CZ20012574A3 - Sloučenina, oligonukleotidový analog a jeho pouľití, farmaceutický prostředek, sonda a primer - Google Patents

Description

Sloučenina, oligonukleotidový analog a jeho použití, farmaceutický prostředek, sonda a primer.

Oblast techniky

Popisují se nové oligonukleotidové analogy, které vykazují ^nesmyslnou nebo antigenní aktivity^ výbornou stabilitu nebo vykazují výbornou aktivitu jako detekční činidlo (sonda) pro specifický gen nebo jako primer pro počátek amplifikace, a nové nukleosidové analogy, které mohou zprostředkovat jejich produkci.

Dosavadní stav techniky

Očekává se, že oligonukleotidové analogy, které vykazují výbornou nesmyslnou nebo antigenní aktivitu a ktere jsou v těle stabilní, se budou moci použití jako farmaceutické prostředky. Navíc oligonukleotidové analogy, které vykazují vysoký stupeň schopnosti tvořit stabilní komplementární řetězec s DNA nebo mRNA se mohou použít jako detekční činidla vhodná pro specifický gen nebo jako primery pro začátek amplifikace.

Naopak je známo, že přirozeně se vyskytující oligonukleotidy se rychle rozkládají pomocí různých nukleáz, které jsou přítomny v krvi a v buňkách. V některých případech přirozeně se vyskytující oligonukleotidy nevykazují dostatek citlivosti při použití jako detekční činidlo pro specifické geny nebo jako primery pro začátek amplifikace, což je způsobeno jejich afinitou vůči sekvencím komplementárních bází.

Za účelem překonat nedostatky, se připravily různé nepřirozeně se vyskytující oligonukleotidové analogy, které jsou určeny pro použití jako farmaceutické prostředky nebo detekční činidla pro specifické geny. Jmenovitě známé příklady takových nepřirozeně se vyskytujících oligonukleotidových analogů zahrnují ty, kde atom kyslíku zachycený na atomu fosforu ve fosfordiesterové vazbě oligonukleotidu je nahrazen atomem síry, • ·· ·· ·· ·· · • · · · · ·· · · ♦·· • · · ···· · · · ·· ··· ······ · · • · · · · · ··· ··· ·· ·· · · · · · · dále ty, kde uvedený atom kyslíku je nahrazen atomem bóru a ty, ve kterých cukerná část a báze oligonukleotidu je upravena chemickou cestou. Například společnost ISIS Corp. vyvinula thioátový typ oligonukleotidu ISIS2922 (Vitravene) jako terapeutický prostředek vhodný pro lidský zánět sítnice způsobený cytomegalovirem a tento prostředek se uvedl na trh v USA.

Když se vsak zvazuje potenciál aesmyslne a antigenní aktivity shora popsaných nepřirozeně se vyskytujících oligonukleotidových analogů, jmenovitě pak schopnost tvořit stabilní komplementární řetězec s DNA nebo mRNA, stabilita s ohledem na různé nukleázy a zobrazení nežádoucích vedlejších účinků způsobených nespecifickým navázáním na různé proteiny v těle, je nutné připravit nepřirozeně se vyskytující oligonukleotidový analog, který má dokonce lepší stabilitu v těle a malý výskyt vedlejších účinků a vysoký stupeň schopnosti tvpřit komplementární řetězce.

Podstata vynálezu

Vynález popisuje nepřirozeně se vyskytující oligonukleoti, , ptačit dové analogy, ktere vykazuji výbornou 'i*esmyslnou nebo antigenní aktivitu, výbornou stabilitu v těle a nízký výskyt nežádoucích vedlejších účinků. Zjistilo se, že oligonukleotidové analogy nebo nukleosidové analogy vykazující etherovou vazbu , _ pp&W v uvedených molekulách je mozne použit jako 's=esmyslne nebo antigenní prostředky mající výbornou stabilitu, jako detekční činidla (sondy) vhodné pro specifický gen, jako primer pro začátek amplifikace nebo jako meziprodukt pro jejich přípravu.

Nové nukleosidové analogy podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce 1:

• 9 • ·· ·· ·· ·· ··· · · * · · ♦ • · · · · ····· · ····· ·· ·· ·· ·

kde symboly R¹ a R² jsou stejné a reprezentují atom vodíku, hydroxylovou ochranou skupinu, skupinu kyseliny fosforečné, chráněnou skupinu kyseliny fosforečné nebo -P(R³)R⁴, kde symboly R³ a R⁴ jsou stejné nebo různé a reprezentují hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, merkaptoskupinu, chráněnou merkaptoskupinu, aminoskupinu, alkoxyskupinu, která obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupinu, která obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, kyanalkoxyskupinu, která obsahuje 1 až 5 atomů uhlíku, nebo aminoskupinu substituovanou alkylovou skupinou, která obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, symbol A reprezentuje alkylenovou skupinu, která obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku a symbol B reprezentuje skupinu purin-9-yl, 2-oxopyrimidin-l-yl nebo substituovanou skupinu purin-9-yl nebo substituovanou skupinu 2-oxopyrimidin-l-yl, která má substituent vybraný z následující skupiny a, nebo jejich sole.

Oligonukleotidové analogy podle vynálezu jsou oligonukleotidové analogy, které mají jednu nebo dvě nebo více struktur obecného vzorce 2:

(2) kde [symbol A reprezentuje alkylenovou skupinu, která má 1 až 4 atomy uhlíku a symbol B reprezentuje skupinu purin-9-yl, 2-oxopyrimidin-l-yl a substituovanou skupinu purin-9-yl nebo substituovanou skupinu 2-oxopyrimidin-l-yl, kde se substituent vybral z následující skupiny a], nebo jejich farmaceuticky přijatelné sole.

Skupina a je:

hydroxylová skupina chráněná hydroxylová skupina alkoxyskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, merkaptoskupina chráněná merkaptoskupina alkylthioskupina s 1 až 4 atomy uhlíku aminoskupina chráněná aminoskupina aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku a halogenový atom.

Termín „alkylenová skupina, která obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku symbolu A ve shora uvedeném vzorci 1 nebo 2 může zahrnovat methylenovou, ethylenovou, trimethylenovou a tetramethylenovou skupinu, přičemž je výhodnější methylenová skupina.

Termín „hydroxylová chránící skupina symbolu R¹ a R² „chráněná hydroxylová skupina symbolu R³ a R⁴ nebo skupina a ve shora uvedeném vzorci 1 nebo 2 znamená chránící skupinu, kterou je možné štěpit chemickou metodou jako je hydrogenolýza, rozklad, hydrolýza, elXetrolýza a fotolýza nebo biologickou metodou, jako je hydrolýza v těle člověka. Takové chránící skupiny mohou zahrnovat „alifatickou acylovou skupinu jako je alkylkarbonylová skupina, což je například formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pentanoyl, pivaloyl, valeryl, isovaleryl, oktanoyl, nonanoyl, dekanoyl, 3-methylnonanoyl, • ··· · ····· · • · · · · · · • · « · · ·· · · ·· ·

8-methylnonanoyl, 3-ethyloktanoyl, 3,7-di-methyloktanoyl, undekanoyl, dodecanoyl, tridekanoyl, tetradekanoyl, pentadekanoyl, hexadekanoyl, 1-methylpenta-dekanoyl, 14-methylpentadekanoyl, 13,13-dimethyltetradekanoyl, heptadekanoyl, 15-methylhexadekanoyl, oktadekanoyl, 1-methyl-heptadekanoyl, nonadekanoyl, eikosanoyl a heneikosanoyl, karboxylovaná alkylkarbonylová skupina, je to například sukcinoylová, glutaroylová a adipoylová skupina, halogen nižší alkylkarbonylová skupina, například chloracetylová, dichloracetylová, trichloracetylová a trifluoracetylová, nižší alkoxyalkyl karbonylová skupina, což je například methoxyacetyl, a nesaturovaná alkoxykarbonylová skupina, což je například (E)-2-methyl-2-butenoyl,

Termín „aromatická acylová skupina, jako například arylkarbonylová skupina je například 2-brombenzoylová a 4-chlorbenzoylová, nižší alkylovaná arylkarbonylová skupina, což je například 2,4,6-trimethylbenzoyl a 4-toluoyl, nižší alkoxylovaná arylkarbonylová skupina, což je například 4-ani-soyl, karboxylovaná arylkarbonylová skupina, což je například 2-karboxybenzoylová, 3-karboxybenzoyl a 4-karboxybenzoyl, nitrovaná arylkarbonylová skupina, což je například 4-nitro-benzoyl a 2-nitrobenzoyl, nižší alkoxykarbonylovaná arylkarbonylová skupina , což je například 2-(methoxykar-bonyl)benzoyloová a arylovaná arylkarbonylová skupina, což je například 4-fenylbenzoyl.

Termín „tetrahydropyranylová skupina nebo tetrahydrothiopyranylová skupina je například tetrahydropyran-2-yl, 3-bromotetrahydropyran-2-yl, 4-methoxytetrahydropyran-4-yl, tetrahydropyran-2-yl a 4-methoxytetrahydrothiopyran-4-yl.

Termín „tetrahydrofuranylová skupina nebo tetrahydrothiofuranylová skupina je například tetrahydrofuran-2-yl a tetrahydrothiofuran-2-yl.

Termín „silylová skupina zahrnuje například silylovou skupinu obsahující tři nižší alkyly, což je například trimethylsilyl, triethylsilyl, isopropyldimethylsilyl, t-butyldimebutyldimethylsilyl, methyldiisopropylsilyl, methyldi-t-butylsilyl a triisopropylsilyl a silylová skupina obsahující tři alkyly substituovaná jednou nebo dvěmi arylovými skupinami, což je například difenylmethylsilyl, difenylbutylsilyl, difenylisopropylsilyl a fenyladiisopropylsilyl.

Termín „nižší alkoxymethylová skupina je například metho xymethyl, 1,1-dimethyl-l-methoxymethyl, ethoxymethyl, propoxymethyl, isopropoxymethyl, butoxymethyl a t-butoxy/methyl.

Termín „nižší alkoxylovaná nižší alkoxymethylová skupina je například 2-methoxyethoxxymethyl.

Termín „halogenovaná nižší alkoxymethylová skupina znamená například 2,2,2-trichlorethoxymethyl a bis(2-chlorethoxy)methyl.

Termín „nižší alkoxylovaná ethylová skupina znamená například 1-ethoxyathyl a 1-(isopropoxy)ethyl.

Termín „halogenovaná ethylová skupina znamená například

2,2,2-trichlorethyl.

Termín „methylovaná skupina substituovaná jednou až třemi arylovými skupinami znamená například benzyl, α-naftylmethyl, β-naftylmethyl, difenylmethyl, trifenylmethyl, α-naftyl-difenylmethyl a 9-antrylmethyl.

Termín „methylová skupina substituovaná jednou až třemi arylovými skupinami, kde uvedený arylový kruh je substituován nižším alkylem, nižší alkoxyskupinou, halogenem nebo kyanoskupinou zahrnuje například 4-methylbenzyl, 2,4,6-tri-methylbenzyl, 3,4,5-trimethylbenzyl, 4-methoxybenzyl, 4-methoxyfenyldifenylmethyl, 4,4'-dimethoxytrifenylmethyl, 2-nitrobenzyl, 4-nitrobenzyl, 4-chlorbenzyl, 4-brombenzyl a

4-kyanbenzyl.

Termín „nižší alkoxykarbonylová skupina zahrnuje například methoxykarbonyl, ethoxykarbonyl, t-butoxykarbonyl a isobutoxykarbonyl.

Termín „nižší alkoxykarbonylová skupina substituovaná halogenem nebo „silylová skupina obsahující tři nizžší alkyly • ·· · · ·· ·· •99 9 · · 9 · · *9 zahrnuje 2, 2,2-trichlorethoxykarbonyl a 2-trimethylsilylethoxykarbonyl.

Termín „alkenoyloxykarbonylová skupina zahrnuje vinyloxykarbonyl a alyloxykarbonyl.

Termín „aralkyloxykarbonylová skupina, kde uvedený arylový kruh se může substituovat jednou nebo dvěmi alkoxy nebo nitroskupinami zahrnuje například benzyloxykarbonyl, 4-methoxybenzyloxykarbonyl, 3,4-dimethoxybenzyloxykarbonyl, 2-nitrobenzyloxykarbonyl a 4-nitrobenzylkarbonyl.

„Hydroxylová chránící skupina symbolu R¹ a R² přednostně zahrnuje „alyfatickou acylovou skupinu, „aromatickou acylovou skupinu, „methylovou skupinu substituovanou jednou až třemi arylovými skupinami, „methylovou skupinu substituovanou 1 až třemi arylovými skupinami, kde arylový kruh se substituoval nižší alkylovou, nižší alkoxy, kyanoskupinou nebo halogenem nebo „sulylovou skupinu. Výhodnější je acetylová skupina, benzoylová skupina, benzylová skupina, p-methoxybenzoylová skupina, dimethoxytritylová skupina, monomethoxytritylová skupina nebo terc-butyldifenylsilylová skupina.

Chránící skupina „chráněné hydroxylové skupiny symbolu R³ a R⁴ nebo skupina a může s výhodou zahrnovat „alifatickou acylovou skupinu nebo „aromatickou acylovou skupinu, výhodnější je benzoylová skupina.

Chránící skupina „chráněné skupiny kyseliny fosforečné symbolu R¹ a R² ve shora uvedeném vzorci 1 reprezentuje chránící skupinu, která se může štěpit chemickou metodou, jako je hydrogenolýza, hydrolýza, elektrolýza a fosfolýza a biologickou metodou, jako je hydrolýza v lidském těle. Takové chránící skupiny mohou zahrnovat „nižší alkylovou skupinu jako je methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, a-butyl, isobutyl, s-butyl, terc-butyl, n-pentyl, isopentyl, 2-methylbutyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, isohexyl, 4-methylpentyl, 3-methylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 3,3-dimethylbutyl,

2.2- dimethylbutyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl a 2-ethylbutyl.

„Nižší alkylová skupina substituovaná kyanoskupinou zahrnuje například 2-kyanoethyl a 2-kyano-l,1-dimethylethyl.

„Ethylová skupina substituovaná silylovou šupinou zahrnuje například 2-methyldifenylsilylethyl, 2-trimethylsilylethyl a 2-trifenylsilylethyl.

„Halogenovaná nižší alkylová skupina zahrnuje například

2.2.2- trichlorethyl, 2,2,2-tribromethyl, 2,2,2-trifluorethyl a

2.2.2- trichlor-l,1-dimethylethyl.

„Nižší alkenylová skupina zahrnuje například ethenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, l-methyl-2-propenyl, 1-methyl-l-propenyl, 2-methyl-l-propenyl, 2-methyl-2-propenyl, 2-ethyl-2-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, l-methyl-2-butenyl, 1-methyl-2-butenyl, 1-methyl-l-butenyl, 3-methyl-2-butenyl, l-ethyl-2-butenyl, 3-butenyl, l-methyl-3-butenyl, 2-methyl-3-butenyl, l-ethyl-3-butenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, l-methyl-2-pentenyl, l-methyl-2-pentenyl, 3-pentenyl, l-methyl-3-pentenyl, 2-methyl-3-pentenyl, 4-pentenyl, l-methyl-4-pentenyl, 2-methyl-4-pentenyl, 1-hexenyl, 2-hexenyl, 3-hexenyl, 4-hexenyl a 5-hexenyl.

„Cykloalkylová skupina zahrnuje například cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, norbornyl a adamantyl.

„Kyanátovaná nižší alkenylová skupina je například 2-kyanobutenyl.

„Arylalkylová skupina zahrnuje například benzyl, a-naftylmethyl, indenylmethyl, fenantrenylmethyl, antracenylmethyl, difenylmethyl, trifenylmethyl, 1-fenethyl, 2-fenethyl, 1-naftylethyl, 2-naftylethyl, 1-fenylpropyl, 2-fenylpropyl, 3-fenylpropyl, 1-naftylpropyl, 2-naftylpropyl, 3-naftylpropyl, 1-fenylbutyl, 2-fenylbutyl, 3-fenylbutyl, 4-fenylbutyl, 1-naftylbutyl, 2-naftylbutyl, 3-naftylbutyl, 4-naftylbutyl, 1-fenylpentyl, 2-fenylpentyl, 3-fenylpentyl, 4-fenylpentyl, 4-fe9 • ·· *· ·· ·· · • · · · · ♦ · ♦ ♦ ? · · • · · · · · · ·« · • · ··· ····«· · · ··· · · · · · · ··· ·· ·· ·· ·* ··· nylpentyl, 5-fenylpentyl, 1-naftylpentyl, 2-naftylpentyl, 3-naftylpentyl, 4-naftylpentyl, 5-naftylpentyl, 1-fenylhexyl, 3-fenylhexyl, 4-fenylhexyl, 5-fenylhexyl, 6-fenylhexyl, 1-naftylhexyl, 2-naftylhexyl, 3-naftylhexyl, 4-naftylhexyl, 5-naftylhexyl a 6-naftylhexyl.

„Aralkylová skupina, kde uvedený arylový kruh se substituoval nitroskupinou nebo halogenovým atomem zahrnuje 4-chlorbenzyl, 2-(4-nitrofenyl)ethyl, o-nitrobenzyl, 4-nitrobenzyl,

2.4- dinitrobenzyl a 4-chlor-2-nitrobenzyl.

„Arylová skupina zahrnuje fenyl, indenyl, naftyl, fenantrenyl a antracenyl a „arylová skupina substituovaná nižší alkylovou skupinou, atomem halogenu nebo nitroskupinou zahrnuje 2-methylfenyl, 2,6-dimethylfenyl, 2-chlorfenyl, 4-chlorfenyl,

2.4- dichlorfenyl, 2,5-dichlorfenyl, 2-bro-mofenyl, 4-nitrofenyl a 4-chlor-2-nitrofenyl.

Výhodné jsou „nižší alkylová skupina, „nižší alkylová skupina substituovaná cyanoskupinou, „aralkylová skupina nebo „aralkylová skupina, kde uvedený arylový kruh se substituuje nitroskupinou nebo halogenovým atomem. Výhodnější je 2-kyanoethylová skupina, 2,2,2-trichlorethylová skupina nebo benzylová skupina.

„Alkoxyskupina zahrnující 1 až 4 atomy uhlíku symbolu R³ a R⁴ nebo skupina a ve shora uvedeném vzorci 1 a 2 může zahrnovat methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, a-butoxy, isobutoxy, s-butoxy nebo terc-butoxyskupinu. Výhodná je methoxyskupina nebo ethoxyskupina.

Chránící skupina „chráněné merkaptoskupiny symbolu R³ a R⁴ nebo skupina a ve shora uvedeném vzorci 1 a 2 může zahrnovat mimo hydroxylovách chránících skupin uvedených shora v textu „skupinu, která tvoří disulfid jako je alkylthioskupina, což je například methylthioskupina, ethylthioskupina, terc-butylthioskupina a aralkylthioskupina jako je benzylthioskupina. Výhodná je „alifatická acylová skupina nebo „aromatická acylová skupina, výhodnější je benzoylová skupina. Termín „alky10 « ·· ♦· ·· ·· ΦΦΦΦ ···· 9 9 • · · » · · ·*♦ · 9 · ····· · 4 9

999 99 ·· *· ·♦

Ithioskupina, která vykazuje 1 až 4 atomy uhlíku symbolu R³ a R⁴ nebo skupina a ve shora uvedeném vzorci 1 nebo 2 může zahrnovat methylthioskupinu, ethylthioskupinu, propylthioskupinu, isopropylthioskupinu, butylthioskupinu, s-butylthioskupinu a terc-butylthioskupinu. Výhodná je methylthioskupina nebo ethylthioskupina.

Chránící skupina „chráněné aminoskupiny skupiny a ve sho ra uvedeném vzorci 1 a 2 zahrnuje „alifatickou acylovou skupinu jako je alkylkarbonylová skupina a to například formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pentanoyl, pivaloyl, valeryl, isovaleryl, aktanoyl, nonanoyl, dekanoyl, 3-methylnonanoyl, 8-methyl-nonanoyl, 3-ethyloctanoyl, 3,7-dimethyloktanoyl, undekanoyl, dodekanoyl, tridekanoyl, tetradekanoyl, pentadekanoyl, hexadekanoyl, 1-methyl-pantadekanoyl, 14-methylpentadekanoyl, 13,13-dimethyltetra-dekanoyl, heptadekanoyl, 15-methylhexa-dekanoyl, oktadekanoyl, 1-methylheptadekanoyl, nonadekanoyl, eikosanoyl a heneikosanoyl a karboxylovaná akylkarbonylová skupina, jako je například sukcinoyl, glutaroyl a adipoyl, halogen nižší alkylkarbonylová skupina, což je například chloracetyl, dichloracetyl, trichloracetyl a trifluoracetyl, nižší alkoxy nižší alkylkarbonylová skupina, jako je například methoxyacetyl, a nesaturovaná alkylkarbonylová skupina, což je například (E)-2-methyl-2-butenoyl.

„Aromatická acylová skupina je například arylkarbonylová skupina, což je například benzoyl, α-naftoyl a β-naftoyl, halogenoarylkarbonylová skupina, jako je například benzoyl, a-naftoyl a β-naftoyl, halogenarylkarbonylová skupina, což je například 2-brombenzoyl a 4-chlorbenzoyl, nižší alkylovaná arylkarbonylová skupina, což je například 2,4,6-trimethylbenzoyl a 4-toluoyl, nižší alkoxylovaná arylkarbonylovaná skupina, jako je například 4-anisoyl, karboxylovaná arylkarbonylová skupina, což je například 2-karboxybenzoyl, 3-karboxybenzoyl a 4-karboxybenzoyl, nitrovaná arylkarbonylová skupina, což je například 4-nitrobenoyl a 2-nitrobenzoyl, nižší alkoxykarbonylovaná

9 9 Μ 99 9· 9

909 9 9 99 9 * 999

999 99#9 99 9

999 999999 9 9

999 99 9 999

999 99 99 99 99 99 ,aryl karbonylovaná skupina, což je například 2-(methoxykarbonyl)benzoyl a arylovaná arylkarbonylová skupina, což je například 4-fenylbenzoyl.

„Nižší alkoxykarbonylová skupina, což je například methoxykarbonyl, ethoxykarbonyl, t-butoxykarbonyl a isobutoxykarbonyl.

„Nižší alkoxykarbonylová skupina substituovaná halogenem nebo silylová skupina s třeminižšími alkyly zahrnuje například 2,2,2-trichlorethoxykarbonyl a 2-trimethylsilylethoxykarbonyl.

„Alkenyloxykarbonylová skupina zahrnuje například vinyloxykarbonyl a alyloxykarbonyl.

Termín „aralkyloxykarbonylová skupina, kde uvedený arylový kruh se může substituovat nižší alkoxyskupinou nebo nitroskupinou zahrnuje benzyloxykarbonyl, 4-methoxybenzyloxykarbonyl, 3,4-dimethoxybenzyloxykarbonyl, 2-nitrobenzyloxykarbonyl a 4-nitrobenzoyloxykarbonyl, přičemž je výhodná „alifatická acylová skupina nebo „aromatická acylová skupina. Více se upřednostňuje benzoylová skupina.

„Aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou zahrnující 1 až 4 atomy uhlíku symbolu R³ a R⁴ nebo skupina a ve shora popsaném vzorci 1 a 2 může zahrnovat methylamino, ethylamino, propylamino, isopropylamino, butylamino, isobutylamino, s-butylamino, terc-butylamino, dimethylamino, díethylamino, dípropylamino, diisopropylamino, dibutylamino, diisobutyl-amino, di(s-butyl)amino a di(terc-butyl)amino, přičemž je výhodné použít skupinu methylamino, ethylamino, dimethylamino, diethylamino nebo diisopropylamino.

Termín „kyanoalkoxyskupina vykazující 1 až 5 atomů uhlíku symbolu R³ a R⁴ ve shora uvedeném vzorci 1 reprezentuje skupinu, ve které shora popsaná „alkoxyskupina vykazující 1 až 4 atomy uhlíku se substituovala kyanoskupinou. Taková skupina může zahrnovat kyanomethoxy, 2-kyanoethoxy, 3-kyanopropoxy, 412

4 4 · · · · 4

4 4 4 4 4 4 · • · 4 · 4 4 444 * · • 4 4 4 4 4 4

4·· 44 44 44

-kyanobutoxy, 3-kyano-2-methylpropoxy nebo 1-kyanomethyl-l, 1-dimethylmethoxy. Výhodná je 2-kyanoethoxyskupina.

Termín „alkylová skupina zahrnující 1 až 4 atomy uhlíku skupiny a ve shora uvedeném vzorci 1 nebo 2 může zahrnovat methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, s-butyl a terc-butyl. Upřednostňuje se methylová a ethylová skupina.

Termín „atom halogenu skupiny a ve shora uvedeném vzorci nebo 2 může zahrnovat atom fluóru, chlóru a brómu nebo jódu. Výhodný je atom jódu nebo chlóru.

Preferované skupiny „purin-9-yl a „substituovaná skupina purin-9-yl symbolu B ve shora v textu uvedeném vzorci 1 nebo může zahrnovat jako celek 6-aminopurin-9-yl (to je adeninyl), aminoskupinu chráněnou skupinou 6-aminopurin-9-yl, 2,6-diaminoputin-9-yl, 2-amino-6-chlorpurin-9-yl, aminoskupinu chráněnou skupinou 2-amino-6-chlorpurin-9-yl, aminoskupinu chráněnou skupinou 2-amino-6-fluorpurin-9-yl, 2--amino-6-brompurin-9-yl, aminoskupinu chráněnou skupinou 2-amino-6-brompurin-9-yl, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl chráněný aminoskupinou a hydroxylovou skupinou, 6-amino-2-methoxypurin-9-yl, 6-amino-2-chlorpurin-9-yl, 6-amino-2-fluorpurin-9-yl, 2,6-dimethoxypurin-9-yl, 2,6-dichlorpurin-9-yl nebo 6-merkaptopurin. Výhodnější je 6-benzylaminopurin-9-yl, adeninyl, 2-isobutyrylamino-6-hydroxypurin-9-yl nebo guaninylová skupina.

Výhodné skupiny „skupiny 2-oxopyrimidin-l-yl a „substituovaná skupina 2-oxopyrimidin-l-yl symbolu B ve shora v textu uvedením vzorci 1 a 2 mohou zahrnovat jako celek 2-oxo-4-aminopyrimidin-l-yl (to je cytosinyl), aminoskupinu chráněnou skupinou 2-oxo-4-aminopyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-amino-5-fluorpyrimidin-l-yl, aminoskupinu chráněnou skupinou 2-oxo-4-amino-5-fluorpyrimidin-l-yl, 4-amino-2-oxo-5-chlorpyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-methoxypyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-merkaptopyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-hydroxypyremidin-l-yl (to je uracinyl), 2-oxo-4-hydroxy-5-methylpyrimidin-l-yl (to je thyminyl) nebo 4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-l-yl (to je 5-methylcytosinyl). Výhodnější • *· ·· ·* ·· 9 · · · · · « 9 · f ♦ · · • · · · ♦ ······ · · • · · · · · · · · ··» ·· ·· ·· ·» ♦·· je skupina 2-oxo-4-benzoylaminopyrimidin-l-yl, cytosinyl, thyminyl, uracinyl, 2-oxo-4-benzoylamino-5-methyl-pyrimidin-l-yl nebo 5-methylcytosinylová skupina.

Termín „nukleosidový analog znamená nepřirozený typ nukleosidu, ve kterém purinová nebo pyrimidinová skupina je zachycena na cukru.

Termín „oligonukleotidový analog zahrnuje nepřirozený typ derivátu „oligonukleotidu, který zahrnuje 2 až 50 „nukleosidů a mohou být stejné nebo odlišné a váží se pomocí diesterové vazby kyseliny fosforečné a takové analogy mohou přednostně zahrnovat cukerné deriváty, ve kterých se upravuje cukerná složka. Dále zahrnuje deriváty thiotátu, ve kterých část vázaná diesterovou vazbou kyseliny fosforečné je thioátována. Dále zahrnuje esterové produkty, kde je esterifikována terminální část kyseliny fosforečné a amidové produkty, kde aminoskupina na purinové bázi je amidována. Výhodné jsou cukerné deriváty, ve kterých se cukerná složka upravuje a deriváty thioátu, kde část diesteru kyseliny fosforečné je thioátována.

Termín „jejich sůl znamená sole sloučeniny obecného vzorce 1 podle vynálezu, poněvadž se mohou převést na sole a takové sole mohou s výhodou zahrnovat anorganické sole například sole kovů, jako jsou sole alkalických kovů, například sodné sole, draselné sole a litné sole, sole kovů alkalických zemin, například vápenaté sole a sole hořečnaté, sole hlinité, sole železité, sole zinku, mědi, niklu a kobaltu. Dále může zahrnovat sole aminů, jako jsou anorganické sole, například sole amonné, organické sole, například sole t-oktylaminu, sole dibenzylaminu, sole morfolinu, sole glukozaminu, sole fenylglycinalkylesteru, sole ethylendiaminu, sole N-methylglukaminu, sole guanidinu, sole diethylaminu, sole triethylaminu, sole dicyklohexylaminu, N,N'-dibenzylethylendiaminu, sole chlorprokainu, sole prokainu, sole diethanolaminu, sole N-benzylfenethylaminu, sole piperazinu, tetramethylamonné sole a sole tris(hydroxymethyl)aminomethanu. Dále zahrnuje sole anorganic14 ·· · · ·· • · · · · · · · · · ft · · · · · · · · • · · · ······ · · • · ·· · · · »

9· ·· ·· · * · *' „kých kyselin, jako jsou sole halogenovodíkových kyselin, například sole kyseliny fluorovodíkové, sole kyseliny chlorovodíkové, sole kyseliny bromovodíkové a sole kyseliny jodovodíkové, sole kyseliny dusičné, sole kyseliny chloristé, sole kyseliny sírové a sole kyseliny fosforečné. Dále zahrnuje sole organických kyselin, jako jsou sole kyseliny nižší alkensulfonové, například sole kyseliny methansulonové, sole kyseliny trifluormethansulfonové a sole kyseliny ethansulfonové, sole kyseliny arylsulfonové, například sole kyseliny benzensulfonové a sole kyseliny p-toluensulfonové, sole kyseliny octové, sole kyseliny máselné, sole kyseliny mravenčí, sole kyseliny jantarové, sole kyseliny citrónové, sole kyseliny vinné, sole kyseliny šťavelové a sole kyseliny máselné a sole aminokyselin, jako jsou například sole glycinu, sole lyzinu, sole argininu, sole ornitinu a sole kyseliny glutamové a sole kyseliny asparagové.

Poněvadž upravené oligonukleotidy nebo poloynukleotidové analogy podle vynálezu se mohou převést na sůl, termín „jejich farmaceuticky přijatelné sole může s výhodou zahrnovat anorganické sole, jako jsou například sole kovů, což jsou například sole alkalických kovů, například sodné sole, draselné sole a litné sole, sole kovů alkalických zemin, například vápenaté sole a sole hořečnaté, sole hlinité, sole železité, sole zinku, mědi, niklu a kobaltu. Dále může zahrnovat sole aminů, jako jsou anorganické sole, například sole amonné, organické sole, například sole t-oktylaminu, sole dibenzylaminu, sole morfolinu, sole glukozaminu, sole fenylglycinalkylesteru, sole ethylendiaminu, sole N-methylglukaminu, sole guanidinu, sole diethylaminu, sole triethylaminu, sole dicyklohexylaminu, N,N'-dibenzyl-ethylendiaminu, sole chlorprokainu, sole prokainu, sole diethanolaminu, sole N-benzylfenethylaminu, sole piperazinu, tetramethylamonné sole a sole tris(hydroxymethyl)aminomethanu. Dále zahrnuje sole anorganických kyselin, jako jsou sole halogenovodíkových kyselin, například sole ky»9 ^J-'-' »>· ······ ^v ··· 99 99 »· ·· ·♦' .seliny fluorovodíkové, sole kyseliny chlorovodíkové, sole kyseliny bromovodíkové a sole kyseliny jodovodíkové, sole kyseliny dusičné, sole kyseliny chloristé, sole kyseliny sírové a sole kyseliny fosforečné. Dále zahrnuje sole organických kyselin, jako jsou sole kyseliny nižší alkensulfonové, například sole kyseliny methansulonové, sole kyseliny trifluormethansulfonové a sole kyseliny ethansulfonové, sole kyseliny arylsulfonové, například sole kyseliny benzensulfonové a sole kyseliny p-toluensulfonové, sole kyseliny octové, sole kyseliny máselné, sole kyseliny mravenčí, sole kyseliny jantarové, sole kyseliny citrónové, sole kyseliny vinné, sole kyseliny šťavelové a sole kyseliny máselné a sole aminokyselin, jako jsou například sole glycinu, sole lyzinu, sole argininu, sole ornitinu a sole kyseliny glutamové a sole kyseliny asparagové.

Ze sloučenin podle obecného vzorce 1 a jejich solí podle vynálezu výhodné sloučeniny mohou zahrnovat (1) sloučeniny, ve kterých symbol R¹ představuje atom vodíku, alifatickou acylovou skupinu, aromatickou acylovou skupinu, methylovou skupinu substituovanou jednou až třemi arylovými skupinami, methylovou skupinu substituovanou jednou až třemi arylovými skupinami, přičemž arylový kruh je substituovaný nižším alkylem, nižší alkoxyskupinu, halogenem nebo kyanoskupinou nebo silylovou skupinu, a její sole, (2) sloučeniny, kde symbol R¹ představuje atom vodíku, acetylovou skupinu, benzoylovou skupinu, benzylovou skupinu, p-methoxybenzylovou skupinu, dimethoxytritylovou skupinu, monomethoxytritylovou skupinu nebo terc-butyldifenylsilylovou skupinu, a její sole, (3) sloučeniny, ve kterých symbol R² představuje atom vodíku, alifatickou acylovou skupinu, aromatickou acylovou skupinu, methylovou skupinu substituovanou jednou až třemi arylovými skupinami, methylovou skupinu substituovanou jednou až třemi arylovými skupinami, přičemž arylový kruh je substituovaný nižším alkylem, nižší alkoxyskupinou, halogenem ♦· 99 ·· • 9 9 9 9 · a ♦ • 9 9 9 * 9 9

9 9 9 9*9 99 9

9 9 9 9 9

99 9*9 • 99 nebo kyanoskupinou nebo silylovou skupinou, skupinou fos foramiditu, fosfonylovou skupinou, skupinou kyseliny fos forečné nebo chráněnou skupinou kyseliny fosforečné, a je jí sole, (4) sloučeniny, kde symbol R² představuje atom vodíku, acetylovou skupinu, benzoylovou skupinu, benzylovou skupinu, p-methoxybenzylovou skupinu, terc-butyldifenylsilylovou skupinu, -P (OCH₂H₄CN) (NCH (CH₃) ₂) , -P (OCH₃) (NCH (CH₃) 2) , fosfonylovou skupinu nebo 2-chlorfenyl nebo skupinu kyseliny 4-chlorfenylfosforečné a jejich sole, (5) sloučeniny, kde symbol A představuje methylenovou skupinu a jejich sole, (6) sloučeniny, kde symbol B představuje 6-aminopurin-9-yl (to je adeninyl), aminoskupinu chráněnou skupinou 6-aminopurin-9-yl, 2,6-diaminopurin-9-yl, 2-amino-6-chlorpurin-9-yl, aminoskupina chráněná skupinou 2-amino-6-chlorpurin-9-yl, 2-amino-6-fluorpurin-9-yl, aminoskupina chráněná skupinou 2-amino-6-fluorpurin-9-yl, 2-amino-6-brompurin-9-yl, aminoskupina chráněná skupinou 2-amino-6-brompurin-9-yl, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl (to je guaninyl), aminoskupina chráněná skupinou 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl, hydroxylová skupina chráněná skupinou 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl, 6-amino-6-chlorpurin-9-yl, 2-amino-6-fluorpurin-9-yl, 2,6-dimethoxypurin-9-yl, 2,6-dichlorpurin-9-yl, 6-merkaptopurin-9-yl, 2-oxo-4-amino-pyrimidin-1-yl (to je cytosinyl), aminoskupina chráněná skupinou 2-oxo-4-aminopyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-amino-5-fluorpyrimidin-l-yl, aminoskupina chráněná skupinou 2-oxo-4-amino-5fluorpyrimidin-l-yl, 4-amino-2-oxo-5-chlorpyrímidin-l-yl, 2-oxo-4-methoxypyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-merkaptopyrimidin-1-yl, 2-oxo-4-hydroxypyrimidin-l--yl (to je uracinyl), 2-oxo-4-hydroxy-5-methylpyrimidin-l—yl (to je thyminyl), 4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-l-yl (to je 5-methylcyto« · • * φ» « · · · · · »··· ··· · · « t 9 9 9

-1-7 «···«· ··♦ · · · 9

X / 999 99 9 999

999 99 99 99 9 9. ··!

sinyl) nebo aminoskupina chráněná skupinou 4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-l-yl, a jejich sole a (7) sloučeniny, kde symbol B představuje 6-benzoylaminopurin-9-yl, adeninyl, 2-isobutyrylamino-6~hydroxypurin-9-yl, guaninyl, 2-oxo-4-benzoylaminopyrimidin-l-yl, cytosinyl, 2-oxo-5-methyl-4-benzoylaminopyrimidin-l-yl, 5-methylcytosinyl, uracinyl nebo thyminyl, a jejich sole.

Shora uvedené sloučeniny v odstavcích (1) a (2), (3) a (4) nebo (6) a (7) označují výhodné sloučeniny, jejichž počet se stává ve vzorci 1 vyšší. Sloučenina získaná výběrem symbolu R¹ ze skupin popsaných v odstavcích (1) a (2), výběrem symbolu R² ze skupin popsaných v odstavcích (3) a (4), výběrem symbolu A ze skupin popsaných v odstavci (5) a výběrem symbolu B ze skupin popsaných v odstavci (6) a (7) nebo jejich kombinací, a její sole je výhodná. Zvláště výhodné jsou sloučeniny a jejich sole vybrané z následujících skupin.

(Skupina sloučenin)

2'-0,4'-C-ethylenguanosin 2'-0,4'-C-ethylenadenosin ', 5 '-di-0-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin

3', 5'-di-O-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin 5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin 5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin 2'-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin

2'-0,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin

5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit

5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit 2'-0,4'-C-ethylenuridin

2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin

2'-0, 4'-C-ethylencytidin

2'-0,4'-C-ethylen-5-methylcytidin

3',5'-di-O-benzyl-2'-0,4'-C-ethylenuridin ·♦ μ ·♦ ·» · · · · · ♦ · · • · · » * « » * « · · · ♦ ··* · · · « · e » ·♦·· • ·* *· ·« ·* ·* .5 ' -O-dimethoxytrityl-2 '-0,4' -C-ethylenuridin 3',5'-di-0-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin 5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin 3',5'-di-0-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin 5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin 3',5'-di-0-benzýl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methyluridin 5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methylcytidin

2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin

2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methylcytidin

5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylenuridin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit

5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit

5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit a 5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit

Výhodné sloučeniny zahrnující oligonukleotidové analogy obsahující jednu nebo dvě nebo více struktur obecného vzorce 2 a jejich farmaceuticky přijatelné sole podle vynálezu mohou zahrnovat (8) oligonukleotidové analogy, kde symbol A představuje methylenovou skupinu, a jejich farmaceuticky přijatelné sole, (9) oligonukleotidové analogy, kde symbol B představuje 6-aminopurin-9-yl (to je adeninyl), aminoskupinu chráněnou skupinou 6-ami-nopurin-9-yl, 2,6-diaminopurin-9-yl, 2-amino-6-chlor-purin-9-yl, aminoskupina chráněná skupinou 2ami-no-6-chlorpurin-9-yl, 2-amino-6-fluorpurin-9-yl, aminoskupina chráněná skupinou 2-amino-6-fluorpurin-9-yl, 2-amino-6-brompurin-9-yl, aminoskupina chráněná skupinou 2amino-6-brompurin-9-yl, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl (to je guaninyl), aminoskupina chráněná skupinou 2-amino-6« »« »· *· »· ·· « » »«»* «·· • « ♦ »»♦· »»

-1Γ, ··»»»··«»··· i y «···«··· · ·«··♦<··«···· hydroxypurin-9-yl, hydroxylová skupina chráněná skupinou 2-amino~6-hydroxypurin-9-yl, 6-amino-6-chlorpurin-9-yl, 2 -amino-6-fluorpurin-9-yl, 2,6-dimethoxypurin-9-yl, 2,6-dichlorpurin-9-yl, 6-merkaptopurin-9-yl, 2-oxo-4-amino-pyrimidin-l-yl (to je cytosinyl), aminoskupina chráněná skupinou 2-oxo-4-aminopyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-amino-5-fluorpyrimidin-l-yl, aminoskupina chráněná skupinou 2-oxo-4-amino-5-fluorpyrimidin-l-yl, 4-amino-2-oxo-5-chlorpyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-methoxypyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-merkaptopyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-hydroxypyrimidin-l—yl (to je uracinyl), 2-oxo-4-hydroxy-5-methylpyrimidin-l-yl (to je thyminyl), 4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-l-yl (to je 5-methylcytosinyl) nebo aminoskupina chráněná skupinou 4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-l-yl, a jejich sole a (10) oligonukleotidové analogy, kde symbol B představuje 6-benzoylaminopurin-9-yl, adeninyl, 2-isobutyrylamino-6-hydroxypurin-9-yl, guaninyl, 2-oxo-4-benzoylaminopyrimidin-1-yl, cytosinyl, 2-oxo-5-methyl-4-benzoylaminopyrimidin-1-yl, 5-methylcytosinyl, uracinyl nebo thyminyl, a jejich farmaceuticky přijatelné sole.

Odstavce (9) a (10) shora v textu označují nejvýhodnější oligonukleotidové analogy, jejichž počet se zvyšuje, a preferují se oligonukleotidové analogy získané výběrem symbolu A z odstavce (8) a výběrem symbolu B z odstavce (9) a (10) nebo jejich kombinace a jejich farmaceuticky přijatelné sole.

Specifické sloučeniny zahrnuté ve sloučenině shora uvedeného obecného vzorce 1 podle vynálezu jsou uvedeny v tabulce č. 1 a 2. Avšak sloučeniny podle vynálezu se neomezují na zde uvedené sloučeniny.

V tabulce č. 1 a 2 zkratka Př.č. slouč. reprezentuje příklad sloučeniny číslo, Me představuje methylovou skupinu, Bn představuje benzylovou skupinu, Bz představuje benzoylovou skupinu, PMB reprezentuje p-methoxybenzylovou skupinu, Tr reprezentuje trifenylmethylovou skupinu, MMTr reprezentuje ·· 4»· ·· • 9 9 · 4 9 999 < · 9 <9 4 · • 999 9 999 99 9

9 9 9 9 9 9 <99 9« 49 44 4

4-methoxytrifenylmethylovou (monomethoxytritylovou) skupinu, DMTr reprezentuje 4,4'-dimethoxytrifenylmethylovou (dimethoxytritylovo) skupinu, zkratka .TMTr reprezentuje 4,4',4''-trimethoxytrifenylmethylovou (trimethoxytritylovou) skupinu, TMS reprezentuje trimethylsilylovou skupinu, TBDMS reprezentuje terc-butyldimethylsilylovou skupinu, TBDPS reprezentuje tercbutyldifenylsilylovou skupinu a TIPS reprezentuje triisopropylsilylovou skupinu.

(1·)

	• v	•9 «·		99
• ·	•	• · · 9	•		9	9
• ·	• ·	• i ··· ·	•		•
• ·	•	• · 9	•		•
• 9	·»	99 99		*9		9

Tabulka č. 1:

Př. slouč. č.	A	R1	R2	R3a	R4a
1-1	ch2	H	H	H	H
1-2	ch2	H	H	H	nh2
1-3	ch2	H	H	H	OH
1-4	ch2	H	H	OH	H
1-5	ch2	H	H	OH	nh2
1-6	ch2	H	H	OH	OH
1-7	ch2	H	H	nh2	H
1-8	ch2	H	H	nh2	nh2
1-9	ch2	H	H	nh2	Cl
1-10	ch2	H	H	nh2	F
1-11	ch2	H	H	nh2	Br
1-12	ch2	H	H	nh2	OH
1-13	ch2	H	H	OMe	H
1-14	ch2	H	H	OMe	OMe
1-15	ch2	H	H	OMe	nh2
1-16	ch2	H	H	Cl	H
1-17	ch2	H	H	Br	H
1-18	ch2	H	H	F	H
1-19	ch2	H	H	Cl	Cl
1-20	ch2	H	H	SH	H

• · • ·

1-21	ch2	Bn	H	NHBz	H
1-22	ch2	Bn	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-23	ch2	Bn	Bn	NHBz	H
1-24	ch2	Bn	Bn	OH	NHCOCH(CH3)2
1-25	ch2	PMB	H	NHBz	H
1-26	ch2	PMB	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-27	ch2	PMB	PMB	NHBz	H
1-28	ch2	PMB	PMB	OH	NHCOCH(CH3)2
1-29	ch2	Tr	H	NHBz	H
1-30	ch2	MMTr	H	NHBz	H
1-31	ch2	DMTr	H	NHBz	H
1-32	ch2	TMTr	H	NHBz	H
1-33	ch2	Tr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-34	ch2	MMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-35	ch2	DMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-36	ch2	TMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-37	ch2	TMS	H	NHBz	H
1-38	ch2	TBDMS	H	NHBz	H
1-39	ch2	TBDPS	H	NHBz	H
1-40	ch2	TIPS	H	NHBz	H
1-41	ch2	TMS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-42	ch2	TBDMS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-43	ch2	TBDPS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-44	ch2	TIPS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-45	(CH2)2	H	H	H	H
1-46	(CH2)2	H	H	H	nh2
1-47	(CH2)2	H	H	H	OH
1-48	(CH2)2	H	H	OH	H
1-49	(CH2)2	H	H	OH	nh2
1-50	(CH2)2	H	H	OH	OH
1-51	(CH2)2	H	H	nh2	H
1-52	(ch2)2	H	H	nh2	nh2

1-53	(CH2)2	H	H	nh2	Cl
1-54	(CH2)2	H	H	nh2	F
1-55	(CH2)2	H	H	nh2	Br
1-56	(CH2)2	H	H	nh2	OH
1-57	(CH2)2	H	H	OMe	H
1-58	(CH2)2	H	H	OMe	OMe
1-59	(CH2)2	H	H	OMe	nh2
1-60	(CH2)2	H	H	Cl	H
1-61	(CH2)2	H	H	Br	H
1-62	(CH2)2	H	H	F	H
1-63	(CH2)2	H	H	Cl	Cl
1-64	(CH2)2	H	H	SH	H
1-65	(CH2)2	Bn	H	NHBz	H
1-66	(CH2)2	Bn	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-67	(CH2)2	Bn	Bn	NHBz	H
1-68	(CH2)2	Bn	Bn	OH	NHCOCH(CH3)2
1-69	(CH2)2	PMB	H	NHBz	H
1-70	(CH2)2	PMB	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-71	(CH2)2	PMB	PMB	NHBz	H
1-72	(CH2)2	PMB	PMB	OH	NHCOCH(CH3)2
1-73	(CH2)2	Tr	H	NHBz	H
1-74	(CH2)2	MMTr	H	NHBz	H
1-75	(CH2)2	DMTr	H	NHBz	H
1-76	(CH2)2	TMTr	H	NHBz	H
1-77	(CH2)2	Tr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-78	(CH2)2	MMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-79	(CH2)2	DMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-80	(CH2)2	TMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-81	(CH2)2	TMS	H	NHBz	H
1-82	(CH2)2	TBDMS	H	NHBz	H
1-83	(CH2)2	TBDPS	H	NHBz	H
1-84	(CH2)2	TIPS	H	NHBz	H

• · · 99 99 99 9 • 99 9 · ·· · · *99

999 9 9 9 9 99 9

999 999999 9 ·

999 99 9 ··· •99 99 99 99 99 999

1-85	(CH2)2	TMS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-86	(CH2)2	TBDMS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-87	(CH2)2	TBDPS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-88	(CH2)2	TIPS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-89	(CH2)3	H	H	H	H
1-90	(CH2)3	H	H	H	NH2
1-91	(CH2)3	H	H	H	OH
1-92	(CH2)3	H	H	OH	H
1-93	(CH2)3	H	H	OH	nh2
1-94	(CH2)3	H	H	OH	OH
1-95	(CH2)3	H	H	NH2	Η
1-96	(CH2)3	H	H	nh2	nh2
1-97	(CH2)3	H	H	nh2	Cl
1-98	(CH2)3	H	H	nh2	F
1-99	(CH2)3	H	H	nh2	Br
1-100	(CH2)3	H	H	nh2	OH
1-101	(CH2)3	H	H	OMe	H
1-102	(CH2)3	H	H	OMe	OMe
1-103	(CH2)3	H	H	OMe	nh2
1-104	(CH2)3	H	H	Cl	H
1-105	(CH2)3	H	H	Br	H
1-106	(CH2)3	H	H	F	H
1-107	(CH2)3	H	H	Cl	Cl
1-108	(CH2)3	H	H	SH	H
1-109	(CH2)3	Bn	H	NHBz	H
1-110	(CH2)3	Bn	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-111	(CH2)3	3n	Bn	NHBz	H
1-112	(CH2)3	3n	Bn	OH	NHCOCH(CH3)2
1-113	(CH2)3	PMB	H	NHBz	H
1-114	(CH2)3	PMB	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-115	(CH2)3	PMB	PMB	NHBz	H
1-116	(CH2)3	PMB	PMB	OH	NHCOCH(CH3)2

1-117	(CH2)3	Tr	H	NHBz	H
1-118	(CH2)3	MMTr	H	NHBz	H
1-119	(CH2)3	DMTr	H	NHBz	H
1-120	(CH2)3	TMTr	H	NHBz	H
1-121	(CH2)3	Tr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-122	(CH2)3	MMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-123	(CH2)3	DMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-124	(CH2)3	TMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-125	(CH2)3	TMS	H	NHBz	H
1-126	(CH2)3	TBDMS	H	NHBz	H
1-127	(CH2)3	TBDPS	H	NHBz	H
1-128	(CH2)3	TIPS	H	NHBz	H
1-129	(CH2)3	TMS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-130	(CH2)3	TBDMS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-131	(CH2)3	TBDPS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-132	(CH2)3	TIPS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-133	(CH2)4	H	H	H	H
1-134	(CH2)4	H	H	H	NH2
1-135	(CH2)4	H	H	H	OH
1-136	(CH2)4	H	H	OH	H
1-137	(CH2)4	H	H	OH	nh2
1-138	(CH2)4	H	H	OH	OH
1-139	(CH2)4	H	H	NH2	H
1-140	(CH2)4	H	H	nh2	nh2
1-141	(CH2)4	H	H	nh2	Cl
1-142	(CH2)4	H	H	nh2	F
1-143	(CH2)4	H	H	nh2	Br
1-144	(CH2)4	H	H	nh2	OH
1-145	(CH2)4	H	H	OMe	H
1-146	(CH2)4	H	H	OMe	OMe
1-147	(CH2)4	H	H	OMe	nh2
1-148	(CH2)4	H	H	Cl	H

1-149	(CH2)4	H	H	Br	H
1-150	(CH2)4	H	H	F	H
1-151	(CH2)4	H	H	Cl	Cl
1-152	(CH2)4	H	H	SH	H
1-153	(CH2)4	Bn	H	NHBz	H
1-154	(CH2)4	Bn	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-155	(CH2)4	Bn	Bn	NHBz	H
1-156	(CH2)4	Bn	Bn	OH	NHCOCH(CH3)2
1-157	(CH2)4	PMB	H	NHBz	H
1-158	(CH2)4	PMB	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-159	(CH2)4	PMB	PMB	NHBz	H
1-160	(CH2)4	PMB	PMB	OH	NHCOCH(CH3)2
1-161	(CH2)4	Tr	H	NHBz	H
1-162	(CH2)4	MMTr	H	NHBz	H
1-163	(CH2)4	DMTr	H	NHBz	H
1-164	(CH2)4	TMTr	H	NHBz	H
1-165	(CH2)4	Tr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-166	(CH2)4	MMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-167	(CH2)4	DMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-168	(CH2)4	TMTr	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-169	(CH2)4	TMS	H	NHBz	H
1-170	(CH2)4	TBDMS	H	NHBz	H
1-171	(CH2)4	TBDPS	H	NHBz	H
1-172	(CH2)4	TIPS	H	NHBz	H
1-173	(CH2)4	TMS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-174	(CH2)4	TBDMS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-175	(CH2)4	TBDPS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-176	(CH2)4	TIPS	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-177	ch2	H	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-178	ch2	H	H	NHBz	H
1-179	(CH2)2	H	H	OH	NHCOCH(CH3)2
1-180	(CH2)2	H	H	NHBz	H

1-181	(CH2)3	H	H	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-182	(CH2)3	H	H	ΝΗΒζ	Η
1-183	(CH2)4	H	H	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-184	(CH2)4	H	H	ΝΗΒζ	Η
1-185	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-186	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	ΝΗΒζ	Η
1-187	(CH2)2	DMTr	PÍNfiPrhXOCNELfCN)	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-188	(CH2)2	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	ΝΗΒζ	Η
1-189	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-190	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	ΝΗΒζ	Η
1-191	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2XOC2H4CN)	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-192	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	ΝΗΒζ	Η
1-193	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-194	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	ΝΗΒζ	Η
1-195	(CH2)2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-196	(CH2)2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	ΝΗΒζ	Η
1-197	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-198	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	ΝΗΒζ	Η
1-199	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-200	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	ΝΗΒζ	Η
1-201	ch2	DMTr	P(O)(OH)H	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-202	ch2	DMTr	P(O)(OH)H	ΝΗΒζ	Η
1-203	(CH2)2	DMTr	P(OXOH)H	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-204	(CH2)2	DMTr	P(O)(OH)H	ΝΗΒζ	Η
1-205	(CH2)3	DMTr	Ρ(Ο)(ΟΗ)Η	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-206	(CH2)3	DMTr	Ρ(ΟΧΟΗ)Η	ΝΗΒζ	Η
1-207	(CH2)4	DMTr	Ρ(ΟΧΟΗ)Η	ΟΗ	NHCOCH(CH3)2
1-208	(CH2)4	DMTr	Ρ(Ο)(ΟΗ)Η	ΝΗΒζ	Η

Π)

Tabulka č. 2

Př. slouč. č.	A	R1	R2	R5	R6
2-1	ch2	H	H	OH	H
2-2	ch2	H	H	OH	ch3
2-3	ch2	H	H	nh2	H
2-4	ch2	H	H	nh2	ch3
2-5	ch2	H	H	nh2	F
2-6	ch2	H	H	Cl	H
2-7	ch2	H	H	OMe	H
2-8	ch2	H	H	SH	H
2-9	ch2	Bn	H	OH	H
2-10	ch2	Bn	Bn	OH	H
2-11	ch2	PMB	H	OH	H
2-12	ch2	PMB	PMB	OH	H
2-13	ch2	Tr	H	OH	H
2-14	ch2	MMTr	H	OH	H
2-15	ch2	DMTr	H	OH	H
2-16	ch2	TMTr	H	OH	H
2-17	ch2	TMS	H	OH	H
2-18	ch2	TBDMS	H	OH	H
2-19	ch2	TBDPS	H	OH	H

* 4»

• * · · • · · · • · · « « · • · · ·· · *

2-20	ch2	TIPS	H	OH	H
2-21	ch2	Bn	H	OH	ch3
2-22	ch2	Bn	Bn	OH	ch3
2-23	ch2	PMB	H	OH	ch3
2-24	ch2	PMB	PMB	OH	ch3
2-25	ch2	Tr	H	OH	ch3
2-26	ch2	MMTr	H	OH	ch3
2-27	ch2	DMTr	H	OH	ch3
2-28	ch2	TMTr	H	OH	ch3
2-29	ch2	TMS	H	OH	ch3
2-30	ch2	TBDMS	H	OH	ch3
2-31	ch2	TBDPS	H	OH	ch3
2-32	ch2	TIPS	H	OH	ch3
2-33	ch2	Bn	H	NHBz	H
2-34	ch2	Bn	Bn	NHBz	H
2-35	ch2	PMB	H	NHBz	H
2-36	ch2	PMB	PMB	NHBz	H
2-37	ch2	Tr	H	NHBz	H
2-38	ch2	MMTr	H	NHBz	H
2-39	ch2	DMTr	H	NHBz	H
2-40	ch2	TMTr	H	NHBz	H
2-41	ch2	TMS	H	NHBz	H
2-42	ch2	TBDMS	H	NHBz	H
2-43	ch2	TBDPS	H	NHBz	H
2-44	ch2	TIPS	H	NHBz	H
2-45	ch2	3n	H	NHBz	CH3
2-46	ch2	Bn	Bn	NHBz	ch3
2-47	ch2	PMB	H	NHBz	ch3
2-48	ch2	PMB	PMB	NHBz	ch3
2-49	ch2	Tr	H	NHBz	ch3
2-50	ch2	MMTr	H	NHBz	ch3
2-51	ch2	DMTr	H	NHBz	ch3

* ♦ · * * · · 9 •*·» 9 · · · «9« • · · 9 9*9 « « • 9 9 » · * ··« · « » • · · 9 9 · «3

9·*·· »9 * * 9 9 3

2-52	ch2	TMTr	H	NHBz	CH3
2-53	ch2	TMS	H	NHBz	ch3
2-54	ch2	TBDMS	H	NHBz	ch3
2-55	ch2	TBDPS	H	NHBz	ch3
2-56	ch2	TIPS	H	NHBz	ch3
2-57	(CH2)2	H	H	OH	H
2-58	(CH2)2	H	H	OH	čh3
2-59	(CH2)2	H	H	NH2	Η
2-60	(CH2)2	H	H	nh2	ch3
2-61	(CH2)2	H	H	nh2	F
2-62	(CH2)2	H	H	Cl	H
2-63	(CH2)2	H	H	OMe	H
2-64	(CH2)2	H	H	SH	H
2-65	(CH2)2	Bn	H	OH	H
2-66	(CH2)2	Bn	Bn	OH	H
2-67	(CH2)2	PMB	H	OH	H
2-68	(CH2)2	PMB	PMB	OH	H
2-69	(CH2)2	Tr	H	OH	H
2-70	(CH2)2	MMTr	H	OH	H
2-71	(ch2)2	DMTr	H	OH	H
2-72	(CH2)2	TMTr	H	OH	H
2-73	(CH2)2	TMS	H	OH	H
2-74	(CH2)2	TBDMS	H	OH	H
2-75	(CH2)2	TBDPS	H	OH	H
2-76	(CH2)2	TIPS	H	OH	H
2-77	(CH2)2	Bn	H	OH	CH3
2-78	(CH2)2	3n	Bn	OH	ch3
2-79	(CH2)2	PMB	H	OH	ch3
2-80	(CH2)2	PMB	PMB	OH	ch3
2-81	(CH2)2	Tr	H	OH	ch3
2-82	(CH2)2	MMTr	H	OH	ch3
2-83	(CH2)2	DMTr	H	OH	ch3

*· • · * *

2-84	(CH2)2	TMTr	H	OH	ch3
2-85	(CH2)2	TMS	H	OH	ch3
2-86	(CH2)2	TBDMS	H	OH	ch3
2-87	(CH2)2	TBDPS	H	OH	ch3
2-88	(CH2)2	TIPS	H	OH	ch3
2-89	(CH2)2	Bn	H	NHBz	H
2-90	(CH2)2	Bn	Bn	NHBz	H
2-91	(CH2)2	PMB	H	NHBz	H
2-92	(CH2)2	PMB	PMB	NHBz	H
2-93	(CH2)2	Tr	H	NHBz	H
2-94	(CH2)2	MMTr	H	NHBz	H
2-95	(CH2)2	DMTr	H	NHBz	H
2-96	(CH2)2	TMTr	H	NHBz	H
2-97	(CH2)2	TMS	H	NHBz	H
2-98	(CH2)2	TBDMS	H	NHBz	H
2-99	(CH2)2	TBDPS	H	NHBz	H
2-100	(CH2)2	TIPS	H	NHBz	H
2-101	(CH2)2	Bn	H	NHBz	ch3
2-102	(CH2)2	Bn	Bn	NHBz	ch3
2-103	(CH2)2	PMB	H	NHBz	ch3
2-104	(CH2)2	PMB	PMB	NHBz	ch3
2-105	(CH2)2	Tr	H	NHBz	ch3
2-106	(CH2)2	MMTr	H	NHBz	ch3
2-107	(CH2)2	DMTr	H	NHBz	ch3
2-108	(CH2)2	TMTr	H	NHBz	ch3
2-109	(CH2)2	TMS	H	NHBz	ch3
2-110	(CH2)2	TBDMS	H	NHBz	ch3
2-111	(CH2)2	TBDPS	H	NHBz	ch3
2-112	(CH2)2	TIPS	H	NHBz	ch3
2-113	(CH2)3	H	H	OH	H
2-114	(CH2)3	H	H	OH	ch3
2-115	(CH2)3	H	H	nh2	H

2-116	(CH2)3	H	H	nh2	CH3
2-117	(CH2)3	H	H	nh2	F
2-118	(CH2)3	H	H	Cl	H
2-119	(CH2)3	H	H	OMe	H
2-120	(CH2)3	H	H	SH	H
2-121	(CH2)3	Bn	H	OH	H
2-122	(CH2)3	Bn	Bn	OH	H
2-123	(CH2)3	PMB	H	OH	H
2-124	(CH2)3	PMB	PMB	OH	H
2-125	(CH2)3	Tr	H	OH	H
2-126	(CH2)3	MMTr	H	OH	H
2-127	(CH2)3	DMTr	H	OH	H
2-128	(CH2)3	TMTr	H	OH	H
2-129	(CH2)3	TMS	H	OH	H
2-130	(CH2)3	TBDMS	H	OH	H
2-131	(CH2)3	TBDPS	H	OH	H
2-132	(CH2)3	TIPS	H	OH	H
2-133	(CH2)3	Bn	H	OH	ch3
2-134	(CH2)3	Bn	Bn	OH	ch3
2-135	(CH2)3	PMB	H	OH	ch3
2-136	(CH2)3	PMB	PMB	OH	ch3
2-137	(CH2)j	Tr	H	OH	ch3
2-138	(CH2)3	MMTr	H	OH	ch3
2-139	(CH2)3	DMTr	H	OH	ch3
2-140	(CH2)3	TMTr	H	OH	ch3
2-141	(CH2)3	TMS	H	OH	ch3
2-142	(CH2)3	TBDMS	H	OH	ch3
2-143	(CH2)3	TBDPS	H	OH	ch3
2-144	(CH2)3	TIPS	H	OH	ch3
2-145	(CH2)3	Bn	H	NHBz	H
2-146	(CH2)3	Bn	Bn	NHBz	H
2-147	(CH2)3	PMB	H	NHBz	H

• · ·· ·

2-148	(CH2)3	PMB	PMB	NHBz	H
2-149	(CH2)3	Tr	H	NHBz	H
2-150	(CH2)3	MMTr	H	NHBz	H
2-151	(CH2)3	DMTr	H	NHBz	H
2-152	(CH2)3	TMTr	H	NHBz	H
2-153	(CH2)3	TMS	H	NHBz	H
2-154	(CH2)3	TBDMS	H	NHBz	H
2-155	(CH2)3	TBDPS	H	NHBz	H
2-156	(CH2)3	TIPS	H	NHBz	H
2-157	(CH2)3	Bn	H	NHBz	ch3
2-158	(CH2)3	Bn	Bn	NHBz	ch3
2-159	(CH2)3	PMB	H	NHBz	ch3
2-160	(CH2)3	PMB	PMB	NHBz	ch3
2-161	(CH2)3	Tr	H	NHBz	ch3
2-162	(CH2)3	MMTr	H	NHBz	ch3
2-163	(CH2)3	DMTr	H	NHBz	ch3
2-164	(CH2)3	TMTr	H	NHBz	ch3
2-165	(CH2)3	TMS	H	NHBz	ch3
2-166	(CH2)3	TBDMS	H	NHBz	ch3
2-167	(CH2)3	TBDPS	H	NHBz	ch3
2-168	(CH2)3	TIPS	H	NHBz	ch3
2-169	(CH2)4	H	H	OH	Η
2-170	(CH2)4	H	H	OH	ch3
2-171	(CH2)4	H	H	NH2	H
2-172	(CH2)4	H	H	nh2	ch3
2-173	(CH2)4	H	H	nh2	F
2-174	(CH2)4	H	H	Cl	H
2-175	(CH2)4	H	H	OMe	H
2-176	(CH2)4	H	H	SH	H
2-177	(CH2)4	Bn	H	OH	H
2-178	(CH2)4	Bn	Bn	OH	H
2-179	(CH2)4	PMB	H	OH	H

• ·

2-180	(CH2)4	PMB	PMB	OH	H
2-181	(CH2)4	Tr	H	OH	H
2-182	(CH2)4	MMTr	H	OH	H
2-183	(CH2)4	DMTr	H	OH	H
2-184	(CH2)4	TMTr	H	OH	H
2-185	(CH2)4	TMS	H	OH	H
2-186	(CH2)4	TBDMS	H	OH	H
2-187	(CH2)4	TBDPS	H	OH	H
2-188	(CH2)4	TIPS	H	OH	H
2-189	(CH2)4	Bn	H	OH	ch3
2-190	(CH2)4	Bn	Bn	OH	ch3
2-191	(CH2)4	PMB	H	OH	ch3
2-192	(CH2)4	PMB	PMB	OH	ch3
2-193	(CH2)4	Tr	H	OH	ch3
2-194	(CH2)4	MMTr	H	OH	ch3
2-195	(CH2)4	DMTr	H	OH	ch3
2-196	(CH2)4	TMTr	H	OH	ch3
2-197	(CH2)4	TMS	H	OH	ch3
2-198	(CH2)4	TBDMS	H	OH	ch3
2-199	(CH2)4	TBDPS	H	OH	ch3
2-200	(CH2)4	TIPS	H	OH	ch3
2-201	(CH2)4	Bn	H	NHBz	H
2-202	(CH2)4	Bn	Bn	NHBz	H
2-203	(CH2)4	PMB	H	NHBz	H
2-204	(CH2)4	PMB	PMB	NHBz	H
2-205	(CH2)4	Tr	H	NHBz	H
2-206	(CH2)4	MMTr	H	NHBz	H
2-207	(CH2)4	DMTr	H	NHBz	H
2-208	(CH2)4	TMTr	H	NHBz	H
2-209	(CH2)4	TMS	H	NHBz	H
2-210	(CH2)4	TBDMS	H	NHBz	H
2-211	(CH2)4	TBDPS	H	NHBz	H

' 2-212	(CH2)4	TIPS	H	NHBz	H
2-213	(CH2)4	Bn	H	NHBz	CH3
2-214	(CH2)4	Bn	Bn	NHBz	ch3
2-215	(CH2)4	PMB	H	NHBz	ch3
2-216	(CH2)4	PMB	PMB	NHBz	ch3
2-217	(CH2)4	Tr	H	NHBz	ch3
2-218	(CH2)4	MMTr	H	NHBz	ch3
2-219	(CH2)4	DMTr	H	NHBz	ch3
2-220	(CH2)4	TMTr	H	NHBz	ch3
2-221	(CH2)4	TMS	H	NHBz	ch3
2-222	(CH2)4	TBDMS	H	NHBz	ch3
2-223	(CH2)4	TBDPS	H	NHBz	ch3
2-224	(CH2)4	TIPS	H	NHBz	ch3
2-225	ch2	H	H	NHBz	H
2-226	ch2	H	H	NHBz	ch3
2-227	(CH2)2	H	H	NHBz	H
2-228	(CH2)2	H	H	NHBz	ch3
2-229	(ch2)3	H	H	NHBz	H
2-230	(CH2)3	H	H	NHBz	ch3
2-231	(CH2)4	H	H	NHBz	H
2-232	(CH2)4	H	H	NHBz	ch3
2-233	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	OH	Η
2-234	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	OH	ch3
2-235	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	NHBz	H
2-236	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	NHBz	ch3
2-237	(CH2)2	DMTr	PÍNCiPrhXOCzILCN)	OH	H
2-238	(CH2)2	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	OH	ch3
2-239	(CH2)2	DMTr	PCNCiPrhXOQJLCN)	NHBz	H
2-240	(CH2)2	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	NHBz	ch3
2-241	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	OH	H
2-242	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN) -	OH	ch3
2-243	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	NHBz	H

2-244	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	NHBz	ch3
2-245	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	OH	H
2-246	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	OH	ch3
2-247	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	NHBz	H
2-248	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2)(OC2H4CN)	NHBz	ch3
2-249	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	OH	H
2-250	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	OH	CH3
2-251	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	NHBz	H
2-252	ch2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	NHBz	ch3
2-253	(CH2)2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	OH	H
2-254	(CH2)2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	OH	ch3
2-255	(CH2)2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	NHBz	H
2-256	(CH2)2	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	NHBz	ch3
2-257	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	OH	Η
2-258	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	OH	ch3
2-259	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	NHBz	H
2-260	(CH2)3	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	NHBz	CH3
2-261	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	OH	H
2-262	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	OH	ch3
2-263	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	NHBz	H
2-264	(CH2)4	DMTr	P(N(iPr)2)(OCH3)	NHBz	CH3

« ·

V tabulce č. 1 a 2 uvedené shora v textu výhodné sloučeniny zahrnuj í (i_5)_? (μγχ (1-23), (1-24), (1-31), (1-35), (1-39), (1-43), (1-49), (1-51), (1-67), (1-68), (1-75), (1-79), (1-83), (1-87), (1-93), (1-95), (1-111), (1-112), (1-119), (1-123), (1-127), (1-131), (1-137), (1-139), (1-155), (1-156), (1-163), (1-167), (1-171), (1-175), (1-177), (1-178), (1-185), (1-186), (1-193), (1-194), (1-201), (1-202), (2-1), (2-2), (2-3), (2-4), (2-10), (2-15), (2-19), (2-22), (2-27), (2-31), (2-34), (2-39), (2-43), (2-46), (2-51), (2-55), (2-57), (2-58), (2-59), (2-60), (2-66), (2-71), (2-75), (2-78), (2-83), (2-87), (2-90), (2-95), (2-99), (2-102), (2-107), (2-111), (2-113), (2-114), (2-115), (2-116), (2-122), (2-127), (2-131), (2-134), (2-139), (2-143), (2-146), (2-151), (2-155), (2-158), (2-163), (2-167), (2-169), (2-170), (2-171), (2-172), (2-178), (2-183), (2-187), (2-190), (2-195), (2-199), (2-202), (2-207), (2-211), (2-214), (2-219), (2-223), (2-225), (2-226), (2-233), (2-234), (2-235) (2-236), výhodnější sloučeniny mohou zahrnovat 2 ' -O,4'-C-ethylenguanosin (1-5)

2'-O,4'-C-ethylenadenosin (1-7)

3',5'-di-O-benzyl-2'-O,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin (1-23)

3',5'-di-O-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin (124)

5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin (131)

5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin (1-35) '-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin (1-177)

2'-0,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin (1-178) '-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin-3'-O-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (1-185)

5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (1-186) '-0,4'-C-ethylenuridin (2-1)

2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin (2-2) ' -0,4'-C-ethylencytidin (2-3)

2'-O,4'-C-ethylen-5-methylcytidin (2-4) ',5'-di-O-benzyl-2'-0,4'-C-ethylenuridin (2-10) • ·

5-O-dimethoxytrityl-2-0,4-C-ethylenuridin (2-15) ',5'-di-0-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin (2-22)

5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin (2-27)

3',5'-di-0-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin (2-34)

5'-0-dimethoxytrityl-2'-O,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin (239)

3',5'-dí-0-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methyluridin (2-46)

5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methylcytidin (2-51)

2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin (2-225)

2'-O,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methylcytidin (2-226)

5'-O-dimethoxytrityl-2'-O,4'-C-ethylenuridin-3'-O-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (2-233)

5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (2-234)

5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (2-235) a 5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin-3'-O-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (2-36).

Postup A

(6)

Při postupu A, symbol X reprezentuje chránící skupinu, symbol Y reprezentuje chránící skupinu, symbol A reprezentuje to samé, jak se uvádí shora v textu, zatímco symbol B¹ reprezentuje skupinu purin-9-yl, substituovanou skupinu purin-9-yl nebo substituovanou skupinu 2-oxopyrimidin-l-yl, uvedené substituenty se vybraly ze shora uvedených substituentů a, ale s výjimkou nechráněné aminoskupiny „aminoskupiny, která se může chránit, zatímco symbol B² reprezentuje skupinu purin-9-yl, substituovanou skupinu purin-9-yl nebo substituovanou skupinu 2-oxopyrimidin-l-yl, uvedené substituenty se vybraly ze shora uvedených substituentů a, ale s výjimkou chráněných aminoskupin „aminoskupiny, která se může chránit. Symbol R⁷ reprezentuje skupinu, která tvoří odstupující skupinu a symbol R⁸ reprezentuje alifatickou acylovou skupinu, která obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku.

Chránící skupina vyjádřená symbolem X je stejná skupina jako je „hydroxylová chránící skupina ve shora v textu uvedeném symbolu R¹.

Chránící skupina Y je stejná skupina jako „hydroxylová chránící skupina ve shora uvedeném symbolu R².

„Skupina, která tvoří odstupující skupinu, symbolu R⁷ může zahrnovat nižší alkylsulfonylovou skupinu, jako je methansulfonyl a ethansulfonyl, nižší alkylsulfonylovou skupinu substituovanou halogenem, jako je trifluormethansulfonyl a arylsulfonylová skupina, jako je p-toluensulfonyl, přičemž je výhodná methansulfonylová skupina nebo p-toluensulfonylová skupina.

„Alifatická acylová skupina zahrnující 2 až 4 atomy uhlíku symbolu R⁸ může zahrnovat acetylovou, propionylovou, butyrylovou skupinu a podobně. Výhodná je acetylová skupina.

Dále v textu se každý krok postupu A popisuje detailně.

Krok A-l

Účelem je připravit sloučeninu obecného vzorce 4 reakcí sloučeniny obecného vzorce 3, která se může připravit způsobem B až D popsaným dále v textu s činidlem vhodným pro zavedení odstupující skupiny v přítomnosti bazického katalyzátoru v inertním rozpouštědle.

Použitelné rozpouštědlo může zahrnovat alifatické uhlovodíky, jako je hexan, heptan, ligroín a petroleter. Dále může zahrnovat aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako je methylchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, estery, jako je ethylformát, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako je diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako je aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isoforon a cyklohexanon, nitrosloučeniny, jako je nitroethan a nitrobenzen, nitrily, jako je acetonitril a isobutyronitril, amidy, jako je formamid, N,N-dimethylformamid, N,N-dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrolidon, N-methylpyrolidinon a hexamethylfosforečný triamid, sulfoxidy, jako je sulfolan a pyridinové deriváty, přičemž výhodný je pyridin.

Zde použitý bazický katalyzátor může přednostně zahrnovat bázi, jako je triethylamin, pyridin a dimethylaminopyridin.

Činidlo pro zavedení odstupující skupiny může zahrnovat alkylsulfonylové halidy, jako je methansulfonylchlorid a ethansulfonylbromid a arylsulfonylové halidy, jako je p-toluensulfonylchlorid, přičemž výhodný je methansulfonylchlorid a p-toluensulfonylchlorid.

• * ·

Reakční teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, na rozpouštědle, na činidle pro zavedení odstupující skupiny a bazického katalyzátoru, ale je použitelný při teplotě 0°C až 50°C. Výhodná je teplota 10°C až 40°C.

Reakční čas kolísá v závislosti na počátečním materiálu, na rozpouštědle, na činidle pro zavedení odstupující skupiny a na bazickém katalyzátoru a reakční teplotě, ale je obvykle 10 minut až 24 hodin. Výhodný čas je 1 až 10 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 4 získala například neutralizací reakčního roztoku, koncentrací reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla němísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promýváním vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením nevodným síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstranilo destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistil, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem.

Krok A-2

Dalším krokem je příprava sloučeniny obecného vzorce 5 reakcí sloučeniny obecného vzorce 4 v kroku A-l s kyselým anhydridem v přítomnosti kyselého katalyzátoru v rozpouštědle.

Zde použitelné rozpouštědlo může zahrnovat ethery, jako je diethylether, dioxan a tetrahydrofuran, nitrily, jako je acetonitril a isobutyronitril, amidy, jako je formamid, N,N-dimethylformamid, N,N-dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidin, N-methylpyrrolidin a triamid kyseliny hexamethylfosforečné a organická kyselina, jako je kyselina octová. Výhodné je použití kyseliny octové.

Zde použitelný kyselý katalyzátor může zahrnovat anorganické kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová a kyselina dusičná. Výhodná je kyselina sírová (zvláště koncentrovaná kyselina sírová).

• · · ♦ · ♦·

Zde použitelný kyselý anhydrid může zahrnovat anhydrid nižší alifatické karboxylové kyseliny, jako je kyselý anhydrid a anhydrid kyseliny propionové, upřednostňuje se kyselý anhydrid .

Reakční teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, kyselém katalyzátoru a kyselém anhydridu a je obvykle 0°C až 50°C. Výhodné je 10°C až 40 °C.

Reakční směs kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, kyselém katalyzátoru, kyselém anhydridu a reakční teplotě, ale je obvykle 10 minuť až 12 hodin. Výhodný čas reakce je 30 minut až 3 hodiny.

Po reakci požadovaná sloučenina obecného vzorce 5 se získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je etylacetát, promytím vodou, separací organické vrstvy, která obsahuje požadovanou sloučeninu, sušením na síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstranilo destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistil, je-li to nutné, běžnou metodou, například rekrystalizací, chromatografií na koloně se silkagelem a podobně.

Krok A-3

Dalším krokem je příprava sloučeniny obecného vzorce 6 reakcí sloučeniny obecného vzorce 5 v kroku A-2 s trimethylsilylovanou sloučeninou odpovídající purinu nebo pyrimidinu, který může zahrnovat požadovaný substituent připravený podle publikace H. Vorbrggen, K. Krolikiewicz and B. Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981) v přítomnosti katalyzátoru v inertním rozpouštědle.

Použitelný rozpouštědlo může zahrnovat aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen, xylen, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, 1,2-dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, nitrily, jako je acetonitril a isobutyronitril, amidy, jako je formamid, N,N43 dímethylformamid, N, N-dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidin, N-methylpyrrolidinon a triamid kyseliny hexamethylfosforečné, sulfid uhličitý. Výhodný je 1,2-di-chlorethan.

Zde použitelný kyselý katalyzátor může zahrnovat Lewisovy kyselé katalyzátory, jako je A1C1₃, SnCl₄, TiCl₄, ZnCl₂, BF₃, trimethylsilyltrifluormethansulfonát. Výhodný je trimethylsilyltrifluormethansulfonát.

Reakčni teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a kyselém katalyzátoru, ale obvykle se pohybuje od 0°C do 100 °C. Výhodná je teplota 50 °C až 80 °C.

Reakčni čas kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, kyselém katalyzátoru a reakčni teplotě, ale obvykle se pohybuje od 1 hodiny do 24 hodin. Výhodná je doba reakce 1 až 8 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 6 získala například zakoncentrováním reakčni směsi, přidáním organického rozpouštědla němísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušení nevodným síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstranilo destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistil, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Krok Ά-4

Dalším krokem je příprava sloučeniny obecného vzorce la podle vynálezu cyklizací sloučeniny obecného vzorce 6 připravenév kroku A-3 v přítomnosti bazického katalyzátoru v inertním rozpouštědle.

Použitelný rozpouštědlo může zahrnovat vodu, pyridinové deriváty, acetonitrily, jako je acetonitril a isobutyronitril, amidy, jako je formamid, N,N-dimethylformamid, N,N-dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidin, N-methylpyrrolidinon a ♦

« ♦

triamid kyseliny hexamethylfosforečné a jejich směsi. Výhodná je směs vody a pyridinu.

Zde použitelný bazický katalyzátor může zahrnovat hydroxidy alkalických kovů, jako je hydroxid sodný a hydroxid draselný, uhličitany alkalických kovů, jako je uhličitan sodný a uhličitan draselný, alkoxidy alkalických kovů, jako je methoxid sodný a ethoxid sodný a vodný amoniak. Výhodné jsou hydroxidy alkalických kovů (zvláště pak hydroxid sodný).

Teplota reakce kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a bazickém katalyzátoru, ale obvykle její hodnota je od 0°C do 50°C. Výhodná je teplota od 10°C do 30°C.

Reakční čas kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, kyselém katalyzátoru a reakční teplotě, ale je obvykle od 1 minuty do 5 hodin. Výhodný je čas reakce 1 minuta až 30 minut.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 6 získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla němísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, běžným způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Krok A-5

Dalším krokem je příprava sloučeniny obecného vzorce lb reakcí sloučeniny obecného vzorce la připravené v kroku A-4 v přítomnosti činidla odstraňujícího ochranou skupinu v inertním rozpouštědle.

Metoda odstranění ochranné skupiny závisí na druhu ochranné skupiny a není omezena. Způsobuje vedlejší reakce a může se například provést způsobem popsaným v publikaci „Protective • ·

Groups in Organic Synthesis, Theodora W. Greene and Peter G. M. Wuts, 1999, Published A. Wiley-Interscience Publication).

Odstranění ochranné skupiny je možné zvláště provést následujícím způsobem, kde ochranná skupina je (1) alifatická acylová skupina nebo aromatická acylová skupina, (2) methylová skupina substituovaná jednou až třemi arylovými skupinami nebo methylovou skupinou substituovanou jednou až třemi arylovými kruhy, které jsou substituovanými nižším alkylem, nižší alkoxyskupinou, halogenem nebo kyanoskupinou nebo (3) silylovou skupinou.

(1) V případě, že ochranná skupina je alifatická acylová skupina nebo aromatická acylová skupina, reakce odstraňující ochrannou skupinu je obvykle provedena ošetřením alkalickým činidlem v inertním rozpouštědle.

Zde použitelné rozpouštědlo není omezeno, pokud je jednoduše mísitelné s vodou, neinhibuje reakci a rozpouští počáteční materiál a může zahrnovat vodné a nevodné amidy, jako je dimethylformamid a dimethylacetamid, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, 1,2-dichlorethan nebo tetrachlorid uhlíku a ethery, jako je tetrahydrofuran, diethylether a dioxan. Výhodné jsou ethery. Výhodnější je tetrafuran.

Zde použitelné alkalické činidlo může zahrnovat hydroxidy alkalických kovů, jako je hydroxid litný, hydroxid draselný a hydroxid sodný, uhličitany alkalického kovu, jako je uhličitan sodný a uhličitan draselný, alkoxidy alkalických kovů, jako je methoxid sodný a ethoxid sodný a roztok amoniaku, jako je roztok amoniaku ve vodě a roztok amoniaku v methanolu.

Reakční teplota je od 0°C do 60 °C. Výhodná je teplota 20°C až 40°C. Reakční čas je od 10 minut do 24 hodin. Výhodná je doba reakce 1 až 3 hodiny.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce lb získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla němísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující po46 • *· žadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu horečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

(2) V případě, že ochranná skupina je methylová skupina substituovaná jednou až třemi arylovými skupinami nebo methylovou skupinou substituovanou jednou až třemi arylovými kruhy, které jsou substituovanými nižším alkylem, nižší alkoxyskupinou, halogenem nebo kyanoskupinou, reakce se provádí v inertním rozpouštědle za použití redukčního činidla.

Zde použitelné rozpouštědlo zahrnuje přednostně alkoholy, jako je methanol, ethanol aisopropanol, ethery, jako je diethylether, tetrahydrofuran a dioxan, aromatické uhlovodíky, jako je toluen, benzen a xylen, alifatické uhlovodíky, jako je hexan a cyklohexan, estery, jako je ethylacetát a propylacetát, organické kyseliny, jako je kyselina octová nebo směsi těchto organických rozpouštědel a vody.

Zde použitelné redukční činidlo není zvláště omezeno, pokud se může použít pro katalytickou redukci a je výhodné, aby zahrnovalo paládium na uhlíku, Raneyoův nikl, oxid platiny, platinovou čerň, oxid rhodičito-hlinitý, chlorid trifenylfosfinrhodíčitý a síran paladičito-barnatý.

Tlak není nijak omezen, ale je obvykle od 1 do 10 atmosfér .

Reakční teplota je od 0°C do 60°C. Výhodná je teplota od 20°C do 40°C.

Reakční čas je od 10 minut do 24 hodin. Výhodná je jedna hodina až tři hodiny.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce lb získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promytím vodou, separací organické vrstvy obsahující po47

9 > »9 • · 9 • · 9 • 999 • 9 » 99 žadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu horečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čisti, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

V případě, že ochranná skupina je methylová skupina substituovaná třemi arylovými skupinami, to znamená tritylová skupina, reakce odstraňující tritylovou skupinu může také proběhnout za použití kyseliny.

V případě, že zde použitelné rozpouštědlo zahrnuje aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, 1,2-dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, alkoholy, jako je methanol, ethanol, isopropanol a terc-butanol, nitrily, jako je acetonitril a isobutyronitril, amidy, jako je formamid, N,N-dimethylformamid, N,N-dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon, N-methylpyrolidon a triamid kyseliny hexamethylfosforečné a organické kyseliny, jako je kyselina octová. Výhodné jsou organické kyseliny (zvláště kyselina octová) nebo alkoholy (zvláště terc-butanol).

Zde použitelná kyselina může s výhodou zahrnovat kyselinu octovou nebo kyselinu trifluoicctovou.

Reakční teplota je od 0°C do 60°C. Výhodná je reakční teplota od 20°C do 40°C.

Reakční čas je od 10 minut do 24 hodin. Výhodná je doba reakce 1 až 3 hodiny.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce lb získala například zakončenírováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu horečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

·· Φ· > φ φ φ Φ Φ 9 Φ ΦΦΦ ► ♦ Φ ·· ΦΦ

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, běžným způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

(3) V případě, že ochranná skupina je silylová skupina, může se obvykle odstranit ošetřením se sloučeninou produkující fluorid, jako je tetrabutylamoniumfluorid, kyselina fluorovodíková, kyselina fluorovodíková-pyridin a fluorid draselný nebo organické kyseliny, jako je kyselina octová, kyselina methansulfonová, kyselina paratoluensulfonová, kyselina trifluorctová a kyselina trifluormethansulfonová nebo organické kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková.

V případě, že se ochranná skupina odstraní fluoridem, reakce se někdy podpoří přidáním organických kyselin, jako je kyselina mravenčí, kyselina octová a kyselina propionová.

Zde použitelné rozpouštědlo není omezeno, pokud neinhibuje reakci a rozpouští počáteční materiál a může s výhodou použít ether, jako je tetrahydrofuran, diethylether, diisopropylether a dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, nitrily, jako je acetonitril a isobutyronitril, voda, organické kyseliny, jako je kyselina octová a jejich směsi.

Reakční teplota je od 0°C do 100°C. Výhodná je reakční teplota od 20°C do 70°C.

Reakční čas je od 5 minut do 48 hodin. Výhodná je doba reakce 1 až 24 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce lb získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla němísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

. Krok A-6

Dalším krokem je příprava sloučeniny obecného vzorce lc reakcí sloučeniny obecného vzorce lb připravené v kroku A-5 v přítomnosti činidla odstraňujícího ochranou skupinu v inertním rozpouštědle.

Metoda odstranění ochranné skupiny závisí na druhu ochranné skupiny a není omezena. Způsobuje vedlejší reakce a může se například provést způsobem popsaným v publikaci „Protective Groups in Organic Synthesis, Theodora W. Greene and Peter G. M. Wuts, 1999, Published A. Wiley-Interscience Publication).

Odstranění ochranné skupiny je možné zvláště provést následujícím způsobem, když ochranná skupina je alifatická acylová skupina nebo aromatická acylová skupina, reakce odstraňující ochrannou skupinu je obvykle provedena ošetřením alkalickým činidlem v inertním rozpouštědle.

Zde použití rozpouštědla není omezeno, pokud je jednoduše mísitelné s vodou, neinhibuje reakci a rozpouští počáteční materiál a může zahrnovat vodné a nevodné alkoholy jako je methanol a ethanol, amidy, jako je dimethylformamid a dimethylacetamid, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, 1,2-dichlorethan nebo chlorid uhličitý a ethery, jako je tetrahydrofuran, diethylether a dioxan. Výhodné jsou alkoholy. Výhodnější je methanol.

Zde použitelné alkalické činidlo může zahrnovat hydroxidy alkalických kovů, jako je hydroxid litjyiý, hydroxid draselný a hydroxid sodný, uhličitany alkalického kovu, jako je uhličitan sodný a uhličitan draselný, alkoxidy alkalických kovů, jako je methoxid sodný a ethoxid sodný a roztok amoniaku. Výhodný je amoniak.

Reakční teplota je od 0°C do 50 °C. Výhodné je teplota od 10°C do 40°C.

Reakční čas je od 10 minut do 24 hodin. Výhodná je doba reakce 10 minut až 15 hodin.

• 9 • ·

Ml • 4 • 4 « 4 4 • » • 4 *4 «

·*· • 4 4

4

4 ·

*

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce lc získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Meziprodukt obecného vzorce 3 popsaný shora v textu se může připravit způsobem B až D, jak se popisuje dále v textu.

Způsob B

B-3 xo

OHC0.

B-4

OY (10)

HO

(⁷) (11) (12)

Při způsobu B až D symboly X a Y mají stejný význam jako se definuje shora v textu. Symbol R⁹ reprezentuje skupinu, která tvoří odstupující skupinu, symbol E reprezentuje ethylen, trimethylen nebo tetramethylen a symbol Z reprezentuje jednoduchou vazbu, methylenovou nebo ethylenovou skupinu.

Skupina, která tvoří odstupující skupinu symbolu R⁹ může zahrnovat skupinu popsanou shora v textu pro symbol R⁷. Výhodná je trifluormethansulfonylová skupina.

Symboly R¹¹ a R¹² jsou stejné a reprezentují vodíkový atom a dohromady tvoří atom kyslíku.

V případě, kde symbol R¹¹ a R¹² dohromady tvoří atom kyslíku, symbol R¹⁰ reprezentuje alkylovou skupinu, která má 1 až 4 • · · · · ·· · · ··· · · · · · · ·· atomy uhlíku, jako je metyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, s-butyl a terc-butyl. Výhodná je methylová skupina.

V případe, že symboly R a R jsou stejne a reprezentuji atom vodíku, symbol R¹⁰ může zahrnovat aralkylovou skupinu, jako je benzylová skupina, alkoxyalkylová skupina, jako je methoxymethylová skupina, arylkarbonyloxymethylovou skupinu, jako je benzoyloxymethylová skupina, aralkyloxymethylová skupina, jako je benzyloxymethylová skupina, alkoxyalkoxyalkylová skupina, jako je methoxyethoxymethylová skupina, silylová skupina, jako je trimethylsilyl, t-butyldimethylsilyl, difenylmethylsilyl, difenylbutylsilyl, difenyl-isopropylsilyl a fenyldiisopropylsilyl.

Sloučenina obecného vzorce 7, to znamená počáteční materiál používaný v postupu B nebo v postupu C, se může připravit následujícím způsobem.

Sloučenina odpovídající sloučenině obecného vzorce 6, jejíž část „X je atom vodíku, se připravila z 1,1,5,6-diisopropyliden-D-glukosy podle způsobu uvedeného v publikaci R.D. Youssefyeh, J. P. H. Verheyden, J.G. Moffatt. J. Organ. Chem., 44, 1301-1309 (1979) a následně sloučenina obecného vzorce 6 se může připravit podle metody popsané v publikaci T. Waga, T. Nishizaki, I. Miyakawa, H. Ohrui, H. Meguro, Biosci. Biotechnol. Biochem., 57, 1433-1438 (1993) (v případě, že symbol X je Bn).

Způsob B

Krok B-l

V tomto kroku se připravuje sloučenina obecného vzorce 8 reakcí sloučeniny obecného vzorce 7 připravené shora v textu popsanou metodou s činidlem vhodným pro zavedení odstupující skupiny v přítomnosti alkalického katalyzátoru v inertním rozpouštědle .

Použitelné rozpouštědlo může zahrnovat amidy, jako je dimethylformamid a dimethylacetamid, halogenované uhlovodíky, • · · · · ·· ·· • · · · · ·· · · · · • · · ···· ·· ·· ··· ······ · ····· · · · ····· ·· ·· · · · . jako je methylenchlorid, chloroform, 1,2-dichlorethan nebo chlorid uhličitý a ethery, jako je hydrofuran, diethylether a dioxan. Výhodný je methylenchlorid.

Použitelný alkalický katalizátor s výhodou může zahrnovat alkalické činidlo, jako je triethylamin, pyridin a dimethylaminopyridin.

Činidlo pro zavedení odstupující skupiny může zahrnovat s výhodou chlorid trifluormethansulfonové kyseliny nebo anhydrid kyseliny trifluormethansulfonové.

Reakční teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a kyselém katalyzátoru, ale je obvykle -100°C až -50 °C. Výhodná je teplota od -100°C do -70°C. Obvyklá teplota je od -100°C do -50°C. Výhodná je teplota -100°C až -70°C.

Reakční čas kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a kyselém katalyzátoru, ale obvykle je od 30 minut do 12 hodin. Výhodná je doba reakce 30 minut až 3 hodiny.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 8 získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, běžným způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Krok B-2

V tomto kroku se připravuje sloučenina obecného vzorce 9 reakcí sloučeniny obecného vzorce 8, která se připravila v kroku B-l s činidlem pro zavedení kyanoskupiny v inertním rozpouštědle.

Zde použitelné rozpouštědlo může zahrnovat amidy, jako jsou methylenchlorid, chloroform, 1,2-dichlorethan, chlorid uhličitý, ethery, jako je tetrahydrofuran, diethylether a dioxan, acetonitril, dimethoxysulfoxid a podobně. Výhodné jsou amidy (dimethylformamid).

Použitelné činidlo pro zavedení kyanoskupiny může zahrnovat KCN, NaCN a kyanid trimethylsilanu. Významný je NaCN.

Reakční teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědlu a činidlu vhodném pro zavedení kyanoskupiny, ale obvykle je od 0°C do 100°C . Výhodná je teplota 30°C až 70°C.

Reakční doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, činidlu pro zavedení kyanoskupiny a teplotě reakce, ale je obvykle 30 minut až 12 hodin. Výhodná je reakční doba od 1 do 3 hodiny.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 9 získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla němísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Krok B-3

V tomto kroku se připraví sloučenina obecného vzorce 10 reakcí sloučeniny obecného vzorce 9 v kroku B-2 s redukčním činidlem v inertním rozpouštědle.

Zde použitelné rozpouštědlo může zahrnovat halogenované uhlovodíky, jako je methylchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, 1,2-dichlorethan, alifatické uhlovodíky, jako je hexan, heptan, ligroin a petrolether. Dále může zahrnovat aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, ethery, jako je diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako je • · · · ·· ·· ·· · · · ♦ · * · • · ···· ·· • ··· · ····· · • · ·· · · 9· 9 aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isoforon acyklohexanon. Výhodné jsou halogenované uhlovodíky (zvláště methylenchlorid).

Zde použitá redukční činidla mohou zahrnovat diisobutylhydrid hlinitý a triethoxyhydrid hlinitý. Výhodný je diisobutylhydrid hlinitý.

Reakční teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a redukčním činidlu, ale je obvykle -100°C a -50°C. Výhodná je teplota -90°C až -70°C.

Reakčni doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, redukčním činidlu a reakční teplotě. Doba reakce je obvykle od 30 minut do 12 hodin. Výhodná doba reakce je 1 hodina až 5 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 9 získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Krok B-4

V tomto kroku se připraví sloučenina obecného vzorce (3a), která je počátečním materiálem v postupu A s reakční sloučeninou obecného vzorce 10 připravené v kroku B-3 s redukčním činidlem v inertním rozpouštědle.

Zde použitelné rozpouštědlo může zahrnovat alkoholy, jako je methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isObutanol, isoamylalkohol, diethylglykol, terc-butanol, diethylglykol, glycerin, oktanol, cyklohexanol a methylcelosolv a kyselina octová. Výhodné jsou alkoholy (zvláště ethanol).

• ··· · ····· · • · · · ·· · ·

Použitelné redukční činidlo může zahrnovat borovodík alkalického kovu, jako je borovodík sodný a borovodík lítný, sloučeniny hydridu litného jako je hydrid litno-hlinitý a triethoxid litný-hydrid hlinitý a boran. Výhodný je hydrid sodnoboritý.

Reakční teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a redukčním činidle, ale je obvykle 0°C až 50°C. Upřednostňuje se teplota od 10°C do 40°C.

Reakční doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, redukčním činidlu a reakční teplotě. Doba reakce je obvykle od 10 minut do 12 hodin. Výhodná doba reakce je 30 minut až 5 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 3a získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Postup C

Krok C-l

V tomto kroku se připravuje sloučenina obecného vzorce 11 reakcí sloučeniny obecného vzorce 7 připravené v postupu s oxidačním činidlem v inertním rozpouštědle.

Použitelné rozpouštědlo může zahrnovat alifatické uhlovodíky, jako je hexan, heptan, ligroin a petrolether. Dále může zahrnovat aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, estery, jako je ethylformát, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako je diethyle57 • 9 · « · · · · • ··· · ····· · ·· ·· ·· ·· , ther, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako je aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, ísoforon a cyklohexanon. Výhodné jsou halogenované uhlovodíky (zvláště methylenchlorid.

Zde použitelná oxidační činidla zahrnují Swernovo činidlo pro oxidaci, Dess-Martinovo činidlo pro oxidaci, komplex oxidu chromového, jako je komplex pyridinhydrochlorid/oxid chromový (pyridinium chlorchromát a pyrídiníum dichromát). Výhodné je Swernovo činidlo pro oxidaci (jmenovitě dimethylsulfoxidoxalylchlorid).

Reakční teplota kolísí v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a oxidačním činidle, ale je obvykle od -100°C do -50°C. Výhodná je teplota -100°C až -70°C.

Reakční doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, redukčním činidlu a reakční teplotě. Doba reakce je obvykle od 10 minut do 12 hodin. Výhodná doba reakce je 30 minut až 5 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 11 získala například rozložením oxidačního činidla, zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla němísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Krok C-2

V tomto kroku se připravuje sloučenina obecného vzorce 12 reakcí sloučeniny obecného vzorce 11 připravené v kroku C-l s činidle zvyšujícím počet uhlíků v inertním rozpouštědle.

Použitelné rozpouštědlo může zahrnovat alifatické uhlovodíky, jako je hexan, heptan, ligroin a petrolether. Dále může ·· ·· ·· ·· ♦ · ♦♦·♦ « « · • ··· · * · · · · · • · · · · · · · ··· ·· ·· »· ·· · „ zahrnovat aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, dichloroethan, chlorobenzen a dichlorobenzen, estery, jako je ethylformát, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako je diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako je aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isoforon a cyklohexanon. Výhodné jsou halogenované uhlovodíky (zvláště methylenchlorid) .

Zde použitelná oxidační činidla zahrnují Wittingovo činidlo, Horner-Emmonsovo činidlo, Petersonovo reakční činidlo, reakční činidlo systému TiCl₄-CH₂Cl2-Zn a Tebbeho činidlo. Výhodné je Wittingovo činidlo, Horner-Emmosovo činidlo a Tebbeho činidlo.

Reakční teplota kolísí v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a oxidačním činidle, ale je obvykle od -20°C do 20°C. Výhodná je teplota 0°C.

Reakční doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, redukčním činidlu a reakční teplotě. Doba reakce je obvykle od 30 minut do 12 hodin. Výhodná doba reakce je jedna až 5 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 12 získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla němísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Krok C-3 ♦ · • · • · · ·· · ·· • · * · · ·· · · · · φ

V tomto kroku se připravuje sloučenina obecného vzorce 3a selektivně zavádějící hydroxylovou skupinu na koncový uhlík olefinu sloučeniny obecného vzorce 12 připravené v kroku C-2 v inertním rozpouštědle.

Použitelné rozpouštědlo může zahrnovat alifatické uhlovodíky, jako je hexan, heptan, ligroin a petrolether. Dále může zahrnovat aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, estery, jako je ethylformát, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako je diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako je aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isoforon a cyklohexanon. Výhodné jsou ethery (zvláště tetrahydrofuran).

Zde použitelná oxidační činidla zahrnují boranovodík, disiamylboran, thexylboran, 9-BBN (9-borabicyklo[3,3, l]nonan) . Výhodný je 9-BBN.

Reakční teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a oxidačním činidle, ale je obvykle od 0°C do 50°C. Výhodná je teplota 10°C až 40°C.

Reakční doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, redukčním činidle a reakční teplotě. Doba reakce je obvykle od 6 hodin do 48 hodin. Výhodná doba reakce je 12 až 24 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 3a získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu horečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

• · · · · 9 · · • · · · · ····« 9

9 9 9 9 9 9

999 99 99 99 99 9

Postup D Krok D-l

V tomto kroku se připravuje sloučenina obecného vzorce 13 reakcí sloučeniny obecného vzorce 11 připravené v kroku C-l s činidlem zvyšujícím počet uhlíků v inertním rozpouštědle.

Použitelné rozpouštědlo může zahrnovat alifatické uhlovodíky, jako je hexan, heptan, ligroin a petrolether. Dále může zahrnovat aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, estery, jako je ethylformát, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako je diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, ketony, jako je aceton, methylethylketon, methylisobutylketon, isoforon a cyklohexanon. Výhodné jsou halogenované uhlovodíky (zvláště methylenchlorid) .

Zde použitelná činidla ke zvyšování počtu uhlíků zahrnují Wittingovo činidlo, Horner-Emmonsovo činidlo.

Reakční teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a činidle, ale je obvykle od -20°C do 40°C. Výhodná je teplota 0°C až 20°C.

Reakční doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, redukčním činidlu a reakční teplotě. Doba reakce je obvykle od 30 minut do 12 hodin. Výhodná doba reakce je jedna až 5 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 13 získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla němísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

• · *· · · ·· • · · ♦ · · · • · · · · ♦ · · • · · · · ··· · · φ * ····«·♦« ·· · · · ·· ·« · φ φ

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Krok D-2

V tomto kroku se připravila sloučenina obecného vzorce 14 reakcí sloučeniny obecného vzorce 13 připravené v kroku D-l s redukčním činidlem v inertním rozpouštědle.

Tento krok se provedl podle odstavce (2) v kroku A-5.

V případě, kde symbol R¹⁰ je substituován benzylovou skupinou a symboly R¹¹ a R¹² jsou atomy vodíku, se sloučenina 3b může přímo připravit v tomto kroku.

Krok D-3

V tomto kroku se připravila sloučenina obecného vzorce 3b, který je jeden z počátečních materiálů postupu A reakcí sloučeniny obecného vzorce 14 připravené v kroku D-2 s redukčním činidlem.

(a) Případ, kde symbol R¹¹ a R¹² dohromady tvoří atom kyslíku. Použitelné rozpouštědlo může zahrnovat alkoholy, jako je methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, isoamylalkohol, terc-butanol, diethylenglykol, glycerin, oktanol, cyklohexanol a methylcelosolv a kyselina octová. Výhodné jsou alkoholy (zvláště ethanol).

Použitelné redukční činidlo může zahrnovat borovodík alkalického kovu, jako je borovodík sodný a borovodík litný, sloučeniny hydridu litného jako je hydrid litno-hlinitý a triethoxid litný-hydrid hlinitý a boran. Výhodný je hydrid sodnoboritý.

Reakční teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a redukčním činidle, ale je obvykle 0°C až 50 °C. Upřednostňuje se teplota od 10°C do 40°C.

• 9 • 99

99 99 • 9 9 9 9 9 • · 9 · «9 • 9 999 99 9 • 9 9 9 9 ·· 99 99

Reakčni doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, redukčním činidlu a reakčni teplotě. Doba reakce je obvykle od 10 minut do 12 hodin. Výhodná doba reakce je 30 minut až 5 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 3b získala například zakoncentrováním reakčni směsi, přidáním organického rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, běžným způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

(b) Případ, kde symboly R¹¹ a R¹² jsou vodíkové atomy a symbol

R¹⁰ je skupina jiná než benzylová skupina.

V případě, kdy symbol R¹⁰ je silylová skupina, se tento krok provede podle metody popsané v odstavci (3) krok A-5.

V případě, že symbol R¹⁰ je aralkylová skupina, jako je benzylová skupina, alkoxyalkylová skupina, jako je methoxymethylová skupina, arylkarbonyloxymethylová skupina, jako je benzoyloxymethylová skupina nebo aralkyloxymethylenová skupina, jako je benzyloxymethylová skupina a alkoxyalkoxyalkylová skupina, jako je methoxyethoxymethylová skupina, se použije kyselý katalyzátor a ten může zahrnovat v tomto případě organickou kyselina, jako je p-toluensulfonovou kyselinu, trifluoroctovou kyselinu a dichloroctovou kyselinu a Lewisovou kyselinu, jako je BF₃ a A1C1₃.

Použitelné rozpouštědlo může zahrnovat aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, 1,2-dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, nitrily, jako je acetonitril a isobutyrinitril, amidy, jako je formamid, N,N-dimethylformamid, N,N-dimethylacetamid, N-methyl-2-pyrrolidon,

99 99

9 9 9 9 9

9 9 9 9

999 99 9

9 9 9 9

99 99 9

N-methylpyrrolidinon a triamid kyseliny hexamethylfosforečné a sulfid uhličitý.

Reakční teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a kyselém katalyzátoru, ale je obvykle 0°C až 50 °C. Upřednostňuje se teplota od 10°C do 40°C.

Reakční doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, kyselém katalyzátoru a reakční teplotě. Doba reakce je obvykle od 10 minut do 12 hodin. Výhodná doba reakce je 30 minut až 5 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 3b získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla němísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, běžným způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Oligonukleotidy obsahující upravený nukleosid nebo jeho thioátový derivát se mohou připravit podle postupu E, jak se popisuje dále v textu za použití sloučeniny obecného vzorce 1 podle vynálezu.

• 99 ·· 9 · 9 9 · *·9 9 9 · • 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9

999 99 99 99

Postup E

E-3

->- oligonucleotid

V postupu E symbol A a B mají stejný význam jak se definuje shora v textu, symbol R¹³ reprezentuje hydroxylovou ochrannou skupinu (zvláště tritylovou skupinu, která se může substituovat methoxyskupinou),symbol R¹⁴ reprezentuje fosfonylovou skupinu a skupinu tvořenou reakcí monosubstituovaných chlor(alkoxy)fosfinů nebo dvakrát substituovaných alkoxyfosfinů popsaných dále v textu.

Postup E

Krok E-l

V tomto kroku se připravuje sloučenina obecného vzorce 15 reakcí sloučeniny obecného vzorce 1 připravené postupem A s ochranným činidlem v inertním rozpouštědle.

Použitelné rozpouštědlo může zahrnovat aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen, estery, jako je ethylformát, ethylacetát, propylacetát, butylacetát a diethylkarbonát, ethery, jako je diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran, dioxan, dimethoxyethan a diethylenglykoldimethylether, * »4 ·* 44 4» • 4 » · · · · · « · » • 4 · · ♦ · f · 4 «4 4 · 4 ««···· ·

4 ♦ · · 4 · 4 •«4 4« ·« »» _fc ketony, jako je aceton, methyl-ethylketon, methylisobutylketon, isoforon a cyklohexanon, nitrátované sloučeniny, jako je nitroethan a nitrobenze, nitrily, jako je acetonitril a isobutyronitril, amidy, jako je formamid, dimethylformamid (DMF), dimethylacet-amid a triamid kyseliny hexamethylfosforečné, sulfoxid, jako je dimethylsulfoxid a sulfolan, alifatické terciální aminy, jako je trimethylamin, triethylamin a N-methylmorfolin a aromatické aminy, jako je pyridin a pikolin. Výhodné jsou halogenované uhlovodíky (zvláště methylenchlorid) a aromatické aminy (zvláště pyridin).

Použitelné chránící činidlo není nijak omezeno pokud se může selektivně chránit pouze 5-poloha a může se odstranit za kyselých nebo neutrálních podmínek. Může s výhodou zahrnovat triarylmethylhalidy, jako je tritylchlorid, monomethoxytritylchlorid a dimethoxytritylchlorid.

V případě triarylmethylhalidů se používá ochranné činidlo, obvykle používané alkalické činidlo.

V takovém případě zde použitelné alkalické činidlo může zahrnovat heterocyklické aminy, jako je pyridin, dimethylaminopyridin a pyrrolidinpyridin a alifatické terciální aminy, jako je trimethylamin a triethylamin. Výhodný je pyridin, dimethylaminopyridin a pyrrolidinpyridin.

V případě, že se jako rozpouštědlo použije kapalné alkalické činidlo, protože samotné alkalické činidlo funguje jako kyselé zachycovací činidlo, není potřeba přidat jiné alkalické činidlo.

Reakční teplota kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle a činidle, ale je obvykle od 0°C do 150°C. Výhodná je teplota 20°C až 100°C.

Reakční doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, redukčním činidle a reakční teplotě. Doba reakce je obvykle od 1 do 100 hodin. Výhodná doba reakce je 2 až 5 hodin.

• · · · · · · t 9 · « * · 9··«· 9 9*9« 9 · · ·*« ·· 9* ·· *9 9

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 15 získala například zakoncentrováním reakční směsi, přidáním organického rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením za použití nevodného síranu hořečnatého a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Krok E-2

V tomto kroku se připravuje sloučenina obecného vzorce 16 reakcí sloučeniny obecného vzorce 15 připravené v kroku E-l s chlor(alkoxy)fosfiny s jednou substitucí nebo alkoxyfosfiny s dvěmi substitucemi, které se obvykle používají při amidaci v inertním rozpouštědle.

Použitelné rozpouštědlo není omezeno pokud neovlivňuje reakcí a může přednostně zahrnovat ethery, jako je tetrahydrofuran, diethylether a dioxan a halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform, chlorid uhličitý, dichlorethan, chlorbenzen a dichlorbenzen.

Chlor(alkoxy)fosfiny s jednou substitucí mohou zahrnovat fosfinové deriváty, jako je chlor(morfolin)methoxyfosfin, chlor(morfolin)kyanoethoxyfosfin, chlor(dimethylamino)methoxyfosfin, chlor(diisopropylamino)methoxyfosfin a chlor(diisopropylamino)kyanoethoxyfosfin. Výhodný je chlor(morfolin)methoxyfosfin, chlor(morfolin)kyanoethoxyfosfin, chlor(diisopropylamino) kyanoethoxyfosfin.

V případě chlor(alkoxy)fosfinů s jednou substitucí se používá kyselé zachytávací činidlo a toto činidlo může zahrnovat heterocyklické aminy, jako je pyridin a dimethylaminopyridin a alifatické aminy, jako je trimethylamin, triethylamin a diisopropylamin. Výhodné jsou alifatické aminy (zvláště diisopropylamin).

·· • » • t *φ ·φ • · » · · · • · · · · ·

Φ » Φ · Φ ··· · · · • · · φ · · · ·· ·· «· 4«

Zde použitelné alkoxyfosfiny se dvěmi substitucemi mohou zahrnovat deriváty fosfinů, jako je bis(diisopropylamino)kyanoethoxyfosfin, bis(diethylamino)methansulfonylethoxyfosfin, bis(diisopropylamino)2,2,2-trichlorethoxy)fosfin a bis(diisopropylamino)(4-chlorfenylmethoxy)fosfin. Výhodný je bis (diisopropylamino)kyanoethoxyfosfín.

V případě kde se používají alkoxyfosfiny s dvojitou substitucí se použije kyselina. V takovém případě používaná kyselina může s výhodou zahrnovat tetrazol, kyselinu octovou nebo kyselinu p-toluensulfonovou.

Reakční teplota není nijak omezena, ale obvykle je v rozmezí 0°C až 80 °C. Výhodná je teplota místnosti.

Reakční doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, redukčním činidlu a reakční teplotě. Doba reakce je obvykle od 5 minut až 30 hodin. Výhodná doba reakce je od 30 minut do 10 hodin.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 16 získala například neutralizací reakční směsi, odstraněním nerozpustných částic filtrací, jestliže existují, přidáním organického rozpouštědla němísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

V jiném případě se v tomto kroku připraví sloučenina obecného vzorce 16 reakcí sloučeniny obecného vzorce 15 připravené v kroku E-l s tris-(1,2,4-triazolyl)fosfitem v inertním rozpouštědle (s výhodou jde o halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid). Následuje adice vody za účelem dosažení Hfosfonace.

Reakční teplota není nijak omezena, ale obvykle je v rozmezí -20°C až 100 °C. Výhodná je teplota 10°C až 40°C.

Reakční doba kolísá v závislosti na počátečním materiálu, rozpouštědle, redukčním činidlu a reakční teplotě. Doba reakce je obvykle 5 minut až 30 hodin. Výhodná doba reakce je 30 minut v případě, že reakce se provedla při teplotě místnosti.

Po reakci se požadovaná sloučenina obecného vzorce 16 získala například neutralizací reakční směsi, odstraněním nerozpustných částic filtrací, jestliže existují, přidáním organického rozpouštědla nemísitelného s vodou, jako je ethylacetát, promývání vodou, separací organické vrstvy obsahující požadovanou sloučeninu, sušením na nevodném síranu hořečnatém a rozpouštědlo se odstraní destilací.

Takto získaný požadovaný produkt se dále čistí, je-li to nutné, konvenčním způsobem, například rekrystalizací a chromatografií na koloně se silikagelem a podobně.

Krok E-3

V tomto kroku se připravuje oligonukleotidový analog pomocí DNA syntetizéru za použití alespoň jedné sloučeniny obecného vzorce 16 připravené v kroku E-2 a obecně dostupného fosforamiditového činidla nutného při produkci oligonukleotidového analogu požadované nukleotidové sekvence v souladu s běžnými metodami.

Oligonukleotidový analog vykazující požadovanou nukleotidovou sekvenci se může syntetizovat DNA syntetizérem, jako je Perkin-Elmer model 392 za použití fosforamiditové metody v souladu s metodou popsanou v publikaci (Nucleic Acids Research, 12, 4539 (1984)).

Navíc v případě převedení thioátu derivát thioátu se může získat v souladu s metodou popsanou v publikaci Tetrahedron Letters, 32, 3005 (1991, J. Am. Chem. Soc. , 112, 1253 (1990) za použití činidla, které tvoří thioát reakcí s trivalentní kyselinou fosforečnou, jako je tetraethylthiuramdisulfid (TETD, Applied Biosystems lne.) nebo Beaucageovo činidlo (Millipore Corp.).

Výsledný surový oligonukleotidový analog se může čistit chromatograficky na koloně s reverzní fází OligoPak a čistota produktu se může potvrdit analýzou HPLC.

Délka řetězce výsledného oligonukleotidového analogu je v normálním případě 2 až 50 jednotek a s výhodou 10 až 30 jednotek v jednotkách nukleosidů.

Schopnost tvořit komplementární řetězec a odolnost vůči nukleázám výsledného oligonukleotidového analogu se může stanovit způsoby popsanými shora v textu.

Testovací metoda 1

Schopnost tvořit hybrid oligonukleotidového analogu podle vynálezu s ohledem na komplementární DNA a RNA se může stanovit teplotní hybridizací různých výsledných oligonukleotidových analogů s oligonukleotidovým analogem, který zahrnuje přirozeně se vyskytující DNA nebo RNA, která má komplementární sekvenci a měřitelnou teplotu denaturace (hodnota Tm).

Vzorek roztoku obsahující stejné množství oligonukleotidového analogu a přirozeně se vyskytujícího komplementárního oligonukleotidu v pufru fosforečnanu sodného se vložil do lázně s vroucí vodou a pak se pomalu ochlazoval při teplotě místnosti (teplotní hybridizace) . Teplota roztoku v cele spektrofotometru (například Shimadzu UV-2100PC) pak postupně trochu vzrostla z 20°C na 90 °C. Pak následuje měření absorbce ultrafialového světla při vlnové délce 260 nm.

Testovací metoda 2: Meření rezistence na nukleázy

K oligonukleotidu v pufru se přidala nukleáza a směs se zahřála. Příklady použitých nukleáz zahrnují fosfodiesterázu hadího jedu, endonukleázu Pl a Sl. Ačkoli neexistuje žádné zvláštní omezení v použitém pufru, doporučuje se pufr vhodný pro enzymy, v případě fosfodiesterázy hadího jedu se použil Tris-HCl, zatímco v případě endonukleázy Pl se použil pufr acetát sodný. Navíc je-li to nezbytné k roztoku pufru se přiΊΟ daly ionty kovů. Příklady iontů kovů zahrnujív případě fosfodiesterázu hadího jedu ionty horečnaté a v případě endonukleázy ionty zinečnaté. Reakční teplota je s výhodou 0 až 100°C. Výhodná je teplota v rozmezí 30°C až 50°C.

Po předem stanovené době se přidá kyselina ethylendiamintetraoctová (EDTA) a pak se směs zahřívá na teplotu 100 °C po dobu 2 minuty za účelem ukončit reakci.

Příklady metod používané k testování množství zbývajícího oligonukleotidu zahrnují metodu, při které se oligonukleotid značí radioizotopem, přičemž pak následuje testování štěpící reakce produktu analyzátorem obrazu, což je metoda, při které se produkt štěpící reakce testuje HPLC s reverzní fází a způsobem, při kterém se produkt štěpící reakce testuje barvivém (jako je ethidiumbromid) a obraz se zpracovávý na počítači.

Formy dávek oligonukleotidového analogu mající jednu nebo dvě nebo více struktur obecného vzorce 2 podle vynálezu mohou být tablety, kapsule, granule, prášek nebo syrup, které se používají pro orální aplikaci, nebo to mohou být injekce nebo čípky pro parenterální aplikaci. Tyto dávkové formy se připravují dobře známými metodami za použití přídavných činidel, jako jsou ekcipienti) například organické ekcipienti, jako jsou cukerné deriváty, například laktóza, sacharóza, glukóza, manitol a sorbitol, deriváty škrobu, jako je například kukuřičný škrob, bramborový škrob, α-škrob a dextrin, deriváty celulózy, jako je například krystalická celulóza, arabská guma, dextran a pululan a anorganické ekcipienti, jako jsou silikátové deriváty, například anhydrid křemičitý, syntetizovaný křemičitan hlinitý, křemičitan vápenatý a metakřemičitan hořečnatohlinitý, fosforečnany, jako je například hydrogenfosforečnan vápenatý, uhličitany, jako je například uhličitan vápenatý a sírany, jako je například síran vápenatý, lubrikační prostředek (například kyselina stearová, kovové sole kyseliny stearové, jako je stearát vápenatý a stearát hořečnatý, talek, koloidní silika, vosky, jako je včelí vosk a spermacet, kyselina bori71 tá, kyselina adipová, sulfáty, jako je například síran sodný, glykol, kyselina mravenčí, benzoát sodný, DL-leucin, sodná sůl mastné kyseliny, laurylsulfáty, jako je laurylsulfát sodný a laurylsulfát hořečnatý, kyselina orthokřemičitá, jako je anhydrid křemičitý a kyselý hydrát křemičitý a shora uvedené deriváty škrobu), pojidlo (například hydroxypropylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, polyvinylpyrrolidon, Macrogol a sloučeniny podobné shora uvedeným ekcipientům), disintegrační činidla (například deriváty celulózy, jako je málo substituovaná hydroxypropylcelulóza, karboxymethylcelulóza, karboxymethylacelulóza vápníku a karboxymethylacelulóza sodíku s vnitřními můstky a chemicky upravené škrob-celulózy, jako je karboxymethylový škrob, karboxymethylový škrob sodíku a polyvinylpyrrolidon s můstky), stabilizátory (paraoxybenzoáty, jako je methylparaben a propylparaben, alkoholy, jako je chlorbutanol, benzylalkohol a fenylethylalkohol, benzalkoniumchlorid, deriváty fenolu, jako je fenol a kresol, thimerosal, kyselina dehydrooctová a kyselina sorbová) , látky korigující smyslově nepříjemné vlastnosti léku (například sladidla, kyselící činidla), ředidla atd.

Zatímco dávka bude kolísat v závislosti na stavu onemocnění, věku pacienta, metodách aplikace atd., například v případě orální aplikace je nutné aplikovat aktivní látku v množství v rozmezí 0,01 kg/kg tělesné hmotnosti (upřednostňuje se 0,1 mg/kg tělesné hmotnosti) až 1 000 mg/kg tělesné hmotnosti (s výhodou jde o dávku 100 mg/kg tělesné hmotnosti) a v případě intravenózní aplikace je nutné aplikovat aktivní složku v množství od 0,001 mg/kg tělesné hmotnosti (s výhodou 0,01 mg/kg tělesné hmotnosti) až 100 mg/kg tělesné hmotnosti (výhodná je dávka 10 mg/kg tělesné hmotnosti) ve formě jediné dávky za den nebo se dávka rozdělí do několika dávek za den.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1: 3',5'-di-O-benzyl-2'-O,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin (příklad sloučeniny číslo 2-34)

Vodný roztok 2N hydroxidu sodného (68 ml) se přidal k roztoku sloučeniny získané v příkladu 11 (6,80 g, 8,86 mmol) v pyridinu (136 ml) při teplotě 0°C a směs se míchala při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Reakční směs se neutralizovala přidáváním po kapkách 20% vodného roztoku kyseliny octové a extrahovala se chloroformem. Vrstva chloroformu se promyla saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se použila směs dichlormethan:methanol = 100:3), aby se získala sloučenina uvedená v názvu (3,3 g, 6,02 mmol, výtěžek je 68 %).

fo-NMRMOO MHz, CDC1₃) : 8,64(2H, brs), 7,89(2H, d, 7,6 Hz),

7, 64-7,60 (1H, m) , 7,54-7,51(2H, m) , 7,48-7,37(3H, m) , 7,367,26(8H, m) , 6,18(1H, s), 4,7O(1H, d, 11Hz), 4,6O(1H, d,

11Hz), 4,46(1H, d, 2,9Hz), 4,42(1H, d, 11Hz), 4,10-4,02(2H,

m) , 3,89(1H, d, 2,9 Hz), 3,75(1H, d, 11Hz) , 3,62(1H, d, 11Hz) , 2,34-2,26(1H, m), 1,39-1,36 (1H, m) .

FAB-MAS(mNBA): 554(M+H)⁺

Příklad 2: 2'-O,4'-C-ethylen-4-N-benoylcytidin (příklad sloučeniny č. 2-225)

Roztok (31,7 ml) 1,0 M trichlorboranu v dichlormethanu se přidal po kapkách do roztoku sloučeniny získané v příkladu 1 (2,06 gm 3,72 mmol) v nevodném methylenchloridu (317 ml) při teplotě -78°C a směs se míchala při teplotě -78°C po dobu jedné hodiny. Reakční směs se pomalu zahřívala na teplotu -20°C a reakční nádoba se umístila do ledové lázně s chloridem sodným a směs se míchala při teplotě mezi -20°C a -10°C po dobu 2 hodin. Do směsi se pomalu přidával methanol (12 ml) a směs se míchala po dobu 10 minut. Hodnota pH reakční směsi se upravila na hodnotu 7 až 8 tak, že se po kapkách přidával saturovaný • · · · ····»· · · • · · · · · · · • · · · · ·· · · ··· vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Směs se zahřála na teplotu místnosti a koncentrovala se vakuu. Zbytek se čistil chromatografií na koloně se silikagelem (jako eluent se použila směs dichlormethan:methanol=100:5), aby se získala sloučenina uvedená v názvu (1,21 g, 3,24 mmol, výtěžek je 87 %) ve formě bílé pevné látky.

^xH-NMR(500 MHz, DMSO-d₆) : 11,23(1H, brs), 8,7O(1H, d, 7,2 Hz), 8,00(2H, d, 7,5 Hz), 7,3-6(4H, m), 5,97(1H, s), 5,35(1H, dd, 5 a 10 Hz), 4,1O(1H, dd, 5 a 10 Hz), 4,O3(1H, d, 3,2 Hz), 3,953,85(2H, m) , 3,83(1H, d, 3,2Hz), 3,65-3,51(2H, m), 2,061,98(1H, m), 1,26(1).

FAB-MAS(mNBA): 374(M+H)⁺

Příklad 3

2'-O,4 '-C-ethylencytidin (příklad sloučeniny č. 2-3)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 2 (0,1 g, 0,268 mmol) v methanolu saturovaném v amoniaku (12 ml) se nechal stát přes noc. Směs se zakoncentrovala do sucha, přičemž vzniká sloučenina uvedená v názvu (0,054 g, výtěžek je 75 %) ve formě bílé pevné látky.

^-NMRUOO MHz, DMSO-d₆) : 8,18(1H, d, 7,4 Hz), 7,10(2H, br) ,

5,84(1H, s), 5,69(1H, d, 7,6 Hz), 5,27-5,24(2H, m) , 3,86(1H, d, 3,2 Hz), 3,90-3, 78 (2H, m) , 3,76(1H, d, 3,2 Hz), 3,56(1H, dd, 5,5 a 12 Hz), 3,49(1H, dd, 5,5 a 12 Hz), 2,01-1,93(1H, dt,

7,5 a 12 Hz), 1,22(1H, dd, 3,6 a 13 Hz).

FAB-MAS(mNBA): 270(M+H)⁺

Příklad 4: 5'-O-dimethoxytrityl-2'-O,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcitidin (příklad sloučeniny č. 2-39)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 2 (1,29 g, 3,46 mmol) v nevodném pyridinu se azeotropicky refluxoval za účelem od74 stranit vodu. Produkt se rozpustil v bezvodém pyridinu (26 ml) v atmosféře dusíku a do roztoku se přidal 4,4'-dimethoxytritylchlorid (1,76 g, 5,18 mmol). Směs se míchala při teplotě mlsnosti přes noc. Do reakční směsi se přidalo malé množství methanolu a z reakční směsi se rozpouštědlo odpařilo ve vakuu. Zbytek se rozdělil mezi vodu a chloroform a organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se použila směs dichlormethanol:methanol = 100:5), přičemž se získala sloučenina uvedená v názvu (2,10 g, 3,11 mmol, výtěžek je 90 %) ve formě bezbarvé amorfní pevné látky.

¹H-NMR(270 MHz, DMSO-dg) : 11,27(lH,brs), 8,59(1H, m), 6,928,01(19H, m) , 6,O3(1H, s) , 5,56(1H, m) , 4,17(1H, m) , 4,O8(1H,

m) , 3,86(2H, m), 3,77(6H, s), 3,24(2H,m), 1,98(1H, m) .

FAB-MAS(mNBA): 676 (M+H)⁺

Příklad 5: 5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4^x-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin-3'-O-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (příklad sloučeniny č. 2-235)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 4 (6,53 g, 9,66 mmol) v bezvodém pyridinu se azeotropicky refluxovalo za účelem odstranit vodu. Produkt se rozpustil za podmínek atmosféry dusíku v nevodném dichlormethanu (142 ml). Do roztoku se přidal N, N-diisopropylamin (2,80 ml, 16,1 mmol) a pak se po kapkách do ledové lázně přidal 2-kyanoethyl-N,N-diisopropylchlorfosforamidit (2,16 ml, 9,66 mmol). Směs se míchala při teplotě místnosti po dobu 6 hodin. Reakční směs se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a zakoncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se používá směs dichlormethan:triethylamin = 50:1 - dichlormethan:ethylacetát:triethylamin = 60: 30:1), za účelem získání sloučeniny uvedené v názvu (7,10 g , 8,11 mmol, výtěžek je 84 %), ve formě bílé látky.

^xH-NMR(270 MHz, CDCl₃) : 1,1-1,2(12H, m) , 1,35(1H, m) , 2,11(1H,

m) , 2,3(2H, m) , 3,35-3,7(6H, m) , 3,8(6H, m) , 3,9-4,l(2H, m) ,

4,33(1H, m) , 6,23(1H, m) , 6,23(1H, s) , 6,9(4H, s) , 7,37,9(15H, m), 8,7-8,8(lH, m).

Příklad 6: 3', 5'-di-O-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin (příklad sloučeniny č. 2-22)

Do sloučeniny získané v příkladu 10 (418 mg, 0,62 mmol) ve směsi pyridin:methanol:voda = 65:30:5 (5 ml) při teplotě 0°C se přidal 2N roztok hydroxidu sodného a roztok směsi (5 ml), která obsahuje pyridin:methanol:voda = 65:30:5 a směs se míchala při teplotě místnosti po dobu 15 minut. Reakčni směs se neutralizovala 1N kyselinou chlorovodíkovou a extrahovala se ethylacetátem (přibližně 30 ml). Organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (přibližně 30 ml) a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného (přibližně 30 ml) , sušila se na bezvodém síranu hořečnatém a pak se koncentrovala ve vakuu. Zbytek se čitil chromatografřeky na koloně se silikagelem (jako eluent se použila směs hexan : ethylacetát = 1:1), aby se získala bezbarvá amorfní pevná látka (228 mg, 0,49 mmol, výtěžek je 79 %).

^xH-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,35(1H, d, 13 Hz), 1,41(3H, s),

2,28(1H, dt, 9,4 a 13 Hz), 3,6O(1H, d, 11Hz) , 3,76(1H, d, 11Hz), 3,94(1H, d, 3,0 Hz), 4,1O(1H, d, 7,0 Hz), 4,14(1H, d, 7,0 Hz), 4,31(1H, d, 3,0 Hz), 4,51(1H, d, 12 Hz), 4,54(1H, d, 12 Hz), 4,58(1H, d, 12 Hz), 4,75(1H, d, 12 Hz), 6,O6(1H, s), 7,3(10H, m), 7,91(lH,s), 8,42(1H, brs).

FAB-MAS(mNBA): 465 (M+H)⁺ • · ·»· »····· * · ··· ·» ·· ·· ·· ···

Příklad 7: 2'-Ο,4'-C-ethylen-5-methyluridin (příklad sloučeniny č. 2-2)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 6 (195 mg, 0,42 mmol) v methanolu (10 ml) se míchal v atmosféře vodíku za atmosferického tlaku v přítomnosti hydrogenačního katalyzátoru po dobu 5 hodin. Reakční směs se filtrovala za účelem odstranit katalyzátor a filtrát se koncentroval ve vakuu. Zbytek se čistil chromatografií na koloně se silikagelem (jako eluant se použila směs dichlormethan/methanol = 10:1) za účelem získat bezbarví prášek (v množství 76 mg, 0,268 mmol a výtěžek je 64 %).

A-NMR^OO MHz, CD₃OD) : 1,33(1H, dd, 3,8 a 13 Hz), 1,86(3H, D,

0,9 Hz), 1,94(1H, ddd, 7,5, 11,7 a 13 Hz), 3,86(1H, d, 12 Hz), 3,75(1H, d, 12 Hz), 3,9-4,0(2H, m), 4,O5(1H, d, 3,2 Hz),

4,O9(1H, d, 3,2 Hz), 6,00(lH, s), 8,28(1H, d, 1,1 Hz).

FAB-MAS(mNBA): 285 (M+H)⁺

Příklad 8: 5'-O-dimethoxytrityl-2'-O,4'-C-ethylen-5-methyluridin (příklad sloučeniny č. 2-27)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 7 (1,45 g, 5,10 mmol) v nevodném pyridinu se azeotropicky refluxoval za účelem odstranění vody. Produkt se rozpustil v bezvodém pyridinu (44 ml) za atmosféry dusíku a 4,4'-dimethoxytritylchloridu (2,59 g, 7,65 mmol) a přidal se k roztoku. Směs se míchala při teplotě místnosti přes noc. Do reakční směsi se přidalo malé množství methanolu a pak se rozpouštědlo odpařilo ve vakuu. Zbytek se rozdělil mezi vodu a chloroform a organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatografíčky na koloně se silikagelem (jako eluant se použila směs dichlormethan:methanol = 100 : 10) za vzniku sloučeniny uvedené v názvu »» · * · · · · • * · · » ····· · « » · · · · ·· (2,42 g, 4,13 mmol, výtěžek je 81 %) ve formě bezbarvé amorfní pevné látky.

M-NMR^O MHz, DMSO-dg) : ll,36(lH,s), 7,68(1H, s) , 6,907,44(13H, m) , 5,89(1H, s), 5,55(1H, d), 4,O9(1H, m) , 4,O4(1H, d) , 4,O4(1H, d) , 3,82(2H, m) , 3,74(6H,s), 3,19(2H, m) ,

1,99(1H, m), 1,36(1H, m) , 1,17(3H, s).

FAB-MAS(mNBA): 578 (M+H)⁺

Příklad 9: 5'-O-dimethoxytrityl-2'-O,4'-C-ethylen-5-methyluridin-3'-O-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (příklad sloučeniny č. 2-234)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 8 (4,72 g, 8,05 mmol) v bezvodém pyridinu se azeotropicky refluxoval za účelem odstranit vodu. Produkt se rozpustil v atmosféře dusíku v nevodném dichlormethanu (142 ml). K roztoku se přidal N,N-diisopropylamin (2,80 ml, 16,1 mmol) a pak 2-kyanoethyl-N,N-diisopropylchorfosforamidit (2,16 ml, 9,66 mmol) přidal po kapkách do ledové lázně. Směs se míchala při teplotě místnosti po dobu 6 hodin. Reakční směs se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitannu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chormatograficky na koloně se silikagelem (jako eluát se použila směs hexan:ethylacetát:triethylamin = 50:50:1 - hexan : ethylacetát : triethylamin = 30:60:1) za účelem získání sloučeniny uvedené v názvu (5,64 g, 7,17 mmol, výtěžek je 89 %) ve formě bezbarvé amorfní pevné látky.

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,1-1,2(15H, m) , 1,4(1H, m) , 2,08(lH,

m) , 2,4(2H, m) , 3,2-4,0(14H, m) , 4,38(2H, m) , 4,47(1H, m) ,

6,O6(1H, s), 6,8-6,9(4H, m), 7,2-7,5(9H, m), 7,91(1H, m).

FAB-MAS(mNBA): 787 (M+H)⁺

Příklad 10: 3',5'-di-O-benzyl-2'-0,4-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin (příklad sloučeniny č. 1-23)

K sloučenině získané v příkladu 12 (238 mg, 0,30 mmol) ve směsi pyridin:methanol:voda = 65:30.5 (5 ml) při teplotě 0°C se přidal vodný 2N roztok hydroxidu sodného a roztok směsi (5 ml) obsahující pyridin:methanol:voda = 65:30:5. Směs se míchala při teplotě místnosti po dobu 15 minut. Reakční směs se neutralizovala 1N kyselinou chlorovodíkovou a extrahovala se ethylacetátem (přibližně 30 ml). Organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem uhličitanu sodného (přibližně 30 ml) a saturovaným vodným roztok chloridu sodného (přibližně 30 ml), sušila se na bezvodém síranu hořečnatém a pak se koncentrovala ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky a na koloně se silikagelem (jako eluát se použila směs dichlormethan:methanol = 50:1) za účelem získat bezbarvou amorfní pevnou látku (133 mg, 0,23 mmol, výtěžek je 78 %) .

to-NMRÍÍOO MHz, CDC1₃) : 1,44(1H, d, 13 Hz), 2,31(1H, dd, 13 a 19 Hz), 3,56(1H, d, 11Hz), 3,70(lH, d, 11Hz), 4,10(2H,m), 4,24(lH,s), 4,45(1H, d, 12 Hz), 4,53-4,67(4H, m), 6,52(1H, s), 7,3(10H, m) , 7,53(2H, m) , 7,62(1H, m) , 8,03(2H, d, 7,6 Hz), 8,66 (1H, s), 8,78(1H, s), 9,OO(1H, brs).

FAB-MAS(mNBA): 578 (M+H)⁺

Příklad 11: 2'-0,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin (příklad sloučeniny č. 1-178)

K roztoku sloučeniny získané v příkladu 10 (116 mg, 0,20 mmol) v bezvodém methylenchloridu (5 ml) při teplotě -78 °C se přidal pomalu po kapkách 1M roztok chloridu boritého (1,5 ml, 1,5 mmol) v dichlormethanu a směs se míchala při teplotě -78°C po dobu 3 hodiny. K reakční směsi se přidal 1M roztok chloridu boritého (1,5 ml, 1,5 mmol) v dichlormethanu a směs se míchala po dobu 2 hodin. Směs se pomalu zahřívala na teplotu místnosti a rychle se ochladila na teplotu -78°C a pak se přidal do směsi methanol (5 ml). Reakční směs se pomalu zahřívala na teplotu místnosti a zakoncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil

♦ · ·· · · ·· chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se používá směs dichlormethan:methanol = 9:1). Vzniká bílý prášek (49 mg, 0,17 mmol, výtěžek je 84 %).

¹H-NMR(400 MHz, CD₃OD): 1,45(1H, dd, 4,3 a 13 Hz), 2,12(1H, m), 3,72(1H, d, 12Hz), 3,79(1H, d, 12Hz) , 4,O4(1H, dd, 7,3 a 12

Hz), 4,15(1H, dt, 4,3 a9,4 Hz), 4,36(1H, d, 3,2Hz), 4,43(1H, d, 3,2 Hz), 6,57(1H, s), 7,57(2H, m), 7,66(1H, m), 8,09(2H, d, 8,0 Hz), 8,72(1H, s), 8,85(1H, s).

FAB-MAS(mNBA): 398 (M+H)⁺

Příklad 12: 2'-0,4'-ethylenadenosin (příklad sloučeniny č. 1-7)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 11 (14 mg, 0,035 mmol) v methanolu saturovaném amoniakem (1 ml) se nechal stát přes noc. Směs se zakoncentrovala a zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluant se použila směs dichlormethan:methanol) za vzniku bílého prášku (10 mg, 0,034 mmol, výtěžek je 98 %) .

¹H-NMR(400 MHz, CD₃OD) : 1,32(1H, dd, 4 a 13 Hz), 2,04(lH, dt, 7,4 a 12 Hz), 3,53(1H, dd, 5 a 12 Hz), 3,61(1H, dd, 5,2 a 12 Hz), 3,90(lH, dd, 7,4 a 12 Hz), 3,97(1H, dt, 4 a 12 Hz), 4,15(1H, d, 3,1 Hz), 5,27(1H, t, 5,2 Hz), 5,39(1H, d, 3,1 Hz), 6,33(1H, s), 7,29(2H, s) , 7,66(1H, m) , 8,14(1H, s) , 8,42(1H,

s) .

FAB-MAS(mNBA): 294 (M+H)⁺

UV(Xmax):260(pH7), 260(pHl), 258(pHl3)

Příklad 13: 5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin (příklad sloučeniny číslo 1-31)

Roztok sloučeniny získaný v příkladu 11 (14 mg, 0,035 mmol) v bezvodém pyridinu se azeotropicky refluxoval za účelem odstranit vodu. Produkt se rozpustil v nevodném pyridinu (1

• ♦	• « •	♦	• a ♦·	• · • «	• · •	•
• ·	*	♦		• ·	•	•
• ·	♦	* ·	*	« · ·	♦ ·	•
* ·	a ·		• ·	< »

ml) za atmosféry dusíku a k roztoku se přidal 4,4'dimethoxytritylchlorid (2,59 g, 7,65 mmol). Směs se míchala při teplotě 40°C po dobu 5 hodin. Do reakční směsi se přidalo malé množství methanolu a pak se rozpouštědlo odpařilo ve vakuu. Zbytek se rozdělil mezi vodu a chloroform a organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a koncentroval se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluant se použila směs dichlormethan:methanol = 100 : 5) za vzniku sloučeniny uvedené v názvu (18 mg, 0,026 mmol, výtěžek je 73 %) ve formě bezbarvé amorfní pevné látky.

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : l,63(lH,m), 2,14(1H, 7,5, 12 a 13 Hz),

3,37(1H, d, 11Hz), 3,41(1H, d, 11 Hz), 3,79(6H, s),

4,10(2H,m), 4,48(1H, d, 3,3 Hz), 4,59(1H, d, 3,3 Hz), 6,54(1H, s), 6,58(4H, m) , 7,2-7,6(12H, m) , 8,02(2H, m) , 8,45(1H, s),

8,82(1H, s) , 9,02(1H, brs) .

FAB-MAS(mNBA): 700 (M+H)⁺

Příklad 14: 5'-O-dimethoxytrityl-2'-O,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin-3'-O-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (příklad sloučeniny č. 1-186)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 13 (16 mg, 0,023 mmol) v bezvodém pyridinu se azeotropicky refluxovalo za účelem odstranit vodu. Produkt se rozpustil za podmínek atmosféry dusíku v bezvodém dichlormethanu (0,5 ml). K roztoku se přidal tetrazol-N, N-diisopropylaminová sůl (10 mg) a pak se po kapkách do ledové lázně přidal 2-kyanoethyl-N, N, Ν', N'-tetraisopropylchlorfosforamidit (přibližně 20 μΐ) . Směs se míchala při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a zakoncentrovala se ve va81 • « ·· ** ·· · * * · ♦ ♦ 9 ·· * · · · » I * * · «·« 9 · · <

·····♦···

999 99 99 ·· 99 + 9 9 kuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se používá směs dichlormethan:ethylacetát =

2:1), za účelem získání sloučeniny uvedené v názvu (20 mg ,

0,022 mmol, výtěžek je 97 %), ve formě bílé pevné látky.

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : l,0-l,2(12H, m) , 1,54(1H, m) , 2,15(1H, m), 2,33(2H, m), 3,3-3,6(6H, m), 3,8(6H, s), 4,08(2H, m),

4,65(1H, m), 4,75(1H, m), 6,53(1H, s), 6,84(4H, m), 7,27,6(12H, m) , 8,01(2H, m) , 8,53(1H, s), 8,83(1H, s) , 9,O1(1H, brs) .

FAB-MAS(mNBA):900(M+H)⁺

Příklad 15: 3',5'-di-O-benzyl-2'-O,4'-C-ethylenuridin (příklad sloučeniny č. 2-10)

Vodný roztok IN hydroxidu sodného (2 ml) se přidal k roztoku sloučeniny získané v příkladu 13 (194 mg, 0,292 mmol) v pyridinu (3 ml) při teplotě 0°C a směs se míchala při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Reakční směs se neutralizovala IN kyselinou chlorovodíkovou a extrahovala se ethylacetátem (10 ml). Organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného, sušil se na bezvodém síranu hořečnatém a pak se koncentroval ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluát se použila směs dichlormethan:methanol = 100:3) za vzniku bezbarvého oleje (105 mg, 0,233 mmol, výtěžek je 80 %).

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,36(1H, m) , 2,29(1H, m) , 3,63(1H, d,

Hz), 3,74(1H, d, 11 Hz), 3,87(1H, d, 2,9 Hz), 4,03(2H, m), 4,29(1H, d, 2,9 Hz), 4,49(1H, d, 12 Hz), 4,5O(1H, d, 11Hz), 4,53(1H, d, 12 Hz), 5,2O(1H, dd, 2 a 8 Hz), 6,O4(1H, s) , 7,27,4(10H, m),, 8,13(1H, d, 8,2 Hz), 8,57(1H, brs).

FAB-MAS(mNBA):451(M+H)⁺

Příklad 16: 2'-0,4'-ethylenuridin • 9 9 9 9 4·9 · « · • · 9 · 9 9 9

999 49 99 ·· 99 9 (příklad sloučeniny č. 2-1)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 15 (100 mg, 0,222 mmol) v methanolu (4 ml) se míchal v atmosféře vodíku za atmosferického tlaku v přítomnosti hydrogenačního katalyzátoru po dobu 5 hodin. Reakční směs se filtrovala za účelem odstranění katalyzátoru a filtrát se koncentroval ve vakuu. Zbytek se čistil chromatografií na koloně se silikagelem (jako eluant se použila směs dichlormethan:methanol = 10:1) za účelem získat bezbarvý olej (v množství 45 mg, 0, 167 mmol a výtěžek je 75 %) .

¹H-NMR(400 MHz, CD₃OD) : 1,35(1H, dd, 4 a 13 Hz), 2,13(1H, ddd,

7,11 a 13 Hz), 3,66(1H, d, 12 Hz), 3,73(1H, d, 12 Hz), 3,914,08(2H,m), 4,01(lH, d, 3,2 Hz), 4,12(lH, d, 3,2 Hz), 5,66(1H, d, 8,2 Hz), 6,OO(1H, s), 8,37(1H, d, 8,2 Hz).

FAB-MAS(mNBA): 271 (M+H)⁺

Příklad 17: 5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylenuridin (příklad sloučeniny č. 2-15)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 16 (28 mg, 0,104 mmol) v bezvodém pyridinu se azeotropicky refluxoval za účelem odstranit vodu. Produkt se rozpustil v bezvodém pyridinu (3 ml) v atmosféře dusíku a do roztoku se přidal 4,4'-dimethoxytritylchlorid (50 mg, 0,15 mmol). Směs se míchala při teplotě mísnosti přes noc. Do reakční směsi se přidalo malé množství methanolu a z reakční směsi se rozpouštědlo odpařilo ve vakuu. Zbytek se rozdělil mezi vodu a chloroform a organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se použila směs dichlormethan:methanol=100:3), přičemž se získala sloučenina uvedená v názvu (25 mg, 0,044 mmol, výtěžek je 42 %) ve formě bezbarvého oleje.

· · *· >· ·· • · · « • · ♦ · · • ··· « · » * 9 9 · «

999 99 99 99 ·· ·

A-NMRHOO MHz, CD₃OD) : 1,35(1H, dd, 3 a 14 Hz), 2,03(lH, ddd,

8, 11 a 14 Hz), 2,46(1H, d, 8Hz), 3,36(1H, d, 11 Hz), 3,41(1H, d, 11 Hz), 3,80(3H, s) , 3,81(3H, s), 3,97(2H, m) , 4,21(1), 4,33(1H, brm), 5,31(1H, m) , 6,1O(1H, s), 6,86(4H, m) , 7,27,5(9H, m) , 8,27(1H, d, 8,2 Hz), 8,43(1H, brs) .

FAB-MAS(mNBA): 573 (M+H)⁺

Příklad 18: 5'-O-dimethoxy trityl-2'-O,4'-C-ethylenuridin-3'-O-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (příklad sloučeniny č. 2-233)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 17 (6 mg, 0,0105 mmol) v bezvodém pyridinu se azeotropicky refluxoval za účelem odstranit vodu. Produkt se rozpustil v bezvodém pyridinu v atmosféře dusíku a do roztoku se přidal dichlormethan (0,5 ml). K roztoku se přidal tetrazol-N,N-diisopropylaminová sůl (3 mg) a pak se po kapkách do ledové lázně přidal 2-kyanoethyl-Ν,Ν, Ν', N'-tetraisopropylchlorfosforamidit (přibližně 5 μΐ) . Směs se míchala při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a zakoncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se používá směs dichlormethan : ethylacetát = 2:1), za účelem získání sloučeniny uvedené v názvu (8mg) ve formě bílé pevné látky.

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,1-1,2(13H, m) , 2,O9(1H, m) , 2,4(2H,

m) , 3,3-3,6(6H, m) , 3,81(6H, s), 3,94(2H, m) , 4,47(1H, m) ,

5,18(1H, d, 8,2 Hz), 6,O8(1H, s), 6,86(4H, m), 7,2-7,4(9H, m) ,

8,31(1H, d, 8,2 Hz).

FAB-MAS(mNBA):773(M+H)⁺

Příklad 19: 3',5'-di-O-benyl-2'-O,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5methylcytidin (příklad sloučeniny č. 2-46)

Φ · · • · φ • · · φφ· · φ φ * · «

Κ roztoku sloučeniny získané v příkladu 14 (310 mg, 0,396 mmol) v pyridinu (5 ml) při teplotě 0°C se přidal IN vodný roztok hydroxidu sodného (5 ml) a směs se míchala při teplotě místnosti po dobu 20 minut. Reakční směs se neutralizovala přidáváním po kapkách 20% kyseliny octové a extrahovala se dichlormethanem. Dichlormethanová vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se se použila směs dichlormethan : methanol = 100:2) a získala se sloučenina uvedená v názvu (190 mg, 0,334 mmol, výtěžek je 84 %).

8,29(2H, m)

FAB-MAS(mNBA):568(M+H)⁺

Příklad 20: 2'-O,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methylcytidin (příklad sloučeniny č. 2-226)

K roztoku sloučeniny získané v příkladu 19 (120 mg, 0,211 mmol) v bezvodém dichlormethanu (5 ml) při teplotě -78 °C se přidal po kapkách 1 M roztok chloridu boritého (1,6 ml) a směs se míchala při teplotě -78 °C po dobu 4 hodin. Ke směsi se po kapkách pomalu přidával methanol (1 ml) a směs se míchala po dobu 10 minut. pH reakce se upravilo na hodnotu 7 až 8 přidáváním saturovaného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Reakční směs se zahřívala na teplotu místnosti a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se použije směs dichlormetan : methanol = 100 : 6) za vzniku sloučeniny uvedené v názvu (29 mg,

0,075 mmol, výtěžek je 36 %) ve formě pevné látky.

• · · 9 9 999 99 9 • 9 9 9 9 9 9 ·9 99 99 99 ¹H-NMR(400 MHz, d-DMSO: 1,24(1H, m), 2,01(3H, m) , 2,0(lH, m) ,

3,54(1H, dd, 5,4 a 12 Hz), 3,64(1H, dd, 5,4 a 12 Hz), 3,88(3H, m) , 4,1O(1H, m) , 5,36(1H, d, 5,4 Hz), 5,49(1H, t, 5,0 Hz),

5,95(1H, s), 7,4-7,6(3H,

13,17(1H, brs).

FAB-MAS(mNBA):388(M+H)⁺ !,21(2H, m) , 8,49(1H,

Příklad 21: 5'-O-dimethoxytrityl-2'-O,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methylcytidin (příklad sloučeniny č. 2-51)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 20 (44 mg, 0,114 mmol) v nevodném pyridinu se azeotropicky refluxoval za účelem odstranění vody. Produkt se rozpustil v bezvodém pyridinu (1 ml) za atmosféry dusíku a k roztoku se přidal 4,4'-dimethoxytritylchlorid (60 mg, 0,177 mmol). Směs se míchala při teplotě místnosti přes noc. Do reakční směsi se přidalo malé množství methanolu a pak se rozpouštědlo odpařilo ve vakuu. Zbytek se rozdělil mezi vodu a chloroform a organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluant se použila směs dichlormethan:methanol = 100 : 4) za vzniku sloučeniny uvedené v názvu (73 mg, 0,106 mmol, výtěžek je 93 %) ve formě bezbarvé amorfní pevné látky.

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,46(1H, m) , 1,49(3H, s) , 2,O6(1H, m) , 2,59(lh, d, 8,6 Hz), 3,36(1H, d, 11 Hz), 3,39(1H, d, 11Hz) , 3,80(3H, s), 3,81(3H, s), 3,99(2H, m) , 4,3O(1H, d, 3,3 Hz),

4,39(1H, m) , 6,12(1H, s) , 6,85(4H, m) , 7,2 - 7,5 (12H, m) ,

8,03(1H, s), 8,28(2H, s).

FAB-MAS(mNBA): 573 (M+H) «*«

• ·

Příklad 22: 5'-O-dimethoxytrityl-2'-O,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methylcytidin-3'-O-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (příklad sloučeniny č. 2-236)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 21 (35 mg, 0,0507 mmol) v bezvodém pyridinu se azeotropicky refluxovalo za účelem odstranit vodu. Produkt se rozpustil za podmínek atmosféry dusíku v bezvodém dichlormethanu (1 ml) . K roztoku se přidala tetrazol-N,N-diisopropylaminová sůl (17 mg) a pak se po kapkách do ledové lázně přidal 2-kyanoethyl-N, N, Ν', N'-tetraisopropylchlorfosforamidit (přibližně 32 μΐ, 0,1 mmol). Směs se míchala při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a zakoncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se používá směs dichlormethan:ethylacetát = 2:1), za účelem získání sloučeniny uvedené v názvu (40 mg , 0,0445 mmol, výtěžek je 89 %), ve formě bílé pevné látky.

ta-NMRÍÍOO MHz, CDC1₃) : 1,1-1,2(12H, m) , 1,36(3H, m), 2,1O(1H, m) , 2,36(2H, m) , 3,3-3,6(6H, m) ,

3,98(2H, m) , 4,42(1H, m) , 4,49(1H, m) , 6,11(1H,

m), 7,2-7,5(12H, m), 8,14(1H, s), 8,28(2H, m). FAB-MAS(mNBA):890(M+H)⁺

s), 1,37(1H, 3,81(6H, m), s) , 6,88(4H,

Příklad 23: 2'-O,4'-C-ethylen-5-methylcytidin (příklad sloučeniny č. 2-226)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 20 (11,6 mg, 0,030 mmol) v methanolu saturovaném amoniakem (2 ml) se nechal stát přes noc. Směs se zakoncentrovala a získalo se pevná bílá látka (8,5 mg, 0,030 mmol).

¹H-NMR(400 MHz, d-DMSO): 1,2O(1H, m), 1,82(3H, s), 1,97(1H, m), 3,49(1H, dd, 5 a 12 Hz), 3,58(1H, dd, 5 a 12 Hz), 3,85(2H, m), • ·

5,23(1H, d, 5 Hz), 5,32(1H, t, 5 Hz), 5,84{lH, s), 6,7 (1H, brs), 7,2(1H, brs), 8,O8(1H, s).

FAB-MAS(mNBA):284(M+H)⁺

UV(lmax): 279(pH7), 289(pHl), 279(pH13)

Příklad 24: 3',5'-di-O-benzyl-2'-O,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin (příklad sloučeniny č. 1-24)

K roztoku sloučeniny získané v příkladu 15 (přibližně 200 mg) v pyridinu (2 ml) se přidal 1 N vodný roztok hydroxidu sodného (2 ml) a směs se míchala při teplotě místnosti po dobu 15 minut. Reakční směs se neutralizovala 1 N kyselinou chlorovodíkovou a extrahovala se ethylacetátem. Organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného, sušila se na bezvodém síranu hořečnatém a pak se koncentrovala ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se se použila směs dichlormethan : methanol = 50:1) a získala se bezbarvá amorfní pevná látka (20 mg, 0,36 mmol, výtěžek je 6 %, dva kroky).

fo-NMRKOO MHz, CDC1₃) : 1,27(3H, s) , 1,29(3H, s) , 1,43(1H, dd, a 13 Hz), 2,28(1H, m) , 2,59(1H, kvi, 6,9 Hz), 3,54(1H, d, 11 Hz), 3,68(1H, d, 11 Hz), 4,03(2H, m) , 4,15(1H, d, 3,0 Hz),

	4,31(1H,	d,	3,0 Hz),	4,45(1H, d,	12) ,	4,56(1H, d, 12	Hz) ,
	4,61(1H,	d,	12 Hz),	4,63(1H, d,	12 Hz)	, 6,18(1H, s),	7,2-
	7,4(10H,	m) ,	8, 19(1H,	s), 11,93(1H,	brs) .

FAB-MAS(mNBA):560(M+H)

Příklad 25: 2'-O,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin (příklad sloučeniny č. 1-177)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 24 (10 mg, 0,018 mmol) v methanolu (2 ml) se míchal v atmosféře vodíku za atmosferického tlaku v přítomnosti hydrogenačního katalyzátoru * φφ »φ ·φ ··

Φ·Φ« » φ · φ · « φ φ φ φ φ · · · « · • · Φ · · « ΦΦΦ * φ « φ φ · ·· φ φφ ··· φφ < φ φφ φφ « po dobu 5 hodin. Reakční směs se filtrovala za účelem odstranění katalyzátoru a filtrát se koncentroval ve vakuu. Zbytek se čistil chromatografií na koloně se silikagelem (jako eluent se použila směs dichlormethan/methanol = 10:2) za účelem získání bezbarvého oleje (v množství 5 mg, 0,013 mmol a výtěžek je 72 %).

¹H-NMR(400 MHz, CD₃OD): 1,21(3H, s), 1,22(3H, s), 1,41(1H, dd, 4 a 13 Hz), 2,18 (1H, m) , 2,69(1H, kvi, 6,9 Hz), 3,69(1H, d,

Hz), 3,76(1H, d, 12 Hz), 4,0(2H, m) , 4,26(1H, d, 3,2 Hz),

4,3O(1H, d, 3,2 Hz), 6,30(lH, s), 8,4O(1H, s).

FAB-MAS(mNBA): 380 (M+H)⁺

Příklad 26: 5'-O-dimethoxytrityl-2-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin (příklad sloučeniny č. 1-35)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 25 (5 mg, 0,13 mmol) v bezvodém pyridinu se azeotropicky refluxoval za účelem odstranění vody. Produkt se rozpustil v bezvodém pyridinu (1 ml) za atmosféry dusíku a 4,4'-dimethoxytritylchloridu (14 mg, 0,04 mmol) a přidal se k roztoku. Směs se míchala při teplotě 40 °C po dobu 3 hodiny. Do reakční směsi se přidalo malé množství methanolu a pak se rozpouštědlo odpařilo ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se použila směs dichlormethan:methanol = 100 : 6) za vzniku sloučeniny uvedené v názvu (4 mg, 0,0059 mmol, výtěžek je 45 %) ve formě bezbarvé pevné látky.

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,26(3H, d, 1,4 Hz), 1,28(3H, d, 1,4

Hz), 1,66(1H, m) , 2,15(1H, m) , 2,59(1H, kvi, 6,9 Hz), 3,65(1H, m) , 3,78(1H, m) , 4,06(2H, m) , 4,35(1H, m) , 4,38(1H, d, 3,2 Hz), 6,23(1H, s) , 6,8(4H, m) , 7,2-7,5(9H, m) , 8,01(lH, s) , 8,19(1H, brs).

FAB-MAS(mNBA): 682(M+H)⁺ • 94 99 *4 99 • 9 · 9 9 · 4 9 9 « 9 ο _η ·«···«··· ο y ···♦·· ««· · · 9

994 99 3 99 • 9« 99 99 9« 99 9

Příklad 27: 5 '-0-c!imethoxytrityl-2 '-0, 4 '-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit (příklad sloučeniny č. 1-185)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 26 (4 mg, 0,0058 mmol) v bezvodém pyridinu se azeotropicky refluxoval za účelem odstranit vodu. Produkt se rozpustil za podmínek atmosféry dusíku v bezvodém dichlormethanu (0,5 ml). K roztoku se přidala tetrazol-N,N-diisopropylaminová sůl (5 mg) a pak se po kapkách do ledové lázně přidal 2-kyanoethyl-N,N, Ν', N'-tetraisopropylchlorf osf oramidit (9 μΐ, 0,03 mmol). Směs se míchala při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Reakční směs se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a zakoncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na koloně se silikagelem (jako eluent se používá směs dichlormethan:ethylacetát = 2:1), za účelem získání sloučeniny uvedené v názvu (4 mg ) ve formě bílé pevné látky.

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,1-1,4(19H, m) , 2,1(1H, m) , 2,4(2H,

m) , 2,6(1H, m) , 3,3-3,6(6H, m) , 3,8(6H, s) , 4,0-4,6(4H, m) ,

6,2(1H, s), 6,8(4H, m) , 7,2-7,5(9H, m) , 8,1(1H, s) .

Příklad 28: 2'-0,4'-ethylenguanosin (příklad sloučeniny č. 1-5)

Roztok sloučeniny získané v příkladu 25 (0,5 mg) v methanolu saturovaném v amoniaku (0,5 ml) se nechal stát při teplotě 60 °C po dobu 5 hodin. Směs se zakoncentrovala a vytvořil se bílý prášek (0,4 mg).

FAB-MAS(mNBA): 310(M+H)⁺ UV(Xmax): 255(pH7), 256(pHl), 258266(pH13)

Příklad 29: Syntéza oligonukleotidového derivátu • · «··· * · • · · · · «·· * · · • · · · · · · ··» ·· ·· *« »· ·

Syntéza oligonukleotidového derivátu se provádí za použití mechanického syntetizéru nukleových kyselin (ABI model392 DNA/RNA syntetizér: produkt firmy Perkin-Elmer Corp.) v rozmezí 1,0 mikromolů. Rozpouštědla, činidla a koncentrace fosforamiditu v každém cyklu syntézy je stejná, jako při syntéze přirozených oligonukleotidů. Rozpouštědla, činidla a fosforamídity přirozeného typu nukleotidů jsou produkty firmy PE Biosystems. Každá sekvence upraveného oligonukleotidového derivátu se syntetizovala opakováním kondenzace sloučeniny získané v příkladu 9 nebo amidity obsahující čtyři druhy bází nukleové kyseliny vhodné pro syntézu nukleotidů s 5'-hydroxythymidinem produkovaným deprotekcí skupiny DMTr 5'-O-DMTr-thymidinu (1,0 mikromolů) za použití kyseliny trichlorctové, 3'-hydroxyskupiny thymidinu, která je zachycena na nosiči CGP. Cyklus syntézy je následující:

1) detritylace směsí kyselina trichlorctová/dichlormethan, 35 vteřin

2) spojování fosforamiditu (přibližně 20 ekv.), tetrazol/acetonitril, 25 vteřin nebo 10 minut

3) vyplňování mezer za použití směsi 1-methylimidazol/tetrahydrofuran, anhydrid kyseliny octové/pyridin/tetrahydrofuran, 15 vteřin

4) oxidace za použití směsi jód/voda/pyridin/tetrahydrofuran, vteřin

Když se použije ve shora uvedeném kroku 2) cyklusloučenina získaná v příkladu 9, reakční čas je 10 minut, a když se použijí fosforamidity, reakční čas je 25 vteřin.

Po syntéze požadované sekvence oligonukleotiového derivátu se odstranila skupina 5'-DTMr. Nosič obsahující požadovaný produkt se odstranil koncentrovaným vodným roztokem amoniaku za účelem odstranit oligomér z nosiče a tak se odstranila ochrana z kyanoethylové skupiny, která je chráněna fosforovou skupinou. Z oligoméru se odstranila ochranná aminoskupina v adeninu, guaninu a v cytosinu. Oligonukleotidový derivát se se Čistil HPLC s reverzní fází (HPLC: LC-PV: produkt firmy Shimazu Corp., kolona: Wakopak WS-DNA: produkt Wako Pure Chemical Industry, Ltd.) za účelem získání požadovaného oligonukleotidu.

Na základě této syntetické metody se získala následující oligonukleotidová sekvence (oligonukleotid je zde označen jako „oligonukleotid 1) (koncentrace je 0,23 μπιοί, výtěžek je 23 %)

Příkladem sekvence č. 2 uvedené v seznamu sekvencí je sekvence 5'-gcgttttttgct-3', kde cukerná část thymidinů v bázích č. 4 až 8 je 2'-O,4'-C-ethylen.

Připomínky k příkladu 1

3,5-di-O-benzyl-4-trifluormethansulfonyloxymethyl-1,2-O-isopropyliden-a-D-erythropentofuranosa

K roztoku 3,5-di-O-benzyl-4-trifluormethansulfonyloxymethyl-1,2-O-iso-propyliden-a-D-erythropentofuranosy (2 000 mg, 5,0 mmol) v bezvodém dichlormethanu (50 ml) a trifluorsulfonovém anhydridu (1 010 mg, 6,0 mmol) v atmosféře dusíku při teplotě -78°C se přidal bezvodý pyridin (0,60 ml, 7,5 mmol) a směs se míchala po dobu 40 minut. Reakční směs se částečně rozdělila mezi methylenchlorid a saturovaný vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (přibližně 100 ml). Organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (přibližně 100 ml) a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného (přibližně 100 ml) , sušila se za použití bezvodého síranu hořečnatého a pak se koncentrovala ve vakuu za vzniku bílého prášku (2 520 mg, 4,73 mmol, výtěžek je 95 %) , který se použije v další reakci, aniž dojde k dalšímu čištění.

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,34(3H, s) , 1,63(3H, s) , 3,48(1H, d, 10 Hz), 3,53(1H, d, 10 Hz), 4,21(1H, d, 5,0 Hz), 4,5(4H, m) , 4,74(1H, d, 12 Hz), 4,80(lH, d, 12 Hz), 5,01(lH, d, 12 Hz), 5,73(1H, d, 4,6 Hz), 7,3(10H, m) .

• ·· · · ·· ·· ··· · · · · · · · · ' Odkaz k příkladu 2

3.5- di-0-benzyl-4-kyanomethyl-l,2-O-isopropyliden-a-D-erythropentofuranosa

Sloučenina získaná v příkladu 1 (2 520 mg, 4,73 mmol) se rozpustila v dimethylsulfoxidu (50 ml) při teplotě 90 °C.

K roztoku se přidal kyanid sodný (463 mg, 9,46 mmol) při teplotě místnosti a směs se míchala při teplotě 50°C po dobu 3 hodin. Reakční směs se rozdělila mezi vodu (přibližně 100 ml) a ethylacetát (přibližně 100 ml) . Organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem chloridu sodného (přibližně 100 ml), sušila se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na silikagelu (za použití směsi hexan : ethylacetát =4:1) za vzniku bezbarvého oleje (1 590 mg, 3,89 mmol, výtěžek je 82 %). ¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,34(3H, s), 1,62(3H, s), 2,88(1H, d, 17 Hz), 3,15(1H, d, 17 Hz), 3,5O(1H, d, 10 Hz), 3,58(1H, d, 10 Hz), 4,O8(1H, d, 5,1 Hz), 4,52(1H, d, 12 Hz), 4,56(1H, d, 12Hz), 4,57(1H, m) , 4,58(1H, d, 12 Hz), 4,76(1H, d, 12 Hz),

5,73(1H, d, 3,7 Hz), 7,3(10H, m).

Odkaz k příkladu 3

3.5- di-0-benzyl-4-formylmethyl-l,2-O-isopropyliden-a-D-erythropentofuranosa

K roztoku sloučeniny získané v příkladu 2 (610 mg, 1,49 mmol) v dichlormethanu (10 ml) v atmosféře dusíku při teplotě -78°C se přidal po kapkách 1,5 M toluenový roztok hydridu isobutylhlinítého a směs se míchala po dobu 1 hodiny při teplotě -78°C a pak se zahřála na teplotu místnosti. K reakční směsi se přidal methanol (5 ml) a saturovaný vodný roztok chloridu amonného (přibližně 20 ml) a tato směs se míchala po dobu 30 minut. Reakční směs se extrahovala ethylacetátem (přibližně 30 ml) . Organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (přibližně 30 ml) a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného (přibližně 30 ml), sušila se • · · · · ·· ·· · • · · · · ·· · · »·· • · · ···· ·· · • · · · · ······ · · ··· ·· · ··· ··· · · ·· ·· ·· ··· pomocí bezvodého síranu horečnatého a pak se koncentrovala ve vakuu za vzniku produktu, který se použil v další reakci bez dalšího čištění.

Odkaz k příkladu 4

3.5- di-0-benzyl-4-hydroxyethyl-l,2-0-isopropyliden-a-D-erythropentofuranosa

K roztoku sloučeniny získané v příkladu 3 (154 mg, 0,377 mmol) v ethanolu (5 ml) se přidal NaBH₄ (7,6 mg, 0,2 mmol) a směs se míchala při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Reakční směs se rozdělila mezi ethylacetát (přibližně 10 ml) a vodu (přibližně 10 ml) a organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem chloridu sodného (přibližně 10 ml) , sušila se za použití vodného síranu hořečnatého a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na silikagelu (za použití směsi hexan : ethylacetát =2:1) za vzniku bezbarvého oleje (117 mg, 0,284 mmol, 75 %).

Odkaz k příkladu 5

3.5- di-O-benzyl-4-formyl-1,2-O-isopropyliden-a-D-erythropentofuranosa

K methylenchloridu (200 ml) chlazenému při teplotě -78°C se přidal oxalylchlorid (6,02 ml, 69,0 mmol). K tomuto roztoku se po kapkách přidal roztok dimethylsulfoxidu (7,87 ml, 110 mmol) v bezvodém methylenchloridu (100 ml) . Po zamíchání po dobu 20 minut se k této směsi přidal roztok 3,5-di-O-benzyl-1,2-O-isopropyliden-a-D-erythropentofuranosy (9 210 mg, 23,02 mmol) v bezvodém dichlormethanu (100 ml) a směs se míchala po dobu 30 minut. K reakční směsi se přidal triethylamin (28 ml, 200 mmol) a pomalu se zahříval na teplotu místnosti. Reakční směs se rozdělila mezi dichlormethan a vodu (přibližně 300 ml) . Organická vrstva se promyla vodou (přibližně 300 ml) a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného (přibližně 300 ml), sušila se pomocí bezvodého síranu hořečnatého a pak se • · · · · · · ·· ··· · · ·· · · »· koncentrovala ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na slikagelu (za použití směsi hexan : ethylacetát = 5:1) za vzniku bezbarvého oleje (8 310 mg, 20,88 mmol, výtěžek je 91 %) · ¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,35(3H, s), l,60(3H, s) , 3,68(1H, d,

Hz), 4,37(1H, d, 4,4 Hz), 4,46(1H, d, 12Hz), 4,52(1H, d, 12 Hz), 4,59(1H, d, 12 Hz), 4,59(1H, dd, 3,4, 4,4 Hz), 4,71(1H, d, 12 Hz), 5,84(1H, d, 3,4 Hz), 7,3(10H, m), 9,91(1H, s).

FABMS(mNBA): 397(M-H)⁺, 421(M+Na)⁺ [a]_D+27,4° (0,51, methanol).

Odkaz k příkladu 6

3,5-di-O-benzyl-4-vinyl-l,2-O-isopropyliden-a-D-erythropentofuranosa

K roztoku sloučeniny získané v odkazech k příkladu 5 (8

310 mg, 20,88 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (300 ml) v atmosféře dusíku při teplotě 0°C se přidal 0,5 M toluenový roztok činidla Tebbe (44 ml, 22 mmol) a směs se míchala. Pak se pomalu přidával 0,1 N vodný roztok hydroxidu sodného (20 ml) . Směs se filtrovala přes celit za účelem odstranit sraženinu a sraženina se promyla diethyletherem (přibližně 100 ml) . Organická vrstva se sušila za použití bezvodého síranu horečnatého a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na silikagelu (za použití směsi hexan : ethylacetát = 8 : 1 až 5:1) za vzniku bezbarvého oleje (5 600 mg, 14,14 mmol, výtěžek je 68 %) .

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,28(3H, s) , 1,52(3H, s), 3,31(1H, d,

Hz), 3,34(1H, d, 11 Hz), 4,25(1H, d, 4,9 Hz), 4,4O(1H, d,

Hz), 4,52(1H, d, 12 Hz), 4,57(1H, dd, 3,9, 4,9 Hz),

4,59(1H, d, 12 Hz), 4,76(1H, d, 12 Hz), 5,25(1H, dd, 1,8, 11

Hz), 5,52(1H, dd, 1,8, 18 Hz), 5,76(1H, d, 3,9 Hz), 6,20(lH, dd, 11, 8 Hz) , 7,3 (10H, m) .

FABMS(mNBA): 419(M+Na)⁺.

* Odkaz k příkladu 7

3,5-di-0-benzyl-4-hydroxyethyl-l,2-O-isopropyliden-a-D-erythropentofuranosa

K roztoku sloučeniny získané v odkazech k příkladu 6 (5

500 mg, 13,89 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (200 ml) v atmosféře dusíku se přidal po kapkách 0,5 M roztok tetrahydrofuranu 9-BBN (9-borabicyklo[3,3, ljnonan) (80 ml, 40 mmol) a směs se míchala při teplotě místnosti přes noc. Do reakční směsi se přidávala voda do té doby než se zastavil vývoj plynu. Pak se přidal 3N vodný roztok hydroxidu sodného (30 ml) a pak se pomalu přidával 30 % vodný roztok hydrogenperoxidu při teplotě, která se udržovala mezi hodnotou 30 a 50 °C. Směs se míchala při teplotě 30 minut a dělila mezi saturovaný vodný roztok chloridu sodného (přibližně 200 ml) a ethylacetát (200 ml) . Organická vrstva se promyla neutrálním pufrovaným roztokem kyseliny fosforečné (přibližně 200 ml) a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného (přibližně 200 ml) a sušila se pomocí bezvodého síranu horečnatého a pak se koncentrovala ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na silikagelu (za použití směsi hexan : ethylacetát = 2 : 1 až 1 : 1) za vzniku bezbarvého oleje (5 370 mg, 12,97 mmol, výtěžek je 93 %). ¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,33(3H, s) , 1,66(3H, s) , 1,78(1H, ddd, 4,0, 8,5, 15 Hz), 2,51(1H, ddd, 3,4, 6,4, 15 Hz), 3,54(1H, d, 10 Hz), 3,80(2H, m), 4,13(1H, d, 5,3 Hz), 4,43(1H, d, 12 Hz), 4,52(1H, d, 12 Hz), 4,55(1H, d, 12 Hz), 4,65(1H, dd, 4,0, 5,3 Hz), 4,77(1H, d, 12 Hz), 5,77(1H, d, 4,0 Hz), 7,3(10H, m).

FABMS (mNBA) : 415(M+Na)⁺, [oc]_D+57,4° (0,91, methanol).

Odkaz k příkladu 8

3,5-di-O-benzyl-4-(p-toluensulfonyloxyethyl)-1,2-O-isopropyliden-a-D-erythropentofuranosa

K roztoku sloučeniny získané v odkazu k příkladu 4, který se azeotropicky refluxoval s toluenem (1 035 mg, 2,5 mmol) v bezvodém dichlormethanu (35 ml) v atmosféře dusíku při tep96 lote 0 °C se přidal triethylamin (1,8 ml, 13 mmol), dimethylaminopyridin (30 mg, 0,25 mmol) a p-toluensulfonylchlorid (858 mg, 4,5 mmol) a směs se míchala při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se dělila mezi dichlormethan a saturovaný vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (přibližně 100 ml) . Organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (přibližně 100 ml) a saturovaného vodného roztoku chloridu sodného (přibližně 100 ml) a sušila se za pomoci bezvodého síranu hořečnatého a pak se koncentrovala ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na silikagelu (za použití směsi hexan : ethylacetát =3:1) za vzniku bezbarvého oleje (1 340 mg, 2,6 mmol, výtěžek je 94 %).

XH	-NMR(400	MHz,	CDC13) : 1	,33 (	:3h, s),	1,49(3H,	s), 1,99(1H,	dt,
7,	6 a 15	Hz) ,	2,47(3H,	s) ,	2,60 (1H	ddd, 5,	7, 7,6, 15	Hz) ,
3,	28 (1H, d, 10	Hz), 3,45	(1H,	. d, 10	Hz), 4,11	(1H, d, 5,3	Hz) ,
4,	32(2H,	m) ,	4,42(1H, d,	12	Hz), 4,	5O(1H, d,	12 Hz), 4,54	‘ (1H,
d,	12 Hz)	, 4,	62(1H, dd,	4,	0, 5,2	Hz), 4,76	(1H, d, 12	Hz) ,

5,74(1H, d, 4,0 Hz), 7,3(12H, m), 7,78(2H, d, 8,3 Hz).

FABMS(mNBA): 569(M+H)⁺.

Odkaz k příkladu 9

1,2-di-O-acetyl-3,5-di-O-benzyl-4-(p-toluensulfonyloxyethyl)-a-D-erythropentofuranosa

K roztoku sloučeniny získané v odkazu k příkladu 8 (1 340 mg, 2,36 mmol) v kyselině octové (15 ml) se přidal kyselý anhydrid (1,88 ml, 20 mmol) a koncentrovaná kyselina sírová (0,01 ml). Směs se míchala při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Reakční směs nalila do vody (60 ml) v ledové lázni a míchala se po dobu 30 minut a pak se dělila mezi saturovaný vodný roztok chloridu sodného (přibližně 100 ml) a ethylacetát (přibližně 100 ml). Organická vrstva se promyla neutrálním pufrovacím roztokem kyseliny fosforečné, saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a a sušila se za použití bezvodého sí• 9 ♦ 9 ránu horečnatého a pak se koncentrovala. Zbytek se čistil chromatograficky na silikagelu (za použití směsi hexan : ethylacetát = 2:1) za vzniku bezbarvého oleje (1 290 mg, 2,11 mmol, výtěžek je 89 %, poměr α : β je 1 : 5) .

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : (derivát β) 1,86(3H, s) , 2,05(3H, s),

2,08(lH, m), 2,18(1H, m) , 2,42(3H s) , 3,30(lH, d, 10 Hz), 3,33(1H, d, 10 Hz), 4,23(1H, d, 5,1 Hz), 4,24(2H, m) , 4,42(2H, s), 4,45(1H, d, 12Hz), 4,55(1H, d, 12 Hz), 5,28(1H, d, 5,1

Hz), 6,01(lH, s), 7,3 (12 H, m), 7,73(2H, d, 8,3 Hz).

FAB-MAS(mNBA): 613(M+H)⁺.

Odkaz k příkladu 10

2'-O-acetyl-3', 5'-di-O-benzyl-4-p-toluensulfonyloxyethyl-5-methyluridin

Trimethylsilyllovaný thymin (500 mg, přibližně 2 mmol), který se připravil způsobem popsaným v publikaci H. Vorbrggen, K. Krolíkiewicz and B. Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)) se přidal do roztoku sloučeniny získané v odkazu příkladu 9 (650 mg, 1,06 mmol) v bezvodém 1,2-dichlorethanu (15 ml) při teplotě místnosti v atmosféře dusíku. Ke směsi se po kapkách přidal trimethylasilyltrifluormethansulfonát (0,36 ml, 2 mmol) a směs se míchala při teplotě 50 °C po dobu 1 hodiny. Saturovaný vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného se filtroval před celit. K filtrátu se přidal dichlormethan (50 ml). Organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (přibližně 50 ml) a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného (přibližně 50 ml) a sušila se za použití síranu horečnatého a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na silikagelu (použila se směs hexan : ethylacetát =1 : 2) za vzniku bezbarvé amorfní pevné látky (432 mg, 0,64 mmol, výtěžek je 60 %).

^xH-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,52(3H, d, 0,9 Hz), 1,94(1H, dt, 7,5 a 15 Hz), 2,06(3H, s), 2,23(1H, dt, 6,0 a 15 Hz), 2,42(3H, s) , 3,38(1H, d, 10 Hz), 3,67(1H, d, 10 Hz), 4,17(2H, m) , 4,36(1H, *9 99 99

9999 9 *9

999 9 999*9 9

9 9 9 9 9 9

999 9* *9 99 9* 9 d, 6,0 Hz), 4,41(1H, d, 12 Hz), 4,44(1H, d, 12 Hz), 4,48(1H, d, 12 Hz), 4,58(1H, d, 12 Hz), 5,39(1H, dd, 5,1 a 6,0 Hz), 6,O4(1H, d, 5,1 Hz), 7,3 (12 H, m) , 7,73(2H, dt, 1?8 a 8,3

Hz), 8,18 (1H, s).

FAB-MAS(mNBA): 679(M+H)⁺.

Odkaz k příkladu 11

2'-O-acetyl-3',5'-di-O-benzyl-4'-p-toluensulfonyloxyethyl-4-N-benzoylcytidin

Trimethylsilylovaný benzoylcytosin (300 mg, přibližně 1,0 mmol), který se připravil způsobem popsaným v publikaci H. Vorbrggen, K. Krolikiewicz and B. Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981) se přidal k roztoku sloučeniny získané v odkazu příkladu 9 (383 mg, 0,626 mmol) v bezvodém 1,2-dichlorethanu (4 ml). Trimethylsilyltrifluormethansulfonát (0,18 ml, 0,995 mmol) při teplotě 0 °C se přidal do směsi a směs se míchala při teplotě 50 °C po dobu 1 hodiny. Do směsí se přidal saturovaný vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (přibližně 10 ml) a methylenchlorid (přibližně 20 ml) a směs se míchala. Výsledná bílá sraženina se odfiltrovala za použití celitu. Organická vrstva filtrátu se promyla saturovaným vodným roztokem chloridu sodného (přibližně 20 ml) a sušila se za použití bezvodého síranu hořečnatého a koncentrovala se ve vakuu za vzniku bezbarvé amorfní pevné látky (397 mg, výtěžek je 83 %). ¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 8,70(lH, br) , 8,18(1H, d, 7,4 Hz), 7,87(2H, d, 7,5 Hz), 7,72(2H, d, 8,3 Hz), 7,61-7,57 (1H, m) , 7,51-7,48(2H, m) , 7,43-7,21(13 H, m) , 6,02(lH, d, 2,9 Hz), 5,4O(1H, dd, 5,8, 2,9 Hz), 4,57(1H, d, 11 Hz), 4,39(1H, d, 11 Hz), 4,32-4,28(3H, m) , 4,19-4,16(2H, m) , 3,69(1H, d 11 Hz),

3,31(1H, d, 11 Hz), 2,40(3H, s) , 2,30-2,23(1H, m) , 2,06(3H,

s), 1,95-1,89(1H, m).

FAB-MAS(mNBA): 768(M+H)⁺.

Odkaz k příkladu 12 • ·· ·· ·· ·· · y y *········· ····«···♦♦··· • · · · · · · · · ··· ·· ·· ·· ·♦ ··· • 2'-O-acetyl-3',5'-di-O-benzyl-4'-p-toluensulfonyloxyethyl-6-N—

-benzoyladenosin

Trimethylsilylovaný benzoyladenosin (500 mg, přibližně 2 mmol), který se připravil způsobem popsaným v publikaci H. Vorbrggen, K. Krolikiewicz and B. Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)) se přidal do roztoku sloučeniny získané v odkazu příkladu 9 (600 mg, 0,98 mmol) v bezvodém 1,2-dichlorethanu (15 ml) při teplotě místnosti v atmosféře dusíku.

Ke směsi se po kapkách přidal trimethylasílyltrífluormethansulfonát (0,36 ml, 2 mmol) a směs se míchala při teplotě 50 °C po dobu 4 hodiny. Do reakční směsi se přidal saturovaný vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a dichlormethan (50 ml). Reakční směs se rozdělila do těchto dvou vrstev. Organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (přibližně 50 ml) a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného (přibližně 50 ml) a sušila se za použití síranu hořečnatého a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatograficky na silikagelu (použila se směs dichlormethan : methanol =50 : 1) za vzniku bezbarvé amorfní pevné látky (405 mg, 0,51 mmol, výtěžek je 52 %).

^xH-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 2,O(1H, m) , 2,06(3H, s), 2,32(1H, dt,

6,0 a 15 Hz), 2,40(3H, s) , 3,36(1H, d, 10 Hz), 3,58(1H, d, 10

Hz) ,	4,	22(2H, m), 4,39(1H, d, 12	Hz) ,	4,45(1H,	d,	12 Hz),
4,47	(1H,	d, 12 Hz), 4,59(1H, d, 12	Hz),	4, 62(1H,	d,	5,6 Hz) ,
5, 94	(1H,	dd, 4,5 a 5.6 Hz), 5,94	(1H,	dd, 4,5	a	5,6 Hz),
6,21	(1H,	d, 4,5 Hz), 7,2-7,3(12H,	m) ,	7,54(2H,	m) ,	7,62(1H,
dt,	1,2	a 6,2 Hz), 7,72(2H, d, 8,3	Hz) ,	8,02(2H,	m) ,	8,21(1H,

s) , 8,75(1H, s), 8,97(1H, brs) .

FAB-MAS(mNBA): 7 92 (M+H)⁺.

Odkaz k příkladu 13

2'-O-acetyl-3',5'-di-O-benzyl-4'-p-toluensulfonyloxyethyluridin • «

100 φ φ · φ φ » φ φ φ ·· · · · · · · • · φ φ φ φ φφ φ φ φ • · φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφ φ φ φφ φ

Trimethylsilylovaný uráčil (200 mg, přibližně 0,8 mmol), který se připravil způsobem popsaným v publikaci H. Vorbrggen, K. Krolíkíewicz and B. Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)) se přidal do roztoku sloučeniny získané v odkazu příkladu 9 (200 mg, 0,327 mmol) v bezvodém 1,2-dichlorethanu (8 ml) při teplotě místnosti v atmosféře dusíku. Ke směsi se po kapkách přidal trimethylasilyltrífluormethansulfonát (0,145 ml, 0,8 mmol) a směs se míchala při teplotě 70 °C po dobu 1 hodiny. Do reakční směsi se přidal saturovaný vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a směs se filtrovala za použití celitu. K filtrátu se přidal dichlormethan (přibližně 10 ml) . Organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a sušila se za použití bezvodého síranu hořečnatého a koncentrovala se ve vakuu. Zbytek se čistil chromatografícky na silikagelu (použila se směs dichlormethan : methanol = 100 : 2) za vzniku bezbarvého oleje (199 mg, 0,299 mmol, výtěžek je 92 %) .

¹H-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,94(1H, dt, 7,4 a 15 Hz), 2,07(3H, s), 2,23(1H, dt, 5,9 a 15 Hz), 2,43(3H, s), 3,36(1H, d, 10 Hz),

3,65(1H, d, 10 Hz),	4,17 (2H, dd,	6 a	7 Hz), 4,31(1H, d, 5,9
Hz), 4,38(1H, d, 11Hz), 4,39(1H,	d,	11 Hz), 4,40(lH, d, 11
Hz), 4,58(1H, d, 11	Hz), 5,29(1H,	dd,	2,4 a 8,2 Hz), 5,33(1H,
dd, 4,5 a 6 Hz),	6,00(lH, d,	4,5	Hz), 7,2-7,4(12H, m),
7,61(1H, d, 8,2 Hz),	7,74(1H, d, 8,	3 Hz	), 8,14(1H, brs).

FAB-MAS(mNBA): 665(M+H)⁺.

Odkaz k příkladu 14

2'-O-acetyl-3',5'-di-O-benzyl-4'-p-toluensulfonyloxyethyl-4-N-benzoyl-5-methylcytidin

Trimethylsilylovaný uráčil (200 mg, přibližně 0,8 mmol), který se připravil způsobem popsaným v publikaci H. Vorbrggen, K. Krolikiewicz and B. Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)) se přidal do roztoku sloučeniny získané v odkazu pří• *

101 kladu 9 (400 mg, 0,653 mmol) v bezvodém 1,2-dichlorethanu (6 ml) . Ke směsi se po kapkách přidal trimethylasilyltrifluormethansulfonát (0,180 μΐ, 1,0 mmol) při teplotě 0°C a směs se míchala při teplotě 50 °C po dobu 1 hodiny. Reakční směs se zahřála na teplotu místnosti. Do reakční směsi se přidal saturovaný vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (přibližně 5 ml) a methylenchlorid (přiližně 10 ml) a směs se zamíchala. Dále se směs filtrovala za použití celitu, aby se odstranila bílá sraženina. Organická vrstva filtrátu se promyla saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a sušila se za použití bezvodého síranu hořečnatého a koncentrovala se ve vakuu za vzniku bezbarvé amorfní pevné látky (320 mg, 0,409 mmol, výtěžek je 63 %) .

^xH-NMR(400 MHz, CDC1₃) : 1,68(3H, s), 1,95(1H, dt, 7,3 a 15 Hz), 2,07(3H, s), 2,25(1H, dt, 6 a 15 Hz), 2,43(3H, s), 3,4O(1H, d, 10 Hz), 3,71(1H, d, 10 Hz), 4,18(2H, m), 4,37(1H, d, 5,8 Hz), 4,42(1H, d, 12 Hz), 4,46(1H, d, 12 Hz), 4,51(1H, d, 12 Hz), 4,61(lH,d, 12 Hz), 5,42(1H, dd, 4,9 a 5,8 Hz), 6,07(lH, d, 4,9 Hz), 7,2-7,6(17H, m) , 7,74(2H, d, 8,3 Hz), 8,28(2H, d, 7,0 Hz) .

FAB-MAS(mNBA): 782(M+H)⁺.

Odkaz k příkladu 15

2'-0-acetyl-3',5'-di-O-benzyl-4'-p-toluensulfonyloxyethyl-2-N-isobutyrylguanosin

Trimethylsilylovaný isobutyrylguanosin (650 mg, přibližně 1,5 mmol), který se připravil způsobem popsaným v publikaci H. Vorbrggen, K. Krolikiewicz and B. Bennua, Chem. Ber., 114, 1234-1255 (1981)) se přidal do roztoku sloučeniny získané v odkazu příkladu 9 (400 mg, 0,65 mmol) v bezvodém 1,2-dichlorethanu (10 ml) při teplotě místnosti v atmosféře dusíku. Ke směsi se po kapkách přidal trimethylasilyltrifluormethansulfonát (0,2 ml, 1,2 mmol) a směs se míchala při teplotě 50 °C po dobu 4 hodin. Do reakční směsi se přidal saturovaný vod102

99 9999 9 • 99 9999 9 · ·

9 9 · 9 999 999 9

999 99 9 999 • 99 99 99 99 99 9 9 9 ný roztok hydrogenuhličitanu sodného (5 ml) a organická vrstva se promyla saturovaným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a saturovaným vodným roztokem chloridu sodného a sušila se za použití bezvodého síranu hořečnatého a koncentrovala se ve vakuu za vzniku produktu, který se použil v další reakci bez dalšího čištění.

Příklad testu 1

Test měření Tm

Roztok vzorku (1 ml), jehož konečná koncentrace NaCl je 100 mM, pufrovací roztok fosforečnanu sodného (pH7,2) s koncentrací 10 mM, oligonukleotid (1) s koncentrací 4 μΜ a komplementární DNA (zde uvedená jako oligonukleotid (2)), která vykazuje sekvenci indikovanou svým komplementárním řetězcem (sekvence 5'-agcaaaaaacgc-3'(sekvence č. 1 na seznamu sekvencí) nebo komplementární RNA (zde uvedená jako oligonukleotid (3)), která má sekvenci indikovanou sekvencí 5'-agcaaaaaacgc3' (sekvence č. 1 uvedenou na seznamu sekvencí) s koncentrací 4 μΜ, se zahřál v lázni s vroucí vodou a pomalu se chladil na teplotu místnosti, což trvalo přibližně dvě hodiny. Vzorek se pak zahřál a měřilo se za použití spektrofotometru (UV-3100PC: produkt firmy Shimadzu Corp.). Vzorek se zahřál v cele (tloušťka cely je 1,0 cm, cylindrický plášťový typ) cirkulující vodou zahřívanou v inkubátoru (Haake FE2: produkt firmy EKO Corp.) a monitorovala se teplota za použití teploměru (SÁTO SK1250MC) . Teplota se zvýšila z 20 °C na 95 °C a při každém zvýšení teploty o jeden °C se měřila absorbance ultrafialového záření při maximální absorpční vlnové délce 260 nm. Přirozeně se vyskytující DNA (zde uvedená jako oligonukleotid (4)), která má sekvenci indikovanou sekvencí 5'-gcgttttttgct3' (sekvence č. 2 uvedená v seznamu sekvencí), jenž má stejnou sekvenci jako oligonukleotid (1) (sloučenina příkladu 29) se použila jsko kontrola a provedl se stejný postup.

103 * · 4 4 4 *4 ♦» • •44 4444 444

444 4444 « «

444 4 44« 4 4 4

444 4 4 4 44

4444« 44 44 44 4

Teplota, při které změna na 1°C dosáhne maxima, je teplota Tm (teplota denaturace) a při této teplotě se hodnotila schopnost olígonukleotidového analogu tvořit komplementární řetězec .

Výsledky měření hodnot Tm oligonukleotidu (4) (přirozeně se vyskytující DNA) a oligonukleotidu (1) (sloučenina z příkladu 29) je vztažena k oligonukleotidu (2) (komplementární DNA) a oligonukleotidu (3) (komplementární RNA).

Tabulka č. 3

Tm (°C)
sloučenina	oligonukleotid (2)	oligonukleotid (3)
oligonukleotid (4)	48	44
oligonukleotid (1)	61	75

S tabulky plyne, že oligonukleotidový analog podle vynálezu vykazuje překvapivě vyšší hodnotu Tm a překvapivě vyšší schopnost tvořit komplementární řetězec ve srovnání s přirozeně se vyskytující DNA.

Příklad testu 2

Měření rezistence vůči nukleázám

Exonukleáza a endonukleáza se smíchaly s pufrem s oligonukleotidem a směs se udržovala při teplotě 37 °C po dobu 15 minut. Roztok směsi se pak udržoval při teplotě 37 °C po předem určenou dobu. K části směsi se přidala kyselina ethylendiaminotetraoctová (EDTA) a směs se zahřála na teplotu 100 °C po dobu 2 minuty, přičemž se zastavila reakce. Množství zbývajícího oligonukleotidu se stanovilo HPLC s reverními fázemi, měřily se změny množství oligonukleotidu závislé na čase v přítomnosti nukleázy.

Oligonukleotidové analogy podle vynálezu demonstrují překvapivou rezistenci vůči nukleázám.

104

9» 4» *» 9»

4·»· 9 4 4· · 9 9

499 «994 · · · · · · ··· 4 4 ·

49· 49 4 44

494 44 «4 4» 44 4

Průmyslová využitelnost

Nový oligonukleotidový a nukleosidový analog podle vynálezu se může použít jako antigenní farmaceutický prostředek, který vykazují skvělou stabilitu. Dále se mohou použít jako detekční činidla (sondy) specifického genu, jako primery pro začátek amplifikace nebo jako meziprodukty při jejich přípravě .

105 • ·· »* e* ·· * »· » » · O « · f ·· • · · * · · · · · 9 • 9 · » · · ··· · ♦ · « • « · ·· · · · 9 ··· ·· «· et ·« *··

Seznam sekvencí <210> 1 <211> 12 <212> DNA <213> umělá sekvence <220>

<223> Popis umělé sekvence: Syntetizovaný oligonukleotid určený pro testování hodnoty Tm <400> 1 agcaaaaaac gc 12 <210> 2 <211> 12 <212> DNA <213> umělá sekvence <220>

<223> Popis umělé sekvence: Syntetizovaný oligonukleotid určený pro testování hodnoty Tm

Claims (19)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sloučenina obecného vzorce 1:

   kde symboly R¹ a R² jsou stejné nebo různé a reprezentují atom vodíku, hydroxylovou ochranou skupinu, skupinu kyseliny fosforečné, chráněnou skupinu kyseliny fosforečné nebo -P(R³)R⁴, [kde symboly R³ a R⁴ jsou stejné nebo různé a reprezentují hydroxylovou skupinu, chráněnou hydroxylovou skupinu, merkaptoskupinu, chráněnou merkaptoskupinu, aminoskupinu, alkoxyskupinu, která obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupinu, která obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, kyanoalkoxyskupinu, která obsahuje 1 až 5 atomů uhlíku, nebo aminoskupinu substituovanou alkylovou skupinou, která obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku], symbol A reprezentuje alkylenovou skupinu, která obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku a symbol B reprezentuje skupinu purin-9-yl, 2-oxopyrimidin-l-yl nebo substituovanou skupinu purin-9-yl nebo substituovanou skupinu 2-oxopyrimidin-l-yl, která má alespoň jeden substituent vybraný z následující skupiny a, nebo její sole, přičemž skupina a je hydroxylová skupina, chráněná hydroxylová skupina, alkoxyskupina, která obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, merkaptoskupina,

   107 chráněná merkaptoskupina, alkylthioskup.ina s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupina, chráněná aminoskupina, aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku a halogenový atom.
2. 2. Sloučenina podle nároku 1 nebo její sůl, kde symbol R¹ je atom vodíku, alifatická acylová skupina, aromatická acylová skupina, methylová skupina substituovaná jednou až třemi arylovými skupinami, methylová skupina substituovaná jednou až třemi arylovými skupinami, jejichž arylový kruh je substituován nižším alkylem, nižší alkoxyskupinou, halogenem nebo kyanoskupinou nebo silylovou skupinou.
3. 3. Sloučenina podle nároku 1 nebo její sůl, kde symbol R¹ je atom vodíku, acetylová skupina, benzoylová skupina, benzylová skupina, p-methoxybenzylová skupina, dimethoxytritylová skupina, monomethoxytritylová skupina nebo terc-butyldifenylsilylová skupina.
4. 4. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 3 nebo její sůl, kde symbol R² je atom vodíku, alifatická acylová skupina, aromatická acylová skupina, methylová skupina substituovaná jednou až třemi arylovými skupinami, methylová skupina substituovaná jednou až třemi arylovými skupinami, jejichž arylový kruh je substituován nižším alkylem, nižší alkoxyskupinou, halogenem nebo kyanoskupinou, silylovou skupinou, fosforamiditovou skupinou, fosfonylovou skupinou, skupinou kyseliny fosforečné nebo chráněnou skupinou kyseliny fosforečné.
5. 5. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 3 nebo její sůl, kde symbol R² je atom vodíku, acetylová skupina, benzoylová skupina, benzylová skupina, p-methoxybenzylová skupina, terc-butyldifenylsilylová skupina, -P(OC2H4CN)NCH(CH3) 2) _r

   108

   -P(OCH₃) NCH(CH₃) ₂) , fosfonylová skupina nebo skupina kyseliny

   2-chlorfenylfosforečné nebo 4-chlorfenylfosforečné.
6. 6. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 5 nebo její sůl, kde symbol A je methylenová skupina.
7. 7. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 6 nebo její sůl, kde symbol B je 6-aminopurin-9-yl (to je adeninyl),

   6-aminopurin-9-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2,6-diaminopurin-9-yl, 2-amino-6-chlorpurin-9-yl, 2-amino-6«chlorpurin-9-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2-amino-6•fluorpurin-9-yl, 2-amino-6-fluorpurin-9-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2-amino-6-brompurin-9-yl, 2-amino-6-brompurin-9-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl (to je guaninyl), 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl, jehož aminoskupina a hydroxylová skupina jsou chráněné, 6-amino-2-methoxypurin-9-yl, 6-amino-2-chlorpurin-9-yl, 6-amino-2-fluorpurin-9-yl, 2,6-dimethoxypurin-9-yl, 2,6-dichlorpurin-9-yl, 6-merkaptopurin-9-yl, 2-oxo-4-aminopyrimidin-l-yl (to je cytosinyl), 2-oxo-4-aminopyrimidin-l-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2-oxo-4-amino-5-fluorpyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-amino5-fluorpyrimidin-l-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 4-amino-2-oxo-5-chlorpyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-methoxypyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-merkaptopyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-hydroxypyrimidin-l-yl (to je uracinyl), 2-oxo-4-hydroxy-5-methylpyrimidin-l-yl (to je thyminyl) nebo 4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-l-yl (to je methylcytosinyl) nebo 4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-l-yl, jehož aminoskupina je chráněná.
8. 8. Sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 6 nebo její sůl, kde symbol B je 6-benzoylaminopurin-9-yl, adeninyl, 2-isobutyrylamino-6-hydroxypurin-9-yl, guaninyl, 2-oxo-4~benzoylaminopyrimidin-l-yl, cytosinyl, 2-oxo-5-methyl-4-benzoylaminopyridin-l-yl, 5-methylcytosinyl, uracinyl nebo thyminyl.
9. 9. Sloučenina nebo její sůl vybraná z následující skupiny:

   2'-O,4'-C-ethylenguanosin

   109 • ·

   2'-O,4'-C-ethylenadenosin

   3', 5'-di-O-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin 3',5'-di-O-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin 5'-0-dimethoxytrityl-2'-O,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin 5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin 2'-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin

   2'-O,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin

   5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-6-N-benzoyladenosin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit

   5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-2-N-isobutyrylguanosin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit 2'-0, 4'-C-ethylenuridin

   2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin

   2'-0, 4'-C-ethylencytidin

   2'-0,4'-C-ethylen-5-methylcytidin

   3',5'-di-O-benzyl-2'-0,4'-C-ethylenuridin

   5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylenuridin

   3',5'-di-O-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin

   5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin

   3',5'-di-O-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin

   5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin 3',5'-di-O-benzyl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methylcytidin

   5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methylcytidin

   2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin

   2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methylcytidin

   5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylenuridin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit

   5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-5-methyluridin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit

   5'-0-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoylcytidin-3'-0-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit a

   110 • ·

   5'-O-dimethoxytrityl-2'-0,4'-C-ethylen-4-N-benzoyl-5-methylcytidin-3'-O-(2-kyanoethyl-N,N-diisopropyl)fosforamidit.
10. 10. Oligonukleotidový analog, který vykazuje jednu nebo dvě nebo více struktur obecného vzorce 2:

    kde symbol A reprezentuje alkylenovou skupinu, která má 1 až 4 atomy uhlíku a symbol B reprezentuje skupinu purin-9-yl, 2-oxopyrimidin-l-yl a substituovanou skupinu purin-9-yl nebo substituovanou skupinu 2-oxopyrimidin-l-yl, kde se alespoň jeden substituent vybral z následující skupiny a, nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, přičemž skupina a je: hydroxylová skupina, chráněná hydroxylová skupina, alkoxyskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, merkaptoskupina, chráněná merkaptoskupina, alkylthioskupina s 1 až 4 atomy uhlíku, aminoskupina, chráněná aminoskupina, aminoskupina substituovaná alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku a halogenový atom.
11. 11. Oligonukleotidový analog podle nároku 10 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, kde symbol A je methylenová skupina.

    111 • · · ·· ·· ·· _β ···· ···· « · · ·· ··· ······ · ····· ·· ·· ** *
12. 12. Oligonukleotidový analog podle libovolného z nároků 10 a 11 nebo jeho farmakologicky přijatelná sůl, kde symbol B je 6-aminopurin-9-yl (to je adeninyl), 6-aminopurin-9-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2,6-diaminopurin-9-yl, 2-amino-6-chlorpurin-9-yl, 2-amino-6-chlorpurin-9-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2-amino-6-fluorpurin-9-yl, 2-amino-6-fluorpurin-9-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2-amino-6-brompurin-9-yl, 2-amino-6-brompurin-9-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl (to je guaninyl), 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2-amino-6-hydroxypurin-9-yl, jehož aminoskupina a hydroxylová skupina jsou chráněné, 6-amino-2-methoxypurin-9-yl, 6-amino-2-chlorpurin-9-yl, 6-amino-2-fluorpurin-9-yl, 2,6-dimethoxypurin-9-yl, 2,6-dichlorpurin-9-yl, 6-merkaptopurin-9-yl, 2-oxo-4-aminopyrimidin-l-yl (to je cytosinyl), 2-oxo-4-aminopyrimídin-l-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 2-oxo-4-amino-5-fluorpyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-amino-5-fluorpyrimidin-l-yl, jehož aminoskupina je chráněná, 4-amino-2-oxo-5-chlorpyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-methoxypyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-merkaptopyrimidin-l-yl, 2-oxo-4-hydroxypyrimidin-l-yl (to je uracinyl), 2-oxo-4-hydroxy-5-methylpyrimidin-l-yl (to je thyminyl) nebo 4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-l-yl (to je methylcytosinyl) nebo 4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-l-yl, jehož aminoskupina je chráněná.
13. 13. Oligonukleotidový analog podle libovolného z nároků 10 a 11 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, kde symbol B je 6-benzoylaminopurin-9-yl, adeninyl, 2-isobutyrylamino-6-hydroxy-purin-9-yl, guaninyl, 2-oxo-4-benzoylaminopyrimidin-l-yl, cytosinyl, 2-oxo-5-methyl-4-benzoylaminopyridin-l-yl, 5-methylcytosinyl, uracinyl nebo thyminyl.
14. 14. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se tím, že obsahuje účinné množství farmaceuticky aktivní sloučeniny spolu s nosičem nebo ředidlem, kde uvedená farmakologicky aktivní sloučenina je oligonukleotidový analog

    112 • 9 • 9 9

    9 9 9

    9 9 • · • · podle libovolného z nároků 10 až 13 nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.
15. 15. Sonda vhodná pro gen obsahující oligonukleotidový analog podle libovolného z nároků 10 až 13.
16. 16. Primer vhodný pro začátek amplifikace obsahující oligonukleotidový analog podle libovolného z nároků 10 až 13.
17. 17. Použití oligonukleotidového analogu podle libovolného z nároků 10 až 13 nebo jeho farmakologicky přijatelné sole při výrobě léčiva vhodného pro prevenci nebo léčbu onemocnění, kterému je možné předcházet nebo ho léčit schopností uvedeného oligonukleotidového analogu vykazovat farmakologicky použitelnou aktivitu v těle pacienta po jeho aplikaci.
18. 18. Použití oligonukleotidového analogu podle libovolného z nároků 10 až 13 nebo jeho farmakologicky přijatelné sole při výrobě léčiva vhodného pro prevenci nebo léčbu onemocnění, kterému je možné předcházet nebo ho léčit schopností uvedeného oligonukleotidového analogu vykazovat farmakologicky použitelnou antigenní aktivitu v těle pacienta po jeho aplikaci.
19. 19. Oligonukleotidový analog podle libovolného z nároků 10 až 13 nebo jeho farmakologicky přijatelná sůl vhodná pro použití jako léčiva.