JP7209298B2 - 血液凝固第ｖｉｉｉ因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第ｉｘ因子異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物 - Google Patents

血液凝固第ｖｉｉｉ因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第ｉｘ因子異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物 Download PDF

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Description

本発明は、血液凝固第VIII因子（FVIII）の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第IX因子（FIX）異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物に関する。
FIX異常症は、FIXの先天的欠損又は機能不全に起因する稀な出血性疾患である(非特許文献1)。FIX異常症は、血友病Bと称されることもある。FIXは酵素の前駆体であり、血液凝固反応が開始した際、前駆体から酵素活性を持つ活性型血液凝固第IX因子（FIXa）に変化する。FIXaは、活性型血液凝固第VIII因子（FVIIIa）等と共に血液凝固第X因子活性化複合体（tenase complex）を形成し、血液凝固第X因子（FX）の活性化を介して、血液凝固反応促進に重要な役割を果たす。同様にFVIII異常症は、FVIIIの先天的欠損又は機能不全に起因する出血性疾患であり、血友病Aと称されることもある。FIX異常症では、活性化部分トロンボプラスチン時間（APTT）がFVIII異常症と同様に異常延長する。FVIII異常症およびFIX異常症の鑑別は、FVIIIおよびFIXの定量（活性定量としてFVIII:CおよびFIX:C、因子抗原定量としてFVIII:AgおよびFIX:Ag）で行う。FIX異常症の出血に対しては主にFIX製剤で治療が実施され、出血を予防するために定期的にFIX製剤を投与する定期補充療法（予防投与）も実施されている。現在のところ、最も普通に使われているFIX異常症（血友病B）の定期補充療法プロトコールは、25～40 IU/kg のFIX製剤を週2回静脈内投与するものである。しかし、同じ国の中でさえも数多くの違ったプロトコールが実施されており、最適なプロトコールの検討は今後の問題である(非特許文献1)。また近年本邦においては、半減期延長型のFIX製剤も開発され、50 IU/kgの週1回又は100 IU/kgの10日に1回の頻度で静脈内投与を行う定期補充療法も利用可能となっている(非特許文献2)。しかしながら、静脈内投与の反復は、血管確保の困難さの課題があり、特に小児においては患者およびcare giverの大きな負担となっている（非特許文献3）。
血友病は、血液凝固因子のうちFVIIIまたはFIXの先天的欠損または機能不全に起因する出血性疾患である。FVIII異常に起因する疾患は血友病A、FIX異常に起因する疾患は血友病Bと称される。血友病の出血症状の重症度は、欠乏している凝固因子の血液中活性レベルと良く相関している。活性1%未満の患者が重症、活性1%以上5%未満の患者が中等症、活性5%以上40%未満の患者が軽症と分類される。血友病患者の約半数を占める重症患者においては、月に数回の出血症状を呈するが、これは中等症患者および軽症患者に比べ顕著に高頻度である。このことから、重症血友病患者においては、欠乏している凝固因子（FVIIIまたはFIX）の補充療法により、血液中の凝固因子活性を1%以上に維持することが、出血症状の発現阻止に有効と考えられている（非特許文献1）。
血友病患者における出血の予防および/または治療には、主として血漿から精製された若しくは遺伝子組換え技術により作製された凝固因子製剤（血友病A：FVIII、血友病B：FIX）が使用される。これらの製剤を用いて、出血時の止血を目的としたon-demand投与、または出血イベントの発生を防ぐための予防投与が行われる（非特許文献1、4）。しかしながら、FVIII製剤の血中半減期は、約12時間であるため、予防投与では週に3回程度の頻回投与が必要となる（非特許文献５、６）。FIX製剤の血中半減期は、16～28時間であり、3～38時間という大きな個人差も報告されており、予防投与では週に2回程度の頻回投与が標準的なプロトコールである（非特許文献5、6、7）。On-demand投与においては、再出血を防ぐため、必要に応じ、一定間隔で追加投与する必要がある。また、凝固因子製剤の投与は静脈内に実施される。従って、既存の凝固因子製剤と比べて、投与の負担が少ない（投与頻度が少なく、静注が必要ない）薬剤が、強く求められている。
また、投与された凝固因子製剤に対する抗体（インヒビター）が、血友病患者に発生することがある（非特許文献8）。血友病Aでは、重症患者の20～30%にインヒビターが発生し、血友病Bでは、血友病Aに比べてその発生頻度は低いものの、1～6%にインヒビターが発生するとの報告がある（非特許文献8、9）。インヒビターは、補充された凝固因子製剤の効果を打ち消すため、以後の凝固因子製剤による予防/治療に困難を来す。インヒビターが発生した患者（インヒビター患者）の出血に対しては、バイパス製剤（活性型血液凝固第VII因子（FVII）製剤やAPCC製剤）が投与される（非特許文献1、8）。それらの作用機序は、FVIII製剤又はFIX製剤の機能への依存性が少なく、インヒビター存在下の血友病でも止血作用を示し得る。しかしながら、その血中半減期は約2～8時間程度と短いため、頻回の静脈注射が必要であり、且つ、その止血活性の程度としては出血を十分止められないケースがある。従って、インヒビターの存在に左右されず、投与の負担が少ない薬剤が、強く求められている。
関連する出血異常症として、後天的に血液凝固因子に対する自己中和抗体が発生するなどの原因で、血液凝固因子が不全となる後天性血友病（非特許文献10、11）が考えられる。後天性血友病の多くは抗FVIII自己抗体が出現することによって引き起こされる。これらの後天性の出血異常症患者の出血に対しては、バイパス製剤などが投与されるが、同様に頻回の静脈注射や止血活性の程度として出血を十分止められないケースが課題である。
その他にもFVIIIが関与する出血異常症として、フォンビルブランド因子（vWF）の機能異常または欠損に起因するフォンビルブランド病が知られている。vWFは、血小板が、血管壁の損傷部位の内皮下組織に正常に粘着するのに必要であるだけでなく、FVIIIと複合体を形成し、血液中のFVIIIレベルを正常に保つのにも必要である。フォンビルブランド病患者では、これらの機能が低下し、止血機能異常を来たしている（非特許文献12）。フォンビルブランド病患者の出血に対しては、デスモプレシン（DDAVP）や血漿由来のvWFを含むFVIII製剤が投与されるが、同様に頻回の静脈注射や止血活性の程度として出血を十分止められないケースが課題である。
近年、FIXaおよびFXの双方を認識し、FVIIIの補因子機能、すなわちFIXaによるFX活性化を促進する機能を代替する機能を有する多重特異性抗原結分子が見出された(特許文献1、2、3)。多重特異性抗原結合分子のうち、二重特異性抗体は、血友病Aの出血に対する予防および/または治療のための医薬品組成物として開発が進められている(特許文献1、2、3、非特許文献13、14、15、16、17、18)。また、当該二重特異性抗体は、FVIIIの機能不全が関与する後天性血友病A、フォンビルブランド病、および血友病Cの出血に対する予防および/または治療への適用も考えられている（特許文献1、2、3、4）。さらに、当該二重特異性抗体は、血友病Aの治療において、FIX製剤との併用も考えられている（特許文献5）。
Guidelines for the management of hemophilia, 2005, World Federation of Hemophilia オルプロリクス静注用添付文書，2017 Haemophilia 2011；17：2-10 Nature 1984；312：330-337 Nature 1984；312：337-342 Biochim Biophys Acta 1986；871：268-278 Haemophilia 2007；13：663-669 Blood 2007；109(2)：546-551 Haemophilia 2013；19：2-10 Semin Thromb Hemost 2012；38：433-446 Thromb Haemost 2013；110：1114-1120 Blood 2013；122：3735-3740 Nature Medicine 2012;18(10):1570-1574 PLOS ONE 2013;8(2):e57479 J Thromb Haemost 2014;12(2):206-213 Blood 2014;124(20):3165-3171 Blood 2016;127(13):1633-1641 N Engl J Med 2016;374:2044-2053
WO2005/035756 WO2006/109592 WO2012/067176 WO2016/171202 WO2016/166014
本発明は、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、FIX異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物の提供を課題とする。
本発明者らは上記課題を解決すべく、FIX異常症患者由来の血液・血漿および市販のFIX欠乏ヒト血漿を用いて、ROTEMおよびAPTTの各凝固評価法にて、「FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子（FVIII機能代替分子）」の血液・血漿凝固促進作用を検証した。
その結果、本発明者らは、FIX異常症患者由来の血液・血漿およびFIX欠乏ヒト血漿において、上述の各凝固評価法において、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子が凝固促進作用を示すことを見出した。従って、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子は、FVIIIの機能不全に起因する血友病A、後天性血友病A、フォンビルブランド病、および血友病Cでの出血に対する予防剤および/または治療剤として利用できるのみならず、その凝固促進活性からFIX異常症での出血に対する予防剤および/または治療剤として利用できることが示された。
本発明はこのような知見に基づき、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血友病A、後天性血友病A、フォンビルブランド病、および血友病C以外のFIX異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物に関するものであり、より具体的には以下に関する。
〔１〕血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物。
〔２〕血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子が、血液凝固第IX因子および/または活性型血液凝固第IX因子ならびに血液凝固第X因子を認識する二重特異性抗体である、〔１〕に記載の医薬組成物。
〔３〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔２〕に記載の医薬組成物：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：1、2、3（Q499のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：4、5、6（J327のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：7、8、9（L404のL鎖CDR）に記載のL鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔４〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔２〕または〔３〕に記載の医薬組成物：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：13に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：14に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：15に記載のL鎖可変領域のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔５〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔２〕～〔４〕のいずれかに記載の医薬組成物：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：10に記載のアミノ酸配列からなるH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：11に記載のアミノ酸配列からなるH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：12に記載の共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔６〕血液凝固第IX因子異常症が、血液凝固第IX因子および／または活性型血液凝固第IX因子の活性の低下、機能異常および／または欠損によって発症および／または進展する疾患である、〔１〕～〔５〕のいずれかに記載の医薬組成物。
〔７〕血液凝固第IX因子異常症が先天性または後天性の疾患である、〔１〕～〔６〕のいずれかに記載の医薬組成物。
〔８〕血液凝固第IX因子異常症が血友病Bまたは血液凝固第IX因子欠乏症である、〔１〕～〔７〕のいずれかに記載の医薬組成物。
〔９〕血液凝固第IX因子製剤と併用するための、〔１〕～〔８〕のいずれかに記載の医薬組成物。
〔１０〕血液凝固第IX因子製剤の血液凝固活性を増強するための、〔１〕～〔８〕のいずれかに記載の医薬組成物。
〔１１〕血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子と血液凝固第IX因子製剤を組み合わせてなる、血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療に用いられる併用医薬。
〔１２〕血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を用いて血液凝固第IX因子異常症患者における血液凝固第IX因子製剤の血液凝固活性を増強する方法。
〔１３〕〔１〕～〔８〕のいずれかに記載の医薬組成物と併用するための血液凝固第IX因子製剤。
〔１４〕〔１〕～〔８〕のいずれかに記載の医薬組成物のFVIIIの機能を代替する活性を増強するための血液凝固第IX因子製剤。
〔１５〕血液凝固第IX因子製剤を用いて血友病B患者における血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子のFVIIIの機能を代替する活性を増強する方法。
〔Ａ１〕患者に対して、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を投与する工程を含む、血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療のための方法。
〔Ａ２〕血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子が、血液凝固第IX因子および/または活性型血液凝固第IX因子ならびに血液凝固第X因子を認識する二重特異性抗体である、〔Ａ１〕に記載の方法。
〔Ａ３〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔Ａ２〕に記載の方法：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：1、2、3（Q499のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：4、5、6（J327のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：7、8、9（L404のL鎖CDR）に記載のL鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔Ａ４〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔Ａ２〕または〔Ａ３〕に記載の方法：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：13に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：14に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：15に記載のL鎖可変領域のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔Ａ５〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔Ａ２〕～〔Ａ４〕のいずれかに記載の方法：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：10に記載のアミノ酸配列からなるH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：11に記載のアミノ酸配列からなるH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：12に記載の共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔Ａ６〕血液凝固第IX因子異常症が、血液凝固第IX因子および／または活性型血液凝固第IX因子の活性の低下、機能異常および／または欠損によって発症および／または進展する疾患である、〔Ａ１〕～〔Ａ５〕のいずれかに記載の方法。
〔Ａ７〕血液凝固第IX因子異常症が先天性または後天性の疾患である、〔Ａ１〕～〔Ａ６〕のいずれかに記載の方法。
〔Ａ８〕血液凝固第IX因子異常症が血友病Bまたは血液凝固第IX因子欠乏症である、〔Ａ１〕～〔Ａ７〕のいずれかに記載の方法。
〔Ａ９〕血液凝固第IX因子製剤との併用療法である、〔Ａ１〕～〔Ａ８〕のいずれかに記載の方法。
〔Ａ１０〕血液凝固第IX因子製剤の血液凝固活性を増強するための方法である、〔Ａ１〕～〔Ａ８〕のいずれかに記載の方法。
〔Ａ１１〕患者に対して、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子と血液凝固第IX因子製剤を組み合わせて投与する工程を含む、血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療のための方法。
〔Ａ１２〕血液凝固第IX因子異常症患者に対して、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を投与する工程を含む、血液凝固第IX因子製剤の血液凝固活性を増強する方法であって、該患者は、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子の投与の前に、同時に、または、後に、血液凝固第IX因子製剤が投与される患者である、方法。
〔Ａ１３〕患者に対して、血液凝固第IX因子製剤を投与する工程を含む、血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療のための方法であって、血液凝固第IX因子製剤が血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子と組み合わせて投与される方法。
〔Ａ１４〕血友病B患者に対して、血液凝固第IX因子製剤を投与する工程を含む、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子のFVIIIの機能を代替する活性を増強する方法であって、該患者は、血液凝固第IX因子製剤の投与の前に、同時に、または、後に、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子が投与される患者である、方法。
〔Ｂ１〕血液凝固第IX因子異常症の予防方法および／または治療方法に使用するための、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子。
〔Ｂ２〕血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子が、血液凝固第IX因子および/または活性型血液凝固第IX因子ならびに血液凝固第X因子を認識する二重特異性抗体である、〔Ｂ１〕に記載の抗原結合分子。
〔Ｂ３〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔Ｂ２〕に記載の抗原結合分子：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：1、2、3（Q499のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：4、5、6（J327のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：7、8、9（L404のL鎖CDR）に記載のL鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔Ｂ４〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔Ｂ２〕または〔Ｂ３〕に記載の抗原結合分子：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：13に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：14に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：15に記載のL鎖可変領域のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔Ｂ５〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔Ｂ２〕～〔Ｂ４〕のいずれかに記載の抗原結合分子：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：10に記載のアミノ酸配列からなるH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：11に記載のアミノ酸配列からなるH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：12に記載の共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔Ｂ６〕血液凝固第IX因子異常症が、血液凝固第IX因子および／または活性型血液凝固第IX因子の活性の低下、機能異常および／または欠損によって発症および／または進展する疾患である、〔Ｂ１〕～〔Ｂ５〕のいずれかに記載の抗原結合分子。
〔Ｂ７〕血液凝固第IX因子異常症が先天性または後天性の疾患である、〔Ｂ１〕～〔Ｂ６〕のいずれかに記載の抗原結合分子。
〔Ｂ８〕血液凝固第IX因子異常症が血友病Bまたは血液凝固第IX因子欠乏症である、〔Ｂ１〕～〔Ｂ７〕のいずれかに記載の抗原結合分子。
〔Ｂ９〕予防方法および／または治療方法が、血液凝固第IX因子製剤との併用療法である、〔Ｂ１〕～〔Ｂ８〕のいずれかに記載の抗原結合分子。
〔Ｂ１０〕予防方法および／または治療方法が、血液凝固第IX因子製剤の血液凝固活性の増強に使用するための方法である、〔Ｂ１〕～〔Ｂ８〕のいずれかに記載の抗原結合分子。
〔Ｂ１１〕血液凝固第IX因子異常症の予防方法および／または治療方法に使用するための、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子と血液凝固第IX因子製剤との併用医薬。
〔Ｂ１２〕血液凝固第IX因子異常症患者における血液凝固第IX因子製剤の血液凝固活性の増強に使用するための、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子。
〔Ｂ１３〕血液凝固第IX因子異常症の予防方法および／または治療方法に使用するための血液凝固第IX因子製剤であって、〔Ｂ１〕～〔Ｂ８〕のいずれかに記載の抗原結合分子と組み合わせて投与される血液凝固第IX因子製剤。
〔Ｂ１４〕〔Ｂ１〕～〔Ｂ８〕のいずれかに記載の抗原結合分子のFVIIIの機能を代替する活性の増強に使用するための血液凝固第IX因子製剤。
〔Ｂ１５〕血友病B患者における血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子のFVIIIの機能を代替する活性の増強に使用するための血液凝固第IX因子製剤。
〔Ｃ１〕血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療のための医薬の製造における、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子の使用。
〔Ｃ２〕血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子が、血液凝固第IX因子および/または活性型血液凝固第IX因子ならびに血液凝固第X因子を認識する二重特異性抗体である、〔Ｃ１〕に記載の使用。
〔Ｃ３〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔Ｃ２〕に記載の使用：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：1、2、3（Q499のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：4、5、6（J327のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：7、8、9（L404のL鎖CDR）に記載のL鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔Ｃ４〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔Ｃ２〕または〔Ｃ３〕に記載の使用：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：13に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：14に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：15に記載のL鎖可変領域のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔Ｃ５〕前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である〔Ｃ２〕～〔Ｃ４〕のいずれかに記載の使用：
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：10に記載のアミノ酸配列からなるH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：11に記載のアミノ酸配列からなるH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：12に記載の共通L鎖からなる二重特異性抗体。
〔Ｃ６〕血液凝固第IX因子異常症が、血液凝固第IX因子および／または活性型血液凝固第IX因子の活性の低下、機能異常および／または欠損によって発症および／または進展する疾患である、〔Ｃ１〕～〔Ｃ５〕のいずれかに記載の使用。
〔Ｃ７〕血液凝固第IX因子異常症が先天性または後天性の疾患である、〔Ｃ１〕～〔Ｃ６〕のいずれかに記載の使用。
〔Ｃ８〕血液凝固第IX因子異常症が血友病Bまたは血液凝固第IX因子欠乏症である、〔Ｃ１〕～〔Ｃ７〕のいずれかに記載の使用。
〔Ｃ９〕医薬が、血液凝固第IX因子製剤との併用医薬である、〔Ｃ１〕～〔Ｃ８〕のいずれかに記載の使用。
〔Ｃ１０〕医薬が、血液凝固第IX因子製剤の血液凝固活性を増強するための医薬である、〔Ｃ１〕～〔Ｃ８〕のいずれかに記載の使用。
〔Ｃ１１〕血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療のための併用医薬の製造における、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子と血液凝固第IX因子製剤の使用。
〔Ｃ１２〕血液凝固第IX因子異常症患者における血液凝固第IX因子製剤の血液凝固活性を増強するための医薬の製造における、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子の使用。
〔Ｃ１３〕血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療のための医薬であって、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子との併用医薬の製造における、血液凝固第IX因子製剤の使用。
〔Ｃ１４〕血友病B患者における血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子のFVIIIの機能を代替する活性を増強するための医薬の製造における、血液凝固第IX因子製剤の使用。
本発明により、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血友病A、後天性血友病A、フォンビルブランド病、および血友病C以外のFIX異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物が提供された。
定期投与療法中のFIX異常症の患者の血液検体を用いた、Caトリガーによる全血凝固能検査(ROTEM)での血液凝固(開始)時間短縮率を示す図である。 FIX異常症の患者の血漿における、ACE910 (100 μg/mL) ex vivo添加時のAPTT短縮率を示す図である。図中の略語の説明を以下に示す。 ACE： ACE910 sFIXd： 市販FIX欠乏ヒト血漿（Sysmex） CogtrN： 市販標準ヒト血漿（Coagtrol N, Sysmex） FIX:C： FIX活性量 FIX:Ag： FIX抗原量 市販FIX欠乏ヒト血漿(FIXd-plasmaまたはsFIXd)に、FIX製剤(rFIX, BeneFix，Pfizer)を0、0.01、0.1、1、10、および100 IU/dLの濃度で、または抗FIX-Gla抗体（anti-FIX Ab）を添加し、更にACE910を ex vivo添加して、100 μg/mLのACE910添加前後でAPTT短縮率を評価した図である。 FIX欠乏ヒト血漿に抗FIX-Gla抗体（aFIXAb）を更にex vivo添加した結果を示す図である。
本発明のFVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子とは、FVIII様活性を有する多重特異性抗原結合分子と言い換えることもできる。本発明において「FVIIIの機能を代替する」とは、FIXaによるFXの活性化を促進する（FIXaによるFXa産生を促進する）ことを意味する。また、より具体的には、本発明において「FVIIIの機能を代替する」とは、FIXおよび/またはFIXaならびにFXを認識し、FIXaによるFXの活性化を促進する（FIXaによるFXa産生を促進する）ことを意味する。FXa産生促進活性は、当業者によく知られた方法により行うことができ、例えば、FIXa、FX、合成基質S-2222（FXaの合成基質）、リン脂質から成る測定系で評価することができる。より詳細には、WO2005/035756、WO2006/109592、WO2012/067176などに記載の方法に従って評価することが出来る。
本発明の多重特異性抗原結合分子とは、少なくとも2種類の異なる抗原またはエピトープに対して特異的に結合することができる第一の抗原結合部位と第二の抗原結合部位を含む。第一の抗原結合部位と第二の抗原結合部位は、それぞれ、FIXおよび/またはFIXaとFXに対して結合活性を有していれば特に限定されないが、例えば、抗体、Scaffold分子（抗体様分子）、ペプチド等の抗原との結合に必要な部位、または当該部位を含む断片をあげることができる。Scaffold分子とは、ターゲット分子に結合することで機能を発揮するような分子であり、少なくとも1つの標的抗原に結合することができる立体構造的に安定なポリペプチドであれば、どのようなポリペプチドであっても用いることができる。そのようなポリペプチドの例としては、例えば、抗体可変領域、フィブロネクチン（WO2002/032925）、Protein Aドメイン（WO1995/001937）、LDL受容体Aドメイン（WO2004/044011, WO2005/040229）、アンキリン（WO2002/020565）等のほか、Nygrenら（Current Opinion in Structural Biology 1997;7:463-469、Journal of Immunol Methods2004;290:3-28)、Binzら(Nature Biotech 2005;23:1257-1266)、Hosseら(Protein Science 2006;15:14-27)に記載の分子を挙げることができる。また、Curr Opin Mol Ther 2010;12(4):487-95やDrugs 2008;68(7):901-12に記されているように標的抗原に結合することができるペプチド分子を用いることもできる。
本発明において、多重特異性抗原結合分子としては、少なくとも2種類の異なる抗原またはエピトープと結合することができる分子であれば特に限定されない。例えば、抗体やScaffold分子およびこれらの断片等の上記抗原結合部位を含むポリペプチド、核酸分子やペプチドからなるアプタマー等が挙げられ、単一分子であっても良いしこれらの多量体であってもよい。好ましい多重特異性抗原結合分子としては、少なくとも2つの異なる抗原に対して特異的に結合することができる多重特異性抗体を挙げることができる。本発明の多重特異性抗体においては、特に好ましい抗体として、2つの異なる抗原に対して特異的に結合することができる二重特異性抗体(bispecific antibody; BsAb)（二種特異性抗体と呼ばれる場合もある）を挙げることができる。
本発明において「共通L鎖」とは、異なる2種以上のH鎖とそれぞれ対を形成し、それぞれの抗原に対して結合能を示し得るL鎖である。ここで、「異なるH鎖」とは、好ましくは異なる抗原に対する抗体のH鎖を指すが、それに限定されず、アミノ酸配列が互いに異なっているH鎖を意味する。共通L鎖は、例えばWO2006/109592に記載の方法に従って取得することができる。
本発明の一態様として、本発明の多重特異性抗原結合分子、多重特異性抗体、あるいは二重特異性抗体がそれぞれ抗体L鎖を複数有している場合、それら抗体L鎖は互いに異なっていてもよく、共通L鎖であってもよい。
本発明の一態様として、多重特異性抗原結合分子は、FIXおよび/またはFIXa、およびFXを認識し、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子であるが、好ましくはFIXおよび/またはFIXa、およびFXを認識し、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗体であり、さらに好ましくはFIXおよび/またはFIXa、およびFXを認識し、FVIIIの機能を代替する二重特異性抗体である。本発明の抗原結合分子あるいは抗体は、好ましくは、抗FIXa抗体における可変領域と、抗FX抗体における可変領域とを含む。
本発明の一態様として、多重特異性抗原結合分子、多重特異性抗体あるいは二重特異性抗体は、FIXおよび/またはFIXaを認識する抗原結合部位を含む第一のポリペプチドおよび第三のポリペプチド、ならびにFXを認識する抗原結合部位を含む第二のポリペプチドおよび第四のポリペプチドを含む。第一のポリペプチドと第三のポリペプチド、ならびに第二のポリペプチドと第四のポリペプチドには、抗体のH鎖の抗原結合部位と、抗体のL鎖の抗原結合部位が含まれる。
例えば本発明における多重特異性抗原結合分子、多重特異性抗体あるいは二重特異性抗体において、第一のポリペプチドと第三のポリペプチドはそれぞれFIXまたはFIXaに対する抗体のH鎖またはL鎖の抗原結合部位を含み、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドはそれぞれFXに対する抗体のH鎖またはL鎖の抗原結合部位を含む。このとき、第一のポリペプチドと第三のポリペプチド、ならびに第二のポリペプチドと第四のポリペプチドに含まれる抗体のL鎖の抗原結合部位は、共通L鎖の抗原結合部位であってもよい。
本発明における抗体のL鎖の抗原結合部位を含むポリペプチドは、好ましくは、FIX、FIXaおよび/またはFXに結合する抗体のL鎖の全部または一部の配列を含むものである。
本発明に記載のFVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子の好ましい態様として、FIXおよび/またはFIXaならびにFXを認識する二重特異性抗体を例示することができる。このような抗体は、例えばWO2005/035756、WO2006/109592、WO2012/067176などに記載の方法に従って取得することができる。本発明の二重特異性抗体にはこれらの文献に記載の抗体が含まれる。
好ましい二重特異性抗体として、特許文献（WO 2012/067176）に記載の二重特異性抗体である以下の抗体（ACE910：Emicizumab）を挙げることができる。
第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：1、2、3（Q499のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：4、5、6（J327のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：7、8、9（L404のL鎖CDR）に記載のL鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
さらに具体的には、第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：13に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：14に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：15に記載のL鎖可変領域のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
さらに具体的には、第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：10に記載のアミノ酸配列からなるH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：11に記載のアミノ酸配列からなるH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：12に記載の共通L鎖からなる二重特異性抗体（Q499-z121/J327-z119/L404-k）。
本発明で記載されているアミノ酸配列に含まれるアミノ酸は翻訳後に修飾（例えば、N末端のグルタミンのピログルタミル化によるピログルタミン酸への修飾は当業者によく知られた修飾である）を受ける場合もあるが、そのようにアミノ酸が翻訳後修飾された場合であっても当然のことながら本発明で使用される抗体に含まれる。
本明細書において、「抗原Aを認識する抗体」における「認識」、「抗原Aに結合する抗体」における「結合」、「抗原Aに特異的に結合する抗体」における「特異的に結合」なる用語はそれぞれ互換性をもって広義な意味で使用され得る。
本発明におけるポリペプチドとは、通常、１０アミノ酸程度以上の長さを有するペプチド、およびタンパク質を指す。また、通常、生物由来のポリペプチドであるが、特に限定されず、例えば、人工的に設計された配列からなるポリペプチドであってもよい。また、天然ポリペプチド、あるいは合成ポリペプチド、組換えポリペプチド等のいずれであってもよい。さらに、上記のポリペプチドの断片もまた、本発明のポリペプチドに含まれる。
「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、抗体誘導体および抗体修飾物であってもよい（Miller K et al. J Immunol. 2003, 170(9), 4854-61）。抗体は、マウス抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体であってもよく、または他の種由来であっても、人工的に合成したものであってもよい。本明細書中に開示される抗体は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、IgG、IgE、IgM、IgDおよびIgA）、クラス（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1およびIgA2）またはサブクラスであり得る。免疫グロブリンは、任意の種（例えば、ヒト、マウスまたはウサギ）由来であり得る。尚、「抗体」、「免疫グロブリン」および「イムノグロブリン」なる用語は互換性をもって広義な意味で使われる。
「抗体誘導体」とは抗体の一部、好ましくは抗体の可変ドメイン、または少なくとも抗体の抗原結合領域を含む。抗体誘導体には、例えばFab、Fab'、F(ab')2、Fv断片、線状抗体、一本鎖抗体（scFv）、sc(Fv)2、Fab3、ドメイン抗体 （dAb）（国際公開第2004/058821号、国際公開第2003/002609号）、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディおよび抗体誘導体から形成される多重特異性抗体が含まれるが、それらに限定されるわけではない。ここで、「Fab」は一本の軽鎖、ならびに一本の重鎖のCH1領域および可変領域から構成される。また、「Fv」は最小の抗体誘導体であり、完全な抗原認識領域と抗原結合領域を含む。また抗体誘導体は例えばIgG抗体のFcとの融合体であってもよい。例えば、米国特許第5641870号明細書、実施例2；Zapata G et al. Protein Eng.1995, 8(10), 1057-1062 ; Olafsen T et al. Protein Eng. Design & Sel. 2004, 17(4):315-323 ; Holliger P et al. Nat. Biotechnol. 2005, 23(9);1126-36；Fischer N et al. Pathobiology. 2007, 74(1):3-14 ; Shen J et al. J Immunol Methods. 2007, 318, 65-74 ; Wu et al. Nat Biotechnol. 2007, 25(11), 1290-7を参照できる。
ダイアボディは、遺伝子融合により構築された二価(bivalent)の低分子化抗体を指す(Holliger P et al., Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1993;90:6444-6448、EP404,097号、WO93/11161号等)。ダイアボディは、2本のポリペプチド鎖から構成されるダイマーであり、ポリペプチド鎖は各々、同じ鎖中でL鎖可変領域(VL)およびH鎖可変領域(VH)が、互いに結合できない位に短い、例えば、2～12残基が好ましく、さらに3～10残基が好ましく、特には5残基程度のリンカーにより結合されている。同一ポリペプチド鎖上にコードされるVLとVHとは、その間のリンカーが短いため単鎖可変領域フラグメントを形成することが出来ず二量体を形成するため、ダイアボディは2つの抗原結合部位を有することとなる。
一本鎖抗体またはscFv抗体断片には、抗体のVHおよびVL領域が含まれ、これらの領域は単一のポリペプチド鎖中に存在する。一般に、FvポリペプチドはさらにVHおよびVL領域の間にポリペプチドリンカーを含んでおり、これによりscFvは、抗原結合のために必要な構造を形成することができる（scFvの総説については、Pluckthun『The Pharmacology of Monoclonal Antibodies』Vol.113（Rosenburg and Moore ed (Springer Verlag, New York) pp.269-315, 1994）を参照）。本発明におけるリンカーは、その両端に連結された抗体可変領域の発現を阻害するものでなければ特に限定されない。
また、Fab’を化学的に架橋することによっても二重特異性抗体を作製し得る。例えば一方の抗体から調製したFab’をo-PDM(ortho-phenylenedi-maleimide)にてマレイミド化し、これともう一方の抗体から調製したFab’を反応させることにより、異なる抗体由来Fab’同士を架橋させ二重特異性 F(ab’)2を作製することが出来る（Keler T et al. Cancer Research 1997;57:4008-4014）。またFab’-チオニトロ安息香酸(TNB)誘導体とFab’-チオール(SH)等の抗体断片を化学的に結合する方法も知られている（Brennan M et al. Science 1985;229:81-83）。
化学架橋の代わりにFos, Junなどに由来するロイシンジッパーを用いることも出来る。Fos, Junはホモダイマーも形成するが、ヘテロダイマーを優先的に形成することを利用する。Fosロイシンジッパーを付加したFab’とJunのそれを付加したもう一方のFab’を発現調製する。温和な条件で還元した単量体Fab’-Fos, Fab’-Junを混合し反応させることによって二重特異性 F(ab’)2が形成できる（Kostelny SA et al. J of Immunology, 1992;148:1547-53）。この方法はFab’には限定されず、scFv, Fvなどにおいても応用可能である。
また、IgG-scFv（Protein Eng Des Sel. 2010;23(4):221-8）やBiTEなどのsc(Fv)2（Drug Discov Today 2005;15;10(18):1237-44）、DVD-Ig（Nat Biotechnol 2007;25(11):1290-7. Epub 2007 Oct 14、MAbs 2009;1(4):339-47. Epub 2009 Jul 10）などの他（IDrugs 2010;13:698-700）、two-in-one抗体（Science 2009;20;323(5921):1610-4、Immunotherapy 2009;1(5):749-51）、Tri-FabやタンデムscFv、ダイアボディなどの二重特異性抗体も知られている（MAbs 2009;1(6):539-547.）。更にscFv-Fc、scaffold-Fcなどの分子形を用いても、ヘテロな組合せのFcを優先的に分泌させることで（Ridgway JB et al. Protein Engineering 1996;9:617-621、Merchant AM et al. Nature Biotechnology 1998;16:677-681、WO2006/106905、Davis JH et al. Protein Eng Des Sel 2010;4:195-202）、二重特異性抗体を効率的に作製し得る。
ダイアボディにおいても二重特異性抗体を作製し得る。二重特異性ダイアボディは二つのcross-over scFv断片のヘテロダイマーである。つまり二種の抗体A,B由来のVHとVLを5残基前後の比較的短いリンカーで結ぶことによって作製されたVH (A)-VL (B), VH (B)-VL (A)を用いてヘテロダイマーを構成することによって出来る（Holliger P et al. Proc of the National Academy of Sciences of the USA 1993;90:6444-6448）。
この際、二種のscFvを15残基程度の柔軟な比較的長いリンカーで結ぶ(一本鎖ダイアボディ：Kipriyanov SM et al. J of Molecular Biology 1999;293:41-56)、適当なアミノ酸置換(knobs-into-holes: Zhu Z et al. Protein Science 1997;6:781-788、VH/VL interface engineering: Igawa T et al. Protein Eng Des Sel 2010;8:667-77)を行うことによって目的の構成を促進させることも出来る。
二種のscFvを15残基程度の柔軟な比較的長いリンカーで結ぶことによって作製できるsc(Fv)2も二重特異性抗体となり得る（Mallender WD et al. J of Biological Chemistry 1994;269:199-206）。
抗体修飾物としては、例えば、ポリエチレングリコール(PEG)等の各種分子と結合した抗体を挙げることができる。本発明の抗体には、これらの抗体修飾物も包含される。本発明の抗体修飾物においては、結合される物質は限定されない。このような抗体修飾物を得るには、得られた抗体に化学的な修飾を施すことによって得ることができる。これらの方法はこの分野において既に確立されている。
「二重特異性」抗体は、異なるエピトープを認識する可変領域を同一の抗体分子内に有する抗体をいう。二重特異性抗体は2つ以上の異なる抗原を認識する抗体であってもよいし、同一抗原上の異なる2つ以上のエピトープを認識する抗体であってもよい。二重特異性抗体には、wholeの抗体だけでなく抗体誘導体が含まれていてもよい。本発明の抗体には、二重特異性抗体も含まれる。なお、本明細書において、抗FIXa/FX二重特異性抗体は、FIXaおよびFXを認識する二重特異性抗体と同義で用いられる。
遺伝子組換え抗体の作製方法
抗体としては、遺伝子組換え技術を用いて産生した組換え型抗体を用いることができる。組換え型抗体は、それをコードするDNAをハイブリドーマ、または抗体を産生する感作リンパ球等の抗体産生細胞からクローニングし、ベクターに組み込んで、これを宿主（宿主細胞）に導入し産生させることにより得ることができる。
抗体は、ヒト抗体、マウス抗体、ラット抗体など、その由来は限定されない。またキメラ抗体やヒト化抗体などの遺伝子改変抗体でもよい。
ヒト抗体の取得方法は既に知られており、例えば、ヒト抗体遺伝子の全てのレパートリーを有するトランスジェニック動物を目的の抗原で免疫することで目的のヒト抗体を取得することができる（国際特許出願公開番号WO 93/12227, WO 92/03918，WO 94/02602, WO 94/25585，WO 96/34096, WO 96/33735参照）。
遺伝子改変抗体は、既知の方法を用いて製造することができる。具体的には、たとえばキメラ抗体は、免疫動物の抗体のH鎖、およびL鎖の可変領域と、ヒト抗体のH鎖およびL鎖の定常領域からなる抗体である。免疫動物由来の抗体の可変領域をコードするDNAを、ヒト抗体の定常領域をコードするDNAと連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることによって、キメラ抗体を得ることができる。
ヒト化抗体は、再構成(reshaped)ヒト抗体とも称される改変抗体である。ヒト化抗体は、免疫動物由来の抗体の相補性決定領域（CDR;complementarity determining region）を、ヒト抗体のCDRへ移植することによって構築される。その一般的な遺伝子組換え手法も知られている（欧州特許出願公開番号EP 239400、国際特許出願公開番号WO 96/02576、Sato K et al, Cancer Research 1993, 53: 851-856、国際特許出願公開番号WO 99/51743参照）。
二重特異性抗体はIgGタイプのものに限られないが、例えばIgGタイプ二重特異性抗体はIgG抗体を産生するハイブリドーマ二種を融合することによって生じるhybrid hybridoma(quadroma)によって分泌させることが出来る（Milstein C et al. Nature 1983, 305: 537-540）。また目的の二種のIgGを構成するL鎖およびH鎖の遺伝子、合計4種の遺伝子を細胞に導入することによって共発現させることによって分泌させることが出来る。
この際H鎖のCH3領域に適当なアミノ酸置換を施すことによってH鎖についてヘテロな組合せのIgGを優先的に分泌させることも出来る（Ridgway JB et al. Protein Engineering 1996, 9: 617-621、Merchant AM et al. Nature Biotechnology 1998, 16: 677-681、WO2006/106905、Davis JH et al. Protein Eng Des Sel. 2010, 4: 195-202.）。
また、L鎖に関しては、H鎖可変領域に比べてL鎖可変領域の多様性が低いことから、両H鎖に結合能を与え得る共通のL鎖が得られることが期待され、本発明の抗体は、共通のL鎖を有する抗体であってもよい。この共通L鎖と両H鎖遺伝子を細胞に導入することによってIgGを発現させることで効率の良い二重特異性IgGの発現が可能となる。
抗体の製造方法
本発明の抗体は当業者に公知の方法により製造することができる。具体的には、目的とする抗体をコードするDNAを発現ベクターへ組み込む。その際、発現制御領域、例えば、エンハンサー、プロモーターの制御のもとで発現するよう発現ベクターに組み込む。次に、この発現ベクターにより宿主細胞を形質転換し、抗体を発現させる。その際には、適当な宿主と発現ベクターの組み合わせを使用することができる。
ベクターの例としては、M13系ベクター、pUC系ベクター、pBR322、pBluescript、pCR-Scriptなどが挙げられる。また、cDNAのサブクローニング、切り出しを目的とした場合、上記ベクターの他に、例えば、pGEM-T、pDIRECT、pT7などを用いることができる。
抗体を生産する目的においてベクターを使用する場合には、特に、発現ベクターが有用である。発現ベクターとしては、例えば、宿主をJM109、DH5α、HB101、XL1-Blueなどの大腸菌とした場合においては、大腸菌で効率よく発現できるようなプロモーター、例えば、lacZプロモーター（Wardら, Nature (1989) 341, 544-546；FASEB J. (1992) 6, 2422-2427）、araBプロモーター（Betterら, Science (1988) 240, 1041-1043）、またはT7プロモーターなどを持っていることが不可欠である。このようなベクターとしては、上記ベクターの他にpGEX-5X-1（Pharmacia社製）、「QIAexpress system」（QIAGEN社製）、pEGFP、またはpET（この場合、宿主はT7 RNAポリメラーゼを発現しているBL21が好ましい)などが挙げられる。
また、ベクターには、ポリペプチド分泌のためのシグナル配列が含まれていてもよい。ポリペプチド分泌のためのシグナル配列としては、大腸菌のペリプラズムに産生させる場合、例えばpelBシグナル配列（Lei, S. P. et al J. Bacteriol. (1987) 169, 4397）を使用すればよい。宿主細胞へのベクターの導入は、例えば塩化カルシウム法、エレクトロポレーション法を用いて行うことができる。
大腸菌発現ベクターの他、本発明の抗体を製造するためのベクターとしては、例えば、哺乳動物由来の発現ベクター（例えば、pcDNA3（Invitrogen社製）や、pEGF-BOS (Nucleic Acids. Res.1990, 18(17),p5322)、pEF、pCDM8）、昆虫細胞由来の発現ベクター（例えば「Bac-to-BAC baculovairus expression system」（GIBCO BRL社製）、pBacPAK8）、植物由来の発現ベクター（例えばpMH1、pMH2）、動物ウィルス由来の発現ベクター（例えば、pHSV、pMV、pAdexLcw）、レトロウィルス由来の発現ベクター（例えば、pZIPneo）、酵母由来の発現ベクター（例えば、「Pichia Expression Kit」（Invitrogen社製）、pNV11、SP-Q01）、枯草菌由来の発現ベクター（例えば、pPL608、pKTH50）が挙げられる。
CHO細胞、COS細胞、NIH3T3細胞等の動物細胞での発現を目的とした場合には、細胞内で発現させるために必要なプロモーター、例えばSV40プロモーター（Mulliganら, Nature (1979) 277, 108）、MMTV-LTRプロモーター、EF1αプロモーター（Mizushimaら, Nucleic Acids Res. (1990) 18, 5322）、CAGプロモーター（Gene. (1991) 108, 193）、CMVプロモーターなどを持っていることが不可欠であり、形質転換細胞を選抜するための遺伝子を有すればさらに好ましい。形質転換細胞を選抜するための遺伝子としては、例えば、薬剤（ネオマイシン、G418など）により判別できるような薬剤耐性遺伝子がある。このような特性を有するベクターとしては、例えば、pMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV、pOP13などが挙げられる。
さらに、遺伝子を安定的に発現させ、かつ、細胞内での遺伝子のコピー数の増幅を目的とする場合には、核酸合成経路を欠損したCHO細胞にそれを相補するDHFR遺伝子を有するベクター（例えば、pCHOIなど）を導入し、メトトレキセート（MTX）により増幅させる方法が挙げられ、また、遺伝子の一過性の発現を目的とする場合には、SV40 T抗原を発現する遺伝子を染色体上に持つCOS細胞を用いてSV40の複製起点を持つベクター（pcDなど）で形質転換する方法が挙げられる。複製開始点としては、ポリオーマウィルス、アデノウィルス、ウシパピローマウィルス（BPV）等の由来のものを用いることもできる。さらに、宿主細胞系で遺伝子コピー数増幅のため、発現ベクターは選択マーカーとして、アミノグリコシドトランスフェラーゼ（APH）遺伝子、チミジンキナーゼ（TK）遺伝子、大腸菌キサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ecogpt）遺伝子、ジヒドロ葉酸還元酵素（dhfr）遺伝子等を含むことができる。
これにより得られた本発明の抗体は、宿主細胞内または細胞外（培地など）から単離し、実質的に純粋で均一な抗体として精製することができる。抗体の分離、精製は、通常の抗体の精製で使用されている分離、精製方法を使用すればよく、何ら限定されるものではない。例えば、クロマトグラフィーカラム、フィルター、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動法、透析、再結晶等を適宜選択、組み合わせれば抗体を分離、精製することができる。
クロマトグラフィーとしては、例えばアフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー等が挙げられる（Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Ed Daniel R. Marshak et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996）。これらのクロマトグラフィーは、液相クロマトグラフィー、例えばHPLC、FPLC等の液相クロマトグラフィーを用いて行うことができる。アフィニティークロマトグラフィーに用いるカラムとしては、Protein Aカラム、Protein Gカラムが挙げられる。例えば、Protein Aを用いたカラムとして、Hyper D, POROS, Sepharose FF（GE Amersham Biosciences）等が挙げられる。本発明は、これらの精製方法を用い、高度に精製された抗体も包含する。
治療または予防目的で使用される本発明の医薬組成物は、必要に応じて、適当な薬学的に許容される担体、媒体等と混和して調製し、凍結乾燥製剤または溶液製剤とすることができる。適当な薬学的に許容される担体、媒体としては、例えば、滅菌水や生理食塩水、安定剤、賦形剤、酸化防止剤(アスコルビン酸等)、緩衝剤（リン酸、クエン酸、ヒスチジン、他の有機酸等）、防腐剤、界面活性剤（PEG、Tween等）、キレート剤（EDTA等）、結合剤等を挙げることができる。また、その他の低分子量のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチンや免疫グロブリン等の蛋白質、グリシン、グルタミン、アスパラギン、グルタミン酸、アスパラギン酸、メチオニン、アルギニンおよびリシン等のアミノ酸、多糖および単糖等の糖類や炭水化物、マンニトールやソルビトール等の糖アルコールを含んでいてもよい。注射用の水溶液とする場合には、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えば、D-ソルビトール、D-マンノース、D-マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール（エタノール等）、ポリアルコール（プロピレングリコール、PEG等）、非イオン性界面活性剤（ポリソルベート80、ポリソルベート20、ポロキサマー188、HCO-50）等と併用してもよい。また、製剤中にヒアルロニダーゼ（hyaluronidase）を混合することによって、より大きな液量を皮下投与することも可能である（Expert Opin Drug Deliv. 2007 Jul;4(4):427-40.）。また、本発明の医薬組成物は予め注射筒に入れられていてもよい。尚、溶液製剤はWO2011/090088に記載の方法に従って作製することができる。
本発明の医薬組成物の投与は、任意の適切な経路を介して患者に投与することができる。例えば、ボーラスとしてまたは一定期間にわたる持続注入による静脈内、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、経皮、皮下、関節内、舌下、滑液内、経口、吸入、局所または外用による経路により患者に投与される。静脈内投与または皮下投与が好ましい。本願における患者には、ヒト患者及び非ヒト動物患者が含まれる。本願において、「患者」という用語は、「対象」および「個体」と互換的に用いられる。
投与量は、例えば前記二重特異性抗体の場合、0.001～1000mg/kgである。投与間隔は、前記二重特異性抗体の場合、少なくとも1日以上である。
FVIII等の血液凝固因子の薬効をモニタリングする方法としては、rotation thromboelastometry (ROTEM)、活性化部分トロンボプラスチン時間（APTT）、凝固波形解析（CWA）およびトロンビン生成試験（TGA）などが広く知られており、当業者であればこれらの方法を適宜改変・修正して使用することができる。これらの方法は単独で用いてもよく、いくつかを併用して用いてもよく、少なくとも一つの方法の結果をもって薬効を判断することができる。
ROTEMは、トロンボエラストグラフ（凝固血液の弾力性変化）をモニタリングすることにより、血液の凝固能・凝固過程を総合的に評価できる検査法である。出血原因の分析や治療薬の効果判定などに汎用されている。被検血液にCaトリガーなどの反応惹起試薬を添加し、評価パラメータとしてclotting time（CT）やclot formation time（CFT）などを測定する。
APTTは、FVIII製剤の薬効のモニタリング法として古くから汎用されている。APTTは、被検血漿にAPTT試薬を添加後、CaCl2を添加し、フィブリノゲンが不溶性フィブリンに変換される時間、すなわち凝固が開始されるまでの時間を測定する方法である。
CWAは、凝固反応が亢進する中で生じるフィブリン量を光学的（例えば、吸光度）変化量として経時的に測定する試験である。CWAでは、凝固反応のフィブリン生成の開始段階から増幅段階までの一連の凝固反応を経時的に評価できる。更に、CWAの凝固開始試薬については、APTT試薬(Thromb Haemost 2002;87(3):436-41、J Thromb Haemost 2006;4(2):377-84)、低濃度の組織因子（TF）と血液凝固第XII因子（FXII）活性化剤（ellagic acid）の混合溶液と組み合せた試薬(J Thromb Haemost 2014;12(3):355-62)などが報告されている。凝固波形は、光量に関する光学的情報(吸光度)の経時的変化を表す波形である。凝固波形を微分(１次微分)して、凝固速度を算出し、最大凝固速度をパラメータとして利用する。凝固速度を微分(２次微分)して、凝固加速度を算出し、最大凝固加速度をパラメータとして利用する（Haemophilia 2008;14:83-92、J Thromb Haemost 2014;12(3):355-62）。
TGAは、トロンビンに対する蛍光基質を用いて、凝固反応が亢進する中で生成されるトロンビン量を酵素活性として経時的に測定する試験である(Haemophilia 2008;14(suppl. 3):83-92)。
本発明の一態様として、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、FIX異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物が提供される。FIX異常症は、FIXの先天的欠損または機能不全に起因する稀な出血性疾患であり、例えば血友病BあるいはFIX欠乏症を挙げることができる。また、FIXの活性低下または欠損は、先天的および/または後天的な原因によるものを例示することができるが、これらに限定されない。FIXの活性低下の程度としては、健常者と比較して、好ましくは40％未満（例えば40％未満、30％未満、20％未満、10％未満）、より好ましくは10％未満（例えば10％未満、9％未満、8％未満、7％未満、6％未満）、更に好ましくは5％未満（例えば5％未満、4％未満、3％未満、2％未満）、特に好ましくは1％未満の患者が挙げられるが、これらに限定されない。FIXの活性の測定方法は当業者に周知である(例えば、「みんなに役立つ血友病の基礎と臨床」、白幡聡、医薬ジャーナル社、2009など)。
本発明の一態様として、血友病B患者あるいはFIX欠乏症患者は、特にこれらに限定されるものではないが、インヒビター（FIXに対する自己抗体）を有する又は有しない患者、FIXの量が低下又は完全に欠損した患者、FIXの活性が低下又は完全に欠損した患者を含む。
一つの局面において、血友病B患者あるいはFIX欠乏症患者は1.0 IU/dL未満の微量FIX活性を有する血友病B重症患者あるいFIX欠乏症重症患者である。一つの局面において、血友病B患者あるいはFIX欠乏症患者はインヒビターを保有しない血友病B患者あるいはFIX欠乏症患者である。
尚、「血友病B」および「FIX欠乏症」なる用語は互換性をもって広義な意味で使われる。
本発明の一態様として、血液凝固第IX因子製剤（FIX製剤）と併用するための、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物を提供する。併用は、これらの薬剤を同時に、連続して、あるいは、一方を先に投与した後、時間をおいて他方を投与してもよい。
また、別の局面において、FIX製剤の血液凝固活性を増強するための、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物を提供する。
また、別の局面において、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子とFIX製剤を組み合わせてなる、血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療に用いられる併用医薬を提供する。
また、別の局面において、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を用いて血液凝固第IX因子異常症患者におけるFIX製剤の血液凝固活性を増強する方法を提供する。
尚、血液凝固活性の増強とは、当該多重特異性抗原結合分子を投与する前に比べ、当該多重特異性抗原結合分子を投与することにより、例えばAPTTが少なくとも1秒短縮すればよく、好ましくは少なくとも3秒あるいは5秒、より好ましくは少なくとも10秒短縮することをいう。
また、別の局面において、血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物と併用するための血液凝固第IX因子製剤を提供する。
血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物のFVIIIの機能を代替する活性を増強するための血液凝固第IX因子製剤を提供する。
血液凝固第IX因子製剤を用いて血液凝固第IX因子異常症患者における血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子のFVIIIの機能を代替する活性を増強する方法を提供する。
FIX製剤は、FIXの由来や分子形などは問わずFIXを含んでいる医薬組成物であればよく、特にこれらに限定されるものではないが、クリスマシンM、ノバクトM、PPSB-HT、ベネフィクス（ノナコグアルファ）、リクスビス(ノナコグガンマ)、オルプロリクス（エフトレノナコグアルファ）、イデルビオン（アルブトレペノナコグ アルファ）を含む。
本発明の一態様として、FIXは、ヒト由来のFIXに限定されず、ヒト、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、およびネズミ由来のFIXであってよい。一局面において、FIXはヒトFIXであり、461アミノ酸残基からなる未成熟型ヒトFIX（配列番号：16）から、46アミノ酸からなるN末端シグナル配列およびプロペプチド領域が除かれた415アミノ酸残基からなるヒトFIXをいう（例えば、UniProtKB/Swiss-Prot Accession P00740-1を参照）。尚、ヒトFIXは配列番号：16の47位から461位で示される。FIXには、 FIXの典型的な特徴を有する FIXの任意の形態を含む。FIXは、一般的には、GLAドメイン（γ－カルボキシグルタミン酸残基を含む領域）、２つのEGFドメイン（ヒトEGFホモロジードメイン）、活性化ペプチドドメイン、ならびにC末端プロテアーゼドメインを含む。しかし必ずしもこれらを含むものに限定されず、当該技術分野で公知のこれらのドメインと同義なドメインを含んでいてもよく、また一部が欠損した断片であってもよい。FIXまたは配列バリアントは、これらに限定されないが、米国特許4,770,999号、米国特許7,700,734号に説明されるようにクローン化されており、ヒトFIXをコードするｃＤＮＡは単離されている（例えば、Choo et al., Nature 299:178-180 (1982); Fair et al., Blood 64:194-204 (1984); and Kurachi et al., Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A. 79:6461-6464 (1982)参照）。これらの公知の配列バリアントには、FIXの作用を増強するアミノ酸置換や半減期を延長するアミノ酸置換を有するものが含まれる。また、本発明の目的を達成できる限り、あらゆるFIX改変体（例えば人為的にアミノ酸配列に変異を加えたFIX）およびあらゆるFIX修飾体（例えばPEG化されたFIX）が使用可能である。以下、本願において、単に「FIX」と記載した場合、それは、特に断りが無ければ、その配列バリアント、FIX改変体およびFIX修飾体も含む。
本明細書において用いる場合、「・・・を含む（comprising）」との表現により表される態様は、「本質的に・・・からなる（essentially consisting of）」との表現により表される態様、ならびに「・・・からなる（consisting of）」との表現により表される態様を包含しうる。
本明細書において明示的に引用される全ての特許および参考文献の内容は全て本明細書に参照として取り込まれる。
本発明は、以下の実施例によってさらに例示されるが、下記の実施例に限定されるものではない。
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明は、これら実施例に制限されるものではない。
[実施例１]
本発明では、血友病A、後天性血友病A、フォンビルブランド病、および血友病C以外のFIX異常症の血液または血漿を用いて、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子による血液・血漿凝固促進作用の検証を試みた。具体的には、血友病B患者由来の血液・血漿および市販のFIX欠乏ヒト血漿（George King Bio-Medical）を用いて、ROTEMおよびAPTTの各凝固評価法にて、前記多重特異性抗原結合分子の一つである特許文献（WO 2012/067176）に記載の二重特異性抗体であるACE910（Emicizumab）による血液・血漿凝固促進作用を調べた。
[実施例２]
FVIIIの機能を代替する抗FIXa/FX二重特異性抗体であるACE910の調製
ACE910を、WO2005/035756、WO2006/109592、WO2012/067176に記載された方法で取得した。抗体遺伝子を、動物細胞発現ベクターに組み込み、それをCHO細胞へトランスフェクションすることで、二重特異性抗体を発現した。次いで、細胞の培養上清に含まれる二重特異性抗体を精製した。
このように精製された二重特異性抗体のFVIII機能代替活性の測定は、以下に示す酵素アッセイにて行った。室温下、1 nMのhuman FIXa(Enzyme Research Laboratories)、140nMのhuman FX(Enzyme Research Laboratories)、20 μMのリン脂質（10% phosphatidylserine、60% phosphatidylcholine、30% phosphatidylethanolamine）、および二重特異性抗体を、5 mM CaCl2と0.1%牛血清アルブミンを含むトリス緩衝生理食塩水溶液で混合後2分間インキュベーションし、FIXaによるFX活性化反応を進めた。本反応は、EDTAの添加により停止させた。次いで、FXa特異的な発色基質溶液S-2222（CHROMOGENIX）を添加し、405nmの吸光度変化をSpectraMax 340PC384 (Molecular Devices)を用いて測定した。既知濃度のヒトFXa(Enzyme Research Laboratories)による吸光度変化から検量線を作成し、二重特異性抗体によるFXa産生促進活性を評価した。
[実施例３]
ROTEM測定
ROTEM測定は常法に従い、ROTEM delta測定装置（Tem International GmbH）を用いて実施した。Caトリガーとしてカルシウム溶液star-tem試薬（Ref. No 503-01、Tem International GmbH）を使用した。
APTT測定
APTT試薬としてThrombocheck APTT-SLA（Sysmex）を用いた。ACE910および/または抗FIX-Gla抗体（Thromb Res 2000;100:73-79）を含むFIX欠乏ヒト血漿またはFIX異常症患者由来の血漿50μLに、APTT試薬50 μLを添加した。37℃にて5分間インキュベーション後、0.02 mol/L塩化カルシウム溶液50 μLを添加して凝固反応を開始し、血液凝固自動測定装置（CS-2000i、Sysmex）で常法に従いAPTTを測定した。
[実施例４]
ROTEM測定の結果
FIX異常症患者由来の血液へACE910を添加した試料を用いて、CaトリガーによるROTEMでの血液凝固(開始)時間短縮率[（1-ACE910添加後の凝固(開始)時間/ ACE910添加前の凝固(開始)時間）x100]を調べた。ROTEMでの血液凝固(開始)時間は、ROTEM delta測定装置で測定されるclotting time（CT）およびclot formation time（CFT）の和として算出した。
FIX製剤による定期投与療法中のFIX異常症の患者17例由来の血液25検体（FIX:Cの中央値1.9 IU/dL；FIX:Cの範囲0.2未満～16.5 IU/dL）を用いて、CaトリガーによるROTEMを実施したところ、ACE910 (50 μg/mL) ex vivo添加による凝固(開始)時間短縮率は、中央値18%であり、概ね短縮した（図１には一部の検体の血液凝固(開始)時間比を示した）。
APTT測定の結果
FIX欠乏ヒト血漿またはFIX異常症患者由来の血漿へACE910を添加した試料を用いて、APTTの短縮率[（1-ACE910添加後のAPTT/ ACE910添加前のAPTT）x100]を調べた。
FIX異常症の患者10例の血漿で、ACE910 (100 μg/mL) ex vivo添加によるAPTT短縮率は、FIXインヒビター陽性の1例ではACE910による短縮率 -6%（APTT ratioは1.06）と無効であったが、残り9例（FIX:Cの範囲 0.9～6.4 IU/dL）で中央値39%（範囲35%～45%)（APTT ratio 0.55～0.65）と全例に奏効した（図２）。
市販FIXヒト欠乏血漿に、FIX製剤（BeneFix，Pfizer）を0、0.01、0.1、1、10、および100 IU/dLの濃度で添加し、更にACE910を ex vivo添加した。100 μg/mLのACE910添加前後でAPTT短縮率を評価したところ、APTT短縮率はFIX製剤濃度に応じて各々、7%、11%、19%、26%、30%、および33%であった（図３－１）。ACE910のAPTT短縮効果はFIX濃度依存性で、かつFIX濃度 1～100 IU/dLでは短縮率の変化量がほぼ安定（26%～33%）した。この効果は、FIX製剤を添加していないFIX欠乏ヒト血漿でもわずかに示された(短縮率 7%)が、これに抗FIX-Gla抗体（anti-FIX Ab：Thromb Res 2000;100:73-79を参照し調製）を更にex vivo添加（抗FIX-Gla抗体：150 μg/mL）すると無効化した(短縮率 -3%)（図３－２）。尚、ACE910の添加群は100 μg/mLのACE910を添加した。従って、ACE910の効果発現にFIXが必須であるが、極微量のFIX存在下 (0.01 IU/dLレベル)でさえも奏効することが示された。FIX欠乏ヒト血漿へFIX製剤のみを濃度を変えて添加し、FIX濃度変化によるAPTT短縮の検量線を作り、そこからACE910添加時のAPTTをFIX:Cへ換算すると、FIX濃度 0.1、1、および10 IU/dL存在時のACE910の最大効果は、FIX:Cとして 0.6、11、および114 IU/dL(すなわち%）相当であり、FIX製剤の効果を6～11倍に増強した。血友病B重症例の多くは1.0 IU/dL未満の微量FIX活性を有する。本結果は、微量FIX存在下血友病B患者へのACE910の応用可能性を示唆した。
本発明により、血友病A、後天性血友病A、フォンビルブランド病、血友病C以外のFIX異常症において、出血、出血を伴う疾患、もしくは出血に起因する疾患の発症および/または進展に対する、予防法および/または治療法としてFVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子を用いる方法が提供された。FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子は、FVIIIの機能不全に起因する血友病A、後天性血友病A、フォンビルブランド病、および血友病Cでの出血に対する予防法および/または治療法として利用できるのみならず、その凝固促進活性から他のFIX異常症での出血に対する予防法および/または治療法として利用できると考えられる。FIX異常症の現行治療では、FIX製剤を反復して静脈内投与する必要があるため、血管確保の困難さが課題であり、特に小児においては患者およびcare giverの大きな負担となっている。FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子である抗体（例示としてACE910）は、皮下投与製剤として開発されており、反復の静脈内投与が必要なFIX製剤に比べて、投与負担の軽減が期待され、本発明は、FIX異常症の予防剤および/または治療剤として有望と考えられる。また、FVIIIの機能を代替する多重特異性抗原結合分子とFIX製剤を併用することでFIX製剤の効果を増強することができ、安定した止血効果を示す併用療法として有望と考えられる。

Claims (11)

  1. 血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物であって、
    該血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子が、血液凝固第IX因子および/または活性型血液凝固第IX因子ならびに血液凝固第X因子を認識する二重特異性抗体であり、前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である、医薬組成物：
    第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：1、2、3（Q499のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：4、5、6（J327のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：7、8、9（L404のL鎖CDR）に記載のL鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
  2. 前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である請求項１に記載の医薬組成物：
    第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：13に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：14に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：15に記載のL鎖可変領域のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
  3. 前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である請求項１または２に記載の医薬組成物：
    第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：10に記載のアミノ酸配列からなるH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：11に記載のアミノ酸配列からなるH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：12に記載の共通L鎖からなる二重特異性抗体。
  4. 血液凝固第IX因子異常症が、血液凝固第IX因子および／または活性型血液凝固第IX因子の活性の、低下、機能異常および／または欠損によって発症および／または進展する疾患である、請求項１～３のいずれかに記載の医薬組成物。
  5. 血液凝固第IX因子異常症が先天性または後天性の疾患である、請求項１～４のいずれかに記載の医薬組成物。
  6. 血液凝固第IX因子異常症が血友病Bまたは血液凝固第IX因子欠乏症である、請求項１～５のいずれかに記載の医薬組成物。
  7. 血液凝固第IX因子製剤と併用するための、請求項１～６のいずれかに記載の医薬組成物。
  8. 血液凝固第IX因子製剤の血液凝固活性を増強するための、請求項１～７のいずれかに記載の医薬組成物。
  9. 血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子と血液凝固第IX因子製剤を組み合わせてなる、血液凝固第IX因子異常症の予防および／または治療に用いられる併用医薬であって、
    該血液凝固第VIII因子の機能を代替する多重特異性抗原結合分子が、血液凝固第IX因子および/または活性型血液凝固第IX因子ならびに血液凝固第X因子を認識する二重特異性抗体であり、前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である、併用医薬：
    第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：1、2、3（Q499のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：4、5、6（J327のH鎖CDR）に記載のH鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含むH鎖、第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：7、8、9（L404のL鎖CDR）に記載のL鎖CDR1、2、3のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
  10. 前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である、請求項９に記載の併用医薬：
    第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：13に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：14に記載のH鎖可変領域のアミノ酸配列を含むH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：15に記載のL鎖可変領域のアミノ酸配列を含む共通L鎖からなる二重特異性抗体。
  11. 前記二重特異性抗体が以下に記載の抗体である、請求項９または１０に記載の併用医薬：
    第一のポリペプチドと第三のポリペプチドが対を形成し、第二のポリペプチドと第四のポリペプチドが対を形成する二重特異性抗体であって、第一のポリペプチドが配列番号：10に記載のアミノ酸配列からなるH鎖、第二のポリペプチドが配列番号：11に記載のアミノ酸配列からなるH鎖および第三のポリペプチドと第四のポリペプチドが配列番号：12に記載の共通L鎖からなる二重特異性抗体。
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Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3623473A1 (en) 2005-03-31 2020-03-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
US9670269B2 (en) 2006-03-31 2017-06-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of modifying antibodies for purification of bispecific antibodies
JP5624276B2 (ja) 2006-03-31 2014-11-12 中外製薬株式会社 抗体の血中動態を制御する方法
EP3689912A1 (en) 2007-09-26 2020-08-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr
TWI609698B (zh) 2010-01-20 2018-01-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 穩定化的含抗體溶液製劑
DK3050896T3 (da) 2013-09-27 2021-07-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåde til fremstilling af en polypeptid-heteromultimer
TWI701435B (zh) 2014-09-26 2020-08-11 日商中外製藥股份有限公司 測定ｆｖｉｉｉ的反應性之方法
TWI700300B (zh) 2014-09-26 2020-08-01 日商中外製藥股份有限公司 中和具有第ｖｉｉｉ凝血因子（ｆｖｉｉｉ）機能替代活性的物質之抗體
WO2016159213A1 (ja) 2015-04-01 2016-10-06 中外製薬株式会社 ポリペプチド異種多量体の製造方法
JP7219005B2 (ja) 2015-12-28 2023-02-07 中外製薬株式会社 Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法
CN109661241A (zh) 2016-09-06 2019-04-19 中外制药株式会社 使用识别凝血因子ix和/或活化凝血因子ix以及凝血因子x和/或活化凝血因子x的双特异性抗体的方法
MX2020002710A (es) 2017-09-29 2020-07-20 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union al antigeno multiespecifica que tiene actividad de sustitucion de la funcion de cofactor del factor viii de coagulacion de sangre (fviii) y formulacion farmaceutica que contiene tal molecula como ingrediente activo.
US11220554B2 (en) 2018-09-07 2022-01-11 Novo Nordisk A/S Procoagulant antibodies
CN113368098B (zh) * 2020-03-10 2024-03-29 鲁南制药集团股份有限公司 淫羊藿苷元在制备血友病防治药物中的用途
CN116444674B (zh) * 2022-11-21 2024-06-21 苏州大学 一种抗血管性血友病因子抗体及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012067176A1 (ja) 2010-11-17 2012-05-24 中外製薬株式会社 血液凝固第viii因子の機能を代替する機能を有する多重特異性抗原結合分子
WO2016166014A1 (en) 2015-04-17 2016-10-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with coagulation factors and multispecific antibodies
WO2016171202A1 (ja) 2015-04-24 2016-10-27 公立大学法人奈良県立医科大学 血液凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第ｘｉ因子（ｆｘｉ）異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4770999A (en) 1985-04-22 1988-09-13 Genetics Institute, Inc. High yield production of active Factor IX
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
KR100272077B1 (ko) 1990-08-29 2000-11-15 젠팜인터내셔날,인코포레이티드 이종 항체를 생산할 수 있는 전이유전자를 가진 인간이외의 동물
CA2124967C (en) 1991-12-17 2008-04-08 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
JPH07509137A (ja) 1992-07-24 1995-10-12 セル　ジェネシス，インク． 異種抗体の生産
EP0754225A4 (en) 1993-04-26 2001-01-31 Genpharm Int HETEROLOGIC ANTIBODY-PRODUCING TRANSGENIC NON-HUMAN ANIMALS
FR2707189B1 (fr) 1993-07-09 1995-10-13 Gradient Ass Procédé de traitement de résidus de combustion et installation de mise en Óoeuvre dudit procédé.
WO1996002576A1 (fr) 1994-07-13 1996-02-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anticorps humain reconstitue contre l'interleukine-8 humaine
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
KR20050085971A (ko) 1995-04-27 2005-08-29 아브게닉스, 인크. 면역화된 제노마우스 유래의 인간 항체
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
IL138801A0 (en) 1998-04-03 2001-10-31 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Humanized antibody against human tissue factor and process for the preparation thereof
WO2002020565A2 (en) 2000-09-08 2002-03-14 Universität Zürich Collections of repeat proteins comprising repeat modules
JP2004526419A (ja) 2000-10-16 2004-09-02 フィロス インク． 抗体模倣物および他の結合タンパク質のためのタンパク質骨格
US20030157561A1 (en) 2001-11-19 2003-08-21 Kolkman Joost A. Combinatorial libraries of monomer domains
DK1399484T3 (da) 2001-06-28 2010-11-08 Domantis Ltd Dobbelt-specifik ligand og anvendelse af denne
CA2511910A1 (en) 2002-12-27 2004-07-15 Domantis Limited Dual specific single domain antibodies specific for a ligand and for the receptor of the ligand
AU2003271174A1 (en) 2003-10-10 2005-04-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Double specific antibodies substituting for functional protein
AU2004284090A1 (en) 2003-10-24 2005-05-06 Avidia, Inc. LDL receptor class A and EGF domain monomers and multimers
EP3623473A1 (en) 2005-03-31 2020-03-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
WO2006109592A1 (ja) 2005-04-08 2006-10-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 血液凝固第viii因子の機能代替抗体
US7700734B2 (en) 2007-01-09 2010-04-20 Shu-Wha Lin Recombinant human factor IX and use thereof
TWI609698B (zh) 2010-01-20 2018-01-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 穩定化的含抗體溶液製劑
TWI831106B (zh) * 2014-06-20 2024-02-01 日商中外製藥股份有限公司 用於因第viii凝血因子及/或活化的第viii凝血因子的活性降低或欠缺而發病及/或進展的疾病之預防及/或治療之醫藥組成物
TWI700300B (zh) * 2014-09-26 2020-08-01 日商中外製藥股份有限公司 中和具有第ｖｉｉｉ凝血因子（ｆｖｉｉｉ）機能替代活性的物質之抗體

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012067176A1 (ja) 2010-11-17 2012-05-24 中外製薬株式会社 血液凝固第viii因子の機能を代替する機能を有する多重特異性抗原結合分子
WO2016166014A1 (en) 2015-04-17 2016-10-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with coagulation factors and multispecific antibodies
WO2016171202A1 (ja) 2015-04-24 2016-10-27 公立大学法人奈良県立医科大学 血液凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第ｘｉ因子（ｆｘｉ）異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Journal of Biological Chemistry，1993年，Vol.268, No.32，pp.24041-24046
インヒビターのない血友病患者に対する止血治療ガイドライン：2013年改訂版，日本血栓止血学会誌，2013年，Vol.24, No.6，pp.619-639
インヒビター保有先天性血友病患者に対する止血治療ガイドライン：2013年改訂版，日本血栓止血学会誌，2013年，Vol.24, No.6，pp.640-658
日本小児科学会雑誌，2017年03月01日，Vol.121, No.3，pp.543-552
日本小児血液・がん学会雑誌，2016年，Vol.53, No.2，pp.69-74
日本血栓止血学会誌，1991年，Vol.2, No.1，pp.1-11
日本血栓止血学会誌，2015年，Vol.26，No.2，p.188, #O-024
日本血栓止血学会誌，2017年04月01日，Vol.28, No.2，p.190, #O-012

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