CN1327476A - 含有多取代的蛋白酶变体和淀粉酶变体的清洗组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含蛋白酶变体的清洗组合物。一种清洗组合物包含一种蛋白酶变体,和一种或多种清洗辅助物质,所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位的氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基,同时结合在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基;其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置处的氨基酸残基的取代时,还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代。另一种清洗组合物包含一种蛋白酶变体,一种淀粉酶变体和一种或多种清洗辅助物质,所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位中的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基。还提供了使用清洗组合物的方法。

Description

含有多取代的蛋白酶变体和淀粉酶变体的清洗组合物
发明领域
本发明涉及包含一种或多种蛋白酶和一种或多种淀粉酶的清洗组合物,其中所述蛋白酶是多取代的蛋白酶变体,所述淀粉酶是淀粉酶变体。更具体地,本发明涉及包含一种或多种多取代的蛋白酶变体和一种或多种淀粉酶变体的洗衣洗涤剂组合物、洗餐具洗涤剂组合物、硬表面清洗组合物和个人清洗组合物。
发明背景
长期在洗衣洗涤剂中使用各种类型的酶,以助于从织物上去除某些污渍。每种类型的酶(淀粉酶、蛋白酶等)一般催化不同的化学反应。例如,已知蛋白酶具有水解(将化合物分解成两种或多种更简单的化合物)其他蛋白质的能力。通过将天然产生的或工程蛋白酶加入洗衣洗涤剂组合物中已利用了它们的这种能力。
最近几年,还研究了酶在自动洗餐具组合物中的应用。遗憾地是,许多酶,例如许多常规蛋白酶,不能很好地转移到洗涤环境中。具体说,要求热稳定性、pH稳定性、氧化稳定性和基质特异性最好以保证满意的性能。
Estell等的美国专利RE34606公开了在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素中的酪氨酸-1、天冬氨酸+32、天冬酰胺+155、酪氨酸+104、蛋氨酸+222、甘氨酸+166、组氨酸+64、甘氨酸+169、苯基丙氨酸+189、丝氨酸+33、丝氨酸+221、酪氨酸+217、谷氨酸+156和丙氨酸+152位置的枯草溶菌素氨基酸残基的修饰。
美国专利5182204公开了对淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素中的+224氨基酸残基和对其他枯草溶菌素中的等同位置的修饰,这种修饰可以借助于取代、插入或缺失改进并且可以结合美国专利RE34606中确定的残基的修饰,以形成有用的枯草溶菌素突变体或变体。美国专利5182204还公开了对枯草溶菌素中的许多氨基酸残基的修饰,具体包括+99、+101、+103、+107、+126、+128、+135、+197和+204。
Baeck等的美国专利5679630公开了包含蛋白酶变体和一种或多种清洗组合物材料的清洗组合物,所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的76位置处,同时结合99,101,103,104,107,123,27,105,109,126,128,135,156,166,195,197,204,206,210,216,217,218,222,260,265和/或274位中的一个或多个位置处用其他氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基。
除了蛋白酶外,已使用淀粉酶用于各种不同的目的,其中最重要的是淀粉液化、织物退浆、纸和纸浆工业的淀粉改性和用于酿造和烘烤。成为日益重要的淀粉酶的另外用途是在洗涤织物、硬表面和/或餐具过程中,对含淀粉的污垢和污渍的去除。
1994年8月18日公布的WO94/18314(Genencor)、1994年2月3日公布的WO94/02596(Novo)和1995年4月20日公布的WO95/10603(Novo)描述了掺入突变体淀粉酶的清洗组合物。
用于清洗组合物中已知的其他淀粉酶包括α-和β-淀粉酶。α-淀粉酶是现有技术已知的并包括在美国专利5003257;EP252666;WO91/00353;FR2676456;EP285123;EP525610;EP368341;和英国专利说明书1296839(Novo)中公开的那些。
1995年10月5日公布的WO95/26397(Novo)公开了一种α-淀粉酶,其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下,比活度比Termamyl的比活度高至少25%。
1998年2月12日公布的WO98/05748(P&G)公开了用于洗涤剂组合物中的在WO95/26397中描述的α-淀粉酶的变体。
1998年7月16日公布的WO98/30669(Henkel)公开了含有蛋白酶和淀粉酶的洗涤剂组合物,其中蛋白酶是一种蛋白酶突变体,其中在野生型蛋白酶的211位置(BLAP编号方法)处存在的氨基酸亮氨酸被天冬氨酸或谷氨酸交换;淀粉酶是一种淀粉酶突变体,其中在野生型淀粉酶中存在的至少一个蛋氨酸、色氨酸、半胱氨酸或酪氨酸被除去或被具体不是半胱氨酸或蛋氨酸的另一种氨基酸交换。适用于WO98/30669的组合物中的淀粉酶突变体的实例公开在WO94/02597(Novo)、WO95/10603(Novo)和WO94/18314(Genencor)中并且可按Duramyl(Novo)和Purafect OxAm(Genencor)商购。
然而,仍存在消费者对清洗组合物的需求,这种清洗组合物比含常规酶的清洗组合物能提供从底物上更强和/或改善的对污垢和/或污渍的清洗(去除和/或减少)。
本发明已发现新蛋白酶和淀粉酶的组合比含常规酶清洗组合物和/或含本发明新蛋白酶而不存在本发明淀粉酶的清洗组合物提供了增强和/或改善的去污垢和/或污渍效果,其中所述新蛋白酶是多取代的蛋白酶变体,所述淀粉酶是淀粉酶变体。
另外,令人吃惊地发现包含本发明新蛋白酶和本发明淀粉酶的新组合的清洗组合物提供了比包含本发明新蛋白酶或本发明淀粉酶中的一种或另一种,但不是这两种的清洗组合物提供的累积清洗效果更优异的清洗效果。
因此,本发明的目的是提供清洗组合物,特别是洗衣洗涤剂组合物和/或洗餐具洗涤剂组合物,其具有改善的去污垢和/或污渍效果和/或清洁织物效果。
另外,本申请中要求保护的特定组合未在任何这些现有技术参考文献中被确认。
发明概述
本发明满足了上述需求,在于令人吃惊地发现本发明多取代的蛋白酶变体当与本发明淀粉酶变体组合用于清洗组合物中时比含常规酶的清洗组合物提供了改善和增强的清洗能力,包括,但不限于去除和/或减少污渍和/或污垢和/或保持白度和/或使污秽清洁和/或去除和/或减少污斑和/或膜。
本发明多取代的蛋白酶变体和淀粉酶变体适用于高和低密度颗粒、重垢和轻垢型液体、片以及合成洗涤剂条组合物和其他清洗组合物。
本发明的一方面,清洗组合物包含:
(a)蛋白酶变体,优选有效量的蛋白酶变体,按该清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位的氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基,同时结合在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基;其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置处的氨基酸残基的取代时,还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代;
(b)淀粉酶变体,优选有效量的淀粉酶变体,按该清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体选自:
(i)α-淀粉酶,特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性实验测定,其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下,比活度比Termamyl的比活度高至少25%;和/或
(ii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iv)根据(i)的α-淀粉酶,其包含以下N-端氨基酸序列:His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或与N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(v)根据(i-iv)的α-淀粉酶,其中该α-淀粉酶可由嗜碱的芽孢杆菌种得到,和/或
(vi)根据(v)的α-淀粉酶,其中该淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到,和/或
(vii)α-淀粉酶,其与具有分别对应于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出阳性免疫交叉反应活性,和/或
(viii)母体α-淀粉酶变体,其中母体α-淀粉酶(1)具有分别在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一种氨基酸序列,或(2)表现出与一个或多个所述的氨基酸序列至少80%同源,和/或与具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出免疫交叉反应活性,和/或由一种DNA序列编码,该DNA序列与编码具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探针杂交,该变体中:(A)所述母体α-淀粉酶中缺失至少一个氨基酸残基;和/或(B)所述母体α-淀粉酶的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基代替;和/或(C)相对所述的母体α-淀粉酶,插入至少一个氨基酸残基;所述变体具有α-淀粉酶活性并相对所述母体α-淀粉酶表现出至少一种以下性质:提高了热稳定性、提高了抗氧化的稳定性;降低了对Ca离子的依赖性;在中性至相对高pH值下提高了稳定性和/或α-淀粉分解活性;在相对高温下提高了α-淀粉分解活性;和提高或降低了等电点(pI),以便使α-淀粉酶变体的pI值更好地与介质的pH匹配;和
(c)一种或多种清洗辅助材料。
本发明另一方面,提供了一种织物清洗组合物,其包含:
(a)蛋白酶变体,优选有效量的蛋白酶变体,按该织物清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体如上文所述;
(b)淀粉酶变体,优选有效量的淀粉酶变体,按该清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体如上文所述;
(c)按织物清洗组合物重量计至少约5%的表面活性剂;和
(d)按织物清洗组合物重量计至少约5%的助洗剂。
本发明还一方面,提供了一种清洗需要被清洁的织物的方法,包括将织物与本发明的织物清洗组合物接触。
本发明还一个方面,提供了一种洗餐具组合物,其包含:
(a)蛋白酶变体,优选有效量的蛋白酶变体,按该洗餐具组合物的重量计更优选约0.0001%-10%蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体如上文所述;
(b)淀粉酶变体,优选有效量的淀粉酶变体,按该清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体如上文所述;和
(c)约0.1%-10%重量表面活性剂。
本发明还一个方面,提供了一种清洗需要被清洁的餐具的方法,其包括将餐具与本发明洗餐具组合物接触。
本发明还一个方面,提供了一种个人清洗组合物,其包含:
(a)蛋白酶变体,优选有效量的蛋白酶变体,按该个人清洗组合物的重量计更优选约0.001%-5%蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体如上文所述;
(b)淀粉酶变体,优选有效量的淀粉酶变体,按该清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体如上文所述;和
(c)按个人清洗组合物的重量计,约0.1%-95%表面活性剂体系;和
(d)任选地,按个人清洗组合物的重量计,约0.05%-50%酶稳定剂。
本发明还一个方面,提供了一种个人清洗需要被清洁的人体或低级动物体部分的方法,包括将所述部分与本发明个人清洗组合物接触。
本发明还一个方面,提供了一种清洗组合物,其包含:
(a)蛋白酶变体,优选有效量的蛋白酶变体,按该清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置处的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基;
(b)淀粉酶变体,优选有效量的淀粉酶变体,按该清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体选自:
(i)α-淀粉酶,特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性实验测定,其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下,比活度比Termamyl的比活度高至少25%;和/或
(ii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iv)根据(i)的α-淀粉酶,其包含以下N-端氨基酸序列:His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或与N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(v)根据(i-iv)的α-淀粉酶,其中该α-淀粉酶可由嗜碱的芽孢杆菌种得到,和/或
(vi)根据(v)的α-淀粉酶,其中该淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到,和/或
(vii)α-淀粉酶,其与具有分别对应于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出阳性免疫交叉反应活性,和/或
(viii)母体α-淀粉酶变体,其中母体α-淀粉酶(1)具有分别在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一种氨基酸序列,或(2)表现出与一个或多个所述的氨基酸序列至少80%同源,和/或与具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出免疫交叉反应活性,和/或由一种DNA序列编码,该DNA序列与编码具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探针杂交,该变体中:(A)所述母体α-淀粉酶中缺失至少一个氨基酸残基;和/或(B)所述母体α-淀粉酶的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基代替;和/或(C)相对所述的母体α-淀粉酶,插入至少一个氨基酸残基;所述变体具有α-淀粉酶活性并相对所述母体α-淀粉酶表现出至少一种以下性质:提高了热稳定性、提高了抗氧化的稳定性;降低了对Ca离子的依赖性;在中性至相对高pH值下提高了稳定性和/或α-淀粉分解活性;在相对高温下提高了α-淀粉分解活性;和提高或降低了等电点(pI),以便使α-淀粉酶变体的pI值更好地与介质的pH匹配;和
(c)一种或多种清洗辅助材料。
本发明还一个方面,提供了一种织物清洗组合物,其包含:
(a)蛋白酶变体,优选有效量的蛋白酶变体,按该织物清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置处的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基;
(b)淀粉酶变体,优选有效量的淀粉酶变体,按该清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体如上文所述;
(c)按该织物清洗组合物的重量计,至少约5%表面活性剂;和
(d)按该织物清洗组合物的重量计,至少约5%助洗剂。
本发明还一个方面,提供了一种清洗需要被清洁的织物的方法,其包括将织物与本发明织物清洗组合物接触。
本发明还一个方面,提供了一种洗餐具组合物,其包含:
(a)蛋白酶变体,优选有效量的蛋白酶变体,按该织物清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置处的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基;
(b)淀粉酶变体,优选有效量的淀粉酶变体,按该清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体如上文所述;和
(c)按该洗餐具组合物的重量计,约0.1%-10%表面活性剂。
本发明还一个方面,提供了一种清洗需要被清洁的餐具的方法,其包括将餐具与本发明洗餐具组合物接触。
本发明还一个方面,提供了一种个人清洗组合物,其包含:
(a)蛋白酶变体,优选有效量的蛋白酶变体,按该个人清洗组合物的重量计更优选约0.001%-5%蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置处的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基;
(b)淀粉酶变体,优选有效量的淀粉酶变体,按该清洗组合物的重量计更优选约0.0001%-10%淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体如上文所述;和
(c)按该个人清洗组合物的重量计,约0.1%-95%表面活性剂体系;和
(d)任选地,按该个人清洗组合物的重量计,约0.05%-50%酶稳定剂。
本发明还一个方面,提供了一种个人清洗需要被清洁的人体或低级动物体部分的方法,包括将所述部分与本发明个人清洗组合物接触。
因此,本发明的目的是提供含有蛋白酶变体和淀粉酶变体的组合的清洗组合物,其能够改善和增强对织物、器皿、餐具、厨具、炊具和其他硬表面载污体的清洗。本发明还一个目的是通过使用本发明含蛋白酶变体/淀粉酶变体的清洗组合物来提供清洗织物、器皿、餐具、厨具、炊具和其他硬表面载污体的方法。
由以下的详细描述、实施例和所附的权利要求书,本发明的这些和其他目的、特征和优点将是显然的。
除非另外说明,本发明的所有百分数、比例和比率是按重量计。本文引用的所有文献在此引用作参考。
附图简述
图1A-C描述了淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的DNA和氨基酸序列和该基因的部分限制图。
图2描述了得自淀粉分解芽孢杆菌(BPN’)和缓慢芽孢杆菌(野生型)的枯草溶菌素中的保守氨基酸残基。
图3A和3B描述了四种枯草溶菌素的氨基酸序列。上部的线表示得自淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素(有时还称为枯草溶菌素BPN’)的枯草溶菌素的氨基酸序列。第二条线描述了得自枯草芽孢杆菌的枯草溶菌素的氨基酸序列。第三条线描述了得自地衣形芽孢杆菌的枯草溶菌素的氨基酸序列。第四条线描述了得自缓慢芽孢杆菌的枯草溶菌素(在PCT WO89/06276中还称为枯草溶菌素309)的枯草溶菌素的氨基酸序列。符号*表示与枯草溶菌素BPN相比,不存在特定的氨基酸残基。
发明详述
1.蛋白酶-蛋白酶是通常起到使蛋白质或肽的肽键断开作用的羰基水解酶。这里所述的“蛋白酶”意思是天然产生的蛋白酶或重组蛋白酶。天然产生的蛋白酶包括α-氨基酰基肽水解酶、肽基氨基酸水解酶、酰基氨基水解酶、丝氨酸羧基肽酶、金属羧基肽酶、硫醇蛋白酶、羧基蛋白酶和金属蛋白酶。包括丝氨酸、金属、硫醇和酸蛋白酶以及内切和外切蛋白酶。
本发明包括蛋白酶,其是非天然产生的羰基水解酶变体(蛋白酶变体),其与产生该变体的氨基酸序列的前体羰基水解酶相比具有不同的蛋白水解活性、稳定性、基质特异性、pH范围和/或性能特征。具体而言,这种蛋白酶变体具有在自然界中未发现的氨基酸序列,其由用不同的氨基酸取代前体蛋白酶的多个氨基酸残基得到。该前体蛋白酶可以是天然产生的蛋白酶或重组蛋白酶。如先前所述,蛋白酶变体被设计成具有似胰蛋白酶的特异性并优选还是漂白稳定的。
本发明有用的蛋白酶变体包括任何十九个天然产生的L-氨基酸在指定氨基酸残基位置处的取代。这种取代可在任何前体枯草溶菌素(原核生物、真核生物、哺乳动物等)中进行。本申请中,通过普通的1和3个字母编码的方式来参考各种氨基酸。这种编码确定在Dale,M.W.(1989),细菌的分子遗传,John Wiley&Sons,Ltd.,附录B中。
本发明有用的蛋白酶变体优选得自枯草芽孢杆菌。更优选,该蛋白酶变体得自缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素和/或枯草溶菌素309。
羰基水解酶-羰基水解酶是水解含:键的化合物的蛋白酶,其中X是氧或氮。它们包括天然产生的羰基水解酶和重组羰基水解酶。天然产生的羰基水解酶主要包括水解酶例如肽水解酶例如枯草溶菌素或金属蛋白酶。肽水解酶包括α-氨基酰基肽水解酶、肽基氨基酸水解酶、酰基氨基水解酶、丝氨酸羧基肽酶、金属羧基肽酶、硫醇蛋白酶、羧基蛋白酶和金属蛋白酶。包括丝氨酸、金属、硫醇和酸蛋白酶以及内切和外切蛋白酶。
枯草溶菌素-枯草溶菌素是细菌或真菌蛋白酶,其一般起到使蛋白质或肽的肽键断开的作用。这里所述的“枯草溶菌素”意思是天然产生的枯草溶菌素或重组枯草溶菌素。一组天然产生的枯草溶菌素已知是可生产的并通常由各种微生物物种分泌。该组中的枯草溶菌素的氨基酸序列不完全是同源的。然而,该组中的枯草溶菌素表现出相同或相似类型的蛋白水解活性。此类丝氨酸蛋白酶具有定义催化三分体的普通氨基酸序列,它们不同于胰凝乳蛋白酶相关类型的丝氨酸蛋白酶。该枯草溶菌素和胰凝乳蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶都具有催化三分体,包括天冬氨酸、组氨酸和丝氨酸。在枯草溶菌素相关的蛋白酶中,这些氨基酸的相对顺序,从与端羧基相连的氨基读起,是天冬氨酸-组氨酸-丝氨酸。然而,在胰凝乳蛋白酶相关的蛋白酶中,相对的顺序是组氨酸-天冬氨酸-丝氨酸。因此,本发明的枯草溶菌素是指具有枯草溶菌素相关的蛋白酶的催化三分体的丝氨酸蛋白酶。实例包括,但不限于:在本文的图3中确定的枯草溶菌素。一般,对于本发明目的,蛋白酶的氨基酸编号对应于在图1中所示的成熟的淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素序列给定的编号。
蛋白酶变体-“蛋白酶变体”具有从“前体蛋白酶”的氨基酸序列衍生得到的氨基酸序列。前体蛋白酶包括天然产生的蛋白酶和重组蛋白酶。蛋白酶变体的氨基酸序列是通过前体氨基酸序列中的一个或多个氨基酸的取代、缺失或插入而由前体蛋白酶氨基酸序列“衍生”得到。这种修饰是对“前体DNA序列”的修饰,其编码了前体蛋白酶的氨基酸序列,而不是前体蛋白酶本身的操作。这种操作前体DNA序列的适合方法包括本文中公开的方法以及本领域技术人员公知的方法(参见,例如EP0328299,WO89/06279和本文已参考的美国专利和申请)。
在优选的实施方案中,该蛋白酶变体是本发明清洗组合物中有用的蛋白酶,所述清洗组合物包含下述的蛋白酶变体和一种或多种清洗辅助材料,所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位的氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基,同时结合在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置处中的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基;其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置处的氨基酸残基的取代时,还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置处的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代。
虽然可使用以上所列的氨基酸取代的任何组合,但本发明适用的优选的蛋白酶变体包括按下列组合方式的取代、缺失或插入氨基酸残基:
(1)一种蛋白酶变体,其包括在103位置和在以下236和245位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(2)一种蛋白酶变体,其包括在103和236位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、230、232、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(3)一种蛋白酶变体,其包括在103和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、、170、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、222、230、232、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;和
(4)一种蛋白酶变体,其包括在103、236和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、230、232、243、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代。
本发明清洗组合物中有用的更优选的蛋白酶变体包括选自以下的一组取代(下表I中每行一组取代):
                         表I
 76  98  103  104
 76  78  103  104
 76  103  104  107
 4  76  103  104
 76  103  104  246
 76  77  103  104
 76  103  104  183  218
 16  76  103  104  248
 1  76  103  104
 76  103  104  261
 76  103  104  160
 76  103  104  216
 17  76  103  104
 37  76  103  104
 76  77  103  104  174
 38  76  103  104
 38  76  103  104  237
 8  76  103  104
 76  103  104  183
 19  76  103  104
 13  76  103  104
 19  76  103  104
 76  103  104  194
 76  103  104  252
 76  103  104  259
 76  103  104  251
 76  86  103  104
 72  76  103  104  185
 76  103  104  237  274
 76  103  104  160
 76  103  104  228
 55  76  103  104  240
 76  103  104  254
 76  103  104  204
 76  103  104  204
 43  76  103  104
 76  103  104  159
 10  76  103  104  177
 58  76  103  104
 76  103  104  270
 76  103  104  185
 27  76  103  104
 76  103  104  262
 76  78  103  104
 24  76  103  104
 76  103  104  166  236  251
 17  76  103  104  237
 76  103  104  130
 76  103  104  109
 76  99  103  104  204
 76  103  104  181
 12  76  103  104
 76  103  104  212  271
 76  103  104  252  261
 76  103  104  242
 76  103  104  271
 12  76  103  104  242
 43  76  103  104  116  183
 76  103  104  258
 76  103  104  271
 61  76  103  104
 38  76  103  104  182  263
 76  103  104  182  272
 76  103  104  109  246
 76  87  103  104  206  249  265
 76  103  104  137  238  271
 103  104  228
 76  103  104  182  198
 21  76  103  104  182
 76  103  104  119  137
 76  103  104  137  248
 13  76  103  104  206
 76  103  104  206
 76  103  104  212  258
 58  76  103  104  271
 76  103  104  206  261
 4  76  103  104  206
 76  77  103  104  206
 76  103  104  158
 76  103  104  206
 4  76  103  104  159  217  251
 4  76  103  104  159  217  252
 76  77  103  104  133  185  251
 76  103  104  159  206  244
 4  76  103  104  188
 4  76  103  104  158
 76  77  103  104  185
 76  103  104  206  251
 48  76  103  104  111  159
 68  76  103  104  159  236
 42  76  103  104  159
 12  62  76  103  104  159
 42  76  103  104  159
 76  103  104  146  159
 76  103  104  159  238
 76  103  104  159  224
 76  103  104  212  268  271
 76  89  103  104
 76  87  103  104  212  271
 76  103  104  212  245  271
 76  103  104  134  141  212  271
 76  103  104  212  236  243  271
 76  103  104  109  245
 76  103  104  109  210
 20  62  76  103  104
 68  76  103  104  236
 68  76  103  104  159  236  271
 68  76  103  104  159  236  245
 68  76  103  104  159  217  236  271
 17  68  76  103  104
 68  76  103  104
 68  76  103  104  159  236
 68  75  76  103  104  159  236
 68  76  76  103  114  121  159  236  245
 12  68  76  103  104  159  236
 68  76  103  104  159  209  236  253
 68  76  103  104  117  159  184  236
 68  76  103  104  159  236  243
 68  76  103  104  159  236  245
 68  76  103  104  142  159
 68  76  103  104  123  159  236  249
 68  76  103  104  159  236  249
 76  103  104  222  245
 12  76  103  104  222  249
 76  103  104  173  222
 76  103  104  222  263
 21  76  103  104  222  237  263
 76  103  104  109  222
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 101  103  104  130  159  232  236  245  248  252
 101  103  104  128  159  232  236  245  248  252
 62  101  103  104  159  213  232  236  245  248  252
 62  103  104  128  159  213  232  236  245  248  252
 62  103  104  128  159  213  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  232  236  245  248  252  260
 101  103  104  131  159  232  236  245  248  252
 98  101  103  104  159  232  236  245  248  252
 99  101  103  104  159  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 76  103  104  167  170  194
 101  103  104  159  209  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  210  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  205  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  230  236  245
 101  103  104  159  194  232  236  245  248  252
 76  101  103  104  159  194  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  230  232  236  245  248  252
 62  103  104  159  185  206  213  232  236  245  248  252     271
本发明清洗组合物中有用的甚至更优选的蛋白酶变体包括选自以下的一组取代(下表II中每行一组取代):
                        表II
N76D A98E S103A V104I
N76D S78T S103A V104I
N76D S103A V104I I107V
V4E N76D S103A V104I
N76D S103A V104I I246V
N76D N77D S103A V104I
N76D S103A V104I N183D N218I
A16T N76D S103A V104I N248D
A1E N76D S103A V104I
N76D S103A V104I N261D
N76D S103A V104I S160T
N76D S103A V104I S216C
H17Q N76D S103A V104I
S37T N76D S103A V104I
N76D N77D S103A V104I A174V
T38S N76D S103A V104I
T38S N76D S103A V104I K237Q
18V N76D S103A V104I
N76D S103A V104I N183D
R19L N76D S103A V104I
A13V N76D S103A V104I
R19C N76D S103A V104I
N76D S103A V104I N184D
N76D S103A V104I N252D
N76D S103A V104I S259C
N76D S103A V104I K251T
1N76D P86S S103A V104I
172V N76D S103A V104I N185D
N76D S103A V104I K237E T274A
N76D S103A V104I S160L
N76D S103A V104I A228V
P55S N76D S103A V104I S240T
N76D S103A V104I A254T
N76D S103A I104N N204T
N76D S103A V104I N204D
N43S N76D S103A V104I
N76D S103A V104I G159D
R10H N76D S103A V104I V177A
T58S N76D S103A V104I
N76D S103A V104I A270V
N76D S103A V104I N185D
K27N N76D S103A V104I
N76D S103A V104I L262M
N76D S78P S103A V104I
S24P N76D S103A V104I
N76D S103A V104I S166G Q236R K251R
H17L N76D S103A V104I K237E
N76D S103A V104I S130L
N76D S103A V104I Q109R
N76D S99R S103A V104I N204T
N76D S103A V104I D181N
Q12R N76D S103A V104I
N76D S103A V104I S212P E271V
N76D S103A V104I N252K N261Y
N76D S103A V104I S242T
N76D S103A V104I E271Q
Q12R N76D S103A V104I S242T
N43S N76D S103A V104I N116K N183I
N76D S103A V104I G258R
N76D S103A V104I E271G
G61R N76D S103A V104I
T38S N76D S103A V104I Q182R Y263H
N76D S103A V104I Q182R A272S
N76D S103A V104I Q109R 1246V
N76D S87G S103A V104I Q206R H249Q S265G
N76D S103A V104I Q137R N238Y E271V
S103A V104I A228T
N76D S103A V104I Q182R I198V
L21M N76D S103A V104I Q182R
N76D S103A V104I M119I Q137R
N76D S103A V104I Q137R N248S
A13T N76D S103A V104I Q206R
N76D S103A V104I Q206R
N76D S103A V104I S212P G258R
T58S N76D S103A V104I E271G
N76D S103A V104I Q206E N261D
V4E N76D S103A V104I Q206E
N76D N77D S103A V104I Q206E
N76D S103A V104I A158E
N76D S103A V104I Q206E
V4E N76D S103A V104I G159D L217E K251Q
V4E N76D S103A V104I G159D L217E N252D
N76D N77D S103A V104I A133T N185D 1251T
N76D S103A V104I G159D Q206E V244A
V4E N76D S103A V104I S188E
V4E N76D S103A V104I A158E
N76D N77D S103A V104I N185D
N76D S103A V104I Q206E K251T
A48T N76D S103A V104I L111M G159D
V68A N76D S103A V104I G159D Q236H
LA2V N76D S103A V104I G159D
Q12H N62H N76D S103A V104I G159D
L42I N76D S103A V104I G159D
N76D S103A V104I G146S G159D
N76D S103A V104I G159D N238S
N76D S103A V104I G159D T224A
N76D S103A V104I S212P V268F E271V
N76D E89A S103A V104I
N76D S87R S103A V104I S212P E271V
N76D S103A V104I S212P O245L E271V
N76D S103A V104I T134S S141N S212P E271V
N76D S103A V104I S212P Q236L N243S E271V
N76D S103A V104I Q109R Q245R
N76D S103A V104I Q109R P210L
G20V N62S N76D S103A V104I
V68A N76D S103A V104I Q236H
V68A N76D S103A V104I G159D Q236H E271V
V68A N76D S103A V104I G159D Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D L217I Q236H E271V
H17Q V68A N76D S103A V104I
V68A N76D S103A V104I
V68A N76D S103A V104I G159D Q236R
V68A L75R N76D S103A V104I G159D O236H
V68A N76D N76D S103A A114V V121I G159D Q236H Q245R
O12R V68A N76D S103A V104I G159D Q236H
V68A N76D S103A V104I G159D Y209S Q236H T253I
V68A N76D S103A V104I N117K G159D N184S Q236H
V68A N76D S103A V104I G159D Q236H N243I
V68A N76D S103A V104I G159D Q236H Q245L
V68A N76D S103A V104I A142V G159D
V68A N76D S103A V104I N123S G159D Q236H H249Y
V63A N76D S103A V104I G159D Q236H H249Q
N76D S103A V104I M222S Q245R
Q12R N76D S103A V104I M222S H249R
N76D  S103A V104I N173R M222S
N76D S103A V104I M222S Y263F
L21M N76D S103A V104I M222S K237R Y263F
N76D S103A V104I Q109R M222S
N76D S103A V104I Q109R M222S E271D
G61R N76D S103A V104I M222S
N76D S103A V104I Q137R M222S
N76D S103A V104I Q109R M222S N248S
N76D S103A V104I M222S H249R
V68A N76D S103A V104I G159D Q236H Q245R N261D
V68A N76D S103A V104I S141N G159D O236H Q245R T255S
V68A N76D S103A V104I G159D Q236H Q245R R247H
V68A N76D S103A V104I G159D A174V N204D Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D N204D Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I A133V G159D N218D Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D A194I V203A Q236H Q245R
Q12R N76D S103A V104I M222S Q245R
N76D S103A V104I A232V Q245R
S24T V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G189D A232V Q236H Q245R N252K
V68A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A
Q12R N76D S103A I104T M222S V244I Q245R
Q12R N76D S103A M222S P210T Q245R
Q12R N76D S103A I104T S130T M222S Q245R
T22K V68A N76D S103A V104I
V68A N76D S103A V104I N184D
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I N140D G159D A232V Q236H Q245R N252K
N43S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K
N43K V68A S103A V104I G159D A233V Q236H Q245R
N43D V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K
V68A S87G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K R275S
Q12R N76D S103A I104T S130T M222S Q245R N248S L262M
Q12R N76D S103A 1104T S130T A215V M222S Q245R
Q12R N76D S103A I104T S130T M222S V227A Q245R L262S
Q12R N76D S103A I104T S130T A215T M222S Q245R
Q12R N76D S103A I104T S130T M222S Q245R N261D
N76D S103A I104T S130T M222S Q245R
Q12R N76D S103A I104T S130T N218D M222S Q245R L262S N269D
Q12R S57P N76D S103A I104T S130T M222S Q245R K251Q
Q12R N76D S103A I104T S130T R170S N185D M222S N243D Q245R
Q12R N76D S103A I104T S130T M222S Q245R V268A
Q12R N76D S103A I104T S130T M222S P210S Q245R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V
V68A S103A V104I N116D G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D
R10C V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D V203E A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H K237E Q245R
V68A N76D I179N S103A V104I G159D A332V Q236H Q245R
V68A S103A V104I Q159D N183D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A174V Q206L A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D S188C A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A230T A232V Q236H Q245R
V68A A98T S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A215T A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248S
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D P210R A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V
N76D S103A V104I A232V Q236H Q245R L237V
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V R275H
N76D S103A V104I L257V R275H
V68A S103A V104I G159D T224A A232V Q236H Q245R L257V
N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V
V68A N76D S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D G211R A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D G211V A232V Q236H Q245R
Q12R V68A N76D S103A V104I G159D Y214L A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R
Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
G20R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S259G
V68A S87R N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R T260V
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N261G
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N261W
N76D S103A V104I A232V Q236H S242P Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D P210L A232V Q236H Q245R
Q12R A48V V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
N76D S103A V104I A232V Q236H Q245R
N76D S103A V104I G159D Y192F A232V Q236H Q245R
N76D S103A V104I V147I G159D A232V Q236H Q245R N248S K251R
Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R A272S
V68A N76D S103A V104I Q159D N183K Q206L A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S256R
V68A N76D S103A V104I G159D Q206R A232V Q236H Q245R
K27R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I N116T G159D R170S N185S A232V Q236H Q245R
G61E V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
N43D V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S212P A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I S99N G159D N184D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I Q159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I Q109R G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
G20R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252I
V68A S103A V104I G159D Y209F A232V Q236H Q245R N248D N252H
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K N261D
V62A S103A V104I G159D N185D A232V Q236H Q245R N248D N232K
V68A S103A V104I G159D P210R A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D P210T A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D P210S A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D N185D P210L A232V Q236H Q245R N248D  N252K
V68A S103A V104I G159D P210L A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S212A A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S212E A232V Q236H Q245R N248D N252K
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V68A S103A V104I T213S A212V O236H Q245R N248D N252K
V68A A103V V104I G159D T213E A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D T213G A232V G236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A215V A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S216T A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S216V A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S216C A232V Q236H Q245R N248D N252K
G20A V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D N173D A232V Q276H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D K251V N252K
V68A S103A V104I G159D Q206R A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252F
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252L
P55S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252P
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N242D N252K T255V
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256N
V68A S103A V104I G159D A332V Q236H Q245R N248D N252K S256E
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N242D N252K L257R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K G258D
18V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K N269D
V68A S103A V104I N116S G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260E
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K N261R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K N261D
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A232S Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236R Q245R N248D N252K
N18S V68A S103A V10AI G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245V N242D N252I
V68A N76D S101T S103A V104I G159D T213R N218S A232V Q236H Q245R T260A
V68A S103A V104I G159D A228V A232V Q236H Q245R N248D N252K
T33S V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A N76D E89D S103A V104I G159D P210L T213R A232V Q236H Q245R T260A
G61E V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D V205I P210I A232V Q236H Q245R
G61E V68A S103A V104I S130A G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
G61E V68A S103A V104I A133S Q137R G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
G61E S103A V104I A133V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248G N252K
V68A S103A V104I G159D N218S A232V Q236H Q245R N248D N252K
G61E V68A S103A V104I G159D S160V A232V Q236H Q245R N248D N252K
S3L G61E V68A N76D S103A V104I A232V Q236H Q245R N248D N252K
G61E V68A S103A V104I G159D S167F A232V Q236H Q245R N248D N252K
G97E S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
A98D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252I
S99E S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101E S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
G102A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I S106E G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A  V104I Q109E G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G129D A232V Q236H Q245R N248D N252K N261R
S103A V104I O109R G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D N184D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D S166D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D L317E A232V Q236H Q245R N248D N252K
Q20R N62D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D Q206R L217E A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I G159D Q206R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I S130G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
K27N S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
T38G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
T38A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H A245R T260A
V68A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A E271G
V68A N76D S103A V104I G159D Y209W T213R A232V Q236H Q245R T260A
V68A N76D S103A V104I G159D P210I T213R A232V Q236H Q245R T260A
V68A N76D S103A V104I G159D V205I T213R A232V Q236H Q245R T26QA
V68A N76D S103A V104I G159D P210I A232V Q236H Q245R T260A
V68A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A
N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A
V68A S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I Q159D P210I A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A230V A232V Q236H Q245R
V68A S03A V104I G159D L126F A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D V205I A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D P210L A232V Q236H Q245R
S103A V104I G159D A230V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R T260A
S103A V1O4I O159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A174V A232V Q236H Q215R L257V
V68A S103A V104I G159D A194S A232V Q236H Q245R L257V
V68A S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R L257V
S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V
V68A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A N261W
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V N261W
S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A
S103A V104I G159D P210I A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R L257V
V68A N76D S103A V104I G159D P210L T213R A232V Q236H Q245R T260A
Q12R S103A V104I G159D Y209W T213R A232V Q236H Q245R T260A
S103A V104I Y209W A232V Q236H Q245R L257V
S103A V104I G159D V205I P210I T213R A232V Q236H Q245R T260A
S103A V104I G159D V205I Y209W A232V Q236H Q245R T260A
V68A S103A V104I G159D V205I Y209W P210I A232V O236H Q245R
S103A V104I G159D V205I Y209W P210I A232V Q236H O245R L257V
S103A V104I G159D V205I Y209W A232V O236H O245R L257V
V68A S103A V104I G159D V205I Y209W P210I A232V Q236H Q245R T260A
S103A V104I G159D V205I Y209W P210I A232V Q236H Q245R
S103A V104I G159D Y209W P210I A232V Q236H Q245R
S103A V104I G159D V205I P210I A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I S128L G159D A232V Q236H Q245R
A48V S103A V104I G159D A230V Q236H Q245R
A48V V68A S103A V104I G155D Y209W A232V Q236H Q243R
A48V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
A48V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V N261W
G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
Q12R Q102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
G102A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D N184S A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D N184G A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A232V Q236H V244T Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A232V Q236H V244A Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K  S256R
Q12R N62D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D  N252K
S101G S103A V104I G159D N185D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D Q206E A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D T213Q A232V Q236H Q245R N248D N252K
A98L G102A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G G102A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H N248D N252K
N62D S103A V104I Q109R G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I G159D S212G T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S101G S103A V104I G159D S212G T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A232V Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A230V Q245R
N62D S103A V104I S130G G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I S130G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I S128G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I S128L G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S101G S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I S128G G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I S128L G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260A
S101G S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
A98V S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S99G S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
 S101G S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D P210I A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D V205I A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D A230V Q236H Q245R
S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K
N76D S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D A230V A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I G159D N185D Q206E T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K E271Q
本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取代,其选自除了以下表III的多组取代外的表I中的多组取代:
                               表III
    76     103     104     259
    76     86     103     104
    76     103     104     130
    76     99     103     104     204
    76     103     104     242
    76     103     104     104     182     198
    21     76     103     104     182
    76     103     104     119     137
    76     103     104     173     222
    61     76     103     104     222
    68     76     103     104     116     159     170     185     232     236     245
本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取代,其选自表IV中的多组取代:
                           表IV
 76  103  104  222  245
 76  103  104  222  249
 68  103  104  159  232  236  245  252
 68  76  103  104  159  213  232  236  245     260
 22  68  76  103  104
 68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  232  236  245
 68  103  104  140  159  232  236  245  252
 43  68  103  104  159  232  236  245  252
 43  68  103  104  159  232  236  245
 12  76  103  104  130  222  245  261
 76  103  104  130  222  245
 68  103  104  159  232  236  245  257
 68  76  103  104  159  210  232  236  245
 68  103  104  159  224  232  236  245  257
 76  103  104  159  232  236  245  257
 68  76  103  104  159  211  232  236  245
 12  68  76  103  104  159  214  232  236  245
 68  76  103  104  159  215  232  236  245
 12  68  76  103  104  159  232  236  245
 20  68  76  103  104  159  232  236  245  259
 68  76  87  103  104  159  232  236  245  260
 68  76  103  104  159  232  236  245  261
 12  48  68  76  103  104  159  232  236  245
 76  103  104  159  192  232  236  245
 76  103  104  147  159  232  236  245  248  251
 12  68  76  103  104  159  232  236  245  272
 68  76  103  104  159  183  206  232  236  245
 68  76  103  104  159  232  236  245  256
 68  76  103  104  159  206  232  236  245
 27  68  76  103  104  159  232  236  245
 68  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  209  232  236  245  248  252
 68  103  104  109  159  232  236  245  248  252
 20  68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  209  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  210  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  213  232  236  245  248  252
 68  103  104  213  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  215  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  216  232  236  245  248  252
 20  68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  232  236  245  248  252  255
 68  103  104  159  232  236  245  248  252  256
 68  103  104  159  232  236  245  248  252  260
 68  103  104  159  228  232  236  245  248  252
 68  76  89  103  104  159  210  213  232  236  245  260
 68  103  104  159  218  232  236  245  248  252
本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取代,其选自表V中的多组取代:
                               表V
V68A S103A V104I G159D A228V A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D N218S A232V Q236H Q245R N248D N252K
G20R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A N76D E89D S103A V104I G159D P210L T213R A232V Q236H Q245R T260A
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T255V
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256N
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252L
V68A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N242D N252K
V68A S103A V104I G159D A215V A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S216T A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S216V A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I T213S A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D P210L A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S212C A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D Y209W A232V  Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I Q109R G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
G20R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D Y209F A232V Q236H Q245R N248D N252K
Q12R N76D S103A I104T S130T M222S Q245R N261D
N76D S103A I104T S130T M222S Q245R
N76D S103A V104I M222S H249R
N76D S103A V104I M222S Q245R
N76D S103A V104I G159D Y192F A232V Q236H Q245R
N76D S103A V104I V147I G159D A232V Q236H Q245R N248S K251R
Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R A272S
V68A N76D S103A V104I G159D N183K Q206L A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S256R
V68A N76D S103A V104I G159D Q206R A232V Q236H Q243R
K27R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
Q12R A48V V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N261W
V68A N76D S103A V104I G159D G211R A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D G211V A232V Q236H Q245R
Q12R V68A N76D S103A V104I G159D Y214L A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R
Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
G20R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S259G
V68A N76D S87R S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R T260V
N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V
V68A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A
T22K V68A N76D S103A V104I
V68A N76D S103A V104I Q159D P210R A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D S212P A232V Q236H Q245R N248D N252I
V68A S103A V104I G159D T224A A232V Q236H Q245R L257V
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N2528
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I N140D G159D A232V Q236H Q245R N252K
N43S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K
N43K V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
N43D V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V
本发明清洗组合物中有用的高度优选的蛋白酶变体包括选自以下的一组取代:12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252; 12/76/103/104/130/170/185/222/243/245;12/76/103/104/130/222/245/261;              12/76/103/104/130/222/245;12/76/103/104/222/245;61/68/103/104/159/232/236/245/248/252;      62/103/104/159/213/232/236/245/248/252;62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252; 62/103/104/159/232/236/245/248/252;62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252;62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252; 68/103/104/159/232/236/245/248/252/270;68/103/104/159/185/232/236/245/248/252;     68/103/104/159/210/232/236/245/248/252;68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252; 68/103/104/159/213/232/236/245/248/252;68/103/104/159/230/232/236/245;             68/76/103/104/159/209/932/236/245;68/103/104/232/236/245/248/257/275;         68/103/104/213/232/236/245/248/252;68/103/104/159/232/236/245/248/252;         68/103/104/159/209/232/36/245;68/76/103/104/159/236;                      68/76/103/104/159/236/245;68/76/103/104/159/232/236/245;              68/103/104/159/232/236/245/252;68/103/104/159/232/236/245;                 68/103/104/159/232/236/245/257;68/76/103/104/159/211/232/236/245;          68/76/103/104/159/215/232/236/245;68/103/104/159/210/232/236/245;             68/103/104/159/213/232/236/245/260;68/76/103/104/159/213/232/236/245/260;      68/103/104/159/236;68/76/103/104/159/210/232/236/245/260;      68/103/104/159/236/245;68/103/104/159/183/232/236/245/248/252;     68/76/103/104/159/236/245;68/103/104/232/236/245/257/275;             68/103/104/159/213/232/236/245;76/103/222/245;                             76/103/104/222/245;76/103/104/159/232/236/245;76/103/104/159/213/232/236/245/260;         76/103/104/159;76/103/104/131/159/232/236/245/248/252;     97/103/104/159/232/236/245/248/252;98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252; 98/103/104/159/232/236/245/248/252;101/103/104/159/232/236/245/248/252;        102/103/104/159/232/236/245/248/252;103/104/159/232/236/245;                    103/104/159/232/236/245/248/252;103/104/159/205/209/232/236/245/257          103/104/159/232/245/248/252;103/104/159/205/209/210/232/236/245/257;    103/104/159/213/232/236/245/248/252;103/104/159/217/232/236/245/248/252;        103/104/130/159/232/236/245/248/252;103/104/159/230/236/245;                    103/104/159/236/245;103/104/159/248/252/270;                    103/104/131/159/232/236/245/248/252;103/104/159/205/209/232/236/245;和          103/104/159/232/236/245/257.
本发明清洗组合物中有用的更高度优选的蛋白酶变体包括选自以下的一组取代:
         12R/76D/103A/104T/130T/222S/245R;
            12R/76D/103A/104I/222S/245R;12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K;
      12R/76D/103A/104T/130G/222S/245R/261D;
 12R/76D/103A/104T/130G/170S/185D/222S/243D/245R;
 61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
 62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
    62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
 68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A;
  68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
             68A/103A/104I/159D/236H;
           68A/103A/104I/159D/236H/245R;
    68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A;
  68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K;
       68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R;
     68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R;
     68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R;
     68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
            68A/76D/103A/104I/159D/236H;
          68A/76D/103A/104I/159D/236H/245R;
        68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
       68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K;
         68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
       68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V;
  68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K;
  68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K;68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K;
  68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K;
       68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R;
68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236I/245R;
68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H;
   68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H;
68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K;
68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
   68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R;
   68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R;
   68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R;
             76D/103A/222S/245R;
           76D/103A/104I/222S/245R;
      76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
             76D/103A/104I/159D;76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
  97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K;
  101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
     103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
  103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
          103A/104I/159D/230V/236H/245R;
  103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K;
            103A/104I/159D/236H/245R;
          103A/104I/159D/248D/252K/270V;
          103A/1041/159D/232V/236H/245R;
      103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R;
        103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V;
   103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V;
   103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K;103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V;和
      103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K.
本发明清洗组合物中有用的甚至更高度优选的蛋白酶变体包括选自以下的一组取代:
      12/76/103/104/130/222/245/261;
   62/103/104/159/232/236/245/248/2252;
62/103/104/159/213/232/236/245/248/252;62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252;
        68/103/104/159/232/236/245;
     68/103/104/159/230/232/236/245;
     68/103/104/159/209/232/236/245;
     68/103/104/159/232/236/245/257;
 68/76/103/104/159/213/232/236/245/260;
68/103/104/159/213/232/236/245/248/252;
 68/103/104/159/183/232/236/245/248/252;
 68/103/104/159/185/232/236/245/248/252;68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252;
 68/103/104/159/210/232/236/245/248/252;
      68/103/104/159/213/232/236/245;
   98/103/104/159/232/236/245/248/252;98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252;
   101/103/104/159/232/236/245/248/252;
   102/103/104/159/232/236/245/248/252;
          103/104/159/230/236/245;
     103/104/159/232/236/245/248/252;
   103/104/159/217/232/236/245/248/252;
   103/104/130/159/232/236/245/248/252;
   103/104/131/159/232/236/245/248/252;
103/104/159/213/232/236/245/248/252;和
          103/104/159/232/236/245.
本发明清洗组合物中有用的最高度优选的蛋白酶变体包括选自以下的一组取代:
     12R/76D/103A/104T/130T/222S/245R/261D;
 62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
    68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R;68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K;68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K;
         68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
      68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R;
      68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V;68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R/248D/252K;68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K;68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K;68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K;
      68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R;
   98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K;
  101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
         103A/104I/159D/230V/236H/245R;
     103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K;
  103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;和
          103A/104I/159D/232V/236H/245R
在另一优选的实施方案中,该蛋白酶变体是本发明清洗组合物中有用的蛋白酶,该蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置中的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基。
虽然可使用以上所列的氨基酸取代的任何组合,但本发明适用的优选的蛋白酶变体包括按下列组合方式的取代、缺失或插入氨基酸残基:
(1)一种蛋白酶变体,其包括在62位置和在以下103、104、109、159、213、232、236、245、248和252位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(2)一种蛋白酶变体,其包括在212位置和在以下12、98、102、103、104、159、232、236、245、248和252位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(3)一种蛋白酶变体,其包括在230位置和在以下68、103、104、159、232、236和245位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(4)一种蛋白酶变体,其包括在232位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(5)一种蛋白酶变体,其包括在232位置和在以下103、104、236和245位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(6)一种蛋白酶变体,其包括在232和103位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(7)一种蛋白酶变体,其包括在232和104位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(8)一种蛋白酶变体,其包括在232和236位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(9)一种蛋白酶变体,其包括在232和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、107、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(10)一种蛋白酶变体,其包括在232、103、104、236和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(11)一种蛋白酶变体,其包括在252位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(12)一种蛋白酶变体,其包括在252位置和在以下103、104、236和245位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(13)一种蛋白酶变体,其包括在252和103位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(14)一种蛋白酶变体,其包括在252和104位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(15)一种蛋白酶变体,其包括在252和236位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(16)一种蛋白酶变体,其包括在252和245位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(17)一种蛋白酶变体,其包括在252、103、104、236和245位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代;
(18)一种蛋白酶变体,其包括在257位置和在以下68、103、104、205、209、210、232、236、245和275位置中的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代。
本发明清洗组合物中有用的更优选的蛋白酶变体包括选自以下的一组取代(下表VI中每行一组取代):
                         表VI
 76  103  104  212  271
 76  103  104  252  261
 76  103  104  212  258
 4  76  103  104  159  217  252
 12  62  76  103  104  159
 76  103  104  212  268  271
 76  87  103  104  212  271
 76  103  104  212  245  271
 76  103  104  134  141  212  271
 76  103  104  212  236  243  271
 20  62  76  103  104
 68  76  103  104  159  232  236  245
 76  103  104  232  245
 24  68  76  103  104  159  232  236  245
 68  103  104  159  232  236  245  252
 68  76  103  104  159  213  232  236  245  260
 68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  232  236  245
 68  103  104  140  159  232  236  245  252
 43  68  103  104  159  232  236  245  252
 43  68  103  104  159  232  236  245
 43  68  103  104  159  232  236  245  252
 68  87  103  104  159  232  236  245  252  275
 68  103  104  159  232  236  245  257
 68  103  104  116  159  232  236  245
 68  103  104  159  232  236  245  248
 10  68  103  104  159  232  236  245
 68  103  104  159  203  232  236  245
 68  103  104  159  232  236  237  245
 68  76  79  103  104  159  232  236  245
 68  103  104  159  183  232  236  245
 68  103  104  159  174  206  232  236  245
 68  103  104  159  188  232  236  245
 68  103  104  159  230  232  236  245
 68  98  103  104  159  232  236  245
 68  103  104  159  215  232  236  245
 68  103  104  159  232  236  245  248
 68  76  103  104 159  232  236  245
 68  76  103  104  159  210  232  236  245
 68  76  103  104  159  232  236  245  257
 76  103  104  232  236  245  257
 68  103  104  159  232  236  245  257  275
 76  103  104  257  275
 68  103  104  159  224  232  236  245  257
 76  103  104  159  232  236  245  257
 68  76  103  104  159  209  232  236  245
 68  76  103  104  159  211  232  236  245
 12  68  76  103  104  159  214  232  236  245
 68  76  103  104  159  215  232  236  245
 12  68  76  103  104  159  232  236  245
 20  68  76  103  104  159  232  236  245  259
 68  87  76  103  104  159  232  236  245  260
 68  76  103  104  159  232  236  245  261
 76  103  104  232  236  242  245
 68  76  103  104  159  210  232  236  245
 12  48  68  76  103  104  159  232  236  245
 76  103  104  232  236  245
 76  103  104  159  192  232  236  245
 76  103  104  147  159  232  236  245  248  251
 12  68  76  103  104  159  232  236  245  272
 68  76  103  104  159  183  206  232  236  245
 68  76  103  104  159  232  236  245  256
 68  76  103  104  159  206  232  236  245
 27  68  76  103  104  159  232  236  245
 68  76  103  104  116  159  170  185  232  236  245
 61  68  103  104  159  232  236  245  248  252
 43  68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 68  103  104  99  159  184  232  236  245  248  252
 103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  209  232  236  245  248  252
 68  103  104  109  159  232  236  245  248  252
 20  68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  209  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  232  236  245  248  252  261
 68  103  104  159  185  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  210  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  185  210  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  213  232  236  245  248  252
 68  103  104  213  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  215  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  216  232  236  245  248  252
 20  68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  173  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  232  236  245  248  251  252
 68  103  104  159  206  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  232  236  245  248  252
 55  68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  232  236  245  248  252  255
 68  103  104  159  232  236  245  248  252  256
 68  103  104  159  232  236  245  248  252  260
 68  103  104  159  232  236  245  248  252  257
 68  103  104  159  232  236  245  248  252  258
 8  68  103  104 159  232  236  245  248  252  269
 68  103  104  116  159  232  236  245  248  252  260
 68  103  104  159  232  236  245  248  252  261
 68  103  104  159  232  236  245  248  252  261
 68  76  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  232  236  245  248  252
 103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  232  236  245  248  252
 18  68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  76  101  103  104  159  213  218  232  236  245  260
 68  103  104  159  228  232  236  245  248  252
 33  68  76  103 104  159  232  236  245  248  252
 68  76  89  103  104  159  210  213  232  236  245  260
 61  68  76  103  104  159  232  236  245  248  252
 103  104  159  205  210  232  236  245
 61  68  103  104  130  159  232  236  245  248  252
 61  68  103  104  133  137  159  232  236  245  248  252
 61  103  104  133  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  218  232  236  245  248  252
 61  68  103  104  159  160  232  236  245  248  252
    3  61  68  76  103  104  232  236  245  248  252
 61  68  103  104  159  167  232  236  245  248  252
 97  103  104  159  232  236  245  248  252
 98  103  104  159  232  236  245  248  252
 99  103  104  159  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  232  236  245  248  252
 102  103  104  159  232  236  245  248  252
 103  104  106  159  232  236  245  248  252
 103  104  109  159  232  236  245  248  252
 103  104  159  232  236  245  248  252  261
 62  103  104  159  232  236  245  248  252
 103  104  159  184  232  236  245  248  252
 103 104  159  166  232  236  245  248  252
 103  104  159  217  232  236  245  248  252
 20  62  103  104  159 213  232  236  245  248  252
 62  103  104  159  213  232  236  245  248  252
 103  104  159  206  217  232  236  245  248  252
 62  103  104  159  206  232  236  245  248  252
 103  104  130  159  232  236  245  248  252
 103  104  131  159  232  236  245  248  252
 27  103  104  159  232  236  245  248  252
 38  103  104  159  232  236  245  248  252
 38  76  103  104  1 59  21 3  232  236  245  260
 68  76  103  104  159  213  232  236  245  260  271
 68  76  103  104  159  209  213  232  236  245  260
 68  76  103  104  159  210  213  232  236  245  260
 68  76  103  104  159  205  213  232  236  245  260
 68  76  103  104  159  210  232  236  245  260
 68  103  104  159  213  232  236  245  260
 76  103  104  159  213  232  236  245  260
 68  103  104  159  209  232  236  245
 68  103  104  159  210  232  236  245
 68  103  104  159  230  232  236  245
 68  103  104  159  126  232  236  245
 68  103  104  159  205  232  236  245
 68  103  104  159  210  232  236  245
 103  104  159  230  236  245
 68  103  104  159  232  236  245  260
 103  104  159  232  236  245
 68  103  104  159  174  232  236  245  257
 68  103  104  159  194  232  236  245  257
 68  103  104 159  209  232  236  245  257
 103  104  159  232  236  245  257
 68  76  103  104  159  213  232  236  245  260  261
 68  103  104  159  232  236  245  257  261
 103  104  159  213  232  236  245  260
 103  104  159  210  232  236  245  248  252
 103  104  159  209  232  236  245  257
 68  76  103  104  159  210  213  232  236  245  260
 12  103  104  159  209  213  232  236  245  260
 103  104  209  232  236  245  257
 103  104  159  205  210  213  232  236  245  260
 103  104  159  205  209  232  236  245  260
 68  103  104  159  205  209  210  232  236  245
 103  104  159  205  209  210  232  236  245  257
 103  104  159  205  209  232  236  245  257
 68  103  104  159  205  209  210  232  236  245  260
 103  104  159  205  209  210  232  236  245
 103  104  159  209  210  232  236  245
 103  104  159  205  210  232  236  245
 68  103  104  128  159  232  236  245
 48  103  104  159  230  236  245
 48  68  103  104  159  209  232  236  245
 48  68  103  104  159  232  236  245  248  252
 48  68  103  104  159  232  236  245  257  261
 102  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 12  102  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 101  102  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 98  102  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 102  103  104  159  213  232  236  245  248  252
 103  104  131  159  232  236  245  248  252
 103  104  159  184  232  236  245  248  252
 103  104  159  232  236  244  245  248  252
 62  103  104  159  213  232  236  245  248  252  256
 12  62  103  104  159  213  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  185  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  206  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  213  232  236  245  248  252
 98  102  103  104  159  232  236  245  248  252
 101  102  103  104  159  232  236  245  248  252
 98  102  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 98  102  103  104  159  212  232  236  248  252
 62  103  104  109  159  213  232  236  245  248  252
 62  103  104  159  212  213  232  236  245  248  252
 62  101  103  104  159  212  213  232  236  245  248  252
 103  104  159  232  245  248  252
 103  104  159  230  245
 62  103  104  130  159  213  232  236  245  248  252
 101  103  104  130  159  232  236  245  248  252
 101  103  104  128  159  232  236  245  248  252
 62  101  103  104  159  213  232  236  245  248  252
 62  103  104  128  159  213  232  236  245  248  252
 62  103  104  128  159  213  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  232  236  245  248  252  260
 101  103  104  131  159  232  236  245  248  252
 98  101  103  104  159  232  236  245  248  252
 99  101  103  104  159  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  209  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  210  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  205  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  230  236  245
 101  103  104  159  194  232  236  245  248  252
 76  101  103  104  159  194  232  236  245  248  252
 101  103  104  159  230  232  236  245  248  252
 62  103  104  159  185  206  213  232  236  245  248  252  271
本发明清洗组合物中有用的甚至更优选的蛋白酶变体包括选自以下的一组取代(下表VII中每行一组取代):
                                表VII
N76D  S103A V104I  S212P E271V
N76D S103A V104I N252K N261Y
N76D S103A V104I S212P G258R
V4E N76D S103A V104I G159D L217E N252D
Q12H N62H N76D S103A V104I G159D
N76D S103A V104I S212P V268F E271V
N76D S87R S103A V104I S212P E271V
N76D S103A V104I S212P Q245L E271V
N76D S103A V104I T134S S141N S212P E271V
N76D S103A V104I S212P Q236L N243S E271V
G20V N62S N76D S103A V104I
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
N76D S103A V104I A232V Q245R
S24T V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K
V68A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I N140D G159D A232V Q236H Q245R N252K
N43S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K
N43K V68A S103A V104I Q159D A232V Q236H Q245R
N43D V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K
V68A S87G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N252K R275S
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V
V68A S103A V104I N116D G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D
R10C V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D V203E A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H 1237E Q245R
V68A N76D I179N S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D N183D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A174V Q206L A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D S188C A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A230T A232V Q236H Q245R
V68A A98T S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A215T A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248S
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D P210R A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V
N76D S103A V104I A232V Q236H Q245R L257V
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V R275H
N76D S103A V104I L257V R275H
V68A S103A V104I G159D T224A A232V Q236H  Q245R L257V
N76D S103A V104I G159D A232V  Q236H Q245R  L257V
V68A N76D S103A V104I G159D Y209W  A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D G211R A232V  Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D G211V A232V Q236H Q245R
Q12R V68A N76D S103A V104I G159D Y214L A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R
Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q336H Q245R
G20R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S259G
V68A S87R N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R T260V
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N261G
V68A N76D S103A V104I Q159D A232V Q236H Q245R N261W
N76D S103A V104I A232V Q236H S242P O245R
V68A N76D S103A V104I G159D P210L A232V Q236H Q245R
Q12R A48V V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
N76D S103A V104I A232V Q236H Q243R
N76D S103A V104I G159D Y192F A232V Q236H Q245R
N76D S103A V104I V147I G159D A232V Q236H Q245R N248S K251R
Q12R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R A272S
V68A N76D S103A V104I G159D N183K Q206L A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R S256R
V68A N76D S103A V104I G159D Q206R A232V Q236H Q245R
K27R V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A N76D S103A V104I N116T G159D R170S N185S A232V Q236H Q245R
G61E V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
N43D V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252I
V68A S103A V104I G159D S212P A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A  S103A V104I S99N G159D N184D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N348D N252K
V68A S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I Q109R G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
G20R V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D Y209F A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K N261D
V68A S103A V104I G159D N185D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D P210R A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D P210T A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D P210S A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D N185D P210L A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D P210L A332V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S212A A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S212E A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D T213E A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I T213S A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A A103V V104I G159D T213E A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D T213G A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A215V A232V Q236H Q245R N248D N252I
V68A S103A V104I G159D A215R A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S216T A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S216V A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D S216C A232V Q236H Q245R N248D N252K
G20A V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D N173D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D K251V N252K
V68A S103A V104I G159D Q206R A232V Q236I Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252F
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252L
P55S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252F
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T255V
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256N
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K S256E
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N2531 S256R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K L257R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K G258D
18V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K N269D
V68A S103A V104I N116S G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260E
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K N261R
V65A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K N261D
V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I A232V Q236I Q245R N248D N252K
S103A V104I Q159D A232S Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236R Q245R N248D N252K
N18S V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245V N248D N252K
V68A N76D S101T S103A V104I G159D T213R N218S A232V Q236H Q245R T260A
V68A S103A V104I G159D A228V A232V Q236H Q245R N248D N252K
T33S V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A N76D E89D S103A V104I G159D P210L T213R A232V Q236H Q245R T260A
G61E V68A N76D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D V205I P210I A232V Q236H Q245R
G61E V68A S103A V104I S130A G139D A232V Q236H Q243R N248D N352K
G61E V68A S103A V104I A133S Q137R G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
G61E S103A V104I A133V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248G N252K
V68A S103A V104I G159D N218S A232V Q236H Q245R N248D N252K
G61E V68A S103A V104I G159D S160V A232V Q236H Q245R N248D N252K
S3L G61E V68A N76D S103A V104I A232V Q236H Q245R N248D N252K
G61E V68A S103A V104I G159D S167F A232V Q236H Q245R N248D N252K
Q97E S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
A98D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S99E S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101E S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
G102A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I S106E G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I Q109E G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K 4261R
S103A V104I Q109R G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D N184D A232V O236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G139D S166D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D L217E A232V Q236H Q245R N248D N252K
G20R N62D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D Q206R L217E A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I G159D Q206R A232V O236H Q245R N248D N252K
S103A V104I S130G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
K27N S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
T38G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
T38A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A
V68A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A E271G
V68A N76D S103A V104I G159D Y209W T213R A232V Q236H Q245R T260A
V68A N76D S103A V104I G159D P210I T213R A232V Q236H Q245R T260A
V68A N76D S103A V104I G159D V205I T213R A232V Q236H Q245R T260A
V68A N76D S103A V104I G159D P210I A232V Q236H Q245R T260A
V68A S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A
N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A
V68A S103A V104I G159D Y209V A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D P210I A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A230V A332V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D L126F A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D V205I A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D P210L A232V Q236H Q245R
S103A V104I G159D A230V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R T260A
S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I G159D A174V A232V Q236H O245R L257V
V68A S103A V104I G159D A194S A232V Q236H Q245R L257V
V68A S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R L257V
S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V
V68A N76D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A N261W
V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V N261W
S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R T260A
S103A V104I G159D P210I A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R L257V
V68A N76D S103A V104I G159D P210L T213R A232V Q236H Q245R T260A
Q12R S103A V104I G159D Y209W T213R A232V Q236H Q245R T260A
S103A V104I Y209A A232V Q236H Q245R L257V
S103A V104I G159D V205I P210I T213R A232V Q236H Q245R T260A
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S103A V104I G159D Y209W P210I A232V Q236H Q245R
S103A V104I G159D V205I P210I A232V Q236H Q245R
V68A S103A V104I S128L G159D A232V Q236H Q245R
A48V S103A V104I G159D A230V Q236H Q245R
A48V V68A S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R
A48V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
A48V V68A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R L257V N261W
G102A S103A V104I G159D S212G A332V Q236H Q245R N248D N252K
Q12R G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
G102A  S103A V104I G159D T223R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D N184S A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D N184G A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A232V Q236H V244T Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A232V Q236H V244A Q245R N248D N252I
N62D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K S256R
Q12R N62D S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D N185D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D Q206E A232V Q236H  Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D T213Q A332V Q236H Q245R N248D N252K
A98L G102A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G G102A S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D  N252K
A98L G102A S103A V104I G159D S212G A232V Q236H N248D N252K
N62D S103A V104I Q109R G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I G159D S212G T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S101G S103A V104I G159D S212G T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A232V Q245R N248D N252K
S103A V104I G159D A230V Q245R
N62D S103A V104I S130G G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I S130G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I S128G G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I S128L G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S101G S103A V104I G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I S128G G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I S128L G159D T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K T260A
S101G S103A V104I P131V G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
A98V S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S99G S101G S103A V104I G159D A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D S212G A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D Y209W A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D P210I A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D V205I A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D A230V Q236H Q245R
S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K
N76D S101G S103A V104I G159D A194P A232V Q236H Q245R N248D N252K
S101G S103A V104I G159D A230V A232V Q236H Q245R N248D N252K
N62D S103A V104I G159D N185D Q206E T213R A232V Q236H Q245R N248D N252K  E271Q
本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取代,其选自除了以下表VIII的取代组外的表VI中的多组取代:
                          表VIII
 68     76     103     104     116     159     170     185     232     236     245
本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取代,其选自表IX中的多组取代:
                        表IX
 68  103  104  159  232  236  245  252
 68  76  103  104  159  213  232  236  245  260
 68  103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  232  236  245
 68  103  104  140  159  232  236  245  252
 43  68  103  104  159  232  236  245  252
 43  68  103  104  159  232  236  245
 68  103  104  159  232  236  245  257
 68  76  103  104  159  210  232  236  245
 68  103  104  159  224  232  236  245  257
 76  103  104  159  232  236  245  257
 68  76  103  104  159  211  232  236  245
 12  68  76  103  104  159  214  232  236  245
 68  76  103  104  159  215  232  236  245
 12  68  76  103  104  159  232  236  245
 20  68  76  103  104  159  232  236  245  259
 68  76  87  103  104  159  232  236  245  260
 68  76  103  104  159  232  236  245  261
 12  48  68  76  103  104  159  232  236  245
 76  103  104  159  192  232  236  245
 76  103  104  147  159  232  236  245  248  251
 12  68  76  103  104  159  232  236  245  272
 68  76  103  104  159  183  206  232  236  245
 68  76  103  104  159  232  236  245  256
 68  76  103  104  159  206  232  236  245
 27  68  76  103  104  159  232  236  245
 68  103  104  159  212  232  236  245  248  252
 103  104  159  232  236  245  248  252
 68  103  104  159  209  232  236     245     248     252
 68  103  104  109  159  232  236     245     248     252
 20  68  103  104  159  232  236     245     248     252
 68  103  104  159  209  232  236     245     248     252
 68  103  104  159  210  232  236     245     248     252
 68  103  104  159  212  232  236     245     248     252
 68  103  104  159  213  232  236     245     248     252
 68  103  104  213  232  236  245     248     252
 68  103  104  159  215  232  236     245     248     252
 68  103  104  159  216  232  236     245     248     252
 20  68  103  104  159  232  236     245     248     252
 68  103  104  159  232  236  245     248     252     255
 68  103  104  159  232  236  245     248     252     256
 68  103  104  159  232  236  245     248     252     260
 68  103  104  159  228  232  236     245     248     252
 68  76  89  103  104  159  210     213     232     236  245 260
 68  103  104  159  218  232  236     245     248     252
本发明清洗组合物中有用的还甚至更优选的蛋白酶变体包括一组取代,其选自表X中的多组取代:
                           表X
 V68A  S103A  V104I  G159D  A228V  A232V  Q236H  Q245R  N248D N252K
 V68A  S103A  V104I  G159D  N218S  A232V  Q236H  Q245R  N248D N252K
 G20R  V68A  S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N248D N252K
 V68A  N76D  E89D  S103A  V104I  G159D  P210L  T213R  A232V Q236H  Q245R T260A
 V68A  S103A  V104I G159D  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K S256R
 V68A  S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K T260R
 V68A  S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K T255V
 V68A  S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K S256N
 V68A  S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252L
 V68A  S103A  V104I  G159D  T213R  A232V  Q236H  Q245R  N248D N252K
 V68A  S103A  V104I  G159D  A215V  A232V  Q236H  Q245R  N248D N252K
 V68A  S103A  V104I  G159D  A215R  A232V  Q236H  Q245R  N248D N252K
 V68A S103A  V104I G159D  P210L  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K
 V68A S103A  V104I G159D  S212C  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K
 V68A S103A  V104I G159D  S212G  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K
 S103A V104I  G159D A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K
 V68A S103A  V104I G159D  Y209W  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K
 V68A S103A  V104I Q109R  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K
 G20R V68A  S103A V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K
 V68A S103A  V104I G159D  Y209F  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K
 N76D S103A  V104I G159D  Y192F  A232V  Q236H  Q245R
 N76D S103A  V104I V147I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N248S  K251R
 Q12R V68A  N76D S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  A272S
 V68A N76D  S103A V104I  G159D  N183K  Q206L  A232V  Q236H  Q245R
 V68A N76D  S103A V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  S256R
 V68A N76D  S103A V104I  G159D  Q206R  A232V  Q236H  Q245R
 K27R V68A  N76D S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R
 Q12R A48V  V68A N76D  S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R
 V68A N76D  S103A V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N261W
 V68A N76D  S103A V104I  G159D  G211R  A232V  Q236H  Q245R
 V68A N76D  S103A V104I  G159D  G211V  A232V  Q236H  Q245R
 Q12R V68A  N76D S103A  V104I  G159D  Y214L  A232V  Q236H  Q245R
 V68A N76D  S103A V104I  G159D  A215R  A232V  Q236H  Q245R
 Q12R V68A  N76D S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R
 G20R V68A  N76D S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  S259G
 V68A N76D  S87R S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  T260V
 N76D S103A  V104I G159D  A232V  Q236H  Q245R  L257V
 V68A N76D  S103A V104I  G159D  T213R  A232V  Q236H  Q245R  T260A
 V68A N76D  S103A V104I  G159D  P210R  A232V  Q236H  Q245R
 V68A S103A  V104I G159D  S212P  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K
 V68A S103A  V104I G159D  T224A  A232V  Q236H  Q245R  L257V
 V68A S103A  V104I G159D  A232V  Q236H  Q245R  N252S
 V68A S103A  V104I G159D  A232V  Q236H  Q245R  N252K
 V68A S103A  V104I G159D  A232V  Q236H  Q245R  N248D  N252K
 V68A S103A  V104I G159D  A232V  Q236H  Q245R
 V68A S103A  V104I N140D  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N252K
 N43S V68A  S103A V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N252K
 N43K V68A  S103A V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R
N43D V68A  S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  N252K
V68A S103A  V104I  G159D  A232V  Q236H  Q245R  L257V
本发明清洗组合物中有用的高度优选的蛋白酶变体包括选自以下的一组取代:12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252; 61/68/103/104/159/232/236/245/248/252;62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252; 62/103/104/159/213/232/236/245/248/252;62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252; 62/103/104/159/232/236/245/248/252;62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252;68/103/104/159/232/236/245/248/252/270;68/103/104/159/185/232/236/245/248/252;     68/103/104/159/210/232/236/245/248/252;68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252; 68/103/104/159/213/232/236/245/248/252;68/103/104/159/230/232/236/245;             68/76/103/104/159/209/232/236/245;68/103/104/232/236/245/248/257/275;         68/103/104/213/232/236/245/248/252;68/103/104/159/232/236/245/248/252;         68/103/104/159/209/232/236/245;68/76/103/104/159/232/236/245;              68/103/104/159/232/236/245/252;68/103/104/159/232/236/245;                 68/103/104/159/232/236/245/257;68/76/103/104/159/211/232/236/245;          68/76/103/104/159/215/232/236/245;68/103/104/159/210/232/236/245;             68/103/104/159/213/232/236/245/260;68/76/103/104/159/213/232/236/245/260;      68/76/103/104/159/210/232/236/245/260;68/103/104/159/183/232/236/245/248/252;     68/103/104/232/236/245/257/275;68/103/104/159/213/232/236/245 ;            76/103/104/159/232/236/245;76/103/104/159/213/232/236/245/260;         76/103/104/131/159/232/236/245/248/252;97/103/104/159/232/236/245/248/252;         98/103/104/159/232/236/245/248/252;98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252; 101/103/104/159/232/236/245/248/252;102/103/104/159/232/236/245/248/252;        103/104/159/232/236/245;103/104/159/248/252/270;                    103/104/159/232/236/245/248/252;103/104/159/205/209/232/236/245/257          103/104/159/232/245/248/252;103/104/159/205/209/210/232/236/245/257;    103/104/159/213/232/236/245/248/252;103/104/159/217/232/236/245/248/252;        103/104/130/159/232/236/245/248/252;103/104/131/159/232/236/245/248/252;        103/104/159/205/209/232/236/245;和103/104/159/232/236/245/257.本发明清洗组合物中有用的更高度优选的蛋白酶变体包括选自以下的一组取代:   12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K;
   61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
   62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
     62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
  68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
  68A/76D/103A/104I/159D/2101/232V/236H/245R/260A;
  68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K;
      68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R;
    68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R;
    68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R;
    68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
       68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
      68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K;
         68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
      68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V;
 68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K;
 68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K;68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K;
 68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K;
      68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R;
    68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R;
    68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H;
      68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H;
    68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K;
    68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
      68A/103A/104I/159D/2101/232V/236H/245R;
      68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R;
      68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R;
  68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A;
        76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
  76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
    76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
    97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
    98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K;
101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K;
        103A/104I/159D/248D/252K/270V;
        103A/104I/159D/232V/236H/245R;
   103A/1041/159D/205I/209W/232V/236H/245R;
     103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V;
103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V;
103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K;103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V;和
    103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K
重组蛋白酶/重组枯草溶菌素-“重组蛋白酶”或“重组枯草溶菌素”是指其中分别编码天然产生的蛋白酶或枯草溶菌素的DNA序列被修饰产生突变DNA序列的蛋白酶或枯草溶菌素,所述突变DNA序列编码了蛋白酶或枯草溶菌素氨基酸序列中的一个或多个氨基酸的取代、插入或缺失。适合的修饰方法公开在本文和美国专利RE34606,US5204015和5185258中。
非人体蛋白酶/非人体枯草溶菌素-“非人体蛋白酶”或“非人体枯草溶菌素”和编码它们的DNA可由许多原核生物和真核生物得到。原核生物的适合实例包括革兰氏阴性生物例如大肠杆菌或假单胞菌和革兰氏阳性细菌例如微球菌或芽孢杆菌。可由其得到羰基水解酶和它们的基因的真核生物的实例包括酵母例如啤酒糖酵母,真菌例如曲霉属和非人类的哺乳动物源例如牛物种,由其可得到编码蛋白凝乳酶或枯草溶菌素凝乳酶的基因。可从各种相关的物种得到一系列蛋白酶和/或枯草溶菌素,该系列物种之间具有不完全同源的氨基酸序列,但尽管如此仍表现出相同或相似类型的生物活性。因此,本文使用的非人体蛋白酶或非人体枯草溶菌素具有一种功能定义,其分别称为蛋白酶或枯草溶菌素,其直接或间接与原核和真核生物源相关。
变异的DNA序列-编码这种蛋白酶或枯草溶菌素变体的变异的DNA序列是由编码天然产生的或重组前体酶的前体DNA序列衍生得到。该变异的DNA序列是由修饰前体DNA序列衍生得到,其编码了由前体DNA序列编码的对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位置的一个或多个特定氨基酸残基的取代,同时结合淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的以下1、3、4、8、10、12、13、15、16、17、18、20、21、22、24、25、27、33、37、38、42、43、48、55、57、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、115、116、117、119、121、123、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、161、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置处的一个或多个氨基酸残基的取代;其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置处的氨基酸残基的取代时,还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置处的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代。尽管在本文确认用于修饰的氨基酸残基是根据淀粉分解芽孢杆菌应用的编号来确定(其已成为确定在所有枯草溶菌素中的残基位置的常规方法),但本发明适用的优选的前体DNA序列是如图3中所示的缓慢芽孢杆菌的DNA序列。
在优选的实施方案中,这些变异的DNA序列编码了对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位置的氨基酸残基的取代、插入或缺失,同时结合淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的以下1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置处的一个或多个其他氨基酸残基的取代、插入或缺失;其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置处的氨基酸残基的取代时,还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置处的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代。更优选,这些变异DNA序列编码本文描述的蛋白酶变体。
在另一优选的实施方案中,这些变异的DNA序列编码了对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位置的一个或多个氨基酸残基的取代、插入或缺失。更优选这些变异的DNA序列编码了本文描述的蛋白酶变体。
尽管在本文确认用于修饰的氨基酸残基是根据淀粉分解芽孢杆菌应用的编号来确定(其已成为确定在所有枯草溶菌素中的残基位置的常规方法),但本发明适用的优选的前体DNA序列是如图3中所示的缓慢芽孢杆菌的DNA序列。
这些重组DNA序列编码了具有新氨基酸序列的蛋白酶变体,并且一般至少有一种性质显著地不同于由前体蛋白酶DNA序列编码的酶的同一性质。这种性质包括蛋白水解活性、基质特异性、稳定性、变化的pH范围和/或增强的性能特征。
本文描述了对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位置的特定取代,同时结合以下1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置中的一个或多个位置的取代;其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置处的氨基酸残基的取代时,还存在在非对应于27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置处的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代,其中编号的位置对应于来自淀粉分解芽孢杆菌的天然产生的枯草溶菌素或对应于在其他羰基水解酶或枯草溶菌素(例如缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素)中的相当氨基酸残基。另外,本文描述了对应于以下62、212、230、232、252和257位置中的一个或多个位置的特定取代,其中编号的位置对应于来自淀粉分解芽孢杆菌的天然产生的枯草溶菌素或对应于在其他羰基水解酶或枯草溶菌素(例如缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素)中的相当氨基酸残基。这些氨基酸位置编号是指编排在图1中表示的成熟淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素序列的那些。然而,本发明不限于使用该特定枯草溶菌素的突变,而是延伸到在“相当于”与淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素中特别确定的残基位置处含有氨基酸残基的前体蛋白酶。在本发明优选的实施方案中,前体蛋白酶是缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素和在缓慢芽孢杆菌中对应于以上所列的那些相当氨基酸残基处进行取代、缺失或插入。
若是同源的(即对应于一级或三级结构中的位置)或类似于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素中的特定残基或部分特定残基(即在化学上具有相同或相似的结合、反应或相互作用的功能),则前体蛋白酶的残基(氨基酸)相当于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的残基。
为了确定与一级结构的同源性,直接将前体蛋白酶的氨基酸序列与淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的一级序列相比,特别是与已知序列的枯草溶菌素中不变的一组已知残基相比。例如,本文图2说明了在淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素和缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素之间保守残基。在排列保守残基后,允许必要的插入和缺失以保持排列(即避免通过任意的缺失和插入而消除保守残基),确定与淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的一级序列中的特定氨基酸相当的残基。保守残基的排列优选应当保守100%这种残基。然而,有大于75%或少至50%保守残基的排列也足以确定相当残基。应当维持催化三分体,Asp32/His64/Ser221的保守。
例如,在图3中,排列了从淀粉分解芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣形芽孢杆菌(carlsbergensis)和缓慢芽孢杆菌得到的枯草溶菌素的氨基酸序列以提供在氨基酸序列间最大量的同源性。这些序列的比较表明存在许多含在各序列中的保守残基。在图2中确定了这些保守残基(如BPN’和缓慢芽孢杆菌之间)。
因此这些保守残基可用于确定相应的缓慢芽孢杆菌的相当氨基酸残基(PCT公开号WO89/06279,1989年7月13日公布)、本发明优选的蛋白酶前体酶或称为PB92的枯草溶菌素(EP0328299),其与优选的缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素高度同源。这些中的一些枯草溶菌素的氨基酸序列被排列在图3A和3B中,其中列出了产生保守残基的最大同源性的淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的序列。可以看出,与淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素相比,在缓慢芽孢杆菌序列中存在许多缺失。因此,例如在其他枯草溶菌素中与淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素中的Val 165相当的氨基酸,对于缓慢芽孢杆菌和地衣形芽孢杆菌是异亮氨酸。因此,例如在淀粉分解芽孢杆菌和缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素中的+76位置的氨基酸是天冬酰胺(N)。然而,在本发明蛋白酶变体中,相当于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的+76位置的氨基酸被天冬氨酸(D)取代。本发明中所有氨基酸的缩写和一种字母编号符合Patentin使用手册(GenBank,Mountain View,CA),1990,第101页。
也可通过测定前体蛋白酶的三级结构水平的同源性来确定“相当残基”,前体蛋白酶的三级结构是通过X-射线晶体学来测定。相当残基被定义为以下的那些:前体蛋白酶和淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的特定氨基酸残基的两个或多个主链原子的原子坐标(N对N,CA对CA,C对C和O对O)在排列之后是在0.13nm内,优选0.1nm内。在最好的模型被定位和放置得到最大覆盖关于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的蛋白酶的非氢蛋白质原子的原子坐标后之后,才获得排列。最好的模型是晶体学模型,其在可得到的最高分辨率下给出了实验衍射数据的最低R因子:
功能类似于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的特定残基的相当残基被定义为那些下述的前体蛋白酶的氨基酸:其可采取一定的构型使得它们改变、改善或有助于蛋白质的结构、结合基质或催化,这是以一种确认的方式和归结于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的特定残基的原因。另外,它们是占据类似位置至一定程度的前体蛋白酶的那些残基(已由X-射线晶体学得到三级结构),使得按占据同源位置为基础计,虽然给定残基的主链原子可能不满足等价标准,但该残基的至少两个侧链原子的原子坐标落在淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的相应侧链原子的0.13nm内。淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的三维结构的坐标在EPO公开号0251446(等同于美国专利5182204,其公开内容在本文引用作参考)中给出并可按以上概述用于测定在三级结构水平上的相当残基。
确认用于取代、插入或缺失的一些残基是保守残基,而其他的不是。在残基不被保守的情况下,取代一个或多个氨基酸是受限于这样的取代:其产生的变体的氨基酸序列不对应于自然界中发现的一种。在保守残基的情况中,这种取代不应当导致天然产生的序列。本发明蛋白酶变体包括成熟的蛋白酶变体形式以及这种蛋白酶变体的原体和前体形式。该前体形式是优选的结构,因为这有助于蛋白酶变体的表达、分泌和成熟。
“原序列”指的是与成熟形式的蛋白酶的N-端部分相连的氨基酸序列,当其除去时,得到了“成熟”形式的蛋白酶状态。在自然界中发现许多蛋白水解酶为翻译酶原产品,在不存在后翻译加工下,其按此方式表达。产生蛋白酶变体的优选原序列是淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的推定的原序列,但可使用其他的蛋白酶原序列。
“信号序列”或“前序列”指的是与蛋白酶的N’端部分或蛋白酶原的N-端部分相连的任何氨基酸序列,其可参与成熟或原体形式的蛋白酶的分泌。信号序列的此定义是一种功能性的定义,意思是包括由蛋白酶基因的N-端部分编码的所有那些氨基序列,其参与在自然条件下的蛋白酶分泌的实施。本发明使用这种序列以实现本文定义的蛋白酶变体的分泌。一种可能的信号序列包括来自枯草芽孢杆菌枯草溶菌素的信号序列的头七个氨基酸残基并合到来自缓慢芽孢杆菌(ATCC21536)的枯草溶菌素的信号序列的其余部分上。
“前体”形式的蛋白酶变体由成熟形式的蛋白酶组成,该成熟形式的蛋白酶具有与蛋白酶的氨基端可操作连接的原序列和与该原序列的氨基端可操作连接的“前”或“信号”序列。
“表达载体”指的是含有可操作连接适合的控制序列的DNA序列的DNA构建物,所述控制序列能够实现所述DNA在适合宿主中的表达。这种控制序列包括转录的启动子、控制这种转录的选择性的操纵基因序列、编码适合的控制转录和翻译的mRNA核糖体结合部位和序列。该载体可以是质粒、噬菌粒或简单潜在的基因组插入片段。一旦转化至适合的宿主中,该载体可独立地复制和起作用或宿主基因组在某些情况下可整合到基因组本身中。在本说明书中,“质粒”和“载体”有时相互交换使用,因为质粒是目前最通常使用的载体形式。然而,本发明预期包括这种其他形式的表达载体,其具有等价的功能并是或成为现有技术中已知的。
本发明使用的“宿主细胞”一般是原核生物或真核生物宿主,其优选用美国专利RE34606中公开的方法控制使用,以使它们不能酶催分泌活性的内切蛋白酶。表达蛋白酶的优选的宿主细胞是芽孢杆菌属菌株BG2036,在酶催活性的中性蛋白酶和碱性蛋白酶(枯草溶菌素)中其是缺损的。菌株BG2036的构建详细地描述在美国专利5264366中。表达蛋白酶的其他宿主细胞包括枯草芽孢杆菌168(还描述在美国专利RE34606和美国专利5264366中,其公开内容在本文引用作参考)以及任何适合的芽孢杆菌菌株例如地衣形芽孢杆菌、缓慢芽孢杆菌等。
用重组DNA技术构建的载体转化或转染宿主细胞。这种被转化的宿主细胞能够复制编码蛋白酶变体或表达所需的蛋白酶变体的载体。在编码前体形式的蛋白酶变体的载体的情况下,这种变体当被表达时一般是从宿主细胞分泌到宿主细胞介质中。
当描述两个DNA区之间的关系时,“可操作连接”简单地意思是它们彼此间功能相关。例如,原序列如果作为一种信号序列的话与肽可操作连接,参与成熟形式的蛋白酶的分泌,多半可能包括信号序列的断开。启动子如果控制编码序列的转录的话,其与编码序列可操作连接,核糖体结合部位如果其处的位置允许翻译的话,其与编码序列可操作连接。
根据本领域技术人员已知的一般方法可得到编码天然产生的前体蛋白酶的基因。该方法一般包括合成标记的探针,其具有编码感兴趣的蛋白酶区域的推定的序列,从表达蛋白酶的有机体制备基因组文库,通过与探针杂交筛分该文库得到感兴趣的基因。然后绘制和排序正杂交克隆。
克隆的蛋白酶然后用于转化宿主细胞,以便表达该蛋白酶。该蛋白酶基因然后被连接入高拷贝数目的质粒中。该质粒在宿主中复制,在这种意义上其含有质粒复制必要的公知要素:一种与所述的基因可操作连接的启动子(其可作为该基因自身同源的启动子提供,如果其被确认,即由宿主转换的话),转录终止和聚腺苷酸化区域(对由宿主从某些真核宿主细胞中的蛋白酶基因转换的mRNA的稳定性是必要的)其是外源的或由蛋白酶基因的内源终止区提供,最好选择基因例如抗生素抗性基因通过在含抗生素的介质中生长能够连续地培养维持质粒感染的宿主细胞。高拷贝数目的质粒还含有宿主的复制源,由此使得多数质粒在细胞质中生殖而不受染色体的限制。然而,在本发明范围内是将多次将蛋白酶基因拷贝整合到宿主基因组中。这被原核生物和真核生物促进,它们对同源重组特别敏感。该基因可以是天然的缓慢芽孢杆菌基因。另外,可生产编码天然产生的或突变前体蛋白酶的合成基因。在这种方法中,确定了前体蛋白酶的DNA和/或氨基酸序列。在下文合成了多重重叠合成的单链DNA片段,其经杂交和连接产生编码前体蛋白酶的合成DNA。合成基因构建的实例在美国专利5204105的实施例3中列出,其公开内容在本文引用作参考。
一旦天然产生或合成前体蛋白酶基因被克隆,就进行多种修饰以增加不能合成天然产生的前体蛋白酶的基因的使用。这种修饰包括生产重组蛋白酶如美国专利RE34606和EPO公开号0251446中所述和生产本文描述的蛋白酶变体。
可使用以下盒式诱变方法来促进本发明蛋白酶变体的构建,但也可使用其他方法。首先,得到编码蛋白酶的天然产生的基因,其是完整的或部分序列。然后在该序列中寻找到一理想的点,以在被编码的酶中对一个或多个氨基酸进行突变(缺失、插入或取代)。在有用寡核苷酸库替代短基因碎片的限制部位存在下,评价旁侧所述点位的序列,所述寡核苷酸库当被表达时将编码各种突变体。这种限制部位优选是在蛋白酶基因中的独特部位,以便促使基因碎片的替代。然而,可使用在蛋白酶基因中不过分多余的任何适宜限制部位,条件是由限制消化产生的基因碎片可以适当的序列重装配。如果在离所选择的点的适宜距离(从10-15个核苷酸)内的位置处不存在限制部位,则以一定的方式通过取代基因中的核苷酸而产生这种部位,所述方式是使得读框或编码的氨基酸在最终结构中都不改变。为改变其序列以符合所要求序列的基因突变是根据一般公知的方法由M13引子扩展完成。确定适合的旁侧区域和评价达到两种适宜的限制部位序列所需的变化,这两方面工作通常是由多余的遗传密码、基因的限制酶图和大量的不同限制性酶来完成。注意到若适宜的旁侧限制部位可得到,以上方法的使用仅与不含所述部位的旁侧区域有关。
一旦天然产生的DNA或合成DNA被克隆,旁侧被突变的位置的限制部位就用相关限制性酶消化并且多个末端互补的寡核苷酸盒被连接到基因中。通过该方法简化了诱变,因为可合成所有的寡核苷酸,以便具有相同的限制部位,和不需要合成连接物来产生限制部位。这里使用的蛋白水解活性被定义为每毫克活性酶的肽键水解速率。存在测定蛋白水解活性的许多公知方法(K.M.Kalisz,“微生物蛋白酶”,高等生物化学工程/生物技术A.Fiechter等,1988)。除此之外或作为改性的蛋白水解活性的替代,本发明变异体酶具有许多其他的改性性质例如Km,kcat,kcat/Km比例和/或具体改性的基质和/或改性的pH活性范围。这些酶可适合特定的基质,所述基质例如在制备肽中或对于水解过程例如洗衣应用中是预期存在的。
本发明的一方面,目的是保证变体蛋白酶具有与前体蛋白酶相比改变的蛋白水解活性,由于增加了这种活性(数值上较大)能够使酶更有效地作用于目标基质。还有利的是与前体相比具有改变的热稳定性和/或改变的基质特异性的变异体酶。在一些情况下,较低的蛋白水解活性可能是理想的,例如当蛋白酶的合成活性是理想时,蛋白水解活性的降低是有用的(如用于合成肽)。一种情况可能希望降低此蛋白水解活性,其能够破坏这种合成的产品。相反,在一些情况下,可能需要增加变体酶相对其前体的蛋白水解活性。此外,可能需要增加或降低(改变)变异体的稳定性,无论是碱性或热稳定性。Km,kcat或kcat/Km的增加或降低对用于测定这些动力学参数的基质是特定的。
本发明的另一方面,已确定在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位置的取代,同时结合以下1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位置中的一个或多个位置的取代对调整酶的总稳定性和/或蛋白水解活性是重要的。
本发明的另一方面,已确定在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的以下62、212、230、232、252和257位中的一个或多个位置处的取代对调整酶的总稳定性和/或蛋白水解活性也是重要的。
这些取代优选在缓慢芽孢杆菌(重组或天然类型的)枯草溶菌素中进行,尽管在任何芽孢杆菌蛋白酶中也可以进行取代。
根据变体蛋白酶得到的筛分结果,注意到在淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素中的突变对于这些酶的蛋白水解活性、性能和/或稳定性和对这种变体酶的清洗或洗涤性能都是重要的。
制备本发明洗涤剂和清洗组合物中使用的酶的方法和步骤是已知的并披露在PCT申请号WO95/10615中。
本发明酶具有似胰蛋白酶的特异性。即本发明酶水解蛋白质是通过优先断开带电荷的氨基酸残基的肽键,更具体地是例如精氨酸和赖氨酸的残基,而不优先断开疏水氨基酸残基的肽键,更具体地是苯基丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。具有后者情况的酶具有似胰凝乳蛋白酶的特异性。以上所述的基质特异性由酶对两种合成基质的作用来说明。具有似胰蛋白酶特异性的蛋白酶要优先于合成基质sucAAPF-pNA水解合成基质bVGR-pNA。相反,似胰凝乳蛋白酶的蛋白酶水解前者要比后者更快。对于本发明目的而言,使用以下方法定义本发明蛋白酶的似胰蛋白酶的特异性。
将pH为10和在温度25℃下的固定量的甘氨酸缓冲液加入标准10ml试管中。将要测试的0.5ppm活性酶加入该试管中。将每ml缓冲溶液大约1.25mg合成基质加入试管中。使该混合物在25℃下培养15分钟。培养阶段完成时,向混合物中以每ml缓冲液0.5mg量加入酶抑制剂,PMSF。在410nm波长处读取混合物的吸光度或OD值。该吸光度则表示酶对合成基质的活性。吸光度越大,对基质的活性水平越高。
为了测定各酶的特异性,可将对两种合成基质蛋白质的吸光度转化成特异性比值。对于本发明目的,由下式确定特异性比值:
       [对sAAPF-pNA的活性]/[对bVGR-pNA的活性]
则具有比值低于约10,更优选低于约5,最优选低于约2.5的酶被认为证明有似胰蛋白酶的活性。
这种变体一般具有至少一种性质不同于得到变体的氨基酸序列的蛋白酶前体的同一种性质。
本发明的一方面是用于处理织物、器皿、餐具、厨具、炊具和其他硬表面底物的组合物,例如洗涤剂和清洗组合物,其包括一种或多种本发明的变体蛋白酶。含蛋白酶的组合物可用于处理例如丝绸或羊毛以及其他类型的织物,如公开文献例如RD216034,EP134267,US4533359和EP344259中所述;和处理器皿、餐具、厨具、炊具和其他硬表面底物如公开文献例如美国专利5478742,US5346822,US5679630和US5677272中所述。
II.淀粉酶变体-用于本发明的淀粉酶变体包括,但不限于:描述在W095/26397和W096/23873(Novo)中的淀粉酶。这些酶在清洗组合物中的掺入量,按该清洗组合物的重量计,为从约0.0001%,优选从约0.00018%,更优选从约0.00024%,最优选从约0.05%至约0.1%,优选至约0.060%,更优选至约0.048%纯酶。
淀粉酶变体优选选自α-淀粉酶变体。
用于本发明的适合的α-淀粉酶变体包括,但不限于以下的α-淀粉酶:
(i)α-淀粉酶,特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性实验测定,其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下,比活度比Termamyl的比活度高至少25%;和/或
(ii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iv)根据(i)的α-淀粉酶,其包含以下N-端氨基酸序列:His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或与N-端中所示的氨基酸序列(SEQ ID No.3)至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(v)根据(i-iv)的α-淀粉酶,其中该α-淀粉酶可由嗜碱的芽孢杆菌种得到,和/或
(vi)根据(v)的α-淀粉酶,其中该淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到,和/或
(vii)α-淀粉酶,其与具有分别对应于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出阳性免疫交叉反应活性,和/或
(viii)母体α-淀粉酶变体,其中母体α-淀粉酶(1)具有分别在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一种氨基酸序列,或(2)表现出与一个或多个所述的氨基酸序列至少80%同源,和/或与具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出免疫交叉反应活性,和/或由一种DNA序列编码,该DNA序列与编码具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探针杂交,该变体中:(A)所述母体α-淀粉酶中缺失至少一个氨基酸残基;和/或(B)所述母体α-淀粉酶的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基代替;和/或(C)相对所述的母体α-淀粉酶,插入至少一个氨基酸残基;所述变体具有α-淀粉酶活性并相对所述母体α-淀粉酶表现出至少一种以下性质:提高了热稳定性、提高了抗氧化的稳定性;降低了对Ca离子的依赖性;在中性至相对高pH值下提高了稳定性和/或α-淀粉分解活性;在相对高温下提高了α-淀粉分解活性;和提高或降低了等电点(pI),以便使α-淀粉酶变体的pI值更好地与介质的pH匹配。
若比较通过例如由Lipman和Pearson在科学227,1985,第1435页中所述的一种算法预制的各氨基酸序列显示了有X%同一性,则认为多肽与母体淀粉酶有X%同源。
在本发明中,术语“由…可得”意思不仅表示由芽孢杆菌属菌株产生的淀粉酶,而且表示由从芽孢杆菌属菌株中分离出的DNA序列编码的淀粉酶和在用DNA序列转化的宿主有机体中产生的淀粉酶。
III.蛋白酶/淀粉酶组合-在本发明高度优选的实施方案中,尽管上述的任何一种或多种蛋白酶变体可与上述的一种或多种淀粉酶变体组合,但蛋白酶变体包含一组取代:101/103/104/159/232/236/245/248/252,更高度优选的一组取代是:101G/103A/104I/232V/236H/245R/248D/252K。
尽管蛋白酶变体和淀粉酶变体可以任何ppm计的比例存在于清洗组合物中,但在本发明清洗组合物中,蛋白酶变体与淀粉酶变体的ppm优选比例为约1∶20-20∶1,优选约1∶10-10∶1,更优选约1∶3-3∶1。
清洗组合物
除了上文所述的一种或多种蛋白酶变体外,本发明清洗组合物还包含优选与蛋白酶变体相容的一种或多种清洗辅助物质。本文使用的术语“清洗辅助物质”意思是选择用于理想的特定类型的清洗组合物和产品形式(例如液体;颗粒;粉状;条;膏状;喷雾剂;片;凝胶;泡沫体组合物)的任何液体、固体或气态材料,该材料还优选与组合物中使用的蛋白酶是相容的。颗粒组合物还可以是“浓缩”形式,液体组合物还可以是“浓缩”形式。
清洗辅助物质的具体选择可容易地由考虑被清洗的表面、物品或织物和用于使用中的清洗条件(例如洗涤剂使用经过的)的所需组合物形式来确定。本文所述术语“相容”意思是清洗组合物材料不降低蛋白酶的蛋白水解活性至蛋白酶在正常的使用条件下不是预期有效的程度。适合的清洗辅助物质的实例包括,但不限于:表面活性剂、助洗剂、漂白剂、漂白活化剂、漂白催化剂、其他酶、酶稳定体系、螯合剂、荧光增白剂、污垢解脱聚合物、染料转移抑制剂、分散剂、抑泡剂、染料、香料、着色剂、填料盐、水溶助长剂、光活化剂、荧光剂、织物调理剂、可水解的表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂、防缩剂、抗皱剂、杀菌剂、杀真菌剂、色粒、银器护理剂、防晦暗和/或防腐蚀剂、碱源、增溶剂、载体、加工助剂、颜料和pH控制剂,其描述在美国专利5705464、5710115、5698504、5695679、5686014和5646101中。具体的清洗组合物物质在下文详细举例说明。
若清洗辅助物质与清洗组合物中的蛋白酶变体不相容,则可使用适当的方法,保持清洗辅助物质和蛋白酶变体隔离(彼此不相互接触),直至两种组分的组合是适当的。适合的方法可以是本领域任何公知的方法,例如胶封、包胶、成片、物理分离等。
优选在适用于清洗需要去除蛋白质类污垢的各种表面的组合物中包括有效量的上述一种或多种蛋白酶变体。这种清洗组合物包括用于清洗硬表面的洗涤剂组合物,形式不限(例如液体和颗粒);用于清洗织物的洗涤剂组合物,形式不限(例如颗粒、液体和条制品等);洗餐具组合物(形式不限并包括自动洗餐具用颗粒和液体);口腔清洗组合物,形式不限(例如洁齿剂、牙膏和漱口制剂);和假牙清洗组合物,形式不限(例如液体、片)。
这里所述的“有效量的蛋白酶变体”是指需要获得在特定清洗组合物中所需的酶活性的上述蛋白酶变体的数量。这种有效量容易由本领域的普通技术人员来确定,其基于许多因素,例如所用的特定变体、清洗应用、清洗组合物的特定组成和是否需要液体或干燥(例如颗粒、条)组合物等。
按清洗组合物的重量计,优选清洗组合物包含从约0.0001%,优选从约0.001%,更优选从约0.01%至约10%,优选至约1%,更优选至约0.1%的一种或多种本发明蛋白酶变体。还优选本发明蛋白酶变体在组合物中存在足够量,以提供每100g组合物的活性蛋白酶mg与由洗涤水溶液中的任何过氧酸得到的理论有效O2(“AvO2”)ppm之比,在本文称为酶与漂白剂之比(E/B之比),为约1∶1-20∶1。在下文进一步详细地讨论其中可使用本发明蛋白酶变体的各种清洗组合物的几个实例。另外,清洗组合物按该组合物的重量计可包括约1%-99.9%清洗辅助物质。
本发明清洗组合物可以是“织物清洗组合物”或“非织物清洗组合物”形式。
这里所述的“织物清洗组合物”包括手洗和机器洗衣洗涤剂组合物,包括洗衣添加剂组合物和适用于浸泡和/或预处理脏织物的组合物。
这里所述的“非织物清洗组合物”包括硬表面清洗组合物、洗餐具洗涤剂组合物、口腔清洗组合物、假牙清洗组合物和个人清洗组合物。
当本发明清洗组合物配制成适用于洗衣机洗涤方法的组合物时,本发明组合物优选含有表面活性剂和助洗剂两类化合物和其他的一种或多种清洗辅助物质,其优选选自有机聚合物、漂白剂、附加酶、抑泡剂、分散剂、钙皂分散剂、污垢悬浮和抗再沉积剂和腐蚀抑制剂。洗衣组合物还可含有柔软剂,其作为其他的清洗辅助物质。
本发明组合物还可作为固体或液体形式的洗涤剂添加剂产品。这种添加剂产品用于补充或促进常规洗涤剂组合物的性能并可在清洗过程的任何阶段加入。
当配制成用于手洗餐具方法的组合物时,本发明组合物优选含有表面活性剂和优选含有其它的清洗辅助物质,其选自有机聚合物、增泡剂、II族的金属离子、溶剂、水溶助长剂和附加酶。
如果需要的话,本发明洗衣洗涤剂组合物在20℃下测定的密度为400-1200g/l,优选500-950g/l组合物。
本发明清洗组合物的“密实”形式由密度和就组成而言,由无机填料盐的量得以最好地反映。无机填料盐是粉状洗涤剂组合物的常规组分。在常规洗涤剂组合物中,填料盐是以大量存在,一般为总组合物重量的17-35%。在密实组合物中,填料盐的含量不超过总组合物的15%,优选不超过10%,最优选不超过组合物重量的5%。无机填料盐,例如在本发明组合物中意思是选自碱金属和碱土金属硫酸盐和氯化物。优选的填料盐是硫酸钠。
根据本发明的液体清洗组合物还可以是“浓缩形式”,在这种情况下,根据本发明的液体清洗组合物比常规液体洗涤剂将含有更低量的水。一般浓缩液体清洗组合物的水含量,按该清洗组合物重量计,优选少于40%,更优选少于30%,最优选少于20%。清洗辅助物质
表面活性剂体系-包括在由本发明制得的完整配方的清洗组合物中的去污表面活性剂占清洗组合物重量的至少0.01%,优选至少约0.1%,更优选至少约0.5%,最优选至少约1%-60%,更优选至约35%,最优选至约30%,这取决于所用的特定表面活性剂和所要求的效果。
去污表面活性剂可以是非离子型、阴离子型、两性型、两性离子型、阳离子型、半极性非离子型的表面活性剂和其混合物,其非限制性实例公开在美国专利5707950和5576282中。优选的洗涤剂和清洗组合物包含阴离子去污表面活性剂或阴离子表面活性剂与其他表面活性剂,特别是非离子表面活性剂的混合物。
适用于本发明的表面活性剂的非限制实例包括常规C11-C18烷基苯磺酸盐和伯、仲和无规烷基硫酸盐,C10-C18烷基烷氧基硫酸盐,C10-C18烷基多苷和它们相应的硫酸化多苷,C12-C18α-磺化的脂肪酸酯,C12-C18烷基和烷基酚烷氧基化物(特别是乙氧基化物和混合的乙氧基/丙氧基化物),C12-C18甜菜碱和磺基甜菜碱,C10-C18氧化胺等。其它常规适用的表面活性剂列在标准教科书中。
优选配制表面活性剂与组合物中存在的酶组分相容。在液体或凝胶组合物中,最优选配制表面活性剂使得其促进或至少不降低这些组合物中的任何酶的稳定性。
非离子表面活性剂-烷基酚的聚氧乙烯、聚氧丙烯和聚氧丁烯的缩合物适合用作本发明表面活性剂体系中的非离子型表面活性剂,优选的是聚氧乙烯缩合物。商业上可购得的这种类型的非离子表面活性剂包括IgepalTMC0-630,是由GAF Corporation出售的;和TritonTMX-45,X-114,X-100和X-102,它们都是由Rohm&Haas公司出售的。这些表面活性剂通常称为烷基酚烷氧基化物(例如烷基酚乙氧基化物)。
伯和仲脂肪醇与约1至约25摩尔环氧乙烷的缩合产物适合用作本发明非离子表面活性剂体系中的非离子表面活性剂。商业上可购得的这种类型的非离子表面活性剂包括TergitolTM 15-S-9(C11-C15直链醇与9摩尔环氧乙烷的缩合产物)、TergitolTM24-L-6 NMW(C12-C14伯醇与6摩尔环氧乙烷的缩合产物,并具有窄的分子量分布),两种均由Union Carbide Corporation出售;由Shell Chemical Company出售的NeodolTM 45-9(C14-C15直链醇与9摩尔环氧乙烷的缩合产物),NeodolTM23-3(C12-C13直链醇与3.0摩尔环氧乙烷的缩合产物),NeodolTM45-7(C14-C15直链醇与7摩尔环氧乙烷的缩合产物),NeodolTM45-5(C14-C15直链醇与5摩尔环氧乙烷的缩合产物);由Procter&GambleCompany出售的KyroTM EOB(C13-C15醇与9摩尔环氧乙烷的缩合产物);和由Hoechst出售的Genapol LA030或LA 050(C12-C14醇与3或5摩尔环氧乙烷的缩合产物)。这些产物优选的HLB范围是8-11,最优选8-10。
还适合用作本发明表面活性剂体系中的非离子表面活性剂的是在美国专利US 4565647中公开的烷基多糖。
优选的烷基多苷具有式:R2O(CnH2nO)t(糖基)x
其中R2选自烷基、烷基苯基、羟烷基、羟烷基苯基和其混合物,其中烷基含有约10至约18个碳原子,优选约12至约14个碳原子;n是2或3,优选2;t是0至约10,优选0;x是约1.3至约10,优选约1.3至约3,最优选约1.3至约2.7。
环氧乙烷与通过环氧丙烷与丙二醇缩合形成的疏水基的缩合产物也适合用作本发明附加的非离子表面活性剂体系。这种类型化合物的实例包括一些商业上可购得的P1urafacTM LF404和PluronicTM表面活性剂,它由BASF出售。
也适合用作本发明非离子表面活性剂体系中的非离子表面活性剂的是环氧乙烷与由环氧丙烷和乙二胺反应得到的产物进行缩合的产物。这种类型非离子表面活性剂的实例包括一些商业上可购得的TetronicTM化合物,由BASF出售。
优选的用作本发明表面活性剂体系中的非离子表面活性剂的是烷基酚的聚氧乙烯缩合物、伯和仲脂肪醇与约1至约25摩尔环氧乙烷的缩合产物、烷基多糖和其混合物。最优选的是具有3至15个乙氧基的C8-C14烷基酚乙氧基化物和具有2至10个乙氧基的C8-C18醇乙氧基化物(优选C10平均),和其混合物。
高度优选的非离子表面活性剂是式:R2-C(O)-N(R1)-Z的多羟基脂肪酸酰胺表面活性剂,其中R1是H,或R1是C1-4烃基、2-羟基乙基、2-羟基丙基或其混合物,R2是C5-31烃基,Z是具有直接连有至少3个羟基的直链烃基链的多羟基烃基,或其烷氧基化的衍生物。优选R1是甲基,R2是直链C11-15烷基或C16-18烷基或链烯基例如椰子油烷基或其混合物,Z是由在还原胺化反应中的还原糖例如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖衍生得到。
阴离子表面活性剂-适合使用的阴离子表面活性剂是直链烷基苯磺酸盐、烷基酯磺酸盐表面活性剂,包括按照“美国油化学家学会杂志”(“The Journal of the American Oil Chemists Society”),52(1975),第323-329页的方法用气态SO3磺化的直链C8-C20羧酸(即脂肪酸)酯。适合的原料包括天然的脂肪类物质如由牛油、棕榈油等衍生的物质。
特别用于洗衣应用的优选的烷基酯磺酸盐表面活性剂包括具有以下结构式的烷基酯磺酸盐表面活性剂:
Figure A9881264001051
其中R3是C8-C20烃基,优选烷基,或其组合,R4是C1-C6烃基,优选烷基,或其组合,M是阳离子,其与烷基酯磺酸根形成水溶性盐。适合的形成盐阳离子包括金属例如钠、钾和锂,以及取代或未取代的铵阳离子例如单乙醇胺、二乙醇胺和三乙醇胺。优选R3是C10-C16烷基,R4是甲基、乙基或异丙基。特别优选的是甲基酯磺酸盐其中R3是C10-C16烷基。
其它适合的阴离子表面活性剂包括烷基硫酸盐表面活性剂,其是式ROSO3M的水溶性盐或酸,其中R优选是C10-C24烃基,优选烷基或具有C10-C20烷基部分的羟烷基,更优选C12-C18烷基或羟烷基,M是H或阳离子。一般对于较低的洗涤温度(例如低于约50℃),优选C12-C16烷基链,而对较高的洗涤温度(例如高于约50℃),优选C16-C18烷基链。
其它可用于洗涤目的的阴离子表面活性剂包括皂的盐、C8-C22伯或仲烷烃磺酸盐、C8-C24链烯烃磺酸盐、通过磺化碱土金属柠檬酸盐的热解产物制得的磺化的多羧酸,例如在英国专利说明书No.1,082,179中所描述的;C8-C24烷基聚乙二醇醚硫酸盐(含有多至10摩尔氧乙烯);烷基甘油磺酸盐、脂肪酰基甘油磺酸盐、脂肪油酰基甘油硫酸盐、烷基酚氧乙烯醚硫酸盐、石蜡烃磺酸盐、烷基磷酸盐、羟乙磺酸盐例如酰基羟乙磺酸盐、N-酰基牛磺酸盐、烷基琥珀酰胺酸盐和磺基琥珀酸盐、磺基琥珀酸单酯(特别是饱和和不饱和的C12-C18单酯)和磺基琥珀酸二酯(特别是饱和和不饱和的C6-C12二酯)、酰基肌氨酸盐、烷基多糖的硫酸盐例如烷基多葡萄糖苷硫酸盐(下文描述的非离子性的非硫酸化的化合物)、支链的伯烷基硫酸盐和烷基聚乙氧基羧酸盐例如那些具有式RO(CH2CH2O)kCH2COO-M+的盐,其中R是C8-C22烷基,k为1至10的整数,M是形成可溶性盐的阳离子。树脂酸和氢化树脂酸也是适用的,例如松香、氢化松香,以及存在于松浆油或由松浆油衍生的树脂酸和氢化树脂酸。
其它例子被描述在“表面活性剂和洗涤剂”(第1和II卷,由Schwartz,Perry及Berch编著)书中。各种这样的表面活性剂也一般性地公开在1975年12月30日授予Laughlin等人的美国专利US3,929,678,第23栏58行至29栏23行中(本文引用作参考)。
高度优选的阴离子表面活性剂包括烷基烷氧基化硫酸盐表面活性剂,其是式R0(A)mS03M的水溶性盐或酸,其中R是未取代的C10-C24烷基或具有C10-C24烷基部分的羟烷基,优选C12-C20烷基或羟烷基,更优选C12-C18烷基或羟烷基,A是乙氧基或丙氧基单元,m值大于0,一般在约0.5至约6之间,更优选在约0.5至约3之间,M是H或阳离子,其可以是例如金属阳离子(例如钠、钾、锂、钙、镁等)、铵或取代的铵阳离子。烷基乙氧基化硫酸盐以及烷基丙氧基化硫酸盐是本发明预期使用的。取代的铵阳离子的具体实例包括甲基、二甲基、三甲基铵阳离子和季铵阳离子例如四甲基铵和二甲基哌啶鎓阳离子,以及那些由烷基胺例如乙胺、二乙胺、三乙胺和其混合物衍生的阳离子等。示例性的表面活性剂有C12-C18烷基聚乙氧基化物(1.0)硫酸盐(C12-C18E(1.0)M),C12-C18烷基聚乙氧基化物(2.25)硫酸盐(C12-C18E(2.25)M),C12-C18烷基聚乙氧基化物(3.0)硫酸盐(C12-C18E(3.0)M)和C12-C18烷基聚乙氧基化物(4.0)硫酸盐(C12-C18E(4.0)M),其中M适宜选自钠和钾。
当含有它们时,本发明清洗组合物典型地含有从约1%,优选从约3%至约40%,优选约20%重量的这种阴离子表面活性剂。
阳离子表面活性剂-适合用于本发明清洗组合物中的阳离子去污表面活性剂是那些具有一个长链烃基的表面活性剂。这种阳离子型表面活性剂的实例包括铵盐表面活性剂例如烷基三甲基卤化铵,以及具有下式的那些表面活性剂:[R2(OR3)y][R4(OR3)y]2R5N+X-
,其中R2是在其烷基链中含有约8至约18个碳原子的烷基或烷基苄基,每个R3选自-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2CH(CH2OH)-、-CH2CH2CH2-和其混合物;每个R4选自C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、由连接两个R4基团形成的苄基环结构、-CH2CHOH-CHOHCOR6CHOHCH2OH,其中R6是分子量小于约1000的任何己糖或己糖聚合物基团,以及氢(当y不为0时);R5是同R4相同的基团,或者是烷基链,其中R2加R5的碳原子总数不多于约18个;每个y是0至约10,并且y值总和为0至约15;X是任何一种相容的阴离子。
适用于本发明组合物的高度优选的阳离子型表面活性剂是水溶性季铵盐化合物,其具有式(i):R1R2R3R4N+X-,其中R1是C8-C16烷基,每个R2、R3和R4独立地为C1-C4烷基、C1-C4羟烷基、苄基和-(C2H4O)xH,其中x值为2至5,X是阴离子。R2、R3、R4中是苄基的应当不能多于一个。R1的烷基链长优选是C12-C15,特别是,该烷基是由椰子或棕榈仁脂肪衍生的链长的混合物,或者是通过链烯烃或羰基合成醇合成得到的。R2、R3和R4优选的基团是甲基和羟乙基,并且阴离子X可选自卤化物、甲基硫酸根、乙酸根和磷酸根离子。
用于本发明的具有式(i)的适合季铵盐化合物的实例包括,但不限于:椰子油三甲基氯化铵或溴化铵;椰子油甲基二羟乙基氯化铵或溴化铵;癸基三乙基氯化铵;癸基二甲基羟乙基氯化铵或溴化铵;C12-C15二甲基羟乙基氯化铵或溴化铵;椰子油二甲基羟乙基氯化铵或溴化铵;肉豆蔻基三甲基甲基硫酸铵;月桂基二甲基苄基氯化铵或溴化铵;月桂基二甲基(氧乙烯)4氯化铵或溴化铵;胆碱酯(式(i)的化合物,其中R1是CH2-CH2-O-C(O)-C12-14烷基,和R2、R3、R4是甲基);和二烷基咪唑啉[(i)]。
本发明有用的其它阳离子表面活性剂还描述在1980年10月14日授予的Cambre的美国专利US4,228,044和欧洲专利申请EP000,224中。
当包含它们时,本发明清洗组合物典型地含有约0.2%,优选从约1%至约25%,优选至约8%重量这种阳离子表面活性剂。
两性表面活性剂-两性表面活性剂也适用于本发明清洗组合物中,其实例描述在美国专利3929678中。
当包含它们时,本发明清洗组合物典型地含有约0.2%,优选从约1%至约15%,优选至约10%重量这种两性表面活性剂。
两性离子表面活性剂-两性离子表面活性剂也适用于清洗组合物中,其实例描述在美国专利3929678中。
当包含它们时,本发明清洗组合物典型地含有约0.2%,优选从约1%至约15%,优选至约10%重量这种两性离子表面活性剂。
半极性非离子表面活性剂-半极性非离子表面活性剂是特殊的一类非离子表面活性剂,其包括具有下式的水溶性氧化胺:
Figure A9881264001081
其中R3是含有约8至约22个碳原子的烷基、羟烷基或烷基苯基、或它们的混合物;R4是含有约2至约3个碳原子的亚烷基或羟亚烷基或它们的混合物;x为0至约3;每个R5是含有约1至约3个碳原子的烷基或羟烷基或含有约1至约3个氧乙烯基团的聚氧乙烯基团。(R5基团可彼此连接,例如通过氧或氮原子连接形成环状结构);水溶性氧化膦,其含有一个约10-18个碳原子的烷基部分和选自含有约1-3个碳原子的烷基和羟烷基的两个残基部分;和水溶性亚砜,其含有一个约10-18个碳原子的烷基部分和选自具有约1-3个碳原子的烷基和羟烷基的一个残基部分。
氧化胺表面活性剂特别是包括C10-C18烷基二甲基氧化胺和C8-C12烷氧基乙基二羟乙基氧化胺。
当包含它们时,本发明清洗组合物典型地含有0.2%,优选从约1%至约15%,优选至约10%重量这种半极性非离子表面活性剂。
辅助表面活性剂-本发明清洗组合物还可包含选自伯或叔胺的辅助表面活性剂。用于本发明的适合的伯胺包括根据式R1NH2的胺,其中R1是C6-C12,优选C6-C10烷基链,或R4X(CH2)n,X是-O-,-C(O)NH-或-NH-,R4是C6-C12烷基链,n是1-5,优选3。R1烷基链可以是直链或支链,并且可间隔多至12个,优选少于5个氧乙烯部分。
根据本文上式,优选的胺是正烷基胺。用于本发明适合的胺可选自1-己胺、1-辛胺、1-癸胺和月桂胺。其它优选的伯胺包括C8-C10氧丙胺、辛氧基丙基胺、2-乙基己基氧丙基胺、月桂基酰氨基丙基胺和酰氨基丙基胺。用于本发明组合物最优选的胺是1-己胺、1-辛胺、1-癸胺、1-十二烷基胺。特别适合的是正十二烷基二甲基胺和二羟乙基椰子油烷基胺和7摩尔乙氧基化的油胺、月桂基酰氨基丙基胺和椰子油酰氨基丙基胺。
LFNIs-在本发明自动洗餐具组合物(ADD)中特别优选的表面活性剂是低泡非离子表面活性剂(LFNI),其描述在美国专利5705464和5710115中。LFNI的含量可为0.01%-约10%重量,优选约0.1%-10%,最优选约0.25%-4%。ADDs中最典型使用LFNIs,这是由于它们赋予ADD产品改善的使水成片的作用(特别是从玻璃上)。它们还包含下文进一步说明的已知能使自动洗餐具中碰到的食物污垢消泡的非硅氧烷、非磷酸盐聚合材料。
优选的LFNIs包括非离子烷氧基化表面活性剂,特别是由伯醇衍生的乙氧基化物和它们与更复杂的表面活性剂的混合体,例如聚氧丙烯/聚氧乙烯/聚氧丙烯(PO/EO/PO)逆嵌段聚合物,其描述在美国专利5705464和5710115中。
还可使用的LFNIs包括从Olin Corp。购得的那些POLY-TERGENTSLF18非离子表面活性剂,和具有上文讨论的熔点性质的任何可生物降解的LFNI。
这些和其它非离子表面活性剂是现有技术公知的,其更详细地描述在Kirk Othmer’s的化学工艺百科全书(Encyclopedia of ChemicalTechnology),第3版,第22卷,第360-379页,“表面活性剂和去污酶”中,其在本文引用作参考。
漂白体系-本发明清洗组合物优选包含漂白体系。漂白体系一般包含“漂白剂”(过氧化氢源)和“引发剂”或“催化剂”。当存在时,漂白剂一般占组合物重量的从约1%,优选从约5%至约30%,优选至约20%。如果存在的话,漂白活化剂的含量一般为包含漂白剂加上漂白活化剂的漂白组合物重量的从约0.1%,优选从约0.5%至约60%,优选至约40%。
漂白剂-过氧化氢源详细地描述在本文引用的Kirk Othmer的化学工艺百科全书,第4版(1992,John Wiley&Sons),第4卷,第271-300页“漂白剂(综述)”,包括各种形式的过硼酸钠和过碳酸钠,包括各种涂覆和改性的形式。
本发明使用的优选的过氧化氢源可以来自任何适宜的来源,包括过氧化氢本身。本发明可使用例如,过硼酸盐,例如过硼酸钠(任何水合物,但优选一水合物或四水合物)、碳酸钠过氧水合物或等同的过碳酸盐、焦磷酸钠过氧水合物、尿素过氧水合物或过氧化钠。还适合的是有效氧的来源例如过硫酸盐漂白剂(例如OXONE,由DuPont生产)。过硼酸钠一水合物和过碳酸钠是特别优选的。还可使用任何适宜的过氧化氢源的混合物。
优选的过碳酸盐漂白剂包括具有平均颗粒度在约500至约1000微米范围的干燥颗粒,小于约200微米的所述颗粒不超过约10%(重量),大于约1250微米的所述颗粒不超过约10%(重量)。过碳酸盐可以选择性地用硅酸盐、硼酸盐或水溶性表面活性剂涂覆。过碳酸盐可以从各种商业来源如FMC,Solvay和Tokai Denka得到。
本发明组合物还可包含作为漂白剂的氯型漂白物质。这种试剂是本领域已知的并包括例如二氯异氰脲酸钠(“NaDCC”)。然而,氯型漂白剂在包含酶的组合物中不太优选。
(a)漂白活化剂-优选,组合物中的过氧漂白剂组分与活化剂(过酸前体)一起配制。按组合物的重量计,活化剂的含量为从约0.01%,优选从约O.5%,更优选从约1%至约15%,优选至约10%,更优选至约8%。优选的漂白活化剂选自四乙酰乙二胺(TAED)、苯甲酰己内酰胺(BzCl)、4-硝基苯甲酰己内酰胺、3-氯代苯甲酰己内酰胺、苯甲酰氧基苯磺酸盐(BOBS)、壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)、苯甲酸苯酯(PhBz)、癸酰氧基苯磺酸盐(C10-OBS)、苯甲酰戊内酰胺(BZVL)、辛酰氧基苯磺酸盐(C8-OBS)、可过水解的酯和它们的混合物,最优选苯甲酰己内酰胺和苯甲酰戊内酰胺。在pH约8-9.5范围的特别优选的漂白活化剂是那些选择具有OBS或VL离去基团的活化剂。
优选的疏水漂白活化剂包括,但不限于:壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)、4-[N-(壬酰基)氨基己酰基氧]苯磺酸钠(NACA-OBS),其实例描述在美国专利5523434中,十二烷酰基氧基苯磺酸盐(LOBS或C12-0BS)、10-十一碳烯酰基氧基苯磺酸盐(UDOBS或C11-OBS,在10-位置有不饱和度)和癸酰基氧基苯甲酸(DOBA)。
优选的漂白活化剂描述在1997年12月16日授权的Christie等的美国专利5698504;1997年12月9日授权的Christie等的美国专利5695679;1997年11月11日授权的Willey等的美国专利5686401;1997年11月11日授权的Hartshorn等的美国专利5686014;1995年4月11日授权的Willey等的美国专利5405412;1995年4月11日授权的Willey等美国专利5405413;1992年7月14日授权的Mitchel等的美国专利5130045;和1983年11月1日授权的Chung等的美国专利4412934,和未结案的美国专利申请序号08/709072,08/064564,所有这些在本文引用作参考。
本发明中,过氧漂白化合物(按AvO)与漂白活化剂的摩尔比一般至少为1∶1,优选约20∶1,更优选约10∶1至约1∶1,优选至约3∶1。
还可包括四元取代的漂白活化剂。本发明清洗组合物优选包含四元取代的漂白活化剂(QSBA)或四元取代的过酸(QSP);更优选前者。优选的QSBA结构还被描述在1997年11月11日授权的Willey等的美国专利5686015;1997年8月5日授权的Taylor等的美国专利5654421;1995年10月24日授权的Gosselink等的美国专利5460747;1996年12月17日授权的Miracle等的美国专利5584888和1996年11月26日授权的Taylor等的美国专利5578136,所有这些在本文引用作参考。
本发明有用的高度优选的漂白活化剂是酰胺-取代的类型,如美国专利5698504,5695679和5686014中所述,其在本文引用作参考。这种漂白活化剂的优选实例包括(6-辛酰氨基己酰基)氧苯磺酸盐,(6-壬酰氨基己酰基)氧苯磺酸盐,(6-癸酰氨基己酰基)氧苯磺酸盐,和它们的混合物。
公开在美国专利5698504,5695679和5686014(其在本文引用作参考)和1990年10月30日授权的Hodge等的美国专利4966723中的其他有用的活化剂包括苯并噁嗪型活化剂,例如C6H4环被稠合在-C(O)OC(R1)=N-部分的1,2-位置。
根据活化剂和确切的应用,可由在使用中pH为约6-约13,优选约9.O-约10.5的漂白体系得到良好的漂白结果。一般,例如,具有吸电子部分的活化剂是用于近中性或中性以下pH范围。碱和缓冲剂可用于保证这种pH。
如描述在美国专利5698504,5695679和5686014(其在本文引用作参考)中的酰基内酰胺活化剂是本发明非常有用的,尤其是酰基己内酰胺(参见例如WO94-28102A)和酰基戊内酰胺(参见1996年4月2日授权的Willey等的US5503639,其在本文引用作参考)。
(b)有机过氧化物,特别是二酰基过氧化物
这些化合物详细地描述在Kirk Othmer的化学工艺百科全书(Encylopedia of Chemical Technology),第17卷,John Wiley andSons,1982,第27-90页,特别是第63-72页,所有这些被本文引用作参考。如果使用二酰基过氧化物的话,优选其是对去斑/成膜产生最小不利影响的一种。
(c)含金属的漂白催化剂
本发明组合物和方法使用了用于漂白组合物中有效的含金属的漂白催化剂。优选的是含锰和钴的漂白催化剂。
一种类型的含金属的漂白催化剂是一种催化剂体系,其包含具有所定义的漂白催化活性的过渡金属阳离子例如铜、铁、钛、钌、钨、钼或锰阳离子;具有少的或不具有漂白催化活性的辅助金属阳离子例如锌或铝阳离子,和对催化和辅助金属阳离子具有定义的稳定常数的螯合剂,特别是乙二胺四乙酸、乙二胺四(亚甲基膦酸)和其水溶性盐。这类催化剂公开在1982年2月2日授权的Bragg的美国专利4,430,243中。
锰金属配合物
如果需要的话,本发明组合物可以用锰化合物来催化。该类化合物和其用量是本领域公知的,包括例如在美国专利US5576282、US5246621,US5244594,US5194416,US5114606和欧洲专利申请公开号EP549271A1,EP549272A1,EP54444OA2和EP544490A1中公开的锰基催化剂。这些催化剂的优选实例包括MnTV 2(u-O)3(1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷)2(PF6)2,MnIII 2(u-O)1(u-OAc)2(1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷)2(ClO4)2,MnTV 4(u-O)6(1,4,7-三氮杂环壬烷)4(ClO4)4,MnIIIMnIV 4(u-O)1(u-OAc)2(1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷)2(ClO4)3,MnIV(1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷)(OCH3)3(PF6),和它们的混合物。其他金属基漂白催化剂包括在美国专利US4430243、US5114611中公开的那些。使用带有各种配合物配体的锰用于提高漂白力也在下列美国专利中被报道:US4728455,US5284944,US5246612,US5256779,US5280117,US5274147,US5153161和US5227084。
钴金属配合物-用于本发明的钴漂白催化剂是已知的,其描述在例如美国专利5597936;5595967和5703030和M.L.Tobe,“过渡金属配合物的碱水解”,高等无机生物无机机理(Adv.Inorg.Bioinorg.Mech.),(1983),2,第1-94页中。适合于本发明的最优选的钴催化剂是具有式[Co(NH3)5OAc]Ty的钴五胺乙酸盐,其中“OAc”表示乙酸根部分,“Ty”是阴离子,特别是氯化钴五胺乙酸[Co(NH3)5OAc]Cl2;以及[Co(NH3)5OAc](OAc)2;[Co(NH3)5OAc](PF6)2;[Co(NH3)5OAc](S04);[Co(NH3)5OAc](BF4)2;和[Co(NH3)5OAc](NO3)2(本文“PAC”)。
这些钴催化剂容易用已知的方法制备,例如在美国专利5597936;5595967和5703030;在Tobe文章和其中引用的参考文献;在美国专利US4,810,410;J.Chem.Ed.(1989),66(12),1043-1045;无机化合物的合成和表征,W.L.Jolly(Prentice-Hall;1970),第461-463页;无机化学,18,1497-1502(1979〕;无机化学,21,2881-2885(1982);无机化学,18,2023-2025(1979);无机合成,173-176(1960);和物理化学杂志,56,22-25(1952)中讲述的。
大多环刚性配位体的过渡金属配合物-本发明组合物还适宜包括作为漂白催化剂的大多环刚性配位体的过渡金属配合物。短语“大多环刚性配位体”在下文讨论中有时缩写为“MRL”。所用量是催化有效量,适宜为约1ppb或更多,例如高至约99.9%,更典型地是约0.001ppm或更多,优选约0.05ppm-500ppm(其中“ppb”表示十亿分之一重量份,“ppm”表示百万分之一重量份)。
适合的过渡金属例如锰,在下文被例举说明。“大多环”意思是MRL既是大环又是多环。“多环”意思是至少双环。这里所述的术语“刚性”包括“具有超结构”和“交联”。“刚性”被定义为挠曲性转变是受限的:参见D.H Bush.化学综述(Chemical Reviews)(1993),93,847-860,其在本文引用作参考。更具体地讲,本文所述的“刚性”意思是MRL必须比否则相同的(在主环中具有相同的环尺寸和类型和原子数目)但缺少MRL中存在的超结构(特别是连接部分,或优选交联部分)的大环(“母体大环”)有可测定的更强的刚性。在测定具有和不具有超结构的大环的对比刚性中,本专业人员使用大环的游离形式(不是结合金属的形式)。已知可使用刚性来比较大环;测定、测量或比较刚性的适合方法包括计算方法(参见例如Zimmer,.化学综述(Chemical RevieWS)(1995),95(38),2629-2648或Hancock等,无机Chimica Acta,(1989),164,73-84)。
本发明优选的MRL是特殊类型的交联的超刚性配位体。“交联”非限制性地说明在以下的1.11中。在1.11中,交联是-CH2CH2-部分,其桥连该示例结构中的N1和N8。通过对比,“同侧的”桥连,例如若横跨1.11中的N1和N12加入的一个桥连,其不能充分地构成“交联”,因此不是优选的。
刚性配位体配合物中的适合金属包括Mn(II)、Mn(III)、Mn(IV)、Mn(V)、Fe(II)、Fe(III)、Fe(IV)、Co(I)、Co(II)、Co(III)、Ni(I)、Ni(II)、Ni(III)、Cu(I)、Cu(II)、Cu(III)、Cr(II)、Cr(III)、Cr(IV)、Cr(V)、Cr(VI)、V(III)、V(IV)、V(V)、Mo(IV)、Mo(V)、Mo(VI)、W(IV)、W(V)、W(VI)、Pd(II)、Ru(II)、Ru(III)和Ru(IV)。本发明过渡金属漂白催化剂中优选的过渡金属包括锰、铁和铬。
更一般地是,本发明MRL(和相应的过渡金属催化剂)适宜包含:
(a)至少一个包含4个或更多个杂原子的主要的大环;和
(b)能够增强大环刚性的共价连接的非金属超结构,优选选自:
(i)桥连超结构,例如连接部分;
(ii)交联超结构,例如交联的连接部分;和
(iii)它们的组合。
本文所述的术语“超结构”如在Busch等的文章中所定义,参见例如Busch在“化学综述”中的文章。
本文优选的超结构不仅增强了母体大环的刚性,而且还有助于大环的折叠,使得其与缝隙处的金属配位。适合的超结构明显可以是简单的,例如可使用诸如以下图1和图2中说明的任何连接部分:
Figure A9881264001151
                    图1其中n是整数,例如为2-8,优选低于6,一般为2-4,或
Figure A9881264001152
                   图2其中m和n是约1-8的整数,更优选1-3;Z是N或CH;T是相容的取代基,例如H、烷基、三烷基铵、卤素、硝基、磺酸根等。在1.10中的芳环可被饱和环代替,其中连接环的Z中的原子可含N、O、S或C。
适合的MRL还非限制性地由以下化合物说明:
Figure A9881264001153
                    图3
这是根据本发明的MRL,其是高度优选的交联的甲基取代的(所有氮原子是叔氮)cyclam的衍生物。正规地讲,使用推广的von Baeyer系统,该配位体的名称为5,12-二-甲基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷。参见“有机化合物IUPAC命名法介绍指南1993”,(A Guideto IUPAC Nomenclature of Organic Compounds:Recommendations1993),R.Panico,W.H.Powell和J-C Richer(编辑),Blackwell科技出版社,波士顿,1993;特别参见R-2.4.2.1部分。
本发明组合物适用的大环刚性配位体的过渡金属漂白催化剂一般可包括符合本发明定义的公知化合物,以及更优选一些大量的特意指定用于本发明洗衣或清洗应用的新化合物,由以下进行非限制说明:二氯-5,12-二甲基-1,5,8,12,-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II);二水合-5,12-二甲基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II)六氟磷酸盐;水合-羟基-5,12-二甲基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(III)六氟磷酸盐;二水合-5,12-二甲基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II)四氟硼酸盐;二氯-5,12-二甲基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(III)六氟磷酸盐;二氯-5,12-二-正丁基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II);二氯-5,12-二苄基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II);二氯-5-正丁基-12-甲基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II);二氯-5-正辛基-12-甲基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II);二氯-5-正丁基-12-甲基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷锰(II)。
在实施中,不受限制,本发明组合物和清洗方法可被调整以在含水洗涤介质中提供约至少万万分之一份的活性漂白催化剂物质,优选在洗涤水溶液中提供约0.01ppm至约25ppm,更优选约0.05ppm至约10ppm,最优选约0.1ppm至约5ppm漂白催化剂物质.在自动洗涤过程的洗涤水溶液中为了达到这种含量,本发明典型的组合物按该漂白组合物重量计将包含约0.0005%至约0.2%,更优选约0.004%至约0.08%漂白催化剂,特别是锰或钴催化剂。
(d)其他漂白催化剂-本发明组合物可包含一种或多种其他漂白催化剂。优选的漂白催化剂是两性离子漂白催化剂,其描述在美国专利5576282中,特别是3-(3,4-二氢异喹啉鎓)丙磺酸盐。其他漂白催化剂包括阳离子漂白催化剂,其描述在美国专利5360569、5442066、5478357、5370826、5482515、5550256和WO95/13351,WO95/13352和WO95/13353中。
还适合作为漂白剂的是预制过酸,例如苯二甲酰亚氨基-过氧己酸(“PAP”)。参见例如美国专利5487818,5310934,5246620,5279757和5132431。
任选的去污酶-本发明洗涤剂和清洗组合物还可任选地含有一种或多种类型的洗涤剂酶。这种酶可包括其他蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶。这种物质是现有技术公知的并可按商品名商购。它们可以悬浮液、“颗粒”(marumes)或“小球”的形式掺入本发明非水基液体洗涤剂组合物中。另一类适合的酶包括酶在非离子表面活性剂中的浆料形式,例如由Novo Nordisk按商品名“SL”销售的酶或由NovoNordisk按商品名“LDP”销售的微囊包封的酶。适合的酶和其用量描述在美国专利5576282、5705464和5710115中。
对用于本发明,酶以常规的酶小球的形式加入本发明组合物中是特别优选的。这种小球一般尺寸在约100-1000微米,更优选在约200-800微米,并且将悬浮在组合物的整个非水液相中。本发明组合物中的酶小球与其它酶形式相比,就随时间推移保持酶活性而论,发现表现出特别理想的酶稳定性。因此,使用酶小球的组合物不需要含有常规的酶稳定剂,例如当酶掺入含水液体洗涤剂中时必须通常使用的酶稳定剂。
然而,加入本发明组合物中的酶可以是颗粒,优选T-颗粒形式。
本文中使用的“去污酶”指在洗衣、硬表面清洗或个人护理洗涤剂组合物中具有洗涤、去污渍或其它有益效果的任何酶。优选的洗涤酶是水解酶如蛋白酶,淀粉酶和脂肪酶。优选的用于洗衣用途的酶包括,但不局限于,蛋白酶,纤维素酶,脂肪酶和过氧化物酶。用于自动洗餐具高度优选的是淀粉酶和/或蛋白酶,包括通常商业可购得的类型和改进的类型,虽然越来越多的漂白剂经过不断的改进是可相容的,但仍保留一定程度的漂白剂失活敏感度。
适合的酶的实例包括,但不限于:半纤维素酶、过氧化物酶、蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质素酶、支链淀粉酶、单宁酶、戊聚糖酶、苹果酸酶(malanase)、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酶、软骨素酶、漆酶和公知的淀粉酶,或它们的混合物。
这种适合的酶的实例公开在美国专利US5705464、5710115、5576282、5728671和5707950中。
本发明使用的纤维素酶包括细菌和霉菌纤维素酶。优选它们具有最佳pH范围5-12和比活性高于50CEVU(纤维素粘度单位)。适宜的纤维素酶公开在美国专利US4,435,307,J61078384和WO96/02653中,其公开了分别由Humicola insolens、木霉属、草根霉属和孢子丝菌属产生的霉菌纤维素酶。EP739982描述了从新的杆菌种分离出的纤维素酶。适宜的纤维素酶还公开在GB-A-2075028;GB-A-2095275;DE-OS-2247832和WO95/26398中。
这种纤维素酶的实例是由Humicola insolens(灰色腐质霉变异的thermoidea)菌株,特别是腐质霉属菌株DSM1800产生的纤维素酶。其它适合的纤维素酶是来源于Humicola insolens、具有分子量约50KDa、等电点为5.5并含有415个氨基酸的纤维素酶,和由腐质霉属insolens,DSM1800衍生的具有纤维素酶活性的~43kD的内葡聚糖酶;优选的内葡聚糖酶组分具有在WO91/17243中公开的氨基酸序列。还适合的纤维素酶是由Trichoderma longibrachiatum得到的EGIII纤维素酶,其描述在Genencor的WO94/21801中。特别适合的纤维素酶是具有护理颜色作用的纤维素酶。这种纤维素酶的实例是在1991年11月6日(Novo)提交的欧洲专利申请No.91202879.2中描述的那些纤维素酶。Carezyme和Celluzyme(Novo Nordisk A/S)是特别适用的。还参见WO 91/17244和WO 91/21801。具有护理织物和/或清洗性质的其它适合的纤维素酶描述在WO 96/34092、WO 96/17994和WO 95/24471中。
纤维素酶,当存在时,一般在清洗组合物中的掺入量为清洗组合物重量的0.0001%-2%纯酶。
过氧化物酶是与氧源,例如过碳酸盐、过硼酸盐、过硫酸盐、过氧化氢等以及与作为增强漂白剂分子的酚类基质结合使用。它们用于“漂白溶液”,即抑制在洗涤过程中从底物上脱落的染料或颜料迁移至洗涤溶液中的其它底物上。过氧化物酶在本文技术领域中是已知的,包括例如,辣根过氧化物酶、木质素酶和卤代过氧化物酶,如氯代和溴代过氧化物酶。适合的过氧化物酶和含有过氧化物酶的洗涤剂组合物公开在,例如美国专利5705464、5710115、5576282、5728671和5707950、PCT国际申请WO 89/099813、WO89/09813和1991年11月6日申请的欧洲专利申请No.91202882.6和1996年2月20日申请的EP96870013.8中。还适合的是漆酶。
增效剂一般占总组合物重量的0.1%-5%。优选的增效剂为取代的吩噻嗪和吩噁嗪10-吩噻嗪丙酸(PPT)、10-乙基吩噻嗪-4-羧酸(EPC)、10-吩噁嗪丙酸(POP)和10-甲基吩噁嗪(如WO94/12621所述)和取代的丁香酸酯(C3-C5取代的烷基丁香酸酯)和苯酚。过碳酸钠或过硼酸钠是优选的过氧化氢源。
以清洗组合物重量计,清洗组合物中所述过氧化物酶的掺入量通常为0.0001-2%纯酶。
可使用酶催体系作为漂白剂。还可通过加入能在洗涤和/或漂清过程的开始或过程中产生过氧化氢的酶催体系(即酶和随之的基质)产生过氧化氢。这种酶催体系公开在1991年10月9日申请的欧洲专利申请91202655.6中。
本发明清洗组合物可包括的其它优选酶包括脂肪酶。洗涤剂可使用的适宜脂肪酶包括由假单胞菌属族中的微生物,如司徒茨氏(stutzeri)假单胞菌ATCC 19.154产生的那些脂肪酶,如公开在英国专利1372034中。适合的脂肪酶包括由微生物荧光假单胞菌IAM1057产生的与脂肪酶的抗体表现出阳性免疫交叉反应的那些脂肪酶。这种脂肪酶可由Amano Pharmacetical有限公司,Nagoya,日本买到,商品名为脂肪酶P“Amano”,下文称之为“Amano-P”。其他适合的商业脂肪酶包括Amano-CES,由粘稠色杆菌(Chromobacter viscosum)得到的脂酶,例如由Toyo Jozo公司,Tagata,日本得到的粘稠色杆菌变异的lipolyticum NRRLB 3673,;由U.S.Biochemical公司,U.S.A.和荷兰的Disoynth公司得到的粘稠色杆菌脂酶和由唐菖蒲假单胞菌(Pseudomonas gladioli)得到的脂酶。特别适合的脂肪酶是诸如M1LipaseR和LipomaxR(Gist-Brocades)和LipolaseR和LipolaseUltraLR(Novo)的脂酶,已发现当它们与本发明组合物组合使用时是非常有效的。还适合的是由Novo Nordisk描述在EP258068、WO92/05249和WO 95/22615和由Unilever描述在WO 94/03578、WO 95/35381和WO 96/00292中的脂解酶。
还适合的酶是角质酶[EC 3.1.1.50],其被认为是一种特殊种类的脂肪酶,称为不需要界面活化的脂肪酶。在清洗组合物中加入角质酶已被描述在例如WO-A-88/09367(Genencor);WO 90/09446(PlantGenetic System)和WO 94/14963和WO 94/14964(Unilever)中。
脂肪酶和/或角质酶,当存在时,一般在清洗组合物中的掺入量为清洗组合物重量的0.0001%-2%纯酶。
除了上述的脂肪酶外,磷脂酶也可掺入本发明清洗组合物中。适合的磷脂酶的非限制实例包括EC 3.1.1.32磷脂酶A1;EC3.1.1.4磷脂酶A2;EC3.1.1.5溶血磷脂酶;EC3.1.4.3磷脂酶C;EC3.1.4.4磷脂酶D。可商购的磷脂酶包括从丹麦的Novo Nordisk A/S购得的LECITASE和从Sigma购得的磷脂酶A2。当磷脂酶包括在本发明组合物中时,优选还包括淀粉酶。不希望受理论的限制,相信磷脂酶和淀粉酶的结合作用显著地去除了污渍,特别是对油脂/油性的淀粉和浓色的污渍和污垢。优选,磷脂酶和淀粉酶,当存在时,是以重量比为4500∶1-1∶5,更优选50∶1-1∶1的纯酶掺入本发明组合物中。
适宜的蛋白酶为枯草溶菌素,它是由枯草芽胞杆菌和地衣型芽胞杆菌的特定菌株得到(枯草溶菌素BPN和BPN’)。一种适合的蛋白酶是由杆菌菌株得到,它在pH8-12范围内具有最大活性,它由丹麦的NovoIndustries A/S公司,下文中称为“Novo”,开发并以ESPERASE销售。这种酶和类似酶的制备描述在Novo公司的英国专利说明书GB1243784中。蛋白水解酶还包括改性的细菌丝氨酸蛋白酶,例如在1987年4月28日提交的欧洲专利申请序列号为87303761.8中(特别是第17、24和98页)描述的那些,其在本文被称为“蛋白酶B”,和在1986年10月29日公开的Venegas的欧洲专利申请199404中描述的那些,它们是改性的细菌丝氨酸蛋白水解酶,在本文被称为“蛋白酶A”。适合的是在本文被称为“蛋白酶C”的蛋白酶,它们是由杆菌得到的碱性丝氨酸蛋白酶的变体,其中赖氨酸取代27位置的精氨酸,酪氨酸取代104位置的缬氨酸、丝氨酸取代123位置的天冬酰胺,和丙氨酸取代274位置的苏氨酸。蛋白酶C描述在EP90915958:4中,其相应于1991年5月16日公开的WO91/06637。遗传改性的变体,特别是蛋白酶C的变体也包括在本发明中。
被称为“蛋白酶D”的优选蛋白酶是如描述在美国专利5677272和WO95/10591中的羰基水解酶。还适合的是描述在WO95/10591中的蛋白酶的羰基水解酶变体,其氨基酸序列是通过取代位于前体酶中对应于+210位置处的多个氨基酸残基,同时结合取代以下位置处的一个或多个残基得到的:+33,+62,+67,+76,+100,+101,+103,+104,+107,+128,+129,+130,+132,+135,+156,+158,+164,+166,+167,+170,+209,+215,+217,+218,和+222,这里的编号位置对应于由淀粉分解芽孢杆菌得到的天然存在的枯草溶菌素或其它羰基水解酶或枯草溶菌素例如缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素的等价的氨基酸残基(1997年6月4日申请的未结案的专利申请US60/048550和PCT国际申请序号PCT/IB98/00853)。
还适合于本发明的是描述在专利申请EP251446和WO91/06637中的蛋白酶、描述在WO91/02792中的蛋白酶BLAP和描述在WO95/23221中的它们的变体。
还参见描述在Novo的WO9318140A中的得自杆菌NCIMB 40338的高pH蛋白酶。含有蛋白酶,一种或多种其他酶,和可逆蛋白酶抑制剂的加酶洗涤剂描述在Novo的WO9203529A中。当需要时,如在Procter&Gamble的WO95/07791中描述的,可以得到吸附降低和水解提高的蛋白酶。适合于本发明洗涤剂的类似胰蛋白酶的重组蛋白酶描述在Novo的WO9425583中。其它适合的蛋白酶描述在Unilever的EP516200中。
特别适用的蛋白酶描述在PCT公开文献:WO95/30010;WO95/30011和WO95/29979中。适合的蛋白酶可从丹麦的Novo Nordisk A/S按ESPERASE、ALCALASE、DURAZyM、SAVINASE、EVERLASE和KANNASE商购,和从Genencor International(以前是荷兰的Gist-Brocades)按MAXATASE、MAXACAL、PROPERASE和MAXAPEM商购。
这种蛋白水解酶,当存在时,在本发明清洗组合物中的掺入量,按组合物的重量计,为0.0001%-2%,优选0.001%-0.2%,更优选0.005%-0.1%纯酶。
可包括淀粉酶(α和/或β)用于去除基于碳水化合物的污渍。WO/94/02597描述了掺入突变体淀粉酶的清洗组合物。还参见WO95/10603。用于清洗组合物中的其它公知的淀粉酶包括α-和β-淀粉酶。α-淀粉酶是现有技术已知的,包括在US5003257;EP252666;WO91/00353;FR 2676456;EP285123;EP525610;EP368341和英国专利说明书1296839(Novo)中公开的那些淀粉酶。其它适合的淀粉酶是稳定性增强的淀粉酶,其描述在WO94/18314和Genencor的WO96/05295中;和在WO95/10603中公开的由Novo Nordisk A/S购得的对直接母体进行附加修饰得到的淀粉酶变异体。还适合的是描述在EP277216中的淀粉酶。
商业α-淀粉酶产品的实例是从Genencor购得的Purafect Ox Am和Termamyl,Ban,Fungamyl和Duramyl,它们都可从Novo NordiskA/S丹麦购得。WO95/26397描述了其它适合的淀粉酶:α-淀粉酶,其特征在于通过Phadebasα-淀粉酶活性实验测定,在25℃-55℃温度和pH值在8-10范围下具有比活度大于Termamyl的比活度至少25%。适合的是描述在WO96/23873(Novo Nordisk)中的以上酶的变体。具有改善的关于活性量和热稳定性与更高活性量组合性质的其它淀粉分解酶描述在WO95/35382中。
这种淀粉分解酶,当存在时,在本发明清洗组合物中的掺入量,按该组合物的重量计,为0.0001%-2%,优选0.00018%-0.06%,更优选0.00024%-0.048%纯酶。
上述酶可以来自任何适宜的来源,如植物、动物、细菌、霉菌和酵母源。该源还可以是亲中介态或嗜极端态的(extremophilic)(嗜冷的、冷食性的、嗜热的、嗜压的、嗜碱的、嗜酸的、嗜盐的等)。可使用这些酶的纯化或非纯化形式。当今,普通的作法是通过蛋白/遗传工程技术修饰野生型酶,以便使其在本发明洗衣洗涤剂和/或织物护理组合物中的性能最有效。例如,可修饰变体使得酶与这种组合物中通常遇到的组分的相容性增加。另外,可修饰变体使得该酶变体的最佳pH、漂白或螯合稳定性、催化活性等适合于特定的清洗应用。
特别是,在漂白剂稳定的情况下,应将注意力集中在对氧化敏感的氨基酸上和使表面活性剂相容的表面电荷上。这种酶的等电点可通过取代一些带电荷的氨基酸而改变,例如等电点的增加可有助于改善与阴离子表面活性剂的相容性。酶稳定性的增强还可通过产生例如附加的盐桥键和强化钙的结合部位以增加螯合剂的稳定性来实现。
这些任选的去污酶,当存在时,一般在清洗组合物中的掺入量为清洗组合物重量的0.0001%至2%纯酶。该酶可作为独立的单一组分加入(含有一种酶的丸、粒、稳定的液体等…)或作为两种或多种酶的混合物加入(例如复合颗粒)。
可加入的其它适合的洗涤剂组分是酶氧化清除剂。这种酶氧化清除剂的实例是乙氧基化的四亚乙基多胺。
各种酶物质和将它们掺入合成洗涤剂组合物中的方法还公开在Genencor International的WO 9307263和WO 9307260,WO 8908694,和1971年1月5日授权的McCarty等人的美国专利US3553139中。一些酶还公开在美国专利US4101457和美国专利US4507219中。用于液体洗涤剂配方的酶物质和它们掺入到这些配方中的方法公开在美国专利US4261868中。
酶稳定剂-用于洗涤剂中的酶可用各种技术使其稳定化。酶稳定化技术公开并举例说明在美国专利US3600319,EP199405和EP200586中。酶稳定体系也描述在例如美国专利US3519570中。产生蛋白酶、木聚糖酶和纤维素酶的有用的杆菌AC13描述在WO 9401532A中。本发明使用的酶可通过在成品组合物中存在钙和/或镁离子的水溶性源,以给酶提供这种离子而使酶稳定。适合的酶稳定剂和其用量描述在美国专利5705464,5710115和5576282中。
助洗剂-本文描述的洗涤剂和清洗组合物优选包含一种或多种洗涤剂助洗剂或助洗剂体系。当存在助洗剂时,组合物中一般包含至少约1%的助洗剂,优选从约5%,更优选从约10%-80%,优选至约50%,更优选至约30%的洗涤剂助洗剂。但这不意味着排除更低和更高含量的助洗剂。
用于本文描述的洗涤剂和清洗组合物,特别是洗餐具组合物中的优选助洗剂包括,但不限于水溶性助洗剂化合物(例如多羧酸盐)如美国专利5695679、5705464和5710115中所述。其他适合的多羧酸盐公开在美国专利4144226、3308067和3723322中。优选的多羧酸盐是每分子含有多至三个羧基的羟基羧酸盐,更具体地是柠檬酸盐。
无机或含磷助洗剂包括,但不局限于:以下的碱金属,铵和烷醇铵盐:聚磷酸盐(例如三聚磷酸盐,焦磷酸盐,和玻璃状聚合的偏磷酸盐)、膦酸盐(参见例如美国专利3159581;3213030;3422021;3400148和3422137)、肌醇六磷酸、硅酸盐、碳酸盐(包括碳酸氢盐和倍半碳酸盐)、硫酸盐和硅铝酸盐。
但是,在某些地区需要非磷助洗剂。重要的是,甚至在所谓的“弱”助洗剂(与磷酸盐比较)如柠檬酸盐存在下,或在使用沸石或层状硅酸盐助洗剂时可发生的所谓“低复配”情况下,本发明组合物的性能出乎意料地好。
适合的硅酸盐包括SiO2∶Na2O比为约1.0-2.8,优选约1.6-2.4,最优选约2.0的水溶性硅酸钠。硅酸盐可以是无水盐或水合盐的形式。SiO2∶Na2O比为2.0的硅酸钠是最优选的。硅酸盐,当存在时,优选在本文描述的洗涤剂和清洗组合物中的含量为组合物重量的约5%-50%,更优选约10%-40%。
适用于洗涤剂和清洗组合物,特别是颗粒洗涤剂组合物中的部分可溶性或不溶性的助洗剂化合物包括,但不限于:结晶层状硅酸盐,特别是结晶层状硅酸钠(部分水溶性)如美国专利4664839中所述和铝硅酸钠(水不溶性)。当存在于洗涤剂和清洗组合物中时,这些助洗剂的含量一般为组合物重量的约1%-80%,优选约10%-70%,最优选约20%-60%。
本文所述组合物中可使用具有通式:NaMSixO2x+1·yH2O的结晶层状硅酸钠,其中M为钠或氢,x为约1.9至约4的数值,优选为约2至约4,最优选为2,y为约0至约20的数值,优选为0。该类结晶层状硅酸钠公开在EP-A-0164514中,它们的制备方法公开在DE-A-3417649和DE-A-3742043中。最优选的物质是从Hoechst AG按NaSKS-6购得的δ-Na2SiO5(在本文中通常缩写为″SKS-6″)。不象沸石助洗剂,Na SKS-6硅酸盐助洗剂不含铝。NaSKS-6是具有δ-Na2SiO5形态学形式的层状硅酸盐。SKS-6是本文所述组合物中使用的高度优选的层状硅酸盐,但本文所述组合物中也可以使用这样其它的层状硅酸盐,如那些具有通式NaMSixO2x+1·yH2O的层状硅酸盐,其中M为钠或氢,x为1.9至4的数值,优选为2,y为0至20的数值,优选为0。从Hoechst购得的各种其它层状硅酸盐包括NaSKS-5,NaSKS-7,和NaSKS-11,它们是以α、β和γ形式。如上面所提到的,δ-Na2SiO5(NaSKS-6形式)是本文中最优选使用的。其它的硅酸盐也是有用的,例如硅酸镁,其可作为颗粒配方的松脆剂、作为氧漂白剂的稳定剂和作为控泡体系的组分。
结晶层状硅酸钠材料优选作为与固体水溶性的可电离材料的紧密混合物颗粒形式存在于颗粒洗涤剂组合物中。固体水溶性的可电离材料优选选自有机酸、有机和无机酸盐和其混合物。
硅铝酸盐助洗剂在最通常市售的重垢型颗粒洗涤剂组合物中最重要,并且也可以是液体洗涤剂配方中重要的助洗剂组分。硅铝酸盐助洗剂具有下列经验式:
             [Mz(zAlO2)y]·xH2O其中z和y为至少6的整数,z与y的摩尔比在1.0至约0.5的范围内,x是约15至约264的整数。优选硅铝酸盐助洗剂是具有以下单元晶胞的硅铝酸盐沸石:
             Naz[(AlO2)z(SiO2)y]·xH2O其中z和y至少为6;z与y的摩尔比为1.0至0.5,x至少为5,优选7.5-276,更优选10-264。硅铝酸盐助洗剂优选是水合形式,优选是晶体,其含有约10%-28%,更优选约18%-22%结合水。
这些硅铝酸盐离子交换材料可以是结晶或无定形结构,并且可以是天然产生的硅铝酸盐或是合成得到的。制备硅铝酸盐离子交换材料的方法揭示于美国专利US3985669中。用于本文的优选的合成结晶硅铝酸盐离子交换材料可以按注册商标为沸石A、沸石B、沸石P、沸石X、沸石MAP和沸石HS和其混合物购买到。在特别优选的实施方案中,结晶硅铝酸盐离子交换材料具有下式:
               Na12[(AlO2)12(SiO2)12]·xH2O其中x为约20至约30,尤其是约27。该物质称为沸石A。脱水沸石(x=0-10)也可以在本文中使用。硅铝酸盐优选具有直径为约0.1-10微米的粒度。沸石X具有式:
               Na86[(AlO2)86(SiO2)106]·276H2O
柠檬酸盐助洗剂,例如,柠檬酸和其可溶性盐(特别是钠盐)是重垢液体洗涤剂配方中特别重要的多羧酸盐助洗剂,原因是它们可由再生资源得到和它们具有生物降解能力。柠檬酸盐也可用于颗粒组合物中,特别是与沸石和/或层状硅酸盐助洗剂结合使用。氧二琥珀酸盐在这种组合物和混合物中也特别有用。
适合于本文所述洗涤剂组合物的还有在美国专利US4566984中公开的3,3-二羧基-4-氧杂-1,6-己二酸盐以及有关的化合物。有用的琥珀酸助洗剂包括C5-C20烷基和链烯基琥珀酸和它们的盐。这种类型中特别优选的化合物是十二碳烯基琥珀酸。琥珀酸盐助洗剂的具体实例包括:月桂基琥珀酸盐,肉豆寇基琥珀酸盐、棕榈基琥珀酸盐、2-十二碳烯基琥珀酸盐(优选),2-十五碳烯基琥珀酸盐等。月桂基琥珀酸盐是该组中优选的助洗剂,并被描述在1986年11月5日公开的欧洲专利申请86200690.5/0200263中。
脂肪酸,例如C12-C18单羧酸,也可以单独地掺入组合物中,或与前述的助洗剂,尤其是柠檬酸盐和/或琥珀酸盐助洗剂结合掺入组合物中,以提供额外的助洗剂活性。使用脂肪酸一般会导致消弱起泡,这是配方师应当考虑的。
分散剂-可将一种或多种适合的聚亚烷基亚胺分散剂掺入本发明清洗组合物中。这种适合的分散剂的实例可参见欧洲专利申请111965、111984和112592;美国专利4597898、4548744和5565145。然而,在本发明洗衣组合物中可使用任何适合的粘土/污垢分散剂或抗再沉积剂。
此外,包括聚合多羧酸盐和聚乙二醇的聚合分散剂也适合用于本发明中。可以经聚合形成适合的聚合多羧酸盐的不饱和单体酸包括丙烯酸,马来酸(或马来酸酐),富马酸,衣康酸,乌头酸,中康酸,柠康酸和亚甲基丙二酸。尤其适合的聚合多羧酸盐可以从丙烯酸得到。可以用于本发明中的该类基于丙烯酸的聚合物是聚合丙烯酸的水溶性盐。以酸形式存在的该类聚合物的平均分子量优选为约2000-10000,更优选为约4000-7000,最优选为约4000-5000。该类丙烯酸聚合物的水溶性盐可以包括,例如,碱金属盐,铵盐和取代铵盐。该类可溶的聚合物是已知的材料。该类聚丙烯酸盐在洗涤剂组合物中的应用公开在例如美国专利US3308067中。
基于丙烯酸/马来酸的共聚物也可以用作分散/抗沉积剂的优选组分。这类物质包括丙烯酸和马来酸共聚物的水溶性盐。以酸形式存在的该类共聚物的平均分子量优选为约2000-100000,更优选为约5000-75000,最优选为约7000-65000。在该类共聚物中丙烯酸盐部分与马来酸盐部分的比率一般为约30∶1至约1∶1,更优选约10∶1至2∶1.这类丙烯酸/马来酸共聚物的水溶性盐可以包括,例如,碱金属盐,铵盐和取代铵盐。这类可溶性丙烯酸盐/马来酸盐共聚物是在1982年12月15日公开的欧洲专利申请EP66915以及在1986年9月3日公开的欧洲专利EP193360中描述的已知物质,后者还描述了包括丙烯酸羟基丙基酯的该类聚合物。另一类有用的分散剂包括马来酸/丙烯酸/乙烯基醇三元共聚物。该材料也在EP193160中被公开,包括,例如,45/45/10的丙烯酸/马来酸/乙烯基醇三元共聚物。
另一类可以被包括的聚合材料是聚乙二醇(PEG)。PEG除了可以作为去除粘土污垢-抗再沉积剂之外还具有分散剂的性能。作为该用途的聚乙二醇的平均分子量一般为约500-约100000,优选为约1000-约50000,更优选为约1500-约10000。
本发明也可以使用聚天冬氨酸盐和聚谷氨酸盐分散剂,尤其是与沸石助洗剂结合使用。分散剂如聚天冬氨酸盐优选具有约10000的分子量(平均)。
污垢解脱剂-本发明组合物可任选地包含一种或多种污垢解脱剂。如果使用的话,污垢解脱剂一般占本发明组合物重量的约0.01%,优选从约0.1%,更优选从约0.2%至约10%,优选至约5%,更优选至3%。适合的污垢解脱聚合物的非限制实例公开在美国专利5728671;5691298;5599782;5415807;5182043;4956447;4976879;4968451;4925577;4861512;4877896;4771730;4711730、4721580;4000093;3959230和3893929;和欧洲专利申请0219048。
另外适合的污垢解脱剂描述在美国专利US4201824;US4240918;US4525524;US4579681;US4240918;US4787989;EP279134A;EP457205A;和DE2335044。
螯合剂-本发明组合物还可以任选地含有起螯合否则会使漂白剂失活的金属离子和金属杂质作用的螯合剂。有用的螯合剂可包括氨基羧酸盐,膦酸盐、氨基膦酸盐,多官能取代的芳族螯合剂及其混合物。适合的螯合剂的进一步实例和其用量描述在美国专利US5705454、5710115、5728671和5576282中。
本发明组合物还可含有水溶性的甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)盐(或酸形式)作为螯合剂,或作为例如不溶性的助洗剂如沸石、层状硅酸盐等的有用的辅助助洗剂。
如果使用螯合剂,则这些螯合剂一般占本发明洗涤剂组合物重量的约0.1%-15%,更优选约0.1%-3.0%。
抑泡剂-另一种任选的组分是抑泡剂,示例为聚硅氧烷,和二氧化硅-聚硅氧烷混合物。适合的抑泡剂的实例公开在美国专利US5707950和5728671中。这些抑泡剂使用量一般为组合物重量的0.001%至2%,优选0.01%至1%。
柔软剂-织物柔软剂也可掺入本发明洗衣洗涤剂组合物中。无机柔软剂的示例有公开在GB-A-1400898和USP5,019,292中的绿土类。有机柔软剂包括如公开在GB-A1514276和EP-B0011340中的水不溶性叔胺和公开在EP-B-0026527和EP-B-0026528中前者叔胺与单C12-C14季铵盐的混合物,以及如公开在EP-B-0242919中的双长链酰胺。用于织物柔软剂体系的其它适合的有机组分包括公开在EP-A-0299575和0313146中的高分子量聚环氧乙烷物质。
特别适合的织物柔软剂公开在美国专利US577950和5728673中。
绿土的含量通常为2%至20%,更优选5%至15%重量,该物质是作为干混组分加入到配方的其余组分中。有机织物柔软剂例如水不溶性叔胺或双长链的酰胺物质的掺入量是0.5%至5%重量,通常是1%至3%重量,而高分子量聚环氧乙烷物质和水溶性阳离子物质的加入量是0.1%至2%,通常是0.15%至1.5%重量。虽然在某些情况下,这些物质作为干混颗粒加入或将它们作为熔融液体喷到组合物的其它固体组分上可能更为方便,但通常将它们加入组合物的喷雾干燥的部分中。
如描述在EP-A-040562和EP-A-239910中的生物可降解的季铵化合物已作为传统使用的氯化和甲基硫酸化双长链烷基铵的替代物而存在。
用于季铵化合物和胺前体的与柔软剂相容的阴离子的非限制实例包括氯或甲基硫酸根。
染料转移抑制作用-本发明洗涤剂组合物还可包括用于抑制在包含带色织物的洗涤织物和调理操作过程中碰到的溶解和悬浮的染料从一种织物转移至另一种织物上的化合物。
聚合染料转移抑制剂
本发明洗涤剂组合物还可包含0.001%至10%,优选0.01%至2%,更优选0.05%至1%重量聚合的染料转移抑制剂。通常将所说的聚合染料转移抑制剂掺入洗涤剂组合物中是为了抑制染料从带色的织物上转移至同时洗涤的织物上。在从带色织物洗涤下来的短效染料有机会接触洗涤中的其它物品之前,这些聚合物具有将其螯合或吸附的能力。
特别适合的聚合染料转移抑制剂是聚胺N-氧化物聚合物、N-乙烯基吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基吡咯烷酮聚合物、聚乙烯基噁唑烷酮和聚乙烯基咪唑或它们的混合物。这种染料转移抑制剂的实例公开在美国专利US5707950和US5707951中。
其他适合的染料转移抑制剂包括,但不限于交联的聚合物。交联聚合物是其骨架互连至一定程度的聚合物;这些键可以是化学或物理性的,在骨架上或在支链上可具有活性基团。交联聚合物已被描述在聚合物科技杂志,第22卷,第1035-1039页。
在一种实施方案中,交联聚合物是以这样的方法制备的,即它们形成三维的刚性结构,其能将染料捕集在由三维结构形成的孔中。在另一实施方案中,交联聚合物通过溶胀捕集染料。这种交联聚合物被描述在未结案的欧洲专利中请94870213.9中。
另外,这种聚合物还增强了本发明酶的性能。
pH和缓冲变化-本文描述的许多洗涤剂和清洗组合物将被缓冲,即在酸性污垢存在下,它们相对耐pH降低。然而,本发明其他组合物可具有优异的低缓冲能力或可基本上不被缓冲。在建议使用值下控制或变化pH的技术更通常是包括不仅使用缓冲剂,而且使用其他的碱、酸、pH调节体系、双室容器等,它们是本领域技术人员公知的。
本发明优选的ADD组合物包含pH调节组分,其选自水溶性碱性无机盐和水溶性有机或无机助洗剂,如描述在美国专利5705464和5710115中。
材料护理剂-优选的ADD组合物可含有作为腐蚀抑制剂和/或防晦暗助剂有效的一种或多种材料护理剂,如描述在美国专利5705464、5710115和5646101中。
当存在时,这种保护材料优选掺入低量,例如为ADD组合物的约0.01%-5%。
其他材料-任选地包括在本发明组合物中的去污组分或辅助材料可包括有助于或增强清洗性能、对被清洗的底物的处理或用于改善组合物的美学性的一种或多种材料。还可包括在本发明组合物中的辅助物,是以它们常规技术确定的含量使用(一般,辅助材料总共占组合物重量约30%-99.9%,优选约70%-95%),包括其他活性组分例如非磷酸盐助洗剂、色粒、银器护理剂、防晦暗和/或防腐蚀剂、染料、填料、杀菌剂、碱源、水溶助长剂、抗氧化剂、香料、增溶剂、载体、加工助剂、颜料和pH控制剂,其描述在美国专利5705464、5710115、5698504、5695679、5686014和5646101中。
清洗方法-除了本文描述的清洗织物、餐具和其他硬表面和由个人清洗人体部分的方法外,本发明还包括已带有污垢或污渍的织物的洗涤预处理方法,包括在使用常规洗涤水溶液洗涤这种织物之前,将所述污渍和/或污垢直接与高浓度形式的上述清洗组合物接触。优选,在用常规方法洗涤预处理过的污垢/污渍底物之前,将清洗组合物与污垢/污渍保持接触约30秒-24小时。更优选,预处理时间为约1-180分钟。
以下实施例是用于说明本发明组合物,但不必然用于限制或另外定义本发明的范围。
在所有以下实施例中,蛋白酶1意思是指包含在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基的蛋白酶变体。蛋白酶1可以用本发明任何其他附加的蛋白酶变体代替,在以下实施例中得到明显相似的结果。
在本发明清洗组合物实施例中,蛋白酶1的酶含量是按纯酶占总组合物重量表示,其他酶含量是按原料占总组合物重量表示,和除非另外说明,其他组分按占总组合物重量表示。
另外,在所有以下实施例中,淀粉酶3意思是根据本发明的淀粉酶变体。
另外,在以下实施例中,使用本领域普通技术人员公知的一些缩写,其与本文公开内容一致。
                       实施例1-7
                  液体硬表面清洗组合物
                              实施例编号组分            1       2      3       4      5      6      7蛋白酶1       0.05    0.05   0.20    0.02   0.03   0.10   0.03蛋白酶2       -       -      -       -      -      0.20   0.1淀粉酶3       -       0.002  0.002   0.0005 0.04   0.0008 0.005螯合剂**       -       -      -       2.90   2.90   -      -柠檬酸盐       -       -      -       -      -      2.90   2.90LAS            -       1.95   -       1.95   -      1.95   -AS             2.00    -      2.20    -      2.20   -      2.20AES            2.00    -      2.20    -      2.20   -      2.20氧化胺         0.40    -      0.50    -      0.50   -      0.50水溶助长剂     -       1.30   -       1.30   -      1.30   -溶剂***        -       6.30   6.30    6.30   6.30   6.30   6.30水和少量组分                    平衡量至100%
2非蛋白酶1的蛋白酶,包括,但不限于这里所述的本发明中有用的其他蛋白酶
**乙二胺二乙酸四钠
***二乙二醇一己醚
****所有配方均调至pH7
在实施例6和7中,其中,在这里所述的本发明中有用的蛋白酶的任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2,得到基本上相似的结果。
                    实施例2-7
                   洗餐具组合物
                           实施例编号组分                  2      3     4     5     6      7蛋白酶1            0.05   0.50  0.02   0.40  0.10   0.03蛋白酶2            -      -     -      -     0.40   0.1淀粉酶3            0.002  0.002 0.0005 0.04  0.0008 0.005TFAAI               0.90   0.90  0.90   0.90  0.90   0.90AES                 12.00  12.00 12.00  12.00 12.00  12.002-甲基十一烷酸      4.50   4.50  -      4.50  4.50    -C12乙氧基(2)羧酸盐 4.50   4.50  4.50   4.50  4.50   4.50C12醇乙氧基化物(4) 3.00   3.00  3.00   300   3.00   3.00氧化胺              3.00   3.00  3.00   3.00  3.00   3.00水溶助长剂          2.00   2.00  2.00   2.00  2.00   2.00乙醇                4.00   4.00  4.00   4.00  4.00   4.00Mg++(为MgCl2)     0.20   0.20  0.20   0.20  0.20   0.20Ca++(为CaCl2)     0.40   0.40  0.40   0.40  0.40   0.40水和少量组分****                平衡量至100%2非蛋白酶1的蛋白酶,包,但不限于这里所述的本发中有用的其他蛋白酶****产品pH被调至pH7
在实施例6和7中,其中,在这里所述的本发明中有用的蛋白酶的任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2,得到基本上相似的结果。
                         实施例8
               洗餐具组合物(A&B ADW:C液体)组分                               A     B     CSTPP                              17.5   -     -柠檬酸盐                                 15.0  -聚丙烯酸钠    (MW 4500)           0.80   -     -Acusol 480N                       -      5.10  -碳酸钾                            8.30   -     -碳酸钠                            -      8.50  -2.1r硅酸钾                        3.99   -     -2.0r硅酸纳                        2.00   -     -3.2r硅酸钠                     5.18    -       -三硬脂酸铅                     0.10    -       -非离子表面活性剂               -       2.50    -NaAE0.6S                       -       -       24.70葡糖酰胺                       -       -       3.09C10E8                          -       -       4.11甜菜碱                         -       -       2.06氧化胺                         -       -       2.06氧化镁                         -       -       0.49水溶助长剂                     -       -       4.47为AvCl2的次氯酸钠             1.15    -       -淀粉酶3                       0.002   0.03    0.005蛋白酶1                       0.01    0.43    0.05平衡量至100%
                   实施例9
      液体洗餐具组合物(特别适合于日本条件)组分                               A       BAE1.4S                            24.69    24.69N-椰油基N-甲基葡糖胺              3.09     3.09氧化胺                            2.06     2.06甜菜碱                            2.06     2.06非离子表面活性剂                  4.11     4.11水溶助长剂                        4.47     4.47镁                                0.49     0.49乙醇                              7.2      7.2LemonEase                         0.45     0.45香叶醇/BHT                        -        0.60/0.02淀粉酶3                          0.03     0.005蛋白酶1                          0.01     0.43平衡量至100%
                     实施例10
               粒状自动洗餐具组合物组分                               A        B      C柠檬酸                            15.0      -      -柠檬酸盐                          4.0       29.0   15.0丙烯酸盐/异丁烯酸盐共聚物         6.0       -      6.0丙烯酸马来酸共聚物                -         3.7    -干添加剂碳酸盐                    9.0       -      20.0碱金属硅酸盐                      8.5       17.0   9.0石蜡                              -         0.5    -苯并三唑                          -         0.3    -淀粉酶3                          1.6       1.6    1.6蛋白酶1                          10.2      0.1    0.06过碳酸盐(AvO)                     1.5       -      -过硼酸盐一水合物                  -         0.3    1.5过硼酸盐四水合物                  -         0.9    -四乙酰乙二胺                      3.8       4.4    -二亚乙基三胺五甲基膦酸(Mg盐)      0.13      0.13   0.133摩尔乙氧基化的烷基乙氧基硫酸盐  3.0       -      -烷基乙氧基丙氧基非离子表面活性剂  -         1.5    -抑泡剂                            2.0       -      -Olin SLF18非离子表面活性剂        -         -      2.0硫酸盐                             平衡量至100%
                       实施例11
根据本发明的密实型高密度(0.96Kg/l)洗餐具洗涤剂组合物A-F:
组分 A  B  C  D  E  F
STPP -  51.4  51.4  -  -  44.3
柠檬酸盐 17.05  -  -  49.6  40.2  -
碳酸盐 17.50  14.0  20.0  -  8.0  33.6
碳酸氢盐 -  -  -  26.0  -  -
硅酸盐 14.81  15.0  8.0  -  25.0  3.6
偏硅酸盐 2.50  4.5  4.5  -  -  -
PB1 9.74  7.79  7.79  -  -  -
PB4 -  -  -  9.6  -  -
过碳酸盐  -  -  -  -  11.8  4.8
非离子型表面活性剂  2.00  1.50  1.50  2.6  1.9  5.9
TAED  2.39  -  -  3.8  -  1.4
HEDP  1.00  -  -  -  -  -
DETPMP  0.65  -  -  -  -  -
MnTACN  -  -  -  -  0.008  -
PAAC  -  0.008  0.008  -  -  -
石蜡  0.50  0.38  0.38  0.6  -  -
蛋白酶1  0.1  0.06  0.05  0.03  0.07  0.01
淀粉酶3  1.5  1.5  1.5  2.6  2.1  0.8
BTA  0.30  0.22  0.22  0.3  0.3  0.3
多羧酸盐  6.0  -  -  -  4.2  0.9
香料  0.2  0.12  0.12  0.2  0.2  0.2
硫酸盐/水  20.57  1.97  2.97  3.6  4.5  3.9
pH(1%溶液)  11.0  11.0  11.3  9.6  10.8  10.9
                        实施例12
根据本发明的堆密度为1.02Kg/l的粒状洗餐具洗涤剂组合物实施例A-F:
组分 A  B  C  D  E  F
STPP 30.00  33.5  27.9  29.62  33.8  22.0
碳酸盐 30.50  30.50  30.5  23.00  34.5  45.0
硅酸盐 7.40  7.50  12.6  13.3  3.2  6.2
偏硅酸盐 -  4.5  -
过碳酸盐 -  -  -  4.0
PB1 4.4  4.5  4.3  -  -
NaDCC -  -  2.00  -  0.9
非离子型表面活性剂 1.0  0.75  1.0  1.90  0.7  0.5
TAED 1.00  -  -  0.9
PAAC -  0.004  -  -
石蜡 0.25  0.25  -  -
蛋白酶1 0.05  0.06  0.025  0.1  0.02  0.07
淀粉酶3 0.38  0.64  0.46  -  0.6
BTA 0.15  0.15  -  0.2
香料 0.2  0.2  0.05  0.1  0.2
硫酸盐/水 23.45  16.87  22.26  30.08  21.7  25.4
pH(1%溶液) 10.80  11.3  11.0  10.70  11.5  10.9
                        实施例13
使用标准12头旋转压型机,在压力13KN/cm2下挤压粒状洗餐具洗涤剂组合物来制备根据本发明的片状洗涤剂组合物实施例A-H:
组分 A  B  C  D  E  F  G  H
STPP - 48.8 54.7 38.2 - 52.4 56.1 36.0
柠檬酸盐 20.0 - - - 35.9 - - -
碳酸盐 20.0 5.0 14.0 15.4 8.0 23.0 20.0 28.0
硅酸盐 15.0 14.8 15.0 12.6 23.4 2.9 4.3 4.2
蛋白酶1 0.05 0.09 0.05 0.03 0.06 0.03 0.03 0.1
淀粉酶3 1.5 1.5 1.5 0.85 1.9 0.4 2.1 0.3
PB1 14.3 7.8 11.7 12.2 - - 6.7 8.5
PB4 - - - - 22.8 - 3.4 -
过碳酸盐 - - - - - 10.4 - -
非离子型表面活性剂 1.5 2.0 2.0 2.2 1.0 4.2 4.0 6.5
PAAC - - 0.016 0.009 - - - -
MnTACN - - - - 0.007 - - -
TAED 2.7 2.4 - - - 2.1 0.7 1.6
HEDP 1.0 - - 0.93 - 0.4 0.2 -
DETPMP 0.7 - - - - - - -
石蜡 0.4 0.5 0.5 0.55 - - 0.5 -
BTA 0.2 0.3 0.3 0.33 0.3 0.3 0.3 -
多羧酸盐 4.0 - - - 4.9 0.6 0.8 -
PEG - - - - - 2.0 - 2.0
甘油 - - - - - 0.4 - 0.5
香料 - - - 0.05 0.20 0.2 0.2 0.2
硫酸盐/水 17.4 14.7 - 15.74 - - - 11.3
片的重量 20g 25g 20g 30g 18g 20g 25g 24.0
pH(1%溶液) 10.7 10.6 10.7 10.7 10.9 11.2 11.0 10.8
                      实施例14
                凹片状自动洗餐具组合物组分                 A(%R.M.)    B(gR.M.)    C(gR.M.)片体碳酸钠               15.348         3.500       5.25STPP(12%H2O)       46.482         10.600      9.93Gran HEDP            0.789          0.180       0.28SKS6                 6.578          1.500       2.252比例硅酸盐          7.016          1.600       1.65PB1                  10.743         2.450       3.68Termamyl 2x PCA      0.491          0.112       .17Savinase             0.526          0.120       0.18Plurafac             3.508          0.800       0.9BTA                  0.263          0.060       0.09PEG                  1.140          0.260       -PEG 4000             -              -           0.39Winog                0.439          0.100       0.15香料                 0.101          0.023       0.01凹处的填料柠檬酸               0.987          0.225       0.23碳酸氢盐             2.600          0.593       0.59Sandolan EHRL染料    0.007          0.0017      0.0017PEG 400/4000         0.395          0.090PEG 400              -              -           0.02PEG 4000             -              -           0.08蛋白酶1             0.05           0.268       0.27淀粉酶3             1.412          0.322       0.32粒状织物清洗组合物
本发明粒状织物清洗组合物含有有效量的一种或多种蛋白酶,按组合物的重量计,优选约0.001%-10%,更优选约0.005%-5%,更优选0.01%-1%活性蛋白酶。(参见美国专利5679630的实施例)。
                    实施例15
               粒状织物清洗组合物
                                   实施例编号组分                              A      B     C     D蛋白酶1                         0.10  0.20   0.03  0.05蛋白酶2                         -     -      0.2   0.15淀粉酶3                         0.002 0.0005 0.04  0.005C13直链烷基苯磺酸盐             22.00 22.00  22.00 22.00磷酸盐(为三聚磷酸钠)             23.00 23.00  23.00 23.00碳酸钠                           23.00 23.00  23.00 23.00硅酸钠                           14.00 14.00  14.00 14.00沸石                             8.20  8.20   8.20  8.20螯合剂(二亚乙基三胺五乙酸)       0.40  0.40   0.40  0.40硫酸钠                           5.50  5.50   5.50  5.50水                                     平衡量至100%2非蛋白酶1的蛋白酶,包括,但不限于这里所述的本发明中有用的其他蛋白酶。
在实施例15C和D中,其中,在这里所述的本发明中有用的蛋白酶的任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2,得到基本上相似的结果。
                    实施例16
                粒状织物清洗组合物
                                         实施例编号组分                                   A      B      C     D蛋白酶1                             0.10    0.20   0.03  0.05蛋白酶2                             -       -      0.2   0.1淀粉酶3                             0.005   0.0005 0.04  0.002C12烷基苯磺酸盐                     12.00   12.00  12.00 12.002-丁基辛酸                    4.00  4.00  4.00  4.00C12-C14仲(2,3)烷基硫酸钠   5.00  5.00  5.00  5.00柠檬酸钠                      5.00  5.00  5.00  5.00荧光增白剂                    0.10  0.10  0.10  0.10硫酸钠                        17.00 17.00 17.00 17.00填料,水,少量组分                  平衡量至100%2非蛋白酶1的蛋白酶,包括,但不限于这里所述的本发明中有用的其他蛋白酶。
在实施例16C和D中,其中,在这里所述的本发明中有用的蛋白酶的任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2,得到基本上相似的结果。
                       实施例17
                   粒状织物清洗组合物组分                                   实施例编号
                                   A        B直链烷基苯磺酸盐                       11.4    10.70牛油烷基硫酸盐                         1.80    2.40C14-15烷基硫酸盐                      3.00    3.107摩尔乙氧基化的C14-15醇               4.00    4.0011摩尔乙氧基化的牛油醇                 1.80    1.80分散剂                                 0.07    0.1聚硅氧烷流体                           0.80    0.80柠檬酸三钠                             14.00   15.00柠檬酸                                 3.00    2.50沸石                                   32.50   32.10马来酸丙烯酸共聚物                     5.00    5.00二亚乙基三胺五亚甲基膦酸               1.00    0.20蛋白酶1                                0.1      0.01脂肪酶                                  0.36     0.40淀粉酶3                                0.30     0.30硅酸钠                                  2.00     2.50硫酸钠                                  3.50     5.20聚乙烯基吡咯烷酮                        0.30     0.50过硼酸盐                                0.5      1苯酚磺酸盐                              0.1      0.2过氧化物酶                              0.1      0.1少量组分                            最多至100最多至100
                    实施例18
                 粒状织物清洗组合物
                                    实施例编号组分                                     A        BC12直链烷基苯磺酸钠                    6.5       8.0硫酸钠                                  15.0      18.0沸石A                                   26.0      22.0次氮基三乙酸钠                          5.0       5.0聚乙烯基吡咯烷酮                        0.5       0.7四乙酰乙二胺                            3.0       3.0硼酸                                    4.0       -过硼酸盐                                0.5       1苯酚磺酸盐                              0.1       0.2蛋白酶1                                0.02      0.05淀粉酶3                                0.005     0.002填料(例如硅酸盐、碳酸盐、香料、水)  最多至100  最多至100
                      实施例19
              密实型粒状织物清洗组合物组分                                        重量%烷基硫酸盐                                  8.0烷基乙氧基硫酸盐                            2.03和7摩尔乙氧基化的C25和C45醇的混合物      6.0多羟基脂肪酸酰胺                            2.5沸石                                        17.0层状硅酸盐/柠檬酸盐                         16.0碳酸盐                                      7.0马来酸丙烯酸共聚物                          5.0污垢解脱聚合物                              0.4羧甲基纤维素                                0.4聚(4-乙烯基吡啶)-N-氧化物                   0.1乙烯基咪唑和乙烯基吡咯烷酮的共聚物          0.1PEG2000                                     0.2蛋白酶1                                    0.03脂肪酶                                      0.2纤维素酶                                    0.2淀粉酶3                                    0.005四乙酰乙二胺                                6.0过碳酸盐                                    22.0乙二胺二琥珀酸                              0.3抑泡剂                                      3.54,4′-二(2-吗啉代-4-苯胺基-S-三嗪-6-       0.25基氨基)芪-2,2′-二磺酸二钠4,4′-二(2-磺基苯乙烯基)联苯二钠           0.05水、香料和少量组分                          最多至100
                        实施例20
                    粒状织物清洗组合物组分                                          重量%直链烷基苯磺酸盐                              7.6C16-C18烷基硫酸盐                           1.37摩尔乙氧基化的C14-C15醇                    4.0椰油烷基二甲基羟乙基氯化铵                    1.4分散剂                                        0.07聚硅氧烷流体                                  0.8柠檬酸三钠                                    5.0沸石4A                                        15.0马来酸丙烯酸共聚物                            4.0二亚乙基三胺五亚甲基膦酸                      0.4过硼酸盐                                      15.0四乙酰乙二胺                                  5.0绿土                                          10.0聚(氧乙烯)(MW300.000)                         0.3蛋白酶1                                      0.02脂肪酶                                        0.2淀粉酶2                                      20.3纤维素酶                                      0.2硅酸钠                                        3.0碳酸钠                                        10.0羧甲基纤维素                                  0.2增白剂                                        0.2水、香料和少量组分                            最多至100
                           实施例21
                       粒状织物清洗组合物组分                                             重量%直链烷基苯磺酸盐                                 6.92牛油烷基硫酸盐                                   2.057摩尔乙氧基化的C14-C15醇                       4.43摩尔乙氧基化的C12-C15烷基乙氧基硫酸盐         0.16沸石                                             20.2柠檬酸盐                                         5.5碳酸钠                                           15.4硅酸钠                                           3.0马来酸丙烯酸共聚物                               4.0羧甲基纤维素                                     0.31污垢解脱聚合物                                   0.30蛋白酶1                                         0.1脂肪酶                                           0.36纤维素酶                                         0.13淀粉酶3                                         0.005过硼酸盐四水合物                                 11.64过硼酸盐一水合物                                 8.7四乙酰乙二胺                                     5.0二亚乙基三胺五甲基磷酸                           0.38硫酸镁                                           0.40增白剂                                           0.19香料、聚硅氧烷、抑泡剂                           0.85少量组分                                         最多至100
                         实施例22
                    粒状织物清洗组合物组分                                  A      B      C基本颗粒组分LAS/AS/AES(65/35)                    9.95    -      -LAS/AS/AES(70/30)                    -      12.05   7.70硅铝酸盐                             14.06  15.74   17.10碳酸钠                               11.86  12.74   13.07硅酸钠                               0.58   0.58    0.58NaPAA固体                            2.26   2.26    1.47PEG固体                              1.01   1.12    0.66增白剂                               0.17   0.17    0.11DTPA                                 -      -       0.70硫酸盐                               5.46   6.64    4.25DC-1400 Deaerant                     0.02   0.02    0.02水分                                 3.73   3.98    4.33少量组分                             0.31   0.49    0.31B.O.T.喷雾非离子表面活性剂                     0.50   0.50    0.50附聚物组分LAS/AS(25/75)                        11.70  9.60    10.47硅铝酸盐                             13.73  11.26   12.28碳酸盐                               8.11   6.66    7.26PEG4000                              0.59   0.48    0.52水/少量组分                          4.88   4.00    4.36功能性添加剂碳酸钠                               7.37   6.98    7.45过硼酸盐                             1.03   1.03    2.56AC底涂层                             -      1.00    -NOBS                                 -      -       2.40污垢解脱聚合物                       0.41   0.41    0.31纤维素酶                             0.33   0.33    0.24蛋白酶1                             0.1    0.05    0.15淀粉酶3                             0.002  0.005   0.04AE-薄片                              0.40   0.40    0.29喷上液体香料                                 0.42   0.42    0.42非离子型喷雾剂                  1.00    1.00    0.50少量组分                           最多至100
               实施例23
         粒状织物清洗组合物
    A      B
表面活性剂-NaLAS-KLAS-AS/AE3S-TAS-C24AE5-Genagen-N-椰油基-N-甲基葡糖胺(直链)-C8-10二甲基羟乙基氯化铵 6.40-6.400.083.48-1.141.00 -9.904.390.11-1.882.821.40
助洗剂-沸石-SKS-6-柠檬酸 20.5910.842.00 13.3910.78-
缓冲剂-碳酸盐-碳酸氢盐-硫酸盐-硅酸盐 9.602.002.640.61 12.072.00-0.16
聚合物-丙烯酸/马来酸共聚物(Na)-CMC 1.170.45 1.120.24
-聚合物-用甲基氯二季铵化的六亚甲基二胺四-E 24-乙氧基化物     0.341.00     0.181.00
酶-蛋白酶1(%纯酶)-纤维素酶-淀粉酶3-脂肪酶 0.030.260.650.27 0.030.260.730.15
漂白剂-TAED(100%)-N-壬酰基-6-氨基己酸的苯酚磺酸酯-过碳酸盐-HEDP-EDDS 3.85-16.200.480.30 3.502.7518.300.480.30
微量组分-苹果酶颗粒-增白剂-酞菁磺酸锌-带有三甲基甲硅烷基封端单元的聚二甲基硅氧烷-皂-香料 0.077/0.0140.00260.25-0.45 2.20+bicarb0.07/0.0140.00260.241.000.55
总计     100     100
                 实施例24
            粒状织物清洗组合物
    A     B
    %     %
表面活性剂NaLASKLASFASASC25AE3SAE5N-椰油基-N-甲基葡糖胺GenagenC8-10二甲基羟乙基氯化铵 6.8-0.90.60.14.2--- 0.410.90.11.5--1.81.21.0
助洗剂SKS-6沸石柠檬酸 3.317.21.5 9.018.9-
缓冲剂碳酸盐碳酸氢钠硫酸盐苹果酸硅酸盐 21.1-15.2-0.1 15.02.65.52.9-
聚合物丙烯酸/马来酸共聚物(Na)用甲基氨二季铵化的六亚甲基二胺四-E24乙氧基化物聚合物CMC 2.20.50.10.2 0.90.70.10.1
酶蛋白酶1(%纯酶)脂肪酶 0.020.18 0.050.14
淀粉酶3纤维素酶 0.640.13 0.730.26
漂白剂TAEDN-壬酰基-6-氨基己酸的苯酚磺酸酯过碳酸钠PB4EDDSMgSO4HEDP 2.2--15.60.170.350.15 2.51.9613.1-0.210.470.34
微量组分增白剂-酞菁磺酸锌-带有三甲基甲硅烷基封端单元的聚二甲基硅氧烷皂香料斑粒 0.060.00150.040.50.350.5 0.040.00200.140.70.450.6
                     实施例25
粒状洗衣洗涤剂组合物25A-C特别适用于欧洲洗衣机条件并根据本发明制备:
组分   A   B  C
LAS 7.0 5.61 4.76
TAS - - 1.57
C45AS 6.0 2.24 3.89
C25F3S 1.0 0.76 1.18
C45E7 - 2.0
C25E3 4.0 5.5 -
QAS 0.8 2.0 2.0
STPP - -
沸石A 25.0 19.5 19.5
柠檬酸 2.0 2.0 2.0
NaSKS-6 8.0 10.6 10.6
碳酸盐I 8.0 10.0 8.6
MA/AA 1.0 2.6 1.6
CMC 0.5 0.4 0.4
PB4 - 12.7 -
过碳酸盐 - - 19.7
TAED - 3.1 5.0
Citrate 7.0 - -
DrPMp 0.25 0.2 0.2
HEDP 0.3 0.3 0.3
QEA I 0.9 1.2 1.0
蛋白酶1 0.02 0.05 0.035
脂肪酶 0.15 0.25 0.15
纤维素酶 0.28 0.28 0.28
淀粉酶 0.4 0.7 0.3
PVPI/PVNO 0.4 - 0.1
光敏化的漂白剂(ppm) 15ppm 27ppm 27ppm
增白剂1 0.08 0.19 0.19
增白剂2 - 0.04 0.04
香料 0.3 0.3 0.3
泡腾颗粒(苹果酸40%,碳酸氢钠40%,碳酸钠20%) 15 15 5
聚硅氧烷消泡剂 0.5 2.4 2.4
少量组分/惰性组分至100%
              实施例26以下配方是根据本发明组合物的实施例,其可以是颗粒或片状。
组分 26
基本产品
C45 AS/TAS 3.0
LAS 8.0
C25AE3S 1.0
NaSKS-6 9.0
C25AE5/AE3 5.0
沸石A 10.0
SKS-5(I)(干添加剂) 2.0
MA/AA 2.0
柠檬酸1 1.5
EDDS 0.5
HEDP 0.2
PB1 10.0
NACAOBS 2.0
TAED 2.0
碳酸盐 8.0
硫酸盐 2.0
淀粉酶3 0.3
脂肪酶 0.2
蛋白酶1 0.02
少量组分(增白剂/SRP1/CMC/光漂白剂/MgSO4/PVPVI/抑泡剂/ 0.5
香料 0.5
                   实施例27
以下粒状洗衣洗涤剂组合物27A-E特别适用于日本洗衣机条件并根据本发明制备:
组分   A   B   C   D   E
LAS 23.57 23.57 21.67 21.68 21.68
FAS 4.16 4.16 3.83 3.83 3.83
非离子表面活性剂 3.30 3.30 2.94 3.27 3.27
二(羟乙基)甲基烷基氯化铵 0.47 0.47 1.20 1.20 1.20
SKS-6 7.50 7.50 5.17 5.76 5.06
聚丙烯酸盐共聚物(MW11000)(马来酸/丙烯酸盐比例为4∶6) 7.03 7.03 14.36 14.36 14.36
沸石 11.90 11.40 10.69 11.34 11.34
碳酸盐 14.90 14.82 11.71 11.18 11.18
硅酸盐 12.00 12.00 12.37 12.38 12.38
蛋白酶1 0.016 0.016 0.046 0.046 0.046
脂肪酶 - - 0.28 - -
淀粉酶2 - - 0.62 - -
纤维素酶 - - 0.48 - 0.70
NOBS 3.75 3.75 2.70 2.70 2.70
PB1 3.53 - 2.60 - -
过碳酸钠 - 4.21 - 3.16 3.16
SRP 0.52 0.52 0.70 0.70 0.70
增白剂 0.31 0.31 0.28 0.28 0.50
AE-复合薄片 0.17 0.20 0.17 0.17 0.17
聚二甲基硅氧烷 - - 0.68 0.68 0.68
香料 0.06 0.06 0.08 - -
香料 - - - 0.23 0.23
疏水性沉淀二氧化硅 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30
PEG4000 0.19 0.19 0.17 0.17 0.17
少量组分/惰性组分至100%
液体织物清洗组合物
本发明液体织物清洗组合物优选含有有效量的一种或多种蛋白酶,按组合物的重量计,优选约0.001%-10%,更优选约0.001%-1%,最优选0.0001%-0.1%活性蛋白酶。(参见美国专利5679630的实施例)。
                      实施例28
                 液体织物清洗组合物
                        实施例编号组分                 A       B    C     D     E蛋白酶1            0.05   0.03  0.30  0.03  0.10蛋白醇2            -      -     -     0.1   0.20淀粉酶3C12-C14烷基硫酸钠 20.00  20.00 20.00 20.00 20.002-丁基辛酸          5.00   5.00  5.00  5.00  5.00柠檬酸钠            1.00   1.00  1.00  1.00  1.00C10醇乙氧基化物(3) 13.00  13.00 13.00 13.00 13.00单乙醇胺            2.50   2.50  2.50  2.50  2.50水/丙二醇/乙醇(100∶1∶1)      平衡量至100%
2非蛋白酶1的蛋白酶,包括,但不限于这里所述的本发明中有用的其他蛋白酶
在实施例28D和E中,其中,在这里所述的本发明中有用的蛋白酶的任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2,得到基本上相似的结果。
                    实施例29
              液体织物清洗组合物
                                实施例编号组分                                 A        BC12-14烯基琥珀酸                    3.0      8.0柠檬酸一水合物                      10.0     15.0C12-14烷基硫酸钠                    8.0      8.02摩尔乙氧基化的C12-15醇             -        3.07摩尔乙氧基化的C12-15醇             -        8.05摩尔乙氧基化的C12-15醇             8.0      -二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)          0.2      -油酸                                1.8      -乙醇                                4.0      4.0丙二醇                              2.0      2.0蛋白酶1                            0.01     0.02淀粉酶3                            0.005    0.002聚乙烯基吡咯烷酮                    1.0      2.0抑泡剂                            0.15     0.15NaOH                              最多至pH7.5过硼酸盐                          0.5      1苯酚磺酸盐                        0.1      0.2过氧化物酶                        0.4      0.1水和少量组分                      最多至100%
                实施例30
           液体织物清洗组合物
                                实施例编号组分                                28NaLAS(100%am)                      16Neodol                              21.5柠檬酸盐                            6.8EDDS                                1.2分散剂                              1.3过硼酸盐                            12N-壬酰基-6-氨基己酸的苯酚磺酸酯     6蛋白酶1(%纯酶)                    0.03淀粉酶3                            0.40Carezyme                            0.03溶剂(BPP)                           18.5聚合物                              0.1碳酸盐                              10FWA 15                              0.2TiO2                               0.5PEG8000                             0.4香料                                1.0-1.2抑泡剂                              0.06水和少量组分                        最多至100%
                       实施例31
                  液体织物清洗组合物
                                      实施例编号组分                                      A        BD1水                                     38.63     -MEA                                      0.48      9.0NaOH                                     4.40      1.0Pdiol                                    4.00      10.0柠檬酸                                   2.50      2.0DTPA                                     0.50      1.0FWA预混合物(Br 15/MEA/NI 23-9)           0.15      0.15Na C25AE1.80S                            23.50     -AE3S(H)                                  -         4.0C11.8HLAS                                3.00      14.0Neodol                                   2.00      6.0EtOH                                     0.50      2.0甲酸钙*                                 0.10      0.1硼砂预混合物(硼砂/MEA/Pdiol/柠檬酸)      2.50      -C10 APA                                  1.50      -TEPA 105                                 1.20      -FA C12-18                                5.00      -Neptune LC                               0.50      -染料                                     0.0040    0.0015纤维素酶                                 0.053     0.2淀粉酶3                                 0.15      0.2蛋白酶1                                 0.1       0.1DC 2-3597                                0.12      0.2菜子FA                                   6.50      4.0水和少量组分                             最多至100%
                    实施例32
                液体织物清洗组合物组分                                     30Na0H                                     5.50Pdiol                                    6.90柠檬酸                                   1.50DTPA                                     1.50FWA预混合物(Br15/MEA/N1 23-9)            0.15AE3S(H)                                  2.50LAS(H)                                   13.0Neodol                                   2.00EtOH                                     3.50甲酸钙*                                 0.10硼酸                                     1.00粘土                                     4.00淀粉酶3                                 0.15蛋白酶1                                 0.02脂肪酸                                   16.50水和少量组分                             最多至100%
                    实施例34
                液体织物清洗组合物
根据本发明制备以下特别适用于日本洗衣机条件的液体织物清洗组合物:
组分 34
AE2.5S 15.00
AS 5.50
N-椰油基-N-甲基葡糖胺 5.00
非离子表面活性剂 4.50
柠檬酸 3.00
脂肪酸 5.00
0.97
单乙醇胺 5.10
1,2-丙二醇 7.44
EtOH 5.50
HXS 1.90
硼酸 3.50
乙氧基化四亚乙基五胺 3.00
SRP 0.30
蛋白酶1 0.069
淀粉酶3 0.06
纤维素酶 0.08
脂肪酶 0.18
增白剂 0.10
少量组分/惰性组分至100%
                 实施例35
             液体织物清洗组合物
根据本发明制备以下特别适用于日本洗衣机条件的液体织物清洗组合物:
组分 35
AE2.5S 2.16
AS 3.30
N-椰油基-N-甲基葡糖胺 1.10
非离子表面活性剂 10.00
柠檬酸 0.40
脂肪酸 0.70
0.85
单乙醇胺 1.01
1,2-丙二醇 1.92
EtOH 0.24
HXS 2.09
蛋白酶1 0.01
淀粉酶3 0.06
少量组分/惰性组分至100%
条状织物清洗组合物
适用于手洗脏织物的本发明条状织物清洗组合物一般含有有效量的一种或多种蛋白酶,按组合物的重量计,优选约0.001%-10%,更优选约0.01%-1%活性蛋白酶。(参见美国专利5679630的实施例)。
                    实施例36
               条状织物清洗组合物
                          实施例编号组分                    A      B      C      D蛋白酶1               0.3     -     0.1    0.02蛋白酶2                -      -     0.4    0.1淀粉酶3               0.01   0.02   0.002  0.005C12-C16烷基硫酸钠    20.0   20.0   20.0   20.00C12-C14N-甲基葡糖酰胺5.0    5.0    5.0    5.00C11-C13烷基苯磺酸钠  10.0   10.0   10.0   10.00碳酸钠                 25.0   25.0   25.0   25.00三聚磷酸钠             7.0    7.0    7.0    7.00沸石A(0.1-.10μ)       5.0    5.0    5.0    5.00羧甲基纤维素           0.2    0.2    0.2    0.20聚丙烯酸盐(MW 1400)    0.2    0.2    0.2    0.20椰子单乙醇酰胺         5.0    5.0    5.0    5.00增白剂,香料           0.2    0.2    0.2    0.20CaSO4                 1.0    1.0    1.0    1.00MgSO4                  1.0    1.0    1.0    1.00水                     4.0    4.0    4.0    4.00填料*                         平衡量100%*可选自适宜的材料例如CaCO3、滑石粉、粘土、硅酸盐等。2非蛋白酶1的蛋白酶,包括,但不限于这里所述的本发明中有用的其他蛋白酶。
在实施例36C和D中,其中,在这里所述的本发明中有用的蛋白酶的任何组合用于代替蛋白酶1和蛋白酶2,得到基本上相似的结果。
虽然已描述了本发明的具体实施方案,但在不脱离本发明精神和范围下可对本发明进行各种变化和修改,这对于本领域技术人员来说是显而易见的。在所附的权利要求书中意图覆盖在本发明范围内的所有这样的修改。
本发明组合物可适宜用配方师选择的任何方法来制备,其非限制实施例描述在1997年11月11日授权的Nassano等的美国专利5691297;1996年11月12日授权的Welch等的美国专利5574005;1996年10月29日授权的Dinniwell等的美国专利5569645;1996年10月15日授权的Greco等的美国专利5565422;1996年5月14日授权的Capeci等的美国专利5516448;1996年2月6日授权的Capeci等的美国专利5489392和1996年1月23日授权的Capeci等的5486303中,所有这些专利在本文引用作参考。
除了上述实施例外,本发明清洗组合物可配制成任何适合的洗衣洗涤剂组合物,其非限制实例描述在1997年10月21日授权的Baeck等的美国专利5679630;1996年10月15日授权的Watson等的美国专利5565145;1995年12月26日授权的Fredj等的美国专利5478489;1995年11月28日授权的Fredj等美国专利5470507;1995年11月14日授权的Panandiker等的美国专利5466802;1995年10月24日授权的Fredj等的美国专利5460752;1995年10月17日授权的Fredj等美国专利5458810;1995年10月17日授权的Fredj等美国专利5458809和1994年2月22日授权的Huber等的美国专利5288431中,所有这些专利在本文引用作参考。
参考优选的实施方案和实施例,已详细描述了本发明,在不脱离本发明范围下可作各种变化和修改,这对于本领域技术人员来说是显然的,并且不认为本发明限制在说明书中所述内容。序列描述:SEQ ID No.1His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr1               5                 10              15Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ala
        20                  25                30Asn Leu Lys Ser Lys Gly Ile Thr Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp
    35              40                  45Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
  50               55               60Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly65                 70               75                  80Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Thr Ser Leu Lys Asn Asn Gly
          85                  90                95Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
        100              105                    110Gly Tnr Glu Ile Val Asn Ala Val Glu Val Asn Arg Ser Asn Arg Asn
  115                 120               125Gln Glu Thr Ser Gly Glu Tyr Ala Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
130               135               140Phe Pro Gly Arg Gly Asn Asn His Ser Ser Phe Lys Trp Arg Trp Tyr145                 150             155                160His Phe Asp Gly Thr Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Leu Gln Asn Lys
            165                 170             175Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Thr Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Asp
        180             185                     190Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met
  195                   200            205Asp His Pro Glu Val Ile His Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr
  210              215                       220Thr Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His225                 230             235                240Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Thr
            245             250               255Thr Gly Lys Pro Met Phe Ala Val Ala Glu Pha Trp Lys Asn Asp Leu
       260                265               270Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Ser Trp Asn His Set Val
  275                 280               285Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly
  290                 295               300Gly Tyr Tyr Asp Met Arg Asn Ile Leu Asn Gly Ser Val Val Gln Lys305                310               315                320His Pro Thr His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro
            325                     330                 335Gly Glu Ala Leu Glu Sar Phe Val Gln Gln Trp Phe Lys Pro Leu Ala
        340                 345               350Tyr Ala Leu Val leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
  355                 360                 365Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Tnr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser
  370           375               380Lys Ile Asp Pro leu Leu Gln Ala Arg Gln Thr Phe Ala Tyr Gly Thr385                 390               395               400Gln His Asp Tyr Phe Asp His His Asp Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu
           405                410               415Gly Asn Ser Ser His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp
        420              425                 430Gly Pro Gly Gly Asn Lys Trp Met Tyr Val Gly Lys Asn Lys Ala Gly
     435              440               445Gln Val Trp Arg Asp Ile Thr Gly Asn Arg Thr Gly Thr Val Thr Ile
450              455                460Ash Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser465                470               475                480Val Trp Val Lys Gln
               485序列描述:SEQ ID NO.2His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp His1                 5                  10               15Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Asp Asp Ala Ser
             20              25                   30Asn Leu Arg Asn Arg Gly Ile Thr Ala Ile Trp Ile Pro Pro Ala Trp
        35                40      -         45Lys Gly Thr Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr
  50                  55                60Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly
  65                  70                75Thr Arg Ser Gln Leu Glu Ser Ala Ile His Ala Leu Lys Asn Asn Gly80                 85                 90                 95Val Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp
          100               105               110Ala Tnr Glu Asn Val Leu Ale Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn
          115               120               125Gln Glu Ile Ser Gly Asp Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp
    130                 135             140Pne Pro Gly Arg Gly Asn Thr Tyr Ser Asp Phe Lys Trp Arg Trp Tyr
    145               150               155His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Gln Phe Gln Asn Arg160                165              170                175Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Ala Trl Asp Trp Glu Val Asp
         180                185                190Ser Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Val Asp Met
       195                200                 205Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Arg Trp Gly Glu Trp Tyr
  210                215                220Thr Asn Thr Leu Asn Leu Asp Gly Phe Atg Ile Asp Ala Val Lys His
 225               230               235Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Leu Thr His Val Arg Asn Ala240                245                250               255Thr Gly Lys Glu Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu
          260               265                 270Gly Ala Leu Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val
        275               280                285Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Asn Ser Gly
    290                295             300Gly Asn Tyr Asp Met Ala Lys Leu Leu Asn Gly Thr Val Val Gln Lys
 305                310              315His Pro Met His Ala Val Tnr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro320                325                330               335Gly Glu Ser Leu Glu Ser Phe Val Gln Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala
            340                      345                    350Tyr Ala Leu Ile Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr
        355               360               365Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Ser Val Pro Ala Met Lys Ala
    370                375              380Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Asn Phe Ala Tyr Gly Tnr
  385             390                395Gln His Asp Tyr Phe Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu400                405               410                415Gly Asn Thr Thr His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp
            420               425              430Gly Pro Gly Gly Glu Lys Trp Met Tyr Val Gly Gln Asn Lys Ala Gly
         435              440               445Gln Val Trp His Asp Ile Thr Gly Asn Lys Pro Gly Thr Val Thr Ile
  450                455              450Asn Ala Asp Gly Trp Ala Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser
 465               470               475Ile Trp Val Lys Arg480序列描述:SEQ ID No.3His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp序列描述:SEQ ID No.4AAPFNGTMMO     YFEWYLPDDG      TLWTKVANEA   NNLSSLGTTA   LWLPPAYKGTSRSDVGYGVY     DLYDLGEFNO      KGAVRTKYGT   KAOYLOAIOA
           AHAAGMOVYADVVFDHKGGA     DGTEWVDAVE      VNPSDRNOEI   SGTYOIOAWTKFDFPGRGNTYSSFKWRWYH     FDGVDWDESR      KLSRIYKFRG   IGKAWDWEVDTENGNYDYLMYADLDMDHFE     VVTELKSWGK      WYVNTTNIDG   FRLDAVKHIK FSFFPDWLSDVRRSOTGKPLF    TVGEYWSYD       NKLHNYIMKT   NGTMSLFDAP LHNKFYTASKSGGTFDMRTL     MTNTLMKDOP      TLAVTFVDNH   DTEPGOALOS
           WVDPWFKPLAYAFILTROEG     YPCVFYGDYY      GIPOYNIPSL   KSKIDPLLIA RRDYAYGTOHDYLDHSDIIG     WTREGVTEKP      GSGLAALITD   GPGGSKWMYVGKOHAGKVFYDLTGNRSDTV     TINSDGWGEF      KVNGGSVSVW   VPRKTTVSTI AWSITTRPWTDEFVRWTEPR     LVAWP

Claims (46)

1.一种织物和/或洗餐具和/或硬表面清洗组合物,其包含:
(a)有效量的蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位的氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基,同时结合在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基;其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置处的氨基酸残基的取代时,还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代;
(b)淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体选自:
(i)α-淀粉酶,特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性实验测定,其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下,比活度比Termamyl的比活度高至少25%;和/或
(ii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iv)根据(i)的α-淀粉酶,其包含以下N-端氨基酸序列:His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或与N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(v)根据(i-iv)的α-淀粉酶,其中该α-淀粉酶可由嗜碱的芽孢杆菌种得到,和/或
(vi)根据(v)的α-淀粉酶,其中该淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到,和/或
(vii)α-淀粉酶,其与具有分别对应于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出阳性免疫交叉反应活性,和/或
(viii)母体α-淀粉酶变体,其中母体α-淀粉酶(1)具有分别在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一种氨基酸序列,或(2)表现出与一个或多个所述的氨基酸序列至少80%同源,和/或与具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出免疫交叉反应活性,和/或由一种DNA序列编码,该DNA序列与编码具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探针杂交,该变体中:(A)所述母体α-淀粉酶中缺失至少一个氨基酸残基;和/或(B)所述母体α-淀粉酶的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基代替;和/或相对所述的母体α-淀粉酶,插入至少一个氨基酸残基;所述变体具有α-淀粉酶活性并相对所述母体α-淀粉酶表现出至少一种以下性质:提高了热稳定性、提高了抗氧化的稳定性;降低了对Ca离子的依赖性;在中性至相对高pH值下提高了稳定性和/或α-淀粉分解活性;在相对高温下提高了α-淀粉分解活性;和提高或降低了等电点(pI),以便使α-淀粉酶变体的pI值更好地与介质的pH匹配;和
(c)一种或多种清洗辅助材料。
2.根据权利要求1的清洗组合物,其中所述蛋白酶变体是由枯草芽孢杆菌,优选由缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素或枯草溶菌素309衍生得到。
3.根据权利要求1的清洗组合物,其中所述蛋白酶变体包括在以下位置处的氨基酸残基的取代:在103位置和在以下236和245位的一个或多个位置,优选在103和236位置和以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、230、232、248、252、257、260、270和275位中的一个或多个位置,或在103和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、170、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、222、230、232、248、252、257、260、261、270和275位中的一个或多个位置,更优选在103、236和245位置和以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、211、212、213、215、217、230、232、248、252、257、260、270和275位中的一个或多个位置。
4.根据权利要求1的清洗组合物,其中所述蛋白酶变体包括选自以下的一组取代:12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252;12/76/103/104/130/170/185/222/243/245;12/76/103/104/130/222/245/261;             12/76/103/104/222/245;12/76/103/104/130/222/245;61/68/103/104/159/232/236/245/248/252;     62/103/104/159/213/232/236/245/248/252;62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252;62/103/104/159/232/236/245/248/252;62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252;62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252;68/103/104/159/232/236/245/248/252/270;68/103/104/159/185/232/236/245/248/252;    68/103/104/159/210/232/236/245/248/252;68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252;68/103/104/159/213/232/236/245/248/252;68/103/104/159/230/232/236/245;            68/76/103/104/159/209/232/236/245;68/103/104/232/236/245/248/257/275;        68/103/104/213/232/236/245/248/252;68/103/104/159/232/236/245/248/252;        68/103/104/159/209/232/236/245;68/76/103/104/159/236;                     68/76/103/104/159/236/245;68/76/103/104/159/232/236/245;             68/103/104/159/232/236/245/252;68/103/104/159/232/236/245;                68/103/104/159/232/236/245/257;68/76/103/104/159/211/232/236/245;         68/76/103/104/159/215/232/236/245;68/103/104/159/210/232/236/245;            68/103/104/159/213/232/236/245/260;68/76/103/104/159/213/232/236/245/260;     68/103/104/159/236;68/76/103/104/159/210/232/236/245/260;     68/103/104/159/236/245;68/103/104/159/183/232/236/245/248/252;    68/76/103/104/159/236/245;68/103/104/232/236/245/257/275;            68/103/104/159/213/232/236/245;76/103/222/245;                            76/103/104/159/232/236/245;76/103/104/159/213/232/236/245/260;        76/103/104/159;76/103/104/131/159/232/236/245/248/252;    76/103/104/222/245;97/103/104/159/232/236/245/248/252;98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252;98/103/104/159/232/236/245/248/252;101/103/104/159/232/236/245/248/252;       102/103/104/159/232/236/245/248/252;103/104/159/232/236/245;                   103/104/159/232/236/245/248/252;103/104/159/205/209/232/236/245/257         103/104/159/232/245/248/252;103/104/159/205/209/210/232/236/245/257;   103/104/159/213/232/236/245/248/252;103/104/159/217/232/236/245/248/252;       103/104/130/159/232/236/245/248/252;103/104/159/230/236/245;                   103/104/159/236/245;103/104/159/248/252/270;                   103/104/131/159/232/236/245/248/252;103/104/159/205/209/232/236/245;和         103/104/159/232/236/245/257.
5.根据权利要求4的清洗组合物,其中所述蛋白酶变体包括选自以下的一组取代:
          12R/76D/103A/104T/130T/222S/245R;
             12R/76D/103A/104I/222S/245R;12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K;
       12R/76D/103A/104T/130G/222S/245R/261D;
   12R/76D/103A/104T/130G/170S/185D/222S/243D/245R;
   61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;62D/103A/104I/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
   62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
     62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
  68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
              68A/103A/104I/159D/2361;
            68A/103A/104I/159D/236H/245R;
  68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A;
 68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K;
      68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R;
    68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R;
    68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R;
    68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
            68A/76D/103A/104I/159D/236H;
          68A/76D/103A/104I/159D/236H/245R;
        68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
        68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K;
          68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
        68A/103A/104I/159D/232V/20036H/245R/257V;
   68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K;
   68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K;
68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K;   68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K;
     68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R;
  68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R;
  68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H;
     68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H;
  68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K;
  68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
     68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R;
     68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R;
     68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R;68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A;
              76D/103A/222S/245R;
       76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
              76D/103A/104I/159D;
            76D/103A/104I/222S/245R;76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
  97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K;
  101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
     103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
  103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
  103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
           103A/104I/159D/230V/236H/245R;
  103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K;
              103A/104I/159D/236H/245R;
           103A/104I/159D/248D/252K/270V;
           103A/104I/159D/232V/236H/245R;
     103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R;
        103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V;
  103A/1041/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V;
  103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K;103A/104I/159D/205I/209W/210I/232V/236H/245R/257V; 和
        103A/104I/159D/232V/245R/248D/252K
6.根据权利要求1的清洗组合物,其中所述清洗辅助物质选自表面活性剂、溶剂、缓冲剂、酶、污垢解脱剂、粘土污垢去除剂、分散剂、增白剂、抑泡剂、织物柔软剂、增泡剂、酶稳定剂、助洗剂、其他漂白剂、染料、香料、螯合剂和其混合物。
7.根据权利要求6的清洗组合物,其中所述清洗辅助物质包括至少一种去污表面活性剂,优选支化表面活性剂,更优选中链支化的表面活性剂。
8.根据权利要求7的清洗组合物,其中清洗辅助物质包括占组合物重量至少约0.1%表面活性剂,所述表面活性剂包括选自以下的物质:烷基苯磺酸盐、伯烷基硫酸盐、仲烷基硫酸盐、烷基烷氧基硫酸盐、烷基烷氧基羧酸盐、烷基多苷和它们相应的硫酸化多苷、a-磺化的脂肪酸酯、烷基和烷基酚烷氧基化物、甜菜碱和磺基甜菜碱、氧化胺、N-甲基葡糖酰胺、非离子伯醇乙氧基化物、带有混合的乙氧基/丙氧基的非离子伯醇和其混合物。
9.根据权利要求8的清洗组合物,其还包含至少约5%助洗剂,其选自沸石、多羧酸盐、层状硅酸盐、磷酸盐和其混合物。
10.根据权利要求6的清洗组合物,其中所述清洗辅助物质包括至少一种去污酶,其选自纤维素酶、脂肪酶、其他淀粉酶、磷脂酶、其他蛋白酶、过氧化物酶和其混合物.
11.根据权利要求6的清洗组合物,其中所述清洗辅助物质包含至少一种漂白剂,其优选选自过碳酸盐、过硼酸盐和其混合物,任选地,其还包含至少一种漂白活化剂,其优选选自:苯甲酰氧基苯磺酸盐(BOBS)、壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)、癸酰氧基苯磺酸盐(C10-OBS)、辛酰氧基苯磺酸盐(C8-OBS)、可过水解的酯、4-[N-(壬酰基)氨基己酰基氧]苯磺酸钠(NACA-OBS)、月桂基氧基苯磺酸盐(LOBS或C12-OBS)、10-十一碳烯酰基氧基苯磺酸盐(UDOBS或C11-OBS,在10-位置有不饱和度)和癸酰基氧基苯甲酸(DOBA)和其混合物,还任选地包含漂白催化剂,优选3-(3,4-二氢异喹啉鎓)丙磺酸盐。
12.根据权利要求1的清洗组合物,其中所述清洗组合物是织物清洗组合物,优选是液体、颗粒、条、片、凝胶、粉末或泡沫体形式,其包含占该组合物重量至少约5%表面活性剂和至少约5%助洗剂。
13.根据权利要求1的清洗组合物,其中所述清洗组合物是织物清洗组合物,其包含:
(a)0.0001%-10%重量的所述蛋白酶变体;
(b)0.0001%-0.1%重量的所述淀粉酶变体;
(c)至少约5%重量表面活性剂,优选其选自烷基苯磺酸盐、伯烷基硫酸盐、仲烷基硫酸盐、烷基烷氧基硫酸盐、烷基烷氧基羧酸盐、烷基多苷和它们相应的硫酸化多苷、a-磺化的脂肪酸酯、烷基和烷基酚烷氧基化物、甜菜碱和磺基甜菜碱、氧化胺、N-甲基葡糖酰胺、非离子伯醇乙氧基化物、带有混合的乙氧基/丙氧基的非离子伯醇和其混合物;和其中另外助洗剂选自沸石、多羧酸盐、层状硅酸盐、磷酸盐和其混合物;和
(d)至少约5%重量助洗剂,优选其选自沸石、多羧酸盐、层状硅酸盐、磷酸盐和其混合物。
14.根据权利要求25的清洗组合物,其是包含至少约15%表面活性剂的浓缩粒状织物清洗组合物形式。
15.一种清洗织物的方法,所述方法包括将需要清洗的织物与根据权利要求12或13的清洗组合物接触。
16.根据权利要求1的清洗组合物,其中所述清洗组合物是洗餐具组合物,优选是液体、颗粒、粉末、凝胶或片形式,其包含:
(a)0.0001%-10%重量所述蛋白酶变体;
(b)按洗餐具组合物的重量计,0.0001%-0.1%所述淀粉酶变体;和
(c)0.1%-10%重量表面活性剂。
17.一种清洗餐具的方法,所述方法包括将需要清洗的餐具与根据权利要求16的清洗组合物接触。
18.一种个人清洗组合物,其包含:
(a)有效量的蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的103位的氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基,同时结合在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的1、3、4、8、9、10、12、13、16、17、18、19、20、21、22、24、27、33、37、38、42、43、48、55、57、58、61、62、68、72、75、76、77、78、79、86、87、89、97、98、99、101、102、104、106、107、109、111、114、116、117、119、121、123、126、128、130、131、133、134、137、140、141、142、146、147、158、159、160、166、167、170、173、174、177、181、182、183、184、185、188、192、194、198、203、204、205、206、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、222、224、227、228、230、232、236、237、238、240、242、243、244、245、246、247、248、249、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、265、268、269、270、271、272、274和275位的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基;其中当所述蛋白酶变体包括在对应于103和76位置处的氨基酸残基的取代时,还存在在非对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的27、99、101、104、107、109、123、128、166、204、206、210、216、217、218、222、260、265或274位的氨基酸残基位置的一个或多个氨基酸残基位置处的氨基酸残基的取代;
(b)淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体选自:
(i)α-淀粉酶,特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性实验测定,其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下,比活度比Termamyl的比活度高至少25%;和/或
(ii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iv)根据(i)的α-淀粉酶,其包含以下N-端氨基酸序列:His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或与N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(v)根据(i-iv)的α-淀粉酶,其中该α-淀粉酶可由嗜碱的芽孢杆菌种得到,和/或
(vi)根据(v)的α-淀粉酶,其中该淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到,和/或
(vii)α-淀粉酶,其与具有分别对应于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出阳性免疫交叉反应活性,和/或
(viii)母体α-淀粉酶变体,其中母体α-淀粉酶(1)具有分别在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一种氨基酸序列,或(2)表现出与一个或多个所述的氨基酸序列至少80%同源,和/或与具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出免疫交叉反应活性,和/或由一种DNA序列编码,该DNA序列与编码具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探针杂交,该变体中:(A)所述母体α-淀粉酶中缺失至少一个氨基酸残基;和/或(B)所述母体α-淀粉酶的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基代替;和/或(C)相对所述的母体α-淀粉酶,插入至少一个氨基酸残基;所述变体具有α-淀粉酶活性并相对所述母体α-淀粉酶表现出至少一种以下性质:提高了热稳定性、提高了抗氧化的稳定性;降低了对Ca离子的依赖性;在中性至相对高pH值下提高了稳定性和/或α-淀粉分解活性;在相对高温下提高了α-淀粉分解活性;和提高或降低了等电点(pI),以便使α-淀粉酶变体的pI值更好地与介质的pH匹配;和
(c)一种或多种清洗辅助材料。
19.根据权利要求18的个人清洗组合物,其中所述个人清洗组合物包含:
(a)0.001%-5%,优选0.001%-2%,更优选0.002%-0.8%重量所述蛋白酶变体;
(b)按该个人清洗组合物的重量计,0.0001%-0.1%所述淀粉酶变体;和
(c)0.1%-95%重量表面活性剂体系,优选其包含选自以下的表面活性剂:阴离子羧酸盐、氧化胺、烷基葡糖苷、葡糖酰胺、烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、酰基羟乙磺酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、烷基磷酸酯、乙氧基化磷酸酯、烷基甘油醚磺酸盐和其混合物,更优选包含选自以下的表面活性剂:皂、酰基谷氨酸盐、烷基肌氨酸盐、月桂基氧化胺、椰油基氧化胺、椰油酰氨基丙基氧化胺、癸基葡糖苷、月桂基硫酸盐、月桂醚硫酸盐、C12-18酰基羟乙磺酸盐和其混合物;和
(d)任选地,0.05%-50%重量酶稳定剂。
20.根据权利要求19的个人清洗组合物,其中所述表面活性剂是皂,按清洗组合物的重量计,其含量为至少约2%,优选至少约10%,更优选至少约25%。
21.根据权利要求20的个人清洗组合物,其中皂与蛋白酶变体的比例为2000∶1-8∶1,优选400∶1-40∶1。
22.一种个人清洗方法,所述方法包括将需要清洗的人体或低级动物体部分与根据权利要求18的清洗组合物接触。
23.一种织物和/或洗餐具和/或硬表面清洗组合物,其包含:
(a)有效量的蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位中的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基;
(b)淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体选自:
(i)α-淀粉酶,特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性实验测定,其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下,比活度比Termamyl的比活度高至少25%;和/或
(ii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iv)根据(i)的α-淀粉酶,其包含以下N-端氨基酸序列:His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或与N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(v)根据(i-iv)的α-淀粉酶,其中该α-淀粉酶可由嗜碱的芽孢杆菌得到,和/或
(vi)根据(v)的α-淀粉酶,其中该淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到,和/或
(vii)α-淀粉酶,其与具有分别对应于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出阳性免疫交叉反应活性,和/或
(viii)母体α-淀粉酶变体,其中母体α-淀粉酶(1)具有分别在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一种氨基酸序列,或(2)表现出与一个或多个所述的氨基酸序列至少80%同源,和/或与具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出免疫交叉反应活性,和/或由一种DNA序列编码,该DNA序列与编码具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探针杂交,该变体中:(A)所述母体α-淀粉酶中缺失至少一个氨基酸残基;和/或(B)所述母体α-淀粉酶的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基代替;和/或(C)相对所述的母体α-淀粉酶,插入至少一个氨基酸残基;所述变体具有α-淀粉酶活性并相对所述母体α-淀粉酶表现出至少一种以下性质:提高了热稳定性、提高了抗氧化的稳定性;降低了对Ca离子的依赖性;在中性至相对高pH值下提高了稳定性和/或α-淀粉分解活性;在相对高温下提高了α-淀粉分解活性;和提高或降低了等电点(pI),以便使α-淀粉酶变体的pI值更好地与介质的pH匹配;和
(c)一种或多种清洗辅助材料。
24.根据权利要求23的清洗组合物,其中所述蛋白酶变体是由枯草芽孢杆菌,优选缓慢芽孢杆菌枯草溶菌素或枯草溶菌素309衍生得到。
25.根据权利要求23的清洗组合物,其中所述蛋白酶变体包括在选自以下位置的一个或多个位置处的氨基酸残基的取代:
(1)62位置和在以下103、104、109、159、213、232、236、245、248和252位置中的一个或多个位置;
(2)212位置和在以下12、98、102、103、104、159、232、236、245、248和252位置中的一个或多个位置;
(3)230位置和在以下68、103、104、159、232、236和245位置中的一个或多个位置;
(4)232位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置;
(5)232位置和在以下103、104、236和245位置中的一个或多个位置;
(6)232和103位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置;
(7)232和104位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置;
(8)232和236位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置;
(9)232和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置;
(10)232、103、104、236和245位置和在以下12、61、62、68、76、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、205、209、210、212、213、217、230、236、245、248、252、257、260、270和275位置中的一个或多个位置;
(11)252位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置;
(12)252位置和在以下103、104、236和245位置中的一个或多个位置;
(13)252和103位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置;
(14)252和104位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置;
(15)252和236位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置;
(16)252和245位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置;
(17)252、103、104、236和245位置和在以下12、61、62、68、97、98、101、102、103、104、109、130、131、159、183、185、210、212、213、217、232、236、245、248和270位置中的一个或多个位置;
(18)257位置和在以下68、103、104、205、209、210、232、236、245和275位置中的一个或多个位置。
26.根据权利要求23的清洗组合物,其中所述蛋白酶变体包括选自以下的一组取代:12/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252;61/68/103/104/159/232/236/245/248/252;62/103/104/130/159/213/232/236/245/248/252;62/103/104/159/213/232/236/245/248/252;62/103/104/109/159/213/232/236/245/248/252;62/103/104/159/232/236/245/248/252;62/101/103/104/159/212/213/232/236/245/248/252;68/103/104/159/232/236/245/248/252/270;68/103/104/159/185/232/236/245/248/252;    68/103/104/159/210/232/236/245/248/252;68/103/104/159/185/210/232/236/245/248/252;68/103/104/159/213/232/236/245/248/252;68/103/104/159/230/232/236/245;            68/76/103/104/159/209/232/236/245;68/103/104/232/236/245/248/257/275;        68/103/104/213/232/236/245/248/252;68/103/104/159/232/236/245/248/252;        68/103/104/159/209/232/236/245;68/76/103/104/159/232/236/245;             68/103/104/159/232/236/245/252;68/103/104/159/232/236/245;                68/103/104/159/232/236/245/257;68/76/103/104/159/211/232/236/245;         68/76/103/104/159/215/232/236/245;68/103/104/159/210/232/236/245;            68/103/104/159/213/232/236/245/260;68/76/103/104/159/213/232/236/245/260;     68/76/103/104/159/210/232/236/245/260;68/103/104/159/183/232/236/245/248/252;    68/103/104/232/236/245/257/275;68/103/104/159/213/232/236/245;            76/103/104/159/232/236/245;76/103/104/159/213/232/236/245/260;        76/103/104/131/159/232/236/245/248/252;97/103/104/159/232/236/245/248/252;        98/103/104/159/232/236/245/248/252;98/102/103/104/159/212/232/236/245/248/252;101/103/104/159/232/236/245/248/252;102/103/104/159/232/236/245/248/252;       103/104/159/232/236/245;103/104/159/248/252/270;                   103/104/159/232/236/245/248/252;103/104/159/205/209/232/236/245/257         103/104/159/232/245/248/252;03/104/159/205/209/210/232/236/245/257;    103/104/159/213/232/236/245/248/252;03/104/159/217/232/236/245/248/252;        103/104/130/159/232/236/245/248/252;03/104/131/159/232/236/245/248/252;        103/104/159/205/209/232/236/245;和03/104/159/232/236/245/257.
27.根据权利要求26的清洗组合物,其中所述蛋白酶变体包括选自以下的一组取代:   12R/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K;
  61E/68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;62D/103A/1041/109R/159D/213R/232V/236H/245R/248D/25K;
  62D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
    62D/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;62D/103A/104I/130G/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;62D/101G/103A/104I/159D/212G/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
 68A/76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
 68A/76D/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R/260A;
68A/103A/104I/159D/183D/232V/236H/245R/248D/252K;
     68A/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R;
   68A/76D/103A/104I/159D/211R/232V/236H/245R;
   68A/76D/103A/104I/159D/215R/232V/236H/245R;
  68A/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
     68A/76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
    68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/252K;
      68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R;
    68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V;
68A/103A/104I/159D/185D/232V/236H/245R/248D/252K;
68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R/248D/252K;68A/103A/104I/159D/185D/210L/232V/236H/245R/248D/252K;
68A/103A/104I/159D/213E/232V/236H/245R/248D/252K;
    68A/103A/104I/159D/230V/232V/236H/245R;
  68A/76D/103A/104I/159D/209W/232V/236H/245R;
  68A/103A/104I/232V/236H/245R/248D/257V/275H;
    68A/103A/104I/232V/236H/245R/257V/275H;
  68A/103A/104I/213E/232V/236H/245R/248D/252K;
  68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
    68A/103A/104I/159D/210I/232V/236H/245R;
    68A/103A/104I/159D/210L/232V/236H/245R;
   68A/103A/104I/159D/213G/232V/236H/245R;68A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K/270A;
     76D/103A/104I/159D/232V/236H/245R;76D/103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
76D/103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/260A;
97E/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
98L/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;98L/102A/103A/104I/159D/212G/232V/236H/245R/248D/252K;
101G/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
102A/103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
   103A/104I/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
103A/104I/159D/213R/232V/236H/245R/248D/252K;
103A/104I/130G/159D/232V/236H/245R/248D/252K;
103A/104I/159D/217E/232V/236H/245R/248D/252K;
        103A/104I/159D/248D/252K/270V;
        103A/104I/159D/232V/236H/245R;
   103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R;
     103A/104I/159D/232V/236H/245R/257V;
103A/104I/159D/205I/209W/232V/236H/245R/257V;
103A/104I/131V/159D/232V/236H/245R/248D/252K;103A/104I/159D/205I/209W/2101/232V/236H/245R/257V;和
     103A/1041/159D/232V/245R/248D/252K.
28.根据权利要求23的清洗组合物,其中所述清洗辅助物质选自表面活性剂、溶剂、缓冲剂、酶、污垢解脱剂、粘土污垢去除剂、分散剂、增白剂、抑泡剂、织物柔软剂、增泡剂、酶稳定剂、助洗剂、其他漂白剂、染料、香料、螯合剂和其混合物。
29.根据权利要求28的清洗组合物,其中所述清洗辅助物质包括至少一种去污表面活性剂,优选支化表面活性剂,更优选中链支化的表面活性剂。
30.根据权利要求28的清洗组合物,其中清洗辅助物质包括占组合物重量至少约0.1%表面活性剂,所述表面活性剂包括选自以下的物质:烷基苯磺酸盐、伯烷基硫酸盐、仲烷基硫酸盐、烷基烷氧基硫酸盐、烷基烷氧基羧酸盐、烷基多苷和它们相应的硫酸化多苷、a-磺化的脂肪酸酯、烷基和烷基酚烷氧基化物、甜菜碱和磺基甜菜碱、氧化胺、N-甲基葡糖酰胺、非离子伯醇乙氧基化物、带有混合的乙氧基/丙氧基的非离子伯醇和其混合物。
31.根据权利要求30的清洗组合物,其还包含至少约5%助洗剂,其选自沸石、多羧酸盐、层状硅酸盐、磷酸盐和其混合物。
32.根据权利要求28的清洗组合物,其中所述清洗辅助物质包括至少一种去污酶,其选自纤维素酶、脂肪酶、淀粉酶、磷脂酶、其他蛋白酶、过氧化物酶和其混合物。
33.根据权利要求28的清洗组合物,其中所述清洗辅助物质包含至少一种漂白剂,其优选选自过碳酸盐、过硼酸盐和其混合物,任选地,其还包含至少一种漂白活化剂,其优选选自:苯甲酰氧基苯磺酸盐(BOBS)、壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)、癸酰氧基苯磺酸盐(C10-OBS)、辛酰氧基苯磺酸盐(C8-OBS)、可过水解的酯、4-[N-(壬酰基)氨基己酰基氧]苯磺酸钠(NACA-OBS)、月桂基氧基苯磺酸盐(LOBS或C12-OBS)、10-十一碳烯酰基氧基苯磺酸盐(UDOBS或C11-OBS,在10-位置有不饱和度)和癸酰基氧基苯甲酸(DOBA)和其混合物,还任选地包含漂白催化剂,优选3-(3,4-二氢异喹啉鎓)丙磺酸盐。
34.根据权利要求23的清洗组合物,其中所述清洗组合物是织物清洗组合物,优选是液体、颗粒、条、片、凝胶、粉末或泡沫体形式,其包含占该组合物重量至少约5%表面活性剂和至少约5%助洗剂。
35.根据权利要求23的清洗组合物,其中所述清洗组合物是织物清洗组合物,其包含:
(a)0.0001%-10%重量的所述蛋白酶变体;
(b)按织物清洗组合物的重量计,0.0001%-0.1%重量的所述淀粉酶变体;
(c)至少约5%重量表面活性剂,优选其选自烷基苯磺酸盐、伯烷基硫酸盐、仲烷基硫酸盐、烷基烷氧基硫酸盐、烷基烷氧基羧酸盐、烷基多苷和它们相应的硫酸化多苷、a-磺化的脂肪酸酯、烷基和烷基酚烷氧基化物、甜菜碱和磺基甜菜碱、氧化胺、N-甲基葡糖酰胺、非离子伯醇乙氧基化物、带有混合的乙氧基/丙氧基的非离子伯醇和其混合物;和其中另外助洗剂选自沸石、多羧酸盐、层状硅酸盐、磷酸盐和其混合物;和
(d)至少约5%重量助洗剂,优选其选自沸石、多羧酸盐、层状硅酸盐、磷酸盐和其混合物。
36.根据权利要求35的清洗组合物,其是包含至少约15%表面活性剂的浓缩粒状织物清洗组合物形式。
37.一种清洗织物的方法,所述方法包括将需要清洗的织物与根据权利要求34或35的清洗组合物接触。
38.根据权利要求23的清洗组合物,其中所述清洗组合物是洗餐具组合物,优选是液体、颗粒、粉末、凝胶或片形式,其包含:
(a)0.0001%-10%重量所述蛋白酶变体;和
(b)0.1%-10%重量表面活性剂。
39.一种清洗餐具的方法,所述方法包括将需要清洗的餐具与根据权利要求38的清洗组合物接触。
40.一种个人清洗组合物,其包含:
(a)有效量的蛋白酶变体,其中所述蛋白酶变体包括在对应于淀粉分解芽孢杆菌枯草溶菌素的62、212、230、232、252和257位中的一个或多个氨基酸残基位置处用另一种天然产生的氨基酸残基取代所述位置的氨基酸残基;
(b)淀粉酶变体,其中所述淀粉酶变体选自:
(i)α-淀粉酶,特征在于由Phadebasα-淀粉酶活性实验测定,其在温度25℃-55℃和pH值为8-10下,比活度比Termamyl的比活度高至少25%;和/或
(ii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.1中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iii)根据(i)的α-淀粉酶,其包含在SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列或与SEQ ID No.2中所示的氨基酸序列至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(iv)根据(i)的α-淀粉酶,其包含以下N-端氨基酸序列:His-His-Asn-Gly-Thr-Asn-Gly-Thr-Met-Met-Gln-Tyr-Phe-Glu-Trp-Tyr-Leu-Pro-Asn-Asp(SEQ ID No.3)或与N-端中所示的氨基酸序列(SEQID No.3)至少80%同源的α-淀粉酶,和/或
(v)根据(i-iv)的α-淀粉酶,其中该α-淀粉酶可由嗜碱的芽孢杆菌种得到,和/或
(vi)根据(v)的α-淀粉酶,其中该淀粉酶可由NCIB 12289、NCIB12512、NCIB12513和DSM935中的任何菌株得到,和/或
(vii)α-淀粉酶,其与具有分别对应于SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.3的氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出阳性免疫交叉反应活性,和/或
(viii)母体α-淀粉酶变体,其中母体α-淀粉酶(1)具有分别在SEQ ID No.1、ID No.2或ID No.4中所示的一种氨基酸序列,或(2)表现出与一个或多个所述的氨基酸序列至少80%同源,和/或与具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶产生的抗体表现出免疫交叉反应活性,和/或由一种DNA序列编码,该DNA序列与编码具有一个所述氨基酸序列的α-淀粉酶的DNA序列相同的探针杂交,该变体中:(A)所述母体α-淀粉酶中缺失至少一个氨基酸残基;和/或(B)所述母体α-淀粉酶的至少一个氨基酸残基被不同的氨基酸残基代替;和/或(C)相对所述的母体α-淀粉酶,插入至少一个氨基酸残基;所述变体具有α-淀粉酶活性并相对所述母体α-淀粉酶表现出至少一种以下性质:提高了热稳定性、提高了抗氧化的稳定性;降低了对Ca离子的依赖性;在中性至相对高pH值下提高了稳定性和/或α-淀粉分解活性;在相对高温下提高了α-淀粉分解活性;和提高或降低了等电点(pI),以便使α-淀粉酶变体的pI值更好地与介质的pH匹配;和
(c)一种或多种清洗辅助材料。
41.根据权利要求40的个人清洗组合物,其中所述个人清洗组合物包含:
(a)0.001%-5%,优选0.001%-2%,更优选0.002%-0.8%重量所述蛋白酶变体;
(b)按该个人清洗组合物的重量计,0.0001%-0.1%所述淀粉酶变体;和
(c)0.1%-95%重量表面活性剂体系,优选其包含选自以下的表面活性剂:阴离子羧酸盐、氧化胺、烷基葡糖苷、葡糖酰胺、烷基硫酸盐、烷基醚硫酸盐、酰基羟乙磺酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、烷基磷酸酯、乙氧基化磷酸酯、烷基甘油醚磺酸盐和其混合物,更优选包含选自以下的表面活性剂:皂、酰基谷氨酸盐、烷基肌氨酸盐、月桂基氧化胺、椰油基氧化胺、椰油酰氨基丙基氧化胺、癸基葡糖苷、月桂基硫酸盐、月桂醚硫酸盐、C12-18酰基羟乙磺酸盐和其混合物;和
(d)任选地,0.05%-50%重量酶稳定剂。
42.根据权利要求41的个人清洗组合物,其中所述表面活性剂是皂,按清洗组合物的重量计,其含量为至少约2%,优选至少约10%,更优选至少约25%。
43.根据权利要求42的个人清洗组合物,其中皂与蛋白酶变体的比例为2000∶1-8∶1,优选400∶1-40∶1。
44.一种个人清洗方法,所述方法包括将需要清洗的人体或低级动物体部分与根据权利要求40的清洗组合物接触。
45.一种预处理需要清洗的织物的方法,所述方法包括在用含有表面活性剂的水溶液洗涤所述织物之前,将所述织物与根据权利要求12或13的漂白组合物接触。
46.一种预处理需要清洗的织物的方法,所述方法包括在用含有表面活性剂的水溶液洗涤所述织物之前,将所述织物与根据权利要求34或35的漂白组合物接触。
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