JP5192215B2 - 免疫賦活組成物 - Google Patents

Description

本発明は、麦類から得られる水溶性成分を含有することを特徴とする、免疫賦活組成物に関する。

医療技術の進歩と共に医療費が高騰を続ける中、病気にかからないようにする予防医学という概念が注目されてきている。免疫機能は生体の恒常性維持に役立っており、この免疫機能を向上させて病気を予防しようという提案がなされている。例えば、基礎免疫機能を向上させることにより種々の感染症にかからないようにしたり、非特異的な免疫機能を向上させることにより癌ならびに種々の抗原、微生物およびウイルスなどを排除するようにしたり、初期免疫機能を向上させたりすることで、免疫機能全体の改善や免疫機能の調節を行い、さらに特異的免疫機能のバランスを改善し、異常な免疫作用によって引き起こされる種々の病態、例えば、花粉症、アトピー、自己免疫疾患などを予防または治療しようとする試みが行われている。

また、免疫賦活剤は医療分野において各種疾患の治療にも使用され、薬物治療効果の増強や副作用の軽減などに有用であることが報告されている。例えば、癌治療においては、化学療法や放射線治療に免疫増強剤を併用することにより治療効果の向上が認められている。しかしながら、医薬品として用いられている免疫賦活剤、例えば、インターロイキンやインターフェロンなどは、優れた抗ウイルス効果や抗癌効果を発揮するものの、副作用も強いため重症患者と診断されなければ処方できず、医師の厳重な管理のもとで投薬しなければならないなど、その適用には困難がある。

そこで、日常的に摂取することが可能で、しかも副作用の心配がなく、十分な効果が期待できる天然由来の免疫賦活剤の開発も行われており、例えば、特許文献１には、乳酸菌と共にＤ−マンノース、アラビノキシランなどの多糖類を共存させた免疫賦活剤が記載されている。また特許文献２には、トウモロコシ外皮から得られたヘミセルロースの部分分解物を有効成分とする免疫賦活剤が記載されている。また特許文献３には、米糠の水溶性成分を有効成分とする免疫賦活用組成物が記載されている。しかしながら、これらの免疫賦活成分の免疫機能増強作用は弱く、満足のいくものではなかった。したがって、安全で簡便に日常的に継続して摂取することができ、かつ顕著な免疫賦活作用を有し、種々の感染症、花粉症、アトピー、自己免疫疾患および各種の癌の予防および／または改善に有効な天然素材が望まれていた。

特開２００５−８６１６号公報 特開２００１−３２２９４２号公報 特開２００２−２５５８４３号公報

本発明の課題は、安全で有害な作用がなく、継続して摂取することができる免疫賦活作用を有する組成物を提供することである。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、麦類に圧力処理後酵素処理を行って得られた水溶性成分のうち、特定分子量のものが高い免疫賦活作用を有すること、特に小麦由来の分子量２,０００Ｄａ以上の水溶性ヘミセルロースを含むものが、他の天然由来成分に比較して極めて強力な免疫賦活作用を有し、様々な免疫疾患の予防および／または改善に有用であることを見出した。

すなわち、本発明は以下を包含する。
（１）麦類に圧力処理後酵素処理を行って得られる平均分子量２０００Ｄａ以上の水溶性成分を有効成分として含有する、免疫賦活組成物。
（２）前記水溶性成分が水溶性ヘミセルロースを含有するものである、（１）に記載の免疫賦活組成物。
（３）感染症、自己免疫疾患、花粉症、アトピーおよび／または癌を予防および／または改善するための、（１）または（２）に記載の免疫賦活組成物。

本発明によれば、安全で簡便に日常的に継続して摂取することができ、かつ顕著な免疫賦活作用を有する組成物を提供することができる。

以下、本発明の好適な実施形態について具体的に説明する。

本発明において免疫賦活作用とは、主として非特異的な貪食作用を中心とする細胞性免疫を活性化する作用をさす。非特異的な免疫反応の１つであるマクロファージによる貪食作用は、体外からの非自己抗原、すなわち異物に対して初期免疫応答として働き、即時的に異物を排除する。同時に貪食した異物を抗原として免疫系に提示し、リンパ球や抗体による特異的免疫応答を発動させ、より強力な異物の排除を行うと共に、獲得免疫として次回以降の同種異物に対して直ちに特異的免疫応答ができるようにする。また、非特異的な貪食作用は、癌などの自己由来でありながら有害である細胞などに対しても排除する能力を有し、自己免疫力を高めて有害な成分を排除して健康を保つ働きを示す。このように非特異的細胞性免疫は、異物の排除を中心とした免疫系による生体の恒常性維持に重要な役割を果たしている。さらに本発明において免疫賦活作用には、前記の非特異的な免疫反応の活性化により、特異的免疫機能の改善、調節もしくは向上、またはＴｈ１／Ｔｈ２バランスなどの免疫バランスの改善をもたらすことも包含される。

本発明において免疫賦活作用は、細胞性免疫機能を担う細胞であるナチュラルキラー細胞、マクロファージ、顆粒球などの細胞が活性化して起こる代表的な現象である、サイトカイン放出量、細胞傷害作用、および細胞貪食作用などを測定することによって評価することができる。

本発明に用いられる麦類は、小麦、大麦、ライ麦、エンバクなどのイネ科の食用作物を指す。具体的には、イネ科コムギ属のパンコムギ、デュラムコムギ、クラブコムギ、スペルトコムギおよびエンマコムギなど、イネ科エギロプス属のタルホコムギおよびクサビコムギなど、イネ科オオムギ属のオオムギ、イネ科カラスムギ属のエンバクおよびカラスムギなど、イネ科ドクムギ属のドクムギ、ホソムギ、ネズミムギ、アマドクムギ、ノゲナシドクムギおよびボウムギなど、イネ科スズメノチャヒキ属のイヌムギなど、イネ科ジュズダマ属のハトムギなど、および、イネ科ナガハグサ属のライ麦などが挙げられる。これらの中では、小麦、大麦、ライ麦およびエンバクが好ましい。

上記麦類は、花、穂、花柄、茎、葉、種子、根、胚、胚乳、胚芽、糠、ふすま、籾殻など、細胞壁が含まれる部位であればいずれの部位であっても使用できるが、これらの中でも、ふすまを用いるのが、効率よく免疫賦活組成物を得られるため好ましい。代表的なふすまとしては、通常の製粉工程で生じる小麦の一般ふすま、それ以外のふすまのいずれも使用でき、組成や製造過程を問わない。そのうちでも特に、一般ふすまを粉砕した後、繊維質に富む区分を分級処理することにより得られた繊維質含量の高いふすまを使用すると、本発明に係る組成物の有効成分を高収量で得ることができる。

本発明の免疫賦活組成物は、上記のような麦類に圧力処理後酵素処理を行って得られる平均分子量２０００Ｄａ以上、好ましくは２,５００Ｄａ以上の水溶性成分を有効成分として含有する。上記水溶性成分は、麦類に圧力処理後酵素処理を行って、例えば、カラムクロマトグラフィーなどを用いて平均分子量２,０００Ｄａ以上、好ましくは２,５００Ｄａ以上の成分を分画することにより麦類から抽出することができる。ここで平均分子量とは、ゲル濾過クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、サイズ排除高速液体クロマトグラフィーなど公知の方法によって測定することができるが、特にサイズ排除高速液体クロマトグラフィーよって算出された値をさす。

本発明の組成物の有効成分である上記水溶性成分は、好ましくは麦類由来の水溶性ヘミセルロース、すなわち平均分子量２０００Ｄａ以上、好ましくは２,５００Ｄａ以上の水溶性ヘミセルロースを含有する。本発明の組成物には、水溶性成分として、麦類に圧力処理後酵素処理を行って得られる平均分子量２,０００Ｄａ以上の水溶性ヘミセルロース自体を用いてもよい。

本発明において水溶性ヘミセルロースは、上記麦類に圧力処理後酵素処理を行って得ることができる。本発明の組成物が麦類由来の水溶性ヘミセルロースを含有する場合、組成物中に、原料に含まれていたタンパク質やグルコースなどの糖質といったヘミセルロース以外の成分が含まれていてもよい。本発明における水溶性ヘミセルロースは、好ましくは糖組成として、キシロース３５〜７５質量％およびアラビノース５〜６０質量％を含むアラビノキシランを多く含むものである。

以下、本発明の免疫賦活組成物の製造方法について詳細に説明する。

本発明の免疫賦活組成物における有効成分である上記水溶性成分は、麦類に圧力処理後酵素処理を行って得られるものであるが、具体的な調製方法としては、特許公報第３０７９１１５号に記載された方法を利用できる。以下に、麦類として小麦ふすまを用いた場合の詳細な調製方法を説明するが、この方法は小麦以外にも、また、ふすま以外の麦類の各部位にも容易に適用できるものである。

小麦ふすまは、まず水洗して、蛋白質、少糖類、その他の有機物などの水溶性夾雑物を除去するのが好ましい。その際の水の温度は特に限定されないが、操作のし易さ、夾雑物の除去効率、熱効率などの点から通常２０〜７０℃がよく、好ましくは３０〜６０℃がよい。水洗は、小麦ふすまを水に分散させて攪拌しながら行うのが、小麦ふすまからの水溶性夾雑物の除去を円滑に行うことができ好ましいが、これに限定されない。水に分散させて攪拌しながら水洗する場合には、水１００質量部に対して、小麦ふすま約１０〜２０質量部を分散させて、周速度約１０〜３０ｍ／秒で約２〜１０分間行うのが、操作のし易さ、夾雑物の除去効果率、水洗終了後の小麦ふすまからの水の除去の容易さなどの点から好ましい。

次いで、水洗終了後の小麦ふすまから水を除去する。水の除去は、ろ過、遠心分離、遠心ろ過などの固液分離として一般的ないずれの方法で行ってもよい。操作が簡便であり、速やかに水を除去できる点で遠心ろ過による方法が好ましい。水を除去した後の小麦ふすまは、そのまま湿った状態で、または必要に応じて乾燥して、次の処理に供する。

続いて小麦ふすまを圧力処理に付すことにより、植物細胞壁構造を部分的に破壊またはゆるやかな構造に変性させることで、水溶性成分の抽出を容易に、高収率で行うことができる。圧力処理においては、合わせて加熱を行うことが好ましい。圧力処理は、例えば、水分の存在下、温度１００〜１４５℃および圧力１〜４気圧、好ましくは１１５〜１２３℃および１.７〜２.３気圧で実施することができる。温度を１００℃以上とすることで、水溶性成分の十分な抽出効率が達成され、また温度１４５℃以上、４気圧以上にしても水溶性成分の抽出効率はこれ以上は上昇しない。ここで水分の存在下とは、圧力処理した後で植物細胞壁分解酵素を作用させたときに所望の水溶性成分が得られるいかなる量の水分でもよいが、小麦ふすまの乾燥重量に対して１〜８倍量程度の水の添加で通常は十分であって、水分量が前記範囲内であると、圧力損失もなく適度な処置が可能であり好ましい。圧力処理は数秒〜数十分程度、好ましくは１〜１０分程度の短時間で行えばよく、この範囲以上の長時間行っても効果はほぼ同様である。この圧力処理は、任意の加圧可能な容器、例えばオートクレーブを用いて行うことができるが、連続式加熱加圧装置を用いて連続式操作によって行うこともできる。

このように処理された小麦ふすまを、次いで酵素処理に付す。酵素としては、通常、植物細胞壁分解酵素を用いる。上記圧力処理により部分的に破壊またはゆるやかな構造に変性していた植物細胞壁は、酵素処理によって容易に分解を受ける。この操作により、ほぼ選択的に平均分子量２,０００Ｄａ以上の水溶性成分を得ることができる。そして植物細胞壁分解酵素により分解を受けた水溶性成分は容易に分離することができる。

上記酵素処理で用いる酵素としては、植物細胞壁分解酵素、例えば、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼ、キシラナーゼ、マンナナーゼなどが挙げられ、これらを単独で用いてもよいし、複数を混合して用いてもよい。複数混合されている複合酵素を用いるのが好ましい。上記酵素は高等植物、菌類、細菌などに広く分布しており、これらから抽出して用いることもできる。また、微生物に起源を有するものが市販されており、これらを用いることもできる。

酵素はその至適ｐＨおよび至適温度において使用することが好ましい。至適ｐＨおよび至適温度は個々の酵素により異なるが、一般にｐＨ５〜７、および２５〜６０℃の範囲にあり、これらの範囲で処理を行うのが好ましい。これらの酵素は、反応液中に遊離状態で存在させて反応させることもできるが、酵素を担体に担持させるなど、固定化した状態で反応させることもできる。

この酵素による処理は、前記圧力処理した小麦ふすまの乾燥質量に対して０.０１〜２０質量％、好ましくは０.０５〜１０質量％の量の酵素を用いて行うことが、反応効率および経済性の観点から望ましい。上記の酵素量を用いる場合、１〜１２０分、好ましくは１５〜６０分間反応させることにより、十分に植物細胞壁を分解し、効率的に水溶性成分を抽出することができる。酵素反応をとめるには、反応液を８０〜１００℃にして酵素を失活させる方法などがある。

以上説明したように、麦類に圧力処理および酵素処理を行うことで、両処理の併用効果により、麦類から選択的に平均分子量２,０００Ｄａ以上の水溶性成分を５〜２０質量％含有する麦類抽出物を得ることができる。これらの処理によって得られる抽出物には、水溶性ヘミセルロースなどの麦類由来の水溶性成分が含まれるので、この抽出物をそのまま本発明の免疫賦活組成物に配合してもよい。したがって本発明の免疫賦活組成物には、製造工程上不可避的に含まれるふすま由来のその他の成分や酵素類が含有されていてもよい。

しかしながら、取り扱いの容易性、保存性などを考慮すると、この水溶性成分から不溶物を除去し、さらに水分を除去して固体状の形態とすることが好ましい。この不溶物の除去や水分除去は、得られた水溶性成分が変性や熱分解を起こさない条件下であれば、どのような方法でもよく、例えばろ過、遠心分離、遠心ろ過、スプレードライ、スプレークール、ドラムドライ、真空乾燥、凍結乾燥などのいずれの方法も使用できる。または、水溶性成分を適当な担体に結合または担持させた後、上記のような方法により溶媒を除去することで、固形物として得ることもできる。

麦類を単に通常の抽出処理に付して得られる成分では、その免疫賦活効果は従来の免疫賦活組成物の効果と変わらないが、本願発明者らは、上記のように麦類に圧力処理後酵素処理を行って得られる水溶性成分によって、極めて高い免疫賦活効果が得られることを初めて見出した。

本発明の免疫賦活組成物は、上記の工程によって得られた水溶性成分を含有することを特徴とするが、これをそのまま単独で、あるいは医薬品、食品または飼料などの様々な形態にして継続的に摂取する、あるいは化粧料の形態にして継続的に適用すると、非特異的な免疫、換言すれば基礎免疫機能が向上し、感染症、花粉症、アトピー、自己免疫疾患、癌などの様々な障害および疾患を、予防および／または改善することができる。また本発明の免疫賦活組成物は、安全な麦類を原料としているため、安全性が高く、また風味もよいことから、経口摂取や化粧料としての適用が容易であり、長期間の継続的投与が可能である。さらに様々な医薬品、食品、飼料の形態として長期間の継続的摂取に供することができる。

本発明の免疫賦活組成物は、通常の場合、上記の工程によって得られた水溶性成分の乾燥質量を基準として、成人１日当たり０．０１〜２０ｇの範囲で適用される。経口投与の場合、一般的な１日当たりの摂取量は、１〜１０ｇであるが、該水溶性成分は、麦類を原料としている安全性の高いものであるため、その摂取量をさらに増やすこともできる。１日当たりの摂取量は、１回で摂取してもよいが、数回に分けて摂取してもよい。本発明の組成物を上記範囲で摂取すると、毒性症状は認められない。

その際、上記の工程によって得られた水溶性成分をそのまま単独で用いることもできるが、本発明の効果を阻害しない限り、後述する添加剤、他の公知の免疫賦活物質、免疫調節物質などを単独または複数組み合わせて配合してもよい。

本発明の免疫賦活組成物を医薬組成物として調製する場合の剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、液剤、懸濁剤などの経口剤、吸入剤、坐剤などの経腸製剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤などの皮膚外用剤、点滴剤、注射剤などの局所投与剤が挙げられる。これらのうちでは、経口剤が好ましい。

このような剤型の免疫賦活組成物は、有効成分である水溶性成分に、慣用される添加剤、例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、アルコール、水、水溶性高分子、甘味料、矯味剤、酸味料などを剤型に応じて配合し、常法に従って製造することができる。なお、液剤、懸濁剤などの液体製剤は、服用直前に水または他の適当な媒体に溶解または懸濁する形であってもよく、また錠剤、顆粒剤の場合には周知の方法でその表面をコーティングしてもよい。

本発明に係る医薬組成物における水溶性成分の含有量は、その剤型により異なるが、乾燥質量を基準として、通常は、０.００１〜９９質量％、好ましくは０.０１〜８０質量％の範囲であり、上述した成人１日当たりの摂取量を摂取できるよう、１日当たりの投与量が管理できる形にすることが望ましい。

本発明の免疫賦活組成物を食品組成物として調製する場合、その形態は特に制限されず、健康食品、機能性食品、特定保健用食品などの他、有効成分である上記水溶性成分を配合できる全ての食品が含まれる。また、本発明において食品には飲料も包含される。具体的には、錠剤、チュアブル錠、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、ドリンク剤、経管経腸栄養剤などの流動食といった各種製剤形態とすることができる。製剤形態の食品組成物は、医薬製剤と同様に製造することができる。さらに食品組成物は、緑茶、ウーロン茶、紅茶などの茶飲料、清涼飲料、ゼリー飲料、スポーツ飲料、乳飲料、炭酸飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料、発酵乳飲料、粉末飲料、ココア飲料、精製水などの飲料、バター、ジャム、ふりかけ、マーガリンなどのスプレッド類、マヨネーズ、ショートニング、カスタードクリーム、ドレッシング類、パン類、米飯類、麺類、パスタ、味噌汁、豆腐、牛乳、ヨーグルト、スープまたはソース類、菓子（例えば、ビスケットやクッキー類、チョコレート、キャンディ、ケーキ、アイスクリーム、チューインガム、タブレット）などとして調製してもよい。

食品組成物にはさらに、食品や飼料の製造に用いられる他の食品素材、各種栄養素、各種ビタミン、ミネラル、アミノ酸、各種油脂、種々の添加剤（例えば、呈味成分、甘味料、有機酸などの酸味料、界面活性剤、ｐＨ調整剤、安定剤、酸化防止剤、色素、フレーバー）などを配合してもよい。また、通常食されている食品に本発明に係る水溶性成分を配合することにより、本発明に係る食品組成物を製造することもできる。

本発明に係る食品組成物において、水溶性成分の含有量は、食品の形態により異なるが、乾燥質量を基準として、通常は、０.００１〜８５質量％、好ましくは０.０１〜５０質量％、より好ましくは１〜５０質量％、さらに好ましくは２０〜５０質量％の範囲である。１日当たりの摂取量は、１回で摂取してもよいが、数回に分けて摂取してもよい。上述した、成人１日当たりの摂取量が飲食できるよう、１日当たりの摂取量が管理できる形にするのが好ましい。

さらに本発明の免疫賦活組成物には、人用の食品のみならず、家畜、競走馬などの飼料、ペットフードなども包含される。飼料は、対象が動物である以外は食品とほぼ等しいことから、本明細書における食品に関する記載は、飼料についても同様に当てはめることができる。

本発明の免疫賦活組成物は安全性が高いため、化粧料組成物として調製することもできる。本発明に係る化粧料組成物は、継続的に適用することができるため、特にアトピー性皮膚炎を予防および／または改善するために有効である。

本発明に係る化粧料組成物を調製する場合、上記水溶性成分をそのまま化粧料組成物としてもよく、または水溶性成分を汎用の方法で配合し、乳液、化粧液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、シート、ファンデーション、おしろい、頬紅、口紅、アイシャドー、アイライナー、マスカラ、洗顔料、皮膚洗浄料、ゲル剤、ジェル剤、美肌剤、ボディシャンプーなどの洗浄料、シャンプー、リンスなどの毛髪化粧料、ヘアートリートメント、養毛剤、浴用剤、軟膏、医薬部外品、あぶら取り紙などの形態の化粧料組成物として調製してもよい。

本発明に係る化粧料組成物は、水溶性成分のほかに、所望する剤型に応じて従来公知の賦形剤や香料を初め、油脂類、界面活性剤、防腐剤、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子、増粘剤、顔料などの粉末成分、紫外線防御剤、保湿剤、酸化防止剤、ｐＨ調節剤、洗浄剤、乾燥剤、乳化剤などを適宜配合して、常法に従って製造することができる。

本発明に係る化粧料組成物における水溶性成分の含有量は、特に限定されないが、乾燥質量を基準として、通常、０.００１〜８０質量％、好ましくは０.０１〜５０質量％の範囲内である。

さらに本発明の免疫賦活組成物には、上記以外に例えば、共役リノール酸、タウリン、グルタチオン、カルニチン、クレアチン、コエンザイムＱ、グルクロン酸、グルクロノラクトン、トウガラシエキス、ショウガエキス、カカオエキス、ガラナエキス、ガルシニアエキス、テアニン、γ−アミノ酪酸、カプサイシン、カプシエイト、各種有機酸、フラボノイド類、ポリフェノール類、カテキン類、キサンチン誘導体、フラクトオリゴ糖などの難消化性オリゴ糖、ポリビニルピロリドンなどを配合してもよい。

それら添加剤の配合量は、組成物の形態、添加剤の種類および所望すべき摂取量に応じて適宜決められるが、本発明の免疫賦活組成物中、０.０１〜７０質量％の範囲内であり、好ましくは０.１〜５０質量％の範囲内である。

本発明によれば、免疫賦活の活性化、特に細胞性免疫機能を活性化することにより、種々の感染症、花粉症、アトピー、自己免疫疾患および各種の癌などを予防および／または改善することができる。さらに本発明の組成物は、副作用がなく、風味がよく簡便に摂取可能で長期間の継続的摂取が容易である。

また、本発明の免疫賦活組成物を、食品、飼料、化粧料もしくは医薬組成物として、上述したような有効量で投与することにより、種々の感染症、花粉症、アトピー、自己免疫疾患および各種の癌の予防および／または改善方法を提供することができる。

以下、実施例に基づいて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

以下の例中、平均分子量は次の方法で測定した。

平均分子量測定方法
各実施例の組成物１０ｍｇを蒸留水１ｍＬに溶解し、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（使用カラム：ＴＯＨＳＯ Ｇ２０００ＳＷＸＬ 東ソー製、カラム温度：４０℃）に供し、次に蒸留水を使用して１ｍＬ／分の流速で溶離させた。溶離液を視差屈折系を用いて測定して、測定値を、分子量既知のプルラン（分子量５,９００、１１,８００、２２,８００、４７,３００、１１２,０００、２１２,０００、４０４,０００、７８８,０００Ｄａのもの）から作成した検量線に当てはめて平均分子量を決定した。

（実施例１）水溶性成分の製造
（１）反応釜に小麦ふすま（日清製粉）２００ｇ、水１.４Ｌを仕込み、５０℃でミキサーを用いて３分間攪拌洗浄した。洗浄後、小麦ふすまをガーゼを用いて濾過して水分を除去した。再度小麦ふすまを反応釜に戻し、水１.４Ｌを加えて５０℃でミキサーを用いて３分間攪拌洗浄した。これを更にもう一度繰り返し行い、合計３回洗浄操作を行った。
（２）ついで、洗浄濾過後の小麦ふすまをメディウムびんに移し、蒸留水６００ｍＬを加えて、オートクレーブ（ＴＯＭＹ ＳＳ−３２５）で１２０℃、約１．８気圧にて１５分間圧力処理した。処理終了後、室温にて放冷した。
（３）放冷後、残った水分を濾過により除去し、小麦ふすまを、１０Ｌ容器に移した。
（４）蒸留水１Ｌを加え、５０℃に加温後、ヘミセルラーゼ（セルラーゼＲＳ；ヤクルト薬品工業製）を０.２ｇ（原料小麦ふすまに対して０.１質量％）を投入して５０℃で２０分間反応させた。
（５）反応液を９０℃に加熱し、１５分間維持して酵素を失活させた。
（６）蒸留水を加えて反応液の温度を下げ、遠心分離して上清を分取した。
（７）上清を凍結乾燥し、水溶性成分を粉末の形態で約１７ｇ得た。
（８）この水溶性成分は、糖質が約８０％、蛋白質が約２０％であり、糖質の約９５％はアラビノース、キシロース、グルコースであり、その糖組成はキシロース：アラビノース：グルコースが１００：２７：４０であった。また、平均分子量２,８００Ｄａ、分子量分布は２００〜５００,０００Ｄａであった。また、この水溶性成分は、わずかに甘味のある風味の良い粉末であり、これを水性媒体に添加すると、容易に溶解し清澄な液体が得られた。

（比較例１）小麦ふすまのアルカリ抽出物の製造
（１）反応釜に小麦ふすま（日清製粉）２００ｇ、水１．４Ｌを仕込み、５０℃でミキサーを用いて３分間攪拌洗浄した。洗浄後、小麦ふすまをガーゼを用いて濾過して水分を除去した。再度小麦ふすまを反応釜に戻し、水１.４Ｌを加えて５０℃でミキサーを用いて３分間攪拌洗浄した。これを更にもう一度繰り返し行い、合計３回洗浄操作を行った。
（２）洗浄濾過後の小麦ふすまを１０Ｌ容器に移し、０.２ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１Ｌを加え、８０℃に加温して１.５時間攪拌抽出した。
（３）遠心分離して上清を分取し、４ｍｏｌ／Ｌ塩酸を、ｐＨが７になるまで添加した。
（４）ここにエタノール１.５Ｌを添加し、１６時間静置して沈殿を生成させた。
（５）生成した沈殿を遠心分離後、分取した。
（６）沈殿を２５０ｍＬの水に溶解し、４８時間透析膜を通過させて低分子成分を除去した。
（７）通過液を凍結乾燥し、小麦ふすまのアルカリ抽出物を粉末の形態として約２.２１ｇ得た。
（８）こうして抽出されたアルカリ抽出物は、糖組成がキシロース：アラビノース：グルコースが１００：８２：１４であり、平均分子量３００,０００Ｄａ、分子量分布は２００,０００〜１,０００,０００Ｄａであった。また、このアルカリ抽出物は、茶褐色の塊状であり風味はあまり好ましいものではなかった。またこれを水性媒体に添加すると、容易に溶解しわずかに濁りのある液体が得られた。

（比較例２）小麦ふすまの酵素分解物の製造
（１）反応釜に小麦ふすま（日清製粉）２００ｇ、水１．４Ｌを仕込み、５０℃でミキサーを用いて３分間攪拌洗浄した。洗浄後、小麦ふすまをガーゼを用いて濾過して水分を除去した。再度小麦ふすまを反応釜に戻し、水１.４Ｌを加えて５０℃でミキサーを用いて３分間攪拌洗浄した。これを更にもう一度繰り返し行い、合計３回洗浄操作を行った。
（２）洗浄濾過後の小麦ふすまを１０Ｌ容器に移し、０.２ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１Ｌを加え、８０℃に加温して１.５時間攪拌抽出した。
（３）遠心分離して上清を分取し、４ｍｏｌ／Ｌ塩酸を、ｐＨが５.５になるまで添加した。
（４）ヘミセルラーゼ（セルラーゼオノヅカＲＳ；ヤクルト薬品工業製）を０.４ｇ（原料小麦ふすまに対して０.２質量％）を投入して５０℃、１時間反応させた。
（５）反応液の容量を測定し、ここに６０体積％エタノールとなるようエタノールを添加し、攪拌した。
（６）生成した沈殿を遠心分離後、分取した。
（７）沈殿を２５０ｍＬの蒸留水に溶解し、透析膜を通過させて脱塩処理した。
（８）通過液を凍結乾燥し、ふすま酵素分解物を粉末の形態として約１.１７ｇ得た。
（９）こうして抽出された酵素分解物は、糖組成がキシロース：アラビノース：グルコースが１００：１０７：６であり、平均分子量３００,０００Ｄａ、分子量分布は２００,０００〜１,０００,０００Ｄａであった。また、この組成物は、茶褐色の塊状であり風味はあまり好ましいものではなかった。またこれを水性媒体に添加すると、容易に溶解しわずかに濁りのある液体が得られた。

（実施例２〜３、比較例３〜４）抽出物の分画
実施例１で得られた水溶性成分を以下の方法を用いて分画処理し、以下の分画物を得た。
（１）実施例１で得られた水溶性成分１０ｇを１００ｍＬの蒸留水に溶解し、ここに１００ｍＬのエタノールを加えて攪拌し（５０％エタノール溶液）、１時間静置した。
（２）沈殿が得られたので遠心分離により分取し、５０ｍＬの蒸留水に溶解して凍結乾燥を行った。得られた画分の平均分子量は２，８００Ｄａであった。（実施例２）。
（３）遠心上清にエタノールをさらに５００ｍＬ加えて攪拌し（８５％エタノール溶液）、１時間静置した。
（４）沈殿が得られたので遠心分離により分取し、５０ｍＬの蒸留水に溶解して凍結乾燥を行った。得られた画分の平均分子量は２，８００Ｄａであった。（実施例３）。
（５）上清はそのまま減圧下で濃縮乾固した。得られた画分の平均分子量は１，７００Ｄａであった。（比較例３）。
（６）比較例３の０．５ｇを蒸留水５ｍＬに溶解し、ＭＥＧＡ Ｂｏｎｄ ＥＬＵＴ Ｃ−１８（ＶＡＲＩＡＮ社）にアプライし、非吸着の溶出画分を分取して濃縮乾固した。得られた画分の平均分子量は１，２００Ｄａであった。（比較例４）

（実施例４〜９）抽出物の分画
実施例１で得られた水溶性成分を以下の方法を用いて分画処理し、以下の分画物を得た。
（１）実施例１の水溶性成分１ｇを蒸留水４ｍＬに溶解し、あらかじめ別に蒸留水でカラム充填しておいたＳｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ−４００ＨＲ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス製）にアプライした。
（２）蒸留水で溶出し、１０ｍＬずつ分取し、画分７〜１２をそれぞれ濃縮乾固して実施例４〜９とした。画分７〜１２の分子量はそれぞれ４１４，０００Ｄａ、３９０，０００Ｄａ、３４９，０００Ｄａ、２８７，０００Ｄａ、２１２，０００Ｄａ、２０，０００Ｄａであった。

（試験例１）
実施例の各組成物の免疫賦活作用を検討した、その際小麦以外の素材の比較例として、比較例５：とうもろこしアラビノキシラン（日食アラビノキシランＩＰ；日本食品加工株式会社製、平均分子量＝５３，０００Ｄａ）、比較例６：米糠アラビノキシラン（レンチンプラス１００；株式会社エイブリー製、平均分子量＝６００Ｄａ）を同時に試験に用いた。また陽性対照として、免疫賦活剤、免疫増強剤として常用されているリポポリサッカライド（ＬＰＳ；シグマ社製）を用い、コントロールとして、蒸留水を用いた。

１０％ＦＢＳおよび１２０ｎｍｏｌカルシトリオールを含有させたＰＭＩ１６４０培地でＨＬ−６０細胞を７日以上培養し、４８ｗｅｌｌプレートに２．５×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ／２５０μＬになるよう分取した。３７℃に加温し、濃度調整したＹＧ蛍光ビーズ（Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ．ＰＡ；ｐｏｌｙｓｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．製、２μｍ径）を２５μＬずつ加え、さらに実施例１〜１０、比較例１〜６の各組成物を１０μｇ／ｍＬの濃度になるよう２５μＬ添加し、シェイカー（１１００ｒｐｍ、３０秒）で混和した。３７℃、５％ＣＯ_２の環境下で１６時間培養し、培養終了後、２％ホルムアルデヒドを用いて細胞を固定し、フローサイトメーター（ＦＣＭ ＦＬ１）；Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏａｌｔｅｒ製）にて蛍光ビーズを貪食した細胞を測定した。なお陽性対照は、ＬＰＳを１μｇ／ｍＬの濃度になるよう２５μＬ添加した。結果は、総細胞数に対する蛍光ビーズ貪食細胞数の比を、コントロールを１００％とする相対値で表１に表した。

表１から、本発明の組成物は、いずれもＨＬ−６０細胞のビーズ貪食作用を促進することがわかる。小麦ふすまに圧力処理および酵素処理を行った実施例１の水溶性成分およびその分画物である実施例２〜９の組成物は、比較例５〜６のとうもろこしアラビノキシランおよび米糠アラビノキシランに比べても顕著に高い作用を示した。さらに、免疫賦活作用の陽性対照であるＬＰＳに比べても、顕著に高い作用を示した。一方、小麦ふすまからのアルカリ抽出物である比較例１、小麦ふすまからの酵素処理物である比較例２の組成物の作用は高いものではなかった。また実施例１の水溶性成分の分画物であっても、平均分子量が１７００Ｄａ以下の画分である比較例３〜４の組成物は、ほとんど免疫賦活作用を示さなかった。

（実施例１０）錠剤の製造
実施例１で得られた水溶性成分８４ｇ、結晶セルロース（旭化成）１０ｇおよびポリビニルピロリドン（ＢＡＳＦ）５ｇを混合し、これにエタノール３０ｍＬを添加して、湿式法により常法にしたがって顆粒を製造した。この顆粒を乾燥した後、ステアリン酸マグネシウム１．２ｇを加えて打錠用顆粒末とし、打錠機を用いて打錠し、１錠が１ｇの錠剤１００個を製造した。

（実施例１１）顆粒剤の製造
実施例１で得られた水溶性成分１００ｇ、乳糖（ＤＭＶ）１００ｇおよび結晶セルロース（旭化成）４０ｇを混合し、これにエタノール１３０ｍＬを練合機に添加し、通常の方法により５分間練合した。練合終了後、１０メッシュで篩過し、乾燥機中にて５０℃で乾燥した。乾燥後、整粒し、顆粒剤２４０ｇを得た。

（実施例１２）シロップ剤の製造
精製水４００ｇを煮沸し、これをかき混ぜながら、白糖７５０ｇおよび実施例１で得られた水溶性成分１００ｇを加えて溶解し、熱時に布ごしし、これに精製水を加えて全量を１０００ｍＬとしてシロップ剤を製造した。

（実施例１３）流動食の製造
約６５℃の純水７００ｇにカゼインナトリウム（ＤＭＶ）４０ｇ、マルトデキストリン（三和デンプン）１６０ｇおよび実施例１で得られた水溶性成分５０ｇを添加して溶解させ、ついでビタミンミックスおよび微量ミネラルの各成分混合液を添加した。得られた混合液をホモミキサーに投入し、約８，０００ｒｐｍにて１５分間粗乳化した。得られた乳化液を約２０℃に冷却し、香料を添加後、最終メスアップを行い、この液をパウチへ本液２３０ｇ充填後、窒素置換を行いながらパウチを密封し、１２１℃で１５分間殺菌を行って流動食を得た。

（実施例１４）パンの製造
小麦粉（強力粉）１６０ｇとドライイースト２ｇを混合した。これとは別に、実施例１で得られた水溶性成分５ｇ、砂糖２５ｇ、食塩３ｇ、脱脂粉乳６ｇを温湯７０ｇに溶かし、鶏卵１個を添加してよく混合した。これを上記の小麦粉とドライイーストの混合物に加え、よく手でこねた後、バター約４０ｇを加えてさらによくこね、２０個のロールパン生地を作り、次いで、これらのパン生地を発酵させた後、表面に溶き卵を塗り、オーブンにて１８０℃で約１５分焼き、ロールパンを作成した。

（実施例１５）レトルトご飯の製造
お米２合を用いて一般的な水量に対し、実施例１で得られた水溶性成分２ｇを加えて炊飯し、これを慣用の方法に従ってレトルト用パックに充填した後、窒素置換を行いながら密封し、１２１℃で１５分間殺菌を行ってレトルトご飯を得た。

（実施例１６）パスタ用ソースの製造
パスタ用のミートソース一人前（１５０ｇ）を鍋に入れ、これに実施例１で得られた水溶性成分１ｇを加えて加温混合した。このソースをパウチへ充填した後、窒素置換を行いながらパウチを密封し、１２１℃で１５分間殺菌を行って、パスタ用ミートソースを得た。

（実施例１７）野菜ジュースの製造
市販の野菜ジュースに実施例１で得られた水溶性成分を５質量％になるよう添加・混合し、野菜ジュースを調製した。

（実施例１８）コンソメスープの製造
タマネギ１００ｇ、ニンジン１００ｇ、長ネギ１００ｇ、セロリ５０ｇ、およびトマト１００ｇの各スライスを鍋に入れ、ここに牛の挽き肉５００ｇ、卵の白味２個分、ビーフブイヨン１ｋｇを加え、火にかけて沸騰したら火を弱め、表面に浮いてきたアクや脂肪分を除去しながら弱火で１時間煮て、実施例１で得られた水溶性成分５０ｇを加えてさらに３０分間煮て、布でこし、コンソメスープを得た。

（実施例１９）軟膏剤の製造

Ｂを７０℃で加熱溶解しながら混合し油相とする。Ａを７０℃で加熱溶解しながら混合し、これにＢの油相を加えて混合乳化し、その後Ｃを加えながら冷却処理をしてよく混合し、軟膏を得た。

Claims (4)

1. 麦類ふすまに温度１００〜１４５℃での圧力処理後酵素処理を行って得られる平均分子量２０００Ｄａ以上の水溶性成分を有効成分として含有する、免疫賦活組成物。
2. 前記水溶性成分が水溶性ヘミセルロースを含有するものである、請求項１に記載の免疫賦活組成物。
3. 感染症、自己免疫疾患、花粉症、アトピーおよび／または癌を予防および／または改善するための、請求項１または２に記載の免疫賦活組成物。
4. 麦類ふすまが小麦ふすまである、請求項１〜３のいずれか１項記載の免疫賦活組成物。