ES2475066T3

ES2475066T3 - Inhibidores de tirosina quinasas

Info

Publication number: ES2475066T3
Application number: ES10174608.9T
Authority: ES
Inventors: Werner Breitenstein; Pascal Furet; Sandra Jacob; Paul W. Manley
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2002-07-05
Filing date: 2003-07-04
Publication date: 2014-07-10
Anticipated expiration: 2023-07-04
Also published as: CA2491632C; CA2677313A1; PL395096A1; BRPI0312464B8; US20090286821A1; ES2318164T3; KR20050018952A; ATE414699T1; TW200403060A; NZ537396A; ECSP055525A; EP2100891A1; JP2011219495A; GB0229893D0; GB0215676D0; RU2005102917A; PL219723B1; US7956053B2; US7569566B2; CY1108813T1

Abstract

Un compuesto de fórmula en donde R1 representa hidrógeno; R2 representa 5-(4-metil-1H-imidazol-1-il)-3-(trifluorometil)-fenil; y R4 representa hidrógeno; o un N-óxido o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto.

Description

Inhibidores de tirosina quinasas

La invención se relaciona con pirimidinilaminobenzamidas sustituidas novedosas, procesos para su preparación, composiciones farmacéuticas que las contienen, el uso de éstas opcionalmente en combinación con uno o más de otros compuestos farmac�uticamente activos para la terapia de una enfermedad que responde a una inhibición de actividad de proteína quinasa, especialmente una enfermedad neopl�sica, en particular leucemia, y un método para el tratamiento de tal enfermedad.

Antecedentes de la invención

Las proteínas quinasas (PK) son enzimas que catalizan la fosforilaci�n de residuos serina, treonina o tirosina específicos en proteínas celulares. Estas modificaciones postranslacionales de las proteínas de sustrato actúan como conmutadores moleculares que regulan la proliferaci�n, activación y/o diferenciación celular. Se ha observado actividad PK aberrante o excesiva en muchos estados de enfermedad que incluyen trastornos proliferativos benignos y malignos. En un número de casos, ha sido posible tratar enfermedades, tales como trastornos proliferativos, al hacer uso de inhibidores PK in vitro e in vivo.

En vista del gran número de inhibidores de proteína quinasa y la multitud de enfermedades proliferativas y otras enfermedades relacionadas con PK, subsiste la necesidad de proveer clases novedosas de compuestos que sean útiles como inhibidores de PK y as� en el tratamiento de estas enfermedades relacionadas con PTK. Lo que se requiere son nuevas clases de compuestos que inhiban PK farmac�uticamente ventajosos.

El Cromosoma Filadelfia es un sello distintivo para la leucemia miel�gena crónica (CML) y lleva un gen híbrido que contiene exones en el terminal N del gen bcr y la parte principal del terminal C (exones 2-11) del gen c-abl. El producto de gen es una proteína 210 kD (p210 Bcr-Abl). La parte Abl de la proteína Bcr-Abl contiene la tirosina quinasa abl que se regula ajustadamente en el c-abl tipo silvestre, pero activada constitutivamente en la proteína de fusión Bcr-Abl. Esta tirosina quinasa desregulada interact�a con múltiples rutas de se�alizaci�n celulares que conducen a la transformación y proliferaci�n desregulada de las células (Lugo et al., Science 247, 1079 [1990]).

Descripci�n general de la invención

Se ha encontrado ahora que diversos compuestos de la clase pirimidinilaminobenzamida muestran inhibición de actividad de proteína quinasa. Los compuestos de fórmula I, descritos adelante en más detalle, especialmente muestran inhibición de una o más tirosina quinasas, tales como c-Abl, Bcr-Abl, el receptor de tirosina quinasas PDGF-R, Flt3, VEGF-R, EGF-R, y c-Kit, as� como también combinaciones de dos o más de estas; en el caso de pirimidinilaminobenzamidas novedosas de acuerdo con la invención, los compuestos son apropiados para la inhibición de estas y/u otras proteínas quinasas, especialmente aquellas mencionadas anteriormente y/o para la inhibición de mutantes de estas enzimas, especialmente de Bcr-Abl, por ejemplo el mutante Glu255 -> Valina. En vista de estas actividades, se pueden utilizar los compuestos para el tratamiento de enfermedades relacionadas especialmente con actividad aberrante o excesiva de tales tipos de quinasas, especialmente aquellas mencionadas.

Descripci�n detallada de la invención

La invención se relaciona con un compuesto de fórmula I,

en donde R1 representa hidrógeno; R2 representa 5-(4-metil-1H-imidaiol-1-il)-3-(trifluorometil)-fenilo; y R4 representa hidrógeno; o un N-óxido o una sal farmac�uticamente aceptable de tal compuesto.

Cuando se usa la forma plural para los compuestos, sales, y similares, esta se toma para significar también un compuesto único, sal, o similares.

Pueden estar presentes cualesquier átomos de carbono asimétricos en la configuración (R)-, (S)- o (R,S), preferiblemente en la configuración (R)- o (S). Los compuestos pueden estar as� presentes como mezclas de isómeros o como isómeros puros, preferiblemente como enanti�meros diastere�meros puros.

La invención se relaciona también con posibles taut�meros de los compuestos de fórmula I.

Las sales son especialmente las sales farmac�uticamente aceptables de compuestos de fórmula I.

Se forman tales sales, por ejemplo, como sales de adición ácida, preferiblemente con ácidos orgánicos o inorgánicos, de los compuestos de fórmula I con un átomo de nitrógeno básico, especialmente las sales farmac�uticamente aceptables. Los ácidos inorgánicos adecuados son, por ejemplo, ácidos de halógeno, tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, o ácido fosf�rico. ácidos orgánicos adecuados son, por ejemplo, ácidos carbox�lico, fosf�nico, sulf�nico o sulf�mico, por ejemplo ácido acético, ácido propi�nico, ácido octanoico, ácido decanoico, ácido dodecanoico, ácido glic�lico, ácido l�ctico, ácido fum�rico, ácido succ�nico, ácido ad�pico, ácido pim�lico, ácido sub�rico, ácido azelaico, ácido m�lico, ácido tartárico, ácido cítrico, amino�cidos, tales como ácido glut�mico o ácido asp�rtico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido metilmaleico, ácido ciclohexanocarbox�lico, ácido adamantanecarbox�lico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido 4-aminosalic�lico, ácido ft�lico, ácido fenilac�tico, ácido mand�lico, ácido cin�mico, ácido metano- o etanosulf�nico, ácido 2-hidroxietanosulf�nico, ácido etano-1,2disulf�nico, ácido bencenosulf�nico, ácido 2-naftalenosulf�nico, ácido 1,5-naftaleno-disulf�nico, ácido 2-, 3- o 4metilbencenosulf�nico, ácido metilsulf�rico ácido etilsulf�rico, ácido dodecilsulf�rico ácido N-ciclohexilsulf�mico, ácido N-metil-, N-etil- o N-propil-sulf�mico, u otros ácidos protónicos orgánicos, tal como ácido asc�rbico.

En la presencia de radicales cargados negativamente, tal como carboxi o sulfo, las sales también se pueden formar con bases, por ejemplo sales de metal o amonio, tal como sales de metal álcali o sales de metal alcalinot�rreo, por ejemplo sales de sodio, potasio, magnesio o calcio, o sales de amonio con amonio o aminas orgánicas adecuadas, tales como monoaminas terciarias, por ejemplo trietilamina o tri(2-hidroxietil)amina, o bases heteroc�clicas, por ejemplo N-etil-piperidina o N,N’-dimetilpiperazina.

Cuando un grupo básico y un grupo ácido est�n presentes en la misma molécula, un compuesto de fórmula I también puede formar sales internas.

Para propósitos de aislamiento o purificación también es posible usar sales farmac�uticamente no aceptables, por ejemplo picratos o percloratos. Para uso terapéutico, solo se emplean sales farmac�uticamente aceptables o los compuestos libres (cuando sean aplicables en la forma de preparaciones farmacéuticas), y por lo tanto estos son preferidos.

A la vista de la relación cercana entre los compuestos novedosos en forma libre y los que est�n en la forma de sus sales, incluyendo aquellas sales que pueden ser utilizadas como intermedios, por ejemplo en la purificación o identificación de los compuestos novedosos, cualquier referencia a los compuestos libres aquí anteriormente y de aquí en adelante debe entenderse como referencia también a las sales correspondientes, según sea apropiado y conveniente.

El compuesto de fórmula I y sus N-óxidos tienen propiedades farmacol�gicas valiosas, como se describe aquí anteriormente y de aquí en adelante.

La eficacia del compuesto de la invención como inhibidor de la actividad tirosina quinasa del receptor de c-Abl, Bcr-Abl, y VEGF se puede demostrar como sigue:

Prueba para actividad contra proteína tirosina quinasa c-Abl. Se conduce la prueba como un ensayo enlazante de filtro como sigue: El dominio quinasa objetivo His de c-Abl se clona y se expresa en el sistema baculovirus/Sf9 como se describe por Bhat et al. en J.Bioi.Chem. 272:16170-5 (1997). Una proteína de 37 kD (quinasa c-Abl) se purifica mediante un procedimiento de dos etapas sobre una columna de metal de cobalto quelado seguido por una columna de intercambio de ani�n con un rendimiento de 1-2 mg/L de células Sf9. La pureza de la quinasa c-Abl es >90% como se juzga por SDS-PAGE después de teñido azul de Coomassie. El ensayo contiene: quinasa c-Abl (50 ng), Tris-HCl 20 mM, pH 7.5, MgCl2 10 mM, Na3VO4 10 !M, DTT 1 mM y 0.06 !Ci/ensayo [l33 P]-ATP (5 !M de ATP) utilizando 30 !g/ml poly-Ala, Glu, Lys, Tyr-6:2:5:1 (Poly-AEKY, Sigma P1152) en la presencia de DMSO al 1%, volumen total de 30 !L. Las reacciones se terminan al agregar 10 !L de 250 mM de EDTA y 30 !L de la mezcla de reacción se transfiere en membrana Immobilon-PVDF (Millipore, Bedford, MA, USA) previamente remojada durante 5 min con metanol, se enjuaga con agua, luego se empapa durante 5 min con H3PO4 al 0.5% y se monta sobre colector de vacío con fuente de vacío desconectada. Después de manchar todas las muestras, se conecta el vacío y cada pozo se enjuaga con H3PO4 al 0.5% 200 !L. Las membranas se remueven y se lavan en un agitador con H3PO4 al 0.5% (4 veces) y una vez con etanol. Las membranas se cuentan después de secado a temperatura

ambiente, se montan en la estructura Packard TopCount de 96-pozos, y la adición de 10 !L/pozo de Microscint TM (Packard)

Prueba para actividad contra Bcr-Abl. La línea de célula progenitora mieloide de murino 32Dcl3 transfectada con el vector de expresión p210 Bcr-Abl pGDp210Bcr/Abl (32D-bcr/abl) se obtuvo de J. Griffin (Dana Faber Cancer Institue, Bosten, MA, USA). Las células expresan la proteína Bcr-Abl de fusión con una quinasa abl constitutivamente activa y proliferan independiente del factor de crecimiento. Las células se expanden en RPMI 1640 (AMIMED), suero de ternero fetal al 10%, glutamina 2 mM (Gibco) (“medio completo”), y se prepara una solución madre de trabajo mediante alícuotas congeladas de 2 x 106 por vial en medio de congelación (FCS al 95%, DMSO al 5% (SIGMA)). Después de descongelar, se utilizan las células durante máximamente 10 - 12 pasajes para los experimentos. Para ensayos celulares, se disuelven los compuestos en DMSO y se diluyen con medio completo para producir una concentración de partida de 10 �M seguido por preparación de diluciones 3 veces en serie en medio completo. Se siembran 200’000 32D-Bcr/Abl células en 50 !L de medio completo por pozo en placas de cultivo de tejido de fondo redondo de 96 pozos. Se agregan 50 ÉL por pozo de diluciones 3 veces en serie del compuesto de prueba a las células en triplicado. Se utilizan las células no tratadas como control. Los compuestos se incuban junto con las células durante 90 min a 37� C, CO2 al 5%, seguido por centrifugaci�n de las placas de cultivo de tejido a 1300 rpm (Beckmann GPRcentrifuge) y se remueven los sobrenadantes mediante aspiración cuidadosa teniendo cuidado de no remover cualquiera de las células sedimentadas. Los sedimentos celulares se lisan por adición de regulador de lisis 150 ÉL (50 mM de Tris/HCl, pH 7.4, 150 mM de cloruro de sodio, 5 mM de EDTA, 1 mM de EGTA, NP-40 al 1%, orto-vanadato de sodio 2 mM, PMSF 1 mM, aprotinina 50 �g/mL y leupeptina 80 �g/mL) y se utiliza inmediatamente para el ELISA o se almacena congelado en las placas a -20� C hasta uso. Las placas ELISA negras (placas negras 96 Packard HTRF) se precubren durante la noche a 4� C con 50 ng/pozo del domino Ab 06-466 anti-abl-SH3 policlonal de conejo de Upstate en 50 ÉL de PBS. Después de lavar 3 veces con 200 ÉL/pozo) con PBS que contiene Tween20 al 0.05% (PBST) y TopBlock al 0.5% (Juro), se bloquean los sitios de unión de proteína residuales con PBST 200�L/pozo, TopBlock al 3% durante 4 h a temperatura ambiente seguido por incubaci�n con lisatos 50 ÉL de células no tratados o tratadas con el compuesto (20 �g de proteína total por pozo) durante 3-4 h a 4� C. Después de 3 lavadas, se agrega anti-fosfotirosina 50 ÉL/pozo Ab PY20(AP) etiquetada con fosfatasa alcalina (Zymed) diluida con 0.2 �g/mL en regulador de bloqueo y se incuba durante la noche (4� C). Para todas las etapas de incubaci�n las placas se cubren con selladores de placa (Costar). Finalmente, las placas se lavan otras tres veces con regulador de lavado y una vez con agua desionizada antes de la adición de 90 ÉL/pozo del sustrato AP CDPStar RTU con Emerald II. Las placas, ahora selladas con selladores de placa Packard TopSeal™-A, se incuban durante 45 min a temperatura ambiente en la oscuridad y la luminiscencia se cuantifica al medir conteos por segundo (CPS) con un contador de Centelleo de Microplaca Packard Top Count (Top Count).

Las diferencias entre la lectura ELISA- (CPS) obtenidas con los lisados de las células 32D-Bcr/Abl no tratadas y la lectura para el ensayo-antecedente (todos los componentes, pero sin lisado celular) se calculan y se toman como 100% al reflejar la proteína Bcr-Abl fosforilada constitutivamente presente en estas células. La actividad del compuesto en la actividad quinasa de Bcr-Abl se expresa como reducción de porcentaje de la fosforilaci�n de Bcr-Abl. Se determinan los valores para el IC50 eIC90a partir de las curvas de respuesta de dosis mediante extrapolación gráfica.

Prueba para actividad contra tirosina quinasa del receptor de VEGF. Se conduce la prueba utilizando la tirosina quinasa receptor de VEGF Fit-1. El procedimiento detallado es como sigue: solución de quinasa 30 ÉL (10 ng del dominio quinasa de Flt-1, Shibuya et al., Oncogene 5 519-24 [1990]) en Tris•HCl 20 mM pH 7.5, dicloruro de manganeso 3 mM (MnCl2), cloruro de magnesio 3 mM (MgCl2), vanadato de sodio 10 �M, polietilenglicol 0.25 mg/mL (PEG) 20000, ditiotreitol 1 mM y poly(Glu,Tyr) 3 �g/ÉL 4:1 (Sigma, Buchs, Suiza), [33P]-ATP 8 �M (0.2 �Ci), DMSO al 1%, y 0 a 100 �M del compuesto a ser probado se incuban juntos durante 10 minutos a temperatura ambiente. La reacción se termina luego mediante la adición de 10 ÉL de etilenodiaminatetraacetato 0.25 M (EDTA) pH 7. Utilizando un dispensador multicanal (LAB SYSTEMS, USA), se aplica una alícuota de 20 ÉL a una membrana PVDF (= difluoruro de polivinilo) Immobilon P (Millipore, Bedford, USA), a través de un colector del filtro de microtitulaci�n de Gibco-BRL y conectado a un vacío. Luego de la eliminación completa del líquido, la membrana se lava 4 veces sucesivamente en un baño que contiene ácido fosf�rico al 0.5% (H3PO4) y una vez con etanol, se incuba durante 10 minutos cada vez mientras se agita, luego se monta en un colector Hewlett Packard TopCount y se mide la radioactividad después de la adición de Microscint� 10 ÉL (líquido contador de centelleo �). Se determinan los valores IC50 mediante análisis de regresión lineal de los porcentajes para la inhibición de cada compuesto en por lo menos cuatro concentraciones (como una regla 0.01, 0.1, 1.0 y 10 �mol). Los valores IC50 que se pueden encontrar can con los compuestos de fórmula I est�n en el rango de 1 a 10’000 nM, preferiblemente en el rango de 1 a 100 nM.

La inhibición de autofosforilaci�n del receptor de KDR inducida por VEGF se puede confirmar con un experimento in vitro adicional en células: células CHO transfectadas, que expresan permanentemente el receptor VEGF humano (KDR), se siembran en medio de cultivo completo con suero de ternera fetal al 10% (FCS) en placas de cultivo celular de 6 pozos y se incuban a 37� C bajo CO2 al 5% hasta que ellas muestran aproximadamente confluencia al 80%. Los compuestos a ser probados se diluyen luego en medio de cultivo (sin FCS, con albúmina de suero bovino al 0.1%) y se agrega a las células. (Los controles comprenden medio sin compuestos de prueba). Después de dos

horas de incubaci�n a 37�C, se agrega el VEGF recombinante; la concentración VEGF final es 20 ng/mL). Después de una incubaci�n adicional de cinco minutos a 37�C, se lavan las células dos veces con PBS enfriado con hielo (solución salina regulada con fosfato) e inmediatamente se lisan en regulador de lisis 100 ÉL por pozo. Los lisados se centrifugan luego para remover el núcleo celular, y se determinan las concentraciones de proteína de los sobrenadantes utilizando un ensayo de proteína comercial (BIORAD). Los lisados se pueden entonces o bien ser utilizados inmediatamente o, si es necesario almacenar a -20� C.

Se lleva a cabo un ELISA de s�ndwich para medir la fosforilaci�n del receptor de KDR: se inmoviliza un anticuerpo monoclonal para KDR (por ejemplo Mab 1495.12.14) en placas ELISA negras (OptiPlate™ HTRF-96 de Packard). Las placas se lavan entonces y los sitios de enlazamiento de proteína libres restantes se saturan con BSA al 1% en PBS. Los lisados celulares (20 �g de proteína por pozo) son entonces incubados en estas placas durante la noche a 4�C junto con un anticuerpo antifosfotirosina acoplado con fosfatasa alcalina (PY20:AP de Transduction Laboratories). Las placas se lavan de nuevo y el enlace del anticuerpo antifosfotirosina al receptor fosforilado capturado se demuestra entonces utilizando un sustrato AP luminiscente (CDP-Star, listo para uso, con Emerald II; TROPIX). Se mide la luminiscencia en un Contador de Centelleo de Microplaca Packard Top Count (Top Count). La diferencia entre la señal del control positivo (estimulado con VEGF) y aquel del control negativo (no estimulado con VEGF) corresponde a la fosforilaci�n del receptor de KDR inducido por VEGF (=100%). La actividad de las sustancias probadas es calculada como % de inhibición de fosforilaci�n del receptor de KDR inducido por VEGF, en donde la concentración de sustancia que induce la mitad de la inhibición máxima se define como el ED50 (dosis efectiva para inhibición al 50%). Los compuestos de fórmula I aquí preferiblemente muestran valores ED50 en el rango de 0.25 nM a 1000 nM, preferiblemente 0.25 a 250 nM.

Un compuesto de fórmula I o un N-óxido del mismo inhibe a grados variables también otras tirosinas quinasas involucradas en la transducci�n de señal que se media por factores tr�ficos, por ejemplo las quinasas Bcr-Abl y Abl, Arg, quinasas de la familia Src, especialmente quinasa c-Src, Lck, y Fyn; también quinasas de la familia EGF, por ejemplo, quinasa c-erbB2 (HER-2), quinasa c-erbB3, quinasa c-erbB4; quinasa del receptor del factor de crecimiento similar a insulina (quinasa IGF-1), especialmente miembros de la familia de tirosina quinasa del receptor PDGF, tal como quinasa del receptor de PDGF, quinasa del receptor de CSF-1, quinasa del receptor de Kit y quinasa del receptor de VEGF; y también serina/treonina quinasas, todas las cuales juegan un papel en la regulaci�n y transformación del crecimiento en células de mamíferos, que incluyen célula humanas.

Se puede medir la inhibición de la tirosina quinasa c-erbB2 (HER-2), por ejemplo, en la misma forma como la inhibición de proteína quinasa EGF-R, utilizando procedimientos conocidos.

Sobre la base de estos estudios, un compuesto de fórmula I de acuerdo con la invención muestra eficacia terapéutica especialmente contra trastornos dependientes de proteína quinasa, especialmente enfermedades proliferativas.

Sobre la base de su eficacia como inhibidores de actividad de tirosina quinasa del receptor de VEGF, los compuestos de la fórmula I principalmente inhiben el crecimiento de vasos sanguíneos y son as�, por ejemplo, efectivos contra un número de enfermedades asociadas con angiogenia desregulada, especialmente enfermedades originadas por neovascularizaci�n ocular, especialmente retinopat�as, tal como retinopat�a diab�tica o degeneración macular relacionada con la edad, soriasis, hemoangioblastoma, tal como hemoangioma, trastornos proliferativos de células mesangiales, tal como enfermedades renales agudas o crónicas, por ejemplo neuropatía diab�tica, nefroesclerosis maligna, síndromes de microangiopat�a tromb�tica o rechazo de trasplante, o especialmente enfermedad renal inflamatoria, tal como glomerulonefritis, especialmente glomerulonefritis mesangioproliferativa, síndrome de uremia hemol�tico, neuropatía diab�tica, nefroesclerosis hipertensiva, ateroma, reestenosis arterial, enfermedades autoinmunes, diabetes, endometriosis, asma crónica, y especialmente enfermedades neopl�sicas (tumores sólidos, pero también leucemias y otros “tumores líquidos”, especialmente aquellos que expresan c-kit, KDR, Flt-1 o Fit-3), tal como especialmente cáncer de seno, cáncer de colon, cáncer de pulmón (especialmente de pulmón de células pequeñas), cáncer de pr�stata o sarcoma de Kaposi. Un compuesto de fórmula I (o un N-óxido del mismo) inhibe el crecimiento de tumores y es especialmente adecuado para prevenir la diseminaci�n metast�sica de los tumores y el crecimiento de micromet�stasis.

Un compuesto de fórmula I se puede administrar solo o en combinación con uno o más de otros agentes terapéuticos, la terapia de combinación posible tomando la forma de combinaciones fijas o la administración de un compuesto de la invención y uno o más de otros agentes terapéuticos que se dan escalonados o se dan independientemente uno de otro, o la administración combinada de combinaciones fijas y uno o más de otros agentes terapéuticos. Un compuesto de fórmula I puede además o en adición ser administrado especialmente para terapia de tumor, tal como terapia para leucemia, en combinación con quimioterapia, radioterapia, inmunoterapia, intervención quirúrgica, o una combinación de estos. La terapia a largo plazo es igualmente posible cuando es terapia adyuvante en el contexto de otras estrategias de tratamiento, como se describió anteriormente. Otros tratamientos posibles son terapias para mantener el estado del paciente después de la regresión del tumor, o aún terapia quimiopreventiva, por ejemplo en pacientes en riesgo.

Los agentes terapéuticos para posible combinación son especialmente uno o más compuestos citost�ticos o citot�xicos, por ejemplo un agente quimioterap�utico o varios seleccionados del grupo que comprende indarrubicina, citarabina, interfer�n, hidroxiurea, bisulfan, o un inhibidor de biosíntesis de poliamina, un inhibidor de proteína quinasa, especialmente de serina/treonina proteína quinasa, tal como proteína quinasa C, o de proteína tirosina quinasa, tal como tirosina quinasa del receptor del factor de crecimiento epid�rmico, una citoquina, un regulador de crecimiento negativo, tal como THF- o IFN-, un inhibidor de aromatasa, un citost�tico clásico, y un inhibidor de la interacción de un dominio de SH2 con una proteína fosforilada.

Un compuesto de acuerdo con la invención es no solo para el manejo (profiláctico y preferiblemente terapéutico) de los humanos, sino también para el tratamiento de otros animales de sangre caliente, por ejemplo animales útiles comercialmente, por ejemplo roedores, tales como ratones, conejos o ratas, o cobayas. Tal compuesto también se puede utilizar como un estándar de referencia en los sistemas de prueba descritos anteriormente para permitir una comparación con otros compuestos.

En general, la invención se relaciona también con el uso de un compuesto de fórmula I o un N-óxido del mismo para la inhibición de la actividad de la tirosina quinasa, in vitro o in vivo.

Con los grupos de compuestos preferidos de fórmula I y N-óxidos de los mismos mencionados anteriormente, las definiciones de sustituyentes de las definiciones generales mencionadas anteriormente pueden ser utilizadas razonablemente, por ejemplo para reemplazar más definiciones generales con definiciones más específicas o especialmente con definiciones caracterizadas por ser preferidas.

Especialmente, la invención se relaciona con el uso de un compuesto de fórmula I o de un N-óxido o un posible taut�mero del mismo o de una sal farmac�uticamente aceptable de tal compuesto para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad que responde a una inhibición de actividad de proteína quinasa, en donde la enfermedad es una enfermedad neopl�sica.

M�s particularmente, la invención se relaciona con el uso de un compuesto de la fórmula I o de un N-óxido o un posible taut�mero del mismo; o de una sal farmac�uticamente aceptable de tal un compuesto para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de leucemia que responde a una inhibición de la actividad de tirosina quinasa Abl.

Adicionalmente, la invención provee compuestos para usar en un método para el tratamiento de una enfermedad que responde a una inhibición de actividad de proteína quinasa, que comprende administrar un compuesto de fórmula I o un N-óxido o una sal farmac�uticamente aceptable de los mismos, en donde los radicales y símbolos tienen los significados como se definió anteriormente, en una cantidad efectiva contra dicha enfermedad, a un animal de sangre caliente que requiere tal tratamiento.

Preparaciones farmacéuticas, métodos, y usos

La presente invención se relaciona adicionalmente con compuestos para uso en un método para el tratamiento de una enfermedad neopl�sica que responde a una inhibición de una actividad de proteína quinasa, que comprende administrar un compuesto de fórmula I o un N-óxido o una sal farmac�uticamente aceptable de los mismos, en donde los radicales y símbolos tienen los significados como se definió anteriormente para la fórmula I, en una cantidad efectiva contra dicha enfermedad, a un animal de sangre caliente que requiere tal tratamiento.

En particular la invención se relaciona con compuestos para uso en un método para el tratamiento de leucemia que responde a una inhibición de la actividad de tirosina quinasa Abl, que comprende administrar un compuesto de fórmula I o un N-óxido o una sal farmac�uticamente aceptable de los mismos, en donde los radicales y símbolos tienen los significados como se definió anteriormente para la fórmula I, en una cantidad efectiva contra dicha leucemia, a un animal de sangre caliente que requiere tal tratamiento.

La presente invención se relaciona también con composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula I o un N-óxido de los mismos como ingrediente activo y que se pueden utilizar especialmente en el tratamiento de las enfermedades mencionadas en el inicio. Se prefieren especialmente las composiciones para la administración enteral, tal como administración nasal, bucal, rectal o, especialmente, administración oral, y para administración parenteral, tal como intravenosa, intramuscular o administración subcutánea, a animales de sangre caliente, especialmente humanos. Las composiciones comprenden los ingredientes activos solos o, preferiblemente, junto con un portador farmac�uticamente aceptable. La dosificación del ingrediente activo depende de la enfermedad a ser tratada y de las especies, su edad, peso, y condición individual, los datos farmacocin�ticos individuales, y el modo de administración.

La presente invención se relaciona especialmente con composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula I, un taut�mero, un N-óxido o una sal farmac�uticamente aceptable, o un hidrato o solvato de los mismos, y al menos un portador farmac�uticamente aceptable.

La invención se relaciona también con composiciones farmacéuticas para uso en un método para el manejo profiláctico o especialmente terapéutico del cuerpo humano o animal, con un proceso para la preparación de las mismas (especialmente en la forma de composiciones para el tratamiento de tumores) y con un método para tratar enfermedades tumorales, especialmente aquellas mencionadas aquí más arriba.

La invención se relaciona también con procesos y con el uso de los compuestos de fórmula I o N-óxidos de los mismos para la preparación de preparaciones farmacéuticas que comprenden compuestos de fórmula I o N-óxidos de los mismos como componente activo (ingrediente activo).

En la realización preferida, una preparación farmacéutica es adecuada para la administración a un animal de sangre caliente, especialmente humanos o mamíferos comercialmente útiles que sufren de una enfermedad sensible a la inhibición de la tirosina quinasa Abl, por ejemplo leucemia mielogenosa crónica (CML), y comprende una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I o N-óxidos de los mismos para la inhibición de la proteína de fusión de Bcr-Abl, o una sal farmac�uticamente aceptable de los mismos, si los grupos formadores de sal est�n presentes, junto con al menos un portador farmac�uticamente aceptable.

Una composición farmacéutica para el manejo profiláctico o especialmente terapéutico de enfermedades neopl�sicas y otras enfermedades proliferativas de un animal de sangre caliente, especialmente un humano o un mamífero comercialmente útil que requiere tal tratamiento, especialmente que sufre de tal una enfermedad, que comprende como ingrediente activo en una cantidad que es profil�cticamente o especialmente terapéuticamente activa contra las dichas enfermedades un compuesto novedoso de fórmula I o N-óxidos de los mismos, es igualmente preferido.

Las composiciones farmacéuticas comprenden de aproximadamente 1% a aproximadamente 95% de ingrediente activo, formas de administración de dosis individual que comprenden en la realización preferida de aproximadamente 20% a aproximadamente 90% de ingrediente activo y formas que no son de tipo de dosis individual que comprenden en la realización preferida de aproximadamente 5% a aproximadamente 20% de ingrediente activo. Las formas de dosis individuales son, por ejemplo, tabletas cubiertas y no cubiertas, ampollas, viales, supositorios, o cápsulas. Las formas de dosificación adicionales son, por ejemplo, ungüentos, cremas, pastas, espumas, tinturas, aspersiones, etc. Ejemplos son cápsulas que contienen de aproximadamente 0.05 g a aproximadamente 1.0 g de ingrediente activo.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se preparan en una forma conocida per se, por ejemplo por medio de procesos de mezcla, granulación, recubrimiento, disolución o liofilización convencionales.

Se da preferencia al uso de soluciones del ingrediente activo, y también suspensiones o dispersiones, especialmente soluciones acuosas isot�nicas, dispersiones o suspensiones que, por ejemplo en el caso de composiciones liofilizadas que comprenden el ingrediente activo solo o junto con un vehículo se pueden hacer antes del uso. Las composiciones farmacéuticas se pueden esterilizar y/o pueden comprender excipientes, por ejemplo conservantes, estabilizantes, agentes de humectación y/o emulsificadores, solubilizantes, sales para regular presión osm�tica y/o reguladores y se preparan en una forma conocida per se, por ejemplo por medio de procesos de disolución y liofilización convencionales. Las dichas soluciones o suspensiones pueden comprender agentes que incrementan viscosidad o solubilizantes.

Las suspensiones en aceite comprenden como el componente de aceite los aceites vegetales, sintéticos o semisint�ticos habituales para propósitos de inyección. Con respecto a los cuales, se puede hacer mención especial de ésteres de ácidos grasos líquidos que contienen como el componente ácido un ácido graso de cadena larga que tiene de 8 a 22 átomos de carbono. El componente de alcohol de estos ésteres de ácido graso tienen un máximo de 6 átomos de carbono y es un monovalente o polivalente, por ejemplo un alcohol mono-, di- o trivalente, especialmente glicol y glicerol.

Las composiciones farmacéuticas para administración oral se pueden obtener, por ejemplo, al combinar el ingrediente activo con uno o más vehículos sólidos, si se desea granular una mezcla resultante, y procesar la mezcla

o gránulos, si se desea o es necesario, por la inclusión de excipientes adicionales, para formar tabletas o núcleos de tabletas.

Los vehículos adecuados son especialmente agentes de relleno, tales como azúcares, preparaciones de celulosa, y/o fosfatos de calcio, y también aglomerantes, tal como almidones , y/o povidina, y/o, si se desea, desintegrantes. Excipientes adicionales son especialmente acondicionadores de flujo y lubricantes.

Se pueden proveer núcleos de tabletas con recubrimientos adecuados, opcionalmente ent�ricos, a través del uso de, inter alia, soluciones de azúcar concentrado que pueden comprender goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, polietilen glicol y/o di�xido de titanio, o soluciones de recubrimiento en solventes orgánicos adecuados o mezclas de solventes, o, para la preparación de recubrimientos ent�ricos, soluciones de preparaciones de celulosa adecuadas.

Las composiciones farmacéuticas para administración oral también incluyen cápsulas duras que consisten de gelatina, y también suaves, cápsulas selladas que consisten de gelatina y un plastificante. Las cápsulas duras pueden contener el ingrediente activo en la forma de gránulos, por ejemplo en mezcla con agentes de relleno, aglomerantes, y/o deslizantes, y opcionalmente estabilizadores. En las cápsulas suaves, el ingrediente activo es preferiblemente disuelto o suspendido en excipientes líquidos adecuados, a los que también se pueden agregar estabilizadores y detergentes.

Las composiciones farmacéuticas adecuadas para administración rectal son, por ejemplo, supositorios que consisten de una combinación del ingrediente activo y una base de supositorio.

Son especialmente adecuados para administración parenteral, las soluciones acuosas de un ingrediente activo en forma soluble en agua, por ejemplo de una sal soluble en agua, o suspensiones de inyección acuosa que contienen sustancias que incrementan la viscosidad, por ejemplo carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol y/o dextrano, y, si se desea, estabilizadores. El ingrediente activo, opcionalmente junto con excipientes, también puede estar en la forma de un liofilizado y se puede hacer en una solución antes de administración parenteral mediante la adición de solventes adecuados.

Soluciones tales como son usadas, por ejemplo, para administración parenteral también se pueden emplear como soluciones de infusión.

Los conservantes preferidos son, por ejemplo, antioxidantes, tales como ácido asc�rbico, o microbicidas, tales como ácido s�rbico o ácido benzoico.

La invención se relaciona de la misma forma con un proceso o un método para el tratamiento de una de las condiciones patológicas mencionadas aquí más arriba, especialmente una enfermedad que responde a una inhibición de una tirosina quinasa, especialmente una enfermedad neopl�sica correspondiente. Se pueden administrar los compuestos de fórmula I o N-óxidos de los mismos tal como o especialmente en la forma de composiciones farmacéuticas, profil�cticamente o terapéuticamente, preferiblemente en una cantidad efectiva contra las dichas enfermedades, a un animal de sangre caliente, por ejemplo un humano, que requiere tal tratamiento. En el caso de un individuo que tiene un peso corporal de aproximadamente 70 kg la dosis diaria administrada es de aproximadamente 0.05 g a aproximadamente 5 g, preferiblemente de aproximadamente 0.25 g a aproximadamente

1.5 g, de un compuesto de la presente invención.

La presente invención también se relaciona especialmente con el uso de un compuesto de fórmula I o N-óxidos del mismo, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo, especialmente un compuesto de fórmula I que se dice es preferido, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo, tal como o en la forma de una formulación farmacéutica con al menos un vehículo farmac�uticamente aceptable para el manejo terapéutico y también profiláctico de una o más de las enfermedades mencionadas aquí más arriba, preferiblemente una enfermedad que responde a una inhibición de una proteína quinasa, especialmente una enfermedad neopl�sica, más especialmente leucemia que responde a una inhibición de la tirosina quinasa Abl.

La cantidad preferida de la dosis, la composición, y la preparación de formulaciones farmacéuticas (medicinas) que son para ser utilizadas en cada caso se describen anteriormente.

Materiales de partida

Los nuevos materiales de partida y/o intermedios, as� como también procesos para la preparación de los mismos, son en forma similar el objeto de esta invención. En la realización preferida, se utilizan tales materiales de partida y las condiciones de reacción se seleccionan para permitir la obtención de los compuestos preferidos.

El ácido aminobenzoico sustituido de fórmula II, por ejemplo, se puede obtener mediante reacción de un éster de ácido 3-amino-4-R4-benzoico, por ejemplo ácido 3-amino-4-metilbenzoico, con cianamida y condensando la guanidina obtenible con 3-(dimetilamino)-1-(3-piridinil)-2-propen-1-ona, y finalmente hidrolizando la función éster.

Se conocen los materiales de partida de la fórmula III, disponibles comercialmente, o se pueden sintetizar en analogía a o de acuerdo con métodos que son conocidos en la técnica.

Los siguientes Ejemplos sirven para ilustrar la invención sin limitar la invención en su alcance.

Abreviaturas

DMSO dimetilsulf�xido

HPLC/MS-MS cromatograf�a líquida de alta presión/espectrometr�a de masa en t�ndem

min minutos

p.f. punto de fusión

NMP N-metil-pirrolidona

RMN resonancia magnética nuclear

PEG polietilen glicol

THF tetrahidrofurano

Ejemplos

Ejemplo de Preparación 1: N-(2-Furanilmetil)-4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]benzamida

Se agrega una solución que contiene �50% de anh�drido propilfosf�nico en N,N-dimetilformamida (Fluka, Buchs, Suiza; 674 ÉL, -1 mmol) en 20 minutos a una mezcla agitada de ácido 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]benzoico (214.4 mg, 0.7 mmol), furfurilamina (Aldrich, Buchs, Suiza; 61.8 ÉL, 0.7 mmol) y trietilamina (776 ÉL, 5.6 mmol) en 2 ml de N,N-dimetilformamida. Después de agitar durante 24 horas a temperatura ambiente, la mezcla se trata con una solución acuosa saturada media de hidrógeno carbonato de sodio y se extrae tres veces con acetato de etilo. El solvente se evapora bajo presión reducida y el residuo se seca in vacuo. El producto crudo se cristaliza a partir de diclorometano para dar el compuesto del título como un sólido cristalino.

1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6, 5): 2.28 (s, 3H); 4.43 (d, 2H); 6.23 (m, 1H); 6.33-6.37 (m, 1H); 7.30 (d,1H); 7.42 (d, 1H); 7.49 (ddd, 1H); 7.53 (m, 1H); 7.59 (dd, 1H): 8.11 (d, 1H); 8.38 (m, 1H); 8.49 (d, 1H); 8.66 (dd, 1H); 8.87 (t, 1H);

9.05 (s, 1H); 9.22 (m, 1H).

El material de partida se prepara como sigue:

Ejemplo 1a: mononitrato de etil éster de ácido 3-[(Aminoiminometil)amino]4-metil-benzoico

Se agrega cianamida (Fluka, Buchs, Suiza; 77.4 g, 1.842 mol) a una solución de etil éster de ácido 3-amino-4metilbenzoico (J. Med. Chem. 16, 118-122, 1973; 150 g, 0.837 mol) en 850 mL de etanol. Se agrega entonces gota a gota ácido clorhídrico (Fluka, Buchs, Suiza; 108 mL de 12M, 1.27 mol) durante 15 min y la mezcla de reacción se agita entonces a 90�C (temperatura de baño) durante 15 horas. El solvente se evapora bajo presión reducida para dar un residuo que se trata con agua (1000 mL) y se agita con enfriamiento a 5-10�C. Se agrega gota a gota una solución de nitrato de amonio (Merck, Darmstadt, Alemania; 134.8 g, 1.68 mol) en agua (400 mL) durante 30 min. seguido por agua helada (1200 mL). Después de agitar durante 30 min. adicionales el producto se filtra, se lava con agua helada (3 x 1000 mL) y se seca al aire. El residuo se lava con dietil éter (2 x 2000 m L) y se seca in vacuo a 50�para dar el compuesto del título como un sólido cristalino, p.f. 195-197�C.

Ejemplo 1b: etil éster de ácido 4-Metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]-benzoico

Una mezcla agitada del Ejemplo intermedio 1a (164 g, 0.577 mol), 3-(dimetilamino)-1-(3-piridinil)-2-propen-1-ona

(113.8 g, 0.646 mol) y NaOH en polvo (99%; Merck, Darmstadt, Alemania; 26.6 g, 0.658 mol) en etanol (2200 mL) se calienta bajo reflujo durante 68 h. El solvente de reacción se evapora bajo presión reducida y el residuo se somete a partición entre acetato de etilo y agua. La capa orgánica se separa y la fase acuosa se extrae dos veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavan con agua y salmuera, se secan (Na2SO4) y el solvente se evapora bajo presión reducida para dar un residuo, que se cristaliza a partir de dietil éter para dar el compuesto del título como un sólido cristalino, p.f -95-96�C.

Ejemplo 1c: ácido 4-Metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]-benzoico

Se agrega gota a gota hidróxido de sodio acuoso (500 mL de 2M) a una suspensión agitada del Ejemplo intermedio 1b (132.8 g, 0.397 mol) en etanol (1200 m L) y agua (1200 mL). La mezcla de reacción se agita a 45�C durante 2.5 h y luego se trata gota a gota con HCl acuoso (1000 mL de 1 M) durante 1.5 horas. Después de adición de agua (1000 mL) el precipitado se filtra, se lava con agua (4 x 500 mL) y se seca a temperatura ambiente. El agua residual presente en el producto secado al aire se remueve por destilación azeotr�pica con tolueno bajo presión reducida. La suspensión seca de tolueno se diluye con dietil éter y se filtra. El residuo sólido se lava con dietil éter y se seca in vacuo a 80� C para dar el compuesto del título, p.f. 277-278�C.

Ejemplo 2: 3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]-N-[5-(4-metil-1H-imidazol-1-il)-3-(trifluorometil)fenil]benzamida

Utilizando el procedimiento descrito en el ejemplo 1, pero empleando ácido 3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]benzoico en lugar de ácido 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]-benzoico y 5-(4-metil-1H-imidazol-1-il)-3(trifluorometil)-bencenamina en lugar de furfurilamina, genera el compuesto del título como un sólido cristalino amarillo pálido p.f. 264-266�C.

Ejemplo 2a: mononitrato de etil éster de ácido 3-[(Aminoiminometil)amino]-benzoico

Utilizando el procedimiento descrito en el ejemplo 1 a pero empleando etil éster del ácido 3-amino-benzoico (Fluka, Buchs, Suiza) en lugar de etil éster de ácido 3-amino-4-metilbenzoico, genera el compuesto del título como un sólido cristalino, p.f 170-172�C.

Ejemplo 2b: etil éster del ácido 3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]-benzoico

Utilizando el procedimiento descrito en el ejemplo 1b pero empleando mononitrato de etil éster de ácido 3[(aminoiminometil)amino]-benzoico en lugar de mononitrato de etil éster de ácido 3-[(aminoiminometil)amino]-4-metilbenzoico, genera el compuesto del título como un sólido cristalino, p.f 197-199�C.

Ejemplo 2c: ácido 3-[[4-(3-piridinil)-2-piridinil]amino]-benzoico

Utilizando el procedimiento descrito en el ejemplo 1c pero empleando etil éster de ácido 3-[[4-(3-piridinil)-2pirimidinil)amino]-benzoico en lugar de etil éster de ácido 4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-2-pirimidinil]amino]-benzoico, genera el compuesto del título como un sólido cristalino, p.f 291-295�C.

Ejemplo 3: Cápsulas suaves

5000 cápsulas de gelatina suave, cada una que comprende como ingrediente activo 0.05 g de uno de los compuestos de fórmula I mencionados en los Ejemplos precedentes, se preparan como sigue: 250 g de ingrediente activo pulverizado se suspende en 2L de Lauroglykol� (propileno glicol laurato, Gattefoss� S.A., Saint Priest, Francia) y se muele en un pulverizador húmedo para producir un tamaño de partícula de aproximadamente 1 a 3 �m. Luego se introducen porciones de 0.419 g de la mezcla en las cápsulas de gelatina suave utilizando una máquina para llenado de cápsula.

Ejemplo 4: Datos farmacocin�ticos:

El compuesto de fórmula I a ser probado se formula para administración a ratones hembra OF1 de IFACREDO, Francia, primero disolviendo en NMP, y luego diluyendo con PEG300 a una concentración final de NMP al 10% v/v: PEG300 al 90% v/v, produciendo una solución clara del compuesto. Las concentraciones se ajustaron para suministrar un volumen constate de 10 mL/kg de peso corporal. El compuesto se prepara inmediatamente antes de uso. El compuesto formulado se administra de forma peroral mediante alimentación forzada para proveer dosificaciones de 50 mg/kg. En los puntos de tiempo asignados, se anestesian los ratones (4 en cada momento) con isoflurano al 3% en oxígeno m�dico y se obtienen las muestras de sangre mediante punci�n del corazón en tubos heparinizados (ca. 30 IU/mL). Los animales se sacrifican subsecuentemente sin recuperarse de la anestesia. Se prepara el plasma a partir de la sangre mediante centrifugaci�n (10,000 g, 5 min) y se analiza inmediatamente o se almacena congelado a -70� C.

Las muestras de plasma (10 - 250 ÉL) reciben por ejemplo la adición de 5 ÉL de estándar interno, mezcladas con 200 ÉL de NaOH 0.1 M y 500 ÉL de cloroformo en un tubo Eppendorf de 1.5 mL y se agita vigorosamente durante 10 minutos en un mezclador Eppendorf. Después de esto, la mezcla se centrifuga (3 min a 10’000xg) la fase orgánica se transfiere a un segundo tubo Eppendorf y se evapora hasta secado en una centrífuga de vacío (Speedvac 5301). El residuo seco por ejemplo se disuelve en 250 ÉL de Acetonitrilo al 10% v/v en agua que contiene ácido f�rmico al 0.1%. Se lleva a cabo el análisis subsecuente por ejemplo por HPLC/MS-MS utilizando un sistema HPLC Agilent 1100 Series (Agilent, Palo Alto, CA, USA) con desgasificador en vacío, la bomba binaria, y compartimiento de columna de termostato combinados con un sistema automuestreador enfriado (HTS PAL, CTC Analytics, Zwingen, Suiza). La muestra (5-15 ÉL) se inyecta por ejemplo en una columna Ultra Phenyl (tamaño de partícula 3 �m, 50 x1 mm; Restek, Bellefonte, USA) con una columna de guarda (4 x 2 mm) del mismo material (Fenomenex, Torrance, USA). Después del equilibrio por ejemplo con agua y un periodo de latencia de 1 min la muestra es eludida por ejemplo mediante un gradiente lineal de 0 -100% de acetonitrilo en agua que contiene 0.2% v/v de ácido f�rmico durante un periodo de de 11 min a una rata de flujo de 60 ÉL/min. La columna se prepara para la siguiente muestra por ejemplo al reequilibrar durante 3 min con 100% de agua a las condiciones de partida. La separación se desarrolla por ejemplo a una temperatura de columna de 40�C. Se introduce el efluente de columna por ejemplo directamente en la fuente de i�n de un espectrómetro de masa cuadripolar de etapa triple (Quattro Ultima™, Micromass, Manchester, UK) controlado por el software Masslynx™ 3.5 (Micromass, Manchester, UK) utilizando como técnica de ionizaci�n el modo positivo de ionizaci�n por electroaspersi�n (ESI +). El compuesto se detecta por MS/MS luego de fragmentación de los iones originales. El límite de cuantificación se determina en por ejemplo 0.002 nmol/L. Una curva de calibración se construye con cantidades conocidas de compuesto que incluyen una cantidad fija de estándar interno en el plasma que se procesa como se describió anteriormente. La concentración de muestras no conocidas se calcula a partir de una gráfica de la relación de área de pico del i�n hijo seleccionado del analito al producto de su estándar interno (ordenada) contra la concentración nominal (abscisa). Se desarrolla el análisis de regresión utilizando Quanlynx™, software Masslynx™ 3.5 (Micromass, Manchester, UK).

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula

en donde

5 R1 representa hidrógeno; R2 representa 5-(4-metil-1H-imidazol-1-il)-3-(trifluorometil)-fenil; y R4 representa hidrógeno;

o un N-óxido o una sal farmac�uticamente aceptable de tal compuesto.
2. Una composición farmacéutica que comprende como un ingrediente activo un compuesto de fórmula I de acuerdo

10 con la reivindicación 1 o un N-óxido o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo junto con un vehículo farmac�uticamente aceptable.
3. El uso de un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 o un N-óxido o un taut�mero posible del mismo o de una sal farmac�uticamente aceptable del mismo para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad que responde a una inhibición de la actividad de la proteína quinasa.

15 4. Un compuesto de fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 o un N-óxido o un taut�mero posible del mismo o de una sal farmac�uticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de una enfermedad que responde a una inhibición de la actividad de la proteína quinasa.