TW202334187A - 可活化細胞激素構築體及相關組成物與方法 - Google Patents

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Abstract

本文提供可活化細胞激素構築體，其包括：(a)第一單體構築體，其包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、第一可切割部分(CM1)和第一二聚合結構域(DD1)，其中CM1係位於CP1與DD1之間；及(b)第二單體構築體，其包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)，其中CM2係位於CP2與DD2之間，其中：CM1及CM2作用為蛋白酶受質；DD1及DD2彼此結合；且其中ACC係以與CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低為特徵。

Description

可活化細胞激素構築體及相關組成物與方法
本揭示關於生物科技領域，且更特定言之，關於可活化細胞激素構築體，包括可活化介白素15(IL-15)細胞激素構築體。 相關申請案之交叉參考 本申請案主張2021年10月8日申請之美國臨時申請案第63/253,939號及2022年2月17日申請之美國臨時申請案第63/311,397號的權益。將上文確認之申請案的整體內容完整地併入本文以供參考。 電子序列表參考 將電子序列表的內容(CYTX087.xml；大小：360,448個位元組；創建日期：2022年9月29日)以其全文併入本文以供參考。
細胞激素為天然存在的小蛋白及糖蛋白家族，藉由大多數有核細胞反應病毒感染及/或其他抗原刺激物而生產及分泌。介白素為細胞激素的子類別。介白素調節細胞生長、分化及運動。彼等在刺激免疫反應(諸如發炎)特別重要。介白素已用於治療癌症、自身免疫性疾患及其他疾患。例如，介白素-2(IL2)適應於治療黑色素瘤、移植物抗宿主疾病(GVHD)、神經胚細胞瘤、腎細胞癌(RCC)，且亦被認為有用於以下病症：包括急性冠狀動脈症候群、急性骨髓性症候群、異位性皮膚炎、自身免疫性肝病、基底細胞癌、膀胱癌、乳癌、念珠菌症、大腸直腸癌、皮膚T細胞淋巴瘤、子宮內膜瘤、HIV感染、缺血性心臟病、類風濕性關節炎、鼻咽腺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、全身性紅斑性狼瘡、結核病及其他疾患。 已知介白素-15(IL-15)促進T細胞、B細胞及天然殺手(NK)細胞分化及擴增，導致增強的抗腫瘤反應。IL-15已鑑定為抗癌療法之有希望的候選藥物且已在許多臨床試驗中測試。儘管有此希望，但已知IL-15展現有害的促發炎效應且與許多自身免疫性疾病的發病機制相關聯。重組IL-15具有2微克/kg之最大耐受劑量。重組可溶性IL-15亦具有短的活體內半生期，這阻礙其作為治療劑的用途。其他的介白素(諸如尤其為IL-6、IL-7、IL-12和IL-21)亦為用於癌症及其他疾病的潛在治療。然而，介白素療法時常伴隨非所欲副作用，尤其包括流感樣症狀(flu-like symptom) 、噁心、嘔吐、腹瀉、低血壓和心律不整。 干擾素為細胞激素之另一子類別。干擾素目前分成三大類：I型干擾素、II型干擾素和III型干擾素。干擾素係藉由結合至細胞表面上特定的膜受體而發揮其細胞活性。 干擾素療法具有許多臨床效益。例如，已知干擾素調升免疫系統且亦具有抗病毒和抗增殖性質。該等生物學性質導致干擾素在臨床上用作為治療病毒感染及惡性腫瘤之治療劑。再者，干擾素可用於招募患者的先天性免疫系統以鑑定及攻擊癌細胞。據此，干擾素療法已廣泛地用於癌症及抗病毒療法，包括用於治療肝炎、卡波西氏肉瘤、毛細胞白血病、慢性骨髓性白血病(CML)、濾泡性淋巴瘤、腎細胞癌(RCC)、黑色素瘤和其他的疾病狀態。然而，干擾素的全身性投予伴隨劑量依賴性毒性，尤其包括強烈的流感樣症狀、神經系統症狀、肝毒性、骨髓抑制和心律不整。在黑色素瘤患者研究中，帕博利珠單抗(Pembrolizumab)與聚乙二醇化IFNa之組合導致60.5%之ORR。組合治療亦與49%之G3/G4不良事件相關聯，需要減少聚乙二醇化IFNa的劑量(Davar等人之J. Clin. Oncol., 2018)。該等非所欲副作用限制干擾素療法的劑量且有時導致干擾素治療中斷或延遲。 因此，改進細胞激素療法對所欲標靶之特異性及選擇性的需求及渴望有很大的興趣。增加細胞激素治療劑靶向疾病位點可降低基於全身性機制的毒性且導致更廣泛的治療效用。
本揭示提供可活化細胞激素構築體(ACC)，其包括：(a)第一單體，其包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、第一可切割部分(CM1)和第一二聚合結構域(DD1)，其中CM1係位於CP1與DD1之間；及(b)第二單體，其包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)，其中CM2係位於CP2與DD2之間，其中：CM1及CM2作用為蛋白酶受質；DD1及DD2彼此結合；且其中ACC係以與CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低為特徵。相對於健康組織，切割CM1及CM2之蛋白酶可能過度表現在患病組織(例如腫瘤組織)中。ACC可在CM1及/或CM2切割後活化，使得細胞激素可在患病組織中(例如在腫瘤微環境中)發揮其活性，而細胞激素活性在健康組織環境中減弱。因此，本文所提供之ACC可提供相對於傳統的細胞激素治療劑而降低的毒性，能使細胞激素的有效劑量更高及/或增加細胞激素的治療範圍。 本文提供可活化細胞激素構築體(ACC)，其包括第一單體構築體及第二單體構築體，其中：(a)第一單體構築體包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、第一可切割部分(CM1)和第一二聚合結構域(DD1)，其中CM1係位於CP1與DD1之間；及(b)第二單體構築體包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)，其中CM2係位於CP2與DD2之間；其中DD1及DD2彼此結合，由此形成第一單體構築體及第二單體構築體之二聚物；且其中ACC係以具有與至少一種CP1及/或CP2活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低的水平為特徵。 本揭示提供可活化細胞激素構築體(ACC)，其包括：(a)第一單體，其包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、第一二聚合結構域(DD1)；及(b)第二單體，其包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)、可切割部分(CM)和第二二聚合結構域(DD2)，其中CM係位於CP2與DD2之間，其中：CM作用為蛋白酶受質；DD1及DD2彼此結合；且其中ACC係以與CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低為特徵。 本揭示提供可活化細胞激素構築體(ACC)，其包括：(a)第一單體，其包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、可切割部分(CM)和第一二聚合結構域(DD1)，其中CM係位於CP1與DD1之間；及(b)第二單體，其包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)和第二二聚合結構域(DD2)，其中：CM作用為蛋白酶受質；DD1及DD2彼此結合；且其中ACC係以與CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低為特徵。 本揭示提供可活化細胞激素構築體(ACC)，其包括：(a)第一單體，其包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)和第一二聚合結構域(DD1)；及(b)第二單體，其包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)和第二二聚合結構域(DD2)，其中CP1、CP2或CP1和CP2兩者包括作用為蛋白酶受質之胺基酸序列；DD1及DD2彼此結合；且其中ACC係以與CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低為特徵。 在一些實施態樣中，CP1包含介白素多肽及/或CP2包含介白素多肽。在一些實施態樣中，ACC係以具有與相應的對照介白素相比，介白素活性降低的水平為特徵。例如，在一些實施態樣中，對照介白素可包含重組介白素蛋白質或聚乙二醇化介白素蛋白質。在一些實施態樣中，介白素多肽為選自由下列所組成之群組的蛋白質：IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-18、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13、IL-15、IL-3、IL-5、IL-6、IL-11、IL-12、IL-10、IL-20、IL-21 IL-14、IL-16和IL-17。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2包含IL-15。 在一些實施態樣中，包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)之第一單體及/或包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)之第二單體另包含肽遮罩(peptide mask)(PM)。在一些實施態樣中，ACC另包含在PM與CP之間的CM。 在一些實施態樣中，可活化細胞激素構築體(ACC)包括第一單體構築體及第二單體構築體，其中：(a)第一單體構築體包含第一肽遮罩(PM1)、第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、第一及第三可切割部分(CM1及CM3)和第一二聚合結構域(DD1)，其中CM1係位於CP1與DD1之間，且CM3係位於PM1與CP1之間；及(b)第二單體構築體包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)，其中CM2係位於CP2與DD2之間；其中DD1及DD2彼此結合，由此形成第一單體構築體及第二單體構築體之二聚物；且其中ACC係以具有與至少一種CP1及/或CP2活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低的水平為特徵。 在一些實施態樣中，第二單體構築體另包含第二肽遮罩(PM2)及第四可切割部分(CM4)，其中CM4係位於PM2與CP2之間。在一些實施態樣中，第一單體構築體包含第一多肽，其包含PM1、CM3、CP1、CM1和DD1。在一些實施態樣中，第二單體構築體包含第二多肽，其包含CP2、CM2和DD2。在一些實施態樣中，第二單體構築體包含第二多肽，其包含PM2、CM4、CP2、CM2和DD2。 在一些實施態樣中，第一單體構築體包含第一多肽，其包含CP1、CM1和DD1。在一些實施態樣中，第二單體構築體包含第二多肽，其包含CP2、CM2和DD2。在一些實施態樣中，DD1及DD2為一對選自由下列所組成之群組：一對Fc結構域，來自人類IL-15受體之α鏈(IL15Rα)的壽司結構域(sushi domain)及可溶性IL-15；芽孢桿菌核醣核酸酶(barnase)及芽孢桿菌核醣核酸酶抑制蛋白(barnstar)；蛋白質激酶A(PKA)及A-激酶錨定蛋白(anchoring protein)(AKAP)；基於突變之RNase I片段的接頭/對接標籤模組；表位及單結構域抗體(sdAb)；表位及單鏈可變片段(scFv)；以及基於蛋白質突觸蛋白、突觸結合蛋白質(synaptotagmin)、小突觸囊泡蛋白(synaptobrevin)及SNAP25之相互作用的可溶性N-乙基-順丁烯二醯亞胺敏感因子附著蛋白質受體(SNARE)模組、抗原結合結構域及表位。 在一些實施態樣中，DD1及DD2為一對Fc結構域。在一些實施態樣中，一對Fc結構域為一對人類Fc結構域。在一些實施態樣中，人類Fc結構域為人類IgG1 Fc結構域、人類IgG2 Fc結構域、人類IgG3 Fc結構域或人類IgG4 Fc結構域。在一些實施態樣中，人類Fc結構域為人類IgG4 Fc結構域。在一些實施態樣中，人類Fc結構域包含與SEQ ID NO：3至少80%之同一性的序列。在一些實施態樣中，人類Fc結構域各自包含與SEQ ID NO：3至少90%、95%、96%、97%、98%、或99%之同一性的序列。在一些實施態樣中，人類Fc結構域各自包含SEQ ID NO：3。在一些實施態樣中，DD1及DD2為相同的。例如，DD1及DD2可為一對相同的人類IgG4 Fc結構域。在一些實施態樣中，二聚合結構域分別具有SEQ ID NO：315和316之胺基酸序列。在一些實施態樣中，人類Fc結構域包括消除糖基化及/或降低Fc-γ受體結合之突變。在一些實施態樣中，人類Fc結構域包含突變N297Q、N297A或N297G；在一些實施態樣中，人類Fc結構域包含在位置234及/或235上的突變，例如L235E或L234A及L235A(在IgG1中)，或F234A及L235A (在IgG4中)；在一些實施態樣中，人類Fc結構域為IgG2 Fc結構域，其包含突變V234A、G237A、P238S、H268Q/A、V309L、A330S或P331S或其組合(全部根據EU編號)。 工程化人類Fc結構域的額外實例為那些熟習本技術領域者已知。其中在至少一種胺基酸中的突變導致Fc功能降低之Ig重鏈恆定區胺基酸的實例包括但不限於重鏈恆定區之胺基酸228、233、234、235、236、237、239、252、254、256、265、270、297、318、320、322、327、329、330和331中的突變(根據EU編號)。突變之胺基酸組合的實例亦為本技術中已知，諸如但不限於胺基酸234、235和331中的突變(諸如L234F、L235E和P331S)之組合或胺基酸318、320和322中的突變(諸如E318A、K320A和K322A)之組合。 工程化Fc結構域的其他實例包括F243L/R292P/Y300L/ V305I/P396 IgG1；S239D/I332E IgG1；S239D/I332E/ A330L IgG1；S298A/E333A/K334A；在一個重鏈中的L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A IgG1及在相反重鏈中的D270E/K326D、A330M/K334E IgG； G236A/S239D/I332E IgG1；K326W/E333S IgG1； S267E/H268F/S324T IgG1；E345R/E430G/S440Y IgG1； N297A或N297Q或N297G IgG1；L235E IgG1； L234A/L235A IgG1；F234A/L235A IgG4； H268Q/V309L/A330S/P331S IgG2； V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S IgG2； M252Y/S254T/T256E IgG1；M428L/N434S IgG1； S267E/L328F IgG1；N325S/L328F IgG1；及類似者。在一些實施態樣中，工程化Fc結構域包含一或多種選自由下列所組成之群組的取代：N297A IgG1、N297Q IgG1和S228P IgG4。 在一些實施態樣中，DD1包含抗原結合結構域及DD2包含相應表位。在一些實施態樣中，抗原結合結構域為抗His標籤抗原結合結構域，且其中DD2包含His標籤。在一些實施態樣中，抗原結合結構域為單鏈可變片段(scFv)。在一些實施態樣中，抗原結合結構域為單結構域抗體(sdAb)。在一些實施態樣中，DD1及DD2中至少一者包含選自由非多肽聚合物和小分子所組成之群組的二聚合結構域取代物。在一些實施態樣中，DD1及DD2包含彼此共價結合之非多肽聚合物。在一些實施態樣中，非多肽聚合物為含硫之聚乙二醇，且其中DD1及DD2彼此經由一或多個雙硫鍵共價結合。在一些實施態樣中，DD1及DD2中至少一者包含小分子。在一些實施態樣中，小分子為生物素。在一些實施態樣中，DD1包含生物素及DD2包含抗生物素蛋白。 在一些實施態樣中，CP1及CP2為成熟細胞激素。在一些實施態樣中，CP1及CP2之各者包含成熟細胞激素序列且另包含訊息肽(在本文亦稱為「訊息序列」)。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2個別地選自由下列所組成之群組：干擾素、介白素、GM-CSF、G-CSF、LIF、OSM、CD154、LT-β、TNF-α、TNF-β、4-1BBL、APRIL、CD70、CD153、CD178、GITRL、LIGHT、OX40L、TALL-1、TRAIL、TWEAK、TRANCE、TGF-β1、TGF-β1、TGF-β3、Epo、Tpo、Flt-3L、SCF、M-CSF和MSP。 CP1及/或CP2可為野生型人類或非人類動物序列、突變序列、截短序列、雜合序列或包含插入之序列。在一些實施態樣中，CP1及CP2為相同的。在一些實施態樣中，CP1及CP2為不同的，且本揭示包括選擇及組合本文列出之細胞激素蛋白質中任兩者。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2為介白素。在一些實施態樣中，CP1及CP2兩者為介白素。在一些實施態樣中，CP1及CP2為不同的介白素。在一些實施態樣中，CP1及CP2為相同的介白素。在一些實施態樣中，CP1或CP2為介白素。在一些實施態樣中，CP1及CP2中之一者為介白素及CP1或CP2中之另一者為除了介白素以外的細胞激素。在一些態樣中，一或兩個細胞激素為單體細胞激素。在一些態樣中，一或兩個干擾素為單體介白素。在一些態樣中，CP1或CP2中任一者為單體介白素及其他的CP1或CP2為不同的細胞激素。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2個別地選自由下列所組成之群組：IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-18、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13、IL-15、IL-3、IL-5、IL-6、IL-11、IL-12、IL-10、IL-20、IL-21、IL-14、IL-16和IL-17。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2包含IL-15。在一些態樣中，CP1及/或CP2包括突變的細胞激素序列。在一些態樣中，CP1及/或CP2包括普適性細胞激素序列。在一些態樣中，CP1及/或CP2包括保留細胞激素活性之截短序列。 在一些實施態樣中，介白素為人類野生型成熟介白素。在一些實施態樣中，介白素可為IL-15。在一些實施態樣中，CP1及CP2兩者為IL-15。在一些實施態樣中，CP1及CP2兩者為人類成熟IL-15。在一些實施態樣中，CP1及CP2兩者包含源自於人類成熟IL-15之胺基酸序列。在一些實施態樣中，可將IL-15截短。在一些實施態樣中，IL-15包含人類IL-15(SEQ ID NO：347)之胺基酸49至161。在一些實施態樣中，IL-15包含人類IL-15(SEQ ID NO：348)之胺基酸49至162。在一些實施態樣中，介白素為突變的介白素。在一些實施態樣中，介白素為突變的介白素，其中內源性蛋白酶切割位點已藉由一或多個胺基酸之取代、刪除或插入而使得功能失調。在一些實施態樣中，介白素為普適性細胞激素分子，例如具有不同的細胞激素子類型之雜合序列或嵌合細胞激素序列或人源化細胞激素序列。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2包含與SEQ ID NO：347至少80%之同一性的序列。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2包含與SEQ ID NO：347至少90%、95%、96%、97%、98%、或99%之同一性的序列。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2包含SEQ ID NO：347之序列。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2包含介白素。在一些實施態樣中，介白素係選自由下列所組成之群組：IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-18、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13、IL-15、IL-3、IL-5、IL-6、IL-11、IL-12、IL-10、IL-20、IL-14、IL-16和IL-17。在一些實施態樣中，介白素係選自由IL-2和IL-15所組成之群組。 在一些實施態樣中，CM1及/或CM2各自包含總共約3個胺基酸至約15個胺基酸。在一些實施態樣中，CM1及CM2包含不同的蛋白酶受質。在一些實施態樣中，CM1及CM2具有相同的長度且包含相同的胺基酸序列。在一些實施態樣中，其中CM1及CM2包含對相同的蛋白酶受質。在一些實施態樣中，蛋白酶係選自由下列所組成之群組：ADAM8、ADAM9、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADAMDEC1、ADAMTS1、ADAMTS4、ADAMTS5、BACE、腎素、組織蛋白酶(Cathepsin) D、組織蛋白酶E、凋亡蛋白酶(Caspase)1、凋亡蛋白酶2、凋亡蛋白酶3、凋亡蛋白酶4、凋亡蛋白酶5、凋亡蛋白酶6、凋亡蛋白酶7、凋亡蛋白酶8、凋亡蛋白酶9、凋亡蛋白酶10、凋亡蛋白酶14、組織蛋白酶B、組織蛋白酶C、組織蛋白酶K、組織蛋白酶L、組織蛋白酶S、組織蛋白酶V/L2、組織蛋白酶X/Z/P、克魯茲蛋白酶(Cruzipain)、豆莢蛋白酶(Legumain)、Otubain-2、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK10、KLK11、KLK13、KLK14、穿膜肽酶(Meprin)、腦啡肽酶(Neprilysin)、PSMA、BMP-1、基質金屬蛋白酶(例如MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-19、MMP-20、MMP-23、MMP-24、MMP-26、MMP-27)、活化蛋白C、組織蛋白酶A、組織蛋白酶G、凝乳酶、FVIIa、FIXa、FXa、FXIa、FXIIa、彈性蛋白酶、顆粒酶B、胍基苯甲酸酯酶(Guanidinobenzoatase)、HtrA1、人類嗜中性球解離酶、乳鐵蛋白、胰蛋白酶型絲胺酸肽酶(marapsin)、NS3/4A、PACE4、胞漿素、PSA、tPA、凝血酶、中性蛋白酶、uPA、DESC1、DPP-4、FAP、穿膜絲胺酸蛋白酶(Hepsin)、馬曲肽酶(Matriptase)-2、MT-SP1/馬曲肽酶、TMPRSS2、TMPRSS3和TMPRSS4。在一些實施態樣中，蛋白酶係選自由下列所組成之群組：uPA、豆莢蛋白酶、MT-SP1、ADAM17、BMP-1、TMPRSS3、TMPRSS4、MMP-2、MMP-9、MMP-12、MMP-13和MMP-14。 適合的可切割部分已揭示於WO 2010/081173、 WO 2015/048329、WO 2015/116933、WO 2016/118629和WO 2020/118109中，將其揭示內容以其全文併入本文以供參考。 在一些實施態樣中，CM1及/或CM2包含選自由下列所組成之群組的序列：LSGRSDNH(SEQ ID NO：5)、TGRGPSWV(SEQ ID NO：6)、PLTGRSGG(SEQ ID NO：7)、TARGPSFK(SEQ ID NO：8)、NTLSGRSENHSG(SEQ ID NO：9)、NTLSGRSGNHGS(SEQ ID NO：10)、 TSTSGRSANPRG(SEQ ID NO：11)、TSGRSANP (SEQ ID NO：12)、VHMPLGFLGP(SEQ ID NO：13)、AVGLLAPP (SEQ ID NO：14)、AQNLLGMV(SEQ ID NO：15)、QNQALRMA(SEQ ID NO：16)、LAAPLGLL(SEQ ID NO：17)、STFPFGMF(SEQ ID NO：18)、ISSGLLSS(SEQ ID NO：19)、PAGLWLDP(SEQ ID NO：20)、VAGRSMRP (SEQ ID NO：21)、VVPEGRRS(SEQ ID NO：22)、ILPRSPAF(SEQ ID NO：23)、MVLGRSLL(SEQ ID NO：24)、QGRAITFI(SEQ ID NO：25)、SPRSIMLA(SEQ ID NO：26)、SMLRSMPL(SEQ ID NO：27)、 ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：28)、 AVGLLAPPGGLSGRSDNH(SEQ ID NO：29)、 ISSGLLSSGGSGGSLSGRSDNH(SEQ ID NO：30)、 LSGRSGNH(SEQ ID NO：31)、SGRSANPRG(SEQ ID NO：32)、LSGRSDDH(SEQ ID NO：33)、LSGRSDIH(SEQ ID NO：34)、LSGRSDQH(SEQ ID NO：35)、 LSGRSDTH(SEQ ID NO：36)、LSGRSDYH(SEQ ID NO：37)、LSGRSDNP(SEQ ID NO：38)、LSGRSANP(SEQ ID NO：39)、LSGRSANI(SEQ ID NO：40)、LSGRSDNI(SEQ ID NO：41)、MIAPVAYR(SEQ ID NO：42)、RPSPMWAY (SEQ ID NO：43)、WATPRPMR(SEQ ID NO：44)、 FRLLDWQW(SEQ ID NO：45)、ISSGL(SEQ ID NO： 46)、ISSGLLS(SEQ ID NO：47)、ISSGLL(SEQ ID NO：48)、ISSGLLSGRSANPRG(SEQ ID NO：49)、 AVGLLAPPTSGRSANPRG(SEQ ID NO：50)、 AVGLLAPPSGRSANPRG(SEQ ID NO：51)、 ISSGLLSGRSDDH(SEQ ID NO：52)、ISSGLLSGRSDIH (SEQ ID NO：53)、ISSGLLSGRSDQH(SEQ ID NO：54)、ISSGLLSGRSDTH(SEQ ID NO：55)、ISSGLLSGRSDYH (SEQ ID NO：56)、ISSGLLSGRSDNP(SEQ ID NO：57)、ISSGLLSGRSANP(SEQ ID NO：58)、ISSGLLSGRSANI (SEQ ID NO：59)、AVGLLAPPGGLSGRSDDH(SEQ ID NO：60)、AVGLLAPPGGLSGRSDIH(SEQ ID NO：61)、AVGLLAPPGGLSGRSDQH(SEQ ID NO：62)、 AVGLLAPPGGLSGRSDTH(SEQ ID NO：63)、 AVGLLAPPGGLSGRSDYH(SEQ ID NO：64)、 AVGLLAPPGGLSGRSDNP(SEQ ID NO：65)、 AVGLLAPPGGLSGRSANP(SEQ ID NO：66)、 AVGLLAPPGGLSGRSANI(SEQ ID NO：67)、 ISSGLLSGRSDNI(SEQ ID NO：68)、 AVGLLAPPGGLSGRSDNI(SEQ ID NO：69)、 GLSGRSDNHGGAVGLLAPP(SEQ ID NO：70)、 GLSGRSDNHGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：71)、 LSGRSDNHGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：72)、ISSGLSS (SEQ ID NO：73)、PVGYTSSL(SEQ ID NO：74)、 DWLYWPGI(SEQ ID NO：75)、LKAAPRWA(SEQ ID NO：76)、GPSHLVLT(SEQ ID NO：77)、LPGGLSPW(SEQ ID NO：78)、MGLFSEAG(SEQ ID NO：79)、 SPLPLRVP(SEQ ID NO：80)、RMHLRSLG(SEQ ID NO：81)、LLAPSHRA(SEQ ID NO：82)、GPRSFGL(SEQ ID NO：83)、GPRSFG(SEQ ID NO：84)、SARGPSRW(SEQ ID NO：85)、GGWHTGRN (SEQ ID NO：86)、HTGRSGAL (SEQ ID NO：87)、AARGPAIH(SEQ ID NO：88)、 RGPAFNPM(SEQ ID NO：89)、SSRGPAYL(SEQ ID NO：90)、RGPATPIM(SEQ ID NO：91)、RGPA(SEQ ID NO：92)、GGQPSGMWGW(SEQ ID NO：93)、FPRPLGITGL (SEQ ID NO：94)、SPLTGRSG(SEQ ID NO：95)、 SAGFSLPA(SEQ ID NO：96)、LAPLGLQRR(SEQ ID NO：97)、SGGPLGVR(SEQ ID NO：98)、PLGL(SEQ ID NO：99)、SGRSDNI(SEQ ID NO：100)和LSGRSNI (SEQ ID NO：349)。在一些實施態樣中，CM包含選自由下列所組成之群組的序列：ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：28)、LSGRSDDH(SEQ ID NO：33)、ISSGLLSGRSDQH(SEQ ID NO：54)、SGRSDNI(SEQ ID NO：100)、 ISSGLLSGRSDNI(SEQ ID NO：68)、LSGRSDNI(SEQ ID NO：41)和LSGRSNI(SEQ ID NO：349)。在一些實施態樣中，CM包含選自由下列所組成之群組的序列：SGRSDNI (SEQ ID NO：100)、LSGRSDNI(SEQ ID NO：41)和 LSGRSNI(SEQ ID NO：349)。在一些實施態樣中，蛋白酶係由個體中的腫瘤產生，例如在腫瘤中的蛋白酶產生量比健康的個體組織中更多。在一些實施態樣中，個體已經診斷或鑑定為患有癌症。 在一些實施態樣中，CP1和CM1係在第一單體構築體中彼此直接鄰接。在一些實施態樣中，CM1和DD1係在第一單體構築體中彼此直接鄰接。在一些實施態樣中，CP2和CM2係在第二單體構築體中彼此直接鄰接。在一些實施態樣中，CM2和DD2係在第二單體構築體中彼此直接鄰接。在一些實施態樣中，第一單體構築體包含直接鄰接CM1之CP1及直接鄰接DD1之CM1，其中CM1包含選自由SEQ ID NO：5至100及SEQ ID NO：349所組成之群組的序列。在一些實施態樣中，第二單體構築體包含直接鄰接CM2之CP2及直接鄰接DD2之CM2，其中CM2包含選自由SEQ ID NO：5至100及SEQ ID NO：349所組成之群組的序列。在一些實施態樣中，第一單體構築體包含直接鄰接CM1之CP1及直接鄰接DD1之CM1，其中CM1包含不超過13、12、11、10、9、8、7、6、5或4個胺基酸長度的序列。在一些實施態樣中，第二單體構築體包含直接鄰接CM2之CP2及直接鄰接DD2之CM2，其中CM2包含不超過13、12、11、10、9、8、7、6、5或4個胺基酸長度的序列。在一些實施態樣中，第一及第二單體構築體各自建構，使得細胞激素(分別為CM1及CM2)直接鄰接不超過10、9、8、7、6、5或4個胺基酸長度的可切割部分(分別為CM1及CM2)，且可切割部分直接鄰接二聚合結構域(分別為DD1及DD2)，該二聚合結構域為人類IgG之Fc區，其中Fc區之N端為絞鏈區中沿N端至C端方向讀取之第一半胱胺酸殘基(例如人類IgG1之半胱胺酸226，使用EU編號)。在一些態樣中，二聚合結構域為IgG Fc區，其中上絞鏈殘基已經刪除。例如，Fc為其中N端序列EPKSCDKTHT (SEQ ID NO：387)、ERK、ELKTPLGDTTHT(SEQ ID NO：388)或ESKYGPP(SEQ ID NO：389)已經刪除之變異體。 在一些實施態樣中，第一單體構築體包含至少一個連結子。在一些實施態樣中，至少一個連結子為配置在CP1與CM1之間的連結子L1及/或為配置在CM1與DD1之間的連結子L2。在一些實施態樣中，第二單體構築體包含至少一個連結子。在一些實施態樣中，至少一個連結子為配置在CP2與CM2之間的連結子L3及/或為配置CM2和DD2之間的連結子L4。在一些實施態樣中，第一單體構築體包含連結子L1及第二單體構築體包含連結子L3。在一些實施態樣中，L1及L3為相同的。在一些實施態樣中，第一單體構築體包含連結子L2及第二單體構築體包含連結子L4。在一些實施態樣中，L2及L4為相同的。在一些實施態樣中，各連結子具有1個胺基酸至約15個胺基酸總長度。在一些實施態樣中，各連結子具有至少5個胺基酸總長度。如本文所使用之術語「連結子」係指肽，其胺基酸序列不為蛋白酶受質。 在一些實施態樣中，第一單體構築體包含至少一個連結子，其中各連結子獨立地選自由下列所組成之群組：單一甘胺酸(G)；兩個甘胺酸殘基(GG)；GSSGGSGGSGG (SEQ ID NO：210)；GGGS(SEQ ID NO：2)；GGGSGGGS (SEQ ID NO：211)；GGGSGGGSGGGS(SEQ ID NO： 212)；GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：213)； GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO： 214)；GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：215)；GGGGS(SEQ ID NO：216)；GS；GGGGSGS(SEQ ID NO：217)； GGGGSGGGGSGGGGSGS(SEQ ID NO：218)； GGSLDPKGGGGS(SEQ ID NO：219)； PKSCDKTHTCPPCPAPELLG(SEQ ID NO：220)； SKYGPPCPPCPAPEFLG(SEQ ID NO：221)； GKSSGSGSESKS(SEQ ID NO：222)；GSTSGSGKSSEGKG (SEQ ID NO：223)；GSTSGSGKSSEGSGSTKG(SEQ ID NO：224)；GSTSGSGKPGSGEGSTKG (SEQ ID NO： 225)；GSTSGSGKPGSSEGST(SEQ ID NO：226)；(GS)n、(GGS)n、(GSGGS)n (SEQ ID NO：227)、(GGGS)n (SEQ ID NO：228)、(GGGGS)n (SEQ ID NO：216)，其中各n為至少1的整數；GGSG(SEQ ID NO：229)；GGSGG(SEQ ID NO：230)；GSGSG(SEQ ID NO：231；GSGGG(SEQ ID NO：232)；GGGSG(SEQ ID NO：233)；GSSSG(SEQ ID NO：234)；GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：213)； GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：235)；及 GSTSGSGKPGSSEGST(SEQ ID NO：226)。在一些實施態樣中，連結子包含GGGS(SEQ ID NO：2)之序列。 如本文所使用之術語「間隔子」在本文係指在成熟ACC的游離端併入之胺基酸殘基或肽，例如在成熟ACC的訊息肽與N端之間。在一些態樣中，間隔子(或「頭端(header)」)可含有麩醯胺酸(Q)殘基。在一些態樣中，在間隔子中的殘基使胺肽酶及/或肽鏈端解酶作用最小化以防止N端胺基酸切割。例示性及非限制性間隔子胺基酸序列可包含或由下列示例性胺基酸序列中任一者所組成：QGQSGS(SEQ ID NO：375)；GQSGS(SEQ ID NO：376)；QSGS(SEQ ID NO：377)；SGS；GS；S；QGQSGQG(SEQ ID NO：378)；GQSGQG(SEQ ID NO：379)；QSGQG(SEQ ID NO：380)；SGQG(SEQ ID NO：381)；GQG；QG；G；QGQSGQ(SEQ ID NO：382)；GQSGQ(SEQ ID NO：383)；QSGQ(SEQ ID NO：384)；QGQSG(SEQ ID NO：385)；QGQS(SEQ ID NO：386)；SGQ；GQ；和Q。在一些實施態樣中，可將間隔子序列省略。 在一些實施態樣中，第一單體構築體沿N端至C端方向包含視需要的PM1、視需要的CM3、CP1、CM1和直接或間接連結至CM1之C端的DD1。在一些實施態樣中，第一多肽沿C端至N端方向包含視需要的PM1、視需要的CM3、CP1、CM1和直接或間接連結至CM1之N端的DD1。在一些實施態樣中，第二多肽沿N端至C端方向包含視需要的PM2、視需要的CM4、CP2、CM2和直接或間接連結至CM2之C端的DD2。在一些實施態樣中，第二多肽沿C端至N端方向包含CP2、CM2和直接或間接連結至CM2的DD2。 在一些實施態樣中，第一單體構築體沿N至C端方向包含CP1、視需要的連結子、CM1、視需要的連結子和DD1，其中DD1為IgG之Fc區，其中Fc區之N端為絞鏈區中沿N端至C端方向讀取之第一半胱胺酸殘基(例如人類IgG1或IgG4之半胱胺酸226，使用EU編號)，且其中CM1及插在CP1與DD1之N端半胱胺酸之間的任何連結子具有不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5或4個胺基酸的組合總長度，較佳為不超過10個胺基酸，尤佳為不超過7個胺基酸。在一些實施態樣中，第二單體構築體沿N至C端方向包含CP2、視需要的連結子、CM2、視需要的連結子和DD2，其中DD2為IgG之Fc區，其中Fc區之N端為絞鏈區中沿N端至C端方向讀取之第一半胱胺酸殘基(例如人類IgG1或IgG4之半胱胺酸226，使用EU編號)，且其中CM2及插在CP2與DD2之N端半胱胺酸之間的任何連結子具有不超過15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5或4個胺基酸的組合總長度，較佳為不超過10個胺基酸，較佳為不超過8胺基酸，尤佳為不超過7個胺基酸。 在一些實施態樣中，ACC為同型二聚物，其中第一單體構築體及第二單體構築體為相同的且包含SEQ ID NO：350之胺基酸序列。在一些實施態樣中，ACC為同型二聚物，其中第一單體構築體及第二單體構築體為相同的且包含SEQ ID NO：350之胺基酸21至359。在一些實施態樣中，ACC為同型二聚物，其中第一單體構築體及第二單體構築體為相同的且包含選自由下列所組成之群組的胺基酸序列：SEQ ID NO：350、SEQ ID NO：351、SEQ ID NO：352、SEQ ID NO：353、SEQ ID NO：354、SEQ ID NO：355和SEQ ID NO：356。在一些實施態樣中，第一單體構築體及第二單體構築體各自包含與SEQ ID NO：350之胺基酸21至359至少90%、95%、96%、97%、98%、或99%之同一性的胺基酸序列。在一些實施態樣中，第一單體構築體及第二單體構築體各自包含與選自由下列所組成之群組的序列至少90%、95%、96%、97%、98%、或99%之同一性的胺基酸序列：SEQ ID NO：350、SEQ ID NO：350、SEQ ID NO：351、SEQ ID NO：352、SEQ ID NO：353、SEQ ID NO：354、SEQ ID NO：355和SEQ ID NO：356之胺基酸21至359。在一些實施態樣中，第一單體構築體及第二單體構築體各自包含與SEQ ID NO：347至少90%、95%、96%、97%、98%、或99%之同一性的胺基酸序列。在一些實施態樣中，第一單體構築體及第二單體構築體沿N至C端方向各自包含SEQ ID NO：347；包含選自由SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：100和SEQ ID NO：349所組成之群組的胺基酸序列之CM；和二聚合結構域。在一些實施態樣中，第一單體構築體及第二單體構築體沿N至C端方向各自包含特異性結合人類IL-15之視需要的肽遮罩；視需要的CM3；包含人類IL-15之胺基酸序列之CP1；包含選自由SEQ ID NO：5至100和SEQ ID NO：349所組成之群組的胺基酸序列之CM1；和人類IgG之Fc結構域。在一些實施態樣中，第一單體構築體及第二單體構築體沿N至C端方向各自包含特異性結合人類IL-15之視需要的肽遮罩；視需要的CM3；SEQ ID NO：347；包含選自由SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：100和SEQ ID NO：349所組成之群組的胺基酸序列之CM；和人類IgG之Fc結構域。在一些實施態樣中，CP1為IL-15，且ACC包含肽遮罩，其包含源自於由SEQ ID NO：358至374所組成之群組的胺基酸序列。在一些實施態樣中，CP1為IL-15，且ACC包含不超過40個胺基酸之肽遮罩，其係源自於選自由SEQ ID NO：358至374所組成之群組的胺基酸序列。 在一些實施態樣中，至少一種CP1及/或CP2活性為CP1及/或CP2對其同族受體之結合親和性(K D)，如使用表面電漿子共振所測定。例如，在CP1或CP2為介白素的情況下，同族受體可為例如包含CD25(IL-2Rα)、CD122(IL-2Rβ)和CD132(IL-2Rγ)之介白素受體。在一些實施態樣中，至少一種CP1及/或CP2活性為淋巴瘤細胞增殖水平。在一些實施態樣中，至少一種CP1及/或CP2活性為淋巴瘤細胞中的JAK/STAT/ISGF3路徑活化水平。在一些實施態樣中，至少一種活性為細胞(例如淋巴瘤細胞或HEK細胞)中的分泌型鹼性磷酸酶(SEAP)生產水平。在一些實施態樣中，ACC(在暴露於蛋白酶前)係以與對照水平相比，至少一種CP1及/或CP2活性降低至少2倍為特徵。在一些實施態樣中，ACC係以與對照水平相比，至少一種CP1及/或CP2活性降低至少5倍為特徵。在一些實施態樣中，ACC係以與對照水平相比，至少一種CP1及/或CP2活性降低至少10倍為特徵。在一些實施態樣中，ACC係以與對照水平相比，至少一種CP1及/或CP2活性降低至少20倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、1000倍、1100倍、1200倍、1300倍、1400倍、1500倍、1600倍、1700倍、1800倍、1900倍、2000倍為特徵。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平為ACC暴露於蛋白酶後於ACC中的CP1及/或CP2活性。在一些實施態樣中，至少一種CP1及/或CP2的對照水平為相應的野生型成熟細胞激素之相應的CP1及/或CP2活性。 在一些實施態樣中，ACC係以暴露於蛋白酶後產生切割產物為特徵，其中切割產物包含CP1及/或CP2之至少一種活性。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2之至少一種活性為抗增殖活性。在一些實施態樣中，對照水平為野生型成熟細胞激素之EC50值，且其中EC50(切割產物)對EC50 (野生型對照水平)之比小於約10、或小於約9、或小於約8、或小於約7、或小於約6、或小於約5、或小於約4、或小於約3、或小於約2、或小於約1.5、或等於約1。在一些實施態樣中，切割產物之EC50與野生型成熟細胞激素之EC50大約相同，證明在切割後，CP1及/或CP2活性完全恢復或幾乎完全恢復。在一些實施態樣中，切割產物之EC50對野生型對照物之EC50之比為約1至約10、或約2至約8、或約3至約7、或約4至約6，證明在蛋白酶活化後良好恢復細胞激素活性。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2為IL-15，且ACC係以蛋白酶活化後具有切割產物為特徵，其中切割產物之EC50對重組IL-15之EC50之比為1至約10、或約2至約8、或約3至約7、或約4至約6、或約5至約7、或約6，如以IL-2/IL-15-反應性HEK293細胞所測量。 本文提供包含本文所述之ACC中任一者之組成物。在一些實施態樣中，組成物為醫藥組成物。本文亦提供包含至少一個劑量的本文所述之組成物中任一者之套組。 本文提供治療有其需要的個體之方法，其包含對個體投予治療有效量的本文所述之ACC中任一者或本文所述之組成物中任一者。在一些實施態樣中，個體已經鑑定或診斷為患有癌症。在一些非限制性實施態樣中，癌症為卡波西氏肉瘤、毛細胞白血病、慢性骨髓性白血病(CML)、濾泡性淋巴瘤、腎細胞癌(RCC)、黑色素瘤、神經胚細胞瘤、基底細胞癌、膀胱癌、乳癌、大腸直腸癌、皮膚T細胞淋巴瘤、鼻咽腺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌。在一些非限制性實施態樣中，癌症為淋巴瘤。在一些非限制性實施態樣中，淋巴瘤為伯基特氏(Burkitt’s)淋巴瘤。 本文提供編碼包含本文所述之ACC中任一者之CP1和CM1的多肽之核酸。在一些實施態樣中，多肽另包含本文所述之DD1中任一者。本文亦提供編碼包含本文所述之ACC中任一者之CP2和CM2的多肽之核酸。當單體相同時，則本揭示提供編碼二聚合以形成ACC的單體之單一核酸。在一些實施態樣中，多肽另包含本文所述之DD2中任一者。本文亦提供包含本文所述之核酸中任一者之載體。在一些實施態樣中，載體為表現載體。本文亦提供包含本文所述之核酸中任一者或本文所述之載體中任一者之細胞。在一些實施態樣中，編碼多肽之核酸包含根據SEQ ID NO：357之多核苷酸。 本文提供核酸對，其一起編碼包含本文所述之ACC中任一者之第一單體構築體的CP1和CM1之多肽及包含本文所述之ACC中任一者之第二單體構築體的CP2和CM2之多肽。本文亦提供載體對，其一起包含本文所述之核酸對中任一者。在一些實施態樣中，載體對為表現載體對。本文亦提供包含本文所述之核酸對中任一者或本文所述之載體對中任一者之細胞。在其他的實施態樣中，本發明提供包含載體對之載體。 本文提供生產ACC之方法，其包含：將本文所述之細胞中任一者在液體培養基中在足以生產ACC之條件下培養；及自細胞或液體培養基回收ACC。在一些實施態樣中，該方法另包含：將回收之ACC與細胞或液體培養基單離。在一些實施態樣中，該方法另包含：將單離之ACC調配成醫藥組成物。 本文提供由本文所述之方法中任一者生產之ACC。本文亦提供包含本文所述之ACC中任一者之組成物。本文亦提供本文所述之組成物中任一者之組成物，其中組成物為醫藥組成物。本文亦提供包含至少一個劑量的本文所述之組成物中任一者之套組。 除非另有其他定義，否則本文所使用之所有技術及科學術語具有與本發明所屬領域之普通技能者通常理解之相同含義。方法及材料係於本文所述用於本發明；亦可使用本技術中已知的其他適合的方法及材料。材料、方法及實例僅為例示性且不意欲為限制。將本文提及之所有出版物、專利申請、專利、序列、數據庫項目及其他參考文獻以其整體併入本文以供參考。在衝突的情況下，以本說明書(包括定義)為準。 本發明之其他特性及優點將自下列的詳細說明和圖形及自申請專利範圍顯而易知。 術語「一(a)及(an)」係指冠詞的語法對象中之一或多者(亦即至少一個)。以實例說明，「一細胞」包含一或多個細胞。 如本文所使用之術語「約(about)」及「約 (approximately)」在用於修飾數值或範圍內指定的量時，其表明數值及自熟習本技術領域者已知的值之合理偏差。例如，在適當的情況下，±20%、±10%、或±5%係在所列舉之值的意欲含義內。 濃度、量及其他數值數據可在本文中以範圍格式表示或呈現。應理解的是此範圍格式的使用僅為了方便及簡潔，且因此應被靈活地解釋為不僅包括明確列舉為範圍限制的數值，且亦包括所有個別的數值或涵蓋在此範圍內的子範圍，如同各數值及子範圍皆被明確地列舉。作為例證，「約0.01至2.0」的數值範圍應被解釋為不僅包括約0.01至約2.0之明確列舉的值，且亦包括在指示範圍內的個別值及子範圍。因此，包括在此數值範圍內的是個別值(諸如0.5、0.7和1.5)及子範圍(諸如0.5至1.7、0.7至1.5和1.0至1.5等)。此外，此解釋皆適用，無關於所述之範圍或特徵的廣度。另外，應注意所有的百分比皆以重量計，除非另有其他指定。 在理解本揭示之範圍時，如本文所用之術語「包括」或「包含」及其派生詞意欲為開放式術語，其指定所陳述之特性、要素、組分、群組、整數及/或步驟的存在，但不排除其他未陳述之特性、要素、組分、群組、整數及/或步驟的存在。前述亦適用於具有類似含義的詞語，諸如術語「包括」、「具有」及其派生詞。如本文所用之術語「由…所組成」及其派生詞意欲為封閉式術語，其指定所陳述之特性、要素、組分、群組、整數及/或步驟的存在，但排除其他未陳述之特性、要素、組分、群組、整數及/或步驟的存在。如本文所用之術語「基本上由…所組成」意欲指定所陳述之特性、要素、組分、群組、整數及/或步驟的存在，以及那些不顯著地影響特性、要素、組分、群組、整數及/或步驟之基本及新穎特徵的特性、要素、組分、群組、整數及/或步驟。應理解的是該等過渡術語中任一者(亦即「包含」、「由…所組成」或「基本上由…所組成」)之述及提供對置換成未具體使用之其他過渡術語中任一者的直接支持。例如，術語自「包含」修訂成「基本上由…所組成」或「由…所組成」可由於整個此揭示內容所揭示之任何元素的此定義而得到直接支持。基於此定義，本文所揭示或併入以供參考之任何要素可包括在請求之發明中或自其中排除。 如本文所使用之複數個化合物、要素或步驟可出於方便而呈示於共同列表中。然而，該等列表應被解釋成好像列表的各成員經個別地鑑定為單獨且唯一的成員。因此，此列表中的個別成員不應在沒有相反的指示下，僅基於其在共同群組中的呈示而被解釋成事實上等同於相同列表中的任何其他成員。 此外，特定的分子、構築體、組成物、要素、部分、賦形劑、疾患、病症、性質、步驟或類似者可在一個具體實施態樣或態樣的上下文中或在本揭示之單獨段落或章節中討論。應理解的是這僅為了方便及簡潔，且任何此揭示內容同樣地適用於且意欲與本揭示及申請專利範圍中的任何地方發現之任何其他實施態樣或態樣組合，該等在申請日全部構成本申請案及請求之本發明。例如，關於構築體、組成物或方法所述之構築體、分子、方法步驟、套組或組成物列表意欲且確實發現對本揭示之任何其他部分所述之構築體、組成物、調配物及方法有關的實施態樣之直接支持，即使該等方法步驟、活性劑、套組或組成物未在該實施態樣或態樣的上下文或章節中再次列出。 除非另有其他指定，否則「編碼蛋白質之核酸序列」包括彼此為簡併型式且因此編碼相同的胺基酸序列之所有核苷酸序列。 當述及多肽一級胺基酸序列中的第一結構域或序列相對於第二結構域或序列的位置時，術語「位於N端」意指第一結構域或序列係位於比第二結構域或序列更靠近多肽一級胺基酸序列的N端。在一些實施態樣中，在第一結構域或序列與第二結構域或序列之間可能有額外的序列及/或結構域。 當述及多肽一級胺基酸序列中的第一結構域或序列相對於第二結構域或序列的位置時，術語「位於C端」意指第一結構域或序列係位於比第二結構域或序列更靠近多肽一級胺基酸序列的C端。在一些實施態樣中，在第一結構域或序列與第二結構域或序列之間可能有額外的序列及/或結構域。 術語「外源性」係指自細胞、組織或生物體外部引入或起源之任何物質，其不是由其引入其中的相同細胞、組織或生物體產生或起源自該相同細胞、組織或生物體。 術語「經轉導」、「經轉染」或「經轉形」係指使外源性核酸引入或轉移至細胞中的過程。「經轉導」、「經轉染」或「經轉形」之細胞(例如哺乳動物細胞)為已經外源性核酸(例如載體)(包括編碼本文所述之可活化細胞激素構築體中任一者之外源性核酸)轉導、轉染或轉形之細胞。 術語「核酸」係指呈單股或雙股形式之脫氧核醣核酸(DNA)或核醣核酸(RNA)或其組合。除非有明確的限制，否則術語涵蓋含有具有與參考核苷酸類似的結合性質之已知的天然核苷酸類似物之核酸。除非另有其他指示，否則特定的核酸序列亦固有地涵蓋互補序列以及明確指示的序列。在本文所述之核酸中任一者的一些實施態樣中，核酸為DNA。在本文所述之核酸中任一者的一些實施態樣中，核酸為RNA。 修飾可以本技術中已知的標準技術引入核苷酸序列內中，諸如定點誘變和經聚合酶鏈反應(PCR)媒介之誘變。保守型胺基酸取代為其中胺基酸殘基經具有類似側鏈之胺基酸殘基置換之取代。具有類似側鏈之胺基酸殘基家族已於本技術中定義。該等家族包括：具有酸性側鏈之胺基酸(例如天冬胺酸和麩胺酸)、具有鹼性側鏈之胺基酸(例如離胺酸、精胺酸和組胺酸)、非極性胺基酸(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯基丙胺酸、甲硫胺酸和色胺酸)、不帶電極性胺基酸(例如甘胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、半胱胺酸、絲胺酸、蘇胺酸和酪胺酸)、親水性胺基酸(例如精胺酸、天冬醯胺酸、天冬胺酸、麩醯胺酸、麩胺酸、組胺酸、離胺酸、絲胺酸和蘇胺酸)、疏水性胺基酸(例如丙胺酸、半胱胺酸、異白胺酸、白胺酸、甲硫胺酸、苯基丙胺酸、脯胺酸、色胺酸、酪胺酸和纈胺酸)。胺基酸的其他家族包括：脂族羥基胺基酸(例如絲胺酸和蘇胺酸)、醯胺家族(例如天冬醯胺酸和麩醯胺酸)、脂族家族(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸和異白胺酸)、芳族家族(例如苯基丙胺酸、色胺酸和酪胺酸)。 如本文所使用之短語「特異性結合」或「與…免疫反應」意指可活化抗原結合蛋白質複合物與所欲靶抗原的一或多種抗原決定位反應且不與其他多肽反應，或以低得多的親和性結合，例如約或大於10 -6M。 術語「治療」係指改善疾患的至少一種症狀。在一些實施態樣中，欲治療之疾患為癌症，且改善癌症的至少一種症狀。
本文提供可活化細胞激素構築體(ACC)，其展現相應細胞激素之至少一種活性水平降低，但是在暴露於活化條件後，其產出具有實質上恢復的活性之細胞激素產物。可設計本發明之可活化細胞激素構築體在暴露於患病的組織後選擇性活化，而不在正常組織中活化。就此而言，該等化合物具有賦予基於細胞激素之療法效益的潛在性，與特定的基於細胞激素之療法相關聯的毒性可能較低。 本文亦提供相關中間物、組成物、套組、核酸及重組細胞，以及相關方法，包括使用本文所述之可活化細胞激素構築體中任一者之方法及生產本文所述之可活化細胞激素構築體中任一者之方法。 本發明人已驚訝地發現具有本文所述之特定要素及結構定向之ACC似乎潛在地有效改進細胞激素在治療中的安全性及治療指數，特別用於治療癌症。儘管細胞激素為先天性及後天性免疫系統調節劑且在臨床前模式中具有廣泛的抗腫瘤活性，但是其臨床成功受到全身性毒性及對靶組織的全身性暴露不良的限制。本發明人已驚奇地發現具有本文所述之特定要素及結構定向之ACC似乎降低與細胞激素治療劑相關聯的全身性毒性且改進對靶組織的靶向及暴露。就此而言，本揭示提供降低細胞激素治療劑的經標靶媒介之體內藥物動向(TMDD)之方法，其係藉由對個體投予具有本文所述之特定要素及結構定向之ACC。就此而言，本發明解決所投予之細胞激素劑量的顯著部分與正常組織隔離的問題，該問題為限制以習知的細胞激素治療劑在全身性循環中到達靶組織(例如癌組織)的可用劑量部分。本發明之細胞激素構築體定位標靶與腫瘤組織結合，由此維持效力、減少副作用、能成為新的標靶機會、改進經驗證之標靶的治療範圍、對無法用藥的標靶創建治療範圍及提供多種結合形式。本揭示能成為安全及有效的全身性遞送，由此避免習知的全身性細胞激素療法之劑量依賴性毒性，且亦避免腫瘤內注射的需求。本揭示提供給予局部化抗病毒活性、免疫調節活性、抗增殖活性及促細胞凋亡活性之方式。本發明人驚訝地發現第一及第二單體構築體之二聚合作用達成更降低的細胞激素活性，特別比單一細胞激素附接至二聚合結構域時降得更多。參見圖4。 另外，本發明人已發現細胞激素活性的降低程度可藉由改變可撓性連結子長度或連結區長度來調整。本發明人驚訝地發現降低大約1,000倍或更多的細胞激素活性可藉由將細胞激素經由短的蛋白酶可切割序列附接至空間受限之二聚合結構域(諸如在絞鏈區的第一半胱胺酸(例如以EU編號所編號之Cys226)截短之人類IgG的Fc結構域)來達成。驚訝的是儘管空間受限，但仍發生蛋白酶切割，且在自二聚合結構域切割細胞激素後收復全細胞激素活性。 本發明人已發現IL-15細胞激素活性可藉由將IL-15細胞激素經由短的蛋白酶可切割序列附接至空間受限之二聚合結構域(諸如在絞鏈區的第一半胱胺酸(例如以EU編號所編號之Cys226)已截短之人類IgG4的Fc結構域)來降低大約1,000倍及至少250倍。再者，在自二聚合結構域切割IL-15細胞激素後，IL-15細胞激素活性可恢復至與標準的重組IL-15相同或幾乎相同的水平。在一些實施態樣中，在自二聚合結構域切割IL-15後，IL-15細胞激素活性增加至少50倍。在一些實施態樣中，在自二聚合結構域切割IL-15後，IL-15細胞激素活性增加至少60倍。 將2020年4月10申請之申請人的美國臨時申請案第63/008,542號以其全文併入本文以供參考，其說明特定的可活化細胞激素構築體。將皆於2021年3月16日申請之申請人的美國臨時申請案第63/161,889號和第63/161,913號的完整內容及將皆於2021年3月23日申請之申請人的美國臨時申請案第63/164,827號和第63/164,849號的完整內容亦併入本文以供參考，彼等說明特定的可活化細胞激素構築體。 可活化細胞激素構築體 本發明之可活化細胞激素構築體為包含第一單體構築體及第二單體構築體之二聚物複合物。單體組分之二聚合作用係由一對二聚合結構域促成。在一個態樣中，各單體構築體包括細胞激素蛋白質、可切割部分和二聚合結構域(DD)。在一個態樣中，一個單體構築體包括細胞激素蛋白質、可切割部分和DD，而其他單體構築體包括細胞激素蛋白質和DD，但沒有可切割部分。在一個態樣中，一個單體構築體包括細胞激素蛋白質、可切割部分和DD，而其他單體構築體包括缺乏細胞激素活性之蛋白質或肽和DD，但沒有可切割部分。在特定的實施態樣中，本發明提供包括第一單體構築體及第二單體構築體之可活化細胞激素構築體(ACC)，其中： (a)第一單體構築體包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、第一可切割部分(CM1)和第一二聚合結構域(DD1)， 其中CM1係位於CP1與DD1之間；及 (b)第二單體構築體包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)， 其中CM2係位於CP2與DD2之間； 其中DD1及DD2彼此結合，由此形成第一單體構築體及第二單體構築體之二聚物；且 其中ACC係以具有與至少一種CP1及/或CP2活性的對照水平相比，至少一種CP1及/或CP2活性降低的水平為特徵。 在特定的實施態樣中，CP1及CP2各自包含介白素多肽。在一個實施態樣中，介白素多肽係選自由下列所組成之群組：IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-18、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13、IL-15、IL-3、IL-5、IL-6、IL-11、IL-12、IL-10、IL-20、IL-21 IL-14、IL-15、IL-16和IL-17。在本揭示之另一實施態樣中，介白素多肽為IL-15，由此包含可活化IL-15構築體。在一個態樣中，與重組IL15相比，可活化IL-15構築體具有降低的活性。 當術語「可活化」用於述及之細胞激素構築體時，該術語係指展現第一水平的一或多種活性之細胞激素構築體，之後暴露於引起一或兩個可切割部分切割的條件導致產生展現第二水平的一或多種活性之細胞激素構築體，其中第二水平的活性大於第一水平的活性。活性的非限制性實例包括本文所述或本技術中已知的細胞激素之示例性活性中任一者。 術語「成熟細胞激素蛋白質」在本文係指缺乏訊息序列之細胞激素蛋白質。細胞激素蛋白質(CP)可為成熟細胞激素蛋白質或具有訊息肽之細胞激素蛋白質。因此，本揭示之ACC可在一些態樣中包括成熟細胞激素蛋白質序列。在一些態樣中，本揭示之ACC可包括成熟細胞激素蛋白質序列及另外包括訊息序列。在一些態樣中，本揭示之ACC可包括本文所揭示之序列，其包括或缺乏本文列舉之訊息序列。 術語「可切割部分」及「CM」在本文中可互換使用，其係指其胺基酸序列包含序列特異性蛋白酶受質之肽。適合用作為CM1及/或CM2之可切割部分包括本技術中已知的蛋白酶受質中任一者。示例性可切割部分於下文更詳細說明。 術語「二聚合結構域」及「DD」在本文中可互換使用，其係指一對二聚合結構域的一個成員，其中該對的各成員能夠經由一或多個共價或非共價相互作用與另一者結合。第一DD及第二DD可為相同或不同的。適合用作為DD1及/或DD2之示例性DD於下文更詳細說明。 術語「肽遮罩」及「PM」在本文中可互換使用，其係指降低或抑制細胞激素蛋白質的一或多種活性之少於50個胺基酸之胺基酸序列。PM可結合至細胞激素且限制細胞激素與其受體之相互作用。在一些實施態樣中，PM的長度不超過40個胺基酸。在較佳的實施態樣中，PM的長度不超過20個胺基酸。在一些實施態樣中，PM的長度不超過19、18、17、16、或15個胺基酸。 如本文所使用之術語「遮蔽效率」係指未經切割之ACC的活性(例如EC50)除以對照細胞激素的活性，其中對照細胞激素可為ACC的切割產物或用作ACC的CP之細胞激素。具有至少一種CP1及/或CP2活性水平降低之ACC具有大於10之遮蔽效率。在一些實施態樣中，本文所述之ACC具有大於10、大於100、大於1000、或大於5000之遮蔽效率。在其中CP1及/或CP2為IL-15多肽的一些實施態樣中，ACC可具有約10至約100、或約10至約200、或約50至約150、或約50至約80之遮蔽效率，如以IL-2/IL-15-反應性HEK293細胞中的未經切割之ACC的EC50對ACC之切割產物的EC50之比所測量。 如本文所使用之多肽(諸如細胞激素或Fc結構域)可為野生型多肽(例如天然存在的多肽)或野生型多肽的變異體。變異體可為經取代、插入、刪除及/或添加野生型多肽的一或多個胺基酸修飾之多肽，其條件為變異體保留野生型多肽的基本功能或活性。在一些實例中，與野生型多肽相比，變異體可能具有改變(例如增加或減少)的功能或活性。在一些態樣中，變異體可為野生型多肽的功能性片段。術語「功能性片段」意指多肽(例如細胞激素)序列可包括比全長多肽序列少的胺基酸，但是足以賦予活性(例如細胞激素活性)的多肽鏈長度。 第一及第二單體構築體可另包含額外的要素，諸如一或多個連結子及類似者。額外的要素係於下文更詳細說明。在第一及第二單體構築體之各者中的CP、CM和DD組分編制可在各單體構築體中以相同的順序排列。與相應的CP2、CM2和DD2相比，CP1、CM1和DD1組分在例如分子量、大小、CP和CM組分(及在其中DD組分為多肽的實施態樣中的DD組分)之胺基酸序列及類似者方面可為相同或不同的。因此，所得二聚物可具有對稱或不對稱的單體構築體組分。 在一些實施態樣中，第一單體構築體沿CP和CM組分的N端至C端包含CP1、CM1和直接或間接(經由連結子)連結至CM1的C端之DD1。在其他的實施態樣中，第一單體構築體沿CP和CM組分的C端至N端包含CP1、CM1和直接或間接(經由連結子)連結至CM1的N端之DD1。在一些實施態樣中，第二單體構築體沿CP和CM組分的N端至C端包含CP2、CM2和直接或間接(經由連結子)連結至CM2的C端之DD2。在其他的實施態樣中，第二單體構築體沿CP和CM組分的C端至N端包含CP2、CM2和直接或間接(經由連結子)連結至CM2的N端之DD2。 在一些實施態樣中，包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)之第一單體及/或包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)之第二單體另包含肽遮罩(PM)。在一些實施態樣中，ACC另包含介於PM與CP之間的CM。 在一些實施態樣中，可活化細胞激素構築體(ACC)包括第一單體構築體及第二單體構築體，其中：(a)第一單體構築體包含第一肽遮罩(PM1)、第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、第一與第三可切割部分(CM1與CM3)和第一二聚合結構域(DD1)，其中CM1係位於CP1與DD1之間，及CM3係位於PM1與CP1之間；及(b)第二單體構築體包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)，其中CM2係位於CP2與DD2之間；其中DD1及DD2彼此結合，由此形成第一單體構築體及第二單體構築體之二聚物，且其中ACC係以具有與至少一種CP1及/或CP2活性的對照水平相比，至少一種CP1及/或CP2活性降低的水平為特徵。 在一些實施態樣中，第二單體構築體另包含第二肽遮罩(PM2)和第四可切割部分(CM4)，其中CM4係位於PM2與CP2之間。在一些實施態樣中，第一單體構築體包含第一多肽，其包含PM1、CM3、CP1、CM1和DD1。在一些實施態樣中，第二單體構築體包含第二多肽，其包含CP2、CM2和DD2。在一些實施態樣中，第二單體構築體包含第二多肽，其包含PM2、CM4、CP2、CM2和DD2。 發現ACC結構非常有效降低成熟細胞激素蛋白質組分的活性，此方式不導致在活化後顯著損害的細胞激素活性。在ACC中的CP活性可能因ACC結構(例如二聚物結構)及ACC中的肽遮罩兩者而降低。在一些實施態樣中，用於本文所述之ACC的活化條件為暴露於一或多種可自DD和PM兩者解離CP之蛋白酶。例如，一或多種蛋白酶可切割在CP與PM之間的CM及在CP與DD之間的CM。如實施例中所證明，活化ACC導致顯著恢復的細胞激素活性。結果示意細胞激素組分的構形在ACC環境中沒有不可逆的改變。 在一些實施態樣中，當CP與PM偶合且在CP之天然結合伴體的存在時，當以遮蔽效率檢定法測量時，CP與結合伴體不結合或實質上不結合，或與CP與PM不偶合結合相比，經至少2、4、6、8、12、28、24、30、36、48、60、72、84、96小時，或5、10、15、30、45、60、90、120、150、180天，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個月或更久，CP與其結合伴體之結合不超過0.001%、0.01%、0.1%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、或50%。例如，遮蔽效率檢定法可能涉及以例如FACS測量ACC與展示候選肽遮罩的細胞表面結合之親和性。另一非限制的示例性檢定法包括評定肽遮罩在治療相關濃度及時間下抑制ACC與其結合伴體結合的能力。已對此第二種方法開發免疫吸附檢定法以測量前蛋白與其結合伴體結合的時間依賴性結合，如US20200308243中所述，將其併入本文以供參考。在其中CP為IL-15細胞激素的實施態樣中，遮蔽效率檢定法可能涉及測量在IL-2/IL15-反應性HEK293細胞中經分泌之鹼性磷酸酶(SEAP)生產水平，如實施例6中所闡述。 在特定的實施態樣中，將第一及第二單體構築體定向，使得二聚物的各成員中的組分沿CP和CM組分的N端至C端以相同的順序編制。例示性ACC的示意圖提供於圖1A中。參考圖1A，ACC沿CP和CM組分的N端至C端包含：(1)第一單體構築體，其具有CP1 100；位於相對於CP1 100的C端之CM1 120；視需要的連結子110，其若存在，則位於CPI 100的C端與CM1 120的N端之間；DD1 140；和視需要的連結子130，其若存在，則位於CM1 120的C端與DD1 140之間；(2)第二單體構築體，其具有CP2 150；位於相對於CP2 150的C端之CM2 170；視需要的連結子160，其若存在，則位於CP2 150的C端與CM2 170的N端之間；DD2 190；和視需要的連結子180，其若存在，則位於CM2 170的C端與DD2 190之間；及(3)一或多個共價或非共價鍵(ßà)。 另一例示性ACC的示意圖提供於圖1B中，其組分係以ACC的相反方向編制。參考圖1B，ACC沿CP和CM組分的N端至C端包含：(1)第一單體構築體，其具有DD1 200；CM1 220；視需要的連結子210，其若存在，則位於DD1 200與CM1 220的N端之間；位於相對於CM1 220的C端之CP1 240；和視需要的連結子230，其若存在，則位於CM1 220的C端與CP1 240的N端之間；(2)第二單體構築體，其具有DD2 250；CM2 270；視需要的連結子260，其若存在，則位於DD2 250與CM2 270的N端之間；位於相對於CM2 270的C端之CP2 290；和視需要的連結子280，其若存在，則位於CM2 290的C端與CP2 290的N端之間；及(3)一或多個共價或非共價鍵(ßà)。 圖2A為例示性可活化細胞激素構築體的示意圖，該構築體包含分別經由第一及第二二聚合結構域DD1 340及DD2 390彼此以非共價方式結合之第一及第二單體構築體。第一單體構築體沿CP和CM組分的N端至C端包含第一成熟細胞激素蛋白質CP1 300、第一視需要的連結子310、第一可切割部分CM1 320、第二視需要的連結子330和第一二聚合結構域DD1 340。第二單體構築體沿N端至C端包含第二成熟細胞激素蛋白質CP2 350、第三視需要的連結子360、第二可切割部分CM2 370、第四視需要的連結子380和第二二聚合結構域DD2 390。 圖2B為例示性可活化細胞激素構築體的示意圖，該構築體包含分別經由第一及第二二聚合結構域DD1 400及DD2 450彼此以非共價方式結合之第一及第二單體構築體。第一單體構築體沿CP和CM組分的N端至C端包含第一二聚合結構域DD1 400、第二視需要的連結子410、第一可切割部分CM1 420、第一視需要的連結子430和第一成熟細胞激素蛋白質CP1 440。第二單體構築體沿CP和CM組分的N端至C端包含第二二聚合結構域DD2 450、第四視需要的連結子460、第二可切割部分CM2 470、第三視需要的連結子480和第二成熟細胞激素蛋白質CP2 490。在替代的態樣中，以CP1 440及CP2 490描述的兩個部分中之一者為缺乏細胞激素活性的經截短之細胞激素蛋白質。例如，CP1或CP2中任一者可為具有野生型干擾素α2b之前151個胺基酸的經截短之干擾素α2b。在替代的態樣中，以CP1 440及CP2 490描述的兩個部分中之一者為缺乏細胞激素活性的經突變之細胞激素蛋白質。例如，CP1或CP2中任一者可為具有L130P突變的經截短之干擾素α2b。在替代的態樣中，以CP1 440及CP2 490描述的兩個部分中之一者為缺乏細胞激素活性之多肽序列，例如訊息部分及/或殘端序列。在替代的態樣中，以CP1 440及CP2 490描述的兩個部分之第一者為與以CP1 440及CP2 490描述的兩個部分之第二者以高親和性結合之多肽序列，且與第二部分的對照水平相比，降低第二部分的細胞激素活性。 發現包括二聚合結構域之ACC結構非常有效降低成熟細胞激素蛋白質組分的活性，此方式不導致在活化後顯著損害的細胞激素活性。用於本文所述之ACC的活化條件為暴露於可切割ACC中的可切割部分(CM)中至少一者之蛋白酶。如實施例中所證明，活化ACC導致顯著恢復的細胞激素活性。結果示意細胞激素組分的構形在ACC環境中沒有不可逆的改變。值得注意的是ACC沒必要依賴對細胞激素蛋白質組分具有結合親和性之肽遮罩以達成遮蔽效應。因此，ACC可包含或可不包含對細胞激素蛋白質組分具有結合親和性之肽遮罩。 ACC可使用各種成熟細胞激素蛋白質、可切割部分及DD中任一者分別作為CP1、CP2、CM1、CM2、DD1和DD2。例如，在本技術中已知的各種成熟細胞激素蛋白質或其序列及/或截短變異體中任一者可適合用作ACC的CP1及CP2組分中任一或兩者。成熟細胞激素蛋白質，CP1及CP2可為相同或不同的。在某些特定的實施態樣中，CP1及CP2為為相同的。在其他的實施態樣中，CP1及CP2為不同的。ACC可包含在CP1及/或CP2的N端及/或C端中任一端或兩端之額外的胺基酸殘基。 在一些實施態樣中，CP1及/或CP2可各自獨立地包含選自下列群組之成熟細胞激素蛋白質：干擾素(諸如干擾素α、干擾素β、干擾素γ、干擾素τ和干擾素ω)、介白素(諸如IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-18、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13、IL-15、IL-3、IL-5、GM-CSF、IL-6、IL-11、IL-21)、G-CSF、IL-12、LIF、OSM、IL-10、IL-20、IL-14、IL-16、IL-17、CD154、LT-β、TNF-α、TNF-β、4-1BBL、APRIL、CD70、CD153、CD178、GITRL、LIGHT、OX40L、TALL-1、TRAIL、TWEAK、TRANCE、TGF-β1、TGF-β1、TGF-β3、紅血球生成素(EPO)、TPO、Flt-3L、SCF、M-CSF和MSP及類似者，以及其序列和截短變異體。例如，此等蛋白質之序列包括本文示例的那些序列，且額外的序列可自ncbi.nlm.nih.gov/protein獲得。適合用於本發明之ACC的截短變異體包括保留細胞激素活性的任何經N端或C端截短之細胞激素。在本發明中使用之示例性截短變異體包括在本技術中已知的經截短之細胞激素多肽中任一者(參見例如Slutzki等人之 J. Mol. Biol.360:1019-1030, 2006及US 2009/0025106)，以及以1至約40個胺基酸、1至約35個胺基酸、1至約30個胺基酸、1至約25個胺基酸、1至約20個胺基酸、1至約15個胺基酸、1至約10個胺基酸、1至約8個胺基酸、1至約6個胺基酸、1至約4個胺基酸經N端及/或C端截短之細胞激素多肽，其保留細胞激素活性。在一些前述實施態樣中，經截短之CP為經N端截短之CP。在其他的實施態樣中，經截短之CP為經C端截短之CP。在某些實施態樣中，經截短之CP為經C端及N端截短之CP。 在一些實施態樣中，CP1及/或CP2各自獨立地包含與選自由下列所組成之群組的細胞激素參考序列至少80%之同一性(例如至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%之同一性)的胺基酸序列：SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：161、SEQ ID NO：162、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：181、SEQ ID NO：182、SEQ ID NO：183、SEQ ID NO：184、SEQ ID NO：185、SEQ ID NO：186、SEQ ID NO：187、SEQ ID NO：188、SEQ ID NO：189、SEQ ID NO：190、SEQ ID NO：191、SEQ ID NO：192、SEQ ID NO：193、SEQ ID NO：194、SEQ ID NO：195、SEQ ID NO：196、SEQ ID NO：197、SEQ ID NO：198、SEQ ID NO：199、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：203、SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：205、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：207、SEQ ID NO：208、SEQ ID NO：209、SEQ ID NO：347和SEQ ID NO：348。序列同一性百分比係指使用序列比對程序比對時，二或更多個肽序列之間的胺基酸序列同一性水平，例如使用在NCBI網站的網際網路上公開取得BLAST套裝程式。亦參考Altschul等人之J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990。在一些態樣中，ACC包括干擾素α2b突變體，例如在位置L130上具有突變(例如L130P突變)之干擾素α2b分子，如CP1或CP2中任一者。在一些態樣中，ACC包括在位置I24、F64、I60、I63、F64、W76、I116、L117、F123或L128或其組合上具有突變之干擾素α2b突變體。例如，干擾素α2b突變體可包括突變I116至T、N或R；L128至N、H或R；I24至P或Q；L117H或L128T或其組合。在一些態樣中，干擾素α2b突變體可包括突變I24Q、I60T、F64A、W76H、I116R和L128N，或其子集。在一些態樣中，ACC包括作為CP1及CP2中之一者的缺乏細胞激素活性的經截短之干擾素α2b分子。例如，經截短之干擾素α2b可能由干擾素α2b的151個或更少的胺基酸所組成，例如在野生型干擾素α2b序列中沿N端至C端的下列胺基酸中任一者：1至151、1至150、1至149、1至148、...1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、或2至151、3至151、4至151、5至150、6至149、7至148、8至147或任何其間的胺基酸序列或其突變體。 在某些特定的實施態樣中，CP1及/或CP2包含介白素。適合於本發明之構築體中用作為CP1及/或CP2之介白素包括例如IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-18、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13、IL-15、IL-3、IL-5、GM-CSF、IL-6、IL-11、IL-21。在一些實施態樣中，介白素包含野生型(WT)或重組介白素。在一些實施態樣中，WT或重組介白素多肽包含IL-15。示例性IL-15序列係以SEQ ID NO：347、SEQ ID NO：348、SEQ ID NO：129和SEQ ID NO：130提供。 在一些實施態樣中，CP1及/或CP2展現介白素活性，且包括與選自由SEQ ID NO：111至134、137至140、143至146、151至160和347至348所組成之群組的序列至少80%之同一性、至少82%之同一性、至少84%之同一性、至少86%之同一性、至少88%之同一性、至少90%之同一性、至少92%之同一性、至少94%之同一性、至少96%之同一性、至少98%之同一性、或至少99%之同一性、或100%之同一性的胺基酸序列。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2包含具有選自由SEQ ID NO：111至134、137至140、143至146、151至160和347至348所組成之群組的胺基酸序列之介白素。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2包含具有選自由SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：347和SEQ ID NO：348所組成之群組的胺基酸序列之介白素。在某些實施態樣中，CP1及/或CP2各自獨立為包含SEQ ID NO：347之胺基酸序列之介白素。在一些上述實施態樣中，CP1及CP2包含相同的胺基酸序列。 在其他的實施態樣中，CP1及/或CP2展現介白素活性，且包括與選自由SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：347和SEQ ID NO：348所組成之群組的介白素參考序列至少80%之同一性、至少82%之同一性、至少84%之同一性、至少86%之同一性、至少88%之同一性、至少90%之同一性、至少92%之同一性、至少94%之同一性、至少96%之同一性、至少98%之同一性、或至少99%之同一性、或100%之同一性的胺基酸序列。在某些實施態樣中，介白素參考序列為選自由SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：347和SEQ ID NO：348所組成之群組的人類介白素參考序列。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2包含具有選自由SEQ ID NO：129, SEQ ID NO：347和SEQ ID NO：348所組成之群組的胺基酸序列之成熟介白素。在一些上述實施態樣中，CP1及CP2包含相同的胺基酸序列。 在一些實施態樣中，CP1及/或CP2展現介白素活性，且包括與相應於包含SEQ ID NO：347之胺基酸序列的介白素參考序列至少80%之同一性、至少82%之同一性、至少84%之同一性、至少86%之同一性、至少88%之同一性、至少90%之同一性、至少92%之同一性、至少94%之同一性、至少96%之同一性、至少98%之同一性、或至少99%之同一性、或100%之同一性的胺基酸序列。在某些特定的實施態樣中，CP1及/或CP2包含介白素多肽，其包含SEQ ID NO：347之胺基酸序列。在一些上述的實施態樣中，CP1及CP2包含相同的胺基酸序列。 在一些實施態樣中，CP1及/或CP2展現介白素活性，且包括與選自由下列所組成之群組的介白素參考序列至少80%之同一性、至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%之同一性或100%之同一性的胺基酸序列：SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：347和SEQ ID NO：348。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2包含具有選自由下列所組成之群組的胺基酸序列之成熟介白素：SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：347和SEQ ID NO：348。在一些上述的實施態樣中，CP1及CP2包含相同的胺基酸序列。 在一些實施態樣中，CP1及/或CP2展現介白素-15活性，且包括與選自由下列所組成之群組的IL-15參考序列至少80%之同一性、至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%之同一性的胺基酸序列：SEQ ID NO：129(人類IL-15)、SEQ ID NO：347(人類IL-15的胺基酸49至161)和SEQ ID NO：348(人類IL-15的胺基酸49至162)。在一些實施態樣中，CP1及CP2包含相同的胺基酸序列，且此序列與選自由下列所組成之群組的序列至少80%之同一性、至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%之同一性：SEQ ID NO：129(人類IL-15)、SEQ ID NO：347(人類IL-15的胺基酸49至161)和SEQ ID NO：348(人類IL-15的胺基酸49至162)。 在所使用之細胞激素蛋白質之序列中的胺基酸數目可取決於所使用之特定的細胞激素蛋白質而改變。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2各自包括總共約10個胺基酸至約700個胺基酸、約10個胺基酸至約650個胺基酸、約10個胺基酸至約600個胺基酸、約10個胺基酸至約550個胺基酸、約10個胺基酸至約500個胺基酸、約10個胺基酸至約450個胺基酸、約10個胺基酸至約400個胺基酸、約10個胺基酸至約350個胺基酸、約10個胺基酸至約300個胺基酸、約10個胺基酸至約250個胺基酸、約10個胺基酸至約200個胺基酸、約10個胺基酸至約150個胺基酸、約10個胺基酸至約100個胺基酸、約10個胺基酸至約80個胺基酸、約10個胺基酸至約60個胺基酸、約10個胺基酸至約40個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約20個胺基酸至約700個胺基酸、約20個胺基酸至約650個胺基酸、約20個胺基酸至約600個胺基酸、約20個胺基酸至約550個胺基酸、約20個胺基酸至約500個胺基酸、約20個胺基酸至約450個胺基酸、約20個胺基酸至約400個胺基酸、約20個胺基酸至約350個胺基酸、約20個胺基酸至約300個胺基酸、約20個胺基酸至約250個胺基酸、約20個胺基酸至約200個胺基酸、約20個胺基酸至約150個胺基酸、約20個胺基酸至約100個胺基酸、約20個胺基酸至約80個胺基酸、約20個胺基酸至約60個胺基酸、約20個胺基酸至約40個胺基酸、約40個胺基酸至約700個胺基酸、約40個胺基酸至約650個胺基酸、約40個胺基酸至約600個胺基酸、約40個胺基酸至約550個胺基酸、約40個胺基酸至約500個胺基酸、約40個胺基酸至約450個胺基酸、約40個胺基酸至約400個胺基酸、約40個胺基酸至約350個胺基酸、約40個胺基酸至約300個胺基酸、約40個胺基酸至約250個胺基酸、約40個胺基酸至約200個胺基酸、約40個胺基酸至約150個胺基酸、約40個胺基酸至約100個胺基酸、約40個胺基酸至約80個胺基酸、約40個胺基酸至約60個胺基酸、約60個胺基酸至約700個胺基酸、約60個胺基酸至約650個胺基酸、約60個胺基酸至約600個胺基酸、約60個胺基酸至約550個胺基酸、約60個胺基酸至約500個胺基酸、約60個胺基酸至約450個胺基酸、約60個胺基酸至約400個胺基酸、約60個胺基酸至約350個胺基酸、約60個胺基酸至約300個胺基酸、約60個胺基酸至約250個胺基酸、約60個胺基酸至約200個胺基酸、約60個胺基酸至約150個胺基酸、約60個胺基酸至約100個胺基酸、約60個胺基酸至約80個胺基酸、約80個胺基酸至約700個胺基酸、約80個胺基酸至約650個胺基酸、約80個胺基酸至約600個胺基酸、約80個胺基酸至約550個胺基酸、約80個胺基酸至約500個胺基酸、約80個胺基酸至約450個胺基酸、約80個胺基酸至約400個胺基酸、約80個胺基酸至約350個胺基酸、約80個胺基酸至約300個胺基酸、約80個胺基酸至約250個胺基酸、約80個胺基酸至約200個胺基酸、約80個胺基酸至約150個胺基酸、約80個胺基酸至約100個胺基酸、約110個胺基酸至約162個胺基酸、約100個胺基酸至約120個胺基酸、約110個胺基酸至約120個胺基酸、約110個胺基酸至約115個胺基酸、約100個胺基酸至約700個胺基酸、約100個胺基酸至約650個胺基酸、約100個胺基酸至約600個胺基酸、約100個胺基酸至約550個胺基酸、約100個胺基酸至約500個胺基酸、約100個胺基酸至約450個胺基酸、約100個胺基酸至約400個胺基酸、約100個胺基酸至約350個胺基酸、約100個胺基酸至約300個胺基酸、約100個胺基酸至約250個胺基酸、約100個胺基酸至約200個胺基酸、約100個胺基酸至約150個胺基酸、約150個胺基酸至約700個胺基酸、約150個胺基酸至約650個胺基酸、約150個胺基酸至約600個胺基酸、約150個胺基酸至約550個胺基酸、約150個胺基酸至約500個胺基酸、約150個胺基酸至約450個胺基酸、約150個胺基酸至約400個胺基酸、約150個胺基酸至約350個胺基酸、約150個胺基酸至約300個胺基酸、約150個胺基酸至約250個胺基酸、約150個胺基酸至約200個胺基酸、約150個胺基酸至約170個胺基酸、約160個胺基酸至約165個胺基酸、約200個胺基酸至約700個胺基酸、約200個胺基酸至約650個胺基酸、約200個胺基酸至約600個胺基酸、約200個胺基酸至約550個胺基酸、約200個胺基酸至約500個胺基酸、約200個胺基酸至約450個胺基酸、約200個胺基酸至約400個胺基酸、約200個胺基酸至約350個胺基酸、約200個胺基酸至約300個胺基酸、約200個胺基酸至約250個胺基酸、約250個胺基酸至約700個胺基酸、約250個胺基酸至約650個胺基酸、約250個胺基酸至約600個胺基酸、約250個胺基酸至約550個胺基酸、約250個胺基酸至約500個胺基酸、約250個胺基酸至約450個胺基酸、約250個胺基酸至約400個胺基酸、約250個胺基酸至約350個胺基酸、約250個胺基酸至約300個胺基酸、約300個胺基酸至約700個胺基酸、約300個胺基酸至約650個胺基酸、約300個胺基酸至約600個胺基酸、約300個胺基酸至約550個胺基酸、約300個胺基酸至約500個胺基酸、約300個胺基酸至約450個胺基酸、約300個胺基酸至約400個胺基酸、約300個胺基酸至約350個胺基酸、約350個胺基酸至約700個胺基酸、約350個胺基酸至約650個胺基酸、約350個胺基酸至約600個胺基酸、約350個胺基酸至約550個胺基酸、約350個胺基酸至約500個胺基酸、約350個胺基酸至約450個胺基酸、約350個胺基酸至約400個胺基酸、約400個胺基酸至約700個胺基酸、約400個胺基酸至約650個胺基酸、約400個胺基酸至約600個胺基酸、約400個胺基酸至約550個胺基酸、約400個胺基酸至約500個胺基酸、約400個胺基酸至約450個胺基酸、約450個胺基酸至約700個胺基酸、約450個胺基酸至約650個胺基酸、約450個胺基酸至約600個胺基酸、約450個胺基酸至約550個胺基酸、約450個胺基酸至約500個胺基酸、約500個胺基酸至約700個胺基酸、約500個胺基酸至約650個胺基酸、約500個胺基酸至約600個胺基酸、約500個胺基酸至約550個胺基酸、約550個胺基酸至約700個胺基酸、約550個胺基酸至約650個胺基酸、約550個胺基酸至約600個胺基酸、約600個胺基酸至約700個胺基酸、約600個胺基酸至約650個胺基酸、或約650個胺基酸至約700個胺基酸。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2為成熟野生型人類細胞激素蛋白質。 ACC之各單體構築體可使用各種二聚合結構域中任一者。適合的DD包括聚合(例如合成聚合物、多肽、多核苷酸及類似者)分子和小分子(具有分子量少於約1千道爾頓，且有時少於約800道爾頓之非聚合部分)兩種類型部分。一對DD可為彼此結合之本技術中已知的任何一對部分。 例如在一些實施態樣中，DD1及DD2為一對選自下列群組的成員：來自人類IL-15受體的α鏈(IL15Rα)之壽司結構域及可溶性IL-15；芽孢桿菌核醣核酸酶及芽孢桿菌核醣核酸酶抑制蛋白；PKA及AKAP；基於突變之RNase I片段的接頭/對接標籤分子；一對抗原結合結構域(例如一對單結構域抗體)；基於蛋白質突觸蛋白、突觸結合蛋白質、小突觸囊泡蛋白及SNAP25之相互作用的可溶性N-乙基-順丁烯二醯亞胺敏感因子附著蛋白質受體(SNARE)模組；單結構域抗體(sdAb)及相應表位；抗原結合結構域(例如單鏈抗體，諸如單鏈可變片段(scFv)、單結構域抗體及類似者)及相應表位；纏繞線圈多肽結構(例如Fos-Jun纏繞線圈結構、酸/鹼纏繞線圈螺旋體、Glu-Lys纏繞線圈螺旋體、白胺酸拉鍊結構)、小分子結合配對，諸如生物素和抗生物素蛋白或鏈黴抗生物素蛋白(streptavidin)、胺/醛、凝集素/碳水化合物；可彼此結合之一對聚合物，諸如一對含硫或硫醇之聚合物(例如一對Fc結構域、一對硫醇化人類血清白蛋白多肽及類似者)；及類似者。 在一些實施態樣中，DD1及DD2為非多肽聚合物。非多肽聚合物可彼此共價結合。在一些實例中，非多肽聚合物可為含硫之聚合物，例如含硫之聚乙二醇。在此等例子中，DD1及DD2可經由一或多個雙硫鍵彼此共價結合。 當一對DD1和DD2為一對表位及抗原結合結構域的成員時，該表位可為天然或非天然存在的表位。示例性非天然存在的表位包括例如非天然存在的肽，諸如poly-His肽(例如His標籤及類似者)。 在某些特定的實施態樣中，DD1及DD2為一對Fc結構域。如本文所使用之「Fc結構域」係指免疫球蛋白之單一重鏈的連續胺基酸序列。一對Fc結構域締合在一起以形成免疫球蛋白之Fc區。 在一些實施態樣中，一對Fc結構域為一對人類Fc結構域(例如一對野生型人類Fc結構域)。在一些實施態樣中，人類Fc結構域為人類IgG1 Fc結構域(例如野生型人類IgG1 Fc結構域)、人類IgG2 Fc結構域(例如野生型人類IgG2 Fc結構域)、人類IgG3 Fc結構域(例如野生型人類IgG3 Fc結構域)、或人類IgG4 Fc結構域(例如野生型人類IgG4 Fc結構域)。在一些實施態樣中，人類Fc結構域包含與SEQ ID NO：3至少80%之同一性(例如至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%之同一性)的序列。 在一些實施態樣中，一對Fc結構域包含Fc結構域之旋鈕突變體(knob mutant)及孔突變體(hole mutant)。旋鈕及孔突變體可彼此相互作用以促成二聚合作用。在一些實施態樣中，旋鈕及孔突變體可包含在兩個Fc結構域之間的界面內(例如在CH3結構域中)的一或多個胺基酸修飾。在一個實例中，修飾包含在抗體重鏈之一者中的胺基酸取代T366W和視需要的胺基酸取代S354C，及在抗體重鏈之另一者中的胺基酸取代T366S、L368A、Y407V和視需要的Y349C(根據Kabat編號系統之EU索引編號)。旋鈕及孔突變體的實例包括SEQ ID NO：315和316之Fc突變體，以及那些在美國專利第5,731,168號；第7,695,936號；及第10,683,368號中所述者，將彼等以彼之全文併入本文以供參考。在一些實施態樣中，二聚合結構域包含分別與SEQ ID NO：315和316至少80%之同一性(例如至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%之同一性)的序列。 在一些實施態樣中，DD1及/或DD2可另包括血清半生期延長部分(例如結合血清蛋白質(諸如免疫球蛋白(例如IgG))或血清白蛋白(例如人類血清白蛋白(HSA))之多肽)。半生期延長部分的實例包括hexa-hat GST(麩胱甘肽S-轉移酶)麩胱甘肽親和性、鈣調蛋白結合肽(CBP)、Strep標籤、纖維素結合結構域、麥芽糖結合蛋白質、S-肽標籤、甲殼素結合標籤、免疫反應性表位、表位標籤、E2標籤、HA表位標籤、Myc表位、FLAG表位、AU1與AU5表位、Glu-Glu表位、KT3表位、IRS表位、Btag表位、蛋白質激酶-C表位和VSV表位。 在一些實施態樣中，DD1及/或DD2各自包括總共約5個胺基酸至約250個胺基酸、約5個胺基酸至約200個胺基酸、約5個胺基酸至約180個胺基酸、約5個胺基酸至約160個胺基酸、約5個胺基酸至約140個胺基酸、約5個胺基酸至約120個胺基酸、約5個胺基酸至約100個胺基酸、約5個胺基酸至約80個胺基酸、約5個胺基酸至約60個胺基酸、約5個胺基酸至約40個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約5個胺基酸至約10個胺基酸、約10個胺基酸至約250個胺基酸、約10個胺基酸至約200個胺基酸、約10個胺基酸至約180個胺基酸、約10個胺基酸至約160個胺基酸、約10個胺基酸至約140個胺基酸、約10個胺基酸至約120個胺基酸、約10個胺基酸至約100個胺基酸、約10個胺基酸至約80個胺基酸、約10個胺基酸至約60個胺基酸、約10個胺基酸至約40個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約20個胺基酸至約250個胺基酸、約20個胺基酸至約200個胺基酸、約20個胺基酸至約180個胺基酸、約20個胺基酸至約160個胺基酸、約20個胺基酸至約140個胺基酸、約20個胺基酸至約120個胺基酸、約20個胺基酸至約100個胺基酸、約20個胺基酸至約80個胺基酸、約20個胺基酸至約60個胺基酸、約20個胺基酸至約40個胺基酸、約40個胺基酸至約250個胺基酸、約40個胺基酸至約200個胺基酸、約40個胺基酸至約180個胺基酸、約40個胺基酸至約160個胺基酸、約40個胺基酸至約140個胺基酸、約40個胺基酸至約120個胺基酸、約40個胺基酸至約100個胺基酸、約40個胺基酸至約80個胺基酸、約40個胺基酸至約60個胺基酸、約60個胺基酸至約250個胺基酸、約60個胺基酸至約200個胺基酸、約60個胺基酸至約180個胺基酸、約60個胺基酸至約160個胺基酸、約60個胺基酸至約140個胺基酸、約60個胺基酸至約120個胺基酸、約60個胺基酸至約100個胺基酸、約60個胺基酸至約80個胺基酸、約80個胺基酸至約250個胺基酸、約80個胺基酸至約200個胺基酸、約80個胺基酸至約180個胺基酸、約80個胺基酸至約160個胺基酸、約80個胺基酸至約140個胺基酸、約80個胺基酸至約120個胺基酸、約80個胺基酸至約100個胺基酸、約100個胺基酸至約250個胺基酸、約100個胺基酸至約200個胺基酸、約100個胺基酸至約180個胺基酸、約100個胺基酸至約160個胺基酸、約100個胺基酸至約140個胺基酸、約100個胺基酸至約120個胺基酸、約120個胺基酸至約250個胺基酸、約120個胺基酸至約200個胺基酸、約120個胺基酸至約180個胺基酸、約120個胺基酸至約160個胺基酸、約120個胺基酸至約140個胺基酸、約140個胺基酸至約250個胺基酸、約140個胺基酸至約200個胺基酸、約140個胺基酸至約180個胺基酸、約140個胺基酸至約160個胺基酸、約160個胺基酸至約250個胺基酸、約160個胺基酸至約200個胺基酸、約160個胺基酸至約180個胺基酸、約180個胺基酸至約250個胺基酸、約180個胺基酸至約200個胺基酸、約200個胺基酸至約250個胺基酸、約210至約220個胺基酸、約215至約225個胺基酸、約215至約220個胺基酸、約217至約200個胺基酸、或約218至約200個胺基酸。在一些實施態樣中，DD1及DD2各自為包含一部分絞鏈區之Fc結構域，該絞鏈區包括兩個半胱胺酸殘基、CH2結構域和CH3結構域。在一些實施態樣中，DD1及DD2各自為Fc結構域，其N端為沿N端至C端方向讀取之絞鏈區中的第一半胱胺酸殘基(例如人類IgG1或IgG4之半胱胺酸226，使用EU編號)。 在一些態樣中，直接或間接(例如經由連結子)位於CP與DD組分之間的是包含蛋白酶受質的可切割部分。在一些實施態樣中，CM1及CM2可各自獨立地包含選自由下列所組成之群組的蛋白酶受質：ADAM8、ADAM9、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADEMDEC1、ADAMTS1、ADAMTS4、ADAMTS5、BACE、腎素、組織蛋白酶D、組織蛋白酶E、凋亡蛋白酶1、凋亡蛋白酶2、凋亡蛋白酶3、凋亡蛋白酶4、凋亡蛋白酶5、凋亡蛋白酶6、凋亡蛋白酶7、凋亡蛋白酶8、凋亡蛋白酶9、凋亡蛋白酶10、凋亡蛋白酶14、組織蛋白酶A、組織蛋白酶B、組織蛋白酶C、組織蛋白酶G、組織蛋白酶K、組織蛋白酶L、組織蛋白酶S、組織蛋白酶V/L2、組織蛋白酶X/Z/P、凝乳酶、克魯茲蛋白酶、DESC1、DPP-4、FAP、豆莢蛋白酶、Otubain-2、彈性蛋白酶、FVIIa、FiXA、FXa、FXIa、FXIIa、顆粒酶B、胍基苯甲酸酯酶、穿膜絲胺酸蛋白酶、HtrA1、人類嗜中性球彈性蛋白酶、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK10、KLK11、KLK13、KLK14、乳鐵蛋白、胰蛋白酶型絲胺酸肽酶、馬曲肽酶-2、穿膜肽酶、MT-SP1/馬曲肽酶、腦啡肽酶、NS3/4A、PACE4、胞漿素、PSMA、PSA、BMP-1、MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13、MMP14、MMP15、MMP16、MMP17、MMP19、MMP20、MMP23、MMP24、MMP26、MMP27、TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4、tPA、凝血酶、中性蛋白酶和uPA。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，切割本文所述之CM中任一者之蛋白酶可為ADAM8、ADAM9、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADAMDEC1、ADAMTS1、ADAMTS4、ADAMTS5、BACE、腎素、組織蛋白酶D、組織蛋白酶E、凋亡蛋白酶1、凋亡蛋白酶2、凋亡蛋白酶3、凋亡蛋白酶4、凋亡蛋白酶5、凋亡蛋白酶6、凋亡蛋白酶7、凋亡蛋白酶8、凋亡蛋白酶9、凋亡蛋白酶10、凋亡蛋白酶14、組織蛋白酶B、組織蛋白酶C、組織蛋白酶K、組織蛋白酶L、組織蛋白酶S、組織蛋白酶V/L2、組織蛋白酶X/Z/P、克魯茲蛋白酶、豆莢蛋白酶、Otubain-2、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK10、KLK11、KLK13、KLK14、穿膜肽酶、腦啡肽酶、PSMA、BMP-1、MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-19、MMP-20、MMP-23、MMP-24、MMP-26、MMP-27、活化蛋白C、組織蛋白酶A、組織蛋白酶G、凝乳酶、FVIIa、FIXa、FXa、FXIa、FXIIa、彈性蛋白酶、顆粒酶B、胍基苯甲酸酯酶、HtrA1、人類嗜中性球解離酶、乳鐵蛋白、胰蛋白酶型絲胺酸肽酶、NS3/4A、PACE4、胞漿素、PSA、tPA、凝血酶、中性蛋白酶、uPA、DESC1、DPP-4、FAP、穿膜絲胺酸蛋白酶、馬曲肽酶-2、MT-SP1/馬曲肽酶、TMPRSS2、TMPRSS3和TMPRSS4。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，蛋白酶係選自下列群組：uPA、豆莢蛋白酶、MT-SP1、ADAM17、BMP-1、TMPRSS3、TMPRSS4、MMP-2、MMP-9、MMP-12、MMP-13和MMP-14。 已於許多癌症中報導具有已知受質之蛋白酶的水平增加。參見例如La Roca等人之 British J. Cancer90(7):1414-1421, 2004。適合於本文所使用之CM1及/或CM2組分中使用之受質包括那些更普遍於癌細胞及組織中發現的受質。因此，在某些實施態樣中，CM1及/或CM2各自獨立地包含更普遍於癌症相關聯的患病組織中發現的蛋白酶受質。在一些實施態樣中，癌症係選自下列群組：胃癌、乳癌、骨肉瘤和食管癌。在一些實施態樣中，癌症為乳癌。在一些實施態樣中，癌症為HER2陽性癌症。在一些實施態樣中，癌症為卡波西氏肉瘤、毛細胞白血病、慢性骨髓性白血病(CML)、濾泡性淋巴瘤、腎細胞癌(RCC)、黑色素瘤、神經胚細胞瘤、基底細胞癌、皮膚T細胞淋巴瘤、鼻咽腺癌、乳癌、卵巢癌、膀胱癌、BCG抗性非肌肉侵襲性膀胱癌(NMIBC)、子宮內膜癌、胰臟癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、大腸直腸癌、食管癌、膽囊癌、神經膠瘤、頭與頸癌、子宮癌、子宮頸癌或睪丸癌及類似者。在一些上述的實施態樣中，CM組分包含更普遍於腫瘤組織中的蛋白酶受質。 在一些實施態樣中，CM1及/或CM2各自獨立地包括選自由下列所組成之群組的序列：SEQ ID NO：5至SEQ ID NO：100和SEQ ID NO：349，以及其C端和N端截短變異體。 在一些實施態樣中，CM包括選自下列群組之序列：ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：28)、LSGRSDDH(SEQ ID NO：33)、LSGRSDNI(SEQ ID NO：41)、 ISSGLLSGRSDQH(SEQ ID NO：54)、ISSGLLSGRSDNI (SEQ ID NO：68)、SGRSDNI(SEQ ID NO：100)和LSGRSNI(SEQ ID NO：349)。 在某些實施態樣中，CM1及/或CM2包括選自下列群組之序列：APRSALAHGLF(SEQ ID NO：263)、 AQNLLGMY(SEQ ID NO：264)、 LSGRSDNHGGAVGLLAPP(SEQ ID NO：265)、 VHMPLGFLGPGGLSGRSDNH(SEQ ID NO：266)、 LSGRSDNHGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：267)、 LSGRSDNHGGSGGSISSGLLSS(SEQ ID NO：268)、 ISSGLLSSGGSGGSLSGRSGNH(SEQ ID NO：269)、 LSGRSDNHGGSGGSQNQALRMA(SEQ ID NO：270)、 QNQALRMAGGSGGSLSGRSDNH(SEQ ID NO：271)、 LSGRSGNHGGSGGSQNQALRMA(SEQ ID NO：272)、 QNQALRMAGGSGGSLSGRSGNH(SEQ ID NO：273)、 ISSGLLSGRSGNH(SEQ ID NO：274)，以及其C端及N端截短變異體。CM的實例亦包括那些於美國專利申請公開案第2016/0289324號、第2019/0284283號，及公開案的 WO 2010/081173號、第WO 2015/048329號、第 WO 2015/116933號、第WO 2016/118629號和第 WO 2020/118109號中所述者，將彼等以彼之全文併入本文以供參考。 適合於CM1及/或CM2中使用之前述胺基酸序列之截短變異體為保留對相應蛋白酶之識別位點的任何變異體。該等變異體包括C端及/或N端截短變異體，其包含保留對蛋白酶之識別位點的上述胺基酸序列的至少3個連續胺基酸或前述胺基酸序列的至少4個、或至少5個、或至少6個、或至少7個胺基酸。在某些實施態樣中，上述胺基酸序列之截短變異體為相應於上述中任一者之胺基酸序列，但是以1至約10個胺基酸、1至約9個胺基酸、1至約8個胺基酸、1至約7個胺基酸、1至約6個胺基酸、1至約5個胺基酸、1至約4個胺基酸、或1至約3個胺基酸經C端及/或N端截短，及該變異體：(1)具有至少三個胺基酸殘基；且(2)保留對蛋白酶之識別位點。在一些前述實施態樣中，經截短之CM為經N端截短之CM。在一些實施態樣中，經截短之CM為經C端截短之CM。在一些實施態樣中，經截短之CM為經C端及N端截短之CM。 在本文所述之可活化細胞激素構築體中任一者的一些實施態樣中，CM1及/或CM2包含總共約3個胺基酸至約25個胺基酸。在一些實施態樣中，CM1及/或CM2包含總共約3個胺基酸至約25個胺基酸、約3個胺基酸至約20個胺基酸、約3個胺基酸至約15個胺基酸、約3個胺基酸至約10個胺基酸、約3個胺基酸至約5個胺基酸、約5個胺基酸至約25個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約5個胺基酸至約15個胺基酸、約5個胺基酸至約10個胺基酸、約10個胺基酸至約25個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約15個胺基酸、約15個胺基酸至約25個胺基酸、約15個胺基酸至約20個胺基酸、或約20個胺基酸至約25個胺基酸。 在一些實施態樣中，ACC可包含多種CM，其包含對不同的蛋白酶之受質。在一些實施態樣中，CM1及CM2包含對不同的蛋白酶之受質。在一些實施態樣中，CM1及CM2包含對相同的蛋白酶之受質。 第一及第二單體構築體可包含一或多個額外組分，其包括一或多個連結子及類似者。在一些實施態樣中，第一單體可包括配置在CP1與CM1之間的連結子。在一些實施態樣中，CP1和CM1在第一單體中彼此直接鄰接。在一些實施態樣中，第一單體包含配置在CM1與DD1之間的連結子。在一些實施態樣中，連結子具有1個胺基酸至約15個胺基酸的總長度。在一些實施態樣中，CM1和DD1在第一單體中彼此直接鄰接。在一些實施態樣中，CM及配置在CP1與DD1之間的任何連結子具有3至15個胺基酸、或3至10個胺基酸、或3至7個胺基酸的組合總長度。 在一些實施態樣中，第二單體包含配置在CP2與CM2之間的連結子。在一些實施態樣中，CP2和CM2在第二單體中彼此直接鄰接。在一些實施態樣中，第二單體包含配置在CM2與DD2之間的連結子。在一些實施態樣中，連結子具有1個胺基酸至約15個胺基酸的總長度。在一些實施態樣中，連結子包含G；GG；或GGGS(SEQ ID NO：2)之序列。在一些實施態樣中，CM2(例如本文所述之可切割部分中任一者)和DD2(例如本文所述之DD中任一者)在第二單體中彼此直接鄰接。在一些實施態樣中，CM及配置在CP2與DD2之間的任何連結子具有3至15個胺基酸、或3至10個胺基酸、或3至7個胺基酸的組合總長度。 在一些實施態樣中，第一單體及/或第二單體可各自包括總共約50個胺基酸至約800個胺基酸、約50個胺基酸至約750個胺基酸、約50個胺基酸至約700個胺基酸、約50個胺基酸至約650個胺基酸、約50個胺基酸至約600個胺基酸、約50個胺基酸至約550個胺基酸、約50個胺基酸至約500個胺基酸、約50個胺基酸至約450個胺基酸、約50個胺基酸至約400個胺基酸、約50個胺基酸至約350個胺基酸、約50個胺基酸至約300個胺基酸、約50個胺基酸至約250個胺基酸、約50個胺基酸至約200個胺基酸、約50個胺基酸至約150個胺基酸、約50個胺基酸至約100個胺基酸、約100個胺基酸至約800個胺基酸、約100個胺基酸至約750個胺基酸、約100個胺基酸至約700個胺基酸、約100個胺基酸至約650個胺基酸、約100個胺基酸至約600個胺基酸、約100個胺基酸至約550個胺基酸、約100個胺基酸至約500個胺基酸、約100個胺基酸至約450個胺基酸、約100個胺基酸至約400個胺基酸、約100個胺基酸至約350個胺基酸、約100個胺基酸至約300個胺基酸、約100個胺基酸至約250個胺基酸、約100個胺基酸至約200個胺基酸、約100個胺基酸至約150個胺基酸、約150個胺基酸至約800個胺基酸、約150個胺基酸至約750個胺基酸、約150個胺基酸至約700個胺基酸、約150個胺基酸至約650個胺基酸、約150個胺基酸至約600個胺基酸、約150個胺基酸至約550個胺基酸、約150個胺基酸至約500個胺基酸、約150個胺基酸至約450個胺基酸、約150個胺基酸至約400個胺基酸、約150個胺基酸至約350個胺基酸、約150個胺基酸至約300個胺基酸、約150個胺基酸至約250個胺基酸、約150個胺基酸至約200個胺基酸、約200個胺基酸至約800個胺基酸、約200個胺基酸至約750個胺基酸、約200個胺基酸至約700個胺基酸、約200個胺基酸至約650個胺基酸、約200個胺基酸至約600個胺基酸、約200個胺基酸至約550個胺基酸、約200個胺基酸至約500個胺基酸、約200個胺基酸至約450個胺基酸、約200個胺基酸至約400個胺基酸、約200個胺基酸至約350個胺基酸、約200個胺基酸至約300個胺基酸、約200個胺基酸至約250個胺基酸、約250個胺基酸至約800個胺基酸、約250個胺基酸至約750個胺基酸、約250個胺基酸至約700個胺基酸、約250個胺基酸至約650個胺基酸、約250個胺基酸至約600個胺基酸、約250個胺基酸至約550個胺基酸、約250個胺基酸至約500個胺基酸、約250個胺基酸至約450個胺基酸、約250個胺基酸至約400個胺基酸、約250個胺基酸至約350個胺基酸、約250個胺基酸至約300個胺基酸、約300個胺基酸至約800個胺基酸、約300個胺基酸至約750個胺基酸、約300個胺基酸至約700個胺基酸、約300個胺基酸至約650個胺基酸、約300個胺基酸至約600個胺基酸、約300個胺基酸至約550個胺基酸、約300個胺基酸至約500個胺基酸、約300個胺基酸至約450個胺基酸、約300個胺基酸至約400個胺基酸、約300個胺基酸至約350個胺基酸、約350個胺基酸至約800個胺基酸、約350個胺基酸至約750個胺基酸、約350個胺基酸至約700個胺基酸、約350個胺基酸至約650個胺基酸、約350個胺基酸至約600個胺基酸、約350個胺基酸至約550個胺基酸、約350個胺基酸至約500個胺基酸、約350個胺基酸至約450個胺基酸、約350個胺基酸至約400個胺基酸、約400個胺基酸至約800個胺基酸、約400個胺基酸至約750個胺基酸、約400個胺基酸至約700個胺基酸、約400個胺基酸至約650個胺基酸、約400個胺基酸至約600個胺基酸、約400個胺基酸至約550個胺基酸、約400個胺基酸至約500個胺基酸、約400個胺基酸至約450個胺基酸、約450個胺基酸至約800個胺基酸、約450個胺基酸至約750個胺基酸、約450個胺基酸至約700個胺基酸、約450個胺基酸至約650個胺基酸、約450個胺基酸至約600個胺基酸、約450個胺基酸至約550個胺基酸、約450個胺基酸至約500個胺基酸、約500個胺基酸至約800個胺基酸、約500個胺基酸至約750個胺基酸、約500個胺基酸至約700個胺基酸、約500個胺基酸至約650個胺基酸、約500個胺基酸至約600個胺基酸、約500個胺基酸至約550個胺基酸、約550個胺基酸至約800個胺基酸、約550個胺基酸至約750個胺基酸、約550個胺基酸至約700個胺基酸、約550個胺基酸至約650個胺基酸、約550個胺基酸至約600個胺基酸、約600個胺基酸至約800個胺基酸、約600個胺基酸至約750個胺基酸、約600個胺基酸至約700個胺基酸、約600個胺基酸至約650個胺基酸、約650個胺基酸至約800個胺基酸、約650個胺基酸至約750個胺基酸、約650個胺基酸至約700個胺基酸、約700個胺基酸至約800個胺基酸、約700個胺基酸至約750個胺基酸、或約750個胺基酸至約800個胺基酸。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，可將一或多個連結子(例如可撓性連結子)引入可活化細胞激素構築體中，在結構域之間、在部分之間、在部分與結構域之間的一或多個接合處或在連結子可能有利的任何其他接合處提供可撓性。在一些實施態樣中，在提供ACC作為構形受限之構築體的情況下，可插入可撓性連結子以促成未經切割之可活化細胞激素構築體中的結構形成及維持。本文所述之連結子中任一者可提供所欲可撓性以促成抑制靶標(例如細胞激素之受體)結合或促成以蛋白酶切割CM。在一些實施態樣中，連結子包括在全部或部分為可撓性的ACC中，使得連結子可包括可撓性連結子以及一或多個賦予低可撓性結構以提供所欲ACC的部分。一些連結子可包括半胱胺酸殘基，其可形成雙硫鍵且降低構築體的可撓性。在一些實施態樣中，減少連結子或連接區的長度使ACC中的成熟細胞激素蛋白質活性降低(參見例如圖7A至7B和8A至8B)。在大多數情況下，連結子長度係藉由沿N至C方向計數自與前一組分之C端胺基酸相鄰的連結子之N端至與下一組分之N端胺基酸相鄰的連結子之C端的胺基酸數目來測定(亦即在連結子長度不包括前一組分之C端胺基酸或下一組分之N端胺基酸的情況下)。在其中包含Fc結構域的DD之N端上使用連結子的實施態樣中，連結子長度係藉由計數自與前一組分之C端胺基酸相鄰的連結子之N端至與Fc絞鏈區之第一半胱胺酸相鄰的連結子之C端的胺基酸數目來測定(亦即在連結子長度不包括前一組分之C端胺基酸或Fc絞鏈區之第一半胱胺酸的情況下)。 如本揭示及圖14顯而易知，本揭示之ACC包括在介於CP與二聚合結構域之間相互作用的鄰近點之間的胺基酸延伸。該胺基酸延伸可稱為連結區(LR)。如本文所使用之術語「連結區」或「LR」係指在介於細胞激素之C端與在N端與二聚合結構域之間相互作用的鄰近點相鄰的胺基酸殘基之間的胺基酸殘基延伸(亦即連結區不包括細胞激素之C端胺基酸或DD之N端胺基酸，其形成與相應的第二單體之DD相互作用的鄰近點)。例如，當DD為一對Fc結構域時，連結區為介於細胞激素之C端與參與Fc之雙硫鍵聯之第一N端半胱胺酸殘基(例如IgG1或IgG4 Fc結構域之半胱胺酸226，根據EU編號)之間的胺基酸殘基延伸。當二聚合結構域不為肽時，則連結區為細胞激素之C端之後直到最後一個胺基酸的胺基酸殘基延伸。例如，當DD為生物素-鏈黴抗生物素蛋白配對時，含生物素之單體的連結區為介於細胞激素之C端與生物素分子之間的胺基酸殘基延伸，且含鏈黴抗生物素蛋白之單體的連結區為介於細胞激素之C端與鏈黴抗生物素蛋白分子之間的胺基酸殘基延伸。在一些態樣中，連結區可能包含不超過24、18、14、12、11、10、9、8、7、6、5、或4個胺基酸，例如5至14、7至12、7至11、或8至11個胺基酸。 在一些實施態樣中，額外的胺基酸序列可位於相對於ACC中任一者的結構域中任一者之N端或C端。實例包括但不限於靶向部分(例如存在於靶組織中的細胞受體之配體)和血清半生期延長部分(例如結合血清蛋白質(諸如免疫球蛋白(例如IgG))或血清白蛋白(例如人類血清白蛋白(HSA))之多肽)。 在本文所述之可活化細胞激素構築體的一些實施態樣中，連結子可包括總共約1個胺基酸至約25個胺基酸(例如約1個胺基酸至約24個胺基酸、約1個胺基酸至約22個胺基酸、約1個胺基酸至約20個胺基酸、約1個胺基酸至約18個胺基酸、約1個胺基酸至約16個胺基酸、約1個胺基酸至約15個胺基酸、約1個胺基酸至約14個胺基酸、約1個胺基酸至約12個胺基酸、約1個胺基酸至約10個胺基酸、約1個胺基酸至約8個胺基酸、約1個胺基酸至約6個胺基酸、約1個胺基酸至約5個胺基酸、約1個胺基酸至約4個胺基酸、約1個胺基酸至約3個胺基酸、約1個胺基酸至約2個胺基酸、約2個胺基酸至約25個胺基酸、約2個胺基酸至約24個胺基酸、約2個胺基酸至約22個胺基酸、約2個胺基酸至約20個胺基酸、約2個胺基酸至約18個胺基酸、約2個胺基酸至約16個胺基酸、約2個胺基酸至約15個胺基酸、約2個胺基酸至約14個胺基酸、約2個胺基酸至約12個胺基酸、約2個胺基酸至約10個胺基酸、約2個胺基酸至約8個胺基酸、約2個胺基酸至約6個胺基酸、約2個胺基酸至約5個胺基酸、約2個胺基酸至約4個胺基酸、約2個胺基酸至約3個胺基酸、約4個胺基酸至約25個胺基酸、約4個胺基酸至約24個胺基酸、約4個胺基酸至約22個胺基酸、約4個胺基酸至約20個胺基酸、約4個胺基酸至約18個胺基酸、約4個胺基酸至約16個胺基酸、約4個胺基酸至約15個胺基酸、約4個胺基酸至約14個胺基酸、約4個胺基酸至約12個胺基酸、約4個胺基酸至約10個胺基酸、約4個胺基酸至約8個胺基酸、約4個胺基酸至約6個胺基酸、約4個胺基酸至約5個胺基酸、約5個胺基酸至約25個胺基酸、約5個胺基酸至約24個胺基酸、約5個胺基酸至約22個胺基酸、約5個胺基酸至約20個胺基酸、約5個胺基酸至約18個胺基酸、約5個胺基酸至約16個胺基酸、約5個胺基酸至約15個胺基酸、約5個胺基酸至約14個胺基酸、約5個胺基酸至約12個胺基酸、約5個胺基酸至約10個胺基酸、約5個胺基酸至約8個胺基酸、約5個胺基酸至約6個胺基酸、約6個胺基酸至約25個胺基酸、約6個胺基酸至約24個胺基酸、約6個胺基酸至約22個胺基酸、約6個胺基酸至約20個胺基酸、約6個胺基酸至約18個胺基酸、約6個胺基酸至約16個胺基酸、約6個胺基酸至約15個胺基酸、約6個胺基酸至約14個胺基酸、約6個胺基酸至約12個胺基酸、約6個胺基酸至約10個胺基酸、約6個胺基酸至約8個胺基酸、約8個胺基酸至約25個胺基酸、約8個胺基酸至約24個胺基酸、約8個胺基酸至約22個胺基酸、約8個胺基酸至約20個胺基酸、約8個胺基酸至約18個胺基酸、約8個胺基酸至約16個胺基酸、約8個胺基酸至約15個胺基酸、約8個胺基酸至約14個胺基酸、約8個胺基酸至約12個胺基酸、約8個胺基酸至約10個胺基酸、約10個胺基酸至約25個胺基酸、約10個胺基酸至約24個胺基酸、約10個胺基酸至約22個胺基酸、約10個胺基酸至約20個胺基酸、約10個胺基酸至約18個胺基酸、約10個胺基酸至約16個胺基酸、約10個胺基酸至約15個胺基酸、約10個胺基酸至約14個胺基酸、約10個胺基酸至約12個胺基酸、約12個胺基酸至約25個胺基酸、約12個胺基酸至約24個胺基酸、約12個胺基酸至約22個胺基酸、約12個胺基酸至約20個胺基酸、約12個胺基酸至約18個胺基酸、約12個胺基酸至約16個胺基酸、約12個胺基酸至約15個胺基酸、約12個胺基酸至約14個胺基酸、約14個胺基酸至約25個胺基酸、約14個胺基酸至約24個胺基酸、約14個胺基酸至約22個胺基酸、約14個胺基酸至約20個胺基酸、約14個胺基酸至約18個胺基酸、約14個胺基酸至約16個胺基酸、約14個胺基酸至約15個胺基酸、約15個胺基酸至約25個胺基酸、約15個胺基酸至約24個胺基酸、約15個胺基酸至約22個胺基酸、約15個胺基酸至約20個胺基酸、約15個胺基酸至約18個胺基酸、約15個胺基酸至約16個胺基酸、約16個胺基酸至約25個胺基酸、約16個胺基酸至約24個胺基酸、約16個胺基酸至約22個胺基酸、約16個胺基酸至約20個胺基酸、約16個胺基酸至約18個胺基酸、約18個胺基酸至約25個胺基酸、約18個胺基酸至約24個胺基酸、約18個胺基酸至約22個胺基酸、約18個胺基酸至約20個胺基酸、約20個胺基酸至約25個胺基酸、約20個胺基酸至約24個胺基酸、約20個胺基酸至約22個胺基酸、約22個胺基酸至約25個胺基酸、約22個胺基酸至約24個胺基酸、或約24個胺基酸至約25個胺基酸)。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，連結子包括總共約1個胺基酸、約2個胺基酸、約3個胺基酸、約4個胺基酸、約5個胺基酸、約6個胺基酸、約7個胺基酸、約8個胺基酸、約9個胺基酸、約10個胺基酸、約11個胺基酸、約12個胺基酸、約13個胺基酸、約14個胺基酸、約15個胺基酸、約16個胺基酸、約17個胺基酸、約18個胺基酸、約19個胺基酸、約20個胺基酸、約21個胺基酸、約22個胺基酸、約23個胺基酸、約24個胺基酸、或約25個胺基酸。 本發明人已驚訝地發現不在CP與DD之間包含任何連結子之ACC展現相對於野生型成熟細胞激素，最顯著降低的細胞激素活性。參見圖7A和8A。再者，其中在CP與DD之間沒有連結子的組態仍容許有效切割位於CP與DD之間的CM。參見圖9至11。因此，在一些實施態樣中，ACC不在CP與DD之間包含任何連結子，且在CP與DD之間的CM包含不超過10、9、8、7、6、5、4、或3個胺基酸。在一些實施態樣中，在LR中包含的胺基酸總數目不超過25個胺基酸，例如不超過25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、或3個胺基酸、或3至10個胺基酸或5至15個胺基酸、或7至12個胺基酸、或選自由3至25個胺基酸所涵蓋的範圍之任何範圍或特定數目的胺基酸。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，連結子可富含甘胺酸(Gly或G)殘基。在一些實施態樣中，連結子可富含絲胺酸(Ser或S)殘基。在一些實施態樣中，連結子可富含甘胺酸和絲胺酸殘基。在一些實施態樣中，連結子具有一或多個甘胺酸-絲胺酸殘基配對(GS)(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10或更多個GS配對)。在一些實施態樣中，連結子具有一或多個Gly-Gly-Gly-Ser(GGGS)序列(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10或更多個GGGS序列)。在一些實施態樣中，連結子具有一或多個Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(GGGGS)序列(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10或更多個GGGGS序列)。在一些實施態樣中，連結子具有一或多個Gly-Gly-Ser-Gly(GGSG)序列(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10或更多個GGSG序列)。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，連結子包括下列中任一者或下列中之一或多者的組合：G、GG、GSSGGSGGSGG(SEQ ID NO：210)、GGGS(SEQ ID NO：2)、GGGSGGGS(SEQ ID NO：211)、 GGGSGGGSGGGS(SEQ ID NO：212)、 GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：213)、 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：214) 、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：215)、GGGGS(SEQ ID NO：216)、GS、GGGGSGS(SEQ ID NO：217)、 GGGGSGGGGSGGGGSGS(SEQ ID NO：218)、 GGSLDPKGGGGS(SEQ ID NO：219)、 PKSCDKTHTCPPCPAPELLG(SEQ ID NO：220)、 SKYGPPCPPCPAPEFLG(SEQ ID NO：221)、 GKSSGSGSESKS(SEQ ID NO：222)、GSTSGSGKSSEGKG (SEQ ID NO：223)、GSTSGSGKSSEGSGSTKG(SEQ ID NO：224)和GSTSGSGKPGSGEGSTKG(SEQ ID NO：225)。 連結子的非限制性實例可包括與GGGS(SEQ ID NO：2)、GSSGGSGGSGG(SEQ ID NO：210)、 GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：213)、GGGGSGS (SEQ ID NO：217)、GGGGSGGGGSGGGGSGS(SEQ ID NO：218)、GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO： 235)、GGSLDPKGGGGS(SEQ ID NO：219)和 GSTSGSGKPGSSEGST(SEQ ID NO：226)至少70%之同一性(例如至少72%、至少74%、至少75%、至少76%、至少78%、至少80%、至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%之同一性)的序列。 在一些實施態樣中，連結子包括選自下列群組之序列：GGSLDPKGGGGS(SEQ ID NO：219)、 GGGGSGGGGSGGGGSGS(SEQ ID NO：218)、GGGGSGS (SEQ ID NO：217)、GS、(GS)n、(GGS)n、(GSGGS)n (SEQ ID NO：227)和(GGGS)n (SEQ ID NO：228)、GGSG (SEQ ID NO：229)、GGSGG(SEQ ID NO：230)、GSGSG (SEQ ID NO：231)、GSGGG(SEQ ID NO：232)、GGGSG (SEQ ID NO：233)、GSSSG(SEQ ID NO：234)、 GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：213)、 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：235)、 GSTSGSGKPGSSEGST(SEQ ID NO：226)、(GGGGS)n (SEQ ID NO：216)，其中n為至少1的整數。在一些實施態樣中，連結子包括選自由下列所組成之群組的序列：GGSLDPKGGGGS(SEQ ID NO：219)、 GGGGSGGGGSGGGGSGS(SEQ ID NO：218)、GGGGSGS (SEQ ID NO：217)和GS。在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，連結子包括選自下列群組之序列：GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：213)、 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：235)和 GSTSGSGKPGSSEGST(SEQ ID NO：226)。在本文所述之可活化細胞激素構築體的一些實施態樣中，連結子包括選自下列群組之序列：GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：213)或GGGGS(SEQ ID NO：216)。在一些實施態樣中，連結子包含GGGS(SEQ ID NO：2)之序列。在一些實施態樣中，連結子包含單一甘胺酸殘基(G)或兩個甘胺酸殘基(GG)之序列。 在一些實施態樣中，ACC可包括一、二、三、四、五、六、七、八、九、或十個連結子序列(例如本文所述或本技術中已知的示例性連結子序列中任一者之相同或不同的連結子序列)。在一些實施態樣中，連結子包含磺基-SIAB、SMPB和磺基-SMPB，其中連結子係與一級胺巰基反應。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，ACC係以與CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低為特徵。在一些實施態樣中，對照水平可為重組CP1及/或CP2(例如市場上取得的重組CP1及/或CP2、重組野生型CP1及/或CP2及類似者)的活性水平。在一些實施態樣中，對照水平可為ACC之切割(活化)形式的活性水平。在某些實施態樣中，對照水平可為聚乙二醇化CP1及/或CP2的活性水平。 在一些實施態樣中，至少一種活性為CP1及/或CP2對其同族受體之結合親和性(K D)，如使用表面電漿子共振(例如在磷酸鹽緩衝之鹽水中於25℃下執行)所測定。在某些實施態樣中，至少一種活性為淋巴瘤細胞增殖水平。在其他的實施態樣中，至少一種活性為淋巴瘤細胞中的JAK/STAT/ISGF3路徑活化水平。在一些實施態樣中，至少一種活性為淋巴瘤細胞中的SEAP生產水平。在一些實施態樣中，至少一種活性為使用HEK細胞的基於細胞之檢定法中的SEAP生產水平。在進一步的實施態樣中，CP1及/或CP2之至少一種活性為使用例如RNAseq方法的經細胞激素刺激之基因誘導水平(參見例如Zimmerer等人之 Clin. Cancer Res.14(18):5900-5906, 2008；Hilkens等人之 J. Immunol.171:5255-5263, 2003)。 在一些實施態樣中，ACC係以與至少一種CP1及/或CP2活性的對照水平相比，至少一種CP1及/或CP2活性降低至少2倍為特徵。在一些實施態樣中，ACC係以與CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低至少5倍為特徵。在一些實施態樣中，ACC係以與CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低至少10倍為特徵。在一些實施態樣中，ACC係以與CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低至少20倍為特徵。在一些實施態樣中，ACC係以與CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低至少30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、500倍、或1000倍為特徵。在一些實施態樣中，ACC係以與CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低至少1至20倍、降低至少200至500倍、降低至少300至500倍、降低至少400至500倍、降低至少500至600倍、降低至少600至700倍、降低至少150至1000倍、降低至少100至1500倍、降低至少200至1500倍、降低至少300至1500倍、降低至少400至1500倍、降低至少500至1500倍、降低至少1000至1500倍、降低至少100至1000倍、降低至少200至1000倍、降低至少300至1000倍、降低至少400至1000倍、降低至少500至1000倍、降低至少100至500倍、降低至少20至50倍、降低至少30至50倍、降低至少40至50倍、降低至少100至400倍、降低至少200至400倍、或降低至少300至400倍、降低至少100至300倍、降低至少200至300倍、或降低至少100至200倍為特徵。 在一些實施態樣中，CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平為以蛋白酶切割CM1及CM2後自ACC釋放之CP1及/或CP2之活性(「切割產物」)。在一些實施態樣中，CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平為相應野生型成熟細胞激素(例如重組野生型成熟細胞激素)之活性。 在一些實施態樣中，ACC與蛋白酶培育產出經活化之細胞激素產物，其中經活化之細胞激素產物的CP1及/或CP2之一或多種活性比完整ACC的CP1及/或CP2之一或多種活性更大。在一些實施態樣中，經活化之細胞激素產物的CP1及/或CP2之一或多種活性比ACC的CP1及/或CP2之一或多種活性大至少1倍。在一些實施態樣中，經活化之細胞激素產物的CP1及/或CP2之一或多種活性比ACC的CP1及/或CP2之一或多種活性大至少2倍。在一些實施態樣中，經活化之細胞激素產物的CP1及/或CP2之一或多種活性比ACC的CP1及/或CP2之一或多種活性大至少5倍。在一些實施態樣中，經活化之細胞激素產物的CP1及/或CP2之一或多種活性比ACC的CP1及/或CP2之一或多種活性大至少10倍。在一些實施態樣中，經活化之細胞激素產物的CP1及/或CP2之一或多種活性比ACC的CP1及/或CP2之一或多種活性大至少20倍。在一些實施態樣中，經活化之細胞激素產物的CP1及/或CP2之一或多種活性比ACC的CP1及/或CP2之一或多種活性大至少1至20倍、大至少2至20倍、大至少3至20倍、大至少4至20倍、大至少5至20倍、大至少10至20倍、大至少15至20倍、大至少1至15倍、大至少2至15倍、大至少3至15倍、大至少4至15倍、大至少5至15倍、大至少10至15倍、大至少1至10倍、大至少2至10倍、大至少3至10倍、大至少4至10倍、大至少5至10倍、大至少1至5倍、大至少2至5倍、大至少3至5倍、大至少4至5倍、大至少1至4倍、大至少2至4倍、大至少3至4倍、大至少1至3倍、大至少2至3倍、或大至少1至2倍。 在一些實施態樣中，ACC可包括與SEQ ID NO：347或348至少80%(例如至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%、至少99%、或100%)之同一性的序列。在一些實施態樣中，ACC可以包括與SEQ ID NO：357至少80%(例如至少82%、至少84%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少96%、至少98%、至少99%、或100%)之同一性的序列之核酸編碼。在一些態樣中，ACC可能包括此等序列，但具有或不具有此等序列之訊息序列。訊息序列未受到特別的限制。訊息序列的一些非限制性實例包括例如SEQ ID NO：309之殘基1至20和其他序列中的相應殘基及核苷酸，或經來自另一物種或細胞系之訊息序列取代之訊息序列。訊息序列的其他實例包括MRAWIFFLLCLAGRALA(SEQ ID NO：343)和 MALTFALLVALLVLSCKSSCSVG(SEQ ID NO：344)。 該等可活化細胞激素構築體的各種示例性態樣於下文說明且可以任何組合用於本文所提供之方法中而沒有限制。可活化細胞激素構築體及製造可活化細胞激素構築體之方法的示例性態樣於下文說明。 在一些實施態樣中，選擇CM與特定蛋白酶一起使用。蛋白酶可為以腫瘤細胞生產之蛋白酶(例如腫瘤細胞可表現比健康組織更大量的蛋白酶)。在一些實施態樣中，CM為至少一種選自下列群組的蛋白酶之受質：ADAM 17、BMP-1、半胱胺酸蛋白酶(諸如組織蛋白酶)、HtrA1、豆莢蛋白酶、馬曲肽酶(MT-SP1)、基質金屬蛋白酶(MMP)、嗜中性球彈性蛋白酶、TMPRSS(諸如TMPRSS3或TMPRSS4)、凝血酶和u型纖維蛋白溶酶原活化物(uPA，亦稱為尿激酶)。 在一些實施態樣中，CM為至少一種基質金屬蛋白酶(MMP)受質。MMP的實例包括MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13、MMP14、MMP15、MMP16、MMP17、MMP19、MMP20、MMP23、MMP24、MMP26和MMP27。在一些實施態樣中，CM為MMP9、MMP14、MMP1、MMP3、MMP13、MMP17、MMP11和MMP19受質。在一些實施態樣中，CM為MMP7受質。在一些實施態樣中，CM為MMP9受質。在一些實施態樣中，CM為MMP14受質。在一些實施態樣中，CM為二或更多種MMP受質。在一些實施態樣中，CM為至少MMP9受質和MMP14受質。在一些實施態樣中，CM包括相同的MMP之二或更多種受質。在一些實施態樣中，CM包括至少二或更多種MMP9受質。在一些實施態樣中，CM包括至少二或更多種MMP14受質。 在一些實施態樣中，CM為MMP受質且包括序列ISSGLLSS(SEQ ID NO：19)；QNQALRMA(SEQ ID NO：16)；AQNLLGMV(SEQ ID NO：15)；STFPFGMF(SEQ ID NO：18)；PVGYTSSL(SEQ ID NO：74)；DWLYWPGI (SEQ ID NO：75)；MIAPVAYR(SEQ ID NO：42)；RPSPMWAY(SEQ ID NO：43)；WATPRPMR(SEQ ID NO：44)；FRLLDWQW(SEQ ID NO：45)；LKAAPRWA(SEQ ID NO：76)；GPSHLVLT(SEQ ID NO：77)；LPGGLSPW (SEQ ID NO：78)；MGLFSEAG(SEQ ID NO：79)； SPLPLRVP(SEQ ID NO：80)；RMHLRSLG(SEQ ID NO：81)；LAAPLGLL(SEQ ID NO：17)；AVGLLAPP(SEQ ID NO：14)；LLAPSHRA(SEQ ID NO：82)；PAGLWLDP (SEQ ID NO：20)；及/或ISSGLSS(SEQ ID NO：73)。 在一些實施態樣中，CM為凝血酶受質。在一些實施態樣中，CM為凝血酶受質且包括序列GPRSFGL(SEQ ID NO：83)或GPRSFG(SEQ ID NO：84)。 在一些實施態樣中，CM包括選自下列群組的胺基酸序列：NTLSGRSENHSG(SEQ ID NO：9)； NTLSGRSGNHGS(SEQ ID NO：10)；TSTSGRSANPRG (SEQ ID NO：11)；TSGRSANP(SEQ ID NO：12)； VAGRSMRP(SEQ ID NO：21)；VVPEGRRS(SEQ ID NO：22)；ILPRSPAF(SEQ ID NO：23)；MVLGRSLL(SEQ ID NO：24)；QGRAITFI(SEQ ID NO：25)；SPRSIMLA(SEQ ID NO：26)；和SMLRSMPL(SEQ ID NO：27)。 在一些實施態樣中，CM為嗜中性球彈性蛋白酶受質。在一些實施態樣中，CM為絲胺酸蛋白酶受質。在一些實施態樣中，CM為uPA受質。在一些實施態樣中，CM為豆莢蛋白酶受質。在一些實施態樣中，CM為馬曲肽酶受質。在一些實施態樣中，CM為半胱胺酸蛋白酶受質。在一些實施態樣中，CM為半胱胺酸蛋白酶(諸如組織蛋白酶)受質。 在一些實施態樣中，CM包括下列序列：ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：28)； ISSGLLSSGGSGGSLSGRSDNH(SEQ ID NO：30)； AVGLLAPPGGTSTSGRSANPRG(SEQ ID NO：275)； TSTSGRSANPRGGGAVGLLAPP(SEQ ID NO：276)； VHMPLGFLGPGGTSTSGRSANPRG(SEQ ID NO：277)； TSTSGRSANPRGGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：278)； AVGLLAPPGGLSGRSDNH(SEQ ID NO：29)； LSGRSDNHGGAVGLLAPP(SEQ ID NO：70)； VHMPLGFLGPGGLSGRSDNH(SEQ ID NO：266)； LSGRSDNHGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：267)； LSGRSDNHGGSGGSISSGLLSS(SEQ ID NO：268)； LSGRSGNHGGSGGSISSGLLSS(SEQ ID NO：279)； ISSGLLSSGGSGGSLSGRSGNH(SEQ ID NO：269)； LSGRSDNHGGSGGSQNQALRMA(SEQ ID NO：270)； QNQALRMAGGSGGSLSGRSDNH(SEQ ID NO：271)； LSGRSGNHGGSGGSQNQALRMA(SEQ ID NO：272)； QNQALRMAGGSGGSLSGRSGNH(SEQ ID NO：273)；及/或ISSGLLSGRSGNH(SEQ ID NO：274)。 在一些實施態樣中，CM1及/或CM2包含選自由下列所組成之群組的序列：SEQ ID NO：5至SEQ ID NO：100。在一些實施態樣中，CM包含選自下列群組之序列： ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：28)、LSGRSDDH(SEQ ID NO：33)、ISSGLLSGRSDQH(SEQ ID NO：54)、SGRSDNI (SEQ ID NO：100)和ISSGLLSGRSDNI(SEQ ID NO：68)、LSGRSDNI(SEQ ID NO：41)和LSGRSNI(SEQ ID NO：349)。 在一些態樣中，ACC包括選自SEQ ID NO：111至134、137至140、143至146、151至160和347至348之CP1，選自SEQ ID NO：5至100和263至308之CM1、及與選自SEQ ID NO：111至134、137至140、143至146、151至160和347至348之CP2二聚合之DD1，選自SEQ ID NO：5至100和263至308之CM2、及DD2。在一些態樣中，ACC可包括介於CP1與CM1之間及/或介於CM1與DD1之間的選自SEQ ID NO：2和210至234、245或250之連結子，及介於CP2與CM2之間及/或介於CM2和DD2之間的選自SEQ ID NO：2和210至234、245或250之連結子。在一些實施態樣中，ACC包括具有與SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4至少80%之同一性(例如至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%之同一性)的胺基酸序列之DD1及/或DD2。在一些實施態樣中，ACC包括具有與SEQ ID NO：315或SEQ ID NO：316至少80%之同一性(例如至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%之同一性)的胺基酸序列之DD1。在一些實施態樣中，ACC包括具有與SEQ ID NO：315或SEQ ID NO：316至少80%之同一性(例如至少82%、至少84%、至少85%、至少86%、至少88%、至少90%、至少92%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%之同一性)的胺基酸序列之DD2。 與藥劑共軛 本揭示亦提供用於包括額外要素於本文所述之ACC中任一者中之方法及材料，包括例如促成遞送至關注的細胞或組織之靶向部分、藥劑(例如治療劑、抗腫瘤劑)、毒素或其片段。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，ACC可與細胞毒性劑共軛，該細胞毒性劑包括而不限於毒素(例如細菌、真菌、植物或動物來源的酵素活性毒素或其片段)或放射性同位素。在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，可活化細胞激素構築體可與細胞毒性劑共軛，該細胞毒性劑包括而不限於毒素(例如細菌、真菌、植物或動物來源的酵素活性毒素或其片段)或放射性同位素。 可與本文所述之ACC中任一者共軛之非限制性示例性細胞毒性劑包括：尾海兔素(dolastatin)和其衍生物(例如澳瑞他汀(auristatin)E、AFP、單甲基澳瑞他汀D (MMAD)、單甲基澳瑞他汀F(MMAF)、單甲基澳瑞他汀E (MMAE)、去甲基澳瑞他汀E(DMAE)、澳瑞他汀F、去甲基澳瑞他汀F(DMAF)、尾海兔素16(DmJ)、尾海兔素16 (Dpv)、澳瑞他汀衍生物(例如澳瑞他汀酪胺(auristatin tyramine)、澳瑞他汀喹啉酮)、類美登素(maytansinoid)(例如DM-1、DM-4)、類美登素衍生物、倍癌黴素(duocarmycin)、α-蠅蕈素、渦輪他汀(turbostatin)、非那西汀(phenstatin)、羥基非那西汀、海綿抑素(spongistatin) 5、海綿抑素7、哈利他汀(halistatin)1、哈利他汀2、哈利他汀3、鹵代他汀(halocomstatin)、吡咯并苯并咪唑(PBI)、環他汀6(cibrostatin6)、多沙利鳳(doxaliform)、西馬多汀(cemadotin)類似物(CemCH2-SH)、假單胞菌毒素A (PES8)變異體、假單胞菌毒素A(ZZ-PE38)變異體、ZJ-101、蒽環、阿黴素(doxorubicin)、道諾黴素(daunorubicin )、苔蘚蟲素、喜樹鹼、經7取代之喜樹鹼、10,11-二氟甲二氧基喜樹鹼、康柏他汀(combretastatin)、脫溴海兔毒素(debromoaplysiatoxin)、KahaMide-F、盤皮海綿內酯(discodermolide)和海鞘素。 可與本文所述之ACC中任一者共軛之非限制性示例性酵素活性毒素包括：白喉毒素、來自綠膿桿菌 ( Pseudomonas aeruginosa)之外毒素A鏈、蓖麻毒蛋白A鏈、相思子素A鏈、蒴蓮根毒素(modeccin)A鏈、α-八疊球菌、油桐蛋白( Aleuriies fordiiprotein)、香石竹蛋白(dianfhin protein)、美洲商陸蛋白(Phytoiaca Americana protein)(例如PAPI、PAPII和PAP-8)、苦瓜抑制劑、麻風樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotir)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹素(geionin)、有絲分裂素(mitogeliin)、局限麯菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、新黴素和新月毒素(tricothecene)。 可與本文所述之ACC中任一者共軛之非限制性示例性抗腫瘤劑包括：阿德力黴素(adriamycin)、紅比黴素(cerubidine)、博萊黴素(bleomycin)、阿爾克蘭(alkeran)、長春花鹼(velban)、安可平(oncovin)、氟脲嘧啶、胺甲喋呤、沙奧特帕(thiotepa)、比桑烯(bisantrene)、能滅瘤(novantrone)、硫鳥嘌呤、丙卡巴肼(procarabizine)和阿糖胞苷。 可與本文所述之ACC中任一者共軛之非限制性示例性抗病毒包括：無環鳥糞核苷(acyclovir)、維拉A(vira A)和鹽酸金剛烷胺(symmetrel)。 可與本文所述之ACC中任一者共軛之非限制性示例性抗真菌劑包括：耐絲菌素(nystatin)。 可與本文所述之ACC中任一者共軛之非限制性示例性可共軛檢測試劑包括：螢光素和其衍生物、螢光素異硫氰酸酯(FITC)。 可與本文所述之可活化細胞激素構築體中任一者共軛之非限制性示例性抗菌劑包括：胺基醣苷、鏈黴素、新黴素、康黴素、丁胺卡那霉素(amikacin)、建它黴素 (gentamicin)和托普霉素(tobramycin)。 可與本文所述之可活化細胞激素構築體中任一者共軛之非限制性示例性3β,16β,17α-三羥基膽甾-5-烯-22-酮16-O-(2-O-4-甲氧基苯甲醯基-β-D-吡喃木糖基(xylopyranosyl))-(1--＞3)-(2-O-乙醯基-α-L-阿拉伯吡喃糖苷)(OSW-1)包括：O6-苯甲基鳥嘌呤之s-硝基苯甲氧基羰基衍生物、拓樸異構酶抑制劑、半星芒素(hemiasterlin)、三尖杉鹼、升粗榧鹼(homoharringionine)、吡咯并苯并二氮呯二聚物(PBD)、官能化吡咯并苯并二氮呯、卡奇黴素(calcicheamicin)、鬼臼毒素、紫杉烷和長春花生物鹼。 可與本文所述之可活化細胞激素構築體中任一者共軛之非限制性示例性放射性藥品包括： 123I、 89Zr、 125I、 131I、 99mTc、 201T1、 62Cu、 18F、 68Ga、 13N、 15O、 38K、 82Rb、 111In、 133Xe、 11C和 99mTc(鎝)。 可與本文所述之ACC中任一者共軛之非限制性示例性重金屬包括：鋇、金和鉑。 可與本文所述之ACC中任一者共軛之非限制性示例性抗黴漿菌劑(anti-mycoplasmal)包括：泰樂菌素(tylosine)、觀黴素、鏈黴素B、安比西林、胺苯磺醯胺、多黏菌素和氯黴素。 那些熟習本技術的一般技能者將認識到很多各種可能的部分可與本文所述之可活化細胞激素構築體中任一者共軛。共軛可包括使兩個分子結合的任何化學反應，只要ACC及其他部分保持彼等各自的活性。共軛可包括許多化學機制，例如共價結合、親和性結合、嵌入、配位結合和複合。在一些實施態樣中，較佳的結合為共價結合。共價結合可藉由現有側鏈之直接縮合或藉由併入外部橋接分子來達成。許多二價或多價連結劑可用於共軛本文所述之可活化細胞激素構築體中任一者。例如，共軛可包括包括有機化合物，諸如硫酯、碳二醯亞胺、琥珀醯亞胺酯、戊二醛、重氮苯和六亞甲二胺。在一些實施態樣中，可活化細胞激素構築體可包括或以其他方式引入一或多種非天然胺基酸殘基以提供適合於共軛之位點。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，藥劑及/或共軛體係以雙硫鍵(例如在半胱胺酸分子上的雙硫鍵)附接至抗原結合結構域。因為許多癌症自然釋放高水平的麩胱甘肽，一種還原劑，存在於癌組織微環境中的麩胱甘肽可還原雙硫鍵，且隨後在遞送位點上釋放藥劑及/或共軛體。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，當共軛體在補體的存在下於靶位點內(例如患病的組織(例如癌組織))結合至其靶標時，將共軛體及/或藥劑附接至連結子之醯胺鍵或酯鍵切割，導致共軛體及/或藥劑以其活性形式釋放。當該等共軛體及/或藥劑投予個體時，其實現共軛體及/或藥劑在靶位點(例如患病的組織(例如癌組織))上遞送及釋放。該等共軛體及/或藥劑特別有效於活體內遞送本文所述之共軛體及/或藥劑中任一者。 在一些實施態樣中，連結子不以補體系統的酵素切割。例如，釋放共軛體及/或藥劑無需補體活化，因為補體活化最終溶解靶細胞。在此等實施態樣中，共軛體及/或藥劑係遞送至靶細胞(例如激素、酵素、皮質類固醇、神經傳遞質或基因)。此外，連結子對以血清蛋白酶之切割裂解有輕微的敏感性，且共軛體及/或藥劑係在靶位點上緩慢釋放。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，設計共軛體及/或藥劑，使得共軛體及/或藥劑遞送至靶位點(例如疾病組織(例如癌組織))，但不釋放共軛體及/或藥劑。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，共軛體及/或藥劑係直接或經由不可切割連結子附接至抗原結合結構域。示例性不可切割連結子包括胺基酸(例如D-胺基酸)、肽或其他有機化合物，其可經修飾以包括隨後可以本文所述之方法用於附接至抗原結合結構域之官能基。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，ACC包括至少一個與藥劑共軛之點。在一些實施態樣中，所有可能的共軛點皆可有效與藥劑共軛。在一些實施態樣中，一或多個共軛點包括而不限於涉及雙硫鍵的硫原子、涉及鏈間雙硫鍵的硫原子、涉及鏈間硫鍵的硫原子但不涉及鏈內雙硫鍵的硫原子、及/或半胱胺酸或含有硫原子之其他胺基酸殘基的硫原子。在此等例子中，殘基可天然存在於蛋白質構築體結構中或可使用包括而不限於定點誘變、化學轉化或非天然胺基酸錯併(mis-incorporation)之方法併入蛋白質構築體中。 本揭示亦提供用於製備供共軛之ACC之方法及材料。在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，ACC經修飾以包括一或多個鏈間雙硫鍵。例如，在ACC中的雙硫鍵可在暴露於還原劑(諸如而不限於TCEP、DTT或β-巰基乙醇)後經歷還原。在一些例子中，雙硫鍵僅部分還原。如本文所使用之術語部分還原係指其中ACC與還原劑接觸且所有可能的共軛位點中的一部分經歷還原(例如不使所有的雙硫鍵還原)的情況。在一些實施態樣中，若所有可能的共軛位點中少於99%(例如少於98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、或少於5%)被還原，則可活化細胞激素構築體在與還原劑接觸後部分還原。在一些實施態樣中，具有一或多個鏈間雙硫鍵還原之ACC係與對游離硫醇具有反應性的藥物共軛。 本揭示亦提供用於治療劑與ACC上的特定位置共軛之方法及材料。在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，ACC經修飾使得治療劑可在ACC的特定位置上與ACC共軛。例如，ACC可經部分還原，以此方式促成與ACC共軛。在此等例子中，ACC之部分還原係以ACC中的共軛位點不還原的方式發生。在一些實施態樣中，選擇在ACC上的共軛位點以促成治療劑在蛋白質構築體的特定位置上共軛。在以還原劑處理後，各種因素可影響ACC之「還原水平」。例如而不限於，還原劑對ACC之比例、培育時長、培育溫度及/或還原反應溶液之pH可能需要最適化，以便以本文所述之方法及材料達成ACC之部分還原。可使用任何適當的因素組合(例如還原劑對ACC之比例、與還原劑培育的時長和溫度、及/或還原劑之pH值)來達成ACC之部分還原(例如可能的共軛位點的一般還原或在特定的共軛位點上還原)。 還原劑對ACC之有效比例可為任何比例，以容許與劑共軛的方式使ACC至少部分還原(例如可能的共軛位點的一般還原或在特定的共軛位點上還原)。在一些實施態樣中，還原劑對ACC之比例可在下列範圍內：約20:1至1:1、約10:1至1:1、約9:1至1:1、約8:1至1:1、約7:1至1:1、約6:1至1:1、約5:1至1:1、約4:1至1:1、約3:1至1:1、約2:1至1:1、約20:1至1:1.5、約10:1至1:1.5、約9:1至1:1.5、約8:1至1:1.5、約7:1至1:1.5、約6:1至1:1.5、約5:1至1:1.5、約4:1至1:1.5、約3:1至1:1.5、約2:1至1:1.5、約1.5:1至1:1.5、或約1:1至1:1.5。在一些實施態樣中，該比例係在約5:1至1:1之範圍內。在一些實施態樣中，該比例係在約5:1至1.5:1之範圍內。在一些實施態樣中，該比例係在約4:1至1:1之範圍內。在一些實施態樣中，該比例係在約4：1至1.5：1之範圍內。在一些實施態樣中，該比例係在約8:1至約1:1之範圍內。在一些實施態樣中，該比例係在約2.5:1至1:1之範圍內。 用於以還原劑處理ACC之有效培育時間和溫度可為任何時間和溫度，以容許劑與ACC共軛的方式使ACC至少部分還原(例如可能的共軛位點的一般還原或在特定的共軛位點上還原)。在一些實施態樣中，用於處理ACC之培育時間和溫度可在37℃下約1小時至37℃下約12小時之範圍內(或其中的任何子範圍)。 用於以還原劑處理ACC之還原反應的有效pH可為任何pH，以容許ACC與劑共軛的方式使ACC至少部分還原(例如可能的共軛位點的一般還原或在特定的共軛位點上還原)。 當部分還原之ACC與含有硫醇之劑接觸時，該劑可與ACC中的鏈間硫醇共軛。該劑可以使用含硫醇之試劑(例如半胱胺酸或N-乙醯基半胱胺酸)的方式修飾以包括硫醇。例如，ACC可在約37℃下與還原劑(例如TEPC)在還原劑對ACC之所欲比例下培育約1小時後部分還原。還原劑對ACC之有效比例可為任何比例，以容許與含硫醇之劑共軛的方式使位於ACC中的至少兩個鏈間雙硫鍵部分還原(例如可能的共軛位點的一般還原或在特定的共軛位點上還原)。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，ACC係以避免還原任何鏈內雙硫鍵的方式以還原劑還原。在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，ACC係以避免還原任何鏈內雙硫鍵及還原至少一個鏈間雙硫鍵的方式以還原劑還原。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，ACC亦可包括與ACC共軛之劑。在一些實施態樣中，經共軛之劑為治療劑。 在一些實施態樣中，劑(例如與可活化細胞激素構築體共軛之劑)為可檢測部分，諸如標記物或其他標誌物。例如，該劑為或包括經放射性標記之胺基酸、一或多種可以經標誌之抗生物素蛋白(例如含有可以光學或量熱方法檢測之螢光標誌物或酵素活性的鏈黴抗生物素蛋白)檢測之生物素基部分、一或多種放射性同位素或放射性核種、一或多種螢光標記物、一或多種酵素標記物、及/或一或多種化學發光劑。在一些實施態樣中，可檢測部分係以間隔子分子附接。 在一些實施態樣中，劑(例如與可活化細胞激素構築體共軛之細胞毒性劑)係使用碳水化合物部分、巰基、胺基或羧酸酯基團連結至ACC。 在與劑共軛之本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，劑(例如與可活化細胞激素構築體共軛之細胞毒性劑)係經由連結子及/或CM(亦稱為可切割序列)與ACC共軛。在一些實施態樣中，劑(例如與可活化細胞激素構築體共軛之細胞毒性劑)係與ACC中的半胱胺酸或離胺酸共軛。在一些實施態樣中，劑(例如與可活化細胞激素構築體共軛之細胞毒性劑)係與ACC之另一殘基(諸如那些本文所揭示之殘基)共軛。在一些實施態樣中，連結子為含有硫醇之連結子。在一些實施態樣中，連結子為不可切割連結子。可切割部分及連結子的一些非限制性實例提供於表1中。 那些熟習本技術的一般技能者認識到很多各種可能的部分可與本揭示之ACC偶合。(參考例如“Conjugate Vaccines”, Contributions to Microbiology and Immunology, J. M. Cruse和R. E. Lewis, Jr (eds), Carger Press, New York, (1989)，將其完整內容併入本文以供參考)。劑(例如細胞毒性劑)與ACC之有效共軛通常可藉由使劑結合至ACC，同時亦容許劑及ACC保留功能性的任何化學反應來實現。 在與劑共軛之ACC中任一者的一些實施態樣中，各種雙功能性蛋白偶合劑可用於劑與ACC共軛，包括而不限於N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫醇)丙酸酯(SPDP)、亞胺基四氫噻吩(IT)、醯亞胺酯之雙功能性衍生物(例如已二亞胺酸二甲酯(dimethyl adipimidate)HCL)、活性酯(例如辛二酸二琥珀醯亞胺酯(disuccinimidyl suberate))、醛(例如戊二醛)、雙疊氮基化合物(例如雙(對疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙重氮衍生物(例如雙-(對重氮苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯類(例如2,6-二異氰酸甲苯)和雙活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝苯)。例如，蓖麻毒蛋白免疫毒素可如Vitetta等人之Science 238: 1098(1987)所述方式製備。在一些實施態樣中，經碳14標記之1-異硫氰酸基苯甲基-3-甲基二伸乙三胺五乙酸(MX-DTPA)螯合劑可用於放射性核苷酸與ACC共軛(參見例如WO94/11026)。 適合的連結子及CM說明於文獻中。(參見例如 Ramakrishnan, S.等人之Cancer Res. 44:201-208(1984)，其說明使用MBS(M-順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯)。亦參見美國專利案第5,030,719號，其說明使用鹵化乙醯基醯肼衍生物以寡肽連結子的方式與ACC偶合。在一些實施態樣中，適合的連結子包括：(i) EDC (1-乙基-3-(3-二甲基胺基-丙基)碳二醯亞胺鹽酸鹽；(ii) SMPT(4-琥珀醯亞胺基氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)-甲苯(Pierce Chem. Co., Cat. (21558G)；(iii) SPDP(琥珀醯亞胺基-6 [3-(2-吡啶基二硫基)丙醯胺基]己酸酯(Pierce Chem. Co., Cat #21651G)；(iv)磺基-LC-SPDP (磺基琥珀醯亞胺基6 [3-(2-吡啶基二硫基)-丙醯胺]己酸酯(Pierce Chem. Co. Cat. #2165-G)；及(v)與EDC共軛之磺基-NHS(N-羥磺基-琥珀醯亞胺：Pierce Chem. Co., Cat. #24510)。額外的連結子包括但不限於SMCC、磺基-SMCC 、SPDB或磺基-SPDB。 上述之CM及連結子含有具有不同屬性之組分，因此導致具不同的生理化學性質之共軛體。例如，烷基甲酸酯之磺基-NHS酯比芳族甲酸酯之磺基-NHS酯更穩定。含有NHS-酯之連結子具有比磺基-NHS酯低的溶解性。再者，連結子SMPT含有空間位阻之雙硫鍵，且可形成具有穩定性增加的共軛體。雙硫鍵聯通常具有比其他鍵聯低的穩定性，因為雙硫鍵聯係於試管內切割，導致可用的共軛體較少。磺基-NHS可特別提高碳二醯亞胺偶合劑的穩定性。當碳二醯亞胺偶合劑(諸如EDC)與磺基-NHS結合使用時，其形成比單獨的碳二醯亞胺偶合反應對水解更具有抗性之酯。 在ACC中任一者之一些實施態樣中，劑可使用包括在ACC之胺基酸序列中的經修飾之胺基酸序列與ACC共軛。藉由在ACC之胺基酸序列內的特定位置上插入能夠共軛之胺基酸，可設計蛋白質構築體用於控制共軛劑(例如細胞毒性劑)之佈置及/或劑量。例如，ACC可經修飾，使得第一單體、第二單體、第三單體及/或第四單體的位置上包括半胱胺酸胺基酸殘基，以提供反應性硫醇基團及不負面地影響蛋白質折疊及/或組裝，且不改變抗原結合性質。在一些實施態樣中，ACC可經修飾，使得ACC之胺基酸序列內包括一或多種非天然胺基酸殘基以提供適合於共軛位點。在一些實施態樣中，ACC可經修飾，使得ACC之胺基酸序列內包括酵素可活化肽序列。 核酸 本文提供核酸，其包括編碼本文所述之ACC中任一者之第一單體構築體(或第一單體構築體的蛋白質部分)(例如本文所述之第一單體構築體中任一者)及第二單體構築體(或第二單體構築體的蛋白質部分)(例如本文所述之第二單體構築體中任一者)的序列。在一些實施態樣中，核酸對一起編碼第一單體構築體(或第一單體構築體的蛋白質部分)及第二單體構築體(或第二單體構築體的蛋白質部分)。在一些實施態樣中，編碼第一單體構築體(或第一單體構築體的蛋白質部分)之核酸序列與編碼第二單體構築體(或第二單體構築體的蛋白質部分)之核酸序列為至少70%之同一性(例如至少72%之同一性、至少74%之同一性、至少76%之同一性、至少78%之同一性、至少80%之同一性、至少82%之同一性、至少84%之同一性、至少86%之同一性、至少88%之同一性、至少90%之同一性、至少92%之同一性、至少94%之同一性、至少96%之同一性、至少98%之同一性、至少99%之同一性、或100%之同一性)。 在一些實施態樣中，編碼第一單體構築體的蛋白質部分之核酸編碼包含CP1和CM1部分之多肽。在一些實施態樣中，編碼第二單體構築體的蛋白質部分之核酸編碼包含CP2和CM2部分之多肽。在一些實施態樣中，核酸對一起編碼第一單體構築體的蛋白質部分及第二單體構築體的蛋白質部分，其中蛋白質部分接著分別與DD1及DD2部分共軛(在後續共軛步驟中)。 在一些實施態樣中，編碼第一單體構築體之核酸編碼包含DD1部分之多肽。在一些實施態樣中，編碼第二單體構築體之核酸編碼包含DD2部分之多肽。 載體 本文提供包括本文所述之核酸中任一者之載體及載體組。熟習本技術的一般技能者能夠選擇適合於製造本文所述之ACC中任一者之載體或載體組(例如表現載體)及使用載體或載體組表現本文所述之ACC中任一者。例如，在選擇載體或載體組時，必須考慮細胞，因為載體可能必須能夠整合至細胞染色體中及/或於其中複製。可用於生產ACC的示例性載體亦於下文說明。 如本文所使用之術語「載體」係指能夠在細胞(例如本文所述之細胞中任一者)中誘導重組蛋白(例如第一或第二單體)表現之多核苷酸。「載體」能夠遞送核酸及其片段至宿主細胞中，且包括調控序列(例如啟動子、增強子、多腺苷訊息(poly(A) signal))。外源性多核苷酸可插入表現載體中以便於表現。術語「載體」亦包括人工染色體、質體、反轉錄酶病毒和桿狀病毒載體。 用於構築包括本文所述之核酸中任一者及適合於轉形細胞(例如哺乳動物細胞)之適合的載體之方法為本技術中所熟知。參見例如Sambrook等人編輯之“Molecular Cloning: A Laboratory Manual,” 2 ndEd., Cold Spring Harbor Press, 1989及Ausubel等人編輯之“Current Protocols in Molecular Biology,” Current Protocols, 1993。 載體的非限制性實例包括質體、轉位子、黏質體和病毒載體(例如任何腺病毒載體(例如pSV或pCMV載體)、腺相關病毒(AAV)載體、慢病毒載體和反轉錄病毒載體)和任何Gateway®載體。載體可例如包括足以用於表現之順式作用要素；用於表現的其他要素可由宿主哺乳動物細胞或於試管內表現系統中供給。熟習的從業者能夠選擇適合的載體及哺乳動物細胞以製造本文所述之ACC中任一者。 在本文所述之ACC中任一者的一些實施態樣中，ACC可使用在真核或原核物種中的重組DNA技術及表現以生物合成方式製造。 在一些實施態樣中，載體包括編碼本文所述之ACC中任一者的第一單體及第二單體之核酸。在一些實施態樣中，載體為表現載體。 在一些實施態樣中，載體對一起包括編碼本文所述之ACC中任一者的第一單體及第二單體之核酸對。在一些實施態樣中，載體對為表現載體對。 細胞 本文亦提供包括本文所述之載體或載體組中任一者之宿主細胞，該載體或載體組包括本文所述之核酸中任一者。 本文所述之ACC中任一者可以任何細胞(例如哺乳動物細胞)生產。在一些實施態樣中，宿主細胞為哺乳動物細胞(例如人類細胞)、囓齒動物細胞(例如小鼠細胞、大鼠細胞、倉鼠細胞或天竺鼠細胞)或非人靈長類動物細胞。 引入核酸及載體(例如本文所述之載體中任一者或載體組中任一者)至細胞中之方法為本技術中已知。可用於引入核酸至細胞中之方法的非限制性實例包括：脂質轉染、轉染、磷酸鈣轉染、陽離子聚合物轉染、病毒轉導(例如腺病毒轉導、慢病毒轉導)、奈米粒子轉染和電穿孔。 在一些實施態樣中，引入步驟包括將載體(例如本文所述之載體或載體組中任一者)引入細胞中，該載體包括編碼組成本文所述之ACC中任一者的單體之核酸。 在本文所述之方法中任一者的一些實施態樣中，細胞可為真核細胞。如本文所使用之術語「真核細胞」係指具有獨特的經膜結合之細胞核的細胞。此等細胞可包括例如哺乳動物(例如囓齒動物、非人靈長類動物或人類)、昆蟲、真菌或植物細胞。在一些實施態樣中，真核細胞為酵母細胞，諸如釀酒酵母。在一些實施態樣中，真核細胞為高等真核生物，諸如哺乳動物、鳥類、植物或昆蟲細胞。哺乳動物細胞的非限制性實例包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞和人類胚胎腎細胞(例如HEK293細胞)。 在一些實施態樣中，細胞含有編碼本文所述之ACC中任一者的第一單體及第二單體之核酸。在一些實施態樣中，細胞含有一起編碼本文所述之ACC中任一者的第一單體及第二單體之核酸對。 生產可活化細胞激素構築體之方法 本文提供生產本文所述之ACC中任一者之方法，其包括：(a)將本文所述之重組宿主細胞中任一者在液體培養基中在足以生產ACC之條件下培養；及(b)自宿主細胞及/或液體培養基回收ACC。 培養細胞之方法為本技術中所熟知。細胞可在有利於細胞增殖、細胞分化及細胞生長的條件下維持於試管內。例如，細胞可藉由將細胞(例如本文所述之細胞中任一者)與包括足以支持細胞生存力及生長的必需生長因子和補充物之細胞培養基接觸來培養。 在本文所述之方法中任一者的一些實施態樣中，方法另包括單離回收之ACC。單離方法的非限制性實例包括：硫酸銨沉澱、聚乙二醇沉澱、粒徑排阻層析法、配體親和性層析法、離子交換層析法(例如陰離子或陽離子)和疏水性相互作用層析法。 在一些實施態樣中，細胞可生產包括CP1、CM1、PM2和CM3之第一單體構築體的蛋白質部分及包括CP2和CM2及視需要的PM2和CM4之第二單體構築體的蛋白質部分，且接著蛋白質部分隨後分別與DD1及DD2部分共軛。 本文所述之組成物及方法可涉及使用非還原或部分還原條件，其容許雙硫鍵在二聚合結構域之間形成，以形成及維持ACC之二聚合作用。 在本文所述之方法中任一者的一些實施態樣中，該方法另包括將單離之ACC調配成醫藥組成物。各種調配物為本技術中已知且於本文中說明。經單離之本文所述之ACC中任一者可經調配而用於任何投予途徑(例如靜脈內、腫瘤內、皮下、皮內、經口(例如吸入)、經皮(例如局部)、經黏膜或肌內)。 本文亦提供以本文所述之分法中任一者生產之ACC。亦提供包括以本文所述之方法中任一者生產之ACC中任一者之組成物(例如醫藥組成物)。本文亦提供包括至少一個劑量的本文所述之組成物(例如醫藥組成物)中任一者之套組。 治療方法 本文提供治療個體的疾病(例如癌症(例如本文所述之癌症中任一者))之方法，其包括對個體投予治療有效量的本文所述之ACC中任一者。 如本文所使用之術語「個體」係指任何哺乳動物。在一些實施態樣中，個體為貓科動物(例如貓)、犬科動物(例如狗)、馬科動物(例如馬)、兔子、豬、囓齒動物(例如小鼠、大鼠、倉鼠或天竺鼠)、非人靈長類動物(例如類人猴(例如猴子(例如狒狒、狨猴)或猿類(例如黑猩猩、大猩猩、紅毛猩猩或長臂猿))或人類。在一些實施態樣中，個體為人類。 在一些實施態樣中，個體已於先前鑑定或診斷為患有疾病(例如癌症(例如本文所述之癌症中任一者))。 如本文所使用之術語「治療」包括降低個體(例如本文所述之個體中任一者)的疾病(例如癌症(例如本文所述之癌症中任一者))之一或多種(例如1、2、3、4或5種)症狀或體徵的嚴重性、頻率或數量。在一些實施態樣中，在疾病為癌症的情況下，治療導致在患有癌症的個體中減少癌症生長、抑制癌症進展、抑制癌症轉移或降低癌症復發的風險。 在本文所述之方法中任一者的一些實施態樣中，疾病為癌症。本文亦提供治療有其需要的個體(例如本文所述或本技術中已知的示例性個體中任一者)之方法，其包括對個體投予治療有效量的本文所述之ACC中任一者或本文所述之組成物(例如醫藥組成物)中任一者。 在該等方法的一些實施態樣中，個體已經鑑定或診斷為患有癌症。癌症的非限制性實例包括：實性腫瘤、血液腫瘤、肉瘤、骨肉瘤、神經膠母細胞瘤、神經胚細胞瘤、黑色素瘤、橫紋肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B細胞腫瘤、多發性骨髓瘤、淋巴瘤(例如B細胞淋巴瘤、B細胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤)、白血病(例如毛細胞白血病、慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴球性白血病(ALL))、骨髓發育不良症候群(MDS)、卡波西氏肉瘤、視網膜胚細胞瘤、胃癌、尿道上皮癌、肺癌、腎細胞癌、胃與食管癌、胰臟癌、前列腺癌、腦癌、大腸癌、骨癌、肺癌、乳癌、大腸直腸癌、卵巢癌、鼻咽腺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、鱗狀細胞頭與頸癌、子宮內膜癌、膀胱癌、子宮頸癌、肝癌和肝細胞癌。在一些實施態樣中，癌症為淋巴瘤。在一些實施態樣中，淋巴瘤為伯基特氏淋巴瘤。在一些態樣中，個體已經鑑定或診斷為患有家族性癌症候群，諸如李-佛美尼症候群(Li Fraumeni Syndrome)、家族性乳癌-卵巢癌(BRCA1或BRAC2突變)症候群及其他等。本文所揭示之方法亦可用於治療非實性癌。示例性實性腫瘤包括各種器官系統的惡性腫瘤(例如肉瘤、腺癌和癌)，諸如肺、乳房、淋巴、胃腸道(例如大腸)和生殖泌尿道(例如腎、尿道上皮或睪丸腫瘤)、咽喉、前列腺和卵巢的那些惡性腫瘤。示例性腺癌包括大腸直腸癌、腎細胞癌、肝癌、非小細胞肺癌和小腸癌。 由國家癌症研究所所述之示例性癌症包括：成人急性淋巴母細胞白血病；幼童急性淋巴母細胞白血病；成人急性髓性白血病；腎上腺皮質腺癌；幼童腎上腺皮質腺癌；AIDS相關淋巴瘤；AIDS相關惡性腫瘤；肛門癌；幼童小腦星狀細胞瘤；幼童大腦星狀細胞瘤；肝外膽管癌；膀胱癌；幼童膀胱癌；骨癌、骨肉瘤/惡性纖維組織細胞瘤；幼童腦幹神經膠瘤；成人腦腫瘤；幼童腦腫瘤，腦幹神經膠瘤；幼童腦腫瘤，小腦星狀細胞瘤；幼童腦腫瘤，大腦星狀細胞瘤/惡性神經膠瘤；幼童腦腫瘤，室管膜瘤；幼童腦腫瘤，神經管胚細胞瘤；幼童腦腫瘤，幕上原始神經外胚葉腫瘤；幼童腦腫瘤，視覺通路和下視丘神經膠瘤；幼童(其他)腦腫瘤；乳癌；乳癌與妊娠；幼童乳癌；男性乳癌；幼童支氣管腺瘤/類癌；幼童類癌瘤；腸胃類癌瘤；腎上腺皮質腺癌；胰島細胞癌；未知的原發性癌；原發性癌中樞神經系統淋巴瘤；幼童小腦星狀細胞瘤；幼童大腦星狀細胞瘤/惡性神經膠瘤；子宮頸癌；幼童癌；慢性淋巴球性白血病；慢性骨髓性白血病；慢性骨髓增殖性疾患；腱鞘之亮細胞肉瘤；大腸癌；幼童大腸直腸癌；皮膚T細胞淋巴瘤；子宮內膜癌；幼童室管膜瘤；卵巢上皮癌；食管癌；幼童食管癌；尤文氏腫瘤家族；幼童顱外生殖細胞腫瘤；性腺外生殖細胞腫瘤；肝外膽管癌；眼癌，眼內黑色素瘤；眼癌，視網膜胚細胞瘤；膽囊癌；胃(Gastric)(胃(Stomach))癌；幼童胃(Gastric)(胃(Stomach))癌；腸胃類癌瘤；幼童顱外生殖細胞腫瘤；性腺外生殖細胞腫瘤；卵巢生殖細胞腫瘤；妊娠性滋養細胞腫瘤；幼童腦幹神經膠瘤；幼童視覺路徑和下視丘神經膠瘤；毛細胞白血病；頭與頸癌；成人(原發性)肝細胞(肝)癌；幼童(原發性)肝細胞(肝)癌；成人霍奇金氏淋巴瘤；幼童霍奇金氏淋巴瘤；妊娠期霍奇金氏淋巴瘤；咽下癌；幼童下視丘和視覺路徑神經膠瘤；眼內黑色素瘤；胰島細胞癌(內分泌胰腺)；卡波西氏肉瘤；腎癌；喉癌；幼童喉癌；成人急性淋巴母細胞白血病；幼童急性淋巴母細胞白血病；成人急性骨髓性白血病；幼童急性骨髓性白血病；慢性淋巴球性白血病；慢性骨髓性白血病；毛細胞白血病；唇與口腔癌；成人(原發性)肝癌；幼童(原發性)肝癌；非小細胞肺癌；小細胞肺癌；成人急性淋巴母細胞白血病；幼童急性淋巴母細胞白血病；慢性淋巴球性白血病；AIDS相關淋巴瘤；(原發性)中樞神經系統淋巴瘤；皮膚T細胞淋巴瘤；成人霍奇金氏淋巴瘤；幼童霍奇金氏淋巴瘤；妊娠期霍奇金氏淋巴瘤；成人非霍奇金氏淋巴瘤；幼童非霍奇金氏淋巴瘤；妊娠期非霍奇金氏淋巴瘤；原發性中樞神經系統淋巴瘤；瓦登斯特隆巨球蛋白血症；男性乳癌；成人惡性中皮瘤；幼童惡性中皮瘤；惡性胸腺瘤；幼童神經管胚細胞瘤；黑色素瘤；眼內黑色素瘤；莫克爾氏細胞癌；惡性中皮瘤；隱匿性原發性、轉移性鱗狀頸癌；幼童多發性內分泌腫瘤症候群；多發性骨髓瘤/漿細胞腫瘤；蕈狀肉芽腫；骨髓發育不良症候群；慢性骨髓性白血病；幼童急性骨髓性白血病；多發性骨髓瘤；慢性骨髓增殖性疾患；鼻腔和鼻竇癌症；鼻咽癌；幼童鼻咽癌；神經胚細胞瘤；成人非霍奇金氏淋巴瘤；幼童非霍奇金氏淋巴瘤；妊娠期非霍奇金氏淋巴瘤；非小細胞肺癌；幼童口腔癌；口腔與唇癌；口咽癌；骨的骨肉瘤/惡性纖維組織細胞瘤；幼童卵巢癌；卵巢上皮癌；卵巢生殖細胞腫瘤；卵巢低惡性潛在腫瘤；胰臟癌；幼童胰臟癌；胰島細胞胰臟癌；副鼻竇與鼻腔癌；副甲狀腺癌；陰莖癌；嗜鉻細胞瘤；幼童松果體與幕上原始神經外胚葉腫瘤；腦下垂體腫瘤；漿細胞腫瘤/多發性骨髓瘤；胸膜肺胚細胞瘤；妊娠與乳癌；妊娠與霍奇金氏淋巴瘤；妊娠與非霍奇金氏淋巴瘤；原發性中樞神經系統淋巴瘤；成人原發性肝癌；幼童原發性肝癌；前列腺癌；直腸癌；腎細胞(腎)癌；幼童腎細胞(腎)癌；腎盂和輸尿管移行細胞癌；視網膜胚細胞瘤；幼童橫紋肌肉瘤；唾液腺癌；幼童唾液腺癌；肉瘤，尤文氏腫瘤家族；卡波西氏肉瘤；骨的肉瘤(骨肉瘤)/惡性纖維組織細胞瘤；幼童橫紋肌肉瘤；成人軟組織肉瘤；幼童軟組織肉瘤；塞扎萊(Sezary)症候群；皮膚癌；幼童皮膚癌；皮膚癌(黑色素瘤)；莫克爾氏細胞皮膚癌；小細胞肺癌；小腸癌；成人軟組織肉瘤；幼童軟組織肉瘤；隱匿性原發性、轉移性鱗狀頸癌；胃(Stomach)(胃(Gastric))癌；幼童胃(Stomach)(胃(Gastric))癌；幼童幕上原始神經外胚葉腫瘤；皮膚T細胞淋巴瘤；睪丸癌；幼童胸腺瘤；惡性胸腺瘤；甲狀腺癌；幼童甲狀腺癌；腎盂和輸尿管移行細胞癌；妊娠性滋養細胞腫瘤；未知的幼童原發性癌位點；幼童的未知癌；輸尿管和腎盂移行細胞癌；尿道癌；子宮肉瘤；陰道癌；幼童視覺通路和下視丘神經膠瘤；陰門癌；瓦登斯特隆巨球蛋白血症；及威爾姆斯瘤。 其他示例性癌症包括彌漫型大B細胞淋巴瘤(DLBCL)和套膜細胞淋巴瘤(MCL)。 前述癌症的轉移亦可以依照本文所述之方法治療或預防。 在一些實施態樣中，該等方法可導致個體的癌症之一或多種症狀的數量、嚴重性或頻率降低(例如與個體在治療前的癌症之一或多種症狀的數量、嚴重性或頻率相比)。 在本文所述之方法中任一者的一些實施態樣中，該方法另包括對個體投予額外的治療劑(例如表2中列出的治療劑中之一或多者)。 表2. 額外的治療劑
抗體商品名(抗體名稱) 標靶
Raptiva™ (依法利珠單抗(efalizumab)) CD11a
Arzerra™ (奧法木單抗(ofatumumab)) CD20
Bexxar™ (托西莫單抗(tositumomab)) CD20
Gazyva™ (奧比努單抗(obinutuzumab)) CD20
Ocrevus™ (歐瑞珠單抗(ocrelizumab)) CD20
Rituxan™ (利妥昔單抗(rituximab)) CD20
Zevalin™ (替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)) CD20
Adcetris™ (布倫妥昔單抗維多汀(brentuximab vedotin) CD30
Myelotarg™ (吉妥單抗(gemtuzumab)) CD33
Mylotarg™ (吉妥單抗奧唑米星(ozogamicin)) CD33
(凡達斯單抗(vadastuximab))  CD33
(凡達斯單抗塔利林(talirine)) CD33
Campath™ (阿崙單抗(alemtuzumab)) CD52
Lemtrada™ (阿崙單抗) CD52
Tactress™ (坦土維單抗(tamtuvetmab)) CD52
Soliris™ (艾庫珠單抗(eculizumab)) 補體C5
Ultomiris™ (拉武珠單抗(ravulizumab)) 補體C5
(奧崙珠單抗(olendalizumab)) 補體C5
Yervoy TM(易普利木單抗(ipilimumab)) CTLA-4
(曲美木單抗(tremelimumab)) CTLA-4
Orencia™ (阿巴西普(abatacept)) CTLA-4
Hu5c8 CD40L
(來托珠單抗(letolizumab)) CD40L
 Rexomun™ (厄妥美索單抗(ertumaxomab)) CD3/Her2
Erbitux™ (西妥昔單抗(cetuximab)) EGFR
Portrazza™ (奈昔木單抗(necitumumab)) EGFR
Vectibix™ (帕尼單抗(panitumumab)) EGFR
CH806 EGFR
(去帕妥珠單抗(depatuxizumab)) EGFR
(去帕妥珠單抗馬福多汀(mafodotin)) EGFR
(氟妥昔單抗(futuximab)：莫多妥昔單抗(modotuximab)) EGFR
ICR62 (伊姆加土珠單抗(imgatuzumab)) EGFR
(拉普妥昔單抗(laprituximab))  EGFR
(洛沙妥珠單抗(losatuxizumab)) EGFR
(洛沙妥珠單抗維多汀) EGFR
mAb 528 EGFR
(馬妥珠單抗(matuzumab)) EGFR
(尼妥珠單抗(nimotuzumab)) EGFR
(托莫妥昔單抗(tomuzotuximab)) EGFR
(扎魯木單抗(zalutumumab)) EGFR
MDX-447 EGFR/CD64
(阿替木單抗(adecatumumab)) EpCAM
Panorex™ (依瑞科洛單抗(edrecolomab)) EpCAM
Vicinium™ EpCAM
Synagis™ (帕利珠單抗(palivizumab)) RSV之F蛋白質
ReoPro™ (阿昔單抗(abiciximab)) 糖蛋白受體 IIb/IIIa
Herceptin™ (曲妥珠單抗(trastuzumab)) Her2
Herceptin™ Hylecta (曲妥珠單抗(trastuzumab)；玻糖醛酸酶) Her2
(曲妥珠單抗德魯替康(deruxtecan)) Her2
(赫妥珠單抗佛多汀(hertuzumab verdotin)) Her2
Kadcyla™ (曲妥珠單抗艾姆坦辛(emtansine)) Her2
(瑪格妥昔單抗(margetuximab)) Her2
(替米古妥珠單抗(timigutuzumab)) Her2
Xolair™ (奧馬珠單抗(omalizumab)) IgE
(利格珠單抗(ligelizumab)) IgE
(菲吉木單抗(figitumumab)) IGF1R
(泰普洛單抗(teprotumumab)) IGF1R
Simulect™ (巴利昔單抗(basiliximab)) IL2R
Zenapax™ (達珠單抗(daclizumab)) IL2R
Zinbryta™ (達珠單抗) IL2R
Actemra™ (托珠單抗(tocilizumab)) IL-6受體
Kevzara™ (沙魯單抗(sarilumab)) IL-6受體
(伏巴利珠單抗(vobarilizumab)) IL-6受體
Stelara™ (優特克單抗(ustekinumab)) IL-12/IL-23
Tysabri™ (那他珠單抗(natalizumab)) 整合素α4
(阿布里單抗(abrilumab)) 整合素α4
   鋸齒狀1或鋸齒狀2
(法西單抗(fasinumab)) NGF
(富蘭單抗(fulranumab)) NGF
(他尼珠單抗(tanezumab)) NGF
   凹痕，例如凹痕1
匹地珠單抗(Pidilizumab) δ-1 (PD-1路徑抑制劑)
Opdivo® (納武單抗(nivolumab)) PD1
Keytruda® (帕博利珠單抗) PD1
Libtayo® (西普利單抗(cemiplimab)) PD1
BGB-A317 (替雷利珠單抗(tislelizumab)) PD1
PDR001 (斯巴達珠單抗(spartalizumab)) PD1
JNJ-63723283 (西曲利單抗(cetrelimab)) PD1
TSR042 (多斯利單抗(dostarlimab)) PD1
AGEN2034 (巴利單抗(balstilimab)) PD1
JS001 (特瑞普利單抗(toripalimab)) PD1
IOBI308 (信迪利單抗(sintilimab)) PD1
BCD100 (普羅格單抗(prolgolimab)) PD1
CBT-501 (吉諾單抗(genolimzumab)) PD1
ABBV181 (布加利單抗(budigalimab)) PD1
AK105 PD1
BI-754091 PD1
INCSHR-1210 PD1
MEDI0680 PD1
MGA012 PD1
SHR-1210 PD1
Imfinzi™ (度伐單抗(durvalumab)) PD-L1
Tecentriq® (阿特珠單抗(atezolizumab)) PD-L1
Bavencio® (阿維單抗(avelumab)) PD-L1
KN035 (恩弗利單抗(envafolimab)) PD-L1
BMS936559 (MDX1105) PD-L1
BGBA 333 PD-L1
FAZ053 PD-L1
LY-3300054 PD-L1
SH-1316 PD-L1
AMP-224 PD-L2
(巴維妥昔單抗(bavituximab)) 磷脂醯基絲胺酸
huJ591 PSMA
RAV12 RAAG12
Prolia™ (狄諾蘇單抗(denosumab)) RANKL
GC1008 (菲索木單抗(fresolimumab)) TGFβ
Cimzia™ (賽妥珠單抗培勾(Certolizumab Pegol)) TNFα
Remicade™ (英夫利昔單抗(infliximab)) TNFα
Humira™ (阿達木單抗(adalimumab)) TNFα
Simponi™ (戈利木單抗(golimumab)) TNFα
Enbrel™ (依那西普(etanercept)) TNF-R
(馬帕木單抗(mapatumumab)) TRAIL-R1
Avastin™ (貝伐單抗(bevacizumab)) VEGF
Lucentis™ (蘭比珠單抗(ranibizumab)) VEGF
(溴魯西單抗(brolucizumab)) VEGF
(凡努西珠單抗(vanucizumab)) VEGF
組成物/套組 本文亦提供包括本文所述之ACC中任一者及一或多種(例如1、2、3、4或5)醫藥上可接受的載劑(例如本文所述之醫藥上可接受的載劑中任一者)、稀釋劑或賦形劑之組成物(例如醫藥組成物)。 在一些實施態樣中，包括本文所述之ACC中任一者的組成物(例如醫藥組成物)可配置在無菌小瓶或預裝填之注射筒中。 在一些實施態樣中，包括本文所述之ACC中任一者的組成物(例如醫藥組成物)可經調配而用於不同的投予途徑(例如靜脈內、皮下、肌內、腹膜內或腫瘤內)。 在一些實施態樣中，本文所述之醫藥組成物中任一者可包括一或多種緩衝劑(例如中性緩衝鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)、胺基酸(例如甘胺酸)、一或多種碳水化合物(例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖、聚葡萄醣或甘露醇)、一或多種抗氧化劑、一種或多種螯合劑(例如EDTA或麩胱甘肽)、一或多種防腐劑及/或醫藥上可接受的載劑(例如制菌水、PBS或鹽水)。 如本文所使用之短語「醫藥上可接受的載劑」係指與醫藥投予可相容的任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗菌劑、抗微生物劑、等滲劑和吸收延遲劑及類似者。適合的載劑包括但不限於：水、鹽水、林格氏液、右旋糖溶液和約5%之人類血清白蛋白。 在本文所述之醫藥組成物中任一者的一些實施態樣中，本文所述之ACC中任一者係與免於自身體快速消除之載劑一起製備，例如持續和控制釋放調配物，包括植入物和微囊化遞送系統。可使用可生物降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。用於製備此等醫藥組成物及調配物之方法為那些熟習本技術領域者顯而易知的。 本文亦提供包括本文所述之ACC中任一者、包括本文所述之ACC中任一者之組成物中任一者或包括本文所述之ACC中任一者之醫藥組成物中任一者之套組。亦提供包括除了本文所述之ACC以外，亦包括一或多種選自表2的第二治療劑之套組。第二治療劑可以與ACC分開的劑量投予形式提供。另一選擇地，第二治療劑可與ACC一起調配。在一些實施態樣中，套組包含(1)ACC，其包含選自由SEQ ID NO：129和SEQ ID NO：347至356所組成之群組的胺基酸序列，及(2)選自表2的第二治療劑。 本文所述之套組中任一者可包括使用本文所述之組成物(例如醫藥組成物)中任一者及/或ACC中任一者之用法說明。在一些實施態樣中，套組可包括執行本文所述之方法中任一者之用法說明。在一些實施態樣中，套組可包括至少一個劑量的本文所述之組成物(例如醫藥組成物)中任一者。在一些實施態樣中，套組可提供用於投予本文所述之醫藥組成物中任一者之注射筒。 本揭示包括下列的非限制性態樣： 1. 一種可活化細胞激素構築體(ACC)，其包括第一單體構築體及第二單體構築體，其中： (a)第一單體構築體包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、第一可切割部分(CM1)和第一二聚合結構域(DD1)，其中CM1係位於CP1與DD1之間；及 (b)第二單體構築體包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)，其中CM2係位於CP2與DD2之間；或 (a)第一單體構築體包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、第一二聚合結構域(DD1)，及 (b)第二單體構築體包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)、可切割部分(CM)和第二二聚合結構域(DD2)，其中CM係位於CP2與DD2之間，其中CM作用為蛋白酶受質；或 (a)第一單體構築體包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、可切割部分(CM)和第一二聚合結構域(DD1)，其中CM係位於CP1與DD1之間，及 (b)第二單體構築體包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)和第二二聚合結構域(DD2)，其中CM作用為蛋白酶受質；或 (a)第一單體構築體包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)和第一二聚合結構域(DD1)，及 (b)第二單體構築體包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)和第二二聚合結構域(DD2)，其中CP1、CP2或CP1及CP2兩者包括作用為蛋白酶受質之胺基酸序列； 另其中： (c)DD1及DD2彼此結合，由此形成第一單體構築體及第二單體構築體之二聚物；及 (d)ACC係以具有與至少一種CP1及/或CP2活性的對照水平相比，至少一種CP1及/或CP2活性降低的水平為特徵。 2. 態樣1之ACC，其中第一單體構築體包含第一多肽，該第一多肽包含CP1、CM1和DD1。 3. 態樣1或2中任一者或組合之ACC，其中第二單體構築體包含第二多肽，該第二多肽包含CP2、CM2和DD2。 4. 態樣1至3中任一者或組合之ACC，其中DD1及DD2為一對選自由下列所組成之群組：一對Fc結構域、來自人類IL-15受體之α鏈(IL15Rα)的壽司結構域及可溶性IL-15；芽孢桿菌核醣核酸酶及芽孢桿菌核醣核酸酶抑制蛋白；PKA及AKAP；基於突變之RNase I片段的接頭/對接標籤模組；表位及sdAb；表位及scFv；以及基於蛋白質突觸蛋白、突觸結合蛋白質、小突觸囊泡蛋白與SNAP25之相互作用的SNARE模組、抗原結合結構域及表位。 5. 態樣4之ACC，其中DD1及DD2為一對Fc結構域。 6. 態樣5之ACC，其中一對Fc結構域為一對人類Fc結構域。 7. 態樣6之ACC，其中人類Fc結構域為人類IgG1 Fc結構域、人類IgG2 Fc結構域、人類IgG3 Fc結構域或人類IgG4 Fc結構域。 8. 態樣7之ACC，其中人類Fc結構域為人類IgG4 Fc結構域。 9. 態樣8之ACC，其中人類Fc結構域包含與SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：315或SEQ ID NO：316至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、或99%之同一性的序列。 10. 態樣9之ACC，其中人類Fc結構域包含與SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：315或SEQ ID NO：316至少90%之同一性的序列。 11. 態樣10之ACC，其中人類Fc結構域包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：315或SEQ ID NO：316。 12. 態樣1至3及5至11中任一者或組合之ACC，其中DD1及DD2為相同的。 13. 態樣4之ACC，其中DD1包含抗原結合結構域及DD2包含相應表位。 14. 態樣13之ACC，其中抗原結合結構域為抗His標籤抗原結合結構域及其中DD2包含His標籤。 15. 態樣13之ACC，其中抗原結合結構域為單鏈可變片段(scFv)。 16. 態樣13之ACC，其中抗原結合結構域為單結構域抗體(sdAb)。 17. 態樣1之ACC，其中DD1及DD2中至少一者包含選自由非多肽聚合物和小分子所組成之群組的二聚合結構域取代物。 18. 態樣17之ACC，其中DD1及DD2包含彼此共價結合之非多肽聚合物。 19. 態樣18之ACC，其中非多肽聚合物為含硫之聚乙二醇，且其中DD1及DD2彼此經由一或多個雙硫鍵共價結合。 20. 態樣17之ACC，其中DD1及DD2中至少一者包含小分子。 21. 態樣20之ACC，其中小分子為生物素。 22. 態樣20之ACC，其中DD1包含生物素及DD2包含抗生物素蛋白。 23. 態樣1至22中任一者或組合之ACC，其中CP1及/或CP2個別為介白素。 24. 態樣1至23中任一者或組合之ACC，其中CP1及CP2為相同的。 25. 態樣1至23中任一者或組合之ACC，其中CP1及CP2為不同的。 26. 態樣1至23中任一者或組合之ACC，其中CP1及/或CP2個別地選自由下列所組成之群組：IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-18、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13、IL-15、IL-3、IL-5、IL-6、IL-11、IL-12、IL-10、IL-20、 IL-21、IL-14、IL-15、IL-16和IL-17。 27. 態樣26之ACC，其中CP1及CP2係選自由下列所組成之群組：IL-2、IL-10、IL-12、IL-15和IL-21。 28. 態樣26之ACC，其中CP1及CP2為不同的介白素。 29. 態樣26之ACC，其中CP1及CP2為相同的介白素。 30. 態樣26之ACC，其中CP1或CP2為介白素。 31. 態樣26至30中任一者或組合之ACC，其中介白素為人類野生型成熟介白素。 32. 態樣26至31中任一者或組合之ACC，其中介白素為IL-2、IL-10、IL-12或IL-15。 33. 態樣32之ACC，其中介白素為IL-2、IL-12和IL-15。 34. 態樣33之ACC，其中介白素為IL-2和IL-15中至少一者。 35. 態樣34之ACC，其中介白素為IL-15。 36. 態樣35之ACC，其中CP1及/或CP2包含與選自由SEQ ID NO：129、347和348所組成之群組的序列至少80%之同一性的序列。 37. 態樣36之ACC，其中CP1及/或CP2包含與選自由SEQ ID NO：129、347和348所組成之群組的序列至少90%之同一性的序列。 38. 態樣37之ACC，其中CP1及/或CP2包含SEQ ID NO：347之序列。 39. 態樣32之ACC，其中介白素為IL-15。 40. 態樣38之ACC，其中介白素具有選自由SEQ ID NO：347和SEQ ID NO：348所組成之群組的序列。 41. 態樣1至40中任一者之ACC，其中CP1及/或CP2包含介白素結構域。 42. 態樣41之ACC，其中CP1及CP2各自包含介白素。 43. 態樣42之ACC，其中介白素係選自由下列所組成之群組：IL-1α、IL-1β、IL-1RA、IL-18、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-13、IL-15、IL-3、IL-5、IL-6、IL-11、IL-12、IL-10、IL-20、IL-14、IL-16和IL-17。 44. 態樣1至43中任一者或組合之ACC，其中CM1及/或CM2包含總共約3胺基酸至約15胺基酸。 45. 態樣1至44中任一者或組合之ACC，其中CM1及CM2包含對不同的蛋白酶之受質。 46. 態樣1至44中任一者或組合之ACC，其中CM1及CM2包含對相同的蛋白酶之受質。 47. 態樣1至46中任一者或組合之ACC，其中蛋白酶係選自由下列所組成之群組：ADAM8、ADAM9、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADAMDEC1、ADAMTS1、ADAMTS4、ADAMTS5、BACE、腎素、組織蛋白酶D、組織蛋白酶E、凋亡蛋白酶1、凋亡蛋白酶2、凋亡蛋白酶3、凋亡蛋白酶4、凋亡蛋白酶5、凋亡蛋白酶6、凋亡蛋白酶7、凋亡蛋白酶8、凋亡蛋白酶9、凋亡蛋白酶10、凋亡蛋白酶14、組織蛋白酶B、組織蛋白酶C、組織蛋白酶K、組織蛋白酶L、組織蛋白酶S、組織蛋白酶V/L2、組織蛋白酶X/Z/P、克魯茲蛋白酶、豆莢蛋白酶、Otubain-2、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK10、KLK11、KLK13、KLK14、穿膜肽酶、腦啡肽酶、PSMA、BMP-1、MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-19、MMP-20、MMP-23、MMP-24、MMP-26、MMP-27、活化蛋白C、組織蛋白酶A、組織蛋白酶G、凝乳酶、FVIIa、FIXa、FXa、FXIa、FXIIa、彈性蛋白酶、顆粒酶B、胍基苯甲酸酯酶、HtrA1、人類嗜中性球解離酶、乳鐵蛋白、胰蛋白酶型絲胺酸肽酶、NS3/4A、PACE4、胞漿素、PSA、tPA、凝血酶、中性蛋白酶、uPA、DESC1、DPP-4、FAP、穿膜絲胺酸蛋白酶、馬曲肽酶-2、MT-SP1/馬曲肽酶、TMPRSS2、TMPRSS3和TMPRSS4。 48. 態樣47之ACC，其中蛋白酶係選自由下列所組成之群組：uPA、豆莢蛋白酶、MT-SP1、ADAM17、BMP-1、TMPRSS3、TMPRSS4、MMP-2、MMP-9、MMP-12、MMP-13和MMP-14。 49. 態樣47之ACC，其中CM1及/或CM2包含選自由下列所組成之群組的序列：LSGRSDNH(SEQ ID NO：5)、TGRGPSWV(SEQ ID NO：6)、PLTGRSGG(SEQ ID NO：7)、TARGPSFK(SEQ ID NO：8)、NTLSGRSENHSG(SEQ ID NO：9)、NTLSGRSGNHGS(SEQ ID NO：10)、TSTSGRSANPRG(SEQ ID NO：11)、TSGRSANP(SEQ ID NO：12)、VHMPLGFLGP(SEQ ID NO：13)、AVGLLAPP (SEQ ID NO：14)、AQNLLGMV(SEQ ID NO：15)、 QNQALRMA(SEQ ID NO：16)、LAAPLGLL(SEQ ID NO：17)、STFPFGMF(SEQ ID NO：18)、ISSGLLSS(SEQ ID NO：19)、PAGLWLDP(SEQ ID NO：20)、VAGRSMRP (SEQ ID NO：21)、VVPEGRRS(SEQ ID NO：22)、ILPRSPAF(SEQ ID NO：23)、MVLGRSLL(SEQ ID NO：24)、QGRAITFI(SEQ ID NO：25)、SPRSIMLA(SEQ ID NO：26)、SMLRSMPL(SEQ ID NO：27)、 ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：28)、 AVGLLAPPGGLSGRSDNH(SEQ ID NO：29)、 ISSGLLSSGGSGGSLSGRSDNH(SEQ ID NO：30)、 LSGRSGNH(SEQ ID NO：31)、SGRSANPRG(SEQ ID NO：32)、LSGRSDDH(SEQ ID NO：33)、LSGRSDIH(SEQ ID NO：34)、LSGRSDQH(SEQ ID NO：35)、 LSGRSDTH(SEQ ID NO：36)、LSGRSDYH(SEQ ID NO：37)、LSGRSDNP(SEQ ID NO：38)、LSGRSANP(SEQ ID NO：39)、LSGRSANI(SEQ ID NO：40)、LSGRSDNI(SEQ ID NO：41)、MIAPVAYR(SEQ ID NO：42)、RPSPMWAY (SEQ ID NO：43)、WATPRPMR(SEQ ID NO：44)、 FRLLDWQW(SEQ ID NO：45)、ISSGL(SEQ ID NO：46)、ISSGLLS(SEQ ID NO：47)、ISSGLL(SEQ ID NO：48)、ISSGLLSGRSANPRG(SEQ ID NO：49)、 AVGLLAPPTSGRSANPRG(SEQ ID NO：50)、 AVGLLAPPSGRSANPRG(SEQ ID NO：51)、 ISSGLLSGRSDDH(SEQ ID NO：52)、ISSGLLSGRSDIH (SEQ ID NO：53)、ISSGLLSGRSDQH(SEQ ID NO：54)、ISSGLLSGRSDTH(SEQ ID NO：55)、ISSGLLSGRSDYH (SEQ ID NO：56)、ISSGLLSGRSDNP(SEQ ID NO：57)、ISSGLLSGRSANP(SEQ ID NO：58)、ISSGLLSGRSANI (SEQ ID NO：59)、AVGLLAPPGGLSGRSDDH(SEQ ID NO：60)、AVGLLAPPGGLSGRSDIH(SEQ ID NO：61)、AVGLLAPPGGLSGRSDQH(SEQ ID NO：62)、 AVGLLAPPGGLSGRSDTH(SEQ ID NO：63)、 AVGLLAPPGGLSGRSDYH(SEQ ID NO：64)、 AVGLLAPPGGLSGRSDNP(SEQ ID NO：65)、 AVGLLAPPGGLSGRSANP(SEQ ID NO：66)、 AVGLLAPPGGLSGRSANI(SEQ ID NO：67)、 ISSGLLSGRSDNI(SEQ ID NO：68)、 AVGLLAPPGGLSGRSDNI(SEQ ID NO：69)、 GLSGRSDNHGGAVGLLAPP(SEQ ID NO：70)、 GLSGRSDNHGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：71)、 LSGRSDNHGGVHMPLGFLGP(SEQ ID NO：72)、ISSGLSS (SEQ ID NO：73)、PVGYTSSL(SEQ ID NO：74)、DWLYWPGI (SEQ ID NO：75)、LKAAPRWA(SEQ ID NO：76)、GPSHLVLT(SEQ ID NO：77)、LPGGLSPW(SEQ ID NO：78)、MGLFSEAG(SEQ ID NO：79)、 SPLPLRVP(SEQ ID NO：80)、RMHLRSLG(SEQ ID NO：81)、LLAPSHRA(SEQ ID NO：82)、GPRSFGL(SEQ ID NO：83)、GPRSFG(SEQ ID NO：84)、SARGPSRW(SEQ ID NO：85)、GGWHTGRN(SEQ ID NO：86)、HTGRSGAL (SEQ ID NO：87)、AARGPAIH(SEQ ID NO：88)、 RGPAFNPM(SEQ ID NO：89)、SSRGPAYL(SEQ ID NO：90)、RGPATPIM(SEQ ID NO：91)、RGPA(SEQ ID NO：92)、GGQPSGMWGW(SEQ ID NO：93)、FPRPLGITGL (SEQ ID NO：94)、SPLTGRSG(SEQ ID NO：95)、 SAGFSLPA(SEQ ID NO：96)、LAPLGLQRR(SEQ ID NO：97)、SGGPLGVR(SEQ ID NO：98)、PLGL(SEQ ID NO：99)、SGRSDNI(SEQ ID NO：100)和LSGRSNI(SEQ ID NO：349)。 50. 態樣47之ACC，其中CM1及/或CM2包含選自由下列所組成之群組的序列：ISSGLLSGRSDNH(SEQ ID NO：28)、LSGRSDDH(SEQ ID NO：33)、LSGRSDNI(SEQ ID NO：41)、ISSGLLSGRSDQH(SEQ ID NO：54)、SGRSDNI (SEQ ID NO：100)、ISSGLLSGRSDNI(SEQ ID NO：68)和LSGRSNI(SEQ ID NO：349)。 51. 態樣1至50中任一者或組合之ACC，其中蛋白酶係由個體中的腫瘤產生。 52. 態樣51之ACC，其中個體已經診斷或鑑定為患有癌症 53. 態樣1至52中任一者或組合之ACC，其中CP1和CM1係在第一單體構築體中彼此直接鄰接。 54. 態樣1至53中任一者或組合之ACC，其中CM1和DD1係在第一單體構築體中彼此直接鄰接。 55. 態樣1至54中任一者或組合之ACC，其中CP2和CM2係在第二單體構築體中彼此直接鄰接。 56. 態樣1至55中任一者或組合之ACC，其中CM2和DD2係在第二單體構築體中彼此直接鄰接。 57. 態樣1至56中任一者或組合之ACC，其中第一單體構築體包含至少一個連結子。 58. 態樣57之ACC，其中至少一個連結子為配置在CP1與CM1之間的連結子L1及/或配置在CM1與DD1之間的連結子L2。 59. 態樣58之ACC，其中第二單體構築體包含至少一個連結子。 60. 態樣59之ACC，其中至少一個連結子為配置在CP2與CM2之間的連結子L3及/或為配置CM2和DD2之間的連結子L4。 61. 態樣60之ACC，其中第一單體構築體包含連結子L1及第二單體構築體包含連結子L3。 62. 態樣61之ACC，其中L1及L3為相同的。 63. 態樣62之ACC，其中第二單體構築體包含連結子L2及第二單體構築體包含連結子L4。 64. 態樣63之ACC，其中L2及L4為相同的。 65. 態樣64之ACC，其中各連結子具有1個胺基酸至約15個胺基酸的總長度。 66. 態樣65之ACC，其中各連結子具有至少5個胺基酸的總長度。 67. 態樣1至66中任一者或組合之ACC，其中第一單體構築體包含至少一個連結子，其中各連結子獨立地選自由下列所組成之群組：G；GG；GSSGGSGGSGG(SEQ ID NO：210)；GGGS(SEQ ID NO：2)；GGGSGGGS(SEQ ID NO：211)；GGGSGGGSGGGS(SEQ ID NO：212)； GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：213)； GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO： 214)；GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：215)；GGGGS(SEQ ID NO：216)；GS；GGGGSGS(SEQ ID NO：217)； GGGGSGGGGSGGGGSGS(SEQ ID NO：218)； GGSLDPKGGGGS(SEQ ID NO：219)； PKSCDKTHTCPPCPAPELLG(SEQ ID NO：220)； SKYGPPCPPCPAPEFLG(SEQ ID NO：221)； GKSSGSGSESKS(SEQ ID NO：222)；GSTSGSGKSSEGKG (SEQ ID NO：223)；GSTSGSGKSSEGSGSTKG(SEQ ID NO：224)；GSTSGSGKPGSGEGSTKG (SEQ ID NO：225) ；GSTSGSGKPGSSEGST(SEQ ID NO：226)；(GS)n、(GGS)n、(GSGGS)n (SEQ ID NO：227)、(GGGS)n (SEQ ID NO：228)、(GGGGS)n (SEQ ID NO：216)，其中各n為至少1的整數；GGSG(SEQ ID NO：229)；GGSGG(SEQ ID NO：230)；GSGSG(SEQ ID NO：231；GSGGG(SEQ ID NO：232)；GGGSG(SEQ ID NO：233)；GSSSG(SEQ ID NO：234)；GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：213)；GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：235)；和GSTSGSGKPGSSEGST(SEQ ID NO：226)。 68. 態樣67之ACC，其中連結子包含選自由G、GG和GGGS (SEQ ID NO：2)所組成之群組的序列。 69. 態樣1至68中任一者或組合之ACC，其中第一單體構築體沿N端至C端方向包含CP1、CM1和直接或間接連結至CM1之C端的DD1。 70. 態樣1至69中任一者或組合之ACC，其中第一多肽沿C端至N端方向包含CP1、CM1和直接或間接連結至CM1之N端的DD1。 71. 態樣1至70中任一者或組合之ACC，其中第二多肽沿N端至C端方向包含CP2、CM2和直接或間接連結至CM2之C端的DD2。 72. 態樣1至71中任一者或組合之ACC，其中第二多肽沿C端至N端方向包含CP2、CM2和直接或間接連結至CM2的DD2。 73. 態樣69之ACC，其中第一單體構築體沿N端至C端方向包含CP1、CM1和DD1，其中CP1和CM1彼此直接鄰接，其中CM1和DD1彼此直接鄰接，其中CM1為不超過10個胺基酸之肽，其中第二單體構築體係與第一單體構築體相同，且其中第一及第二單體構築體係經由至少兩個雙硫鍵彼此共價結合。 74. 態樣73之ACC，其中CP1為介白素。 75. 態樣74之ACC，其中CP1為IL-15。 76. 態樣1至75中任一者或組合之ACC，其中至少一種CP1及/或CP2活性為CP1及/或CP2對其同族受體之結合親和性(K D)，如使用表面電漿子共振所測定。 77. 態樣1至75中任一者或組合之ACC，其中至少一種CP1及/或CP2活性為淋巴瘤細胞增殖水平。 78. 態樣1至75中任一者或組合之ACC，其中至少一種CP1及/或CP2活性為淋巴瘤細胞中的JAK/STAT/ISGF3路徑活化水平。 79. 態樣1至75中任一者或組合之ACC，其中至少一種活性為HEK細胞中的SEAP生產水平。 80. 態樣1至79中任一者或組合之ACC，其中ACC係以與對照水平相比，至少一種CP1及/或CP2活性降低至少20倍為特徵。 81. 態樣80之ACC，其中ACC係以與對照水平相比，至少一種CP1及/或CP2活性降低至少50倍為特徵。 82. 態樣81之ACC，其中ACC係以與對照水平相比，CP1及/或CP2之至少一種活性降低至少100倍為特徵。 83. 態樣82之ACC，其中ACC係以與對照水平相比，至少一種CP1及/或CP2活性降低至少500倍為特徵。 84. 態樣1至83中任一者或組合之ACC，其中CP1及/或CP2之至少一種活性的對照水平為ACC暴露於蛋白酶後於ACC中的CP1及/或CP2活性。 85. 態樣1至83中任一者或組合之ACC，其中至少一種CP1及/或CP2的對照水平為相應的野生型成熟細胞激素之相應的CP1及/或CP2活性。 86. 態樣1至85中任一者或組合之ACC，其中ACC係以暴露於蛋白酶後產生切割產物為特徵，其中切割產物包含CP1及/或CP2之至少一種活性。 87. 態樣86之ACC，其中CP1及/或CP2之至少一種活性為抗增殖活性。 88. 態樣87之ACC，其中對照水平為EC50值，且其中EC50(切割產物)對EC50(對照水平)之比小於約10、或小於約9、或小於約8、或小於約7、或小於約6、或小於約5、或小於約4、或小於約3、或小於約2、或小於約1.5。 89. 一種組成物，其包含態樣1至88中任一者或組合之ACC。 90. 態樣89之組成物，其中組成物為醫藥組成物。 91. 一種容器、小瓶、注射筒、注射器筆或套組，其包含至少一個劑量的態樣89或90之組成物。 92. 一種治療有其需要的個體之方法，其包含對個體投予治療有效量的態樣1至88中任一者或組合之ACC或態樣89或90之組成物。 93. 態樣92之方法，其中個體已經鑑定或診斷為患有癌症。 94. 態樣93之方法，其中癌症為淋巴瘤、實性腫瘤、血液腫瘤、肉瘤、骨肉瘤、神經膠母細胞瘤、神經胚細胞瘤、黑色素瘤、橫紋肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、B細胞腫瘤、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、B細胞非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴球性白血病(CLL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性淋巴球性白血病(ALL)、骨髓發育不良症候群(MDS)、皮膚T細胞淋巴瘤、視網膜胚細胞瘤、膀胱癌、胃癌、尿道上皮癌、肺癌、大腸癌、腎細胞癌、胃與食管癌、胰臟癌、前列腺癌、乳癌、大腸直腸癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、鱗狀細胞頭與頸癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、肝癌或肝細胞癌。 95. 態樣94之方法，其中淋巴瘤為伯基特氏淋巴瘤。 96. 一種編碼多肽之核酸，該多肽包含態樣1至88中任一者或組合之ACC的CP1和CM1。 97. 態樣96之核酸，其中多肽另包含態樣1至16或態樣23至88中任一者或組合之DD1。 98. 一種編碼多肽之核酸，該多肽包含態樣1至88中任一者或組合之ACC的CP2和CM2。 99. 態樣98之核酸，其中多肽另包含態樣1至16或態樣23至88中任一者或組合之DD2。 100. 一種載體，其包含態樣96至99中任一者或組合之核酸。 101. 態樣100之載體，其中載體為表現載體。 102. 一種細胞，其包含態樣96至99中任一者或組合之核酸或態樣100或101之載體。 103. 一種核酸對，其一起編碼態樣1至88任一者或組合之包含第一單體構築體的CP1和CM1之多肽及包含第二單體構築體的CP2和CM2之多肽。 104. 一種載體對，其一起包含態樣103之核酸對。 105. 態樣104之載體對，其中載體對為表現載體對。 106. 一種細胞，其包含態樣103之核酸對或態樣104或105之載體對。 107. 一種生產ACC之方法，其包含： 將態樣102或106之細胞在液體培養基中在足以生產ACC之條件下培養；及 自細胞或液體培養基回收ACC。 108. 態樣107之方法，其另包含： 將回收之ACC與細胞或液體培養基單離。 109. 態樣108之方法，其另包含： 將單離之ACC調配成醫藥組成物。 110. 一種以態樣107之方法生產之ACC。 111. 一種包含態樣110之ACC的組成物。 112. 態樣111之組成物，其中組成物為醫藥組成物。 113. 一種容器、小瓶、注射筒、注射器筆或套組，其包含至少一個劑量的態樣111或112之組成物。 114. 一種可活化細胞激素構築體(ACC)，其包含第一單體構築體及第二單體構築體，其中： (a)第一單體構築體包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、第一可切割部分(CM1)和第一二聚合結構域(DD1)； (b)第二單體構築體包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)； (c)第一單體構築體為沿N至C端方向包含CP1、CM1和DD1之多肽，另其中： (i)第一單體及第二單體之各者包含連結區，其包含不超過24個胺基酸；及 (ii)CP1為成熟介白素； (d)另其中： (i)第二單體構築體係與第一單體構築體相同， (ii)第一及第二單體構築體係經由至少一個雙硫鍵彼此共價結合，及 (iii)DD1及DD2為一對人類IgG Fc結構域； (e)DD1及DD2彼此結合，由此形成第一單體構築體及第二單體構築體之二聚物；及 (f)ACC係以具有與相應的對照介白素相比，介白素活性降低的水平為特徵。 115. 態樣114之ACC，其中CP1為成熟人類介白素。 116. 態樣114至115中任一者或組合之ACC，其中成熟介白素為成熟IL-15。 117. 態樣114至116中任一者或組合之ACC，其中成熟介白素為IL-15之截短形式。 118. 態樣114至116中任一者或組合之ACC，其中成熟介白素包含與選自由SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：347和SEQ ID NO：348所組成之群組的序列至少95%之同一性的序列。 119. 態樣114至116中任一者或組合之ACC，其中成熟介白素包含SEQ ID NO：347之序列。 120. 態樣114至119中任一者或組合之ACC，其中CP1和CM1彼此直接鄰接，CM1和DD1彼此直接鄰接，且CM1及CM2各自包含不超過10個胺基酸，視需要不超過7個胺基酸。 121. 態樣114至120中任一者或組合之ACC，其中CM1及CM2各自獨立地作用為尿激酶(uPa)受質及/或基質金屬蛋白酶(MMP)受質。 122. 態樣114至121中任一者或組合之ACC，其中CM1及CM2各自獨立地作用為尿激酶(uPa)受質及/或MMP-14受質。 123. 態樣114至122中任一者或組合之ACC，其中CM1及CM2各自包含與SEQ ID NO：100至少85%之同一性的序列。 124. 態樣114至123中任一者或組合之ACC，其中CM1及CM2各自包含選自由SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：100和LSGRSNI(SEQ ID NO：349)所組成之群組的序列。 125. 態樣114至124中任一者或組合之ACC，其中DD1及DD2為一對人類IgG1 Fc結構域或一對人類IgG4 Fc結構域。 126. 態樣125之ACC，其中DD1及DD2為在N端截短至如以EU編號所編號之半胱胺酸226的一對人類IgG1 Fc結構域或在N端截短至如以EU編號所編號之半胱胺酸226的一對人類IgG4 Fc結構域。 127. 態樣125或126之ACC，其中DD1及DD2為包含如以EU編號所編號之S228P突變的一對人類IgG4 Fc結構域。 128. 態樣114至127中任一者或組合之ACC，其中DD1及DD2各自包含與SEQ ID NO：3至少95%之同一性的序列。 129. 態樣114至128中任一者或組合之ACC，其中DD1及DD2各自包含SEQ ID NO：3之序列。 130. 態樣114至129中任一者或組合之ACC，其中第一及第二單體構築體係經由至少兩個雙硫鍵彼此共價結合。 131. 態樣114至130中任一者或組合之ACC，其中第一及第二單體構築體係經由至少三個雙硫鍵彼此共價結合。 132. 態樣114至131中任一者或組合之ACC，其中第一及第二單體構築體係經由至少四個雙硫鍵彼此共價結合。 133. 態樣114至132中任一者或組合之ACC，其中第一單體構築體另包含直接鄰接CM1之N端的訊息序列。 134. 態樣133之ACC，其中訊息序列包含與SEQ ID NO：345至少95%之同一性的序列。 135. 態樣133之ACC，其中訊息序列包含SEQ ID NO：345之序列。 136. 態樣114至135中任一者或組合之ACC，其包含連結區，該連結區包含不超過18個胺基酸或不超過12個胺基酸。 137. 態樣136之ACC，其中連結區包含7至12個胺基酸。 138. 態樣136之ACC，其中連結區包含7個胺基酸。 139. 態樣114至138中任一者或組合之ACC，其中ACC係以與相應的對照介白素相比，介白素活性降低至少500倍為特徵。 140. 態樣114至139中任一者或組合之ACC，其中CP1為介白素及對照介白素為重組介白素。 141. 態樣114至139中任一者或組合之ACC，其中ACC另包含肽遮罩(PM1)和位於CP1之N端的可切割部分(CM3)。 142. 態樣114至141中任一者或組合之ACC，其中介白素活性為淋巴瘤細胞中的抗增殖活性。 143. 態樣114至141中任一者或組合之ACC，其中介白素活性係在介白素-反應性HEK293細胞中誘導分泌型胚胎鹼性磷酸酶(secreted embryonic alkaline phosphatase)生產。 144. 態樣114至143中任一者之ACC，其中ACC另以暴露於蛋白酶後產生切割產物為特徵，CM1作用為該蛋白酶受質，其中對照介白素對切割產物的介白素活性之比小於約2，且其中對照介白素為相應的重組野生型介白素。 145. 態樣144之ACC，其中切割產物之EC50與相應的重組野生型介白素之EC50大約相同。 146. 態樣114之ACC，其中第一及第二單體構築體各自包含與選自由SEQ ID NO：350和SEQ ID NO：351至356之胺基酸21至359所組成之群組的序列至少95%之同一性的序列。 147. 態樣146之ACC，其中ACC係以與野生型介白素相比，介白素活性降低至少200倍為特徵，且其中ACC另以暴露於uPA後產生切割產物為特徵，其中切割產物具有比完整ACC大至少50倍介白素活性，其中介白素活性係以淋巴瘤細胞中的抗增殖檢定法或以介白素-反應性HEK293細胞中誘導分泌型胚胎鹼性磷酸酶生產之檢定法測量。 148. 態樣146或147之ACC，其中ACC展現比重組人類IL-15更低的活體內毒性。 149. 一種可活化細胞激素構築體(ACC)，其包含第一單體構築體及第二單體構築體，其中： (a)第一單體構築體包含第一成熟細胞激素蛋白質(CP1)、第一可切割部分(CM1)和第一二聚合結構域(DD1)； (b)第二單體構築體包含第二成熟細胞激素蛋白質(CP2)、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)； (c)第一單體構築體為沿N至C端方向包含CP1、CM1和DD1之多肽，另其中： (i)ACC包含7至10個胺基酸的連結區(LR)； (ii)CP1包含與SEQ ID NO：347至少85%之同一性的序列， (iii)CM1包含與SEQ ID: 349至少85%之同一性的序列， (d)另其中： (i)第二單體構築體係與第一單體構築體相同， (ii)第一及第二單體構築體係經由至少一個雙硫鍵彼此共價結合，及 (iii)DD1及DD2為一對人類IgG Fc結構域； (e)DD1及DD2彼此結合，由此形成第一單體構築體及第二單體構築體之二聚物；及 (f)ACC係以具有與重組人類IL-15的IL-15 活性相比，IL-15活性降低的水平為特徵。 150.一種組成物，其包含態樣114至149中任一者或組合之ACC。 151. 態樣150之組成物，其中組成物為醫藥組成物。 152. 一種容器、小瓶、注射筒、注射器筆或套組，其包含至少一個劑量的態樣150或151之組成物。 153. 一種治療有其需要的個體之方法，其包含對個體投予治療有效量的態樣114至149中任一者或組合之ACC或態樣150或151之組成物。 154. 態樣153之方法，其中個體已經鑑定或診斷為患有癌症。 155. 一種編碼多肽之核酸，該多肽包含態樣114至149中任一者或組合之ACC的第一單體。 156. 一種包含態樣155之核酸的載體。 157. 態樣156之載體，其中載體為表現載體。 158. 一種包含態樣155之核酸或態樣156或157之載體的哺乳動物細胞。 159. 態樣158之哺乳動物細胞，其中哺乳動物細胞為HEK293細胞或CHO細胞。 160. 一種製造ACC之方法，該方法包含： a. 在態樣158或159之哺乳動物細胞中表現ACC；及 b. 純化經表現之ACC。 161. 態樣114至149中任一者或組合之ACC，其中CM1作用為過度表現在腫瘤組織中的蛋白酶之受質。 162. 態樣114之ACC，其中第一及第二單體構築體各自包含與SEQ ID NO：356至少95%、96%、97%、98%、99%、或100%之同一性的序列。 163. 態樣162之ACC，其中第一及第二單體構築體為相同的且各自包含SEQ ID NO：356。 164. 一種包含態樣162或163之ACC的組成物。 165. 態樣164之組成物，其中組成物為醫藥組成物。 166. 一種容器、小瓶、注射筒、注射器筆或套組，其包含至少一個劑量的態樣165之組成物。 167. 一種治療有其需要的個體之方法，其包含對個體投予治療有效量的態樣162之ACC或態樣165之組成物。 168. 態樣167之方法，其中個體已經鑑定或診斷為患有癌症。 169. 一種編碼多肽之核酸，該多肽包含態樣162或163之ACC的第一單體。 170. 一種包含態樣169之核酸的載體。 171. 態樣170之載體，其中載體為表現載體。 172. 一種哺乳動物細胞，其包含態樣169之核酸或態樣170或171之載體。 173. 態樣172之哺乳動物細胞，其中哺乳動物細胞為HEK293細胞或CHO細胞。 174. 一種製造ACC之方法，該方法包含： a)在態樣172或173之哺乳動物細胞中表現ACC；及 b)純化經表現之ACC。 實施例 本發明於下列實施例中進一步說明，其不限制申請專利範圍內所述之本發明範圍。 實施例1：生產可活化細胞激素構築體 可活化細胞激素構築體IFN-α2b-1204DNIdl-hIgG4係以重組方法製備。此ACC之第一及第二單體構築體為相同，各者為具有根據SEQ ID NO：309的胺基酸序列之多肽。第一及第二單體構築體之各者沿N端至C端包含來自小鼠IgG κ訊息序列之訊息序列(SEQ ID NO：309之殘基1至20)、相應於人類干擾素α-2b之成熟細胞激素蛋白質(SEQ ID NO：1)、具有SEQ ID NO：99之胺基酸序列的可切割部分、具有胺基酸序列GGGS(SEQ ID NO：2)之連結子和相應於人類IgG Fc之DD(SEQ ID NO：4)。多肽之製備係藉由將宿主細胞以具有SEQ ID NO：310的序列之多核苷酸轉形，隨後培養所得重組宿主細胞。所得經表現之多肽的二聚合作用產出可活化細胞激素構築體IFNα-2b 1204DNIdl hIgG4。 可活化細胞激素構築體IFN-α-2b 1490DNI-hIgG4亦以重組方法製備。此ACC之第一及第二單體構築體亦為相同，各者為具有根據SEQ ID NO：311的胺基酸序列之多肽。此ACC之第一及第二單體構築體之各者沿N端至C端包含來自小鼠IgG κ訊息序列之訊息序列(SEQ ID NO：309之殘基1至20)、相應於人類干擾素α-2b之成熟細胞激素蛋白質(SEQ ID NO：1)、具有SEQ ID NO：68之胺基酸序列的可切割部分、具有胺基酸序列GGGS(SEQ ID NO：2)之連結子和相應於人類IgG Fc之DD(SEQ ID NO：4)。多肽之製備係藉由將宿主細胞以具有SEQ ID NO：312的序列之多核苷酸轉形，隨後培養所得重組宿主細胞。所得經表現之多肽的二聚合產出可活化細胞激素構築體IFN-α2b 1204dl hIgG4。 製備額外的可活化細胞激素構築體，其包括在連結子中的額外五個胺基酸殘基。 電泳係在可活化細胞激素構築體及經蛋白酶處理之可活化細胞激素構築體上執行。圖15描述顯示出下列者的結果之凝膠(自左至右)：(1)ACC IFN-α2b-1204DNIdl-hIgG4 (「1204」)；(2)經MT-SP1處理之IFN-α2b-1204DNIdl-hIgG4 (「1204 MT-SP1」)；(3)經uPA處理之IFN-α2b-1204DNIdl-hIgG4(「1204 uPA」)；(4)具有五個添加至連結子中的胺基酸殘基之IFN-α2b-1204DNIdl-hIgG4 (「1204+1」)；(5)經MT-SP1處理之IFN-α2b-1204DNIdl-hIgG4(「1204+1 MT-SP1」)；(6)經uPA處理之IFN-α2b-1204DNIdl-hIgG4(「1204+1 uPA」)；(7)IFN-α-2b 1490DNI-hIgG4(「1490」)；(8)經MT-SP1處理之IFN-α-2b 1490DNI-hIgG4(「1490 MT-SP1」)；及(9)經uPA處理之IFN-α-2b 1490DNI-hIgG4(「1490 uPA」)。結果示意蛋白酶有效切割可活化細胞激素構築體中的可切割部分。 實施例2. 可活化細胞激素構築體的IFN-α-2b活性 用於人類第I型干擾素的基於細胞之報導子檢定法係用於測試實施例1中所述之ACC的活性。 IFN-反應性HEK293細胞係藉由以人類STAT2及IRF9基因穩定轉染而產生，以獲得完全活性第I型IFN傳訊路徑。細胞亦以在IFNα/β可誘導的ISG54啟動子控制下可誘導的SEAP(分泌型胚胎鹼性磷酸酶)報導子為特色。為了維持轉基因表現，將細胞在以10%之FBS、Pen/Strep、30 µg/mL之殺稻瘟菌素、100 µg/m之吉歐黴素及100 µg/mL之諾莫黴素(normocin)補充之DMEM GlutaMax培養基中培養。以第I型IFN添加至該等細胞中活化JAK/STAT/ISGF3路徑及隨後誘導SEAP產生，其可在上清液中使用Quanti-Blue溶液(用於鹼性磷酸酶活性之比色法檢測)輕易地評定。含有IFNα-2b之ACC活性係使用此報導子檢定法與Sylatron®(聚乙二醇化干擾素α-2b)活性相比。在圖16中的數據顯示與Sylatron ®(聚乙二醇化干擾素α-2b)之IFNα-2b活性相比，ACC之IFNα-2b活性顯著地降低。 此外，在圖7A和7B中的數據顯示(未經切割之)ACC的活性能藉由改變連結子或連結區長度來調節。在圖7A至7B中的數據顯示具有不同的連結子長度或在IFNa-2b與hIgG4 Fc之間沒有連結子之IFNa-2b-hIgG4 Fc融合構築體的結果，如HEK293報導子檢定法所測試。在此實驗中所測試之融合蛋白沿N端至C端方向包括成熟IFNα-2b細胞激素序列、視需要的連結子及/或可切割部分和SEQ ID NO：4之人類IgG4的Fc結構域(包括全絞鏈區，使得Fc序列的N端係以胺基酸序列ESKYGPPCPPC…開始)。第一構築體(連結區=7)不具有連結子或可切割部分；其沿N端至C端方向的序列係由與SEQ ID NO：4融合之SEQ ID NO：1所組成。第二構築體(連結區=12)具有5個胺基酸連結子SGGGG(SEQ ID NO：335)；其沿N端至C端方向的序列係由與SEQ ID NO：4融合之SEQ ID NO：335融合之SEQ ID NO：1所組成。第三構築體(連結區=18)包括7個胺基酸CM (SGRSDNI)和4個胺基酸連結子GGGS；其沿N端至C端方向的序列係由與SEQ ID NO：4融合之SEQ ID NO：2融合之SEQ ID NO：100融合之SEQ ID NO：1所組成。第四構築體(連結區=23)包括5個胺基酸連結子、7個胺基酸CM和4個胺基酸連結子；其沿N端至C端方向的序列係由與SEQ ID NO：4融合之SEQ ID NO：2融合之SEQ ID NO：100融合之SEQ ID NO：335融合之SEQ ID NO：1所組成。第五構築體(連結區=24)包括13個胺基酸CM(ISSGLLSGRSDNI)及4個胺基酸連結子；其沿N端至C端方向的序列係由與SEQ ID NO：4融合之SEQ ID NO：2融合之SEQ ID NO：68融合之SEQ ID NO：1所組成。 實施例3：經蛋白酶處理之ACC的活性 經蛋白酶處理之包含IFNα-2b之ACC係在Daudi淋巴細胞中及基於細胞之報導子檢定法中測試抗增殖反應，以測定是否能恢復活性。 為了切割二聚合結構域，將包含IFNα-2b之ACC以重組人蛋白酶(諸如尿激酶型纖維蛋白溶酶原活化物(uPA)或馬曲肽酶(MT-SP1))在37℃下經隔夜處理。在測試活性前添加蛋白酶抑制劑混合液以中和蛋白酶，如實施例2和3中所述。來自該等檢定法的結果表明以蛋白酶處理包含IFNα-2b之ACC能使活性恢復至與重組細胞激素可相比的水平。ACC IFNα-2b-1204DNIdl-hIgG4、ACC IFNα-2b-1204DNIdl-hIgG4+uPA及幹細胞IFNα-2b(人類重組IFN-α-2b，取自StemCell Technologies，目錄#78077.1)之EC50值係自Daudi細胞凋亡檢定法結果計算，且提供於以下表3中。 ACC IFNα-2b-1204DNIdl-hIgG4、ACC IFNα-2b-1204DNIdl-hIgG4+uPA及幹細胞IFNα-2b之EC50值係自IFNα/β檢定法結果計算，且提供於以下表4中。 該等結果顯示IFNα-2b-1204DNIdl-hIgG4的活性在沒有活化蛋白酶存在下相對於IFNα-2b對照物，顯著地降低。 實施例4：ACC之活體內耐受性活性 人類IFNα-2b與倉鼠IFNα受體交叉反應，且已於先前顯示在倉鼠中具有活性(Altrock等人之Journal of Interferon Research, 1986)。為了評定包含IFNα-2b之ACC ProC440的耐受性，以0.4 mg/kg之起始劑量給藥敘利亞金倉鼠。動物接受一個劑量的試驗物品且在給藥後繼續研究至多7天，除非鑑定出不耐受之毒性(DLT意指劑量限制毒性)。起始劑量(0.4 mg/kg(「mpk」))代表INFα-con(重組干擾素α，由Amgen以Infergen®名稱製造之非天然存在的第I型干擾素)的等效劑量，預期在倉鼠(125 gr)中誘導體重減輕、食物消耗減少及骨髓抑制。(在石蟹獼猴(cyno)中，0.1 mg/kg/天之INFα-con已與體重減輕、食物消耗減少及骨髓抑制相關聯(相當於125克倉鼠之1.25至2.5×10 ^7 U)。)若耐受起始劑量，則對動物提升至2 mg/kg之「中等劑量」且接受三個劑量的試驗物品，除非不耐受。若耐受，則對動物提升至10 mg/kg之「高劑量」且接受三個劑量的試驗物品，除非不耐受。若耐受，則對動物提升至15 mg/kg之「更高劑量」。在各階段，若不耐受試驗劑量，則對動物下降至下一較低劑量。若不耐受起始劑量，則對動物下降至0.08 mg/kg之「較低劑量」。以具有DD-CM-CP二聚物之N端至C端結構之ACC(ProC286)給藥動物。以作為陰性對照物的人類IgG4給藥動物。陰性對照物如預期不在動物中誘導任何毒性。 ProC286(ChIgG4 5AA 1204DNIdL IFNa2b)亦以重組方法製備。第一及第二單體構築體為相同的，各者為具有SEQ ID NO：320之胺基酸序列及在其N端的訊息序列之多肽。第一及第二單體構築體之各者沿N端至C端包含訊息序列、相應於人類IgG Fc之二聚合結構域(SEQ ID NO：3)、連結子(SEQ ID NO：321)、具有SEQ ID NO：100之胺基酸序列的可切割部分、連結子(SEQ ID NO：2)和相應於人類干擾素α-2b之成熟細胞激素蛋白質(SEQ ID NO：1)。 ProC291(NhIgG4 5AA 1204DNIdL IFNa2b)亦以重組方法製備。第一及第二單體構築體為相同的。第一及第二單體構築體之各者沿N端至C端包含相應於人類干擾素α-2b之成熟細胞激素蛋白質(SEQ ID NO：1)、連結子(SEQ ID NO：321)、CM(SEQ ID NO：100)、連結子(GGGS)(SEQ ID NO：2)和包括全絞鏈序列之人類IgG4 Fc區(SEQ ID NO：4)。 將ProC286及ProC291的活性與Sylatron®(PEG-IFN-α2b)的活性在Daudi細胞凋亡檢定法中相比(圖17A至17B)。在此檢定法中，ProC286及Sylatron®顯示類似的活性水平，如圖17A中所示。這表明ProC286具有與市場上取得的聚乙二醇化IFN-α2b類似的活性，且能用作為替代的Sylatron®對照物以評估IFNα-2b在倉鼠研究中的耐受性。與ProC286及Sylatron®相比，ProC291顯示降低的活性，表明IFN N-末端對Fc之結構定向對降低活性為重要。那就是，當DD為一對Fc結構域時，對DD定位細胞激素N-末端(如在ProC291中)可提供比對DD定位細胞激素C-末端(如ProC286中)時降低更大的細胞激素活性。 在第1天以0.4 mg/kg之起始劑量給藥動物。對動物繼續研究一週，除非達到不可耐受之劑量(DLT)。在給藥前及給藥後6h、24h、72h和7d對每隻動物測量臨床觀察、體重及體溫。在每隻動物給藥後72h、7d收集用於血液學及化學分析的血液樣品。血液學及化學分析在取樣後立即執行。評估用於血液學分析的血液抹片(blood smear)、差別白血球分類計數、紅血球容積比、血紅素、平均血球血紅素、平均血球體積、血小板計數、紅血球(red blood cell)(紅血球(erythrocyte))計數、紅血球分布寬度、網狀紅血球計數及白血球(white blood cell)(白血球(leukocyte))計數。臨床化學小組包括丙胺酸胺基轉移酶、白蛋白、白蛋白/球蛋白之比、鹼性磷酸酶、天冬胺酸胺基轉移酶、鈣、氯化物、膽固醇、肌酸激酶、肌酸、γ麩胺醯基轉移酶、球蛋白、葡萄糖、無機磷、鉀、鈉、總膽紅素、總蛋白質、質三酸甘油酯、尿素、氮和C反應蛋白的測量。在耐受性研究中的毒性證據總結在圖18至20中。 總體而言，以未遮蔽之ProC286構築體給藥之動物在以2 mpk給藥時顯示平均5%之體重減輕，在以10 mpk和15 mpk給藥時顯示平均15%之體重減輕(圖18)。一隻以15 mpk之ProC286給藥之動物在給藥後7天(研究結束)顯示20%之體重減輕。這被認為是不耐受之劑量。相比之下，以2 mpk和10 mpk之ProC440給藥之動物未顯示體重減輕。 以15 mpk之ProC440給藥之動物顯示平均5%之體重減輕(圖18)。這表明具有在N端開始之二聚合結構(CP-CM-DD)的本揭示之ACC出乎意料地限制經IFNα-2b媒介之體重減輕。不想受到理論的束縛，咸信定位DD之干擾素N端及使用相對較短的LR在ProC440的情況下抑制細胞激素活性，與聚乙二醇化IFNα-2b(Sylatron®)或ProC286相比，降低干擾素毒性。 在臨床化學方面，以ProC286給藥之動物在所有劑量(0.4 mpk、2 mpk、10 mpk和15 mpk)給藥後7天(研究結束)顯示顯著升高的鹼性磷酸酶(ALP)(圖19)。當以10 mpk或15 mpk之ProC440給藥動物時，未測到顯著增加的ALP (圖19)。升高的ALT為肝毒性的標誌。已顯示IFNα-2b誘導肝毒性。這表明具有在N端開始之二聚合結構(CP-CM-DD)的本揭示之ACC出乎意料地限制經IFNa-2b媒介之肝毒性。 在血液學方面，在給藥後3天及給藥後7天(研究結束)，以2 mpk、10 mpk和15 mpk之ProC286給藥之動物顯示顯著降低水平的網狀紅血球計數、嗜中性球計數及白血球(WBC)計數(圖20)。該等減少使人聯想到經IFNα-2b媒介之骨髓毒性。在給藥後三天，以ProC440給藥之動物顯示降低水平的網狀紅血球計數、嗜中性球計數及白血球(WBC)計數(圖20)。總體而言，在以ProC440給藥之動物中觀察到降低的造血細胞水平不如以ProC286給藥之動物中觀察到的降低水平一樣顯著。在給藥後7天(研究結束)，在以ProC440給藥之動物中，網狀紅血球計數、嗜中性球計數及白血球(WBC)計數的總體水平返回至正常水平或與以陰性對照物IgG4給藥之動物中所觀察到類似的水平(圖20)。在以ProC286給藥之動物中，維持低水平的網狀紅血球計數、嗜中性球計數及白血球(WBC)計數。這表明具有在N端開始之二聚合結構(CP-CM-DD)的本揭示之ACC出乎意料地限制經IFNa-2b媒介之骨髓毒性。 實施例5. 額外的IFNa-2b細胞激素構築體之試管內特徵 包含IFNa-2b之額外的可活化細胞激素構築體亦以重組方法製備。該等ACC之第一及第二單體構築體為相同。第一及第二單體構築體之各者沿N端至C端包含來自小鼠IgG κ訊息序列之訊息序列(SEQ ID NO：309之殘基1至20)、相應於人類干擾素α-2b之成熟細胞激素蛋白質(SEQ ID NO：1)、具有SEQ ID NO：100之胺基酸序列的可切割部分(CM)和相應於人類IgG4 S228P Fc之二聚合結構域(包含SEQ ID NO：3)。另外，該等ACC包括或不包括在CP與CM之間具有胺基酸序列SGGGG(SEQ ID NO：335)之連結子。該等ACC包括或不包括在CM與DD之間具有胺基酸序列GGGS(SEQ ID NO：2)之連結子。該等ACC亦沿N端至半胱胺酸226含有或不含有DD之絞鏈區部分。該等額外的可活化細胞激素構築體說明於表6中(參見SEQ ID NO：336至342和SEQ ID NO：313)。 ProC440，沒有可撓性連結子及截短至Cys226的Fc區之ACC的活性及含有各種連結子和Fc區序列之額外ACC的活性係於試管內使用如先前所述之IFN-反應性HEK293細胞及Daudi細胞測試。在兩種檢定法中，與在細胞激素與結合DD至相應的第二單體(亦即Cys226)之第一胺基酸之間含有各種額外序列之所有其他ACC相比，ProC440的活性(例如抗增殖效應)降低。ACC之EC50值係自IFNα/β檢定法結果計算且提供於以下表7中。 ACC之EC50值係自Daudi細胞凋亡檢定法結果計算且提供於以下表8中。 在表7至8中的數據亦顯示(未經遮蔽之)ACC的活性能藉由改變細胞激素與DD之Cys226之間的胺基酸序列長度來調節。 不想受到理論的束縛，本發明人係基於本文呈示的結果而設想定位DD之細胞激素N端及使用相對較短的LR抑制除了前述特定實施例中所示例之干擾素-α細胞激素以外的細胞激素之細胞激素活性。 實施例6：實例IL-15細胞激素構築體之試管內特徵 含有人類IL-15之可活化細胞激素構築體(ProC1471)係以重組方法製備。ProC1471之第一及第二單體構築體為相同，各者為具有SEQ ID NO：350之胺基酸序列及在其N端的訊息序列之多肽。第一及第二單體構築體之各者沿N端至C端包含來自小鼠IgG κ訊息序列之訊息序列(SEQ ID NO：309之殘基1至20)、相應於人類IL-15胺基酸殘基49至161之成熟細胞激素蛋白質(SEQ ID NO：347)、具有SEQ ID NO：100之胺基酸序列的可切割部分和相應於在Cys226 (根據EU編號)截短且包括S228P突變之人類IgG4 Fc之二聚合結構域(SEQ ID NO：3)(圖3)。ProC1471之完整單體構築體序列(包括訊息序列)顯示於SEQ ID NO：350中。此單體構築體之連結區(LR)為7個胺基酸長度。 多肽之製備係藉由將宿主細胞以具有SEQ ID NO：357的序列之多核苷酸轉形，隨後培養所得重組宿主細胞。所得經表現之多肽的二聚合作用產出細胞激素構築體ProC1471。 ProC1471的活性係於試管內使用IL-2/IL-15-反應性HEK293細胞測試。參見圖4和6。IL-2/IL15-反應性HEK293細胞係藉由以人類CD25(IL-2Rα)、CD122(IL-2Rβ)及CD132(IL-2Rγ)基因，連同人類JAK3及STAT5基因穩定轉染而產生，以獲得全功能性IL-2/IL-15傳訊路徑。細胞亦以STAT5可誘導的SEAP(分泌型胚胎鹼性磷酸酶)報導子為特色。為了維持轉基因表現，將細胞在以10%之FBS、Pen/Strep、10 ug/ml之嘌呤黴素及100 µg/mL之諾莫黴素補充之DMEM GlutaMax培養基中培養。添加IL-2及IL-15至該等細胞中活化STAT5且隨後誘導SEAP產生，其可在上清液中使用Quanti-Blue溶液(用於鹼性磷酸酶活性之比色法檢測)輕易地評定。 IL-2/IL-15-反應性HEK293細胞係在以10%之FBS補充之DMEM培養基中以280,000個細胞/mL之濃度製備，且將180 μL之等分試樣移液至白色平底96孔盤的孔中(50,000個細胞/孔)。將測試之細胞激素在以10%之FBS補充之DMEM培養基中稀釋。製備一式兩份的三倍連續稀釋液，將20 μL之稀釋液添加至各孔中。在37℃下培育20至24小時後，將經誘導之報導子細胞的20 μl之上清液轉移至平底96孔盤的孔中。每孔添加180 µl之再懸浮之QUANTI-Blue溶液。盤在培育器中於37℃下培育1至3 h後，使用分光光度計在620 nm下測量SEAP水平。產生劑量反應曲線，且使用Graph Pad Prism軟體以S形擬合非線性迴歸獲得EC50值。 在報導子檢定法中，與PeproTech IL-15(重組人類IL-15，取自PeproTech，目錄#200-15)相比，ProC1471的活性降低至少250X(250倍)(圖4)。這表明相應於人類IgG Fc之可切割二聚合結構域之融合對ACC構築體中的IL-15提供空間遮蔽。 實施例7：經蛋白酶處理之包含IL-15之ACC的活性 經蛋白酶處理之包含IL-15之ACC係在報導子檢定法中測試，以測定是否能恢復介白素活性。為了切割二聚合結構域，將包含IL-15之ACC以重組人蛋白酶(諸如尿激酶型纖維蛋白溶酶原活化物(uPA)或馬曲肽酶(MT-SP1))在37℃下經隔夜處理。在可切割部分的預期位點上以uPa切割係以電泳確認(圖5)。結果示意uPa蛋白酶能切割ProC1471中的可切割部分(CM)。以uPa之蛋白酶活化使ProC1471活性部分恢復至接近但低於重組IL-15的水平(圖6)。ProC1471、ProC1471+uPA及PeproTech IL-15之EC50值係自IL-15報導子檢定法結果計算且提供於以下表9中。以uPA蛋白酶之ACC活化因此導致IL-15活性比完整ACC高約64倍。當以uPa活化時，ProC1471之EC50(切割產物)對EC50(野生型對照水平)之比為約6(9.046/1.48=6.11)，證明在蛋白酶活化後良好的恢復IL-15活性。 實施例8. 設計額外的IL-15細胞激素構築體 額外的可活化細胞激素構築體ProC1874、ProC1875、ProC1876、ProC1877、ProC1878和ProC1879亦以重組方法製備。該等ACC之第一及第二單體構築體為相同。第一及第二單體構築體之各者沿N端至C端包含來自小鼠IgG κ訊息序列之訊息序列(SEQ ID NO：309之殘基1至20)、相應於人類IL-15殘基49至162之成熟細胞激素蛋白質(SEQ ID NO：348)、可切割部分(CM)和相應於在Cys226(根據EU編號)截短且包括S228P突變之人類IgG4 Fc之二聚合結構域(SEQ ID NO：3)。另外，該等ACC包括或不包括在細胞激素與具有以下表10中所示之胺基酸序列的CM之間之連結子。該等額外的可活化細胞激素構築體說明於表10中及該等構築體之完整胺基酸序列提供於表14中(參見SEQ ID NO：351至356)。 實施例9：額外的包含IL-15之ACC的特徵 將包含IL-15之ACC ProC1471、ProC1876和ProC1879以重組uPA在37℃下經隔夜處理。在可切割部分的預期位點上以uPa切割係以電泳確認(圖21A)。HEK293報導子檢定法使完整及經蛋白酶處理之包含IL-15之ACC的活性特徵化(圖21B)。表11顯示來自多個實驗(n＞3)的包含IL-15之ACC的平均EC50值。以uPA蛋白酶之ACC活化導致IL-15活性比完整ACC高約49至104倍。 實施例10：包含IL-15之ACC對人類PBMC增殖的活性 在細胞增殖檢定法中，將人類PBMC與重組IL-15或IL-15-ACC(具有或不具有先前的蛋白酶活化)培育3天。在培育後，將PBMC以可固定細胞活力染料eFlur™780、抗CD3-FITC(UCHTI)、抗CD4-BV608(RPA-T4)、抗CD8-BV480(RPA-T8)、抗CD56-BV421(HCD56)及抗Ki67-APC (Ki67)抗體染色。分析各種細胞族群，包括CD3-、CD56+ NK細胞；CD3+、CD8+ T細胞；及CD3+、CD4+ T細胞，且將各種細胞族群之增殖基於Ki67表現百分比測定，如圖22中所示。經蛋白酶處理之IL-15-ACC顯示比相應完整的包含IL-15之ACC更強的增殖活性。表12顯示各種包含IL-15之ACC在PBMC增殖檢定法中的EC50。 實施例11：包含IL-15之ACC對人類PBMC STAT5磷酸化的活性 IL-15與IL-15R之結合驅動 STAT5之磷酸化及隨後的NK和T細胞增殖。在STAT5磷酸化檢定法中，將人類PBMC先以抗CD3-FITC(UCHTI)、抗CD4-BV608(RPA-T4)、抗CD8-BV480(RPA-T8)、抗CD56-BV421(HCD56)在室溫下染色30分鐘。在表面染色後，將細胞在37℃下於含有10%之FBS的RPMI培養基中以各種IL-15試驗物品刺激20分鐘。將細胞立即以預溫熱之固定溶液在37℃下經10至12分鐘固定，清洗且與預冷(-20℃)的90%之甲醇在4℃下培育30分鐘。在固定及透化後，將細胞再清洗且以抗 pSTAT5-Alexa647(pY687)染色。分析各種細胞族群，包括CD3-、CD56+ NK細胞；CD3+、CD8+ T細胞；及CD3+、CD4+ T細胞，且將各種細胞族群中的STAT5磷酸化以pSTAT5陽性細胞百分比測定(圖23)。IL15-ACC對各種細胞族群之STAT5磷酸化的EC50總結於表13中。 如上述，本文所述之發明涵蓋可活化細胞激素構築體，其包括本文所討論的各種細胞激素蛋白質。作為非限制性實例，在本發明之ACC中所使用的CP可為那些以SEQ ID NO：111至140、143至146、151至160和347至348列出之任一者及其變異體。單體細胞激素特別適合用於本文所述之ACC中。基於本文所提供的結果，咸信本發明之ACC展現比相應的野生型細胞激素降低的細胞激素活性，且在以相關蛋白酶切割ACC後，切割產物將恢復細胞激素活性至類似於相應的野生型細胞激素的活性。 其他的實施態樣 應理解的是儘管本發明已結合其詳細的說明予以說明，但是前述說明意欲例證而非限制本發明之範圍，本發明之範圍係由所附之申請專利範圍限定。其他的態樣、優點及修飾係在下列申請專利範圍之範圍內。
100,240,115,300,440,500,640,700:第一成熟細胞激素蛋白質CP1 110,230,310,430,510,630,710,860:第一視需要的連結子 120,220,113,320,420,520,720:第一可切割部分CM1 130,210,330,410,530,660,730,880:第二視需要的連結子 140,200,111,340,400,540,600,740,800:第一二聚合結構域DD1 150,290,125,350,490,550,690,890:第二成熟細胞激素蛋白質CP2 160,280,360,480,680:第三視需要的連結子 170,270,123,370,470:第二可切割部分CM2 180,260,380,460:第四視需要的連結子 190,250,121,390,450,590,650,790,850:第二二聚合結構域DD2 110:第一單體構築體 120:第二單體構築體 112,114,116,118,122,124,126,128:視需要的連結子 117:CM3 119:視需要的PM1 127:CM4 129:視需要的PM2 670,870:可切割部分CM 780,830:缺乏細胞激素活性之多肽或蛋白質
[圖1A]為例示性可活化細胞激素構築體的示意圖，該構築體包含分別經由第一及第二二聚合結構域DD1 140及DD2 190彼此共價或非共價結合之第一及第二單體構築體。第一單體構築體沿N端至C端包含第一成熟細胞激素蛋白質CP1 100、第一視需要的連結子110、第一可切割部分CM1 120、第二視需要的連結子130和第一二聚合結構域DD1 140。第二單體構築體沿N端至C端包含第二成熟細胞激素蛋白質CP2 150、第三視需要的連結子160、第二可切割部分CM2 170、第四視需要的連結子180和第二二聚合結構域DD2 190。 [圖1B]為例示性可活化細胞激素構築體的示意圖，該構築體包含分別經由第一及第二二聚合結構域DD1 200及DD2 250彼此共價或非共價結合之第一及第二單體構築體。第一單體構築體沿N端至C端包含第一二聚合結構域DD1 200、第二視需要的連結子210、第一可切割部分CM1 220、第一視需要的連結子230和第一成熟細胞激素蛋白質CP1 240。第二單體構築體沿N端至C端包含第二二聚合結構域DD2 250、第四視需要的連結子260、第二可切割部分CM2 270、第三視需要的連結子280和第二成熟細胞激素蛋白質CP2 290。 [圖1C]為例示性可活化細胞激素構築體的示意圖，該構築體沿N端至C端包含：(1)第一單體構築體110，其具有視需要的PM1 119、視需要的CM3 117、CP1 115、CM1 113和DD1 111；及(2)第二單體構築體120，其具有視需要的PM2 129、視需要的CM4 127、CP2 125、CM2 123和DD2 121；及(3)鍵結第一單體構築體110至第二單體構築體120之一或多個共價或非共價鍵(ßà)。ACC可另包含在組分之間視需要的連結子112、114、116、118、122、124、126和128中之一或多者。在一個實例中，DD1 111及DD2 121為相同的。在另一實例中，DD1 111及DD2 121為不同的。 [圖2A]為例示性可活化細胞激素構築體的示意圖，該構築體包含分別經由第一及第二二聚合結構域DD1 340及DD2 390彼此以非共價方式結合之第一及第二單體構築體。第一單體構築體沿N端至C端包含第一成熟細胞激素蛋白質CP1 300、第一視需要的連結子310、第一可切割部分CM1 320、第二視需要的連結子330和第一二聚合結構域DD1 340。第二單體構築體沿N端至C端包含第二成熟細胞激素蛋白質CP2 350、第三視需要的連結子360、第二可切割部分CM2 370、第四視需要的連結子380和第二二聚合結構域DD2 390。 [圖2B]為例示性可活化細胞激素構築體的示意圖，該構築體包含分別經由第一及第二二聚合結構域DD1 400及DD2 450彼此以非共價方式結合之第一及第二單體構築體。第一單體構築體沿N端至C端包含第一二聚合結構域DD1 400、第二視需要的連結子410、第一可切割部分CM1 420、第一視需要的連結子430和第一成熟細胞激素蛋白質CP1 440。第二單體構築體沿N端至C端包含第二二聚合結構域DD2 450、第四視需要的連結子460、第二可切割部分CM2 470、第三視需要的連結子480和第二成熟細胞激素蛋白質CP2 490。 [圖3]顯示經遮蔽之細胞激素構築體ProC1471的序列，具有斜體的視需要的訊息序列、劃下線的成熟IL-15 (胺基酸49至161)之序列及粗體的可切割部分(CM)之序列。 [圖4]顯示與重組IL-15相比，ProC1471的活性，如使用IL-2/IL-15-反應性HEK293細胞於試管內測試。 [圖5]顯示以蛋白酶uPA及MT-SP1活化ProC1471。 [圖6]顯示與未經活化之ProC1471及重組IL-15相比，經蛋白酶活化之ProC1471的活性，如使用IL-2/IL-15-反應性HEK293細胞於試管內測試。 [圖7A]描述在干擾素-α2b-Fc融合體中的可撓性連結子長度對EC50的效應，如基於HEK293細胞之報導子檢定法所測定。[圖7B]描述在干擾素-α2b-Fc融合體中的連結區(LR)長度對EC50之效應，如基於HEK293細胞之報導子檢定法所測定。 [圖8A]描述在干擾素-α2b-Fc融合蛋白中的連結子長度對EC50之效應，如自Daudi細胞凋亡檢定法所測定。[圖8B]描述在干擾素-α2b-Fc融合體中的連結區(LR)長度對EC50之效應，如自Daudi細胞凋亡檢定法所測定。 [圖9]描述基於HEK293細胞之報導子檢定法以評定ACC(IFNa2b 1204DNIdL NhG4)活性；經蛋白酶處理(活化)之ACC(IFNα-2b 1204DNIdL NhG4+uPA)活性；Sylatron®活性；及重組親代細胞激素(IFNa2b)活性的結果。結果表明在以蛋白酶處理ACC後，在ACC中的細胞激素活性可恢復至與重組親代細胞激素可相比的水平。 [圖10]描述基於Daudi淋巴瘤細胞之檢定法以測量抗增殖活性的結果(上圖)及基於HEK293細胞之報導子檢定法以測量ACC(ProC440)活性、經蛋白酶處理之ACC (ProC440+uPA)活性和幹細胞IFNa2b活性的結果(下圖)。結果表明活性係藉由製造本揭示之ACC結構而降低1000倍，且在以蛋白酶處理ACC後，在ACC中的細胞激素活性恢復至與重組親代細胞激素可相比的水平。 [圖11A]描述ProC440之結構，且顯示以質譜法分析證實在CM中的預期位點上以uPa切割。除了對uPa活化之敏感性以外，ProC440亦經MMP4切割。[圖11B]顯示以質譜法分析鑑定在靠近可切割部分之IFNa的C末端(在L161)之MMP14切割位點。以MMP14之蛋白酶活化使活性恢復至與重組細胞激素可相比的水平。 [圖12A]為例示性可活化細胞激素構築體的示意圖，該構築體包含分別經由第一及第二二聚合結構域DD1 540及DD2 590彼此以非共價方式結合之第一及第二單體構築體。第一單體構築體沿N端至C端包含第一成熟細胞激素蛋白質CP1 500、第一視需要的連結子510、第一可切割部分CM1 520、第二視需要的連結子530和第一二聚合結構域DD1 540。第二單體構築體沿N端至C端包含第二成熟細胞激素蛋白質CP2 550、第三視需要的連結子560和第二二聚合結構域DD2 590。 [圖12B]為例示性可活化細胞激素構築體的示意圖，該構築體包含分別經由第一及第二二聚合結構域DD1 600及DD2 650彼此以非共價方式結合之第一及第二單體構築體。第一單體構築體沿N端至C端包含第一二聚合結構域DD1 600、第一視需要的連結子630和第一成熟細胞激素蛋白質CP1 640。第二單體構築體沿N端至C端包含第二二聚合結構域DD2 650、第二視需要的連結子660、可切割部分CM 670、第三視需要的連結子680和第二成熟細胞激素蛋白質CP2 690。 [圖13A]為例示性可活化細胞激素構築體的示意圖，該構築體包含分別經由第一及第二二聚合結構域DD1 740及DD2 790彼此以非共價方式結合之第一及第二單體構築體。第一單體構築體沿N端至C端包含第一成熟細胞激素蛋白質CP 700、第一視需要的連結子710、第一可切割部分CM1 720、第二視需要的連結子730和第一二聚合結構域DD1 740。第二單體構築體沿N端至C端包含缺乏細胞激素活性之多肽或蛋白質780和第二二聚合結構域DD2 790。缺乏細胞激素活性之多肽或蛋白質780可為例如缺乏細胞激素活性的經截短之細胞激素蛋白質、缺乏細胞激素活性的經突變之細胞激素蛋白質、殘端序列(stub sequence)、或以高親和性結合至CP 700且與第二部分的對照水平相比，降低第二部分的細胞激素活性之多肽序列。DD1 740及DD2 790可為相同或不同的。 [圖13B]為例示性可活化細胞激素構築體的示意圖，該構築體包含分別經由第一及第二二聚合結構域DD1 800及DD2 850彼此以非共價方式結合之第一及第二單體構築體。第一單體構築體沿N端至C端包含第一二聚合結構域DD1 800和缺乏細胞激素活性之多肽或蛋白質830。第二單體構築體沿N端至C端包含第二二聚合結構域DD2 850、第一視需要的連結子860、可切割部分CM 870、第二視需要的連結子880和成熟細胞激素蛋白質CP 890。缺乏細胞激素活性之多肽或蛋白質830可為例如缺乏細胞激素活性的經截短之細胞激素蛋白質、缺乏細胞激素活性的經突變之細胞激素蛋白質、殘端序列、或以高親和性結合至CP 700且與第二部分的對照水平相比，降低第二部分的細胞激素活性之多肽序列。DD1 800及DD2 850可為相同或不同的。 [圖14]係以示意圖顯示之ACC的實施態樣，表示其連結區(LR)。 [圖15]為以下列裝載之凝膠的圖像：(1)具有可切割部分1204之ACC IFNα-2b-hIgG4 Fc (1204)；(2)蛋白酶膜型絲胺酸蛋白酶1 (MT-SP1)與具有可切割部分1204之ACC IFNα-2b-hIgG4之產物(1204 MT-SP1)；(3)具有可切割部分1204之ACC IFNα-2b-hIgG4 Fc與蛋白酶uPA之產物(1204 uPA)；(4)與5個胺基酸連結子融合之具有可切割部分1204之ACC IFNα-2b-hIgG4 Fc(1204+1)；(5) IFNα-2b-hIgG4 Fc 1204+1與MT-SP1之產物(1204+1 MT-SP1)；(6)具有可切割部分1490之ACC IFNα-2b-hIgG4 Fc；(7) MT-SP1與具有可切割部分1490之ACC IFNα-2b-hIgG4 Fc之產物；uPA與具有可切割部分1490之ACC IFNα-2b-hIgG4 Fc之產物(1490 uPA)。 [圖16]提供基於HEK293細胞之報導子檢定法以評定Sylatron ®(聚乙二醇化干擾素(peginterferon)α-2b)及下列各種干擾素α-2b(IFNa2b)融合體之干擾素-α2b活性的結果：與IFNa2b經N端融合之人類IgG4(IFNa2b NhG4)；經由五個胺基酸連結子與IFNa2b經N端融合之人類IgG4(IFNa2b 5AA NhG4)；可活化細胞激素構築體IFN-α2b-1204dL-hIgG4(IFNa2b 1204DNIdL NhG4)；包括與 IFN-α2b-1204dL-hIgG4相同的組分，但亦具有位於成熟細胞激素蛋白質組分與可切割部分之間的5個胺基酸連結子之可活化細胞激素構築體(IFNa2b 5AA 1204DNIdL NhG4) ；及可活化細胞激素構築體IFN-α2b-1490DNI-hIgG4 (IFNa2b 1490DNI NhG4)。 [圖17A]描述ProC286結構及在Daudi細胞凋亡檢定法中與Sylatron®活性相比之ProC286活性。ProC286和Sylatron®顯示類似的活性水平，表明ProC286可用作為替代的Sylatron®對照物以評估IFNα-2b在倉鼠研究中的耐受性。[圖17B]描述ProC291結構及在Daudi細胞凋亡檢定法中與Sylatron®活性相比之ProC291活性。ProC291顯示與Sylatron®和ProC286相比，顯著降低的活性。 [圖18A至18C]顯示在敘利亞金倉鼠中以2 mpk(圖18A)、10 mpk(圖18B)和15 mpk(圖18C)之對照hIgG4、ProC286或ProC440給藥時，隨治療期間的動物體重減輕。 [圖19A至19C]顯示以2 mpk、10 mpk和15 mpk之對照hIgG4、ProC286或ProC440給藥之敍利亞金倉鼠中的臨床化學結果(鹼性磷酸酶(ALP)，圖19A；丙胺酸轉胺酶(ALT)，圖19B；及天冬胺酸轉胺酶(AST)，圖19C)。 [圖20A至20C]顯示以2 mpk、10 mpk和15 mpk之對照hIgG4、ProC286或ProC440給藥之敍利亞金倉鼠中的血液學分析結果(網狀紅血球計數，圖20A；嗜中性球計數，圖20B；及白血球細胞(WBC)計數，圖20C)。 [圖21A至21B]顯示以uPa活化包含IL-15之ACC。圖21A顯示藉由電泳以uPa切割各種包含IL-15之ACC。圖21B顯示在HEK-Blue報導子檢定法中與未經活化之包含IL-15之ACC相比，經蛋白酶活化之包含IL-15之ACC活性。 [圖22]顯示在基於Ki67表現百分比之人類PBMC增殖檢定法中與未經活化之包含IL-15之ACC相比，經蛋白酶活化之包含IL-15之ACC活性。 [圖23]顯示在人類PBMC STAT5磷酸化檢定法中與未經活化之包含IL-15之ACC相比，經蛋白酶活化之包含IL-15之ACC活性。
TW202334187A_111138032_SEQL.xml
100,240,115:第一成熟細胞激素蛋白質CP1
110,230:第一視需要的連結子
110:第一單體構築體
112,114,116,118,122,124,126,128:視需要的連結子
117:CM3
119:視需要的PM1
120:第二單體構築體
120,220,113:第一可切割部分CM1
127:CM4
129:視需要的PM2
130,210:第二視需要的連結子
140,200,111:第一二聚合結構域DD1
150,125:第二成熟細胞激素蛋白質CP2
160,280:第三視需要的連結子
170,270,123:第二可切割部分CM2
180,260:第四視需要的連結子
190,250,121:第二二聚合結構域DD2

Claims (50)

  1. 一種可活化細胞激素構築體(ACC)，其包含第一單體構築體及第二單體構築體，其中： (a)該第一單體構築體包含第一介白素多肽、第一可切割部分(CM1)和第一二聚合結構域(DD1)； (b)該第二單體構築體包含第二介白素多肽、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)； (c)第一單體構築體為沿N至C端方向包含該介白素多肽、該CM1和該DD1之多肽，另其中： (i)該第一單體構築體及該第二單體構築體之各者包含連結區，其包含不超過18個胺基酸，及 (ii)該介白素多肽為IL-15； (d)另其中： (i)該第二單體構築體係與該第一單體構築體相同，及 (ii)該DD1及該DD2為一對人類IgG Fc結構域； (e)該DD1及該DD2係經由至少一個雙硫鍵彼此共價結合，由此形成該第一單體構築體及該第二單體構築體之二聚物；及 (f)該ACC係以具有與重組人類IL-15相比，IL-15活性降低的水平為特徵，如以IL-2/IL-15-反應性HEK293細胞中的SEAP(分泌型胚胎鹼性磷酸酶(secreted embryonic alkaline phosphatase))生產水平所測量。
  2. 如請求項1之ACC，其中該介白素多肽包含與SEQ ID NO：347至少95%之同一性的序列。
  3. 如請求項1之ACC，其中該CM1及該CM2分別包含不超過8個胺基酸。
  4. 如請求項1之ACC，其中該CM1及該CM2之各者獨立地以尿激酶(uPa)及/或基質金屬蛋白酶(MMP)可切割。
  5. 如請求項1之ACC，其中該CM1及該CM2分別包含與SEQ ID NO：349至少85%之同一性的序列。
  6. 如請求項1之ACC，其中該CM1及該CM2分別包含選自由下列所組成之群組的序列：SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：100和SEQ ID NO：349。
  7. 如請求項1之ACC，其中該DD1及該DD2為一對人類IgG4 Fc結構域。
  8. 如請求項1之ACC，其中該DD1及該DD2為在N端截短至如以EU編號所編號之半胱胺酸226的一對人類IgG1或IgG4 Fc結構域。
  9. 如請求項7之ACC，其中該人類IgG4 Fc結構域包含如以EU編號所編號之S228P突變。
  10. 如請求項1之ACC，其中該DD1及該DD2分別包含與SEQ ID NO：3至少95%之同一性的序列。
  11. 如請求項1之ACC，其中該DD1及該DD2分別包含SEQ ID NO：3之序列。
  12. 如請求項1之ACC，其中該第一及第二單體構築體係經由至少兩個雙硫鍵彼此共價結合。
  13. 如請求項1之ACC，其中該第一及第二單體構築體係經由至少三個雙硫鍵彼此共價結合。
  14. 如請求項1之ACC，其中該第一及第二單體構築體係經由至少四個雙硫鍵彼此共價結合。
  15. 如請求項1之ACC，其中該第一及第二單體構築體之各者包含與SEQ ID NO：350之胺基酸21至359至少95%之同一性的多肽序列。
  16. 如請求項1之ACC，其中該第一及第二單體構築體之各者包含選自由SEQ ID NO：350至356所組成之群組的多肽序列。
  17. 一種可活化細胞激素構築體(ACC)，其包含第一單體構築體及第二單體構築體，其中： (a)該第一單體構築體包含第一介白素多肽、第一可切割部分(CM1)和第一二聚合結構域(DD1)； (b)該第二單體構築體包含第二介白素多肽、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)； (c)該第一單體構築體為沿N至C端方向包含該介白素多肽、該CM1和該DD1之多肽，另其中： (i)該介白素多肽和該CM1彼此直接鄰接， (ii)該CM1和該DD1彼此直接鄰接， (iii)該介白素多肽包含與SEQ ID NO：347至少85%之同一性的序列， (iv)該CM1包含與SEQ ID NO：349至少85%之同一性的序列， (d)另其中： (i)該第二單體構築體係與該第一單體構築體相同，及 (ii)該DD1及該DD2為一對人類IgG1或IgG4 Fc結構域； (e)該DD1及該DD2係經由至少一個雙硫鍵彼此共價結合，由此形成該第一單體構築體及該第二單體構築體之二聚物；及 (f)該ACC係以具有與重組人類IL-15的活性相比，IL-15活性降低的水平為特徵。
  18. 一種可活化細胞激素構築體(ACC)，其包括第一單體構築體及第二單體構築體，其中： (a)該第一單體構築體包含第一介白素多肽、第一可切割部分(CM1)和第一二聚合結構域(DD1)， 其中該CM1係位於該介白素多肽與該DD1之間；及 (b)該第二單體構築體包含第二介白素多肽、第二可切割部分(CM2)和第二二聚合結構域(DD2)， 其中該CM2係位於該CP2與該DD2之間；或 (a)該第一單體構築體包含第一介白素多肽、第一二聚合結構域(DD1)，及 (b)該第二單體構築體包含第二介白素多肽、可切割部分(CM)和第二二聚合結構域(DD2)，其中該CM係位於該CP2與該DD2之間，其中該CM作用為蛋白酶受質；或 (a)該第一單體構築體包含第一介白素多肽、可切割部分(CM)和第一二聚合結構域(DD1)，其中該CM係位於該介白素多肽與該DD1之間，及 (b)該第二單體構築體包含第二介白素多肽和第二二聚合結構域(DD2)， 其中該CM作用為蛋白酶受質；或 (a)該第一單體構築體包含第一介白素多肽和第一二聚合結構域(DD1)，及 (b)該第二單體構築體包含第二介白素多肽和第二二聚合結構域(DD2)，其中該第一介白素多肽、該第二介白素多肽、或該第一介白素多肽和該第二介白素多肽兩者包括作用為蛋白酶受質之胺基酸序列； 其中該DD1及該DD2彼此結合，由此形成該第一單體構築體及該第二單體構築體之二聚物；及 其中該ACC係以具有與介白素活性的對照水平相比，介白素活性降低的水平為特徵。
  19. 如請求項18之ACC，其中該DD1及該DD2為一對Fc結構域。
  20. 如請求項19之ACC，其中該一對Fc結構域為一對人類Fc結構域。
  21. 如請求項20之ACC，其中該人類Fc結構域為人類IgG1 Fc結構域、人類IgG2 Fc結構域、人類IgG3 Fc結構域或人類IgG4 Fc結構域。
  22. 如請求項21之ACC，其中該人類Fc結構域為人類IgG4 Fc結構域。
  23. 如請求項22之ACC，其中該人類Fc結構域包含與SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：315或SEQ ID NO：316至少90%之同一性的序列。
  24. 如請求項22之ACC，其中該人類Fc結構域包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：315或SEQ ID NO：316。
  25. 如請求項18之ACC，其中該第一介白素多肽及/或該第二介白素多肽包含與SEQ ID NO：347至少90%之同一性的序列。
  26. 如請求項18之ACC，其中該第一單體構築體及該第二單體構築體沿N端至C端方向分別具有第一介白素多肽-CM1-DD1及第二介白素多肽-CM2-DD1之結構。
  27. 如請求項18之ACC，其中該第一介白素多肽及/或第二介白素多肽包含SEQ ID NO：347之序列。
  28. 如請求項1至27中任一或組合項之ACC，其中該ACC係以具有與重組人類IL-15相比，降低約100至約500倍之IL-15活性水平為特徵，如以IL-2/IL-15-反應性HEK293細胞中的SEAP (分泌型胚胎鹼性磷酸酶)生產水平所測量。
  29. 如請求項28之ACC，其中該ACC係以具有與重組人類IL-15相比，降低至少200倍之IL-15活性水平為特徵。
  30. 如請求項28之ACC，其中該ACC係以具有與重組人類IL-15相比，降低約250倍之IL-15活性水平為特徵。
  31. 如請求項1至27中任一或組合項之ACC，其中該ACC係以該ACC以uPA蛋白酶切割後具有EC50為野生型重組IL-15之EC50的約1至約10倍為特徵，如在IL-2/IL15-反應性HEK293細胞中所測量。
  32. 如請求項1至27中任一或組合項之ACC，其中該ACC係以該ACC以uPA蛋白酶切割後具有EC50為野生型重組IL-15之EC50的約3至約7倍為特徵，如在IL-2/IL15-反應性HEK293細胞中所測量。
  33. 一種編碼多肽之多核苷酸，該多肽包含如請求項1至32中任一項之ACC的該CP1和該CM1。
  34. 如請求項33之多核苷酸，其中該多肽另包含如請求項1至33中任一項之DD1。
  35. 一種載體，其包含如請求項33或34之多核苷酸。
  36. 如請求項35之載體，其中該載體為表現載體。
  37. 一種宿主細胞，其包含如請求項33或34中任一項之多核苷酸或如請求項35或36之載體。
  38. 一種核酸對，其一起編碼如請求項1至32中任一或組合項之包含該第一單體構築體的該CP1和CM1之多肽及包含該第二單體構築體的該CP2和CM2之多肽。
  39. 一種宿主細胞，其包含如請求項38之核酸對。
  40. 如請求項37或39之宿主細胞，其中該宿主細胞為哺乳動物細胞。
  41. 一種生產ACC之方法，其包含： 將如請求項37、39或40中任一項之細胞在液體培養基中在足以生產該ACC之條件下培養；及 自該細胞或該液體培養基回收該ACC。
  42. 如請求項41之方法，其另包含： 將自該細胞或該液體培養基回收的該ACC單離。
  43. 如請求項42之方法，其另包含： 將單離之ACC調配成醫藥組成物。
  44. 一種以如請求項41或42之方法生產之ACC。
  45. 一種包含如請求項1至32中任一項或請求項44之ACC之組成物。
  46. 如請求項45之組成物，其中該組成物為醫藥組成物。
  47. 一種容器、小瓶、注射筒、注射器筆(injector pen)或套組，其包含至少一個劑量的如請求項45或46之組成物。
  48. 一種治療有其需要的個體之方法，其包含對該個體投予治療有效量的如請求項1至32中任一或組合項之ACC或如請求項45或46之組成物。
  49. 如請求項48之方法，其中該個體已經鑑定或診斷為患有癌症。
  50. 如請求項49之方法，其中該癌症為白血病、淋巴瘤或實性腫瘤。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0279862B1 (en) 1986-08-28 1993-11-03 Teijin Limited Cytocidal antibody complex and process for its preparation
ES2091684T3 (es) 1992-11-13 1996-11-01 Idec Pharma Corp Aplicacion terapeutica de anticuerpos quimericos y radiomarcados contra el antigeno de diferenciacion restringida de los linfocitos b humanos para el tratamiento del linfoma de las celulas b.
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
KR20070018054A (ko) * 2004-04-14 2007-02-13 에프. 호프만-라 로슈 아게 정제된 인터루킨-15／Ｆｃ융합 단백질 및 이의 제조방법
CN1946739A (zh) * 2004-04-14 2007-04-11 豪夫迈－罗氏公司 纯化的白细胞介素－15/Fc融合蛋白及其制备
US20060024272A1 (en) 2004-07-29 2006-02-02 Large Scale Biology Corporation C-terminally truncated interferon
BRPI1006141B8 (pt) 2009-01-12 2021-05-25 Cytomx Therapeutics Llc composições de anticorpo modificado, métodos para preparar e usar as mesmas
CA2753294A1 (en) 2009-02-23 2010-08-26 Cytomx Therapeutics, Inc. Proproteins and methods of use thereof
MX2016003957A (es) 2013-09-25 2017-02-02 Cytomx Therapeutics Inc Substratos de metaloproteinasas de matriz y otras porciones escindibles y metodos para usar los mismos.
RU2016135239A (ru) 2014-01-31 2018-03-12 Сайтомкс Терапьютикс, Инк. Субстраты матриптазы и u-активатора плазминогена и другие расщепляемые остатки и способы их применения
WO2016071376A2 (en) 2014-11-06 2016-05-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with modified fcrn-binding and methods of use
MA41374A (fr) 2015-01-20 2017-11-28 Cytomx Therapeutics Inc Substrats clivables par métalloprotéase matricielle et clivables par sérine protéase et procédés d'utilisation de ceux-ci
AU2019347751A1 (en) * 2018-09-27 2021-04-29 Xilio Development, Inc. Masked cytokine polypeptides
US20200377602A1 (en) 2018-12-06 2020-12-03 Cytomx Therapeutics, Inc. Matrix metalloprotease-cleavable and serine or cysteine protease-cleavable substrates and methods of use thereof
WO2021207669A1 (en) * 2020-04-10 2021-10-14 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable cytokine constructs and related compositions and methods

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