KR102176766B1 - 차나무 잎 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 차나무(Camellia sinensis) 잎 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 유효성분인 차나무 잎 아임계수 추출물은 1 MPa 내지 5 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 아임계 조건에서 추출한 차나무 잎 아임계수 추출물일 수 있다.
또한, 본 발명은 차나무 잎으로부터 미백 활성 및 항주름 활성이 가장 우수할 뿐만 아니라 추출수율도 가장 높은 차나무 잎 아임계수 추출물의 제조방법에 관한 것이다. 상기 제조방법은 차나무 잎을 분쇄하여 차나무 잎 분쇄물을 제조하는 단계; 상기 차나무 잎 분쇄물에 물을 첨가하는 단계; 및 상기 차나무 잎 분쇄물 및 물을 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 조건에서 반응시켜 차나무 잎 아임계수 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 주름 예방 또는 개선능을 가진 차나무 잎 아임계수 추출물 제조방법일 수 있다.
본 발명의 제조방법에 의해 제조된 차나무 잎 아임계수 추출물은 타이로시나아제 저해 활성 즉, 미백 활성과 에스터라제 저해 활성 및 콜라겐 합성능 즉, 항주름 활성이 우수할 뿐만 아니라, 음료의 재료로 사용되던 차나무 잎과 가장 안전한 용매인 수용매를 이용하는 것으로 부작용 등에 대한 안전성도 보장되며, 우리나라 남부지역에서 풍부하게 생산되는 차나무 잎을 이용하여 간단한 방법으로 제조될 수 있어 경제적으로도 유리하고, 지역경제 활성화 및 차나무 재배 농가의 소득향상에도 이바지할 수 있으므로, 본 발명의 화장료 조성물은 산업적 측면에서 그 효과가 매우 클 것으로 기대된다.

Description

차나무 잎 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물{A COSMETIC COMPOSITION COMPRISING SUBCRITICAL WATER EXTRACTS OF CAMELLIA SINENSIS}

본 발명은 피부미용기능성을 갖는 천연물질을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 외부로부터 피부 안쪽의 다양한 기관을 보호하고 있는 인체를 구성하는 기관들 중 가장 큰 기관으로서, 내부의 수분 및 유용성 성분의 피부 밖으로의 유출을 막아주는 장벽기능, 온도조절기능, 배설기능, 호흡기능 등 다양한 생리적 역할을 감당하고 있다.

그러나, 나이가 들면 피부의 생리적 기능이 저하되고 피부의 두께가 얇아져 피부장벽으로서의 기능이 저하될 뿐만 아니라, 자외선, 대기오염, 냉난방 시설 등 외적 요인과 과도한 피로, 스트레스 및 연령에 따른 호르몬 변화 등 내적 요인에 의해 피부의 건성화가 이루어지게 되며, 이와 같은 피부 건성화는 역시 피부의 생리적 기능을 떨어뜨려 외부의 작은 자극원에 의해서도 피부자극 및 손상이 쉽게 일어나게 하는 원인이 된다.

통상적으로 성장기에는 내부 및 외부로부터의 노화 요인에 대하여 피부의 다양한 방어 시스템에 의해 쉽게 대응을 할 수 있으나, 연령이 높아짐에 따라 자외선 등의 원인으로 생성된 활성산소종에 의해 항산화 시스템이 파괴되고 이로 인해 방어능력이 현저하게 저하된다. 상기한 바와 같이, 방어능력이 저하된 경우, 피부에 산화적 스트레스가 가해지면, 지질과산화, 단백질 산화, 탄력섬유인 콜라겐과 엘라스틴의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합, 히알루론산 사슬의 절단, DNA 산화 등 생체 구성성분의 손상을 가져오게 된다. 상기한 생체 구성성분의 손상으로 인하여, 피부 주름의 초기증상인 피부의 처짐, 거칠어짐, 건조함 등이 유발되며, 결과적으로 피부 주름이 형성되게 된다.

과거에는 여성들이 사용하는 제품이라고 생각되던 화장품은 오늘날에는 단순한 아름다움의 표현 도구만이 아닌 생활용품으로 남녀노소를 불문하고 사용하고 있으며, 산업의 발전에 따라 화장품에 대한 고급화와 다양화의 요구가 증대됨에 따라, 특별한 효과나 효능을 기대하는 기능성 제품에 대한 관심도가 높아지고 있는 실정이다.

우리나라에서 현재 인정되고 있는 기능성 화장품은 피부의 미백에 도움을 주는 미백제품, 피부의 주름개선에 도움을 주는 주름개선 제품 및 피부를 곱게 태워주거나 자외선으로부터 피부를 보호하는데 도움을 주는 자외선 차단 제품이 있다.

일반적으로 이러한 기능성 화장품은 미용 효과뿐만 아니라 신체의 구조나 기능에 영향을 주고, 예방, 개선 및 치료 작용을 하는 화장품으로 해석되고 있다. 특히, 최근에는 화장품 전체 매출에서 기능성 화장품의 매출비중이 현저하게 증가하면서, 인체에 미치는 새로운 효능 성분을 모색하고, 이를 피부에 효율적으로 이용하고자 하는 연구가 활발히 이루어지고 있다.

특히, 최근 인구고령화 추세에 따른 노인 인구의 증가 현상 및 경제 발전에 따른 삶의 질의 향상에 따라, 노화에 자연스럽게 수반된다고 하였던 피부의 주름 등을 억제 또는 제어할 수 있는 제품에 대한 요구가 증가하고 있다. 특히, 노인 인구의 사회활동 기회의 증가로 인하여, 노령 인구의 미용에 대한 관심이 증대되는 한편, 자외선 등과 같은 피부에 대한 자극 및 노화 촉진의 요인이 증대되고 있어서, 피부의 주름개선 및 예방과 관련된 기능성 화장품에 대한 수요 및 사용량이 현저하게 증가하고 있는 실정이다.

상기 피부의 주름개선과 관련하여, 피부의 탄력성이 상실되어 느슨해진 상태 즉, 피부외관에 주름살이 형성되는 원인은 자연적 노화에 의한 주름의 생성과 자외선 노출(광노화)에 의한 주름의 생성으로 크게 나눌 수 있는 데, 두 가지 원인에 의한 주름 형성 메커니즘은 아직까지 정확하게 밝혀져 있지 않은 상태이다. 상기 주름과 밀접하게 관련된 피부노화 또한 크게 두 가지로 구분되는데, 자연적 노화 즉, 시간의 흐름에 따른 생리적 노화(chronological aging)와 자외선 노출을 포함하여 바람, 온도, 습도, 담배연기 및 공해 등과 같은 외재적 요인에 의한 노화(extrinsic aging)가 있다.

상기 두 가지 주름의 원인 즉, 자연적 노화와 광노화에 의한 피부변화와 관련되어 발견되는 공통적인 현상은 진피 내의 주 구성단백질인 콜라겐 및 엘라스틴의 감소 및 변형 및 진피의 기질인 히알루론산의 감소에 의한 피부 탄력 감소이다. 특히, 지금까지의 연구결과에 의하면 상기 진피 내 주 단백질인 콜라겐 및 엘라스틴의 감소 및 변형이 주름의 생성 및 피부의 탄력저하에 직접적으로 관여하는 것으로 알려져 있다.

상기 콜라겐은 세포 외 기질(extracellular matrix)의 주요 구성 성분으로, 피부의 섬유아세포에서 생성되는 주요 기질 단백질로서 세포 외 간질에 존재한다. 또한, 생체 단백질 총 중량의 약 30%를 차지하는 중요한 단백질로서 견고한 3중 나선구조를 가지고 있다. 콜라겐은 피부, 건(tendon), 뼈 및 치아의 유기 물질의 대부분을 형성하는데, 특히 뼈와 피부의 진피에 그 포함량이 높다. 대부분의 다른 체 구조물에서는 섬유상 봉입체로서 존재한다.

상기 콜라겐의 주된 기능으로는 피부에 강도와 장력을 부여하여 피부의 기계적 견고성 확보, 결합조직의 저항력 유도, 조직의 결합, 세포 접착의 지탱, 세포 분할과 분화(유기체의 성장 혹은 상처 치유 시)의 유도 등으로 알려져 있다. 또한, 콜라겐은 상처 치유에 있어서 중요한 역할을 담당하며, 손상된 상피에서 콜라겐의 합성을 촉진시켜서 상처를 신속하게 흉터 없이 회복시킬 수 있는 것으로 알려져 있다.

특히, 진피층의 90%를 차지하고 있는 콜라겐의 감소는 피부의 노화와 매우 밀접한 관계를 가진다고 보고되어 있다. 보다 구체적으로, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외 기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화의 진행이나 자외선 조사는 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(matrix metalloproteinase, MMP)의 발현을 촉진시키며, 이러한 콜라게나제에 의한 콜라겐 분해로 인하여 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다.

또한, 지금까지 알려진 피부 노화 억제제로는 피부 노화 억제 기전에 따라 종류가 다양하다. 대표적인 예로는 콜라겐 생성 촉진제, 엘라스틴 활성화제, 히알루론산 생성 증가제, 자유라디칼 소거제, 세포 증식제, 광노화 억제제, 각질세포 증식억제제, 보습제, 유해 활성산소 생성방지제, 세포 재생물질 등이 있다.

또한, 피부 주름을 개선시키기 위한 방법으로 콜라겐을 포함시킨 화장품 또는 연고 등과 같은 피부 외용제 조성물을 사용하는 방법이 제시되었다. 이는 콜라겐의 주름 개선 및 피부 회복 효과를 이용하기 위하여 제시된 것이나, 고분자 물질인 콜라겐의 경피 흡수가 어려워 보습작용 또는 상처치유 효과를 기대할 수 없으므로 본질적인 피부기능 개선 및 상처치유의 기능을 나타낼 수 없다는 문제점이 지적되었다.

종래의 문제점을 해결하기 위해 제시된 것으로, 자유 라디칼의 형성이나 반응을 억제하는 비타민 C, 비타민 E 또는 카로티노이드와 같은 항산화제에 의해 주름의 형성을 예방하는 방법, 레티놀과 같이 진피 내의 콜라겐 생합성을 증가시키는 방법, 콜라겐을 피부내로 주입하는 방법 또는 보툴리눔 독소를 피부에 주사하는 방법 등이 제시되었다.

그러나, 상기 비타민 C, 비타민 E, 카로티노이드 및 레티놀은 모두 상온에서 쉽게 부서진다는 단점이 있고, 상기 레티놀은 처리농도가 높아지면 피부에 부작용을 나타내는 단점이 있는 것으로 알려져 있다. 또한, 콜라겐이나 보툴리눔 독소의 경우 피부적용시 자극과 발적 등의 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나 효과가 미미하여 실질적으로 피부 기능 개선 또는 상처 치유의 효과를 기대할 수 없다는 단점이 지적되어 왔다.

이런 기능성 화장품의 원료와 관련하여, 기능성 소재와 관련된 최근 연구는 친환경 열풍과 맞물려 주로 천연물로부터 유래한 천연물질 소재에 집중이 되고 있으며, 주로 허브(herb)류나 한방에서 약재로 사용되던 물질들에 관해 연구가 진행되고 있으며, 이에 대한 연구의 필요성이 증대되고 있다.

차는 커피, 코코아와 함께 동백나무과의 차나무(Camellia senensis)의 잎을 가공하여 제조하는 대표적인 비알콜성 음료로 품종, 제법, 형상 등에 의해 여러 가지로 구분되나, 일반적으로 상기 차류는 제조공정 중의 발효 정도에 따라 주로 녹차로 대표되는 비발효차, 우롱차로 대표되는 반발효차 및 홍차로 대표되는 완전발효차의 3종류로 구분될 수 있다.

차는 기원전부터 기호차로서 음용되어져 왔고, 과거에는 주로 한국, 일본 및 중국을 포함한 동양권에서 주로 음용되었으나, 현재에는 전세계에서 폭넓게 음용되고 있다.

또한, 최근에는 상기 차에 함유된 여러 성분들의 약리적인 메커니즘이 점차 밝혀짐에 따라 그 가치가 일반인들에게도 인식되고 있으며, 차의 기능성이 크게 주목받고 있다.

이와 같은 차의 효능 및 기능성에 관한 인식이 확산되면서 차 시장의 규모와 녹차를 포함한 차의 소비 인구가 증가하였고, 이에 따라 국내 차 재배면적도 현저하게 증가하였다. 일 예로, 1985년에는 449 ha이던 차 재배면적이, 2000년에는 1530 ha로 증가하였고, 2007년에는 3800 ha로 증가하였다. 이러한 재배면적의 증가에 따라, 국내 차 생산량도 1985년에는 116톤이던 것이, 1995년에는 699톤으로 증가하였고, 2000년에는 1434톤으로 현저하게 증가하였으며, 2007년에는 3888톤으로 매우 빠르게 증가하고 있다.

차 소비량도 증가하고 있으나, 상기한 바와 같이 차 재배면적과 생산량의 급격한 증가로 인하여, 차의 공급과잉으로 인한 문제, 구체적으로 녹차 제품 재고의 증가되고 있다. 이러한 가격 하락으로 인해 국내 녹차 사업 및 차 재배 농가는 심각한 어려움을 겪고 있다.

이와 관련하여, 상기 차에 대한 기능성 연구를 통하여, 통상 사용되는 음료 외에 다른 용도와 관련된 연구개발을 통해, 차나무의 활용 용도를 확장하여, 차나무 재배 농가에 대한 소득을 확대시킬 수 있는 연구의 필요성과 시급성은 더욱 증대되고 있다.

KR 0750870 B KR 0879283 B KR 10-2001-0010368 A

본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 개선하기 위한 것으로, 천연물질을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 차나무 잎 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다. 구체적으로, 본 발명의 유효성분인 차나무 잎 아임계수 추출물은 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 아임계수로 추출한 차나무 잎 아임계수 추출물일 수 있고, 더욱 구체적으로, 상기 차나무 잎 아임계수 추출물은 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃의 아임계수로 추출한 것일 수 있으며, 보다 구체적으로, 상기 차나무 잎 아임계수 추출물은 3 MPa 및 210℃의 아임계수로 추출한 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 차나무 잎(Camellia sinensis) 분쇄물에 물을 첨가하고 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 조건에서 추출하는 것을 특징으로 차나무 잎 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물일 수 있다.

또한, 본 발명은 차나무 잎으로부터 항주름 활성 및 미백활성이 가장 우수할 뿐만 아니라 추출수율도 가장 높은 차나무 잎 아임계수 추출물의 제조방법에 관한 것이다.

구체적으로, 상기 차나무 잎 아임계수 추출물의 제조방법은 차나무 잎(Camellia sinensis)를 분쇄하여 차나무 잎 분쇄물을 제조하는 단계; 상기 차나무 잎 분쇄물에 물을 첨가하는 단계; 및 상기 차나무 잎 분쇄물 및 물을 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 조건에서 반응시켜 차나무 잎 아임계수 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 미백 및 주름 예방 또는 개선능을 가진 차나무 잎 아임계수 추출물 제조방법일 수 있다.

보다 구체적으로, 상기 차나무 잎 분쇄물에 첨가되는 물의 양은 차나무 잎 분쇄물 100 중량부를 기준으로 500 중량부 내지 1,500 중량부이고, 상기 차나무 잎 아임계수 추출물을 제조하는 단계의 반응조건은 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃일 수 있다.

더욱 구체적으로, 상기 차나무 잎 분쇄물을 제조하는 단계는 상기 차나무 잎(Camellia sinensis)를 건조한 후, 분쇄하는 방법으로 수행하는 것이고, 상기 차나무 잎 분쇄물에 첨가되는 물의 양은 차나무 잎 분쇄물 100 중량부를 기준으로 900 중량부 내지 1,100 중량부이며, 상기 차나무 잎 아임계수 추출물을 제조하는 단계는 3 MPa 및 210℃의 조건에서 1분간 수행하는 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 차나무(Camellia sinensis) 잎 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물일 수 있다. 상기 차나무 잎 아임계수 추출물은 3 MPa 및 210℃의 아임계수로 추출한 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 차나무(Camellia sinensis) 잎 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물일 수 있다. 상기 차나무 잎 아임계수 추출물은 3 MPa 및 210℃의 아임계수로 추출한 것일 수 있다.

본 발명자들은 전라남도 보성지역에 풍부한 차나무 잎에 대해 수용매를 이용하여 아임계수 추출물을 제조하는 경우, 기존 용매 추출법에 비하여 기능성이 향상될 수 있다는 것을 확인하고, 더욱 연구를 진행하여 주름개선 및 미백과 관련된 효능이 특정 조건 즉, 3 MPa 및 210℃ 조건에서 가장 우수한 주름개선 활성, 구체적으로 엘라스타제 저해활성 및 콜라겐 합성능 및 타이로시나아제 저해능을 가지고, 상기 온도보다 낮은 온도 또는 높은 온도에서는 오히려 활성이 감소할 뿐만 아니라 추출수율도 가장 우수하다는 것을 확인하여, 이로부터 본 발명을 완성하였다.

본 발명에 있어서, 화장료 조성물이란 인체를 청결 및 미화하여 매력을 더하고 용모를 밝게 변화시키거나 피부 및 모발의 건강을 유지 또는 증진하기 위하여 인체에 사용되는 조성물로 세정제(detergents) 및 화장제(cosmetics)를 포함하는 개념이다.

본 발명에 있어서, 유효성분이란 피부 상태에 적용하여 피부주름의 예방, 개선 또는 보완 효과를 제공하는 화장료 조성물의 성분을 의미한다.

본 발명에 있어서, 초임계 유체(supercritical fluid)란 물질이 액체와 기체의 두 상태가 서로 분간할 수 없게 되는 임계상태에서의 온도와 이때의 증기압 즉, 그의 임계점보다 높은 온도와 압력하에 있을 때 즉, 초임계점 이상의 상태에 있는 유체를 의미한다. 또한, 본 발명에 있어서, 아임계 유체(sub-supercritical fluid)란 초임계 유체와 거의 비슷한 성격을 가진 유체를 의미한다. 또한, 아임계 추출법이란 아임계 유체를 이용한 추출법을 의미한다.

상기 아임계 유체는 물, 이산화탄소(CO₂), 에틸렌, 에탄, 프로판, 아세틸렌 또는 암모니아 등일 수 있고, 바람직하게는 경제적이고, 유해성분이 없으며, 안전하게 폐기할 수 있어 친환경적일 뿐만 아니라, 본 발명에 의하여 추출효율을 극대화할 수 있는 조건을 확인한 물, 더욱 바람직하게는 아임계 수일 수 있다. 상기 아임계 수란 아임계 조건의 물을 의미한다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

본 발명은 차나무 잎 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다

상기 차나무(tea plant)는 차나무과에 속하는 상록교목 또는 상록활엽관목으로 학명은 Camellia sinensis이다. 티베트와 중국 쓰촨성의 경계에 해당하는 산악지대가 원산지로 알려져 있고, 열대지방, 아열대지방 및 온대지방에 자생하며, 현재에는 주로 한국, 일본, 중국, 인도 및 동남아지역에 분포되어 있다. 상기 차나무에는 변종이 많으며, 이들 변종은 그 모양이 각기 크게 다르다. 주로, 중국이나 일본에서 재배되는 소엽종은 자연 상태에서도 높이가 약 2m 내지 약 3m 정도까지 자라는 관목이고, 인도 아삼 지방의 대엽종은 높이가 약 15m 내지 약 30m에 달하는 교목이다. 차나무의 잎은 품종이나 위치에 따라 변이가 크지만, 주로 길이 6cm 내지 20cm 및 폭 3cm 내지 4cm의 긴 타원 모양이며 가장자리에 둔한 톱니가 있고 끝과 밑 부분이 뾰족한 것이 특징이다. 잎의 질은 단단하고 약간 두꺼우며 표면에 광택이 있다. 품종에 따라 잎 빛깔의 진하고 엷음에 차이가 있고 주름에도 변화가 있다. 어린잎이나 어린 싹의 뒷면에는 부드러운 털이 있다. 우리나라에서는 지리산에 자라는 야생종은 중국산 소엽종이고, 재배차의 경우에는 중국산 소엽종을 개량한 일본산 야부키타종이 주로 재배된다.

상기 차나무(Camellia sinensis) 는 바람직하게는 차나무 잎일 수있다.

상기 차나무(Camellia sinensis) 잎 아임계수 추출물은 180℃ 내지 240℃의 아임계수로 추출한 차나무(Camellia sinensis) 잎 아임계수 추출물일 수 있다.

또한, 상기 차나무 잎 아임계수 추출물은 1 MPa 내지 5 MPa 및 180℃ 내지 240℃ 또는 2 MPa 내지 4 MPa 및 200℃ 내지 220℃ 또는 3 MPa 및 200℃ 내지 210℃의 아임계 조건 또는 3 MPa 및 200℃ 내지 210℃의 조건에서 1분간 추출한 차나무 잎 아임계수 추출물일 수 있다.

또한, 상기 차나무 잎 아임계수 추출물은 차나무 잎 분쇄물에 물을 첨가하고 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 조건에서 추출하는 것을 특징으로 차나무 잎 아임계수 추출물일 수 있다.

상기 차나무 잎 아임계수 추출물은 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃의 아임계수로 추출한 것, 또는 3 MPa 및 210℃의 아임계수로 추출한 것일 수 있다.

상기 아임계수 추출물을 제조하기 위한 아임계 추출법의 조건은 상기 아임계 수의 압력이 1 MPa 내지 5 MPa 또는 2 MPa 내지 4 MPa 또는 2.5 MPa 내지 3.5 MPa 또는 3 MPa일 수 있고, 상기 아임계수의 온도는 180℃ 내지 240℃ 또는 190℃ 내지 230℃ 또는 200℃ 내지 220℃ 또는 210℃일 수 있다.

상기 아임계수 추출물을 제조하기 위한 아임계 추출법은 5초 내지 10분, 또는 10초 내지 5분, 또는 30초 내지 3분 또는 45초 내지 2분 또는 1분 동안 수행할 수 있다.

상기 아임계수 추출물은 용매 추출물에 비하여 타이로시나아제 저해활성, 엘라스타제(elastase) 저해활성 및 콜라겐 합성능이 현저하게 우수하고, 특히 3 MPa의 압력 조건 및 210℃에서는 150℃ 또는 270℃에 비하여 우수한 엘라스타제 저해활성 및 콜라겐 합성능이 확인되었다.

상기 아임계수 추출물은 상기 아임계 추출 후에 여과공정, 농축공정 또는 건조공정을 선택적으로 추가할 수 있으며, 상기 여과공정은 여과지를 이용하여 수행할 수 있고, 상기 농축공정은 감압농축 등을 통하여 수행할 수 있으며, 상기 건조공정은 열풍건조 또는 냉동건조 등의 방법으로 수행할 수 있다.

상기한 바와 같이, 엘라스타제를 저해하고 콜라겐 합성을 유도할 수 있는 경우, 주름 예방 또는 개선 효과가 우수할 뿐만 아니라, 실험을 통하여 확인한 결과, 다른 추출조건에 비하여 세포독성도 적은 것으로 확인되었고, 천연물질인 차나무 잎 및 물에 의해 제조된 물질이 유효성분이므로 부작용도 문제되지 않고, 안전하다는 점에서, 본 발명의 화장료 조성물은 미백활성 또는 주름 개선 활성이 요구되는 피부에 적용될 수 있다

따라서, 본 발명의 화장료 조성물은 미백용 화장료 조성물이거나, 주름개선용 화장료 조성물, 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물 또는 항주름용 화장료 조성물일 수 있다.

상기 화장료 조성물은 피부에 상기 차나무 잎 아임계수 추출물이 전체 조성물에 대하여 0.0001 중량% 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.001 중량% 내지 30중량% 포함될 수 있다. 즉, 차나무 잎 아임계수 추출물의 함량은 피부 관련 기능성, 구체적으로 주름 방지 효과의 달성을 위하여 최소치 이상의 함량이어야 하나, 피부자극 여부 및 과량 첨가에 따른 사용감 저하 및 각종 제형에의 적용 가능성을 고려하여, 상기 범위 이내에서 자유롭게 조절될 수 있다. 이때, 유효성분의 함량 및 추가 성분의 함량은 제형 또는 화장료 조성물에 함유되는 성분들의 함량에 따라 상기 범위 내에서 적절히 조절될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 피부 외용연고, 기초화장품, 메이크업 화장품, 바디 화장품 또는 면도용 화장품 등의 용도로 제공될 수 있으며, 상기 기초화장품의 예로는 에센스, 로션, 크림, 젤, 화장수, 팩, 마사지 크림, 유액 등이 있을 수 있고, 상기 메이크업 화장품의 예로는 파운데이션, 립스틱, 아이새도, 아이라이너, 마스카라, 아이브로우 펜슬, 메이크업 베이스 등이 있을 수 있으며, 바디 화장품으로는 비누, 액체 세정제, 입욕제, 썬 스크린 크림, 썬 오일 등이 있을 수 있고, 면도용 화장품으로는 애프터셰이브로션, 셰이빙 크림 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 유효성분으로 차나무 잎 아임계수 추출물을 포함하는 것 외에, 추가로 주름개선 효과나 미백 효과가 있는 기능성 물질이나 다른 기능성 일 예로, UV차단 또는 보습효과가 있는 기능성 물질이나 물성 개선을 위한 부형제, 희석제 등의 물질이 추가로 포함될 수 있다.

일 예로, 상기 화장료 조성물에는 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류 또는 합성 고분자 물질 등이 추가로 첨가될 수 있다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로 유지 성분, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 안료, 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, pH 조정제, 알콜, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한제 또는 정제수 등일 수 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩타이드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상을 더욱 포함할 수 있다.

상기 유효성분 이외의 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되지 않으며, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.

또한, 상기 화장료 조성물은 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있으며, 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형 일 예로 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등의 제형일 수 있다.

보다 구체적으로 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트리젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함할 수 있다.

일 예로, 본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있으며, 특히 본 발명의 제형이 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제, 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르일 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

상기한 바와 같이, 다른 아임계 추출 조건에서 추출된 차나무 잎 아임계수 추출물 또는 다른 추출법에 의해 제조된 차나무 잎 용매 추출물에 비하여, 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃, 또는 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃, 또는 3 MPa 및 210℃의 아임계수로 추출한 차나무 잎(Camellia sinensis) 아임계수 추출물의 경우, 타이로시나아제 저해 활성, 엘라스타제 저해 활성 및 콜라겐 합성능 개선 효과가 우수하며, 천연물질 유래의 물질이어서 부작용이 문제되지 않고, 안전할 수 있으므로, 화장품의 유효성분으로 사용될 수 있다.

이러한 측면에서 본 발명은 미백활성 및 주름개선 활성 즉, 주름 예방 또는 개선능을 가진 차나무 잎 아임계수 추출물의 제조방법에 관한 것일 수 있다.

본 발명의 차나무 잎 아임계수 추출물의 제조방법에 의해 제조된 추출물은 항주름 활성이 가장 우수할 뿐만 아니라, 본 발명의 제조방법은 다른 추출방법 또는 다른 추출조건에 비하여 추출수율도 가장 높다는 장점을 갖는다.

구체적으로, 상기 차나무 잎 아임계수 추출물의 제조방법은 차나무 잎(Camellia sinensis)를 분쇄하여 차나무 잎 분쇄물을 제조하는 단계; 상기 차나무 잎 분쇄물에 물을 첨가하는 단계; 및 상기 차나무 잎 분쇄물 및 물을 3 MPa 및 180℃ 내지 240℃의 조건에서 반응시켜 차나무 잎 아임계수 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 주름 예방 또는 개선능을 가진 차나무 잎 아임계수 추출물 제조방법일 수 있다.

상기 차나무 잎 분쇄물을 제조하는 단계는 상기 차나무 잎을 통상의 육상식물 분쇄기를 이용하여 수행할 수 있고, 상기 분쇄물 제조과정에 앞서 차나무 잎의 건조 과정을 추가로 수행할 수 있다. 이러한 측면에서, 상기 차나무 잎 분쇄물을 제조하는 단계는 상기 차나무 잎을 건조하는 과정 및 상기 건조된 차나무 잎을 분쇄하는 과정을 포함하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 차나무 잎 건조는 통상의 식물 또는 육상식물 건조방법, 일 예로 자연건조법, 열풍건조법, 냉동건조법 등의 방법으로 수행할 수 있으며, 상기 자연건조법은 20℃ 내지 30℃의 온도조건 및 통풍이 가능한 통기조건에서 수행할 수 있다.

상기 차나무 잎 분쇄물에 물을 첨가하는 단계에서, 첨가되는 물의 양은 차나무 잎 분쇄물 100 중량부를 기준으로 500 중량부 내지 1,500 중량부 또는 700 중량부 내지 1300 중량부 또는 900 중량부 내지 1100 중량부일 수 있다.

상기 물은 일반적인 물 또는 증류수일 수 있고, 상기 증류수는 1차 증류수 또는 2차 증류수 또는 3차 증류수일 수 있다.

상기 차나무 잎 아임계수 추출물을 제조하는 단계는 상기 차나무 잎 분쇄물 및 물을 일정 온도 및 일정 압력 조건에서 일정 시간동안 반응시키는 방법으로 수행할 수 있다.

보다 구체적으로, 상기 압력 조건 구체적으로, 상기 아임계 추출의 압력 조건은 1 MPa 내지 5 MPa 또는 2 MPa 내지 4 MPa 또는 2.5 MPa 내지 3.5 MPa 또는 3 MPa일 수 있고, 상기 온도 조건 구체적으로, 상기 아임계 추출의 온도 조건은 180℃ 내지 240℃ 또는 190℃ 내지 230℃ 또는 200℃ 내지 220℃ 또는 210℃일 수 있다. 도한, 상기 반응시간, 구체적으로 상기 아임계수 추출물을 제조하기 위한 아임계 추출법을 수행하는 시간은 5초 내지 10분, 또는 10초 내지 5분, 또는 30초 내지 3분 또는 45초 내지 2분 또는 1분일 수 있다.

구체적으로, 상기 차나무 잎 아임계수 추출물을 제조하는 단계의 반응조건은 3 MPa 및 200℃ 내지 220℃ 또는 3 MPa 및 210℃의 조건에서 1분간 수행하는 것일 수 있다.

상기 아임계 추출에 있어서, 운반체(carrier)가 필요한 경우, 상기 운반체는 질소가스(nitrogen gas)일 수 있다. 보다 구체적으로 상기 아임계 추출법은 아임계 유체로 아임계 수를 이용하고, 운반체로 질소가스를 사용하는 것일 수 있다.

상기 아임계 열수추출법에 의한 경우, 기존 추출법이 가지는 유기용매의 제거를 위한 과도한 비용 및 공정이 요구된다는 점과 환경문제를 유발할 수 있다는 문제점을 해결하였을 뿐만 아니라, 본 발명의 최적 조건에 의해 추출을 수행하는 경우, 특히 최적 조건인 3 MPa 및 210℃의 조건에서 수행하는 경우, 기존 추출법인 용매 추출법에 비하여 향상된 수율, 구체적으로 약 1,300% 내지 200%의 추출효율의 상승이 확인되어, 현저하게 향상된 수율을 얻을 수 있는 것으로 평가되었다.

상기한 바와 같이, 본 발명의 아임계수를 이용하여 항주름 활성을 갖는 차나무 잎 추출물을 제조하는 방법은 기존 방법에 비하여, 안전성 및 친환경성이 인정되고, 비교적 간단한 공정으로 수행할 수 있을 뿐만 아니라, 항주름 활성도 개선되고, 수율도 현저하게 상승되는 장점이 있다.

본 발명의 차나무 잎 아임계수 추출물은 상기 아임계 추출의 조건에 따라 에스터라제 저해 활성 및 콜라겐 합성능 즉, 항주름 활성과 타이로시나아제 저해 활성 즉, 미백 활성을 개선시킬 수 있을 뿐만 아니라, 추출수율도 개선되고, 특히 기존 유기용매 등을 사용하던 추출방법에 비해서 현저하게 개선된 미백활성, 항주름 활성 및 수율을 가질 수 있으며, 가장 대중적으로 사용되던 음료의 재료인 차나무와 가장 안전한 용매인 수용매를 이용하는 것으로 부작용 등에 대한 안전성도 보장되고, 실험결과에 의해 독성도 없는 것으로 확인되었으며, 나아가 우리나라 남부지역에 풍부하게 생산되는 차나무 잎을 이용하여 간단한 방법으로 제조될 수 있어 경제적으로도 유리하고, 지역경제 활성화 및 지역 농어민 소득향상에도 이바지할 수 있으므로, 본 발명의 화장료 조성물은 산업적 측면에서 그 효과가 매우 크다 할 것이다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 각 추출물의 종류에 따른 타이로시나아제 저해능을 측정한 그래프로, 가로축의 수치는 아임계 추출조건 중 온도 또는 압력을 나타내고, 문자는 용매의 종류를 나타내며, 세로축은 타이로시나아제 저해능을 IC50값으로 나타낸 것을 의미한다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 각 추출물의 종류에 따른 엘라스타제 저해능을 측정한 그래프로, 가로축의 수치는 아임계 추출조건 중 온도 또는 압력을 나타내고, 문자는 용매의 종류를 나타내며, 세로축은 엘라스타제 저해능을 IC50값으로 나타낸 것을 의미한다.

이하 본 발명의 실시예를 기재한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다. 그러나, 하기 제조예 및 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위하여 예시한 것을 뿐, 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 예들에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 차나무 잎 추출물의 제조

차나무 잎 시료는 전라남도 보성지역에서 채취된 차나무 잎을 20℃ 내지 30℃의 온도조건 및 통풍이 가능한 조건에서 3일간 자연건조시킨 차나무 잎을 분쇄기로 분쇄하여 제조하였다.

차나무 잎 아임계 추출물은 상기 차나무 잎 분쇄물 20 g과 3차 증류수 200 mL를 아임계 추출장치에 넣은 후, 1MPa, 3MPa 및 3MPa의 압력 조건에서 온도를 각각 90℃, 150℃, 180℃, 210℃ 및 240℃로 조절하고, 상기 각각의 압력 및 온도 조건에서 1분간 반응시켜 추출하는 방법으로 제조하였다. 상기 제조된 추출액을 종이여과지(Whatman, No.2)를 이용하여 감압여과 하였으며, 상기 여과 후 회전식 감압농축기(Rotary Vacuum Evaporator)를 이용하여 농축하였으며, 상기 농축 후 동결건조기를 이용하여 건조시켜 분말화시켜 추출물을 제조하였다. 최종 제조된 추출물은 -20℃ 보관하며 실험에 사용하였다.

차나무 잎 용매 추출물은 물, 메탄올 및 에탄올을 이용하여 용매 추출법으로 제조하였다. 구체적으로, 차나무 잎 열수 추출물은 상기 차나무 잎 분쇄물 20 g을 3차 증류수 200 mL에 침지시킨 후, 95℃에서 1시간동안 추출하는 방법으로 제조하였다. 상기 제조된 추출액을 종이여과지(Whatman, No.2)를 이용하여 감압여과 하였으며, 상기 여과 후 회전식 감압농축기(Rotary Vacuum Evaporator)를 이용하여 농축하였으며, 상기 농축 후 동결건조기를 이용하여 건조시켜 분말화시켜 추출물을 제조하였다. 최종 제조된 추출물은 -20℃ 보관하며 실험에 사용하였다.

유기용매를 이용한 차나무 잎 용매 추출물은 상기 차나무 잎 분쇄물 20 g을 메탄올(Methanol) 또는 에탄올(Ethanol)을 각각 200 mL에 침지하여 상온에서 24시간 동안 추출하는 방법으로 제조하였다. 상기 제조된 추출액을 종이여과지(Whatman, No.2)를 이용하여 감압여과 하였으며, 상기 여과 후 회전식 감압농축기(Rotary Vacuum Evaporator)를 이용하여 농축하였으며, 상기 농축 후 동결건조기를 이용하여 건조시켜 분말화시켜 추출물을 제조하였다. 최종 제조된 추출물은 -20℃ 보관하며 실험에 사용하였다.

상기 각 방법에 의해 제조된 추출물의 추출수율은 처음 사용된 차나무 잎 시료 대비 최종 수득한 추출물의 중량을 비교하여 확인하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

추출물 종류	아임계 추출(3M Pa)					용매 추출
	90℃	150℃	180℃	210℃	240℃	열수	메탄올	에탄올
추출수율(%)	23.09	23.69	25.7	29.25	25.9	21.44	17.36	16.99

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 아임계 추출법에 의할 경우 용매 추출법에 비하여 비교적 추출수율이 높은 것으로 확인되었다. 아임계 추출법에서는 210℃까지는 온도가 증가됨에 따라 추출수율이 증가되었으나, 240℃에서는 오히려 추출수율이 감소되어 210℃의 온도가 가장 적합한 것으로 확인되었다. 특히, 용매 추출법에서 가장 추출수율이 좋은 열수 추출법에 비하여 210℃의 아임계 추출이 약 40% 이상 수율이 개선되었고, 에탄올을 이용한 용매 추출법에 비해서는 약 80% 수율이 개선된 것으로 확인되었다.

따라서, 추출수율 면에서 상기 3MPa 및 210℃의 조건에서 아임계 추출을 수행하여 추출물을 제조하는 것이 가장 바람직한 것으로 확인되었다.

< 실시예 2> 추출법 및 추출조건에 따른 차나무 잎 추출물의 기능성 확인

상기 실시예 1에서 제조된 차나무 잎 추출물에 대하여 추출법, 추출용매 및 추출조건에 따른 항주름 활성을 확인하였고, 추가로 세포독성을 확인하였다.

2-1. 타이로시나아제 저해활성을 통한 미백 활성의 확인

상기 실시예 1에서 제조된 차나무 잎 추출물에 대하여 미백 활성을 확인하기 위하여, 다음과 같이 타이로시나아제 저해활성을 확인하였다.

우선, 아임계수 녹차 추출물 및 용매 추출물의 미백효과를 측정하기 위하여 멜라닌(melanin) 생합성에 관여한다고 알려진 버섯 유래의 타이로시나아제(tyrosinase, Sigma, USA)를 사용하였으며, 기질은 L-DOPA(3,4-Dihyrroxyphenylalanine, Sigma)를 사용하였다. 1 mL phosphate saline buffer(0.1 M, pH 6.8), 0.1 mL sample, 0.3 mL distilled water 및 0.1 mL tryrosinase solution(in 0.1 M PBS, pH 6.8, 500 unit/mL)을 cuvette 넣은 후, 25℃에서 6분 동안 정치반응(pre-incubation)시켰다. 타이로시나아제(Tyrosinase) 저해활성은 10 mM substrate solution 0.5 mL를 cuvette에 첨가하고 475 nm에서 product의 양을 측정하여 계산하였으며, 그 결과를 표 2 및 도 1에 나타내었다.

시료		Tyrosinase inhibition activity (SC50: mg/mL)
시료명	추출조건
아임계 추출 (3M Pa)	90℃	2.24
	150℃	1.96
	180℃	1.88
	210℃	1.72
	240℃	1.77
용매 추출	열수	2.34
	메탄올	2.27
	에탄올	2.45

상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 타이로시나아제에 대한 저해활성은 용매 추출법에 비하여 아임계 추출법이 우수한 것으로 확인되었다. 또한, 아임계 추출법과 관련하여, 210℃까지는 온도가 증가됨에 따라 추출수율이 증가되었으나, 240℃에서는 오히려 추출수율이 감소되어 210℃의 온도가 가장 적합한 것으로 확인되었다. 또한, 아임계 추출물과 관련하여, 추출조건 중 압력조건에 따른 타이로시나아제 저해활성 결과를 도 1에 나타내었다. 상기 도 1에 나타낸 바와 같이, 모든 온도 조건에서 1MPa에서 3MPa로 압력이 상승할 때에는 저해활성이 증가하였으나, 3MPa에서 5MPa로 압력이 상승할 때에는 오히려 저해활성이 감소하여, 아임계 추출 압력조건으로는 3MPa이 적합한 것으로 확인되었다.

따라서, 엘라스타제 저해 활성을 통한 항주름 활성과 관련해서, 상기 3MPa 및 210℃의 조건에서 아임계 추출을 수행하여 추출물을 제조하는 것이 가장 바람직한 것으로 확인되었다.

2-2. 엘라스타제 저해 효과를 통한 항주름활성 측정

피부 주름의 생성 원인 중 하나로 알려진 엘라스타제에 대한 저해활성을 통하여 차나무 잎 아임계수 추출물의 항주름활성을 측정하기 위해, 상기 실시예 1에서 제조된 차나무 잎 추출물에 대하여 엘라스타제 저해활성을 측정하였다.

보다 구체적으로, 돼지에서 유래한 엘라스타제 및 기질인 N-succinyl-l-(Ala)3-ρ-nitroanilide를 사용하여 실험을 수행하였다. 우선, 96 well plate의 각 well에 50mM Tri-HCl buffer(pH 8.0) 60 μL를 첨가한 후, 10mM의 N-succinyl-l-(Ala)3-ρ-nitroanilide 10 μL 및 각각의 차나무 잎 추출물 및 증류수 10 μL를 첨가한 후, 37℃에서 5분간 정치반응(pre-incubation)시켰고, 이후, 1unit/mL의 농도로 조제한 엘라스타제를 각 well에 10 μL씩 첨가한 후, 15분 동안 37℃에서 반응시켰다. 반응 종류 후, 415 nm에서 흡광도를 측정하여 저해활성을 측정하였으며, 상기 측정 결과 확인된 IC₅₀을 하기 표 3 및 도 2에 나타내었다. 상기 Ursolic acid를 동일한 실헝방법으로 확인한 결과, IC₅₀값은 12.9 ㎍/mL인 것으로 확인되었다.

시료		Elastase inhibition activity (SC50: ㎍/mL)
시료명	추출조건
아임계 추출 (3M Pa)	90℃	454.02
	150℃	394.8
	180℃	388.5
	210℃	371.98
	240℃	381.67
용매 추출	열수	461.84
	메탄올	402.76
	에탄올	424.18

상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 엘라스타제에 대한 저해활성은 용매 추출법에 비하여 아임계 추출법이 우수한 것으로 확인되었다. 또한, 아임계 추출법과 관련하여, 210℃까지는 온도가 증가됨에 따라 추출수율이 증가되었으나, 270℃에서는 오히려 추출수율이 감소되어 210℃의 온도가 가장 적합한 것으로 확인되었다. 또한, 아임계 추출물과 관련하여, 추출조건 중 압력조건에 따른 엘라스타제 저해활성 결과를 도 2에 나타내었다. 상기 도 2에 나타낸 바와 같이, 모든 온도 조건에서 1MPa에서 3MPa로 압력이 상승할 때에는 저해활성이 증가하였으나, 3MPa에서 5MPa로 압력이 상승할 때에는 오히려 저해활성이 감소하여, 아임계 추출 압력조건으로는 3MPa이 적합한 것으로 확인되었다.

따라서, 엘라스타제 저해 활성을 통한 항주름 활성과 관련해서, 상기 3MPa 및 210℃의 조건에서 아임계 추출을 수행하여 추출물을 제조하는 것이 가장 바람직한 것으로 확인되었다.

2-3. 콜라겐 생성능을 통한 항주름활성 측정

상기 실시예 1에서 제조된 제조된 차나무 잎 추출물에 대하여 항주름활성을 확인하기 위하여, 피부세포인 섬유아세포(normal human dermal fibroblast)를 대상으로 세포외로 유리된 콜라겐 함량을 측정함으로써 콜라겐 생성능을 확인하였다.

구체적으로, 상기 CCD-1064Sk(normal human dermal fibroblast, ATCC CRL-2079, USA)를 이용하여 Sirius red dye binding assay를 수행하였다. 우선, 상기 CCD-1064Sk를 24 well plate에 1×10⁵ cells/mL의 농도로 300 μL/well씩 분주하고, 24시간 동안 37°C 및 5% CO₂의 조건에서 배양한 뒤, 상기 실시예 1에서 제조된 각 압력 및 온도 조건별 차나무 잎 아임계수 추출물을 10% FBS(fetal bovine serum)가 포함된 IMDM(iscove's modified dulbecco's medium)에 첨가하여 각 well에 300 μL씩 처리하고, 37°C 및 5% CO₂의 조건에서 72시간 동안 배양하였다.

상기 배지 600 μL에 50 μM sirius red solution(0.5M acetic acid) 6 mL을 가한 후 상온에서 20분 동안 반응시켜 주었다. 상기 반응 후, 5000×g에서 20 분간 원심분리 한 후, 침전물에 0.5M NaOH 200 μL를 가하여 5분 동안 콜라겐을 용출시켰다. 용출된 콜라겐 염색액(collagen dye)을 96well plate에 옮겨 담은 후 540nm에서 흡광도 값을 측정하여 세포 외로 유리된 총 콜라겐 함량을 구하였으며, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

시료			Collagen synthesis on Fibroblast(%)
			25 μg/mL	100 μg/mL	500 μg/mL	1000 μg/mL
아임계 추출	1 Mpa	90℃	103.1 ± 0.6	109.4 ± 1.1	116.5 ± 0.4	123.7 ± 0.7
		150℃	106.4 ± 0.7	113.2 ± 1.3	118.7 ± 0.8	125.6 ± 0.7
		210℃	107.3 ± 0.5	116.9 ± 1.1	121.7 ± 0.3	128.4 ± 0.7
	3 Mpa	90℃	105.8 ± 0.8	112.7 ± 0.9	118.4 ± 0.7	125.6 ± 0.6
		150℃	107.4 ± 1.2	115.3 ± 0.7	121.1 ± 0.9	127.8 ± 0.2
		180℃	108.6 ± 1.2	117.5 ± 0.8	122.8 ± 0.2	129.6 ± 1.2
		210℃	106.8 ± 0.7	117.9 ± 0.5	124.6 ± 0.3	133.2 ± 0.7
		240℃	107.2 ± 1.3	115.8 ± 0.6	121.4 ± 1.2	128.4 ± 1.4
	5 Mpa	90℃	104.6 ± 1.5	109.6 ± 0.7	115.7 ± 0.2	119.6 ± 0.6
		150℃	106.4 ± 0.7	114.3 ± 1.1	117.9 ± 1.4	123.5 ± 0.3
		210℃	107.3 ± 0.9	116.8 ± 0.2	119.2 ± 0.7	125.6 ± 1.3
용매 추출	열수		103.2 ± 0.3	105.8 ± 0.8	114.6 ± 0.6	122.7 ± 0.7
	메탄올		105.1 ± 0.9	1118. ± 0.7	118.2 ± 0.3	124.1 ± 0.4
	에탄올		104.3 ± 1.1	107.7 ± 0.7	114.5 ± 0.5	119.7 ± 0.9

상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 콜라겐 생성능은 용매 추출법에 비하여 아임계 추출법이 우수한 것으로 확인되었다. 또한, 아임계 추출법과 관련하여, 210℃까지는 온도가 증가됨에 따라 추출수율이 증가되었으나, 270℃에서는 오히려 추출수율이 감소되어 210℃의 온도가 가장 적합한 것으로 확인되었다. 또한, 아임계 추출물과 관련하여, 1MPa에서 3MPa로 압력이 상승할 때에는 콜라겐 생성능이 증가하였으나, 3MPa에서 5MPa로 압력이 상승할 때에는 오히려 콜라겐 생성능이 감소하여, 아임계 추출 압력조건으로는 3MPa이 적합한 것으로 확인되었다.

따라서, 콜라겐 생성능을 통한 항주름 활성과 관련해서, 상기 3MPa 및 210℃의 조건에서 아임계 추출을 수행하여 추출물을 제조하는 것이 가장 바람직한 것으로 확인되었다.

Claims (7)

1. 차나무(Camellia sinensis) 잎을 분쇄하여 차나무 잎 분쇄물을 제조하는 단계; 상기 차나무 잎 분쇄물에 물을 첨가하는 단계; 및 상기 차나무 잎 분쇄물에 상기 차나무 잎 분쇄물 100 중량부를 기준으로, 물 1,000 중량부를 첨가하고, 3 MPa 및 210℃의 조건에서 1분간 반응시켜 차나무 잎 아임계수 추출물을 제조하는 단계
   를 포함하는 주름 예방 또는 개선능을 가진 차나무 잎 아임계수 추출물 제조방법.
2. 제1항에 있어서,
   상기 차나무(Camellia sinensis) 잎 분쇄물을 제조하는 단계는 상기 차나무 잎를 건조한 후, 분쇄하는 방법으로 수행하는 것을 특징으로 하는 주름 예방 또는 개선능을 가진 차나무 잎 아임계수 추출물 제조방법.
3. 삭제
4. 제1항의 제조방법으로 제조된 차나무(Camellia sinensis) 잎 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
5. 삭제
6. 제1항의 제조방법으로 제조된 차나무(Camellia sinensis) 잎 아임계수 추출물을 유효성분으로 포함하는 미백용 화장료 조성물.
7. 삭제

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