JP6296650B2 - 免疫疾患に対する医薬組成物 - Google Patents
免疫疾患に対する医薬組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6296650B2 JP6296650B2 JP2014050077A JP2014050077A JP6296650B2 JP 6296650 B2 JP6296650 B2 JP 6296650B2 JP 2014050077 A JP2014050077 A JP 2014050077A JP 2014050077 A JP2014050077 A JP 2014050077A JP 6296650 B2 JP6296650 B2 JP 6296650B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- cells
- pharmaceutical composition
- disease
- type
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 title claims description 61
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 55
- 108010048507 poliovirus receptor Proteins 0.000 claims description 201
- 102100029740 Poliovirus receptor Human genes 0.000 claims description 181
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 86
- 208000010247 contact dermatitis Diseases 0.000 claims description 43
- 206010012442 Dermatitis contact Diseases 0.000 claims description 23
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 claims description 23
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 claims description 19
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 13
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 13
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 claims description 13
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 9
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims description 6
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 5
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 claims description 4
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 claims description 4
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 claims description 4
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 claims description 4
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 claims description 4
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 claims description 4
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 4
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 claims description 3
- 241000721454 Pemphigus Species 0.000 claims description 3
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000031981 Thrombocytopenic Idiopathic Purpura Diseases 0.000 claims description 3
- 206010043781 Thyroiditis chronic Diseases 0.000 claims description 3
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 claims description 3
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 claims description 3
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 claims description 3
- 229940046731 calcineurin inhibitors Drugs 0.000 claims description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 claims 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 claims 1
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 78
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 78
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 67
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 58
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 238000000034 method Methods 0.000 description 41
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 39
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 38
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 36
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 33
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 31
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 27
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 25
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 24
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 24
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 24
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 22
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 22
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 22
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 21
- 101000713602 Homo sapiens T-box transcription factor TBX21 Proteins 0.000 description 20
- 102100036840 T-box transcription factor TBX21 Human genes 0.000 description 20
- 102000006381 STAT1 Transcription Factor Human genes 0.000 description 19
- 108010044012 STAT1 Transcription Factor Proteins 0.000 description 19
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 19
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 19
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 19
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 17
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 17
- 102100038077 CD226 antigen Human genes 0.000 description 16
- 101000884298 Homo sapiens CD226 antigen Proteins 0.000 description 16
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 15
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 15
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 15
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 13
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 12
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 12
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 12
- 108010007457 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Proteins 0.000 description 11
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 11
- 102100024193 Mitogen-activated protein kinase 1 Human genes 0.000 description 11
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 11
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 11
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 11
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 11
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 11
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 11
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 11
- VYZAHLCBVHPDDF-UHFFFAOYSA-N Dinitrochlorobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(Cl)C([N+]([O-])=O)=C1 VYZAHLCBVHPDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 10
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 10
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 10
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 10
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 9
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- 230000034190 positive regulation of NF-kappaB transcription factor activity Effects 0.000 description 9
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 8
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 8
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 8
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 8
- 210000000068 Th17 cell Anatomy 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 7
- 108010052419 NF-KappaB Inhibitor alpha Proteins 0.000 description 7
- 102000018745 NF-KappaB Inhibitor alpha Human genes 0.000 description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- 208000037883 airway inflammation Diseases 0.000 description 7
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 7
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 7
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 7
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000979342 Homo sapiens Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- 208000002029 allergic contact dermatitis Diseases 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 6
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 5
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 5
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 5
- 206010014025 Ear swelling Diseases 0.000 description 4
- 101001066288 Gallus gallus GATA-binding factor 3 Proteins 0.000 description 4
- 101000819111 Homo sapiens Trans-acting T-cell-specific transcription factor GATA-3 Proteins 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 4
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 4
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 4
- 102100021386 Trans-acting T-cell-specific transcription factor GATA-3 Human genes 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 4
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 4
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 4
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 4
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 4
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000024949 interleukin-17 production Effects 0.000 description 4
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 4
- 208000002440 photoallergic dermatitis Diseases 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 3
- 101000586618 Homo sapiens Poliovirus receptor Proteins 0.000 description 3
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000863881 Mus musculus Sialic acid-binding Ig-like lectin 5 Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108091008778 RORγ2 Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 3
- 102000005747 Transcription Factor RelA Human genes 0.000 description 3
- 108010031154 Transcription Factor RelA Proteins 0.000 description 3
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 3
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 3
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 3
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 3
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 3
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 206010055128 Autoimmune neutropenia Diseases 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 206010010744 Conjunctivitis allergic Diseases 0.000 description 2
- 206010013700 Drug hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 2
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 2
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 2
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 2
- 101100013967 Mus musculus Gata3 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 description 2
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 2
- 208000024998 atopic conjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 2
- 201000005311 drug allergy Diseases 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBCZOTMMGHGTPH-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCOCCO)C=C1 LBCZOTMMGHGTPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 6-[3-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-3-oxopropyl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)C(CCC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)=O DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 6alpha-methylprednisolone Chemical compound C([C@@]12C)=CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@](O)(C(=O)CO)CC[C@H]21 VHRSUDSXCMQTMA-PJHHCJLFSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 229940122739 Calcineurin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710192106 Calcineurin-binding protein cabin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100024123 Calcineurin-binding protein cabin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150106931 IFNG gene Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000016844 Immunoglobulin-like domains Human genes 0.000 description 1
- 108050006430 Immunoglobulin-like domains Proteins 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 238000012218 Kunkel's method Methods 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- HZQDCMWJEBCWBR-UUOKFMHZSA-N Mizoribine Chemical compound OC1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HZQDCMWJEBCWBR-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 101001043827 Mus musculus Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 101710138747 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 229940089416 Serine/threonine phosphatase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 206010047924 Wheezing Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003092 anti-cytokine Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000781 anti-lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- -1 antibody drugs Substances 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 210000000285 follicular dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 244000000056 intracellular parasite Species 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 208000001875 irritant dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 229960004584 methylprednisolone Drugs 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 229950000844 mizoribine Drugs 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960003816 muromonab-cd3 Drugs 0.000 description 1
- RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1C\C=C(/C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N 0.000 description 1
- 229960004866 mycophenolate mofetil Drugs 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005937 nuclear translocation Effects 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000001314 paroxysmal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000007578 phototoxic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 208000019585 progressive encephalomyelitis with rigidity and myoclonus Diseases 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000010379 pull-down assay Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 229940016590 sarkosyl Drugs 0.000 description 1
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M sodium lauroyl sarcosinate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC([O-])=O KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001967 tacrolimus Drugs 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000029069 type 2 immune response Effects 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Th1細胞は主にIFN-γ、IL-12によって誘導され、IFN-γ、IL-2を産生し、マクロファージを活性化し、細胞内寄生菌の排除や炎症性疾患に関与している(非特許文献1:Murphy, K. M., and S. L. Reiner. 2002. Nat Rev Immunol 2: 933-944)。
Th2細胞は主にIL-4によって誘導され、IL-4、IL-5、IL-13などを産生し、寄生虫排除や好酸球主体のアレルギーに関与している。
Th17細胞は主にIL-6とTGF-βによって誘導され、IL-17A/FやIL-22を産生し、主に細胞外細菌及び真菌の排除、自己免疫疾患などに関与しているが、慢性炎症性疾患やアレルギーにも関与しているという報告もあり、その機能は多岐に渡ると考えられている(非特許文献2:Bettelli, E. et al. 2008. Nature 453: 1051-1057)。
TregはTGF-βによって誘導され、TGF-βやIL-10を産生し、様々なエフェクター細胞に作用することにより、免疫応答の抑制に関与している。
例えば、IV型アレルギーである接触性皮膚炎(contact hypersensitivity; CHS)は、金属イオンなどの様々な化学物質がハプテンとなり、Th1細胞が病態形成に関わる疾患の一つである(非特許文献3:Krasteva, M. et al. 1999. EJD 9: 65-76)。
自己免疫疾患やアレルギーは、その発症のトリガーや病態形成の分子メカニズムについては不明な点が多く、十分な解明がなされていない。そのため、これらの治療には対症療法が一般的であり、細胞表面分子やシグナル伝達因子など病態形成の基盤となる分子メカニズムを標的とした根本治療の確立には至っていないのが現状である。
すなわち、本発明は以下の通りである。
(2)免疫疾患がTh1型又はTh2型免疫疾患である、上記(1)に記載の医薬組成物。
(3)Th1型免疫疾患が、Th1型アレルギー疾患、自己免疫疾患、移植による拒絶反応及び移植片対宿主病からなる群から選ばれる少なくとも1種である、上記(2)に記載の医薬組成物。
(4)Th1型アレルギー疾患が、接触性皮膚炎、Th1型気管支喘息及びTh1型アトピー性皮膚炎からなる群から選ばれる少なくとも1種である、上記(3)に記載の医薬組成物。
(5)自己免疫疾患が、関節リウマチ、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病、クローン病、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス、乾癬、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性好中球減少症、重症筋無力症、天疱瘡、慢性甲状腺炎、バセドウ病、自己免疫性肝炎及びグッドパスチャー症候群からなる群から選ばれる少なくとも1種である、上記(3)に記載の医薬組成物。
(6)Th2型免疫疾患が、Th2型気管支喘息、Th2型アトピー性皮膚炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎、蕁麻疹、アレルギー性胃腸炎、食物アレルギー及び薬物アレルギーからなる群から選ばれる少なくとも1種である、上記(2)に記載の医薬組成物。
(7)CD155がCD4+ T細胞上に存在するものである、上記(1)に記載の医薬組成物。
(8)抗体がモノクローナル抗体である、上記(1)に記載の医薬組成物。
(9)抗体が、キメラ抗体、ヒト型化抗体又はヒト化抗体である、上記(8)に記載の医薬組成物。
(10)少なくとも1種の免疫抑制剤と併用投与するための、上記(1)〜(9)のいずれかに記載の医薬組成物。
(11)少なくとも1種の免疫抑制剤が、ステロイド、カルシニューリン阻害薬、代謝拮抗型免疫抑制剤、抗体医薬及びアルキル化剤からなる群から選択される少なくとも1種の免疫抑制剤である、上記(10)に記載の医薬組成物。
本発明は、CD155に対する抗体又はその断片を含む、免疫疾患に対する医薬組成物であり、免疫疾患の治療又は予防に有用なものである。
CD155は、CD8+ T細胞などに存在するDNAM-1のリガンドとしての機能は知られていたが、CD4+ T細胞における受容体としての機能については明らかにされていなかった。
本発明者は、CD4+ T細胞上に存在するCD155の受容体としての機能に着目し、詳細な検討を行った。その結果、驚くべきことに、CD155はCD4+ナイーブT細胞からTh1細胞への分化誘導に寄与していることを見出した。また、本発明者は、CD155は生体内でTh1型免疫応答を正に制御し、その結果としてTh2型免疫応答を負に制御し、Th1型免疫疾患の増悪及びTh2型免疫疾患の抑制に関与していることを見出した。そして、本発明者は、CD155に対する抗体を用いることにより、Th1/Th2バランスを制御し、Th1型免疫疾患及びTh2型免疫疾患を含む幅広い免疫疾患の治療及び/又は予防が可能であることを見出した。例えば、CD155とリガンドとの結合を阻害する抗CD155抗体(阻害抗体)を用いることにより、Th1/Th2バランスがTh2に傾き、Th1型免疫疾患を治療又は予防することができる。他方、CD155を活性化するアゴニスト作用を有する抗CD155抗体(アゴニスト抗体)を用いることにより、Th1/Th2バランスがTh1に傾き、Th2型免疫疾患を治療又は予防することができる。
本発明はこのような知見に基づき完成されたものである。
本発明において、CD155は、CD4+ナイーブT細胞からTh1細胞への分化を誘導するとともに、Th1型免疫疾患の病態(症状)の悪化に関与するタンパク質であることが見出された。また、CD155は生体内においてTh2型免疫疾患を抑制していることが見出された。
本発明におけるCD155は、膜結合型(膜型)タンパク質であることが好ましく、免疫細胞上に存在(発現)するものが好ましい。免疫細胞としては、例えば、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、B細胞、抗原提示細胞(マクロファージ、樹状細胞等)等が挙げられる。本発明において、CD155はCD4+ T細胞上に存在するものが好ましい。
本発明におけるCD155は、任意の哺乳動物に由来するものであってもよく、そのような哺乳動物としては、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、サル、ヒトが挙げられ、好ましくは、マウス、ラット、ヒトであり、より好ましくはヒトである。
ラットCD155のアミノ酸配列:NP_058772.2(配列番号4)
ヒトCD155のアミノ酸配列:NP_006496.3(配列番号6)
マウスCD155をコードするDNAの塩基配列:NM_027514.2(配列番号1)
ラットCD155をコードするDNAの塩基配列:NM_017076.2(配列番号3)
ヒトCD155をコードするDNAの塩基配列:NM_006505.3(配列番号5)
(a) 配列番号2、4若しくは6で表されるアミノ酸配列を含むタンパク質
(b) 配列番号2、4若しくは6で表されるアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が、欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列を含み、かつDNAM-1と結合する活性を有するタンパク質
(c)配列番号2、4若しくは6で表されるアミノ酸配列に対して80%以上の相同性を有するアミノ酸配列を含み、かつDNAM-1と結合する活性を有するタンパク質
また、「配列番号2、4若しくは6で表されるアミノ酸配列において、1若しくは数個のアミノ酸が、欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列」としては、例えば、
(i) 配列番号2、4又は6で表されるアミノ酸配列中の1〜10個(例えば、1〜5個、好ましくは1〜3個、より好ましくは1〜2個、さらに好ましくは1個)のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、
(ii) 配列番号2、4又は6で表されるアミノ酸配列中の1〜10個(例えば、1〜5個、好ましくは1〜3個、より好ましくは1〜2個、さらに好ましくは1個)のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、
(iii) 配列番号2、4又は6で表されるアミノ酸配列に1〜10個(例えば、1〜5個、好ましくは1〜3個、より好ましくは1〜2個、さらに好ましくは1個)のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、
(iv) 上記(i)〜(iii) の組合せにより変異されたアミノ酸配列
などが挙げられる。
本発明において、CD155に対する抗体とは、上記CD155と特異的に結合する抗体を意味する。CD155に対する抗体はポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよいが、好ましくはモノクローナル抗体である。また、CD155に対する抗体には、CD155とリガンドとの結合を阻害する阻害抗体、及びCD155を活性化するアゴニスト作用を有する抗体(アゴニスト抗体)の両者が含まれる。本発明者は、CD4+ T細胞上に存在するCD155のリガンドがDNAM-1であることを見出している。
本発明において、「特異的に結合する」とは、CD155には結合する(反応する)が、CD155以外には結合しない(反応しない)ことを意味する。結合が特異的か否かであることの確認は、免疫学的手法、例えばELISA法、ウエスタンブロット法、又は免疫組織学的染色等によって確認することができる。
(1)抗原の調製
CD155は、本発明の抗体を作製するための免疫原として使用される。
免疫原としてCD155を用いる場合、CD155の全長配列のうち一部のアミノ酸配列を含むペプチドを使用することもできる。抗原又は免疫原として用いられるCD155及び変異の導入方法等の説明については、上記「2.CD155」に記載した通りである。
前記のようにして作製したCD155又は部分ペプチドをそれ自体で、あるいは担体、希釈剤と共に非哺乳動物、例えばウサギ、イヌ、モルモット、マウス、ラット、ヤギ等に投与することにより免疫する。抗原の動物1匹当たりの投与量は、アジュバントを用いるときは0.1〜10 mgである。アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント(FCA)、フロイント不完全アジュバント(FIA)、水酸化アルミニウムアジュバント等が挙げられる。免疫は、主として静脈内、皮下又は腹腔内等に注入することにより行われる。また、免疫の間隔は特に限定されず、数日から数週間間隔、好ましくは1〜2週間間隔で、2〜10回、好ましくは3〜5回免疫を行う。免疫の間隔は、当業者であれば得られる抗体価を勘案して設定することができる。3〜4回皮下免疫を行った時点で試採血を行い、抗体価を測定することが好ましい。血清中の抗体価の測定は、ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、EIA(enzyme immunoassay)、放射性免疫測定法(RIA; radioimmuno assay)等によって行うことができる。抗体価が十分上昇したことを確認した後、全採血し、通常行われる方法により抗体を分離精製することができる。分離精製は、硫安塩析法、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等の公知の方法を適宜選択して、又はこれらを組み合わせることにより、精製することができる。具体的には、目的の抗体を含有する血清を、CD155以外のタンパク質を結合したカラムに通し、素通り画分を採取することにより、CD155に対する特異性を向上させたポリクローナル抗体を得ることができる。
(i) 抗体産生細胞の採取
ポリクローナル抗体の作製と同様に、CD155又は部分ペプチドをそれ自体で、あるいは担体及び希釈剤と共に非哺乳動物に投与することにより免疫する。動物1匹当たりの抗原の投与量、用いられるアジュバントの種類、免疫方法、免疫の間隔はポリクローナル抗体の作製と同様である。最終の免疫日から1〜30日後、好ましくは2〜5日後に、抗体価の認められた個体を選択し抗体産生細胞を採集する。抗体産生細胞としては、脾臓細胞、リンパ節細胞、末梢血細胞等が挙げられるが、脾臓細胞又はリンパ節細胞が好ましい。
ハイブリドーマを得るため、抗体産生細胞とミエローマ細胞との細胞融合を行う。融合操作は既知の方法、例えばKohlerらの方法に従い実施できる。抗体産生細胞と融合させるミエローマ細胞として、マウスなどの動物の一般に入手可能な株化細胞を使用することができる。使用する細胞株としては、薬剤選択性を有し、未融合の状態ではHAT選択培地(ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジンを含む)で生存できず、抗体産生細胞と融合した状態でのみ生存できる性質を有するものが好ましい。ミエローマ細胞としては、例えばSP2/O-Ag14、PAI、P3U1、NSI/1-Ag4-1、NSO/1などのマウスミエローマ細胞株、YB2/0などのラットミエローマ細胞株などが挙げられる。
細胞融合処理後の細胞から目的とするハイブリドーマを選別する。その方法として、細胞懸濁液を、例えば10〜20%のウシ胎児血清含有RPMI-1640培地などで適当に希釈後、マイクロタイタープレート上に限界希釈法で計算上0.3 個/well程度まき、各ウェルにHAT培地などの選択培地を加え、以後適当に選択培地を交換して培養を行う。その結果、選択培地で培養開始後、10日前後から生育してくる細胞をハイブリドーマとして得ることができる。
樹立したハイブリドーマからモノクローナル抗体を採取する方法として、通常の細胞培養法又は腹水形成法等を採用することができる。細胞培養法においては、ハイブリドーマを10%ウシ胎児血清含有RPMI-1640培地、MEM培地又は無血清培地等の動物細胞培養培地中で、通常の培養条件(例えば37℃、5% CO2濃度)で7〜14日間培養し、その培養上清から抗体を取得する。腹水形成法の場合は、ミエローマ細胞由来の哺乳動物と同種系動物、例えばマウス(BALB/c)の腹腔内にハイブリドーマを約5×106 〜2×107個投与し、ハイブリドーマを大量に増殖させる。そして、1〜2週間後に腹水を採取する。上記抗体の採取方法において抗体の精製が必要とされる場合は、硫安塩析法、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、アフィニティークロマトグラフィーなどの公知の方法を適宜選択して、又はこれらを組み合わせることにより精製することができる。
本発明の抗体の好ましい態様の一つとして、遺伝子組換え抗体が挙げられる。遺伝子組換え抗体としては、限定はされないが、例えば、キメラ抗体、ヒト型化抗体及びヒト化抗体等が挙げられる。
また、本発明においては、ハイブリドーマ又は当該ハイブリドーマから抽出したDNA若しくはRNAなどを原料として、上述した周知の方法に準じてキメラ抗体、ヒト型化抗体、ヒト化抗体を作製することができる。
本発明で使用されるCD155に対する抗体の断片は、CD155に特異的に結合する。
抗体の断片は、本発明の抗体の一部分の領域を意味し、例えば、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、diabody(dibodies)、dsFv、scFv(single chain Fv)などが挙げられる。上記抗体断片は、本発明の抗体を目的に応じて各種タンパク質分解酵素で切断することにより得ることができる。
例えば、Fabは、抗体分子をパパインで処理することにより、F(ab')2は、抗体分子をペプシンで処理することによりそれぞれ得ることができる。また、Fab'は、上記F(ab')2のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することで得ることができる。
scFvの場合は、抗体のH鎖V領域及びL鎖V領域をコードするcDNAを取得し、scFvをコードするDNAを構築する。このDNAを発現ベクターに挿入し、当該発現ベクターを宿主生物に導入して発現させることにより、scFvを製造することができる。
diabodyの場合は、抗体のH鎖V領域及びL鎖V領域をコードするcDNAを取得し、ペプチドリンカーのアミノ酸配列の長さが8残基以下となるようにscFvをコードするDNAを構築する。このDNAを発現ベクターに挿入し、当該発現ベクターを宿主生物に導入して発現させることにより、diabodyを製造することができる。
dsFvの場合は、抗体のH鎖V領域及びL鎖V領域をコードするcDNAを取得し、dsFvをコードするDNAを構築する。このDNAを発現ベクターに挿入し、当該発現ベクターを宿主生物に導入して発現させることにより、dsFvを製造することができる。
結合親和性は、結合定数(KA)及び解離定数(KD)により決定することができる。親和性平衡定数(K)はKA/KDの比で表される。その結合親和性は、以下のようにして検出することができる。
結合親和性は、少なくとも1×10-10 Mの解離定数(KD)を有しており、この解離定数に対し、例えば2〜5倍、5〜10倍、10〜100倍、100〜1000倍又は1000〜10,000倍高い親和性を有する。具体的には、本発明の抗体は、CD155の結合親和性に関する解離定数(KD)が、1×10-10 M、5×10-11 M、1×10-11 M、5×10-12 M、1×10-12 M、5×10-13 M、1×10-13 M、5×10-14 M、1×10-14 M、5×10-15 M、又は1×10-15 Mであり、1×10-10 M〜1×10-13 Mであることがより好ましい。あるいはこれらのKDよりも低い値であり高親和性であってもよい。
ここで、親和性の測定対象となる抗体の解離定数(KD)が、本発明の抗体のKDの約1〜100倍以内であるときは、当該抗体は、本発明の抗体と実質的に同一であるとして本発明に含まれる。
結合定数(KA)及び解離定数(KD)は、表面プラスモン共鳴(SPR)を用いて測定することができ、結合率をリアルタイムで検出し、さらにモニタリングする公知の機器及び方法を採用することができる(例えばBiacore(登録商標)T200(GE Healthcare社)、ProteON XPR36 (Bio-Rad社)など)。
本発明の医薬組成物は、上記「3.CD155に対する抗体」に記載した抗体又はその断片を有効成分として含有するものであり、免疫疾患の予防又は治療用として使用され、当該予防又は治療に有効な医薬組成物である。
本発明者は、CD155が生体内でTh1型免疫応答を正に制御し、その結果としてTh2型免疫応答を負に制御し、Th1型免疫疾患の増悪及びTh2型免疫疾患の抑制に関与していることを見出した。そして、CD155とリガンドとの結合を阻害する抗CD155抗体(阻害抗体)を用いることにより、Th1型免疫疾患の治療又は予防が可能であり、他方、CD155を活性化するアゴニスト作用を有する抗CD155抗体(アゴニスト抗体)を用いることにより、Th2型免疫疾患の治療及び予防が可能であることを見出した。阻害抗体とアゴニスト抗体のいずれを用いるかは、当業者であれば対象となる患者の病態、治療又は予防の目的に応じて適宜選択することができる。
Th2型免疫疾患は、主にTh2細胞による免疫応答が関与する免疫疾患であればよく、Th2細胞に加えてTh1細胞及び/又はTh17細胞がさらに関与する疾患もこれに含まれる。Th2型免疫疾患にはIgEが関与する。
本発明において、「予防」とは、疾患の発症前に本発明の医薬組成物を被験者に接触させる(例えば、投与する)ことにより、接触させない場合に比べて、疾患の発症後の症状を軽減することを意味し、必ずしも発症を完全に抑制することを意味するものではない。
免疫疾患の「症状」としては、例えば、発赤、腫脹、発熱、疼痛、機能障害等の炎症に起因する症状、かゆみ、水泡、潰瘍(重症例)等が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明においては、CD155に対する抗体又はこれを含む医薬組成物を被験者に投与することにより、免疫疾患を治療又は予防することができる。すなわち、本発明の医薬組成物は、免疫疾患の治療又は予防方法に使用することができる。
本発明の医薬組成物は、免疫抑制剤の少なくとも1種と併用投与するために用いることができる。本発明の医薬組成物等と免疫抑制剤の少なくとも1種とを併用投与することにより、それぞれ単独で用いるよりもさらに優れた効果が期待される。優れた効果には、治療効果を維持しつつ従来よりも副作用を軽減するという効果が含まれる。
本発明において「併用」とは、本発明の医薬組成物等と免疫抑制剤の少なくとも1種とを、同時又は別々に投与することを意味する。「同時」とは、一つの投与スケジュールにおいて同一のタイミングで投与されることを意味し、投与の時分が完全に同一である必要はない。「別々」とは、一つの投与スケジュールにおいて異なるタイミングで投与されることを意味する。
本発明の併用療法に用いる医薬組成物及び免疫抑制剤の投与形態、投与経路、投与対象は特に限定されず、上記「4.医薬組成物」の記載に準じて適宜選択することができる。また、併用する薬剤の投与形態又は投与量が互いに異なっていてもよく、その併用する組み合わせにより、適宜調整することができる。
本発明の医薬組成物を免疫抑制剤と併用する場合は、投与量を適宜減らすことも可能である。従って、本発明の医薬組成物と免疫抑制剤との組合せにおいては、
(i) 本発明の医薬組成物の有効量と、免疫抑制剤の有効量、
(ii) 本発明の医薬組成物の有効量と、免疫抑制剤の非有効量、
(iii) 本発明の医薬組成物の非有効量と、免疫抑制剤の有効量、及び
(iv) 本発明の医薬組成物の非有効量と、免疫抑制剤の非有効量
の組合せを採用することができる。
医薬組成物及び免疫抑制剤の一方又は両者が非有効量の使用態様であっても、併用により薬理効果を発揮することができる場合は、そのような態様により併用投与することができる。
例えば、本発明のCD155に対する抗体と、免疫抑制剤とを併用する場合の割合は、限定されるものではないが、例えば、約1000〜1:1、好ましくは約100〜1:1、より好ましくは約10〜1:1である。
ステロイドとしては、例えば、メチルプレドニゾロン、ソルメドロールなどが挙げられる。カルシニューリン阻害薬としては、例えば、タクロリムス、シクロスポリン、シロリムスなどが挙げられる。代謝拮抗型免疫抑制剤としては、例えば、ミゾリビン、ミコフェノール酸モフェチル、アザチオプリン、メルカプトプリン、メトトレキサートなどが挙げられる。抗体医薬としては、例えば、ムロモナブCD3、抗リンパ球グロブリン(ALG)、パシリキシマブなどが挙げられる。アルキル化剤としては、例えばシクロフォスファミドなどが挙げられる。
(1)マウス
C57BL/6マウス及びBALB/cマウスは8〜12週齢を用い、Clea Japan, Inc (Tokyo, Japan) より購入した。C57BL/6背景及びBALB/cA背景CD155遺伝子欠損マウスはGunter Bernhardt博士らによって作製された(Maier, M. K. et al. 2007. Eur J Immunol 37: 2214-2225)。
IFN-γ遺伝子欠損マウスとRag-1遺伝子欠損マウスはJackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA) より購入した。いずれもSPF (specific pathogen free) の環境下にて飼育し、筑波大学生命科学動物資源センターの規約に従い実験を行った。
抗マウスCD3、CD4、CD8、CD62L、CD44、Siglec-F、CD11b、CD16/32、IFN-γ、IL-4、IL-17抗体及びアイソタイプコントロール抗体は、BD Bioscience (San Jose, CA, USA) より購入した。抗マウスT-bet、GATA-3抗体はeBioscience (San Diego, CA, USA) より購入した。抗リン酸化マウスERK、STAT1およびERK、STAT1、IκBα抗体はCell Signaling (Danvers, MA, USA) より購入した。抗マウスNFκB抗体はSanta Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA) より購入した。抗マウスβ-actin抗体はSigma Aldrich (St. Louis, MO, USA) より購入した。ELISAに用いた精製およびビオチン化抗マウスIFN-γ、IgE抗体はBD Bioscienceより、horseradish peroxidase (HRP) 標識ストレプトアビジン、抗ラットIgG、抗マウスIgG抗体はGE Healthcare Biosciences (Little Chalfont, UK) より購入した。
CD155に対する抗体(抗CD155抗体 (TX56))は、以下のようにして作製した。
マウスCD155を抗原として用いてWisterラットに免疫した後、10〜30日後に当該ラットから脾臓またはリンパ節を採取し、脾臓細胞またはリンパ節細胞とミエローマ細胞株とをペグチン等により融合し、さらに融合細胞から抗体産生ハイブリドーマをスクリーニングすることによりTX56産生ハイブリドーマを取得した。TX56産生ハイブリドーマをマウスの腹腔内に投与し、ハイブリドーマを大量に増殖させた。1〜2週間後に腹水を採取し、ラット抗マウスCD155抗体(TX56)として用いた。
本発明者らが作製した抗CD155抗体 (TX56)及び抗DNAM-1抗体 (TX42) のアイソタイプは、いずれもラットIgG2aである。またいずれもリガンドとの結合を阻害する抗体であり、生体内において免疫細胞を除去しない。抗CD155抗体 (TX56)の作製方法の詳細は、Tahara-Hanaoka S, et al. (2006) Blood 107: 1491-1496、Iguchi-Manaka A, et al. (2008) J Exp Med 205: 2959-2964、Nabekura T, et al. (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107: 18593-18598などに記載されている。
また、本実施例で用いたマウス抗ヒトCD155抗体(TX24)(Tahara-Hanaoka, S. et al. (2004) Int Immunol 16:533-538)は、抗原としてヒトCD155を用い、免疫動物としてマウスを用いた以外は上記TX56の作製方法と同様の方法により作製した。
リコンビナントマウスIL-2はBD Bioscienceより購入した。
洗浄液(2%ウシ胎児血清を加えたPBS)にて洗浄した細胞浮遊液を1×106個/サンプルに調整し、氷上で抗CD16/32抗体(2.4G2)0.5μgにてFcレセプターに対するブロックを10分行った後、一次抗体にて氷上で20分反応させ、次いで二次抗体にて氷上で20分反応させ染色を行った。細胞を洗浄液(2%ウシ胎児血清を加えたPBS)で洗浄後、フローサイトメトリー法にて解析を行った。フローサイトメーターはFACSCalibur (BD) を用いた。データ解析はCellquest Pro (BD) およびFloJo (Tree Star, OR, USA) を用いた。
C57BL/6N野生型マウスより脾細胞を採取し、0.75%塩化アンモニウム溶液にて溶血後、細胞を洗浄液(2%ウシ胎児血清を加えたPBS)にて洗浄し、MACS (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany) にてCD4+ T細胞をポジティブセレクションで得た。純度は95%以上である。CD4+ T細胞を、抗CD3抗体 (0.25μg/ml) と抗CD155抗体あるいはrat IgG2aアイソタイプコントロール (20μg/ml) を37℃で2時間プレートコートしたウェルに、5×104個ずつ播種し、10%ウシ胎仔血清(Biological Industries, Kibbutz Beit-Haemek, Israel)、50μM 2-メルカプトエタノール (Sigma)、100U/mlペニシリン/0.1mg/mlストレプトマイシン(Sigma)含有の、コンプリートRPMI (Sigma)(以下「培養メディウム」と称する)にて、37℃、5%CO2環境下にて培養した。CD4+ナイーブT細胞は、MACSで採取したCD4+細胞を抗CD4抗体、抗CD62L抗体で染色し、FACSAria (BD) にてCD4+CD62Lhighの分画をソーティングして得た。CD4+ナイーブT細胞は、抗CD3抗体 (1μg/ml) と抗CD155抗体あるいはrat IgG2a (20μg/ml) を37℃で2時間プレートコートしたウェルに2.5×105個ずつ播種し、リコンビナントマウスIL-2 (20 ng/ml) 含有培養メディウムで37℃、5%CO2環境下にて6日間培養した。
細胞内サイトカイン染色は、まず培養細胞をPMA/Ionomycin (Sigma) をそれぞれ終濃度50 ng/ml、500 ng/mlで37℃、4時間反応し、後半の2時間はBrefeodin A (Sigma) を終濃度10μg/mlで添加した。細胞を洗浄液に回収し、表面抗原抗体 (抗CD4-APC) で氷上で30分間反応させ染色を行い、ホルムアルデヒドで室温、30分間固定したのち、抗サイトカイン抗体を30 分間反応させ染色を行った。染色はFIX and PERMキット (Invitrogen) を用い、プロトコールに従い行った。転写因子は、細胞を洗浄液に回収後、表面抗原を染色し、細胞を固定したのちに抗転写因子抗体を反応させ染色を行った。染色はFoxp3 staining kit (eBioscience) を用いた。解析はフローサイトメトリーを用いた。
培養上清中のIFN-γ、IL-2濃度、血清中IgE濃度は、キャプチャー抗体およびビオチン化二次抗体、HRP標識ストレプトアビジンを用いたサンドイッチELISA法にて測定した。IL-4、IL-17のELISA用キットはそれぞれBD Bioscience、R&Dより購入し、キットの添付プロトコールに従い定量した。吸光度の測定にはSpectra Max M2 (Molecular Devices, Tokyo, Japan) を用いた。
MACSにて分離したマウス脾臓CD4+ T細胞を、抗CD3抗体 (0.25μg/ml) と抗CD155抗体あるいはrat IgG2a (20μg/ml) を37℃で2時間プレートコートした48穴プレート (STAT1の解析) あるいは6穴プレート (IκBα, NFκBの解析) に1.5×105あるいは1.2×106ずつ播種し、培養メディウムにて37℃、5%CO2環境下にて表記の時間刺激培養した。全細胞溶解液は細胞を溶解バッファー(1%NP-40、PMSF、アプロチニン、Na3VO4、セリン/スレオニンフォスファターゼインヒビター) を用いて4℃、2時間で溶解して得た。核抽出液、細胞質抽出液は、Nuclear Extract kit (Active Motif, Carlsbad, CA, USA) を用い、キットのプロトコールに従い調整した。全細胞溶解液、核抽出液、細胞質抽出液は非還元条件下でSDS-PAGEにて分離した。その後PVDFメンブレン (Immobilon-P, Millipore, Billerica, MA) に転写バッファー (25 mM Tris, 195 mM glycine, 20% methanol) 中で100 V、1時間で転写した。メンブレンは3%牛血清アルブミン(BSA) 含有のTBST (pH 8.0, 10 mM Tris-buffered salineに0.5% Tween 20を0.5 g/L MgCl2を添加した洗浄液) でブロッキングをした後、一次抗体を4℃、オーバーナイトで反応させ、TBSTで洗浄し、次いでHRP標識二次抗体を室温、1時間反応させた。メンブレンを洗浄した後、基質 (Super-Signal CL-HRP substrate, Thermo Fisher Scientific, Inc, Waltham, MA, USA) と反応させ、化学発光をLAS-3000 mini (FUJIFILM, Tokyo, Japan) で検出し解析した。リブロットするためにメンブレンをRestore Western Blot Stripping Buffer (Thermo Fisher Scientific, Inc) で処理しTBSTで洗浄した後、同様の方法で一次抗体、二次抗体反応、化学発光の検出を行った。
刺激培養を行った細胞を回収し、ISOGEN(NIPPON GENE, Tokyo, Japan)を用いてプロトコールに従いmRNAを抽出し、High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kits(Applied Biosystems, Carlsbad, CA, USA)を用いてプロトコールに従いcDNAを合成した。Platinum SYBR Green qPCR SuperMix-UDG(Invitrogen)を用いて、ABI 7500 fast(Applied Biosystems)にて解析を行った。プライマーは以下のものを用いた。
Tbx21 Reverse: 5’-GGGTGGACATATAAGCGGTTC-3’(配列番号8)
Gata3 Forward: 5’-TTATCAAGCCCAAGCGAAGG-3’(配列番号9)
Gata3 Reverse: 5’-CATTAGCGTTCCTCCTCCAGAG-3’(配列番号10)
RORc Forward: 5’-GGAGGACAGGGAGCCAAGTT-3’(配列番号11)
RORc Reverse: 5’-CCGTAGTGGATCCCAGATGACT-3’(配列番号12)
Foxp3 Forward: 5’-CCCATCCCCAGGAGTCTTG3’(配列番号13)
Foxp3 Reverse: 5’-ACCATGACTAGGGGCACTGTA-3’(配列番号14)
Actb Forward: 5’-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3’(配列番号15)
Actb Reverse: 5’-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3’(配列番号16)
PCRサイクル条件は、95℃にて10分変性後、95℃15秒、60℃1分にて40サイクル行った。
1-クロロ-2,4-ジニトロベンゼン (DNCB) (Sigma) を100%エタノール (Sigma)に溶解し5%とし、剃毛したC57BL/6N野生型およびCD155遺伝子欠損マウスの腹部に200μl塗布して感作を行った。5日後、1% DNCBをマウスの左耳、溶媒のエタノールを右耳にそれぞれ40μlずつ塗布し、チャレンジを行った。本明細書において、「チャレンジ」とは、ある抗原に感作されている個体に再び同じ抗原を接触させ、二次応答を誘発することを意味する。24時間後、耳介の厚さを計測した。また、病理組織解析のため、耳介を摘出した。Δ耳介の厚さ(thickness)(mm)は以下の方法で算出した。
Δ耳介の厚さ(thickness)(mm)=チャレンジした耳介の厚さ(mm)−チャレンジしていない耳介の厚さ(mm)
リンパ節の解析は、感作後5日目に鼠径および腋窩リンパ節を採取し、PMA/IONOで4時間刺激後、細胞内サイトカインをフローサイトメトリー法にて観察した。
0日目及び7日目に、100μgのOVAタンパク (Sigma) を水酸化アルミニウムゲル (Sigma)と1:1で混和し、BALB/cA野生型およびCD155遺伝子欠損マウスに腹腔内投与し感作を行った。14、15及び16日目にOVAタンパク10μg/PBSあるいはPBSのみを経鼻的に投与し、チャレンジを行った。18日目に、2% 血清入り洗浄液1 mlで気管支肺胞洗浄 (BAL) を3回行い、BAL液中の細胞分画をフローサイトメトリー法にて解析した。CD45+Siglec-F+CD11b+細胞を好酸球とし、好酸球の割合とBAL液中総血球数を乗じて総好酸球を算出した。また、18日目に、病理組織解析のため、肺を摘出した。血清IgE値は、7日目と14日目に採取した血清を用いて測定した。
耳介および肺はホルマリン固定、パラフィン包埋し、HE染色を行った。組織標本は顕微鏡BioRevo (KEYENCE, Osaka, Japan) を用いて観察した。
C57BL/6N野生型マウスに抗CD155モノクローナル抗体 (TX56) あるいはコントロール抗体 (rat Ig (MP Biomedicals, Solon, OH)) を、DNCBによる感作あるいはチャレンジの2時間前にそれぞれ1.0 mg、0.5 mg経静脈投与した。
統計学的解析はunpaired t-testを用いて行った。P<0.05を有意差ありと判定した。
(1)CD155のTh1分化誘導能の検討
CD155が、共刺激分子として細胞内にシグナルを伝える機能を持つことから、CD4+ T細胞の活性化だけではなく、CD4+ナイーブT細胞からCD4+エフェクターT細胞 (Th1/Th2/Th17細胞) への機能分化に関与している可能性を検討することとした。
CD4+ナイーブT細胞をマウスの脾臓より分離し、抗CD3と抗CD155抗体(TX56)で6日間刺激培養し、PMA/Ionomycinで4時間再刺激した後、細胞内サイトカインをフローサイトメトリー法にて観察した。Th1/Th2/Th17細胞への分化を細胞内サイトカインIFN-γ/IL-2/IL-17の産生で評価した。また、上記6 日間培養した細胞を抗CD3 抗体で再刺激し、48 時間後の培養上清中のサイトカイン産生をELISA にて測定した。
フローサイトメトリー解析の結果、CD3とCD155を刺激するとCD3単独刺激に比べてIFN-γの産生が亢進していた (図2A)。また培養上清中のIFN-γの濃度をELISAにて定量した結果、CD3とCD155を刺激した方がCD3単独刺激に比べIFN-γ産生が有意に亢進していた (図2B)。一方、IL-4、IL-17産生には影響はなかった (図2A, B)。
これらのことから、CD155がCD4+ T細胞のTh1分化誘導を促進していることが示された。
その結果、T-betの発現上昇およびGATA-3の発現低下が認められた (図3A)。また、フローサイトメトリー解析の結果、タンパクレベルでもT-betの発現上昇を認めた (図3B)。一方、RORγt、 Foxp3には影響を与えなかった (図3A)。これらのことから、CD155がCD4+ T細胞においてTh1分化誘導の促進に関与していることが示された。
なお、本実験では、最低2回の独立した実験を実施し、同様の結果を得た。図において、棒グラフは平均値+SD を表す。p<0.05; *, p<0.01; **, p<0.005; ***, ND; not detectable。
これらの結果より、ヒ卜においても、CD155はCD4+T細胞のTh1分化誘導を促進していることが明らかになった。すなわち、上記の結果により、CD155を分子標的とする本願発明はヒトの免疫疾患に対しても有効であることが示された。
CD155を介した共刺激およびTh1分化の詳細な分子メカニズムを検討するため、CD4+ T細胞の活性化および分化に関与するシグナル伝達因子を解析した。
具体的には、野生型CD4+ T細胞を抗CD3抗体と抗CD155抗体 (TX56) あるいはコントロール抗体 (cIg) で刺激し、シグナル伝達分子(ERK、STAT1、T-bet)の発現を観察した。以下、この系に基づき、以下の実験を行った。
ERKのリン酸化の解析においては、上記系において図4に示す時間刺激をした後、全細胞溶解液を抗リン酸化ERK 抗体でブロットし、その後抗ERK 抗体でリブロットした。
その結果、刺激後2分において、CD3単独刺激に比べERKのリン酸化が亢進しているのが認められた (図4)。このことから、CD155を介した共刺激シグナルはERKの活性化を増強することが示された。
ERKのリン酸化の遷延化は、GATA-3の発現を低下させ、その結果T-betの発現が上昇することで、Th1分化を誘導することが知られている(Yamane, H., J. Zhu, and W. E. Paul. 2005. J Exp Med 202: 793-804)。CD155を刺激した場合、ERKのリン酸化の遷延化は認められなかった (図4)。このことから、CD155によるTh1分化誘導はERK非依存的であることが示された。
その結果、CD3単独刺激に比べ、CD155を刺激するとSTAT1のリン酸化が増強された (図5A, B:左の2レーン)。また、STAT1タンパクの発現量自体も、CD155を刺激することで上昇した (図5A, B:左の2レーン)。
その結果、CD155によるSTAT1のリン酸化の増強および発現上昇が、IFN-γ中和抗体の添加およびIFN-γ遺伝子欠損CD4+ T細胞で認められなくなった (図5A, B:右の2レーン)。また、STAT1の下流因子、T-betについても、IFN-γ中和抗体の添加およびIFN-γ遺伝子欠損CD4+ T細胞でCD155による発現上昇がキャンセルされた (図6A, B)。これらのことから、CD155によるSTAT1の活性化、T-betの発現上昇にはIFN-γが必須であることが明らかになった。
その結果、IFN-γ中和抗体非存在下ではCD155-/- OT-II CD4+T細胞におけるIFN-γ産生細胞の割合が、CD155+/+ OT-II CD4+T細胞に比べて減少していた。一方IFN-γ中和抗体存在下では、その差はキャンセルされ、いずれにおいてもIFN-γ産生細胞の割合が減少した(図20)。
この結果から、CD155を介したTh1分化誘導にはIFN-γが必須であることが明らかになった。
その結果、刺激後15分において、CD3単独刺激に比べCD155を刺激するとIκBαの分解の亢進が認められた (図7A)。同様の刺激でNFκB p65の核内移行を観察した結果、CD155を刺激すると核内におけるNFκB p65の量がCD3単独刺激に比べ増加しているのが認められた (図7B)。細胞内NFκB p65についてはその差を認めなかった (図7B、nuc; nuclear extracts, cyt; cytoplasimic extracts)。本実験においては、最低2回の独立した実験を実施し、同様の結果を得ている。図において、棒グラフは平均値+SD を表す。p<0.005; ***
その結果、野生型CD4+T細胞において、CD3とCD155を同時に刺激した場合、CD3単独刺激に比べIκBαの分解が亢進した。IFN-γ遺伝子欠損CD4+T細胞においても、同様の結果であった(図21)。
この結果から、CD155を介したNFκBの活性化にはIFN-γが必須ではないことが明らかになった。
以上の結果から、CD155はNFκBの活性化を増強することで、IFN-γの発現を上昇させ、より多く産生されたIFN-γがCD4+ T細胞にオートクリンに作用することでSTAT1、T-betの発現を上げ、その結果、Th1分化を誘導していることが示された (図19)。
より詳細には、T細胞受容体が抗原刺激を受ける際、CD155は抗原提示細胞上のリガンドから刺激を受け、細胞内にシグナルを伝達する。CD155は、T細胞受容体刺激の共刺激分子として、NFκBの活性化を促進する(図24(1))。NFκBはIFN-γ遺伝子の発現を促す(図24(2))。より多く産生されたIFN-γはオートクリンに作用し、IFN-γ受容体に結合する(図24(3))。IFN-γ受容体の下流でSTAT1の発現上昇およびリン酸化の増強が起こる(図24(4))。その下流でT-betの発現が上昇し(図24(5))、さらにIFN-γの産生が亢進する。その結果、Th1分化が促進される。CD155はTh1分化誘導を促進するポジティブフィードバックループを開始するトリガーとなることが明らかとなった(図19及び図24)。
CD155が生体内においてTh1型免疫応答に関与しているか検討するため、Th1型免疫応答がその病態の主体をなす接触性皮膚炎 (Contact Hypersensitivity; CHS) のマウスモデルを用い解析を行った。CHSは、0日目にDNCB (1-クロロ-2, 4-ジニトロベンゼン)を腹部に塗布して感作し、5日目に右耳に溶媒のみ、左耳にDNCB を塗布することにより耳介チャレンジすることで誘導し、耳介の腫脹で病態を評価した (図8)。
CHSをCD155遺伝子欠損マウスあるいは野生型マウスに誘導し、耳の腫脹を計測して病態の比較検討を行った結果、野生型に比べ、CD155遺伝子欠損マウスで耳介の腫脹が抑制された (図9A)。またHE 染色による病理組織解析においても、炎症細胞の浸潤および浮腫が、野生型に比べCD155遺伝子欠損マウスで軽度であった (図9B)。これらのことから、CD155はCHSの病態の増悪に関与していることが明らかになった。
その結果、野生型に比べ、CD155遺伝子欠損マウスにおいてIFN-γ産生細胞の割合が低いという結果を得た (図10A, B)。一方、IL-4、IL-17産生には影響を及ぼさなかった (図10A, B)。図10Bの棒グラフは平均値+SD を表す。p<0.05; *, p<0.01; **, p<0.005; ***
これらのことから、CD155はDNCBの感作に対してTh1型免疫応答を促進しており、それが病態の増悪に関与していることが示された。
その結果、野生型CD4+ T細胞移入群に比べ、CD155遺伝子欠損CD4+ T細胞移入群において、耳介の腫脹が抑制された (図11)。図11において、グラフの丸印は各個体を表し、実線は平均値±SD を表す。
これらことから、CD4+ T細胞上のCD155がCHSの病態の増悪に関与していることが示された。またこの結果により、CHSに代表されるTh1型免疫疾患には、CD4+ T細胞上のCD155が重要な役割を担っていることが示された。
抗CD155抗体であるTX56は、リガンドとの結合を阻害する阻害抗体であることがin vivoおよびin vitroの予備実験で明らかになっており、またTX56の投与によって、いずれの細胞分画も除去されないことを確認した (データ非掲載)。
抗CD155抗体の投与による治療及び予防効果を判定するため、CHSにおいてDNCBの感作前、およびチャレンジ前に抗CD155抗体あるいはコントロール抗体を投与し、CHS病態の比較検討を行った (図12)。具体的には、感作の2 時間前に抗CD155 抗体(TX56) あるいはコントロール抗体 (cIg) を、1 mg/ マウス、チャレンジの2 時間前に0.5 mg/ マウスの量でそれぞれ経静脈的に投与し、耳介の腫脹の計測又は耳介の病理組織のHE染色を行い、CHS病態を比較検討した。
その結果、感作前の投与で、コントロール抗体投与に比べ、抗CD155抗体投与によって耳介の腫脹が抑制された (図13A, B)。また、チャレンジ前投与によっても同様の結果を得た (図14A, B)。本実験では、最低2回の独立した実験を実施し、同様の結果を得ている。図13A及び図14Aにおけるグラフの丸印は各個体を表し、実線は平均値±SD を表す。p<0.05; *, p<0.01; **
これらのことから、CD155に対する抗体はCHSに対して治療及び/又は予防効果を有することが示された。
なお、CHSには、抗原に感作されてTh1細胞が分化する感作相、再び抗原に暴露され、メモリーTh1細胞が活性化し局所でエフェクター機能を発揮する惹起相がある(Krasteva, M. et al. 1999. EJD 9: 65-76)。本実施例で行った感作前の投与は感作相の抑制、チャレンジ前の投与は惹起相の抑制に相当すると考えられる。ヒトにおける接触性皮膚炎においても、その発症は2回目以降の抗原暴露によって起こるため、臨床的には惹起相が接触性皮膚炎の発症に深く関与しており、惹起相を抑制することが接触性皮膚炎発症の抑制において重要である。
すなわち、惹起相においても疾患発症の抑制効果を示した本発明の抗CD155抗体は、CHSに代表されるTh1型免疫疾患の治療及び/又は予防において、極めて顕著な効果を有する。
Th2型気管支喘息のモデルとして好酸球性気道炎症のマウスモデルを用い、CD155のTh2型免疫疾患への関与について解析した。好酸球性気道炎症モデルにはBALB/cを用いるため、まず、CD155によるTh1分化の促進がBALB/cマウスでもB6マウスと同様に惹起されるかどうかを確認した。具体的には、BALB/cマウス由来のCD4+ T細胞を抗CD3抗体と抗CD155抗体又はコントロール抗体で刺激し、6日後の細胞内サイトカイン産生をフローサイトメトリー法により解析した。その結果、CD3単独刺激に比較してIFN-γ産生の亢進が認められ、B6マウスと同様の結果を得た (図16)。
好酸球性気道炎症は、0、7日目にOVAタンパクで感作し、14、15、16日目にOVAタンパクを経鼻的に投与することで誘発した (図15)。好酸球性気道炎症をCD155遺伝子欠損マウスまたは野生型マウスに誘導し、血清中のIgE濃度、気管支肺胞洗浄 (BAL) 液中の好酸球数、肺への炎症細胞浸潤を指標に病態の比較検討を行った (図15)。
その結果、Th2型免疫応答の指標となるIgE産生は、免疫後7、14日目において野生型に比べCD155遺伝子欠損マウスで亢進していた (図17)。未処置のCD155遺伝子欠損マウスでは、野生型マウスと同様IgEは検出されないことを予備実験で確認した(データ非掲載)。
BAL液中の血球細胞を計数し、好酸球(CD45+Siglec-F+CD11b+)をフローサイトメトリー法にて解析し、好酸球の割合と血球細胞数を乗じて好酸球の絶対数を算出した。
その結果、BAL液中の好酸球数は、野生型に比べ、CD155遺伝子欠損マウスで増加していた (図18A)。HE染色を用いた肺の病理組織解析の結果、PBSのみでチャレンジすると炎症細胞の浸潤は観察されないのに対し、OVAでチャレンジした場合は肺への炎症細胞の浸潤が認められ、その程度はCD155遺伝子欠損マウスの方が野生型よりも激しいという結果を得た (図18B)。なお、本実験では、最低2回の独立した実験を実施し、同様の結果を得た。図18A において、グラフの丸印は各個体を表し、実線は平均値+SD を表す。p<0.05; *、 p<0.005; ***。
これらの結果から、CD155遺伝子欠損マウスではTh2型免疫応答が亢進していること、すなわちCD155は生体内でTh2型免疫応答を抑制していることが示された。また、これらの結果から、CD155に対しアゴニスト作用を有する抗CD155抗体を用いてCD155を活性化することにより、Th2型免疫疾患を治療又は予防できることが示唆された。
また、CD155は生体内でTh1/Th2免疫応答のバランスを制御していることが示され、CD155に対する抗体は、マウス、ヒト等の哺乳動物において、Th1型免疫疾患及びTh2型免疫疾患を含む幅広い免疫疾患の治療及び/又は予防効果を有することが示された。
配列番号8:合成DNA
配列番号9:合成DNA
配列番号10:合成DNA
配列番号11:合成DNA
配列番号12:合成DNA
配列番号13:合成DNA
配列番号14:合成DNA
配列番号15:合成DNA
配列番号16:合成DNA
Claims (9)
- CD155に対する阻害抗体又はその断片を含む、Th1型免疫疾患を治療又は予防するための医薬組成物。
- Th1型免疫疾患が、Th1型アレルギー疾患、自己免疫疾患、移植による拒絶反応及び移植片対宿主病からなる群から選ばれる少なくとも1種である、請求項1に記載の医薬組成物。
- Th1型アレルギー疾患が、接触性皮膚炎、Th1型気管支喘息及びTh1型アトピー性皮膚炎からなる群から選ばれる少なくとも1種である、請求項2に記載の医薬組成物。
- 自己免疫疾患が、関節リウマチ、多発性硬化症、インスリン依存性糖尿病、クローン病、潰瘍性大腸炎、全身性エリテマトーデス、乾癬、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性好中球減少症、重症筋無力症、天疱瘡、慢性甲状腺炎、バセドウ病、自己免疫性肝炎及びグッドパスチャー症候群からなる群から選ばれる少なくとも1種である、請求項2に記載の医薬組成物。
- CD155がCD4+ T細胞上に存在するものである、請求項1に記載の医薬組成物。
- 抗体がモノクローナル抗体である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 抗体が、キメラ抗体、ヒト型化抗体又はヒト化抗体である、請求項6に記載の医薬組成物。
- 少なくとも1種の免疫抑制剤と併用投与するための、請求項1〜7のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 少なくとも1種の免疫抑制剤が、ステロイド、カルシニューリン阻害薬、代謝拮抗型免疫抑制剤、抗体医薬及びアルキル化剤からなる群から選択される少なくとも1種の免疫抑制剤である、請求項8に記載の医薬組成物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014050077A JP6296650B2 (ja) | 2013-03-13 | 2014-03-13 | 免疫疾患に対する医薬組成物 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013050403 | 2013-03-13 | ||
JP2013050403 | 2013-03-13 | ||
JP2014050077A JP6296650B2 (ja) | 2013-03-13 | 2014-03-13 | 免疫疾患に対する医薬組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014198710A JP2014198710A (ja) | 2014-10-23 |
JP6296650B2 true JP6296650B2 (ja) | 2018-03-20 |
Family
ID=52355870
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014050077A Active JP6296650B2 (ja) | 2013-03-13 | 2014-03-13 | 免疫疾患に対する医薬組成物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6296650B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20160093753A1 (en) | 2014-09-29 | 2016-03-31 | Panasonic Intellectual Property Management Co., Ltd. | Solar cell manufacturing method |
CN112424226A (zh) * | 2018-02-27 | 2021-02-26 | 平衡生物科技股份有限公司 | 用于治疗重度哮喘的抗cd6抗体 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3214095B1 (en) * | 2005-05-12 | 2019-12-11 | ZymoGenetics, Inc. | Compositions and methods for modulating immune responses |
JP5206134B2 (ja) * | 2008-06-06 | 2013-06-12 | 月桂冠株式会社 | 免疫調節剤およびそれを含む抗アレルギー剤 |
JP5357652B2 (ja) * | 2008-07-28 | 2013-12-04 | 日清ファルマ株式会社 | 抗アレルギー剤 |
-
2014
- 2014-03-13 JP JP2014050077A patent/JP6296650B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2014198710A (ja) | 2014-10-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7259107B2 (ja) | Pd-1アゴニスト抗体およびその使用 | |
AU2016334051B2 (en) | Anti-TREM2 antibodies and methods of use thereof | |
TWI660972B (zh) | 抗mcam抗體及相關使用方法 | |
TWI665214B (zh) | 特異性針對il-21之結合分子及其用途 | |
KR20210061341A (ko) | 신규한 lilrb4 항체 및 이의 용도 | |
US10100120B2 (en) | Antibody which specifically binds to human CRTH2 | |
US20190002543A1 (en) | Inflammatory Disease Treatment Composition Including Anti-Myosin Regulatory Light-Chain Polypeptide Antibody | |
JP6296650B2 (ja) | 免疫疾患に対する医薬組成物 | |
WO2023143425A1 (zh) | 改善认知障碍的方法 | |
WO2004097019A1 (ja) | ヒト抗ヒトインターロイキン-18抗体およびその断片、並びにそれらの利用方法 | |
WO2023028525A2 (en) | Pilra antibodies and methods of use thereof | |
CN115697405A (zh) | 用于治疗或预防Th2介导的疾病的含有PD-1激动剂的药物组合物 | |
US11078266B2 (en) | Anti-human IL-3 antibodies, their use in treatment of a disease or malfunction associated with elevated expression or levels of IL-3, and their use in a method to detect human IL-3 | |
WO2021085295A1 (ja) | 免疫応答抑制剤 | |
TWI825131B (zh) | Htlv-1關聯性脊髓病(ham)之治療或預防劑、及ham之治療方法 | |
TW201400501A (zh) | 新穎抗體及其用途 | |
JPWO2006054748A1 (ja) | 腎炎の治療剤 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170116 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170829 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20171013 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171225 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180206 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180219 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6296650 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |