KR101987425B1 - 갯버들 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 갯버들 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

Description

갯버들 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{A COSMETIC COMPOSITION COMPRISING SALIX GRACILISTYLA EXTRACT}

본 발명은 갯버들 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부환경과 접촉하여 외부 자극에 대한 신체를 보호하는 가장 기초적인 방어기관이며, 외적인 아름다움을 표현하는 중요한 기관이다. 외적인 아름다움이 젊음과 건강을 상징하는 판단의 기준일 뿐 아니라 자신감을 표출하여 업무능력에 영향을 주는 경쟁력으로 자리잡고 있기 때문에, 현대사회에서 피부를 관리하는 경향이 증가하고 있다.

그러나 사람들의 외부 활동량이 증가함에 따라 피부가 태양광선에 장기간 노출되면서 자외선에 의해 피부가 손상된다. 피부가 자외선에 장기간 노출되면 피부노화가 진행되고, 자외선으로부터 피부 내층을 보호하기 위해 생성된 멜라닌 색소로 인해 피부가 검게 변색된다. 따라서 현대사회에서 피부를 관리하는 방법으로 기능성 화장품의 소비가 증가하고 있으며, 백옥같이 하얗고 깨끗하면서 젊고 탄력이 있는 피부를 선호하기 때문에 화장품 산업에서는 미백효과와 노화방지에 대한 개발이 활발히 이루어지고 있다.

화장품의 미백 효과는 사용자의 피부를 하얗게 하는 것을 말하며, 대부분의 미백 화장품은 멜라닌의 생성을 억제하는 기능을 한다. 멜라닌은 표피 내 기저층에 존재하는 멜라노사이트(melanocyte)에 의해 생성되며, 멜라노사이트의 활동성과 분포가 사람의 피부색을 결정한다. 멜라노사이트 내부에 함유되어 있는 타이로시나제(tyrosinase)라는 효소에 의해 아미노산의 일종인 타이로신(tyrocine)이 도파(DOPA, dihydroxy phenylalanine)로 전환되고, 도파퀴논(dopaquinone)과 도파크롬(dopachrome) 등을 거치는 일련의 산화과정을 통해 최종적으로 중합체인 멜라닌이 생성된다. 따라서 대부분 미백 화장품은 멜라닌 생성의 주요 효소인 타이로시나제의 활성을 저해함으로써 멜라닌의 생성을 억제시키는 원리로 미백 효과가 발휘된다.

한편, 화장품의 노화방지는 피부노화를 촉진하는 원인들을 차단하거나 제거하는 것이다. 상기 피부노화는 나이가 들면서 자연스럽게 나타나는 현상이 아닌 태양광에 의한 광노화이다. 광노화는 자외선에 의해 과잉의 활성산소종이 생성되고, 체내의 항산화효소와 비타민 E, C, 글루타티온 및 유비퀴놀 등의 항산화제가 감소함으로 인해 산화와 항산화의 불균형으로 인해 야기된다.

광노화가 진행됨에 따라 멜라닌 생성반응이 촉진될 뿐 아니라 지질 과산화, 단백질 산화, 단백질 분해효소의 활성화, 콜라겐과 엘라스틴의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합, 히알루론산 사슬절단, DNA 산화 등에 의해 생체 구성성분들의 손상을 가져오고 결국에는 피부탄력감소, 주름 및 기미, 주근깨 생성 등의 피부노화가 일어나게 된다. 따라서 타이로시나제의 활성을 저해함과 동시에 항산화 효과를 가지는 화장료 조성물이 피부의 미백 효과를 효과적으로 유도하면서 피부노화를 방지할 수 있다.

종래에 아스코르빈산(일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논(일본특개평 6-192062), 코직산(일본특개소 56-7710), 알부틴(일본특개평 4-93150) 및 식물 추출물 등이 타이로시네이즈 저해 활성을 나타내어 미백 화장료로 이용되었다. 하지만, 상기 성분들은 화장품 제형 중에서 안정성이 미흡하여, 분해되어 착색되거나, 이취를 유발할 수 있으며, 생체 내에서 안전성 또는 효능이 불명확하여 그 사용이 제한되고 있다.

화장품 업계는 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 다수의 제품을 개발하고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 점차 증가하고 있다.

그러나, 통상의 방법으로 수득된 천연 유래의 추출물을 함유하는 화장료 제품은 피부 미백 효과 등 기능성이 충분히 구현되지 아니하며, 피부 개선 활성이 지속적으로 유지되지 않는 문제가 있었다. 따라서, 우수한 기능성과 함께 생체 안정성 및 피부 개선 효과가 우수한 천연물 유래 화장료 제품의 개발 필요성이 꾸준히 대두되고 있는 상황이다.

따라서 생체 안전하고 항산화, 미백 및 항노화 효과가 우수한 천연물 유래 화장품 제품의 개발 필요성이 꾸준히 대두되고 있는 상황에서, 본 발명자들은 천연 추출물로 우수한 기능성 화장료 조성물을 개발하고자 하였다.

본 발명은 전술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명의 목적은 갯버들 추출물을 포함하는 기능성이 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 갯버들(Salix gracilistyla) 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.

일 실시예에 있어서, 상기 갯버들 추출물은 발효 균주를 접종하여 수득한 발효 추출물일 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 발효 추출물은 갯버들 줄기에 발효 균주를 접종하여 수득할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 발효 추출물은 갯버들 줄기 및 갯버들 잎에 발효 균주를 접종하여 수득할 수 있다.

일 실시예에 있어서, 상기 발효 균주는 영지버섯(Ganoderma lucidum) 균사체일 수 있다..

일 실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 항산화, 피부 미백 또는 주름 개선용일 수 있다.

본 발명의 다른 일 측면에 따르면, 갯버들 줄기 및 잎을 분쇄하는 단계; 버섯 균사체를 접종하고 발효시키는 단계; 및 용매를 혼합하여 침적 추출하는 단계;를 포함하는 갯버들 발효 추출물의 제조 방법이 제공된다.

본 발명의 일 측면에 따른 화장료 조성물은 갯버들 추출물을 유효성분으로 포함함으로써, 항산화, 피부 미백 및 주름 개선 효과가 우수하다.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 조성물의 항산화능을 평가하기 위해 자유라디칼 소거능을 대조군과 비교한 그래프이다. 갯버들 줄기 추출물(S. gracilistyla branch) 및 갯버들 잎 추출물(S. gracilistyla Leaf)을 12.5, 25, 50, 100 및 200 μg/mL의 농도로 DPPH 라디칼 소거능을 평가하였고, 대조군은 Ascorbic Acid을 사용하였다. Con은 무처리 군이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 조성물의 미백효과를 평가하기 위해 타이로시나제(tyrosinase) 억제 활성을 대조군과 비교한 그래프이다. 갯버들 줄기 추출물(S. gracilistyla branch) 및 갯버들 잎 추출물(S. gracilistyla Leaf)을 500 및 1000 μg/mL의 농도로 타이로시나제 억제 활성을 평가하였고, 대조군은 알부틴(Arbutin)을 사용하였다. Con은 무처리 군이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 조성물의 항노화 효과를 평가하기 위해 콜라게나제(Collagenase) 저해 활성을 대조군과 비교한 그래프이다. 갯버들 줄기 추출물(S. gracilistyla branch) 및 갯버들 잎 추출물(S. gracilistyla Leaf)을 500 및 1000 μg/mL의 농도로 콜라게나제 저해 활성을 평가하였고, 양성 대조군으로 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)을 사용하였다. Con은 무처리 군이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 조성물의 항노화 효과를 평가하기 위해 프로콜라겐(Procollagen) 합성 활성을 대조군과 비교한 그래프이다. 갯버들 줄기 추출물(S. gracilistyla branch)과 갯버들 줄기를 영지버섯(Ganoderma lucidum)으로 발효한 발효 추출물(Fermented lucidum)의 프로콜라겐 합성 활성을 평가하였고, 발효의 비교예로 갯버들 줄기를 아스퍼질러스(Aspergillus oryzae)로 발효한 비교 발효 추출물(Fermented oryzae)을 사용하였다. 대조군은 Ascorbic Acid을 사용하였다.

본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.

이하, 본 발명의 실시예를 상세히 기술하나, 하기 실시예에 의해 본 발명이 한정되지 아니함은 자명하다.

본 발명의 일 측면에 따르면, 갯버들(Salix gracilistyla) 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물이 제공된다.

상기 화장료 조성물은 천연 유래의 추출물을 유효성분으로 포함하여 피부 개선 효과 및 생체 안전성이 우수할 뿐만 아니라 피부 자극이 최소화될 수 있다.

상기 “유효 성분으로 포함하는”은 피부 개선 효과를 나타낼 수 있는, 예컨대, 주름개선효능과 관련된 콜라겐 합성, 탄력 개선 또는 피부 미백, 피부 자극 완화, 피부 진정 효과 등을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미할 수 있다.

상기 “갯버들(Salix gracilistyla)”은 버드나무의 일종으로 한국, 일본, 중국의 강 연안에서 분포하는 나무이다. 상기 갯버들의 높이는 1~2m 이고 뿌리 근처에서 가지가 많이 나오며 어린 가지는 노란빛이 도는 녹색으로 털이 있다. 상기 갯버들의 잎은 거꾸로 세운 바소꼴 또는 넓은 바소꼴로 양 끝이 뾰족하고 톱니가 있으며, 잎자루의 길이는 3~10mm이다. 갯버들의 나무 껍질에는 살리실염(Salicylglykoside)이 함유되어 있어 한방에서는 진통제로 사용된다. 또한, 상기 갯버들의 줄기와 잎은 약재로 사용되며, 피부병과 상처에 효과가 있고, 뿌리는 관절염에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

상기 갯버들 추출물은 발효 균주를 접종하여 수득한 발효 추출물일 수 있다.

상기 “발효”는 발효 균주 자신이 가지고 있는 효소를 이용해 유기물을 분해시키는 과정을 의미한다. 발효 균주를 통한 발효과정을 거친 원료는 발효 전보다 최소 2배에서 최대 수 십배의 효과가 증대되는 것으로 알려져 있다. 발효를 거친 대사물질은 피부에 좋은 각종 아미노산, 유기산, 항산화물질을 함유하여 피부대사를 촉진시켜 피부결을 매끄럽게 가꿔준다. 또한, 발효과정을 거치면서 입자가 작아지고 중금속 등의 독성이 분해되어 흡수율이 좋을 뿐 아니라 피부트러블이나 알레르기 부작용을 완화해준다.

상기 “발효 추출물”은 갯버들 줄기 및 갯버들 잎에 발효 균주를 접종하여 수득할 수 있다. 상기 갯버들 줄기 및 잎을 멸균하고 발효 균주를 접종하여 일정 온도에서 일정 기간 동안 발효한 후, 특정 용매로 추출하여 제조할 수 있다.

상기 발효 균주는 영지버섯(Ganoderma lucidum), 상황버섯(Phellinus linteus), 아위버섯(Pleurotusus ferulae), 및 꽃송이버섯(Sparassis crispa)으로 이루어진 군에서 하나 이상 선택된 균사체일 수 있으나, 바람직하게는 영지버섯 균사체일 수 있다.

상기 발효 추출물은 갯버들 줄기 및 잎을 혼합하고 분쇄하는 단계; 버섯 균사체를 접종하교 발효시키는 단계; 및 용매를 혼합하여 침적 추출하는 단계를 포함하는 제조 방법에 의해 제조될 수 있다.

상기 갯버들 줄기와 상기 갯버들 잎을 혼합함으로써, 버섯 발효가 어려운 갯버들 잎을 버섯 균사체로 발효하여 다양한 유효성분을 추출할 수 있다.

상기 버섯 균사체는 목질이 존재해야 생장할 수 있다. 상기 목질은 나무 줄기 내부에 존재하는 단단한 부분을 의미하며, 상기 갯나무 잎은 목질을 함유하지 않으므로 버섯 균사체에 의해 발효될 수 없다. 그러나 상기 갯버들 줄기와 상기 갯나무 잎을 혼합하여 분쇄 및 발효시키는 경우 상기 갯버들 줄기의 목질에 의해 상기 갯나무 잎에 대한 발효가 가능하다.

상기 “추출물”은 용매와 추출 원료를 특정 조건 하에서 접촉시킴으로써 추출 원료에 함유된 유효성분으로 천연물로부터 원료에 함유된 성분을 분리해낸 물질이라면, 추출 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함할 수 있다.

예컨대, 물이나 유기용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출한 것, 천연물의 특정 성분, 예컨대 오일과 같은 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함할 수 있다. 상기 추출물은 건조 후 분말화하거나, 열수추출법, 에탄올 추출법 등 종래 알려진 다양한 추출법에 의해 수득할 수 있다.

상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 석유에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 트리클로로메탄, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 1,3-부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 용매로 추출될 수 있고, 구체적으로 60 내지 80% 농도(v/v)의 에탄올에 의해 추출될 수 있다.

상기 원료에 포함된 유효성분은 용매의 극성에 따라 추출 비율이 상이해질 수 있으며, 상기 에탄올은 천연 원료의 생리 활성 물질 추출에 있어서 선택성이 뛰어나므로 상기 에탄올 추출에 의해 최적의 피부 개선 효과가 구현될 수 있다.

물과 에탄올은 극성이 상이하고 각 극성에 따라 추출되는 유효성분이 달라질 수 있으므로 최적의 피부 개선 효과가 구현될 수 있도록 상기 에탄올의 농도를 적절히 제어할 수 있다. 이 때, 상기 에탄올의 농도가 60% 미만이면 피부 개선 효과를 나타내는 유효성분이 충분하게 추출되지 않을 수 있고, 80% 초과이면 적정한 수율이 구현되지 않을 수 있다.

상기 추출물은 추출 원료를 물로 수세한 후 건조 및 분쇄하여, 원료 중량의 8 내지 12배에 달하는 부피의 용매로 약 1 내지 24시간 동안 환류 순환 추출, 가압 추출, 초음파 추출 등 통상적인 방법으로 추출 및 여과하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 추출물은 감압 증류 또는 동결 건조 등과 같은 추가적인 공정에 의해 분말 상태로 수득할 수 있다.

상기 추출물은 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함할 수 있다. 예컨대, 상기 추출물은 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획물을 포함할 수 있다.

상기 추출물은 상기 에탄올을 용매로 하여 50℃ 내지 70℃ 의 온도에서 12 내지 18시간 동안 추출될 수 있다.

한편, 상기 추출 온도가 50℃ 미만이면 추출 효율이 저하되고 유효 성분이 적절히 용출되지 않을 수 있고, 70℃ 초과이면 천연 원료에 함유된 유효 성분이 고온에서 변형 또는 소실되어 피부 개선 효과가 저하될 수 있으므로, 추출 온도를 적정 범위 내로 유지하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 추출 시간이 12시간 미만이면, 천연 원료에 함유된 유효 성분이 완전이 추출되지 않을 수 있으며, 18시간 초과이면 천연 원료에 함유된 잔여 유효 성분의 함량이 과소하여 시간 및 비용 측면에서 비효율적이므로 추출 시간을 적절히 제어하는 것이 바람직하다.

상기 화장료 조성물은 항산화, 피부 미백 또는 피부 주름 개선용일 수 있다.

상기 “항산화”는 산화를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 인체는 산화촉 진물질과 산화억제물질이 균형을 이루고 있으나, 여러 가지 요인들로 인하여 이러한 균형 상태를 잃고 산화를 촉진하는 방향으로 기울게 되면, 생체 내에 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 세포손상 및 병리적 질환을 유발할 수 있다.

산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 화학적으로 불안정하고 반응성이 높아 DNA, 단백질, 지질 및 탄수화물과 같은 여러 생체물질과 쉽게 반응할 수 있으며, 생체 내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나 돌연변이, 세포독성 및 암 등을 초래하게 되고, 노화의 직접적인 원인이 되기도 한다. 상기 활성 산소종을 제거하거나 감소시킴으로써 항산화 효과를 얻어 노화를 방지하고 건강을 유지할 수 있다.

상기 “피부 미백”은 피부색에 영향을 미치는 멜라닌, 산화-환원 헤모글로빈, 카로틴, 멜라노이드 등 다양한 생체 분자의 생성을 억제함으로써 잡티, 주근깨, 기미 등의 피부 색소 침착 현상을 완화시키고, 피부 누런기, 붉은기를 완화시켜 피부 밝기 및 균일도를 향상시키는 효과를 의미한다.

상기 "피부 주름 개선"은 엘라스틴으로 구성된 탄력섬유가 콜라겐과 함께 존재하며, 상기 엘라스틴과 콜라겐이 충분히 존재하는 상태에서 피부 탄력이 유지 또는 향상되는 현상을 의미한다. 또한 상기 "주름 개선"은 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름이 완화되는 현상을 의미한다.

상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 수분크림, 영양크림, 마사지크림, 영양로션, 에센스, 앰플, 젤, 아이크림, 오일, 파운데이션, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 샴푸, 린스, 팩, 스프레이 및 파우더로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상으로 제형화될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 통상의 방법에 의해 제형화될 수 있다. 피부 외용제의 제형화에 있어서 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있고, 화장료 조성물의 제형화에 있어서 International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed(The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995)에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있다.

구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 피부 외용제는, 연고, 패치, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다

상기 화장료 조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.

상기 화장료 조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물이 비누로 제형화될 때, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 사용될 수 있다.

상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.

다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.

이하 실시예를 통해, 본 발명을 더욱 상술하나 하기 실시예에 의해 본 발명이 제한되지 아니함은 자명하다.

실시예 1 : 갯버들 추출물의 제조

갯버들 줄기 및 잎을 수세한 후 상온에서 완전히 건조시키고 분쇄하여 분쇄물을 100g 수득하였다. 각각의 분쇄물 100g에 대해 20배 부피의 70%(v/v) 에탄올을 용매로 하여 85℃에서 4시간 동안 환류 순환 추출하였다.

상기 추출물은 250메쉬 및 11㎛ 필터 에 의해 여과되었으며, 40℃에서 감압 농축 후 동결 건조하여 추출물의 고형분을 수득하였다.

실시예 2 : 갯버들 영지버섯 발효 추출물의 제조

갯버들 줄기를 수세한 후 상온에서 완전히 건조시키고 분쇄하여 분쇄물을 각각 100g 수득하였다. 상기 갯버들 줄기 분쇄물을 121℃에서 120분간 각각 고압 멸균한 후 발효 균주인 영지버섯(Ganoderma lucidum) 균사체를 10%(w/v)로 각각 접종하였다.

발효 균주가 접종된 갯버들 줄기를 30℃ 에서 12일간 배양한 후 발효된 갯버들 줄기 및 잎에 대해 10배 부피의 에탄올을 용매로 하여 85℃의 온도에서 4시간 동안 환류 순환 추출하였다.

추출물은 250메쉬 및 11㎛ 필터에 의해 여과되었으며, 잔여 원료에 대해 동일한 방법으로 3회씩 반복 추출 하고, 30℃에서 감압 농축 후 동결 건조하여 갯버들 줄기 발효 추출물 각각의 고형분을 수득하고, 제1 발효 추출물로 하였다.

비교예 : 갯버들 곰팡이 발효 추출물의 제조

실시예 2와 동일한 방법으로 발효 추출물을 제조하되, 발효 균주만을 아스퍼질러스(Aspergillus)로 달리하였다.

실험예 1 : 피부 안전성 시험

실시예 및 비교예의 시료에 대한 피부 안전성을 검증하기 위해, 섬유아세포(HDF), 멜라닌형성세포(B16F10), 각질세포(HEKa)에 대한 MTT assay 실험을 수행하였다.

실시예 및 비교예의 시료를 정제수에 0, 6.25, 12.5, 25 및 50 mg/L의 농도별로 각각 현탁한 후, 세포 생존율을 측정하였다.

세포 독성은 MTT{3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide} 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하는 모스만(Mosmann)의 방법을 변형하여 수행하였다.

섬유아세포(HDF), 멜라닌형성세포(B16F10), 및 각질세포(HEKa)를 각각 96-웰 플레이트에 1×10⁴ cells/well의 농도로 분주하여 37℃, 5% CO₂에서 48시간 동안 배양하였다.

배양 배지를 제거하고 시료를 농도별로 처리한 배지에 24 시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS(Phosphate buffered saline)로 반복 세척하였다.

MTT를 5mg/mL로 PBS에 녹여 50 μL 첨가하고 37℃, 5%의 CO₂에서 1시간 동안 배양하였다. DMSO(Dimethyl sulfoxide)를 한 웰(well) 당 100L 넣고, 10분 동안 교반한 후 570nm에서 흡광도를 측정하였다.

측정 결과, 각 시료의 모든 농도에서 세포 독성은 확인되지 않았다. 상기 결과는 상기 시료가 인체에 무해할 뿐만 아니라 인체 안전성이 우수함을 시사한다.

실험예 2 : DPPH 측정법을 통한 자유라디칼 소거 활성 평가

실시예 1의 추출물을 정제수에 농도별로 현탁하여 자유라디칼 소거 활성(free radical scavenging activity)을 평가하였다.

DPPH 측정법은 억제제(inhibitor)가 안정한 라디칼 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl radical)를 소거하여 탈색되는 정도를 517nm에서 흡광도를 측정하는 방법이다.

상기 대조군은 Ascorbic Acid를 이용하였고, 농도별 라디칼 DPPH의 소거능(%) 및 라디칼 DPPH의 50% 소거하는 농도(SC₅₀)를 측정하였다(도 1).

SC₅₀의 값이 낮을수록 자유라디칼의 소거 활성이 높은 것을 의미한다. 자유라디칼 소거활성이 높을수록 항산화 효과가 뛰어난 것으로 평가할 수 있다.

도 1을 참조하면, 양성 대조군인 비타민 C의 SC₅₀ 값은 5μg/㎖ 수준으로 측정되었으나, 갯버들 줄기 추출물의 SC₅₀ 값은38.46μg/㎖, 갯버들 잎 추출물의 SC₅₀ 값은 35.79μg/㎖로 측정되었다.

실험예 3 : 타이로시나제 억제 활성을 통한 미백 효과 평가

실시예 1의 추출물을 정제수에 농도별로 현탁하여 타이로시나제 억제 활성(tyrosinase inhibition activity)을 평가하였다. 타이로시나제는 타이로신과 반응하여 멜라닌을 형성하는 효소로, 타이로시나제가 억제되면 멜라닌의 생성이 저해되기 때문에 미백 효과가 나타난다.

멜라닌형성세포(B16F10)를 96-웰 플레이트에 1×10⁴ cells/well의 농도로 분주하여 37℃, 5% CO₂에서 24시간 동안 배양하였다. 시료를 농도별로 처리하고 72 시간 동안 배양한 후 1% triton X-100 용액을 처리하여 용해하였다.

약 1시간동안 혼합한 후 원심 분리한 상층액을 타이로시나제 활성 측정 용액으로 사용하였다.

실시예의 시료 및 0.1M 포스페이트 완충액((phosphate buffer, pH 6.8)을 총 100μL가 되게 섞은 후 L-DOPA를 100μL씩 처리한 후 490nm에서 흡광도 변화를 측정하였다.

양성 대조군은 알부틴(Arbutin)을 사용하였고, 농도별 효소의 저해활성을 평가하였다(도 2).

도 2를 참조하면, 갯버들 줄기 추출물 및 잎 추출물은 양성 대조군인 알부틴과 비교하여 동일 농도 대비13% 수준의 미백 활성이 있는 것으로 평가되었으며, 갯버들 줄기 추출물 및 잎 추출물의 타이로시나제 억제 활성은 동등한 수준으로 평가되었다.

실험예 4 : 콜라게나제 저해 활성을 통한 항노화 효과 평가

제조예 1의 추출물을 정제수에 농도별로 현탁하여 콜라게나제 저해 활성(collagenase inhibition activity)을 평가하였다.

0.1 M tris-HCl buffer(pH 7.5)에 4 mM CaCl₂를 첨가하여, 0.3mg/mL의 4-phenylazobenzyl oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg(sigma, U.S.A)를 녹인 기질액 125 μL에 시료 50 μL를 혼합하였다.

0.2mg/mL의 collagenase(sigma, U.S.A) 75 μL를 첨가하고 실온에서 20분간 반응시킨 후 6%(w/w)의 citric acid 250μL을 첨가하여 반응을 정지시켰다.

Ethyl acetate 1.5 mL을 첨가하여 320nm에서 흡광도를 측정하였다. 콜라게나제 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.

농도별 콜라게나제 억제능(%) 및 콜라게나제의 50% 억제하는 농도(IC₅₀)를 측정하였다(도 3).

도 3을 참조하면, 갯버들 잎 추출물의 SC₅₀ 값은 양성 대조군인 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG) 및 갯버들 줄기 추출물의 SC₅₀ 값보다 낮은 수준으로 측정되었으며, 상기 결과는 갯버들 잎 추출물의 주름 개선 효과가 우수한 것을 시사한다.

실험예 5 : 프로콜라겐 합성 활성을 통한 항노화 효과 평가

실시예 및 비교예의 시료를 정제수에 농도별로 현탁하여 프로콜라겐 합성 활성(procollagen synthesis activity)을 평가하였다.

Human fibroblast 세포를 96-웰 플레이트에 1×10⁴ cells/well의 농도로 분주하여 37℃, 5% CO₂에서 24시간 동안 배양하였다.

배지를 제거하고 24시간 세포를 기아상태를 유지하며 시료를 처리한 후 48시간 배양하였다.

세포의 배지를 수거하여 Procollagen Type-1 C-Peptide (PIP)Elisa kit (Takara Bio Inc., JAPAN)를 사용하여 프로콜라겐 양을 측정하였다.

대조군은 Ascorbic Acid를 사용하였으며, 시료는 25μg/㎖ 처리하여 프로콜라겐 합성량을 측정하였다(도 4).

도 4를 참조하면, 영지버섯 발효 추출물(실시예 2)의 프로콜라겐 합성 활성은 갯버들 줄기 추출물(실시예 1) 보다 현저히 높은 수준으로 측정되었으며, 특히, 아스퍼질러스(Aspergillus)로 발효한 비교예의 프로콜라겐 합성 활성은 실시예 1보다 낮은 수준으로 평가되었다.

상기 결과는 갯버들 줄기 추출물이 영지버섯 발효에 의해 항노화 효과가 현저히 증대될 수 있음을 시사한다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (7)

1. 갯버들(Salix gracilistyla) 발효 추출물을 유효성분으로 포함하고,
   상기 발효 추출물은 발효 균주인 영지버섯(Ganoderma lucidum) 균사체를 접종하여 수득한 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,
   상기 발효 추출물은 갯버들 줄기에 발효 균주를 접종하여 수득한 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 발효 추출물은 갯버들 줄기 및 갯버들 잎에 발효 균주를 접종하여 수득한 화장료 조성물.
5. 삭제
6. 삭제
7. 갯버들 줄기 및 잎을 혼합 및 분쇄하는 단계;
   영지버섯(Ganoderma lucidum) 균사체를 접종하고 발효시키는 단계; 및
   용매를 혼합하여 침적 추출하는 단계;를 포함하는, 피부 주름 개선용 갯버들 발효 추출물의 제조 방법.

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