CN108026487B - 包含具有黄原胶降解活性的多肽的洗涤剂组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含具有黄原胶降解活性的多肽的洗涤剂组合物。本发明还涉及用于生产所述洗涤剂组合物的方法以及所述洗涤剂组合物在清洁应用中的用途。

Description

包含具有黄原胶降解活性的多肽的洗涤剂组合物

序列表的提及

本申请包含以计算机可读形式的序列表，其引入本文作为参考。

技术领域

本发明涉及包含具有黄原胶降解活性的多肽的洗涤剂组合物。具体地，本发明涉及包含具有黄原胶降解活性的在糖基水解酶家族5(GH5)内的多肽的洗涤剂组合物。本发明还涉及用于生产所述洗涤剂组合物的方法以及所述洗涤剂组合物在清洁应用中的用途。

背景技术

黄原胶是由细菌野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)分泌的多糖。它是通过葡萄糖、蔗糖或乳糖在含水生长培养基中经由野油菜黄单胞菌的发酵而产生。在发酵期后，用异丙醇将多糖从生长培养基中沉淀出来，干燥，且研磨成细粉。然后，将粉末加入液体介质中以形成胶。

黄原胶由戊多糖亚基组成，形成具有三糖侧链的纤维素主链，所述三糖侧链由通过α1,3键附着到主链中的交替葡萄糖残基的甘露糖-(β1,4)-葡糖醛酸-(β1,2)-甘露糖组成。这种生物聚合物由于其优异的假塑性、触变性和粘性而具有很大的商业意义。

近年来，黄原胶已广泛用作许多消费品的成分，所述消费品包括食品(例如作为沙拉酱和乳制品中的增稠剂)和化妆品(例如作为牙膏和化妆品中的稳定剂和增稠剂，以防止成分分离)和化妆品(例如防晒霜)。

另外，黄原胶已在石油工业中使用，黄原胶在此被大量使用以增稠钻井泥浆。这些流体作用于将由钻头切割的固体携带回到表面。当循环停止时，固体仍然悬浮在钻井流体中。水平钻井的广泛使用已导致其扩展使用。还将黄原胶加入自固化混凝土(包括水下浇灌的混凝土)中，以增加其粘度。

黄原胶的广泛使用已导致希望能够降解黄原胶的溶液或凝胶。迄今为止，黄原胶的完全酶促降解需要几种酶促活性，包括黄原胶裂解酶活性和内切-β-1,4-葡聚糖酶活性。黄原胶裂解酶是切割黄原胶的β-D-甘露糖基-α-β-D-1,4-葡萄糖醛酸基键的酶，并且已在文献中描述。黄原胶降解酶是本领域已知的，例如从溶藻类芽孢杆菌(Paenibacillusalginolyticus)XL-1分离的两种黄原胶裂解酶。

糖基水解酶是催化糖基键水解以释放较小糖的酶。存在已被分类的超过100个糖基水解酶类别。糖基水解酶家族5(GH5)包括内切葡聚糖酶(EC3.2.1.4)、内切-β-1,4-木聚糖酶(EC3.2.1.8)；β-葡糖苷酶(EC 3.2.1.21)；β-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.25)。然而，直到现在，在糖基水解酶家族5中尚未报道黄原胶降解酶的鉴定。

与来自Echinicola vietnamensis(UNIPROT：L0FVA9)的基因组的预测内切葡聚糖酶相比，SEQ ID NO:2中的成熟肽为45％等同，并且SEQ ID NO:4中的成熟肽为57％等同。

SEQ ID NO:6中的成熟肽与来自Barnesiella intestinihominis(UNIPROT：K0WXE1)的基因组的未表征蛋白质47％等同。

SEQ ID NO:8中的成熟肽与来自施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)(UNIPROT：M2V1S3)基因组的未表征的蛋白质100％等同。

发明内容

本发明提供了包含用于降解黄原胶的酶的新的和改善的洗涤剂组合物，以及用于生产所述洗涤剂组合物的方法以及所述洗涤剂组合物在清洁应用中的用途。

本发明人已惊讶地发现了一组新的酶，所述酶具有黄原胶降解活性，且不属于先前已知包含该酶促活性的任何糖基水解酶家族。这些酶与任何具有黄原胶降解活性的已知酶都没有显著的序列相似性。

本发明提供了包含多肽的洗涤剂组合物，所述多肽具有黄原胶降解活性，即对黄原胶具有活性和/或对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性。

相应地，本发明提供了包含具有黄原胶降解活性的糖基水解酶家族5的多肽的洗涤剂组合物。更特别地，本发明提供了洗涤剂组合物，其包含选自下述的具有黄原胶降解活性的糖基水解酶家族5的多肽：

(a)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8中任一个的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性的多肽；

(b)由在中等严格条件下与下述杂交的多核苷酸编码的多肽：(i)SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7中任一个的成熟多肽编码序列，(ii)或(i)的全长互补体；

(c)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:7中任一个的成熟多肽编码序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性；

(d)在一个或多个位置处包含取代、缺失和/或插入的SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8中任一个的成熟多肽的变体；

(e)具有黄原胶降解活性的(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段；和

(f)包含(a)、(b)、(c)、(d)或(e)的多肽和N末端和/或C末端His标签的多肽。

本发明还涉及使用包含所述多肽的洗涤剂组合物降解黄原胶的方法。

序列表概述

SEQ ID NO:1是从丰祐菌科物种(Opitutaceae sp)中分离的EXa基因的DNA序列。

SEQ ID NO:2是如从SEQ ID NO:1推导的EXa GH5多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:3是如从环境样品中分离的EXb基因的DNA序列。

SEQ ID NO:4是如从SEQ ID NO:3推导的EXb GH5多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:5是如从环境样品中分离的EXc基因的DNA序列。

SEQ ID NO:6是如从SEQ ID NO:5推导的EXc GH5多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:7是如从公共数据库(UNIPROT M2V1S3，源于从Galapagos Rifthydrothermal vent，Ecuador收集的施氏假单胞菌菌株)获得的EXd基因的DNA序列。

SEQ ID NO:8是如SEQ ID NO:7推导的EXd GH5多肽的氨基酸序列。

SEQ ID NO:9是编码EXa GH5多肽的合成密码子优化的DNA。

SEQ ID NO:10是编码EXb GH5多肽的合成密码子优化的DNA。

SEQ ID NO:11是编码EXc GH5多肽的合成密码子优化的DNA。

SEQ ID NO:12是编码EXd GH5多肽的合成密码子优化的DNA。

SEQ ID NO:13是在大肠杆菌(E.coli)中表达的EXa GH5多肽+His亲和标签。

SEQ ID NO:14是在大肠杆菌中表达的EXb GH5多肽+His亲和标签。

SEQ ID NO:15在大肠杆菌中表达的EXc GH5多肽+His亲和标签。

SEQ ID NO:16是在枯草芽孢杆菌(B.subtilis)中表达的EXb GH5多肽+His亲和标签。

SEQ ID NO:17是在枯草芽孢杆菌中表达的EXc GH5多肽+His亲和标签。

SEQ ID NO:18是在枯草芽孢杆菌中表达的EXd GH5多肽+His亲和标签。

SEQ ID NO:19是His亲和标签序列。

SEQ ID NO:20是克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)分泌信号的氨基酸序列。

SEQ ID NO:21是来自类芽孢杆菌属物种(Paenibacillus sp)(来自WO2013167581的SEQ ID NO:8)的黄原胶裂解酶XLa的氨基酸序列。

SEQ ID NO:22是来自类芽孢杆菌属物种(来自WO2013167581的SEQ ID NO:66)的黄原胶裂解酶XLb的氨基酸序列。

SEQ ID NO:23是来自类芽孢杆菌属物种(来自WO2013167581的SEQ ID NO:68)的黄原胶裂解酶XLc的氨基酸序列。

SEQ ID NO:24是来自类芽孢杆菌属物种(来自WO2013167581的SEQ ID NO:120)的黄原胶裂解酶XLd的氨基酸序列。

具体实施方式

本发明提供了包含具有黄原胶降解活性的GH5多肽的洗涤剂组合物。多肽不属于已知包含降解黄原胶的酶的GH家族。另外，包含黄原胶裂解酶和本发明的具有黄原胶降解活性的酶的组合的洗涤剂组合物显示超过使用包含黄原胶裂解酶或具有黄原胶降解活性的单独的GH5多肽的洗涤剂组合物的协同改善的洗涤性能。

定义

编码序列：术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由开放读码框决定，所述开放读码框以起始密码子如ATG、GTG或TTG开始，并且以终止密码子如TAA、TAG或TGA结束。编码序列可以是基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。

颜色澄清：在洗涤和穿着过程中，松散或断裂的纤维可以在织物表面上积聚。一个后果可以是由于表面污染，织物的颜色看起来不太亮或不太强烈。从纺织品中去除松散或断裂的纤维将部分地恢复纺织品的原始颜色和外观。如本文使用的，术语“颜色澄清”意指纺织品的初始颜色的部分恢复。

洗涤剂组合物：

除非另有说明，否则术语“洗涤剂组合物”包括颗粒或粉末形式的通用或重型洗涤试剂，尤其是清洁洗涤剂；液体、凝胶或糊状通用洗涤试剂，尤其是所谓的重型液体(HDL)类型；液态精细织物洗涤剂；手洗餐具洗涤剂或轻型餐具洗涤剂，尤其是高发泡类型的那些；机洗餐具洗涤剂，包括用于家庭和机构用途的各种片剂、粒状、液体和清洗助剂类型；液体清洁和消毒剂、包括抗菌洗手类型、清洁条、皂条、漱口水、假牙清洁剂、汽车或地毯清洗剂、浴室清洁剂；头发香波和头发清洗剂；沐浴露、泡沫浴；金属清洁剂；以及清洁助剂如漂白添加剂和“去渍棒”或预处理类型。术语“洗涤剂组合物”和“洗涤剂制剂”用于指预期用于清洗介质中用于清洗污物的混合物。在一些实施方案中，该术语用于指洗涤织物和/或衣服(例如“洗涤用洗涤剂”)。在可替代的实施方案中，该术语指其他洗涤剂，例如用于清洁餐具、刀叉餐具等的那些洗涤剂(例如“餐具洗涤剂”)。本发明预期并不限于任何特定的洗涤剂配方或组合物。术语“洗涤剂组合物”预期并不限于含有表面活性剂的组合物。预期除根据本发明的变体之外，该术语还涵盖可以含有例如如下的洗涤剂：表面活性剂、增洁剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物柔顺剂、泡沫促进剂、抑泡剂、染料、香料、鞣质抑制剂、光学增白剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、抗腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂和增溶剂。

餐具洗涤：术语“餐具洗涤”指所有形式的餐具洗涤，例如手洗或自动餐具洗涤。餐具洗涤包括但不限于清洁所有形式的餐具，如盘子、杯子、玻璃杯、碗、各种形状的刀叉餐具(如勺子、刀子、叉子和一次性餐具(serving utensil))，以及陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃和丙烯酸树脂。

餐具洗涤组合物：术语“餐具洗涤组合物”指用于清洁硬表面的所有形式的组合物。本发明并不限于任何特定类型的餐具洗涤组合物或任何特定的洗涤剂。

酶去垢益处：术语“酶去垢益处”在本文中定义为与不含酶的相同洗涤剂相比，酶可添加至洗涤剂的有利效应。可以由酶提供的重要去垢益处是在洗涤和/或清洗之后没有或非常少的可见污垢的污渍去除，防止或减少在洗涤过程中释放的污垢的再沉积，该效应也被称为抗再沉积，完全或部分恢复纺织品的白度，所述纺织品最初是白色，但在反复使用和洗涤后，已获得了灰白或淡黄色的外观，该效应也被称为美白。与催化污渍去除或防止污垢再沉积并不直接相关的纺织品护理益处对于酶去垢益处也是重要的。这样的纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一种织物转移到另一种织物或同一织物的另一部分，该效应也被称为染料转移抑制或防回染，从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或者去除已存在的小球或起毛，该效应也被称为抗起球，改善织物柔软性，织物的颜色澄清和去除织物或衣服纤维中捕集的颗粒状污垢。酶促漂白是进一步的酶去垢益处，其中催化活性一般用于催化漂白组分例如过氧化氢或其他过氧化物的形成。

片段：术语“片段”意指在成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个(例如几个)氨基酸的多肽；其中所述片段具有黄原胶降解活性。

硬表面清洁：术语“硬表面清洁”在本文中定义为硬表面的清洁，其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等，以及硬物体的表面，例如汽车(洗车)和餐具(餐具洗涤)。餐具洗涤包括但不限于清洗盘子、杯子、玻璃杯、碗和刀叉餐具例如勺子、刀子、叉子、一次性餐具、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃和丙烯酸树脂。

改善的洗涤性能：术语“改善的洗涤性能”在本文中定义为相对于亲本蛋白酶变体的洗涤性能，，例如通过增加的污渍去除，展示蛋白酶变体的洗涤性能的改变的(变体)酶(也是酶的共混物，不一定只是变体，以及主链，并且与某些清洁组合物等组合)。术语“洗涤性能”包括洗涤以及包括例如在餐具洗涤中的洗涤性能。

分离的：术语“分离的”意指不是以天然存在的形式或不是在天然环境中存在的物质。分离物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)任何物质，包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子，其至少部分去除它与之在自然界中结合的天然存在的组成成分中的一种或多种或全部；(3)相对于在自然界中发现的那种物质，通过人工修饰的任何物质；或(4)相对于它与之天然结合的其他组分，通过增加物质的量来修饰的任何物质(例如在宿主细胞中的重组产生；编码该物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码该物质的基因天然结合的启动子更强的启动子)。分离的物质可以存在于发酵液样品中；例如宿主细胞可以被遗传修饰以表达本发明的多肽。来自该宿主细胞的发酵液将包含分离的多肽。

成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N末端加工、C末端截短、糖基化、磷酸化等之后，以其最终形式的多肽。在一个方面，成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至802。在第二个方面，成熟多肽是SEQ ID NO:4的氨基酸1至808。在第三个方面，成熟多肽是SEQ ID NO:6的氨基酸1至800。在第四个方面，成熟多肽是SEQ ID NO:8的氨基酸1至657。本领域已知宿主细胞可以产生由相同的多核苷酸表达的两种或更多种不同成熟多肽的混合物(即，具有不同的C末端和/或N末端氨基酸)。本领域还已知不同的宿主细胞不同地加工多肽，并且因此，与表达相同多核苷酸的另一种宿主细胞相比，表达多核苷酸的一种宿主细胞可以产生不同的成熟多肽(例如，具有不同的C末端和/或N末端氨基酸)。

成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有黄原胶降解活性的成熟多肽的多核苷酸。在一个方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:1的核苷酸109至2514。SEQ ID NO:1的核苷酸1至108编码信号肽。在一个方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:3的核苷酸112至2493。SEQ ID NO:3的核苷酸1至111编码信号肽。在一个方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:5的核苷酸106至2505。SEQ ID NO:5的核苷酸1至105编码信号肽。在一个方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:7的核苷酸109至2079。SEQ ID NO:7的核苷酸1至108编码信号肽。

核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子，其从天然存在的基因中分离，或被修饰以包含核酸的区段，其方式为在自然界中否则不存在或是合成的，其包含一个或多个控制序列。

可操作地连接的：术语“可操作地连接的”意指这样的配置，其中控制序列被置于相对于多核苷酸的编码序列的适当位置处，使得控制序列指导编码序列的表达。

序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性由参数“序列同一性”描述。

为了本发明的目的，两个氨基酸序列之间的序列同一性使用Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48:443-453)进行测定，所述Needleman-Wunsch算法如在EMBOSS软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open SoftwareSuite，Rice等人，2000，Trends Genet.16:276-277)的Needle程序中实现的，优选版本5.0.0或更高版本。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。标记为“最长的同一性”(使用–nobrief选项获得)的Needle输出用作同一性百分比，并且如下计算：

(相同的残基x 100)/(比对的长度–比对中的空位总数目)

为了本发明的目的，两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性使用Needleman-Wunsch算法(Needleman和Wunsch，1970，同上)进行测定，所述Needleman-Wunsch算法如在EMBOSS软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite，Rice等人，2000，同上)的Needle程序中实现的，优选版本5.0.0或更高版本。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)取代矩阵。标记为“最长的同一性”(使用–nobrief选项获得)的Needle输出用作同一性百分比，并且如下计算：

(相同的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对的长度–比对中的空位总数目)

纺织品：术语“纺织品”意指任何纺织材料，包括纱线、纱线中间产物、纤维、非织造材料、天然材料、合成材料和任何其他纺织材料，由这些材料制成的织物和由织物制成的产品(例如服装和其他物品)。纺织品或织物可以以编织物、织造物、牛仔布、非织造物、毛毡、纱线和毛巾料的形式。纺织品可以是基于纤维素的，例如天然纤维素，包括棉、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维，或人造纤维素(例如源于木浆)，包括粘胶/人造丝、苎麻、乙酸纤维素纤维(tricell)、lyocell或其共混物。该纺织品或织物还可以是非基于纤维素的，例如天然聚酰胺，包括羊毛、骆驼、羊绒、马海毛、兔和丝，或合成聚合物例如尼龙、芳纶、聚酯、丙烯酸、聚丙烯和氨纶/弹性纤维、或其共混物，以及基于纤维素的纤维和非基于纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶与一种或多种伴侣材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳纶纤维)和含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、乙酸纤维素纤维、lyocell)的共混物。织物可以是常规的可洗涤物，例如弄脏的家用可洗涤物。当使用术语织物或服装时，它预期还包括更广义的纺织品。

纺织品护理益处：与催化污渍去除或防止污垢再沉积并非直接相关的“纺织品护理益处”对于酶去垢益处也是重要的。这样的纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一种纺织品转移到另一种纺织品或同一纺织品的另一部分，该效应也被称为染料转移抑制或防回染，从纺织品表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或者去除已存在的小球或起毛，该效应也被称为抗起球，改善纺织品柔软性，纺织品的颜色澄清和去除纺织品纤维中捕集的颗粒状污垢。酶促漂白是进一步的酶去垢益处，其中催化活性一般用于催化漂白组分例如过氧化氢或其他过氧化物或其他漂白种类的形成。

洗涤性能：术语“洗涤性能”用作酶去除在例如洗涤或硬表面清洁过程中待清洁物体上存在的污渍的能力。洗涤性能中的改善可以通过计算如本文的“用于衣物的自动机械应力测定法(AMSA)(Automatic Mechanical Stress Assay(AMSA)for laundry)”中定义的所谓的强度值(Int)来量化。还参见本文实施例18中的洗涤性能测试。

白度：术语“白度”在本文中定义为在不同地区和对于不同客户具有不同含义的广义术语。白度丧失可以例如是由于灰化、黄化或去除光学增白剂/着色剂。灰化和黄化可能是由于污垢再沉积、身体污垢、来自铁和铜离子的着色或染料转移。白度可能包括来自下文列表的一个或几个问题：色素或染料效应；不完全的污渍去除(例如身体污垢、皮脂等)；再沉积(灰化、黄化或物体的其他变色)(去除的污垢与污损或未污损的纺织品的其他部分再结合)；在应用过程中纺织品的化学变化；和颜色澄清或增亮。

黄原胶裂解酶：术语“黄原胶裂解酶”在本文中定义为切割黄原胶中的β-D-甘露糖基-β-D-1,4-葡萄糖醛酸基键的酶(EC 4.2.2.12)。为了本发明的目的，黄原胶裂解酶活性根据‘黄原胶裂解酶活性测定法’中实施例中所述的程序来测定。

黄原胶降解活性：术语“黄原胶降解活性”在本文中定义为引起黄原胶溶液的粘度降低的能力。黄原胶溶液即使在低聚合物浓度下也是高度粘稠的，并且这种粘度与黄原胶的聚合度有关。因此，粘度降低可以用于监测黄原胶降解。粘度降低可以使用如实施例6中描述的粘度压力测定法来检测。

黄原胶降解活性包括针对完整黄原胶的活性以及针对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶(经修饰的黄原胶-参见实施例8)的活性。

对黄原胶的活性：术语“对黄原胶具有活性的GH5多肽”或“对黄原胶具有活性并且属于GH5类糖基水解酶的多肽”定义为包含属于GH5类糖基水解酶，并且对黄原胶具有显著活性的结构域的多肽。在本发明的一个方面，对黄原胶具有活性的GH5多肽可以是具有选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8中的序列的多肽。

对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶的活性：术语“对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性的GH5多肽”或“对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性且属于GH5类糖基水解酶的多肽”定义为包含属于GH5类糖基水解酶，并且对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶(经修饰的黄原胶-参见实施例8)具有显著活性的结构域的多肽。在本发明的一个方面，对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性的GH5多肽可以是具有选自SEQ ID NO:2、SEQID NO:4、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8中的序列的多肽。

包含具有黄原胶降解活性的多肽的洗涤剂组合物

在一个实施方案中，本发明涉及包含多肽的洗涤剂组合物，所述多肽与SEQ IDNO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，所述多肽具有黄原胶降解活性。在一个方面，多肽与SEQ ID NO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽相差至多10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸。

在一个特定实施方案中，本发明涉及包含多肽的洗涤剂组合物，所述多肽与SEQID NO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，并且其中所述多肽具有SEQ IDNO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽的黄原胶降解活性的至少70％。

在一个特定实施方案中，本发明涉及包含多肽的洗涤剂组合物，所述多肽与SEQID NO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，并且其中所述多肽具有SEQ IDNO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽的黄原胶降解活性的至少75％。

在一个特定实施方案中，本发明涉及包含多肽的洗涤剂组合物，所述多肽与SEQID NO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，并且其中所述多肽具有SEQ IDNO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽的黄原胶降解活性的至少80％。

在一个特定实施方案中，本发明涉及包含多肽的洗涤剂组合物，所述多肽与SEQID NO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，并且其中所述多肽具有SEQ IDNO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽的黄原胶降解活性的至少85％。

在一个特定实施方案中，本发明涉及包含多肽的洗涤剂组合物，所述多肽与SEQID NO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，并且其中所述多肽具有SEQ IDNO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽的黄原胶降解活性的至少90％。

在一个特定实施方案中，本发明涉及包含多肽的洗涤剂组合物，所述多肽与SEQID NO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，并且其中所述多肽具有SEQ IDNO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽的黄原胶降解活性的至少95％。

在一个特定实施方案中，本发明涉及包含多肽的洗涤剂组合物，所述多肽与SEQID NO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性，并且其中所述多肽具有SEQ IDNO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽的黄原胶降解活性的至少100％。

在一个实施方案中，包含在本发明洗涤剂组合物中的多肽已被分离。多肽优选包含下述或由下述组成：SEQ ID NO:2、4、6和8中任一个的氨基酸序列或其等位基因变体；或者是其具有黄原胶降解活性的片段。在另一个方面，多肽包含下述或由下述组成：SEQ IDNO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽。在另一个方面，多肽包含下述或由下述组成：SEQ IDNO:2的氨基酸1至802、SEQ ID NO:4的氨基酸1至808、SEQ ID NO:6的氨基酸1至800、或SEQID NO:8的氨基酸1至657。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含由多核苷酸编码的具有黄原胶降解活性的多肽的洗涤剂组合物，所述多核苷酸在极低严格条件、低严格条件、中等严格条件、中等-高严格条件、高严格条件或极高严格条件下与下述杂交：(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列，(ii)，或(iii)(i)或(ii)的全长互补体。在一个实施方案中，包含在洗涤剂组合物中的多肽已被分离。

为了本发明的目的，杂交指示多核苷酸在极低至极高严格条件下与对应于下述的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:1、3、5或7中任一个；(ii)SEQ ID NO:1、3、5或7中任一个的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补体；或(iv)其子序列。在这些条件下与核酸探针杂交的分子可以使用例如X射线膜或本领域已知的任何其他检测手段来检测。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含由多核苷酸编码的具有黄原胶降解活性的多肽的洗涤剂组合物，所述多核苷酸与SEQ ID NO:1、3、5或7中任一个的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一个进一步的实施方案中，多肽已被分离。

在另一个实施方案中，本发明涉及包含SEQ ID NO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽的变体的洗涤剂组合物，所述变体包含在一个或多个(例如几个)位置处的取代、缺失和/插入。在一个实施方案中，引入SEQ ID NO:2、4、6和8中任一个的成熟多肽内的氨基酸取代、缺失和/或插入数目至多10个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9，5、6、7、8、9或10个。氨基酸改变可为不重要的，其为不显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；小的缺失，通常为1-30个氨基酸；小的氨基或羧基末端延伸，如氨基末端甲硫氨酸残基；至多20-25个残基的小接头肽；或通过改变净电荷或另一种功能(例如聚组氨酸标签、抗原性表位或结合结构域)来促进纯化的小延伸。SEQ ID NO:13、14和15显示具有N末端多组氨酸标签(His-标签)的本发明多肽(SEQ ID NO:2、4和6)。SEQ ID NO:16、17和18显示具有N末端多组氨酸标签的本发明多肽(SEQ ID NO:4、6和8)。

保守取代的实例在碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)和小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)的组内。一般不改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的，并且例如由H.Neurath和R.L.Hill，1979，In，The Proteins，Academic Press，New York描述。常见的取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。

具有黄原胶降解活性的多肽的来源

如包含在本发明的洗涤剂组合物中的具有黄原胶降解活性的多肽可以得自任何属的微生物。为了本发明的目的，如本文与给定来源结合使用的术语“得自”应该意指由多核苷酸编码的多肽由来源或来自来源的多核苷酸已插入其中的菌株产生。

在一个方面，多肽是从丰祐菌科物种获得的多肽。

多核苷酸

本发明还涉及如本文所述的编码多肽的多核苷酸。在一个实施方案中，编码本发明多肽的多核苷酸已被分离。

洗涤剂组合物

在本发明的一个实施方案中，本发明的多肽可以以对应于0.0001-200mg酶蛋白，例如0.0005-100mg酶蛋白，优选0.001-30mg酶蛋白，更优选0.005-8mg酶蛋白，甚至更优选0.01-2mg酶蛋白/升洗涤液的量加入洗涤剂组合物中。

例如，用于自动洗碗(ADW)的组合物可以包括按组合物的重量计0.0001％-50％，例如0.001％-20％，例如0.01％-10％，例如0.05-5％的酶蛋白。

例如，用于洗涤粉中的组合物可包括按组合物的重量计0.0001％-50％，例如0.001％-20％，例如0.01％-10％，例如0.05％-5％的酶蛋白。

例如，用于洗涤液中的组合物可包括按组合物的重量计0.0001％-10％，例如0.001-7％，例如0.1％-5％的酶蛋白。

本发明的洗涤剂组合物的酶可以使用常规稳定剂来稳定，所述常规稳定剂例如多元醇如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物，例如芳族硼酸酯或苯基硼酸衍生物如4-甲酰基苯基硼酸，并且该组合物可以如例如WO92/19709和WO92/19708中所述进行配制。

在某些市场中，使用不同的洗涤条件，并且像这样使用不同类型的洗涤剂。这公开于例如EP 1 025 240中。例如，在亚洲(日本)使用低洗涤剂浓度系统，而美国使用中等洗涤剂浓度系统，并且欧洲使用高洗涤剂浓度系统。

在一个实施方案中，本发明涉及包含与一种或多种另外的清洁组合物组分组合的本发明酶的洗涤剂组合物。另外组分的选择在技术人员的技能范围内，并且包括常规成分，包括下文阐述的示例性非限制性组分。

对于纺织品护理，组分的选择可以包括待清洁的纺织品类型的考虑、污损类型和/或程度、清洁在其下发生的温度以及洗涤剂产品的制剂。尽管下文提到的组分根据特定的功能性通过一般标题加以分类，但这不应被解释为限制，因为组分可以包含如本领域技术人员将理解的另外功能。

在一个实施方案中，本发明涉及ADW(自动餐具洗涤)组合物，其包含与一种或多种另外的ADW组合物组分组合的本发明的酶。另外组分的选择在技术人员的技能范围内，并且包括常规成分，包括下文阐述的示例性非限制性组分。

在一个实施方案中，本发明的洗涤剂组合物包含至多

表面活性剂

洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂，其可以是阴离子和/或阳离子和/或非离子和/或半极性和/或两性离子的、或其混合物。在一个特定实施方案中，洗涤剂组合物包括一种或多种非离子表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。表面活性剂通常以按重量计约0.1％至60％，例如约1％至约40％、或约3％至约20％、或约3％至约10％的水平存在。表面活性剂基于所需的清洁应用加以选择，并且可以包括本领域已知的任何常规表面活性剂。

当包括在其中时，洗涤剂通常含有按重量计约1％至约40％的阴离子表面活性剂，例如约5％至约30％，包括约5％至约15％、或约15％至约20％、或约20％至约25％的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，特别是线性烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、分支烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基烷基磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、烯烃磺酸盐、烷烃-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基烷烃磺酸盐和二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)例如十二烷基硫酸钠(SDS)、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲烷烃磺酸盐(SAS)、石蜡磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)包括甲酯磺酸盐(MES)、烷基或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸盐(皂)及其组合。

当包括在其中时，洗涤剂通常含有按重量计约1％至约40％，例如约0.5％至约30％，特别是约1％至约20％，约3％约10％，例如约3％至约5％、约8％至约12％、或约10％至约12％的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇胺季铵化合物(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂基氯化铵(DSDMAC)和烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、酯季铵化合物及其组合。

当包括在其中时，洗涤剂通常含有按重量计约0.2％至约40％，例如约0.5％至约30％，特别是约1％至约20％，约3％约10％，例如约3％至约5％、约8％至约12％、或约10％至约12％的非离子表面活性剂。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酯如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基聚葡糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、聚羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺(葡糖酰胺，GA或脂肪酸葡糖酰胺，FAGA)的N-酰基N-烷基衍生物、以及以商品名SPAN和TWEEN下可获得的产品及其组合。

当包括在其中时，洗涤剂通常含有按重量计约0％至约10％的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)例如烷基二甲胺氧化物、N-(椰油烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛脂烷基)-N,N-双(2-羟基乙基)氧化胺及其组合。

当包括在其中时，洗涤剂通常含有按重量计约0％至约10％的两性离子表面活性剂。两性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱例如烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱及其组合。

水溶助长剂

水溶助长剂是使水溶液中的疏水性化合物(或者相反地，在非极性环境中的极性物质)增溶的化合物。通常，水溶助长剂具有亲水性和疏水性特征两者(如从表面活性剂已知的所谓的两性性质)；然而，水溶助长剂的分子结构一般不利于自发的自聚集，参见例如通过Hodgdon和Kaler(2007)，Current Opinion in Colloid&Interface Science 12:121-128的综述。水溶助长剂不展示超过其自聚集发生的临界浓度，如对于表面活性剂和脂质形成胶束、层状或其他良好限定的中间相发现的。相反，许多水溶助长剂显示连续型聚集过程，其中聚集物的尺寸随着浓度的增加而增长。然而，许多水溶助长剂改变含有极性和非极性特征的物质的系统的相行为、稳定性和胶体性质，所述系统包括水、油、表面活性剂和聚合物的混合物。水溶助长剂经常跨越从制药、个人护理、食品到技术应用的工业使用。在洗涤剂组合物中使用水溶助长剂允许例如表面活性剂的更浓缩制剂(如在通过去除水而压实液体洗涤剂的过程中)，而不诱导不希望有的现象，例如相分离或高粘度。

洗涤剂可以含有按重量计0-10％，例如按重量计0-5％，例如约0.5至约5％、或约3至约5％的水溶助长剂。可以利用用于洗涤剂中的本领域已知的任何水溶助长剂。水溶助长剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯苯磺酸钠(SCS)、伞花素磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基硫酸钠及其组合。

增洁剂和共增洁剂

洗涤剂组合物可含有按重量计约0-65％，如约5％至约50％的洗涤剂增洁剂或共增洁剂、或其混合物。在餐具洗涤洗涤剂中，增洁剂的水平通常为40-65％，特别是50-65％。增洁剂和/或共增洁剂可以特别是与Ca和Mg形成水溶性络合物的螯合试剂。可以利用用于洗涤剂中的本领域已知的任何增洁剂和/或共增洁剂。增洁剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐如碳酸钠、可溶性硅酸盐如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自Hoechst的SKS-6)、乙醇胺如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，也称为2,2'-亚氨基二乙-1-醇)、三乙醇胺(TEA，也称为2,2’,2”-硝基三乙-1-醇)和(羧甲基)菊粉(CMI)及其组合。

洗涤剂组合物还可以含有按重量计0-50％，例如约5％至约30％的洗涤剂共增洁剂。该洗涤剂组合物可以包括单独的共增洁剂，或与增洁剂如沸石增洁剂的组合。共增洁剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，例如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。进一步的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和膦酸盐、以及烷基或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N’-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)和磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)乙二胺-N,N’,N”-三乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)及其组合和盐。进一步的示例性增洁剂和/或共增洁剂在例如WO 09/102854、US 5977053中描述。

漂白系统

洗涤剂可以含有按重量计0-30％，例如约1％至约20％的漂白系统。可以利用用于洗涤剂中的本领域已知的任何漂白系统。合适的漂白系统组分包括漂白催化剂，光漂白剂，漂白活化剂，过氧化氢来源如过碳酸钠、过硼酸钠和过氧化氢-尿素(1:1)，预形成的过酸及其混合物。合适的预形成的过酸包括但不限于过氧羧酸和盐、二过氧二羧酸、过亚胺酸和盐、过一硫酸和盐例如Oxone(R)及其混合物。漂白系统的非限制性实例包括基于过氧化物的漂白系统，其可包含例如与形成过酸的漂白活化剂组合的无机盐，包括碱金属盐如过硼酸盐的钠盐(通常为一水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐。术语漂白活化剂在本文中意欲为与过氧化氢反应以经由过水解形成过酸的化合物。因此形成的过酸构成活化的漂白剂。在本文中待使用的合适的漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。合适的实例是四乙酰乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二烷酰氧基)苯-1-磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰氧基)苯-1-磺酸盐、4-(癸酰氧基)苯甲酸盐(DOBS或DOBA)、4-(壬酰氧基)苯-1-磺酸盐(NOBS)和/或WO98/17767中公开的那些。在EP624154中公开了目的漂白活化剂的特定家族，并且在该家族中特别优选的是乙酰基柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酯如三乙酸甘油酯具有其为环境友好的优点。此外，乙酰基柠檬酸三乙酯和三乙酸甘油酯在贮存时在产品中具有良好的水解稳定性，并且是有效的漂白活化剂。最后ATC是多功能的，因为过水解反应中释放的柠檬酸盐可以充当增洁剂。可替代地，漂白系统可以包含例如酰胺、酰亚胺或砜类型的过氧酸。漂白系统还可以包含过酸如6-(邻苯二甲酰亚胺基)过氧己酸(PAP)。漂白系统还可以包括漂白催化剂。在一些实施方案中，漂白剂组分可以是选自具有下式的有机催化剂的有机催化剂：

C)

(ii)

(iii)及其混合物；

其中每个R¹独立地为含有9至24个碳的分支烷基或含有11至24个碳的线性烷基，优选每个R¹独立地为含有9至18个碳的分支烷基或含有11至18个碳的线性烷基，更优选每个R¹独立地选自2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基和异十五烷基。其他示例性漂白系统例如在WO2007/087258、WO2007/087244、WO2007/087259、EP1867708(维生素K)和WO2007/087242中描述。合适的光漂白剂可以例如是磺化锌或铝酞菁。

优选地，除漂白催化剂，特别是有机漂白催化剂之外，漂白组分还包含过酸的来源。过酸的来源可以选自(a)预形成的过酸；(b)过碳酸盐、过硼酸盐或过硫酸盐(过氧化氢来源)，优选与漂白活化剂组合；和(c)过水解酶和用于在纺织品或硬表面处理步骤中在水的存在下原位形成过酸的酯。

聚合物

洗涤剂可以含有按重量计0-10％，例如0.5-5％、2-5％、0.5-2％或0.2-1％的聚合物。可以利用用于洗涤剂中的本领域已知的任何聚合物。该聚合物可以充当如上所述的共增洁剂，或者可以提供抗再沉积、纤维保护、去污、染料转移抑制、油脂清洁和/或消泡性质。一些聚合物可以具有超过一种的上述性质和/或超过一种的下述基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化聚(乙烯亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)和聚羧酸酯如PAA、PAA/PMA、聚天冬氨酸和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水改性的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二醇酯)和聚(对苯二甲酸氧乙烯酯)(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)和聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。进一步的示例性聚合物包括磺化聚羧酸盐、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)和乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物公开于例如WO 2006/130575中。还考虑了上述聚合物的盐。

织物着色剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物着色剂，例如染料或颜料，其在洗涤剂组合物中配制时可以在所述织物与包含所述洗涤剂组合物的洗涤液接触时沉积在织物上，并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色调。荧光增白剂发出至少一些可见光。相比之下，当织物着色剂吸收至少一部分可见光谱时，它们改变表面的色调。合适的织物着色剂包括染料和染料-粘土缀合物，并且还可以包括颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合染料。合适的小分子染料包括选自落入下述颜色索引(CI)分类的小分子染料：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红或其混合物，例如如WO2005/03274、WO2005/03275、WO2005/03276和EP1876226(引入本文作为参考)中所述。洗涤剂组合物优选包含约0.00003重量％至约0.2重量％、约0.00008重量％至约0.05重量％、或甚至约0.0001重量％至约0.04重量％的织物着色剂。该组合物可以包含0.0001重量％至0.2重量％的织物着色剂，当组合物为单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。合适的着色剂也公开于例如WO 2007/087257和WO2007/087243。

另外的酶

洗涤剂添加剂以及洗涤剂组合物可以包含一种或多种另外的酶，例如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、碳水化合物酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶例如漆酶、和/或过氧化物酶和/或黄原胶裂解酶。

一般而言，所选择的酶的性质应当与所选择的洗涤剂(即，最佳pH、与其他酶促和非酶促成分的相容性等)相容，并且酶应当以有效量存在。

纤维素酶

合适的纤维素酶包括细菌或真菌起源的那些。包括化学修饰或蛋白质改造的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、腐质霉属(Humicola)、镰刀菌属(Fusarium)、梭孢壳属(Thielavia)、枝顶孢霉属(Acremonium)的纤维素酶，例如US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757和WO 89/09259中公开的由特异腐质霉(Humicola insolens)、嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)产生的真菌纤维素酶。

尤其合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中所述的纤维素酶。其他实例是纤维素酶变体，例如WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307和WO99/001544中所述的那些。

其他纤维素酶是具有与WO 2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％同一性的序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶，或家族44木葡聚糖酶，其是具有与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60％同一性的序列的木葡聚糖酶。

商购可得的纤维素酶包括Celluzyme^TM和Carezyme^TM(Novozymes A/S)CarezymePremium^TM(Novozymes A/S)、Celluclean^TM(Novozymes A/S)、Celluclean Classic^TM(Novozymes A/S)、Cellusoft^TM(Novozymes A/S)、Whitezyme^TM(Novozymes A/S)、Clazinase^TM和Puradax HA^TM(Genencor International Inc.)、以及KAC-500(B)^TM(KaoCorporation)。

甘露聚糖酶

合适的甘露聚糖酶包括细菌或真菌起源的那些。包括化学或基因修饰的突变体。甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属，特别是黏琼脂芽孢杆菌(B.agaradhaerens)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、碱耐盐芽孢杆菌(B.halodurans)，克劳氏芽孢杆菌(B.clausii)或特异腐质霉的野生型。合适的甘露聚糖酶在WO 1999/064619中描述。商购可得的甘露聚糖酶是Mannaway(Novozymes A/S)。

黄原胶裂解酶

合适的黄原胶裂解酶包括植物、细菌或真菌起源的那些。包括化学修饰或蛋白质改造的突变体。有用的酶的实例包括WO2013167581中公开的并且在本文中显示为SEQ IDNO:21、22、23和24的黄原胶裂解酶。

蛋白酶

合适的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物起源，例如蔬菜或微生物起源的蛋白酶。微生物起源是优选的。包括化学修饰或蛋白质改造的突变体。它可以是碱性蛋白酶，例如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族例如胰蛋白酶，或S8家族例如枯草杆菌蛋白酶。金属蛋白酶蛋白酶可以例如是来自家族M4的嗜热菌蛋白酶，或其他金属蛋白酶例如来自M5、M7或M8家族的那些。

术语“枯草杆菌蛋白酶”指根据Siezen等人，Protein Engng.4(1991)719-737和Siezen等人Protein Science 6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征在于在活性位点具有丝氨酸的蛋白酶亚组，所述丝氨酸与底物形成共价加合物。枯草杆菌蛋白酶可以分成6个亚部分，即枯草杆菌蛋白酶家族、热酶(Thermitase)家族、蛋白酶K家族、羊毛硫抗生素(Lantibiotic)肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。

枯草杆菌蛋白酶的实例是衍生自芽孢杆菌属的那些，例如US7262042和WO09/021867中描述的迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)和吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)；以及WO89/06279中描述的枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168，以及(WO93/18140)中描述的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是WO92/175177、WO01/016285、WO02/026024和WO02/016547中所述的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是WO89/06270、WO94/25583和WO05/040372中描述的胰蛋白酶(例如猪或牛起源的)和镰刀菌属(Fusarium)蛋白酶，以及WO05/052161和WO05/052146中描述的衍生自Cellumonas的胰凝乳蛋白酶蛋白酶。

进一步优选的蛋白酶是如例如WO95/23221中所述的来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶，以及在WO92/21760、WO95/23221、EP1921147和EP1921148中描述的其变体。

金属蛋白酶的实例是如WO07/044993(Genencor Int.)中所述的中性金属蛋白酶，如衍生自解淀粉芽孢杆菌的那些。

有用的蛋白酶的实例是WO92/19729、WO96/034946、WO98/20115、WO98/20116、WO99/011768、WO01/44452、WO03/006602、WO04/03186、WO04/041979、WO07/006305、WO11/036263、WO11/036264中描述的变体，尤其是在下述位置的一个或多个中具有取代的变体：使用BPN编号的3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252和274。更优选的枯草杆菌蛋白酶变体可包含以下突变：S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G,D,A、S99AD、S101G,M,RS103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、T274A(使用BPN编号)。

合适的商购可得的蛋白酶包括以商品名

Duralase^Tm、Durazym^Tm、

Ultra、

Ultra、

Ultra、

Ultra、

和

(Novozymes A/S)销售的那些，以商品名

Purafect

Purafect

Purafect

Purafect

和

(Danisco/DuPont)、Axapem^TM(Gist-Brocases N.V.)销售的那些，BLAP(US5352604的图29中所示的序列)及其变体(Henkel AG)和来自Kao的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。

脂肪酶和角质酶

合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌起源的那些。包括化学修饰或蛋白质改造的突变酶。实例包括来自嗜热真菌属(Thermomyces)，例如如EP258068和EP305216中描述的来自疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(以前命名为绵毛状腐质霉(Humicolalanuginosa))的脂肪酶，来自腐质霉属例如特异腐质霉的角质酶(WO96/13580)，来自假单胞菌属菌株的脂肪酶(其中一些现在重新命名为伯克氏菌属(Burkholderia))，例如产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP218272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP331376)、假单胞菌属物种(P.sp.)菌株SD705(WO95/06720和WO96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO96/12012)、GDSL型链霉菌属(Streptomyces)脂肪酶(WO10/065455)、来自稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)的角质酶(WO10/107560)、来自门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)的角质酶(US5,389,536)、来自嗜热裂孢菌的脂肪酶(Thermobifida fusca)(WO11/084412)、嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)脂肪酶(WO11/084417)、来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO11/084599)、以及来自灰色链霉菌(Streptomyces griseus)(WO11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)(WO12/137147)的脂肪酶。

其他实例是脂肪酶变体，例如EP407225、WO92/05249、WO94/01541、WO94/25578、WO95/14783、WO95/30744、WO95/35381、WO95/22615、WO96/00292、WO97/04079、WO97/07202、WO00/34450、WO00/60063、WO01/92502、WO07/87508和WO09/109500中所述的那些。

优选的商业脂肪酶产品包括Lipolase^TM、Lipex^TM；Lipolex^TM和Lipoclean^TM(Novozymes A/S)、Lumafast(最初来自Genencor)和Lipomax(最初来自Gist-Brocades)。

另外其他实例是脂肪酶，有时被称为酰基转移酶或过水解酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A(WO10/111143)具有同源性的酰基转移酶、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO09/67279)、以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体，特别是来自Huntsman TextileEffects Pte Ltd的商业产品Gentle Power Bleach中使用的S54V变体(WO10/100028)。

淀粉酶

可以连同本发明的酶一起使用的合适的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶，并且可以是细菌或真菌起源的。包括化学修饰或蛋白质改造的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属获得的α-淀粉酶，例如GB 1,296,839中更详细描述的地衣芽孢杆菌的特殊菌株。

合适的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:3具有90％序列同一性的变体。WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424和WO 99/019467的SEQ ID NO:4中描述了优选的变体，例如在下述位置的一个或多个中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。

不同的合适淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是具有在位置181和182处的缺失和在位置193处的取代的那些。

合适的其他淀粉酶是杂合α-淀粉酶，其包含WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中所示的衍生自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33，以及WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中所示的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483，或其具有其90％序列同一性的变体。这种杂合α-淀粉酶的优选变体是在下述位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264。包含WO 2006/066594的SEQ IDNO:6中所示的衍生自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33以及SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有下述取代的那些：

M197T；

H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或

G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。

合适的进一步淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在下述位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182或位置H183和G184处具有缺失的淀粉酶。

可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些，或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:7具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选变体是在下述位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476，使用WO 96/023873的SEQ ID 2用于编号。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置，例如181和182、182和183，或位置183和184中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是具有在位置183和184中的缺失以及在位置140、195、206、243、260、304和476的一个或多个中的取代的那些。

可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶，或者其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列同一性或WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列同一性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选变体是在下述位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。

合适的进一步淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:2具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:2的优选变体是具有C末端截短和/或在下述位置的一个或多个中的取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO:2的更优选变体是在下述位置的一个或多个中具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E和G475K和/或位置R180和/或S181或T182和/或G183中的缺失。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：

N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；

N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；

S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或

S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中所述变体是C末端截短的，并且任选进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。

合适的进一步淀粉酶是具有WO13184577的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQ IDNO:1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选变体是在下述位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476和G477。SEQ ID NO:1的更优选变体是在下述位置的一个或多个中具有取代的那些：K176L、E187P、N192FYH、M199L、I203YF、S241QADN、R458N、T459S、D460T、G476K和G477K和/或在位置R178和/或S179或T180和/或G181中的缺失。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：

E187P+I203Y+G476K

E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K

其中所述变体任选进一步包含在位置241处的取代和/或在位置178和/或位置179处的缺失。

合适的进一步淀粉酶是具有WO10104675的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQ IDNO:1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选变体是在下述位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：N21、D97、V128K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477和G478。SEQ ID NO:1的更优选变体是在下述位置的一个或多个中具有取代的那些：N21D、D97N、V128I K177L、M200L、L204YF、E242QA、G477K和G478K和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182中的缺失。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：

N21D+D97N+V128I

其中所述变体任选进一步包含在位置200处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。

其他合适的淀粉酶是具有WO01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO01/66712中的SEQ IDNO:12的下述位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体，以及另外具有选自以下的一个或多个位置中的取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339，最优选在所有这些位置另外具有取代的变体。

其他实例是淀粉酶变体，如WO2011/098531、WO2013/001078和WO2013/001087中所述的那些。

商购可得的淀粉酶是Duramyl^TM、Termamyl^TM、Fungamyl^TM、Stainzyme ^TM、StainzymePlus^TM、Natalase^TM、Liquozyme X和BAN^TM(来自Novozymes A/S)，以及Rapidase^TM、Purastar^TM/Effectenz^TM、Powerase、Preferenz S1000、Preferenz S100和Preferenz S110(来自Genencor International Inc./DuPont)。

过氧化物酶/氧化酶

根据本发明的过氧化物酶是如通过国际生物化学与分子生物学联盟(International Union of Biochemistry and Molecular Biology)(IUBMB)的命名委员会阐述的酶分类EC 1.11.1.7包含的过氧化物酶，或显示出过氧化物酶活性的由其衍生的任何片段。

合适的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌起源的那些。包括化学修饰或蛋白质改造的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属(Coprinopsis)，例如来自灰盖鬼伞(C.cinerea)(EP179,486)的过氧化物酶及其变体，如WO 93/24618、WO 95/10602和WO 98/15257中所述的那些。

根据本发明的过氧化物酶还包括卤素过氧化物酶，如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶和显示出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。卤素过氧化物酶根据其对于卤化物离子的特异性进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化来自氯离子的次氯酸盐形成。

在一个实施方案中，本发明的卤素过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，卤素过氧化物酶是钒卤素过氧化物酶，即含钒酸盐的卤素过氧化物酶。在本发明的优选方法中，将含钒酸盐的卤素过氧化物酶与氯离子来源组合。

卤素过氧化物酶已从许多不同的真菌中分离，所述真菌特别是真菌组暗色丝孢真菌(dematiaceous hyphomycetes)，例如Caldariomyces，例如C.fumago、链格孢属(Alternaria)、弯孢属(Curvularia)例如疣状弯孢(Curvularia verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis)、内脐蠕孢属(Drechslera)、单格孢属(Ulocladium)和葡萄孢属(Botrytis)。

卤素过氧化物酶也已从细菌例如假单胞菌属例如吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia)和链霉菌属例如金色链霉菌(S.aureofaciens)中分离。

在一个优选实施方案中，卤素过氧化物酶可衍生自弯孢菌属物种，特别是疣状弯孢或不等弯孢，例如如WO 95/27046中所述的不等弯孢CBS 102.42；或如WO 97/04102中所述的疣状弯孢CBS 147.63或疣状弯孢CBS 444.70；或如WO 01/79459中所述的Drechslerahartlebii、如WO 01/79458中所述的盐水小树状霉(Dendryphiella salina)、如WO 01/79461中所述的Phaeotrichoconis crotalarie、或如WO 01/79460中所述Geniculosporium物种。

根据本发明的氧化酶特别包括由酶分类EC1.10.3.2包含的任何漆酶，或显示出漆酶活性的由其衍生的任何片段或显示出相似活性的化合物，例如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。

优选的漆酶是微生物起源的酶。酶可以衍生自植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。

来自真菌的合适实例包括可衍生自下述菌株的漆酶：曲霉属(Aspergillus)、脉孢霉属(Neurospora)例如粗糙脉孢菌(N.crassa)、足孢虫属(Podospora)、葡萄孢属(Botrytis)、金钱菌属(Collybia)、层孔菌属(Fomes)、香菇属(Lentinus)、侧耳属(Pleurotus)、栓菌属(Trametes)例如长绒毛栓菌(T.villosa)和变色栓菌(T.versicolor)、丝核菌属(Rhizoctonia)例如立枯丝核菌(R.solani)、鬼伞属(例如灰盖鬼伞、毛头鬼伞(C.comatus)、费赖斯鬼伞(C.friesii)和褶纹鬼伞(C.plicatilis))、小脆柄菇属(Psathyrella)例如P.condelleana、斑褶菇属(Panaeolus)例如大孢斑褶菇(P.papilionaceus)、毁丝霉属(Myceliophthora)例如嗜热毁丝霉(M.thermophila)、Schytalidium例如S.thermophilum、多孔菌属(Polyporus)例如筛孔多孔菌(P.pinsitus)、射脉菌属(Phlebia)例如P.radiata(WO 92/01046)、或云芝属(Coriolus)例如毛云芝菌(C.hirsutus)(JP 2238885)。

来自细菌的合适例子包括可衍生自芽孢杆菌菌株的漆酶。

衍生自鬼伞属或毁丝霉属的漆酶是优选的；特别是如WO 97/08325中公开的衍生自灰盖鬼伞的漆酶；或如WO 95/33836中公开的衍生自嗜热毁丝霉的漆酶。

通过加入含有一种或多种酶的分开的添加剂，或通过加入包含所有这些酶的组合添加剂，洗涤剂酶可包括在洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂，即分开的添加剂或组合的添加剂可以例如配制为颗粒、液体、浆料等。优选的洗涤剂添加剂制剂是颗粒，特别是无粉尘颗粒、液体特别是稳定液体或浆料。

无粉尘颗粒可以如US 4,106,991和4,661,452中公开的生产，并且可以任选地通过本领域已知的方法进行涂布。蜡质包衣材料的实例是平均摩尔重量为1000至20000的聚乙二醇(PEG)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中醇含有12至20个碳原子并且其中存在15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯和甘油三酯。适合于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB1483591中给出。例如，液体酶制剂可以根据已确定的方法通过加入多元醇如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸得到稳定。受保护的酶可以根据EP 238,216中公开的方法进行制备。

辅助材料

也可以利用用于洗涤剂中的本领域已知的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括单独或组合的抗腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂/崩解试剂、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC、和/或多元醇如丙二醇)、织物柔顺剂包括粘土、填料/加工助剂、荧光增白剂/光学增白剂、泡沫促进剂、泡沫(泡沫)调节剂、香料、污垢悬浮剂、软化剂、抑泡剂、鞣质抑制剂和芯吸剂。可以利用用于洗涤剂中的本领域已知的任何成分。这些成分的选择完全在技术人员的技能范围内。

分散剂

本发明的洗涤剂组合物也可以含有分散剂。特别地，粉状洗涤剂可以包含分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚或共聚酸或其盐，其中多元羧酸包含通过不超过两个碳原子彼此分开的至少两个羧基原子团。合适的分散剂例如在Powdered Detergents，Surfactant science series volume 71，Marcel Dekker，Inc中描述。

染料转移抑制剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、聚胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基噁唑烷酮和聚乙烯基咪唑或其混合物。当存在于主题组合物中时，染料转移抑制剂可以以按组合物的重量计约0.0001％至约10％、约0.01％至约5％、或甚至约0.1％至约3％的量存在。

荧光增白剂

本发明的洗涤剂组合物优选还含有可以给待清洁的物品着色的另外组分，例如荧光增白剂或光学增白剂。当存在时，增白剂优选为约0.01％至约0.5％的水平。适用于洗涤用洗涤剂组合物的任何荧光增白剂都可用于本发明的组合物中。最常用的荧光增白剂是属于二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-二苯乙烯基衍生物类别的那些。二氨基芪-磺酸衍生物类型的荧光增白剂的实例包括下述的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸酯、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸酯、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸酯、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸酯和5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从Ciba-Geigy AG，Basel，瑞士获得的Tinopal DMS和Tinopal CBS。TinopalDMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸的二钠盐。Tinopal CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的荧光增白剂是由Paramount Minerals and Chemicals，Mumbai，印度供应的商购可得的Parawhite KX。适用于本发明的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷基氨基香豆素。

合适的荧光增白剂水平包括约0.01、0.05、0.1或者甚至约0.2重量％的较低水平至0.5或甚至0.75重量％的更高水平。

去污聚合物

本发明的洗涤剂组合物还可包括一种或多种去污聚合物，其帮助从织物如基于棉和聚酯的织物去除污垢，特别是从基于聚酯的织物去除疏水性污垢。去污聚合物可以是例如基于非离子或阴离子对苯二甲酸酯的聚合物、聚乙烯己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺参见例如Powdered Detergents，Surfactant science seriesvolume 71，Marcel Dekker，Inc中的第7章。另一类型的去污聚合物是两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物，其包含核心结构和附着至核心结构的多个烷氧基化物基团。核心结构可以包含如WO 2009/087523(在此引入作为参考)中详细描述的聚乙烯亚胺结构或聚烷醇胺结构。此外，无规接枝共聚物是合适的去污聚合物。合适的接枝共聚物在WO 2007/138054、WO2006/108856和WO 2006/113314(引入本文作为参考)中更详细地描述。其他去污聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，例如改性纤维素衍生物，例如在EP 1867808或WO 2003/040279(两者均在此引入作为参考)中所述的那些。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺及其混合物。合适的纤维素聚合物包括阴离子改性纤维素、非离子改性纤维素、阳离子改性纤维素、两性离子改性纤维素及其混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素酯及其混合物。

抗再沉积剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、以及乙氧基化聚乙烯亚胺。在上文去污聚合物下描述的基于纤维素的聚合物也可以充当抗再沉积剂。

流变改性剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种流变改性剂，结构剂或增稠剂，与粘度降低剂不同。流变改性剂选自非聚合结晶、羟基官能材料、聚合流变改性剂，其对液体洗涤剂组合物的水性液体基质赋予剪切稀化特性。洗涤剂的流变学和粘度可以通过本领域已知的方法进行修改和调节，例如如EP 2169040所示。

洗涤剂产物制剂

本发明的洗涤剂组合物可以是任何方便的形式，例如条、均质片剂、具有两层或更多层的片剂、具有一个或多个区室的小袋、常规或致密粉末、颗粒、糊剂、凝胶或常规的致密或浓缩液体。

小袋可以配置为单个或多个区室。它可以具有任何形式、形状和材料，其适合于容纳组合物，例如而不允许组合物在水接触之前从小袋中释放。小袋由封装内部容积的水溶性膜制成。所述内部容积可以被分成小袋的区室。优选的膜是聚合物材料，优选形成为膜或片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或衍生物是所选择的聚丙烯酸酯和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糖糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选聚乙烯醇共聚物和羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，膜例如PVA中的聚合物水平为至少约60％。优选的平均分子量通常为约20,000至约150,000。膜也可以是包含可水解降解和水溶性聚合物共混物的共混组合物，例如聚丙交酯和聚乙烯醇(如由MonoSol LLC，Indiana，USA出售的，在贸易参考M8630下已知)加上增塑剂如甘油、乙二醇、丙二醇、山梨糖醇及其混合物。小袋可以包含由水溶性膜分离的固体洗涤清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或部分组分。用于液体组分的区室可以在组成中不同于含有固体的区室：US2009/0011970 A1。

洗涤剂成分可以通过水溶性袋中的小室或在片剂的不同层中彼此物理分离。由此可以避免组分之间的负面贮存相互作用。每个区室的不同溶出曲线也可以导致所选组分在洗涤溶液中的延迟溶解。

并非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，通常含有按重量计至少20％和至多95％的水，例如至多约70％的水、至多约65％的水、至多约55％的水、至多约45％的水、至多约35％的水。其他类型的液体，包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚和多元醇可以包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有0-30％的有机溶剂。

液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。

洗涤皂条

本发明的酶可以加入洗涤皂条中并且用于手洗涤物、织物和/或纺织品。术语洗涤皂条包括洗涤条、皂条、组合条、syndet条和洗涤剂条。条的类型通常在其所含的表面活性剂的类型方面不同，并且术语洗涤皂条包括含有来自脂肪酸的皂和/或合成皂。洗涤皂条具有其在室温下是固体，而不是液体、凝胶或粉末的物理形式。术语固体被定义为在一段时间内不显著改变的物理形式，即如果将固体物体(例如洗涤皂条)放置在容器内，则固体物体不改变以填充其置于其中的容器。条是通常为条形式的固体，但也可以是其他固体形状如圆形或椭圆形。

洗涤皂条可以含有一种或多种另外的酶、蛋白酶抑制剂如肽醛(或亚硫酸氢盐加合物或半缩醛加合物)、硼酸、硼酸盐、硼砂和/或苯基硼酸衍生物如4-甲酰基苯基硼酸、一种或多种皂或合成表面活性剂、多元醇如甘油、pH控制化合物如脂肪酸、柠檬酸、乙酸和/或甲酸、和/或单价阳离子和有机阴离子的盐，其中单价阳离子可以是例如Na⁺、K⁺或NH₄ ⁺，并且有机阴离子可以是例如甲酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐或乳酸盐，使得一价阳离子和有机阴离子的盐可以是例如甲酸钠。

洗涤皂条还可以含有络合剂如EDTA和HEDP、香料和/或不同类型的填料、表面活性剂例如阴离子合成表面活性剂、增洁剂、聚合物去污剂、洗涤剂螯合剂、稳定剂、填料、染料、色素、染料转移抑制剂、烷氧基化聚碳酸酯、抑泡剂、结构剂、粘合剂、溶浸剂、漂白活化剂、粘土污垢去除剂、抗再沉淀剂、聚合物分散剂、增白剂、织物柔顺剂、香料和/或本领域已知的其他化合物。

洗涤皂条可以在常规的洗涤皂条制造设备中进行加工，所述设备例如但不限于：混合器、压条机例如两级真空压条机、挤出机、切割机、标志压模机、冷却通道和包装机。本发明并不限于通过任何单一方法制备洗涤皂条。本发明的预混物可以在该过程的不同阶段加入皂中。例如，可以制备含有皂、本发明的酶、任选的一种或多种另外的酶、蛋白酶抑制剂以及一价阳离子和有机阴离子的盐的预混物，然后将该混合物压条。本发明的酶和任选的另外的酶可以与例如以液体形式的蛋白酶抑制剂同时加入。除混合步骤和压条步骤以外，该方法可以进一步包括研磨、挤出、切割、冲压、冷却和/或包装的步骤。

酶在共颗粒中的配制

包含在本发明的洗涤剂组合物中的酶可以被配制为颗粒，例如组合一种或多种酶的共颗粒。每种酶然后以更多的颗粒存在，确保洗涤剂中酶的更均匀分布。这也减少了由于不同粒径的不同酶的物理隔离。用于生产用于洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法公开于IP.com公开内容IPCOM000200739D中。

WO2013/188331中公开了通过使用共颗粒的酶制剂的另一个实例，其涉及包含下述的洗涤剂组合物：(a)多酶共颗粒；(b)小于10重量的沸石(无水基础)；和(c)小于10重量的磷酸盐(无水基础)，其中所述酶共颗粒包含10至98重量％的吸湿组分，并且所述组合物另外包含20至80重量％的洗涤剂吸湿组分。WO2013/188331还涉及处理和/或清洁表面，优选织物表面的方法，所述方法包括以下步骤：(i)使所述表面与如本文请求保护和描述的洗涤剂组合物在水性洗涤液中接触，(ii)将表面冲洗和/或使表面干燥。

多酶共颗粒可以包含本发明的酶和(a)选自第一洗涤脂肪酶、清洁纤维素酶、木葡聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、脂氧合酶、漆酶及其混合物的一种或多种酶；(b)选自半纤维素酶、蛋白酶、护理纤维素酶、纤维二糖脱氢酶、木聚糖酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶酸裂合酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、苔聚糖酶葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、淀粉酶及其混合物的一种或多种酶。

在降解黄原胶中的用途

黄原胶用作许多消费品包括食品和化妆品以及石油和钻井工业中的成分。因此，具有黄原胶降解活性的酶可以应用于改善的清洁过程中，例如更容易去除含有黄原胶的污渍，以及经常用于石油和钻井工业中的黄原胶的降解。因此，本发明涉及本发明的洗涤剂组合物降解黄原胶的用途。本发明的洗涤剂组合物还可以包含如本文所述的酶和黄原胶裂解酶的组合。还设想了这种洗涤剂组合物降解黄原胶的用途。

黄原胶的降解可以使用如本文所述的粘度降低测定法对黄原胶进行测量。黄原胶降解活性可以可替代地测量为在黄原胶上的还原末端，使用由Lever(1972)，Anal.Biochem.47:273-279，1972开发的比色测定法。

在洗涤剂中的用途

本发明涉及本发明的洗涤剂组合物在清洁过程中的用途，所述清洁过程例如纺织品和织物的洗涤(例如家用洗涤用洗涤和工业洗涤用洗涤)，以及家用和工业硬表面清洁，例如餐具洗涤。

一个实施方案是包含如本文所述的酶连同黄原胶裂解酶的组合的洗涤剂组合物在清洁过程中的用途，所述清洁过程例如纺织品和织物的洗涤(例如家用洗涤用洗涤和工业洗涤用洗涤)，以及家用和工业硬表面清洁，例如餐具洗涤。

本发明还涉及用于降解纺织品的表面或硬表面如餐具洗涤上的黄原胶的方法，所述方法包括将包含如本文所述的一种或多种酶的洗涤剂组合物应用于黄原胶。本发明进一步涉及用于降解纺织品的表面或硬表面如餐具洗涤上的黄原胶的方法，所述方法包括将包含一种或多种黄原胶裂解酶的洗涤剂组合物应用于黄原胶。一个实施方案是用于降解纺织品的表面或硬表面如餐具洗涤上的黄原胶的方法，所述方法包括将包含如本文所述的一种或多种酶的洗涤剂组合物连同一种或多种黄原胶裂解酶一起应用于黄原胶。一个实施方案是包含如上所述的一种或多种洗涤剂组分的洗涤剂组合物。

本发明通过下述实施例进一步描述，所述实施例不应被解释为限制本发明的范围。

实施例

活性测定法

黄原胶裂解酶活性测定法

将0.8mL 100mM HEPES缓冲液pH 6.0与溶于1mL 1cm比色杯中的0.2mL黄原胶(5mg/mL)混合。将比色杯插入分光光度计(Agilent G1103A8453A，CA，USA)中，其中温度控制设为40℃下。将溶液预温育10分钟，并且加入0.1mL样品，并且通过使用移液管将溶液抽吸且分配至少5次来混合溶液。总反应体积为1.1mL。使用30秒的测量间隔收集在235nm处的吸光度共10分钟。通过使用软件(UV-Visible Chemstation Rev A.10.01[81]，Agilent)计算初始活性。

实施例1：菌株和DNA

编码SEQ ID NO:2的GH5多肽EXa的SEQ ID NO:1中的DNA得自从在丹麦收集的环境污垢样品分离的丰祐菌科物种。

编码SEQ ID NO:4的GH5多肽EXb的DNA SEQ ID NO:3从丹麦收集的环境样品中分离。

编码SEQ ID NO:5的GH5多肽EXc的DNA SEQ ID NO:5从丹麦收集的环境样品中分离。

编码SEQ ID NO:8的GH5多肽EXd的DNA SEQ ID NO:7得自公共数据库(UNIPROTM2V1S3)，但源于从厄瓜多尔的Galapagos Rift深海热泉收集的施氏假单胞菌菌株。

制备了编码四种多肽的成熟肽序列的密码子优化的合成DNA(SEQ ID NO:9；SEQID NO:10，SEQ ID NO:11；SEQ ID NO:12)。

实施例2：GH5多肽的克隆和表达

GH5编码基因或者通过常规技术从上文所示的菌株克隆，或者从合成DNA克隆，并且插入如下所述的合适质粒内。

实施例2a：GH5多肽在大肠杆菌中的克隆和表达

编码GH5内切葡聚糖酶基因的部分的成熟肽，SEQ ID NO:1、3、5和7被插入具有额外脯氨酸和精氨酸的N末端多组氨酸标签(HHHHHHPR)(SEQ ID NO:19)，在来自Novagen的大肠杆菌pET-32a(+)载体中的甲硫氨酸之后，使用标准重组技术。从含有质粒的大肠杆菌转化体中纯化含有插入片段的表达质粒，并且转化到大肠杆菌Xjb(DE3)宿主细胞(来自ZymoResearch)内。含有pET32-GH5载体的大肠杆菌Xjb(DE3)的新鲜克隆在含有100ug/ml氨苄青霉素的Terrific Broth中生长过夜。第二天，用1ml过夜培养物接种新鲜的500ml培养物，并且将细胞培养(37℃，250rpm)至6-8之间的光密度(OD600)。在20℃下，通过1mM异丙基硫代-D-半乳糖苷酶(IPTG)和6mM阿拉伯糖诱导蛋白质表达4.5小时。在继续培养后，通过离心收获细胞并且通过

(Novagen)裂解。如实施例4中所述，可溶级分用于GH5多肽SEQ ID NO:13、14和15的多组氨酸标签纯化。

实施例2b：GH5多肽在枯草芽孢杆菌中的克隆和表达

将合成密码子优化的基因SEQ ID NO:10、11和12克隆到WO 2012/025577中所述的芽孢杆菌属表达载体内。通过将天然分泌信号序列替换为在信号肽的C末端处具有额外亲和标签序列(HHHHHHPR)(SEQ ID NO:19)的克劳氏芽孢杆菌分泌信号MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA(SEQ ID NO:20)来表达基因，以促进纯化过程。这导致在成熟野生型序列(SEQ ID NO:16、17和18)的N末端前面具有His标签的重组成熟多肽。

选择具有正确的重组基因序列的一个克隆，并且通过同源重组将相应的质粒整合到枯草芽孢杆菌宿主细胞基因组(果胶酸裂解酶基因座)内，并且基因构建体在三重启动子系统的控制下表达，如WO99/43835中所述。编码氯霉素乙酰转移酶的基因用作标记(如Diderichsen等人，1993，Plasmid 30:312-315中所述)。

通过PCR分析氯霉素抗性转化体以验证扩增片段的正确大小。选择含有整合的表达构建体的重组枯草芽孢杆菌克隆，并且在旋转振动台上在500mL带挡板的锥形瓶中培养，每个锥形瓶含有100ml基于酵母提取物的培养基。克隆在30℃下培养5天。收获含有酶的上清液，并且如实施例5中所述纯化酶。

实施例3：从天然丰祐菌科菌株中纯化野生型GH5多肽

将丰祐菌科菌株在旋转振动台上在500mL带挡板的锥形瓶中培养，每个锥形瓶含有100ml具有0.5％黄原胶的矿物质溶液。该菌株在30℃下培养20天。通过离心收获总共2.0L上清液，并且使用0.2μm瓶顶过滤器(Nalgene Nunc)过滤。使用具有30kDa截断值的超滤(Sartorius)，将肉汤浓缩至300mL。伴随连续搅拌，缓慢加入等体积的在40mM Tris-HCl(pH 7.9)中的3.2M硫酸铵。使用Whatman玻璃过滤器(1.7μm-0.7μm)过滤样品，以去除较大的颗粒。将样品应用于20mL苯基-琼脂糖高性能柱(GE Healthcare)，所述柱用在20mMTris-HCl(pH 7.9)(平衡缓冲液)中的1.6M硫酸铵预平衡。未结合的蛋白质通过两个柱体积的平衡缓冲液洗脱。通过在20mM Tris-HCl(pH 7.9)中从1.6M到0.0M硫酸铵的12个柱体积的线性梯度来完成洗脱。使用平衡缓冲液具有4个柱体积的最后一个洗脱步骤用于洗脱紧密结合的蛋白质。在整个纯化期间记录在280nm处的吸光度。通过SDS-PAGE(NuPAGE，Invitrogen)分析通过在色谱图中在280nm处的吸光度鉴定的含有蛋白质的级分。合并判断为纯的级分。使用具有3kDa截断值(Pall)的Macrosep超滤装置，将样品从30浓缩到4mL。通过使用计算的消光系数测量在280nm处的吸光度来测定蛋白质浓度，其中1mg/mL等于1.89吸光度单位。

实施例4：在大肠杆菌中产生的重组GH5多肽的纯化

使200mL裂解的细胞(如实施例2a生长)通过Fast PES 0.2μm瓶顶过滤器过滤，以去除碎片和未破碎的细胞。将200mL平衡缓冲液(20mM Tris-HCl，pH 7.5+500mM NaCl)加入粗蛋白溶液中。装有Ni²⁺的20mL HisPrep柱用平衡缓冲液平衡，直到获得稳定的UV基线。在纯化过程自始至终连续监测在280nm处的吸光度。使用4mL/分钟的流速将粗蛋白装载到柱上。通过用平衡缓冲液洗涤柱去除未结合的蛋白质，直到获得稳定的UV基线。使用20mMTris-HCl，pH 7.5+500mM NaCl+500mM咪唑(洗脱缓冲液)，通过两步线性梯度进行洗脱。第一洗脱梯度为10个柱体积的0至40％洗脱缓冲液，随后为40％至100％的4个柱体积。通过SDS-PAGE(NuPAGE，Invitrogen)分析在280nm处吸收的峰。将含有具有正确表观分子量的蛋白质的级分合并。使用由20mM Tris-HCl，pH 8.0平衡的Sephadex G-25超细脱盐柱，将该合并物(pool)脱盐并且缓冲液交换。将该合并物应用于20mL用20mM Tris-HCl，pH 8.0预平衡的Source15Q柱上。使用20mM Tris-HCl，pH 8.0洗掉未结合的蛋白质，直到获得稳定的UV基线。通过在20mM Tris-HCl，pH 8.0中的0至500mM NaCl的10个柱体积的线性NaCl梯度来完成洗脱。通过SDS-PAGE分析含有蛋白质的级分，并且合并判断为纯的级分。使用计算的消光系数，使用在280nm处的吸光度测量蛋白质浓度，其中1mg/mL对应于1.86吸光度单位。

实施例5：枯草芽孢杆菌中产生的重组GH5多肽的纯化

所有加上His标签的酶通过在5mL HisTrap Excel柱(GE Healthcare LifeSciences)上使用Ni²⁺作为金属离子的固定化金属层析(IMAC)进行纯化。纯化在pH 8下进行，并且结合的蛋白质用咪唑洗脱。通过SDS-PAGE检查纯化的酶的纯度，并且在缓冲液交换之后通过Ab 280nm测定每种酶的浓度。

实施例6：通过粘度降低的测量，GH5多肽和黄原胶裂解酶对黄原胶的黄原胶降解活性

粘度降低测量使用WO2011/107472中所述的粘度压力测定法并且遵循WO2013167581中所述的方法来执行。所呈现的结果是三次测量的平均值，并且显示于下表1和2中。

使用400μL的样本大小。水解条件如下：30℃，在50mM MES缓冲液+0.01％tritonx-100pH 7.0或100mM CHES缓冲液+0.01％triton x-100pH10中的0.25％或0.5％黄原胶(XG)。在热平衡后加入酶。在使用之前，所有酶使用NAP 5柱(GE Healthcare)将缓冲液变换为MES缓冲液。

实施例5的纯化酶制剂以31.25mg/L的浓度用于分析。

上文呈现的结果显示单独和与黄原胶裂解酶组合的GH5多肽可以降解在pH 7下在培养基中存在的黄原胶，因此导致粘度降低。用GH5和黄原胶裂解酶的组合获得了协同效应。

上文呈现的结果显示单独或与黄原胶裂解酶组合的GH5多肽可以降解在pH 10下在培养基中存在的黄原胶，因此导致粘度降低。

上文呈现的结果显示单独和与黄原胶裂解酶组合的GH5多肽可以降解在pH 7下在培养基中存在的黄原胶，因此导致粘度降低。

上文呈现的结果显示单独和与黄原胶裂解酶组合的GH5多肽EXa、EXb和EXc可以降解在pH 7下在培养基中存在的黄原胶，因此导致粘度降低。用GH5多肽和黄原胶裂解酶的组合获得了协同效应。

上文呈现的结果显示单独和与黄原胶裂解酶组合的GH5多肽EXa、EXb和EXc可以降解在pH 7下在培养基中存在的黄原胶，因此导致粘度降低。用GH5多肽和黄原胶裂解酶的组合获得了协同效应。

上文呈现的结果显示与黄原胶裂解酶组合的GH5多肽GH5、EXb和EXc可以降解在pH10下在培养基中存在的黄原胶，因此导致粘度降低。

实施例8：通过粘度降低的测量，GH5多肽和黄原胶裂解酶对黄原胶的黄原胶降解活性

使用WO2011/107472中描述的粘度压力测定法执行粘度测量。每1mL水解或对照的150μL是样本大小。呈现的结果是四次测量的平均值，并且显示于下表8和9中。

改性黄原胶是通过Nankai等人1999."Microbial system for polysaccharidedepolymerization:enzymatic route for xanthan depolymerization by Bacillus spstrain GL1."Applied and Environmental Microbiology 65(6):2520-2526的修改制备。

在2L烧杯中将2.5g黄原胶(CP Kelco)用5mL 96％乙醇润湿。加入500mL的100mMACES缓冲液pH 7.00，并且将溶液在环境温度下搅拌2小时。加入250μL黄原胶裂解酶(芽孢杆菌属物种，Megazyme)，并且使溶液在50℃下温育20小时。然后通过烧杯置于冰上冷却样品。在水解后，在搅拌下，将1400mL冰冷的96％乙醇加入500mL样品中。发生沉淀，并且在大约5分钟后，倾析乙醇，去除丙酮酸甘露糖残余物。将样品真空过滤并且转移到玻璃板。玻璃在50℃下干燥20小时。收集样品，称重并且碾磨。

水解条件如下：40℃，在50mM HEPES缓冲液+0.01％triton X-100pH7.0中的0.35％黄原胶(XG)。如上所述制备改性黄原胶粉末(mXG)，并且使用与对于XG概述的相同程序制备0.7％溶液。在热平衡后加入酶。在热平衡之后，在酶加入之前测量初始粘度。对照与加入的缓冲液而不是酶相同。监测缓冲液以确定总水解的最终终点。

实施例9：GH5多肽和黄原胶裂解酶的洗涤性能

在洗涤用洗涤实验中使用小型洗涤测定法来评价GH5酶的洗涤性能，所述小型洗涤测定法是其中污损的纺织品连续举起和下降到测试溶液内，并且随后清洗的测试方法。洗涤实验在表10中指定的实验条件下进行。

随后将纺织品晾干，并且洗涤性能测量为纺织品颜色的亮度。亮度可以表示为缓解(R)，其是在用白光照射时从测试材料反射或发射的光的量度。使用Zeiss MCS 521VIS分光光度计在460nm处测量纺织品的缓解(R)。测量根据制造商的方案完成。

将新酶(组合)的性能与单独的洗涤剂(空白对照)的性能进行比较。如果酶比单独的洗涤剂表现得更好(即R_酶>R_空白对照)，则酶(组合)视为显示出改善的洗涤性能(参见表13和14)。

实施例10：GH5多肽和黄原胶裂解酶的组合的洗涤性能对特定的污渍进行测试

液体和粉末洗涤剂中的变体的洗涤性能通过使用下述标准化污渍来测定，所有这些均可从CFT(Center for Testmaterials)B.V.，Vlaardingen，荷兰获得：

A：流体化妆品：产品编号PCS17

B：流体化妆品：产品编号CS17

对于液体洗涤剂中的测试，具有下述组成的液体洗涤剂用作基础制剂(所有值为重量百分比)：0至0.5％黄原胶、0.2至0.4％消泡剂、6至7％甘油、0.3至0.5％乙醇、0至7％FAEOS(脂肪醇醚硫酸盐)、10至28％非离子表面活性剂、0.5-1％硼酸、1至2％柠檬酸钠(二水合物)、2至4％苏打、0至16％椰子脂肪酸、0.5％HEDP(1-羟基乙烷-(1,1-二膦酸))、0至0.4％PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、0至0.05％光学增白剂、0至0.001％染料，剩余部分为去离子水。

基于该基础制剂，通过加入如表15所示的各种酶组合来制备洗涤剂。作为参考，使用不添加酶组合的洗涤剂组合物。

液体洗涤剂的剂量比为4.7克/升洗涤液，并且洗涤程序在40℃的温度下进行60分钟，水具有在15.5和16.5°之间的水硬度(德国硬度)。

对于固体洗涤剂中的测试，欧洲高级洗涤剂用作基础制剂。

用光度法测定白度，即污渍的增白作为洗涤性能的指标。使用Minolta CM508d光谱仪装置，所述装置预先使用与该单元一起提供的白色标准进行校准。

所得到的结果是用洗涤剂获得的缓解单位与用含有酶组合的洗涤剂获得的缓解单位之间的差值。正值因此指示由于洗涤剂中存在的酶组合而改善的洗涤性能。从表15中显而易见的是，根据本发明的酶组合显示改善的洗涤性能。

表15：在液体洗涤剂中的洗涤性能

表16：在固体洗涤剂中的洗涤性能

实施例11：含和不含黄原胶裂解酶的GH5多肽的洗涤性能

在该实施例中，在自动机械应力测定法(AMSA)中在20℃或40℃下洗涤的液体模型洗涤剂A中评估GH5多肽的洗涤性能。单独或与黄原胶裂解酶组合评估酶的洗涤性能。所使用的洗涤条件在下表17中指定。

表17.实施例11中使用的洗涤条件：

将酶和洗涤液加入AMSA板中并且根据表17中列出的条件洗涤。在洗涤后，将织物在自来水中冲洗并且晾干。

随后酶的性能测量为纺织品样品颜色的亮度。当用白光照射时，亮度测量为从纺织品样品反射的光的强度。用具有专门设计软件的专业平板扫描仪EPSON EXPRESSION10000XL测量强度，所述软件通过标准矢量计算从扫描的图像中提取强度值。

将酶(或酶的组合)的性能与单独的洗涤剂(空白对照)或具有黄原胶裂解酶(XL)的洗涤剂的性能进行比较。如果酶(或酶的组合)比单独的洗涤剂表现得更好(即R_酶>R_空白对照)，则酶视为显示出改善的洗涤性能(参见表18、19、20和21)。

表18.在20℃下在模型洗涤剂A中，在AMSA中测试的GH5多肽EXb(SEQ ID NO:16)和EXc(SEQ ID NO:17)的强度和δ强度。

表19.在40℃下在模型洗涤剂A中，在AMSA中测试的GH5多肽EXb(SEQ ID NO:16)和EXc(SEQ ID NO:17)的强度和δ强度。

表20.在20℃下在模型洗涤剂A中，在AMSA中测试的具有黄原胶裂解酶(XLb(SEQID NO:22)的GH5多肽EXb(SEQ ID NO:16)和EXc(SEQ ID NO:17)的强度和δ强度。

表21.在40℃下在模型洗涤剂A中，在AMSA中测试的具有黄原胶裂解酶(XLb(SEQID NO:22)的GH5多肽EXb(SEQ ID NO:16)和EXc(SEQ ID NO:17)的强度和δ强度。

上表中的结果显示，当单独或与黄原胶裂解酶例如XLb组合评估时，GH5多肽例如EXb和EXc具有改善的洗涤性能。

本文描述和请求保护的本发明在范围中不受本文公开的具体方面的限制，因为这些方面预期作为本发明的几个方面的举例说明。任何等价的方面都预期在本发明的范围内。实际上，除本文显示和描述的那些之外的本发明的各种修改根据前文说明书对于本领域技术人员将是显而易见的。这样的修改也预期落入所附权利要求的范围内。在冲突的情况下，以本公开内容包括定义为准。

Claims (22)

1.一种洗涤剂组合物，其包含具有黄原胶降解活性的糖基水解酶家族5的多肽，其中所述多肽选自由下述组成的组中：

(a)SEQ ID NO:6所示的多肽；

(b)由SEQ ID NO:5所示的多核苷酸编码的多肽；和

(c)由(a)或(b)的多肽以及N末端和/或C末端His标签组成的多肽。

2.权利要求1的洗涤剂组合物，其进一步包含具有黄原胶裂解酶活性的多肽。

3.权利要求2的洗涤剂组合物，其中具有黄原胶裂解酶活性的所述多肽是具有SEQ IDNO:21、22、23或24中任一个的氨基酸序列的多肽。

4.根据权利要求1的洗涤剂组合物，其中所述组合物为条、均质片剂、具有一个或多个区室的小袋、常规粉末、颗粒、糊剂、凝胶或常规液体的形式。

5.根据权利要求1的洗涤剂组合物，其中所述组合物为具有两层或更多层的片剂的形式。

6.根据权利要求1的洗涤剂组合物，其中所述组合物为具有致密粉末的形式。

7.根据权利要求1的洗涤剂组合物，其中所述组合物为具有致密或浓缩液体的形式。

8.权利要求1的洗涤剂组合物，所述组合物进一步包含选自以下的一种或多种另外的酶：蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、碳水化合物酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、黄原胶酶、漆酶和/或过氧化物酶。

9.权利要求1的洗涤剂组合物，所述组合物进一步包含选自以下的一种或两种另外的酶：纤维素酶和/或果胶酶。

10.权利要求1至9中任一项的洗涤剂组合物，其中所述组合物是洗涤用洗涤剂组合物。

11.权利要求1至9中任一项的洗涤剂组合物，其中所述组合物是餐具洗涤组合物。

12.权利要求11的洗涤剂组合物，其中所述餐具洗涤组合物是机器餐具洗涤组合物。

13.根据权利要求1至12中任一项的洗涤剂组合物在清洁过程中的用途。

14.根据权利要求13的用途，其中所述清洁过程是洗涤。

15.根据权利要求14的用途，其中所述清洁过程是硬表面清洁。

16.根据权利要求15的用途，其中所述硬表面清洁是餐具洗涤。

17.一种从表面去除污渍的方法，其包括使所述表面与根据权利要求1至12中任一项的洗涤剂组合物接触。

18.根据权利要求1至12中任一项的洗涤剂组合物用于降解黄原胶的用途。

19.权利要求18的用途，其中所述洗涤剂组合物具有酶去垢益处。

20.一种用于降解黄原胶的方法，其包括将根据权利要求1至12中任一项的洗涤剂组合物应用于黄原胶。

21.权利要求20的方法，其中所述黄原胶在纺织品的表面或硬表面上。

22.权利要求21的方法，其中所述黄原胶在餐具洗涤中的硬表面上。