KR20180091918A - Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 정제를 효율화하기 위한 방법 - Google Patents

Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 정제를 효율화하기 위한 방법 Download PDF

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KR20180091918A
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노부유키 다나카
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추가이 세이야쿠 가부시키가이샤
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Abstract

Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 Fc 영역을, Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄는 프로테인 A 레진에 결합하지만, Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 결합이 약한 Fc 영역으로 하는 것에 의해, 상기 레진 체적당 상기 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 결합량이 증가하여, 상기 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 보다 효율적인 정제가 가능해지는 것을 발견했다.

Description

Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 정제를 효율화하기 위한 방법
본 발명은 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량을 증가시키는 방법 및 그 방법을 이용한 정제 방법 등에 관한 것이다.
항체 의약품의 제조에 있어서, 프로테인 A 컬럼, 이온 교환 컬럼 등을 이용한 정제 공정은, 항체의 제조 효율(수율)을 크게 좌우하기 때문에, 그의 효율화가 요망되고 있다. 효율화를 도모하기 위한 수단으로서, (1) 수지 단위 체적당 결합 용량을 올리는 것, (2) 고유속 처리에 의해, 정제에 필요로 하는 시간을 단축하는 것의 2가지의 방법이 있다.
근년, 프로테인 A 레진의 개량이 진행되어, 프로테인 A 레진에는 보다 많은 항체를 결합할 수 있게 되고, 그에 수반하여 항체 정제의 효율화가 도모되어 왔다. 예를 들면, 대표적인 제1세대 프로테인 A 레진인 GE 헬스케어사제 rProtein A sepharose Fast Flow에서는, 통상 항체의 결합 용량은 15-20g/L resin인 것에 비해, 동일사제 제2세대 프로테인 A 레진이고, 현재 세계적으로 가장 사용되고 있는 Mab Select SuRe에서는, 일반적으로 약 30g/L resin의 결합 용량이 확인되어 있다. 게다가, 전자에 비해서 후자는 1.5-2배 정도 높은 선유속에 대응 가능하여, 보다 효율적인 항체 분자의 프로테인 A 정제가 가능해져 있다.
이중특이성 항체는 상이한 2종류의 항원을 인식하는 성질상, 2종류의 H쇄를 갖고 있다. 그 때문에, 이중특이성 항체를 포함하는 배양 상청에는, 2종류의 H쇄를 포함하는 이중특이성 항체뿐만 아니라, 1종류의 H쇄만을 갖는 항체도 포함되어 있다. 이들과 이중특이성 항체를 분리하도록, 프로테인 A 레진에 대한 결합력을 변화시킨 Fc 영역 변이체가 이용되고 있다(특허문헌 1, 특허문헌 2). 이와 같은 분자 개변의 영향에 의해, 이중특이성 항체의 프로테인 A 정제가 비효율이 되는 것이 염려되었다.
이상과 같은 상황하, 프로테인 A 레진 컬럼을 이용한 이중특이성 항체 정제를 보다 효율적으로 행하기 위한 새로운 방책이 요망되고 있었다.
US 20100331527 US 20130018174
본 발명의 목적은 Fc 영역 함유 폴리펩타이드, 특히 이중특이성 항체를 프로테인 A 레진 컬럼을 이용하여 보다 효율적으로 정제하기 위한 방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여 예의 연구한 결과, 본 발명자들은, Fc 영역을, 해당 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄와 해당 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄의 프로테인 A 레진에 대한 결합력이 서로 상이한 Fc 영역으로 함으로써, 항체의 동적 결합 용량이 높아지고, 항체의 정제 효율이 증가하는 것을 발견하여, 본 발명을 완성했다.
즉, 본 발명은 이하의 것을 제공한다.
〔1〕 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량을 증가시키는 방법.
〔2〕 상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄 및 제 2 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 대한 결합력이 서로 상이한 제 1 폴리펩타이드쇄 및 제 2 폴리펩타이드쇄를 준비하는 공정을 포함하는, 〔1〕에 기재된 방법.
〔3〕 상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 결합하는 제 1 폴리펩타이드쇄를 준비하고, 상기 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 (상기 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해 상기 레진에 대한) 결합이 약한 제 2 폴리펩타이드쇄를 준비하는 공정을 포함하는, 〔1〕 또는 〔2〕에 기재된 방법.
〔4〕 상기 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 Fc 영역을, 해당 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지만, 해당 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 (상기 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해 상기 레진에 대한) 결합이 약한 Fc 영역이 되도록 개변하는 공정을 포함하는, 〔1〕∼〔3〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔5〕 상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄는 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 CH3을 포함하고, 상기 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄는 IgG3의 CH3을 포함하는, 〔1〕∼〔4〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔6〕 상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄의 EU 넘버링 435번째의 아미노산은 His이고, 제 2 폴리펩타이드쇄의 EU 넘버링 435번째 아미노산은 Arg인, 〔1〕∼〔5〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔7〕 상기 결합 용량의 증가가 5g/L 레진 이상인, 〔1〕∼〔6〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔8〕 상기 증가 후의 동적 결합 용량이 45g/L 레진 이상인, 〔1〕∼〔7〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔9〕 상기 Fc 영역 함유 폴리펩타이드가 항체인, 〔1〕∼〔8〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔10〕 상기 항체가 이중특이성 항체인, 〔9〕에 기재된 방법.
〔11〕 〔1〕∼〔10〕에 기재된 방법을 이용한 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 정제 방법.
〔12〕 〔11〕에 기재된 방법으로 정제된 Fc 영역 함유 폴리펩타이드.
〔13〕 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량이 45g/L 레진 이상인, Fc 영역 함유 폴리펩타이드가 결합한 프로테인 A 레진.
〔14〕 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량이 증가한 Fc 영역 함유 폴리펩타이드.
〔15〕 이하의 공정을 포함하는, 프로테인 A 레진을 이용하여 Fc 영역 함유 폴리펩타이드를 제조하는 방법:
(a) 해당 레진에 대한 결합력이 서로 상이한 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄와 제 2 폴리펩타이드쇄를 준비하는 공정,
(b) 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 공정(a)의 해당 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량을, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 해당 레진에 대한 결합력이 실질적으로 동일한 2본의 폴리펩타이드쇄를 포함하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량과 비교하는 공정,
(c) Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드 및 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드를 포함하는 시료를 해당 레진에 접촉시키는 공정; 및
(d) 해당 레진에 결합한, Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드 및 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드의 헤테로체를 함유하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드를 회수하는 공정.
〔16〕 상기 공정(a)가, 상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 결합하는 제 1 폴리펩타이드쇄를 준비하고, 상기 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 (상기 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해 상기 레진에 대한) 결합이 약한 제 2 폴리펩타이드쇄를 준비하는 공정인, 〔15〕에 기재된 방법.
〔17〕 상기 공정(a)가, 정제 대상인 상기 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 Fc 영역을, 해당 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지만, 해당 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 (상기 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해 상기 레진에 대한) 결합이 약한 Fc 영역이 되도록 개변하는 공정인, 〔15〕 또는 〔16〕에 기재된 방법.
〔18〕 상기 공정(c)에 기재된 시료가, 상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드 및 상기 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드의 양방에 결합능을 줄 수 있는 공통의 L쇄 폴리펩타이드를 포함하는, 〔15〕∼〔17〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔19〕 상기 Fc 영역 함유 폴리펩타이드가 항체인, 〔11〕에 기재된 정제 방법.
〔20〕 상기 항체가 이중특이성 항체인, 〔19〕에 기재된 정제 방법.
〔21〕 〔19〕에 기재된 방법으로 정제된 항체.
〔22〕 〔20〕에 기재된 방법으로 정제된 이중특이성 항체.
〔23〕 〔13〕에 기재된 레진을 포함하는 컬럼.
본 발명에 의해, Fc 영역 함유 폴리펩타이드, 특히 이중특이성 항체를 프로테인 A 레진을 이용하여 보다 효율적으로 정제하기 위한 방법이 제공되었다.
도 1은 BiAb 용액을 프로테인 A 레진 컬럼에 계속 부하했을 때에 컬럼으로부터 누출된 단백질을 검출한 브레이크스루 커브 크로마토그램을 나타내는 도면이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명에서 사용되는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드는 항체의 Fc 영역을 포함하고 있으면 되고, Fc 영역과 다른 폴리펩타이드가 융합한 폴리펩타이드, 예를 들면 항체 등이 포함된다.
본 발명에 있어서의 폴리펩타이드란, 통상, 10 아미노산 정도 이상의 길이를 갖는 펩타이드 및 단백질을 가리킨다. 또한, 통상, 생물 유래의 폴리펩타이드이지만, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 인공적으로 설계된 서열로 이루어지는 폴리펩타이드여도 된다. 또한, 천연 폴리펩타이드 또는 합성 폴리펩타이드, 재조합 폴리펩타이드 등 중 어느 것이어도 된다.
「Fc 영역」은, 통상, 항체 분자 중의, 힌지부 또는 그의 일부, CH2 도메인, CH3 도메인으로 이루어지는 폴리펩타이드쇄를 2본 포함하는 영역을 말하지만, 특별히 이것으로 한정되지 않고, 힌지부 또는 그의 일부가 포함되지 않는 경우도 있다. 인간 IgG 클래스의 Fc 영역은, Kabat의 EU 넘버링으로, 예를 들면 226번째의 시스테인으로부터 C 말단, 또는 230번째의 프롤린으로부터 C 말단까지를 의미하지만, 이것으로 한정되지 않는다. 또한 인간 CH2 도메인은 Kabat의 EU 넘버링으로 231번째로부터 340번째를 의미하고, 인간 CH3 도메인은 Kabat의 EU 넘버링으로 341번째로부터 447번째를 의미하지만, 이것으로 한정되지 않는다.
Fc 영역은, IgG1, IgG2, IgG3, Fc 영역 함유 모노클로날 항체 등을 펩신 등의 단백질 분해 효소로 부분 소화한 후에, 프로테인 A 레진에 흡착된 분획을 재용출하는 것에 의해 적합하게 취득될 수 있다. 이러한 단백질 분해 효소로서는 pH 등의 효소의 반응 조건을 적절히 설정하는 것에 의해 제한적으로 Fab나 F(ab')2가 생기도록 전장 항체를 소화할 수 있는 것이면 특단의 한정은 되지 않고, 예를 들면, 펩신이나 파파인 등을 예시할 수 있다.
Fc 영역으로서는 인간 IgG 타입의 Fc를 들 수 있고, 예를 들면 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4의 아이소타입 중 어느 것이어도 된다.
본 발명의 Fc 영역은, 제 1 상기 폴리펩타이드쇄 및 제 2 상기 폴리펩타이드쇄를 포함한다.
본 발명의 하나의 실시형태는, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량을 증가시키는 방법이다. Fc 영역에 포함되는 제 1 폴리펩타이드쇄와 제 2 폴리펩타이드쇄는 프로테인 A 레진에 대한 결합력이 서로 상이한 것이 바람직하고, 예를 들면, 제 1 폴리펩타이드쇄로서 프로테인 A 레진에 결합하는 폴리펩타이드쇄를 이용하는 경우, 제 2 폴리펩타이드쇄로서는 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해, 프로테인 A 레진에 약하게 결합하거나, 또는 결합하지 않는 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있다. 그와 같은 제 1 폴리펩타이드쇄로서는 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 CH3을 포함하는 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있고, 제 2 폴리펩타이드쇄로서는 IgG3의 CH3을 포함하는 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있다. 이때, IgG1, IG2, IgG3 및 IgG4는 천연형이어도 되고, 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 범위에서 변이를 포함하고 있어도 된다. 또한, 그와 같은 제 1 폴리펩타이드쇄로서는 EU 넘버링 435위가 His(H)인 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있고, 제 2 폴리펩타이드쇄로서는 EU 넘버링 435위가 Arg(R)인 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있다. 또한, 그와 같은 제 1 폴리펩타이드쇄로서는 EU 넘버링 435위가 His(H), 436위가 Tyr(Y)인 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있고, 제 2 폴리펩타이드쇄로서는 EU 넘버링 435위가 Arg(R), 436위가 Phe(F)인 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있다. 한편, EU 넘버링 435위 또는 436위 이외의 포지션은 천연형 IgG와 동일해도 되고, 또한 천연형 IgG와는 상이해도 된다.
본 실시형태에 있어서, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 상기 레진에 대한 동적 결합 용량의 증가는, 상기 레진에 결합하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 Fc 영역을, 해당 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄와 해당 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄의 상기 레진에 대한 결합력이 서로 상이한 Fc 영역이 되도록 개변하는 것에 의해서도 달성할 수 있다.
본 발명의 다른 실시형태에 있어서, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 상기 레진에 대한 동적 결합 용량의 증가는, 상기 레진에 결합하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 Fc 영역을, 해당 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지만, 해당 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 상기 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해 결합이 약한 Fc 영역이 되도록 개변하는 것에 의해서도 달성할 수 있다.
당해 개변으로서는, Fc 영역의 제 1 및 제 2 폴리펩타이드쇄가 위에 예시한 바와 같은 CH3 영역을 포함하도록, 예를 들면 위에 예시한 바와 같은 특정한 위치에서의 특정한 아미노산 잔기를 포함하도록 하는 개변을 들 수 있지만, 그들로 한정되지 않는다.
한편, 본 발명에서 사용되는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드에 있어서의 Fc 영역 이외의 영역은 호모체여도 되고, 헤테로체여도 된다.
호모체로서는, 1 또는 2 이상의 단일 또는 동일한 항원 결합 활성을 갖는 호모체이다(즉, 당해 Fc 영역 함유 폴리펩타이드가 항원 결합 분자인 경우, 1 또는 2 이상의 단일 또는 동일한 항원 결합 활성을 갖는 항원 결합 분자, 예를 들면 동일한 2개의 항원 결합 부위를 갖는 IgG형 항체이다).
헤테로체로서는, 바람직하게는, 상이한 항원 결합 활성을 갖는 헤테로체이다(즉, 당해 Fc 영역 함유 폴리펩타이드가 이중특이성 항원 결합 분자, 예를 들면 이중특이성 항체이다). 본 발명에서 사용되는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드가 이중특이성 항체인 경우, H쇄는 헤테로체이지만 L쇄는 공통이어도 되고, 당해 공통 L쇄는 바람직하게는 양 H쇄에 결합능을 줄 수 있는 공통 L쇄이다. 한편, 이중특이성 항체는 IgG형인 경우, 헤테로인 H쇄 2본과 동일한 공통 L쇄 2본으로 구성된다.
결합 용량에는, 정적 결합 용량(Static Binding Capacity, SBC)과 동적 결합 용량(Dynamic Binding Capacity, DBC)이 있다. 정적 결합 용량은 레진이 폴리펩타이드를 흡착할 수 있는 상한의 양을 나타내고, 동적 결합 용량은 컬럼에 폴리펩타이드를 포함하는 용액을 흘려보내고 있는 상태에서, 폴리펩타이드를 회수할 수 있는 정도를 나타낸다. 동적 결합 용량이 큰 레진이면, 고선유속에서도 폴리펩타이드를 효율적으로 흡착할 수 있고, 단시간에 폴리펩타이드를 정제할 수 있다.
동적 결합 용량(DBC)은, 예를 들면 이하의 방법으로 결정할 수 있다. 우선 레진을 충전한 컬럼을 크로마토 장치에 장전하고, 컬럼에 폴리펩타이드를 포함하는 샘플 용액을 소정의 선유속으로 통액시킨다. 그 후, 용출액의 흡광도를 측정하고, 첨가한 샘플 용액의 흡광도의 소정의 비율(예를 들면 5%)의 브레이크스루(BT)가 측정된 시점의 첨가 폴리펩타이드의 질량을 특정함으로써, DBC를 결정할 수 있다.
DBC의 계산에는, 예를 들면 이하의 장치 등을 이용할 수 있다.
·LC 장치; GE 헬스케어사제 AKTA AVANT25
·소프트웨어; GE 헬스케어사제 Unicorn version 6.1
·Protein A 수지; GE 헬스케어사제 Mab Select SuRe (Cat No. 17-5438-05)
또는 Hitrap Mab Select SuRe (Cat No. 11-0034-93)
·사용 완충액;
평형화/전(前)세정...20mmol/L Na-phosphate, pH 7.5
용출...50mmol/L Acetic acid
재생...0.1mol/L NaOH
DBC의 계산 방법은 이하와 같이 행할 수 있다.
상기 사용 기기, 소프트웨어 및 수지를 이용하여, 이하의 순서로 크로마토그래피 조작에 의해 DBC를 산출한다. 이하에 5% BT를 지표로 하는 경우의 계산 방법을 나타낸다.
(1) 부하 분획(IgG 농도 Pg/L로 함)을 일단 컬럼을 통하지 않고서 LC 장치에 흘려보내고, 100% 누출(=100% BT) 시의 OD280nm의 값을 확인했다. 이 값을 a로 한다.
(2) a에 0.05를 곱한 값을 5% BT 시의 OD280nm로 정의한다. 이 값을 b5%로 한다.
(3) 부하 분획을 평형화된 일정량의 수지(r L로 함)에 계속 흘려보내고, OD280nm의 값이 b5%가 되었을 때의 부하 분획의 용량을 크로마토그램으로부터 판독한다. 이 값을 c5% L로 한다.
(4) 계산식 (P×c5%)/r로 얻어지는 값을 5% BT 시의 동적 결합 용량, DBC5%로서 산출한다.
DBC5% = (P×c5%)/r (단위; g/L resin)
DBC10%를 구할 때는, 동일한 요령으로 c10%를 구하여 산출할 수 있다.
본 발명의 하나의 실시형태에 있어서, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량의 증가분은, 5% BT를 기준으로 보면, 적어도 5g/L 레진이고, 바람직하게는 10g/L 레진 이상, 15g/L 레진 이상, 20g/L 레진 이상, 25g/L 레진 이상이다.
본 발명의 특정한 실시형태에 있어서, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량의 증가분은, 5% BT를 기준으로 보면, 접촉 시간 3.4분에 있어서, 적어도 5g/L 레진이고, 바람직하게는 10g/L 레진 이상, 15g/L 레진 이상, 20g/L 레진 이상, 25g/L 레진 이상이다.
본 발명의 하나의 실시형태에 있어서, 본 발명의 방법에 의하면, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량은 적어도, 5% BT를 기준으로 보면, 45g/L 레진 이상이고, 바람직하게는 50g/L 레진 이상, 55g/L 레진 이상, 60g/L 레진 이상이다.
본 발명의 특정한 실시형태에 있어서, 본 발명의 방법에 의하면, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량은 적어도, 5% BT를 기준으로 보면, 접촉 시간 3.4분에 있어서, 50g/L 레진 이상이고, 바람직하게는 51g/L 레진 이상, 52g/L 레진 이상, 53g/L 레진 이상, 54g/L 레진 이상, 55g/L 레진 이상이다.
본 발명의 하나의 실시형태에 있어서, Fc 영역 함유 폴리펩타이드는, Fc 영역과, 다른 단백질, 생리 활성 펩타이드 등이 결합한 것이어도 된다. 다른 단백질, 생리 활성 펩타이드로서는, 예를 들면 수용체, 접착 분자, 리간드(사이토카인, 케모카인 등), 효소를 들 수 있지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 예를 들면, 혈액 응고 인자여도 되고, 예를 들면 FIX, FIXa, FX 등을 들 수 있다.
본 발명의 하나의 실시형태에 있어서, Fc 영역 함유 폴리펩타이드는 이뮤노어드헤신이어도 된다.
본 발명의 다른 하나의 실시형태에 있어서, Fc 영역 함유 폴리펩타이드는 항체여도 된다. 본 발명에 있어서의 항체는, 원하는 항원과 결합하는 한 특별히 제한은 없고, 폴리클로날 항체여도 모노클로날 항체여도 되고, 균질한 항체를 안정되게 생산할 수 있는 점에서 모노클로날 항체가 바람직하다.
본 발명에서 사용되는 모노클로날 항체로서는, 인간, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 양, 낙타, 원숭이 등의 동물 유래의 모노클로날 항체뿐만 아니라, 키메라 항체, 인간화 항체(재구성(reshaped) 인간 항체라고도 함), 이중특이성 항체(bispecific 항체) 등 인위적으로 개변한 유전자 재조합형 항체도 포함된다. 또, 혈중 체류성이나 체내 동태의 개선을 목적으로 한 항체 분자의 물성의 개변(구체적으로는, 등전점(pI) 개변, Fc 수용체의 친화성 개변 등)을 행하기 위해서 항체의 정상 영역 등을 인위적으로 개변한 유전자 재조합형 항체도 포함된다.
또한, 본 발명에서 사용되는 항체의 면역 글로불린 클래스는 특별히 한정되는 것은 아니고, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등의 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM 등 어느 클래스여도 되지만, IgG가 바람직하다.
또, 본 발명에서 사용되는 항체에는, whole 항체뿐만 아니라, Fv, Fab, F(ab)2 등의 항체 단편이나, 항체의 가변 영역을 펩타이드 링커 등의 링커로 결합시킨 1가 또는 2가 이상의 1본쇄 Fv(scFv, sc(Fv)2나 scFv 다이머 등의 Diabody 등) 등의 저분자화 항체 등도 포함된다.
전술한 본 발명에서 사용되는 항체는 당업자에게 주지인 방법에 의해 제작할 수 있다.
모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마는, 기본적으로는 공지 기술을 사용하여, 이하와 같이 해서 제작할 수 있다. 즉, 원하는 항원이나 원하는 항원을 발현하는 세포를 감작 항원으로서 사용해서, 이것을 통상의 면역 방법에 따라 면역 하고, 얻어지는 면역 세포를 통상의 세포 융합법에 의해 공지의 친세포와 융합시키고, 통상의 스크리닝법에 의해, 모노클로날인 항체 산생 세포(하이브리도마)를 스크리닝하는 것에 의해 제작할 수 있다. 하이브리도마의 제작은, 예를 들어, 밀스테인 등의 방법(Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73:3-46) 등에 준하여 행할 수 있다.
아미노산 잔기의 개변은, 후술과 같이 폴리펩타이드를 코딩하는 DNA에 있어서 1 또는 복수의 염기를 개변하고, 당해 DNA를 숙주 세포에서 발현시키는 것에 의해 행할 수 있다. 당업자이면, 개변 후의 아미노산 잔기의 종류에 따라, 개변해야 할 염기의 수나 위치, 종류를 용이하게 결정할 수 있다.
본 발명에 있어서 개변이란, 치환, 결손, 부가, 삽입 중 어느 것, 또는 그들의 조합을 의미한다.
또한 본 발명에서 사용되는 항체는, 전술의 아미노산 서열의 개변에 더하여, 추가로 부가적인 개변을 포함할 수 있다. 부가적인 개변은, 예를 들어, 아미노산의 치환, 결손 및 수식 중 어느 것, 또는 그들의 조합으로부터 선택할 수 있다. 구체적으로는, 그 아미노산 서열에 다음과 같은 개변을 포함하는 폴리펩타이드는 모두 본 발명에 포함된다.
·이중특이성 항체의 2종류의 H쇄의 헤테로 회합률을 높이기 위한 아미노산의 개변
·제 1 항원 결합 활성을 갖는 폴리펩타이드와 제 2 항원 결합 활성을 갖거나 또는 항원 결합 활성을 갖지 않는 폴리펩타이드 사이의 다이설파이드 결합을 안정화시키기 위한 아미노산 개변
·항체의 혈장 중 체류성을 개선하기 위한 아미노산 개변
·산성 조건하에 있어서의 안정성 향상을 위한 개변
·헤테로지니어티 저감을 위한 개변
·탈아마이드화 반응 억제를 위한 개변
·2종류의 폴리펩타이드 사이에 등전점의 차이를 도입하기 위한 개변
·Fcγ 리셉터에 대한 결합성을 변화시키기 위한 개변
인간 항체의 취득 방법도 알려져 있다. 예를 들면, 인간 림프구를 in vitro에서 원하는 항원 또는 원하는 항원을 발현하는 세포로 감작하고, 감작 림프구를 인간 골수종 세포와 융합시켜, 항원에 대한 결합 활성을 갖는 원하는 인간 항체를 얻을 수도 있다. 또한, 인간 항체 유전자의 모든 레퍼토리를 갖는 트랜스제닉 동물을 항원으로 면역함으로써 원하는 인간 항체를 취득할 수 있다. 또, 인간 항체 라이브러리를 이용하여, 패닝에 의해 인간 항체를 취득하는 기술도 알려져 있다. 예를 들면, 인간 항체의 가변 영역을 1본쇄 항체(scFv)로서 파지 디스플레이법에 의해 파지의 표면에 발현시키고, 항원에 결합하는 파지를 선택하는 것에 의해, 인간 항체를 취득할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 항체에는, 이와 같은 인간 항체도 포함된다.
항체 유전자를 일단 단리하고, 적당한 숙주에 도입해서 항체를 제작하는 경우에는, 적당한 숙주와 발현 벡터의 조합을 사용할 수 있다. 진핵 세포를 숙주로서 사용하는 경우, 동물 세포, 식물 세포, 진균 세포를 이용할 수 있고, 동물 세포로서는, 포유류 세포, 예를 들면, CHO, COS, 골수종, BHK(baby hamster kidney), HeLa, Vero 등을 이용할 수 있다. 이들 세포에, 목적으로 하는 항체 유전자를 형질 전환에 의해 도입하고, 형질 전환된 세포를 in vitro에서 배양하는 것에 의해 항체가 얻어진다.
본 발명에서 사용되는 항체의 항원으로서는 특별히 한정되지 않고, 어떠한 항원이어도 된다. 항원의 예로서는, 예를 들면, 리간드(사이토카인, 케모카인 등), 수용체, 암 항원, MHC 항원, 분화 항원, 면역글로불린 및 면역글로불린을 일부에 포함하는 면역 복합체를 적합하게 들 수 있다. 예를 들면, 혈액 응고 인자여도 되고, 예를 들면 FIX, FIXa, FX 등을 들 수 있다.
발현 산물의 회수는, 폴리펩타이드가 배지에 분비되는 경우는, 배지를 회수한다. 폴리펩타이드가 세포 내에 산생되는 경우는, 그 세포를 우선 용해시키고, 그 후에 폴리펩타이드를 회수한다.
재조합 세포 배양물로부터 폴리펩타이드를 회수하여 정제하기 위해서는, 황산 암모늄 또는 에탄올 침전, 산 추출, 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 포스포셀룰로스 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 어피니티 크로마토그래피, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피 및 렉틴 크로마토그래피를 포함한 공지의 방법을 이용할 수 있다. 본 발명에 있어서는 프로테인 A 어피니티 크로마토그래피가 바람직하다. 한편, 본 명세서에 있어서, 컬럼을 이용한 정제 방법, 컬럼을 이용한 분리 방법 및 크로마토그래피는 같은 뜻으로 이용되는 경우가 있다. 프로테인 A 레진을 이용한 컬럼으로서는, POROS A(Applied Biosystems제), rProtein A Sepharose F. F.(GE제), ProSep vA(Millipore제) 등을 들 수 있지만 이들로 한정되지 않는다. 또한, 프로테인 A 어피니티 크로마토그래피에는, 원형(intact) 프로테인 A로부터 아미노산 서열 등을 개변한 리간드를 결합시킨 레진(수지)을 이용할 수도 있다. 이와 같은 개변 프로테인 A 수지를 이용한 경우도, 본 발명의 아미노산 개변에 의해, 그 결합력에 차가 생겨, 목적의 폴리펩타이드 다량체를 분리·정제하는 것이 가능하다. 개변 프로테인 A를 결합시킨 레진으로서는, 예를 들면, mabSelect SuRE(GE 헬스케어제), Hitrap MabSelect Sure(GE 헬스케어제)를 들 수 있지만 이것으로 한정되지 않는다. 한편, 본 명세서에 있어서, 프로테인 A 레진이 충전된 컬럼, 프로테인 A 레진을 이용한 컬럼, 프로테인 A 레진 컬럼 및 프로테인 A 컬럼은 같은 뜻이다. 또한, 프로테인 A 레진을 이용한 정제 방법, 프로테인 A 컬럼을 이용한 정제 방법도 같은 뜻으로 이용되는 경우가 있다.
본 발명에 있어서의 하나의 실시형태는, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량을 증가시키는 방법을 이용한 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 정제 방법이다. 보다 구체적으로는 하나의 실시형태는 항체의 정제 방법이고, 또 다른 하나의 실시형태는 이중특이성 항체의 정제 방법이다.
본 발명에 있어서의 다른 하나의 실시형태는, 상기 정제 방법으로 정제된 Fc 영역 함유 폴리펩타이드이다. 보다 구체적으로는 하나의 실시형태는 상기 정제 방법으로 정제된 항체이고, 또 다른 하나의 실시형태는 상기 정제 방법으로 정제된 이중특이성 항체이다.
또, 본 발명에 있어서의 다른 하나의 실시형태는, 5% BT를 기준으로 보면, 45g/L 레진 이상인, Fc 영역 함유 폴리펩타이드가 결합한 프로테인 A 레진 및 당해 레진을 포함하는 컬럼이다. Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 당해 레진 및 그것을 포함하는 컬럼에 대한 동적 결합 용량은, 5% BT를 기준으로 보면, 바람직하게는 50g/L 이상, 55g/L 이상, 60g/L 이상, 65g/L 이상이다.
또한, 본 발명의 특정한 실시형태는, 5% BT를 기준으로 보면, 접촉 시간 3.4분에 있어서, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량이 50g/L 레진 이상인, Fc 영역 함유 폴리펩타이드가 결합한 프로테인 A 레진 및 당해 레진을 포함하는 컬럼이다. Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 당해 레진 및 그것을 포함하는 컬럼에 대한 동적 결합 용량은 5% BT를 기준으로 보면, 접촉 시간 3.4분에 있어서, 바람직하게는 51g/L 레진 이상, 52g/L 레진 이상, 53g/L 레진 이상, 54g/L 레진 이상, 55g/L 레진 이상이다.
본 발명에 있어서의 하나의 실시형태는, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량이 증가한 Fc 영역 함유 폴리펩타이드이다.
보다 구체적으로는 하나의 실시형태에 있어서 Fc 영역 함유 폴리펩타이드는 항체이고, 또 다른 하나의 실시형태에 있어서 Fc 영역 함유 폴리펩타이드는 이중특이성 항체이다.
본 발명에 있어서의 하나의 실시형태에 있어서, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량의 증가분은, 5% BT를 기준으로 보면, 적어도 5g/L 레진이고, 바람직하게는 10g/L 레진 이상, 15g/L 레진 이상, 20g/L 레진 이상, 25g/L 레진 이상이다.
본 발명의 특정한 실시형태에 있어서, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량의 증가분은, 5% BT를 기준으로 보면, 접촉 시간 3.4분에 있어서, 적어도 5g/L 레진이고, 바람직하게는 10g/L 레진 이상, 15g/L 레진 이상, 20g/L 레진 이상, 25g/L 레진 이상이다.
프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량이 증가한 Fc 영역 함유 폴리펩타이드는, 당해 Fc 영역에 포함되는 제 1 폴리펩타이드쇄와 제 2 폴리펩타이드쇄는 프로테인 A 레진에 대한 결합력이 상이한 것이 바람직하고, 예를 들면, 제 1 폴리펩타이드쇄로서 프로테인 A 레진에 결합하는 폴리펩타이드쇄를 이용하는 경우, 제 2 폴리펩타이드쇄로서는 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해, 프로테인 A 레진에 약하게 결합하거나, 또는 결합하지 않는 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있다. 그와 같은 제 1 폴리펩타이드쇄로서는 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 CH3을 포함하는 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있고, 제 2 폴리펩타이드쇄로서는 IgG3의 CH3을 포함하는 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있다. 이때, IgG1, IG2, IgG3 및 IgG4는 천연형이어도 되고, 본 발명의 목적을 달성할 수 있는 범위에서 변이를 포함하고 있어도 된다. 또한, 그와 같은 제 1 폴리펩타이드쇄로서는 EU 넘버링 435위가 His(H)인 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있고, 제 2 폴리펩타이드쇄로서는 EU 넘버링 435위가 Arg(R)인 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있다. 또한, 그와 같은 제 1 폴리펩타이드쇄로서는 EU 넘버링 435위가 His(H), 436위가 Tyr(Y)인 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있고, 제 2 폴리펩타이드쇄로서는 EU 넘버링 435위가 Arg(R), 436위가 Phe(F)인 폴리펩타이드쇄를 이용할 수 있다. 한편, EU 넘버링 435위 또는 436위 이외의 포지션은 천연형 IgG와 동일해도 되고, 또한 천연형 IgG와는 상이해도 된다.
본 발명에 있어서의 하나의 실시형태는, 이하의 공정을 포함하는, 프로테인 A 레진을 이용하여 Fc 영역 함유 폴리펩타이드를 제조하는 방법이다:
(a) 해당 레진에 대한 결합력이 서로 상이한 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄와 제 2 폴리펩타이드쇄를 준비하는 공정;
(b) 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 공정(a)의 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량을, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 해당 레진에 대한 결합력이 실질적으로 동일한 2본의 폴리펩타이드쇄를 포함하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량과 비교하는 공정,
(c) Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드 및 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드를 포함하는 시료를 해당 레진에 접촉시키는 공정; 및
(d) 해당 레진에 결합한, Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드 및 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드의 헤테로체를 함유하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드를 회수하는 공정.
상기 공정(a)는 상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 결합하는 제 1 폴리펩타이드쇄를 준비하고, 상기 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 (상기 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해 상기 레진에 대한) 결합이 약한 제 2 폴리펩타이드쇄를 준비하는 공정이어도 된다. 또한 상기 공정(a)는 정제 대상인 상기 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 Fc 영역을, 해당 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지만, 해당 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 (상기 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해 상기 레진에 대한) 결합이 약한 Fc 영역이 되도록 개변하는 공정이어도 된다. 당해 개변은, 상기와 같은 특징을 갖는 Fc 영역을 얻기 위한 개변이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 제 1 폴리펩타이드쇄가 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 CH3을 포함하는 폴리펩타이드쇄가 되도록 하는 개변, 및 제 2 폴리펩타이드쇄가 IgG3의 CH3을 포함하는 폴리펩타이드쇄가 되도록 하는 개변을 들 수 있다. 그와 같은 개변으로서는, 예를 들면, 제 1 폴리펩타이드쇄의 EU 넘버링 435위가 His(H)이고, 또한 제 2 폴리펩타이드쇄의 EU 넘버링 435위가 Arg(R)이도록 하는 개변을 들 수 있다. 또한, 다른 개변으로서, 제 1 폴리펩타이드쇄의 EU 넘버링 435위가 His(H), 436위가 Tyr(Y)이고, 또한 제 2 폴리펩타이드쇄의 EU 넘버링 435위가 Arg(R), 436위가 Phe(F)이도록 하는 개변을 들 수 있다. 한편, EU 넘버링 435위 또는 436위 이외의 포지션은 천연형 IgG와 동일해도 되고, 또한 천연형 IgG와는 상이해도 된다.
상기 공정(b)에 있어서, 2본의 폴리펩타이드쇄는 해당 레진에 대한 결합력이 실질적으로 동일하면 어떠한 폴리펩타이드쇄여도 되고, 2본의 폴리펩타이드쇄끼리의 상동성의 정도는 높아도 낮아도 된다. 예를 들면 「해당 레진에 대한 결합력이 실질적으로 동일한 2본의 폴리펩타이드쇄를 포함하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드」는 2본의 상기 제 1 폴리펩타이드쇄를 포함하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드, 또는 2본의 상기 제 2 폴리펩타이드쇄를 포함하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드이다. 또한, 프로테인 A 레진에 대한 결합력이 서로 실질적으로 동일한 2본의 폴리펩타이드쇄란, 예를 들면, 2본의 폴리펩타이드쇄가 모두 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 CH3 중 어느 것을 포함하는 폴리펩타이드쇄, 2본의 폴리펩타이드쇄가 모두 IgG3의 CH3을 포함하는 폴리펩타이드쇄, 2본의 폴리펩타이드쇄의 EU 넘버링 435위가 모두 His(H)이거나, 또는 모두 Arg(R)인 폴리펩타이드쇄, 2본의 폴리펩타이드쇄 모두 EU 넘버링 435위가 His(H), 436위가 Tyr(Y)인 폴리펩타이드쇄, 2본의 폴리펩타이드쇄 모두 EU 넘버링 435위가 Arg(R), 436위가 Phe(F)인 폴리펩타이드쇄를 들 수 있다.
「실질적으로 동일」이란, 본 발명의 목적을 달성하는 범위 내이면, 반드시 완전히 동일할 필요는 없고, 또한 「동일」한 경우를 포함하는 의미이다.
본 발명의 하나의 실시형태에 있어서, 상기 공정(b)에 있어서 「비교한다」란, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 공정(a)의 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량이, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 해당 레진에 대한 결합력이 실질적으로 동일한 2본의 폴리펩타이드쇄를 포함하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량보다도 「높은 것을 확인」하는 공정이어도 된다.
한편, 동적 결합 용량을 비교 또는 확인함으로써, 항체 제조 시에 프로테인 A 레진 컬럼에 첨가할 수 있는 최대 항체량을 알 수 있어, 효율적인 항체 제조가 가능해진다.
상기 공정(c)에 기재된 시료는, 상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드의 H쇄 및 상기 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드의 H쇄의 양방에 결합능을 줄 수 있는 공통의 L쇄 폴리펩타이드를 포함해도 되고, 2개의 상이한 L쇄 폴리펩타이드를 포함해도 된다.
본 발명의 하나의 실시형태에 있어서, 상기 Fc 영역 함유 폴리펩타이드를 정제하는 방법에 있어서, Fc 영역 함유 폴리펩타이드는 항체이고, 또 다른 하나의 실시형태에 있어서 Fc 영역 함유 폴리펩타이드는 이중특이성 항체이다.
한편, 상기 공정(a)∼(d)는 반드시 이 순서일 필요는 없고, 또한 각 공정이 복수회 포함되어 있어도 된다.
본 발명의 하나의 실시형태는, 상기 (a)∼(d)의 공정을 포함하는, 프로테인 A 레진을 이용하여 Fc 영역 함유 폴리펩타이드를 정제하는 방법이다.
본 명세서에 있어서 명시적으로 인용되는 모든 특허 및 참고문헌의 내용은 모두 본 명세서에 참조로서 원용된다.
이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더 구체적으로 설명한다. 단, 본 발명의 기술적 범위는 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.
실시예
실시예 1 항체 유전자 발현 벡터의 제작과 각 항체의 발현
본 실시예에서는, WO2012/067176에 기재된 FVIII 기능 대체 활성을 갖는 항FIXa/FX 이중특이성 항체(H1쇄/H2쇄/L쇄: 서열번호 1/2/3)를 이용했다(이하, 「BiAb」라고 하고, 이른바 헤테로체이다). 한편, 당해 BiAb는 3종류의 4본의 쇄로 이루어지고, 2종류의 H1쇄 및 H2쇄를 각각 1본, 1종류의 공통 L쇄 2본으로 이루어진다. 당해 항체는 WO2012/067176에 기재된 방법으로 취득했다. 항체 유전자를 동물 세포 발현 벡터에 짜 넣고, 그것을 CHO 세포에 트랜스펙션함으로써, 이중특이성 항체를 발현시켰다. 또한, 상기 L쇄 2본과 H1쇄 2본으로 이루어지는 Q homo, 상기 L쇄 2본과 H2쇄 2본으로 이루어지는 J homo를 상기의 방법으로 취득했다.
본 항체는 IgG4형이고, H1쇄의 Fc 영역에 있어서의 EU 넘버링 435번째의 His는 Arg로 치환되어 있다. 한편, 이 치환은 Fc 영역의 프로테인 A 레진에 대한 결합력을 감약 또는 상실되게 한다.
실시예 2 동적 결합 용량(DBC)의 평가 방법
일반적으로 DBC의 검증에는, UV 검출기를 연결한 정제 장치를 이용한 UV 모니터링에 의해, 계속 부하된 단백질이 컬럼으로부터 누출되는 양상을 브레이크스루 커브(이하 BTC)로서 크로마토그램에 그리는 것에 의해 행해진다. 일례로서 도 1에 BiAb를 이용했을 때의 BTC 크로마토그램을 나타냈다.
금회에는, 각각의 항체 분자 및 그의 혼합액에 대해서, 5% 브레이크스루 포인트(BT point)의 부하량을 비교함으로써 DBC를 평가했다.
DBC의 계산에는 이하의 장치 등을 이용했다.
·LC 장치; GE 헬스케어사제 AKTA AVANT25
·소프트웨어; GE 헬스케어사제 Unicorn version 6.1
·Protein A 수지; GE 헬스케어사제 Mab Select SuRe (Cat No. 17-5438-05)
또는 Hitrap Mab Select SuRe (Cat No. 11-0034-93)
·사용 완충액;
평형화/전세정...20mmol/L Na-phosphate, pH 7.5
용출...50mmol/L Acetic acid
재생...0.1mol/L NaOH
DBC의 계산 방법은 이하와 같이 행했다.
상기 사용 기기, 소프트웨어 및 수지를 이용하여, 이하의 순서로 크로마토그래피 조작에 의해 DBC를 산출했다.
(1) 부하 분획(IgG 농도 Pg/L로 함)을 일단 컬럼을 통하지 않고서 LC 장치에 흘려보내고, 100% 누출(=100% BT) 시의 OD280nm의 값을 확인했다. 이 값을 a로 했다.
(2) a에 0.05를 곱한 값을 5% BT 시의 OD280nm로 정의했다. 이 값을 b5%로 했다.
(3) 부하 분획이 평형화된 일정량의 수지(r L로 함)에 계속 흘려보내고, OD280nm의 값이 b5%가 되었을 때의 부하 분획의 용량을 크로마토그램으로부터 판독했다. 이 값을 c5% L로 했다.
(4) 계산식 (P×c5%)/r로 얻어지는 값을 5% BT 시의 동적 결합 용량, DBC5%로서 산출했다.
DBC5% = (P×c5%)/r (단위; g/L resin)
DBC10%를 구할 때는, 동일한 요령으로 c10%를 구하여 산출했다.
실시예 3 각 항체 분자 단독의 DBC
Q homo, J homo 및 BiAb 각각 단독의 DBC를 이하의 조건에서 검증했다.
·Column: Hitrap MabSelect Sure(이하, MSS라고 함)(GE 헬스케어),
0.7×2.5cm
·Load material: 각 항체 정제 표준품을 이용하여 실제 부하 CM의 IgG 농도,
pH, 도전율을 모방한 것.
IgG 농도 약 2g/L, pH 7.5, Conductivity 1.2 S/m
J homo 약 80%, Q homo 약 85%, BiAb 약 95% 순도의 것
을 사용
·Contact time: 3.4min(43.75cm/h)
그 결과를 표 1에 나타냈다.
Figure pct00001
이 결과는 BiAb의 DBC가 양 homo에 대해서 유의하게 높은 것을 나타내는 것이었다.
실시예 4 (BiAb의 DBC에 대한 pH, 접촉 시간의 검증)
다음으로, BiAb 단독으로, 부하 용액의 pH, 및 수지에 대한 접촉 시간을 변화시켰을 때의 DBC를 확인하여, 양자의 파라미터의 영향을 검증했다.
조건을 이하에 나타냈다.
·Column: MabSelect Sure(GE 헬스케어), 1.0×20cm
·Load material: BiAb 정제 표품을 희석 조제하여 CM을 모방한 것(BiAb 95%)
2g/L, pH 6.5-8.0(검증), Conductivity 1.2 S/m
·Contact time: 3-8min(검증)
그 결과를 표 2에 나타냈다.
Figure pct00002
실시예 5 (BiAb와 Homo 혼합액에 있어서의 DBC )
실제의 프로테인 A 수지에 부하하는 배양 상청(이하 HCCF)은 BiAb와 양 homo가 혼재되어 있다. 즉, 목적 물질인 BiAb를 회수한다는 시점에서는, 양 homo는 BiAb의 경합 물질이라고 파악된다. 따라서, 실제조를 고려한 경우, 양 homo가 HCCF 중에 어느 정도 존재하는 상황에서의 BiAb의 DBC를 검증하는 것은 의의가 있다. 이것을 검증하기 위해, 이하의 조건에서 시험을 행했다.
·Column: Hitrap MabSelect Sure(MSS)(GE 헬스케어), 0.7×2.5cm
·Load Material: BiAb/Homo 정제 표품을 혼합하여 CM을 모방한 것
2g/L, pH 7.5, Cond 1.2 S/m
Control BiAb(95%) J homo:BiAb:Q homo = 5:95:0
Mimic A J homo:BiAb:Q homo = 10:83:7
Mimic B J homo:BiAb:Q homo = 10:68:22
·Contact time: 3.4min(43.75cm/h)
·BTC의 Load를 분획하고, Analytical CIEC로 각 BT Points의 BiAb/Homo비를 확인
Analytical CIEC의 조건은 이하와 같이 행했다.
·HPLC 장치; Waters사제 Alliance 2695/2487
·소프트웨어; Waters사제 Empower3
·CIEC 컬럼; Thermo scientific사제 ProPac WCX-10, Product No. 054993
·컬럼 온도; 30degC
·주입량; 30μg/shot
·사용 완충액;
이동상 A...9.6mmol/L Tris, 6.0mmol/L piperazine, 11.0mmol/L
imidazole, pH 6.0
이동상 B...9.6mmol/L Tris, 6.0mmol/L piperazine, 11.0mmol/L
imidazole, 150mmol/L NaCl, pH 10.1
·그레이디언트 조건;
시간(min) 유속(mL/min) %A %B
0.0 1.0 100 0
1.0 1.0 100 0
20.0 1.0 0 100
35.0 1.0 0 100
그 결과를 표 3에 나타냈다.
Figure pct00003
이상의 결과로부터, 이하를 알 수 있었다.
·DBC; J homo ≒ Q homo < BiAb
·MSS에 대한 친화력; Q homo < BiAb < J homo
·BiAb DBC에 있어서의 파라미터의 영향;
pH...6.5-8.0의 범위에 있어서, 낮을수록 DBC는 높은 경향이 있지만, 임팩트는 작다.
접촉 시간...3-8분의 범위에 있어서, 길수록 DBC는 높아지는 경향이 있지만, 3분에서조차 Q homo 및 J homo의 DBC를 하회하는 경우는 없다.
MSS에 대한 친화력에 관해서는, 본 발명의 구성을 반영한 결과이고, 그것은 실시예 5에서의 리크의 순서로도 나타나고 있다.
한편, DBC에 대해서는, MSS 수지에 대한 친화력의 차이와 리간드의 유효 이용성이 작용하여 이와 같은 결과가 되었다고 추측하고 있다. 즉, J homo는 MSS 리간드에 강하게 결합하는 서열을 2개소 가지고 있기 때문에, 2개소에서 MSS 수지에 결합하고 있다. 즉, J homo가 공간적으로 차지하는 범위 내에 존재하는 MSS 리간드는 이용할 수 없게 된다. 한편, BiAb는 MSS에 강하게 결합하는 서열을 1개소밖에 가지지 않기 때문에, 공간적인 자유도가 J homo보다 높아, 보다 많은 MSS 리간드를 유효 활용해서, 높은 DBC를 실현할 수 있었다고 생각된다. Q homo의 DBC가 낮은 것은 단순히 분자 전체적으로의 결합력이 낮기 때문이라고 생각된다. 또한, Q homo 및 J homo는 BiAb의 MSS에 대한 결합을 경합 저해하고 있다고 생각된다.
SEQUENCE LISTING <110> CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA <120> METHOD FOR PROMOTING EFFICIENCY OF PURIFICATION OF FC REGION-CONTAINING POLYPEPTIDE <130> C1-A1520P <150> JP 2015-255726 <151> 2015-12-28 <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr 20 25 30 Asp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Pro Ser Gly Gln Ser Thr Tyr Tyr Arg Arg Glu Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Thr Gly Arg Glu Tyr Gly Gly Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200 205 Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys 210 215 220 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Gln Lys Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 <210> 2 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn 20 25 30 Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Thr Arg Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Glu Glu Phe 50 55 60 Gln Asp Arg Val Ile Met Thr Val Asp Lys Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr His Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Lys Ser Tyr Gly Tyr Tyr Leu Asp Glu Trp Gly Glu Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Glu Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 <210> 3 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> An artificially synthesized peptide sequence <400> 3 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asn Ile Glu Arg Gln 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Glu Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gln Ala Ser Arg Lys Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asp Pro Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (17)

  1. 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량을 증가시키는 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄 및 제 2 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 대한 결합력이 서로 상이한 제 1 폴리펩타이드쇄 및 제 2 폴리펩타이드쇄를 준비하는 공정을 포함하는 방법.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 결합하는 제 1 폴리펩타이드쇄를 준비하고, 상기 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 상기 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해 상기 레진에 대한 결합이 약한 제 2 폴리펩타이드쇄를 준비하는 공정을 포함하는 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 Fc 영역을, 해당 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지만, 해당 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 상기 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해 상기 레진에 대한 결합이 약한 Fc 영역이 되도록 개변하는 공정을 포함하는 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄는 IgG1, IgG2 또는 IgG4의 CH3을 포함하고, 상기 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄는 IgG3의 CH3을 포함하는 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄의 EU 넘버링 435번째의 아미노산은 His이고, 제 2 폴리펩타이드쇄의 EU 넘버링 435번째 아미노산은 Arg인 방법.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 결합 용량의 증가가 5g/L 레진 이상인 방법.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 증가 후의 동적 결합 용량이 45g/L 레진 이상인 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 Fc 영역 함유 폴리펩타이드가 항체인 방법.
  10. 제 9 항에 있어서,
    상기 항체가 이중특이성 항체인 방법.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 기재된 방법을 이용한 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 정제 방법.
  12. 제 11 항에 기재된 방법으로 정제된 Fc 영역 함유 폴리펩타이드.
  13. 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량이 45g/L 레진 이상인, Fc 영역 함유 폴리펩타이드가 결합한 프로테인 A 레진.
  14. 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량이 증가한 Fc 영역 함유 폴리펩타이드.
  15. 이하의 공정을 포함하는, 프로테인 A 레진을 이용하여 Fc 영역 함유 폴리펩타이드를 제조하는 방법:
    (a) 해당 레진에 대한 결합력이 서로 상이한 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄와 제 2 폴리펩타이드쇄를 준비하는 공정,
    (b) 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 공정(a)의 해당 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량을, 프로테인 A 컬럼 크로마토그래피에 있어서의, 해당 레진에 대한 결합력이 실질적으로 동일한 2본의 폴리펩타이드쇄를 포함하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 프로테인 A 레진에 대한 동적 결합 용량과 비교하는 공정,
    (c) Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드 및 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드를 포함하는 시료를 해당 레진에 접촉시키는 공정; 및
    (d) 해당 레진에 결합한, Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드 및 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄를 함유하는 폴리펩타이드의 헤테로체를 함유하는 Fc 영역 함유 폴리펩타이드를 회수하는 공정.
  16. 제 15 항에 있어서,
    상기 공정(a)가, 상기 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 결합하는 제 1 폴리펩타이드쇄를 준비하고, 상기 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄로서 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 상기 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해 상기 레진에 대한 결합이 약한 제 2 폴리펩타이드쇄를 준비하는 공정인 방법.
  17. 제 15 항 또는 제 16 항에 있어서,
    상기 공정(a)가, 정제 대상인 상기 Fc 영역 함유 폴리펩타이드의 Fc 영역을, 해당 Fc 영역의 제 1 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지만, 해당 Fc 영역의 제 2 폴리펩타이드쇄는 상기 레진에 결합하지 않거나 또는 상기 제 1 폴리펩타이드쇄에 비해 상기 레진에 대한 결합이 약한 Fc 영역이 되도록 개변하는 공정인 방법.
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10011858B2 (en) 2005-03-31 2018-07-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
ES2654040T3 (es) 2006-03-31 2018-02-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Método de modificación de anticuerpos para la purificación de anticuerpos biespecíficos
DK3056568T3 (da) 2006-03-31 2021-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåder til kontrollering af antistoffers blodfarmakokinetik
CL2008002886A1 (es) 2007-09-26 2009-12-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Region constante de un anticuerpo humano; anticuerpo anti-receptor de interleucina-6 (il-6) y composicion farmaceutica que la comprende.
CN106519025B (zh) 2007-09-26 2021-04-23 中外制药株式会社 利用cdr的氨基酸取代来改变抗体等电点的方法
JP5787446B2 (ja) 2009-03-19 2015-09-30 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
US10435458B2 (en) 2010-03-04 2019-10-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variants with reduced Fcgammar binding
TR201802772T4 (tr) 2010-11-17 2018-03-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Kan pıhtılaşma faktörü VIII in işlevi için alternatif işleve sahip multi-spesifik antijen bağlayıcı molekül.
AR084053A1 (es) 2010-11-30 2013-04-17 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agente terapeutico que induce citotoxicidad
BR112016006197B1 (pt) 2013-09-27 2023-04-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Método para produzir um anticorpo biespecífico de polipeptídeos
EP3279216A4 (en) 2015-04-01 2019-06-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha PROCESS FOR PREPARING POLYPEPTIDE HETERO OLIGOMER
WO2017115773A1 (ja) 2015-12-28 2017-07-06 中外製薬株式会社 Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100331527A1 (en) 2009-06-26 2010-12-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Readily Isolated Bispecific Antibodies with Native Immunoglobulin Format
US20130018174A1 (en) 2009-12-25 2013-01-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Polypeptide modification method for purifying polypeptide multimers

Family Cites Families (349)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE370449B (ko) 1970-08-29 1974-10-14 Philips Nv
JPS5334319B2 (ko) 1971-12-28 1978-09-20
JPS5717624B2 (ko) 1974-04-17 1982-04-12
US4208479A (en) 1977-07-14 1980-06-17 Syva Company Label modified immunoassays
US4474893A (en) 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
US4444878A (en) 1981-12-21 1984-04-24 Boston Biomedical Research Institute, Inc. Bispecific antibody determinants
JPH06104071B2 (ja) 1986-08-24 1994-12-21 財団法人化学及血清療法研究所 第▲ｉｘ▼因子コンホメ−シヨン特異性モノクロ−ナル抗体
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US5004697A (en) 1987-08-17 1991-04-02 Univ. Of Ca Cationized antibodies for delivery through the blood-brain barrier
US5670373A (en) 1988-01-22 1997-09-23 Kishimoto; Tadamitsu Antibody to human interleukin-6 receptor
US5322678A (en) 1988-02-17 1994-06-21 Neorx Corporation Alteration of pharmacokinetics of proteins by charge modification
US6010902A (en) 1988-04-04 2000-01-04 Bristol-Meyers Squibb Company Antibody heteroconjugates and bispecific antibodies for use in regulation of lymphocyte activity
US5126250A (en) 1988-09-28 1992-06-30 Eli Lilly And Company Method for the reduction of heterogeneity of monoclonal antibodies
IL89491A0 (en) 1988-11-17 1989-09-10 Hybritech Inc Bifunctional chimeric antibodies
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
JPH0341033A (ja) 1989-07-07 1991-02-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 安定なモチリン類含有製剤
GB8916400D0 (en) 1989-07-18 1989-09-06 Dynal As Modified igg3
JP3032287B2 (ja) 1989-12-11 2000-04-10 イムノメデイツクス・インコーポレイテツド 診断薬または治療薬の抗体ターゲティング
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
TW212184B (ko) 1990-04-02 1993-09-01 Takeda Pharm Industry Co Ltd
JPH05184383A (ja) 1990-06-19 1993-07-27 Dainabotsuto Kk 二重特異性抗体
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
JPH05199894A (ja) 1990-08-20 1993-08-10 Takeda Chem Ind Ltd 二重特異性抗体および抗体含有薬剤
ES2134212T3 (es) 1991-04-25 1999-10-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo humano reconstituido contra el receptor de la interleuquina 6 humano.
JPH05304992A (ja) 1991-06-20 1993-11-19 Takeda Chem Ind Ltd ハイブリッド・モノクローナル抗体および抗体含有薬剤
US5637481A (en) 1993-02-01 1997-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell
US6136310A (en) 1991-07-25 2000-10-24 Idec Pharmaceuticals Corporation Recombinant anti-CD4 antibodies for human therapy
JPH07501451A (ja) 1991-11-25 1995-02-16 エンゾン・インコーポレイテッド 多価抗原結合タンパク質
US6027725A (en) 1991-11-25 2000-02-22 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
US5667988A (en) 1992-01-27 1997-09-16 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
JPH05203652A (ja) 1992-01-28 1993-08-10 Fuji Photo Film Co Ltd 抗体酵素免疫分析法
JPH05213775A (ja) 1992-02-05 1993-08-24 Otsuka Pharmaceut Co Ltd Ｂｆａ抗体
US6749853B1 (en) 1992-03-05 2004-06-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Combined methods and compositions for coagulation and tumor treatment
GB9206422D0 (en) 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
US6129914A (en) 1992-03-27 2000-10-10 Protein Design Labs, Inc. Bispecific antibody effective to treat B-cell lymphoma and cell line
US5744446A (en) 1992-04-07 1998-04-28 Emory University Hybrid human/animal factor VIII
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
ZA936260B (en) 1992-09-09 1994-03-18 Smithkline Beecham Corp Novel antibodies for conferring passive immunity against infection by a pathogen in man
US5837821A (en) 1992-11-04 1998-11-17 City Of Hope Antibody construct
JP3720353B2 (ja) 1992-12-04 2005-11-24 メディカル リサーチ カウンシル 多価および多重特異性の結合タンパク質、それらの製造および使用
ATE187494T1 (de) 1992-12-11 1999-12-15 Dow Chemical Co Multivalente einkettige antikörper
EP0660937A1 (en) 1993-07-01 1995-07-05 Dade International Inc. Process for the preparation of factor x depleted plasma
UA40577C2 (uk) 1993-08-02 2001-08-15 Мерк Патент Гмбх Біспецифічна молекула, що використовується для лізису пухлинних клітин, спосіб її одержання, моноклональне антитіло (варіанти), фармацевтичний препарат, фармацевтичний набір (варіанти), спосіб видалення пухлинних клітин
IL107742A0 (en) 1993-11-24 1994-02-27 Yeda Res & Dev Chemically-modified binding proteins
US5945311A (en) 1994-06-03 1999-08-31 GSF--Forschungszentrumfur Umweltund Gesundheit Method for producing heterologous bi-specific antibodies
DE4419399C1 (de) 1994-06-03 1995-03-09 Gsf Forschungszentrum Umwelt Verfahren zur Herstellung von heterologen bispezifischen Antikörpern
US8017121B2 (en) 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
HU220347B (hu) 1994-07-11 2001-12-28 Board Of Regents The University Of Texas System Készítmény az érrendszer specifikus koagulálásához
ATE306930T1 (de) 1994-08-12 2005-11-15 Immunomedics Inc Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
US6451523B1 (en) 1994-09-14 2002-09-17 Interneuron Pharmaceuticals, Inc. Detection of a leptin receptor variant and methods for regulating obesity
US6309636B1 (en) 1995-09-14 2001-10-30 Cancer Research Institute Of Contra Costa Recombinant peptides derived from the Mc3 anti-BA46 antibody, methods of use thereof, and methods of humanizing antibody peptides
EP2077120A3 (en) 1994-10-07 2009-07-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Rheumatoid arthritis remedy containing il-6 antagonist as active ingredient
CZ298790B6 (cs) 1994-10-21 2008-01-30 Kishimoto@Tadamitsu Farmaceutický prípravek pro prevenci nebo lécení kachexie
AU4289496A (en) 1994-12-02 1996-06-19 Chiron Corporation Method of promoting an immune response with a bispecific antibody
US6485943B2 (en) 1995-01-17 2002-11-26 The University Of Chicago Method for altering antibody light chain interactions
ES2152514T3 (es) 1995-02-28 2001-02-01 Procter & Gamble Preparacion de productos de bebidas no carbonatadas que tienen una estabilidad microbiana superior.
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
WO1996034892A1 (en) 1995-05-03 1996-11-07 Bioenhancements Ltd. Bispecific antibodies in which the binding capability is reversibly inhibited by a photocleavable moiety
JP3946256B2 (ja) 1995-09-11 2007-07-18 協和醗酵工業株式会社 ヒトインターロイキン５受容体α鎖に対する抗体
IL125073A0 (en) 1996-01-08 1999-01-26 Genentech Inc Wsx receptor and ligands
MA24512A1 (fr) 1996-01-17 1998-12-31 Univ Vermont And State Agrienl Procede pour la preparation d'agents anticoagulants utiles dans le traitement de la thrombose
FR2745008A1 (fr) 1996-02-20 1997-08-22 Ass Pour Le Dev De La Rech En Recepteur nucleaire de glucocorticoides modifie, fragments d'adn codant pour ledit recepteur et procedes dans lesquels ils sont mis en oeuvre
US20020147326A1 (en) 1996-06-14 2002-10-10 Smithkline Beecham Corporation Hexameric fusion proteins and uses therefor
CA2259163C (en) 1996-07-19 2004-07-06 Amgen Inc. Nt-3 and bdnf analogs having improved circulating life and/or absorption
JPH10165184A (ja) 1996-12-16 1998-06-23 Tosoh Corp 抗体、遺伝子及びキメラ抗体の製法
US5990286A (en) 1996-12-18 1999-11-23 Techniclone, Inc. Antibodies with reduced net positive charge
US6323000B2 (en) 1996-12-20 2001-11-27 Clark A. Briggs Variant human α7 acetylcholine receptor subunit, and methods of production and uses thereof
ATE383430T1 (de) 1997-03-20 2008-01-15 Us Gov Health & Human Serv Rekombinante antikörper und immunkonjugate gezielt auf cd22-tragende zellen und tumoren
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6183744B1 (en) 1997-03-24 2001-02-06 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6884879B1 (en) 1997-04-07 2005-04-26 Genentech, Inc. Anti-VEGF antibodies
US20070059302A1 (en) 1997-04-07 2007-03-15 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US20030207346A1 (en) 1997-05-02 2003-11-06 William R. Arathoon Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
DE69830901T2 (de) 1997-05-02 2006-05-24 Genentech Inc., San Francisco ein verfahren zur herstellung multispezifischer antikörper die heteromultimere und gemeinsame komponenten besitzen
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
WO2001036486A2 (en) 1999-11-18 2001-05-25 Oxford Biomedica (Uk) Limited Scfv antibodies against disease associated molecules
DE19725586C2 (de) 1997-06-17 1999-06-24 Gsf Forschungszentrum Umwelt Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper
US6368596B1 (en) 1997-07-08 2002-04-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for homoconjugates of antibodies which induce growth arrest or apoptosis of tumor cells
US5980893A (en) 1997-07-17 1999-11-09 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Agonist murine monoclonal antibody as a stimulant for megakaryocytopoiesis
US6207805B1 (en) 1997-07-18 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Prostate cell surface antigen-specific antibodies
US20020187150A1 (en) 1997-08-15 2002-12-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient
US6342220B1 (en) 1997-08-25 2002-01-29 Genentech, Inc. Agonist antibodies
RU2221809C2 (ru) 1997-10-03 2004-01-20 Тугаи Сейяку Кабусики Кайся Способ получения природного гуманизированного антитела
CA2324115C (en) 1998-03-17 2008-12-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A preventive or therapeutic agent for inflammatory bowel disease comprising il-6 antagonist as an active ingredient
SK14812000A3 (sk) 1998-04-03 2001-08-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chimérny reťazec protilátky, chimérna protilátka, v oblasť, humanizovaný reťazec protilátky, humanizovaná protilátka, dna, expresný vektor, hostiteľ, spôsob prípravy a liečivo
DE19819846B4 (de) 1998-05-05 2016-11-24 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Multivalente Antikörper-Konstrukte
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US7081360B2 (en) 1998-07-28 2006-07-25 Cadus Technologies, Inc. Expression of G protein-coupled receptors with altered ligand binding and/or coupling properties
EP1105427A2 (en) 1998-08-17 2001-06-13 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
WO2000018806A1 (de) 1998-09-25 2000-04-06 Horst Lindhofer Bispezifische und trispezifische antikörper, die spezifisch mit induzierbaren oberflächenantigenen als operationelle zielstrukturen reagieren
MXPA01005515A (es) 1998-12-01 2003-07-14 Protein Design Labs Inc Anticuerpos humanizados para gamma-interferon.
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6897044B1 (en) 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
US6972125B2 (en) 1999-02-12 2005-12-06 Genetics Institute, Llc Humanized immunoglobulin reactive with B7-2 and methods of treatment therewith
AR030019A1 (es) 1999-05-18 2003-08-13 Smithkline Beecham Corp Anticuerpos monoclonales humanos y fragmentos funcionales del mismo, un procedimiento para su produccion, composiciones farmaceuticas que los comprenden, una molecula aislada de acido nucleico, un plasmido recombinante, una celula hospedante y el uso de dichos anticuerpos para la manufactura de un m
SK782002A3 (en) 1999-07-21 2003-08-05 Lexigen Pharm Corp FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens
AT411997B (de) 1999-09-14 2004-08-26 Baxter Ag Faktor ix/faktor ixa aktivierende antikörper und antikörper-derivate
SE9903895D0 (sv) 1999-10-28 1999-10-28 Active Biotech Ab Novel compounds
US20020028178A1 (en) 2000-07-12 2002-03-07 Nabil Hanna Treatment of B cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
CA2390662A1 (en) 1999-12-14 2001-06-21 The Burnham Institute Bcl-g polypeptides, encoding nucleic acids and methods of use
AU2001256174A1 (en) 2000-03-01 2001-09-12 Christoph Gasche Mammalian interleukin-10 (il-10) receptor variants
TWI242043B (en) 2000-03-10 2005-10-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Polypeptide inducing apoptosis
DK1265914T3 (da) 2000-03-22 2008-03-10 Curagen Corp WNT-1-relaterede polypeptider og nukleinsyrer, der koder for samme
KR20020091170A (ko) 2000-03-31 2002-12-05 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션 Ｂ 세포 림프종의 치료를 위한 항-사이토카인 항체 또는길항제 및 항-ｃｄ２０의 조합된 사용
AU2001249835A1 (en) 2000-04-03 2001-10-15 Oxford Glycosciences (Uk) Ltd. Diagnosis and treatment of alzheimer's disease
AU2001246934A1 (en) 2000-04-17 2001-10-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agonist antibodies
JP2004511426A (ja) 2000-05-03 2004-04-15 ミュンヘン　バイオテク　アーゲー 活性化血管部位に関連する陽イオン性の診断薬、画像化剤、および治療薬
EP1299419A2 (en) 2000-05-24 2003-04-09 Imclone Systems, Inc. Bispecific immunoglobulin-like antigen binding proteins and method of production
WO2001097858A2 (en) 2000-06-20 2001-12-27 Idec Pharmaceuticals Corporation Cold anti-cd20 antibody/radiolabeled anti-cd22 antibody combination
JP2004502742A (ja) 2000-07-12 2004-01-29 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション Ｂ細胞を消滅させる抗体及び免疫調節抗体を併用するｂ細胞悪性疾患の治療関連出願
AU2001271066A1 (en) 2000-07-17 2002-01-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for screening ligand having biological activity
CA2422076A1 (en) 2000-09-18 2002-03-21 Idec Pharmaceutical Corporation Combination therapy for treatment of autoimmune diseases using b cell depleting/immunoregulatory antibody combination
AU1344102A (en) 2000-10-12 2002-04-22 Genentech Inc Reduced-viscosity concentrated protein formulations
US8034903B2 (en) 2000-10-20 2011-10-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Degraded TPO agonist antibody
AU1091802A (en) 2000-10-20 2002-04-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Degraded agonist antibody
AU2002210917B2 (en) 2000-10-20 2006-05-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Degraded TPO agonist antibody
US20040242847A1 (en) 2000-10-20 2004-12-02 Naoshi Fukushima Degraded agonist antibody
JP4889187B2 (ja) 2000-10-27 2012-03-07 中外製薬株式会社 Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する血中ｍｍｐ−３濃度低下剤
EP2341060B1 (en) 2000-12-12 2019-02-20 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
BR0207854A (pt) 2001-03-07 2004-08-24 Merck Patent Gmbh Tecnologia de expressão para proteìnas contendo uma porção de anticorpo de isotipo hìbrido
WO2002078612A2 (en) 2001-04-02 2002-10-10 Euro-Celtique S.A. Thrombopoietin (tpo) synthebody for stimulation of platelet production
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
CN1294148C (zh) 2001-04-11 2007-01-10 中国科学院遗传与发育生物学研究所 环状单链三特异抗体
YU80903A (sh) 2001-04-13 2006-05-25 Biogen Inc. Antitela vla-1
ATE407204T1 (de) 2001-06-22 2008-09-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Zellproliferationsinhibitoren mit anti-glypican-3-antikörper
DE60237282D1 (de) 2001-06-28 2010-09-23 Domantis Ltd Doppelspezifischer ligand und dessen verwendung
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
US20030049203A1 (en) 2001-08-31 2003-03-13 Elmaleh David R. Targeted nucleic acid constructs and uses related thereto
CN1604966A (zh) 2001-10-15 2005-04-06 免疫医疗公司 直接靶定的结合蛋白
ES2326964T3 (es) 2001-10-25 2009-10-22 Genentech, Inc. Composiciones de glicoproteina.
US20030190705A1 (en) 2001-10-29 2003-10-09 Sunol Molecular Corporation Method of humanizing immune system molecules
DE10156482A1 (de) 2001-11-12 2003-05-28 Gundram Jung Bispezifisches Antikörper-Molekül
EP1573002A4 (en) 2002-02-11 2008-07-16 Genentech Inc ANTIBODY VARIANTS WITH ACCELERATED ANTIGEN ASSOCIATED SPEEDS
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
WO2003074679A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Xencor Antibody optimization
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7736652B2 (en) 2002-03-21 2010-06-15 The Regents Of The University Of California Antibody fusion proteins: effective adjuvants of protein vaccination
ATE512989T1 (de) 2002-04-15 2011-07-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Verfahren zur herstellung von scdb-bibliotheken
EP1495055B1 (en) 2002-04-18 2013-08-14 Genencor International, Inc. Production of functional antibodies in filamentous fungi
AU2003235833A1 (en) 2002-04-26 2003-11-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of screening agonistic antibody
EP1510943A4 (en) 2002-05-31 2007-05-09 Celestar Lexico Sciences Inc INTERACTION PREDICTION DEVICE
JP2004086862A (ja) 2002-05-31 2004-03-18 Celestar Lexico-Sciences Inc タンパク質相互作用情報処理装置、タンパク質相互作用情報処理方法、プログラム、および、記録媒体
WO2003104425A2 (en) 2002-06-07 2003-12-18 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Novel stable anti-cd22 antibodies
AU2003256266A1 (en) 2002-06-12 2003-12-31 Genencor International, Inc. Methods and compositions for milieu-dependent binding of a targeted agent to a target
PT1517921E (pt) 2002-06-28 2006-09-29 Domantis Ltd Ligandos duplamente especificos com semi-vida no soro aumentada
ES2368733T3 (es) 2002-07-18 2011-11-21 Merus B.V. Producción recombinante de mezclas de anticuerpos.
CA2492524A1 (en) 2002-08-15 2004-02-26 Epitomics, Inc. Humanized rabbit antibodies
US20060058511A1 (en) 2002-08-27 2006-03-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for stabilizing protein solution preparation
US20060235208A1 (en) 2002-09-27 2006-10-19 Xencor, Inc. Fc variants with optimized properties
DE60324700D1 (de) 2002-10-11 2008-12-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Zelltod-induzierender wirkstoff
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
GB0224082D0 (en) 2002-10-16 2002-11-27 Celltech R&D Ltd Biological products
SI1558648T1 (sl) 2002-10-17 2012-05-31 Genmab As Človeška monoklonalna protitelesa proti CD
PT1575517E (pt) 2002-12-24 2012-05-28 Rinat Neuroscience Corp Anticorpos anti-ngf e métodos de utilização dos mesmos
AU2003303543A1 (en) 2002-12-26 2004-07-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agonist antibody against heteroreceptor
JP4477579B2 (ja) 2003-01-21 2010-06-09 中外製薬株式会社 抗体の軽鎖スクリーニング方法
CA2515081A1 (en) 2003-02-07 2004-08-19 Protein Design Labs, Inc. Amphiregulin antibodies and their use to treat cancer and psoriasis
WO2004075913A1 (ja) 2003-02-28 2004-09-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha タンパク質含有安定化製剤
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
JP4739954B2 (ja) 2003-03-13 2011-08-03 中外製薬株式会社 変異受容体に対するアゴニスト活性を有するリガンド
EP1609803A4 (en) 2003-03-31 2006-05-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd MODIFIED ANTIBODY AGAINST CD22 AND ITS USE
GB2400851B (en) 2003-04-25 2004-12-15 Bioinvent Int Ab Identifying binding of a polypeptide to a polypeptide target
JP2004321100A (ja) 2003-04-25 2004-11-18 Rikogaku Shinkokai ＩｇＧのＦｃ領域を含むタンパク質の変異体
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
CA2527694C (en) 2003-05-30 2015-07-14 Hendricus Renerus Jacobus Mattheus Hoogenboom Fab library for the preparation of anti vegf and anti rabies virus fabs
KR20060027801A (ko) 2003-06-05 2006-03-28 제넨테크, 인크. Ｂ 세포 장애에 대한 조합 요법
JP4794301B2 (ja) 2003-06-11 2011-10-19 中外製薬株式会社 抗体の製造方法
WO2004113387A2 (en) 2003-06-24 2004-12-29 Merck Patent Gmbh Tumour necrosis factor receptor molecules with reduced immunogenicity
US20050033029A1 (en) 2003-06-30 2005-02-10 Jin Lu Engineered anti-target immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
US7297336B2 (en) 2003-09-12 2007-11-20 Baxter International Inc. Factor IXa specific antibodies displaying factor VIIIa like activity
JP2005101105A (ja) 2003-09-22 2005-04-14 Canon Inc 位置決め装置、露光装置、デバイス製造方法
US20060134105A1 (en) 2004-10-21 2006-06-22 Xencor, Inc. IgG immunoglobulin variants with optimized effector function
WO2005035753A1 (ja) 2003-10-10 2005-04-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 機能蛋白質を代替する二重特異性抗体
AU2003271186A1 (en) 2003-10-14 2005-04-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Double specific antibodies substituting for functional protein
WO2005063815A2 (en) 2003-11-12 2005-07-14 Biogen Idec Ma Inc. Fcϝ receptor-binding polypeptide variants and methods related thereto
CA2545603A1 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. Neonatal fc receptor (fcrn)-binding polypeptide variants, dimeric fc binding proteins and methods related thereto
EP1701979A2 (en) 2003-12-03 2006-09-20 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target the epidermal growth factor receptor
CA2546054C (en) 2003-12-10 2014-05-13 Medarex, Inc. Interferon alpha antibodies and their uses
PL1691837T3 (pl) 2003-12-10 2012-11-30 Squibb & Sons Llc IP-10 przeciwciała i ich zastosowanie
WO2005056605A1 (ja) 2003-12-12 2005-06-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ３量体以上の受容体を認識する改変抗体
TW200530269A (en) 2003-12-12 2005-09-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Mpl antibodies
AR048210A1 (es) 2003-12-19 2006-04-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Un agente preventivo para la vasculitis.
WO2005062916A2 (en) 2003-12-22 2005-07-14 Centocor, Inc. Methods for generating multimeric molecules
TW200540186A (en) 2003-12-25 2005-12-16 Kirin Brewery Mutants of anti-CD40 antibody
CA2551915C (en) 2003-12-30 2015-06-23 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung Il-7 fusion proteins
US20050266425A1 (en) 2003-12-31 2005-12-01 Vaccinex, Inc. Methods for producing and identifying multispecific antibodies
SV2006001990A (es) 2004-01-09 2006-01-30 Pfizer Anticuerpos contra madcam
EP2053062A1 (en) 2004-03-24 2009-04-29 Xencor, Inc. Immunoglobin variants outside the Fc region
AR048335A1 (es) 2004-03-24 2006-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes terapeuticos para trastornos del oido interno que contienen un antagonista de il- 6 como un ingrediente activo
WO2005112564A2 (en) 2004-04-15 2005-12-01 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Germline and sequence variants of humanized antibodies and methods of making and using them
TW200605906A (en) 2004-05-11 2006-02-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedy for thrombopenia
US7728114B2 (en) 2004-06-03 2010-06-01 Novimmune S.A. Anti-CD3 antibodies and methods of use thereof
KR100620554B1 (ko) 2004-06-05 2006-09-06 한국생명공학연구원 Ｔａｇ-72에 대한 인간화 항체
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
EP1773391A4 (en) 2004-06-25 2009-01-21 Medimmune Inc INCREASING THE PRODUCTION OF RECOMBINANT ANTIBODIES IN MAMMALIAN CELLS BY MUTAGENESIS ON THE SITE
ATE486610T1 (de) 2004-07-09 2010-11-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-glypican-3-antikörper
EP1919950A1 (en) 2004-07-15 2008-05-14 Xencor, Inc. Optimized fc variants
EA012464B1 (ru) 2004-08-04 2009-10-30 Эпплайд Молекьюлар Эволюшн, Инк. Антитело против cd20 и его применение
CA2577082A1 (en) 2004-09-02 2006-03-16 Genentech, Inc. Heteromultimeric molecules
MX2007002883A (es) 2004-09-13 2007-06-15 Macrogenics Inc Anticuerpos humanizados contra el virus de nilo occidental y usos terapeuticos y profilacticos del mismo.
EP1799718A1 (en) 2004-09-14 2007-06-27 National Institute for Biological Standards and Control (NIBSC) Vaccine
US20060074225A1 (en) 2004-09-14 2006-04-06 Xencor, Inc. Monomeric immunoglobulin Fc domains
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
US7563443B2 (en) 2004-09-17 2009-07-21 Domantis Limited Monovalent anti-CD40L antibody polypeptides and compositions thereof
US8911726B2 (en) 2004-09-22 2014-12-16 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Stabilized human Igg4 antibodies
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
KR101370253B1 (ko) 2004-10-22 2014-03-05 암젠 인크 재조합 항체의 재접힘 방법
US7462697B2 (en) 2004-11-08 2008-12-09 Epitomics, Inc. Methods for antibody engineering
US7632497B2 (en) 2004-11-10 2009-12-15 Macrogenics, Inc. Engineering Fc Antibody regions to confer effector function
JP5787461B2 (ja) * 2004-12-14 2015-09-30 ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ 免疫グロブリンの精製方法
US20090061485A1 (en) 2004-12-22 2009-03-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of Producing an Antibody Using a Cell in Which the Function of Fucose Transporter Is Inhibited
US8728828B2 (en) 2004-12-22 2014-05-20 Ge Healthcare Bio-Sciences Ab Purification of immunoglobulins
EP1833510A4 (en) 2004-12-27 2010-02-10 Progenics Pharmaceuticals Neva ORAL ADMINISTRATION ANTITOXIN ANTIBODIES AND METHODS OF MAKING AND USING THE SAME
ES2557325T5 (es) 2004-12-28 2023-11-15 Innate Pharma Sa Anticuerpos monoclonales contra NKG2A
US8716451B2 (en) 2005-01-12 2014-05-06 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Stabilized human IgG2 and IgG3 antibodies
WO2006076594A2 (en) 2005-01-12 2006-07-20 Xencor, Inc. Antibodies and fc fusion proteins with altered immunogenicity
US7700099B2 (en) 2005-02-14 2010-04-20 Merck & Co., Inc. Non-immunostimulatory antibody and compositions containing the same
TW200722518A (en) 2005-03-31 2007-06-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Sc(fv)2 structural isomers
EP1871808A2 (en) 2005-03-31 2008-01-02 Xencor, Inc. Fc VARIANTS WITH OPTIMIZED PROPERTIES
US10011858B2 (en) 2005-03-31 2018-07-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
DK2824183T3 (da) 2005-04-08 2020-09-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåde til fremstilling af bispecifikke antistoffer
MX2007012687A (es) 2005-04-15 2008-03-14 Genentech Inc Variantes de cadena beta de hgf.
CA2606102C (en) 2005-04-26 2014-09-30 Medimmune, Inc. Modulation of antibody effector function by hinge domain engineering
EP1885755A4 (en) 2005-05-05 2009-07-29 Univ Duke TREATMENTS OF AUTOIMMUNE DISEASES BY ANTI-CD19 ANTIBODIES
JP5068167B2 (ja) 2005-06-10 2012-11-07 中外製薬株式会社 メグルミンを含有するタンパク質製剤の安定化剤、およびその利用
US20090028854A1 (en) 2005-06-10 2009-01-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha sc(Fv)2 SITE-DIRECTED MUTANT
KR20080025174A (ko) 2005-06-23 2008-03-19 메디뮨 인코포레이티드 응집 및 단편화 프로파일이 최적화된 항체 제제
EP1907002A2 (en) 2005-07-11 2008-04-09 Macrogenics, Inc. Methods of treating autoimmune disease using humanized anti-cd16a antibodies
SI2573114T1 (sl) 2005-08-10 2016-08-31 Macrogenics, Inc. Identifikacija in inženiring protiteles z variantnimi fc regijami in postopki za njih uporabo
ES2534760T3 (es) 2005-08-19 2015-04-28 Wyeth Llc Anticuerpos antagonistas contra GDF-8 y sus usos en el tratamiento de ELA y otros trastornos asociados con GDF-8
JP2009510102A (ja) 2005-09-29 2009-03-12 ヴァイラル ロジック システムズ テクノロジー コーポレーション 免疫調節組成物およびその使用
CA2625773C (en) 2005-10-14 2015-05-12 Fukuoka University Inhibition of interleukin-6 (il-6) receptor promotes pancreatic islet transplantation
BRPI0617664B8 (pt) 2005-10-21 2021-05-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd uso de um anticorpo que reconhece a il-6 para a produção de uma composição farmacêutica para tratar o enfarte do miocárdio ou suprimir a remodelagem ventricular esquerda depois do enfarte do miocárdio
WO2007060411A1 (en) 2005-11-24 2007-05-31 Ucb Pharma S.A. Anti-tnf alpha antibodies which selectively inhibit tnf alpha signalling through the p55r
EP1820513A1 (en) 2006-02-15 2007-08-22 Trion Pharma Gmbh Destruction of tumor cells expressing low to medium levels of tumor associated target antigens by trifunctional bispecific antibodies
TW200745163A (en) 2006-02-17 2007-12-16 Syntonix Pharmaceuticals Inc Peptides that block the binding of IgG to FcRn
JP4294082B2 (ja) 2006-03-23 2009-07-08 協和発酵キリン株式会社 ヒトトロンボポエチン受容体に対するアゴニスト抗体
AU2007229698B9 (en) 2006-03-24 2012-11-08 Merck Patent Gmbh Engineered heterodimeric protein domains
ES2654040T3 (es) 2006-03-31 2018-02-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Método de modificación de anticuerpos para la purificación de anticuerpos biespecíficos
DK3056568T3 (da) 2006-03-31 2021-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåder til kontrollering af antistoffers blodfarmakokinetik
WO2007116962A1 (ja) 2006-04-07 2007-10-18 Osaka University 筋再生促進剤
MX2008014804A (es) 2006-06-02 2009-01-27 Regeneron Pharma Anticuerpos de afinidad elevada a receptor de il-6 humano.
WO2007145941A2 (en) 2006-06-06 2007-12-21 Tolerrx, Inc. Administration of anti-cd3 antibodies in the treatment of autoimmune diseases
CN101500608A (zh) 2006-06-08 2009-08-05 中外制药株式会社 炎性疾病的预防或治疗药
JP2009541275A (ja) 2006-06-22 2009-11-26 ノボ・ノルデイスク・エー／エス 二重特異性抗体の生産
US20100034194A1 (en) 2006-10-11 2010-02-11 Siemens Communications Inc. Eliminating unreachable subscribers in voice-over-ip networks
WO2008090960A1 (ja) 2007-01-24 2008-07-31 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. ガングリオシドgm2に特異的に結合する遺伝子組換え抗体組成物
WO2008092117A2 (en) 2007-01-25 2008-07-31 Xencor, Inc. Immunoglobulins with modifications in the fcr binding region
EP2626372B1 (en) 2007-03-29 2018-03-21 Genmab A/S Bispecific antibodies and methods for production thereof
JP6071165B2 (ja) 2007-05-31 2017-02-01 ゲンマブ エー／エス 安定なＩｇＧ４抗体
EP2155790A1 (en) 2007-05-31 2010-02-24 Genmab A/S Method for extending the half-life of exogenous or endogenous soluble molecules
CN101802011A (zh) 2007-06-29 2010-08-11 先灵公司 Mdl-1应用
EP2031064A1 (de) 2007-08-29 2009-03-04 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Verfahren zur Steigerung von Proteintitern
AU2008298904B2 (en) 2007-09-14 2014-10-16 Amgen Inc. Homogeneous antibody populations
WO2009041734A1 (ja) 2007-09-26 2009-04-02 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. ヒトトロンボポエチン受容体に対するアゴニスト抗体
CL2008002886A1 (es) 2007-09-26 2009-12-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Region constante de un anticuerpo humano; anticuerpo anti-receptor de interleucina-6 (il-6) y composicion farmaceutica que la comprende.
CN106519025B (zh) 2007-09-26 2021-04-23 中外制药株式会社 利用cdr的氨基酸取代来改变抗体等电点的方法
PE20140132A1 (es) 2007-09-26 2014-02-14 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-receptor de il-6
AU2008305851B2 (en) 2007-09-28 2014-12-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-glypican-3 antibody having improved kinetics in plasma
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
AU2008314697B2 (en) 2007-10-22 2013-08-29 Merck Serono S.A. Single IFN-beta fused to a mutated lgG Fc fragment
BRPI0821110B8 (pt) 2007-12-05 2021-05-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd anticorpo de neutralização de anti-nr10/il31ra, composição farmacêutica compreendendo o referido anticorpo e uso do mesmo
AU2008338313B2 (en) 2007-12-18 2014-01-16 Bioalliance C.V. Antibodies recognizing a carbohydrate containing epitope on CD-43 and CEA expressed on cancer cells and methods using same
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
PT2235064E (pt) 2008-01-07 2016-03-01 Amgen Inc Método de preparação de moléculas heterodiméricas de fc de anticorpos utilizando efeitos de indução eletrostática
CN101952454B (zh) 2008-02-08 2014-06-04 米迪缪尼有限公司 具有减弱的Fc配体亲和性的抗IFNAR1抗体
DK2274008T3 (da) 2008-03-27 2014-05-12 Zymogenetics Inc Sammensætninger og fremgangsmåder til hæmning af PDGFRBETA og VEGF-A
KR102469853B1 (ko) 2008-04-11 2022-11-22 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 복수 분자의 항원에 반복 결합하는 항원 결합 분자
SG190572A1 (en) 2008-04-29 2013-06-28 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP2816059A1 (en) 2008-05-01 2014-12-24 Amgen, Inc Anti-hepcidin antibodies and methods of use
KR20110047255A (ko) 2008-09-26 2011-05-06 로슈 글리카트 아게 이중특이적 항-ｅｇｆｒ／항-ｉｇｆ-１ｒ 항체
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
JP5856845B2 (ja) * 2008-10-20 2016-02-10 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗体精製中におけるウイルスの不活性化
WO2010064090A1 (en) 2008-12-02 2010-06-10 Pierre Fabre Medicament Process for the modulation of the antagonistic activity of a monoclonal antibody
AR074438A1 (es) 2008-12-02 2011-01-19 Pf Medicament Proceso para la modulacion de la actividad antagonista de un anticuerpo monoclonal
DE202008016028U1 (de) 2008-12-04 2010-04-15 Melitta Haushaltsprodukte Gmbh & Co. Kg Behälter zur Aufbewahrung von Gegenständen
JP2012515160A (ja) 2009-01-12 2012-07-05 ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ アフィニティークロマトグラフィーマトリックス
EP2389192A4 (en) 2009-01-23 2013-01-16 Biogen Idec Inc STABILIZED FC POLYPEPTIDES WITH REDUCED EFFECTOR FUNCTION AND METHOD OF USE
EP2810652A3 (en) 2009-03-05 2015-03-11 AbbVie Inc. IL-17 binding proteins
JP2010210772A (ja) 2009-03-13 2010-09-24 Dainippon Screen Mfg Co Ltd 液晶表示装置の製造方法
WO2010107110A1 (ja) 2009-03-19 2010-09-23 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
JP5787446B2 (ja) 2009-03-19 2015-09-30 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
EP2233500A1 (en) 2009-03-20 2010-09-29 LFB Biotechnologies Optimized Fc variants
AU2010236787A1 (en) 2009-04-01 2011-11-10 Genentech, Inc. Anti-FcRH5 antibodies and immunoconjugates and methods of use
EP2417156B1 (en) 2009-04-07 2015-02-11 Roche Glycart AG Trivalent, bispecific antibodies
CN102459346B (zh) 2009-04-27 2016-10-26 昂考梅德药品有限公司 制造异源多聚体分子的方法
WO2011037158A1 (ja) 2009-09-24 2011-03-31 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
US10053513B2 (en) 2009-11-30 2018-08-21 Janssen Biotech, Inc. Antibody Fc mutants with ablated effector functions
SI2519543T1 (sl) 2009-12-29 2016-08-31 Emergent Product Development Seattle, Llc Beljakovine, ki se vežejo s heterodimeri in njihova uporaba
WO2011091181A1 (en) 2010-01-20 2011-07-28 Tolerx, Inc. Immunoregulation by anti-ilt5 antibodies and ilt5-binding antibody fragments
WO2011091177A1 (en) 2010-01-20 2011-07-28 Tolerx, Inc. Anti-ilt5 antibodies and ilt5-binding antibody fragments
TWI505838B (zh) 2010-01-20 2015-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Stabilized antibody solution containing
AU2011222012C1 (en) 2010-03-02 2015-02-26 Kyowa Kirin Co., Ltd. Modified antibody composition
US10435458B2 (en) 2010-03-04 2019-10-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variants with reduced Fcgammar binding
WO2011111007A2 (en) 2010-03-11 2011-09-15 Rinat Neuroscience Corporation ANTIBODIES WITH pH DEPENDENT ANTIGEN BINDING
US9162161B2 (en) 2010-03-31 2015-10-20 Jsr Corporation Filler for affinity chromatography
US9150663B2 (en) 2010-04-20 2015-10-06 Genmab A/S Heterodimeric antibody Fc-containing proteins and methods for production thereof
ES2617777T5 (es) 2010-04-23 2022-10-13 Hoffmann La Roche Producción de proteínas heteromultiméricas
US9527926B2 (en) 2010-05-14 2016-12-27 Rinat Neuroscience Corp. Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
AU2011257121A1 (en) 2010-05-27 2013-01-10 Genmab A/S Monoclonal antibodies against HER2
JP5953303B2 (ja) 2010-07-29 2016-07-20 ゼンコア インコーポレイテッド 改変された等電点を有する抗体
EP2603526A1 (en) 2010-08-13 2013-06-19 Medimmune Limited Monomeric polypeptides comprising variant fc regions and methods of use
AU2011325833C1 (en) 2010-11-05 2017-07-13 Zymeworks Bc Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain
TR201802772T4 (tr) 2010-11-17 2018-03-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Kan pıhtılaşma faktörü VIII in işlevi için alternatif işleve sahip multi-spesifik antijen bağlayıcı molekül.
AR084053A1 (es) 2010-11-30 2013-04-17 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agente terapeutico que induce citotoxicidad
WO2012133782A1 (ja) 2011-03-30 2012-10-04 中外製薬株式会社 抗原結合分子の血漿中滞留性と免疫原性を改変する方法
EP2699263A4 (en) 2011-04-20 2014-12-24 Liquidating Trust METHOD FOR REDUCING AN UNWANTED IMMUNE RESPONSE TO A FOREIGN-LIKE IN A HUMAN PATIENT WITH ANTI-CD4 ANTIBODIES OR CD4-BINDING FRAGMENTS THEREOF OR CD4-BINDING MOLECULES
CN104114579B (zh) 2011-10-27 2020-01-24 健玛保 异二聚体蛋白的生成
CN109134658B (zh) 2011-10-31 2022-10-14 中外制药株式会社 控制了重链与轻链的缔合的抗原结合分子
WO2013063702A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
GB201203051D0 (en) 2012-02-22 2012-04-04 Ucb Pharma Sa Biological products
WO2013131866A1 (en) 2012-03-08 2013-09-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Abeta antibody formulation
DK2825559T3 (da) 2012-03-13 2019-06-03 Novimmune Sa Letisolerbare bispecifikke antistoffer med nativt immunoglobulinformat
EP2832856A4 (en) 2012-03-29 2016-01-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd ANTI-LAMP5 ANTIBODIES AND USE THEREOF
MX360109B (es) 2012-04-20 2018-10-23 Merus Nv Metodos y medios para la produccion de moleculas de tipo ig.
US20140154270A1 (en) * 2012-05-21 2014-06-05 Chen Wang Purification of non-human antibodies using kosmotropic salt enhanced protein a affinity chromatography
WO2014028354A1 (en) 2012-08-13 2014-02-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-pcsk9 antibodies with ph-dependent binding characteristics
WO2014038686A1 (ja) * 2012-09-10 2014-03-13 株式会社カネカ 吸着体
JP6273205B2 (ja) 2012-10-05 2018-01-31 協和発酵キリン株式会社 ヘテロダイマータンパク質組成物
CA2889951C (en) 2012-11-02 2023-04-18 Zymeworks Inc. Crystal structures of heterodimeric fc domains
CN105143257B (zh) 2013-03-15 2020-10-27 艾伯维生物医疗股份有限公司 Fc变体
BR112016006197B1 (pt) 2013-09-27 2023-04-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Método para produzir um anticorpo biespecífico de polipeptídeos
PE20160724A1 (es) * 2013-11-04 2016-08-04 Glenmark Pharmaceuticals Sa Produccion de inmunoglobulinas heterodimericas de redireccionamiento de celulas t
TW201625299A (zh) 2014-06-20 2016-07-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 用於因第ｖｉｉｉ凝血因子及／或活化的第ｖｉｉｉ凝血因子的活性降低或欠缺而發病及／或進展的疾病之預防及／或治療之醫藥組成物
AR101262A1 (es) * 2014-07-26 2016-12-07 Regeneron Pharma Plataforma de purificación para anticuerpos biespecíficos
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
JP6630036B2 (ja) * 2014-09-30 2020-01-15 Jsr株式会社 標的物の精製方法、及び、ミックスモード用担体
KR20170110129A (ko) 2015-02-05 2017-10-10 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 이온 농도 의존적 항원 결합 도메인을 포함하는 항체, Fc 영역 개변체, IL-8에 결합하는 항체, 및 그들의 사용
EP3279216A4 (en) 2015-04-01 2019-06-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha PROCESS FOR PREPARING POLYPEPTIDE HETERO OLIGOMER
EP3280444A4 (en) 2015-04-10 2019-03-27 Adimab, LLC METHOD FOR CLEANING HETERODIMEROUS MULTISPECIFIC ANTIBODIES FROM PARENTAL HOMODIMERIC ANTIBODY TYPES
JP6698102B2 (ja) 2015-04-17 2020-05-27 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 凝固因子と多重特異的抗体を用いた併用療法
JP2018123055A (ja) 2015-04-24 2018-08-09 公立大学法人奈良県立医科大学 血液凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第ｘｉ因子（ｆｘｉ）異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物
WO2017115773A1 (ja) 2015-12-28 2017-07-06 中外製薬株式会社 Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法
JOP20170017B1 (ar) 2016-01-25 2021-08-17 Amgen Res Munich Gmbh تركيب صيدلي يتضمن تركيبات جسم مضاد ثنائي الاختصاص
RU2748046C2 (ru) 2016-04-28 2021-05-19 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Препарат, содержащий антитело
CN110461358A (zh) 2017-03-31 2019-11-15 公立大学法人奈良县立医科大学 可用于预防和/或治疗凝血因子ⅸ异常、包含代替凝血因子ⅷ的功能的多特异性抗原结合分子的药物组合物
JP2020518584A (ja) 2017-05-02 2020-06-25 中外製薬株式会社 細胞傷害誘導治療剤
US10246642B2 (en) 2017-08-25 2019-04-02 Saudi Arabian Oil Company Process to produce blown asphalt
MX2020002710A (es) 2017-09-29 2020-07-20 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union al antigeno multiespecifica que tiene actividad de sustitucion de la funcion de cofactor del factor viii de coagulacion de sangre (fviii) y formulacion farmaceutica que contiene tal molecula como ingrediente activo.
MX2020003472A (es) 2017-11-01 2020-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Variante e isoforma de anticuerpos con actividad biologica reducida.
KR20210011002A (ko) 2018-05-16 2021-01-29 얀센 바이오테크 인코포레이티드 암을 치료하는 방법 및 t-세포 재유도 치료제의 효능을 향상시키는 방법
CN115380210A (zh) 2020-04-02 2022-11-22 中外制药株式会社 含多特异性抗原结合分子的组合物中的杂质分子的分析方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100331527A1 (en) 2009-06-26 2010-12-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Readily Isolated Bispecific Antibodies with Native Immunoglobulin Format
US20130018174A1 (en) 2009-12-25 2013-01-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Polypeptide modification method for purifying polypeptide multimers

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