BR122021018583B1 - Método para limpar um material têxtil ou uma superfície dura ou outra superfície em cuidados com tecidos e com a casa - Google Patents

Abstract

São descritos métodos e composições para tratar materiais têxteis e superfícies duras com composições tendo lipases específicas. As composições têm estabilidade aumentada à degradação oxidativa, em particular, devido aos catalisadores de alvejamento.

Description

REFERÊNCIA A UMA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[0001] Este pedido contém uma Listagem de Sequências em for ma legível por computador, que é incorporada a título de referência.

CAMPO DA INVENÇÃO

[0002] Esta invenção refere-se às composições que compreendem enzimas lipase e agentes alvejantes, e também aos métodos para produzir e para usar tais composições que são preferencialmente produtos para cuidados com tecidos e com a casa.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0003] Os fabricantes de detergentes continuam a tentar fornecer composições para limpeza, particularmente composições para limpeza de louça e de tecidos que fornecem os mais robustos sistemas de limpeza. No caso da limpeza com enzimas lipase, elas podem ser particularmente vulneráveis à oxidação, especialmente se tais enzimas entrarem em contato com agente alvejante durante armazenamento ou durante uma etapa de lavagem ou de tratamento, quer ambos os componentes incorporados na etapa de lavagem ou tratamento, quer um ou outro componente sendo transferido de uma etapa de pré-tratamento, particularmente, por exemplo, de uma etapa de alvejamento de pré- tratamento. Isto leva, de modo geral, à perda de atividade ou de eficácia das composições, e em particular à perda de atividade enzimática. Certos componentes alvejantes são particularmente problemáticos, como perácidos pré-formados e catalisadores de alvejamento ou refor- çadores. WO2007/001262 refere-se às composições para limpeza que compreendem catalisadores orgânicos com compatibilidade otimizada com enzimas, especificamente em relação à compatibilidade otimizada com enzima amilase. Existe uma necessidade de uma composição que ajude a diminuir este problema.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0004] De acordo com a presente invenção é apresentado um mé todo de limpar e/ou tratar um material têxtil, uma superfície dura e/ou outra superfície para cuidados com tecidos e/ou com a casa, que compreende as etapas de: a) contatar um material têxtil, uma superfície dura e/ou outra superfície para cuidados com tecidos e/ou com a casa com uma solução aquosa compreendendo uma lipase; e (ii) um componente de alvejamento e (iii) um composto auxiliar detergente opcional; b) enxaguar e secar o material têxtil ou a superfície dura;

[0005] caracterizado pelo fato de que a lipase tem estabilidade otimizada à degradação oxidativa em comparação com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO:1 e atividade de lipase, preferencialmente a variante de lipase compreende uma variante de lipase que compreende uma substituição em uma ou mais dentre as posições selecionadas do grupo de posições correspondendo a T37, N39 e G91, do polipeptí- deo maduro de SEQ ID NO:1.

[0006] A presente invenção também fornece método de manufatu ra de uma composição detergente compreendendo uma variante de lipase que apresenta estabilidade otimizada à degradação oxidativa em comparação com a variante de lipase de SEQ ID NO:1, e atividade de lipase, o método compreendendo a etapa de misturar a variante de lipase com um composto auxiliar detergente. preferencialmente a variante de lipase é uma variante de SEQ ID NO:1 compreendendo uma substituição em uma ou mais dentre as posições selecionadas do grupo de posições correspondendo a T37, N39 e G91 do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO:1.

[0007] De acordo com um outro aspecto da invenção é fornecida uma composição compreendendo uma variante de lipase tendo atividade de lipase e apresentando estabilidade otimizada à degradação oxidativa, e um composto auxiliar detergente. A invenção também fornece uma composição de limpeza e/ou tratamento compreendendo uma variante de lipase tendo atividade de lipase e compreendendo uma substituição em uma ou mais dentre as posições selecionadas do grupo de posições correspondendo a T37, N39 e G91 do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO:1, e um composto auxiliar detergente. Pode ser preferencial que as composições também compreendam um componente de alvejamento.

[0008] De acordo com um outro aspecto da invenção é apresenta do um método de fabricação de uma composição detergente compreendendo uma lipase e apresentando estabilidade otimizada à degradação oxidativa, compreendendo a etapa de misturar uma variante de lipase que compreende uma substituição em uma ou mais dentre as posições selecionadas do grupo de posições correspondendo a T37, N39 e G91 do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO:1, em que a variante tem atividade de lipase, com um composto auxiliar detergente.

[0009] Uma variante de lipase que apresenta estabilidade otimiza da à degradação oxidativa pode ser determinada usando-se o teste no Exemplo 1. As variantes de lipase apresentando estabilidade otimizada à degradação oxidativa têm um RPwash de pelo menos 1,01, ou pelo menos 1,2 ou mesmo pelo menos 1,5. A lipase convencional para comparação é aquela de SEQ ID NO:1.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Definições

[0010] Exceto onde especificado em contrário, todos os teores de componente ou de composição referem-se à porção ativa daquele componente ou daquela composição e excluem impurezas, por exem- plo, solventes residuais ou subprodutos, que podem estar presentes em fontes comercialmente disponíveis de tais componentes ou composições.

[0011] Todas as porcentagens e razões são (1) calculadas em pe so exceto onde indicado em contrário e (2) calculadas com base na composição total exceto onde indicado em contrário.

[0012] Para uso na presente invenção, artigos como "um" e "uma" quando usados em uma reivindicação, são entendidos como significando um ou mais do que é reivindicado ou descrito.

[0013] Para uso na presente invenção, os termos "incluir", "inclui" e "incluindo" se destinam a ser não limitadores.

[0014] Para uso na presente invenção, o termo "sólido" inclui for mas de produto granulares, em pó, em barra e em tablete.

[0015] Para uso na presente invenção, o termo "fluido" inclui pro dutos na forma de líquido, gel, pasta e gás.

[0016] Como usado aqui, o termo "lipase" ou "enzima lipolítica" ou "lipídeo-esterase" é uma enzima na classe EC 3.1.1 conforme definida pela Nomenclatura de Enzimas ("Enzyme Nomenclature"). Pode ter atividade de lipase (triacilglicerol-lipase, EC 3.1.1.3), atividade de cuti- nase (EC 3.1.1.74), atividade de esterol-esterase (EC 3.1.1.13) e/ou atividade de atividade de cera-éster-hidrolase (EC 3.1.1.50). Para os propósitos da presente invenção, a atividade de lipase é determinada de acordo com o procedimento descrito nos Exemplos. Em um aspecto, as variantes da presente invenção têm pelo menos 20%, por exemplo, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100% da atividade de lipase do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1.

[0017] Como usado aqui, o termo "variante alélica" significa qual- quer de duas ou mais formas alternativas de um gene ocupando o mesmo lócus cromossômico. A variação alélica surge naturalmente através de mutações, e pode resultar em polimorfismo dentro de populações. As mutações de genes podem ser silenciosas (nenhuma alteração no polipeptídeo codificado) ou podem codificar polipeptídeos com sequências de aminoácido alteradas. Uma variante alélica de um polipeptídeo é um polipeptídeo codificado por uma variante alélica de um gene.

[0018] Como usado aqui, o termo "cDNA" significa uma molécula de DNA que pode ser preparada por transcrição reversa a partir de uma molécula de mRNA, madura, emendada, obtida de uma célula eucariótica ou procariótica. cDNA está destituído de sequências de íntron que podem estar presentes no DNA genômico correspondente. O transcrito de RNA primário, inicial, é um precursor de mRNA que é processado através de uma série de etapas, inclusive splicing, antes de aparecer como mRNA maduro submetido a splicing.

[0019] Como aqui usado, o termo "sequência de codificação" signi fica um polinucleotídeo, que diretamente especifica a sequência de aminoácidos de uma variante. Os limites da sequência de codificação são em geral determinados por uma fase de leitura aberta, que começa com um códon de iniciação como ATG, GTG ou TTG e termina com um códon de terminação como TAA, TAG, ou TGA. A sequência de codificação pode ser um DNA genômico, cDNA, DNA sintético, ou uma sua combinação.

[0020] Como aqui usado, o termo "sequências de controle" signifi ca sequências de ácido nucleico necessárias para a expressão de um polinucleotídeo que codifica uma variante da presente invenção. Cada sequência de controle pode ser nativa (isto é, do mesmo gene) ou estranha (isto é, de um gene diferente) ao polinucleotídeo que codifica a variante ou mutuamente nativa ou estranha. Essas sequências de con- trole incluem, mas não se limitam a, uma sequência líder, uma sequência de poliadenilação, uma sequência de propeptídeo, um promotor, uma sequência de peptídeo de sinalização e um terminador de transcrição. No mínimo, as sequências de controle incluem um promotor, bem como sinais de terminação transcricional e traducional. As sequências de controle podem ser dotadas de ligações com o propósito de introduzir sítios de restrição específicos, facilitando a ligação das sequências de controle com as regiões de codificação da sequência de nucleotídeos que codifica uma variante.

[0021] Como aqui usado, o termo "expressão" inclui qualquer eta pa envolvida na produção de uma variante incluindo, mas não se limitando a, transcrição, modificação pós-transcricional, tradução, modificação pós-traducional, e secreção.

[0022] Como aqui usado, o termo "vetor de expressão" significa uma molécula de DNA linear ou circular que compreende um polinu- cleotídeo que codifica uma variante e está funcionalmente ligada nas sequências de controle que proporciona sua expressão.

[0023] Como aqui usado, o termo "fragmento" significa um polipep- tídeo tendo um ou mais (por exemplo, vários) aminoácidos ausentes das terminações amino e/ou carboxila de um polipeptídeo maduro; em que o fragmento tem atividade de lipase. Em um aspecto, um fragmento contém pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, e pelo menos 95% do número de aminoácidos do polipeptídeo maduro.

[0024] Como aqui usado, o termo "condições de alta estringência" significa para sondas de pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré-hibridização e hibridização a 42°C em SSPE 5X, SDS 0,3%, 200 microgramas/ml de DNA de esperma de salmão desnaturado e cisa- lhado, e formamida 50%, seguindo-se os procedimentos de transfe- rência de Southern padrão durante 12 a 24 horas. O material carrea- dor é finalmente lavado três vezes, cada vez durante 15 minutos com o uso de SSC 2X, 0,2% de SDS a 65°C.

[0025] Como aqui usado, o termo "célula hospedeira" significa qualquer tipo de célula que é suscetível às transformação, transfecção, transdução, ou similares com um construto de ácido nucleico ou vetor de expressão compreendendo um polinucleotídeo da presente invenção. O termo "célula hospedeira" abrange qualquer progênie de uma célula progenitora que não é idêntica à célula progenitora devido às mutações que ocorrem durante a replicação.

[0026] Como aqui usado, o termo "propriedade otimizada" significa uma característica associada com uma variante que está otimizada em comparação com a característica original. Tais propriedades otimizadas incluem desempenho otimizado na presença de um catalisador orgânico. Em algumas modalidades preferenciais, a invenção refere-se a uma composição ou a um método em que a variante tem estabilidade otimizada a um catalisador orgânico selecionado do grupo consistindo em catalisadores orgânicos tendo as seguintes fórmulas: a)

Fórmula 1; b)

Fórmula 2; ou c) suas misturas,

[0027] suas misturas, em que cada R1 é independentemente um grupo alquila ramificado contendo de 3 a 24 carbonos ou um grupo alquila linear contendo de 1 a 24 carbonos em particular em que R é 2- butil-octila, e preferencialmente a estabilidade otimizada está na presença da Fórmula 2 em que R é 2-butil-octila.

[0028] Como aqui usado, o termo "isolada (isolado)" significa uma substância sob uma forma ou em um ambiente que não ocorre na natureza. Exemplos não limitadores de substâncias isoladas incluem (1) qualquer substância de ocorrência não natural, (2) qualquer substância que inclui, mas não se limita a, qualquer enzima, variante, ácido nu- cleico, proteína, peptídeo ou cofator, que está pelo menos parcialmente removida de um ou mais ou de todos os constituintes de ocorrência natural com o(s) qual (quais) está associada na natureza; (3) qualquer substância modificada pela mão humana em relação àquela substância encontrada na natureza; ou (4) qualquer substância modificada pelo aumento da quantidade da substância em relação aos outros componentes com os quais ela está associada na natureza (por exemplo, cópias múltiplas de um gene que codifica a substância; uso de um promotor mais forte que o promotor naturalmente associado com o gene que codifica a substância). Uma substância isolada pode estar presente em uma amostra de caldo de fermentação.

[0029] Como aqui usado, o termo "condições de baixa estringên- cia" significa para sondas de pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré-hibridização e hibridização a 42°C em SSPE 5X, SDS 0,3%, 200 microgramas/ml de DNA de esperma de salmão desnaturado e cisalhado, e formamida 25%, seguindo-se procedimentos de transferência de Southern padrão durante 12 a 24 horas. O material carrea- dor é finalmente lavado três vezes, cada vez durante 15 minutos com o uso de SSC 2X, SDS 0,2% a 50°C.

[0030] Como aqui usado, o termo "polipeptídeo maduro" significa um polipeptídeo em sua forma após tradução e quaisquer modificações pós-traducionais, como processamento N-terminal, truncamento C-terminal, glicosilação, fosforilação, etc. Em um aspecto, o polipeptí- deo maduro é aminoácidos 1 a 269 de SEQ ID NO: 1.

[0031] Como aqui usado, o termo "condições de média estringên- cia" significa para sondas de pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré-hibridização e hibridização a 42°C em SSPE 5X, SDS 0,3%, 200 microgramas/ml de DNA de esperma de salmão desnaturado e cisalhado, e formamida 35%, seguindo-se procedimentos de transferência de Southern padrão durante 12 a 24 horas. O material carrea- dor é finalmente lavado três vezes, cada vez durante 15 minutos com o uso de SSC 2X, SDS 0,2% a 55°C.

[0032] Como aqui usado, o termo "condições de média-alta estrin- gência" significa para sondas de pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré-hibridização e hibridização a 42°C em SSPE 5X, SDS 0,3%, 200 microgramas/ml de DNA de esperma de salmão desnaturado e cisalhado, e também formamida 35%, seguindo-se procedimentos de transferência de Southern padrão durante 12 a 24 horas. O material carreador é finalmente lavado três vezes, cada vez durante 15 minutos com o uso de SSC 2X, SDS 0,2% a 60°C.

[0033] Como aqui usado, o termo "mutante" significa um polinu- cleotídeo que codifica uma variante.

[0034] Como aqui usado, o termo "construto de ácido nucleico" significa uma molécula de ácido nucleico, de fita quer única quer dupla, que está isolada de um gene de ocorrência natural ou está modificada para conter segmentos de ácidos nucleicos em uma maneira que normalmente não existiria na natureza ou que é sintética, que compreende uma ou mais sequências de controle.

[0035] Como aqui usado, o termo "funcionalmente ligado" significa uma configuração em que uma sequência de controle está posicionada em uma posição apropriada em relação à sequência de codificação de um polinucleotídeo de tal modo que a sequência de controle dirige a expressão da sequência de codificação.

[0036] Como aqui usado, o termo "parental" ou "lipase parental" significa uma lipase na qual é feita uma alteração para produzir varian- tes de enzima da presente invenção. A lipase parental pode ser um polipeptídeo de ocorrência natural (de tipo selvagem) ou uma sua variante ou um seu fragmento.

[0037] Identidade de sequência: O parentesco entre duas sequên cias de aminoácidos ou duas sequências de nucleotídeos é descrito pelo parâmetro "identidade de sequência". Para os propósitos da presente invenção, a identidade de sequência entre duas sequências de aminoácidos é determinada com o uso do algoritmo de Needleman- Wunsch (Needleman e Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453) conforme implementado no programa Needle do pacote EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), preferencialmente versão 5.0.0 ou superior. Os parâmetros usados são penalidade por abertura de lacuna de 10, penalidade por extensão da lacuna de 0,5, e a matriz de substituição EBLOSUM62 (versão de EMBOSS de BLOSUM62). A saída do programa Needle identificada como "identidade mais longa" (obtida com o uso da opção -nobrief) é usada como a porcentagem de identidade e é calculada da seguinte maneira:

[0038] (Resíduos idênticos x 100)/(Comprimento do alinhamento - Número total de lacunas no alinhamento)

[0039] Para os propósitos da presente invenção, a identidade de sequência entre duas sequências de desoxirribonucleotídeos é determinada com o uso do algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman e Wunsch, 1970, supra) conforme implementado no programa Needle do pacote EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, supra), preferencialmente versão 5.0.0 ou superior. Os parâmetros usados são penalidade de abertura de lacuna de 10, penalidade por extensão da lacuna de 0,5, e a matriz de substituição EDNAFULL (versão EMBOSS de NCBI NUC4.4). A saída do programa Needle identificada como "identidade mais longa" (obtida com o uso da opção -nobrief) é usada como a porcentagem de identidade e é calculada da seguinte maneira:

[0040] (Desoxirribonucleotídeos idênticos x 100)/(Comprimento do alinhamento - Número total de lacunas no alinhamento)

[0041] Como aqui usado, o termo "subsequência" significa um po- linucleotídeo tendo um ou mais (por exemplo, vários) nucleotídeos ausentes das extremidades 5' e/ou 3' de uma sequência de codificação de polipeptídeo maduro; em que a subsequência codifica um fragmento tendo atividade de lipase. Em um aspecto, uma subsequência contém pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, e pelo menos 95% do número de nucleotí- deos da sequência de codificação de polipeptídeo maduro.

[0042] Como aqui usado, o termo "variante" significa um polipeptí- deo tendo atividade de lipase compreendendo uma substituição em uma ou mais (por exemplo, várias) posições. uma substituição significa a troca do aminoácido que ocupa uma posição por um aminoácido diferente. As variantes da presente invenção têm pelo menos 20%, por exemplo, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100% da atividade de lipase do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1.

[0043] Como aqui usado, o termo "condições de muito alta estrin- gência" significa para sondas de pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré-hibridização e hibridização a 42°C em SSPE 5X, SDS 0,3%, 200 microgramas/ml de DNA de esperma de salmão desnaturado e cisalhado, e formamida 50%, seguindo-se procedimentos de transferência de Southern padrão durante 12 a 24 horas. O material carreador é finalmente lavado três vezes, cada vez durante 15 minutos com o uso de SSC 2X, SDS 0,2% a 70°C.

[0044] Como aqui usado, o termo "condições de muito baixa es- tringência" significa para sondas de pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, pré-hibridização e hibridização a 42°C em SSPE 5X, SDS 0,3%, 200 microgramas/ml de DNA de esperma de salmão desnaturado e cisalhado, e formamida 25%, seguindo-se procedimentos de transferência de Southern padrão durante 12 a 24 horas. O material carreador é finalmente lavado três vezes, cada vez durante 15 minutos com o uso de SSC 2X, SDS 0,2% a 45°C.

[0045] Como aqui usado, o termo lipase de "tipo selvagem" signifi ca uma lipase expressa por um microrganismo de ocorrência natural, como uma bactéria, levedura, ou fungo filamentoso encontrado na natureza.

Convenções para designação de variantes

[0046] Para os propósitos da presente invenção, o polipeptídeo maduro apresentado em SEQ ID NO: 1 é usado para determinar o resíduo de aminoácido correspondente em outra lipase. A sequência de aminoácidos de outra lipase é alinhada com o polipeptídeo maduro apresentado em SEQ ID NO: 1, e com base no alinhamento, o número de posição de aminoácido correspondendo a qualquer resíduo de ami- noácido no polipeptídeo maduro apresentado em SEQ ID NO: 1 é determinado com o uso de algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman e Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453) conforme implementado no programa Needle do pacote EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), preferencialmente versão 5.0.0 ou superior. Os parâmetros usados são penalidade de abertura de lacuna de 10, penalidade por extensão da lacuna de 0,5, e a matriz de substituição EBLO- SUM62 (versão EMBOSS de BLOSUM62).

[0047] A identificação do resíduo de aminoácido correspondente em outra lipase pode ser determinada por um alinhamento de múltiplas sequências de polipeptídeo com o uso de vários programas de computador incluindo, mas não limitados a, MUSCLE ("multiple sequence comparison by log-expectation"; versão 3.5 ou superior; Edgar, 2004, Nucleic Acids Research 32: 1792-1797), MAFFT (versão 6.857 ou superior; Katoh e Kuma, 2002, Nucleic Acids Research 30: 3059-3066; Katoh et al., 2005, Nucleic Acids Research 33: 511-518; Katoh e Toh, 2007, Bioinformatics 23: 372-374; Katoh et al., 2009, Methods in Molecular Biology 537: 39-64; Katoh e Toh, 2010, Bioinformatics 26: 18991900), e EMBOSS EMMA utilizando ClustalW (1.83 ou superior; Thompson et al., 1994, Nucleic Acids Research 22: 4673-4680), com uso de seus parâmetros padrão.

[0048] Quando a outra enzima tem divergido do polipeptídeo ma duro de SEQ ID NO: 1 de tal modo que comparações baseadas em sequência tradicionais falham em detectar seu parentesco (Lindahl e Elofsson, 2000, J. Mol. Biol. 295: 613-615), podem ser usados outros algoritmos de comparação de sequências em pares. Uma maior sensibilidade de busca com base em sequência pode ser alcançada com o uso de programas de busca que utilizam representações probabilísti- cas de famílias (perfis) de polipeptídeos para pesquisar bases de dados. Por exemplo, o programa PSI-BLAST gera perfis por meio de um processo de busca iterativa em base de dados e é capaz de detectar homólogos remotos (Atschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25: 33893402). Uma sensibilidade ainda maior pode ser alcançada se a família ou superfamília para o polipeptídeo tem um os mais representantes nas bases de dados de estrutura de proteína. Programas como GenTHREADER (Jones, 1999, J. Mol. Biol. 287: 797-815; McGuffin e Jones, 2003, Bioinformatics 19: 874-881) utilizam informações de uma variedade de fontes (PSI-BLAST, predição de estrutura secundária, perfis de alinhamento estrutural, e potenciais de associação) como entrada para uma rede neural que prediz a dobra estrutural para uma sequência consulta. De modo similar, o método de Gough et al., 2000, J. Mol. Biol. 313: 903-919, pode ser usado para alinhar uma sequência de estrutura desconhecida com os modelos de superfamília presentes na base de dados SCOP. Estes alinhamentos podem, por sua vez, ser usados para gerar modelos de homologia para o polipeptídeo, e estes modelos podem ser avaliados para verificar a exatidão com o uso de uma variedade de ferramentas desenvolvidas para este propósito.

[0049] Para proteínas de estrutura desconhecida, várias ferramen tas e recursos estão disponíveis para recuperar e gerar alinhamentos estruturais. Por exemplo, as superfamílias de proteínas SCOP têm sido alinhadas estruturalmente, e aqueles alinhamentos são acessíveis e podem ser baixados pela internet. Duas ou mais estruturas de proteína podem ser alinhadas com o uso de uma variedade de algoritmos como a matriz de distância a partir do alinhamento (Holm e Sander, 1998, Proteins 33: 88-96) ou extensão combinatória (Shindyalov e Bourne, 1998, Protein Engineering 11: 739-747), e implementação destes algoritmos pode ser adicionalmente utilizada para consultar as bases de dados de estruturas com uma estrutura de interesse com o objetivo de descobrir os possíveis homólogos estruturais (por exemplo, Holm e Park, 2000, Bioinformatics 16: 566-567).

[0050] Na descrição das variantes da presente invenção, a no menclatura descrito a seguir é adaptada para facilidade de referência. São utilizadas as abreviações de aminoácido em letra única ou em três letras aceitas pela IUPAC.

[0051] Substituições. Para uma substituição de aminoácido, a no menclatura a seguir é usada: Aminoácido original, posição, aminoácido substituído. Consequentemente, a substituição de treonina na posição 226 por alanina é designada como "Thr226Ala" ou "T226A". Mutações múltiplas são separadas por marcas de adição ("+"), por exemplo, "Gly205Arg +Ser411Phe" ou "G205R +S411F", representando substituições nas posições 205 e 411 de glicina (G) por arginina (R) e serina (S) por fenilalanina (F), respectivamente.

[0052] Substituições múltiplas. As variantes compreendendo subs tituições múltiplas são separadas por marcas de adição ("+"), por exemplo, "Arg170Tyr +Gly195Glu" ou "R170Y +G195E" representa uma substituição de arginina e glicina nas posições 170 e 195 por tiro- sina e ácido glutâmico, respectivamente.

[0053] Substituições Diferentes. Onde alterações diferentes podem ser introduzidas em uma posição, as alterações diferentes são separadas por uma vírgula, por exemplo, "Arg170Tyr,Glu" ou "R170Y,E" representa uma substituição de arginina na posição 170 por tirosina ou ácido glutâmico. Desta forma, "Tyr167Gly,Ala +Arg170Gly,Ala" designa as seguintes variantes: "Tyr167Gly +Arg170Gly", "Tyr167Gly +Arg170Ala", "Tyr167Ala +Arg170Gly", e "Tyr167Ala +Arg170Ala".

Variantes de lipase

[0054] Com o propósito de avaliar a estabilidade à degradação oxidativa de uma variante de lipase, é determinado o valor do Desempenho Relativo (RPwash), isto é o desempenho de lavagem (P) de uma variante de lipase a ser testada, e dividido pelo desempenho de lavagem da lipase de SEQ ID NO:1. Desta forma, RPwash = P(variante de lipase da invenção) / P(lipase de SEQ ID NO:1). As variantes de lipase tendo estabilidade otimizada à degradação oxidativa terão um valor de RPwash de pelo menos 1,01, preferencialmente pelo menos 1,1, ou mesmo pelo menos 1,5.

[0055] Uma variante de lipase adequada para uso na presente in venção compreende uma substituição em uma ou mais dentre as posições selecionadas do grupo de posições correspondendo a T37, N39 e G91. Preferencialmente a variante de lipase é uma variante de lipase isolada. As variantes de lipase adequadas para uso na presente invenção preferencialmente compreendem uma substituição em uma ou mais (por exemplo, várias) posições correspondendo às posições T37A,D,E,F,G,H,I,L,N,P,Q,R,S,V,W,Y, N39A,C,D,E,F,G,I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W,Y, e G91D,H,I,P,Q ou mesmo G91A do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1, em que a variante tem atividade de lipase. Com a máxima preferência tal uma ou mais substituição é combinada com uma, preferencialmente ambas as T231R e N233R.

[0056] Preferencialmente a variante tem identidade de sequência de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menor que 100%, com a sequência de ami- noácidos da lipase parental.

[0057] Em uma outra modalidade, a variante tem pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, como pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos 99%, mas menos que 100%, de identidade de sequência com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1.

[0058] Em um aspecto, o número de substituições nas variantes da presente invenção é 1-20, por exemplo, 1-10 e 1-5, como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ou 20 substituições.

[0059] Em outro aspecto, uma variante compreende uma substitui ção em uma ou mais (por exemplo, várias) posições correspondendo às posições T37A,D,E,F,G,H,I,L,N,P,Q,R,S,V,W,Y, N39A,C,D,E,F,G,I, K,L,M,P,Q,R,T,V,W,Y, e G91D,H,I,P,Q do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, uma variante compreende uma alteração em duas posições correspondendo a quaisquer das posições T37A,D,E,F,G,H,I,L,N,P,Q,R,S,V,W,Y, N39A,C,D,E,F,G,I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W,Y, e G91D,H,I,P,Q do polipeptí- deo maduro de SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, uma variante compreende uma alteração em três posições correspondendo a quaisquer das posições T37A,D,E,F,G,H,I,L,N,P,Q,R,S,V,W,Y, N39A,C,D,E,F,G, I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W,Y, e G91D,H,I,P,Q do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1.

[0060] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondendo à posição T37 do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1 que é substituída por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val, preferencialmente por Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste na substituição T37A, T37D, T37E, T37F, T37G, T37H, T37I, T37L, T37N, T37P, T37Q, T37R, T37S, T37V, T37W, ou T37Y do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1.

[0061] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondendo à posição N39 do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1 que é substituída por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val, preferencialmente por Ala, Arg, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Thr, Trp, Tyr, ou Val. Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondendo à posição N39A, N39C, N39D, N39E, N39F, N39G, N39I, N39K, N39L, N39M, N39P, N39Q, N39R, N39T, N39V, N39W, N39Y do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1.

[0062] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondendo à posição G91 do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1 que é substituída por Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ou Val, preferencialmente por Asp, Gln, His, Ile, ou Pro. Em outro aspecto, a variante compreende a ou consiste na substituição G91D, G91H, G91I, G91P, G91Q do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1. Em um aspecto preferível a variante compreende ou consiste em uma substituição em uma posição correspondendo a G91 que é G91A.

[0063] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em substituições em posições correspondendo às posições T37 e N39, como aquelas descritas acima.

[0064] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em substituições em posições correspondendo às posições T37 e G91, como aquelas descritas acima.

[0065] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em substituições em posições correspondendo às posições N39 e G91, como aquelas descritas acima.

[0066] Em outro aspecto, a variante compreende ou consiste em substituições em posições correspondendo às posições T37, N39, e G91, como aquelas descritas acima.

[0067] As variantes podem adicionalmente compreender uma ou mais substituições adicionais em uma ou mais (por exemplo, várias) outras posições.

[0068] As mudanças de aminoácido podem ser de uma natureza menor, isto é inserções ou substituições conservadoras de aminoácido que não afetam significativamente o dobramento e/ou a atividade da proteína; deleções pequenas, tipicamente de 1-30 aminoácidos; extensões amino- ou carbóxi-terminais pequenas, como um resíduo de metionina amino-terminal; um peptídeo de ligação pequeno de até 2025 resíduos; ou uma extensão pequena que facilita a purificação pela mudança da carga líquida ou outra função, como uma cauda de poli- histidina, um epítopo antigênico ou um domínio de ligação.

[0069] Exemplos de substituições conservadoras estão dentro dos grupos de aminoácidos básicos (arginina, lisina e histidina), aminoáci- dos ácidos (ácido glutâmico e ácido aspártico), aminoácidos polares (glutamina e asparagina), aminoácidos hidrofóbicos (leucina, isoleuci- na e valina), aminoácidos aromáticos (fenilalanina, triptofano e tirosina), e aminoácidos pequenos (glicina, alanina, serina, treonina e metionina).

[0070] Alternativamente, as alterações de aminoácido são de natu reza tal que as propriedades físico-químicas dos polipeptídeos são alteradas. Por exemplo, as alterações de aminoácido podem otimizar a estabilidade térmica do polipeptídeo, alterar a especificidade por substrato, alterar o nível ótimo de pH, e similares.

[0071] Por exemplo, as variantes podem compreender uma substi tuição em uma posição correspondendo às posições D96, T143, A150, E210, G225, T231, N233 e P250 do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1. Em algumas modalidades a substituição é selecionada dentre D96G, T143A, A150G, E210Q, G225R, T231R, N233R e P250R.

[0072] Em uma modalidade preferencial a variante de lipase para uso na invenção refere-se às variantes selecionadas dentre:

[0073] Os aminoácidos essenciais em um polipeptídeo podem ser identificados de acordo com procedimentos conhecidos na técnica, como mutagênese sítio-dirigida ou mutagênese por varredura de ala- nina (Cunningham e Wells, 1989, Science 244: 1081-1085). Na última técnica, mutações de alanina única são introduzidas em cada resíduo na molécula, e as moléculas mutantes resultantes são testadas para a atividade de lipase para identificar os resíduos de aminoácido que são críticos para a atividade da molécula. Consulte também, Hilton et al., 1996, J. Biol. Chem. 271: 4699-4708. O sítio ativo da enzima ou outra interação biológica pode, também, ser determinado (determinada) pela análise física da estrutura, conforme determinado por tais técnicas, como ressonância magnética nuclear, cristalografia, difração de elétrons ou marcação por fotoafinidade, em conjunto com mutação de aminoácidos com sítio de contato putativo. Consulte, por exemplo, de Vos et al., 1992, Science 255: 306-312; Smith et al., 1992, J. Mol. Biol. 224: 899-904; Wlodaver et al., 1992, FEBS Lett. 309: 59-64. A identidade dos aminoácidos essenciais também pode ser deduzida de um alinhamento com um polipeptídeo relacionado.

[0074] As variantes podem consistir em pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, e pelo menos 95% do número de aminoácidos do polipeptídeo maduro.

[0075] Em uma modalidade, a variante tem desempenho otimizado, em particular na presença de um componente de alvejamento. As variantes preferenciais têm desempenho otimizado na presença de um catalisador selecionado do grupo consistindo em catalisadores orgânicos tendo as seguintes fórmulas: a)

Fórmula 1; b)

Fórmula 2; ou c) suas misturas,

[0076] suas misturas, em que cada R1 é independentemente um grupo alquila ramificado contendo de 3 a 24 carbonos ou um grupo alquila linear contendo de 1 a 24 carbonos; e recuperação da variante.

[0077] Em algumas modalidades R1 é independentemente um grupo alquila ramificado contendo de 8 a 18 carbonos ou um grupo alquila linear contendo de 8 a 18 carbonos.

[0078] Em algumas modalidades R1 é independentemente seleci onado do grupo que consiste em 2-propil-heptila, 2-butiloctila, 2- pentilnonila, 2-hexildecila, n-dodecila, n-tetradecila, n-hexadecila, n- octadecila, iso-nonila, iso-decila, iso-tridecila, e iso-pentadecila. Prefe-rencialmente R1 é selecionado do grupo consistindo em 2-butiloctila, 2-pentilnonila, 2-hexildecila, iso-tridecila, e iso-pentadecila. As variantes preferíveis têm desempenho otimizado na presença de um catalisador da fórmula b) em que R é 2-butiloctila.

Lipases parentais

[0079] A lipase parental pode ser um polipeptídeo que tem pelo menos 60% de identidade de sequência com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1.

[0080] Em um aspecto, a lipase parental tem uma identidade de sequência com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1 de pelo menos 60%, por exemplo, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100%, que tem atividade de lipase. Em um aspecto, a sequência de aminoácidos da lipase parental difere em não mais que 20 aminoácidos, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ou 20 do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1.

[0081] Em outro aspecto, a lipase parental compreende a ou con siste na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Em outro aspecto, a lipase parental compreende o ou consiste no polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1. Em um outro aspecto, o original compreende os ou consiste nos aminoácidos 1 a 269 de SEQ ID NO: 1.

[0082] Em outro aspecto, a lipase parental é um fragmento do po- lipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1 contendo pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, e pelo menos 95% do número de aminoácidos do polipeptídeo maduro.

[0083] Em uma outra modalidade, a lipase parental é uma variante alélica do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1.

[0084] O polipeptídeo de SEQ ID NO: 1 ou um seu fragmento, po de ser usado para planejar sondas de ácido nucleico para identificar e clonar DNA que codifica lipase parental de cepas de gêneros ou espécies diferentes de acordo com métodos bem conhecidos na técnica. Em particular, tais sondas podem ser usadas para hibridização com o DNA genômico ou cDNA de uma célula de interesse, seguindo-se procedimentos de transferência de Southern padrão, com o objetivo de identificar e isolar o gene correspondente dentro da mesma. Tais sondas podem ser consideravelmente mais curtas do que a sequência inteira, mas devem ser de pelo menos 15, por exemplo, pelo menos 25, pelo menos 35, ou pelo menos 70 nucleotídeos de comprimento. De preferência, a sonda de ácido nucleico tem pelo menos uma sonda de ácido nucleico que tem pelo menos 100 nucleotídeos de comprimento, por exemplo, pelo menos 200 nucleotídeos, pelo menos 300 nucleotí- deos, pelo menos 400 nucleotídeos, pelo menos 500 nucleotídeos, pelo menos 600 nucleotídeos, pelo menos 700 nucleotídeos, pelo menos 800 nucleotídeos, ou pelo menos 900 nucleotídeos de comprimento. Podem ser usadas sondas tanto de DNA quanto de RNA. As sondas são, tipicamente, marcadas para detecção do gene correspondente (por exemplo, com 32P, 3H, 35S, biotina ou avidina). Essas sondas são abrangidas pela presente invenção.

[0085] Uma biblioteca de DNA genômico ou cDNA preparada a partir de tais outras cepas pode ser triada para DNA que hibridiza com as sondas descritas acima e codifica uma lipase parental. DNA genô- mico ou outro DNA de tais outras cepas pode ser separado por eletroforese em gel de poliacrilamida ou de agarose, ou outras técnicas de separação. O DNA das bibliotecas ou o DNA separado pode ser transferido para, e imobilizado em, nitrocelulose ou outro material carreador adequado. Com o propósito de identificar um clone ou DNA que hibri- diza com a SEQ ID NO: 1 ou uma sua subsequência, o material carre- ador é usado em uma transferência de Southern.

[0086] O polipeptídeo pode ser um polipeptídeo híbrido no qual um a região de um polipeptídeo está fundida na extremidade N-terminal ou na extremidade C-terminal de uma região de outro polipeptídeo.

[0087] A lipase parental pode ser um polipeptídeo de fusão ou um polipeptídeo de fusão clivável no qual outro polipeptídeo está fundido na extremidade N-terminal ou na extremidade C-terminal do polipeptí- deo da presente invenção. Um polipeptídeo de fusão é produzido pela fusão de um polinucleotídeo que codifica outro polipeptídeo em um polinucleotídeo da presente invenção. As técnicas para produzir poli- peptídeos de fusão são conhecidas na técnica, e como ligação das sequências de codificação que codificam os polipeptídeos de modo que elas estejam em fase e que a expressão do polipeptídeo de fusão esteja sob o controle do(s) mesmo(s) promotor(es) e terminador. Os polipeptídeos de fusão podem ser construídos com o uso de tecnologia "intein" na qual polipeptídeos de fusão são produzidos após a tradução (Cooper et al., 1993, EMBO J. 12: 2575-2583; Dawson et al., 1994, Science 266: 776-779).

[0088] Um polipeptídeo de fusão pode compreender adicionalmen te um sítio de clivagem entre os dois polipeptídeos. Durante a secreção da proteína de fusão, o sítio é clivado liberando os dois polipeptí- deos. Exemplos de sítios de clivagem incluem, mas não se limitam aos, sítios revelados em Martin et al., 2003, J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 3: 568-576; Svetina et al., 2000, J. Biotechnol. 76: 245-251; Rasmussen- Wilson et al., 1997, Appl. Environ. Microbiol. 63: 3488-3493; Ward et al., 1995, Biotechnology 13: 498-503; e Contreras et al., 1991, Biotechnology 9: 378-381; Eaton et al., 1986, Biochemistry 25: 505-512; Collins-Racie et al., 1995, Biotechnology 13: 982-987; Carter et al., 1989, Proteins: Structure, Function, and Genetics 6: 240-248; e Stevens, 2003, Drug Discovery World 4: 35-48.

[0089] A lipase parental pode ser obtida a partir de microrganis mos de qualquer gênero. Para os propósitos da presente invenção, o termo "obtida a partir de" como aqui usado em conjunto com uma dada fonte deve significar que a lipase parental codificada por um polinucle- otídeo é produzida pela fonte ou por uma cepa na qual polinucleotídeo da fonte foi inserido. Em um aspecto, a lipase parental é secretada ex- tracelularmente.

[0090] A lipase parental pode ser uma lipase bacteriana. Por exemplo, a lipase parental pode ser um polipeptídeo de bactéria Gram- positiva como uma lipase de Bacillus, Clostridium, Enterococcus, Ge-obacillus, Lactobacillus, Lactococcus, Oceanobacillus, Staphylococcus, Streptococcus, Streptomyces, Thermobifida fusca alias Thermomo- nospora fusca lipase ou um polipeptídeo de bactéria Gram-negativa como Campylobacter, E. coli, Flavobacterium, Fusobacterium, Helico-bacter, Ilyobacter, Neisseria, Pseudomonas, Salmonella, ou Ureaplas- ma.

[0091] Em um aspecto, a lipase parental é uma lipase de Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus brevis, Bacillus circu- lans, Bacillus clausii, Bacillus coagulans, Bacillus firmus, Bacillus lau- tus, Bacillus lentus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis, ou Bacillus thuringiensis.

[0092] Em outro aspecto, a lipase parental é uma lipase de Strep tococcus equisimilis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus uberis, ou Streptococcus equi subsp. Zooepidemicus.

[0093] Em outro aspecto, a lipase parental é uma lipase de Strep- tomyces achromogenes, Streptomyces avermitilis, Streptomyces coeli- color, Streptomyces griseus, ou Streptomyces lividans.

[0094] A lipase parental pode ser uma lipase fúngica. Por exemplo, a lipase parental pode ser uma lipase de levedura como uma lipase de Candida, Kluyveromyces, Pichia, Saccharomyces, Schizosaccha- romyces, ou Yarrowia; ou uma lipase de fungo filamentoso como uma lipase de Acremonium, Agaricus, Alternaria, Aspergillus, Aureobasi- dium, Botryospaeria, Ceriporiopsis, Chaetomidium, Chrysosporium, Claviceps, Cochliobolus, Coprinopsis, Coptotermes, Corynascus, Cryphonectria, Cryptococcus, Diplodia, Exidia, Filibasidium, Fusarium, Gibberella, Holomastigotoides, Humicola, Irpex, Lentinula, Leptospae- ria, Magnaporthe, Melanocarpus, Meripilus, Mucor, Mycelioftora, Neo- callimastix, Neurospora, Paecilomyces, Penicillium, Phanerochaete, Piromyces, Poitrasia, Pseudoplectania, Pseudotrichonympha, Rhizo- mucor, Schizophyllum, Scytalidium, Talaromyces, Thermoascus, Thie- lavia, Tolypocladium, Trichoderma, Trichophaea, Verticillium, Volvariel- la, ou Xylaria.

[0095] Em outro aspecto, a lipase parental é uma lipase de Sac- charomyces carlsbergensis, Saccharomyces cerevisiae, Saccha- romyces diastaticus, Saccharomyces douglasii, Saccharomyces kluy- veri, Saccharomyces norbensis, ou Saccharomyces oviformis.

[0096] Em outro aspecto, a lipase parental é uma lipase de Acre- monium cellulolyticus, Aspergillus aculeatus, Aspergillus awamori, As-pergillus foetidus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus japonicus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Chrysosporium inops, Chrysosporium keratinophilum, Chrysosporium lucknowense, Chrysosporium merdarium, Chrysosporium pannicola, Chrysosporium queenslandicum, Chrysosporium tropicum, Chrysosporium zonatum, Fusarium bactridioides, Fusarium cerealis, Fusarium crookwellense, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium graminum, Fu-sarium heterosporum, Fusarium negundi, Fusarium oxisporum, Fusarium reticulatum, Fusarium roseum, Fusarium sambucinum, Fusarium sarcochroum, Fusarium sporotrichioides, Fusarium sulphureum, Fusarium torulosum, Fusarium trichothecioides, Fusarium venenatum, Hu- micola grisea, Humicola insolens, Humicola lanuginosa, Irpex lacteus, Mucor miehei, Mycelioftora thermophila, Neurospora crassa, Penicil- lium funiculosum, Penicillium purpurogenum, Phanerochaete chrysos- porium, Thielavia achromatica, Thielavia albomyces, Thielavia albopi- losa, Thielavia australeinsis, Thielavia fimeti, Thielavia microspora, Thielavia ovispora, Thielavia peruviana, Thielavia setosa, Thielavia spededonium, Thielavia subthermophila, Thielavia terrestris, Tricho- derma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma longibrachiatum, Trichoderma reesei, ou Trichoderma viride.

[0097] Em outro aspecto, a lipase parental é uma lipase de Humi- cola lanuginosa lipase, por exemplo, a lipase de SEQ ID NO: 1 ou o seu polipeptídeo maduro.

[0098] Deve-se compreender que, para as espécies anteriormente mencionadas, a invenção abrange os estados tanto perfeitos como imperfeitos, e outros equivalentes taxonômicos, por exemplo, anamor- fos, independentemente do nome da espécie pelo qual são conhecidos. Os versados na técnica reconhecerão prontamente a identidade de equivalentes adequados.

[0099] Cepas destas espécies estão prontamente acessíveis ao público em várias coleções de culturas, como a "American Type Culture Collection" (ATCC), "Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH" (DSMZ), "Centraalbureau Voor Schimmelcultures" (CBS) e "Agricultural Research Service Patent Culture Collection, Northern Regional Research Center" (NRRL).

[00100] A lipase parental pode ser identificada e obtida de outras fontes que incluem microrganismos isolados da natureza (por exemplo, solo, adubos, água, etc.) ou amostras de DNA obtidas diretamente de materiais naturais (por exemplo, solo, adubos, água, etc.) com o uso das sondas acima mencionadas. As técnicas para o isolamento de microrganismos e DNA diretamente dos hábitats naturais são bem conhecidas na técnica. Um polinucleotídeo que codifica uma lipase parental pode ser então obtido similarmente por triagem de uma biblioteca de DNA genômico ou cDNA de outro microrganismo ou de amostra de DNA misto. Quando um polinucleotídeo que codifica uma lipase parental tem sido detectado da(s) sonda(s), o polinucleotídeo pode ser isolado ou clonado pelo uso de técnicas que são conhecidas pelos versados na técnica (consulte, por exemplo, Sambrook et al., 1989, supra).

Preparação de variantes

[00101] A presente invenção também se refere a um método para obter uma variante de lipase, compreendendo introduzir em uma lipase parental uma substituição em uma ou mais posições correspondendo às posições T37, N39, ou G91 do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1, em que a variante tem atividade de lipase e em comparação com a lipase parental tem desempenho otimizado na presença de um catalisador orgânico selecionado do grupo consistindo em catalisadores orgânicos tendo as seguintes fórmulas: (a)

Fórmula 1; (b)

Fórmula 2; ou (c) suas misturas, em que cada R1 é independentemente um grupo alquila ramificado contendo de 3 a 24 carbonos ou um grupo alquila linear contendo de 1 a 24 carbonos; e recuperar a variante.

[00102] Em algumas modalidades a invenção refere-se a um método em que R1 é independentemente um grupo alquila ramificado contendo de 8 a 18 carbonos ou um grupo alquila linear contendo de 8 a 18 carbonos.

[00103] Em algumas modalidades a invenção refere-se a um método em que R1 é independentemente selecionado do grupo consistindo em 2-propil-heptila, 2-butiloctila, 2-pentilnonila, 2-hexildecila, n- dodecila, n-tetradecila, n-hexadecila, n-octadecila, iso-nonila, iso-decila, iso-tridecila, e iso-pentadecila. preferencialmente R1 é selecionado do grupo consistindo em 2-butiloctila, 2-pentilnonila, 2-hexildecila, isotridecila, e iso-pentadecila.

[00104] O catalisador orgânico é tipicamente usado em uma quantidade que fornece 0,001-0,02 g de material ativo por litro de líquido de lavagem ou em uma quantidade que fornece 0,01 a 4,5, 0,5 a 4,0, 1,0 a 3,5, 1,5 a 3,0, ou 2,0 a 2,5 ppm de material ativo por litro de líquido de lavagem.

[00105] Em algumas modalidades a invenção refere-se a um método em que uma fonte de peroxiácidos orgânicos está presente como um agente alvejante. A fonte de peroxiácidos orgânicos pode ser um perácido pré-formado ou um peróxido de diacila, ou pode compreender uma fonte de peróxido de hidrogênio e um ativador de alvejante.

[00106] Os agentes alvejantes adequados incluem peróxidos de diacila, ativadores de alvejante, peróxido de hidrogênio, fontes de pe- róxido de hidrogênio, perácidos pré-formados e suas misturas.

[00107] Em geral, quando é usado um agente alvejante, as composições da presente invenção podem compreender de cerca de 0,1% a cerca de 50%, ou mesmo de cerca de 0,1% a cerca de 25% de agente alvejante, em peso da presente composição para limpeza. O agente alvejante é tipicamente uma fonte de peroxiácidos orgânicos ou uma ponte de peroxigênio ativado.

[00108] Quando presente, o perácido e/ou ativador de alvejante está geralmente presente na composição em uma quantidade de cerca de 0,1% a cerca de 60%, de cerca de 0,5% a cerca de 40%, ou mesmo de cerca de 0,6% a cerca de 10%, em peso, com base na composição. Um ou mais perácidos hidrofóbicos ou seus precursores podem ser usados em combinação com um ou mais perácidos hidrofílicos ou seus precursores.

[00109] As quantidades da fonte de peróxido de hidrogênio e de perácido ou ativador de alvejante podem ser selecionadas de modo que a razão molar entre o oxigênio disponível (da fonte de peróxido) e o perácido seja de 1:1 a 35:1 ou mesmo 2:1 a 10:1.

[00110] Em algumas modalidades a invenção refere-se a um método em que a lipase parental compreende uma sequência de aminoáci- dos com pelo menos 60% de identidade com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1; consiste na sequência de aminoácidos do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1, ou um seu fragmento tendo atividade de lipase.

[00111] Em algumas modalidades a invenção refere-se a um método em que a variante é: (a) um polipeptídeo compreendendo uma se- quência de aminoácidos com pelo menos 60% de identidade com o polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1; (b) um polipeptídeo codificado por um polinucleotídeo que hibridiza sob condições de estringência pelo menos baixa com: (i) a sequência de codificação de polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1; ou (ii) uma fita complementar de comprimento total de (i), ou (c) um polipeptídeo codificado por um polinucleo- tídeo compreendendo uma sequência de nucleotídeos tendo pelo menos 60% de identidade com a sequência de codificação de polipeptí- deo maduro de SEQ ID NO: 1.

[00112] Em algumas modalidades a invenção refere-se a um método em que a substituição é selecionada dentre T37A,D,E,F,G,H,I,L,N,P, Q,R,S,V,W,Y, N39A,C,D,E,F,G,I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W,Y, e G91D,H,I,P,Q.

[00113] Em algumas modalidades a invenção refere-se a um método em que a variante adicionalmente compreende uma substituição em uma ou mais posições correspondendo às posições D96, T143, A150, E210, yG225, T231, N233 e P250 do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1.

[00114] Em algumas modalidades a invenção refere-se a um método em que a substituição é selecionada dentre D96G, T143A, A150G, E210Q, G225R, T231R, N233R e P250R.

[00115] As variantes podem ser preparadas com o uso de qualquer procedimento de mutagênese conhecido na técnica, como mutagêne- se sítio-dirigida, construção de gene sintético, construção de gene se- missintético, mutagênese aleatória, embaralhamento, etc.

[00116] A mutagênese sítio-dirigida é uma técnica na qual uma ou mais (por exemplo, várias) mutações são introduzidas em um ou mais sítios definidos em um polinucleotídeo que codifica a lipase parental.

[00117] A mutagênese sítio-dirigida pode ser efetuada in vitro por PCR envolvendo o uso de iniciadores de oligonucleotídeo contendo a mutação desejada. A mutagênese sítio-dirigida pode ser também efe- tuada in vitro por mutagênese em cassete envolvendo a clivagem por uma enzima de restrição em um sítio no plasmídeo que compreende um polinucleotídeo que codifica a lipase parental e a ligação subsequente de um oligonucleotídeo contendo uma mutação no polinucleo- tídeo. Habitualmente a enzima de restrição que digere o plasmídeo e o oligonucleotídeo é a mesma, permitindo que extremidades coesivas do plasmídeo e do inserto se liguem uma na outra. Consulte, por exemplo, Scherer e Davis, 1979, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76: 4949-4955; e Barton et al., 1990, Nucleic Acids Res. 18: 7349-4966.

[00118] A mutagênese sítio-dirigida pode também ser realizada in vivo com o uso de métodos conhecidos na técnica. Consulte, por exemplo, publicação de pedido de patente US n° 2004/0171154; Stori- ci et al., 2001, Nature Biotechnol. 19: 773-776; Kren et al., 1998, Nat. Med. 4: 285-290; e Calissano e Macino, 1996, Fungal Genet. Newslett. 43: 15-16.

[00119] Qualquer procedimento de mutagênese sítio-dirigida pode ser usado na presente invenção. Existem muitos kits comerciais disponíveis que podem ser usados para preparar variantes.

[00120] A construção de genes sintéticos requer a síntese in vitro de uma molécula de polinucleotídeo planejada para codificar um poli- peptídeo de interesse. A síntese de gene pode ser feita com o uso de numerosas técnicas, como a metodologia com base em "microcircuito multiplex" descrita por Tian et al. (2004, Nature 432: 1050-1054) e tecnologias similares nas quais oligonucleotídeos são sintetizados e montados sobre circuitos microfluídicos fotoprogramáveis.

[00121] Substituições, deleções, e/ou inserções de aminoácidos únicos ou múltiplos, podem ser feitas e testadas com o uso de métodos conhecidos de mutagênese, recombinação, e/ou embaralhamento, seguido de um procedimento de triagem relevante, como aqueles apresentados por Reidhaar-Olson e Sauer, 1988, Science volume 241: páginas 53 a 57; Bowie e Sauer, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA volume 86: páginas 2152 a 2156; WO 95/17413; ou WO 95/22625. Outros métodos que podem ser usados incluem e PCR propensa a erros, exposição em fago (por exemplo, Lowman et al., 1991, Biochemistry 30: 10832-10837; patente US n° 5.223.409; WO 92/06204) e mutagê- nese região-dirigida (Derbyshire et al., 1986, Gene 46: 145; Ner et al., 1988, DNA 7: 127).

[00122] Métodos de mutagênese/embaralhamento podem ser combinados com métodos de triagem automatizados de alto rendimento para detectar a atividade de polipeptídeos clonados e mutagenizados expressados pelas células hospedeiras (Ness et al., 1999, Nature Biotechnology volume 17: páginas 893 a 896). Moléculas de DNA muta- genizadas que codificam polipeptídeos ativos podem ser recuperadas a partir de células hospedeiras e rapidamente sequenciadas com o uso de métodos-padrão conhecidos na técnica. Estes métodos permitem uma determinação rápida da importância de resíduos de aminoá- cidos individuais em um polipeptídeo.

[00123] A construção de genes semissintéticos é efetuada pela combinação dos aspectos da construção do gene sintético, e/ou muta- gênese sítio-dirigida, e/ou mutagênese aleatória, e/ou embaralhamento. A construção semissintética é exemplificada por um processo que utiliza fragmentos de polinucleotídeo que são sintetizados, em combinação com técnicas de PCR. Regiões de genes definidas podem ser desta forma sintetizadas de novo, enquanto que outras regiões podem ser amplificadas usando iniciadores mutagênicos sítio-específicos, enquanto que ainda outras regiões podem ser submetidas à amplificação por PCR propensa a erros ou PCR não propensa a erros. Subsequên- cias de polinucleotídeos podem então ser embaralhadas.

Polinucleotídeos

[00124] Também são aqui revelados polinucleotídeos isolados que codificam uma variante da presente invenção.

Construtos de ácido nucleico

[00125] Também são aqui revelados construtos de ácido nucleico compreendendo um polinucleotídeo que codifica uma variante da presente invenção funcionalmente ligado em uma ou mais sequências de controle que dirigem a expressão da sequência de codificação em uma célula hospedeira adequada sob condições compatíveis com as sequências de controle.

[00126] O polinucleotídeo pode ser manipulado em uma variedade de maneira para realizar a expressão de uma variante. A manipulação do polinucleotídeo antes de sua inserção em um vetor pode ser desejável ou necessária dependendo do vetor de expressão. As técnicas para modificar os polinucleotídeos que utilizam métodos de DNA re- combinante são bem conhecidas na técnica.

[00127] A sequência de controle pode ser um promotor, um polinu- cleotídeo que é reconhecido por uma célula hospedeira para a expressão do polinucleotídeo. O promotor contém sequências de controle transcricional que medeiam a expressão da variante. O promotor pode ser qualquer polinucleotídeo que mostra atividade traducional na célula hospedeira incluindo promotores mutantes, truncados, e híbridos, e pode ser obtido de genes que codificam polipeptídeos extracelulares ou intracelulares quer homólogos quer heterólogos à célula hospedeira.

[00128] Exemplos de promotores adequados para dirigir a transcrição dos construtos de ácido nucleico em uma célula hospedeira bacte- riana são os promotores obtidos do gene de alfa-amilase (amyQ) de Bacillus amyloliquefaciens, gene de alfa-amilase (amyL) de Bacillus licheniformis, gene de penicilinase (penP) de Bacillus licheniformis, gene de amilase maltogênica (amyM) de Bacillus stearothermophilus, gene de lenvansucrase (sacB) de Bacillus subtilis, genes xylA e xylB de Bacillus subtilis, gene cryIIIA de Bacillus thuringiensis (Agaisse e Lereclus, 1994, Molecular Microbiology 13: 97-107), operon lac de E. coli, promotor trc de E. coli (Egon et al., 1988, Gene 69: 301-315), gene de agarase (dagA) de Streptomyces coelicolor, e gene de betalactamase procariótica (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 3727-3731), e também o promotor tac (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 21-25). Outros promotores são descritos em "Useful proteins from recombinant bacteria" em Gilbert et al., 1980, Scientific American 242: 74-94; e em Sambrook et al., 1989, supra. Exemplos de promotores em tandem são revelados em WO 99/43835.

[00129] Exemplos de promotores adequados para dirigir a transcrição dos construtos de ácido nucleico da presente invenção em uma célula hospedeira fúngica filamentosa são os promotores obtidos dos genes para acetamidase de Aspergillus nidulans, alfa-amilase neutra de Aspergillus niger, alfa-amilase estável a ácidos de Aspergillus niger, glicoamilase (glaA) de Aspergillus niger ou Aspergillus awamori, TAKA amilase de Aspergillus oryzae, protease alcalina de Aspergillus oryzae, triose-fosfato-isomerase de Aspergillus oryzae, protease semelhante à tripsina de Fusarium oxisporum (WO 96/00787), amiloglicosidase de Fusarium venenatum (WO 00/56900), Daria de Fusarium venenatum (WO 00/56900), Quinn de Fusarium venenatum (WO 00/56900), lipase de Rhizomucor miehei, proteinase aspártica de Rhizomucor miehei, beta-glicosidase de Trichoderma reesei, celobio-hidrolase I de Tricho- derma reesei, celobio-hidrolase II de Trichoderma reesei, endoglica- nase I de Trichoderma reesei, endoglicanase II de Trichoderma reesei, endoglicanase III de Trichoderma reesei, endoglicanase IV de Tricho- derma reesei, endoglicanase V de Trichoderma reesei, xilanase I de Trichoderma reesei, xilanase II de Trichoderma reesei, beta-xilosidase de Trichoderma reesei, e também o promotor NA2-tpi (um promotor modificado de um gene alfa-amilase neutra de Aspergillus em que a sequência líder não tem sido substituída por uma sequência líder não traduzida de um gene triose-fosfato-isomerase de Aspergillus; exemplos não limitadores incluem promotores modificados de um gene alfa- amilase neutra de Aspergillus niger em que a sequência líder não traduzida foi substituída por uma sequência líder não traduzida de um gene de triose-fosfato-isomerase de Aspergillus nidulans ou Aspergillus oryzae); e seus promotores mutantes, truncados, e híbridos.

[00130] Em uma levedura hospedeira, os promotores úteis são obtidos de genes para enolase (ENO-1) de Saccharomyces cerevisiae, galactoquinase (GAL1) de Saccharomyces cerevisiae, álcool-desidro- genase/gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (ADH1, ADH2/GAP) de Saccharomyces cerevisiae, triose-fosfato-isomerase (TPI) de Saccha- romyces cerevisiae, metalotioneína (CUP1) de Saccharomyces cerevi- siae, e 3-fosfoglicerato-quinase de Saccharomyces cerevisiae. Outros promotores úteis para as células hospedeiras de levedura são descritos por Romanos et al., 1992, Yeast 8: 423-488.

[00131] A sequência de controle também pode ser um terminador de transcrição, que é reconhecido por uma célula hospedeira para terminar a transcrição. A sequência terminadora está funcionalmente ligada na extremidade 3'-terminal do polinucleotídeo que codifica a variante. Qualquer terminador que é funcional na célula hospedeira pode ser usado.

[00132] Os terminadores preferenciais para células hospedeiras bacterianas são obtidos dos genes para protease alcalina (aprH) de Bacillus clausii, alfa-amilase (amyL) de Bacillus licheniformis, e RNA ribossômico (rrnB) de Escherichia coli.

[00133] Os terminadores preferenciais para células hospedeiras fúngicas filamentosas são obtidos dos genes para antranilato-sintase de Aspergillus nidulans, glicoamilase de Aspergillus niger, alfa-glicosi- dase de Aspergillus niger, TAKA amilase de Aspergillus oryzae, e pro tease semelhante à tripsina de Fusarium oxisporum.

[00134] Os terminadores preferenciais para células hospedeiras de levedura são obtidos a partir dos genes para enolase de Saccha- romyces cerevisiae, citocromo C de Saccharomyces cerevisiae (CYC1) e gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase de Saccharomyces cerevisiae. Outros terminadores úteis para células hospedeiras de levedura são descritos por Romanos et al., 1992, acima citado.

[00135] A sequência de controle também pode ser uma região es-tabilizadora de mRNA a jusante de um promotor e a montante da sequência de codificação de um gene que aumenta a expressão do gene.

[00136] Exemplos de regiões estabilizadoras de mRNA são obtidos de um gene cryIIIA de Bacillus thuringiensis (WO 94/25612) e de um gene SP82 de Bacillus subtilis (Hue et al., 1995, Journal of Bacteriology 177: 3465-3471).

[00137] A sequência de controle também pode ser uma sequência líder, uma região não traduzida de um mRNA que é importante para a tradução pela célula hospedeira. A sequência líder está funcionalmente ligada na extremidade 5'-terminal do polinucleotídeo que codifica a variante. Qualquer sequência líder que é funcional na célula hospedeira pode ser usada.

[00138] As sequências de iniciação preferenciais para células hospedeiras fúngicas filamentosas são obtidas dos genes para TAKA ami- lase de Aspergillus oryzae e triose fosfato isomerase de Aspergillus nidulans.

[00139] As sequências líder adequadas para células hospedeiras de levedura são obtidas dos genes para enolase (ENO-1) de Saccha- romyces cerevisiae, 3-fosfoglicerato-quinase de Saccharomyces cere- visiae, fator alfa de Saccharomyces cerevisiae e álcool-desidrogenase/ gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (ADH2/GAP) de Saccharomyces cerevisiae.

[00140] A sequência de controle também pode ser uma sequência de poliadenilação, uma sequência funcionalmente ligada na extremidade 3'-terminal da sequência que codifica a variante e, quando transcrita, é reconhecida pela célula hospedeira como uma sinalização para adicionar resíduos de poliadenosina no mRNA transcrito. Qualquer sequência de poliadenilação que é funcional na célula hospedeira pode ser usada.

[00141] As sequências de poliadenilação preferíveis para células hospedeiras fúngicas filamentosas são obtidas dos genes para antrani- lato-sintase de Aspergillus nidulans, glicoamilase de Aspergillus niger, alfa-glicosidase de Aspergillus niger, TAKA amilase de Aspergillus ory- zae, e protease semelhante à tripsina de Fusarium oxisporum.

[00142] As sequências de poliadenilação úteis para as células hospedeiras de levedura são descritas por Guo eSherman, 1995, Mol. Cellular Biol. 15: 5983-5990.

[00143] A sequência de controle também pode ser uma região de codificação de peptídeo de sinalização que codifica um peptídeo de sinalização ligado na extremidade N-terminal de uma variante e direciona a variante para dentro da rota secretória da célula. A extremidade- 5’ da sequência de codificação do polinucleotídeo pode inerentemente conter uma sequência de codificação de peptídeo de sinalização naturalmente ligada em fase de leitura de tradução com o segmento da sequência de codificação que codifica a variante. Alternativamente, a ex- tremidade-5' da sequência de codificação pode conter uma sequência de codificação de peptídeo de sinalização que é estranha à sequência de codificação. Uma sequência de codificação de peptídeo de sinalização estranha pode ser necessária se a sequência de codificação naturalmente não contiver uma sequência de codificação de peptídeo de sinalização. Alternativamente, uma sequência de codificação de peptídeo de sinalização estranha pode simplesmente substituir a se- quência de codificação de peptídeo de sinalização natural a fim de in-tensificar a secreção da variante. Entretanto, qualquer sequência de codificação de peptídeo de sinalização que direciona a variante expressada para dentro da rota secretória de uma célula hospedeira pode ser usada.

[00144] As sequências de codificação de peptídeo de sinalização eficazes para células hospedeiras bacterianas são as sequências de codificação de peptídeo de sinalização obtidas dois genes para amila- se maltogênica de Bacillus NCIB 11837, subtilisina de Bacillus licheni- formis, beta-lactamase de Bacillus licheniformis, alfa-amilase de Bacillus stearothermophilus, proteases neutras (nprT, nprS, nprM) de Bacillus stearothermophilus, e prsA de Bacillus subtilis. Outros peptídeos de sinalização são descritos por Simonen e Palva, 1993, Microbiological Reviews 57: 109-137.

[00145] As sequências de codificação de peptídeo de sinalização eficazes para células hospedeiras fúngicas filamentosas são as sequências de codificação de peptídeo de sinalização obtidas dos genes para amilase neutra de Aspergillus niger, glicoamilase de Aspergillus niger, TAKA amilase de Aspergillus oryzae, celulase de Humicola inso- lens, endoglicanase V de Humicola insolens, lipase de Humicola lanuginosa, e proteinase aspártica de Rhizomucor miehei.

[00146] Os peptídeos de sinalização úteis para células hospedeiras de levedura são obtidos a partir dos genes para fator alfa de Saccha- romyces cerevisiae e invertase de Saccharomyces cerevisiae. Outras sequências de codificação de peptídeo de sinalização úteis são descritas por Romanos et al., 1992, supra.

[00147] A sequência de controle também pode ser uma sequência de codificação de propeptídeo que codifica um propeptídeo posicionado na extremidade N-terminal de uma variante. O polipeptídeo resultante é conhecido como uma proenzima ou propolipeptídeo (ou, em alguns casos, um zimogênio). Um propolipeptídeo é em geral inativo e pode ser convertido em um polipeptídeo ativo por clivagem catalítica ou autocatalítica do propeptídeo a partir do propolipeptídeo. A sequência de codificação de propeptídeo pode ser obtida dos genes para protease alcalina (aprE) de Bacillus subtilis, protease neutra (nprT) de Bacillus subtilis, lacase de Mycelioftora thermophila (WO 95/33836), proteinase aspártica de Rhizomucor miehei, e fator-alfa de Saccha- romyces cerevisiae.

[00148] Se ambas as sequências de propeptídeo e de peptídeo de sinalização estão presentes, a sequência de propeptídeo está posicionada ao lado da extremidade N-terminal da variante e a sequência de peptídeo de sinalização está posicionada ao lado da extremidade N- terminal da sequência de propeptídeo.

[00149] Também pode ser desejável adicionar sequências regulató- rias que regulam a expressão da variante em relação ao crescimento da célula hospedeira. Exemplos de sistemas reguladores são aqueles que causam a ligação ou a desligamento da expressão do gene em resposta a um estímulo químico ou físico, incluindo a presença de um composto regulatório. Os sistemas reguladores em sistemas procarió- ticos incluem os sistemas operadores lac, tac e trp. Em leveduras, pode ser usado o sistema ADH2 ou GAL1. Em fungos filamentosos, podem ser usados o promotor glicoamilase de Aspergillus niger, o promotor TAKA alfa-amilase de Aspergillus oryzae, e o promotor glicoamilase de Aspergillus oryzae. Outros exemplos de sequências regulatórias são aquelas que permitem a amplificação de gene. Em sistemas euca- rióticos, estas sequências regulatórias incluem o gene di-hidrofolato- redutase que é amplificado na presença de metotrexato, e os genes metalotioneína que são amplificados com metais pesados. Nestes casos, o polinucleotídeo que codifica a variante estaria funcionalmente ligado na sequência regulatória.

Vetores de expressão

[00150] A presente invenção também se refere aos vetores de expressão recombinantes compreendendo um polinucleotídeo que codifica uma variante da presente invenção, um promotor, e sinais de terminação transcricional e traducional. As várias sequências de nucleo- tídeos e sequências de controle podem ser unidas juntas para produzir um vetor de expressão recombinante que pode incluir um ou mais sítios de restrição convenientes para permitir a inserção ou a substituição do polinucleotídeo que codifica a variante em tais sítios. Alternativamente, o polinucleotídeo pode ser expresso pela inserção do polinu- cleotídeo ou de um construto de ácido nucleico compreendendo o po- linucleotídeo em um vetor apropriado para expressão. Ao produzir o vetor de expressão, a sequência de codificação está localizada no vetor, de modo que a sequência de codificação esteja funcionalmente ligada às sequências de controle adequadas para expressão.

[00151] O vetor de expressão recombinante pode ser qualquer vetor (por exemplo, um plasmídeo ou vírus) que pode ser convenientemente submetido aos procedimentos de DNA recombinante e pode causar a expressão do polinucleotídeo. A escolha do vetor dependerá, tipicamente, da compatibilidade do vetor com a célula hospedeira na qual é para ser introduzido o vetor. O vetor pode ser um plasmídeo linear ou circular fechado.

[00152] O vetor pode ser um vetor autonomamente replicante, isto é, um vetor que existe como uma entidade extracromossômica, cuja re- plicação é independente da replicação cromossômica, por exemplo, um plasmídeo, um elemento extracromossômico, um minicromossomo, ou um cromossomo artificial. O vetor pode conter quaisquer meios para garantir a autorreplicação. Alternativamente, o vetor pode ser um que, quando introduzido em uma célula hospedeira, é integrado no genoma e replicado junto com o(s) cromossomo(s) no(s) qual (quais) ele foi integrado. Ademais, pode(m) ser usado(s) um plasmídeo ou vetor único ou dois ou mais plasmídeos ou vetores que juntos contêm o DNA a ser introduzido no genoma da célula hospedeira, ou um transposon.

[00153] O vetor preferencialmente contém um ou mais marcadores selecionáveis que permitem a fácil seleção de células transformadas, transfectadas, transduzidas, ou semelhante. Um marcador selecioná- vel é um gene cujo produto oferece características biocidas ou resistência viral, resistência a metais pesados, prototrofia para auxotrofos, e similares.

[00154] Exemplos de marcadores bacterianos selecionáveis são genes dal de Bacillus licheniformis ou Bacillus subtilis ou marcadores que conferem resistência a antibióticos como resistência a ampicilina, cloranfenicol, canamicina, neomicina, espectinomicina ou tetraciclina. Os marcadores adequados para células hospedeiras de levedura incluem, mas não se limitam a, ADE2, HIS3, LEU2, LYS2, MET3, TRP1, e URA3. Os marcadores selecionáveis para uso em uma célula hospedeira fúngica filamentosa incluem, mas não se limitam a, amdS (acetamidase), argB (ornitina-carbamoil-transferase), bar (fosfofinotri- cina-acetiltransferase), hph (higromicina-fosfotransferase), niaD (nitra- to-redutase), pirG (orotidina-5’-fosfato-descarboxilase), sC (sulfato- adeniltransferase), e trpC (antranilato-sintase), e também seus equivalentes. Preferíveis para uso em uma célula de Aspergillus são os genes amdS e pirG de Aspergillus nidulans ou Aspergillus oryzae e um gene bar de Streptomyces hygroscopicus.

[00155] O vector preferencialmente contém um elemento(s) que permite a integração do vetor no genoma da célula hospedeira ou a replicação autônoma do vetor na célula independente do genoma.

[00156] Para integração no genoma da célula hospedeira, o vetor pode depender da sequência do polinucleotídeo que codifica a varian- te ou de qualquer outro elemento do vetor para integração no genoma por recombinação homóloga ou não homóloga. Alternativamente, o vetor pode conter polinucleotídeos adicionais para direcionar a integração por recombinação homóloga para dentro do genoma da célula hospedeira em uma localização precisa (localizações precisas) no(s) cromossomo(s). Para aumentar a possibilidade de integração em uma localização precisa, os elementos de integração devem conter um número suficiente de ácidos nucleicos, como 100 a 10.000 pares de bases, 400 a 10.000 pares de bases, e 800 a 10.000 pares de bases, que têm um grau alto de identidade de sequência com a sequência alvo correspondente para aumentar a probabilidade de recombinação homóloga. Os elementos integracionais podem consistir em qualquer sequência que seja homóloga à sequência-alvo no genoma da célula hospedeira. Ademais, os elementos integracionais podem ser polinu- cleotídeos codificadores ou não codificadores. Por outro lado, o vetor pode ser integrado ao genoma da célula hospedeira mediante recom- binação não homóloga.

[00157] Para replicação autônoma, o vetor pode compreender, ainda uma origem de replicação capacitando o vetor a replicar-se autonomamente na célula hospedeira em questão. A origem de replicação pode ser qualquer replicador de plasmídeo que medeia replicação autônoma que funciona em uma célula. O termo "origem de replicação" ou "replicador de plasmídeo" significa um polinucleotídeo que permite que um plasmídeo ou vetor se replique in vivo.

[00158] Exemplos de origens de replicação bacterianas são as origens de replicação de plasmídeos pBR322, pUC19, pACYC177 e pACYC184, que permitem a replicação em E. coli, e pUB110, pE194, pTA1060 e pAMβl, que permitem a replicação em Bacillus.

[00159] Exemplos de origens de replicação para uso em uma célula hospedeira de levedura consiste na origem de replicação de 2 mícron, ARS1, ARS4, na combinação de ARS1 e CEN3, e na combinação de ARS4 e CEN6.

[00160] Exemplos de origens de replicação úteis em uma célula fúngica filamentosa são AMA1 e ANS1 (Gems et al., 1991, Gene 98: 61-67; Cullen et al., 1987, Nucleic Acids Res. 15: 9163-9175; WO 00/24883). O isolamento do gene AMA1, e a construção de plasmí- deos ou vetores compreendendo o gene, podem ser realizados de acordo com os métodos apresentados em WO 00/24883.

[00161] Mais que uma cópia de um polinucleotídeo da presente invenção podem ser inseridas em uma célula hospedeira para aumentar a produção de uma variante. Um aumento no número de cópias do polinucleotídeo pode ser obtido mediante a integração de pelo menos uma cópia adicional da sequência no genoma da célula hospedeira, ou mediante a inclusão de um gene marcador selecionável amplificável com o polinucleotídeo, em que as células contendo cópias amplificadas do gene marcador selecionável, e portanto as cópias adicionais do polinucleotídeo, podem ser selecionadas mediante o cultivo das células na presença do agente selecionável adequado.

[00162] Os procedimentos usados para ligar os elementos acima descritos para construir os vetores de expressão recombinantes da presente invenção são bem conhecidos do versado na técnica (vide, por exemplo, Sambrook et al., 1989, acima citado).

Células hospedeiras

[00163] A presente invenção também se refere às células hospedeiras recombinantes, compreendendo um polinucleotídeo que codifica uma variante da presente invenção funcionalmente ligado em uma ou mais sequências de controle que dirigem a produção de uma variante da presente invenção. Um construto ou vetor compreendendo um poli- nucleotídeo é introduzido em uma célula hospedeira de modo que o construto ou vetor seja mantido como um integrante cromossômico ou como um vetor extracromossômico autorreplicante conforme descrito antes. O termo "célula hospedeira" abrange qualquer progênie de uma célula progenitora que não é idêntica à célula progenitora devido às mutações que ocorrem durante a replicação. A escolha de uma célula hospedeira dependerá em uma grande extensão do gene que codifica a variante e sua fonte.

[00164] A célula hospedeira pode ser qualquer célula útil na produção recombinante de uma variante, por exemplo, um procarionte ou um eucarionte.

[00165] A célula hospedeira procariótica pode ser qualquer bactéria Gram-negativa ou Gram-positiva. As bactérias Gram-positivas incluem, mas não se limitam a, Bacillus, Clostridium, Enterococcus, Geobacillus, Lactobacillus, Lactococcus, Oceanobacillus, Staphylococcus, Strepto-coccus, e Streptomyces. As bactérias Gram-negativas incluem, mas não se limitam a, Campylobacter, E. coli, Flavobacterium, Fusobacte- rium, Helicobacter, Ilyobacter, Neisseria, Pseudomonas, Salmonella, e Ureaplasma.

[00166] A célula hospedeira bacteriana pode ser qualquer célula de Bacillus que inclui, mas não se limita às células Bacillus alkalophilus, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus brevis, Bacillus circulans, Bacillus clausii, Bacillus coagulans, Bacillus firmus, Bacillus lautus, Bacillus len- tus, Bacillus licheniformis, Bacillus megaterium, Bacillus pumilus, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis, e Bacillus thuringiensis.

[00167] A célula hospedeira bacteriana também pode ser qualquer célula de Streptococcus que inclui, mas não se limita às células Streptococcus equisimilis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus uberis, e Streptococcus equi subsp. Zooepidemicus.

[00168] A célula hospedeira bacteriana também pode ser qualquer célula de Streptomyces, que inclui, mas não se limita às células Strep- tomyces achromogenes, Streptomyces avermitilis, Streptomyces coeli- color, Streptomyces griseus, e Streptomyces lividans.

[00169] A introdução de DNA em uma célula de Bacillus pode ser realizada por transformação de protoplasto (consulte, por exemplo, Chang e Cohen, 1979, Mol. Gen. Genet. 168: 111-115), transformação de célula competente (consulte, por exemplo, Young e Spizizen, 1961, J. Bacteriol. 81: 823-829, ou Dubnau e Davidoff-Abelson, 1971, J. Mol. Biol. 56: 209-221), eletroporação (consulte, por exemplo, Shigekawa e Dower, 1988, Biotechniques 6: 742-751), ou conjugação (consulte, por exemplo, Koehler e Thorne, 1987, J. Bacteriol. 169: 5271-5278). A introdução de DNA em uma célula de E. coli pode ser realizada por transformação de protoplasto (consulte, por exemplo, Hanahan, 1983, J. Mol. Biol. 166: 557-580) ou eletroporação (consulte, por exemplo, Dower et al., 1988, Nucleic Acids Res. 16: 6127-6145). A introdução de DNA em uma célula de Streptomyces pode ser realizada por transformação de protoplasto, eletroporação (consulte, por exemplo, Gong et al., 2004, Folia Microbiol. (Praha) 49: 399-405), conjugação (consulte, por exemplo, Mazodier et al., 1989, J. Bacteriol. 171: 3583-3585), ou transdução (consulte, por exemplo, Burke et al., 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98: 6289-6294). A introdução de DNA em uma célula de Pseudomonas pode ser realizada por eletroporação (consulte, por exemplo, Choi et al., 2006, J. Microbiol. Methods 64: 391-397), ou conjugação (consulte, por exemplo, Pinedo e Smets, 2005, Appl. Environ. Microbiol. 71: 51-57). A introdução de DNA em uma célula de Streptococcus pode ser realizada por competência natural (consulte, por exemplo, Perry e Kuramitsu, 1981, Infect. Immun. 32: 1295-1297), transformação de protoplasto (consulte, por exemplo, Catt e Jollick, 1991, Microbios 68: 189-207), eletroporação (consulte, por exemplo, Buckley et al., 1999, Appl. Environ. Microbiol. 65: 3800-3804) ou conjugação (consulte, por exemplo, Clewell, 1981, Microbiol. Rev. 45: 409436). Entretanto, pode ser usado qualquer método conhecido na técni- ca para introdução de DNA em uma célula hospedeira.

[00170] A célula hospedeira pode, também, ser um eucariote, como uma célula de mamífero, de inseto, de planta ou de fungo.

[00171] A célula hospedeira pode ser uma célula fúngica. "Fungos" como aqui usado inclui os filos Ascomycota, Basidiomycota, Chytridi- omycota, e Zygomycota e também o Oomycota e todos os s fungos mitospóricos (conforme definidos por Hawksworth et al., em, Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi, oitava edição, 1995, CAB International, University Press, Cambridge, Reino Unido).

[00172] A célula hospedeira fúngica pode ser uma célula hospedeira. O termo "levedura", para uso na presente invenção, inclui leveduras ascosporógenas (Endomycetales), leveduras basidiosporógenas e le-veduras pertencentes ao filo Fungi Imperfecti (Blastomycetes). Visto que a classificação de levedura pode mudar no futuro, para os propósitos desta invenção, levedura deve ser definida conforme descrito em Biology and Activities of Yeast (Skinner, Passmore, e Davenport, editores, Soc. App. Bacteriol. Symposium Series n° 9, 1980).

[00173] A célula hospedeira de levedura pode ser uma célula de Candida, Hansenula, Kluyveromyces, Pichia, Saccharomyces, Schizo- saccharomyces, ou Yarrowia tal como uma célula de Kluyveromyces lactis, Saccharomyces carlsbergensis, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces diastaticus, Saccharomyces douglasii, Saccharomyces kluyveri, Saccharomyces norbensis, Saccharomyces oviformis, ou Yar- rowia lipolitica.

[00174] A célula hospedeira fúngica pode ser uma célula fúngica filamentosa. O termo "fungos filamentosos" incluem todas as formas filamentosas das subdivisões Eumycota e Oomycota (conforme definidas por Hawksworth et al., 1995, acima citado). Os fungos filamentosos são caracterizados, geralmente, por uma parede micelial composta de quitina, celulose, glicana, quitosana, manana e outros polissacarí- deos complexos. O crescimento vegetativo se dá por alongamento da hifa, e o catabolismo de carbono é obrigatoriamente aeróbico. Em contraste, o crescimento vegetativo de leveduras como Saccharomyces cerevisiae se dá por brotamento de um talo unicelular, e o catabolismo de carbono pode ser fermentativo.

[00175] A célula hospedeira fúngica filamentosa pode ser uma célula de Acremonium, Aspergillus, Aureobasidium, Bjerkandera, Ceripori- opsis, Chrysosporium, Coprinus, Coriolus, Cryptococcus, Filibasidium, Fusarium, Humicola, Magnaporthe, Mucor, Mycelioftora, Neocallimastix, Neurospora, Paecilomyces, Penicillium, Phanerochaete, Phlebia, Pi- romyces, Pleurotus, Schizophyllum, Talaromyces, Thermoascus, Thie- lavia, Tolypocladium, Trametes, ou Trichoderma.

[00176] Por exemplo, a célula hospedeira fúngica filamentosa pode ser uma célula de Aspergillus awamori, Aspergillus foetidus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus japonicus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Bjerkandera adusta, Ceriporiopsis aneirina, Ceriporiopsis caregiea, Ceriporiopsis gilvescens, Ceriporio- psis pannocinta, Ceriporiopsis rivulosa, Ceriporiopsis subrufa, Ceripo- riopsis subvermispora, Chrysosporium inops, Chrysosporium kerati- nophilum, Chrysosporium lucknowense, Chrysosporium merdarium, Chrysosporium pannicola, Chrysosporium queenslandicum, Chrysos- porium tropicum, Chrysosporium zonatum, Coprinus cinereus, Coriolus hirsutus, Fusarium bactridioides, Fusarium cerealis, Fusarium cro- okwellense, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Fusarium graminum, Fusarium heterosporum, Fusarium negundi, Fusarium oxis- porum, Fusarium reticulatum, Fusarium roseum, Fusarium sambuci- num, Fusarium sarcochroum, Fusarium sporotrichioides, Fusarium sul- phureum, Fusarium torulosum, Fusarium trichothecioides, Fusarium venenatum, Humicola insolens, Humicola lanuginosa, Mucor miehei, Mycelioftora thermophila, Neurospora crassa, Penicillium purpuroge- num, Phanerochaete chrysosporium, Phlebia radiata, Pleurotus eryngii, Thielavia terrestris, Trametes villosa, Trametes versicolor, Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Trichoderma longibrachiatum, Tri- choderma reesei, ou Trichoderma viride.

[00177] As células fúngicas podem ser transformadas por um processo envolvendo formação de protoplastos, transformação dos proto- plastos, e regeneração da parede celular em uma maneira conhecida por si só. Os procedimentos adequados para transformação de células hospedeiras Aspergillus e Trichoderma são descritos em EP 238023, Yelton et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 1470-1474, e Christensen et al., 1988, Bio/Technology 6: 1419-1422. Os métodos adequados para a transformação de espécie Fusarium são descritos por Malardier et al., 1989, Gene 78: 147-156, e WO 96/00787. Levedura pode ser transformada com o uso dos procedimentos descritos por Becker e Guarente, In Abelson, J.N. e Simon, M.I., editors, Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology, Methods in Enzymology, Volume 194, pp 182-187, Academic Press, Inc., New York; Ito et al., 1983, J. Bacteriol. 153: 163; e Hinnen et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 1920.

Métodos de produção

[00178] Também são aqui revelados métodos de produção de uma variante, compreendendo: (a) cultivar uma célula hospedeira da presente invenção sob condições adequadas para a expressão da variante; e (b) recuperar a variante.

[00179] As células hospedeiras são cultivadas em um meio nutriente adequado para a produção de uma variante com o uso de métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, a célula pode ser cultivada por cultivo em frasco agitado, ou fermentação em escala pequena ou em escala grande (incluindo fermentações contínua, em batelada, em batelada alimentada, ou no estado sólido) em fermentadores de laborató- rio ou industriais realizada em um meio adequado e sob condições que permitem que uma variante seja expressada e/ou isolada. O cultivo se dá em meio nutritivo adequado, compreendendo fontes de carbono e de nitrogênio, bem como sais inorgânicos, mediante o uso de procedimentos conhecidos na técnica. Os meios adequados estão disponíveis junto a fornecedores comerciais, ou podem ser preparados de acordo com as composições publicadas (por exemplo, nos catálogos da American Type Culture Collection). Se a variante é secretada para o meio nutriente, a variante pode ser recuperada diretamente do meio. Se a variante não é secretada, ela pode ser recuperada de lisados celulares.

[00180] A variante pode ser detectada com o uso de métodos conhecidos na técnica que são específicos para as variantes. Estes métodos de detecção incluem, mas não se limitam a, uso de anticorpos específicos, formação de um produto de enzima, ou desaparecimento de um substrato de enzima. Por exemplo, em ensaio de enzima pode ser utilizado para determinar a atividade da variante.

[00181] A variante pode ser recuperada com o uso de métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, a variante pode ser recuperada do meio nutriente por procedimentos convencionais que incluem, mas não se limitam a, coleta, centrifugação, filtração, extração, secagem por aspersão, evaporação, ou precipitação.

[00182] A variante pode ser purificada por uma variedade de procedimentos conhecidos na técnica que incluem, mas não se limitam a, cromatografia (por exemplo, troca iônica, afinidade, hidrofóbica, croma- tofocalização, e exclusão por tamanho), procedimentos eletroforéticos (por exemplo, focalização isoelétrica preparatória), solubilidade diferencial (por exemplo, precipitação por sulfato de amônio), SDS-PAGE, ou extração (consulte, por exemplo, Protein Purification, Janson e Ryden, editores, VCH Publishers, New York, EUA, 1989) para obter variantes substancialmente puras.

[00183] Em um aspecto alternativo, a variante não é recuperada, mas em vez disto uma célula hospedeira da presente invenção que expressa a variante é usada como uma fonte da variante.

Composições

[00184] Também são aqui reveladas composições particuladas conforme descritas em EP11170520 compreendendo uma variante de lipase, compreendendo uma substituição em uma ou mais posições correspondendo às posições T37A,D,E,F,G,H,I,L,N,P,Q,R,S,V,W,Y, N39A,C,D,E,F,G,I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W,Y, e G91D,H,I,P,Q do polipeptí- deo maduro de SEQ ID NO: 1, em que a variante tem atividade de lipase.

[00185] Em algumas modalidades a composição particulada compreende: (a) partículas compreendendo uma fonte de peroxiácidos orgânicos; e (b) partículas compreendendo um catalisador de alvejamen- to; e (c) partículas compreendendo (i) um núcleo compreendendo uma enzima circundada por (ii) um revestimento de liberação retardada, em que a enzima é uma variante de lipase, compreendendo uma substituição em uma ou mais posições correspondendo às posições T37A,D,E,F,G,H,I,L,N,P,Q,R,S,V,W,Y, N39A,C,D,E,F,G,I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W,Y, e G91D,H,I,P,Q do polipeptí- deo maduro de SEQ ID NO: 1, em que a variante tem atividade de lipase.

[00186] Em algumas modalidades a composição particulada compreende: (a) partículas compreendendo uma fonte de peroxiácidos orgânicos; e (b) partículas compreendendo um catalisador de alvejamen- to; e (c) partículas compreendendo (i) um núcleo compreendendo uma enzima que é uma enzima lipolítica de primeira lavagem circundada por (ii) um revestimento de liberação retardada, em que a variante de lipase, compreendendo uma substituição em uma ou mais posições correspondendo às posições T37A,D,E,F,G,H,I,L,N,P,Q,R,S,V,W,Y, N39A,C,D,E,F,G,I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W,Y, e G91D,H,I,P,Q do polipeptí- deo maduro de SEQ ID NO: 1, em que a variante tem atividade de lipase.

Usos

[00187] Também é aqui revelado o uso de uma variante de lipase, compreendendo uma substituição em uma ou mais posições corres-pondendo às posições T37A,D,E,F,G,H,I,L,N,P,Q,R,S,V,W,Y, N39A,C, D,E,F,G,I,K,L,M,P,Q,R,T,V,W,Y, e G91D,H,I,P,Q do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1, em que a variante tem atividade de lipase, para preparar partículas de lipase conforme descritas em EP11170520.

[00188] Em algumas modalidades o método de preparar as partículas de lipase, compreende: (a) testar a sensibilidade ao catalisador de alvejamento de pelo menos uma enzima pela determinação do desempenho de lavagem para uma combinação da enzima com um catalisador de alvejamento e uma fonte de peroxiácidos orgânicos, e comparar com o desempenho sem o catalisador de alvejamento, para identificar uma enzima sensível ao catalisador de alvejamento; (b) fornecer um núcleo compreendendo a enzima sensível, e circundar o núcleo com um revestimento de liberação retardada, em que a pelo menos uma enzima é uma variante de lipase, compreendendo uma substituição em uma ou mais posições correspondendo às posições T37A,D,E,F,G,H,I,L,N,P,Q,R,S,V,W,Y, N39A,C,D,E,F,G,I,K,L,M,P,Q,R, T,V,W,Y, e G91D,H,I,P,Q do polipeptídeo maduro de SEQ ID NO: 1.

[00189] Preferencialmente a lipase está presente na composição em quantidades de 0,00001% a 2%, mais preferencialmente de 0,0001% a 0,02%, com a máxima preferência de 0,001% a 0,01% em peso. Tipicamente a composição para limpeza e/ou de tratamento está presente em água em uma quantidade de 0,001 a 5%, de tal modo que os teores preferidos de variante de lipase na etapa de tratamento aquoso seja de 0,000001 a 1.000 ppm.

Componente de alvejamento

[00190] O componente de alvejamento adequado para incorporação nos métodos e nas composições da invenção compreende um ou uma mistura de mais do que um componentes alvejantes. Os componentes alvejantes adequados incluem catalisadores de alvejamento, alvejantes fotoativados, ativadores de alvejante, peróxido de hidrogênio, fontes de peróxido de hidrogênio, perácidos pré-formados e suas combinações. Em geral, quando um componente de alvejamento é usado, as composições da presente invenção podem compreender de cerca de 0,00001 a 90% em peso, preferencialmente 0,0001% a cerca de 50% ou mesmo de cerca de 0,001% a cerca de 25% componente de alvejamento em peso da presente composição para limpeza. Exemplos de componentes alvejantes adequados incluem: (1) Perácidos pré-formados: Perácidos pré-formados adequados incluem, mas não se limitam a, compostos selecionados do grupo que consiste em peroxiácidos pré-formados ou seus sais, tipicamente um ácido peroxicarboxílico ou seu sal, ou um ácido peroxis- sulfônico ou seu sal.

[00191] O peroxiácido pré-formado ou seu sal é, de preferência, um ácido peroxicarboxílico ou seu sal, tipicamente apresentando um estrutura química que corresponde à seguinte fórmula química:

em que: R14 é selecionado dentre alquila, arilalquila, cicloalquila, arila ou grupos heterocíclicos; o grupo R14 pode ser linear ou ramificado, substituído ou não substituído; e Y é qualquer contraíon adequado que alcança a neutralidade de carga elétrica, de preferência Y é selecionado dentre hidrogênio, sódio ou potássio. De preferência, R14 é uma alquila C6-9 linear ou ramificada, substituída ou não substituída. De pre- ferência, o peroxiácido ou seu sal é selecionado dentre ácido peroxi- hexanóico, ácido peroxi-heptanóico, ácido peroxioctanóico, ácido pe- roxinonanóico, ácido peroxidecanóico, qualquer seu sal, ou qualquer combinação dos mesmos. Os peroxiácidos particularmente preferenciais são ácidos ftalimidoperoxialcanoicos, em particular ácidoεftalimido- peroxi-hexanoico (PAP). De preferência, o peroxiácido ou seu sal tem um ponto de fusão na faixa de 30°C a 60°C.

[00192] O peroxiácido pré-formado ou seu sal pode ser um ácido peroxissulfônico ou seu sal, tipicamente apresentando um estrutura química que corresponde à seguinte fórmula química:

em que: R15 é selecionado dentre alquila, arilalquila, cicloalquila, arila ou grupos heterocíclicos; o grupo R15 pode ser linear ou ramificado, substituído ou não substituído; e Z é qualquer contraíon adequado que alcance a neutralidade de carga elétrica, de preferência é selecionado dentre hidrogênio, sódio ou potássio. De preferência R15 é uma alquila C6-9 linear ou ramificada, substituída ou não substituída. Preferencialmente tais componentes alvejantes podem estar presentes nas composições da invenção em uma quantidade de 0,01% a 50%, com a máxima preferência de 0,1% a 20%.

[00193] (2) Fontes de peróxido de hidrogênio incluem por exemplo, sais inorgânicos peridrato, incluindo sais de metais alcalinos, como sais sódicos de perborato (habitualmente mono- ou tetra-hidratado), percarbonato, persulfato, perfosfato, persilicato e suas misturas. Em um aspecto da invenção, os sais inorgânicos de peridrato como aqueles selecionados do grupo que consiste em sais sódicos de perborato, de percarbonato, e combinações dos mesmos. Quando utilizados, os sais inorgânicos de peridrato estão, tipicamente, presentes em quanti- dades de 0,05% a 40%, ou de 1% a 30%, em peso do total da composição, e são, tipicamente, incorporados nessas composições sob a forma de um sólido cristalino que pode ser revestido. Os revestimentos adequados incluem, sais inorgânicos como sais de silicato, carbonato ou borato de metal alcalino ou suas misturas, ou materiais orgânicos como sabões graxos, óleos, ceras, ou polímeros dispersíveis ou solúveis em água.

[00194] Preferencialmente tais componentes alvejantes podem estar presentes nas composições da invenção em uma quantidade de 0,01% a 50%, com a máxima preferência de 0,1% a 20%.

[00195] (3) Os ativadores de alvejante adequados são aqueles ten do R-(C=O)-L em que R é um grupo alquila, opcionalmente ramificado, tendo, quando o ativador de alvejante é hidrofóbico, de 6 a 14 átomos de carbono, ou de 8 a 12 átomos de carbono e, quando o ativador de alvejante é hidrofílico, menor que 6 átomos de carbono ou mesmo menor que 4 átomos de carbono; e L é grupo de saída. Exemplos de grupos de saída adequados são ácido benzoico e seus derivados, especialmente benzenossulfonato. Os ativadores de alvejante adequados incluem dodecanoiloxibenzenossulfonato, decanoiloxibenzenossulfo- nato, ácido decanoiloxibenzoico ou seus sais, 3,5,5-trimetil-hexanoilo- xibenzenossulfonato, tetraacetiletilenodiamina (TAED) e nonanoiloxi- benzenossulfonato (NOBS). Os ativadores de alvejante adequados são, também, apresentados em WO 98/17767. Embora qualquer ati- vador de alvejante adequado possa ser utilizado, em um aspecto da invenção, a presente composição para limpeza pode compreender NOBS, TAED ou suas misturas. Quando presente, o perácido e/ou ati- vador de alvejante está geralmente presente no produto destinado ao consumidor em uma quantidade de cerca de 0,1 a cerca de 60%, em peso, de cerca de 0,5 a cerca de 40%, em peso, ou mesmo de cerca de 0,6 a cerca de 10%, em peso, com base no produto para cuidados tecidos e da casa. Um ou mais perácidos hidrofóbicos ou seus precursores podem ser usados em combinação com um ou mais perácidos hidrofílicos ou seus precursores.

[00196] Preferencialmente tais componentes alvejantes podem estar presentes nas composições da invenção em uma quantidade de 0,01% a 50%, com a máxima preferência de 0,1% a 20%.

[00197] As quantidades da fonte de peróxido de hidrogênio e de perácido ou ativador de alvejante podem ser selecionadas de modo que a razão molar entre o oxigênio disponível (da fonte de peróxido) e o perácido seja de 1:1 a 35:1 ou mesmo 2:1 a 10:1.

[00198] (4) peróxidos de diacila - de preferência espécies alvejan tes à base de peróxido de diacila incluem aqueles selecionados dentre peróxidos de diacila com a seguinte fórmula geral: R1-C(O)-OO-(O)C-R2 nas quais R1 representa uma alquila C6-C18, de preferência grupo alquila C6-C12 contendo uma cadeia linear de pelo menos 5 átomos de carbono e contendo opcionalmente um ou mais substituintes (por exemplo -N+ (CH3)3, -COOH ou -CN) e/ou uma ou mais porções de interrupção (por exemplo -CONH- ou -CH=CH-) interpoladas entre átomos de carbono adjacentes do radical alquila, e R2 representa um grupo alifático compatível com uma porção peróxido, de modo que R1 e R2 juntos contêm um total de 8 a 30 átomos de carbono. Em um aspecto preferencial, R1 e R2 são cadeias de alquila C6-C12 não substituídas lineares. Com a máxima preferência, R1 e R2 são idênticos. Peró- xidos de diacila, nos quais ambos R1 e R2 são grupos alquila C6-C12, são particularmente preferenciais. De preferência, pelo menos um dentre, com a máxima preferência apenas um dentre os grupos R (R1 ou R2), não contém anéis ramificados ou pendentes na posição alfa, ou de preferência nem nas posições alfa ou beta ou com a máxima prefe-rência em nenhuma das posições alfa ou beta ou gama. Em uma mo- dalidade adicionalmente preferencial, o DAP pode ser assimétrico, de modo que de preferência a hidrólise de grupo acila R1 gera rapidamente o perácido, mas a hidrólise do grupo acila R2 é lenta.

[00199] A espécie alvejante à base de peróxido de tetraacila é de preferência selecionada dentre peróxidos de tetraacila com a seguinte fórmula geral: R3-C(O)-OO-C(O)-(CH2)n-C(O)-OO-C(O)-R3 em que R3 representa uma alquila C1-C9, de preferência um grupo C3 - C7, e n representa um número inteiro de 2 a 12, de preferência 4 a 10 inclusive.

[00200] De preferência, as espécies alvejantes à base de peróxido de diacila e/ou de tetraacila estão presentes em uma quantidade suficiente para fornecer pelo menos 0,5 ppm, com mais preferência pelo menos 10 ppm, e com mais preferência ainda, pelo menos 50 ppm, em peso, do líquido de lavagem. Em uma modalidade preferencial, as espécies alvejantes estão presentes em uma quantidade suficiente para fornecer cerca de 0,5 a cerca de 300 ppm, com mais preferência de cerca de 30 a cerca de 150 ppm, em peso, do líquido de lavagem.

[00201] Preferencialmente o componente de alvejamento compreende um catalisador de alvejamento (5 e 6).

[00202] (5) São preferenciais os catalisadores de alvejamento orgâ nicos (de não metal) que incluem catalisador de alvejamento capaz de aceitar um átomo de oxigênio de um peroxiácido e/ou seu sal, e transferir o átomo de oxigênio para um substrato oxidável. Os catalisadores de alvejante adequados incluem, mas não se limitam a: cátions e polií- ons de imínio; zwiteríons de imínio; aminas modificadas; óxidos de amina modificados; N-sulfoniliminas; N-fosfoniliminas; N-aciliminas; dióxidos de tiadiazol; perfluoroiminas; cetonas de açúcar cíclico e suas misturas.

[00203] Os cátions e poliíons de imínio adequados incluem, mas não se limitam a, tetrafluoroborato de N-metil-3,4-di-hidro-isoquinolínio, preparado conforme descrito em Tetrahedron (1992), 49(2), 423-38 (consulte, por exemplo, Composto 4, página 433); p-tolueno sulfonato de N-metil-3,4-di-hidro-isoquinolínio, preparado conforme descrito na patente U.S. N° 5.360.569 (consulte, por exemplo, a coluna 11, exemplo 1); e p-toluenossulfonato de N-octil-3,4-di-hidro-isoquinolínio, preparado conforme descrito na patente U.S. n° 5.360.568 (consulte, por exemplo, Coluna 10, Exemplo 3).

[00204] Zwiteríons de imínio adequados incluem, mas não se limitam a, N-(3-sulfopropil)-3,4-di-hidro-isoquinolínio, sal interno, preparado conforme descrito na patente U.S. N° 5.576.282 (consulte, por exemplo, a coluna 31, exemplo II); N-[2-(sulfoxi)dodecil]-3,4-di-hidro- isoquinolínio, sal interno, preparado conforme descrito na patente U.S. N° 5.817.614 (consulte, por exemplo, a coluna 32, exemplo V); 2-[3- [(2-etil-hexil)oxi]-2-(sulfoxi)propil]-3,4-di-hidro-isoquinolínio, sal interno, preparado conforme descrito no WO05/047264 (consulte, por exemplo, a página 18, exemplo 8), e 2-[3-[(2-butil-octil)oxi]-2-(sulfoxi)propil]-3,4- di-hidro-isoquinolínio, sal interno.

[00205] Os catalisadores de transferência de oxigênio à base de amina modificada adequados incluem, mas não se limitam a, 1,2,3,4- tetra-hidro-2-metil-1-isoquinolinol, os quais podem ser produzidos de acordo com os procedimentos descritos em "Tetrahedron Letters" (1987), 28(48), 6061-6064. Os catalisadores de transferência de oxigênio à base de óxido de amina modificado adequados incluem, mas não se limitam a, 1-hidróxi-N-oxi-N-[2-(sulfoxi)decil]-1,2,3,4-tetra-hidroisoqui- nolina de sódio.

[00206] Os catalisadores de transferência de oxigênio à base de N- sulfonilimina adequados incluem, mas não se limitam a, 1,1-dióxido de 3-metil-1,2-benzisotiazol, preparado de acordo com o procedimento descrito em Journal of Organic Chemistry (1990), 55(4), 1254-61.

[00207] Os catalisadores de transferência de oxigênio à base de N- fosfonilimina adequados incluem, mas não se limitam a, amida [R-(E)]- N-[(2-cloro-5-nitrofenil)metileno]-P-fenil-P-(2,4,6-trimetilfenil)-fosfínica, que pode ser produzida de acordo com os procedimentos descritos em Journal of the Chemical Society, Chemical Communications (1994), (22), 2569-70.

[00208] Os catalisadores de transferência de oxigênio à base de N- acilimina adequados incluem, mas não se limitam a, -N-(fenilmetileno) acetamida, que pode ser produzida de acordo com os procedimentos descritos em Polish Journal of Chemistry (2003), 77(5), 577-590.

[00209] Os catalisadores de transferência de oxigênio à base de dióxido de tiadiazol adequados incluem, mas não se limitam a, 1,1- dióxido de 3-metil-4-fenil-1,2,5-tiadiazol, que pode ser produzido de acordo com os procedimentos descritos na Patente U.S. N° 5.753.599 (Coluna 9, Exemplo 2).

[00210] Os catalisadores de transferência de oxigênio à base de perfluoroimina adequados incluem, mas não se limitam a, fluoreto de (Z)-2,2,3,3,4,4,4-heptafluoro-N-(nonafluorobutil)butanoimidoíla, que pode ser produzido de acordo com os procedimentos descritos em Te-trahedron Letters (1994), 35(34), 6329-30.

[00211] Os catalisadores de transferência de oxigênio à base de cetona de açúcar cíclico adequados incluem, mas não se limitam a, 1,2:4,5-di-O-isopropilideno-D-eritro-2,3-hexodiuro-2,6-piranose, con forme preparado na patente U.S. n° 6.649.085 (Coluna 12, Exemplo 1).

[00212] De preferência, o catalisador de alvejamento compreende um grupo funcional imínio e/ou carbonila, e é, tipicamente, capaz de formar um grupo funcional oxaziridínio e/ou dioxirano mediante a aceitação de um átomo de oxigênio, especialmente mediante a aceitação de um átomo de oxigênio proveniente de um peroxiácido e/ou seu sal. De preferência, o catalisador de alvejamento compreende um grupo funcional oxaziridínio, e/ou é capaz de formar um grupo funcional oxa- ziridínio, mediante a aceitação de um átomo de oxigênio, especialmente mediante a aceitação de um átomo de oxigênio proveniente de um peroxiácido e/ou seu sal. De preferência, o catalisador de alvejamento compreende um grupo funcional imínio cíclico em que, de preferência, a porção cíclica tem um tamanho de anel de cinco a oito átomos (inclusive o átomo de nitrogênio), de preferência seis átomos. De preferência, o catalisador de alvejamento compreende um grupo funcional arilimínio, de preferência um grupo funcional arilimínio bicíclico, de preferência um grupo funcional 3,4-di-hidro-isoquinolínio. Tipicamente, o grupo funcional imina é um grupo funcional imina quaternária que é, tipicamente, capaz de formar um grupo funcional oxaziridínio quaternário mediante a aceitação de um átomo de oxigênio, especialmente mediante a aceitação de um átomo de oxigênio de um peroxiácido e/ou seu sal. Em outro aspecto, a composição detergente compreende um componente de alvejamento tendo um logPo/w não maior que 0, não maior que -0,5, não maior que -1,0, não maior que -1,5, não maior que -2,0, não maior que -2,5, não maior que -3,0, ou mesmo não maior que -3,5. O método para determinar coeficiente de partição octa- nol/água (logPo/w) é descrito em mais detalhes abaixo.

[00213] Tipicamente, o ingrediente alvejante tem a capacidade de gerar uma espécie alvejante que tem um XSO de 0,01 a cerca de 0,30, de 0,05 a cerca de 0,25, ou mesmo de cerca de 0,10 a 0,20. O método para determinar XSO é descrito em maiores detalhes abaixo. Por exemplo, ingredientes alvejantes que têm uma estrutura de isoquinolí- nio têm a capacidade de gerar uma espécie alvejante que tem uma estrutura de oxaziridínio. Nesse exemplo, o XSO é aquele da espécie alvejante à base de oxaziridínio.

[00214] De preferência, o catalisador de alvejamento tem uma estrutura química correspondente à seguinte fórmula química

em que: n e m são, independentemente, de 0 a 4, de preferência n e m são ambos 0; cada R1 é independentemente selecionado a partir de um radical substituído ou não substituído selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, cicloalquila, arila, arila fundida, anel heterocíclico, anel heterocíclico fundido, radicais nitro, halo, ciano, sulfonato, alcoxila, ceto, carboxílico, e carboalcoxila; e quaisquer dois substituintes vicinais R1 podem combinar para formar uma arila fundida, um carbocíclico fundido ou um anel heterocíclico fundido; cada R2 é, independentemente, selecionado a partir de um radical substituído ou não substituído independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxila, alquila, cicloalquila, alcarila, arila, aralquila, alquilenos, anel heterocíclico, alcoxilas, grupos arilcarbonila, grupos carboxialquila e grupos amida; qualquer R2 pode ser unido com qualquer outro R2 para formar parte de um anel comum; qualquer R2 geminal pode combinar-se para formar uma carbonila; e quaisquer dois R2 podem combinar-se para formar uma porção insaturada fundida substituída ou não substituída; R3 é uma alquila C1 a C20 substituída ou não substituída; R4 é hidrogênio ou a porção Qt-A, em que: Q é um alquile- no ramificado ou não ramificado, t = 0 ou 1 e A é um grupo aniônico selecionado do grupo que consiste em OSO3-, SO3-, CO2-, OCO2-, OPO32-, OPO3H- e OPO2-; R5 é hidrogênio ou a porção -CR11R12-Y-Gb- Yc-[(CR9R10)y-O]k-R8, em que: cada Y é, independentemente, selecionado do grupo que consiste em O, S, N-H, ou N-R8; e cada R8 é, inde-pendentemente, selecionado do grupo que consiste em alquila, arila e heteroarila, sendo as ditas porções substituídas ou não substituídas, e onde as ditas porções substituídas ou não substituídas têm menos de 21 carbonos; cada G é, independentemente, selecionado do grupo que consiste em CO, SO2, SO, PO e PO2; R9 e R10 são independentemente selecionados do grupo formado por alquila H e C1-C4; R11 e R12 são independentemente selecionados do grupo formado por H e alquila, ou quando considerados juntos podem unir-se para formar uma carbonila; b = 0 ou 1; c pode ser igual a 0 ou 1, mas c deve ser 0 se b é 0; y é um número inteiro de 1 a 6; k é um número inteiro de 0 a 20; R6 é H, ou uma porção alquila, arila ou porção heteroarila; sendo tais porções substituídas ou não substituídas; e X, se estiver presente, é um contra- íon de balanceamento de carga adequado, de preferência, X está presente quando R4 é hidrogênio, X adequado, inclui, mas não se limita a: cloreto, brometo, sulfato, metossulfato, sulfonato, p-toluenossulfonato, borotetrafluoreto e fosfato.

[00215] Em uma modalidade da presente invenção, o catalisador de alvejamento tem uma estrutura correspondente à fórmula geral apresentada abaixo:

em que R13 é um grupo alquila ramificado contendo de 3 a 24 átomos de carbono (inclusive os átomos de carbono da ramificação) ou um grupo alquila linear contendo de 1 a 24 átomos de carbono; de preferência R13 é um grupo alquila ramificado contendo de 8 a 18 átomos de carbono ou um grupo alquila linear contendo de 8 a 18 átomos de carbono; de preferência R13 é selecionado do grupo consistindo em 2- propil-heptila, 2-butiloctila, 2-pentilnonila, 2-hexildecila, n-dodecila, n- tetradecila, n-hexadecila, n-octadecila, iso-nonila, iso-decila, isotridecila e iso-pentadecila, de preferência R13 é selecionado do grupo consistindo em 2-butiloctila, 2-pentilnonila, 2-hexildecila, iso-tridecila e iso-pentadecila.

[00216] Preferencialmente o componente de alvejamento compreende uma fonte de perácido em adição ao catalisador de alvejamento, particularmente catalisador de alvejamento orgânico. A fonte de perá- cido pode ser selecionada dentre (a) perácido pré-formado; (b) sal de percarbonato, perborato ou persulfato (fonte de peróxido de hidrogênio) preferencialmente em combinação com um ativador de alvejante; e (c) enzima per-hidrolase e um éster para formar perácido localmente na presença de água em uma etapa de tratamento de material têxtil ou de superfície dura.

[00217] Quando presente, o perácido e/ou ativador de alvejante está geralmente presente na composição em uma quantidade de cerca de 0,1 % a cerca de 60 %, de cerca de 0,5 % a cerca de 40 %, ou mesmo de cerca de 0,6 % a cerca de 10 %, em peso, com base na composição. Um ou mais perácidos hidrofóbicos ou seus precursores podem ser usados em combinação com um ou mais perácidos hidrofí- licos ou seus precursores.

[00218] As quantidades da fonte de peróxido de hidrogênio e de perácido ou ativador de alvejante podem ser selecionadas de modo que a razão molar entre o oxigênio disponível (da fonte de peróxido) e o perácido seja de 1:1 a 35:1 ou mesmo 2:1 a 10:1.

[00219] (6) Catalisadores de alvejamento contendo metal - O com ponente alvejante pode ser fornecido por um complexo de metal catalítico. Um tipo de catalisador de alvejamento contendo metal é um sistema catalisador que contém um cátion de metal de transição com atividade catalítica definida para alvejante, como cátions de cobre, ferro, titânio, rutênio, tungstênio, molibdênio ou manganês, um cátion de metal auxiliar com pouca ou nenhuma atividade catalítica para alvejante, como cátions de zinco ou alumínio, e um sequestrado que tem constantes de estabilidade definidas para os cátions de metal catalíticos e auxiliares, particularmente ácido etilenodiaminotetraacético, ácido eti- lenodiaminotetra(metilenofosfônico), e seus sais solúveis em água. Estes catalisadores são apresentados em U.S. 4.430.243. Os catalisadores preferenciais são descritos em WO09/839406, US6218351 e WO00/012667. São particularmente preferenciais o catalisador de metal de transição ou ligantes para o mesmo que são ligantes N-doado- res polidentados ligados por ponte cruzada.

[00220] Caso se deseje, as composições da presente invenção podem ser catalisadas por meio de um composto de manganês. Estes compostos e teores de uso são bem conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, os catalisadores baseados em manganês apresentados em U.S. 5.576.282.

[00221] Catalisadores de alvejamento à base de cobalto aqui utilizáveis são conhecidos, e são descritos, por exemplo, na patente US 5.597.936; US 5.595.967. Esses catalisadores baseados em cobalto são prontamente preparados por procedimentos conhecidos, como ensinados, por exemplo, na patente US n° 5.597.936 e patente US n° 5.595.967.

[00222] As composições da presente invenção podem, também, incluir de modo estável um complexo de metal de transição de ligantes como bispidonas (U.S. 7.501.389) e/ou ligantes rígidos macropolicícli- cos - abreviados como "MRLs". Como uma questão prática, e não a título de limitação, as composições e processos da presente invenção podem ser ajustados a fim de fornecer aproximadamente pelo menos uma parte por cem milhões da espécie de MRL ativa no meio de lavagem aquoso, e fornecerá tipicamente de cerca de 0,005 ppm a cerca de 25 ppm, de cerca de 0,05 ppm a cerca de 10 ppm, ou mesmo de cerca de 0,1 ppm a cerca de 5 ppm, do MRL no líquido de lavagem.

[00223] Os metais de transição adequados no presente catalisador de alvejante à base de metal de transição incluem, por exemplo, man- ganês, ferro e cromo. Os MRLs adequados incluem 5,12-dietil- 1,5,8,12-tetraazabiciclo[6.6.2]hexadecano.

[00224] Os MRLs de metal de transição adequados são facilmente preparados por procedimentos conhecidos, como os ensinados, por exemplo, U.S. 6.225.464 e WO 00/32601.

[00225] (7) Fotoalvejantes - os fotoalvejantes adequados incluem, por exemplo, ftalocianina de zinco sulfonatada, ftalocianinas de alumínio sulfonatadas, corantes de xanteno e suas misturas. Os componentes de alvejamento preferenciais para uso nas presentes composições da invenção compreendem uma fonte de peróxido de hidrogênio, ati- vador de alvejante e/ou peroxiácido orgânico, opcionalmente gerado localmente pela reação entre a fonte de peróxido de hidrogênio e o ativador de alvejante, em combinação com um catalisador de alveja- mento. Componentes alvejantes preferenciais compreendem catalisadores de alvejante, de preferência catalisadores de alvejante orgânicos, conforme descrito acima.

[00226] Os componentes de alvejamento particularmente preferenciais são os catalisadores de alvejante em particular os catalisadores de alvejante orgânicos.

[00227] As composições da invenção são em particular composições sólidas ou líquidas para tratamento e/ou limpeza. Em um aspecto preferível da invenção, a composição tem uma forma de dose unitária monocompartimentada ou multicompartimentada.

Materiais auxiliares

[00228] Embora não essenciais para os propósitos da presente invenção, os compostos auxiliares ilustrados mais adiante neste documento em uma lista não limitadora são adequados para uso nas composições e nos métodos da presente invenção podem ser desejavelmente incorporados em certas modalidades da invenção, por exemplo, para auxiliar ou intensificar o desempenho de limpeza, para tratamento do substrato a ser limpo, ou para modificar a estética do produto destinado ao consumidor como é o caso com perfumes, colorantes, corantes ou similares. Os teores de qualquer destes compostos auxiliares incorporados em qualquer produto para cuidados com tecidos e da casa são em adição a quaisquer materiais anteriormente mencionados para incorporação. A natureza exata destes componentes adicionais, bem como os níveis de incorporação dos mesmos, dependerão da forma física do produto destinado ao consumidor e da natureza da operação de limpeza na qual o mesmo será usado. Os materiais auxiliares adequados incluem, mas não se limitam a, tensoativos, agentes reforçadores, agentes quelantes, agentes inibidores de transferência de corantes, dispersantes, enzimas, e estabilizadores de enzima, materiais catalíticos, ativadores de alvejante, peróxido de hidrogênio, fontes de peróxido de hidrogênio, perácidos pré-formados, agentes dis- persantes poliméricos, agentes de remoção/antirredeposição de sujeira argilosa, abrilhantadores, supressores de espuma, corantes, corantes de matização, perfumes, sistemas de liberação de perfume, agentes elastificantes de estrutura, amaciantes de tecido, veículos, hidró- tropos, agentes auxiliares de processamento, solventes e/ou pigmentos. Além da descrição abaixo, exemplos adequados desses outros compostos auxiliares, bem como seus níveis de uso, são encontrados nas patentes US n° 5.576.282, n° 6.306.812 B1 e n° 6.326.348 B1, que estão aqui incorporadas, por referência.

[00229] Conforme declarado anteriormente, os ingredientes auxiliares não são essenciais aos produtos destinados ao consumidor dos Requerentes. Portanto, determinadas modalidades dos produtos destinados ao consumidor dos Requerentes não contêm um ou mais dos seguintes materiais auxiliares: tensoativos, agentes reforçadores, agentes quelantes, agentes inibidores de transferência de corantes, dispersantes, enzimas adicionais e estabilizantes de enzimas, materi- ais catalíticos, ativadores de alvejante, peróxido de hidrogênio, fontes de peróxido de hidrogênio, perácido pré-formado, agentes poliméricos dispersantes, agentes antirreposição /remoção de sujeira à base de argila, alvejantes, supressores de espuma, corantes, perfumes, sistemas de liberação de perfume, agentes elastificantes de estrutura, amaciantes de tecidos, veículos, hidrótropos, elementos auxiliares ao processamento, solvente e/ou pigmentos. No entanto, quando um ou mais compostos auxiliares estão presentes, estes podem estar presentes conforme detalhado abaixo:

Agentes de matização para tecido adequados

[00230] A composição pode compreender um agente de matização para tecidos. Os agentes de matização para tecido adequados incluem corantes, conjugados corante-argila, e pigmentos. Os corantes adequados incluem corantes de moléculas pequenas e corantes poliméri- cos. Os corantes de moléculas pequenas adequados incluem aqueles selecionados do grupo que consiste em corantes que se enquadram nas classificações do Índice de Cores ("Colour Index") (C.I.) de Azul Direto, Vermelho Direto, Violeta Direto, Azul Ácido, Vermelho Ácido, Violeta Ácido, Azul Básico, Violeta Básico e Vermelho Básico ou suas misturas.

[00231] Em outro aspecto, os corantes de molécula pequena adequados incluem corantes de molécula pequena selecionados do grupo consistindo nos números do "Colour Index" (Society of Dyers and Colourists, Bradford, Reino Unido) de Violeta Direto 9, Violeta Direto 35, Violeta Direto 48, Violeta Direto 51, Violeta Direto 66, Violeta Direto 99, Azul Direto 1, Azul Direto 71, Azul Direto 80, Azul Direto 279, Vermelho Ácido 17, Vermelho Ácido 73, Vermelho Ácido 88, Vermelho Ácido 150, Violeta Ácido 15, Violeta Ácido 17, Violeta Ácido 24, Violeta Ácido 43, Vermelho Ácido 52, Violeta Ácido 49, Violeta Ácido 50, Azul Ácido 15, Azul Ácido 17, Azul Ácido 25, Azul Ácido 29, Azul Ácido 40, Azul Ácido 45, Azul Ácido 75, Azul Ácido 80, Azul Ácido 83, Azul Ácido 90 e Azul Ácido 113, Preto Ácido 1, Violeta Básico 1, Violeta Básico 3, Violeta Básico 4, Violeta Básico 10, Violeta Básico 35, Azul Básico 3, Azul Básico 16, Azul Básico 22, Azul Básico 47, Azul Básico 66, Azul Básico 75, Azul Básico 159 e suas misturas. Em um outro aspecto, os corantes de moléculas pequenas adequados incluem corantes de moléculas pequenas selecionados do grupo consistindo nos números do Índice de Cores ("Colour Index") (Society of Dyers and Colourists, Bradford, Reino Unido) de Violeta Ácido 17, Violeta Ácido 43, Vermelho Ácido 52, Vermelho Ácido 73, Vermelho Ácido 88, Vermelho Ácido 150, Azul Ácido 25, Azul Ácido 29, Azul Ácido 45, Azul Ácido 113, Preto Ácido 1, Azul Direto 1, Azul Direto 71, Violeta Direto 51 e suas misturas. Em outro aspecto, os corantes de moléculas pequenas adequados incluem aqueles selecionados a partir do grupo que consiste nos números do "Colour Index" (Society of Dyers and Colourists, Bradford, Reino Unido) de Violeta Ácido 17, Azul Direto 71, Violeta Direto 51, Azul Direto 1, Vermelho Ácido 88, Vermelho Ácido 150, Azul Ácido 29, Azul Ácido 113 ou suas misturas.

[00232] Os corantes poliméricos adequados incluem corantes poli- méricos selecionados do grupo consistindo em polímeros contendo cromogênios conjugados (conjugados corante-polímero) e polímeros com cromogênios copolimerizados na cadeia principal do polímero e suas misturas.

[00233] Em outro aspecto, os corantes poliméricos adequados incluem aqueles selecionados do grupo consistindo em colorantes aderentes para tecido disponíveis comercialmente sob o nome de Liqui- tint® (Milliken, Spartanburg, South Carolina, EUA), conjugados corante-polímero formados a partir de pelo menos um corante reativo e um polímero selecionado do grupo consistindo em polímeros compreendendo uma porção selecionada do grupo consistindo em uma porção hidroxila, uma porção amina primária, uma porção amina secundária, uma porção tiol e suas misturas. Em ainda um outro aspecto, os corantes poliméricos adequados incluem corantes poliméricos selecionados do grupo que consiste em Liquitint® (Milliken, Spartanburg, South Carolina, EUA) Violeta CT, carboximetilcelulose (CMC) conjugada com um corante azul reativo, violeta reativo ou vermelho reativo como CMC conjugada com Azul Reativo C.I. 19, vendido por Megazyme, Wicklow, Irlanda sob o nome de produto AZO-CM-CELLULOSE, código de produto S-ACMC, corantes poliméricos de trifenilmetano alcoxilados, corantes poliméricos de tiofeno alcoxilados e suas misturas.

[00234] Os corantes de matização incluem os agentes branqueadores encontrados em WO 08/87497 A1. Estes agentes branqueadores podem ser caracterizados pela seguinte estrutura (I):

na qual R1 e R2 podem ser independentemente selecionados dentre: a) [(CH2CR'HO)x(CH2CR"HO)yH] em que R’ é selecionado do grupo que consiste em H, CH3, CH2O(CH2CH2O)zH, e suas misturas; em que R’ é selecionado do grupo que consiste em H, CH, CH2O(CH2CH2O)zH, e suas misturas; em que x + y < 5; em que y > 1; e em que z = 0 a 5; b) R1 = alquila, arila ou arilalquila e R2 = [(CH2CR'HO)x (CH2CR"HO)yH] em que R’ é selecionado do grupo que consiste em H, CH3, CH2O(CH2CH2O)zH, e suas misturas; em que R’ é selecionado do gru- po que consiste em H, CH, CH2O(CH2CH2O)zH, e suas misturas; em que x + y < 10; em que y > 1; e em que z = 0 a 5; c) R1 = [CH2CH2(OR3)CH2OR4] e R2 = [CH2CH2(O R3)CH2O R4] em que R3 é selecionado do grupo que consiste em H, (CH2CH2O)zH, e suas misturas; e em que z = 0 a 10; em que R4 é selecionado do grupo que consiste em grupos alquila (C1-C16), arila e suas misturas; e em que R1 e R2 podem ser independentemente selecionados do produto de adição de amino de óxido de estireno, éter glicidílico e metílico, éter glicidílico e isobutílico, éter glicidílico e isopropílico, éter glicidílico e t-butílico, éter 2-etil-hexílico e glicidílico e éter glicidílico e hexadecílico, seguida da adição de 1 a 10 unidades de óxido de alqui- leno.

[00235] Um agente branqueador preferencial da presente invenção pode ser caracterizado pela seguinte estrutura (II):

em que R’ é selecionado do grupo que consiste em H, CH3, CH2O (CH2CH2O)zH, e suas misturas; em que R’ é selecionado do grupo que consiste em H, CH, CH2O(CH2CH2O)zH, e suas misturas; em que x + y < 5; em que y > 1; e em que z = 0 a 5.

[00236] Um outro agente branqueador preferencial da presente invenção pode ser caracterizado pela seguinte estrutura (III):

tipicamente compreendendo uma mistura tendo um total de 5 grupos EO. As moléculas preferenciais adequadas são aquelas na Estrutura I tendo os seguintes grupos pendentes em "parte a" acima:

[00237] Outros agentes branqueadores de uso incluem aqueles descritos em USPN 2008 34511 A1 (Unilever). Um agente preferível é "Violeta 13".

[00238] Os conjugados de corante-argila adequados incluem aqueles selecionados do grupo que consiste em pelo menos um corante catiônico/básico e uma argila esmectita, e suas misturas. Em um outro aspecto, os conjugados de corante-argila adequados incluem conjugados de corante-argila selecionados do grupo que consiste em um corante catiônico/básico selecionado do grupo que consiste em Amarelo Básico C.I. 1 até 108, Laranja Básico C.I. 1 até 69, Vermelho Básico C.I. 1 até 118, Violeta Básico C.I. 1 até 51, Azul Básico C.I. 1 até 164, Verde Básico C.I. 1 até 14, Marrom Básico C.I. 1 até 23, Preto Básico C.I. 1 até 11, e uma argila selecionada do grupo que consiste em argila montmorilonita, argila hectorita, argila saponita e suas misturas. Em ainda um outro aspecto, conjugados de corantes e argila adequados incluem conjugados de corantes e argila selecionados do grupo con- sistindo em: Azul Básico de Montmorilonita B7 C.I. 42595 conjugado, Azul Básico de Montmorilonita B9 C.I. 52015 conjugado, Violeta Básico de Montmorilonita V3 C.I. 42555 conjugado, Verde Básico de Mon- tmorilonita G1 C.I. 42040 conjugado, Vermelho Básico de Montmorilo- nita R1 C.I. 45160 conjugado, Preto Básico de Montmorilonita C.I. 2 conjugado, Azul Básico de Hectorita B7 C.I. 42595 conjugado, Azul Básico de Hectorita B9 C.I. 52015 conjugado, Violeta Básico de Hectorita V3 C.I. 42555 conjugado, Verde Básico de Hectorita G1 C.I. 42040 conjugado, Vermelho Básico de Hectorita R1 C.I. 45160 conjugado, Preto Básico de Hectorita C.I. 2 conjugado, Azul Básico de Saponita B7 C.I. 42595 conjugado, Azul Básico de Saponita B9 C.I. 52015 conjugado, Violeta Básico de Saponita V3 C.I. 42555 conjugado, Verde Básico de Saponita G1 C.I. 42040 conjugado, Vermelho Básico de Sa- ponita R1 C.I. 45160 conjugado, Preto Básico de Saponita C.I. 2 conjugado e suas misturas.

[00239] Os pigmentos adequados incluem aqueles selecionados do grupo consistindo em flavantrona, indantrona, indantrona clorada contendo de 1 a 4 átomos de cloro, pirantrona, dicloropirantrona, mono- bromodicloropirantrona, dibromodicloropirantrona, tetrabromopirantro- na, diimida de ácido perileno-3,4,9,10-tetracarboxílico, em que os grupos imida podem ser não substituídos ou substituídos com alquila C1C3 ou uma fenila ou radical heterocíclico, e em que a fenila e os radicais heterocíclicos podem, adicionalmente, transportar substituintes que não conferem solubilidade em água, amidas de ácido antrapirimi- dinocarboxílico, violantrona, isoviolantrona, pigmentos à base de dioxazina, ftalocianina de cobre que pode conter até 2 átomos de cloro por molécula, ftalocianina de policloro-cobre ou ftalocianina de poli- bromocloro-cobre contendo até 14 átomos de bromo por molécula, bem como suas misturas.

[00240] Em outro aspecto, os pigmentos adequados incluem aque- les selecionados do grupo consistindo em Azul Ultramarino (C.I. Pigmento Azul 29), Violeta Ultramarino (C.I. Pigmento Violeta 15) e suas misturas.

[00241] Os agentes de matização de tecido acima mencionados podem ser usados em combinação (qualquer mistura de agentes de matização de tecido pode ser utilizada). Os agentes de matização adequados são descritos com mais detalhe em US 7.208.459 B2. Os teores preferenciais de corante nas composições da invenção são 0,00001 a 0,5 % em peso, ou 0,0001 a 0,25 % em peso.

[00242] A concentração de corantes preferível em água para a etapa de tratamento e/ou de limpeza é de 1 ppb a 5 ppm, preferencialmente 10 ppb ou 20 ppb a 5 ppm. Nas composições preferenciais, a concentração de tensoativo será de 0,2 a 3 g/l.

Encapsulados

[00243] A composição pode compreender um encapsulado. Em um aspecto, é apresentado um encapsulado que compreende um núcleo e uma película que tem uma superfície interna e uma superfície externa, em que a dita película encapsula o dito núcleo.

[00244] Em um aspecto do dito encapsulado, o dito núcleo pode compreender um material selecionado do grupo consistindo em perfumes; abrilhantadores, corantes; repelentes de inseto; silicones; ceras, flavorizantes; vitaminas; agentes amaciantes de tecido; agentes de tratamento de pele, em um aspecto, parafinas; enzimas agentes anti- bacterianos; alvejantes; elementos sensoriais; bem como suas misturas, e a dita película pode compreender um material selecionado do grupo consistindo em polietilenos; poliamidas; poli(álcoois vinílicos), contendo opcionalmente outros comonômeros; poliestirenos; poliiso- prenos; policarbonatos; poliéster; poliacrilatos; plásticos aminados, em um aspecto, o dito plástico aminado pode compreender uma poliureia, poliuretano e/ou poliureauretano, em um aspecto, a dita poliureia pode compreender polioximetilenoureia e/ou formaldeído-melamina; poliole- finas; polissacarídeos, em um aspecto, o dito polissacarídeo pode compreender alginato e/ou quitosana; gelatina; goma-laca; resinas epoxídicas, polímeros vinílicos; compostos inorgânicos insolúveis em água; silicone; e suas misturas.

[00245] Em um aspecto do dito encapsulado, o dito núcleo pode compreender perfume.

[00246] Em um aspecto do dito encapsulado, a dita película pode compreender melamina-formaldeído e/ou melamina-formaldeído reticulado.

[00247] Em um aspecto, encapsulados adequados podem compreender um material de núcleo e uma película, em que a dita película circunda pelo menos parcialmente o dito material de núcleo. Pelo menos 75%, 85% ou mesmo 90% dos ditos encapsulados podem ter uma resistência à fratura de cerca de 0,2 MPa a cerca de 10 MPa, de cerca de 0,4 MPa a cerca de 5 MPa, de cerca de 0,6 MPa a cerca de 3,5 MPa, ou mesmo de cerca de 0,7 MPa a cerca de 3 MPa; e um escoamento do agente de benefício de 0% a cerca de 30%, de 0% a cerca de 20%, ou mesmo de 0% a cerca de 5%.

[00248] Em um aspecto, pelo menos 75%, 85% ou mesmo 90% de ditos encapsulados pode ter um tamanho de partícula de cerca de 1 micrômetros a cerca de 80 micrômetros, cerca de 5 micrômetros a 60 micrômetros, de cerca de 10 micrômetros a cerca de 50 micrômetros, ou mesmo de cerca de 15 micrômetros a cerca de 40 micrômetros.

[00249] Em um aspecto, pelo menos 75%, 85% ou mesmo 90% dos ditos encapsulados podem ter uma espessura de parede de partícula de cerca de 30 nm a cerca de 250 nm, de cerca de 80 nm a cerca de 180 nm, ou mesmo de cerca de 100 nm a cerca de 160 nm.

[00250] Em um aspecto, o dito material nuclear de encapsulados pode compreender um material selecionado do grupo consistindo em uma matéria-prima de perfume e/ou, opcionalmente, um material sele-cionado a partir do grupo que consiste em óleo vegetal, incluindo óleos vegetais puros e/ou mesclados, incluindo óleo de rícino, óleo de coco, óleo de semente de algodão, óleo de uva, colza, óleo de soja, óleo de milho, óleo de babaçu, óleo de linhaça, óleo de açafrão, óleo de oliva, óleo de amendoim, óleo de coco, óleo de caroço de palma, óleo de rícino, óleo de limão e suas misturas; ésteres de óleos vegetais, ésteres, incluindo adipato de dibutila, ftalato de dibutila, adipato de butil- benzila, adipato de benziloctila, fosfato de tricresila, fosfato de trioctila e suas misturas; hidrocarbonetos de cadeia linear ou ramificada, inclusive aqueles hidrocarbonetos de cadeia linear ou ramificada que têm um ponto de ebulição maior que cerca de 80 °C; terfenilas parcialmente hidrogenadas, ftalatos de dialquila, alquilbifenilas, incluindo mo- noisopropilbifenila, naftaleno alquilado, incluindo dipropilnaftaleno, éteres de petróleo, incluindo querosene, óleo mineral e suas misturas; solventes aromáticos, incluindo benzeno, tolueno e suas misturas; óleos de silicone; e suas misturas.

[00251] Em um aspecto, o material de parede dos ditos encapsulados pode compreender uma resina adequada incluindo o produto de reação de um aldeído e uma amina, em que os aldeídos adequados incluem formaldeído. As aminas adequadas incluem melamina, ureia, benzoguanamina, glicolurila, e suas misturas. As melaminas adequadas incluem metilolmelamina, metilolmelamina metilada, iminomelami- na e suas misturas. As ureias adequadas incluem, dimetilolureia, dime- tilolureia metilada, ureia-resorcinol, e suas misturas.

[00252] Em um aspecto, sequestrantes de formaldeído adequados podem ser utilizados com os encapsulados, por exemplo, em uma pasta aquosa em cápsula e/ou adicionados a um produto destinado ao consumidor antes, durante ou depois que os encapsulados forem adicionados a tal produto destinado ao consumidor.

[00253] As cápsulas adequadas podem ser feitas de acordo com os ensinamentos contidos em USPA 2008/0305982 A1; e/ou USPA 2009/0247449 A1. Alternativamente, as cápsulas adequadas podem ser adquiridas junto à Appleton Papers Inc., de Appleton, Wisconsin, EUA.

[00254] Em um aspecto preferível a composição também pode compreender um auxiliar de deposição, preferencialmente consistindo no grupo compreendendo polímeros catiônicos ou não iônicos. Os polímeros adequados incluem amidos catiônicos, hidroxietilcelulose ca- tiônica, polivinilformaldeído, goma de alfarrobeira, mananas, xiloglica- nas, goma de tamarindo, poli(tereftalato de etileno) e polímeros que contêm metacrilato de dimetilaminoetila, opcionalmente com um ou mais monômeros selecionados do grupo compreendendo ácido acrílico e acrilamida.

[00255] Perfumes - Em um aspecto a composição compreende um perfume que compreende uma ou mais matérias-primas de perfume selecionadas do grupo consistindo em 1,1'-oxibis-2-propanol; éster die- tílico de ácido 1,4-ciclo-hexanodicarboxílico; (etoximetoxi)ciclododeca- no; monoacetato de 1,3-nonanodiol; éster 2-propenílico de ácido (3- metilbutoxi)acético; beta-metil-ciclododecanoetanol; 2-metil-3-[(1,7,7- trimetilbiciclo[2.2.1]hept-2-il)oxi]-1-propanol; oxaciclo-hexadecan-2-ona; acetato de alfa-metil-benzenometanol; trans-3-etoxi-1,1,5-trimetilciclo- hexano; acetato de 4-(1,1-dimetiletil)ciclo-hexanol; dodeca-hidro-3a,6,6, 9a-tetrametilnafto[2,1-b]furano; beta-metilbenzenopropanal; beta-metil- 3-(1-metiletil)benzenopropanal; 4-fenil-2-butanona; éster etílico de ácido 2-metilbutanoico; benzaldeído; éster 1-metiletílico de ácido 2-metil- butanoico; di-hidro-5-pentil-2(3H)furanona; (2E)-1-(2,6,6-trimetil-2-ciclo -hexen-1-il)-2-buten-1-ona; dodecanal; undecanal; 2-etil-alfa,alfa-dime- tilbenzenopropanal; decanal; acetato de alfa,alfa-dimetilbenzenoetanol; 2-(fenilmetileno)octanal; éster metílico de ácido 2-[[3-[4-(1,1-dimetiletil) fenil]-2-metilpropilideno]amino]benzoico; 1-(2,6,6-trimetil-1-ciclo-hexe- no-1-il)-3-buteno-2-ona 2-pentilciclopentanona; éster metílico de ácido 3-oxo-2-pentilciclopentanoacético; 4-hidroxi-3-metoxibenzaldeído; 3- etoxi-4-hidroxibenzaldeído; 2-heptilciclopentanona; 1-(4-metilfenil) eta- nona; (3E)-4-(2,6,6-trimetil-1-ciclo-hexen-1-il)-3-buten-2-ona; (3E)-4- (2,6,6-trimetil-2-ciclo-hexen-1-il)-3-buten-2-ona; benzenoetanol; 2H-1- benzopiran-2-ona; 4-metoxibenzaldeído; 10-undecenal; éster fenilmetí- lico de ácido propanoico; beta-metilbenzenopentanol; 1,1-dietoxi-3,7- dimetil-2,6-octadieno; alfa,alfa-dimetilbenzenoetanol; (2E)-1-(2,6,6-tri- metil-1-ciclo-hexen-1-il)-2-buten-1-ona; éster fenilmetílico de ácido acético; éster 2-propenílico de ácido ciclo-hexanopropanoico; éster 2-pro- penílico de ácido hexanoico; 1,2-dimetoxi-4-(2-propenil)benzeno; 1,5- dimetil-biciclo[3.2.1]octan-8-ona-oxima; 4-(4-hidroxi-4-metilpentil)-3- ciclo-hexeno-1-carboxaldeído; 3-buten-2-ol; éster metílico de ácido 2- [[[2,4(ou 3,5)-dimetil-3-ciclo-hexen-1-il]metileno]amino]benzoico; 8-ciclo -hexadecen-1-ona; metil-ionona; 2,6-dimetil-7-octen-2-ol; 2-metoxi-4- (2-propenil)fenol; (2E)-3,7-dimetil-2,6-octadien-1-ol; éster (3Z)-3-hexe- nílico de ácido 2-hidroxi-benzoico; 2-tridecenonitrila; 4-(2,2-dimetil-6- metilenociclo-hexil)-3-metil-3-buten-2-ona; tetra-hidro-4-metil-2-(2-me- til-1-propenil)-2H-pirano; éster 2-propenílico de ácido (2-metilbutoxi) acético; éster 3-metilbutílico de ácido 2-hidroxibenzoico; (Z)-1-(2,6,6- trimetil-1-ciclo-hexen-1-il)-2-buten-1-ona; éster metílico de ácido 2-hexil -3-oxo-ciclopentanocarboxílico; 4-etil-alfa,alfa-dimetil-benzenopropanal; 3-(4-hidroxi-4-metilpentil)-3-ciclo-hexeno-1-carboxaldeído; [3R-(3.alfa., 3a.beta.,7.beta.,8a.alfa.)]-1-(2,3,4,7,8,8a-hexa-hidro-3,6,8,8-tetrametil- 1H-3a,7-metanoazulen-5-il)-etanona; 2-metil-undecanal,

[00256] 6-butil-tetra-hidro-2H-piran-2-ona; 4-(1,1-dimetiletil)-alfa- metil-benzenopropanal; 5-heptildi-hidro-2(3H)-furanona; éster metílico de ácido 2-[(7-hidroxi-3,7-dimetiloctilideno)amino]-benzoico; éster fe- nilmetílico de ácido 2-hidroxi-benzoico; 2-metoxi-naftaleno; 2-hexil-2- ciclopenten-1-ona; 5-hexil-di-hidro-2(3H)-furanona; éster etílico de ácido 3-metil-3-fenil-oxiranocarboxílico; 1,3,3-trimetil-2-oxabiciclo[2.2.2] octano; gama-metil-benzenopentanol; 3,7-dimetil-3-octanol; 3,7-dime- til-2,6-octadienonitrila; 3,7-dimetil-6-octen-1-ol; acetato de terpineol; di- hidro-derivado de 2-metil-6-metileno-7-octen-2-ol; propanoato de 3a,4, 5,6,7,7a-hexa-hidro-4,7-metano-1H-inden-6-ol; acetato de 3-metil-2- buten-1-ol; acetato de (Z)-3-hexen-1-ol; 2-etil-4-(2,2,3-trimetil-3-ciclo- penten-1-il)-2-buten-1-ol; 4-(octa-hidro-4,7-metano-5H-inden-5-ilideno)- butanal; 3-2,4-dimetil-ciclo-hexeno-1-carboxaldeído; 1-(1,2,3,4,5,6,7,8- octa-hidro-2,3,8,8-tetrametil-2- naftalenil)-etanona; éster metílico de ácido 2-hidroxi-benzoico; éster hexílico de ácido 2-hidroxibenzoico; 2- fenoxi-etanol; éster pentílico de ácido 2-hidroxibenzoico; 2,3-hepta- nodiona; 2-hexen-1-ol; 2,6-dimetil-6-octen-2-ol; damascona (alfa, beta, gama ou delta ou suas misturas), acetato de 3a,4,5,6,7,7a-hexa-hidro- 4,7-metano-1H-inden-6-ol; 9-Undecenal; 8-Undecenal; isociclocitral; 1- (1,2,3,5,6,7,8,8a-octa-hidro-2,3,8,8-tetrametil-2-naftalenil)-etanona; 3,5-dimetil-3-ciclo-hexeno-1-carboxaldeído; 2,4-dimetil-3-ciclo-hexeno- 1-carboxaldeído; 3,7-dimetil-1,6-octadien-3-ol; acetato de 3,7-dimetil- 1,6-octadien-3-ol; Lilial (p-t-Bucinal), e 2-[2-(4-metil-3-ciclo-hexen-1- il)propil]-ciclopentanona, 1-metil-4-(1-metiletenil)ciclo-hexeno e suas misturas.

[00257] Em um aspecto a composição pode compreender uma partícula de perfume encapsulada compreendendo quer um composto hidroxilado solúvel em água quer melamina-formaldeído quer po- li(álcool vinílico) modificado. Em um aspecto o encapsulado compreende (a) uma matriz sólida pelo menos parcialmente solúvel em água compreendendo um ou mais compostos hidroxílicos solúveis em água, preferencialmente amido; e (b) um óleo essencial encapsulado pela matriz sólida.

[00258] Em um outro aspecto o perfume pode ser pré-complexado com uma poliamina, preferencialmente uma polietilenoimina de modo a formar uma base de Schiff.

Polímeros

[00259] O produto destinado ao consumidor pode compreender um ou mais polímeros. O exemplos são carboximetilcelulose, poli(vinilpir- rolidona), poli(etilenoglicol), poli(álcool vinílico), poli(vinilpiridina-N- óxido), poli(vinilimidazol), policarboxilatos como poliacrilatos, copolíme- ros de ácido maleico/acrílico e copolímeros de metacrilato de lauri- la/ácido acrílico.

[00260] O produto destinado ao consumidor pode compreender um ou mais polímeros anfifílicos para limpeza como o composto que tem a seguinte estrutura geral: bis((C2H5O)(C2H4O)n)(CH3)-N+-CxH2x-N+- (CH3)-bis((C2H5O)(C2H4O)n), em que n = de 20 a 30, e x = de 3 a 8, ou suas variantes sulfatadas ou sulfonadas.

[00261] O produto destinado ao consumidor pode compreender polímeros anfifílicos para limpeza de graxas\gorduras que têm propriedades hidrofílicas e hidrofóbicas equilibradas de modo que eles possam remover partículas de graxa\gordura de tecidos e superfícies. Modalidades específicas dos polímeros anfifílicos alcoxilados para limpeza de graxas\gorduras da presente invenção compreendem uma estrutura de núcleo e uma pluralidade de grupos alcoxilato ligados àquela estrutura de núcleo. Estes podem compreender polialquilenoiminas alcoxi- ladas, de preferência, que tenham um bloco de poli(óxido de etileno) interno e um bloco de poli(óxido de propileno) externo.

[00262] Os policarboxilatos alcoxilados como aqueles preparados a partir de poliacrilatos são úteis na presente invenção para fornecer um desempenho adicional na remoção de graxas\gorduras. Tais materiais são descritos nos documentos WO 91/08281 e PCT 90/01815. Quimicamente, estes materiais compreendem poliacrilatos que têm uma cadeia lateral de etóxi por cada 7 a 8 unidades de acrilato. As cadeias laterais são da seguinte fórmula -(CH2CH2O)m (CH2)nCH3 em que m é 2 a 3 e n é 6 a 12. As cadeias laterais são ligadas por éster à "cadeia principal" de poliacrilato para fornecer uma estrutura do tipo polímero "em pente". O peso molecular pode variar, mas está tipicamente na faixa de cerca de 2.000 a cerca de 50.000. Tais policarboxilatos alcoxi- lados podem compreender de cerca de 0,05% a cerca de 10% em peso das composições da presente invenção.

[00263] Os tensoativos derivados de isoprenoide da presente invenção, e suas misturas com outros cotensoativos e outros ingredientes auxiliares, são particularmente adequados para serem usados com um copolímero graftizado anfifílico, preferencialmente o copolímero graftizado anfifílico compreende (i) cadeia principal de po- li(etilenoglicol); e (ii) e pelo menos uma porção pendente selecionada a partir de poli(acetato de vinila), poli(álcool vinílico) e suas misturas. Um copolímero graftizado anfílico preferencial é Sokalan HP22, suprido a partir de BASF. Polímeros adequados incluem Copolímeros graftiza- dos aleatórios, de preferência um copolímero de poli(óxido de etileno) graftizado com poli(acetato de vinila) que tem uma cadeia principal de poli(óxido de etileno) e múltiplas cadeias laterais de poli(acetato de vinila). O peso molecular da cadeia principal de poli(óxido de etileno) é preferencialmente de cerca de 6.000 e a razão em peso entre o po- li(óxido de etileno) e o poli(acetato de vinila) é cerca de 40 a 60 e não maior do que 1 ponto de graftização por 50 unidades de óxido de etile- no.

[00264] Polímero de carboxilato - Os produtos destinados ao consumidor da presente invenção, também, podem incluir um ou mais polímeros de carboxilato como um copolímero aleatório de malea- to/acrilato ou homopolímero de poliacrilato. Em um aspecto, o polímero de carboxilato é um homopolímero de poliacrilato que tem um peso molecular de 4.000 Da a 9.000 Da, ou de 6.000 Da a 9.000 Da.

[00265] Polímero para liberação de sujeiras - Os produtos destinados ao consumidor da presente invenção, também, podem incluir um ou mais polímeros para liberação de sujeiras que têm uma estrutura conforme definida por uma das estruturas a seguir (I), (II) ou (III): (I) -[(OCHR1-CHR2)a-O-OC-Ar-CO-]d (II) -[(OCHR3-CHR4)b-O-OC-sAr-CO-]e (III) -[(OCHR5-CHR6)c-OR7]f em que: a, b e c são de 1 a 200; d, e e f são de 1 a 50; Ar é um fenileno 1,4-substituído; sAr é fenileno 1,3-substituído na posição 5 por SO3Me, Me é Li, K, Mg/2, Ca/2, Al/3, amônio, mono-, di-, tri- ou te- traalquilamônio em que os grupos alquila são alquila C1-C18 ou hidroxi- alquila C2-C10 ou suas misturas, R1, R2, R3, R4, R5 e R6 são independentemente selecionados dentre H ou C1-C18 n ou iso-alquila; e R7 é uma alquila linear ou ramificada C1-C18 ou uma alque- nila linear ou ramificada C2-C30, ou um grupo cicloalquila com 5 a 9 átomos de carbono, ou um grupo arila C8-C30, ou um grupo arilalquila C6-C30.

[00266] Os polímeros para liberação de sujeiras adequados são polímeros de poliéster para liberação de sujeiras como polímeros Repel- o-tex, incluindo Repel-o-tex, SF-2 e SRP6 disponíveis junto à Rhodia. Outros polímeros para liberação de sujeiras adequados incluem polímeros Texcare, incluindo Texcare SRA100, SRA300, SRN100, SRN170, SRN240, SRN300 e SRN325 disponíveis junto à Clariant. Outros polímeros para liberação de sujeiras adequados são polímeros Marloquest, como Marloquest SL fornecido por Sasol.

[00267] Polímero celulósico - Os produtos destinados ao consumi- dor da presente invenção também podem incluir um ou mais polímeros celulósicos inclusive aqueles selecionados dentre alquilcelulose, alqui- lalcoxialquilcelulose, carboxialquilcelulose, alquilcarboxialquilcelulose. Em um aspecto, os polímeros celulósicos são selecionados do grupo que compreende carboximetilcelulose, metilcelulose, metil-hidroxietil- celulose, metilcarboximetilcelulose, e misturas disso. Em um aspecto, a carboximetilcelulose tem um grau de substituição de carboximetila de 0,5 a 0,9 e um peso molecular de 100.000 Da a 300.000 Da.

Enzimas

[00268] Os produtos destinados ao consumidor podem compreender uma ou mais enzimas que fornecem benefícios de desempenho de limpeza e/ou de tratamento de tecidos. Exemplos de enzimas adequadas incluem, mas não se limitam a, hemicelulases, peroxidases, proteases, celulases, xilanases, lipases, fosfolipases, esterases, cutinases, pectinases, mananases, pectato liases, queratinases, redutases, oxidases, fenoloxidases, lipoxigenases, ligninases, pululanases, tanases, pentosanases, malanases, β-glicanases, arabinosidases, hialuronidase, condroitinase, lacase e amilases, ou suas misturas. Uma combinação típica é um coquetel de enzimas que pode compreender, por exemplo, uma protease e uma lipase em conjunto com amilase. Quando presentes em um produto destinado ao consumidor, as enzimas adicionais anteriormente mencionadas podem estar presentes em teores na faixa de cerca de 0,00001% a cerca de 2%, de cerca de 0,0001% a cerca de 1% ou mesmo de cerca de 0,001% a cerca de 0,5%, de proteína de enzima em peso do produto destinado ao consumidor.

[00269] Em um aspecto, enzimas preferenciais incluiriam uma protease. As proteases adequadas incluem metaloproteases e proteases de serina, incluindo proteases de serina microbianas neutras ou alcalinas, como subtilisinas (EC 3.4.21.62). As proteases adequadas incluem aquelas de origem animal, vegetal ou microbiana. Em um aspecto, tal protease adequada pode ser de origem microbiana. As proteases adequadas incluem mutantes química ou geneticamente modificados das proteases adequadas supracitadas. Em um aspecto, a protease adequada pode ser uma protease de serina, como uma protease microbiana alcalina e/ou uma protease do tipo tripsina. Os exemplos de proteases neutras ou alcalinas adequadas incluem: (a) subtilisinas (EC 3.4.21.62), incluindo aquelas derivadas de bacilo, como Bacillus lentus, B. alkalophilus, B. subtilis, B. amyloliquefaciens, Bacillus pumilus e Bacillus gibsonii, descritos em US 6.312.936 B1, US 5.679.630, US 4.760.025, US 7.262.042 e WO09/021867. (b) proteases do tipo tripsina ou do tipo quimiotripsina, como tripsina (por exemplo, de origem porcina ou bovina), inclusive a protease de Fusarium descrita em WO 89/06270 e as quimiotripsina proteases derivadas de Cellumonas descritas em WO 05/052161 e WO 05/052146. (c) metaloproteases, incluindo aquelas derivadas de Bacillus amyloliquefaciens descritas no WO 07/044993A2.

[00270] As proteases preferenciais incluem aquelas derivadas de Bacillus gibsonii ou Bacillus Lentus.

[00271] Enzimas protease adequadas comercialmente disponíveis incluem aquelas comercializadas sob os nomes comerciais Alcalase®, Savinase®, Primase®, Durazym®, Polarzyme®, Kannase®, Liqua- nase®, Liquanase Ultra®, Savinase Ultra®, Ovozyme®, Neutrase®, Everlase® e Esperase® por Novozymes A/S (Dinamarca), aquelas vendidas sob o nome comercial de Maxatase®, Maxacal®, Maxapem®, Properase®, Purafect®, Purafect Prime®, Purafect Ox®, FN3®, FN4®, Excellase® e Purafect OXP® por Genencor International, aquelas vendidas sob o nome comercial de Opticlean® e Optimase® por Solvay Enzymes, aquelas disponíveis junto à Henkel/ Kemira, a saber BLAP (sequência mostrada na Figura 29 de US 5.352.604 com as mu-tações a seguir S99D + S101 R + S103A + V104 l +G159S, mais adiante neste documento chamadas de BLAP), BLAP R (BLAP com S3T + V4I + V199M + V205I + L217D), BLAP X (BLAP com S3T + V4I + V205l) e BLAP F49 (BLAP com S3T + V4I + A194P + V199M + V205I + L217D) - todos obtidos Junto à Henkel/Kemira; e KAP (subtilisina de Bacillus alkalophilus com mutações A230V + S256G + S259N) da Kao.

[00272] As alfa-amilases adequadas incluem aquelas de origem bacteriana ou fúngica. Os mutantes química ou geneticamente modificados (variantes) estão incluídos. Uma alfa-amilase alcalina preferencial é derivada de uma cepa de bacilo, como Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subti- lis ou outro Bacillus sp., como Bacillus sp. NCIB 12289, NCIB 12512, NCIB 12513, DSM 9375 (USP 7.153.818) DSM 12368, DSMZ n° 12649, KSM AP1378 (WO 97/00324), KSM K36 ou KSM K38 (EP 1.022.334). As amilases preferenciais incluem: (a) as variantes descritas em WO 94/02597, WO 94/18314, WO96/23874 e WO 97/43424, especialmente as variantes com substi-tuições em uma ou mais das seguintes posições versus a enzima mencionada como SEQ ID No. 2 em WO 96/23874: 15, 23, 105, 106, 124, 128, 133, 154, 156, 181, 188, 190, 197, 202, 208, 209, 243, 264, 304, 305, 391, 408 e 444. (b) as variantes descritas em USP 5.856.164 e WO99/ 23211, WO 96/23873, WO00/60060 e WO 06/002643, especialmente as variantes com uma ou mais substituições nas seguintes posições versus a enzima AA560 mencionada como SEQ ID No. 12 em WO 06/002643: 26, 30, 33, 82, 37, 106, 118, 128, 133, 149, 150, 160, 178, 182, 186, 193, 203, 214, 231, 256, 257, 258, 269, 270, 272, 283, 295, 296, 298, 299, 303, 304, 305, 311, 314, 315, 318, 319, 339, 345, 361, 378, 383, 419, 421, 437, 441, 444, 445, 446, 447, 450, 461, 471, 482, 484, de preferência que também contenham as deleções de D183* e G184*. (c) variantes que apresentam pelo menos 90% de identidade com SEQ ID No. 4 em WO06/002643, a enzima de tipo selvagem obtida de Bacillus SP722, especialmente as variantes com deleção nas posições 183 e 184 e as variantes descritas em WO 00/60060, que está aqui incorporado, a título de referência. (d) variantes que apresentam pelo menos 95% de identidade com a enzima de tipo selvagem obtida de Bacillus sp.707 (SEQ ID n° 7 em US 6.093.562), especialmente aquelas compreendendo uma ou mais dentre as seguintes mutações M202, M208, S255, R172, e/ou M261. De preferência, a dita amilase compreende uma ou mais dentre M202L, M202V, M202S, M202T, M202I, M202Q, M202W, S255N e/ou R172Q. São particularmente preferenciais aquelas que compreendem as mutações M202L ou M202T. (e) variantes descritas em WO 09/149130, preferencialmente aquelas apresentando pelo menos 90% de identidade com SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO:2 em WO 09/149130, a enzima de tipo selvagem de Geobacillus Stearophermophilus ou uma sua versão truncada.

[00273] Alfa-amilases comercialmente disponíveis adequadas incluem DURAMYL®, LIQUEZYME®, TERMAMYL®, TERMAMYL ULTRA®, NATALASE®, SUPRAMYL®, STAINZYME®, STAINZYME PLUS®, FUNGAMYL® e BAN® (Novozymes A/S, Bagsvaerd, Dinamarca), KEMZYM® AT 9000 Biozym Biotech Trading GmbH Wehlis- trasse 27b A-1200 Viena Áustria, RAPIDASE®, PURASTAR®, ENZYSIZE®, OPTISIZE HT PLUS®, POWERASE® e PURASTAR OXAM® (Genencor International Inc., Palo Alto, Califórnia, EUA) e KAM® (Kao, 14-10 Nihonbashi Kayabacho, 1-chome, Chuo-ku Tokyo 103-8210, Japão). Em um aspecto, as amilases adequadas incluem NATALASE®, STAINZYME® e STAINZYME PLUS® e suas misturas.

[00274] Em um aspecto, estas enzimas podem ser selecionadas do grupo consistindo em: lipases, inclusive "lipases de primeiro ciclo" como aquelas descritas na patente US n° 6.939.702 B1 e US PA 2009/0217464. Em um aspecto, a lipase é uma lipase de primeira lavagem, preferencialmente, uma variante da lipase de tipo selvagem de Thermomyces lanuginosus compreendendo uma ou mais das mutações T231R e N233R. A sequência de tipo selvagem consiste nos 269 aminoácidos (aminoácidos de 23 a 291) do número de acesso Swiss- Prot O59952 (derivada de Thermomyces lanuginosus (Humicola lanuginosa)). As lipases preferenciais incluiriam aquelas vendidas sob os nomes comerciais Lipex® e Lipolex®.

[00275] Em um aspecto, outras enzimas preferenciais incluem en- doglicanases derivadas de micróbios, endoglicanases que apresentam atividade de endo-beta-1,4-glicanase (E.C. 3.2.1.4), que inclui um poli- peptídeo bacteriano endógeno a um membro do gênero Bacillus que tem uma sequência com pelo menos 90%, 94%, 97% e mesmo 99% de identidade com a sequência de aminoácidos SEQ ID NO:2 em 7.141.403B2) e suas misturas. As endoglicanases adequadas são vendidas sob os nomes comerciais Celluclean® e Whitezyme® (No- vozymes A/S, Bagsvaerd, Dinamarca).

[00276] Outras enzimas preferenciais incluem pectato-liases vendidas sob os nomes comerciais Pectawash®, Pectaway®, Xpect® e ma- nanases vendidas sob os nomes comerciais Mannaway® (todas disponíveis junto à Novozymes A/S, Bagsvaerd, Dinamarca), e Purabri- te® (Genencor International Inc., Palo Alto, Califórnia, EUA).

[00277] Tensoativos - As composições de acordo com a presente invenção podem compreender um tensoativo ou um sistema tensoati- vo no qual o tensoativo pode ser selecionado dentre tensoativos não iônicos, aniônicos, catiônicos, anfolíticos, zwiteriônicos, tensoativos não iônicos semipolares e suas misturas. Quando presente, o tensoa- tivo está, tipicamente, presente em um teor de cerca de 0,1% a cerca de 60%, de cerca de 1% a cerca de 50%, ou mesmo de cerca de 5% a cerca de 40%, em peso, do produto destinado ao consumidor em questão.

[00278] Os tensoativos detersivos aniônicos adequados incluem tensoativos detersivos à base de sulfato e à base de sulfonato.

[00279] Os tensoativos detersivos à base de sulfonato adequados incluem alquilbenzenossulfonato, em um aspecto, alquilC10-13 benze- nossulfonato. O alquilbenzenossulfonato (LAS) adequado pode ser obtido por sulfonação de alquilbenzeno linear (LAB) comercialmente disponível; O LAB adequado inclui 2-fenil-LAB inferior, como aqueles fornecidos pela Sasol sob a designação comercial Isochem® ou aqueles disponíveis junto à Petresa sob a designação comercial Petrelab®, outros LABs adequados incluem 2-fenil-LAB superior, como aqueles disponíveis junto à Sasol sob a designação comercial Hyblene®. Um tensoativo detersivo aniônico adequado é o alquilbenzenossulfonato que é obtido pelo processo de catálise DETAL, embora outras rotas de síntese, como HF, possam também ser adequadas. Em um aspecto é usado um sal de magnésio de LAS.

[00280] Os tensoativos detersivos à base de sulfato adequados incluem alquilsulfato, em um aspecto, alquilC8-18 sulfato ou, predominantemente, alquilC12sulfato.

[00281] Outro tensoativo detersivo à base de sulfato adequado é alquilsulfato alcoxilado, em um aspecto, alquilsulfato etoxilado, em um aspecto, um alquilC8-18 sulfato alcoxilado, em outro aspecto, um al- quilC8-18 sulfato etoxilado, tipicamente, o alquilsulfato alcoxilado tem um grau médio de alcoxilação de 0,5 a 20, ou de 0,5 a 10, tipicamente, o alquilsulfato alcoxilado é um alquilC8-18 sulfato etoxilado que tem um grau médio de etoxilação de 0,5 a 10, de 0,5 a 7, de 0,5 a 5 ou mesmo de 0,5 a 3.

[00282] O alquilsulfato, alquilsulfato alcoxilado e alquilbenzenossul- fonatos podem ser lineares ou ramificados, substituídos ou não substituídos.

[00283] O tensoativo detersivo pode ser um tensoativo detersivo de cadeia média ramificada, em um aspecto, um tensoativo detersivo aniônico de cadeia média ramificada, em um aspecto, um alquilsulfato de cadeia média ramificada e/ou um alquilbenzenossulfonato de cadeia média ramificada, por exemplo, um alquilsulfato de cadeia média ramificada. Em um aspecto, a ramificações de cadeia média são grupos C1-4, tipicamente, grupos metila e/ou etila.

[00284] Tensoativos detersivos não iônicos adequados são selecionados do grupo consistindo em: etoxilatos de alquila C8-C18, como ten- soativos não iônicos NEODOL® disponíveis junto à Shell, alcoxilatos de alquilC6-C12fenol em que as unidades alcoxilato podem ser unidades oxietileno unidades, oxipropileno ou uma sua mistura; condensados de álcool alquílico C12-C18 e alquilC6-C12fenol com polímeros em bloco de óxido de etileno/óxido de propileno como Pluronic® da BASF; álcoois de cadeia média ramificada C14-C22, alcoxilatos de alquila de cadeia média ramificada C14-C22, tipicamente com um grau médio de alcoxilação de 1 a 30, alquilpolissacarídeos, em um aspecto, alquilpo- liglicosídeos; amidas de ácido graxo poli-hidroxilado, tensoativos à base de álcool poli(oxialquilado) bloqueado com grupo éter, e suas misturas.

[00285] Os tensoativos detersivos não iônicos adequados incluem alquilpoliglicosídeo e/ou um álcool alquílico alcoxilado.

[00286] Em um aspecto, tensoativos detersivos não iônicos incluem álcoois alquílicos alcoxilados, em um aspecto, álcool alquílico C8-18 al- coxilado, por exemplo, um álcool alquílico C8-18 etoxilado, o álcool al- quílico alcoxilado pode ter um grau médio de alcoxilação de 1 a 50, de 1 a 30, de 1 a 20, ou de 1 a 10. Em um aspecto, o álcool alquílico al- coxilado pode ser um álcool alquílico C8-18 etoxilado que tem um grau médio de etoxilação de 1 a 10, de 1 a 7, mais de 1 a 5 ou de 3 a 7. O álcool alquílico alcoxilado pode ser linear ou ramificado, e estar substituído ou não substituído.

[00287] Os tensoativos não iônicos adequados incluem aqueles vendidos sob o nome comercial de Lutensol® junto à BASF.

[00288] Tensoativos detersivos catiônicos adequados incluem compostos de alquilpiridínio, compostos de alquilamônio quaternário, compostos de alquilfosfônio quaternário, compostos de alquilsulfônio ternário e suas misturas.

[00289] Os tensoativos catiônicos detersivos adequados são compostos de amônio quaternário com a seguinte fórmula geral:

[00290] (R)(R1)(R2)(R3)N+ X-

[00291] em que, R é uma porção de alquila ou alquenila C6-18 linear ou ramificada, substituída ou não substituída, R1 e R2 são independentemente selecionados de porções metila ou etila, R3 é uma porção hi- droxila, hidroximetila ou hidroxietila, X é um ânion que proporciona neutralidade de carga; ânions preferenciais incluem: haletos, por exemplo, cloreto; sulfato; e sulfonato. Os tensoativos detersivos catiô- nicos adequados são os cloretos de monoalquilC6-18mono-hidroxietil- dimetilamônio quaternário. Os tensoativos detersivos catiônicos altamente adequados são cloreto de monoalquilC8-10 mono-hidroxietildi- metilamônio quaternário, cloreto de monoalquilC10-12 mono-hidroxietil- dimetilamônio quaternário e cloreto de monoalquilC10 mono-hidroxietil- dimetilamônio quaternário.

[00292] Os tensoativos anfotéricos/zwiteriônicos adequados incluem óxidos de amina e betaínas. Tensoativos aniônicos neutralizados com amina - Os tensoativos aniônicos da presente invenção e os co- tensoativos aniônicos auxiliares, podem existir em uma forma ácida, e a dita forma ácida pode ser neutralizada para formar um sal de tensoa- tivo que é desejável para uso nas presentes composições detergentes. Os agentes típicos para neutralização incluem as bases com contraíon de metal como hidróxidos, por exemplo, NaOH ou KOH. Outros agentes preferenciais para neutralizar os tensoativos aniônicos da presente invenção e os cotensoativos ou tensoativos aniônicos auxiliares em suas formas ácidas incluem amônia, aminas, ou alcanolaminas. As alcanolaminas são preferenciais. Alguns exemplos não limitadores adequados incluindo monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina e outras alcanolaminas lineares ou ramificadas conhecidas na técnica; por exemplo, alcanolaminas altamente preferenciais incluem 2-amino- 1-propanol, 1-aminopropanol, monoisopropanol amina ou 1-amino-3- propanol. A neutralização por amina pode ser feita em uma extensão total ou parcial, por exemplo, parte da mistura de tensoativos aniônicos pode ser neutralizada com sódio ou potássio e parte da mistura do tensoativos aniônicos pode ser neutralizada com aminas ou alcanola- minas.

[00293] Podem ser preferenciais os sistemas tensoativos compreendendo misturas de um ou mais tensoativos aniônicos e em adição um ou mais tensoativos não iônicos opcionalmente com um tensoativo adicional como um tensoativo catiônico. As razões em peso preferenciais entre tensoativo não iônico e tensoativo não iônico são pelo menos 2:1, ou mesmo pelo menos 1:1 a 1:10.

[00294] Builders (agentes reforçadores) - As composições da presente invenção podem compreender um ou mais builders ou sistemas builder. Quando um builder é usado, o produto destinado ao consumidor em questão tipicamente compreenderá pelo menos cerca de 1%, de cerca de 2% a cerca de 60% ou mesmo de cerca de 5% a cerca de 10%, em peso de builder do produto destinado ao consumidor em questão. A composição pode estar, ainda, substancialmente livre de builder; substancialmente livre significa zeólita e/ou fosfato "adicionada (adicionado) de maneira não deliberada". Os builders à base de zeólita típicos incluem zeólita A, zeólita P e zeólita MAP. Um builder à base de fosfato típico é tripolifosfato de sódio.

[00295] Agentes quelantes e inibidores de formação de cristais - As composições da presente invenção podem conter um agente quelante e/ou um inibidor de crescimento de cristal. As moléculas adequadas incluem agentes quelantes de cobre, ferro e/ou manganês e suas misturas. As moléculas adequadas incluem DTPA (ácido dietilenotriami- nopentaacético), HEDP (ácido hidroxietanodifosfônico), DTPMP (ácido dietilenotriaminopenta(metilenofosfônico)), sal dissódico hidratado de ácido 1,2-di-hidroxibenzeno-3,5-dissulfônico, etilenodiamina, dietileno- triamina, ácido etilenodiaminodissuccínico (EDDS), ácido N-hidroxie- tiletilenodiaminotriacético (HEDTA), ácido trietilenotetraamino-hexaa- cético (TTHA), ácido N-hidroxietiliminodiacético (HEIDA), di-hidroxietil- glicina (DHEG), ácido etilenodiaminotetrapropiônico (EDTP), carboxi- metilinulina e ácido 2-fosfonobutano-1,2,4-tricarboxílico (Bayhibit® AM) e seus derivados. Tipicamente o produto destinado ao consumidor pode compreender de cerca de 0,005% a cerca de 15% ou mesmo de cerca de 3,0% a cerca de 10% de agente quelante ou inibidor de crescimento de cristal, em peso, do presente produto destinado ao consumidor.

[00296] Agentes inibidores de transferência de corantes - As composições da presente invenção podem conter também um ou mais agentes inibidores de transferência de corantes. Agentes poliméricos inibidores de transferência de corantes adequados incluem, mas não se limitam a, polímeros de polivinilpirrolidona, polímeros de poli(N- óxido de amina), copolímeros de N-vinilpirrolidona e N-vinilimidazol, poliviniloxazolidonas e polivinilimidazóis, ou suas misturas. Quando presente em um produto destinado ao consumidor em questão, os agentes inibidores de transferência de corante podem estar presentes em níveis de cerca de 0,0001% a cerca de 10%, de cerca de 0,01% a cerca de 5% ou mesmo de cerca de 0,1% a cerca de 3%, em peso, do produto destinado ao consumidor.

[00297] Abrilhantadores - As composições da presente invenção também podem conter componentes adicionais que podem matizar os artigos sendo limpos, como abrilhantadores fluorescentes.

[00298] A composição pode compreender abrilhantador fluorescente C.I. 260 sob forma cristalina-alfa tendo a seguinte estrutura:

[00299] Em um aspecto, o abrilhantador é um abrilhantador solúvel em água fria, como o abrilhantador fluorescente C.I. 260 sob forma cristalina-alfa.

[00300] Em um aspecto, o abrilhantador está predominantemente sob a forma cristalina-alfa, o que significa que tipicamente pelo menos 50%, em peso, pelo menos 75%, em peso, pelo menos 90%, em peso, pelo menos 99%, em peso, ou mesmo substancialmente todo, do abri- lhantador fluorescente C.I. 260 está sob a forma cristalina-alfa.

[00301] O abrilhantador está tipicamente sob a forma de particulado micronizado, que tem um tamanho médio ponderado da partícula principal de 3 a 30 micrômetros, de 3 micrômetros a 20 micrômetros, ou de 3 a 10 micrômetros.

[00302] A composição pode compreender abrilhantador fluorescente C.I. 260 sob forma cristalina-beta, e a razão em peso entre: (i) abri- lhantador fluorescente C.I. 260 sob a forma cristalina-alfa, e (ii) abri- lhantador fluorescente C.I. 260 sob forma cristalina-beta pode ser pelo menos 0,1, ou pelo menos 0,6.

[00303] BE680847 refere-se a um processo para produção de abri- lhantador fluorescente C.I. 260 sob forma alfa-cristalina.

[00304] Os abrilhantadores ópticos comerciais que podem ser úteis na presente invenção podem ser classificados em subgrupos, que incluem, mas não são necessariamente limitados a, derivados de estil- beno, pirazolina, cumarina, ácido carboxílico, metinocianinas, diben- zotiofeno-5,5-dióxido, azóis, heterociclos de 5 e 6 elementos e outros agentes variados. Exemplos destes abrilhantadores são apresentados em "The Production and Application of Fluorescent Brightening Agents", M. Zahradnik, publicado por John Wiley & Sons, New York (1982). Alguns exemplos não-limitadores específicos de abrilhantadores ópticos que são úteis nas presentes composições são aqueles identificados na patente US n° 4.790.856 e na patente US n° 3.646.015.

[00305] Um outro abrilhantador adequado tem a estrutura abaixo:

[00306] Os teores adequados de abrilhantador fluorescente incluem desde teores mais baixos, de cerca de 0,01, de cerca de 0,05, de cerca de 0,1 ou mesmo de cerca de 0,2 %, em peso, até teores mais altos de 0,5 ou mesmo 0,75 %, em peso.

[00307] Em um aspecto o abrilhantador pode ser carregado sobre uma argila para formar uma partícula. Sais de silicato - As composições da presente invenção também podem conter sais de silicato, como silicato de sódio ou silicato de potássio. A composição pode compreender de 0 %, em peso, a menos do que de 10 %, em peso, de sal de silicato, a 9 %, em peso, ou a 8 %, em peso, ou a 7 %, em peso, ou a 6 %, em peso, ou a 5 %, em peso, ou a 4 %, em peso, ou a 3 %, em peso, ou mesmo a 2 %, em peso, e de preferência, acima de 0 %, em peso, ou de 0,5 %, em peso, ou mesmo de 1 %, em peso de sal de silicato. Um sal de silicato adequado é o silicato de sódio.

[00308] Dispersantes - As composições da presente invenção podem, também, conter dispersantes. Os materiais orgânicos solúveis em água adequados incluem os ácidos homopoliméricos ou copolimé- ricos, ou seus sais, em que o ácido policarboxílico contém pelo menos dois radicais carboxila separados um do outro por não mais que dois átomos de carbono.

[00309] Estabilizadores de enzima - As enzimas para uso nas composições podem ser estabilizadas por várias técnicas. As enzimas usadas neste caso podem ser estabilizadas pela presença, nos produtos finais para cuidados com tecidos e da casa, de fontes solúveis de água de íons de cálcio e/ou magnésio que fornecem estes íons às enzimas. No caso de composições aquosas compreendendo protease, um inibidor de protease reversível, como um composto de boro que inclui borato, ácido 4-formilfenilborônico, ácido fenilborônico e seus derivados, ou compostos como formiato de cálcio, formiato de sódio e 1,2-propanodiol podem ser adicionados para adicionalmente otimizar a estabilidade.

[00310] Solventes - Os solventes adequados incluem água e outros solventes, como fluidos lipofílicos. Exemplos de fluidos lipofílicos ade-quados incluem siloxanos, outros silicones, hidrocarbonetos, éteres glicólicos, derivados de glicerina como éteres de glicerina, aminas per-fluoradas, solventes perfluorados e à base de hidrofluoroéter, solventes orgânicos não fluorados de baixa volatilidade, solventes à base de diol, outros solventes ambientalmente benéficos e suas misturas.

Estruturante / Espessantes

[00311] Os líquidos estruturados podem ser internamente estruturados, de modo que a estrutura é formada pelos ingredientes primários (por exemplo, material tensoativo) e/ou externamente estruturada através do fornecimento de uma estrutura de matriz tridimensional que usa os ingredientes secundários (por exemplo, polímeros, argila e/ou material de silicato). A composição pode compreender um estruturante, de preferência, de 0,01 % em peso a 5 % em peso, de 0,1 % em peso a 2,0 % em peso de estruturante. O estruturante é tipicamente selecionado do grupo consistindo em diglicerídeos e triglicerídeos, diestearato de etileno glicol, celulose microcristalina, materiais à base de celulose, celulose microfibrilar, emulsões dilatáveis em álcali hidrofobicamente modificado como Polygel W30 (3VSigma), biopolímeros, goma de xan- tana, goma gelana, e suas misturas. Um estruturante adequado inclui óleo de rícino hidrogenado, e seus derivados não etoxilados. Um es- truturante adequado é apresentado na patente US n° 6.855.680. Tais estruturantes têm um sistema estruturante filamentar que tem um faixa de razões de aspecto. Outros estruturantes adequados e os processos para produzí-los são descritos em WO2010/034736.

Agentes condicionadores

[00312] A composição da presente invenção pode incluir um composto graxo com ponto de fusão alto. O composto graxo com ponto de fusão alto útil na presente invenção tem um ponto de fusão de 25°C ou maior, e é selecionado do grupo que consiste em álcoois graxos, ácidos graxos, derivados de álcool graxo, derivados de ácido graxo, e suas misturas. Esses compostos de baixo ponto de fusão não se destinam a ser incluídos nesta seção. Alguns exemplos não limitadores dos compostos com alto ponto de fusão são encontrados no "International Cosmetic Ingredient Dictionary" (Dicionário Internacional de Ingredientes Cosméticos), quinta edição, 1993, e no "CTFA Cosmetic Ingredient Handbook" (Manual de Ingredientes Cosméticos da CTFA), segunda edição, 1992.

[00313] O composto graxo com ponto de fusão alto está incluído na composição em um teor de cerca de 0,1% a cerca de 40%, de preferência de cerca de 1% a cerca de 30% e, com mais preferência, de cerca de 1,5% a cerca de 16%, em peso da composição, de cerca de 1,5% a cerca de 8% tendo em vista a obtenção de benefícios de condicionamento otimizados, como sensação lisura durante a aplicação aos cabelos molhados, e sensação de maciez e hidratação nos cabelos secos.

[00314] As composições da presente invenção podem conter um polímero catiônico. As concentrações do polímero catiônico na composição se situam tipicamente na faixa de cerca de 0,05% a cerca de 3%, em outra modalidade, de cerca de 0,075% a cerca de 2,0%, e Em ainda outra modalidade, de cerca de 0,1% a cerca de 1,0%. Os polímeros catiônicos adequados terão densidades de carga catiônica de pelo menos cerca de 0,5 meq/gm, em outra modalidade, pelo menos cerca de 0,9 meq/gm, em outra modalidade, pelo menos cerca de 1,2 meq/gm, em ainda outra modalidade, pelo menos cerca de 1,5 meq/gm, mas em uma modalidade, também menos que cerca de 7 meq/gm, e em outra modalidade, menos que cerca de 5 meq/gm, no pH de uso pretendido da composição, em que o pH se situará geralmente na faixa de cerca de pH 3 a cerca de pH 9, Em uma modalidade, entre cerca de pH 4 e cerca de pH 8. Na presente invenção, "densidade de carga catiônica" de um polímero se refere à razão entre o número de cargas positivas no polímero e o peso molecular do polímero. O peso molecular médio destes polímeros catiônicos adequados estará, geralmente, entre cerca de 10.000 e cerca de 10 milhões, em uma modalidade entre cerca de 50.000 e cerca de 5 milhões e em outra modalidade, entre cerca de 100.000 e cerca de 3 milhões.

[00315] Polímeros catiônicos adequados ao uso nas composições da presente invenção incluem porções catiônicas contendo nitrogênio, como amônio quaternário ou porções catiônicas de amino protonado. Quaisquer contraíons aniônicos podem ser utilizados em associação com os polímeros catiônicos, desde que os polímeros permaneçam solúveis em água, na composição ou em uma fase de coacervado da composição, e desde que os contraíons sejam física e quimicamente compatíveis com os componentes essenciais da composição, ou que de outro modo não prejudiquem indevidamente a estabilidade, a estética ou o desempenho do produto. Alguns exemplos não limitadores de tais contraíons incluem haletos (por exemplo, cloreto, fluoreto, brometo, iodeto), sulfato e metilsulfato.

[00316] Alguns exemplos não limitadores de tais polímeros são descritos no "CTFA Cosmetic Ingredient Dictionary", 3a edição, editado por Estrin, Crosley e Haynes, ("The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association", Inc., Washington, D.C., EUA (1982)).

[00317] Outros polímeros catiônicos adequados para uso na composição incluem polímeros de polissacarídeos, derivados de goma guar catiônica, éteres de celulose contendo nitrogênio quaternário, polímeros sintéticos, copolímeros de celulose eterificada, goma guar e amido. Quando utilizados, os polímeros catiônicos da presente invenção são ou solúveis na composição ou solúveis em uma fase de coa- cervado complexo na composição, formada pelo polímero catiônico e pelo componente aniônico, anfotérico e/ou zwiteriônico descrito acima. Os coacervados complexos do polímero catiônico podem, também, ser formados com outros materiais carregados na composição.

[00318] Os polímeros catiônicos adequados são descritos nas patentes US n°s 3.962.418; 3.958.581; e na publicação n° US 2007/ 0207109A1, que estão todas.

[00319] A composição da presente invenção pode incluir um polí- mero não iônico como um agente condicionador. Polialquileno glicois com um peso molecular de mais que cerca de 1.000 são úteis na presente invenção. São úteis aqueles que têm a seguinte fórmula geral:

onde R95 é selecionado a partir do grupo consistindo em H, metila e suas misturas. Agentes condicionadores e, em particular, silicones, podem estar incluídos na composição. Os agentes condicionadores úteis nas composições da presente invenção tipicamente contém um líquido insolúvel em água, dispersível em água e não-volátil, que forma partículas líquidas emulsificadas. Agentes condicionadores adequados ao uso na composição são aqueles caracterizados geralmente como silicones (por exemplo, óleos de silicone, silicones catiônicos, gomas de silicone, silicones de alta refração e resinas de silicone), óleos condicionadores orgânicos (por exemplo, óleos de hidrocarboneto, poliole- finas e ésteres graxos) ou suas combinações, ou aqueles agentes condicionadores que de outro modo formam partículas líquidas, dispersas na matriz de tensoativo aquoso da presente invenção. Tais agentes condicionadores devem ser física e quimicamente compatíveis com os componentes essenciais da composição e não devem, de outro modo, prejudicar indevidamente a estabilidade, a estética ou o desempenho do produto.

[00320] A concentração do agente condicionador na composição deve ser suficiente para fornecer os benefícios de condicionamento desejados. Tal concentração pode variar conforme o agente condicionador, o desempenho de condicionamento desejado, o tamanho médio das partículas do agente condicionador, o tipo e a concentração de outros componentes, e outros fatores similares.

[00321] A concentração do agente de condicionamento à base de silicone situa-se, tipicamente, na faixa de cerca de 0,01% a cerca de 10%. Alguns exemplos não limitadores de agentes condicionadores à base de silicone adequados, e de agentes de suspensão opcionais para o silicone, são descritos na Renovação de Patente U.S. n° 34.584 e nas patentes U.S. n°s 5.104.646; 5.106.609; 4.152.416; 2.826.551; 3.964.500; 4.364.837; 6.607.717; 6.482.969; 5.807.956; 5.981.681; 6.207.782; 7.465.439; 7.041.767; 7.217.777; nos pedidos de patente US n°s 2007/0286837A1; 2005/0048549A1; 2007/0041929A1; em patente britânica n° 849.433; em patente alemã n° DE 10036533, estando todos esses documentos aqui incorporados, a título de referência; "Chemistry and Technology of Silicones", New York, EUA: Academic Press (1968); "General Electric Silicone Rubber Product Data Sheets" (Fichas Técnicas de Produtos de Borracha de Silicone da General Electric") SE 30, SE 33, SE 54 e SE 76; Silicon Compounds, Petrarch Systems, Inc. (1984); e na "Encyclopedia of Polymer Science and Engineering", vol. 15, 2a edição, páginas 204 a 308, John Wiley & Sons, Inc. (1989).

[00322] As composições da presente invenção também podem compreender de cerca de 0,05% a cerca de 3% de pelo menos um óleo condicionador orgânico como o agente condicionador, quer sozinho quer em combinação com outros agentes condicionadores, como os silicones (descritos na presente invenção). Óleos condicionadores adequados incluem óleos de hidrocarboneto, poliolefinas e ésteres graxos. São também adequados ao uso nas composições da presente invenção os agentes condicionadores descritos pela Procter & Gamble Company nas Patentes U.S. n°s 5.674.478 e 5.750.122. Também são adequados para uso na presente invenção os agentes condicionadores descritos nas patentes US n°s 4.529.586, 4.507.280, 4.663.158, 4.197.865, 4.217.914, 4.381.919 e 4.422.853.

[00323] Higiene e mau cheiro - As composições da presente invenção também podem compreender um ou mais dentre ricinoleato de zinco, timol, sais de amônio quaternário como Bardac®, polietilenoimi- nas (como Lupasol® da BASF) e seus complexos de zinco, prata e compostos de prata, especificamente aqueles planejados para lentamente liberar Ag+ ou dispersões de nanoprata.

[00324] Probióticos - As composições podem compreender probió- ticos como aqueles descritos em WO2009/043709.

[00325] Reforçadores de espuma - Se alta formação de espuma é desejada, reforçadores de espuma como as alcanolamidas C10-C16 ou alquilC10-C14sulfatos podem ser incorporados nas composições, tipicamente em teores de 1% a 10%. As monoetanolamidas e dietanola- midas C10-C14 ilustram uma classe típica de tais reforçadores de espuma. Também é vantajoso o uso destes reforçadores de espuma com tensoativos auxiliares de alta formação de espuma como os óxidos de amina, betaínas e sultaínas acima mencionadas. Se desejados, sais de cálcio e/ou de magnésio solúveis em água como MgCl2CaCl2 MgSO4, CaSO4, e similares, podem ser adicionados em teores de, tipicamente, 0,1% a 2%, para fornecer espuma adicional e para intensificar o desempenho de remoção de graxas\gorduras.

[00326] Supressores de espuma - Compostos para reduzir ou suprimir a formação de espuma podem ser incorporados nas composições da presente invenção. A supressão de espuma pode ser de importância especial no denominado "processo de limpeza em alta concentração" como descrito nas patentes US n°s 4.489.455 e 4.489.574, e em máquinas de lavar de eixo horizontal (de carregamento frontal).

[00327] Uma ampla variedade de materiais pode ser usada como supressores de espuma, e supressores de espuma são bem conhecidos por aqueles versados na técnica. Consulte, por exemplo, "Kirk Othmer Enciclopedia of Chemical Technology", Terceira Edição, Volume 7, páginas 430 a 447 (John Wiley & Sons, Inc., 1979). Exemplos de supressores de espuma incluem ácido graxo monocarboxílico e seus sais solúveis, hidrocarbonetos de alto peso molecular, como pa- rafina, ésteres de ácido graxo (por exemplo, triglicerídeos de ácido graxo), ésteres de ácido graxo de álcoois monovalentes, cetonas alifá- ticas C18-C40 (por exemplo, estearona), aminotriazinas N-alquiladas, hidrocarbonetos cerosos, de preferência tendo um ponto de fusão abaixo de cerca de 100°C, supressores de espuma à base de silicone, e álcoois secundários. Os supressores de espumas são descritos em patentes US n°s 2.954.347; 4.265.779; 4.265.779; 3.455.839; 3.933.672; 4.652.392; 4.978.471; 4.983.316; 5.288.431; 4.639.489; 4.749.740; e 4.798.679; 4.075.118; pedido de patente europeu n° 89307851.9; EP 150.872; e DOS 2.124.526.

[00328] Para quaisquer composições detergentes a serem usadas em máquinas de lavar roupas automáticas, as espumas não devem ser formadas até o ponto em que transbordam da máquina de lavar. Os supressores de espuma, quando utilizados, estão preferencialmente presentes em uma "quantidade de supressão de espuma". Por "quantidade de supressão de espuma" entende-se que o formulador da composição pode selecionar uma quantidade deste agente controlador de espuma que controlará de maneira suficiente a espuma para resultar em um detergente para lavagem de roupas de baixa formação de espuma para uso em máquinas de lavar roupas automáticas.

[00329] As composições no presente documento geralmente com-preenderão de 0% a cerca de 10% de supressor de espuma. Quando utilizados como supressores de espuma, os ácidos graxos monocar- boxílicos e seus sais estarão tipicamente presentes em quantidades até cerca de 5% em peso da composição detergente. De preferência, de cerca de 0,5% a cerca de 3% de supressor de espuma à base de monocarboxilato graxo é utilizado. Os supressores de espuma à base de silicone são tipicamente utilizados em quantidades até cerca de 2,0% em peso da composição detergente, embora quantidades maiores possam ser usadas. Os supressores de espuma à base de fosfato de monoestearila são geralmente utilizados em proporções na faixa de cerca de 0,1% a cerca de 2% em peso da composição. Os supressores de espuma à base de hidrocarboneto são tipicamente utilizados em proporções na faixa de cerca de 0,01% a cerca de 5,0%, embora níveis mais elevados possam ser usados. Os supressores de espuma à base de álcool são tipicamente usados em 0,2% a 3% em peso das composições finalizadas.

[00330] Filme solúvel em água - As composições da presente invenção também podem estar encapsuladas dentro de um filme solúvel em água. Materiais de filme preferenciais são de preferência materiais poliméricos. O material de filme, pode, por exemplo, ser obtido mediante vazamento, moldagem por sopro, extrusão ou extrusão por sopro do material polimérico, conforme conhecido na técnica.

[00331] Os polímeros, copolímeros ou seus derivados adequados para o uso como material para como bolsas são selecionados dentre poli(álcoois vinílicos), polivinilpirrolidona, poli(óxidos de alquileno), acri- lamida, ácido acrílico, celulose, éteres de celulose, ésteres de celulose, amidas de celulose, poli(acetatos de vinila), ácidos policarboxílicos e sais, poliaminoácidos ou peptídeos, poliamidas, poliacrilamida, copo- límeros de ácidos maleico/acrílico, polissacarídeos incluindo amido e gelatina, gomas naturais como xantana e carragena. Com mais preferência, os polímeros são selecionados de poliacrilatos e copolímeros de acrilato solúveis em água, metilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, dextrina, etilcelulose, hidroxietilcelulose, hidroxipropilmetilcelu- lose, maltodextrina, polimetacrilatos e, com a máxima preferência, selecionados dentre poli(álcoois vinílicos), copolímeros de poli(álcool vi- nílico) e hidroxipropilmetilcelulose (HPMC), bem como suas combinações. De preferência, o teor de polímero no material da bolsa, por exemplo, um polímero de PVA, é de pelo menos 60%. O polímero pode ter qualquer peso molecular ponderal médio, de preferência, de cerca de 1.000 a 1.000.000, com mais preferência de cerca de 10.000 a 300.000, com mais preferência ainda de cerca de 20.000 a 150.000. As misturas dos polímeros podem, também, ser usadas como o material de bolsa.

[00332] Naturalmente, diferentes materiais de filme e/ou filmes de diferentes espessuras podem ser utilizados na produção dos compar-timentos da presente invenção. Um benefício da seleção de diferentes filmes é tal que os compartimentos resultantes podem apresentar diferentes características de solubilidade ou liberação.

[00333] Materiais de filme mais preferidos são filmes de PVA conhecidos sob a designação comercial de referência MonoSol M8630, M8900, H8779 (conforme descrito no pedido copendente do requerente ref. 44528 e 11599) e os descritos na U.S. 6.166.117 e U.S. 6.787.512 e filmes de PVA de características de solubilidade e de de- formabilidade correspondentes.

[00334] O material de filme da presente invenção pode também compreender um ou mais ingredientes aditivos. Por exemplo, pode ser benéfico adicionar plastificantes, por exemplo, glicerol, etileno glicol, dietileno glicol, propileno glicol, sorbitol e suas misturas. Outros aditivos incluem aditivos detergentes funcionais para serem aplicados à água de lavagem, por exemplo, dispersantes poliméricos orgânicos, etc.

Processos de preparação das composições

[00335] As composições da presente invenção podem ser formuladas em qualquer forma adequada e preparadas por qualquer processo escolhido pelo formulador, cujos exemplos não limitadores são descritos nos exemplos dos requerentes e em U.S. 4.990.280; U.S. 20030087791A1; U.S. 20030087790A1; U.S. 20050003983A1; U.S. 20040048764A1; U.S. 4.762.636; U.S. 6.291.412; U.S. 20050227891A1; EP 1070115A2; U.S. 5.879.584; U.S. 5.691.297; U.S. 5.574.005; U.S. 5.569.645; U.S. 5.565.422; U.S. 5.516.448; U.S. 5.489.392; U.S. 5.486.303 todas as quais são aqui incorporadas a título de referência. As composições da invenção ou preparadas de acordo com a invenção compreendem composição para limpeza e/ou tratamento que incluem, mas não se limitam, produtos para tratamento de tecidos, superfícies duras e qualquer outras superfícies na área de cuidados com tecidos e da casa, incluindo: cuidados com o ar, incluindo desodoriza- dores de ambientes e sistemas de liberação de aroma, cuidados com o automóvel, lavagem de louça, condicionamento de tecidos (incluindo amaciamento e/ou renovação), detergência para lavagem de roupas, cuidados e/ou aditivos para lavagem e enxágue de roupas, limpeza e/ou tratamento de superfícies duras incluindo limpadores de piso e vaso sanitário, agentes de lavagem sob forma granulada ou em pó, para múltiplas finalidades ou para "tarefas pesadas", especialmente detergentes para limpeza; agentes de lavagem para múltiplas finalidades sob a forma de líquido, gel ou pasta, especialmente os tipos líquidos chamados "para tarefas pesadas"; detergentes líquidos para tecidos delicados; agentes para lavagem manual de pratos ou agentes para lavagem de pratos para tarefas leves, especialmente aqueles do tipo altamente espumante; agentes para lavagem de pratos à máquina, incluindo os vários tipos em tablete, granulares, líquidos e de auxílio ao enxágue para uso doméstico e institucional. xampus para carros ou tapetes, limpadores para banheiro, incluindo limpadores de vaso sanitário; bem como compostos auxiliares de limpeza como aditivos alvejantes e "bastão removedor de manchas" ou tipos para pré-tratamento, produtos de substrato carregado como folhas para adição na secagem à máquina. São preferenciais as composições e os métodos para limpar e/ou tratar materiais têxteis e/ou superfícies duras, com a máxima preferência materiais têxteis. As composições são preferencialmente composições usadas em uma etapa de pré-tratamento ou etapa de lavagem principal de um processo de lavagem, com a máxima preferência para uso em etapa de lavagem de materiais têxteis.

[00336] Para uso na presente invenção, o termo "composição de tratamento e/ou limpeza de tecido e/ou de superfícies duras" é um subcontjunto de composições para limpeza e tratamento que inclui, a não ser que indicado de outra forma, agentes de lavagem sob forma granulada ou em pó, para múltiplas finalidades ou para "tarefas pesadas", especialmente detergentes para limpeza; agentes de lavagem para múltiplas finalidades sob a forma de líquido, gel ou pasta, especialmente os tipos líquidos chamados "para tarefas pesadas"; detergentes líquidos para tecidos delicados; agentes para lavagem manual de pratos ou agentes para lavagem de pratos para tarefas leves, especialmente aqueles do tipo altamente espumante; agentes para lavagem de pratos à máquina, incluindo os vários tipos em tabletes, granulares, líquidos e de auxílio ao enxágue para uso doméstico e institucional; agentes líquidos de limpeza e desinfecção, xampus para carros ou tapetes, limpadores para banheiro incluindo limpadores de vaso sanitário; produtos para condicionamento de tecidos incluindo amaciante e/ou refrescante que podem estar sob a forma líquida, sólida e/ou folha de secagem; bem como compostos auxiliares de limpeza como aditivos alvejantes e "bastão removedor de manchas" ou tipos para pré- tratamento, produtos de substrato carregado como folhas para adição na secagem à máquina. Todos os produtos desse tipo que forem aplicáveis podem estar sob forma convencional, concentrada ou mesmo altamente concentrada, mesmo até o ponto em que esses produtos possam, em certos aspectos, ser não-aquosos.

Método de uso

[00337] A presente invenção inclui um método limpar e/ou tratar um material têxtil ou uma superfície dura ou outra superfície em cuidados com tecidos ou da casa. Em um aspecto preferencial da invenção, o método compreende a etapa de contatar a superfície a ser tratada em uma etapa de pré-tratamento ou etapa de lavagem principal de um processo de lavagem, com a máxima preferência para uso em uma etapa de lavagem de material têxtil. Em uma modalidade da invenção a variante de lipase e os componentes de alvejamento são adicionados no método para limpar e/ou tratar a superfície. Por exemplo, em um método preferencial pode haver etapa de pré-tratamento de alve- jamento na qual o componente de alvejamento pode ser contatado com a superfície em uma etapa de pré-tratamento, e a superfície pré- tratada na presença do componente de alvejamento é então contatada em uma segunda etapa com a variante de lipase. Alternativamente a variante de lipase pode ser contatada com a superfície antes da adição superior do componente de alvejamento.

[00338] Para uso na presente invenção, a lavagem inclui, mas não se limita a, esfregamento e agitação mecânica. A secagem destas superfícies ou tecidos pode ser realizada por qualquer um dos meios comuns utilizados em instalações domésticas ou industriais. As composições para limpeza da presente invenção são idealmente adequadas em aplicações de lavagem de roupas. Consequentemente, a presente invenção inclui um método de lavagem de um tecido. O método inclui as etapas de colocar um tecido a ser lavado em contato com a dita solução de limpeza para lavagem de roupas contendo pelo menos uma modalidade da composição para limpeza dos requerentes, aditivo de limpeza ou sua mistura. O tecido pode compreender praticamente qualquer tecido que possa ser lavado sob condições normais de uso doméstico ou institucional. A solução tem, de preferência um pH na faixa de cerca de 8 a cerca de 10,5. As composições podem ser usadas em concentrações de cerca de 500 ppm a cerca de 15.000 ppm em solução. As temperaturas da água situam-se, tipicamente, na faixa de cerca de 5 °C a cerca de 90 °C. A razão entre a água e o tecido é, tipicamente, de cerca de 1:1 a cerca de 30:1.

[00339] A presente invenção é adicionalmente descrita pelos exemplos a seguir que não devem ser considerados como sendo limitadores do escopo da invenção.

Exemplos Exemplo 1: Teste de esforço mecânico automático para lavagem de roupas

[00340] Com o propósito de avaliar a estabilidade à degradação oxidativa de uma variante de lipase, é determinado o valor para Desempenho Relativo ("Relative Performance") (RPwash): desempenho de lavagem (P) da variante de lipase da invenção contra a lipase de SEQ ID NO:1 ou RP = P(variante de lipase da invenção) / P(lipase de SEQ ID NO:1). O desempenho de lavagem é determinado pela realização de experimentos lavagem de roupas, em lavanderia, com o uso do teste de esforço mecânico automático (AMSA, "Automatic Mechanical Stress Assay"). Com o AMSA, pode ser examinado o desempenho de lavagem de uma grande quantidade de soluções detergentes contendo lipase de volume pequeno. A placa para AMSA tem numerosas fendas para as soluções de teste e uma tampa que comprime firmemente o material têxtil tingido contra todas as aberturas de fendas. Durante o tempo de lavagem, a placa, soluções de teste, os materiais têxteis e a tampa são vigorosamente agitados para colocar a solução de teste em contato com o tecido e aplicar esforço mecânico de maneira regular, periódica, oscilante. Para uma descrição adicional consulte WO02/42740, especialmente o parágrafo "Modalidades de métodos especiais" nas páginas 23 a 24.

[00341] Os experimentos de lavagem de roupas são conduzidos sob condições experimentais especificadas abaixo:

[00342] Detergente modelo e materiais de teste foram os seguintes:

• catalisador de alvejamento tem a estrutura química que corresponde à fórmula química:

na qual R13 é 2-butiloctila,

[00343] A dureza da água é ajustada para 18 °dH pela adição de CaCl2, MgCl2, e NaHCO3 (Ca2+:Mg2+ = 4:1:7.5) no sistema de teste. Após a lavagem os materiais têxteis são enxaguados em água de torneira corrente e secos durante 5 minutos a 85°C em uma cabina de secagem.

[00344] O desempenho de lavagem é medido como a brilho da cor do material têxtil lavado. O brilho também pode ser expresso como a intensidade da luz refletida da amostra quando iluminada com luz branca. Quando a amostra é corada, a intensidade da luz refletida é mais baixa que aquela de uma amostra limpa. Portanto, a intensidade da luz refletida pode ser usada para medir o desempenho de lavagem.

[00345] Medições de cor são feitas com um escâner de base plana profissional (Kodak iQsmart, Kodak, Midtager 29, DK-2605 Br0ndby, Dinamarca), que é usado para captura de uma imagem do material têxtil lavado.

[00346] Para extrair um valor para a intensidade de luz das imagens escaneadas, valores de pixel de 24 bits da imagem são convertidos em valores para vermelho, verde e azul (RGB ou em inglês, Red, Green, Blue). O valor da intensidade (Int) é calculado mediante a adição dos valores RGB como vetores e, então, tomando-se o comprimento do vetor resultante:

[00347] O desempenho de lavagem (P) de uma variante de lipase é calculado de acordo coma seguinte fórmula: P = ΔInt = Int(v) - Int(r), na qual Int(v) é o valor de intensidade de luz da superfície do material têxtil lavada com a variante de lipase, e Int(r) é o valor de intensidade de luz da superfície do material têxtil lavada sem a variante de lipase.

[00348] Cálculo da pontuação de desempenho relativo (RPwash): Uma pontuação para o desempenho relativo é dada como o resultado de lavagem completa obtido de acordo com a definição:

[00349] Pontuações de desempenho relativo (RPwash) dão o desempenho (P) da variante de lipase invenção contra a lipase convencional: RP = P(variante de lipase da invenção) / P(lipase convencional). Considera-se que uma formulação de lipase apresenta desempenho de lavagem otimizado, se ela desempenha melhor que a lipase convencional. Exemplo 2: Variantes G91 com desempenho otimizado na presença de catalisadores de alvejante

Exemplo 3: Variantes T37 com desempenho otimizado na presença de catalisadores de alvejante

Exemplo 4: Variantes N39 com desempenho otimizado na presença de catalisadores de alvejante

Exemplo 5: Variantes com duas ou mais mutações e com desempenho otimizado na presença de catalisadores de alvejante

Exemplos de Composição 1 a 6

[00350] Composições detergentes granulares destinadas à lavagem de roupa manual ou para máquinas de lavar automáticas com carregamento superior.

1 Copolímero graftizado aleatório é um copolímero de poli(óxido de etileno) graftizado com poli(acetato de vinila) que tem uma cadeia principal de poli(óxido de etileno) e múltiplas cadeias laterais de poli(acetato de vinila). O peso molecular da cadeia principal de poli(óxido de etileno) é cerca de 6.000 e a razão entre o peso do poli(óxido de etileno) e o peso do poli(acetato de vinila) é cerca de 40 a 60 e não mais que 1 ponto de graftização por 50 unidades de óxido de etileno.

Exemplos de Composição 7 a 12

[00351] Composições detergentes granulares para lavagem de roupas, produzidas para máquinas de lavar automáticas com carregamento frontal.

[00352] Qualquer uma das composições acima é usada para lavar tecidos em uma concentração de 7.000 a 10.000 ppm em água, 20 a 90°C, e uma razão em peso de água:pano de 5:1. O pH típico é de cerca de 10. Os tecidos são então submetidos à secagem. Em um aspecto, os tecidos são ativamente submetidos à secagem com o uso um secador. Em um aspecto, os tecidos são submetidos ativamente à secagem com o uso um ferro de passar. Em um outro aspecto, permite-se meramente deixar os tecidos secarem em uma corda, expostos ao ar e opcionalmente à luz solar. Exemplos de Composições 13 a18 Composições detergentes líquidas para lavagem de roupas para tarefas pesadas

Exemplos de Composição 19 a 31 - Composições em dose unitária

[00353] Estas formulações são detergentes em dose unitária para lavagem de roupas. Tais formulações em dose unitária podem com-preender um ou múltiplos compartimentos.

1 Polietilenoimina (peso molecular = 600) com 20 grupos etoxilato por -NH.

Matérias-primas e notas para os Exemplos de Composições 1 a 23

[00354] Alquilbenzenossulfonato linear com um comprimento de cadeia de carbono alifático médio de C11-C12, disponível junto à Stepan, de Northfield, Illinois, EUA

[00355] Cloreto de C12-14dimetil-hidroxietilamônio, disponível junto à Clariant GmbH, Sulzbach, Alemanha

[00356] AE3S é alquilC12-15 sulfato etoxilado (3), disponível junto à Stepan, Northfield, Illinois, EUA

[00357] AE7 é etoxilato de álcool C12-15, com um grau médio de eto- xilação de 7, disponível junto à Huntsman, Salt Lake City, Utah, EUA

[00358] AE9 é etoxilato de álcool C12-13, com um grau médio de eto- xilação de 9, disponível junto à Huntsman, Salt Lake City, Utah, EUA

[00359] HSAS é um alquilsulfato primário de cadeia média com comprimento de cadeia de carbonos de cerca de 16-17

[00360] Tripolifosfato de sódio, disponível junto à Rhodia, Paris, França

[00361] Zeólita A, disponível junto à Industrial Zeolite (Reino Unido) Ltd, Grays, Essex, Reino Unido

[00362] Silicato 1.6R, disponível junto à Koma, Nestemica, República Checa

[00363] Carbonato de sódio, disponível junto à Solvay, Houston, Texas, EUA

[00364] Poliacrilato com peso molecular de 4.500, disponível junto à BASF, Ludwigshafen, Alemanha

[00365] Carboximetilcelulose é Finnfix® V disponível junto à CP Kelco, Arnhem, Holanda

[00366] Os quelantes adequados são, por exemplo, ácido dietileno- tetraaminopentaacético (DTPA) disponível junto à Dow Chemical, Mi-dland, Michigan, EUA ou Hidroxietanodifosfonato (HEDP) disponível junto à Solutia, St Louis, Missouri, EUA

[00367] Savinase®, Natalase®, Stainzyme®, Lipex®, Celluclean™, Mannaway® e Whitezyme® são todos produtos da Novozymes, Bagsvaerd, Dinamarca.

[00368] Proteases podem ser fornecidas por Genencor International, Palo Alto, California, EUA (por exemplo Purafect Prime®) ou por No- vozymes, Bagsvaerd, Dinamarca (por exemplo Liquanase®, Coro- nase®).

[00369] Abrilhantador fluorescente 1 é Tinopal® AMS, Abrilhantador fluorescente 2 é Tinopal® CBS-X, Ftalocianina de zinco sulfonatada e Violeta Direto 9 é Pergasol® Violet BN-Z todos disponíveis junto à Ci- ba Specialty Chemicals, Basel, Suíça

[00370] Percarbonato de sódio, disponível junto à Solvay, Houston, Texas, EUA

[00371] Perborato de sódio, disponível junto à Degussa, Hanau, Alemanha

[00372] NOBS é nonanoiloxibenzenossulfonato de sódio, disponível junto à Future Fuels, Batesville, Arkansas, EUA

[00373] TAED é tetraacetiletilenodiamina, disponível sob o nome comercial Peractive® junto à Clariant GmbH, Sulzbach, Alemanha

[00374] Catalisador orgânico de alvejamento tem a seguinte estrutura, na qual R13 = 2-butiloctila,

[00375] e é produzido de acordo com o pedido de patente US n° 2006/0089284A1.

[00376] S-ACMC é carboximetilcelulose conjugada com I.C. Azul Reativo 19, disponível comercialmente junto à Megazyme de Wicklow, Irlanda, sob o nome de produto AZO-CM-CELLULOSE, código S- ACMC.

[00377] O agente de liberação de sujeira é Texcare® SRA300, dis- ponível junto à Clariant, Frankfurt, Alemanha

[00378] O copolímero de ácido acrílico/ácido maleico tem peso molecular 70.000 e uma razão acrilato:maleato de 70:30, e está disponível junto à BASF, Ludwigshafen, Alemanha

[00379] Sal sódico de ácido etilenodiamino-N,N'-dissuccínico, isô- mero (S,S) (EDDS), disponível junto à Octel, Ellesmere Port, Reino Unido

[00380] Hidroxietanodifosfonato (HEDP), disponível junto à Dow Chemical, Midland, Michigan, EUA

[00381] Aglomerado de supressor de espuma, disponível junto à Dow Corning, Midland, Michigan, EUA

[00382] HSAS é um alquilsulfato com ramificação média, conforme apresentado em US 6.020.303 e US 6.060.443

[00383] Óxido de C12-14 dimetilamina disponível junto à Procter & Gamble Chemicals, Cincinnati, Ohio, EUA

[00384] Liquitint® Violet CT e corantes de tiofeno etoxilados disponíveis junto à Milliken, Spartanburg, South Carolina, EUA

[00385] As dimensões e valores apresentados na presente invenção não devem ser compreendidos como estando estritamente limitados aos exatos valores numéricos mencionados. Em vez disso, exceto onde especificado em contrário, cada uma dessas dimensões se destina a significar tanto o valor mencionado como uma faixa de valores funcionalmente equivalentes em torno daquele valor. Por exemplo, uma dimensão apresentada como "40 mm" destina-se a significar "cerca de 40 mm".

Claims (7)

1. Método para limpar um material têxtil ou uma superfície dura ou outra superfície em cuidados com tecidos e com a casa, ca-racterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) contatar a superfície com uma solução aquosa compre-endendo (i) uma lipase; e (ii) um componente de alvejamento e (iii) um composto auxiliar detergente opcional; b) enxaguar e secar o material têxtil ou a superfície dura; em que a lipase consiste em uma sequência de aminoáci- dos identificada pela SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 7, ou uma combinação das mesmas.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a lipase apresenta estabilidade otimizada à degradação oxidativa na presença de um composto da Fórmula 2:

Fórmula 2 na qual R1 é 2-butiloctila.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o componente de alvejamento compreende um catali-sador de alvejamento que é capaz de aceitar um átomo de oxigênio de um peroxiácido e transferir o átomo de oxigênio para um substrato oxi- dável e (ii) peróxido de diacila e/ou de tetraacila.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o catalisador de alvejamento compreende um grupo funcional oxazidínio e/ou dioxirano, e/ou é capaz de formar um grupo funcional oxaziridínio e/ou um grupo funcional dioxirano sob aceitação de um átomo de oxigênio.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o catalisador de alvejamento tem uma estrutura quí- mica correspondendo à fórmula química:

em que: n e m são independentemente de 0 a 4; cada R1 é selecionado independentemente a partir de um radical substituído ou não substituído selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila, cicloalquil, aril, aril fundido, anel heterocíclico, anel hete- rocíclico fundido, nitro, halo, ciano, sulfonato, alcoxi, ceto, carboxílico e radicais carboalcoxi e quaisquer dois substituintes R1 vicinais podem combinar para formar um anel aril fundido, carbocíclico fundido ou he- terocíclico fundido; cada R2 é independentemente selecionado a partir de um radical substituído ou não substituído independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxi, alquil, cicloalquil, alcaril, aril, aralquil, alquilenos, anel heterocíclico, grupos alcoxi, arilcarbonil, grupos carboxialquil e grupos amida; qualquer R2 pode ser unido a qualquer outro R2 para formar parte de um anel comum; qualquer R2 geminal pode combinar para formar um carbonil; e em que quaisquer dois R2 podem combinar para formar uma porção insaturada fundida substituída ou não substituída; R3 é um C1 a C20 alquil substituído ou não substituído; R4 é hidrogênio ou a porção Qt-A, em que: Q é um alquileno ramificado ou não ramificado, t = 0 ou 1, e A é um grupo aniônico selecionado do grupo que consiste em OSO3-, SO3-, CO2-, OCO2-, OPO32-, OPO3H- e OPO2-; R5 é hidrogênio ou a porção -CR11R12-Y-Gb-Yc-[(CR9R10)y-O]k-R8, em que: cada Y é selecionado independentemente do grupo que consiste em O, S, N-H ou N-R8; e cada R8 é selecionado independentemente do grupo que consiste em alquil, aril e heteroaril, sendo as referidas porções substituídas ou não substituídas e se as ditas porções substituídas ou não substituídas possuem menos de 21 carbonos; cada G é selecionado independen-temente do grupo que consiste em CO, SO2, SO, PO e PO2; R9 e R10 são selecionados independentemente do grupo que consiste em hidrogênio e C1-C4 alquil; R11 e R12 são selecionados independentemente do grupo que consiste em hidrogênio e alquil, ou quando tomados juntos podem se unir para formar um carbonil; b = 0 ou 1; c = 0 ou 1, mas c deve ser = 0 se b = 0; y for um número inteiro de 1 a 6; k é um número inteiro de 0 a 20; R6 é H, ou uma porção alquil, aril ou heteroaril; sendo as referidas porções substituídas ou não substituídas; e X, se presente, é um contra-íon de balanceamento de carga adequado.

6. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o catalisador de alvejamento tem uma estrutura química correspondendo à fórmula química:

em que R13 é um grupo alquil ramificado contendo de 3 a 24 carbonos ou um grupo alquil linear contendo de 1 a 24 carbonos.

7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que R13 é selecionado a partir do grupo que consiste em 2-butiloctil, 2-pentilnonil, 2-hexildecil, iso-tridecil e iso-pentadecil.