JP2023112042A - カチオン交換クロマトグラフィーを使用した三重軽鎖抗体の分離 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2017年9月22日出願の米国仮出願第62/562,188号(参照により本明細書に組み込まれる)の優先権を主張する。
電子的に提出された配列表(名称:2921_097PC01_ST25;サイズ:15,736バイト;及び作成日:2018年9月21日)の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語及び語句を以下に定義する。
publication No.91-3242,1991、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる)。ある特定の実施形態では、Fc領域は、EUインデックスにより番付される位置239、282、289、297、312、324、330、335、337、339、356、359、361、383、384、398、400、440、422、及び442のうちの1つ以上にシステインを含む。ある特定の実施形態では、次の残基のうちの任意の1つ以上が、システインで置換され得る:軽鎖のV205(Kabat番付);重鎖のA118(EU番付);及び重鎖Fc領域のS400(EU番付)。ある特定の実施形態では、例えば、scFvの可変軽鎖ドメインは、Kabat位置100にシステインを有する。ある特定の実施形態では、例えば、scFvの可変重鎖ドメインは、Kabat位置44にシステインを有する。システイン操作抗体は、米国特許第7,521,541号、米国特許第7,855,275号、米国公開出願第20110033378号、及びWO2011/005481に記載されるように生成され得る。
Institutes of Health,Bethesda Md.),「Kabat」)、及び(2)抗原-抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ(Al-lazikani et al,J.Molec.Biol.273:927-948(1997))。加えて、これらの2つのアプローチの組み合わせは、CDRを決定するために当技術分野で時おり使用される。
本明細書に提供される方法により、カチオン交換樹脂を使用して、三重軽鎖(H2L3)抗体及びその抗原結合断片を、H2L3ならびに二重軽鎖(H2L2)抗体及びその抗原結合断片を含む組成物から分離することができる。
抗体及びその抗原結合断片(例えば、治療的に有用な抗体及びその抗原結合断片)は一般的に、2つの重鎖またはその断片と、2つの軽鎖またはその断片と、を含有する。しかしながら、2つの重鎖またはその断片及び3つの軽鎖またはその断片を含有する三重軽鎖(H2L3)種も観察されている。そのようなH2L3種は、例えば、H2L3種が余分な軽鎖と抗体またはその抗原結合断片上の操作されたシステインのうちの1つとの間に形成されたジスルフィド結合の結果である場合、システイン操作抗体及びその抗原結合断片において高い率で生じ得る。したがって、本明細書で使用される抗体組成物は、システイン操作抗体またはその抗原結合断片を含む。同様に、H2L2もしくはH2L3抗体またはその抗原結合断片は、システイン操作H2L2もしくはH2L3抗体またはその抗原結合断片であり得る。システイン操作抗体またはその抗原結合断片は、例えば、EU/OU番付位置442に操作されたシステイン残基を含む。
本明細書に提供される方法により、三重軽鎖(H2L3)抗体及びその抗原結合断片と、二重軽鎖(H2L2)抗体及びその抗原結合断片と、の両方を含む抗体組成物をカチオン交換樹脂に接触させて、H2L3及びH2L2種を分離することができる。
本明細書に提供される方法により、三重軽鎖(H2L3)抗体及び抗原結合、ならびに二重軽鎖(H2L2)抗体及びその抗原結合断片は、カチオン交換樹脂から別個に溶出することができる。
本明細書に提供される方法により、三重軽鎖(H2L3)抗体及びその抗原結合断片を、二重軽鎖(H2L2)抗体及びその抗原結合断片から分離して、H2L2組成物を産生することができる。そのようなH2L2組成物は、例えば、治療目的に有用である。例えば、H2L2組成物は、高純度H2L2抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物、例えば、1%または0.5%以下のH2L3種を含む組成物を製剤化するために使用され得る。
システイン操作抗体を発現するように安定してトランスフェクトされた哺乳類細胞が三重軽鎖(H2L3)抗体として知られる高分子量種も分泌することが以前に報告されている(Gomez et al.,Biotechnol Bioeng.2010 Mar 1;105(4):748-60)。これらの抗体は、抗体上の操作されたシステインと会合する余分な(第3の)軽鎖を含有する。単量体種の類似性により、この新しい高分子量(HMW)種の分離は、システイン操作モノクローナル抗体(CysmAb)の下流精製中の課題となる。H2L3種を除去するための頑強かつ効果的な精製方法を開発するために、例示的な抗体中のH2L3含有量を評価し、H2L3を除去するための様々な方法が評価された。
H2L3種の除去は、セラミックヒドロキシアパタイト(CHT)クロマトグラフィーを使用して効率的に達成されなかった。(図3。)これらの実験において、CHTカラムは、pH6.7の20mMリン酸カリウムを含有する緩衝液で平衡化された。4.7%のH2L3種を有するCysmAbを、CHT(商標)樹脂(BioRad Laboratories,Hercules,CA)上に充填し、pH6.7の100mM、95mM、90mM、または85mMリン酸カリウムを使用して、段階溶出により溶出した。溶出ピークは、1CV画分において50mAUの上で収集した。各画分の抗体段階収率及びH2L3%を分析し、計算ならびに6カラム体積(CV)仮想プールの段階収率及びH2L3%との比較に使用した。高分子量種(すなわち、凝集体及びH2L3)はそれらのより大きいサイズによりCHT樹脂により強く結合し、後の画分において溶出されるだろうと考えられた。さらに、低ホスフェート濃度での溶出は、より広い溶出ピーク及び仮想プールの低段階収率をもたらすであろうが、分離を改善すると考えられた。しかしながら、図3は、H2L3種の除去が試験したホスフェート範囲にわたって改善されず、2.5%と高いままであったことを示す。塩濃度が異なる追加の実験もH2L3種を効率的に分離することができず、CHTカラムのpHを変更する余地はほとんどない。よって、CHTクロマトグラフィーはH2L3を効率的に分離することができなかった。
POROS(商標)XS強カチオン交換クロマトグラフィーを使用して、H2L3種の除去を試験した。POROS(商標) strong cation exchange
resin XS(Life Technologies Corporation,Carlsbad,CA)を、pH5.5の50mM酢酸ナトリウムを含有する緩衝液で平衡化した。3%の凝集体及び4%のH2L3種を有するCysmAb組成物を、POROS(商標)XSカラム上に充填し、20CVにわたって0~200mM NaClを使用して勾配溶出により溶出した。溶出ピークは、0.5CV画分において50mAUの上で収集した。各画分の抗体段階収率、凝集体%、及びH2L3%を分析し、画分番号に対してプロットした。図4は、凝集体種が後の画分(F8~F10)で溶出され、溶出された抗体の主ピークから効率的に分離されたことを示す。H2L3種も溶出された抗体の主ピークとは異なる画分で溶出された。H2L3種のかなりの部分が後の画分において溶出され、H2L2抗体の主ピークから効率的に分離された(図4)。しかしながら、H2L3種の部分は、抗体ピークの初期の画分と共溶出された(図4)。初期に溶出するH2L3種はグルタチオンでキャッピングされているH2L3抗体の遊離システインに由来すると考えられる。グルタチオンキャッピング種は、より酸性であり(低PI)、したがって、初期の画分において溶出する。後に溶出するH2L3種は、システインでキャッピングされているH2L3抗体の遊離システインに由来すると考えられる。システインキャッピング種は、あまり酸性ではなく(高PI)、したがって、後の画分において溶出する。
* * *
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
(項目1)
H2L3抗体またはその抗原結合断片を、H2L3抗体またはその抗原結合断片及びH2L2抗体またはその抗原結合断片を含む抗体組成物から分離する方法であって、
(i)H2L3抗体またはその抗原結合断片及びH2L2抗体またはその抗原結合断片がカチオン交換樹脂に結合するように、前記抗体組成物を前記樹脂に接触させることと、
(ii)約3.8~約5.0のpHの溶出組成物を前記カチオン交換樹脂に接触させることと、
(iii)前記樹脂から溶出したH2L2組成物を収集することと、を含む、前記方法。
(項目2)
H2L3抗体またはその抗原結合断片を、H2L3抗体またはその抗原結合断片及びH2L2抗体またはその抗原結合断片を含む抗体組成物から分離する方法であって、
(i)H2L3抗体またはその抗原結合断片及びH2L2抗体またはその抗原結合断片がカチオン交換樹脂に結合するように、前記抗体組成物を前記樹脂に接触させることと、
(ii)約300mM~約600mMの塩濃度の溶出組成物を前記カチオン交換樹脂に接触させることと、
(iii)前記樹脂から溶出したH2L2組成物を収集することと、を含む、前記方法。
(項目3)
前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の2%以下が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目1または2に記載の方法。
(項目4)
前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の1%以下が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目3に記載の方法。
(項目5)
前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の0.5%以下が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目4に記載の方法。
(項目6)
前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の少なくとも98%、少なくとも99%、または少なくとも99.5%が、H2L2抗体またはその抗原結合断片である、項目1~5のいずれか1項に記載の方法。
(項目7)
前記H2L2組成物が、前記カチオン交換樹脂に適用された前記抗体組成物中に25%以下、20%以下、15%以下、10%以下、または5%以下の前記H2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目1~6のいずれか1項に記載の方法。
(項目8)
前記H2L2組成物が、1~9のカラム体積から選択される1つ以上の溶出されたカラム体積を含む、項目1~7のいずれか1項に記載の方法。
(項目9)
前記H2L2組成物が、1~4の溶出されたカラム体積を含む、項目1~7のいずれか1項に記載の方法。
(項目10)
前記カチオン交換樹脂が、架橋ポリ(スチレンジビニルベンゼン)を含む、項目1~9のいずれか1項に記載の方法。
(項目11)
前記カチオン交換樹脂が、スフロプロピル(-CH2CH2CH2SO3-)表面官能性を有する、項目1~10のいずれか1項に記載の方法。
(項目12)
前記カチオン交換樹脂の粒径が、約50μmである、項目1~11のいずれか1項に記載の方法。
(項目13)
前記カチオン交換樹脂が、二峰性孔径分布を有する、項目1~12のいずれか1項に記載の方法。
(項目14)
前記二峰性孔径分布が、直径約500nMの細孔及び直径約22nMの細孔を含む、項目13に記載の方法。
(項目15)
前記カチオン交換樹脂が、POROS(商標)Strong Cation Exchange Resin XSである、項目1~14のいずれか1項に記載の方法。
(項目16)
前記溶出組成物が、塩を含む、項目1または3~15のいずれか1項に記載の方法。
(項目17)
前記溶出組成物中の前記塩が、塩化物塩である、項目16に記載の方法。
(項目18)
前記塩化物塩が、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、または塩化マグネシウムである、項目17に記載の方法。
(項目19)
前記溶出組成物中の塩濃度が、約100mM~約600mM、約300mM~約500mM、または約350mM~約450mMである、項目16~18のいずれか1項に記載の方法。
(項目20)
前記溶出組成物中の前記塩濃度が、約300mM~約500mMまたは約350mM~約450mMである、項目2~15のいずれか1項に記載の方法。
(項目21)
前記溶出組成物中の前記塩濃度が、約400mMである、項目19または20に記載の方法。
(項目22)
前記溶出組成物が、約3.8~約6.5のpHを有する、項目2~21のいずれか1項に記載の方法。
(項目23)
前記溶出組成物が、約3.8~約5.0のpHを有する、項目1~22のいずれか1項に記載の方法。
(項目24)
前記溶出組成物が、約4.2のpHを有する、項目22または23に記載の方法。
(項目25)
前記方法が、平衡組成物を前記カチオン交換樹脂に接触させた後に、前記抗体組成物を前記カチオン交換樹脂に接触させることを含む、項目1~24のいずれか1項に記載の方法。
(項目26)
前記平衡組成物が、酢酸ナトリウムを含む、項目25に記載の方法。
(項目27)
前記平衡組成物中の前記酢酸ナトリウムの濃度が、約10mM~150mMである、項目25に記載の方法。
(項目28)
前記平衡組成物中の前記酢酸ナトリウムの前記濃度が、約50mMである、項目25に記載の方法。
(項目29)
前記平衡組成物が、約3.8~約6.5のpHを有する、項目25~28のいずれか1項に記載の方法。
(項目30)
前記平衡組成物が、約4.2のpHを有する、項目29に記載の方法。
(項目31)
前記抗体組成物が、約10~約100g/Lのタンパク質を含む、項目1~30のいずれか1項に記載の方法。
(項目32)
前記抗体組成物が、約30g/L~約50g/Lまたは約35g/L~約45g/Lのタンパク質を含む、項目31に記載の方法。
(項目33)
前記抗体組成物が、約40g/Lのタンパク質を含む、項目32に記載の方法。
(項目34)
前記抗体組成物が、約3.8~約6.5のpHを有する、項目1~33のいずれか1項に記載の方法。
(項目35)
前記抗体組成物が、約4.2のpHを有する、項目34に記載の方法。
(項目36)
前記抗体組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の約1%~約20%が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目1~35のいずれか1項に記載の方法。
(項目37)
前記抗体組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の約1%~約15%、または約5%~約15%、または約3%~約12%、または約10%~約15%が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目36に記載の方法。
(項目38)
前記H2L2組成物が、前記カチオン交換樹脂に接触させた前記抗体組成物中に少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、または少なくとも55%の前記H2L2抗体またはその抗原結合断片を含む、項目1~37のいずれか1項に記載の方法。
(項目39)
前記抗体組成物が、システイン操作抗体またはその抗原結合断片を含む、項目1~38のいずれか1項に記載の方法。
(項目40)
前記システイン操作抗体またはその抗原結合断片が、EU/OU番付位置442に操作されたシステイン残基を含む、項目39に記載の方法。
(項目41)
前記抗体組成物が、抗体を含む、項目1~40のいずれか1項に記載の方法。
(項目42)
前記抗体組成物が、抗体の抗原結合断片を含む、項目1~40のいずれか1項に記載の方法。
(項目43)
前記抗体組成物が、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、単鎖FvもしくはscFv、ジスルフィド連結Fv、V-NARドメイン、IgNar、イントラボディ、IgGΔCH2、ミニボディ、F(ab’)3、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2、またはscFv-Fcを含む、項目1~40のいずれか1項に記載の方法。
(項目44)
前記抗体組成物が、CHO細胞株から産生された抗体またはその抗原結合断片を含む、項目1~43のいずれか1項に記載の方法。
(項目45)
前記H2L2組成物中の前記H2L2抗体またはその抗原結合断片を細胞毒にコンジュゲートして、イムノコンジュゲート組成物を形成することをさらに含む、項目1~44のいずれか1項に記載の方法。
(項目46)
項目1~45のいずれか1項に記載の方法により産生されたH2L2組成物。
(項目47)
2%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目46に記載のH2L2組成物。
(項目48)
1%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目47に記載のH2L2組成物。
(項目49)
0.5%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目48に記載のH2L2組成物。
(項目50)
項目45に記載の方法により産生されたイムノコンジュゲート組成物。
(項目51)
2%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目50に記載のイムノコンジュゲート組成物。
(項目52)
1%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目51に記載のイムノコンジュゲート組成物。
(項目53)
0.5%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目52に記載のイムノコンジュゲート組成物。
(項目54)
(i)前記カチオン交換樹脂が、架橋ポリ(スチレンジビニルベンゼン)、スフロプロピル(-CH2CH2CH2SO3-)表面官能性、約50μmの粒径、ならびに直径約500nMの細孔及び直径約22nMの細孔を含む二峰性孔径分布を有し、
(ii)前記溶出組成物が、約300~600mMの塩化物塩、及び約3.8~約5.0のpHを含み、
(iii)前記抗体組成物が、約10~約100g/Lのタンパク質を含み、前記抗体組成物中の約10%~約15%の前記抗体またはその抗原結合断片が、H2L3抗体またはその抗原結合断片であり、
(iv)前記H2L2組成物が、1~9のカラム体積から選択される1つ以上の溶出されたカラム体積を含み、
(v)前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の2%以下が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目1に記載の方法。
(項目55)
(i)前記カチオン交換樹脂が、架橋ポリ(スチレンジビニルベンゼン)、スフロプロピル(-CH2CH2CH2SO3-)表面官能性、約50μmの粒径、ならびに直径約500nMの細孔及び直径約22nMの細孔を含む二峰性孔径分布を有し、
(ii)前記溶出組成物が、約400mM NaCl及び4.2のpHを有し、
(iii)前記抗体組成物が、約30~約50g/Lのタンパク質を含み、前記抗体組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の約10%~約15%が、H2L3抗体またはその抗原結合断片であり、
(iv)前記H2L2組成物が、1~4の溶出されたカラム体積を含み、
(v)前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の1%以下が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目1に記載の方法。
(項目56)
抗CD123 H2L3抗体またはその抗原結合断片を、抗CD123 H2L3抗体またはその抗原結合断片及び抗CD123 H2L2抗体またはその抗原結合断片を含む抗CD123抗体組成物から分離する方法であって、
(i)抗CD123 H2L3抗体またはその抗原結合断片及び抗CD123 H2L2抗体またはその抗原結合断片がカチオン交換樹脂に結合するように、前記抗CD123抗体組成物を前記樹脂に接触させることと、
(ii)約3.8~約5.5のpHの溶出組成物を前記カチオン交換樹脂に接触させることと、
(iii)前記樹脂から溶出した抗CD123 H2L2組成物を収集することと、を含み、
前記抗CD123 H2L3抗体またはその抗原結合断片及び前記抗CD123 H2L2抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ、配列番号5~7の可変重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3配列と、それぞれ、配列番号8~10の可変軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3配列と、を含む、前記方法。
(項目57)
抗CD123 H2L3抗体またはその抗原結合断片を、抗CD123 H2L3抗体またはその抗原結合断片及び抗CD123 H2L2抗体またはその抗原結合断片を含む抗CD123抗体組成物から分離する方法であって、
(i)抗CD123 H2L3抗体またはその抗原結合断片及び抗CD123 H2L2抗体またはその抗原結合断片がカチオン交換樹脂に結合するように、前記抗CD123抗体組成物を前記樹脂に接触させることと、
(ii)約300mM~約600mMの塩濃度の溶出組成物を前記カチオン交換樹脂に接触させることと、
(iii)前記樹脂から溶出した抗CD123 H2L2組成物を収集することと、を含み、
前記抗CD123 H2L3抗体またはその抗原結合断片及び前記抗CD123 H2L2抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ、配列番号5~7の可変重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3配列と、それぞれ、配列番号8~10の可変軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3配列と、を含む、前記方法。
(項目58)
前記抗CD123抗体が、配列番号1の可変重鎖配列を含む、項目56または57に記載の方法。
(項目59)
前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片が、配列番号2の可変軽鎖配列を含む、項目56~58のいずれか1項に記載の方法。
(項目60)
前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片が、システイン操作されている、項目56~59のいずれか1項に記載の方法。
(項目61)
前記抗CD123抗体が、配列番号3の重鎖配列を含む、項目56~60のいずれか1項に記載の方法。
(項目62)
前記抗CD123抗体が、配列番号4の軽鎖配列を含む、項目56~61のいずれか1項に記載の方法。
(項目63)
前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の2%以下が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目56~62のいずれか1項に記載の方法。
(項目64)
前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の1%以下が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目63に記載の方法。
(項目65)
前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の0.5%以下が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目64に記載の方法。
(項目66)
前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の少なくとも98%、少なくとも99%、または少なくとも99.5%が、H2L2抗体またはその抗原結合断片である、項目56~65のいずれか1項に記載の方法。
(項目67)
前記H2L2組成物が、前記カチオン交換樹脂に接触させた前記抗体組成物中に25%以下、20%以下、15%以下、10%以下、または5%以下の前記H2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目56~66のいずれか1項に記載の方法。
(項目68)
前記H2L2組成物が、1~9のカラム体積から選択される1つ以上の溶出されたカラム体積を含む、項目56~67のいずれか1項に記載の方法。
(項目69)
前記H2L2組成物が、1~4の溶出されたカラム体積を含む、項目56~68のいずれか1項に記載の方法。
(項目70)
前記カチオン交換樹脂が、架橋ポリ(スチレンジビニルベンゼン)を含む、項目56~69のいずれか1項に記載の方法。
(項目71)
前記カチオン交換樹脂が、スフロプロピル(-CH2CH2CH2SO3-)表面官能性を有する、項目56~70のいずれか1項に記載の方法。
(項目72)
前記カチオン交換樹脂の粒径が、約50μmである、項目57~72のいずれか1項に記載の方法。
(項目73)
前記カチオン交換樹脂が、二峰性孔径分布を有する、項目56~72のいずれか1項に記載の方法。
(項目74)
前記二峰性孔径分布が、直径約500nMの細孔及び直径約22nMの細孔を含む、項目73に記載の方法。
(項目75)
前記カチオン交換樹脂が、POROS(商標)Strong Cation Exchange Resin XSである、項目56~74のいずれか1項に記載の方法。
(項目76)
前記溶出組成物が、塩を含む、項目56または58~75のいずれか1項に記載の方法。
(項目77)
前記溶出組成物中の前記塩が、塩化物塩である、項目76に記載の方法。
(項目78)
前記塩化物塩が、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、または塩化マグネシウムである、項目77に記載の方法。
(項目79)
前記溶出組成物中の塩濃度が、約100mM~約600mM、約300mM~約500mM、または約350mM~約450mMである、項目76~78のいずれか1項に記載の方法。
(項目80)
前記溶出組成物中の前記塩濃度が、約300mM~約500mMまたは約350mM~約450mMである、項目57~78のいずれか1項に記載の方法。
(項目81)
前記溶出組成物中の前記塩濃度が、約400mMである、項目79または80に記載の方法。
(項目82)
前記溶出組成物が、約3.8~約6.5のpHを有する、項目57~81のいずれか1項に記載の方法。
(項目83)
前記溶出組成物が、約3.8~約5.0のpHを有する、項目56~82のいずれか1項に記載の方法。
(項目84)
前記溶出組成物が、約4.2のpHを有する、項目82または83に記載の方法。
(項目85)
前記方法が、平衡組成物を前記カチオン交換樹脂に接触させた後に、前記抗体組成物を前記カチオン交換樹脂に接触させることを含む、項目56~84のいずれか1項に記載の方法。
(項目86)
前記平衡組成物が、酢酸ナトリウムを含む、項目85に記載の方法。
(項目87)
前記平衡組成物中の前記酢酸ナトリウムの濃度が、約10mM~150mMである、項目86に記載の方法。
(項目88)
前記平衡組成物中の前記酢酸ナトリウムの前記濃度が、約50mMである、項目86に記載の方法。
(項目89)
前記平衡組成物が、約3.8~約6.5のpHを有する、項目85~88のいずれか1項に記載の方法。
(項目90)
前記平衡組成物が、約4.2のpHを有する、項目89に記載の方法。
(項目91)
前記抗体組成物が、約10~約100g/Lのタンパク質を含む、項目56~90のいずれか1項に記載の方法。
(項目92)
前記抗体組成物が、約30g/L~約50g/Lまたは約35g/L~約45g/Lのタンパク質を含む、項目91に記載の方法。
(項目93)
前記抗体組成物が、約40g/Lのタンパク質を含む、項目92に記載の方法。
(項目94)
前記抗体組成物が、約3.8~約6.5のpHを有する、項目56~93のいずれか1項に記載の方法。
(項目95)
前記抗体組成物が、約4.2のpHを有する、項目94に記載の方法。
(項目96)
前記抗体組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の約1%~約20%が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目56~95のいずれか1項に記載の方法。
(項目97)
前記抗体組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の約1%~約15%、または約5%~約15%、または約3%~約12%、または約10%~約15%が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目96に記載の方法。
(項目98)
前記H2L2組成物が、前記カチオン交換樹脂に接触させた前記抗体組成物中に少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、または少なくとも55%の前記H2L2抗体またはその抗原結合断片を含む、項目56~97のいずれか1項に記載の方法。
(項目99)
前記抗体組成物が、システイン操作抗体またはその抗原結合断片を含む、項目56~97のいずれか1項に記載の方法。
(項目100)
前記システイン操作抗体またはその抗原結合断片が、EU/OU番付位置442に操作されたシステイン残基を含む、項目99に記載の方法。
(項目101)
前記抗体組成物が抗体を含む、項目56~100のいずれか1項に記載の方法。
(項目102)
前記抗体組成物が、抗体の抗原結合断片を含む、項目56~100のいずれか1項に記載の方法。
(項目103)
前記抗体組成物が、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、単鎖FvもしくはscFv、ジスルフィド連結Fv、V-NARドメイン、IgNar、イントラボディ、IgGΔCH2、ミニボディ、F(ab’)3、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2、またはscFv-Fcを含む、項目56~100のいずれか1項に記載の方法。
(項目104)
前記抗体組成物が、CHO細胞株から産生された抗体またはその抗原結合断片を含む、項目56~103のいずれか1項に記載の方法。
(項目105)
前記H2L2組成物中の前記H2L2抗体またはその抗原結合断片を細胞毒にコンジュゲートして、イムノコンジュゲート組成物を形成することをさらに含む、項目56~104のいずれか1項に記載の方法。
(項目106)
項目56~105のいずれか1項に記載の方法により産生されたH2L2組成物。
(項目107)
2%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目106に記載のH2L2組成物。
(項目108)
1%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目107に記載のH2L2組成物。
(項目109)
0.5%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目108に記載のH2L2組成物。
(項目110)
項目105に記載の方法により産生されたイムノコンジュゲート組成物。
(項目111)
2%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目110に記載のイムノコンジュゲート組成物。
(項目112)
1%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目111に記載のイムノコンジュゲート組成物。
(項目113)
0.5%以下のH2L3抗体またはその抗原結合断片を含む、項目112に記載のイムノコンジュゲート組成物。
(項目114)
(i)前記カチオン交換樹脂が、架橋ポリ(スチレンジビニルベンゼン)、スフロプロピル(-CH2CH2CH2SO3-)表面官能性、約50μmの粒径、ならびに直径約500nMの細孔及び直径約22nMの細孔を含む二峰性孔径分布を有し、
(ii)前記溶出組成物が、約300~600mMの塩化物塩、及び約3.8~約5.0のpHを含み、
(iii)前記抗体組成物が、約10~約100g/Lのタンパク質を含み、前記抗体組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の約10%~約15%が、H2L3抗体またはその抗原結合断片であり、
(iv)前記H2L2組成物が、1~9のカラム体積から選択される1つ以上の溶出されたカラム体積を含み、
(v)前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の2%以下が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目56に記載の方法。
(項目115)
(i)前記カチオン交換樹脂が、架橋ポリ(スチレンジビニルベンゼン)、スフロプロピル(-CH2CH2CH2SO3-)表面官能性、約50μmの粒径、ならびに直径約500nMの細孔及び直径約22nMの細孔を含む二峰性孔径分布を有し、
(ii)前記溶出組成物が、約400mM NaCl及び4.2のpHを有し、
(iii)前記抗体組成物が、約30~約50g/Lのタンパク質を含み、前記抗体組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の約10%~約15%が、H2L3抗体またはその抗原結合断片であり、
(iv)前記H2L2組成物が、1~4の溶出されたカラム体積を含み、
(v)前記H2L2組成物中の前記抗体またはその抗原結合断片の1%以下が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目57に記載の方法。
(項目116)
抗CD123抗体またはその抗原結合断片を含む組成物であって、前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片の1%未満が、H2L3抗体またはその抗原結合断片であり、前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ、配列番号5~7の可変重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3配列と、それぞれ、配列番号8~10の可変軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3配列と、を含む、前記組成物。
(項目117)
前記抗CD123抗体が、配列番号1の可変重鎖配列を含む、項目116に記載の組成物。
(項目118)
前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片が、配列番号2の可変軽鎖配列を含む、項目116または117に記載の組成物。
(項目119)
前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片が、システイン操作されている、項目116~118のいずれか1項に記載の組成物。
(項目120)
前記抗CD123抗体が、配列番号3の重鎖配列を含む、項目116~119のいずれか1項に記載の組成物。
(項目121)
前記抗CD123抗体が、配列番号4の軽鎖配列を含む、項目116~120のいずれか1項に記載の組成物。
(項目122)
前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片の0.5%未満が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目116~121のいずれか1項に記載の組成物。
(項目123)
抗CD123イムノコンジュゲートを含む組成物であって、前記イムノコンジュゲートが、DGN549-Cに連結された抗CD123抗体またはその抗原結合断片を含み、前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片の1%未満が、H2L3抗体またはその抗原結合断片であり、前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ、配列番号5~7の可変重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3配列と、それぞれ、配列番号8~10の可変軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3配列と、を含む、前記組成物。
(項目124)
前記抗CD123抗体が、配列番号1の可変重鎖配列を含む、項目123に記載の組成物。
(項目125)
前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片が、配列番号2の可変軽鎖配列を含む、項目123または124に記載の組成物。
(項目126)
前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片が、システイン操作されている、項目123~125のいずれか1項に記載の組成物。
(項目127)
前記抗CD123抗体が、配列番号3の重鎖配列を含む、項目123~126のいずれか1項に記載の組成物。
(項目128)
前記抗CD123抗体が、配列番号4の軽鎖配列を含む、項目123~127のいずれか1項に記載の組成物。
(項目129)
前記イムノコンジュゲートが次の構造を有する、項目1~128のいずれか1項に記載の組成物。
(項目130)
前記抗CD123抗体またはその抗原結合断片の0.5%未満が、H2L3抗体またはその抗原結合断片である、項目1~129のいずれか1項に記載の組成物。
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