CN101909610B - 口服给药组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种组合物、包含该组合物的食品、药品和饲料，所述组合物具有高安全性，并且在降低体脂肪(例如内脏脂肪、皮下脂肪等)和中性脂肪方面具有优异的效果。特别是公开了一种口服给药组合物，其包含类胡萝卜素和神经鞘脂、或者类胡萝卜素、和类黄酮和/或其衍生物，优选的是组合物包含玉米黄质和神经鞘脂、或者玉米黄质、和类黄酮和/或其衍生物。其中玉米黄质、和/或神经鞘脂、和/或类黄酮衍生自柑橘类水果。优选地，并且所述柑橘类水果优选为Unshumandarin orange。所述组合物具有体脂肪降低作用和/或中性脂肪降低作用。
Description
技术领域
本发明涉及具有高安全性的组合物，该组合物具有含有类胡萝卜素和神经鞘脂、或者类胡萝卜素、和类黄酮和/或其衍生物的组成，所述组合物具有体脂肪降低作用、中性脂肪降低作用等，并且可以作为食品、药品或饲料摄取。
背景技术
在日本，自从2008年4月以来，在接受医疗保险(国家健康保险、雇员保险)者中，40岁或年纪更大的投保者和被抚养者有必要进行针对代谢综合症的健康检查和保险指南。之后通过判断5年的结果，具有较差结果的投保者受到经济处罚。厚生劳动省预计两个中年男性中有一人患有代谢综合症，并且约二百万人处于代谢综合症及其预备组中。
近年来，随着关于脂肪对于身体影响的研究的进展，已经表明，特别地内脏脂肪的蓄积不仅和肥胖、而且和生活习惯相关疾病、高脂血症、耐糖能异常、高血压等高度相关，并且认为不使内脏脂肪蓄积可防止多种疾病。基于这些考虑的病理是代谢综合症。为了降低内脏脂肪，必须改变生活环境，例如改善饮食和参加日常运动。然而，情况是由于西化饮食和生活方式的改变，饮食变得高卡路里化，并且难于确保参加运动的时间。
随着目前日本老龄化的发展，为了抑制日益增加的医疗费用，人们开始注意预防性医疗治疗。由于上述疾病在产生时需要大量治疗费和治疗时间，因此销售多种健康食品和补品，旨在从预防性医疗治疗的观点通过降低内脏脂肪来降低所述疾病发作的风险。
然而，难以预计通过常规摄取这些健康食品会产生足够的效果，尽管当大量摄取时，可预计到某些程度的效果，但这样引起副作用增加的缺点。鉴于此，强烈关注开发这样的食品，其少量摄取时就产生效果，并且表现出安全的内脏脂肪降低作用。
作为具有降低体脂肪(特别是内脏脂肪)的这种效果的现有食品，可以提及儿茶酸和虾青素。儿茶酸含在绿茶、茶、巧克力等中，并且被认为有效地使体脂肪燃烧(专利参考文献1)。然而，由于当含量增加时涩味增强，因此其在商品中的添加受到极大地限制。另外，虾青素也表现出使体脂肪燃烧的效果(专利参考文献2)，但是由于虾青素本身几乎不能被吸收到体内，并且单独使用时其效果并不高，因此难以摄取有效量来降低脂肪。
另外，使用培养细胞的试验报道，单独通过β-玉米黄质可预防肥胖(专利参考文献3和非专利参考文献1)，但当我们测试时，单独使用时其作用很弱，使得难以摄取有效量来降低脂肪。
专利参考文献1：JP-A-2002-326932
专利参考文献2：JP-A-2007-153845
专利参考文献3：国际公开No.2005/112904
非专利参考文献1：论文摘要，第28届日本肥胖学会，第288页
发明内容
本发明所要解决的问题
通过考虑上述目前的状况，高度关注提供在通常摄取量时就具有体脂肪(例如内脏脂肪和皮下脂肪)降低作用的食品、药品和饲料。本发明旨在提供表现出高安全性并且具有体脂肪降低作用和中性脂肪降低作用的食品、药品和饲料。
解决问题的手段
为了解决这些问题，本发明人进行了深入的研究，结果发现当联合使用类胡萝卜素和神经鞘脂、或者类胡萝卜素、和类黄酮和/或其衍生物时，由于它们的协同作用，可发挥出高于当单独使用时能够预期到的功能的效果，因而完成了本发明。另外发现，当联合使用柑橘类水果植物作为材料时，可以容易地进行它们的萃取和浓缩。
即，本发明的第一实施方案涉及具有体脂肪降低作用和/或中性脂肪降低作用的口服给药组合物，其包含类胡萝卜素和神经鞘脂，优选涉及这样的组合物，其中类胡萝卜素是玉米黄质和/或其脂肪酸酯，以及这样的组合物，其中类胡萝卜素和/或神经鞘脂衍生自柑橘类水果，并且优选地所述柑橘类水果是Citrus unshiu。
本发明的第二实施方案的主旨在于上述组合物中任一种的制备方法，其(1)包括将柑橘类水果植物榨汁，然后从所得残渣中获得包含类胡萝卜素和/或神经鞘脂的组合物；(2)包括通过使用酶处理柑橘类水果植物来获得包含类胡萝卜素和/或神经鞘脂的组合物；或(3)包括使柑橘类水果植物接触有机溶剂，然后使包含类胡萝卜素和/或神经鞘脂的组合物萃取到所述有机溶剂中。
本发明的第三实施方案的主旨在于具有体脂肪降低作用和/或中性脂肪降低作用的口服给药组合物，其包含类胡萝卜素、和类黄酮和/或其衍生物，优选涉及这样的组合物，其中类胡萝卜素是玉米黄质和/或其脂肪酸酯，更优选涉及这样的组合物，其中类黄酮和/或其衍生物选自橙皮苷、其衍生物和橙皮素中的至少一种，甚至更优选涉及这样的组合物，其中类胡萝卜素、和类黄酮和/或其衍生物衍生自柑橘类水果。
本发明的第四实施方案的主旨在于上述具有体脂肪降低作用和/或中性脂肪降低作用的口服给药组合物中任一种的制备方法，其(1)包 括将柑橘类水果植物榨汁，然后从所得残渣中获得包含类胡萝卜素、和类黄酮和/或其衍生物的组合物；(2)包括通过使用酶处理柑橘类水果植物来获得包含类胡萝卜素、和类黄酮和/或其衍生物的组合物；或(3)包括使柑橘类水果植物接触有机溶剂，然后使包含类胡萝卜素、和类黄酮和/或其衍生物的组合物萃取到所述有机溶剂中。
本发明的第五实施方案的主旨在于包含上述口服给药组合物的食品、药品或饲料。
本发明的第六实施方案的主旨在于降低体脂肪的方法和/或降低中性脂肪的方法，其包括向对象施用上述口服给药组合物。
本发明的第六实施方案的主旨在于上述口服给药组合物在制备降低体脂肪和/或中性脂肪的试剂中的应用。
发明的优点
根据本发明，由于高的体脂肪降低作用和中性脂肪降低作用、以及高安全性，因此其可以混合到各种食品、药品和饲料中。另外，由于使用少量即可证实所述作用，因此容易获得在混合设计中的作用效果。
附图简要说明
图1是示出L4/L5横截区域的腹腔内脂肪面积变化的图。
图2是示出L4/L5横截区域的皮下脂肪面积变化的图。
图3是示出L4/L5横截区域的全部脂肪面积变化的图。
图4是示出体重变化的图。
图5是示出腰围变化的图。
图6是示出中性脂肪(TG)变化的图。
图7是示出体重变化的图。
图8是示出血清甘油三酯量的变化的图。
图9是示出内脏脂肪重量变化的图。
图10是示出体重变化的图。
图11是示出血中甘油三酯的变化的图。
图12是示出内脏脂肪重量变化的图。
图13是示出体重变化的图。
图14是示出血中甘油三酯的变化的图。
图15是示出内脏脂肪重量变化的图。
图16是示出体重变化的图。
图17是示出血中甘油三酯的变化的图。
图18是示出内脏脂肪重量变化的图。
图19是示出体重变化的图。
图20是示出血中甘油三酯的变化的图。
图21是示出内脏脂肪重量变化的图。
图22是示出体重变化的图。
图23是示出血中甘油三酯的变化的图。
图24是示出内脏脂肪重量变化的图。
就此而言，在附图中，*表示p＜0.05，并且**表示p＜0.01。
本发明的最佳实施方式
下面详细描述本发明。
在本说明书中，除非另有说明，否则所有比例、百分比等都以质量计，并且这与以重量计的那些是相同的。
本发明中的类胡萝卜素并无特别限定，例如，可以提及α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、玉米黄质、虾青素、角黄素、叶黄素、玉米黄素、番茄红素、胡萝卜二醇、墨角藻黄素等、及其脂肪酸酯。作为脂肪酸酯，可以提及上述类胡萝卜素的棕榈酸酯、肉豆蔻酸酯、月桂酸酯等。其中，由于它们高的体脂肪降低作用和中性脂肪降低作 用，因此玉米黄质及其脂肪酸酯是期望的。
本发明中的玉米黄质并无特别限定，例如还包括α-玉米黄质、β-玉米黄质、其脂肪酸酯化合物、及其结构上可接受的衍生物。脂肪酸酯化合物的脂肪酸长度并无特别限定，例如，可以提及月桂酸(C12)、肉豆蔻酸(C14)、棕榈酸(C16)、硬脂酸(C18)等的脂肪酸酯。另外，作为这些玉米黄质的供给源，柑橘类水果是期望的，尤其期望作为日本古时候水果的Citrus unshiu(Citrus unshiu Mark.)起源的柑橘类水果并且其具有较高产量。
本发明中的神经鞘脂是这样一族化合物，其中氨基-醇(其是所谓的由约14至24个碳原子构成的鞘氨醇或具有与此类似结构的长链氨基-醇)和脂肪酸(例如长链脂肪酸等)酰胺基-结合，并且还包括结合糖类的化合物、结合磷酸酯基团的化合物等。脂肪酸可以是饱和脂肪酸或不饱和脂肪酸，可以是直链或支链的，并且可以被一个或多个羟基取代。另外，糖、磷酸、唾液酸、胆碱、乙醇胺等可与氨基-醇的羟基连接。作为糖类，期望葡萄糖、甘露糖、半乳糖、乳糖等与其结合，特别地，进一步期望葡萄糖与其结合。在结合磷酸酯基团的情况下，还包括通过磷酸酯基团结合肌醇(另外的糖)的神经鞘脂。本发明并不使用具有特定链长度或结构的那些作为对象，所有称为神经鞘脂的物质都包括在内。另外，其起源可以是天然产物起源、或通过化学合成法获得的常规已知的神经鞘脂及其衍生物。当这些神经鞘脂用于食品时，可以获得衍生自大米、小麦、牛奶、玉米、甜菜、魔芋、苹果、多种蘑菇(例如黄白侧耳和灰树花)、醋酸菌等的那些，使得可以同样地使用它们，但是衍生自柑橘类水果的神经鞘脂是优选的，并且衍生自Citrus unshiu的神经鞘脂是特别优选的。由于衍生自柑橘类水果的神经鞘脂含有大量不含糖的游离型神经鞘脂，因此具有强的体脂肪降低和中性脂肪降低作用，期望使用这些起源。
本发明的口服给药组合物中含有的类黄酮和/或其衍生物并无特 别限定，并且可以提及：橙皮苷、柚皮苷、和芦丁；它们的衍生物，例如α-葡糖基化橙皮苷、α-葡糖基化柚皮苷和α-葡糖基化芦丁；以及橙皮苷、柚皮苷和芦丁的糖苷配基，例如橙皮素、柚皮素和槲皮素等。其中，因为较高的体脂肪降低和中性脂肪降低作用，因此橙皮苷、其衍生物、或橙皮素是期望的。
作为本发明中的柑橘类水果，可以提及属于芸香科的植物等。更具说明性地，可以例举：伊予柑(Citrus iyo)、Citrus unshiu、橙、kabosu(Citrus sphaerocarpa)、kawabata、kishu mikan(Citrus kinokuni)、清见、金橘(Citrus fortunella)、葡萄柚、月橘(Murraya paniculata)、三宝柑(Citrus sulcata)、酸橙(Citrus depressa Hayata)、jabara(Citrus jabara)、sweety(oroblanco)、酸桔(Citrus sudachi)、代代花(Citrus·sinensis var.daidai)、日本立花(Citrus tachibana)、凸椪、日本夏橙、八朔(Citrushassaku)、巴伦西亚桔、晚白柚(Citrus grandis，Citrus maxima)、hyuganatsu(Citrus tamurana hort.ex T.Tanaka)、buntan(Citrus maxima)、椪柑(Citrus reticulata)、瓯柑、yatsushiro、柚子(Citrus junos)、lime(Citrusaurantifolia)、lemon(Citrus limon)、karatachi(Poncirus trifoliate)等。
在本发明的口服给药组合物中，只要含有类胡萝卜素和类黄酮和/或其衍生物，它们的比例并无限定。例如，可以将0.00001至70％(质量比)、优选0.0001至50％(质量比)、进一步优选0.01至30％(质量比)比率的类胡萝卜素和0.01至90％(质量比)、优选0.1至70％(质量比)、进一步优选1至30％(质量比)比率的类黄酮和/或其衍生物混合。
本发明的口服给药组合物可含有除了类胡萝卜素和鞘氨醇碱、或类胡萝卜素和类黄酮之外的物质，所述物质已报道具有降低内脏脂肪的效果。作为在该情况下的混合量，期望混合0.01至90％(质量比)的量的除了类胡萝卜素和鞘氨醇脂质、或类胡萝卜素和类黄酮之外的物质，作为除了类胡萝卜素和类黄酮之外具有降低内脏脂肪效果的物质，可以使用常规已知的物质。例如，期望单独混合或联合混合ω3不饱和 脂肪酸、墨角藻黄素、L-阿拉伯糖、DHA、EPA、辣椒素、L-左旋肉碱等。
当口服给药摄取时，上述本发明的口服给药组合物表现出降低体脂肪(例如内脏脂肪、皮下脂肪等)、中性脂肪(通常为甘油三酯)等的作用。
关于摄取本发明的口服给药组合物的方法，所述组合物可这样单独直接摄取，或可通过加工成粉末、片剂、颗粒、胶囊剂、软胶囊、凝胶剂、糊剂、糖浆、混悬液、乳液、饮料等来摄取。
下面描述上述具有体脂肪降低作用和/或中性脂肪降低作用的口服给药组合物的制备方法。作为这样的制备方法，可以提及下列方法：将柑橘类水果植物榨汁，然后从所得残渣中获得包含类胡萝卜素和神经鞘脂、或类黄酮和/或其衍生物的组合物；通过加入酶进行酶处理柑橘类水果植物来获得包含胡萝卜素和神经鞘脂、或类黄酮和/或其衍生物的组合物；以及将有机溶剂加入柑橘类水果植物，然后使包含胡萝卜素和神经鞘脂、或类黄酮和/或其衍生物的组合物萃取到所述有机溶剂中。下面将依次解释这些方法。
关于用作萃取和酶处理的材料的柑橘类水果植物，柑橘类水果植物的部位并不是问题，但是其中，期望使用其果实作为具有高含量的部位。柑橘类水果植物的果实可以直接使用，或在对它们进行物理处理(例如捣碎、破碎、粉碎、加热、脱水、干燥等)后使用。期望进行这些处理，原因在于酶处理效率和萃取效率都提高。另外，根据本发明，期望使用果实的榨汁残渣。果实的榨汁残渣通过下列方式来制备：使用管道式(inline)榨汁机、助切式(chopper helper)榨汁机、Brown榨汁机等将果实榨汁，然后使用桨式或螺杆式整理机等通过其过滤或筛选、或其离心分离来制备果汁，接着收集所得榨汁残渣。另外，作为本发明中使用的柑橘类水果植物的榨汁残渣，其还是为微细的果肉成分的榨汁残渣，所述榨汁残渣通过使用榨汁机榨汁后离心分离处理果汁而获得。这种微细的果肉成分是合适的材料，原因在于其还具有高含量的含有类胡萝卜素和神经鞘脂、或类胡萝卜素和类黄酮和/或其衍生物的组合物。
关于本发明的萃取方法中使用的有机溶剂，其可以是任何物质，只要具有体脂肪降低作用的部分可以从柑橘类水果或其加工产物中获得作为材料、并且不破坏本发明即可。另外，可以单独使用一种溶剂，或者可以通过将它们混合使用两种或多种溶剂。作为这些溶剂，例如可以提及：醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等；多元醇，例如乙二醇、丙二醇、丁二醇、甘油等；酮，例如丙酮、甲基乙基酮等；酯，例如乙酸甲酯、乙酸乙酯等；卤化烃，例如乙腈、二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿等；脂肪族烃，例如正戊烷、正己烷等；芳族烃，例如苯、甲苯等；醚，例如四氢呋喃、二乙基醚等；吡啶；聚醚，例如聚乙二醇等；超临界二氧化碳等。其中，从安全性的观点考虑特别期望使用丙酮、乙醇、正己烷、和超临界二氧化碳，原因在于它们在本发明中用于食品应用。可以单独使用这些有机溶剂或使用它们的混合物。另外，还可以向有机溶剂中添加添加剂，例如水、表面活性剂等。
萃取中使用的有机溶剂的量并无特别限定，只要其含量足以从待萃取的物质中萃取玉米黄质和神经鞘脂即可。举例说明，其可以为待萃取的物质的固含量重量的0.5至100倍，优选1至50倍。尽管其取决于使用的溶剂的沸点，但是在使用乙醇的情况下，例如萃取温度优选为0℃至80℃。当萃取温度低于该范围时，萃取效率降低，当高于该范围时，其引起溶剂的蒸发，并且只增加使用的能量的量。萃取时间并无特别限定，但从萃取效率和可操纵性的角度考虑，其优选为10分钟至24小时。
就此而言，萃取操作并不限于只进行一次分批操作。萃取操作可以通过在萃取后再次向残渣中加入新的溶剂来进行，或者萃取溶剂可以两次或多次接触待萃取的物质。即，作为萃取操作，可以使用分批操作、半连续操作和逆流多步骤接触操作中的任一种。另外，可以使用常规已知的萃取方法，例如Soxhlet萃取、回流萃取等。在萃取后残渣的分离和除去也可以通过常规已知的方法来进行，示意性地，可以使用抽吸过滤法、压滤机法、滚筒压机法、倾析器法、离心分离机法、过滤离心分离机法等。另外，可以随后除去杂质。作为杂质除去方法，例如可以提及水洗涤法、有机溶剂洗涤法、通过二氧化硅凝胶柱、树脂柱、反相柱等的方法、活性炭处理法、具有不同极性的溶剂的分离法、重结晶法、真空蒸馏法等。
以这种方式获得的萃取物可以通过随后进行的处理而用于各种食品、药品和饲料，所述处理例如为碱处理、浓缩、通过柱等纯化、干燥、粉末化、和载体、乳化剂混合等。
在本发明中，用于制备柑橘类水果植物的酶处理产物的酶并无特别限定，只要其可以降解柑橘类水果中所含的有机物质、特别是构成细胞壁等的生物高分子等即可，并且可以使用淀粉酶、葡糖淀粉酶、纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、蛋白酶、肽酶、脂肪酶、浸渍酶(细胞壁分解酶)等。其中，因为它们浓缩神经鞘脂的高效率，因此纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶和糖苷的浸渍酶是合适的酶。作为待加入的酶制剂，可以使用其精制的酶，或者可以使用表现出这些活性的微生物细胞或培养混合物、或它们的粗精制产物。另外，还可以使用市售的酶，例如可以使用Sumizyme PX(由Shinnihon Chemicals Corporation生产)、SumizymeSPC(由Shinnihon Chemicals Corporation生产)、Pectinex SRL(由Novozymes Japan Ltd.生产)、Sumizyme PMAC(由Shinnihon ChemicalsCorporation生产)等作为果胶酶；可以使用Cellulosine GM 5(由HBIEnzyme Inc.生产)、Cellulosine HC(由HBI Enzyme Inc.生产)等作为半纤维素酶；可以使用Cellulose Y-NC(由Yakult Pharmaceutical Industry Co.，Ltd.生产)、Entilon MCH(由Rakuto-Kasei Industry Co.，Ltd.生产)、 Cellulose R10(由Yakult Pharmaceutical Industry Co.，Ltd.生产)、Sumizyme CAP(由Shinnihon Chemicals Corporation生产)、CelluloseTP-3(由Kyowa Kasei Co.，Ltd.生产)等作为纤维素酶；和可以使用Protease M(由Amano Enzyme Inc.生产)、Orientase 20A(由HBI EnzymeInc.生产)等作为蛋白酶。
作为待加入的酶制剂，可以使用其精制的酶，或者可以使用表现出这些活性的微生物细胞或培养混合物、或它们的粗精制产物。可以单独使用这些酶，或可以混合使用两种或多种酶。加入的酶的量并无特别限定，并且其可以对应酶的活性而加入。例如在使用果胶酶的情况下，基于100g的榨汁残渣，其优选1至100,000单位，进一步优选为10至10,000单位。
在加入上述酶后，经过搅拌等均匀地混合酶和待萃取的物质来进行酶反应。关于在该情况下的反应温度，期望在酶不失活并且很难产生腐败物的条件下进行，以及在不损失神经鞘脂、和类胡萝卜素、或类黄酮及其衍生物的条件下进行。示意性地，温度为0℃至90℃，优选0℃至80℃，进一步优选0℃至70℃。关于反应pH，不言自明的是期望在酶的最佳条件下进行，并且其可设定为pH为2至12，优选pH为2.5至8。反应时间取决于使用的榨汁残渣和酶的量，但从加工观点考虑其通常适于设定为1至48小时。在进行该反应时，反应可在搅拌该反应混合物的同时进行，或其可以是静态反应。
在酶处理结束后，酶处理的反应混合物可以直接使用，或可以使用进行某些加工的那些。示意性地，可以使用通过固液分离反应混合物而制备的残渣、干燥固液分离的残渣的制剂、在不进行其固液分离的条件下干燥反应混合物本身的制剂等。此外，由于杂质可以容易地除去，因此期望使用水洗涤法(其可容易除去反应产物，例如通过酶处理、固液分离酶处理的反应混合物而形成的糖)，进一步加入水，然后再次进行固液分离。另外，杂质可进一步除去。作为除去杂质的方法， 例如可以提及化学处理法(例如水洗涤法或有机溶剂洗涤法、碱处理法等)、通过二氧化硅凝胶柱、树脂柱、反相柱等的方法、活性炭处理法、具有不同极性的溶剂的分离法、重结晶法、真空蒸馏法等。
按照上述方法获得的本发明的组合物发挥多种功能，特别地其中，通过口服给药表现出降低体脂肪(例如内脏脂肪、皮下脂肪等)、中性脂肪(典型为甘油三酯)等的作用。
作为摄取本发明的组合物的方法，可以仅直接摄取所述组合物，或者可以通过加工成粉末、片剂、颗粒、胶囊剂、软胶囊、凝胶剂、糊剂、糖浆、混悬液、乳液、饮料等来摄取。在摄取的情况下，标准的摄取量可基于各个对象的年龄、性别、体重等来任选地选择，但是通常在成年人的情况下，每日剂量为(1)0.01mg至1g的类胡萝卜素和0.01mg至10g的神经鞘脂，或(2)0.01mg至1g的类胡萝卜素和0.01mg至10g的类黄酮和/或其衍生物。期望剂量为(1)0.1mg至100mg的类胡萝卜素和0.1mg至1g的神经鞘脂，或(2)0.1mg至100mg的类胡萝卜素和0.1mg至1g的类黄酮和/或其衍生物。
通过摄取本发明的组合物而可以获得本发明效果的期间并无特别限定，但期望的是，每年摄取天数为1天或更多并且为365天或更少，优选为14天或更多并且为365天或更少，进一步优选为60天或更多并且为365天或更少。
在本发明中施用所述组合物的对象并无特别限定，只要发挥其效果即可，但优选温血动物，进一步优选哺乳动物，最优选人。
本发明的另一发明点在于包含上述本发明的组合物的食品或饮料、和药品。关于药品，其可以以注射液、输液、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、肠溶剂、混悬剂、糖浆、口服给药液、锭剂、乳剂、外用液、湿布剂、滴鼻剂、滴耳剂、滴眼剂、吸入剂、软膏剂、 洗剂、栓剂、肠营养剂等的形式来摄取。取决于症状，可单独使用它们或联合使用两种或多种。本发明的组合物的含量可任选地确定在0.1％至90％的范围内，但是期望以可以每天摄取上述标准摄取量的方式来进行制剂设计。
另外，除了通常的食品，本发明的食品或饮料包括所有的食品和/或饮料，例如特定保健用食品、健康食品、功能食品、准药品等。食品和/或饮料并无特别限定，例如除了上述类药品的实施方案，可以提及：主食，例如面包、面条、荞麦面条、米饭等；食品，例如奶酪、维也纳香肠、香肠、火腿、鱼类加工品等；糖果点心，例如冰激凌、甜饼、蛋糕、果冻、布丁、糖果、口香糖、酸奶、胶、巧克力、饼干等；软饮料；调味品，例如果酱等；和饮料，例如蒸馏酒、营养饮品、咖啡、茶、牛奶、果汁饮品、软饮料等。本发明的组合物的含量可任选地确定在0.1％至70％的范围内，但是期望以可以每天摄取上述标准摄取量的方式来决定混合量。
作为饲料，其可通过将本发明的组合物和下列物质混合来制备，所述物质例如为：谷类，例如玉米、小麦、大麦、黑麦等；糠，例如麦糠、米糠等；粕，例如玉米面筋粉、玉米胚饼粉等；动物饲料，例如脱脂乳粉、乳清、鱼粉、骨粉等；酵母，例如啤酒酵母等；钙类，例如磷酸钙、碳酸钙等；维生素；油和脂肪；氨基酸；糖类等。作为饲料的形式，其可用于宠物食品、家畜饲料、养殖渔业饲料等。所述组合物的含量可任选地确定在0.01％至20％的范围内，但是期望以下列方式加入饲料材料等：每天每1kg的体重可以摄取(1)0.001mg至100mg的类胡萝卜素和0.01mg至1g的神经鞘脂，或(2)0.001mg至100mg的类胡萝卜素和0.1mg至1g的类黄酮和/或其衍生物。
实施例
下面描述了试验的例子。就此而言，本发明的范围不受这些例子的限制。高效液相色谱法(HPLC)用于测定玉米黄质。使用LC-10A(由 Shimadzu Corporation生产)作为HPLC装置，装配Resolve C18(Φ3.9x150mm，由Waters Corporation生产)柱，并且引入混合相同体积的甲醇的样品。使用甲醇∶乙酸乙酯＝7∶3作为流动相，并且在柱温为30℃、流速为1.0ml/min、和检测波长为450nm的条件下进行分析。
使连接InertsilSIL 100A柱(由GL Sciences Inc.生产)的HPLC装置LC-10A用于测定神经鞘脂，并且使用光散射检测器(500ELSD，由ALLTECH生产)来检测。使用线性梯度的两种液体氯仿和氯仿/甲醇(1/1)作为流动相，并且在37℃、流速为1.0ml/min的条件下进行测定。
使用高效液相色谱法(HPLC)进行类黄酮和/或其衍生物的含量的测定。即，使用LC-10A(由Shimadzu Corporation生产)作为HPLC装置，其连接有Asahipak ODP-50(φ4.6x150mm，由Asahi Kasei Corporation生产)柱，将溶于0.1N NaOH中的样品用蒸馏水稀释10倍并引入。使用水∶乙腈＝8.2作为流动相，并且在柱温为30℃、流速为1.5ml/min、和检测波长为285nm的条件下进行分析。
实施例1
使用离心分离机(BRPX 417，由Alfa Laval生产)使果汁进行低速离心分离(2,500x g·分钟)，所述果汁通过使用管道式榨汁机将Citrusunshiu榨汁，然后通过整理机(0.5mm筛网)过滤而制得。使用相同的离心分离机对低速离心分离的上清液进行高速离心(4,000x g·分钟)，收集析出物。向1.2kg的粉末中加入4.5升的乙醇并且搅拌2小时，从而进行萃取，其中所述粉末通过下列方式获得：将8kg的该榨汁残渣(橙汁微细果肉，含水量85％)冻干，并使用粉碎机粉碎。在过滤后，回收乙醇部分并且使用蒸发器蒸发乙醇，加入300ml的水并搅拌，然后通过过滤回收水不溶性成分，相同操作重复两遍。结果获得10g的Citrusunshiu萃取物。在该萃取物中含有4重量％的玉米黄质和20重量％的神经鞘脂。
试验例1-1
对于26名BMI值为25至30的中等程度肥胖的男性(平均年龄40.7岁)，通过将实施例1中制得的含有玉米黄质和神经鞘脂的萃取物和乳化剂混合在一起来制备乳液制剂。将该乳液制剂加工成果汁，每天摄取2瓶果汁(每天12.5mg萃取物(β-玉米黄质0.5mg/天，神经鞘脂2.5mg/天))，摄取12周。通过双盲法进行试验，其中各组使用13人，并且使用不含萃取物的果汁作为比较(比较例1-1)。主要在L4/L5椎间盘横截区域进行CT扫描照相，使用内脏脂肪测量软件Fat Scan Ver 3.0(由N 2 System生产)来测量腹腔内面积、皮下脂肪面积和全部脂肪面积。另外，还测定体重、腰围尺寸和中性脂肪。结果，对于比较例1-1或摄取开始前，在腹腔内脂肪面积、皮下脂肪面积、全部脂肪面积、体重、腰围尺寸和中性脂肪中发现明显差异。结果分别示于图1、图2、图3、图4、图5和图6中。明显地，发现体脂肪(例如内脏脂肪、皮下脂肪等)和中性脂肪降低作用。另外，作为体脂肪降低的其他结果，还发现体重和腰围尺寸降低。
试验例1-2
将建立作为II型糖尿病模型动物的KK-Ay/TacJcl系雌性鼠(6周龄，由CLEA Japan Inc.培养)分组，每组6只动物，将β-玉米黄质(纯度为95％，由SHIKOKU YASHIMA PURE CHEMICALS CO.，LTD.提供)和葡糖基神经酰胺(纯度为3％，由UNITIKA，LTD.生产的魔芋神经酰胺)分别以0.2％和4％的比例和高脂肪饲料混合，然后和水一起进行自由摄取。作为对照组，通过下列方式进行试验：提供鼠高脂肪饲料(CLEARodent Diet Quick Fat，由CLEA Japan Inc生产)，其中，所述高脂肪饲料中不加任何东西(比较例1-2)，所述高脂肪饲料中只加入0.2％的β-玉米黄质(比较例1-3)，和所述高脂肪饲料中只加入4％的葡糖基神经酰胺(比较例1-4)。
施用进行4周，在施用前和施用后第7、14、21和28天测定体重和甘油三酯含量。另外，在施用开始后第29天处死鼠，收集内脏脂肪 (即腹腔内白色脂肪组织)并比较它们的重量。结果分别示于图7、图8和图9中。
关于体重，与比较例1-2和比较例1-4相比，在试验例1-2的组中从第7天开始有降低体重的趋势，并且在第14、21和28天明显降低(图7)。证实在试验例1-2中，在第21天及之后甘油三酯含量明显降低(图8)。此外，与比较例1-2和比较例1-4相比，在试验例1-2和比较例1-3中腹腔内脂肪组织重量明显降低。另外发现，与比较例1-3相比，试验例1-2的脂肪组织重量变得明显更小(图9)。
由上证实，通过同时混合类胡萝卜素和神经鞘脂，本发明的组合物表现出降低体脂肪和中性脂肪的作用，所述作用明显强于它们单独使用的情况，并且通过将两种成分混合，其成为了具有更小剂量和高安全性的口服给药组合物。
实施例2
向800g的从Citrus unshiu榨果汁后的残渣(橙汁粕，含水量约90％)中加入1g用于食品加工的果胶酶酶制剂Sumizyme PX(由ShinnihonChemicals Corporation生产，果胶酶5,000单位/g，阿拉伯聚糖酶90单位/g)和1g的纤维素酶/半纤维素酶酶制剂，纤维素酶Y-NC(由YakultPharmaceutical Industry Co.，Ltd.生产)，彻底混合以在室温下进行8小时的静态反应。在通过离心分离该反应液而除去上清液后，向其中加入水并进行搅拌，再次通过离心分离而除去上清液。使用冻干机将该析出物干燥，并使用混合器型粉碎机将其粉碎和粉末化，从而获得本发明的口服给药组合物。该粉末含有0.5质量％的β-玉米黄质(基于游离态)、0.05质量％的β-胡萝卜素和15质量％的橙皮苷。通过使自然发生II型糖尿病的鼠口服给药该组合物，证实其对内脏脂肪、白色脂肪细胞的效果。
试验例2-1
将建立作为II型糖尿病模型的动物KK-Ay/TacJcl系雌性鼠(6周龄，由CLEA Japan Inc.培养)分组，每组6只动物，将实施例1中获得的组合物以4％的比例和高脂肪饲料混合，然后和水一起进行自由摄取。使对照组只摄取高脂肪饲料。
进行施用4周，在施用前和施用后第7、14、21和28天测定体重。结果示于图10中。与对照组相比，在施用组中从第14天开始体重表现出降低的趋势，并在第21和28天明显降低。
试验例2-2
在测量试验例1-1中使用的鼠的体重的同时，收集血液，并且使用甘油三酯E-test Wako(由Wako Pure Chemical Industries，Ltd.生产)来测定血液中甘油三酯含量。结果示于图11中。与对照组相比，在施用组中甘油三酯值在第21和28天明显降低。
试验例2-3
在施用开始后第29天处死试验例2-1中使用的鼠，收集内脏脂肪(即白色脂肪组织)并比较它们的质量。结果示于图12。与对照组相比，在施用组中脂肪组织的质量明显降低。
实施例3
通过向试验例2-1中示出的高脂肪饲料中加入0.02质量％的β-玉米黄质(由Extra Synthase生产)和0.6质量％的α-葡糖基橙皮苷(由ToyoSugar Refining Co.，Ltd.生产)，从而获得本发明的口服给药组合物。
试验例3-1
使用实施例3中获得的组合物进行试验例2-1的相同试验，结果示于图13中。与对照组相比，在施用组中从第21天开始体重表现出降低的趋势，并在施用后第28天明显降低。
试验例3-2
在测量试验例3-1中使用的鼠的体重的同时，收集血液，并且通过使用和试验例2-2相同的方法来测定血液中甘油三酯含量。结果示于图14中。与对照组相比，在施用组中甘油三酯值在第21和28天明显降低。
试验例3-3
在施用开始后第29天处死试验例3-1中使用的鼠，按照与试验例2-3相同的方式收集腹腔内白色脂肪组织并比较它们的质量。结果示于图15。与对照组相比，在施用组中脂肪组织质量显著降低。
比较例2
以下列方式将含有已知具有内脏脂肪降低作用的墨角藻黄素的裙带菜(wakame seaweed)萃取物和上述高脂肪饲料混合，所述方式为其等同于试验例2-1中所含的浓度为0.02质量％的β-玉米黄质，并且被用作比较例2，通过进行和试验例2-1、2-2和2-3相同的试验来证实其效果。结果分别示于图16、图17和图18中。关于体重改变，其表现出从第21天降低的趋势，并且在第28天明显降低(图16)。关于血液中的甘油三酯含量，在和对照组的比较中未发现很大的差别(图17)。关于在第29天后腹腔内白色脂肪组织的质量，与对照组相比，内脏脂肪质量明显降低(图18)。
上述结果揭示出，和含有墨角藻黄素的裙带菜萃取物相比，含有β-玉米黄质和α-葡糖基橙皮苷的组合物具有较强地降低体重、血液中的甘油三酯含量、和腹腔内白色脂肪组织的质量的效果。
比较例3
按照下列方式制备高脂肪饲料作为比较例3，所述方式为其包含0.02质量％的市售β-玉米黄质(由Extra Synthase生产)，并且进行和试 验例2-1、2-2和2-3相同的试验来证实其效果。结果分别示于图19、图20和图21中。关于体重改变，与对照组相比，其在第28天明显降低(图19)。关于血液中的甘油三酯含量，与对照组相比，在第21和28天其明显降低(图20)。关于在第29天后腹腔内白色脂肪组织的质量，与对照组相比，在施用组中脂肪组织质量明显降低(图21)。
上述结果揭示出，和只含有β-玉米黄质的作用相比，联合使用β-玉米黄质和α-葡糖基橙皮苷具有较强地降低体重、血液中的甘油三酯含量、和腹腔内白色脂肪组织的质量的作用。
比较例4
按照下列方式制备高脂肪饲料作为比较例4，所述方式为其包含0.6质量％的市售α-葡糖基橙皮苷(由Toyo Sugar Refining Co.，Ltd.生产)，并且进行和试验例2-1、2-2和2-3相同的试验来证实其效果。结果分别示于图22、图23和图24中。关于体重改变，在施用组和对照组之间未发现明显差别(图22)。关于血液中的甘油三酯含量，在施用组和对照组之间未发现明显差别(图23)。关于在第29天后腹腔内白色脂肪组织的质量，在施用组和试验组之间未发现内脏脂肪降低(图24)。
上述结果揭示出，和只含有α-葡糖基橙皮苷的作用相比，联合使用β-玉米黄质和α-葡糖基橙皮苷具有较强地降低体重、血液中的甘油三酯含量、和腹腔内白色脂肪组织的质量的作用。
实施例4
将实施例2中制备的粉末混合物分别以各自混合比和下列材料彻底混合，然后成型和在烘箱中烘烤，以制备具有橙子风味的饼干。
材料 粉末组合物 5％
小麦粉 50％
糖 20％
液蛋 5％
黄油 18.5％
碳酸钙 1％
食盐 0.5％
实施例5
将实施例2中制备的粉末混合物分别以各自混合比和下列材料彻底混合，然后进行压片以制备片剂。
材料 粉末组合物 40％
蛋壳钙 5％
结晶纤维素 10％
还原麦芽糖 43％
蔗糖脂肪酸酯 2％
实施例6
将实施例2中制备的粉末混合物分别以各自混合比和下列材料彻底混合，以制备用于饲养的饲料。就此而言，1kg的维生素-矿物质混合物含有1.5mg的硝酸硫胺、10.5mg的核黄素、0.75mg的吡哆醇、9mg的烟酰胺、16.4mg的D-泛酸钙、86.4mg的氯化胆碱、10,000IU的维生素A、32,000IU的维生素D、10mg的醋酸生育酚、50mg的Mn，、50mg的Fe、10mg的Cu、50mg的Zn和1mg的I。
材料 粉末组合物 2％
玉米 65％
大豆粕 16.5％
麦麸 15.2％
碳酸钙 0.6％
磷酸二钙 0.05％
氯化钠 0.3％
维生素-矿物质混合物 0.35％
实施例7
将1L的乙醇加入100g的实施例2中制备的粉末组合物中，搅拌1小时，然后将乙醇溶性成分(β-玉米黄质等)萃取并通过过滤分离。通过使用蒸发器蒸发乙醇来浓缩该部分，获得Citrus unshiu萃取物。该萃取物含有5％的β-玉米黄质(游离态)和0.5％的β-胡萝卜素。
通过将该萃取物和下列材料彻底混合至100ml，制得饮料制剂。
材料 Citrus unshiu萃取物 10mg
葡萄糖果糖糖浆 500mg
烟酰胺 20mg
硝酸维生素B1 5mg
磷酸维生素B2 5mg
维生素B6 5mg
无水咖啡因 50mg
α-葡糖基橙皮苷 5mg
实施例8
将实施例7中制得的Citrus unshiu萃取物和下列材料彻底混合至100ml，以制备具有橙子风味的果冻。
材料 Citrus unshiu萃取物 20mg
砂糖 20g
明胶 4g
α-葡糖基橙皮苷 10mg
实施例9
将实施例7中制得的Citrus unshiu萃取物和下列材料彻底混合以 制备富含β-玉米黄质的低卡路里冰激凌。
材料 Citrus unshiu萃取物 20mg
豆腐 80g
牛奶 30ml
蛋黄 25g
玉米淀粉 20g
还原淀粉糖浆 10g
蔗糖 40mg
α-葡糖基橙皮苷 20mg
β-玉米黄质 2mg
香草精 0.01mg
尽管已经参照具体实施方案详细地说明了本发明，但对本领域技术人员而言显而易见的是，在不背离本发明的精神和范围的情况下可进行各种修改和改变。
本申请基于2007年12月28日提交的日本专利申请(日本专利申请No.2007-339460)和于2008年2月1日提交的日本专利申请(日本专利申请No.2008-022784)，其全部内容通过引用的方式并入本文中。
工业实用性
本发明涉及具有高安全性的组合物，该组合物具有含有类胡萝卜素和神经鞘脂、或者类胡萝卜素、和类黄酮和/或其衍生物的组成，所述组合物表现出体脂肪降低作用、中性脂肪降低作用等，并且可以作为食品、药品或饲料摄取。
Claims (7)
1.一种组合物在生产具有体脂肪降低作用和/或中性脂肪降低作用的口服给药组合物中的应用，该组合物包含玉米黄质和神经鞘脂。
2.权利要求1所述的应用，其中所述玉米黄质和/或神经鞘脂衍生自柑橘类水果。
3.权利要求2所述的应用，其中所述柑橘类水果为Citrus unshiu。
4.一种组合物在生产具有体脂肪降低作用和/或中性脂肪降低作用的食品中的应用，该组合物包含玉米黄质和神经鞘脂。
5.一种组合物在生产具有体脂肪降低作用和/或中性脂肪降低作用的药品或饲料中的应用，该组合物包含玉米黄质和神经鞘脂。
6.权利要求4或5所述的应用，其中所述玉米黄质和/或神经鞘脂衍生自柑橘类水果。
7.权利要求6所述的应用，其中所述柑橘类水果为Citrus unshiu。
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