JP2012514982A5

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Publication number: JP2012514982A5
Application number: JP2011545537A
Authority: JP
Filing date: 2010-01-12
Publication date: 2012-12-06
Anticipated expiration: 2030-01-12

Claims

活性化可能な抗体であって、前記活性化可能な抗体は：
標的分子への結合に関して約１００ｎＭ以下の平衡解離定数を有する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）と；
切断されていない状態で、前記標的分子への前記ＡＢの結合を阻害することができるマスキング部分（ＭＭ）であって、ここで、
（Ａ）前記ＭＭは、長さ約２アミノ酸〜約４０アミノ酸のポリペプチドであり、
（Ｂ）前記ＭＭは、前記ＡＢへの結合に関して、前記標的分子に対する前記ＡＢの平衡解離定数よりも大きい平衡解離定数を有し、
（Ｃ）前記ＭＭのポリペプチド配列は、前記標的分子の配列とは異なり、かつ前記ＭＭのポリペプチド配列は、前記ＡＢの天然の結合パートナーに対して５０％以下同一であり、かつ
（Ｄ）前記ＭＭは、切断された状態で、前記標的への結合に関して、前記ＡＢを妨害も競合もしない、マスキング部分（ＭＭ）と；
長さ最大１５アミノ酸のポリペプチドである切断可能な部分（ＣＭ）であって、前記ＣＭは、第１の組織中において前記標的分子と共に共局在化し、前記活性化可能な抗体中の前記ＣＭを切断することができるプロテアーゼの基質として役割を果たし、ここで、前記切断されていない状態で、前記標的への前記活性化可能な抗体の結合が、前記標的への改変されていないＡＢの結合の平衡解離定数よりも少なくとも１００倍大きい平衡解離定数で生じるように低減され、かつ一方で、前記切断された状態で、前記ＡＢが、前記標的の存在下で、前記標的分子に結合することができるように、前記ＣＭが、前記活性化可能な抗体中に位置づけられている、切断可能な部分（ＣＭ）と；ならびに、
各々長さ約１アミノ酸〜約２０アミノ酸のペプチドである、２つの連結ペプチド（ＬＰ１、ＬＰ２）であって、ここで、ＬＰ１およびＬＰ２は、互いに同一である必要はない、連結ペプチドと；
を含み、
前記活性化可能な抗体は、前記切断されていない状態で、以下のような、Ｎ末端からＣ末端までの構造上の配置を有する：
（ＭＭ）−ＬＰ１−（ＣＭ）−ＬＰ２−（ＡＢ）または（ＡＢ）−ＬＰ２−（ＣＭ）−Ｌ１（ＭＭ）
ここで、前記ＭＭのカップリングは、前記標的に対する、前記ＭＭとカップリングした場合の前記ＡＢの解離定数（Ｋ_ｄ）が、前記標的に対する、前記ＭＭとカップリングしていない場合の前記ＡＢのＫ_ｄよりも少なくとも１００倍大きいように、前記ＡＢがその標的に結合する能力を低下させる、
活性化可能な抗体。
標的置換アッセイを用いてｉｎｖｉｔｒｏでアッセイした場合に、前記ＣＭが切断された場合と比較して、標的分子の存在下で、前記ＣＭが切断されていない場合、前記ＭＭが、前記ＡＢが前記標的分子と結合する能力を少なくとも９０％低下させる、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
前記その抗原結合断片が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、ｓｃＦｖ、ｓｃＡＢ、ｄＡｂ、単一ドメイン重鎖抗体、および単一ドメイン軽鎖抗体からなる群より選択される、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
前記ＡＢが、セツキシマブ、アダリムマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、エファリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、アデカツムマブ、Ｈｕ５ｃ８、アレムツズマブ、ラニビズマブ、トシツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、リツキシマブ、トシリズマブ、ベバシズマブ、またはフィギツムマブであるか、あるいはそれらに由来する、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
前記標的が、ＥＧＦＲ、Ｊａｇｇｅｄ１、Ｊａｇｇｅｄ２、ｇｐ１３０、ＴＮＦアルファ、ＣＤ１１ａ、ＣＳＦＲ、ＣＴＬＡ−４、ＥｐＣＡＭ、ＶＥＧＦ、ＣＤ４０、ＣＤ２０、Ｎｏｔｃｈ１、Ｎｏｔｃｈ２、Ｎｏｔｃｈ３、Ｎｏｔｃｈ４、ＣＤ５２、ＭＵＣ１、ＩＧＦ１Ｒ、トランスフェリン、ＶＣＡＭ−１、ＣＤ４４、ＤＬＬ４、またはＩＬ４である、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
前記標的が細胞表面受容体である、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
前記標的が、トシリズマブの標的である、インターロイキン６受容体（ＩＬ−６Ｒ）である、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
前記ＣＭが、ｕＰＡ、ＭＴ−ＳＰ１、レグマイン、プラスミン、ＴＭＰＲＳＳ−３／４、ＭＭＰ−９、ＭＴ１−ＭＭＰ、カテプシン、カスパーゼ、ヒト好中球エラスターゼ、ベータ−セクレターゼ、またはＰＳＡからなる群より選択される酵素の基質である、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
前記ＭＭが、前記ＡＢの前記標的分子に対して２５％超のアミノ酸配列同一性または１０％超のアミノ酸配列同一性を含まず、必要に応じて、前記ＭＭが、ＣＩＳＰＲＧＣ（配列番号１）、Ｃ（Ｎ／Ｐ）Ｈ（ＨＶＦ）（Ｙ／Ｔ）（Ｆ／Ｗ／Ｔ／Ｌ）（Ｙ／Ｇ／Ｔ／Ｓ）（Ｔ／Ｓ／Ｙ／Ｈ）ＣＧＣＩＳＰＲＧＣＧ（配列番号２）、ｘＣｘｘＹＱＣＬｘｘｘｘｘｘ（配列番号３）、ＸＸＱＰｘＰＰＲＶＸＸ（配列番号４）、ＰｘＰＧＦＰＹＣｘｘｘｘ（配列番号５）、ｘｘｘｘＱｘｘＰＷＰＰ（配列番号６）、ＧｘＧｘＣＹＴＩＬＥｘｘＣｘｘｘＲ（配列番号７）、ＧｘｘｘＣＹｘＩｘＥｘｘＣｘｘｘｘ（配列番号８）、ＧｘｘｘＣＹｘＩｘＥｘＷＣｘｘｘｘ（配列番号９）、ｘｘｘＣＣｘｘＹｘＩｘｘＣＣｘｘｘ（配列番号１０）、およびｘｘｘｘｘＹｘＩＬＥｘｘｘｘｘ（配列番号１１）から選択されるコンセンサス配列を含む、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
前記ＭＭのカップリングにより、前記標的に対する前記ＭＭとカップリングした場合の前記ＡＢの解離定数（Ｋ_ｄ）が前記標的に対する前記ＭＭとカップリングしていない場合の前記ＡＢのＫ_ｄよりも少なくとも１０００倍大きい、または少なくとも１０，０００倍大きいように、前記ＡＢがその標的と結合する能力が低下する、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
前記第１の組織中での前記活性化可能な抗体とその標的との結合の親和性が、第２の組織中での前記活性化可能な抗体とその標的との結合と比較した場合により高く、前記第１の組織が罹患した組織であり、必要に応じて、前記罹患した組織が、乳房の組織、頭部の組織、頸部の組織、肺の組織、膵臓の組織、神経系の組織、肝臓の組織、前立腺の組織、泌尿生殖器の組織、または子宮頸部の組織である、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
以下のうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の活性化可能な抗体：
（ｉ）第２のＡＢであって、前記第２のＡＢの標的は、Ｎｏｔｃｈ１、ＥＧＦＲ、ＴＮＦアルファ、ＣＤ１１ａ、ＣＳＦＲ、ＣＴＬＡ−４、ＥｐＣＡＭ、ＶＥＧＦ、ＣＤ４０、ＣＤ２０、Ｎｏｔｃｈ２、Ｎｏｔｃｈ３、Ｎｏｔｃｈ４、Ｊａｇｇｅｄ１、Ｊａｇｇｅｄ２、ＣＤ５２、ＭＵＣ１、ＩＧＦ１Ｒ、トランスフェリン、ｇｐ１３０、ＶＣＡＭ−１、ＣＤ４４、ＤＬＬ４、およびＩＬ４からなる群より選択される、第２のＡＢ；または
（ｉｉ）少なくとも１つの第１のＣＭおよび第２のＣＭであって、ここで、前記第１のＣＭは、標的組織中の第１の切断剤によって切断可能であり、前記第２のＣＭは、標的組織中の第２の切断剤によって切断可能である、第１のＣＭおよび第２のＣＭ、
活性化可能な抗体。
前記第１のＣＭ、前記第２のＣＭ、前記第１の切断剤または前記第２の切断剤が、以下の特徴のうちの少なくとも１つを含む、請求項１２に記載の活性化可能な抗体：
（ｉ）前記第１の切断剤および前記第２の切断剤は同じ酵素であり、かつ前記第１のＣＭおよび前記第２のＣＭは前記酵素の異なる基質である；
（ｉｉ）前記第１の切断剤および前記第２の切断剤は異なる酵素である；
（ｉｉｉ）前記第１の切断剤および前記第２の切断剤は前記第１の組織中において共局在化している；あるいは
（ｉｖ）前記第１のＣＭおよび前記第２のＣＭは前記第１の組織中における少なくとも１つの切断剤によって切断可能である、
活性化可能な抗体。
ＬＰ１およびＬＰ２のうちの少なくとも１つが、（ＧＳ）_ｎ、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号１２）、（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号１３）、ＧＧＳＧ（配列番号１４）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１５）、ＧＳＧＳＧ（配列番号１６）、ＧＳＧＧＧ（配列番号１７）、ＧＧＧＳＧ（配列番号１８）およびＧＳＳＳＧ（配列番号１９）から選択されるアミノ酸配列を含み、式中、ｎは少なくとも１の整数である、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
検出可能な部分、必要に応じて診断剤を含むか、または前記ＡＢに結合体化された治療剤、必要に応じて、抗腫瘍剤をさらに含む、請求項１に記載の活性化可能な抗体。
被験体における新生物、自己免疫疾患または炎症性疾患を処置するため、あるいは被験体における血管形成を阻害するための組成物であって、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の活性化可能な抗体を含む、組成物。
被験体における新生物、自己免疫疾患または炎症性疾患を処置するための医薬の製造における、あるいは被験体における血管形成を阻害するための医薬の製造における、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の活性化可能な抗体の使用。
活性化可能な抗体を製造する方法であって、前記方法は：
（ａ）前記活性化可能な抗体の発現を誘導する条件下で前記活性化可能な抗体をコードする核酸構築物を含む細胞を培養する工程であって、ここで、前記活性化可能な抗体は、マスキング部分（ＭＭ）、切断可能な部分（ＣＭ）、および標的に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）を含み、ここで、
（ｉ）前記ＭＭは、長さ約２アミノ酸〜約４０アミノ酸のポリペプチドであり、前記ＭＭは、前記ＡＢへの結合に関して、前記標的への結合についての前記ＡＢの平衡解離定数よりも大きい平衡解離定数を有し、そして前記ＭＭのアミノ酸配列は、前記標的のアミノ酸配列とは異なり、かつ前記ＭＭのアミノ酸配列は、前記ＡＢの天然の結合パートナーのアミノ酸配列に対して５０％以下同一であり；
（ｉｉ）前記ＣＭは、組織中において前記標的と共に共局在化するプロテアーゼの基質として機能するポリペプチドであり、前記プロテアーゼは、前記活性化可能な抗体が前記プロテアーゼに曝露された場合に前記活性化可能な抗体中の前記ＣＭを切断し；
（ｉｉｉ）前記活性化可能な抗体は、切断されていない状態で、以下：
ＭＭ−ＣＭ−ＡＢまたはＡＢ−ＣＭ−ＭＭ
のような、Ｎ末端からＣ末端までの構造上の配置を有し；そして
（ｉｖ）切断されていない状態で、前記ＭＭは、前記標的への前記ＡＢの特異的結合を妨害し、そして切断された状態で、前記ＭＭは、前記標的への前記ＡＢの特異的結合を妨害も競合もしない；
工程；
（ｂ）前記活性化可能な抗体を回収する工程
を包含する、方法。
請求項１に記載の活性化可能な抗体を製造する方法であって、前記方法は：
（ａ）抗体またはその抗原結合断片（ＡＢ）、マスキング部分（ＭＭ）、切断可能な部分（ＣＭ）、第１の連結ペプチド（ＬＰ１）および第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を提供するステップと；
（ｂ）前記第１の連結ペプチド（ＬＰ１）を介して、前記ＭＭを前記ＣＭにカップリングさせるステップと；
（ｃ）前記第２の連結ペプチド（ＬＰ２）を介して、前記ＡＢを前記ＣＭにカップリングさせるステップと；
を含み、ここで、
前記活性化可能な抗体は、切断されていない状態で、以下のような、Ｎ末端からＣ末端までの構造上の配置を有する：
（ＭＭ）−ＬＰ１−（ＣＭ）−ＬＰ２−（ＡＢ）または（ＡＢ）−ＬＰ２−（ＣＭ）−Ｌ１（ＭＭ）、
方法。
請求項１に記載の活性化可能な抗体をコードする、単離された核酸分子。
請求項１に記載の活性化可能な抗体の発現を誘導する条件下で、細胞を培養することによって、請求項１に記載の活性化可能な抗体を生成する方法であって、前記細胞は、前記活性化可能な抗体をコードする単離された核酸分子を含むベクターを含む、方法。