JP2013529084A5 - - Google Patents

Claims (36)

1. 共に相互作用して二量体ヒンジ境界を形成する第１の免疫グロブリン様ヒンジポリペプチドおよび第２の免疫グロブリン様ヒンジポリペプチドを含むヒンジ領域
   を含むヘテロ二量体タンパク質であって、ヒンジ境界内の１つまたは複数の荷電アミノ酸の間の静電気的相互作用が、２つの第１のヒンジポリペプチド間または２つの第２のヒンジポリペプチド間の相互作用よりも第１のヒンジポリペプチドと第２のヒンジポリペプチドとの間の相互作用に有利であり、それによってホモ二量体の形成よりもヘテロ二量体の形成を促進する、ヘテロ二量体タンパク質。
2. ヒンジ領域がＩｇＧヒンジ領域である、請求項１に記載のヘテロ二量体タンパク質。
3. 第１のヒンジポリペプチドが、野生型ヒンジ領域において少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むものであり、第２のヒンジポリペプチドが、第１のヒンジポリペプチドにおけるアミノ酸修飾と同一の位置で、野生型ＩｇＧヒンジ領域において少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むものであり、第２のヒンジポリペプチドにおける野生型アミノ酸が、第１のヒンジポリペプチドにおける対応するアミノ酸修飾と逆の電荷を有するアミノ酸で置き換えられている、請求項２に記載のヘテロ二量体タンパク質。
4. アミノ酸修飾が、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、およびＧｌｕからなる群から選択される、請求項３に記載のヘテロ二量体タンパク質。
5. ＩｇＧヒンジ領域がヒトＩｇＧヒンジ領域を含む、請求項３に記載のヘテロ二量体タンパク質。
6. ヒトＩｇＧヒンジ領域がヒトＩｇＧ１ヒンジ領域を含む、請求項５に記載のヘテロ二量体タンパク質。
7. 第１のヒンジポリペプチドにおけるアミノ酸修飾が、２２１および２２８からなる群から選択される位置にある、請求項６に記載のヘテロ二量体タンパク質。
8. 第１のヒンジポリペプチドに融合した第１のＣＨ３ポリペプチドおよび第２のヒンジポリペプチドに融合した第２のＣＨ３ポリペプチドを含む免疫グロブリン様ＣＨ３領域をさらに含み、第１のＣＨ３ポリペプチドおよび第２のＣＨ３ポリペプチドが共に相互作用してＣＨ３境界を形成し、ＣＨ３境界内の１つまたは複数のアミノ酸が、ホモ二量体の形成を不安定化させ、かつホモ二量体の形成にとって静電気的に不利ではない、請求項６に記載のヘテロ二量体タンパク質。
9. 第１のＣＨ３ポリペプチドが、野生型ＩｇＧ１のＣＨ３領域配列において少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むものであり、かつ第２のＣＨ３ポリペプチドが、野生型ＩｇＧ１のＣＨ３領域配列において少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むものである、請求項８に記載のヘテロ二量体タンパク質。
10. アミノ酸修飾が、３４９、３６８、４０５、および４０９からなる群から選択される位置にある、請求項９に記載のヘテロ二量体タンパク質。
11. 第１のヒンジポリペプチドが、Ａｒｇ２２１またはＧｌｕ２２１およびＡｒｇ２２８またはＧｌｕ２２８を含み、第１のＣＨ３ポリペプチドが、Ｇｌｕ３６８またはＡｒｇ４０９を含み、第２のヒンジポリペプチドが、Ａｒｇ２２１またはＧｌｕ２２１およびＡｒｇ２２８またはＧｌｕ２２８を含み、第２のＣＨ３ポリペプチドが、Ｇｌｕ３６８またはＡｒｇ４０９を含み、第１のヒンジポリペプチドの２２１位および２２８位、ならびに第１のＣＨ３ポリペプチドの３６８位および４０９位のアミノ酸が、第２のヒンジポリペプチドおよびＣＨ３ポリペプチドにおける対応するアミノ酸と同一ではない、
    請求項１０に記載のヘテロ二量体タンパク質。
12. ヒトＩｇＧヒンジ領域がヒトＩｇＧ２ヒンジ領域を含む、請求項５に記載のヘテロ二量体タンパク質。
13. アミノ酸修飾が、２２３、２２５、および２２８からなる群から選択される、請求項１２に記載のヘテロ二量体タンパク質。
14. 第１のヒンジポリペプチドに融合した第１のＣＨ３ポリペプチドおよび第２のヒンジポリペプチドに融合した第２のＣＨ３ポリペプチドを含む免疫グロブリン様ＣＨ３領域をさらに含み、ＣＨ３境界内の１つまたは複数のアミノ酸が、ホモ二量体の形成を不安定化させ、かつホモ二量体の形成にとって静電気的に不利ではない、請求項１３に記載のヘテロ二量体タンパク質。
15. 第１のＣＨ３ポリペプチドが、野生型ＩｇＧ２のＣＨ３領域配列において少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むものであり、第２のＣＨ３ポリペプチドが、野生型ＩｇＧ２のＣＨ３領域配列において少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むものである、請求項１４に記載のヘテロ二量体タンパク質。
16. アミノ酸修飾が、３６８および４０９からなる群から選択される位置にある、請求項１５に記載のヘテロ二量体タンパク質。
17. 第１のヒンジポリペプチドが、Ａｒｇ２２３またはＧｌｕ２２３、Ａｒｇ２２５またはＧｌｕ２２５、およびＡｒｇ２２８またはＧｌｕ２２８を含み、第１のＣＨ３ポリペプチドが、Ａｒｇ４０９またはＧｌｕ３６８を含み、第２のヒンジポリペプチドが、Ａｒｇ２２３またはＧｌｕ２２３、Ａｒｇ２２５またはＧｌｕ２２５、およびＡｒｇ２２８またはＧｌｕ２２８を含み、第２のＣＨ３ポリペプチドが、Ａｒｇ４０９またはＧｌｕ３６８を含み、第１のヒンジポリペプチドの２２３位、２２５位、および２２８位、ならびに第１のＣＨ３ポリペプチドの３６８位および４０９位のアミノ酸が、第２のヒンジポリペプチドおよびＣＨ３ポリペプチドにおける対応するアミノ酸と同一ではない、
    請求項１６に記載のヘテロ二量体タンパク質。
18. ヒトＩｇＧヒンジ領域がヒトＩｇＧ４ヒンジ領域を含む、請求項５に記載のヘテロ二量体タンパク質。
19. アミノ酸修飾が２２８位にある、請求項１８に記載のヘテロ二量体タンパク質。
20. 第１のヒンジポリペプチドが、Ｌｙｓ２２８またはＡｒｇ２２８を含み、第２のヒンジポリペプチドが、Ａｓｐ２２８またはＧｌｕ２２８を含む、請求項１９に記載のヘテロ二量体タンパク質。
21. ヒンジ領域が、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはＩｇＭヒンジ領域である、請求項１に記載のヘテロ二量体タンパク質。
22. 抗体、マキシボディ、モノボディ、ペプチボディ、およびＦｃ融合タンパク質からなる群から選択される、請求項１に記載のヘテロ二量体タンパク質。
23. 単一特異的な一価の、二重特異的な一価の、または二重特異的な二価の抗体である、請求項１に記載のヘテロ二量体タンパク質。
    
24. 請求項１に記載のヘテロ二量体タンパク質を発現する細胞系。
    
25. 請求項１に記載のヘテロ二量体タンパク質および担体を含む医薬組成物。
26. 効果的な量の請求項２５に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む、それを必要とする対象における状態、障害、または疾患を治療する方法。
27. ヘテロ二量体タンパク質を生産する方法であって、ヘテロ二量体タンパク質が、免疫グロブリン様ヒンジ領域を含む第１のポリペプチドおよび免疫グロブリン様ヒンジ領域を含む第２のポリペプチドを含み、第１のポリペプチドのヒンジ領域および第２のポリペプチドのヒンジ領域が、共に相互作用してヒンジ境界を形成し、ヒンジ境界内の１つまたは複数の荷電アミノ酸が、ホモ二量体の形成よりもヘテロ二量体の形成に静電気的に有利であり、
    ａ）第１のポリペプチドをコードする核酸および第２のポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞を培養するステップであって、培養された宿主細胞が第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを発現するステップ、および
    ｂ）任意選択で、宿主細胞培養物からヘテロ二量体タンパク質を回収するステップ
    を含む方法。
28. ヘテロ二量体タンパク質を生産する方法であって、ヘテロ二量体タンパク質が、免疫グロブリン様ヒンジ領域を含む第１のポリペプチドおよび免疫グロブリン様ヒンジ領域を含む第２のポリペプチドを含み、第１のポリペプチドのヒンジ領域および第２のポリペプチドのヒンジ領域が、共に相互作用して、ヘテロ二量体の形成を促進するように操作されたヒンジ境界を形成し、ヒンジ境界内の１つまたは複数の荷電アミノ酸が、ホモ二量体の形成よりもヘテロ二量体の形成に静電気的に有利であり、
    ａ）第１の宿主細胞において第１のポリペプチドを発現させるステップ、
    ｂ）第２の宿主細胞において第２のポリペプチドを発現させるステップ、
    ｃ）任意選択で、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを単離するステップ、および
    ｄ）第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを、二量体化に適した条件下でインキュベートして、ヘテロ二量体タンパク質を生産するステップ
    を含む方法。
29. ステップｄ）の条件が、ステップｃ）の２つのポリペプチドを還元剤とインキュベートすることである、請求項２８に記載の方法。
30. 還元剤がグルタチオンである、請求項２９に記載の方法。
    
31. 請求項１に記載のヘテロ二量体タンパク質を精製する方法であって、精製がクロマトグラフィーステップを含む、方法。
32. クロマトグラフィーステップがイオン交換クロマトグラフィーである、請求項３１に記載の方法。
    
33. 完全長ヒト抗体であり、ヘテロ二量体タンパク質の第１の抗体可変ドメインが、ヒト免疫エフェクター細胞上に位置する抗原に特異的に結合することによってヒト免疫エフェクター細胞の活性を動員することができ、ヘテロ二量体タンパク質の第２の抗体可変ドメインが、標的抗原に特異的に結合することができる、請求項１に記載のヘテロ二量体タンパク質。
34. 第１のヒンジポリペプチドがＧｌｕ２２５およびＧｌｕ２２８を含み、第１のＣＨ３ポリペプチドがＧｌｕ３６８を含み、第２のヒンジポリペプチドがＡｒｇ２２５およびＡｒｇ２２８を含み、第２のＣＨ３ポリペプチドがＡｒｇ４０９を含む、請求項１７に記載のヘテロ二量体蛋白質。
35. 第１のヒンジポリペプチドが、Ａｒｇ２２５またはＧｌｕ２２５、およびＡｒｇ２２８またはＧｌｕ２２８を含み、第１のＣＨ３ポリペプチドが、Ａｒｇ４０９またはＧｌｕ３６８を含み、第２のヒンジポリペプチドが、Ａｒｇ２２５またはＧｌｕ２２５、およびＡｒｇ２２８またはＧｌｕ２２８を含み、第２のＣＨ３ポリペプチドが、Ａｒｇ４０９またはＧｌｕ３６８を含み、第１のヒンジポリペプチドの２２５位および２２８位、ならびに第１のＣＨ３ポリペプチドの３６８位および４０９位のアミノ酸が、第２のヒンジポリペプチドおよびＣＨ３ポリペプチドにおける対応するアミノ酸と同一ではない、
    請求項１６に記載のヘテロ二量体タンパク質。
36. 第１のヒンジポリペプチドが、Ａｒｇ２２８またはＧｌｕ２２８を含み、第１のＣＨ３ポリペプチドが、Ｇｌｕ３６８またはＡｒｇ４０９を含み、第２のヒンジポリペプチドが、Ａｒｇ２２８またはＧｌｕ２２８を含み、第２のＣＨ３ポリペプチドが、Ｇｌｕ３６８またはＡｒｇ４０９を含み、第１のＣＨ３ポリペプチドの３６８位および４０９位のアミノ酸が、第２のヒンジポリペプチドおよびＣＨ３ポリペプチドにおける対応するアミノ酸と同一ではない、
    請求項１０に記載のヘテロ二量体タンパク質。