TWI700300B - 中和具有第ｖｉｉｉ凝血因子（ｆｖｉｉｉ）機能替代活性的物質之抗體 - Google Patents

中和具有第ｖｉｉｉ凝血因子（ｆｖｉｉｉ）機能替代活性的物質之抗體 Download PDF

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Abstract

本發明嘗試製作於具有FVIII機能代替活性之物質存在下測定FVIII之反應性之方法中使用的將具FVIII機能代替活性之物質之活性予以中和之抗體。其結果發現若使用製得之抗體，在以APTT為主之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)可以正確地評價血友病A患者血漿中之FVIII活性，更發現以APTT為主之Bethesda分析法能正確地評價擁有FVIII抑制因子之血友病A患者血漿中之FVIII抑制因子力價。

Description

中和具有第VIII凝血因子(FVIII)機能替代活性的物質之抗體
本發明係關於在具有第VIII凝血因子(FVIII)機能代替活性之物質存在下測定FVIII之反應性之方法用之抗體。
血友病係起因於FVIII或第IX凝血因子(FIX)之先天性缺損或機能不全的出血性疾病。前者稱為血友病A、後者稱為血友病B。兩基因均存在於X染色體上，基因異常係採取X染色體連鎖隱性遺傳形式，故發病患者的99%以上為男性。有病率約為出生男子1萬人中有1人，血友病A與血友病B之比率已知約5：1。
血友病患者之主要出血部位可列舉關節內、肌肉內、皮下、口腔內、頭蓋內、消化管、鼻腔內等。其中向關節內之反複出血有時會進展成伴隨關節障礙、步行困難的血友病性關節症，最終須要關節取代術。所以，成為使血友病患者之QOL低落之重大要因。
血友病之重症度和血液中之FVIII活性或FIX活性有良好相關性。凝血因子活性未達1%之患者分類為重症，活性為1%以上未達5%之患者分類為中等症，活性為5%以上未達40%之患者分類為輕症。佔血友病患者之約半數之重症患者 中，若無後述預防性補充療法，則每月會呈現數次出血症狀，比起中等症患者及輕症患者的頻度顯著較高。
作為相關連之出血異常症，除了血友病、後天性血友病以外，已知尚有溫韋伯因子(vWF)之機能異常或缺損引起的溫韋伯氏病(von Willebrand disease)。vWF不只對於血小板正常黏附於血管壁之損傷部位之內皮下組織為必要，且對於和FVIII形成複合體且保持血液中之FVIII水平為正常亦為必要。溫韋伯氏病患者之該等機能低落，造成止血機能異常。
血友病患者之出血預防及/或治療主要係使用從血漿精製而得或利用基因重組技術製作之凝血因子。重症血友病患者利用FVIII或FIX之補充療法維持血液中之FVIII活性或FIX活性為1%以上的話，據認為對於阻止出現出血症狀有效(非專利文獻1、2)。另一方面，血友病患者，尤其重症血友病患者有時會產生稱為抑制因子(inhibitor)之對抗FVIII或FIX之抗體。若產生抑制因子，凝血因子製劑之效果會因抑制因子受妨礙。其結果，要實施使用大量凝血因子製劑之中和療法、或使用複合體製劑(complex concentrate)或活化第VII凝血因子製劑(FVIIa製劑)之繞道療法。
血友病A之FVIII活性測定主要係利用以活化部分凝血酶時間(APTT，activated partial thromboplastin time)為主之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)(非專利文獻3)及使用精製凝血因子之再構建系成色法(chromogenic assay)(非專利文獻4)實施。
血友病A之FVIII抑制因子之力價測定主要係利用 Bethesda分析法或Nijmegen Bethesda分析法實施(非專利文獻5、6)。
近年來，已找到會結合於FIX及/或活化第IX凝血因子(FIXa)及第X凝血因子(FX)及/或活化血液第X凝血因子(FXa)兩者且能替代FVIII之輔因子機能，亦即替代FIXa所為之促進FX活化之機能之雙專一性抗體(非專利文獻7、8、專利文獻1、2、3)。該雙專一性抗體藉由替代FVIII之機能，會改善FVIII缺損及機能異常所致之凝固反應低落。例如：關於凝固反應之指標APTT、凝血酶生成，該雙專一性抗體不論是否FVIII抑制因子之存在，均可使來自血友病A患者之血漿之APTT縮短，使凝血酶生成增大。該雙專一性抗體之APTT縮短作用比FVIII更顯著。原因是：血漿中之FVIII係因為凝血酶、活化第X因子(FXa)而活化方呈現輔因子活性，而該雙專一性抗體不需如此的活化過程，故相應更快發揮輔因子機能。
又，已有人取得對抗該雙專一性抗體之FIXa Fab之抗體、對抗FX Fab之抗體，並實施動物實驗之血漿樣本中之該雙專一性抗體之濃度測定(非專利文獻9)
雙專一性抗體係替代FVIII之輔因子機能，故影響測定FVIII本身之反應性之分析系。例如：為了診斷血友病A之重症度，或為了監測已投予FVIII製劑之患者之FVIII製劑之藥理活性，而以APTT為主之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)測定血漿FVIII活性時，當該雙專一性抗體存在下時會強力干擾其凝固時間縮短促進作用，故正確性大幅受損。又，於以APTT為主之Bethesda分析法測定血漿FVIII抑 制因子力價時，當於該雙專一性抗體存在下時，其凝固時間縮短促進作用會受強力干擾，正確性大幅受損。亦即，無法對於已投予該雙專一性抗體之患者正確地測定FVIII活性、FVIII抑制因子力價。故，希望能有即使在該雙專一性抗體存在下仍能測定FVIII活性及FVIII抑制因子力價之方法。
[先前技術文獻] [非專利文獻]
非專利文獻1：N Engl J Med. 2007;357(6):535-44
非專利文獻2：Thromb Res. 2011;127 (suppl1):S14-7
非專利文獻3：Thromb Diath Haemorrh. 1962 May 15;7:215-28
非專利文獻4：Haemostasis. 1989 19:196-204.
非專利文獻5：Thromb Diath Haemorrh. 1975;34(3):869-72
非專利文獻6：Thromb Haemost. 1995 Feb;73(2):247-51.
非專利文獻7：Nat Med. 2012; 18(10):1570-74
非專利文獻8：PLoS One. 2013; 8(2):e57479.
非專利文獻9：J Thromb Haemost. 2014; 12(2):206-13 Supporting Information
[專利文獻]
專利文獻1：WO2005/035756
專利文獻2：WO2006/109592
專利文獻3：WO2012/067176
本發明係關於在具有FVIII機能代替活性之物質存在下，測定FVIII之反應性之方法，例如測定FVIII活性、FVIII抑制因子力價之方法用的抗體。又，本發明之目的為提供，於具FVIII機能代替活性之物質存在下，測定FVIII之反應性，例如FVIII活性及FVIII抑制因子力價之套組等所含的抗體。
本案發明人等為了解決上述課題，以測定FVIII之反應性之檢查項目為對象，製作中和該雙專一性抗體之活性之物質，並探討即使於該雙專一性抗體存在下仍保持正確性之測定條件。其結果，本案發明人等發現：藉由以適當濃度(例如：能充分中和雙專一性抗體之濃度)使用對抗雙專一性抗體之中和抗體，能於以APTT為主之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)正確地評價血友病A患者血漿中之FVIII活性，進而於以APTT為主之Bethesda分析法，也能正確地評價擁有FVIII抑制因子之血友病A患者血漿中之FVIII抑制因子力價。又，本案發明人等成功地找出包括本測定使用之對抗具FVIII代替活性之雙專一性抗體之中和抗體的套組。本發明係基於如此的見解，提供以下：
[1]一種抗體，係中和具第VIII凝血因子之機能代替活性之物質。
[2]如[1]之抗體，其中，具第VIII凝血因子之機能代替活性之物質為會結合於第IX凝血因子及/或活化第IX凝血因子以及第X凝血因子及/或活化血液第X凝血因子之雙專一性抗體。
[3]如[2]之抗體，其中，該雙專一性抗體為以下任一者之抗體，且係第1多肽與第3多肽締合，第2多肽與第4多肽締合之雙專一性抗體：第1多肽為由序列編號：9之胺基酸序列構成之H鏈、第2多肽為由序列編號：11之胺基酸序列構成之H鏈，第3多肽與第4多肽為序列編號：10之共通L鏈所構成之雙專一性抗體(Q499-z121/J327-z119/L404-k)；第1多肽為由序列編號：36之胺基酸序列構成之H鏈、第2多肽為由序列編號：37之胺基酸序列構成之H鏈，第3多肽與第4多肽為序列編號：38之共通L鏈所構成之雙專一性抗體(Q153-G4k/J142-G4h/L180-k)。
[4]如[1]至[3]中任一項之抗體，其中，前述中和抗體係會結合於包括和第IX凝血因子及/或活化第IX凝血因子結合之抗原結合部位之Fab的抗體，a)重鏈可變區包括由序列編號：12記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：13記載之胺基酸序列構成之CDR2、及由序列編號：14記載之胺基酸序列構成之CDR3，b)輕鏈可變區包括由序列編號：18記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：19記載之胺基酸序列構成之CDR2、及由序列編號：20記載之胺基酸序列構成之CDR3。
[5]如[1]至[4]中任一項之抗體，前述中和抗體包括a)由序列編號：1記載之胺基酸序列構成之重鏈可變區，及 b)由序列編號：2記載之胺基酸序列構成之輕鏈可變區。
[6]如[1]至[3]中任一項之抗體，其中，該中和抗體係會結合於包括和第X凝血因子及/或活化第X凝血因子結合之抗原結合部位之Fab的抗體；a)重鏈可變區包括由序列編號：24記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：25記載之胺基酸序列構成之CDR2、及由序列編號：26記載之胺基酸序列構成之CDR3，b)輕鏈可變區包括由序列編號：30記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：31記載之胺基酸序列構成之CDR2、及由序列編號：32記載之胺基酸序列構成之CDR3。
[7]如申請專利範圍第1~3、6項中任一項之抗體，前述中和抗體包括：a)序列編號：3記載之胺基酸序列構成之重鏈可變區，及b)序列編號：4記載之胺基酸序列構成之輕鏈可變區。
[8]一種核酸，編碼為如[1]至[7]中任一項之抗體。
[9]一種載體，插入有如[8]之核酸。
[10]一種細胞，包括如[8]之核酸或如[9]之載體。
[11]一種抗體製造方法，係利用培養如[10]之細胞以進行。
[12]一種抗體，係會結合於包括和第IX凝血因子及/或活化第IX凝血因子結合之抗原結合部位之Fab的抗體，a)重鏈可變區包括由序列編號：12記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：13記載之胺基酸序列構成之CDR2、及由序列編號：14記載之胺基酸序列構成之CDR3，b)輕鏈可變區包括由序列編號：18記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：19記載之胺基酸序列構成之CDR2、及 由序列編號：20記載之胺基酸序列構成之CDR3。
[13]如[12]之抗體，包括a)由序列編號：1記載之胺基酸序列構成之重鏈可變區，及b)由序列編號：2記載之胺基酸序列構成之輕鏈可變區。
[14]一種抗體，係會結合於包括和第X凝血因子及/或活化第X凝血因子結合之抗原結合部位之Fab的抗體；a)重鏈可變區包括由序列編號：24記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：25記載之胺基酸序列構成之CDR2、及由序列編號：26記載之胺基酸序列構成之CDR3，b)輕鏈可變區包括由序列編號：30記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：31記載之胺基酸序列構成之CDR2、及由序列編號：32記載之胺基酸序列構成之CDR3。
[15]如[14]之抗體，包括：a)序列編號：3記載之胺基酸序列構成之重鏈可變區，及b)序列編號：4記載之胺基酸序列構成之輕鏈可變區。
[16]一種核酸，編碼為如[12]~[15]中任一項之抗體。
[17]一種載體，插入有如[16]之核酸。
[18]一種細胞，包括如[16]之核酸或如[17]之載體。
[19]一種抗體製造方法，係利用培養如[18]之細胞以進行。
依本發明，提供為了可不受具FVIII代替活性之物質之活性之影響而測定FVIII活性及FVIII抑制因子力價之抗體。作為具FVIII代替活性之物質，可列舉會結合於FIX及/或FIXa及FX及/或FXa之雙專一性抗體。
第1圖顯示使用rAQ8-mIgG2b及rAJ540-rbtIgG之抗FIXa/FX雙專一性抗體中和下之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)之結果。於將已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體ACE910之含10或100U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以緩衝液稀釋時(#3、#7)，顯示校準線之範圍以上之FVIII活性。另一方面，於對於已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體ACE910之含10或100U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體之緩衝液稀釋時(#4、#8)，顯示和抗FIXa/FX雙專一性抗體無添加群(#1、#5)同樣的FVIII活性。對於含10或100U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以只含針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體之緩衝液稀釋時(#2、#6)，顯示和抗FIXa/FX雙專一性抗體無添加群(#1、#5)同樣之FVIII活性。
第2圖顯示利用AQ1與AJ541、或AQ1與AJ522所為之抗FIXa/FX雙專一性抗體中和下之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)之結果。將已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體ACE910之含10U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以緩衝液稀釋時(#4)，顯示校準線之範圍以上之FVIII活性。另一方面，對於已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體ACE910之含10U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體AQ1與AJ541之緩衝液稀釋時(#5)或以含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體AQ1與 AJ522之緩衝液稀釋時(#6)，顯示抗FIXa/FX雙專一性抗體無添加群(#1)同樣的FVIII活性。對於含10U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以只含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體AQ1與AJ541之緩衝液稀釋時(#2)或以只含有2種抗體即AQ1與AJ522之緩衝液稀釋時(#3)，顯示和抗FIXa/FX雙專一性抗體無添加群(#1)同樣的FVIII活性。
第3圖顯示利用AQ512與AJ114、或AQ512與AJ521所為之抗FIXa/FX雙專一性抗體中和下之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)之結果。當將已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體hBS23之含10U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以緩衝液稀釋時(#4)，顯示校準線之範圍以上之FVIII活性。另一方面，當對於已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體hBS23之含10U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體AQ512與AJ114之緩衝液稀釋時(#5)或以含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體AQ512與AJ521之緩衝液稀釋時(#6)，顯示和抗FIXa/FX雙專一性抗體無添加群(#1)同樣的FVIII活性。對於含有10U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿，以只含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體AQ512與AJ114之緩衝液稀釋時(#2)或以只含有2種抗體AQ512與AJ521之緩衝液稀釋時(#3)，顯示和抗FIXa/FX雙專一性抗體無添加群(#1)同樣之FVIII活性。
第4圖顯示使用rAQ8-mIgG2b及rAJ540-rbtIgG之抗FIXa/FX雙專一性抗體中和下之Bethesda法之結果。只含有抗FIXa/FX雙專一性抗體ACE910之FVIII抑制因子血漿(#3)顯 示校準線之FVIII 100%以上之活性。另一方面，含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體及抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體之FVIII抑制因子血漿(#4)，顯示和無添加之抑制因子血漿(#1)同樣的FVIII抑制因子力價。只含有2種針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之抗體之FVIII抑制因子血漿(#2)顯示和#1同樣的結果。
本發明之測定FVIII之活性之方法包括使以下(1)與(2)接觸之步驟。此外，可依一般使用之FVIII活性測定方法實施。具體也於實施例說明。
(1)含有具FVIII之機能代替活性之物質之來自血液的樣本
(2)將具FVIII之機能代替活性之物質予以中和之物質
FVIII活性測定法
FVIII活性測定法
作為一般使用之FVIII活性測定方法可使用對於該技術領域中有通常知識者為公知之方法，例如可以使用將凝固時間(aPTT測定)作為基本之使用第VIII因子欠缺血漿(Sysmex,Kobe,Japan)之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)(Casillas et al.,(1971)Coagulation 4：107-11)。單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)例如可依以下方法實施。將已稀釋10倍之待驗血漿50μL、FVIII欠缺血漿50μL、及APTT試藥50μL之3種溶液混合，於37℃培育5分鐘後，添加鈣溶液50μL以使凝固反應開始，測定直到凝固為止之時間。又，將待驗血漿替換成測定正常血漿稀釋系列樣本(設10 倍稀釋之正常血漿中所含之FVIII活性為100%)，以橫軸為FVIII活性、縱軸為凝固時間，進行作圖，製成校準線。從校準線，將待驗血漿之凝固時間換算為FVIII活性，並算出待驗血漿中之FVIII活性。又，本說明書中，「FVIII活性之測定」若無特別指定，可作為也包括「活化第VIII凝血因子(FVIIIa)之活性之測定」而使用。
作為測定FVIII活性之方法，除了單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)以外，也可以使用凝血酶生成試驗(TGA)、使用旋轉血栓彈力描記圖(rotational thromboelastometry)之測定法、FVIII成色法、凝固波形解析，凝血酶及活性型第X因子生成試驗等。本發明之測定FVIII抑制因子之力價之方法包括使以下之(1)與(2)接觸之步驟。此外，可依一般使用之FVIII抑制因子力價測定方法實施。具體也於實施例說明。
(1)含有具FVIII之機能代替活性之物質之來自血液的樣本
(2)將具FVIII之機能代替活性之物質予以中和之物質
FVIII抑制因子力價測定法
一般使用之FVIII抑制因子力價測定方法可使用對於該技術領域中有通常知識者為公知之方法，例如可使用Bethesda分析法(Kasper et al.,(1975)Thrombos Diath Haemorrh 34：869-872)、ELISA法、Nijmegen Bethesda分析法(Nijmegen modification assay)(Verbruggen et al.,(1995)Thromb Haemost 73：247-251)。Bethesda分析法可依例如以下方法實施。將正常血漿與待驗血漿等量混合而得之溶液於37℃培育2小時後，以 活化部分凝血酶時間(APTT)為主之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)來測定正常血漿中之殘存第VIII因子活性。規定抑制正常血漿中之第VIII因子活性之50%之作用為1Bethesda(1BU)，所以，能以Bethesda之單位算出FVIII抑制因子之力價。又，待驗血漿中所含之FVIII抑制因子力價高，殘存第FVIII活性未收斂於25-75%之範圍時，則使用經緩衝液適當稀釋之待驗血漿，再度算出Bethesda單位後，乘上稀釋倍率而算出待驗血漿中之FVIII抑制因子力價。
FVIII
FVIII為涉及血液凝固之一系列分子之一，若因凝血酶、FXa活化則呈輔因子活性，促進FIXa所為之FX活化反應。
FVIII抑制因子
FVIII抑制因子係於20~30%之血友病A患者產生之對抗外來性FVIII之同種抗體。又，原本於正常個體也可能後天地產生針對FVIII之自體抗體。一般而言，大部分FVIII抑制因子同種抗體及自體抗體係作為抗FVIII中和抗體之作用，使FVIII活性減少、或使其消滅。
FVIII代替活性
本發明之具有FVIII機能代替活性之物質也可改稱為具FVIII樣活性之物質。本發明中，「代替FVIII之機能」係指促進FIXa所為之FX之活化(促進FIXa所為之FXa產生)。又，更具體而言，本發明中，「代替FVIII之機能」，係指認識FIX及/或FIXa及FX及/或FXa，並促進FIXa所為之FX之活化(促進FIXa所為之FXa產生)。FXa產生促進活性，例如可以在由 FIXa、FX、合成基質S-2222(FXa之合成基質)、磷脂質構成之測定系進行評價。如此之測定系和血友病A症例之疾病之重症度及臨床症狀呈相關性(Rosen S,Andersson M,Blomba.ck M et al.Clinical applications of a chromogenic substrate method for determination of FVIII activity.Thromb Haemost 1985；54：811-23)。
本發明記載之具有代替FVIII之機能之活性之物質之理想態樣可列舉結合於FIX及/或FIXa及FX及/或FXa之雙專一性抗體。如此之抗體例如可依WO2005/035756、WO2006/109592、WO2012/067176等記載之方法取得。本發明之雙專一性抗體包括該等文獻記載之抗體。
作為理想之雙專一性抗體，可列舉：專利文獻(WO 2012/067176)記載之雙專一性抗體ACE910(Q499-z121/J327-z119/L404-k)(由序列編號：9記載之胺基酸序列構成之H鏈與序列編號：10記載之L鏈締合，且由序列編號：11記載之胺基酸序列構成之H鏈與序列編號：10記載之L鏈締合之雙專一性抗體)、hBS23(Q153-G4k/J142-G4h/L180-k)(由序列編號：36記載之胺基酸序列構成之H鏈與序列編號：38記載之L鏈締合，且由序列編號：37記載之胺基酸序列構成之H鏈與序列編號：38記載之L鏈締合之雙專一性抗體)。
中和
本發明中，將具FVIII之機能代替活性之物質予以中和之物質中之「中和」，係指抑制例如具FVIII機能代替活性之物 質之FVIII機能代替活性的全部或一部分。抑制FVIII機能代替活性之全部或一部分，例如於具FVIII之機能代替活性之物質為抗體時，可藉由抑制抗體向抗原之結合全部或一部分以實現，但不限於此。
中和之物質
本發明中，將具FVIII之機能代替活性之物質予以中和之物質中之中和之物質之「物質」，係指例如和具有FVIII之機能代替活性之物質結合之胜肽、多肽、有機化合物、適配體、抗體等。
中和之物質可組合多種使用，例如可以將抗體與適配體組合使用。
多肽
本發明中，多肽通常係指有10個胺基酸左右以上之長度之胜肽、及蛋白質。又，通常是來自生物之多肽，但不特別限定，例如可為由人工設計之序列構成的多肽。又，可為天然多肽、或合成多肽、重組多肽等中任一者。再者，上述多肽之片段也包括在本發明之多肽。
有機化合物
本發明中，有機化合物例如為低分子化合物，較佳為分子量為1000以下。
適配體
「適配體」係指對於多肽等標的分子專一性地結合之核酸分子。例如：本發明之適配體，可為能專一性地結合於具FVIII代替活性之物質的RNA適配體。適配體之生成及治療之用途 已於該技術領域充分確立。例如：適配體可藉由使用SELEX法(參照美國專利第5475096號、第5580737號、第5567588號、第5707796號、第5763177號、第6699843號等)取得。
抗體
和具有FVIII之機能代替活性之物質結合之抗體，於具FVIII之機能代替活性之物質為和FIX及/或FIXa及FX及/或FXa結合之雙專一性抗體時，可列舉例如選自於由以下構成之群組中之抗體：會結合於包括和FIX結合之抗原結合部位之Fab的抗體、會結合於包括和FIXa結合之抗原結合部位之Fab的抗體、會結合於包括和FX結合之抗原結合部位之Fab的抗體、會結合於包括和FXa結合之抗原結合部位之Fab的抗體、會結合於包括和FIX及/或FIXa結合之抗原結合部位之Fab及包括和FX及/或FXa結合之抗原結合部位之Fab的雙專一性抗體。上述抗體可單獨使用，也可以組合多數使用。例如：結合於包括和1種抗原結合之抗原結合部位之Fab之抗體可使用多種，例如會結合於包括和FIX結合之抗原結合部位之Fab的抗體可使用多種。具FVIII之機能代替活性之物質係結合於FIX及/或FIXa及FX及/或FXa之雙專一性抗體時，例如可使用以下之組合。
(a)會結合於包括和FIX結合之抗原結合部位之Fab的抗體，與會結合於包括和FX結合之抗原結合部位之Fab的抗體
(b)會結合於包括和FIXa結合之抗原結合部位之Fab的抗體，與會結合於包括和FX結合之抗原結合部位之Fab的抗體
(c)會結合於包括和FIX結合之抗原結合部位之Fab的抗體， 與會結合於包括和FIXa結合之抗原結合部位之Fab的抗體
(d)會結合於包括和FIX結合之抗原結合部位之Fab的抗體，與會結合於包括和FX結合之抗原結合部位之Fab的抗體及會結合於包括和FIXa結合之抗原結合部位之Fab的抗體
會結合於包括和FIX及/或FIXa結合之抗原結合部位之Fab的抗體，例如AQ8、AQ1、AQ512抗體。可變區之鹼基序列及由此預測之胺基酸序列係以GENETYX Ver.9(GENETYX CORPORATION)解析。
AQ8之H鏈可變區之胺基酸序列及核酸序列以下列序列編號表示。
胺基酸序列：序列編號：1
核酸序列：序列編號：5
AQ8之L鏈可變區之胺基酸序列及核酸序列以下列序列編號表示。
胺基酸序列：序列編號：2
核酸序列：序列編號：6
AQ8之H鏈CDR1~3之胺基酸序列及核酸序列以下列序列編號表示。
CDR1胺基酸序列：序列編號：12
CDR2胺基酸序列：序列編號：13
CDR3胺基酸序列：序列編號：14
CDR1核酸序列：序列編號：15
CDR2核酸序列：序列編號：16
CDR3核酸序列：序列編號：17
AQ8之L鏈CDR1~3之胺基酸序列及核酸序列以下列序列編號表示。
CDR1胺基酸序列：序列編號：18
CDR2胺基酸序列：序列編號：19
CDR3胺基酸序列：序列編號：20
CDR1核酸序列：序列編號：21
CDR2核酸序列：序列編號：22
CDR3核酸序列：序列編號：23
會結合於包括和FX及/或FXa結合之抗原結合部位之Fab的抗體，例如AJ540、AJ541、AJ522、AJ114、AJ521抗體。可變區之鹼基序列及由此預測之胺基酸序列以GENETYX Ver.9(GENETYX CORPORATION)解析。
AJ540之H鏈可變區之胺基酸序列及核酸序列以下列序列編號表示。
胺基酸序列：序列編號：3
核酸序列：序列編號：7
AJ540之L鏈可變區之胺基酸序列及核酸序列以下列序列編號表示。
胺基酸序列：序列編號：4
核酸序列：序列編號：8
AJ540之H鏈CDR1~3之胺基酸序列及核酸序列以下列序列編號表示。
CDR1胺基酸序列：序列編號：24
CDR2胺基酸序列：序列編號：25
CDR3胺基酸序列：序列編號：26
CDR1核酸序列：序列編號：27
CDR2核酸序列：序列編號：28
CDR3核酸序列：序列編號：29
AJ540之L鏈CDR1~3之胺基酸序列及核酸序列以下列序列編號表示。
CDR1胺基酸序列：序列編號：30
CDR2胺基酸序列：序列編號：31
CDR3胺基酸序列：序列編號：32
CDR1核酸序列：序列編號：33
CDR2核酸序列：序列編號：34
CDR3核酸序列：序列編號：35
「抗體」之用語係以最廣的含意使用，只要能代表所望之生物學活性，可為單株抗體、多株抗體、二聚體、多聚體、多專一性抗體(例如：雙專一性抗體)、抗體衍生物及抗體修飾物(Miller K et al.J Immunol.2003,170(9),4854-61)。抗體可以為小鼠抗體、人抗體、人化抗體、嵌合抗體，或可為來自其他物種，也可為人工合成者。本說明書中揭示之抗體可為免疫球蛋白分子之任意型(例如：IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)、類別(例如：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或子類別。免疫球蛋白可來自任意物種(例如：人、小鼠或兔)。又，「抗體」、「免疫球蛋白」及「immunoglobulin」之用語可互換，以廣義使用。
「抗體衍生物」，包括抗體之一部分，較佳為包括 抗體之可變區、或至少抗體之抗原結合區。抗體衍生物包括例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、線狀抗體、單鏈抗體(scFv)、sc(Fv)2、Fab3、分域抗體(dAb)(國際公開第2004/058821號、國際公開第2003/002609號)、雙價抗體(diabody)、三價抗體、四價抗體、微抗體(minibody)及抗體衍生物所形成之多專一性抗體，但不限於此等。在此，「Fab」係由一條輕鏈及一條重鏈之CH1區及可變區構成。又，「Fv」為最小的抗體衍生物，包括完整的抗原認識區與抗原結合區。抗體衍生物也可為和例如IgG抗體之Fc之融合體。例如：可參照美國專利第5641870號說明書、實施例2；Zapata G et al.Protein Eng.1995,8(10),1057-1062；Olafsen T et al.Protein Eng.Design & Sel.2004,17(4)：315-323；Holliger P et al.Nat.Biotechnol.2005,23(9)；1126-36；Fischer N et al.Pathobiology.2007,74(1)：3-14；Shen J et al.J Immunol Methods.2007,318,65-74；Wu et al.Nat Biotechnol.2007,25(11),1290-7。
抗體修飾物，例如和聚乙二醇(PEG)等各種分子結合而得之抗體。本發明之抗體也包括該等抗體修飾物。本發明之抗體修飾物結合之物質不限定。為了獲得如此的抗體修飾物，可藉由對於獲得之抗體施以化學性修飾而得。該等方法在此技術領域已經確立。
「雙專一性」抗體係指同一抗體分子內具有認識不同之抗原決定區之可變區之抗體。雙專一性抗體可為認室2個以上之不同之抗原之抗體，也可為認識同一抗原上之不同之2個以上之抗原決定區之抗體。雙專一性抗體不只包括完整抗 體，也包括抗體衍生物。本發明之抗體也包括雙專一性抗體。又，本說明書中，抗FIXa/FX雙專一性抗體係和結合於FIXa及FX之雙專一性抗體以相同含意使用。
基因重組抗體之製作方法
抗體可採用使用基因重組技術產生之重組型抗體。重組型抗體，可藉由從融合瘤、或產生抗體之感作淋巴球等抗體產生細胞選殖編碼為其之DNA並納入載體，將載體導入到寄主(寄主細胞)使其生產以獲得。
抗體可為人抗體、小鼠抗體、大鼠抗體等，其來源不限定。又，可為嵌合抗體、人化抗體等基因改變抗體。
人抗體之取得方法為已知，例如：可藉由以目的抗原對於具有人抗體基因之全部曲目(repertory)之基因轉殖動物進行免疫以取得目的之人抗體(參照國際專利出願公開號WO 93/12227、WO 92/03918、WO 94/02602、WO 94/25585、WO 96/34096、WO 96/33735)。
基因改變抗體可使用已知方法製造。具體而言，嵌合抗體為由免疫動物之抗體之H鏈、及L鏈之可變區，與人抗體之H鏈及L鏈之不變區構成之抗體。可藉由以下方式獲得”將編碼為來自免疫動物之抗體之可變區之DNA和編碼為人抗體之不變區之DNA予以連結，並將其納入表現載體後導入到寄主使其生產，以獲得嵌合抗體。
人化抗體係也稱為再構成(reshaped)人抗體之改變抗體。人化抗體係藉由將來自免疫動物之抗體之CDR移植到人抗體之互補性決定區以構建。其一般的基因重組方法亦為已 知(參照歐洲專利出願公開號EP 239400、國際專利出願公開號WO 96/02576、Sato K et al,Cancer Research 1993,53：851-856、國際專利出願公開號WO 99/51743)。
雙專一性抗體(bispecific抗體)係針對2種不同之抗原有專一性之抗體。
雙專一性抗體不限於IgG型，例如IgG型雙專一性抗體可藉由使融合2種產生IgG抗體之融合瘤而產生之混成融合瘤(hybrid hybridoma(quadroma))分泌(Milstein C et al.Nature 1983,305：537-540)。又，可藉由將構成目的之2種IgG之L鏈及H鏈之基因，合計4種基因導入到細胞並使其共表現以使其分泌。
此時，可藉由對於H鏈之CH3區施以適當的胺基酸取代，以使其優先分泌針對H鏈為異質組合之IgG(Ridgway JB et al.Protein Engineering 1996,9：617-621、Merchant AM et al.Nature Biotechnology 1998,16：677-681、WO2006/106905、Davis JH et al.Protein Eng Des Sel.2010,4：195-202.)。
又，關於L鏈，因比起H鏈可變區，L鏈可變區之多樣性較低，故可期待獲得能給予對於兩H鏈有結合能力之共通L鏈，本發明之抗體也也可為有共通之L鏈之抗體。藉由將此共通L鏈與兩H鏈基因導入到細胞，並使其表現IgG，能以良好效率表現雙專一性IgG。
抗原決定區
本發明中，將具FVIII之機能代替活性之物質予以中和之物質之一實施形態的抗體，也包括：會結合於和該抗體所結合 之抗原決定區為重複之抗原決定區的抗體，更佳為包括結合於相同抗原決定區之抗體。
某抗體是否認識和其他抗體為重複之抗原決定區或相同抗原決定區的情事，可藉由對於兩者之抗原決定區之競爭以確認。抗體間之競爭可利用競爭結合分析法評價，此方式可列舉酵素連結免疫吸附檢定法(ELISA)、螢光能量轉移測定法(FRET)、螢光微量測定技術(FMAT(註冊商標))等。和抗原結合之該抗體之量，間接地和對於重複之抗原決定區或同一抗原決定區之結合競爭之候選競爭抗體(待驗抗體)之結合能力相關。亦即，若待驗抗體之量、親和性對於重複之抗原決定區或同一抗原決定區愈大，則該抗體向抗原之結合量愈低，待驗抗體向抗原之結合量增加。具體而言，針於抗原，同時添加經適當標記之該抗體及待驗抗體，利用標記而檢測出已結合之該抗體。已和抗原結合之該抗體量可藉由對於該抗體預先標記而輕易測定。此標記無特殊限制，可選擇因應方法之標記方法。標記方法，具體而言可舉螢光標記、放射標記、酵素標記等。
在此所指，「和重複之抗原決定區結合之抗體」或「和同一抗原決定區結合之抗體」，係指就該標記抗體因非標記之抗體之結合導致結合量減少50%之濃度(IC50)而言，待驗抗體為能以非標記抗體之IC50之通常、100倍，較佳為80倍，更佳為50倍，更佳為30倍，更佳為10倍高濃度使該標記抗體之結合量減少至少50%之抗體。又，抗體所認識之抗原決定區之解析可依該技術領域中有通常知識者公知之方法進行，例如可依西方點墨法等進行。
抗體之製造方法
本發明之抗體可依該技術領域中有通常知識者公知之方法製造。具體而言，將編碼為目的抗體之DNA納入表現載體。此時，係以在表現控制區，例如：增進子、啟動子之控制下表現的方式納入表現載體。然後，利用此表現載體將寄主細胞轉形，並使抗體表現。此時，可使用適當的寄主與表現載體之組合。
載體，例如M13系載體、pUC系載體、pBR322、pBluescript、pCR-Script等。又，當目的為cDNA之次選殖、切出時，除了上述載體，也可使用例如：pGEM-T、pDIRECT、pT7等。
當為了生產抗體而使用載體時，尤其表現載體為有用。表現載體，例如：寄主為JM109、DH5α、HB101、XL1-Blue等大腸菌時，必須帶有能在大腸菌以良好效率表現之啟動子、例如：lacZ啟動子(Ward等，Nature(1989)341,544-546；FASEB J.(1992)6,2422-2427)、araB啟動子(Better等，Science(1988)240,1041-1043)、或T7啟動子等。如此的載體，除了上述載體，也可列舉pGEX-5X-1(Pharmacia公司製)、「QIAexpress system」(QIAGEN公司製)、pEGFP、或pET(此時，寄主宜為表現T7 RNA聚合酶之BL21較佳)等。
又，載體也可包括用以使多肽分泌之信號序列。多肽分泌用之信號序列，於在大腸菌之胞外質使其產生時，可使用例如pelB信號序列(Lei,S.P.et al J.Bacteriol.(1987)169,4397)。載體向寄主細胞之導入，例如可使用氯化鈣法、電穿 孔法。
大腸菌表現載體以外，用以製造本發明之抗體之載體，例如：來自哺乳動物之表現載體(例如：pcDNA3(Invitrogen公司製)、pEGF-BOS(Nucleic Acids.Res.1990,18(17),p5322)、pEF、pCDM8)、來自昆蟲細胞之表現載體(例如「Bac-to-BAC baculovirus expression system」(GIBCO BRL公司製)、pBacPAK8)、來自植物之表現載體(例如pMH1、pMH2)、來自動物病毒之表現載體(例如：pHSV、pMV、pAdexLcw)、來自反轉錄病毒之表現載體(例如：pZIPneo)、來自酵母菌之表現載體(例如：「Pichia Expression Kit」(Invitrogen公司製)、pNV11、SP-Q01)、來自枯草菌之表現載體(例如：pPL608、pKTH50)。
為了於CHO細胞、COS細胞、NIH3T3細胞等動物細胞表現時，必須帶有為了於細胞內表現所必要之啟動子，例如SV40啟動子(Mulligan等，Nature(1979)277,108)、MMTV-LTR啟動子、EF1α啟動子(Mizushima等，Nucleic Acids Res.(1990)18,5322)、CAG啟動子(Gene.(1991)108,193)、CMV啟動子等，具有用以選擇轉形細胞之基因則更理想。用以選擇轉形細胞之基因，例如能利用藥劑(新黴素(neomycin)、G418等)判別之藥劑耐性基因。具有如此之特性之載體，例如：pMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV、pOP13等。
再者，目的為使基因安定表現且放大於細胞內之基因副本數時，可列舉對於核酸合成路徑缺損之CHO細胞導入與其為互補之具有DHFR基因之載體(例如：pCHOI等)，並以 胺甲喋呤(MTX)使其放大之方法，又，當為了將基因暫時表現時，可列舉將使用染色體上具有表現SV40 T抗原之基因的COS細胞以帶有SV40之複製起點的載體(pcD等)轉形之方法。作為複製開始點，也可使用多瘤病毒、腺病毒、牛乳突病毒(BPV)等來源者。再者，為了以寄主細胞系放大基因副本數，表現載體可包括作為選擇標記之胺基糖苷轉移酶(APH)基因、胸苷激酶(TK)基因、大腸菌黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(Ecogpt)基因、二氫葉酸還原酵素(dhfr)基因等。
藉此獲得之本發明之抗體，可從寄主細胞內或細胞外(培養基等)單離並且精製成實質上純且均勻的抗體。抗體之分離、精製，只要是使用通常之抗體精製使用之分離、精製方法即可，無任何限定。例如：適當選擇層析管柱、過濾、超過濾、鹽析、溶劑沉澱、溶劑萃取、蒸餾、免疫沈降、SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳、等電點電泳法、透析、再結晶等並組合，則可將抗體分離、精製。
層析，例如親和性層析、離子交換層析、疏水性層析、凝膠過濾、逆相層析、吸附層析等(Strategies for Protein Purification and Characterization：A Laboratory Course Manual.Ed Daniel R.Marshak et al.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1996)。該等層析，可使用液相層析例如HPLC、FPLC等液相層析進行。作為親和性層析使用之管柱，可列舉Protein A管柱、Protein G管柱。例如：作為使用了Protein A之管柱，可列舉Hyper D,POROS,Sepharose FF(GE Amersham Biosciences)等。本發明也包括使用該等精製方法高度精製而 得的抗體。
獲得的抗體可純化成同質。例如可依照一般蛋白質使用的分離及純化方法將抗體分離及純化。例如若適當選擇及合併使用親和性層析等管柱層析、過濾、超過濾、鹽析、透析、SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳及等電點電泳以將抗體分離、精製(Antibodies：A Laboratory Manual.Ed Harlow and David Lane,Cold Spring Harbor Laboratory(1988))，但不限於此等。可使用蛋白質A管柱及蛋白質G管柱當做該親和性管柱。
樣本取得方法
本發明中，來自血液之樣本較佳為從待驗者抽取的血液來源樣本。如此的血液來源樣本，可以從已投予有FVIII代替活性之物質的待驗者取得。待驗者可列舉在體內之任一部位伴隨出血性症狀之患者(出血性疾病患者)。主要出血部位可列舉關節內、肌肉內、皮下、口腔內、頭蓋內、消化管、鼻腔內等，但不限於此等部位。出血性疾病患者較佳為FVIII及/或FVIIIa之活性低落或缺損為原因之出血性疾病患者。FVIII及/或FVIIIa之活性之低落或缺損為原因之出血性疾病患者係有出血性症狀之患者，可列舉先天或後天性的FVIII及FVIIIa中之任一者或兩者之活性低落或缺損之患者。FVIII、FVIIIa之活性之低落可列舉和健常者比較，該等活性較佳為未達40%(例如未達40%、未達30%、未達20%、未達10%)，更佳為未達10%(例如未達10%、未達9%、未達8%、未達7%、未達6%)，更佳為未達5%(例如未達5%、未達4%、未達3%、未達2%)，尤佳為未達1%之患者，但不限於此等。
更具體而言，如此的疾病，例如可列舉選自於血友病(血友病A、血友病B)、後天性血友病及溫韋伯因子(vWF)之機能異常或缺損引起的溫韋伯氏病(von Willebrand disease)之疾病，但不限定於此等。血液來源的樣本包括血清、血漿、或全血。本發明中，宜使用血漿樣本較佳。從待驗者取得來自血液之樣本之方法對於該技術領域中有通常知識者為周知。
套組
本發明之使用抗體測定FVIII之反應性之方法所必要之緩衝液等各種試藥類，可以預先包裝成套組的形式供給。本發明之套組中，除了包括緩衝液，也可包括從血液中之FVIII活性、FIX活性為正常的人單離的血漿樣本、具FVIII代替活性之物質、可用於測定FVIII活性測定者、可用於測定FVIII抑制因子力價測定者等。又，套組所含之各種試藥可因應其使用態樣而為粉末狀或液狀。又，可將此等容納於適當容器並適時地使用。
使用本發明之使用抗體之方法可診斷例如已投予具FVIII之機能代替活性之物質之患者之重症度。使用本發明之使用抗體之方法可測定FVIII之反應性，並依據其測定結果判斷、判定患者之重症度及/或抑制因子力價。診斷‧判定方法可依對於該技術領域中有通常知識者為公知之方法實施。
使用本發明之使用抗體之方法可以監測例如已投予具FVIII之機能代替活性之物質及FVIII製劑之患者之FVIII製劑之藥理活性。監測可依對於該技術領域中有通常知識者為公知之方法實施。
本發明之含抗體之套組例如可作為診斷已投予具FVIII之機能代替活性之物質之患者之重症度之套組使用。可使用本發明之含抗體之套組測定FVIII之反應性，並基於其測定結果診斷‧判定患者之重症度及/或抑制因子力價。診斷‧判定方法可以依對於該技術領域中有通常知識者公知之方法實施。
本發明之含抗體之套組可以作為監測例如已投予具FVIII之機能代替活性之物質及FVIII製劑之患者之FVIII製劑之藥理活性的套組使用。監測可依對於該技術領域中有通常知識者為公知之方法實施。
例如本發明可以使用為治療患者之方法且包括以下步驟之方法：(a)投予第1投予量之具FVIII之機能代替活性之物質；(b)監測患者之FVIII之反應性；(c)依據觀測到的FVIII的反應性，決定具FVIII之機能代替活性之物質之第2投予量，及(d)對於該患者投予第2投予量之具FVIII之機能代替活性之物質。
又，例如本發明可使用為治療患者之方法且包括以下步驟之方法：(a)以第1投予間隔投予有FVIII之機能代替活性之物質；(b)監測患者之FVIII之反應性；(c)依據觀測到的FVIII的反應性，決定具FVIII之機能代替活性之物質之第2投予間隔，及 (d)以第2投予間隔對該患者投予具FVIII之機能代替活性之物質。
又，例如可使用為治療患者之方法且係監測FVIII之反應性，並因應FVIII之反應性而改變具第VIII凝血因子之機能代替活性之物質之投予量或/及投予間隔之方法。
具FVIII之機能代替活性之物質較佳為和會FIX及/或FIXa及FX及/或FXa結合之雙專一性抗體。更佳為係以下記載之抗體，且第1多肽與第3多肽締合，第2多肽與第4多肽締合之雙專一性抗體。雙專一性抗體(Q499-z121/J327-z119/L404-k)，其第1多肽為由序列編號：9之胺基酸序列構成之H鏈、第2多肽為由序列編號：11之胺基酸序列構成之H鏈，且第3多肽與第4多肽為序列編號；10之共通L鏈；或雙專一性抗體(Q153-G4k/J142-G4h/L180-k)，第1多肽為由序列編號：36之胺基酸序列構成之H鏈、第2多肽為由序列編號：37之胺基酸序列構成之H鏈，第3多肽與第4多肽為序列編號：38之共通L鏈。
投予量，例如前述雙專一性抗體時，為0.001~100mg/kg。較佳為約0.001mg/kg、約0.003mg/kg、約0.005mg/kg、約0.01mg/kg、約0.03mg/kg、約0.05mg/kg、約0.1mg/kg、約0.3mg/kg、約0.5mg/kg、約1mg/kg、約3mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg、約20mg/kg、約30mg/kg、約40mg/kg、約50mg/kg、約60mg/kg、約70mg/kg、約80mg/kg、約90mg/kg、約100mg/kg。投予量於監測之前後可相同也可不同。投予間隔，例如為前述雙專一性抗體時，為至少 1日以上。較佳為1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週、2週、3週、4週、5週、6週、7週、8週、9週、10週、11週、12週、13週、14週、15週、16週、17週、18週、19週、20週、21週、22週、23週、24週、25週、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1年。投予間隔於監測前後可以相同也可不同。
成為本發明之使用抗體之方法或本發明之含抗體之套組之對象之患者，例如為血友病A、後天性血友病A、溫韋伯氏病(von Willebrand disease)、及針對FVIII及/或FVIIIa出現抑制因子之血友病A之患者。
本說明書中，「包含(comprising)‧‧‧」之表達方式所代表之態樣，包括：「本質上由‧‧‧構成(essentially consisting of)」之表達方式所代表之態樣，及「由‧‧‧構成(consisting of)」之表達方式所代表之態樣。
本說明書明示地引用的全部專利及參考文獻的內容納入本說明書作為參照。
本發明利用以下實施例更進一步例示，但不限於下列實施例。
【實施例】
以下對於本發明依實施例更具體說明，但本發明不限於此等實施例。
[實施例1] 針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之抗體之製作及可變區之序列決定
嘗試製作針對專利文獻3(WO 2012/067176)記載之雙專一性抗體即ACE910(Q499-z121/J327-z119/L404-k)(由序列編號：9記載之胺基酸序列構成之H鏈與序列編號：10記載之L鏈締合，且由序列編號：11記載之胺基酸序列構成之H鏈與序列編號：10記載之L鏈締合之雙專一性抗體)之抗體。使用基因重組方法及胃蛋白酶(Pepsin)消化，製作以抗FIXa側、抗FX側各自的Fab構成的F(ab')2。
將抗FIXa-F(ab')2或抗FX-F(ab')2對於小鼠及大鼠進行免疫。將從小鼠或大鼠摘出之脾臟或大鼠淋巴節獲得之細胞和小鼠骨髓瘤細胞依常法進行細胞融合，並製成融合瘤。將融合瘤之培養上清利用檢測向ACE910之抗FIXa-arm或抗FX-arm之結合之ELISA進行評價，最後選擇只和ACE910之抗FIXa-arm結合，不結合於抗FX-arm之小鼠抗體AQ8、AQ1、大鼠抗體AQ512，及只和ACE910之抗FX-arm結合，不結合於抗FIXa-arm之大鼠抗體AJ540、AJ114、AJ521、AJ522、AJ541。再者，解析AQ8抗體或AJ540抗體之可變區之鹼基序列。AQ8及AJ540之可變區之鹼基序列及由此預測之胺基酸序列以GENETYX Ver.9(GENETYX CORPORATION)解析。
[實施例2] 重組小鼠抗體AQ8及重組大鼠-兔嵌合抗體AJ540之表現載體之製作
重組小鼠抗體AQ8，係將實施例1獲得之AQ8抗體之可變區之序列和已知之小鼠IgG2b之不變區序列(重鏈：EMBL存取號：J00461，輕鏈：EMBL存取號：V00807)組合而製作全 長抗體基因，並插入到表現載體。同樣，重組大鼠-兔嵌合抗體AJ540，係將AJ540抗體之可變區和已知之兔IgG(重鏈：EMBL存取號：L29172，輕鏈：EMBL存取號：X00231)組合並製作。將製作的表現選殖體質體導入到HEK293細胞，實施大量培養及利用Protein A及凝膠過濾所為之精製，製成重組小鼠抗體AQ8(rAQ8-mIgG2b)及重組大鼠-兔嵌合抗體AJ540(rAJ540-rbtIgG)。
[實施例3] 使用rAQ8-mIgG2b及rAJ540-rbtIgG之於抗FIXa/FX雙專一性抗體中和下之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)之實施
於含有10或100U/dL之重組FVIII(Kogenate FS、拜耳藥品(股)公司)之FVIII欠缺血漿(George King)添加抗FIXa/FX雙專一性抗體ACE910使濃度成為0或300μg/mL。再將各製備的血漿分成以咪唑緩衝液(Kyowa medex)稀釋10倍之群，以及以已添加rAQ8-mIgG2b及rAJ540-rbtIgG使濃度各成為300μg/mL之咪唑緩衝液稀釋10倍之群，共分2群，製備測定用樣本溶液。又，加入為了將ACE910中和所必要量之rAQ8-mIgG2b及rAJ540-rbtIgG。組合之詳情如下。
Figure 104131372-A0202-12-0033-1
Figure 104131372-A0202-12-0034-2
又，為了製作將凝固時間換算為FVIII活性之校準線，製作將標準血漿COAGUTROL N(Sysmex)以咪唑緩衝液稀釋10、20、40、80、160倍之溶液(校準線用溶液之FVIII活性各為93、46.5、23.3、11.6、5.81%)。將測定用樣本溶液或校準線用溶液50μL、第VIII因子欠缺人血漿(Sysmex)50μL、及THROMBOCHECK APTT-SLA(Sysmex)50μL混合，於37℃培育5分鐘。培育後添加0.02mol/L氯化鈣溶液(Sysmex)50μL，使凝固開始，並以血液凝固自動測定裝置KC4 Delta(Stago)測定凝固時間。
從校準線用溶液之各FVIII活性之凝固時間，將測定用樣本之凝固時間換算成FVIII活性。
結果
結果如第1圖。將已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體之含10或100U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以緩衝液稀釋時(#3、#7)，呈現校準線之範圍以上之FVIII活性，無法正確測定。另一方面，對於已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體之含 10或100U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體之緩衝液稀釋時(#4、#8)，顯示和抗FIXa/FX雙專一性抗體無添加群(#1、#5)為同樣的FVIII活性。因此藉由針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之抗體將雙專一性抗體之活性予以完全中和，能於即使雙專一性抗體存在，仍正確地測定血漿中之FVIII活性。又，對於含有10或100U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以只含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體之緩衝液稀釋時(#2、#6)，和抗FIXa/FX雙專一性抗體無添加群(#1、#5)呈現同樣的FVIII活性，可知：針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之抗體對於雙專一性抗體有專一性的中和作用。
[實施例4] 利用AQ1與AJ541、或AQ1與AJ522所為之抗FIXa/FX雙專一性抗體中和下之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)之實施
於含10U/dL之重組FVIII(Kogenate FS、拜耳藥品(股)公司)之FVIII欠缺血漿(George King)添加抗FIXa/FX雙專一性抗體ACE910使其濃度成為0或10μg/mL。再將各製備的血漿分成以咪唑緩衝液(Kyowa medex)稀釋10倍之群，以及以已添加AQ1及AJ541使濃度各成為100μg/mL之咪唑緩衝液稀釋10倍之群、及以已添加AQ1及AJ522使濃度各成為100μg/mL之咪唑緩衝液稀釋10倍之群，共分3群，製備測定用樣本溶液。又，加入為了充分中和ACE910之必要量之AQ1、AJ541、AJ522。組合之詳情如下。
Figure 104131372-A0202-12-0036-3
又，為了製作將凝固時間換算為FVIII活性之校準線，製作將標準血漿COAGUTROL N(Sysmex)以咪唑緩衝液稀釋10、20、40、80、160、320、640倍之溶液(校準線用溶液之FVIII活性各為102、51.0、25.5、12.8、6.38、3.19、1.59%)。將測定用樣本溶液或校準線用溶液50μL、第VIII因子欠缺人血漿(Sysmex)50μL、及THROMBOCHECK APTT-SLA(Sysmex)50μL混合，於37℃培育5分鐘。培育後添加0.02mol/L氯化鈣溶液(Sysmex)50μL，使凝固開始，並以血液凝固自動測定裝置KC4 Delta(Stago)測定凝固時間。
從校準線用溶液之各FVIII活性之凝固時間，將測定用樣本之凝固時間換算成FVIII活性。
結果
結果如第2圖。將已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體ACE910之含10U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以緩衝液稀釋時 (#4)，呈現校準線之範圍以上之FVIII活性，無法正確測定。另一方面，對於已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體ACE910之含10U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體AQ1與AJ541之緩衝液稀釋時(#5)，或以含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體AQ1與AJ522之緩衝液稀釋時(#6)，顯示和抗FIXa/FX雙專一性抗體無添加群(#1)為同樣的FVIII活性。因此作為將雙專一性抗體ACE910之活性予以完全中和之針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之抗體，不只是rAQ8-mIgG2b及rAJ540-rbtIgG，其他抗體的組合亦為有效。
[實施例5] 利用AQ512與AJ114、或AQ512與AJ521所為之抗FIXa/FX雙專一性抗體中和下之單步驟凝血分析法(one-stage clotting assay)之實施
於含有10U/dL之重組FVIII(Kogenate FS、拜耳藥品(股)公司)之FVIII欠缺血漿(George King)添加抗FIXa/FX雙專一性抗體hBS23使濃度成為0或10μg/mL。再將各製備的血漿分成以咪唑緩衝液(Kyowa medex)稀釋10倍之群，以及以已添加AQ512及AJ114使濃度各成為100μg/mL之咪唑緩衝液稀釋10倍之群、及以已添加AQ512及AJ521使濃度各成為100μg/mL之咪唑緩衝液稀釋10倍之群，共分3群，製備測定用樣本溶液。又，加入為了充分中和hBS23所必要之量之AQ512、AJ114、AJ521。組合之詳情如下。
【表3】
Figure 104131372-A0202-12-0038-4
又，為了製作將凝固時間換算為FVIII活性之校準線，製作將標準血漿COAGUTROL N(Sysmex)以咪唑緩衝液稀釋10、20、40、80、160、320、640倍之溶液(校準線用溶液之FVIII活性各為102、51.0、25.5、12.8、6.38、3.19、1.59%)。將測定用樣本溶液或校準線用溶液50μL、第VIII因子欠缺人血漿(Sysmex)50μL、及THROMBOCHECK APTT-SLA(Sysmex)50μL混合，於37℃培育5分鐘。培育後添加0.02mol/L氯化鈣溶液(Sysmex)50μL，使凝固開始，並以血液凝固自動測定裝置KC4 Delta(Stago)測定凝固時間。從校準線用溶液之各FVIII活性之凝固時間，將測定用樣本之凝固時間換算成FVIII活性。
結果
結果如第3圖。將已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體hBS23之含10U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以緩衝液稀釋時(#4)，呈現校準線之範圍以上之FVIII活性，無法正確測定。 另一方面，對於已添加抗FIXa/FX雙專一性抗體hBS23之含10U/dL之重組FVIII之FVIII欠缺血漿以含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體AQ512與AJ114之緩衝液稀釋時(#5)，或以含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體AQ512與AJ521之緩衝液稀釋時(#6)，顯示和抗FIXa/FX雙專一性抗體無添加群(#1)為同樣的FVIII活性。即使是和ACE910為不同之雙專一性抗體hBS23，藉由將其活性完全中和，即便有雙專一性抗體存在仍能正確地測定血漿中之FVIII活性，故顯示本方法對於各種有FVIII代替活性之雙專一性抗體為有效。
[實施例6] 於使用rAQ8-mIgG2b及rAJ540-rbtIgG之抗FIXa/FX雙專一性抗體中和下之Bethesda法之實施
於第VIII因子欠缺人血漿(含FVIII抑制因子)(George King Bio-Medical)添加抗FIXa/FX雙專一性抗體ACE910使濃度成為0或300μg/mL。再將各製備之血漿以含有0.25%(w/v)牛血清白蛋白(Sigma-Aldrich)之咪唑緩衝液(Kyowamedex)(以下BSA-咪唑)進行25倍稀釋或30倍稀釋。於標準血漿COAGUTROL N(Sysmex)不添加rAQ8-mIgG2b及rAJ540-rbtIgG，或各添加rAQ8-mIgG2b及rAJ540-rbtIgG使濃度成為300μg/mL。
將製備的各血漿中的2種依以下組合(共計8種)等量混合，於37℃培育2小時。
【表4】
Figure 104131372-A0202-12-0040-5
培育後，再將混合溶液以BSA-咪唑稀釋10倍，製備成測定用樣本溶液。又，為了製作將凝固時間換算成FVIII活性值之校準線，製備將COAGUTROL N以BSA-咪唑稀釋20、40、80、160、320倍的溶液(校準線用溶液之FVIII活性各為100、50、25、12.5、6.25%)。
將測定用樣本溶液或校準線用溶液50μL、第VIII因子欠缺人血漿(Sysmex)50μL、及THROMBOCHECK APTT-SLA(Sysmex)50μL混合，於37℃培育3分鐘。培育後添加0.02mol/L氯化鈣溶液(Sysmex)50μL，開始凝固，並以血液凝固自動測定裝置KC4 Delta(Stago)測定凝固時間。
從校準線用溶液之各FVIII活性之凝固時間，將測定用樣本之凝固時間換算為FVIII活性。以殘存FVIII活性為 50%時定義為1Bethesda，算出測定用樣本中之Bethesda值後呈以25倍及30倍，將此算出值之平均值定義為各樣本原液中之抑制因子力價。
結果
結果如第4圖。只含有抗FIXa/FX雙專一性抗體之FVIII抑制因子血漿(#3)，呈現校準線之FVIII 100%以上之活性，故無法測定FVIII抑制因子力價。
另一方面，含有針對抗FIXa/FX雙專一性抗體及抗FIXa/FX雙專一性抗體之2種抗體之FVIII抑制因子血漿(#4)，和無添加之抑制因子血漿(#1)顯示同樣的FVIII抑制因子力價。因此，針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之抗體藉由將雙專一性抗體之活性予以完全中和，即便雙專一性抗體存在，仍可正確地測定血漿中之FVIII抑制因子力價。又，只含有2種針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之抗體之FVIII抑制因子血漿(#2)，和#1呈現同樣結果，可知：針對抗FIXa/FX雙專一性抗體之抗體對於雙專一性抗體有專一性的中和作用。
[產業利用性]
依本發明可提供在具FVIII機能代替活性之雙專一性抗體存在下測定FVIII之反應性之方法，例如測定FVIII活性、FVIII抑制因子力價之方法使用的抗體。藉由使用本發明之抗體之方法，能於利用該雙專一性抗體所為之血友病等出血性疾病之治療正確地測定患者之FVIII之反應性。
<110> 中外製藥股份有限公司(CHUGAI SEIYAKU KABUSIKI KAISHA)
<120> 中和具有第VIII凝血因子(FVIII)機能替代活性的物質之抗體
<150> JP 2014-197207
<151> 2014-09-26
<160> 38
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 124
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AQ8 VH
<400> 1
Figure 104131372-A0305-02-0044-1
Figure 104131372-A0202-12-0043-7
<210> 2
<211> 107
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AQ8 VL
<400> 2
Figure 104131372-A0202-12-0043-8
Figure 104131372-A0202-12-0044-9
<210> 3
<211> 120
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AJ540 VH
<400> 3
Figure 104131372-A0202-12-0044-10
Figure 104131372-A0202-12-0045-11
<210> 4
<211> 107
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AJ540 VL
<400> 4
Figure 104131372-A0202-12-0045-12
<210> 5
<211> 372
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AQ8 VH之核酸序列
<400> 5
Figure 104131372-A0202-12-0046-13
<210> 6
<211> 321
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AQ8 VL之核酸序列
<400> 6
Figure 104131372-A0202-12-0046-14
<210> 7
<211> 360
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AJ540 VH之核酸序列
<400> 7
Figure 104131372-A0202-12-0047-15
<210> 8
<211> 321
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AJ540 VL之核酸序列
<400> 8
Figure 104131372-A0202-12-0047-16
<210> 9
<211> 448
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> 人造序列
<400> 9
Figure 104131372-A0202-12-0048-17
Figure 104131372-A0202-12-0049-18
Figure 104131372-A0202-12-0050-19
<210> 10
<211> 214
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> 人造序列
<400> 10
Figure 104131372-A0202-12-0051-20
Figure 104131372-A0202-12-0052-21
<210> 11
<211> 444
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> 人造序列
<400> 11
Figure 104131372-A0202-12-0052-22
Figure 104131372-A0202-12-0053-23
Figure 104131372-A0202-12-0054-24
Figure 104131372-A0202-12-0055-25
<210> 12
<211> 5
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AQ8重鏈CDR1
<400> 12
Figure 104131372-A0202-12-0055-26
<210> 13
<211> 19
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AQ8重鏈CDR2
<400> 13
Figure 104131372-A0202-12-0055-27
<210> 14
<211> 13
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AQ8重鏈CDR3
<400> 14
Figure 104131372-A0202-12-0056-28
<210> 15
<211> 15
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AQ8重鏈CDR1之核酸序列
<400> 15
Figure 104131372-A0202-12-0056-29
<210> 16
<211> 57
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AQ8重鏈CDR2之核酸序列
<400> 16
Figure 104131372-A0202-12-0056-30
<210> 17
<211> 39
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AQ8重鏈CDR3之核酸序列
<400> 17
Figure 104131372-A0202-12-0056-31
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AQ8輕鏈CDR1
<400> 18
Figure 104131372-A0202-12-0057-32
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AQ8輕鏈CDR2
<400> 19
Figure 104131372-A0202-12-0057-33
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AQ8輕鏈CDR3
<400> 20
Figure 104131372-A0202-12-0057-34
<210> 21
<211> 33
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AQ8輕鏈CDR1之核酸序列
<400> 21
Figure 104131372-A0202-12-0058-35
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AQ8輕鏈CDR2之核酸序列
<400> 22
Figure 104131372-A0202-12-0058-36
<210> 23
<211> 27
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AQ8輕鏈CDR3之核酸序列
<400> 23
Figure 104131372-A0202-12-0058-37
<210> 24
<211> 5
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AJ540重鏈CDR1
<400> 24
Figure 104131372-A0202-12-0059-38
<210> 25
<211> 17
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AJ540重鏈CDR2
<400> 25
Figure 104131372-A0202-12-0059-39
<210> 26
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AJ540重鏈CDR3
<400> 26
Figure 104131372-A0202-12-0059-40
<210> 27
<211> 15
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AJ540重鏈CDR1之核酸序列
<400> 27
Figure 104131372-A0202-12-0060-41
<210> 28
<211> 51
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AJ540重鏈CDR2之核酸序列
<400> 28
Figure 104131372-A0202-12-0060-42
<210> 29
<211> 33
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AJ540重鏈CDR3之核酸序列
<400> 29
Figure 104131372-A0202-12-0060-43
<210> 30
<211> 11
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AJ540輕鏈CDR1
<400> 30
Figure 104131372-A0202-12-0060-44
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AJ540輕鏈CDR2
<400> 31
Figure 104131372-A0202-12-0061-45
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> AJ540輕鏈CDR3
<400> 32
Figure 104131372-A0202-12-0061-46
<210> 33
<211> 33
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AJ540輕鏈CDR1之核酸序列
<400> 33
Figure 104131372-A0202-12-0061-47
<210> 34
<211> 21
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AJ540輕鏈CDR2之核酸序列
<400> 34
Figure 104131372-A0202-12-0062-48
<210> 35
<211> 27
<212> DNA
<213> 人造
<220>
<223> AJ540輕鏈CDR3之核酸序列
<400> 35
Figure 104131372-A0202-12-0062-49
<210> 36
<211> 448
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> 人造序列
<400> 36
Figure 104131372-A0202-12-0062-50
Figure 104131372-A0202-12-0063-51
Figure 104131372-A0202-12-0064-52
Figure 104131372-A0202-12-0065-53
<210> 37
<211> 444
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> 人造序列
<400> 37
Figure 104131372-A0202-12-0065-54
Figure 104131372-A0202-12-0066-55
Figure 104131372-A0202-12-0067-56
<210> 38
<211> 214
<212> PRT
<213> 人造
<220>
<223> 人造序列
<400> 38
Figure 104131372-A0202-12-0068-57
Figure 104131372-A0202-12-0069-58

Claims (16)

  1. 一種抗體，係中和具第VIII凝血因子之機能代替活性之物質，其中，前述具第VIII凝血因子之機能代替活性之物質為，結合於第IX凝血因子及/或活化第IX凝血因子以及第X凝血因子及/或活化血液第X凝血因子之雙專一性抗體，前述中和抗體係為一抗體，該抗體結合於包括和第IX凝血因子及/或活化第IX凝血因子結合之抗原結合部位之Fab，該抗體為：a)重鏈可變區包括由序列編號：12記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：13記載之胺基酸序列構成之CDR2、及由序列編號：14記載之胺基酸序列構成之CDR3，b)輕鏈可變區包括由序列編號：18記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：19記載之胺基酸序列構成之CDR2、及由序列編號：20記載之胺基酸序列構成之CDR3。
  2. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中，該雙專一性抗體係第1多肽與第3多肽締合，第2多肽與第4多肽締合之雙專一性抗體，係由第1多肽為由序列編號：9記載之胺基酸序列構成之H鏈、第2多肽為由序列編號：11記載之胺基酸序列構成之H鏈，第3多肽與第4多肽為序列編號：10記載之共通L鏈所構成之雙專一性抗體(Q499-z121/J327-z119/L404-k)。
  3. 如申請專利範圍第1項之抗體，前述中和抗體係為一抗體，該抗體結合於包括和第IX凝血因子及/或活化第IX凝血因 子結合之抗原結合部位之Fab，該抗體包括a)由序列編號：1記載之胺基酸序列構成之重鏈可變區，及b)由序列編號：2記載之胺基酸序列構成之輕鏈可變區。
  4. 一種抗體，係中和具第VIII凝血因子之機能代替活性之物質，其中，前述具第VIII凝血因子之機能代替活性之物質為，結合於第IX凝血因子及/或活化第IX凝血因子以及第X凝血因子及/或活化血液第X凝血因子之雙專一性抗體，該中和抗體係為一抗體，該抗體結合於包括和第X凝血因子及/或活化第X凝血因子結合之抗原結合部位之Fab，該抗體為：a)重鏈可變區包括由序列編號：24記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：25記載之胺基酸序列構成之CDR2、及由序列編號：26記載之胺基酸序列構成之CDR3，b)輕鏈可變區包括由序列編號：30記載之胺基酸序列構成之CDR1、由序列編號：31記載之胺基酸序列構成之CDR2、及由序列編號：32記載之胺基酸序列構成之CDR3。
  5. 如申請專利範圍第4項之抗體，其中，該雙專一性抗體係第1多肽與第3多肽締合，第2多肽與第4多肽締合之雙專一性抗體，係由第1多肽為由序列編號：9記載之胺基酸序列構成之H鏈、第2多肽為由序列編號：11記載之胺基酸序列構成之H鏈，第3多肽與第4多肽為序列編號：10記載之共通L鏈所構成之雙專一性抗體(Q499-z121/J327-z119/L404-k)。
  6. 如申請專利範圍第4項之抗體，前述中和抗體係為一抗體，該抗體結合於包括和第X凝血因子及/或活化第X凝血因子結合之抗原結合部位之Fab，該抗體包括：a)由序列編號：3記載之胺基酸序列構成之重鏈可變區，及b)由序列編號：4記載之胺基酸序列構成之輕鏈可變區。
  7. 一種核酸，編碼為如申請專利範圍第1至6項中任一項之抗體。
  8. 一種載體，插入有如申請專利範圍第7項之核酸。
  9. 一種細胞，包括如申請專利範圍第7項之核酸。
  10. 一種抗體製造方法，係利用培養如申請專利範圍第9項之細胞以進行。
  11. 一種細胞，包括如申請專利範圍第8項之載體。
  12. 一種抗體製造方法，係利用培養如申請專利範圍第11項之細胞以進行。
  13. 一種組成物，包括如申請專利範圍第1項之抗體及如申請專利範圍第4項之抗體。
  14. 一種組成物，包括如申請專利範圍第3項之抗體及如申請專利範圍第6項之抗體。
  15. 一種溶液，包括如申請專利範圍第1項之抗體及如申請專利範圍第4項之抗體。
  16. 一種溶液，包括如申請專利範圍第3項之抗體及如申請專利範圍第6項之抗體。
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ZA (1) ZA201701844B (zh)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RS57038B1 (sr) 2010-11-17 2018-05-31 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Multi-specifičan antigen-vezujući molekul koji ima alternativnu funkciju funkciji faktora viii koagulacije krvi
TWI701435B (zh) * 2014-09-26 2020-08-11 日商中外製藥股份有限公司 測定ｆｖｉｉｉ的反應性之方法
TWI700300B (zh) 2014-09-26 2020-08-01 日商中外製藥股份有限公司 中和具有第ｖｉｉｉ凝血因子（ｆｖｉｉｉ）機能替代活性的物質之抗體
TW201836636A (zh) * 2017-03-31 2018-10-16 公立大學法人奈良縣立醫科大學 含有替代凝血因子ｖｉｉｉ功能之多特異性抗原結合分子之用於預防和／或治療凝血因子ｉｘ異常症的醫藥組合物
GB201709970D0 (en) 2017-06-22 2017-08-09 Kymab Ltd Bispecific antigen-binding molecules
CN107449925A (zh) * 2017-09-22 2017-12-08 郑州大学第附属医院 一种用于凝血因子viii抑制物检测的缓冲液以及检测方法
KR102382743B1 (ko) * 2018-08-01 2022-04-12 노보 노르디스크 에이/에스 개선된 응혈 촉진 항체
PL3723858T3 (pl) 2018-12-21 2022-03-07 Kymab Limited Przeciwciało dwuswoiste fixaxfx o wspólnym łańcuchu lekkim
EP3914290A4 (en) * 2019-01-22 2022-10-12 Clemson University Research Foundation ANTI-ELASTIN ANTIBODIES AND METHODS OF USE
US20230183376A1 (en) 2020-05-22 2023-06-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody for neutralizing substance having coagulation factor viii (f.viii) function-substituting activity

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201243049A (en) * 2010-11-17 2012-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Multi-specific antigen-binding molecule having alternative function to function of blood coagulation factor viii

Family Cites Families (87)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4208479A (en) 1977-07-14 1980-06-17 Syva Company Label modified immunoassays
US4474893A (en) 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
US4444878A (en) 1981-12-21 1984-04-24 Boston Biomedical Research Institute, Inc. Bispecific antibody determinants
EP0432134A1 (en) 1984-01-12 1991-06-12 Chiron Corporation Hybridoma cell lines and monoclonal antibodies
US6010902A (en) 1988-04-04 2000-01-04 Bristol-Meyers Squibb Company Antibody heteroconjugates and bispecific antibodies for use in regulation of lymphocyte activity
IL89491A0 (en) 1988-11-17 1989-09-10 Hybritech Inc Bifunctional chimeric antibodies
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
JPH0332287A (ja) 1989-06-29 1991-02-12 Pioneer Electron Corp 記録媒体演奏装置
JP3032287B2 (ja) 1989-12-11 2000-04-10 イムノメデイツクス・インコーポレイテツド 診断薬または治療薬の抗体ターゲティング
TW212184B (zh) 1990-04-02 1993-09-01 Takeda Pharm Industry Co Ltd
JPH05184383A (ja) 1990-06-19 1993-07-27 Dainabotsuto Kk 二重特異性抗体
JPH05199894A (ja) 1990-08-20 1993-08-10 Takeda Chem Ind Ltd 二重特異性抗体および抗体含有薬剤
JPH05304992A (ja) 1991-06-20 1993-11-19 Takeda Chem Ind Ltd ハイブリッド・モノクローナル抗体および抗体含有薬剤
JPH06104071A (ja) 1991-08-30 1994-04-15 Jasco Corp 発熱体セラミックス溶接加工方法
DE69233528T2 (de) 1991-11-25 2006-03-16 Enzon, Inc. Verfahren zur Herstellung von multivalenten antigenbindenden Proteinen
US5667988A (en) 1992-01-27 1997-09-16 The Scripps Research Institute Methods for producing antibody libraries using universal or randomized immunoglobulin light chains
JPH05203652A (ja) 1992-01-28 1993-08-10 Fuji Photo Film Co Ltd 抗体酵素免疫分析法
JPH05213775A (ja) 1992-02-05 1993-08-24 Otsuka Pharmaceut Co Ltd Ｂｆａ抗体
US6749853B1 (en) 1992-03-05 2004-06-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Combined methods and compositions for coagulation and tumor treatment
US6129914A (en) 1992-03-27 2000-10-10 Protein Design Labs, Inc. Bispecific antibody effective to treat B-cell lymphoma and cell line
US5744446A (en) 1992-04-07 1998-04-28 Emory University Hybrid human/animal factor VIII
US5837242A (en) 1992-12-04 1998-11-17 Medical Research Council Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use
EP0660937A1 (en) 1993-07-01 1995-07-05 Dade International Inc. Process for the preparation of factor x depleted plasma
HU220347B (hu) 1994-07-11 2001-12-28 Board Of Regents The University Of Texas System Készítmény az érrendszer specifikus koagulálásához
AU4289496A (en) 1994-12-02 1996-06-19 Chiron Corporation Method of promoting an immune response with a bispecific antibody
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
MA24512A1 (fr) 1996-01-17 1998-12-31 Univ Vermont And State Agrienl Procede pour la preparation d'agents anticoagulants utiles dans le traitement de la thrombose
JPH10165184A (ja) 1996-12-16 1998-06-23 Tosoh Corp 抗体、遺伝子及びキメラ抗体の製法
US5755446A (en) 1996-12-24 1998-05-26 United Technologies Corporation Seal apparatus between a shaft and a non-linear inner surface of a housing
US20030207346A1 (en) 1997-05-02 2003-11-06 William R. Arathoon Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
DK0979281T3 (da) 1997-05-02 2005-11-21 Genentech Inc Fremgangsmåde til fremstilling af multispecifikke antistoffer med heteromultimere og fælles bestanddele
DE19725586C2 (de) 1997-06-17 1999-06-24 Gsf Forschungszentrum Umwelt Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper
US6207805B1 (en) 1997-07-18 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Prostate cell surface antigen-specific antibodies
US6342220B1 (en) 1997-08-25 2002-01-29 Genentech, Inc. Agonist antibodies
CN1073412C (zh) 1998-03-19 2001-10-24 中国科学院化学研究所 一种高分子微包囊的制备方法
EP1074842A1 (en) 1999-07-21 2001-02-07 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Catalytic anti-factor VIII allo-antibodies
AT411997B (de) 1999-09-14 2004-08-26 Baxter Ag Faktor ix/faktor ixa aktivierende antikörper und antikörper-derivate
JP2004511430A (ja) 2000-05-24 2004-04-15 イムクローン　システムズ　インコーポレイティド 二重特異性免疫グロブリン様抗原結合蛋白および製造方法
US7160540B2 (en) 2000-06-30 2007-01-09 Regents Of The University Of Minnesota Methods for detecting activity of clottings factors
EP1304573A4 (en) 2000-07-17 2006-06-07 Chugai Pharmaceutical Co Ltd METHOD FOR SCREENING A LIGAND WITH BIOLOGICAL ACTIVITY
EP1324776B2 (en) 2000-10-12 2018-03-21 Genentech, Inc. Reduced-viscosity concentrated protein formulations
CA2424371A1 (en) 2000-10-20 2003-04-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agonistic monoclonal antibody fragments
KR100988949B1 (ko) 2001-10-25 2010-10-20 제넨테크, 인크. 당단백질 조성물
DE10156482A1 (de) 2001-11-12 2003-05-28 Gundram Jung Bispezifisches Antikörper-Molekül
US8030461B2 (en) 2002-04-15 2011-10-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for constructing scDb libraries
US7732149B2 (en) 2002-04-26 2010-06-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of screening agonistic antibodies
ATE514717T1 (de) 2002-07-18 2011-07-15 Merus B V Rekombinante produktion von antikörpermischungen
WO2004060919A1 (ja) 2002-12-26 2004-07-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ヘテロ受容体に対するアゴニスト抗体
ATE431423T1 (de) 2003-01-21 2009-05-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Verfahren zum screening der leichten kette eines antikörpers
AU2004216298B2 (en) 2003-02-28 2009-04-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Stabilized protein-containing formulations
GB2400851B (en) 2003-04-25 2004-12-15 Bioinvent Int Ab Identifying binding of a polypeptide to a polypeptide target
US8597911B2 (en) 2003-06-11 2013-12-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for producing antibodies
US7297336B2 (en) 2003-09-12 2007-11-20 Baxter International Inc. Factor IXa specific antibodies displaying factor VIIIa like activity
AU2003271174A1 (en) 2003-10-10 2005-04-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Double specific antibodies substituting for functional protein
JPWO2005035754A1 (ja) 2003-10-14 2006-12-21 中外製薬株式会社 機能蛋白質を代替する二種特異性抗体
US20050266425A1 (en) 2003-12-31 2005-12-01 Vaccinex, Inc. Methods for producing and identifying multispecific antibodies
EP3050963B1 (en) 2005-03-31 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
DK2824183T3 (da) 2005-04-08 2020-09-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåde til fremstilling af bispecifikke antistoffer
EP1915176A4 (en) 2005-07-15 2008-12-03 Univ Vermont ULTRASENSITIVE IMMUNOASSAY AND ANTIBODIES FOR DETECTION OF BLOOD FACTOR VIII
EP3345616A1 (en) 2006-03-31 2018-07-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody modification method for purifying bispecific antibody
IN2014DN10515A (zh) 2006-03-31 2015-08-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd
SG174782A1 (en) * 2006-09-08 2011-10-28 Abbott Lab Interleukin - 13 binding proteins
WO2009024653A1 (fr) 2007-08-23 2009-02-26 Lfb Biotechnologies Anticorps anti-idiotypigues neutralisant l'activite inhibitrice d'un anticorps inhibiteur dirige contre le domaine c1 du facteur viii
CA2700701C (en) 2007-09-26 2020-12-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
AU2009203350B2 (en) * 2008-01-11 2014-03-13 Gene Techno Science Co., Ltd. Humanized anti-alpha9 integrin antibodies and the uses thereof
FR2933496B1 (fr) 2008-07-02 2012-10-05 Lfb Biotechnologies Procede de mesure du taux de facteur vii active dans un echantillon
CN101906160A (zh) 2009-06-05 2010-12-08 苏州泽璟生物制药有限公司 一种抗人凝血因子ⅷ单克隆抗体及其制备方法和用途
EP2332994A1 (en) * 2009-12-09 2011-06-15 Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg Trispecific therapeutics against acute myeloid leukaemia
ES2777901T3 (es) 2009-12-25 2020-08-06 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Método de modificación de polipéptidos para purificar multímeros polipeptídicos
TWI505838B (zh) 2010-01-20 2015-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Stabilized antibody solution containing
TW201217526A (en) * 2010-07-09 2012-05-01 Biogen Idec Hemophilia Inc Chimeric clotting factors
CN104159613B (zh) 2012-03-08 2016-11-23 霍夫曼-拉罗奇有限公司 Abeta抗体制剂
CA2886326C (en) 2012-09-28 2021-11-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for evaluating blood coagulation reaction
EP2968517A4 (en) * 2013-03-15 2017-02-22 Bullet Biotechnology, Inc. Specific multivalent virus-like particle vaccines and uses thereof
SG10201803449VA (en) 2013-09-27 2018-05-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for producing polypeptide heteromultimer
TW201625299A (zh) 2014-06-20 2016-07-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd 用於因第ｖｉｉｉ凝血因子及／或活化的第ｖｉｉｉ凝血因子的活性降低或欠缺而發病及／或進展的疾病之預防及／或治療之醫藥組成物
TWI701435B (zh) 2014-09-26 2020-08-11 日商中外製藥股份有限公司 測定ｆｖｉｉｉ的反應性之方法
TWI700300B (zh) 2014-09-26 2020-08-01 日商中外製藥股份有限公司 中和具有第ｖｉｉｉ凝血因子（ｆｖｉｉｉ）機能替代活性的物質之抗體
US10787500B2 (en) 2015-04-10 2020-09-29 Adimab, Llc Methods for purifying heterodimeric multispecific antibodies from parental homodimeric antibody species
AU2016248817A1 (en) 2015-04-17 2017-08-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with coagulation factors and multispecific antibodies
JP2018123055A (ja) 2015-04-24 2018-08-09 公立大学法人奈良県立医科大学 血液凝固第ｖｉｉｉ因子（ｆｖｉｉｉ）の機能を代替する多重特異性抗原結合分子を含有する、血液凝固第ｘｉ因子（ｆｘｉ）異常症の予防および／または治療に用いられる医薬組成物
TWI797073B (zh) 2016-01-25 2023-04-01 德商安美基研究（慕尼黑）公司 包含雙特異性抗體建構物之醫藥組合物
BR112018067792A2 (pt) 2016-04-28 2019-02-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha preparação contendo o anticorpo
TW201836636A (zh) 2017-03-31 2018-10-16 公立大學法人奈良縣立醫科大學 含有替代凝血因子ｖｉｉｉ功能之多特異性抗原結合分子之用於預防和／或治療凝血因子ｉｘ異常症的醫藥組合物
MX2020003472A (es) 2017-11-01 2020-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Variante e isoforma de anticuerpos con actividad biologica reducida.

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW201243049A (en) * 2010-11-17 2012-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Multi-specific antigen-binding molecule having alternative function to function of blood coagulation factor viii

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Muto A., "Anti‐factor IXa/X bispecific antibody (): hemostatic potency against ongoing bleeds in a hemophilia A model and the possibility of routine supplementation", Journal of Thrombosis and Haemostasis, Vol. 12, No. 2, February 2014, page 206-213. *
Muto A., "Anti‐factor IXa/X bispecific antibody (ACE910): hemostatic potency against ongoing bleeds in a hemophilia A model and the possibility of routine supplementation", Journal of Thrombosis and Haemostasis, Vol. 12, No. 2, February 2014, page 206-213.

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