JP7415005B2 - 二重特異性抗ｃｃｌ２抗体 - Google Patents

二重特異性抗ｃｃｌ２抗体 Download PDF

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Description

本発明は、ヒトＣＣＬ２上の２つの異なるエピトープに結合する二重特異性抗ＣＣＬ２抗体、その医薬組成物、それらの製造、並びに、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患及び眼科疾患の処置のための医薬としての使用に関する。
背景
ＣＣＬ２／ＣＣＲ２軸は、腫瘍への未成熟骨髄細胞の動員の主なメディエータである。ＣＣＬ２は悪性細胞によって過剰発現され、化学誘引物質勾配を構築する細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に結合する。一旦腫瘍に達すると、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）は、抗腫瘍Ｔ細胞応答の開始を阻害する抗炎症性サイトカイン／受容体を分泌／上方制御することによって腫瘍形成促進環境に寄与する。このようにして、ＭＤＳＣは、任意のＴ細胞活性化療法（Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１４）の有効性を低下させるか、又は損なうことさえあり得る。したがって、これらの未成熟骨髄細胞の動員の特異的阻害は、チェックポイント阻害剤、Ｔ細胞二重特異性抗体（ＴＣＢ）又は他のがん免疫療法（ＣＩＴ）の有効性を高める。さらに、ＣＣＬ２は、血管新生、転移及び腫瘍成長の促進にも関与しており、ＣＣＬ２の中和がいくつかの抗腫瘍介入に寄与し得ることを示唆している。
ＣＣＬ２を標的化することは、その受容体とは対照的に、望ましくないＣＣＬ２媒介効果を特異的に阻害し、Ｔｈ１及びＮＫ細胞のような他の免疫細胞集団の動員に関与する同じ受容体（ＣＣＲ２）であるが異なるリガンド（例えば、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３）を介してシグナル伝達し得るものを節約する。
臨床的には、ＣＣＬ２は、関節リウマチ（Ｈａｒｉｎｇｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．２００６ Ａｕｇ；５４（８）：２３８７－９２）、特発性肺線維症（Ｒａｇｈｕ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ．２０１５ Ｄｅｃ；４６（６）：１７４０－５０）、糖尿病性腎症（Ｍｅｎｎｅ ｅｔ ａｌ，Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ（２０１７）３２：３０７－３１５）、及び、がん（Ｓａｎｄｈｕ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１３ Ａｐｒ；７１（４）：１０４１－５０）などの異なる炎症性疾患によって引き起こされるその上昇したレベルを中和することを目的としたいくつかの研究において好ましい抗体標的であった。しかし、その高い合成速度は、観察された高いインビボ抗体－抗原解離定数（ＫＤ）と共に、臨床的に実行可能な用量での従来の抗体による遊離ＣＣＬ２の抑制を妨げる主な障害であることが証明されている（Ｆｅｔｔｅｒｌｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１３ Ｏｃｔ；５３（１０）：１０２０－７）。
ＣＣＬ２中和は、乳がん（ＢＣ）、卵巣がん（ＯｖＣａ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、膵臓がん及び前立腺がんなどのいくつかの種類のがんで観察されている、ＣＣＬ２の血清レベルが上昇した患者においてより明らかに関連するようである。しかし、この血清学を提示しないが、腫瘍が骨髄系統の免疫細胞で高度に浸潤されているこれらの適応症内の患者であっても、上記のように腫瘍状況においてＣＣＬ２が果たす多くの役割のために、この新規治療から非常に利益を得ることができる。
Ｉｇａｗａ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２７０（２０１６）１３２－１５１は、生成された抗体が、ｐＨ依存性ＣＤＲ（酸性エンドソーム内での抗体－抗原解離のために、抗原分解をもたらす）と、最適化された等電点（ｐＩ）及びＦｃガンマＲＩＩｂへの増強された結合（免疫複合体の細胞取り込みを促進する）及び新生児型Ｆｃ受容体に対する中程度の親和性を有する操作されたＦｃ部分とを有し、許容され得る薬物動態学的プロファイルを維持する、掃引技術を記載している。
発明の概要
本発明は、ヒトＣＣＬ２上の２つの異なるエピトープに結合する二重特異性抗ＣＣＬ２抗体、その医薬組成物、それらの製造、並びに、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患及び眼科疾患の処置のための医薬としての使用に関する。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する異なる第２の抗原結合部位とを含む二重特異性抗体であって、ヒトＩｇＧアイソタイプのＦｃドメインを含む二重特異性抗体である。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する異なる第２の抗原結合部位とを含む二重特異性抗体であって、
Ａ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｂ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｃ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｄ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｅ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｆ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｇ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｈ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｉ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧアイソタイプのＦｃドメインを含む。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧアイソタイプの定常重鎖ドメインを含む。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む。
１つの実施形態において、ヒト野生型ＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）が、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃガンマ受容体サイレンシング定常重鎖ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）と比較して、２０ｍｇ／ｋｇの各二重特異性抗体及び０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２からなる予め形成された免疫複合体を１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した場合に、少なくとも２倍高い（一実施形態において、少なくとも５倍高い、一実施形態において、少なくとも１０倍高い、一実施形態において、少なくとも２０倍高い）。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む抗体と同じＣＣＬ２上のエピトープに結合し、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む抗体と同じＣＣＬ２上のエピトープに結合する、二重特異性抗体である。
１つの実施形態において、ヒト野生型ＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）が、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃガンマ受容体サイレンシング定常重鎖ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）と比較して、２０ｍｇ／ｋｇの各二重特異性抗体及び０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２からなる予め形成された免疫複合体を１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した場合に、少なくとも１５倍高く、特に少なくとも２０倍高い。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号６３のアミノ酸配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦを含むＦＲ－Ｈ１、（ｅ）配列番号６４のアミノ酸配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧを含むＦＲ－Ｈ２、（ｆ）配列番号６５のアミノ酸配列ＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹ ＹＣＡＲを含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｇ）配列番号６６のアミノ酸配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含むＦＲ－Ｈ４を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｈ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｊ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３、（ｋ）配列番号６７のアミノ酸配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣを含むＦＲ－Ｌ１、（ｌ）配列番号６８のアミノ酸配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹを含むＦＲ－Ｌ２、（ｍ）配列番号６９のアミノ酸配列ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣを含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｎ）配列番号７０のアミノ酸配列ＧＱＧＴＫＶＥＩＫを含むＦＲ－Ｌ４を含む、ＶＬドメイン
を含み；
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＬＴＩＳを含むＦＲ－Ｈ１、（ｅ）配列番号８３のアミノ酸配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧを含むＦＲ－Ｈ２、（ｆ）配列番号８４のアミノ酸配列ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲを含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｇ）配列番号８５のアミノ酸配列ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳを含むＦＲ－Ｈ４を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｈ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｊ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３、（ｋ）配列番号８６のアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣを含むＦＲ－Ｌ１、（ｌ）配列番号８７のアミノ酸配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨを含むＦＲ－Ｌ２、（ｍ）配列番号８８のアミノ酸配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣを含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｎ）配列番号８９のアミノ酸配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫを含むＦＲ－Ｌ４を含む、ＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
Ａ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｂ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｃ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｄ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｅ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｆ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｇ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｈ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｉ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｊ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｋ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｌ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｍ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｎ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｏ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｐ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
Ａ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶであり、Ｘ２がＰであり、Ｘ３がＨである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦであり、Ｘ２がＲである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｂ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶであり、Ｘ２がＰであり、Ｘ３がＨである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦであり、Ｘ２がＲである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｃ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｄ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｅ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｆ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｇ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｈ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｉ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｊ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｋ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｌ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｍ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｎ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｏ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｐ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
１つの実施形態において、本明細書中に記載される二重特異性抗体は、
ｉ）インビトロでＣＣＬ２のその受容体ＣＣＲ２への結合を遮断する（レポーターアッセイ、ＩＣ５０＝０．５ｎＭ）；及び／又は
ｉｉ）骨髄系細胞のＣＣＬ２媒介走化性をインビトロで阻害する（ＩＣ５０＝１．５ｎＭ）；及び／又は
ｉｉｉ）カニクイザル及びヒトＣＣＬ２に対して交差反応性である。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、他のＣＣＬホモログに対して交差反応性ではなく、特に、ＣＣＬ２に対する結合と比較して、他のＣＣＬホモログ（例えば、ＣＣＬ８）に対して１００倍少ない結合を示す。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、イオン依存的にヒトＣＣＬ２上の第１及び第２のエピトープに結合する。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、ｐＨ依存的にヒトＣＣＬ２に結合し、第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位はどちらも酸性ｐＨよりも中性ｐＨで、より高い親和性でＣＣＬ２に結合する。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、ｐＨ７．４において、ｐＨ５．８よりも１０倍高い親和性でヒトＣＣＬ２に結合する。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及び／又はＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｈ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｔ３０７Ｐ、Ｋ３２６Ｔ及び／又はＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び／又は
ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及び／又はＹ４３６Ｔ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及び／又はＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ、及び／又はＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｉ）Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｈ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｋ３２６Ｔ及び／又はＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び／又は
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及び／又はＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｈ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｋ３２６Ｔ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及び／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｉｉ）Ｑ４３８Ｒ及び／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及び／又はＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｐ及び／又はＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び／又は
ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及び／又はＹ４３６Ｔ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及び／又はＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｐ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及びＹ４３６Ｔ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｐ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ及び（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書中に記載の二重特異性抗体は、下記の突然変異（ＥＵナンバリング）を（独立して、又は上記の突然変異に加えて）含む、２つのＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）重鎖定常ドメインの一方におけるＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗ
ｉｉ）他方の重鎖定常ドメインにおけるＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２に（特異的に）結合する（単離された）（単一特異性）抗体であり、
該抗体は、
Ａ）（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｂ）（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２に（特異的に）結合する（単離された）（単一特異性）抗体であり、
該抗体は、
Ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｅ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｇ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｈ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む。
本発明の一実施形態は、先行する実施形態のいずれか一つに記載の（単一又は二重特異性）抗体をコードする単離された核酸である。
本発明の一実施形態は、そのような核酸を含む宿主細胞である。
本発明の一実施形態は、抗体が産生されるようにそのような宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法である。
本発明の一実施形態では、そのような方法は、宿主細胞から抗体を回収する工程を更に含む。
本発明の一実施形態は、本明細書中に記載される二重特異性抗体及び薬学的に許容され得るキャリアを含む医薬製剤である。
本発明の一実施形態は、医薬として使用するための本明細書に記載の二重特異性抗体である。
本発明の一実施形態は、医薬の製造における本明細書中に記載される二重特異性の使用である。
一実施形態において、そのような医薬は、がんの処置のためのものである。
一実施形態において、そのような医薬は、炎症性疾患又は自己免疫疾患を処置するためのものである。
本発明の一実施形態は、がんの処置において使用するための本明細書に記載の二重特異性抗体である。
本発明の一実施形態は、炎症性疾患又は自己免疫疾患の処置において使用するための本明細書に記載の二重特異性抗体である。
本発明の一実施形態は、がんを有する個体を処置する方法であって、該個体に有効量の本明細書に記載の抗体を投与することを含む方法である。
本発明の一実施形態は、炎症性疾患又は自己免疫疾患を有する個体を処置する方法であって、該個体に有効量の本明細書に記載の抗体を投与することを含む方法である。
単一特異性抗ＣＣＬ２抗体（ＣＮＴＯ８８８（＝ＣＮＴＯ）、１Ａ５、１Ｇ９及びヒト化１１Ｋ２（＝１１ｋ２）の組換えＣＣＬ２及びＣＣＬ２ホモログへの結合を示す表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））センサーグラム。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体ＣＮＴＯ８８８－ＳＧ１（野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体ＣＮＴＯ８８８－ＳＧ１０５（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）を、ＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体１１Ｋ２－ＳＧ１（野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体１１Ｋ２－ＳＧ１０５（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）を、ＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体ＡＢＮ９１２－ＳＧ１（野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体ＡＢＮ９１２－ＳＧ１０５（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）を、ＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ａ４－ＳＧ１（野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ａ４－ＳＧ１０５（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）を、ＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ａ５－ＳＧ１（野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ａ５－ＳＧ１０５（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）を、ＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ｇ９－ＳＧ１（野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ｇ９－ＳＧ１０５（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）を、ＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体２Ｆ６－ＳＧ１（野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体２Ｆ６－ＳＧ１０５（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）を、ＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した。 ｉ．ｖ．注射後の血清総マウスＣＣＬ２濃度（図３ａ）及び抗体－時間プロファイル（図３ｂ）の時間経過を示す。ａ）実線：２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体１１Ｋ２－ＳＧ１（野生型ＩｇＧ１）及びｂ）点線：２０ｍｇ／ｋｇの単一特異性抗ＣＣＬ２抗体１１Ｋ２－ＳＧ１０５（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）をマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体１１Ｋ２／／１Ｇ９－ＷＴ ＩｇＧ１（インタクトＦｃ受容体結合を有する野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体１１Ｋ２／／１Ｇ９－ＰＧＬＡＬＡ（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）をＢａｌｂ／ｃマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体ＣＮＴＯ８８８／／１１Ｋ２－ＷＴ ＩｇＧ１（インタクトＦｃ受容体結合を有する野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体ＣＮＴＯ８８８／／１１Ｋ２－ＰＧＬＡＬＡ（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）をＢａｌｂ／ｃマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体ＣＮＴＯ８８８／／１Ｇ９－ＷＴ ＩｇＧ１（インタクトＦｃ受容体結合を有する野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体１１Ｋ２／／１Ｇ９－ＰＧＬＡＬＡ（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）をＢａｌｂ／ｃマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体ＣＮＴＯ８８８／／１Ａ５－ＷＴ ＩｇＧ１（インタクトＦｃ受容体結合を有する野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体ＣＮＴＯ８８８／／１Ａ５－ＰＧＬＡＬＡ（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）をＢａｌｂ／ｃマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ａ５／／１Ｇ９－ＷＴ ＩｇＧ１（インタクトＦｃ受容体結合を有する野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ａ５／／１Ｇ９－ＰＧＬＡＬＡ（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）をＢａｌｂ／ｃマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体１１Ｋ２／／２Ｆ６－ＷＴ ＩｇＧ１（インタクトＦｃ受容体結合を有する野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体１１Ｋ２／／２Ｆ６－ＰＧＬＡＬＡ（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）をＢａｌｂ／ｃマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体ＡＢＮ９１２／／１１Ｋ２－ＷＴ ＩｇＧ１（インタクトＦｃ受容体結合を有する野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体ＡＢＮ９１２／／１１Ｋ２－ＰＧＬＡＬＡ（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）をＢａｌｂ／ｃマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ａ４／／２Ｆ６－ＷＴ ＩｇＧ１（インタクトＦｃ受容体結合を有する野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ａ４／／２Ｆ６－ＰＧＬＡＬＡ（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）をＢａｌｂ／ｃマウスに投与した。 以下からなる予め形成された免疫複合体のｉ．ｖ．注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。ａ）実線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ａ５／／２Ｆ６－ＷＴ ＩｇＧ１（インタクトＦｃ受容体結合を有する野生型ＩｇＧ１）又はｂ）点線：０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２（ｈＣＣＬ２）及び２０ｍｇ／ｋｇの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体１Ａ５／／２Ｆ６－ＰＧＬＡＬＡ（Ｆｃ受容体結合サイレンシングＩｇＧ１）をＢａｌｂ／ｃマウスに投与した。 ｐＨ７．４（黒線）及びｐＨ５．８（灰色線）での、４つの改変１１Ｋ２及び４つのＣＮＴＯ８８８バリアントの単量体ＣＣＬ２、並びに４つの改変１１Ｋ２及び４つのＣＮＴＯ８８８バリアントのそれぞれの組み合わせ抗原結合部分から生じる１６個の二重特異性抗ＣＣＬ２抗体ＣＫＬＯ０１～ＣＫＬＯ１６への結合プロファイルを示すＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）センサーグラム。 ４つの改変１１Ｋ２及び４つのＣＮＴＯ８８８バリアントの単量体ＣＣＬ２、並びに４つの改変１１Ｋ２及び４つのＣＮＴＯ８８８バリアントのそれぞれの組み合わせ抗原結合部分から生じる１６個の二重特異性抗ＣＣＬ２抗体ＣＫＬＯ０１～ＣＫＬＯ１６への結合プロファイルを示すＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）センサーグラム。ｐＨ５．８での更なる解離相を、ｐＨ７．４での解離相の直後にＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイに組み込んだ。 ｐＨ７．４（黒線）及びｐＨ５．８（灰色線）での、単量体ＣＣＬ８に対する二重特異性抗ＣＣＬ２抗体ＣＫＬＯ０１、ＣＫＬＯ０２、ＣＫＬＯ０３及びＣＫＬＯ０４の結合プロファイルを示すＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）センサーグラム。 ｈＣＣＬ２及び二重特異性抗ＣＣＬ２抗体（親ＣＮＴＯ／／１１Ｋ２及びｐＨ依存性バリアントＣＫＬＯ０１、ＣＫＬＯ０２、ＣＫＬＯ０３及びＣＫＬＯ０４）からなる予め形成された免疫複合体をＳＣＩＤマウスに注射した後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。 ｈＣＣＬ２及びＣＫＬＯ０３（ＩｇＧ１野生型Ｆｃを含む）又はＣＫＬＯ０３－ＳＧ１０９９（ｐＩ Ｆｃが増強されたＣＫＬＯ０３）からなる予め形成された免疫複合体をＳＣＩＤマウスに注射した後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。 走化性アッセイ：同一のＣＤＲ及び可変領域ＶＨ／ＶＬを有する（すなわちＣＫＬＯ２－ＩｇＧ１野生型及びＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９５）が異なるＦｃ部分を有する二重特異性抗ＣＣＬ２抗体は、同一の効力でＴＨＰ－１細胞の遊走を阻害することができる（ＩＣ５０＝０．２μｇ／ｍｌ；図８、左パネル）。 同様に、ｐＨ非依存性であるＣＣＬ２－００４８（ＣＫＬＯ２の親非改変二重特異性抗体ＣＮＴＯ８８８／１１ｋ２ｋ２ ＩｇＧ１）もまた、ｐＨ依存性は抗原掃引に重要であるので（このアッセイでは起こらない現象である）、０、２μｇ／ｍｌのＩＣ５０を示す。 対応する単一特異性抗体ＣＮＴＯ８８８ ＩｇＧ １及びヒト化１１ｋ２ ＩｇＧ１は、それぞれ０．３及び０．７μｇ／ｍｌのＩＣ５０値を示すが、ｈｕＩｇＧ１アイソタイプ対照は阻害を示さない（図８、右パネル）。 遺伝子改変マウスモデルにおけるインビボ抗腫瘍活性。Ｍａｂ ＣＫＬＯ２－ＩｇＧ１（Ｆｃ野生型ＩｇＧ１）及びＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９（＝ＣＫＬＯ２ ｐＩ増強）によるマウス腫瘍モデルの処置。試験終了時の腫瘍体積（左）、腫瘍重量（中央）及びＭ－ＭＤＳＣ浸潤物（右）。（黒色はビヒクル、灰色はＣＫＬＯ２野生型ＩｇＧ１、及び白色バー／点線はＣＫＬＯ２ ｐＩ増強Ｆｃ（ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９）） 二重特異性抗ＣＣＬ２抗体（黒色はビヒクル、灰色はＣＫＬＯ２野生型ＩｇＧ１、及び白色バー／点線はｐＩ増強Ｆｃ（ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９））で処置したインビボ抗腫瘍活性試験（図９の有効性を参照）中の血清総（左）及び遊離（右）ＣＣＬ２レベル。 カニクイザルにおけるＣＣＬ２掃引効率の概念実証試験。カニクイザルの血清中の総抗体濃度－時間プロファイル；左パネル：４つの抗体の平均濃度－時間プロファイルを７日間にわたって示す；群１：最大総ＣＣＬ２蓄積の対照としての単一特異性ＣＮＴＯ８８８－ＳＧ１（＝ＩｇＧ１野生型）抗ＣＣＬ２抗体（ｎ＝３動物）；群２：ｐＨ依存性標的結合を有するがＦｃ修飾を有さない二重パラトピック（ｂｉｐａｒａｔｏｐｉｃ）抗ＣＣＬ２抗体ＣＫＬＯ２－ＳＧ１（ＩｇＧ１野生型）（ｎ＝３）；群３：ｐＨ依存性標的結合及びＦｃ－ｐＩ及び更なる修飾を有する二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体ＣＫＬＯ２－ＳＧ１１００（ｎ＝４）、並びに群４：ｐＨ依存性標的結合、Ｆｃ－ｐＩ及びＦｃγＲＩＩｂ親和性増強及び更なる修飾を有する二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９５（ｎ＝４）。右パネル：ＰＫ試験期間（７０日間）にわたる個体４（群２）の個々の濃度－時間プロファイルを示す。 カニクイザルにおけるＣＣＬ２掃引効率の概念実証試験。カニクイザルの血清中の総ＣＣＬ２濃度－時間プロファイル；左パネル：４つの抗体の平均総ＣＣＬ２濃度－時間プロファイルを７日間にわたって示す；右パネル：ＰＫ試験期間（７０日間）にわたって、個体４（群２）の個々の総ＣＣＬ２濃度－時間プロファイルを示す。 カニクイザルの血清中遊離ＣＣＬ２濃度－時間プロファイル；左パネル：４つの抗体の平均遊離ＣＣＬ２濃度－時間プロファイルを７日間にわたって示す；右パネル：ＰＫ試験期間（７０日間）にわたる個体４（群２）の個々の遊離ＣＣＬ２濃度－時間プロファイルを示す；検出限界未満の試料については０．０１ｎｇ／ｍＬ（定量下限）の値を用いて平均プロファイルを計算した。 カニクイザルにおけるＣＣＬ２掃引効率のＰＫ／ＰＤ試験。カニクイザルの血清中の総ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５濃度－時間プロファイル（異なる濃度でのＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５処置（群１～３））；左パネル：３つの用量レベルについての平均濃度－時間プロファイル（ｎ＝４）を７日間にわたって示す；右パネル：試験期間（９８日間）にわたる、２匹のＡＤＡ陰性個体動物（２５ｍｇ／ｋｇ用量群）の個々の濃度－時間プロファイルを示す。 カニクイザルにおけるＣＣＬ２掃引効率のＰＫ／ＰＤ試験。異なる濃度でのＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５処置下（群１～３）のカニクイザルの血清中の総ＣＣＬ２濃度－時間プロファイル及びＣＮＴＯ８８８－ＳＧ１処置（群４）との比較；左パネル：４つの試験群の平均総ＣＣＬ２濃度－時間プロファイル（エラーバーはＳＤを示す）を７日間にわたって提示する；右パネル：群３（ｎ＝２、エラーバーは範囲を示す）及び群４（ｎ＝３、エラーバーはＳＤを示す）のＡＤＡ陰性動物の個々の総ＣＣＬ２濃度－時間プロファイルをＰＫ試験期間（９８日間）にわたって示す。 カニクイザルにおけるＣＣＬ２掃引効率のＰＫ／ＰＤ試験。カニクイザルの血清中遊離ＣＣＬ２濃度－時間プロファイル；左パネル：４つの試験群の平均遊離ＣＣＬ２濃度－時間プロファイル（エラーバーはＳＤを示す）を７日間にわたって示す（異なる濃度でのＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５処置（群１～３）及びＣＮＴＯ８８８－ＳＧ１処置（群４）との比較）；右パネル：群３（ｎ＝２、エラーバーは範囲を示す）及び４（ｎ＝３、エラーバーはＳＤを示す）のＡＤＡ陰性動物の平均遊離ＣＣＬ２濃度－時間プロファイルをＰＫ試験期間（７０日間）にわたって示す；検出限界未満の試料については０．０１ｎｇ／ｍＬ（定量下限）の値を用いて平均プロファイルを計算した。
発明の詳細な説明
本発明は、ヒトＣＣＬ２上の２つの異なるエピトープに結合する二重特異性抗ＣＣＬ２抗体、その医薬組成物、それらの製造、並びに、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患及び眼科疾患の処置のための医薬としての使用に関する。したがって、抗体は、ヒトＣＣ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する異なる第２の抗原結合部位とを含む。
本発明は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む二重特異性抗体を含み、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む抗体と同じＣＣＬ２上のエピトープに結合し、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む抗体と同じＣＣＬ２上のエピトープに結合する。
１つの実施形態において、ヒト野生型ＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）が、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃガンマ受容体サイレンシング定常重鎖ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）と比較して、２０ｍｇ／ｋｇの各二重特異性抗体及び０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２からなる予め形成された免疫複合体を１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した場合に、少なくとも１５倍高く、特に少なくとも２０倍高い。
「エピトープ」という用語は、抗体に対して特異的に結合することができる任意のポリペプチド決定基を含む。特定の実施形態では、エピトープ決定基は、分子の化学的に活性な表面基、例えば、アミノ酸類、糖側鎖、ホスホリル、又はスルホニルを含み、特定の実施形態では、特定の三次元構造特徴、及び／又は特定の電荷特徴を有していてもよい。エピトープは、抗体によって結合される抗原の領域である。本発明は、ヒトＣＣＬ２上の２つの異なるエピトープに結合する二重特異性抗ＣＣＬ２抗体に関する。第１のエピトープ及び第２のエピトープという用語は、ヒトＣＣＬ２上の２つの異なるエピトープを指す。したがって、第２のエピトープは第１のエピトープとは異なる。抗体が参照抗ＣＣＬ２抗原結合部位と同じエピトープに結合するか、又は結合について競合するかどうかは、当技術分野で公知の日常的な方法を使用することによって容易に決定することができる。例えば、試験抗体が本発明の参照抗ＣＣＬ２抗原結合部位と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体を飽和条件下でそのＣＣＬ２ドメインに結合させる。次に、試験抗体がヒトＣＣＬ２に結合する能力を評価する。試験抗体が参照抗ＣＣＬ２抗原結合部位との飽和結合後にヒトＣＣＬ２に結合することができる場合、試験抗体は参照抗ＣＣＬ２抗原結合部位とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。一方、試験抗体が、参照抗ＣＣＬ２抗体との飽和結合後にヒトＣＣＬ２に結合することができない場合、試験抗体は、本発明の参照抗ＣＣＬ２抗体によって結合されるエピトープと同じエピトープに結合し得る。次いで、試験抗体の結合の観察された欠如が実際に参照抗体と同じエピトープへの結合によるものであるかどうか、又は立体遮断（又は別の現象）が観察された結合の欠如の原因であるかどうかを確認するために、更なる日常的な実験（例えば、ペプチド突然変異及び結合分析）を行うことができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）、フローサイトメトリー、又は当技術分野で利用可能な任意の他の定量的若しくは定性的抗体結合アッセイを使用して行うことができる。本発明の特定の実施形態によれば、２つの抗体は、例えば、１倍、５倍、１０倍、２０倍又は１００倍過剰の一方の抗体が、競合結合アッセイ（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０：５０：１４９５－１５０２を参照）で測定した場合に、他方の結合を少なくとも５０％、好ましくは７５％、９０％又はさらには９９％阻害する場合、同じ（又は重複する）エピトープに結合する。
あるいは、一方の抗体の結合を低下又は排除する抗原のアミノ酸変異のうち、実質的に全てのアミノ酸変異が他方の抗体の結合を低下又は排除する場合、２つの抗体は同じエピトープに結合するとみなされる。２つの抗体は、一方の抗体の結合を減少又は排除するアミノ酸変異のサブセットのみが、他方の抗体の結合を減少又は排除する場合、「重複エピトープ」を有するとみなされる。
抗体が結合について参照抗ＣＣＬ２抗体と競合するかどうかを決定するために、上記の結合方法論は２つの方向で行われる。第１の方向では、参照抗体を飽和条件下でＣＣＬ２に結合させ、続いて試験抗体のヒトＣＣＬ２への結合を評価する。第２の方向では、試験抗体を飽和条件下でＣＣＬ２分子に結合させ、続いて参照抗体のヒトＣＣＬ２への結合を評価する。両方の方向において、第１の（飽和）抗体のみがＣＣＬ２分子に結合することができる場合、試験抗体及び参照抗体はＣＣＬ２への結合について競合すると結論付けられる。当業者には理解されるように、結合について参照抗体と競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同じエピトープに結合するとは限らないが、重複又は隣接するエピトープに結合することによって参照抗体の結合を立体的に遮断し得る。
本明細書で使用される場合、「ＭＣＰ－１」とも呼ばれる「ＣＣＬ２」、「ヒトＣＣＬ２」という用語は、ＮＣＢＩ記録アクセッション番号ＮＰ＿００２９７３で参照され、ＣＣＬ２、ＭＣＰ－１（単球走化性タンパク質１）、ＳＭＣ－ＣＦ（平滑筋細胞走化性因子）、ＬＤＣＦ（リンパ球由来走化性因子）、ＧＤＣＦ（神経膠腫由来単球走化性因子）、ＴＤＣＦ（腫瘍由来走化性因子）、ＨＣｌ１（ヒトサイトカイン１１）、ＭＣＡＦ（単球走化性及び活性化因子）として様々に知られている７６アミノ酸配列を意味する。遺伝子記号はＳＣＹＡ２、ヒト１７番染色体上のＪＥ遺伝子であり、新たな名称はＣＣＬ２である（Ｚｌｏｔｎｉｋ，Ｙｏｓｈｉｅ ２０００．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １２：１２１－１２７）。ＪＥはヒトＭＣＰ－１／ＣＣＬ２のマウスホモログである。
ＨａｎｄｅｌらＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１９９６；３５：６５６９－６５８４）は、ＣＣＬ２二量体の溶液構造を決定した。これらの研究は、ＣＣＬ２の二次構造が４つのβシートからなることを示した。さらに、ＣＣＬ２の二量体化界面を担う残基は、Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｒｏｌｌｉｎｓ（Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９９５；１５：４８５１－４８５５）によって記載されている。タンパク質複合体は、２つのモノマーが大きなポケットを形成するように配向された伸長したように見える。２つの結晶形態、いわゆるＩ及びＰ形態の単量体及び二量体ＣＣＬ２の構造も決定されている（Ｌｕｂｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ．１９９７；４：６４－６９）。Ｐａｏｌｉｎｉら（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４ Ｓｅｐ １５；１５３（６）：２７０４－１７）は、ＭＣＰ１／ＣＣＬ２が生理学的に適切な濃度でモノマーとして存在することを記載した：ｒｅｃ．ＣＣＬ２タンパク質（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈから購入）をサイズ排除ＨＰＬＣ、沈降平衡超遠心法、化学架橋で分析することにより、ＭＣＰ－１の単量体及び二量体の重量分率がインビトロでの協働に依存することを示すことができた。最後に、Ｓｅｏ及び共同研究者（Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ．２０１３ Ｍａｒ ２０；１３５（１１）：４３２５－３２）は、イオン移動度質量分析によって、生理学的条件下で単量体及び二量体の両方の形態の注入されたＣＣＬ２の存在を示すことができた。
したがって、「野生型ＣＣＬ－２」（ｗｔ ＣＣＬ２）は単量体として存在することができるが、実際には生理学的濃度で二量体を形成することもできる。この単量体－二量体の平衡は確かに異なり、異なる濃度が使用され得る記載された全てのインビトロ実験について慎重に考慮する必要がある。不確実性を回避するために、本発明者らは点突然変異ＣＣＬ２バリアントを作製した：ＣＣＬ２の「Ｐ８Ａ」バリアントは、二量体化界面に突然変異を保有し、その結果、定義された純粋なＣＣＬ２単量体をもたらす二量体を形成することができない。対照的に、ＣＣＬ２の 「Ｔ１０Ｃ」バリアントは、ＣＣＬ２の固定二量体をもたらす（Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ．２０１３ Ｍａｒ ２０；１３５（１１）：４３２５－３２）。
ＣＣＬ２／ＣＣＲ２軸は、腫瘍への未成熟骨髄細胞の動員の主なメディエータである。ＣＣＬ２は悪性細胞によって過剰発現され、化学誘引物質勾配を構築する細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に結合する。一旦腫瘍に達すると、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）は、抗腫瘍Ｔ細胞応答の開始を阻害する抗炎症性サイトカイン／受容体を分泌／上方制御することによって腫瘍形成促進環境に寄与する。このようにして、ＭＤＳＣは、任意のＴ細胞活性化療法（Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ，２０１４）の有効性を低下させるか、又は損なうことさえあり得る。したがって、これらの未成熟骨髄細胞の動員の特異的阻害は、チェックポイント阻害剤、Ｔ細胞二重特異性及びがん免疫療法の有効性を高める。さらに、ＣＣＬ２は、血管新生、転移及び腫瘍成長の促進にも関与しており、ＣＣＬ２の中和がいくつかの抗腫瘍介入に寄与し得ることを示唆している。
ＣＣＬ２を標的化することは、その受容体とは対照的に、望ましくないＣＣＬ２媒介効果を特異的に阻害し、Ｔｈ１及びＮＫ細胞のような他の免疫細胞集団の動員に関与する同じ受容体（ＣＣＲ２）であるが異なるリガンド（例えば、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３）を介してシグナル伝達し得るものを節約する。
臨床的には、ＣＣＬ２は、関節リウマチ（Ｈａｒｉｎｇｍａｎ ｅｔ ａｌ，２００６）、特発性肺線維症（Ｒａｇｈｕ ｅｔ ａｌ，２０１５）、糖尿病性腎症（Ｍｅｎｎｅ ｅｔ ａｌ，２０１６）、及び、がん（Ｓａｎｄｈｕ ｅｔ ａｌ，２０１３）などの異なる炎症性疾患によって引き起こされるその上昇したレベルを中和することを目的としたいくつかの研究において好ましい抗体標的であった。しかし、その高い合成速度は、観察された高いインビボ抗体－抗原解離定数（ＫＤ）と共に、臨床的に実行可能な用量での従来の抗体による遊離ＣＣＬ２の抑制を妨げる主な障害であることが証明されている（Ｆｅｔｔｅｒｌｙ ｅｔ ａｌ，２０１３）。
ＣＣＬ２中和は、乳がん（ＢＣ）、卵巣がん（ＯｖＣａ）、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、膵臓がん及び前立腺がんなどのいくつかの種類のがんで観察されている、ＣＣＬ２の血清レベルが上昇した患者においてより明らかに関連するようである。しかし、この血清学を提示しないが、腫瘍が骨髄系統の免疫細胞で高度に浸潤されているこれらの適応症内の患者であっても、上記のように腫瘍状況においてＣＣＬ２が果たす多くの役割のために、この新規治療から非常に利益を得ることができる。
本明細書で使用される場合、「ヒトＣＣＬ２に結合する」、「ヒトＣＣＬ２に特異的に結合する」、「ヒトＣＣＬ２に結合する」又は「抗ＣＣＬ２」抗体は、５．０×１０－８ｍｏｌ／ｌ以下のＫＤ値、一実施形態では１．０×１０－９ｍｏｌ／ｌ以下のＫＤ値、一実施形態では５．０×１０－８ｍｏｌ／ｌ～１．０×１０－１３ｍｏｌ／ｌのＫＤ値の結合親和性で、ヒトＣＣＬ２抗原に特異的に結合する抗体を指す。
結合親和性は、例えばＣＣＬ２細胞外ドメイン（例えば、その天然に存在する３次元構造）を含む構築物を使用して、表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、ＧＥ－Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ウプサラ、スウェーデン）等の標準的な結合アッセイで決定される。一実施形態では、結合親和性は、例示的な可溶性ＣＣＬ２を使用する標準的な結合アッセイで決定される。
抗体の特異性は、抗原の特定のエピトープに対する抗体の選択的認識を指す。例えば、天然の抗体は、単一特異性である。
本明細書で使用される「単一特異性」抗体という用語は、同じ抗原の同じエピトープにそれぞれ結合する１つ以上の結合部位を有する抗体を示す。
本明細書で使用される「（ヒト）ＣＣＬ２に結合する二重特異性抗体」、「（ヒト）ＣＣＬ２に結合する二重パラトピック抗体」、「二重特異性抗ＣＣＬ２抗体」、「二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体」という用語は、抗体が（ヒト）ＣＣＬ２上の少なくとも２つの異なるエピトープに特異的に結合することができることを意味する。典型的には、そのような二重特異性抗体は、２つの異なる抗原結合部位（２つの異なるパラトープ）を含んでおり、それぞれが（ヒト）ＣＣＬ２の異なるエピトープに特異的である。特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＣＬ２上の２つの異なる重複しないエピトープに結合することができ、これは、２つの異なる抗原結合部位がＣＣＬ ２への結合について競合しないことを意味する。
本明細書の目的において「受容体ヒトフレームワーク」とは、以下に定義するように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、又はアミノ酸配列の変更を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸変更の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に対して、配列が同一である。
「抗体」という用語は、ここでは最も広い意味で使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含めた（これらに限定されない）、様々な抗体構造を包含する。
「抗体断片」とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多特異的抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「価数」という用語は、抗体内の特定数の抗原結合部位の存在を示す。したがって、「抗原に対する一価の結合」という用語は、抗体内の抗原に特異的な１つの（及び１つを超えない）抗原結合部位の存在を示す。
「抗原結合部位」という用語は、抗原との相互作用を提供する抗体の部位又は領域、すなわち１つ又はいくつかのアミノ酸残基を指す。例えば、抗体の抗原結合部位は、相補性決定領域（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含む。一実施形態において、抗体の抗原結合部位はＶＨ及びＶＬ由来のアミノ酸残基を含む。ネイティブ免疫グロブリン分子は、典型的には、２つの抗原結合部位を含み；Ｆａｂ分子は、典型的には、１つの抗原結合部位を有する。「抗原結合部分」は、抗原決定基に特異的に結合する抗原結合部位を含むポリペプチド分子を指す。抗原結合部分は、本明細書に更に定義される抗体及びその断片を含む。特定の抗原結合部分は、抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域とを含む、抗体の抗原結合ドメインを含む。特定の実施形態では、抗原結合部分は、本明細書で更に定義され、当該技術分野で知られているような抗体定常領域を含んでいてもよい。有用な重鎖定常領域は、α、δ、ε、γ又はμの５つのアイソタイプのいずれかを含む。有用な軽鎖定常領域は、κ及びλの２つのアイソタイプのいずれかを含む。
本明細書で使用される場合、「抗原決定基」又は「抗原」という用語は、抗原結合部分／部位が結合して抗原結合部分－抗原複合体を形成するポリペプチド高分子上の部位を指す。有用な抗原決定基は、例えば、腫瘍細胞の表面上に、ウイルス感染した細胞の表面上に、他の疾患細胞の表面上に、免疫細胞の表面上に、血清中で遊離して、及び／又は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）中に認めることができる。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の供給源又は種に由来する抗体を指し、一方、重鎖及び／又は軽鎖の残りは、異なる供給源又は種に由来する。
抗体の「クラス」とは、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体には、次の５種類の主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、下位クラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。好ましくは、本発明の二重特異性抗体はヒトＩｇＧアイソタイプのものであり、より好ましくはヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである。本明細書で使用されるＩｇＧアイソタイプ及びＩｇＧ１アイソタイプという用語は、ヒトＩｇＧアイソタイプ及びヒトＩｇＧ１アイソタイプを指す。典型的には、異なるＩｇＧアイソタイプは、ＩｇＧサブクラス間の対立遺伝子変異に基づいてわずかに異なるアロタイプの形態で存在する（Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．；Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５（２０１４）Ａｒｔｉｃｌｅ ５２０，１－１７を参照）。薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要な薬用量及び所要期間で有効な量を指す。
本明細書における「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界は、わずかに変動してもよいが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシ末端まで伸長するよう規定されている。しかしながら、宿主細胞によって産生される抗体は、重鎖のＣ末端から１つ又は複数、特に１つ又は２つのアミノ酸の翻訳後開裂を受けてもよい。したがって、全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現によって、宿主細胞によって産生する抗体は、全長重鎖を含んでいてもよく、又は全長重鎖の開裂したバリアントを含んでいてもよい（本明細書で「開裂したバリアント重鎖」とも呼ばれる）。これは、重鎖の最終的な２つのＣ末端アミノ酸がグリシン（Ｇ４４６）及びリジン（Ｋ４４７、Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）である場合であってもよい。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）、又はＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）及びリジン（Ｋ４４７）が存在してもよく、又は存在していなくてもよい。Ｆｃドメイン（又は本明細書に定義されるＦｃドメインのサブユニット）を含む重鎖のアミノ酸配列は、特に示されていない場合には、本明細書では、Ｃ末端グリシン－リジンジペプチドを含まずに示される。本発明の一実施形態では、本発明に係る抗体又は二重特異性抗体に含まれる本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖は、更なるＣ末端グリシン－リジンジペプチド（Ｇ４４６及びＫ４４７、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング）を含む。本発明の一実施形態では、本発明に係る抗体又は二重特異性抗体に含まれる本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖は、更なるＣ末端グリシン残基（Ｇ４４６、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング）を含む。本発明の組成物、例えば、本明細書に記載の医薬組成物は、本発明の抗体又は二重特異性抗体の集合を含む。抗体又は二重特異性抗体の集団は、完全長重鎖を有する分子及び切断されたバリアント重鎖を有する分子を含み得る。抗体又は二重特異性抗体の集団は、完全長重鎖を有する分子と切断されたバリアント重鎖を有する分子との混合物からなり得、抗体又は二重特異性抗体の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％が切断されたバリアント重鎖を有する。本発明の一実施形態では、本発明の抗体又は二重特異性抗体の集合を含む組成物は、更なるＣ末端グリシン－リジンジペプチド（Ｇ４４６及びＫ４４７、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング）を含む、本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖を含む抗体又は二重特異性抗体を含む。本発明の一実施形態では、本発明の抗体又は二重特異性抗体の集合を含む組成物は、更なるＣ末端グリシン残基（Ｇ４４６、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング）を含む、本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖を含む抗体又は二重特異性抗体を含む。本発明の一実施形態では、そのような組成物は、本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖を含む分子、更なるＣ末端グリシン残基（Ｇ４４６、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング）を含む本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖を含む分子、更なるＣ末端グリシン－リジンジペプチド（Ｇ４４６及びＫ４４７、ＫａｂａｔのＥＵインデックスによるナンバリング）を含む本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖を含む分子で構成される抗体又は二重特異性抗体の集合を含む。本明細書で特に明記されない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１（上も参照されたい）に記載されるような、「ＥＵナンバリングシステム」（「ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ったナンバリング」又は「Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング」とも呼ばれる）に従う。本明細書において使用されるＦｃドメインの「サブユニット」は、二量体Ｆｃドメインを形成する二つのポリペプチドの一方、即ち、免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含み、安定な自己会合能を有するポリペプチドを指す。例えば、ＩｇＧ Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３定常ドメインを含む。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４からなる。したがって、ＣＤＲ及びＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（又はＶＬ）中において以下の配列で現れる：ＦＲ－Ｈ１（Ｌ１）－ＣＤＲ－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ－Ｈ２（Ｌ２）－ＣＤＲ－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ－Ｈ３（Ｌ３）－ＣＤＲ－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ－Ｈ４（Ｌ４）。
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」及び「全抗体」とは、本明細書では相互に交換可能に使用され、天然抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す。
「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞により産生される抗体、又はヒト抗体レパートリー若しくはヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト起源由来の抗体のアミノ酸に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｖｏｌｓ．１－３におけるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬに関して、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上記参照）におけるようなサブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨに関して、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上記参照）におけるようなサブグループＩＩＩである。
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＣＤＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むものであり、それにおいて、ＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに相当し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに相当する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」とは、ヒト化を受けた抗体を指す。
「相補鎖決定領域」又は「ＣＤＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列において超可変性であり、及び／又は構造的に所定のループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／又は抗原に接触する残基（「抗原接触」）を含有する抗体可変ドメインのそれぞれの領域を指す。一般に、抗体は６つのＣＤＲを含み、３つがＶＨにあり（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）、３つがＶＬにある（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）。本明細書における例示的なＣＤＲとしては、以下が挙げられる：
（ａ）アミノ酸残基２６～３２（ＣＤＲ－Ｌ１）、５０～５２（ＣＤＲ－Ｌ２）、９１～９６（ＣＤＲ－Ｌ３）、２６～３２（ＣＤＲ－Ｈ１）、５３～５５（ＣＤＲ－Ｈ２）及び９６～１０１（ＣＤＲ－Ｈ３）で生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））；
（ｂ）アミノ酸残基２４～３４（ＣＤＲ－Ｌ１）、５０～５６（ＣＤＲ－Ｌ２）、８９～９７（ＣＤＲ－Ｌ３）、３１～３５ｂ（ＣＤＲ－Ｈ１）、５０－６５（ＣＤＲ－Ｈ２）及び９５～１０２（ＣＤＲ－Ｈ３）で生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（ＣＤＲ－Ｌ１）、４６－５５（ＣＤＲ－Ｌ２）、８９－９６（ＣＤＲ－Ｌ３）、３０－３５ｂ（ＣＤＲ－Ｈ１）、４７－５８（ＣＤＲ－Ｈ２）、及び９３－１０１（ＣＤＲ－Ｈ３）で生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６））；並びに
（ｄ）ＣＤＲアミノ酸残基２４～３４（ＣＤＲ－Ｌ１）、５０～５６（ＣＤＲ－Ｌ２）、８９～９７（ｖＬ３）、３１～３５（ＣＤＲ－Ｈ１）、５０～６３（ＣＤＲ－Ｈ２）及び９５～１０２（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む（ａ）、（ｂ）及び／又は（ｃ）の組み合わせ。
別段の示がない限り、可変ドメイン中のＣＤＲ残基及び他の残基（例えばＦＲ残基）は、本明細書ではＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に従ってナンバリングされる。
「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギ及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、個体又は対象はヒトである。
「単離された」抗体とは、その自然環境の構成要素から分離されているものである。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフ（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）によって決定される、９５％超又は９９％超の純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８（２００７）７９－８７を参照されたい。
「単離された」核酸は、その天然環境の構成要素から分離された核酸分子を指す。単離された核酸には、通常核酸分子を含む細胞内に含まれる核酸分子が含まれるが、核酸分子は、染色体外、又は天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
「単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体をコードする単離された核酸」とは、抗体の重鎖及び軽鎖（又はそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内のそのような核酸分子（複数可）を含み、そのような核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、及び／又は同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有するか、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、起こり得るバリアント抗体は例外であり、かかるバリアントは一般的に少量で存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤のそれぞれのモノクローナル抗体は、１つの抗原上の単一の決定基に対して指向する。したがって、修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集合から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするように解釈すべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含めた（これらに限定されない）多様な技法によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載されている。
「ネイティブ抗体」とは、様々な構造を持つネイティブに存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、２本の同一の軽鎖と２本の同一の重鎖がジスルフィド結合したものを含む、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端までの各重鎖は、可変重ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、これに３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、これに定常軽（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類の１つに割り当てられ得る。
「パッケージ添付文書」との用語は、治療製品の市販パッケージに通常含まれる指示を指すために用いられ、このような治療製品に関する適応症、使用、投薬量、投与、併用療法、禁忌及び／又は警告に関する情報を含む。
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列の同一性パーセント（％）」は、配列をアラインメントし、最大の配列同一性パーセントを達成するために、必要ならばギャップを導入した後、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合であると定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のための整列は、当技術分野における技術の範囲内にある種々の方法において、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列のアラインメントのための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を用いて生成している。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．が作成したものであり、ソースコードは、使用者用書類と共に、米国著作権局、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、２０５５９に提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルし得る。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含め、ＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定されており、変わらない。
ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ｂへの、アミノ酸配列Ｂとの、又はアミノ酸配列Ｂに対する、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、アミノ酸配列Ｂとの、又はアミノ酸配列Ｂに対する、ある特定のアミノ酸配列同一性％を有する又は含む、所与のアミノ酸配列Ａとして記述され得る）は、以下のように計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、Ａ及びＢのこのプログラムのアラインメントにおいて、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって同一性マッチとしてスコアリングされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の合計数である。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％に等しくないことが理解されるだろう。他の意味であると具体的に述べられていない限り、本明細書で使用されるアミノ酸配列同一性％の値は全て、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを用いる直前の段落に記載されるように得られる。
「医薬製剤」という用語は、調製物中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を全く含有しない調製物を指す。
「薬学的に許容され得る担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容され得る担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「処置」（及びその文法的な変形語、例えば、「処置する」又は「処置すること」）は、処置される個体の本来の経過を変える試みにおける臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理の経過の間に行うことができる。処置の所望の効果としては、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の軽減、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の減弱、転移を予防すること、疾患進行率を低下させること、病状の寛解又は緩和、及び回復又は改良された予後が挙げられる。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるために、又は疾患の進行を遅らせるために使用される。
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体と抗原との結合に関与する、抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は、一般に類似の構造を有し、各ドメインが４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＣＤＲ）を含む。（例えばＫｉｎｄｔ，Ｔ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．（２００７），９１頁を参照）抗原結合特異性を付与するには、単一のＶＨ又はＶＬドメインで十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体のＶＨ又はＶＬドメインを使用し、それぞれ、相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリをスクリーニングして、単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０（１９９３）８８０－８８７；Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２（１９９１）６２４－６２８）を参照。
「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、それが連結している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製する核酸構造としてのベクター、及びベクターが導入された宿主細胞のゲノム内へと組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが機能的に連結されている核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターを、本明細書では「発現ベクター」と呼ぶ。
Ｉ．組成物及び方法
一態様では、本発明は、本明細書に記載の二重特異性抗体が、第１及び第２の抗原結合部位／部分として異なる抗ＣＣＬ２抗原結合部位を使用するという知見に部分的に基づく。これらの抗ＣＣＬ２抗体は、ＣＣＬ２の特定のエピトープに高い特異性で結合し、その受容体ＣＣＲ２へのＣＣＬ２の結合を特異的に阻害する能力を有する。それらは、単一特異性抗体と比較して改善された免疫複合体形成及びインビボでの改善されたＣＣＬ２抑制を示す。
二重特異性抗ＣＣＬ２抗体
二重特異性抗体
本明細書に記載の二重特異性抗体は、ＣＣＬ２上の少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。
多重特異性抗体及び二重特異性抗体を作製するための技法には、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖ペアの組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ及びＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）を参照）及び「ノブ－イン－ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号及びＡｔｗｅｌｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６（１９９７）を参照）が含まれる。多重特異性抗体は、また、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果の操作（例えば、国際公開第２００９／０８９００４号参照）；２つ又はそれより多くの抗体若しくは断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号及びＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）参照）；ロイシンジッパーを使用した二重特異性抗体の産生（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）及び国際公開第２０１１／０３４６０５号参照）；軽鎖の誤対合問題を回避するための一般的な軽鎖技術の使用（例えば、国際公開第９８／５０４３１号参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）参照）；及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）参照）；並びに例えばＴｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されている三重特異性抗体の調製によって作製することができる。
例えば、「オクトパス抗体」を含め、３つ又はそれより多くの抗原結合部位を有する操作抗体、又はＤＶＤ－Ｉｇもまたここに含まれる（例えば、国際公開第２００１／７７３４２号及び国際公開第２００８／０２４７１５号を参照）。３つ又はそれより多くの抗原結合部位を有する多重特異性抗体の他の例は、国際公開第２０１０／１１５５８９号、国際公開第２０１０／１１２１９３号、国際公開第２０１０／１３６１７２号、国際公開第２０１０／１４５７９２号、及び国際公開第２０１３／０２６８３１号に見出され得る。二重特異性抗体又はその抗原結合断片には、ＣＣＬ２と別の異なる抗原、又はＣＣＬ２の２つの異なるエピトープに結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」も含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号明細書及び国際公開第２０１５／０９５５３９号を参照）。
多重特異性抗体は、同じ抗原特異性の１つ又は複数の結合アームにドメインクロスオーバーを有する非対称形態で、即ちＶＨ／ＶＬドメイン（例えば、国際公開第２００９／０８０２５２号及び国際公開第２０１５／１５０４４７号参照）、ＣＨ１／ＣＬドメイン（例えば、国際公開第２００９／０８０２５３号参照）又は完全なＦａｂアーム（例えば、国際公開第２００９／０８０２５１号、同第２０１６／０１６２９９号参照、Ｓｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ，１０８（２０１１）１１８７－１１９１，及びＫｌｅｉｎ ａｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ８（２０１６）１０１０－２０）も参照）を交換すること（ＣｒｏｓｓＭａｂとも呼ばれる）によっても提供されうる。非対称結合アームは、荷電又は非荷電アミノ酸変異をドメイン界面に導入して正しいＦａｂペアリングを指向することによって操作することもできる。例えば、国際公開第２０１６／１７２４８５号を参照。
多重特異性抗体の様々なさらなる分子フォーマットが当該技術分野で知られており、本明細書に含まれる（例えば、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６７（２０１５）９５－１０６参照）。
好ましい二重特異性抗体フォーマット。
本発明の特定の実施形態によれば、本明細書中に記載の二重特異性抗体は、同じ抗原特異性の１つ又は複数の結合アームに、すなわちＶＨ／ＶＬドメイン（例えば、国際公開第２００９／０８０２５２号及び国際公開第２０１５／１５０４４７号を参照）、ＣＨ１／ＣＬドメイン（国際公開第２００９／０８０２５３号を参照）又は完全なＦａｂアーム（国際公開第２００９／０８０２５１号、国際公開第２０１６／０１６２９９号を参照、Ｓｃｈａｅｆｅｒら、ＰＮＡＳ、１０８（２０１１）１１８７～１１９１、及びＫｌｅｉｎら、ＭＡｂｓ ８（２０１６）１０１０～２０も参照）を交換することにより、ドメインクロスオーバーを有する。
そのような二重特異性抗体における電荷修飾、特にＶＨ／ＶＬドメインの交換を伴うものである（国際公開第２０１５／１５０４４７号参照）：本発明の二重特異性抗体は、それに含まれるＦａｂ分子に、１つ（又は２つより多い抗原結合Ｆａｂ分子を含む分子の場合には、更に多くの）結合アーム中にＶＨ／ＶＬ交換を有するＦａｂベース二重特異性抗体／抗体の産生において生じ得る、軽鎖と適合しない重鎖との誤対合（ベンス・ジョーンズ型副生成物）を低減するうえで特に効率的であるアミノ酸置換を含み得る（全体が本明細書に参照により組み込まれる国際公開第２０１５／１５０４４７号、特にその中の実施例も参照されたい）。望ましくない副生成物、特に、結合アームの１つにＶＨ／ＶＬドメイン交換を有する二重特異性抗体に生じるベンス・ジョーンズ型副生成物と比較した、所望の二重特異性抗体の比を、ＣＨ１及びＣＬドメインの特定のアミノ酸位置と反対の電荷を有する荷電アミノ酸を導入することによって改善することができる（本明細書で「電荷修飾」と呼ぶことがある）。
したがって、二重特異性抗体の第１及び第２の抗原結合部分が両方ともＦａｂ分子であり、抗原結合部分の１つ（特に、第２の抗原結合部分）において、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬ及びＶＨが互いに置き換わっている、いくつかの実施形態では、
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、正に帯電したアミノ酸によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸又は位置２１３のアミノ酸は、負に帯電したアミノ酸によって置換されているか（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、又は
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、正に帯電したアミノ酸によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸又は位置２１３のアミノ酸は、負に帯電したアミノ酸によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
二重特異性抗体は、ｉ）及びｉｉ）に記述されている修飾を両方とも含むことはない。ＶＨ／ＶＬが置き換わっている抗原結合部分の定常ドメインＣＬ及びＣＨ１は、互いに置き換わっていない（すなわち、交換されていないままである）。
より具体的な実施形態では、
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸又は位置２１３のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されているか（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、又は
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸又は位置２１３のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
そのような一実施形態では、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸又は位置２１３のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
更なる実施形態では、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
特定の実施形態では、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
さらに特定の実施形態では、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸が、リジン（Ｋ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸が、リジン（Ｋ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
更に特定の実施形態では、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸が、リジン（Ｋ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸が、アルギニン（Ｒ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
特定の実施形態では、上の実施形態に係るアミノ酸置換が、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬ及び定常ドメインＣＨ１でなされる場合、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬは、カッパアイソタイプである。
又は、上の実施形態に係るアミノ酸置換が、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬ及び定常ドメインＣＨ１の代わりに、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬ及び定常ドメインＣＨ１でなされていてもよい。特定のそのような実施形態では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬは、カッパアイソタイプである。
したがって、一実施形態では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸又は位置２１３のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
更なる実施形態では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
さらに別の実施形態では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
一実施形態では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸が、リジン（Ｋ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸が、リジン（Ｋ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
別の実施形態では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸が、リジン（Ｋ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸が、アルギニン（Ｒ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
これらの非対称（ヘテロ二量体）タンパク質のＦｃドメインのヘテロ二量体化を改善するために、本発明のこれらの態様による一実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、位置３６６のトレオニン残基がトリプトファン残基で置き換えられており（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、位置４０７のチロシン残基がバリン残基で置き換えられており（Ｙ４０７Ｖ）、任意に位置３６６のトレオニン残基がセリン残基で置き換えられており（Ｔ３６６Ｓ）、位置３６８のロイシン残基がアラニン残基で置き換えられている（Ｌ３６８Ａ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
本発明のこれらの態様による更なる実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、追加的に、位置３５４のセリン残基がシステイン残基で置き換えられている（Ｓ３５４Ｃ）か又は位置３５６のグルタミン酸残基がシステイン残基で置き換えられており（Ｅ３５６Ｃ）（特に、位置３５４のセリン残基がシステイン残基で置き換えられており）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、追加的に、位置３４９のチロシン残基がシステイン残基と置により置き換えられて（Ｙ３４９Ｃ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
代替のヘテロ二量体化技術は、以下に、「Ｆｃドメイン」の下に記載され、本発明のさらなる実施形態としても企図される。
本発明のこれらの態様による更なる実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
Ｆｃドメイン及び修飾
特定の実施形態では、本発明の二重特異性抗体は、第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインを含む。二重特異性抗体に関連して本明細書中に記載されるＦｃドメインの特徴は、本発明の抗体に含まれるＦｃドメインに等しく適用され得ることが理解される。
二重特異性抗体のＦｃドメインは、免疫グロブリン分子の重鎖ドメインを含む一対のポリペプチド鎖からなる。例えば、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分子のＦｃドメインは、ダイマーであり、それぞれのサブユニットは、ＣＨ２及びＣＨ３ ＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む。Ｆｃドメインの２つのサブユニットは、互いに安定な会合が可能である。一実施形態では、本発明の二重特異性抗体は１つを超えるＦｃドメインを含まない。
一実施形態では、二重特異性抗体のＦｃドメインはＩｇＧ Ｆｃドメインである。特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。別の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインである。より具体的な実施形態では、Ｆｃドメインは、位置Ｓ２２８にアミノ酸置換、特にアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むＩｇＧ４Ｆｃドメインである（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）。このアミノ酸置換は、インビボでのＩｇＧ４抗体のＦａｂアーム交換を低減する（Ｓｔｕｂｅｎｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ３８，８４－９１（２０１０）を参照されたい）。更に特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインである。更により特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインである。
ＩｇＧアイソタイプのＦｃドメインは、例えばＦｃガンマ受容体又は新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）とのそれらの相互作用に基づいて様々な特性によって特徴付けられる（例えば、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．；Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ５（２０１４）Ａｒｔｉｃｌｅ ５２０，１－１７を参照）。
ヘテロ二量体化を促進するＦｃドメイン修飾
本発明による二重特異性抗体は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一方又は他方に融合し得る異なる抗原結合部分を含み、したがってＦｃドメインの２つのサブユニットは、典型的には２つの非同一ポリペプチド鎖に含まれる。これらのポリペプチドの組換え同時発現及びその後の二量体化が、２つのポリペプチドのいくつかの可能な組合せをもたらす。組換え産生における二重特異性抗体の収率及び純度を改善するため、二重特異性抗体のＦｃドメインに、所望のポリペプチドの会合を促進する修飾を導入することが有利である。
したがって、特定の実施形態では、本発明に係る二重特異性抗体のＦｃドメインは、Ｆｃドメインの第１及び第２のサブユニットの会合を促進する改変を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインの２つのサブユニット間の最も長いタンパク質－タンパク質相互作用の部位は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメイン内にある。したがって、一実施形態では、当該修飾は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインの中にある。
ヘテロ二量体化を強化するために、ＦｃドメインのＣＨ３ドメイン中の修飾にいくつかの手法が存在し、例えば、国際公開第９６／２７０１１号、国際公開第９８／０５０４３１号、欧州特許第１８７０４５９号、国際公開第２００７／１１０２０５号、国際公開第２００７／１４７９０１号、国際公開第２００９／０８９００４号、国際公開第２０１０／１２９３０４号、国際公開第２０１１／９０７５４号、国際公開第２０１１／１４３５４５号、国際公開第２０１２０５８７６８号、国際公開第２０１３１５７９５４号、国際公開第２０１３０９６２９１号に十分に記載されている。典型的には、全てのかかる手法において、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインと、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインが、両方とも、各ＣＨ３ドメイン（又はそれを含む重鎖）が、自身とホモ二量化せず、相補的に操作された他のＣＨ３ドメインとヘテロ二量化するように仕向けられている相補的な様式で操作されている（その結果、第１のＣＨ３ドメイン及び第２のＣＨ３ドメインがヘテロ二量化し、２つの第１のＣＨ３ドメイン又は２つの第２のＣＨ３ドメインの間のホモ二量体は形成されない）。改善された重鎖ヘテロ二量体化のためのこれらの異なる手法は、重鎖／軽鎖の誤対合及びベンス・ジョーンズ型副生成物を低減する、二重特異性抗体における重鎖－軽鎖修飾との組み合わせでの異なる代替例として考慮される（例えば、１つの結合アームにおけるＶＨ及びＶＬの交換／置き換え、並びにＣＨ１／ＣＬ界面における反対の電荷を有する荷電アミノ酸の置換の導入）。
具体的な実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニット及び第２のサブユニットの会合を促進する修飾は、いわゆる「ノブ・イントゥ・ホール」修飾であり、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの１つに「ノブ」修飾と、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの他の１つに「ホール」修飾とを含む。
ノブ・イントゥ・ホール技術は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、米国特許第７，６９５，９３６号、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ９，６１７－６２１（１９９６）及びＣａｒｔｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ ２４８，７－１５（２００１）に記載される。一般的に、この方法は、第１のポリペプチドの界面にある突起（「ノブ」）と、第２のポリペプチドの界面にある対応する空洞（「ホール」）とを導入することを含み、その結果、突起が、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨害するように空洞内に位置することができる。突起は、第１のポリペプチドの界面からの小さなアミノ酸側鎖を、より大きな側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）と交換することによって構築される。突起と同一又は同様の大きさの相補性空洞が、大きなアミノ酸側鎖を、より小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニン又はトレオニン）と置き換えることによって、第２のポリペプチドの界面に作られる。
したがって、特定の実施形態では、二重特異性抗体のＦｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおいて、アミノ酸残基は、より大きな側鎖容積を有するアミノ酸残基と置き換わり、それによって、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の空洞内で位置換え可能な第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に突起を生成し、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおいて、アミノ酸残基は、より小さな側鎖容積を有するアミノ酸残基と置き換わり、それによって、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に空洞を生成し、その中で、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の突起が位置換え可能である。
好ましくは、より大きな側鎖体積を有する当該アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）及びトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。
好ましくは、より小さな側鎖体積を有する当該アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）及びバリン（Ｖ）からなる群から選択される。
突起及び空洞は、ポリペプチドをコードする核酸を変えることによって、例えば、部位特異的突然変異誘発によって、又はペプチド合成によって作成することができる。
具体的な実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニット（「ノブ」サブユニット）（のＣＨ３ドメイン）において、位置３６６のトレオニン残基が、トリプトファン残基と置き換わっており（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃドメイン（「ホール」サブユニット）の第２のサブユニット（のＣＨ３ドメイン）において、位置４０７のチロシン残基は、バリン残基と置き換わっている（Ｙ４０７Ｖ）。一実施形態では、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、更に、位置３６６のトレオニン残基が、セリン残基と置き換わっており（Ｔ３６６Ｓ）、位置３６８のロイシン残基が、アラニン残基と置き換わっている（Ｌ３６８Ａ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
なお更なる実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、更に、位置３５４のセリン残基が、システイン残基と置き換わっている（Ｓ３５４Ｃ）か、又は位置３５６のグルタミン酸残基が、システイン残基と置き換わっており（Ｅ３５６Ｃ）（特に、位置３５４のセリン残基がシステイン残基と置き換わっており）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、更に、位置３４９のチロシン残基が、システイン残基と置き換わっている（Ｙ３４９Ｃ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。これら２つのシステイン残基の導入によって、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの間にジスルフィド架橋の形成を生じ、二量体を更に安定化する（Ｃａｒｔｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８，７－１５（２００１））。
特定の実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
特定の実施形態では、第２の抗原に結合する抗原結合部分は、Ｆｃドメインの第１のサブユニット（「ノブ」修飾を含む）に融合（任意に、ＣＣＬ２に結合する第１の抗原結合部分及び／又はペプチドリンカーを介して）される。理論に拘束されることを望むものではないが、第２の抗原（例えば、活性化Ｔ細胞抗原）に結合する抗原結合部分の、Ｆｃドメインのノブ含有サブユニットへの融合は、活性化Ｔ細胞抗原に結合する２つの抗原結合部分を含む抗体の生成を（更に）最小限に抑える（２つのノブ含有ポリペプチドの立体衝突）。
ヘテロ二量体化を強化するＣＨ３修飾についての他の技術が本発明の代替例として考慮され、例えば、国際公開第９６／２７０１１号、国際公開第９８／０５０４３１号、欧州特許第１８７０４５９号、国際公開第２００７／１１０２０５号、国際公開第２００７／１４７９０１号、国際公開第２００９／０８９００４号、国際公開第２０１０／１２９３０４号、国際公開第２０１１／９０７５４号、国際公開第２０１１／１４３５４５号、国際公開第２０１２／０５８７６８号、国際公開第２０１３／１５７９５４号、国際公開第２０１３／０９６２９１号に記載されている。
一実施形態では、欧州特許第１８７０４５９号に記載されるヘテロ二量体化手法を代わりに使用する。この手法は、Ｆｃドメインの２つのサブユニット間のＣＨ３／ＣＨ３ドメイン界面における特定のアミノ酸位置への反対の電荷を有する荷電アミノ酸の導入に基づく。本発明の二重特異性抗体の好ましい一実施形態は、（Ｆｃドメインの）２つのＣＨ３ドメインの一方におけるアミノ酸変異Ｒ４０９Ｄ、Ｋ３７０Ｅ及びＦｃドメインのＣＨ３ドメインの他方におけるアミノ酸変異Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋである（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
別の実施形態において、本発明の二重特異性抗体は、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｔ３６６Ｗ及びＦｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖを含み、追加的に、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｒ４０９Ｄ、Ｋ３７０Ｅ及びＦｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
別の実施形態において、本発明の二重特異性抗体は、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＦｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖを含むか、又は上記二重特異性抗体は、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内のアミノ酸変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｗ及びＦｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内のアミノ酸変異Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖを含み、追加的に、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内のアミノ酸変異Ｒ４０９Ｄ、Ｋ３７０Ｅ及びＦｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内のアミノ酸変異Ｄ３９９Ｋ、Ｅ３５７Ｋを含む（すべてＫａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
一実施形態では、国際公開第２０１３／１５７９５３号に記載されるヘテロ二量体化手法を代わりに使用する。一実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｔ３６６Ｋを含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｌ３５１Ｄを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。更なる実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、更なるアミノ酸突然変異Ｌ３５１Ｋを含む。更なる実施形態では、第２のＣＨ３ドメインは、更に、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｄ及びＬ３６８Ｅ（好ましくはＬ３６８Ｅ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）から選択されるアミノ酸突然変異を含む。
一実施形態では、国際公開第２０１２／０５８７６８号に記載されるヘテロ二量体化手法を代わりに使用する。一実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｌ３５１Ｙ、Ｙ４０７Ａを含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｔ３６６Ａ、Ｋ４０９Ｆを含む。更なる実施形態では、第２のＣＨ３ドメインは、位置Ｔ４１１、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｆ４０５、Ｎ３９０又はＫ３９２にある更なるアミノ酸突然変異、例えば、（ａ）Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｒ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｋ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ又はＴ４１１Ｗ、（ｂ）Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｗ、Ｄ３９９Ｙ又はＤ３９９Ｋ、（ｃ）Ｓ４００Ｅ、Ｓ４００Ｄ、Ｓ４００Ｒ又はＳ４００Ｋ、（ｄ）Ｆ４０５Ｉ、Ｆ４０５Ｍ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｓ、Ｆ４０５Ｖ又はＦ４０５Ｗ、（ｅ）Ｎ３９０Ｒ、Ｎ３９０Ｋ又はＮ３９０Ｄ、（ｆ）Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｒ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｆ又はＫ３９２Ｅ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）を含む。更なる実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｌ３５１Ｙ、Ｙ４０７Ａを含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｔ３６６Ｖ、Ｋ４０９Ｆを含む。更なる実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｙ４０７Ａを含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｔ３６６Ａ、Ｋ４０９Ｆを含む。更なる実施形態では、第２のＣＨ３ドメインは、更に、アミノ酸突然変異Ｋ３９２Ｅ、Ｔ４１１Ｅ、Ｄ３９９Ｒ及びＳ４００Ｒを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
一実施形態では、国際公開第２０１１／１４３５４５号に記載されるヘテロ二量化手法が代わりに使用され、例えば、３６８及び４０９からなる群から選択される位置にアミノ酸改変を有する（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
一実施形態では、上に記載するホールにノブを入れる技術も使用する、国際公開第２０１１／０９０７６２号に記載されるヘテロ二量化手法が、代わりに使用される。一実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｔ３６６Ｗを含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｙ４０７Ａを含む。一実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｔ３６６Ｙを含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｙ４０７Ｔを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
一実施形態では、二重特異性抗体又はそのＦｃドメインは、ＩｇＧ２サブクラスのものであり、国際公開第２０１０／１２９３０４号に記載されているヘテロ二量体化手法が代替的に使用される。
代替的な実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニット及び第２のサブユニットの会合を促進する修飾は、例えば、ＰＣＴ国際公開第２００９／０８９００４号に記載されるように、静電操縦効果に介在する修飾を含む。一般に、この方法は、ホモ二量体形成が静電的に望ましくないが、ヘテロ二量化が静電的に望ましくなるように、荷電アミノ酸残基による２つのＦｃドメインサブユニットの界面での１つ又は複数のアミノ酸残基の置き換えを伴う。かかる一実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、Ｋ３９２又はＮ３９２の負に帯電したアミノ酸（例えば、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）、好ましくはＫ３９２Ｄ又はＮ３９２Ｄ）によるアミノ酸置換を含み、第２のＣＨ３ドメインは、Ｄ３９９、Ｅ３５６、Ｄ３５６又はＥ３５７の正に帯電したアミノ酸によるアミノ酸置換（例えば、リジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）、好ましくはＤ３９９Ｋ、Ｅ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｋ又はＥ３５７Ｋ、より好ましくはＤ３９９Ｋ及びＥ３５６Ｋ）を含む。更なる実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、更に、Ｋ４０９又はＲ４０９の負に帯電したアミノ酸によるアミノ酸置換（例えば、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）、好ましくはＫ４０９Ｄ又はＲ４０９Ｄ）を含む。更なる実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、更に、又はこれに代えて、Ｋ４３９及び／又はＫ３７０の負に帯電したアミノ酸（例えば、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ））（全てＫａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）によるアミノ酸置換を含む。
なお更なる実施形態では、国際公開第２００７／１４７９０１号に記載されるヘテロ二量体化手法を代わりに使用する。一実施形態では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｋ２５３Ｅ、Ｄ２８２Ｋ及びＫ３２２Ｄを含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸突然変異Ｄ２３９Ｋ、Ｅ２４０Ｋ及びＫ２９２Ｄを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
更に別の実施形態では、国際公開第２００７／１１０２０５号に記載されるヘテロ二量体化手法を代わりに使用してもよい。
一実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換Ｋ３９２Ｄ及びＫ４０９Ｄを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置換Ｄ３５６Ｋ及びＤ３９９Ｋを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。
二重特異性抗ＣＣＬ２抗体について本明細書で使用される「野生型（ＷＴ）ＩｇＧ又はＩｇＧ１」という用語は、ヘテロ二量体化を促進する上記の修飾／突然変異を含み得るが、以下に記載されるＦｃ受容体結合及び／又はエフェクター機能を増加又は減少させるさらなるＦｃドメイン修飾／突然変異を含まないＩｇＧ又はＩｇＧ１重鎖を含む二重特異性抗体を指す。
Ｆｃ受容体結合及び／又はエフェクタ機能を増加又は低下させるＦｃドメイン修飾／突然変異：
掃引技術による二重特異性抗ＣＣＬ２抗体の修飾
二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を、掃引技術を使用して改変して、二重特異性抗ＣＣＬ２抗体が遊離ＣＣｌ２を長期間にわたって消失させて、インビボで抗がん効果のような生物学的効果を持続させることを可能にした。
掃引の概念は、例えば、Ｉｇａｗａ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２７０（２０１６）１３２－１５１，ＷＯ２０１２／１２２０１１，ＷＯ２０１６／０９８３５７、及びＷＯ２０１３／０８１１４３に記載されており、これらは参照により本明細書中に組み込まれる。
本発明は、上記抗体の酸性ｐＨ範囲における抗原結合活性（結合能）を中性ｐＨ範囲におけるその抗原結合活性よりも低下させることによって、細胞への抗体媒介性抗原取り込みを促進するための方法を提供する。これは、細胞への抗原取り込みを促進する。本発明はまた、細胞への抗原取り込みを促進する上記抗体の抗原結合ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を変化させることに基づく、細胞への抗体媒介性抗原取り込みを促進する方法を提供する。本発明はまた、細胞への抗体媒介性抗原取り込みを促進するための方法であって、細胞への抗原取り込みを促進する、少なくとも１つのアミノ酸をヒスチジンに置換すること、又は上記抗体の抗原結合ドメインに少なくとも１つのヒスチジンを挿入することに基づく方法を提供する。
本明細書において、抗体が媒介する「細胞への抗原取り込み」とは、エンドサイトーシスによって抗原が細胞内に取り込まれることを意味する。なお、本明細書において「細胞への取り込みを促進する」とは、血漿中の抗原に結合した抗体の細胞内取り込み速度が亢進していること、及び／又は取り込まれた抗原の血漿への再利用量が低下していることを意味する。これは、中性ｐＨ範囲で抗体のヒトＦｃＲｎ結合活性を増加させる前、又は、ヒトＦｃＲｎ結合活性を増加させ、酸性ｐＨ範囲での抗体の抗原結合活性（結合能）を中性ｐＨ範囲でのその抗原結合活性よりも低下させる前の抗体と比較して、細胞への取り込み速度が促進されることを意味する。この速度は、好ましくはインタクトなヒトＩｇＧと比較して、より好ましくはインタクトなヒトＩｇＧと比較して改善される。したがって、本発明では、細胞への抗原取り込みが抗体によって促進されるかどうかを、細胞への抗原取り込み速度の増加に基づいて評価することができる。細胞への抗原取り込み速度は、例えば、ヒトＦｃＲｎ発現細胞を含む培地に抗原及び抗体を添加した後の培地中の抗原濃度の経時的な減少をモニタリングすることによって、又はヒトＦｃＲｎ発現細胞への抗原取り込み量を経時的にモニタリングすることによって計算することができる。細胞への抗体媒介性抗原取り込み速度を促進するための本発明の方法を使用して、例えば、血漿からの抗原除去速度を、抗体を投与することによって高めることができる。したがって、細胞への抗体媒介性抗原取り込みが促進されるかどうかは、例えば、血漿からの抗原除去速度が加速されるかどうか、又は抗体を投与することによって血漿中の総抗原濃度が低下するかどうかを試験することによっても評価することができる。
ここで、「血漿中の総抗原濃度」とは、抗体結合抗原と非結合抗原濃度の和、又は抗体非結合抗原濃度である「血漿中の遊離抗原濃度」を意味する。「血漿中の総抗原濃度」又は「血漿中の遊離抗原濃度」を測定する様々な方法は、以下に記載されるように当技術分野で周知である。
本明細書で使用される「インタクトなヒトＩｇＧ」（又は「野生型（ＷＴ）ヒトＩｇＧ）は、未修飾（上記のヘテロ二量体化の潜在的な修飾については除く）ヒトＩｇＧを意味し、ＩｇＧの特定のクラスに限定されない。これは、酸性のｐＨ範囲でヒトＦｃＲｎに結合できる限り、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４を「インタクトなヒトＩｇＧ」として使用できることを意味する。好ましくは、「インタクトなヒトＩｇＧ」はヒトＩｇＧ１であり得る。
本発明はまた、単一の抗体が結合することができる抗原の数を増加させるための方法を提供する。より具体的には、本発明は、中性ｐＨ範囲における抗体のヒトＦｃＲｎ結合活性を増大させることにより、酸性ｐＨ範囲においてヒトＦｃＲｎ結合活性を有する単一の抗体が結合可能な抗原の数を増大させる方法を提供する。本発明はまた、抗体のヒトＦｃＲｎ結合ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を変化させることによって、酸性ｐＨ範囲においてヒトＦｃＲｎ結合活性を有する単一の抗体が結合することができる抗原の数を増大させる方法を提供する。
本発明は、細胞への抗体媒介性抗原取り込みを促進する方法を提供する。より具体的には、本発明は、酸性ｐＨ範囲においてヒトＦｃＲｎ結合活性を有する抗体による細胞への抗原取り込みを促進するための方法であって、中性ｐＨ範囲における抗体のヒトＦｃＲｎ結合活性を増大させることに基づく方法を提供する。本発明はまた、酸性ｐＨ範囲においてヒトＦｃＲｎ結合活性を有する抗体による細胞への抗原取り込みを改善する方法であって、抗体のヒトＦｃＲｎ結合ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を変化させることに基づく方法を提供する。
本発明はまた、酸性ｐＨ範囲においてヒトＦｃＲｎ結合活性を有する抗体による細胞への抗原取り込みを促進する方法であって、親ＩｇＧのＦｃドメインを含むヒトＦｃＲｎ結合ドメインの親ＩｇＧ Ｆｃドメインにおいて、位置２３７、２３８、２３９、２４８、２５０、２５２、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２６５、２７０、２８６、２８９、２９７、２９８、３０３、３０５、３０７、３０８、３０９、３１１、３１２、３１４、３１５、３１７、３２５、３３２、３３４、３６０、３７６、３８０、３８２、３８４、３８５、３８６、３８７、３８９、４２４、４２８、４３３、４３４及び４３６（ＥＵナンバリング）から選択される少なくとも１つのアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されたアミノ酸配列を含むヒトＦｃＲｎ結合ドメインを使用することに基づく方法を提供する。
本発明はまた、上記抗体の酸性ｐＨ範囲における抗原結合活性（結合能）を中性ｐＨ範囲におけるその抗原結合活性よりも低下させることによって、細胞への抗体媒介性抗原取り込みを促進するための方法も提供する。これは、細胞への抗原取り込みを促進する。本発明はまた、細胞への抗原取り込みを促進する上記抗体の抗原結合ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を変化させることに基づく、細胞への抗体媒介性抗原取り込みを促進する方法を提供する。本発明はまた、細胞への抗体媒介性抗原取り込みを促進するための方法であって、細胞への抗原取り込みを促進する、少なくとも１つのアミノ酸をヒスチジンに置換すること、又は上記抗体の抗原結合ドメインに少なくとも１つのヒスチジンを挿入することに基づく方法を提供する。
本明細書において、抗体が媒介する「細胞への抗原取り込み」とは、エンドサイトーシスによって抗原が細胞内に取り込まれることを意味する。なお、本明細書において「細胞への取り込みを促進する」とは、血漿中の抗原に結合した抗体の細胞内取り込み速度が亢進していること、及び／又は取り込まれた抗原の血漿への再利用量が低下していることを意味する。これは、中性ｐＨ範囲で抗体のヒトＦｃＲｎ結合活性を増加させる前、又は、ヒトＦｃＲｎ結合活性を増加させ、酸性ｐＨ範囲での抗体の抗原結合活性（結合能）を中性ｐＨ範囲でのその抗原結合活性よりも低下させる前の抗体と比較して、細胞への取り込み速度が促進されることを意味する。この速度は、好ましくはインタクトなヒトＩｇＧと比較して、より好ましくはインタクトなヒトＩｇＧと比較して改善される。したがって、本発明では、細胞への抗原取り込みが抗体によって促進されるかどうかを、細胞への抗原取り込み速度の増加に基づいて評価することができる。細胞への抗原取り込み速度は、例えば、ヒトＦｃＲｎ発現細胞を含む培地に抗原及び抗体を添加した後の培地中の抗原濃度の経時的な減少をモニタリングすることによって、又はヒトＦｃＲｎ発現細胞への抗原取り込み量を経時的にモニタリングすることによって計算することができる。細胞への抗体媒介性抗原取り込み速度を促進するための本発明の方法を使用して、例えば、血漿からの抗原除去速度を、抗体を投与することによって高めることができる。したがって、細胞への抗体媒介性抗原取り込みが促進されるかどうかは、例えば、血漿からの抗原除去速度が加速されるかどうか、又は抗体を投与することによって血漿中の総抗原濃度が低下するかどうかを試験することによっても評価することができる。
ここで、「血漿中の総抗原濃度」とは、抗体結合抗原と非結合抗原濃度の和、又は抗体非結合抗原濃度である「血漿中の遊離抗原濃度」を意味する。「血漿中の総抗原濃度」又は「血漿中の遊離抗原濃度」を測定する様々な方法は、以下に記載されるように当技術分野で周知である。
本明細書で使用される「インタクトなヒトＩｇＧ」（又は「野生型ＩｇＧ」）は、未修飾ヒトＩｇＧ（上記のヘテロ二量体化の潜在的な修飾については除く）を意味し、ＩｇＧの特定のクラスに限定されない。これは、酸性のｐＨ範囲でヒトＦｃＲｎに結合できる限り、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４を「インタクトなヒトＩｇＧ」として使用できることを意味する。好ましくは、「インタクトなヒトＩｇＧ」はヒトＩｇＧ１であり得る。
本明細書で使用される「親ＩｇＧ」は、親ＩｇＧの修飾バリアントが酸性ｐＨ範囲でヒトＦｃＲｎに結合することができる限り（したがって、親ＩｇＧは、酸性条件下でヒトＦｃＲｎに対する結合活性を必ずしも必要としない）、バリアントを生成するように後で修飾される未修飾ＩｇＧを意味する。親ＩｇＧは、天然に存在するＩｇＧ、又は天然に存在するＩｇＧのバリアント若しくは操作バージョンであり得る。親ＩｇＧは、ポリペプチド自体、親ＩｇＧを含む組成物、又はそれをコードするアミノ酸配列を指してもよい。「親ＩｇＧ」は、以下に概説するように、公知の市販の組換え産生ＩｇＧを含むことに留意すべきである。「親ＩｇＧ」の起源は限定されず、非ヒト動物又はヒトの任意の生物から得られ得る。好ましくは、生物は、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、スナネズミ、ネコ、ウサギ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、及び非ヒト霊長類から選択される。別の実施形態では、「親ＩｇＧ」は、カニクイザル、マーモセット、アカゲザル、チンパンジー又はヒトからも得ることができる。好ましくは、「親ＩｇＧ」は、ヒトＩｇＧ１から得られるが、ＩｇＧの特定のクラスに限定されない。このことは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４を「親ＩｇＧ」として適宜用いることができることを意味する。同様に、上記の任意の生物由来の任意のクラス又はサブクラスのＩｇＧを、好ましくは「親ＩｇＧ」として使用することができる。天然に存在するＩｇＧのバリアント又は操作されたバージョンの例は、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００９ Ｄｅｃ；２０（６）：６８５－９１，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８ Ａｕｇ；２０（４）：４６０－７０，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２０１０ Ａｐｒ；２３（４）：１９５－２０２，ＷＯ ２００９／０８６３２０、ＷＯ ２００８／０９２１１７、ＷＯ ２００７／０４１６３５及びＷＯ ２００６／１０５３３８に記載されているが、これらに限定されない。
本発明はまた、抗体を投与することによって血漿抗原を除去する能力を増加させる方法を提供する。本発明において、「血漿抗原を除去する能力を増加させるための方法」は、「血漿から抗原を除去する抗体の能力を増強する方法」と同義である。より具体的には、本発明は、中性ｐＨ範囲での抗体のヒトＦｃＲｎ結合活性を増大させることにより、酸性ｐＨ範囲でのヒトＦｃＲｎ結合活性を有する抗体による血漿抗原を除去する能力を増大させる方法を提供する。本発明はまた、酸性ｐＨ範囲でヒトＦｃＲｎ結合活性を有する抗体による血漿抗原を除去する能力を増大させる方法であって、抗体のヒトＦｃＲｎ結合ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を変化させることに基づく方法を提供する。
本発明はまた、親ＩｇＧのＦｃドメインを含むヒトＦｃＲｎ結合ドメインの親ＩｇＧ Ｆｃドメインにおいて、位置２３７、２３８、２３９、２４８、２５０、２５２、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２６５、２７０、２８６、２８９、２９７、２９８、３０３、３０５、３０７、３０８、３０９、３１１、３１２、３１４、３１５、３１７、３２５、３３２、３３４、３６０、３７６、３８０、３８２、３８４、３８５、３８６、３８７、３８９、４２４、４２８、４３３、４３４及び４３６（ＥＵナンバリング）から選択される少なくとも１つのアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されたアミノ酸配列を含むヒトＦｃＲｎ結合ドメインを使用することにより、酸性ｐＨ範囲でヒトＦｃＲｎ結合活性を有する抗体による血漿抗原を除去する能力を増大させる方法を提供する。
本発明はまた、中性ｐＨ範囲の抗原結合活性と比較して血漿抗原を排除する能力が改善された上記抗体の酸性ｐＨ範囲の抗原結合活性を低下させることによって、抗体による血漿抗原を排除する能力を増加させる方法を提供する。本発明はまた、血漿抗原を除去する能力が改善された上記の抗体の抗原結合ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を変化させることによって、抗体による血漿抗原を除去する能力を増大させる方法を提供する。本発明はまた、抗体を投与することによって、少なくとも１つのアミノ酸をヒスチジンに置換することによって、又は、血漿抗原を除去する能力が改善された上記抗体の抗原結合ドメインに少なくとも１つのヒスチジンを挿入することによって、血漿抗原を除去する能力を増大させる方法を提供する。
本明細書において、「血漿抗原を除去する能力」とは、抗体をインビボで投与又は分泌する場合に、血漿から抗原を除去する能力を意味する。したがって、本明細書における「血漿抗原を除去する抗体の能力の増大」は、中性ｐＨ範囲における抗体のヒトＦｃＲｎ結合活性を増大させる前、又はヒトＦｃＲｎ結合活性を増大させて同時に酸性ｐＨ範囲におけるその抗原結合活性を中性ｐＨ範囲のものよりも低下させる前と比較して、抗体の投与時に血漿からの抗原除去速度が加速されることを意味する。血漿から抗原を除去するための抗体の活性の増加は、例えば、可溶性抗原及び抗体をインビボで投与し、投与後の血漿中の可溶性抗原の濃度を測定することによって評価することができる。可溶性抗原及び抗体の投与後の血漿中の可溶性抗原の濃度が、中性ｐＨ範囲における抗体のヒトＦｃＲｎ結合活性を増大させることによって、又は、そのヒトＦｃＲｎ結合活性を増大させて同時に酸性ｐＨ範囲におけるその抗原結合活性を中性ｐＨ範囲のものよりも低下させることによって減少する場合、血漿抗原を除去する抗体の能力は増大したと判断することができる。可溶性抗原の形態は、抗体結合抗原又は抗体非結合抗原であり得、その濃度は、それぞれ「血漿中の抗体結合抗原濃度」及び「血漿中の抗体非結合抗原濃度」として決定され得る（後者は「血漿中の遊離抗原濃度」と同義である。「血漿中の総抗原濃度」は抗体結合抗原と非結合抗原濃度の和、又は抗体非結合抗原濃度である「血漿中の遊離抗原濃度」を意味するので、可溶性抗原の濃度は「血漿中の総抗原濃度」と決定できる。「血漿中の総抗原濃度」又は「血漿中の遊離抗原濃度」を測定する様々な方法は、以下に記載されるように当技術分野で周知である。
本発明はまた、抗体の薬物動態を改善するための方法を提供する。より具体的には、本発明は、中性ｐＨ範囲での抗体のヒトＦｃＲｎ結合活性を増大させることにより、酸性ｐＨ範囲でのヒトＦｃＲｎ結合活性を有する抗体の薬物動態を改善させる方法を提供する。さらに本発明は、抗体のヒトＦｃＲｎ結合ドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を変化させることにより、酸性ｐＨ範囲においてヒトＦｃＲｎ結合活性を有する抗体の薬物動態を改善する方法を提供する。
本発明はまた、ＩｇＧのＦｃドメインを含むヒトＦｃＲｎ結合ドメインの親ＩｇＧ Ｆｃドメインにおいて、位置２３７、２３８、２３９、２４８、２５０、２５２、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２６５、２７０、２８６、２８９、２９７、２９８、３０３、３０５、３０７、３０８、３０９、３１１、３１２、３１４、３１５、３１７、３２５、３３２、３３４、３６０、３７６、３８０、３８２、３８４、３８５、３８６、３８７、３８９、４２４、４２８、４３３、４３４及び４３６（ＥＵナンバリング）から選択される少なくとも１つのアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されたアミノ酸配列を含むヒトＦｃＲｎ結合ドメインを使用することにより、酸性ｐＨ範囲でヒトＦｃＲｎ結合活性を有する抗体の薬物動態を改善させる方法を提供する。
抗体に結合していない遊離抗原の血漿濃度又は総濃度に対する遊離抗原濃度の比は、当業者に公知の方法によって、例えば、Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．２００６ Ｊａｎ；２３（１）：９５－１０３に記載の方法によって決定することができる。あるいは、抗原がインビボで特定の機能を示す場合、抗原機能が中和されているかどうかを試験することによって、抗原が抗原機能を中和する抗体（アンタゴニスト分子）に結合しているかどうかを評価することができる。抗原機能が中和されるかどうかは、抗原機能を反映するインビボマーカーをアッセイすることによって評価することができる。抗原が抗原機能を活性化する抗体（アゴニスト分子）に結合しているかどうかは、抗原機能を反映するインビボマーカーをアッセイすることによって評価することができる。
遊離抗原の血漿中濃度及び血漿中の遊離抗原の量と血漿中の総抗原の量との比の決定、インビボマーカーアッセイ、及びそのような測定は特に限定されないが、抗体投与後一定時間経過後に行うことが好ましい。本発明において、抗体投与後の期間は特に限定されない。当業者であれば、投与する抗体の性質等に応じて適切な期間を決定することができる。そのような期間には、例えば、抗体の投与の１日後、抗体の投与の３日後、抗体の投与の７日後、抗体の投与の１４日後、及び抗体の投与の２８日後が含まれる。ここで、「血漿抗原濃度」とは、抗体結合抗原と非結合抗原濃度の和である「血漿中の総抗原濃度」又は抗体非結合抗原濃度である「血漿中の遊離抗原濃度」のいずれかを意味する。
血漿中の総抗原濃度は、本発明の抗体の投与によって、インタクトなヒトＩｇＧ ＦｃドメインをヒトＦｃＲｎ結合ドメインとして含む参照抗体の投与と比較して、又は本発明の抗原結合ドメイン分子が投与されない場合と比較して、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、１，０００倍、又はさらにそれ以上低下させることができる。
別の態様において、本発明は、ｐＨ依存的結合特性を示す二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を提供する。本明細書で使用される場合、「ｐＨ依存的結合」という表現は、抗体が「中性ｐＨでの結合と比較して、酸性ｐＨでのＣＣＬ２への結合の減少」を示すことを意味する（本開示の目的のために、両方の表現が交換可能に使用されてもよい）。例えば、「ｐＨ依存的結合特性を有する」抗体には、酸性ｐＨよりも中性ｐＨでより高い親和性でＣＣＬ２に結合する抗体が含まれる。ある特定の実施形態において、本発明の二重特異性抗体は、酸性ｐＨよりも中性ｐＨで、少なくとも２倍、３倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、２００倍、４００倍、１０００倍、１００００倍又はそれを超える親和性でＣＣＬ２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ｐＨ５．８よりもｐＨ７．４で、高い親和性でＣＣＬ２に結合する。さらなる実施形態では、抗体は、ｐＨ５．８よりもｐＨ７．４で、少なくとも２倍、３倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、２００倍、４００倍、１０００倍、１００００倍又はそれを超える親和性でＣＣＬ２に結合する。
抗原が可溶性タンパク質である場合、抗体は抗原自体よりも長い血漿中半減期を有することができ、抗原の担体として機能し得るので、抗原への抗体の結合は、血漿中の抗原の半減期の延長をもたらし得る（すなわち、血漿からの抗原のクリアランスの減少）。これは、細胞内のエンドソーム経路を介したＦｃＲｎによる抗原抗体複合体の再利用に起因する（Ｒｏｏｐｅｎｉａｎ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７（９）：７１５－７２５（２００７））。しかしながら、中性細胞外環境でその抗原に結合し、細胞への進入後に酸性エンドソーム区画に抗原を放出するｐＨ依存的結合特性を有する抗体は、ｐＨ非依存的に結合するその対応物と比較して、抗原中和及びクリアランスに関して優れた特性を有すると予想される（Ｉｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８（１１）：１２０３－１２０７（２０１０）；Ｄｅｖａｎａｂｏｙｉｎａ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ ５（６）：８５１－８５９（２０１３）；ＷＯ ２００９／１２５８２５）。
ＣＣＬ２に対する抗体の「親和性」は、本開示の目的のために、抗体のＫＤに関して表される。抗体のＫＤは、抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指す。その抗原に結合する抗体のＫＤ値が大きいほど、その結合親和性はその特定の抗原に対して弱くなる。したがって、本明細書で使用される場合、表現「酸性ｐＨよりも中性ｐＨで高い親和性」（又は同等の表現「ｐＨ依存性結合」）は、酸性ｐＨでＣＣＬ２に結合する抗体のＫＤが中性ｐＨでＣＣＬ２に結合する抗体のＫＤよりも大きいことを意味する。例えば、本発明の文脈において、酸性ｐＨでＣＣＬ２に結合する抗体のＫＤが、中性ｐＨでＣＣＬ２に結合する抗体のＫＤより少なくとも２倍大きい場合、抗体は、酸性ｐＨよりも中性ｐＨでより高い親和性でＣＣＬ２に結合すると考えられる。したがって、本発明は、中性ｐＨにおいてＣＣＬ２に結合する抗体のＫＤよりも少なくとも２倍、３倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、２００倍、４００倍、１０００倍、１００００倍又はそれを超えるＫＤで酸性ｐＨにおいてＣＣＬ２に結合する抗体を含む。別の実施形態では、中性ｐＨでの抗体のＫＤ値は、１０－７ Ｍ、１０－８ Ｍ、１０－９ Ｍ、１０－１０ Ｍ、１０－１１ Ｍ、１０－１２ Ｍ以下であり得る。別の実施形態では、酸性ｐＨでの抗体のＫＤ値は、１０－９ Ｍ、１０－８ Ｍ、１０－７ Ｍ、１０－６ Ｍ以上であり得る。
さらなる実施形態では、ｐＨ５．８でＣＣＬ２に結合する抗体のＫＤが、ｐＨ７．４でＣＣＬ２に結合する抗体のＫＤより少なくとも２倍大きい場合、抗体は、酸性ｐＨよりも中性ｐＨでより高い親和性で結合すると考えられる。いくつかの実施形態では、提供される抗体は、ｐＨ７．４においてＣＣＬ２に結合する抗体のＫＤよりも少なくとも３倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、２００倍、４００倍、１０００倍、１００００倍又はそれを超えるＫＤでｐＨ５．８においてＣＣＬ２に結合する。別の実施形態では、ｐＨ７．４での抗体のＫＤ値は、１０－７ Ｍ、１０－８ Ｍ、１０－９ Ｍ、１０－１０ Ｍ、１０－１１ Ｍ、１０－１２ Ｍ以下であり得る。別の実施形態では、ｐＨ５．８での抗体のＫＤ値は、１０－９ Ｍ、１０－８ Ｍ、１０－７ Ｍ、１０－６ Ｍ以上であり得る。
特定の抗原に対する抗体の結合特性はまた、抗体のｋｄに関して表され得る。抗体のｋｄは、特定の抗原に対する抗体の解離速度定数を指し、秒の逆数（すなわち、秒－１）で表される。ｋｄ値の増加は、その抗原に対する抗体の結合がより弱いことを意味する。したがって、本発明は、中性ｐＨよりも酸性ｐＨでより高いｋｄ値でＣＣＬ２に結合する抗体を含む。本発明は、中性ｐＨにおいてＣＣＬ２に結合する抗体のｋｄよりも少なくとも２倍、３倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、２００倍、４００倍、１０００倍、１００００倍又はそれを超えるｋｄで酸性ｐＨにおいてＣＣＬ２に結合する抗体を含む。別の実施形態では、中性ｐＨでの抗体のｋｄ値は、１０－２ １／ｓ、１０－３ １／ｓ、１０－４ １／ｓ、１０－５ １／ｓ、１０－６ １／ｓ以下であり得る。別の実施形態では、酸性ｐＨでの抗体のｋｄ値は、１０－３ １／ｓ、１０－２ １／ｓ、１０－１ １／ｓ以上であり得る。本発明はまた、ｐＨ７．４よりもｐＨ５．８でより高いｋｄ値でＣＣＬ２に結合する抗体を含む。本発明は、ｐＨ７．４においてＣＣＬ２に結合する抗体のｋｄよりも少なくとも、３倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、２００倍、４００倍、１０００倍、１００００倍又はそれを超えるｋｄでｐＨ５．８においてＣＣＬ２に結合する抗体を含む。別の実施形態では、ｐＨ７．４での抗体のｋｄ値は、１０－２ １／ｓ、１０－３ １／ｓ、１０－４ １／ｓ、１０－５ １／ｓ、１０－６ １／ｓ以下であり得る。別の実施形態では、ｐＨ５．８での抗体のｋｄ値は、１０－３ １／ｓ、１０－２ １／ｓ、１０－１ １／ｓ以上であり得る。
特定の場合において、「中性ｐＨでの結合と比較して、酸性ｐＨでのＣＣＬ２への結合の減少」は、中性ｐＨでＣＣＬ２に結合する抗体のＫＤ値に対する酸性ｐＨでＣＣＬ２に結合する抗体のＫＤ値の比に関して表される（又はその逆）。例えば、抗体が２以上の酸性／中性ＫＤ比を示す場合、本発明の目的のために、抗体は「中性ｐＨでの結合と比較して、酸性ｐＨでのＣＣＬ２への結合の減少」を示すと見なされ得る。特定の実施形態では、本発明の抗ＣＣＬ２抗体についてのｐＨ５．８／ｐＨ７．４のＫＤ比は、２以上である。特定の例示的な実施形態において、本発明の抗体についての酸性／中性ＫＤ比は、２倍、３倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、２００倍、４００倍、１０００倍、１００００倍又はそれを超えてもよい。別の実施形態では、中性ｐＨでの抗体のＫＤ値は、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ以下であり得る。別の実施形態では、酸性ｐＨでの抗体のＫＤ値は、１０－９Ｍ、１０－８Ｍ、１０－７Ｍ、１０－６Ｍ以上であり得る。さらなる例では、抗体がｐＨ５．８／ｐＨ７．４のＫＤ比２以上を示す場合、抗体は「中性ｐＨでの結合と比較して、酸性ｐＨでのＣＣＬ２への結合の減少」を示すと見なされ得る。特定の例示的な実施形態において、抗体のｐＨ５．８／ｐＨ７．４のＫＤ比は、３倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、２００倍、４００倍、１０００倍、１００００倍又はそれを超えてもよい。別の実施形態では、ｐＨ７．４での抗体のＫＤ値は、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ以下であり得る。別の実施形態では、ｐＨ５．８での抗体のＫＤ値は、１０－９Ｍ、１０－８Ｍ、１０－７Ｍ、１０－６Ｍ以上であり得る。
特定の場合において、「中性ｐＨでの結合と比較して、酸性ｐＨでのＣＣＬ２への結合の減少」は、中性ｐＨでＣＣＬ２に結合する抗体のｋｄ値に対する酸性ｐＨでＣＣＬ２に結合する抗体のｋｄ値の比に関して表される（又はその逆）。例えば、抗体が２以上の酸性／中性ｋｄ比を示す場合、本発明の目的のために、抗体は「中性ｐＨでの結合と比較して、酸性ｐＨでのＣＣＬ２への結合の減少」を示すと見なされ得る。特定の例示的な実施形態において、本発明の抗体のｐＨ５．８／ｐＨ７．４のｋｄ比は２以上である。特定の例示的な実施形態において、本発明の抗体についての酸性／中性ｋｄ比は、２倍、３倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、２００倍、４００倍、１０００倍、１００００倍又はそれを超えてもよい。別の実施形態では、中性ｐＨでの抗体のｋｄ値は、１０－２ １／ｓ、１０－３ １／ｓ、１０－４ １／ｓ、１０－５ １／ｓ、１０－６ １／ｓ以下であり得る。別の実施形態では、酸性ｐＨでの抗体のｋｄ値は、１０－３ １／ｓ、１０－２ １／ｓ、１０－１ １／ｓ以上であり得る。特定の例示的な実施形態において、本発明の抗体のｐＨ５．８／ｐＨ７．４のｋｄ比は、２倍、３倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、２００倍、４００倍、１０００倍、１００００倍又はそれを超えてもよい。別の実施形態では、ｐＨ７．４での抗体のｋｄ値は、１０－２ １／ｓ、１０－３ １／ｓ、１０－４ １／ｓ、１０－５ １／ｓ、１０－６ １／ｓ以下であり得る。別の実施形態では、ｐＨ５．８での抗体のｋｄ値は、１０－３ １／ｓ、１０－２ １／ｓ、１０－１ １／ｓ以上であり得る。
本明細書で使用される場合、「酸性ｐＨ」という表現は、４．０～６．５のｐＨを意味する。「酸性ｐＨ」という表現は、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４及び６．５のいずれか１つのｐＨ値を含む。特定の態様では、「酸性ｐＨ」は５．８である。
本明細書で使用される場合、「中性ｐＨ」という表現は、６．７～約１０．０のｐＨを意味する。「中性ｐＨ」という表現は、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、９．０、９．１、９．２、９．３、９．４、９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、及び１０．０のいずれか１つのｐＨ値を含む。特定の態様では、「中性ｐＨ」は７．４である。
本明細書で表されるＫＤ値及びｋｄ値は、抗体－抗原相互作用を特徴付けるために表面プラズモン共鳴ベースのバイオセンサを使用して決定することができる。ＫＤ値及びｋｄ値は、２５℃又は３７℃で決定することができる。
さらなる態様において、本発明は、ＣＣＬ２と免疫複合体（すなわち、抗原抗体複合体）を形成する二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を提供する。特定の実施形態では、２つ以上の二重特異性抗ＣＣＬ２抗体が２つ以上のＣＣＬ２分子に結合して免疫複合体を形成する。これは、抗体が２つの抗原結合部位を有する一方で、ＣＣＬ２は２つのＣＣＬ２分子を含むホモ二量体として存在するために可能である。
一般的に言えば、２つ以上の抗体が２つ以上の抗原と免疫複合体を形成する場合、得られた免疫複合体は、複合体中の抗体のＦｃ領域を介したアビディティー効果により、細胞表面に存在するＦｃ受容体に強く結合することができ、次いで高効率で細胞内に取り込まれ得る。したがって、２つ以上の抗ＣＣＬ２抗体及び２つ以上のＣＣＬ２分子を含む免疫複合体を形成することができる上記の抗ＣＣＬ２抗体は、アビディティ効果によるＦｃ受容体への強い結合を介して、生体内の血漿からのＣＣＬ２の迅速なクリアランスをもたらし得る。
さらに、ｐＨ依存的結合特性を有する抗体は、ｐＨ非依存的に結合するその対応物と比較して、抗原中和及びクリアランスに関して優れた特性を有すると考えられている（Ｉｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２８（１１）：１２０３－１２０７（２０１０）；Ｄｅｖａｎａｂｏｙｉｎａ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ ５（６）：８５１－８５９（２０１３）；ＷＯ ２００９／１２５８２５）。したがって、上記の特性の両方を有する抗体、すなわちｐＨ依存的な結合特性を有し、２つ以上の抗原と２つ以上の抗体を含む免疫複合体を形成する抗体は、血漿からの抗原の除去を高度に促進するという、より優れた特性を有することが期待される（ＷＯ ２０１３／０８１１４３）。
一態様では、本発明は、以下を含む少なくとも２つのアミノ酸変化を含む、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域（複数）を含むポリペプチドを提供する。（ａ）位置２３６における１つのアミノ酸の変化、及び（ｂ）以下からなる群より選択される少なくとも１つの位置の少なくとも１つのアミノ酸の変化：ＥＵナンバリングで、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３７、２３８、２３９、２６４、２６６、２６７、２６８、２７１、２９５、２９８、３２５、３２６、３２７、３２８、３３０、３３１、３３２、３３４、及び３９６。
一態様では、本発明は、ＥＵナンバリングで２３６位のアミノ酸変化を含む、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域を含むポリペプチドを提供する。
一態様では、本発明は、以下を含む少なくとも２つのアミノ酸変化を含む、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域を含むポリペプチドを提供する。（ａ）位置２３６における１つのアミノ酸の変化、及び（ｂ）以下からなる群より選択される少なくとも１つの位置の少なくとも１つのアミノ酸の変化：ＥＵナンバリングで、２３１、２３２、２３５、２３９、２６８、２９５、２９８、３２６、３３０、及び３９６。さらなる実施形態では、バリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される少なくとも１つの位置のアミノ酸変化を含む：ＥＵナンバリングで、２３１、２３２、２３５、２３９、２６８、２９５、２９８、３２６、３３０、及び３９６。さらなる実施形態では、バリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される少なくとも１つの位置のアミノ酸変化を含む：ＥＵナンバリングで、２６８、２９５、３２６、及び３３０。
別の態様では、本発明は、以下の（１）～（３７）のいずれか１つのアミノ酸変化を含む、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域を含むポリペプチドを提供する。ＥＵナンバリングで、（１）位置２３１、２３６、２３９、２６８及び３３０；（２）位置２３１、２３６、２３９、２６８、２９５及び３３０；（３）位置２３１、２３６、２６８及び３３０；（４）位置２３１、２３６、２６８、２９５及び３３０；（５）位置２３２、２３６、２３９、２６８、２９５及び３３０；（６）位置２３２、２３６、２６８、２９５及び３３０；（７）位置２３２、２３６、２６８及び３３０；（８）位置２３５、２３６、２６８、２９５、３２６及び３３０；（９）位置２３５、２３６、２６８、２９５及び３３０；（１０）位置２３５、２３６、２６８及び３３０；（１１）位置２３５、２３６、２６８、３３０及び３９６；（１２）位置２３５、２３６、２６８及び３９６；（１３）位置２３６、２３９、２６８、２９５、２９８及び３３０；（１４）位置２３６、２３９、２６８、２９５、３２６及び３３０；（１５）位置２３６、２３９、２６８、２９５及び３３０；（１６）位置２３６、２３９、２６８、２９８及び３３０；（１７）位置２３６、２３９、２６８、３２６及び３３０；（１８）位置２３６、２３９、２６８及び３３０；（１９）位置２３６、２３９、２６８、３３０及び３９６；（２０）位置２３６、２３９、２６８及び３９６；（２１）位置２３６及び２６８；（２２）位置２３６、２６８及び２９５；（２３）位置２３６、２６８、２９５、２９８及び３３０；（２４）位置２３６、２６８、２９５、３２６及び３３０；（２５）位置２３６、２６８、２９５、３２６、３３０及び３９６；（２６）位置２３６、２６８、２９５及び３３０；（２７）位置２３６、２６８、２９５、３３０及び３９６；（２８）位置２３６、２６８、２９８及び３３０；（２９）位置２３６、２６８、２９８及び３９６；（３０）位置２３６、２６８、３２６及び３３０；（３１）位置２３６、２６８、３２６、３３０及び３９６；（３２）位置２３６、２６８及び３３０；（３３）位置２３６、２６８、３３０及び３９６；（３４）位置２３６、２６８及び３９６；（３５）位置２３６及び２９５；（３６）位置２３６、３３０及び３９６；及び（３７）位置２３６及び３９６。
さらなる実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸を含む：ＥＵナンバリングで、（ａ）Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ（２３１位）；（ｂ）Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ（２３２位）；（ｃ）Ａｓｐ（２３３位）；（ｄ）Ｔｒｐ、Ｔｙｒ（２３４位）；（ｅ）Ｔｒｐ（２３５位）；（ｆ）Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ（２３６位）；（ｇ）Ａｓｐ、Ｔｙｒ（２３７位）；（ｈ）Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ｔｙｒ（２３８位）；（ｉ）Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ（２３９位）；（ｊ）Ｉｌｅ（２６４位）；（ｋ）Ｐｈｅ（２６６位）；（ｌ）Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ（２６７位）；（ｍ）Ａｓｐ、Ｇｌｕ（２６８位）；（ｎ）Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ（２７１位）；（ｏ）Ｌｅｕ（２９５位）；（ｐ）Ｌｅｕ（２９８位）；（ｑ）Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ（３２５位）；（ｒ）Ｔｈｒ（３２６位）；（ｓ）Ｉｌｅ、Ａｓｎ（３２７位）；（ｔ）Ｔｈｒ（３２８位）；（ｕ）Ｌｙｓ、Ａｒｇ（３３０位）；（ｖ）Ｇｌｕ（３３１位）；（ｗ）Ａｓｐ（３３２位）；（ｘ）Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、Ｔｙｒ（３３４位）；及び（ｙ）Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ（３９６位）。
さらなる実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸変化（例えば、置換）を含む：ＥＵナンバリングで、（ａ）Ｇｌｙ、Ｔｈｒ（２３１位）；（ｂ）Ａｓｐ（２３２位）；（ｃ）Ｔｒｐ（２３５位）；（ｄ）Ａｓｎ、Ｔｈｒ（２３６位）；（ｅ）Ｖａｌ（２３９位）；（ｆ）Ａｓｐ、Ｇｌｕ（２６８位）；（ｇ）Ｌｅｕ（２９５位）；（ｈ）Ｌｅｕ（２９８位）；（ｉ）Ｔｈｒ（３２６位）；（ｊ）Ｌｙｓ、Ａｒｇ（３３０位）；及び（ｋ）Ｌｙｓ、Ｍｅｔ（３９６位）。さらなる実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域は、以下のアミノ酸変化（例えば、置換）を含む：ＥＵナンバリングで、２３６位のＡｓｎ、２６８位のＧｌｕ、３３０位のＬｙｓ、及び３９６位のＭｅｔ。さらなる実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域は、以下のアミノ酸変化（例えば、置換）を含む：ＥＵナンバリングで、２３６位のＡｓｎ、２６８位のＡｓｐ、及び３３０位のＬｙｓ。さらなる実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域は、以下のアミノ酸変化（例えば、置換）を含む：ＥＵナンバリングで、２３６位のＡｓｎ、２６８位のＡｓｐ、２９５位のＬｅｕ、及び３３０位のＬｙｓ。さらなる実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域は、以下のアミノ酸変化（例えば、置換）を含む：ＥＵナンバリングで、２３６位のＴｈｒ、２６８位のＡｓｐ、及び３３０位のＬｙｓ。さらなる実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域は、以下のアミノ酸変化（例えば、置換）を含む：ＥＵナンバリングで、２３６位のＡｓｎ、２６８位のＡｓｐ、２９５位のＬｅｕ、３２６位のＴｈｒ、及び３３０位のＬｙｓ。さらなる実施形態では、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強されたバリアントＦｃ領域は、以下のアミノ酸変化（例えば、置換）を含む：ＥＵナンバリングで、２３５位のＴｒｐ、２３６位のＡｓｎ、２６８位のＡｓｐ、２９５位のＬｅｕ、３２６位のＴｈｒ、及び３３０位のＬｙｓ。
別の態様では、本発明は、等電点（ｐＩ）が増加したバリアントＦｃ領域を含む単離されたポリペプチドを提供する。特定の実施形態では、本明細書中に記載されるバリアントＦｃ領域は、親Ｆｃ領域に少なくとも２つのアミノ酸変化を含む。特定の実施形態では、アミノ酸変化のそれぞれは、親Ｆｃ領域と比較してバリアントＦｃ領域の等電点（ｐＩ）を増加させる。それらは、例えば抗体をインビボで投与した場合、少なくとも２つのアミノ酸残基の改変によってｐＩが増加した抗体で血漿からの抗原除去を促進できるという知見に基づいている。
本発明において、ｐＩは、理論的又は実験的に決定されたｐＩのいずれかであり得る。ｐＩの値は、例えば、当業者に公知の等電点電気泳動によって決定することができる。理論ｐＩの値は、例えば、遺伝子及びアミノ酸配列解析ソフト（Ｇｅｎｅｔｙｘ等）を用いて算出することができる。
一実施形態では、ｐＩ値は、改変前と比較して、例えば、少なくとも０．０１、０．０３、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、又はそれよりも多く、少なくとも０．６、０．７、０．８、０．９、又はそれよりも多く、少なくとも１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、又はそれよりも多く、又は少なくとも１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、３．０、又はそれよりも多く増加し得る。
特定の実施形態では、ｐＩ増加のためのアミノ酸は、バリアントＦｃ領域の表面に露出させることができる。本発明において、表面に露出し得るアミノ酸とは、通常、バリアントＦｃ領域を構成するポリペプチドの表面に位置するアミノ酸残基をいう。ポリペプチドの表面に位置するアミノ酸残基とは、その側鎖が溶媒分子（一般にほとんどが水分子である）と接触することができるアミノ酸残基を指す。ただし、側鎖は必ずしも完全に溶媒分子と接触している必要はなく、側鎖の一部でも溶媒分子と接触していれば、そのアミノ酸は、「表面に位置するアミノ酸残基」と定義される。ポリペプチドの表面に位置するアミノ酸残基は、表面の近くに位置するアミノ酸残基も含み、それによって、側鎖が部分的であってさえも溶媒分子と接触している別のアミノ酸残基からの電荷の影響を有し得る。当業者は、例えば、市販のソフトウェアを使用して、ポリペプチドの相同性モデルを調製することができる。あるいは、Ｘ線結晶学などの当業者に公知の方法を使用することが可能である。表面に露出し得るアミノ酸残基は、例えば、ＩｎｓｉｇｈｔＩＩプログラム（Ａｃｃｅｌｒｙｓ）などのコンピュータプログラムを用いた３次元モデルからの座標を用いて決定される。表面露出可能部位は、当技術分野で公知のアルゴリズムを使用して決定することができる（例えば、Ｌｅｅ ａｎｄ Ｒｉｃｈａｒｄｓ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５５：３７９－４００（１９７１））；Ｃｏｎｎｏｌｌｙ（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．１６：５４８－５５８（１９８３））。表面露出部位は、タンパク質モデリング及び三次元構造情報に適したソフトウェアを使用して決定することができる。そのような目的のために利用可能なソフトウェアには、例えば、ＳＹＢＹＬ Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ Ｍｏｄｕｌｅソフトウェア（Ｔｒｉｐｏｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）が含まれる。アルゴリズムがユーザ入力サイズパラメータを必要とする場合、計算に使用されるプローブの「サイズ」は、半径約１．４オングストローム以下に設定され得る。さらに、パーソナルコンピュータ用のソフトウェアを使用して表面露出可能領域を決定する方法は、Ｐａｃｉｏｓ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ｃｈｅｍ．１８（４）：３７７－３８６（１９９４）；Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｏｄｅｌ．１：４６－５３（１９９５））によって記載されている。上記のこのような情報に基づいて、バリアントＦｃ領域を構成するポリペプチドの表面に位置する適切なアミノ酸残基を選択することができる。
一定の実施形態では、ポリペプチドは、バリアントＦｃ領域と抗原結合ドメインの両方を含む。さらなる実施形態では、抗原は可溶性抗原である。一実施形態において、抗原は対象の体液（例えば、血漿、間質液、リンパ液、腹水、及び胸水）中に存在する。抗原は膜抗原であってもよい。
さらなる実施形態では、抗原結合ドメインの抗原結合活性はイオン濃度条件に従って変化する。一実施形態において、イオン濃度は、特に限定されず、水素イオン濃度（ｐＨ）又は金属イオン濃度を指す。ここで、金属イオンとは、アルカリ金属及び銅族元素等の水素を除くＩ族元素、アルカリ土類金属及び亜鉛族元素等のＩＩ族元素、ホウ素を除くＩＩＩ族元素、炭素及びケイ素を除くＩＶ族元素、鉄族及び白金族元素等のＶＩＩＩ族元素、Ｖ族、ＶＩ族、ＶＩＩ族の亜族Ａに属する元素、アンチモン、ビスマス、及びポロニウム等の金属元素のイオンをいう。本発明において、金属イオンには、例えば、国際公開第２０１２／０７３９９２号及び国際公開第２０１３／１２５６６７号に記載されているように、カルシウムイオンが含まれる。一実施形態では、「イオン濃度条件」は、低イオン濃度と高イオン濃度との間の抗原結合ドメインの生物学的挙動の差に焦点を合わせた条件であり得る。さらに、「抗原結合ドメインの抗原結合活性はイオン濃度条件に応じて変化する」とは、抗原結合ドメインの抗原結合活性が低イオン濃度と高イオン濃度との間で変化することを意味する（そのような抗原結合ドメインは、本明細書において「イオン濃度依存性抗原結合ドメイン」と呼ばれる）。高イオン濃度条件下での抗原結合ドメインの抗原結合活性は、低イオン濃度条件下よりも高く（強く）又は低く（弱く）なり得る。一実施形態では、イオン濃度依存性抗原結合ドメイン（ｐＨ依存性抗原結合ドメイン又はカルシウムイオン濃度依存性抗原結合ドメインなど）は、公知の方法、例えば国際公開第２００９／１２５８２５号、国際公開第２０１２／０７３９９２号及び国際公開第２０１３／０４６７２２号に記載されている方法によって得ることができる。
本発明において、高カルシウムイオン濃度条件下での抗原結合ドメインの抗原結合活性は、低カルシウムイオン濃度条件下よりも高くてもよい。高カルシウムイオン濃度は、特に限定されないが、１００μＭ～１０ｍＭ、２００μＭ～５ｍＭ、４００μＭ～３ｍＭ、２００μＭ～２ ｍＭ、４００μＭ～１ｍＭ、又は５００μＭ～２．５ ｍＭから選択される濃度であってもよく、インビボのカルシウムイオンの血漿（血液）濃度に近いことが好ましい。一方、低カルシウムイオン濃度は、特に限定されないが、０．１μＭ～３０μＭ、０．２μＭ～２０μＭ、０．５μＭ～１０μＭ、１μＭ～５μＭ、又は２μＭ～４μＭの中から選択される濃度であってもよく、インビボの初期エンドソーム中のカルシウムイオン濃度に近いことが好ましい。
一実施形態では、低カルシウムイオン濃度条件下と高カルシウムイオン濃度条件下での抗原結合活性の比は、限定されないが、高カルシウムイオン濃度条件下でのＫＤに対する低カルシウムイオン濃度条件下での解離定数（ＫＤ）の比、すなわちＫＤ（低カルシウムイオン濃度条件）／ＫＤ（高カルシウムイオン濃度条件）は、２以上、１０以上又は４０以上である。この比の上限は、当業者に公知の技術によってそのような抗原結合ドメインを製造することができる限り、４００、１０００又は１００００であり得る。また、ＫＤの代わりに、例えば、解離速度定数（ｋｄ）を用いることもできる。この場合、高カルシウムイオン濃度条件のｋｄに対する低カルシウムイオン濃度条件のｋｄの比、すなわち、ｋｄ（低カルシウムイオン濃度条件）／ｋｄ（高カルシウムイオン濃度条件）は、２以上、５以上、１０以上、又は３０以上である。この比の上限は、当業者の技術常識に基づいて抗原結合ドメインを製造できる限り、５０、１００又は２００であり得る。
本発明において、低水素イオン濃度（中性ｐＨ）下での抗原結合ドメインの抗原結合活性は、高水素イオン濃度（酸性ｐＨ）下よりも高くてもよい。酸性ｐＨは、例えば、ｐＨ４．０～ｐＨ６．５から選択されるｐＨ、ｐＨ４．５～ｐＨ６．５から選択されるｐＨ、ｐＨ５．０～ｐＨ６．５から選択されるｐＨ、又はｐＨ５．５～ｐＨ６．５から選択されるｐＨであってもよく、初期エンドソームのインビボｐＨに近いことが好ましい。酸性ｐＨは、例えば、ｐＨ５．８又はｐＨ６．０であってもよい。特定の実施形態では、酸性ｐＨはｐＨ５．８である。なお、中性のｐＨは、例えば、ｐＨ６．７～ｐＨ１０．０から選択されるｐＨ、ｐＨ６．７～ｐＨ９．５から選択されるｐＨ、ｐＨ７．０～ｐＨ９．０から選択されるｐＨ、又はｐＨ７．０～ｐＨ８．０から選択されるｐＨであってもよく、血漿（血液）中のインビボｐＨに近いことが好ましい。中性ｐＨは、例えば、ｐＨ７．４又はｐＨ７．０であってもよい。特定の実施形態では、中性ｐＨはｐＨ７．４である。
一実施形態では、酸性ｐＨ条件下と中性ｐＨ条件下での抗原結合活性の比は限定されないが、中性ｐＨ条件下でのＫＤに対する酸性ｐＨ条件下での解離定数（ＫＤ）の比、すなわちＫＤ（酸性ｐＨ条件）／ＫＤ（中性ｐＨ条件）は、２以上、１０以上、又は４０以上である。この比の上限は、当業者に公知の技術によってそのような抗原結合ドメインを製造することができる限り、４００、１０００又は１００００であり得る。また、ＫＤの代わりに、例えば、解離速度定数（ｋｄ）を用いることもできる。この場合、中性ｐＨ条件下のｋｄに対する酸性ｐＨ条件下のｋｄの比、すなわち、ｋｄ（酸性ｐＨ条件）／ｋｄ（中性ｐＨ条件）は、２以上、５以上、１０以上、又は３０以上である。この比の上限は、当業者の技術常識に基づいて抗原結合ドメインを製造できる限り、５０、１００又は２００であり得る。
一実施形態では、例えば、国際公開第２００９／１２５８２５号に記載されているように、少なくとも１つのアミノ酸残基が４．０～８．０の側鎖ｐＫａを有するアミノ酸残基で置換され、及び／又は４．０～８．０の側鎖ｐＫａを有する少なくとも１つのアミノ酸が抗原結合ドメインに挿入される。アミノ酸は、置換又は挿入前に比べて酸性ｐＨ条件下では中性ｐＨ条件下よりも抗原結合ドメインの抗原結合活性が弱くなる限り、任意の部位で置換及び／又は挿入され得る。抗原結合ドメインが可変領域又はＣＤＲを有する場合、その部位は可変領域又はＣＤＲ内にあり得る。置換又は挿入されるアミノ酸の数は、当業者が適宜決定することができ、その数は、１以上であってもよい。４．０～８．０の側鎖ｐＫａを有するアミノ酸を使用して、水素イオン濃度条件に従って抗原結合ドメインの抗原結合活性を変化させることができる。そのようなアミノ酸としては、例えば、Ｈｉｓ（Ｈ）及びＧｌｕ（Ｅ）などの天然アミノ酸、並びにヒスチジン類似体（米国特許出願公開第２００９／００３５８３６号）、ｍ－ＮＯ２－Ｔｙｒ（ｐＫａ７．４５）、３，５－Ｂｒ２－Ｔｙｒ（ｐＫａ７．２１）、及び３，５－Ｉ２－Ｔｙｒ（ｐＫａ７．３８）（Ｈｅｙｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１１（１７）：３７６１－３７６８（２００３））などの非天然アミノ酸が挙げられる。６．０～７．０の側鎖ｐＫａを有するアミノ酸も使用することができ、例えばＨｉｓ（Ｈ）が挙げられる。
別の実施形態では、ｐＩが増加したバリアントＦｃ領域の好ましい抗原結合ドメインが記載されており、国際公開第２０１６／１２５４９５号及び国際公開第２０１７／０４６９９４号に記載されている方法によって得ることができる。
特定の実施形態では、ｐＩが増加したバリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される少なくとも２つの位置の少なくとも２つのアミノ酸変化を含む：ＥＵナンバリングで、２８５、３１１、３１２、３１５、３１８、３３３、３３５、３３７、３４１、３４２、３４３、３８４、３８５、３８８、３９０、３９９、４００、４０１、４０２、４１３、４２０、４２２、及び４３１。
さらなる実施形態では、ｐＩが増加したバリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される少なくとも２つの位置の少なくとも２つのアミノ酸変化を含む：ＥＵナンバリングで、３１１、３４１、３４３、３８４、３９９、４００、４０１、４０２、及び４１３。
別の態様では、本発明は、以下の（１）～（１０）のいずれか１つのアミノ酸変化を含む、ｐＩ画像化したバリアントＦｃ領域を含むポリペプチドを提供する。ＥＵナンバリングで、（１）位置３１１及び３４１；（２）位置３１１及び３４３；（３）位置３１１，３４３及び４１３；（４）位置３１１，３８４及び４１３；（５）位置３１１及び３９９；（６）位置３１１及び４０１；（７）位置３１１及び４１３；（８）位置４００及び４１３；（９）位置４０１及び４１３；及び（１０）位置４０２及び４１３。
一態様では、本発明は、以下を含む少なくとも３つのアミノ酸変化を含む、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強され、かつｐＩが増加したバリアントＦｃ領域（複数）を含むポリペプチドを提供する。（ａ）以下からなる群より選択される少なくとも１つの位置の少なくとも１つのアミノ酸の変化：ＥＵナンバリングで、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２６４、２６６、２６７、２６８、２７１、２９５、２９８、３２５、３２６、３２７、３２８、３３０、３３１、３３２、３３４、及び３９６、及び（ｂ）以下からなる群から選択される少なくとも２つの位置の少なくとも２つのアミノ酸変更：ＥＵナンバリングで、２８５、３１１、３１２、３１５、３１８、３３３、３３５、３３７、３４１、３４２、３４３、３８４、３８５、３８８、３９０、３９９、４００、４０１、４０２、４１３、４２０、４２２、及び４３１。
一態様では、本発明は、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強され、かつｐＩが増加した、以下を含む少なくとも３つのアミノ酸変化を含む、バリアントＦｃ領域（複数）を含むポリペプチドを提供する：（ａ）以下からなる群より選択される少なくとも１つの位置の少なくとも１つのアミノ酸の変化：ＥＵナンバリングで、２３１、２３２、２３５、２３６、２３９、２６８、２９５、２９８、３２６、３３０、及び３９６、及び（ｂ）以下からなる群から選択される少なくとも２つの位置の少なくとも２つのアミノ酸変更：ＥＵナンバリングで、３１１、３４１、３４３、３８４、３９９、４００、４０１、４０２、及び４１３。
別の態様では、本発明は、以下の（１）～（９）のいずれか１つのアミノ酸変化を含む、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強され、かつｐＩが増加した、バリアントＦｃ領域を含むポリペプチドを提供する。ＥＵナンバリングで、（１）位置２３５、２３６、２６８、２９５、３１１、３２６、３３０及び３４３；（２）位置２３６、２６８、２９５、３１１、３２６、３３０及び３４３；（３）位置２３６、２６８、２９５、３１１、３３０及び４１３；（４）位置２３６、２６８、３１１、３３０、３９６及び３９９；（５）位置２３６、２６８、３１１、３３０及び３４３；（６）位置２３６、２６８、３１１、３３０、３４３及び４１３；（７）位置２３６、２６８、３１１、３３０、３８４及び４１３；（８）位置２３６、２６８、３１１、３３０及び４１３；及び（９）位置２３６、２６８、３３０、３９６、４００及び４１３。
一態様では、本発明は、以下を含む少なくとも３つのアミノ酸変化を含む、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強され、かつｐＩが増加したバリアントＦｃ領域（複数）を含むポリペプチドを提供する。（ａ）以下からなる群より選択される少なくとも１つの位置の少なくとも１つのアミノ酸の変化：２３４、２３８、２５０、２６４、２６７、３０７、及び３３０、及び（ｂ）以下からなる群から選択される少なくとも２つの位置の少なくとも２つのアミノ酸変更：ＥＵナンバリングで、２８５、３１１、３１２、３１５、３１８、３３３、３３５、３３７、３４１、３４２、３４３、３８４、３８５、３８８、３９０、３９９、４００、４０１、４０２、４１３、４２０、４２２、及び４３１。さらなる実施形態では、ポリペプチドは、以下からなる群から選択される少なくとも２つの位置の少なくとも２つのアミノ酸変化を含む：ＥＵナンバリングで、３１１、３４１、３４３、３８４、３９９、４００、４０１、４０２、及び４１３。
別の態様では、本発明は、以下の（１）～（１６）のいずれか１つのアミノ酸変化を含む、ＦｃガンマＲＩＩｂ結合活性が増強され、かつｐＩが増加した、バリアントＦｃ領域を含むポリペプチドを提供する。ＥＵナンバリングで、（１）位置２３４、２３８、２５０、２６４、３０７、３１１、３３０及び３４３；（２）位置２３４、２３８、２５０、２６４、３０７、３１１、３３０及び４１３；（３）位置２３４、２３８、２５０、２６４、２６７、３０７、３１１、３３０及び３４３；（４）位置２３４、２３８、２５０、２６４、２６７、３０７、３１１、３３０及び４１３；（５）位置２３４、２３８、２５０、２６７、３０７、３１１、３３０及び３４３；（６）位置２３４、２３８、２５０、２６７、３０７、３１１、３３０及び４１３；（７）位置２３４、２３８、２５０、３０７、３１１、３３０及び３４３；（８）位置２３４、２３８、２５０、３０７、３１１、３３０及び４１３；（９）位置２３８、２５０、２６４、２６７、３０７、３１１、３３０及び３４３；（１０）位置２３８、２５０、２６４、２６７、３０７、３１１、３３０及び４１３；（１１）位置２３８、２５０、２６４、３０７、３１１、３３０及び３４３；（１２）位置２３８、２５０、２６４、３０７、３１１、３３０及び４１３；（１３）位置２３８、２５０、２６７、３０７、３１１、３３０及び３４３；（１４）位置２３８、２５０、２６７、３０７、３１１、３３０及び４１３；（１５）位置２３８、２５０、３０７、３１１、３３０及び３４３；及び（１６）位置２３８、２５０、３０７、３１１、３３０及び４１３。
さらに、他の目的（複数可）のために行われるアミノ酸変化を、本明細書中に記載されるバリアントＦｃ領域において組み合わせることができる。例えば、ＦｃＲｎ結合活性を改善するアミノ酸置換（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６（１）：３４６－３５６（２００６）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（３３）：２３５１４－２３５２４（２００６）；Ｐｅｔｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）；Ｚａｌｅｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８（２）：１５７－１５９（２０１０）；ＷＯ ２００６／０１９４４７；ＷＯ ２００６／０５３３０１；及びＷＯ ２００９／０８６３２０）、及び抗体の不均一性又は安定性を改善するためのアミノ酸置換（ＷＯ ２００９／０４１６１３）を加えてもよい。あるいは、ＷＯ ２０１１／１２２０１１、ＷＯ ２０１２／１３２０６７、ＷＯ ２０１３／０４６７０４又はＷＯ ２０１３／１８０２０１に記載されている抗原クリアランスを促進する特性を有するポリペプチド、ＷＯ ２０１３／１８０２００に記載されている標的組織への特異的結合特性を有するポリペプチド、ＷＯ ２００９／１２５８２５、ＷＯ ２０１２／０７３９９２又はＷＯ ２０１３／０４７７５２に記載されている複数の抗原分子への反復結合特性を有するポリペプチドを、本明細書に記載のバリアントＦｃ領域と組み合わせることができる。あるいは、他の抗原への結合能を付与する目的で、欧州特許第１７５２４７１号及び欧州特許第１７７２４６５号に開示されているアミノ酸変化を、本明細書に記載のバリアントＦｃ領域のＣＨ３において組み合わせることができる。あるいは、血漿保持を増加させる目的で、定常領域のｐＩを減少させるアミノ酸変化（国際公開第２０１２／０１６２２７号）を本明細書に記載のバリアントＦｃ領域において組み合わせてもよい。あるいは、細胞への取り込みを促進する目的で、定常領域のｐＩを増加させるアミノ酸変化（国際公開第２０１４／１４５１５９号）を本明細書に記載のバリアントＦｃ領域において組み合わせることができる。あるいは、血漿からの標的分子の除去を促進する目的で、定常領域のｐＩを増加させるアミノ酸変化（国際公開第２０１６／１２５４９５号）を、本明細書中に記載のバリアントＦｃ領域において組み合わせることができる。一実施形態では、そのような変更は、例えば、ＥＵナンバリングで３１１、３４３、３８４、３９９、４００及び４１３からなる群から選択される少なくとも１つの位置の置換を含み得る。さらなる実施形態では、そのような置換は、各位置のＬｙｓ又はＡｒｇによるアミノ酸の置換であり得る。
酸性ｐＨ下でヒトＦｃＲｎ結合活性を増強するアミノ酸変化も、本明細書に記載のバリアントＦｃ領域に組み合わせることができる。具体的には、このような変更は、例えば、ＥＵナンバリングで４２８位におけるＭｅｔについてＬｅｕの置換及び４３４位におけるＡｓｎについてＳｅｒの置換（Ｚａｌｅｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８：１５７－１５９（２０１０））；４３４位におけるＡｓｎについてＡｌａの置換（Ｄｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．３８（４）：６００－６０５（２０１０））；２５２位におけるＭｅｔについてＴｙｒの置換、２５４位におけるＳｅｒについてＴｈｒの置換、及び２５６位におけるＴｈｒについてＧｌｕの置換（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：２３５１４－２３５２４（２００６））；２５０位におけるＴｈｒについてＧｌｎの置換、及び４２８位におけるＭｅｔについてＬｅｕの置換（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６（１）：３４６－３５６（２００６））；４３４位におけるＡｓｎについてＨｉｓの置換（Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．８９（２）：２８３－２９０（２０１１）、及びＷＯ ２０１０／１０６１８０、ＷＯ ２０１０／０４５１９３、ＷＯ ２００９／０５８４９２、ＷＯ ２００８／０２２１５２、ＷＯ ２００６／０５０１６６、ＷＯ ２００６／０５３３０１、ＷＯ ２００６／０３１３７０、ＷＯ ２００５／１２３７８０、ＷＯ ２００５／０４７３２７、ＷＯ ２００５／０３７８６７、ＷＯ ２００４／０３５７５２、又はＷＯ ２００２／０６０９１９に記載の変更を含んでよい。このような変更としては、例えば、４２８位におけるＭｅｔにういてＬｅｕの置換、４３４位におけるＡｓｎについてＡｌａの置換、及び４３６位におけるＴｙｒについてＴｈｒの置換からなる群より選択される少なくとも１つの変更が挙げられ得る。これらの変化には、４３８位におけるＧｌｎについてＡｒｇの置換及び／又は４４０位におけるＳｅｒについてＧｌｕの置換がさらに含まれ得る（国際公開第２０１６／１２５４９５号）。
例示的な二重特異性抗ＣＣＬ２抗体
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する異なる第２の抗原結合部位とを含む二重特異性抗体であって、
Ａ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｂ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｃ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｄ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｅ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｆ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｇ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｈ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｉ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む。
１つの実施形態において、ヒト野生型ＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）が、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇを含むヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃガンマ受容体サイレンシング定常重鎖ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）と比較して、２０ｍｇ／ｋｇの各二重特異性抗体及び０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２からなる予め形成された免疫複合体を１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した場合に、少なくとも２倍高い（一実施形態において、少なくとも５倍高い、一実施形態において、少なくとも１０倍高い、一実施形態において、少なくとも２０倍高い）。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む抗体と同じＣＣＬ２上のエピトープに結合し、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む抗体と同じＣＣＬ２上のエピトープに結合する。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む。
１つの実施形態において、ヒト野生型ＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）が、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇを含むヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃガンマ受容体サイレンシング定常重鎖ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）と比較して、２０ｍｇ／ｋｇの各二重特異性抗体及び０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２からなる予め形成された免疫複合体を１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した場合に、少なくとも１５倍高く、特に少なくとも２０倍高い。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号６３のアミノ酸配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦを含むＦＲ－Ｈ１、（ｅ）配列番号６４のアミノ酸配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧを含むＦＲ－Ｈ２、（ｆ）配列番号６５のアミノ酸配列ＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹ ＹＣＡＲを含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｇ）配列番号６６のアミノ酸配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含むＦＲ－Ｈ４を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｈ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｊ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３、（ｋ）配列番号６７のアミノ酸配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣを含むＦＲ－Ｌ１、（ｌ）配列番号６８のアミノ酸配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹを含むＦＲ－Ｌ２、（ｍ）配列番号６９のアミノ酸配列ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣを含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｎ）配列番号７０のアミノ酸配列ＧＱＧＴＫＶＥＩＫを含むＦＲ－Ｌ４を含む、ＶＬドメイン
を含み；
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＬＴＩＳを含むＦＲ－Ｈ１、（ｅ）配列番号８３のアミノ酸配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧを含むＦＲ－Ｈ２、（ｆ）配列番号８４のアミノ酸配列ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲを含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｇ）配列番号８５のアミノ酸配列ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳを含むＦＲ－Ｈ４を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｈ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｊ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３、（ｋ）配列番号８６のアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣを含むＦＲ－Ｌ１、（ｌ）配列番号８７のアミノ酸配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨを含むＦＲ－Ｌ２、（ｍ）配列番号８８のアミノ酸配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣを含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｎ）配列番号８９のアミノ酸配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫを含むＦＲ－Ｌ４を含む、ＶＬドメイン
を含む。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
Ａ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｂ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｃ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｄ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｅ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｆ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｇ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｈ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｉ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｊ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｋ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｌ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｍ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｎ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｏ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｐ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む。本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
Ａ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶであり、Ｘ２がＰであり、Ｘ３がＨである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦであり、Ｘ２がＲである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｂ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶであり、Ｘ２がＰであり、Ｘ３がＨである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦであり、Ｘ２がＲである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｃ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｄ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｅ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｆ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｇ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｈ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｉ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｊ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｋ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｌ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｍ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｎ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｏ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｐ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体である。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む。
１つの実施形態において、本明細書中に記載される二重特異性抗体は、
ｉ）インビトロでＣＣＬ２のその受容体ＣＣＲ２への結合を遮断する（レポーターアッセイ、ＩＣ５０＝０．５ｎＭ）；及び／又は
ｉｉ）骨髄系細胞のＣＣＬ２媒介走化性をインビトロで阻害する（ＩＣ５０＝１．５ｎＭ）；及び／又は
ｉｉｉ）カニクイザル及びヒトＣＣＬ２に対して交差反応性である。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、他のヒトＣＣＬホモログに対して交差反応性ではなく、特に、ＣＣＬ２に対する結合と比較して、他のＣＣＬホモログ（ＣＣＬ８、ＣＣＬ７、及びＣＣＬ１３の群から選択される）に対して１００倍少ない結合を示す。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、イオン依存的にヒトＣＣＬ２上の第１及び第２のエピトープに結合する。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、ｐＨ依存的にヒトＣＣＬ２に結合し、第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位はどちらも酸性ｐＨよりも中性ｐＨで、より高い親和性でＣＣＬ２に結合する。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、ｐＨ７．４において、ｐＨ５．８よりも１０倍高い親和性でヒトＣＣＬ２に結合する
一実施形態では、本明細書中に記載の二重特異性抗体は、下記の突然変異（ＥＵナンバリング）を（独立して、又は上記の突然変異に加えて）含む、２つのＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）重鎖定常ドメインの一方におけるＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗ
ｉｉ）他方の重鎖定常ドメインにおけるＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む。
１つの実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む。一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及び／又はＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｈ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｔ３０７Ｐ、Ｋ３２６Ｔ及び／又はＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び／又は
ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及び／又はＹ４３６Ｔ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及び／又はＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ、及び／又はＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｉ）Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｈ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｋ３２６Ｔ及び／又はＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び／又は
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及び／又はＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｈ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｋ３２６Ｔ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｉｉ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及び／又はＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｐ及び／又はＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び／又は
ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及び／又はＹ４３６Ｔ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及び／又はＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｐ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及びＹ４３６Ｔ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｐ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ及び（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
Ａ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｂ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｃ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｄ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
上記二重特異性抗体は、以下を有するヒトＩｇＧアイソタイプ（好ましくはヒトＩｇＧ１アイソタイプ）の全長抗体であり、
ａ）それぞれのｉ）の下に上記第１の抗原結合部位を含む第１の抗体の第１の軽鎖及び第１の重鎖；及び
ｂ）それぞれのｉｉ）の下に上記第２の抗原結合部位を含む第２の抗体の第２の軽鎖及び第２の重鎖であって、上記第２の抗体の第２の軽鎖及び第２の重鎖中の可変ドメインＶＬ及びＶＨが互いに置き換えられている、第２の軽鎖及び第２の重鎖；
ａ）の下の第１の軽鎖の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸はリジン（Ｋ）で置換されており（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、位置１２３のアミノ酸はリジン（Ｋ）で置換されており（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、
ａ）の下の第１の重鎖の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換され（ナンバリングはＫａｂａｔ ＥＵインデックスに従う）、位置２１３のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換される（ナンバリングはＫａｂａｔ ＥＵインデックスに従う）。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
上記二重特異性抗体は、以下を有する（全長）抗体であり、
ａ）ｉ）の下に上記第１の抗原結合部位を含むＩｇＧ１アイソタイプの第１のカッパ又はラムダ軽鎖及び第１の重鎖；及び
ｂ）ｉｉ）の下に上記第２の抗原結合部位を含むＩｇＧ１アイソタイプの第２のカッパ又はラムダ軽鎖及び第２のＩｇＧ１重鎖であって、上記第２の抗体の第２の軽鎖及び第２の重鎖中の可変ドメインＶＬ及びＶＨが互いに置き換えられている、第２のカッパ又はラムダ軽鎖及び第２のＩｇＧ１重鎖；
ａ）の下の第１の軽鎖の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸はリジン（Ｋ）で置換されており（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、位置１２３のアミノ酸はリジン（Ｋ）で置換されており（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、
ａ）の下の第１の重鎖の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換され（ナンバリングはＫａｂａｔ ＥＵインデックスに従う）、位置２１３のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換される（ナンバリングはＫａｂａｔ ＥＵインデックスに従う）。
一実施形態において、そのような二重特異性抗体は、以下の突然変異を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）
ｉ）重鎖定常ドメインの一方におけるＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗ
ｉｉ）他方の重鎖定常ドメインにおけるＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ
一実施形態において、そのような二重特異性抗体は、さらに以下の突然変異を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｈ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｋ３２６Ｔ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
１つの代替的な実施形態において、そのような二重特異性抗体は、さらに以下の突然変異を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｉｉ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
１つの代替的な実施形態において、そのような二重特異性抗体は、さらに以下の突然変異を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）。
１つの代替的な実施形態において、そのような二重特異性抗体は、さらに以下の突然変異を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｐ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及びＹ４３６Ｔ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している。
１つの代替的な実施形態において、そのような二重特異性抗体は、さらに以下の突然変異を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｐ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ及び（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１１２の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１３の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１４の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１５の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１１２の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１３の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１４の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１５の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１１６の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１７の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１８の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１９の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１１６の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１７の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１８の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１１９の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１２０の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２１の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２２の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２３の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１２０の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２１の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２２の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２３の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１２０の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２１の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２２の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２３の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１２０の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２１の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２２の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２３の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１５５の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１５６の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１５７の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１５８の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１５５の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１５６の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１５７の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１５８の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１５９の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６０の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６１の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６２の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１５９の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６０の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６１の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６２の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１６３の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６４の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６５の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６６の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１６３の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６４の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６５の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６６の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１６７の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６８の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６９の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１７０の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１６７の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６８の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１６９の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１７０の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１７１の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１７２の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１７３の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１７４の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１７１の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１７２の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１７３の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１７４の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
上記二重特異性抗体は、以下を有するヒトＩｇＧ１アイソタイプの（全長）抗体であり、
ａ）ｉ）の下に上記第１の抗原結合部位を含むＩｇＧ１アイソタイプの第１のカッパ又はラムダ軽鎖及び第１の重鎖；及び
ｂ）ｉｉ）の下に上記第２の抗原結合部位を含むＩｇＧ１アイソタイプの第２のカッパ又はラムダ軽鎖及び第２のＩｇＧ１重鎖であって、上記第２の抗体の第２の軽鎖及び第２の重鎖中の可変ドメインＶＬ及びＶＨが互いに置き換えられている、第２のカッパ又はラムダ軽鎖及び第２のＩｇＧ１重鎖；
ａ）の下の第１の軽鎖の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸はリジン（Ｋ）で置換されており（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、位置１２３のアミノ酸はリジン（Ｋ）で置換されており（ナンバリングはＫａｂａｔに従う）、
ａ）の下の第１の重鎖の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換され（ナンバリングはＫａｂａｔ ＥＵインデックスに従う）、位置２１３のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換される（ナンバリングはＫａｂａｔ ＥＵインデックスに従う）。
一実施形態において、そのような二重特異性抗体は、以下の突然変異を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）
ｉ）重鎖定常ドメインの一方におけるＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗ
ｉｉ）他方の重鎖定常ドメインにおけるＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ
一実施形態において、そのような二重特異性抗体は、さらに以下の突然変異を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｈ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｋ３２６Ｔ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｉｉ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
一実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体は、以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン（又はそのＦｃドメイン）を含む。
Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）。
１つの代替的な実施形態において、そのような二重特異性抗体は、さらに以下の突然変異を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｐ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及びＹ４３６Ｔ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
１つの代替的な実施形態において、そのような二重特異性抗体は、さらに以下の突然変異を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｐ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ及び（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１２４の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２５の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２６の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２７の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１２４の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２５の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２６の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２７の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１２８の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２９の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１３０の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１３１の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１２８の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１２９の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１３０の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１３１の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１３２の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１３３の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１３４の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１３５の配列と少なくとも９８％又は９９％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
本発明の具体的な一実施形態は、ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、配列番号１３２の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１３３の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１３４の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドと、配列番号１３５の配列のアミノ酸配列を含むポリペプチドとを含む二重特異性抗体である。
組換え方法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組換え法及び組成物を使用して生成されてもよい。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＣＬ２抗体（二重特異性又は単一特異性のいずれか）をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、単一特異性抗体又は二重特異性抗体の１つ又はすべてのＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は１つ又はすべてのＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。更なる実施形態では、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下を用いて形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列と、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列とをコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。一実施形態では、宿主細胞は、真核生物のもの、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨＥＫ２９３細胞又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗ＣＣＬ２抗体の作製方法が提供され、本方法は、上述される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
抗ＣＣＬ２細胞の組換え産生のために、そのような核酸は、従来の手順（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）を使用して容易に単離され、配列決定され得る。
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適した宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされていない場合には、細菌中で産生されてもよい。細菌中の抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、米国特許第５，７８９，１９９号及び米国特許第５，８４０，５２３号を参照されたい。（大腸菌における抗体フラグメントの発現を記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｋ．Ａ．，Ｉｎ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８，Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（ｅｄ．），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ（２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照。）発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製することができる。
原核生物に加えて、糸状菌や酵母等の真核生物は、抗体をコードするベクターのクローニング又は発現宿主として適しており、その中には、グリコシル化経路が「ヒト化」された菌株や酵母株が含まれ、その結果、部分的又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体が産生される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｔ．Ｕ．、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２（２００４）１４０９～１４１４；及びＬｉ，Ｈ．ら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４（２００６）２１０～２１５を参照されたい。
また、グリコシル化抗体を発現させるのに適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定されており、昆虫細胞と組み合わせて使用することができ、特にスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションに使用することができる。
植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載）を参照されたい。
脊椎動物細胞も、宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合した哺乳動物細胞株が有用な場合がある。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．、Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ３６（１９７７）５９－７４）に記載されるような２９３細胞又は２９３細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ、Ｊ．Ｐ．、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３（１９８０）２４３－２５２）に記載されるようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト頸部癌腫細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）、ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３（１９８２）４４－６８に記載）、ＭＲＣ ５細胞及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７（１９８０）４２１６～４２２０）を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；並びに骨髄腫細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０が含まれる。抗体産生に適したある特定の哺乳動物宿主細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ，Ｐ．及びＷｕ，Ａ．Ｍ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２４８巻、Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（編）、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ（２００４）、２５５～２６８頁を参照されたい。
別の態様において、本発明は、部分的には、本明細書中に記載される改変された単一特異性抗体が改善されたｐＨ依存性結合特性を示し、したがって、本発明の二重特異性抗体の作製に特に有用であるという発見に基づく。
ｐＨ依存性結合特性を有する単一特異的抗ＣＣＬ２抗体
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２に（特異的に）結合する（単離された）（単一特異性）抗体であり、
該抗体は、
Ａ）（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
又は
Ｂ）（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む。
本発明の一実施形態は、ヒトＣＣＬ２に（特異的に）結合する（単離された）（単一特異性）抗体であり、
該抗体は、
Ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｅ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｇ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｈ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む。
診断及び検出のための方法及び組成物
特定の実施形態では、本明細書で提供される単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体のいずれも、生物学的試料中のＣＣＬ２の存在を検出するために有用である。本明細書で使用される場合、「検出」という用語は、定量的又は定性的な検出を包含する。ある特定の実施形態では、生物学的試料は、免疫細胞、又はＴ細胞浸潤物及び又は腫瘍細胞等の細胞若しくは組織を含む。
一実施形態では、診断又は検出方法において使用するための単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体が提供される。更なる態様では、生体試料中のＣＣＬ２の存在を検出する方法が提供される。特定の実施形態では、本方法は、単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体とＣＣＬ２との結合を許容する条件下で、生物学的試料を本明細書に記載の単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体と接触させ、単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体とＣＣＬ２との間に複合体が形成されているかどうかを検出することを含む。このような方法は、インビトロ法又はインビボ法であってもよい。一実施形態では、例えば、ＣＣＬ２が患者の選択のためのバイオマーカーである場合、単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を使用して、単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体での療法に適格な対象を選択する。
特定の実施形態では、標識された単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体が提供される。標識としては、限定されないが、直接的に検出される標識又は部分（例えば、蛍光、色素体、電子密度の高い、化学発光及び放射性標識）、及び例えば酵素反応又は分子相互作用によって、間接的に検出される部分（例えば、酵素又はリガンド）が挙げられる。例示的な標識としては、限定されないが、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅｓ）、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリ性ホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ及びグルコース－６－ホスフェートデヒドロゲナーゼ、ヘテロ環オキシダーゼ、例えば、ウリカーゼ及び過酸化水素を使用する酵素と連結し、染料前駆体を酸化するキサンチンオキシダーゼ、例えば、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はミクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定な遊離ラジカル等が挙げられる。
Ｅ．医薬製剤
本明細書に記載される単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体の医薬製剤は、所望の程度の純度を有するかかる抗体と、１つ以上の任意の薬学的に許容され得る担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．（ｅｄ．）（１９８０））とを混合することによって、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で調製される。薬学的に許容され得る担体は一般的に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝剤、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化物質、防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、若しくはベンジルアルコール、メチル若しくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール等）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン等のタンパク質、ポリ（ビニルピロリドン）等の親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジン等のアミノ酸、単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡ等のキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトール等の糖類、ナトリウム等の塩形成対イオン、金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）、並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。ここにおける例示的な薬学的に許容され得る担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の介在性薬物分散剤を更に含む。ｒｈｕＰＨ２０を含む、ある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載される。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰを、１つ以上の更なるグリコサミノグリカナーゼ（例えば、コンドロイチナーゼ）と組み合わせる。
例示的な凍結乾燥した抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載される。水性抗体製剤としては、米国特許第６，１７１，５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されるものが挙げられ、後者の製剤は、酢酸ヒスチジン緩衝液を含む。
本明細書における製剤はまた、処置される特定の適応症に必要な２つ以上の活性成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有してもよい。例えば、更に提供することが望ましい場合がある。そのような有効成分は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。
有効成分は、例えば、コアセルベーション技法によって、又は界面重合、例えば、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）又はマクロエマルジョンにおいて、それぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン－マイクロカプセル及びポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセルによって調製されたマイクロカプセル内に封入することができる。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．（ｅｄ．）（１９８０）に開示されている。
徐放性調製物が調製されてもよい。持続放出調製物の好適な例としては、本抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、又はマイクロカプセルの形態である。
インビボ投与に使用される製剤は一般に、滅菌される。滅菌は、例えば滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成され得る。
Ｆ．治療方法及び組成物
本明細書に提供される単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体はいずれも、治療法に使用され得る。
一態様では、医薬として使用するための単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体が提供される。さらなる態様では、単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体、又はがんの処置における使用が提供される。特定の実施形態では、処置方法における使用のための単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、がんを有する個体を処置する方法であって、有効量の単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を個体に投与することを含む方法における使用のための単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を提供する。
さらなる実施形態では、本発明は、腫瘍における免疫抑制を阻害し、したがって、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ－１アンタゴニストなどのように免疫刺激に対して腫瘍を感受性にする単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を提供する。
したがって、その一態様は、本明細書に記載の単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体と、抗ＰＤ１、抗ＰＤＬ－１アンタゴニストなどのがん免疫療法との組み合わせである。
本明細書で使用される「がん」という用語は、例えば、肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、肺細気管支肺胞がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭部若しくは頸部のがん、皮膚若しくは眼内の黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん、乳がん、子宮がん、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰の癌腫、ホジキン病、食道のがん、小腸のがん、内分泌系のがん、甲状腺のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、軟組織の肉腫、尿道のがん、陰茎のがん、前立腺がん、膀胱のがん、腎臓又は尿管のがん、腎細胞癌腫、腎盂の癌腫、中皮腫、肝細胞がん、胆道がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、多形膠芽細胞腫、星細胞種、神経鞘腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮癌腫、下垂体腺腫、リンパ腫、リンパ球性白血病（上述のがんのいずれかの難治性態様を含む）、又は上述のがんの１つ以上の組み合わせであってもよい。
上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、好ましくはヒトである。さらなる態様では、本発明は、医薬の製造又は調製における単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体の使用を提供する。一実施形態では、医薬は、がんの処置のためのものである。さらなる実施形態では、医薬は、がんを処置する方法であって、がんを有する個体に有効量の医薬を投与することを含む方法における使用のためのものである。更なる実施形態では、医薬は、がん細胞の細胞媒介性溶解を誘導するためのものである。更なる実施形態では、医薬は、がんに罹患している個体においてがん細胞の細胞媒介性溶解を誘導する方法において使用するためのものであり、がん細胞におけるアポトーシスを誘導するために／又はがん細胞増殖を阻害するために有効な量の医薬を個体に投与することを含む。上記実施形態のいずれかに従った「個体」は、ヒトであってもよい。
更なる一態様において、本発明は、がんを処置するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、がんを有する個体に有効量の単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を投与することを含む。上記実施形態のいずれかに従った「個体」は、ヒトであってもよい。
更なる態様では、本発明は、がんに罹患している個体においてがん細胞の細胞媒介性溶解を誘導する方法を提供する。一実施形態では、上記方法は、がんに罹患している個体においてがん細胞の細胞媒介溶解を誘導するために、有効量の単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を個体に投与することを含む。一実施形態では、「個体」は、ヒトである。
本発明の別の態様では、炎症性疾患又は自己免疫疾患の処置における使用ための単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、炎症性疾患又は自己免疫疾患を有する個体を処置する方法であって、有効量の単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を個体に投与することを含む方法における使用のための単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を提供する。
更なる態様では、本発明は、例えば、上記の治療法のいずれかにおける使用のための、本明細書に提供される単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体のいずれかを含む医薬製剤を提供する。一実施形態では、医薬製剤は、本明細書に提供される単一又は二重特異性抗ＣＣＬ２抗体のうちのいずれか及び薬学的に許容され得る担体を含む。
いくつかの実施形態では、炎症性疾患又は自己免疫疾患は、自己免疫障害、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性又は好酸球性）障害、単球性障害、若しくはリンパ球性障害、又は正常若しくは異常な組織常在細胞（例えば、マスト細胞、マクロファージ、又はリンパ球など）若しくは間質細胞（例えば、線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮又は内皮）の数若しくは分布の増加に関連する障害である。いくつかの実施形態では、障害は、肺障害である。いくつかの実施形態では、肺障害は、顆粒球性（好酸球性及び／又は好中球性）肺炎症、感染誘発性肺症状（ウイルス（例えば、インフルエンザ、パラインフルエンザ、ライノウイルス、ヒトメタニューモウイルス、及び呼吸器合胞体ウイルスに関連するものを含む）、細菌又は真菌（例えば、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ））トリガーに関連する。いくつかの実施形態では、障害は、アレルゲン誘発性肺症状、毒性環境汚染物質誘発性肺症状（例えば、石綿肺、珪肺又はベリリウム症）、胃吸引誘発性肺症状、又は免疫調節不全若しくは嚢胞性線維症などの遺伝的素因を有する炎症性症状に関連する。いくつかの実施形態では、障害は、物理的外傷誘発性肺症状（例えば、人工呼吸器損傷）、気腫、シガレット誘発性気腫、気管支炎、サルコイドーシス、組織球症、リンパ脈管筋腫症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、慢性肺疾患、気管支肺異形成、肺炎（例えば、院内肺炎、院内肺炎、人工呼吸器関連肺炎、ウイルス性肺炎、細菌性肺炎、及び重症肺炎）、気道増悪、及び急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）である。いくつかの実施形態では、炎症性肺障害は、ＣＯＰＤである。
いくつかの実施形態では、炎症性肺障害は、喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、生命を脅かし得る症状を悪化させる（増悪又は再燃）急性事象を伴う、持続性の慢性重度喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、アトピー性（アレルギー性としても知られる）喘息、非アレルギー性喘息（例えば、しばしば、呼吸器ウイルス（例えば、インフルエンザ、パラインフルエンザ、ライノウイルス、ヒトメタニューモウイルス、及び呼吸系発疹ウイルス）又は吸入した刺激物質（大気汚染物質、スモッグ、ディーゼル粒子、揮発性化学物質及びガス、屋内若しくは屋外又はさらには冷たい乾燥した空気による）での感染によって引き起こされる。
いくつかの実施形態では、喘息は、「煙」（典型的には、紙巻タバコ、葉巻、パイプ）、吸入、若しくは喫煙（タバコ、マリファナ、又は他のそのような物質）への急性又は慢性の一次又は二次曝露による間欠的又は運動誘発性の喘息、又はアスピリン若しくは関連ＮＳＡＩＤＳの新しい摂取によって引き起こされる喘息である。いくつかの実施形態では、喘息は、軽度の喘息若しくはコルチコステロイド未治療喘息、新たに診断された未処置喘息であるか、又は以前には、症状（咳、喘鳴、呼吸困難／息切れ、又は胸痛）を制御するための吸入局所若しくは全身ステロイドの慢性使用を必要としていない。いくつかの実施形態では、喘息は、慢性のコルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、コルチコステロイドで制御不能な喘息、又は他の慢性喘息制御薬で制御不能な喘息である。いくつかの実施形態では、自己免疫障害、炎症性障害、線維性障害、好中球性障害又は好酸球性障害は、肺線維症である。いくつかの実施形態では、肺線維症は特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。いくつかの実施形態では、自己免疫障害、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性又は好酸球性）障害、単球性障害又はリンパ球性障害は、食道炎、アレルギー性鼻炎、非アレルギー性鼻炎、ポリープを伴う鼻副鼻腔炎、鼻ポリープ、気管支炎、慢性肺炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、気道炎症、アレルギー性鼻炎、気管支拡張症及び／又は慢性気管支炎である。
いくつかの実施形態では、自己免疫障害、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性又は好酸球性）障害、単球性障害又はリンパ球性障害は、関節炎である。いくつかの実施形態では、関節炎は関節リウマチである。いくつかの実施形態では、関節炎は、変形性関節症、関節リウマチ、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、早期関節炎、多関節性関節リウマチ、全身型関節リウマチ、腸疾患性関節炎、反応性関節炎、乾癬性関節炎、及び／又は傷害の結果としての関節炎である。
いくつかの実施形態では、自己免疫障害、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性又は好酸球性）障害、単球性障害又はリンパ球性障害は、胃腸炎症状態である。いくつかの実施形態では、胃腸炎症状態は、ＩＢＤ（炎症性腸疾患）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、大腸炎（例えば、環境的傷害（例えば、化学療法、放射線療法などの治療レジメンによって引き起こされるか、又は関連する）によって引き起こされる大腸炎、感染性大腸炎、虚血性大腸炎、コラーゲン性又はリンパ球性大腸炎、壊死性腸炎、慢性肉芽腫性疾患又はセリアック病などの状態における大腸炎、食物アレルギー、胃炎、胃腸炎、感染性胃炎又は腸炎（例えば、ピロリ菌感染慢性活動性胃炎）、及び感染因子によって引き起こされる他の形態の胃腸炎症、又は不確定大腸炎である。
いくつかの実施形態では、自己免疫障害、炎症性障害、線維性障害、顆粒球性（好中球性若しくは好酸球性）障害、単球性障害、若しくはリンパ球性障害、又は正常若しくは異常な組織常在細胞（例えば、マスト細胞、マクロファージ、又はリンパ球など）若しくは間質細胞（例えば、線維芽細胞、筋線維芽細胞、平滑筋細胞、上皮又は内皮）の数若しくは分布の増加に関連する障害は、狼瘡若しくは全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、又は狼瘡の１つ若しくは複数の器官特異的症状発現（例えば、腎臓に影響を及ぼすループス腎炎（ＬＮ）、又は血液及び／若しくはリンパ系器官（リンパ節、脾臓、胸腺、及び関連するリンパ管）、並びに／又は関節及び／若しくは他の器官に影響を及ぼすが必ずしも腎臓に影響を及ぼさない腎外ループス（ＥＲＬ））である。いくつかの実施形態では、自己免疫障害、炎症性障害又は線維性障害は、敗血症及び／又は外傷、ＨＩＶ感染症、又は特発性（原因不明）、例えば、ＡＮＣＡ関連白斑症（ＡＡＶ）、多発血管炎性肉芽腫症（以前はウェゲナー肉芽腫症として知られていた）、ベーチェット病、心血管疾患、好酸球性気管支炎、ライター症候群、ＳＥＡ症候群（血清反応陰性、腱付着部障害、関節症症候群）、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、強皮症、例えば、全身性硬化症とも呼ばれる全身性強皮症、血管炎（例えば、側頭動脈炎、頭蓋動脈炎又はホートン病とも呼ばれる巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ））、筋炎、多発性筋炎、皮膚筋炎、結節性動脈炎、動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、サルコイドーシス、原発性胆汁性硬化症、硬化性胆管炎、シェーグレン症候群、乾癬、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆説乾癬、膿疱性乾癬、紅皮性乾癬、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、天疱瘡、例えば、尋常性天疱瘡、アテローム性動脈硬化症、狼瘡、スチル病、重症筋無力症、セリアック病、再発寛解型（ＲＲＭＳ）又は原発性進行型（ＰＰＭＳ）又は続発性進行型（ＳＰＭＳ）サブタイプの多発性硬化症（ＭＳ）、ギラン・バレー病、Ｉ型糖尿病（Ｔ１ＤＭ）若しくはインスリン依存性（ＩＤＤＭ）若しくは若年発症ＤＭ型、甲状腺炎（例えば、グレーブス病）、セリアック病、チャーグ・シュトラウス症候群、筋痛症候群、好酸球増加症候群、発作性血管浮腫を含む浮腫性反応、蠕虫感染症、肝細胞性皮膚炎、好酸球性食道炎、好酸球性腸炎、好酸球性大腸炎、閉塞性睡眠時無呼吸、心内膜線維症、アジソン病、レイノー病又は現象、自己免疫性肝炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）又は臓器移植拒絶に関連する。
本発明の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、並びに局所処置のために望まれる場合、病変内投与を含む、任意の適切な手段によって投与することができる。非経口輸液には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期か又は長期かに部分的に依存して、任意の適切な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。単回又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス輸注を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが、本明細書では企図される。
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致した方法で製剤化され、投与され、投与されるであろう。これに関連して考慮すべき要因としては、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の要因が挙げられる。抗体は、必ずしもそうである必要はないが、任意に、問題の障害を予防又は処置するために現在使用されている１つ以上の薬剤とともに製剤化される。有効量のそのような他の作用物質は、製剤中に存在する抗体の量、障害又は処置の種類、及び上述の他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載のものと同じ投薬量及び投与経路によって、又は本明細書に記載の投薬量の約１～９９％、又は適切であると経験的／臨床的に判断される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
疾患の予防又は処置について、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独で、又は１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、処置される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的又は治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴及び抗体への応答、並びに主治医の裁量に依存するだろう。抗体は、適切には、患者に一度に又は一連の処置にわたって投与される。疾患の種類及び重篤度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．５ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体を、例えば、１回の又は複数回の別個の投与によるか、又は連続的な注入によるかに関わらず、患者に投与するための初期の候補投薬量とすることができる。典型的な１日投薬量は、上述の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。数日間又はそれ以上にわたる反復投与において、状態に応じ、処置は通常、疾患症状の所望の抑制が生じるまで続けられる。抗体の１つの例示的な投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はこれらの任意の組合せ）のうちの１つ以上の用量が、患者に投与され得る。かかる用量は、間欠的に、例えば、毎週又は３週間に１回（例えば、患者が約２～約２０回、又は例えば、約６回用量の抗体を受けるように）投与され得る。最初の多めの投与量、それに続く１回又は複数回の量の少ない用量を投与してよい。例示的な投薬レジメンは、約４ｍｇ／ｋｇの初期負荷用量、続いて約２ｍｇ／ｋｇの抗体の毎週の維持用量を投与することを含む。しかしながら、他の投薬レジメンが有用であってもよい。この治療の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。
ＩＩ．製造物品
本発明の別の態様では、上述の障害の処置、予防及び／又は診断に有用な材料を含む製造物品が提供される。製造物品は、容器と、容器に挿入されるか、又は容器に付随するラベル又はパッケージ添付文書とを備えている。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグなどを含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、状態を処置、予防、及び／又は診断するのに有効な別の組成物と単独で又は組み合わせて使用される組成物を保持し、無菌アクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択される症状を処置するために使用されることを示す。さらに、製造物品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物が入った第１の容器、及び（ｂ）細胞障害性剤又は他の治療剤をさらに含む組成物が入った第２の容器を備えることができる。本発明のこの実施形態における製造物品は、組成物が特定の状態を処置するために使用され得ることを示すパッケージ添付文書を更に含んでいてもよい。これに代えて、又はこれに加えて、製造物品は、薬学的に許容され得る緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液及びデキストロース溶液を含む第２の（又は第３の）容器を更に備えていてもよい。他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、注射器等、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。
以下に、本発明の特定の実施形態を列挙する。
１．ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する異なる第２の抗原結合部位とを含む二重特異性抗体であって、ヒトＩｇＧアイソタイプ、好ましくはＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインを含む、二重特異性抗体。
２．実施形態１に記載の二重特異性抗体であって、
Ａ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｂ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｃ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｄ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｅ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｆ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｇ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｈ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｉ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体。
３．実施形態２に記載の二重特異性抗体であって、
Ａ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｂ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｃ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び、
配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｄ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｅ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；
及び、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメインを含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｆ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｇ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｈ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｉ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体。
４．ヒトＩｇＧアイソタイプのＦｃドメインを含む二重特異性抗体が、ヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む二重特異性抗体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
５．実施形態４に記載の二重特異性抗体であって、ヒト野生型ＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）が、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃガンマ受容体サイレンシング定常重鎖ドメインを含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）と比較して、２０ｍｇ／ｋｇの各二重特異性抗体及び０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２からなる予め形成された免疫複合体を１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した場合に、少なくとも２倍高い（一実施形態において、少なくとも５倍高い、一実施形態において、少なくとも１０倍高い、一実施形態において、少なくとも２０倍高い）、二重特異性抗体。
６．ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧアイソタイプのＦｃドメインを含み、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び、
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む抗体と同じＣＣＬ２上のエピトープに結合し、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び、
配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む抗体と同じＣＣＬ２上のエピトープに結合する、二重特異性抗体。
７．ヒト野生型ＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）が、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃガンマ受容体サイレンシング定常重鎖ドメインを含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）と比較して、２０ｍｇ／ｋｇの各二重特異性抗体及び０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２からなる予め形成された免疫複合体を１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した場合に、少なくとも１５倍高く、特に少なくとも２０倍高い、実施形態６に記載の二重特異性抗体。
８．ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
を含み、
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体。
９．ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号６３のアミノ酸配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦを含むＦＲ－Ｈ１、（ｅ）配列番号６４のアミノ酸配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧを含むＦＲ－Ｈ２、（ｆ）配列番号６５のアミノ酸配列ＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹ ＹＣＡＲを含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｇ）配列番号６６のアミノ酸配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含むＦＲ－Ｈ４を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｈ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｊ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３、（ｋ）配列番号６７のアミノ酸配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣを含むＦＲ－Ｌ１、（ｌ）配列番号６８のアミノ酸配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹを含むＦＲ－Ｌ２、（ｍ）配列番号６９のアミノ酸配列ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣを含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｎ）配列番号７０のアミノ酸配列ＧＱＧＴＫＶＥＩＫを含むＦＲ－Ｌ４を含む、ＶＬドメイン
を含み；
ｉｉ）上記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＬＴＩＳを含むＦＲ－Ｈ１、（ｅ）配列番号８３のアミノ酸配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧを含むＦＲ－Ｈ２、（ｆ）配列番号８４のアミノ酸配列ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲを含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｇ）配列番号８５のアミノ酸配列ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳを含むＦＲ－Ｈ４を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｈ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｊ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３、（ｋ）配列番号８６のアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣを含むＦＲ－Ｌ１、（ｌ）配列番号８７のアミノ酸配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨを含むＦＲ－Ｌ２、（ｍ）配列番号８８のアミノ酸配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣを含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｎ）配列番号８９のアミノ酸配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫを含むＦＲ－Ｌ４を含む、ＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体。
１０．ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
Ａ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｂ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｃ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｄ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｅ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｆ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｇ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｈ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｉ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｊ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｋ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｌ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｍ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｎ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｏ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、
又は
Ｐ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体。
１１．ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む（単離された）二重特異性抗体であって、
Ａ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶであり、Ｘ２がＰであり、Ｘ３がＨである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦであり、Ｘ２がＲである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｂ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶであり、Ｘ２がＰであり、Ｘ３がＨである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦであり、Ｘ２がＲである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｃ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｄ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｅ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｆ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｇ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｈ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｉ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｊ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｋ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｌ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｍ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｎ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｏ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含む、
又は
Ｐ）ｉ）上記第１の抗原結合部位が、
配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列
を含み、
ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、二重特異性抗体。
１２．ヒトＩｇＧアイソタイプ、好ましくはヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインである、実施形態８～１１のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
１３．ヒトＩｇＧアイソタイプ、好ましくはヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常ドメインを含む、実施形態８～１１のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
１４．先行する実施形態のいずれか一つに記載の二重特異性抗体であって、
ｉ）インビトロでＣＣＬ２のその受容体ＣＣＲ２への結合を遮断する（レポーターアッセイ、ＩＣ５０＝０．５ｎＭ）；及び／又は
ｉｉ）骨髄系細胞のＣＣＬ２媒介走化性をインビトロで阻害する（ＩＣ５０＝１．５ｎＭ）；及び／又は
ｉｉｉ）ｃｙｎｏ及びヒトＣＣＬ２に対して交差反応性である、二重特異性抗体。
１５．先行する実施形態のいずれか一つに記載の二重特異性抗体であって、他のＣＣＬホモログに対して交差反応性ではなく、（ＣＣＬ２に対する結合と比較して、他のＣＣＬホモログ（ＣＣＬ８、ＣＣＬ７、及びＣＣＬ１３の群から選択される）に対して１００倍少ない結合を示す。
１６．イオン依存的にヒトＣＣＬ２上の第１及び第２のエピトープに結合する、先行する実施形態のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
１７．二重特異性抗体は、ｐＨ依存的にヒトＣＣＬ２に結合し、第１の抗原結合部位及び第２の抗原結合部位はどちらも酸性ｐＨよりも中性ｐＨで、より高い親和性でＣＣＬ２に結合する、先行する実施形態のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
１８．ｐＨ７．４において、ｐＨ５．８よりも１０倍高い親和性でヒトＣＣＬ２に結合する、先行する実施形態のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
１９．以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及び／又はＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７ＰＨ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｋ３２６Ｔ及び／又はＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び／又は
ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及び／又はＹ４３６Ｔ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及び／又はＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
２０．以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ、及び／又はＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｉ）Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｈ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｋ３２６Ｔ及び／又はＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び／又は
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及び／又はＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
２１．以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及びＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｈ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｋ３２６Ｔ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
２２．以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及び／又はＰ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｖ及び／又はＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び／又は
ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及び／又はＹ４３６Ｔ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び／又は
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及び／又はＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
２３．以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及び／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｖ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及びＹ４３６Ｔ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び／
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
２４．以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）のうちの１つ又は複数を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインを含む、先行する請求項のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
ｉ）Ｑ３１１Ｒ及び／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；及び
ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｔ３０７Ｖ及びＡ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；及び
ｉｉｉ）Ｎ４３４Ａ（より長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び／
ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及びＳ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
２５．以下の突然変異（ＥＵナンバリング）を含む２つのヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
ｉ）重鎖定常ドメインの一方におけるＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗ
ｉｉ）他方の重鎖定常ドメインにおけるＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ
２６．ヒトＣＣＬ２に（特異的に）結合する（単離された）抗体であって、
該抗体が、
Ａ）（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
又は
Ｂ）（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；
及び
（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
を含む、抗体。
２７．ヒトＣＣＬ２に（特異的に）結合する（単離された）抗体であって、
該抗体が、
Ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｅ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｇ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
又は
Ｈ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
を含む、抗体。
２８．先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体をコードする、単離された核酸。
２９．実施形態２８に記載の核酸を含む、宿主細胞。
３０．抗体を産生する方法であって、抗体が産生されるように、実施形態２９に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
３１．抗体を宿主細胞から回収することをさらに含む、実施形態３０に記載の方法。
３２．実施形態１～２５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む、医薬製剤。
３３．医薬として使用するための、実施形態１～２５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
３４．がんの処置における使用のための、実施形態１～２５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
３５．炎症性疾患又は自己免疫疾患の処置における使用のための、実施形態１～２５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体。
３６．医薬の製造における、実施形態１～２５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体の使用。
３７．医薬が、がんの処置用である、実施形態３６に記載の使用。
３８．医薬が、炎症性疾患又は自己免疫疾患の処置用である、実施形態３６に記載の使用。
３９．がんを有する個体を処置する方法であって、個体に、有効量の実施形態１～２５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体を投与することを含む、、方法。
４０．炎症性疾患又は自己免疫疾患を有する個体を処置する方法であって、個体に、有効量の実施形態１～２５のいずれか一つに記載の二重特異性抗体を投与することを含む、、方法。
以下の実施例及び図面は、本発明の理解を助けるために提供され、本発明の真の範囲は添付の特許請求の範囲において説明される。本発明の要旨から逸脱することなく、記載された手順に変更を加えることができることが理解される。
アミノ酸配列の説明
異なるエピトープに結合する抗ＣＣＬ２抗原結合部分（可変領域及び超可変領域（ＣＤＲ））：
ＣＤＲ改変抗ＣＣＬ２抗原結合部分（可変領域及び超可変領域（ＣＤＲ））：
改変ＣＮＴＯ８８８
改変ヒト化１１Ｋ２
例示的な定常軽鎖領域：
配列番号９５ 例示的なヒトκ軽鎖定常領域
配列番号９６ 例示的なヒトラムダ軽鎖定常領域
例示的な定常重鎖領域：
配列番号９７ ＩｇＧ１由来の例示的なヒト重鎖定常領域
配列番号９８ 突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを有する、ＩｇＧ１由来の例示的なヒト重鎖定常領域（Ｆｃガンマ受容体サイレンシング）
配列番号９９ ＩｇＧ１（ＳＧ１－ＩｇＧ１アロタイプ）配列番号１００由来の例示的なヒト重鎖定常領域 突然変異を有するＩｇＧ１由来の例示的なヒト重鎖定常領域（ＳＧ１０５－ＩｇＧ１アロタイプ－Ｆｃガンマ受容体サイレンシング）
配列番号１０１ ＳＧ１０９５－突然変異を含むＩｇＧ１由来の例示的ヒト重鎖定常領域（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｌ２３５Ｗ／Ｇ２３６Ｎ／Ｈ２６８Ｄ／Ｑ２９５Ｌ／Ａ３３０Ｋ／Ｋ３２６Ｔ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するための等電点（ｐＩ）を増加させるのに適している；
－Ｎ４３４Ａ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している
配列番号１０２ ＳＧ１０９９－突然変異を含むＩｇＧ１由来の例示的ヒト重鎖定常領域（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）
配列番号１０３ ＳＧ１１００－突然変異を含むＩｇＧ１由来の例示的ヒト重鎖定常領域（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；
－Ｎ４３４Ａ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
ＣＮＴＯ８８８／／１１Ｋ２－ＷＴ ＩｇＧ１（例示的な二重特異性ＣＮＴＯ８８８／／１１Ｋ２－ＷＴ ＩｇＧ１ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１０４ 重鎖１－ＣＮＴＯ８８８／／１１Ｋ２－ＷＴ ＩｇＧ１
配列番号１０５ 重鎖２－ＣＮＴＯ８８８／／１１Ｋ２－ＷＴ ＩｇＧ１
配列番号１０６ 軽鎖１－ＣＮＴＯ８８８／／１１Ｋ２－ＷＴ ＩｇＧ１
配列番号１０７ 軽鎖２－ＣＮＴＯ８８８／／１１Ｋ２－ＷＴ ＩｇＧ１
ＣＫＬＯ２－ＩｇＧ１（例示的な二重特異性ＣＫＬＯ２ ＩｇＧ１ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１０８ 重鎖１－ＣＫＬＯ２ ＩｇＧ１
配列番号１０９ 重鎖２－ＣＫＬＯ２ ＩｇＧ１
配列番号１１０ 軽鎖１－ＣＫＬＯ２ ＩｇＧ１
配列番号１１１ 軽鎖２－ＣＫＬＯ２ ＩｇＧ１
ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９５（ＳＧ１０９５ Ｆｃ突然変異を含む例示的な二重特異性ＣＬＯＫ２ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１１２ 重鎖１－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９５
配列番号１１３ 重鎖２－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９５
配列番号１１４ 軽鎖１－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９５
配列番号１１５ 軽鎖２－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９５
ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９（ＳＧ１０９９ Ｆｃ突然変異を含む例示的な二重特異性ＣＫＬＯ２ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１１６ 重鎖１－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９
配列番号１１７ 重鎖２－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９
配列番号１１８ 軽鎖１－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９
配列番号１１９ 軽鎖２－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９
ＣＫＬＯ２－ＳＧ１１００（ＳＧ１１００ Ｆｃ突然変異を含む例示的な二重特異性ＣＫＬＯ２ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１２０ 重鎖１－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１１００
配列番号１２１ 重鎖２－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１１００
配列番号１２２ 軽鎖１－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１１００
配列番号１２３ 軽鎖２－ＣＫＬＯ２－ＳＧ１１００
ＣＫＬＯ３－ＳＧ１０９５（ＳＧ１０９５ Ｆｃ突然変異を含む例示的な二重特異性ＣＬＯＫ３ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１２４ 重鎖１－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１０９５
配列番号１２５ 重鎖２－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１０９５
配列番号１２６ 軽鎖１－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１０９５
配列番号１２７ 軽鎖２－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１０９５
ＣＫＬＯ３－ＳＧ１０９９（ＳＧ１０９９ Ｆｃ突然変異を含む例示的な二重特異性ＣＫＬＯ３ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１２８ 重鎖１－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１０９９
配列番号１２９ 重鎖２－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１０９９
配列番号１３０ 軽鎖１－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１０９９
配列番号１３１ 軽鎖２－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１０９９
ＣＫＬＯ３－ＳＧ１１００（ＳＧ１１００ Ｆｃ突然変異を含む例示的な二重特異性ＣＫＬＯ３ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１３２ 重鎖１－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１１００
配列番号１３３ 重鎖２－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１１００
配列番号１３４ 軽鎖１－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１１００
配列番号１３５ 軽鎖２－ＣＫＬＯ３－ＳＧ１１００
さらなる抗ＣＣＬ２抗原結合部分：
配列番号１３６ 重鎖可変ドメインＶＨ ２Ｆ２
配列番号１３７ 軽鎖可変ドメインＶＬ ２Ｆ２
配列番号１３８ 重鎖可変ドメインＶＨ マウス１１Ｋ２（＝１１Ｋ２ｍ）
配列番号１３９ 軽鎖可変ドメインＶＬ マウス１１Ｋ２（＝１１Ｋ２ｍ）
配列番号１４０ 重鎖可変ドメインＶＨ、Ｖ９ １Ｈ１１
配列番号１４１ 軽鎖可変ドメインＶＬ、Ｖ９ １Ｈ１１
例示的なＣＣＬ２及びホモログ（シグナルペプチドなし）：
配列番号１４２ 例示的なヒトＣＣＬ２（ＭＣＰ１）－野生型（ｗｔ）
配列番号１４３ 例示的なヒトＣＣＬ２（ＭＣＰ１）－Ｐ８Ａバリアント
配列番号１４４ 例示的なヒトＣＣＬ２（ＭＣＰ１）－Ｔ１０Ｃバリアント
配列番号１４５ 例示的なヒトＣＣＬ８（ＭＣＰ２）－野生型（ｗｔ）
配列番号１４６ 例示的なヒトＣＣＬ８（ＭＣＰ２）－Ｐ８Ａバリアント
配列番号１４７ 例示的なヒトＣＣＬ７（ＭＣＰ３）－野生型（ｗｔ）
配列番号１４８ 例示的なヒトＣＣＬ１３（ＭＣＰ４）－野生型（ｗｔ）
配列番号１４９ 例示的なカニクイザルＣＣＬ２－野生型（ｗｔ）
配列番号１５０ 例示的なマウスＣＣＬ２－野生型（ｗｔ）
さらなる例示的な定常重鎖領域：
配列番号１５１ ＧＧ０１－突然変異を含むＩｇＧ１由来の例示的ヒト重鎖定常領域（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｌ２３４Ｙ／Ｐ２３８Ｄ／Ｔ２５０Ｖ／Ｖ２６４Ｉ／Ｔ３０７Ｐ／Ａ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するための等電点（ｐＩ）を増加させるのに適している）；
－Ｎ４３４Ａ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
配列番号１５２ ＧＧ０２－突然変異を含むＩｇＧ１由来の例示的ヒト重鎖定常領域（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｌ２３４Ｙ／Ｐ２３８Ｄ／Ｔ２５０Ｖ／Ｖ２６４Ｉ／Ｔ３０７Ｐ／Ａ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するための等電点（ｐＩ）を増加させるのに適している）；
－Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ａ／Ｙ４３６Ｔ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
配列番号１５３ ＧＧ０３－突然変異を含むＩｇＧ１（ＩｇＧ１アロタイプ配列を含む）由来の例示的ヒト重鎖定常領域（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｌ２３４Ｙ／Ｐ２３８Ｄ／Ｔ２５０Ｖ／Ｖ２６４Ｉ／Ｔ３０７Ｐ／Ａ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するための等電点（ｐＩ）を増加させるのに適している）；
－Ｎ４３４Ａ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
配列番号１５４ ＧＧ０４－突然変異を含むＩｇＧ１（ＩｇＧ１アロタイプ配列を含む）由来の例示的ヒト重鎖定常領域（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｌ２３４Ｙ／Ｐ２３８Ｄ／Ｔ２５０Ｖ／Ｖ２６４Ｉ／Ｔ３０７Ｐ／Ａ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するための等電点（ｐＩ）を増加させるのに適している）；
－Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ａ／Ｙ４３６Ｔ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
ＣＫＬＯ２－ＧＧ０１（ＧＧ０１ Ｆｃ突然変異を含む例示的な二重特異性ＣＬＯＫ２ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１５５ 重鎖１－ＣＫＬＯ２－ＧＧ０１
配列番号１５６ 重鎖２－ＣＫＬＯ２－ＧＧ０１
配列番号１５７ 軽鎖１－ＣＫＬＯ２－ＧＧ０１
配列番号１５８ 軽鎖２－ＣＫＬＯ２－ＧＧ０１
ＣＫＬＯ２－ＧＧ０２（ＧＧ０２ Ｆｃ突然変異を含む例示的な二重特異性ＣＬＯＫ２ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１５９ 重鎖１－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０２
配列番号１６０ 重鎖２－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０２
配列番号１６１ 軽鎖１－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０２
配列番号１６２ 軽鎖２－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０２
ＣＫＬＯ２－ＧＧ０３（ＧＧ０３ Ｆｃ突然変異を含む例示的な二重特異性ＣＬＯＫ２ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１６３ 重鎖１－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０３
配列番号１６４ 重鎖２－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０３
配列番号１６５ 軽鎖１－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０３
配列番号１６６ 軽鎖２－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０３
ＣＫＬＯ２－ＧＧ０４（ＧＧ０４ Ｆｃ突然変異を含む例示的な二重特異性ＣＫＬＯ２ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１６７ 重鎖１－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０４
配列番号１６８ 重鎖２－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０４
配列番号１６９ 軽鎖１－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０４
配列番号１７０ 軽鎖２－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０４
ＣＫＬＯ２－ＧＧ０３／ＧＧ０４（ノブ鎖にＧＧ０３ Ｆｃ変異を含みホール鎖にＧＧ０４ Ｆｃ変異を含む例示的な二重特異性ＣＫＬＯ２ Ｃｒｏｓｓｍａｂ）
配列番号１７１ 重鎖１－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０３／ＧＧ０４
配列番号１７２ 重鎖２－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０３／ＧＧ０４
配列番号１７３ 軽鎖１－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０３／ＧＧ０４
配列番号１７４ 軽鎖２－ＣＫＬＯ２ ＧＧ０３／ＧＧ０４
本明細書中に記載される抗ＣＣＬ２二重特異性抗体のために使用された単一特異性未改変抗ＣＣＬ２抗体／抗原結合部分の指定
突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを含むＩｇＧ１又はＩｇＧ１のいずれかを有するＣｒｏｓｓｍａｂ（ＷＯ ２０１６／０１６２９９参照）としての未改変ＶＨ／ＶＬを有する二重特異性抗ＣＣＬ２の指定（ＰＧＬＡＬＡ）
改変ＶＨ／ＶＬを有するＣｒｏｓｓｍａｂとしての二重特異性抗体の指定（ＷＯ ２０１６／０１６２９９を参照）。使用される重鎖定常ドメイン（例えば、ＩｇＧ１野生型、ＰＧＬＡＬＡ、ＳＧ１０９５、ＳＧ１０９９、１１００）に応じて、接尾辞ＩｇＧ１野生型、ＰＧＬＡＬＡ、ＳＧ１０９５、ＳＧ１０９９、１１００が付加される
実施例Ａ－１単一特異性抗ＣＣＬ２抗体
単一特異性抗ＣＣＬ２抗体及びＣＣＬ２抗原の作製
組換えＤＮＡ技術
標準的な方法を使用して、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９に記載されるように、ＤＮＡを操作した。分子生物学的試薬は、製造者の指示にしたがって使用した。
遺伝子及びオリゴヌクレオチド合成
所望の遺伝子セグメントを、Ｇｅｎｅａｒｔ ＧｍｂＨ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）において化学合成により調製した。合成された遺伝子断片を、増殖／増幅のために大腸菌プラスミドにクローニングした。サブクローニングされた遺伝子断片のＤＮＡ配列を、ＤＮＡ配列決定によって検証した。あるいは、短い合成ＤＮＡ断片を、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドをアニーリングするか、ＰＣＲを介して組み立てた。それぞれのオリゴヌクレオチドを、Ｍｅｔａｂｉｏｎ ＧｍｂＨ（プラネグ－マルティンスリート、ドイツ）によって調製した。
基本的／標準的な哺乳動物発現プラスミドの説明
所望の遺伝子／タンパク質（例えば、全長抗体重鎖、全長抗体軽鎖、又はＣＣＬ－２分子）の発現のため、以下の機能的要素を含む転写単位を使用する。
－ イントロンＡを含む、ヒトサイトメガロウイルス（Ｐ－ＣＭＶ）由来の前初期エンハンサー及びプロモーター、
－ ヒト重鎖免疫グロブリン５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
－ マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
－ 発現される遺伝子／タンパク質（例えば全長抗体重鎖又は抗体軽鎖又はＣＣＬ－２分子）、及び
－ ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ ｐＡ）。
発現される所望の遺伝子を含む発現ユニット／カセットに加えて、基本的／標準的な哺乳動物発現プラスミドは、
大腸菌におけるこのプラスミドの複製を可能にするベクターｐＵＣ１８からの複製起点、及び
大腸菌にアンピシリン耐性を付与するベータラクタマーゼ遺伝子を含む。
組換えモノクローナル抗体及びＣＣＬ－２分子のための発現プラスミドの作製
モノクローナル抗体及びＣＣＬ－２抗原の一過性発現のための発現プラスミドは、それぞれの発現カセットの他に、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるこのプラスミドの複製を可能にするベクターｐＵＣ１８からの複製起点と、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるアンピシリン耐性を付与するベータラクタマーゼ遺伝子とを含んでいた。
それぞれの免疫グロブリンＨＣ又はＬＣ又はＣＣＬ－２分子の転写単位は、以下の機能要素を含んでいた：
－ イントロンＡを含む、ヒトサイトメガロウイルス（Ｐ－ＣＭＶ）由来の前初期エンハンサー及びプロモーター、
－ ヒト重鎖免疫グロブリン５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
－ マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、及び
－ ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ ｐＡ）。
それぞれの抗体１Ａ４、１Ａ５、１Ｇ９、２Ｆ６、ＣＮＴＯ８８８、マウス及びヒト化１１Ｋ２、ＡＢＮ９１２を、ＶＨ及びＶＬに基づいて、ＩｇＧ１野生型として、及びカッパ軽鎖を有するＩｇＧ１ ＰＧＬＡＬＡ／エフェクターサイレントＦｃとして作製した。
一過性発現及び精製
組換え産生を、Ｆ１７培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．）中で培養したＨＥＫ２９３細胞（ヒト胎児腎臓細胞株２９３由来）の一過性トランスフェクションによって行った。モノクローナル抗体の産生のため、細胞を、それぞれの免疫グロブリン重鎖及び軽鎖を含有するプラスミドで同時トランスフェクトした。トランスフェクション「２９３－フェクチン」には、トランスフェクション試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用した。トランスフェクションは、製造業者の説明書に明記されているように実施した。細胞培養上清をトランスフェクションの３～７日後に回収した。上清を低温（例えば－８０℃）で保存した。
例えばＨＥＫ２９３細胞におけるヒト免疫グロブリンの組換え発現に関する一般情報を以下に示す：Ｍｅｉｓｓｎｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．７５（２００１）１９７－２０３。
抗体を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）（ＧＥヘルスケア、スウェーデン）及びＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００サイズ排除（ＧＥヘルスケア、スウェーデン）クロマトグラフィを使用するアフィニティクロマトグラフィによって細胞培養上清から精製した。簡潔に述べれば、無菌濾過された細胞培養上清を、ＰＢＳ緩衝液（１０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４，１ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４，１３７ｍＭ ＮａＣｌ及び２．７ｍＭ ＫＣｌ，ｐＨ７．４）を用いて平衡化されたＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ樹脂に捕捉させ、平衡化緩衝液を用いて洗浄し、２５ｍＭのクエン酸ナトリウムを用いてｐＨ３．０で溶出させた。溶出したタンパク質画分をプールし、２Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ９．０）で中和し、２０ｍＭのヒスチジン、１４０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０を用いて平衡化されたＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ２６／６０ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｓｗｅｄｅｎ）カラムを使用してサイズ排除クロマトグラフィーによりさらに精製した。サイズ排除クロマトグラフィ画分をＣＥ－ＳＤＳ（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、米国）によって分析し、抗体含有画分をプールし、－８０℃で保存した。
組換えＣＣＬ２の作製
野生型ＣＣＬ２は単量体として存在することができるが、実際には生理学的濃度で二量体を形成することもできる。この単量体－二量体の平衡は異なる可能性があり、異なる濃度が使用され得る記載されたすべてのインビトロ実験について慎重に考慮する必要がある。不確実性を回避するために、本発明者らは点突然変異ＣＣＬ２バリアントを作製した：ＣＣＬ２のＰ８Ａバリアントは、二量体化界面に突然変異を保有し、その結果、定義された純粋なＣＣＬ２単量体をもたらす二量体を形成することができない。対照的に、ＣＣＬ２の Ｔ１０Ｃバリアントは、ＣＣＬ２の固定二量体をもたらす（Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ．２０１３ Ｍａｒ ２０；１３５（１１）：４３２５－３２）。
それぞれの可溶性ＣＣＬ２タンパク質（野生型、Ｐ８Ａ又はＴ１０Ｃバリアント）を、ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＨＰ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、スウェーデン）及びＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００サイズ排除（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、スウェーデン）クロマトグラフィを使用する陽イオン交換クロマトグラフィによって細胞培養上清から精製した。簡潔には、滅菌濾過した細胞培養上清を１０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ ５．０）で希釈して、伝導率＜４ ｍＳ／ｃｍに調整した。希釈した上清を、１０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ５．０）で平衡化したＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ樹脂にローディングし、平衡化緩衝液で洗浄し、１０ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ ５．０）への勾配を用いて溶出した。溶出したタンパク質画分をプールし、２０ｍＭのヒスチジン、１４０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０を用いて平衡化されたＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ １６／６０ ＧＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｓｗｅｄｅｎ）カラムを使用してサイズ排除クロマトグラフィーによりさらに精製した。サイズ排除クロマトグラフィ画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び分析高速サイズ排除クロマトグラフィによって分析した。ＣＣＬ２含有画分をプールし、－８０℃で保存した。
機能的特性評価（結合）
Ｔ２００機器にＢｉａｃｏｒｅ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＣＭ５を取り付けた。系緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＴ（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｐ２０）であった。系を３７℃に設定した。各測定について、試料緩衝液は、１ｍｇ／ｍｌのＣＭＤ（カルボキシメチルデキストラン、Ｆｌｕｋａ）をさらに追加した系緩衝液であった。
抗体捕捉系を確立した。１４０００ ＧＡＲＦｃγ（ヤギ抗ウサギＦｃγ）、１１１－００５－０４６、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を、製造業者によって記載されるようにＥＤＣ／ＮＨＳカップリングによって、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）中、２５μｇ／ｍｌで２５℃で固定化した。ＨＢＳ緩衝液（１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７．４）、１．５Ｍ ＮａＣｌ、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０）を用いた１５秒間の注入、１０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ ２．０）を用いた１分間の注入、続いて１０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ ２．２５）を用いた１分間の２回の注入によって、捕捉系を２０μｌ／分で再生した。別の実施形態において、マウスモノクローナル抗体は、１２７００ ＲＵポリクローナルウサギ抗マウス（ＲＡＭＩｇＧ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）抗体を上記のようなＢｉａｃｏｒｅシリーズＣＭ５センサーに固定化することによってバイオセンサー上に捕捉された。１０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ １．７）の３分間の注入によってセンサーを再生した。
抗体クローン上清をシステム緩衝液で１：２に希釈し、５μｌ／分で１分間捕捉した。抗体捕捉後、系を２．５倍濃縮系緩衝液によって８０μｌ／分で３０秒間洗浄し、引き続いて２分間のベースライン安定化を行った。分析物の速度論を３０μｌ／分で行った。溶液中の分析物として、ｗｔヒトＣＣＬ２又は単量体ＣＣＬ２ Ｐ８ＡバリアントＣＣＬ２を使用した。分析物を９０ｎＭの最高濃度で注入した。分析物接触時間は３分であり、解離時間は１０分であった。ＢｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアＶ．３．０を製造者ＧＥＨＣの指示に従って使用した。ＲＭＡＸローカルを有する１：１結合モデルを適用して、速度論的速度を見かけ上推定した。
野生型（ｗｔ）ヒトＣＣＬ２及びヒトＣＣＬ２ Ｐ８Ａバリアント（単量体）に対する抗体の結合
ＳＰＲ分析Ｉから得られたｐＨ依存性ＣＣＬ２結合動態のまとめ
Ｔ２００機器にＢｉａｃｏｒｅ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＣＭ５を取り付けた。系緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＴ（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｐ２０）であった。他の実施形態では、系緩衝液のｐＨをｐＨ ８．３、ｐＨ ７．９、ｐＨ ７．４、ｐＨ ７．１、ｐＨ ６．７、ｐＨ ６．３、ｐＨ ５．９、ｐＨ ５．５に設定した。系を２５℃に設定した。各測定について、試料緩衝液は、１ｍｇ／ｍｌのＣＭＤ（カルボキシメチルデキストラン、Ｆｌｕｋａ）をさらに追加した系緩衝液であった。
抗体捕捉系を確立した。１３０００ ＭＡｂ＜ｈ－Ｆｃ－ｐａｎ＞Ｍ－Ｒ１０Ｚ８Ｅ９－ＩｇＧ（Ｒｏｃｈｅ）を、製造業者によって記載されるようにＥＤＣ／ＮＨＳカップリングによって、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）中１８μｇ／ｍｌで、２５℃で固定化した。ＨＢＳ緩衝液（１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７．４）、１．５Ｍ ＮａＣｌ、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０）を２０μｌ／分で注入し、続いて１０ｍＭ ＮａＯＨを１分１５秒間注入し、２回の１０ｍＭグリシン緩衝液（ｐＨ ２．５）を１分間注入することによって、捕捉系を再生した。捕捉した抗体を、それぞれの系緩衝液で希釈した８０ ｎＭ濃度で１０μｌ／分で３０秒間注入した。抗体捕捉後、系を２．５倍濃縮系緩衝液によって５０μｌ／分で３０秒間洗浄し、引き続いて２分間のベースライン安定化を行った。濃度依存性分析物系列を、１：３希釈段階で、０ｎＭ（緩衝液対照）０．４ｎＭ、１．１ｎＭから、３．３ｎＭ、３０ｎＭでの２回注入で注入した。分析物接触時間は３分であり、解離時間は１０分であった。分析物の速度論を５０μｌ／分で行った。
ヒト抗体をセンサー表面上のリガンドとして捕捉した：
●陽性対照としてのヒト正常ＩｇＧ（Ｈ－Ｎ－ＩｇＧ，Ｉｄ．：１１７１７５７０，Ｒｏｃｈｅ）、
●抗ヒトＣＣＬ２ ｍＡｂ（ヒト化１１ｋ２：ＣＣＬ２－０００２）、
●抗ヒトＣＣＬ２ ｍＡｂ（ＡＢ９１２、ＣＣＬ２－０００３）、及び
●抗ヒトＣＣＬ２ ｍＡｂ（ＣＮＴＯ８８８、ＣＣＬ２－０００４）；
●陰性対照としての系緩衝液。
ＢｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアＶ．３．０を製造者ＧＥＨＣの指示に従って使用した。ＲＭＡＸローカルを有する１：１結合モデルを適用して、速度論的速度を決定した。
交差反応性ＣＣＬホモログ
ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）は、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬ８（ＭＣＰ－２）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）に対して高い相同性を有し、これらのＣＣＬケモカインはＣＣＲ２に結合することができるので、これらのホモログに対する抗ＣＣＬ２抗体の結合を評価した。結果を図１に示す。ＣＣＬ２に対する選択性を有すると記載されたＣＮＴＯ８８８（Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２ Ｊｕｎ；５１（２）：２２７－３３）を除いて、試験された他の抗体は、ＣＣＬ７又はＣＣＬ８のいずれかに結合した（ＣＣＬ７又はＣＣＬ８のいずれかに対して交差反応性を示した）。
Ｂｉａｃｏｒｅアッセイ法：ＣＣＬホモログ、例えばＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＣＣＬ８（ＭＣＰ－２）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）及びＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）に対する抗ＣＣＬ２抗体の結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して２５℃で評価した。アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を製造者の推奨設定に従って使用して、マウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）をＣＭ４センサーチップの各フローセルに固定化した。抗体及び分析物をＡＣＥＳ（ｐＨ ７．４）緩衝液（２０ｍＭ ＡＣＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％ ＮａＮ３）に希釈した。抗体を抗Ｆｃセンサ表面上に捕捉し、次いで組換えヒトＣＣＬホモログタンパク質をフローセル上に５ｎＭ及び２０ｎＭで注入した。野生型ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＣＣＬ８（ＭＣＰ－２）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）及びＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから市販されていたが、単量体ＣＣＬ２（Ｐ８Ａバリアント）は社内で作製した抗原であった。センサ表面を３Ｍ ＭｇＣｌ２を用いて各サイクルで再生した。結合センサグラムを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ ２００評価ソフトウェア、バージョン２．０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して処理した。
機能的特性評価（生物学的）
ＣＣＲ２シグナル伝達Ｉ－カルシウム流動アッセイ
ＴＨＰ－１（ヒト急性単球性白血病細胞株；ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２０２）細胞を、ＲＰＭＩ １６４０、１０％ ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５０μＭ β－メルカプトエタノール（供給業者Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で培養した。アッセイ日に、細胞密度を２５．８ｍｌアッセイ培地（ＲＰＭＩ １６４０ ｗ／ｏ ＦＢＳ）中、８．３３×１０５細胞／ｍｌに調整した。ＦＬＩＰＲ（登録商標）カルシウムＡｓｓａｙ Ｋｉｔｓ（ＦＬＩＰＲ カルシウム４アッセイキット、カタログ番号Ｒ８１４２、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ａ ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ａｓｓａｙ ｆｏｒｍａｔ．
色素ローディング溶液は、製造業者Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓの指示に従って、成分Ａのバイアル２つと成分Ｂ（ＨＢＳＳ緩衝液＋２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７．４））２０ｍｌとを混合することによって調製した。５１６μｌの１Ｍ Ｈｅｐｅｓ（最終アッセイ濃度：１０ｍＭ）を加えた後、５１６μｌの２５０ｍＭプロベネシド（最終アッセイ濃度：２．５ｍＭ）を加える。ストック溶液の場合、６５．４ｍｇのプロベネシド（Ｓｉｇｍａ Ｐ８７６１）を４６５μｌの１Ｎ ＮａＯＨに溶解し、４６５μｌの１×ＨＢＳＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を添加する。２５．８ｍｌのローディングバッファを、例えば４つのマイクロタイタープレートに十分な細胞（５２．６ｍｌ容量が必要である；１０６ＴＨＰ－１／ｍｌ）を含む２５．８ｍｌのアッセイ培地と混合した。ローディングバッファ中の１２０μｌの細胞懸濁液を黒色Ｆ底９６ウェル細胞培養プレートの各ウェルに移した。プレートを室温で３～４時間インキュベートした。
その間に、抗体及びリガンド溶液を調製した。３０μｇ／ｍｌ～０．０２５μｇ／ｍｌ（段階希釈なし、ウェル中の最終濃度）の各抗体の８つの濃度を試験した。各濃度を２つのプレートで試験した。全ての希釈液をアッセイ培地中で１０倍濃縮溶液として調製した。参照抗体として、ヒトＣＣＬ２／ＪＥ／ＭＣＰ－１抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＭＡＢ２７９）を使用した。リガンドＣＣＬ２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号２７９－ＭＣ－１０）を、５０μｇのＣＣＬ２凍結乾燥物を５００μｌのＲＰＭＩ １６４０（１００μｇ／ｍｌ）に溶解し、４００μｌを１０ｍｌのアッセイ培地（４μｇ／ｍｌストック溶液）に移すことによって調製した。刺激対照として、イオノマイシン（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｉ－０６３４）を使用した（１３４０μｌのＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｄ－８７７９）に溶解した１ｍｇのイオノマイシン、１ｍＭ）。１０μｌの１ｍＭストック溶液を１９９０μｌアッセイ培地（５μＭ、最終アッセイ濃度５００ ｎＭ）で希釈した。１００μｌをポリプロピレンＭＴＰの対応する対照ウェルにピペットで入れた。
抗体希釈物及びＣＣＬ２を２つのＶ字形ポリプロピレン９６ウェルプレート中でプレインキュベートした。５０μｌの４μｇ／ｍｌストック溶液ＣＣＬ２（最終４００ｎｇ／ｍｌ ＣＣＬ２）及び５０μｌの１０倍濃縮抗体希釈物をウェルにピペットで入れた。プレートを室温で３０～６０分間インキュベートした。
インキュベーション後、細胞プレート及び化合物プレートをＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ（登録商標）３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）の読取位置に直接移し、システムマニュアル（励起４８５ｎｍ、発光５２５ｎｍ）に記載されているようにカルシウムアッセイを実施した。読出は数秒間隔で行った。
結果：
単球上に発現されるＣＣＲ２受容体のＣＣＬ２誘導性内在化を阻害する抗ＣＣＬ２抗体の効力
骨髄細胞上のリガンド誘導性ＣＣＲ２内在化を防ぐために、本発明者らはインビトロアッセイを設定し、抗ＣＣＬ２抗体を特徴付けた。健常ドナーの末梢血から市販のキット（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ、カタログ番号１５０６８）を用いて磁気分離により単球を単離した。ＦｃγＲのブロッキングのために、単球を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋０．２％ＢＳＡ）中、氷上で５０分間、５００μｇ／ｍｌの最終濃度で正常ヒトＩｇＧ（Ｐｒｉｖｉｇｅｎ、ＣＳＬ Ｂｅｈｒｉｎｇ）とプレインキュベートした。次いで、細胞を１０分間遠心分離し（３００×ｇ、４℃）、ＦＡＣＳ緩衝液でもう一度洗浄し、氷上で保存した。抗ＣＣＬ２抗体希釈液（それぞれ５０μｌ）を９６Ｕ底ウェル（ＢＤ）中で調製した（４℃及び３７℃の並行手法）。単球を分割し、培地（ＲＰＭＩ １６４０；１０％ ＦＣＳ；２ｍＭ Ｌ－グルタミン）に再懸濁し、さらなる使用までそれぞれ４℃及び３７℃でインキュベートした。組換えＣＣＬ２（５０μｌ；１００ｎｇ／ｍｌの最終濃度で）を、調製した抗体希釈物に（可変濃度で）４℃及び３７℃の両方で添加した。１００μｌの単球懸濁液（２×１０５細胞／ウェル）を２００μｌの総体積でＣＣＬ２／抗ＣＣＬ２混合物に添加し、細胞を４℃及び３７℃で１時間３０分間インキュベートした後、３００×ｇ、４℃で遠心分離した。これ以降、すべての工程を予備冷却緩衝液で実施した：細胞を２５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、さらに細胞をＣＣＲ２受容体に対して染色した（市販のＣＣＲ２－ＡＰＣコンジュゲート又は適切なアイソタイプｃｔｒｌ－ＡＰＣを標準的なＦＡＣＳプロトコルに従って使用する：アリコートを、ＣＤ１９２（ＣＣＲ２）ＡＰＣ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、＃３５７２０８、クローンＫ０３６Ｃ２／ｍＩｇＧ２ａκ）並びに適切なアイソタイプｃｔｒｌ抗体：２０μｌ／１０６細胞ｍＩｇＧ２ａ ｋ ＡＰＣ ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、＃４００２２２、クローンＭＯＰＣ－１７３を用いて５μｌ／１０６細胞で染色した）。
次いで、受容体発現をＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩで分析し、ＣＣＲ２内在化を以下のように計算した：
●内在化なし：リガンド（ｒｅｃ．ＣＣＬ２）インキュベーションなしで細胞を分析した。
●１００％内在化：ｒｅｃ．ＣＣＬ２と以前にインキュベートした細胞上のＣＣＲ２発現レベルは最大に低下した。
ヒトＴＨＰ－１細胞に対するＣＣＬ２媒介性走化性の阻害
ＣＣＬ２勾配に向かうＣＣＲ２＋ＴＨＰ１細胞の遊走を以下のように試験した。単球性ＴＨＰ１細胞（ＡＴＣＣ（コピーライト）ＴＩＢ－２０２（商標））を、ＦＣＳ及びＬ－グルタミンを補充したＲＰＭ１ １６４０培地（ＰＡＮ、カタログ番号Ｐ ０４－１７５００）中で培養した。細胞を、遊走アッセイで使用する前に通常通りに２～３回継代し、次いで、ＦＳＣ含有量が減少した培地（１０％ ＦＣＳの代わりに１．５％）中で一晩飢餓状態にした。細胞を計数し、１０μｇ／ｍｌの正常ヒトＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１２０００；ＦｃｇＲをブロックするため）と室温で１５分間インキュベートした。
その間に、抗ＣＣＬ２抗体（及び／又は対照）を、２５ｎｇ／ｍｌのｒｈＣＣＬ－２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号＃２７９－ＭＣ）を含む無血清培地を含有するＨＴＳ Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ ９６ウェルプレートシステム（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号＃３３８６；３μｍ細孔径）の下側チャンバーに加えた。次いで、インサートプレートを下部チャンバー－プレートに貼り付け、７５μｌ（１．５×１０５細胞）の上記細胞懸濁液（ＩｇＧブロックを含む）を、５μｇ／ｍｌ抗体／アイソタイプあり又はなしで各インサートに添加した。プレートを覆い、ＣＯ２インキュベーター（５％ ＣＯ２）中、３７℃で一晩インキュベートした。
インサートプレートを除去し、Ｃｅｌｌ－ｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号＃ Ｇ７５８）を下部チャンバープレートの各ウェルに添加して、遊走細胞の生存率を測定した。３００ｒｐｍの振盪機上で１時間インキュベートした後（カバープレートを密封した）、各ウェル２００μｌをＭｉｃｒｏｆｌｕｏｒ ｂｌａｃｋ ９６ウェルプレート（ＶＷＲ、カタログ番号＃７３５－０５２７）に移し、発光を測定した（発光リーダー、例えばＢｉｏ－Ｔｅｋ、Ｔｅｃａｎ）。倍数変化を、ＩｇＧ対照抗体及び抗ＣＣＬ２抗体による遊走細胞の数の間の比（Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ，ＲＬＵ）として計算した。以下の表２には、条件ごとに５～１０回の反復の結果が示されている。
マウスにおける単一特異性（単一パラトピック）抗ＣＣＬ２抗体によるヒトＣＣＬ２免疫複合体掃引の評価
単一パラトピック抗体が野生型ヒトＣＣＬ２と免疫複合体を形成する能力を評価するために、抗ＣＣＬ２単一パラトピック抗体（２０ｍｇ／ｋｇ）及び野生型ヒトＣＣＬ２（０．１ｍｇ／ｋｇ）からなる予め形成された免疫複合体を、１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でヒトＦｃＲｎトランスジェニックマウス（Ｂ６．Ｃｇ－Ｆｃｇｒｔｔｍ１ＤｃｒＴｇ（ＦＣＧＲＴ）３２Ｄｃｒ／ＤｃｒＪ，Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の尾静脈に投与した。投与の５分後、７時間後、１日後、２日後、３日後及び７日後に血液を採取した。血液を直ちに１４，０００ｒｐｍで１０分間、４℃で遠心分離することによって血清を調製した。血清を測定まで－８０℃以下で保存した。試験した単一パラトピック抗体を以下の表３に列挙する。ＳＧ１ Ｆｃを有する抗体は、野生型と同様のＦｃガンマ受容体結合を有するが、ＳＧ１０５ Ｆｃを有する抗体はＦｃガンマ受容体結合サイレントである。
図２に示すように、インビボでのｈＣＣＬ２クリアランスに対する各抗ＣＣＬ２単一パラトピック抗体の免疫複合体掃引の効果を、抗ＣＣＬ２抗体とＦｃガンマ受容体結合（ＳＧ１、＝インタクトなＦｃガンマ受容体結合を有するＩｇＧ１野生型；実線）及び抗ＣＣＬ２抗体とＦｃガンマ受容体結合サイレント（ＳＧ１０５、＝Ｆｃガンマ受容体結合なしのＩｇＧ１；点線）とを比較することによって評価した。それぞれの図２ａ～２ｇは、ＦｃＲｎトランスジェニックマウスへのｈＣＣＬ２及びそれぞれの抗ＣＣＬ２抗体（２つの異なるＦｃ部分：ＳＧ１＝インタクトなＦｃガンマ受容体結合を有するＩｇＧ１野生型及びＳＧ１０５＝Ｆｃガンマ受容体結合を有しないＩｇＧ１）からなる予め形成された免疫複合体の注射後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度を示す。抗体プロファイルは、Ｐｈｏｅｎｉｘ ６４（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ／Ｃｅｒｔａｒａ）を使用した非コンパートメント分析によって分析した。ＡＵＣｉｎｆは、無限大に外挿した線形対数台形則によって推定した。クリアランス値を用量／ＡＵＣｉｎｆと定義する。このクリアランスの差は、Ｆｃガンマ受容体結合を有する抗体（ＳＧ１）のｈＣＣＬ２クリアランスを、Ｆｃガンマ受容体結合サイレントを有する抗体（ＳＧ１０５）のｈＣＣＬ２クリアランスで割ることによって計算される倍率変化としても表された（以下の表３）。以下の表３中のデータは、Ｆｃガンマ受容体結合抗体（ＳＧ１＝インタクトなＦｃガンマ受容体結合を有するＩｇＧ１野生型）によるヒトＣＣＬ２のクリアランスが、試験したすべての単一パラトピック抗体について、Ｆｃガンマ受容体結合サイレント抗体（Ｆｃガンマ受容体結合なしのＳＧ１０５）によるクリアランスと類似していたことを示す。これは、試験された単一パラトピック抗体によるＣＣＬ２の免疫複合体媒介性掃引が効率的でなかったことを示唆する。
電気化学発光（ＥＣＬ）による血清中の全ヒトＣＣＬ２濃度の測定
マウス血清中の全ヒトＣＣＬ２の濃度をＥＣＬによって測定した。３ｕｇ／ｍＬの抗ＣＣＬ２抗体（Ｆ７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）又はクローンＭＡＢ６７９（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ））をＭＵＬＴＩ－ＡＲＲＡＹ ９６ウェルプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）上に一晩固定化した後、ブロッキング緩衝液中で３０ｏＣにて２時間インキュベートした。抗ＣＣＬ２ ＭＡＢ６７９を、ヒト化１１Ｋ２、１Ａ４又は１Ａ５抗体を含有するサンプルの捕捉抗体として使用した。抗ＣＣＬ２クローン５Ｄ３－Ｆ７を、ＡＢＮ９１２、ＣＮＴＯ８８８、１Ｇ９、２Ｆ６Ｈ抗体を含有する試料に使用した。ヒトＣＣＬ２検量線試料、品質管理試料及びマウス血清試料を、希釈緩衝液で希釈し、過剰の薬物と共に３７ｏＣで３０分間インキュベートすることによって調製した。その後、試料を抗ＣＣＬ２固定化プレートに添加し、３０ｏＣで１時間結合させた後、洗浄した。次に、ＳＵＬＦＯ ＴＡＧ ＮＨＳ－エステル（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）標識抗ヒトＦｃ（クローン：ＪＤＣ－１０、ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）を添加し、プレートを３０ｏＣで１時間インキュベートした後、洗浄した。読出バッファＴ（ｘ４）（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を直ちにプレートに加え、ＳＥＣＴＯＲ Ｉｍａｇｅｒ ２４００（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって信号を検出した。分析ソフトウェアＳＯＦＴｍａｘ ＰＲＯ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、検量線の応答に基づいてヒトＣＣＬ２濃度を計算した。
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）による血清中の抗ＣＣＬ２抗体濃度の測定
マウス血清中の抗ＣＣＬ２抗体の濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。抗ヒトＩｇＧカッパ鎖（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）をＮｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐプレート（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）に分注し、４℃で一晩静置して抗ヒトＩｇＧ固定化プレートを調製した。検量線及び試料を１％プールマウス血清で調製した。その後、試料を抗ヒトＩｇＧ固定化プレートに分注し、３０℃で１時間静置した。その後、ＨＲＰコンジュゲート（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を有するヤギ抗ヒトＩｇＧ（ガンマ鎖特異的）を添加して、３０℃で１時間反応させた。発色反応は、ＴＭＢ基質（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を基質として用いて行った。１Ｎ硫酸（Ｗａｋｏ）で反応停止後、マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定した。マウス血漿中の濃度は、検量線の吸光度から、解析ソフトウェアＳＯＦＴｍａｘ ＰＲＯ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて算出した。
マウスにおける単一パラトピック抗体による内因性マウスＣＣＬ２免疫複合体掃引の評価
上記の結果（試験した単一パラトピック抗体によるＣＣＬ２の免疫複合体媒介掃引が効率的でなかったことを示唆する）に加えて、さらなる評価を行った。
単一パラトピック抗体が内在性マウスＣＣＬ２との免疫複合体を形成し、それを除去する能力を評価するために、マウス交差反応性１１Ｋ２抗ＣＣＬ２単一パラトピック抗体をマウスに投与した。ヒト化１１Ｋ２Ｈ２－ＳＧ１（ＩｇＧ１野生型＝Ｆｃガンマ受容体結合）又はヒト化１１Ｋ２－ＳＧ１０５（Ｆｃガンマ受容体結合サイレント）抗体を、２０ｍｇ／ｋｇの単回用量で、１０ ｍｌ／ｋｇの単回用量で、Ｂａｌｂ／ｃマウスの尾静脈に静脈内投与した。投与前、投与の５分後、７時間後、１日後、２日後、３日後及び７日後に血液を採取した。血液を直ちに１４，０００ｒｐｍで１０分間、４℃で遠心分離することによって血清を調製した。血清を測定まで－８０℃以下で保存した。
図３は、マウスにおけるヒト化１１Ｋ２－ＳＧ１及び１１Ｋ２－ＳＧ１０５の血清総マウスＣＣＬ２濃度及び抗体－時間プロファイルの時間経過を示す。
図３に見られるように、蓄積されたマウスＣＣＬ２のレベルは、１１Ｋ２－ＳＧ１０５（Ｆｃガンマ受容体結合サイレントＦｃ）と１１Ｋ２－ＳＧ１（ＩｇＧ１野生型＝Ｆｃガンマ受容体結合Ｆｃ）との間で差はなかった。これは、注入された抗体による内因性マウスＣＣＬ２のＦｃガンマ受容体媒介性クリアランスがなかったか又はほとんどなかったことを示している。免疫複合体中の抗原は、Ｆｃガンマ受容体の多量体結合を介して複合体化していない抗原よりも迅速に除去されるので、これは、１１Ｋ２抗体が内因性マウスＣＣＬ２と免疫複合体を形成することができなかったことを示唆している。
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によるマウス血清中のマウスＣＣＬ２濃度の測定
市販のマウスＣＣＬ２ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）からの試薬を適合させることによって、マウス血清中のマウスＣＣＬ２の濃度を測定した。検量線サンプルの調製を除いて、製造業者のプロトコルに従った。精製された組換えマウスＣＣＬ２を、製造業者のタンパク質の代わりに標準として置換した。抗体を注射した後に採取した試料について、検量線試料及び試料を、４０マイクログラム／ｍｌの濃度でスパイクした２．５％マウス血清注射抗体を用いて調製し、３７℃で３０分間インキュベートした。その後、試料を抗ヒトＣＣＬ２固定化プレートに分注し、３０℃で２時間インキュベートした。マウスＭＣＰ－１コンジュゲートを添加して３０℃で２時間インキュベートし、引き続いて基質及び停止溶液を添加することによる検出。
抗体を注射する前に採取した試料については、マウスＭＣＰ－１ Ｕｌｔｒａ－Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を製造者の指示に従って使用した。プレートに添加する前に、抗体を試料に添加しなかった。
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）による血清中の抗ＣＣＬ２抗体濃度の測定
マウス血清中の抗ＣＣＬ２抗体の濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。抗ヒトＩｇＧカッパ鎖（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）をＮｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐプレート（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）に分注し、４℃で一晩静置して抗ヒトＩｇＧ固定化プレートを調製した。検量線及び試料を１％プールマウス血清で調製した。その後、試料を抗ヒトＩｇＧ固定化プレートに分注し、室温で１時間静置した。その後、マウス抗ヒトＩｇＧ ＨＲＰ（クローンＪＤＣ－１０、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を加え、室温で３０分間反応させた。ＡＢＴＳ基質（ＫＰＬ）を基質として発色反応を行い、マイクロプレートリーダーで４０５ｎｍの吸光度を測定した。マウス血漿中の濃度は、検量線の吸光度から、解析ソフトウェアＳＯＦＴｍａｘ ＰＲＯ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて算出した
単一特異性（単一パラトピック）抗ＣＣＬ２抗体を用いた異なるマウスＰＫ試験の結論
マウスＰＫ試験の結果を要約すると、試験された単一パラトピック抗体のいずれも、循環からのＣＣＬ２の効率的なクリアランスを示さなかった。これらのデータは、単一パラトピック抗体がＣＣＬ２と免疫複合体を形成してそれを循環から効率的に除去することができないことを示唆している。
対照的に、以下に記載するように、２つの異なる抗原結合部分／部位を有する二重特異性抗ＣＣＬ２抗体（二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体）は、ＣＣＬ２と免疫複合体を効率的に形成し、それを循環から除去することができた。
実施例Ｂ－１
二重特異性（二重パラトピック）抗ＣＣＬ２抗体
ヒトＣＣＬ２上の２つの異なる特異的エピトープに結合する２つの異なる抗原結合部分（パラトープ）を有するいくつかの二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を作製した
序論
抗原の単一結合又は架橋がインビボＣＣＬ２クリアランスに有意な影響を及ぼすかどうかを試験するために、二重特異性ＣｒｏｓｓＭａｂ技術（例えば、ＷＯ ２００９／０８０２５２、ＷＯ ２０１５／１５０４４７）、ＷＯ ２００９／０８０２５３、ＷＯ ２００９／０８０２５１、ＷＯ ２０１６／０１６２９９、Ｓｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ，１０８（２０１１）１１８７－１１９１、及びＫｌｅｉｎ ａｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ８（２０１６）１０１０－２０）（二重特異性（＝二重パラトピック）ＣｒｏｓｓＭａｂｓを参照）を使用して、ＣＣＬ２上の２つの異なるエピトープに結合する２つの異なる抗原結合部分／部位を有する二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を作製した。これらの分子は、最初にそれらの生化学的及び機能的特性についてインビトロで特徴付けられたが、マウス共注射試験におけるインビボＣＣＬ２クリアランス評価のためのツールとしても機能した。Ｆｃガンマ受容体（ＦｃｇＲ）結合媒介性掃引（例えば、Ｉｇａｗａ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２７０（２０１６）１３２－１５１，ＷＯ２０１２／１２２０１１及びＷＯ２０１６／０９８３５７及びＷＯ２０１３／０８１１４３）に基づいてクリアランス能を評価するために、本発明者らは、ＦｃｇＲに結合する野生型ｈｕＩｇＧ１として、及び、ＦｃｇＲエフェクターサイレント分子（例えば、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇを有するＩｇＧ１（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング））への結合が低減／除去された改変ヒトＩｇＧ１定常鎖を有する、全てのＣｒｏｓｓｍａｂを作製した。
適切な抗ＣＣＬ２抗体対の同定
－サンドイッチＥＬＩＳＡによる二重パラトピック抗体アームの選択。
サンドイッチＥＬＩＳＡを実施して、ヒトＣＣＬ２への結合について競合しない抗体対を同定した。３８４ウェルのＭＡＸＩＳＯＲＰ（ＮＵＮＣ）プレートを１μｇ／ｍＬの７つの示された捕捉抗体（アーム１）でコーティングし、２％ ＢＳＡでブロックした。ビオチン化（ＮＨＳ－ＰＥＯ４－ビオチン、Ｐｉｅｒｃｅ）ＷＴヒトＣＣＬ２（２０ｎｇ／ｍＬ）を、過剰量の同じ７つの抗体（アーム２）を１μｇ／ｍＬ、又はブロック緩衝液と、摂氏３７度で１時間インキュベートした。インキュベーション後、混合物をブロッキングＥＬＩＳＡプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートに結合したＣＣＬ２の検出は、ストレプトアビジンＨＲＰ、続いてＴＭＢ Ｏｎｅ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ基質（Ｌｉｆｅｔｅｃｈ）を用いて行った。シグナルの発生を１Ｎ ＨＣｌ酸（Ｗａｋｏ）によって停止させた。競合抗体を有しないウェルのＯ．Ｄ．を各捕捉抗体について１００％シグナルとして設定した。ＣＣＬ２を添加していないブランク・ウェルのＯ．Ｄ．を０％シグナルとした。両方向でＣＣＬ２結合に対して強い競合を示さなかった９つの抗体対を、二重特異性Ｃｒｏｓｓｍａｂ抗体の作製のための候補として選択した。
二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体及び免疫複合体の作製及び特徴づけ
二重特異性ＣｒｏｓｓＭａｂフォーマット組換えＤＮＡ技術における二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体の作製
標準的な方法を使用して、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９に記載されるように、ＤＮＡを操作した。分子生物学的試薬は、製造者の指示にしたがって使用した。
遺伝子及びオリゴヌクレオチド合成
所望の遺伝子セグメントを、Ｇｅｎｅａｒｔ ＧｍｂＨ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）において化学合成により調製した。合成された遺伝子断片を、増殖／増幅のために大腸菌プラスミドにクローニングした。サブクローニングされた遺伝子断片のＤＮＡ配列を、ＤＮＡ配列決定によって検証した。あるいは、短い合成ＤＮＡ断片を、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドをアニーリングするか、ＰＣＲを介して組み立てた。それぞれのオリゴヌクレオチドを、Ｍｅｔａｂｉｏｎ ＧｍｂＨ（プラネグ－マルティンスリート、ドイツ）によって調製した。
基本的／標準的な哺乳動物発現プラスミドの説明
所望の遺伝子／タンパク質（例えば、抗体重鎖又は抗体軽鎖）の発現のため、以下の機能的要素を含む転写単位を使用する。
●イントロンＡを含む、ヒトサイトメガロウイルス（Ｐ－ＣＭＶ）由来の前初期エンハンサー及びプロモーター、
●ヒト重鎖免疫グロブリン５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
●マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
●発現される遺伝子／タンパク質（例えば全長抗体重鎖又はＭＨＣクラスＩ分子）、及び
●ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ ｐＡ）。
●発現される所望の遺伝子を含む発現ユニット／カセットに加えて、基本的／標準的な哺乳動物発現プラスミドは、
●大腸菌におけるこのプラスミドの複製を可能にするベクターｐＵＣ１８からの複製起点、及び
●大腸菌にアンピシリン耐性を付与するベータラクタマーゼ遺伝子を含む。
組換えモノクローナル抗体のための発現プラスミドの作製
組換えモノクローナル抗体遺伝子は、それぞれの免疫グロブリン重鎖及び免疫グロブリン軽鎖をコードする。
一過性発現モノクローナル抗体分子のための発現プラスミドは、免疫グロブリン重鎖又は軽鎖発現カセットの他に、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるこのプラスミドの複製を可能にするベクターｐＵＣ１８からの複製起点と、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるアンピシリン耐性を付与するベータラクタマーゼ遺伝子とを含んでいた。
それぞれの抗体重鎖又は抗体軽鎖の転写単位は、以下の機能要素を含んでいた：
●イントロンＡを含む、ヒトサイトメガロウイルス（Ｐ－ＣＭＶ）由来の前初期エンハンサー及びプロモーター、
●ヒト重鎖免疫グロブリン５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、
●マウス免疫グロブリン重鎖シグナル配列、
●それぞれの抗体重鎖又は軽鎖ｃＤＮＡ配列、及び
●ウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ ｐＡ）。
一過性発現及び分析特性評価
組換え産生を、Ｆ１７培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．）中で培養したＨＥＫ２９３細胞（ヒト胎児腎臓細胞株２９３由来）の一過性トランスフェクションによって行った。モノクローナル抗体の産生のため、細胞を、それぞれの免疫グロブリン重鎖及び軽鎖を含有するプラスミドで同時トランスフェクトした。トランスフェクション「２９３－フェクチン」には、トランスフェクション試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用した。トランスフェクションは、製造業者の説明書に明記されているように実施した。細胞培養上清をトランスフェクションの３～７日後に回収した。上清を低温（例えば－８０℃）で保存した。
例えばＨＥＫ２９３細胞におけるヒト免疫グロブリンの組換え発現に関する一般情報を以下に示す：Ｍｅｉｓｓｎｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．７５（２００１）１９７－２０３。以下の二重特異性抗体を作製するために、ＷＯ ２０１６／０１６２９９に記載されているＣｒｏｓｓＭａｂ技術を使用した。この技術では、ＶＨ／ＶＬが一方の抗体アームにおいて交換されており、他方の抗体アームのＣＨ１／ＣＬ界面が電荷修飾によって修飾されており、ＣＨ３／ＣＨ３界面のノブス・イントゥ・ホール技術と組み合わせてヘテロ二量体化を促進する。この技術を適用した４つすべての抗体鎖の例示的な配列を、ＣＮＴＯ８８８／／１１Ｋ２－ＷＴ ＩｇＧ１について示す（配列番号１０４～配列番号１０７を参照）。
野生型ＩｇＧ１（ＷＴ ＩｇＧ１）を用いて作製された二重特異性（二重パラトピック）抗ＣＣＬ２ Ｃｒｏｓｓｍａｂ抗体のリスト（野生型ＩｇＧ１は、Ｆｃ受容体結合に影響を及ぼす改変／突然変異を伴わないことを意味するが、ホールへのノブのようなヘテロ二量体化技術は含まれる）
Ｆｃガンマ受容体サイレンシング突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むＩｇＧ１（ＩｇＧ１－ＰＧＬＡＬＡ）を用いた二重特異性（二重パラトピック）抗ＣＣＬ２ Ｃｒｏｓｓｍａｂ抗体のリスト
二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体の精製
細胞培養上清を含む二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体をフィルタにかけ、最大３つのクロマトグラフィー工程によって精製した。捕捉工程の溶出液の純度に応じて、捕捉工程と研磨工程との間にイオン交換クロマトグラフィ工程を任意に実施した。
二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕｒｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）（ＧＥヘルスケア、スウェーデン）、ＰＯＲＯＳ ５０ ＨＳ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＳｕｐｅｒｄｅｘ２００サイズ排除（ＧＥヘルスケア、スウェーデン）クロマトグラフィを使用するアフィニティクロマトグラフィによって細胞培養上清から精製した。簡潔に述べれば、無菌濾過された細胞培養上清を、ＰＢＳ緩衝液（１０ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４，１ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４，１３７ｍＭ ＮａＣｌ及び２．７ｍＭ ＫＣｌ，ｐＨ７．４）を用いて平衡化されたＭａｂＳｅｌｅｃｔＳｕＲｅ樹脂に捕捉させ、平衡化緩衝液を用いて洗浄し、２５ｍＭのクエン酸ナトリウムを用いてｐＨ３．０で溶出させた。溶出したタンパク質画分をプールし、２ＭのＴｒｉｓ、ｐＨ９．０を用いて中和した。
ＰＯＲＯＳ ５０ ＨＳ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて任意の第２の精製工程としてイオン交換クロマトグラフィを行い、平衡化し、２０ｍＭヒスチジン（ｐＨ ５．６）で洗浄し、希釈捕捉工程溶出液のローディングを行い、２０ｍＭヒスチジン、０．５Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ ５．６）を用いて勾配クロマトグラフィを行った。ＣＥ－ＳＤＳ ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸ ＩＩ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によってイオン交換クロマトグラフィ画分を分析し、Ｃｒｏｓｓｍａｂ含有画分をプールした。
Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのサイズ排除クロマトグラフィを第二又は第三の精製工程として使用した。サイズ排除クロマトグラフィは、２０ｍＭヒスチジン緩衝液、０．１４Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ ６．０）で行った。サイズ排除クロマトグラフィ画分をＣＥ－ＳＤＳ ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸ ＩＩ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって分析し、Ｃｒｏｓｓｍａｂ含有画分をプールし、－８０℃で保存した。
Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのＰＯＲＯＳ ５０ ＨＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）サイズ排除クロマトグラフィ後の製品品質を満たす場合、２０ｍＭヒスチジン緩衝液、０．１４Ｍ ＮａＣｌ（ｐＨ ６．０）中のＨｉＰｒｅｐ ２６／１０ Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）での脱塩クロマトグラフィに置き換えた。
抗体製剤のタンパク質濃度を、アミノ酸配列に基づいて算出したモル吸光係数を用いて、２８０ｎｍにおける光学濃度（ＯＤ）を測定することにより求めた。
抗体の純度及び完全性を、ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸ ＩＩ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）をＰｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｃｈｉｐ及びＨＴ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓキットと共に使用してＣＥ－ＳＤＳによって分析した。２００ｍＭ Ｋ２ＨＰＯ４／ＫＨ２ＰＯ４、２５０ｍＭ ＫＣｌ、ｐＨ ７．０をランニング緩衝液として使用して、Ｂｉｏｓｕｉｔｅ Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ＳＥＣ、２５０Å、５μｍ分析サイズ排除カラム（Ｗａｔｅｒｓ ＧｍｂＨ）を使用する高性能ＳＥＣによって、抗体調製物の凝集体含有量を決定した。平均純度は、ＣＥ－ＳＤＳによって分析して９４～１００％の間であり、モノマー含量＞９５％（ＳＥＣ）であった。
二重特異性（二重パラトピック）抗ＣＣＬ２抗体の機能特性評価
親和性測定（結合）
捕捉システム（２０μｇ／ｍｌヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ；注文コード：１０９－００５－０９８；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）の約１２００個の共鳴単位（ＲＵ）を、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅによって供給されるアミンカップリングキットを使用してｐＨ ５．０でＣ１チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢＲ－１００５－３５）上にカップリングさせた。サンプル及びシステムバッファーは、ＰＢＳ－Ｔ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含む１０ｍＭのリン酸緩衝生理食塩水）ｐＨ７．４だった。フローセルを２５℃に設定し、試料ブロックを１２℃に設定し、ランニングバッファーで２回プライミングした。この二重特異性抗体を、２μｇ／ｍｌ溶液を１０μｌ／分の流速で６０秒間注入することによって捕捉した。会合は、３０ ｎＭの１：１０希釈で開始して３０μｌ／分の流速で１５０秒間、溶液中の様々な濃度のヒトＣＣＬ２（ｗｔ）の注入によって測定した。解離段階は、最大１２００秒間モニタリングされ、試料溶液からランニングバッファーに切り替えることで誘発された。０．８５％ Ｈ３ＰＯ４溶液で１０μｌ／分の流速で６０秒間洗浄することにより、表面を再生した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ表面から得られた応答を差し引くことにより、バルク屈折率の差を補正した。ブランク注入も差し引いた（二重参照）。速度論的パラメータの計算には、Ｌａｎｇｍｕｉｒ １：１モデルを使用した。
野生型抗原の存在下での自然な免疫複合体形成。
透析又は遠心式限外濾過デバイスを使用して、全てのタンパク質試料（二重特異性抗ＣＣＬ２ ＣｒｏｓｓＭａｂ抗体及び抗原）を１×ＰＢＳ（ｐＨ ７．４）中に再緩衝化した。
２．０～０．１ｍｇ／ｍＬのＣｒｏｓｓＭａｂ試料の希釈系列を調製した。同様に、ＰＢＳ中の抗原溶液を０．０１２～０．２３ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で調製した。等体積の混合を可能にして１：１（抗体：ＣＣＬ２複合体）の一定のモル比を達成するように濃度を選択した。以下の抗原をこの試験で使用した：野生型ＣＣＬ２。
等量の予備希釈したＣｒｏｓｓＭａｂ及びＣＣＬ２調製物を混合し、３７℃で１時間インキュベートした後、試料をＳｕｐｅｒｏｓｅ ６（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ＃２０３９）カラムにアプライし、ＰＢＳで予備平衡化し、０．５ｍＬ／分の流速で溶出した。合計１００μｇ又は２５０μＬの最大可能体積をアプライし、抗体及び抗原のみを対照として使用した。
ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳデータは、ＯｐｔｉＬａｂ ｒＥＸ屈折率検出器及びｍｉｎｉＤＡＷＮ Ｔｒｅｏｓ ＭＡＬＬＳ検出器（両方ともＷｙａｔｔ社製）を用いて記録した。ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳシグナルは、Ａｓｔｒａ Ｖ ５ソフトウェア（Ｗｙａｔｔ）を使用して処理した。
抗ＣＣＬ２抗体の中和特性を試験するためのＣＣＲ２レポーターアッセイ
Ｔａｎｇｏ（商標）ＣＣＲ２－ｂｌａ Ｕ２ＯＳ細胞をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（ドイツ）から購入して、ＣＣＬ２中和抗体構築物の影響を試験した。これらのレポーター細胞は、ＴＥＶプロテアーゼ部位に連結されたヒトケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）受容体２（ＣＣＲ２）と、Ｔａｎｇｏ（商標）ＧＰＣＲ－ｂｌａ Ｕ２ＯＳ親細胞株に安定に組み込まれたＧａｌ４－ＶＰ１６転写因子とを含有する。この親細胞株は、ＵＡＳ応答エレメントの制御下でβ－アレスチン／ＴＥＶプロテアーゼ融合タンパク質及びβ－ラクタマーゼ（ｂｌａ）レポーター遺伝子を安定に発現する。天然リガンドＭＣＰ１＝ＣＣＬ２を添加すると、レポーター遺伝子の活性の指標が得られ、これはＦＲＥＴ対応基質の切断によって測定することができる。
基本的に、アッセイ及び細胞取扱手順は、提供元のマニュアルに従った。簡単に記載すると、ＣＣＲ２－Ｕ２ＯＳ細胞を、５０μｌのアッセイ培地（Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ ２９３発現培地、カタログ番号＃１２３３８－０１８、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に２×１０４細胞／ウェル（９６ ｅｒ黒色透明底板、カタログ番号＃６５５０９０、Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－ｏｎｅ）の密度で播種した。並行して、異なる試験抗体の段階希釈液並びにＣＣＬ２抗原溶液をｃ＝４×最終濃度で調製した。次いで、ＣＣＬ２抗原／抗体混合物を調製し、室温で２～３時間（ｈｒｓ）プレインキュベートした。５０μｌの示されたＣＣＬ２／抗体溶液をＣＣＲ２発現Ｕ２ＯＳ細胞に移し、加湿インキュベータ内で３７℃及び５％ＣＯ２で１８時間インキュベートした。対照として、アッセイ培地のみを使用した。
翌日、β－ラクタマーゼ・ローディング溶液（カタログ番号＃ Ｋ１０８５、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてＣＣＦ４基質（カタログ番号＃Ｋ１０８９、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を調製し、その２０μｌ／ウェルを細胞に添加した。基質溶液を暗所においてＲＴで２時間インキュベートした。
最後に、Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ（Ｍ４）リーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて、以下の波長（Ｅｘ／Ｅｍ＝４０９ｎｍ／４６０ｎｍ＝青色＊；Ｅｘ／Ｅｍ＝４０９ｎｍ／５３０ｎｍ＝緑色＊＊）で蛍光波長を決定し、アッセイ培地対照を差し引いた後の青色／緑色蛍光の比を以下の式に従って計算した：比＝（サンプル－青色＊－対照－青色＊）／（サンプル－緑色＊＊－対照－緑色＊＊）。
ｐＨ操作後、本発明者らは、ＣＣＬ２誘導性ＣＣＲ２シグナル伝達を阻害する能力について最終ＬＯ候補（ＣＫＬＯ１～４）を特徴付けた。この場合、中和特性は、ｒｅｃ．ＣＣＬ２タンパク質の単量体バリアントのみによって評価し、これを約１５ｎｇ／ｍｌの最終濃度で使用した。
マウスにおける二重パラトピック抗体によるヒトＣＣＬ２免疫複合体掃引の評価
二重パラトピック抗体が野生型ヒトＣＣＬ２と免疫複合体を形成する能力を評価するために、抗ＣＣＬ２二重パラトピック抗体（２０ｍｇ／ｋｇ）及び野生型ヒトＣＣＬ２（０．１ｍｇ／ｋｇ）からなる予め形成された免疫複合体を、１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＢａｌｂ／ｃマウスの尾静脈に投与した。投与の５分後、７時間後、１日後、３日後及び７日後に血液を採取した。血液を直ちに１４，０００ ｒｐｍで１０分間、４℃で遠心分離することによって血清を調製した。血清を測定まで－８０℃以下で保存した。試験した二重パラトピック抗体を以下の表４に列挙する。ＷＴ ＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗体は、野生型と同様のＦｃガンマ受容体結合を有するが、ＰＧＬＡＬＡ Ｆｃを有する抗体はＦｃガンマ受容体結合サイレントである。結果を図４ａ～図４ｉに示す。
図４ａ～４ｉに示すように、インビボでのｈＣＣＬ２クリアランスに対する各抗ＣＣＬ２二重パラトピック抗体の免疫複合体掃引の効果を、抗ＣＣＬ２抗体とＦｃガンマ受容体結合（実線）及び抗ＣＣＬ２抗体とＦｃガンマ受容体結合サイレント（ＰＧＬＡＬＡ、点線）とを比較することによって評価した。抗体プロファイルは、Ｐｈｏｅｎｉｘ ６４（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ／Ｃｅｒｔａｒａ）を使用した非コンパートメント分析によって分析した。ＡＵＣｉｎｆは、無限大に外挿した線形対数台形則によって推定した。クリアランス値を用量／ＡＵＣｉｎｆと定義する。このクリアランスの差は、Ｆｃガンマ受容体結合を有する抗体（ＳＧ１）のｈＣＣＬ２クリアランスを、Ｆｃガンマ受容体結合サイレントを有する抗体（ＰＧＬＡＬＡ）のｈＣＣＬ２クリアランスで割ることによって計算される倍率変化としても表された（以下の表４）。以下の表４中のデータは、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃｇＲ）結合抗体（ＷＴ ＩｇＧ１）によるヒトＣＣＬ２のクリアランスが、試験した全ての二重パラトピック抗体について、Ｆｃガンマ受容体結合サイレント抗体（突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインを有するＰＧＬＡＬＡ）によるクリアランスよりも優れていたことを示す。これは、試験された二重パラトピック抗体によって達成されたＣＣＬ２の免疫複合体媒介性掃引がより効率的であったことを示唆する。さらに、いくつかの二重パラトピック抗体は、クリアランス値の大きな倍数変化、例えば、ＣＮＴＯ／／ヒト化１１Ｋ２（ＣＮＴＯ／／１１Ｋ２）を示した。
倍数変化は、ＷＴ ＦｃガンマＲ（ＦｃｇＲ）結合を有する抗体のｈＣＣＬ２クリアランスを、ＰＧＬＡＬＡを有する抗体のｈＣＣＬ２クリアランスで割ることによって計算される。図４ａ～図４ｉ及び下記の表４に示されるように、ＣＮＴＯ／／１１ｋ２は、ＦｃｇＲ結合を有するＩｇＧ１野生型（ＷＴ）を有する抗体と、ＦｃｇＲ結合サイレントである抗体（ＰＧＬＡＬＡ）との間で２１．５の最大倍率変化を示す。これは、ＣＮＴＯ／／１１ｋ２－ＷＴ ＩｇＧ１による免疫複合体媒介性の掃引がすべてのバリアントの中で最も効率的であることを示唆する。
電気化学発光（ＥＣＬ）による血清中の全ヒトＣＣＬ２濃度の測定
マウス血清中の全ヒトＣＣＬ２の濃度をＥＣＬによって測定した。３ｕｇ／ｍＬの抗ＣＣＬ２抗体２Ｆ２－ＳＧ１をＭＵＬＴＩ－ＡＲＲＡＹ ９６ウェルプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）上に一晩固定化した後、ブロッキング緩衝液中で３０ｏＣにて２時間インキュベートした。ヒトＣＣＬ２検量線試料、品質管理試料及び希釈マウス血清試料を、９％ ＳＤＳからなる変性緩衝液とともに３７ｏＣで３０分間、又は、ｐＨ ２．０～２．５グリシンＨＣｌ緩衝液とともに３７ｏＣで１０分間インキュベートした。変性緩衝液の目的は、二重パラトピック抗体からヒトＣＣＬ２を解離させることである。その後、試料を１０倍希釈し、抗ＣＣＬ２固定化プレートに添加し、３０ｏＣで１時間結合させた後、洗浄した。次に、ＳＵＬＦＯ ＴＡＧ標識ＭＣＰ－１抗体を添加し、プレートを３０ｏＣで１時間インキュベートした後、洗浄した。読出バッファＴ（ｘ４）（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を直ちにプレートに加え、ＳＥＣＴＯＲ Ｉｍａｇｅｒ ２４００（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって信号を検出した。分析ソフトウェアＳＯＦＴｍａｘ ＰＲＯ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、検量線の応答に基づいてヒトＣＣＬ２濃度を計算した。
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）による血清中の抗ＣＣＬ２抗体濃度の測定
マウス血清中の抗ＣＣＬ２抗体の濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。抗ヒトＩｇＧカッパ鎖（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）をＮｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐプレート（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）に分注し、４℃で一晩静置して抗ヒトＩｇＧ固定化プレートを調製した。検量線及び試料を１％プールマウス血清で調製した。その後、試料を抗ヒトＩｇＧ固定化プレートに分注し、３０℃で１時間静置した。その後、ＨＲＰコンジュゲート（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を有するヤギ抗ヒトＩｇＧ（ガンマ鎖特異的）を添加して、３０℃で１時間反応させた。ＡＢＴＳ基質（ＫＰＬ）を基質として発色反応を行い、マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定した。マウス血漿中の濃度は、検量線の吸光度から、解析ソフトウェアＳＯＦＴｍａｘ ＰＲＯ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて算出した。
試験の概要
マウスＰＫ試験データを要約すると、試験された二重パラトピック抗体によるヒトＣＣＬ２の掃引は、同じ用量の単一パラトピック抗体と比較してより効率的であった。単一パラトピック抗体では、ＷＴ ＦｃｇＲ結合を有する抗体とＦｃｇＲ結合サイレント抗体との間で抗原クリアランスの差は最小限であった（表３）。対照的に、ＷＴ ＦｃｇＲ結合を有する二重パラトピック抗体とＦｃｇＲ結合サイレントとの間の抗原クリアランスの大きな差が得られ（表４）、試験した二重パラトピック抗体がヒトＣＣＬ２を効率的に掃引できることが示唆された。ＣＮＴＯ８８８／／１１Ｋ２の組み合わせを、クリアランスにおける最大の倍数変化（ｆｏｌｄ ｃｈａｎｃｅ）を示したので、さらなる抗体工学のために選択した。
実施例Ｂ－２ 改変された可変ドメイン及びＣＤＲを有する抗ＣＣＬ２抗体（イオン依存性／ｐＨ依存性結合）
イオン依存性／ｐＨ依存性結合をもたらす改変
ｐＨ依存性抗ＣＣＬ２抗体を作製するために、ｍＡｂ ＣＮＴＯ８８８及びヒト化１１Ｋ２のすべてのＣＤＲについてヒスチジンスキャン突然変異誘発を行った。ＣＤＲ中の各アミノ酸を、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ ＨＤ Ｃｌｏｎｉｎｇキット（クロンテック又はタカラバイオ）を製造者の説明書に従って使用してヒスチジンに個々に突然変異させた。シーケンシングによって各バリアントが正しく突然変異していることを確認した後、以下の方法によってバリアントを一過性に発現させ、精製した：組換え抗体を、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ ＦＳ２９３－Ｆ細胞及び２９３Ｆｅｃｔｉｎ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を製造者の説明書に従って使用して一過性に発現させた。組換え抗体をプロテインＡ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製し、Ｄ－ＰＢＳ又はＨｉｓ緩衝液（２０ ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ ６．０）で溶出した。サイズ排除クロマトグラフィをさらに実施して、必要に応じて高分子量及び／又は低分子量成分を除去した。すべてのヒスチジン置換バリアントを、上記のものと比較して改変ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイによって評価した。簡潔には、ｐＨ５．８でのさらなる解離相を、ｐＨ７．４での解離相の直後にＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイに組み込んだ。これは、ｐＨ５．８での対応する解離とは対照的に、ｐＨ７．４で形成された複合体からの抗体（Ａｂ）と抗原（Ａｇ）との間のｐＨ依存性解離を評価するためである。ｐＨ５．８緩衝液での解離速度は、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０（ＢｉｏＬｏｇｉｃ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）曲線フィッティングソフトウェアを使用してデータを処理及びフィッティングすることによって決定した。
ｐＨ７．４の解離相と比較してｐＨ５．８での結合応答の減少をもたらした単一のヒスチジン置換を選択して組み合わせた。ｐＨ７．４での親和性を改善する突然変異を同定するために、ヒスチジン置換工程中に作製された少なくとも１つのバリアントを使用して、重鎖及び軽鎖に対してそれぞれについて５００を超えるバリアントを作製した。これらのバリアントは、ＣＤＲ中の各アミノ酸を、元のアミノ酸及びシステインを除く他の１８個のアミノ酸で置換した。ヒトＣＣＬ２に対するバリアントの結合能を、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）４０００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してｐＨ７．４下、３７℃で評価した。以前と同様に、ｐＨ５．８でのさらなる解離相を、ｐＨ７．４での解離相の直後にＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイに組み込んだ。ｐＨ５．８緩衝液での解離速度は、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０（ＢｉｏＬｏｇｉｃ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）曲線フィッティングソフトウェアを使用してデータを処理及びフィッティングすることによって決定した。
ｐＨ７．４での親和性及びｐＨ依存性が改善されたバリアントを選択し、これらの突然変異を組み合わせた。これは、以下の表の４つの１１Ｋ２バリアント及び４つのＣＮＴＯ８８８バリアントで例示される。
改変１１Ｋ２及びＣＮＴＯ８８８バリアントの組み合わせ効果を評価するために、各１１Ｋ２バリアントを４つの改変ＣＮＴＯ８８８バリアントと組み合わせ、ＣｒｏｓｓＭａｂ形式で二重パラトピックＣＣＬ２抗体として発現させた。これは、以下の表に例示されており、４×４の組み合わせは、ＣＫＬＯ０１～ＣＫＬＯ１６と呼ばれる１６個の二重パラトピック抗体の生成をもたらす。
二重特異性抗体を作製するために、ＷＯ ２０１６／０１６２９９に記載されているＣｒｏｓｓＭａｂ技術を使用した。この技術では、ＶＨ／ＶＬが一方の抗体アームにおいて交換されており、他方の抗体アームのＣＨ１／ＣＬ界面が電荷修飾によって修飾されており、ＣＨ３／ＣＨ３界面のノブス・イントゥ・ホール技術と組み合わせてヘテロ二量体化を促進する。この技術を適用した４つすべての抗体鎖の例示的な配列を、ＣＫＬＯ２ ＩｇＧ１について示す（配列番号１０８～配列番号１１１を参照）。使用される重鎖定常ドメイン（例えば、ＩｇＧ１野生型（Ｆｃ受容体結合サイレンシング突然変異なし）、ＰＧＬＡＬＡ、ＳＧ１０９５、ＳＧ１０９９、１１００（ＳＧ１０９５、ＳＧ１０９９、１１００については、以下の説明又は配列説明を参照）に応じて、接尾辞ＩｇＧ１、ＰＧＬＡＬＡ、ＳＧ １０９５、ＳＧ１０９９、１１００が付加される
改変された可変ドメイン及びＣＤＲを有する二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体の機能特性評価（イオン依存性／ｐＨ依存性結合）
親和性測定（上記の方法を参照）
ＩｇＧ１野生型として作製された１６個すべての二重特異性抗ＣＣＬ２抗体について、それらのｐＨ依存的結合ヒトＣＣＬ２を決定した。
図５ａは、ｐＨ７．４（黒線）及びｐＨ５．８（灰色線）における、４つの改変１１Ｋ２及び４つのＣＮＴＯ８８８バリアントの並びに組み合わせ後の１６個のＣｒｏｓｓｍａｂの単量体ＣＣＬ２に対する結合プロファイルを示すＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）センサーグラムを示す。
図５ｂは、４つの改変１１Ｋ２及び４つのＣＮＴＯ８８８バリアント、並びに組み合わせ後の１６個のＣｒｏｓｓｍａｂの、単量体ＣＣＬ２に対する結合プロファイルを示すＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）センサーグラムを示し、ｐＨ５．８でのさらなる解離相をｐＨ７．４での解離相の直後にＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイに組み込んだ。
ＣＣＬ８への交差反応性結合
組換え単量体ヒトＣＣＬ２及び組換え単量体ヒトＣＣＬ８へのｐＨ依存性結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して３７℃で評価した。アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を製造者の推奨設定に従って使用して、抗ヒトＦｃ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）をＣＭ４センサーチップの各フローセルに固定化した。抗体及び分析物をＡＣＥＳ（ｐＨ ７．４又はｐＨ ５．８）緩衝液（２０ｍＭ ＡＣＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％ ＮａＮ３）に希釈した。抗体を抗Ｆｃセンサ表面上に捕捉し、次いで組換え単量体ヒトＣＣＬ２をフローセル上に８ｎ濃度で注入した。抗体に対する分析物の会合相を１２０秒間監視し、続いて解離相を１８０秒間監視した。センサ表面を３Ｍ ＭｇＣｌ２を用いて各サイクルで再生した。結合センサグラムを、捕捉レベルに対する結合応答の正規化によってＴＩＢＣＯ Ｓｐｏｆｉｒｅによって処理した。
ｐＨ ７．４で形成された抗体／抗原複合体のｐＨ依存性解離の評価を、改変Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって確認した。簡潔には、ｐＨ５．８でのさらなる解離相を、ｐＨ７．４での解離相の直後にＢｉａｃｏｒｅアッセイに組み込んだ。結合センサグラムを、捕捉レベルに対する結合応答の正規化によってＴＩＢＣＯ Ｓｐｏｆｉｒｅによって処理した。
組換えヒトＣＣＬ８ Ｐ８Ａ単量体の発現及び精製：野生型ヒトＣＣＬ８の配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ（ＮＣＢＩ：ＮＰ＿００５６１４．２）から入手した。単量体ＣＣＬ８を作製するために、成熟ＣＣＬ８タンパク質の８位のプロリンをアラニンに突然変異させた。Ｅｘｐｉ ２９３細胞（Ｌｉｆｅｔｅｃｈ）を製造者の説明書に従ってトランスフェクトした。ＣＣＬ８野生型及びＰ８Ａ単量体タンパク質を、ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＨＰ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）及びＳｕｐｅｒｏｓｅ ２００サイズ排除（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）クロマトグラフィを使用する陽イオン交換クロマトグラフィによって細胞培養上清から同じ方法を使用して精製した。簡潔には、細胞培養上清をＭｉｌｌｉＱ水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で２．５倍希釈し、ＰＢＳで平衡化したＨｉ－Ｔｒａｐ ＳＰ－ＨＰカラムにローディングし、平衡化緩衝液で洗浄し、０～２Ｍ ＮａＣｌの勾配を用いて溶出した。溶出したタンパク質画分をプールし、２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０を用いて平衡化されたＨｉＬｏａｄ １６／６００ Ｓｕｐｅｒｏｓｅ ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラムを使用してサイズ排除クロマトグラフィーによりさらに精製した。画分をサイズ排除クロマトグラフィ及びＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した。ＣＣＬ８タンパク質を含有する画分をプールし、濃縮し、－８０℃で保存した。
ヒトＣＣＬ８は、ＣＣＬ２と高度の相同性を共有し、ＣＣＲ２にも結合することができる。１１Ｋ２アームはＣＣＬ８に結合することができるので（図１参照）、ＣＣＬ８を中和する可能性のあるオフターゲット効果を回避するために、この結合を減少させる突然変異を同定することが必要であった。さらに、１１Ｋ２アーム上のＣＣＬ８結合の除去は、ＣＣＬ２との免疫複合体の効率的な形成に重要である。ＣＮＴＯアームはＣＣＬ８に結合しないので、１１Ｋ２アームへのＣＣＬ８の結合は、ＣＣＬ２との免疫複合体形成を妨害し、血漿からのＣＣＬ２のクリアランス速度を低下させ得る。
１１Ｋ２のヒトＣＣＬ８への結合を低下させ、ヒトＣＣＬ２に対する選択性を付与する突然変異を同定するために、いくつかのＣＤＲ位置を、例えば、ＣＫＬＯ０２の１１Ｋ２ ＶＨにおけるＤ１０１Ｅ又はＣＫＬＯ０３の１１Ｋ２ ＶＬにおけるＷ９２Ｒのように置換して、ｈｕＣＣＬ８に対する交差反応性を除去した。図６に示されるように、二重パラトピックＣｒｏｓｓｍａｂにおけるＣＣＬ８結合は、１１Ｋ２を操作することによって著しく減少させることができた。ＣＫＬＯ０１バリアントは、ＣＣＬ８結合を減少させるように最適化されなかったが、ＣＫＬＯ０４、ＣＫＬＯ０３、及びＣＫＬＯ０２は、ＣＣＬ８結合を減少させる突然変異を含む。４つのＣｒｏｓｓｍａｂは全て、ＣＣＬ８に対するｐＨ依存性結合を有する。
ｐＨ ７．４及びｐＨ ５．８での組換えＣＣＬ２及びＣＣＬ８に対する抗ＣＣＬ２抗体の結合親和性
親ＣＮＴＯ８８８Ｈ／１１Ｋ２Ｈ２、ＣＫＬＯ１、ＣＫＬＯ２及びＣＫＬＯ３のヒトＣＣＬ２及びＣＣＬ８への親和性及びｐＨ依存性結合を決定するために、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して３７℃で評価した。アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を製造者の推奨設定に従って使用して、抗ヒトＦｃ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）をＣＭ４センサーチップの各フローセルに固定化した。抗体及び分析物をＡＣＥＳ（ｐＨ ７．４又はｐＨ ５．８）緩衝液（２０ｍＭ ＡＣＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０、０．００５％ ＮａＮ３）に希釈した。抗体を抗Ｆｃセンサ表面上に捕捉し、次いで組換えヒトＣＣＬ２ Ｐ８Ａバリアント（単量体）又はＣＣＬ８ Ｐ８Ａバリアント（単量体）を、二倍段階希釈によって調製した１．２５ｎＭ～２０ｎＭでフローセル上に注入した。センサ表面を３Ｍ ＭｇＣｌ２を用いて各サイクルで再生した。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア、バージョン２．０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してデータを処理し、１：１結合モデルに当てはめることによって結合親和性を決定した。ｐＨ ７．４及びｐＨ ５．８での組換えＣＣＬ２及びＣＣＬ８に対する抗ＣＣＬ２抗体の結合親和性を以下の表５に示す。
表５のデータは、ｐＨ７．４でのＣＣＬ８への結合がＣＫＬＯ２及びＣＫＬＯ３については消滅したが、ＣＣＬ２についてはｐＨ７．４での強い親和性及びｐＨ依存性結合を維持したことを示す。結果は、ＣＮＴＯ８８８及び１１Ｋ２に基づく親二重特異性抗体の可変領域及びＣＤＲに導入された異なる改変が、ｐＨ７．４で親Ａｂと比較してＣＣＬ２に対する結合親和性が増強された親和性成熟バリアントＣＫＬＯ１、ＣＫＬＯ２、ＣＫＬＯ３の作製に成功したことを示す。同時に、ＣＫＬＯ１、ＣＫＬＯ２、ＣＫＬＯ３は、ＣＣＬ２への強いｐＨ依存性結合を示した。ｐＨ ７．４でのＫＤ値と比較して、ＣＣＬ２に対する結合親和性の１０００倍よりも弱いＫＤがｐＨ ５．８で観察された。
野生型ヒトＣＣＬ２のクリアランス
ｐＨ依存性二重特異性抗体が野生型ヒトＣＣＬ２のクリアランスを増強する能力を評価するために、抗ＣＣＬ２単一パラトピック抗体（２０ｍｇ／ｋｇ）及び野生型ヒトＣＣＬ２（０．１ｍｇ／ｋｇ）からなる予め形成された免疫複合体を、１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＳＣＩＤマウスの尾静脈に投与した。投与の５分後、１時間後、４時間後、７時間後、１日後及び７日後に血液を採取した。血清を測定まで－８０℃以下で保存した。試験したＣｒｏｓｓｍａｂ抗体は、親ＣＮＴＯ／／１１Ｋ２、及び４つのｐＨ操作バリアントＣＫＬＯ０１、ＣＫＬＯ０２、ＣＫＬＯ０３、及びＣＫＬＯ０４であった。すべての抗体はＩｇＧ１野生型Ｆｃ部分を有していた（Ｆｃ（ガンマ）受容体結合をサイレンシング／除外する突然変異変異なし）。マウス血清中の総ヒトＣＣＬ２及び抗ＣＣＬ２抗体濃度の測定を上記のように行った（表４の「マウスにおける二重パラトピック抗体によるヒトＣＣＬ２免疫複合体掃引の評価」の下）。
結果を図７ａに示す：ｈＣＣＬ２及び二重特異性抗ＣＣＬ２抗体（親ＣＮＴＯ／／１１Ｋ２及びｐＨ依存性バリアントＣＫＬＯ０１、ＣＫＬＯ０２、ＣＫＬＯ０３及びＣＫＬＯ０４）からなる予め形成された免疫複合体をＳＣＩＤマウスに注射した後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。４つすべてのｐＨ操作バリアントは、ヒトＣＣＬ２の迅速なクリアランスを示した。ＣＫＬＯ０２、ＣＫＬＯ０３では、ヒトＣＣＬ２は１日目までに検出限界未満であった。親ＣＮＴＯ／／１１Ｋ２では、ヒトＣＣＬ２の急速なクリアランスが最初に１日目まで観察されたが、その後、ヒトＣＣＬ２のクリアランスは遅かった。
実施例Ｂ－３ 改変された可変ドメイン及びＣＤＲ（イオン依存性／ｐＨ依存性結合）及びＦｃ媒介性掃引を有する抗ＣＣＬ２抗体
掃引技術による二重特異性抗ＣＣＬ２抗体の修飾
二重特異性抗ＣＣＬ２抗体を、掃引技術を使用して改変して、二重特異性抗ＣＣＬ２抗体が遊離ＣＣｌ ２を長期間にわたって消失させて、インビボで抗がん効果又は抗炎症有効性効果のような生物学的効果を持続させることを可能にした。
掃引の概念は、例えば、Ｉｇａｗａ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２７０（２０１６）１３２－１５１，ＷＯ２０１２／１２２０１１，ＷＯ２０１６／０９８３５７、及びＷＯ２０１３／０８１１４３に記載されており、これらは参照により本明細書中に組み込まれる。
ｐＩ Ｆｃ媒介性掃引
ｐＨ操作された二重パラトピック抗体がインビボでＣＣＬ２クリアランスを加速することができることを実証したので、本発明者らは次に、ｐＩ増加置換を有する抗体が野生型ヒトＣＣＬ２のクリアランスを増強する能力を評価した。抗ＣＣＬ２単一パラトピック抗体（２０ｍｇ／ｋｇ）及び野生型ヒトＣＣＬ２（０．１ｍｇ／ｋｇ）からなる予め形成された免疫複合体を、１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＳＣＩＤマウスの尾静脈に投与した。投与の５分後、３０分後、１時間後、２時間後、４時間後、７日後に血液を採取した。血清を測定まで－８０℃以下で保存した。試験したＣｒｏｓｓｍａｂ抗体は、ＩｇＧ１を有する親ＣＫＬＯ０３、及びｐＩ増強Ｆｃを有するＣＫＬＯ０３、ＣＫＬＯ０３－ＳＧ１０９９であった。マウス血清中の総ヒトＣＣＬ２及び抗ＣＣＬ２抗体濃度の測定を上記のように行った（表４の「マウスにおける二重パラトピック抗体によるヒトＣＣＬ２免疫複合体掃引の評価」の下）。
結果を図７ｂに示す：ｈＣＣＬ２及びＣＫＬＯ０３（ＩｇＧ１野生型Ｆｃを含む）又はＣＫＬＯ０３－ＳＧ１０９９（ｐＩ Ｆｃが増強されたＣＫＬＯ０３）からなる予め形成された免疫複合体をＳＣＩＤマウスに注射した後の経時的なｈＣＣＬ２の血清濃度。Ｆｃ置換Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（ＥＵ Ｋａｂａｔナンバー）を含むＣＫＬＯ０３－ＳＧ１０９９は、ＩｇＧ１を有するＣＫＬＯ０３と比較して、ヒトＣＣＬ２のより速いクリアランス／減少を示した。これは、ｐＩが増加する突然変異を有するｐＨ依存性二重パラトピック抗体がＣＣＬ２のクリアランスを加速し得ることを実証する。
ＦｃガンマＲＩＩｂ増強Ｆｃバリアント及びさらなるＦｃ改変を有する二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体の作製
この例では、ＣＣＬ２クリアランスを増強するためのＦｃ工学が示されている。
国際公開第２０１３／１２５６６７号では、可溶性抗原のクリアランスが、ＦｃガンマＲＩＩｂに対する親和性の増加を示すＦｃドメインを含む抗原結合分子（例えば、抗体）の投与によって増強され得ることが実証されている。さらに、ヒトＦｃガンマＲＩＩｂに対する結合の増強を示すことができるＦｃバリアントは、国際公開第２０１２／１１５２４１号及び国際公開第２０１４／０３０７２８号に示されている。これらのＦｃバリアントは、ヒトＦｃガンマＲＩＩｂに対する選択的に増強された結合及び他の活性Ｆｃガンマ受容体（ＦｃガンマＲ）に対する減少した結合を示すことができることも示されている。ＦｃガンマＲＩＩｂ結合のこの選択的増強は、可溶性抗原のクリアランスだけでなく、望ましくないエフェクター機能及び免疫応答のリスクの低減にも有利であり得る。
抗体薬物の開発のために、薬物が薬理学的に活性である非ヒト動物において有効性、薬物動態及び安全性を評価すべきである。それがヒトにおいてのみ活性である場合、代理抗体の使用などの代替アプローチを考慮しなければならない（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｏｘ．２８：２３０－２５３（２００９））。しかしながら、非ヒト動物におけるＦｃガンマＲの発現パターン及び／又は機能は必ずしもヒトと同じではないので、代理抗体を使用してヒトにおけるＦｃ領域とＦｃガンマＲとの間の相互作用の影響を正確に予測することは容易ではない。抗体薬物のＦｃ領域は、非ヒト動物、特にヒトに近いＦｃガンマＲの発現パターン及び機能を有するカニクイザルに対して交差反応性を有するべきであり、その結果、非ヒト動物で得られた結果をヒトに外挿することができる。
二重特異性抗ＣＣＬ２抗体の以下のＩｇＧ１定常ドメイン／Ｆｃバリアントを、Ｆｃ部分の位置に突然変異を有するように作製した（ＥＵ Ｋａｂａｔナンバリング）。
ＳＧ１０９５－突然変異を含むＩｇＧ１由来（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｌ２３５Ｗ／Ｇ２３６Ｎ／Ｈ２６８Ｄ／Ｑ２９５Ｌ／Ａ３３０Ｋ／Ｋ３２６Ｔ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するための等電点（ｐＩ）を増加させるのに適している）；
－Ｎ４３４Ａ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
ＳＧ１０９９－突然変異を含むＩｇＧ１由来（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）
ＳＧ１１００－突然変異を含むＩｇＧ１由来（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するためにｐＩを増加させるのに適している）；
－Ｎ４３４Ａ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
ＧＧ０１－突然変異を含むＩｇＧ１由来（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｌ２３４Ｙ／Ｐ２３８Ｄ／Ｔ２５０Ｖ／Ｖ２６４Ｉ／Ｔ３０７Ｐ／Ａ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するための等電点（ｐＩ）を増加させるのに適している）；
－Ｎ４３４Ａ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
ＧＧ０２－突然変異を含むＩｇＧ１由来（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｌ２３４Ｙ／Ｐ２３８Ｄ／Ｔ２５０Ｖ／Ｖ２６４Ｉ／Ｔ３０７Ｐ／Ａ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するための等電点（ｐＩ）を増加させるのに適している）；
－Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ａ／Ｙ４３６Ｔ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
ＧＧ０３－突然変異を含むＩｇＧ１（ＳＧ１－ＩｇＧ１アロタイプ）由来（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｌ２３４Ｙ／Ｐ２３８Ｄ／Ｔ２５０Ｖ／Ｖ２６４Ｉ／Ｔ３０７Ｐ／Ａ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するための等電点（ｐＩ）を増加させるのに適している）；
－Ｎ４３４Ａ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
ＧＧ０４－突然変異を含むＩｇＧ１（ＳＧ１－ＩｇＧ１アロタイプ）由来（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
－Ｌ２３４Ｙ／Ｐ２３８Ｄ／Ｔ２５０Ｖ／Ｖ２６４Ｉ／Ｔ３０７Ｐ／Ａ３３０Ｋ（ヒトＦｃｇＲＩＩｂに対する親和性の増加及び他のヒトＦｃｇＲに対する親和性の減少に適している）；
－Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（抗原の取り込みを増強するための等電点（ｐＩ）を増加させるのに適している）；
－Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ａ／Ｙ４３６Ｔ（抗体のより長い血漿半減期のためにＦｃＲｎに対する親和性を増加させるのに適している）；及び
－Ｑ４３８Ｒ／Ｓ４４０Ｅ（リウマチ因子結合を抑制するのに適している）。
改変された可変ドメイン及びＣＤＲ（イオン依存性／ｐＨ依存性結合）を有し、Ｆｃ媒介性掃引を有する又は有さない、二重特異性抗ＣＣＬ２抗体の機能特性評価
ＣＫＬＯ２のＦｃバリアントＳＧ１０９５、ＧＧ０１、ＧＧ０２、ＧＧ０３／０４のＳＰＲ結合
Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器でのＳＰＲアッセイにおいて、ｐＨ ７．４及び５．８での４つの異なる抗体Ｐ１ＡＤ８３２５、Ｐ１ＡＦ８１３７、Ｐ１ＡＦ８１３９、及びＰ１ＡＦ８１４０への単量体ヒト及びカニクイザルＣＣＬ２の結合を調べた。
この設定において、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）Ｈｕｍａｎ Ｆａｂ－ｋａｐｐａ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、アミンカップリング法を使用してＣＭ３センサーチップ上に固定化し、多様な抗体をリガンドとして捕捉し、測定を、０、１０、１００及び１０００ｎＭの単量体ヒト又はカニクイザルＣＣＬ２を分析物として２つの異なるｐＨ値で行った。
ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９５、ＣＫＬＯ２－ＧＧ０１、ＣＫＬＯ２－ＧＧ０２、ＣＫＬＯ２－ＧＧ０３／０４は、単量体ヒト及びカニクイザルＣＣＬ２とほぼ同一の結合プロファイルを示すが（１０、１００及び１０００ｎＭで結合し、ｐＨ ７．４で等しい速さで解離する）、ｐＨ ５．８では安定した結合は観察されなかった。結果を以下の表に示す。
走化性アッセイ：
方法の説明
ＴＨＰ－１細胞を８ｘ１０Ｅ５細胞／ｍｌまで３日間培養した。５０００細胞／ウェルの総細胞数をマイクロタイタープレートの上部チャンバーに播種し、３７℃で静置させた。抗ＣＣＬ２抗体の存在下又は非存在下で、組換えｈｕＣＣＬ２を最終濃度５０ｎｇ／ｍｌで底部チャンバーにピペットで入れた（代理抗体を試験するためにアッセイを実施したとき、組換えｍｕＣＣＬ２を代わりに１００ｎｇ／ｍｌで使用した）。気泡の形成を回避して上部及び底部チャンバーを合わせ、次いで、プレートを３７℃で２４時間インキュベートした。遊走細胞を、製造業者の推奨に従ってＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ法によって定量化し、Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ ２００リーダーを用いて発光を測定した。
結果を図８に示す：走化性アッセイ：同一のＣＤＲ及び可変領域ＶＨ／ＶＬを有する（すなわちＣＫＬＯ２－ＩｇＧ１野生型及びＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９５）が異なるＦｃ部分を有する二重特異性抗ＣＣＬ２抗体は、同一の効力でＴＨＰ－１細胞の遊走を阻害することができる（ＩＣ５０＝０．２μｇ／ｍｌ；図８、左パネル）。
同様に、ｐＨ非依存性であるＣＣＬ２－００４８（ＣＫＬＯ２の親ＶＨ／ＶＬ非改変二重特異性抗体ＣＮＴＯ８８８／１１ｋ２）もまた、ｐＨ依存性は抗原掃引に重要であるので（このアッセイでは起こらない現象である）、０、２μｇ／ｍｌのＩＣ５０を示す。
対応する単一パラトピック抗体ＣＮＴＯ８８８ ＩｇＧ１及びヒト化１１ｋ２ ＩｇＧ１は、それぞれ０．３及び０．７μｇ／ｍｌのＩＣ５０値を示すが、ｈｕＩｇＧ１アイソタイプ対照は阻害を示さない（図８、右パネル）。
さらなる類似の実験では、ＣＫＬＯ２－ＧＧ０１（０．２μｇ／ｍｌ）、ＣＫＬＯ２－ＧＧ０２（０．２μｇ／ｍｌ）、及びＧＧ０３／ＧＧ０４（０．３μｇ／ｍｌ）のＩＣ５０値を決定した。
遺伝子改変マウスモデルにおけるインビボ生物学的活性
材料及び方法
Ｂ１６－ｈｕＣＣＬ２／ＣＣＬ２ヌルモデル
本モデルは、他の点では免疫適格である腫瘍担持マウスにおいてマウスＣＣＬ２の干渉なしに抗ヒトＣＣＬ２抗体を試験することを目的として生成された。このために、マウス腫瘍細胞株Ｂ１６－Ｆ１０を、ｍＣＣＬ２を分泌せず、ＣＣＬ２ノックアウトマウスの遺伝的背景であるＣ５７／Ｂｌ６株のマウスにおいてインビボで増殖することが知られていることから選択した。
ｈｕＣＣＬ２を発現するＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞の安定なプールを作製するために、それらをｈｕＣＣＬ２及びハイグロマイシン－Ｂ選択カセットをコードするプラスミドＤＮＡでトランスフェクトした。したがって、細胞を、増殖培地（ＤＭＥＭ＋１０％ ＦＣＳ＋２ｍＭ Ｌ－グルタミン）中、２．０Ｅ＋０５細胞／ウェルで６ウェルプレートに播種した。２４時間後、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培地中、ウェルあたり１μｇのＤＮＡ及びリポフェクタミン２０００で構成されるトランスフェクションミックスを細胞に添加した。続いて、ハイグロマイシン－Ｂ（０．５ｍｇ／ｍｌ）を含む培地で細胞を選択した。２０日間の培養後、生存単一細胞を、ＢＤ ＦＡＣＳ Ａｒｉａ ＩＩＩを使用してＦＳＣ／ＳＳＣ散乱に基づいて選別した。１２日後、単一細胞クローン由来の細胞培養上清を、野生型Ｂ１６Ｆ１０細胞（データ示さず）と比較して、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製ＥＬＩＳＡ Ｒｅａｄｙ－ＳＥＴ－Ｇｏ（カタログ番号８８－７３９９－８６）を使用してヒトＣＣＬ２の発現についてスクリーニングした。
選択されたＢ１６－Ｆ１０＿ＨＯＭＳＡ＿ＣＣＬ２腫瘍細胞クローン１Ａ５、２Ａ３及び２Ｂ２を、１０％ ＦＣＳ及び２ｍＭ Ｌ－グルタミン（ＰＡＮ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ、ドイツ）を含有するＤＭＥＭ中、３７℃、水飽和雰囲気、５％ＣＯ２でルーチンに培養した。培養継代は、トリプシン／ＥＤＴＡ １×（ＰＡＮ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＧｍｂＨ、ドイツ）を週に２回分割して行った。
到着時７～１０週齢の雌Ｂ６．１２９Ｓ４－Ｃｃｌ２ｔｍ１Ｒｏｌ／Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）にＢ１６－Ｆ１０＿ＨＯＭＳＡ＿ＣＣＬ２腫瘍細胞クローンを接種した：その日（試験０日目）に、腫瘍細胞を培養フラスコから採取し、培養培地に移し、１回洗浄し、ＰＢＳに再懸濁した。細胞数は、細胞計数装置及び分析装置システム（Ｖｉ－ＣＥＬＬ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して決定した。皮下用注射細胞力価を１×１０Ｅ７細胞／ｍｌに調整し、１００μｌをマウスの右側腹部に、冷却した
１．０ｍｌツベルクリンシリンジ（Ｄｉｓｐｏｍｅｄ、ドイツ）及び小型針（０．４５×１２ｍｍ）を用いて皮下注射した。小動物用吸入ユニットにてイソフルラン（ＣＰ Ｐｈａｒｍａ、ドイツ）による全身麻酔下で細胞接種を行った。
腫瘍成長を毎日モニタリングし、腫瘍がＢ１６－Ｆ１０＿ＨＯＭＳＡ＿ＣＣＬ２腫瘍細胞クローン１Ａ５及び２Ａ３について約１０００ ｍｍ３に達した試験１５日目にマウスを屠殺した（この時点で、２Ｂ２腫瘍は成長速度が遅いため約６００ ｍｍ３であった）。エンドポイントで、上記のように、ＣＣＬ２測定のために血液試料を採取し、腫瘍を外植し、フローサイトメトリによって分析した。
マウス免疫細胞はすべての腫瘍に浸潤することが見出され、ヒトＣＣＬ２がマウスＣＣＲ２＋細胞を引き寄せることができるという考えが確認された。Ｂ１６－Ｆ１０＿ＨＯＭＳＡ＿ＣＣＬ２腫瘍細胞クローン１Ａ５は、最も高いＣＤ４５＋総浸潤を示し、最も高い相対ｍＭＤＳＣ（単球性骨髄由来サプレッサー細胞）組成を有していた（図２）。２Ａ３細胞は１Ａ５細胞と同様のレベルの血清総ＣＣＬ２をもたらした、２Ｂ２クローンは有意により低いＣＣＬ２血清濃度を示したが、クローン２Ａ３及び２Ｂ２は腫瘍中の免疫細胞の頻度がより低かった（データは示さず）。
雌Ｂ６．１２９Ｓ４－Ｃｃｌ２ｔｍ１Ｒｏｌ／Ｊマウスに、上記のように、Ｂ１６－Ｆ１０＿ＨＯＭＳＡ＿ＣＣＬ２腫瘍細胞クローン１Ａ５を接種した。
試験群の処置は細胞接種の５日後に開始した。群１にはヒトＩｇＧビヒクル対照処置を投与し、群２及び３にはそれぞれＭａｂ ＣＫＬＯ２－ＩｇＧ１（Ｆｃ野生型ＩｇＧ１）及びＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９（（突然変異Ｑ３１１Ｒ／Ｐ３４３Ｒ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を有するＩｇＧ１に基づくＣＫＬＯ２ ｐＩ増強Ｆｃ）を３，７ｍｇ／ｋｇで９日間ｉ．ｐ．処置した。試験１４日目に、マウスを屠殺し、腫瘍を外植した。酵素消化及び細胞ストレーナーを使用して、フローサイトメトリによって非プールで分析するために、各腫瘍塊から単一細胞懸濁液を作製した。目的の免疫細胞集団の検出のために、以下のマーカー及び蛍光色素を使用した：ＣＤ４５－ＢＵＶ３９５、ＣＤ１１ｂ－ＢＵＶ７３７、Ｆ４／８０－ＢＶ４２１、ＣＤ１１ｃ－ＢＶ６０５、Ｌｙ６Ｃ－ＡＦ４８８、Ｌｙ６Ｇ－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５、ＣＤ２０６－ＢＶ７１１、ＣＤ４－ＢＶ５１０、ＣＤ８ａ－ＡＰＣ－Ｈ７、ＮＫ１．１－ＰＥ－Ｃｙ７、ＣＤ２７９－ＡＰＣ及びＣＤ２７４－ＰＥ．試料をＢＤ ＬＳＲ－Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメータで取得し、ＢＤ Ｄｉｖａソフトウェアを使用して分析した。
総ｈｕＣＣＬ２及び遊離ｈｕＣＣＬ２を測定するために、試験６、８、１１及び１４日目に血清試料を採取した。
遊離ＣＣＬ２を検出する方法は、以下の「カニクイザルにおけるＣＣＬ２掃引効率の概念実証試験」に詳細に記載されている。この試験における遊離ヒトＣＣＬ２の分析のために、組換えカニクイザルＣＣＬ２を組換えヒトＣＣＬ２で置き換えてキャリブレータ及びＱＣを調製した。
総ＣＣＬ２血清試料を、検証されていないが適格な特異的サンドイッチＥＬＩＳＡで分析した。簡潔には、ビオチン化抗ＣＣＬ２捕捉抗体（ＣＮＴＯ８８８ ＣＣＬ２－０００４）、ブロッキング緩衝液、前処理した試験試料及び検出試薬（ジゴキシゲニン化抗ＣＣＬ２抗体（Ｍ－１Ｈ１１－ＩｇＧ））を３８４ウェルストレプトアビジン被覆マイクロタイタープレートに段階的に添加し、各工程で激しくないシェーカー上で１時間インキュベートした。前処理工程試料中でＣＣＬ２－薬物複合体を解離させるために、キャリブレータ又はＱＣをｐＨ５．５で３７℃にて１０分間酸性化した。酸性化試料をＳＡ－ＭＴＰに添加した。固定された免疫複合体の検出のために、ポリクローナル抗ジゴキシゲニン－ＰＯＤコンジュゲートを加え、プレートを６０分間インキュベートした。各工程後にプレートを３回洗浄して未結合物質を除去した。
ＡＢＴＳをプレートに添加し、振盪しながら室温でインキュベートした。吸収を４０５／４９０ｎｍの波長で測定した。分析ソフトウェアＸＬＦｉｔ（ＩＤＢＳ）を使用して、検量線の応答に基づいてヒトＣＣＬ２濃度を計算した。
統計学的に分析されるデータセットに応じて、多重比較のためのテューキー検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡ又はｔ検定を適用した。
結果
試験終了時に、ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９（ＣＫＬＯ２ ｐＩ増強Ｆｃ）を投与したマウスでは、腫瘍体積及び腫瘍重量が有意に減少した（図９）。腫瘍浸潤物をより詳細に見ると、ＣＣＬ２遮断時に予想されるように、単球性骨髄由来サプレッサー細胞（Ｍ－ＭＤＳＣ）の腫瘍浸潤物の減少が明らかになった（図９）。
さらに、血清分析により、治療の有効性が確認された：ｐＩ最適化は実際にＩｇＧ１野生型Ｆｃ ＣＫＬＯ２分子と比較して総ＣＣＬ２の蓄積の減少をもたらすが、遊離ＣＣＬ２（抗体に結合していない）は検出限界以下で完全に抑制される（図１０）。したがって、本モデルは、抗ｈｕＣＣＬ２二重パラトピック掃引抗体ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９（ＣＫＬＯ２ ｐＩ増強Ｆｃ）を使用して、腫瘍状況におけるＣＣＬ２遮断の効果を調べるのに適している。その後の試験では、ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９（ＣＫＬＯ２ ｐＩ増強Ｆｃ）を低用量で週に１回又は２回投与する最適用量レジメンを調べ、遊離ＣＣＬ２抑制の延長を数週間にわたって監視する。さらに、このモデルでは、Ｔ細胞活性化療法（すなわち、Ｔ細胞の二重特異性、ＰＤ－Ｌ１遮断）との組み合わせも検討されている。
さらなる類似の実験では、ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９５、ＣＫＬＯ２－ＧＧ０１、ＧＧ０２及びＧＧ０３／ＧＧ０４のような他のバリアントを分析する。
カニクイザルにおけるＣＣＬ２掃引効率の概念実証試験（ＰＯＣ）
方法。この試験の主な目的は、カニクイザルにおける４つの抗ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）抗体のＣＣＬ２抑制及び掃引効率の延長を評価することであった。二次的な目的は、これらの抗体の薬物動態（ＰＫ）特性を評価することであった。すべての抗体を２５ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶ注入として３０分間にわたって３～４年齢の雄動物に投与し、血清中の総ＣＣＬ２及び抗体濃度を７０日間にわたって測定した。試験した抗ＣＣＬ２抗体は、対照抗体（群１及び２）並びにＣＣＬ２－薬物複合体の除去を増強するように特異的に操作された抗体（以下、抗原掃引又は単に掃引と呼ぶ）からなるものであった。群１：ＣＮＴＯ８８８－ＳＧ１（＝ＩｇＧ１野生型）抗ＣＣＬ２抗体（ｎ＝３動物）（最大総ＣＣＬ２蓄積の対照として）；群２：ｐＨ依存性標的結合を有するがＦｃ改変を有さない二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体ＣＫＬＯ２－ＳＧ１（ＩｇＧ１野生型）（ｎ＝３）；群３：ｐＨ依存性標的結合及びＦｃ－ｐＩ並びにさらなる改変を有する二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体ＣＫＬＯ２－ＳＧ１１００（ｎ＝４）、及び、群４：ｐＨ依存性標的結合、Ｆｃ－ｐＩ及びＦｃγＲＩＩ並びにさらなる改変を有する二重パラトピック抗ＣＣＬ２抗体ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９５（ｎ＝４）。
この試験では、抗体の総血清濃度、総（遊離及び抗体結合ＣＣＬ２）及び遊離標的を定量した。さらに、抗薬物抗体（ＡＤＡ）の存在を評価した。抗体、総及び遊離ＣＣＬ２プロファイルを、Ｐｈｏｅｎｉｘ ６４（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ／Ｃｅｒｔａｒａ）を使用した非コンパートメント分析によって分析した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ．６．０７（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いてデータを示した。
抗体については、一般的なヒトサンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて血清試料を分析した。サル血清中の全抗体の濃度をＥＬＩＳＡで測定した。２μｇ／ｍＬの抗ヒトカッパ鎖抗体をｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレートに一晩固定した後、ブロッキング緩衝液中で３０ｏＣで２時間インキュベートした。抗体検量線試料、品質管理試料及びサル血清試料をプレート上で３０ｏＣにて１時間インキュベートした後、洗浄した。次に、抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰを添加し、３０ｏＣで１時間インキュベートした後、洗浄した。ＡＢＴＳ基質を１０、２０及び３０分間インキュベートした後、マイクロプレートリーダーを用いて４０５ｎｍで検出した。分析ソフトウェアＳＯＦＴｍａｘ ＰＲＯ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、検量線の応答に基づいて抗体濃度を計算した。
総ＣＣＬ２血清試料を、検証されていないが適格な特異的サンドイッチＥＣＬ法アッセイで分析した。３μｇ／ｍＬの抗ＣＣＬ２抗体（ｒ２Ｆ２－ＳＧ１）をＭＵＬＴＩ－ＡＲＲＡＹ ９６ウェルプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）上に一晩固定化した後、ブロッキング緩衝液中で３０ｏＣにて２時間インキュベートした。カニクイザルＣＣＬ２検量線試料、品質管理試料及び希釈したカニクイザル血清試料をｐＨ５．５の酸緩衝液と共に３７ｏＣで１０分間インキュベートした。その後、試料を抗ＣＣＬ２固定化プレート上で３０ｏＣで１時間インキュベートした後、洗浄した。次に、ＳＵＬＦＯ ＴＡＧ標識ＭＣＰ－１抗体を添加し、３０ｏＣで１時間インキュベートした後、洗浄した。読出バッファＴ（ｘ ４）（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を直ちにプレートに加え、ＳＥＣＴＯＲ Ｉｍａｇｅｒ ２４００（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）によって信号を検出した。分析ソフトウェアＳＯＦＴｍａｘ ＰＲＯ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、検量線の応答に基づいてカニクイザルＣＣＬ２濃度を計算した。
Ｇｙｒｏｌａｂ Ｘｐｌｏｒｅで実行される、検証されていないが適格なＧｙｒｏｌａｂ（商標）イムノアッセイを用いて、遊離ＣＣＬ２血清試料を分析した。ビオチン化抗ＣＣＬ２抗体（Ｍ－２Ｆ６－ＩｇＧ）を捕捉試薬として使用し、検出のためにＡｌｅｘａ ６４７標識抗ＣＣＬ２抗体（Ｍ－１Ｈ１１－ＩｇＧ）を選択した。両方の試薬をＰＢＳ、０．１％Ｔｗｅｅｎ、１％ＢＳＡ中、１μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェルＰＣＲプレート（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に移した。カニクイザルＣＣＬ２検量線試料、ＱＣ及び未希釈血清試料も９６ウェルＰＣＲプレートに移した。両方のプレートを、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏａｆｆｙ ２００ ｎｌディスク（Ｇｙｒｏｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＡＢ）と共に機器に装填した。３段階アッセイプロトコル（２００－３Ｗ－００１）を選択した。簡潔には、プロトコルは、Ｇｙｒｏｌａｂ Ｂｉｏ Ａｆｆｙ ２００ディスクの指定されたストレプトアビジンカラムへの捕捉試薬、試料及び検出試薬の連続的な添加を記載する。各試薬は、短いスピニング工程がディスクに適用された後、同時にカラムに到達する。各工程後にカラムをＰＢＳ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎで洗浄し、最後にレーザー誘起蛍光値を装置内で記録した。ＸＬ Ｆｉｔソフトウェア（ＩＤＢＳ）を使用して、検量線の応答に基づいて遊離カニクイザルＣＣＬ２濃度を計算した。
ＡＤＡを、他の箇所に記載される方法（Ｓｔｕｂｅｎｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１０）を使用して分析した。要約すると、ビオチン化ｍＡｂ抗ヒトＦｃγ－ｐａｎ Ｒ１０Ｚ８Ｅ９を０．５μｇ／ｍＬの濃度でストレプトアビジン被覆高結合プレートに結合させ、１時間インキュベートした。試料及び標準をアッセイ緩衝液で５％カニクイザル血清に希釈し、洗浄後に被覆プレートの各ウェルに添加し、振盪しながら１時間インキュベートした。洗浄後、０．１μｇ／ｍＬのジゴキシゲニン化抗カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＩｇＧを添加し、振盪しながら１時間インキュベートした。洗浄後、２５ｍＵ／ｍＬのポリクローナル抗ジゴキシゲニン－ＨＲＰコンジュゲートを添加し、振盪しながら１時間インキュベートした。ＡＢＴＳをプレートに添加し、振盪しながら室温で１０分間インキュベートした。吸収を４０５／４９０ｎｍの波長でマイクロプレートリーダーによって測定した。分析ソフトウェアＳＯＦＴｍａｘ ＰＲＯ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、検量線の応答に基づいてＡＤＡ濃度を計算した。
結果。動物がＡＤＡを含まない期間中に（すなわち、１４日目より前に）ＰＫ挙動を評価した。この期間中、全ての抗ＣＣＬ２抗体の血清濃度－時間プロファイルは類似しており（図１１の左パネルを参照）、部分平均ＡＵＣ値（ＡＵＣ０－７ｄ）は異なる群（群１、２、３及び４についてそれぞれ１４９０、１８１０、１２１０及び１３２０日．μｇ／ｍＬ）で同等であった。同様に、平均Ｃｍａｘ値は、群１、２、４及び４についてそれぞれ値が６２０、７６４、６１６及び６６４μｇ／ｍＬであり同等であった。ＡＤＡ発達の程度は、動物及び群の間で非常に可変的であり、７日目を超えて非常に可変的なＰＫプロファイルをもたらした（データは示さず）。群２の１匹の動物は、７０日間の観察期間全体を通してＡＤＡ陰性であった（図１１の右パネルを参照）。この動物では、抗ＣＣＬ２抗体のクリアランス、分布容積及び最終半減期を、それぞれ７．３４ｍＬ／（日．ｋｇ）、７６．２ｍＬ／ｋｇ及び１０．９日の非コンパートメント分析によって推定した。
血清中のＣＣＬ２のベースラインレベルを、抗体処置を開始する前に各動物について評価した。基礎ＣＣＬ２レベルは、０．１２６～０．３５７ｎｇ／ｍＬの範囲であった（幾何平均（％ＣＶ）：０．１９９ｎｇ／ｍＬ（３２．２％、Ｎ＝１４））。遊離形態のＣＣＬ２は、抗体結合形態のＣＣＬ２よりも除去速度が高いため、抗体処置後の総ＣＣＬ２血清濃度の増加が予想された。これは実際にすべての群で観察され（図１２左パネル）、すべての抗体による標的の関与が実証された。処置下で、総ＣＣＬ２のＣｍａｘ値は、群１、２、３及び４についてそれぞれ８２４、５７５、１０６、３２．７ｎｇ／ｍＬに増加した。ＡＵＣ０－７ｄ値は、群１、２、３及び４についてそれぞれ３０６０、２９７０、５２２及び１８１日．ｎｇ／ｍＬ であった。動物がＡＤＡ陰性であった期間中、モル薬物濃度は総ＣＣＬ２濃度を超えたままであった。２つの掃引抗ＣＣＬ２抗体（群３及び４）は、従来の抗体（群１）と比較して、総ＣＣＬ２血清濃度のかなりの減少を示した（血清Ｃｍａｘ値に基づいてそれぞれ約８倍及び２５倍、総ＣＣＬ２のＡＵＣ０－７ｄ値に基づいて約６倍～１７倍）。群２のＡＤＡ陰性動物は、総ＣＣＬ２濃度の持続的な標的関与（プラトーによって明らか）を示した（図１２右パネル）。
すべての抗体での処置は、血清中の遊離ＣＣＬ２レベルの実質的な低下をもたらした（図１３左パネル）が、低下は部分的には最初だけであった。群１では、すべての個体が、１日後に再び定量可能なレベルの遊離ＣＣＬ２を有していた。群２では、すべての個体が、２日後に再び定量可能なレベルの遊離ＣＣＬ２を有していた。群３及び４では、各群の２個体が、遊離ＣＣＬ２の抑制を７日間示した。群３では、十分な抗体濃度を維持している中程度のＡＤＡ応答を有する２匹の動物が、検出限界未満の遊離ＣＣＬ２抑制を２１日間示した。ＡＤＡ陽性動物では、抗体除去が有意に増加し、標的関与の喪失の結果として、ＣＣＬ２レベルは元のベースラインに急速に戻った（ここには示さず）。
さらなる類似の実験では、ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９、ＣＫＬＯ２－ＧＧ０１、ＧＧ０２及びＧＧ０３／ＧＧ０４のような他のバリアントを分析する。
カニクイザルにおけるＣＣＬ２掃引効率のＰＫ／ＰＤ試験
試験の概要と目的。ＰＫ／ＰＤ試験を、抗ＣＣＬ２抗体ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５を使用したＰＯＣ研究の結果に基づいて設計した。ＰＯＣ試験は、高度の抗薬物抗体（ＡＤＡ）形成を実証したので、ＡＤＡ応答を低下させることを意図して、Ｇａｚｙｖａ（登録商標）（オビニツズマブ）処置をＰＫ／ＰＤ試験に含めた。この目的のために、３０ｍｇ／ｋｇ用量のＧａｚｙｖａを、試験全体を通して４回：－１４、－７、８及び３６日目に静脈内注入によって投与した。ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５を、２．５、１０及び２５ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、１日目に３０分間にわたってＩＶ注入として用量群あたり４匹の動物（雄及び雌２／２）に投与した（群１～３）。比較のために、従来の抗ＣＣＬ２抗体（ＣＮＴＯ８８８－ＩｇＧ１）を、１日目に３０分間にわたってＩＶ注入として２５ｍｇ／ｋｇで投与した（群４；上記のＰＯＣ試験の群１と同じ対照）。総ＰＫ（ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５）、総ＣＣＬ２及び遊離ＣＣＬ２濃度を９９日目まで評価した（すなわち、投与後１４週間）。
ＰＫ／ＰＤ試験の目的は、非ヒト霊長類において、従来の抗ＣＣＬ２抗体（野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ部分を有するＣＮＴＯ８８８）と比較して、ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５の長期間にわたる遊離ＣＣＬ２抑制を実証することであった。
方法。この試験では、総ＰＫ並びに総ＣＣＬ２及び遊離ＣＣＬ２を定量した。しかしながら、血清試料中のＧａｚｙｖａの存在に起因して、本明細書中に記載されるＰＯＣ試験と比較して、総ＰＫアッセイ、総ＣＣＬ２アッセイ及びＡＤＡアッセイに対していくつかの改変を行なった。ＣＮＴＯ８８８ ＩｇＧ１については、ＰＫアッセイは開発されなかった。
サル血清中の全抗体ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５の濃度をＥＬＩＳＡで測定した。ＥＬＩＳＡのために、ビオチン化組換えヒトＣＣＬ２（抗原）について、前処理した試験試料、陽性対照標準（キャリブレータ）又はＱＣ（品質管理）及びジゴキシゲニン化抗ヒトＩｇＧ（Ｍ－１．１９．３１－ＩｇＧ）を３８４ウェル・ストレプトアビジン被覆マイクロタイタープレート（ＳＡ－ＭＴＰ）に連続的に添加した。ＣＣＬ２－薬物複合体を解離させるために、試験試料の前処理をｐＨ５．５で２０分間行った。ＳＡ－ＭＴＰに添加する前に、酸性化した試料を中和した。固定された免疫複合体を、ポリクローナル抗ジゴキシゲニン－ＰＯＤコンジュゲートを用いて検出した。各工程後にプレートを３回洗浄して未結合物質を除去した。ＡＢＴＳを基質としてプレートに添加し、室温でインキュベートした。吸収を４０５／４９０ｎｍの波長で測定した。分析ソフトウェアＸＬＦｉｔ（ＩＤＢＳ）を使用して、検量線の応答に基づいて抗体濃度を計算した。
総ＣＣＬ２血清試料を、検証されていないが適格な特異的サンドイッチＥＬＩＳＡで分析した。簡潔には、ビオチン化抗ＣＣＬ２捕捉抗体＊、前処理した試験試料及び検出試薬（ジゴキシゲニン化抗ＣＣＬ２抗体（１Ｈ１１－ＩｇＧ１））を３８４ウェルのストレプトアビジン被覆マイクロタイタープレートに段階的に添加し、捕捉及び試料工程のために１時間、検出試薬のために５０分間、それぞれ激しくないシェーカー上でインキュベートした。前処理工程試料中でＣＣＬ２－薬物複合体を解離させるために、キャリブレータ又はＱＣをｐＨ５．５で２０分間酸性化した。酸性化試料をＳＡ－ＭＴＰに添加した。固定された免疫複合体の検出のために、ポリクローナル抗ジゴキシゲニン－ＰＯＤコンジュゲートを加え、プレートを５０分間インキュベートした。各工程後にプレートを３回洗浄して未結合物質を除去した。
ＡＢＴＳをプレートに添加し、振盪しながら室温でインキュベートした。吸収を４０５／４９０ｎｍの波長で測定した。分析ソフトウェアＸＬＦｉｔ（ＩＤＢＳ）を使用して、検量線の応答に基づいてカニクイザルＣＣＬ２濃度を計算した。＊群１～群３の分析のための捕捉抗体：抗ＣＣＬ２ ＣＮＴＯ８８８８ ＩｇＧ１、群４の分析のための捕捉抗体：抗ＣＣＬ２ ２Ｆ２ ＩｇＧ１。
ＡＤＡを３８４ウェルプレートにおいて架橋サンドイッチＥＬＩＳＡでスクリーニングした。群１、２及び３の動物の試験試料、品質管理試料及び陽性対照を、ビオチン化捕捉抗体ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５及びジゴキシゲニン化検出抗体ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５とともに、２つのさらなる抗ＣＣＬ２抗体（２Ｆ６－ＩｇＧ１及び１Ｈ１１－ＩｇＧ１）と共に、室温、５００ｒｐｍで、ＭＴＰシェーカー上で一晩インキュベートした。これらの抗体を添加してＣＣＬ２を中和した。群４の動物の試料には、ビオチン標識ＣＮＴＯ８８８－ＳＧ１及びジゴキシゲニル化ＣＮＴＯ８８８－ＳＧ１をそれぞれ使用した。形成された免疫複合体をストレプトアビジン（ＳＡ）被覆ＭＴＰに移し、ビオチン標識（Ｂｉ）捕捉抗体を介して免疫複合体を固定化した。上清を吸引した後、未結合物質を繰り返し洗浄することによって除去した。検出を、抗ジゴキシゲニンＰＯＤ（ｐ）コンジュゲート化抗体及びＡＢＴＳ基質溶液の添加によって達成した。反応物の着色強度を測光的に決定した（４０５ｎｍ～４９０ｎｍ参照波長での吸収）。シグナルがプレート特有のカットポイントを上回ることが判明した場合、試料をＡＤＡ陽性と定義した。このカットポイントは、アッセイ適格化中に定義した。
結果。Ｇａｚｙｖａ（登録商標）（オビニツズマブ）前処置にもかかわらず、ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５処置動物１２匹中１０匹及びＣＮＴＯ８８８処置動物４匹中１匹がＡＤＡを発症し、薬物及びバイオマーカー濃度に影響を及ぼした。しかし、ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５の２匹のＡＤＡ陰性動物は２５ｍｇ／ｋｇ用量群であり、ＣＮＴＯ８８８群のＡＤＡ陰性動物と直接比較することができた。動物がＡＤＡを含まない期間中に（すなわち、１０日目より前に）ＰＫ挙動を評価した。ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５についての３つの異なる用量群のＰＫプロファイルを図１４の左パネルに示す。部分平均ＡＵＣ値（ＡＵＣ０－７ｄ）は、用量レベル２．５、１０及び２５ ｍｇ／ｋｇについて、それぞれ２２９／１９１（雄／雌）、６９６／８１３及び１４９２／１３４６日．μｇ／ｍＬであった。Ｃｍａｘ値は、用量レベル２．５、１０及び２５ｍｇ／ｋｇについて、それぞれ１１５／１２２（雄／雌）、３６９／４９１及び８６９／９４１μｇ／ｍＬであった。最高用量レベルでは、これらの所見はＰＯＣ試験と一致する。２匹のＡＤＡ陰性動物について、ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５のクリアランス、分布容積及び最終半減期を、それぞれ１０．５～１７．４ｍＬ／（日．ｋｇ）、１１６～１１８ｍＬ／ｋｇ及び５．８～１１．６日の非コンパートメント分析によって推定した（図１４の右パネルを参照）。
上記のＰＯＣ試験に関して、抗ＣＣＬ２抗体で処置すると、総ＣＣＬ２の蓄積が観察された（図１５左パネル参照）。ＣＣＬ２のベースラインレベルを薬物投与前に５回（Ｇａｚｙｖａ（登録商標）（オビニツズマブ）処置前の１回を含む）評価した。平均ＣＣＬ２ベースライン値は０．７４２ｎｇ／ｍＬであり、Ｇａｚｙｖａ（登録商標）（オビニツズマブ）処置は基礎ＣＣＬ２レベルに影響を及ぼさなかった。総ＣＣＬ２蓄積の程度（括弧内の値は、個々のベースラインからの中央倍数変化を示す）は、用量及び構築物依存性であった。ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５の場合、総ＣＣＬ２レベルは、２．５、１０及び２５ｍｇ／ｋｇ用量レベルについて、２２．４（２２）、６７．２（１０５）及び５４．９（７６）ｎｇ／ｍＬ（４匹の動物の中央値）に増加した。ＣＮＴＯ８８８ ＩｇＧ１の場合、総ＣＣＬ２レベルは１４９０（３１６０）ｎｇ／ｍＬに増加した（４動物の中央値）。群３と群４のＡＤＡ陰性動物の比較は、ＣＮＴＯ８８８と比較して、ＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５の蓄積レベルがかなり低いことを示した（図１５右パネル）。
すべての研究群の処置は、血清中の遊離ＣＣＬ２レベルの実質的な一過性低下をもたらす（図１６左パネルを参照；典型的には、検出限界（０．０１ ｎｇ／ｍＬ）未満）。全てのＡＤＡ陽性動物について、遊離ＣＣＬ２レベルは、ＡＤＡ発症後に急速にベースライン値に戻った（薬物曝露の喪失及び迅速な標的代謝ターンオーバーと一致する）。ＡＤＡ陰性動物（群３では２／４）及び（群４では３／４）については、試験期間を通して遊離ＣＣＬ２抑制の期間を評価することができた。従来の抗体ＣＮＴＯ８８８（群４）では、ＣＣＬ２抑制の持続時間は短く、これはおそらく全標的の広範な蓄積によるものであった（図１５）。薬物濃度は定量化されなかったが（ＣＮＴＯ８８８について利用可能な特異的アッセイはない）、ＰＯＣ試験は、ＣＮＴＯ８８８とＣＫＬ０２－ＳＧ１０９５との間で同様のＰＫ特性を示唆している。一方、群３の２匹のＡＤＡ陰性動物では、長期持続性の遊離ＣＣＬ２抑制が観察された。一匹の動物について、遊離ＣＣＬ２レベルは２９日間検出限界未満のままであった（図１６右パネル）。
さらなる類似の実験では、ＣＫＬＯ２－ＳＧ１０９９、ＣＫＬＯ２－ＧＧ０１、ＧＧ０２及びＧＧ０３／ＧＧ０４のような他のバリアントを分析する。
異なる腫瘍タイプにおけるＣＣＬ２の有病率試験
ＣＤ１６３／ＣＤ６８及びＣＤ１４を使用するマクロファージ分析を含む、ＣＣＬ２及びその受容体ＣＣＲ２の以下のＩＨＣ有病率試験を、６つの異なる適応症の１２１のヒト適合腫瘍及び血清試料で実施した：
膵がん（ＰａＣ）
結腸直腸がん（ＣＲＣ）
乳がん（ＢＣ）
前立腺がん（ＰｒＣ）
卵巣がん（ＯｖＣ）
胃がん（ＧＣ）
以下の質問に対処した：
●これらの腫瘍はＣＣＬ２を（過剰）発現するか？
●これらの腫瘍患者において血中ＣＣＬ２レベルは上昇しているか？
●血液と腫瘍のＣＣＬ２レベルの間に相関があるか？
●腫瘍ＣＣＬ２と浸潤ＣＣＲ２＋免疫細胞との間に相関があるか？
●腫瘍ＣＣＬ２と浸潤骨髄細胞との間に相関があるか？
材料及び方法
組織病理学的スコアリングを半定量的に行った。さらに、自動多重画像解析をＣＤ１６３／ＣＤ６８ ＩＨＣのために使用し、免疫細胞定量化のためのＣＤ１４及びＣＣＲ２、並びにＣＣＬ２定量化のために試験した。
６つの異なる適応症の１２１個のヒト腫瘍の切除標本のセットに対して免疫組織学的調査を実施した：３１膵臓がん（ＰａＣ）、３０結腸直腸がん（ＣＲＣ）、３０乳がん（ＢＣ）、２９前立腺がん（ＰｒＣ）、２０卵巣がん（ＯｖＣ）及び１０胃がん（ＧＣ）、Ｉｎｄｉｖｕｍｅｄ（Ｈａｍｂｕｒｇ）及びＡｓｔｅｒａｎｄ（Ｒｏｙｓｔｏｎ／Ｈｅｒｔｓ、英国）によって提供される。腫瘍を４％緩衝ホルムアルデヒドで固定し、パラフィン包埋し、２．５μｍの厚さに切断し、Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ Ｐｌｕｓスライドにマウントした。ＣＣＬ２に対するマウスモノクローナル抗体（クローン２Ｄ８、Ｎｏｖｕｓｂｉｏ ＮＢＰ２－２２１１５）を、標準的な染色プロトコル（３２’についてＣＣ１、ＶＢＸ中１μｇ／ｍＬの濃度、Ｏｐｔｉｖｉｅｗ ＤＡＢ検出システム）に従って、Ｖｅｎｔａｎａ ＢＸＴで使用した。ＣＣＲ２に対するウサギモノクローナル抗体（Ｅ６８、Ａｂｃａｍ ａｂ３２１４４）を、標準的な染色プロトコル（３２’についてＣＣ１、ＤＳ２中０．８ ｕｇ／ｍｌの濃度、Ｏｍｎｉ－ＵｌｔｒａＭａｐ ＨＲＰ ＤＡＢ検出システム）に従って、Ｖｅｎｔａｎａ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＸＴで使用した。単球マーカーＣＤ１４（Ｃｅｌｌ Ｍａｒｑｕｅ ＥＰＲ３６５３、ＲＴＵ）に対するマウスモノクローナル抗体を、標準的な染色プロトコル（６４’についてＣＣ１、Ｏｍｎｉ－ＵｌｔｒａＭａｐ ＨＲＰ ＤＡＢ検出システム検出システム）に従って、Ｖｅｎｔａｎａ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｕｌｔｒａで使用した。マクロファージ及びＭ２様ＴＡＭ（腫瘍関連マクロファージＣＤ１６３／ＣＤ６８（ＤＡＢ ＣＤ１６３ Ｍｏｕｓｅ ＭＲＱ－２６ Ｃｅｌｌ Ｍａｒｑｕｅ ＲＴＵ ／／ ｒｅｄ ＣＤ６８ Ｍｏｕｓｅ ＰＧ－Ｍ１ Ｄａｋｏ）に対する二重染色を、標準的な染色プロトコル（３２’についてＣＣ１、ＤＳ２中０．６μｇ／ｍｌのＣＤ１６３ ＲＴＵ／／ＣＤ６８濃度、ＤＡＢ及びＲｅｄ検出システムによる検出）に従って、Ｖｅｎｔａｎａ ＢＸＴで使用した。すべての画像は、Ｖｅｎｔａｎａ ｉＳｃａｎ ＨＴ（登録商標）を使用してスキャンした。組織切片を半定量的に分析した。
１．結果
ＣＣＬ２及びＣＣＲ２の有病率
分析されたすべての腫瘍適応症は、可変レベルのＣＣＬ２の上方制御及び可変量のＴＡＭ上のＣＣＲ２の存在を伴ういくつかの腫瘍を示した（以下の表６）。ＣＣＬ２及びＣＣＲ２の両方について、卵巣癌腫で最も高い発現が観察され、続いてＰＤＡＣ及びＧＣが観察された。
腫瘍型特異的特徴
高いＭＤＳＣ誘引及びＭ２分極の腫瘍増殖増強免疫学的状態に関連する、ＣＣＬ２－ＣＣＲ２の高い活性を有する腫瘍は、ＣＣＬ２遮断療法に好ましい腫瘍を表わす。ＣＣＲ２ ＩＨＣは、ＭＤＳＣ及びＭ２様マクロファージとの良好な相関を示し、その生物学的役割を確認し、この経路のバイオマーカーとしてＣＣＬ２ ＩＨＣ測定よりも高い関連性を実証した。本研究から結論として、ＣＣＬ２療法についての以下の推奨事項を要約することができる：
●ＯｖＣは、ＣＣＬ２及びＣＣＲ２の有病率及びＭ２分極が最も高いため、ＣＣＬ２標的療法に推奨することができる：
●ＰＤＡＣは、他の分析された腫瘍型と比較してＭＤＳＣの量が最も多いため、並びにＣＣＲ２及びＭ２がかなり高いレベル及び量で存在したため、ＣＣＬ２標的療法に推奨され得る。ＣＣＬ２はＰＤＡＣにおいても高く、他の腫瘍型とは対照的に、腫瘍細胞よりも免疫細胞において並外れて高い存在を示した。ＰａＣは、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２とＭＤＳＣ誘引／Ｍ２分極との間の非常に良好な相関を示した。これらの結果は、分析されたＰＤＡＣにおいて、ＣＣＬ２－ＣＣＲ２の役割が免疫細胞誘引に非常に集中していることを裏付けている。
●ＢＣ、特にＴＮＢＣは、ＣＣＬ２標的療法に推奨され得る：ＢＣは、かなり高いレベル及び量のＣＣＬ２、ＣＣＲ２、ＭＤＳＣ及びＭ２を示した。特に、ＴＮＢＣ症例は、非ＴＮＢＣよりも多量のＭ２及びＭＤＳＣを特徴としたが、非ＴＮＢＣは、他の腫瘍適応症と比較して腫瘍細胞において最も高いＣＣＬ２産生を示した。
以下の腫瘍適応症は、ＣＣＬ２－ＣＣＲ２軸からの依存性が低いようであり、したがって、ＣＣＬ２標的療法にあまり推奨されない可能性がある。
●ＣＲＣ：ＣＣＬ２は、他の腫瘍型と比較して（特にＰａＣと比較した場合に）低かった。ここでも、他の腫瘍型と比較して、Ｍ２様マクロファージの最小量を測定した。ＣＣＲ２及びＭＤＳＣは可変量で存在した。興味深いことに、この指標のみでは、ＣＣＬ２とＣＣＲ２との間の正の相関の傾向が検出可能であった。しかしながら、全体的な所見は、ＣＲＣでは、ＣＣＬ２－ＣＣＲ２の役割が腫瘍細胞の生存に焦点を当てており、免疫細胞の誘引に焦点を当てていないことを裏付けている。
●ＧＣは、ＣＣＬ２については高いがＣＣＲ２については低いことが観察され、ＭＤＳＣの量が最も少ないことを示した。Ｍ２様マクロファージは様々な量で存在した。
●ＰｒＣにおいて、ＣＣＲ２は様々なレベルで存在した。（Ｍ２及びＭＤＳＣは測定せず）
相関分析
試験結果は以下のように要約することができる：
●腫瘍ＣＣＬ２とＣＣＲ２（ＩＨＣ）との間で、唯一の正の相関がＣＲＣに存在した。
●血清ＣＣＬ２（ＥＬＩＳＡ）は、ＣＣＬ２、ＣＣＲ２、マクロファージ、及びＭＤＳＣを含む腫瘍において測定されたパラメータのいずれとも相関しなかった。腫瘍ＣＣＬ２に対する正の相関の傾向はＰｒＣでのみ見られ、両方の方法が非常に低い値を示す。
●ＣＣＲ２発現は、Ｍ２様マクロファージ及びＣＤ１４＋細胞の存在と正に相関し、Ｍ１／Ｍ２比と負に相関し、ＣＣＲ２の生物学的役割を確認する。ＣＣＲ２のレベルは、ＭＤＳＣ誘引よりもＭ２分極と良好に相関する。
●ＣＣＬ２は、ＭＤＳＣ誘引及びＭ２分極と正の相関の傾向を示した。したがって、ＣＣＬ２レベルのみが、ＭＤＳＣ及びＭ２様分極の存在の主な要因ではないようであった。

Claims (33)

  1. ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の異なる第２のエピトープに結合する異なる第２の抗原結合部位とを含む二重特異性抗体であって、ヒトＩｇＧアイソタイプのＦｃドメインを含み、
    Ａ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｂ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｃ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｄ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｅ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｆ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｇ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｈ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｉ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、二重特異性抗体。
  2. Ａ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｂ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｃ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｄ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｅ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｆ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｇ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｈ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｉ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、請求項１に記載の二重特異性抗体。
  3. ヒトＩｇＧアイソタイプのＦｃドメインを含む前記二重特異性抗体が、ヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む二重特異性抗体である、請求項１又は２に記載の二重特異性抗体。
  4. ヒト野生型ＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む前記二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）が、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃガンマ受容体サイレンシング定常重鎖ドメインを含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）と比較して、２０ｍｇ／ｋｇの各二重特異性抗体及び０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２からなる予め形成された免疫複合体を１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した場合に、少なくとも２倍高い、請求項３に記載の二重特異性抗体。
  5. ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
    ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む抗体と同じＣＣＬ２上のエピトープに結合し、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、（ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、（ｄ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む抗体と同じＣＣＬ２上のエピトープに結合する、（単離された）二重特異性抗体。
  6. ヒト野生型ＩｇＧ１アイソタイプの定常重鎖ドメインを含む前記二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）が、突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）を含むヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃガンマ受容体サイレンシング定常重鎖ドメインを含む二重特異性抗体を投与した後のヒトＣＣＬ２のインビボクリアランス速度（ｍｌ／日／ｋｇ）と比較して、２０ｍｇ／ｋｇの各二重特異性抗体及び０．１ｍｇ／ｋｇのヒトＣＣＬ２からなる予め形成された免疫複合体を１０ｍｌ／ｋｇの単回用量でＦｃＲｎトランスジェニックマウスに投与した場合に、少なくとも１５倍高く、特に少なくとも２０倍高い、請求項５に記載の二重特異性抗体。
  7. ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
    ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    （ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
    を含む、（単離された）二重特異性抗体。
  8. ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
    ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    （ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号６３のアミノ酸配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦを含むＦＲ－Ｈ１、（ｅ）配列番号６４のアミノ酸配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧを含むＦＲ－Ｈ２、（ｆ）配列番号６５のアミノ酸配列ＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹ ＹＣＡＲを含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｇ）配列番号６６のアミノ酸配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含むＦＲ－Ｈ４を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｈ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｊ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３、（ｋ）配列番号６７のアミノ酸配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣを含むＦＲ－Ｌ１、（ｌ）配列番号６８のアミノ酸配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹを含むＦＲ－Ｌ２、（ｍ）配列番号６９のアミノ酸配列ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣを含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｎ）配列番号７０のアミノ酸配列ＧＱＧＴＫＶＥＩＫを含むＦＲ－Ｌ４を含む、ＶＬドメイン
    を含み；
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    （ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＬＴＩＳを含むＦＲ－Ｈ１、（ｅ）配列番号８３のアミノ酸配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧを含むＦＲ－Ｈ２、（ｆ）配列番号８４のアミノ酸配列ＲＶＴＩＴＡＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲを含むＦＲ－Ｈ３、及び（ｇ）配列番号８５のアミノ酸配列ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳを含むＦＲ－Ｈ４を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｈ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｉ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｊ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３、（ｋ）配列番号８６のアミノ酸配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣを含むＦＲ－Ｌ１、（ｌ）配列番号８７のアミノ酸配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＨを含むＦＲ－Ｌ２、（ｍ）配列番号８８のアミノ酸配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣを含むＦＲ－Ｌ３、及び（ｎ）配列番号８９のアミノ酸配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫを含むＦＲ－Ｌ４を含む、ＶＬドメイン
    を含む、（単離された）二重特異性抗体。
  9. ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
    Ａ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｂ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｃ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｄ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｅ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｆ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｇ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｈ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｉ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｊ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｋ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｌ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｍ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｎ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｏ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｐ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、（単離された）二重特異性抗体。
  10. ヒトＣＣＬ２上の第１のエピトープに（特異的に）結合する第１の抗原結合部位と、ヒトＣＣＬ２上の第２のエピトープに（特異的に）結合する第２の抗原結合部位とを含む、（単離された）二重特異性抗体であって、
    Ａ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶであり、Ｘ２がＰであり、Ｘ３がＨである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦであり、Ｘ２がＲである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｂ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶであり、Ｘ２がＰであり、Ｘ３がＨである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦであり、Ｘ２がＲである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｃ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｄ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｅ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｆ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｇ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｈ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含む、ＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｉ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｊ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｋ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｌ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｍ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｎ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｏ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、
    又は
    Ｐ）ｉ）前記第１の抗原結合部位が、
    配列番号７１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含み、
    ｉｉ）前記第２の抗原結合部位が、
    配列番号９２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメイン配列であって、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン配列；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメイン配列であって、（ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン配列；
    を含む、二重特異性抗体。
  11. ヒトＩｇＧアイソタイプのＦｃドメインを含む、請求項７～１０のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  12. ヒトＩｇＧアイソタイプのＦｃドメインが、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのＦｃドメインである、請求項１１に記載の二重特異性抗体。
  13. ヒトＩｇＧアイソタイプの定常ドメインを含む、請求項７～１０のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  14. ヒトＩｇＧアイソタイプの定常ドメインが、ヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常ドメインである、請求項１３に記載の二重特異性抗体。
  15. ｉ）インビトロでＣＣＬ２のその受容体ＣＣＲ２への結合を遮断する（レポーターアッセイ、ＩＣ５０＝０．５ｎＭ）；及び／又は
    ｉｉ）骨髄系細胞のＣＣＬ２媒介走化性をインビトロで阻害する（ＩＣ５０＝１．５ｎＭ）；及び／又は
    ｉｉｉ）ｃｙｎｏ及びヒトＣＣＬ２に対して交差反応性である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  16. 他のＣＣＬホモログに対して交差反応性でない、請求項１～１５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  17. ｐＨ７．４において、ｐＨ５．８よりも１０倍高い親和性でヒトＣＣＬ２に結合する、請求項１～１６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  18. 以下の突然変異（Ｋａｂａｔ ＥＵナンバリング）：
    ｉ）Ｑ３１１Ｒ及び／又はＰ３４３Ｒ；及び／又は
    ｉｉ）Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３５Ｗ、Ｇ２３６Ｎ、Ｐ２３８Ｄ、Ｔ２５０Ｖ、Ｖ２６４Ｉ、Ｈ２６８Ｄ、Ｑ２９５Ｌ、Ｔ３０７Ｐ、Ｋ３２６Ｔ及び／又はＡ３３０Ｋ；及び／又は
    ｉｉｉ）Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及び／又はＹ４３６Ｔ；及び／又は
    ｉｖ）Ｑ４３８Ｒ及び／又はＳ４４０Ｅ
    のうちの１つ又は複数を含むヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  19. ヒトＣＣＬ２に（特異的に）結合する（単離された）抗体であって、
    前記抗体が、
    Ａ）（ａ）ＸがＩ又はＴである、配列番号５７のアミノ酸配列ＳＨＹＧＸＳを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）Ｘ１がＶ、Ｉ又はＨであり、Ｘ２がＰ又はＨであり、Ｘ３がＨ又はＧである、配列番号５８のアミノ酸配列ＧＸ１ＩＸ２ＩＦＸ３ＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列ＹＤＡＨＹＧＥＬＤＦを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）配列番号６０のアミノ酸配列ＲＡＳＱＨＶＳＤＡＹＬＡを含むＣＤＲ－Ｌ１；（ｅ）配列番号６１のアミノ酸配列ＤＡＳＤＲＡＥを含むＣＤＲ－Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６２のアミノ酸配列ＨＱＹＩＨＬＨＳＦＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン；
    を含む、
    並びに
    Ｂ）（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列ＨＴＹＭＨを含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７７のアミノ酸配列ＲＩＤＰＸＮＨＮＴＫＦＤＰＫＦＱＧを含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）ＸがＤ又はＥである、配列番号７８のアミノ酸配列ＧＶＦＧＦＦＸＨを含むＣＤＲ－Ｈ３を含む、ＶＨドメイン；及び
    （ｄ）Ｘ１がＦ又はＴであり、Ｘ２がＲ又はＬである、配列番号７９のアミノ酸配列ＫＡＸ１ＥＤＩＹＮＲＸ２Ａを含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号８０のアミノ酸配列ＧＡＴＳＬＥＨを含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）ＸがＷ又はＲである、配列番号８１のアミノ酸配列ＱＱＦＸＳＡＰＹＴを含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、ＶＬドメイン
    を含む、（単離された）抗体。
  20. ヒトＣＣＬ２に（特異的に）結合する（単離された）抗体であって、
    前記抗体が、
    Ａ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    並びに
    Ｂ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｃ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    並びに
    Ｄ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号７５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｅ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    並びに
    Ｆ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    又は
    Ｇ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、
    並びに
    Ｈ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び
    配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；
    を含む、（単離された）抗体。
  21. 請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体をコードする、単離された核酸。
  22. 請求項２１に記載の核酸を含む、宿主細胞。
  23. 抗体を産生する方法であって、前記抗体が産生されるように、請求項２２に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
  24. 前記抗体を前記宿主細胞から回収することをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
  25. 請求項１～１８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む、医薬製剤。
  26. 医薬として使用するための、請求項１～１８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  27. がんの処置における使用のための、請求項１～１８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  28. 炎症性疾患又は自己免疫疾患の処置における使用のための、請求項１～１８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
  29. 医薬の製造における、請求項１～１８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体の使用。
  30. 前記医薬が、がんの処置用である、請求項２９に記載の使用。
  31. 前記医薬が、炎症性疾患又は自己免疫疾患の処置用である、請求項２９に記載の使用。
  32. がんを有する個体を処置するための医薬であって、有効量の請求項１～１８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体を含む、医薬。
  33. 炎症性疾患又は自己免疫疾患を有する個体を処置するための医薬であって、有効量の請求項１～１８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体を含む、医薬。
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