CN103987845A - 含有蛋白酶和淀粉酶的储存稳定的液体洗涤剂或清洗剂 - Google Patents

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Abstract

本发明的目的在于改善含有蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂的储存稳定性。通过使用蛋白酶实现上述目标，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有至少两个选自S3T、V4I和V199I的其他氨基酸取代。

Description

含有蛋白酶和淀粉酶的储存稳定的液体洗涤剂或清洗剂
本发明涉及液体洗涤剂和清洗剂的领域。本发明具体地涉及含有酶的液体洗涤剂和清洗剂，其含有与淀粉酶组合的特定蛋白酶；并且还建议了使用这类洗涤剂和清洗剂的方法。本发明还涉及特定的蛋白酶在含有淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂中的用途。
对于洗涤剂和清洗剂优选使用枯草杆菌蛋白酶类型的蛋白酶。现有技术中已知用于洗涤剂或清洗剂的蛋白酶最初来源于微生物，例如芽孢杆菌属、链霉菌属、腐质霉属或假单胞菌属；和/或利用本身已知的生物技术方法通过合适的微生物制备，例如通过芽孢杆菌属或丝状真菌的转基因表达宿主制备。
其他酶，特别是淀粉酶越来越多地特别是存在于现代的液体洗涤剂中。淀粉酶是催化糖苷键水解的酶，特别是在多糖诸如淀粉中。淀粉酶当中，水解直链淀粉中α(1-4)-糖苷键的α-淀粉酶经常被用于洗涤剂和清洗剂。在酶的EC分类即酶的数字分类系统内，α-淀粉酶具有EC编号(“国际酶学委员会编号”)3.2.1.1并且因此属于六个主要酶类中的第三个——水解酶类(EC3.-.-.-)，然后还属于糖基化类(EC3.2.-.-)，还属于糖苷酶类(EC3.2.1.-)，即能水解O-和/或S-糖基化合物的酶。通过α-淀粉酶分解淀粉产生糊精，然后从后者产生麦芽糖、葡萄糖和支化低聚糖。淀粉酶因此特别作用于待洗的衣物上含淀粉的污渍并且催化其水解。
国际专利申请WO95/23221和WO92/21760公开了适合用于洗涤剂或清洗剂的来自迟缓芽孢杆菌(bacillus lentus)DSM5483的碱性蛋白酶的变体，以及含有这样的蛋白酶的洗涤剂和清洗剂。此外，国际专利申请WO2011/032988公开了同样含有来自迟缓芽孢杆菌DSM5483的碱性蛋白酶的变体的洗涤剂和清洗剂。除其他位置外，公开在所述文献中的蛋白酶变体在按照来自迟缓芽孢杆菌DSM5483的碱性蛋白酶的编号系统的位置3、4、99和199中可被修饰，并且例如在指定位置中具有氨基酸3T、4I、99D、99E或199I。此外还公开的是：该洗涤剂可含有其他酶，也包括淀粉酶。洗涤剂可以是固态或液体。但是，所述文献并未直接并清楚地公开含有与蛋白酶组合的淀粉酶的液体洗涤剂，其中该蛋白酶具有下文描述的这些修饰的组合。
含有蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂和清洗剂的现有技术的缺点是它们储存稳定性不足，并因此在很短的时间后丧失相当程度的酶促活性，特别是水解淀粉的活性和/或水解蛋白质的活性。蛋白酶的存在往往导致淀粉水解活性的丧失，因为蛋白酶钝化淀粉酶。因此洗涤剂或清洗剂不再表现出最佳清洗性能。
本发明的目的是克服上述缺点，并提供含有蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂，该液体洗涤剂或清洗剂具有合适的或改善的储存稳定性，特别是就它们的酶活性而言，并且优选地就它们的淀粉水解活性和/或蛋白水解活性而言。
因此，本发明提供液体洗涤剂或清洗剂，其包含
(a)蛋白酶，所述蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有选自S3T、V4I和V199I的至少两个其它氨基酸取代，以及
(b)淀粉酶。
令人惊讶地发现，含有这样的蛋白酶与淀粉酶的组合的液体洗涤剂或清洗剂在储存中有利地稳定。特别地，在储存后与仅在相应洗涤剂或清洗剂中所含的蛋白酶上不同于本发明的洗涤剂或清洗剂比较，其呈现提高的清洗性能，尤其是改进的水解淀粉的清洗性能和/或水解蛋白质的清洗性能，其中在储存开始时，用于比较的洗涤剂或清洗剂所含蛋白酶相对于活性酶具有相同的浓度。因此，为本发明的目的而提供的蛋白酶减弱了淀粉酶的失活，并且其自身的性能丧失也得以减少。但是，通过为本发明的目的而提供的蛋白酶减弱淀粉酶和/或蛋白酶的失活并不是因为蛋白酶性能和/或活性不足。
根据本发明的试剂在这方面较好地表现出关于蛋白酶敏感的污渍的清洗性能，其中该清洗性能保持良好，尤其有利。因此这样的试剂使得能够令人满意地或改善去除纺织品和/或坚硬表面例如盘子上的至少一种、优选多种蛋白酶敏感类型的污渍。在本发明选择进行的研制中，这样的关于至少一种蛋白酶敏感类型的污渍的清洗性能特别地还发生在低温下，例如10℃-50℃、10℃-40℃或20℃-40℃。
关于引言中提到的国际专利申请WO95/23221、WO92/21760和WO2011/032988，本发明因此是特别有利的选择，这使得能得到具有良好性能并且储存稳定的液体洗涤剂，特别是关于该试剂在储存后的水解蛋白和/或水解淀粉的清洗性能和/或关于该试剂在储存后的蛋白水解活性和/或淀粉水解活性。
为了本发明的目的，清洗性能理解为洗涤剂或清洗剂部分地或完全地除去施加试剂时存在的污渍的能力。就待洗衣物污渍来说，这是关于纺织品上一种或多种类型污渍的较好的减轻性能。洗衣污渍的实例为棉布上的血-乳液/墨汁、棉布上的全蛋/色素、棉布上的巧克力-乳液/墨汁、聚酯/棉布上的花生油-色素/墨汁、棉布上的草或棉布上的可可。就洗碗剂来说，清洗性能描述了该洗碗剂除去盘子坚硬表面存在的污渍的能力。陶器污渍的实例为乳液、肉末、蛋黄、燕麦粥中的燕麦以及淀粉。为了本发明的目的，无论是包含蛋白酶与淀粉酶的洗涤剂或清洗剂或者由这样的试剂形成的洗涤液，还是该蛋白酶或者淀粉酶自身表现出相应的清洗性能。酶的清洗性能因此有助于试剂或者由该试剂形成的洗涤液的清洗性能。水解淀粉的清洗性能指的是关于淀粉酶敏感性污渍的清洗性能。水解蛋白的清洗性能指的是关于蛋白酶敏感性污渍的清洗性能。清洗性能以常规方式测定，优选地如下文进一步所述。
洗涤液理解为含有洗涤剂或清洗剂的工作溶液，该溶液作用于纺织品或织物或坚硬表面，并且因此与纺织品或织物或坚硬表面上存在的污渍接触。通常，当洗涤或清洗过程开始并且在例如洗碗机、洗衣机或另一适合的容器中用水稀释洗涤剂或清洗剂时产生洗涤液。
当根据本发明的洗涤剂或清洗剂在储存之后与对照组合物比较而呈现更强的清洗性能时，可具体地获得为本发明目的的储存稳定性，其中所述对照组合物不同于本发明的洗涤剂或清洗剂仅在于存在对照组合物的蛋白酶。因此，在储存开始时，要比较的两种试剂具有相同的淀粉酶量或浓度和/或初始的淀粉水解活性。此外，在储存开始时，以活性酶为准，蛋白酶以相同的浓度存在于两种试剂中，并且以相同的方式处理该两种试剂，特别是关于储存条件和酶活性的测定。储存优选地以递增方式持续至少24小时、48小时、72小时、5天、1星期、2星期、3星期或4星期。此外，储存优选地在20℃、30℃或40℃的温度下进行，更优选地在40℃。
在这方面，酶活性可根据具体的酶类型而以常规方式被测定。用于测定活性的方法为所属酶技术领域的专业人员所熟知，并且由这样的专业人员按惯例使用。用于测定蛋白酶活性的方法例如被公开在Tenside[Surfactants],第7卷(1970)，125-132页。此外，蛋白水解活性可基于从底物suc-L-Ala-L-Ala-Pro-L-Phe-对硝基苯胺(suc-AAPF-pNA)释放发色团对硝基苯胺(pNA)而被测定。蛋白酶裂解该底物并释出pNA。pNA的释放带来410nm处吸光度的增加，其时间谱是酶活性的量度(参见Del Mar等，1979)。测量在25℃的温度、pH8.6和410nm的波长下进行。测量时间为5min，测量间隔为20s-60s。蛋白酶活性优选以PU(蛋白酶单位)表示。
淀粉酶活性以常规方式测定。优选地按以下所示测定淀粉酶活性。淀粉酶将淀粉转化为葡萄糖。在特定的反应条件(tris-马来酸盐缓冲液pH6.5，50℃，15min)下，用0.67％淀粉(可溶解,使用Zulkowsky法进行预处理(用甘油在190℃下处理))将使待测样品温育。通过添加二硝基水杨酸并加热至100℃，在碱性条件下所述酸被葡萄糖及其他还原糖还原形成橘红色染料，在反应结束后使用分光光度计在540nm处测定该染料。此处，对应于该颜色的释放的糖的量为酶活性的量度(参见Sumner等，J.Biol.Chem.,1921,47&1924,62)。
关于本发明目的的酶存在的稳定性更优选地如上所述使用在40℃的温度下储存四个星期的含有蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂来测定，其中通过从底物suc-AAPF-pNA释放的对硝基苯胺(pNA)发色团测定蛋白水解活性，并且如上所述测定淀粉水解活性。
存在于根据本发明的洗涤剂或清洗剂的蛋白酶包含在全长上与SEQID no.1所示的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ IDno.1的编号具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有选自S3T、V4I和V199I的至少两个其它氨基酸取代。
在本发明的另外的实施方案中，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77、78、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％和98.8％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99E并同时具有选自S3T、V4I和V199I的至少两个其它氨基酸取代。
在本发明的另外实施方案中，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77、78、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％和98.8％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99D并同时具有选自S3T、V4I和V199I的至少两个其它氨基酸取代。
SEQ ID no.1为来自迟缓芽孢杆菌DSM5483的成熟碱性蛋白酶的序列，其公开在国际专利申请WO92/21760中，并且明确引用该公开。
根据本发明更优选的蛋白酶为：
蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％和98.8％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99E并同时具有氨基酸取代S3T和V4I，特别是根据SEQ ID no.1具有氨基酸取代S3T、V4I和R99E的蛋白酶。
蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％和98.8％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99E并同时具有氨基酸取代S3T和V199I，特别是根据SEQ ID no.1具有氨基酸取代S3T、R99E和V199I的蛋白酶。
蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％和98.8％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99E并同时具有氨基酸取代V4I和V199I，特别是根据SEQ ID no.1具有氨基酸取代V4I、R99E和V199I的蛋白酶。
蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％和98.8％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99D并同时具有氨基酸取代S3T和V4I，特别是根据SEQ ID no.1具有氨基酸取代S3T、V4I和R99D的蛋白酶。
蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％和98.8％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99D并同时具有氨基酸取代S3T和V199I，特别是根据SEQ ID no.1具有氨基酸取代S3T、R99D和V199I的蛋白酶。
蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％和98.8％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99D并同时具有氨基酸取代V4I和V199I，特别是根据SEQ ID no.1具有氨基酸取代V4I、R99D和V199I的蛋白酶。
根据本发明的蛋白酶的另一个更优选实施方案的不同之处在于：它们具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有三个其他氨基酸取代S3T、V4I和199I。在这方面特别优选以下蛋白酶：
蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77、78、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％和98.5％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99E并同时具有氨基酸取代S3T、V4I和V199I，特别是根据SEQ ID no.1具有氨基酸取代S3T、V4I、R99E和V199I的蛋白酶。这样的蛋白酶示出在SEQ ID no.2。
蛋白酶，该蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％和98.5％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99D并同时具有氨基酸取代S3T、V4I和V199I,特别是根据SEQ ID no.1具有氨基酸取代S3T、V4I、R99D和V199I的蛋白酶。这样的蛋白酶示出在SEQ ID no.3。
进一步更优选的蛋白酶为如上所述的在根据SEQ ID no.1编号中还具有在位置211处的氨基酸亮氨酸(L)的蛋白酶。
为本发明的目的而通过比对所用的蛋白酶的氨基酸序列与如SEQ IDno.1所示的来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶的氨基酸序列来定义氨基酸位置。因为现有技术中来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶构成用于描述蛋白酶和氨基酸变化的重要参考分子，在氨基酸位置比对方面参考来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶的编号(SEQ ID no.1)是有利的。而且，该编号基于成熟蛋白。如果在与根据SEQ ID no.1的来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶比较要使用的蛋白酶的氨基酸序列包含更大量的氨基酸残基，这样的比对特别应当使用。基于来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶的氨基酸序列中的指定位置，本发明所用的蛋白酶中的氨基酸位置是在比对中精确分配至这些位置的氨基酸位置。
除位置99之外，特别有利的位置应相应为在与SEQ ID no.1的比对中并因此在根据SEQ ID no.1编号中的位置3、4、199和211。所述的位置由来自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶的野生型分子中的以下氨基酸残基占据：S3、V4、V199和L211。根据存在的来自SEQ ID no.1的序列偏差的数目，因此产生SEQ ID no.1中的本发明所用的蛋白酶可以表现的不同最大相同性值，关于所有其它氨基酸其甚至应当匹配SEQ ID no.1。在每种单独情况下对于所建议的序列修饰的每种可能的组合应该考虑这个因素，而且还取决于蛋白酶的氨基酸序列的长度。例如，具有1、2、3、4、5、6、7、8或9个序列修饰，对于长度为269个氨基酸的氨基酸序列，最大相同性量分别为98.88％、98.51％、98.14％、97.77％、97.40％、97.03％或96.65％，或者对于长度为275个氨基酸的氨基酸序列，分别为98.91％、98.55％、98.18％、97.82％、97.45％、97.09％或96.73％。
根据本发明已经发现，通过添加这样的蛋白酶至含有淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂，得到尤其储存稳定的液体洗涤剂，特别是关于其在储存之后的剩余清洗性能，特别是在如下递增的优选的储存期之后：24h、48h、72h、5天、1星期、2星期、3星期或4星期。
根据本发明的洗涤剂或清洗剂中含有的蛋白酶表现出蛋白水解活性，即其能够水解多肽或蛋白的肽键。因此其为催化肽键水解并且由此能裂解肽或蛋白的酶。特别是枯草杆菌酶，并且优选枯草杆菌蛋白酶。
淀粉酶为如引言中描述的酶。淀粉酶通过同义词可以被称为例如1,4-α-D-葡聚糖葡聚糖水解酶或糖原酶。能够根据本发明配制的淀粉酶优选地为α-淀粉酶。酶是否为用于本发明目的的α-淀粉酶是通过它对淀粉的直链淀粉中的α(1-4)-糖苷键的水解能力来判定的。
根据本发明能够配制的淀粉酶的实例为来自地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、来自解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)或来自嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)的α-淀粉酶，及其强化以用于洗涤剂或清洗剂的进一步开发品。来自地衣芽孢杆菌的酶可从Novozymes以名称以及从Danisco/Genencor以名称ST.下获得。此类α-淀粉酶的进一步开发产品可从Novozymes以商品名和从Danisco/Genencor以名称OxAm，以及从DaiwaSeiko Inc.,Tokyo,Japan以下获得。来自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶由Novozymes经销，名为来自嗜热脂肪芽孢杆菌的α-淀粉酶的变体同样由Novozymes经销，名为和为了此目的，还应进一步特别注意来自芽孢杆菌A7-7(DSM12368)的α-淀粉酶和来自粘琼脂芽孢杆菌(Bacillus agaradherens)(DSM9948)的环糊精葡糖基转移酶(CGTase)。同样可以使用所有指定分子的融合产物。此外，可得自于Novozymes在商品名下的来自黑曲霉(Aspergillus niger)和米曲霉(A.oryzae)的α-淀粉酶的进一步开发品也是适合的。可以有利地使用的其他商业产品为，例如和或Stainzyme或Stainzyme后者同样来自Novozymes。根据本发明，也可以使用通过点突变获得的这些酶的变体。更优选的淀粉酶公开在国际公开的专利申请WO00/60060、WO03/002711、WO03/054177和WO07/079938中，因此明确地参考这些公开，或者因此明确地将这些公开内容包括在本专利申请中。
根据SEQ ID no.4的α-淀粉酶AA560的α-淀粉酶变体特别适合用于根据本发明的试剂。以下变体是特别有利的：
(a)α-淀粉酶变体，相对于根据SEQ ID no.4的α-淀粉酶AA560，其在α-淀粉酶AA560的编号中具有1、2、3、4、5或6个以下序列修饰：R118K、D183*(缺失)、G184*(缺失)、N195F、R320K、R458K。该α-淀粉酶变体更优选地具有所有6个指定的序列修饰。
(b)α-淀粉酶变体，相对于根据SEQ ID no.4的α-淀粉酶AA560，其具有以下序列修饰(在α-淀粉酶AA560的编号中)：
(1)M9L/M202I,
(2)M9L/M202I/M323T,
(3)M9L/M202I/M323T/M382Y,
(4)M9L/M202I/Y295F/A339S,
(5)M9L/M202I/Y295F,
(6)M9L/M202I/A339S,
(7)M9L/M202I/Y295F/A339S,
(8)M9L/M202I/Y295F/A339S/E345R,
(9)M9L/G149A/M202I/Y295F/A339S/E345R,
(10)M9L/M202L,
(11)M9L/M202L/M323T,
(12)M9L/M202L/M323T/M382Y,
(13)M9L/M202L/Y295F/A339S,
(14)M9L/M202L/Y295F,
(15)M9L/M202L/A339S,
(16)M9L/M202L/Y295F/A339S,
(17)M9L/M202L/Y295F/A339S,E345R,
(18)M9L/G149A/M202L/Y295F/A339S/E345R,
(19)M9L/M202T,
(20)M9L/M202T/M323T,
(21)M9L/M202T/M323T/M382Y,
(22)M9L/M202T/Y295F/A339S,
(23)M9L/M202T/Y295F,
(24)M9L/M202T/A339S,
(25)M9L/M202T/Y295F/A339S,
(26)M9L/M202T/Y295F/A339S/E345R,
(27)M9L/G149A/M202T/Y295F/A339S/E345R,
(28)M9L/G149A/M202I/V214T/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R,
(29)M9L/G149A/M202L/V214I/Y295F/M323T/A339S/E345R/M382Y,
(30)M9L/G149A/G182T/G186A/M202I/V214I/Y295F/N299Y/M323T/A339S,
(31)M9L/G149A/G182T/G186A/M202L/T257I/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R,
(32)M9L/G149A/M202L/V214T/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R,
(33)M9L/G149A/M202I/V214I/Y295F/M323T/A339S/E345R/M382Y,
(34)M9L/G149A/G182T/G186A/M202L/V214I/Y295F/N299Y/M323T/A339S,
(35)M9L/G149A/G182T/G186A/M202I/T257I/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R,
(36)M9L/G149A/M202I/V214T/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R/N471E,
(37)M9L/G149A/M202L/V214I/Y295F/M323T/A339S/E345R/M382Y/N471E,
(38)M9L/G149A/G182T/G186A/M202I/V214I/Y295F/N299Y/M323T/A339S/N471E,
(39)M9L/G149A/G182T/G186A/M202L/T257I/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R/N471E,
(40)M202L/M105F/M208F,
(41)G133E/M202L/Q361E,
(42)G133E/M202L/R444E,
(43)M202L/Y295F,
(44)M202L/A339S,
(45)M202L/M323T,
(46)M202L/M323T/M309L,
(47)M202L/M323T/M430I,
(48)M202L/V214T/R444Y,
(49)M202L/N283D/Q361E,
(50)M202L/M382Y/K383R,
(51)M202L/K446R/N484Q,
(52)M202I/Y295F,
(53)M202I/A339S,
(54)M202I/M105F/M208F,
(55)G133E/M202I/Q361E,
(56)G133E/M202I/R444E,
(57)M202I/M323T,
(58)M202I/M323T/M309L,
(59)M202I/M323T/M430I,
(60)M202I/V214T/R444Y,
(61)M202I/N283D/Q361E,
(62)M202I/M382Y/K383R,
(63)M202I/K446R/N484Q,
(64)M202V/M105F/M208F,
(65)G133E/M202V/Q361E,
(66)G133E/M202V/R444E,
(67)M202V/M323T,
(68)M202V/M323T/M309L,
(69)M202V/M323T/M430I,
(70)M202V/M323T/M9L,
(71)M202V/V214T/R444Y,
(72)M202V/N283D/Q361E,
(73)M202V/M382Y/K383R,
(74)M202V/K446R/N484Q,
(75)M202T/M105F/M208F,
(76)G133E/M202T/Q361E,
(77)G133E/M202T/R444E,
(78)M202T/Y295F,
(79)M202T/A339S,
(80)M202T/M323T,
(81)M202T/M323T/M309L,
(82)M202T/M323T/M430I,
(83)M202T/M323T/M9L,
(84)M202T/V214T/R444Y,
(85)M202T/N283D/Q361E,
(86)M202T/A339S,
(87)M202T/Y295F
(88)M202T/N299F,Y,
(89)M202T/M382Y/K383R或
(90)M202T/K446R/N484Q。
这些当中，特别优选以下α-淀粉酶变体：
(10)M9L/M202L,
(28)M9L/G149A/M202I/V214T/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R,
(31)M9L/G149A/G182T/G186A/M202L/T257I/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R,
(35)M9L/G149A/G182T/G186A/M202I/T257I/Y295F/N299Y/M323T/
(38)M9L/G149A/G182T/G186A/M202I/V214I/Y295F/N299Y/M323T/
(39)M9L/G149A/G182T/G186A/M202L/T257I/Y295F/N299Y/M323T/A339S/E345R/N471E,
(45)M202L/M323T,
(46)M202L/M323T/M309L,
(62)M202I/M382Y/K383R,
(68)M202V/M323T/M309L,
(73)M202V/M382Y/K383R
(82)M202T/M323T/M430I或
(84)M202T/V214T/R444Y.
(c)根据(b)的α-淀粉酶变体，其另外还具有所有6个(a)中指定的序列修饰，特别优选具有(a)中指定的6个序列修饰的变体31。
根据本发明，(a)中指定的α-淀粉酶变体和具有6个(a)中指定的序列修饰的(c)中指定的α-淀粉酶变体31为特别优选的。
通过序列比较确定核酸或氨基酸序列的相同性。这样的比较通过在核苷酸序列或氨基酸序列中互相分配相似的序列来进行。这种序列比较优选地在现有技术建立的常规使用的BLAST算法的基础上进行(Altschul,S.F.,Gish,W.,Miller,W.,Myers,E.W.&Lipman,D.J.(1990)"Basic localalignment search tool."J.Mol.Biol.215:403-410以及Altschul,Stephan F.,Thomas L.Madden,Alejandro A.Schaffer,Jinghui Zhang,Hheng Zhang,WebbMiller,and David J.Lipman(1997):"Gapped BLAST and PSI-BLAST:a newgeneration of protein database search programs"；Nucleic Acids Res.,25,pp.3389-3402)，并且原则上通过互相分配核酸或氨基酸序列中的核苷酸或氨基酸的相似的序列来进行。所讨论的位置的表格分配称为比对。现有技术中可用的另一算法为FASTA算法。利用计算机软件常规创建序列比较(比对)，特别是多个序列比较。例如经常使用Clustal系列(参见例如Chenna等(2003):Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs.Nucleic Acid Research31,3497-3500)，T-Coffee(参见例如Notredame等(2000):T-Coffee:A novel method for Multiple sequence alignments.J.Mol.Biol.302,205-217)或者基于这些程序或算法的程序。为了本发明的目的，序列比较和比对优选地用计算机程序Vector10.3(InvitrogenCorporation,1600Faraday Avenue,Carlsbad,California,USA)利用预设的缺省参数进行。
这样的比较允许做出关于所比较的序列的相似性的说明。常规以百分比相同性(即其中相同的核苷酸或氨基酸残基的比例)或者以相互对应的位置的比对来说明。较广泛的术语“同源性”还包括考虑氨基酸序列中保守的氨基酸取代，因此具有相似的特性的氨基酸，因为它们一般在蛋白内具有相似的活性或功能。因此所比较序列的相似性还可以以百分比同源性或百分比相似性来说明。可以对整个多肽或基因或者仅对单个结构域做出关于相同性和/或同源性的说明。因此各种核酸或氨基酸序列的同源或相同结构域通过序列中的匹配来定义。它们经常具有相同或相似的功能。它们可以很小，并且仅包含几个核苷酸或氨基酸。这类小的结构域经常发挥对蛋白的总体活性必不可少的功能。因此序列匹配仅涉及单个任选的小结构域可以是有意义的。但是，如果没有另外说明，在本申请中关于相同性或同源性的说明在每种情况下涉及所示核酸或氨基酸序列的整个长度。
在本发明的另一实施方案中，根据本发明的洗涤剂或清洗剂的进一步特征在于：其清洗性能至少对应于含有蛋白酶的洗涤剂或清洗剂的清洗性能，所述蛋白酶包含对应于SEQ ID no.2或SEQ ID no.3中所示的氨基酸序列的氨基酸序列，更优选地为SEQ ID no.2中所示的氨基酸序列。清洗性能在含有4.0-11.0克/升洗涤液的添加率的含淀粉酶洗涤剂以及含有蛋白酶的洗涤系统中测定，其中待比较的蛋白酶在相同浓度(关于活性蛋白)下使用，并且通过测定洗涤过程后相应的污渍的残留来测定对于盘子上的肉末和/或蛋黄污渍的清洗性能，该洗涤过程进行至少30min，优选地60min，在50℃的温度下并且水的硬度为15.5-16.5°dH(德国的硬度标度)。
用于洗涤系统的洗涤剂优选地为两相的液体自动洗碗剂，其具有以下组成(所有值均以重量百分比表示):
(a)酶相：
淀粉酶优选地是α-淀粉酶变体的制备物，相对于根据SEQ ID no.4的α-淀粉酶AA560，该α-淀粉酶变体具有根据α-淀粉酶AA560的编号的以下序列修饰：R118K、D183*(缺失)、G184*(缺失)、N195F、R320K、R458K(Novozymes)。
(b)碱相：
相对于活性蛋白，蛋白酶以0.01-1重量％的浓度存在于洗涤剂或清洗剂中，优选地为0.1-0.5重量％。对于洗碗机的洗涤周期，该两相以相同比例分配(在各种情况下，每相20g)。在传统的洗碗机中，洗涤是在pH9-10下进行，例如来自于Miele的G698SC洗碗机。在洗涤开始时，洗涤液中的蛋白酶活性或淀粉酶活性均不为0。
利用标度1-10的标准IKW法目视地评价清洗性能，其中值10为最好的等级(无可见残渣)。
更优选地，在洗碗机中利用如上所述的两相液体自动洗碗剂相对于盘子上肉末和蛋黄污渍测定清洗性能。
在本发明的另一实施方案中，根据本发明的洗涤剂或清洗剂进一步的特征在于：其储存稳定性至少对应于含有蛋白酶的洗涤剂或清洗剂的储存稳定性，所述蛋白酶包含对应于SEQ ID no.2或SEQ ID no.3中所示的氨基酸序列的氨基酸序列，更优选地为SEQ ID no.2中所示的氨基酸序列。在50℃下储存4星期之后，与对比用的洗涤剂或清洗剂比较，如果根据本发明的洗涤剂或清洗剂具有相同的或更强的清洗性能，则这样的储存稳定性是存在的；其中根据本发明的洗涤剂或清洗剂与对比用的洗涤剂或清洗剂不同之处仅在于包含在其中的蛋白酶。
对比用的洗涤剂或清洗剂更优选地包含如上所述的两相液体自动洗碗剂，其中按上述测定清洗性能。
在储存开始时，相对于活性酶，待比较的两个试剂都具有相同的初始淀粉水解活性，含有相同浓度的蛋白酶，并且以同样方式处理两者。试剂中的蛋白水解活性在各种情况下通过来自底物suc-AAPF-pNA的发色团对硝基苯胺(pNA)的释放来测定，并且其淀粉水解活性在各种情况下也如上述被测定。相应的洗涤剂或清洗剂中的蛋白酶和淀粉酶的初始活性不等于0。
相对于活性蛋白，利用相同活性的淀粉酶和相同浓度的蛋白酶来确保即使在活性物质比总蛋白的比例(比活值)任何偏差的情况下仍然比较的是实际存在的酶的特性。
为本发明的目的，除非另有说明，在各种情况下参考液体洗涤剂的重量，即该值是相对于其重量而言的。
许多蛋白酶特别是枯草杆菌蛋白酶形成为“前蛋白”，即伴随着前肽和信号肽，其中所述信号肽的功能通常在于确保蛋白酶从产生其的细胞输出至胞外质或细胞周围的培养基，并且所述前肽对于蛋白酶的正确折叠通常是必需的。信号肽和前肽通常是前蛋白的N端部分。信号肽在天然条件下通过信号肽酶从蛋白酶的剩余部分被切割。然后发生正确、最终、前肽辅助的蛋白酶折叠。然后蛋白酶为其活性形式，并且自身切除前肽。一旦将前肽切除，则没有最初存在的N端氨基酸的成熟蛋白酶，特别是枯草杆菌蛋白酶发挥其催化活性。一般为了工业应用并且特别为了本发明的目的，成熟蛋白酶即其产生之后加工的酶比前蛋白优选。在产生多肽链之后，蛋白酶可以被产生它们的细胞进一步修饰，例如通过连接糖分子、甲酰化、胺化等。这类修饰为翻译后修饰，并且可以但不必需对蛋白酶的功能施加影响。
此外，成熟蛋白酶还可以在其N端和/或C端截短，从而蛋白酶相对于SEQ ID no.1或SEQ ID no.2或SEQ ID no.3截短，即片段存在于根据本发明的洗涤剂或清洗剂中。在这种情况下，相同性的所有说明均涉及结构域，其中在比对SEQ ID no.1中分配各个片段。然而，在任何情况下各个片段含有在与SEQ ID no.1比对中分配至位置3、4、99和/或199的位置，并且在此包含与根据本发明所提供的那些相对应的修饰。此外，这样的片段具有蛋白水解活性。在这方面进一步优选的片段包含氨基酸序列，该氨基酸序列在至少100或至少110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、265或266个连续氨基酸位置的长度上匹配SEQ ID no.1或SEQ ID no.2或SEQ ID no.3，考虑上文所述的位置99的氨基酸，并且还考虑上文所述的位置3和/或4和/或199和/或211的氨基酸。如上文所述在各种情况下测定的，包含这样的片段的本发明的液体洗涤剂或清洗剂的清洗性能和/或储存稳定性更优选地至少对应于含有如下蛋白酶的洗涤剂或清洗剂的清洗性能和/或储存稳定性，所述蛋白酶包含对应于SEQ ID no.2或SEQ ID no.3中所示的氨基酸序列的氨基酸序列。
根据本发明的洗涤剂或清洗剂含有蛋白酶的量相对于活性蛋白渐增地优选为1×10-8-5重量％、0.0001-3重量％、0.0005-1重量％、0.001-0.75重量％，并且更优选地为0.005-0.5重量％。根据本发明的洗涤剂或清洗剂含有淀粉酶的量相对于活性蛋白渐增地优选为1×10-8-5重量％、0.0001-3重量％、0.0005-1重量％、0.001-0.75重量％，并且更优选地为0.005-0.5重量％。可以在已知方法的辅助下测定蛋白浓度，例如BCA法(二喹啉甲酸；2,2'-联喹啉-4,4-二羧酸)或缩二脲法(A.G.Gornau,C.S.Bardawill and M.M.David,J.Biol.Chem.,177(1948),pp.751-766)。活性蛋白浓度在此是通过利用适合的不可逆抑制剂(用于蛋白酶，例如苯甲基磺酰氟(PMSF))进行活性中心的滴定并且测定残余活性(参见M.Bender等,J.Am.Chem.Soc.88,24(1966),第5890-5913页)来进行的。
此外，蛋白酶和/或淀粉酶可以吸附在载体物质上和/或包埋在封装物质中，以便保护它们免于过早失活。在洗涤液中，即在使用条件下，然后酶被释放并能够发挥其催化作用。
在本发明的另一个实施方案中，洗涤剂或清洗剂的特征在于其进一步包含选自以下的组分：
i.阴离子和/或多阴离子物质，和/或
ii.阳离子和/或多阳离子物质，和/或
iii.包含羟基和/或多羟基的物质。
已经发现，添加这样的物质进一步增强洗涤剂和清洗剂的清洗性能，特别是含有蛋白酶和淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂的清洗性能，特别是如以上描述的那些，尤其是在相对较低的温度下，特别是10℃-50℃、10℃-40℃、10℃-30℃和/或20℃-40℃。特别是与根据本发明所用的蛋白酶结合，发生协同作用，首要的是在除去至少一种类型的蛋白酶敏感污渍方面，特别地如以上所述的类型。
上文i所述的物质为阴离子或多阴离子物质，即这些物质带有至少一个并且优选多个负电荷。物质优选地为具有至少一个带负电荷的单体的聚合物，优选具有多个带负电荷的单体。因此根据本发明，这种聚合物优选地为带负电荷的聚合物。例如，优选有机酸或其盐的聚合物，特别是聚丙烯酸酯类和/或多糖酸和/或聚丙烯酸酯共聚物和/或多糖共聚物。在这方面，进一步优选的化合物为聚丙烯酸磺酸酯或聚羧酸酯以及它们的盐、共聚物或共聚物的盐。
更优选地要用到的物质的实例为Acusol587D(聚丙烯酸磺酸酯；Rohm&Haas/Dow Chemical)、Acusol445N(聚羧酸钠盐；Rohm&Haas/DowChemical)、Acusol590(聚丙烯酸酯共聚物；Rohm&Haas/Dow Chemical)、Acusol916N(聚羧酸钠盐；Rohm&Haas/Dow Chemical)、Sokalan CP42(修饰的聚羧酸钠盐；BASF)、Sokalan PA30CL(聚羧酸钠盐；BASF)、DequestP9000(聚马来酸；Thermphos)、藻酸、聚-2-丙烯酰氨基-2-甲基-1-丙磺酸、聚-4-苯乙烯磺酸-共-马来酸钠盐、聚-丙烯酰氨基-共-丙烯酸钠盐、聚甲基丙烯酸钠盐、聚甲基乙烯醚-交替共聚-马来酸或聚乙烯磺酸钠盐。
上文ii所述的物质为阳离子或多阳离子物质，即这些物质带有至少一个并且优选地多个正电荷。物质优选地为具有至少一个带正电荷的单体的聚合物，优选具有多个带正电荷的单体。因此根据本发明，这种聚合物优选地为带正电荷的聚合物。在这方面，优选的化合物的实例为聚胺的盐、聚乙烯亚胺的盐或其共聚物的盐，聚烯丙胺的盐，聚二烯丙基二甲基铵化合物的盐或者聚(丙烯酰胺-共-二烯丙基二甲基铵)化合物的盐。
iii所述的物质为包含至少一个羟基和/或多羟基并且优选多个羟基和/或多羟基的物质。在这方面，优选例如聚乙烯醇,例如在商品名Mowiol(Kremer Pigmente GmbH&Co.KG)下可获得的聚乙烯醇。
在这一点上，明确指出具体物质可以属于上文所述组i-iii中的一个或多个。例如，其可以是包含一个或多个羟基和/或多羟基的阴离子聚合物。则这样的物质属于组i和iii。包含一个或多个羟基和/或多羟基的阳离子聚合物同样属于组ii和iii。
为了本发明的目的，同样可能使用上文所述属于i、ii或iii的物质的衍生物。为了本申请的目的，衍生物理解为在上文所述物质中的一种的基础上化学修饰的物质，例如通过侧链的转换或通过将另一化合物共价键合至所述物质。例如这样的化合物可以为低分子量化合物，如脂类或者单糖、寡糖或多糖或者胺或胺化合物。此外，所述物质可以被糖基化、水解、氧化、N-甲基化、N-甲酰化、N-乙酰化，或者含有甲基、甲酰基、乙基、乙酰基、叔丁基、茴香基、苄基、三氟乙酰基、N-羟基琥珀酰亚胺、叔丁氧基羰基、苯甲酰基、4-甲基苄基、硫代茴香基(thioanizyl)、硫甲苯基、苄氧基甲基、4-硝基苯基、苄氧基羰基、2-硝基苯甲酰基、2-硝基苯基亚磺酰基、4-甲苯磺酰基、五氟苯基、二苯基甲基、2-氯苄氧基羰基、2,4,5-三氯苯基、2-溴苄氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、三苯基甲基、2,2,5,7,8-五甲基苯并二氢吡喃基-6-磺酰基。衍生物同样理解为表示将所述物质共价或非共价键合至大分子载体，或者还等同地表示非共价包含在合适的大分子笼形结构中。还可以进行与其它大分子化合物例如聚乙二醇的偶联反应。进一步优选的化学修饰为化学基团-COOH、-OH、＝NH2、-SH至-COOR、-OR、-NHR、-NR2、-NHR、-NR、-SR中的一种或多种修饰；其中：R为-CH＝CH-R2，-C＝C-R2，-C(R2)＝CH2，-C(R2)＝C(R3)，-CH＝NR2，-C(R2)＝N-R3、有或无取代的4-7C环体系、有或无取代的4-7氮杂环或者具有选自R1、R2或R3的取代的具有1至5个双键或三键的C2-C8链，其中
-R1为H，-R，-NO2，-CN，卤素取代基，-N3，-C1-8烷基，-(CH2)nCO2R2，-C2-8-烯基-CO2R2，-O(CH2)nCO2R2，-C(O)NR2R3，-P(O)(OR2)2，烷基取代的四唑-5-基，-(CH2)nO(CH2)n-芳基，-NR2R3，-(CH2)nOR2，-(CH2)nSR2，-N(R2)C(O)R3，-S(O2)NR2R3，-N(R2)S(O2)R3，-(CHR2)nNR2R3，-C(O)R3，(CH2)nN(R3)C(O)R3，-N(R2)CR2R3，取代或未取代的(CH2)n-环烷基，取代或未取代的(CH2)N-苯基，或-环；其中n为大于1的数字；
-R2为H，卤素取代基，烷基，卤烷基，-(CH2)n-苯基，-(CH2)1-3-联苯基，-(CH2)1-4-苯基-N(SO2-C1-2-烷基)2，-CO(CHR1)n-OR1，-(CHR1)n-杂环，-(CHR1)n-NH-CO-R1，-(CHR1)n-NH-SO2R1，-(CHR1)n-Ph-N(SO2-C1-2-烷基)2，-(CHR1)n-C(O)(CHR1)-NHR1，-(CHR1)n-C(S)(CHR1)-NHR1，-(CH2)nO(CH2)nCH3，-CF3，-C2-5酰基，-(CHR1)nOH，-(CHR1)nCO2R1，-(CHR1)n-O-烷基，-(CHR1)n-O-(CH2)n-O-烷基，-(CHR1)n-S-烷基，-(CHR1)n-S(O)-烷基，-(CHR1)n-S(O2)-烷基，-(CHR1)n-S(O2)-NHR3，-(CHR3)n-N3，-(CHR3)nNHR4，具有1至5个双键的C2-C8烯链，具有1至5个三键的C2-C8链炔，取代或未取代的-(CHR3)n-杂环，取代或未取代的、饱和的或不饱和的-(CHR3)n-环烷基；其中n为大于1的数字，并且R1和R3可以相同或不同；
-R3为H，-OH，-CN，取代的烷基，-C2至C8烯基，取代或未取代的环烷基，-N(R1)R2，饱和的或不饱和的C5-C7杂环或4-7个C原子的杂二环，-NR1、-NR2、由4-7个C原子的饱和的或不饱和的杂环或杂二环组成的-NR1R2；
-R4为H，-(CH2)nOH，-C(O)OR5，-C(O)SR5，-(CH2)nC(O)NR6R7，-O-C(O)-O-R6，氨基酸或肽；其中n为0-4的数字；
-R5为H,
-R6为-C(R7)-(CH2)n-O-C(O)-R8，-(CH2)n-C(R7)-O-C(O)R8，-(CH2)n-C(R7)-O-C(O)-O-R8，或-C(R7)-(CH2)n-O-C(O)-O-R8；其中n为0-4的数字；并且
R7和R8在每种情况下为H、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、杂环、取代的杂环、烷基芳基、取代的烷基芳基、环烷基、取代的环烷基或CH2CO2-烷基，其中R7和R8可以相同或不同。
根据本发明，还可能使用上文所述属于i、ii或iii的物质和/或它们的衍生物的所有可能的组合。
根据本发明的液体洗涤剂或清洗剂可以直接使用或用水稀释之后使用，用于清洗纺织品和/或坚硬表面。这样的稀释溶液可以容易地通过以所述洗涤剂或清洗剂:水的具体重量比将一部分洗涤剂或清洗剂稀释于进一步量的水中来产生，并且任选将这种稀释液振摇以确保所述洗涤剂或清洗剂在水中均匀分布。所述稀释液可能的重量或体积比为1:0所述洗涤剂或清洗剂:水-1:10,000或1:20,000所述洗涤剂或清洗剂:水，优选1:10-1:2000所述洗涤剂或清洗剂:水。
所有液体或可流动的形式在这里均可以作为液体洗涤剂或清洗剂。为了本申请的目的，“可流动”表示能够被倾倒并且可以表现出高达几万mPa·s的粘度的洗涤剂或清洗剂。粘度可以用常规的标准方法(例如在20rpm和20℃的Brookfield LVT-II粘度计，转子3)来测量，并且优选在5-30,000mPa·s的范围中。优选的洗涤剂或清洗剂具有10-15,000mPa·s的粘度，其中更优选120-8000mPa·s的值。因此为了本发明的目的，液体洗涤剂或清洗剂还可以采用凝胶或糊剂形式，其可以作为均质溶液或悬浮液存在，并且例如配制为可喷射的或其它常规形式。洗涤剂包括所有可以想得到的洗涤剂类型，特别是用于纺织品、地毯或天然纤维的洗涤剂。可以提供它们用于手动和/或还有机器用途。洗涤剂进一步包括洗涤助剂，可以将洗涤助剂加入实际洗涤剂用于手动或机器洗涤纺织品，以便实现进一步的效果。清洗剂包括所有的洗涤剂或清洗剂，同样地呈现为所有所述形式，用于清洗和/或消毒坚硬表面，手动和自动洗碗剂、地毯清洁剂、擦洗剂(scouring agent)、玻璃清洁剂和厕所清洁剂(WC rimblocks)等。最后，纺织品前处理和后处理试剂一方面是待洗衣物在实际洗涤之前接触的试剂，以便例如部分地溶解顽固污渍，而另一方面是在实际洗涤过程的下游步骤中赋予所洗涤的物品进一步期望的特征的试剂，诸如舒适的手感、无折痕或低静电。后一类试剂特别包括清洗调理剂。消毒剂例如是手消毒剂、表面消毒剂和仪器消毒剂，其同样可以以所述的形式存在。
在本发明的另一优选实施方案中，所述洗涤剂或清洗剂的特征在于其包含至少一种其他成分，特别是选自膦酸盐/酯、表面活性剂、助洗剂、非水溶剂、酸、水溶性盐、增稠剂及上述物质的组合成分。
膦酸盐/酯为膦酸的盐和有机化合物，特别是酯。一级(M'H2PO3或HP(O)(OH)(OM'))和二级(M'2HPO3或HP(O)(OM')2)膦酸盐作为盐存在，其中M'表示单价金属。这些无机膦酸盐还被称为一级或二级亚磷酸盐。例如通过使膦酸HP(O)(OH)2，特别是亚磷酸的稳定互变异构形式与一个(一级)或两个(二级)当量的碱例如碱金属氢氧化物反应产生无机膦酸盐。为了本发明的目的，优选包含磷-碳键的有机P-取代的膦酸盐/酯(有机磷化合物)。它们的一般结构为R1P(O)(OR2)2，其中R1和/或R2＝烷基、芳基或H，其中所述烷基或芳基包含其他取代基或者可以带有其他化学基团。例如作为Michaelis-Arbusov反应的结果产生有机P-取代的膦酸盐/酯。这些膦酸盐/酯中有许多可溶于水。一些工业上重要的膦酸盐/酯额外地带有NR-(CH2)x-PO(OH)2(R＝烷基、芳基或H)类型的氨基。这些氨基膦酸盐/酯中的一些与络合剂诸如EDTA、NTA或DTPA具有结构相似性，并且具有相似功能。为了本发明的目的，更优选的膦酸盐/酯特别包括有机膦酸盐/酯，例如1-羟基亚乙基-1,1-二膦酸(HEDP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP,也称为氨基-三(亚甲基膦酸)或次氨基三(亚甲基膦酸)(NTMP))、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP或DETPMP或DTPNT)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMP,也称为乙二胺四(亚甲基膦酸))以及2-膦酰基丁烷-1,2,4-三羧酸(PBS-AM,也称为2-膦酰基丁烷-1,2,4-三羧酸或3-羧基-3-膦酰基己二酸),它们通常以其铵或碱金属盐形式被使用。更优选二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)钠。这样的膦酸盐/酯例如可在商品名2066(Thermphos)下获得。
膦酸盐/酯优选地以0.01-2.5重量％的量，并且渐增优选地以0.02-2重量％、0.03-1.5重量％以及特别是0.05-1重量％的量存在于洗涤剂或清洗剂中。
阴离子、非离子、两性离子和/或两性表面活性剂可以用作表面活性剂。从应用角度看，优选阴离子和非离子型表面活性剂的混合物。液体洗涤剂或清洗剂的总表面活性剂含量相对于总液体洗涤剂或清洗剂优选低于60重量％，更优选低于45重量％。
合适的非离子型表面活性剂包括烷氧基化脂肪醇、烷氧基化脂肪酸烷基酯、脂肪酸酰胺、烷氧基化脂肪酸酰胺、多羟基脂肪酸酰胺、烷基苯酚聚乙二醇醚、胺氧化物、烷基聚葡糖苷以及上述物质的混合物。
作为非离子型表面活性剂优选使用烷氧基化，有利地为乙氧基化，特别是优选具有8-18个C原子并且每摩尔醇含有平均1-12mol环氧乙烷(EO)的伯醇，其中如羰基合成醇基中通常存在的，醇基可以是线性的或者优选在位置2处甲基分支的或者可以在混合物中含有线性的和甲基分支的基团。然而，特别地，优选具有制备自具有12-18个C原子的天然来源的醇(例如来自椰子醇、棕榈醇、牛脂醇或油醇)的线性基团并且每摩尔醇含有平均2-8EO的醇乙氧基化物。优选的乙氧基化醇包括例如具有3EO、4EO或7EO的C12-14醇，具有7EO的C9-11醇，具有3EO、5EO、7EO或8EO的C13-15醇，具有3EO、5EO或7EO的C12-18醇以及它们的混合物，例如具有3EO的C12-14醇和具有7EO的C12-18醇的混合物。所述乙氧基化程度为统计平均值，对于特定产物，其可以是整数或分数。优选的醇乙氧基化物具有狭窄的同系物分布(窄范围乙氧基化物,NRE)。除了这些非离子表面活性剂，还可以使用具有超过12EO的脂肪醇。这些脂肪醇的实例为具有14EO、25EO、30EO或40EO的牛脂醇。根据本发明还可以使用在一个分子中共同包含EO和PO基团的非离子表面活性剂。而且(比较高的)分支的乙氧基化脂肪醇和未分支的乙氧基化脂肪醇的混合物也是合适的，例如具有7EO的C16-18脂肪醇和具有7EO的2-丙基庚醇的混合物。更优选洗涤剂、清洗剂或后处理剂或洗涤助剂含有具有7EO的C12-18脂肪醇或具有7EO的C13-15羰基合成醇作为非离子表面活性剂。
在每种情况下相对于总洗涤剂或清洗剂，所述洗涤剂或清洗剂中的非离子表面活性剂的含量优选为3-40重量％，优选5-30重量％，并且特别是7-20重量％。
除了非离子表面活性剂，所述洗涤剂或清洗剂还可以含有阴离子表面活性剂。磺酸盐、硫酸盐、皂、磷酸烷基酯、阴离子有机硅表面活性剂以及上述物质的混合物优选用作阴离子表面活性剂。
本文可以优选考虑的磺酸盐类型的表面活性剂为C9-13烷基苯磺酸盐、烯烃磺酸盐，即烯与羟基烷磺酸盐和二磺酸盐的混合物，例如通过用气态三氧化硫磺化随后碱水解或酸水解磺化产物而获得自具有未端或内部双键的C12-18单烯烃。C12-18烷磺酸盐和α-磺基脂肪酸的酯(磺酸酯)也是合适的，例如氢化椰子酸、棕榈仁酸或牛脂酸的α-磺化甲酯。
优选的烷基(烯基)硫酸盐是C12-C18脂肪醇的硫酸半酯的碱金属盐并且特别是钠盐，所述脂肪醇例如制备自椰子脂肪醇、牛脂醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇或十八烷醇，或者C10-C20羰基合成醇，以及这些链长度的仲醇的半酯的碱金属盐并且特别是钠盐。由于它们的洗涤特性，优选C12-C16烷基硫酸盐和C12-C15烷基硫酸盐和C14-C15烷基硫酸盐。2,3-烷基硫酸盐也是合适的阴离子表面活性剂。
用1-6mol环氧乙烷乙氧基化的直链或分支的C7-21醇的硫酸单酯也是合适的，例如具有平均3.5mol环氧乙烷(EO)的2-甲基-分支的C9-11醇或具有1-4EO的C12-18脂肪醇。
皂也是优选的阴离子表面活性剂。饱和及不饱和脂肪酸皂特别合适，例如月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、(氢化)芥酸和山俞酸的盐，特别是来源于诸如椰子、棕榈仁、橄榄油或牛脂酸的天然脂肪酸的皂混合物。
包括皂在内的阴离子表面活性剂可以以其钠、钾、镁或铵盐的形式存在。阴离子表面活性剂优选以其钠盐形式存在。阴离子表面活性剂的进一步优选的反荷离子还有胆碱、三乙胺或甲基乙基胺的质子化形式。
在每种情况下相对于总洗涤剂或清洗剂，所述洗涤剂或清洗剂的阴离子表面活性剂的含量可以为1-40重量％，优选5-30重量％，并且特别优选10-25重量％。
所述洗涤剂或清洗剂中可以含有的可能的助洗剂特别是硅酸盐、硅酸铝(特别是沸石)、碳酸盐、有机二羧酸和多羧酸的盐以及这些物质的混合物。
可以存在于所述洗涤剂或清洗剂中的有机助洗剂为，例如在其钠盐形式可用的多羧酸，其中多羧酸表示带有一个以上酸官能团的那些羧酸。这些多羧酸为,例如柠檬酸、己二酸、琥珀酸、戊二酸、苹果酸、酒石酸、马来酸、富马酸、糖酸、氨基羧酸、氨三乙酸(NTA)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)以及上述物质的衍生物和混合物。优选的盐为多羧酸例如柠檬酸、己二酸、琥珀酸、戊二酸、酒石酸、糖酸的盐以及它们的混合物的盐。
而且聚合物多羧酸盐适合作为助洗剂。这些聚合物多羧酸盐例如聚丙烯酸或聚甲基丙烯酸的碱金属盐，例如具有600-750,000g/mol的相对分子量的那些。
合适的聚合物特别是聚丙烯酸酯，其优选具有1,000-15,000g/mol的分子量。由于它们优越的溶解度，因此可以优选来自这组的短链聚丙烯酸酯，它们具有1000-10,000g/mol的摩尔质量，并且更优选1000-5000g/mol的摩尔质量。
共聚合的聚羧酸酯也是合适的，特别是丙烯酸与甲基丙烯酸以及丙烯酸或甲基丙烯酸与马来酸的那些。为了提高水溶解度，聚合物还可以含有作为单体的烯丙基磺酸，例如烯丙氧基苯磺酸和甲代烯丙基磺酸。
然而，优选地，可溶性助洗剂例如柠檬酸或具有1000-5000g/mol的摩尔质量的丙烯酸聚合物优选用于液体洗涤剂或清洗剂。
为了本文的目的，用于表示聚合物聚羧酸酯的摩尔质量包含各个酸式的重量平均摩尔质量Mw，其一般通过凝胶渗透色谱法(GPC)测定，其中使用UV检测器。此处相对于外标聚丙烯酸进行测量，其由于与所研究聚合物的结构关系而提供了真实的分子量值。这些值明显不同于其中将聚苯乙烯磺酸用作标准的分子量值。相对于聚苯乙烯磺酸测量的摩尔质量一般明显高于本文所述的摩尔质量。
如果期望，这类有机助洗剂物质可以以至多40重量％的量存在，特别是至多25重量％，并且优选1重量％-8重量％。接近所述上限的量优选用于糊状物或溶液，特别是含水的试剂。
根据本发明的洗涤剂或清洗剂为液体，并且优选含有水作为主要的溶剂。此外，可以将非水溶剂添加至洗涤剂或清洗剂。适合的非水溶剂包括一元醇或多元醇、烷醇胺或者乙二醇醚，只要它们在指定浓度范围内能与水混溶。所述溶剂优选选自乙醇、正丙醇、异丙醇、丁醇、乙二醇、丙二醇、丁二醇、甘油、二甘醇、二乙二醇丙基醚、二乙二醇单丁基醚、已二醇、乙二醇甲基醚、乙二醇乙基醚、乙二醇丙基醚、乙二醇正丁基醚、二乙二醇甲基醚、二乙二醇乙基醚、丙二醇甲基醚、丙二醇乙基醚、丙二醇丙基醚、二丙二醇单甲基醚、二丙二醇单乙基醚、二异丙二醇单甲基醚、二异丙二醇单乙基醚、甲氧基三甘醇、乙氧基三甘醇、丁氧基三甘醇、1-丁氧基乙氧基-2-丙醇、3-甲基-3-甲氧基丁醇、丙二醇-叔丁基醚、二正辛基醚以及这些溶剂的混合物。然而，优选所述洗涤剂或清洗剂含有多元醇作为非水溶剂。特别地，所述多元醇可包含甘油、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、乙二醇、二乙二醇和/或二丙二醇。更优选地，所述洗涤剂或清洗剂含有多元醇和一元醇的混合物。非水溶剂在所述洗涤剂或清洗剂中的用量可以为0.5-15重量％，但优选低于12重量％。
为了建立无法通过混合剩余组分而自动获得的所需pH值，所述洗涤剂或清洗剂可含有与系统相容且与环境相容的酸，特别是柠檬酸、乙酸、酒石酸、苹果酸、乳酸、乙醇酸、琥珀酸、戊二酸和/或己二酸；以及无机酸，特别是硫酸；或碱，特别是铵或碱金属氢氧化物。此类pH调节剂在所述洗涤剂或清洗剂中的存在量优选不多于20重量％，特别是1.2-17重量％。
根据本发明的洗涤剂或清洗剂可进一步含有一个或多个水溶性盐，其用于例如调整粘度。所述盐可以是无机盐和/或有机盐。可使用的无机盐优选选自包含碱金属、碱土金属、铝和/或过渡金属的无色水溶性卤化物、硫酸盐、亚硫酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、硝酸盐、亚硝酸盐、磷酸盐和/或氧化物的组；可进一步使用铵盐。更优选碱金属的卤化物和硫酸盐；因此，所述无机盐优选选自包含氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾以及上述盐的混合物的组。可使用的有机盐的实例为羧酸的碱金属、碱土金属、铵、铝和/或过渡金属的无色水溶性盐。所述盐优选选自包含甲酸盐、乙盐酸、丙酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、丙二酸盐、草酸盐、乳酸盐以及上述盐的混合物的组。
为了增稠的目的，根据本发明的洗涤剂或清洗剂可含有一种或多种增稠剂。所述增稠剂优选选自包含黄原胶、瓜耳胶、角叉菜胶、琼脂、结冷胶、果胶、刺槐豆粉以及上述物质的混合物的组。即便在有无机盐的情况下，这些化合物也是有效的增稠剂。在一个更优选的实施方案中，所述洗涤剂或清洗剂含有作为增稠剂的黄原胶，因为即便在有高盐浓度的情况下，黄原胶也可有效增稠并且防止连续相的宏观分离。此外，所述增稠剂稳定连续的低表面活性剂相，并且防止宏观的相分离。
可选择地或另外，还可使用(甲基)丙烯酸(共)聚合物作为增稠剂。适合的丙烯酸和甲基丙酸烯(共)聚合物包括，例如丙烯酸的高分子量均聚物，其与聚烯基聚醚交联，特别是蔗糖、季戊四醇或丙烯的烯丙醚(根据"theCosmetic,Toiletry,and Fragrance Association(CTFA)"的"InternationalDictionary of Cosmetic Ingredients"的INCI名称：卡波姆)，其也称作羧基乙烯基聚合物。此类聚丙烯酸可以和的商品名获得。此外，以下的丙烯酸共聚物也是合适的：(i)来自丙烯酸、甲基丙烯酸及其简单酯，优选与C1-4烷醇形成的酯的组的两种或更多种单体的共聚物(INCI丙烯酸酯共聚物)，其可以例如或的商品名获得；(ii)交联的高分子量丙烯酸共聚物，其包括例如与蔗糖或季戊四醇的烯丙醚交联的C10-30烷基丙烯酸酯与来自丙烯酸、甲基丙烯酸及其简单酯，优选与C1-4烷醇形成的酯的组的一种或多种单体的共聚物(INCI丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物)，其可以例如的商品名获得。其他合适的聚合物为型的(甲基)丙烯酸(共)聚合物。
优选本发明的洗涤剂或清洗剂含有(甲基)丙烯酸(共)聚合物与其他增稠剂，优选黄原胶的组合。所述洗涤剂或清洗剂可含有0.05-1.5重量％、优选0.1-1重量％的增稠剂，在每种情况下均相对于总的洗涤剂或清洗剂。本文中所用的增稠剂的量取决于增稠剂的类型和所需的增稠程度。
通常通过简单混合各成分，其中可将作为未溶解材料或作为溶液的成分引入到自动混合机中，从而产生含有常规溶剂的溶液形式的本发明液体或糊状产物。
根据本发明的洗涤剂或清洗剂可仅含有所述的蛋白酶和淀粉酶。或者，它们还可以以有利于所述洗涤剂或清洗剂的功效的浓度含有其他水解酶或其他酶。因此，本发明进一步提供额外包含一种或多种其他酶的洗涤剂或清洗剂，其中在现有技术中确定用于此目的的所有酶大体上均可使用。优选使用的其他酶为能够在本发明的洗涤剂或清洗剂中实现催化活性的任何酶，特别是蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、半纤维毒酶、甘露聚糖酶、鞣酸酶、木聚糖酶、黄原胶酶、木葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、果胶酶、卡拉胶酶、过水解酶(perhydrolase)、氧化酶、氧化还原酶或脂肪酶以及上述酶的混合物。相对于活性蛋白，在每种情况下其他酶有利地以1×10-8-5重量％的量存在于所述洗涤剂或清洗剂中。存在于本发明的洗涤剂或清洗剂中的各其他酶的量相对于活性蛋白渐增地优选为1×10-7-3重量％、0.00001-1.5重量％、0.00005-1重量％、0.0001-0.75重量％，并且更优选地为0.0005-0.5重量％。更优选地，所述酶表现出关于其对于具体污渍或污迹的作用的协同清洗性能，即包含在洗涤剂或清洗剂组合物中的酶有助于彼此的清洗性能。特别优选地，此类协同作用存在于本发明的蛋白酶和本发明洗涤剂或清洗剂的其他酶之间，特别包括在指定蛋白酶和淀粉酶和/或脂肪酶和/或甘露聚糖酶和/或纤维素酶和/或果胶酶之间。不仅在不同酶之间，在一种或多种酶和本发明洗涤剂或清洗剂的其他成分之间也可出现协同作用。
在本发明的另外的实施方案中，洗涤剂或清洗剂的特征在于其为自动洗碗剂。如本申请中所定义的，自动洗碗剂为可以在自动洗碗方法中用于清洗有污渍的盘子的组合物。因此，根据本发明的自动洗碗剂不同于例如自动漂洗助剂，该漂洗助剂总是和自动洗碗剂共同使用，并且自身不能实现任何清洁作用。与手洗盘子相比较，机器洗涤盘子经常会有更严格的要求。例如，在机器清洗之后，盘子不仅应该完全无食物残渣，而且还应该例如不会由于缺少润湿剂而表现出基于水的硬度或其它来源于干燥水滴的无机盐的任何发白斑痕。现代的自动洗碗剂通过合并清洗和/或调理和/或水软化和/或漂洗活性物质来满足这些要求，并且为消费者所知的例如“2合1”或“3合1”洗碗剂。自动洗碗剂含有助洗剂作为主要成分以便于顺利清洗和漂洗。一方面，这些助洗剂增大所述洗涤液的碱度，其中当碱度增大时脂和油被乳化和皂化，并且另一方面，通过络合存在于含水液体中的钙离子，从而降低所述洗涤液的水硬度。在一个另外优选的研制中，自动洗碗剂被封装在水溶性膜中。所述膜优选包括聚乙烯醇(PVA)或由聚乙烯醇(PVA)组成。
本发明还提供本发明的洗涤剂或清洗剂用于从纺织品或坚硬表面去除污渍，特别是蛋白酶敏感性和/或淀粉酶敏感性污渍的用途，即用于清洗纺织品或坚硬表面的用途。这是因为，特别是由于其中含有的蛋白酶和淀粉酶的组合，本发明的洗涤剂或清洗剂可有利地用于从纺织品或从坚硬表面除去相应的污渍。本发明这方面的实施方案包括，例如手洗、手动从纺织品或坚硬表面除去污渍，或与机器方法有关的应用。对本发明的洗涤剂或清洗剂描述的所有因素、方面和实施方案也适用于本发明的这方面。因此，在这一点上的表述涉及在相应点的公开，其指出此公开同样适用于本发明的上述用途。
本发明还提供用于清洗纺织品或坚硬表面的方法，其中在至少一个方法步骤中使用本发明的洗涤剂或清洗剂。
这些包括手动和机器方法，其中，优选机器方法，由于其例如在使用量和接触时间方面更精确地可控制。用于清洗纺织品的方法大体上的区别在于在两个或更多个方法步骤中，将具有清洗作用的各种物质施用到待清洗的材料上，在接触时间后将其洗去，或者以其他方式使用洗涤剂或该洗涤剂的溶液或稀释液处理处理待清洗的材料。这同样可应用于用于清洗除了纺织品之外的所有材料，特别是坚硬表面的方法。可通过在至少一个方法步骤中应用本发明的洗涤剂或清洗剂来增强任何可想像的洗涤或清洗方法，然后构成本发明的实施方案。对本发明的洗涤剂或清洗剂描述的所有因素、方面和实施方案也适用于本发明的这方面。因此，在这一点上的表述涉及在相应点的公开，其指出此公开同样适用于本发明的上述方法。
在优选实施方案中，所述方法的特征在于所述淀粉酶在所述洗涤液中存在的浓度为1×10-10-0.2重量％、0.000001-0.12重量％、0.000005-0.04重量％、0.00001-0.03重量％，并且更优选0.00005-0.02重量％，和/或所述蛋白酶在所述洗涤液中存在的浓度为1×10-10-0.2重量％、0.000001-0.12重量％、0.000005-0.04重量％、0.00001-0.03重量％，并且更优选0.00005-0.02重量％，其中指定的值相对于所述洗涤液中的活性蛋白。在进一步优选的实施方案中，所述方法的特征在于，其在10℃-60℃、优选在20℃-50℃、并且更优选在30℃-50℃的温度下进行。
根据上述说明，用于本发明的洗涤剂或清洗剂的蛋白酶可有利地用于本发明的洗涤剂和清洗剂中，以及本发明的方法中，特别是洗涤和清洗方法中。因此，它们可有利地用于在相应的洗涤剂或清洗剂中提供蛋白水解活性。
本发明还提供蛋白酶在进一步包含淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂中提供蛋白水解活性的用途，其中所述蛋白酶包含在全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有至少两个选自S3T、V4I和V199I的其他氨基酸取代。
对本发明的洗涤剂或清洗剂描述的所有因素、方面和实施方案也适用于指定的用途。因此，在这一点上的表述涉及在相应点的公开，其指出此公开同样适用于本发明的上述用途。
实施例
实施例：本发明的液体自动洗碗剂的储存稳定性的测定
基本配方为含有淀粉酶的两相性的液体自动洗碗剂，其组成如下(所有值以重量百分数表示)：:
(a)酶相:
存在的淀粉酶为α-淀粉酶变体，相对于根据SEQ ID no.4的α-淀粉酶AA560，该α-淀粉酶变体在α-淀粉酶AA560的编号中具有以下序列修饰：R118K、D183*(缺失)、G184*(缺失)、N195F、R320K、R458K(Novozymes)。(b)碱相：
对于各种试验批次，所述基本配方的酶相在每种情况下与3重量％的以下蛋白酶的制品结合(在每种情况下结果为0.5重量％活性蛋白)：
批次1：来自根据WO2011/032988的SEQ ID no.2的迟缓芽孢杆菌的蛋白酶的强化性能变体(参考)；
批次2：根据SEQ ID no.2的蛋白酶(SEQ ID no.1+S3T+V4I+R99E+V199I)。
通过以相同比例分配所述两相来测定清洗性能(在每种情况下每相20g)。在来自Miele的容积为4升的G698SC洗碗机中在pH9-10、温度为50℃的条件下洗涤60分钟。
使用带有以下污渍的盘子：乳液(A)、肉末(B)、蛋黄(C)、麦片粥中的燕麦(D)和淀粉(E)。
利用标度1-10的标准IKW法目视地评价清洗性能，其中值为10为最好的等级(无可见残渣)。
测试批次1和2的洗涤剂在40℃下储存4星期的前后的清洗性能。结果示出在下表1：
表1：
污渍 A B C D E
储存以前的批次1 5.6 10.0 5.2 7.7 9.6
储存以前的批次2 5.2 10.0 5.7 7.8 9.8
储存之后的批次1 5.1 2.8 1.7 2.0 3.4
储存之后的批次2 5.2 7.7 3.0 5.1 4.0
在40℃下储存4星期之后，显然，由于其中含有的蛋白酶，本发明的组合物呈现明显改善的清洗性能，特别是对于蛋白酶敏感类型的污渍B和C(水解蛋白的清洗性能)。特别地，对于淀粉酶敏感类型的污渍D和E的清洗性能也得到改善(水解淀粉的清洗性能)。

Claims (14)

1.一种液体洗涤剂或清洗剂，其包含：
(a)蛋白酶，所述蛋白酶包含其全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1编号具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有至少两个选自S3T、V4I和V199I的其他氨基酸取代，以及
(b)淀粉酶。
2.如权利要求1所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于：所述蛋白酶包含其全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％和98.5％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1编号具有氨基酸取代R99E并同时具有氨基酸取代S3T、V4I和V199I，特别是具有根据SEQ ID no.2的氨基酸序列的蛋白酶。
3.如权利要求1所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于：所述蛋白酶包含其全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％和98.5％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1编号具有氨基酸取代R99D并同时具有氨基酸取代S3T、V4I和V199I，特别是具有根据SEQ ID no.3的氨基酸序列的蛋白酶。
4.如权利要求1至3中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于所述淀粉酶为根据SEQ ID no.4的α-淀粉酶AA560的α-淀粉酶变体，具有根据α-淀粉酶AA560编号的一个、两个、三个、四个、五个或六个的以下序列修饰：R118K、D183*(缺失)、G184*(缺失)、N195F、R320K、R458K。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于：相对于活性蛋白，所述淀粉酶存在的量为1×10-8-5重量％，和/或相对于活性蛋白，所述蛋白酶存在的量为1×10-8-5重量％。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于其还包含选自下列的组分：
i.阴离子和/或多阴离子物质，和/或
ii.阳离子和/或多阳离子物质，和/或
iii.包含羟基和/或多羟基的物质。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于：其包含至少一种其他成分，特别是选自膦酸盐/酯、表面活性剂、助洗剂、非水溶剂、酸、水溶性盐、增稠剂及上述物质的组合的成分。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于：其含有至少一种其他酶，特别是蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、半纤维素酶、甘露聚糖酶、鞣酸酶、木聚糖酶、黄原胶酶、木葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、果胶酶、卡拉胶酶、过水解酶、氧化酶、氧化还原酶或脂肪酶、以及上述酶的混合物。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的洗涤剂或清洗剂，其特征在于其为自动洗碗剂。
10.权利要求1至9中任一项所述的洗涤剂或清洗剂用于从纺织品或坚硬表面去除蛋白酶敏感性污渍的用途。
11.一种用于清洗纺织品或坚硬表面的方法，其特征在于：在至少一个方法步骤中使用权利要求1至9中任一项所述的洗涤剂或清洗剂。
12.如权利要求11所述的方法，其特征在于：所述淀粉酶在洗涤液中存在的浓度为1×10-10-0.2重量％，和/或所述蛋白酶在所述洗涤液中存在的浓度为1×10-10-0.2重量％。
13.如权利要求11或12所述的方法，其特征在于，其在10℃-60℃、优选在20℃-50℃、并且更优选在30℃-50℃的温度下进行。
14.蛋白酶在包含淀粉酶的液体洗涤剂或清洗剂中提供蛋白水解活性的用途，其中所述蛋白酶包含在其全长上与SEQ ID no.1所示的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸序列，并且根据SEQ ID no.1的编号具有氨基酸取代R99E或R99D并同时具有至少两个选自S3T、V4I和V199I的其他氨基酸取代。
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