CN110461358A - 可用于预防和/或治疗凝血因子ⅸ异常、包含代替凝血因子ⅷ的功能的多特异性抗原结合分子的药物组合物 - Google Patents

可用于预防和/或治疗凝血因子ⅸ异常、包含代替凝血因子ⅷ的功能的多特异性抗原结合分子的药物组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN110461358A
CN110461358A CN201880019962.8A CN201880019962A CN110461358A CN 110461358 A CN110461358 A CN 110461358A CN 201880019962 A CN201880019962 A CN 201880019962A CN 110461358 A CN110461358 A CN 110461358A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polypeptide
chain
antibody
factor
antigen binding
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201880019962.8A
Other languages
English (en)
Inventor
岛绿伦
野上惠嗣
荻原建一
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Nara Medical University
Public University Corp Nara Medical University
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Nara Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chugai Pharmaceutical Co Ltd, Nara Medical University filed Critical Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Publication of CN110461358A publication Critical patent/CN110461358A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/36—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against blood coagulation factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen

Abstract

本发明人使用来自FⅨ病症患者的血液和血浆检查了功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子的促凝血活性。结果显示，由于其促凝血活性，功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子不仅可用作预防和/或治疗由FⅧ功能障碍引起的血友病A、获得性血友病A、血管性血友病和血友病C的出血的方法，还可用作预防和/或治疗FⅨ病症的出血的方法。此外，通过将其与功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子组合使用可以增强FⅨ制剂的效果，这表明组合使用作为显示稳定止血效果的组合疗法是有前途的。

Description

可用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ异常、包含代替凝血因子Ⅷ 的功能的多特异性抗原结合分子的药物组合物
技术领域
本发明涉及用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ(FⅨ)病症的药物组合物，其包含代替凝血因子Ⅷ(FⅧ)的功能(功能性代替)的多特异性抗原结合分子。
背景技术
FⅨ病症(FIX disorder)是由FⅨ的先天性缺陷或功能障碍引起的罕见出血性疾病(NPL 1)。FⅨ病症也称为血友病B。FⅨ是一种酶前体，当血凝反应开始时，它从前体变为具有酶活性的活化凝血因子Ⅸ(FⅨa)。FⅨa与活化的凝血因子Ⅷ(FⅧa)一起形成凝血因子X-活化复合物(tenase复合物)，并且通过激活凝血因子X(FX)在促进凝血反应中起重要作用。类似地，FⅧ病症(FⅧdisorder)是由FⅧ的先天性缺陷或功能障碍引起的出血性疾病，也称为血友病A。在FⅨ病症中，活化部分促凝血酶原激酶时间(activated partialthromboplastin time,APTT)异常延长，类似于FⅧ病症。通过定量FⅧ和FⅨ(FⅧ:C和FⅨ:C用于活性定量，或FⅧ:Ag和FⅨ:Ag用于因子抗原定量)来区分FⅧ病症和FⅨ病症。FⅨ病症中的出血主要通过FⅨ制剂治疗，并且还进行定期代替治疗，其中定期施用FⅨ制剂以防止出血(预防性给药)。目前，最常用的FⅨ病症(血友病B)的常规代替治疗方案是每周两次静脉内施用25IU/kg至40IU/kg FⅨ制剂。然而，即使在同一国家内也执行许多不同的方案，研究最佳方案是未来的问题(NPL 1)。此外，最近在日本开发了具有延长半衰期的FⅨ制剂，并且定期代替疗法也已成为可能，其中以50IU/kg每周一次或以100IU/kg每十天一次进行静脉内给药(NPL 2)。然而，重复静脉内给药具有难以确保血管通路的问题，并且对患者和护理人员而言尤其在儿科病例中非常麻烦(NPL 3)。
血友病是由凝血因子中FⅧ或FⅨ的先天性缺陷或功能障碍引起的出血性疾病。由FⅧ异常引起的疾病称为血友病A，由FⅨ异常引起的疾病称为血友病B。血友病出血症状的严重程度与血液中不足的凝血因子的活性水平良好相关。活性小于1％的患者被归类为严重，活性为1％或更高且小于5％的患者被归类为中度，活性为5％或更高且小于40％的患者被归类为轻度。患有严重症状的患者(约占血友病患者的一半)每月出现几次出血症状。与中度患者和轻度患者相比，这一频率非常高。因此，在患有严重血友病的患者中，代替不足的凝血因子(FⅧ或FⅨ)以将血液中凝血因子的活性维持在1％或更高的治疗被认为对于预防出血症状的发展是有效的(NPL 1)。
为了预防和/或治疗血友病患者的出血，主要使用从血浆中纯化或通过基因工程技术制备的凝血因子制剂(血友病A：FⅧ；血友病B：FⅨ)。这些制剂用于按需给药以在发生出血时止血，或用于预防性给药以防止出血事件的发展(NPL 1和4)。然而，FⅧ制剂具有约12小时的血液半衰期，因此它们需要大约每周施用三次以进行预防性给药(NPL 5和6)。FⅨ制剂在血液中的半衰期为16小时至28小时，据报道在个体之间差异很大，从3小时到38小时不等。因此，对于预防性给药，每周施用约两次FⅨ制剂是标准方案(NPL 5、6和7)。在按需给药中，必要时必须另外定期施用制剂，以防止再出血。另外，凝血因子制剂是静脉内施用的。因此，强烈需要一种药剂，其给药的负担比现有的凝血因子制剂较轻(给药频率较低，不需要静脉注射)。
此外，在血友病患者中可能出现针对所施用的凝血因子制剂的抗体(抑制剂)(NPL8)。据报道，对于血友病A，抑制剂在20％至30％的重症患者中发生，而对于血友病B，抑制剂的发展频率低于血友病A，但在1％至6％中发生(NPL 8和9)。这些抑制剂消除了所提供的凝血因子制剂的作用，使得随后用凝血因子制剂预防/治疗变得困难。对于已经出现抑制剂的患者(抑制剂患者)的出血，施用旁路剂(bypassing agent)(活化的凝血因子Ⅶ(FⅦ)制剂或APCC制剂)(NPL 1和8)。它们的作用机制较少依赖于FⅧ制剂或FⅨ制剂的功能，并且即使对于存在抑制剂的血友病也可显示出止血作用。然而，由于它们在血液中的半衰期短至约2小时至8小时，需要频繁的静脉注射，并且在某些情况下它们的止血活性不足以完全止血。因此，非常需要一种不受抑制剂存在影响且其给药负担较轻的药剂。
获得性血友病，其中凝血因子由于获得性出现针对凝血因子的自体中和抗体而受损，可能是相关的出血性疾病(NPL 10和11)。在大多数情况下，获得性血友病是由出现抗FⅧ自身抗体引起的。对于患有这种获得性出血性病症的患者的出血，施用旁路制剂等；然而，类似地，问题是需要频繁进行静脉注射，并且有些情况下它们的止血活性不足以完全止血。
此外，由于涉及FⅧ的出血异常，已知由血管性血友病因子(vWF)的功能异常或缺乏引起的血管性血友病(von Willebrand's disease)。vWF不仅是血小板在血管壁损伤部位正常粘附内皮下组织所必需的，而且对于与FⅧ形成复合物并使血液中的FⅧ保持在正常水平也是必需的。在血管性血友病患者中，这些功能降低，导致止血功能障碍(NPL 12)。对于血管性血友病患者的出血，施用含有去氨加压素(DDAVP)或血浆来源的vWF的FⅧ制剂，但同样地，问题是需要频繁静脉注射，并且有些情况下它们的止血活性不足以完全止血。
最近，已发现了多特异性抗原结合分子，其识别FⅨa和FX，并具有代替FⅧ的辅因子功能的功能，特别是促进FⅨa活化FX的功能(PTL 1、2和3)。在这些多特异性抗原结合分子中，正在开发双特异性抗体作为用于预防和/或治疗血友病A的出血的药物组合物(PTL1、2和3，以及NPL13、14、15、16、17和18)。此外，还考虑了双特异性抗体在预防和/或治疗涉及FⅧ功能障碍的获得性血友病A和血管性血友病以及血友病C的出血的应用(PTL 1、2、3和4)。此外，还考虑将双特异性抗体与FⅨ制剂组合用于治疗血友病A(PTL 5)。
[现有技术参考文献]
[非专利文献]
[NPL 1]Guidelines for the management of hemophilia,2005,WorldFederation of Hemophilia
[NPL 2]Alprolix for intravenous administration,package insert,2017
[NPL 3]Haemophilia 2011；17:2-10
[NPL 4]Nature 1984；312:330-337
[NPL 5]Nature 1984；312:337-342
[NPL 6]Biochim Biophys Acta 1986；871:268-278
[NPL 7]Haemophilia 2007；13:663-669
[NPL 8]Blood 2007；109(2):546-551
[NPL 9]Haemophilia 2013；19:2-10
[NPL 10]Semin Thromb Hemost 2012；38:433-446
[NPL 11]Thromb Haemost 2013；110:1114-1120
[NPL 12]Blood 2013；122:3735-3740
[NPL 13]Nature Medicine 2012；18(10):1570-1574
[NPL 14]PLOS ONE 2013；8(2):e57479
[NPL 15]J Thromb Haemost 2014；12(2):206-213
[NPL 16]Blood 2014；124(20):3165-3171
[NPL 17]Blood 2016；127(13):1633-1641
[NPL 18]N Engl J Med 2016；374:2044-2053
[专利文献]
[PTL 1]WO 2005/035756
[PTL 2]WO 2006/109592
[PTL 3]WO2012/067176
[PTL 4]WO 2016/171202
[PTL 5]WO 2016/166014
发明内容
[本发明要解决的问题]
本发明的目的是提供用于预防和/或治疗FⅨ病症的药物组合物，其包含代替FⅧ功能(功能性代替)的多特异性抗原结合分子。
[解决问题的手段]
为了解决上述问题，本发明人使用市售的FⅨ缺陷型人血浆和源自FⅨ病症患者的血液/血浆，通过凝血评价方法ROTEM和APTT，检查了“代替FⅧ功能的多特异性抗原结合分子(FⅧ功能代替分子)”的血液/血浆凝固促进作用(促凝血活性)。
结果，本发明人发现，在上述每种凝血评价方法中，功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子在源自FⅨ病症患者的血液/血浆和FⅨ缺陷型人血浆中显示出促凝血活性。因此，由于其促凝血活性，代替FⅧ功能的多特异性抗原结合分子不仅可以用作针对由FⅧ功能障碍引起的血友病A、获得性血友病A、血管性血友病和血友病C的出血的预防和/或治疗剂，还可以用作针对FⅨ病症的出血的预防和/或治疗剂。
基于这些发现，排除血友病A、获得性血友病A、血管性血友病和血友病C，本发明涉及用于预防和/或治疗FⅨ病症的药物组合物，其包含代替FⅧ功能的多特异性抗原结合分子。更具体地，本发明涉及以下内容：
[1]一种用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的药物组合物，其包含功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子；
[2][1]的药物组合物，其中所述功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子是识别凝血因子Ⅸ和/或活化的凝血因子Ⅸ以及凝血因子X的双特异性抗体；
[3][2]的药物组合物，其中所述双特异性抗体是：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:1,2和3的H链CDR 1,2和3氨基酸序列(Q499的H链CDR)的H链组成，第二多肽由包含SEQ ID NO:4,5和6的H链CDR 1,2和3氨基酸序列(J327的H链CDR)的H链组成，第三多肽和第四多肽由包含SEQ ID NO:7,8和9的L链CDR 1,2和3氨基酸序列(L404的L链CDR)的共同L链组成；
[4][2]或[3]的药物组合物，其中所述双特异性抗体是：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:13的H链可变区氨基酸序列的H链组成，第二多肽由包含SEQ ID NO:14的H链可变区氨基酸序列的H链组成，并且第三多肽和第四多肽由包含SEQID NO:15的L链可变区氨基酸序列的共同L链组成；
[5][2]-[4]中任一项的药物组合物，其中所述双特异性抗体是：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由由SEQ ID NO:10的氨基酸序列组成的H链组成，第二多肽由由SEQ IDNO:11的氨基酸序列组成的H链组成，第三多肽和第四多肽由SEQ ID NO:12的共同L链组成。
[6][1]至[5]中任一项的药物组合物，其中凝血因子Ⅸ病症是由于凝血因子Ⅸ和/或活化的凝血因子Ⅸ活性的降低、功能障碍和/或缺陷而产生和/或发展的疾病；
[7][1]-[6]中任一项的药物组合物，其中凝血因子Ⅸ病症是先天性或获得性疾病；
[8][1]-[7]中任一项的药物组合物，其中凝血因子Ⅸ病症是血友病B或凝血因子Ⅸ缺乏病；
[9][1]-[8]中任一项的药物组合物，其与凝血因子Ⅸ制剂组合使用；
[10][1]-[8]中任一项的药物组合物，其用于提高凝血因子Ⅸ制剂的凝血活性。
[11]一种用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的组合药物，其是功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子与凝血因子Ⅸ制剂的组合；
[12]一种在患有凝血因子Ⅸ病症的患者中增强凝血因子Ⅸ制剂的凝血活性的方法，其使用功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子；
[13]一种凝血因子Ⅸ制剂，其与[1]-[8]中任一项的药物组合物组合使用；
[14]一种凝血因子Ⅸ制剂，其用于增强[1]-[8]中任一项的药物组合物的FⅧ功能代替活性；
[15]一种增强多特异性抗原结合分子的FⅧ功能代替活性的方法，所述多特异性抗原结合分子功能性代替血友病B患者中的凝血因子Ⅷ，该方法使用凝血因子Ⅸ制剂；
[A1]一种预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的方法，该方法包括向患者施用功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子；
[A2][A1]的方法，其中，所述功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子是识别凝血因子Ⅸ和/或活化的凝血因子Ⅸ以及凝血因子X的双特异性抗体；
[A3][A2]的方法，其中所述双特异性抗体是以下抗体：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:1,2和3的H链CDR 1,2和3氨基酸序列(Q499的H链CDR)的H链组成，第二多肽由包含SEQ ID NO:4,5和6的H链CDR 1,2和3氨基酸序列(J327的H链CDR)的H链组成，第三多肽和第四多肽由包含SEQ ID NO:7,8和9的L链CDR 1,2和3氨基酸序列(L404的L链CDR)的共同L链组成；
[A4][A2]或[A3]的方法，其中双特异性抗体是以下抗体：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:13的H链可变区氨基酸序列的H链组成，第二多肽由包含SEQ ID NO:14的H链可变区氨基酸序列的H链组成，并且第三多肽和第四多肽由包含SEQID NO:15的L链可变区氨基酸序列的共同L链组成；
[A5][A2]-[A4]中任一项的方法，其中双特异性抗体是以下抗体：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由由SEQ ID NO:10的氨基酸序列组成的H链组成，第二多肽由由SEQ IDNO:11的氨基酸序列组成的H链组成，第三多肽和第四多肽由SEQ ID NO:12的共同L链组成；
[A6][A1]-[A5]中任一项的方法，其中凝血因子Ⅸ病症是由于凝血因子Ⅸ和/或活化的凝血因子Ⅸ活性的降低、功能障碍和/或缺陷而产生和/或发展的疾病；
[A7][A1]-[A6]中任一项的方法，其中凝血因子Ⅸ病症是先天性或获得性疾病；
[A8][A1]-[A7]中任一项的方法，其中凝血因子Ⅸ病症是血友病B或凝血因子Ⅸ缺乏病；
[A9][A1]-[A8]中任一项的方法，其是与凝血因子Ⅸ制剂的组合疗法；
[A10][A1]-[A8]中任一项所述的方法，其是提高凝血因子Ⅸ制剂的凝血活性的方法；
[A11]一种用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的方法，其包括向患者施用与凝血因子Ⅸ制剂组合的、功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子；
[A12]一种用于增强凝血因子Ⅸ制剂的凝血活性的方法，其包括向患有凝血因子Ⅸ病症的患者施用功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子，其中在施用功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子之前，同时或之后，向所述患者施用凝血因子Ⅸ制剂；
[A13]一种预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的方法，其包括向患者施用凝血因子Ⅸ制剂，其中所述凝血因子Ⅸ制剂与功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子组合施用；
[A14]一种增强功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子的FⅧ功能代替活性的方法，其包括向血友病B患者施用凝血因子Ⅸ制剂，其中在施用凝血因子Ⅸ制剂之前，同时或之后，向所述患者施用功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子；
[B1]功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子，其用于凝血因子Ⅸ病症的预防方法和/或治疗方法；
[B2][B1]的抗原结合分子，其中功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子是识别凝血因子Ⅸ和/或活化的凝血因子Ⅸ以及凝血因子X的双特异性抗体；
[B3][B2]的抗原结合分子，其中所述双特异性抗体是以下抗体：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:1,2和3的H链CDR 1,2和3氨基酸序列(Q499的H链CDR)的H链组成，第二多肽由包含SEQ ID NO:4,5和6的H链CDR 1,2和3氨基酸序列(J327的H链CDR)的H链组成，第三多肽和第四多肽由包含SEQ ID NO:7,8和9的L链CDR 1,2和3氨基酸序列(L404的L链CDR)的共同L链组成；
[B4][B2]或[B3]的抗原结合分子，其中所述双特异性抗体是以下抗体：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:13的H链可变区氨基酸序列的H链组成，第二多肽由包含SEQ ID NO:14的H链可变区氨基酸序列的H链组成，并且第三多肽和第四多肽由包含SEQID NO:15的L链可变区氨基酸序列的共同L链组成；
[B5][B2]-[B4]中任一项的抗原结合分子，其中所述双特异性抗体是以下抗体：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由由SEQ ID NO:10的氨基酸序列组成的H链组成，第二多肽由由SEQ IDNO:11的氨基酸序列组成的H链组成，第三多肽和第四多肽由SEQ ID NO:12的共同L链组成；
[B6][B1]-[B5]中任一项的抗原结合分子，其中凝血因子Ⅸ病症是由于凝血因子Ⅸ和/或活化的凝血因子Ⅸ活性的降低、功能障碍和/或缺陷而产生和/或发展的疾病；
[B7][B1]-[B6]中任一项所述的抗原结合分子，其中凝血因子Ⅸ病症是先天性或获得性疾病；
[B8][B1]-[B7]中任一项的抗原结合分子，其中凝血因子Ⅸ病症是血友病B或凝血因子Ⅸ缺乏病；
[B9][B1]-[B8]中任一项的抗原结合分子，其中所述预防方法和/或治疗方法是与凝血因子Ⅸ制剂的组合疗法；
[B10][B1]-[B8]中任一项的抗原结合分子，其中所述预防方法和/或治疗方法是用于增强凝血因子Ⅸ制剂的凝血活性的方法；
[B11]一种功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子与凝血因子Ⅸ制剂的组合药物，其用于凝血因子Ⅸ病症的预防方法和/或治疗方法；
[B12]一种功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子，其用于增强患有凝血因子Ⅸ病症的患者中的凝血因子Ⅸ制剂的凝血活性；
[B13]一种用于凝血因子Ⅸ病症的预防方法和/或治疗方法的凝血因子Ⅸ制剂，其中所述制剂与[B1]-[B8]中任一项的抗原结合分子组合施用。
[B14]一种凝血因子Ⅸ制剂，其用于增强[B1]-[B8]中任一项的抗原结合分子的FⅧ功能代替活性；
[B15]一种凝血因子Ⅸ制剂，其用于增强多特异性抗原结合分子的FⅧ功能代替活性，所述多特异性抗原结合分子功能性代替血友病B患者中的凝血因子Ⅷ；
[C1]功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子在制备用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的药物中的用途；
[C2][C1]的用途，其中功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子是识别凝血因子Ⅸ和/或活化的凝血因子Ⅸ以及凝血因子X的双特异性抗体；
[C3][C2]的用途，其中所述双特异性抗体是以下抗体：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:1,2和3的H链CDR 1,2和3氨基酸序列(Q499的H链CDR)的H链组成，第二多肽由包含SEQ ID NO:4,5和6的H链CDR 1,2和3氨基酸序列(J327的H链CDR)的H链组成，第三多肽和第四多肽由包含SEQ ID NO:7,8和9的L链CDR 1,2和3氨基酸序列(L404的L链CDR)的共同L链组成；
[C4][C2]或[C3]的用途，其中所述双特异性抗体是以下抗体：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:13的H链可变区氨基酸序列的H链组成，第二多肽由包含SEQ ID NO:14的H链可变区氨基酸序列的H链组成，并且第三多肽和第四多肽由包含SEQID NO:15的L链可变区氨基酸序列的共同L链组成；
[C5][C2]-[C4]中任一项的用途，其中所述双特异性抗体是以下抗体：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由由SEQ ID NO:10的氨基酸序列组成的H链组成，第二多肽由由SEQ IDNO:11的氨基酸序列组成的H链组成，第三多肽和第四多肽由SEQ ID NO:12的共同L链组成；
[C6][C1]-[C5]中任一项的用途，其中凝血因子Ⅸ病症是由于凝血因子Ⅸ和/或活化的凝血因子Ⅸ活性的降低、功能障碍和/或缺陷而产生和/或发展的疾病；
[C7][C1]-[C6]中任一项的用途，其中凝血因子Ⅸ病症是先天性或获得性疾病；
[C8][C1]-[C7]中任一项的用途，其中凝血因子Ⅸ病症是血友病B或凝血因子Ⅸ缺乏病；
[C9][C1]-[C8]中任一项的用途，其中所述药物是与凝血因子Ⅸ制剂的组合药物；
[C10][C1]-[C8]中任一项的用途，其中所述药物是用于增强凝血因子Ⅸ制剂的凝血活性的药物；
[C11]功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子和凝血因子Ⅸ制剂在制备用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的组合药物中的用途。
[C12]功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子在制备用于增强患有凝血因子Ⅸ病症的患者中的凝血因子Ⅸ制剂的凝血活性的药物中的用途；
[C13]凝血因子Ⅸ制剂在制备用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的药物中的用途，所述药物是与功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子的组合药物；和
[C14]凝血因子Ⅸ制剂在制备用于增强多特异性抗原结合分子的FⅧ功能代替活性的药物中的用途，所述多特异性抗原结合分子功能性代替血友病B患者中的凝血因子Ⅷ。
[本发明的效果]
本发明提供用于预防和/或治疗除血友病A、获得性血友病A、血管性血友病和血友病C以外的FⅨ病症的药物组合物，所述组合物包含功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子。
附图说明
图1显示了在常规给药治疗下使用来自FⅨ病症患者的血液样品，根据Ca触发的全血凝固性试验(ROTEM)的凝血(初始)时间的缩短比例。
图2显示当离体加入ACE910(100μg/mL)到来自FⅨ病症患者的血浆时APTT缩短的比例。下面解释了图中的缩写。
ACE：ACE910
sFⅨd：市售的FⅨ缺陷型人血浆(Sysmex)
CogtrN：市售标准人血浆(Coagtrol N，Sysmex)
FⅨ:C：FⅨ活性水平
FⅨ:Ag：FⅨ抗原水平
图3-1显示了当将浓度为0、0.01、0.1、1、10或100IU/dL的FⅨ制剂(rFⅨ，BeneFⅨ，Pfizer)或抗FⅨ-Gla抗体(抗FⅨ抗体)加入到市售的FⅨ缺陷型人血浆(FⅨd-血浆或sFⅨd)中并进一步离体添加ACE910时，根据添加100μg/mL ACE910前后的数值确定的APTT缩短比例的评估。
图3-2显示了通过离体进一步向FⅨ缺陷型人血浆中添加抗FⅨ-Gla抗体(aFⅨAb)而获得的结果。
具体实施方式
本发明的代替FⅧ功能的多特异性抗原结合分子也可以称为具有类FⅧ活性的多特异性抗原结合分子。在本发明中，短语“功能性代替/替代FⅧ(代替/替代FⅧ的功能)”是指促进FⅨa活化FX(促进FⅨa生成FXa)。更具体地，在本发明中，短语“功能性代替/替代FⅧ(代替/替代FⅧ的功能)”是指识别FⅨ和/或FⅨa以及FX，并促进FⅨa活化FX(促进FⅨa生成FXa)。促进FXa生成的活性可以通过本领域熟知的方法评估，例如使用包含FⅨa、FX、合成底物S-2222(FXa的合成底物)和磷脂的测量系统。更详细地，可以根据WO 2005/035756，WO2006/109592，WO 2012/067176等中描述的方法进行评估。
本发明的多特异性抗原结合分子包含第一抗原结合位点和第二抗原结合位点，其可以特异性结合至少两种不同类型的抗原或表位。虽然第一抗原结合位点和第二抗原结合位点没有特别限制，只要它们分别具有结合FⅨ和/或FⅨa以及FX的活性即可，实例包括与抗原结合所必需的位点，例如含有这些位点的抗体、支架分子(类抗体分子)或肽、或片段。支架分子是通过与靶分子结合而发挥功能的分子，并且可以使用任何多肽，只要它们是可以与至少一个靶抗原结合的构象稳定的多肽即可。此类多肽的实例包括抗体可变区、纤连蛋白(WO 2002/032925)、蛋白A结构域(WO 1995/001937)、LDL受体A结构域(WO 2004/044011，WO 2005/040229)、锚蛋白(WO 2002/020565)等，以及Nygren等人(CurrentOpinion in Structural Biology 1997；7:463-469；and Journal of Immunol Methods2004；290:3-28)、Binz等人(Nature Biotech 2005；23:1257-1266)和Hosse等人(ProteinScience 2006；15:14-27)在文献中描述的分子。此外，如Curr Opin Mol Ther 2010；12(4):487-95和Drugs 2008；68(7):901-12所述，可以使用可以与靶抗原结合的肽分子。
在本发明中，多特异性抗原结合分子没有特别限制，只要它们是能够结合至少两种不同类型的抗原或表位的分子即可，但实例包括含有上述抗原结合位点的多肽，例如抗体和支架分子以及它们的片段，以及包含核酸分子和肽的适配体，它们可以是单个分子或其多聚体。优选的多特异性抗原结合分子包括可以特异性结合至少两种不同抗原的多特异性抗体。本发明的多特异性抗体的特别优选的实例包括可以特异性结合两种不同抗原的双特异性抗体(BsAb)(它们也可以称为双重特异性抗体)。
在本发明中，术语“共同L链(共有的L链)”是指分别与两个或更多个不同H链形成配对的L链，并且可以显示对每种抗原的结合能力。本文中，术语“不同的H链”优选是指针对不同抗原的抗体的H链，但不限于此，并且还指其氨基酸序列彼此不同的H链。例如，可以根据WO 2006/109592中描述的方法获得共有的L链。
在本发明的一个实施方案中，当本发明的多特异性抗原结合分子、多特异性抗体或双特异性抗体分别具有多个抗体L链时，那些抗体L链可以彼此不同或它们可以是共同的L链。
在本发明的一个实施方案中，多特异性抗原结合分子是识别FⅨ和/或FⅨa以及FX并且功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子；优选地，识别FⅨ和/或FⅨa以及FX并且功能性代替FⅧ的多特异性抗体；更优选地，识别FⅨ和/或FⅨa以及FX并且功能性代替FⅧ的双特异性抗体。本发明的抗原结合分子或抗体优选包含抗FⅨa抗体中的可变区和抗FX抗体中的可变区。
在本发明的一个实施方案中，多特异性抗原结合分子、多特异性抗体或双特异性抗体包含第一多肽和第三多肽(其包含识别FⅨ和/或FⅨa的抗原结合位点)和第二多肽和第四多肽(其包含识别FX的抗原结合位点)。第一多肽和第三多肽，以及第二多肽和第四多肽包括抗体H链的抗原结合位点和抗体L链的抗原结合位点。
例如，在本发明的多特异性抗原结合分子、多特异性抗体或双特异性抗体中，第一多肽和第三多肽分别含有针对FⅨ或FⅨa的抗体的H链和L链的抗原结合位点，第二多肽和第四多肽分别含有针对FX的抗体的H链和L链的抗原结合位点。在这种情况下，第一多肽和第三多肽以及第二多肽和第四多肽中包含的抗体L链抗原结合位点可以是共同L链的抗原结合位点。
在本发明中，包含抗体L链抗原结合位点的多肽优选含有与FⅨ、FⅨa和/或FX结合的抗体的全部或部分L链的序列。
本发明中功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子的优选实施方案包括，例如，识别FⅨ和/或FⅨa以及FX的双特异性抗体。这种抗体可以根据例如WO 2005/035756，WO2006/109592和WO 2012/067176中描述的方法获得。本发明的双特异性抗体包括这些文献中描述的抗体。
优选的双特异性抗体包括以下抗体(ACE910：Emicizumab)，其是专利文献(WO2012/067176)中描述的双特异性抗体：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:1,2和3的H链CDR 1,2和3的氨基酸序列(Q499的H链CDR)的H链组成，第二多肽由包含SEQ ID NO:4,5和6的H链CDR 1,2和3的氨基酸序列(J327的H链CDR)的H链组成，第三多肽和第四多肽由包含SEQ ID NO:7,8和9的L链CDR 1,2和3的氨基酸序列的共同L链组成；
更具体地，所述抗体是双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:13的H链可变区氨基酸序列的H链组成，第二多肽由包含SEQ ID NO:14的H链可变区氨基酸序列的H链组成，并且第三多肽和第四多肽由包含SEQ ID NO:15的L链可变区氨基酸序列的共同L链组成；
更具体地，所述抗体是双特异性抗体(Q499-z121/J327-z119/L404-k)，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由由SEQ ID NO:10的氨基酸序列组成的H链组成，第二多肽由由SEQ ID NO:11的氨基酸序列组成的H链组成，第三多肽和第四多肽由SEQ ID NO:12的共同L链组成。
本发明中描述的氨基酸序列中包含的氨基酸可以是翻译后修饰的(例如，通过焦谷氨酸化(pyroglutamylation)将N-末端谷氨酰胺修饰成焦谷氨酸是本领域技术人员熟知的)。当然，具有这种翻译后修饰的氨基酸的抗体包括在本发明使用的抗体中。
本文中，短语“识别抗原A的抗体”中的术语“识别”，短语“结合抗原A的抗体”中的术语“结合”，以及短语“特异性结合抗原A的抗体”中的术语“特异性结合”可以广义上互换使用。
本发明中的多肽通常是指长度约为10个氨基酸或更长的蛋白质和肽。通常，它们是生物来源的多肽，但不特别限于这种多肽，并且可以是，例如，包含人工设计序列的多肽。此外，它们可以是任何天然多肽，或合成多肽，重组多肽等。另外，上述多肽的片段也包括在本发明的多肽中。
术语“抗体”以最广义使用，可以是单克隆抗体、多克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、抗体衍生物和修饰的抗体产物(Miller K等人，JImmunol.2003,170(9),4854-61)，只要它们显示出所需的生物活性。抗体可以是小鼠抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体或源自其他物种的抗体，或者它们可以是人工合成的抗体。本文公开的抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或免疫球蛋白分子的亚类。免疫球蛋白可以源自任何物种(例如，人、小鼠或兔)。术语“抗体”和“免疫球蛋白”在广义上可互换使用。
术语“抗体衍生物”包括抗体的一部分，优选抗体可变结构域，或抗体的至少抗原结合区。抗体衍生物包括，例如，Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、线性抗体和由抗体衍生物形成的单链抗体(scFv)、sc(Fv)2、Fab3、结构域抗体(dAb)(WO 2004/058821，WO 2003/002609)、双抗体、三抗体、四抗体、微抗体和多特异性抗体，但不限于此。这里，“Fab”由单个轻链和单个重链的CH1结构域和可变区构成。此外，“Fv”是最小的抗体衍生物，包括完整的抗原识别区和抗原结合区。抗体衍生物可以是例如IgG抗体和Fc的融合体。例如，可以参考美国专利No.5641870说明书中的实施例2；Zapata G等人，Protein Eng.1995,8(10),1057-1062；Olafsen T等人，Protein Eng.Design&Sel.2004,17(4):315-323；Holliger P等人，Nat.Biotechnol.2005,23(9):1126-36；Fischer N等人，Pathobiology.2007,74(1):3-14；Shen J等人，J Immunol Methods.2007,318,65-74；和Wu等人，Nat Biotechnol.2007,25(11),1290-7。
双抗体是通过基因融合构建的二价低分子量抗体(微抗体)(Holliger，P等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993；90:6444-6448；EP 404,097；WO 93/11161)。双抗体是由两条多肽链组成的二聚体，其中每条多肽链包含通过连接体连接的L链可变区(VL)和H链可变区(VH)，该连接体足够短以防止这两个结构域在同一链内缔合，例如，优选2-12个氨基酸，更优选3-10个氨基酸，特别是约5个氨基酸的连接体。因为在相同多肽上编码的VL和VH之间的连接体太短而不能形成单链可变区片段，多肽链形成二聚体。因此，双抗体包含两个抗原结合位点。
单链抗体或scFv抗体片段包含抗体的VH和VL区，并且这些区域存在于单一多肽链中。通常，Fv多肽还包含VH和VL区之间的多肽连接体，这使得scFv能够形成抗原结合所必需的结构(关于scFv的综述，参见Pluckthun“The Pharmacology of MonoclonalAntibodies”第113卷)(Rosenburg和Moore编辑(Springer Verlag，New York)，pp.269-315,1994)。在本发明的上下文中，连接体不受特别限制，只要它们不抑制连接在其末端的抗体可变区的表达即可。
双特异性抗体可以通过化学交联Fab'来生产。双特异性F(ab')2可以例如通过从抗体制备Fab'，使用它来用邻亚苯基二马来酰亚胺(ortho-phenylenedi-maleimide,o-PDM)产生马来酰亚胺化的Fab'，然后使其与由另一抗体制备的Fab'反应以交联来自不同抗体的Fab'(Keler T等人，Cancer Research 1997,57：4008-4014)。化学连接Fab'-硫代硝基苯甲酸(TNB)衍生物和抗体片段如Fab'-硫醇(SH)的方法也是已知的(Brennan M等人，Science 1985；229:81-83)。
也可以使用来自Fos和Jun的亮氨酸拉链代替化学交联。尽管它们也形成同型二聚体，但利用Fos和Jun优先形成异二聚体。表达并制备加入Fos亮氨酸拉链的Fab'和加入Jun亮氨酸拉链的另一个Fab'。将在温和条件下还原的单体Fab'-Fos和Fab'-Jun混合并反应形成双特异性F(ab’)2(Kostelny SA等人，J.of Immunology，1992,148:1547-53)。该方法不仅可以应用于Fab'，还可以应用于scFv、Fv等。
此外，双特异性抗体包括sc(Fv)2，例如IgG-scFv(Protein Eng Des Sel.2010；23(4)：221-8)和BiTE(Drug Discov Today 2005；15；10(18)：1237-44)，DVD-Ig(NatBiotechnol.2007；25(11)：1290-7.Epub 2007年10月14日；和MAbs 2009；1(4)：339-47.Epub 2009年7月10日)，以及包括二合一抗体(Science 2009；20；323(5921)：1610-4；和Immunotherapy 2009；1(5)：749-51)、Tri-Fab、串联scFv和双抗体的其他抗体(IDrugs2010；13：698-700)也是已知的(MAbs 2009；1(6)：539-547)。此外，即使使用scFv-Fc和支架-Fc等分子形式时，也可以通过优先分泌Fc的异源组合来有效地生产双特异性抗体(Ridgway JB等人，Protein Engineering 1996；9：617-621；Merchant AM等人，NatureBiotechnology 1998；16：677-681；WO 2006/106905；和Davis JH等人，Protein Eng DesSel 2010；4：195-202)。
也可以使用双抗体生产双特异性抗体。双特异性双抗体是两个交叉scFv片段的异二聚体。更具体地，它通过使用VH(A)-VL(B)和VH(B)-VL(A)形成异二聚体来制备，所述VH(A)-VL(B)和VH(B)-VL(A)通过使用约5个残基的相对短的连接体连接源自两种抗体A和B的VH和VL而制备(Holliger P等人，Proc Natl.Acad.Sci.USA 1993；90：6444-6448)。
通过将两个scFv用包含约15个残基的柔性且相对长的连接体连接(单链双抗体：Kipriyanov SM等，J.of Molecular Biology 1999；293：41-56)，并进行合适的氨基酸取代(knobs-into-holes：Zhu Z等人，Protein Science1997；6：781-788；VH/VL interfaceengineering：Igawa T等人，Protein Eng Des Sel 2010；8：667-77)，可以实现所需的结构。
可以通过将两种类型的scFv用包含约15个残基的柔性且相对长的连接体连接而生产的sc(Fv)2也可以是双特异性抗体(Mallender WD等人，J.of Biological Chemistry1994；269：199-206)。
修饰的抗体产物的实例可包括与各种分子(例如聚乙二醇(PEG)连接的抗体。本发明的抗体包括这种修饰的抗体产物。待连接的物质不限于本发明的经修饰的抗体产物。为了产生这种修饰的抗体产物，可以对获得的抗体进行化学修饰。这种方法已经在该领域中建立。
“双特异性”抗体是指具有识别不同表位的可变区的抗体，其中这些区域在同一抗体分子内。双特异性抗体可以是识别两种或更多种不同抗原的抗体，或识别同一抗原上的两种或更多种不同表位的抗体。双特异性抗体不仅可以包括完整抗体，还可以包括抗体衍生物。本发明的抗体还包括双特异性抗体。本文中，同义地使用抗FⅨa/FX双特异性抗体和识别FⅨa和FX的双特异性抗体。
生产基因工程抗体的方法
通过使用基因工程技术生产的重组抗体可用作抗体。通过从杂交瘤或产生抗体的细胞(例如产生抗体的致敏淋巴细胞)中克隆编码抗体的DNA，将它们插入载体，然后将它们引入宿主(宿主细胞)以产生抗体，可以获得重组抗体。
抗体包括人抗体、小鼠抗体和大鼠抗体，它们的来源不受限制。它们也可以是基因修饰的抗体，例如嵌合抗体和人源化抗体。
获得人抗体的方法是已知的。例如，携带整个人抗体基因库的转基因动物可以用目标抗原免疫以获得目标人抗体(参见国际公开WO 93/12227，WO 92/03918，WO 94/02602，WO 94/25585，WO 96/34096和WO 96/33735)。
可以使用已知方法生产基因修饰的抗体。具体地，例如，嵌合抗体包含免疫动物抗体的H链和L链可变区，以及人抗体的H链和L链恒定区。嵌合抗体可以通过将编码来自免疫动物的抗体的可变区的DNA与编码人抗体的恒定区的DNA连接，将其插入表达载体，然后将其导入宿主以生产抗体来获得。
人源化抗体是经修饰的抗体，其也称为重构的人抗体。通过将源自免疫动物的抗体的互补决定区(CDR)转移至人抗体的CDR来构建人源化抗体。用于此目的的常规基因重组技术是已知的(参见欧洲专利申请公开号EP 239400；国际公开号WO 96/02576；Sato K等人，Cancer Research 1993,53：851-856；国际公开号WO 99/51743)。
然而双特异性抗体不限于IgG类型的抗体，例如，IgG型双特异性抗体可以由通过融合产生IgG抗体的两种类型的杂交瘤产生的杂交杂交瘤(四倍体)来分泌(Milstein C.等人，Nature 1983,305：537-540)。它们还可以通过将构成两种类型的目标IgG的L链和H链基因(总共四种类型的基因)引入细胞中以共表达基因来分泌。
在这种情况下，通过将合适的氨基酸取代引入H链的CH3区，可以优先分泌具有H链异质组合的IgG(Ridgway JB等，Protein Engineering 1996,9：617-621；Merchant AM等人，Nature Biotechnology 1998,16：677-681；WO 2006/106905；Davis JH等人，ProteinEng Des Sel.2010,4：195-202)。
关于L链，由于L链可变区的多样性低于H链可变区的多样性，可以预期获得可赋予两条H链结合能力的共同L链。本发明的抗体可以是包含共同L链的抗体。通过将共同L链和两条H链的基因引入细胞，可以有效地表达双特异性IgG。
抗体生产方法
可以通过本领域技术人员已知的方法生产本发明的抗体。具体地，将编码目标抗体的DNA插入表达载体中。进行插入表达载体，使得表达将在表达调控区如增强子和启动子的控制下进行。接下来，使用该表达载体转化宿主细胞以表达抗体。宿主和表达载体的适当组合可用于该步骤。
载体的实例包括M13系列载体、pUC系列载体、pBR322、pBluescript和pCR-Script。除了这些载体之外，例如，pGEM-T、pDIRECT或pT7也可用于cDNA亚克隆和切除的目的。
特别地，表达载体可用于将载体用于生产抗体的目的。例如，当宿主是大肠杆菌(E.coli)如JM109、DH5α、HB101或XL1-Blue时，表达载体必不可少地具有允许在大肠杆菌中有效表达的启动子，例如lacZ启动子(Ward等人，Nature(1989)341,544-546；和FASEB J(1992)6,2422-2427)、araB启动子(Better等人，Science(1988)240,1041-1043)或T7启动子。此类载体的实例包括上述载体以及pGEX-5X-1(由Pharmacia制备)、“QIAexpresssystem”(由QIAGEN制备)、pEGFP和pET(在这种情况下，宿主优选表达T7 RNA聚合酶的BL21)。
载体可含有用于多肽分泌的信号序列。在大肠杆菌周质中生产的情况下，pelB信号序列(Lei，S.P等人，J.Bacteriol.(1987)169,4397)可用作多肽分泌的信号序列。可以使用例如氯化钙法或电穿孔法将载体转移至宿主细胞。
除了大肠杆菌表达载体之外，用于生产本发明抗体的载体的实例包括哺乳动物来源的表达载体(例如，pcDNA3(由Invitrogen Corp.制备)、pEGF-BOS(NucleicAcids.Res.1990，18(17)，p5322)、pEF和pCDM8)、昆虫细胞来源的表达载体(例如，“Bac-to-BAC baculovairus expression system”(由GIBCO BRL制备)和pBacPAK8)、植物来源的表达载体(例如，pMH1和pMH2)、动物病毒来源的表达载体(例如，pHSV、pMV和pAdexLcw)、逆转录病毒来源的表达载体(例如，pZIPneo)、酵母来源的表达载体(例如，“Pichia ExpressionKit”(由Invitrogen Corp.制备)、pNV11和SP-Q01)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)来源的表达载体(例如，pPL608和pKTH50)。
为了在动物细胞如CHO细胞、COS细胞或NIH3T3细胞中表达，载体必不可少地具有细胞内表达所必需的启动子，例如SV40启动子(Mulligan等人，Nature(1979)277,108)、MMTV-LTR启动子、EF1α启动子(Mizushima等人，Nucleic Acids Res(1990)18,5322)、CAG启动子(Gene(1991)108,193)或CMV启动子，更优选具有筛选转化细胞的基因(例如，可以作为药物标记物的药物抗性基因(新霉素，G418等))。具有这种特性的载体的实例包括pMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV和pOP13。
旨在稳定表达基因并增加细胞内基因拷贝数的示例性方法涉及用具有作为其互补物的DHFR基因的载体(例如，pCHOI)转染缺乏核酸合成途径的CHO细胞，并在基因扩增中使用甲氨蝶呤(MTX)。旨在瞬时表达基因的示例性方法包括使用具有在其染色体上表达SV40T抗原的基因的COS细胞，以利用具有SV40复制起点的载体(pcD等)转化该细胞。可以使用源自多瘤病毒、腺病毒、牛乳头瘤病毒(BPV)等的复制起点。用于增加宿主细胞系统中基因拷贝数的表达载体可另外含有选择标记，例如氨基糖苷转移酶(APH)基因、胸苷激酶(TK)基因、大肠杆菌黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Ecogpt)基因或二氢叶酸还原酶(dhfr)基因。
通过上述方法获得的本发明的抗体可以从宿主细胞内部或从细胞外部(培养基等)中分离并纯化成几乎纯的和同质的抗体。可以通过常规用于分离和纯化抗体的方法分离和纯化抗体，并且方法的类型不受限制。例如，可以通过适当选择和组合柱层析、过滤、超滤、盐析、溶剂沉淀、溶剂提取、蒸馏、免疫沉淀、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦、透析、重结晶等来分离和纯化抗体。
层析包括，例如，亲和层析、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤、反相层析和吸附层析(Strategies for Protein Purification and Characterization:A LaboratoryCourse Manual.Ed Daniel R.Marshak等人,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1996)。上述层析方法可以使用液相层析法进行，例如HPLC和FPLC。用于亲和层析的柱包括蛋白A柱和蛋白G柱。使用蛋白质A的柱包括例如Hyper D、POROS和Sepharose FF(GEAmersham Biosciences)。本发明包括使用这些纯化方法高度纯化的抗体。
用于本发明治疗或预防目的的药物组合物可以通过(如果需要)与合适的药学上可接受的载体(carrier)、媒介(vehicle)等混合，然后制成冻干制剂或溶液制剂来制备。合适的药学上可接受的载体和媒介的实例包括无菌水、生理盐水、稳定剂、赋形剂、抗氧化剂(如抗坏血酸)、缓冲剂(如磷酸盐、柠檬酸盐、组氨酸和其他有机酸)、防腐剂、表面活性剂(如PEG和Tween)、螯合剂(如EDTA)和粘合剂。它们还可以包含其他低分子量多肽、蛋白质(如血清白蛋白、明胶和免疫球蛋白)、氨基酸(如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、蛋氨酸、精氨酸和赖氨酸)、糖和碳水化合物(如多糖和单糖)、以及糖醇(如甘露醇和山梨糖醇)。当制备注射用水溶液时，可以使用生理盐水和包含葡萄糖和其他佐剂(如D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露糖醇和氯化钠)的等渗溶液，并且如果需要，可以与适当的增溶剂如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇和PEG)和非离子表面活性剂(例如聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、泊洛沙姆188和HCO-50)组合使用。通过将透明质酸酶混合到制剂中，可以皮下施用更大的液体体积(Expert Opin Drug Deliv.2007Jul；4(4)：427-40)。或者，可以预先将本发明的药物组合物填充到注射器中。溶液制剂可根据WO2011/090088中描述的方法制备。
本发明的药物组合物可以通过任何合适的途径施用于患者。例如，患者可以通过静脉内、肌肉内、腹膜内、脑内、透皮、皮下、关节内、舌下、滑膜内、口服、吸入、局部或外部途径在一段时间内用推注或连续输注治疗。静脉给药或皮下给药是优选的。本申请中的患者包括人类患者和非人类动物患者。在本申请中，术语“患者”可与“受试者”和“个体”互换使用。
在上述双特异性抗体的情况下，剂量为例如0.001mg/kg至1000mg/kg。在上述双特异性抗体的情况下，给药间隔为至少一天或更长。
旋转血栓弹性测定法(ROTEM)，活化部分促凝血酶原激酶时间(APTT)，凝块波形分析(clot waveform analysis，CWA)，凝血酶生成测定(TGA)等广泛已知作为监测凝血因子如FⅧ的药物功效的方法，并且本领域技术人员可以通过适当地改变/修改这些方法来使用它们。这些方法可以单独使用或组合使用，并且可以根据至少一种方法的结果确定药物功效。
ROTEM是一种可以通过监测血栓弹性图(凝血的弹性变化)来全面评估血液的凝固性和凝血过程的检查方法。它通常用于分析出血原因和确定治疗剂的作用。将诸如Ca触发剂的反应引发试剂添加到测试血液中，并且测量凝固时间(CT)、凝块形成时间(CFT)等作为评估参数。
长期以来，APTT被广泛用作监测FⅧ制剂的药效的方法。APTT是一种方法，其中将APTT试剂加入到测试血浆中，然后加入CaCl2，并测量纤维蛋白原转化成不溶性纤维蛋白的时间，即凝血开始的时间。
CWA是一种测试，其中随着凝血反应的进行而产生的纤维蛋白的量测量为随时间的光学(例如吸光度)变化。在CWA中，可以随时间评估从纤维蛋白形成的初始阶段到凝血反应的扩大阶段的一系列凝血反应。此外，关于CWA的凝血引发试剂，已经报道了APTT试剂(Thromb Haemost 2002；87(3)：436-41，J Thromb Haemost 2006；4(2)：377-84))，具有低浓度组织因子(TF)和凝血因子Ⅻ(FⅫ)激活剂(鞣花酸)的混合溶液的试剂(J ThrombHaemost 2014；12(3)：355-62)等试剂。凝块波形是表示与光量相关的光学信息(吸光度)的时间变化的波形。对凝块波形进行微分(第一次微分)以计算凝血速度，并使用最大凝血速度作为参数。对凝血速度形进行微分(第二次微分)以计算凝血加速度，并且使用最大凝血加速度作为参数(Haemophilia 2008；14：83-92，J Thromb Haemost 2014；12(3)：355-62)。
TGA是一种测定，其中随着凝血反应的进行而产生的凝血酶的量使用凝血酶的荧光底物测量为随时间的酶活性(Haemophilia 2008；14(suppl.3)：83-92)。
在本发明的一个实施方案中，提供了用于预防和/或治疗FⅨ病症的药物组合物，其包含代替FⅧ功能的多特异性抗原结合分子。FⅨ病症是由FⅨ的先天性缺陷或功能障碍引起的罕见的出血性疾病，并且包括例如血友病B和FⅨ缺乏病。另外，FⅨ的活性降低或缺陷包括例如由于先天性和/或获得性原因的那些，但不限于此。与正常受试者相比，患者的FⅨ活性降低程度优选小于40％(例如，小于40％，小于30％，小于20％，小于10％)，更优选小于10％(例如，小于10％，小于9％，或小于8％，小于7％，或小于6％)，甚至更优选小于5％(例如，小于5％，小于4％，小于3％，或小于2％)，特别优选小于1％，但不限于此。测量FⅨ活性的方法是本领域技术人员熟知的(例如，“Minna ni yakudatsu ketsuyuubyou no kisoto rinsho”(Basics and clinical practice of hemophilia useful for all),SatoshiShirahata,Iyaku Journal,2009等)。
在本发明的一个实施方案中，血友病B患者或患有FⅨ缺乏病的患者包括具有或不具有抑制剂(针对FⅨ的自身抗体)的患者，具有降低或完全缺乏FⅨ水平的患者，以及具有降低或完全缺乏FⅨ活性的患者，但不特别限于此。
在一个方面，血友病B患者或FⅨ缺乏病患者是具有小于1.0IU/dL的微量FⅨ活性的严重血友病B患者或严重FⅨ缺乏病患者。在一个方面，血友病B患者或FⅨ缺乏病患者是不携带抑制剂的血友病B患者或FⅨ缺乏病患者。
术语“血友病B”和“FⅨ缺乏病”在广义上可互换使用。
在一个实施方案中，本发明提供用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的药物组合物，其包含功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子，其中所述组合物与凝血因子Ⅸ制剂(FⅨ制剂)组合使用。在组合使用中，这些药剂可以同时或连续给药，或者可以先施用一种，然后在一段时间后再施用另一种。
另一方面，本发明提供用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的药物组合物，其包含功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子，其中所述组合物用于增强FⅨ制剂的凝血活性。
此外，另一方面，本发明提供用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的组合药物，其是功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子和FⅨ制剂的组合。
另外，另一方面，本发明提供了使用功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子来增强患有凝血因子Ⅸ病症的患者的FⅨ制剂的凝血活性的方法。
短语“增强血液凝固活性”是指，例如，与施用多特异性抗原结合分子之前相比，通过施用多特异性抗原结合分子缩短APTT至少一秒，优选至少三秒或五秒，更优选至少十秒。
此外，另一方面，本发明提供凝血因子Ⅸ制剂，其与用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的药物组合物组合使用，该药物组合物包含功能性代替血凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子。
此外，本发明提供凝血因子Ⅸ制剂，用于增强用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的药物组合物的FⅧ功能代替活性，该药物组合物包含功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子。
此外，本发明提供了使用凝血因子Ⅸ制剂增强多特异性抗原结合分子的FⅧ功能代替活性的方法，所述多特异性抗原结合分子在患有凝血因子Ⅸ病症的患者中功能性代替凝血因子Ⅷ。
FⅨ制剂可以是包含FⅨ的任何药物组合物，不管FⅨ的来源和分子形式如何，并且包括Christmassin M、Novact M、PPSB-HT、BeneFⅨ(nonacog alfa)、Rixubis(nonacoggamma)、Alprolix(eftrenonacog alfa)和Idelvion(albutrepenonacog alfa)，但不特别限于此。
在本发明的一个实施方案中，FⅨ不限于人源FⅨ，并且可以是源自人、牛、猪、狗、猫或小鼠/大鼠的FⅨ。在一个方面，FⅨ是人FⅨ，其是指由415个氨基酸残基组成的人FⅨ，其通过从由461个氨基酸残基组成的未成熟人FⅨ(SEQ ID NO:16)(参见例如UniProtKB/Swiss-Prot Accession P00740-1)中去除由46个氨基酸组成的N端信号序列和前肽区而形成。人FⅨ由SEQ ID NO:16的47至461位显示。FⅨ包括具有FⅨ典型特征的任何形式的FⅨ。通常，FⅨ含有GLA结构域(含有β-羧基谷氨酸残基的结构域)、两个EGF结构域(人EGF同源结构域)、活化肽结构域和C-末端蛋白酶结构域。然而，FⅨ不必限于含有上述的FⅨ，它可以包含本技术领域中已知的与这些结构域同义的结构域，或其部分缺失的片段。FⅨ或其序列变体不限于以下，但它们已如美国专利号4,770,999和7,700,734中所述被克隆，并且已经分离了编码人FⅨ的cDNA(参见例如，Choo等人，Nature 299：178-180(1982)；Fair等人，Blood64：194-204(1984)；和Kurachi等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 79：6461-6464(1982))。这些已知的序列变体包括携带增强FⅨ功能的氨基酸取代和延长FⅨ半衰期的氨基酸取代的那些变体。此外，只要可以实现本发明的目的，可以使用各种FⅨ变体(例如，人工引入氨基酸序列突变的FⅨ)和各种修饰形式的FⅨ(例如，PEG化FⅨ)。在下文中，除非另外特别说明，否则在本申请中简单提及术语“FⅨ”，其包括其序列变体、FⅨ变体和修饰形式的FⅨ。
如本文所用，由表述“包含......”表示的实施方案可包括由表述“基本上由...组成”表示的实施方案和由表述“由......组成”表示的实施方案。
本文明确引用的所有专利和参考文献均通过引用整体并入本说明书中。
通过实施例进一步阐述本发明，但不应解释为限于此。
[实施例]
在下文中，将通过实施例具体描述本发明，但不应解释为限于此。
[实施例1]
在本发明中，使用来自除血友病A、获得性血友病A、血管性血友病和血友病C之外的FⅨ病症的血液或血浆检查功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子的血液/血浆促凝血活性。具体而言，使用来自血友病B患者的血液/血浆和市售的FⅨ缺陷型人血浆(GeorgeKing Bio-Medical)，通过每种凝血评估方法，ROTEM和APTT，检查ACE910(艾美赛珠单抗(Emicizumab))(其是专利文献(WO2012/067176)中描述的双特异性抗体并且是上述多特异性抗原结合分子之一)的血液/血浆促凝血活性。
[实施例2]
ACE910的制备，它是一种代替FⅧ功能的抗FⅨa/FX双特异性抗体
通过WO 2005/035756，WO 2006/109592和WO 2012/067176中描述的方法获得ACE910。通过将抗体基因掺入动物细胞表达载体并将其转染到CHO细胞中来表达该双特异性抗体。然后纯化细胞培养上清液中含有的双特异性抗体。
通过下面所示的酶测定法测量由此纯化的双特异性抗体的FⅧ功能代替活性。在室温下，将1nM人FⅨa(Enzyme Research Laboratories)、140nM人FX(Enzyme ResearchLaboratories)、20μM磷脂(10％磷脂酰丝氨酸、60％磷脂酰胆碱、30％磷脂酰乙醇胺)和双特异性抗体与含有5mM CaCl2和0.1％牛血清白蛋白的Tris-缓冲盐水溶液混合，并孵育2分钟以通过FⅨa引起FX活化反应进行。加入EDTA终止该反应。随后，加入FXa特异性生色底物溶液S-2222(CHROMOGENIX)，并使用SpectraMax 340PC384(Molecular Devices)测量405nm处吸光度的变化。由已知浓度的人FXa(Enzyme Research Laboratories)的吸光度变化制备校准曲线，并评估双特异性抗体的FXa生产促进活性。
[实施例3]
ROTEM测量
使用ROTEM delta测量装置(Tem International GmbH)根据常规方法进行ROTEM测量。使用钙溶液star-tem试剂(Ref.No.503-01，Tem International GmbH)作为Ca触发剂3002
APTT测量
使用Thrombocheck APTT-SLA(Sysmex)作为APTT试剂。将50μL APTT试剂加入到50μL含有ACE910和/或抗FⅨ-Gla抗体的FⅨ病症患者来源的血浆或FⅨ缺陷型人血浆中(Thromb Res 2000；100：73-79)。在37℃孵育5分钟后，加入50μL 0.02mol/L氯化钙溶液以引发凝血反应，并根据常规方法用自动血液凝固测量装置(CS-2000i，Sysmex)测量APTT。
[实施例4]
ROTEM测量结果
使用通过将ACE910添加到源自FⅨ病症患者的血液中制备的样品，根据Ca触发的ROTEM确定凝血(初始)时间缩短百分比[(1-加入ACE910后的凝血(初始)时间/加入ACE910前的凝血(初始)时间)×100]。根据ROTEM的凝血(初始)时间计算为通过ROTEM delta测量装置测量的凝血时间(CT)和凝块形成时间(CFT)的总和。
使用来自17例利用FⅨ制剂进行常规给药治疗(中位数FⅨ:C为1.9IU/dL；FⅨ:C范围从小于0.2IU/dL至16.5IU/dL)的FⅨ病症患者的25份血样进行Ca触发的ROTEM。结果，大多数情况下，通过离体添加ACE910(50μg/mL)缩短了凝血(初始)时间，中位缩短百分比为18％(图1显示一些样品的凝血(初始)时间的比例)。
APTT测量结果
使用通过将ACE910添加至源自FⅨ病症患者的血浆或FⅨ缺陷型人血浆而制备的样品，测定APTT的缩短百分比[(1-加入ACE910后的APTT/加入ACE910前的APTT)×100]。
当在10例FⅨ病症患者的血浆中离体加入ACE910(100μg/mL)时，在一个FⅨ抑制剂阳性病例中没有观察到APTT缩短效应，缩短率为-6％(APTT比例为1.06)。然而，在所有其余9例(FⅨ:C范围为0.9IU/dL至6.4IU/dL)中，ACE910有效缩短APTT，中位缩短率为39％(范围从35％至45％)(APTT比例为0.55至0.65)(图2)。
将FⅨ制剂(BeneFⅨ，Pfizer)以0、0.01、0.1、1、10和100IU/dL的浓度添加到市售的FⅨ缺陷型人血浆中，并且进一步离体添加ACE910。评估加入100μg/mL ACE910后APTT缩短的百分比。结果显示，根据FⅨ制剂的各自浓度，APTT缩短百分比为7％、11％、19％、26％、30％和33％(图3-1)。ACE910的APTT缩短作用是FⅨ浓度依赖性的，当FⅨ浓度为1IU/dL至100IU/dL时，缩短率的变化水平几乎是稳定的(26％至33％)。在未添加FⅨ制剂的FⅨ缺陷型人血浆中也略微观察到这种作用(缩短率为7％)，但是在该血浆中进一步离体添加抗FⅨ-Gla抗体(抗FⅨ抗体：通过参考Thromb Res 2000；100：73-79制备)(抗FⅨ-Gla抗体：150μg/mL)消除了这种作用(缩短率为-3％)(图3-2)。对于添加ACE910的组，添加了100μg/mLACE910。因此，这表明FⅨ对于ACE910表达其作用是必需的，并且即使存在痕量的FⅨ(在0.01IU/dL的水平下)也发挥作用。通过将不同浓度的FⅨ制剂添加到FⅨ缺陷的人血浆中来制备APTT缩短随FⅨ浓度变化的校准曲线，并且该校准曲线用于将通过添加ACE910获得的APTT转化为FⅨ:C。结果，在0.1IU/dL、1IU/dL和10IU/dL的FⅨ存在下，ACE910的最大作用分别相当于0.6IU/dL、11IU/dL和114IU/dL的FⅨ:C(即，％)。因此，FⅨ制剂的作用提高了6至11倍。许多严重的血友病B病例的FⅨ活性小于1.0IU/dL。该结果表明ACE910可用于具有极少量FⅨ的血友病B患者。
工业实用性
本发明提供了使用功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子的方法，其作为出血的发作和/或进展、伴随出血的疾病、或除血友病A、获得性血友病A、血管性血友病和血友病C以外的由FⅨ病症中的出血引起的疾病的预防方法和/或治疗方法。研究认为，由于其促凝血活性，功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子不仅可用作由FⅧ功能障碍引起的血友病A、获得性血友病A、血管性血友病和血友病C的出血的预防方法和/或治疗方法，还可用作其他FⅨ病症中的出血的预防方法和/或治疗方法。在FⅨ病症的当前治疗中，需要重复静脉内施用FⅨ制剂导致难以确保血管通路的问题，并且对患者和护理人员而言尤其在儿科病例中非常麻烦。已经开发了作为功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子的抗体(例如，ACE910)用作皮下给药的制剂，并且与需要重复静脉内施用的FⅨ制剂相比，预期减少给药负担。因此，本发明可能有希望作为FⅨ病症的预防剂和/或治疗剂。此外，功能性代替FⅧ的多特异性抗原结合分子和FⅨ制剂的组合使用可以增强FⅨ制剂的作用，并且这作为显示稳定止血效果的组合疗法是有前途的。

Claims (12)

1.一种用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的药物组合物，其包含功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子。
2.权利要求1所述的药物组合物，其中所述功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子是识别凝血因子Ⅸ和/或活化的凝血因子Ⅸ以及凝血因子X的双特异性抗体。
3.权利要求2所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体是：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:1,2和3的H链CDR 1,2和3氨基酸序列(Q499的H链CDR)的H链组成，第二多肽由包含SEQ ID NO:4,5和6的H链CDR 1,2和3氨基酸序列(J327的H链CDR)的H链组成，第三多肽和第四多肽由包含SEQ ID NO:7,8和9的L链CDR 1,2和3氨基酸序列(L404的L链CDR)的共同L链组成。
4.权利要求2或3所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体是：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由包含SEQ ID NO:13的H链可变区氨基酸序列的H链组成，第二多肽由包含SEQID NO:14的H链可变区氨基酸序列的H链组成，并且第三多肽和第四多肽由包含SEQ ID NO:15的L链可变区氨基酸序列的共同L链组成。
5.权利要求2-4中任一项所述的药物组合物，其中所述双特异性抗体是：
双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成配对，第二多肽和第四多肽形成配对，其中第一多肽由由SEQ ID NO:10的氨基酸序列组成的H链组成，第二多肽由由SEQ ID NO:11的氨基酸序列组成的H链组成，第三多肽和第四多肽由SEQ ID NO:12的共同L链组成。
6.权利要求1-5中任一项所述的药物组合物，其中所述凝血因子Ⅸ病症是由于凝血因子Ⅸ和/或活化的凝血因子Ⅸ活性的降低、功能障碍和/或缺陷而产生和/或发展的疾病。
7.权利要求1-6中任一项所述的药物组合物，其中凝血因子Ⅸ病症是先天性或获得性疾病。
8.权利要求1-7中任一项所述的药物组合物，其中凝血因子Ⅸ病症是血友病B或凝血因子Ⅸ缺乏病。
9.权利要求1-8中任一项所述的药物组合物，其与凝血因子Ⅸ制剂组合使用。
10.权利要求1-8中任一项所述的药物组合物，其用于提高凝血因子Ⅸ制剂的凝血活性。
11.一种用于预防和/或治疗凝血因子Ⅸ病症的组合药物，其是功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子与凝血因子Ⅸ制剂的组合。
12.一种在患有凝血因子Ⅸ病症的患者中增强凝血因子Ⅸ制剂的凝血活性的方法，其使用功能性代替凝血因子Ⅷ的多特异性抗原结合分子。
CN201880019962.8A 2017-03-31 2018-03-30 可用于预防和/或治疗凝血因子ⅸ异常、包含代替凝血因子ⅷ的功能的多特异性抗原结合分子的药物组合物 Pending CN110461358A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2017069714 2017-03-31
JP2017-069714 2017-03-31
PCT/JP2018/013547 WO2018181870A1 (ja) 2017-03-31 2018-03-30 血液凝固第ｖｉｉｉ因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第ｉｘ因子異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110461358A true CN110461358A (zh) 2019-11-15

Family

ID=63677626

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880019962.8A Pending CN110461358A (zh) 2017-03-31 2018-03-30 可用于预防和/或治疗凝血因子ⅸ异常、包含代替凝血因子ⅷ的功能的多特异性抗原结合分子的药物组合物

Country Status (7)

Country Link
US (2) US20210107994A1 (zh)
EP (1) EP3603670A4 (zh)
JP (1) JP7209298B2 (zh)
KR (1) KR20190133230A (zh)
CN (1) CN110461358A (zh)
TW (1) TW201836636A (zh)
WO (1) WO2018181870A1 (zh)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3050963B1 (en) 2005-03-31 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
IN2014DN10515A (zh) 2006-03-31 2015-08-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd
EP3345616A1 (en) 2006-03-31 2018-07-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody modification method for purifying bispecific antibody
CA2700701C (en) 2007-09-26 2020-12-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr
TWI505838B (zh) 2010-01-20 2015-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Stabilized antibody solution containing
SG10201803449VA (en) 2013-09-27 2018-05-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for producing polypeptide heteromultimer
TWI701435B (zh) 2014-09-26 2020-08-11 日商中外製藥股份有限公司 測定ｆｖｉｉｉ的反應性之方法
TWI700300B (zh) 2014-09-26 2020-08-01 日商中外製藥股份有限公司 中和具有第ｖｉｉｉ凝血因子（ｆｖｉｉｉ）機能替代活性的物質之抗體
JP7082484B2 (ja) 2015-04-01 2022-06-08 中外製薬株式会社 ポリペプチド異種多量体の製造方法
SG11201803989WA (en) 2015-12-28 2018-06-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for promoting efficiency of purification of fc region-containing polypeptide
SG11201901961SA (en) 2016-09-06 2019-04-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Methods of using a bispecific antibody that recognizes coagulation factor ix and/or activated coagulation factor ix and coagulation factor x and/or activated coagulation factor x
JP6496095B1 (ja) 2017-09-29 2019-04-03 中外製薬株式会社 血液凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）補因子機能代替活性を有する多重特異性抗原結合分子および当該分子を有効成分として含有する薬学的製剤
US11220554B2 (en) 2018-09-07 2022-01-11 Novo Nordisk A/S Procoagulant antibodies
CN113368098B (zh) * 2020-03-10 2024-03-29 鲁南制药集团股份有限公司 淫羊藿苷元在制备血友病防治药物中的用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016047656A1 (ja) * 2014-09-26 2016-03-31 中外製薬株式会社 凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）機能代替活性を有する物質を中和する抗体
WO2016166014A1 (en) * 2015-04-17 2016-10-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with coagulation factors and multispecific antibodies
WO2016171202A1 (ja) * 2015-04-24 2016-10-27 公立大学法人奈良県立医科大学 血液凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第ｘｉ因子（ｆｘｉ）異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2584443B2 (ja) 1985-04-22 1997-02-26 ジエネテイツクス・インスチチユ−ト・インコ−ポレ−テツド 活性化▲ｉ▼▲ｘ▼因子の高収率産生
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
WO1994025585A1 (en) 1993-04-26 1994-11-10 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
EP0546073B1 (en) 1990-08-29 1997-09-10 GenPharm International, Inc. production and use of transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
AU3328493A (en) 1991-12-17 1993-07-19 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
EP0652950B1 (en) 1992-07-24 2007-12-19 Amgen Fremont Inc. Generation of xenogeneic antibodies
FR2707189B1 (fr) 1993-07-09 1995-10-13 Gradient Ass Procédé de traitement de résidus de combustion et installation de mise en Óoeuvre dudit procédé.
CA2194907A1 (en) 1994-07-13 1996-02-01 Kouji Matsushima Reshaped human antibody against human interleukin-8
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
JP4312259B2 (ja) 1995-04-27 2009-08-12 アムジェン フレモント インク． 免疫したゼノマウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ）に由来するヒト抗体
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
HUP0101160A2 (hu) 1998-04-03 2001-08-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Humán szöveti faktor (TF) elleni humanizált antitest és eljárás előállítására
AU2002218166A1 (en) 2000-09-08 2002-03-22 Universitat Zurich Collections of repeat proteins comprising repeat modules
JP2004526419A (ja) 2000-10-16 2004-09-02 フィロス インク． 抗体模倣物および他の結合タンパク質のためのタンパク質骨格
US20030157561A1 (en) 2001-11-19 2003-08-21 Kolkman Joost A. Combinatorial libraries of monomer domains
WO2004058821A2 (en) 2002-12-27 2004-07-15 Domantis Limited Dual specific single domain antibodies specific for a ligand and for the receptor of the ligand
EP1399484B1 (en) 2001-06-28 2010-08-11 Domantis Limited Dual-specific ligand and its use
AU2003271174A1 (en) 2003-10-10 2005-04-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Double specific antibodies substituting for functional protein
EP1675878A2 (en) 2003-10-24 2006-07-05 Avidia, Inc. Ldl receptor class a and egf domain monomers and multimers
EP3050963B1 (en) 2005-03-31 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
DK2824183T3 (da) 2005-04-08 2020-09-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåde til fremstilling af bispecifikke antistoffer
US7700734B2 (en) 2007-01-09 2010-04-20 Shu-Wha Lin Recombinant human factor IX and use thereof
TWI505838B (zh) 2010-01-20 2015-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Stabilized antibody solution containing
RS57038B1 (sr) 2010-11-17 2018-05-31 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Multi-specifičan antigen-vezujući molekul koji ima alternativnu funkciju funkciji faktora viii koagulacije krvi
TW201625299A (zh) * 2014-06-20 2016-07-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 用於因第ｖｉｉｉ凝血因子及／或活化的第ｖｉｉｉ凝血因子的活性降低或欠缺而發病及／或進展的疾病之預防及／或治療之醫藥組成物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016047656A1 (ja) * 2014-09-26 2016-03-31 中外製薬株式会社 凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）機能代替活性を有する物質を中和する抗体
WO2016166014A1 (en) * 2015-04-17 2016-10-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with coagulation factors and multispecific antibodies
WO2016171202A1 (ja) * 2015-04-24 2016-10-27 公立大学法人奈良県立医科大学 血液凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第ｘｉ因子（ｆｘｉ）異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TOSHIYUKI: ""Molecular Defects of Factor IX", 《JAPANESE JOURNAL OF THROMBOSIS AND HEMOSTASIS》 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20190133230A (ko) 2019-12-02
US20210107994A1 (en) 2021-04-15
TW201836636A (zh) 2018-10-16
EP3603670A1 (en) 2020-02-05
JP7209298B2 (ja) 2023-01-20
JPWO2018181870A1 (ja) 2020-02-06
WO2018181870A1 (ja) 2018-10-04
US20240052059A1 (en) 2024-02-15
EP3603670A4 (en) 2021-03-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110461358A (zh) 可用于预防和/或治疗凝血因子ⅸ异常、包含代替凝血因子ⅷ的功能的多特异性抗原结合分子的药物组合物
RU2534564C1 (ru) Мультиспецифическая связывающая антиген молекула, которая обладает альтернативной функцией к функции фактора свертывания крови viii
JP7330977B2 (ja) Ｗｎｔサロゲート分子及びその使用
WO2016171202A1 (ja) 血液凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第ｘｉ因子（ｆｘｉ）異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物
JP2020055864A (ja) 血液凝固第ｖｉｉｉ因子および／または活性化血液凝固第ｖｉｉｉの活性の低下ないし欠損によって発症および／または進展する疾患の予防および／または治療に用いられる医薬組成物
TWI700300B (zh) 中和具有第ｖｉｉｉ凝血因子（ｆｖｉｉｉ）機能替代活性的物質之抗體
JP2011504371A (ja) 抗第ｘｉ因子モノクローナル抗体およびその使用方法
AU2017331739A1 (en) Coagulation factor binding proteins and uses thereof
JP6284481B2 (ja) 血液凝固反応の評価方法
JP2018510613A (ja) 新規な抗線維芽細胞活性化タンパク質（ｆａｐ）抗体およびその派生使用
JP2021176865A (ja) 増強された活性を有する抗体及びその改変方法
AU2021202612B2 (en) Inhibition of platelet aggregation using anti-human GPVI antibodies
BR112021003789A2 (pt) método para tratar ataque de angioedema hereditário (hae) ou reduzir a taxa de ataque de hae
TWI701435B (zh) 測定ｆｖｉｉｉ的反應性之方法
EP3617316A1 (en) Coagulation factor ix with improved pharmacokinetics
JP2024057106A (ja) Ｗｎｔサロゲート分子及びその使用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40010041

Country of ref document: HK