CN110430888B - 一种促进胶原蛋白增生的植物萃取物组合物 - Google Patents

一种促进胶原蛋白增生的植物萃取物组合物 Download PDF

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Abstract

一种含有植物萃取物的组合物，包括：葡萄籽、红茶、绿茶、红酒、柑橘、菠菜、青咖啡豆、蓝莓、普洱茶、或四季春茶的萃取物,所述组合物能有效促进胶原蛋白的增生。

Description

一种促进胶原蛋白增生的植物萃取物组合物
相关申请的交叉引用
本申请主张在2017年04月03日在美国提交的美国专利申请号No. 62/480,860、以及在2017年05月08日在美国提交的美国专利申请号No. 62/503,185的优先权，其全部内容通过引用包含于此。
技术领域
本发明涉及一种含有植物萃取物的组合物及其用途，尤其涉及一种含有植物萃取物的组合物及其用于促进胶原蛋白增生的用途。
背景技术
胶原蛋白是动物体内最主要的一种结构性蛋白质，为细胞外间质及结缔组织主要的成分，其广泛存在于肌腱、骨骼、皮肤及眼角膜等组织中，是动物体内含量最多的蛋白质，约占动物体总蛋白质量的20％～30％及身体总重的6％。
在有充足蛋白质营养及维生素C的情况下，人体能自行合成胶原蛋白，然而随着年龄增长，胶原蛋白的合成速率减慢且流失率增加，则会产生许多胶原蛋白流失所致的问题，例如皮肤松垮或关节容易磨损等。
因此，若能适当提升体内胶原蛋白的分泌量，可使皮肤保持弹性，减缓皱纹的形成，也能增加关节强度与灵活度，减缓关节磨损及老化的发生。然而，目前可用于促进胶原蛋白分泌量增加的成分或药物有限，若为某种植物萃取物，其必须施予相当高的剂量，在使用成本上以及效果上有其局限，因此，若能施予多种萃取物的少量组分，即可产生单一成分的高剂量效果时，对于前述功效的运用，不但可大幅提升，也同时降低了使用成本。
发明内容
因此，本发明的一目的在于提供一种含有植物萃取物的组合物，其包含选自由红酒萃取物与蓝莓萃取物、柑橘萃取物与蓝莓萃取物、柑橘萃取物与四季春茶萃取物、菠菜萃取物与红茶萃取物、菠菜萃取物与绿茶萃取物、青咖啡萃取物与蓝莓萃取物、及青咖啡萃取物与普洱茶萃取物所组成的组中的至少任一组的组合。
本发明的一实施例中，该组合物包含下列任一组合：至少0.003906mg/ml 的青咖啡萃取物、及至少0.003906mg/ml的蓝莓萃取物；至少0.015625mg/ml 的青咖啡萃取物、及至少0.015625mg/mL的普洱茶取物；至少0.125mg/ml 的蓝莓萃取物、及至少0.125mg/ml的红酒萃取物；至少0.25mg/ml的菠菜萃取物、及至少0.25mg/ml的绿茶萃取物；至少0.5mg/ml的菠菜萃取物、及至少0.5mg/ml红茶萃取物；至少0.5mg/ml的柑橘萃取物、及至少0.5mg/ml的四季春茶萃取物；或至少4mg/ml柑橘萃取物、及至少4mg/ml的蓝莓萃取物。
本发明的又一目的在于提供一种促进胶原蛋白增生的医药组合物，包含前述组合物、及药学上可接受的载体。
本发明的又一目的在于提供一种前述医药组合物的用途，且该组合物用于促进胶原蛋白增生。
本发明的又一目的在于提供一种如前述医药组合物的用途，且该组合物用于制备促进胶原蛋白增生的医药组合物，该医药组合物的剂型为溶液、胶囊或锭剂。
本发明的含有植物萃取物的组合物及其于促进胶原蛋白增生的用途能有效促进胶原蛋白的增生率，并具有增强皮肤弹性及降低皱纹形成，与改善关节的强度及灵活度的效力。
附图说明
图1为本发明的各植物萃取组合物的胶原蛋白增生率的直方图。
具体实施方式
以下将配合附图进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例用以阐明本发明的发明特点及应用，而非以限定本发明的范围，对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，因此本发明的保护范围应当以本申请权利要求书的内容为准。
实施例1植物萃取物的制备方法
实施例1-1本发明四季春茶萃取物的制备方法
四季春茶(Four Seasons Spring tea)萃取物的制备方法如下：首先，将四季春茶叶(Leaves ofFour Seasons Spring tea plant)洗净并进行干燥，再用粉碎机将四季春茶叶进行粗碎，接着以水为溶剂对四季春茶叶的粗碎物进行萃取，该溶剂与四季春茶叶粗碎物以液固比5～20：1～5均匀混合，萃取温度为50℃～100℃，优选为75℃～95℃，萃取时间约为0.5～3小时，得到四季春茶的粗萃取物，将该粗萃取物冷却至室温后，经由400目的滤网过滤以移除残余固体物，再进一步于45℃～70℃进行减压浓缩而获得浓缩产物，即为本发明的四季春茶萃取物。
实施例1-2本发明绿茶萃取物的制备方法
绿茶(Green tea)萃取物的制备方法如下：首先，将绿茶茶叶 (Unfermentedleaves of Camellia sinensis)洗净并进行干燥，再用粉碎机将绿茶茶叶进行粗碎，接着以水为溶剂对绿茶叶的粗碎物进行萃取，该溶剂与绿茶叶粗碎物以液固比5～20：1～5均匀混合，萃取温度为50℃～100℃，优选为75℃～95℃，萃取时间约为0.5～3小时，得到绿茶的粗萃取物，将该粗萃取物冷却至室温后，经由400目的滤网过滤以移除残余固体物，再进一步于 45℃～70℃进行减压浓缩而获得浓缩产物，即为本发明的绿茶萃取物。
实施例1-3本发明红茶萃取物的制备方法
红茶(Black tea)萃取物的制备方法如下：首先，将红茶茶叶(Fermented leavesof Camellia sinensis)洗净并进行干燥，再用粉碎机将红茶茶叶进行粗碎，接着以水为溶剂对红茶叶粗碎物进行萃取，该溶剂与红茶叶粗碎物以液固比 5～20：1～5均匀混合，萃取温度为50℃～100℃，优选为75℃～95℃，萃取时间约为0.5～3小时，得到红茶的粗萃取物，将该粗萃取物冷却至室温后，经由 400目(mesh)的滤网过滤以移除残余固体物，再进一步于45℃～70℃进行减压浓缩而获得浓缩产物，即为本发明的红茶萃取物。
实施例1-4本发明菠菜萃取物的制备方法
菠菜萃取物通过对菠菜(Spinacia oleracea)进行萃取而获得，本实施例中使用的菠菜萃取物购自弘祥农产加工厂。
实施例1-5本发明红酒萃取物的制备方法
红酒萃取物通过对红葡萄酒进行萃取而获得，本实施例中使用的红酒萃取物购自上海博优堂生物技术有限公司。
实施例1-6本发明柑橘萃取物的制备方法
柑橘萃取物通过对柑橘(Citrus reticulata)果实进行萃取而获得，本实施例中使用的柑橘萃取物购自罗顿贸易有限公司。
实施例1-7本发明青咖啡萃取物的制备方法
青咖啡豆萃取物通过对未经烘焙的咖啡属植物(Coffea spp.)种子进行萃取而获得，本实施例中使用的青咖啡豆萃取物购自ARJUNA NATURAL EXTRACTS有限公司(印度)。
实施例1-8本发明蓝莓萃取物的制备方法
蓝莓萃取物通过对北美蓝莓(Vaccinium Cyanococcus)果实进行萃取而获得，本实施例中使用的蓝莓萃取物购自元弘草本科研有限公司。
实施例1-9本发明普洱茶萃取物的制备方法
普洱茶(Puerh tea)萃取物通过对普洱茶茶叶(Post-fermented leaves ofCamellia sinensis)进行萃取而获得，本实施例中使用的普洱茶萃取物购自南京泽朗生物科技有限公司。
实施例1-10本发明葡萄籽萃取物的制备方法
本实施例中使用的葡萄籽萃取物购自诚鸿生物科技有限公司。
实施例2本发明植物萃取物及其组合物促进纤维细胞增生胶原蛋白的效果
本发明以人类皮肤纤维母细胞(Human skin fibroblast,CCD-966sk)进行对胶原蛋白增生的分析。该人类皮肤纤维母细胞购自食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心(中国台湾)编号为BCRC 60153，将该细胞在含有10％的胎牛血清(Fetal Bovine Serum)以及90％的Minimum Essential Medium(MEM)的培养液(购自Gibco，美国)中培养，其中含有1mM丙酮酸钠(Sodium pyruvate) 以及1％青霉素(Penicillins)或链霉素(Streptomycin)。
首先，将2×104个人类皮肤纤维母细胞种植于含500μL上述培养液的 24孔培养板中，并于37℃培养24小时后，以磷酸盐缓冲溶液(Phosphate buffered saline,PBS)在不扰动细胞的情况下冲洗细胞，接着将细胞分成21 组并分别加入于500μL不含胎牛血清的MEM中：(1)0.003906mg/mL的青咖啡豆萃取物、(2)0.007813mg/mL的四季春茶萃取物、(3)0.5mg/mL的四季春茶萃取物、(4)0.125mg/mL的蓝莓萃取物、(5)4mg/mL的蓝莓萃取物、 (6)0.125mg/mL的红酒萃取物、(7)0.25mg/mL的红酒萃取物、(8)0.25mg/mL 的菠菜萃取物、(9)0.5mg/mL的菠菜萃取物、(10)0.5mg/mL的柑橘萃取物、 (11)4mg/mL的柑橘萃取物、(12)0.003906mg/mL的葡萄籽萃取物、(13)0.5 mg/mL的红茶萃取物、(14)4mg/mL的菠菜萃取物与蓝莓萃取物的组合物、(15) 0.003906mg/mL的以1:1比例混合的青咖啡豆萃取物与蓝莓萃取物的组合物、 (16)0.015625mg/mL的以1:1比例混合的青咖啡豆萃取物与普洱茶萃取物的组合物、(17)0.125mg/mL的以1:1比例混合的蓝莓萃取物与红酒萃取物的组合物、(18)0.25mg/mL的以1:1比例混合的菠菜萃取物与绿茶萃取物的组合物、(19)0.5mg/mL的以1:1比例混合的菠菜萃取物与红茶萃取物的组合物、(20)0.5mg/mL的以1:1比例混合的四季春茶萃取物与柑橘萃取物的组合物、及(21)4mg/mL的柑橘萃取物与蓝莓萃取物的组合物，并以没有加入任何萃取物的组为空白对照组，以及以仅含有培养液不含细胞的组作为后续读取吸光度的背景值，于37℃培养48小时后，在不扰动细胞的情况下，每组细胞收集1mL的培养液，并置于1.5mL离心管中，用可溶性胶原蛋白分析试剂盒(SircolTM Soluble CollagenAssay kit,Bicolor Life Science Assays, Notherm Ireland，英国)，检测皮肤纤维母细胞分泌的胶原蛋白量，首先加入 200μL的胶原蛋白分离与浓缩试剂(collagen isolation&concentration reagent)并上下颠倒以混合均匀，接着将离心管于4℃放置16-18小时，时间到后取出，避免摇晃到管身，并在4℃下以12000rpm离心十分钟，离心后小心地移除1mL的上清液，再加入1mL的Sircol染剂(Sircol dye reagent) 使胶原蛋白染色，并轻柔地摇晃30分钟以混合均匀，接着在4℃下以12000rpm 离心十分钟后移除上清液，再加入750μL酸性盐清洗剂(Acid-salt washing reagent)，以将多余的染剂清洗掉，并在4℃下以12000rpm离心十分钟后移除上清液，并小心地以棉球将残留于管壁及盖子的液体移除，接着加入250μL 的强碱试剂(alkali reagent)并用试管震荡器使胶原蛋白均匀溶解，最后用酶联免疫分析仪测量该21组及空白对照组的产物在555nm处的吸光值，并在扣除背景值后，计算该21组的读数与空白对照组的差异的百分比，再用Excel 软件进行学生t-test来确定变异系数以及是否在统计上具有显著差异(*表示p值<0.05；**表示p值<0.01；***表示p值<0.001)。
本发明实施例的各植物萃取组合物的胶原蛋白增生率如表1及图1所示，百分比越高代表促进胶原蛋白增生的能力越好。根据表1及图1，相对于空白对照组，青咖啡豆萃取物、0.125mg/mL的蓝莓萃取物、菠菜萃取物、0.5mg/mL 的柑橘萃取物、及0.5mg/mL的红茶萃取物无法显著促进胶原蛋白的增生，其中有些处理甚至会显著降低胶原蛋白的增生率，例如青咖啡豆萃取物、0.125 mg/mL的蓝莓萃取物、0.25mg/mL菠菜萃取物、0.5mg/mL的柑橘萃取物、及 0.5mg/mL的红茶萃取物(请参见比较组)。然而除了菠菜萃取物与蓝莓萃取物的组合物之外，青咖啡豆萃取物与蓝莓萃取物的组合物、青咖啡豆萃取物与普洱茶萃取物的组合物、红酒萃取物与蓝莓萃取物的组合物、菠菜萃取物与绿茶萃取物的组合物、菠菜萃取物与红茶萃取物的组合物、柑橘萃取物与四季春茶萃取物的组合物、及柑橘萃取物与蓝莓萃取物的组合物的胶原蛋白增生率 (请参见实验组)，皆比相同浓度的单方植物萃取物有较高的胶原蛋白增生率，此结果显示具有上述特定组合的组合物皆意外地较单一组分简单相加表现出更高的促进胶原蛋白增生的能力，且并非随意的组合皆能达到此效果。
表1各组萃取物的胶原蛋白增生率
Figure GDA0003454544060000061
Figure GDA0003454544060000071
综上所述，本发明的组合物通过混合特定植物萃取物或混合特定植物萃取物与源自植物的化合物，能显著提升促进胶原蛋白增生的能力。因此，可利用这些组合物制备相关的医药组合物，使施用者或食用者能够增强皮肤弹性及降低皱纹形成，与改善关节的强度及灵活度。
将本发明实施例的促进胶原蛋白增生的组合物制备为医药组合物时，该医药组合物也可进一步加入所属技术领域所熟知的载体或其他辅剂。医药组合物的剂型，可为但不限于溶液、胶囊、或锭剂。

Claims (5)

1.一种可以促进胶原蛋白增生的含有植物萃取物的组合物，其由体积比为1：1的0.5mg/ml的柑橘萃取物与0.5mg/ml的四季春茶萃取物所组成。
2.一种医药组合物，其由如权利要求1所述的组合物、及药学上可接受的载体所组成。
3.如权利要求2所述的医药组合物，其中所述医药组合物的剂型为溶液、胶囊或锭剂。
4.权利要求1所述的组合物用于非治疗目的的促进胶原蛋白增生的用途。
5.权利要求1所述的组合物用于制备促进胶原蛋白增生的医药组合物的用途。
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