ES2624828T3 - Agonistas de la guanilato ciclasa útiles para el tratamiento de trastornos gastrointestinales, inflamación, cáncer y otros - Google Patents

Abstract

Un péptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2.

Description

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DESCRIPCION

Agonistas de la guanilato ciclasa utiles para el tratamiento de trastornos gastrointestinales, inflamacion, cancer y otros

Campo de la invencion

La presente invencion se refiere al uso terapeutico de agonistas de la guanilato ciclasa C (GC-C) como un medio para potenciar la produccion intracelular de GMPc. Los agonistas pueden utilizarse ya sea solos o en combinacion con inhibidores de la fosfodiesterasa GMPc espedfica, para prevenir o tratar la inflamacion, el cancer y otros trastornos, en particular del tracto gastrointestinal y el pulmon.

Antecedentes de la invencion

La uroguanilina, la guanilina y los peptidos ST (sigla del ingles stable toxin: enterotoxinas termoestables) bacterianos son peptidos estructuralmente relacionados que se unen a un receptor guanilato ciclasa y estimulan la produccion intracelular de la guanosina monofosfato dclica (GMPc) (1-6). Esto da como resultado la activacion del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis qmstica (CFTR, sigla del ingles cystic fibrosis transmembrane conductance regulator), un canal de la membrana apical para la salida de cloruro de los enterocitos que recubren el tracto intestinal (1-6). La activacion del CFTR y la posterior potenciacion de la secrecion transepitelial de cloruro conducen a la estimulacion de la secrecion de sodio y agua en el lumen del intestino. Por lo tanto, desempenandose como reguladores paracrinos de la actividad de CFTR, los agonistas del receptor de GMPc regulan el transporte de fluidos y de electrolitos en el tracto del GI (1-6; patente de Estados Unidos 5.489.670). Por lo tanto, la activacion mediada por GMPc del CFTR y la senalizacion aguas abajo desempenan un papel importante en el funcionamiento normal de la fisiologfa del intestino. Por lo tanto, cualquier anomalfa en este proceso podna conducir de forma potencial a trastornos gastrointestinales tales como el smdrome del colon irritable, la enfermedad inflamatoria intestinal, la acidez excesiva y el cancer (25, 26).

El proceso de renovacion epitelial implica la proliferacion, migracion, diferenciacion, senescencia y la perdida eventual de celulas GI en el lumen (7, 8). La mucosa GI puede dividirse en tres zonas distintas a base del mdice de proliferacion de las celulas epiteliales. Una de estas zonas, la zona proliferativa, consiste en celulas madre indiferenciadas responsables de proporcionar una fuente constante de celulas nuevas. Las celulas madre migran hacia arriba, hacia el lumen, en la que se extruden. A medida que migran, las celulas pierden su capacidad de dividirse y diferenciarse, para llevar a cabo funciones especializadas de la mucosa GI (9). La renovacion de la mucosa Gi es muy rapida, produciendose un recambio completo al cabo de un periodo de 24-48 horas (9). Durante este proceso las celulas mutadas y no deseadas se reponen con celulas nuevas. Por lo tanto, la homeostasis de la mucosa GI se regula mediante el mantenimiento continuo del balance de las velocidades de proliferacion y de apoptosis (8).

Las velocidades de proliferacion y apoptosis celular en el epitelio del intestino pueden aumentarse o disminuirse en una amplia diversidad de circunstancias distintas, por ejemplo, en respuesta a estfmulos fisiologicos tales como el envejecimiento, senales inflamatorias, hormonas, peptidos, factores de crecimiento, productos qmmicos y habitos alimentarios. Ademas, una velocidad de proliferacion potenciada se asocia con frecuencia con una reduccion del tiempo de recambio y una expansion de la zona proliferativa (10). Se ha observado que el mdice de proliferacion es mucho mayor en los casos patologicos de colitis ulcerosa y de otros trastornos GI (11). Por lo tanto, la hiperplasia intestinal es el principal promotor de la inflamacion y la carcinogenesis gastrointestinales.

Ademas de un papel para la uroguanilina y la guanilina como moduladores del fluido intestinal y de la secrecion de iones, estos peptidos tambien pueden estar implicados en la renovacion continua de la mucosa GI manteniendo el balance entre la proliferacion y la apoptosis en las celulas que recubren la mucosa GI. Por lo tanto, cualquier alteracion de este proceso de renovacion, debido a la produccion reducida de uroguanilina y/o guanilina puede conducir a la inflamacion GI y al cancer (25, 26). Esto es consistente con los datos publicados anteriormente en el documento WO 01/25266, que sugieren que un peptido con el dominio activo de la uroguanilina puede funcionar como un inhibidor del desarrollo de polipos en el colon y puede constituir un tratamiento del cancer de colon. Sin embargo, datos recientes tambien sugieren que la uroguanilina tambien se une a un receptor actualmente desconocido, el cual es distinto del receptor de la GC-C (3,4). Los ratones genosuprimidos que carecen de este receptor guanilato ciclasa muestran resistencia a los peptidos ST en el intestino, pero no estan afectados los efectos de la uroguanilina y de los peptidos ST en el rinon in vivo (3). Estos resultados estaban respaldados ademas por el hecho de que la despolarizacion de la membrana inducida por guanilina se bloqueaba por genistema, un inhibidor de la tirosina quinasa, mientras que la hiperpolarizacion inducida por la uroguanilina no estaba afectada (12, 13). Por lo tanto, no esta claro si las actividades anti cancer de colon y anti inflamatorias de la uroguanilina y sus analogos estan mediadas a traves de la union a uno o ambos de estos receptores.

La enfermedad inflamatoria intestinal es un nombre general dado a un grupo de trastornos que provocan que los intestinos se inflamen, caracterizados por un tejido rojo e inflamado. La inflamacion gastrointestinal (GI) puede ser una afeccion cronica y a menudo conduce al cancer GI (14). Los ejemplos de tales enfermedades inflamatorias

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intestinales (EII) incluyen la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa (CU). Se estima que estan aquejados de EII hasta 1.000.000 de estadounidenses, con los pacientes masculinos y femeninos que parece estar igualmente afectados. La mayona de los casos se diagnostica antes de los 30 anos, pero la enfermedad puede aparecer en la sexta o septima decada, o mas tarde.

La enfermedad de Crohn es una enfermedad inflamatoria grave que afecta predominantemente al fleo y al colon, pero tambien puede producirse en otras secciones del tracto Gi, mientras que la CU es exclusivamente una enfermedad inflamatoria del colon, el intestino grueso (15). A diferencia de la enfermedad de Crohn, en la cual estan implicadas todas las capas del intestino, y en la cual puede haber un intestino sano normal entre los parches de intestino enfermo, la CU afecta solo el revestimiento mas interno (mucosa) del colon, de una manera continua (16). Dependiendo de que porcion del tracto GI este implicada, la enfermedad de Crohn puede denominarse como ileitis, enteritis regional, colitis, etc. La enfermedad de Crohn y la CU difieren del colon irritable o del smdrome del colon irritable, que son trastornos de la motilidad del tracto GI.

Aunque no se conoce la causa precisa de la EII, se cree que puede estar implicada en la enfermedad la alteracion del proceso de renovacion continua de la mucosa GI (17,18). El proceso de renovacion del revestimiento GI es un proceso eficaz y dinamico que implica la proliferacion continua y la reposicion de las celulas danadas no deseadas. Las velocidades de proliferacion del revestimiento de celulas de la mucosa GI son muy altas, solo por detras del sistema hematopoyetico. Por lo tanto, el balance entre la proliferacion y apoptosis es importante para el mantenimiento de la homeostasis de la mucosa GI (19,20).

El elevado mdice proliferativo de las celulas epiteliales GI en pacientes de EII podna tambien estar vinculado a una incidencia mas alta de cancer de colon en pacientes de EII. Por lo tanto, los agonistas de la GC-C podnan tambien ser utiles para retardar el inicio de la EII en el desarrollo del cancer de colon. La combinacion de agonistas de la GC-C con inhibidores la PDE podna ser particularmente mas util en el tratamiento de la EII y del cancer de colon.

La enterocolitis necrosante (ECN) es una afeccion inflamatoria devastadora del tracto gastrointestinal que aqueja al 10% de los recien nacidos prematuros que pesan menos de 1500 gramos. A pesar de los avances medicos modernos, la etiologfa sigue siendo desconocida y la morbilidad y la mortalidad son inaceptablemente elevadas, sucumbiendo a la enfermedad tanto como el 10-30% de los lactantes afectados. Aunque la patofisiologfa se entiende de forma incompleta, se sabe que la prematuridad, la alimentacion con preparados para lactantes, la isquemia intestinal y la colonizacion bacteriana son factores de riesgo importantes. Se ha sugerido que estos factores de riesgo inician la activacion de la respuesta proinflamatoria, que en ultima instancia conduce a la necrosis del intestino y en algunos casos al smdrome de disfuncion multiorganica y la muerte. Se han identificado multiples mediadores inflamatorios que podnan contribuir a esta ruta comun final. Se han estudiado con detalle en modelos animales, en seres humanos e in vitro, varias de las moleculas pro- y antiinflamatorias, incluyendo las IL -6, IL-8 e IL-10, asf como el oxido mtrico, los radicales de oxfgeno libres y muchos otros. Anteriormente, los inventores informaron que SP-304 mejora la inflamacion GI en modelos experimentales de colitis murina, posiblemente a traves de la regulacion por disminucion de las citocinas proinflamatorias tales como IL-4, IL-5, IL-17, IL-23 y TNF-a. (Shailubhai et al., 2007 y 2008). Por lo tanto, los agonistas de la GC-C tales como la uroguanilina, la guanilina, los peptidos ST de la enterotoxina de E. coli y sus analogos podnan utilizarse para prevenir, controlar y tratar la ECN. Los agonistas de la GC-C pueden proporcionarse ya sea en el agua potable o en la leche materna para tratar la ECN en bebes recien nacidos.

La homeostasis GI depende tanto de la proliferacion como de la muerte celular programada (apoptosis) de las celulas epiteliales que recubren la mucosa intestinal. Por lo tanto, a partir de las vellosidades del intestino se pierden celulas hacia el lumen de forma continua y se reponen a una velocidad sustancialmente equivalente por la proliferacion de celulas en las criptas, seguido de su movimiento hacia las vellosidades. Se ha hecho cada vez mas obvio que el control de la muerte celular es un regulador igualmente, si no mas, importante, del numero de celulas y del mdice de proliferacion celular (19,20). Las velocidades reducidas de apoptosis a menudo se asocian con el crecimiento anomalo, inflamacion y transformacion neoplasica. Por lo tanto, la proliferacion disminuida y/o la muerte celular aumentada podnan aumentar el numero de celulas, mientras que la proliferacion aumentada y/o la muerte celular reducida podna aumentar el mdice de proliferacion del tejido intestinal (20), lo que puede conducir a enfermedades inflamatorias GI y al cancer.

Los peptidos uroguanilina y guanilina tambien parecen promover la apoptosis controlando el flujo celular de iones. Las alteraciones en la apoptosis se han asociado con la evolucion tumoral al fenotipo metastasico. Aunque un cancer gastrointestinal (GI) primario esta limitado al intestino delgado, el colon y el recto, puede metastatizar y propagarse a lugares tales como el hueso, los ganglios linfaticos, el hugado, el pulmon, el peritoneo, los ovarios y el cerebro. Potenciando la salida de K+ y la entrada de Ca++, la uroguanilina y los peptidos relacionados pueden promover la muerte de celulas transformadas y, de este modo, inhibir la metastasis.

El smdrome del colon irritable (SCI) y el estrenimiento idiopatico cronico son afecciones patologicas que pueden provocar una gran incomodidad intestinal y malestar, pero a diferencia de las enfermedades EII, tales como la colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn, el SCI no provoca la grave inflamacion o los cambios en el tejido intestinal, y no se cree que aumente el riesgo de cancer colorrectal. En el pasado, la enfermedad inflamatoria intestinal (EII), la

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enfermedad ceUaca y el smdrome del colon irritable (SCI) eran considerados trastornos totalmente distintos. Ahora, con la descripcion de la inflamacion en el SII, aunque leve, y de los smtomas que se solapan entre el SCI y la enfermedad celfaca, esta aseveracion esta en entredicho. La gastroenteritis bacteriana aguda es el factor de riesgo mas fuerte identificado a la fecha para el posterior desarrollo del smdrome del colon irritable posinfeccioso. Los factores de riesgo clmicos incluyen enfermedad aguda prolongada y la ausencia de vomitos. Una susceptibilidad determinada de forma genetica a estimulos inflamatorios tambien puede ser un factor de riesgo para el smdrome del colon irritable. La patofisiologfa subyacente indica una permeabilidad intestinal aumentada y una inflamacion leve, asf como la motilidad y la sensibilidad visceral alteradas (27). La serotonina (5-hidroxitriptamina [5-HT]) es un modulador clave en la funcion intestinal y se sabe que desempena un papel importante en la patofisiologfa del SII. Se ha demostrado que la actividad de la 5-HT esta regulada por GMPc (28). Por lo tanto, a base de esta observacion, asf como otros efectos del GMPc, los inventores creen que los agonistas de la GC-C seran utiles en el tratamiento del SII.

Dada la prevalencia de afecciones inflamatorias en las sociedades occidentales y del riesgo paralelo de desarrollo de lesiones cancerosas a partir de tejido inflamado, en particular del tejido intestinal, existe una necesidad de mejorar las opciones de tratamiento para las afecciones inflamatorias, en particular del tracto gastrointestinal.

Schulz et al. (Journal of Peptide Science, vol. 11, n.° 6, junio de 2005, p 319-330) describe un conjunto de peptidos L-alanina-sustituidos y peptidos quimericos de guanilina, uroguanilina y ST de E. coli.

Estos se analizaron para determinar los restos de aminoacido que afectan la interconversion de los peptidos de guanilina y uroguanilina.

Gali et al. (Nuclear Medicine & Biology, vol 28, n.° 8, 1 noviembre de 2001, p 903-909) describen una evaluacion in vivo de un analogo DOTA-NCS-ST, para determinar la captacion tumoral in vivo y la farmacocinetica de este analogo en ratones con inmunodeficiencia combinada grave que tienen tumor LS-180.

Vaandrager (Molecular & Cellular Biochemistry, vol 230, n.° 1-2, enero de 2002, p 73-83) describe la estructura y funcion del receptor de la enterotoxina termoestable/guanilato ciclasa C.

Beltowski (Journal of Physiology & Pharmacology, vol 52, n.° 3, 1 septiembre de 2001, p 351-375) es un artmulo de revision que describe a la guanilina y peptidos relacionados.

Shailubhai (Current Opinion in Drug Discovery & Development, vol 5, n.° 2, marzo de 2002, p 261-268) describe diversas aplicaciones terapeuticas de los agonistas de la guanilato ciclasa C.

El documento WO 02/078683 describe agonistas del receptor guanilato ciclasa para el tratamiento de la inflamacion de tejidos y de la carcinogenesis.

Sumario de la invencion

La presente invencion es a base del desarrollo de agonistas del receptor guanilato ciclasa. Los agonistas son analogos de la uroguanilina, guanilina, linfoguanilina y peptidos ST, y tienen propiedades preeminentes tales como, por ejemplo, una alta resistencia a la degradacion en el extremo N y el extremo C por carboxipeptidasas y/o por otras enzimas proteolfticas presentes en los jugos intestinales humanos y los jugos gastricos humanos simulados.

Los peptidos de la invencion pueden utilizarse para tratar cualquier afeccion que responda a los niveles intracelulares potenciados de GMPc. Los niveles intracelulares de GMPc pueden aumentarse potenciando la produccion intracelular de GMPc y/o mediante la inhibicion de su degradacion por fosfodiesterasas GMPc espedficas. Entre las afecciones espedficas que pueden tratarse o prevenirse estan los trastornos gastrointestinales, los trastornos inflamatorios, los trastornos pulmonares, el cancer, los trastornos cardiacos, los trastornos oculares, los trastornos bucales, los trastornos sangumeos, los trastornos hepaticos, los trastornos cutaneos, los trastornos de la prostata, los trastornos endocrinos, el aumento de la motilidad gastrointestinal y la obesidad. Los trastornos gastrointestinales incluyen, por ejemplo, el smdrome del colon irritable (SCI), la dispepsia no ulcerosa, la seudo obstruccion intestinal cronica, la dispepsia funcional, la seudo obstruccion del colon, el reflujo duodenogastrico, la enfermedad de reflujo gastroesofagico (ERGE), la inflamacion del fleo (por ejemplo, el fleo posoperatorio), la gastroparesis, la acidez gastrica (la acidez elevada en el tracto GI), el estrenimiento (por ejemplo, el estrenimiento asociado al uso de medicamentos tales como los opioides, los farmacos para la osteoartritis, los farmacos para la osteoporosis; el estrenimiento posquirurgico, el estrenimiento asociado con trastornos neuropaticos. Los trastornos inflamatorios incluyen la inflamacion de tejidos y organos tales como la inflamacion del rinon, (por ejemplo, nefritis), inflamacion del aparato gastrointestinal (por ejemplo, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa), enterocolitis necrosante (ECN); inflamacion pancreatica (por ejemplo, pancreatitis), inflamacion pulmonar (por ejemplo, bronquitis o asma) o inflamacion cutanea (por ejemplo, psoriasis, eccema). Los trastornos del pulmon incluyen, por ejemplo, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC) y la fibrosis. El cancer incluye la carcinogenesis de tejidos y organos incluyendo metastasis tales como, por ejemplo, el cancer gastrointestinal (por ejemplo, cancer gastrico, cancer esofagico, cancer pancreatico, cancer colorrectal, cancer intestinal, cancer anal,

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cancer de tngado, cancer de vesfcula biliar o cancer de colon; cancer de pulmon; cancer de tiroides; cancer de la piel (por ejemplo, melanoma); cancer bucal; cancer del tracto urinario (por ejemplo, cancer de vejiga o cancer de rinon); cancer de celulas sangumeas (por ejemplo, mieloma o leucemia) o cancer de prostata. Los trastornos cardfacos incluyen, por ejemplo, insuficiencia cardiaca congestiva, hipertension de cardias de la traquea, colesterol alto o trigliceridos altos. Los trastornos hepaticos incluyen, por ejemplo, cirrosis y fibrosis. Ademas, el agonista de la GC-C tambien puede ser util para facilitar la regeneracion del tngado en los pacientes con trasplante de tngado. Los trastornos oculares incluyen, por ejemplo, tension intraocular aumentada, glaucoma, degeneracion retiniana, ojos secos, trastornos de las glandulas lagrimales o inflamacion ocular. Los trastornos cutaneos incluyen, por ejemplo, xerosis. Los trastornos bucales incluyen, por ejemplo, boca seca (xerostomia), smdrome de Sjogren, enfermedades de la endas (por ejemplo, periodontitis) o bloqueo o malfuncionamiento del conducto de la glandula salival. Los trastornos de la prostata incluyen, por ejemplo, hiperplasia prostatica benigna (HPB). Los trastornos endocrinos incluyen, por ejemplo, diabetes mellitus, hipertiroidismo, hipotiroidismo y fibrosis qmstica.

En un aspecto, la presente invencion se refiere a un peptido que comprende la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 2 y a las composiciones terapeuticas que contienen estos peptidos.

Los peptidos pueden estar en una composicion farmaceutica en una forma farmaceutica unitaria, junto con uno o mas transportadores, excipientes o diluyentes farmaceuticamente aceptables. La expresion "forma farmaceutica unitaria" se refiere a una entidad de suministro de farmacos individual, por ejemplo, un comprimido, capsula, solucion o formulacion de inhalacion. La cantidad de peptido presente debena ser suficiente para tener un efecto terapeutico positivo cuando se administra a un paciente (normalmente, entre 100 |jg y 3 g). Lo que constituye un "efecto terapeutico positivo" dependera de la afeccion particular a tratar e incluira cualquier mejora significativa en una afeccion facilmente reconocida por un experto en la materia. Por ejemplo, puede constituir una reduccion de la inflamacion, la contraccion de polipos o tumores, una reduccion de lesiones metastasicas, etc.

En aun otro aspecto, una invencion proporciona la administracion a dicho paciente de una dosis eficaz de un inhibidor de la fosfodiesterasa GMPc espedfica (GMPc-PDE) ya sea de forma simultanea o secuencial con dicho agonista del receptor guanilato ciclasa. El inhibidor de la GMPc-PDE incluye, por ejemplo, sulindaco sulfona, zaprinast y motapizona, vardenafil y sildenafil. Ademas, los peptidos agonistas de la GC-C pueden utilizarse en combinacion con los inhibidores de los transportadores de nucleotidos dclicos.

De forma opcional, tambien se administran agentes antiinflamatorios. Los agentes antiinflamatorios incluyen, por ejemplo, farmacos antiinflamatorios esteroides y no esteroides (AINE).

Otras caractensticas y ventajas de la invencion seran obvias a partir de, y estan abarcadas por, la siguiente descripcion detallada y las reivindicaciones.

Descripcion detallada

La presente invencion es a base del desarrollo de agonistas de la guanilato ciclasa C (GC-C). Los agonistas son analogos de uroguanilina, guanilina, linfoguanilina y peptido ST, y tienen propiedades preminentes tales como, por ejemplo, alta resistencia a la degradacion en el extremo N y extremo C por carboxipeptidasas y/o por otras enzimas proteoltticas tales como las presentes en el fluido intestinal simulado (FIS) humano y el fluido gastrico simulado (FGS) humano.

La GC-C se expresa en diversas celulas, incluyendo las celulas epiteliales gastrointestinales y los tejidos extraintestinales incluyendo rinon, pulmon, pancreas, hipofisis, suprarrenal, tngado en desarrollo, corazon y los tejidos reproductores masculinos y femeninos (revisado en Vaandrager 2002 Mol Cell Biochem 230:73-83). La GC-C es un regulador clave del balance de fluidos y de electrolitos en el intestino y el rinon. En el intestino, cuando esta estimulado, la GC-C provoca un aumento en el GMPc epitelial intestinal. Este aumento en el GMPc provoca una disminucion de la absorcion de agua y de sodio, y un aumento de la secrecion de iones cloruro y potasio, lo que conduce a cambios en el fluido intestinal y en el transporte electrolitos, y una motilidad intestinal aumentada.

Los agonistas de la guanilato ciclasa C de acuerdo con la invencion incluyen la secuencia de aminoacidos compendiada a continuacion en la Tabla I. Los agonistas de la guanilato ciclasa C de acuerdo con la invencion se denominan en el presente documento "peptidos GCRA".

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Tabla I. Analogos de SP-304 y uroguanilina

Nombre

Posicion de los enlaces disulfuro Estructura SEQ ID NO

Formula I

C4:C12, C7:C15 Glu1-Asp2-Asp3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys15-Leu16 2

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento se unen a la guanilato ciclasa C (GC-C) y estimulan la produccion intracelular de guanosina monofosfato dclica (GMPc). De forma opcional, los peptidos GCRA inducen apoptosis. En algunos aspectos, los peptidos GCRA estimulan la produccion intracelular de GMPc a niveles mas altos que los agonistas de la GC-C de origen natural (por ejemplo, uroguanilina, guanilina, linfoguanilina y peptidos ST) y/o que SP-304.

La secuencia de aminoacidos de uroguanilina es: Asn-Asp-Asp-Cys-Glu-Leu-Cys-Val-Asn-Val-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys- Leu. (SEQ ID NO: 139)

La secuencia de aminoacidos de la guanilina es: Ser-His-Thr-Cys-Glu-Ile-Cys-Ala-Phe-Ala-Ala-Cys-Ala-Gly-Cys. (SEQ ID NO: 140)

La secuencia de aminoacidos de la linfoguanilina es: Gln-Glu-Glu-Cys-Glu-Leu-Cys-Ile-Asn-Met-Ala-Cys-Thr-Gly-Tyr. (SEQ ID NO: 141)

La secuencia de aminoacidos del peptido ST de E. coli es: Asn-Ser-Ser-Asn-Ser-Ser-Asn-Tyr-Cys-Cys-Glu-Lys-Cys- Cys-Asn-Pro-Ala-Cys -Thr-Gly-Cys-Tyr. (SEQ ID NO: 142)

La secuencia de aminoacidos de SP-304 es: Asn-Asp-Glu-Cys-Glu-Leu-Cys-Val-Asn-Val-Ala-Cys12-Thr-Lys-Cys- Leu (SEQ ID NO: 143)

Por ejemplo, los peptidos GCRA de la invencion estimulan el 5, 10 % , 20 % , 30 % , 40 % , 50 % , 75 % , 90 % o mas de GMPc intracelular, en comparacion con los agonistas de la GC-C de origen natural y/o SP-304. Los terminos inducido y estimulado se usan indistintamente en toda la memoria descriptiva. Los peptidos GCRA descritos en el presente documento son mas estables que los agonistas de la GC-C de origen natural y/o que SP-304. Por mas estable se entiende decir que el peptido se degrada menos y/o mas lentamente en fluido gastrointestinal simulado y/o el fluido intestinal simulado en comparacion con los agonistas de la GC-C de origen natural y/o con SP-304. Por ejemplo, el peptido GCRA de la invencion se degrada el 2 % , 3 % , 5 % , 10 % , 15 % , 20 % , 30 % , 40 % , 50 % , 75 % , 90 % o menos en comparacion con los agonistas de la GC-C de origen natural y/o con SP-304.

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento tienen un valor terapeutico en el tratamiento de una amplia diversidad de trastornos y afecciones que incluyen, por ejemplo, trastornos gastrointestinales, trastornos inflamatorios, trastornos del pulmon, cancer, trastornos cardiacos, trastornos oculares, trastornos bucales, trastornos sangumeos, trastornos hepaticos , trastornos cutaneos, trastornos de la prostata, trastornos endocrinos, el aumento

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de la motilidad gastrointestinal y la obesidad. Los trastornos gastrointestinales incluyen, por ejemplo, el smdrome del colon irritable (SCI), la dispepsia no ulcerosa, la seudo obstruccion intestinal cronica, la dispepsia funcional, la seudo obstruccion del colon, el reflujo duodenogastrico, la enfermedad de reflujo grastroesofagico (ERGE), fleo (por ejemplo, el fleo posoperatorio), gastroparesis, acidez gastrica (alta acidez en el tracto GI), estrenimiento (por ejemplo, estrenimiento asociado con el uso de medicamentos tales como opioides, farmacos para la osteoartritis, farmacos para la osteoporosis; estrenimiento posquirurgico, estrenimiento asociado con trastornos neuropaticos. Los trastornos inflamatorios incluyen inflamacion de tejidos y organos tales como inflamacion del rinon (por ejemplo, nefritis), inflamacion del aparato gastrointestinal por ejemplo, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa); enterocolitis necrosante; inflamacion pancreatica (por ejemplo, pancreatitis), inflamacion del pulmon (por ejemplo, bronquitis o asma) o inflamacion cutanea (por ejemplo, psoriasis, eccema). Los trastornos pulmonares incluyen, por ejemplo, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC) y fibrosis. El cancer incluye carcinogenesis de tejidos y organos, incluyendo metastasis tales como, por ejemplo, cancer gastrointestinal (por ejemplo, cancer gastrico, cancer esofagico, cancer pancreatico, cancer colorrectal, cancer intestinal, cancer anal, cancer hepatico, cancer de la vesmula biliar o cancer de colon; cancer de pulmon; cancer de tiroides; cancer de piel (por ejemplo, melanoma); cancer bucal; cancer del tracto urinario (por ejemplo, cancer de vejiga o cancer de rinon); cancer de celulas sangumeas (por ejemplo, mieloma o leucemia) o cancer de prostata. Los trastornos cardfacos incluyen, por ejemplo, insuficiencia cardfaca congestiva, hipertension de cardias de la traquea, colesterol alto o trigliceridos altos. Los trastornos hepaticos incluyen, por ejemplo, cirrosis y fibrosis. Los trastornos oculares incluyen, por ejemplo, tension intraocular aumentada, glaucoma, ojos secos, degeneracion retiniana, trastornos de la glandula lagrimal o inflamacion ocular. Los trastornos cutaneos incluyen, por ejemplo, xerosis. Los trastornos bucales incluyen, por ejemplo, boca seca (xerostomia), enfermedad de Sjogren, enfermedades de la encfa (por ejemplo, periodontitis) o bloqueo o mal funcionamiento del conducto de la glandula salival. Los trastornos de la prostata incluyen, por ejemplo, hiperplasia prostatica benigna (HPB). Los trastornos endocrinos incluyen, por ejemplo, diabetes mellitus, hipertiroidismo, hipotiroidismo y fibrosis qmstica.

Como se utiliza en el presente documento, la expresion "guanilato ciclasa C (GC-C)" se refiere a la clase de receptor guanilato ciclasa C en cualquier tipo celular al cual los peptidos agonistas de la invencion o los agonistas naturales descritos en el presente documento se unen. Como se utiliza en el presente documento, el "receptor guanilato ciclasa intestinal" se encuentra de forma exclusiva en las celulas epiteliales que recubren la mucosa GI. Se espera que la uroguanilina, la guanilina y los peptidos ST se unan a estos receptores y puedan inducir la apoptosis. La posibilidad de que pueda haber distintos receptores para cada peptido agonista no se excluye. Por lo tanto, el termino se refiere a la clase de receptores guanilato ciclasa en las celulas epiteliales que recubren la mucosa GI.

Como se utiliza en el presente documento, la expresion “agonista de GCR” se entiende que se refiere a los peptidos y/u otros compuestos que se unen a una guanilato ciclasa C intestinal y estimulan el transporte de fluidos y de electrolitos. Esta expresion tambien incluye fragmentos y propeptidos que se unen a la GC-C y estimulan la secrecion de fluidos y de agua.

Como se utiliza en el presente documento, la expresion "sustancialmente equivalente" se entiende que se refiere a un peptido que tiene una secuencia de aminoacidos equivalente a la del dominio de union, en donde determinados restos pueden estar delecionados o reemplazados por otros aminoacidos sin afectar la capacidad del peptido de unirse a un receptor guanilato ciclasa intestinal y estimular el transporte de fluidos y electrolitos.

La adicion de transportadores (por ejemplo, solucion salina tamponada con fosfato o PBS) y de otros componentes a la composicion de la presente invencion, esta dentro del nivel de la experiencia en la tecnica. Ademas del compuesto, tales composiciones pueden contener transportadores farmaceuticamente aceptables y otros ingredientes conocidos para facilitar la administracion y/o potenciar la captacion. Tambien pueden utilizarse de acuerdo con la presente invencion otras formulaciones, tales como microesferas, nanopartmulas, liposomas y sistemas basados de forma inmunologica. Otros ejemplos incluyen formulaciones con polfmeros (por ejemplo, polietilenglicol al 20 % p/v) o celulosa, o formulaciones entericas.

La presente invencion es a base de varios conceptos. El primero es que hay un mecanismo dependiente de GMPc que regula el balance entre proliferacion y apoptosis celulares, y que una reduccion de los niveles de GMPc, debido a una deficiencia de uroguanilina/guanilina, y/o debido a la activacion de fosfodiesterasas GMPc espedficas, es una etapa temprana y cntica en la transformacion neoplasica. Un segundo concepto es que la liberacion de acido araquidonico a partir de la membrana de fosfolfpidos, lo que conduce a la activacion de la fosfolipasa A2 citoplasmatica (cPLA2), la ciclooxigenasa 2 (COX-2) y posiblemente la 5-lipooxigenasa (5-LO) durante el proceso de inflamacion, esta regulada de forma negativa mediante un mecanismo dependiente de GMPc, lo que conduce a niveles reducidos de prostaglandinas y leucotrienos, y que el aumento de los niveles intracelulares de GMPc puede por lo tanto producir una respuesta antiinflamatoria. Ademas, se cree que en el control de los procesos proinflamatorios esta implicado un mecanismo dependiente de GMPc. Por lo tanto, la elevacion de los niveles intracelulares de GMPc puede utilizarse como un medio para tratar y controlar los trastornos gastrointestinales, los trastornos inflamatorios, los trastornos pulmonares, el cancer, los trastornos cardiacos, los trastornos oculares, los trastornos bucales, los trastornos sangumeos, los trastornos hepaticos, los trastornos cutaneos, los trastornos de la prostata, los trastornos endocrinos, el aumento de la motilidad gastrointestinal y la obesidad. Los trastornos gastrointestinales incluyen, por ejemplo, el smdrome del colon irritable (SCI), dispepsia no ulcerosa, seudo

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obstruccion intestinal cronica, dispepsia funcional, seudo obstruccion del colon, reflujo duodenogastrico, enfermedad de reflujo gastroesofagico (ERGE), fleo (por ejemplo, fleo posoperatorio), gastroparesis, acidez gastrica (alta acidez en el tracto GI), estrenimiento (por ejemplo, estrenimiento asociado con el uso de medicamentos tales como opioides, farmacos para la osteoartritis, farmacos para la osteoporosis; estrenimiento posquirurgico, estrenimiento asociado con trastornos neuropaticos. Los trastornos inflamatorios incluyen inflamacion de tejidos y organos tales como inflamacion del rinon (por ejemplo, nefritis), inflamacion del aparato gastrointestinal (por ejemplo, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa); enterocolitis necrosante; inflamacion pancreatica (por ejemplo, pancreatitis), inflamacion pulmonar (por ejemplo, bronquitis o asma) o inflamacion cutanea (por ejemplo, psoriasis, eccema). Los trastornos pulmonares incluyen, por ejemplo, EPOC y fibrosis. El cancer incluye carcinogenesis de tejidos y organos incluyendo metastasis tales como, por ejemplo, cancer gastrointestinal, (por ejemplo, cancer gastrico, cancer esofagico, cancer pancreatico, cancer colorrectal, cancer intestinal, cancer anal, cancer hepatico, cancer de la vesmula biliar o cancer de colon; cancer de pulmon; cancer de tiroides; cancer de la piel (por ejemplo, melanoma); cancer bucal; cancer del tracto urinario (por ejemplo, cancer de vejiga o cancer de rinon); cancer de celulas sangumeas (por ejemplo, mieloma o leucemia) o cancer de prostata. Los trastornos cardiacos incluyen, por ejemplo, insuficiencia cardiaca congestiva, hipertension de cardias de la traquea, colesterol alto o trigliceridos altos. Los trastornos hepaticos incluyen, por ejemplo, cirrosis y fibrosis. Los trastornos oculares incluyen, por ejemplo, tension intraocular aumentada, glaucoma, ojos secos, degeneracion retiniana, trastornos de las glandulas lagrimales o inflamacion ocular. Los trastornos cutaneos incluyen, por ejemplo, xerosis. Los trastornos bucales incluyen, por ejemplo, boca seca (xerostomia), smdrome de Sjogren, enfermedades de la encfa (por ejemplo, periodontitis) o bloqueo o mal funcionamiento del conducto de la glandula salival. Los trastornos de la prostata incluyen, por ejemplo, hiperplasia prostatica benigna (HPB). Los trastornos endocrinos incluyen, por ejemplo, diabetes mellitus, hipertiroidismo, hipotiroidismo y fibrosis qrnstica.

Sin intencion de limitarse a teona alguna, se preve que el transporte de iones a traves de la membrana plasmatica pueda resultar un regulador importante del balance entre la proliferacion y la apoptosis celulares, que estara afectado por agentes que modifican las concentraciones de GMPc. Se da demostrado que la uroguanilina estimula la salida de K+, la entrada de Ca++ y el transporte de agua en el tracto gastrointestinal (3). Ademas, tambien se ha demostrado que el peptido atrial natriuretico (PAN), un peptido que tambien se une a un receptor guanilato ciclasa espedfico, induce apoptosis en celulas mesangiales de rata, y que induce apoptosis en miocitos cardiacos mediante un mecanismo de GMPc (21-24).

La union de los presentes agonistas a un receptor guanilato ciclasa estimula la produccion de GMPc. Esta interaccion ligando-receptor induce apoptosis en las celulas diana a traves de la activacion de una cascada de protema quinasas dependientes de GMPc y del CFTR. Por lo tanto, la administracion de los peptidos nuevos y los enumerados en la Tabla I es util en la eliminacion o, al menos el retraso, del inicio de los trastornos gastrointestinales, los trastornos inflamatorios, los trastornos pulmonares, el cancer, los trastornos cardiacos, los trastornos oculares, los trastornos bucales, los trastornos sangumeos, los trastornos hepaticos, los trastornos cutaneos, los trastornos endocrinos, el aumento de la motilidad gastrointestinal y la obesidad. Los trastornos gastrointestinales incluyen, por ejemplo, smdrome del colon irritable (SCI), dispepsia no ulcerosa, seudo obstruccion intestinal cronica, dispepsia funcional, seudo obstruccion colonica, reflujo duodenogastrico, enfermedad de reflujo gastroesofagico (ERGe), inflamacion del fleo (por ejemplo, fleo posoperatorio), gastroparesis, acidez gastrica (alta acidez en el tracto GI), estrenimiento (por ejemplo, estrenimiento asociado con el uso de medicamentos tales como opioides, farmacos para la osteoartritis, farmacos para la osteoporosis; estrenimiento posquirurgico, estrenimiento asociado con trastornos neuropaticos. Los trastornos inflamatorios incluyen inflamacion de tejidos y organos tales como inflamacion del rinon (por ejemplo, nefritis), inflamacion del aparato gastrointestinal (por ejemplo, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa); enterocolitis necrosante; inflamacion pancreatica (por ejemplo, pancreatitis), inflamacion pulmonar (por ejemplo, bronquitis o asma) o inflamacion cutanea (por ejemplo, psoriasis, eccema). Los trastornos pulmonares incluyen, por ejemplo, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC) y fibrosis. El cancer incluye carcinogenesis de tejidos y organos, incluyendo metastasis tales como, por ejemplo, cancer gastrointestinal, (por ejemplo, cancer gastrico, cancer esofagico, cancer pancreatico, cancer colorrectal, cancer intestinal, cancer anal, cancer hepatico, cancer de la vesmula biliar o cancer de colon; cancer de pulmon; cancer de tiroides; cancer de piel (por ejemplo, melanoma); cancer bucal; cancer del tracto urinario (por ejemplo, cancer de vejiga o cancer de rinon); cancer de celulas sangumeas (por ejemplo, mieloma o leucemia) o cancer de prostata. Los trastornos cardiacos incluyen, por ejemplo, insuficiencia cardiaca congestiva, hipertension de cardias de la traquea, colesterol alto o trigliceridos altos. Los trastornos hepaticos incluyen, por ejemplo, cirrosis y fibrosis. Los trastornos oculares incluyen, por ejemplo, tension intraocular aumentada, glaucoma, ojos secos, degeneracion retiniana, trastornos de las glandulas lagrimales o inflamacion ocular. Los trastornos cutaneos incluyen, por ejemplo, xerosis. Los trastornos bucales incluyen, por ejemplo, boca seca (xerostomia), smdrome de Sjogren, enfermedades de la encfa (por ejemplo, periodontitis) o bloqueo o mal funcionamiento del conducto de la glandula salival. Los trastornos de la prostata incluyen, por ejemplo, hiperplasia prostatica benigna (HPB). Los trastornos endocrinos incluyen, por ejemplo, diabetes mellitus, hipertiroidismo, hipotiroidismo y fibrosis qrnstica.

La uroguanilina es una hormona peptfdica circulante con actividad natriuretica que se ha descubierto que estimula el transporte de fluidos y electrolitos, de una manera similar a otra familia de enterotoxinas termoestables (peptido ST) secretadas por cepas patogenas de E. coli y otras bacterias entericas que activan el receptor guanilato ciclasa y provocan diarrea secretora. A diferencia de los peptidos ST bacterianos, la union de la uroguanilina al receptor

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guanilato ciclasa es dependiente del pH fisiologico del intestino. Por lo tanto, se espera que la uroguanilina regule el transporte de fluidos y de electrolitos en una manera dependiente del pH y sin provocar diarrea grave.

PEPTIDOS GCRA

En un aspecto, la invencion proporciona un peptido GCRA. Los peptidos GCRA son analogos de la uroguanilina, guanilina, linfoguanilina y peptidos ST. En el termino “peptido” no esta implicada una longitud particular. En algunas realizaciones, el peptido GCRa es de menos de 25 aminoacidos de longitud, por ejemplo, menos de o igual a 20, 15, 14, 13, 12, 11, 10, o 5 aminoacidos de longitud.

Los peptidos GCRA pueden ser polfmeros de L-aminoacidos, D-aminoacidos o una combinacion de ambos. Por ejemplo, en diversas realizaciones, los peptidos son peptidos retro-inversos D. La expresion “isomero retro-inverso” se refiere a un isomero de un peptido lineal en el cual la direccion de la secuencia esta invertida y la quiralidad de cada resto de aminoacido esta invertida. Vease, por ejemplo, Jameson et al., Nature, 368, 744-746 (1994); Brady et al., Nature, 368, 692-693 (1994). El resultado neto de la combinacion de D-enantiomeros y la smtesis inversa es que las posiciones de los grupos carbonilo y amino en cada enlace amida se intercambian, mientras que la posicion de los grupos de la cadena lateral en cada carbono alfa se conserva. A menos que se establezca de forma espedfica otra cosa, se presumen que cualquier secuencia de L-aminoacidos dada de la invencion puede fabricarse en un peptido retro-inverso D sintetizando una inversion de la secuencia para la correspondiente secuencia natural de L-aminoacidos. Por ejemplo, un peptido GCRA puede incluir la secuencia enumerada en la Tabla I.

Por induccion de la produccion de GMPc se entiende que el peptido GCRA induce la produccion de GMPc intracelular. El GMPc intracelular se mide mediante metodos conocidos en la tecnica. Por ejemplo, el peptido GCRA de la invencion estimula el 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 75%, 90% o mas de GMPc intracelular, en comparacion con los agonistas de la GC-C de origen natural. Naturalmente, de forma opcional, los peptidos GCRA de la invencion estimulan el 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 75%, 90% o mas de GMPc intracelular, en comparacion con SP-304. En realizaciones adicionales, el peptido GCRA estimula la apoptosis, por ejemplo la muerte celular programada, o activa el regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis qmstica (CFTR). En algunas realizaciones, los peptidos GCRA descritos en el presente documento son mas estables que los agonistas de la GC-C de origen natural y/o que SP-304. Por mas estable se entiende que el peptido se degrada menos y/o mas lentamente en fluido gastrico simulado y/o en fluido intestinal simulado, en comparacion con los agonistas de la GC-C de origen natural y/o con SP-304. Por ejemplo, el peptido GCRA de la invencion se degrada el 2 %, 3 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 75 %, 90 % o menos, en comparacion con los agonistas de la GC-C de origen natural y/o con SP-304.

Como se utiliza en el presente documento, el termino “AMIDA” se entiende que denota que el acido carboxflico terminal esta reemplazado por un grupo amida, es decir, el COOH terminal esta reemplazado por CONH2.

Como se utiliza en el presente documento (por ejemplo, en las Formulas I-III), Xaa es cualquier aminoacido o analogo de aminoacido natural o no natural; Maa es una Cistema (Cys), Penicilamina (Pen), homocistema o 3- mercaptoprolina. Xaan1 se entiende que denota una secuencia de aminoacidos de cualquier aminoacido o analogo de aminoacido natural o no natural que tiene uno o dos restos de longitud. De forma adicional, cualquier aminoacido representado por Xaa, puede ser un L-aminoacido, un D-aminoacido, un aminoacido metilado, un aminoacido fluorado o cualquier combinacion de los mismos. Preferentemente, el aminoacido en el extremo N, extremo C o ambos, son D-aminoacidos. De forma opcional, cualquier peptido GCRA representado por las Formulas I-III puede contener uno o mas restos polietilenglicol en el extremo N, extremo C o ambos. Un polietilenglicol ejemplar incluye acido aminoetiloxi-etiloxi-acetico y polfmeros del mismo.

En determinadas realizaciones, uno o mas aminoacidos de los peptidos GCRA pueden reemplazarse por un aminoacido que no es de origen natural o un aminoacido analogo de origen natural o no natural. Hay muchos aminoacidos mas alla de los 20 convencionales (Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr y VaI). Algunos son de origen natural y otros no. (Vease, por ejemplo, Hunt, The Non-Protein Amino Acids: In Chemistry and Biochemistry of the Amino Acids, Barrett, Chapman and Hall, 1985). Por ejemplo, un aminoacido aromatico puede reemplazarse por 3,4-dihidroxi-L-fenilalanina, 3-yodo-L-tirosina, triyodotironina, L- tiroxina, fenilglicina (Phg) o nortirosina (norTyr). Phg y norTyr, y otros aminoacidos incluyendo Phe y Tyr, pueden sustituirse por, por ejemplo, un halogeno, -CH3, -OH, - CH2NH3, -C(O)H, -CH2CH3, -CN, -CH2CH2CH3, -SH u otro grupo. Cualquier aminoacido puede sustituirse por la forma D del aminoacido.

Con respecto a los aminoacidos de origen no natural o los analogos de aminoacido de origen natural o no natural, son posibles varias sustituciones en el polipeptido y los agonistas descritos en el presente documento, solas o en combinacion.

Por ejemplo, los restos glutamina pueden sustituirse por gamma-hidroxi-Glu o gamma-carboxi-Glu. Los restos tirosina pueden sustituirse por un aminoacido alfa sustituido tal L-alfa-metilfenilalanina o por analogos tales como: 3- amino-Tyr; Tyr(CH3); Tyr(PO3(CH3)2); Tyr(SO3H); beta-ciclohexil-Ala; beta-(1-ciclopentenil)-Ala; beta-ciclopentil- Ala; beta-ciclopropil-Ala; beta-quinolin-Ala; beta-(2-tiazolil)-Ala; beta-(triazol-I-il)-Ala; beta-(2-piridil)-Ala; beta-(3-

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piridil)-Ala; amino-Phe; fluoro-Phe; ciclohexil-Gly; tBu-Gly; beta-(3-benzotienil)-Ala; beta-(2-tienil)-Ala; 5-metil-Trp y A- metil-Trp. Los restos prolina pueden sustituirse por homopro (acido L-pipecolico); hidroxi-Pro; 3,4-deshidro-Pro; 4- fluoro-Pro o alfa-metil-Pro, o analogos de aminoacidos ciclizados N(alfa)-C(alfa) con la estructura: n = 0, 1, 2, 3. Los restos alanina pueden sustituirse por aminoacidos alfa sustituidos o N-metilados tales como acido alfa-amino isobutmco (aib), L/D-alfa-etilalanina (L/D-isovalina), L/D-metilvalina o L/D-alfa-metileucina, o un aminoacido no natural tal como beta-fluoro-Ala. La alanina tambien puede sustituirse con: n = 0, 1, 2, 3. Los restos glicina pueden sustituirse por acido alfa-amino isobutmco (aib) o L/D-alfa-etilalanina (L/D-isovalina).

Los ejemplos adicionales de aminoacidos no naturales incluyen: un analogo no natural de tirosina; un analogo no natural de glutamina; un analogo no natural de fenilalanina; un analogo no natural de serina; un analogo no natural de treonina; un aminoacido alquilo, arilo, acilo, azido, ciano, halo, hidrazina, hidrazida, hidroxilo, alquenilo, alquinilo, eter, tiol, sulfonilo, seleno, ester, tioacido, borato, boronato, fosfo, fosfono, fosfino, heterodclico, enona, imina, aldehfdo, hidroxilamina, ceto o amino sustituido, o cualquier combinacion de los mismos; un aminoacido con un entrecruzador fotoactivable; un aminoacido marcado con espm; un aminoacido fluorescente; un aminoacido con un grupo funcional nuevo; un aminoacido que interactua de forma covalente o no covalente con otra molecula; un aminoacido de union a metales; un aminoacido que esta amidado en un sitio que no esta imidado de forma natural, un aminoacido que contiene metal; un aminoacido radioactivo; un aminoacido foto-enjaulado y/o fotoisomerizable; un aminoacido que contiene biotina o un analogo de biotina; un aminoacido glucosilado o modificado por carbohidrato; un aminoacido que contiene un ceto; aminoacidos que comprenden polietilenglicol o polieter; un aminoacido sustituido con atomos pesados (por ejemplo, un aminoacido que contiene deuterio, tritio, 13C, 15N o 18O); un aminoacido escindible de forma qrnmica o fotoescindible; un aminoacido con una cadena lateral elongada; un aminoacido que contiene un grupo toxico; un aminoacido sustituido con azucares, por ejemplo, una serina sustituida con azucares o similar; un aminoacido que contiene azucares enlazadas por carbono; un aminoacido redox-activo; un aminoacido que contiene a-hidroxi; un aminoacido que contiene amino tio acido; un aminoacido a, a disustituido; un p-aminoacido; un aminoacido cfclico que no sea prolina; una O-metil-L-tirosina; una L-3-(2-naftil)alanina; una 3- metil-fenilalanina; una p-acetil-L-fenilalanina; una O-4-alil-L-tirosina; una 4-propil-L-tirosina; una tri-O-acetil-GlcNAc p-serina; una L-Dopa; una fenilalanina fluorada; una isopropil-L-fenilalanina; una p-azido-L-fenilalanina; una p-acil-L- fenilalanina; una p-benzoil-L-fenilalanina; una L-fosfoserina; una fosfonoserina; una fosfonotirosina; una p-iodo- fenilalanina; una 4-fluorofenilglicina; una p-bromofenilalanina; una p-amino-L-fenilalanina; una isopropil-L- fenilalanina; L-3-(2-naftil)alanina; D-3-(2-naftil)alanina (dNal); un analogo de fenilalanina que contiene amino, isopropilo u O-alilo; una dopa, 0-metil-L-tirosina; un aminoacido glucosilado; una p-(propargiloxi)fenilalanina; dimetil- lisina; hidroxi-prolina; acido mercaptopropionico; metil-lisina; 3-nitro-tirosina; norleucina; acido piroglutamico; Z (carbobenzoxil); e-acetil-lisina; p-alanina; derivado de aminobenzoflo; acido aminobutmco (Abu); citrulina; acido aminohexanoico; acido aminoisobutmco (AIB); ciclohexilalanina; d-ciclohexilalanina; hidroxiprolina; nitro-arginina; nitro-fenilalanina; nitro-tirosina; norvalina; carboxilato de octahidroindol; ornitina (Orn); penicilamina (PEN); tetrahidroisoquinolina; aminoacidos protegidos por acetamidometilo y aminoacidos pegilados. Los ejemplos adicionales de aminoacidos y analogos de aminoacido no naturales pueden encontrarse en los documentos US 20030108885, US 20030082575, US20060019347 (parrafos 410-418) y las referencias citadas en ellos. Los polipeptidos de la invencion pueden incluir modificaciones adicionales que incluyen las descritas en el documento US20060019347, parrafo 589.

En algunas realizaciones, se puede reemplazar un aminoacido por un aminoacido de origen natural, no esencial, por ejemplo, taurina.

Como alternativa, los peptidos GCRA son peptidos dclicos. Los peptidos GCRA dclicos se preparan mediante metodos conocidos en la tecnica. Por ejemplo, la macrociclizacion a menudo se lleva a cabo formando un enlace amida entre los extremos N y C del peptido, entre una cadena lateral y el extremo N o C [por ejemplo, con K3Fe(CN)6 a pH 8,5] (Samson et al., Endocrinology, 137: 5182-5185 (1996)), o entre dos cadenas laterales de aminoacido, tal como cistema. Vease, por ejemplo, DeGrado, Adv Protein Chem, 39: 51-124 (1988). En diversos aspectos, los peptidos GCRA son biciclos [4,12; 7,15].

En algunos peptidos GCRA, uno o ambos miembros de una o ambas parejas de restos Cys que habitualmente forman un enlace disulfuro pueden estar reemplazados por homocistema, penicilamina, 3-mercaptoprolina (Kolodziej et al. 1996 Int J Pept Protein Res 48:274); p, p dimetilcistema (Hunt et al. 1993 Int J Pept Protein Res 42:249) o acido diaminopropionico (Smith et al. 1978 J Med Chem 2 1: 117) para formar entrecruzamientos internos alternativos en las posiciones de los enlaces disulfuro normales.

Ademas, pueden reemplazarse uno o mas enlaces disulfuros mediante entrecruzamientos covalentes alternativos, por ejemplo, una union amida (-CH2CH(O)NHCH 2- o -CH2NHCH(O)CH 2-), una union ester, una union tioester, un puente lactamo, una union carbamoilo, una union de urea, una union de tiourea, una union de fosfonato ester, una union alquilo (-CH2CH2CH2CH2-), una union alquenilo (-CH 2CH=CHCH 2-), una union eter (-CH2CH2OCH2- o -CH2OCH2CH2-), una union tioeter (-CH2CH2SCH2- o - CH2SCH2CH2-), una union amina (-CH2CH2NHCH2- o -CH2NHCH 2CH2-) o una union tioamida (-CH2CH(S)HNHCH 2- o -CH2NHCH(S)CH 2-). Por ejemplo, Ledu et al. (Proc Natl Acad. Sci. 100:11263-78, 2003) describe metodos para la preparacion de entrecruzamientos lactamo y amida. Los peptidos GCRA ejemplares que incluyen un puente lactamo incluyen, por ejemplo, a SP-370.

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Los peptidos GCRA pueden tener uno o mas enlaces polipeptidicos convencionales reemplazados por un enlace alternativo. Tales reemplazos pueden aumentar la estabilidad del polipeptido. Por ejemplo, el reemplazo del enlace peptidico entre un resto amino terminal y un resto aromatico (por ejemplo Tyr, Phe, Trp) con un enlace alternativo, puede reducir la escision por carboxipeptidasas y puede aumentar la semivida en el tracto digestivo. Los enlaces que pueden reemplazar enlaces polipeptfdicos incluyen: un enlace retro-inverso (C(O)-NH en lugar de NH-C(O); un enlace amida reducido (NH-CH2); un enlace tiometileno (S-CH2 o CH2-S); un enlace oxometileno (O-CH 2 o CH2- O); un enlace etileno (CH2-CH2); un enlace tioamida (C(S)-NH); un enlace trans-olefina (CH=CH); un enlace trans-olefina fluoro sustituido (CF=CH); un enlace cetometileno (C(O)-CHR o CHR-C(O) en donde R es H o CH3; y un enlace fluoro-cetometileno (C(O)-CFR o CFR-C(O), en donde R es H o F o CH3.

Los peptidos GCRA pueden modificarse utilizando modificaciones convencionales. Las modificaciones pueden producirse en el extremo amino (N-), carboxilo (C-), de forma interna o una combinacion de cualquiera de los anteriores. En un aspecto descrito en el presente documento, puede haber mas de un tipo de modificacion en el polipeptido. Las modificaciones incluyen, pero sin limitacion: acetilacion, amidacion, biotinilacion, cinamoilacion, farnesilacion, formilacion, miristoilacion, palmitoilacion, fosforilacion (Ser, Tyr o Thr), estearoilacion, succinilacion, sulfurilacion y ciclizacion (a traves de puentes disulfuro o ciclacion amida), y modificacion por Cys3 o Cys5. Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden tambien modificarse por 2, 4-dinitrofenilo (DNP), DNP- lisina, modificacion por 7-amino-4-metil-cumarina (AMC), flourescema, NBD (7-nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol), p-nitro- anilida, rhodamina B, EDANS (5-((acido 2-aminoetil)amino)naftalen-1-sulfonico), dabcilo, dabsilo, dansilo, rojo texas, FMOC y Tamra (tetrametilrhodamina). Los peptidos GCRA descritos en el presente documento tambien pueden conjugarse a, por ejemplo, polietilenglicol (PEG); grupos alquilo (por ejemplo, grupos alquilo lineales o ramificados C1-C20); radicales de acidos grasos; combinaciones de PEG, grupos alquilo y radicales de acidos grasos (vease, la patente de Estados Unidos 6.309.633; Soltero et al., 2001 Innovations in Pharmaceutical Technology 106-110); BSA y HLC (hemocianina de lapa californiana). La adicion de PEG y otros polfmeros que pueden utilizarse para modificar polipeptidos de la invencion se describe en el documento US20060 19347 seccion IX.

Los peptidos GCRA tambien pueden incluir derivados de peptidos GCRA, que no se pretende que incluyan formas hforidas y modificadas de los peptidos GCRA en los que determinados aminoacidos se han delecionado o reemplazado, y las modificaciones tales como en donde uno o mas aminoacidos se han cambiado a un aminoacido modificado o aminoacido no usual, y las modificaciones tales como la glucosilacion, en tanto la forma modificada conserve la actividad biologica de los peptidos GCRA. Por conservar la actividad biologica, se entiende que el GMPc y/o la apoptosis se inducen mediante el peptido GCRA, aunque no necesariamente al mismo nivel de potencia que un peptido GCRA de origen natural identificado.

Las variantes preferentes son las que tienen sustituciones de aminoacidos conservativas hechas en uno o mas restos de aminoacido no esenciales predichos. Una “sustitucion de aminoacido conservativa” es una en la que el resto de aminoacido se reemplaza por un resto de aminoacido que tiene una cadena lateral similar. Se han identificado en la tecnica las familias de restos de aminoacido que tienen cadenas laterales similares. Estas familias incluyen aminoacidos con cadenas laterales basicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas laterales acidas (por ejemplo, acido aspartico, acido glutamico), cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cistema), cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), cadenas laterales beta ramificadas (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromaticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Por lo tanto, un resto de aminoacido no esencial predicho en un polipeptido GCRA se reemplaza por otro resto de aminoacido de la misma familia de cadena lateral. Como alternativa, en otra realizacion, las mutaciones pueden introducirse aleatoriamente a lo largo de toda o parte de la secuencia codificante de GCRA, tal como mediante mutagenesis por saturacion, y los mutantes resultantes pueden explorarse para identificar mutantes que conserven actividad.

Tambien esta incluido dentro del significado de sustancialmente homologo cualquier peptido GCRA que pueda aislarse en virtud de la reactividad cruzada con anticuerpos para el peptido GCRA.

PREPARACION DE PEPTIDOS GCRA

Los peptidos GCRA se preparan facilmente utilizando tecnicas de clonacion modernas o pueden sintetizarse mediante metodos en estado solido o mediante mutagenesis dirigida. Un peptido GCRA puede incluir formas negativas dominantes de un polipeptido.

En general, la smtesis qrnmica puede realizarse utilizando smtesis peptfdica en fase en solucion o en fase solida convencional, en las que se produce una union peptfdica a traves de la condensacion directa del grupo amino de un aminoacido con el grupo carboxilo del otro aminoacido, con la eliminacion de una molecula de agua. La smtesis de enlaces peptfdicos por condensacion directa, como se formula anteriormente, requiere la supresion del caracter reactivo del grupo amino del primer y el grupo carboxilo del segundo aminoacido. Los sustituyentes enmascarantes deben permitir su eliminacion facil, sin inducir la descomposicion de la labil molecula peptfdica.

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En la smtesis en fase en solucion, puede utilizarse una amplia diversidad de metodos de acoplamiento y de grupos protectores (vease, Gross y Meienhofer, eds., "The Peptides: Analysis, Syntesis, Biology," Vol. 1-4 (Academic Press, 1979); Bodansky y Bodansky, "The Practice of Peptide Shyntesis," 2d ed. (Springer Verlag, 1994)). Ademas, son posibles la purificacion intermedia y el cambio de escala lineal. Los expertos en la materia apreciaran que la smtesis en solucion requiere la consideracion de los grupos protectores de la cadena principal y de la cadena lateral y el metodo de activacion. Ademas, es necesaria una cuidadosa seleccion de segmentos para minimizar la racemizacion durante la condensacion de segmentos. Las condiciones de solubilidad tambien son un factor. La smtesis peptfdica en fase solida utiliza un polfmero insoluble para el soporte durante la smtesis organica. La cadena peptfdica soportada por el polfmero permite el uso de etapas de lavado y filtracion simples en lugar de purificaciones laboriosas en las etapas intermedias. La smtesis peptfdica en fase solida en general puede realizarse de acuerdo con el metodo de Merrifield et al., J. Am. Chem. Soc., 1963, 85: 2149, que implica el ensamblaje de una cadena peptfdica lineal sobre un soporte de resina, utilizando aminoacidos protegidos. La smtesis peptfdica en fase solida normalmente utiliza la estrategia Boc o Fmoc, las cuales son bien conocidas en la tecnica.

Los expertos en la materia reconoceran que en la smtesis en fase solida, las reacciones de desproteccion y de acoplamiento deben proceder hasta la finalizacion y los grupos bloqueantes de cadenas laterales deben ser estables a lo largo de toda la smtesis. Ademas, la smtesis en fase solida en general es mas adecuada cuando los peptidos han de fabricarse a pequena escala.

La acetilacion del N terminal puede realizarse haciendo reaccionar el peptido final con anhndrido acetico antes de la escision de la resina. La C-amidacion se lleva a cabo utilizando una resina apropiada tal como la resina de metilbencidrilamina utilizando la tecnologfa Boc.

Como alternativa, los peptidos GCRA se producen mediante tecnicas de clonacion modernas. Por ejemplo, los peptidos GCRA se producen ya sea en bacterias que incluyen, pero sin limitacion, E. coli, o en otro sistema existente para la produccion de polipeptidos o protemas (por ejemplo, Bacillus subtilis, sistemas de expresion en baculovirus utilizando celulas Sf9 de Drosofila, sistemas de expresion en levadura o en hongos filamentosos, sistemas de expresion en celulas de mairnfero), o pueden sintetizarse de forma qmmica. Si el peptido GCRA o el peptido variante se va a producir en bacterias, por ejemplo en E. coli, la molecula de acido nucleico que codifica el polipeptido puede tambien codificar una secuencia lfder que permite la secrecion del polipeptido maduro de la celula. Por lo tanto, la secuencia que codifica el polipeptido puede incluir la presecuencia y la prosecuencia de, por ejemplo, un polipeptido ST bacteriano de origen natural. El polipeptido secretado maduro puede purificarse a partir del medio de cultivo.

La secuencia codificante de un peptido GCRA descrito en el presente documento puede insertarse en un vector que tenga la capacidad de suministrar y mantener la molecula de acido nucleico en una celula bacteriana. La molecula de ADN puede insertarse en un vector de replicacion autonoma (los vectores adecuados incluyen, por ejemplo, pGEM3Z y pcDNA3, y derivados de los mismos). El acido nucleico vector puede ser un ADN bacteriano o de bacteriofago, tal como bacteriofago lambda o M13, y derivados de los mismos. La construccion de un vector que contiene un acido nucleico descrito en el presente documento puede estar seguida de la transformacion de una celula hospedadora, tal como una bacteria. Los hospedadores bacterianos adecuados incluyen, pero sin limitacion, E. coli, B. subtilis, Pseudomonas, Salmonella. La construccion genetica tambien incluye, ademas de la molecula de acido nucleico codificante, elementos que permiten la expresion, tales como un promotor y secuencias reguladoras. Los vectores de expresion pueden contener secuencias de control transcripcional que controlan el inicio de la transcripcion, tales como promotores, potenciadores, operadores y secuencias represoras.

Los expertos en la materia conocen una diversidad de secuencias de control transcripcional. El vector de expresion puede tambien incluir una secuencia reguladora de la traduccion (por ejemplo, una secuencia 5' no traducida, una secuencia 3' no traducida o un sitio interno de entrada al ribosoma). El vector puede tener la capacidad de replicacion autonoma o puede integrarse en el ADN del hospedador para asegurar la estabilidad durante la produccion del polipeptido.

Para facilitar la purificacion, la secuencia codificante de la protema que incluye un peptido GCRA descrito en el presente documento, tambien puede fusionarse a un acido nucleico que codifica una etiqueta de afinidad a polipeptido, por ejemplo, glutation S-transferasa (GST), protema de union a maltosa E, protema A, etiqueta FLAG, hexa-histidina, etiqueta myc o la etiqueta HA de influenza. La fusion de la etiqueta de afinidad o del indicador une la fase de lectura del polipeptido de interes a la fase de lectura del gen que codifica la etiqueta de afinidad, de forma que se genera una fusion traduccional. La expresion del gen de fusion da como resultado la traduccion de un unico polipeptido que incluye tanto el polipeptido de interes como la etiqueta de afinidad. En algunos casos, cuando se utilicen etiquetas de afinidad, se fusionara la secuencia de ADN que codifica un sitio de reconocimiento para proteasa entre las fases de lectura para la etiqueta de afinidad y el polipeptido de interes.

Pueden tambien utilizarse para producir polipeptidos en un sistema biologico construcciones geneticas y metodos adecuados para la produccion de las formas inmadura y madura de los peptidos GCRA y variantes descritos en el presente documento, en sistemas de expresion de protemas que no sean bacterias, y bien conocidos para los expertos en la materia.

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Los peptidos divulgados en el presente documento pueden modificarse mediante el ligamiento a una segunda molecula que confiere una propiedad deseada al peptido, tal como una semivida aumentada en el cuerpo, por ejemplo, pegilacion. Tales modificaciones tambien estan incluidas dentro del ambito del termino “variante” como se utiliza en el presente documento.

METODOS TERAPEUTICOS

La presente invencion proporciona metodos profilacticos y terapeuticos para el tratamiento de un sujeto en riesgo de (o susceptible a) un trastorno o que tiene un trastorno asociado que esta mediado por los agonistas del receptor guanilato ciclasa. Los trastornos mediados por los agonistas del receptor guanilato ciclasa incluyen trastornos gastrointestinales, trastornos inflamatorios, trastornos pulmonares, cancer, trastornos cardiacos, trastornos oculares, trastornos bucales, trastornos sangumeos, trastornos hepaticos, trastornos cutaneos, trastornos de la prostata, trastornos endocrinos, aumento de la motilidad gastrointestinal y obesidad. Los trastornos gastrointestinales incluyen, por ejemplo, el smdrome del colon irritable (SCI), la dispepsia no ulcerosa, la seudo obstruccion intestinal cronica, la dispepsia funcional, la seudo obstruccion colonica, el reflujo duodenogastrico, la enfermedad de reflujo gastroesofagico (ERGE), fleo (por ejemplo, fleo posoperatorio), gastroparesis, acidez estomacal (alta acidez en el tracto GI), estrenimiento (por ejemplo, estrenimiento asociado con el uso de medicamentos tales como opioides, farmacos para la osteoartritis, farmacos para la osteoporosis; estrenimiento posquirurgico, estrenimiento asociado con trastornos neuropaticos. Los trastornos inflamatorios incluyen inflamacion de tejidos y organos, tales como inflamacion del rinon (por ejemplo, nefritis), inflamacion del aparato gastrointestinal (por ejemplo, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa); enterocolitis necrosante; inflamacion pancreatica (por ejemplo, pancreatitis), inflamacion pulmonar (por ejemplo, bronquitis o asma) o inflamacion cutanea (por ejemplo, psoriasis, eccema). Los trastornos pulmonares incluyen, por ejemplo, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC) y fibrosis. El cancer incluye carcinogenesis de tejidos y organos, incluyendo metastasis tal como, por ejemplo, cancer gastrointestinal (por ejemplo, cancer gastrico, cancer esofagico, cancer pancreatico, cancer colorrectal, cancer intestinal, cancer anal, cancer hepatico, cancer de vesmula biliar o cancer de colon; cancer de pulmon; cancer de tiroides; cancer de piel (por ejemplo, melanoma); cancer bucal; cancer del tracto urinario (por ejemplo, cancer de vejiga o cancer de rinon); cancer de celulas sangumeas (por ejemplo, mieloma o leucemia) o cancer de prostata. Los trastornos cardiacos incluyen, por ejemplo, insuficiencia cardiaca congestiva, hipertension de cardias de la traquea, colesterol alto o trigliceridos altos. Los trastornos hepaticos incluyen, por ejemplo, cirrosis y fibrosis. Los trastornos oculares incluyen, por ejemplo, tension intraocular aumentada, glaucoma, ojos secos, degeneracion retiniana, trastornos de las glandulas lagrimales o inflamacion ocular. Los trastornos cutaneos incluyen, por ejemplo, xerosis. Los trastornos bucales incluyen, por ejemplo, boca seca (xerostomia), smdrome de Sjogren, enfermedades de la encfa (por ejemplo, periodontitis) o bloqueo o mal funcionamiento del conducto de la glandula salival. Los trastornos de la prostata incluyen, por ejemplo, hiperplasia prostatica benigna (HPB). Los trastornos endocrinos incluyen, por ejemplo, diabetes mellitus, hipertiroidismo, hipotiroidismo y fibrosis qmstica.

El termino "tratamiento" se refiere a la reduccion o alivio de los smtomas en un sujeto, a la prevencion del empeoramiento o evolucion de los smtomas y/o la prevencion de la enfermedad en un sujeto que no esta enfermo. Para un dado sujeto, la mejora de un smtoma, su empeoramiento, su regresion o evolucion, puede determinarse mediante cualquier medida objetiva o subjetiva. La eficacia del tratamiento puede medirse como una mejora en la morbilidad o la mortalidad (por ejemplo, alargamiento de la curva de supervivencia para una poblacion seleccionada). Por lo tanto, el tratamiento eficaz incluina la terapia de la enfermedad existente, el control de la enfermedad ralentizando o deteniendo su evolucion, la prevencion de la aparicion de la enfermedad, la reduccion del numero o gravedad de los smtomas, o una combinacion de los mismos. El efecto puede mostrarse en un estudio controlado, utilizando uno o mas criterios estadfsticamente significativos.

El GMPc intracelular inducido por la exposicion, por ejemplo, poniendo en contacto un tejido (por ejemplo, tejido gastrointestinal) o celula, a agonistas de GCRA. Los receptores de GC-C se expresan en todo el tracto GI comenzando por el esofago, duodeno, yeyuno, fleo, ciego y colon. Las lmeas celulares de cancer de colon humanas (T81, CaCo-2 y HT-29) tambien expresan receptores de GC-C. Por que induce se entiende un aumento en la produccion de GMPc en comparacion con un tejido o celula que no ha estado en contacto con un peptido GCRA o una variante. Los tejidos o celulas se ponen en contacto de forma directa con un peptido de GCRA o variante. Como alternativa, el peptido GCRA o variante se administra de forma sistemica. El peptido GCRA o variante se administra en una cantidad suficiente para aumentar la concentracion intracelular de GMPc. La produccion de GMPc se mide mediante un ensayo basado en celulas conocido en la tecnica (25).

Los trastornos se tratan, previenen o alivian administrando a un sujeto, por ejemplo, un mairnfero tal como un ser humano que lo necesite, una dosis terapeuticamente eficaz de un peptido GCRa. Los peptidos GCRA pueden estar en una composicion farmaceutica en forma farmaceutica unitaria, junto con uno o mas excipientes farmaceuticamente aceptables. La expresion "forma farmaceutica unitaria" se refiere a una entidad de suministro de farmaco individual, por ejemplo, un comprimido, capsula, solucion o formulacion de inhalacion. La cantidad de peptido presente debena ser suficiente para tener un efecto terapeutico positivo cuando se administra a un paciente (normalmente, entre 10 |jg y 3 g). Lo que constituye un "efecto terapeutico positivo" dependera de la afeccion particular que se trata e incluira cualquier mejora significativa en una afeccion que un experto en la materia reconoce facilmente.

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Los peptidos GCRA pueden administrate solos o en combinacion con otros agentes. Por ejemplo, los peptidos GCRA pueden administrate en combinacion con inhibidores de la fosfodiesterasa dependiente de GMPc, tales como, por ejemplo, sulindaco sulfona, zaprinast, motapizona, vardenafil o sildenafil y, uno o mas de otros agentes quimioterapeuticos; o farmacos antiinflamatorios tales como, por ejemplo, farmacos antiinflamatorios esteroides y no esteroides (AINE), tales como la aspirina.

La terapia de combinacion puede lograrse administrando dos o mas agentes, por ejemplo, un peptido GCRA descrito en el presente documento y otro compuesto, cada uno de los cuales se formula y administra de forma separada, o administrando dos o mas agentes en una formulacion unica. La terapia de combinacion tambien abarca otras combinaciones. Por ejemplo, pueden formularse juntos y administrarse dos agentes en conjuncion con una formulacion distinta que contiene un tercer agente. Aunque los dos o mas agentes en la terapia de combinacion pueden administrarse de forma simultanea, no hay necesidad de ello. Por ejemplo, la administracion de un primer agente (o combinacion de agentes) puede preceder a la administracion de un segundo agente (o combinacion de agentes) en minutos, horas, dfas o semanas. Por lo tanto, los dos o mas agentes pueden administrarse al cabo de minutos entre sf o al cabo de 1, 2, 3, 6, 9, 12, 15, 18 o 24 horas entre sf, o al cabo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14 dfas entre sf, o al cabo de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 semanas entre st En algunos casos son posibles incluso intervalos mas prolongados. Aunque en muchos casos es conveniente que los dos o mas agentes utilizados en una terapia de combinacion esten presentes en el cuerpo del paciente al mismo tiempo, esto no tiene por que ser asf.

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden combinarse con inhibidores de la fosfodiesterasa, por ejemplo, sulindaco sulfona, Zaprinast, sildenafil, vardenafil o tadalafil, para potenciar adicionalmente los niveles de GMPc en los tejidos u organos diana.

La terapia de combinacion tambien puede incluir dos o mas administraciones de uno o mas de los agentes utilizados en la combinacion. Por ejemplo, si el agente X y el agente Y se utilizan en combinacion, se podnan administrar de forma secuencial en cualquier combinacion de una o mas veces, por ejemplo, en el orden X-Y-X, X-X-Y, Y-X-Y, Y-Y- X, X-X-Y-Y, etc.

La terapia de combinacion tambien puede incluir la administracion de uno de los agonistas de la GC-C con azotioprina y/u otros agentes inmunomoduladores. Los agentes inmunomoduladores pueden incluir farmacos de molecula pequena y productos biologicos tales como Remicade, Humaira, Cimzia, etc.

La terapia de combinacion tambien puede incluir la administracion de dos o mas agentes a traves de distintas rutas o emplazamientos. Por ejemplo, (a) un agente se administra por via oral y los otros agentes se administran por via intravenosa o (b) un agente se administra por via oral y el otro se administra por via local. En cada caso, los agentes pueden ser simultaneos o secuenciales. Las dosificaciones aproximadas para algunos de los agentes de la terapia de combinacion descritos en el presente documento se encuentran en "BNF Recommended Dose", columna de las tablas de las paginas 11-17 del documento WO01/76632 (atribuyendose los datos en las tablas al March 2000 British National Formulary) y tambien pueden encontrarse en otros formularios convencionales y otros directorios sobre prescripcion de farmacos. Para algunos farmacos, la dosis prescrita habitual para una indicacion variara en un tanto de pafs en pafs.

Los peptidos GCRA, solos o en combinacion, pueden combinarse con cualquier transportador o medio farmaceuticamente aceptable. Por lo tanto, pueden combinarse con materiales que no producen una reaccion adversa, alergica o de otro modo no deseada cuando se administran a un paciente. Los transportadores o medios utilizados pueden incluir disolventes, dispersantes, recubrimientos, agentes que estimulan la absorcion, agentes de liberacion controlada y uno o mas excipientes inertes (que incluyen almidones, polioles, agentes de granulacion, celulosa microcristalina (por ejemplo, celphere, Celphere beads®), diluyentes, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares), etc. Si se desea, las dosificaciones en comprimido de las composiciones divulgadas pueden recubrirse mediante tecnicas acuosas o no acuosas convencionales.

Una composicion farmaceutica de la invencion se formula para que sea compatible con su via pretendida de administracion. Los ejemplos de vfas de administracion incluyen la parenteral, por ejemplo, la intravenosa, intradermica, subcutanea, oral (por ejemplo, inhalacion), transdermica (topica), transmucosal y la administracion rectal. Las soluciones o suspensiones usadas para la aplicacion parenteral, intradermica o subcutanea pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente esteril tal como agua para inyeccion, solucion salina, aceites no volatiles, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros disolventes sinteticos; agentes antibacterianos tales como alcohol bendlico o metilparabenos; antioxidantes tales como acido ascorbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes tales como acido etilendiaminotetracetico; tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos, y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro de sodio o dextrosa. El pH puede ajustarse con acidos o bases, tales como acido clorhfdrico o hidroxido de sodio. La preparacion parenteral puede estar contenida en ampollas, jeringas descartables o viales de multiples dosis fabricados de vidrio o plastico.

Las composiciones farmaceuticas adecuadas para el uso inyectable incluyen soluciones (donde son solubles en agua) o dispersiones acuosas esteriles, y polvos esteriles para la preparacion extemporanea de soluciones o dispersiones inyectables esteriles. Para la administracion intravenosa, los transportadores adecuados incluyen

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solucion salina fisiologica, agua bacteriostatica, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) o solucion tamponada con fosfato (PBS). En todos los casos, la composicion debe estar esteril y debena ser fluida al punto de que exista una inyectabilidad facil. Debe ser estable en las condiciones de fabricacion y almacenamiento, y debe preservarse frente la accion contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El transportador puede ser un medio disolvente o de dispersion que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol lfquido, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamano de partfcula necesario en el caso de una dispersion y mediante el uso de tensioactivos. La prevencion de la accion de microorganismos puede lograrse mediante diversos agentes antibacterianos y antifungicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, acido ascorbico, timerosal y similares. En muchos casos, sera preferente incluir en la composicion agentes isotonicos, por ejemplo, azucares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol, cloruro de sodio. La absorcion prolongada de las composiciones inyectables puede conseguirse incluyendo en la composicion un agente que retrasa la absorcion, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

Las soluciones inyectables esteriles pueden prepararse incorporando el compuesto activo (por ejemplo, un agonista de GCRA) en la cantidad necesaria en un disolvente apropiado, con uno, o una combinacion, de los ingredientes enumerados anteriormente, segun se requiera, seguido de la esterilizacion por filtracion. En general, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto activo en un vehnculo esteril que contenga un medio de dispersion basico y los otros ingredientes necesarios de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos esteriles para la preparacion de soluciones inyectables esteriles, los metodos de preparacion son el desecado al vado y el liofilizado, que producen un polvo del principio activo mas cualquier ingrediente adicional deseado, a partir de una solucion previamente filtrada de forma esteril.

En general, las composiciones orales incluyen un diluyente inerte o un transportador comestible. Tales como manitol, fructooligosacaridos, polietilenglicol y otros excipientes. Pueden estar contenidos en capsulas de gelatina o comprimidos en comprimidos. Para el fin de administracion terapeutica oral, el compuesto activo puede incorporarse con excipientes y utilizarse en la forma de comprimido, trociscos o capsulas. Las composiciones orales tambien pueden prepararse utilizando un transportador fluido para su uso como un enjuague bucal, en el que el compuesto en el transportador fluido se aplica por via oral y se hace un enjuague y se escupe, o se traga. Pueden incluirse como parte de la composicion agentes aglutinantes farmaceuticamente compatibles y/o los materiales adyuvantes. Los comprimido, pfldoras, capsulas, trociscos y similares, pueden contener cualquiera de los siguientes ingredientes, o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante tal como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente tal como almidon o lactosa, un agente disgregante tal como acido algmico, Primogel o almidon de mafz; un lubricante tal como estearato de magnesio o Sterotes; un agente emoliente tal como dioxido de silicio coloidal; un agente edulcorante tal como sacarosa o sacarina; o un agente saborizante tal como menta, metil salicilato o aromatizante de naranja.

Para la administracion mediante inhalacion, los compuestos se suministran en la forma de pulverizacion en aerosol a partir de un envase o dosificador que contenga un propulsor adecuado, por ejemplo, un gas, tal como dioxido de carbono, o un nebulizador.

La administracion sistemica tambien puede ser por medios transmucosales o transdermicos. Para la administracion transmucosal o transdermica, se utilizan en la formulacion penetrantes apropiados para la barrera a permear. Tales penetrantes se conocen en general en la tecnica, e incluyen, por ejemplo, para la administracion transmucosal, detergentes, sales biliares y derivados de acido fusfdico. La administracion transmucosal puede conseguirse a traves del uso de aerosoles nasales o supositorios. Para la administracion transdermica, los compuestos activos se formulan en pomadas, unguentos, geles o cremas, como se conoce en general en la tecnica.

Los compuestos tambien pueden prepararse en la forma de supositorios (por ejemplo, con bases de supositorio convencionales tales como manteca de cacao y otros gliceridos) o enemas de retencion para el suministro rectal.

En una realizacion, los compuestos activos se preparan con transportadores que protegeran al compuesto frente a la eliminacion rapida del cuerpo, tales como una formulacion de liberacion controlada, incluyendo implantes y sistemas de suministro microencapsulados. Pueden utilizarse polfmeros biodegradables biocompatibles, tales como acetato de etilenvinilo, polianhndridos, acido poliglicolico, colageno, poliortoesteres y acido polilactico. Los metodos para la preparacion de tales formulaciones seran obvios para los expertos en la materia. Los materiales tambien pueden obtenerse de forma comercial de Alza Corporation y Nova Pharmaceuticals, Inc. Las suspensiones liposomales (incluyendo liposomas dirigidos a celulas infectadas con anticuerpos monoclonales frente a antfgenos vmcos) tambien pueden utilizarse como transportadores farmaceuticamente aceptables. Estos pueden prepararse de acuerdo con metodos conocidos para los expertos en la materia, por ejemplo, como se describe en la Patente de Estados Unidos N.° 4.522.811.

Para la facilidad en la administracion y uniformidad de la dosificacion es especialmente ventajoso formular composiciones orales o parenterales en formas farmaceuticas unitarias. Forma farmaceutica unitaria, como se utiliza en el presente documento, se refiere a unidades ffsicamente discretas ajustadas como dosificaciones unitarias para el sujeto a tratar; conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de compuesto activo, calculada para

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producir el efecto terapeutico deseado, en asociacion con el transportador farmaceutico necesario. La especificacion de las formas farmaceuticas unitarias de la invencion se establece por, y depende directamente de, las caractensticas exclusivas del compuesto activo y del efecto terapeutico particular a lograr.

Las composiciones farmaceuticas pueden incluirse en un recipiente, envase o dosificador, junto con instrucciones para la administracion.

Las composiciones de la presente invencion pueden incluir tambien, de forma opcional, otros ingredientes terapeuticos, agentes antiapelmazantes, conservantes, agentes edulcorantes, colorantes, saborizantes, desecantes, plastificantes, colorantes, emolientes, antiadherentes, agentes antiestatica, tensioactivos (agentes de humectacion), antioxidantes, agentes de recubrimiento en pelfcula y similares. Cualquiera de tales ingredientes opcionales puede ser compatible con el compuesto descrito en el presente documento, para asegurar la estabilidad de la formulacion.

La composicion puede contener otros aditivos segun se necesario, incluyendo, por ejemplo, lactosa, glucosa, fructosa, galactosa, trehalosa, sacarosa, maltosa, rafinosa, maltitol, melezitosa, estaquiosa, lactitol, palatinita, almidon, xilitol, manitol, mioinositol, y similares, e hidratos de los mismos, y aminoacidos, por ejemplo, alanina, glicina y betama, y polipeptidos y protemas, por ejemplo albumina.

Los ejemplos de excipientes para su uso como los transportadores farmaceuticamente aceptables, y los transportadores inertes farmaceuticamente aceptables y los ingredientes adicionales anteriormente mencionados incluyen, pero sin limitacion, aglutinantes, rellenos, disgregrantes, lubricantes, agentes microbianos y agentes de recubrimiento tales como: AGLUTINANTES: almidon de mafz, almidon de patata, otros almidones, gelatina, gomas naturales y sinteticas tales como arabiga, de xantano, alginato de sodio, acido algmico, otros alginatos, de tragacanto en polvo, goma guar, celulosa y sus derivados (por ejemplo, etilcelulosa, acetato de celulosa, carboximetilcelulosa de calcio, carboximetilcelulosa de sodio), polivinilpirrolidona (por ejemplo, povidona, crospovidona, copovidona, etc.), metilcelulosa, Methocel, almidon pregelatinizado (por ejemplo, STARCH 1500® y STARCH 1500 LM®, vendido por Colorcon, Ltd.), hidroxipropilmetil celulosa, celulosa microcristalina (FMC Corporation, Marcus Hook, PA, Ee. UU.), o mezclas de los mismos, RELLENOS: talco, carbonato de calcio (por ejemplo, granulos o polvo), fosfato dibasico de calcio, fosfato tribasico de calcio, sulfato de calcio (por ejemplo, granulos o polvo), celulosa microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, caolm, manitol, acido silfcico, sorbitol, almidon, almidon pregelatinizado, dextrosa, fructosa, miel, lactosa anhidra, monohidrato de lactosa, lactosa y aspartamo, lactosa y celulosa, lactosa y celulosa microcristalina, maltodextrina, maltosa, manitol, celulosa microcristalina y amp; goma guar, melaza, sacarosa o mezclas de los mismos, DISGREGANTES: agar-agar, acido algmico, carbonato de calcio, celulosa microcristalina, croscarmelosa de sodio, crospovidona, polacrilina de potasio, almidon glicolato de sodio, almidon de patata o tapioca, otros almidones, almidon pregelatinizado, arcillas, otras alginas, otras celulosas, gomas (como gellan), hidroxipropil celulosa de baja sustitucion, o mezclas de los mismos, LUBRICANTES: estearato de calcio, estearato de magnesio, aceite mineral, aceite mineral ligero, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenglicol, otros glicoles, acido estearico, laurilsulfato de sodio, estearil fumarato de sodio, lubricantes de acidos grasos de base vegetal, talco, aceite vegetal hidrogenado (por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon, aceite de girasol, aceite de sesamo, aceite de oliva, aceite de mafz y aceite de soja), estearato de zinc, etil oleato, etil laurato, agar, gel de sflice syloid (AEROSIL 200, W.R. Grace Co., Baltimore, MD, EE. UU.), un aerosol coagulado de sflice sintetico (Deaussa Co., Piano, TX USA), un dioxido de silicio pirogenico (CAB-O-SIL, Cabot Co., Boston, MA, EE. UU.), o mezclas de los mismos, AGENTES ANTIAPELMAZANTES: silicato de calcio, silicato de magnesio, dioxido de silicio, dioxido de silicio coloidal, talco o mezclas de los mismos, AGENTES ANTIMICROBIANOS: cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, acido benzoico, alcohol bendlico, butilparabeno, cloruro de cetilpiridinio, cresol, clorobutanol, acido deshidroacetico, etilparabeno, metilparabeno, fenol, alcohol feniletilico, fenoxietanol, acetato fenilmercurico, nitrato fenilmercurico, sorbato de potasio, propilparabeno, benzoato de sodio, deshidroacetato de sodio, propionato de sodio, acido ascorbico, timerosal, thymo, o mezclas de los mismos, AGENTES DE RECUBRIMIENTO: carboximetilcelulosa de sodio, acetato ftalato de celulosa, etilcelulosa, gelatina, esmalte farmaceutico, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa (hipromelosa), hidroxipropilmetilcelulosa ftalato, metilcelulosa, polietilenglicol, acetato de polivinilo ftalato, goma laca, sacarosa, dioxido de titanio, cera carnauba, cera microcristalina, goma gellan, maltodextrina, metacrilatos, celulosa microcristalina y carragenano, o mezclas de los mismos.

La formulacion tambien puede incluir otros excipientes y categonas de los mismos que incluyen, pero sin limitacion, L-histidina, Pluronic®, Poloxameros (tales como Lutrol® y Poloxamero 188), acido ascorbico, glutation, potenciadores de la permeabilidad (por ejemplo, lfpidos, colato de sodio, acilcarnitina, salicilatos, sales biliares en mezcla, micelas de acidos grasos, quelantes, acidos grasos, tensioactivos, gliceridos de cadena media), inhibidores de proteasas (por ejemplo, inhibidores de tripsina de soja, acidos organicos), agentes reductores del pH y potenciadores de la absorcion eficaces para estimular la biodisponibilidad (que incluyen, pero sin limitacion, los descritos en el documento US6086918 y US5912014), cremas y lociones (como maltodextrina y carragenanos); materiales para comprimidos masticables (como dextrosa, fructosa, monohidrato de lactosa, lactosa y aspartamo, lactosa y celulosa, maltodextrina, maltosa, manitol, celulosa microcristalina y goma guar, sorbitol cristalino); parenterales (como manitol y povidona); plastificantes (como sebacato de dibutilo, plastificantes para recubrimientos, ftalato de acetato de polivinilo); lubricantes en polvo (como behenato de glicerilo); capsulas de gelatina blanda (como solucion especial de sorbitol); esferas para recubrimiento (como esferas de azucar); agentes de esferonizacion

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(como behenato de glicerilo y celulosa microcristalina); agentes de suspension/gelificantes (como carragenano, goma gellan, manitol, celulosa microcristalina, povidona, almidon glicolato de sodio, goma de xantano); edulcorantes (aspartamo, aspartamo y lactosa, dextrosa, fructosa, miel, maltodextrina, maltosa, manitol, melazas, sorbitol cristalino, solucion especial de sorbitol, sacarosa); agentes de granulacion humedos (como carbonato de calcio, lactosa anhidra, monohidrato de lactosa, maltodextrina, manitol, celulosa microcristalina, povidona, almidon), caramelo, carboximetilcelulosa de sodio, sabor de crema de cereza y sabor de cereza, acido cftrico anhidro, acido cftrico, azucar de pastelero, D&C Rojo N.° 33, D&C Amarillo N.° 10 laca de aluminio, edetato de disodio, alcohol etflico al 15 %, FD&C Amarillo N.° 6 laca de aluminio, , FD&C Azul N.° 1 laca de aluminio, FD&C Azul N.° 1, FD&C Azul N.° 2 laca de aluminio, FD&C Verde N.° 3, FD&C Rojo N.° 40, FD&C Amarillo N.° 6 laca de aluminio, FD&C Amarillo N.° 6, FD&C Amarillo N.° 10, palmitoestearato de glicerol, monoestearato de glicerilo, carmm de indigo, lecitina, manitol, metil y propil parabenos, glicirricinato de monoamonio, sabor de naranja natural y artificial, esmalte farmaceutico, poloxamero 188, polidextrosa, polisorbato 20, polisorbato 80, polividona, almidon de mafz pregelatinizado, almidon pregelatinizado, oxido de hierro rojo, sacarina de sodio, carboximetileter de sodio, cloruro de sodio, citrato de sodio, fosfato de sodio, sabor de fresa, oxido de hierro negro sintetico, oxido de hierro rojo sintetico, dioxido de titanio y cera blanca.

Las formas farmaceuticas orales solidas pueden tratarse de forma opcional con sistemas de recubrimiento (por ejemplo, sistema de recubrimiento en peftcula Opadry® fx, por ejemplo Opadry® blue (OY-LS-20921), Opadry® white (YS-2-7063), Opadry® white (YS-1-7040) y tinta negra (S-1-8 106).

Los agentes, en su forma libre o como una sal, pueden combinarse con un poftmero tal como acido polilactico- glicolico (PLGA), acido poli-(I)-lactico-glicolico-tartarico (P(I)LGT) (documento WO 01/12233), acido poliglicolico (documento US 3.773.919), acido polilactico (documento US 4.767.628), poli(g-caprolactona) y poli(oxido de alquileno) (documento US 20030068384), para crear una formulacion de liberacion sostenida. Tales formulaciones pueden utilizarse en implantes que liberan un polipeptido u otro agente activo a lo largo de un penodo de varios dfas, unas varias semanas o varios meses dependiendo del poftmero, el tamano de partfcula del poftmero y el tamano del implante (vease, por ejemplo, el documento US 6.620.422). Otras formulaciones de liberacion sostenida y poftmeros para su uso se describen en los documentos EP 0 467 389 A2, WO 93/24150, US 5.612.052, WO 97/40085, WO 03/075887, WO 01/01964A2, US 5.922.356, WO 94/155587, WO 02/074247A2, WO 98/25642, US 5.968.895, US 6.180.608, US 20030171296. US 20020176841, US 5.672.659, US 5.893.985, US 5.134.122, US 5.192.741, US 5.192.741, US 4.668.506, US 4.713.244, US 5.445.832 US 4.931.279, US ,5.980.945, WO 02/058672, WO 9726015, WO 97/04744 y US200200 19446. En tales formulaciones de liberacion sostenida las micropartfculas (Delie y Blanco-Prieto 2005 Molecule 10:65-80)) de polipeptido se combinan con micropartfculas de poftmero. Pueden colocarse uno o mas implantes de liberacion sostenida en el intestino grueso, el intestino delgado o en ambos. Los documentos US 6.011.0 1 y el documento WO 94/06452 describen una formulacion de liberacion sostenida que proporciona polietilenglicoles (es decir, PEG 300 y PEG 400) o triacetina. El documento WO 03/053401 describe una formulacion que puede potenciar la biodisponibilidad y proporcionar la liberacion controlada del agente dentro del tracto GI. Se describen formulaciones de liberacion controlada adicionales en los documentos WO 02/38129, EP 326151, US 5236.704, WO 02/30398, WO 98/13029; US 20030064105, US 20030138488A1, US 20030216307A1, US 6.667.060, WO 01/49249, WO 01/49311, WO 01/49249, WO 01/49311 y US 5,877,224, materiales que pueden incluir los descritos en el documento WO04041195 (que incluye el sello y el recubrimiento gastrorresistente descritos alft) y recubrimientos sensibles a pH que logran el suministro en el colon, incluyendo los descritos en los documentos US4.910.021 y WO9001329. El documento US4910021 describe el uso de un material sensible a pH para recubrir una capsula. El documento WO9001329 describe el uso de recubrimientos sensibles a pH sobre perlas que contienen acido, en donde el acido en el nucleo de la perla prolonga la disolucion del recubrimiento sensible a pH. La Patente de Estados Unidos N.° 5.175.003 divulga una mezcla polimerica de mecanismo doble compuesta de materiales gastrorresistente sensibles a pH y plastificantes formadores peftcula que tienen la capacidad de conferir permeabilidad al material gastrorresistente, para su uso en sistemas de suministro de farmacos; un granulo de matriz compuesto de una mezcla polimerica de mecanismo doble impregnada con un farmaco y que en ocasiones recubre un nucleo farmaceuticamente neutro; un granulo recubierto de membrana que comprende un granulo de matriz recubierto con una envoltura de mezcla polimerica de mecanismo doble de la misma o distinta composicion y una forma farmaceutica que contiene granulos de matriz. El granulo de matriz libera farmacos solubles en acido por difusion en pH acido y por desintegracion a niveles de pH de forma nominal de aproximadamente 5,0 o mayores.

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden formularse en sistemas de liberacion controlada dirigidos desencadenados por pH descritos en el documento WO04052339. Los agentes descritos en el presente documento pueden formularse de acuerdo con la metodologfa descrita en cualquiera de los documentos WO03105812 (poftmeros hidratables extruidos); WO0243767 (translocadores de membrana escindibles por enzimas); WO03007913 y WO03086297 (sistemas mucoadhesivos); WO02072075 (formulacion laminada de bicapa que comprende un agente reductor del pH y un potenciador de la absorcion); WO04064769 (polipeptidos amidados); WO05063156 (suspension lipfdica solida con propiedades seudotropicas y/o tixotropicas tras la fusion); WO03035029 y WO03035041 (formas farmaceuticas de retencion gastrica erosionables); US5007790 y US5972389 (formas farmaceuticas de liberacion sostenida); WO041 1271 1 (composiciones orales de liberacion prolongada); WO05027878, WO02072033 y WO02072034 (composiciones de liberacion retardada con goma natural o sintetica); WO05030182 (formulaciones de liberacion controlada con una tasa ascendente de liberacion); WO05048998 (sistema de microencapsulacion); Patente de Estados Unidos 5.952.314 (biopoftmero); US5.108.758 (suministro de

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matriz de amilosa vftrea); US5.840.860 (suministro a base de almidon modificado). Documento JP10324642 (sistema de suministro que comprende quitosano y material resistente gastrico tal como gliadina de trigo o zema); US5.866.619 y US6.368.629 (polfmero que contiene sacaridos); US 6.531.152 (describe un sistema de suministro de farmacos que contiene un nucleo soluble en agua (pectinato de Ca u otros polfmeros insolubles en agua) y una cubierta externa que se rompe (por ejemplo, polfmero hidrofobo-Eudragrit)); US 6.234.464; US 6.403.130 (recubrimiento con polfmero que contiene casema y metoxi pectina alta; WO0174 175 (producto de reaccion Maillard); WO05063206 (formulacion de aumento de la solubilidad); WO040 19872 (protemas de fusion de transferencia).

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden formularse utilizando la tecnologfa sistema de retencion gastrointestinal (GIRES (acronimo de gastrointestinal retention system); Merrion Pharmaceuticals). GIRES comprende una forma farmaceutica de liberacion controlada dentro de una bolsa inflable, que se coloca en una capsula farmacologica para la administracion oral. Tras la disolucion de la capsula, un sistema que genera gas infla la bolsa en el estomago, en donde se retiene durante 16-24 horas, liberando durante todo ese tiempo los agentes descritos en el presente documento.

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden formularse en un dispositivo osmotico que incluye los descritos en los documentos Us4.503.030, US5.609.590 y US5.358.502. El documento US4.503.030 divulga un dispositivo osmotico para dispensar un farmaco a determinadas regiones de pH del tracto gastrointestinal. De forma mas particular, la invencion se refiere a un dispositivo osmotico que comprende una pared formada de una composicion sensible a pH semipermeable que rodea un compartimiento que contiene un farmaco, con un pasaje a traves de la pared que conecta el exterior del dispositivo con el compartimiento. El dispositivo suministra el farmaco a una velocidad controlada en la region del tracto gastrointestinal que tiene un pH de menos de 3,5, y el dispositivo se autodestruye y libera todo su farmaco en la region del tracto gastrointestinal que tiene un pH mayor que 3,5, proporcionando de este modo la disponibilidad total para la absorcion del farmaco. Las Patentes de Estados Unidos N.° 5.609.590 y 5.358.502 divulgan un dispositivo de ruptura osmotica para dispensar un agente beneficioso a un entorno acuoso. El dispositivo comprende un agente beneficioso y un osmoagente rodeados, al menos en parte, por una membrana semipermeable. El agente beneficioso tambien puede funcionar como el osmoagente. La membrana semipermeable es permeable al agua y sustancialmente impermeable al agente beneficioso y al osmoagente. Se acopla un medio accionador a la membrana semipermeable (por ejemplo, une dos mitades de capsula). El medio accionador se activa por un pH de 3 a 9 y acciona el suministro eventual, pero repentino, del agente beneficioso. Estos dispositivos permiten la liberacion accionada por pH del nucleo del agente beneficioso como un bolo mediante ruptura osmotica.

AGENTES EJEMPLARES PARA LA TERAPIA DE COMBINACION

Agentes analgesicos

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden utilizarse en la terapia de combinacion con un agente analgesico, por ejemplo, un compuesto analgesico o un polipeptido analgesico. Estos polipeptidos y compuestos pueden administrarse con los peptidos GCRA descritos en el presente documento (de forma simultanea o secuencial). De forma opcional pueden estar enlazados o ligados de forma covalentemente a un agente descrito en el presente documento para crear conjugados terapeuticos. Entre los agentes analgesicos utiles estan: bloqueantes del canal Ca, antagonistas del receptor 5HT (por ejemplo, antagonistas de los receptores 5HT3, 5HT4 y 5HT1), agonistas del receptor de opioides (loperamida, fedotozina y fentanilo), antagonistas del receptor NK1, agonistas del receptor CCK (por ejemplo, loxiglumida), antagonistas del receptor NK1, antagonistas del receptor NK3, inhibidores de la recaptacion de norepinefrina-serotonina (IRNS), agonistas de los receptores de vanilloides y cannabinoides, y sialorfina. Los agentes analgesicos en las diversas clases se describen en la bibliograffa.

Entre los polipeptidos analgesicos utiles estan los polipeptidos relacionados con la sialorfina, que incluyen los que comprenden la secuencia de aminoacidos QHNPR (sEq ID NO:), incluyendo: VQHNPR (SEQ ID NO:); VRQHNPR (SEQ ID NO:); VRGQHNPR (SEQ ID NO:); VRGPQHNPR (SEQ ID NO:); VRGPRQHNPR (SEQ ID NO:); VRGPRRQHNPR (SEQ ID NO:) y RQHNPR (SEQ ID NO:). Los polipeptidos relacionados con la sialorfina se unen a neprilesina e inhiben la descomposicion mediada por neprilesina de la sustancia P y Met-encefalina. Por lo tanto, los compuestos o polipeptidos que son inhibidores de la neprilesina son agentes analgesicos utiles que pueden administrarse con los polipeptidos descritos en el presente documento en una coterapia o unirse con los polipeptidos descritos en el presente documento, por ejemplo, mediante enlaces covalentes. La sialofina y los polipeptidos relacionados se describen en la Patente de Estados Unidos 6.589.750; el documento US 20030078200 A1 y el documento WO 02/051435 A2.

Los antagonistas y agonistas del receptores de opioides se pueden administrar con los peptidos GCRA descritos en el presente documento en una coterapia o unidos al agente descrito en el presente documento, por ejemplo, mediante un enlace covalente. Por ejemplo, se cree que en el tratamiento del SCI son utiles los antagonistas del receptor de opioides tales como naloxona, naltrexona, metil nalozona, nalmefeno, cipridima, beta funaltrexamina, naloxonazina, naltrindol y nor-binaltorfimina. Puede ser util para formular antagonistas de opioides de este tipo una formulacion de liberacion retardada y sostenida, de forma que la liberacion inicial del antagonista este en el intestino

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delgado medio a distal y/o en el colon ascendente. Tales antagonistas se describen en el documento WO 01/32180 A2. El pentapeptido encefalina (HOE825, Tyr-D-Lys-Gly-Phe-L-homoserina) es un agonista de los receptores de opioides mu y delta, y se cree que es util para aumentar la motilidad intestinal (Eur. J. Pharm. 219:445, 1992), y este polipeptido puede utilizarse junto con los polipeptidos descritos en el presente documento. Tambien es util la trimebutina, la cual se cree que se une a los receptores de opioides mu/delta/kappa y activa la liberacion de la motilina y modula la liberacion de gastrina, polipeptido intestinal vasoactivo, gastrina y los glucagones. Los agonistas de receptores de opioides Kappa, tales como fedotozina, asimadolina y la cetociclazocina, y los compuestos descritos en los documentos WO03/097051 y WO05/007626, pueden utilizarse con, u unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento. Ademas, pueden utilizarse los agonistas del receptor de opioides mu tales como morfina, difeniloxilato, frakefamida (H-Tyr-D-Ala-Phe(F)-Phe-NH 2; documento WO 01/019849 A1) y loperamida.

Tyr-Arg (quiotorfina) es un dipeptido que actua estimulando la liberacion de metencefalinas para producir un efecto analgesico (J. Biol. Chem 262:8165, 1987). La quiotorfina puede utilizarse con, o unirse a, los peptidos GCRA descritos en el presente documento.

El polipeptido derivado de la cromogranina (CgA 47-66; vease, por ejemplo, Ghia et al., 2004 Regulatory polypeptides 119:199) puede utilizarse con, o unirse a, los peptidos GCRA descritos en el presente documento.

Los agonistas del receptor CCK tales como la caeruleina de anfibios y otras especies, son agentes analgesicos utiles que pueden utilizarse con, o unirse a, los peptidos GCRA descritos en el presente documento.

Los polipeptidos de canotoxina representan una clase grande de polipeptidos analgesicos que actuan en los canales de calcio regulados por voltaje, los receptores de NMDA o los receptores nicotmicos. Estos polipeptidos pueden utilizarse con, o unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento.

Los analogos peptfdicos de la timulina (solicitud FR 2830451) pueden tener actividad analgesica y pueden utilizarse con, o unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento.

Los agonistas del receptor CCK (CCKa o CCKb), que incluyen loxiglumida y dexloxiglumida (el isomero R de loxiglumida) (documento WO 88/05774), pueden tener actividad analgesica y pueden utilizarse con, o unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento.

Otros agentes analgesicos utiles incluyen agonistas de 5-HT4 tales como tegaserod (Zelnorm®), mosaprida, metoclopramida, zacoprida, cisaprida, renzaprida, derivados de bencimidazol tales como BIMU 1 y BIMU 8, y lirexaprida. Tales agonistas se describen en los documentos: EP1321 142 A1, WO 03/053432A1, EP 505322 A1, Ep 505322 B1, US 5.510.353, EP 507672 A1, EP 507672 B1 y US 5.273.983.

Los bloqueantes del canal de calcio tales como ziconotida y los compuestos relacionados descritos en, por ejemplo, los documentos EP 625162B1, US 5.364.842, US 5.587.454, US 5.824.645, US 5.859.186, US 5.994.305, US 6.087.091, US 6.136.786, WO 93/13128 A1, EP 1336409 A1, EP 835126 A1, EP 835126 B1, US 5.795.864, US 5.891.849, US 6.054.429, WO 97/01351 A1, pueden utilizarse con, o unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento.

Pueden utilizarse con, o unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento diversos antagonistas de los receptores NK-I, NK-2 y NK-3 (para una revision vease Giardina et al., 2003.Drugs 6:758).

Los antagonistas del receptor NK1, tales como: aprepitant (Merck & Co Inc), vofopitant, ezlopitant (Pfizer, Inc.), R-673 (Hoffmann-La Roche Ltd), SR-48968 (Sanofi Synthelabo), CP-122,721 (Pfizer, Inc.), GW679769 (Glaxo Smith Kline), TAK-637 (Takeda/Abbot), SR-14033 y los compuestos relacionados descritos en, por ejemplo, los documentos EP 873753 A1, US 20010006972 A1, US 20030109417 A1, WO 01/52844 A1, pueden utilizarse con, o unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento.

Los antagonistas del receptor NK-2, tales como nepadutant ((Menarini Ricerche SpA), saredutant (Sanofi- Synthelabo), GW597599 (Glaxo Smith Kline), SR-144190 (Sanofi-Synthelabo) y UK-290795 (Pfizer Inc), pueden utilizarse con, o unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento.

Los antagonistas del receptor NK3 tales como osanetant (SR-142801; Sanofi-Synthelabo), SSR-241586, talnetant y los compuestos relacionados descritos en, por ejemplo, los documentos WO 02/094187 A2, EP 876347 A1, WO 97/21680 A1, US 6.277.862, WO 98/1 1090, WO 95/28418, WO 97/19927 y Boden et al. (J Med Chem. 39:1664-75, 1996), pueden utilizarse con, o unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento.

Pueden utilizarse con, o unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento los inhibidores de la recaptacion de norepirefrina-serotonina (iRnS), tales como milnacipran y los compuestos relacionados descritos en el documento WO 03/077897 A1.

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Pueden utilizarse con, o unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento los antagonistas de receptor de vanilloides, tales como arvanil y los compuestos relacionados descritos en el documento WO 01/64212 A1.

Los polipeptidos y compuestos analgesicos pueden administrate con los polipeptidos y agonistas descritos en el presente documento (de forma simultanea o secuencial). Los agentes analgesicos pueden unirse tambien, de forma covalente, a los polipeptidos y agonistas descritos en el presente documento, para crear conjugados terapeuticos. Cuando el analgesico es un polipeptido y esta unido de forma covalente a un agente descrito en el presente documento, el polipeptido resultante tambien puede incluir al menos un sitio de escision para tripsina. Cuando esta presente dentro del polipeptido, el polipeptido analgesico puede estar precedido por (si esta en el extremo carboxilo), o seguido por (si esta en el extremo amino), un sitio de escision para tripsina que permita la liberacion del polipeptido analgesico.

Ademas de los polipeptidos relacionados con sialorfina, los polipeptidos analgesicos incluyen: AspPhe, endomorfina 1, endomorfina 2, nocistatina, dalargina, lupron, ziconotida y sustancia P.

Agentes para tratar trastornos gastrointestinales

Los ejemplos de agentes terapeuticos adicionales para tratar trastornos gastrointestinales y otros incluyen agentes para tratar el estrenimiento (por ejemplo, un activador del canal de cloruro tal como el acido graso bidclico, Lubiprostona (anteriormente conocida como SPI-0211, Sucampo Pharmaceuticals, Inc. Bethesda, MD), un laxante (por ejemplo, un laxante formador de masa (por ejemplo, polisacaridos que no son almidon, Comprimido Colonel (policarbofilo de calcio), Plantago Ovata®, Equalactin® (policarbofilo de calcio)), fibra (por ejemplo,. FIBERCON® (policarbofilo de calcio), un laxante osmotico, un laxante estimulante (tal como difenilmetanos (por ejemplo, bisacodilo), antraquinonas (por ejemplo, cascara, senna) y laxantes tensioactivos (por ejemplo, aceite de ricino, docusatos), un agente emoliente/lubricante (tal como aceite mineral, glicerina y docusatos) MiraLax (Braintree Laboratories, Braintree MA), dexloxiglumida (Forest Laboratories, tambien conocido como CR 2017 Rottapharm (Rotta Research Laboratorium SpA)), laxantes salinos, enemas, supositorios y CR 3700 (Rottapharm (Rotta Research Laboratorium SpA); agentes inhibidores de la secrecion acida, tales como los inhibidores de la bomba de protones (por ejemplo, omeprazol (Prilosec®), esomeprazol (Nexium®), lansoprazol (Prevacid®), pantoprazol (Protonix®) y rabeprazol (Aciphex®)) y agonistas del receptor de la Histamina H2 (tambien conocido como bloqueantes del receptor de H2, que incluyen cimetidina, ranitidina, famotidina y nizatidina); agentes procineticos que incluyen itoprida, octreotida, betanecol, metoclopramida (Reglan®), domperidona (Motilium®), eritromicina (y derivados de la misma) o cisaprida (propulsid®); homologos de polipeptidos de procineticina, variantes y quimeras de los mismos, incluyendo los descritos en el documento US 7.052.674, los cuales pueden utilizarse con, o unirse a, los polipeptidos descritos en el presente documento; agentes promotilidad tales como el polipeptido derivado de la vasostatina, cromogranina A (4-16) (vease, por ejemplo, Ghia et al. 2004 Regulatory polypeptides 121:31) o agonistas de la motilina (por ejemplo, GM-611 o fumarato de mitemcinal) o moduladores del receptor de nociceptina/Orfanina FQ documento (US200501 69917); otros peptidos que pueden unirse a, y/o activar, la GC-C, incluyendo los descritos en el documento US20050287067; agonistas o antagonistas completos o parciales del receptor 5HT (por ejemplo, 5HT1, 5HT2, 5HT3, 5HT4) (incluyendo antagonistas de 5HT1A (por ejemplo, AG1-OO1 (AGI therapeutics), antagonistas de 5HT2B (por ejemplo, PgN 1091 y PGN1 164 (Pharmagene Laboratories Limited) y agonistas del receptor 5HT4 (tales como tegaserod (ZELNORM®), prucaloprida, mosaprida, metoclopramida, zacoprida, cisaprida, renzaprida, derivados de benzimidazolona tales como BIMU 1 y BIMU 8, y lirexaprida). Tales agonistas/moduladores se describen en los documentos: EP1321142 A1, WO 03/053432A1, EP 505322 A1, EP 505322 B1, US 5.510.353, EP 507672 A1, EP 507672 B1, US 5.273.983 y US 6.951.867); agonistas del receptor 5HT3 tales como MKC-733 y antagonistas del receptor 5HT3 tales como DDP-225 (MCl-225, Dynogcn Pharmaceuticals, Inc.), cilansetron (Calmactin®), alosetron (Lotronex®), Ondansetron HCl (Zofran®), Dolasetron (ANZEMET®), palonosetron (Aloxi®), Granisetron (Kytril®), YM060 (ramosetron; Astellas Pharma Inc.; romasetron se pueden proporcionar como una dosis diaria de 0,002 a 0,02 mg, como se describe en el documento EP01588707) y ATI-7000 (Aryx Therapeutics, Santa Clare CA); agonistas del receptor muscarmico; agentes antiinflamatorios; antiespasmodicos que incluyen, pero sin limitacion, farmacos anticolinergicos (como la diciclomina) (por ejemplo, Colimex®, Formulex®, Lomine®, Protylol®, Visceral®, Spasmoban®, Bentyl®, Bentyol®), hiosciamina (por ejemplo, IB-Stat®, Nulev®, Levsin®, Levbid®, Levsinex Timecaps®, Levsin/SL®, Anaspoz®, A-Spas S/L®, Cystospaz®, Cystospaz-M®, Donnamar®, Colidrops Liquid Pediatric®, Gastrosed®, Hyco Elixir ®, Hyosol®, Hyospaz®, Hyosyne®, Losamine®, Medispaz®, Neosol®, Spacol®, Spasdel®, Symax®, Symax SL®), Donnatal (por ejemplo, Donnatal® Extentabs), clidinio (por ejemplo, Quarzan, en combinacion de Librium = Librax), metantalina (por ejemplo, Banthina), Mepenzolato (por ejemplo, Cantil), homatropina (por ejemplo, hycodan, Homapina), bromuro de propantelina (por ejemplo, Pro-Banthina), Glucopirrolato (por ejemplo, Robinul®, Robinul Forte®), escopolamina (por ejemplo, Transderm-Scop®, Transderm-V®), hiosina-N-butilbromuro (por ejemplo, Buscopan®), Pirenzepina (por ejemplo, Gastrozepin®), Bromuro de Propantelina (por ejemplo, Propanthel®), dicicloverina (por ejemplo, Merbentyl®), bromuro de glucopirronio (por ejemplo, Glycopyrrolate®), hidrobromuro de hioscina, metobromuro de hioscina, metantelinio y octatropine); aceite de menta y relajantes del musculo liso directos como bromuro de cimetropio, mebeverina (DUSPATAL®, DUSPATALIN®, COLOFAC MR®, COLOTAL®), bromuro de otilonio (octilonio), pinaverio (por ejemplo, Dicetel® (bromuro de pinaverio, Solvay SA)), Spasfon® (floroglucinol hidratado y trimetilfloroglucinol) y trimebutina (que incluye maleato de trimebutina (Modulon®)), antidepresivos, que incluyen, pero sin limitacion, los enumerados en el presente documento, asf como antidepresivos tridclicos como amitriptilina

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(Elavil®), desipramina (Norpramin®), imipramina (Tofranil®), amoxapina (Asendin®), nortriptilina, inhibidores selectivos de la recaptacion de serotonina (los ISRS), como paroxetina (Paxil®), fluoxetina (Prozac®), sertralina (Zoloft®) y citralopram (Celexa®), y otros como doxepina (Sinequan®) y trazodona (Desyrel®); agentes analgesicos que actuan de forma central, tales como agonistas del receptor de opioides, antagonistas del receptor de opioides (por ejemplo, naltrexona); agentes para el tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal; agentes para el tratamiento de la enfermedad de Crohn y/o la colitis ulcerosa (por ejemplo, alequel (Enzo Biochem, Inc., Farmingsale, NY); el polipeptido antiinflamatorio RDP58 Genzyme, Inc.; Cambridge, MA) y TRAFICET-EN™ (ChemoCentryx, Inc.; San Carlos, CA); agentes que tratan el dolor gastrointestinal o visceral; agentes que aumentan los niveles de GMPc (como se describe en el documento US20040121994) como los antagonistas del receptor adrenergico, agonistas del receptor de dopamina e inhibidores de la PDE (fosfodiesterasa), que incluyen, pero sin limitacion, los divulgados en el presente documento; purgantes que extraen fluidos al intestino (por ejemplo, VISICOL®, una combinacion de fosfato de sodio monobasico monohidrato y fosfato de sodio dibasico anhidro); antagonistas del receptor del factor de liberacion de corticotropina (FLC) (que incluye NBI-34041 (Neurocrine Biosciences, San Diego, CA), CRH9-41, astresina, R121919 (Janssen Pharmaceutical), CP154.526, NBI-27914, Antalarmina, DMP696 (Bristol-Myers Squibb), CP-316.311 (Pfizer, Inc.), SB723620 (GSK), GW876008 (Neurocrine/Glaxo Smith Kline), ONO-2333Ms (Ono Pharmaceuticals), TS-041 (Janssen), AAG561 (Novartis) y los divulgados en los documentos US 5.063.245, US 5.861.398, US20040224964, US20040198726, US20040176400, US20040171607, US20040110815, US20040006066 y US20050209253); polipeptidos similares a glucagon (glp-1) y analogos de los mismos (que incluyen exendina 4 y GTP-010 (Gastrotech Pharma A)) e inhibidores de DPP-IV (DPP-IV media la inactivacion de glp-1); tofisopam, R-tofisoparn enantiomericamente puro y sales farmaceuticamente aceptables de los mismos (documento US 20040229867); antidepresivos tridclicos del tipo de dibenzotiazepina, incluyendo, pero sin limitacion Dextofisopam® (Vela Pharmaceuticals), tianeptina (Stablon®) y otros agentes descritos en el documento US 6.683.072; (E)-4-(acido 1, 3bis (ciclohexilmetil)-1,2,34-tetrahidro-2,6- diono-9H-purin-8-il)cinamico nonaetilen glicol metil eter ester y compuestos relacionados descritos en el documento WO 02/067942; el probiotico PROBACTRIX® (The BioBalance Corporation, Nueva York, NY) que contiene microorganismos utiles en el tratamiento de trastornos gastrointestinales; farmacos antidiarreicos que incluyen, pero sin limitacion, loperamida (Imodium, Pepto Diarrea), difenoxilato con atropina (Lomotil, Lomocot), colestiramina (Questran, Cholybar), atropina (Co-Phenotrope, Diarsed, Difenoxilato, Lofene, Logen, Lonox, Vi-Atro, inyeccion de sulfato de atropina) y Xifaxan® (rifaximina; Salix Pharmaceutical Ltd), TZP-201 (Tranzyme Pharma Inc.), el bloqueante del receptor de acetilcolina neuronal (nAChR) AGI-004 ((AGI therapeutics) y subsalicilato de bismuto (Pepto-bismol); farmacos ansiolfticos que incluyen, pero sin limitacion, Ativan (lorazepam), alprazolam (Xanax®), clordiazepoxido/clidinio (Librium®, Librax®), clonazepam (Klonopin®), clorazepato (Tranxene®), diazepam (Valium®), estazolam (ProSom®), flurazepam (Dalmane®), oxazepam (Serax®), prazepam (Centrax®), temazepam (Restoril®), triazolam (Halcion®; Bedelix® (Montmorillonita beidellitica; Ipsen Ltd), Solvay SLV332 (ArQuIc Inc), YKP (SK Parma), Asimadolina (Tioga Pharmaceuticals/Merek), AGI-003 (AGI Therapeutics); antagonistas de la neuroquinina que incluyen los descritos en el documento US2006004-0950; moduladores del canal de potasio que incluyen los descritos en el documento US7.002.015; el modulador de la serotonina AZD7371 (AstraZeneca PIc); antagonistas del receptor muscarmico M3, tales como darifenacina (Enablex, Novartis AG y zamifenacina (Pfizer); fitoterapias y terapias naturales que incluyen, pero sin limitacion, acidophilus, te de camomila, aceite de onagra, semillas de hinojo, ajenjo, consuelda y compuestos de Bao-Ji-Wan (magnolol, honokiol, imperatorina e isoimperatorina), como en el documento US6923992, y composiciones que comprenden lisina y un agente antiestres para el tratamiento del smdrome del colon irritable, como se describe en el documento EPO 1550443.

Insulina y agentes moduladores de insulina

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden utilizarse en terapia de combinacion con insulina y compuestos relacionados que incluyen insulina de primate, roedor o conejo, incluyendo variantes biologicamente activas de la misma, que incluyen variantes alelicas, mas preferentemente la insulina humana disponible en forma recombinante. Las fuentes de insulina humana incluyen formulaciones farmaceuticamente aceptables y esteriles, tales como las disponibles de Eli Lilly (Indianapolis, Ind. 46285) como Humulin™ (insulina humana de origen de ADNr). Vease, THE PHYSICIAN'S DESK REFERENCE, 55a Ed (2001) Medical Economics, Thomson Healtheare (que divulga otras insulinas humanas adecuadas).

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento tambien pueden utilizarse en terapia de combinacion con agentes que pueden reforzar los efectos o niveles de la insulina de un individuo tras la administracion, por ejemplo glipizida y/o rosiglitazona. Los polipeptidos y agonistas descritos en el presente documento pueden utilizarse en terapia de combinacion con SYMliN® (acetato de pramlintida) y Exenatide® (exendina 4 sintetica, un polipeptido de 39 aa).

Agentes para el tratamiento del fleo posoperatorio

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento tambien pueden utilizarse en terapia de combinacion con agentes (por ejemplo, Entereg™ (alvimopan; anteriormente llamado ado lor/ADL 8-2698), conivaptan y agentes relacionados descritos en el documento US 6.645.959) utilizados para el tratamiento del fleo posoperatorio y otros trastornos.

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Agentes antihipertensores

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden utilizarse en terapia de combinacion con un agente antihipertensor que incluye, pero sin limitacion: (1) diureticos, tales como tiazidas, que incluyen clortalidona, clortiazida, diclorofenamida, hidroflumetiazida, indapamida, politiazida e hidroclorotiazida; diureticos del asa, tales como bumetanida, acido etacrmico, furosemida y torsemida; agentes moderadores del potasio, tales como amilorida y triamterene; inhibidores de la anhidrasa carbonica, osmoticos (tales como glicerina) y antagonistas de la aldosterona, tales como espironolactona, epirenon y similares; (2) bloqueantes beta adrenergicos tales como acebutolol, atenolol, betaxolol, bevantolol, bisoprolol, bopindolol, carteolol, carvedilol, celiprolol, esmolol, indenolol, metaprolol, nadolol, nebivolol, penbutolol, pindolol, propanolol, sotalol, tertatolol, tilisolol y timolol, y similares; (3) bloqueantes del canal de calcio tales como amlodipina, aranidipina, azelnidipina, bamidipina, benidipina, bepridil, cinaldipina, clevidipina, diltiazem, efonidipina, felodipina, gallopamil, isradipina, lacidipina, lemildipina, lercanidipina, nicardipina, nifedipina, nilvadipina, nirnodepina, nisoldipina, nitrendipina, manidipina, pranidipina y verapamil, y similares; (4) inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ECA) tales como benazepril; captopril; ceranapril; cilazapril; delapril; enalapril; enalopril; fosinopril; imidapril; lisinopril; losinopril; moexipril; quinapril; quinaprilat; ramipril; perindopril; perindropril; quanipril; espirapril; tenocapril; trandolapril y zofenopril, y similares; (5) inhibidores de la endopeptidasa neutra tales como omapatrilat, cadoxatril y ecadotril, fosidotril, sampatrilat, AVE7688, ER4030 y similares; (6) antagonistas de la endotelina tales como tezosentan, A308165 y YM62899, y similares; (7) vasodilatadores tales como hidralazina, clonidina, minoxidil y alcohol nicotimlico, y similares; (8) antagonistas del receptor de la angiotensina II tales como aprosartan, candesartan, eprosartan, irbesartan, losartan, olmesartan, pratosartan, tasosartan, telmisartan, valsartan y EXP-3137, FI6828K y RNH6270, y similares; (9) bloqueantes a/p adrenergicos tales como nipradilol, arotinolol y amosulalol, y similares; (10) bloqueantes alfa 1, tales como terazosina, urapidil, prazosina, tamsulosina, bunazosina, trimazosina, doxazosina, naftopidil, indoramina, WHP 164 y XENOIO, y similares; (11) agonistas alfa 2 tales como lofexidina, tiamenidina, moxonidina, rilmenidina y guanobenz, y similares; (12) inhibidores de la aldosterona y similares, y (13) agentes de union a la angiopoyetina 2, tales como los divulgados en el documento WO03/030833. Los agentes antihipertensores espedficos que pueden utilizarse en combinacion con los polipeptidos y agonistas descritos en el presente documento incluyen, pero sin limitacion: diureticos tales como tiazidas (por ejemplo, clortalidona, ciclotiazida (CAS RN 2259-96-3), clorotiazida (CAS RN 72956-09-3, que puede prepararse como se divulga en el documento US2809194), diclorofenamida, hidroflumetiazida, indapamida, politiazida, bendoflumetazida, meticlotazide, politiazida, triclormetazida, clortalidona, indapamida, metolazona, quinetazona, altiazida (CAS RN 5588-16-9, que puede prepararse como se divulga en la Patente Britanica n.° 902.658), benztiazida (CAS RN 91-33-8, que puede prepararse como se divulga en el documento US3108097), butiazida (que puede prepararse como se divulga en la Patente Britanica n.° 861.367) e hidroclorotiazida), diureticos del asa (por ejemplo bumetanida, acido etacrmico, furosemida y torasemida), agentes moderadores de potasio (por ejemplo amilorida y triamterene (numero CAS 396-01-O)), y antagonistas de la aldosterona (por ejemplo espironolactona (numero CAS 52-01-7), epirenona y similares); bloqueantes p- adrenergicos tales como Amiodarona (Cordarona, Pacerona), clorhidrato de bunolol, (CAS RN 31969-05-8, Parke- Davis), acebutolol (±N-[3-acetil-4-[2-hidroxi-3-[1 metiletil)amino]propoxi]fenil]butanamida, o (±)-3'-acetil-4'-[2-hidroxi- 3-(isopropilamino)propoxi]butiranilida), clorhidrato de acebutolol (por ejemplo, Sectral®, Wyeth-Ayerst), clorhidrato de alprenolol (CAS Rn 13707-88-5, vease la Solicitud de Patente de los Pafses Bajos n.° 6.605.692), atenolol (por ejemplo Tenormin®, AstraZeneca), clorhidrato de carteolol (por ejemplo, Cartrol® Filmtab®, Abbott), clorhidrato de Celiprolol (CAS RN 57470-78-7, vease tambien en el documento US4034009), clorhidrato de cetamolol (CAS RN 77590-95-5, vease tambien US4059622), clorhidrato de labetalol (por ejemplo, Normodyne®, Schering), clorhidrato de esmolol (por ejemplo, Brevibloc®, Baxter), clorhidrato de levobetaxolol (por ejemplo Suspension Oftalmologica Betaxon™, Alcon), clorhidrato de levobunolol (por ejemplo, Betagan® Liquifilm®, con C cAp® Compliance Cap, Allergan), nadolol (por ejemplo Nadolol, Mylan), practolol (CAS RN 6673-35-4, vease tambien el documento US3408387), corhidrato de propranolol (CaS rN 318-98-9), clorhidrato de sotalol (por ejemplo Betapace AF™, Berlex), timolol (2-Propanol,1-[(1,1-dimetiletil)amino]-3-[[4-4(4-morfolinil)-1,2,5-tiadiazol-3-il]oxi]-, hemihidrato, (S)-, CAS RN 91524-16-2), maleato de timolol (S)-I-[(1,1-dimetiletil)amino]-3-[[4-(4-morfolinil)-1,2,5-tiadiazol-3-il]oxi]-2- propanol (Z)-2-butenodioato, sal (1:1), CAS RN 26921-17-5), bisoprolol (2-Propanol, 1-[4-[[2-(1-metiletoxi)etoxi]- metil]fenoxil]-3-[(1-met-iletil)amino]-, (±), CAS RN 66722-44-9), fumarate de bisoprolol (tal como (E)-2-butenodioato de (±)-1-[4-[[2-(1-Metiletoxi)etoxi]metil]fenoxi]-3-[(1-metiletil)amino]-2-propanol (2:1) (sal), por ejemplo, Zebeta™, Lederle Consumer), nebivalol (2H-1-Benzopiran-2-metanol, aa'-[imino-bis(metilen)]bis[6-fluoro-3,4-dihidro-, CAS RN 99200-09-6, vease tambien la patente de Estados Unidos N.° 4.654.362), corhidrato de cicloprolol, como 2-Propanol, 1-[4-[2-(ciclopropilmetoxi)etoxi]fenoxi]-3-[1-metiletil)amino]-, corhidrato, A.A.S. RN 63686-79-3), corhidrato de dexpropranolol (2-Propanol,1-[1-metileti)-amino]-3-(1-naftaleniloxi)-corhidrato (CAS RN 13071-11-9), corhidrato de diacetolol (Acetamida, N-[3-acetil-4-[2-hidroxi-3-[(1-metil-etil)amino]propoxi][fenil]-, monocorhidrato CAS RN 6979604-9), corhidrato de dilevalol (Benzamida, 2-hidroxi-5-[1-hidroxi-2-[1-metil-3-fenilpropil)amino]etil]-, monocorhidrato, CAS RN 75659-08-4), corhidrato de exaprolol (2-Propanol, 1-(2-ciclohexilfenoxi)-3-[(1-metiletil)amino]-, corhidrato CAS RN 59333-90-3), sulfato de flestolol (acido Benzoico, 2-fluro-,3-[[2-[aminocarbonil)amino]--dimetiletil]amino]-2- hidroxipropil ester, (+)-sulfato (1:1) (sal), CAS RN 88844-73-9; corhidrato de metalol (Metanosulfonamida, N-[4-[1- hidroxi-2-(metilamino)propil]fenil]-, monocorhidrato CAS RN 7701-65-7), metoprolol 2-Propanol, 1-[4-(2- metoxietil)fenoxi]-3-[1-metiletil)amino]-; CAS RN 37350-58-6), tartrato de metoprolol (tal como 2-Propanol, 1-[4-(2- metoxietil)fenoxi]-3-[(1-metiletil)amino]-, por ejemplo, Lopressor®, Novartis), sulfato de pamatolol (acido carbamico, [2-[4-[2-hidroxi-3-[(1-metiletil)amino]pro-poxil]fenil]-etil]-, metil ester, (±) sulfato (sal) (2:1), CAS RN 59954-01-7), sulfato de penbutolol (2-Propanol, 1-(2-ciclopentilfenoxi)-3-[1,1-dimetiletil)amino]1, (S)-, sulfato (2:1) (sal), CAS rN

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38363-32-5), practolol (Acetamida, N-[4-[2-hidroxi-3-[(1-metiletil)amino]-propoxi]fenil]-, CAS RN 6673-35-4;) corhidrato de tiprenolol (Propanol, 1-[(1-metiletil)amino)-3-[2-(metiltio)-fenoxi]-, corhidrato, (±), CAS RN 39832-43-4), tolamolol (Benzamida, 4-[2-([2-hidroxi-3-(2-metilfenoxi)-propil]amino]etoxil]-, CAS RN 38103-61-6), bopindolol, indenolol, pindolol, propanolol, tertatolol y tilisolol, y similares; bloqueantes de canales de calcio tales como sal besilato de amlodipina (tal como bencenosulfonato de 3-etil-5-metil-2-(2-aminoetoximetil)-4-(2-clorofenil)-1,4-dihidro- 6-metil-3,5-piridinadicarboxilato, por ejemplo, Norvasc®, Pfizer), maleato de clentiazem (1,5-Benzotiazepin-4(5H)- ona, 3-(acetiloxi)-8-cloro-5-[2-(dimetilamino)etil]-2,3-dihidro-2-(4-metoxifenil)-(2S-cis)-, (Z)-2-butenodioato (1:1), vease tambien el documento US4567195), isradipina (acido 3,5-Piridinedicarboxflico, 4-(4-benzofurazanil)-1,4- dihidro-2,6-dimetil-, metil 1 -metiletil ester, (±)-4(4-benzofurazanil)-1,4-dihidro-2,6-dimetil-3,5-piridinadicarboxilato, vease tambien el documento US4466972); nimodipina (tal como isopropil (2-metoxietil) 1,4-dihidro-2,6-dimetil-4-(3- nitrofenil)-3,5-piridina-dicarboxilato, por ejemplo Nimotop®, Bayer), felodipina (tal como etil metil 4-(2,3-diclorofenil)-

1.4- dihidro-2,6-dimetil-3,5-piridinadicarboxilato-, por ejemplo Plendil® Extended-Release, AstraZeneca LP), nilvadipina acido 3,5-Piridinedicarboxflico, 2-ciano-1,4-dihidro-6-metil-4-(3-nitrofenil)-,3-metil 5-(1-metiletil) ester, vease tambien el documento US3799934), nifedipina (tal como acido 3,5-piridinadicarboxflico,1,4-dihidro-2,6-dimetil- 4-(2-nitrofenil)-, dimetilester, por ejemplo, Procardia XL® comprimidos de liberacion prolongada, Pfizer), clorhidrato de diltiazem (tal como 1,5-Benzotiazepin-4(5H)-ona,3-(acetiloxi)-5[2-(dimetilamino)etil]-2,-3-dihidro-2(4-metoxifenil)-, monoclorhidrato, (±)-cis., por ejemplo, Tiazac®, Forest), clorhidrato de verapamil (tal como benceno-acetronitrilo, clorhidrato de (alfa)-[[3-[[2-(3,4-dimetoxifenil)etil]metilamino]propil]-3,4-dimetoxi-(alfa)-(1-metiltetil), por ejemplo, Isoptin® SR, Knoll Labs), clorhidrato de teludipina (acido 3,5-Piridinedicarboxflico, 2-[(dimetilamino)metil]4-[2-[(1E)-3- (1,1-dimetiletoxi)-3-oxo-1-propenil]fenil]-1,4-dihidro-6-metil-, dietilester, monoclorhidrato) CAS Rn 1087oO-03-4), belfosdil (acido fosfonico, [2-(2-fenoxi etil)-1,3 -propano-diil]bis-, tetrabutil ester CAS RN 103486-79-9), fostedil (acido fosfonico, [[4-(2-benzotiazolil)fenil]metil]-, dietil ester CAS RN 75889-62-2), aranidipina, azelnidipina, barnidipina, benidipina, bepridilo, cinaldipina, clevidipina, efonidipina, gallopamilo, lacidipina, lemildipina, lercanidipina, maleato de monatepilo (1-Piperazinabutanamida, N-(6,11-dihidrodibenzo(b,e)tiepin-11-il)4-(4-fluorofenil)-, (+)-, (Z)-2-

butenodioato (1:1) maleato de (±)-N-(6,11-Dihidrodibenzo(b,e)tiep-in-11-il)-4-(p-fluorofenil)-1-piperazinabutiramida (1:1) CAS RN 132046-06-1), nicardipina, nisoldipina, nitrendipina, manidipina, pranidipina y similares; antagonistas del canal de calcio T, tales como mibefradil; inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ECA), tales como benazepril, clorhidrato de benazepril (tales como acido 3-[[1-(etoxicarbonil)-3-fenil-(1S)-propil]amino]-2,3,4,5- tetrahidro-2-oxo-1H-1-(3S)-benzazepina-1-acetico monoclorhidrato, por ejemplo, Lotrel®, Novartis), captopril (tal como 1-[(2S)-3-mercapto-2-metilpropionil]-L-prolina, por ejemplo, Captopril, Mylan, CAS RN 62571-86-2 y otros divulgados en el documento US4046889), ceranapril (y otros divulgados en el documento US4452790), cetapril (alacepril, Dainippon, divulgado en Eur. Therap. Res. 39: 671 (1986); 40:543 (1986)), cilazapril (Hoffman-LaRoche) divulgado en J. Cardiovasc. Pharmacol. 9: 39 (1987), indalapril (clorhidrato de delapril (2H-1,2,4-benzotiadiazina-7- sulfonamida, 3-biciclo[2.2.1]hept-5-en-2-il-6-cloro-3,4-dihidro-, 1,1-dioxido CAS rN 2259-96-3); divulgado en el documento US4385051), enalapril (y otros divulgados en el documento US4374829), enalopril, enaloprilat, fosinopril, ((tal como L-prolina, 4-ciclohexil-1-[[[2-metil-1-(1-oxopropoxi)propoxi](4-fenilbutil)fosfinil]acetil]-, sal de sodio, por ejemplo, Monopril, Bristol-Myers Squibb, y otros divulgados en el documento US4168267), fosinopril de sodio (L- prolina, 4-ciclohexil-1-[[(R)-[(1S)-2-metil-1-(1-ox-opropoxi)propox), imidapril, indolapril (Schcring, divulgado en J. Cardiovasc. Pharmacol. 5:643, 655 (1983)), lisinopril (Merck), losinopril, moexipril, clorhidrato de moexipril (acido 3- isoquinolinacarboxflico, 2-[(2S)-2-[[(1S)-1-(etoxicarbonil)-3-fenilpropil]amino]-1-oxopropil]-1,2,3,4-tetrahidro-6,7- dimetoxi-, monoclorhidrato, (3S)-CAS Rn 82586-52-5), quinapril, quinaprilat, ramipril (Hoechsst), divulgado en el documento EP 79022 y en Curr. Ther. Res. 40:74 (1986), perindopril erbumina (tal como acido 2S,3aS,7aS-1-[(S)-N- [(S)-1-carboxibutil]alanil]hexahidroA-indolinacarboxflico, 1 -etil ester, compuesto con terc-butilamina (1:1), por ejemplo, Aceon®, Solvay), perindopril (Servier, divulgado en Eur. J. clin. Pharmacol. 31:519 (1987)), quanipril (divulgado en el documento US4344949), espirapril (Schering, divulgado en Acta. Pharmacol. Toxicol. 59 (Sup. 5): 173 (1986)), tenocapril, trandolapril, zofenopril (y otros divulgados en el documento US4316906), rentiapril (fentiapril, divulgado en Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 10:131 (1983)), pivopril, YS980, teprotida (potenciador de la bradicinina BPP9a CAS RN 35115-60-7), BRL 36.378 (Smith Kline Beecham, veanse los documentos EP80822 y EP60668), MC-838 (Chugai, vease CA. 102:72588v y Jap. J. Pharmacol. 40:373 (1986), CGS 14824 (Ciba-Geigy, acido 3-([1- etoxicarbonil-3-fenil-(1S)-propil]amino)-2,3,4,5-tetrahidro-2-ox-o-1-(3S)-benzazepina-1 acetico HCl, vease la Patente del R.U. n.° 2103614), CGs 16.617 (Ciba-Geigy, acido 3(S)-[[(1S)-5-amino-1-carboxipentil]amino]-2,3,4,-5-tetrahidro- 2-oxo-1H-1-benzacepina-1-etanoico, vease el documento US4473575), Ru 44570 (Hoechst, vease

Arzneimittelforschung 34:1254 (1985)), R 31-2201 (Hoffman-LaRoche, vease FEBS Lett. 165:201 (1984)), C1925 (Pharmacologist 26:243, 266 (1984)), WY-44221 Wyeth, vease J. Med. Chem. 26:394 (1983)), y los divulgados en los documentos US2003006922 (parrafo 28), US4337201, US4432971 (fosfonamidatos); inhibidores de la endopeptidasa neutra, tales como omapatrilat (Vanlev®), CGS 30440, cadoxatril y ecadotril, fasidotril (tambien conocido como aladotril y alatriopril), sampatrilat, mixanpril y gemopatrilat, AVE7688, ER4030, y los divulgados en los documentos US5362727, US5366973, US5225401, US4722810, US5223516, US4749688, US5552397, US5504080, US5612359, US5525723, EP0599444, EP0481522, EP0599444, EP0595610, EP0534363, EP534396, EP534492, EP0629627; antagonistas de la endotelina tales como tezosentan, A308165 e YM62899, y similares; vasodilatadores tales como hidralazina (apresolina), clonidina (clorhidrato de clonidina (1H-imidazol-2-amina, N-(2,6- diclorofenil)4,5-dihidro-, monoclorhidrato CAS RN 4205-91-8), catapres, minoxidil (loniten), alcohol nicotimlico (roniacol), clorhidrato de diltiazem (tal como 1,5-benzotiazepin-4(5H)-ona, 3-(acetiloxi)-5[2-(dimetilamino)etil]-2,-3- dihidro-2(4-metoxifenil)-, monoclorhidrato, (+)-cis, por ejemplo, Tiazac®, Forest), dinitrato de isosorburo (tal como

2.5- dinitrato de 1,4:3,6-dianhidro-D-glucitol, por ejemplo Isordil® Titradose®, Wyeth-Ayerst), mononitrato de sosorburo (tal como 1,4:3,6-dianhidro-D-glucito-1,5-nitrato, un nitrato organico, por ejemplo Ismo®, Wyeth-Ayerst),

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nitroglicerina (tal como trinitrato de 2,3 propanotriol, por ejemplo Nitrostat® Parke-Davis), clorhidrato de verapamil (tal como bencenoacetonitrilo, clorhidrato de (±)-(alfa)[3-[[2-(3,4 dimetoxifenil)etil]metilamino]propil]-3,4-dimetoxi- (alfa)-(1 -metiletil), por ejemplo, Covera HS® liberacion prolongada, Searle), cromonar (el cual puede prepararse como se divulga en el documento USA3282938), clonitato (Annalen 1870 155), droprenilamina (que puede prepararse como se divulga en el documento DE2521113), lidoflazina (que puede prepararse como se divulga en el documento US3267104); prenilamina (que puede prepararse como se divulga en el documento US3152173), nitrato de propatilo (que puede prepararse como se divulga en la Patente Francesa n.° 1.103.113), clorhidrato de mioflazina (1-Piperazina-acetamida, 3-(aminocarbonil)4-[4,4-bis(4-fluorofenil)butil]-N-(2,6-diclorofenil)-, diclorhidrato CAS RN 83898-67-3), mixidina (Benzenetanamina, 3,4-dimetoxi-N-(1-metil-2-pirrolidinilideno)-pirrolidina, 2-[(3,4- dimetoxifenetil)imino]-1-metil-1-Metil-2-[(3, 4-dimetoxifenetil)imino]pirrolidina CAS RN 27737-38-8), molsidomina (1,2,3-Oxadiazolio, 5-[(etoxicarbonil)amino]-3-(4-morfolinil)-, salt interna CAS RN 25717-80-0), mononitrato de isosorburo (D-Glucitol, 1,4:3,6-dianhidro-, 5-nitrato CAS RN 16051-77-7), tetranitrato de eritritilo (1,2,3,4- Butanotetrol, tetranitrato, (2R,3S)-rel-CAS RN 7297-25-8), clonitrato(1,2-Propanodiol, 3-cloro-, dinitrato (7CI, 8CI, 9CI) CAS RN 2612-33-1), dipiridamol etanol, 2,2’,2",2",-[(4,8-di-1-piperidinilpirimido[5,4-d]pirimidina-2,6- diil)dinitrilo]tetraquis-CAS RN 58-32-2), nicorandil (CAS RN 65141-46-0 3-), piridinacarboxamida (acido N-[2- (nitrooxi)etil]-Nisoldipine3,5-Piridinadicarboxflico, 1,4-dihidro-2,6-dimetil-4-(2-nitrofenil)-, metil 2-metilpropil ester cAs RN 63675-72-9), acido nifedipina3,5-Piridinedicarbox^lico, 1,4-dihidro-2,6-dimetil-4-(2-nitrofenil)-, dimetil ester CAS RN 21829-25-4), maleato de perhexilina (Piperidina, 2-(2,2-diciclohexiletil)-, (2Z)-2-butenodioato (1:1) CAS RN 672453-4), clorhidrato de oxprenolol (2-Propanol, 1-[(1-metiletil)amino]-3-[2-(2-propeniloxi)fenoxi]-, clorhidrato CAS RN 6452-73-9), pentrinitrol(1,3-Propanodiol,2,2-bis[(nitrooxi)metil]-, mononitrato (ester) cAs RN 1607-17-6), verapamil (Bencenoacetonitrilo, a-[3-[[2-(3,4-dimetoxifenil)etil]-metilamino]propil]-3,4-dimetoxi-a-(1-metiletil)-CAS rN 52-53-9) y similares; antagonistas del receptor de la angiotensina II, tales como aprosartan, zolasartan, olmesartan, pratosartan, FI6828K, RNH6270, candesartan (acido 1H-Bencimidazol-7-carboxflico, 2-etoxi-1-[[2’-(1H-tetrazol-5- il)[1,1'-bifenil]4-il]metil]-CAS RN 139481-59-7), candesartan cilexetil (carboxilato de (+/-)-1-(ciclohexilcarboniloxi)etil- 2-etoxi-1-[[2'-(1H-tetrazol-5-il)bifenil-4-il]-1H-benzoimidazol, CAS RN 145040-37-5, documentos US5703110 y US5196444), eprosartan (acido 3-[1-4-carboxifenilmetil)-2-n-butil-imidaxol-5-il]-(2-tienilmetil) propenoico, documentos US5185351 y US5650650), irbesartan (2-n-butil-3-[[2'-(1h-tetrazol-5-il)bifenil-4-il]metil] 1,3-diazazespiro[4,4]non-1- en-4-ona, documentos US5270317 y US5352788), losartan (2-N-butil-4-cloro-5-hidroximetil-1-[(2’-(1H-tetrazol-5- il)bifenil-4-il)-metil]imidazol, sal de potasio, documentos USA5138069, US5153197 y US5128355), tasosartan (5,8- dihidro-2,4-dimetil-8-[(2'-(1H-tetrazol-5-il)[1,r-bifenil]4-il)metil]-pirido[5,6-d]pirimidin-7(6H)-ona, documento

US5149699), telmisartan acido 4'-[(1,4-dimetil-2'-propil-(2,6'-bi-1H-benzoimidazol)-r-il)]-[1,1'-bifenil]-2-carbox^lico, CAS RN 144701-48-4, documento US5591762), milfasartan, abitesartan valsartan (Diovan® (Novartis), (S)-N-valeril- N-[[2'-(1H-tetrazol-5-il)bifelil-4-il)metil]valina, documento US5399578), EXP-3137 (acido 2-N-butil-4-cloro-1-[(2’-(1H- tetrazol-5-il)bifenil-4-il)-metil]imidazol-5-carbox^lico, documentos US5138069, US5153197 y US5128355), 3-(2’- (tetrazol-5-il)-1,r-bifen-4-il)metil-5,7-dimetil-2-etil-3H-imidazo[4,5-b]piridina, acido 4’[2-metil-4-metil-6-(5,6,7,8- tetrahidroimidazo[1,2-a]piridin-2-il]-benzoimidazol-1-il]-metil]-1,r-bifenil]-2-carbox^lico, 2-butil-6-(1 -metoxi-1 -metiletil)- 2-[2'-)1H-tetrazol-5-il)bifenil-4-ilmetil] guinazolin-4(3H)-ona, acido 3-[2'-carboxibifenil-4-il)metil] -2-ciclopropil-7-metil- 3H-imidazo[4,5-b]piridina, 2-butil-4-cloro-1-[(2’-tetrazol-5-il)bifenil-4-il)metil]imidazol-carbox^lico, acido 2-butil-4-cloro- 1 -[[2'-(1H-tetrazol-5-il)[1,1'-bifenil]-4-il]metil]-1H-imidazol-5-carbox^lico-1 -(etoxicarbonil-oxi)etil ester sal de potasio, di- sal de dipotasio, 2-butil-4-(metiltio)-1-[[2-[[[(propilamino)carbonil]amino]-sulfonil](1,1'-bifenil)-4-il]metil]-1H-imidazol-5- carboxilato, metil-2-[[4-butil-2-metil-6-oxo-5-[[2'-(1H-tetrazol-5-il)-[1,1'-bifenil]-4-il]metil]-1-(6H)-pirimidinil]metil]-3- tiofencarboxilato, 5-[(3,5-dibutil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil]-2-[2-(1H-tetrazol-5-ilfenil)]piridina, 6-butil-2-(2-feniletil)-5[[2’- (1H-tetrazol-5-il)[1,1'-bifenil]-4-metil]pirimidin-4-(3H)-ona sal de D,L lisina, 5-metil-7-n-propil-8-[[2’-(1H-tetrazol-5- il)bifenil-4-il]metil]-[1,2,4]-triazolo[1,5-c]pirimidin-2(3H)-ona, 2,7-dietil-5-[[2’-(5-tetrazolo)bifenil-4-il]metil]-5H-

pirazolo[1,5-b][1,2,4]triazol sal de potasio, acido 2-[2-butil-4,5-dihidro-4-oxo-3-[2’-(1H-tetrazol-5-il)-4-bifenilmetil]-3H- imidazol[4,5-c]piridina-5-ilmetil]benzoico, etil ester, sal de potasio, 3-metoxi-2,6-dimetil-4-[[2’(1H-tetrazol-5-il)-1,1’- bifenil-4-il]metoxi]piridina, acido 2-etoxi-1-[[2’-(5-oxo-2,5-di-hidro-1,2,4-oxadiazol-3-il)bifenil-4-il]metil]-1H- benzoimidazol-7-carbox^lico, acido 1-[N-(2’-(1H-tetrazol-5-il)bifenil-4-il-metil)-N-valeroilaminometil)ciclopentano-1- carbox^lico, 7-metil-2n-propil-3-[[2'1H-tetrazol-5-il)bifenil-4-il]metil]-3H-imidazo[4,5-6]piridina, 2-[5-[(2-etil-5,7-dimetil- 3H-imidazo[4,5-b]piridina-3-il)metil]-2-quinolinil] benzoato de sodio, 2-butil-6-cloro-4-bidroximidil-5-metil-3-[[2'-(IH- tetrazol-5-il)bifenil-4-il]metil]piridina, acido 2-[[[2-butil-1-[(4-carboxifenil)metil]-1H-imidazol-5-il]metil]amino]benzoico tetrazol-5-il)bifenil-4-il]metil]pirimidin-6-ona, 4(S)-[4-(carboximetil)fenoxi]-N-[2(R)-[4-(2-sulfobenzamido)imidazol-1- il]octanil]-L-prolina, 1-(2,6-dimetilfenil)-4-butil-1,3-dihidro-3-[[6-[2-(1H-tetrazol-5-il)fenil]-3-piridinil]metil]-2H-imidazol-2- ona, 5,8-etano-5,8-dimetil-2-n-propil-5,6,7,8-tetrahidro-1-[[2'(1H-tetrazol-5-il)bifenil-4-il]metil]-1H,4H-1,3,4a,8a-

tetrazaciclopentanaftaleno-9-ona, 4-[1-[2’-(1,2,3,4-tetrazol-5-il)bifen-4-il)metilamino]-5,6,7,8-tetrahidro-2-

trifilquinazolina, acido 2-(2-clorobenzoil)imino-5-etil-3-[2'-(1H-tetrazol-5-il)bifenil-4-il)metil-1,3,4-tiadiazolina,2-[5-etil-3- [2-(1H-tetrazol-5-il)hifenil-4-il]metil-1,3,4-tiazolina-2-ilideno]aminocarbonil-1-ciclopentenocarbox^lico sal de sodio, y acido 2-butil-4-[N-metil-N-(3-metilcrotonoil)amino]-1[[2’-(1H-tetrazol-5-il)bifenil-4-il]metil]-1H-imidzole-5-carboxflico 1- etoxicarboniloxietil ester, los divulgados en las publicaciones de patente EP475206, EP497150, EP539086, EP539713, EP535463, EP535465, EP542059, EP497121, EP535420, EP407342, EP415886, EP424317,

EP435827, EP433983, EP475898, EP490820, P528762, EP324377, EP323841, P420237, EP500297, EP426021, EP480204, EP429257, EP430709, EP434249, EP446062, EP505954, EP524217, EP514197, EP514198,

EP514193, EP514192, EP450566, EP468372, EP485929, EP503162, EP533058, EP467207 EP399731, EP399732, EP412848, EP453210, EP456442, EP470794, EP470795, EP495626, EP495627, EP499414, EP499416,

EP499415, EP511791, EP516392, EP520723, EP520724, EP539066, EP438869, EP505893, EP530702,

EP400835, EP400974, EP401030, EP407102, EP411766, EP409332, EP412594, EP419048, EP480659,

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EP481614, EP490587, EP467715, EP479479, EP502725, EP503838, EP505098, EP505111 EP513,979 EP507594, EP510812, EP511767, EP512675, EP512676, EP512870, EP517357, EP537937, EP534706, EP527534,

EP540356, EP461040, EP540039, EP465368, EP498723, EP498722, EP498721, EP515265, EP503785,

EP501892, EP519831, EP532410, EP498361, EP432737, EP504888, EP508393, EP508445, EP403159,

EP403158, EP425211, EP427463, EP437103, EP481448, EP488532, EP501269, EP500409, EP540400,

EP005528, EP028834, EP028833, EP411507, EP425921, EP430300, EP434038, EP442473, EP443568,

EP445811, EP459136, EP483683, EP518033, EP520423, EP531876, EP531874, EP392317, EP468470,

EP470543, EP502314, EP529253, EP543263, EP540209, EP449699, EP465323, EP521768, EP415594,

WO92/14468, WO93/08171, WO93/08169, WO91/00277, WO91/00281, WO91/14367, WO92/00067, WO92/00977, WO92/20342, WO93/04045, WO93/04046, WO91/15206, WO92/14714, WO92/09600, WO92/16552, WO93/05025, WO93/03018, WO91/07404, WO92/02508, WO92/13853, WO91/19697, WO91/11909, WO91/12001, WO91/11999, WO91/15209, WO91/15479, WO92/20687, WO92/20662, WO92/20661, WO93/01177, WO91/14679, WO91/13063, WO92/13564, WO91/17148, WO91/18888, WO91/19715, WO92/02257, WO92/04335, WO92/05161, WO92/07852, WO92/15577, WO93/03033, WO91/16313, WO92/00068, WO92/02510, WO92/09278, WO9210179, WO92/10180, WO92/10186, WO92/10181, WO92/10097, WO92/10183, WO92/10182, WO92/10187, WO92/10184, WO92/10188. WO92/10180, WO92/10185, WO92/20651, WO93/03722, WO93/06828, WO93/03040, WO92/19211, WO92/22533, WO92/06081, WO92/05784, WO93/00341, WO92/04343, WO92/04059, US5104877, US5187168, US5149699, US5185340, US4880804, US5138069, US4916129, US5153197, US5173494, US5137906, US5155126,

US5140037, US5137902, US5157026, US5053329, US5132216, US5057522, US5066586, US5089626,

US5049565, US5087702, US5124335, US5102880, US5128327, USA5151435, USA5202322, US5187159, US5198438, US5182288, US5036048, US5140036, US5087634, US5196537, US5153347, US5191086,

US5190942, US5177097, US5212177, US5208234, US5208235, US5212195, US5130439, US5045540,

US5041152 y US5210204, y las sales y esteres farmaceuticamente aceptables de los mismos; bloqueantes a/p adrenergicos tales como nipradilol, arotinolol, amosulalol, tosilato de bretilio (CAS RN: 61-75-6), mesilato de dihidroergtamina (tal como ergotaman-3',6'-18-triona,9,10-dihidro-12'-hidroxi-2'-metil-5'-(fenilmetil)-,(5'(a))-, monometanosulfonato, por ejemplo, DHE 45® Inyeccion, Novartis), carvedilol (tal como (±)-1-(carbazol-4-iloxi)-3-[[2- (o-metoxifenoxi)etil]amino]-2-propanol, por ejemplo, Coreg®, SmithKline Beecham), labetalol (tal como monoclorhidrato de 5-[1-hidroxi-2-[(1-metil-3-fenilpropil)amino]etil]salicilamida, por ejemplo, Normodyne®, Schering), tosilato de bretilio (bencenometanaminio, 2-bromo-N-etil-N,N-dimetil-, sal con acido 4-metilbencenosulfonico (1:1) CAS RN 61-75-6), mesilato de fentolamina (fenol, 3-[[(4,5-dihidro-1H-imidazol-2-il)metil](4-metilfenil)amino]-, monometanosulfonato (sal) CAS RN 65-28-1), tartrato de solipertina (5H-1,3-dioxolo[4,5-f]indol, 7-[2-[4-(2- metoxifenil)-1 -piperazinil]etil]-, (2R, 3R)-2,3-dihidroxibutanodioato (1:1) CAS RN 5591-43-5), clorhidrato de zolertina (piperazina, 1-fenil 4-[2-(1H-tetrazo1-5-il)etil]-, monoclorohidrato (8Cl, 9Cl) CAS RN 7241-94-3) y similares; bloqueantes de los receptores a adrenergicos, tales como alfuzosina (CAS RN: 81403-68-1), terazosina, urapidil, prazosina (Minipress®), tamsulosina, bunazosina, trimazosina, daxarosina, naftopidil, indoramina, WHP 164, XENOIO, clorhidrato de fenspirida (que puede prepararse como se divulga en el documento US3399192), proroxan (CAS RN 33743-96-3) y clorhidrato de labetalol, y combinaciones de los mismos; agonistas a 2 tales como metildopa, metildopa HCL, lofexidina, tiamenidina, moxonidina, rilmenidina, guanobenz y similares; inhibidores de la aldosterona y similares; inhibidores de la renina que incluyen Aliskiren (SPPlOO; Novartis/Speedel); agentes de union a la angiopoyetina 2, tales como los divulgados en el documento WO03/030833; agentes anti angina tales como ranolazina (clorhidrato de 1-piperazinacetamida, N-(2,6-dimetilfenil)-4-[2-hidroxi-3-(2-metoxi-fenoxi)propil]-, diclorhidrato CAS RN 95635-56-6), clorhidrato de betaxolol (2-propanol, 1-[4-[2(ciclopropilmetiloxi)etil]fenoxi]-3-[(1- metiletil)amino]-, clorhidrato CAS RN 63659-19-8), clorhidrato de butoprozina, (metanona, [4-

[3(dibutilamino)propoxi]fenil](2-etil-3-indolizinil)-, monoclorhidrato CAS RN 62134-34-3), cinepazet maleatel-acido piperazinacetico, 4-[1-oxo-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-2-propenil]-, etil ester, (2Z)-2-butenodioato (1:1) CAS RN 50679-077), tosifeno (bencenosulfonamida, 4-metil-N-[[[(1S)-1-metil-2-feniletil]amino]carbonil]-CAS RN 32295-184),

verapamilclorhidrato (bencenoacetonitrilo, a-[3-[[2-(3,4-dimetoxifenil)etil]metilamino]propil]-3,4-dimetoxi-a-(1- metiletil)-, monoclorhidrato CAS RN 152-114), molsidomina (1,2,3-oxadiazolio, 5-[(etoxicarbonil)amino]-3-(4- morfolinil)-, sal interna CAS RN 25717-80-0) y clorhidrato de ranolazina (1-piperazincetamida, N-(2,6-dimetilfenil)4-[2- hidroxi-3-(2-metoxifenoxi)propilo]-, dihidrocloruro CAS RN 95635-56-6); tosifeno (bencenosulfonamida, 4-metil-N- [[[(1S)-1-metil-2-feniletil]amino]carbonil]-CAS RN 32295-184); estimulantes adrenergicos tales como clorhidrato de guanfacina (tales como clorhidrato de N-amidino-2-(2,6-diclorofenil) acetamida, por ejemplo, Tenex® Comprimidos, disponibles de Robins); metildopahidroclorotiazida (tal como levo-3-(3,4-dihidroxifenil)-2-metilalanina) combinada con hidroclorotiazida (tal como 1,1 -dioxido de 6-cloro-3,4-dihidro-2H-1,2,4-benzotiadiazina-7-sulfonamida, por ejemplo, la combinacion como, por ejemplo, Aldoril® Comprimidos, disponibles de Merck), metildopaclorotiazida (tal como 1,1- dioxido de 6-cloro-2H-1, 2,4-benzotiadiazina-7-sulfonamida y metildopa, como se describe anteriormente, por ejemplo, Aldoclor®, Merck), clorhidrato de clonidina (tal como clorhidrato de 2-(2,6-diclorofenilamino)-2-imidazolina y clortalidona (tal como 2-cloro-5-(1-hidroxi-3-oxo-1-isoindolinil) bencenosulfonamida), por ejemplo Combipres®, Boehringer Ingelheim), clorhidrato de clonidina (tal como clorhidrato de 2-(2,6-diclorofenilamino)-2-imidazolina, Catapres®, Boehringer Ingelheim), clonidina (1H-imidazol-2-amina, N-(2,6-diclorofenil)4,5-dihidro-CAS RN 4205-907), Hyzaar (Merck, una combinacion de losartan e hidroclorotiazida), Co-Diovan (Novartis; una combinacion de ofvalsartan e hidroclorotiazida, Lotrel (Novartis; una combinacion de benazepril y amlodipina), y Caduet (Pfizer, una combinacion de amlodipino y atorvastatina), y los agentes divulgados en el documento US20030069221.

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Agentes para el tratamiento de trastornos respiratorios

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden utilizarse en terapia de combinacion con uno o mas de los siguientes agentes utiles en el tratamiento de trastornos respiratorios y otros, que incluyen, pero sin limitacion: (1) agonistas p que incluyen, pero sin limitacion: albuterol (pRo VENTIL®, S ALBUT AMOl®, VENTOLIN®), bambuterol, bitoterol, clenbuterol, fenoterol, formoterol, isoetarina (BRONKOSOL®, BRONKOMETER®), metaproterenol (ALUPENT®, METAPREL®), pirbuterol (MAXAIR®), reproterol, rimiterol, salmeterol, terbutalina (BRETHAIRE®, BRETHINE®, BRICANYL®), adrenalina, isoproterenol (ISUPREL®), bitartrato de epinefrina (PRIMATENE®), efedrina, orciprenlina, fenoterol e isoetarina; (2) esteroides, que incluyen, pero sin limitacion, beclometasona, dipropionato de beclometasona, betametasona, budesonida, bunedosida, butixocort, dexametasona, flunisolida, fluocortina, fluticasona, hidrocortisona, metil prednisona, mometasona, prednisolona, predonisona, tipredane, toxicortal, triamcinolona y triameinolona acetonida; (3) combinaciones de agonistas p2-corticoesteroides [por ejemplo, salmeterol-fluticasona (AD V AIR®), formeterol-budesonida (S YMBICORT®)]; (4) antagonistas del receptor de leucotrienos D4/antagonistas de leucotrienos/antagonistas de LTD4 (es decir, cualquier compuesto que tenga la capacidad de bloquear, inhibir, reducir o interrumpir de otra forma la interaccion entre los leucotrienos y el receptor Cys LTI) que incluyen, pero sin limitacion: zafhiukast, montclukast, montelukast de sodio (SINGULAIR®), pranlukast, iralukast, pobilukast, SKB-106.203 y los compuestos descritos que tengan actividad antagonizante de LTD4 descritos en la Patente de Estados Unidos n.° 5.565.473; (5) inhibidores de la 5-lipooxigenasa y/o inhibidores de la biosmtesis de leucotrienos [por ejemplo, zileuton y BAY1005 (registro CA 128253-31-6)]; (6) antagonistas del receptor de la histamina H1/antihistammicos (por ejemplo, cualquier compuesto que tenga la capacidad de bloquear, inhibir, reducir o interrumpir de otra forma la interaccion entre la histamina y su receptor) que incluye, pero sin limitacion: astemizol, acrivastina, antazolina, azatadina, azelastina, astamizol, bromofeniramina, maleato de bromofeniramina, carbinoxamina, carebastina, cetirizina, clorfeniramina, maleato de clorofeniramina, cimetidina clemastina, ciclizina, ciproheptadina, descarboetoxiloratadina, dexclorfeniramina, dimetinden, difenhidramina, difenilpiralina, succinato de doxilamina, doxilarnina, ebastina, efletirizina, epinastina, famotidina, fexofenadina, hidroxizina, hidroxizina, cetotifeno, levocabastina, levocetirizina, levocetirizina, loratadina, meclizina, mepiramina, mequitazina, metdilazina, mianserin, mizolastina, noberastina, norasternizol, noraztemizol, fenindamina, feniramina, picurnast, prometazina, pinlamina, pirilamina, ranitidina, temelastina, terfenadina, trimeprazina, tripelenamina y triprolidina; (7) un anticolinergico que incluye, pero sin limitacion: atropina, benztropina, biperiden, flutropio, hiosciamina (por ejemplo Levsin®; Levbid®; Levsin/SL®, Anaspaz®, Levsinex timecaps®, NuLev®), ilutropio, ipratropio, bromuro de ipratropio, metscopolamina, oxibutinina, rispenzepina, escopolamina y tiotropio; (8) un antitusivo que incluye, pero sin limitacion: dextrometorfan, codema e hidromorfona; (9) un descongestivo que incluye, pero sin limitacion: seudoefedrina y fenilpropanolamina; (10) un expectorante que incluye, pero sin limitacion: guafenesina, guaicolsulfato, terpina, cloruro de amonio, guaicolato de glicerol y glicerol yodado; (11) un broncodilatador que incluye, pero sin limitacion: teofilina y aminofiline; (12) un antiinflamatorio que incluye, pero sin limitacion: fluribiprofeno, diclofenaco, indometacina, cetoprofeno, S-cetroprofeno, tenoxicam; (13) un inhibidor de la PDE (fosfodiesterasa) que incluye, pero sin limitacion, los divulgados en el presente documento; (14) un anticuerpo monoclonal humanizado recombinante [por ejemplo xolair (tambien llamado omalizumab), rhuMab y talizumab]; (15) un tensioactivo de pulmon humanizado que incluye formas recombinantes de las protemas tensioactivas SP-B, SP-C o SP-D [por ejemplo SURTAXIN®, anteriormente conocido como dsc-104 (Discovery Laboratories)], (16) agentes que inhiben los canales de sodio epiteliales (CNaE), tales como amilorida y compuestos relacionados; (17) agentes antimicrobianos utilizados para tratar infecciones pulmonares tales como aciclovir, amicacina, amoxicilina, doxiciclina, trimetoprina sulfametoxazol, anfotericina B, azitromicina, claritromicina, roxitromicina, claritromicina, cefalosporinas (cefoxitina, cefmetazol, etc.), ciprofloxacina, etambutol, gentamicina, ganciclovir, imipenem, isoniazida, itraconazol, penicilina, ribavirina, rifampina, rifabutina, amantadina, rimantidina, estreptomicina, tobramicina y vancomicina; (18) agentes que activan la secrecion de cloruro a traves de canales de cloruro dependientes de Ca++ (tales como los agonistas del receptor purinergico (P2Y(2)); (19) agentes que disminuyen la viscosidad del esputo, tales como la ADNasa 1 humana recombinante, (Pulmoxyme®); (20) agentes antiinflamatorios no esteroides (acemetacina, acetaminofeno, acido acetilsalidlico, alclofenaco, alminoprofeno, apazona, aspirina, benoxaprofeno, bezpiperilon, acido bucloxico, carprofeno, clidanaco, diclofenaco, diclofenaco, diflunisal, diflusinal, etodolaco, fenbuleno, fenbufeno, fenclofenaco, acido fenclozico, fenoprofeno, fentiazaco, feprazona, acido flufenamico, flufenisal, flufenisal, fluprofeno, flurbiprofeno, flurbiprofeno, furofenaco, ibufenaco, ibuprofeno, indometacina, indometacina, indoprofeno, isoxepaco, isoxicam, cetoprofeno, cetoprofeno, cetorolaco, acido meclofenamico, acido meclofenamico, acido mefenamico, acido mefenamico, miroprofeno, mofebutazona, nabumetona oxaprozin, naproxeno, naproxeno, acido niflumico, oxaprozina, oxpinaco, oxifenbutazona, fenacetina, fenilbutazona, fenilbutazona, piroxicam, piroxicam, piroprofeno, pranoprofeno, sudoxicam, tenoxican, sulfasalazina, sulindaco, sulindaco, suprofeno, acido tiaprofenico, tiopinaco, tioxaprofeno, acido tolfenamico, tolmetina, tolmetina, zidometacina, zomepirac y zomepirac) y (21) productos terapeuticos antioxidantes aerosolizados tales como S- Nitrosoglutation.

Agentes antiobesidad

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden utilizarse en terapia de combinacion con un agente antiobesidad. Tales agentes adecuados incluyen, pero sin limitacion: inhibidores de 11p HSD-I (11-beta hidroxi esteroides deshidrogenasa tipo 1), tal como BVT 3498, BVT 2733, 3-(1-adamantil)-4-etil-5-(etiltio)-4H-1,2,4-triazol, 3- (1-adamantil)-5-(3,4,5-trimetoxi-fenil)-4-metil-4H-1,2,4-triazol, 3-adamantanil-4,5,6,7,8,9,10,11,12,3a-decahidro-1,2,4-

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triazol[4,3-a][1 1]anuleno, y los compuestos divulgados en los documentos WO01/90091, WOO 1/90090, WOO 1/90092 y WO02/072084; antagonistas de 5HT, tales como los de los documentos WO03/037871, WO03/037887 y similares; moduladores de 5HTIa, tales como carbidopa, benserazida y los divulgados en los documentos US6207699, WO03/03149, y similares; agonistas de 5Ht2c (receptor de serotonina 2c), tales como BVT933, DPCA37215, IK264, PNU 22394, WAY161503, R-1065, SB 243213 (Glaxo Smith Klinc) e YM 348, y los divulgados en los documentos US3914250, WO00/77010, WO02/36S96, WO02/48124, WO02/10169, WO01/66548, WO02/14152, WO02/51844, WO02/40456 y WO02/40457; moduladores del receptor 5HT6, tales como los de los documentos WO03/030901, WO03/035061, WO03/039547, y similares; acil-estrogenos, tales como oleoil-estrona, divulgada en del Mar-Grasa, M. et al., Obesity Research, 9: 202-9 (2001) y la Solicitud de Patente Japonesa n.° JP 2000256190; compuestos bidclicos anorecticos tales como 1426 (Aventis) y 1954 (Aventis), y los compuestos divulgados en los documentos WO00/18749, WO01/32638, WO01/62746, WO01/62747 y WO03/015769; antagonistas/agonistas inversos de CB 1 (receptor de cannabinoides 1), tales como rimonabant (Acomplia; Sanofi); SR-147778 (Sanofi), SR-141716 (Sanofi), BAY 65-2520 (Bayer) y SLV 319 (Solvay), y los divulgados en las publicaciones de patente US4973587, US5013837, US5081122, US5112820, US5292736, US5532237, US5624941, US6028084, US6509367, US6509367, WO96/33159, WO97/29079, WO98/31227, WO98/33765, WO98/37061, WO98/41519, WO98/43635, WO98/43636, WO99/02499, WO00/10967, WO00/10968, WO01/09120, WO01/58869, WO01/64632, WO01/64633, WO01/64634, WO01/70700, WO01/96330, WO02/076949, WO03/006007,

WO03/007887, WO03/020217, WO03/026647, WO03/026648, WO03/027069, WO03/027076, WO03/027114, WO03/037332, WO03/040107, WO03/086940, WO03/084943 y EP658546; los agonistas de la CCK-A (colecistoquinina A), tales como AR-R 15849, GI 181771 (GSK), JMV-180, A-71378, A-71623 y SR146131 (Sanofi), y los descritos en el documento US5739106; FCNT (factores ciliares neurotroficos), tales como GI-181771 (GlaxoSmithKline), SR1 46131 (Sanofi Synthelabo), butabindida, PD 170.292 y PD 149164 (Pfizer); derivados de FCNT, tales como Axokine® (Regeneron) y los divulgados en los documentos WO94/09134, WO98/22128 y WO99/43813; inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV (DP-IV), tales como isoleucina tiazolidida, valina pirrolidida, NVP-DPP728, LAF237, P93/01, P 3298, TsL 225 (acido triptofil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-3-carboxflico; divulgado por Yamada et al., Bioorg. & Med. Chem. Lett. 8 (1998) 1537-1540), TMC-2A/2B/2C, inhibidores de CD26, FE 999011, P9310/K364, VIP 0177, SDZ 274-444, 2-cianopirrolididas y 4-cianopirrolididas, como se divulga en Ashworth et al., Bioorg. & Med. Chem. Lett., Vol. 6, n.° 22, pag. 1163-1166 y 2745-2748 (1996), y los compuestos divulgados en las publicaciones de patente WO99/38501, WO99/46272, WO99/67279 (Probiodrug), WO99/67278 (Probiodrug), WO99/61431 (Probiodrug), WO02/083128, WO02/062764, WO03/000180, WO03/000181, WO03/000250,

WO03/002530, WO03/002531, WO03/002553, WO03/002593, WO03/004498, WO03/004496,WO03/017936, WO03/024942, WO03/024965, WO03/033524, WO03/037327 y EP1258476; agonistas/antagonistas del receptor de secretagogo de hormona de crecimiento, tales como NN703, hexarrelina, MK-0677 (Merck), SM-130686, CP-424391 (Pfizer), LY 444.711 (Eli Lilly), L-692.429 y L-163.255, y tales como los divulgados en el documento USSN 09/662448, la solicitud provisional de Estados Unidos 60/203335, los documentos US6358951, USA2002049196, USA2002/022637, WO01/56592 y WO02/32888; los antagonistas/agonistas inversos de la H3 (histamina H3), tales como tioperamida, 3-(1H-imidazol-4-il)propil N-(4-pentenil)carbamato), clobenpropit, yodofenpropit, imoproxifano, GT2394 (Gliatech) y A331440, O-[3-(1H-imidazol-4-il)propanol]carbamatos (Kiec-Kononowicz, K. et al., Pharmazie, 55: 349-55 (2000)), antagonistas del receptor de histamina H3 que contienen piperidina (Lazewska, D. et al., Pharmazie, 56:927-32 (2001), derivados de benzofenona y compuestos relacionados (Sasse, A. et al., Arch. Pharm.(Weinheim) 334: 45-52 (2001)), N-fenilcarbamatos sustituidos (Reiderneister, S. et al., Pharmazie, 55:83-6 (2000)) y derivados de proxifano (Sasse, A. et al., J. Med. Chem. 43: 3335-43 (2000)) y moduladores del receptor de histamina H3, tales como los divulgados en los documentos WO02/15905, WO03/024928 y WO03/024929; derivados de leptina, tales como los divulgados en los documentos US5552524, US5552523, USA5552522, US5521283, WO96/23513, WO96/23514, WO96/23515, WO96/23516, WO96/23517, WO96/23518, WO96/23519 y WO96/23520; leptina, que incluye leptina humana recombinante (PEG-OB, Hoffman La Roche) y leptina metionilo humana recombinante (Amgen); inhibidores de lipasa, tales como tetrahidrolipstatina (orlistat/Xenical®), Triton WR1 339, RHC80267, lipstatina, teasaponina, fosfato de dietilumbeliferilo, FL-386, WAY-121898, Bay-N-3176, valilactona, esteracina, ebelactona A, ebelactona B y RHC 80267, y los divulgados en las publicaciones de patente WO01/77094, US4598089, US4452813, USUS5512565, US5391571, USA5602151, US4405644, US4189438 y US4242453; moduladores del metabolismo de los lfpidos, tales como el acido maslmico, eritrodiol, acido ursolico uvaol, acido betulmico, betulina y similares, y los compuestos divulgados en el documento WO03/011267; agonistas de rMc4 (receptor de melanocortina 4), tales como CHIR86036 (Chiron), ME-10142, ME-10145 y HS-131 (Melacure), y los divulgados en las publicaciones PCT n.° WO99/64002, WO00/74679, WOO 1/991752, WOO 1/25192, WOO 1/52880, WOO 1/74844, WOO 1/70708, WO01/70337, WO01/91752, WO02/059095, WO02/059107, WO02/059108, WO02/059117, WO02/06276, WO02/12166, WO02/11715, WO02/12178, WO02/15909, WO02/38544,

WO02/068387, WO02/068388, WO02/067869, WO02/081430, WO03/06604, WO03/007949, WO03/009847,

WO03/009850, WO03/013509 y WO03/031410; moduladores de r Mc5 (receptor de melanocortina 5), tales como los divulgados en los documentos WO97/19952, WO00/15826, WO00/15790, USA20030092041; antagonistas del receptor de la hormona concentradora de melanina 1 (RHCM), tales como T-226296 (Takeda), SB 568849, SNP- 7941 (Synaptic) y los divulgados en las publicaciones de patente WOO 1/21169, WO01/82925, WO01/87834, WO02/051809, WO02/06245. WO02/076929, WO02/076947, WO02/04433, WO02/51809, WO02/083134,

WO02/094799, WO03/004027, WO03/13574, WO03/15769, WO03/028641, WO03/035624, WO03/033476,

WO03/033480, JP13226269 y JP1437059; moduladores de mGluR5 tales como los divulgados en los documentos WO03/029210, WO03/047581, WO03/048137, WO03/051315, WO03/051833, WO03/053922, WO03/059904 y similares; agentes serotoninergicos, tales como fenfluramina (tales como Pondimin® (bencenoetanamina, N-etil-alfa-

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metil-3-(trifluorometil)-, clorohidrato), Robbins), dexfenfluramina (tal como Redux® (bencenoetanamina, N-etil-alfa- metil-3-(trifluorometil)-, clorhidato), Interneuron) y sibutramina ((Meridia®, Knoll/Reductil™), incluyendo mezclas racemicas, como isomeros opticamente puros (+) y (-), y sales, disolventes, hidratos, clatratos y profarmacos farmaceuticamente aceptables de los mismos, que incluyen sales monohidrato de clorhidrato de sibutramina de los mismos, y los compuestos divulgados en los documentos US4746680, US4806570 y US5436272, US20020006964, WOO 1/27068 y WOO 1/62341; inhibidores del transporte de NE (norepinefrina), tales como GW 320659, despiramina, talsupram y nomifensina; antagonistas de NPY 1, tales como BIBP3226, J-115814, BIBO 3304, LY- 357897, CP-671906, GI-264879A, y los divulgados en los documentos US6001836, WO96/14307, WO01/23387, WO99/51600, WO01/85690, WO01/85098, WO01/85173 y WO01/89528; antagonistas de NPY5 (neuropeptido Y Y5), tales como 152.804, GW-569180A, GW-594884A, GW-587081X, GW-548118X, FR235208, FR226928, FR240662, FR252384, 1229U91, GI-264879A, CGP71683A, LY-377897, LY-366377, PD-160170, SR-120562A, SR- 120819A, JCF-104 y H409/22, y los compuestos divulgados en las publicaciones de patente US6140354, US6191160, US6218408, US6258837, US6313298, US6326375, US6329395, US6335345, US6337332,

US6329395, US6340683, EP01010691, EP-01044970, WO97/19682, WO97/20820, WO97/20821, WO97/20822, WO97/20823, WO98/27063, WO00/107409, WO00/185714, WO00/185730, WO00/64880, WO00/68197,

WO00/69849, WO/0113917, WO01/09120, WO01/14376, WO01/85714, WO01/85730, WO01/07409, WO01/02379, WO01/23388, WO01/23389, WOO 1/44201, WO01/62737, WO01/62738, WO01/09120, WO02/20488, WO02/22592, WO02/48152, WO02/49648, WO02/051806, WO02/094789, WO03/009845, WO03/014083, WO03/022849, WO03/028726 y Norman et al., J. Med. Chem. 43:4288-4312 (2000); antagonistas de opioides, tales como nalmefene (REVEX ®), 3-metoxinaltrexona, metilnaltrexona, naloxona y naltrexona (por ejemplo PT901; Pain Therapeutics, Inc.), y los divulgados en los documentos US20050004155 y WO00/21509; antagonistas de orexina, tales como SB-334867-A y los divulgados en las publicaciones de patente WO01/96302, WO01/68609, WO02/44172, WO02/51232, WO02/51838, WO02/089800, WO02/090355, WO03/023561, WO03/032991 y WO03/037847; inhibidores de la PDE (por ejemplo, compuestos que enlentecen la degradacion de AMP dclico (AMPc) y/o GMP dclico (GMPc) por la inhibicion de las fosfodiesterasas, lo que puede conducir a un aumento relativo de la concentracion intracelular de AMPc y GMPc; los posibles inhibidores de la PDE son principalmente las sustancias que deben enumerarse entre la clase que consiste en los inhibidores de la PDE3, la clase que consiste en los inhibidores de la PDE4 y/o la clase que consiste en los inhibidores de la PDE5, en particular las sustancias que pueden denominarse como tipos mixtos de inhibidores de la PDE3/4 o como tipos mixtos de inhibidores de la PDE3/4/5), tales como las divulgadas en las publicaciones de patente DE1470341, DE2108438, DE2123328, DE2305339, DE2305575, DE2315801, DE2402908, DE2413935, DE2451417, DE2459090, DE2646469,

DE2727481, DE2825048, DE2837161, DE2845220, DE2847621, DE2934747, DE3021792, DE3038166,

DE3044568, EP000718, EP0008408, EP0010759, EP0059948, EP0075436, EP0096517, EPO1 12987, EPO1 16948, EP0150937, EP0158380, EP0161632, EP0161918, EP0167121, EP0199127, EP0220044, EP0247725, EP0258191, EP0272910, EP0272914, EP0294647, EP0300726, EP0335386, EP0357788, EP0389282, EP0406958, EP0426180, EP0428302, EP0435811, EP0470805, EP0482208, EP0490823, EP0506194, EP0511865, EP0527117, EP0626939, EP0664289, EP0671389, EP0685474, EP0685475, EP0685479, JP92234389, JP94329652,

JP95010875, US4963561, US5141931, WO9117991, WO9200968, WO9212961, WO9307146, WO9315044,

WO9315045, WO9318024, WO9319068, WO9319720, WO9319747, WO9319749, WO9319751, WO9325517,

WO9402465, WO9406423, WO9412461, WO9420455, WO9422852, WO9425437, WO9427947, WO9500516,

WO9501980, WO9503794, WO9504045, WO9504046, WO9505386, WO9508534, WO9509623, WO9509624,

WO9509627, WO9509836, WO9514667, WO9514680, WO9514681, WO9517392, WO9517399, WO9519362,

WO9522520, WO9524381, WO9527692, WO9528926, WO9535281, WO9535282, WO9600218, WO9601825,

WO9602541, WO9611917, DE3142982, DE1 116676, DE2162096, EP0293063, EP0463756, EP0482208, EP0579496, EP0667345 US6331543, US20050004222 (incluyendo las divulgadas en las formulas 1-XIII y los parrafos 37-39, 85-0545 y 557-577), WO9307124, EP0163965, EP0393500, EP0510562, EP0553174, WO9501338 y WO9603399, asf como los inhibidores de la PDE5 (tales como RX-RA-69, SCH-51866, KT-734, vesnarrinona, zaprinast, SKF-96231, ER-21355, BF/GP-385, NM-702 y sildenafil (Viagra™)), inhibidores de la PDE4 (tales como etazolato, ICI63197, RP73401, imazolidinona (RO-20-1724), MEM 1414 (R1533/R1500; Pharmacia Roche), denbufilina, rolipram, oxagrelato, nitraquazona, Y-590, DH-6471, SKF-94120, motapixona, lixazinona, indolidan, olprinona, atizoram, KS-506-G, dipamfilina, BMY-43351, atizoram, arofilina, filaminast, PDB-093, UCB-29646, CDP- 840, SKF-107806, piclamilast, RS-17597, RS-25344-000, SB-207499, TIBENELAST, SB-210667, SB-211572, SB- 211600, SB-212066, SB-212179, GW-3600, CDP-840, mopidamol, anagrelida, ibudilast, amrinona, pimobendan, cilostazol, quazinona y N-(3,5-dicloropirid-4-il)-3-ciclopropilmetoxi4-difluorometoxibenzamida, inhibidores de la PDE3 (tales como ICI153, 100, bemorandane (rWj 22867), MCI-154, UD-CG 212, sulmazol, ampizona, cilostamida, carbazeran, piroximona, imazodan, CI-930, siguazodan, adibendan, saterinona, SKF-95654, SDZ-MKS-492, 349-U- 85, emoradan, EMD-53998, EMD-57033, NSP-306, NSP-307, revizinona, NM-702, WIN-62582 y WIN-63291, enoximona y milrinona, inhibidores de la PDE3/4 (tales como benafentrina, trequinsina, ORG-30029, zardaverina, L-686398, SdZ-ISQ-844, ORG-20241, EMD-54622 y tolafentrina) y otros inhibidores de la PDE (tales como vinpocetina, papaverina, enprofilina, cilomilast, fenoximona, pentoxifilina, roflumilast, tadalafil(Cialis®), teofilina y vardenafil(Levitra®); antagonistas del Neuropeptido Y2 (NPY2) que incluyen, pero sin limitacion: polipeptido YY y fragmentos y variantes del mismo (por ejemplo YY3-36 (PYY3-36) (N. Engl. J. Med. 349:941, 2003; IKPEAPgE DASPEELNRY YASLRHYLNL VTRQRY (SEQ ID NO:XXX)) y agonistas de PYY tales como los divulgados en los documentos WO02/47712, WO03/026591, WO03/057235 y WO03/027637, inhibidores de la recaptacion de serotonina, tales como paroxetina, fluoxetina (Prozac™), fluvoxamina, sertralina, citalopram e imipramina, y los divulgados en los documentos US6162805, US6365633, WO03/00663, WOO 1/27060 y WOO 1/162341; agonistas

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de la hormona tiroidea p, tales como KB-2611 (KaroBioBMS) y los divulgados en los documentos WO02/15845, WO97/21993, WO99/00353, GB98/284425, Solicitud Provisional de Estados Unidos n.° 60/183.223 y la Solicitud de Patente Japonesa n.° JP 2000256190; activadores de UCP-I (protema de desacoplamiento 1), 2 o 3, tales como acido fitanico, acido 4-[(E)-2-(5,6,7,8-tetrahidro-5,5,8,8-tetrametil-2-naftalenil)-1-propenil]benzoico (TTNPB), acido retinoico y los divulgados en el documento WO99/00123; agonistas p3 (receptor beta adrenergico 3), tales como AJ9677/TAK677 (Dainippon/Takeda), L750355 (Merck), C331648 (Pfizer), CL-316.243, SB 418790, BRL-37344, L-796568, BMS-196085, BRL-35135A, CGP12177A, BTA-243, GW 427353, Trecadrina, Zeneca D7114, N-5984 (Nisshin Kyorin), LY-377604 (Lilly), SR 59119A, y los divulgados en los documentos US5541204, US5770615, US5491134, US5776983, US488064, US5705515, US5451677, WO94/18161, WO95/29159, WO97/46556, WO98/04526 y WO98/32753, WO01/74782, WO02/32897, WO03/014113, WO03/016276, WO03/016307, WO03/024948, WO03/024953 y WO03/037881; agentes noradrenergicos que incluyen, pero sin limitacion, dietilpropion (tal como Tenuate® (1-propanona, 2-(dietilamino)-1-fenil-, clorohidrato), Merrell), dextroanfetamina (tambien conocida como sulfato de dextroanfetamina, dexanfetamina, dexedrina, Dexampex , Ferndex, Oxydess II, Robese, Spancap n.° 1), mazindol ((o 5-(p-clorofenil)-2,5-dihidro-3H-imidazo[2,1-a]isoindol-5-ol), tal como Sanorex®, Novartis o Mazanor®, Wyeth Ayerst), fenilpropanolamina (o bencenometanol, alfa-(1-aminoetil)-, clorhidrato), fentermina ((o fenol, 3-[[4,5-dihidro-1H-imidazol-2-il)etil](4-metilfeni-1)amino], monoclorhidrato), tal como Adipex-P®, Lemmon, FaSTIN®, Smith-Kline Beecham y lonamin®, Medeva), fendimetrazina ((o (2S,3S)-3,4-dimetil-2- fenilmorfolino L-(+)-tartrato (1:1)), tal como Metra® (Forest), Plegine® (Wyeth-Ayerst), Prelu-2® (Boehringer Ingelheim) y Statobex® (Lemmon), tartrato de fendamina (tal como Thephorin® (2,3,4,9-tetrahidro-2-metil-9-fenil-1H- indenol[2,1-c]piridina L-(+)-tartrato (1:1)), Hoffmann-LaRoche), metanfetamina (tal como Desoxyn®, (clorhidrato de (S)-N, (alfa)-dimetilbencenoetanamina)) y tartrato de fendimetracinc (tal como Bontril® Capsulas de Liberacion Retardada, Amarin (tartrato de 3,4-dimetil-2-fenilmorfolino); reguladores positivos/inductores de la oxidacion de los acidos grasos tales como Famoxin® (Genset); inhibidores de la monamina oxidasa que incluyen, pero sin limitacion, befloxatona, moclobemida, brofaromina, fenoxatina, esuprona, befol, toloxatona, pirlindol, amiflamina, sercloremina, bazinaprina, lazabemida, milacemida, caroxazona y otros determinados compuestos como se divulga en el documento WO01/12176, y otros agentes antiobesidad tales como los agonistas de 5HT-2, inhibidores de la ACC (acetil-CoA carboxilasa) tales como los divulgados en el documento WO03/072197, acido alfa-lipoico (alfa-LA), AOD9604, inhibidores del apetito, tales como los del documento WO03/40107, ATL-962 (Alizyme PlC), benzocama, clorhidrato de benzfetamina (Didrex), focu (Fucus vesiculosus), agonistas de BRS3 (receptor de la bombesina subtipo 3), bupropion, cafema, agonistas de CCK, quitosano, cromo, acido linoleico conjugado, agonistas de la hormona liberadora de corticotropina, deshidroepiandrosterona, inhibidores de la DGAT1 (diacilglicerol aciltransferasa 1), inhibidores de la DGAT2 (diacilglicerol aciltransferasa 2), inhibidores del transportador de dicarboxilato, efedra, exendina 4 (un inhibidor de glp-1), inhibidores de la FAS (acido graso sintetasa) (tales como cerulenina y C75), inhibidores de la reabsorcion de grasas (tales como los del documento WO03/053451 y similares), inhibidores del transportador de acidos grasos, fibras solubles en agua naturales (tales como psyllium, plantago, goma guar, avena, pectina), antagonistas de la galanina, galega (Ruda Cabruna, Gallega), Garcinia cambogia, germandrina (Teucrium chamaedrys), anticuerpos de grelina y antagonistas de grelina (tales como los divulgados en los documentos WO01/87335 y WO02/08250), hormonas polipeptfdicas y variantes de las mismas que afectan a la secrecion de los islotes de Langerhans, tales como las hormonas de la familia genica de la secretina/polipeptido inhibidor gastrico (PIG)/polipeptido intestinal vasoactivo (PIV)/polipeptido activador de la adenilato ciclasa de la hipofisis (PAACH)/polipeptido similar a glucagon II (GLP-II)/glicentina/glucagon y/o los de la familia genica del polipeptido relacionado con genes de la adrenomedulina/amilina/calcitonina (CGRP) que incluyen los agonistas de GLP-1 (polipeptido similar a glucagon I) (por ejemplo (1) exendina 4, 2) las moleculas GLP-1 descritas en el documento US20050130891 que incluyen GLP-1 (7-34), GLP-1 (7-35), GLP-1 (7-36) o GLP-1 (7-37) en su forma carboxilada o amidada de forma C terminal o como polipeptidos GLP-I modificados, y modificaciones de los mismos que incluyen los descritos en los parrafos 17-44 del documento US20050130891, y se emplean derivados obtenidos de GLP-1-(7-34)COOH y la correspondiente amida acida que tienen la siguiente formula general: R-NH-HAEGTFTSDVSYLEGQAAKEFIAWLVK-CONH2, en la que R = H o un compuesto organico que tiene de 1 a 10 atomos de carbono. Preferentemente, R es el resto de un acido carboxflico. Particularmente preferente son los siguientes restos de acido carboxflico: formilo, acetilo, propionilo, isopropionilo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, terc-butilo) y glp-1 (polipeptido similar a glucagon-1), antagonistas de glucocorticoides, inhibidores de la glucosa transportada, secretagogos de la hormona del crecimiento (tales como los divulgados y descritos de forma espedfica en el documento US5536716), interleucina 6 (IL-6) y moduladores de la misma (como en el documento WO03/057237 y similares), L-carnitina, agonistas de rMc3 (receptor de la melanocortina 3), agonistas/antagonistas de MCH2R (hormona concentradora de melanina 2R), antagonistas de la hormona concentradora de melanina, agonistas de melanocortina (tales como Melanotan II o los descritos en el documento WO 99/64002 y WO 00/74679), hierba nomame, inhibidores del transportador de fosfato, compuesto de phytopharm 57 (CP 644.673), piruvato, inhibidores de SCD-I (estearoil-CoA desaturasa-1), T71 (Tularik, Inc., Boulder CO), Topiramato (Topimax®, indicado como un anticonvulsivo que se ha demostrado que aumenta la perdida de peso), moduladores de factores de transcripcion (tales como los divulgados en el documento WO03/026576), inhibidores de la p-hidroxi esteroides deshidrogenasa (p-HSD-I), p-hidroxi-p-metilbutirato, p57 (Pfizer), Zonisamida (Zonegran™, indicado como un antiepileptico que se ha demostrado que conduce a la perdida de peso), y los agentes divulgados en el documento US20030119428, parrafos 20-26.

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Agentes antidiabeticos

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden utilizarse en combinacion terapeutica con uno o mas agentes antidiabeticos, que incluyen, pero sin limitacion: agonistas de PPARy como las glitazonas (por ejemplo, WAY-120.744, AD 5075, balaglitazona, ciglitazona, darglitazona (CPG-86325, Pfizer), englitazona (CP-68722, Pfizer), isaglitazona (MIT/J&J), MCC-555 (Mitsibishi divulgado en el documento US5594016), pioglitazona (tal como pioglitazona Actos™; Takeda), rosiglitazona (Avandia™, Smith Kline Beecham), maleato de rosiglitazona, troglitazona (Rezulin®, divulgado en el documento US4572912), rivoglitazona (CS-O1 1, Sankyo), GL-262570 (Glaxo Welcome), BRL49653 (divulgado en WO98/05331) CLX-0921, 5-BTZD, GW-0207, LG-100641, JJT-501 (JPNT/P&U), L-895645 (Merck), R-119702 (Sankyo/Pfizer), NN-2344 (Dr. Reddy/NN), YM-440 (Yamanouchi), LY- 300512, LY-519818, r483 (Roche), T131 (Tularik) y similares, y compuestos divulgados en los documentos US4687777, US5002953, US5741803, US5965584, US6150383, US6150384, US6166042, US6166043,

US6172090, US6211205, US6271243, US6288095, US6303640, US6329404, US5994554, WO97/10813, WO97/27857, WO97/28115, WO97/28137, WO97/27847, WO00/76488, WO03/000685, WO03/027112,

WO03/035602, WO03/048130, WO03/055867, y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos; biguanidas tales como clorhidrato de metformina (clorhidrato de N,N-dimetilimidodicarbonimida diamida, tal como Glucophage™, Bristol-Myers Squibb); clorhidrato de metformina con gliburida, tal como Glucovance™Bristol-Myers Squibb); buformina (diamina imidodicarboniirndica, N-butil-); etoformina (1 -butil-2-etilbiguanida, Schering A. G.); otras formas salinas de metformina (incluyendo cuando la sal se selecciona del grupo de, acetato, benzoato, citrato, ftimarato, embonato, clorofenoxiacetato, glicolato, palmoato, aspartato, metanosulfonato, maleato, paraclorofenoxiisobutirato, formato, lactato, succinato, sulfato, tartrato, ciclohexanocarboxilato, hexanoato, octanoato, decanoato, hexadecanoato, octodecanoato, bencenosulfonato, trimetoxibenzoato, paratoluenosulfonato, adamantanocarboxilato, glicoxilato, glutamato, pirrolidonacarboxilato, naftalenosulfonato, 1-glucosafosfato, nitrato, sulfito, ditionato y fosfato), y fenformina; inhibidores de la protema tirosina fosfatasa-IB (PTP-IB), tales como A-401.674, KR 61639, OC-060062, OC-83839, OC-297962, MC52445, MC52453, ISIS 113715 y los divulgados en los documentos WO99/585521, WO99/58518, WO99/58522, WO99/61435, WO03/032916, WO03/032982, WO03/041729, WO03/055883, WO02/26707, WO02/26743, JP2002114768 y las sales y esteres farmaceuticamente aceptables de los mismos; sulfonilureas tales como acetohexamida, (por ejemplo Dymelor, Eli Lilly), carbutamida, clorpropamida (por ejemplo, Diabinese®, Pfizer), gliamilida (Pfizer), gliclazida (por ejemplo Diamcron, Servier Canada Inc), glimepirida (por ejemplo la divulgada en el documento USA4379785, tal como Amaryl, Aventis), glipentida, glipizida (por ejemplo Glucotrol y Glucotrol XL Liberacion Prolongada, Pfizer), gliquidona, glisolamida, gliburida/glibenelamida (por ejemplo, Micronasa y Glinasa Prestab, Pharmacia & Upjohn y Diabeta, Aventis), tolazamida (por ejemplo Tolinasa) y tolbutamida (por ejemplo, Orinasa), y sales y esteres farmaceuticamente aceptables de los mismos; meglitinidas tales como repaglinida (por ejemplo, Pranidin®, Novo Nordisk), KAD1229 (PF/Kissei) y nateglinida (por ejemplo Starlix®, Novartis), y sales y esteres farmaceuticamente aceptables de los mismos; inhibidores de la glucosido hidrolasa (o inhibidores glucosido) tales como acarbosa (por ejemplo, Precose™, Bayer divulgado en el documento US4904769), miglitol (tales como GLYSET™, Pharmacia & Upjohn, divulgado en el documento US4639436), camiglibosa (metil 6-desoxi-6-[(2R,3R,4R,5S)-3,4,5-trihidroxi-2- (hidroximetil)piperidino]-alfa-D-glucopiranosido, Marion Merrell Dow), voglibosa (Takeda), adiposina, emiglitato, pradimicina-Q, salbostatina, CKD-711, MDL-25.637, MDL-73.945 y MoR 14, y los compuestos divulgados en los documentos US4062950, US4174439, US4254256, US4701559, US4639436, US5192772, US4634765,

US5157116, US5504078, US5091418, US5217877, US51091 y WOO 1/47528 (poliaminas); inhibidores de la a- amilasa tales como tendamistat, trestatina y A1-3688, y los compuestos divulgados en los documentos US4451455, US4623714 y US4273765; inhibidores de SGLT2 que incluyen los divulgados en los documentos US6414126 y US6515117; un inhibidor de aP2 tal como se divulga en el documento US6548529; los secretagogos de insulina tales como linoglirida, A-4166, forskilina, AMPc dibutirilo, isobutilmetilxantina (IBMX), y sales y esteres farmaceuticamente aceptables de los mismos; inhibidores de la oxidacion de acidos grasos, tales como clomoxir y etomoxir, y sales y esteres farmaceuticamente aceptables de los mismos; antagonistas de A2, tales como midaglizol, isaglidol, deriglidol, idazoxan, caroxan y fluparoxan, y sales y esteres farmaceuticamente aceptables de los mismos; insulina y compuestos relacionados (por ejemplo, mimeticos de insulina) tales como biota, LP-100, novarapid, insulina detemir, insulina lispro, insulina glargina, suspension de insulina cinc (lente y ultralente), insulina Lys-Pro, GLP-I (1-36) amida, GLP-I (73-7) (insulintropina, divulgada en el documento US5614492), LY-315902 (Lilly), GLP-I (7-36)-NH2), AL-401 (Autoimmune), determinadas composiciones como se divulgan en los documentos USA4579730, USA4849405, US4963526, US5642868, US5763396, US5824638, US5843866, US6153632, US6191105 y WO 85/05029, e insulina de primate, roedor o conejo, incluyendo variantes biologicamente activas de las mismas que incluyen variantes alelicas, mas preferentemente insulina humana disponible en forma recombinante (las fuentes de insulina humana incluyen formulaciones farmaceuticamente aceptables y esteriles, tales como las disponibles de Eli Lily (Indianapolis, Ind. 46285) como Humulin™ (insulina humana de origen de ADNr), tambien vease THE PHYSICIAN'S DESK REFERENCE, 55a Ed. (2001) Medical Economics, Thomson Healthcare (que divulga otras insulinas humanas adecuadas); no tiazolidinodionas tales como JT-501 y farglitazar (GW-2570/GI- 262579) y sales y esteres farmaceuticamente aceptables de las mismas; agonistas dobles de PPARa/Y tales como AR-HO39242 (Aztrazeneca), GW-409544 (Glaxo-Wellcome), BVT-142, CLX-0940, GW-1536, GW-1929, GW-2433, KRP-297 (Kyorin Merck; 5-[(2,4-dioxo tiazolidinil)metil]metoxi-N-[[4-(trifluorometil)fenil]metilbenzamida), L-796449, LR-90, MK-0767 (Merck/Kyorin/Banyu) SB 219994, muraglitazar (bMs), lesaglitzar (Astrazeneca), reglitazar (JTT- 501), y los divulgados en los documentos WO99/16758, WO99/19313, WO99/20614, WO99/38850, WO00/23415, WO00/23417, WO00/23445, WO00/50414, WO01/00579, WO01/79150, WO02/062799, WO03/004458,

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WO03/016265, WO03/018010, WO03/033481, WO03/033450, WO03/033453, WO03/043985, WO 031053976, la solicitud de patente n.° de Ser. 09/664.598, presentada el 18 de septiembre de 2000, Murakami et al. Diabetes 47, 1841-1847 (1998), y sales y esteres farmaceuticamente aceptables de los mismos; otros farmacos sensibilizadores de insulina; agonistas del receptor VPAC2; moduladores de GLK, tales como los divulgados en el documento WO03/015774; moduladores de retinoides tales como los divulgados en el documento WO03/000249; inhibidores de GSK 3p/GSK3 tales como 4-[2-(2-bromofenil)-4-(4-fluorofenil-1H-imidazol-5-il]piridina y los compuestos divulgados en los documentos WO03/024447, WO03/037869, WO03/037877, WO03/037891, WO03/068773, EP1295884, EP1295885 y similares; inhibidores de la glicogeno fosforilasa (HGLPa), tales como CP-368.296, CP-316.819, BAYR3401 y compuestos divulgados en los documentos WOO 1/94300, WO02/20530, WO03/037864, y sales o esteres farmaceuticamente aceptables de los mismos; promotores del consumo de ATP, tales como los divulgados en el documento WO03/007990, inhibidores de TRB3; ligandos del receptor de vanilloides, tales como los divulgados en el documento WO03/049702; agentes hipoglucemicos, tales como los divulgados en los documentos WO03/015781 y WO03/040114; inhibidores de la glucogeno sintetasa quinasa 3, tales como los divulgados en el documento WO03/035663, agentes tales como los divulgados en los documentos WO99/51225, US20030134890, WO01/24786 y WO03/059870; protema de union a ADN sensible a insulina 1 (IRDBP-I), como se divulga en el documento WO03/057827, y similares; antagonistas de la adenosina A2 tales como los divulgados en los documentos WO03/035639, WO03/035640, y similares; agonistas del PPAR8 tales como GW 501516, GW 590735, y compuestos divulgados en los documentos JP10237049 y WO02/14291; inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV (DP-IV), tales como isoleucina tiazolidida, NVP-DPP728A (1-[[[2-[(5-cianopiridin-2-il)amino]etil]amino]acetil]-2- ciano(S)-pirrolidina, divulgado en Hughes et al, Biochemistry, 38(36), 11597-11603, 1999), P32/98, NVP-LAF-237, P3298, TSL225 (acido triptofil-1,2,3,4-tetrahidro-isoquinolina-3-carboxflico, divulgado en Yamada et al, Bioorg. & Med. Chem. Lett. 8 (1998) 1537-1540), valina pirrolidida, TMC-2A/2B/2C, inhibidores de CD-26, FE999011, P9310/K364, VIP 0177, DPP4, SDZ 274-444, 2-cianopirrolididas y 4-cianopirrolididas, como se divulga en Ashworth et al, Bioorg. & Med. Chem. Lett., Vol. 6, No. 22, pag. 1163-1166 y 2745-2748 (1996), y los compuestos divulgados en los documentos US6395767, USA6573287, USA6395767 (los compuestos divulgados incluyen BMS-477118, BMS-471211 y BMS 538.305), WO99/38501, WO99/46272, WO99/67279, WO99/67278,

WO99/61431WO03/004498, WO03/004496, EP1258476, WO02/083128, WO02/062764, W003/000250,

WO03/002530, WO03/002531, WO03/002553, WO03/002593, W003/000180 y WO03/000181; agonistas de GLP-I tales como exendina 3 y exendina 4 (incluyendo la exendina 4 de polipeptido sintetico de 39aa llamada Exenatide®, y los compuestos divulgados en los documentos US2003087821 y NZ 504256, y sales y esteres farmaceuticamente aceptables de los mismos; peptidos que incluyen amlintida y Symlin® (acetato de pramlintida), y activadores de glucoquinasa, tales como los divulgados en el documento US2002103199 (compuestos heteroaromaticos fusionados) y el documento WO02/48106 (compuestos de propionamida isoindolin-1-ona sustituidos).

Inhibidores de la fosfodiesterasa

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden utilizarse en terapia de combinacion con un inhibidor de la fosfodiesterasa. Los inhibidores de la PDE son los compuestos que enlentecen la degradacion de AMP dclico (AMPc) y/o GMP dclico (GMPc) mediante la inhibicion de las fosfodiesterasas, lo que puede conducir a un aumento relativo de la concentracion intracelular de AMPc y/o GMPc. Los posibles inhibidores de la PDE son principalmente las sustancias que deben enumerarse entre la clase que consiste en los inhibidores de la PDE3, la clase que consiste en los inhibidores de la PDE4 y/o la clase que consiste en los inhibidores de la PDE5, en particular las sustancias que pueden designarse como tipos mixtos de inhibidores de la PDE3/4 o como tipos mixtos de inhibidores de la PDE3/4/5. A modo de ejemplo, los inhibidores de la PDE se pueden mencionar tal como se describen y/o reivindican en las siguientes solicitudes de patente y patentes: DE1470341, DE2108438, DE2123328, DE2305339, DE2305575, DE2315801, DE2402908, DE2413935, DE2451417, DE2459090, DE2646469,

DE2727481, DE2825048, DE2837161, DE2845220, DE2847621, DE2934747, DE3021792, DE3038166,

DE3044568, EP000718, EP0008408, EP0010759, EP0059948, EP0075436, EP0096517, EPO1 12987, EPO1 16948, EP0150937, EP0158380, EP0161632, EP0161918, EP0167121, EP0199127, EP0220044, EP0247725, EP0258191, EP0272910, EP0272914, EP0294647, EP0300726, EP0335386, EP0357788, EP0389282, EP0406958, EP0426180, EP0428302, EP0435811, EP0470805, EP0482208, EP0490823, EP0506194, EP0511865, EP0527117, EP0626939, EP0664289, EP0671389, EP0685474, EP0685475, EP0685479, JP92234389, JP94329652,

JP95010875, patentes de Estados Unidos N.° 4.963.561, 5.141.931, WO9117991, WO9200968, WO9212961, WO9307146, WO9315044, WO9315045, WO9318024, WO9319068, WO9319720, WO9319747, WO9319749,

WO9319751, WO9325517, WO9402465, WO9406423, WO9412461, WO9420455, WO9422852, WO9425437,

WO9427947, WO9500516, WO9501980, WO9503794, WO9504045, WO9504046, WO9505386, WO9508534,

WO9509623, WO9509624, WO9509627, WO9509836, WO9514667, WO9514680, WO9514681, WO9517392,

WO9517399, WO9519362, WO9522520, WO9524381, WO9527692, WO9528926, WO9535281, WO9535282,

WO9600218, WO9601825, WO9602541, WO9611917, DE3142982, DE1 116676, DE2162096, EP0293063, EP0463756, EP0482208, EP0579496, EP0667345, US6.331.543, US20050004222 (incluyendo los divulgados en las formulas I-XIII y los parrafos 37-39, 85-0545 y 557-577) y WO9307124, EP0163965, EP0393500, EP0510562, EP0553174, WO9501338 y WO9603399. Los inhibidores de la PDE5 que pueden mencionarse a modo de ejemplo son RX-RA-69, SCH-51866, KT-734, vesnarrinona, zaprinast, SKF-96231, ER-21355, BF/GP-385, NM-702 y sildenafil (Viagra®). Los inhibidores de la PDE4 que pueden mencionarse a modo de ejemplo son RO-20-1724, MEM 1414 (R1533/R1500; Pharmacia Roche), DENBUFILINA, ROLIPRAM, OXAGRELATO, NITRAQUAZONA, Y- 590, DH-6471, SKF-94120, MOTAPIZONA, LIXAZINONA, INDOLAN, OLPRINONA, ATIZORAM, KS-506-G,

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DIPAMFILINA, BMY-43351, ATIZORAM, AROFILINA, FILAMINAST, PDB-093, UCB-29646, CDP-840, SKF-107806, PICLAMILAST, RS-17597, RS-25344-000, SB-207499, TIBENELAST, SB-210667, SB-211572, SB-211600, SB- 212066, SB-212179, GW-3600, CDP-840, MOPIDAMOL, ANAGRELIDA, IBUDILAST, AMRINONA,

PIMOBENDANO, CILOSTAZOL, QUAZINONA y N-(3,5-dicloropirid-4-il)-3-ciclopropilmetoxi4- difluorometoxibenzamida. Los inhibidores de la PDE3 que pueden mencionarse a modo de ejemplo son SULMAZOL, AMPIZONA, CILOSTAMIDA, CARBAZERAN, PIROXIMONA, IMAZODAN, CI-930, SIGUAZODAN, ADIBENDAN, SATERINONA, SKF-95654, SDZ-MKS-492, 349-U-85, EMORADAN, EMD-53998, EMD-57033, NSP-306, NSP-307, REVIZINONA, NM-702, WIN-62582 y WIN-63291, ENOXIMONA y MILRINONA. Los inhibidores de la PDE3/4 que pueden mencionarse a modo de ejemplo son BENAFENTRINA, TREQUINSfN, ORG-30029, ZARDAVERiNa, L-686398, SDZ-ISQ-844, ORG-20241, EMD-54622 y TOLAFENTRINA. Otros inhibidores de la PDE incluyen: cilomilast, pentoxifiline, roflumilast, tadalafil (Cialis®), teofilina y vardenafil (Levitra®), zaprinast (espedfico de la PDE5).

Agentes anticontracciones uterinas

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden usarse en terapia de combinacion (por ejemplo, para disminuir o inhibir las contracciones uterinas) con un agente tocolftico que incluye, pero sin limitacion, agentes beta-adrenergicos, sulfato de magnesio, inhibidores de prostaglandinas y bloqueantes del canal de calcio.

Agentes antineoplasicos

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden utilizarse en terapia de combinacion con agentes antineoplasicos que incluyen, pero sin limitacion, agentes alquilantes, epipodofilotoxinas, nitrosoureas, antimetabolitos, alcaloides de la vinca, antibioticos antraciclina, agentes de mostaza nitrogenada, y similares. Los agentes antineoplasicos particulares pueden incluir tamoxifeno, taxol, etoposido y 5-fluorouracilo.

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden utilizarse en terapia de combinacion (por ejemplo en una composicion quimioterapeutica) con terapias antivmcas y de anticuerpos monoclonales.

Agentes para tratar la insuficiencia card^aca congestiva

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden utilizarse en terapia de combinacion (por ejemplo, en la prevencion/tratamiento de la insuficiencia cardfaca congestiva u otro metodo descrito en el presente documento) con el agonista parcial del receptor de la nociceptina ORL1, descrito en Dooley et al. (The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 283 (2): 735-741, 1997). El agonista es un hexapeptido que tiene la secuencia de aminoacidos Ac-RYY (RK) (WI) (RK)-NH2 (“el polipeptido Dooley”), en donde los parentesis muestran la variacion permisible de restos de aminoacido. Por lo tanto, el polipeptido Dooley puede incluir, pero sin limitacion, KYYRWR, RYYRWR, KWRYYR, RYYRWK, RYYRWK (todos D-aminoacidos), RYYRIK, RYYRIR, RYYKJK, RYYKIR, RYYKWR, RYYKWK, RYYRWR, RYYRWK, RYYRIK, RYYKWR, RYYKWK, RYYRWK y KYYRWK, en los que los restos de aminoacido estan en la forma L, a menos que se especifique otra cosa. Los peptidos GCRA descritos en el presente documento tambien pueden utilizarse en terapia de combinacion con modificaciones del conjugado polipeptfdico del polipeptido de Dooley descritas en el documento WO0198324.

DOSIFICACION

Los niveles de dosificacion de los principios activos de una composicion farmaceutica tambien pueden variarse de forma que se logre una concentracion transitoria o sostenida del compuesto en un sujeto, en especial en, y alrededor de, el sitio de inflamacion o el area enferma, y para dar como resultado la respuesta deseada. Esta dentro de la experiencia en la tecnica iniciar las dosis del compuesto en niveles inferiores que los necesarios para lograr el efecto deseado y aumentar de forma gradual la dosificacion hasta que se logra el efecto deseado. Se entendera que el nivel de dosis espedfico para un sujeto particular dependera de una diversidad de factores, incluyendo el peso corporal, la salud general, la dieta, la evolucion natural de la enfermedad, la via y el programa de administracion, la combinacion con uno o mas farmacos, y la gravedad de la enfermedad.

Una dosificacion eficaz de la composicion normalmente estara entre aproximadamente 1 |jg y aproximadamente 10 mg por kilogramo de peso corporal, preferentemente entre aproximadamente 10 jg y 5 mg del compuesto por kilogramo de peso corporal. Los ajustes en la dosificacion se haran utilizando los metodos que son rutinarios en la tecnica y se basaran en la composicion particular que se utilice y las consideraciones clfnicas.

Los agonistas del receptor de la guanilato ciclasa utilizados en los metodos descritos anteriormente pueden administrarse por via oral, sistemica o local. Las formas de dosificacion incluyen preparaciones para inhalacion o inyeccion, soluciones, suspensiones, emulsiones, comprimidos, capsulas, unguentos y lociones topicos, composiciones transdermicas, otras formulaciones de peptido conocidas y analogos de peptido pegilados. Los agonistas pueden administrarse ya sea como un agente activo unico o en combinacion con otros farmacos, por ejemplo, un inhibidor de la fosfodiesterasa GMPc dependiente y un agente antiinflamatorio. En otros casos, los

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farmacos adicionales debenan administrate a una dosificacion que sea terapeuticamente eficaz, utilizando la tecnica existente como gma. Los farmacos pueden administrarse en una composicion unica o de forma secuencial.

Los niveles de dosificacion del agonista del GCR para su uso en los metodos de la invencion normalmente son de aproximadamente 0,001 mg a aproximadamente 10.000 mg diarios, preferentemente de aproximadamente 0,005 mg a aproximadamente 1.000 mg diarios. Sobre la base de una dosis diaria de mg/kg, ya sea proporcionada en dosis individuales o divididas, las dosificaciones normalmente variaran de aproximadamente 0,001/75 mg/kg a aproximadamente 10.000/75 mg/kg, preferentemente de aproximadamente 0,005/75 mg/kg a aproximadamente 1.000/75 mg/kg.

La dosis diaria total de cada inhibidor se puede administrar al paciente en una dosis unica, o en multiples subdosis. Normalmente, las subdosis pueden administrarse de dos a seis veces por dfa, preferentemente de dos a cuatro veces por dfa e incluso mas preferentemente de dos a tres veces por dfa. Las dosis pueden estar en forma de liberacion inmediata o de liberacion sostenida suficientemente eficaces para obtener el control deseado sobre la afeccion medica.

El regimen de dosificacion para prevenir, tratar, proporcionar alivio de, o mejorar una afeccion medica o trastorno, o para proteger de otra forma frente a, o tratar, una afeccion medica con las combinaciones y composiciones de la presente invencion, se seleccionan en conformidad con una diversidad de factores. Estos factores incluyen, pero sin limitacion, el tipo, edad, peso, sexo, dieta y estado medico del sujeto, la gravedad de la enfermedad, la via de administracion, las consideraciones farmacologicas tales como la actividad, eficacia, perfiles de farmacocinetica y toxicologfa, de los inhibidores particulares empleados, ya sea se utilice un sistema de suministro de farmaco y ya sea que los inhibidores se administren con otros principios activos. Por lo tanto, el regimen de dosificacion de hecho empleado puede variar ampliamente y, por lo tanto, desviarse del regimen de dosificacion preferente expuesto anteriormente.

Ejemplos

EJEMPLO 1: SfNTESIS Y PURIFICACION DE PEPTIDOS GCRA

Los peptidos GCRA se sintetizaron utilizando metodos convencionales para la smtesis de peptidos en fase solida. Se selecciono una estrategia de grupo protector ya sea Boc/Bzl o Fmoc/tBu, dependiendo de la escala del peptido a producir. En el caso de cantidades menores, es posible obtener el producto deseado utilizando un protocolo Fmoc/tBu, pero para cantidades mayores (1 g o mas), es superior Boc/Bzl.

En cada caso, los peptidos GCRA se iniciaron utilizando una resina ya sea Wang (Fmoc) o Merrifield (Boc), o Pam (Boc) precargada. Para los productos con Leu C terminal, resina Fmoc-Leu-Wang (D-1115) o Boc-Leu-Pam (D- 1230) o Boc-Leu-Merrifield (D-1030). Por lo tanto, para los peptidos que contienen d-Leu C terminal, la resina fue resina Fmoc-dLeu-Wang (D-2535) y Boc-dLeu-Merrifield, resina Boc-dLeu-Pam (Productos de Bachem D-1230 y D- 1590, respectivamente) (SP-332 y analogos relacionados). Para los peptidos producidos como amidas C terminales, se utilizo una resina con enlazador Ramage (Producto de Bachem D-2200) (Fmoc) o mBHA (Boc) (Producto de Bachem D-1210) y se cargo con el resto C terminal como la primera etapa de smtesis.

Generalidades de Fmoc-tBu

Cada ciclo sintetico consistio en la desproteccion con piperidina al 20 % en DMF. Los lavados de la resina se realizaron con DMF e IpOH de forma alterna para hinchar y encoger la resina, respectivamente. La smtesis peptfdica elongo la cadena desde el extremo C al extremo N. La qmmica de activacion para cada aminoacido fue con HBTU/DIEA en un exceso de 4 veces durante 45 minutos. En las reacciones qmmicas automatizadas, cada aminoacido se acoplo de forma doble para maximizar la eficacia de acoplamiento. Para asegurar la correcta posicion de los enlaces disulfuro, los residuos Cys se introdujeron como Cys(Acm) en las posiciones 15 y 7. Cys(Trt) se posiciono en Cys4 y Cys12. Esta estrategia de grupo protector produjo el topoisomero correcto como el producto dominante (75:25). (Para los analogos de enterotoxinas, se utilizo un tercer grupo protector de enlace disulfuro (Mob)).

Para los peptidos que contienen grupos Aeea (aminoetiloxietiloxiacetilo) C terminales, estos se acoplaron a un enlazador de amida Ramage utilizando la misma reaccion qmmica de activacion anterior, utilizando un derivado Aeea protegido con Fmoc. La numeracion de Cys en estos casos se mantuvo igual y la posicion de los grupos protectores tambien. Para los peptidos que conteman la extension N terminal de Aeea, la numeracion de los restos Cys se aumentara, haciendo a Cys4 Cys7, Cys12 se hace Cys15; Cys7 se hace Cys10 y Cys15 se hace Cys18. El ultimo par se protege con Acm y el par anterior mantiene los grupos Trt.

Para los analogos que contienen sustituciones de D-aminoacidos, estos se introdujeron de forma directa incorporando el derivado protegido de forma correcta en la posicion deseada, utilizando la misma reaccion qmmica de activacion descrita en el presente documento. Para las estrategias de Fmoc, se utilizanan las estrategias Fmoc-

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dAsn(Trt)-OH, Fmoc-dAsn(Xan)-OH, Fmoc-dAsp(tBu)-OH, Fmoc-dGlu(tBu)-OH y para las estrategias Boc, Boc- dAsn(Xan)-OH, Boc-dAsn(Trt)-OH, Boc-dAsp(Chx), Boc-dAsp(Bzl)-OH, Boc-dGlu(Chx)-OH y Boc-dGlu(Bzl)-OH.

Cada peptido se escinde del soporte en fase solida utilizando un coctel de escision de TFA:H2O:Trisisopropilsilano (8,5:0,75:0,75) ml/g de resina durante 2 h a TA. El peptido desprotegido crudo se filtra para eliminar las perlas de resina agotadas y se precipita en dietileter enfriado en hielo.

Cada uno de los enlaces disulfuro se introdujo de forma ortogonal. Brevemente, el producto sintetico crudo se disolvio en agua que contema NH4OH para aumentar el pH a 9. Despues de la solubilizacion completa del producto, el enlace disulfuro se hizo entre los restos Cys desprotegidos de Trt mediante titulacion con H2O2. El producto monodclico se purifico por RP-HPLC. El producto monodclico purificado se trato posteriormente con una solucion de yodo para eliminar de forma simultanea los grupos protectores Acm y para introducir el segundo enlace disulfuro.

Para los analogos de enterotoxina, el grupo Mob se elimino a traves del tratamiento del producto didclico con TFA al 85 % que contema DMSO al 10 % y tioanisol al 5 % durante 2 ha TA.

Cada producto se purifico despues por RP-HPLC utilizando un sistema de tampon de combinacion de TEAP en H2O frente a MeCN, seguido de TFA en H2O frente a MeCN. Las fracciones altamente puras se combinaron y liofilizaron. El producto final se convirtio a una sal de acetato utilizando intercambio ionico con resina Dow-Ex cargada con acetato o utilizando RP-HPLC, utilizando una etapa de lavado con base con NH4OAc seguido de AcOH al 1 % en agua frente a MeCN.

Tambien es posible preparar analogos de enterotoxina utilizando una metodologfa de oxidacion aleatoria, utilizando Cys(Trt) en Fmoc o Cys(MeB) en Boc. Despues de la escision, los enlaces disulfuro pueden formarse utilizando parejas redox de intercambio de disulfuro tales como glutation (red/ox) y/o cistema/cistina. Este procedimiento producira un producto plegado en el que las parejas de disulfuro deben determinarse dado que no habna modo de conocer su posicion de forma directa.

Procedimiento Boc-Bzl

La smtesis de peptidos se inicia en una resina precargada Merrifield o Pam, o con mBHA para peptidos producidos como amidas C terminales. Cada ciclo sintetico consiste en una etapa de desproteccion con TFA al 50 % en MeCL2. La resina se lava de forma repetida con MeC12 y MeOH. La sal de TFA formada se neutraliza con un lavado con base de TEA al 10 % en MeCl2. Antes de las etapas de acoplamiento la resina se lava con MeC12 y MeOH, y por ultimo con DMF. Se realiza una prueba colorimetrica para asegurar la desproteccion. Cada acoplamiento esta mediado por carbodiimida diisopropflica con HOBT para formar el ester activo. Cada acoplamiento se deja continuar durante 2 h a TA o durante una noche en acoplamientos diffciles. Los reacoplamientos se realizan con ya sea reactivos de Uronio o Fosfonio, hasta que se obtiene una prueba colorimetrica negativa para aminas primarias libres. La resina se lava despues con DMF, MeCl2 y MeOH, y se prepara para la siguiente etapa de fase solida. La proteccion de Cys utiliza Cys(Acm) en las posiciones 7 y 15, y Cys(MeB) en Cys4 y Cys12.

La escision y la desproteccion simultanea se llevan a cabo mediante el tratamiento con HF utilizando anisol como un limpiador (9:1:1) ml:ml:g (resina) a 0°C durante 60 min. Posteriormente, el peptido se extrae de la resina y se precipita en eter enfriado en hielo. La introduccion de enlaces disulfuro y la purificacion siguen exactamente el mismo protocolo descrito anteriormente para el producto producido por Fmoc.

EJEMPLO 2: ESTABILIDAD PROTEOLmCA IN VITRO UTILIZANDO DIGESTION EN FLUIDO GASTRICO SIMULADO (FGS)

La estabilidad del peptido GRCA de acuerdo con la invencion se determina en presencia de fluido gastrico simulado (FGS). El peptido GRCA (concentracion final de 8,5 mg/ml) se incuba en FGS (peptona proteosa (8,3 g/litro; Difco), D-Glucosa (3,5 g/litro; Sigma), NaCl (2,05 g/litro; (Sigma), KH2PO4 (0,6 g/litro; Sigma), CaCl2 (0,11 g/litro), KCl (0,37 g/litro; Sigma), bilis porcina (concentracion final 1 X, 0,05 g/litro; Sigma) en PBS, Lisozima (concentracion final 1 X, 0,10 g/litro; Sigma) en PBS, Pepsina (concentracion final 1 X, 0,0133 g/litro, Sigma) en PBS). El FGS se prepara el dfa del experimento y el pH se ajusta a 2,0 ± 0,1 utilizando HCl o NaOH segun sea necesario. Tras el ajuste de pH, el FGS se esteriliza por filtracion con filtros de membrana de 0,22 pm. SP-304 (concentracion final de 8,5 mg/ml) se incuba en FGS a 37 °C durante 0, 15, 30, 45, 60 y 120 min en alfcuotas por triplicado. Despues de las incubaciones, las muestras se congelan de forma instantanea en hielo seco, despues se almacenan en un congelador a -80 °C hasta que se ensayan por duplicado.

EJEMPLO 3: ESTABILIDAD PROTEOLmCA IN VITRO UTILIZANDO DIGESTION EN FLUIDO INTESTINAL SIMULADO (FIS)

La estabilidad del peptido GRCA tambien se evalua frente a la digestion con fluido intestinal simulado (FIS). La solucion de FIS se preparo por el metodo como se describe en la Farmacopea de Estados Unidos, edicion 24a, pag. 2236. La receta para preparar la solucion de FIS es como se describe anteriormente. La solucion FIS contiene NaCl

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(2,05 g/litro; Sigma), KH2PO4 (0,6 g/litro; Sigma), CaCl2 (0,11 g/litro), KCl (0,37 g/litro; Sigma) y Pacreatina 10 mg/ml. El pH se ajusta a 6 y la solucion se esteriliza por filtro. Se incuba una solucion de SP-304 (8,5 mg/ml) en FGS a 37 °C durante 0, 30, 60, 90, 120, 150 y 300 min en almuotas por triplicado. Despues de las incubaciones, las mezclas se retiran y se congelan de forma instantanea con hielo seco, y se almacenan en un congelador a -80 °C hasta que se ensayan por duplicado.

La integridad del peptido GRCA se evalua por HPLC utilizando esencialmente el metodo descrito para la digestion por FGS.

EJEMPLO 4: ENSAYOS DE ESTIMULACION DE GMP dCLICO

La capacidad del peptido GCRA para unirse a, y activar el receptor de la GC-C intestinal, se analiza utilizando la lmea celular de carcinoma de colon humano T84. Las celulas de carcinoma de colon T84 humanas se obtienen de la Coleccion Americana de Cultivos Tipo. Las celulas se cultivan en una mezcla 1:1 en medio F-12 de Ham y medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) complementado con suero fetal bovino al 10%, penicilina 100U/ml y estreptomicina 100 pg/ml. Las celulas se alimentan con medio recien preparado cada tercer dfa y se dividen a una confluencia de aproximadamente el 80 %.

La actividad biologica de los peptidos de GCRA se ensaya como se informa anteriormente (15). Brevemente, se lavan dos veces las monocapas confluentes de celulas T-84 en placas de 24 pocillos con 250 pl de DMEM que contiene HEPES 50 mM (pH 7,4), se preincuban a 37 °C durante 10 min con 250 pl de DMEM que contiene HEPES 50 mM (pH 7,4) e isobutilmetilxantina (IBMX) 1 mM, seguido de la incubacion con peptidos GCRA (0,1 nM a 10mu.M) durante 30 min. El medio se aspira y la reaccion se finaliza por la adicion de acido perclorico al 3%. Despues de la centrifugacion, y de la neutralizacion con NaOH 0,1 N, se utiliza el sobrenadante de forma directa para las mediciones de GMPc utilizando un de kit de ELISA (Caymen Chemical, Ann Arbor, Mich.).

EJEMPLO 5: PEPTIDOS PEGILADOS

La otra estrategia para hacer que los peptidos sean mas resistentes frente a las digestiones con proteasas digestivas, es pegilarlos en el N y C terminal. El peptido GCRA se pegila con el grupo de acido aminoetiloxi- etiloxiacetico (Aeea) en el C terminal (o en el N terminal o en ambos extremos). La smtesis de GMP dclico en las celulas T84 se mide mediante el metodo como se describe anteriormente.

EJEMPLO 6: COMBINACION DE LOS AGONISTAS DEL RECEPTOR DE LA GUANILATO CICLASA CON INHIBIDORES DE LA FOSFODIESTERASA

La regulacion de las concentraciones intracelulares de nucleotidos dclicos (es decir, AMPc y GMPc) y, por lo tanto, la senalizacion a traves de estos segundos mensajeros, en general se considera que esta dirigida por sus velocidades de produccion frente a sus velocidades de destruccion dentro de las celulas. Por lo tanto, los niveles de GMPc en los tejidos y organos tambien pueden regularse mediante los niveles de expresion de las fosfodiesterasas GMPc espedficas (GMPc-PDE), las cuales, en general, tienen expresion aumentada en el cancer y en las enfermedades inflamatorias. Por lo tanto, una combinacion que consiste en un agonista de la GC-C con un inhibidor de la GMPc-PDE podna producir un efecto sinergico sobre los niveles de GMPc en los tejidos y organos diana.

Sulindaco Sulfona (SS) y Zaprinast (ZAP) son dos de los inhibidores conocidos de la GMPc-PDE y han mostrado inducir apoptosis en celulas cancerosas a traves de un mecanismo dependiente de GMPc. Se evaluan SS y ZAP en combinacion con el peptido GCRA para observar si estos inhibidores de la PDE tienen algun efecto sinergico sobre la acumulacion intracelular de GMPc.

EJEMPLO 7: UN ESTUDIO DE BUSQUEDA DEL INTERVALO DE LA DOSIS DE TOXICIDAD ORAL EN MONOS CINOMOLGOS.

El objetivo del estudio es determinar la toxicidad de los peptidos GRCA de acuerdo con la invencion, despues de una unica administracion oral por sonda al mono cinomolgo, para permitir la evaluacion de la reversibilidad de cualquiera de los cambios despues de un penodo mmimo de observacion/eliminacion de 7 dfas. Cada peptido GRCA de acuerdo con la invencion se proporcionara a dos niveles de dosis distintos.

Diseno experimental

El artfculo de ensayo (por ejemplo, los peptidos GRCA de acuerdo con la invencion) y de control se administraran en tres fases separadas por un penodo mmimo de observacion de 7 dfas. Cada fase consistira en una administracion oral por sonda unica a monos cinomolgos hembra, como se indica en las tablas a continuacion:

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Fase 1:

Se transferiran ocho monos cinomolgos hembra que no son sin tratamiento previo desde la Colonia de monos de reserva de ITR y se asignaran a cuatro grupos de dosis como sigue:

Numero del grupo

Designacion del grupo Dfa de Estudio Nivel de dosis (mg/kg) Concentracion de la dosis (mg/ml) Volumen de la dosis (ml/kg) Numero de animales (hembras)

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Control/Vehuculo 1 0 0 10 2

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Peptidos de ensayo 1 1 0,1 10

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Despues de la finalizacion de la dosificacion de la Fase 1, todos los monos se observaran durante 33 dfas. Despues de la finalizacion del penodo de observacion, todos los monos se transferiran de nuevo a la Colonia de monos de reserva de ITR.

Fase 2:

Se transferiran desde la Colonia de monos de reserva de ITR los mismos ocho monos cinomolgos hembra que no son sin tratamiento previo utilizados como anteriormente en la Fase 1, y se asignaran a cuatro grupos de dosis como sigue:

Numero del grupo

Designacion del grupo Dfa de estudio Nivel de dosis (mg/kg) Concentracion de la dosis (mg/ml) Volumen de la dosis (ml/kg) Numero de animales (hembras)

1

Control/Vehfculo 1 10 1 10 2

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Peptidos de ensayo 1 10 1 10

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Despues de la finalizacion de la dosificacion de la Fase 2, todos los monos se observaran durante un mmimo de 7 dfas.

Via de administracion

Se ha elegido la via oral de administracion debido a que es una via terapeutica preferente en el ser humano. Preparacion de los articulos de ensayo y de control/vehiculo

Los artfculos de ensayo y de control/vehuculo se prepararan de forma reciente el dfa de la dosificacion en agua destilada fria (mantenida en un bano de agua helada). Se anadira una cantidad suficiente de polvo del artfculo de ensayo a una cantidad apropiada de agua destilada para lograr la concentracion deseada. Las formulaciones de dosis se mezclaran por inversion simple.

Analisis de la concentracion del articulo de ensayo y de la estabilidad de las formulaciones de dosis

Para la posible confirmacion de la concentracion y estabilidad del artfculo de ensayo en las formulaciones, el primer dfa de dosificacion se tomaran de cada grupo, incluyendo el artfculo de control/vehuculo, muestras representativas de la mitad de cada concentracion, como se indica a continuacion. Las muestras se recogeran inmediatamente despues de la preparacion el Dfa 1 y otra vez despues de acabar la dosificacion ese dfa, y se almacenaran congeladas (aproximadamente 80 °C nominales) en viales con tapa a rosca de 20 ml. Por lo tanto, los viales de formulacion de dosis restantes se devolveran al Departamento de farmacia tan pronto como sea posible tras la finalizacion de la dosificacion.

Grupo 1: 1,5 ml por duplicado de la mitad, el Dfa 1 (predosis y posdosis).

Grupo 2: 1,5 ml por duplicado de la mitad, el Dfa 1 (predosis y posdosis).

Grupo 3: 1,5 ml por duplicado de la mitad, el Dfa 1 (predosis y posdosis).

Grupo 4: 1,5 ml por duplicado de la mitad, el Dfa 1 (predosis y posdosis).

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Durante todos los procedimientos de muestreo las formulaciones se mantendran fnas en un bano de agua helada.

Las formulaciones se agitaran de forma continua con una barra agitadora durante un mmimo de 15 minutos antes del muestreo.

Las muestras se conservaran congeladas (aproximadamente -80 °C nominales) en el ITR hasta que el Patrocinador solicite que se envfen a un laboratorio designado por el mismo para el analisis. Las muestras pueden desecharse una vez que el analista y el director del estudio determinen que ya no son necesarias. El uso de estas muestras se registrara en los datos sin procesar.

Si se analizan, el Investigador Principal preparara un informe sobre la Formulacion de Dosis (Analisis de formulacion) y se proporcionara al ITR para la inclusion en el informe final.

Sistema de prueba

Mono cinomolgo (Macaca fasicularis) orldwide Primates Inc.,

P.O. Box 971279 Miami, Florida, 33187, EE.UU.

y

Covance Research Products Inc.

P.O. Box 549

Alice, Texas, 78333, EE.UU.

8 hembras que no son sin tratamiento previo 2-4 kg al inicio del tratamiento Adultos jovenes al inicio del tratamiento

Los animales se transferiran desde la colonia de monos de reserva del ITR. Por lo tanto, se los considera como completamente aclimatados al entorno del laboratorio.

Los intervalos de edad y peso corporal reales se indicaran en el informe final.

Administracion de los articulos de ensayo y de control/vehiculo

Los artmulos de ensayo y de control/vehmulo se administraran mediante la administracion oral por sonda utilizando una sonda acoplada a una jeringuilla, en tres fases separadas por un penodo mmimo de observacion/eliminacion de 7 dfas. Cada sesion de dosificacion consistira en una unica administracion oral por sonda. La sonda se lavara abundantemente con 3 ml de agua de osmosis inversa inmediatamente despues de la administracion de la formulacion de dosis, para asegurar que se ha suministrado al animal el volumen de la dosis completo. El volumen de dosis sera de 10 ml/kg para todos los animales, incluyendo los controles. El volumen real administrado a cada mono en el dfa 1 de cada fase se calculara utilizando los pesos corporales del dfa 1 de cada fase.

Las formulaciones de dosificacion se mantendran fnas durante la administracion de la dosis, colocandolas en un bano de agua helada.

Las formulaciones de dosificacion deben colocarse en una placa de agitacion durante un mmimo de 15 minutos antes del inicio de la dosificacion y deben mantenerse en la placa de agitacion a lo largo de todo el procedimiento de dosificacion.

Las formulaciones de dosificacion deben utilizarse dentro de las 2 horas de la preparacion.

Observaciones clinicas

N.° total de monos en el estudio: Intervalo de peso corporal: Intervalo de edad al inicio: Penodo de aclimatacion:

Especie/Cepa:

Fuente:

Los signos clmicos en el laboratorio (mal estado de salud, cambios del comportamiento, etc.) se registraron como se indica a continuacion, excepto en los dfas de examen clmicos detallado, en donde los signos clmicos matutinos en el laboratorio se reemplazaran por un examen clmico detallado (ECD). Durante los examenes de los signos clmicos en el laboratorio regulares y los detallados, se pondra particular atencion a las deposiciones con respecto a la cantidad de deposiciones producidas, descripcion de las deposiciones, etc.

Los signos clmicos en el laboratorio se realizaran como sigue:

Durante el penodo de pretratamiento y durante los penodos de observacion de 7 dfas (mmimos): tres veces por dfa con un mmimo de 3 horas entre cada ocasion.

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En el dfa de dosificacion de la Fase 1: predosis, 2, 4, 6, 8 y 24 horas posdosificacion

En el dfa de dosificacion de la Fase 2: predosis, de forma continua para las primeras 4 horas posdosis y a las 6, 8 y 24 horas posdosificacion

En el dfa de dosificacion de la Fase 3: predosis, de forma continua para las primeras 4 horas posdosis y a las 6, 8 y 24 horas posdosificacion

Se realizara un examen clmico detallado de cada mono una vez en el momento de la transferencia de los animales y una vez por semana partir de entonces.

Los animales para los que se juzgue que el estado de salud garantiza la evaluacion adicional, se examinaran por parte de un Veterinario Clmico, o por un tecnico que trabaje bajo la supervision del Veterinario Clmico. Cualquiera de los tratamientos recomendados por el veterinario solo se realizara una vez que se haya obtenido el consentimiento del Director del Estudio. Cuando sea posible, antes de la administracion de los farmacos terapeuticos se consultara al Patrocinador.

Los pesos corporales se registraran para todos los animales una vez al dfa desde el dfa de la transferencia hasta el final del estudio.

Se registrara el consumo de alimento para todos los animales una vez al dfa desde el dfa de la transferencia hasta el final del estudio.

Las jaulas se limpiaran antes del inicio del consumo diario de alimento para asegurar que no quedan galletas alimentarias en la jaula. Los monos se alimentaran con 7 galletas antes de las 12 pm y 7 galletas despues de las 12 pm. Se registrara la suma del numero total de galletas proporcionadas por dfa.

La manana siguiente, se realizara una comprobacion visual para observar cuantas galletas quedan en la jaula. Se registrara el numero de galletas enteras que quedan en la tolva de alimentos o en la bandeja. Para calcular el numero de galletas consumidas se restara el numero de galletas enteras que quedaron del numero total de galletas proporcionadas.

EJEMPLO 8: MODELO DE SECRECION INTESTINAL EN RATON LACTANTE (ENSAYO SUMI (del ingles: suckling mouse model of intestinal secretion))

Los peptidos GCRA descritos en el presente documento pueden analizarse por su capacidad para aumentar la secrecion intestinal utilizando un modelo de secrecion intestinal en raton lactante. En este modelo, se administra un peptido GCRA a ratones lactantes que tienen entre siete y nueve dfas de edad. Tras el sacrificio de los ratones, se disecciona el tracto gastrointestinal desde el estomago hasta el ciego (“intestinos”). Lo que queda (“la canal”) asf como los intestinos se pesan y se calcula la proporcion del peso de los intestinos con respecto a la canal. Si la proporcion esta por encima de 0,09, se puede concluir que el compuesto de ensayo aumenta la secrecion intestinal. Los controles para este ensayo pueden incluir SP-304 de tipo silvestre, el polipeptido ST y Zelnorm®.

Modelo de contorsion inducida por fenilbenzoquinona. Para evaluar la actividad de control del dolor de los peptidos GCRA descritos en el presente documento puede utilizarse el modelo de contorsion inducida por PBQ. Este modelo se describe en Siegmund et al. (1957 Proc. Soc. Exp. Bio Med. 95:729-731). Brevemente, una hora despues de la dosificacion oral con un compuesto de ensayo, por ejemplo, un peptido GCRA, morfina o vehmulo, se inyecta al raton por via intraperitoneal una solucion de fenilbenzoquinona (PBQ) al 0,02 % (12,5 ml/kg). Para proporcionar una evaluacion cinetica se registra la cantidad de estiramientos y contorsiones desde el 5° al 10° minuto tras la inyeccion de PBQ, y tambien pueden contarse entre los minutos 35° y 40° y entre los minutos 60° y 65°. Los resultados se expresan como el numero de estiramientos y contorsiones (media ± ETM), y el porcentaje de variacion del umbral nociceptivo se calcula a partir del valor medio del grupo tratado con vehmulo. La significacion estadfstica de cualquiera de las diferencias entre los grupos tratados y el grupo de control se determina por una prueba de Dunnett, utilizando la varianza residual tras un analisis de la varianza de una via (P <0,05), utilizando el programa informatico SigmaStat.

EJEMPLO 9: DETERMINACION DE LA PROPIEDAD FARMACOCINETICA DE LOS PEPTIDOS GCRA

Se extraen muestras de suero de sangre completa de los ratones expuestos (ratones dosificados por via oral o por via intravenosa con peptido (o peptidos) GCRA descritos en el presente documento) y de control, despues se las inyecta de forma directa (10 ml) en una columna de extraccion en fase solida (EFS) en lmea (columna Waters Oasis HLB 25 pm, 2,0 x 15 mm, conexion directa) sin procesamiento adicional. La muestra en la columna de EFS se lava con una solucion de metanol al 5% dH2O al 95% (2,1 ml/min, 1,0 minutos), despues se carga en una columna analttica 0 utilizando una valvula conmutadora que coloca la columna de EFS en una trayectoria de flujo invertida sobre la columna analftica (columna Waters Xterra MS C8 5 pm IS, 2,1 x 20 mm). La muestra se eluye de la columna analftica con un gradiente de fase inversa (Fase Movil A: hidroxido de amonio 10 mM en dH2O, Fase Movil

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B: hidroxido de amonio 10 mM en acetonitrilo al 80 % y metanol al 20 %; B al 20 % durante los primeros 3 minutos, despues se incrementa hasta B al 95 % a lo largo de 4 min y se mantiene durante 25 min, todo a un caudal de 0,4 ml/min). A los 9,1 minutos, el gradiente retorna a las condiciones iniciales de B al 20% durante 1 min. El polipeptido se eluye de la columna analftica y se detecta mediante una espectrometna de masa con triple cuadrupolo (MMR, 764 (estado de carga +2) > 182 (estado de carga +1) Da; voltaje de cono = 30 V, colision = 20 eV, resolucion de precursor = 2 Da en el pico de base; resolucion de producto = 2 Da en el pico de base). La respuesta del instrumento se convierte en unidades de concentracion mediante la comparacion con una curva patron utilizando cantidades conocidas de polipeptido (o polipeptidos) sintetizado de forma qmmica, preparado e inyectado en plasma de raton utilizando el mismo procedimiento.

De manera similar, se determinan las propiedades farmacocineticas en ratas utilizando la metodologfa LCMS. Las muestras de plasma de rata que contienen el peptido GCRA se extraen utilizando una placa de extraccion en fase solida (EFS) de 96 pocillos Waters Oasis MAX. Se mezcla un volumen de 200 pl de plasma de rata con 200 pl de polipeptido marcado con 13Cg, 15N en el pocillo de una placa de EFS preparada. Las muestras se extraen a lo largo de la fase estacionaria con vado de 15 mm Hg. Todas las mezclas se enjuagan con 200 pl de hidroxido de amonio al 2 % en agua seguido de 200 pl de metanol al 20 % en agua. Las muestras se eluyen con volumenes consecutivos de 100 pl de acido formico/agua/metanol 5/20/75 y 100 pl de acido formico/agua/metanol 5/15/80. Las muestras se secan en nitrogeno y se resuspenden en 100 pl de metanol al 20 % en agua. Las muestras se analizan mediante un espectrometro de masas Waters Quattro Micro acoplado a una bomba binaria Waters 1525 con un automuestreador Waters 2777. Se inyecta un volumen de 40 pl de cada muestra en una columna Thermo Hypersil GOLD C18 (2,1 x 50 mm, 5 pm). El polipeptido se eluye mediante un gradiente a lo largo de 3 minutos con acetonitrilo y agua que contiene acido trifluoroacetico al 0,05 %. El espectrometro de masas Quattro Micro se ejecuta en el modo de control de reaccion multiple (CRM) utilizando las transiciones de masas de, por ejemplo, 764>182 o 682>136. Utilizando esta metodologfa, el polipeptido se administra la ratas por via oral y por via i.v. a 10mg/kg. Se determinan las propiedades farmacocineticas, incluyendo el area bajo la curva y la biodisponibilidad.

EJEMPLO 10: EFECTO DE EXPERIMENTOS RELACIONADOS CON LA DIURESIS SOBRE LA DIURESIS Y LA NATRIURESIS

El efecto de los peptidos GCRA descritos en el presente documento sobre la diuresis y la natriuresis puede determinarse utilizando una metodologfa similar a la descrita en el documento WO06/001931 (ejemplos 6 (pag. 42) y 8 (pag. 45)). Brevemente, el polipeptido/agonista descrito en el presente documento (180 pmol) se infunde durante 60 minutos en un grupo de 5 ratones o primates anestesiados. Dado un volumen de plasma de rata estimado de 10 ml, la velocidad de infusion es aproximadamente 3 pmol/ml/min. Se controlan la tension arterial, la produccion de orina y la excrecion de sodio durante aproximadamente 40 minutos antes de la infusion, durante la infusion y durante aproximadamente 50 minutos tras la infusion, para medir el efecto de los peptidos GCRA sobre la diuresis y la natriuresis. Para la comparacion, se infunde con solucion salina normal un grupo de cinco ratas de control. Se puede evaluar la orina y la excrecion de sodio. Tambien se puede determinar la respuesta a la dosis. El polipeptido/agonista de la GC-C descrito en el presente documento se infunde en ratones o primates por via intravenosa a lo largo de 60 minutos. Se recoge a orina a intervalos de 30 minutos hasta los 180 minutos despues de la finalizacion de la infusion del polipeptido/agonista de la GC-C, y se determinan el volumen de orina, la excrecion de sodio y la excrecion de potasio para cada intervalo de recoleccion. La tension arterial se controla de forma continua. Para cada dosis se puede determinar una relacion dosis-respuesta para el volumen de orina, la excrecion de sodio y de potasio. Tambien se puede determinar la concentracion plasmatica del polipeptido/agonista de la GC antes y despues de la infusion i.v.

Experimento de diuresis en raton o primate: una vez que se ha logrado un nivel apropiado de anestesia, se inserta un cateter de poliuretano esteril en la uretra, y se asegura utilizando 1 - 2 gotas de pegamento de contacto veterinario aplicado a la union uretra/cateter. Despues, se les administra a los animales vetnculo o artfculo de ensayo por via intravenosa o intraperitoneal. Se permite que los animales recuperen la conciencia y se registra de forma periodica para cada rata el volumen de orina excretada a lo largo de 1-5 horas.

Referencias:

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Claims (10)

1. 5

   10

   15

   20

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   REIVINDICACIONES

   1. Un peptido que comprende la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 2.
2. 2. Una composicion farmaceutica en forma farmaceutica unitaria que comprende un peptido agonista del receptor de la guanilato ciclasa que tiene la secuencia de la SEQ ID NO: 2, presente en una cantidad terapeuticamente eficaz y un transportador, excipiente o diluyente farmaceutico.
3. 3. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 2, en la que la forma farmaceutica unitaria se selecciona del grupo que consiste en un comprimido, una capsula, una solucion o una formulacion de inhalacion.
4. 4. Un agonista de la guanilato ciclasa que comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 2 para su uso en la prevencion o el tratamiento de una afeccion seleccionada del grupo que consiste en Colitis Ulcerosa, Smdrome del colon irritable (SCI), enterocolitis necrosante (ECN), dispepsia no ulcerosa, seudo obstruccion intestinal cronica, dispepsia funcional, seudo obstruccion colonica, reflujo duodenogastrico, estrenimiento asociado con el uso de analgesicos opioides, enfermedad de reflujo gastroesofagico (ERGE), estrenimiento posquirurgico, gastroparesis, estrenimiento asociado con trastornos neuropaticos, acidez gastrica, mala motilidad gastrointestinal, insuficiencia cardiaca congestiva, hipertension, hiperplasia prostatica benigna (HPB), cancer de colon, cancer de pulmon, cancer de vejiga, cancer de Idgado, cancer de glandula salival o cancer de piel, bronquitis, inflamacion de tejidos, inflamacion de organos, inflamacion respiratoria, asma y EPOC.
5. 5. Un agonista de la guanilato ciclasa para su uso de acuerdo con la reivindicacion 4, en el que dicho tratamiento o prevencion comprende adicionalmente administrar una dosis eficaz de inhibidor de una fosfodiesterasa GMPc espedfica.
6. 6. Un agonista de la guanilato ciclasa para su uso de acuerdo con la reivindicacion 5, en el que dicho tratamiento o prevencion comprende adicionalmente administrar a dicho paciente una dosis eficaz de un inhibidor de la fosfodiesterasa dependiente de GMPc, de forma ya sea simultanea o secuencial con dicho agonista del receptor de la guanilato ciclasa.
7. 7. Un agonista de la guanilato ciclasa para su uso de acuerdo con la reivindicacion 5, en el que dicho inhibidor de la fosfodiesterasa dependiente de GMPc se selecciona del grupo que consiste en sulindaco sulfona, zaprinast y motapizona, vardenafil y sildenafil.
8. 8. Un agonista de la guanilato ciclasa para su uso de acuerdo con la reivindicacion 4, en el que dicho tratamiento o prevencion comprende adicionalmente administrar una dosis eficaz de al menos un agente antiinflamatorio.
9. 9. Un agonista de la guanilato ciclasa para su uso de acuerdo con la reivindicacion 8, en el que un agente antiinflamatorio es un farmaco antiinflamatorio esteroide o no esteroide (AINE).
10. 10. El uso de un peptido que comprende la secuencia de la SEQ ID NO: 2 en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad humana.