JP5602164B2 - 抗炎症剤 - Google Patents
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Description
本発明の第一の態様は、抗炎症剤である。本発明の抗炎症剤は、青大豆種子の溶媒抽出物質に由来する光活性処理物質を有効成分として含んでなることを特徴とする。以下、本発明の抗炎症剤について、具体的に説明をする。
本明細書において「抗炎症剤」とは、抗炎症作用を有する物質をいう。「抗炎症」とは、サイトカインの一種であるIL-2(インターロイキン2)の産生によって生じる様々な有害作用を予防、治療、減少又は緩和させることをいう。IL-2は、T細胞やNK細胞(ナチュラルキラー細胞)によって産生され、T細胞、B細胞及びNK細胞の増殖、活性化、B細胞における抗体産生の亢進並びに細胞障害活性の増強に機能することが知られている。「IL-2の産生によって生じる様々な有害作用」とは、例えば、IL-2によって活性化された炎症性細胞により発症する局所的な又は全身的な炎症症状及びそれらによって誘発される様々な二次的症状をいう。具体的には、胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患、関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎、並びに花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の種々のアレルギー性炎症疾患が該当する。ただし、ここでいうアレルギー性炎症疾患には、即時型アレルギー反応とも呼ばれる、IgEを介したI型アレルギー反応による疾患は含まない。したがって、例えば、前記アトピー性皮膚炎における症状において、丘疹や色素沈着は「IL-2の産生によって生じる様々な有害作用」の一つに含まれるが、掻痒は含まれない。
本発明の抗炎症剤によれば、そのまま単独で、あるいは他の抗炎症剤と共に継続的に使用することにより、IL-2の産生量を抑制することができるため、炎症性細胞や免疫細胞の機能を低下させることが可能となる。そのため、胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患、関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎、花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の炎症症状に対しての予防及び/又は改善、健康の増進若しくは滋養強壮の促進に有用である。
本発明の第二の態様は、抗炎症用飲食品、飼料及び化粧料である。本発明の抗炎症用飲食品、飼料及び化粧料は、前記第一態様の抗炎症剤を一以上含有することを特徴とする。以下、各組成物について説明をする。
本発明の抗炎症用飲食品及び飼料(以下「本発明の抗炎症用飲食品等」とする)は、本発明の抗炎症剤を有効成分として含有する飲食品及び飼料である。飲食品等として調製する場合、その形態は特に制限されず、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、あるいは家畜、競走馬若しくは鑑賞動物等の飼料又はペットフード等の他、本発明の抗炎症剤を配合できる全ての飲食品又は飼料が含まれる。これらは、より具体的には、錠剤、チュアブル錠、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、ドリンク剤及び経管経腸栄養剤等の流動食等の各種製剤形態とすることができる。製剤形態の飲食品等は、前記医薬組成物と同様の方法で製造することができる。さらに飲食品は、緑茶、ウーロン茶や紅茶等の茶飲料、清涼飲料、ゼリー飲料、スポーツ飲料、乳飲料、炭酸飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料、発酵乳飲料、粉末飲料、ココア飲料、精製水等の飲料、バター、ジャム、ふりかけ、マーガリン等のスプレッド類、マヨネーズ、ショートニング、カスタードクリーム、ドレッシング類、パン類、米飯類、麺類、パスタ、味噌汁、豆腐、牛乳、ヨーグルト、スープ又はソース類、菓子(たとえばビスケットやクッキー類、チョコレート、キャンディ、ケーキ、アイスクリーム、チューインガム、タブレット)等として調製してもよい。
本発明の抗炎症剤は、化粧料としても用いることができる。化粧料を調製する場合、青大豆種子の溶媒抽出物由来の光活性化処理物質をそのまま化粧料として利用してもよく、又はそれを汎用の方法で配合し、乳液、化粧液、クリーム、ローション、エッセンス、パック及びシート、ファンデーション、おしろい、頬紅、口紅、アイシャドー、アイライナー、マスカラ、洗顔料、皮膚洗浄料、ゲル剤、ジェル剤、美肌剤、ボディシャンプー等の洗浄料、シャンプー、リンス等の毛髪化粧料、頭髪料、ヘアートリートメント、養毛剤、浴用剤、軟膏、医薬部外品、あぶら取り紙等の形態で調製してもよい。
本発明の食品、飼料又は化粧料は、前記態様の本発明の抗炎症剤を有効成分として含有することから、継続的に適用すると前記抗炎症剤と同様の効果を得ることができる。すなわち、IL-2の産生量を抑制し、炎症性細胞や免疫細胞の機能を低下させることが可能となる。そのため、胃炎及び潰瘍性大腸炎等の炎症性疾患、関節リウマチ及び変性性骨関節炎等の関節炎、花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎及びアトピー性皮膚炎等の炎症症状に対しての予防及び/又は改善、健康の増進若しくは滋養強壮の促進に有用である。さらに本発明の抗炎症剤は、免疫抑制剤としても有用であり、例えば臓器移植時/後の副作用防止等に有用である。また本発明の剤は、食品として使用される青大豆種子を原料としているため、安全性が高く、また風味もよいことから、そのまま単独でも充分に経口摂取したり、化粧料として適用することが可能であり、食品、飼料の形態として長期間の継続的摂取も容易である。
本発明の第三の態様は、抗炎症剤の製造方法である。
本発明の製造方法は、(1)抽出工程、及び(2)光活性化処理工程を含む。以下、各工程について詳細に説明する。
本工程は、青大豆種子から溶媒抽出物を抽出する工程である。青大豆種子は、一又は二以上の品種を使用することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲で、抽出の際に青大豆以外の大豆(例えば、黄大豆、黒大豆)の種子を含むこともできる。
本工程は、前記抽出工程で得られた青大豆種子の溶媒抽出物に光活性化処理をする工程である。
本発明の抗炎症剤の製造方法によれば、青大豆種子から、簡便に、かつ比較的安価で抗炎症効果の高い抗炎症剤を製造することができる。
(1)各種大豆種子のエタノール抽出物に由来する抗炎症剤の製造
まず、表1に示す各種大豆種子の粉砕物1.4gに脱脂処理を行い、続いて、脱脂後の粉砕物に大豆種子の溶媒抽出物を調製するため5倍量のエタノールを加え、2時間室温で振とう抽出した後、濾過して不溶物を除きエタノール抽出液を回収した。エタノールを留去し、それぞれの大豆種子から約20〜40mgの溶媒抽出物を得た。次いで、この溶媒抽出物にDMSOを加えて総量を200μLとし、蛍光灯下、冷蔵にて2ヶ月間光活性化処理を行った。光活性化の処理量は、3.7klxで2ヶ月、すなわち、5328klx・hrであった。得られた光活性化処理物質を含む大豆種子溶媒抽出物のうち、青大豆種子由来のものを抗炎症剤の試験サンプル1として、他の大豆(黒大豆、黄大豆、その他の色大豆)種子由来のものを比較サンプル1として、下記実施例2に用いた。
青大豆(エチゴミドリ)種子の破砕物50gに脱脂処理を行い、続いて、脱脂後の粉砕物に大豆種子の溶媒抽出物を調製するため5倍量のエタノールを加え、2時間室温で振とう抽出した後、濾過して不溶物を除き、エタノール抽出液を回収した。エタノールを留去し、粉末状の溶媒抽出物1.2gを得た。次いでこの粉末1.2gにDMSOを添加、溶解して7mLの試料溶液とした。24ウェル培養プレート(BD Falcon製)の各ウェルに100μLずつ試料溶液を分注した。得られたサンプルを試験サンプル2として、下記実施例3で詳述する条件にしたがって光活性化処理を行った。
青大豆(エチゴミドリ)種子の破砕物350gに水1750mLを加え、97℃で60分間加熱して抽出を行った。遠心分離して得られた水抽出液を凍結乾燥して粉末83.9gを得た。次いで、この粉末を蛍光灯の30cm下、72時間光活性化処理を行った。光活性化の処理量は、3.7klxで72時間、すなわち、266.4klx・hrであった。
青大豆(エチゴミドリ)種子の破砕物3kgに脱脂処理を行い、続いて、脱脂後の粉砕物に大豆種子の溶媒抽出物を調製するため5倍量のエタノールを加え、室温、300rpmで2時間攪拌抽出した後、濾過して不溶物を除きエタノール抽出液を回収した。エタノールを留去し、粉末状の溶媒抽出物86.7gを得た。次いで、この粉末を蛍光灯の30cm下、72時間光活性化処理を行った。光活性化の処理量は、3.7klxで72時間、すなわち、266.4klx・hrであった。
Jurkat細胞は、凍結保管してあるワーキングストックを用いた。このストック細胞は、継代回数は、10回を超えない範囲で使用した。培地は、RPMI1640を基礎培地とし、これに、56℃、30分加熱により非働化した牛胎児血清を10%添加した。培養は炭酸ガスインキュベータ内で100%湿潤下、5%炭酸ガス濃度、37℃で行った。試験にはセミコンフルエントとなる培養状態のものを使用した。細胞を2×105/mLの濃度で25mL調製懸濁して、これに10μg/mLのPhorbol myristate acetage (PMA)を12.5μL及び500μg/mLのCa2+ イオノフォア A23187を7.5μL添加して再度懸濁した。この細胞懸濁液を24ウェル培養プレート(BD Falcon製)に1mL/ウェルで分注し、ここに実施例1の各試験サンプル1及び比較サンプル1を1ウェルあたり1μLずつ添加した。炭酸ガスインキュベータ内で約24時間培養した後、培養上清中に含まれるIL-2量をELISA法によって測定した。ELISAにはDuoSet ELISA Development System human IL-2 (R&D Systems )を用いた。なお、無刺激例としてPMA、A23187及び試験サンプルのいずれも無添加の例を、刺激例として試験サンプルのみ無添加の例を設定した。
照射時間とIL-2産生抑制作用の関係を明らかにするため、実施例1の(2)で調製した試験サンプル2に光照射条件をそれぞれ変えて光活性化処理を行った。24ウェル培養プレート(BD Falcon製)の各ウェルに100μLずつDMSO試料溶液を分注したものを5枚用意した。各プレートを蛍光灯スタンドから一定の距離(表2)に設置し、36時間静置して光を照射した。距離と照度の関係を表2に示す。照度は、プレート設置位置に照度計(照度データロガ:PHR-51、ティアンドティ社)を置き、測定した。光活性化処理中、3、6、12、24、36時間後に各プレートの一部のウェルからサンプルを取り出し、前記実施例2と同様の方法にてIL-2産生抑制作用を測定した。
アトピー性皮膚炎モデルであるNC/Ngaマウスに抗原を反復塗布する事によって発症する皮膚炎に対する本発明の抗炎症剤の効果を検討した。
前記実施例1(3)と同様にして得られた抗炎症剤85g、結晶セルロース(旭化成)10g及びポリビニルピロリドン(BASF)4gを混合し、これにエタノール30mLを添加して、湿式法により常法に従って顆粒を製造した。この顆粒を乾燥した後、ステアリン酸マグネシウム1.2gを加えて打錠用顆粒末とし、打錠機を用いて打錠し、1錠が1gの錠剤100個を製造した。
前記実施例1(3)と同様にして得られた抗炎症剤100g、乳糖(DMV)100g及び結晶セルロース(旭化成)40gを混合し、これにエタノール130mLを練合機に添加し、通常の方法により5分間練合した。練合終了後、10メッシュで篩過し、乾燥機中にて50℃で乾燥した。乾燥後、整粒し、顆粒剤240gを得た。
精製水400gを煮沸し、これをかき混ぜながら、白糖750g及び前記実施例1(4)と同様にして得られた処理物質100gを加えて溶解し、熱時に布ごしし、これに精製水を加えて全量を1000mLとしてシロップ剤を製造した。
約65℃の純水700gにカゼインナトリウム(DMV)40g、マルトデキストリン(三和デンプン)160g及び前記実施例1(4)と同様にして得られた抗炎症剤50gを添加して溶解させ、ついでビタミンミックス及び微量ミネラルの各成分混合液を添加した。得られた混合液をホモミキサーに投入し、約8,000rpmにて15分間粗乳化した。得られた乳化液を約20℃に冷却し、香料を添加後、最終メスアップを行い、この液をパウチへ本液230g充填後、窒素置換を行いながらパウチを密封し、121℃で15分間殺菌を行って流動食を得た。
小麦粉(強力粉)160gとドライイースト2gを混合した。これとは別に、実施例1(3)と同様にして得られた抗炎症剤5g、砂糖25g、食塩3g、脱脂粉乳6gを温湯70gに溶かし、鶏卵1個を添加してよく混合した。これを上記の小麦粉とドライイーストの混合物に加え、よく手でこねた後、バター約40gを加えてさらによくこね、20個のロールパン生地を作り、次いで、これらのパン生地を発酵させた後、表面に溶き卵を塗り、オーブンにて180℃で約15分焼き、ロールパンを作成した。
マーガリンと砂糖を混合してミキサーを用いてよく攪拌し、ホイップを調製した。これに半量の全卵を添加してクリーム状とした。これに実施例1(3)と同様にして得られた抗炎症剤を加え、軽い混合をして生地を作製した。生地を成形し、オーブンで150℃にて25分間焼成し、菓子を作成した。
全卵を泡立て器でほぐし、砂糖90g分の甘味料を入れてよく混合した。これに実施例1(4)と同様にして得られた抗炎症剤10g、小麦粉40gとベーキングパウダーを加え、攪拌混合し、さらにバター及びラム酒を加えてよく混合し、生地を作成した。生地を型に入れ、オーブンで170℃にて15分間焼成し、菓子を作成した。
お米2合を用いて一般的な水量に対し、実施例1(4)と同様にして得られた抗炎症剤2.5gを加えて炊飯し、これを慣用の方法に従ってレトルト用パックに充填した後、窒素置換を行いながら密封し、121℃で15分間殺菌を行ってレトルトご飯を得た。
パスタ用のミートソース一人前(150g)を鍋に入れ、これに実施例1(3)と同様にして得られた抗炎症剤1gを加えて加温混合した。このソースをパウチへ充填した後、窒素置換を行いながらパウチを密封し、121℃で15分間殺菌を行って、パスタ用ミートソースを得た。
市販の野菜ジュースに実施例1(3)と同様にして得られた抗炎症剤を5質量%になるよう添加・混合し、野菜ジュースを調製した。
タマネギ100g、ニンジン100g、長ネギ100g、セロリ50g、及びトマト100gの各スライスを鍋に入れ、ここに牛の挽き肉500g、卵の白味2個分、ビーフブイヨン1kgを加え、火にかけて沸騰したら火を弱め、表面浮いてきたアクや脂肪分を除去しながら弱火で1時間煮て、実施例1(3)と同様にして得られた抗炎症剤50gを加えてさらに30分間煮て、布でこし、コンソメスープを得た。
A液.
・実施例4と同様にして得られた処理物質: 1質量%
・プロピレングリコール: 5質量%
・パラオキシ安息香酸メチル: 0.2質量%
・カルボキシビニルポリマー: 0.5質量%
B液.
・アジピン酸ジイソプロピル: 10質量%
・セタノール: 2質量%
・ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60: 2質量%
・モノステアリン酸ポリエチレングリコール: 1質量%
・パラオキシ安息香酸ブチル: 0.1質量%
C液.
・精製水:100質量%まで適量
B液を70℃で加熱溶解しながら混合し油相とする。A液を70℃で加熱溶解しながら混合し、これにB液の油相を加えて混合乳化し、その後C液を加えながら冷却処理をしてよく混合し、軟膏を得た。
Claims (10)
- 青大豆種子の溶媒抽出物に含まれる光活性化処理物質前駆体に、光照射することによって得ることができる光活性化処理物質を含んでなる抗炎症剤。
- 光活性化処理物質は、前記溶媒抽出物に光照射処理をすることによって得ることのできる、請求項1に記載の抗炎症剤。
- 光照射処理は、照度(キロルクス:klx)及び照射時間(hr)の積が40klx・hr以上となるように光を照射する処理である、請求項2に記載の抗炎症剤。
- 光照射処理における光の波長が200nm〜800nmである、請求項2又は3に記載の抗炎症剤。
- 前記溶媒が極性溶媒である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の抗炎症剤。
- 極性溶媒が水、低級アルコール、クロロホルム又はジメチルスルホキシドから選択される1種以上である、請求項5に記載の抗炎症剤。
- IL-2産生を抑制する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗炎症剤。
- (1)青大豆種子から溶媒抽出物を抽出する工程、及び
(2)前記溶媒抽出物に光活性化処理をする工程
を含む、抗炎症剤の製造方法。 - (2)において照度(キロルクス:klx)と照射時間(hr)の積が40klx・hr以上となるように光を照射する、請求項8に記載の製造方法。
- (2)において光照射処理の光の波長が200nm〜800nmである、請求項8又は9に記載の製造方法。
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