ES2351603T3

ES2351603T3 - Análogos de nucleósidos de purina para el tratamiento de enfermedades causadas por flaviridae incluyendo hepatitis c.

Info

Publication number: ES2351603T3
Application number: ES04744307T
Authority: ES
Inventors: David Dukhan; Gilles Gosselin; Frederic Leroy; Richard Storer
Original assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Universite Montpellier 2 Sciences et Techniques; Idenix Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Universite Montpellier 2 Sciences et Techniques; Idenix Pharmaceuticals LLC
Priority date: 2003-07-25
Filing date: 2004-07-26
Publication date: 2011-02-08
Anticipated expiration: 2024-07-26
Also published as: DE602004028841D1; CN1852915A; US20050075309A1; ATE478886T1; DK1658302T3; CA2533367C; US8742101B2; US20090169507A1; KR20060084845A; EP1658302B1; PT1658302E; BRPI0412849A; WO2005009418A3; EP1658302A2; NO20060914L; RU2006105640A; AU2004258750A1; US9186369B2; CA2533367A1; US20140234251A1

Abstract

Un compuesto de la estructura general de la Fórmula (I): **(Ver fórmula)**o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, donde: R es H; mono-, di- o trifosfato; o fosfonato; X es O; R1 y R1' son independientemente H, alquilo, ácido, ciano, alquenilo, alquinilo, -C(O)-(alquilo), -C(O)(O)(alquenilo), -C(O) (O)(alquinilo), C(O) NH2,-C(O)NH(alquilo), -C(O)N(alquilo)2, -C(H)=N-NH2, C(S)NH(alquilo), o C(S)N(alquilo)2; donde alquilo, alquenilo, y/o alquinilo puede sustituirse de manera opcional; R2 y R3 es independientemente H, OH, NH2, SH, F, Cl, Br, I, CN, NO2, -C(O)NH2, -C(O)NH(alquilo), y -C(O)N(alquilo)2, N3, alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo or alquinilo opcionalmente sustituido, -C(O)O-(alquilo), C(O)O-(alquenilo), -C(O)O-(alquinilo), O(acilo), -O(alquilo), -O(alquenilo), -O(alquinilo), -OC(O)NH2, NC, C(O)OH, SCN, OCN, -S(alquilo), -S(alquenilo), -S(alquinilo), NH(alquilo), -N(alquilo)2, -NH(alquenilo), -NH(alquinilo), un residuo de aminoácido o un derivado, o un anillo heterocíclico de 3-7 miembros opcionalmente sustituido que tiene O, S y/o N independientemente como un heteroátomo tomado solo o en combinación; R2' es alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituido; halógeno, ácido o ciano; R3' es H; alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituido; C(O)O-(alquilo), -C(O)O-(alquenilo), -C(O)O-(alquinilo), -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), halógeno, ácido, ciano, NO2, -S(alquilo), S(alquenilo), -S(alquinilo), NH2, -NH(alquilo), -N(alquilo)2, NH(alquenilo),-NH(alquinilo), -NH(acilo) o N(acilo)2; y Base se selecciona del grupo consistente en: **(Ver fórmula)**donde cada R' and R independientemente es H, C1-6 alquilo, C2-6 alquenilo, C2-6 alquinilo, halógeno, alquilo halogenado, OH, CN, N3, carboxi, C1-4 alcoxicarbonilo,NH2, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino,C16 alcoxi,C1-6 alquilosulfonilo, o (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo; cada W es independientemente H, Cl, Br, I, F, alquilo halogenado, alcoxi, OH, SH, O-alquilo, S-alquilo, O-alquenilo, O-alquinilo, Salquenilo, S-alquinilo, -OC(O)NR4R4, O-acilo, S-acilo, CN, SCN, OCN, NO2, N3, NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, NH-cicloalquilo, NHacilo, NH=NH, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2; y cada R4 es independientemente H, acilo, o C1-6 alquilo; y cada Z es independientemente O, S, NH, N-OH, N-NH2, N(alquilo), N(alquilo)2, N-cicloalquilo, alcoxi, CN, SCN, OCN, SH, NO2, N3, NH=NH, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2.

Description

Esta solicitud reivindica prioridad de la Solicitud Provisional de U.S.A. Nº 60/490,216 presentada el 25 de julio del 2003. CAMPO DE LA INVENCIÓN

Esta invención se sitúa en el área de química farmacéutica y, en particular, en el área de nucleósidos de purina, su síntesis, y su uso como agentes anti-Flaviviridae en el tratamiento de huéspedes infectados por Flaviviridae y en especial por Hepatitis C. CONTEXTO DE LA INVENCIÓN Virus Flaviviridae

La familia de virus Flaviviridae comprende al menos tres géneros distintos: pestivirus, que provocan enfermedades en ganado y cerdos; flavivirus, que son la principal causa de enfermedades como fiebre dengue y fiebre amarilla; y hepacivirus como hepatitis C (HCV). El género flavivirus incluyen más de 68 miembros separados en grupos en base a su relación serológica (Calisher et al., J. Gen. Virol., 1993, 70, 37-43). Los síntomas clínicos varían e incluyen fiebre, encefalitis y fiebre hemorrágica (Fields Virology, Editors: Fields, B. N., Knipe, D. M., and Howley, P. M., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA, 1996, Capítulo 31, 931-959). Los flavivirus de preocupación global que se asocian con enfermedades humanas incluyen el virus Dengue, virus de fiebre hemorrágica como Lassa, Ebola, virus de fiebre amarilla, síndrome del shock y virus de encefalitis japonesa (Halstead, S. B., Rev. Infect. Dis., 1984, 6, 251-264; Halstead, S. B., Science, 239:476-481, 1988; Monath, T. P., New Eng. J. Med, 1988, 319, 641643).

El género pestivus inclujyen virus de la diarrea viral bovina (BVDV), virus de fiebre porcina clásica (CSFV, también llamado virus de fiebre porcina) y virus de la enfermedad de la frontera (BDV) de ovejas (Moennig, V. et al., Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98). Las infecciones de pestvirus de animales domesticados (vacas, cerdos y ovejas) causan importantes pérdidas económicas en todo el mundo. BVDV causa enfermedad en las mucosas en el ganado y tiene gran importancia económica en la industria ganadera (Meyer, G. y Thiel, H-J., Advances in Virus Research, 1996, 47, 53-118; Moenning V., et al., Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98). Los pestivirus humanos no se han caracterizado de manera tan extensa como los pestvirus animales. Sin embargo, los estudios serológicos indican una considerable exposición a pestvirus en humanos.

Los pestvirus y hepacivirus son grupos de virus muy relacionados dentro de la familia Flaviviridae. Otros virus muy relacionados en esta familia incluyen el virus A GB, agentes del tipo de virus A GB, virus B GB, virus C GB (también llamado virus de hepatitis G, HGV). El grupo hepacivirus (virus de hepatitis C; HCV) consiste en un número de virus muy relacionados pero genotípicamente distinguibles que infectan a humanos. Hay aproximadamente 6 genotipos HCV y más de 50 subtipos. Debido a las similitudes entre pestivirus y hepacivirus, en combinación con la poca habilidad del hepacivirus para crecer de manera eficiente en cultivo celular, con frecuencia se usa el virus de la diarrea viral bovina (BVDV) como un surrogado para estudiar el virus HCV.

La organización genética de pestivirus y hepacivirus es muy similar. Estos virus con ARN de cadena positiva poseen un único marco de lectura abierto y grande (ORF) que codifica todas las proteínas virales necesarias para la réplica de virus. Estas proteínas se expresan como una poliproteína que es co-y posttraslacionalmente procesadas por proteinasas celulares y codificadas por virus para producir las proteínas virales maduras. Las proteínas virales responsables de la réplica de ARN de genoma rial se localizan aproximadamente en el interior de la terminal de carboxi. Dos tercios del ORF se denominan proteínas no estructurales (NS). La organización genética y el proceso de la poliproteínas de la porción de de proteína no estructural de ORF para pestivirus y hepacivirus es muy similar. Para ambos, pestivirus y hepacivirus, las proteínas maduras no estructurales (NS), en orden secuencial desde la terminal amino de la proteína no estructural codificadora de región hasta la terminal carboxi del ORF, consiste en p7, NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, y NS5B.

Las proteínas NS de pestivirus y hepacivirus comparten los dominios secuenciales que son característicos de las funciones específicas de las proteínas. Por ejemplo, la glicoproteína NS1 es una proteína con superficie celular que se desplaza al lumen ER. NS1 se caracteriza inicialmente por ser un antígeno soluble de fijado complementado que se encuentra en el suero y tejidos de animales infectados, y ahora se le conoce por provocar respuestas inmune humorales en su forma extracelular. Los anticuerpos para NS1 pueden usarse para dar inmunidad pasiva a ciertos pestivirus y flavivirus. NS1 has estado implicado en el proceso de réplica de ARN donde se cree que tiene un papel funcional en el proceso citoplásmico de ARN. NS2A es una proteína pequeña (aproximadamente 22 kd) de función desconocida. Los estudios sugieren que se enlaza con NS3 y NS5, por lo que podría ser un reclutador de plantillas de ARN para las réplicas que se unen a la membrana. NS2B también es una proteína pequeña (aproximadamente 14 kd) que se asocia a la membrana, y es un cofactor necesario para la función de proteasa de serina de NS3, con el que forma un complejo.

Las proteínas NS3 de virus en ambos grupos son grandes (aproximadamente 70 kd), son proteínas asociadas a la membrana que poseen motivos de secuencia de aminoácido característicos de proteinasas y de helicasas (Gorbalenya et al. (1988) Nature 333: 22; Bazan and Fletterick (1989) Virology 171:637-639; Gorbalenya et al. (1989) Nucleic Acid Res. 17.3889-3897). Por lo tanto, las proteínas NS3 tienen actividad enzimática necesaria para procesar poliproteínas para la réplica de ARN. El extremo de la terminal C de las proteínas NS3 tienen una actividad de trifosfotasa ARN que parece modificar el extremo 5’ del genoma antes de la adición del tope 5’ por parte de guanililtransferasa.

NS4A y NS4B se asocian con la membrana, son pequeñas (aproximadamente 16kd y aproximadamente 27kd, respectivamente), y son proteínas hidrofóbicas que parecen funcionar en la réplica de ARN anclando componentes de réplica en membranas celulares (Fields, Virology, 4ª Edición, 2001, p. 1001).

Las proteínas NS5 son las más grandes (aproximadamente 103 kd) y las mejor conservadas, con homología secuencial con otros virus ARN de cadena (+). También juega un papel fundamental en la réplica viral. Las proteínas NS5B de pestivirus y hepacivirus son las enzimas necesarias para la síntesis de ARN intermedio con cadena negativa que es complementario al genoma viral, y del ARN con cadena positiva que es complementario al ARN intermedio con cadena negativa. El producto gen NS5B tiene Gly-Asp-Asp (GDD) como secuencia distintiva, que comparte con transcriptasas inversas y otras polimerasas virales y que es predictiva de actividad de polimerasa ARN dependiente de ARN (RdRP) (DeFrancesco et al., Antiviral Research, 2003, 58:1-16). Resulta interesante destacar el hecho de que se haya descubierto que la cola hidrofóbica larga del residuo 21 de la terminal C en NS5B es necesaria para alcanzar NS5B para la membrana ER, pero su retirada no tiene ningún otro efecto y, de hecho, lleva a una mayor solubilidad y actividad enzimática (Tomei et al., J. Gen. Virol., 2000, 81:759-767; Lohmann et al., J. Virol., 1997, 71: 8416-28; Ferrari et al., J. Virol., 1999, 73:1649-54).

Los productos de enzima NS5B tiene los rasgos característicos de las polimerasas de ARN dirigidas a ARN, y además, comparten homología con enzimas de metiltransferasa que participan en la formación del tapón de ARN (Koonin, E.V. and Dolja, V.V. (1993) Crit. Rev. Biochem. Molec. Biol. 28:375-430; Behrens et al.(1996) EMBO J. 15:12-22; Lchmannet al.(1997) J. Virol. 71:8416-8428; Yuan et al.(1997) Biochem. Biophys. Res. Comm. 232:231-235; Hagedorn, PCT WO 97/12033; Zhong et al.(1998) J. Virol. 72.9365-9369). La estructura de cristal que no pertenece al ligandos de NS5B muestra la única característica estructural de plegarse en una clásica forma de “mano derecha”, en cuyos dedos, palmas y subdominios del pulgar pueden reconocerse (una característica que comparte con otras polimerasas), pero difiere de otras polimerasas “mano derecha medio abierta” al tener una forma más compacta debido a dos curvas extendidas que abarcan los dominios del dedo y pulgar en la parte superior de la cavidad activa (DeFrancesco et al., en 9). Los subdominios del dedo, pulgar y palma rodean la cavidad activa a la que la plantilla de ARN y los sustratos de NTP tienen acceso por medio de dos túneles con carga positiva (Bressanelli et al., J. Virol. 2002, 76, 3482-92). Los dominios del dedo y el pulgar tienen fuertes interacciones que limitan su habilidad para cambiar la conformaicón independientemente de uno u otro, una característica estructural compartida por otros RdRPs. El dominio del pulgar contiene una curva a modo de horquilla β que se extiende hasta la hendidura del punto activo y puede tener un papel a la hora de restringir el enlace de la plantilla/cebador en el punto activo de la enzima (DeFrancesco et al., en 10). Se están realizando estudios para determinar el papel de esta curva en el mecanismo de iniciación de síntesis de ARN (Id).

Los residuos de la reacción de nucleotidil transferasa se localizan en el dominio de la palma y contienen el rasgo de la firma de GDD (DeFrancesco et al., 9). La geometría del domino de la palma se conserva prácticamente en todas las polimerasas, y tiene un centro catalítico conservado con dos iones de metal que es necesario para catalizar una reacción fosfori transferasa en el punto activo de la polimerasa.

Se cree que el modelo nuevo de iniciación de polimerización de ARN, en lugar un mecanismo de “copia”, se utiliza por parte de pesti-, flavi-y hepacivirus. En el modelo nuevo de iniciación, la síntesis de ARN complementario se inicia en el extremo 3’ del genoma por parte de un trifosfato nucleótido en lugar de un ácido nucleico o un cebador de proteínas. NS5B purificado es capaz de este tipo de acción dependiente de cebador, y la curva β en la terminal C que se cree que se posiciona de manera correcta en el extremo 3’ de la plantilla de ARN funcionando como puerta que retarda la bajada del extremo 3’ de ARN a través del punto activo de la polimerasa (Hong et al., Virology, 2001, 285:6-11. Bressanelli et al., escribió sobre la estructura de polimerasa NSB5 en complejos con nucleótidos en los que se observaron tres puntos distintos de enlace con nucleótidos en el centro catalítico del HCV RdRP, y el complejo mostró una geometría similar a la del complejo de nueva iniciación de polimerasa phi 6 (Bressanelli et al., J. Virol., 2002, 76: 3482-92). Por lo tanto, la iniciación nueva ocurre y aparentementes es seguida por el alargamiento, terminación y polimerización de ARN, y liberación de la nueva cadena. En cada uno de estos pasos existe la oportunidad de intervención e inhibición del ciclo vital viral.

Los papeles y funciones reales de las proteínas NS de pestivirus y hepacivirus en el ciclo vital de virus son directamente análogos. En ambos casos, la serina proteinasa NS3 es responsables de todas los procesos proteolíticos de los precursores de poliproteína por debajo de su posición en el ORF (Wiskerchen and Collett (1991) Virology 184:341-350; Bartenschlager et al. (1993) J. Virol. 67:3835-3844; Eckart et al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Comm. 192:399-406; Grakoui et al. (1993) J. Virol. 67:2832-2843; Grakoui et al. (1993) Proc. Natl. Acad Sci. USA 90:10583-10587; Hijikata et al. (1993) J. Virol. 67:4665-4675; Tome et al. (1993) J. Virol. 67:4017-4026). La proteína NS4A, en ambos casos, actúa como un cofactor con la serina proteasa NS3. (Bartenschlager et al. (1994) J. Virol. 68:5045-5055; Failla et al. (1994) J. Virol. 68: 3753-3760; Lin et al. (1994) 68:8147-8157; Xu et al. (1997) J. Virol. 71:5312-5322). La proteína NS3 de ambos virus también funciona como una helicasa (Kim et al. (1995) Biochem. Biophys. Res. Comm. 215: 160-166; Jin and Peterson (1995) Arch. Biochem. Biophys., 323:47-53; Warrener and Collett (1995) J. Virol. 69:1720-1726). Finalmente, las proteínas NS5B de pestivirus y hepacivirus tienen la actividad prevista de polimerasas de ARN dirigidas a ARN (Behrens et al.(1996) EMBO J. 15:12-22; Lchmannet al.(1997) J. Virol. 71:8416-8428; Yuan et al.(1997) Biochem. Biophys. Res. Comm. 232: 231-235; Hagedorn, PCT WO 97/12033; Zhong et al.(1998) J. Virol. 72.9365-9369). Virus de Hepatitis C

El virus de la hepatitis C (HCV) es la principal causa en todo el mundo de enfermedades crónicas del hígado. (Boyer, N. et al., J. Hepatol. 32:98-112, 2000). HCV provoca una lenta infección viral creciente y es la principal causas de cirrosis y carcinoma hepatocelular (Di Besceglie, A. M. and Bacon, B. R., Scientific American, Oct.: 80-85, (1999); Boyer, N. et al. J. Hepatol. 32:98-112, 2000). Se calcula que 170 millones de personas están infectadas de HCV en todo el mundo. (Boyer, N. et al., J. Hepatol. 32:98-112, 2000). La cirrosis causada por infección crónica de hepatitis C representa entre 8.000 y 12.000 muertes por año en los Estados Unidos, y la infección de HCV es la principal indicio para el trasplante de hígado.

Se conoce que HCV causa al menos el 80% de hepatitis post-transfusión y una sustancial proporción de hepatitis aguda esporádica. La evidencia preliminar también implica a HCV en muchos casos de hepatitis crónica “idiopática”, cirrosis “criptogénica”, y probablemente carcinoma hepatocelular no relacionado con otros virus de hepatitis, como Virus de Hepatitis B (HBV). Una pequeña proporción de personas sanas parecen ser portadores de HCV crónico, cifra que varía con factores geográficos y otros factores epidemiológicos. Los números pueden exceder sustancialmente para HBV, aunque esta información es aún preliminar. Lo que no está claro es el número de personas que tiene enfermedad crónica subclínica del hígado (The Merck Manual, capítulo 69, p. 901, 16ª ed., (1992)).

HCV es un virus envuelto que contiene un genoma de ARN en sentido positivo y con una única cadena de aproximadamente 9.4 kb. El genoma viral consiste en una región 5’ no trasladada (UTR), un marco de lectura abierto y largo que codifica un precursor de poliproteína de aproximadamente 3011 aminoácidos, y un UTR 3’ corto. El UTR 5’ es la parte mejor conservadas del genoma de HCV y es importante para la iniciación y el control de translación de poliproteína.

La translación del genoma HCV se inicia mediante un mecanismo dependiente de la tapa conocido como entrada de ribosoma interno. Este mecanismo implica el enlace de ribosomas con una secuencia de ARN conocida como punto de entrada de ribosoma interno (IRES). Recientemente se ha determinado una estructura pseudonudo para que sea un elemento estructural esencial de HCV IRES. Las proteínas estructurales virales incluyen una proteína con centro nucleocápside (C) y dos glicoproteínas sobres, E1 y E2.

HCV también codifica dos proteinasas, una metaloproteinasa dependiente de zinc codificada por la región NS2NS3 y una proteinasa de serina codificada en la región NS3. Estas proteinasas son necesarias para la división de regiones específicas de la poliproteína precursora en péptidos maduros: la unión entre NS2 y NS3 se divide automáticamente por la proteasa NS2/NS3, mientras que el resto de las uniones se dividen por la acción del domino de proteasa de serina en terminal T del complejo NS3 con NS4A. La proteína NS3 contiene la actividad de helicada dependiente de NTP que desenrolla el dúplex ARN durante la réplica. La terminal hidrofóbica de carboxi con 21 aminoácidos de la proteína estructural 5, NS5B, contiene la polimerasa ARN dependiente de ARN que es esencial para la réplica viral (Fields Virology, Fourth Edition, Editors: Fields, B. N., Knipe, D. M., y Howley, P. M., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA, 2001, Capítulo 32, pp. 1014-1015). NS5B es conocido por enlazarse con ARNs de manera no específica y por interactura directamente con NS3 y NS4A que, a su vez, forman complejos con NS4B y NS5A (Id.@1015; Ishido et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1998; 244:35-40).

Ciertos experimentos in vitro que usan NS5B y guanosina 5’mono-, di-, y trifosfato así como 5’-trifosfato de 2’-deoxi-y 2’,3’dideoxi-guanosina como inhibidores de HCV sugieren que HCV-RdRP puede tener una especificidad estricta para 5’-trifosfatos y 2’y 3’-grupos OH (Watanabe et al., U.S. 2002/0055483). Si no, las funciones del resto de proteínas no estructurales, NS4A, NS4B y NS5A (la mitad amino amino-terminal de proteína 5 no estructural) quedan sin mostrar.

Existe un especial interés en la investigación actual antiviral dirigido al desarrollo de métodos mejorados en el tratamiento de infecciones crónicas de HCV en humanos (Di Besceglie, A., M. y Bacon, B. R., Scientific American, Oct: 80-85, (1999)). Métodos para Tratar Infecciones de Flaviviridae

El desarrollo de nuevos agentes antivirales para infecciones Flaviviridae, especialmente hepatitisC,seencuentraactualmenteen proceso. Inhibidores específicos de enzimas derivadas de HCV como inhibidores de proteasa, helicasa, y polimerasa se están desarrollando. Los fármacos que inhiben otros pasosenlaréplicade HCV también se encuentran en desarrollo, por ejemplo, fármacos que bloquean la producción de antígenos HCV de ARN (Inhibidores IRES), fármacos que previenen el proceso normaldeproteínasHCV (inhibidores de glicosilación), fármacos que bloquean la entrada de HCV a células (bloqueando su receptor) yagentescitoprotectoresno específicos que bloquean la lesión celular causada por la infección del virus. Además, las técnicas moleculares también están siendo desarrolladas para tratar hepatitis C, por ejemplo, se están investigando ribozimas, que son enzimas que descomponen las moléculas virales específicas de ARN, y oligonucleótidos antisentido, que son pequeños segmentoscomplementariosdeADN que se unen a ARN viral yque inhiben la réplica viral. Un número de tratamientos para HCV están siendo revisados por parte de Bymock et al., en Antiviral Chemistry & Chemotherapy, 11:2; 79-95 (200) y De Francesco et al., en Antiviral Research, 58: 1-16 (2003).

Idenix Pharmaceuticals, Ltd. describe nucleósidos ramificados, y su uso en el tratamiento de HCV y flavivirus y pestivirus en las Publicaciones de Patente de Estados Unidos Números 2003/0050229 A1, 2004/0097461 A1, 2004/0101535 A1, 2003/0060400 A1, 2004/0102414 A1, 2004/0097462 A1, y 2004/0063622 A1 que corresponde a los Números de Publicación Internacional WO 01/90121 y WO 01/92282. Un método para el tratamiento de infección de hepatitis C (y flavivirus y pestivirus) en humanos y otros animales huéspedes se describe en las publicaciones de Idenix que incluye la administración de una cantidad efectiva de nucleósidos β-D o β-L ramificados 1’, 2’, 3’ o 4’ biológicamente activos o una sal farmacéuticamente aceptable oun profármaco del mismo, administrado bien solo o en combinación, opcionalmente en un portador farmacéuticamente aceptable. Ver también Número de Publicación de Patente de Estados Unidos 2004/006002 y 2004/006007 así como WO 03/026589 y WO 03/026675. Idenix Pharmaceuticals, Ltd. también describe en el Número de Publicación de Patente de Estados Unidos 2004/0077587 profármacos de nucleósidos ramificados farmacéuticamente aceptables, y su uso en el tratamiento de HVC y flavivirus y pestivirus en profármacos. Ver también Números de Publicaciones PCT WO 04/002422, WO 04/002999 y WO 04/003000. Además, Idenix Pharmaceuticals, Ltd. También describe en WO 04/046331 mutaciones de Flaviviridae provocadas por nucleósidos β-D o β-L ramificados 2’ biológicamente activos o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo.

Biota Inc. Describe varios derivados de fosfato de nucleósidos, incluyendo nucléosidos β-D o β-L ramificados 2’, 3’ o 4’ para el tratamiento de infección de hepatitis C en la Publicaciónd e Patente Internacional WO 03/072757.

La Universidad Emory y la Universidad de Georgia Research Foundation Inc. (UGARF) describen el uso de 2’-fluoronucleósidos para el tratamiento de HCV en el Número de Patente de Estados Unidos 6,348,587. Ver también el Número de Publicación de Patente de Estados Unidos 2002/0198171 y la Publicación de Patente Internacional WO 99/43691.

BioChem Pharma Inc. (ahora Shire Biochem, Inc.) describe el uso de varios nucleósidos 1,3-dioxolano para el tratamiento de infección de Flaviviridae en el Número de Patente de Estados Unidos 6,566,365. Ver también Números de Patentes de Estados Unidos 6,340,690 y 6,605,614; los Números de Publicación de Patentes de Estados Unidos 2002/0099072 y 2003/0225037, así como la Publicación Internacional Número WO 01/32153 y WO 00/50424.

BioChem Pharma Inc. (ahora Shire Biochem, Inc.) también describe varios nucléosidos 2’-halo, 2’-hidroxi y 2’-alcoxi para para el tratamiento de infección de Flaviviridae en el Número de Publicación de Patente de Estados Unidos 2002/0019363 así como en la Publicación Internacional Número WO 01/60315 (PCT/CA01/00197; presentada el 19 de febrero de 2001).

ICN Pharmaceuticals, Inc. describe varios análogos de nucléosidos que son útiles para modular respuestas inmunes en Patentes de Estados Unidos Números 6,495,677 y 6,573,248. Ver también WO 98/16184, WO 01/68663, y WO 02/03997.

La Patente de Estados Unidos Número 6,660,721; los Números de Publicación de Patente de Estados Unidos /083307 A1, 2003/008841 A1, y 2004/01107118; así como los Números de Publicación de Patente Internacional WO 02/18404; WO 02/100415, WO 02/094289, y WO 04/043159; presentadas por

F. Hoffmann-La Roche AG, describen varios análogos de nucleósidos para el tratamiento de réplica de ARN HCV.

Pharmasset Limited describe varios nucleósidos y antimetabolitos para el tratamiento de una variedad de virus entre los que se incluye Flaviviridae, y en particular HCV, en los Números de Publicación de Patente de Estados Unidos 2003/0087873, 2004/0067877, 2004/0082574, 2004/0067877, 2004/002479, 2003/0225029, y 2002/00555483, así como los Números de Publicación de Patente Internacional WO 02/32920, WO 01/79246, WO 02/48165, WO 03/068162, WO 03/068164 and WO 2004/013298.

El Número de Publicación de Patente Internacional WO 2005/009418 describe varios nucleósidos modificados para el tratamiento de infección de Flaviviridade (incluyendo BVDV y HCV), Orthomyxoviridae (incluyendo Influenza A y B) o Paramyxoviridae (incluyendo RSV), o condiciones relacionadas con proliferación celular anormal.

Merck & Co., Inc. e Isis Pharmaceuticals describen en la Publicación de Patente de Estados Unidos Número 2002/0147160, 2004/0072788, 2004/0067901, y 2004/0110717; así como en las correspondientes Publicaciones de Patente Internacional con Números WO 02/057425 (PCT/US02/01531; presentada el 18 de enero, 2002) y WO 02/057287 (PCT/US02/03086; presentada el 18 de enero, 2002) varios nucleósidos y en particular varios nucleósidos de pirrolopirimidina para el tratamiento de virus cuya réplica es dependiente de polimerasa de ARN dependiente de ARN, incluyendo Flaviviridae, y en particular HCV. Ver también WO 2004/000858, WO 2004/003138, WO 2004/007512, y WO 2004/009020.

Publicación de Patente de Estados Unidos Número 2003/028013 A1 así como las Publicaciones de Patentes Internacionales con Números WO 03/051899, WO 03/061576, WO 03/062255 WO 03/062256, WO 03/062257, y WO 03/061385, presentadas por Ribapharm, también están dirigidas al uso de ciertos análogos de nucleósidos para tratar el virus de la hepatitis C. Genelabs Technologies describe en la Publicación de Patente de Estados Unidos Número 2004/0063658 así como las Publicaciones de Patentes Internacionales con Números WO 03/093290 and WO 04/028481 varios derivados de nucleósidos modificados en la base que incluyen nucleósidos β-D o β-L ramificados 1’, 2’, 3’ o 4 para el tratamiento de infección de hepatitis C.

Eldrup et al. (Oral Sessions V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16ª Conferencia Internacional sobre Investigación Antiviral (27 de abril, 2003, Savannah, Ga.) p. A75) describió la relación de actividad estructural de nucleósidos 2’ modificados para la inhibición de HCV.

Bhat et al. (Oral Sessions V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16ª Conferencia Internacional sobre Investigación Antiviral (27 de abril, 2003, Savannah, Ga.) p. A75) describió la síntesis y las propiedades farmacocinéticas de análogos de nucleósidos como posibles inhibidores de réplica ARN HCV. Los autores incluyen que nucleósidos 2’ modificados demuestran una potente actividad inhibidora en ensayos de réplica basados en células.

Olsen et al. (Oral Sessions V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16ª Conferencia Internacional sobre Investigación Antiviral (27 de abril, 2003, Savannah, Ga.) p. A76) también describió los efectos de los nucleósidos modificados en 2’ en la réplica de ARN HCV.

Krawezyk et al., describe la síntesis de nucleósidos 2azapurina sustituidos por 4 y su uso en el tratamiento de citomegalovirus humano (HCMV). Krawezyk et al., Nucleosides, Nucleotides & Nucleid Acids, 19: 39-68 (2000).

Las variantes de virus resistentes a los fármacos pueden aparecer tras un tratamiento prolongado con un agente antiviral. En la mayoría de los casos, la resistencia a los fármacos ocurre por una mutación de un gen que codifica la enzima usada en la réplica viral, y, por ejemplo, en el caso de VIH, transcriptasa inversa, proteasa, o polimerasa de ADN. Se ha demostrado que la eficacia de un fármaco contra la infección viral puede prolongarse, aumentarse y restablecerse mediante la administración del compuesto en combinación o en alternancia con un segundo, y quizás tercer compuesto antiviral que induce una mutación diferente de la causada por el fármaco principal. De modo alternativo, la farmacocinética, biodistribución u otros parámetros del fármaco pueden alterarse por la acción de dicha terapia de combinación o alternancia.

En general, la terapia de combinación es preferible a la terapia de alternancia porque induce múltiples presiones simultáneas sobre el virus. Sin embargo, no se puede predecir qué mutaciones se inducirán en el genoma viral por la acción de un fármaco determinado, si la mutación es permanente o pasajera, o cómo una secuencia viral mutada responderá a la terapia con otros agentes en combinación o alternancia. Esto se exacerba por el hecho de que existe una escasez de datos sobre cinética de la resistencia de los fármacos a largo plazo en cultivos celulares tratados con agentes antivirales modernos.

A la vista de la gravedad de enfermedades asociadas con pestivirus, flavivirus y virus de hepatitis C, y su omnipresencia en animales y humano, es un objeto e la presente invención proporcionar un compuesto, método y composición para el tratamiento de un huésped infectado por cualquier miembro de la familia Flaviviridae, incluyendo el virus de la hepatitis C.

Además, es un objeto de la presente invención proporcionar un compuesto, método y composición farmacéuticamente aceptable para la profilaxis y/o tratamiento de un huésped, y en particular, un humano, infectado por por cualquier miembro de la familia Flaviviridae.

Además, dada la amenaza creciente de otras infecciones de Flaviviridae, aún existe la necesidad de proporcionar nuevos agentes farmacéuticos efectivos que tengan una baja toxicidad para el huésped.

Por lo tanto, es un objeto de la presente invención proporcionar un compuesto, método y composición para el tratamiento de un huésped infectado por cualquier miembro de la familia Flaviviridae, incluyendo el virus de la hepatitis C, que tenga baja toxicidad para el huésped.

Es otro objeto de la presente invención proporcionar un compuesto, método y composición generalmente para el tratamiento de pacientes infectados por pestivirus, flaviviurs o hepacivirus. RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención ofrece un compuesto como el establecido en la reivindicación 1, una composición como la establecida en la reivindicación 13 y usos como los establecidos en las reivindicaciones 26 y 29.

Se describen métodos y composiciones para el tratamiento de infección causada por pestivirus, flavivirus y hepatitis C que incluyen la administración de una cantidad efectiva de un nucleósido beta-D o beta-L de la Fórmula (I) y (II), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo.

En una primera realización principal, se ofrece un compuesto de la Fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo:

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donde cada R es independientemente H, fosfato (incluyendo mono-, di-, o trifosfato o un profármaco de fosfato estabilizado) o fosfonato; opcionalmente alquilo sustituido incluyendo alquilo de cadena corta,

alquenilo o alquinilo opcionalmente sustituido, acilo, -C(O)-(alquilo), C(O)(alquilo de cadena corta), -C(O)(alquenilo), -C(O)(alquinilo), lípido, fosfolípido, carbohidrato, péptido, colesterol, un residuo de aminoácido o derivado, u otro grupo saliente farmacéuticamente aceptable que sea capaz de proporcionar H o fosfato cuando se administre in vivo; n es 0-2; cuando X is CH2, CHOH, CH-alquilo, CH-alquenilo, CH-alquinilo, Cdialquilo, CH-O-alquilo, CHO-alquenilo-, CH-O-alquinilo, CH-Salquilo, CH-S-alquenilo, CH-S-alquinilo, CH-halógeno, or C(halógeno)2, entonces cada R1 y R1’ es independientemente H, OH, alquilo opcionalmente sustituido incluyendo alquilo de cadena corta, ciano, alquenilo o alquinilo opcionalmente sustituido, -C(O)-(alquilo), C(O)(O)(alquilo de cadena corta), -C(O)(O)(alquenilo), -C(O) (O)(alquinilo), -O(acilo), -O(acilo de cadena corta), acyl),-O(alkyl), I(de cadena corta alquilo), -O(alquenilo), -O(alquinilo), halógeno, halógenoated alquilo, -NO2, -NH2, -NH(de cadena corta alquilo), N(alquilo de cadena corta)2, -NH(acilo), -N(acilo)2, -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), -C(O)N(alquilo)2, S(O)N-alquilo, S(O)N-alquenilo, S(O)N-alquinilo, or SCH-halógeno, donde alquilo, alquenilo, y/o alquinilo puede sustituirse de manera opcional; cuando X is O, S[O]n, NH, N-alquilo, N-alquenilo, N-alquinilo, S(O)Nalquilo, S(O)N-alquenilo, S(O)N-alquinilo, o SCH-halógeno, entonces cada R1 and R1’ es independientemente H, alquilo opcionalmente sustituido incluyendo alquilo de cadena corta, azido, ciano, alquenilo o alquinilo opcionalmente sutituido, -C(O)O-(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O-(alquenilo), -C(O)O(alquinilo), alquilo halogenado, -C(O)H2, -C(O)NH(alquilo), C(O)N(alquilo)2, -C(H)=N-NH2, C(S)NH2. C(S)NH(alquilo), o C(S)N(alquilo)2, donde alquilo, alquenilo, y/o alquinilo pueden sustituirse de manera opcional; cada R2 and R3 es independientemente H, OH, NH2, SH, F, Cl, Br, I, CN, NO2, -C(O)NH2, -C(O)NH(alquilo), y -C(O)N(alquilo)2, N3, alquilo opcionalmente sustituido incluyendo alquilo de cadena corta,

alquenilo or alquinilo opcionalmente sustituido, alquilo halogenado, C(O)O-(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O(alquenilo), -C(O)O-(alquinilo), -O(acilo), -O(alquilo), -O(alquenilo), O(alquinilo), -OC(O)NH2, NC, C(O)OH, SCN, OCN, -S(alquilo), 5 S(alquenilo), -S(alquinilo), -NH(alquilo), -N(alquilo)2, -NH(alquenilo), -NH(alquinilo), un residuo de aminoácido o un derivdo, un profármaco o un grupo saliente que proporcione OH in vivo, o un anillo heterocíclico de 3-7 miembros opcionalmente sustituido que tiene O, S y/o N independientemente como un heteroátomo tomado

10 solo o en combinación; each R2’ and R3’ es independientemente H; alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituido; -C(O)O(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O(alquenilo), -C(O)O(alquinilo), -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), -C(O)N(alquilo)2, -O(acilo), -O(de cadena corta

15 acilo), -O(alquilo), -O(alquilo de cadena corta), -O(alquenilo), halógeno, alquilo halogenado y particularmente CF3, azido, ciano, NO2, -S(alquilo), -S(alquenilo), -S(alquinilo), NH2, -NH(alquilo), N(alquilo)2, -NH(alquenilo), -NH(alquinilo), -NH(acilo), o -N(acilo)2, and R3 en 3’-C puede ser también OH; y la Base se selecciona del

20 grupo consistente en:

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35 y

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donde: cada A es independientemente N o C-R5; cada W es H, OH, -O(acilo), -O(C1-4 alquilo), -O(alquenilo), O(alquinilo), -OC(O)R4R4, -OC(O)N R4R4, SH, -S(acilo), -S(C1-4 alquilo), NH2, NH(acilo), N(acilo)2, NH(C1-4 alquilo), N(C1-4 alquilo)2, N(cicloalquilo) C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino, C3-6 cicloalquiloamino, halógeno, C1-4 alquilo, C1-4 alkoxi, CN, SCN, OCN, SH, N3, NO2, NH=NH2, N3, NHOH, -C(O)NH2, -C(O)NH(acilo), C(O)N(acilo)2, -C(O)NH(C1-4 alquilo), -C(O)N(C1-4 alquilo)2, C(O)N(alquilo) (acilo), o alquilo halogenado; cada Z es O, S, NH, N-OH, N-NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, Ncicloalquilo, alkoxi, CN, SCN, OCN, SH, NO2, NH2, N3, NH=NH, NH(alquilo), N(alquilo)2, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2; cada R4 es independientemente H, acilo, o C1-6 alquilo; cada R5 es independientemente H, Cl, Br, F, I, CN, OH, alquilo, alquenilo or alquinilo opcionalmente sutituidos, carboxi, C (=NH)NH2, C1-4 alkoxi, C1-4 alquilooxicarbonil, N3, NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, NO2, N3, alquilo halogenado especialmente CF3, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino, C3-6 cicloalquiloamino, C1-6 alkoxi, SH, -S(C1-4 alquilo), -S(C1-4 alquenilo), -S(C1-4 alquinilo), C1-6 alquilotio, C1-6 alquilosulfonilo, (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo, C3-6 cicloalquiloamino alquenilo, -alquinilo, -(O)alquilo, -(O)alquenilo, -(O)alquinilo, (O)acilo, -O(C1-4 alquilo), -O(C1-4 alquenilo), -O(C1-4 alquinilo), -0C(O)NH2, -OC(O)N(alquilo), -OC(O)R’R", -C(O)OH, C(O)O-alquilo, C(O)O-alquenilo, C(O)O-alquinilo, S-alquilo, Sacilo,

S-alquenilo, S-alquinilo, SCN, OCN, NC, -C(O)-NH2, C(O)NH(alquilo), C(O)N(alquilo)2, C(O)NH(acilo), C(O)N (acilo)2, (S)NH2, NH-alquilo, N(dialquilo)2, NH-acilo, N-diacilo, o un heterociclo de 3-7 miembros que tiene O, S, o N tomados por serparado o en cualquier combinación; cada R’ and R" es independientemente H, C1-6 alquilo, C2-6 alquenilo, C2-6 alquinilo, halógeno, alquilo halogenado, OH, CN, N3, carboxi, C14alcoxicarbonilo, NH2, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino, C1-6 alcoxi, C1-6 alquilosulfonilo, o (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo; y todas las formas tautoméricas, enantioméricas y estereoisoméricas de los mismos; con la salvedad de que cuando X es S en la Fórmula (I), el compuesto no es 5-(4-amino-imidazo [4,5-d][1,2,3] triazin-7-il)-2hidroximetil-tetrahidro-tiofeno-3-ol o 7-(4-hidroxi-5-hidroxi-metiltetrahidro-tiofeno-2-il)-3,7-dihidro-imidazo[4,5-d][1,2,3]triazin-4-uno.

En una segunda realización principal, se proporciona un compuesto de la Fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo:

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donde R, R2, R2’, R3 y R3’ son como se han definido anteriormente; X* es CY3; Y3 es hidrógeno, alquilo, bromo, cloro, flúor, yodo, ácido, ciano, alquenilo, alquinilo, -C(O)O(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), CF3, -CONH2, -CONH(alquilo), o -CON(alquilo)2;

R1 is H, OH, alquilo opcionalmente sutituido que incluye alquilo de cadena corta, ácido, ciano, alquenilo o alquinilo opcionalmente sutituido -C(O)O-(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O(alquenilo), -C(O)O-(alquinilo), -O(acilo), -O(acilo de cadena corta), 5 O(alquilo), -O(alquilo de cadena corta), -O(alquenilo), -O(alquinilo), halógeno, alquilo halogenado, -NO2, -NH2, -NH(alquilo de cadena corta), -N(de cadena corta alquilo)2, -NH(acilo), -N(acilo)2, -C(O)NH2, -C(O)NH(alquilo), o -C(O)N(alquilo)2, donde una sustitución opcional en alquilo, alquenilo, y/o alquinilo puede ser uno o más grupos de

10 halógeno, hidroxi, alcoxi o alquilotio tomados en cualquier combinación; la Base se define como anteriormente para las fórmulas (A)-(G); y todas las formas tautoméricas, enantioméricas y estereoisoméricas de los mismos;

15 con la salvedad de que cuando X es S en la Fórmula (I), el compuesto no es 5-(4-amino-imidazo [4,5-d][1,2,3] triazin-7-il)-2hidroximetil-tetrahidro-tiofeno-3-ol o 7-(4-hidroxi-5-hidroxi-metiltetrahidro-tiofeno-2-il)-3,7-dihidro-imidazo[4,5-d][1,2,3]triazin-4-uno.

En realizaciones preferentes, las Bases (A)-(G) tienen una 20 estructura seleccionada del grupo consistente en: donde cada R’ and R" independientemente es H, C1-6 alquilo, C2-6 alquenilo, C2-6 alquinilo, halógeno, alquilo halogenado, OH, CN, N3, carboxi,C1-4 alcoxicarbonilo,NH2, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino,C1-6 alcoxi,C1-6 alquilosulfonilo, (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo, tal y como se ha expresado anteriormente en las definiciones de a y Z para la Fórmula Base (A)-(G); cada W es independientemente H, Cl, Br, I, F, alquilo halogenado, alcoxi, OH, SH, O-alquilo, S-alquilo, O-alquenilo, O-alquinilo, Salquenilo, S-alquinilo, -OC(O)NR4R4, O-acilo, S-acilo, CN, SCN, OCN, NO2, N3, NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, NH-cicloalquilo, NHacilo, NH=NH, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2; y cada R4 es independientemente H, acilo, o C1-6 alquilo; cada Z es O, S, NH, N-OH, N-NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, Ncicloalquilo, alcoxi, CN, SCN, OCN, SH, NO2, NH2, N3, NH=NH, NH(alquilo), N(alquilo)2, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2.

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En sus realizaciones preferentes, los compuestos de la presente invención comprenden nucleósidos en los cuales cada variable en la Fórmula (I) se selecciona de los siguientes, en cualquier combinación: X es O o S; R es H o fosfato; R1 es H, CH2OH, o CONH2; R2 es OH o F; R3 es alquilo, especialmente metilo o propinilo, o H está en la posición 3’; A es H, CH o N; Z es O, S o NH; W es NH2, Cl, OMe, OH, NH-ciclopropilo, S-Me; y cada R’ y R’’ es independientemente Cl, CN, CONH2 o Me.

En sus realizaciones preferentes para la Fórmula (II), los compuestos de la presente invención comprenden nucleósidos en los cuales cada variable en la Fórmula (II) se selecciona de los siguientes, en cualquier combinación: X* es CH; R es H o fosfato; R1 es H, CH2OH, o CONH2; R2 es OH o F; R3 es alquilo, especialmente metilo o propinilo, o H está en la posición 3’; A es H, CH o N; Z es O, S o NH; W es NH2, Cl, OMe, OH, NH-ciclopropilo, S-Me; y cada R’ y R’’ es independientemente Cl, CN, CONH2 o Me.

En todas las realizaciones, se selecciona sustituyentes opcionales del grupo consistente en uno o más grupos o átomos de halógeno, amino, hidroxi, carboxi y alcoxi, entre otros. Se entenderá que aquí se incluyen todas las formas estereoisoméricas y tautoméricas de los compuestos mostrados.

Los compuestos activos de la presente invención pueden administrarse en combinación, alternancia o en pasos secuenciales con otro agente anti-HCV. En la terapia de combinación, las dosis efectivas de dos o más agentes se administran juntas, mientras que en la terapia de alternancia y de pasos secuenciales, una dosis efectiva de cada agente se administra en serie o secuencialmente. Las dosis administradas dependerán de los índices de absorción, inactivación y excreción del fármaco así como de otros factores conocidos por aquellos expertos en la técnica. Hay que tener en cuenta que los valores de las dosis también variarán con la gravedad de la condición que se pretende mejorar. Además, hay que entender que para un sujeto particular, los regímenes y programas específicos de las dosis deberían ajustarse con el tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que está a cargo de la administración y supervisión de la administración de las composiciones. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

Figura: 1 muestra representaciones estructurales generalizadas para la Fórmula (I) y Fórmula (II) de los ribofuranosilnucleósidos de la presente invención.

Figura 2 Figura 3: muestra estructuras generalizadas para las bases 2-azapurina de la presente invención. muestra descripciones estructurales de bases preferentes de la presente invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona un compuesto, método y composición par el tratamiento de pestivirus, flavivirus y/o hepatitis C en humanos y otros animales huéspedes que incluye la administración efectiva en un tratamiento anti-pestivirus, antiflavivirus o anti-HCV de un nucleósido beta-D o beta-L tal y como aquí se describe, o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, opcionalmente en un portador farmacéuticamente aceptable. Los compuestos de esta invención poseen actividad antiviral o se metabolizan con un compuesto que muestra dicha actividad.

Los flavivirus incluidos en el alcance de esta invención se incluyen de manera general en Fields Virology, Editores: Fields, N., Knipe, D.M y Howley, P.M; Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA; Capítulo 31 (1996). Flavivirus específicos incluyen, sin limitación: Absettarov; Alfuy; Apoi; Aroa; Bagaza; Banzi; Bououi; Bussuquara; Cacipacore; Isla Carey; Dakar bat; virus 1, 2, 3 y 4 Dengue; Edge Hill; Entebbe bat; Gadgets Gully; Hanzalova; Hypr; Ilheus; meningoencefalitis del pavo de Israel; encefalitis japonesa; Jugra; Jutiapa; Kadam; Karshi; Kedougou; Kokoera; Koutango; Kumlinge; Kunjin; enfermedad del bosque de Kyasanur; Langat; Louping ill; Meaban; Modoc; Montana leucoencefalitis myotis; encefalitis del valle Murray; Naranjal; Negishi; Ntaya; fiebre hemorrágica de Omsk; Phnom-Penh bat; Powassan; Rio Bravo; Rocio; Royal Farm; encefalitis rusa de primavera-verano; Saboya; encefalitis de St. Louis; Sal Vieja; San Perlita; Saumarez Reef; Sepik; Sokuluk; Spondweni; Stratford; Temusu; Tyuleniy; Uganda S, Usutu, Wesselsbron; West Nile; Yaounde; fiebre amarilla; y Zika.

Los pestivirus incluidos dentro del ámbito de esta invención también se incluyen de manera de manera general en Fields Virology (Id). Pestivirus específicos incluyen, sin limitación: virus de diarrea viral bovina (“DVB”); virus de fiebre porcina clásica (“CSFV”) también conocida como cólera porcino); y virus de la enfermedad de la frontera (“DV”).

HCV es un miembro de la familia Flaviviridae; sin embargo, HCV ahora se ha colocado en un nuevo género monotípico, hepacivirus. Compuestos Activos, Sales Farmacéuticamente Aceptables y Profármacos de los Mismos

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donde R es H, fosfato (incluyendo mono-, di-, o trifosfato o un profármaco de fosfato estabilizado) o fosfonato; opcionalmente alquilo sustituido incluyendo alquilo de cadena corta, alquenilo o alquinilo opcionalmente sustituido, acilo, -C(O)-(alquilo), -C(O)(alquilo de cadena corta), -C(O)(alquenilo), -C(O)(alquinilo), lípido, fosfolípido, carbohidrato, péptido, colesterol, un residuo de aminoácido o derivado, u otro grupo saliente farmacéuticamente aceptable que sea capaz de proporcionar H o fosfato cuando se administre in vivo; n es 0-2; cuando X is CH2, CHOH, CH-alquilo, CH-alquenilo, CH-alquinilo, Cdialquilo, CH-O-alquilo, CHO-alquenilo-, CH-O-alquinilo, CHS-alquilo, CH-S-alquenilo, CH-S-alquinilo, CH-halógeno, or C(halógeno)2, entonces cada R1 y R1’ es independientemente H, OH, alquilo opcionalmente sustituido incluyendo alquilo de cadena corta, ciano, alquenilo o alquinilo opcionalmente sustituido, -C(O)-(alquilo), C(O)(O)(alquilo de cadena corta), -C(O)(O)(alquenilo), -C(O) (O)(alquinilo), -O(acilo), -O(acilo de cadena corta), acyl),-O(alkyl), I(de cadena corta alquilo), -O(alquenilo), -O(alquinilo), halógeno, halógenoated alquilo, -NO2, -NH2, -NH(de cadena corta alquilo), N(alquilo de cadena corta)2, -NH(acilo), -N(acilo)2, -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), -C(O)N(alquilo)2, S(O)N-alquilo, S(O)N-alquenilo, S(O)N-alquinilo, or SCH-halógeno, donde alquilo, alquenilo, y/o alquinilo puede sustituirse de manera opcional; cuando X is O, S[O]n, NH, N-alquilo, N-alquenilo, N-alquinilo, S(O)Nalquilo, S(O)N-alquenilo, S(O)N-alquinilo, o SCH-halógeno, entonces cada R1 and R1’ es independientemente H, alquilo opcionalmente sustituido incluyendo alquilo de cadena corta, azido, ciano, alquenilo o alquinilo opcionalmente sutituido, -C(O)O-(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O-(alquenilo), -C(O)O(alquinilo), alquilo halogenado, -C(O)H2, -C(O)NH(alquilo), C(O)N(alquilo)2, -C(H)=N-NH2, C(S)NH2. C(S)NH(alquilo), o C(S)N(alquilo)2, donde alquilo, alquenilo, y/o alquinilo pueden sustituirse de manera opcional; cada R2 y R3 es independientemente H, OH, NH2, SH, F, Cl, Br, I, CN, NO2, -C(O)NH2, -C(O)NH(alquilo), y -C(O)N(alquilo)2, N3, alquilo opcionalmente sustituido incluyendo alquilo de cadena corta, alquenilo or alquinilo opcionalmente sustituido, alquilo halogenado, C(O)O-(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O(alquenilo), -C(O)O-(alquinilo), -O(acilo), -O(alquilo), -O(alquenilo), O(alquinilo), -OC(O)NH2, NC, C(O)OH, SCN, OCN, -S(alquilo), S(alquenilo), -S(alquinilo), -NH(alquilo), -N(alquilo)2, -NH(alquenilo), -NH(alquinilo), un residuo de aminoácido o un derivdo, un profármaco o un grupo saliente que proporcione OH in vivo, o un anillo heterocíclico de 3-7 miembros opcionalmente sustituido que tiene O, S y/o N independientemente como un heteroátomo tomado solo o en combinación; cada R2’ y R3’ es independientemente H; alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituido; -C(O)O(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O(alquenilo), -C(O)O(alquinilo), -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), -C(O)N(alquilo)2, -O(acilo), -O(de cadena corta acilo), -O(alquilo), -O(alquilo de cadena corta), -O(alquenilo), halógeno, alquilo halogenado y particularmente CF3, azido, ciano, NO2, -S(alquilo), -S(alquenilo), -S(alquinilo), NH2, -NH(alquilo), N(alquilo)2, -NH(alquenilo), -NH(alquinilo), -NH(acilo), o -N(acilo)2, and R3 en 3’-C puede ser también OH;

y la Base se selecciona del grupo consistente en:

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y

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35 donde:

cada A es independientemente N o C-R5; W es H, OH, -O(acilo), -O(C1-4 alquilo), -O(alquenilo), -O(alquinilo), OC(O)R4R4, -OC(O)N R4R4, SH, -S(acilo), -S(C1-4 alquilo), NH2, NH(acilo), N(acilo)2, NH(C1-4 alquilo), N(C1-4 alquilo)2, -N(cicloalquilo) C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino, C3-6 cicloalquiloamino, halógeno, C1-4 alquilo, C1-4 alkoxi, CN, SCN, OCN, SH, N3, NO2, NH=NH2, N3, NHOH, -C(O)NH2, -C(O)NH(acilo), -C(O)N(acilo)2, C(O)NH(C1-4 alquilo), -C(O)N(C1-4 alquilo)2, -C(O)N(alquilo) (acilo), o alquilo halogenado; Z es O, S, NH, N-OH, N-NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, N-cicloalquilo, alkoxi, CN, SCN, OCN, SH, NO2, NH2, N3, NH=NH, NH(alquilo), N(alquilo)2, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2; cada R4 es independientemente H, acilo, o C1-6 alquilo; cada R5 es independientemente H, Cl, Br, F, I, CN, OH, alquilo, alquenilo or alquinilo opcionalmente sutituidos, carboxi, C (=NH)NH2, C1-4 alkoxi, C1-4 alquilooxicarbonil, N3, NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, NO2, N3, alquilo halogenado especialmente CF3, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino, C3-6 cicloalquiloamino, C1-6 alkoxi, SH, -S(C1-4 alquilo), -S(C1-4 alquenilo), -S(C1-4 alquinilo), C1-6 alquilotio, C1-6 alquilosulfonilo, (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo, C3-6 cicloalquiloamino alquenilo, -alquinilo, -(O)alquilo, -(O)alquenilo, -(O)alquinilo, (O)acilo, -O(C1-4 alquilo), -O(C1-4 alquenilo), -O(C1-4 alquinilo), -0C(O)NH2, -OC(O)N(alquilo), -OC(O)R’R", -C(O)OH, C(O)O-alquilo, C(O)O-alquenilo, C(O)O-alquinilo, S-alquilo, Sacilo, S-alquenilo, S-alquinilo, SCN, OCN, NC, -C(O)-NH2, C(O)NH(alquilo), C(O)N(alquilo)2, C(O)NH(acilo), C(O)N (acilo)2, (S)NH2, NH-alquilo, N(dialquilo)2, NH-acilo, N-diacilo, o un heterociclo de 3-7 miembros que tiene O, S, o N tomados por serparado o en cualquier combinación; cada R’ and R" es independientemente H, C1-6 alquilo, C2-6 alquenilo, C2-6 alquinilo, halógeno, alquilo halogenado, OH, CN, N3, carboxi, C1-4alcoxicarbonilo, NH2, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino, C1-6 alcoxi, C1-6 alquilosulfonilo, o (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo; y todas las formas tautoméricas, enantioméricas y estereoisoméricas de los mismos;

con la salvedad de que cuando X es S en la Fórmula (I), el compuesto no es 5-(4-amino-imidazo [4,5-d][1,2,3] triazin-7-il)-2hidroximetil-tetrahidro-tiofeno-3-ol o 7-(4-hidroxi-5-hidroxi-metiltetrahidro-tiofeno-2-il)-3,7-dihidro-imidazo[4,5-d][1,2,3]triazin-4-uno.

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donde R, R2, R2’, R3 y R3’ son como se han definido anteriormente; X* es CY3; Y3 es hidrógeno, alquilo, bromo, cloro, flúor, yodo, ácido, ciano, alquenilo, alquinilo, -C(O)O(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), CF3, -CONH2, -CONH(alquilo), o -CON(alquilo)2; R1 es H, OH, alquilo opcionalmente sustituido que incluye alquilo de cadena corta, ácido, ciano, alquenilo o alquinilo opcionalmente sustituido -C(O)O-(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), C(O)O-(alquenilo), -C(O)O-(alquinilo), -O(acilo), -O(acilo de cadena corta), -O(alquilo), -O(alquilo de cadena corta), -O(alquenilo), O(alquinilo), halógeno, alquilo halogenado, -NO2, -NH2, -NH(alquilo de cadena corta), -N(de cadena corta alquilo)2, -NH(acilo), -N(acilo)2, -C(O)NH2, -C(O)NH(alquilo), o -C(O)N(alquilo)2, donde una sustitución opcional en alquilo, alquenilo, y/o alquinilo puede ser uno

o más grupos de halógeno, hidroxi, alcoxi o alquilotio tomados en cualquier combinación; la Base se define como anteriormente para las fórmulas (A)-(G); y A y Z son como se han definido anteriomente,

con la salvedad de que cuando X es S en la Fórmula (I), el compuesto no es 5-(4-amino-imidazo [4,5-d][1,2,3] triazin-7-il)-2hidroximetil-tetrahidro-tiofeno-3-ol o 7-(4-hidroxi-5-hidroxi-metiltetrahidro-tiofeno-2-il)-3,7-dihidro-imidazo[4,5-d][1,2,3]triazin-4-uno, y todas las formas tautoméricas, enantioméricas y estereoisoméricas de los mismos;

En realizaciones preferentes, las Bases (A)-(G) tienen una estructura seleccionada del grupo consistente en:

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donde cada R’ and R" independientemente es H, C1-6 alquilo, C2-6 alquenilo, C2-6 alquinilo, halogen, alquilo halogenado, OH, CN, N3, carboxi,C1-4 alcoxicarbonilo,NH2, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino,C1-6 alcoxi,C1-6 alquilosulfonilo, (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo, tal y como

se ha expresado anteriormente en las definiciones de a y Z para la Fórmula Base (A)-(G); cada W es independientemente H, Cl, Br, I, F, alquilo halogenado, alcoxi, OH, SH, O-alquilo, S-alquilo, O-alquenilo, O-alquinilo, Salquenilo, S-alquinilo, -OC(O)NR4R4, O-acilo, S-acilo, CN, SCN, OCN, NO2, N3, NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, NH-cicloalquilo, NHacilo, NH=NH, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2; y cada R4 es independently H, acilo, o C1-6 alquilo; cada Z es O, S, NH, N-OH, N-NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, Ncicloalquilo, alcoxi, CN, SCN, OCN, SH, NO2, NH2, N3, NH=NH, NH(alquilo), N(alquilo)2, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2.

En una realización particular, se proporciona un compuesto de la Fórmula (III), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos.

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cada R, R2*, y R3* independientemente es H, fosfato (incluyendo mono-, di-, o trifosfato o un profármaco estabilizado de fosfato); alquilo opcionalmente sustituido incluyendo alquilo de cadena corta, alquenilo o alquinilo opcionalmente sutituido, acilo, -C(O)-(alquilo), C(O)( alquilo de cadena corta), -C(O)-(alquenilo), -C(O)-(alquinilo), lípido, fosfolípido, carbohidrato, péptido, colesterol, un residuo o derivado de aminoácido, u otro grupo saliente farmacéuticamente aceptable que sea capaz de proporcionar H o fosfato cuando se administre in vivo; X es O, S[O]n, CH2, CHOH, CH-alquilo, CH-alquenilo, CH-alquinilo, C-dialquilo, CH-O-alquilo, CH-O-alquenilo, CH-O-alquinilo, CH-Salquilo, CH-S-alquenilo, CH-S-alquinilo, NH, N-alquilo, N-alquenilo, N-alquinilo, S(O)N-alquilo, S(O)N-alquenilo, S(O)Nalquinilo, SCHhalógeno, o C-(halógeno)2, donde alquilo, alquenilo o alquinilo pueden sustituirse de manera opcional; n es 0-2; cada R2’ independientemente es H; alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituidos; -C(O)O(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O(alquenilo), -C(O)O(alquinilo), -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), -C(O)N(alquilo)2, -OH, -O(acilo), -O(acilo de cadena corta), -O(alquilo), -O(alquilo de cadena corta), -O (alquenilo), halógeno, alquilo halogenado y particularmente CF3, ácido, ciano, NO2, -S(alquilo), -S(alquenilo), -S(alquinilo), NH2, NH(alquilo), -N(alquilo)2, -NH(alquenilo), -NH(alquinilo), -NH(acilo), o -N(acilo)2; y Base se define como anteriormente para las fórmulas (A) – (G); y preferiblemente es una Base definida por las estructuras (i) – (xi) anteriores.

En una realización, el R2’ es alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituidos; halógeno, alquilo halogenado y particularmente CF3, ácido, ciano. En una realización particular, R2’ es alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituidos; halógeno, alquilo halogenado y particularmente CF3. Incluso en otra realización particular, R2’ es CH3 o CF3.

En una realización, cada R, R2*, y R3* independientemente es H, fosfato (incluyendo mono-, di-, o trifosfato o un profármaco estabilizado de fosfato) o fosfonato; En otra realización, cada R, R2* , y R3* independientemente es H. Incluso en otra realización, cada R, R2*, y R3* independientemente es H, acilo, o un residuo acilo de aminoácido.

En una realización, X es O u S. En otra realización, X es O.

En otra realización particular, se ofrece un compuesto de la Fórmula (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos.

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cada R, R2*, y R3* independientemente es H, fosfato (incluyendo mono-, di-, o trifosfato o un profármaco estabilizado de fosfato); alquilo opcionalmente sustituido incluyendo alquilo de cadena corta, alquenilo o alquinilo opcionalmente sutituido, acilo, -C(O)-(alquilo), C(O)( alquilo de cadena corta), -C(O)-(alquenilo), -C(O)-(alquinilo), lípido, fosfolípido, carbohidrato, péptido, colesterol, un residuo o derivado de aminoácido, u otro grupo saliente farmacéuticamente aceptable que sea capaz de proporcionar H o fosfato cuando se administre in vivo; X es O, S[O]n, CH2, CHOH, CH-alquilo, CH-alquenilo, CH-alquinilo, C-dialquilo, CH-O-alquilo, CH-O-alquenilo, CH-O-alquinilo, CH-Salquilo, CH-S-alquenilo, CH-S-alquinilo, NH, N-alquilo, N-alquenilo, N-alquinilo, S(O)N-alquilo, S(O)N-alquenilo, S(O)Nalquinilo, SCHhalógeno, o C-(halógeno)2, donde alquilo, alquenilo o alquinilo pueden sustituirse de manera opcional; n es 0-2; cada R3’ independientemente es H; alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituidos; -C(O)O(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O(alquenilo), -C(O)O(alquinilo), -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), -C(O)N(alquilo)2, -OH, -O(acilo), -O(acilo de cadena corta), -O(alquilo), -O(alquilo de cadena corta), -O(alquenilo), halógeno, alquilo halogenado y particularmente CF3, ácido, ciano, NO2, -S(alquilo), -S(alquenilo), -S(alquinilo), NH2, -NH(alquilo), N(alquilo)2, -NH(alquenilo), -NH(alquinilo), -NH(acilo), o -N(acilo)2; y Base se define como anteriormente para las fórmulas (A) – (G); y preferiblemente es una Base definida por las estructuras (i) – (xi) anteriores.

En una realización, el R3’ es alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituidos; halógeno, alquilo halogenado y particularmente CF3, ácido, ciano.

En una realización particular, R3’ es alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituidos; halógeno, alquilo halogenado y particularmente CF3. Incluso en otra realización particular, R3’ es CH3

o CF3.

En una realización, cada R, R2*, y R3* independientemente es H, fosfato (incluyendo mono-, di-, o trifosfato o un profármaco estabilizado de fosfato) o fosfonato; En otra realización, cada R, R2*, y R3* independientemente es H. Incluso en otra realización, cada R, R2*, y R3* independientemente es H, acilo, o un residuo acilo de aminoácido.

En una realización, X es O u S. En otra realización, X es O.

Los nucleósidos beta-D-y beta-L-de esta invención pertenecen a una clase de agentes anti-pestivirus, anti-flavivirus y anti-HCV que inhiben polimerasa viral. Los nucleósidos de trifosfato pueden seleccionarse por su habilidad para inhibir polimerasa viral, ya sea HCV, flavivirus o pestivirus, in vitro de acuerdo con los métodos de selección establecidos a continuación. Chiron Corporation desarrolló un sistema de réplicas para comprobar compuestos potenciales anti-HCV que utiliza una secuencia péptida particular que tiene un punto de reconocimiento de proteasa HCV

(U.S. 6,436,666; U.S. 6,416,946; U.S. 6,416,944; U.S. 6,379,886;and U.S. 6,326,151, para Chiron Corporation). Otros sistemas para evaluar la habilidad de compuestos para inhibir HCV y virus relacionados incluyen aquellos de Rice (ver U.S. 5,874,565) y el ensayo de inhibición de polimerasas del Dr. Ralf Bartenschlager (ver EP 1 043 399 A2).

Unos medios alternativos para evaluar la habilidad de un compuesto para inhibir HCV, pestivirus y/o flavivirus consisten en usar sistemas predictivos con modelos de animales. El modo de elección para testar HCV es el chimpancé, que es el animal usado por los solicitantes. Los chimpancés proporcionan un excelente sistema mamífero para el estudio de compuestos anti-HCV y nos permiten comprender la predictibilidad o falta de predictibilidad en la actividad de un fármaco en base a la cercanía de su especie con los humanos.

Los compuestos activos de la presente invención pueden administrarse en combinación, alternancia o pasos secuenciales junto con otro agente anti-HCV. En terapia de combinación, las dosis efectivas de dos o más agentes se administran juntas, mientras que en la terapia de alternancia y de pasos secuenciales, una dosis efectiva de cada agente se administra en serie o secuencialmente. Las dosis administradas dependerán de los índices de absorción, inactivación y excreción del fármaco así como de otros factores conocidos por aquellos expertos en la técnica. Hay que tener en cuenta que los valores de las dosis también variarán con la

gravedad de la condición que se pretende mejorar. Además, hay que

entender que para un sujeto particular, los regímenes y programas

específicos de las dosis deberían ajustarse con el tiempo de acuerdo

con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que

está a cargo de la administración y supervisión de la administración

de las composiciones. En particular, la presente invención proporciona lo

siguiente: a) un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos; b) Una composición farmacéutica que contiene un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, opcionalmente junto con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable; c) una composición farmacéutica que contiene un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, con uno o más agentes antivirales efectivos, opcionalmente junto con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable; d) una composición farmacéutica para el tratamiento o profilaxis de una infección por pestivirus, flavivirus o HCV en un huésped, especialmente un huésped diagnosticado por tener o estar en riesgo de dicha infección, que consiste en un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, junto con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable; e) una formulación farmacéutica que consiste en un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, junto con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable;

f) un método para el tratamiento de una infección de pestivirus, flavivirus o HCV en un huésped que consiste en un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, opcionalmente con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable;

g) un método para el tratamiento de una infección de pestivirus, flavivirus o HCV en un huésped que consiste en administrar una cantidad efectiva de un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, con uno o más agentes antivirales efectivos, opcionalmente con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable;

h) un método para el tratamiento de una infección de pestivirus, flavivirus o HCV en un huésped que consiste en administrar una cantidad efectiva de un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, con uno o más agentes antivirales efectivos, opcionalmente con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable;

i) un método para el tratamiento de una infección de pestivirus, flavivirus o HCV en un huésped que consiste en administrar una cantidad efectiva de un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, con uno o más agentes antivirales efectivos, opcionalmente con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable; j) un método para el tratamiento de una infección de pestivirus, flavivirus o HCV en un huésped que consiste en administrar una cantidad efectiva de un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, con uno o más agentes antivirales efectivos, opcionalmente con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable;

k) uso de un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, opcionalmente con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable, para el tratamiento de una infección provocada por pestivirus, flavivirus o HCV en un huésped;

l) uso de un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, con uno o más agentes antivirales efectivos, opcionalmente con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable, para el tratamiento de una infección provocada por pestivirus, flavivirus o HCV en un huésped;

m) uso de un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, opcionalmente con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección provocada por pestivirus, flavivirus y/o HCV en un huésped;

n) uso de un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, con uno o más agentes antivirales efectivos y opcionalmente con un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección provocada por pestivirus, flavivirus y/o HCV en un huésped;

o) un compuesto de nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula

(I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, sustancialmente en ausencia de enantiómeros del nucleósido descrito, o sustancialmente aislados de otras entidades químicas;

p) un proceso para la preparación de un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, tal y como se describe con más detalle a continuación; y

q) un proceso para la preparación de un compuesto nucleósido beta-D-o beta-L-de la Fórmula (I) – (IV), o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco de los mismos, sustancialmente en ausencia de enantiómeros del nucleósido descrito, o sustancialmente aislados de otras entidades químicas.

El compuesto activo puede administrarse como una sal o profármaco que tras la administración al receptor es capaz de proporcionar directamente o indirectamente elcompuesto principal,

o que muestra la propia actividad. Ejemplos no limitativos son las sales farmacéuticamente aceptables, que de maneraalternativason referidas como “sales fisiológicamente aceptables”, y u n compuesto que se ha alquilado o acilado en la posición 5’ o en la base de purina o pirimidina, formando de este modo un tipo de “profármaco farmacéuticamente aceptable”. Además, las modificaciones pueden afectar a la actividad biológica del compuesto, en algunos casos incrementando la actividad con respecto al compuesto principal. Esto puede evaluarse de manera sencilla preparando la sal o el profármaco y testando su actividad antiviral de acuerdo con los métodos aquídescritos,uotrosmétodos conocidos por aquellos expertos en la técnica.

Estereoquímica

Se aprecia que los nucleósidos de lapresenteinvencióntienen varios centros quirales y pueden existir y estar aislados en formas racémicas ópticamente activas. Algunos compuestos pueden mostrar polimorfismo. Se entiende que la presente invención engloba cualquier forma racémica, ópticamente aciva, diastereomérica, polimórfica o estereoisomérica, o mezclas de las mismas, de un compuesto de la invención, que posee las propiedades útiles aquí descritas. En la técnica es bien conocido el modo en el que se preparan formas activas (por ejemplo, mediante la resolución de la forma racémica por medio de técnicas de

recristalización, mediante síntesis a partir de materiales iniciales

ópticamente activos, mediante síntesis quiral, o mediante separación

cromatográfica usando una fase fija quiral). Ejemplos de métodos para obtener materiales ópticamente

activos son conocidos en la técnica, e incluyen al menos los

siguientes: i) separación física de cristales – una técnica por medio de de la cual los cristales macroscópicos de los enantiómeros individuales se separan manualmente. Esta técnica puede ser útil si los cristales de los enantiómeros separados existen, es decir, si el material es un conglomerado y los cristales se distinguen visualmente; ii) cristalización simultánea – una técnica por medio de la cual los enantiómeros individuales se cristalizan separadamente a partir de una solución del racemato, posiblemente solamente si éste es un conglomerado en el estado sólido; iii) resoluciones enzimáticas – una por medio de la cual se realiza una separación parcial o completa de un racemato en virtud de diferentes índices de reacción para los enantiómeros con una enzima; iv) síntesis asimétrica enzimática – una técnica sintética por medio de la cual al menos un paso de la síntesis usa una reacción enzimática para obtener un precursor sintético enriquecido o enantioméricamente puro del enantiómero deseado; v) síntesis asimétrica química -una técnica sintética por medio de la cual el enantiómero deseado se sintetiza a partir de un precursor aquiral bajo condiciones que producen asimetría (es decir, quiralidad) en el producto, lo que puede conseguirse usando catalizadores quirales o auxiliares quirales; vi) separaciones diastereoméricas – una técnica por medio de la cual el compuesto racémico reacciona con un reagente enantioméricamente puro (el auxiliar quiral) que

convierte a los enantiómeros individuales en diastereomeros. A continuación, los diastereomeros resultantes se separan mediante cromatografía o cristalización en virtud de sus diferencias estructurales ahora más evidentes y más tarde se retira el auxiliar quiral para obtener el enantiómero deseado;

vii) transformaciones asimétricas de primer y segundo orden – una técnica por medio de la cual los diastereómeros de un racemato se equilibran para producir una preponderancia en solución del diastereómero a partir del enantiómero deseado o donde la cristalización preferencial del diastereómero a partir del enantiómero deseado perturba el equilibrio de modo que finalmente, todo el material en principio se convierte en diastereómero cristalino a partir del enantiómero deseado. El enantiómero deseado se libera posteriormente del diastereómero;

viii)resoluciones cinéticas – esta técnica hace referencia al logro de resolución parcial o completa de un racemato (o de una solución adicional de un compuesto parcialmente descompuesto) en virtud de índices de reacción diferentes de los enantiómeros con un reagente quiral, no racémica o un catalizador bajo condiciones cinéticas;

ix) síntesis enantioespecífica de precursores no racémicos – una técnica sintética por medio de la cual el enantiómero deseado se obtiene a partir de materiales iniciales no quirales y donde la integridad estereoquímica no se pone en peligro o mínimamente se pone en peligro durante el curso de la síntesis;

x) cromatografía líquida quiral – una técnica por medio de la cual los enantiómeros de un racemato se separan en una fase móvil líquida en virtud de sus diferentes interaccionese con una fase inmóvil. La fase inmóvil puede estar hecha de material quiral o la fase inmóvil puede contener un material quiral adicional para provocar las diferentes interacciones;

xi) cromatografía de gas quiral – una técnica por medio de la cual el racemato se volatiliza y los enantiómeros se separan en virtud de sus diferentes interaccionese en la fase móvil gaseosa con una columna que contiene una fase fija no racémica quiral adsorbente;

xii) extracción con disolventes quirales – una técnica por medio de la cual los enantiómeros se separan en virtud de la disolución preferencial de un enantiómero en un disolvente quiral particular;

xiii) transporte a través de membranas quirales – una técnica por medio de la cual se pone un racemato en contacto con una barrera de membrana fina. La barrera normalmente separa dos fluidos miscibles, uno conteniendo el racemato y una fuerza conductora de manera que la concentración o presión diferencial provoca un transporte preferencial a través de la barrera de membrana. La separación ocurre como resultado de la naturaleza quiral no racémica de la membrana que permite que solamente un enantiómero del racemato la atraviese.

Definiciones

El término “alquilo”, tal y como aquí se emplea, a menos que se indique lo contrario, hace referencia a un hidrocarbono recto, ramificado o cíclico, primario, secundario o terciario de normalmente C1 a C10, y en concreto incluye metilo, trifluorometilo, etilo, propilo, isopropilo, ciclopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo, ciclopentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, isohexilo, ciclohexilo, ciclohexilmetilo, 3-metilpentilo, 2,2-dimetilbutilo, y 2,3-dimetilbutilo. El término incluye grupos de alquilo sustituidos y no sustituidos. Los radicales por los que los grupos de alquilo pueden ser sustituidos con uno o más sustituyentes se seleccionan del grupo consistente en halo, incluyendo, Cl, F, Br e I para formar, por ejemplo, CF3, 2-Br-etilo, CH2F, CH2Cl, CH2CF3 o CF2CF3; hidroxilo, por ejemplo, CH2OH; amino, por ejemplo, CH2NH2, CH2NHCH3 o CH2N(CH3)2; carboxilato; carboxamido; alquilamino; arilamino, alcoxi; ariloxi; nitro; ácido, por ejemplo, CH2N3; ciano, por ejemplo, CH2CN; tio; ácido sulfónico; sulfato; ácido fosfónico; fosfato; y fosfonato, bien protegido o no protegido, como sea necesario, tal y como lo conocen los expertos en la técnica, tal y como se muestra en, por ejemplo, Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Willey y Sons, Segunda Edición (1991), aquí incorporado a modo de referencia.

El término “alquilo de cadena corta” tal y como aquí se emplea, a menos que se indique lo contrario, hace referencia a un grupo alquilo C1 a C6 saturado recto, ramificado, o si es apropiado cíclico como en ciclopropilo, que incluye formas sustituidas y no sustituidas. A menos que se indique lo contrario en esta solicitud, cuando el alquilo es un radical adecuado, el alquilo de cadena corta es preferente. De manera similar, cuando el alquilo o alquilo de cadena cortas es un radical adecuado, el alquilo o alquilo de cadena corta no sustiuido es preferente.

Los términos “alquilamino” y “arilamino” hacen referencia a un grupo amino que tiene uno o más sustituyentes de alquilo o arilo, respectivamente.

El término “protegido” tal y como aquí se usa, a menos que defina lo contrario, hace referencia a un grupo que se añade al átomo de oxígeno, nitrógeno o fósforo para evitar su futura reacción

o para otros fines. Los expertos en la técnica de síntesis orgánica conocen numerosos grupos protectores de oxígeno y nitrógeno.

El término “arilo” tal y como aquí se usa, a menos que se especifique lo contrario, hace referencia a fenilo, bifenilo o naftilo, y preferiblemente fenilo. El término incluye radicales sustituidos y no sustituidos. El grupo arilo puede sustituirse por uno o más radicales seleccionados del grupo consistente en alquilo, hidroxilo, amino, alquilamino, arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, tio, alquitio, carboxamido, carboxilato, ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico, fosfato, o fosfonato, bien protegidos o no protegidos, como sea necesario, tal y como lo conocen los expertos en la técnica, tal y como se muestra en, por ejemplo, Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Willey y Sons, Segunda Edición (1991), aquí incorporado a modo de referencia.

Los términos “alcarilo” y “alquilarilo” hacen referencia un grupo alquilo con un sutituyente arilo.

Los términos “aralquilo” y “arilalquilo” hacen referencia a un grupo arilo con un sustituyente alquilo.

El término “halo” tal y como aquí se usa, incluye bromo, cloro, yodo y flúor.

El término base de purina incluye, aunque no se limita a, adenina, bases 2-azapurina e imidazo-triazinas, imidazo-piridazinas, pirrolo-piridazinas, pirrolo-triazinas, triazolo-triazinas opcionalmente sutituidas incluyendo triazolo[4,5-d]triazinas, pirazolo-triazinas incluyendo pirazolo[4,5-d]triazinas, N6-alquilpurinas, N6-acilpurinas (donde acilo es C(O)(alquilo, arilo, alquilarilo o arilalquilo), N6benzilpurina, N6-halopurina, N6-vinilpurina, N6-purina acetilénica, N6purina de acilo, N6-purina de hidroxialquilo, N6-purina de tioalquilo, N2-alquilpurinas, N2-alquil-6-tiopurinas, C5-purina de hidroxialquilo, N2-alquilpurinas, N6-alquil-6-tiopurinas, triazolopiridinilo, imidazolopiridinilo, pirrolopirimidinilo, y pirazolopirimidinilo.

Quizás, la Base se selecciona del grupo consistente en:

imagen1

y

imagen1

El término “acilo” hace referencia a un éster de ácido carboxílico en el que el radical no-carbonilo del grupo éster se selecciona de alquilo o alqulo de cadena corta recto, ramificado o cíclico; alcoxialquilo que incluye metoximetilo; aralquilo que incluye bencilo; ariloxialquilo como fenoximetilo; arilo que incluye fenilo opcionalmente sustituido por halógeno, C1-C6 alquilo o C1-C6 alcoxi; ésteres de sulfonato como alquilo o aralquilo sulfonilo que incluye metanosulfonilo; el éster mono-, di-o trifosfato, tritilo o monometoxitritilo; bencilo sustituido; trialquilsililo como, por ejemplo, dimetil-t-butilsililo o difenilmetilsililo. Los grupos arilo en los ésters normalmente están formados por un grupo fenilo. El término “acilo de cadena corta” hace referencia a un grupo acilo en el que el radical no-carbonilo es alquilo de cadena corta.

Tal y como aquí se emplean, los término “sustancialmente libre de” y “sustancialmente en ausencia de” hacen referencia a una composición de nucleósido que incluye al menos 85-90% por peso, preferiblemente 95-98% por peso, e incluso más preferentemente 99-100% por peso, del enantiómero designado del nucleósido. En una realización preferente, los compuestos listados en los métodos y compuestos de esta invención están sustancialmente libres de enantiómeros sin contar con el designado.

De manera similar, el término “aislado” hace referencia a una composición de nucleósido que incluye al menos 85-90% por peso, preferiblemente 95-98% por peso, e incluso más preferentemente 99-100% por peso, del nucleósido y el resto está formado por otras especies químicas de enantiómeros.

El término “independientemente” aquí se usa para indicar que una variable se aplica en cualquier caso con independencia de la presencia o ausencia de una variable que tiene la misma definición

o una definición diferente dentro del mismo compuesto. Por lo tanto, en un compuesto en el que R” aparece dos veces y se define como “independientemente carbono o nitrógeno”, ambos R’’s pueden ser carbono, ambos R” pueden ser nitrógeno o un R” puede ser carbono y el otro nitrógeno.

El término “huésped”, tal y como aquí se emplea, hace referencia a un organismo unicelular o multicelular en el que el virus puede replicarse, incluyendo líneas celulares y animales, y preferiblemente un humano. De manera alternativa, el huésped puede estar transportando una parte de genoma de flavivirus o pestivirus, cuya réplica o función pude alterarse por los compuestos de la presente invención. El término huésped, en concreto, hace referencia a células infectadas, células transfectadas con todo o parte del genoma de flavivirus o pestivirus en animales, en particular primates (incluyendo chimpancés) y humanos. En la mayoría de las aplicaciones de esta invención en animales, el huésped es un paciente humano. Sin embargo, las aplicaciones veterinarias en ciertas indicaciones se anticipan claramente por la presente invención, como en el caso de los chimpancés.

El término “sal o profármaco farmacéuticamente aceptable” se usa a lo largo de la descripción para describir una forma farmacéuticamente aceptable (éster, éster de fosfato, sal de un éster

o un grupo relacionado) de un compuesto nucleósido, que, tras la administración a un paciente, proporciona el compuesto nucleósido. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen aquellas derivadas de bases y ácidos orgánicos e inorgánicos farmacéuticamente aceptables. Sales adecuadas incluyen aquellas derivadas de metales de alcali como potasio y sodio, metales de tierra alcalina como calcio y magnesio, entro otros numerosos ácidos conocidos en la rama farmacéutica. Profármacos farmacéuticamente aceptables hacen referencia a un compuesto que se metaboliza, por ejemplo, hidroliza u oxida, en el huésped para formar el compuesto de la presente invención. Ejemplos típicos de profármacos incluyen compuestos que tienen grupos protectores biológicamente volubles en un radical funcional del compuesto activo. Los profármacos incluyen compuestos que pueden oxidarse, reducirse, aminarse, desaminarse, someterse a hidroxilación, deshidroxilación, hidrolización, deshidrolización, alquilación, desalquilación, acilación, desacilación, fosforilación, desfosforilación para producir el compuesto activo. Los compuestos de esta invención poseen actividad antiviral contra flavivirus, pestivirus o HCV o se metabolizan con un compuesto que muestra dicha actividad.

Formulaciones con Profármaco de Nucleósido

Cualquiera de los nucleósidos aquí descritos puede administrarse como un profármaco de nucleótido para mejorar la actividad, biodisponibilidad, estabilidad o sino alterar las propiedades del nucleósido. Se conocen un número de ligandos de profármaco de nucleótido. En general, la alquilación, acilación u otra modificación lipofílica del mono-, di-o trifosfato del nucleósido reduce la polaridad y permite el paso a las células. Ejemplos de grupos sustituyentes que sustituyen uno o más hidrógenos en el radical de fosfato son alquilo, arilo, esteroides, carbohidratos, incluyendo azúcares, 1,2-diacilglicerol, alcoholes, acilo (incluyendo acilo de cadena corta); alquilo (incluyendo alquilo de cadena corta); éster de sulfonato que incluye alquilo o arilalquilo sulfonilo que incluye metanosulfonilo y bencilo, donde el grupo fenilo se sustituye de manera opcional por uno o más sustituyentes tal y como se indica en la definición de arilo aquí dada; arilsulfonilo opcionalmente sustituido; un lípido, incluyendo fosfolípido; un residuo o derivado de aminoácido; un carbohidrato; un péptido; colesterol; u otro grupo saliente farmacéuticamente aceptable que, cuando se administre in vivo, proporcione un compuesto en el que R1 es independientemente H o fosfato. Se describen muchos más en R. Jones y N. Bischoferger, Antiviral Research, 1995, 27:1-17. Cualquiera de estos puede usarse en combinación con los nucleósidos descritos para conseguir el efecto deseado.

En casos en los que los compuestos sean suficientemente básicos o ácidos para formar ácidos o sales base estables y no tóxicas, la administración del compuesto como una sal farmacéuticamente aceptable puede ser apropiado. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables son sales ácidas orgánicas de adición formadas con ácidos, que forman un anión fisiológico aceptable, por ejemplo, tosilato, metanosulfonato, acetato, citrato, malonato, tartarato, sucinato, benzoato, ascorbato, α-ketoglutarato, y α-glicerofosfato. Sales inorgánicas adecuadas también pueden formarse, incluyendo sulfato, nitrato, bicarbonato y sales de carbonato.

Las sales farmacéuticamente aceptables pueden obtenerse usando procedimientos estándares bien conocidos en la técnica, por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto suficientemente básico como una amina con un ácido adecuado produciendo un anión fisiológicamente aceptable. También pueden hacerse sales de metales alcali (por ejemplo, sodio, potasio o litio) o de metal de tierra alcalina (por ejemplo calcio) de ácidos carboxílicos.

El nucleósido activo también puede ofrecerse como un lípido 5’-fosfoéter o un lípido 5’-éter, tal y como se describe en las siguientes referencias, que aquí se incorporan a modo de referencia: Kucera, L.S., N. Iyer, E. Leake, A. Raen, Modest E.K., D.L.W., and C. Piantadosi. 1990. "Análogos nuevos de lípido de éter interactivos con membrana que inhiben la producción infecciosa de VIH-1 e inducen la formación de virus defectivo” AIDS Res. Hum. Retro Viruses. 6:491-501; Piantadosi, C., J. Marasco C.J., S.L. Morris-Natschke, K.L. Meyer, F. Gumus, J.R. Surles, K.S. Ishaq, L.S. Kucera, N. Iyer, C.A. Wallen, S. Piantadosi, y E.J. Modest. 1991.

Ejemplos no limitativos de patentes de Estados Unidos que describen sustituyentes lipofílicos que pueden incorporarse de manera covalente al nucleósido, preferiblemente en la posición 5’OH del nucleósido o preparaciones lipofílicas, incluyen las Patentes de Estados Unidos Números 5,149,794 (Sep. 22, 1992, Yatvin et al.); 5,194,654 (Mar. 16, 1993, Hostetler et al., and 5,223,263 (Junio 29, 1993, Hostetler et al.); todas ellas aquí se incorporan a modo de referencia. Solicitudes de patentes extranjeras que describen sustituyentes lipofílicos que pueden unirse a los nucleósidos de la presente invención, o preparaciones lipofílicas, incluyen WO 89/02733, W0 90/00555, W0 91/16920, W0 91/18914, W0 93/00910, W0 94/26273, W0 96/15132, EP 0 350 287, EP 93917054.4, y W0 91/19721.

Terapia de Combinación y Alternancia

Se ha reconocido que variantes de HCV resistentes al fármaco pueden aparecer tras un tratamiento prolongado con un agente antiviral. La resistencia al fármaco ocurre en la mayoría de los casos por la mutación de un gen que codifica una enzima usada en la réplica viral. La eficacia del fármaco contra la infección de HCV puede prolongarse, aumentarse o restablecerse administrando el compuesto en combinación o en alternancia con un segundo, y quizás un tercer compuesto antiviral que induzca una mutación diferente de la causada por el primer fármaco. De manera alternativa, la farmacocinética, biodistribución y otros parámetros del fármaco pueden alterarse mediante dicha terapia de combinación o alternancia. En general, la terapia de combinación es normalmente la preferida sobre la terapia de alternancia porque induce múltiples tensiones simultáneas sobre el virus.

Cualquiera de los tratamientos HCV descritos en el Contexto de la Invención puede usarse en combinación o alternancia con los compuestos descritos en esta descripción. Ejemplos no limitativos incluyen:

(1) Interferón

Los interferones (IFNs) son compuestos que se encuentran disponibles en el mercado para el tratamiento de hepatitis crónica desde hace casi una década. IFNs son glicoproteínas producidas por células inmunes en respuesta a una infección viral. IFNs inhiben la réplica viral de muchos virus, incluyendo HCV, y cuando se usan en único tratamiento para infección de hepatitis C, IFN suprime el suero HCV-ARN hasta niveles indetectables. Además, IFN normaliza los niveles de aminotransferasa en suero.

Desafortunadamente, los efectos de IFN son temperales y una respuesta continua y sostenida solamente se da en el 8%-9% de los pacientes crónicamente infectados por HCV (Gary L. Davis. Gastroenterology 118:S104-S114, 2000).

Un número de patentes describen tratamientos de HCV usando terapias basadas en interferón. Por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5,980,884 de Blatt et al., describe métodos para nuevos tratamientos de pacientes afectados por HCV que usan interferón de consenso. La Patente de Estados Unidos Nº 5,942,223 de Bazer et al. describe una terapia anti-HCV que usa interferón-tau ovino o bovino. La Patente de Estados Unidos Nº 5,928,636 de Alber et al. describe la terapia de combinación de interleucina-12 e interferón alfa para el tratamiento de enfermedades infecciosas entre las que incluye HCV. La Patente de Estados Unidos Nº 5,908,621 de Glue et al. describe el uso de interferón modificado por glicol de polietileno para el tratamiento de HCV. La Patente de Estados Unidos Nº 5,849,696 de Chretien et al. describe el uso de timosinas, solas o en combinación con interferón, para el tratamiento de HCV. La Patente de Estados Unidos Nº 5,830,455 de Valtuena et al. describe una terapia de combinación HCV que emplea interferón y un neutralizador de radicales libres. La Patente de Estados Unidos Nº 5,738,845 de Imakawa describe el uso de proteínas de interferón tau humano para tratar HCV. Otros tratamientos basados en interferón para HCV también se describen en Patente de Estados Unidos Nº 5,676,942 de Testa et al., Patente de Estados Unidos Nº 5,372,808 de Blatt et al., y Patente de Estados Unidos Nº 5,849,696.

(2)Ribavirina (Battaglia, A.M. et al., Ann. Pharmacother, 2000,. 34, 487-494); Berenguer, M. et al. Antivir. Ther., 1998, 3 (Suppl. 3), 125-136).

Ribavirina 1-β-D-ribofuranosil-1-1,2,4-trizol-3-carboxamida) es un análogo de nucleósido de amplio espectro sintético que no induce interferón. Se vende bajo los nombres comerciales Virazole™ (The Merck Index, 11ª edición, Editor: Budavari, S., Merck & Co., Inc., Rahway, NJ, p1304, 1989); Rebetol (Scherig Plough) y Co-Pegasus (Roche). La Patente de Estados Unidos Nº 3,798,209 y RE29,835 (ICN Pharmaceuticals) describen y reivindican ribavirina. La ribavirina es estructuralmente similar a la guanosina, y tiene una actividad vitro contra varios virus de ADN y ARN que incluyen Flaviviridae (Gary L. Davis. Gastroenterology 118:S104-S114, 2000). Patente de Estados Unidos Nº 4,211,771 (de ICN Pharmaceuticals) describe el uso de ribavirina como un agente antiviral. Ribavirina reduce los niveles de aminotransferasa en suero al nivel normal en el 40% de los pacientes, pero no tiene niveles más bajos de suero de HCV-ARN (Gary L. Davis. Gastroenterology 118:S104-S114, 2000). Por lo tanto, la ribavirina sola no es efectiva para reducir los niveles de ARN virales. Además, la ribavirina tiene una significativa toxicidad y es conocida por producir anemia.

Combinación de Interferón y Ribavirina Schering-Plough vende ribavirina como cápsulas Rebetol® (200 mg) para la administración a pacientes con HCV. FDA de Estados Unidos ha aprobado las cápsulas Rebetol para tratar infección crónica de HCV en combinación con los productos Intron®A y PEG-Intron™ alfa-interferón-2b de Schering. Las cápsulas Rebetol no están aprobadas para monoterapia (es decir, la administración independiente de Intron®A o PEG-Intron), a pesar de que Intron A y PEG-Intron son aprobadas para monoterapia (es decir, sin la administración de ribavirina). Hoffman La Roche está vendiendo ribavirina bajo el nombre Co-Pegasus en Europa y en los Estados Unidos, también para uso en combinación con interferón en el tratamiento de HCV. Otros productos alfa interferón incluyen Roferon-A (Hoffmann-La Roche), Infergen® (Intermune, anteriormente product de Amgen’s), y Wellferon® (Wellcome Foundation) están actualmente aprobados por la FDA para monoterapia de HCV. Los productos de inteferón que actualmente se encuentran en desarrollo para HCV incluyen: Roferon-A (interferón alfa-2a) de Roche, PEGASYS (interferón alfa-2a pegilado) por Roche, INFERGEN (interferón alfacon-1) por InterMune, OMNIFERON (interferón natural) por Viragen, ALBUFERON por Human Genome Sciences, REBIF (interferón beta-1a) por Ares-Serono, Omega Interferon por BioMedicine, Oral Interferon Alpha por Amarillo Biosciences, e Interferón gamma-1b por InterMune.

La combinación de IFN y ribavirina para el tratamiento de infección por HCV ha resultado ser efectiva en el tratamiento de pacientes anteriormente no tratados con IFN (por ejemplo, Battaglia,

A.M. et al., Ann. Pharmacother. 34:487-494, 2000). El tratamiento de combinación es efectivo antes de que la hepatitis se desarrolle como cuando se presente la enfermedad histológica (por ejemplo, Berenguer, M. et al. Antivir. Ther. 3(Suppl. 3):125-136, 1998). En la actualidad, la terapia más efectiva para HCV es la terapia de combinación de interferón pegilado con ribavirina (2002 NIH Conferencia de Desarrollo de Consenso sobre la Gestión de Hepatitis C). Sin embargo, los efectos secundarios de la terapia de combinación son importantes e incluyen hemolisis, síntomas similares a los de la gripe, anemia y fatiga ((Gary L. Davis. Gastroenterology 118:S104-S114, 2000).

(3)Se han desarrollado inhibidores de proteasa para el tratamiento de infecciones de Flaviviridae. Entre los ejemplos se incluyen, aunque no se limitan a, los siguientes:

Inhibidores de proteasa NS3 con base de sustrato (ver, por ejemplo, Atwood et al., Antiviral peptide derivatives, PCT WO98/22496, 1998; Attwood et al., Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1999, 10, 259-273; Attwood et al., Preparation and use of amino acid derivatives as anti-viral agents, Publicación de Patente Alemana DE 19914474; Tung et al. Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis C virus NS3 protease, PCT WO 98/17679), incluyendo alfacetoamidas e hidrazinoureas, e inhibidores que terminan en un electrófilo como ácido boronico o fosfanato (ver, por ejemplo, Llinas-Brunet et al, Hepatitis C inhibitor peptide analogues, PCT WO 99/07734);

Inhibidores sin base de sustrato como derivado de 4,6trihidroxi-3-nitro-benzamida (ver, por ejemplo, Sudo K. et al., Biochemical and Biophysical Research Communications, 1997, 238, 643-647; Sudo K. et al. Antiviral Chemistry y Chemotherapy, 1998, 9, 186), incluyendo RD3-4082 y RD3-4078, el primero sustituidos en la amida por una cadena de 14 carbonos y el segundo procesando un grupo para-fenoxifenilo;

Las fenontrenoquinonas que poseen actividad contra proteasa, por ejemplo en SDS-PAGE y/o ensayos de autoradiografía, como, por ejemplo, Sch 68631, aisladas del caldo de cultivo de fermentación de Streptomyces sp. (ver, por ejemplo, Chu M. et al., Tetrahedron Letters, 1996, 37, 7229-7232), y Sch 351633, aisladas de los hongos Penicillium griseofulvum, que demuestra actividad en un ensayo de proximidad de centelleo (ver, por ejemplo, Chu M. et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 9, 1949-1952); y

Inhibidores NS3 selectivos, por ejemplo, basados en la macromolécula eglin c, aislada de la sanguijuela (ver, por ejemplo, Qasim M.A. et al., Biochemistry, 1997, 36, 1598-1607). La potencia nanomolar contra enzima de proteasa HCV NS3 se ha coseguido mediante el diseño de inhibidores selectivos basados en la macromolécula eglin c. Eglin c, aisalda de la sanguijuela, es un potente inhibidor de varias proteasas de serina como S. griseus proteasas A y B, α-quimotripsina, quimasa y subtilisina.

Varias patentes de Estados Unidos describen inhibidores de proteasa para el tratamiento de HCV. Ejemplos no limitativos incluyen, aunque no se limitan a, los siguientes. Patente de Estados Unidos Nº. 6,004,933 de Spruce et al. describe una clase de inhibidores de proteasa cisteína para inhibir endopeptidasa HCV.

La Patente de Estados Unidos Nº. 5,990,276 de Zhang et al. describe inhibidores sintéticos de proteasa NS3 de virus de hepatitis C. El inhibidor es una subsecuencia de un sustrato de la proteasa NS3 o un sustrato del cofactor NS4A. El uso de enzimas de restricción para tratar HCV se describe en la Patente de Estados Unidos Nº. 5,538,865 to Reyes et al. Péptidos como inhibidores de proteasa serina NS3 de HCV se describen en WO02/008251 de Corvas International, Inc, y WO02/08187 y WO 02/008256 de Schering Corporation. Los tripéptidos inhibidores de HCV se describen en las Patente de Estados Unidos Números 6,534,523, 6,410,531, y 6,420,380 de Boehringer Ingelheim y WO 02/060926 de Bristol Myers Squibb. Los péptidos diarilos como inhibidores de proteasa serina NS3 de HCV se describen en WO 02/48172 de Schering Corporation. Imidazoleidinonas como inhibidores de proteasa serina NS3 de HCV se describen en WO 02/08198 de Schering Corporation y WO 02/48157 de Bristol Myers Squibb. WO 98/17679 de Vertex Pharmaceuticals y WO 02/48116 de Bristol Myers Squibb también describen inhibidores de proteasa HCV. Derivados de tiazolidina, por ejemplo, que muestren una relevante inhibición en una ensayo HPLC de fase inversa con una proteína de fusión NS3/4A y un sustrato NS5A/5B (ver, por ejemplo, Sudo K. et al., Antiviral Research, 1996, 32, 9-18), especialmente el compuesto RD-1-6250, que posee un radical de cinamoil fusionado sustituido por una cadena larga de alquilo, RD4 6205 y RD4 6193;

(5): Tiazolidinas y benzanilidas, por ejemplo, tal y como se identifican en Kakiuchi N. et al. J. EBS Letters 421, 217-220; Takeshita N. et al. Analytical Biochemistry, 1997, 247, 242-246;

(6): Inhibidores de helicasa (ver, por ejemplo, Diana G.D. et al., Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C, Patente de Estados Unidos Nº 5,633,358; Diana G.D. et al., Piperidine derivatives, pharmaceutical compositions thereof and their use in the treatment of hepatitis C, PCT WO 97/36554);

(7): Inhibidores de polimerasa como i) análogos nucleótidos, como gliotoxina (ver, por ejemplo, Ferrari R. et al. Journal of Virology, 1999, 73, 1649-1654); ii) el product natural cerulenina (ver, por ejemplo, Lohmann V. et al., Virology, 1998, 249, 108-118); y iii) inhibidores de polimerasa no nucleósidos, incluyendo, por ejemplo, el compuesto R803 (ver, por ejemplo, WO 04/018463 A2 y WO 03/040112 A1, ambas de Rigel Pharmaceuticals, Inc.); pirimidinas de diamina sustituidas (ver, por ejemplo, WO 03/063794 A2 de Rigel Pharmaceuticals, Inc.); derivados de benzimidazola (ver, por ejemplo, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2004, 14:119-124 y Bioorg. Med Chem. Lett., 2004, 14:967-971, ambas de Boehringer Ingelheim Corporation); fenilalaninas sustituídos por N-N (ver, por ejemplo, J.

Biol. Chem., 2003, 278:9495-98 y J. Med. Chem., 2003, 13:1283-85, ambas de Shire Biochem, Inc.); ácidos carboxílicos tiofeno-2 sustituidos (ver, por ejemplo, Bioorg. Med Chem. Lett., 2004, 14:793796 and Bioorg. Med Chem. Lett., 2004, 14:797-800, ambas de Shire Biochem, Inc.); α,γ-diketoácidos (ver, por ejemplo, J. Med. Chem., 2004, 14-17 y WO 00/006529 A1, ambas de Merck & Co., Inc.); y derivados de ácido mecónico (ver, por ejemplo, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2004, 3257-3261, WO 02/006246 A1 yWO03/062211 A1, all to IRBM Merck & Co., Inc.);

(8): Oligonucléotidos de fosforotioatos antisentido (S-ODN) complementarios, por ejemplo, a tramos de secuencia en la región 5’ no codificadora (NCR) del virus (ver, por ejemplo, Alt M. et al., Hepatology, 1995, 22, 707-717), o a nucleótidos 326-348 que forman

el extremo 3’ del NCR y del HCV ARN (ver, por ejemplo, Alt M. et al., Archives of Virology, 1997, 142, 589-599; Galderisi U. et al., Journal of Cellular Physiology, 1999, 181, 251-257).

(9): Inhibidores de traslación dependiente de IRES (ver, por ejemplo, Ikeda N et al., Agent for the prevention and treatment of hepatitisC, Japanese Patent Pub. JP-08268890; Kai Y. et al. Prevention and treatment of viral diseases, Publicación de Patente Japonesa JP10101591).

(10): Ribozimas resistentes a nucleasa (ver, por ejemplo, Maccjak, D.

J.: et al., Hepatology 1999, 30, extracto 995; Patente de Estados Unidos Nº 6,043,077 de Barber et al. y Patentes de Estados Unidos Números 5,869,253 y 5,610,054 de Draper et al.). 11) También se han desarrollado análogos nucleósidos para el tratamiento de infecciones de Flaviviridae.

Idenix Pharmaceuticals, Ltd. describe nucleósidos ramificados, y su uso en el tratamiento de HCV y flavivirus y pestivirus en las Publicaciones de Patente de Estados Unidos Números 2003/0050229 A1, 2004/0097461 A1, 2004/0101535 A1, 2003/0060400 A1, 2004/0102414 A1, 2004/0097462 A1, y 2004/0063622 A1 que corresponde a los Números de Publicación Internacional WO 01/90121 y WO 01/92282. Un método para el tratamiento de infección de hepatitis C (y flavivirus y pestivirus) en humanos y otros animales huéspedes se describe en las publicaciones de Idenix que incluye la administración de una cantidad efectiva de nucleósidos β-D o β-L ramificados 1’, 2’, 3’ o 4’ biológicamente activos o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo, administrado bien solo o en combinación, opcionalmente en un portador farmacéuticamente aceptable. Ver también Número de Publicación de Patente de Estados Unidos 2004/006002 y 2004/006007 así como WO 03/026589 y WO 03/026675. Idenix Pharmaceuticals, Ltd. también describe en el Número de Publicación de Patente de Estados Unidos 2004/0077587 profármacos de nucleósidos ramificados farmacéuticamente aceptables, y su uso en el tratamiento de HVC y flavivirus y pestivirus en profármacos. Ver también Números de Publicaciones PCT WO 04/002422, WO 04/002999 y WO 04/003000. Además, Idenix Pharmaceuticals, Ltd. también describe en WO 04/046331 mutaciones de Flaviviridae provocadas por nucleósidos β-D o β-L ramificados 2’ biológicamente activos o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo.

Biota Inc. Describe varios derivados de fosfato de nucleósidos, incluyendo nucléosidos β-D o β-L ramificados 2’, 3’ o 4’ para el tratamiento de infección de hepatitis C en la Publicaciónd e

Patente Internacional WO 03/072757.

La Patente de Estados Unidos Número 6,660,721; los Números de Publicación de Patente de Estados Unidos /083307 A1, 2003/008841 A1, y 2004/01107118; así como los Números de Publicación de Patente Internacional WO 02/18404; WO 02/100415, WO 02/094289, y WO 04/043159; presentadas por F. Hoffmann-La Roche AG, describen varios análogos de nucleósidos para el tratamiento de réplica de ARN HCV.

Pharmasset Limited describe varios nucleósidos y antimetabolitos para el tratamiento de una variedad de virus entre los que se incluye Flaviviridae, y en particular HCV, en los Números de Publicación de Patente USA 2003/0087873, 2004/0067877, 2004/0082574, 2004/0067877, 2004/002479, 2003/0225029, y 2002/00555483, así como los Números de Publicación de Patente Internacional WO 02/32920, WO 01/79246, WO 02/48165, WO 03/068162, WO 03/068164 and WO 2004/013298.

(12): Otros compuestos misceláneos que incluyen 1-aminoalquilciclohexanos (por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 6,034,134 de Gold et al.), lípidos de alquilo (por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 5,922,757 de Chojkier et al.), vitamina E y otros antioxidantes (por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 5,922,757 de Chojkier et al.), escualeno, amantadina, ácidos biliares (por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 5,846,964 de Ozeki et al.), N-(fosfonoacetilo)-L-ácido espártico (por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 5,830,905 de Diana et al.), benzenodicarboxamidas (por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 5,633,388 de Diana et al.), derivados de ácido poliadenílico (por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 5,496,546 to Wang et al.), 2’,3’-dideoxinosina (por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 5,026,687 de Yarchoan et al.), benzimidazolas (por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 5,891,874 de Colacino et al.), extractos de plantas (por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 5,837,257 de Tsai et al., Patente de Estados Unidos Nº 5,725,859 de Omer et al., y Patente de Estados Unidos Nº 6,056,961), y piperidenos (por ejemplo, Patente de Estados Unidos Nº 5,830,905 de Diana et al.).

(13): Otros compuestos que actualmente se encuentran en desarrollo clínico para el tratamiento de virus de hepatitis C incluyen, por ejemplo: Interleukina-10 de Schering-Plough, IP-501 de Interneuron, Merimebodib VX-497 por Vertex, AMANTADINE® (Symmetrel) por Endo Labs Solvay, HEPTAZYME® por RPI, IDN-6556 por Idun Pharma., XTL-002 por XTL., HCV/MF59 por Chiron, CIVACIR® (Immuneglobulina Hepatitis C) por NABI, LEVOVIRIN® por ICN/Ribapharm, VIRAMIDINE® por ICN/Ribapharm, ZADAXIN® (thymosin alfa-1) por Sci Clone, timosina más interferón pegilado por Sci Clone, CEPLENE® (dihidrocloruro de histamina) por Maxim, VX 950 / LY 570310 por Vertex/Eli Lilly, ISIS 14803 por Isis Pharmaceutical/Elan, IDN-6556 por Idun Pharmaceuticals, Inc., JTK 003 por AKROS Pharma, BILN-2061 por Boehringer Ingelheim, CellCept (micofenolato mofetilo) por Roche, T67, un inhbidor β

tubulina, por Tularik, una vacuna terapéutica dirigida a E2 por Innogenetics, FK788 por Fujisawa Healthcare, Inc., IdB 1016 (Siliphos, silibina oral-fosfaodilcolina fitosoma), inhibidores de réplica de ADN (VP50406) por ViroPharma/Wyeth, vacuna terapéutica por Intercell, vacuna terapéutica por Epimmune/Genencor, inhibidores IRES por Anadys, ANA 245 y ANA 246 por Anadys, inmunoterapia (Therapore) por Avant, inhibidor de proteasa por Corvas/SChering, inhibidor de helicasa por Vertex, inhibidor de fusión por Trimeris, terapia con célula T por CellExSys, inhibidro de polimerasa por Biocryst, química orientada a ARN por PTC Therapeutics, Dication por Immtech, Int., inhibidor de proteasa por Agouron, inhibidor de proteasa por Chiron/Medivir, terapia antisentido por AVI BioPharma, terapia antisentido por Hybridon, hemopurificador por Aethlon Medical, vacuna terapéutica por Merix, inhibidor de proteasa por Bristol-Myers Squibb/Axys, Chron-VacC, una vacuna terapéutica, por Tripep, UT 231B por United Therapeutics, inhibidores de proteasa, helicasa y poiymerasa por Genelabs Technologies, inhibidores de IRES por Immusol, R803 por Rigel Pharmaceuticals, INFERGEN® (interferon alfacon-1) por InterMune, OMNIFERON® (interferón natural) por Viragen, ALBUFERON® por Human Genome Sciences, REBIF® (interferón beta-1a) por Ares-Serono, Interferón Omega por BioMedicine, Interferón Oral Alfa por Amarillo Biosciences, interferón gamma, interferón tau, e intermerón gamma1b por InterMune.

Composiciones Farmacéuticas

Los huéspedes, incluyendo humanos, infectados por pestivirus, flavivirus, HCV u otros organismos que se repliquen a través de polimerasa viral de ARN dependiente de ARN, pueden tratarse mediante la administración a un paciente de una cantidad efectiva del compuesto activo o un profármaco o sal del mismo farmacéuticamente aceptable en presencia de un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Los materiales activos pueden administrase a través de cualquier ruta adecuada, por ejemplo, oralmente, parentalmente, intravenosamente, intradérmicamente, subcutáneamente, o tópicamente en forma líquida o sólida.

Una dosis preferente del compuesto para pestivirus, flavivirus

o HCV se encontrará en el rango de aproximadamente 1 a 50 mg/kg, preferiblemente de 1 a 20 mg/kg, de peso corporal por día, más generalmente entre 0.1 a aproximadamente 100 mg por kilogramos de peso corporal del receptor por día. El rango de dosis efectiva de las sales y profármacos farmacéuticamente aceptables puede calcularse en base al peso del nucleósido principal que va a enviarse. Si la sal o el profármaco muestra actividad por sí mismo, la dosis efectiva puede calcularse como se ha indicado anteriormente usando el peso de la sal o el profármaco, o mediante otros medios conocidos por los expertos en la técnica.

El compuesto se administra convenientemente en una unidad en una forma adecuada de dosis, incluyendo pero sin limitar la que contiene de 7 a 3000 mg, o de 70 a 1400 mg de ingrediente activo por forma de dosis de unidad. Una dosis oral en una realización tiene 50-1000 mg. En otra realización, la forma de dosis contiene 0.5-500 mg; o 0.5-100 mg; o 0.5-50 mg; o 0.5-25 mg; o 1.0-10 mg.

Se considera que lo ideal es que el ingrediente activo se administre para conseguir las concentraciones más altas en plasma del compuesto activo de desde aproximadamente 0.2 a 70 µM, preferiblemente aproximadamente 1.0 a 10 µM. Esto puede conseguirse, por ejemplo, a través de inyección intravenosa de 0.1 a 5% solución del ingrediente activo, opcionalmente en salina, o administrado como un bolo del ingrediente activo.

La concentración de compuesto activo en la composición del fármaco dependerá de los índices de absorción, inactivación y excreción del fármaco así como de otros factores conocidos por aquellos expertos en la técnica. Es importante señalar que los valores de la dosis también dependerán de la gravedad de la condición que se pretende aliviar. Además, se entiende que para un sujeto particular, los regímenes específicos de dosis se ajustarán con el paso del tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona encargada de administrar o supervisar la administración de las composiciones, y que los rangos de concentración aquí establecidos son solamente ejemplares y no pretenden limitar el alcance o práctica de la composición reivindicada. El ingrediente activo puede administrarse una sola vez, o puede dividirse en un número de dosis más pequeñas que se administrarán en diferentes intervalos de tiempo.

Un modo preferente para la administración del compuesto activo es el modo oral. Las composiciones orales generalmente incluirán un diluyente inerte o un portador comestible. Pueden estar introducidas en cápsulas de gelatina o comprimidas en pastillas. Con el fin de una administración oral terapéutica, el compuesto activo puede incorporarse con excipientes y usado en forma de pastillas, trociscos o cápsulas. Agentes de enlace y/o materiales adyuvantes farmacéuticamente compatibles pueden incluirse como parte de la composición.

Las pastillas, píldoras, cápsulas, trociscos y similares pueden contener cualquier de los siguientes ingredientes, o compuestos de una naturaleza similar: un aglutinante como celulosa microcristalina, goma tragacanto o gelatina; un excipiente como almidón o lactosa, un agente desintegrador como ácido algínico, Primogel, o almidón de maíz; un lubricante como estearato de magnesio o estearatos; un glidante como dióxido de silicona coloidal; un endulzante como sacarosa o sacarina; o un agente saborizante como mental, salicilato de metilo o saborizante de naranja. Cuando la forma de unidad de dosis es una cápsula, puede contener, además del material del tipo mencionado, un portador líquido como aceite graso. Además, las formas de unidad de dosis pueden contener varios materiales diferentes que modifican la forma física de la unidad de dosis, por ejemplo, coberturas de azúcar, laca, u otros agentes entéricos.

El compuesto puede administrarse como un componente de un elixir, suspensión, jarabe, oblea, chicle y similares. Un jarabe puede contener, además de los compuestos activos, sacarosa como agente endulzante y ciertos conservantes, colorantes y saborizantes. El compuesto o un profármaco o sal del mismo farmacéuticamente aceptable también pueden mezclarse con otros materiales activos que no afectan a la acción deseada, o con materiales que complementan la acción deseada, como antibióticos, fungicidas, antiinflamatorios, u otros antivirales, entre los que se incluyen compuestos de nucleósido. Las soluciones o suspensiones usadas para aplicación parenteral, subcutánea, o tópica puede incluir los siguientes componentes: un diluyente estéril como agua para inyección, solución de salina, aceites fijados, glicoles de polietileno, glicerina, glicol de propileno u otros disolventes sintéticos; agentes antibacterianos como alcohol de bencilo, o parabenos de metilo; antioxidantes como ácido ascórbico o bisulfito sódico; agentes quelantes como ácido etilendiaminotetraacético; búferes como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de tonicidad como cloruro sódico o dextrosa. La preparación parental puede introducirse en ampollas, jeringas desechables o viales de múltiples dosis hechos de cristal o plástico.

Si se administra por vía intravenosa, los portadores preferentes son salina fisiológica o búfer fosfato salino (PBS).

En una realización preferente, los compuestos activos se preparan con portadores que protegerán el compuesto frente una eliminación rápida del cuerpo, como una formulación de liberación controlada, que incluye implantes y sistemas de envío microencapsulados. Pueden usarse polímeros biodegradables y biocompatibles, como etileno acetato de vinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres y ácido poliláctico. Los métodos para la preparación de tales formulaciones resultarán obvios para aquellos expertos en la técnica. Los materiales también se pueden obtener en el mercado de la mano de Alza Corporation. Las suspensiones liposomales (que incluye liposomas dirigidos a células infectadas con anticuerpos monoclonales a antígenos virales) son también preferentes como portadores farmacéuticamente aceptables. Estos pueden prepararse de acuerdo con los métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica, por ejemplo, tal y como se describe en la Patente de Estados Unidos Nº 4,522,811 (que aquí se incorpora exclusivamente

como referencia). Por ejemplo, las formulaciones de liposomas pueden prepararse disolviendo los lípidos apropiados (como estearoil fosfatidil etanolamina, estearoil fosfatidil colina, araquidoil fosfatidil colina y colesterol) en un disolvente orgánico que a 5 continuación se evapora, dejando atrás una fina capa de lípido seco sobre la superficie del recipiente o envase. A continuación, una solución acuosa del compuesto activo o sus derivados de monofosfato, difosfato y/o trifosfato se introducen en el recipiente o envase. Posteriormente, el recipiente se hace girar de manera

10 manual para liberar el material lípido de los costados del recipiente y para dispersar los agregados lípidos, formando de este modo la suspensión liposomal. Procesos para la Preparación de Compuestos Activos Los nucleósidos de la presente invención pueden sintetizarse

15 a través de métodos conocidos en la técnica. En particular, la síntesis de los presentes nucleósidos puede conseguirse sometiendo a alquilación el azúcar apropiadamente modificado, a lo que le sigue la glicosilación o mediante glicosilación seguida de alquilación del nucleósido, aunque se prefiere la alquilación del

20 azúcar apropiadamente modificado seguida de glicosilación. Las siguientes realizaciones no limitativas ilustran algunas metodologías generales para obtener los nucleósidos de la presente invención.

A. Síntesis General de 1’-C-Nucleósidos ramificados

Los ribonucleósidos ramificados 1’-C de las siguientes 25 estructuras:

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R es H, fosfato (incluyendo mono-, di-, o trifosfato o un profármaco de fosfato estabilizado) o fosfonato; n es 0-2; cuando X is CH2, CHOH, CH-alquilo, CH-alquenilo, CH-alquinilo, Cdialquilo, CH-O-alquilo, CHO-alquenilo-, CH-O-alquinilo, CH-Salquilo, CH-S-alquenilo, CH-S-alquinilo, CH-halógeno, or C(halógeno)2, entonces cada R1 y R1’ es independientemente H, OH, alquilo opcionalmente sustituido incluyendo alquilo de cadena corta, ciano, alquenilo o alquinilo opcionalmente sustituido, -C(O)-(alquilo), C(O)(O)(alquilo de cadena corta), -C(O)(O) (alquenilo),-C(O) (O)(alquinilo), -O(acilo), -O(acilo de cadena corta), acilo),-O (alquilo), -I(de cadena corta alquilo), -O(alquenilo), -O(alquinilo), halógeno, halógenoated alquilo, -NO2, -NH2, -NH(de cadena corta alquilo), N(alquilo de cadena corta)2, -NH(acilo), -N(acilo)2, -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), -C(O)N(alquilo)2, S(O)N-alquilo, S(O)N-alquenilo, S(O)N-alquinilo, or SCH-halógeno, donde alquilo, alquenilo, y/o alquinilo puede sustituirse de manera opcional; cuando ciano, alquenilo o alquinilo opcionalmente sutituido, -C(O)O(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O-(alquenilo), C(O)O-(alquinilo), alquilo halogenado, -C(O)H2, -C(O)NH(alquilo), C(O)N(alquilo)2, -C(H)=N-NH2, C(S)NH2. C(S)NH (alquilo), o C(S)N(alquilo)2, donde alquilo, alquenilo, y/o alquinilo pueden sustituirse de manera opcional; cuando X* es CY3; entonces cada R1 es H, OH, alquilo opcionalmente sustituido que incluye alquilo de cadena corta, ácido, ciano, alquenilo o alquinilo opcionalmente sustituido -C(O)O-(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O-(alquenilo), -C(O)O(alquinilo), -O(acilo), -O(acilo de cadena corta), -O(alquilo), O(alquilo de cadena corta), -O (alquenilo), -O(alquinilo), halógeno, alquilo halogenado, -NO2, -NH2, -NH(alquilo de cadena corta), -N(de cadena corta alquilo)2, -NH(acilo), -N(acilo)2, -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), o -C(O)N (alquilo)2, donde una sustitución opcional en alquilo, alquenilo, y/o alquinilo puede ser uno o más grupos de halógeno, hidroxi, alcoxi o alquilotio tomados en cualquier combinación; Y3 es hidrógeno, alquilo, bromo, cloro, flúor, yodo, ácido, ciano, alquenilo, alquinilo, -C(O)O(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), CF3, -CONH2, -CONH(alquilo), o -CON(alquilo)2; cada R2 y R3 es independientemente H, OH, NH2, SH, F, Cl, Br, I, CN, NO2, -C(O)NH2, -C(O)NH(alquilo), y -C(O)N(alquilo)2, N3, alquilo opcionalmente sustituido incluyendo alquilo de cadena corta, alquenilo or alquinilo opcionalmente sustituido, alquilo halogenado, C(O)O-(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O(alquenilo), -C(O)O-(alquinilo), -O(acilo), -O(alquilo), -O(alquenilo), O(alquinilo), -OC(O)NH2, NC, C(O)OH, SCN, OCN, -S(alquilo), S(alquenilo), -S(alquinilo), -NH(alquilo), -N(alquilo)2, -NH(alquenilo), -NH(alquinilo), un residuo de aminoácido o un derivado, un profármaco o un grupo saliente que proporcione OH in vivo, o un anillo heterocíclico de 3-7 miembros opcionalmente sustituido que tiene O, S y/o N independientemente como un heteroátomo tomado solo o en combinación; X is O, S[O]n, NH, N-alquilo, N-alquenilo, N-alquinilo, S(O)N-alquilo, S(O)N-alquenilo, S(O)N-alquinilo, o SCH-halógeno, entonces cada R1 and R1’ es independientemente H, alquilo opcionalmente sustituido incluyendo alquilo de cadena corta, azido, cada R2’ y R3’ es independientemente H; alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituido; -C(O)O(alquilo), -C(O)O(alquilo de cadena corta), -C(O)O(alquenilo), -C(O)O(alquinilo), -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), -C(O)N(alquilo)2, -O(acilo), -O(de cadena corta acilo), -O(alquilo), -O(alquilo de cadena corta), -O(alquenilo), halógeno, alquilo halogenado y particularmente CF3, azido, ciano, NO2, -S(alquilo), -S(alquenilo), -S(alquinilo), NH2, -NH(alquilo), N(alquilo)2, -NH(alquenilo), -NH(alquinilo), -NH(acilo), o -N(acilo)2, and R3 en 3’-C puede ser también OH;

y la Base se selecciona del grupo consistente en: y

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donde: cada A es independientemente N o C-R5; W es H, OH, -O(acilo), -O(C1-4 alquilo), -O(alquenilo), -O(alquinilo), OC(O)R4R4, -OC(O)N R4R4, SH, -S(acilo), -S(C1-4 alquilo), NH2, NH(acilo), N(acilo)2, NH(C1-4 alquilo), N(C1-4 alquilo)2, -N(cicloalquilo) C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino, C3-6 cicloalquiloamino, halógeno, C1-4 alquilo, C1-4 alkoxi, CN, SCN, OCN, SH, N3, NO2, NH=NH2, N3, NHOH, -C(O)NH2, -C(O)NH(acilo), -C(O)N(acilo)2,

C(O)NH(C1-4 alquilo), -C(O)N(C1-4 alquilo)2, -C(O)N(alquilo) (acilo), o alquilo halogenado; Z es O, S, NH, N-OH, N-NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, N-cicloalquilo, alkoxi, CN, SCN, OCN, SH, NO2, NH2, N3, NH=NH, NH(alquilo), N(alquilo)2, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2; cada R4 es independientemente H, acilo, o C1-6 alquilo; cada R5 es independientemente H, Cl, Br, F, I, CN, OH, alquilo, alquenilo or alquinilo opcionalmente sutituidos, carboxi, C (=NH)NH2, C1-4 alkoxi, C1-4 alquilooxicarbonil, N3, NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, NO2, N3, alquilo halogenado especialmente CF3, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino, C3-6 cicloalquiloamino, C1-6 alkoxi, SH, -S(C1-4 alquilo), -S(C1-4 alquenilo), -S(C1-4 alquinilo), C1-6 alquilotio, C1-6 alquilosulfonilo, (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo, C3-6 cicloalquiloamino alquenilo, -alquinilo, -(O)alquilo, -(O)alquenilo, -(O)alquinilo, (O)acilo, -O(C1-4 alquilo), -O(C1-4 alquenilo), -O(C1-4 alquinilo), -0C(O)NH2, -OC(O)N(alquilo), -OC(O)R’R", -C(O)OH, C(O)O-alquilo, C(O)O-alquenilo, C(O)O-alquinilo, S-alquilo, Sacilo, S-alquenilo, S-alquinilo, SCN, OCN, NC, -C(O)-NH2, C(O)NH(alquilo), C(O)N(alquilo)2, C(O)NH(acilo), C(O)N (acilo)2, (S)NH2, NH-alquilo, N(dialquilo)2, NH-acilo, N-diacilo, o un heterociclo de 3-7 miembros que tiene O, S, o N tomados por serparado o en cualquier combinación; cada R’ and R" es independientemente H, C1-6 alquilo, C2-6 alquenilo, C2-6 alquinilo, halógeno, alquilo halogenado, OH, CN, N3, carboxi, C14alcoxicarbonilo, NH2, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino, C1-6 alcoxi, C1-6 alquilosulfonilo, o (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo; y todas las formas tautoméricas, enantioméricas y estereoisoméricas de los mismos; con la salvedad de que cuando X es S en la Fórmula (I), el compuesto no es 5-(4-amino-imidazo [4,5-d][1,2,3] triazin-7-il)-2hidroximetil-tetrahidro-tiofeno-3-ol o 7-(4-hidroxi-5-hidroxi-metiltetrahidro-tiofeno-2-il)-3,7-dihidro-imidazo[4,5-d][1,2,3]triazin-4-uno, pueden preparase de acuerdo con los Esquemas 1, 2 ó 7 a continuación.

Modificación de la Lactona

El material inicial clave para este proceso es una lactona apropiadamente sustituida. La lactona puede comprarse o prepararse empleando medios conocidos en la técnica entre los que se incluyen técnicas de epimerización, sustitución y ciclización. La lactona puede opcionalmente protegerse con un grupo protector adecuado, preferiblemente con un grupo acilo o sililo, mediante métodos bien conocidos por expertos en la técnica, tal y como se muestra en Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991. La lactona protegida puede a continuación unirse a un agente de enlace adecuado, como carbono nucleófilo organometálico como reagente de Grignard, un organolitio, dialquilcobre de litio o R6-SiMe3 en TAF con el disolvente no prótico apropiado a una temperatura adecuada, para dar el azúcar 1’-alquilado.

El azúcar opcionalmente activada puede unirse a continuación a la base mediante métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, tal y como se muestra en Townsend, Chemistry of Nucleotides, Plenum Press, 1994. Por ejemplo, un azúcar acilado puede unirse a una base sililada con un ácido de Lewis como tetracloruro de estaño, tetracloruro de titanio o trimetilsililtriflato en el solvente apropiado a una temperatura adecuada.

A continuación, el nucleósido puede desprotegerse mediante medios bien conocidos en la técnica, como los mostrados por Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991.

En una realización particular, se desea el ribonucleósido ramificado en 1’-C. La síntesis del ribonucleósido se muestra en el Esquema 1. Como alternativa, se desea el deoxiribonucleósido. Para obtener estos nucleósidos, el ribonucleósido formado puede opcionalmente protegerse con medios bien conocidos por los expertos en la técnica, como los mostrados por Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991, y a continuación el 2’-OH puede reducirse con un agente reductor adecuado. De manera opcional, el 2’-OH puede activarse para facilitar la reducción como, por ejemplo, a través de la reducción de Barton.

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Método Alternativo para la Preparación de Nucleósidos Ramificados 1’-C.

El material inicial clave para este proceso es una hexona apropiadamente sustituida. La hexona puede comprarse o prepararse mediante medios conocidos que incluyen técnicas de epimerización (como, por ejemplo, mediante tratamiento alcalino), sustitución o enlace. La hexona puede protegerse de manera selectiva para dar la hexa-furanosa deseada, tal y como lo muestra Townsend, Chemistry of Nucleotides, Plenum Press, 1994.

El 1’-OH puede activarse de manera opcional con un grupo saliente adecuado como un grupo de acilo o un halógeno por medio de acilación o halogenación, respectivamente. El azúcar opcionalmente activado pueden a continuación unirse a la base mediante medios bien conocidos por aquellos expertos en la técnica, tal y como lo muestra Townsend, Chemistry of Nucleotides, Plenum Press, 1994. Por ejemplo, un azúcar acilado puede unirse a una base sililada con un ácido de Lewis, como tetracloruro de estaño, tetracloruro de titanio o trimetilsililtriflato en el solvente apropiado a una temperatura adecuada. Como alternativa, un halo-azúcar puede unirse a una base sililada en presencia de trimetilsililtriflato.

El 1’-CH2-OH, si se protege, puede desprotegerse de manera selectiva mediante métodos bien conocidos en la técnica. El hidroxilo primario resultante puede reducirse para dar el metilo, usando un agente reductor adecuado. Como alternativa, el hidroxilo puede activarse antes de la reducción para facilitar la reacción, es decir, por medio de la reducción de Barton. En una realización alternativa, el hidroxilo primario puede oxidarse con el aldehído, para unirse a continuación con el nucleófilo de carbono como un reagente de Grignard, un organolitio, dialquilcobre de litio o R6-SiMe3 en TAF con el disolvente no prótico apropiado a una temperatura adecuada.

En una realización particular, se desea el ribonucleósido ramificado en 1’-C. La síntesis de un ribonucleósido se muestra en el Esquema 2. Como alternativa, se desea el deoxiribonucleósido. Para obtener estos nucleósidos, el ribonucleósido formado puede opcionalmente protegerse con medios bien conocidos por los expertos en la técnica, como los mostrados por Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991, y a continuación el 2’-OH puede reducirse con un agente reductor adecuado. De manera opcional, el 2’-OH puede activarse para facilitar la reducción como, por ejemplo, a través de la reducción de Barton.

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Además, los L-enantiómeros que corresponden a la invención pueden prepararse siguiendo los mismos métodos generales (1 ó 2), comenzando con el correspondiente L-azúcar o nucleósido L-enantiómero como material inicial.

B. Síntesis General de Nucléosidos Ramificados en 2’-C.

Los ribonucleósidos ramificados en 2’-C de las siguientes estructuras:

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donde R, R1, R1’, R2, R2’, R3, R3’, X, X* y Base son todos como se han descrito anteriormente, pueden prepararse de acuerdo con los Esquemas 3 ó 4 a continuación.

Glicosilación de la nucleobase con un azúcar apropiadamente modificado.

El material inicial clave para este proceso es un azúcar apropiadamente sustituido por un 2’-OH y 2’-H, con un adecuado grupo saliente (LG), como un grupo de acilo o halógeno, por ejemplo. El azúcar puede comprarse o puede prepararse empleando medios conocidos que incluyen técnicas de epimerización estándar, sustitución, oxidación y/o reducción. A continuación, el azúcar sustituido puede oxidarse con un agente oxidante apropiado en un solvente compatible a una temperatura adecuada para producir el 2’azúcar modificado. Posibles agentes oxidantes son reagente de Jones (una mezcla de ácido crómico y sulfúrico), reagente de Collin (dipiridina Cr(VI)óxido), reagente de Corey (clorocromato de pirimidio), dicromato de piridinio, dicromato ácido, permanganato de potasio, MnO2, tetróxido de rutenio, catalizadores de transferencia de fase como ácido crómico y permanganato apoyados sobre un polímero, Cl2-pirimidina, H2O2-amonio molibdato, NarO2-CAN, NaOCl en HOAc, cromato de cobre, óxido de cobre, níquel de Raney, acetato de paladio, reagente de Meerwine-Ponndorf-Verley (aluminio t-butóxido con otra quetona) y N-bromosuccinimida.

Posteriormente, el enlace de un carbono nucleófilo organometálico como reagente de Grignard, un organolitio, dialquilcobre de litio o R6-SiMe3 en TAF con la quetona y un disolvente no prótico apropiado a una temperatura adecuada, produce el azúcar 2’-alquilada. La azúcar alquilada puede opcionalmente protegerse con un grupo protector adecuado, preferiblemente con un grupo acilo o sililo, empleando métodos bien conocidos por aquellos expertos en la técnica, como los mostrados

5 por Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991.

La azúcar opcionalmente sustituida puede a continuación unirse a la base mediante métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, tal y como lo expresa Townsend, Chemistry of

10 Nucleotides, Plenum Press, 1994. Por ejemplo, un azúcar acilado puede unirse a una base sililada con un ácido de Lewis, como tetracloruro de estaño, tetracloruro de titanio o trimetilsililtriflato en el solvente apropiado a una temperatura adecuada. Como alternativa, un halo-azúcar puede unirse a una base sililada en presencia de

15 trimetilsililtriflato. A continuación, el nucleósido puede desprotegerse con métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, tal y como establece Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991.

20 En una realización particular, se desea el ribonucleósido ramificado en 2’-C, cuya síntesis se muestra en el Esquema 3. Como alternativa, se desea un deoxiribonucleósido. Para obtener estos nucleósidos, el ribonucleósido formado puede opcionalmente protegerse con medios bien conocidos por los expertos en la

25 técnica, como los mostrados por Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991, y a continuación el 2’-OH puede reducirse con un agente reductor adecuado. De manera opcional, el 2’-OH puede activarse para facilitar la reducción como, por ejemplo, a través de la reducción de

30 Barton.

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Modificación de un nucleósido pre-formado

El material inicial clave para este proceso es un nucleósido apropiadamente sustituido por un 2’-OH y 2’-H. El nucleósido puede comprarse o puede prepararse empleando medios conocidos que incluyen técnicas de enlace estándar. El nucleósido puede opcionalmente protegerse con grupos protectores, preferiblemente con grupos de acilo o sililo, mediante métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, como se describe en Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991.

El nucleósido apropiadamente protegido puede a continuación oxidarse con un agente oxidante apropiado en un solvente

compatible a una temperatura adecuada para producir el 2’-azúcar modificado. Posibles agentes oxidantes son reagente de Jones (una mezcla de ácido crómico y sulfúrico), reagente de Collin (dipiridina Cr(VI)óxido), reagente de Corey (clorocromato de pirimidio), 5 dicromato de piridinio, dicromato ácido, permanganato de potasio, MnO2, tetróxido de rutenio, catalizadores de transferencia de fase como ácido crómico y permanganato apoyados sobre un polímero, Cl2-pirimidina, H2O2-amonio molibdato, NarO2-CAN, NaOCl en HOAc, cromato de cobre, óxido de cobre, níquel de Raney, acetato

10 de paladio, reagente de Meerwine-Ponndorf-Verley (aluminio tbutóxido con otra quetona) y N-bromosuccinimida. A continuación, el nucleósido puede desprotegerse con métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, tal y como establece Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis,

15 John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991. En una realización particular, se desea el ribonucleósido ramificado en 2’-C, cuya síntesis se muestra en el Esquema 4. Como alternativa, se desea un deoxiribonucleósido. Para obtener estos nucleósidos, el ribonucleósido formado puede opcionalmente

20 protegerse con medios bien conocidos por los expertos en la técnica, como los mostrados por Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991, y a continuación el 2’-OH puede reducirse con un agente reductor adecuado. De manera opcional, el 2’-OH puede activarse para

25 facilitar la reducción como, por ejemplo, a través de la reducción de Barton.

30

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En otra realización de la invención, se desean los Lenantiómeros. Estos L-enantiómeros correspondientes a los compuestos de la invención pueden prepararse siguiendo los mismos métodos generales anteriormente indicados, pero comenzando con la correspondiente L-azúcar o nucleósido Lenantiómero como material inicial.

A. Síntesis General de Nucleósidos Ramificados en 3’-C.

Los ribonucleósidos ramificados en 3’-C de las siguientes estructuras:

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donde R, R1, R1’, R2, R2’, R3, R3’, X, X* y Base son todos como se han descrito anteriormente, pueden prepararse de acuerdo con los Esquemas 5 ó 6 a continuación.

Glicosilación de la nucleobase con un azúcar apropiadamente modificado (Esquema 5)

El material inicial clave para este proceso es un azúcar apropiadamente sustituido por un 3’-OH y 3’-H, con un adecuado grupo saliente (LG), como un grupo de acilo o halógeno, por ejemplo. El azúcar puede comprarse o puede prepararse empleando medios conocidos que incluyen técnicas de epimerización estándar, sustitución, oxidación y/o reducción. A continuación, el azúcar sustituido puede oxidarse con un agente oxidante apropiado en un solvente compatible a una temperatura adecuada para producir el 3’azúcar modificado.

Posibles agentes oxidantes son reagente de Jones (una mezcla de ácido crómico y sulfúrico), reagente de Collin (dipiridina Cr(VI)óxido), reagente de Corey (clorocromato de pirimidio), dicromato de piridinio, dicromato ácido, permanganato de potasio, MnO2, tetróxido de rutenio, catalizadores de transferencia de fase como ácido crómico y permanganato apoyados sobre un polímero, Cl2-pirimidina, H2O2-amonio molibdato, NarO2-CAN, NaOCl en HOAc, cromato de cobre, óxido de cobre, níquel de Raney, acetato de paladio, reagente de Meerwine-Ponndorf-Verley (aluminio tbutóxido con otra quetona) y N-bromosuccinimida.

Posteriormente, el enlace de un carbono nucleófilo organometálico como reagente de Grignard, un organolitio, dialquilcobre de litio o R6-SiMe3 en TAF con la quetona y un disolvente no prótico apropiado a una temperatura adecuada, produce la azúcar ramificada en 3’-C. La azúcar ramificada en 3’-C puede opcionalmente protegerse con un grupo protector adecuado, preferiblemente con un grupo acilo o sililo, empleando métodos bien conocidos por aquellos expertos en la técnica, como los mostrados por Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991.

La azúcar opcionalmente protegida puede a continuación unirse a la base mediante métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, tal y como lo expresa Townsend, Chemistry of Nucleotides, Plenum Press, 1994. Por ejemplo, un azúcar acilado puede unirse a una base sililada con un ácido de Lewis, como tetracloruro de estaño, tetracloruro de titanio o trimetilsililtriflato en el solvente apropiado a una temperatura adecuada. Como alternativa, un halo-azúcar puede unirse a una base sililada en presencia de trimetilsililtriflato.

A continuación, el nucleósido puede desprotegerse con métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, tal y como establece Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991.

En una realización particular, se desea el ribonucleósido ramificado en 3’-C, cuya síntesis se muestra en el Esquema 5. Como alternativa, se desea un deoxiribonucleósido. Para obtener estos nucleósidos, el ribonucleósido formado puede opcionalmente protegerse con medios bien conocidos por los expertos en la técnica, como los mostrados por Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991, y a continuación el 2’-OH puede reducirse con un agente reductor adecuado. De manera opcional, el 2’-OH puede activarse para facilitar la reducción como, por ejemplo, a través de la reducción de Barton.

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Modificación de un nucleósido pre-formado

El material inicial clave para este proceso es un nucleósido apropiadamente sustituido por un 3’-OH y 3’-H. El nucleósido puede comprarse o puede prepararse empleando medios conocidos que incluyen técnicas de enlace estándar. El nucleósido puede opcionalmente protegerse con grupos protectores, preferiblemente con grupos de acilo o sililo, mediante métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, como se describe en Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991.

El nucleósido apropiadamente protegido puede a continuación oxidarse con un agente oxidante apropiado en un solvente compatible a una temperatura adecuada para producir el 2’-azúcar modificado. Posibles agentes oxidantes son reagente de Jones (una mezcla de ácido crómico y sulfúrico), reagente de Collin (dipiridina Cr(VI)óxido), reagente de Corey (clorocromato de pirimidio), dicromato de piridinio, dicromato ácido, permanganato de potasio, MnO2, tetróxido de rutenio, catalizadores de transferencia de fase como ácido crómico y permanganato apoyados sobre un polímero, Cl2-pirimidina, H2O2-amonio molibdato, NarO2-CAN, NaOCl en HOAc, cromato de cobre, óxido de cobre, níquel de Raney, acetato de paladio, reagente de Meerwine-Ponndorf-Verley (aluminio t-butóxido con otra quetona) y N-bromosuccinimida.

En una realización particular, se desea el ribonucleósido ramificado en 3’-C, cuya síntesis se muestra en el Esquema 6. Como alternativa, se desea un deoxiribonucleósido. Para obtener estos nucleósidos, el ribonucleósido formado puede opcionalmente protegerse con medios bien conocidos por los expertos en la técnica, como los mostrados por Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991, y a continuación el 2’-OH puede reducirse con un agente reductor adecuado. De manera opcional, el 2’-OH puede activarse para facilitar la reducción como, por ejemplo, a través de la reducción de Barton.

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En otra realización de la invención, se desean los Lenantiómeros. Estos L-enantiómeros correspondientes a los compuestos de la invención pueden prepararse siguiendo los mismos métodos generales anteriormente indicados, pero comenzando con la correspondiente L-azúcar o nucleósido Lenantiómero como material inicial. Síntesis General de Nucleósidos Ramificados en 3’-C.

Los ribonucleósidos ramificados en 4’-C de las siguientes estructuras:

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donde R, R1, R1’, R2, R2’, R3, R3’, X, X* y Base son todos como se han descrito anteriormente, pueden prepararse de acuerdo con los siguientes métodos generales.

Modificación de pentodialdo-furanosa

El material inicial clave para este proceso es una pentodialdofuranosa apropiadamente sustituido. Pentodialdo-furanosa puede comprarse o prepararse usando medios conocidos que incluyen técnicas estándares de epimerización, sustitución y ciclización.

En una realización preferente, la pentodialdo-furanosa se preparara a partir de la hexosa apropiadamente sustituida. La hexona puede comprarse o prepararse usando medios conocidos que incluyen técnicas de epimerización estándar (por ejemplo, por medio de tratamiento con alcalino), sustitución y enlace. La hexosa también puede tener forma de furanosa o ciclarse usando medios conocidos en la técnica, como la metodología mostrada por Townsend, Chemistry of Nucleotides, Plenum Press, 1994, preferiblemente mediante protección selectiva de la hexosa, para dar la hexafuranosa apropiada.

El 4’-hidroximetileno de la hexafuranosa puede a continuación oxidarse con un agente oxidante apropiado en un solvente compatible a una temperatura adecuada para producir el azúcar 4¡aldo-modificado. Posibles agentes oxidantes son reagentes de Swern, reagente de Jones (una mezcla de ácido crómico y sulfúrico), reagente de Collin (dipiridina Cr(VI)óxido), reagente de Corey (clorocromato de pirimidio), dicromato de piridinio, dicromato ácido, permanganato de potasio, MnO2, tetróxido de rutenio, catalizadores de transferencia de fase como ácido crómico y permanganato apoyados sobre un polímero, Cl2-pirimidina, H2O2amonio molibdato, NarO2-CAN, NaOCl en HOAc, cromato de cobre, óxido de cobre, níquel de Raney, acetato de paladio, reagente de Meerwine-Ponndorf-Verley (aluminio t-butóxido con otra quetona) y N-bromosuccinimida, aunque usar H3PO4, DMSO y DCC en una mezcla de benceno/piridina a temperatura ambiente es preferible.

A continuación, la pentadialdo-furanosa puede opcionalmente protegerse con un grupo protector adecuado, preferiblemente con un grupo de acilo o sililo, con métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, tal y como establece Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991. En presencia de una base, como hidróxido de sodio, la pendodialdofuranosa protegida puede a continuación unirse a un adecuado alquilo electrofílico, halógeno-alquilo (como CF3), alquenilo o alquinilo (es decir, alilo), para obtener el azúcar 4’-alquilado. Como altenativa, la pentodialdo-furanosa protegida puede enlazarse con un carbonilo correspondiente, como formaldehido, en presencia de una base como hidróxido de sodio y con un solvente polar apropiado como dioxano, a una temperatura adecuada, y a continuación reducirse con un apropiado agente reductor para producir el azúcar 4’-alquilado. En una realización, la reducción se lleva a cabo usando PhOC(S)Cl y DMAP en acetonitrilo a temperatura ambiente, seguido de un tratamiento de reflujo con ACCN y TMSS en tolueno.

La azúcar opcionalmente activada puede unirse a continuación a la base mediante métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, tal y como se muestra en Townsend, Chemistry of Nucleotides, Plenum Press, 1994. Por ejemplo, un azúcar acilado puede unirse a una base sililada con un ácido de Lewis como tetracloruro de estaño, tetracloruro de titanio o trimetilsililtriflato en el solvente apropiado a temperatura ambiente.

En una realización particular, se desea el ribonucleósido ramificado en 4’-C. Como alternativa, se desea el deoxiribonucleósido. Para obtener estos nucleósidos, el ribonucleósido formado puede opcionalmente protegerse con medios bien conocidos por los expertos en la técnica, como los mostrados por Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991, y a continuación el 2’-OH puede reducirse con un agente reductor adecuado. De manera opcional, el 2’-OH puede activarse para facilitar la reducción como, por ejemplo, a través de la reducción de Barton.

En otra realización de la invención, se desean los Lenantiómeros. Estos L-enantiómeros correspondientes a los compuestos de la invención pueden prepararse siguiendo los mismos métodos generales anteriormente indicados, pero comenzando con la correspondiente L-azúcar o nucleósido Lenantiómero como material inicial. Métodos para Síntesis de Ribofuranosil-2-azapurina Preparación de 1’-C-metil-ribofuranosil-2-azapurina por medio de 6amino-9-(1-deoxi-beta-D-psicofruansosil)purina. Como método alternativo de preparación, el compuesto del título puede prepararse de acuerdo con el procedimiento publicado por Farkas y Sorm (J. Farkas y F. Sorm, “Componentes de ácido nucleico y sus análogos. XCIV. Síntesis de 6-amino-9-(1-deoxi-betaD-psicofruansosil)purina”, Collect. Czech. Chem. Commun. 1967, 32:2663-7; y J. Farkas, Collect. Czech. Chem. Commun. 1966, 31:1535 (Esquema 7).

De manera similar, pero usando el azúcar apropiado y la base de 2-azapurina correspondiente al compuesto del producto deseado, pueden prepararse una variedad de compuestos de con la Fórmula

(I) y/o Fórmula (II).

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Método Alternativo para Síntesis de Análogo Ribofuranosil-Purina

Preparación de análogos de ribofuranosil-purina: compuestos derivados de 2-aza-3,7-dideazaadenosina.

La preparación de compuestos derivados de 2-aza-3,7dideazaadenosina puede realizarse de acuerdo con la síntesis publicada por L. Townsend et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters, 1991, 1(2):111-114, donde el material inicial, etil-3-cianopirrol-2carboxilato 4 se sintetizó por parte de Huisgen & Laschtuvka, de acuerdo con el procedimiento expuesto en Chemische Berichte, 1960, 93:65-81, tal y como se muestra en el Esquema 8:

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Preparación de análogos de ribofuranosil-purina: compuestos derivados de 2-aza-3-deazaadenosina.

La preparación de compuestos derivados de 2-aza-3deazaadenosina puede realizarse de acuerdo con la síntesis publicada por B. Otter et al., J. Heterocyclic Chem., 1984, 481-89 que se muestra en el Esquema 9. El material inicial empleado disponible en el mercado es el 4,5-dicloro-6-piridazona 12.

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Una preparación alternativa de compuestos derivados de 2aza-3-deazaadenosina que utiliza un paso de cloración es la presentada por R. Panzica, J. Chem. Soc. Perkin Trans I, 1989, 1769-1774 y J. Med. Chem., 1993, 4113-4120, tal y como se muestra en el Esquema 10:

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Preparación de análogos de purina para nucleósidos: compuestos derivados de 2,8-diaza-3,7-dideazaadenina opcionalmente sustituidos.

La preparación de ciertos compuestos derivados de 2,8-diaza3,7-dideazaadenina puede realizarse de acuerdo con la síntesis publicada por Oda et al. en J. Heterocyclic Chem., 1984, 21:1241-55 y Chem. Pharm. Bull., 1984, 32(11):4437-46, tal y como se muestra en el Esquema 11. El material inicial empleado disponible en el mercado es el 4,5-dicloro-6-piridazona 12.

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Preparación de análogos de purina para nucleósidos: compuestos derivados de 2,8-diaza-3-deazaadenina.

La preparación de ciertos compuestos derivados de 2,8-diaza3-deazaadenina puede realizarse de acuerdo con la síntesis publicada por Panzica et al. en J.Heterocyclic Chem., 1982, 285-88,

J. Med Chem., 1993, 4113-20,y Bioorg. & Med Chem. Letters., 1996, 4(10):1725-31, tal y como se ofrece en el Esquema 12. El intermediario clave 27 se prepare por medio de reacción de cicloadición 1,3-dipolar entre el ácido 2,3,5-tri-O-benzoil-β-Dribofuranosil 26 y metil-hidroxi-2-butilnoato 25. Una síntesis de ácido ribofuranosil 26 se describe por parte de A. Stimac et al., Carbohydrate Res., 1992, 232(2):359-65, usando acidólisis de SNCl4 catalizado de 1-O-Acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-β-ribofuranosa con Me3SiN3 en CH2Cl2.

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Preparación de análogos de purina para nucleósidos: preparación alternativa de compuestos derivados de 2,8-diaza-3-deazaadenina.

Los compuestos derivados de 2,8-diaza-3-deazaadenina pueden prepararse (ver Esquema 13) de acuerdo con la síntesis publicada por Chen et al., en J. Heterocyclic Chem., 1982, 285-88; sin embargo, no se ha encontrado ninguna consideración de este compuesto con ribofuranosa.

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Preparación de ribofuranosil-2-azapurinas a través del uso de grupos protectores.

Como método alternativo de preparación, los compuestos de la presente invención también pueden prepararse mediante métodos sintéticos bien conocidos por aquellos expertos en la técnica de química nucleósida y nucleótida, como los presentados por Townsend en Chemistry of Nucleosides and Nucleotides, Plenum Press, 1994.

Un método sintetico general representativo se ofrece en el Esquema 14. El material inicial es un ribofuranosido 3,5-is-Oprotegido beta-D-alquilo, pero se entenderá que cualquier posición 2’, 3’ o 5’ puede transportar un grupo protector para protegerlo de la reacción. A continuación, 2’-C-OH se oxida con un agente oxidante adecuado en un solvente compatible a una temperatura adecuada para producir el azúcar 2’-keto-modificado. Posibles agentes oxidantes son reagentes de Swern, reagente de Jones (una mezcla de ácido crómico y sulfúrico), reagente de Collin (dipiridina Cr(VI)óxido), reagente de Corey (clorocromato de pirimidio), dicromato de piridinio, dicromato ácido, permanganato de potasio, MnO2, tetróxido de rutenio, catalizadores de transferencia de fase como ácido crómico y permanganato apoyados sobre un polímero, Cl2-pirimidina, H2O2-amonio molibdato, NarO2-CAN, NaOCl en HOAc, cromato de cobre, óxido de cobre, níquel de Raney, acetato de paladio, reagente de Meerwine-Ponndorf-Verley (aluminio tbutóxido con otra quetona) y N-bromosuccinimida.

A continuación, la adición de un reagente de Grignard, como, por ejemplo, haluro de alquil-, alquenil-o alquinil-magnesio como CH3MgBr, CH3CH2MgBr, vini,MgBr, alilMgBR y etinilMgBR, o un alquil-, alquenil-o alquinil-litio como CH3Li, en un solvente orgánico, como, por ejemplo, éter de dietilo o THF, a través de un doble enlace del grupo 2’-carbonilo proporciona un alcohol terciario en esta posición. La adición de un haluro de hidrógeno es un solvente adecuado, como, por ejemplo, Hr en HOAC, en el paso siguiente proporciona un grupo saliente (LG) como, por ejemplo, un cloro, bromo o yodo en el carbono anomérico C-1 del anillo de azúcar que más tarde genera un enlace nucleosídico. Otros LGs adecuados incluyen sulfonatos C-1 como, por ejemplo, metanosulfonato, trifluorometanosulfonato y/o p-toluenosulfonato.

La introducción en el siguiente paso de una sal metálica (Li, Na o K) de una 2-azapurina apropiadamente sustituida en un solvente adecuado como, por ejemplo, THF, acetonitrilo de DMF, da como resultado la formación del enlace nucleosídico deseado y la adición de la base deseada 2-azapurina. Esta reacción de desplazamiento puede catalizarse mediante un catalizador de transferencia de fase como TDA-1 o cloruro de trietilbencilamonio. La introducción de un sustituyente “Z” sobre cualquier fórmula base (i)-(vi) puede realizarse de manera opcional después de la adición inicial de grupos protectores. Por ejemplo, la introducción de un grupo amino para “Z” puede llevarse a cabo mediante la adición de una amina apropiada en un solvente apropiado al intermediario 2’-C-halo justo antes del último paso de la retirada de los grupos protectores. La aminas apropiadas incluyen amonio alcohólico y líquido para generar amina primaria (-NH2), una alquilamina para generar amina secundaria (-NHR), o una dialquilamina para generar amina terciaria (-NRR’).

Finalmente, el nucleósido puede desprotegerse mediante métodos bien conocidos por aquellos expertos en la técnica, como por Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley y Sons, Segunda Edición, 1991. Hay que tener en cuenta que el plan de reacción puede usarse para unir cualquiera de las bases análogas de nucleósido de purina provistas en los Esquemas 8-13 con un radical de ribofuranosil.

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La presente invención se describe a modo de ilustración en los siguientes ejemplos. Los expertos en la técnica entenderán que estos ejemplos no son de ninguna manera limitativos y que pueden realizarse variaciones de detalles siempre y cuando no se salga del espíritu y alcance de la presente invención.

EJEMPLOS

Los compuestos del test se disolvieron en DMSO en una concentración inicial de 200 µm y a continuación se diluyeron en serie en el medio de cultivo.

A menos que se establezca lo contrario, células de riñón de hámster (HK-21) y de bos Taurus (T) (ATCC CRL 1390) crecieron a 37ºC en una atmósfera humedecida de CO2 (5%). Las células HK21 pasaron al Eagle MEM con 2 mM L-glutamina, 10% suero ovino fetal (FS, Gibco) y SS de Earle se ajustó para contener 1.5 g/L de bicarbonato de sodio y 0.1 mM de aminoácidos no esenciales. Las células T pasaron al medio de Eagle modificado de Dulbecco con 4 mM L-glutamina y 10% suero de caballo (HS, Gibco), se ajustó para contener 1.5 g/L bicarbonato de sodio, 4.5 g/L glucosa y 1.0 mM piruvato de sodio. La cepa 17D de la vacuna (YFV-17D) (Stamaril®, Pasteur Merieux) y el virus de la Diarrea Viral Bovina (BVDV) (ATCC VR-534) se usaron para infectar células HK y T respectivamente, en botellas de 75 cm2. Tras un periodo de incubación de 3 días a 37ºC, se observó un gran efecto citopático. Los cultivos se congelaron-descongelaron tres veces, los restos celulares se retiraron mediante centrifugación y el sobrenadante fue alicuotado y almacenado a 70ºC. YFV-17D y VDV se valoraron en las células HK-21 y T respectivamente, que a continuación crecieron hasta que las células confluyeron en placas de 24 pozos.

Los siguientes ejemplos se derivan de una selección de un anillo de azúcar o ciclopentano apropiado y opcionalmente sustituido unido a una base opcionalmente sustituida 2-azapurina, y se preparan de acuerdo con los siguientes esquemas sintéticos: Ejemplo 1: Síntesis de 1’-C-ramificadas-ribofuranosil, -sulfonil, tiofenil o ciclopentanil-2-azapurinas opcionalmente sutituidas; Ejemplo 2: Síntesis de 2’-C-ramificadas-ribofuranosil, -sulfonil, tiofenil o ciclopentanil-2-azapurinas opcionalmente sutituidas; Ejemplo 3: Síntesis de 3’-C-ramificadas-ribofuranosil, -sulfonil, tiofenil o ciclopentanil-2-azapurinas opcionalmente sutituidas; Ejemplo 4: Síntesis de 4’-C-ramificadas-ribofuranosil, -sulfonil, tiofenil o ciclopentanil-2-azapurinas opcionalmente sutituidas; Ejemplos 5-13: Síntesis de compuestos específicos de la presente invención; y Ejemplos 14-18: Resultados del test biológico de ejemplos representativos de compuestos de la presente invención.

Ejemplo 1. 1’-C-ramificadas-ribofuranosil, -sulfonil, -tiofenil o ciclopentanil-2-azapurinas opcionalmente sustituidas.

El compuesto del título se prepara de acuerdo con los Esquemas 1, 2 ó 7. De manera similar pero usando el anillo de azúcar o ciclopentano apropiado y base 2-azapurina opcionalmente sustituida, pueden prepararse los siguientes nucleósidos de Fórmulas (I) y (II):

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donde: la base puede ser cualquiera de las Fórmulas (A)-(G) tal y como aquí se describen donde R en cada caso puede existir en forma mono-, di- o trifosfato.

Como alternativa, puede usarse el reordenamiento de Dimroth para hacer 2-azapurinas de la correspondiente base purina. En esta reacción, un heterociclo N-alquilado o N-arilado imino sufre un reordenamiento con su correspondiente heterociclo de alquilamino o arilamino.

Ejemplo 1a: 1’-C-hidroximetil-2-azaadenosina

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Paso 1: 2-azaadenina, NaH, ACN, rt, 24 hrs; Paso 2: MeONa/MeOH.

El material inicial 2-azaadenina puede prepararse a partir de malonitrilo usando la síntesis mostrada por D. W. Wooley, Journal of Biological Academy, (1951), 189:401. Ejemplo 2. 2’-C-ribofuranosil ramificado, -sulfonil o ciclopentanil-2-azapurina, opcionalmente sustituido.

El compuesto del título puede prepararse de acuerdo con los Esquemas 3, 4 o mediante protección de grupos sustituyentes apropiadamente seleccionados en los Esquemas 7 u 8. De manera similar pero usando el anillo de azúcar o ciclopentano apropiado y base 2-azapurina opcionalmente sustituida, pueden prepararse los siguientes nucleósidos de Fórmulas (I) y (II):

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Como alternativa, puede usarse el reordenamiento de Dimroth para hacer 2-azapurinas a partir de la correspondiente base purina.

En esta reacción, un heterociclo N-alquilado o N-arilado imino sufre un reordenamiento con su correspondiente heterociclo de alquilamino o arilamino.

Ejemplo 2a: 2’-C-metil-2-azaadenosina

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(Síntesis de acuerdo con el procedimiento de J. A. Montgomery, Nucleic Acid Chemistry, 1978, Parte II, 681-685 comenzando con 2’C-metiladenosina). Paso 1: H2O2, AcOH, 80%; Paso 2 : BnBr, DMAc, Paso 3: NaOH, H2O, EtOH, 30%, Paso 4: NH3/MeOH, 80˚C, 2 días, 60%; Paso 5: H2/Pd/C, 3 atm, MeOH, 30% Paso 6: .NaNO2, AcOH, H2O, 50%.

4-Amino-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]-v triazina (2’-C-metil-2-azaadenosina): 1H NMR (DMSOd6)δ8.82 (s, 1H, H8), 7.97 (br, 2H, NH2), 6.12 (s, 1H, H1’), 5.22-5.51 (m, 3H, 3OH), 3.70-4.17 (m, 4H, H3’, H4’, 2H5’), 0.80 (s, 3H, CH3). 13C NMR (DMSO-d6) δ 153, 146, 142, 116, 92, 83, 79, 72, 60, 20. m/z (FAB>O) 565 (2M+H)+, 283 (M+H)+, (FAB<0) 563 (2M-H)-.

Como alternativa, la 2-azaadenosina mostrada como producto final en el Ejemplo 2.a. puede prepararse comenzando con adenosina, de acuerdo con el procedimiento de J. A. Montgomery, Nucleic Acid Chemistry, 1978, Parte II, 681-685 comenzando con 2’C-metiladenosina en un procedimiento sintético como el mostrado por R. P. Panzica, Journal of Heterocyclic Chemistry, 1972, 9:623628 comenzando con ribosida AICA.

Ejemplo 2b: 2’-C-metil-pirrol-4-amino-1,2,3-triazina

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Paso 1 : NCS, DMF; Paso 2: mcPBA, AcOH; Paso 3: a) BnBr, DMAc; b) NaOH, H2O, EtOH, Paso 4: NH3/MeOH, 80˚C, Paso 5: H2/Pd/C, MeOH; Paso 6: .NaNO2, AcOH, H2O.

Ejemplo 3. 3’-C-ribofuranosil ramificado, -sulfonil o ciclopentanil-2-azapurina, opcionalmente sustituido.

El compuesto del título se prepara de acuerdo con los Esquemas 5, 6 o mediante protección de grupos sustituyentes apropiadamente seleccionados en el Esquema 8. De manera similar pero usando el anillo de azúcar o ciclopentano apropiado y base 2azapurina opcionalmente sustituida, pueden prepararse los siguientes nucleósidos de Fórmulas (I) y (II):

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o donde: la base puede ser cualquiera de las Fórmulas (A)-(G) tal y

como aquí se describen donde R en cada caso puede existir en forma mono-, di- o trifosfato.

Como alternativa, puede usarse el reordenamiento de Dimroth para hacer 2-azapurinas a partir de la correspondiente base purina. En esta reacción, un heterociclo N-alquilado o N-arilado imino sufre un reordenamiento con su correspondiente heterociclo de alquilamino o arilamino. Ejemplo 4. 4’-C-ribofuranosil ramificado, -sulfonil o ciclopentanil-2-azapurina, opcionalmente sustituido.

El compuesto del título se prepara de acuerdo con la modificación a partir de la correspondiente pentodialdo-furanosa. De manera similar pero usando el anillo de azúcar o ciclopentano apropiado y base 2-azapurina opcionalmente sustituida, pueden prepararse los siguientes nucleósidos de Fórmulas (I) y (II):

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Como alternativa, puede usarse el reordenamiento de Dimroth para hacer 2-azapurinas a partir de la correspondiente base purina. En esta reacción, un heterociclo N-alquilado o N-arilado imino sufre un reordenamiento con su correspondiente heterociclo de alquilamino o arilamino. Ejemplo 5: Síntesis de 4-amino-1-(□-D-ribofuranosil)imidazo[4,5d] piridazina.

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Paso A: 1-(2,3,5-tri-O-Benzoil-β-D-ribofuranosil)-5benciloximetilimidazo[4-5-d]piridazina-4-uno;

La 5-benciloximetilimidazo[4-5-d]piridazina (500 mg, 1.95 mmol) [para la preparación ver Journal of Heterocyclic Chemistry, 1984, Vol. 21, 481] se calentó a reflujo en hexametildisilazano (6 mL) durante una hora. La mezcla se evaporó hasta secarse para dar un jarabe amarillo claro que se disolvió en 1,2-dicloroetano seco (20 mL). 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-β-D-ribofuranosa (1.04 g, 2.06 mmol) y cloruro estánico (0.4 mL, 3.44 mmol) se añadieron a 20ºC y la mezcla se agitó durante 3 horas. La mezcla de la reacción se vertió en una solución acuosa de hidrogenocarbonato sódico, se filtró a través de una almohadilla de celite y se lavó con diclorometano. La capa orgánica se evaporó hasta que se secó para dar una espuma amarilla.

El producto crudo se purificó sobre gel de sílice usando acetato n-hexano/etilo (3/2) como eluyente para dar el compuesto del título (703 mg) como un polvo blanco. 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 4.39 (s, 2H, CH2), 4.60 (m, 2H), 4.73 (m, 1H), 5.34 (dd, 2H, CH2), 5.77-5,88 (m, 2H, H2’ y H3’), 6.56 (m, 1H, H1’), 6.98-7.10 (m, 5H), 7.23-7.32 (m, 6H), 7.41-7.51 (m, 3H), 7.68

7.73 (m, 2H), 7.74-7.8 (m, 4H), 8.51 (s, 1H), 8.52 (s, 1H). Paso B : 1-(2,3,5-tri-O-Benzoil-β -D-ribofuranosil)imidazo[4,5d]piridazina-4-uno:

A una solución que contenía el compuesto del Paso B (500 mg, 0.7 mol), en diclorometano seco (25 mL) se añadió una solución pre-enfriada (-78ºC) de tricloruro de boro 1M (5 mL) a -78ºC y se agitó durante 2 horas a -78ºC. Una mezcla de metanol/diclorometano (1/1) se añadió a la mezcla a -78ºC y a continuación a 20ºC. La mezcla con la reacción se evaporó hasta secarse para ar un polvo amarillo. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice usando acetato n-hexano/etilo (3/2) como eluyente para dar el compuesto del título (400 mg) como un polvo amarillo. 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 4.77-4.98 (m, 3H, H4’, 2H5’), 5.95-6,12 (m, 2H, H2’ y H3’), 6.65 (m, 1H, H1’), 7.39-7.76 (m, 9H), 7.84-8.06 (m, 6H), 8.64-5,79 (m, 2H, H3 y H8), 12.84 (br, 1H, NH). Espectro de masa: m/z (FAB>0) 581 (M+H)+, (FAB<0) 579 (M-H)Paso C: 4-cloro-1-(2,3,5-tri-O-Benzoil-β -D-ribofuranosil)imidazo[4,5d]piridazina:

Una solución que contenía el compuesto del Paso B (1.32 g,

2.27 mmol), el N-N-dietilanilina (365 µL), cloruro de tetrabutilamonio

(1.2 g), cloruro de fósforo recién destilado (1.3 µL) y acetonitrilo de anhidro (17 mL) se agitó a 90ºC durante una hora. La mezcla con la reacción se vertió sobre hielo/agua craqueada. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (3x60 mL). La capa orgánica se lavó con hidrogenocarbonato sódico 5%, agua y se evaporó hasta secarse. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice usando acetato nhexano/etilo (3/1) como eluyente para dar el compuesto del título (400 mg) como un polvo amarillo. 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 4.82-6.87 (m, 2H), 4.9-6.95 (m, 1H), 6.0

6.08: (m, 1H), 6.12-6.19 (m, 1H), 6.90 (d, 1H, J= 5.2 Hz, H1’), 7.47

7.73: (m, 9H), 7.88-8.12 (m, 6H), 9.10 (s, 1H, H8), 9.90 (s, 1H, H3) Paso D: 4-amino-1-(β -D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]piridazina:

El compuesto del Paso C (420 mg, 0.7 mmol) se añadió a una solución de amonio en metanol y se agitó en una bomba de acero a 150ºC durante 6 horas. La mezcla de la reacción se evaporó hasta secarse para producir un aceite marrón que se purificó sobre gel de sílice en fase inversa (C18) usando agua como eluyente para dar el compuesto del título (50 mg) como un polvo amarillo. 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 3.58-4.48 (m, 5H, H2’, H3’, H4’, 2H5’), 5.14

5.68 (m, 3H, 3xOH), 5.90 (s, 1H, H1’), 6.61 (br, 2H, NH2), 8.59 (s, 1H, H8), 9.12 (s, 1H, H3)

Ejemplo 6. Síntesis de 1-(β-D-ribofuranosil)imidazo[4,5d]piridazina-4-uno:

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1-(2,3,5-tri-O-Benzoil-β -D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]piridazina-4uno (555 mg, 0.9 mmol) se añadió auna solución de metilado de 15 sodio (205 mg) en metanol (25 mL) y se agitó a 20ºC durante 2 horas. La mezcla de la reacción se evaporó hasta secarse. El residuo se disolvió en agua y se lavó en acetato de etilo. La capa acuosa se concentró bajo presión. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice en fase inversa (C18) usando agua como

20 eluyente para dar el compuesto del título (220 mg) como un polvo blanco. 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 3.59-3.62 (m, 2H), 4.02 (m, 1H), 4.11 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 5.16-5.72 (m, 3H, 3xOH), 5.91 (s, 1H, H1’),

8.52 (s, 1H, H8), 8.68 (s, 1H, H3), 12.75 (br, 1H, NH).

25 Espectro de masas: m/z (FAB>0) 537 (2M+H)+, 269 (M+H)+, (FAB<0) 535 (2M+H)+,267 (M-H)

Ejemplo 7. Síntesis de 4-amino-1-(2-C-metil-β-Dribofuranosil)imidazo[4,5-d]piridazina:

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Paso A: 1-(2-C-metil-2,3,5-tri-O-Benzoil-β-D-ribofuranosil)imidazo[4,5d]piridazina-4-uno.

A una suspensión de imidazo[4,5-d]piridazina (3.48 g, 25.5 mmol) [para su preparación ver Journal of Heterocyclic Chemistry, 1969, Vol. 6, 93] en acetonitrilo seco (35 mL) se añadió 1,2,3,5-tetraO-Benzoil-2-C-metil-β-D-ribofuranosa (14.48 g, 25.0 mmol) a 20ºC y se agitó durante 15 minutos. Se añadió DBU (11.5 mL, 76.3 mmol) a 0ºC y la solución se agitó durante 15 minutos a 0ºC. Se añadió TMSOTf (24.7 mL, 127.8 mmol) a 0ºC y la mezcla se calentó a 80ºC durante 20 horas. La mezcla de la reacción se vertió en una solución acuosa de hidrogenocarbonato sódico y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se evaporó hasta secarse para dar un polvo amarillo. El producto se purificó sobre gel de sílice usando diclorometano/metanol (99.3/0.7) como eluyente para dar un polvo amarillo claro que se cristalizó a partir de isopropanol para dar el compuesto del título (2.45 g) como un polvo blanco.1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 1.48 (s, 3H, CH3), 4.75-4.96 (m, 3H, H4’, 2H5’), 5.81 (d, 1H, J= 5.5 Hz, H3’), 6.99 (s, 1H, H1’), 7.39-7.72 (m, 9H), 7.92-8.08 (m, 6H), 8.64 (s, 1H, H8), 8.71 (s, 1H, H3), 12.89 (br, 1H, NH). Espectro de masas: m/z (FAB>0) 1189 (2M+H)+, 585 (M+H)+, (FAB<0) 593 (M-H)Paso B: 4-cloro-1-(2-C-metil-2,3,5-tri-O-Benzoil-β-D-ribofuranosil) imidazo[4,5-d]piridazina:

Una solución que contenía el compuesto del Paso A (300 mg,

0.50 mmol), el N,N-dietilanilina (1.2 mL) y cloruro de fósforo reción destilado (24 mL) se agitó a reflujo durante una hora. La mezla con la reacción se evaporó hasta secarse. Se añadió diclorometano al residuo y la capa orgánica se vertió sobre hielo/agua craqueada. La capa acuosa se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con hidrogenocarbonato sódico 5%, agua y se evaporó hasta secarse. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice usando éter de dietilo/éter de petróleo (1/1) como eluyente para dar el compuesto del título (295 mg) como un polvo blanco.

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 1.5 (s, 3H, CH3), 4.8-5.0 (m, 3H, H4’, 2H5’), 5.85 (d, 1H, J= 5.5 Hz, H3’), 7.15 (s, 1H, H1’), 7.38-8.08 (m, 15H), 9.15 (s, 1H, H8), 9.90 (s, 1H, H3) Paso C: 4-amino-1-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil) imidazo[4,5

5 d]piridazina:

El compuesto del Paso B (590 mg, 0.96 mmol) se añadió a una solución de amonio en metanol y se agitó en una bomba de acero a 150ºC durante 6 horas. La mezcla de la reacción se evaporó hasta secarse para retirar el metanol. El producto crudo se purificó

10 sobre gel de sílice en fase inversa (C18) usando agua como eluyente para dar el compuesto del título (35 mg) como un polvo blanco. 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 0.70 (s, 3H, CH3), 3.64-3.98 (m, 4H, H3’, H4’, 2H5’), 5.23-5.44 (m, 3H, 3OH), 5.98 (s, 1H,vH1’), 6.63 (br, 2H,

15 NH2), 8.68 (s, 1H, H8), 9.05 (s, 1H, H3)13C NMR (DMSO-d6) δppm: 155, 143, 132, 131, 129, 93, 83, 79, 72,

20. Espectro de masas: m/z (FAB>0) 282 (M+H)+, (FAB<0) 280 (M-H)

Ejemplo 8. Síntesis de 4-sustituido-1-(2-C-metil-β-D20 ribofuranosil)imidazo[4,5-d]piridazina:

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1-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]piridazina-4-uno: 1HNMR(DMSO-d6) δ ppm: 1.17 (s, 3H,CH3), 3.44-3.59 (m, 1H), 3.68

3.78 (m, 1H), 3.86-3.94 (m, 1H), 4.11-4.21 (m, 1H), 4.8-5.4 (m, 3H, 3OH), 6.05 (s, 1H, H1’), 8.35 (s, 1H, H8), 8.37 (s, 1H, H3), 12.67 (br, 1H, NH). Espectro de masa: m/z (FAB>0) 283 (2M+H)+, 281 (M+H)+ 4-cloro-1-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil) imidazo[4,5-d]piridazina 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 0.72 (s, 3H, CH3), 3.69-4.06 (m, 4H, H3’, H4’, 2H5’), 5.34-5.51 (m, 3H, 3OH), 6.19 (s, 1H, H1’), 9.18 (s, 1H, H8), 9.87 (s, 1H, H3)

Espectro de masas: m/z (FAB>0) 301 (M+H)+, (FAB<0) 299 (M-H)

Ejemplo 9. Síntesis de derivados de nucleósidos 4,7-diaminoimidazo[4,5-d]piridazina:

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Paso A: A una suspensión de 4,5-dicianoimidazola (1 eq.) [para su preparación ver Journal of Heterocyclic Chemistry, 1976, Vol.41,

15 713] en DMF seco (0.2 M) se añadieron los derivados protegidos βD-ribofuranosa (1 eq.) a 20ºC. Se añadió DBU (3 eq.) a 0ºC y la solución se agitó durante 20 minutos a 0ºC. TMSOTf (4 eq.) se añadió y la mezcla se calentó a 60ºC durante una hora. La mezcla de la reacción se vertió en una solución acuosa de

20 hidrogenocarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se evaporó hasta secarse para dar un polvo amarillo. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice usando éter de dietilo/éter de petróleo como eluyente para dar el compuesto del título (ver la siguiente tabla 1).

25 Paso B: El compuesto del Paso A (1 eq.) se agitó con monohidrato de hidracina (20 eq.) y ácido acético (1.4 eq.) a 75ºC durante varias hoaras (ver la siguiente tabla 1). La mezcla con la reacción se vertió sobre agua. La capa acuosa se lavó con diclorometano y se

30 evaporó bajo presión. El residuo se purificó sobre columna de fase inversa para dar el compuesto del título (ver la siguiente tabla 1).

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4,7-diamino-1- β -D-ribofuranosilimidazo[4,5-d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 3.58-4.32 (m, 5H, H2’, H3’, H4’, 2H5’), 5.10-5.90 (br, 7H, 2NH2, 3OH), 6.11 (s, 1H, H1’), 8.50 (s, 1H, H8) 13C NMR (DMSO-d6) δ ppm: 151, 144, 142, 132, 122, 89, 86, 75, 70,61. Espectro de masa: m/z (FAB>0) 283 (M+H)+, (FAB<0) 281 (M-H)4,7-diamino-1-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 0.75 (s, 3H, CH3), 3.67-3.76 (m, 1H), 3.84-3.94 (m, 3H), 5.32 (m, 3H, 3OH), 5.43 (br, 1H, NH2), 5.71 (br, 1H, NH2), 6.21 (s, 1H, H1’), 8.78 (s,1H, H8) 13C NMR (DMSO-d6) δ ppm: 151, 144, 142, 132, 123, 92, 83, 78, 71, 59, 20. Espectro de masa: m/z (FAB>0) 593 (2M+H)+, 297 (M+H)+, (FAB<0) 295 (M-H)

Ejemplo 10: Síntesis de nucleósidos 4,7-disustituidosimidazo[4,5-d]piridazina:

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Paso A: Procedimiento típico para la preparación de los nucleósidos protegidos 4,7-dicloroimidazo[4,5-d]piridazina:

La 4,7-dicloroimidazo[4,5-d]piridazina [para su preparación ver Journal of Heterocyclic Chemistry, 1968, Vol.5, 13] (1 eq.) se calentó a reflujo en hexametildisilazano durante 12 horas. La mezcla se evaporó hasta secarse para dar el sólido que se disolvió en 1,2dicloroetano. Los derivados protegidos de β-D-ribofuranosa (1.1 eq.) y cloruro estánico (1.4 eq.) se añadieron a 20ºC y la solución se agitó durante 3 horas. La mezcla de la reacción se vertió en una solución acuosa de hidrogenocarbonato sódico, se filtró a través de una almohadilla de celite y se lavó con diclorometano. La capa orgánica se evaporó hasta que se secó. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice usando diclorometano/acetona (40/1) como eluyente para dar el compuesto del título (ver la siguiente tabla 2). Paso B: Procedimiento habitual para la preparación de los nucleósidos 4,7-dicloroimidazo[4,5-d]piridazina:

El compusto del Paso A (1 eq.) se agitó con metóxido de sodio

(0.1 eq.) en metanol durante varias horas. La mezcla de la reacción se evaporó bajo presión. Se añadió agua al residuo. La capa acuosa se lavó con acetato de etilo y se evaporó bajo presión. El residuo se purificó sobre columna de fase inversa para dar el compuesto del título (ver la siguiente tabla 2). Paso C: Procedimiento habitual para la preparación de los nucleósidos imidazo[4,5-d]piridazina

Una mezcla del compuesto del Paso A (1 eq.), paladio sobre carbón vegetal (10%), acetato de sodio (4.2 eq.) en acetato de etilo se agitó bajo hidrógeno hasta que el compuesto del Paso A se consumió. La mezcla con la reacción se evaporó bajo presión y se purificó sobre gel de sílice para dar el compuesto del título protegido que se agitó con metóxido de sodio (3.3 eq.) en metanol. La mezcla de la reacción se evaporó bajo presión. Se añadió agua al residuo. La capa acuosa se lavó con acetato de etilo y se evaporó bajo presión. El residuo se purificó sobre columna de fase inversa para dar el compuesto del título (ver la siguiente tabla 2). Paso D: Procedimiento habitual para la preparación de nucleósidos cloro-metoxi-imidazo[4,5-d]piridazina:

El compuesto del Paso A (1 eq.) se agitó con metóxido de sodio (3.3 eq.) en metanol 0.3 M a 20ºC durante varias horas. La mezcla de la reacción se evaporó bajo presión. Se añadió agua al residuo. La capa acuosa se lavó con acetato de etilo y se evaporó bajo presión. El residuo se purificó sobre columna de fase inversa para dar el compuesto del título (ver la siguiente tabla 2). Paso E: Procedimiento habitual para la preparación de nucleósidos metoxi-imidazo[4,5-d]piridazina:

Una mezcla del compuesto del Paso D (1 eq.), paladio sobre carbón vegetal (10%), acetato de sodio (4.2 eq.) en agua/metanol (1/1) se agitó bajo hidrógeno hasta que el compuesto del Paso A se consumió. La mezcla de la reacción se evaporó bajo presión y se purificó sobre columna de fase inversa para dar el compuesto del título cuya regioselectividad no se dio (ver la siguiente tabla 2). Paso F: Procedimiento habitual para la preparación de nucleósidos protegidos 4,7-diazimidazo[4,5-d]piridazina:

El compuesto del Paso A (1 eq.) se trató a 50ºC con ácido de sodio (1.5 eq.) en DMF. Se añadió agua a la mezcla. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se evaporó bajo presión. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice usando éter de dietilo/éter de petróleo (7/3) como eluyente para dar el compuesto del título (ver la siguiente tabla 2).

5 Paso E: Procedimiento habitual para la preparación de nucleósidos ácido-metoxi-imidazo[4,5-d]piridazina:

El compuesto del Paso F (1 eq.) se agitó a 50ºC con métoxido de sodio (1 eq.) en metanol. La mezcla con la reacción se evaporó bajo presión. Se añadió agua al residuo. La capa acuosa se lavó con

10 acetato de sodio y se evaporó bajo presión. El residuo se purificó sobre columna de fase inversa usando agua/acetonitrilo como eluyente para dar el compuesto del título cuya regioselectividad no se dio (ver la siguiente tabla 2). Paso H: Procedimiento habitual para la preparación de nucleósidos

15 amino-imidazo[4,5-d]piridazina: Una mezcla del compuesto del Paso F (1 eq.), paladio sobre carbón vegetal (10%), acetato de sodio (4.2 eq.) en acetato de etilo se agitó bajo hidrógeno hasta que el compuesto del Paso F se consumió. La mezcla de la reacción se filtró sobre celite y se

20 evaporó bajo presión. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice para dar el compuesto del título cuya regioselectividad no se dio (ver la siguiente tabla 1). Este compuesto se agitó con metóxido de sodio (3 eq.) en metanol. La mezcla de la reacción se evaporó bajo presión. Se añadió agua al residuo. La capa acuosa se lavó con

25 acetato de etilo y se evaporó bajo presión. El residuo se purificó sobre columna de fase inversa para dar el compuesto del título cuya regioselectividad no se dio (ver la siguiente tabla 2).

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4,7-dicloro-1-(2,3,5-tri-O-Benzoil-β -D-ribofuranosil)imidazo[4,5d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 4.8-5.0 (m, 3H, H4’, 2H5’), 6.05 (s, 1H, H3’), 6.25 (s, 1H, H2’), 7.1 (d, 1H, J = 4 Hz, H1’), 7.4-8.0 (m, 15H), 9.25 (s, 1H, H8). Espectro de masa: m/z (FAB>0) 633 (M+H)+ 4,7-dicloro-1-(2-C-metil-2,3,5-tri-O-Benzoil-β -Dribofuranosil)imidazo[4,5-d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δppm: 1.65 (s, 3H, CH3), 4.9-5.0 (m, 3H, H4’, 2H5’), 5.8 (s, 1H, H3’), 7.35-8.05 (m, 16H incluyendo H1’), 9.3 (s, 1H, H8). 4,7-dicloro-1-(2-C-metil-β -D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 0.84 (s, 3H, CH3), 3.77 (m, 1H), 3.88-4.04 (m, 3H), 5.30-5.60 (m, 3H, OH), 6.5 (s, 1H, H1’), 9.44 (s, 1H, H8). 1-(2-C-metil-β -D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 0.80 (s, 3H, CH3), 3.75 (m, 1H), 3.80-4.00 (m, 3H), 5.40 (br, 3H, OH), 6.2 (s, 1H, H1’), 9.0 (s, 1H),

9.65 (s, 1H), 9.85 (s, 1H). 7-cloro-4-metoxi-1-β -D-ribofuranosilimidazo[4.5-d]piridazina o 4cloro-7-metoxi-1-β -D-ribofuranosilimidazo[4,5-d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 3.6-4.5 (m, 8H, 2H5’, H4’, H3’, H2’, OCH3), 5.40 (m, 3H, OH), 6.2 (s, 1H, H1’), 9.0 (s, 1H, H8). 675 (2M+H)+, Espectro de masa: m/z (FAB>0) 317 (M+H)+, (FAB<0) 315 (M-H)4-metoxi-1-β -D-ribofuranosilimidazo[4,5-d]piridazina o 7-metoxi-1-β -D-ribofuranosil imidazo[4,5-d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 3.54-3.79 (m, 2H), 3.95 (m, 1H),

4.15 (m, 1H, H3’), 4.2 (s, 3H, OCH3), 4.4 (m, 1H, H2’), 5.05-5.70 (m, 3H, OH), 6.2 (d, 1H, J = 4.8 Hz, H1’), 8.95 (s, 1H), 9.3 (s, 1H). 13C NMR (DMSO-d6) δ ppm: 154, 145, 143, 142, 121, 90, 85, 75, 70, 61, 55. Espectro de masa: m/z (FAB>0) 283 (M+H)+, (FAB<0) 281 (M-H)4,7-diácido-1-(2,3,5-tri-O-Benzoil-β -D-ribofuranosil)imidazo[4,5d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 4.81-5.1 (m, 3H, H4’, 2H5’), 6.24

6.49 (m, 2H, H2’, H3’), 7.2 (d, 1H, J = 5 Hz, H1’), 7.4-8.0 (m, 15H),

9.12 (s, 1H, H8). Espectro de masa: m/z (FAB>0) 647 (M+H)+ 4,7-diácido-1-(2-C-metil-2.3.5-tri-O-Benzoil-β -Dribofuranosil)imidazo[4,5-d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 1.6 (s, 3H, CH3), 4.96 (m, 3H, H4’, 2H5’), 6.02 (m, 1H, H3’), 7.24 (s, 1H, H1’), 7.40-7.52 (m, 6H), 7.60

7.71 (m, 3H), 7.93-8.1 (m, 6H), 9.10 (s, 1H, H8). Espectro de masa: m/z (FAB>0) 661 (M+H)+ 4-ácido-7-metoxi-(2-C-metil-β -D-ribofuranosil)imidazo[4,5d]piridazina o 7-azido-4-metoxi-1-(2-C-metil-β -Dribofuranosil) imidazo[4,5-d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 0.75 (s, 3H, CH3), 3.70-3.98 (m, 2H), 4.05 (m, 2H), 4.2 (s, 3H, OCH3), 5.32-5.61 (br, 3H, OH), 6.36 (d, 1H, J = 5.7 Hz, H1’), 9.18 (s, 1H, H8), 13C NMR (DMSO-d6) δ ppm: 156, 143, 136, 129, 123, 94, 83, 79, 71, 59, 57, 20. Espectro de masa: m/z (FAB>0) 675 (2M+H)+, 338 (M+H)+, (FAB<0) 673 (2M-H)-, 336 (M-H) 4-amino-7-ácido-1-(2-C-metil-2,3,5-tri-O-Benzoil-β -Dribofuranosil)imidazo[4,5-d] piridazina o 7-amino-4-azido1-(2-C-metil-2,3,5-tri-O-Benzoil-β -D-ribofuranosil) imidazo[4,5d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 01.64 (s, 3H, CH3), 4.95 (m, 3H),

6.06 (m, 1H, H3’), 7.18 (s, 1H, H1’), 7.40-7.52 (m, 6H), 7.63-7.74 (m, 5H, incluyendo NH2), 7.91-8.04 (m, 6H), 8.96 (s, 1H, H8), Espectro de masa: m/z (FAB>0) 1269 (2M+H)+, 635 (M+H)+, (FAB<0) 633 (M-H)4-amino-7-ácido-(2-C-metil-β -D-ribofuranosil)imidazo[4,5d]piridazina o 7-amino-4-azido-1-(2-C-metil-β -D-ribofuranosil) imidazo[4,5-d]piridazina:

1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 0.75 (s, 3H, CH3), 3.65-4.15 (m, 4H), 5.30-5.55 (br, 3H, 3xOH), 6.27 (s, 1H, H1’), 7.63 (br, 2H, NH2),

9.03 (s, 1H, H8), Espectro de masa: m/z (FAB>0) 323 (M+H)+, (FAB<0) 321 (M-H)

Ejemplo 11: Sintesis de nucleósidos 4-amino-6-sustituidoimidazo[4,5-d]-v-triazina

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Paso A: 4-amino-6-bromo-7-(β-D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]-vtriazina:

La 2-azaadenosina (para su preparación ver Patente WO 01/16149, 2001] (70 mg, 0.26 mmol) se añadió a una solución de acetato de sodio 0.5 M (1.4 mL). La solución se calentó hasta que la 2-azaadenosina se estabilizó. Se añadió una solución de bromuro (100 µL de Br2 en 10 mL de agua) (6.3 mL, 1.22 mmol) y la mezcla se agitó a 20ºC durante 3 días. Una segunda porción de solución de bromuro (6.3 mL, 1.22 mmol) se añadió y la mezcla se agitó a 20ºC durante 3 horas. La mezcla de la reacción se evaporó hasta secarse. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice en fase inversa (C18) usando agua/acetronitrilo (9/1) como eluyente para dar el compuesto del título como un polvo amarillo. 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 3.55 (m, 1H, H5’), 3.71 (m, 1H, H5’), 4.01 (m, 1H, H4’), 4.31 (m, 1H, H3’), 5.17 (m, 1H, H2’), 5.19 (m, 1H, OH), 5,36 (m, 1H, OH), 5.58 (m, 1H, OH), 5.93 (d, 1H, J=6,47 Hz, H1’),

8.08 (br, 2H, NH2). Espectro de masa: m/z (FAB>0) 349 (M+2H)+, m/z (FAB<0) 345 (M2H)-. Paso B: 4-amino-6-metil-7-(β-D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]-vtriazina:

El compuesto del Paso A (112 mg, 0.3 mmol) se calentó a reflujo en hexametildisilazano (15 mL) durante 16 horas. La mezcla se evaporó hasta secarse para dar un jarabe que se disolvió en THF seco (12 mL). Se añadieron PPh3 (10 mg; 0,04 mmol), PdCl2 (3.5

mg; 0,02 mmol) y AlMe3 (100 µl; 0,94 mmol). La mezcla se sometió a reflujo durante 5 horas. La mezcla se evaporó hasta secarse. El producto crudo se disolvió en metanol (30 mL) en presencia de cloruro de amonio. La mezcla se evaporó hasta secarse y el residuo se purificó sobre gel de sílice en fase inversa (C18) usando agua/acetonitrilo (de 9/1 a 6/4) como eluyente para dar el compuesto del título (35 mg) como un polvo amarillo. 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 2.67 (s, 3H, CH3), 3.60 (m, 1H, H5’), 3.72 (m, 1H, H5’), 4.03 (m, 1H, H4’), 4.24 (m, 1H, H3’), 4.93 (m, 1H, H2’),

5.48 (m, 3H, OH), 5.92 (d, 1H, J=6,82 Hz, H1’), 7.78 (br, 2H, NH2). Espectro de masa: m/z (FAB>0) (FAB>0) 283 (M+H)+, m/z (FAB<0) 281 (M-H)-.

Ejemplo 12: Sintesis de nucleósidos imidazo[4,5-d]-v-triazina-4uno

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Paso A: 7-(β-D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]-v-triazina-4-uno:

El AICAR [para preparación ver Synthesis, 2003, Nº17, 2639] (1 g, 3.87 mmol) se añadió a una solución de ácido clorhídrico 6N (25 mL) a -30ºC. Una solución de nitrito de sodio 3M (4 ml, 11.62 mmol) se añadió y la mezcla se agitó a -30ºC durante 2 horas. Una solución pre-enfriada (-30ºC) de etanol (25 mL) se añadió. Se añadió una solución de amonio (28%) a -20ºC a pH=7. La mezcla de la reacción se evaporó hasta secarse. El producto crudo se purificó sobre gel de sílice en fase inversa (C18) usando agua como eluyente par dar el compuesto del título (0.81 gr) como un polvo blanco. 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 3.58 (d, 1H, J=11.85Hz, H5’), 3.70 (d, 1H, J=11.85Hz, H5’), 4.00 (dd, 1H, J=3.92Hz, 4.02Hz, H4’), 4.18

(dd, 1H, J=4,27Hz, 4,78Hz, H3’), 4.54 (dd, 1H, J=4.86Hz, 5.19Hz, H2’), 5.18 (br, 1H, OH), 5.35 (br, 1H, OH), 5.73 (br, 1H, OH), 6.08 (d, 1H, J=5.11Hz, H1’), 8.65 (s, 1H, H8). Paso B: 7-(2,3,5-Tri-O-acetil-β-D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]-v

5 triazina-4-uno:

El compuesto del Paso A (1.68 gr, 6.24 mmol) se agitó en piridina (20 mL). Se añadió anhídrido acético (2.3 ml, 25 mmol) y la mezcla se agitó a 20ºC durante 16 horas. La mezcla se evaporó hasta secarse para dar un jarabe que se disolvió en agua. La capa

10 acuosa se extrajo con acetato de etilo. La capa orgáncia se evaporó hasta secarse para dar el compuesto del título (1.5 gr) como una espuma marrón. 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm: 2.04 (s, 3H, COCH3), 2.09 (s, 3H, COCH3), 2.10 (s, 3H, COCH3), 4.39 (m, 3H, 2xH5’ et H4’), 5.53 (dd,

15 1H, J=4.39Hz, 5.4Hz, H3’), 5.80 (t, 1H, J=5.4Hz, H2’), 6.26 (d, 1H, J=5,4Hz, H1’), 8.15 (s, 1H, H8). Ejemplo 13: Métodos Alternativos para Síntesis de Análogos de Ribofuranosil-Purina

I. Preparación de 4-metilamino-7-(β-D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]-v20 triazina:

4-metilamino-7-(β-D-ribofuranosil)imidazo[4,5-d]-v-triazina Va puede prepararse de acuerdo con la siguiente síntesis, donde el material inicial usado es el AICAR I. El AICAR pude prepararse de acuerdo con la síntesis publicada por Y. Yamamoto y N. Kohyama,

25 Synthesis, 2003, 17:2639-2646. La otra síntesis de 4-metilamino-7-(β-Dribofuranosil)imidazo[4,5-d]-v-triazina Va se describió a partir de 2azainosina II de acuerdo con la síntesis publicada por L. Townsend y Co, Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2000, 19(1&2):39-68.

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II. Preparación de compuestos derivados de 4-sustituidos-7-(2,3dideoxi-β-D-glicero-pentofuransil)-imidazo-[4,5-d]-v-triazina:

Los compuestos 4-sustituidos-7 2,3-dideoxi-β-D-gliceropentofuransil imidazo-[4,5-d]-v-triazina IXa, IXb y IXc pueden prepararse de acuerdo con la siguiente síntesis de acuerdo con la síntesis publicada p or R. Panzica y Co., Bioorganic & Medicinal Chemistry, 1999, 7:2373-2379.

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III. Preparación de compuestos derivados de 4-sustituidos-7-(2,3dideoxi-β-D-glicero-pentofuransil)-imidazo-[4,5-d]-v-triazina:

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Ejemplo 14: Ensayo de Fosforilación de Nucleósido a Trifosfato Activo

Para determinar el metabolismo celular de los compuestos, se obtienen células HepG2 de la Colección Americana de Cultivos Tipo (Rockville, MD) y crecen en frascos de cultivo de tejidos de 225 cm2 en un medio esencial mínimo complementando con aminoácidos no esenciales, 1% penicilina-estreptomicina. El medio se renueva cada tres días, y las células se subcultivaron una vez a la semana. Tras la separación de la monocapa adherente con una exposición de 10 minutos a 30 mL de tripsina-EDTA y tres lavados consecutivos con el medio, las células confluentes HepG2 se siembran a una densidad de 2.5 x 106 células por pozo en una placa con 6 pozos y se exponen a 10 µM de compuesto activo etiquetado [3H] (500 dpm/mmol) durante los periodos de tiempo especificados. Las células se mantienen a 37ºC bajo una atmósfera 5% CO2. En los puntos de tiempo seleccionados, las células se lavan tres veces con salina de búfer de fosfato congelada (PS). El compuesto activo intracelular y sus respectivos metabolitos se extraen incubando el sedimento celular durante la noche a -20ºC con 60% metanol a lo que siguió la extracción con 20 µL adicionales de metanol frío durante una hora en un baño de hielo. A continuación, los extractos se combinan, se secan bajo un suave flujo de aire filtrado y se almacenan a -20ºC hasta el análisis HPLC. Ejemplo 15: Ensayo de Biodisponibilidad en Macacos Cangrejeros

1 semana antes del incio del estudio, al macaco cangrejero se le implantó quirúrgicamente un catéter venoso crónico y un puerto de acceso venoso subcutáneo (VAP) para facilitar la recogida de sangre y fue sometido a un examen físico que incluyó evaluaciones de hematología y química de suero y se registró el peso corporal. Cada mono (seis en total) recibe aproximadamente 250 µCi de actividad 3H con cada dosis de compuesto activo a un nivel de dosis de 10 mg/kg en una concentración de dosis de 5 mg/mL, bien por medio de un bolo intravenoso (3 monos, IV) o por medio de un gavaje oral (3 monos, PO). Cada jeringa dosificadora se pesa antes de la dosis para determinar de manera gravimétrica la cantidad de formulación administrada. Se recogen muestras de orina con una bandeja de recogida en los intervalos designados (aproximadamente 18-0 horas antes de la dosis, 0-4, 4-8 y 8-12 después de la dosis) y se procesaron. También se recogieron muestras de sangre (antes de la dosis, 0.25, 0.5, 1, 2, 3, 6, 8, 12 y 24 horas después de la dosis) por medio de un catéter venoso crónico y VAP o de un vaso periférico si no es posible el procedimiento con el catéter crónico venoso. Las muestras de orina y sangre se analizan para la máxima concentración (Cmax), tiempo cuando se consigue la máxima concentración (Tmax), área bajo la curva (AUC), vida media de la concentración de dosis (T1/2), evacuación (CL), volumen y distribución en estado estable (Vss) y biodisponibilidad. Ejemplo 16: Ensayo de Toxicidad de Médula Ósea

Se recogen células de médula ósea humana de voluntarios normales y sanos y se separa la población mononuclear mediante centrifugación de gradiente Ficoll-Hypaque tal y como lo ha descrito previamente Sommadossi J-P, Carlisle R. “Toxicidad de 3’-ácido-3’deoxitimidina y 9-(1,3-dihidroxi-2-propoximetil)guanina para células de progenitor hematopoyético normal humano in vitro” Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1987; 31:452-454; y Sommadossi J-P, Schinazi RF, Chu CK, Xie M-Y. “Comparación de citotoxicidad del enantiómero (-)-y (+)-de 2’,3’-dideoxi-3’-tiacitidina en células progenitoras de médula ósea humana normal” Biochemical Pharmacology 1992; 44:1921-1925. Los ensayos de cultivo para CFU-GM y FU-E se llevan a cabo usando un agar suave con dos capas o un método de metilcelulosa. Los fármacos se diluyen en el medio de cultivo de tejido y se filtran. Depués de 14 a 18 días a 37ºC en una atmósfera humidificada de 5% CO2 en aire, se contabilizan las colonias de más de 50 células usando un microscopio invertido. Los resultados se presentan como la inhibición percentual de formación de colonias en presencia del fármaco en comparación con los cultivos de control con disolvente.

Ejemplo 17: Ensayo de Toxicidad de Mitocondrias

Se cultivan células HepG2 en placas con 12 pozos tal y como se ha descrito anteriormente y se exponen a varias concentracionese de fármacos tal y como muestra Pan-Zhou X-R, Cui L, Zhou X-J, Sommadossi J-P, Darley-Usmer VM. “Efectos diferenciales de análogos nucleósidos antirretrovirales en función mitocondrial en células HepG2”. Antimicro Agents Chemother 2000; 44:496-503. Los niveles de ácido láctico en el medio de cultivo después de 4 días de exposición al fármaco se miden usanod un kit de ensayo e ácido láctico Boehringer. Los niveles de ácido láctico se normalizan por medio del número celular tal y como se mide el conteo con el hemocitómetro. Ejemplo 18: Ensayo de Citotoxicidad

Las células se siembran a un ritmo de 5 x 103 y 5 x 104/pozo en placas con 96 pozos en medio de crecimiento durante la noche a 37ºC en una atmósfera humidificada de CO2 (5%). A continuación se añade el nuevo medio de crecimiento que contiene diluciones en serie de los fármacos. Tras una incubación durante 4 días, los cultivos se fijan en 50% TCA y se tintan con sulforodamina. La densidad óptica se leyó a 550 nm. La concentración citotóxica se expresó como la concentración necesaria para reducir el número celular por 50% (CC50). Los resultados preliminares se indican en la Tabla 3 a continuación.

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Esta invención se ha descrito con referencia a sus realizaciones preferentes. Las variaciones y modificaciones de la invención serán obvias para aquellos expertos en la técnica a partir de la anterior descripción detallada de la invención. Se pretende que

20 todas estas variaciones y modificaciones estén incluidas en el alcance de esta invención.

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Claims

1ª. – Un compuesto de la estructura general de la Fórmula (I):

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o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, donde: R es H; mono-, di- o trifosfato; o fosfonato; X es O; R1 y R1’ son independientemente H, alquilo, ácido, ciano, alquenilo, alquinilo, -C(O)-(alquilo), -C(O)(O)(alquenilo), -C(O) (O)(alquinilo), C(O) NH2,-C(O)NH(alquilo), -C(O)N(alquilo)2, -C(H)=N-NH2, C(S)NH(alquilo), o C(S)N(alquilo)2; donde alquilo, alquenilo, y/o alquinilo puede sustituirse de manera opcional; R2 y R3 es independientemente H, OH, NH2, SH, F, Cl, Br, I, CN, NO2, -C(O)NH2, -C(O)NH(alquilo), y -C(O)N(alquilo)2, N3, alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo or alquinilo opcionalmente sustituido, -C(O)O-(alquilo), C(O)O-(alquenilo), -C(O)O-(alquinilo), O(acilo), -O(alquilo), -O(alquenilo), -O(alquinilo), -OC(O)NH2, NC, C(O)OH, SCN, OCN, -S(alquilo), -S(alquenilo), -S(alquinilo), NH(alquilo), -N(alquilo)2, -NH(alquenilo), -NH(alquinilo), un residuo de aminoácido o un derivado, o un anillo heterocíclico de 3-7 miembros opcionalmente sustituido que tiene O, S y/o N independientemente como un heteroátomo tomado solo o en combinación; R2’ es alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituido; halógeno, ácido o ciano; R3’ es H; alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituido; C(O)O-(alquilo), -C(O)O-(alquenilo), -C(O)O-(alquinilo), -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), halógeno, ácido, ciano, NO2, -S(alquilo),

S(alquenilo), -S(alquinilo), NH2, -NH(alquilo), -N(alquilo)2, NH(alquenilo),-NH(alquinilo), -NH(acilo) o N(acilo)2; y Base se selecciona del grupo consistente en:

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donde cada R’ and R" independientemente es H, C1-6 alquilo, C2-6 alquenilo, C2-6 alquinilo, halógeno, alquilo halogenado, OH, CN, N3, carboxi, C1-4 alcoxicarbonilo,NH2, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino,C16 alcoxi,C1-6 alquilosulfonilo, o (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo; cada W es independientemente H, Cl, Br, I, F, alquilo halogenado, alcoxi, OH, SH, O-alquilo, S-alquilo, O-alquenilo, O-alquinilo, Salquenilo, S-alquinilo, -OC(O)NR4R4, O-acilo, S-acilo, CN, SCN,

OCN, NO2, N3, NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, NH-cicloalquilo, NHacilo, NH=NH, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2; y cada R4 es independientemente H, acilo, o C1-6 alquilo; y cada Z es independientemente O, S, NH, N-OH, N-NH2, N(alquilo), N(alquilo)2, N-cicloalquilo, alcoxi, CN, SCN, OCN, SH, NO2, N3, NH=NH, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2.

2ª.- Un compuesto de la estructura general de la Fórmula (I):

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o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, donde: R es H; mono-, di- o trifosfato; o fosfonato; X es O; R1 y R1’ son independientemente H, alquilo, ácido, ciano, alquenilo, alquinilo, -C(O)-(alquilo), -C(O)(O)(alquenilo), -C(O) (O)(alquinilo), C(O) NH2,-C(O)NH(alquilo), -C(O)N(alquilo)2, -C(H)=N-NH2, C(S)NH(alquilo), o C(S)N(alquilo)2; donde alquilo, alquenilo, y/o alquinilo puede sustituirse de manera opcional; R2 y R3 es independientemente H, OH, NH2, SH, F, Cl, Br, I, CN, NO2, -C(O)NH2, -C(O)NH(alquilo), y -C(O)N(alquilo)2, N3, alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo or alquinilo opcionalmente sustituido, -C(O)O-(alquilo), C(O)O-(alquenilo), -C(O)O-(alquinilo), O(acilo), -O(alquilo), -O(alquenilo), -O(alquinilo), -OC(O)NH2, NC, C(O)OH, SCN, OCN, -S(alquilo), -S(alquenilo), -S(alquinilo), NH(alquilo), -N(alquilo)2, -NH(alquenilo), -NH(alquinilo), un residuo de aminoácido o un derivado, o un anillo heterocíclico de 3-7 miembros opcionalmente sustituido que tiene O, S y/o N independientemente como un heteroátomo tomado solo o en combinación; R2’ es H; alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituido; C(O)O-(alquilo), -C(O)O-(alquenilo), -C(O)O-(alquinilo), -C(O)NH2, C(O)NH(alquilo), halógeno, ácido, ciano, NO2, -S(alquilo), S(alquenilo), -S(alquinilo), NH2, -NH(alquilo), -N(alquilo)2, NH(alquenilo),-NH(alquinilo), -NH(acilo) o N(acilo)2;

R3’

es alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituido; halógeno, ácido o ciano; y Base se selecciona del grupo consistente en:

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donde cada R’ and R" independientemente es H, C1-6 alquilo, C2-6 alquenilo, C2-6 alquinilo, halógeno, alquilo halogenado, OH, CN, N3, carboxi,C1-4 alcoxicarbonilo,NH2, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino,C1-6 alcoxi,C1-6 alquilosulfonilo, o (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo; cada W es independientemente H, Cl, Br, I, F, alquilo halogenado, alcoxi, OH, SH, O-alquilo, S-alquilo, O-alquenilo, O-alquinilo, Salquenilo, S-alquinilo, -OC(O)NR4R4, O-acilo, S-acilo, CN, SCN, OCN, NO2, N3, NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, NH-cicloalquilo, NH

5 acilo, NH=NH, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2; y cada R4 es independientemente H, acilo, o C1-6 alquilo; y cada Z es independientemente O, S, NH, N-OH, N-NH2, N(alquilo), N(alquilo)2, N-cicloalquilo, alcoxi, CN, SCN, OCN, SH, NO2, N3, NH=NH, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2.

10 3ª. – Un compuesto de la estructura general de Fórmula (III)

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20 o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, donde: cada R, R2*, y R3* son independientemente H; mono-, di-, o trifosfato; o fosfonato; alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo o alquinilo opcionalmente sutituido, acilo, -C(O)-(alquilo), -C(O)(alquenilo), -C(O)-(alquinilo), lípido, fosfolípido, carbohidrato, péptido,

25 colesterol, un residuo o derivado de aminoácido; X es O;

R2’

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donde cada R’ and R" independientemente es H, C1-6 alquilo, C2-6 alquenilo, C2-6 alquinilo, halógeno, alquilo halogenado, OH, CN, N3, carboxi,C1-4 alcoxicarbonilo,NH2, C1-4 alquiloamino, di(C1-4 alquilo)amino,C1-6 alcoxi,C1-6 alquilosulfonilo, o (C1-4 alquilo)0-2 aminometilo; cada W es independientemente H, Cl, Br, I, F, alquilo halogenado, alcoxi, OH, SH, O-alquilo, S-alquilo, O-alquenilo, O-alquinilo, Salquenilo, S-alquinilo, -OC(O)NR4R4, O-acilo, S-acilo, CN, SCN, OCN, NO2, N3, NH2, NH(alquilo), N(alquilo)2, NH-cicloalquilo, NHacilo, NH=NH, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2; y cada R4 es independientemente H, acilo, o C1-6 alquilo; y cada Z es independientemente O, S, NH, N-OH, N-NH2, N(alquilo), N(alquilo)2, N-cicloalquilo, alcoxi, CN, SCN, OCN, SH, NO2, N3, NH=NH, CONH2, CONH(alquilo), o CON(alquilo)2.

4ª. – El compuesto de la reivindicación 1 ó 3, donde R2’ es alquilo, alquenilo o alquinilo opcionalmente sustituido; o halógeno. 5ª. – El compuesto de la reivindicación 4, donde R2’ es CH3 o CF3. 6ª. – Un compuesto de la estructura general de la Fórmula

(IV):

5

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10

o una sal farmacológicamente aceptable del mismo, donde: cada R, R2*, y R3* son independientemente H; mono-, di-, o trifosfato; o fosfonato; alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo o alquinilo opcionalmente sutituido, acilo, -C(O)-(alquilo), -C(O)

15 (alquenilo), -C(O)-(alquinilo), lípido, fosfolípido, carbohidrato, péptido, colesterol, un residuo o derivado de aminoácido; X es O;

R2’

es alquilo, alquenilo, o alquinilo opcionalmente sustituido; halógeno, ácido o ciano; y 20 Base se selecciona del grupo consistente en:

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7ª. – El compuesto de la reivindicación 2 ó 6, donde R3’ es alquilo, alquenilo o alquinilo opcionalmente sustituido; o halógeno. 8ª. – El compuesto de la reivindicación 7, donde R3’ es CH3 o CF3.

9ª. – El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8, donde R, R2*, y R3* son independientemente H, mono-, di-, o trifosfato o fosfonato.

10ª. – El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9, donde R, R2*, y R3* son independientemente H.

11ª. – El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8, donde R, R2*, y R3* son independientemente H, acilo, o un residuo acilo de aminoácido.

12ª. – El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, donde la Base se selecciona del grupo consistente en:

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13ª. -Una composición farmacéutica que contiene una cantidad antiviralmente efectiva de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, opcionalmente con un portador, diluyente

o excipiente farmacéuticamente aceptable. 14ª. – La composición farmacéutica de la reivindicación 13, donde la composición tiene forma de una unidad de dosis.

15ª. – La composición farmacéutica de la reivindicación 14, donde la unidad de dosis contiene desde aproximadamente 0.01 a aproximadamente 50 mg del compuesto.

16ª. – La composición farmacéutica de la reivindicación 14 ó 15, donde la unidad de dosis es un comprimido o cápsula.

17ª. – La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16, que además contiene uno o más agentes adicionales antiviralmente efectivos.

18ª. – La composición farmacéutica de la reivindicación 17, donde el agente antiviral se selecciona del grupo consistente en un interferón, ribavirina, una interleuquina, un inhibidor de proteasa NS3, un inhibidor de proteasa cisteína, un derivado de tiazolidina, una tiazolidina, una benzanilida, fenantrenoquinona, un inhibidor de helicasa, un inhibidor de polimerasa, un análogo nucleótido, gliotoxina, cerulenina, un oligodeoxinucleótido antisentido, un inhibidor de translación dependiente de IRES, y una ribozima.

19ª. – La composición farmacéutica de la reivindicación 17 ó 18, donde el agente adicinal antiviralmente efectivo es un interferón.

20ª. – La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19, donde el agente adicional antiviralmente efectivo se selecciona del grupo consistente en inferferón alfa 2a pegilado, inteferón alfacón-1, interferón natural, albuferón, interferón beta-1a, interferón omega, interferón gamma, interferón tau, interferón delta e interferón gamma-1b.

21ª. – La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 13 a 20, donde el compuesto está en forma sustancialmente pura.

22ª. – La composición farmacéutica de la reivindicación 21, donde el compuesto tiene al menos 90% por peso del isómero β-D.

23ª. – La composición farmacéutica de la reivindicación 21, donde el compuesto tiene al menos 95% por peso del isómero β-D.

24ª. – La composición farmacéutica de la reivindicación 21, donde el compuesto tiene al menos 90% por peso del isómero β-L.

25ª. – La composición farmacéutica de la reivindicación 21, donde el compuesto tiene al menos 95% por peso del isómero β-L.

26ª. – Uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un huésped infectado por Flaviviridae.

27ª. – El uso de la reivindicación 26, donde el huésped es un mamífero.

28ª. – El uso de la reivindicación 27, donde el mamífero es un humano.

29ª. – Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para uso en el tratamiento de un huésped infectado por Flaviviridae, donde el el huésped es opcionalmente como el establecido en la reivindicación 27 o reivindicación 28.