JP5357652B2 - 抗アレルギー剤 - Google Patents

Description

本発明は、青大豆の溶媒抽出物を含有することを特徴とする、ＩｇＥ産生抑制剤、Ｔｈ１／Ｔｈ２増加剤及び抗アレルギー剤、並びにそれらを含有する抗アレルギー用飲食品に関する。

先進国においてアレルギー性疾患は最も発症率の高い疾患の一つである。特に代表的なものとして、花粉症、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎等があり、その他にも、リュウマチ、炎症性腸疾患、食物アレルギー等が挙げられる。これらの中でも花粉症とアトピー性皮膚炎の患者数は急激に増加しており、大きな社会問題になっている。

アレルギー反応は大きく４つのタイプに分類されているが、その中で多くのアレルギー性疾患は、Ｉ型アレルギーにより起こるとされている。Ｉ型アレルギーは、即時型アレルギーとも呼ばれており、Ｂ細胞から過剰産生されるアレルゲン特異的ＩｇＥ抗体、マスト細胞や好塩基球から放出されるヒスタミンやロイコトリエン等のケミカルメディエーター、又はヘルパーＴ細胞のサブタイプであるＴｈ１細胞とＴｈ２細胞の機能バランスのＴｈ２側への偏向等の複数の要因が複雑に絡み合って起こると言われている。すなわち、体内に進入したアレルゲンは抗原提示細胞に取り込まれて分解され、その一部の情報がＴ細胞へ抗原提示される。抗原提示を受けたＴ細胞はＴｈ２細胞へと分化・活性化され、ＩＬ−４等のサイトカインを産生してＢ細胞を活性化させる。活性化したＢ細胞からはアレルゲンに特異的なＩｇＥ抗体が産生され、このＩｇＥ抗体はマスト細胞や好塩基球表面に存在するＦｃ受容体に結合する。再度アレルゲンが体内に侵入してマスト細胞や好塩基球表面のＩｇＥ抗体を架橋すると、細胞内からヒスタミン等のケミカルメディエーターが大量に産生・遊離され、さらに細胞表面ではロイコトリエン等が産生される。これら産生された物質は、血管透過性を亢進させて浮腫や鼻汁の過剰分泌を引き起こし、また平滑筋を収縮させて気道収縮を引き起こす。一方、近年の生活様式や食生活の変化等によりＴｈ１−Ｔｈ２バランスが慢性的にＴｈ２側へ偏向し、アレルギー性疾患の増加傾向の一因となっていることが明らかになりつつある。

現在、アレルギー症状を改善する方法としては、マスク、ゴーグル、空気清浄機等で花粉やハウスダスト等のアレルゲンとの接触機会を少なくする方法や、アレルゲンとなる食物を特定してその食物を摂取しないようにする方法等の物理的な方法、遊離したヒスタミンが受容体に結合するのを阻害する抗ヒスタミン剤、炎症反応を抑制するステロイド剤、細胞膜安定化作用を有する脱顆粒抑制剤又はロイコトリエン合成阻害剤等の抗アレルギー剤によってアレルギー反応を抑制する方法等の薬物的な方法がある。しかしながら、アレルゲンとの接触を完璧に防ぐことは極めて困難であり、また、抗アレルギー剤には、多くの場合副作用があり、日常的に長期に適用するには限界がある。

一方、これらの薬剤に代えて、抗アレルギー効果を示す食品を摂取することによってアレルギー症状を改善しようとする試みも行われており、例えば、甜茶、シソ、β−グルカン等を添加した食品が知られている。しかしながらこれらの食品は医薬品に比べて副作用は少ないものの、アレルギー改善効果も限定的で十分な効果があるとはいえず、いずれも満足できるものはこれまでなかった。

したがって、日常的に服用が可能で、しかも効果的に花粉症等の症状を緩和できる抗アレルギー食品が望まれている。

ところで、大豆は豆腐、醤油、納豆等の原料としてよく知られ、大豆から機能性成分を得ようとする試みが行われている。例えば、特許文献１には、イソフラボンと特定のサポニンを有効成分としたアレルギー症の予防／治療用組成物が開示されており、これらの成分は大豆から抽出できることが記載されている。しかしながら、大豆に含まれるイソフラボンやサポニンは量が少なく、大豆の中でも特に含有量が多いとされる胚軸部位から抽出を行って、さらに複雑な精製工程を行って濃縮する必要がある。しかもイソフラボンやサポニンは苦味が強くて呈味性が悪く、継続して摂取できないうえ、毒性を示す可能性がある成分であるため、摂取間隔や摂取量を緻密にコントロールしながら摂取する必要があり、効果を得るように摂取する事が困難であるという問題点があった。
また、特許文献２には、スタキオースを有効成分とする抗アレルギー性組成物が開示されており、スタキオースは大豆から抽出できることが記載されている。しかしながら、大豆に含まれるスタキオースは量が少なく、単なる抽出操作では効果的な成分は得られず、クロマトグラフィー等の複雑な精製工程を行って９８％もの高濃度に濃縮する必要がある。しかもスタキオースはＩｇＥには作用せず、アレルギーの中でもIV型アレルギーにしか効果を示さないため、免疫細胞が関与する遅延型アレルギーには効果が期待できるものの、ＩｇＥが関連する、花粉症、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎の掻痒（かゆみ）症状のような即時型アレルギー（Ｉ型、II型、III型アレルギー）には効果が期待できない。

特開２００７−１９７３９８号公報 特開２００３−３２１３７２号公報

したがって、安全・安価かつ簡便に日常的に継続して摂取することができ、かつ顕著な抗アレルギー作用を有し、種々の即時型アレルギー性疾患、特にＩ型アレルギー疾患、例えば、花粉症、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎等の予防及び／又は改善に有効な天然素材に対する要望は依然として高い。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、青大豆の抽出物、好ましくは青大豆から水、アルコール又は含水アルコールを用いて簡便に抽出した組成物が、黄色大豆等の他の種類の大豆に比べて、極めて強力なＩｇＥ低下作用を示すとともに、Ｔｈ１−Ｔｈ２バランスをＴｈ１優位に改善し（Ｔｈ１／Ｔｈ２を増加させ）、様々なアレルギー性疾患の予防及び／又は改善に有用であることを見出した。そして青大豆を用いると、複雑な濃縮を行わなくとも、簡便に効果の高い抗アレルギー剤が得られることを見出し、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は以下の事項に関する。
（１）青大豆の溶媒抽出物を含有することを特徴とするＩｇＥ産生抑制剤。
（２）青大豆の溶媒抽出物を含有することを特徴とするＴｈ１／Ｔｈ２増加剤。
（３）青大豆の溶媒抽出物を含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
（４）青大豆の溶媒抽出物が水抽出物である（１）〜（３）のいずれかに記載の剤。
（５）青大豆の溶媒抽出物が含水エタノール抽出物である（１）〜（３）のいずれかに記載の剤。
（６）（１）〜（５）のいずれかに記載の剤を含有することを特徴とする、抗アレルギー用飲食品、飼料及び化粧料。

本発明により、安全・安価かつ簡便に日常的に継続して摂取することができ、かつ顕著な抗アレルギー作用を有し、花粉症、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎等の種々のアレルギー性疾患の予防及び／又は改善に有効な抗アレルギー剤が提供される。本発明の抗アレルギー剤は、細胞レベルでＩｇＥの産生を抑制し、Ｔｈ１−Ｔｈ２バランスをＴｈ１側に偏向させるため、経口摂取によって全身に行き渡らせても、または局所適用によっても効果を発揮する事ができるため、好ましくない作用は最小限に抑える事が可能であり、継続して効果を実感できるため、極めて有用である。

以下、本発明の好適な実施形態について具体的に説明する。
本発明において抗アレルギー作用とは、ヘルパーＴ細胞のＴｈ１−Ｔｈ２バランスをＴｈ１側に偏向（Ｔｈ１優位）することによって、Ｔｈ２側への偏向（Ｔｈ２優位）によって生じる様々な有害作用を予防、治療、減少又は緩和させる作用をいう。また本発明において抗アレルギー作用とは、ＩｇＥ抗体によって引き起こされる様々な有害作用を予防、治療、減少又は緩和させる作用をいう。さらには、Ｔｈ２優位な状態、又はＩｇＥ抗体によって肥満細胞等から遊離されるケミカルメディエーターによって引き起こされる、平滑筋の収縮、血管透過性の亢進、好中球の遊走、血小板の凝集等によって誘発される様々な症状を予防、治療、減少又は緩和させる作用も包含する。

また、本発明においては、ヘルパーＴ細胞のＴｈ１−Ｔｈ２バランスをＴｈ１側に偏向することから、腫瘍によって起こる免疫抑制状態を改善する作用、抗癌剤治療や放射線治療によって起こる免疫能低下状態を改善する作用、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の予防又は改善、各種細菌による感染症の予防又は治療、Ｉ型アレルギーに由来する各種症状の予防又は改善、及び加齢や病態に伴う免疫能低下の改善等の種々の症状、不具合の改善、健康の増進、滋養強壮の促進に有用である。

なお、Ｔｈ１−Ｔｈ２バランスは、Ｔｈ１細胞が分泌するＩＦＮ−γの発現量や分泌量と、Ｔｈ２細胞が分泌するＩＬ−４の発現量や分泌量を測定して対比する方法によって測定することができる。また、ＩｇＥ抗体によって引き起こされる作用については、直接血液中のＩｇＥ量を測定する方法や、ＩｇＥによって肥満細胞や好塩基球等から遊離されるヒスタミン等のケミカルメディエーター量を測定する方法等によって測定することができる。

本発明の抗アレルギー剤としては、有効成分として、青大豆の溶媒抽出物を含有するものが好ましい。大豆は畑の肉とも呼ばれ豊富に蛋白質を含有し、重要な栄養源として世界的に食されている数少ない食品の一つであり、本発明の青大豆の溶媒抽出物は安全で簡便に日常的に継続して摂取することができる。しかも本発明の抗アレルギー剤の有効成分は、青大豆から溶媒抽出のみの操作で簡便に取り出すことができるうえ、効果が高いため、経済的にも優れている。

本発明に用いられる青大豆は、一般的に食用に供される黄色大豆ではなく、完熟した後において青色〜青緑色〜緑色の外観をしたものを言い、青入道、ひたし豆、青仁大豆、双青、単一青、かおり豆、だだちゃ豆、みどり豆、アオバタ、青豆等と呼称されている。なお、青大豆には種皮のみ青色をした品種と、中身も全て青色をした品種があるが、後者がより好ましい。なお、枝豆として食されるものは黄色大豆の完熟前の青い色の実を茹でたものが多く、一般的であるが、これは本発明でいう青大豆には該当しない。

以下、本発明に用いられる青大豆の溶媒抽出物の製造方法について詳細に説明する。抽
出方法は特に制限されないが、上記のような青大豆をそのまま、あるいは切断または粉砕したもの、乾燥したもの、乾燥後粉砕したもの、圧搾抽出した搾汁等を、抽出溶媒中に浸漬、攪拌または還流等する方法、ならびに超臨界流体抽出法等の公知の方法を挙げることができる。

抽出に用いることができる溶媒は、好ましくは水又は有機溶媒が挙げられる。具体的には、水としては、純水、蒸留水、水道水、酸性水、アルカリ水、中性水等が挙げられ、有機溶媒としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール等の低級アルコール、および１,３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール等の室温で液体であるアルコール；ジエチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン；ヘキサン；ならびにクロロホルム等を挙げることができる。これらを単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせて用いてもよい。上記の有機溶媒の中では、操作性や環境性の点から、室温で液体であるアルコール、たとえば、炭素原子数１〜４の低級アルコールを用いるのが好ましく、残留溶媒による安全性の観点からはエタノールを用いるのがより好ましい。

本発明において有機溶媒には、有機溶媒にさらに水性成分が含まれている含水有機溶媒も包含される。抽出効率を高く保持する観点からは、上記含水有機溶媒中の水性成分の含有量は、通常８０体積％以下、好ましくは６５体積％以下、より好ましくは５０体積％以下であるのが望ましい。含水有機溶媒としては、好ましくは上記のようなアルコールにさらに水性成分が含まれている含水アルコール、より好ましくは含水エタノールが用いられる。

具体的な抽出方法としては、青大豆を、減圧、常圧あるいは加圧下で、室温あるいは加温した溶媒中に加え、浸漬や攪拌しながら抽出する方法、溶媒中で還流しながら抽出する方法等が挙げられる。その際、抽出温度は５℃から溶媒の沸点以下の温度とするのが適切であり、抽出時間は使用する溶媒の種類や抽出条件、含水有機溶媒の場合にはさらに水性成分含有量によっても異なるが、３０分〜７２時間程度とするのが適切である。還流操作により抽出を行う場合は、青大豆の抽出物が変性や熱分解を起こさないように低沸点の溶媒を用いるのが好ましい。また、二酸化炭素等を用いる超臨界流体抽出法により抽出操作を実施することもできる。

ついで、抽出液および残渣を含む混合物を、必要に応じて濾過あるいは遠心分離等に供し、残渣である固形成分を除去して抽出液を得る。なお、除去した固形成分を再度、抽出操作に供することもでき、さらにこの操作を何回か繰り返してもよい。

このようにして得られた抽出液をそのまま青大豆の溶媒抽出物として用いてもよく、さらに必要に応じて、濃縮あるいは凍結乾燥やスプレードライ等の方法により、乾燥、粉末化したものとして使用してもよい。

抽出液を乾燥する場合、具体的な乾燥方法は、青大豆の溶媒抽出物が変性や熱分解を起こさない条件下で行いうる方法あれば、どのような方法でもよく、例えば、必要に応じて賦形剤を添加し、濾過、遠心分離、遠心濾過、スプレードライ、スプレークール、ドラムドライ、真空乾燥、凍結乾燥等の方法が挙げられ、これらの方法を単独でまたは組み合わせて採用できる。

本発明の剤は、上記の工程によって得られた青大豆の溶媒抽出物を含有することを特徴とするが、これをそのまま単独で、あるいは医薬品、食品または飼料等の様々な形態にして継続的に摂取する、あるいは化粧料の形態にして継続的に適用すると、Ｔｈ１／Ｔｈ２
が増加し、ＩｇＥ量が低下するため、花粉症、アトピー症、自己免疫疾患等の様々な障害・疾患の予防及び／又は改善に有用である。また本発明の剤は、安全な青大豆を原料としているため、安全性が高く、また風味もよいことから、そのまま単独でも充分に経口摂取したり化粧料として適用することが可能であり、長期間の継続的投与が可能である。さらに様々な医薬品、食品、飼料の形態として長期間の継続的摂取も容易である。

本発明の剤は、通常の場合、上記の工程によって得られた青大豆の溶媒抽出物を乾燥質量基準として、成人１日当たり０.０１〜１００ｇの範囲で適用される。経口投与の場合、一般的な１日当たりの摂取量は、０.１〜５０ｇであるが、該抽出物は、安全性の高いものであるため、その摂取量をさらに増やすこともできる。１日当たりの摂取量は、１回で摂取してもよいが、数回に分けて摂取してもよい。

その際、上記の工程によって得られた青大豆の溶媒抽出物をそのまま単独で用いることもできるが、本発明の効果を阻害しない限り、後述する添加剤、他の公知の免疫賦活物質、免疫調節物質等を単独または複数組み合わせて配合してもよい。

本発明の剤を医薬組成物として用いる場合の剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、液剤、懸濁剤等の経口剤、吸入剤、坐剤等の経腸製剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤等の皮膚外用剤、点滴剤、注射剤等が挙げられる。これらのうちでは、経口剤が好ましい。

このような剤型は、有効成分である青大豆の溶媒抽出物に、慣用される添加剤、例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、アルコール、水、水溶性高分子、甘味料、矯味剤、酸味料等を剤型に応じて配合し、常法に従って製造することができる。なお、液剤、懸濁剤等の液体製剤は、服用直前に水または他の適当な媒体に溶解または懸濁する形であってもよく、また錠剤、顆粒剤の場合には周知の方法でその表面をコーティングしてもよい。

本発明に係る医薬組成物における青大豆の溶媒抽出物の含有量は、その剤型により異なるが、乾燥質量を基準として、通常は、０.００１〜９９質量％、好ましくは０.０１〜８０質量％の範囲であり、上述した成人１日当たりの摂取量を摂取できるよう、１日当たりの投与量が管理できる形にすることが望ましい。

本発明の剤を食品組成物として調製する場合、その形態は特に制限されず、健康食品、機能性食品、特定保健用食品等の他、本発明の剤を配合できる全ての食品が含まれる。また、本発明において食品には飲料も包含される。具体的には、錠剤、チュアブル錠、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、ドリンク剤、経管経腸栄養剤等の流動食等の各種製剤形態とすることができる。製剤形態の食品組成物は、医薬製剤と同様に製造することができる。さらに食品組成物は、緑茶、ウーロン茶や紅茶等の茶飲料、清涼飲料、ゼリー飲料、スポーツ飲料、乳飲料、炭酸飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料、発酵乳飲料、粉末飲料、ココア飲料、精製水等の飲料、バター、ジャム、ふりかけ、マーガリン等のスプレッド類、マヨネーズ、ショートニング、カスタードクリーム、ドレッシング類、パン類、米飯類、麺類、パスタ、味噌汁、豆腐、牛乳、ヨーグルト、スープまたはソース類、菓子（たとえばビスケットやクッキー類、チョコレート、キャンディ、ケーキ、アイスクリーム、チューインガム、タブレット）等として調製してもよい。

本発明に係る食品組成物としては、家畜、競走馬、鑑賞動物等の飼料、ペットフード等も包含する。飼料は食品とほぼ同様の組成・形態で利用できることから、本明細書における食品に関する記載は、飼料についても同様に当てはめることが出来る。

食品組成物にはさらに、食品や飼料の製造に用いられる他の食品素材、各種栄養素、各種ビタミン、ミネラル、アミノ酸、各種油脂、種々の添加剤（たとえば呈味成分、甘味料、有機酸等の酸味料、界面活性剤、ｐＨ調整剤、安定剤、酸化防止剤、色素、フレーバー）等を配合して、常法に従って製造することができる。また、通常食されている食品に本発明の剤を配合することにより、本発明に係る食品組成物を製造することもできる。

本発明に係る食品組成物において、青大豆の溶媒抽出物の含有量は、食品の形態により異なるが、乾燥質量を基準として、通常は、０.００１〜８０質量％、好ましくは０.０１〜５０質量％、より好ましくは１〜５０質量％の範囲である。１日当たりの摂取量は、１回で摂取してもよいが、数回に分けて摂取してもよい。上述した、成人１日当たりの摂取量が飲食できるよう、１日当たりの摂取量が管理できる形にするのが好ましい。

本発明の剤は、安全性が高いため、化粧料組成物として調製することもできる。本発明に係る化粧料組成物は、継続的に適用することができるため、特にアトピー性皮膚炎を予防及び／又は改善するために有効である。

本発明に係る化粧料を調製する場合、青大豆の溶媒抽出物をそのまま化粧料としてもよく、または青大豆の溶媒抽出物を汎用の方法で配合し、乳液、化粧液、クリーム、ローション、エッセンス、パックおよびシート、ファンデーション、おしろい、頬紅、口紅、アイシャドー、アイライナー、マスカラ、洗顔料、皮膚洗浄料、ゲル剤、ジェル剤、美肌剤、ボディシャンプー等の洗浄料、シャンプー、リンス等の毛髪化粧料、頭髪料、ヘアートリートメント、養毛剤、浴用剤、軟膏、医薬部外品、あぶら取り紙等の形態の化粧料組成物を調製してもよい。

本発明に係る化粧料組成物は、青大豆の溶媒抽出物のほかに、所望する剤型に応じて従来公知の賦形剤や香料を初め、油脂類、界面活性剤、防腐剤、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子、増粘剤、顔料等の粉末成分、紫外線防御剤、保湿剤、酸化防止剤、ｐＨ調節剤、洗浄剤、乾燥剤、乳化剤等を適宜配合して、常法に従って製造することができる。

本発明に係る化粧料組成物における青大豆の溶媒抽出物の含有量は、特に限定されないが、乾燥質量を基準として通常は、０.００１〜８０質量％、好ましくは０.０１〜５０質量％の範囲内である。

さらに本発明の剤、食品、飼料及び化粧料には、上記以外にたとえば、共役リノール酸、タウリン、グルタチオン、カルニチン、クレアチン、コエンザイムＱ、グルクロン酸、グルクロノラクトン、トウガラシエキス、ショウガエキス、カカオエキス、ガラナエキス、ガルシニアエキス、テアニン、γ−アミノ酪酸、カプサイシン、カプシエイト、各種有機酸、フラボノイド類、ポリフェノール類、カテキン類、キサンチン誘導体、フラクトオリゴ糖等の難消化性オリゴ糖、ポリビニルピロリドン等を配合してもよい。

それら添加剤の配合量は、組成物の形態、添加剤の種類および所望すべき摂取量に応じて適宜決められるが、本発明の剤、食品、飼料及び化粧料中、０.０１〜７０質量％の範囲内であり、好ましくは０.１〜５０質量％の範囲内である。

本発明によれば、Ｔｈ１／Ｔｈ２を増加させ、ＩｇＥ量を低下させることにより、花粉症、アトピー、自己免疫疾患等の種々のアレルギー疾患を予防及び／又は改善することができる。さらに本発明で用いる青大豆の溶媒抽出物は、副作用がなく、風味がよく簡便に摂取可能で長期間の継続的摂取が容易である。

また、本発明の剤を、食品、飼料、化粧料もしくは医薬組成物として、上述したような
有効量で投与することにより、種々の感染症、花粉症、アトピー、自己免疫疾患の予防及び／又は改善方法を提供することができる。
以下、実施例に基づいて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例のみに限定されるものではない。

［実施例１］水抽出物の製造
青大豆を破砕したもの１０ｇに水１００ｍＬを加え、９０℃で６０分間加熱して抽出を行った。濾過して不溶物を除去し、水を蒸発させて粉末２.２ｇを得た。

［実施例２］含水エタノール抽出物の製造
青大豆を破砕したもの１０ｇに含水エタノール（エタノール：水＝９５：５）１００ｍＬを加え、室温で２４時間振とう（１００ｒｐｍ）して抽出を行った。濾過して不溶物を除去し、溶媒を蒸発させて粉末１.２ｇを得た。

［実施例３］水抽出物の製造
青大豆（エチゴミドリ）を破砕したもの１ｋｇに水１２Ｌを加え、９５℃で６０分間加熱して抽出を行った。遠心分離して沈殿を除去し、上清を濾過して不溶物を除去し、凍結乾燥して粉末３４６ｇを得た。

［比較例１］
実施例２と同様にして、大豆（黄色大豆）、黒大豆、赤えんどう、レッドキドニー、カルバソーから含水エタノールを用いて抽出を行い、それぞれ粉末を得た。

［比較例２］黄大豆の水抽出物の製造
黄大豆（フクユタカ）を破砕したもの４００ｇに水４Ｌを加え、９５℃で６０分間加熱して抽出を行った。遠心分離して沈殿を除去し、上清を濾過して不溶物を除去し、凍結乾燥して粉末１４５ｇを得た。

［試験例１］ＩｇＥ低下作用
マウス（Balb／c、♂）に抗原溶液１００μＬ（卵白アルブミン（以下、ＯＶＡという）１μｇとアジュバント（水酸化アルミニウム）２ｍｇを懸濁液としたもの）を腹腔内投与（感作１回目）し、１週間後に再度、上記懸濁液を１００μＬを腹腔内投与（感作２回目）した。
２回目の感作後にマウスの尾部より採血し、血中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ量を酵素抗体法による測定キット（ＤＳマウスＩｇＥ ＥＬＩＳＡ（ＯＶＡ）；大日本住友製薬製）を用いて測定し、ＩｇＥ量に偏りが無いように、コントロール群と青大豆投与群の２群に群分けした。
試験食として、コントロール群にはＡＩＮ−７６飼料（表１）を与え、青大豆投与群には、実施例２の青大豆含水エタノール抽出物を５％含有するＡＩＮ−７６飼料を与えて飼育した。試験食の投与開始日を０日とし、０、７、１６日後に尾部から採血を行い、血中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ量を測定した。その結果を表２に示す。

表２から明らかなように、本発明の抗アレルギー剤により、ＯＶＡにより感作された血液中のＩｇＥ増加量が低下することがわかる。

［試験例２］ＩｇＥ低下作用
マウス（Balb／c、♂、６週齢）に抗原溶液２００μＬ（ＯＶＡ１μｇとアジュバント（水酸化アルミニウム）２ｍｇを懸濁液としたもの）を腹腔内投与（感作１回目）し、２週間後に再度、上記懸濁液を２００μＬを腹腔内投与（感作２回目）した。
２回目の感作１週間後にマウスの尾部より採血し、血中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ量を酵素抗体法による測定キット（ＤＳマウスＩｇＥ ＥＬＩＳＡ（ＯＶＡ）；大日本住友製薬製）を用いて測定し、血清ＩｇＥ量に偏りが無いように、コントロール群、青大豆水抽出物（実施例３）投与群、黄大豆水抽出物（比較例２）の３群に群分けした。
群分け日を０日とし、２日後から試験食として、コントロール群には表１に示すＡＩＮ−７６飼料を与え、試験群には実施例３、比較例２の抽出物をそれぞれ飼料中５％の含有量となるよう添加した飼料を与えて飼育した。
１４日後に途中採血を行い、２８日後に解剖し、それぞれ血中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ量を測定した。また、他クラスの抗体に対する影響を見るために、２８日後のトータルＩｇＧ量を測定した。その結果を表３に示す。

表３から明らかなように、本発明の抗アレルギー剤（青大豆の抽出物）により、ＯＶＡにより感作された血液中のＩｇＥ増加量が顕著に抑制されること、その効果は黄大豆に比べて極めて優れている事がわかる。また、ＩｇＧ量についてはコントロール群と比べて変化がなく、本発明の抗アレルギー剤はＩｇＥ抗体に特異的に作用し、副作用を起こす事がないことがわかる。

［試験例３］ＩｇＥ低下作用
マウス（Balb／c、♂、６週齢）に抗原溶液２００μＬ（ＯＶＡ１μｇとアジュバント（水酸化アルミニウム）２ｍｇを懸濁液としたもの）を腹腔内投与（感作１回目）し、１週間後に再度、上記懸濁液を２００μＬを腹腔内投与（感作２回目）した。
２回目の感作１週間後にマウスの尾部より採血し、血中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ量を酵素抗体法による測定キット（ＤＳマウスＩｇＥ ＥＬＩＳＡ（ＯＶＡ）；大日本住友製薬製
）を用いて測定し、血清ＩｇＥ量に偏りが無いように、コントロール群、青大豆含水エタノール抽出物（実施例２）投与群、青大豆水抽出物（実施例１）の３群に群分けした。
試験食として、コントロール群には表１に示すＡＩＮ−７６飼料を与え、試験群には実施例１、２の抽出物をそれぞれ飼料中５％の含有量となるよう添加した飼料を与えて飼育した。試験食の投与開始日を０日とし、２４日後に解剖し、血中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ量を測定した。その結果を表４に示す。

表４から明らかなように、本発明の抗アレルギー剤により、ＯＶＡにより感作された血液中のＩｇＥ増加量が低下すること、特に水抽出物が高い効果を示すことがわかる。

［試験例４］ＩＦＮ−γ遺伝子発現増加作用
細胞株（Ｊｕｒｋａｔ細胞）を１０％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ社製）で３７℃、５％ＣＯ2の条件で培養を行った。細胞数３×１０⁵個／ｍＬになるよう培養液で希釈し、これを２４ウェルプレートに各ウェル１ｍＬで分注した。培養液に実施例２及び比較例の各種豆類の含水エタノール抽出物を終濃度５００μｇ／ｍＬとなるように１００μＬ添加し、４８時間培養した。
培養終了後、細胞内のＩＦＮ−γ遺伝子発現を定量的ＰＣＲ測定装置（Thermal cycler
Dice TP-800；宝バイオ製）を用いて測定した。その結果を、溶媒抽出物無添加のコントロールを１とする相対値で表５に示す。

表５から、青大豆以外の大豆はＩＦＮ−γにほとんど作用しないことが分かる。一方、本発明の抗アレルギー剤により、Ｔｈ１の指標であるＩＦＮ−γの発現が顕著に増加し、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスをＴｈ１側へ偏向させる作用を有することが分かる。

［試験例５］ＩＬ−４遺伝子発現抑制作用
試験例４と同様にして、細胞株（Ｊｕｒｋａｔ細胞）を培養し、２４ウェルプレートに分注して実施例２の青大豆含水エタノール抽出物を終濃度２５０、５００μｇ／ｍＬとなるように１００μＬ添加し、４８時間培養した。
培養終了後、細胞内のＩＬ−４遺伝子発現を定量的ＰＣＲ測定装置（Thermal cycler Dice TP-800；宝バイオ製）を用いて測定した。その結果を、溶媒抽出物無添加のコントロールを１とする相対値で表６に示す。

表６から、本発明の抗アレルギー剤により、Ｔｈ２の指標であるＩＬ−４の発現が顕著に低下し、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスをＴｈ１側へ偏向させる作用を有することが分かる。

［試験例６］ＩｇＥ、ＩＬ−４量抑制作用
マウス（Balb／c、♂）に抗原溶液１００μＬ（ＯＶＡ１μｇとアジュバント（水酸化アルミニウム）２ｍｇを懸濁液としたもの）を腹腔内投与（感作１回目）し、１４日後に再度、上記懸濁液１００μＬを腹腔内投与（感作２回目）した。
２回目の感作後にマウスの尾部より採血し、血中のＯＶＡ特異的ＩｇＥ量を酵素抗体法による測定キット（ＤＳマウスＩｇＥ ＥＬＩＳＡ（ＯＶＡ）；大日本住友製薬製）を用いて測定し、ＩｇＥ量に偏りが無いように、コントロール群、青大豆投与群と大豆投与群の３群に群分けした。
試験食として、コントロール群にはＡＩＮ−７６飼料を与え、青大豆投与群には、実施例２の青大豆含水エタノール抽出物を５％含有するＡＩＮ−７６飼料を与え、大豆投与群には、比較例１の大豆含水エタノール抽出物を５％含有するＡＩＮ−７６飼料を与えて飼育した。
試験食の投与開始日を０日とし、３週間後にパイエル板のＩＬ−４遺伝子発現量を定量的ＰＣＲ測定装置（Thermal cycler Dice TP-800；宝バイオ製）を用いて測定した。その結果を溶媒抽出物無添加のコントロールを１とする相対値で表７に示す。
また、脾臓細胞を採取し、７２時間培養して培養上清のＯＶＡ特異的ＩｇＥ量を、酵素抗体法による測定キット（ＤＳマウスＩｇＥ ＥＬＩＳＡ（ＯＶＡ）；大日本住友製薬製）を用いて測定した。その結果を表８に示す。

表７から、本発明の抗アレルギー剤により、青大豆以外の大豆に比べてＴｈ２の指標であるＩＬ−４の発現が顕著に低下し、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスをＴｈ１側へ偏向させる作用を有することが分かる。同様に、表８から、本発明の抗アレルギー剤により、青大豆以外の大豆に比べて、ＯＶＡにより感作された血液中のＩｇＥ増加量が低下することがわかる。

［実施例４］錠剤の製造
実施例１と同様にして得られた青大豆の水抽出物８４ｇ、結晶セルロース（旭化成）１０ｇおよびポリビニルピロリドン（ＢＡＳＦ）５ｇを混合し、これにエタノール３０ｍＬを添加して、湿式法により常法にしたがって顆粒を製造した。この顆粒を乾燥した後、ステアリン酸マグネシウム１.２ｇを加えて打錠用顆粒末とし、打錠機を用いて打錠し、１錠が１ｇの錠剤１００個を製造した。

［実施例５］顆粒剤の製造
実施例２と同様にして得られた青大豆の含水エタノール抽出物１００ｇ、乳糖（ＤＭＶ）１００ｇおよび結晶セルロース（旭化成）４０ｇを混合し、これにエタノール１３０ｍＬを練合機に添加し、通常の方法により５分間練合した。練合終了後、１０メッシュで篩過し、乾燥機中にて５０℃で乾燥した。乾燥後、整粒し、顆粒剤２４０ｇを得た。

［実施例６］シロップ剤の製造
精製水４００ｇを煮沸し、これをかき混ぜながら、白糖７５０ｇおよび実施例１と同様にして得られた青大豆の水抽出物１００ｇを加えて溶解し、熱時に布ごしし、これに精製水を加えて全量を１０００ｍＬとしてシロップ剤を製造した。

［実施例７］流動食の製造
約６５℃の純水７００ｇにカゼインナトリウム（ＤＭＶ）４０ｇ、マルトデキストリン（三和デンプン）１６０ｇおよび実施例２と同様にして得られた青大豆の含水エタノール抽出物５０ｇを添加して溶解させ、ついでビタミンミックスおよび微量ミネラルの各成分混合液を添加した。得られた混合液をホモミキサーに投入し、約８,０００ｒｐｍにて１５分間粗乳化した。得られた乳化液を約２０℃に冷却し、香料を添加後、最終メスアップを行い、この液をパウチへ本液２３０ｇ充填後、窒素置換を行いながらパウチを密封し、１２１℃で１５分間殺菌を行って流動食を得た。

［実施例８］パンの製造
小麦粉（強力粉）１６０ｇとドライイースト２ｇを混合した。これとは別に、実施例１と同様にして得られた青大豆の水抽出物５ｇ、砂糖２５ｇ、食塩３ｇ、脱脂粉乳６ｇを温湯７０ｇに溶かし、鶏卵１個を添加してよく混合した。これを上記の小麦粉とドライイーストの混合物に加え、よく手でこねた後、バター約４０ｇを加えてさらによくこね、２０個のロールパン生地を作り、次いで、これらのパン生地を発酵させた後、表面に溶き卵を塗り、オーブンにて１８０℃で約１５分焼き、ロールパンを作成した。

［実施例９］菓子の製造
マーガリンと砂糖を混合してミキサーを用いてよく攪拌し、ホイップを調製した。これに半量の全卵を添加してクリーム状とした。これに実施例３で得られた青大豆の水抽出物を加え、軽い混合をして生地を作製した。生地を成形し、オーブンで１５０℃にて２５分間焼成し、菓子を作成した。

［実施例１０］菓子の製造
全卵を泡立て器でほぐし、砂糖９０ｇ分の甘味料を入れてよく混合した。これに実施例３で得られた青大豆の水抽出物１０ｇ、小麦粉４０ｇとベーキングパウダーを加え、攪拌混合し、さらにバター及びラム酒を加えてよく混合し、生地を作成した。生地を型に入れ、オーブンで１７０℃にて１５分間焼成し、菓子を作成した。

［実施例１１］レトルトご飯の製造
お米２合を用いて一般的な水量に対し、実施例３で得られた青大豆の水抽出物２ｇを加えて炊飯し、これを慣用の方法に従ってレトルト用パックに充填した後、窒素置換を行いながら密封し、１２１℃で１５分間殺菌を行ってレトルトご飯を得た。

［実施例１２］パスタ用ソースの製造
パスタ用のミートソース一人前（１５０ｇ）を鍋に入れ、これに実施例２と同様にして得られた青大豆の含水エタノール抽出物１ｇを加えて加温混合した。このソースをパウチへ充填した後、窒素置換を行いながらパウチを密封し、１２１℃で１５分間殺菌を行って、パスタ用ミートソースを得た。

［実施例１３］野菜ジュースの製造
市販の野菜ジュースに実施例２と同様にして得られた青大豆の含水エタノール抽出物を５質量％ になるよう添加・混合し、野菜ジュースを調製した。

［実施例１４］コンソメスープの製造
タマネギ１００ｇ、ニンジン１００ｇ、長ネギ１００ｇ、セロリ５０ｇ、およびトマト１００ｇの各スライスを鍋に入れ、ここに牛の挽き肉５００ｇ、卵の白味２個分、ビーフブイヨン１ｋｇを加え、火にかけて沸騰したら火を弱め、表面に浮いてきたアクや脂肪分を除去しながら弱火で１時間煮て、実施例１と同様にして得られた青大豆の水抽出物５０ｇを加えてさらに３０分間煮て、布でこし、コンソメスープを得た。

［実施例１５］軟膏剤の製造（質量％）

Ｂを７０℃で加熱溶解しながら混合し油相とする。Ａを７０℃で加熱溶解しながら混合し、これにＢの油相を加えて混合乳化し、その後Ｃを加えながら冷却処理をしてよく混合し、軟膏を得た。

Claims (3)

1. 青大豆の水抽出物を含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
2. ＩｇＥ産生を抑制する請求項１記載の抗アレルギー剤。
3. Ｔｈ１／Ｔｈ２を増加する請求項１記載の抗アレルギー剤。