KR20040002854A

KR20040002854A - Ｒｎａ 의존성 ｒｎａ 바이러스 폴리머라제의억제제로서의 뉴클레오시드 유도체

Info

Publication number: KR20040002854A
Application number: KR10-2003-7009698A
Authority: KR
Inventors: 캐롤스티븐에스.; 맥코스말콤; 올젠데이비드비.; 바트발크리스헨; 바트닐리마; 쿡필립댄; 엘드룹안네비.; 프라카쉬타즈하피.; 프라프치마리자; 쑹취안라이
Original assignee: 머크 앤드 캄파니 인코포레이티드; 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드
Priority date: 2001-01-22
Filing date: 2002-01-18
Publication date: 2004-01-07
Also published as: PL363216A1; YU56903A; EP1355916B1; IL156641A0; ATE526339T1; HRP20030565B1; BG66207B1; EP2399588B1; EG24465A; ES2278009T3; MXPA03006514A; BG108000A; CA2434386A1; EP1539188A2; IS6860A; NO20033289L; RS50236B; US20050272676A1; SK286630B6; EE05709B1

Abstract

본 발명은 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제의 억제제인, 뉴클레오시드 화합물 및 이의 특정 유도체에 관한 것이다. 이들 화합물은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제의 억제제이며, RNA 의존성 RNA 바이러스 감염을 치료하는 데 유용하다. 이들은 특히 C형 간염 바이러스(HCV) NS5B 폴리머라제의 억제제로서, HCV 복제의 억제제로서, 및/또는 C형 간염 감염을 치료하는 데 유용하다. 또한, 본 발명은 이러한 뉴클레오시드 화합물을 단독으로 함유하거나 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염, 특히 HCV 감염에 활성인 기타 제제와의 배합물로서 함유하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 당해 뉴클레오시드 화합물을 사용한 RNA 의존성 RNA 폴리머라제 억제 방법, RNA 의존성 RNA 바이러스 복제 억제 방법 및/또는 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료 방법에 관한 것이다.

Description

ＲＮＡ 의존성 ＲＮＡ 바이러스 폴리머라제의 억제제로서의 뉴클레오시드 유도체{Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase}

발명의 분야

본 발명은 뉴클레오시드 화합물 및 이의 특정 유도체, 이의 합성방법 및 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제의 억제제로서의 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제의 억제제이며, RNA 의존성 RNA 바이러스 감염을 치료하는 데 유용하다. 이들은 특히 C형 간염 바이러스(HCV) NS5B 폴리머라제의 억제제 및 HCV 복제의 억제제로서 유용하며 C형 간염 감염을 치료하는 데 유용하다.

발명의 배경

C형 간염 바이러스(HCV) 감염은 세계 인구의 12 내지 15%인 것으로 추정되는 상당수의 감염 개체에 있어서, 경화증 및 간세포 암종 등의 만성 간 질환을 유발하는 건강상의 주요 문제점이다. 미국 질병 관리 센터(U.S. Center for Disease Control)에 따르면, 미국에서만 감염 인구가 4백5십만명인 것으로 추정된다. 세계 건강 기구(World Health Organization)에 따르면, 범세계적으로 감염 개체는 200백만명 이상이며, 3 내지 4백만명 이상의 인구가 매년 감염되고 있다. 일단 감염되면, 그 중 약 20%는 바이러스가 제거되나, 나머지는 간의 나머지 부분에 HCV가 기생하게 된다. 만성 감염된 개체의 10 내지 20%는 최종적으로는 간 파괴적인 경화증 또는 암으로 발전된다. 바이러스 질환은 오염된 혈액, 혈액 생성물 및 오염된 주사 바늘에 의해 비경구적으로 전달되거나, 감염된 모체 또는 매개체인 모체로부터 그 자손으로 성적으로 수직 전달된다. HCV 감염에 있어 통용되는 치료법(이는 재조합 인터페론-α 만을 사용하거나 뉴클레오티드 유사체 리바비린과의 배합물을 사용하는 면역치료법으로 제한됨)은 임상학적으로 이점이 제한된다. 더구나, HCV에 대한 백신은 입증된 바가 없다. 결과적으로, 만성 HCV 감염을 효율적으로 퇴치하는 치료제를 개선시키는 것이 시급하게 요구된다. HCV 감염 치료에 관한 기술분야를 재검토하고, 전문이 본원에 참조로 인용되어 있는 다음 문헌을 참조한다[참조: B. Dymock, et al., "Novel approaches to the treatment of hepatitis C virus infection", Antiviral Chemistry & Chemotherapy, 11: 79-96 (2000); H. Rosen, et al., "Hepatitis C virus: current understanding and prospects for future therapies", Molecular Medicine Today, 5: 393-399 (1999); D. Moradpour, et al., "Current and evolving therapies for hepatitis C", European J. Gastroenterol. Hepatol., 11: 1189-1202 (1999); R. Bartenschlager, "Candidate Targets for Hepatitis C Virus-Specific Antiviral Therapy", Intervirology, 40: 378-393 (1997); G. M. Lauer and B. D. Walker, "Hepatitis C Virus Infection", N. Engl. J. MED., 345: 41-52 (2001); B. W. Dymock, "Emerging therapies forhepatitis C virus infection", Emerging Drugs, 6: 13-42 (2001); and C. Crabb, "Hard-Won Advances Spark Excitement about Hepatitis C", Science: 506-507 (2001)].

HCV 치료법에 대해 상이하게 접근해 보았는데, 이는 바이러스 세린 프로테아제(NS3 프로테아제), 헬리카제 및 RNA 의존성 RNA 폴리머라제(NS5B)의 억제와 백신 개발을 포함한다.

HCV 비리온(virion)은 아미노산 약 3,010개의 폴리프로테인을 암호화하는 염기 약 9600개의 단일 올리고리보뉴클레오티드 게놈 서열로 둘러싸여진 포지티브 쇄 RNA 바이러스이다. HCV 유전자의 단백질 생성물은 구조상 단백질 C, E1 및 E2, 비구조상 단백질 NS2, NS3, NS4A 및 NS4B와 NS5A 및 NS5B로 이루어진다. 비구조상(NS) 단백질은 바이러스 복제를 위한 촉매적 수단을 제공하는 것으로 여겨진다. NS3 프로테아제는 폴리프로테인 쇄로부터의 RNA 의존성 RNA 폴리머라제인, NS5B를 방출시킨다. HCV NS5B 폴리머라제는 HCV의 복제 사이클에 있어 주형으로서 작용하는 일본쇄 바이러스 RNA로부터 이중 나선 RNA를 합성시키는 데 필요하다. 따라서, NS5B 폴리머라제는 HCV 복제 복합체에 있어 필수 성분인 것으로 여겨진다[참조: K. Ishi, et al., "Expression of Hepatitis C Virus NS5B Protein: Characterization of Its RNA Polymerase Activity and RNA Binding", Hepatology, 29: 1227-1235 (1999) 및 V. Lohmann, et al., "Biochemical and Kinetic Analyses of NS5B RNA-Dependent RNA Polymerase of the Hepatitis C Virus", Virology, 249: 108-118 (1998)]. HCV NS5B 폴리머라제를 억제하면 이중 나선 HCV RNA의 형성이 방지되어, HCV 특이적 항바이러스 치료법에 대해 흥미로운 접근을 이루게 된다.

본 발명에 이르러, 본 발명의 뉴클레오시드 화합물 및 이의 특정 유도체가 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제 및 특히 HCV 복제의 강력한 억제제임을 밝혀냈다. 당해 뉴클레오시드 화합물의 5'-트리포스페이트 유도체는 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제 및 특히 HCV NS5B 폴리머라제의 억제제이다. 즉각적인 뉴클레오시드 화합물 및 이의 유도체는 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 및 특히 HCV 감염을 치료하는 데 유용하다.

따라서, 본 발명의 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제 억제제 및 특히 HCV NS5B 폴리머라제 억제제로서 유용한, 뉴클레오시드 화합물 및 이의 특정 유도체를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제 억제제 및 특히 C형 간염 바이러스 복제 억제제로서 유용한, 뉴클레오시드 및 이의 특정 유도체를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료 및 특히 HCV 감염 치료에 있어 유용한, 뉴클레오시드 화합물 및 이의 특정 유도체를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 본 발명의 뉴클레오시드를 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제 억제제 및특히 HCV NS5B 폴리머라제 억제제로서 사용하기 위한 본 발명의 뉴클레오시드 화합물 및 이의 유도체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제 억제제 및 특히 HCV 복제 억제제로서 사용하기 위한 본 발명의 뉴클레오시드 화합물 및 이의 유도체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료 및 특히 HCV 감염 치료에 사용하기 위한 본 발명의 뉴클레오시드 화합물 및 이의 유도체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 본 발명의 뉴클레오시드 화합물 및 이의 유도체를 RNA 의존성 RNA 바이러스 및 특히 HCV에 대해 활성인 기타 제제와 함께 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제 억제방법 및 특히 HCV NS5B 폴리머라제 억제방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제 억제방법 및 특히 HCV 복제 억제방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료방법 및 특히 HCV 감염 치료방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스에 대해 활성인 기타 제제와의 배합물을 사용한 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료방법 및 HCV에 대해 활성인 기타 제제와의 배합물을 사용한 HCV 감염 치료방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제용 및/또는 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료용 및 특히 HCV 복제 억제용 및/또는 HCV 감염 치료용 약제로서 사용하기 위한 뉴클레오시드 화합물, 이의 특정 유도체 및 이의 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제 억제용 및/또는 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료용 및 특히 HCV 복제 억제용 및/또는 HCV 감염 치료용 약제를 제조하기 위한 뉴클레오시드 화합물 및 이의 특정 유도체의 용도를 제공하는 것이다.

이들 목적 및 기타 목적은 다음 상세한 설명으로부터 용이하게 명백해질 것이다.

발명의 요지

본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.

위의 화학식 I에서,

R¹은 C_2-4알케닐, C_2-4알키닐 또는 C_1-4알킬이며, 여기서 알킬은 치환되지 않거나 하이드록시, 아미노, C_1-4알콕시, C_1-4알킬티오 또는 1개 내지 3개의 불소원자로 치환되고,

R²는 수소, 불소, 하이드록시, 머캅토, C_1-4알콕시 또는 C_1-4알킬이거나, R¹과 R²는 이들이 부착되어 있는 탄소원자와 함께 O, S 및 NC_O-4알킬로부터 선택된 헤테로원자를 함유하거나 함유하지 않는 3 내지 6원의 포화 모노사이클릭 환 시스템을 형성하고,

R³과 R⁴는 서로 독립적으로 수소, 시아노, 아지도, 할로겐, 하이드록시, 머캅토, 아미노, C_1-4알콕시, C_2-4알케닐, C_2-4알키닐 및 C_1-4알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기서 알킬은 치환되지 않거나 하이드록시, 아미노, C_1-4알콕시, C_1-4알킬티오 또는 1개 내지 3개의 불소원자로 치환되고,

R⁵는 수소, C_1-1O알킬카보닐, P₃0₉H₄, P₂O₆H₃또는 P(O)R¹³R¹⁴이고,

R⁶과 R⁷은 서로 독립적으로 수소, 메틸, 하이드록시메틸 또는 플루오로메틸이고,

R⁸은 치환되지 않거나 할로겐, 하이드록시, 아미노, C_1-4알킬 및 C_1-4알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 그룹으로 치환된, 수소, C_1-4알킬, C_2-4알키닐, 할로겐, 시아노, 카복시, C_l-4알킬옥시카보닐, 아지도, 아미노, C_l-4알킬아미노, 디(C_1-4알킬)아미노, 하이드록시, C_1-6알콕시, C_1-6알킬티오, C_1-6알킬설포닐, (C_1-4알킬)_0-2아미노메틸 또는 C_4-6사이클로헤테로알킬이고,

R⁹는 수소, 시아노, 니트로, C_1-3알킬, NHCONH₂, CONR¹²R¹², CSNR¹²R¹², COOR¹², C(=NH)NH₂, 하이드록시, C_1-3알콕시, 아미노, C_1-4알킬아미노, 디(C_1-4알킬)아미노, 할로겐, (1,3-옥사졸-2-일), (1,3-티아졸-2-일) 또는 (이미다졸-2-일)이며, 여기서 알킬은 치환되지 않거나 할로겐, 아미노, 하이드록시, 카복시 및 C_1-3알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 내지 3개의 그룹으로 치환되고,

R¹⁰과 R¹¹은 서로 독립적으로 치환되지 않거나 할로겐, 하이드록시, 아미노, C_1-4알킬 및 C_1-4알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 그룹으로 치환된, 수소, 하이드록시, 할로겐, C_1-4알콕시, 아미노, C_1-4알킬아미노, 디(C_1-4알킬)아미노, C_3-6사이클로알킬아미노, 디(C_3-6사이클로알킬)아미노 또는 C_4-6사이클로헤테로알킬이고,

R¹²는 서로 독립적으로 수소 또는 C_1-6알킬이고,

R¹³과 R¹⁴는 서로 독립적으로 하이드록시, OCH₂CH₂SC(=O)C_1-4알킬, OCH₂0(C=O)OC_1-4알킬, NHCHMeC0₂Me, OCH(C_1-4알킬)O(C=O)C_1-4알킬,또는이며,

단 R^l이 β-메틸이고 R⁴가 수소이거나 R⁴가 β-메틸이고 R¹이 수소이며 R²와 R³이 α-하이드록시이고 R¹⁰이 아미노이고 R⁵, R⁶, R⁷, R⁸및 R¹¹이 수소인 경우, R⁹는 시아노 또는 CONH₂가 아니다.

화학식 I의 화합물은 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제 및 특히 HCV NS5B 폴리머라제의 억제제로서 유용하다. 또한, 화학식 I의 화합물은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제 및 특히 HCV 복제의 억제제로서 유용하며, RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료 및 특히 HCV 감염 치료에 유용하다.

또한, 본 발명에는 당해 화합물을 단독으로 함유하거나 RNA 의존성 RNA 바이러스 및 특히 HCV에 대해 활성인 기타 제제와 함께 함유하는 약제학적 조성물 뿐만 아니라 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제의 억제방법 및 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염의 치료방법이 포함된다.

본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에 관한것이다.

화학식 I

위의 화학식 I에서,

R³과 R⁴는 서로 독립적으로 수소, 시아노, 아지도, 할로겐, 하이드록시, 머캅토, 아미노, C_1-4알콕시, C_2-4알케닐, C_2-4알키닐 및 C_1-4알킬로부터 선택되며, 여기서 알킬은 치환되지 않거나 하이드록시, 아미노, C_1-4알콕시, C_1-4알킬티오 또는1개 내지 3개의 불소원자로 치환되고,

R¹⁰과 R¹¹은 서로 독립적으로 치환되지 않거나 할로겐, 하이드록시, 아미노,C_1-4알킬 및 C_1-4알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 그룹으로 치환된, 수소, 하이드록시, 할로겐, C_1-4알콕시, 아미노, C_1-4알킬아미노, 디(C_1-4알킬)아미노, C_3-6사이클로알킬아미노, 디(C_3-6사이클로알킬)아미노 또는 C_4-6사이클로헤테로알킬이고,

R¹²는 서로 독립적으로 수소 또는 C_1-6알킬이고,

단 R^l이 β-메틸이고 R⁴가 수소이거나 R⁴가 β-메틸이고 R¹이 수소인 경우, R²와 R³은 α-하이드록시이고 R¹⁰은 아미노이고 R⁵, R⁶, R⁷, R⁸및 R¹¹은 수소이며, R⁹는 시아노 또는 CONH₂가 아니다.

화학식 I의 화합물은 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제의 억제제로서 유용하다. 또한, 화학식 I의 화합물은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제의 억제제이며, RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료에 유용하다.

화학식 I의 화합물의 한 가지 양태는 화학식 II의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다.

위의 화학식 II에서,

R^l은 C_1-3알킬이며, 여기서 알킬은 치환되지 않거나 하이드록시, 아미노, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오 또는 1개 내지 3개의 불소원자로 치환되고,

R²는 하이드록시, 플루오로 또는 C_1-3알콕시이고,

R³은 수소, 할로겐, 하이드록시, 아미노 또는 C_1-3알콕시이고,

R⁵는 수소, P₃0₉H₄, P₂0₆H₃또는 P0₃H₂이고,

R⁸은 수소, 아미노 또는 C_1-4알킬아미노이고,

R⁹는 수소, 시아노, 메틸, 할로겐 또는 CONH₂이고,

R¹⁰과 R¹¹은 서로 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록시, 아미노, C_1-4알킬아미노, 디(C_1-4알킬)아미노 또는 C_3-6사이클로알킬아미노이며,

단 R¹이 β-메틸이고 R²와 R³이 α-하이드록시이고 R¹⁰이 아미노이고 R⁵, R⁸및 R¹¹이 수소인 경우, R⁹는 시아노 또는 CONH₂가 아니다.

화학식 I의 화합물의 제2 양태는

R¹이 메틸, 플루오로메틸, 하이드록시메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸 또는 아미노메틸이고,

R²가 하이드록시, 플루오로 또는 메톡시이고,

R³이 수소, 플루오로, 하이드록시, 아미노 또는 메톡시이고,

R⁵가 수소 또는 P₃0₉H₄이고,

R⁸이 수소 또는 아미노이고,

R⁹가 수소, 시아노, 메틸, 할로겐 또는 CONH₂이고,

R¹⁰과 R¹¹이 서로 독립적으로 수소, 플루오로, 하이드록시 또는 아미노이며,

단 R¹이 β-메틸이고 R²와 R³이 α-하이드록시이고 R^1O이 아미노이고 R⁵, R⁸및 R¹¹이 수소인 경우, R⁹는 시아노 또는 CONH₂가 아닌 화학식 II의 화합물이다.

RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제의 억제제로서 유용한 본 발명의 화학식 I의 화합물의 예증적이나 비제한적인 예는

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4-아미노-7-(3-C-메틸-β-D-크실로푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(2,4-디-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

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상응하는 5'-트리포스페이트로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이다.

본 발명의 추가의 예는

4-아미노-7-(2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 및

본 발명의 한 가지 양태에서, 본 발명의 뉴클레오시드 화합물은 포지티브 센스 일본쇄(positive-sense single-strand) RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제의 억제제로서, 포지티브 센스 일본쇄 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제의 억제제로서, 및/또는 포지티브 센스 일본쇄 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료용으로 유용하다. 이러한 부류의 양태에서, 포지티브 센스 일본쇄 RNA 의존성 RNA 바이러스는 플라비비리데 바이러스(Flaviviridae virus) 또는 피코르나비리데 바이러스(Picornaviridae virus)이다. 이러한 부류의 아부류에서, 피코르나비리데 바이러스는 리노바이러스(rhinovirus), 폴리오바이러스(poliovirus) 또는 A형 간염 바이러스(hepatitis A virus)이다. 이러한 부류의 제2 아부류에서, 플라비비리데 바이러스는 C형 간염 바이러스(hepatitis C virus), 황열병 바이러스, 뎅기 바이러스(dengue virus), 웨스트 니일 바이러스(West Nile virus), 일본 뇌염 바이러스(Japanese encephalitis virus), 반지 바이러스(Banzi virus) 및 소 바이러스 설사 바이러스(bovine viral diarrhea virus; BVDV)이다. 이러한 부류의 아부류에서, 플라비비리데 바이러스는 C형 간염 바이러스이다.

본 발명의 또 다른 양상은 치료학적 유효량의 화학식 I의 화합물을 포유동물에게 투여함을 포함하는, RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제의 억제, RNA 의존성RNA 바이러스 복제의 억제 및/또는 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제의 억제를 필요로 하는 포유동물에 있어서의 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제의 억제방법 및/또는 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염의 치료방법에 관한 것이다.

본 발명의 당해 양상의 한 가지 양태에서, RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제는 포지티브 센스 일본쇄 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제이다. 이러한 부류의 양태에서, 포지티브 센스 일본쇄 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제는 플라비비리데 바이러스 폴리머라제 또는 피코르나비리데 바이러스 폴리머라제이다. 당해 부류의 아부류에서, 피코르나비리데 바이러스 폴리머라제는 리노바이러스 폴리머라제, 폴리오바이러스 폴리머라제 또는 A형 간염 바이러스 폴리머라제이다. 당해 부류의 제2 아부류에서, 플라비비리데 바이러스 폴리머라제는 C형 간염 바이러스 폴리머라제, 황열병 바이러스 폴리머라제, 뎅기 바이러스 폴리머라제, 웨스트 니일 바이러스 폴리머라제, 일본 뇌염 바이러스 폴리머라제, 반지 바이러스 폴리머라제 및 소 바이러스 설사 바이러스(BVDV) 폴리머라제이다. 당해 부류의 아부류에서, 플라비비리데 바이러스 폴리머라제는 C형 간염 바이러스 폴리머라제이다.

본 발명의 당해 양상의 제2 양태에서, RNA 의존성 RNA 바이러스 복제는 포지티브 센스 일본쇄 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제이다. 당해 양태 부류에서, 포지티브 센스 일본쇄 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제는 플라비비리데 바이러스 복제 또는 피코르나비리데 바이러스 복제이다. 당해 부류의 아부류에서, 피코르나비리데 바이러스 복제는 리노바이러스 복제, 폴리오바이러스 복제 또는 A형 간염 바이러스복제이다. 당해 부류의 제2 아부류에서, 플라비비리데 바이러스 복제는 C형 간염 바이러스 복제, 황열병 바이러스 복제, 뎅기 바이러스 복제, 웨스트 니일 바이러스 복제, 일본 뇌염 바이러스 복제, 반지 바이러스 복제 및 소 바이러스 설사 바이러스 복제이다. 당해 부류의 아부류에서, 플라비비리데 바이러스 복제는 C형 간염 바이러스 복제이다.

본 발명의 당해 양상의 제3 양태에서, RNA 의존성 RNA 바이러스 감염은 포지티브 센스 일본쇄 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염이다. 당해 양태 부류에서, 포지티브 센스 일본쇄 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염은 플라비비리데 바이러스 감염 또는 피코르나비리데 바이러스 감염이다. 당해 부류의 아부류에서, 피코르나비리데 바이러스 감염은 리노바이러스 감염, 폴리오바이러스 감염 또는 A형 간염 바이러스 감염이다. 당해 부류의 제2 아부류에서, 플라비비리데 바이러스 감염은 C형 간염 바이러스 감염, 황열병 바이러스 감염, 뎅기 바이러스 감염, 웨스트 니일 바이러스 감염, 일본 뇌염 바이러스 감염, 반지 바이러스 감염 및 소 바이러스 설사 바이러스 감염이다. 당해 부류의 아부류에서, 플라비비리데 바이러스 감염은 C형 간염 바이러스 감염이다.

본원에서, 다음 용어는 아래와 같이 정의된다:

위에서 구체화된 알킬 그룹은 목적한 길이의 직쇄 또는 측쇄 구조의 알킬 그룹을 포함한다. 이러한 알킬 그룹의 예로는, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 2급 부틸, 3급 부틸, 펜틸, 이소펜틸, 헥실, 이소헥실 등이 있다.

용어 "알케닐"은, 총 탄소수가 2 내지 6이거나 당해 범위내에 속하는 임의의갯수인 직쇄 또는 측쇄 알켄(예: 에테닐, 프로페닐, 부테닐, 펜테닐 등)을 의미한다.

용어 "알키닐"은, 총 탄소수가 2 내지 6이거나 당해 범위내에 속하는 임의의 갯수인 직쇄 또는 측쇄 알킨(예: 에티닐, 프로피닐, 부티닐, 펜티닐 등)을 의미한다.

용어 "사이클로알킬"은, 총 탄소수가 3 내지 8이거나 당해 범위내에 속하는 임의의 갯수인 알칸의 사이클릭 환(즉, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 또는 사이클로옥틸)을 의미한다.

용어 "사이클로헤테로알킬"은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1개 또는 2개의 헤테로원자를 함유하는 비방향족 헤테로사이클을 포함한다. 4 내지 6원 사이클로헤테로알킬의 예로는, 아제티딜, 피롤리디닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 티아모르폴리닐, 이미다졸리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 테트라하이드로티오페닐, 피페라지닐 등이 있다.

용어 "알콕시"는, 탄소수가 구체화(예: C_1-4알콕시)되거나 당해 범위내에 속하는 임의의 갯수[즉, 메톡시(MeO-), 에톡시, 이소프로폭시 등]인 직쇄 또는 측쇄 알콕사이드를 지칭한다.

용어 "알킬티오"는, 탄소수가 구체화(예: C_1-4알킬티오)되거나 당해 범위내에 속하는 임의의 갯수[즉, 메틸티오(MeS-), 에틸티오, 이소프로필티오 등]인 직쇄 또는 측쇄 알킬설파이드를 지칭한다.

용어 "알킬아미노"는, 탄소수가 구체화(예: C_1-4알킬아미노)되거나 당해 범위내에 속하는 임의의 갯수(즉, 메틸아미노, 에틸아미노, 이소프로필아미노, t-부틸아미노 등)인 직쇄 또는 측쇄의 알킬아민을 지칭한다.

용어 "알킬설포닐"은, 탄소수가 구체화(예: C_1-6알킬설포닐)되거나 당해 범위내에 속하는 임의의 갯수[즉, 메틸설포닐(MeSO₂-), 에틸설포닐, 이소프로필설포닐 등]인 직쇄 또는 측쇄의 알킬설폰을 지칭한다.

용어 "알킬옥시카보닐"은, 탄소수가 구체화(예: C_1-4알킬옥시카보닐)되거나 당해 범위내에 속하는 임의의 갯수[즉, 메틸옥시카보닐(MeOCO-), 에틸옥시카보닐 또는 부틸옥시카보닐]인, 본 발명의 카복실산 유도체의 직쇄 또는 측쇄 에스테르를 지칭한다.

용어 "아릴"은 페닐, 나프틸 및 피리딜을 모두 포함한다. 당해 아릴 그룹은 C_1-4알킬, 할로겐, 시아노, 니트로, 트리플루오로메틸, C_1-4알콕시 및 C_1-4알킬티오로부터 독립적으로 선택된 1개 내지 3개의 그룹으로 치환되거나 치환되지 않는다.

용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 및 요오드 등의 할로겐 원자를 포함한다.

용어 "치환"은 명명된 치환기에 의한 다중 치환을 포함한다. 다중 치환기 잔기가 기재되거나 청구된 경우, 치환된 화합물은 기재되거나 청구된 하나 이상의 치환기 잔기에 의해 독립적으로 단일 또는 다중 치환될 수 있다.

용어 "5'-트리포스페이트"는 본 발명의 화학식 III의 뉴클레오시드 화합물의5'-하이드록실 그룹의 삼인산 에스테르 유도체를 지칭한다.

위의 화학식 III에서,

R¹내지 R¹¹은 위에서 정의된 바와 같다.

또한, 본 발명의 화합물은 트리포스페이트 에스테르의 약제학적으로 허용되는 염 뿐만 아니라 화학식 IV 및 화학식 V의 5'-모노포스페이트 및 5'-디포스페이트 에스테르 유도체의 약제학적으로 허용되는 염을 각각 포함한다.

용어 "5'-(S-아실-2-티오에틸)포스페이트" 또는 "SATE"는 본 발명의 화학식 VI 및 화학식 VII 각각의 5'-모노포스페이트 뉴클레오시드 유도체의 모노에스테르 또는 디에스테르 유도체 뿐만 아니라 모노에스테르의 약제학적으로 허용되는 염을 지칭한다.

"약제학적 조성물"에서와 같이, 용어 "조성물"은 담체를 구성하는 활성성분(들) 및 불활성 성분(들)을 포함하는 생성물 뿐만 아니라 임의의 2개 이상의 성분들을 직접적으로 또는 간접적으로 배합, 복합화 또는 응집시킴으로써, 하나 이상의 성분을 분해시킴으로써, 또는 하나 이상의 성분들을 기타 유형으로 반응시키거나 상호작용시킴으로써 생성되는 임의의 생성물을 포함한다. 따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 본 발명의 화합물과 약제학적으로 허용되는 담체를 혼합시킴으로써 제조된 임의의 조성물을 포함한다.

용어 "투여"는 본 발명의 화합물 또는 이의 프로드럭(prodrug)을 필요로 하는 포유동물에게 이를 제공함을 의미한다.

본 발명의 또 다른 양상은 본 발명의 화합물을 하나 이상의 HCV 감염 치료제와 함께 사용하여 HCV NS5B 폴리머라제를 억제하거나, HCV 복제를 억제하거나, HCV 감염을 억제하는 방법에 관한 것이다. HCV에 대해 활성인 이러한 제제는, 이에 한정되는 것은 아니나, 리바비린, 레보비린, 비라미딘, 티모신 알파-1, 인터페론-α, 페길레이트화 인터페론-α(페긴테르페론-α), 인터페론-α와 리바비린과의 배합물, 페긴테르페론-α와 리바비린과의 배합물, 인터페론-α와 레보비린과의 배합물 및 페기테르페론-α와 레보비린과의 배합물을 포함한다. 인터페론-α는, 이에 한정되는 것은 아니나, 재조합 인터페론-α2a[예: 로페론 인터페론(Roferon interferon), 공급원: 미국 뉴 저지주 뉴틀리 소재의 호프만-라로쉐(Hoffmann-LaRoche)], 페길레이트화 인터페론-α2a[페가시스(Pegasys^TM)], 인터페론-α2b[예: 인트론-A 인터페론, 공급원: 미국 뉴 저지주 케닐워쓰 소재의 쉐링 코포레이션(Schering Corp.),페길화 인터페론-α2b[페그인트론(PegIntron^TM)], 재조합 교감성 인터페론(예: 인터페론 알파콘-1) 및 정제된 인터페론-α 생성물을 포함한다. 암겐(Amgen)의 재조합 교감성 인터페론의 상표명은 인페르겐(Infergen^R)이다. 레보비린은 리바비린의 L 엔안티오머로서, 면역조절 활성이 리바비린과 유사하다. 비라미딘은 WO 제01/60379호[(아이씨엔 파마슈티칼스(ICN Pharmaceuticals)로 양도됨]에 기재되어 있는 리바비린의 유사체를 나타낸다. 본 발명의 방법에 따라, 각각의 재조합 성분은 분할형 또는 단일 조합형으로 치료시 상이한 시간대에 개별적으로 투여되거나 동시에 투여될 수 있다. 따라서, 즉각적인 발명은 동시 치료 또는 교차 치료의 이러한 모든 견본을 포함하는 것으로 여겨지며, 용어 "투여"는 이렇게 해석된다. 본 발명의 화합물과 HCV 감염 치료에 유용한 기타 제제와의 조합물의 범주는 원칙상 HCV 감염 치료용 약제학적 조성물과의 임의의 약제학적 조성물을 포함하는 것으로 이해될 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 HCV에 활성인 제2 치료제와의 배합물로서 사용되는 경우, 각 화합물의 투여량은 화합물이 단독으로 사용되는 경우의 투여량과 동일하거나 상이할 수 있다.

HCV 감염 치료의 경우, 본 발명의 화합물은 HCV NS3 세린 프로테아제 억제제인 제제와 배합하여 투여될 수도 있다. HCV NS3 세린 프로테아제는 필수적인 바이러스 효소이며, HCV 복제 억제에 있어 탁월한 표적인 것으로 기재되어 있다. HCV NS3 프로테아제 억제제의, 기질 및 비기질 둘 다를 기재로 한 억제제는 WO 제98/22496호, WO 제98/46630호, WO 제99/07733호, WO 제99/07734호, WO제99/38888호, WO 제99/50230호, WO 제99/64442호, WO 제00/09543호, WO 제00/59929호 및 GB 제2337262호에 기재되어 있다. HCV 복제 억제제 개발용 및 HCV 감염 치료용 HCV NS3 프로테아제는 문헌[참조: B. W. Dymock, "Emerging therapies for hepatitis C virus infection", Emerging Drugs, 6: 13-42 (2001)]에 거론되어 있다.

리바비린, 레보비린 및 비라미딘은 세포간 효소 이노신 모노포스페이트 탈수소효소(IMPDH)의 억제를 통해 구아닌 뉴클레오티드의 세포간 폴을 조절함으로써 항 HCV 효과를 나타낼 수 있다. IMPDH는 초기 구아닌 뉴클레오티드 생합성에 있어 생합성 경로에 대한 비율 제한적인 효소이다. 리바비린은 용이하게 세포간 인산화되며, 모노포스페이트 유도체는 IMPDH의 억제제이다. 따라서, IMPDH 억제는 HCV 복제 억제제를 발견하기 위한 또 다른 유용한 표적을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 화합물은, WO 제97/41211호 및 WO 제01/00622호[버텍스(Vertex)에게 양도됨]에 기재되어 있는 IMPDH 억제제, 예를 들어, VX-497; WO 제00/25780호[브리스톨 마이어즈 스퀴브(Bristol-Myers Squibb)에게 양도됨]에 기재되어 있는 또 다른 IMPDH 억제제; 또는 마이코페놀레이트 모페틸[참조: A. C. Allison and E. M. Eugui, Agents Action, 44 (Suppl.): 165 (1993)]과 배합하여 투여될 수도 있다.

HCV 감염 치료의 경우, 본 발명의 화합물은 또한 항바이러스제 아만타딘(1-아미노아다만탄)과 배합하여 투여될 수도 있다[당해 제제의 자세한 설명은 문헌: J. Kirschbaum, Anal. Profiles Drug Subs. 12: 1-36 (1983) 참조].

"약제학적으로 허용되는"이란, 담체, 희석제 또는 부형제가 제제의 기타 성분과 혼화성이어야 하거나 이의 수용체에게 유해하지 않아야 함을 의미한다.

또한, 본 발명에는 본 발명의 뉴클레오시드 화합물 및 이의 유도체를 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 약제학적 조성물이 포함된다. 본 발명의 또 다른 예로는, 상기 화합물과 약제학적으로 허용되는 담체를 조합하여 제조된 약제학적 조성물이 있다. 본 발명의 또 다른 예로는, 상기 화합물과 약제학적으로 허요되는 담체를 조합하여 포함하는 약제학적 조성물의 제조방법이 있다.

또한, 본 발명에는 본 발명의 화합물 유효량과 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제, 특히 HCV NS5B 폴리머라제를 억제하는 데 유용한 약제학적 조성물이 포함된다. 또한, 본 발명에는 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염, 특히 HCV 감염을 치료하는 데 유용한 약제학적 조성물 뿐만 아니라 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제, 특히 HCV NS5B 폴리머라제의 억제방법 및 RNA 의존성 바이러스 복제, 특히 HCV 복제의 치료방법이 포함된다. 또한, 본 발명은 본 발명의 화합물 치료학적 유효량을 RNA 의존성 RNA 바이러스, 특히 HCV에 활성인 기타 제제 치료학적 유효량과 함께 포함하는 약제학적 조성물에 관련된다. HCV에 활성인 제제는, 이에 한정되는 것은 아니나, 리바비린, 레보비린, 비라미딘, 티모신 알파-1, HCV NS3 세린 프로테아제 억제제, 인터페론-α, 페길화 인터페론-α(페그인터페론-α), 인터페론-α와 리바비린과의 배합물, 페그인터페론-α와 리바비린과의 배합물, 인터페론-α와 레보비린과의 배합물, 및 페그인터페론-α와 레보비린과의 배합물을 포함한다. 인터페론-α는, 이에 한정되는 것은 아니나, 재조합 인터페론-α2a[예: 로페론 인터페론, 공급원: 미국 뉴 저지주 뉴틀리 소재의 호프만-라로쉐], 인터페론-α2b[예: 인트론-A 인터페론, 공급원: 미국 뉴 저지주 케닐워쓰 소재의 쉐링 코포레이션], 교감성 인터페론 및 정제된 인터페론-α 생성물을 포함한다. 리바비린 및 HCV에 대한 이의 활성은 문헌[참조: J. O. Saunders and S. A. Raybuck, "Inosine Monophosphate Dehydrogenase: Consideration of Structure, Kinetics, and Therapeutic Potential", Ann. Rep. Med. Chem., 35: 201-210 (2000)]에 거론되어 있다.

본 발명의 또 다른 양상은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제, 특히 HCV 복제 억제용 및/또는 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염, 특히 HCV 감염 치료용 약물을 제조하기 위한 뉴클레오시드 화합물, 이의 유도체 및 이의 약제학적 조성물의 용도를 제공한다. 또한, 본 발명의 또 다른 양상은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제, 특히 HCV 복제 억제용 및/또는 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염, 특히 HCV 감염 치료용 약물을 제조하기 위한 뉴클레오시드 화합물, 이의 유도체 및 이의 약제학적 조성물의 용도를 제공한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 활성 성분으로서의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하며, 또한 약제학적으로 허용되는 담체 및 임의로 다른 치료학적 성분을 포함할 수도 있다.

당해 조성물은 소정의 경우에 있어 가장 적합한 경로가 치료될 상태의 특성 및 종증도 및 활성 성분의 특성에 좌우될 지라도, 경구, 직장내, 국소, 비경구(피하내, 근육내 및 정맥내 포함), 안구내(안구), 허파(비강내 흡입 또는 입안 흡입) 또는 비강내 투여에 적합한 조성물을 포함한다. 당해 조성물은 편이상 단위 투여형으로 제공될 수 있으며, 약학 기술분야에 익히 공지되어 있는 임의의 방법으로 제조될 수 있다.

실제 용도에서, 화학식 I의 화합물은 활성 성분으로서 통상의 약제학적 배합 기술에 따라 약제학적 담체와의 초기 혼합물로서 배합될 수 있다. 담체는 투여에 요구되는 제제 형태에 따라 다양한 형태, 예를 들어, 경구 또는 비경구(정맥내 포함) 형태를 취할 수 있다. 경구 투여형 조성물의 제조시, 현탁액제, 엘릭서 및 용액제 등의 경구내 액상 제제의 경우, 통상의 약제학적 매질, 예를 들어, 물, 글리콜, 오일, 알콜, 풍미제, 방부제, 착색제 등이 사용될 수 있거나, 산제, 경질 캡슐제, 연질 캡슐제, 정제 등의 경구내 고체 제제의 경우, 전분, 슈가, 미세결정질 셀룰로즈, 희석제, 입상화제, 윤활제, 결합제, 붕해제 등의 담체가 사용될 수 있으며, 경구내 고체 제제가 액상 제제보다 바람직하다.

투여 용이성으로 인해, 고체형 약제학적 담체가 명백하게 사용되는 정제 및 캡슐제가 가장 유리한 경구 투여 단위형을 제공한다. 목적할 경우, 정제는 수성 또는 비수성 표준 기술로 피복될 수 있다. 이러한 조성물 및 제제는 활성 성분을 0.1% 이상 함유해야 한다. 물론, 이들 조성물에서의 활성 화합물의 비율(%)은 다양할 수 있으며, 편이상 단위 중량의 약 2 내지 약 60%이다. 이렇게 치료학적으로 유용한 조성물에서의 활성 화합물의 양은, 효과적인 투여형이 수득될 수 있는 정도이다. 또한, 활성 화합물은, 예를 들어, 액상 점액제 또는 스프레이로서 비강내 투여될 수도 있다.

또한, 정제, 환제, 캡슐제 등은 검 트라가칸트, 아카시아, 옥수수 전분 또는젤라틴 등의 결합제; 인산이칼슘 등의 부형제; 옥수수 전분, 감자 전분, 알긴산 등의 붕해제; 마그네슘 스테아레이트 등의 윤활제; 및 수크로즈, 락토즈 또는 사카린 등의 감미제를 함유할 수도 있다. 투여 단위형이 캡슐제인 경우, 상기 유형 이외에, 지방 오일 등의 액체 담체를 함유할 수 있다.

기타 각종 재료가 피복재로서 존재할 수 있거나 투여 단위의 물리적 형태를 개질시키기 위해 존재할 수 있다. 예를 들어, 정제는 쉘락, 슈가 또는 둘 다로 피복될 수 있다. 시럽제 또는 엘릭서는 활성 성분 이외에, 감미제로서의 수크로즈, 방부제로서의 메틸 및 프로필파라벤, 염료 및 체리 또는 오렌지 향 등의 풍미제를 함유할 수 있다.

또한, 화학식 I의 화합물은 비경구 투여될 수도 있다. 이들 활성 화합물의 용액 또는 현탁액은 하이드록시-프로필셀룰로즈 등의 계면활성제와 적합하게 혼합된 물 속에서 제조될 수 있다. 또한, 분산액은 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 오일 중의 이들의 혼합물 속에서 제조될 수 있다. 통상적인 저장 및 사용 조건하에, 이들 제제는 미생물 성장을 방지하기 위해 방부제를 함유한다.

주사용으로 적합한 약제학적 형태는 멸균 수성액제 또는 분산액제, 및 멸균 주사액제 또는 분산액제의 임시처방제용 멸균 산제를 포함한다. 모든 경우에 있어, 이들 형태는 멸균되어야 하고, 용이하게 주사할 수 있도록 유동성이어야 한다. 제조 및 저장 조건하에서 안정적이어야 하며, 박테리아 및 진균류 등의 미생물의 오염 작용에 대해 보전되어야 한다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예: 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 이의 적합한 혼합물 및식물성 유를 함유하는 용매 또는 분산액 매질일 수 있다.

임의의 적합한 투여 경로가 포유동물, 특히 사람에게 효과적인 투여량의 본 발명의 화합물을 제공하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 경구, 직장내, 국소적, 비경구, 안구내, 허파, 비강내 등이 사용될 수 있다. 투여형은 정제, 트로키, 분산액제, 현탁액제, 용액제, 캡슐제, 크림, 연고, 에어로졸 등을 포함한다. 바람직하게는, 화학식 I의 화합물은 경구 투여된다.

사람에게 경구 투여되는 경우, 투여량 범위는 분할 투여량으로 체중 1kg당 0.01 내지 1000mg이다. 한 가지 양태에서, 투여량 범위는 분할 투여량으로 체중 1kg당 0.01 내지 100mg이다. 또 다른 양태에서, 투여량 범위는 분할 투여량으로 체중 1kg당 0.5 내지 20mg이다. 경구 투여의 경우, 당해 조성물은 치료될 환자의 증상에 따라 투여량을 조절해가면서 바람직하게는 활성 성분을 1.0 내지 1000mg, 특히 1mg, 5mg, 10mg, 15mg, 20mg, 25mg, 50mg, 75mg, 100mg, 150mg, 200mg, 250mg, 300mg, 400mg, 500mg, 600mg, 750mg, 800mg, 900mg 및 1000mg 함유하는 정제 또는 캡슐 형태로 제공된다.

사용될 활성 성분의 효과적인 투여량은 사용될 특정 화합물, 투여 방식, 치료될 상태 및 치료될 상태의 중증도에 따라 다양할 수 있다. 적합한 투여량은 당해 기술분야의 숙련가에 의해 용이하게 확인될 수 있다. 당해 투여량 견본은 최적의 치료학적 반응을 제공하도록 조정될 수 있다.

본 발명의 화합물은 하나 이상의 부제 중심을 함유하므로, 라세미화물, 라세미 혼합물, 단일 엔안티오머, 부분입체이성체 혼합물 및 개개의 부분입체이성체로서 존재할 수 있다. 본 발명은 다음 화학식에서 언급된 바와 같이 5원 푸라노즈 환에 대해 β-D 입체화학 구조를 갖는 뉴클레오시드 화합물, 즉 5원 푸라노즈 환의 C-1 및 C-4에서의 치환기가 β-입체화학 구조(굵은 선으로 표시된 "상향" 배향)를 갖는 뉴클레오시드 화합물을 포함한다.

본원에 기재되어 있는 화합물들 중 일부는 올레핀계 이중결합을 함유하며, 달리 언급되지 않는 한, E 및 Z 기하학적 이성체를 둘 다 포함한다.

본원에 기재되어 있는 화합물들 중 일부는 케토-엔올 토토머 등의 토토머로서 존재할 수 있다. 개개의 토토머 뿐만 아니라 이의 혼합물은 화학식 I의 화합물과 함께 포함될 수 있다. 본 발명의 화합물에 속하는 케토-엔올 토토머의 예는 다음에 예시되어 있다.

화학식 I의 화합물은, 예를 들어, 메탄올, 에틸 아세테이트 또는 이들의 혼합물 등의 적합한 용매로부터의 분별 결정화, 또는 광학 활성 고정상을 사용한 키랄 크로마토그래피에 의해 개개의 부분입체이성체로 분리될 수 있다.

또한, 화학식 I의 화합물의 입체이성체는 공지된 배위의 광학적으로 순수한 출발 물질 또는 시약을 사용하여 입체특이적 합성으로 수득될 수 있다.

화학식 I의 본 발명의 화합물의 푸라노즈 환의 C-2 및 C-3 위치에서의 치환기의 입체화학은, R¹, R², R³및 R⁴치환기가 서로 독립적으로 α("하향" 치환기) 또는 β("상향" 치환기) 배위를 가질 수 있음을 나타내는 곡선으로 표시된다. 푸라노즈 환의 C-1 및 C-4에서의 굵은 선에 의한 입체화학 표시는, 치환기가 β-배위("상향" 치환기)를 가짐을 나타낸다.

화학식 I

본 발명의 화합물은 약제학적으로 허용되는 염의 형태로 투여될 수 있다. 용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 무기 염기 또는 유기 염기와 무기 산 또는 유기 산을 포함하는 약제학적으로 허용되는 비독성 염기 또는 산으로부터 제조되는 염을 지칭한다. 용어 "약제학적으로 허용되는 염"에 포함되는 염기성 화합물의 염은 통상적으로 유리 염기를 적합한 유기 산 또는 무기 산과 반응시킴으로써 제조되는 본 발명의 화합물의 비독성 염을 지칭한다. 본 발명의 염기성 화합물의 대표적인 염은, 이에 한정되는 것은 아니나, 아세테이트, 벤젠설포네이트, 벤조에이트,비카보네이트, 비설페이트, 비타르트레이트, 보레이트, 브로마이드, 캄실레이트, 카보네이트, 클로라이드, 클라불라네이트, 시트레이트, 디하이드로클로라이드, 에데테이트, 에디실레이트, 에스톨레이트, 에실레이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 글루콜릴아르사닐레이트, 헥실레조르시네이트, 하이드라바민, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드록시나프토레이트, 요오다이드, 이소티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우레이트, 말레이트, 말레에이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸브로마이드, 메틸니트레이트, 메틸설페이트, 무케이트, 나프실레이트, 니트레이트, N-메틸글루카민 암모늄 염, 올레에이트, 옥살레이트, 파모에이트(엠보네이트), 팔미테이트, 판토테네이트, 포스페이트/디포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 설페이트, 설바세테이트, 숙시네이트, 탄네이트, 타르트레이트, 테오클레이트, 토실레이트, 트리에티오디드 및 발레레이트를 포함한다. 또한, 본 발명의 화합물이 산성 잔기를 함유할 경우, 적합한 이의 약제학적으로 허용되는 염은, 이에 한정되는 것은 아니나, 알루미늄, 암모늄, 칼슘, 제2 철, 제1 철, 리튬, 마그네슘, 망간(3가), 망간, 칼슘, 나트륨, 아연 등을 포함한다. 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 칼륨 및 나트륨 염이 특히 바람직하다. 약제학적으로 허용되는 비독성 유기 염기로부터 유도된 염은 1급 아민, 2급 아민 및 3급 아민의 염, 환형 아민 및 염기성 이온 교환 수지, 예를 들어, 아르기닌, 베타인, 카페인, 콜린, N,N-디벤질에틸렌디아민, 디에틸아민, 2-디에틸아미노에탄올, 2-디메틸아미노에탄올, 에탄올아민, 에틸렌디아민, N-에틸모르폴린, N-에틸피페리딘, 글루카민, 글루코사민, 히스티딘, 하이드라바민, 이소프로필아민,리신, 메틸글루카민, 모르폴린, 피페라진, 피페리딘, 폴리아민 수지, 프로카인, 푸린, 테오브로민, 트리에틸아민, 트리메틸아민, 트리프로필아민, 트로메타민 등을 포함한다.

또한, 카복실산(-COOH) 또는 알콜 그룹이 본 발명의 화합물에 존재할 경우, 메틸, 에틸 또는 피발로일옥시메틸 등의 카복실산 유도체, 또는 아세테이트 또는 말레에이트 등의 알콜의 아실 유도체의 약제학적으로 허용되는 에스테르가 사용될 수 있다. 서방성 또는 프로드럭 제제로서 사용하기 위한 가용성 또는 가수분해성을 개질시키기 위해 당해 기술분야에 공지되어 있는 에스테르 및 아실 그룹이 포함된다.

본 발명의 뉴클레오시드 화합물 및 유도체의 제조

본 발명의 뉴클레오시드 화합물 및 유도체는 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드 화학의 수행에 있어 익히 설정되어 있는 합성 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명의 화합물의 제조시 사용되는 합성법의 기재에 대해서는, 전문이 본원에 참조로 인용되어 있는 다음 문헌을 참조한다: "Chemistry of Nucleosides and Nucleotides", L. B. Townsend, ed., Vols. 1-3, Plenum Press, 1988.

본 발명의 화합물의 제조를 위한 대표적인 통상의 방법은 다음 반응식 1에 개략화되어 있다. 당해 반응식은 푸라노즈 환이 β-D-리보 배위를 갖는 화학식 1 내지 7의 본 발명의 화합물의 합성을 예시한다. 출발물질은 화학식 1-1의 3,5-비스-O 보호된 알킬 푸라노시드, 예를 들어, 메틸 푸라노시드이다. 이어서, C-2 하이드록실 그룹은 적합한 산화제, 예를 들어, 삼산화크롬 또는 크로메이트 시약, 데스-마틴(Dess-Martin) 페리오디난을 사용하여 산화되거나, 스웬(Swern) 산화에 의해 산화되어 화학식 1-2의 C-2 케톤을 제공한다. 알킬, 알케닐 또는 알키닐 마그네슘 할라이드(예: MeMgBr, EtMgBr, 비닐MgBr, 알릴MgBr 및 에티닐MgBr) 또는 알킬, 알케닐, 또는 알키닐 리튬, 예를 들어, MeLi 등의 그리그나드(Grignard) 시약을 테트라하이드로푸란, 디에틸 에테르 등의 적합한 유기 용매 중에서 카보닐 이중결합(1-2)을 가로질러 가하여 화학식 1-3의 C-2 3급 알콜을 수득한다. 이어서, 화학식 1-3의 푸라노시드를 아세트산 중의 브롬화수소 등의 적합한 유기 용매 중에서 수소 할라이드로 처리함으로써 양호한 이탈 그룹(예: Cl, Br 및 I)을 푸라노즈 슈가 유도체의 C-1(아노머) 위치에서 유도시켜 중간체 푸라노실 할라이드(1-4)를 수득한다. 또한, 메탄설포네이트(MeSO₂O-), 트리플루오로메탄설포네이트(CF₃SO₂O-) 또는 p-톨루엔설포네이트(-OTs) 등의 C-1 설포네이트는 적합한 반응 중에서 유용한 이탈 그룹을 제공하여 글리코시드(뉴클레오시드) 결합을 생성시킬 수 있다. 뉴클레오시드 결합은 화학식 1-4의 중간체를 적합하게 치환된 1H-피롤로[2,3-d]피리미딘(1-5), 예를 들어, 적합하게 치환된 4-할로-lH-피롤로[2,3-d]피리미딘의 금속 염(예: 리튬, 나트륨 또는 칼륨)으로 처리함으로써 제조될 수 있으며, 이는 아세트니트릴, 테트라하이드로푸란, 1-메틸-2-피롤리디논 또는 N,N-디메틸포름아미드(DMF) 등의 적합한 무수 유기 용매 중의 알칼리 수소화물(예: 수소화나트륨), 알칼리 수산화물(예: 수산화칼륨), 알칼리 탄산염(예: 탄산칼륨)또는 알칼리 헥사메틸디실라지드(예: NaHMDS)로 처리하여 동일 반응계내에서 생성될 수 있다. 당해 치환 반응은 2상 시스템(고체-액체 또는 액체-액체) 중의 TDA-1 또는 트리에틸벤질암모늄 클로라이드 등의 상 전이 촉매를 사용하여 촉매화될 수 있다. 이어서, 화학식 1-6의 보호된 뉴클레오시드 중의 임의의 보호 그룹은 문헌[참조: T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 3^rded., John Wiley & Sons, 1999]에 기재되어 있는 것과 같은 설정된 탈보호 방법에 따라 분해된다. 피롤로[2,3-d]피리미딘 핵의 4위치에서의 아미노 그룹의 임의의 도입은 4-할로 중간체를 적합한 아민, 예를 들어, 알콜성 암모니아 또는 액체 암모니아로 처리함으로써 수행되어 C-4 위치(-NH₂)에서 1급 아민, 알킬 아민을 생성하고, 2급 아민(-NHR) 또는 디알킬아민을 생성하고, 3급 아민(-NRR')을 생성한다. 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(3H)온 화합물은 수성 수산화나트륨 등의 수성 염기를 사용하여 화학식 1-6의 가수분해에 의해 유도될 수 있다. 화학식 1-6의 알콜분해(예: 메탄올분해)로 C-4 알콕시드(-OR)를 제공하는 반면, 알킬 머캅티드로 처리하여 C-4 알킬티오(-SR) 유도체를 제공한다. 본 발명의 목적한 화합물을 수득하기 위해, 유기/의학 화학에 관한 기술분야의 숙련인에게 익히 공지되어 있는 후속적인 화학 처리가 요구될 수 있다.

다음 실시예는 본 발명의 최종 화합물을 제조하는 데 사용되는 최종 화합물 또는 중간체의 제조를 위한 세부사항을 함유하는 문헌을 언급한다. 본 발명의 뉴클레오시드 화합물은 다음 실시예에 상세화되어 있는 공정에 따라 제조된다. 당해 실시예는 본 발명의 범주를 어떠한 방식으로도 제한하고자 함이 아니며, 그렇게 간주되어서도 안 된다. 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드 합성에 관한 기술분야의 숙련인들은 다음 제조 공정의 조건 및 과정을 익히 공지된 대로 변형시켜 본 발명의 당해 화합물 및 기타 화합물을 제조할 수 있음을 용이하게 인식할 것이다. 모든 온도는 달리 언급되지 않는 한, ℃이다.

실시예 1

4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-아라비노푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

0℃에서 디클로로메탄(DCM)(10mL) 중의 삼산화크롬(1.57g, 1.57mmol)에 아세트산 무수물(145mg, 1.41mmol)을 가한 다음, 피리딘(245mg, 3.10mmol)을 가한다. 당해 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, DCM(3mL) 중의 7-[3,5-0-[1,1,3,3-테트라키스(1-메틸에틸)-1,3-디실록산디일]-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민 용액[제조를 위해, 참조:J. Am. Chem. Soc.105: 4059 (1983)](508mg, 1.00mmol)을 가한다. 수득한 용액을 2시간 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(10mL) 속에 부은 후, 에틸 아세테이트를 용출제로서 사용하여 실리카 겔을 통해 여과시킨다. 합쳐진 여액을 진공하에 증발시키고, 디에틸 에테르/THF(1:1)(20mL) 속에 용해시키고, -78℃로 냉각시키고, 메틸마그네슘 브로마이드(3M, THF 중)(3.30mL, 10mmol)를 적가한다. 혼합물을 -78℃에서 10분 동안 교반한 다음, 실온으로 되게 하고, 포화 수성 염화암모늄(10mL)을 가하여 급냉시키고, DCM(20mL)으로 추출한다. 유기 상을 진공하에 증발시키고, 디클로로메탄 중의5% 메탄올을 용출제로서 사용하여 조 생성물을 실리카 겔로 정제시킨다. 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시킨다. 수득한 오일을 THF(5mL) 속에 용해시키고, 실리카 상 테트라부틸암모늄 플루오라이드(TBAF)(1.1mmol/g 실리카 상) (156 mg)를 가한다. 당해 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하고, 여과시키고, 진공하에 증발시킨다. 디클로로메탄 중의 10% 메탄올을 용출제로서 사용하여 조 생성물을 실리카 겔로 정제시킨다. 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시켜 목적한 화합물(49mg)을 무색 고체로서 수득한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 1.08 (s, 3H), 3.67 (m, 2H), 3.74 (m, 1H), 3.83 (m, 1H), 5.19 (m, 1H), 5.23 (m, 1H), 5.48 (m, 1H), 6.08 (1H, s), 6.50 (m, 1H), 6.93 (bs, 2H), 7.33 (m, 1H), 8.02 (s, 1H).

실시예 2

4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A: 3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-1-0-메틸-α-D-리보푸라노즈

메탄올성 K₂C0₃(500mL, 실온에서 포화) 중의 2-O-아세틸-3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-1-O-메틸-α-D-리보푸라노즈[제조를 위해, 참조:Helv. Chim. Acta78: 486 (1995)](52.4g, 0.10mol)를 실온에서 45분 동안 교반한 다음, 감압하에 농축시킨다. 유성 잔사를 CH₂C1₂(500mL) 중에 현탁시키고, 물(300mL + 5×200mL)과 염수(200mL)로 세척하고, 건조(Na₂SO₄)시키고, 여과시키고, 농축시켜 표제 화합물(49.0g)을 무색 오일로서 수득하여, 이를 추가의 정제 없이 후속 단계 B에서 사용한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 3.28 (s, 3H, OCH₃), 3.53 (d, 2H, J_5,4= 4.5Hz, H-5a, H-5b), 3.72 (dd, 1H, J_3,4=3.6Hz, J_3,2= 6.6Hz, H-3), 3.99 (ddd, 1H, J_2,1= 4.5Hz, J_2,OH-2= 9.6Hz, H-2), 4.07 (m, 1H, H-4), 4.50 (s, 2H, CH₂Ph), 4.52, 4.60 (2d, 2H, J_gem= 13.6Hz, CH₂Ph), 4.54 (d, 1H, OH-2), 4.75 (d, 1H, H-1), 7.32-7.45, 7.52-7.57 (2m, 10H, 2Ph).

¹³C NMR (DMSO-d₆): δ 55.40, 69.05, 69.74, 71.29, 72.02, 78.41, 81.45, 103.44, 127.83, 127.95, 129.05, 129.28, 131.27, 131.30, 133.22, 133.26, 133.55, 133.67, 135.45, 135.92.

단계 B: 3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-1-O-메틸-α-D-에리트로펜토푸라노스-2-울로즈

아르곤 하, 무수 CH₂Cl₂(350mL) 중의 데스-마틴 페리오디난(50.0g, 118mmol)의 빙냉 현탁액에 무수 CH₂Cl₂(200mL) 중의 단계 A로부터의 화합물(36.2g, 75mmol)의 용액을 0.5시간 동안 적가한다. 반응 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 실온에서 3일 동안 교반한다. 당해 혼합물을 무수 Et₂O(600mL)로 희석시키고, 포화 수성 NaHCO₃(1400mL) 중의 Na₂S₂0₃.5H₂0(180g)의 빙냉 혼합물에 붓는다. 층을 분리시키고, 유기 층을 포화 수성 NaHC0₃(600mL), 물(800mL) 및 염수(600mL)로 세척하고, 건조(MgS0₄)시키고, 여과시키고, 증발시켜 표제 화합물(34.2g)을 무색 오일로서 수득하여, 이를 추가의 정제 없이 후속 단계 C에 사용한다.

¹H NMR (CDC1₃): δ 3.50 (s, 3H, OCH₃), 3.79 (dd, 1H, J_5a,5b= 11.3Hz, J_5a,4= 3.5Hz, H-5a), 3.94 (dd, 1H, J_5b,4= 2.3Hz, H-5b), 4.20 (dd, 1H, J_3,1= 1.3Hz, J_3,4= 8.4Hz, H-3), 4.37 (ddd, 1H, H-4), 4.58, 4.69 (2d, 2H, J_gem= 13.0Hz, CH₂Ph), 4.87 (d, 1H, H-1), 4.78, 5.03 (2d, 2H, J_gem= 12.5Hz, CH₂Ph), 7.19-7.26, 7.31-7.42(2m, 10H, 2Ph).

¹³C NMR (DMSO-d₆): δ 55.72, 69.41, 69.81, 69.98, 77.49, 78.00, 98.54, 127.99, 128.06, 129.33, 129.38, 131.36, 131.72, 133.61, 133.63, 133.85, 133.97, 134.72, 135.32, 208.21.

단계 C: 3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-메틸-1-O-메틸-α-D-리보푸라노즈

-55℃에서 무수 Et₂0(0.48M, 300mL) 중의 MeMgBr 용액에 무수 Et₂0(125mL) 중, 단계 B(17.40g, 36.2mmol)로부터의 화합물의 용액을 적가한다. 반응 혼합물을 -30℃로 가온시키고, -30 내지 -15℃에서 7시간 동안 교반한 다음, 빙냉수(500mL) 속에 붓고, 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 격렬하게 교반한다. 당해 혼합물을 셀라이트 패드(10×5cm)를 통해 여과시키고, Et₂0로 완전하게 세척한다. 유기 층을 건조(MgS0₄)시키고, 여과, 농축시킨다. 잔사를 헥산(약 30mL) 중에 용해시키고, 실리카 겔 칼럼(10×7cm, 헥산 중에 예비포장됨) 위에 적용시키고, 헥산 및 헥산/EtOAc(9/1)로 용출시켜 표제 화합물(16.7g)을 무색 시럽으로서 수득한다.

¹H NMR(CDCl₃): δ 1.36 (d, 3H, J_Me,OH= 0.9Hz, 2C-Me), 3.33 (q, 1H, OH), 3.41 (d, 1H, J_3,4= 3.3Hz), 3.46 (s, 3H, OCH₃), 3.66 (d, 2H, J_5,4= 3.7Hz, H-5a, H-5b), 4.18 (명백한 q, 1H, H-4), 4.52 (s, 1H, H-1), 4.60 (s, 2H, CH₂Ph), 4.63, 4.81 (2d, 2H, J_gem= 13.2Hz, CH₂Ph), 7.19-7.26, 7.34-7.43 (2m, 10H, 2Ph).

¹³C NMR (CDC1₃): δ 24.88, 55.45, 69.95, 70.24, 70.88, 77.06, 82.18, 83.01, 107.63, 127.32, 129.36, 130.01, 130.32, 133.68, 133.78, 134.13, 134.18, 134.45, 134.58.

단계 D: 4-클로로-7-[3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

0℃에서 무수 디클로로메탄(285mL) 중의 단계 C로부터의 화합물(9.42g, 19mmol)의 용액에 HBr(아세트산 중 5.7M, 20mL, 114mmol)을 적가한다. 수득한 용액을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온에서 3시간 동안 교반하고, 진공하에 증발시키고, 무수 톨루엔(3×40mL)으로 증발시킨다. 유성 잔사를 무수 아세토니트릴(50mL) 중에 용해시키고, 아세토니트릴 중의 4-클로로-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘의 나트륨 염의 용액{실온에서 격렬하게 교반시킨 지 4시간 후, 무수 아세토니트릴(1000mL) 중의 4-클로로-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘(제조를 위해, 문헌[참조:J. Chem. Soc.: 131 (1960)] 참고)(8.76g, 57mmol) 및 NaH(광유 중 60%, 2.28g, 57mmol)으로부터 동일 반응계내에서 생성됨}에 가한다. 합쳐진 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반한 다음, 증발 건조시킨다. 잔사를 물(250mL) 속에 현탁시키고, EtOAc(2×500mL)로 추출한다. 합쳐진 추출물을 염수(300mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 증발시킨다. 에틸 아세테이트/헥산(1:3 및 1:2)을 용출제로서 사용하여 조 생성물을 실리카 겔 칼럼(10cm×10cm)으로 정제시킨다. 생성물을 함유한 분액을 합하고, 진공하에 증발시켜 목적한 생성물(5.05g)을 무색 발포체로서 수득한다.

¹H NMR (CDC1₃): δ0.93 (s, 3H, CH₃), 3.09 (s, 1H, OH), 3.78 (dd, 1H, J_5',5"= 10.9Hz, J_5',4= 2.5Hz, H-5'), 3.99 (dd, 1H, J_5",4= 2.2Hz, H-5"), 4.23-4.34 (m,2H, H-3', H-4'), 4.63, 4.70 (2d, 2H, J_gem= 12.7Hz, CH₂Ph), 4.71, 4.80 (2d, 2H, J_gem= 12.1Hz, CH₂Ph), 6.54 (d, 1H, J_5,6= 3.8Hz, H-5), 7.23-7.44(m, 10H, 2Ph).

¹³C NMR (CDC1₃): δ 21.31, 69.10, 70.41, 70.77, 79.56, 80.41, 81.05, 91.11, 100.57, 118.21, 127.04, 127.46, 127.57, 129.73, 129.77, 130.57, 130.99, 133.51, 133.99, 134.33, 134.38, 134.74, 135.21, 151.07, 151.15, 152.47.

단계 E: 4-클로로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

-78℃에서 디클로로메탄(175mL) 중의 단계 D(5.42g, 8.8mmol)로부터의 화합물의 용액에 삼염화붕소(디클로로메탄 중 1M, 88mL, 88mmol)를 적가한다. 당해 혼합물을 -78℃에서 2.5시간 동안 교반한 다음, -30 내지 -20℃에서 3시간 동안 교반한다. 메탄올/디클로로메탄(1:1)(90mL)을 가하여 반응을 급냉시키고, 수득한 혼합물을 -15℃에서 30분 동안 교반한 다음, 0℃에서 수성 암모니아로 중화시키고, 실온에서 15분 동안 교반한다. 고체를 여과시키고, CH₂Cl₂/MeOH(1/1, 250mL)로 세척한다. 합쳐진 여액을 증발시키고, CH₂C1₂및 CH₂Cl₂:MeOH(99:1, 98:2, 95:5 및 90:10) 구배를 용출제로서 사용하여 잔사를 섬광 크로마토그래피로 정제하여 목적한 화합물(1.73g)을 무색 발포체로서 수득하며, 이는 MeCN으로 처리한 후에 무정형 고체로 변한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ0.64 (s, 3H, CH₃), 3.61-3.71 (m, 1H, H-5'), 3.79-3.88 (m, 1H, H-5"), 3.89-4.01 (m, 2H, H-3', H-4'), 5.15-5.23 (m, 3H, 2'-OH, 3'-OH, 5'-OH), 6.24 (s, 1H, H-1'), 6.72 (d, 1H, J_5,6= 3.8Hz, H-5), 8.13 (d, 1H, H-6), 8.65 (s, 1H, H-2).

¹³C NMR (DMSO-d₆): δ20.20, 59.95, 72.29, 79.37, 83.16, 91.53, 100.17, 117.63, 128.86, 151.13, 151.19, 151.45.

단계 F: 4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 E로부터의 화합물(1.54g, 5.1mmol)에 메탄올성 암모니아(0℃에서 포화됨; 150mL)를 가한다. 당해 혼합물을 85℃의 스테인레스 강 오토클레이브 속에서 14시간 동안 가열시킨 다음, 냉각시키고 진공하에 증발시킨다. CH₂Cl₂/MeOH(9/1)를 용출제로서 사용하여 조 혼합물을 실리카 겔 칼럼으로 정제하여 표제 화합물을 무색 발포체(0.8g)로서 수득하고, 이를 MeCN으로 처리한 후에 무정형 고체로서 분리시킨다. 당해 무정형 고체를 메탄올/아세토니트릴로부터 재결정화시킨다. 융점 222℃.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ0.62 (s, 3H, CH₃), 3.57-3.67 (m, 1H, H-5'), 3.75-3.97 (m, 3H, H-5", H-4', H-3'), 5.00 (s, 1H, 2'-OH), 5.04 (d, 1H, J_3'OH,3'= 6.8Hz, 3'-OH), 5.06 (t, 1H, J_5'OH,5',5"= 5.1Hz, 5'-OH), 6.11 (s, 1H, H-1'), 6.54 (d, 1H, J_5,6= 3.6Hz, H-5), 6.97 (br s, 2H, NH₂), 7.44 (d, 1H, H-6), 8.02 (s, 1H, H-2).

¹³C NMR (DMSO-d₆) δ 20.26, 60.42, 72.72, 79.30, 82.75, 91.20, 100.13, 103.08, 121.96, 150.37, 152.33, 158.15.

LC-MS: 실측치: 279.10 (M-H+); C₁₂H₁₆N₄0₄+H⁺에 대한 계산치: 279.11.

실시예 3

4-아미노-7-(2-C-에틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A: 3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-에틸-1-O-메틸-α-D-리보푸라노즈

-78℃에서 디에틸 에테르(300mL)에 EtMgBr(3.0M, 16.6mL)을 서서히 가한 다음, 무수 Et₂O(100mL) 중의 실시예 2, 단계 B로부터의 화합물(4.80g, 10.0mmol)을 적가한다. 반응 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반하고, -15℃로 가온시키고, 2시간 동안 추가로 교반한 다음, 물(300mL)과 Et₂O(600mL)와의 교반된 혼합물 속에 붓는다. 유기 상을 분리시키고, 건조(MgS0₄)시키고, 진공하에 증발시킨다. 에틸아세테이트/헥산(1:2)을 용출제로서 사용하여 조 생성물을 실리카 겔로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물(3.87g)을 무색 오일로서 수득한다.

단계 B : 4-클로로-7-[3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-에틸-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

디클로로메탄(40mL) 중의 단계 A로부터의 화합물(1.02mg, 2.0mmol)의 용액에 HBr(아세트산 중의 5.7M)(1.75mL, 10.0mmol)을 0℃에서 적가한다. 수득한 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 진공하에 증발시키고, 톨루엔(10mL)으로부터 2회 증발시킨다. 유성 잔사를 아세트니트릴(10mL) 중에 용해시키고, 아세토니트릴(10mL) 중의 4-클로로-lH-피롤로[2,3-d]피리미딘(307mg, 2.0mmol), 수산화칼륨(337mg, 6.0mmol) 및 트리스[2-(2-메톡시에톡시)에틸]아민(130mg, 0.4mmol)과의 격렬하게 교반된 혼합물에 가한다. 수득한 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 포화 염화암모늄(100mL)과 에틸 아세테이트(100mL)와의 교반된 혼합물 중에 붓는다. 유기 층을 분리시키고, 염수(100mL)로 세척하고, MgS0₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공하에 증발시킨다. 에틸 아세테이트/헥산(1:2)을 용출제로서 사용하여 조 생성물을 실리카 겔로 정제하여, 목적한 생성물(307mg)을 무색 발포체로서 수득한다.

단계 C: 4-클로로-7-(2-C-에틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

디클로로메탄(8mL) 중의 단계 B로부터의 화합물(307mg, 0.45mmol)의 용액에 -78℃에서 삼염화붕소(디클로로메탄 중의 1M)(4.50mL, 4.50mmol)를 가한다. 당해 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 다음, -10℃에서 3시간 동안 교반한다. 메탄올/디클로로메탄(1:1)(10mL)을 가하여 반응을 급냉시키고, -15℃에서 30분 동안 교반하고, 수성 수산화암모늄을 가하여 중화시킨다. 당해 혼합물을 감압하에 증발시키고, 메탄올/디클로로메탄(1:9)을 용출제로서 사용하여, 수득한 오일을 실리카 겔로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물(112mg)을 무색 발포체로서 수득한다.

단계 D: 4-아미노-7-(2-C-에틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 C로부터의 화합물(50mg, 0.16mmol)에 메탄올(4mL) 중의 포화 암모니아를 가한다. 당해 혼합물을 밀폐 용기 중, 75℃에서 72시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 진공하에 증발시킨다. 메탄올/디클로로메탄(1:9)을 용출제로서 사용하여 조 혼합물을 실리카 겔로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물(29mg)을 무색 분말로서 수득한다.

¹H NMR (200 MHz, DMSO-d₆): δ 0.52 (t, 3H), 1.02 (m, 2H), 4.01-3.24 (m, 6H), 5.06 (m, 1H), 6.01 (s, 1H), 6.51 (d, 1H), 6.95 (s br, 2H), 6.70 (d, 1H), 7.99 (s, 1H).

LC-MS: 실측치: 295.2 (M+H⁺); C₁₃H₁₈N₄0₄+H⁺에 대한 계산치: 295.14.

실시예 4

2-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(3H)-온

단계 A: 2-아미노-4-클로로-7-[3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

CH₂C1₂(30mL) 중의 실시예 2, 단계 C로부터의 생성물(1.27g, 2.57mmol)의 빙냉 용액에 HBr(아세트산 중의 5.7M; 3mL)을 적가한다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압하에 농축시키고, 톨루엔(2×15mL)으로 증발시킨다. 수득한 오일을 아세토니트릴(MeCN)(15mL) 중에 용해시키고, 아세토니트릴(30mL) 중의 2-아미노-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘[제조를 위해, 참조:Heterocycles35: 825 (1993)](433mg, 2.57mmol), KOH(85%, 분말화)(0.51g, 7.7mmol) 및 트리스-[2-(2-메톡시에톡시)에틸]아민(165㎕, 0.51mmol)과의 충분히 교반된 혼합물에 적가한다. 수득한 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과, 증발시킨다. 헥산/EtOAc, 5/1, 3/1 및 2/1을 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔로 정제하여, 표제 화합물을 무색 발포체(0.65g)로서 수득한다.

단계 B: 2-아미노-4-클로로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

-78℃에서 CH₂C1₂(20mL) 중의 단계 A로부터의 생성물(630mg, 1.0mmol)의 용액에 삼염화붕소(CH₂C1₂중의 1M)(10mL, 10mmol)를 가한다. 당해 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반한 다음, -20℃에서 2.5시간 동안 교반한다. CH₂Cl₂/MeOH(1:1)(10mL)로 반응을 급냉시키고, -20℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 수성 암모니아를 사용하여 0℃에서 중화시킨다. 고체를 여과하고, CH₂Cl₂/MeOH(1:1)로 세척하고, 합쳐진 여액을 진공하에 증발시킨다. CH₂Cl₂/MeOH, 50/1 및 20/1을 사용하여 잔사를 실리카 겔로 정제하여, 표제 화합물을 무색 발포체(250mg)로서 수득한다.

단계 C: 2-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(3H)-온

수성 NaOH(2N, 9mL) 중의 단계 B로부터의 생성물(90mg, 0.3mmol)의 혼합물을 환류 온도에서 5시간 동안 가열시킨 다음, 2N 수성 HCl을 사용하여 0℃에서 중화시키고, 증발 건조시킨다. CH₂Cl₂/MeOH(5/1)를 용출제로서 사용하여 실리카 겔 칼럼으로 정제시켜, 표제 화합물을 백색 고체(70mg)로서 수득한다.

¹H NMR (200 MHz, CD₃0D): δ 0.86 (s, 3H), 3.79 (m 1H), 3.90-4.05 (m, 3H), 6.06 (s, 1H), 6.42 (d, J = 3.7Hz, 1H), 7.05 (d, J = 3.7Hz, 1H).

실시예 5

2-아미노-4-사이클로프로필아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

사이클로프로필아민(0.5mL) 중의 2-아미노-4-클로로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(실시예 4, 단계 B)(21mg, 0.07mmol)의 용액을 70℃에서 2일 동안 가열시킨 다음, 증발시켜 유성 잔사를 수득하여, CH₂Cl₂/MeOH(20/1)를 용출제로서 사용하여 실리카 겔 칼럼으로 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체(17mg)로서 수득한다.

¹H NMR (200 MHz, CD₃CN): δ 0.61 (m, 2H), 0.81 (m, 2H), 0.85 (s, 3H), 2.83 (m, 1H), 3.74-3.86 (m, 1H), 3.93-4.03 (m, 2H), 4.11 (d, J = 8.9Hz, 1H), 6.02 (s,1H), 6.49 (d, J = 3.7HZ, 1H), 7.00 (d, J = 3.7Hz, 1H).

실시예 6

4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카보니트릴

당해 화합물을 문헌[참조: Y. Murai et al.,Heterocycles33: 391-404 (1992)]에 기재되어 있는 공정에 따라 제조한다.

실시예 7

4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카복스아미드

실시예 8

SATE 프로드럭 잔기에 대한 일반 공정

S-아실-2-티오에틸(SATE) 프로뉴클레오티드는, 전문이 본원에 참조로 인용되어 있는 문헌[참조: C. R. Wagner, V. V. Iyer, and E. J. McIntee, "Pronucleotides: Toward the In Vivo Delivery of Antiviral and Anticancer Nucleotides",Med. Res. Rev., 20: 1-35 (2000)]에 거론되어 있다. 또한, 뉴클레오시드의 SATE 유도체는, 전문이 본원에 참조로 인용되어 있는 미국 특허 제5,770,725호, 제5,849,905호 및 제6,020,482호에 기재되어 있다.

비스(S-아세틸-2-티오에틸)-N,N-디이소프로필포스포르아미다이트

2-머캅토에탄올(5g, 64mmol)을 CH₂C1₂(50mL) 중에 용해시킨다. 당해 용액에 트리에틸아민(7.67mL, 57.6mmol)을 가하고, 반응 혼합물을 빙욕 중에서 0℃로 냉각시킨다. 무수 아세트산(4.54mL, 48mmol)을 10분 이내에 적가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한다. 이어서, 반응 혼합물을 2시간에 걸쳐서 실온으로 되게 한다. 반응 혼합물을 CH₂C1₂(50mL)로 희석시키고, 물(75mL), 5% 수성 NaHC0₃(75mL) 및 염수(75mL)로 세척한다. 유기 상을 무수 Na₂S0₄로 건조시키고, 진공하에 농축시켜 오일을 수득한다. 이어서, 당해 오일을 무수 THF(40mL) 중에 용해시키고, 무수 트리에틸아민(7.76mL)을 가한다. 당해 혼합물에 활성화 분자체(4Å)를 가하고, 실온에서 10분 동안 유지시킨다. 반응 혼합물을 빙욕에서 0℃로 냉각시키고, 디이소프로필포스포르아미드 디클로라이드(6.47g, 32.03mmol)를 가한다. 반응 혼합물을 불활성 대기하에 0℃에서 2시간 동안 교반한다. 헥산(40mL)을 반응 혼합물에 가하고, 형성된 침전물을 여과시킨다. 여액을 용적의 1/4로 농축시키고, 부하된 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제시키고, 3% 트리에틸아민 및 증가량의 에틸 아세테이트(0에서 7%)를 함유한 헥산으로 용출시켜 표제 화합물을 오일(2.36g)로서 수득한다.

¹H NMR (CDC1₃): δ 1.17 (s, 6H), 1.21 (s, 6H), 2.36 (s, 6H), 3.14 (t, J = 6.44 Hz), 3.51-3.84 (m, 6H);¹³C NMR (CDC1₃): δ 24.47, 24.61, 30.48, 42.85, 43.1, 61.88, 62.23, 195.26;¹³P NMR (CDC1₃): δ 146.96.

실시예 9

5'-트리포스페이트 유도체

본 발명의 뉴클레오시드 5'-트리포스페이트를 문헌[참조: Chem. Rev. 100: 2047 (2000)]에 기재되어 있는 일반 공정에 따라 제조한다.

실시예 10

5'-트리포스페이트 유도체의 정제 및 순도 분석

50mM 트리스, pH 8의 완충 시스템과 함께 30×100mm 모노 큐 칼럼(Mono Qcolumn)[공급원: 파마시아(Pharmacia)]을 사용한 음이온 교환(AX) 크로마토그래피로 트리포스페이트 유도체를 정제시킨다. 용출 구배는 전형적으로 2개의 칼럼에서 6.5mL/분으로 40mM NaCl로부터 0.8M NaCl이다. 음이온 교환 크로마토그래피로부터 적합한 분액을 회수하고, 10mL/분의 유량으로 루나 씨 18(Luna C 18) 250×21mm 칼럼[공급원: 페노메넥스(Phenomenex)]을 사용하여 가역상(RP) 크로마토그래피로 탈염시킨다. 용출 구배는 통상적으로 5mM 트리에틸암모늄 아세테이트(TEAA)의 일정 농도에서 14분 이내에 1%로부터 95%이다.

휴렛 팩커드(Hewlett-Packard)(미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재) MSD 1100 상에서 온라인 HPLC 질량 분광광도계를 사용하여, 정제된 트리포스페이트의 질량 스펙트럼을 측정한다. 가드 칼럼인 페노메넥스 루나(Phenomenex Luna)(C18(2)), 150×2mm 및 30×2mm와 3-㎛ 입자 크기를 RP HPLC에 대해 사용한다. 20mM TEAA(트리에틸암모늄 아세테이트) pH 7 중의 아세토니트릴 0 내지 50% 선형 구배(15분)를 네가티브 이온화 방식의 질량 스펙트럼 검출을 사용하여 연속하여 수행한다. 질소 기체 및 기체 분무기를 사용하여 전자스프레이를 생성한다. 질량 범위가 150 내지 900이도록 샘플링한다. HP 켐스테이션 애널리시스 팩키지(HP Chemstation analysis package)를 사용하여 분자 질량을 측정한다.

정제된 트리포스페이트의 순도를 분석적 RP 및 AX HPLC로 측정한다. 페노모넥스 루나 또는 주피터 칼럼(Jupiter column)(250×4.6mm)(5-㎛ 입자 크기)이 장착된 RP HPLC를 통상적으로 2 내지 70% 아세토니트릴 구배로 100mM TEAA(pH 7) 중에서 15분 동안 작동시킨다. AX HPLC를 1.6×5mm 모노 큐 칼럼[공급원: 파마시아]으로 수행한다. 트리포스페이트를 50mM 트리스(pH 8)의 일정 농도에서 0 내지 0.4M NaCl의 구배로 용출시킨다. 트리포스페이트의 순도는 통상적으로 80%를 초과한다.

실시예 11

5'-모노포스페이트 유도체

본 발명의 뉴클레오시드 5'-모노포스페이트를 문헌[참조: Tetrahedron Lett. 50: 5065 (1967)]에 기재되어 있는 일반 공정에 따라 제조한다.

실시예 12

5'-트리포스페이트 유도체의 질량 스펙트럼 특징화

본 발명의 화합물의 5'-트리포스페이트의 질량 스펙트럼을 실시예 10에 기재되어 있는 바와 같이 측정한다. 다음 표에는, 실시예 9의 공정에 따라 제조된 대표적인 5'-트리포스페이트에 대한 산출 질량 및 실험 질량이 기재되어 있다. 실시예 번호는 5'-트리포스페이트의 모 화합물에 상응한다.

실시예	계산치	실측치
1	520.0	519.9
2	520.0	520.0
3	534.0	534.0
4	536.0	536.0

실시예 13

[4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]-피리미딘]-5'-모노포스페이트

실시예 2, 단계 F로부터의 화합물(14mg, 0.05mmol)(피리딘으로 1회 및 톨루엔으로 수 회 증발시켜 건조시킴)에 트리메틸 포스페이트(0.5mL)를 가한다. 당해 혼합물을 밀폐 용기 속에서 밤새 교반한다. 이어서, 이를 0℃로 냉각시키고, 염화옥시인(0.0070mL, 0.075mmol)을 주사기로 가한다. 당해 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 트리에틸암모늄 비카보네이트(TEAB)(1M)(0.5mL)와 물(5mL)을 가하여 반응을 급냉시킨다. 실시예 10에 기재된 공정에 따라 반응 혼합물을 정제하고 분석한다.

전자 분무 질량 스펙트럼(ES-MS): 실측치: 359.2(M-H⁺), C₁₂H₁₇N₄0₇P-H⁺에 대한 계산치: 359.1.

실시예 14

[4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘]-5'-디포스페이트

실시예 2, 단계 F로부터의 화합물(56mg, 0.20mmol)(피리딘 1회 및 톨루엔 수 회로 증발시켜 건조시킴)에 트리메틸 포스페이트(체로 저장시킴)(1.0mL)를 가한다. 당해 혼합물을 밀폐 용기 중에서 밤새 교반한다. 이어서, 0℃로 냉각시키고, 염화옥시인(0.023mL, 0.25mmol)을 주사기를 통해 가한다. 당해 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 트리부틸아민(0.238mL, 1.00mmol) 및 트리부틸암모늄 포스페이트(피리딘 중의 인산 및 트리부틸아민으로부터 생성된 다음, 피리딘과 아세토니트릴로 반복하여 비등 증발시켜 생성시킴)(3.30mL 아세토니트릴 중의 1.0 mmol)를 가한다. 당해 혼합물을 0℃에서 30분 동안 추가로 교반한 다음, 밀폐 용기를 열고, TEAB(1M)(1.0mL)와 물(5mL)을 가하여 반응을 급냉시킨다. 실시예 10에 기재된 공정에 따라 반응 혼합물을 정제하고 분석한다.

ES-MS: 실측치: 439.0 (M-H⁺), C₁₂H₁₈N₄O₁₀P₂-H⁺에 대한 계산치: 439.04.

실시예 15

[4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]-피리미딘]-5'-트리포스페이트

실시예 2, 단계 F로부터의 화합물(20mg, 0.07mmol)(피리딘 1회 및 톨루엔 수 회로 증발시켜 건조시킴)에 트리메틸 포스페이트(체로 저장시킴)(0.4mL)를 가한다. 당해 혼합물을 밀폐 용기 중에서 밤새 교반한다. 이어서, 0℃로 냉각시키고, 염화옥시인(0.0070mL, 0.075mmol)을 주사기로 가한다. 당해 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 트리부틸아민(0.083mL, 0.35mmol), 트리부틸암모늄 피로포스페이트(127mg, 0.35mmol) 및 아세토니트릴(체로 저장시킴)(0.25mL)을 가한다. 당해 혼합물을 0℃에서 30분 동안 추가로 교반한 다음, 밀폐 용기를 열고, TEAB(1M)(0.5mL)와 물(5mL)을 가하여 반응을 급냉시킨다. 실시예 10에 기재된 공정에 따라 반응 혼합물을 정제시키고 분석한다.

ES-MS: 실측치: 519.0 (M-H⁺), C₁₂H₁₉N₄O₁₃P₃-H⁺에 대한 계산치: 519.01.

실시예 16

7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(3H)-온

실시예 2, 단계 E로부터의 화합물(59mg, 0.18mmol)에 수성 수산화나트륨(1M)을 가한다. 당해 혼합물을 1시간 동안 환류로 가열시키고, 냉각시키고, 수성 HC1(2M)로 중화시키고, 진공하에 증발시킨다. 디클로로메탄/메탄올(4:1)을 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 모으로 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물(53mg)을 무색 오일로서 수득한다.

¹H NMR (CD₃CN): δ 0.70 (s, 3H), 3.34-4.15 (겹치는 m, 7H), 6.16 (s, 1H), 6.57 (d, 3.6 Hz, 1H), 7.37 (d, 3.6 Hz, 1H), 8.83 (s, 1H).

실시예 17

4-아미노-5-클로로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

DMF(2.5mL) 중의 실시예 2, 단계 F로부터의 화합물(140mg, 0.50mmol)의 예비냉각된 용액(0℃)에 DMF(0.5mL) 중의 N-클로로숙신이미드(0.075g, 0.55mmol)를 적가한다. 당해 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 메탄올(4mL)을 가하여 반응을 급냉시키고, 진공하에 증발시킨다. 메탄올/디클로로메탄(1:9)을 용출제로서 사용하여 조 생성물을 실리카 겔로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물(55mg)을 무색 고체로서 수득한다.

¹H NMR (CD₃CN): δ 0.80 (s, 3H), 3.65-4.14 (겹쳐진 m, 7H), 5.97 (s br, 2H), 6.17 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 8.16 (s, 1H).

ES-MS: 실측치: 315.0(M+H⁺), C₁₂H₁₅ClN₄0₄+H⁺에 대한 계산치: 315.09.

실시예 18

4-아미노-5-브로모-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

DMF(0.5mL) 중의 실시예 2, 단계 F로부터의 화합물(28mg, 0.10mmol)의 예비 냉각된 용액(0℃)에 DMF(0.5mL) 중의 N-브로모숙신이미드(0.018g, 0.10mmol)를 적가한다. 당해 용액을 0℃에서 20분 동안 교반한 다음, 실온에서 10분 동안 교반한다. 메탄올(4mL)을 가하여 반응을 급냉시키고 진공하에 증발시킨다. 메탄올/디클로로메탄(1:9)을 용출제로서 사용하여 조 생성물을 실리카 겔로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물(13.0mg)을 무색 고체로서 수득한다.

¹H NMR (CD₃CN): δ 0.69 (s, 3H), 3.46-4.00 (겹쳐진 m, 7H), 5.83 (s br, 2H), 6.06 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 8.05 (s, 1H).

ES-MS: 실측치: 359.1 (M+H⁺), C₁₂H₁₅BrN₄0₄+H⁺에 대한 계산치: 359.04.

실시예 19

2-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보프라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

EtOH(1.0mL) 중의 2-아미노-4-클로로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(실시예 4, 단계 B)(20mg, 0.07mmol), 피리딘(0.1mL) 및 10% Pd/C(6mg)와의 혼합물을 H₂(대기압)하에 실온에서 밤새 교반한다. 당해 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, 이를 EtOH로 완전히 세척한다. 합쳐진 여액을 증발시키고, CH₂Cl₂/MeOH, 20/1 및 10/1을 용출제로서 사용하여 실리카 겔 칼럼으로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체(16mg)로서 수득한다.

¹H NMR (200MHz, CD₃0D): δ 0.86 (s, 3H, 2'C-Me), 3.82 (dd, J_5'4'= 3.6Hz, J_5',5"= 12.7Hz, 1H, H-5'), 3.94-4.03 (m, 2H, H-5', H-4'), 4.10 (d, J_3'4'= 8.8Hz, 1H, H-3'), 6.02 (s, 1H, H-1'), 6.41 (d, J_5,6= 3.8Hz, 1H, H-5), 7.39 (d, 1H, H-6), 8.43 (s, 1H, H-4). ES MS: 281.4 (MH⁺).

실시예 20

2-아미노-5-메틸-7-(2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(3H)-온

단계 A: 2-아미노-4-클로로-7-[3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실]-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

CH₂C1₂(50mL) 중의 실시예 2, 단계 C로부터의 생성물(1.57g, 3.16mmol)의 빙냉 용액에 HBr(아세트산 중의 5.7M; 3.3mL)을 적가한다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온에서 2시간 동안 교반하고, 진공하에 농축시키고, 톨루엔(2×20mL)으로 증발시킨다. 수득한 오일을 MeCN(20mL) 중에 용해시키고, 아세토니트릴 중의 2-아미노-4-클로로-5-메틸-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘의 나트륨 염의 용액{실온에서 격렬하게 교반한 지 2시간 후, 무수 아세토니트릴(150mL) 중의 2-아미노-4-클로로-5-메틸-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘(제조를 위해, 문헌[참조:Liebigs Ann. Chem.1984: 708-721] 참고)(1.13g, 6.2mmol) 및 NaH(광유 중의 60%, 248mg, 6.2mmol)로부터 동일 반응계내에서 생성됨}에 적가한다. 합쳐진 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반한 다음, 증발 건조시킨다. 잔사를 물(100mL) 속에 현탁시키고, EtOAc(300 + 150mL)로 추출한다. 합쳐진 추출물을 염수(100mL)로 세척하고, 건조(Na₂S0₄)시키고, 여과, 농축시킨다. 에틸 아세테이트/헥산(5% 단계 구배에서 0 내지 30% EtOAc)을 용출제로서 사용하여 조 생성물을 실리카 겔 칼럼(5×7cm)으로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 합하고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물(0.96g)을 무색 발포체로서 수득한다.

단계 B: 2-아미노-4-클로로-7-[3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실]-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

THF(7mL) 중의 단계 A로부터의 생성물(475mg, 0.7mmol)의 빙냉 혼합물에 NaH(광유 중의 60%, 29mg)를 가하고, 0℃에서 0.5시간 동안 교반한다. 이어서, MeI(48㎕)를 가하고, 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반한다. MeOH로 반응을 급냉시키고, 혼합물을 증발시킨다. 헥산/에틸 아세테이트(9/1, 7/1, 5/1 및3/1)를 용출제로서 사용하여 조 생성물을 실리카 겔 칼럼(5×3.5cm)으로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 합하고 증발시켜, 목적한 화합물(200mg)을 무색 발포체로서 수득한다.

단계 C: 2-아미노-7-[3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실]-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(3H)-온

압력 용기 중의 1,4-디옥산(15mL) 중의 단계 B로부터의 생성물(200mg, 0.3mmol)과 수성 NaOH(2N, 15mL)와의 혼합물을 135℃에서 밤새 가열시킨다. 이어서, 당해 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 2N 수성 HCl로 중화시키고, 증발 건조시킨다. 조 생성물을 MeOH 중에 현탁시키고, 여과시키고, 고체를 MeOH로 완전히 세척한다. 합쳐진 여액을 농축시키고, CH₂Cl₂/MeOH(40/1, 30/1 및 20/1)를 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔 칼럼(5×5cm)으로 정제하여, 목적한 화합물(150mg)을 무색 발포체로서 수득한다.

단계 D: 2-아미노-5-메틸-7-(2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(3H)-온

MeOH(5mL) 및 Et₃N(0.2mL) 중의 단계 C로부터의 생성물(64mg, 0.1mmol)과 10% Pd/C(24mg)와의 혼합물을 실온 및 50psi에서 1.5일 동안 파르 수소화기(Parr hydrogenator)로 수소화시킨 다음, 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, 이를 MeOH로완전히 세척한다. 합쳐진 여액을 증발시키고, CH₂Cl₂/MeOH(30/1, 20/1)를 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔 칼럼(3×4cm)으로 정제하여 2-아미노-5-메틸-7-(5-O-벤질-2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(3H)-온을 수득한다. 당해 화합물(37mg)을 수소 대기압하에 10% Pd/C를 사용하여 EtOH(2mL) 중에서 추가로 수소화시킨다. 실온에서 2일 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고, 여액을 증발시키고, CH₂Cl₂/MeOH(30/1, 20/1 및 10/1)를 용출제로서 사용하여 조 생성물을 실리카 겔 칼럼(1×7cm)으로 정제하여, 동결 건조시킨 후에 표제 화합물(12mg)을 수득한다.

¹H NMR (200 MHz, CD₃0D): δ 0.81 (s, 3H, 2'C-Me), 2.16 (d, J_H-6,C5-Me= 1.3Hz, 3H, C5-ME), 3.41 (s, 3H, 2'-OMe), 3.67 (dd, J_5'4'= 3.4Hz, J_5',5"= 12.6Hz, 1H, H-5'), 3.81-3.91 (m, 3H, H-5", H-4', H-3'), 6.10 (s, 1H, H-1'), 6.66 (d, 1H, H-6). ES MS: 323.3 (M-H)⁺.

실시예 21

4-아미노-5-메틸-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A: 4-클로로-7-[3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실]-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

CH₂C1₂(30mL) 중의 실시예 2, 단계 C로부터의 생성물(1.06g, 2.1mmol)의 빙냉 용액에 HBr(아세트산 중의 5.7M; 2.2mL)을 적가한다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온에서 2시간 동안 교반하고, 진공하에 농축시키고, 톨루엔(2×15mL)으로 증발시킨다. 수득한 오일을 MeCN(10mL) 중에 용해시키고, 아세토니트릴 중의 4-클로로-5-메틸-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘의 나트륨 염의 용액{실온에서 격렬하게 교반한 지 2시간 후, 무수 아세토니트릴(70mL) 중의 4-클로로-5-메틸-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘[제조를 위해, 문헌: J. Med. Chem. 33: 1984 (1990)](0.62g, 3.7mmol), 및 NaH(광유 중의 60%, 148mg, 3.7mmol)로부터 동일 반응계내에서 생성시킴}에 붓는다. 합쳐진 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반한 다음, 증발 건조시킨다. 잔사를 물(100mL) 속에 현탁시키고, EtOAc(250 + 100mL)로 추출한다. 합쳐진 추출물을 염수(50mL)로 세척하고, 건조(Na₂S0₄)시키고, 여과, 증발시킨다. 헥산/에틸 아세테이트(9/1, 5/1, 3/1) 구배를 용출제로서 사용하여 실리카 겔 칼럼(5×5cm)으로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 합하고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물(0.87g)을 무색 발포체로서 수득한다.

단계 B: 4-클로로-5-메틸-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

-78℃에서 디클로로메탄(30mL) 중의 단계 A로부터의 화합물(0.87g, 0.9mmol)의 용액에 삼염화붕소(디클로로메탄 중의 1M, 9.0mL, 9.0mmol)를 적가한다. 당해 혼합물을 -78℃에서 2.5시간 동안 교반한 다음, -30 내지 -20℃에서 3시간 동안 교반한다. 메탄올/디클로로메탄(1:1)(9mL)을 가하여 반응을 급냉시키고, 수득한 혼합물을 -15℃에서 30분 동안 교반한 다음, 0℃에서 수성 암모니아로 중화시키고, 실온에서 15분 동안 교반한다. 고체를 여과하고, CH₂Cl₂/MeOH(1/1, 50mL)로 세척한다. 합쳐진 여액을 증발시키고, CH₂C1₂및 CH₂Cl₂/MeOH(40/1 및 30/1) 구배를 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔 칼럼(5×5cm)으로 정제하여, 목적한 화합물(0.22g)을 무색 발포체로서 수득한다.

단계 C: 4-아미노-5-메틸-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 B로부터의 화합물(0.2g, 0.64mmol)에 메탄올성 암모니아(0℃에서 포화됨; 40mL)를 가한다. 당해 혼합물을 100℃의 스테인레스 강 오토클레이브 속에서 14시간 동안 가열시킨 다음, 냉각시키고, 진공하에 증발시킨다. CH₂Cl₂/MeOH(50/1,30/1, 20/1) 구배를 용출제로서 사용하여 조 혼합물을 실리카 겔 칼럼(5×5cm)으로 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체(0.12g)로서 수득한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 0.60 (s, 3H, 2'C-Me), 2.26 (s, 3H, 5C-Me), 3.52-3.61 (m, 1H, H-5'), 3.70-3.88 (m, 3H, H-5", H-4', H-3'), 5.00 (s, 1H, 2'-OH), 4.91-4.99 (m, 3H, 2'-OH, 3'-OH, 5'-OH), 6.04 (s, 1H, H-1'), 6.48 (br s, 2H, NH₂), 7.12 (s, 1H, H-6), 7.94 (s, 1H, H-2). ES MS: 295.2 (MH⁺).

실시예 22

4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카복실산

실시예 6의 화합물(0.035g, 0.11mmol)을 수성 암모니아(4mL, 30중량%)와 포화 메탄올성 암모니아(2mL)와의 혼합물 중에 용해시키고, 물 속의 H₂0₂용액(2mL, 35중량%)을 가한다. 당해 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한다. 용매를 감압하에 제거하고, 가역상 칼럼[알테크 알티마(Altech Altima) C-18, 10×299mm, A = 물, B = 아세토니트릴, 50분 이내에 10 내지 60% B, 유량 2mL/분] 상에서 HPLC로 정제하여, 표제 화합물(0.015g, 41%)을 백색 고체로서 수득한다.

¹H NMR (CD₃0D): δ 0.85 (s, 3H, Me), 3.61 (m, 1H), 3.82 (m, 1H), 3.99-4.86 (m, 2H), 6.26 (s, 1H), 8.10 (s, 2H) 8.22 (s, 1H);¹³C NMR (CD₃0D): 20.13, 61.37, 73.79, 80.42, 84.01, 93.00, 102.66, 112.07, 130.07, 151.40, 152.74, 159.12, 169.30.

HRMS (FAB) C₁₃H₁₇N₄0₆ ⁺에 대한 계산치: 325.1148, 실측치: 325.1143.

실시예 23

4-아미노-7-(2-C-비닐-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A: 3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-비닐-1-O-메틸-α-D-리보푸라노즈

염화세륨 8수화물(50g, 134.2mmol)을 예비 가열된 회반죽으로 미분시키고, 기계식 교반기가 장착된 환저 플라스크로 이동시킨다. 당해 플라스크를 160℃에서 고 진공하에 밤새 가열시킨다. 진공을 아르곤하에 방출시키고, 플라스크를 실온으로 냉각시킨다. 무수 THF(300mL)를 플라스크로 캔뉼라시킨다. 수득한 현탁액을실온에서 4시간 동안 교반한 다음, -78℃로 냉각시킨다. 브롬화비닐마그네슘(THF 중의 1M, 120mL, 120mmol)을 가하고, -78℃에서 2시간 동안 계속 교반한다. 당해 현탁액에 무수 THF(100mL) 중의 3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-1-O-메틸]-α-D-에리트로-펜토푸라노즈-2-우로즈(14g, 30mmol)(실시예 2, 단계 B로부터)의 용액을 가하고, 일정하게 교반하면서 적가한다. 반응액을 -78℃에서 4시간 동안 교반한다. 반응액을 포화 염화암모늄으로 급냉시키고, 실온으로 되게 한다. 당해 화합물을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, 잔사를 Et₂0(2×200mL)로 세척한다. 유기 층을 분리시키고, 수성 층을 Et₂O(2×200mL)로 세척한다. 합쳐진 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 점성 황색 오일로 농축시킨다. 당해 오일을 섬광 크로마토그래피(Si0₂, 헥산 중의 10% EtOAc)로 정제한다. 표제 화합물(6.7g, 13.2mmol)을 담황색 오일로서 수득한다.

단계 B: 4-클로로-7-[3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-비닐-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

-20℃에서 무수 디클로로메탄(150mL) 중의 단계 A로부터의 화합물(6.4g, 12.6mmol)의 용액에 HBr(AcOH 중의 30% 용액, 20mL, 75.6mmol)을 적가한다. 수득한 용액을 -10 내지 0℃에서 4시간 동안 교반하고, 진공하에 증발시키고, 무수 톨루엔(3×40mL)으로 증발시킨다. 유성 잔사를 무수 아세토니트릴(100mL) 중에 용해시키고, -20℃에서 아세토니트릴 중의 4-클로로-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘(5.8g,37.8mmol)의 용액(실시예 2에 기재된 바와 같이 동일 반응계내에서 생성됨)에 가한다. 수득한 혼합물을 실온으로 되게 하고, 실온에서 24시간 동안 교반한다. 이어서, 혼합물을 증발 건조시키고, 물 속에 용해시키고, EtOAc(2×300mL)로 추출한다. 합쳐진 추출물을 Na₂S0₄로 건조시키고, 여과, 증발시킨다. 조 혼합물을 섬광 크로마토그래피(Si0₂, 헥산 중의 10% EtOAc)로 정제시키고, 표제 화합물을 백색 발포체로서 단리시킨다.

단계 C: 4-아미노-7-[3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-비닐-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 B로부터의 화합물(80mg)을 최소량의 1,4-디옥산 중에 용해시키고, 스테인레스 강 봄(bomb) 속에 넣는다. 당해 봄을 -78℃로 냉각시키고, 액체 암모니아를 가한다. 봄을 밀봉시키고, 90℃에서 24시간 동안 가열한다. 암모니아를 증발시키고, 잔사를 백색 고체로 농축시키고, 이를 추가의 정제 없이 후속 단계에 사용한다.

단계 D: 4-아미노-7-(2-C-비닐-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

-78℃에서 디클로로메탄 중의 단계 C로부터의 화합물(60mg)의 용액에 삼염화붕소(디클로로메탄 중의 1M)를 적가한다. 당해 혼합물을 -78℃에서 2.5시간 동안 교반한 다음, -30 내지 -20℃에서 3시간 동안 교반한다.메탄올/디클로로메탄(1:1)을 가하여 반응을 급냉시키고, 수득한 혼합물을 -15℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 0℃에서 수성 암모니아로 중화시키고, 실온에서 15분 동안 교반한다. 고체를 여과시키고, 메탄올/디클로로메탄(1:1)으로 세척한다. 합쳐진 여액을 증발시키고, 잔사를 섬광 크로마토그래피(SiO₂, 0.1% 트리에틸아민을 함유한 EtOAc 중의 10% 메탄올)로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 증발시켜 표제 화합물을 백색 고체(10mg)로서 수득한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ3.6 (m, 1H, H-5'), 3.8 (m, 1H, H-5"), 3.9 (m d, 1-H, H-4'), 4.3 (t, 1H, H-3'), 4.8-5.3 (m, 6H, CH=CH₂, 2'-OH, 3'-OH, 5'-OH) 6.12 (s, 1H, H-1'), 6.59 (d, 1H, H-5), 7.1 (br s, 1H, NH₂), 7.43 (d, 1H, H-6), 8.01 (s, 1H, H-2).

ES-MS: 실측치: 291.1 (M-H^-); C₁₃H₁₆N₄0₄-H^-에 대한 계산치: 291.2.

실시예 24

4-아미노-7-(2-C-하이드록시메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A : 4-클로로-7-[3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-하이드록시메틸-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

1,4-디옥산(5mL) 중의 실시예 23, 단계 B로부터의 화합물(300mg, 0.48mmol)의 용액에 N-메틸모르폴린-N-옥사이드(300mg, 2.56mmol)와 오스뮴 테트라옥사이드(물 속의 4% 용액, 0.3mL)를 가한다. 당해 혼합물을 암실에서 14시간 동안 교반한다. 침전물을 셀라이트 플러그를 통해 여과 제거하고, 물(3×)로 희석시키고, EtOAc로 추출한다. 당해 EtOAc 층을 Na₂S0₄로 건조시키고, 진공하에 농축시킨다. 유성 잔사를 디클로로메탄(5mL) 중에 용해시키고, 실리카 겔(3g, 10% NaIO₄) 상에서 NaI0₄로 12시간 동안 교반한다. 당해 실리카 겔을 여과 제거하고, 잔사를 증발시키고, 무수 에탄올(5mL) 속에 용해시킨다. 당해 용액을 빙욕 중에서 냉각시키고, 나트륨 보로하이드리드(300mg, 8mmol)를 소량으로 나누어서 가한다. 수득한 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, EtOAc로 희석시킨다. 유기 층을 물(2×20mL) 및 염수(20mL)로 세척하고, Na₂S0₄로 건조시킨다. 용매를 증발시키고, 잔사를 섬광 크로마토그래피(Si0₂, 2:1 헥산/EtOAc)로 정제하여 표제 화합물(160mg, 0.25mmol)을 백색 플레이크로서 수득한다.

단계 B: 4-아미노-7-[3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-하이드록시메틸-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A로부터의 화합물(150mg, 0.23mmol)을 최소량의 1,4-디옥산(10mL) 속에 용해시키고, 스테인레스 강 봄 속에 넣는다. 당해 봄을 -78℃로 냉각시키고, 액체 암모니아를 가한다. 당해 봄을 밀봉시키고, 90℃에서 24시간 동안 가열시킨다. 암모니아를 증발시키고, 잔사를 백색 고체로 농축시키고, 이를 추가의 정제 없이 후속 단계에 사용한다.

단계 C: 4-아미노-7-(2-C-하이드록시메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 B로부터의 화합물(120mg, 0.2mmol)을 1:1 메탄올/디클로로메탄 속에 용해시키고, 10% Pd-C를 가하고, 당해 현탁액을 H₂대기하에 12시간 동안 교반한다. 촉매를 셀라이트 패드를 통해 여과 제거하고, 풍부량의 메탄올로 세척한다. 합쳐진 여액을 진공하에 증발시키고, 잔사를 섬광 크로마토그래피(Si0₂, 0.1% 트리에틸아민을 함유한 EtOAc 중의 10% 메탄올)로 정제하여 표제 화합물(50mg)을 백색 분말로서 수득한다.

¹H NMR (CD₃0D): δ 3.12 (d, 1H, CH₂'), 3.33 (d, 1H, CH₂"), 3.82 (m, 1H, H-5'), 3.99-4.1 (m, 2H, H-4', H-5"), 4.3 (d, 1H, H-3'), 6.2 (s, 1H, H-1'), 6.58 (d, 1H, H-5), 7.45 (d, 1H, H-6), 8.05 (s, 1H, H-2).

LC-MS: 실측치: 297.2 (M+H⁺); C₁₂H₁₆N₄0₅+ H⁺에 대한 계산치: 297.3.

실시예 25

4-아미노-7-(2-C-플루오로메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A: 4-클로로-7-[3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-플루오로메틸-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

아르곤 하, 무수 디클로로메탄(5mL) 중의 실시예 24, 단계 A(63mg, 0.1mmol)로부터의 화합물의 용액에 4-디메틸아미노피리딘(DMAP)(2mg, 0.015mmol)과 트리에틸아민(62㎕, 0.45mmol)을 가한다. 당해 용액을 빙욕 중에서 냉각시키고, p-톨루엔설포닐 클로라이드(30mg, 0.15mmol)를 가한다. 반응액을 실온에서 밤새 교반하고, NaHC0₃(2×10mL), 물(10mL) 및 염수(10mL)로 세척하고, Na₂S0₄로 건조시키고, 진공하에 분홍색 고체로 농축시킨다. 고체를 무수 THF(5mL) 속에 용해시키고, 빙욕 중에서 냉각시킨다. 테트라부틸암모늄 플루오라이드(THF 중의 1M 용액, 1mL, 1mmol)를 가하고, 당해 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한다. 용매를 진공하에 제거하고, 잔사를 디클로로메탄 중에 용해시키고, NaHC0₃(2×10mL), 물(10mL) 및 염수(10mL)로 세척한다. 디클로로메탄 층을 무수 Na₂S0₄로 건조시키고, 진공하에 농축시키고, 섬광 크로마토그래피(Si0₂, 2:1 헥산/EtOAc)로 정제하여 표제화합물(20mg)을 백색 고체로서 수득한다.

단계 B: 4-아미노-7-[3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C-플루오로메틸-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

실시예 A로부터의 화합물(18mg, 0.03mmol)을 최소량의 1,4-디옥산 중에 용해시키고, 스테인레스 강 봄 속에 넣는다. 당해 봄을 -78℃로 냉각시키고, 액체 암모니아를 가한다. 당해 봄을 밀봉시키고, 90℃에서 24시간 동안 가열한다. 암모니아를 증발시키고, 잔사를 백색 고체로 농축시키고, 이를 추가의 정제 없이 후속 단계에 사용한다.

단계 C: 4-아미노-7-(2-C-플루오로메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 B로부터의 화합물(16mg)을 1:1 메탄올/디클로로메탄 중에 용해시키고, 10% Pd-C를 가하고, 현탁액을 H₂대기하에 12시간 동안 교반한다. 당해 촉매를 셀라이트 패드를 통해 여과 제거하고, 충분량의 메탄올로 세척한다. 합쳐진 여액을 진공하에 증발시키고, 잔사를 섬광 크로마토그래피(SiO₂, 0.1% 트리에틸아민을 함유한 EtOAc 중의 10% 메탄올)로 정제하여, 표제 화합물(8mg)을 백색 분말로서 수득한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 3.6-3.7 (m, 1H, H-5'), 3.8-4.3 (m, 5H, H-5", H-4', H-3',CH₂) 5.12 (t, 1H, 5'-OH), 5.35 (d, 1H, 3'-OH), 5.48 (s, 1H, 2'-OH), 6.21 (s, 1H, H-1'), 6.52 (d, 1H, H-5), 6.98 (br s, 2H, NH₂), 7.44 (d, 1H, H-6), 8.02 (s, 1H, H-2).

¹⁹F NMR (DMSO-d₆): δ-230. 2 (t).

ES-MS: 계산치: 299.1 (M+H⁺), C₁₂H₁₅FN₄0₄+ H⁺에 대한 계산치: 299.27.

실시예 26 및 실시예 27

4-아미노-7-(3-데옥시-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 및 4-아미노-7-(3-데옥시-2-C-메틸-β-D-아라비노푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A: 7-[2,5-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴)-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d] 피리미딘 및 7-[3,5-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴)-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d] 피리미딘

피리딘(7.5mL)과 DMF(18.5mL)와의 혼합물 중의 투버시딘(5.0g, 18.7mmol)의 교반 용액에 질산은(6.36g, 38.8mmol)을 가한다. 당해 혼합물을 실온에서 2시간동안 교반한다. 이를 빙욕 중에서 냉각시키고, THF(37.4mL)와 3급-부틸디메틸실릴 클로라이드(5.6g, 37mmol)를 가하고, 당해 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한다. 이어서, 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, THF로 세척한다. 여액 및 세척액을 소량의 클로로포름을 함유한 에테르로 희석시킨다. 유기 층을 중탄산나트륨 및 물(3×50mL)로 연속하여 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시킨다. 피리딘을 톨루엔으로 증발 제거하고, CH₂Cl₂중의 5 내지 7% MeOH를 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔로 섬광 크로마토그래피하여 정제한다. 수율 3.0g.

단계 B: 7-[2,5-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴)-β-D-리보푸라노실)]-4-[디-(4-메톡시페닐)페닐메틸]아미노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 및 7-[3,5-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴)-β-D-리보푸라노실]-4-[디-(4-메톡시페닐)페닐메틸]아미노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

무수 피리딘(30mL) 중의 단계 A로부터의 화합물(3.0g, 6.0mmol)의 혼합물 용액에 4,4'-디메톡시트리틸 클로라이드(2.8g, 8.2mmol)를 가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한다. 이어서, 당해 혼합물을 수성 피리딘과 함께 분쇄시키고, 에테르로 추출한다. 유기 층을 물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 황색 발포체(5.6g)로 농축시킨다. 헥산 중의 20 내지 25% EtOAc를 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔로 섬광 크로마토그래피하여 정제한다. 적합한 분액을 회수하고 농축시켜, 2',5'-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴) 보호 뉴클레오시드 및 3',5'-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴) 보호 뉴클레오시드를 무색 발포체(각각 2.2g 및 1.0g)로서 수득한다.

단계 C: 7-[2,5-비스-O-3급-부틸디메틸실릴)-3-O-토실-β-D-리보푸라노실)]-4-[디-(4-메톡시페닐)페닐메틸]아미노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

피리딘(22mL) 중의 단계 B로부터의 2',5'-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴) 보호 뉴클레오시드의 빙냉 용액에 p-톨루엔설포닐 클로라이드(1.9g, 9.8mmol)를 가한다. 반응 혼합물을 실온에서 4일 동안 교반한다. 이어서, 수성 피리딘(50%, 10mL)과 함께 분쇄시키고, 소량의 CH₂C1₂(10mL)를 함유한 에테르(3×50mL)로 추출한다. 유기 층을 중탄산나트륨 및 물(3×30mL)로 세척한다. 유기 층을 무수 Na₂S0₄로 건조시키고, 농축시킨다. 피리딘을 톨루엔(3×25mL)으로 증발시켜 제거한다. 헥산:에틸 아세테이트(70:30)를 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔 패드를 통해 여과시킨다. 수율 1.4g.

단계 D: 4-[디-(4-메톡시페닐)페닐메틸]아미노-7-[3-O-토실-β-D-리보푸라노실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘]

단계 C로부터의 화합물(1.0g, 1.1mmol) 및 THF(10mL)의 용액을 테트라부틸암모늄 플루오라이드(THF 중의 1M 용액, 2.5mL)로 0.5시간 동안 교반한다. 당해 혼합물을 냉각시키고, 에테르(50mL)로 희석시킨다. 당해 용액을 물(3×50mL)로 세척하고, 무수 Na₂S0₄로 건조시키고, 오일로 농축시킨다. 헥산:에틸 아세테이트(1:1)를 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔 패드로 통과시켜 정제한다. 수율 780mg.

단계 E: 4-아미노-7-(3-데옥시-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]-피리미딘 및 4-아미노-7-(3-데옥시-2-C-메틸-β-D-아라비노푸라노실)-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘

무수 톨루엔(3.75mL) 중의 CH₃MgI(에테르 중의 3.0M 용액, 3.0mL)의 용액을 빙욕 중에서 냉각시킨다. 여기에 무수 톨루엔(3.7mL) 중의 단계 D로부터의 화합물(500mg, 0.8mmol)의 용액을 가한다. 수득한 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반한다. 이를 냉각시키고, 수성 NH₄C1 용액으로 처리하고, 에테르(CH₂C1₂10mL를 함유한 50mL)로 추출한다. 유기 층을 분리시키고, 염수(2×30mL)와 물(2×25mL)로 세척하고, 무수 Na₂S0₄로 건조시키고, 오일로 농축시키고, CH₂Cl₂중의 4% MeOH를 사용하여 실리카 겔에서 섬광 크로마토그래피로 정제하여, 2-C-α-메틸 화합물(149mg) 및 2-C-β-메틸 화합물(34mg)을 수득한다. 이를 유도체를 80% 아세트산으로 각각 처리하고, 반응 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반한다. 아세트산을 에탄올 및 톨루엔으로 반복하여 증발시켜 제거한다. 잔사를 클로로포름과 물 사이에 분배시킨다. 수성 층을 클로로포름으로 세척하고, 농축시킨다.CH₂C1₂중의 5 내지 10% MeOH를 용출제로서 사용하여, 증발된 잔사를 실리카 겔로 정제하여, 목적한 화합물을 백색 고체로서 수득한다.

4-아미노-7-(3-데옥시-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(9.0mg):

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 0.74 (s, 3H, CH₃), 1.77 (dd, 1H, H-3'), 2.08 (t, 1H, H-3"), 3.59 (m, 1H, H-5'), 3.73 (m, 1H, H-5"), 4.15 (m, 1H, H-4'), 5.02 (t, 1H, OH-5'), 5.33 (s, 1H, OH-2'), 6.00 (s, 1H, H-1'), 6.54 (d, 1H, H-7), 6.95 (br s, 2H, NH₂), 7.47 (d, 1H, H-8), 8.00 (s, 1H, H-2); ES-MS: 263.1 [M-H].

4-아미노-7-(3-데옥시-2-C-메틸-β-D-아라비노푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(15mg):

¹H NMR(DMSO-d₆): δ 1.23 (s, 3H, CH₃), 2.08 (ddd, 2H, H-3' 및 3"), 3.57 (m, 2H, H-5' 및 5"), 4.06 (m, 1H, H-4), 5.10 (s, 1H, OH-2'), 5.24 (t, 1H, OH-5'), 6.01 (s, 1H, H-1'), 6.49 (d, 1H, H-7), 6.89 (br s, 2H, NH₂), 7.35 (d, 1H, H-8), 8.01 (s, 1H, H-2).

ES-MS: 265.2 [M+H].

실시예 28

4-아미노-7-(2,4-C-디메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A: 5-데옥시-1,2-O-이소프로필리덴-D-크실로푸라노즈

1,2-O-이소프로필리덴-D-크실로푸라노즈(38.4g, 0.2mol), 4-디메틸아미노피리딘(5g) 및 트리에틸아민(55.7mL, 0.4mol)을 디클로로메탄(300mL) 중에 용해시킨다. p-톨루엔설포닐 클로라이드(38.13g, 0.2mol)를 가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨(500mL) 주에 붓고, 2개의 층을 분리시킨다. 유기 층을 수성 시트르산 용액(20%, 200mL)으로 세척하고, 건조(Na₂S0₄)시키고 증발시켜 고체(70.0g)를 수득한다. 고체를 무수 THF(300mL) 중에 용해시키고, LiAlH₄(16.0g, 0.42mol)를 30분 동안 나누어서 가한다. 혼합물을 실온에서 15 동안 교반한다. 에틸 아세테이트(100mL)를 30분 동안 적가하고, 혼합물을 실리카 겔 베드를 통해 여과시킨다. 여액을 농축시키고, 수득한 오일을 실리카 겔(EtOAc/헥산 1/4)으로 크로마토그래피하여, 생성물을 고체(32.5g)로서 수득한다.

단계 B: 3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-1-0-메틸-4-메틸-α-D-리보푸라노즈

세로뮴 옥사이드(50g, 0.5mol), 무수 아세트산(50mL, 0.53mol) 및 피리딘(100mL, 1.24mol)을 빙수 욕 중의 디클로로메탄(1L)에 가하고, 당해 혼합물을 15분 동안 교반한다. 디클로로메탄(200mL) 중의 5-데옥시-1,2-O-이소프로필리덴-D-크실로푸라노즈(32g, 0.18mol)를 가하고, 당해 혼합물을 동일 온도에서 30분 동안 교반한다. 반으액을 에틸 아세테이트(1L)로 희석시키고, 실리카 겔 베드를 통해 여과한다. 여액을 농축시켜 황색 오일을 수득한다. 오일을 1,4-디옥산(1L) 및 포름알데히드(37%, 200mL) 중에 용해시킨다. 당해 용액을 0℃로 냉각시키고, 고체 KOH(50g)를 가한다. 당해 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 에틸 아세테이트(6×200mL)로 추출한다. 농축시킨 후, 잔사를 실리카 겔(EtOAc)로 크로마토그래피하여 생성물을 오일(1.5g)로서 수득한다. 오일을 1-메틸-2-피롤리돈(20mL) 중에 용해시키고, 2,4-디클로로페닐메틸 클로라이드(4g, 20.5mmol) 및 NaH(60%, 0.8g)를 가한다. 당해 혼합물을 밤새 교반하고, 톨루엔(100mL)으로 희석시킨다. 이어서, 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨(3×50mL)으로 세척하고, 건조(Na₂S0₄)시키고, 증발시킨다. 잔사를 메탄올(50mL) 중에 용해시키고, 디옥산(4M, 2mL) 중의 HC1을 가한다. 용액을 밤새 교반하고, 증발시킨다. 잔사를 실리카 겔(EtOAc/헥산: 1/4)으로 크로마토그래피하여, 목적한 생성물을 오일(2.01g)로서 수득한다.

단계 C: 3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-2,4-디-C-메틸-1-O-메틸-α-D-리보푸라노즈

디클로로메탄(30mL) 중의 단계 B로부터의 생성물(2.0g, 4.0mmol) 및 데스-마틴 페리오디난(2.0g)을 실온에서 밤새 교반한 다음, 감압하에 농축시킨다. 잔사를 에테르(50mL)와 함께 분쇄시키고 여과한다. 여액을 포화 중탄산나트륨 수용액(50mL) 중의 Na₂S₂0₃.5H₂0(2.5g) 용액으로 세척하고, 건조(MgS0₄)시키고, 여과 및 증발시킨다. 잔사를 무수 Et₂0(20mL) 중에 용해시키고, -78℃에서 Et₂0(3M, 10mL) 용액에 적가한다. 반응 혼합물을 -30℃로 가온하고, -30 내지 -15℃에서 15시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 염화암모늄(50mL) 중에 붓는다. 2개의 층을 분리시키고, 유기 층을 건조(MgS0₄)시키고, 여과 및 증발시킨다. 잔사를 실리카 겔(EtOAc/헥산 1/9)으로 크로마토그래피하여 표제 화합물을 시럽(1.40g)으로서 수득한다.

단계 D: 4-클로로-7-[3,5-비스-O-(2,4-디클로로페닐메틸)-2,4-디-C-메틸-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

실시예 C로부터의 화합물(0.70g, 1.3mmol)에 HBr(아세트산 중의 5.7M, 2mL)을 가한다. 수득한 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 진공하에 증발시키고, 무수 톨루엔(3×10mL)으로 증발시킨다. 4-클로로-lH-피롤로[2,3-d]피리미딘(0.5g, 3.3mmol) 및 분말화 KOH(85%, 150mg, 2.3mmol)를 1-메틸-2-피롤리돈(5mL) 중에서 30분 동안 교반하고, 혼합물을 톨루엔(10mL)과 함께 증발시킨다. 수득한 용액을상기 브로모 슈가 잔기 중에 붓고, 혼합물을 밤새 교반시킨다. 당해 혼합물을 톨루엔(50mL)으로 희석시키고, 물(3×50mL)로 세척하고, 감압하에 농축시킨다. EtOAc/헥산(15/85)으로 용출시키면서 잔사를 실리카 겔로 크로마토그래피하여 고체(270mg)를 수득한다.

단계 E: 4-아미노-7-(2,4-C-디메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 D로부터의 화합물(270mg)을 디옥산(2mL) 중에 용해시키고, 액체 암모니아(20g)를 스테인레스 강 오토클레이브 속에 가한다. 당해 혼합물을 100℃에서 15 동안 가열한 다음, 냉각시키고 증발시킨다. 잔사를 실리카 겔(EtOAc)로 크로마토그래피하여 고체(200mg)를 수득한다. 메탄올(20mL) 중의 고체(150mg) 및 Pd/C(10% 150mg)를 H₂(30psi)하에 3시간 동안 진탕시키고, 여과 및 증발시킨다. 잔사를 실리카 겔(MeOH/CH₂Cl₂: 1/9)로 크로마토그래피하여, 목적한 생성물을 고체(35mg)로서 수득한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 0.65 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 3.43 (m, 2H), 4.06 (d, 1H, J 6.3Hz), 4.87 (s, 1H), 5.26 (br, 1H), 5.08 (d, 1H, J 6.3Hz), 5.25 (t, 1H, J 3.0Hz), 6.17 (s, 1H), 6.54 (d, 1H, J 3.5Hz), 6.97 (s, br, 2H), 7.54 (d, 1H, J 3.4Hz), 8.02 (s, 1H).

¹³C NMR (DMSO-d₆): δ 18.19, 21.32, 65.38, 73.00, 79.33, 84.80, 90.66, 99.09,102.41, 121.90, 149.58, 151.48, 157.38.

LC-MS: 실측치: 295.1 (M+H⁺); C₁₃H₁₈N₄O₄+H⁺에 대한 산출치: 295.1.

실시예 29

4-아미노-7-(3-데옥시-3-플루오로-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A: 3-데옥시-3-플루오로-1-O-메틸-5-O-톨루오일-α-D-리보프라노즈

피리딘(50mL) 중의 1,2-O-이소프로필리덴-D-크실로푸라노즈(9.0g, 50mmol) 및 p-톨루오일 클로라이드(7.0mL, 50mmol)를 30분 동안 교반한다. 물(10mL)을 가하고, 혼합물을 감압하에 농축시킨다. 잔사를 톨루엔(500mL) 중에 용해시키고, 용액을 물(200mL) 및 포화 수성 중탄산나트륨(200mL)으로 세척한다. 2개의 층을 분리시키고, 유기 층을 증발시킨다. 잔사를 메탄올(100mL) 중에 용해시키고, 디옥산 중의 HCl(4M, 10mL)을 가한다. 당해 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 감압하에 증발시킨다. 수득한 오일을 실리카 겔(EtOAc/헥산: 1/1)으로 크로마토그래피하여 오일(10.1g)을 수득한다. 오일을 디클로로메탄(100mL) 중에 용해시키고, 디에틸아미노설퍼 트리플루오라이드(DAST)(5.7mL)를 가한다. 혼합물을 밤새 교반한 다음, 포화 중탄산나트륨 수용액(100mL) 중에 붓는다. 당해 혼합물을 톨루엔(2×50mL)으로 추출하고, 합쳐진 유기 층을 농축시킨다. 잔사를 실리카 겔(EtOAc/헥산: 15/85)으로 크로마토그래피하여 표제 화합물을 오일(1.50g)로서 수득한다.

단계 B: 3-데옥시-3-플루오로-2-C-메틸-1-O-메틸-5-O-톨루오일-α-D-리보푸라노즈

디클로로메탄(20mL) 중의 단계 A로부터의 생성물(1.0g, 3.5mmol) 및 데스-마틴 페리오디난(2.5g)을 실온에서 밤새 교반한 다음, 감압하에 농축시킨다. 잔사를 디에틸 에테르(50mL)와 함께 분쇄시키고, 여과시킨다. 여액을 포화 수성 중탄산나트륨(100mL) 중의 Na₂S₂0₃.5H₂0(12.5g) 용액으로 세척하고, 건조(MgS0₄)시키고, 여과 및 증발시킨다. 잔사를 무수 THF(50mL) 중에 용해시킨다. 에틸 에테르(3M, 10mL) 중의 TiCl₄(3mL) 및 메틸 마그네슘 브로마이드를 -78℃에서 가하고, 혼합물을 -50 내지 -30℃에서 2시간 동안 교반한다. 혼합물을 포화 중탄산나트륨 수용액(100mL) 중에 붓고, 셀라이트를 통해 여과시킨다. 여액을 톨루엔(100mL)으로 추출하고, 증발시킨다. 잔사를 실리카 겔(EtOAc/헥산: 15/85)으로 크로마토그래피하여 표제 화합물을 오일(150mg)로서 수득한다.

단계 C: 4-아미노-7-(3-데옥시-3-플루오로-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 B로부터의 생성물(150mg, 0.5mmol)을 아세트산(2mL) 중의 HBr(30%) 중에 용해시킨다. 1시간 후, 혼합물을 감압하에 증발시키고, 톨루엔(10mL)과 함께 증발시킨다. 4-클로로-lH-피롤로[2,3-d]피리미딘(0.5g, 3.3mmol) 및 분말화 KOH(85%, 150mg, 2.3mmol)를 DMF(3mL) 중에서 30분 동안 교반하고, 혼합물을 톨루엔(2mL)과 함께 증발시킨다. 수득한 용액을 상기 브로모 슈가에 붓고, 혼합물을 밤새 교반한다. 혼합물을 톨루엔(50mL)으로 희석시키고, 물(3×50mL)로 세척하고, 감압하에 농축시킨다. 잔사를 실리카 겔(EtOAc/헥산: 15/85)으로 크로마토그래피하여 오일(60mg)을 수득한다. 오일을 디옥산(2mL) 중에 용해시키고, 액체 암모니아(20g)를 스테인레스 강 오토클레이브 속에 가한다. 혼합물을 85℃에서 18시간 동안 가열시킨 다음, 냉각 및 증발시킨다. 잔사를 실리카 겔(메탄올/디클로로메탄: 1/9)로 크로마토그래피하여 표제 화합물을 고체(29mg)로서 수득한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): β 0.81 (s, 3H), 3.75 (m, 2H), 4.16 (m, 1H), 5.09 (dd, 1H, J 53.2, 7.8Hz), 5. 26 (br, 1H), 5.77 (s, 1H), 6.15 (d, 1H, J 2.9Hz), 6.59 (d, 1H, J 3.4Hz), 7.02 (s br, 2H), 7.39 (d, 1H, J 3.4Hz), 8.06 (s, 1H).

¹³C NMR (DMSO-d₆): δ 19.40, 59.56, 77.24, 79.29, 90.15, 91.92, 99.88, 102.39, 121.17, 149.80, 151.77, 157.47.

¹⁹F NMR (DMSO-d₆): δ 14.66 (m).

ES-MS: 실측치: 283.1 (M+H⁺); C₁₂H₁₅FN₄0₃+H⁺에 대한 계산치: 283.1.

실시예 30

4-아미노-7-(2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A: 4-클로로-7-[3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

THF(8mL) 중의 실시예 2, 단계 D(618mg, 1.0mmol)로부터의 화합물의 예비 냉각(0℃)된 용액에 메틸 요오다이드(709mg, 5.0mmol) 및 NaH(광유 중의 60%)(44mg, 1.1mmol)를 가한다. 수득한 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 포화 수성 염화암모늄(50mL)과 디클로로메탄(50mL)과의 교반된 혼합물 속에 붓는다. 유기 층을 물(50mL)로 세척하고, 건조(MgSO₄)시키고, 진공하에 증발시킨다. 에틸 아세테이트/헥산을 용출제로서 사용하여, 수득한 조 생성물을 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물(735mg)을 무색 발포체로서 수득한다.

단계 B: 4-아미노-7-[3,5-비스-0-(2,4-디클로로페닐메틸)-2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A로부터의 화합물(735mg, 1.16mmol)에 메탄올성 암모니아(0℃에서 포화됨)(20mL)를 가한다. 당해 혼합물을 80℃, 스테인레스 강 오토클레이브 중에서 밤새 가열한 다음, 냉각시키고, 내용물을 진공하에 증발시킨다. 에틸 아세테이트/헥산을 용출제로서 사용하여 조 혼합물을 실리카 겔로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물(504mg)을 무색 발포체로서 수득한다.

단계 C: 4-아미노-7-(2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 C로부터의 생성물(64mg, 0.1mmol), MeOH(5mL), Et₃N(0.2mL) 및 10% Pd/C(61mg)와의 혼합물을 실온 및 50psi에서 파르 수소화기로 밤새 수소화시킨다. 당해 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고, 진공하에 증발시키고, 디클로로메탄 중의 2% 메탄올을 용출제로서 사용하여 실리카 겔 패드를 통해 여과시킨다. 목적한 생성물을 회수하고, 진공하에 증발시킨다. 당해 화합물을 메탄올(10mL) 중에 다시 용해시키고, 10% Pd/C(61mg)를 가한다. 당해 혼합물을 실온 및 55psi에서 2주일 동안 파르 수소화기로 수소화시킨다. 당해 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고, 진공하에 증발시키고, 디클로로메탄 중의 10% 메탄올을 용출제로서 사용하여시리카 겔로 정제한다. 당해 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물(110mg)을 무색 발포체로서 수득한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 0.68 (s, 3H,), 3.40 (s, 3H), 3.52-3.99 (겹치는 m, 4H), 4.92 (d, 1H), 5.07 (t, 1H), 6.26 (s, 1H), 6.55 (d, 1H), 7.00 (s br, 2H), 7.46 (d, 1H), 8.05 (s, 1H).

LC-MS: 실측치: 293.1 (M-H⁺); C₁₂H₁₆N₄0₄-H⁺에 대한 산출치: 293.12.

실시예 31

4-메틸아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

실시예 2, 단계 E로부터의 화합물(200mg, 0.67mmol)을 메틸아민(소형 스테인레스 강 오토클레이브 중에 응축된 5mL)에 가하고, 85℃에서 48시간 동안 가온시킨 다음, 냉각시키고, 진공하에 증발시킨다. 에탄올을 용출제로서 사용하여 조 혼합물을 실리카 겔로 정제하여 표제 화합물을 수득하고, 이를 MeCN으로 처리한 후에 무정형 고체로서 분리시킨다. 무정형 고체를 물 속에 용해시키고, 동결 건조시켜 무색 분말(144mg)을 수득한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 0.63 (s, 3H, CH3), 3.32 (s, 3H, N CH₃), 3.58-3.67 (m, 1H, H-5'), 3.79-3.39 (m, 3H, H-5", H-4', H-3'), 5.03 (s, 1H, 2'-OH), 5.04-5.11 (1H, 3'-OH, 1H, 5'-OH), 6.14 (s, 1H, H-1'), 6.58 (d, 1H, J_5,6= 3.6Hz, H-5), 7.46 (d, 1H, H-6), 7.70 (br s, 1H, NH), 8.14 (s, 1H, H-2).

LC-MS: 실측치: 295.1 (M-H⁺); C₁₃H₁₈N₄0₄+H+에 대한 산출치: 294.3.

실시예 32

4-디메틸아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

실시예 2, 단계 E로부터의 화합물(200mg, 0.67mmol)을 디메틸아민(소형 스테인레스 강 오토클레이브 중에 응축된 5mL)에 가하고, 85℃에서 48시간 동안 가온시킨 다음, 냉각시키고, 진공하에 증발시킨다. 에탄올을 용출제로서 사용하여 조 혼합물을 실리카 겔로 정제하여 표제 화합물을 수득하고, 이를 MeCN으로 처리한 후에 무정형 고체로서 분리시킨다. 무정형 고체를 물 속에 용해시키고, 동결 건조시켜 무색 분말(164mg)을 수득한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 0.64 (s, 3H, CH₃), 3.29 (s, 3H, N CH₃), 3.32 (s, 3H, N CH₃), 3.60-3.66 (m, 1H, H-5'), 3.77-3.97 (m, 3H, H-5", H-4', H-3'), 5.04 (s, 1H, 2'-OH), 5.06-5.11 (1H, 3'-OH, 1H, 5'-OH), 6.21 (s, 1H, H-1'), 6.69 (d, 1H, J_5,6= 3.6Hz, H-5), 7.55 (d, 1H, H-6), 8.13 (s, 1H, H-2).

LC-MS: 실측치: 309.3 (M-H⁺); C₁₄H₂₀N₄0₄+H⁺에 대한 산출치: 308.33.

실시예 33

4-사이클로프로필아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

실시예 2, 단계 E로부터의 화합물(200mg, 0.67mmol)을 사이클로프로필아민(소형 스테인레스 강 오토클레이브 중에 응축된 5mL)에 가하고, 85℃에서 48시간 동안 가온시킨 다음, 냉각시키고, 진공하에 증발시킨다. 에탄올을 용출제로서 사용하여 조 혼합물을 실리카 겔로 정제하여 표제 화합물을 수득하고, 이를 MeCN으로 처리한 후에 무정형 고체로서 분리시킨다. 무정형 고체를 물 속에 용해시키고, 동결 건조시켜 무색 분말(148mg)을 수득한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 0.51-0.58 (m, 2H), 0.64 (s, 3H, CH₃), 0.74-0.076 (m, 2H), 3.62-3.67 (m, 1H, H-5'), 3.79-3.82 (m, 3H, H-5"), 3.92-3.96 (m, H-4', H-3'), 5.03 (s, 1H, 2'-OH), 5.05-5.10 (1H, 3'-OH, 1H, 5'-OH), 6.15 (s, 1H, H-1'), 7.48 (d, 1H, J_5,6= 3.6Hz, H-5), 7.59 (d, 1H, H-6), 8.13 (s, 1H, H-2).

LC-MS: 실측치: 321.1 (M-H⁺); C₁₅H₂₀N₄0₄+H⁺에 대한 산출치: 320.3.

실시예 34

4-아미노-7-(3-C-메틸-β-D-크실로푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A: 7-[2,5-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴)-ß-D-리보푸라노실)]-4-[(4-메톡시페닐)디페닐메틸]아미노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 및 7-[3,5-비스-O-(3급-부틸디메틸-β-D-리보푸라노실]-4-[(4-메톡시페닐)디페닐메틸]아미노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

무수 피리딘(6mL) 중의 실시예 26, 단계 A로부터의 화합물과 실시예 27, 단계 A로부터의 화합물과의 혼합물(0.32g, 0.65mmol)의 용액에 모노메톡시트리틸 클로라이드(0.30g, 0.98mmol)를 가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한다. 이어서, 혼합물을 농축시키고, 잔사를 CH₂C1₂(70mL)와 물(20mL) 사이에 분배한다. 유기 층을 물과 염수로 세척하고, 건조(Na₂S0₄)시키고 농축시킨다. 헥산 중의 5 내지 13% EtOAc를 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔 칼럼으로 정제한다. 적합한 분액을 모으고 농축시켜, 2',5'-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴) 보호 뉴클레오시드 및 3',5'-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴) 보호 뉴클레오시드를 무색 발포체(각각 343mg 및 84mg)로서 수득한다.

단계 B: 7-[2,5-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴)-β-D-에리트로-펜토푸라노즈-3-우로실]-4-[(4-메톡시페닐)디페닐메틸]아미노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

CH₂C1₂(4mL) 중의 삼산화크롬(91mg, 0.91mmol)의 충분히 교반된 현탁액에 피리딘(147㎕, 1.82mmol)을 가한 다음, 무수 아세트산(86㎕, 0.91mmol)을 가한다. 당해 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반한다. 이어서, CH₂Cl₂(2.5mL) 중의 단계 A로부터의 2',5'-비스-O-비스-(3급-부틸디메틸실릴) 보호 뉴클레오시드(343mg, 0.45mmol)를 가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한다. 이어서, 혼합물을 빙냉 EtOAc(10mL) 속에 붓고, EtOAc를 용출제로서 사용하여 단형 실리카 겔 칼럼을 통해 여과시킨다. 여액을 증발시키고, 헥산 및 헥산/EtOAc(7/1)을 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔 칼럼으로 정제하여 표제 화합물(180mg)을 수득한다.

단계 C: 7-[2,5-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴)-3-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-4-[(4-메톡시페닐)디페닐메틸]아미노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 및 7-[2,5-비스-O-(3급-부틸디메틸실릴)-3-C-메틸-β-D-크실로푸라노실)-4-[(4-메톡시페닐)디페닐메틸]아미노-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

실온에서 무수 헥산(1.5mL) 중의 MeMgBr(에테르 중의 3.0M 용액; 0.17mL, 0.5mmol) 혼합물에 무수 헥산(0.5mL) 중의 단계 B로부터의 화합물(78mg, 0.1mmol)의 용액을 적가한다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 빙냉수(10mL)에 붓고, EtOAc(20mL)로 희석시킨 다음, 셀라이트로 여과시킨 후에 EtOAc로 완전히 세척한다. 층을 분리시키고, 유기 층을 염수고 세척하고, 건조(Na₂SO₄)시키고 농축시킨다. 헥산 중의 8 내지 25% EtOAc를 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔 칼럼으로 정제하여 3-C-메틸 크실로 이성체(60mg)와 3-C-메틸 리보 이성체(20mg)를 수득한다.

단계 D: 4-아미노-7-(3-C-메틸-β-D-크실로푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

THF(2mL) 중의 단계 C로부터의 3-C-메틸-크실로 이성체(60mg, 0.08mmol)의 빙냉 용액에 TBAF(THF 중의 1M; 0.32mL, 0.32mmol)를 가한다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, CH₂C1₂(50mL)로 희석시키고, 물(3×15mL)로 세척하고, 건조 및 증발시킨다. 잔사를 디옥산(0.3mL) 중에 용해시키고, 80% 아세트산(3mL)을 가한다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 증발시킨다. 잔사를 디옥산과 함께 증발시키고, 물(50mL) 속에 용해시키고, CH₂C1₂(2×10mL)로 세척한다. 수성 층을 농축시킨 다음, 동결 건조시킨다. CH₂Cl₂/MeOH(20/1 및 10/1)를 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔 칼럼으로 정제하여 동결 건조시킨 후에 표제 화합물을 푹식한 백색 화합물(10mg)로서 수득한다.

¹H NMR (CD₃CN): δ 1.28 (s, 3H, CH₃), 3.56 (br s, 1H, OH), 3.78 (m, 3H, H-4', H-5', H-5"), 4.10 (br s, 1H, OH), 4.44 (d, 1H, J_2'1'= 3.9Hz, H-2'), 5.58 (d, 1H, H-l'), 5.85 (br s, 2H, NH₂), 6.15 (br s, 1H, OH), 6.48 (d, 1H, J_5,6= 3.7Hz, H-5), 7.23 (d, 1H, H-6), 8.11 (s, 1H, H-2). ES-MS: 281 [MH]⁺.

실시예 35

4-아미노-7-(3-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

실시예 32, 단계 C로부터의 리보 이성체(20mg)를 실시예 32, 단계 D에 기재된 공정에 따라 검출하여 표제 화합물(4mg)을 수득한다.

¹H NMR (CD₃CN): δ 1.43 (s, 3H, CH₃), 3.28 (br s, 1H, OH), 3.58 (m, 2H, H-5', H-5"), 3.99 (m, 1H, H-4'), 4.10 (br s, 1H, OH), 4.62 (d, 1H, J_2'1'= 8.1Hz, H-2'), 5.69 (d, 1H, H-1'), 5.88 (br s, 3H, OH, NH₂), 6.45 (br s, 1H, OH), 6.51 (d, 1H, J_5,6= 3.7Hz, H-5), 7.19 (d, 1H, H-6), 8.12 (s, 1H, H-2). ES-MS: 281 [MH]⁺.

실시예 36

2,4-디아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

수성 암모니아(30%, 10mL) 중의 실시예 4, 단계 B로부터의 생성물(24mg)의 혼합물을 100℃에서 스테인레스 강 오토클레이브로 밤새 가열시킨 다음, 냉각시키고 증발시킨다. CH₂Cl₂/MeOH(10/1 및 5/1)를 용출제로서 사용하여 표제 화합물(15mg)을 수득한다.

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 0.68 (s, 3H, CH₃), 3.48-3.58 (m 1H, H-5'), 3.68-3.73 (m,2H, H-5", H-4'), 3.84 (m, 1H, H-3'), 4.72 (s, 1H, 2'-OH), 4.97-5.03 (m, 2H, 3'-OH, 5'-OH), 5.45 (br s, 2H, NH₂), 6.00 (s, 1H, H-1'), 6.28 (d, 1H, J = 3.7Hz, H-5), 6.44 (br s, 2H, NH₂), 6.92 (d, 1H, J = 3.7Hz, H-6).

ES MS: 294.1 (M-H⁺).

실시예 37

4-아미노-2-플루오로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

-30℃에서 피리딘(1mL)으로 희석시킨 HF/피리딘(70%, 2mL)의 용액에 피리딘 0.5mL 중의 실시예 36의 화합물(60mg, 0.2mmol)을 가한 다음, 3급-부틸 니트라이트(36㎕, 0.3mmol)를 가한다. -25℃에서 5분 동안 계속 교반한다. 이어서, 당해 용액을 빙수(5mL) 속에 붓고, 2N 수성 NaOH로 중화시키고, 증발 건조시킨다. CH₂Cl₂/MeOH(20/1 및 10/1)를 용출제로서 사용하여 잔사를 실리카 겔 칼럼으로 정제하여 표제 화합물을 수득한다.

실시예 38

4-아미노-5-플루오로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

단계 A: 4-아세틸아미노-7-(2,3,5-트리-O-아세틸-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

피리딘 중의 실시예 2, 단계 F로부터의 화합물(280mg, 1.00mmol)의 용액에 무수 아세트산(613mg, 6.0mmol)을 가한다. 수득한 용액을 주위 온도에서 밤새 교반하고 진공하에 증발시키고, 에틸 아세테이트/헥산을 용출제로서 사용하여, 수득한 조 혼합물을 실리카 겔로 정제한다. 목적한 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시켜 목적한 생성물을 수득한다.

단계 B: 4-아세틸아미노-5-브로모-7-(2,3,5-트리-O-아세틸-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

DMF 중의 단계 A로부터의 화합물(460mg, 1.00mmol)의 예비 냉각(0℃)된 용액에 DMF 중의 N-브로모숙신이미드(178mg, 1.0mmol)를 가한다. 수득한 용액을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 실온에서 30분 동안 추가로 교반한다. 메탄올을 가하여 반응액을 급냉시키고 진공하에 증발시킨다. 에틸 아세테이트/헥산을 용출제로서 사용하여, 수득한 조 혼합물을 실리카 겔로 정제한다. 목적한 생성물을 함유한분액을 모으고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물을 수득한다.

단계 C: 4-아미노-5-플루오로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘

THF 중의 단계 B로부터의 화합물(529mg, 1.00mmol)의 예비 냉각(-78℃)된 용액에 부틸 리튬(헥산 중의 2M)(0.5mL, 1.00mmol)을 가한다. 수득한 용액을 -78℃에서 30분 동안 교반한 다음, THF 중의 N-플루오로벤젠설폰이미드(315mg, 1.00mmol)로 급냉시킨다. 수득한 용액을 매우 서서히 주위 온도로 되게 한 다음, 포화 수성 염화암모니아와 디클로로메탄와의 교반된 혼합물에 붓는다. 유기 상을 진공하에 증발시키고, 밀폐된 용기 중, 55℃에서 밤새 수산화암모늄으로 처리한다. 디클로로메탄/메탄올을 용출제로서 사용하여, 수득한 조 혼합물을 실리카 겔로 정제한다. 목적한 생성물을 함유한 분액을 모으고 진공하에 증발시켜, 목적한 생성물을 수득한다.

생물학적 분석

HCV NS5B 폴리머라제 억제 및 HCV 복제를 측정하는 데 사용되는 분석을 다음에 기재하였다.

HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제(RdRp)의 억제제로서의 본 발명 화합물의 효능을 다음 분석법으로 측정하였다.

A. HCV NS5B 폴리머라제 억제를 위한 분석:

당해 분석법을 사용하여, 이형 RNA 주형에 대한 C형 간염 바이러스(HCV)의 RNA 의존성 폴리머라제(NS5B)의 효소 활성을 억제할 수 있는 본 발명의 뉴클레오시드 유도체의 능력을 측정한다.

공정:

분석 완충제 조건: (50㎕-총/반응)

20mM 트리스, pH 7.5

50μM EDTA

5mM DTT

2mM MgCl₂

80mM KCl

0.4U/㎕ RNAsin[공급원: 프로메가(Promega), 스톡은 40유닛/㎕임]

0.75㎍ t500(C형 간염 게놈의 NS2/3 영역으로부터의 서열을 사용하여 T7 런오프 전사를 사용하여 제조된 500-nt RNA)

1.6㎍ 정제된 C형 간염 NS5B(C 말단 종결된 21개의 아미노산을 지닌 형태)

1μM A,C,U,GTP(뉴클레오시드 트리포스페이트 혼합체)

[알파-³²P]-GTP 또는 [알파-³³P]-GTP

당해 화합물을 100μM 최종 농도 이하의 각종 농도에서 시험한다.

효소 및 주형 t500을 포함하는, 적합한 용적의 반응 완충제를 제조한다. 본 발명의 뉴클레오시드 유도체를 96웰 플레이트의 웰 속에 붓는다. 방사선 표지된 GTP를 포함하는 뉴클레오시드 트리포스페이트(NTP)의 혼합물을 제조하고, 96웰 플레이트의 웰 속에 붓는다. 효소-주형 반응액을 가하여 반응을 개시하고, 실온에서 1 내지 2시간 동안 진행시킨다.

0.5M EDTA(pH 8.0) 20㎕를 가하여, 반응을 급냉시킨다. 반응 완충액을 가하기 전에 급냉액이 NTP에 첨가된 블랭크 반응이 포함된다.

급냉된 반응액 50㎕를 DE81 필터 디스크[공급원: 왓트만(Whatman)] 위에 스폿팅시키고, 30분 동안 건조시킨다. 필터를 0.3M 암모늄 포르메이트(pH 8)(세척액 1mL에서의 cpm이 100 미만일 때까지 1회 세척당 150mL, 통상 6회 세척)로 세척한다. 필터를 신틸레이션 카운터로 5mL 신틸레이션 유체 중에서 카운팅한다.

억제율을 다음 수학식에 따라 산출한다: 억제율(%) = [1-(시험 반응액에서의 cpm - 블랭크에서의 cpm) / (대조 반응액에서의 cpm - 블랭크에서의 cpm)]×100.

HCV NS5B 폴리머라제 분석에서 시험된 대표적인 화합물의 IC₅₀은 100μM 미만이다.

B. HCV RNA 복제 억제에 대한 분석:

또한, 본 발명의 화합물을 서브게놈성 HCV 레플리콘을 함유한 배양된 헵파토마(HuH-7)에서의 C형 간염 바이러스 RNA의 복제에 미칠 수 있는 본 발명 화합물의능력에 대해 평가한다. 당해 분석에 대한 세부사항은 다음에 기재되어 있따. 당해 레플리콘 분석은 문헌[참조: V. Lohmann, F. Korner, J-O. Koch, U. Herian, L. Theilmann, and R. Bartenschlager, "Replication of a Sub-genomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line", Science 285: 110 (1999)]에 기재되어 있는 분석의 변형이다.

프로토콜:

당해 분석은 동일 반응계내에서의 리보뉴클레아제 보호, 신틸레이션 프록시미티 기본의 플레이트 분석(SPA)이다. 10,000 내지 40,000개의 셀을, 96웰 사이토스타 플레이트[공급원: 아머샴(Amersham)] 중 G418 0.8mg/mL을 함유하는 매체 100 내지 200㎕에 플레이팅한다. 화합물을 0 내지 18시간 이내에 1% DMSO 중, 100μM 이하의 각종 농도로 셀에 가한 다음, 24 내지 96시간 동안 배양한다. 셀을 고정(20분, 10% 포르말린)시키고, 투과(20분, 0.25% 트리톤 X-100/PBS)시키고, RNA 바이러스 게놈에 함유되어 있는 (+)나선 NS5B(또는 다른 유전자)에 상보적인 일본쇄³³P RNA 프로브로 하이브리드시킨다(밤새, 50℃). 셀을 세척하고, RNAse로 처리하고, 세척하고, 65℃로 가열시키고, 탑 카운트(Top-Count)로 카운팅한다. 복제 억제를 1분당 카운트 감소율(cpm)로서 판독한다.

서브게놈 레플리콘을 함유하도록 선택된 휴먼 HuH-7 헵파토마 셀은 HCV 5' 비전사 영역(NTR), 네오마이신 선택성 마커, EMCV IRES(초기 리보좀 진입 부위) 및HCV 비구조적 단백질 NS3에서 NS5B, 이어서 3' NTR로 이루어진 사이토플라즈마 RNA를 함유한다.

복제 분석에서 시험된 대표적인 화합물의 EC₅₀은 100μM 미만이다.

또한, 본 발명의 뉴클레오시드 유도체를 다음에 기재되어 있는 카운터스크린에서의 세포 독성 및 항바이러스 특이성에 대해 평가한다.

C. 카운터스크린:

휴먼 DNA 폴리머라제를 억제할 수 있는 본 발명의 뉴클레오시드 유도체의 능력을 다음 분석법으로 측정한다.

a. 휴먼 DNA 폴리머라제 알파 및 베타의 억제:

반응 조건:

50㎕ 반응 용적

반응 완충제 성분:

20mM 트리스-HCl, pH 7.5

200㎍/mL 소 혈정 알부민

100mM KC1

2mM β-머캅토에탄올

10mM MgC1₂

1.6μM dA, dG, dC, dTTP

α-³³P-dATP

효소 및 주형:

0.05mg/mL 공극이 생긴 어류 정자 DNA 주형

0.01U/㎕ DNA 폴리머라제 α 또는 β

공극이 생긴 어류 정자 DNA 주형의 제조:

500㎕ 활성화 어류 정자 DNA(USB 70076)에 1M MgCl₂5㎕를 가한다;

37℃로 가온시키고, 엑소뉴클레아제 III[지브코비알엘(GibcoBRL) 18013-011] 65U/㎕ 중 30㎕를 가한다;

37℃에서 5분 동안 항온처리한다;

65℃로 10분 동안 가열하여 반응을 종결시킨다;

20mM 트리스-HCl(pH 7.5)으로 평형화시킨 분취액 50 내지 100㎕를 바이오-스핀 6 크로마토그래피 칼럼[바이오-래드(Bio-Rad) 732-6002] 위에 부하한다;

1,000Xg에서 4분 동안 원심분리시켜 용출시킨다;

용출물을 모으고 260nm에서의 흡광도를 측정하여 농도를 측정한다.

DNA 주형을 적합한 용적의 20mM 트리스-HCl(pH 7.5)로 희석시키고, 2mM β-머캅토에탄올 및 100mM KCl을 함유하는 적합한 용적의 20mM 트리스-HCl로 희석시킨다. 주형 및 효소를 미세원심분리 튜브 또는 96웰 플레이트 위에 피펫팅한다. 또한, 효소 희석 완충제 및 시험 화합물 용매를 각각 사용하여, 효소를 제외시킨 블랭크 반응액 및 시험 화합물을 제외시킨 대조 반응액을 제조한다. 상기 성분과 함께 반응 완충제를 사용하여 반응을 개시한다. 반응액을 37℃에서 1시간 동안 항온처리한다. 0.5M EDTA 20㎕를 가하여 반응을 급냉시킨다. 급냉시킨 반응액 50㎕를 왓트만 DE81 필터 디스크 위에 스폿팅하고 공기 건조시킨다. 세척액 1mL가 100cpm 미만일 때까지 필터 디스크를 0.3M 암모늄 포르메이트(pH 8)로 반복하여 세척한다. 당해 디스크를 무수 에탄올 150mL로 2회 세척하고, 무수 에테르 150mL로 1회 세척하고, 건조시키고, 신틸레이션 유체 5mL 중에서 카운팅한다. 억제율을 다음 수학식에 따라 산출한다: 억제율(%) = [1-(시험 반응액에서의 cpm - 블랭크에서의 cpm) / (대조 반응액에서의 cpm - 블랭크에서의 cpm)]×100.

b. 휴먼 DNA 폴리머라제 감마의 억제:

휴먼 DNA 폴리머라제 감마의 억제를 위한 전위를 효소 0.5ng/㎕를 포함하는 반응액 중에서 측정한다; 10 μM dATP, dGTP, dCTP 및 TTP; 2μCi/반응액 [α-³³P]-dATP, 및 20mM 트리스 pH 8, 2mM β-머캅토에탄올, 50mM KCl, 10mM MgCl₂및 0.1㎍/㎕ BSA를 함유하는 완충제 중의 0.4㎍/㎕ 활성화 어류 정자 DNA[공급원: 유에스 바이오케미칼(US Biochemical)]. 반응을 37℃에서 1시간 동안 진행시키고,0.5M EDTA를 142mM 최종 농도로 가하여 급냉시킨다. 생성물 형성을 음이온 교환 필터 결합 및 신틸레이션 카운팅으로 정량화한다. 당해 화합물을 50μM 이하에서 시험한다.

HIV 감염능 및 HIV 분산을 억제할 수 있는 본 발명의 뉴클레오시드 유도체의 능력을 다음 분석법으로 측정한다.

c. HIV 감염능 분석

낮은 백그라운드 β-갈락토시다제(β-gal)을 위해 선택된 CXCR4와 CCR5를 둘 다 발현시키는 HeLa Magi 세포의 변형물을 사용하여 분석을 실시한다. 세포를 48시간 동안 감염시키고, 집적된 HIV-1 LTR 프로모터로부터의 β-gal 제조를 화학 발광 기질[공급원: 미국 매사추세츠주 베드포드 트로픽스 소재의 갈락토라이트 플러스(Galactolight Plus)]을 사용하여 정량화시킨다. 억제인자를 100μM에서 출발하는 2배 연속 희석액 속에서 적정(2회)시키고, 각 농도에서의 억제율(%)을 대조군 감염에 대해 산출한다.

d. HIV 분산 억제

사람 면역결핍 바이러스(HIV)의 분산을 억제할 수 있는 본 발명 화합물의 능력을, 전문이 본원에 참조로 인용되어 있는 문헌[참조: 미국 특허제5,413,999호(1995년 5월 9일) 및 J. P. Vacca, et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 91: 4096-4100 (1994)]에 기재되어 있는 방법으로 측정한다.

또한, 본 발명의 뉴클레오시드 유도체를 다음 분석법에 기재되어 있는 MTS 세포 기본 분석에서의 서브게놈 HCV 레플리콘을 함유하는 배양 헵파토마(HuH-7) 세포에 대해 세포독성을 스크리닝한다. HuH-7 세포주는 문헌[참조: H. Nakabayashi, et al., Cancer Res., 42: 3858 (1982)]에 기재되어 있다.

e. 세포독성 분석:

세포 배지를, 3일간의 항온처리에서의 현탁액 배지의 경우에는 약 1.5×10⁵개 세포/mL 농도에서, 그리고 3일간의 항온처리에서의 접착성 배지의 경우에는 5.0×10⁴개 세포/mL 농도에서 적합한 매질 중에서 제조한다. 세포 배지 99㎕를 96웰 조직 배지 처리된 플레이트이 웰로 옮기고, DMSO 중의 시험 화합물의 100배 최종 농도 1㎕를 가한다. 플레이트를 특정 시간 동안 37℃ 및 5% CO₂에서 항온처리한다. 항온처리 기간 후, 셀티터 96 아쿠아스 원 솔루션 셀 프로리퍼레이션 에세이(CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay) 시약(MTS)[공급원: 프로메가(Promega)] 20㎕를 각각의 웰에 가하고, 플레이트를 3시간 이하의 시간 동안 37℃ 및 5% CO₂에서 추가로 항온처리한다. 당해 플레이트를 교반하여 충분히 혼합시키고, 490nm에서의 흡광도를 플레이트 판독기로 판독한다. 현탁액 배지의 표준 곡선을 MTS 시약을 가하기 직전에 공지된 세포수를 사용하여 제조한다. 물질대사적으로 활성인 세포는 MTS를 포르마잔으로 환원시킨다. 포르마잔은 490nm에서 흡수한다. 당해 화합물 존재시 490nm에서의 흡광도를, 어떠한 화합물도 첨가되지 않은 세포에서의 흡광도에 비교한다[참조: Cory, A. H. et al., "Use of an aqueous soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth assays in culture", Cancer Commun. 3: 207 [(1991)].

다음 분석법을 사용하여 본 발명의 화합물의 활성을 기타 RNA 의존성 RNA 바이러스에 대해 측정한다.

a. 리노바이러스에 대한 당해 화합물의 시험관내 항바이러스 활성의 측정(세포병변 효과 억제 분석):

분석 조건은 시드웰(Sidwell)과 호프만(Huffman)의 문헌[참조: "Use of disposable microtissue culture plates for antiviral and interferon induction studies", Appl. Microbiol. 22: 797-801 (1971)]에 기재되어 있다.

바이러스:

리노바이러스 유형 2(RV-2), 균주 HGP를 위의 시드웰과 호프만의 문헌에 언급되어 있는 바와 같이 KB 세포 및 배지(0.1% NaHC0₃, 항생제 없음)와 함께 사용한다. ATCC로부터 수득된 바이러스는, 경미한 급성 열병 상부 호흡기 질환을 겪는 성인 남성에서의 인후면봉법으로부터 채취된다. 또한, 리노바이러스 유형 9(RV-9), 균주 211 및 리노바이러스 유형 14(RV-14), 균주 타우(Tow)를 미국 메릴랜드주록크빌 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(ATCC)으로부터 수득한다. RV-9는 사람 인후 세척액으로부터 채취되고, RV-14는 상부 호흡기 질환을 겪는 젊은 성인의 인후면봉법으로부터 채취된다. 이들 바이러스를 둘 다 사람 자궁경부 표피 암종 세포인 HeLa Ohio-1 세포[미국 버지니아 대학의 프레드 헤이던 박사(Dr. Fred Hayden)]와 함께 사용한다. 5% 소 태아 혈청(FBS) 및 0.1% NaHC0₃를 지닌 MEM(독수리의 최소 필수 배지)을 성장 배지로서 사용한다. 세 가지 바이러스 유형 모두에 대한 항바이러스 시험 배지는 5% FBS, 0.1% NaHC0₃, 50㎍ 젠타마이신/mL 및 10mM MgC1₂를 지닌 MEM이다. 2000㎍/mL은 본 발명의 화합물을 분석하기 위해 사용되는 최고 농도이다. 바이러스를 시험 화합물에 있어 약 5분 후에 분석 플레이트에 가한다. 또한, 적합한 대조군을 수행한다. 세포독성을 대조군 세포에서 형태 변화에 대해 현미경으로 모니터링한다. 바이러스 CPE 데이타 및 세포독성 대조군 데이타의 회귀 분석을 통해 ED50(50% 효능 투여량) 및 CC50(50% 세포독성 농도)을 수득한다. 선백도(SI)를 다음 수학식으로 산출한다: SI = CC50 ÷ED50.

b. 뎅기, 반지 및 황열병에 대한 화합물의 시험관내 항바이러스 활성의 측정(CPE 억제 분석)

분석 세부사항은 위에서 언급된 시드웰 및 호프만의 문헌에 기재되어 있다.

바이러스:

뎅기 바이러스 유형 2, 뉴 기니아(New Guinea) 균주를 질병 관리 센터로부터 수득한다. 아프리카 녹색 원숭이 간 세포의 2개의 라인을 사용하여 바이러스(베로)를 배양시키고 항바이러스 시험(MA-104)을 실시한다. 감염된 마우스 뇌로부터 제조된 황열병 바이러스, 17D 균주 및 남아프리카의 열병에 걸린 소년의 혈청으로부터 단리시킨 반지 바이러스, H 336 균주를 둘 다 ATCC로부터 수득한다. 베로 세포를 이들 바이러스와 함께 분석을 위해 사용한다.

세포 및 배지:

MA-104 세포[공급원: 미국 메릴랜드주 위커스빌 소재의 바이오화이테이커 인코포레이티드(BioWhittaker, Inc.)] 및 베로 세포(ATCC)를 항생제 없이 5% FBS와 0.1% NaHCO₃와 함께 배지 199 중에서 사용한다. 뎅기, 황열병 및 반지 바이러스에 대한 분석 배지는 MEM, 2% FBS, 0.18% NaHCO₃및 50㎍ 젠타마이신/mL이다.

본 발명의 화합물의 항바이러스 시험을 상기 리노바이러스 항바이러스 시험법과 유사하게 상기 시드웰 및 호프만 문헌에 따라 수행한다. 적합한 세포병변 효과(CPE) 판독물을 이들 바이러스 각각에 대해 5 내지 6일 후에 수득한다.

c. 웨스트 니일 바이러스에 대한 화합물의 시험관내 항바이러스 활성 측정(CPE 억제 분석)

분석 세부사항은 위에서 언급된 시드웰 및 호프만의 문헌에 기재되어 있다.까마귀 뇌로부터 유도된 뉴욕 분리주(New York isolate)인 웨스트 니일 바이러스를 질병 관리 센터로부터 수득한다. 베로 세포를 위에서 기재된 바와 같이 성장시키고 사용한다. 시험 배지는 MEM, 1% FBS, 0.1% NaHC0₃및 50㎍ 젠타마이신/mL이다.

본 발명의 화합물의 항바이러스 시험을 리노바이러스 활성 분석용과 유사한 시드웰 및 호프만 방법에 따라 수행한다. 적합한 세포병변 효과(CPE) 판독물을 5 내지 6일 후에 수득한다.

d. 리노, 황열병, 뎅기, 반지 및 웨스트 니일 바이러스에 대한 화합물의 시험관내 항바이러스 활성의 측정[뉴트랄 레드 업테이크 분석(Neutral Red Uptake Assay)]

상기 CPE 억제 분석을 수행한 후, 문헌[참조: "Microtiter Assay for Interferon: Microspectrophotometric Quantitation of Cytopathic Effect", Appl. Environ. Microbiol. 31: 35-38 (1976)]에 기재되어 있는 세포병변 검출법을 추가로 사용한다. 모델 EL309 미세판 판독기[공급원: 바이오 텍크 인스트루먼츠 인코포레이티드(Bio-Tek Instruments Inc.)]를 사용하여 분석판을 판독한다. ED50 및 CD50을 위와 같이 산출한다.

약제학적 제형의 예

본 발명의 화합물의 경구 조성물의 특정 양태로서, 실시예 1 또는 실시예 2의 화합물 50mg을 충분하게 미분된 락토즈와 함께 조제하여 총량이 580 내지 590mg이도록 하여 O 크기의 경질 젤라틴 캡슐제를 충전시킨다.

본 발명은 이의 특정 양태를 참조하여 기재 및 예시되어 있으나, 본 발명의 취지 및 범주를 벗어나지 않으면서 다양하게 변경, 변형 및 대체시킬 수 있음은 당해 기술분야의 숙련인들에게 명백할 것이다. 예를 들어, 위에서 언급된 바람직한 투여량 이외의 효과적인 투여량이 HCV 감염 중증도에 대해 치료될 사람의 반응도에 있어 변형의 결과로서 적용될 수 있다. 달리, 관찰된 약리학적 반응은 선택된 특정 활성 화합물 또는 약제학적 담체의 존재 유무 뿐만 아니라 제제 유형 및 사용된 투여 방식에 따르고 이에 의하여 다양할 수 있으며, 결과에 있어 이렇게 예측된 변형 또는 차이는 본 발명의 대상 및 수행에 따라 사료된다. 따라서, 본 발명은 다음 청구의 범위에 의해서만 제한되어야 하며 당해 청구의 범위는 이치에 맞도록 광범위하게 해석되어야 한다.

Claims

화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.

화학식 I

위의 화학식 I에서,

R¹은 C_2-4알케닐, C_2-4알키닐 또는 C_1-4알킬이며, 여기서 알킬은 치환되지 않거나 하이드록시, 아미노, C_1-4알콕시, C_1-4알킬티오 또는 1개 내지 3개의 불소원자로 치환되고,

R²는 수소, 불소, 하이드록시, 머캅토, C_1-4알콕시 또는 C_1-4알킬이거나, R¹과 R²는 이들이 부착되어 있는 탄소원자와 함께 O, S 및 NC_O-4알킬로부터 선택된 헤테로원자를 함유하거나 함유하지 않는 3 내지 6원의 포화 모노사이클릭 환 시스템을 형성하고,

R³과 R⁴는 서로 독립적으로 수소, 시아노, 아지도, 할로겐, 하이드록시, 머캅토, 아미노, C_1-4알콕시, C_2-4알케닐, C_2-4알키닐 및 C_1-4알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기서 알킬은 치환되지 않거나 하이드록시, 아미노, C_1-4알콕시, C_1-4알킬티오 또는 1개 내지 3개의 불소원자로 치환되고,

R⁵는 수소, C_1-1O알킬카보닐, P₃0₉H₄, P₂O₆H₃또는 P(O)R¹³R¹⁴이고,

R⁶과 R⁷은 서로 독립적으로 수소, 메틸, 하이드록시메틸 또는 플루오로메틸이고,

R⁸은 치환되지 않거나 할로겐, 하이드록시, 아미노, C_1-4알킬 및 C_1-4알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 그룹으로 치환된, 수소, C_1-4알킬, C_2-4알키닐, 할로겐, 시아노, 카복시, C_l-4알킬옥시카보닐, 아지도, 아미노, C_l-4알킬아미노, 디(C_1-4알킬)아미노, 하이드록시, C_1-6알콕시, C_1-6알킬티오, C_1-6알킬설포닐, (C_1-4알킬)_0-2아미노메틸 또는 C_4-6사이클로헤테로알킬이고,

R⁹는 수소, 시아노, 니트로, C_1-3알킬, NHCONH₂, CONR¹²R¹², CSNR¹²R¹², COOR¹², C(=NH)NH₂, 하이드록시, C_1-3알콕시, 아미노, C_1-4알킬아미노, 디(C_1-4알킬)아미노, 할로겐, (1,3-옥사졸-2-일), (1,3-티아졸-2-일) 또는 (이미다졸-2-일)이며, 여기서 알킬은 치환되지 않거나 할로겐, 아미노, 하이드록시, 카복시 및 C_1-3알콕시로부터독립적으로 선택된 1개 내지 3개의 그룹으로 치환되고,

R¹⁰과 R¹¹은 서로 독립적으로 치환되지 않거나 할로겐, 하이드록시, 아미노, C_1-4알킬 및 C_1-4알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 또는 2개의 그룹으로 치환된, 수소, 하이드록시, 할로겐, C_1-4알콕시, 아미노, C_1-4알킬아미노, 디(C_1-4알킬)아미노, C_3-6사이클로알킬아미노, 디(C_3-6사이클로알킬)아미노 또는 C_4-6사이클로헤테로알킬이고,

R¹²는 서로 독립적으로 수소 또는 C_1-6알킬이고,

R¹³과 R¹⁴는 서로 독립적으로 하이드록시, OCH₂CH₂SC(=O)C_1-4알킬, OCH₂0(C=O)OC_1-4알킬, NHCHMeC0₂Me, OCH(C_1-4알킬)O(C=O)C_1-4알킬,또는이며,

단 R^l이 β-메틸이고 R⁴가 수소이거나 R⁴가 β-메틸이고 R¹이 수소이며 R²와 R³이 α-하이드록시이고 R¹⁰이 아미노이고 R⁵, R⁶, R⁷, R⁸및 R¹¹이 수소인 경우, R⁹는 시아노 또는 CONH₂가 아니다.
제1항에 있어서, 화학식 II의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.

화학식 II

위의 화학식 II에서,

R^l은 C_1-3알킬이며, 여기서 알킬은 치환되지 않거나 하이드록시, 아미노, C_1-3알콕시, C_1-3알킬티오 또는 1개 내지 3개의 불소원자로 치환되고,

R²는 하이드록시, 플루오로 또는 C_1-4알콕시이고,

R³은 수소, 할로겐, 하이드록시, 아미노 또는 C_1-4알콕시이고,

R⁵는 수소, P₃0₉H₄, P₂0₆H₃또는 P0₃H₂이고,

R⁸은 수소, 아미노 또는 C_1-4알킬아미노이고,

R⁹는 수소, 시아노, 메틸, 할로겐 또는 CONH₂이고,

R¹⁰과 R¹¹은 서로 독립적으로 수소, 할로겐, 하이드록시, 아미노, C_1-4알킬아미노, 디(C_1-4알킬)아미노 또는 C_3-6사이클로알킬아미노이며,

단 R¹이 β-메틸이고 R²와 R³이 α-하이드록시이고 R¹⁰이 아미노이고 R⁵, R⁸및 R¹¹이 수소인 경우, R⁹는 시아노 또는 CONH₂가 아니다.
제2항에 있어서,

R¹이 메틸, 플루오로메틸, 하이드록시메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸 또는 아미노메틸이고,

R²가 하이드록시, 플루오로 또는 메톡시이고,

R³이 수소, 플루오로, 하이드록시, 아미노 또는 메톡시이고,

R⁵가 수소 또는 P₃0₉H₄이고,

R⁸이 수소 또는 아미노이고,

R⁹가 수소, 시아노, 메틸, 할로겐 또는 CONH₂이고,

R¹⁰과 R¹¹이 서로 독립적으로 수소, 플루오로, 하이드록시 또는 아미노이며,

단 R¹이 β-메틸이고 R²와 R³이 α-하이드록시이고 R^1O이 아미노이고 R⁵, R⁸및 R¹¹이 수소인 경우, R⁹는 시아노 또는 CONH₂가 아닌 화합물.
제1항에 있어서,

4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-아라비노푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-메틸아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-디메틸아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-사이클로프로필아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(2-C-비닐-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(2-C-하이드록시메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(2-C-플루오로메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-5-메틸-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카복실산,

4-아미노-5-브로모-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-5-클로로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-5-플루오로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

2,4-디아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

2-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

2-아미노-4-사이클로프로필아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로][2,3-d]피리미딘,

2-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(3H)-온,

4-아미노-7-(2-C-에틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(3H)-온,

2-아미노-5-메틸-7-(2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4(3H)-온,

4-아미노-7-(3-데옥시-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(3-데옥시-2-C-메틸-β-D-아라비노푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-2-플루오로-2-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(3-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(3-C-메틸-β-D-크실로푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(2,4-디-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(3-데옥시-3-플루오로-2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 및

상응하는 5'-트리포스페이트로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제4항에 있어서,

4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-아라비노푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(2-C-플루오로메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-5-메틸-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-5-브로모-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-5-클로로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-5-플루오로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘,

4-아미노-7-(2-C,2-O-디메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 및

상응하는 5'-트리포스페이트로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제5항에 있어서, 4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-아라비노푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘인 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제5항에 있어서, 4-아미노-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘인 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제5항에 있어서, 4-아미노-7-(2-C-플루오로메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘인 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제5항에 있어서, 4-아미노-5-클로로-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘인 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제5항에 있어서, 4-아미노-5-브로모-7-(2-C-메틸-β-D-리보푸라노실)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘인 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
제1항에 따르는 화합물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
제11항에 있어서, RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제 억제용, RNA 의존성 RNA 복제 억제용 및/또는 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료용 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제가 HCV NS5B 폴리머라제이고, RNA 의존성 RNA 바이러스 복제가 HCV 복제이고, RNA 의존성 RNA 바이러스 감염이 HCV 감염인 약제학적 조성물.
RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제 억제 및/또는 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제 억제를 필요로 하는 포유동물에게 제1항에 따르는 화합물 유효량을 투여함을 포함하는, RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제 및/또는 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제의 억제 방법.
제14항에 있어서, RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제가 HCV NS5B 폴리머라제이고, RNA 의존성 RNA 바이러스 복제가 HCV 바이러스 복제인 방법.
RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료를 필요로 하는 포유동물에게 제1항에 따르는 화합물 유효량을 투여함을 포함하는, RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료 방법.
제16항에 있어서, RNA 의존성 RNA 바이러스 감염이 HCV 감염인 방법.
제17항에 있어서, HCV에 활성인 치료학적 유효량의 기타 제제를 병용하는 방법.
제18항에 있어서, HCV에 활성인 제제가 리바비린, 레보비린, 티모신 알파-1, NS3 세린 프로테아제 억제제, 이노신 모노포스페이트 탈수소화제 억제제, 인터페론-α 또는 페길레이트화 인터페론-α 단독이거나 리바비린 또는 레보비린과의 배합물인 방법.
제19항에 있어서, HCV에 활성인 제제가 인터페론-α 또는 페길레이트화 인터페론-α 단독이거나 리바비린과의 배합물인 방법.
포유동물에서의 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제를 억제하거나 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제를 억제하기 위한, 제1항에 따르는 화합물의 용도.
포유동물에서의 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염을 치료하기 위한, 제1항에 따르는 화합물의 용도.
제22항에 있어서, RNA 의존성 RNA 바이러스 감염이 C형 간염 감염인 용도.
포유동물에서의 RNA 의존성 RNA 바이러스 폴리머라제 억제용 또는 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제 억제용 약물을 제조하기 위한, 제1항에 따르는 화합물의 용도.
포유동물에서의 RNA 의존성 RNA 바이러스 감염 치료용 약물을 제조하기 위한, 제1항에 따르는 화합물의 용도.
제25항에 있어서, RNA 의존성 RNA 바이러스 감염이 C형 간염 감염인 용도.