 (히드록시메틸)아미노메탄), 탄산, 숙시네이트, 글리콜레이트 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일반적으로, 본원에 사용된 "완충제"는 약 5 내지 약 7, 바람직하게는 약 5.5 내지 6.5, 바람직하게는 약 5.8 내지 6.2의 pH 범위, 예컨대 약 pH 6 또는 약 pH 6.0에 적합한 pKa 및 완충 능력을 갖는다.
용어 "벌킹제"는 (예를 들어, 제약상 허용되는 케이크를 제공하기 위해) 동결-건조 생성물에 추가의 구조를 제공할 수 있는 작용제를 포함한다. 통상적으로 사용되는 벌킹제는 만니톨, 글리신 등을 포함한다. 제약상 허용되는 케이크를 제공하는 것에 더하여, 벌킹제는 또한 전형적으로 동결건조 조성물에 유용한 품질 예컨대 붕괴 온도를 변형시키는 것, 동결-해동 보호를 제공하는 것, 장기간 보관에 걸쳐 단백질 안정성을 추가로 증진시키는 것 등을 부여한다. 이들 작용제는 또한 장성 개질제로서 작용할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "안정화제"는 단백질에 안정성을 제공하는, 예를 들어, 동결 동안 동결보호제로서 및/또는 (동결-) 건조 또는 '탈수' 공정 동안 동결건조보호제로서 작용하는 작용제를 포함한다. 적합한 안정화제는 비-환원당 또는 사카라이드 및 당 알콜 예컨대 수크로스, 트레할로스, 만니톨, 크실리톨 등뿐만 아니라 아미노산 예컨대 글리신, 알라닌 및 리신을 포함한다. 안정화제는 또한 벌킹제, 장성-개질제 및/또는 점도-증가제로서 작용할 수 있다.
본원에 사용된 "계면활성제"는 전형적으로 표면에 대한 약물 흡착 및/또는 응집을 방지하기 위해 제약 제제에 사용되는 화합물이다. 또한, 계면활성제는 두 액체 사이의 또는 액체와 고체 사이의 표면 장력 (또는 계면 장력)을 낮춘다. 예를 들어, 예시적인 계면활성제는 매우 낮은 농도 (예를 들어, 5% w/w 이하, 예컨대 3% w/w 이하, 예컨대 1% w/w 이하)로 존재하는 경우에 표면 장력을 유의하게 낮출 수 있다. 계면활성제는 친양쪽성이고, 이는 이들이 통상적으로 친수성 및 소수성 또는 친지성 기 둘 다로 구성되고, 따라서 수용액 중에서 미셀 또는 유사한 자기-조립 구조를 형성할 수 있다는 것을 의미한다. 제약 용도를 위한 공지된 계면활성제는 글리세롤 모노올레에이트, 벤제토늄 클로라이드, 소듐 도큐세이트, 인지질, 폴리에틸렌 알킬 에테르, 소듐 라우릴 술페이트 및 트리카프릴린 (음이온성 계면활성제); 벤즈알코늄 클로라이드, 세트리미드, 세틸피리디늄 클로라이드 및 인지질 (양이온성 계면활성제); 및 알파 토코페롤, 글리세롤 모노올레에이트, 미리스틸 알콜, 인지질, 폴록사머, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 폴리옥시에틸렌 피마자 오일 유도체, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 폴리옥실 15 히드록시스테아레이트, 폴리옥실글리세리드, 폴리소르베이트, 프로필렌 글리콜 디라우레이트, 프로필렌 글리콜 모노라우레이트, 소르비탄 에스테르 수크로스 팔미테이트, 수크로스 스테아레이트, 트리카프릴린 및 TPGS (비이온성 및 쯔비터이온성 계면활성제)를 포함한다.
본원의 관심 "희석제"는 제약상 허용되는 (인간에게 투여하기에 안전하고 비-독성인) 것이고 재구성된 제제의 제조에 유용하다. 예시적인 희석제는 액체, 바람직하게는 수성이고, 멸균수, 정박테리아 주사용수 (BWFI), pH 완충 용액 (예를 들어 포스페이트-완충 염수), 멸균 염수 용액, 링거액 또는 덱스트로스 용액을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 전형적인 생리학적 및/또는 종양-특이적 조건 하에 유의한 기간, 예컨대 적어도 약 30분, 적어도 약 45분, 적어도 약 1시간, 적어도 약 2시간, 적어도 약 4시간, 적어도 약 8시간, 적어도 약 12시간, 약 24시간 이상, 약 48시간 이상, 약 3, 4, 5, 6, 7일 또는 그 초과 등, 또는 임의의 다른 관련 기능적으로-정의된 기간 (예컨대 항원에 대한 항체 결합과 연관된 생리학적 반응을 유도하고/거나, 촉진시키고/거나, 증진시키고/거나, 조정하는 데 충분한 시간, 및/또는 항체가 내재화되는 데 충분한 시간)의 반감기로 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 갖는 이뮤노글로불린 분자, 이뮤노글로불린 분자의 단편, 또는 그 중 어느 하나의 유도체를 지칭하는 것으로 의도된다. 항원과 상호작용하는 결합 영역 (또는 본원에서 사용될 수 있는 결합 도메인, 둘 다 동일한 의미를 가짐)은 이뮤노글로불린 분자의 중쇄 및 경쇄 둘 다의 가변 영역을 포함한다. 항체 (Ab)의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예컨대 이펙터 세포) 및 보체계의 성분, 예컨대 보체 활성화의 전형적 경로의 제1 성분인 C1q를 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 대한 이뮤노글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 상기 나타내어진 바와 같이, 본원에 사용된 용어 항체는, 달리 언급되거나 또는 문맥에 의해 명백하게 모순되지 않는 한, 항원과 특이적으로 상호작용하는, 예컨대 결합하는 능력을 보유하는 항체의 단편을 포함한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 용어 "항체" 내에 포괄되는 결합 단편의 예는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편, 또는 [35]에 기재된 바와 같은 1가 항체인 Fab' 또는 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서의 디술피드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 본질적으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 본질적으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 본질적으로 이루어지고, 또한 도메인 항체로 칭해지는 [37] dAb 단편 [36]; (vi) 낙타류 또는 나노바디 [38] 및 (vii) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다. 또한, Fv 단편의 2개의 도메인인 VL 및 VH는 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은 재조합 방법을 사용하여, 이들이 단일 단백질 쇄로서 제조될 수 있게 하는 합성 링커에 의해 연결될 수 있으며, 여기서 VL 및 VH 영역은 쌍형성하여 1가 분자를 형성한다 (단일 쇄 항체 또는 단일 쇄 Fv (scFv)로 공지됨, 예를 들어 [39] 및 [40] 참조). 이러한 단일 쇄 항체는 달리 언급되거나 또는 문맥에 의해 명백하게 지시되지 않는 한 용어 항체 내에 포괄된다. 이러한 단편은 일반적으로 항체의 의미 내에 포함되지만, 이들은 집합적으로 및 각각 독립적으로 상이한 생물학적 특성 및 유용성을 나타내는 본 발명의 특유한 특징이다. 본 발명의 문맥에서 이들 및 다른 유용한 항체 단편은 본원에 추가로 논의되어 있다. 용어 항체는, 달리 명시되지 않는 한, 또한 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체 (mAb), 항체-유사 폴리펩티드, 예컨대 키메라 항체 및 인간화 항체뿐만 아니라 임의의 공지된 기술, 예컨대 효소적 절단, 펩티드 합성, 및 재조합 기술에 의해 제공되는 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하고 (항원-결합 단편), 독소에 접합되는 능력을 보유하는 '항체 단편' 또는 '그의 단편'을 포함한다는 것이 또한 이해되어야 한다. 생성된 바와 같은 항체는 임의의 이소형을 가질 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항원-결합 영역" 또는 "결합 영역"은 항원에 결합할 수 있는 항체의 영역을 지칭한다. 용어 "항원" 및 "표적"은, 문맥에 의해 모순되지 않는 한, 본 발명의 문맥에서 상호교환가능하게 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "결합"은 미리 결정된 항원 또는 표적에 대한 항체의 결합, 전형적으로 예를 들어 비아코어(BIAcore) 3000 기기에서의 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 기술에 의해 리간드로서 항원 및 분석물로서 항체를 사용하여 결정 시, 약 10-6 M 이하, 예를 들어 10-7 M 이하, 예컨대 약 10-8 M 이하, 예컨대 약 10-9 M 이하, 약 10-10 M 이하, 또는 약 10-11 M 또는 심지어 그 미만의 KD에 상응하는 친화도를 갖는 결합을 지칭하며, 여기서 항체는 미리 결정된 항원 또는 밀접하게 관련된 항원 이외의 비-특이적 항원 (예를 들어, BSA, 카세인)에 대한 결합의 그의 KD보다 적어도 10-배 더 낮은, 예컨대 적어도 100배 더 낮은, 예를 들어 적어도 1,000배 더 낮은, 예컨대 적어도 10,000배 더 낮은, 예를 들어 적어도 100,000배 더 낮은 KD에 상응하는 친화도로 미리 결정된 항원에 결합한다. 결합의 KD가 보다 낮은 양은 항체의 KD에 의존하므로, 항체의 KD가 매우 낮은 (즉, 항체가 매우 특이적인) 경우에, 항원에 대한 친화도가 비-특이적 항원에 대한 친화도보다 더 낮은 양은 적어도 10,000배일 수 있다. 본원에 사용된 친화도와 KD는 반비례로 관련되고, 즉 보다 높은 친화도는 보다 낮은 KD를 지칭하는 것으로 의도되고, 보다 낮은 친화도는 보다 높은 KD를 지칭하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된:
- 용어 "KD" (M)는 특정한 항체-항원 상호작용의 해리 평형 상수를 지칭하고, kd를 ka로 나눔으로써 획득된다.
- 용어 "kd" (sec- 1)는 특정한 항체-항원 상호작용의 해리율 상수를 지칭한다. 상기 값은 또한 koff 값 또는 오프-레이트(off-rate)로 지칭된다.
- 용어 "ka" (M-1 x sec- 1)는 특정한 항체-항원 상호작용의 회합률 상수를 지칭한다. 상기 값은 또한 kon 값 또는 온-레이트(on-rate)로 지칭된다.
- 용어 "KA" (M- 1)는 특정한 항체-항원 상호작용의 회합 평형 상수를 지칭하고 ka를 kd로 나눔으로써 획득된다.
본원에 사용된 용어 "AXL에 결합하는 항체"는 AXL의 세포외 부분 상의 에피토프에 결합하는 임의의 항체를 지칭한다.
용어 "에피토프"는 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질 결정기를 의미한다. 에피토프는 통상적으로 분자의 표면 기 예컨대 아미노산, 당 측쇄 또는 그의 조합으로 이루어지고 통상적으로 특정한 3차원 구조적 특징뿐만 아니라 특정한 전하 특징을 갖는다. 입체형태적 및 비-입체형태적 에피토프는 전자에 대한 결합이 변성 용매의 존재 하에 상실되지만, 후자는 그렇지 않다는 점에서 구별된다. 에피토프는 결합에 직접적으로 수반되는 아미노산 잔기, 및 결합에 직접적으로 수반되지 않는 다른 아미노산 잔기, 예컨대 특이적 항원 결합 펩티드에 의해 효과적으로 차단되거나 또는 덮어지는 아미노산 잔기 (다시 말해서, 아미노산 잔기가 특이적 항원 결합 펩티드의 풋프린트 내에 있음)를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "AXL"은 포유동물 TAM 수용체 티로신 키나제 (RTK)의 서브패밀리의 일부인 104-140 kDa의 분자량을 갖는 894개의 아미노산 단백질인, 또한 UFO 또는 JTK11로 지칭되는 AXL이라는 표제의 단백질을 지칭한다. 분자량은 단백질의 글리코실화의 잠재적 차이로 인해 가변적이다. AXL 단백질은 단백질의 N-말단 상의 2개의 세포외 이뮤노글로불린-유사 (Ig-유사) 도메인, 2개의 막-근위 세포외 피브로넥틴 유형 III (FNIII) 도메인, 막횡단 도메인 및 세포내 키나제 도메인으로 이루어진다. AXL은 그의 리간드 Gas6의 결합 시, AXL 세포외 도메인 사이의 리간드-비의존성 동종친화성 상호작용에 의해, 반응성 산소 종의 존재 하에서의 자가인산화에 의해 또는 EGFR을 통한 전사활성화에 의해 활성화되고, 여러 종양 유형에서 비정상적으로 발현된다. 인간에서, AXL 단백질은 서열식별번호: 130 (인간 AXL 단백질: 스위스프로트(Swissprot) P30530; 시노몰구스 AXL 단백질: 진뱅크(Genbank) 수탁 HB387229.1))에 제시된 아미노산 서열을 코딩하는 핵산 서열에 의해 코딩된다.
본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체", "모노클로날 Ab", "모노클로날 항체 조성물", "mAb" 등은 단일 분자 조성물의 항체 분자의 제제를 지칭한다. 모노클로날 항체 조성물은 특정한 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타낸다. 따라서, 용어 "인간 모노클로날 항체"는 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 단일 결합 특이성을 나타내는 항체를 지칭한다. 인간 모노클로날 항체는 불멸화 세포에 융합된 인간 중쇄 트랜스진 및 경쇄 트랜스진을 포함하는 게놈을 갖는 트랜스제닉 또는 트랜스크로모소말 비-인간 동물, 예컨대 트랜스제닉 마우스로부터 수득된 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산될 수 있다.
본 발명의 문맥에서, 용어 "ADC"는 항체 약물 접합체를 지칭하고, 이는 본 발명의 문맥에서 본 출원에 기재된 바와 같은 치료 모이어티, 예를 들어, 세포독성 모이어티에 커플링된 항-AXL 항체를 지칭한다. 이는 예를 들어 링커를 사용하여, 예를 들어 시스테인에 또는 다른 접합 방법을 사용하여 다른 아미노산에 커플링될 수 있다. 모이어티는 예를 들어 약물 또는 독소 등일 수 있다.
본원에 사용된 "치료 모이어티"는 대상체에게 투여되는 경우, 특히 본원에 기재된 바와 같은 ADC로서 전달되는 경우에 치료 또는 예방 효과를 발휘하는 화합물을 의미한다. "세포독성" 또는 "세포증식억제성" 모이어티는 세포에 유해한 (예를 들어, 이를 사멸시키는) 화합물이다. ADC에 사용하기 위한 일부 세포독성 또는 세포증식억제성 모이어티는 소수성이고, 이는 이들이 물 중 용해도를 갖지 않거나 또는 단지 제한된 용해도, 예를 들어, 1 g/L 이하 (매우 약하게 가용성), 예컨대 0.8 g/L 이하, 예컨대 0.6 g/L 이하, 예컨대 0.4 g/L 이하, 예컨대 0.3 g/L 이하, 예컨대 0.2 g/L 이하, 예컨대 0.1 g/L 이하 (사실상 불용성)만을 갖는다는 것을 의미한다. 예시적인 소수성 세포독성 또는 세포증식억제성 모이어티는 특정 마이크로튜불린 억제제, 예컨대 아우리스타틴 및 그의 유도체, 예를 들어, MMAF 및 MMAE뿐만 아니라 메이탄신 및 그의 유도체, 예를 들어, DM1을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
항체 및 리간드의 문맥에서 또는 2개 이상 항체의 문맥에서 본원에 사용되는 경우에, 용어 "와 경쟁하다" 또는 "와 교차-경쟁하다"는 항체가 항원에 대한 결합에서 각각 리간드 또는 또 다른 항체, 예를 들어, "참조" 항체와 경쟁한다는 것을 나타낸다. 실시예 13은 항-AXL 항체와 AXL-리간드 Gas6의 경쟁을 시험하는 방법의 예를 기재한다. 2개의 항체 사이의 교차-경쟁을 위한 바람직한 참조 항체는, 표 1에 제시된 바와 같은, 107, 148, 733, 154, 171, 183, 613, 726, 140, 154-M103L, 172, 181, 183-N52Q, 187, 608-01, 610-01, 613-08, 620-06 또는 726-M101L로 본원에서 지정된 항체의 VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 결합 영역을 포함하는 것이다. 특히 바람직한 참조 항체는 107로 지정된 항체이다.
본 발명은 또한, 한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 VL 영역, VH 영역, 또는 1개 이상의 CDR의 기능적 변이체를 포함하는 항체의 제제를 제공한다. 항-AXL 항체의 문맥에서 사용되는 VL, VH, 또는 CDR의 기능적 변이체는 여전히 항체가 모 항체의 친화도/결합력 및/또는 특이성/선택성의 적어도 실질적인 비율 (적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 그 초과)을 보유하도록 하고 일부 경우에 이러한 항-AXL 항체는 모 항체보다 더 큰 친화도, 선택성 및/또는 특이성으로 회합될 수 있다.
이러한 기능적 변이체는 전형적으로 모 항체에 대해 유의한 서열 동일성을 보유한다. 2종의 서열의 퍼센트 동일성은 2종의 서열의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 수, 및 각각의 갭의 길이를 고려한, 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다 (즉, % 동일성 = 동일한 위치의 #/위치의 총 # x 100). 2종의 서열 사이의 서열의 비교 및 퍼센트 동일성의 결정은 하기 기재된 바와 같이, 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다.
본 발명의 목적을 위해, 2종의 아미노산 서열 사이의 서열 동일성은 EMBOSS 패키지 (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), 바람직하게는 버전 5.0.0 이후의 니들(Needle) 프로그램에서 실행되는 바와 같은 니들만-분쉬(Needleman-Wunsch) 알고리즘 (Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453)을 사용하여 결정된다. 사용되는 파라미터는 갭 개방 페널티 10, 갭 연장 페널티 0.5, 및 EBLOSUM62 (BLOSUM62의 EMBOSS 버전) 치환 매트릭스이다. "가장 긴 동일성" (-nobrief 옵션을 사용하여 획득됨)으로 표지된 니들의 결과는 퍼센트 동일성으로서 사용되고 하기와 같이 계산된다:
(동일한 잔기 x 100)/(정렬의 길이 - 정렬 내의 갭의 총수).
유사한 잔기의 보유는 또한 또는 대안적으로 BLAST 프로그램 (예를 들어, 표준 설정 BLOSUM62, 개방 갭=11 및 연장된 갭=1을 사용하여 NCBI를 통해 이용가능한 BLAST 2.2.8)의 사용에 의해 결정된 바와 같은 유사성 점수에 의해 측정될 수 있다. 적합한 변이체는 전형적으로 모 서열에 대해 적어도 약 45%, 예컨대 적어도 약 55%, 적어도 약 65%, 적어도 약 75%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 그 초과 (예를 들어, 약 99%)의 유사성을 나타낸다.
CDR, VH 또는 VL 변이체의 서열은 대부분 보존적 치환을 통해 모 항체의 CDR, VH 또는 VL의 서열과 상이할 수 있고; 예를 들어 변이체에서의 적어도 약 35%, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상 예컨대 약 96%, 97% 또는 98% 또는 99%의 치환은 보존적 아미노산 잔기 치환이다. 예를 들어, CDR, VH 또는 VL 변이체의 서열은 대부분 보존적 치환을 통해 모 항체의 CDR, VH 또는 VL의 서열과 상이할 수 있고; 예를 들어 변이체에서의 적어도 10개, 예컨대 적어도 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 치환은 보존적 아미노산 잔기 치환이다.
본 발명의 문맥에서, 보존적 치환은 하기 표 중 1개 이상에서 반영되는 아미노산의 부류 내에서의 치환에 의해 정의될 수 있다:
보존적 부류의 아미노산 잔기:
Figure pct00001
아미노산 잔기의 대안적 물리적 및 기능적 분류:
Figure pct00002
본원에 사용된 용어 "이소형"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 코딩되는 이뮤노글로불린 부류 (예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgD, IgA, IgE, 또는 IgM) 또는 그의 임의의 동종이형, 예컨대 IgG1m(za) 및 IgG1m(f)을 지칭한다. 추가로, 각각의 중쇄 이소형은 카파 (κ) 또는 람다 (λ) 경쇄와 조합될 수 있다. 한 실시양태에서, 이소형은 IgG1, 임의로 동종이형 IgG1m(f)이다. 한 실시양태에서, 항체는 전장 모노클로날 항체, 임의로 전장 모노클로날 IgG1,κ 항체이다.
본원에 사용되는 경우 용어 "전장 항체"는 그 이소형의 야생형 항체에서 정상적으로 발견되는 것에 상응하는 모든 중쇄 및 경쇄 불변 및 가변 도메인을 함유하는 항체 (예를 들어, 모 또는 변이체 항체)를 지칭한다. 본 발명에 따른 전장 항체는 (i) CDR 서열을 완전한 중쇄 서열 및 완전한 경쇄 서열을 포함하는 적합한 벡터 내로 클로닝하는 단계, 및 (ii) 완전한 중쇄 및 경쇄 서열을 적합한 발현 시스템에서 발현시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 생산될 수 있다. CDR 서열 또는 전체 가변 영역 서열로부터 시작하는 경우에 전장 항체를 생산하는 것은 통상의 기술자의 지식 내에 있다. 따라서, 통상의 기술자는 본 발명에 따른 전장 항체를 생성하는 방법을 알 것이다.
하나의 바람직한 측면에서, 본원에 기재된 제제 중 어느 하나는 정확한 양(들)의 본원에 포함된 바와 같은 1종 이상의 성분 및/또는 정확한 pH 값을 포함한다. 다시 말해서, 용어 "약" 중 1개 이상은 본 발명의 이러한 다른 바람직한 측면에서 삭제된다.
특정 특색 또는 성분을 "포함하는" 제제와 관련된 각각의 측면 또는 실시양태에서, 이러한 특색 또는 성분"으로 본질적으로 이루어진" 이러한 제제는 또한 본 발명의 별개의 측면 또는 실시양태이다.
본 발명의 구체적 실시양태
본 발명은, 적어도 부분적으로, 동결건조 시, AXL-ADC의 제약 목적 및 치료 용도에 적합한 안정한 동결건조 제제를 제공하는 AXL-ADC의 특정 수성 조성물, 특히 제제의 발견에 기초한다. 이러한 동결건조 제제는, 예를 들어, 희석제, 전형적으로 수성 희석제를 첨가함으로써 제약상 허용되는 액체 제제로 재구성될 수 있다.
본 발명은 또한, 부분적으로, 항체가 동결 및 해동 동안 안정한 항-AXL 항체의 특정 수성 조성물, 특히, 제제의 발견에 기초한다. 본원에 개시된 제제는 또한 계면활성제 예컨대, 예를 들어, 폴리소르베이트 20 및 80; 무기 염 예컨대, 예를 들어, NaCl; 또는 둘 다를 배제하는 옵션을 제공한다.
제약 제품의 장기간 보관 (보관 수명) 동안 효능 및 안전성을 보장하기 위해, 제품은 전형적으로 예정 보관 온도 및 승온(들) 둘 다에서의 보관을 포함하는 선택된 조건 하에 보관되고, 규칙적 시간 간격으로 안정성에 대해 분석된다. 안정성 시험은, 예를 들어, 제품의 동일성, 순도 및/또는 효력의 분석을 포함할 수 있다. 순도는, 예를 들어, 소듐 도데실 술페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE), 모세관 전기영동 소듐 도데실 술페이트 (CE-SDS), 모세관 등전점전기영동 (cIEF), 면역전기영동, 역상 크로마토그래피 (RP-HPLC), 크기-배제 크로마토그래피 (SEC), 이온 교환 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 분석될 수 있다. 안정성 분석은 또한, 예를 들어, 시각적 외관 예컨대 색상 및 투명성, 미립자, pH, 수분 및 재구성 시간을 포함할 수 있다.
장기간 보관 (보관 수명) 동안, 특히 순도 및 효력과 관련하여, 생성된 분해 프로파일은 제약 제품의 조성 및/또는 제제에 의해 영향을 받는다. 특히, 제제의 적절한 선택은 분해 프로파일을 유의하게 개선시킬 수 있다. 모노클로날 항체 및 모노클로날 항체로부터 유래된 접합된 약물 제품의 전형적인 분해 프로파일은 공유 및 비-공유 고분자량 응집체, 단편, 탈아미드화 및 산화 생성물의 형성을 포함한다. 특히, 탈아미드화 및 산화 생성물뿐만 아니라 산성 종은 통상적으로 장기간 보관 (보관 수명) 동안 발생한다. 일부 경우에 이들 분해 생성물은 제약 조성물의 허용되는 보관 수명을 제한한다. 분해 생성물은 다양한 분석 시험 예컨대 cIEF, SEC, SDS-PAGE, CE-SDS, 동적 광 산란 (DLS), 분석용 초원심분리 (AUC) 및 장 흐름 분획화 (FFF)에 의해 확인될 수 있다.
구체적으로, cIEF는 항체 이성질체를 그의 주위의 pH에 의해 정해지는 분자 상의 전체 전하로부터 생성된 그의 등전점 (pI)의 차이에 의해 분리한다. 비-스트레스(non-stressed) HuMax-AXL 샘플의 cIEF 전기영동도는 전형적으로 총 피크 면적의 60% 초과를 차지하는 1개의 주요 피크뿐만 아니라 산성 및 염기성 이소형 둘 다를 나타냈다. 다양한 제제 사이의 cIEF 데이터의 비교를 위해, 백분율 주요, 산성 및 염기성 이소형이 사용되었다.
SEC는 용액 중 분자가 그의 크기 및/또는 분자량에 의해 분리되는 크로마토그래피 방법이다. 비-스트레스 HuMax-AXL 샘플의 SEC 크로마토그램은 전형적으로 단량체 항체에 상응하고, 총 피크 면적의 90% 초과를 차지하는 1개의 주요 피크를 나타냈다. 이 1개의 주요 SEC 피크는 각각의 제제 중의 항체의 크기 균질성을 반영하였다. 다양한 제제 사이의 SEC 데이터의 비교를 위해, 주요 피크 이전에 용리된 종에 대한 피크 면적 값을 합하고 퍼센트 HMW (고분자량) 종으로서 기록하였고, 이는 통상적으로 응집된 형태를 나타낸다. 유사하게, 주요 피크 이후에 용리된 종에 대한 피크 면적 값을 합하고 퍼센트 LMW (저분자량) 종으로서 기록하였고, 이는 통상적으로 분해된 형태를 나타낸다.
"A280"은 280 nm에서의 자외선 흡광도를 측정하는 분광광도측정 방법이다. 자외선 흡수 (280nm)에 의한 단백질 농도의 결정은 단백질 내의 방향족 아미노산의 존재에 의존한다. 용액의 농도는 비어-램버트(Beer-Lambert) 법칙: (c=A/ε.l)을 사용하여 계산할 수 있으며; 여기서 c는 몰 농도이고, l은 큐벳의 경로-길이 (단위 cm)이고, ε는 몰 흡광 계수 (단위 M-1 cm-1)이고 A는 280 nm에서의 흡광도이다.
예를 들어, 제약상 허용되는 안정성을 갖는 본 발명의 동결건조 AXL-ADC 제제는 적어도 약 3개월, 바람직하게는 약 6개월, 및 보다 바람직하게는 약 12개월 이상, 예컨대 18개월 이상의 기간 동안, 예컨대 적어도 24 또는 심지어 36개월 동안 약 5 ± 3℃ 또는 25 ± 2℃의 온도에서 보관되는 경우에, 응집체의 양이 예를 들어 실시예 9에 따라 SEC 분석을 사용하여 결정 시 약 10% 미만, 바람직하게는 약 5% 미만, 보다 바람직하게는 약 2% 미만인 것일 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 본 발명의 안정한 동결건조 AXL-ADC 제제는 적어도 약 3개월, 바람직하게는 약 6개월, 및 보다 바람직하게는 약 12개월 이상의 기간 동안 약 5 ± 3℃ 또는 25 ± 2℃의 온도에서 보관되는 경우에, 주요 이소형의 변화가, 예를 들어, 실시예 9에 따라 cIEF 분석을 사용하여 결정 시 15% 미만, 바람직하게는 10% 미만, 보다 바람직하게는 8% 미만, 가장 바람직하게는 5% 미만인 것일 수 있다.
한 실시양태에서, 제약상 허용되는 안정성을 갖는 동결건조 AXL-ADC 제제는 적어도 6개월 동안, 예컨대 적어도 9개월 동안, 예컨대 적어도 15개월 동안 또는 바람직하게는 적어도 18개월 동안, 또는 보다 더 바람직하게는 적어도 24개월 동안, 또는 가장 바람직하게는 적어도 36개월 동안 2-8℃, 예컨대 약 5℃에서 보관되는 경우에, 응집체의 양이 10% 미만, 예컨대 5.0% 미만, 예컨대 3.0% 미만, 예컨대 2.0% 미만인 것일 수 있다.
한 실시양태에서, 제약상 허용되는 안정성을 갖는 수성 항-AXL 항체 제제는 적어도 6개월 동안, 예컨대 적어도 9개월 동안, 예컨대 적어도 15개월 동안, 예컨대 적어도 18개월 동안, 예컨대 적어도 24개월 동안, 또는 예컨대 적어도 36개월 동안 -70℃ ± 10℃, 예컨대 약 -70℃에서 보관되는 경우에, 응집체의 양이 15% 미만, 예컨대 10% 미만, 예컨대 8.0% 미만, 예컨대 5.0% 미만인 것일 수 있다.
AXL-ADC:
1) 동결건조 제제:
따라서, 본 발명은 하기 예시적이고 비제한적 AXL-ADC의 동결건조 제제를 제공하고, 각각은 구체적 실시양태를 나타낸다:
한 실시양태에서, 본 발명은 항-AXL 항체-약물 접합체 (AXL-ADC) 및 1종 이상의 부형제를 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득가능하거나 또는 수득된 상기 AXL-ADC의 동결건조 제제를 제공하며, 여기서 제제는 계면활성제가 없거나, 또는 적어도 본질적으로 없다. 적합한 부형제는 수성 제제에서 약 5 내지 약 7의 pH를 제공하는 완충제, 고체 상태에서 AXL-ADC와 무정형 상을 형성하는 적어도 1종의 비-환원당; 및 적어도 1종의 벌킹제를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은
(a) AXL-ADC;
(b) 수성 제제에서 약 5 내지 약 7의 pH를 제공하는 완충제;
(c) 적어도 1종의 벌킹제; 및
(d) 고체 상태에서 ADC와 무정형 상을 형성하는 적어도 1종의 비-환원당
을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득가능하거나 또는 수득된 AXL-ADC의 동결건조 제제를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 예컨대 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고, 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 100 mM 히스티딘 완충제; 약 15 mM 내지 약 200 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 50 mM 내지 약 300 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 예컨대 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고, 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC 및 약 5 mM 내지 약 100 mM 히스티딘 완충제; 약 15 mM 내지 약 200 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 100 mM 내지 약 225 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고; 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 5 mM 내지 약 100 mM 히스티딘 완충제; 약 30 mM 내지 약 150 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 100 mM 내지 약 225 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고; 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 30 mM 내지 150 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 100 mM 내지 약 225 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고; 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 30 mM 내지 약 150 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 150 mM 내지 약 180 mM, 예컨대 약 160 mM 내지 약 170 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고; 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 30 mM 내지 약 150 mM 수크로스 또는 트레할로스, 예컨대 약 80 mM 내지 100 mM; 및 약 100 mM 내지 약 225 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고; 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 30 mM 내지 약 150 mM 수크로스; 및 약 100 mM 내지 약 225 mM 만니톨을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고, 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 30 mM 내지 약 150 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고; 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 15 mM 내지 120 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 100 mM 내지 약 225 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고; 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 15 mM 내지 약 120 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 150 mM 내지 약 180 mM, 예컨대 약 160 mM 내지 약 170 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고; 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 15 mM 내지 약 120 mM 수크로스 또는 트레할로스, 예컨대 약 80 mM 내지 100 mM; 및 약 100 mM 내지 약 225 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고; 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 15 mM 내지 약 120 mM 수크로스; 및 약 100 mM 내지 약 225 mM 만니톨을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고, 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 15 mM 내지 약 120 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 예컨대 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고, 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC 및 약 5 mM 내지 약 100 mM 히스티딘 완충제; 약 20 mM 내지 약 100 mM, 예컨대 약 30 mM 내지 약 90 mM, 예컨대 약 70 내지 약 90 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 100 mM 내지 약 225 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 예컨대 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고, 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC 및 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 20 mM 내지 약 100 mM, 예컨대 약 30 mM 내지 약 90 mM, 예컨대 약 70 내지 약 90 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고; 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7, 임의로 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고; 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘 완충제; 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스; 및 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC; 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘 완충제; 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스; 및 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL AXL-ADC; 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘 완충제; 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스; 및 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL AXL-ADC; 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘 완충제; 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스; 및 약 158 mM 내지 약 172 mM 만니톨을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL AXL-ADC; 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘 완충제; 약 84 mM 내지 약 92 mM 수크로스; 및 약 158 mM 내지 약 172 mM 만니톨을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL AXL-ADC; 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘 완충제; 약 84 mM 내지 약 92 mM 수크로스; 및 약 158 mM 내지 약 172 mM 만니톨을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 6의 pH를 갖고 약 10 mg/mL AXL-ADC; 약 30 mM 히스티딘 완충제; 약 88 mM 수크로스; 및 약 165 mM 만니톨을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL AXL-ADC, 예컨대 약 10 mg/mL AXL-ADC (여기서 AXL-ADC는 HuMax-AXL-ADC (IgG1, vcMMAE)이고, ADC는 프로테아제 절단가능한 발린 시트룰린 링커, mc-vc-PAB를 통해, 약물 모노메틸 아우리스타틴 E에 접합된 (vcMMAE), 본원에서 "107"로 지칭되는 인간 모노클로날 IgG1,κ 항체로 구성됨), 및 약 6의 pH를 제공하는 약 30 mM 히스티딘 완충제; 약 88 mM 수크로스; 및 약 165 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하는 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
하나의 바람직한 실시양태에서, AXL-ADC의 항체 모이어티는 각각 서열식별번호: 36, 37, 및 38의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 39, GAS, 및 40의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [107]을 포함하는 적어도 1개의 항원-결합 영역을 포함한다.
별개의 및 구체적 실시양태에서, 제제는 계면활성제가 본질적으로 없다.
다른 별개의 및 구체적 실시양태에서, 제제는 계면활성제가 없다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5 내지 약 7의 범위의 수성 제제 및 재구성된 제제의 pH를 제공하는 완충제, 고체 상태에서 AXL-ADC와 무정형 상을 형성하는 적어도 1종의 비-환원당 및 적어도 1종의 벌킹제를 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 AXL-ADC의 동결건조 제제에 관한 것이며, 여기서 AXL-ADC는 mc-vc-PAB 및 SSP로부터 선택된 링커, MMAE, MMAF 및 DM1로부터 선택된 세포독성제 및 107, 148, 733, 154, 171, 183, 613, 726, 140, M103L, 172, 181, 183-N52Q, 187, 608-01, 610-01, 613-08, 620-06 및 M101L로 이루어진 군으로부터 선택된 항-AXL 항체로부터의 VH 및 VL 영역을 포함하는 참조 항체와 AXL에 대한 결합에 대해 경쟁하는 항-AXL 항체를 포함하고; 임의로 여기서 동결건조 제제는 어떠한 계면활성제도 본질적으로 없다.
다른 별개의 및 구체적 실시양태에서, 본 발명은 어떠한 폴리소르베이트도 본질적으로 없고, 임의로 어떠한 계면활성제도 없는 상기 실시양태 중 어느 하나의 동결건조 제제를 제공한다.
상기 실시양태 중 어느 하나의 하나의 구체적 실시양태에서, 상기 실시양태 중 어느 하나의 동결건조 제제는 만니톨 및 수크로스를 포함하며, 여기서 만니톨 대 수크로스의 중량비는 적어도 약 1, 예컨대 약 1 내지 약 20, 예컨대 약 1 내지 약 10, 예컨대 약 1 내지 약 5, 예컨대 약 1 내지 약 2, 예컨대 약 1이다.
상기 실시양태 중 어느 하나의 하나의 구체적 실시양태에서, 상기 실시양태 중 어느 하나의 동결건조 제제는 만니톨 및 트레할로스를 포함하며, 여기서 만니톨 대 트레할로스의 중량비는 적어도 약 1, 예컨대 약 1 내지 약 20, 예컨대 약 1 내지 약 10, 예컨대 약 1 내지 약 5, 예컨대 약 1 내지 약 2, 예컨대 약 1이다.
상기 실시양태 중 어느 하나의 하나의 구체적 실시양태에서, 상기 실시양태 중 어느 하나의 동결건조 제제는 만니톨 및 수크로스를 포함하며, 여기서 만니톨 대 수크로스의 중량비는 약 1 내지 약 10이고 만니톨 대 ADC의 중량비는 적어도 약 3, 예컨대 약 3 내지 약 20, 예컨대 약 3 내지 약 10이다.
본 발명은 또한 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL AXL-ADC; 약 30 mM 히스티딘; 약 88 mM 수크로스; 및 약 165 mM 만니톨을 포함하는, 임의로 이로 이루어진 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL AXL-ADC; 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘 완충제; 약 84 mM 내지 약 92 mM 수크로스; 및 약 2.5% 내지 약 3.5% (w/v), 예컨대 약 3% (w/v) 만니톨, 글리신 또는 그의 조합물을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL AXL-ADC; 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘 완충제; 약 2.5% (w/v) 내지 약 3.5% (w/v) 수크로스, 트레할로스 또는 그의 조합물; 및 약 2.5% 내지 약 3.5% (w/v)의 만니톨, 글리신 또는 그의 조합물을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 동결건조 제제에 관한 것이다.
AXL-ADC의 동결건조 제제는 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL AXL-ADC 및 수성 제제에서 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 제공하는 약 30 mM 히스티딘 완충제; 약 88 mM 수크로스; 및 약 165 mM 만니톨을 포함하는 제약상 허용되는 부형제를 포함하거나, 또는 이로 본질적으로 이루어진 수성 제제를 동결건조시킴으로써 제조될 수 있으며; 여기서 항체는 107, 148, 733, 154, 171, 183, 613, 726, 140, M103L, 172, 181, 183-N52Q, 187, 608-01, 610-01, 613-08, 620-06 및 M101L로 이루어진 군으로부터 선택된 항체의 VH 및 VL CDR, 또는 VH 및 VL 서열을 포함하는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 적어도 1개의 결합 영역을 포함하고; 약물은 MMAE 또는 DM1, 예를 들어, mc-vc-PAB-MMAE 또는 SSP-DM1인 링커-약물이다. 한 실시양태에서, AXL-ADC는 항체 107의 VH 및 VL CDR, 또는 VH 및 VL 서열을 포함하는 적어도 1개의 결합 영역을 포함하고, 링커-약물은 mc-vc-PAB-MMAE이다. 추가적으로, AXL-ADC의 항체 모이어티는 바람직하게는 전장 항체, 예컨대 전장 모노클로날 IgG1,κ 항체일 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 동결건조 AXL-ADC 제제는 3.0% 미만의 수분 (wt/wt)을 함유한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 동결건조 제제는 2.0% 미만의 수분을 함유한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 동결건조 제제는 1.0% 미만의 수분을 함유한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 동결건조 제제는 0.5% 미만의 수분을 함유한다.
한 실시양태에서, 동결건조 제제 중에서, AXL-ADC는 제약 용도를 위해 적어도 6개월 동안, 예컨대 적어도 9개월 동안, 예컨대 적어도 15개월 동안 또는 바람직하게는 적어도 18개월 동안, 또는 보다 더 바람직하게는 적어도 24개월 동안, 또는 가장 바람직하게는 적어도 36개월 동안 2-8℃에서, 예컨대 5℃에서 안정하다.
한 실시양태에서, 동결건조 제제는 10% 미만의 응집체, 예컨대 5.0% 미만의 응집체, 예컨대 3.0% 미만의 응집체, 예컨대 2.0% 미만의 응집체를 갖는 경우에 5℃에서 보관될 때 적어도 6개월 동안, 예컨대 적어도 9개월 동안, 예컨대 적어도 15개월 동안 또는 바람직하게는 적어도 18개월 동안, 또는 보다 더 바람직하게는 적어도 24개월 동안, 또는 가장 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정하다.
한 실시양태에서, 안정성은 크기-배제 분석, cIEF, 또는 둘 다에 의해 결정된다.
한 실시양태에서, 동결건조 제제는 어떠한 무기 염도 없다.
하기는 고려되는 추가의 실시양태이다:
1. AXL-ADC 및 1종 이상의 부형제를 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득가능하거나 또는 수득된 AXL-ADC의 동결건조 제제이며, 여기서 수성 제제는 어떠한 계면활성제도 없는 것인 동결건조 제제.
2. AXL-ADC 및
(a) 수성 제제에서 약 5 내지 약 7의 pH를 제공하는 완충제;
(b) 적어도 1종의 벌킹제; 및
(c) 고체 상태에서 ADC와 무정형 상을 형성하는 적어도 1종의 비-환원당
을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득가능하거나 또는 수득된 AXL-ADC의 동결건조 제제.
3. 실시양태 2에 있어서, 수성 제제가 어떠한 계면활성제도 없는 것인 동결건조 제제.
4. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 수성 제제가 히스티딘, 시트레이트, 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 (MES), 숙시네이트, 글리콜레이트, 탄산 및 포스페이트, 또는 그의 임의의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제를 포함하고, 수성 제제의 pH가 약 5 내지 약 7의 범위인 동결건조 제제.
5. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 수성 제제가 히스티딘 완충제를 포함하는 것인 동결건조 제제.
6. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 수성 제제가 약 5 mM 내지 약 100 mM의 농도에서의 완충제, 예컨대 약 10 mM 내지 약 50 mM 완충제, 예컨대 약 20 mM 내지 약 40 mM, 예컨대 약 28 mM 내지 약 32 mM, 예컨대 약 30 mM 완충제를 포함하는 것인 동결건조 제제.
7. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 만니톨, 글리신, 및 그의 조합물로부터 선택된 벌킹제를 포함하는 동결건조 제제.
8. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 만니톨을 포함하는 동결건조 제제.
9. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 수성 제제가 약 1% (w/v) 내지 약 5% (w/v), 예컨대 약 2% (w/v) 내지 약 4% (w/v), 예컨대 약 2.5% (w/v) 내지 약 3.5% (w/v), 예컨대 약 3% (w/v)의 농도에서의 벌킹제를 포함하는 것인 동결건조 제제.
10. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 수성 제제가 약 50 mM 내지 약 300 mM, 예컨대 약 100 mM 내지 약 225 mM, 예컨대 약 150 mM 내지 약 180 mM, 예컨대 약 165 mM의 농도에서의 벌킹제를 포함하는 것인 동결건조 제제.
11. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 수크로스, 트레할로스, 및 그의 조합물로부터 선택된 비-환원당을 포함하는 동결건조 제제.
12. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 수크로스를 포함하는 동결건조 제제.
13. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 수성 제제가 약 0.5% (w/v) 내지 약 7% (w/v), 예컨대 약 0.5% (w/v) 내지 약 4% (w/v), 예컨대 약 1% (w/v) 내지 약 3% (w/v) 또는 약 2.5% 내지 약 3.5%, 예컨대 약 3% (w/v)의 농도에서의 비-환원당을 포함하는 것인 동결건조 제제.
14. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 수성 제제가 약 15 mM 내지 약 200 mM, 예컨대 약 15 mM 내지 약 120 mM, 예컨대 약 30 mM 내지 약 90 mM, 예컨대 80 mM 내지 약 100 mM, 예컨대 약 84 mM 내지 약 92 mM 수크로스, 예컨대 약 88 mM의 농도에서의 비-환원당을 포함하는 것인 동결건조 제제.
15. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 수성 제제 중 AXL-ADC 농도가 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL, 예컨대 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL, 예컨대 약 8 mg/mL 내지 약 15 mg/mL, 예컨대 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL, 예컨대 약 10 mg/mL인 동결건조 제제.
16. 상기 실시양태 중 어느 하나에 있어서, 수성 제제의 pH가 약 5.5 내지 6.5, 예컨대 약 5.8 내지 약 6.2의 범위, 예컨대 약 6인 동결건조 제제.
17. 약 5 내지 약 7의 pH를 갖고
(a) 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL의 AXL-ADC 및
(b) 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘;
(c) 약 15 mM 내지 약 120 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및
(d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨 또는 글리신
을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득가능하거나 또는 수득된 동결건조 제제.
18. 실시양태 17에 있어서, 수성 제제가 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고
(a) 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL AXL-ADC, 예컨대 약 10 mg/mL의 AXL-ADC;
(b) 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘, 예컨대 약 30 mM 히스티딘;
(c) 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스, 예컨대 약 88 mM 수크로스; 및
(d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨, 예컨대 약 165 mM
을 포함하고, 수성 제제가 어떠한 계면활성제도 없는 것인 동결건조 제제.
바람직한 실시양태에서, 동결건조 제제의 AXL-ADC에서,
- 항체 모이어티는 인간 항-ADC 항체 107의 VH 및 VL CDR, 임의로 VH (서열식별번호: 1) 및 VL (서열식별번호: 2) 서열을 포함하고,
- 링커는 mc-vc-PAB이고 세포독성제는 MMAE이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 동결건조 제제의 AXL-ADC에서,
- 항체 모이어티는 인간 항-ADC 항체 107의 VH 및 VL CDR, 임의로 VH (서열식별번호: 1) 및 VL (서열식별번호: 2) 서열을 포함하고,
- 링커는 SSP이고 세포독성제는 DM1이다.
추가적으로, AXL-ADC의 항체 모이어티는 바람직하게는 전장 항체, 예컨대 전장 모노클로날 IgG1,κ 항체일 수 있다.
2) 액체 제제:
본 발명은 또한 멸균 수성 희석제 중에서 상기 측면 또는 실시양태 중 어느 하나의 동결건조 제제를 재구성함으로써 수득되거나 또는 수득가능한 제약상 허용되는 액체 제제를 제공한다.
예를 들어, 이러한 액체 제제는 약 5 내지 약 7의 pH를 갖고 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC, 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘; 약 30 mM 내지 약 150 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 50 mM 내지 약 300 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하거나 또는 이로 본질적으로 이루어질 수 있다.
한 실시양태에서, 액체 제제는 약 5 내지 약 7의 pH를 갖고 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC, 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘; 약 15 mM 내지 약 120 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및 약 100 mM 내지 약 225 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하거나 또는 이로 본질적으로 이루어질 수 있다.
한 실시양태에서, 액체 제제는 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL AXL-ADC; 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘; 약 80 mm 내지 약 100 mM 수크로스; 및 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨을 포함하거나 또는 이로 본질적으로 이루어지며; 여기서 액체 제제는 어떠한 계면활성제도 본질적으로 없다.
한 실시양태에서, 액체 제제는 약 6의 pH를 갖고 약 10 mg/mL의 AXL-ADC; 약 30 mM 히스티딘; 약 88 mM 수크로스; 및 약 165 mM 만니톨을 포함하거나 또는 이로 본질적으로 이루어지며; 여기서 액체 제제는 어떠한 계면활성제도 없다.
한 실시양태에서, 액체 제제는 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖고 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL AXL-ADC, 약 28 mM 내지 약 34 mM 히스티딘, 약 84 mM 내지 약 92 mM 수크로스 및 약 160 내지 약 170 mM 만니톨을 포함하거나 또는 이로 본질적으로 이루어진다.
바람직한 실시양태에서, 액체 제제의 AXL-ADC에서,
- 항체 모이어티는 인간 항-ADC 항체 107의 VH 및 VL CDR, 임의로 VH (서열식별번호: 1) 및 VL (서열식별번호: 2) 서열을 포함하고,
- 링커는 mc-vc-PAB이고 세포독성제는 MMAE이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 액체 제제의 AXL-ADC에서,
- 항체 모이어티는 인간 항-ADC 항체 107의 VH 및 VL CDR, 임의로 VH (서열식별번호: 1) 및 VL (서열식별번호: 2) 서열을 포함하고,
- 링커는 SSP이고 세포독성제는 DM1이다.
추가적으로, AXL-ADC의 항체 모이어티는 바람직하게는 전장 항체, 예컨대 전장 모노클로날 IgG1,κ 항체일 수 있다.
3) 수성 제제:
본 발명은 또한 상기 측면 또는 실시양태 중 어느 하나에 따른 AXL-ADC의 동결건조 제제를 제조하는 데 적합한 수성 제제 (또한 본원에서 "수용액"으로 지칭됨)를 제공한다. AXL-ADC의 수성 제제는 또한 그 자체로 AXL-ADC의 제약 목적 및 치료 용도에 적합할 수 있다.
이러한 수성 제제는, 예를 들어,
(a) 항-AXL 항체 107의 VH 및 VL CDR 또는 VH 및 VL 서열을 임의로 포함하는 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL AXL-ADC,
(b) 약 10 mM 내지 50 mM 히스티딘;
(c) 약 30 mM 내지 약 150 mM 수크로스;
(d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨; 또는
(e) a)와 (b) 내지 (d) 중 임의의 2, 3종 또는 모두의 조합물
을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한
(a) 항-AXL 항체 107의 VH 및 VL CDR 또는 VH 및 VL 서열을 임의로 포함하는 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL AXL-ADC,
(b) 약 10 mM 내지 50 mM 히스티딘;
(c) 약 15 mM 내지 약 120 mM 수크로스;
(d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨; 또는
(e) (a)와 (b) 내지 (d) 중 임의의 2, 3종 또는 모두의 조합물
을 포함하는, AXL-ADC의 동결건조 제제를 제조하는 데 적합한 수성 제제를 제공한다.
본 발명은 또한
(a) 항-AXL 항체 107의 VH 및 VL CDR 또는 VH 및 VL 서열을 임의로 포함하는 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL AXL-ADC,
(b) 약 10 mM 내지 50 mM 히스티딘;
(c) 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스;
(d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨; 또는
(e) a)와 (b) 내지 (d) 중 임의의 2, 3종 또는 모두의 조합물
을 포함하는, AXL-ADC의 동결건조 제제를 제조하는 데 적합한 수성 제제를 제공한다.
본 발명은 또한 AXL-ADC의 동결건조 제제를 제조하는 데 적합한 수성 제제를 제공하며, 여기서 수성 제제는 계면활성제를 함유하지 않고, 상기 용액은
(a) 항-AXL 항체 107의 VH 및 VL CDR 또는 VH 및 VL 서열을 임의로 포함하는 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL AXL-ADC,
(b) 약 10 mM 내지 50 mM 히스티딘;
(c) 약 30 mM 내지 약 150 mM 수크로스;
(d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨; 또는
(e) (a)와 (b) 내지 (d) 중 임의의 2, 3종 또는 모두의 조합물
을 포함한다.
본 발명은 또한 AXL-ADC의 동결건조 제제를 제조하는 데 적합한 수성 제제를 제공하며, 여기서 수성 제제는 계면활성제를 함유하지 않고, 상기 용액은
(a) 항-AXL 항체 107의 VH 및 VL CDR 또는 VH 및 VL 서열을 임의로 포함하는 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL AXL-ADC,
(b) 약 10 mM 내지 50 mM 히스티딘;
(c) 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스;
(d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨; 또는
(e) (a)와 (b) 내지 (d) 중 임의의 2, 3종 또는 모두의 조합물
을 포함한다.
본 발명은 또한
(a) 항-AXL 항체 107의 VH 및 VL CDR 또는 VH 및 VL 서열을 임의로 포함하는 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL AXL-ADC,
(b) 약 10 mM 내지 50 mM 히스티딘;
(c) 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스;
(d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨; 또는
(e) (a)와 (b) 내지 (d) 중 임의의 2, 3종 또는 모두의 조합물
로 이루어진, AXL-ADC의 동결건조 제제를 제조하는 데 적합한 수성 제제를 제공한다.
바람직하게는, 히스티딘 완충제는 수성 제제에서 약 5 내지 약 7, 바람직하게는 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH, 예컨대 약 pH6을 제공한다.
바람직한 실시양태에서, 임의의 수성 제제의 AXL-ADC에서,
- 항체 모이어티는 인간 항-ADC 항체 107의 VH 및 VL CDR, 임의로 VH (서열식별번호: 1) 및 VL (서열식별번호: 2) 서열을 포함하고,
- 링커는 mc-vc-PAB이고 세포독성제는 MMAE이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 임의의 수성 제제의 AXL-ADC에서,
- 항체 모이어티는 인간 항-ADC 항체 107의 VH 및 VL CDR, 임의로 VH (서열식별번호: 1) 및 VL (서열식별번호: 2) 서열을 포함하고,
- 링커는 SSP이고 세포독성제는 DM1이다.
추가적으로, AXL-ADC의 항체 모이어티는 바람직하게는 전장 항체, 예컨대 전장 모노클로날 IgG1,κ 항체일 수 있다.
항-AXL 항체:
한 측면에서, 본 발명은 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 항-AXL 항체의 수성 제제에 관한 것이며, 여기서 수성 제제는 어떠한 계면활성제도 없다. 한 실시양태에서, 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제는 완충제 및 적어도 1종의 안정화제를 포함하며, 여기서 수성 제제의 pH는 약 5 내지 약 7, 바람직하게는 약 5.5 내지 약 6.5, 예컨대 약 5.8 내지 약 6.2, 예컨대 약 6이다.
적합한 완충제의 비제한적 예는 히스티딘, 시트레이트, MES, 포스페이트, 탄산, 숙시네이트, 글리콜레이트, 및 그의 임의의 조합물을 포함한다. 하나의 바람직한 완충제는 히스티딘이다. 수성 제제는, 예를 들어, 약 10 내지 약 50 mM의 농도에서의 완충제, 예컨대 약 20 mM 내지 약 40 mM 완충제, 예컨대 약 28 mM 내지 약 34 mM, 예컨대 약 29 mM 내지 약 31 mM, 예컨대 약 30 mM 완충제를 포함할 수 있다.
적합한 안정화제는 만니톨, 수크로스 및 트레할로스, 및 그의 조합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 안정화제는 만니톨이다. 수성 제제는, 예를 들어, 약 20 mM 내지 약 400 mM, 예컨대 약 20 mM 내지 약 200 mM 또는 약 30 mM 내지 약 300 mM, 예컨대 약 30 mM 내지 약 100 mM, 예컨대 약 40 mM 내지 약 80 mM, 예컨대 약 50 mM 내지 약 60 mM, 예컨대 약 55 mM의 농도에서의 안정화제를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 수성 제제는 약 5% (w/v) 이하, 예컨대 약 4% (w/v) 이하, 예컨대 약 3% (w/v) 이하, 예컨대 약 2% (w/v) 이하, 예컨대 약 1% (w/v) 이하, 예컨대 약 1% (w/v), 예컨대 0.4% 내지 약 7% (w/v), 예컨대 0.5% 내지 약 5% (w/v), 예컨대 0.5% 내지 1.5% (w/v), 예컨대 약 1% (w/v)의 농도에서의 안정화제를 포함한다. 한 실시양태에서, 안정화제는 만니톨이다.
임의로, 수성 제제는 수크로스, 트레할로스 및 그의 조합물로부터 선택된 비-환원당을 추가로 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-AXL 항체의 수성 제제는 아르기닌, 글리신, 글루탐산, 소르비톨, 트레할로스, 수크로스 및 염화나트륨 중 어느 하나 이상도 없다.
한 실시양태에서, 항체 농도는 약 5 mg/mL 내지 약 40 mg/mL, 예컨대 약 8 mg/mL 내지 약 35 mg/mL, 예컨대 약 10 mg/mL 내지 약 30 mg/mL, 예컨대 약 15 mg/mL 내지 약 25 mg/mL, 예컨대 약 20 mg/mL이다.
한 실시양태에서, 수성 제제는 약 5 내지 약 7의 pH를 갖고
(a) 약 5 mg/mL 내지 약 40 mg/mL의 항-AXL 항체 및
(b) 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘;
(c) 약 50 mM 내지 약 300 mM 만니톨
을 포함한다.
한 실시양태에서, 수성 제제는 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고
(a) 약 15 mg/mL 내지 약 25 mg/mL 항-AXL 항체, 예컨대 약 20 mg/mL의 항-AXL 항체;
(b) 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘, 예컨대 약 30 mM 히스티딘;
(c) 약 50 mM 내지 약 60 mM 만니톨, 예컨대 약 55 mM
을 포함하며, 여기서 수성 제제는 어떠한 첨가된 계면활성제, 아미노산 부형제 및/또는 염화나트륨도 없다.
한 실시양태에서, 항-AXL 항체는 각각 서열식별번호: 1 및 2의 VH 및 VL 영역 서열을 포함하는 항원-결합 영역을 포함하는 참조 항체와 동일한 인간 AXL 상의 에피토프에 결합한다. 한 실시양태에서, 항-AXL 항체는 항-AXL 항체 107의 VH 및 VL CDR을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 임의의 상기 측면 또는 실시양태의 수성 제제를 동결시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 항-AXL 항체의 동결 수성 제제에 관한 것이다.
하나의 바람직한 실시양태에서, 항-AXL 항체는 각각 서열식별번호: 36, 37, 및 38의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 39, GAS, 및 40의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [107]을 포함하는 적어도 1개의 항원-결합 영역을 포함한다.
항체
이 섹션에 기재된 항-AXL 항체는 본원의 측면 및 실시양태에 기재된 바와 같은 본 발명의 수성 제제 및 본 발명의 동결건조 제제의 AXL-ADC에 있어서의 용도 둘 다에 적합하다.
일반적으로 임의의 항-AXL 항체에 적용가능하지만, VH 및 VL 서열이 본원에 제공된 항-AXL 항체 중 어느 하나 이상과 하나 이상의 물리화학적 및/또는 항원-결합 결합 특성을 공유하는 항-AXL 항체가 특히 적합하다 (표 1 참조). 바람직한 항-AXL 항체의 VH, VL 및 CDR 서열이 표 1에 제시되어 있다. 임의로 IgG1,κ 포맷 (또한 "HuMax AXL" 또는 "IgG1-HuMax-AXL"로 칭해짐)의 107로 지정된 항체가 특히 바람직하다.
한 실시양태에서, 항-AXL 항체는
(a) 각각 서열식별번호: 36, 37, 및 38의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 39, GAS, 및 40의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [107];
(b) 각각 서열식별번호: 46, 47, 및 48의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 49, AAS, 및 50의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [148];
(c) 각각 서열식별번호: 114, 115, 및 116의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열식별번호: 117, DAS, 및 118의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [733];
(d) 각각 서열식별번호: 51, 52, 및 53의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 55, GAS, 및 56의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [154];
(e) 각각 서열식별번호: 51, 52, 및 54의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 55, GAS, 및 56의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [154-M103L];
(f) 각각 서열식별번호: 57, 58, 및 59의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 60, GAS, 및 61의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [171];
(g) 각각 서열식별번호: 62, 63, 및 64의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 65, GAS, 및 66의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [172];
(h) 각각 서열식별번호: 67, 68, 및 69의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 70, GAS, 및 71의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [181];
(i) 각각 서열식별번호: 72, 73, 및 75의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 76, ATS, 및 77의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [183];
(j) 각각 서열식별번호: 72, 74, 및 75의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 76, ATS, 및 77의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [183-N52Q];
(k) 각각 서열식별번호: 78, 79, 및 80의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 81, AAS, 및 82의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [187];
(l) 각각 서열식별번호: 83, 84, 및 85의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 86, GAS, 및 87의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [608-01];
(m) 각각 서열식별번호: 88, 89, 및 90의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 91, GAS, 및 92의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [610-01];
(n) 각각 서열식별번호: 93, 94, 및 95의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 96, GAS, 및 97의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [613];
(o) 각각 서열식별번호: 98, 99, 및 100의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 101, DAS, 및 102의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [613-08];
(p) 각각 서열식별번호: 103, 104, 및 105의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 106, GAS, 및 107의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [620-06];
(q) 각각 서열식별번호: 108, 109, 및 110의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 112, AAS, 및 113의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [726];
(r) 각각 서열식별번호: 108, 109, 및 111의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 112, AAS, 및 113의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [726-M101L];
(s) 각각 서열식별번호: 41, 42, 및 43의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 44, AAS, 및 45의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [140];
(t) 각각 서열식별번호: 93, 94, 및 95의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열식별번호: 128, X가 D 또는 G인 XAS, 및 129의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [613 / 613-08];
(u) 각각 서열식별번호: 46, 119, 및 120의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 49, AAS, 및 50의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [148 / 140];
(v) 각각 서열식별번호: 123, 124, 및 125의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 60, GAS, 및 61의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [171 / 172 / 181]; 및
(w) 각각 서열식별번호: 121, 109, 및 122의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 112, AAS, 및 113의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [726 / 187]; 및
(x) 각각 서열식별번호: 93, 126, 및 127의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 96, GAS, 및 97의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [613 / 608-01 / 610-01 / 620-06]
으로 이루어진 군으로부터 선택된 VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 적어도 1개의 결합 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-AXL 항체는
(a) 서열식별번호: 1을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 2를 포함하는 VL 영역 [107];
(b) 서열식별번호: 5를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 6을 포함하는 VL 영역 [148];
(c) 서열식별번호: 34를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 35를 포함하는 VL 영역 [733]
(d) 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 9를 포함하는 VL 영역 [154];
(e) 서열식별번호: 10을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 11을 포함하는 VL 영역 [171];
(f) 서열식별번호: 16을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 18을 포함하는 VL 영역 [183];
(g) 서열식별번호: 25를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 26을 포함하는 VL 영역 [613];
(h) 서열식별번호: 31을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 33을 포함하는 VL 영역 [726];
(i) 서열식별번호: 3을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 4를 포함하는 VL 영역 [140];
(j) 서열식별번호: 8을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 9를 포함하는 VL 영역 [154-M103L];
(k) 서열식별번호: 12를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 13을 포함하는 VL 영역 [172];
(l) 서열식별번호: 14를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 15를 포함하는 VL 영역 [181];
(m) 서열식별번호: 17을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 18을 포함하는 VL 영역 [183-N52Q];
(n) 서열식별번호: 19를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 20을 포함하는 VL 영역 [187];
(o) 서열식별번호: 21을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 22를 포함하는 VL 영역 [608-01];
(p) 서열식별번호: 23을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 24를 포함하는 VL 영역 [610-01];
(q) 서열식별번호: 27을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 28을 포함하는 VL 영역 [613-08];
(r) 서열식별번호: 29를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 30을 포함하는 VL 영역 [620-06]; 및
(s) 서열식별번호: 32를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 33을 포함하는 VL 영역 [726-M101L]
과 적어도 90%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 적어도 1개의 결합 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-AXL 항체는
(a) 서열식별번호: 1을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 2를 포함하는 VL 영역 [107];
(b) 서열식별번호: 5를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 6을 포함하는 VL 영역 [148];
(c) 서열식별번호: 34를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 35를 포함하는 VL 영역 [733]
(d) 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 9를 포함하는 VL 영역 [154];
(e) 서열식별번호: 10을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 11을 포함하는 VL 영역 [171];
(f) 서열식별번호: 16을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 18을 포함하는 VL 영역 [183];
(g) 서열식별번호: 25를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 26을 포함하는 VL 영역 [613];
(h) 서열식별번호: 31을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 33을 포함하는 VL 영역 [726];
(i) 서열식별번호: 3을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 4를 포함하는 VL 영역 [140];
(j) 서열식별번호: 8을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 9를 포함하는 VL 영역 [154-M103L];
(k) 서열식별번호: 12를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 13을 포함하는 VL 영역 [172];
(l) 서열식별번호: 14를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 15를 포함하는 VL 영역 [181];
(m) 서열식별번호: 17을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 18을 포함하는 VL 영역 [183-N52Q];
(n) 서열식별번호: 19를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 20을 포함하는 VL 영역 [187];
(o) 서열식별번호: 21을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 22를 포함하는 VL 영역 [608-01];
(p) 서열식별번호: 23을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 24를 포함하는 VL 영역 [610-01];
(q) 서열식별번호: 27을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 28을 포함하는 VL 영역 [613-08];
(r) 서열식별번호: 29를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 30을 포함하는 VL 영역 [620-06]; 및
(s) 서열식별번호: 32를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 33을 포함하는 VL 영역 [726-M101L]
으로 이루어진 군으로부터 선택된 VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 적어도 1개의 결합 영역을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-AXL 항체는 상기 언급된 실시양태에 따른 항체 중 어느 하나 이상 (그의 VH 및 VL 서열, 예를 들어, 서열식별번호: 1을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 2를 포함하는 VL 영역 [107]에 의해 정의된 바와 같음)과 동일한 AXL 상의 에피토프에 결합한다.
항체가 결합하는 에피토프를 결정하는 방법이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 하나의 이러한 방법이 실시예 15에 사용되었으며, 여기서 AXL 에피토프 및/또는 도메인 특이성은 인간 Ig1-유사, Ig2-유사, FN1 또는 FN2 도메인이 그의 뮤린 유사체로 대체된 인간-마우스 키메라 AXL 돌연변이체의 패널을 제조하고, 항-AXL 항체가 어떤 돌연변이체에 결합되는지를 결정함으로써 맵핑되었다. 따라서, 별개의 및 구체적 실시양태에서, 항체는 AXL의 Ig1-유사 도메인, AXL의 Ig2-유사 도메인, AXL의 FN1 도메인, 또는 AXL의 FN2 도메인에 결합한다.
보다 고해상도 에피토프 맵핑 방법이 또한 본 실시예에 사용되었다. 구체적으로, 이 방법은 세포외 도메인에서 인간 AXL 서열 (서열식별번호: 130)과 가변적 수준의 상동성을 갖는 종으로부터 유래된 AXL 서열의 재조합에 의해 생성된 AXL 서열 변이체의 라이브러리에 대한 항-AXL 항체의 결합을 분석하였다.
항체 결합에 수반되는 AXL 세포외 도메인 아미노산을 확인하는, 보다 고해상도 에피토프-맵핑 방법이 또한 본 실시예에 사용되었다. 구체적으로, 이 방법은 세포외 도메인에서 인간 AXL 서열 (서열식별번호: 130)과 가변적 수준의 상동성을 갖는 종으로부터 유래된 AXL 서열의 재조합에 의해 생성된 AXL 서열 변이체의 라이브러리에 대한 항-AXL 항체의 결합을 분석하였다. 이 방법은 이들 인간 AXL-특이적 항체가 인간 AXL을 인식하지만, 실시예에 사용된 다른 종 중 어느 것으로부터의 AXL은 그렇지 않다는 원리에 기초하였다.
따라서, 한 실시양태에서, 항체는 AXL의 Ig1 도메인 내에서 에피토프에 결합하고, 항체 결합은 인간 AXL의 위치 L121 내지 Q129 또는 T112 내지 Q124 중 1개 이상 또는 모두에 상응하는 아미노산 중 1개 이상 또는 모두에 의존하며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 인간 AXL (서열식별번호: 130) 내의 그의 각 위치를 지칭한다. 한 실시양태에서, 항체는 AXL의 Ig1 도메인 내에서 에피토프에 결합하고, 항체 결합은 인간 AXL의 위치 L121 내지 Q129 또는 T112 내지 Q124에 상응하는 아미노산에 의존한다. 바람직한 실시양태에서 항체 결합은 본원에서 107로 지정된 항체의 결합에 수반되는 아미노산에 상응하는 위치 L121, G122, H123, Q124, T125, F126, V127, S128 및 Q129에서의 아미노산 중 1개 이상 또는 모두에 의존한다. 한 실시양태에서, 항체 결합은 위치 T112, G113, Q114, Y115, Q116, C117, L118,V119, F120, L121, G122, H123 및 Q124에서의 아미노산 중 1개 이상 또는 모두에 의존한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 AXL의 Ig2 도메인 내에서 에피토프에 결합하고, 항체 결합은 인간 AXL의 위치 D170 또는 D179 또는 위치 T182 내지 R190에서의 아미노산 중 1개 이상 또는 모두의 조합에 상응하는 아미노산 중 1개 이상 또는 모두에 의존한다. 한 실시양태에서 항체 결합은 위치 T182, A183, P183, G184, H185, G186, P187, Q189 및 R190에서의 아미노산에 의존한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 인간 AXL의 FN1 도메인에 결합하고, 항체 결합은 인간 AXL의 위치 Q272 내지 A287 및 G297 내지 P301에 상응하는 아미노산 중 1개 이상 또는 모두에 의존한다. 한 실시양태에서, 항체 결합은 인간 AXL의 위치 Q272 내지 A287 및 G297 내지 P301에 상응하는 아미노산에 의존한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 인간 AXL의 FN2 도메인에 결합하고 항체 결합은 인간 AXL의 위치 A359, R386, 및 Q436 내지 K439에 상응하는 아미노산 중 1개 이상 또는 모두에 의존한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 AXL의 Ig1 도메인 내에서 에피토프에 결합하고, 에피토프는 인간 AXL의 위치 L121 내지 Q129 또는 T112 내지 Q124 중 1개 이상 또는 모두에 상응하는 아미노산 중 1개 이상 또는 모두를 포함하거나 또는 필요로 하며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 인간 AXL (서열식별번호: 130) 내의 그의 각 위치를 지칭한다. 한 실시양태에서, 항체는 AXL의 Ig1 도메인 내에서 에피토프에 결합하고, 에피토프는 인간 AXL의 위치 L121 내지 Q129 또는 T112 내지 Q124에 상응하는 아미노산을 포함하거나 또는 필요로 한다. 바람직한 실시양태에서 에피토프는 본원에서 107로 지정된 항체의 결합에 수반되는 아미노산에 상응하는 위치 L121, G122, H123, Q124, T125, F126, V127, S128 및 Q129에서의 아미노산 중 1개 이상 또는 모두를 포함한다. 한 실시양태에서, 에피토프는 위치 T112, G113, Q114, Y115, Q116, C117, L118, V119, F120, L121, G122, H123 및 Q124에서의 아미노산 중 1개 이상 또는 모두를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 AXL의 Ig2 도메인 내에서 에피토프에 결합하고, 에피토프는 인간 AXL의 위치 D170 또는 D179 또는 위치 T182 내지 R190에서의 아미노산 중 1개 이상 또는 모두의 조합에 상응하는 아미노산 중 1개 이상 또는 모두를 포함하거나 또는 필요로 한다. 한 실시양태에서 에피토프는 위치 T182, A183, P183, G184, H185, G186, P187, Q189 및 R190에서의 아미노산을 포함하거나 또는 필요로 한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 인간 AXL의 FN1 도메인 내에서 에피토프에 결합하며, 에피토프는 인간 AXL의 위치 Q272 내지 A287 및 G297 내지 P301에 상응하는 아미노산 중 1개 이상 또는 모두를 포함하거나 또는 필요로 한다. 한 실시양태에서, 에피토프는 인간 AXL의 위치 Q272 내지 A287 및 G297 내지 P301에 상응하는 아미노산을 포함하거나 또는 필요로 한다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 인간 AXL의 FN2 도메인 내에서 에피토프에 결합하며, 에피토프는 인간 AXL의 위치 A359, R386, 및 Q436 내지 K439에 상응하는 아미노산 중 1개 이상 또는 모두를 포함하거나 또는 필요로 한다.
한 실시양태에서, 항체는 인간 AXL의 FN1-유사 도메인 내에서 에피토프에 결합한다.
항체-약물 접합체 (ADC)
본 발명의 임의의 측면 또는 실시양태에 따른 동결건조 제제는 치료 모이어티, 예컨대 세포독성제, 화학요법 약물, 시토카인, 면역억제제, 항생제, 또는 방사성동위원소에 접합된, 이전 섹션에서의 임의의 실시양태에 따른 항-AXL 항체를 포함하는 AXL-ADC를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 해당 약물에 접합된 경우에, 항-AXL 항체는 약 5 내지 약 12, 예컨대 약 7 내지 약 10, 예컨대 약 8.5 내지 약 9.5, 예컨대 약 8.5 내지 약 9.0의 범위의 pI를 가질 수 있다.
일부 경우에 AXL-ADC를 위해 내재화를 겪는 항-AXL 항체를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "내재화된" 또는 "내재화"는 분자 예컨대 본 발명에 따른 항체가 세포 막에 의해 포식되고 세포의 내부로 끌어당겨지는 생물학적 과정을 지칭한다. 이는 또한 "세포내이입"으로 지칭될 수 있다.
ADC는 종종 세포독성 페이로드가 항체에 접합된 경우에 불활성이도록 설계된다. 일단 내재화되면, ADC는 대부분의 경우에 리소솜에 전달될 수 있으며, 여기서 효과적인 약물 방출은 이들 소기관에서 발견되는 이화작용 환경을 이용한다. 이어서, 세포독성 페이로드는 세포의 형질-막에 결합한 후 ADC의 내재화 시, 또는 대안적으로 종양 미세환경에서의 단백질분해 활성에 반응하여 세포내로 방출될 수 있다. 따라서, 하나의 옵션은 세포내 절단되도록 설계된 링커를 통해 항-AXL 항체를 치료 모이어티에 접합시키는 것이다.
특화된 링커는 단지 표적 종양 세포에서 또는 그 상에서 발견되는 특정한 미세환경 또는 종양 미세환경에서만 절단되도록 설계되었다. 예는 산성 조건, 환원 조건, 또는 특이적 프로테아제에 의해 절단되는 링커를 포함한다.
순환에서 항체-링커-약물의 안정성은 이것이 약물의 특이적 표적 세포로의 항체-매개 전달을 허용하기 때문에 중요하다. 또한, ADC의 긴 순환 반감기는 주사후 수일 내지 수주 동안의 노출을 제공한다. 비-절단가능한 링커 및 프로테아제-절단가능한 링커를 통해 접합된 약물은 일반적으로 디술피드 및 히드라존 링커보다 순환에서 더 안정하지만, 후자 2종의 링커의 안정성은 이웃 화학 구조를 변경시킴으로써 조정될 수 있다.
한 실시양태에서, 치료 모이어티는 세포독성제이다.
세포독소 또는 세포독성제는 세포에 유해한 (예를 들어, 이를 사멸시키는) 임의의 작용제를 포함한다. 본 발명에 사용하기 위한 ADC를 형성하는 데 적합한 세포독성제는 탁솔, 튜부리신, 시토칼라신 B, 그라미시딘 D, 브로민화에티듐, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜키신, 독소루비신, 다우노루비신, 디히드록시 안트라신 디온, 메이탄신 또는 그의 유사체 또는 유도체, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 및 퓨로마이신; 칼리케아미신 또는 그의 유사체 또는 유도체; 항대사물 (예컨대 메토트렉세이트, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 플루다라빈, 5-플루오로우라실, 데카르바진, 히드록시우레아, 아스파라기나제, 겜시타빈, 클라드리빈), 알킬화제 (예컨대 메클로레타민, 티오에파, 클로람부실, 멜팔란, 카르무스틴 (BSNU), 로무스틴 (CCNU), 시클로포스파미드, 부술판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 다카르바진 (DTIC), 프로카르바진, 미토마이신 C, 시스플라틴 및 다른 백금 유도체, 예컨대 카르보플라틴; 뿐만 아니라 두오카르마이신 A, 두오카르마이신 SA, CC-1065 (일명 라켈마이신), 또는 CC-1065의 유사체 또는 유도체), 돌라스타틴, 아우리스타틴, 피롤로[2,1-c][1,4] 벤조디아제핀 (PDB), 인돌리노벤조디아제핀 (IGN) 또는 그의 유사체, 항생제 (예컨대 닥티노마이신 (이전에 악티노마이신), 블레오마이신, 다우노루비신 (이전에 다우노마이신), 독소루비신, 이다루비신, 미트라마이신, 미토마이신, 미톡산트론, 플리카마이신, 안트라마이신 (AMC)), 항유사분열제 (예를 들어, 튜불린-표적화제), 예컨대 디프테리아 독소 및 관련 분자 (예컨대 디프테리아 A 쇄 및 그의 활성 단편 및 하이브리드 분자); 리신 독소 (예컨대 리신 A 또는 탈글리코실화 리신 A 쇄 독소), 콜레라 독소, 시가-유사 독소 (SLT-I, SLT-II, SLT-IIV), LT 독소, C3 독소, 시가 독소, 백일해 독소, 파상풍 독소, 대두 보우만-버크 프로테아제 억제제, 슈도모나스(Pseudomonas) 외독소, 알로린, 사포린, 모데신, 겔라닌, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피토라카 아메리카나(Phytolacca americana) 단백질 (PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 및 에노마이신 독소를 포함한다. 다른 적합한 접합된 분자는 항미생물/용해 펩티드 예컨대 CLIP, 마가이닌 2, 멜리틴, 세크로핀, 및 P18; 리보뉴클레아제 (RNase), DNase I, 스타필로코쿠스(Staphylococcal) 장독소-A, 포크위드(pokeweed) 항바이러스 단백질, 디프테린 독소, 및 슈도모나스 내독소를 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Pastan et al., Cell 47, 641 (1986) 및 Goldenberg, Calif. A Cancer Journal for Clinicians 44, 43 (1994)]을 참조한다. 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 본 발명의 항-AXL 항체 또는 항체-약물 접합체와 조합되어 투여될 수 있는 치료제, 예컨대, 예를 들어, 항암 시토카인 또는 케모카인은 또한 본 발명에 개시된 항체에 대한 접합에 유용한 치료 모이어티에 대한 후보이다.
한 실시양태에서, 세포독성제는 절단가능한 링커, 예컨대 N-숙신이미딜 4-(2-피리딜디티오)-펜타노에이트 (SSP), 말레이미도카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐 (mc-vc-PAB) 또는 AV-1 K-락(K-lock) 발린-시트룰린을 사용하여 상기 항체, 또는 그의 단편에 연결된다.
본원에 사용된 용어 "절단가능한 링커"는 표적화된 세포 또는 종양 미세환경에서 특이적 프로테아제에 의해 촉매되어 세포독성제의 방출을 일으키는 링커의 하위세트를 지칭한다. 절단가능한 링커의 예는 디술피드, 히드라존 또는 펩티드를 포함하는 화학 모티프에 기초한 링커이다. 절단가능한 링커의 또 다른 하위세트는 세포독성제와 1차 링커 사이의 추가의 링커 모티프, 즉, 링커-약물 조합을 항체에 부착시키는 부위를 부가한다. 일부 실시양태에서, 추가의 링커 모티프는 세포내 환경에 (예를 들어 리소솜 또는 엔도솜 또는 소포 내에) 존재하는 절단가능한 작용제에 의해 절단가능하다. 링커는, 예를 들어 리소솜 또는 엔도솜 프로테아제를 포함하나 이에 제한되지 않는 세포내 펩티다제 또는 프로테아제 효소에 의해 절단되는 펩티딜 링커일 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티딜 링커는 적어도 2개의 아미노산 길이 또는 적어도 3개의 아미노산 길이이다. 절단제는 카텝신 B 및 D 및 플라스민을 포함할 수 있고, 이는 모두 디펩티드 약물 유도체를 가수분해하여 표적 세포 내부에서 활성 약물의 방출을 일으키는 것으로 공지되어 있다 (예를 들어 문헌 [Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123] 참조). 구체적 실시양태에서, 세포내 프로테아제에 의해 절단가능한 펩티딜 링커는 Val-Cit (발린-시트룰린) 링커 또는 Phe-Lys (페닐알라닌-리신) 링커이다 (예를 들어 Val-Cit 링커를 갖는 독소루비신의 합성을 기재하는 US6214345 참조). 치료제의 세포내 단백질분해 방출을 사용하는 것의 이점은 작용제가 전형적으로 접합된 경우에 약화되고, 접합체의 혈청 안정성이 전형적으로 높다는 것이다.
또 다른 실시양태에서, 세포독성제는 비-절단가능한 링커, 예컨대 숙신이미딜-4(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트 (MCC) 또는 말레이미도카프로일 (MC)을 사용하여 상기 항체, 또는 그의 단편에 연결된다.
본원에 사용된 용어 "비-절단가능한 링커"는 절단가능한 링커와 대조적으로, 세포내 또는 세포외 프로테아제에 의해 특이적으로 및 예측가능하게 인식되는 모티프를 포함하지 않는 링커의 하위세트를 지칭한다. 따라서, 비-절단가능한 링커에 기초한 ADC는 완전한 항체-링커-약물 복합체가 리소솜 구획에서 분해될 때까지 항체로부터 방출되거나 또는 절단되지 않는다. 비-절단가능한 링커의 예는 티오에테르이다. 또 다른 실시양태에서, 링커 단위는 절단가능하지 않고 약물은 항체 분해에 의해 방출된다 (US 2005/0238649 참조). 전형적으로, 이러한 링커는 세포외 환경에 실질적으로 감수성이 아니다. 링커의 문맥에서 본원에 사용된 "세포외 환경에 실질적으로 감수성이 아닌"은 항체 약물 접합체 화합물의 샘플에서, 항체 약물 접합체 화합물이 세포외 환경 (예를 들어 혈장)에 존재하는 경우에 20％ 이하, 전형적으로 약 15％ 이하, 보다 전형적으로 약 10％ 이하, 및 보다 더 전형적으로 약 5％ 이하, 약 3％ 이하, 또는 약 1％ 이하의 링커가 절단된다는 것을 의미한다. 링커가 세포외 환경에 실질적으로 감수성이 아닌지 여부는 예를 들어 혈장과 함께 항체 약물 접합체 화합물을 미리 결정된 기간 (예를 들어 2, 4, 8, 16 또는 24시간) 동안 인큐베이션하고 이어서 혈장에 존재하는 유리 약물의 양을 정량화함으로써 결정될 수 있다.
한 실시양태에서, 세포독성제는 군: DNA-표적화제, 예를 들어 DNA 알킬화제 및 가교제, 예컨대 칼리케아미신, 두오카르마이신, 라켈마이신 (CC-1065), 피롤로[2,1-c][1,4] 벤조디아제핀 (PBD), 및 인돌리노벤조디아제핀 (IGN); 미세관-표적화제, 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸아우리스타틴 E (MMAE) 및 모노메틸아우리스타틴 F (MMAF), 돌라스타틴, 메이탄신, N(2')-데아세틸-N(2')-(3-메르캅토-1-옥소프로필)-메이탄신 (DM1), 및 튜부리신; 및 뉴클레오시드 유사체; 또는 그의 유사체, 유도체, 또는 전구약물로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 면역접합체는
i) 방관자 사멸 능력을 갖는 상기 절단가능한 링커와 세포독성제;
ii) 방관자 사멸 능력을 갖지 않는 상기 절단가능한 링커와 세포독성제;
iii) 방관자 사멸 능력을 갖는 상기 비-절단가능한 링커와 세포독성제; 또는
iv) 방관자 사멸 능력을 갖지 않는 상기 비-절단가능한 링커와 세포독성제
의 조합을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "방관자 사멸 효과", "방관자 사멸", "방관자 사멸 능력" 또는 "방관자 세포독성"은 절단가능한 또는 비-절단가능한 링커에 의해 항체에 접합된 세포독성제가 항체로부터의 방출 후 세포 막에 걸쳐 확산되고, 그에 의해 이웃 세포의 사멸을 유발하는 능력을 갖는 효과를 지칭한다. 세포독성제가 절단가능한 또는 비-절단가능한 링커에 의해 접합된 경우에, 이는 단지 세포독성제만이거나 또는 방관자 사멸 능력을 갖는 링커의 일부를 갖는 세포독성제일 수 있다. 세포 막에 걸쳐 확산되는 능력은 세포독성제의 소수성 또는 세포독성제와 링커의 조합과 관련된다. 이러한 세포독성제는 유리하게는 막-투과성 독소, 예컨대 프로테아제에 의해 항체로부터 방출되는 MMAE일 수 있다. 특히, 이종 표적 발현을 갖는 종양 및 항체 침투가 제한될 수 있는 고형 종양에서, 방관자 사멸 효과는 바람직할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "방관자 사멸 능력 없는", "방관자 사멸 효과 없는", "비-방관자 사멸" 또는 "방관자 세포독성 없는"은 절단가능한 또는 비-절단가능한 링커에 의해 항체에 접합된 세포독성제가 항체로부터의 방출 후 세포 막에 걸쳐 확산되는 능력을 갖지 않는 효과를 지칭한다. 따라서, 이러한 세포독성제 또는 세포독성제와 링커의 조합은 항체로부터의 방출 시 이웃 세포를 사멸시킬 수 없을 것이다. 이론에 얽매이지는 않지만, 이러한 세포독성제와 절단가능한 또는 비-절단가능한 링커의 조합은 단지 항체가 결합하는 표적을 발현하는 세포만을 사멸시킬 것으로 여겨진다.
항체와 세포독성제 사이의 안정한 연결은 ADC의 중요한 인자이다. 절단가능한 및 비-절단가능한 유형의 링커 둘 다는 전임상 및 임상 시험에서 안전한 것으로 입증되었다.
한 실시양태에서, 세포독성제는 미세관 표적화제, 예컨대 아우리스타틴 및 메이탄시노이드의 군으로부터 선택된다
본원에 사용된 용어 "미세관-표적화제"는 유사분열 (세포 분열)을 억제하는 작용제 또는 약물을 지칭한다. 미세관은 세포 분열 동안 DNA의 적절한 분리에 필수적인 구조이고, 미세관 기능은 중요하게는 '동적 불안정성', 즉, 미세관 구조가 연속적으로 연장되고 단축되는 과정에 의존한다. 미세관-표적화제는 미세관을 파괴하거나 또는 안정화시키며, 이는 유사분열 방추의 형성을 방지하여 유사분열 정지 및 아폽토시스를 일으킨다. 미세관-표적화제는 예를 들어 천연 물질, 예컨대 식물 알칼로이드로부터 유래되고, 미세관 중합을 파괴하거나 안정화시킴으로써 세포가 유사분열을 겪는 것을 방지하고, 따라서 유사분열 방추의 형성 및 후속 세포 분열을 방지하고, 암 성장의 억제를 일으킬 수 있다. 미세관-표적화제의 예는 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈, 아우리스타틴, 메이탄시노이드, 튜부리신, 및 돌라스타틴이다.
한 실시양태에서, 세포독성제는 아우리스타틴 또는 아우리스타틴 펩티드 유사체 및 유도체이다 [45][46]. 아우리스타틴은 미세관 동역학, GTP 가수분해 및 핵 및 세포 분열을 방해하고 항암 및 항진균 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 아우리스타틴 약물 모이어티는 펩티드성 약물 모이어티의 N (아미노) 말단 또는 C (말단)를 통해, 링커를 통해 항체에 부착될 수 있다.
예시적인 아우리스타틴 실시양태는 N-말단-연결된 모노메틸 아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF를 포함한다 [47] [48].
특정한 실시양태에서, 세포독성제는 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE)이다.
Figure pct00003
여기서 항체는 적절한 링커에 의해 상기 화학 구조의 좌측 상의 질소 (N)에서 MMAE에 연결된다.
한 실시양태에서, 세포독성제 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE)는 발린-시트룰린 (VC) 링커를 통해 항체에 연결된다.
또 다른 실시양태에서, 세포독성제 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE)는 발린-시트룰린 (VC) 링커 및 말레이미도카프로일 (MC) 링커를 통해 항체에 연결되며, 여기서 세포독성제와 링커의 조합은 하기 화학 구조를 갖는다.
Figure pct00004
여기서 MAb는 항체이다.
한 실시양태에서, 세포독성제는 모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF)이다.
Figure pct00005
여기서 항체는 적절한 링커에 의해 상기 화학 구조의 좌측 상의 질소 (N)에서 MMAF에 연결된다.
한 실시양태에서, 세포독성제 모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF)는 말레이미도카프로일 (mc)-링커를 통해 항체에 연결되며, 여기서 세포독성제와 링커의 조합은 하기 화학 구조를 갖는다.
Figure pct00006
여기서 MAb는 항체이다.
또 다른 특정한 실시양태에서, 세포독성제는 DNA-표적화제이다.
본원에 사용된 용어 "DNA-작용제"는 DNA를 알킬화시키고/거나 가교할 수 있는 세포독성제의 특정한 부류를 지칭한다. 이러한 DNA-작용제의 예는 DNA를 알킬화시키고 가교하는 그의 능력에 의해 고도로 강력한 인돌리노-벤조디아제핀이량체 및 피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀 (PBD)을 포함하는 IGN 작용제이다. 또 다른 예는 단지 DNA만을 알킬화시키는 능력에 의해 고도로 강력한 인돌리노-벤조디아제핀단량체를 포함하는 IGN 작용제이다. 듀오카르마이신은 또 다른 부류의 DNA-작용제이다. 듀오카르마이신은 소분자, 합성 DNA 작은 홈 결합 알킬화제이다. 이들 화합물은 고형 종양뿐만 아니라 혈액 종양을 표적화하는 데 적합하다.
한 실시양태에서, 면역접합체는 항체당 2 내지 4개의 세포독성 분자를 포함한다. 독소 및 링커-독소 조합의 화학적 특성에 따라, 항체당 2 내지 4개의 세포독성 분자는 덜 로딩된 접합체보다 순환으로부터 보다 신속하게 소거되는 보다 무겁게 로딩된 접합체에 비해 우수할 수 있다. 세포독성제 로딩은 p로 나타내어지고 이는 분자 중의 항체당 세포독성제 모이어티의 평균 수이다 (또한 약물 대 항체 비, DAR로 지정됨). 세포독성제 로딩은 항체당 1 내지 20개의 약물 모이어티의 범위일 수 있고 유용한 관능기, 예컨대 리신 또는 시스테인에서와 같이 아미노 또는 술프히드릴 기 (그러나, 이에 제한되지는 않음)를 갖는 아미노산 상에서 발생할 수 있다.
한 실시양태에서, 항체당 세포독성제의 수는 1 내지 8개, 예컨대 2 내지 7개, 예컨대 2 내지 6개, 예컨대 2 내지 5개, 예컨대 2 내지 4개, 및 예컨대 2 내지 3개이다.
또 다른 실시양태에서, 면역접합체는 항체당 4 내지 8개의 세포독성 분자를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 면역접합체는 항체당 6 내지 10개의 세포독성 분자를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 면역접합체는 항체당 10 내지 30개, 예컨대 15 내지 25개, 예컨대 20개의 세포독성 분자를 포함한다.
접합의 방식에 따라, 예를 들어 부착이 시스테인 티올 또는 리신인 경우에, 항체당 세포독성 분자의 수는 항체 상의 부착 부위의 수에 의해 제한될 수 있다. 일반적으로, 항체 내의 대부분의 시스테인 티올 잔기가 디술피드 가교로서 존재하기 때문에, 항체는 약물 모이어티에 연결될 수 있는 많은 유리 및 반응성 시스테인 티올 기를 함유하지 않는다. 따라서, 세포독성제가 시스테인 티올을 통해 접합되는 그러한 실시양태에서, 항체를 부분 또는 완전 환원 조건 하에 환원제 예컨대 디티오트레이톨 (DTT) 또는 트리카르보닐에틸포스핀 (TCEP)으로 환원시켜 반응성 시스테인 티올 기를 생성할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 ADC에 대한 약물 로딩은 최대 8개의 유리 시스테인 티올 기가 항체의 (부분적) 환원 후 이용가능하게 되기 때문에 (쇄간 디술피드 결합에 수반되는 8개의 시스테인이 존재함), 1 내지 약 8개의 범위이다.
한 실시양태에서, 약물 링커 모이어티는 vcMMAE이다. vcMMAE 약물 링커 모이어티 및 접합 방법은 [49], [50], [51], [52] 및 [53] (이는 본원에 참조로 포함됨)에 개시되어 있다. vcMMAE는 링커 mc-vc-PAB와 세포독성 모이어티 MMAE의 접합에 의해 형성되고, vcMMAE 약물 링커 모이어티는 본원에 개시된 것과 유사한 방법을 사용하여 시스테인 잔기에서 항-AXL 항체에 결합된다.
한 실시양태에서, 약물 링커 모이어티는 mcMMAF이다. mcMMAF 약물 링커 모이어티 및 접합 방법은 [54], [55], 및 [56] (이는 본원에 참조로 포함됨)에 개시되어 있고, mcMMAF 약물 링커 모이어티는 본원에 개시된 것과 유사한 방법을 사용하여 시스테인 잔기에서 항-AXL 항체에 결합된다.
다른 링커 기술, 예컨대 히드록실 기를 포함하는 링커는 본 발명의 항-AXL 항체 약물 접합체에 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 링커는 항-AXL 항체의 (부분적) 환원에 의해 수득된 항-AXL 항체의 유리 시스테인 잔기에 부착된다.
본 발명의 동결건조 제제의 AXL-ADC에 적합한 특이적 항-AXL 항체의 VH, VL 및 CDR 서열이 표 1에 제시되어 있다. 특정한 실시양태에서, 링커는 mc-vc-PAB이고 세포독성제는 MMAE이거나; 또는 링커는 SSP이고 세포독성제는 DM1이다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 링커는 MMC이고 세포독성제는 DM1이거나; 또는 링커는 MC이고 세포독성제는 MMAF이다. 임의로 IgG1,κ 포맷 (또한 "IgG1-HuMax-AXL"로 칭해짐)의 107로 지정된 항체가 특히 바람직하다.
한 실시양태에서, ADC는 링커 mc-vc-PAB, 세포독성제 MMAE 및 상기 섹션의 임의의 측면 또는 실시양태에 따른 항-AXL 항체, 예컨대 항체 107을 포함한다.
제제
본 발명에 따른 항-AXL 항체 및 ADC를 위한 치료 제제는 보관을 위해 목적하는 정도의 순도를 갖는 항체 또는 ADC를 임의적인 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제 (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 함께 수성 또는 동결건조 제제의 형태로 제제화함으로써 제조된다. 허용되는 담체, 부형제, 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이다.
일반적으로, AXL-ADC의 동결건조 및 재구성된 제제는 AXL-ADC, 완충제, 안정화제 (전형적으로 비-환원당), 및 벌킹제를 포함한다. 바람직한 안정화제는 수크로스, 트레할로스 및 그의 조합물이다. 바람직한 벌킹제는 만니톨, 글리신 및 그의 조합물이다.
일반적으로, 항-AXL 항체의 수성 제제는 항-AXL 항체, 완충제, 안정화제를 포함한다. 바람직한 안정화제는 만니톨, 수크로스 및 트레할로스이다.
본원에 사용된 용어 "완충제"는 제약상 허용되는 완충제를 나타낸다. 일반적으로, 완충제는 약 5 내지 약 7, 바람직하게는 약 5.5 내지 6.5의 pH 범위, 예컨대 약 pH 6 또는 약 pH 6.0에 적합한 pKa 및 완충 능력을 갖는다. 동결건조 제제의 경우, 완충제 성분은 사용되는 농도에서 주위 온도 미만에서 결정화되지 않아야 한다. 보다 높은 붕괴 온도를 갖는 완충제가 바람직하며, 이는 보다 빠르고 보다 강건한 동결건조 사이클을 가능하게 하기 때문이다. 적합한 제약상 허용되는 완충제는 히스티딘-완충제, 시트레이트- 완충제, 숙시네이트-완충제, 탄산-완충제, MES 완충제, 포스페이트 완충제, 트리스® (트리스 (히드록시메틸)아미노메탄) 완충제 및 그의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 완충제는 L-히스티딘, 시트레이트, 포스페이트, 탄산, 및/또는 숙시네이트, 예컨대 히스티딘 및/또는 시트레이트에 기초하고, 또한, 예를 들어, L-히스티딘과 L-히스티딘 히드로클로라이드 또는 트리스® (트리스 (히드록시메틸)아미노메탄)의 혼합물을 포함한다. 잠재적으로, 관련 기술분야에 공지된 산 또는 염기를 사용하는 pH 조정이 필요할 수 있다. 상기 언급된 L-히스티딘, 시트레이트, 포스페이트, 탄산, 및/또는 숙시네이트 완충제는 일반적으로 약 1 mM 내지 약 120 mM, 예컨대 약 5 mM 내지 약 100 mM, 바람직하게는 약 10 mM 내지 약 50 mM, 보다 바람직하게는 약 20 mM 내지 약 40 mM, 및 보다 더 바람직하게는 약 30 mM의 양으로 사용된다. 사용되는 완충제와 독립적으로, pH는 관련 기술분야에 공지된 산 또는 염기를 사용하는 조정 또는 완충제 성분의 적절한 혼합물의 사용 또는 둘 다에 의해 약 5 내지 약 7 및 바람직하게는 약 5.5 내지 약 6.5의 범위 및 가장 바람직하게는 약 6 또는 약 6.0의 값으로 조정될 수 있다. 임의로, pH는 또한 다른 성분, 예를 들어, 벌킹제, 안정화제, 또는 둘 다가 완충제 중에 존재하는 경우에 목적하는 범위 내로 또는 목적하는 값으로 조정될 수 있다. 바람직하게는, 완충제는 약 10 mM 내지 약 50 mM의 농도에서의 히스티딘 및/또는 시트레이트 완충제, 예컨대 약 30 mM의 농도에서의 히스티딘 완충제를 포함한다.
본 발명의 제제는 상기 기재된 바와 같은 1종 이상의 제약상 허용되는 안정화제 및 또한 관련 기술분야에 "동결건조보호제"로 공지된 성분 예컨대 관련 기술분야에 공지된 바와 같은 당, 당 알콜, 아미노 당, 아미노산 및 덱스트란을 추가로 포함할 수 있다. 전형적으로, 제약상 허용되는 안정화제는 약 1 mM 내지 약 500 mM의 양으로 사용될 수 있다. 적합한 당은 모노사카라이드 및 디사카라이드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 따라 사용하기 위한 당 및 당 알콜의 비제한적 예는 트레할로스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 만노스, 말토스, 갈락토스, 프룩토스, 소르보스, 라피노스, 글루코사민, N-메틸글루코사민 (또한 "메글루민"으로 지칭됨), 갈락토사민 및 뉴라민산 및 그의 조합물을 포함한다. 약 15 mM 내지 약 200 mM, 예컨대 약 30 mm 내지 150 mM 또는 약 15 내지 약 120 mM, 예컨대 약 20 mM 내지 약 100 mM, 예컨대 약 30 mM 내지 약 90 mM 또는 약 80 mM 내지 약 100 mM, 예컨대 약 70 mM 내지 약 90 mM, 예컨대 약 84 mM 내지 92 mM의 농도에서의 비-환원당 및 당 알콜, 예컨대 수크로스 또는 트레할로스가 바람직하다. 수크로스가 가장 바람직하다.
한 실시양태에서, 제제는 약 5% (w/v) 이하, 예컨대 약 0.5% (w/v) 내지 약 4% (w/v), 예컨대 약 1% (w/v) 내지 약 3% (v/w), 예컨대 약 2.5% 내지 약 3.5% (w/v), 예컨대 약 3% (w/v)의 총 농도에서의 1종 이상의 비-환원당, 예컨대 수크로스, 트레할로스 또는 그의 조합물을 포함한다.
한 실시양태에서 제제는 84 mM 내지 92 mM 수크로스, 예컨대 85 mM, 86 mM, 87 mM, 88 mM, 89 mM, 90 mM, 91 mM 또는 92 mM 수크로스를 포함한다. 가장 바람직하게는 제제는 88 mM 수크로스를 포함한다.
특히, 당 알콜 예컨대 만니톨은 또한 허용되는 시간 내에, 보다 구체적으로 0 - 600초 내에 재구성될 수 있는 균질한 및 안정한 동결건조 케이크를 생성하기 위한 벌킹제로서 사용될 수 있다. 일반적으로, "벌킹제"는 API의 총량이 케이크에 적절한 구조를 제공하기에 너무 적은 경우에 사용된다. 벌킹제는 제약상 우수한(pharmaceutically elegant) 케이크를 제공하는 불활성 매트릭스를 제공해야 한다. 벌킹제는 또한 제제의 열 특징을 개질시킨다. 활성 약물의 농도는 종종 시스템의 동결-건조 특징이 단지 벌킹제로만 인할 정도로 매우 낮다. 통상의 벌킹제는 결정질 벌킹제로서 만니톨, 글리신; 무정형 벌킹제로서 수크로스, 트레할로스, 젤라틴, 덱스트란을 포함하고 있다. 바람직한 벌킹제는 만니톨 및 글리신, 및 그의 조합물이다.
한 실시양태에서, 제제는 약 10% 이하, 예컨대 약 7% 이하, 예컨대 약 5% (w/v) 이하, 예컨대 약 1% (w/v) 내지 약 5% (w/v), 예컨대 약 2% (w/v) 내지 약 4% (w/v), 예컨대 약 2.5 (w/v) 내지 약 3.5% (w/v), 예컨대 약 3%의 총 농도에서의 1종 이상의 벌킹제, 예컨대 만니톨, 글리신 또는 그의 조합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 특히 AXL-ADC를 위해, 제제는 약 50 mM 내지 약 300 mM, 예컨대 약 100 mM 내지 약 225 mM, 예컨대 약 150 mM 내지 약 180 mM, 예컨대 약 165 mM의 농도에서의 벌킹제 예컨대 만니톨을 포함한다.
한 실시양태에서, 특히 AXL-ADC를 위해, 제제는 약 100 mM 내지 약 225 mM 만니톨, 예컨대 160 mM, 또는 162 mM, 또는 165 mM, 또는 170 mM, 또는 180 mM, 또는 200 mM 만니톨을 포함한다. 가장 바람직하게는 이는 약 165 mM 만니톨, 또는 165 mM 만니톨을 포함한다.
한 실시양태에서, 특히 항-AXL 항체를 위해, 제제는 약 20 mM 내지 약 400 mM, 예컨대 약 30 mM 내지 약 300 mM, 예컨대 약 40 mM 내지 약 80 mM, 예컨대 약 50 mM 내지 약 60 mM, 예컨대 약 55 mM 만니톨을 포함한다.
본 발명에 따른 특정 동결건조 제제는 계면활성제를 배제하는 것이 가능하도록 설계된다. 그러나, 관련 기술분야의 통상의 기술자로서 항-AXL 항체 또는 ADC의 안정성을 보존할 필요가 없지만, 그럼에도 불구하고 일부 목적을 위해 계면활성제를 포함하는 것이 바람직할 수 있다는 것을 인지할 수 있다. 적합한 제약상 허용되는 계면활성제는 폴리에틸렌-소르비탄-지방산 에스테르, 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌-스테아레이트 및 소듐 도데실 술페이트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 폴리에틸렌-소르비탄-지방산 에스테르는 폴리에틸렌(20)-소르비탄-에스테르 (폴리소르베이트 20과 동의어, 상표명 (TM) 트윈 20(TM) 하에 판매됨) 및 폴리옥시에틸렌(20)소르비탄모노올레에이트 (폴리소르베이트 80과 동의어, 상표명 트윈 80(TM) 하에 판매됨)를 포함한다. 폴리에틸렌-폴리프로필렌 글리콜은 명칭 플루로닉(Pluronic)(R) F68 또는 폴록사머(Poloxamer) 188(TM) 하에 판매되는 것이다. 폴리옥시에틸렌-스테아레이트는 상표명 미르즈(Myrj)(TM) 하에 판매된다. 폴리옥시에틸렌 모노라우릴 에테르는 상표명 브리즈(Brij)(TM) 하에 판매되는 것이다. 바람직한 경우에, 폴리에틸렌-소르비탄-폴리에틸렌(20)-소르비탄-에스테르 (트윈 20(TM)) 및 폴리옥시에틸렌(20)소르비탄모노올레에이트 (트윈 80(TM))가, 예를 들어, 약 0.01% 내지 약 0.06%, 예컨대 약 0.02% 내지 약 0.04%의 양으로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 특정 동결건조 제제는 종종 등장화제로서 사용되는 무기 염 예컨대 염화나트륨 (NaCl)을 동결건조전 액체 및 동결건조 제제로부터 배제하는 것이 가능하도록 설계된다. 염의 다른 예는 양이온 나트륨, 칼륨, 칼슘 또는 마그네슘과 음이온 클로라이드, 포스페이트, 시트레이트, 숙시네이트, 술페이트 또는 그의 혼합물의 임의의 조합의 염을 포함한다. 그러나, 관련 기술분야의 통상의 기술자로서, 그럼에도 불구하고 일부 목적을 위해, 예를 들어, 동결건조 제제의 재구성을 위해, 즉, 하기 기재된 바와 같은 희석제로서 무기 염을 포함하는 것이 바람직할 수 있다는 것을 인지할 수 있다.
본 발명의 제제는 하기 성분 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다: 항산화제, 아스코르브산, 글루타티온, 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 시클로덱스트린, 예를 들어 히드록시프로필- -시클로덱스트린, 술포부틸에틸- -시클로덱스트린, [베타]-시클로덱스트린, 폴리에틸렌글리콜, 예를 들어 PEG 3000, 3350, 4000, 또는 6000; 저분자량 (약 10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 이뮤노글로불린; 킬레이트화제 예컨대 EDTA; 염-형성 반대-이온 예컨대 나트륨; 및 금속 착물 (예를 들어 Zn-단백질 착물).
공정
동결 건조는 일반적으로 3개의 주요 단계를 함유한다: 동결, 1차 건조, 및 2차 건조. 제1 단계는 생성물의 공융 또는 유리 전이 온도보다 더 낮은 온도에서 생성물을 동결시키는 것이다. 동결 속도는 물 결정의 크기 및 후속 건조 속도에 영향을 미친다. 제2 단계는 용매 (얼음) 물을 제거하는 1차 건조이다. 생성물 온도가 붕괴 온도 미만으로 유지되고 모든 얼음/물이 승화되는 것이 중요하다. 제3 단계는 용질로부터 "결합된" 물 또는 물을 제거하는 2차 건조이고, 그 동안 보관 온도는 종종 탈착 공정을 가속하기 위해 40℃ 초과로 상승된다. 항체- 및 다른 단백질 또는 단백질 접합체 제제에 적합한 동결건조 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 ["Lyophilization of Biopharmaceuticals" by Henry R. Costantino and Michael J. Pikal; "Freeze Drying / Lyophilization of Pharmaceuticals and Biological Products" by Louis Rey and Joan C. May]에 기재되어 있다. 동결건조 공정의 비제한적 예는 실시예 10에 기재되어 있다.
용도
또 다른 측면에서 본 발명은 암의 치료에 사용하기 위한 본원의 측면 또는 실시양태 중 어느 것에 정의된 바와 같은 AXL-ADC 제제를 제공한다. 예시적인 암은 결장직장암, 예컨대 결장직장 암종 및 결장직장 선암종, 방광암, 골암 예컨대 연골육종, 유방암 예컨대 삼중-음성 유방암, 중추 신경계의 암 예컨대 교모세포종, 성상세포종, 신경모세포종, 자궁경부암, 결합 조직암, 자궁내막암, 섬유모세포암, 위암 예컨대 위 암종, 두경부암, 신장암, 간암 예컨대 간세포성 암종, 폐암 예컨대 NSCLC 및 폐 편평 세포 암종, 근육암, 신경 조직암, 난소암, 췌장암 예컨대 췌장관 암종 및 췌장 선암종, 피부암 예컨대 악성 흑색종 및 연부 조직 육종을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
대상체에게 투여하기 전에, 치료 유효량의 ADC를 포함하는 본 발명의 동결건조 제제는 제약상 허용되는 희석제 내로 용해, 즉, 재구성된다. 예시적인, 비제한적 희석제는 멸균 제약 등급의 물 (주사용수, WFI) 또는 염수, 정박테리아 주사용수 (BWFI), pH 완충 용액 (예를 들어 포스페이트-완충 염수), 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 동결건조 제제는 물, pH 완충 용액 (예를 들어 포스페이트-완충 염수), 링거액 및 덱스트로스 용액 중에서 재구성될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 동결건조 제제는 멸균 주사용수 (WFI) 중에서 약 5 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC, 예컨대 약 7 내지 약 20 mg/mL ADC, 예컨대 약 8 내지 15 mg/mL ADC, 예컨대 약 9 내지 약 11 mg/mL ADC, 예컨대 약 10 mg/mL ADC의 농도로 재구성될 수 있다. 농도는, 예를 들어, pH 완충 용액 (예를 들어 포스페이트-완충 염수, 링거액 및/또는 덱스트로스 용액)으로의 주입 동안 약 0.05 mg/mL 내지 30 mg/mL ADC, 예컨대, 예를 들어, 0.12 mg/mL 내지 2.40 mg/mL ADC의 농도로 임의로 추가로 희석될 수 있다.
전형적으로, 본 발명의 재구성된 제제는 비경구 투여에 적합하다. 본원에 사용된 어구 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여된"은 경장 및 국소 투여 이외의 통상적으로 주사 또는 주입에 의한 투여 방식을 의미하고, 표피, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 건내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 두개내, 흉곽내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다. 한 실시양태에서 제약 조성물은, 예를 들어, 동결건조 제제를 멸균수 또는 염수 중에서 재구성하고 대상체에게 투여하기 전에 IV 백 또는 시린지 내에 유지함으로써 정맥내 또는 피하 주사 또는 주입에 의해 투여된다.
본 발명은 또한 전형적으로 활성제의 양을 나타내는 기밀 용기 예컨대 바이알, 앰플 또는 사쉐 내에 본 발명에 따른 AXL-ADC의 동결건조 제제를 포함하는 키트를 제공한다. 제약이 주사에 의해 투여되는 경우에, 멸균 주사용수 또는 염수의 앰플이, 예를 들어, 임의로 키트의 일부로서 제공될 수 있으므로 성분은 투여 전에 혼합될 수 있다. 이러한 키트는, 원하는 경우에, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 명백한 바와 같이, 1종 이상의 다양한 통상적인 제약 키트 성분, 예컨대, 예를 들어 1종 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 용기, 추가의 용기 등을 추가로 포함할 수 있다. 투여될 성분의 양, 투여를 위한 가이드라인, 및/또는 성분 혼합을 위한 가이드라인을 나타내는 삽입물 또는 라벨로서 인쇄된 지침서가 또한 키트 내에 포함될 수 있다.
표 1 - 항체 VH, VL 및 CDR뿐만 아니라 AXL의 아미노산 서열. CDR 서열은 가변 영역 서열 내에 볼드체의, 밑줄친 텍스트로 나타내어진다.
Figure pct00007
Figure pct00008
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Figure pct00020
실시예
실시예 1: 화학적 변성을 사용한 pH, 완충제, 이온 강도 및 부형제의 시험 [HuMax-AXL]
우레아에 의한 화학적 변성을 사용하여 상이한 제제 성분을 스크리닝함으로써 항-AXL 인간 항체 107, 일명 IgG1-AXL-107 또는 HuMax-AXL의 열역학적 안정성에 대한 그의 효과를 평가하였다. 본 실시예는 HuMax-AXL의 열역학적 안정성에 대한 pH, 완충제 유형 (히스티딘, 시트레이트, 및 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 (MES), 완충제 농도 및 다양한 부형제 (당, 아미노산, 폴리올 및 계면활성제)의 효과를 보여준다.
본 실시예에서, 폴딩된 단백질 대 언폴딩된 단백질의 분율이 동일할 때 변성제의 농도인 열역학적 값 C1/2는 상이한 제제 성분의 안정화 효과를 비교하기 위한 파라미터로서 사용된다. C1/2 값이 높을수록 열역학적 안정성은 더 높다.
pH에 대해 스크리닝하는 데 사용된 다수의 완충제는, 표 2에 제시된 바와 같이, C1/2 값이 pH가 증가함에 따라 유의하게 증가하지만, pH 6.5 근처에서 변동이 없다는 것을 나타냈다. pH 6.5에 근접한 pKa 값을 갖는 3종의 상이한 완충제 (히스티딘, 시트레이트 및 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 (MES))의 스크리닝은 표 3에 제시된 바와 같이 C1/2 값의 현저한 차이를 나타내지 않았다. 10 내지 50 mM의 범위의 히스티딘의 추가의 분석은, 표 4에 제시된 바와 같이, 열역학적 안정성이 히스티딘 농도에 의존하지 않는다는 것을 나타냈다. 0에서 500 mM NaCl로의 이온 강도의 증가는 또한 표 5에 제시된 바와 같이 HuMax-AXL의 열역학적 안정성에 영향을 미치지 않았다.
표 2 - HuMax-AXL의 화학적 변성에서 pH에 대해 스크리닝하는 데 사용된 상이한 완충제의 효과로서의 C1/2 값
Figure pct00021
표 3 - HuMax-AXL의 화학적 변성에서 히스티딘, 시트레이트 및 MES 완충제 (6.5 범위의 pKa)의 효과로서의 C1/2 값.
Figure pct00022
표 4 - HuMax-AXL의 화학적 변성에서 10 내지 50 mM의 상이한 농도의 히스티딘의 효과로서의 C1/2 값.
Figure pct00023
표 5 - HuMax-AXL의 화학적 변성에서 2 - 500 mM NaCl의 증가하는 이온 강도의 효과로서의 C1/2 값
Figure pct00024
30 mM 히스티딘 pH 6.5의 제제를 사용한 상이한 부형제 (당, 아미노산, 폴리올 및 계면활성제)에 대한 스크리닝은 시험된 3종의 당 (수크로스, 트레할로스, 및 만니톨)이 모두 안정화 효과를 가지며, 보다 높은 당 농도는 보다 큰 열역학적 안정성을 제공하고, 만니톨은 트레할로스 및 수크로스보다 더 높은 C1/2 값을 나타낸다는 것을 보여주었다 (표 6).
표 6 - HuMax-AXL의 화학적 변성에서 안정화제로서 상이한 농도에서의 수크로스, 트레할로스, 및 만니톨을 사용하는 것의 효과로서의 C1/2 값
Figure pct00025
상이한 아미노산 (아르기닌, 글리신, 및 글루탐산)에 대한 스크리닝은 이들이 제제에 추가의 안정성을 부여하지 않는다는 것을 나타냈다. 데이터는 다소 상이하였는데, 보다 높은 C1/2 값이 보다 높은 농도에서의 글리신 및 글루탐산을 포함하는 제제에 대해 수득된 반면에, C1/2 값은 보다 높은 농도의 아르기닌에 대해 감소하였다. 글리신 및 글루탐산 제제에 대한 pH는 불안정하였으므로, 이들 제제에 대해 수득된 보다 높은 C1/2 값은 아마도 제제의 보다 높은 pH에 의해 부여된 열역학적 안정성의 결과였을 것이다. 표 7은 각각의 C1/2 값을 나타낸다.
표 7 - HuMax-AXL의 화학적 변성에서 안정화제로서 상이한 농도에서의 아르기닌, 글루탐산, 및 글리신을 사용하는 것의 효과로서의 C1/2 값.
Figure pct00026
폴리올 소르비톨 및 글리세롤 둘 다는 HuMax-AXL의 열역학적 안정성에 대한 안정화 효과를 가지며, 보다 높은 농도는 보다 큰 열역학적 안정성을 제공하고, 소르비톨은 글리세롤보다 더 높은 C1/2 값을 나타내는 것으로 밝혀졌다 (표 8).
표 8 - HuMax-AXL의 화학적 변성에서 안정화제로서 상이한 농도에서의 폴리올 소르비톨 및 글리세롤을 사용하는 것의 효과로서의 C1/2 값.
Figure pct00027
계면활성제 (PS-20 및 PS-80)의 스크리닝에 대한 데이터는 계면활성제의 보다 낮은 농도 (0.03% w/v)에서, PS-20을 함유하는 제제는 PS-80을 함유하는 제제보다 더 높은 C1/2 값을 갖고, 계면활성제의 보다 높은 농도 (0.06% w/v)에서, PS-80을 함유하는 제제는 PS-20을 함유하는 제제보다 더 높은 C1/2 값을 갖기 때문에 결론에 이르지 않았다 (표 9). 따라서, 데이터는 계면활성제 중 어느 하나에 대해 증진된 단백질 안정성을 나타내지 않는다.
표 9 - HuMax-AXL의 화학적 변성에서 안정화제로서 상이한 농도에서의 계면활성제 폴리소르베이트 80 및 폴리소르베이트 20을 사용하는 것의 효과로서의 C1/2 값.
Figure pct00028
실시예 2: 계면활성제, 동결보호제 및 NaCl을 사용한 HuMax-AXL의 동결/해동 안정성
계면활성제 또는 동결보호제를 함유하는 제제의 평가를 Humax-AXL의 동결-해동 스트레스 동안 보호제로서 조사하였다. 또한, 동결 동안 HuMax-AXL의 용해도에 대한 NaCl의 효과를 조사하였다.
30 mM 히스티딘 (pH 6.5) 중 폴리소르베이트 80의 3종의 농도 (0.0%, 0.03% 및 0.06%) 및 수크로스의 3종의 농도 (0, 5, 또는 10% 수크로스)를 사용하여 동결-해동의 3회의 사이클 시 HuMax-AXL의 분해에 대한 그의 보호 효과를 조사하였다. 제제를 후속적으로 외관, 농도, 탁도 (A550), 환원 및 비-환원 CE-SDS, 및 SEC에 의해 평가하였다. 모든 제제는 투명하고 가시적인 입자가 없고 표 10 및 표 11에 제시된 바와 같이, 단백질 농도, 탁도, 또는 순도의 변화가 비스트레스(unstressed)와 스트레스 샘플 사이에서 관찰되지 않았고, 이는 폴리소르베이트 80 또는 수크로스 중 어느 것도 동결-해동 시 HuMax-AXL의 안정성을 증진시키지 않는다는 것을 나타낸다.
표 10 - 농도 (A280nm), 탁도 (A550nm), CE-SDS (환원 및 비-환원), SEC에 의해 측정된, 동결-해동 동안 HuMax-AXL의 안정성에 대한 상이한 농도에서의 폴리소르베이트 80의 효과.
Figure pct00029
표 11 - 농도 (A280nm), 탁도 (A550nm), CE-SDS (환원 및 비-환원), SEC에 의해 측정된, 동결-해동 동안 HuMax-AXL의 안정성에 대한 상이한 농도에서의 수크로스의 효과.
Figure pct00030
또한, 40mg/mL 농도의 HuMax-AXL에서 시험된 경우에 NaCl (0 mM, 25 mM, 50 mM 및 100 mM의 NaCl)이 용해도를 증진시키지 않는다는 것이 밝혀졌다. 샘플을 -5℃에서 사전에 냉각된 동결건조기 선반 상에 보관하고 24시간 후 상 분리에 대해 시각적 외관에 의해 평가하였다. 상 분리는 샘플 중 어느 것에서도 관찰되지 않았다. 따라서, 동결 동안 HuMax-AXL의 용해도 및 상 분리에 대한 NaCl의 효과는 관찰될 수 없었다.
실시예 3: 실험 설계 (DoE) [HuMax-AXL]
본 실시예는 HuMax-AXL 제제에 대한 pH, 만니톨, 및 소르비톨 농도를 위한 설계 공간을 사용하는 DoE 연구를 기재한다. 히스티딘 완충제 농도를 제4 파라미터로서 사용하였고, 하기 표를 참조한다. 표 12는 실험 설계 공간을 나타내고 표 13은 DoE 연구의 개요를 나타낸다.
표 12 - HuMax-AXL을 위한 DoE에서의 부형제 실험 설계 공간.
Figure pct00031
*중심점
샘플을 초기에 및 40℃에서 4주 보관 후 평가하였다. 제제의 하위세트를 추가의 5회의 동결-해동 사이클 및 40℃에서 추가의 2주 보관 (6주 시점)에 적용하였다. 샘플을 생성물 특이적 분석, 즉 크기-배제 크로마토그래피 (SEC), 모세관 등전 포커싱 (cIEF) 및 모세관 전기영동-소듐 도데실 술페이트 (CE-SDS) (환원 및 비-환원)를 사용하여 시험하였다. 선택된 결과가 하기 제시되고 논의되어 있다.
표 13 - HuMax-AXL DoE 연구
Figure pct00032
40℃에서 4주 및 6주 동안 인큐베이션된 HuMax-AXL 샘플을 SEC에 의해 평가하여 응집 (고분자량 종 (HMW)) 및 분해 (저분자량 종 (LMW))의 정도에 대한 다양한 제제의 효과를 결정하였다. 초기 시점에서, HMW 종은 샘플 제제 중 어느 것에서도 SEC에 의해 검출되지 않았고 단지 적은 양의 LMW 종만이 검출되었다. 4주 및 6주 시점에서, HMW 및 LHW 종의 백분율 둘 다의 증가가 검출되었다. pH 7.0의 제제는 4주 시점에서 다른 제제보다 더 큰 백분율의 HMW 종을 발생시키는 것으로 보이고 (도 1), 샘플 F22 - F35와 함께 6주 시점에서 포함되지 않았다. 30 mM 히스티딘 (pH 6.0)을 함유하는 샘플은 각각 도 2 및 도 3에 제시된 바와 같이, 가장 높은 백분율의 주요 피크 및 가장 낮은 백분율의 LMW 종을 나타냈다.
40℃에서 4주 및 6주 동안 인큐베이션된 HuMax-AXL 샘플을 cIEF에 의해 평가하여 전하 프로파일, 즉 산성 및 염기성 이소형의 존재에 대한 다양한 제제의 효과를 결정하였다. 초기 시점은 히스티딘 농도, pH, 만니톨 농도, 또는 소르비톨 농도의 차이에 기초하여 퍼센트 주요 및 산성 이소형에서 어떠한 유의한 경향도 시사하지 않았다. 안정성 연구의 시간 경과에 따라, 퍼센트 산성 피크의 변화와 반대의 경향을 나타낸 주요 이소형의 유의한 감소가 있었고, 이는 따라서 주로 주요 피크 이소형의 탈아미드화에 기인할 수 있다. pH 7.0의 제제는 4주 시점에서 다른 제제보다 더 큰 백분율의 산성 및 염기성 이소형뿐만 아니라 더 낮은 백분율의 주요 피크 이소형을 발생시키는 것으로 보였고, 나머지 제제도 매우 유사하였다. 도 4에 제시된 바와 같이, 6-주 시점은 30 mM 히스티딘, pH 6.0을 포함하는 제제에서 가장 높은 백분율의 주요 피크 이소형을 나타냈고, 차이는 통계적으로 유의하였다.
40℃에서 4주 및 6주 동안 인큐베이션된 HuMax-AXL 샘플을 CE-SDS (환원 및 비-환원)에 의해 평가하여 HuMax-AXL의 순도에 대한 다양한 제제의 효과를 결정하였다. 초기 시점에서, 순도의 변동은 방법 변동성 내에 있고, 시험된 제제에 대한 순도의 유의한 차이는 없었다. 4주 시점에서 불순물의 증가는 환원 및 비-환원 SDS 둘 다에서 모든 제제에 대해 관찰되었고, pH 7.0 제제의 것은 가장 높은 백분율의 불순물을 가졌다. 단지 pH 6.0 및 pH 6.5만을 6주 시점에서 시험하였고, 4주 시점에서부터의 새로운 불순물 (밴드)의 출현은 없었다. 모든 pH 6.0 제제는 보다 낮은 백분율의 불순물을 나타냈지만, 이는 예상 방법 변동성 내일 수 있다.
실시예 4: 폴리소르베이트의 효과 - 동결/해동 및 교반 [HuMax-AXL-ADC]
동결-해동 및 교반에 의한 용액 중 HuMax-AXL의 항체-약물 접합체; IgG1-AXL-107-vcMMAE (본원에서 "HuMax-AXL-ADC"로 지칭됨)의 계면 스트레스에 대한 폴리소르베이트 80 (PS-80)의 효과를 시험하도록 연구를 설계하였다. 30 mM 히스티딘, 200 mM 소르비톨 (pH 6.0) 중 10 mg/mL HuMax-AXL-ADC를 3종의 폴리소르베이트 농도, 즉 0, 0.02 및 0.1 %를 사용하여 제제화하였다. PS-80을 포함하는 및 포함하지 않는 샘플을 30 및 60분 동안 교반에 노출시키거나 또는 3 및 5회의 동결/해동 사이클에 노출시키고, 그 후 샘플을 A280 (농도), SEC (응집), 및 cIEF (이소형의 변화)에 의해 평가하였다. 표 14, 도 5, 및 표 15에서 알 수 있는 바와 같이, 각각 교반 또는 동결-해동에 대한 노출 후 농도, cIEF에 의해 측정된 퍼센트 주요 피크, 또는 SEC에 의해 측정된 퍼센트 주요 피크에서 감소가 관찰되지 않았다. 데이터는 HuMax-AXL-ADC 제제가 계면 변성의 보호를 위해 폴리소르베이트 80을 필요로 하지 않고, 따라서 제제는 계면활성제가 없을 수 있다는 것을 시사한다.
표 14 - 폴리소르베이트를 함유하고 교반 및 동결-해동 사이클에 노출된 HuMax-AXL-ADC 샘플에 대한 농도 데이터 (A280nm).
Figure pct00033
표 15 - 폴리소르베이트를 함유하고 교반 및 동결-해동 사이클에 노출된 HuMax-AXL-ADC 샘플에 대한 SEC 데이터 (% 주요 피크).
Figure pct00034
실시예 5: 완충제 유형, 농도, 및 pH의 효과 - DoE [HuMax-AXL-ADC]
본 실시예는 15종의 제제를 사용하는 pH, 완충제 유형, 및 완충제 농도를 위한 설계 공간을 사용하는, HuMax-AXL-ADC를 위한 DoE (실험 설계) 연구를 기재하며, 하기 표 16을 참조한다. 샘플을 초기에 및 25℃ 및 40℃에서의 2주 동안 보관 후 평가하였다. 샘플을 생성물 특이적 분석, 즉 A280, SEC, cIEF를 사용하여 시험하였다. 선택된 결과가 하기 논의되어 있다.
표 16 - HuMax-AXL-ADC 연구
Figure pct00035
25℃ 및 40℃에서 인큐베이션된 HuMax-AXL-ADC 샘플을 SEC에 의해 평가하여 응집 (HMW 종) 및 분해 (LMW 종)의 정도에 대한 다양한 제제의 효과를 결정하였다. 평균 퍼센트 주요 피크의 감소가 25℃ 및 40℃에서 보관된 샘플에 대해 관찰되었고, 효과는 시간 및 온도에 따라 증가하였다 (도 6). 이들 데이터는 평균 퍼센트 고분자량 종 (HMW) 및 평균 퍼센트 저분자량 종 (LMW)의 관찰된 증가와 잘 상응하였다. SEC 데이터의 통계적 분석 (ANOVA - 일원 분산 분석)은 HMW 종의 평균 백분율 및 평균 퍼센트 주요 피크가 용액의 완충제 농도 또는 pH에 의해 영향을 받지 않는다는 것을 시사하는 반면에, 안정성은 히스티딘을 사용하여 제조된 제제가 보다 적은 응집을 나타냈기 때문에 완충제에 의존하는 것으로 보였다. 도 7은 완충제 유형, 완충제 농도 및 pH에 의한 주요 피크의 ANOVA 플롯을 도시한다.
25℃ 및 40℃에서 인큐베이션된 HuMax-AXL-ADC 샘플을 cIEF에 의해 평가하여 전하 이성질체, 즉 산성 및 염기성의 형성에 대한 다양한 제제의 효과를 결정하였다. cIEF 데이터는 HuMax-AXL-ADC의 안정성이 대부분 용액의 pH에 의해 영향을 받는다는 것을 시사한다. 40℃에서의 2주 동안 보관 후 용액의 pH가 증가함에 따라, 평균 퍼센트 주요 피크는 감소하고 평균 퍼센트 산성 피크는 증가하였다. 또한, ANOVA 분석은 평균 주요 피크의 평균이 완충제 유형에 대해 동일하다는 것을 시사하였다. 그러나, 그래프의 시각적 관찰은 평균 퍼센트 주요 피크가 포스페이트 완충제를 사용하여 제조된 제제에서 감소한다는 것을 시사하였다. 이는 평균 퍼센트 산성 피크에 대한 데이터의 통계적 분석과 잘 상관관계가 있는 것으로 발견되었다. 따라서 이는 HuMax-AXL-ADC의 안정성이 완충제의 유형에 의해 영향을 받고 포스페이트 완충제를 사용하여 제조된 제제가 산성 피크의 보다 큰 증가를 나타내는 것으로 보인다. cIEF 데이터는 pH 및 완충제 유형이 HuMax-AXL-ADC의 안정성에 영향을 미친다는 것을 시사하였지만, 데이터는 완충제 농도가 안정성에 대한 임의의 효과를 갖는다는 것을 나타내지는 않았다. 도 8은 완충제 유형, 완충제 농도 및 pH에 의한 주요 피크의 ANOVA 플롯을 도시한다.
실시예 6: 동결건조 사이클 연구
본 실시예는 상이한 pH에서의 HuMax-AXL-ADC의 동결건조 제제의 안정성에 대한 무정형 (트레할로스/수크로스) 및 결정화 (만니톨) 당의 효과를 검사하는 스크리닝 연구를 기재한다. 4종의 제제는 10 mg/mL HuMax-AXL-ADC, 30 mM 히스티딘, 및 5% 만니톨을 함유하고 나머지 4종의 제제는 통계적 설계에 대한 중심점으로서 사용되고 10 mg/mL HuMax-AXL-ADC, 30 mM 히스티딘, 3% 수크로스 또는 트레할로스를 pH 5.5 및 6.5에서 제조된 3% 만니톨과 함께 함유하였다. 샘플을 보존적 사이클을 사용하여 동결건조시키고 샘플을 25℃ 및 40℃에서 2개월 동안 보관하고 A280, SEC, cIEF, 및 동적 광 산란 DLS에 의해 평가하였다. 연구의 개요가 표 17에 제시되었다. 선택된 결과가 하기 논의되어 있다.
표 17 - 동결건조 사이클 연구 설계
Figure pct00036
25℃ 및 40℃에서 인큐베이션된 HuMax-AXL-ADC 샘플을 SEC에 의해 평가하여 응집 (HMW 종) 및 분해 (LMW 종)의 정도에 대한 다양한 제제의 효과를 결정하였다. 평균 퍼센트 주요 피크는 T0에서 동결건조전 및 동결건조후에 변화가 없음을 나타냈다. 평균 퍼센트 HMW 종의 약간의 증가가 25℃에서의 2개월 동안 보관 후 관찰되었고, LMW 종은 존재하지 않았다. 평균 퍼센트 HMW 종의 증가가 40℃에서의 2개월 동안 보관 후 관찰되었고, LMW 종은 일부 제제에서 존재하였다.
평균 퍼센트 주요 피크에 대한 통계적 분석 (도 9)은 데이터가 무정형 당의 농도에 의해 영향을 받는다는 것을 시사하였다 (수크로스 및 트레할로스 - Prob > F = 25℃에서의 0.0031 40℃에서의 0.0510). 무정형 당의 농도가 5%인 경우에 평균 퍼센트 주요 피크의 감소뿐만 아니라 평균 퍼센트 HMW 종의 증가가 관찰되었다. 데이터가 통계적으로 유의하지 않지만, 평균 퍼센트 주요 및 HMW 종의 그래프는 제제에 대한 pH의 가능한 효과를 나타내는 것으로 보인다. 보다 적은 주요 피크 및 보다 많은 HMW 종이 pH 5에서 관찰된다. 도 10은 40℃에서의 2개월 보관 후 8종의 제제의 평균 퍼센트 주요 피크를 나타낸다.
25℃ 및 40℃에서 인큐베이션된 HuMax-AXL-ADC 샘플을 cIEF에 의해 평가하여 전하 이성질체, 즉 산성 및 염기성의 형성에 대한 다양한 제제의 효과를 결정하였다. cIEF 데이터는 데이터를 비교한 경우에 통계적 유의성이 변수 중 어느 것에 대해서도 관찰되지 않는다는 것을 시사하였다 (도 11).
결론적으로 데이터는 용액의 당 농도 및 pH가 제제의 안정성에 가장 중요하다는 것을 시사하였다. 전반적으로 데이터는 pH 5.5 내지 6.5의 pH에서 유사한 결과가 5% 미만의 농도에서의 수크로스 또는 트레할로스를 사용하여 획득된다는 것을 시사하였다.
실시예 7: HuMax-AXL-ADC의 동결건조 공정에 대한 1차 건조 조건의 결정
HuMax-AXL-ADC 제제 (10 mg/mL HuMax-AXL-ADC, 30 mM 히스티딘, 88 mM 수크로스, 165 mM 만니톨, pH 6.0)에 대한 동결건조 사이클을 동결 용액 및 건조 고체의 열 특징화에 기초하여 및 1차 건조 동안 실패 지점의 확인에 의해 결정하였다. 실패 지점은 건조 고체의 시각적 외관의 변화로 이어지는 1차 건조 동안의 생성물 온도로서 정의되었다. 열 특징화 연구를 조정된 시차 주사 열량측정 (DSC) 및 동결-건조 현미경검사 (FDM)를 사용하여 수행하였다. 동결-건조 현미경검사 실험을 제제의 샘플을 -40℃로 냉각시킨 다음, -15℃에서 30분 동안 어닐링하여 제제 중 만니톨을 결정화함으로써 수행하였다. 샘플을 -40℃로 다시 냉각시키고 100 mTorr의 진공을 개시하였다. 허용되는 건조 층을 확립한 다음, 샘플의 완전한 실패가 관찰될 때까지 생성물 온도를 2℃의 증분으로 증가시켰다. 생성물 온도가 -16℃에 도달하였을 때 완전한 실패가 관찰되었다. 이는 실패 지점을 확인하는 데 사용된 실험으로부터의 공정중 동결건조 사이클 데이터와 잘 상응하였다. 모든 바이알의 생성물 온도가 실패 지점으로서 확인된 온도보다 대략 4℃ 더 차갑게 유지되는 것을 보장하도록 제제를 위해 개발된 동결건조 사이클을 설계하였다. 이는 선반의 에지를 따라 위치한 바이알에 대한 생성물 온도가 임계 생성물 온도 미만으로 잘 유지되는 것을 보장한다.
-15℃에서 동결건조 사이클의 열 처리 단계 동안 3시간 어닐링 단계를 사용하는 경우에 만니톨이 완전히 결정화되는지 여부를 결정하기 위해 건조 고체의 샘플을 조정된 시차 주사 열량측정을 사용하여 검사하였다. 데이터는 만니톨이 샘플을 가온하는 동안 발열 사건의 증거가 없다는 것을 입증함으로써 건조 고체 중에서 완전히 결정질이고 따라서 HuMax-AXL-ADC 제제 중 결정질 벌킹제로서 적합하다는 것을 지지한다.
실시예 8: HuMax-AXL-ADC의 안정성에 대한 잔류 수분의 효과
본 실시예는 동결건조 HuMax-AXL-ADC (10 mg/mL HuMax-AXL-ADC, 30 mM 히스티딘, 88 mM 수크로스, 165 mM 만니톨, pH 6.0을 포함하는 수용액으로부터 제조됨) 중 잔류 수분의 효과를 기재한다. 대략 2.28%, 0.84% 및 0.44%의 정의된 잔류 수분 수준을 갖는 샘플을 동결건조의 2차 건조 동안 제거하고 후속적으로 40℃/75%RH에서 최대 2개월 동안 보관하고 외관, A280, SEC, cIEF, 및 DLS에 의해 평가하였다. 선택된 결과가 하기 논의되어 있다.
변화가 연구의 2개월 시간 프레임에 걸쳐 샘플 중 어느 것의 외관에서도 관찰되지 않았다. 그러나, 잔류 수분의 수준의 증가가 예상된 바와 같이 샘플에서 측정되었다 (표 18). 이는 또한 DSC에 의해 시간 경과에 따라 감소된 고체의 중간점 Tg (유리 전이 온도) 값을 측정하여 확인되었고, 즉 수분은 Tg를 낮추는 가소제로서 작용한다. Tg 값은 연구의 시작에서 낮은 수분 샘플의 경우 대략 78℃ 내지 높은 수분 샘플의 경우 대략 60℃의 범위이지만, 낮은 수분 샘플의 경우 대략 60℃ 내지 중간 및 높은 수분 샘플의 경우 대략 45℃로 감소하였다 (도 12).
표 18 - 40℃/75% RH에서의 1개월 및 2개월 보관 후 HuMax-AXL-ADC 동결건조 샘플의 잔류 수분 값.
Figure pct00037
SEC 및 cIEF를 사용한 샘플의 분석은 3% 미만의 수분 수준에서 SEC에 의해 측정된 주요 피크의 백분율 (표 19) 및 cIEF에 의해 측정된 주요 이소형의 백분율 (도 13)로서의 생성물의 특징이 감소하지 않는다는 것을 나타냈고, 따라서 이는 제제의 안정성을 지지한다.
표 19 - 40℃에서의 2개월 후 높은, 중간, 및 낮은 수분 샘플에 대한 SEC 데이터 (% 주요 피크)
Figure pct00038
실시예 9: 시범 배치
최종 동결건조 사이클을 사용하는 시범 배치로부터의 동결건조 HuMax-AXL-ADC를 5 ± 3℃에서 장기간 안정성에 대해 평가하였다. 재구성 후 Humax-AXL-ADC의 조성은 10 mg/mL, 30 mM 히스티딘, 88 mM 수크로스, 165 mM 만니톨, pH 6.0이었다. 장기간 안정성 샘플을 T0, T1, T3, T6, T12, T18, 및 T24개월에서 분석하고, 생성물 특이적 검정 (SEC, cIEF, CE-SDS 등)뿐만 아니라 동결-건조 기반 시험 (잔류 수분, 재구성 시간, 및 외관)에 의해 분석하였다.
5 ± 3℃에서의 적어도 1개월 보관 후 모든 샘플은 안정하게 유지되었고, 즉 샘플은 시험 방법 중 어느 것에 의해서도 유의한 변화를 나타내지 않았다 (표 20). 이들 데이터는 제약 용도에 허용되는 HuMax-AXL-ADC를 위한 제제를 지지한다.
표 20 - HuMax-AXL-ADC 시범 배치
Figure pct00039
n.d. = 결정되지 않음
실시예 10: 동결건조 사이클
본 발명의 HuMax-AXL-ADC의 동결건조 제제에 대한 동결건조 사이클을 하기 기재된 바와 같이 하기 명시된 하기 단계와 함께 수행할 수 있다: 동결, 어닐링, 1차 건조 및 2차 건조.
동결 단계에서 바이알은 0.5℃/분 내지 1℃/분으로 -40℃ 이하로 냉각되고 적어도 120분 동안 등온으로 유지될 수 있다. 어닐링 단계에서 온도는 0.5℃/분 내지 1℃/분의 속도로 -20℃ 내지 -15℃로 상승되고 적어도 180분 동안 등온으로 유지된다. 1차 건조는 -15℃ 내지 0℃의 온도에서 50 - 200 mTorr의 압력의 감소와 함께 개시된다. 2차 건조에서, 온도는 0.5℃/분의 속도로 30℃ 내지 40℃로 증가되고 적어도 8시간 동안 등온으로 유지된다. 잔류 수분은 2 중량% 초과이어서는 안된다.
실시예 11: 항-AXL 항체의 생성
항-AXL 항체의 생성 및 시험은 국제 출원 번호 PCT/EP2015/065900에 상세하게 기재되어 있고, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 간략하게:
인간 및 다른 포유동물 AXL의 다양한 전장 및 키메라 구축물을 제조하고 트랜스제닉 마우스 (메다렉스(Medarex), 미국 캘리포니아주 산호세)를 면역화시키는 데 사용하였다. 다양한 전장 AXL 변이체의 발현을 위해 하기 코돈-최적화된 구축물을 생성하였다: 인간 (호모 사피엔스(Homo sapiens)) AXL (진뱅크 수탁 번호 NP_068713.2), 인간 세포외 도메인 (ECD)이 시노몰구스 원숭이 (마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis)) AXL의 ECD로 대체된 인간-시노몰구스 원숭이 키메라 AXL (진뱅크 수탁번호 HB387229.1의 번역물; aa 1-447), 인간 ECD가 마우스 (무스 무스쿨루스(Mus musculus)) AXL의 ECD로 대체된 인간-마우스 키메라 AXL (진뱅크 수탁번호 NP_033491.2; aa 1-441), 인간 Ig-유사 도메인 I (aa 1-134, 본원에서 또한 "Ig1 도메인"으로 칭해짐)이 마우스 AXL의 Ig-유사 도메인 I로 대체된 인간-마우스 키메라 AXL, 인간 Ig-유사 도메인 II (aa 148-194, 본원에서 또한 "Ig2 도메인"으로 칭해짐)가 마우스 AXL의 Ig-유사 도메인 II로 대체된 인간-마우스 키메라 AXL, 인간 FNIII-유사 도메인 I (aa 227-329, 본원에서 또한 "FN1 도메인"으로 칭해짐)이 마우스 AXL의 FNIII-유사 도메인 I로 대체된 인간-마우스 키메라 ALX, 인간 FNIII-유사 도메인 II (aa 340-444, 본원에서 또한 "FN2 도메인"으로 칭해짐)가 마우스 AXL의 FNIII-유사 도메인 II로 대체된 인간-마우스 키메라 AXL. 또한, 다양한 AXL ECD 변이체에 대한 하기 코돈-최적화된 구축물을 생성하였다: C-말단 His 태그를 갖는 인간 AXL의 세포외 도메인 (ECD) (aa 1-447) (AXLECDHis), N-말단 신호 펩티드 및 C-말단 His 태그를 갖는 인간 AXL의 FNIII-유사 도메인 II (aa 327-447) (AXL-FN2ECDHis), 및 C-말단 His 태그를 갖는 인간 AXL의 Ig1- 및 Ig2-유사 도메인 (aa 1-227) (AXL-Ig12ECDHis).
충분한 항원-특이적 역가 발생을 갖는 HuMab 마우스를 희생시키고 복부 대동맥 및 대정맥에 플랭킹된 비장 및 림프절을 수집하였다. 마우스 골수종 세포주 (SP2.0 세포)에 대한 비장세포 및 림프절 세포의 융합을 시토펄스(CytoPulse) CEEF 50 전기융합 시스템 (셀렉티스(Cellectis), 프랑스 파리)을 본질적으로 제조업체의 지침에 따라 사용하여 전기융합에 의해 수행하였다.
1차 웰을 클론픽스(ClonePix) 시스템 (제네틱스(Genetix), 영국 햄프셔)을 사용하여 서브-클로닝하였다. 면역화된 마우스 또는 HuMab (인간 모노클로날 항체) 하이브리도마 또는 트랜스펙토마 배양물 상청액의 혈청에서의 항-AXL 항체의 존재를 형광측정 마이크로 부피 검정 기술 (FMAT; 어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems), 미국 캘리포니아주 포스터 시티)을 사용하여 동종 항원 특이적 스크리닝 검정에 의해 결정하였다.
스마트 레이스(SMART RACE) cDNA 증폭 키트 (클론테크(Clontech))를 제조업체의 지침에 따라 사용하여, 총 RNA를 0.2 내지 5x106개의 하이브리도마 세포로부터 제조하고 5'-RACE-상보성 DNA (cDNA)를 100 ng 총 RNA로부터 제조하였다. VH 및 VL 코딩 영역을 PCR에 의해 증폭시키고, 라이게이션 독립적 클로닝에 의해 pG1f 및 p카파 발현 벡터에 프레임 내로 직접 클로닝하였다 (Aslanidis, C. and P.J. de Jong, Nucleic Acids Res 1990;18(20): 6069-74). 각각의 항체에 대해, 12개의 VL 클론 및 12개의 VH 클론을 서열분석하였다. 생성된 서열은 표 1에 제시되어 있다. CDR 서열은 IMGT에 따라 정의되었다 [41] [42].
일부의 실시예에서, 이전에 기재된 (EP 2 220 131; U3 파마(U3 Pharma) [43]; WO 2011/159980; 제넨테크(Genentech) [44]) AXL에 대한 비교 항체를 사용하였다 (IgG1-YW327.6S2). 이들 AXL-특이적 항체에 대한 VH 및 VL 서열을 pG1f 및 p카파 발현 벡터 내로 클로닝하였다.
일부의 실시예에서, gp120 특이적 항체인 항체 b12를 음성 대조군으로서 사용하였다.
항체를 IgG1,κ로서 발현시켰다. 항체의 중쇄 및 경쇄 둘 다를 코딩하는 플라스미드 DNA 혼합물을 293펙틴(293fectin) (인비트로젠(Invitrogen), 미국)을 본질적으로 제조업체에 의해 기재된 바와 같이 사용하여 프리스타일 HEK293F 세포 (인비트로젠, 미국)에 일시적으로 형질감염시켰다.
실시예 12: CHO 세포에서의 항-AXL 항체의 발현
HuMax AXL 107은 모, CHO 세포주로부터 서브클로닝되고, 인간 항 AXL mAb 생산 하이브리도마 세포주로부터 유래된 가변 영역 유전자를 보유하는 GS 벡터로 형질감염된 CHO 세포주, CHO K1SV GS-KO에서 생산된다. 표준 포유동물 세포 배양 조건 및 정제 기술이 HuMax AXL의 제조에 사용된다.
실시예 13 - AXL 항체의 결합 특징
AXL 항체의 결합 친화도
9개의 항-AXL 항체뿐만 아니라 가변 도메인에서 단일 아미노산 돌연변이를 갖는 이들 항체의 3개의 변이체 (IgG1-AXL-154-M103L, IgG1-AXL-183-N52Q, IgG1-AXL-726-M101L)의 패널의 친화도를 결정하였다.
친화도를 바이오-레이어(Bio-Layer) 간섭측정법을 사용하여 포르테바이오 옥텟RED384(ForteBio OctetRED384) 상에서 결정하였다. 항-인간 Fc 포획 (AHC) 바이오센서 (포르테바이오, 영국 포츠마우스; 카탈로그 번호 18-5064)에 1 nm의 로딩 반응을 목표로 hIgG (1 μg/mL)를 150초 동안 로딩하였다. 기준선 (150초) 후, AXLECDHis의 회합 (1000초) 및 해리 (2000초) (실시예 1에 기재된 바와 같음)를 2배 희석 단계로 10 μg/mL - 0.16 μg/mL (218 nM - 3 nM)의 농도 범위를 사용하여 결정하였다. 계산을 위해, 아미노산 서열에 기초한 AXLECDHis의 이론적 분자 질량, 즉, 46 kDa를 사용하였다. 실험을 옥텟RED384 상에서, 1000 rpm에서 및 30℃에서 진탕시키면서 수행하였다. 각각의 항체를 3회의 독립적인 실험에서 시험하였다.
데이터를 포르테바이오 데이터 분석 소프트웨어 v7.0.3.1로, 달리 언급되지 않는 한 1:1 모델 및 글로벌 풀 핏을 사용하여 1000초 회합 시간 및 1000초 해리 시간으로 분석하였다. 1000초의 해리 시간 (획득된 2000초 해리 시간 대신)을 사용하였는데, 이는 이것이 보다 양호한 핏을 생성하였기 때문이다. 항체 IgG1-AXL-154 및 IgG1-AXL-154-M103L에 대해 500초의 해리 시간을 사용하였다. IgG1-AXL-012 및 IgG1-AXL-094에 대해 200초의 해리 시간을 사용하였다. 데이터 트레이스를 참조 곡선 (AXLECDHis가 없는 항체)을 감함으로써 수정하고, Y-축을 기준선의 마지막 5초에 대해 정렬하고, 단계간 수정뿐만 아니라 사비츠키-골레이(Savitzky-Golay) 필터링을 적용하였다.
항-AXL 항체의 친화도 (KD)는 0.3*10-9M 내지 63*10-9M 범위였다 (표 21). 돌연변이체 IgG1-AXL-183-N52Q에 대해 KD는 대략 2.5-배 더 높은 해리율로 인해 야생형 IgG1-AXL-183에 대해서보다 더 낮았다. 다른 2종의 돌연변이체의 관찰된 동역학은 야생형 IgG의 동역학과 유사하였다.
표 21 - AXL에 대한 항체의 결합
Figure pct00040
인간, 마우스 및 시노몰구스 AXL에 대한 AXL 항체의 결합
HEK293T 세포를 전장 인간 AXL, 시노몰구스 원숭이 세포외 도메인 (ECD)을 갖는 인간 AXL 또는 마우스 ECD를 갖는 인간 AXL에 대한 발현 구축물로 일시적으로 형질감염시켰다. 이들 세포에 대한 HuMab-AXL 항체의 결합을 유동 세포측정법에 의해 평가하였다. 형질감염된 HEK293 세포를 AXL-항체의 연속 희석물 (최종 농도 범위 0.0024 내지 10 μg/mL)과 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에서 3회 세척한 후, 세포를 PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에 1/100으로 희석된 (최종 부피 100 μL) R-피코에리트린 (PE)-접합된 염소-항-인간 IgG F(ab')2 (잭슨 이뮤노리서치 래보러토리즈 인크.(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.), 펜실베니아주 웨스트 그로브; 카탈로그 번호 109-116-098)와 함께 인큐베이션하였다. 다음에, 세포를 PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에서 2회 세척하고, 120 μL PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에 재현탁시키고 FACS 칸토(Canto)II (비디 바이오사이언시스(BD Biosciences)) 상에서 분석하였다.
결합 곡선을 비-선형 회귀 (가변 기울기를 갖는 S자형 용량-반응)를 사용하여 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) V5.04 소프트웨어 (그래프패드 소프트웨어(GraphPad Software), 미국 캘리포니아주 샌디에고)를 사용하여 분석하였다.
HuMab-AXL 항체는 인간 AXL-ECD를 발현하는 HEK293 세포에 대한 용량-의존성 결합을 나타냈다. 또한, HuMab-AXL 항체는 시노몰구스 원숭이 ECD를 갖는 AXL을, 완전 인간 AXL에 대해서와 동일한 범위의 EC50 값으로 인식하였다. 대조적으로, 마우스 ECD를 갖는 AXL에 대한 HuMab의 결합은 낮거나 (IgG1-AXL-107, IgG1-AXL-154, IgG1-AXL-154-M103L, IgG1-AXL-733, IgG1-AXL-183, IgG1-AXL-183-N52Q), 또는 검출가능하지 않았다 (IgG1-AXL-171, IgG1-AXL-613, IgG1-AXL-726, IgG1-AXL-726-M101L, IgG1-AXL-148). 예상된 바와 같이, 음성 대조군 항체 IgG1-b12는 AXL 변이체 중 어느 것을 발현하는 세포에 대한 결합을 나타내지 않았다. 하기 표는 인간 AXL 또는 시노몰구스 AXL ECD를 갖는 인간 AXL에 대한 항-AXL 항체의 결합에 대한 EC50 값 및 표준 편차를 나타낸다 (적어도 3회의 실험에서 결정됨). 마우스 AXL ECD를 갖는 인간 AXL에 대한 결합에 대한 EC50 값은 매우 낮거나 또는 부재하는 결합으로 인해 결정될 수 없었다.
표 22 - 인간 AXL 또는 시노몰구스 AXL ECD를 갖는 인간 AXL에 대한 항-AXL 항체의 결합
Figure pct00041
AXL 결합에 대한 AXL 항체와 Gas6 사이의 경쟁
AXL 리간드 Gas6이 AXL에 대한 AXL 항체의 결합을 방해하는지 여부를 시험하였다. 따라서, AXL-양성 A431 세포를 4℃에서 15분 동안 10 μg/mL 재조합 인간 Gas6 (알앤디 시스템즈(R&D Systems), 영국 애빙돈; 카탈로그 번호 885-GS)과 함께 인큐베이션하였다. 후속적으로, AXL 항체의 연속 희석물을 제조하고 (최종 농도 범위 0.014-10 μg/mL), 세포에 첨가하고 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에서 3회 세척한 후, 세포를 100 μL에서 2차 항체와 함께 4℃에서 30분 동안 암실에서 인큐베이션하였다. Fc 영역에 결합하는 2차 항체로서, PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에 1/100으로 희석된 R-피코에리트린 (PE)-접합된 염소-항-인간 IgG F(ab')2 (잭슨 이뮤노리서치 래보러토리즈 인크., 펜실베니아주 웨스트 그로브; 카탈로그 번호 109-116-098)를 사용하였다. 다음에, 세포를 PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에서 2회 세척하고, 120 μL PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에 재현탁시키고 FACS 칸토II (비디 바이오사이언시스) 상에서 분석하였다.
대안적으로, A431 세포를 10 μg/mL AXL 항체와 함께 사전-인큐베이션하여 (15분, 4℃) AXL 리간드 Gas6이 AXL 항체의 존재 하에 여전히 결합할 수 있는지 여부를 평가하였다. 항체 사전-인큐베이션 후, 재조합 인간 Gas6 (알앤디 시스템즈, 영국 애빙돈; 카탈로그 번호 885-GS)의 연속 희석물을 세포에 0.001-20 μg/mL의 최종 농도로 첨가하고 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에서 3회 세척한 후, 세포를 마우스 항-Gas6 IgG2a (알앤디 시스템즈; 카탈로그 번호 MAB885)와 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에서 3회 세척한 후, 세포를 FITC-표지된 염소 항-마우스 IgG (다코(Dako), 벨기에 헤벌리; 카탈로그 번호 F049702)와 함께 4℃에서 30분 동안 암실에서 인큐베이션하였다. 다음에, 세포를 PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에서 2회 세척하고, 120 μL PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에 재현탁시키고 FACS 칸토II (비디 바이오사이언시스) 상에서 분석하였다.
결합 곡선을 비-선형 회귀 (가변 기울기를 갖는 S자형 용량-반응)를 사용하여 그래프패드 프리즘 V5.04 소프트웨어 (그래프패드 소프트웨어, 미국 캘리포니아주 샌디에고)를 사용하여 분석하였다.
A431 세포를 Gas6과 함께 사전-인큐베이션한 실험 (n=3)에서, 항-AXL 항체의 최대 결합 값은 Gas6의 부재 하의 항체 결합과 대등하였다 (Gas6 사전-인큐베이션 후의 최대 결합은 Gas6 사전-인큐베이션의 부재 하의 결합의 90-108%였음). Gas6 사전-인큐베이션의 존재 또는 부재 하의 AXL 항체 결합에 대한 EC50 값은 동일한 범위이거나, 또는 Gas6 사전-인큐베이션 후 다소 증진되었다 (표 23).
A431 세포에 대한 대조군 AXL 항체 YW327.6S2의 결합은 Gas의 부재 하의 결합과 비교하여 Gas6의 존재 하에 크게 감소되었다. Gas6의 존재 하의 YW327.6S2의 최대 결합은 Gas6의 부재 하의 결합의 19％이고, A431 세포에 대한 결합에 대한 EC50 값은 세포를 Gas6과 함께 사전-인큐베이션한 경우 21-배 더 높았다.
A431 세포를 항-AXL 항체와 함께 사전-인큐베이션한 실험에서, Gas6 결합을 평가하였다 (n=3). HuMab-AXL 항체와의 사전-인큐베이션의 존재 또는 부재 하의 A431 세포에 대한 Gas6의 결합은 유사하였다. 세포를 HuMab와 함께 사전-인큐베이션한 경우에 Gas6 결합의 평균 EC50 농도 (0.34 내지 0.83 μg/mL) 및 최대 Gas6 결합은 음성 대조군 항체 b12의 존재 하의 Gas6 결합과 유사하였다 (EC50 농도: 0.40 μg/mL; b12 대조군 항체의 존재 하의 Gas6 결합의 95 내지 115％). A431 세포에 대한 Gas6의 결합은 b12와의 사전-인큐베이션과 비교하여 대조군 AXL 항체 YW327.6S2의 존재 하에 크게 감소되었다 (EC50 농도는 14배 더 높았음). 대조군 항체 YW327.6S2의 존재 하의 Gas6의 최대 결합은 음성 대조군 항체 b12의 존재 하의 결합의 17％였다.
표 23 - AXL 결합에 대한 AXL 항체와 Gas6 사이의 경쟁
Figure pct00042
a n.a., 적용가능하지 않음
* 낮은 결합으로 인해 덜 정확한 EC50 값.
실시예 14 - AXL 항체-약물 접합체 (AXL-ADC)의 결합 특징
HEK293T 세포를 전장 인간 AXL에 대한 발현 구축물로 일시적으로 형질감염시켰다 (실시예 1 참조). 이들 세포에 대한 항-AXL 항체 및 AXL-ADC의 결합을 유동 세포측정법에 의해 평가하였다. 일시적으로 형질감염된 HEK293 세포를 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC의 연속 희석물 (4-배 희석; 최종 농도 범위 0.003 내지 10 μg/mL)과 함께 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에서 3회 세척한 후, 세포를 100 μL에서 2차 항체와 함께 4℃에서 30분 동안 암실에서 인큐베이션하였다. 2차 항체로서, PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에 1/100으로 희석된 R-피코에리트린 (PE)-접합된 염소-항-인간 IgG F(ab')2 (잭슨 이뮤노리서치 래보러토리즈 인크., 펜실베니아주 웨스트 그로브; 카탈로그 번호 109-116-098)를 사용하였다. 다음에, 세포를 PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에서 2회 세척하고, 120 μL PBS/0.1％ BSA/0.02％ 아지드 중에 재현탁시키고 FACS 칸토II (비디 바이오사이언시스) 상에서 분석하였다.
결합 곡선을 비-선형 회귀 (가변 기울기를 갖는 S자형 용량-반응)를 사용하여 그래프패드 프리즘 V5.04 소프트웨어 (그래프패드 소프트웨어, 미국 캘리포니아주 샌디에고)를 사용하여 분석하였다. 이들은 인간 AXL-ECD를 발현하는 HEK293 세포에 대한 항-AXL 항체의 결합이 AXL-ADC의 결합과 유사하다는 것을 나타냈다.
실시예 15 - 항-AXL 항체 패널의 에피토프 맵핑 연구
인간-마우스 AXL 키메라 분자를 사용한 AXL 도메인 특이성의 결정
AXL 항체의 AXL 도메인 특이성을 인간-마우스 키메라 AXL 돌연변이체의 패널을 사용하여 결정하였다. 인간 Ig-유사 도메인 I (Ig1), Ig-유사 도메인 II (Ig2), 인간 FNIII-유사 도메인 I (FN1) 또는 인간 FNIII-유사 도메인 II 도메인 (FN2)을 이들의 뮤린 상동체로 대체한 5종의 상이한 키메라 AXL 분자를 생성하였다. AXL 인간-마우스 키메라의 발현을 위한 코돈-최적화된 구축물을 생성하고 HEK293F 세포에서 발현시켰다.
인간-마우스 AXL 키메라에 대한 1 μg/mL 항-AXL 항체의 결합을 유동 세포측정법에 의해 결정하였다. IgG1-b12는 이소형 대조군 IgG1로서 포함되었다.
모든 항-AXL 항체는 인간 AXL에 대한 결합을 나타낸 한편, 결합은 인간 AXL ECD가 그의 뮤린 상동체로 대체된 경우에 제거되거나 또는 강하게 감소되었다. 인간-마우스 교차-반응성 모노클로날 AXL 항체 YW327.6S2는 hsAXL-mmECD의 발현을 확인하기 위해 포함되었다.
항-AXL 항체 107 및 613은 hsAXL-mmIg1에 대한 강하게 감소된 결합을 나타냈고, 이는 AXL Ig1 도메인 내의 에피토프의 인식을 나타낸다. IgG1-AXL-148 및 IgG1-AXL-171은 hsAXL-mmIg2에 대한 강하게 감소된 결합을 나타냈고, 이는 AXL Ig2 도메인 내의 에피토프의 인식을 나타낸다. IgG1-AXL-154, IgG1-AXL-183 및 IgG1-AXL-733은 hsAXL-mmFN1에 대한 감소된 결합을 나타냈고, 이는 AXL FN1 도메인 내의 결합 에피토프를 나타낸다. 마지막으로, IgG1-AXL-726의 결합은 hsAXL-mmFN2에서 상실되었고, 이는 FN2 도메인 내의 에피토프의 인식을 나타낸다.
AXL 항체의 결합에 수반되는 AXL 세포외 도메인 내의 아미노산을 확인하기 위한 고해상도 에피토프 맵핑
항-AXL 항체의 결합에 수반되는 AXL 세포외 도메인 내의 아미노산을 확인하기 위해, AXL 서열 변이체의 라이브러리를 세포외 도메인 내의 인간 AXL 서열과 가변적 수준의 상동성을 갖는 종으로부터 유래된 AXL 서열의 재조합에 의해 생성하였다. 간략하게, 인간 AXL (Hs)을 코딩하는 발현 플라스미드를 무스 무스쿨루스 (Mm), 모노델피스 도메스티카(Monodelphis domestica) (Md; 주머니쥐), 아놀리스 카롤리넨시스(Anolis carolinensis) (Ac; 도마뱀) 및 테트라오돈 니그로비리디스(Tetraodon nigroviridis) (Tn; 복어) AXL 상동체를 코딩하는 클로닝 플라스미드와 혼합하였거나, 또는 그 반대의 경우도 마찬가지였다. 클로닝 또는 발현 벡터에 특이적인 2종의 프라이머의 조합물을 사용하여 AXL 세포외 도메인 (ECD)을 단축된 신장 시간으로 PCR 증폭, 강제 용융 및 PCR 사이클링 동안 발생기 DNA 복제 가닥의 재어닐링을 수행하였다. 전장 ECD를 다시 둘 다의 벡터로부터 기원한 말단을 함유하는 재조합 생성물에 특이적인 네스티드 PCR을 사용하여 증폭시켰다.
생성된 AXL ECD PCR 생성물을 전장 AXL을 생성하는 발현 벡터 내로 클로닝하고, 생성된 플라스미드를 서열분석하고, 주형 벡터와의 최대 차이에 의해 등급화하고 최대 분화력을 갖는 최소 앙상블을 생성하기 위해 선택하였다. Hs, Mm, Md, Ac 및 Tn으로부터의 AXL 상동체를 코딩하는 플라스미드, 뮤린 Ig1, Ig2, Fn1 또는 Fn2 도메인을 갖는 Hs AXL을 코딩하는 4종의 인간/마우스 키메라 플라스미드, 및 재조합 라이브러리로부터의 16종의 가장 구별되는 플라스미드를 제조업체 (라이프 테크놀로지스)에 의해 공급된 설명서에 따라 HEK293-F 세포 내로 형질감염시켰다. 1 μg/mL 항-AXL 항체를 사용한 FACS 결합 데이터를 돌연변이가 결합의 상실과 상호연관되었거나 (+1) 또는 상호연관되지 않은 (-1) 경우에 아미노산당 점수화함으로써 디콘볼루션하고, 그 후 기준선 수정 및 -5 내지 +5의 스케일로의 정규화를 적용하여, 전체 ECD에 걸쳐 아미노산당 영향 점수를 생성하였다.
디콘볼루션된 결합 데이터는 결합에 수반된 아미노산으로서 표 24에 요약되어 있다. 결합 부위의 근처에서 재조합 사건의 결여로 인해 결합 부위가 고해상도로 맵핑될 수 없는 항체는 분석되지 않은 것으로 나타내어진다.
표 24 - 모든 항-AXL 항체에 대한 AXL 도메인 특이성
Figure pct00043
a n.d., 결정되지 않음
실시예 16 - AXL에 대한 결합을 허용하는 항체 VH 및 VL 변이체
항-AXL 항체 패널의 VH 및 VL 영역의 단백질 서열을 정렬하고 AXL 결합에 대해 비교하여 VH 또는 VL 영역 내의 아미노산 잔기의 중요한 또는 허용적 변화를 확인하였다 (실시예 1에 기재됨). 따라서, 동일한 VH 또는 VL 영역을 갖는 항체를 그룹화하고 각각 인간 AXL에 대한 결합 및 VL 또는 VH 서열의 차이에 대해 비교하였다. HEK-293F 세포에 의해 일시적으로 발현된 인간 AXL에 대한 결합을 실시예 1에 기재된 바와 같은 동종 항원 특이적 스크리닝 검정에서 평가하였다. 본 실시예에서 수행된 정렬을 위한 아미노산 위치의 넘버링은 표 1에 제시된 서열에 기초하여 수행되었고, 즉 제시된 서열에서 제1 아미노산을 위치 '1'로, 제2 아미노산을 위치 '2'로 등으로 넘버링하였다.
먼저, 동일한 VL 서열을 갖는 항체를 그룹화하였다.
IgG1-AXL-148 및 IgG1-AXL-140은 동일한 VL 서열을 갖는 것으로 밝혀졌고, HC CDR3 영역에서 1개의 아미노산 차이 (아미노산 위치 109에서의 I에 대해 F)를 나타냈다. 항체 둘 다는 인간 AXL에 결합하였고 (표 7), 이는 위치 109에서의 아미노산이 항체 결합에 필수적이지 않다는 것을 나타내고, CDR2 영역에서 확인된 돌연변이 (아미노산 위치 56에서의 A에 대해 G)가 결합의 상실에 대해 보상하지 않는 것으로 추정된다.
IgG1-AXL-726 및 IgG1-AXL-187은 동일한 VL 서열을 갖는 것으로 밝혀졌고 항체 둘 다는 인간 AXL에 결합하였다 (표 25). HC CDR3 영역에서 2개의 아미노산 잔기의 변화 (위치 97에서의 S에 대해 R 및 위치 105에서의 T에 대해 A)가 결합의 상실 없이 허용되었고, CDR1 (위치 32에서의 H에 대해 Y) 및/또는 프레임워크 영역 (P3Q, V24I, Y25D, T86A 및 T117A)에서 확인된 돌연변이가 결합의 상실에 대해 보상하지 않는 것으로 추정된다.
IgG1-AXL-171, IgG1-AXL-172 및 IgG1-AXL-181은 동일한 VL 서열을 갖는 것으로 밝혀졌고 모든 항체는 인간 AXL에 결합하였다 (표 7). 이들 3종의 항체의 CDR3 영역은 동일하지만, HC CDR1 (위치 31에서의 N에 대해 S) 또는 프레임워크 영역 (위치 82에서의 Q에 대해 H)에서의 아미노산 잔기 변화는 결합의 상실 없이 허용되었다.
IgG1-AXL-613, IgG1-AXL-608-01, IgG1-AXL-610-01 및 IgG1-AXL-620-06은 동일한 VL 서열을 갖는 것으로 밝혀졌고, HC CDR3 영역에서 1개의 아미노산 차이 (아미노산 위치 101에서의 D에 대해 N)를 나타냈다. 모든 항체는 인간 AXL에 결합하였고 (표 25), 이는 위치 101에서의 아미노산이 필수적이지 않다는 것을 나타내고, HC CDR2 (위치 58에서의 A에 대해 V) 및/또는 프레임워크 영역 (N35S, M37V, A61V, L70I, S88A)에서 확인된 돌연변이가 결합의 상실에 대해 보상하지 않는 것으로 추정된다.
다음에, 동일한 VH 서열을 갖는 항체를 그룹화하였다.
IgG1-AXL-613 및 IgG1-AXL-613-08은 동일한 VH 서열을 갖는 것으로 밝혀졌고, LC의 CDR3 영역에서 5개의 아미노산 차이 (위치 92 내지 96에서의 YGSSY에 대해 RSNWL)를 나타냈다. 항체 둘 다는 인간 AXL에 결합하였고 (표 25), 이는 위치 92 내지 96에서의 아미노산의 변이가 허용되고 항체 결합에 영향을 미치지 않는다는 것을 나타내고, CDR1 (위치 30에서의 S의 결실), CDR2 (G51D), 및/또는 프레임워크 영역 (G9A, S54N, R78S, Q100G, L104V)에서 확인된 돌연변이가 결합의 상실에 대해 보상하지 않는 것으로 추정된다.
표 25
Figure pct00044
실시예 17 - MMAE-접합된 AXL 항체에 의해 유도된 시험관내 세포독성
항-AXL 항체에 대한 MMAE의 접합
항-AXL 항체를 표준 절차에 따라 단백질 A 크로마토그래피에 의해 정제하고 vcMMAE에 접합시켰다. 약물-링커 vcMMAE를 문헌에 기재된 절차에 따라 환원된 항체의 시스테인에 알킬화시켰다 ([150], [151], 및 [152] 참조). 반응물을 과량의 N-아세틸시스테인을 첨가하여 켄칭하였다. 임의의 잔류 미접합된 약물을 정제에 의해 제거하고 최종 항-AXL 항체 약물 접합체를 PBS 중에서 제제화하였다. 항-AXL 항체 약물 접합체를 후속적으로 농도 (280 nm에서의 흡광도에 의해), 역상 크로마토그래피 (RP-HPLC) 및 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC)에 의한 약물 대 항체 비 (DAR), 미접합된 약물의 양 (역상 크로마토그래피에 의해), 백분율 응집 (크기-배제 크로마토그래피, SEC-HPLC에 의해) 및 내독소 수준 (LAL에 의해)에 대해 분석하였다. 결과가 하기 제시되어 있다.
표 26 - 항체-약물 접합체의 상이한 특징의 개관
Figure pct00045
세포 배양
LCLC-103H 세포 (인간 대세포 폐암) 및 A431 세포 (DMSZ, 독일 브라운슈바이크)를 10％ (vol/vol) 열 불활성화된 코스믹 송아지 혈청 (퍼바이오(Perbio); 카탈로그 번호 SH30087.03), 2 mM L-글루타민 (캄브렉스(Cambrex); 카탈로그 번호 US17-905C), 50 IU/mL 페니실린, 및 50 μg/mL 스트렙토마이신 (캄브렉스; 카탈로그 번호 DE17-603E)으로 보충된 L-글루타민을 포함하는 RPMI 1640 (캄브렉스; 카탈로그 번호 BE12-115F)에서 배양하였다. MDA-MB231 세포를 고 글루코스 및 HEPES를 포함하는 DMEM (론자(Lonza) #BE12-709F), 철을 포함하는 공여자 소 혈청 (라이프 테크놀로지스 #10371-029), 2 mM L-글루타민 (론자 #BE17-605E), 1 mM 피루브산나트륨 (론자 #BE13-115E), 및 MEM 비-필수 아미노산 용액 (라이프 테크놀로지스 #11140)에서 배양하였다. 세포주를 37℃에서 5％ (vol/vol) CO2 가습 인큐베이터에서 유지하였다. LCLC-103H, A431 및 MDA-MB231 세포를 거의 전면생장률로 배양하고, 그 후 세포를 트립신처리하고, 배양 배지 중에 재현탁시키고 세포 스트레이너 (비디 팔콘(BD Falcon), 카탈로그 번호 352340)를 통과시켜 단세포 현탁액을 수득하였다. 1x103개의 세포를 96-웰 배양 플레이트의 각각의 웰에 시딩하고, 세포를 실온에서 30분 동안 및 후속적으로 37℃, 5％ CO2에서 5시간 동안 인큐베이션하여 플레이트에 부착되게 하였다.
세포독성 검정
MMAE-접합된 AXL-항체의 연속 희석물 (0.00015 내지 10 μg/mL 범위의 최종 농도)을 배양 배지에서 제조하고 플레이트에 첨가하였다. 1 μM 스타우로스포린 (#S6942-200, 시그마(Sigma))과의 세포의 인큐베이션을 100％ 종양 세포 사멸에 대한 참조물로서 사용하였다. 비처리된 세포를 100％ 세포 성장에 대한 참조물로서 사용하였다. 플레이트를 37℃, 5％ CO2에서 5일 동안 인큐베이션하였다. 다음에, 셀타이터-글로(CellTiter-Glo) 시약 (프로메가(Promega); 카탈로그 번호 G7571)을 웰에 첨가하고 (웰당 20 μL), 플레이트를 37℃, 5％ CO2에서 1.5시간 동안 인큐베이션하였다. 후속적으로, 웰당 180 μL를 백색 96-웰 옵티플레이트(Optiplate)™ 플레이트 (퍼킨엘머(PerkinElmer), 매사추세츠주 월섬; 카탈로그 번호 6005299)에 옮기고, 이를 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 마지막으로, 발광을 엔비전(EnVision) 멀티플레이트 판독기 (엔비전, 퍼킨 엘머) 상에서 측정하였다.
MMAE-접합된 AXL-항체는 하기 표 27a에 제시된 바와 같이 LCLC-103H 세포에서 0.004 내지 0.219 μg/mL의 농도에서 50％ 세포 사멸을 유도하였다.
유사하게, AXL-ADC는 A431 및 MDA-MB231 세포 (하기 표 27b)에서 세포독성을 효율적으로 유도하였다.
표 27a - LCLC-103H 세포에서의 MMAE-접합된 AXL-항체의 세포독성 (EC50 값)
Figure pct00046
표 27b. A431 및 MDA-MB-231 세포에서의 MMAE-접합된 AXL 항체의 세포독성 (EC50 값)
Figure pct00047
실시예 17 - MMAE-접합된 항-AXL 항체를 사용한 SCID 마우스에서의 LCLC-103H 종양 이종이식편의 치유적 치료
MMAE-접합된 항-AXL 항체의 생체내 효능을 SCID 마우스에서의 확립된 피하 (SC) LCLC-103H 이종이식 종양에서 결정하였다. 200 μL PBS 중 5 x 106개의 LCLC-103H (대세포 폐 암종) 종양 세포 (라이프니츠-인스티투트 DSMZ-도이치 삼룽 폰 미크로오르가니스멘 운트 첼쿨투렌 게엠베하(Leibniz-Institut DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH) (DSMZ)로부터 수득됨)를 암컷 SCID 마우스의 우측 측복부에 피하로 주사하였다. 평균 종양 크기가 >100-200 mm3이고 뚜렷한 종양 성장이 관찰된 종양 세포 접종 후 14-21일에서 시작하여, 1 mg/kg (20 μg/마우스) IgG1-AXL-vcMMAE 항체 (보충 실시예 1에 기재된 바와 같음) 또는 대조군 (미접합된 IgG1-b12)을 포함하는 단일 주사를 복강내로 주었다 (100 μL/마우스). 종양 부피를 1주에 적어도 2회 결정하였다. 종양 부피 (mm3)를 캘리퍼 (PLEXX) 측정으로부터 0.52 x (길이) x (폭)2으로 계산하였다.
항-AXL-vcMMAE 항체의 패널은 확립된 SC LCLC-103H 종양에서 넓은 범위의 항종양 활성을 나타냈다. 클론 IgG1-AXL-733-vcMMAE, IgG1-AXL-107-vcMMAE 및 IgG1-AXL-148-vcMMAE는 종양 퇴행을 유도하고, 클론 AXL-171-vcMMAE, IgG1-AXL-511-vcMMAE 및 IgG1-AXL-613-vcMMAE는 종양 성장 억제를 유도하고, 클론 IgG1-AXL-154-M103L-vcMMAE, IgG1-AXL-183-N52Q-vcMMAE, 및 IgG1-AXL-726-M101L-vcMMAE는 종양 성장 억제를 나타내지 않거나 또는 단지 조금 나타냈다.
일원 ANOVA (대조군 IgG1-b12에 대한 던넷(Dunnett)의 다중 비교 검정)를 사용한, 모든 군이 무손상인 최종일 (제30일)의 통계적 분석은 IgG1-b12 대 IgG1-AXL-733-vcMMAE, IgG1-AXL-107-vcMMAE 및 IgG1-AXL-148-vcMMAE 사이의 종양 부피의 매우 유의한 차이를 나타냈다 (p<0.0001). 이들 클론을 사용한 치료는 이들 군 내의 일부 마우스에서 완전한 종양 감소를 일으켰다. 클론 IgG1-AXL-171-vcMMAE, IgG1-AXL-511-vcMMAE 및 IgG1-AXL-613-vcMMAE를 사용한 치료는 또한 IgG1-b12와 비교하여 유의한 종양 성장 억제를 나타냈지만, 차이는 덜 현저하였다 (p<0.05 내지 p<0.001). 클론 IgG1-AXL-154-M103L-vcMMAE, IgG1-AXL-183-N52Q-vcMMAE, 및 IgG1-AXL-726-M101L-vcMMAE로 치료된 마우스의 종양 성장은 IgG1-b12 대조군과 비교하여 유의하게 영향을 받지 않았다.
항-AXL-vcMMAE 항체의 항종양 활성이 다양한 다른 생체내 종양 모델에서 관찰되었다. 2종의 세포주-유래된 이종이식편 모델 (A431; 표피양 선암종, 및 MDA-MB-231; 유방암)에서, 항-AXL-vcMMAE 항체는 종양 성장 억제를 유도하고, 췌장암 및 자궁경부암을 갖는 환자로부터의 2종의 환자-유래된 이종이식편 모델에서 항-AXL-vcMMAE 항체에 의해 종양 퇴행이 유도되었다.
실시예 18 - 이종 표적 발현을 갖는 췌장암 환자-유래된 이종이식 (PDX) 모델에서의 AXL-ADC의 항종양 효능
IgG1-AXL-107-vcMMAE, IgG1-AXL-148-vcMMAE, 및 IgG1-AXL-733-vcMMAE의 항종양 활성을 PAXF1657 췌장암 PDX 모델에서 결정하였다 (실험을 옹코테스트(Oncotest) (독일 프라이부르크)에 의해 수행함). 인간 췌장 종양 조직을 5-7주령 암컷 NMRI nu/nu 마우스의 좌측 측복부에 피하로 이식하였다. 동물의 무작위화를 하기와 같이 수행하였다: 50 - 250 mm3, 바람직하게는 80 - 200 mm3의 부피를 갖는 종양을 보유하는 동물을, 군 종양 부피의 비교가능한 중앙값 및 평균을 고려하여 7개의 실험군 (군당 8마리의 동물)에 분포시켰다. 무작위화일 (제0일)에, 3종의 ADC를 4 mg/kg 또는 2 mg/kg으로 정맥내로 (i.v.) 투여하고, 대조군은 단일 용량의 IgG1-b12 (4 mg/kg)를 받았다. 종양 부피 (mm3)를 매주 2회 모니터링하고, 캘리퍼 (PLEXX) 측정으로부터 0.52 x (길이) x (폭)2으로 계산하였다.
2 mg/kg IgG1-AXL-107-vcMMAE, IgG1-AXL-148-vcMMAE 및 IgG1-AXL-733-vcMMAE를 사용한 마우스의 치료는 대조군과 비교하여 PAXF1657 종양의 성장을 유의하게 감소시켰다. 4 mg/kg의 용량에서, IgG1-AXL-107-vcMMAE, IgG1-AXL-148-vcMMAE 및 IgG1-AXL-733-vcMMAE는 PAXF1657 종양의 종양 퇴행을 유도하였다. 치료 후 제14일에, 2 mg/kg 또는 4 mg/kg IgG1-AXL-107-MMAE, IgG1-AXL-148-MMAE 또는 IgG1-AXL-733-MMAE로 치료된 마우스에서의 평균 종양 크기는 이소형 대조군 IgG (IgG1-b12)로 치료된 마우스에서보다 유의하게 더 작았다 (p<0.001; 터키(Tukey)의 다중 비교 검정).
미접합된 IgG1-AXL-148을 사용한 마우스의 치료는 PAXF1657 모델에서 항종양 활성을 일으키지 않았다. 그러나, 접합된 IgG1-AXL-148-vcMMAE는 이 모델에서 용량-의존성 항종양 활성을 유도하였고, 이는 AXL-ADC의 치료 능력이 MMAE의 세포독성 활성에 의존한다는 것을 설명한다.
더욱이, 비표적화된 ADC IgG1-b12-vcMMAE를 사용한 마우스의 치료는 PAXF1657 모델에서 항종양 활성을 나타내지 않았고, 이는 AXL-ADC의 치료 능력이 또한 특이적 표적 결합에 의존한다는 것을 설명한다.
실시예 19 - Ig1 도메인에 대한 AXL 항체 결합
AXL 항체 IgG1-AXL-061, IgG1-AXL-107, IgG1-AXL-137, 및 IgG1-AXL-613의 AXL 도메인 특이성을 인간-마우스 키메라 AXL 돌연변이체의 패널을 사용하여 결정하였다. 인간-마우스 교차-반응성 모노클로날 AXL 항체 YW327.6S2는 hsAXL-mmECD의 발현을 확인하기 위해 포함되었다. IgG1-b12는 이소형 대조군 항체로서 포함되었다. 5종의 상이한 키메라 AXL 분자를 생성하고 HEK293F에서 발현시켰다. 간략하게, 인간 Ig-유사 도메인 I (Ig1), Ig-유사 도메인 II (Ig2), 인간 FNIII-유사 도메인 I (FN1) 또는 인간 FNIII-유사 도메인 II 도메인 (FN2)을 그의 뮤린 상동체로 대체하였다. 인간-마우스 AXL 키메라에 대한 1 μg/mL 항-AXL 항체의 결합을 유동 세포측정법에 의해 결정하였다.
모든 항-AXL 항체는 인간 AXL에 대한 결합을 나타낸 한편, 인간 AXL ECD를 그의 뮤린 상동체로 대체한 경우에 결합이 제거되었다. 예상된 바와 같이, 인간-마우스 교차-반응성 모노클로날 AXL 항체 YW327.6S2는 hsAXL-mmECD에 대한 결합을 나타냈고, 이는 hsAXL-mmECD의 적절한 발현을 확인시켜 준다.
AXL 항체 IgG1-AXL-061, IgG1-AXL-107, IgG1-AXL-137, 및 IgG1-AXL-613은 hsAXL-mmIg1에 대한 강하게 감소된 결합을 나타냈고, 이는 AXL Ig1 도메인 내의 에피토프의 인식을 설명한다. 이와 일치하여, hsAXL-mmIg2, hsAXL-mmFN1 또는 hsAXL-mmFN2에 대한 IgG1-AXL-061, IgG1-AXL-107, IgG1-AXL-137, 및 IgG1-AXL-613의 결합은 영향을 받지 않았다. 인간-마우스 교차-반응성 모노클로날 AXL 항체 YW327.6S2는 모든 키메라 AXL 변이체에 대한 결합을 나타냈고, 이는 이들 단백질의 적절한 발현을 확인시켜 준다.
실시예 20 - AXL 항체 IgG1-AXL-107 및 IgG1-AXL-613은 Ig1 도메인에 결합하지만, Gas6 결합과 경쟁하지 않는다
AXL 항체 IgG1-AXL-061, IgG1-AXL-107, IgG1-AXL-137, 또는 IgG1-AXL-613의 결합이 AXL에 대한 AXL 리간드 Gas6의 결합을 방해하는지 여부를 시험하였다. 따라서, 10 μg/mL AXL 항체와 함께 사전-인큐베이션된 A431 세포에 대한 Gas6의 결합을 시험하였다. AXL 결합에 대해 Gas6과 경쟁하는 것으로 기재된 AXL 항체 YW327.6S2, IgG1-b12 (이소형 대조군) 또는 배지 (음성 대조군)와의 사전-인큐베이션은 대조군으로서 포함되었다.
결합 곡선을 비-선형 회귀 (가변 기울기를 갖는 S자형 용량-반응)를 사용하여 그래프패드 프리즘 V5.04 소프트웨어 (그래프패드 소프트웨어, 미국 캘리포니아주 샌디에고)를 사용하여 분석하였다.
표 28은 IgG1-AXL-107 및 IgG1-AXL-613 항체와 함께 사전-인큐베이션된 A431 세포에 대한 Gas6의 결합이 IgG1-b12 및 배지 대조군과 유사하였다는 것을 나타낸다. 이는 AXL에 대한 IgG1-AXL-107 및 IgG1-AXL-613의 결합이 실시예 13에 제시된 바와 같이 Gas6 결합을 방해하지 않는다는 것을 설명한다. A431 세포에 대한 Gas6의 결합은 IgG1-b12 및 배지 대조군에 비교하여 IgG1-AXL-061, IgG1-AXL-137 및 대조군 AXL 항체 YW327.6S2의 존재 하에 크게 감소되었다.
A431 세포를 Gas6과 함께 사전-인큐베이션한 실험에서, IgG1-AXL-107 및 IgG1-AXL-613의 최대 결합 값은 Gas6의 부재 하의 항체 결합과 대등하였다 (Gas6 사전-인큐베이션 후 최대 결합은 Gas6 사전-인큐베이션의 부재 하의 결합의 91-108%였음) (표 28). Gas6 사전-인큐베이션의 존재 또는 부재 하의 IgG1-AXL-107 및 IgG1-AXL-613 결합에 대한 EC50 값은 동일한 범위이거나, 또는 Gas6 사전-인큐베이션 후 다소 더 높았고 (표 28), 이는 IgG1-AXL-107 및 IgG1-AXL-613이 Gas6 결합과 경쟁하지 않는다는 것을 설명한다.
대조군 항체 YW327.6S2와 유사하게, A431 세포에 대한 IgG1-AXL-061 및 IgG1-AXL-137의 결합은 Gas6이 없는 결합과 비교하여 Gas6의 존재 하에 크게 감소되었다 (Gas6 사전-인큐베이션 후 최대 결합은 Gas6 사전-인큐베이션의 부재 하의 결합의 40-43%였음; 표 28). IgG1-AXL-061 및 IgG1-AXL-137에 대한 EC50 값은 Gas6 사전-인큐베이션 후 적절하게 결정될 수 없었다 (표 28). 이는 IgG1-AXL-061 및 IgG1-AXL-137이 AXL에 대한 결합에 대해 Gas6과 경쟁한다는 것을 나타낸다.
이들 데이터는 AXL Ig1 도메인에 결합하는 항체가 Gas6 결합에 대해 차등적 효과를 갖는다는 것을 입증한다.
표 28
Figure pct00048
a n.a., 적용가능하지 않음
* 낮은 결합으로 인해 덜 정확한 EC50 값.
실시예 21 - 자가분비성 (내인성) Gas6 생성의 존재 및 부재 하의 이종이식편 모델에서의 AXL-ADC의 생체내 항종양 효능
A431 및 LCLC-103H 종양 세포의 Gas6 생산
A431 세포 및 LCLC-103H 세포가 Gas6을 생산하는지 여부를 시험하였다. 따라서, 세포를 완전 배양 배지에서 3일 동안 성장시켰다. 상청액 중 Gas6 수준을 퀀티킨(Quantikine) 인간 Gas6 ELISA (알앤디 시스템즈, 미네소타주 미네아폴리스)를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 결정하였다. 이 검정은 정량적 샌드위치 ELISA 기술을 사용한다. 인간 Gas6에 특이적인 모노클로날 Ab를 마이크로플레이트 상에 사전-코팅하였다. 표준물 및 샘플을 웰 내로 피펫팅하고 존재하는 임의의 인간 Gas6은 고정화된 Ab에 의해 결합된다. 임의의 미결합 물질을 세척한 후, 인간 Gas6에 특이적인 효소-연결된 폴리클로날 Ab를 웰에 첨가한다. 세척하여 임의의 미결합 Ab-효소 시약을 제거한 후, 기질을 웰에 첨가하고 색은 초기 단계에서 결합된 인간 Gas6의 양에 비례하여 발색된다. 색 발색을 중지시키고 색의 강도를 측정한다.
A431 세포에 의해 조건화된 세포 배양 배지는 2576 ng/mL Gas6을 함유하는 것으로 밝혀진 한편, LCLC-103H 세포에 의해 조건화된 배지 중 Gas6의 농도는 20-배 초과 더 적었다 (표 29).
표 29 - 종양 세포 조건화 배지에서의 Gas6 생산.
Figure pct00049
생체내에서의 AXL-ADC의 항종양 활성
IgG1-AXL-061-vcMMAE (Ig1 결합제), IgG1-AXL-107-vcMMAE (Ig1-결합제), IgG1-AXL-137-vcMMAE (Ig1-결합제), IgG1-AXL-148-vcMMAE (Ig2-결합제), IgG1-AXL-183-vcMMAE (FN1-결합제), 및 IgG1-AXL-726-vcMMAE (FN2-결합제)의 생체내 항종양 활성을 높은 수준의 Gas6을 생산하는 A431 (표피양 암종) 종양 모델, 및 낮은 수준의 Gas6을 생산하는 LCLC-103H (대세포 폐 암종) 종양 모델에서 결정하였다.
종양 유도를 암컷 SCID 마우스의 우측 측복부에 200 μL PBS 중 5 x 106개의 A431 또는 LCLC-103H 종양 세포 (둘 다 라이프니츠-인스티투트 - 도이치 삼룽 폰 미크로오르가니스멘 운트 첼쿨투렌 게엠베하 (DSMZ)로부터 수득됨)의 피하 주사에 의해 수행하였다. 평균 종양 크기가 >100-200 mm3이고 뚜렷한 종양 성장이 관찰된 종양 세포 접종 후 14-21일에 치료를 시작하였다. 마우스는 나타내어진 바와 같이, IgG1-AXL-vcMMAE ADC 또는 대조군 항체 (미접합된 IgG1-b12)의 단일 주사 또는 총 4회의 격주 복강내 주사를 받았다. 종양 부피를 1주에 적어도 2회 결정하였다. 종양 부피 (mm3)를 캘리퍼 (PLEXX) 측정으로부터 0.52 x (길이) x (폭)2으로 계산하였다.
결과:
3 mg/kg IgG1-AXL-107-vcMMAE, IgG1-AXL-148-vcMMAE 및 IgG1-AXL-733-vcMMAE를 사용한 마우스의 치료는 A431 종양의 성장 억제를 유도하였다.
3 mg/kg IgG1-AXL-148-vcMMAE, IgG1-AXL-183-vcMMAE (FN1 결합제) 및 IgG1-AXL-726-vcMMAE (FN2 결합제)를 사용한 마우스의 치료는 A431 종양의 성장 억제를 유도하였다. 대조적으로, 클론 IgG1-AXL-061-vcMMAE 및 IgG1-AXL-137-vcMMAE는 A431 이종이식편 모델에서 항종양 활성을 나타내지 않았다.
3 mg/kg IgG1-AXL-061-vcMMAE, IgG1-AXL-137-vcMMAE, IgG1-AXL-148-vcMMAE, IgG1-AXL-183-vcMMAE 및 IgG1-AXL-726-vcMMAE를 사용한 마우스의 치료는 LCLC-103H 이종이식편 모델에서 종양 퇴행을 유도하였다. 유사하게, 1 mg/kg IgG1-AXL-107-vcMMAE 또는 1 mg/kg IgG1-AXL-613-vcMMAE를 사용한 마우스의 치료는 LCLC-103H 종양의 퇴행을 유도하였다.
요약하면, 모든 AXL-ADC는 낮은 수준의 Gas6을 생산하는 LCLC-103H 이종이식편 모델에서 항종양 활성을 나타냈다. 높은 수준의 Gas6을 생산하는 A431 이종이식편 모델에서, 항종양 활성은 단지 AXL 리간드 Gas6과 경쟁하지 않는 그러한 AXL-ADC에 대해서만 관찰되었다.
실시예 22 - 식도암 환자-유래된 이종이식 (PDX) 모델에서의 AXL-ADC의 항종양 효능
IgG1-AXL-107-vcMMAE의 항종양 활성을 BALB/c 누드 마우스에서의 피하 식도 PDX 모델 ES0195에서 평가하였다 (실험을 크라운 바이오사이언스(Crown Bioscience) (중국 장수성 타이창)에 의해 수행함). 환자-유래된 식도 이종이식편 (ES0195)을 보유하는 공여자 마우스로부터의 종양 단편을 BALB/c 누드 마우스 내로의 접종에 사용하였다. 각각의 마우스에게 1개의 종양 단편 (2-3 mm 직경)을 우측 측복부에 피하로 접종하고, 종양 부피가 약 150 mm3가 될 때까지 종양을 성장시켰다. 동물의 무작위화를 하기와 같이 수행하였다: 약 150 mm3의 부피를 갖는 종양을 보유하는 동물을, 군 종양 부피의 비교가능한 중앙값 및 평균을 고려하여 5개의 실험군 (군당 8마리의 동물)에 분포시켰다. 치료군은 IgG1-b12, IgG1-b12-vcMMAE, IgG1-AXL-107, IgG1- AXL-107-vcMMAE, 및 파클리탁셀이었다. 항체 및 ADC를 4 mg/kg으로 무작위화일 (제0일) 및 제7일에 정맥내로 (i.v.) 투여하였다. 파클리탁셀을 20 mg/kg으로 제0일, 제7일, 및 제14일에 복강내로 (i.p.) 투여하였다. 종양 부피 (mm3)를 매주 2회 모니터링하고 캘리퍼 (PLEXX) 측정으로부터 0.52 x (길이) x (폭)2으로 계산하였다.
IgG1-AXL-107-vcMMAE를 사용한 마우스의 치료는 IgG1-b12 및 IgG1-b12-MMAE 대조군과 비교하여 ES0195 종양의 종양 퇴행을 유도하였다 (제23일에 p<0.001, 일원 ANOVA 검정). 비표적화된 ADC IgG1-b12-vcMMAE를 사용한 마우스의 치료는 이 모델에서 항종양 활성을 나타내지 않았고, 이는 AXL-ADC의 치료 능력이 특이적 표적 결합에 의존한다는 것을 설명한다. 파클리탁셀로 치료된 마우스는 종양 성장 억제를 나타냈지만, 이는 IgG1-AXL-107-vcMMAE를 사용한 치료와 비교하여 덜 효과적이었다 (제23일에 p<0.05, 일원 ANOVA 검정).
실시예 23 - AXL-특이적 항체 약물 접합체에 의해 유도된 시험관내 세포독성은 표적 발현에 의존한다.
IgG1-AXL-107-vcMMAE의 시험관내 세포독성을 상이한 수준의 AXL 발현을 갖는 인간 종양 세포주에서 시험하였다.
세포 배양
LS174T 세포 (인간 결장직장 선암종 세포주; ATCC, 카탈로그 번호 CL-188)를 글루타맥스, Hepes 및 페놀 레드(Phenol Red)를 포함하는 최소 필수 배지 (MEM) (라이프 테크놀로지스, 카탈로그 번호 42360-024)에서 배양하였다. 성분은 철을 포함하는는 10％ 공여자 소 혈청 (DBSI) (라이프 테크놀로지스, 카탈로그 번호 10371-029) 및 1％ 피루브산나트륨 (100 mM; 론자, 카탈로그 번호 BE13-115E) 및 1％ 페니실린/스트렙토마이신 (론자, 카탈로그 번호 DE17-603E)이다.
NCI-H226 세포 (인간 폐 편평 세포 암종; ATCC, 카탈로그 번호 CRL-5826), NCI-H661 세포 (인간 대세포 폐암; ATCC, 카탈로그 번호 HTB-183), 및 NCI-H1299 세포 (인간 비-소세포 폐암; ATCC, 카탈로그 번호 CRL-5803)를 RPMI 1640 배지 (ATCC 수정; 라이프 테크놀로지스, 카탈로그 번호 A10491-01)에서 배양하였다. 성분은 철을 포함하는 10％ 공여자 소 혈청 (DBSI; 라이프 테크놀로지스, 카탈로그 번호 10371-029) 및 1％ 페니실린/스트렙토마이신 (론자, 카탈로그 번호 DE17-603E)이다.
SKOV-3 세포 (인간 난소 선암종; ATCC, 카탈로그 번호 HTB-77)를 L-글루타민 및 HEPES를 포함하는 맥코이(McCoy) 5A 배지 (론자, 카탈로그 번호 BE12-168F)에서 배양하였다. 성분은 철을 포함하는 10％ 공여자 소 혈청 (DBSI; 라이프 테크놀로지스, 카탈로그 번호 10371-029) 및 1％ 페니실린/스트렙토마이신 (론자, 카탈로그 번호 DE17-603E)이다.
Calu-1 세포 (인간 폐 표피양 암종; ATCC, 카탈로그 번호 HTB-54)를 카토펩톤(Catopeptone)을 포함하고, HEPES를 포함하지 않는 맥코이 5A 배지 (라이프 테크놀로지스, 카탈로그 번호 26600-023)에서 배양하였다. 성분은 철을 포함하는 10％ 공여자 소 혈청 (DBSI; 라이프 테크놀로지스, 카탈로그 번호 10371-029) 및 0.85％ NaCl 용액 중 1％ L-글루타민 (200 nM) (론자, 카탈로그 번호 BE17-605F) 및 1％ 페니실린/스트렙토마이신 (론자, 카탈로그 번호 DE17-603E)이다. Calu-1 세포는 EGFR 표적화 요법에 대해 저항성이다.
LCLC-103H 세포 (인간 대세포 폐암), A431 세포 (인간 표피양 선암종) 및 MDA-MB-231 세포 (인간 유방암)를 실시예 16에 기재된 바와 같이 배양하였다.
인간 종양 세포주의 형질 막 상의 AXL 발현의 정량화
인간 종양 세포주의 형질 막 상의 AXL 발현을 마우스 모노클로날 항체 Z49M (산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz biotechnology), 카탈로그 번호 sc-73719)과 함께 퀴피키트(QIFIKIT) (다코, 카탈로그 번호 K0078)를 사용하여 간접 면역형광에 의해 평가하였다. 부착 세포를 트립신처리하고 세포 스트레이너를 통과시켜 단세포 현탁액을 수득하였다. 세포를 1,200 rpm에서 5분 동안 원심분리에 의해 펠릿화하고, PBS로 세척하고 1x106개 세포/mL의 농도로 재현탁시켰다. 다음 단계를 얼음 상에서 수행하였다. 100 μL의 단세포 현탁액 (웰당 100,000개의 세포)을 폴리스티렌 96-웰 둥근-바닥 플레이트 (그라이너 바이오-원(Greiner Bio-One), 카탈로그 번호 650101)에 시딩하였다. 세포를 300xg에서 3분 동안 원심분리에 의해 펠릿화하고 50 μL 항체 샘플 또는 마우스 IgG1 이소형 대조군 샘플 (BD/파밍겐(Pharmingen), 카탈로그 번호 555746) 중에 10 μg/mL의 농도로 재현탁시켰다. 4℃에서 30분 인큐베이션 후, 세포를 펠릿화하고 150 μL FACS 완충제 중에 재현탁시켰다. 설정 및 보정 비드를 제조업체의 지침에 따라 플레이트에 첨가하였다. 병렬 세포 및 비드를 150 μL FACS 완충제로 2회 더 세척하고 50 μL FITC-접합된 염소-항-마우스 IgG (1/50; 다코, 카탈로그 번호 K0078) 중에 재현탁시켰다. 2차 항체를 4℃에서 30분 동안 암실에서 인큐베이션하였다. 세포 및 비드를 150 μL FACS 완충제로 2회 세척하고 100 μL FACS 완충제 중에 재현탁시켰다. 면역형광을 FACS 칸토 II (비디 바이오사이언시스) 상에서 생존 세포의 게이트 내에 10,000개의 사건을 기록함으로써 측정하였다. 보정 비드의 평균 형광 강도를 그래프패드 프리즘 소프트웨어 (그래프패드 소프트웨어, 미국 캘리포니아주 샌디에고)를 사용하여 보정 곡선을 계산하는 데 사용하였다. 각각의 세포주에 대해, 형질 막 상에 발현된 AXL 분자의 수에 대한 추정치인 항체 결합 능력 (ABC)을 보정 곡선의 방정식 (그래프패드 소프트웨어를 사용한, 표준 곡선으로부터의 미지물의 내삽)에 기초하여, AXL 항체-염색된 세포의 평균 형광 강도를 사용하여 계산하였다.
세포독성 검정
LCLC-103H, A431, MDA-MB-231, NCI-H226, NCI-H661, NCI-H1299, LS174T 및 SKOV-3 세포에 대해, 시험관내 세포독성 검정을 실시예 8에 기재된 바와 같이 수행하였다. Calu-1에 대해, 세포독성 검정을, 세포 배양물을 5일 대신 11일 동안 인큐베이션하는 것으로 조정하여 실시예 16에 기재된 바와 같이 수행하였다. 용량-반응 곡선을 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 사용하여, 비-선형 회귀 분석을 사용하여 생성하였다. 1 μg/mL의 IgG1-AXL-107-vcMMAE 농도에서의 생존 세포의 백분율을 용량-반응 곡선으로부터 내삽하였다.
IgG1-AXL-107-vcMMAE는 높은 AXL 발현을 갖는 세포주에서 가장 강력한 세포독성을 유도한 반면에, 낮은 AXL 발현을 갖는 세포주에서 세포독성은 낮거나 또는 부재하였다. 이는 IgG1-AXL-107-vcMMAE가 EGFR 표적화 요법에 저항성인 세포, 예컨대 Calu-1에서 세포독성의 유도에 효과적이라는 것을 설명한다.
참고문헌의 목록
Figure pct00050
Figure pct00051
SEQUENCE LISTING <110> Genmab A/S <120> FORMULATION FOR ANTIBODY AND DRUG CONJUGATE THEREOF <130> P/0096-WO <160> 147 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 116 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Thr Ser Gly Ser Gly Ala Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ile Trp Ile Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 108 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 2 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu 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MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Wherein X is A or G <400> 119 Ile Ser Ile Ser Gly Xaa Ser Thr 1 5 <210> 120 <211> 13 <212> PRT <213> homo sapiens <220> <221> Misc <222> (13)..(13) <223> Wherein X is I of F <400> 120 Arg Gly Tyr Ser Gly Tyr Val Tyr Asp Ala Phe Asp Xaa 1 5 10 <210> 121 <211> 8 <212> PRT <213> homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Wherein X is I or F <400> 121 Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Xaa 1 5 <210> 122 <211> 17 <212> PRT <213> homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Wherein X is S or R <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Wherein X is T or A <400> 122 Ala Xaa Phe Ile Thr Met Ile Arg Gly Xaa Ile Ile Thr His Phe Asp 1 5 10 15 Tyr <210> 123 <211> 8 <212> PRT <213> homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Wherein X is S or N <400> 123 Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Tyr Ala 1 5 <210> 124 <211> 8 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 124 Ile Ser Val Ser Gly Gly Ser Thr 1 5 <210> 125 <211> 18 <212> PRT <213> homo 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<220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Wherein X is W or S <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Wherein X is L or Y <400> 129 Gln Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr 1 5 <210> 130 <211> 894 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 130 Met Ala Trp Arg Cys Pro Arg Met Gly Arg Val Pro Leu Ala Trp Cys 1 5 10 15 Leu Ala Leu Cys Gly Trp Ala Cys Met Ala Pro Arg Gly Thr Gln Ala 20 25 30 Glu Glu Ser Pro Phe Val Gly Asn Pro Gly Asn Ile Thr Gly Ala Arg 35 40 45 Gly Leu Thr Gly Thr Leu Arg Cys Gln Leu Gln Val Gln Gly Glu Pro 50 55 60 Pro Glu Val His Trp Leu Arg Asp Gly Gln Ile Leu Glu Leu Ala Asp 65 70 75 80 Ser Thr Gln Thr Gln Val Pro Leu Gly Glu Asp Glu Gln Asp Asp Trp 85 90 95 Ile Val Val Ser Gln Leu Arg Ile Thr Ser Leu Gln Leu Ser Asp Thr 100 105 110 Gly Gln Tyr Gln Cys Leu Val Phe Leu Gly His Gln Thr Phe Val Ser 115 120 125 Gln Pro Gly Tyr Val Gly Leu Glu Gly Leu Pro Tyr Phe Leu Glu Glu 130 135 140 Pro Glu Asp Arg Thr Val Ala Ala Asn Thr Pro Phe Asn Leu Ser Cys 145 150 155 160 Gln Ala Gln 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Trp Ile Ala Ile Glu Ser 705 710 715 720 Leu Ala Asp Arg Val Tyr Thr Ser Lys Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly 725 730 735 Val Thr Met Trp Glu Ile Ala Thr Arg Gly Gln Thr Pro Tyr Pro Gly 740 745 750 Val Glu Asn Ser Glu Ile Tyr Asp Tyr Leu Arg Gln Gly Asn Arg Leu 755 760 765 Lys Gln Pro Ala Asp Cys Leu Asp Gly Leu Tyr Ala Leu Met Ser Arg 770 775 780 Cys Trp Glu Leu Asn Pro Gln Asp Arg Pro Ser Phe Thr Glu Leu Arg 785 790 795 800 Glu Asp Leu Glu Asn Thr Leu Lys Ala Leu Pro Pro Ala Gln Glu Pro 805 810 815 Asp Glu Ile Leu Tyr Val Asn Met Asp Glu Gly Gly Gly Tyr Pro Glu 820 825 830 Pro Pro Gly Ala Ala Gly Gly Ala Asp Pro Pro Thr Gln Pro Asp Pro 835 840 845 Lys Asp Ser Cys Ser Cys Leu Thr Ala Ala Glu Val His Pro Ala Gly 850 855 860 Arg Tyr Val Leu Cys Pro Ser Thr Thr Pro Ser Pro Ala Gln Pro Ala 865 870 875 880 Asp Arg Gly Ser Pro Ala Ala Pro Gly Gln Glu Asp Gly Ala 885 890 <210> 135 <211> 894 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 135 Met Ala Trp Arg Cys Pro Arg Met Gly Arg Val Pro Leu Ala Trp Cys 1 5 10 15 Leu Ala Leu Cys Gly Trp Ala Cys Met Ala Pro Arg Gly Thr Gln Ala 20 25 30 Glu Glu Ser Pro Phe Val Gly Asn Pro Gly Asn Ile Thr Gly Ala Arg 35 40 45 Gly Leu Thr Gly Thr Leu Arg Cys Gln Leu Gln Val Gln Gly Glu Pro 50 55 60 Pro Glu Val His Trp Leu Arg Asp Gly Gln Ile Leu Glu Leu Ala Asp 65 70 75 80 Ser Thr Gln Thr Gln Val Pro Leu Gly Glu Asp Glu Gln Asp Asp Trp 85 90 95 Ile Val Val Ser Gln Leu Arg Ile Thr Ser Leu Gln Leu Ser Asp Thr 100 105 110 Gly Gln Tyr Gln Cys Leu Val Phe Leu Gly His Gln Thr Phe Val Ser 115 120 125 Gln Pro Gly Tyr Val Gly Leu Glu Gly Leu Pro Tyr Phe Leu Glu Glu 130 135 140 Pro Glu Asp Arg Thr Val Ala Ala Asn Thr Pro Phe Asn Leu Ser Cys 145 150 155 160 Gln Ala Gln Gly Pro Pro Glu Pro Val Asp Leu Leu Trp Leu Gln Asp 165 170 175 Ala Val Pro Leu Ala Thr Ala Pro Gly His Gly Pro Gln Arg Ser Leu 180 185 190 His Val Pro Gly Leu Asn Lys Thr Ser Ser Phe Ser Cys Glu Ala His 195 200 205 Asn Ala Lys Gly Val Thr Thr Ser Arg Thr Ala Thr Ile Thr Val Leu 210 215 220 Pro Gln Gln Pro Arg Asn Leu His Leu Val Ser Arg Gln Pro Thr Glu 225 230 235 240 Leu Glu Val Ala Trp Thr Pro Gly Leu Ser Gly Ile Tyr Pro Leu Thr 245 250 255 His Cys Thr Leu Gln Ala Val Leu Ser Asp Asp Gly Met Gly Ile Gln 260 265 270 Ala Gly Glu Pro Asp Pro Pro Glu Glu Pro Leu Thr Ser Gln Ala Ser 275 280 285 Val Pro Pro His Gln Leu Arg Leu Gly Ser Leu His Pro His Thr Pro 290 295 300 Tyr His Ile Arg Val Ala Cys Thr Ser Ser Gln Gly Pro Ser Ser Trp 305 310 315 320 Thr His Trp Leu Pro Val Glu Thr Pro Glu Gly Val Pro Leu Gly Pro 325 330 335 Pro Glu Asn Val Ser Ala Met Arg Asn Gly Ser Gln Val Leu Val Arg 340 345 350 Trp Gln Glu Pro Arg Val Pro Leu Gln Gly Thr Leu Leu Gly Tyr Arg 355 360 365 Leu Ala Tyr Arg Gly Gln Asp Thr Pro Glu Val Leu Met Asp Ile Gly 370 375 380 Leu Thr Arg Glu Val Thr Leu Glu Leu Arg Gly Asp Arg Pro Val Ala 385 390 395 400 Asn Leu Thr Val Ser Val Thr Ala Tyr Thr Ser Ala Gly Asp Gly Pro 405 410 415 Trp Ser Leu Pro Val Pro Leu Glu Pro Trp Arg Pro Gly Gln Gly Gln 420 425 430 Pro Leu His His Leu Val Ser Glu Pro Pro Pro Arg Ala Phe Ser Trp 435 440 445 Pro Trp Trp Tyr Val Leu Leu Gly Ala Val Val Ala Ala Ala Cys Val 450 455 460 Leu Ile Leu Ala Leu Phe Leu Val His Arg Arg Lys Lys Glu Thr Arg 465 470 475 480 Tyr Gly Glu Val Phe Glu Pro Thr Val Glu Arg Gly Glu Leu Val Val 485 490 495 Arg Tyr Arg Val Arg Lys Ser Tyr Ser Arg Arg Thr Thr Glu Ala Thr 500 505 510 Leu Asn Ser Leu Gly Ile Ser Glu Glu Leu Lys Glu Lys Leu Arg Asp 515 520 525 Val Met Val Asp Arg His Lys Val Ala Leu Gly Lys Thr Leu Gly Glu 530 535 540 Gly Glu Phe Gly Ala Val Met Glu Gly Gln Leu Asn Gln Asp Asp Ser 545 550 555 560 Ile Leu Lys Val Ala Val Lys Thr Met Lys Ile Ala Ile Cys Thr Arg 565 570 575 Ser Glu Leu Glu Asp Phe Leu Ser Glu Ala Val Cys Met Lys Glu Phe 580 585 590 Asp His Pro Asn Val Met Arg Leu Ile Gly Val Cys Phe Gln Gly Ser 595 600 605 Glu Arg Glu Ser Phe Pro Ala Pro Val Val Ile Leu Pro Phe Met Lys 610 615 620 His Gly Asp Leu His Ser Phe Leu Leu Tyr Ser Arg Leu Gly Asp Gln 625 630 635 640 Pro Val Tyr Leu Pro Thr Gln Met Leu Val Lys Phe Met Ala Asp Ile 645 650 655 Ala Ser Gly Met Glu Tyr Leu Ser Thr Lys Arg Phe Ile His Arg Asp 660 665 670 Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Leu Asn Glu Asn Met Ser Val Cys Val 675 680 685 Ala Asp Phe Gly Leu Ser Lys Lys Ile Tyr Asn Gly Asp Tyr Tyr Arg 690 695 700 Gln Gly Arg Ile Ala Lys Met Pro Val Lys Trp Ile Ala Ile Glu Ser 705 710 715 720 Leu Ala Asp Arg Val Tyr Thr Ser Lys Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly 725 730 735 Val Thr Met Trp Glu Ile Ala Thr Arg Gly Gln Thr Pro Tyr Pro Gly 740 745 750 Val Glu Asn Ser Glu Ile Tyr Asp Tyr Leu Arg Gln Gly Asn Arg Leu 755 760 765 Lys Gln Pro Ala Asp Cys Leu Asp Gly Leu Tyr Ala Leu Met Ser Arg 770 775 780 Cys Trp Glu Leu Asn Pro Gln Asp Arg Pro Ser Phe Thr Glu Leu Arg 785 790 795 800 Glu Asp Leu Glu Asn Thr Leu Lys Ala Leu Pro Pro Ala Gln Glu Pro 805 810 815 Asp Glu Ile Leu Tyr Val Asn Met Asp Glu Gly Gly Gly Tyr Pro Glu 820 825 830 Pro Pro Gly Ala Ala Gly Gly Ala Asp Pro Pro Thr Gln Pro Asp Pro 835 840 845 Lys Asp Ser Cys Ser Cys Leu Thr Ala Ala Glu Val His Pro Ala Gly 850 855 860 Arg Tyr Val Leu Cys Pro Ser Thr Thr Pro Ser Pro Ala Gln Pro Ala 865 870 875 880 Asp Arg Gly Ser Pro Ala Ala Pro Gly Gln Glu Asp Gly Ala 885 890 <210> 136 <211> 124 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 136 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly His Thr Tyr His Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Arg Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Leu Leu Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 137 <211> 8 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 137 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 138 <211> 8 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 138 Ile Ser Gly Ser Gly Gly His Thr 1 5 <210> 139 <211> 17 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 139 Ala Lys Asp Arg Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Asn Leu Leu Asp 1 5 10 15 Tyr <210> 140 <211> 107 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 140 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Glu Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Ala Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 141 <211> 6 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 141 Gln Gly Ile Ser Ser Trp 1 5 <210> 142 <211> 9 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 142 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 143 <211> 123 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 143 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Val Gln Asn Leu 50 55 60 Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp His Ile Ser Met Leu Arg Gly Ile Ile Ile Arg Asn Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 144 <211> 108 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 144 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Trp Pro Arg 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 145 <211> 124 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 145 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Ile Pro Ile Val Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Ala Gly Tyr Ser Ser Ser Trp Tyr Ala Glu Tyr Phe Gln 100 105 110 His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 146 <211> 108 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 146 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 147 <211> 893 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 147 Ala Trp Arg Cys Pro Arg Met Gly Arg Val Pro Leu Ala Trp Cys Leu 1 5 10 15 Ala Leu Cys Gly Trp Val Cys Met Ala Pro Arg Gly Thr Gln Ala Glu 20 25 30 Glu Ser Pro Phe Val Gly Asn Pro Gly Asn Ile Thr Gly Ala Arg Gly 35 40 45 Leu Thr Gly Thr Leu Arg Cys Gln Leu Gln Val Gln Gly Glu Pro Pro 50 55 60 Glu Val His Trp Leu Arg Asp Gly Gln Ile Leu Glu Leu Ala Asp Ser 65 70 75 80 Thr Gln Thr Gln Val Pro Leu Gly Glu Asp Glu Gln Asp Asp Trp Ile 85 90 95 Val Val Ser Gln Leu Arg Ile Ala Ser Leu Gln Leu Ser Asp Ala Gly 100 105 110 Gln Tyr Gln Cys Leu Val Phe Leu Gly His Gln Asn Phe Val Ser Gln 115 120 125 Pro Gly Tyr Val Gly Leu Glu Gly Leu Pro Tyr Phe Leu Glu Glu Pro 130 135 140 Glu Asp Arg Thr Val Ala Ala Asn Thr Pro Phe Asn Leu Ser Cys Gln 145 150 155 160 Ala Gln Gly Pro Pro Glu Pro Val Asp Leu Leu Trp Leu Gln Asp Ala 165 170 175 Val Pro Leu Ala Thr Ala Pro Gly His Gly Pro Gln Arg Asn Leu His 180 185 190 Val Pro Gly Leu Asn Lys Thr Ser Ser Phe Ser Cys Glu Ala His Asn 195 200 205 Ala Lys Gly Val Thr Thr Ser Arg Thr Ala Thr Ile Thr Val Leu Pro 210 215 220 Gln Gln Pro Arg Asn Leu His Leu Val Ser Arg Gln Pro Thr Glu Leu 225 230 235 240 Glu Val Ala Trp Thr Pro Gly Leu Ser Gly Ile Tyr Pro Leu Thr His 245 250 255 Cys Thr Leu Gln Ala Val Leu Ser Asp Asp Gly Met Gly Ile Gln Ala 260 265 270 Gly Glu Pro Asp Pro Pro Glu Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Ser Val 275 280 285 Pro Pro His Gln Leu Arg Leu Gly Ser Leu His Pro His Thr Pro Tyr 290 295 300 His Ile Arg Val Ala Cys Thr Ser Ser Gln Gly Pro Ser Ser Trp Thr 305 310 315 320 His Trp Leu Pro Val Glu Thr Pro Glu Gly Val Pro Leu Gly Pro Pro 325 330 335 Glu Asn Ile Ser Ala Thr Arg Asn Gly Ser Gln Ala Phe Val His Trp 340 345 350 Gln Glu Pro Arg Ala Pro Leu Gln Gly Thr Leu Leu Gly Tyr Arg Leu 355 360 365 Ala Tyr Gln Gly Gln Asp Thr Pro Glu Val Leu Met Asp Ile Gly Leu 370 375 380 Arg Gln Glu Val Thr Leu Glu Leu Gln Gly Asp Gly Ser Val Ser Asn 385 390 395 400 Leu Thr Val Cys Val Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Gly Asp Gly Pro Trp 405 410 415 Ser Leu Pro Val Pro Leu Glu Ala Trp Arg Pro Gly Gln Ala Gln Pro 420 425 430 Val His Gln Leu Val Lys Glu Thr Ser Ala Pro Ala Phe Ser Trp Pro 435 440 445 Trp Trp Tyr Ile Leu Leu Gly Ala Val Val Ala Ala Ala Cys Val Leu 450 455 460 Ile Leu Ala Leu Phe Leu Val His Arg Arg Lys Lys Glu Thr Arg Tyr 465 470 475 480 Gly Glu Val Phe Glu Pro Thr Val Glu Arg Gly Glu Leu Val Val Arg 485 490 495 Tyr Arg Val Arg Lys Ser Tyr Ser Arg Arg Thr Thr Glu Ala Thr Leu 500 505 510 Asn Ser Leu Gly Ile Ser Glu Glu Leu Lys Glu Lys Leu Arg Asp Val 515 520 525 Met Val Asp Arg His Lys Val Ala Leu Gly Lys Thr Leu Gly Glu Gly 530 535 540 Glu Phe Gly Ala Val Met Glu Gly Gln Leu Asn Gln Asp Asp Ser Ile 545 550 555 560 Leu Lys Val Ala Val Lys Thr Met Lys Ile Ala Ile Cys Thr Arg Ser 565 570 575 Glu Leu Glu Asp Phe Leu Ser Glu Ala Val Cys Met Lys Glu Phe Asp 580 585 590 His Pro Asn Val Met Arg Leu Ile Gly Val Cys Phe Gln Gly Ser Glu 595 600 605 Arg Glu Ser Phe Pro Ala Pro Val Val Ile Leu Pro Phe Met Lys His 610 615 620 Gly Asp Leu His Ser Phe Leu Leu Tyr Ser Arg Leu Gly Asp Gln Pro 625 630 635 640 Val Tyr Leu Pro Thr Gln Met Leu Val Lys Phe Met Ala Asp Ile Ala 645 650 655 Ser Gly Met Glu Tyr Leu Ser Thr Lys Arg Phe Ile His Arg Asp Leu 660 665 670 Ala Ala Arg Asn Cys Met Leu Asn Glu Asn Met Ser Val Cys Val Ala 675 680 685 Asp Phe Gly Leu Ser Lys Lys Ile Tyr Asn Gly Asp Tyr Tyr Arg Gln 690 695 700 Gly Arg Ile Ala Lys Met Pro Val Lys Trp Ile Ala Ile Glu Ser Leu 705 710 715 720 Ala Asp Arg Val Tyr Thr Ser Lys Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val 725 730 735 Thr Met Trp Glu Ile Ala Thr Arg Gly Gln Thr Pro Tyr Pro Gly Val 740 745 750 Glu Asn Ser Glu Ile Tyr Asp Tyr Leu Arg Gln Gly Asn Arg Leu Lys 755 760 765 Gln Pro Ala Asp Cys Leu Asp Gly Leu Tyr Ala Leu Met Ser Arg Cys 770 775 780 Trp Glu Leu Asn Pro Gln Asp Arg Pro Ser Phe Thr Glu Leu Arg Glu 785 790 795 800 Asp Leu Glu Asn Thr Leu Lys Ala Leu Pro Pro Ala Gln Glu Pro Asp 805 810 815 Glu Ile Leu Tyr Val Asn Met Asp Glu Gly Gly Gly Tyr Pro Glu Pro 820 825 830 Pro Gly Ala Ala Gly Gly Ala Asp Pro Pro Thr Gln Leu Asp Pro Lys 835 840 845 Asp Ser Cys Ser Cys Leu Thr Ser Ala Glu Val His Pro Ala Gly Arg 850 855 860 Tyr Val Leu Cys Pro Ser Thr Ala Pro Ser Pro Ala Gln Pro Ala Asp 865 870 875 880 Arg Gly Ser Pro Ala Ala Pro Gly Gln Glu Asp Gly Ala 885 890

Claims (79)

  1. 항-AXL 항체-약물 접합체 (AXL-ADC) 및 1종 이상의 부형제를 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득가능하거나 또는 수득된 AXL-ADC의 동결건조 제제이며, 여기서 수성 제제는 어떠한 계면활성제도 없는 것인 동결건조 제제.
  2. AXL-ADC 및
    (a) 수성 제제에서 약 5 내지 약 7의 pH를 제공하는 완충제;
    (b) 적어도 1종의 벌킹제; 및
    (c) 고체 상태에서 ADC와 무정형 상을 형성하는 적어도 1종의 비-환원당
    을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득가능하거나 또는 수득된 AXL-ADC의 동결건조 제제.
  3. 제2항에 있어서, 수성 제제가 어떠한 계면활성제도 없는 것인 동결건조 제제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제제가 히스티딘, 시트레이트, 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 (MES), 숙시네이트, 글리콜레이트, 탄산 및 포스페이트, 또는 그의 임의의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제를 포함하고, 수성 제제의 pH가 약 5 내지 약 7의 범위인 동결건조 제제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제제가 히스티딘 완충제를 포함하는 것인 동결건조 제제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제제가 약 5 mM 내지 약 100 mM의 농도에서의 완충제, 예컨대 약 10 mM 내지 약 50 mM 완충제, 예컨대 약 20 mM 내지 약 40 mM, 예컨대 약 28 mM 내지 약 32 mM, 예컨대 약 30 mM 완충제를 포함하는 것인 동결건조 제제.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 만니톨, 글리신, 및 그의 조합물로부터 선택된 벌킹제를 포함하는 동결건조 제제.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 만니톨을 포함하는 동결건조 제제.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제제가 약 1% (w/v) 내지 약 5% (w/v), 예컨대 약 2% (w/v) 내지 약 4% (w/v), 예컨대 약 2.5% (w/v) 내지 약 3.5% (w/v), 예컨대 약 3% (w/v)의 농도에서의 벌킹제를 포함하는 것인 동결건조 제제.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제제가 약 50 mM 내지 약 300 mM, 예컨대 약 100 mM 내지 약 225 mM, 예컨대 약 150 mM 내지 약 180 mM, 예컨대 약 165 mM의 농도에서의 벌킹제를 포함하는 것인 동결건조 제제.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 수크로스, 트레할로스, 및 그의 조합물로부터 선택된 비-환원당을 포함하는 동결건조 제제.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 수크로스를 포함하는 동결건조 제제.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제제가 약 0.5% (w/v) 내지 약 7% (w/v), 예컨대 약 0.5% (w/v) 내지 약 4% (w/v), 예컨대 약 1% (w/v) 내지 약 3% (w/v) 또는 약 2.5% 내지 약 3.5%, 예컨대 약 3% (w/v)의 농도에서의 비-환원당을 포함하는 것인 동결건조 제제.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제제가 약 15 mM 내지 약 200 mM, 예컨대 약 15 mM 내지 약 120 mM, 예컨대 약 30 mM 내지 약 90 mM, 예컨대 80 mM 내지 약 100 mM, 예컨대 약 84 mM 내지 약 92 mM 수크로스, 예컨대 약 88 mM의 농도에서의 비-환원당을 포함하는 것인 동결건조 제제.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제제 중 AXL-ADC 농도가 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL, 예컨대 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL, 예컨대 약 8 mg/mL 내지 약 15 mg/mL, 예컨대 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL, 예컨대 약 10 mg/mL인 동결건조 제제.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제제의 pH가 약 5.5 내지 약 6.5, 예컨대 약 5.8 내지 약 6.2의 범위, 예컨대 약 6인 동결건조 제제.
  17. 약 5 내지 약 7의 pH를 갖고
    (a) 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL의 AXL-ADC 및
    (b) 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘;
    (c) 약 15 mM 내지 약 120 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및
    (d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨 또는 글리신
    을 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득가능하거나 또는 수득된 동결건조 제제.
  18. 제17항에 있어서, 수성 제제가 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고
    (a) 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL AXL-ADC, 예컨대 약 10 mg/mL의 AXL-ADC;
    (b) 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘, 예컨대 약 30 mM 히스티딘;
    (c) 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스, 예컨대 약 88 mM 수크로스; 및
    (d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨, 예컨대 약 165 mM
    을 포함하고, 수성 제제가 어떠한 계면활성제도 없는 것인 동결건조 제제.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, AXL-ADC가 절단가능한 링커, 예컨대 N-숙신이미딜 4-(2-피리딜디티오)-펜타노에이트 (SSP), 말레이미도카프로일-발린-시트룰린-p-아미노벤질옥시카르보닐 (mc-vc-PAB) 또는 AV-1 K-락(K-lock) 발린-시트룰린을 사용하여 항체에 연결된 세포독성제를 포함하는 것인 동결건조 제제.
  20. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, AXL-ADC가 비-절단가능한 링커, 예컨대 숙신이미딜-4(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트 (MCC) 또는 말레이미도-카프로일 (MC)을 사용하여 항체에 연결된 세포독성제를 포함하는 것인 동결건조 제제.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, AXL-ADC가 DNA-표적화제, 예를 들어 DNA 알킬화제 및 가교제, 예컨대 칼리케아미신, 두오카르마이신, 라켈마이신 (CC-1065), 피롤로[2,1-c][1,4] 벤조디아제핀 (PBD), 및 인돌리노벤조디아제핀 (IGN); 미세관-표적화제, 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸아우리스타틴 E (MMAE) 및 모노메틸아우리스타틴 F (MMAF), 돌라스타틴, 메이탄신, N(2')-데아세틸-N(2')-(3-메르캅토-1-옥소프로필)-메이탄신 (DM1), 및 튜부리신; 및 뉴클레오시드 유사체; 또는 그의 유사체, 유도체, 또는 전구약물로 이루어진 군으로부터 선택된 세포독성제를 포함하는 것인 동결건조 제제.
  22. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 링커가 mc-vc-PAB이고 세포독성제가 MMAE인 동결건조 제제.
  23. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 링커가 SSP이고 세포독성제가 DM1인 동결건조 제제.
  24. 멸균 수성 희석제 중에서 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항의 동결건조 제제를 재구성함으로써 수득되거나 또는 수득가능한 AXL-ADC의 제약 제제.
  25. 약 5 내지 약 7의 pH를 갖고 수용액 중에서,
    (a) 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL의 AXL-ADC 및
    (b) 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘;
    (c) 약 15 mM 내지 약 120 mM 수크로스 또는 트레할로스; 및
    (d) 약 50 mM 내지 약 300 mM 만니톨 또는 글리신
    을 포함하는 제약 제제.
  26. 제25항에 있어서, 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고
    (a) 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL AXL-ADC, 예컨대 약 10 mg/mL의 AXL-ADC;
    (b) 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘, 예컨대 약 30 mM 히스티딘;
    (c) 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스, 예컨대 약 88 mM 수크로스; 및
    (d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨, 예컨대 약 165 mM
    을 포함하고, 어떠한 계면활성제도 없는 제약 제제.
  27. 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하고, 어떠한 계면활성제도 없는 항-AXL 항체의 수성 제제.
  28. 완충제 및 적어도 1종의 안정화제를 포함하는 항-AXL 항체의 수성 제제이며, 여기서 수성 제제의 pH는 약 5 내지 약 7이고 수성 제제는 어떠한 계면활성제도 없는 것인 수성 제제.
  29. 제27항 또는 제28항에 있어서, 히스티딘, 시트레이트, MES, 포스페이트, 탄산, 숙시네이트, 글리콜레이트, 또는 그의 임의의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제를 포함하고, 수성 제제의 pH가 약 5.5 내지 약 6.5, 예컨대 약 5.8 내지 약 6.2의 범위인 수성 제제.
  30. 제27항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 히스티딘 완충제를 포함하는 수성 제제.
  31. 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 약 10 mM 내지 약 50 mM, 예컨대 약 20 mM 내지 약 40 mM 완충제, 예컨대 약 28 mM 내지 약 34 mM, 예컨대 약 29 mM 내지 약 31 mM, 예컨대 약 30 mM의 농도에서의 완충제를 포함하는 수성 제제.
  32. 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 만니톨, 수크로스 및 트레할로스로 이루어진 군으로부터 선택된 안정화제를 포함하는 수성 제제.
  33. 제27항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 만니톨인 안정화제를 포함하는 수성 제제.
  34. 제27항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20 mM 내지 약 400 mM, 예컨대 약 30 mM 내지 약 300 mM, 예컨대 약 40 mM 내지 약 80 mM, 예컨대 약 50 mM 내지 약 60 mM, 예컨대 약 55 mM의 농도에서의 안정화제를 포함하는 수성 제제.
  35. 제27항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.4% (w/v) 내지 약 7% (w/v), 예컨대 약 0.5% 내지 약 5%, 예컨대 약 0.7% 내지 약 1.5%, 예컨대 약 1%의 농도에서의 안정화제를 포함하는 수성 제제.
  36. 제27항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 수크로스, 트레할로스 및 그의 조합물로부터 선택된 안정화제를 포함하는 수성 제제.
  37. 제27항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 아르기닌, 글리신, 글루탐산, 소르비톨, 트레할로스, 수크로스 및 염화나트륨 중 어느 하나 이상도 없는 수성 제제.
  38. 제27항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 농도가 약 5 mg/mL 내지 약 40 mg/mL, 예컨대 약 8 mg/mL 내지 약 35 mg/mL, 예컨대 약 10 mg/mL 내지 약 30 mg/mL, 예컨대 약 15 mg/mL 내지 약 25 mg/mL, 예컨대 약 20 mg/mL인 수성 제제.
  39. 제27항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 수성 제제의 pH가 약 5.5 내지 6.5의 범위, 예컨대 약 6인 수성 제제.
  40. 약 5 내지 약 7의 pH를 갖고
    (a) 약 5 mg/mL 내지 약 40 mg/mL의 항-AXL 항체 및
    (b) 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘;
    (c) 약 50 mM 내지 약 300 mM 만니톨
    을 포함하는 수성 제제.
  41. 제40항에 있어서, 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖고
    (a) 약 15 mg/mL 내지 약 25 mg/mL 항-AXL 항체, 예컨대 약 20 mg/mL의 항-AXL 항체;
    (b) 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘, 예컨대 약 30 mM 히스티딘;
    (c) 약 50 mM 내지 약 60 mM 만니톨, 예컨대 약 55 mM
    을 포함하고, 어떠한 첨가된 계면활성제, 아미노산 부형제, NaCl, 또는 그의 임의의 조합물도 없는 수성 제제.
  42. 제27항 내지 제41항 중 어느 한 항의 수성 제제를 동결시킴으로써 수득되거나 또는 수득가능한 항-AXL 항체의 동결 수성 제제.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC가
    (a) 각각 서열식별번호: 36, 37, 및 38의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 39, GAS, 및 40의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [107];
    (b) 각각 서열식별번호: 46, 47, 및 48의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 49, AAS, 및 50의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [148];
    (c) 각각 서열식별번호: 114, 115, 및 116의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열식별번호: 117, DAS, 및 118의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [733];
    (d) 각각 서열식별번호: 51, 52, 및 53의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 55, GAS, 및 56의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [154];
    (e) 각각 서열식별번호: 51, 52, 및 54의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 55, GAS, 및 56의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [154-M103L];
    (f) 각각 서열식별번호: 57, 58, 및 59의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 60, GAS, 및 61의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [171];
    (g) 각각 서열식별번호: 62, 63, 및 64의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 65, GAS, 및 66의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [172];
    (h) 각각 서열식별번호: 67, 68, 및 69의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 70, GAS, 및 71의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [181];
    (i) 각각 서열식별번호: 72, 73, 및 75의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 76, ATS, 및 77의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [183];
    (j) 각각 서열식별번호: 72, 74, 및 75의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 76, ATS, 및 77의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [183-N52Q];
    (k) 각각 서열식별번호: 78, 79, 및 80의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 81, AAS, 및 82의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [187];
    (l) 각각 서열식별번호: 83, 84, 및 85의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 86, GAS, 및 87의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [608-01];
    (m) 각각 서열식별번호: 88, 89, 및 90의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 91, GAS, 및 92의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [610-01];
    (n) 각각 서열식별번호: 93, 94, 및 95의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 96, GAS, 및 97의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [613];
    (o) 각각 서열식별번호: 98, 99, 및 100의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 101, DAS, 및 102의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [613-08];
    (p) 각각 서열식별번호: 103, 104, 및 105의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 106, GAS, 및 107의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [620-06];
    (q) 각각 서열식별번호: 108, 109, 및 110의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 112, AAS, 및 113의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [726];
    (r) 각각 서열식별번호: 108, 109, 및 111의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 112, AAS, 및 113의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [726-M101L];
    (s) 각각 서열식별번호: 41, 42, 및 43의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 44, AAS, 및 45의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [140];
    (t) 각각 서열식별번호: 93, 94, 및 95의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열식별번호: 128, X가 D 또는 G인 XAS, 및 129의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [613 / 613-08];
    (u) 각각 서열식별번호: 46, 119, 및 120의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 49, AAS, 및 50의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [148 / 140];
    (v) 각각 서열식별번호: 123, 124, 및 125의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 60, GAS, 및 61의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [171 / 172 / 181]; 및
    (w) 각각 서열식별번호: 121, 109, 및 122의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 112, AAS, 및 113의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [726 / 187]; 및
    (x) 각각 서열식별번호: 93, 126, 및 127의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 96, GAS, 및 97의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [613 / 608-01 / 610-01 / 620-06]
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 적어도 1개의 결합 영역을 포함하는 것인 제제.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC가
    (a) 서열식별번호: 1을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 2를 포함하는 VL 영역 [107];
    (b) 서열식별번호: 5를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 6을 포함하는 VL 영역 [148];
    (c) 서열식별번호: 34를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 35를 포함하는 VL 영역 [733]
    (d) 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 9를 포함하는 VL 영역 [154];
    (e) 서열식별번호: 10을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 11을 포함하는 VL 영역 [171];
    (f) 서열식별번호: 16을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 18을 포함하는 VL 영역 [183];
    (g) 서열식별번호: 25를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 26을 포함하는 VL 영역 [613];
    (h) 서열식별번호: 31을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 33을 포함하는 VL 영역 [726];
    (i) 서열식별번호: 3을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 4를 포함하는 VL 영역 [140];
    (j) 서열식별번호: 8을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 9를 포함하는 VL 영역 [154-M103L];
    (k) 서열식별번호: 12를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 13을 포함하는 VL 영역 [172];
    (l) 서열식별번호: 14를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 15를 포함하는 VL 영역 [181];
    (m) 서열식별번호: 17을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 18을 포함하는 VL 영역 [183-N52Q];
    (n) 서열식별번호: 19를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 20을 포함하는 VL 영역 [187];
    (o) 서열식별번호: 21을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 22를 포함하는 VL 영역 [608-01];
    (p) 서열식별번호: 23을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 24를 포함하는 VL 영역 [610-01];
    (q) 서열식별번호: 27을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 28을 포함하는 VL 영역 [613-08];
    (r) 서열식별번호: 29를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 30을 포함하는 VL 영역 [620-06]; 및
    (s) 서열식별번호: 32를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 33을 포함하는 VL 영역 [726-M101L]
    과 적어도 90%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 99% 동일한 VH 및 VL 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 적어도 1개의 결합 영역을 포함하는 것인 제제.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC가
    (a) 서열식별번호: 1을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 2를 포함하는 VL 영역 [107];
    (b) 서열식별번호: 5를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 6을 포함하는 VL 영역 [148];
    (c) 서열식별번호: 34를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 35를 포함하는 VL 영역 [733]
    (d) 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 9를 포함하는 VL 영역 [154];
    (e) 서열식별번호: 10을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 11을 포함하는 VL 영역 [171];
    (f) 서열식별번호: 16을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 18을 포함하는 VL 영역 [183];
    (g) 서열식별번호: 25를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 26을 포함하는 VL 영역 [613];
    (h) 서열식별번호: 31을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 33을 포함하는 VL 영역 [726];
    (i) 서열식별번호: 3을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 4를 포함하는 VL 영역 [140];
    (j) 서열식별번호: 8을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 9를 포함하는 VL 영역 [154-M103L];
    (k) 서열식별번호: 12를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 13을 포함하는 VL 영역 [172];
    (l) 서열식별번호: 14를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 15를 포함하는 VL 영역 [181];
    (m) 서열식별번호: 17을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 18을 포함하는 VL 영역 [183-N52Q];
    (n) 서열식별번호: 19를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 20을 포함하는 VL 영역 [187];
    (o) 서열식별번호: 21을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 22를 포함하는 VL 영역 [608-01];
    (p) 서열식별번호: 23을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 24를 포함하는 VL 영역 [610-01];
    (q) 서열식별번호: 27을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 28을 포함하는 VL 영역 [613-08];
    (r) 서열식별번호: 29를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 30을 포함하는 VL 영역 [620-06]; 및
    (s) 서열식별번호: 32를 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 33을 포함하는 VL 영역 [726-M101L]
    으로 이루어진 군으로부터 선택된 VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 적어도 1개의 결합 영역을 포함하는 것인 제제.
  46. 제43항 또는 제44항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC가 각각 서열식별번호: 36, 37, 및 38의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 39, GAS, 및 40의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [107]을 포함하는 것인 제제.
  47. 제46항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC가 서열식별번호: 1을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 2를 포함하는 VL 영역 [107]을 포함하는 것인 제제.
  48. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC가 제42항에 정의된 항체 중 어느 것에 의해 인식되는 AXL 상의 에피토프에 결합하는 것인 제제.
  49. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC가 AXL의 Ig1-유사 도메인 내에서 에피토프에 결합하고, 에피토프가 인간 AXL의 위치 L121 내지 Q129 또는 T112 내지 Q124에 상응하는 1개 이상의 아미노산을 포함하거나 또는 필요로 하는 것인 제제.
  50. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC가 AXL의 Ig2-유사 도메인 내에서 에피토프에 결합하고, 에피토프가 인간 AXL의 위치 D170 또는 D179와 위치 T182 내지 R190에 상응하는 1개 이상의 아미노산의 조합에 상응하는 아미노산을 포함하거나 또는 필요로 하는 것인 제제.
  51. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC가 인간 AXL의 FN1-유사 도메인 내에서 에피토프에 결합하고, 에피토프가 인간 AXL의 위치 Q272 내지 A287 및 G297 내지 P301에 상응하는 1개 이상의 아미노산을 포함하거나 또는 필요로 하는 것인 제제.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC의 항체-모이어티가 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된 이소형의 중쇄를 포함하는 것인 제제.
  53. 제51항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC의 항체-모이어티의 이소형이 IgG1, 임의로 동종이형 IgG1m(f)인 제제.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC의 항체 모이어티가 전장 모노클로날 항체, 예컨대 전장 모노클로날 IgG1,κ 항체인 제제.
  55. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC의 항체 모이어티가 이펙터-기능-결핍 항체, 안정화된 IgG4 항체 또는 1가 항체인 제제.
  56. 제55항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC의 항체 모이어티의 중쇄가 전체 힌지 영역이 결실되도록 변형된 것인 제제.
  57. 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC의 항체 모이어티의 서열이 N-연결된 글리코실화를 위한 어떠한 수용자 부위도 포함하지 않도록 변형된 것인 제제.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 항-AXL 항체 또는 AXL-ADC의 항체 모이어티가 단일 쇄 항체인 제제.
  59. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, AXL-ADC의 항체 또는 항체-모이어티가 제43항 내지 제51항 중 어느 한 항에 따른 항-AXL 항체의 제1 결합 영역, 및 제1 결합 영역과 상이한 표적 또는 에피토프에 결합하는 제2 결합 영역을 포함하는 이중특이적 항체인 제제.
  60. 제59항에 있어서, 이중특이적 항체가 제1 및 제2 중쇄를 포함하고, 각각의 제1 및 제2 중쇄가 적어도 힌지 영역, CH2 및 CH3 영역을 포함하고, 제1 중쇄에서 인간 IgG1 중쇄 내의 K409, T366, L368, K370, D399, F405, 및 Y407로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 위치에서의 아미노산 중 적어도 1개가 치환되고, 제2 중쇄에서 인간 IgG1 중쇄 내의 F405, T366, L368, K370, D399, Y407, 및 K409로 이루어진 군으로부터 선택된 위치에 상응하는 위치에서의 아미노산 중 적어도 1개가 치환되며, 여기서 제1 및 제2 중쇄의 치환은 동일한 위치에 있지 않은 것인 제제.
  61. 제43항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 IgG1 중쇄 내의 K409에 상응하는 위치에서의 아미노산이 제1 중쇄에서 R이고, 인간 IgG1 중쇄 내의 F405에 상응하는 위치에서의 아미노산이 제2 중쇄에서 L이거나, 또는 그 반대의 경우인 제제.
  62. 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL의 AXL-ADC, 및
    약 5 내지 약 7의 pH를 제공하는 약 30 mM 히스티딘 완충제;
    약 88 mM 수크로스; 및
    약 165 mM 만니톨
    을 포함하는 제약상 허용되는 부형제
    를 포함하는 수성 제제를 동결건조시킴으로써 수득가능하거나 또는 수득된 동결건조 제제이며,
    여기서 ADC의 항-AXL 항체 모이어티는
    (a) 각각 서열식별번호: 36, 37, 및 38의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 39, GAS, 및 40의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [107];
    (b) 각각 서열식별번호: 46, 47, 및 48의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 49, AAS, 및 50의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [148];
    (c) 각각 서열식별번호: 114, 115, 및 116의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열식별번호: 117, DAS, 및 118의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [733];
    (d) 각각 서열식별번호: 51, 52, 및 53의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 55, GAS, 및 56의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [154];
    (e) 각각 서열식별번호: 51, 52, 및 54의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 55, GAS, 및 56의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [154-M103L];
    (f) 각각 서열식별번호: 57, 58, 및 59의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 60, GAS, 및 61의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [171];
    (g) 각각 서열식별번호: 62, 63, 및 64의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 65, GAS, 및 66의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [172];
    (h) 각각 서열식별번호: 67, 68, 및 69의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 70, GAS, 및 71의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [181];
    (i) 각각 서열식별번호: 72, 73, 및 75의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 76, ATS, 및 77의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [183];
    (j) 각각 서열식별번호: 72, 74, 및 75의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 76, ATS, 및 77의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [183-N52Q];
    (k) 각각 서열식별번호: 78, 79, 및 80의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 81, AAS, 및 82의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [187];
    (l) 각각 서열식별번호: 83, 84, 및 85의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 86, GAS, 및 87의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [608-01];
    (m) 각각 서열식별번호: 88, 89, 및 90의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 91, GAS, 및 92의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [610-01];
    (n) 각각 서열식별번호: 93, 94, 및 95의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 96, GAS, 및 97의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [613];
    (o) 각각 서열식별번호: 98, 99, 및 100의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 101, DAS, 및 102의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [613-08];
    (p) 각각 서열식별번호: 103, 104, 및 105의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 106, GAS, 및 107의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [620-06];
    (q) 각각 서열식별번호: 108, 109, 및 110의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 112, AAS, 및 113의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [726];
    (r) 각각 서열식별번호: 108, 109, 및 111의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 112, AAS, 및 113의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [726-M101L];
    (s) 각각 서열식별번호: 41, 42, 및 43의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 44, AAS, 및 45의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [140];
    (t) 각각 서열식별번호: 93, 94, 및 95의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열식별번호: 128, X가 D 또는 G인 XAS, 및 129의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [613 / 613-08];
    (u) 각각 서열식별번호: 46, 119, 및 120의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 49, AAS, 및 50의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [148 / 140];
    (v) 각각 서열식별번호: 123, 124, 및 125의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 60, GAS, 및 61의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [171 / 172 / 181]; 및
    (w) 각각 서열식별번호: 121, 109, 및 122의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 112, AAS, 및 113의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [726 / 187]; 및
    (x) 각각 서열식별번호: 93, 126, 및 127의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 96, GAS, 및 97의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역 [613 / 608-01 / 610-01 / 620-06]
    을 포함하고
    링커는 mc-vc-PAB이고 세포독성제는 MMAE이거나, 또는 링커는 SSP이고 세포독성제는 DM1인 동결건조 제제.
  63. 제62항에 있어서, 수성 제제가
    약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL의 AXL-ADC, 및
    약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 제공하는 약 30 mM 히스티딘 완충제;
    약 88 mM 수크로스; 및
    약 165 mM 만니톨
    을 포함하는 제약상 허용되는 부형제
    로 본질적으로 이루어진 것인 동결건조 제제.
  64. 제62항 또는 제63항에 있어서, ADC의 항-AXL 항체 모이어티가 각각 서열식별번호: 36, 37, 및 38의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 39, GAS, 및 40의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [107]을 포함하는 것인 동결건조 제제.
  65. 제64항에 있어서, ADC의 항-AXL 항체 모이어티가 서열식별번호: 1을 포함하는 VH 영역 및 서열식별번호: 2를 포함하는 VL 영역 [107]을 포함하는 것인 동결건조 제제.
  66. 제62항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 링커가 mc-vc-PAB이고 세포독성제가 MMAE인 동결건조 제제.
  67. 제62항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, AXL-ADC가 제약 용도를 위해 적어도 6개월 동안, 예컨대 적어도 9개월 동안, 예컨대 적어도 15개월 동안 또는 바람직하게는 적어도 18개월 동안, 또는 보다 더 바람직하게는 적어도 24개월 동안, 또는 가장 바람직하게는 적어도 36개월 동안 2-8℃에서, 예컨대 5℃에서 안정한 것인 동결건조 제제.
  68. 제62항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 제제가 10% 미만의 응집체, 예컨대 5.0% 미만의 응집체, 예컨대 3.0% 미만의 응집체, 예컨대 2.0% 미만의 응집체를 갖는 경우에 5℃에서 보관될 때 적어도 6개월 동안, 예컨대 적어도 9개월 동안, 예컨대 적어도 15개월 동안 또는 바람직하게는 적어도 18개월 동안, 또는 보다 더 바람직하게는 적어도 24개월 동안, 또는 가장 바람직하게는 적어도 36개월 동안 안정한 동결건조 제제.
  69. 제62항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 안정성이 크기-배제 분석, cIEF, 또는 둘 다에 의해 결정된 것인 동결건조 제제.
  70. 제62항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 3.0% 미만의 수분, 예컨대 2.0% 미만의 수분, 예컨대 1 % 미만의 수분, 또는 0.5% 미만의 수분을 함유하는 동결건조 제제.
  71. 제62항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 어떠한 무기 염도 없는 동결건조 제제.
  72. (a) 약 7 mg/mL 내지 약 20 mg/mL의 AXL-ADC;
    (b) 약 5 mM 내지 100 mM 히스티딘;
    (c) 약 15 mM 내지 약 120 mM 수크로스; 및
    (d) 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨
    을 포함하는, AXL-ADC의 동결건조 제제를 제조하는 데 적합하고 약 5 내지 약 7의 pH를 갖는 수성 제제.
  73. 제72항에 있어서, ADC의 항-AXL 항체 모이어티가 각각 서열식별번호: 36, 37, 및 38의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 영역; 및 각각 서열식별번호: 39, GAS, 및 40의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 영역, [107]을 포함하는 것인 수성 제제.
  74. 제72항 또는 제73항에 있어서, 링커가 mc-vc-PAB이고 세포독성제가 MMAE인 수성 제제.
  75. 멸균 수성 희석제 중에서 제62항 내지 제71항 중 어느 한 항의 동결건조 제제를 재구성함으로써 수득된 제약상 허용되는 액체 제제.
  76. 제75항에 있어서, 약 5 내지 약 7의 pH를 갖고 약 5 mg/mL 내지 약 30 mg/mL AXL-ADC, 약 10 mM 내지 약 50 mM 히스티딘; 약 15 mM 내지 약 120 mM 수크로스; 및 약 50 mM 내지 약 300 mM 만니톨 또는 글리신을 포함하고, 만니톨 대 수크로스의 중량비가 적어도 약 1인 액체 제제.
  77. 제76항에 있어서, 약 9 mg/mL 내지 약 11 mg/mL AXL-ADC, 약 20 mM 내지 약 40 mM 히스티딘, 약 80 mM 내지 약 100 mM 수크로스 및 약 150 mM 내지 약 180 mM 만니톨을 포함하는 액체 제제.
  78. 제77항에 있어서, 약 10 mg/mL AXL-ADC, 약 30 mM 히스티딘, 약 88 mM 수크로스 및 약 165 mM 만니톨을 포함하는 액체 제제.
  79. 멸균 수성 희석제 중에서 제62항 내지 제71항 중 어느 한 항의 동결건조 제제를 재구성하는 단계를 포함하는, AXL-ADC의 주사액을 제조하는 방법.
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