TWI667036B - 植物萃取物於調控ｐｄｇｆｃ、ｆｇｆ２、ｉｇｆ１ｒ、ｐｔｇｉｓ、ｎｏｓ３、ｅｄｎ１、ｐｌａｔ、ｐｒｏｃ、ｖｗｆ、ｆ３、ｓｅｒｐｉｎｅ１、ｉｌ－８、ｉｃａｍ１、ｖｃａｍ１及ｃａｓｐ８基因的用途 - Google Patents

植物萃取物於調控ｐｄｇｆｃ、ｆｇｆ２、ｉｇｆ１ｒ、ｐｔｇｉｓ、ｎｏｓ３、ｅｄｎ１、ｐｌａｔ、ｐｒｏｃ、ｖｗｆ、ｆ３、ｓｅｒｐｉｎｅ１、ｉｌ－８、ｉｃａｍ１、ｖｃａｍ１及ｃａｓｐ８基因的用途 Download PDF

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Abstract

本發明提供一種植物萃取物於調控PDGFC、FGF2、IGF1R、PTGIS、NOS3、EDN1、PLAT、PROC、VWF、F3、SERPINE1、IL-8、ICAM1、VCAM1及CASP8基因的用途。植物萃取物是選自於由下列所組成的群組：葡萄籽萃取物與四季春茶萃取物、紅茶萃取物與菠菜萃取物、葡萄籽萃取物與菠菜萃取物、葡萄籽萃取物與青咖啡豆萃取物、紅酒萃取物與普洱茶萃取物，及葡萄籽萃取物與普洱茶萃取物。

Description

植物萃取物於調控PDGFC、FGF2、IGF1R、PTGIS、NOS3、 EDN1、PLAT、PROC、VWF、F3、SERPINE1、IL-8、ICAM1、VCAM1及CASP8基因的用途
本發明是有關於一種植物萃取物於調控PDGFC、FGF2、IGF1R、PTGIS、NOS3、EDN1、PLAT、PROC、VWF、F3、SERPINE1、IL-8、ICAM1、VCAM1及CASP8基因的用途。
心血管疾病是人類健康的一大威脅，根據中華民國衛生福利部公佈的資料，國人十大死因中，心血管疾病就占了三項，其中心臟疾病及腦血管疾病更分別高居第2及第4位。而在美國，心血管疾病更是美國人民的第一大死亡原因，由此可見，心血管疾病對人類健康的威脅已達不容忽視的程度，其發病之初通常沒有明顯症狀，但等到一旦出現併發症時，例如腦中風、心肌梗塞、心衰竭、腎衰竭或視網膜出血等，患者生命通常已遭受嚴重的威脅，且為了治療心血管疾病，心臟血管用藥的需求亦居高不下，成為醫療資源的龐大負擔。因此，本領域的相關技術人員皆致力於開發用於保護心血管的產品(包括食品產品以及醫藥品)，以因應廣大人類健康需求。
近年來，利用植物作為原料來開發具有療效的醫藥品或用於預防保健的食品產品已逐漸受到市場重視。例如，某些植物常被用來做成食品或飲品的原料，包括茶葉或葡萄等。然而，本領域的技術人員目前並未將前述植物萃取物進行組合並拿來開發醫藥品或食品產品，因為若為某種植物萃取物，其必須施予相當高的劑量，在使用成本上以及效果上有其侷限。因此，若能施 予多種萃取物的少量組分，即可產生單一成分之高劑量效果時，將會對本領域的技術帶來相當大的突破。
本發明之目的為提供一種植物萃取物用於製備一調控PDGFC、FGF2、IGF1R、PTGIS、NOS3、EDN1、PLAT、PROC、VWF、F3、SERPINE1、IL-8、ICAM1、VCAM1及CASP8基因的組成物之用途，其中植物萃取物是選自於由葡萄籽萃取物與四季春茶萃取物、紅茶萃取物與菠菜萃取物、葡萄籽萃取物與菠菜萃取物、葡萄籽萃取物與青咖啡豆萃取物、紅酒萃取物與普洱茶萃取物，及葡萄籽萃取物與普洱茶萃取物所組成群組中至少任一組合所組成。
在本發明的一實施例中，植物萃取物係由至少0.0039mg/mL之葡萄籽萃取物，及至少0.0039mg/mL之四季春茶萃取物、波菜萃取物、青咖啡豆萃取物、或普洱茶萃取物所組成。
在本發明的一實施例中，植物萃取物係由至少0.0625mg/mL之紅茶萃取物及至少0.0625mg/mL之菠菜萃取物所組成。
在本發明的一實施例中，植物萃取物係由至少0.0156mg/mL之紅酒萃取物及至少0.0156mg/mL之普洱茶萃取物所組成。
在本發明的一實施例中，組成物具有保護心血管的效果。
在本發明的一實施例中，組成物進一步包含一醫藥上可接受的載劑。
在本發明的一實施例中，組成物為粉末、顆粒、液體、膠狀或膏狀之劑型。
在本發明的一實施例中，組成物被製備成醫藥品或食品產品的形式。
綜上所述，本發明的組成物包括葡萄籽萃取物與四季春茶萃取物、紅茶萃取物與菠菜萃取物、葡萄籽萃取物與菠菜萃取物、葡萄籽萃取物與青咖啡豆萃取物、紅酒萃取物與普洱茶萃取物，及葡萄籽萃取物與普洱茶萃取 物等植物萃取物的功效在於：藉由調控與心血管相關的基因(包括PDGFC、FGF2、IGF1R、PTGIS、NOS3、EDN1、PLAT、PROC、VWF、F3、SERPINE1、IL-8、ICAM1、VCAM1及CASP8)表現來達到保護心血管的功效。
以下將進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
圖1是一長條圖，其顯示本發明實施例中植物萃取物的組合在調控與心血管相關的基因表現上之功效。
定義
本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。
如本文中所使用的用語「基因(gene)」意指一DNA序列，包括但不限於：一可被轉錄成mRNA[它可被轉譯成多肽鏈(polypeptide chains)]、被轉錄成rRNA或tRNA，或者供酵素以及其他涉及DNA複製(DNA replication)、轉錄(transcription)以及調節(regulation)的蛋白質作為辨識位址(recognition sites)的DNA序列。這個定義包括各種不同的序列多型性(sequence polymorphisms)、突變和/或序列變異體(sequence variants)，其中該等改變(alternation)不會影響基因產物(gene product)的功能。該用語「基因」意欲包括不只編碼基因產物的區域還有調節區域包括，例如：啟動子、終止區域(termination regions)、轉譯調節序列(translational regulatory sequences)[諸如，核糖體結合位址以及內部核糖體進入位址(internal ribosome entry sites)]、增強子(enhancers)、默化子(silencers)、絕緣子(insulators)、邊界要素(boundary elements)、複製源點(replication origins)、基質附著位址(matrix attachment sites)，以及基因座控制區域(locus control regions)。該 用語「基因」進一步包括所有插入子(intron)以及其他被剪接自mRNA轉錄本(mRNA transcripts)的DNA序列，還有由選擇性剪接位址(alternative splice site)所導致的變異體。
如本文中所使用的用語「保護心血管(cardiovascular protection)」意指能夠治療心血管疾病、保護心血管系統，或降低心血管疾病發生的風險。
依據本發明，醫藥品可利用熟習此技術者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地(parenterally)或口服地(orally)投藥的劑型(dosage form)，這包括但不限於：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、無菌的粉末(sterile powder)、錠劑(tablet)、片劑(troche)、口含錠(lozenge)、丸劑(pill)、膠囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)或細顆粒(granule)、溶液、懸浮液(suspension)、乳劑(emulsion)、糖漿(syrup)、酏劑(elixir)、濃漿(slurry)以及類似之物。
依據本發明的醫藥品可以一選自於由下列所組成的群組中的非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥：腹膜內注射(intraperitoneal injection)、皮下注射(subcutaneous injection)、肌肉內注射(intramuscular injection)以及靜脈內注射(intravenous injection)。
依據本發明，醫藥上可接受的載劑可包含一或多種選自於由下列所組成之群組中的試劑：溶劑(solvent)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，醫藥上可接受的載劑可包含一選自於由下列所組成之群組中的溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline,PBS)、含糖溶液、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)，以及它們的組合。
依據本發明，組成物可被當作食品添加物(food additive)，藉由習知方法於原料製備時添加，或是於食品的製作過程中添加，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。
依據本發明，食品產品的種類包括但不限於：飲料(beverages)、發酵食品(fermented foods)、烘培產品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食補充品(dietary supplements)。
實施例1. 各種植物萃取物的來源或製備
本發明實施例之葡萄籽萃取物係對葡萄屬(Vitis spp.)植物種子進行萃取而獲得，該萃取物可購自誠鴻生物科技有限公司；普洱茶(Puerh tea)萃取物係對普洱茶茶葉(post-fermented leaves of Camellia sinensis)進行萃取而獲得，該萃取物可購自南京澤朗生物科技有限公司；菠菜萃取物係對菠菜(Spinacia oleracea)進行萃取而獲得，該萃取物可購自弘祥農產加工廠；紅酒萃取物係對紅葡萄酒進行萃取而獲得，該萃取物可購自上海博優堂生物技術有限公司；青咖啡豆萃取物係對未經烘焙的咖啡屬植物(Coffea spp.)種子進行萃取而獲得，該萃取物可購自ARJUNA NATURAL EXTRACTS有限公司(印度)。
本實施例舉例說明本發明紅茶(Camellia sinensis leaves)萃取物之製備方法。首先，將紅茶洗淨及乾燥，以粉碎機將紅茶粗碎。其次，以水為溶劑對紅茶粗碎物進行萃取，該溶劑與紅茶粗碎物依液固比5~20：1~5均勻混合，萃取溫度為介於50℃~100℃，較佳為75℃~95℃。本實施例中萃取時間為0.5~3小時。
經上述萃取步驟所得紅茶萃取物冷卻至室溫後，經由400目(mesh)之濾網過濾以移除殘餘固體物。該過濾後的紅茶萃取物可進一步在45℃~70℃進行減壓濃縮而獲得一濃縮產物。
本實施例舉例說明本發明四季春茶(Four Seasons Spring tea)萃取物之製備方法。首先，將四季春茶洗淨及乾燥，以粉碎機將四季春茶粗碎。其次，以水為溶劑對四季春茶粗碎物進行萃取，該溶劑與四季春茶粗碎物依液固比5~20：1~5均勻混合，萃取溫度為介於50℃~100℃，較佳為75℃~95℃。本實施例中萃取時間為0.5~3小時。
經上述萃取步驟所得四季春茶萃取物冷卻至室溫後，經由400目(mesh)之濾網過濾以移除殘餘固體物。該過濾後的四季春茶萃取物可進一步在45℃~70℃進行減壓濃縮而獲得一濃縮產物。
實施例2. 植物萃取物的組合在調控與心血管相關的基因表現上之功效
首先，將人類臍帶靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)[購自於台灣的食品工業發展研究所(Food Industry Research and Development Institute，FIRDI)的生物資源保存及研究中心(Biosource Collection and Research Center，BCRC)，BCRC編號為H-UV001]培養於EC培養基(EC medium)[添加有培養基200(medium 200，M200)及10%低血清生長補充劑(low serum growth supplement，LSGS)(Gibco；Cat.No.M-200-500)]中。於6孔培養盤的每孔中加入2mL的EC培養基，使每孔具有1.5 x 105個HUVEC細胞。
之後，將HUVEC細胞分成13組，其中包括7個比較組(亦即比較組1至7)以及6個實驗組(亦即實驗組1至6)。接著，將適量之依據上面實施例1的各個植物萃取物添加至各組細胞中，於培養箱中進行培養，並於6、24小時更換培養液且加入植物萃取物或組合物。有關各組細胞所添加的植物萃取物之種類、濃度，及/或用量比例是顯示於下面表1中。
在培養箱中進行培養之後，收取各組細胞培養物並拿來進行基因表現分析。
在本實施例中，用來分析與心血管相關的標的基因包括血小板衍生性生長因子C(platelet-derived growth factor C，PDGFC)基因、纖維母細胞生長因子2(fibroblast growth factor 2，FGF2)基因、似胰島素生長因子1受體(insulin-like growth factor 1 receptor，IGF1R)基因、前列腺素I2合成酶(prostaglandin I2 synthase，PTGIS)基因、一氧化氮合成酶3(nitric oxide synthase 3，NOS3)基因、內皮素1(endothelin 1，EDN1)基因、組織胞漿素原活化物(plasminogen activator,tissue，PLAT)基因、蛋白質C(protein C，PROC)基因、馮威里氏因子(von Willebrand factor，VWF)基因、F3基因、絲胺酸蛋白酶抑制蛋白E1(serpin peptidase inhibitor E1，SERPINE1)基因、介白素-8(interleukin-8，IL-8)基因、細胞間附著分子1(intercellular adhesion molecule 1，ICAM1)基因、血管細胞附著分子1(vascular cell adhesion molecule 1，VCAM1)基因，及半胱-天冬胺酸蛋白酶8(caspase 8，CASP8)基因。
以RNA萃取套組(RNA extraction kit)(Geneaid)對上面所得到的各組細胞培養物進行RNA的萃取。對由此所得到的各組RNA取2,000ng並以SuperScript® III反轉錄酶(SuperScript® III Reverse Transcriptase)(Invitrogen)將RNA反轉錄為cDNA。接著，以cDNA作為模版(template)，並且使用用來擴增標的基因的引子對[包括PTGIS、NOS3、EDN1、PLAT、VWF、F3、SERPINE1、ICAM1、 VCAM1、IL-8、CASP8、PDGFC、FGF2、IGF2BP3、IGF1R，及ACTB(作為內部對照組)，它們的核苷酸序列顯示於下面表2]，在StepOne Plus即時PCR系統(StepOne Plus Real Time PCR system)(ABI)中利用KAPA SYBR FAST qPCR套組(2x)(KAPA Biosystems)來進行定量即時聚合酶鏈反應(quantitative real-time polymerase chain reaction，以下簡稱定量即時PCR)，俾以對標的基因進行擴增及定量。PCR產物的熔化曲線(melting curve)是在定量即時PCR反應期間進行確認。
全部標的基因之相對的表現位準是以SCORE法來進行定量，而計算出各組與心血管相關的基因表現之分數。SCORE法是利用ACTB基因(作為內部對照組)及基準基因(reference gene)的循環閾值[cycle threshold(C t)value]來計算。
目標基因的mRNA相對量係推導自方程式2-△Ct，其中△Ct=Ct目標基因-CtACTB(β-肌動蛋白，beta-actin)，接著計算上述每個基因之表現量在該六組與空白控制組中的差值，並以此差值之加總作為心血管相關的基因表現之分數。
透過調控心血管相關的基因表現，已確認本發明的組合物具有保護心血管的功效，其中與血管生長有關的基因包括PDGFC基因、FGF2基因，及IGF1R基因；與血管彈性有關的基因包括PTGIS基因、NOS3基因，及EDN1基因；與血栓生成有關的基因包括PLAT基因、PROC基因、VWF基因、F3基因，及SERPINE1基因；與發炎因子有關的基因包括IL-8基因、ICAM1基因，及VCAM1基因；及與細胞凋亡有關的基因包括CASP8基因。
本實施例的結果是顯示於圖1及表3。圖1是一長條圖，其顯示本發明實施例中植物萃取物的組合在調控與心血管相關的基因表現上之功效。表3對應顯示圖1之各組所計算出的與心血管相關的基因表現分數數值。其中，分數越高者，代表越具有保護心血管的功效。
由圖1及表3可見，與比較組3(亦即處理葡萄籽萃取物者)及比較組7(亦即處理四季春茶萃取物者)相較之下，實驗組1(亦即處理葡萄籽萃取物及四季春茶萃取物的組合者)所計算出的分數有顯著提升，並且高於比較組3及比較組7的分數總和；與比較組1(亦即處理紅茶萃取物者)及比較組2(亦即處理菠菜萃取物者)相較之下，實驗組2(亦即處理紅茶萃取物及菠菜萃取物的組合者)所計算出的分數有顯著提升，並且高於比較組1及比較組2的分數總和；與比較組2及比較組3相較之下，實驗組3(亦即處理葡萄籽萃取物及菠菜萃取物的組合者)所計算出的分數有顯著提升，並且高於比較組2及比較組3的分數總和；與比較組3及比較組4(亦即處理青咖啡豆萃取物者)相較之下，實驗組4(亦即處理葡萄籽萃取物及青咖啡豆萃取物的組合者)所計算出的分數有顯著提升，並且高於比較組3及比較組4的分數總和；與比較組5(亦即處理紅酒萃取物者)及比較組6(亦即處理普洱茶萃取物者)相較之下，實驗組5(亦即處理紅酒萃取物及普洱茶萃取物的組合者)所計算出的分數有顯著提升，並且高於比較組5及比較組6的分數總和；以及與比較組3及比較組6相較之下，實驗組6(亦即處理葡萄籽萃取物及普洱茶萃取物的組合者)所計算出的分數有顯著提升，並且高於比較組3及比較組6的分數總和。
因此，本發明之實施例的實驗結果顯示：本發明各個植物萃取物的組合具有調控與心血管相關的基因表現之功效。因此，申請人認為，本發明的組成物能夠藉由調控與心血管相關的基因(包括PDGFC、FGE2、IGF1R、PTGIS、NOS3、EDN1、PLAT、PROC、VWF、F3、SERPINE1、IL-8、ICAM1、VCAM1及CASP8)表現來達到保護心血管的功效。此外，本發明的組成物亦能夠製備成醫藥品或食品產品的形式，並無限制。
以上所述僅為舉例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於後附之申請專利範圍中。
<110> 大江生醫股份有限公司
<120> 植物萃取物於調控PDGFC、FGF2、IGF1R、PTGIS、NOS3、EDN1、PLAT、PROC、VWF、F3、SERPINE1、IL-8、ICAM1、VCAM1及CASP8基因的用途
<130> 107B0115-I1
<160> 32
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
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<212> DNA
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Claims (8)

  1. 一種植物萃取物用於製備一調控PDGFC、FGF2、IGF1R、PTGIS、NOS3、EDN1、PLAT、PROC、VWF、F3、SERPINE1、IL-8、ICAM1、VCAM1及CASP8基因的組成物之用途，其中該植物萃取物是選自於由葡萄籽萃取物與四季春茶萃取物、紅茶萃取物與菠菜萃取物、葡萄籽萃取物與菠菜萃取物、葡萄籽萃取物與青咖啡豆萃取物、紅酒萃取物與普洱茶萃取物，及葡萄籽萃取物與普洱茶萃取物所組成群組中至少任一組合所組成。
  2. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該植物萃取物係由至少0.0039mg/mL之葡萄籽萃取物，及至少0.0039mg/mL之四季春茶萃取物、波菜萃取物、青咖啡豆萃取物、或普洱茶萃取物所組成。
  3. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該植物萃取物係由至少0.0625mg/mL之紅茶萃取物及至少0.0625mg/mL之菠菜萃取物所組成。
  4. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該植物萃取物係由至少0.0156mg/mL之紅酒萃取物及至少0.0156mg/mL之普洱茶萃取物所組成。
  5. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該組成物具有保護心血管的效果。
  6. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該組成物進一步包含一醫藥上可接受的載劑。
  7. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該組成物為粉末、顆粒、液體、膠狀或膏狀之劑型。
  8. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該組成物被製備成醫藥品或食品產品的形式。
TW107111690A 2017-04-03 2018-04-02 植物萃取物於調控ｐｄｇｆｃ、ｆｇｆ２、ｉｇｆ１ｒ、ｐｔｇｉｓ、ｎｏｓ３、ｅｄｎ１、ｐｌａｔ、ｐｒｏｃ、ｖｗｆ、ｆ３、ｓｅｒｐｉｎｅ１、ｉｌ－８、ｉｃａｍ１、ｖｃａｍ１及ｃａｓｐ８基因的用途 TWI667036B (zh)

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