KR101929610B1

KR101929610B1 - 프로테아제 및 아밀라제를 함유하는 저장-안정성 액체 세척제 또는 세정제

Info

Publication number: KR101929610B1
Application number: KR1020147019129A
Authority: KR
Inventors: 니나 무스만; 토마스 아이팅; 토르스텐 바스티크카이트; 콘스탄틴 벤다; 헨드리크 헬무스
Original assignee: 헨켈 아게 운트 코. 카게아아
Priority date: 2011-12-15
Filing date: 2012-12-10
Publication date: 2019-03-14
Also published as: BR112014014039B1; MX2014007116A; WO2013087545A1; CN103987845B; MX350254B; JP6154822B2; JP2015507033A; HUE033241T2; PL2791331T3; DE102011088751A1; BR112014014039A2; US20140295522A1; RU2014128801A; EP2791331A1; RU2617406C2; ES2630877T3; KR20140105006A; US9752102B2; CN103987845A; EP2791331B1

Abstract

프로테아제 및 아밀라제를 함유하는 액체 세척제 또는 세정제의 저장 안정성이 향상될 수 있다. 이는 전체 길이에 걸쳐 서열 1에 명시된 아미노산 서열과 70% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 카운트에서 S3T, V4I 및 V199I로 이루어진 군으로부터 선택되는 2개 이상의 추가의 아미노산 치환과 조합하여 아미노산 치환 R99E 또는 R99D를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제의 사용을 통하여 달성된다.

Description

프로테아제 및 아밀라제를 함유하는 저장-안정성 액체 세척제 또는 세정제 {STORAGE-STABLE LIQUID DETERGENT OR CLEANING AGENT CONTAINING PROTEASE AND AMYLASE}

본 발명은 액체 세척제 및 세정제 분야에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 아밀라제와 조합하여 한정된 프로테아제를 함유하는 액체 효소-함유 세척제 및 세정제에 관한 것이며, 그와 같은 작용제가 사용되는 방법도 제안한다. 본 발명은 또한 아밀라제를 함유하는 액체 세척제 또는 세정제에서의 한정된 프로테아제의 용도에 관한 것이다.

서브틸리신 유형 프로테아제의 사용이 세척제 및 세정제용으로 선호되고 있다. 세척제 또는 세정제에서 사용되고 있는 선행 기술 공지의 프로테아제는 원래 예를 들어 바실루스(Bacillus), 스트렙토미세스(Streptomyces), 휴미콜라(Humicola) 또는 슈도모나스(Pseudomonas) 속의 미생물에서 기원하고/거나 원래 알려져 있는 생물공학적 방법을 사용하여 적합한 미생물에 의해, 예를 들어 바실루스 속 유래의 트랜스제닉 발현 숙주 또는 사상 진균에 의해 제조된다.

특히 근래의 액체 세척제에서는 추가의 효소, 특히 아밀라제가 점점 더 많이 존재하고 있다. 아밀라제는 특히 전분과 같은 폴리사카라이드에서 글리코시드 결합의 가수분해를 촉매하는 효소이다. 아밀라제들 중에서도, 아밀로스에서 α(1-4)-글리코시드 결합을 가수분해하는 α-아밀라제가 흔히 세척제 및 세정제에 사용되고 있다. 효소의 번호 분류 시스템인 효소의 EC 분류에서, α-아밀라제는 3.2.1.1의 EC 번호 ("효소 위원회 번호")를 가지는데, 이에 따라 6종의 주 효소 부류 중 세 번째인 히드롤라제 (EC 3.-.-.-), 이어서 글리코실라제 (EC 3.2.-.-), 다시 글리코시다제 (EC 3.2.1.-), 즉 O- 및/또는 S-글리코실 화합물을 가수분해하는 효소에 속한다. α-아밀라제에 의한 전분 분해는 덱스트린, 그리고 그로부터 말토스, 글루코스 및 분지형 올리고사카라이드들을 생성시킨다. 결과적으로, 아밀라제는 특히 세탁물 상의 전분-함유 잔류물에 대하여 작용하여, 그의 가수분해를 촉매한다.

국제 특허 출원 WO95/23221 및 WO92/21760은 세척제 또는 세정제에서 사용하기에 적합한 바실루스 렌투스(Bacillus lentus) DSM 5483 유래 알칼리성 프로테아제의 변이체는 물론, 그와 같은 프로테아제를 함유하는 세척제 및 세정제에 대해 개시하고 있다. 국제 특허 출원 WO2011/032988 또한 마찬가지로 바실루스 렌투스 DSM 5483 유래 알칼리성 프로테아제의 변이체를 함유하는 세척제 및 세정제에 대해 개시하고 있다. 상기 문헌들에 개시되어 있는 프로테아제 변이체들은 다른 위치들에 더하여 바실루스 렌투스 DSM 5483 유래 알칼리성 프로테아제용 넘버링 시스템의 위치 3, 4, 99 및 199에서 변형됨으로써, 예를 들어 언급된 위치에 아미노산 3T, 4I, 99D, 99E 또는 199I를 가질 수 있다. 세척제들이 아밀라제도 포함한 다른 효소를 함유할 수 있다는 것 또한 개시되어 있다. 세척제는 고체 또는 액체일 수 있다. 그러나, 상기 문헌들은 이하에서 기술되는 바와 같은 이러한 변형들의 조합을 가지는 프로테아제와 조합하여 아밀라제를 함유하는 액체 세척제에 대해서는 직접적으로 명확하게 개시하지 않고 있다.

선행 기술 프로테아제- 및 아밀라제-함유 액체 세척제 및 세정제의 단점은 그것이 불충분한 저장 안정성을 가지고 있으며, 그에 따라 짧은 시간 후에도 상당한 효소 활성도, 특히 전분분해(amylolytic) 및/또는 단백질분해 활성도를 상실한다는 것이다. 프로테아제의 존재는 종종 전분분해 활성의 상실로 이어지는데, 프로테아제가 아밀라제를 불활성화하기 때문이다. 그렇게 되면, 세척제 또는 세정제는 더 이상 최적의 세정 성능을 나타내지 못한다.

본 발명의 목적은 언급된 단점을 극복함으로써, 특히 효소 활성, 바람직하게는 전분분해 및/또는 단백질분해 활성과 관련하여 적당하거나 향상된 저장 안정성을 가지는 프로테아제- 및 아밀라제-함유 액체 세척제 또는 세정제를 제공하는 것이다.

이에 따라, 본 발명은

(a) 전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 70% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 S3T, V4I 및 V199I로 이루어진 군으로부터 선택되는 2개 이상의 추가의 아미노산 치환과 조합하여 아미노산 치환 R99E 또는 R99D를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제, 및

(b) 아밀라제

를 포함하는 액체 세척제 또는 세정제를 제공한다.

놀랍게도, 상기 프로테아제의 아밀라제와의 조합을 함유하는 액체 세척제 또는 세정제는 유리하게도 저장시 안정하다는 것이 발견되었다. 구체적으로, 그것은 저장 개시시에 프로테아제가 활성 효소 대비 동일한 농도로 비교될 작용제들에 존재하는 경우로써, 각 작용제에 존재하는 프로테아제만이 본 발명에 따른 작용제와 다른 세척제 또는 세정제와 비교하였을 때, 저장 후에 향상된 세정 성능, 특히 향상된 전분분해 및/또는 단백질분해 세정 성능을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 목적상 제공되는 프로테아제는 감소된 아밀라제 불활성화를 초래하며, 그 자체 역시 감소된 성능 상실을 나타낸다. 그러나, 본 발명의 목적상 제공되는 프로테아제에 의한 감소된 아밀라제 및/또는 프로테아제 불활성화가 불충분한 프로테아제 성능 및/또는 활성으로 인한 것은 아니다.

본 발명에 따른 작용제는 바람직하게도 이와 같은 점에서 우수하게, 특히 유리하게 유지되는 프로테아제-감수성 오염물에 대한 세정 성능을 나타낸다. 이에 따라, 그와 같은 작용제는 텍스타일 및/또는 경질 표면, 예를 들어 접시 상의 1종 이상, 바람직하게는 다수의 프로테아제-감수성 유형 오염물의 만족스럽거나 향상된 제거를 가능케 한다. 본 발명의 선택적인 개발로써, 1종 이상 프로테아제-감수성 유형 오염물과 관련한 그와 같은 세정 성능은 특히 낮은 온도, 예를 들어 10℃ 내지 50℃, 10℃ 내지 40℃ 또는 20℃ 내지 40℃에서도 이루어진다.

따라서, 도입부에서 언급한 국제 특허 출원 WO95/23221, WO92/21760 및 WO2011/032988에 비해, 본 발명은 특히 저장 후 작용제의 단백질분해 및/또는 전분분해 세정 성능과 관련하여, 및/또는 저장 후 작용제의 단백질분해 및/또는 전분분해 활성과 관련하여, 우수한 성능을 가지며 저장시 안정한 액체 세척제가 수득되도록 하는 특히 유리한 선택이 된다.

본 발명의 목적상, 세정 성능은 작용제의 적용분야에 존재하는 오염물을 부분적으로 또는 완전히 제거하는 세척제 또는 세정제의 능력을 의미하는 것으로 받아들여진다. 세탁물 오염물의 경우, 이는 바람직하게는 1종 이상 유형의 텍스타일상 오염물과 관련한 증백(lightening) 성능이다. 세탁물 오염물의 예로는 면직물 상의 혈액-우유/잉크, 면직물 상의 전란(whole egg)/안료, 면직물 상의 초콜릿-우유/잉크, 폴리에스테르/면직물 상의 땅콩 오일-안료/잉크, 면직물 상의 풀 또는 면직물 상의 코코아가 있다. 식기세척제의 경우, 세정 성능은 접시의 경질 표면에 존재하는 오염물을 제거하는 식기세척제의 능력을 말한다. 도자기류 오염물의 예는 우유, 저민 고기, 난황, 포리지 오트(porridge oat) 및 전분이다. 본 발명의 목적상, 프로테아제 및 아밀라제를 포함하는 세척제 또는 세정제 또는 이와 같은 작용제에 의해 형성되는 세척액, 그리고 프로테아제 또는 아밀라제 자체는 모두 각각의 세정 성능을 나타낸다. 효소의 세정 성능은 그와 같이 작용제 또는 작용제에 의해 형성되는 세척액의 세정 성능에 기여한다. 전분분해 세정 성능은 아밀라제-감수성 오염물에 대한 세정 성능을 지칭한다. 단백질분해 세정 성능은 프로테아제-감수성 오염물에 대한 세정 성능을 지칭한다. 세정 성능은 바람직하게는 하기에서 추가로 언급되는 바와 같이 통상적인 방식으로 측정된다.

세척액은 세척제 또는 세정제를 함유하며, 텍스타일 또는 직물 또는 경질 표면 상에 작용함으로써 텍스타일 또는 직물 또는 경질 표면 상에 존재하는 오염물과 접촉하게 되는 작용 용액인 것으로 이해된다. 세척액은 통상적으로 예를 들어 식기세척기, 세탁기 또는 또 다른 적합한 용기에서 세척 또는 세정 과정이 개시되어 세척제 또는 세정제가 물과 희석될 때 발생한다.

본 발명의 목적상, 저장 안정성은 구체적으로 본 발명에 따른 세척제 또는 세정제가, 대조 조성물에 존재하는 프로테아제만이 본 발명에 따른 세척제 또는 세정제와 상이한 대조 조성물에 비해 저장 후 더 큰 세정 성능을 나타내는 경우에 수득된다. 따라서, 저장 개시시, 비교될 2종의 작용제는 동일한 아밀라제 양 또는 농도 및/또는 개시 전분분해 활성을 가진다. 또한, 저장 개시시, 프로테아제는 활성 효소 대비 동일한 농도로 양 작용제에 존재하며, 2종의 작용제는 특히 저장 조건 및 효소 활성의 측정과 관련하여 동일한 방식으로 처리된다. 저장은 더욱 바람직하게는 24시간, 48시간, 72시간, 5일, 1주, 2주, 3주 또는 4주 이상 동안 지속된다. 저장은 또한 바람직하게는 20℃, 30℃ 또는 40℃, 더욱 바람직하게는 40℃의 온도에서 진행된다.

이와 관련하여, 구체적인 효소 유형에 따라, 통상적인 방식으로 효소 활성이 측정될 수 있다. 활성 측정 방법은 효소 기술 분야의 숙련자에게 친숙해서, 담당자에 의해 일상적으로 사용되고 있다. 프로테아제 활성의 측정 방법은 예를 들어 문헌 [Tenside [Surfactants], volume 7 (1970), pages 125-132]에 개시되어 있다. 단백질분해 활성은 또한 기질 suc-L-Ala-L-Ala-L-Pro-L-Phe-p-니트로아닐리드 (suc-AAPF-pNA)로부터의 발색단 파라-니트로아닐린 (pNA)의 방출을 바탕으로 측정될 수 있다. 프로테아제는 기질을 절단하여, pNA를 방출한다. pNA의 방출은 410 nm에서의 흡광도 증가를 초래하는데, 그의 시간 프로파일이 효소 활성의 척도가 된다 (문헌 [Del Mar et al ., 1979] 참조). 측정은 25℃의 온도, pH 8.6 및 410 nm의 파장에서 수행된다. 측정 시간은 20초 내지 60초의 측정 간격으로 5분에 달한다. 프로테아제 활성은 바람직하게는 PU (프로테아제 단위)로 언급된다.

아밀라제 활성은 통상적인 방식으로 측정된다. 아밀라제 활성은 바람직하게는 하기에 언급되어 있는 바와 같이 측정된다. 아밀라제는 전분을 글루코스로 전환한다. 한정된 반응 조건하에서 (트리스-말레에이트 완충제 pH 6.5, 50℃, 15분), 0.67%의 전분 (가용성, 줄코우스키법(Zulkowsky method) (190℃에서 글리세롤로 처리됨)을 사용하여 예비처리됨)과 함께 조사될 샘플이 인큐비에션된다. 디니트로살리실산의 첨가 및 100℃로의 가열에 의해, 상기 산은 알칼리성 조건하에서 글루코스 및 다른 환원당에 의해 환원됨으로써 오렌지-적색 염료를 형성하며, 반응 완료 후 그것은 540 nm에서 광도측정법에 의해 측정된다. 여기에서는, 색상에 상응하는 방출된 당의 양이 효소 활성의 척도가 된다 (문헌 [Sumner et al ., J. Biol. Chem., 1921, 47 & 1924, 62] 참조).

본 발명의 목적상, 효소 안정화의 존재는 더욱 바람직하게는 40℃의 온도에서 4주 동안 저장된 프로테아제- 및 아밀라제-함유 액체 세척제 또는 세정제를 사용하여 상기 언급된 바와 같이 측정되는데, 단백질분해 활성은 기질 suc-AAPF-pNA로부터의 발색단 파라-니트로아닐린 (pNA)의 방출을 통하여 측정되며, 전분분해 활성은 상기 언급된 바와 같이 측정된다.

본 발명에 따른 세척제 또는 세정제에 존재하는 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 70% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 S3T, V4I 및 V199I로 이루어진 군으로부터 선택되는 2개 이상의 추가의 아미노산 치환과 조합하여 아미노산 치환 R99E 또는 R99D를 가지는 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 추가의 실시양태에서, 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 98.8% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 S3T, V4I 및 V199I로 이루어진 군으로부터 선택되는 2개 이상의 추가의 아미노산 치환과 조합하여 아미노산 치환 R99E를 가지는 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 추가의 실시양태에서, 프로테아제는, 전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 98.8% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 S3T, V4I 및 V199I로 이루어진 군으로부터 선택되는 2개 이상의 추가의 아미노산 치환과 조합하여 아미노산 치환 R99D를 가지는 아미노산 서열을 포함한다.

서열 1은 개시내용에 대하여 명시적인 참조가 이루어지는 국제 특허 출원 WO92/21760에 개시되어 있는 바실루스 렌투스 DSM 5483 유래의 성숙한 알칼리성 프로테아제 서열이다.

본 발명에 있어서 더욱 바람직한 프로테아제는 하기이다:

전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 98.8% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 아미노산 치환 S3T 및 V4I와 조합하여 아미노산 치환 R99E를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제, 특히 아미노산 치환 S3T, V4I 및 R99E를 가지는 서열 1에 따른 프로테아제.

전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 98.8% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 아미노산 치환 S3T 및 V199I와 조합하여 아미노산 치환 R99E를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제, 특히 아미노산 치환 S3T, R99E 및 V199I를 가지는 서열 1에 따른 프로테아제.

전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 98.8% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 아미노산 치환 V4I 및 V199I와 조합하여 아미노산 치환 R99E를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제, 특히 아미노산 치환 V4I, R99E 및 V199I를 가지는 서열 1에 따른 프로테아제.

전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 98.8% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 아미노산 치환 S3T 및 V4I와 조합하여 아미노산 치환 R99D를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제, 특히 아미노산 치환 S3T, V4I 및 R99D를 가지는 서열 1에 따른 프로테아제.

전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 98.8% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 아미노산 치환 S3T 및 V199I와 조합하여 아미노산 치환 R99D를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제, 특히 아미노산 치환 S3T, R99D 및 V199I를 가지는 서열 1에 따른 프로테아제.

전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5% 및 98.8% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 아미노산 치환 V4I 및 V199I와 조합하여 아미노산 치환 R99D를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제, 특히 아미노산 치환 V4I, R99D 및 V199I를 가지는 서열 1에 따른 프로테아제.

본 발명에 따른 프로테아제의 추가의 더욱 바람직한 실시양태들은 그들이 3종의 추가의 아미노산 치환 S3T, V4I 및 V199I와 조합하여 아미노산 치환 R99E 또는 R99D를 가진다는 점에서 구별된다. 이와 관련하여서는, 하기의 프로테아제들이 특히 바람직하다:

전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98% 및 98.5% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 아미노산 치환 S3T, V4I 및 V199I와 조합하여 아미노산 치환 R99E를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제, 특히 아미노산 치환 S3T, V4I, R99E 및 V199I를 가지는 서열 1에 따른 프로테아제. 이와 같은 프로테아제는 서열 2에 언급되어 있다.

전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90.5%, 91%, 91.5%, 92%, 92.5%, 93%, 93.5%, 94%, 94.5%, 95%, 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98% 및 98.5 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 아미노산 치환 S3T, V4I 및 V199I와 조합하여 아미노산 치환 R99D를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제, 특히 아미노산 치환 S3T, V4I, R99D 및 V199I를 가지는 서열 1에 따른 프로테아제. 이와 같은 프로테아제는 서열 3에 언급되어 있다.

추가의 더욱 바람직한 프로테아제는 또한 서열 1에 따른 넘버링의 위치 211에 아미노산 류신 (L)을 가지는 상기한 바와 같은 프로테아제들이다.

본 발명의 목적상, 아미노산 위치는 서열 1에 기재된 바와 같은 바실루스 렌투스 유래 프로테아제의 아미노산 서열을 이용하여, 사용될 프로테아제의 아미노산 서열의 정렬에 의해 정의된다. 선행 기술의 바실루스 렌투스 유래 프로테아제가 프로테아제 및 아미노산 변화를 기술함에 있어서 중요한 참조 분자가 되기 때문에, 아미노산 위치 정렬에서는 바실루스 렌투스 유래 프로테아제 (서열 1)의 넘버링을 참조하는 것이 유리하다. 또한, 넘버링은 성숙한 단백질을 기준으로 한다. 이와 같은 정렬은 특히 사용될 프로테아제의 아미노산 서열이 서열 1에 따른 바실루스 렌투스 유래 프로테아제보다 더 많은 수의 아미노산 잔기를 포함하는 경우에도 이용되어야 한다. 바실루스 렌투스 유래 프로테아제 아미노산 서열의 언급되어 있는 위치를 기준으로, 본 발명에 따라 사용될 프로테아제에서의 아미노산 위치는 정확하게 정렬 내의 해당 위치에 할당된 것이다.

서열 1을 이용한 정렬 및 그에 따른 서열 1에 따른 넘버링에서, 위치 99에 더하여, 특히 유리한 위치로는 위치 3, 4, 199 및 211이 그에 따라 할당되어야 한다. 언급된 위치들은 야생형 바실루스 렌투스 유래 프로테아제 분자에서 하기의 아미노산 잔기들에 의해 점유되어 있다: S3, V4, V199 및 L211. 따라서, 그것이 모든 다른 아미노산과 관련하여 서열 1에 매칭되어야 하기는 하지만, 존재하는 서열 1로부터의 서열 편차의 수에 따라, 서열 1의 본 발명에 따라 사용될 프로테아제가 나타낼 수 있는 상이한 최대 동일성 값들이 발생한다. 이와 같은 인자는 각 개별 경우에서의 제안되는 서열 변형의 모든 가능한 조합에 고려되어야 하며, 또한 역시 프로테아제의 아미노산 서열 길이에 따라 달라지게 된다. 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개 서열 변형에서, 최대 동일성은 269개 아미노산 길이의 아미노산 서열의 경우 각각 98.88%, 98.51%, 98.14%, 97.77%, 97.40%, 97.03% 또는 96.65%에 달하거나, 또는 275개 아미노산 길이의 아미노산 서열의 경우 각각 98.91%, 98.55%, 98.18%, 97.82%, 97.45%, 97.09% 또는 96.73%에 달한다.

본 발명에 따라, 아밀라제를 함유하는 액체 세척제 또는 세정제에 대한 그와 같은 프로테아제의 첨가를 통하여, 저장 후, 특히 더욱 바람직하게는 24시간, 48시간, 72시간, 5일, 1주, 2주, 3주 또는 4주 저장 기간 후의 잔류 세정 성능과 관련하여 특히 저장-안정성인 액체 세척제가 수득된다는 것이 발견되었다.

본 발명에 따른 세척제 또는 세정제에 함유되어 있는 프로테아제는 단백질분해 활성을 나타내는데, 다시 말하자면 그것은 폴리펩티드 또는 단백질의 펩티드 결합을 가수분해할 수 있다. 따라서, 그것은 펩티드 결합의 가수분해를 촉매함으로써 펩티드 또는 단백질을 절단할 수 있는 효소이다. 그것은 구체적으로 서브틸라제(subtilase), 더욱 바람직하게는 서브틸리신(subtilisin)이다.

아밀라제는 도입부에 기술되어 있는 바와 같은 효소이다. 아밀라제는 1,4-알파-D-글루칸 글루카노히드롤라제 또는 글리코게나제와 같은 동의어로 지칭될 수도 있다. 본 발명에 따라 제제화될 수 있는 아밀라제는 바람직하게는 α-아밀라제이다. 어떤 효소가 본 발명의 목적을 위한 α-아밀라제인지는 전분의 아밀로스에서 α(1-4)-글리코시드 결합을 가수분해하는 그의 능력에 의해 결정된다.

본 발명에 따라 제제화가능한 아밀라제의 예는 바실루스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실루스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) 또는 바실루스 스테아로써모필루스(Bacillus stearothermophilus) 유래의 α-아밀라제, 특히 세척제 또는 세정제에서 사용하기 위하여 강화된 이들의 추가 개발물들이다. 바실루스 리케니포르미스 유래 효소는 노보자임스(Novozymes)로부터 테르마밀(Termamyl)®이라는 명칭으로, 그리고 다니스코/제넨코르(Danisco/Genencor)로부터 푸라스타(Purastar)®ST라는 명칭으로 입수가능하다. 이와 같은 α-아밀라제의 추가의 개발 제품들은 노보자임스로부터 듀라밀(Duramyl)® 및 테르마밀®울트라(ultra)라는 상표명으로, 다니스코/제넨코르로부터 푸라스타®OxAm이라는 명칭으로, 그리고 일본 도쿄 소재 다이와 세이코 인크.(Daiwa Seiko Inc.)로부터 케이스타제(Keistase)®로서 입수가능하다. 바실루스 아밀로리퀘파시엔스 유래 α-아밀라제는 노보자임스에 의해 BAN®이라는 명칭으로 배급되고 있으며, 바실루스 스테아로써모필루스 유래 α-아밀라제에서 유래하는 변이체가 역시 노보자임스에 의해 BSG® 및 노바밀(Novamyl)®이라는 명칭으로 배급되고 있다. 또한, 이와 같은 목적을 위하여 특히 주목해야 하는 것은 바실루스 종 A 7-7 (DSM 12368) 유래의 α-아밀라제, 및 바실루스 아가라데렌스(Bacillus agaradherens) (DSM 9948) 유래의 시클로덱스트린 글루카노트랜스퍼라제 (CGTase)이다. 모든 언급된 분자들의 융합 제품들 역시 사용될 수 있다. 또한, 노보자임스로부터 풍가밀(Fungamyl)®이라는 상표명으로 입수가능한 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger) 및 에이. 오리자에(A. oryzae) 유래 α-아밀라제의 추가의 개발물들 역시 적합하다. 유리하게 사용될 수 있는 다른 시판 제품은 예를 들어 아밀라제-LT®, 및 스테인자임(Stainzyme)® 또는 스테인자임 울트라® 또는 스테인자임 플러스®로써, 후자는 역시 노보자임스의 것이다. 점 돌연변이에 의해 수득가능한 이들 효소의 변이체들 역시 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 추가의 바람직한 아밀라제에 대해서는 그의 개시내용에 대하여 그에 따른 참조가 명시적으로 이루어지거나 또는 그의 개시 내용이 그에 따라 명시적으로 본 특허 출원에 포함되는 국제 특허 출원 공개 WO00/60060, WO03/002711, WO03/054177 및 WO07/079938에 개시되어 있다.

서열 4에 따른 α-아밀라제 AA560의 α-아밀라제 변이체는 본 발명에 따른 작용제에서 사용하기에 특히 적합하다. 하기의 변이체들이 특히 유리하다:

(a) 서열 4에 따른 α-아밀라제 AA560과 비교할 때, α-아밀라제 AA560의 넘버링에서 하기의 서열 변형들 중 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개를 가지는 α-아밀라제 변이체: R118K, D183^* (결실), G184^* (결실), N195F, R320K, R458K. 더욱 바람직하게는, α-아밀라제 변이체는 언급된 서열 변형 6개 모두를 가진다.

(b) 서열 4에 따른 α-아밀라제 AA560과 비교할 때, (α-아밀라제 AA560의 넘버링에서) 하기의 서열 변형을 가지는 α-아밀라제 변이체:

이들 중, 하기의 α-아밀라제 변이체가 특히 바람직하다:

(c) (a)에서 언급된 서열 변형 6개 모두를 추가로 가지는 (b)에 따른 α-아밀라제 변이체, 특히 바람직하게는 (a)에서 언급된 6개의 서열 변형을 가지는 변이체 31.

(a)에서 언급된 α-아밀라제 변이체, 및 (a)에서 언급된 6개의 서열 변형을 가지는 (c)에서 언급된 α-아밀라제 변이체 31이 본 발명에 있어서 특히 바람직하다.

핵산 또는 아미노산 서열의 동일성은 서열 비교에 의해 측정된다. 그와 같은 비교는 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열에서 서로 유사한 서열을 할당하는 것에 의해 진행된다. 이와 같은 서열 비교는 바람직하게는 선행 기술 문헌 [Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.W. & Lipman, D.J. (1990) "Basic local alignment search tool." J. Mol. Biol. 215:403-410] 및 [Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs"; Nucleic Acids Res., 25, pp. 3389-3402)]에 확립되어 있는 통상적으로 사용되는 블라스트(BLAST) 알고리즘에 기초하여 수행되는데, 원칙적으로 핵산 또는 아미노산 서열 중 서로 유사한 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열을 할당하는 것에 의해 진행된다. 해당 위치의 표에 의한 할당은 정렬로 알려져 있다. 선행 기술에서 이용가능한 추가의 알고리즘은 파스타(FASTA) 알고리즘이다. 서열 비교 (정렬), 특히 다중 서열 비교는 통상적으로 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 생성된다. 종종 사용되는 것은 예를 들어 클러스탈(Clustal) 시리즈 (예를 들어 문헌 [Chenna et al . (2003): Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs. Nucleic Acid Research 31, 3497-3500] 참조), T-커피(Coffee) (예를 들어 문헌 [Notredame et al . (2000): T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments. J. Mol. Biol. 302, 205-217] 참조) 또는 이들 프로그램 또는 알고리즘에 기초한 프로그램들이다. 본 발명의 목적상, 서열 비교 및 정렬은 바람직하게는 사전설정된 디폴트 파라미터들을 사용하는 컴퓨터 프로그램 벡터(Vector) NTI® 수이트(Suite) 10.3 (인비트로젠 코포레이션(Invitrogen Corporation), 미국 캘리포니아 칼스배드 1600 패러데이 애비뉴 소재)을 사용하여 수행된다.

이와 같은 비교는 비교되는 서열들의 유사성에 대한 언급이 이루어지는 것을 가능케 한다. 통상적으로, 그것은 %동일성, 즉 그 내부 또는 상호 매칭되는 위치의 정렬에서의 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 비율로 언급된다. 더 넓은 의미의 "상동성"이라는 용어는 아미노산 서열에서 보존됨으로써 유사한 특성의 아미노산을 가지는 아미노산 치환에 대한 고려도 포함하는데, 그들이 일반적으로 단백질 내에서는 유사한 활성 또는 기능을 가지기 때문이다. 따라서, 비교되는 서열의 유사성은 %상동성 또는 %유사성으로 언급될 수도 있다. 동일성 및/또는 상동성과 관련한 언급은 전체 폴리펩티드 또는 유전자 상에서, 또는 개별 도메인 상에서만 이루어질 수 있다. 따라서, 다양한 핵산 또는 아미노산 서열들의 상동성이거나 동일한 도메인은 서열에서의 매칭에 의해 한정된다. 그들은 종종 동일하거나 유사한 기능을 가진다. 그들은 소형이어서 소수의 뉴클레오티드 또는 아미노산 만을 포함할 수 있다. 때로는, 그와 같은 소형 도메인이 단백질의 전체 활성에 필수적인 기능을 발휘한다. 따라서, 서열 매칭을 개별적이며 임의로는 소형인 도메인에만 관련시키는 것이 의미를 가질 수도 있다. 그러나, 다르게 언급되지 않는 경우, 본 출원에서의 동일성 또는 상동성과 관련한 언급은 각 경우에 나타내는 핵산 또는 아미노산 서열의 전체 길이에 관한 것이다.

본 발명의 추가의 실시양태에서, 본 발명에 따른 세척제 또는 세정제는 또한 그의 세정 성능이 적어도 서열 2 또는 서열 3에 언급되어 있는 아미노산 서열, 더욱 바람직하게는 서열 2에 언급되어 있는 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제를 함유하는 세척제 또는 세정제의 세정 성능에 상응하는 것을 특징으로 한다. 세정 성능은 세척액 리터 당 4.0 내지 11.0 그램의 첨가 비율로 아밀라제-함유 세척제를 함유하며 프로테아제를 함유하는 세척 시스템에서 측정되는데, 여기서 비교될 프로테아제들은 동일한 농도 (활성 단백질 대비)로 사용되며, 세정 성능은 접시 상의 저민 고기 및/또는 난황 오염물과 관련하여 세척 과정 후 각 오염물의 남은 잔류물을 측정하는 것에 의해 측정되고, 세척 과정은 50℃의 온도에서 30분, 바람직하게는 60분 이상 동안 진행되며, 물은 15.5 내지 16.5 °dH (독일 경도)의 물 경도를 가진다.

세척 시스템용 세척제는 바람직하게는 하기의 조성 (모든 값은 중량%로 언급되었음)을 가지는 2상 액체 자동 식기세척제이다:

(a) 효소 상:

빌더 15.0-20.0

당 알콜 8.0-12.0

비이온성 계면활성제 (22 EO로

에톡실화된 C₈-C₁₀ 지방 알콜) 3.0-5.0

알칼리 화합물 (염기) 3.0-4.0

붕산 2.5-3.5

포스포네이트 (HEDP) 1.5-2.5

아밀라제 1.0-2.0

프로테아제 본문 참조

Ca 염 0.8-1.2

Zn 염 0.15-0.25

증점제 0.8-1.2

염료, 퍼퓸, 보존제 0.25-0.5

물 100으로 맞춤

상기 아밀라제는 바람직하게는 서열 4에 따른 α-아밀라제 AA560과 비교할 때, α-아밀라제 AA560의 넘버링에서 하기의 서열 변형들을 가지는 α-아밀라제 변이체의 제제이다: R118K, D183^* (결실), G184^* (결실), N195F, R320K, R458K (노보자임스).

(b) 알칼리성 상:

빌더 7.5-12.5

탄산나트륨 7.5-12.5

술포중합체 5.0-8.0

알칼리 화합물 (염기) 3.0-5.0

모노에탄올아민 2.0-4.0

포스포네이트 (HEDP) 2.0-5.0

증점제 0.8-1.2

염료, 퍼퓸, 보존제 0.25-0.5

물 100으로 맞춤

프로테아제는 활성 단백질 대비 0.01 내지 1 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 0.5 중량%의 농도로 작용제 중에 존재한다. 2종의 상은 동일한 비율 (각 경우 상 당 20 g)로 세척 주기 동안 식기세척기에 배분된다. 세척은 통상적인 식기세척기, 예를 들어 미엘레(Miele)의 G698SC 식기세척기에서 pH 9 내지 pH 10의 pH 값 범위로 수행된다. 세척액 중 프로테아제 또는 아밀라제 활성 어느 것도 세척 개시시에 0은 아니다.

세척 성능은 10의 값이 최고 등급 (식별가능한 잔류물 없음)인 1부터 10까지 척도의 표준 IKW법을 사용하여 시각적으로 평가된다.

세정 성능은 더욱 바람직하게는 상기한 바와 같은 2상 액체 자동 식기세척제를 사용하여 접시 상의 저민 고기 및 난황 오염물 대하여 식기세척기에서 측정된다.

본 발명의 추가의 실시양태에서, 본 발명에 따른 세척제 또는 세정제는 또한 그의 저장 안정성이 적어도 서열 2 또는 서열 3에 언급되어 있는 아미노산 서열, 더욱 바람직하게는 서열 2에 언급되어 있는 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제를 함유하는 세척제 또는 세정제의 저장 안정성에 상응하는 것을 특징으로 한다. 그와 같은 저장 안정성은 50℃에서 4주 저장 후 본 발명에 따른 세척제 또는 세정제가 비교용으로 사용되는 세척제 또는 세정제와 동일하거나 그보다 더 큰 세정 성능을 가지는지 여부로 나타내는데, 여기서 본 발명에 따른 작용제는 비교용으로 사용되는 세척제 또는 세정제와 그 내부에 함유되어 있는 프로테아제만이 다르다.

비교용으로 사용될 작용제는 더욱 바람직하게는 상기 언급된 바와 같은 2상 액체 자동 식기세척제를 포함하며, 상기 언급된 바와 같이 세정 성능이 측정된다.

저장 개시시, 비교될 양 작용제는 동일한 개시 전분분해 활성을 가지며, 활성 효소 대비 동일한 농도의 프로테아제를 함유하고, 양 작용제가 동일한 방식으로 처리된다. 작용제에서의 단백질분해 활성은 각 경우 기질 suc-AAPF-pNA로부터의 발색단 파라-니트로아밀린 (pNA)의 방출을 통하여 측정되며, 이들의 전분분해 활성은 각 경우 상기 언급된 바와 같이 측정된다. 각 작용제에서의 프로테아제 및 아밀라제의 개시 활성은 0이 아니다.

활성 단백질 대비 동일한 활성의 아밀라제 및 동일한 농도의 프로테아제를 사용하는 것은 총 단백질에 대한 활성 물질 비 (비활성 값)의 소정의 이탈의 경우에도 그것이 비교되는 실제로 존재하는 효소 특성이 되도록 한다.

다르게 언급되지 않는 한, 본 발명의 목적상, 각 경우 액체 세척제의 중량을 참조하는데, 다시 말하자면 값들은 그의 중량 대비로 언급된다.

수많은 프로테아제, 특히 서브틸리신은 "예비단백질(preprotein)"로 형성되는 바, 다시 말하자면 프로펩티드(propeptide) 및 신호 펩티드를 동반하는데, 여기서 신호 펩티드의 기능은 통상적으로 그것을 생성하는 세포로부터 주변세포질 또는 세포를 둘러싸고 있는 배지로의 프로테아제의 유출을 보장하는 데에 있으며, 프로펩티드는 통상적으로 프로테아제의 올바른 폴딩(folding)을 위하여 필요하다. 신호 펩티드 및 프로펩티드는 일반적으로 예비단백질의 N-말단 부분이다. 신호 펩티드는 천연 조건하에서 신호 펩티다제에 의해 나머지 프로테아제로부터 절단된다. 이후, 프로테아제의 올바른 최종 프로펩티드-보조 폴딩이 이루어진다. 이후, 프로테아제는 그의 활성 형태로써, 자체적으로 프로펩티드를 절단 제거한다. 일단 프로펩티드가 절단 제거되고 나면, 성숙한 프로테아제, 특히 서브틸리신은 원래 존재하던 N-말단 아미노산들 없이 그의 촉매 활성을 발휘한다. 일반적인 산업적 적용, 특히 본 발명 목적상의 산업적 적용에는 성숙한 프로테아제, 즉 그의 생성 후 프로세싱된 효소가 예비단백질에 비해 바람직하다. 프로테아제는 폴리펩티드 쇄 생성 후 그것을 생성하는 세포에 의해 추가로 변형될 수 있다 (예를 들어 당 분자의 연결, 포르밀화, 아민화 등에 의함). 그와 같은 변형은 번역-후 변형으로써, 반드시 그러한 것은 아니지만 프로테아제의 기능에 영향을 줄 수 있다.

성숙한 프로테아제는 또한 본 발명에 따른 세척제 또는 세정제에 서열 1 또는 서열 2 또는 서열 3 대비 말단절단된 프로테아제, 즉 단편이 존재하도록, 그의 N-말단 및/또는 C-말단 단부에서 말단절단될 수도 있다. 이 경우, 동일성에 대한 모든 언급은 각 단편이 서열 1 정렬에서 할당되는 해당 도메인과 관련된다. 그러나, 각 단편은 어떠한 경우에도 서열 1을 이용한 정렬에서 위치 3, 4, 99 및/또는 199로 할당되는 위치는 포함하고 있으며, 여기에 본 발명에 따라 제공되는 것에 상응하는 변형들을 포함한다. 또한, 그와 같은 단편들은 단백질분해에 있어서 활성이다. 이와 관련하여 더욱 바람직한 단편은 상기-언급된 위치 99 및 또한 위치 3 및/또는 4 및/또는 199 및/또는 211의 아미노산들을 감안하여 100개 이상, 또는 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 265 또는 266개 이상 연속 아미노산 위치의 길이에 걸쳐 서열 1 또는 서열 2 또는 서열 3에 매칭되는 아미노산 서열을 포함한다. 각 경우 상기 언급된 바와 같이 측정하였을 때, 그와 같은 단편을 포함하는 본 발명에 따른 액체 세척제 또는 세정제의 세정 성능 및/또는 저장 안정성은 더욱 바람직하게는 적어도 서열 2 또는 서열 3에 기재된 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제를 함유하는 세척제 또는 세정제의 세정 성능 및/또는 저장 안정성에 상응한다.

본 발명에 따른 작용제는 더욱 바람직하게는 활성 단백질 대비 1×10^-8 내지 5　중량%, 0.0001 내지 3　중량%, 0.0005 내지 1　중량%, 0.001 내지 0.75　중량%, 더욱 바람직하게는 0.005 내지 0.5　중량%의 양으로 프로테아제를 함유한다. 본 발명에 따른 작용제는 더욱 바람직하게는 활성 단백질 대비 1×10^-8 내지 5　중량%, 0.0001 내지 3　중량%, 0.0005 내지 1　중량%, 0.001 내지 0.75　중량%, 더욱 바람직하게는 0.005 내지 0.5　중량%의 양으로 아밀라제를 함유한다. 단백질 농도는 알려져 있는 방법, 예를 들어 BCA법 (비신코닌산; 2,2'-비퀴놀릴-4,4'-디카르복실산) 또는 뷰렛법 (문헌 [A.G. Gornau, C.S. Bardawill and M.M. David, J. Biol. Chem., 177 (1948), pp. 751-766])의 도움으로 측정될 수 있다. 이와 관련하여, 활성 단백질 농도는 적합한 비가역 억제제 (프로테아제의 경우 예를 들어 페닐메틸술포닐 플루오라이드 (PMSF))를 사용한 활성 중심의 적정, 및 잔류 활성의 측정을 통하여 진행된다 (문헌 [M. Bender et al., J. Am. Chem. Soc. 88, 24 (1966), pp. 5890-5913] 참조).

프로테아제 및/또는 아밀라제는 또한 담체 물질 상에 흡착되고/거나 미성숙 불활성화로부터 그들을 보호하기 위하여 캡슐화 물질에 포매될 수 있다. 이후 세척액 내에서, 즉 사용 조건하에서, 효소는 방출되어 그의 촉매 작용을 수행할 수 있다.

본 발명의 추가의 실시양태에서, 세척제 또는 세정제는

i. 음이온성 및/또는 다가음이온성 물질, 및/또는

ii. 양이온성 및/또는 다가양이온성 물질, 및/또는

iii. 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기(들)을 포함하는 물질

로부터 선택되는 성분을 추가로 포함하는 것을 특징으로 한다.

그와 같은 물질을 첨가하는 것이 특히 비교적 낮은 온도, 특히 10℃ 내지 50℃, 10℃ 내지 40℃, 10℃ 내지 30℃ 및/또는 20℃ 내지 40℃에서, 세척제 및 세정제, 특히 프로테아제 및 아밀라제를 함유하는 액체 세척제 또는 세정제, 특히 상기한 바와 같은 것들의 세정 성능을 추가로 향상시킨다는 것이 발견되었다. 특히 본 발명에 따라 사용되는 프로테아제와의 조합에서, 무엇보다도 1종 이상 유형의 프로테아제-감수성 오염물, 특히 상기에 언급된 바와 같은 것의 제거와 관련하여 상승작용이 발생한다.

상기에 i로 나타낸 물질들은 음이온성 또는 다가음이온성 물질로써, 다시 말하자면 이들 물질은 1개 이상, 바람직하게는 수많은 음 전하를 보유한다. 상기 물질은 바람직하게는 1종 이상의 음으로 하전된 단량체, 바람직하게는 다수의 음으로 하전된 단량체를 가지는 중합체이다. 따라서, 본 발명에 있어서, 이와 같은 중합체는 바람직하게는 음으로 하전된 중합체이다. 바람직한 것은 예를 들어 유기 산 또는 그의 염의 중합체, 특히 폴리아크릴레이트 및/또는 폴리사카라이드 산 및/또는 폴리아크릴레이트 공중합체 및/또는 폴리사카라이드 공중합체이다. 이와 관련하여, 추가의 바람직한 화합물은 폴리아크릴 술포네이트 또는 폴리카르복실레이트 및 이들의 염, 공중합체 또는 공중합체의 염이다.

사용되기에 더욱 바람직한 물질의 예는 아쿠솔(Acusol) 587D (폴리아크릴 술포네이트; 롬 & 하스(Rohm & Haas)/다우 케미칼(Dow Chemical)), 아쿠솔 445N (폴리카르복실레이트 나트륨염; 롬 & 하스/다우 케미칼), 아쿠솔 590 (폴리아크릴레이트 공중합체; 롬 & 하스/다우 케미칼), 아쿠솔 916N (폴리카르복실레이트 나트륨염; 롬 & 하스/다우 케미칼), 소칼란(Sokalan) CP42 (변형된 폴리카르복실레이트 나트륨염; 바스프(BASF)), 소칼란 PA 30CL (폴리카르복실레이트 나트륨염; 바스프), 데퀘스트(Dequest) P 9000 (폴리말레산; 썸포스(Thermphos)), 알긴산, 폴리-2-아크릴아미도-2-메틸-1-프로판술폰산, 폴리-4-스티렌술폰산-코-말레산 나트륨염, 폴리-아크릴아미도-코-아크릴산 나트륨염, 폴리메타크릴산 나트륨염, 폴리-메틸 비닐 에테르-alt-말레산 또는 폴리비닐술폰산 나트륨염이다.

상기에 ii로 나타낸 물질들은 양이온성 및/또는 다가양이온성 물질로써, 다시 말하자면 이들 물질은 1개 이상, 바람직하게는 다수의 양 전하를 보유한다. 상기 물질은 바람직하게는 1종 이상의 양으로 하전된 단량체, 바람직하게는 다수의 양으로 하전된 단량체를 가지는 중합체이다. 따라서, 본 발명에 있어서, 이와 같은 중합체는 바람직하게는 양으로 하전된 중합체이다. 이와 관련하여 바람직한 화합물의 예는 폴리아민, 폴리에틸렌이민 또는 이들의 공중합체의 염, 폴리알릴아민의 염, 폴리디알릴 디메틸 암모늄 화합물 또는 폴리(아크릴아미드-코-디알릴 디메틸 암모늄) 화합물의 염이다.

iii으로 나타낸 물질들은 1개 이상의 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기, 바람직하게는 다수의 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기를 포함하는 물질이다. 이와 관련하여, 바람직한 것은 예를 들어 폴리비닐 알콜, 예컨대 모위올(Mowiol) (크레머 피그멘테 게엠베하 운트 코. 카게(Kremer Pigmente GmbH & Co. KG))이라는 상표명으로 입수가능한 것들이다.

이 시점에서, 특정 물질이 상기-언급된 군 i 내지 iii 중 하나 이상에 속할 수 있는지는 명시적으로 드러날 수 있다. 예를 들어, 그것은 1개 이상의 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기(들)를 포함하는 음이온성 중합체일 수 있다. 그와 같은 물질이라면 군 i 및 iii에 속하게 된다. 1개 이상의 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기(들)를 포함하는 양이온성 중합체는 마찬가지로 군 ii 및 iii에 속하게 된다.

본 발명의 목적상, i, ii 또는 iii에 속하는 것으로 상기에서 언급된 물질들의 유도체를 사용하는 것 역시 가능하다. 본 출원의 목적상, 유도체는 상기-언급된 물질들 중 1종에 기초하여, 예를 들어 측쇄의 전환에 의해, 또는 물질에 대한 또 다른 화합물의 공유 결합에 의해 화학적으로 변형된 물질인 것으로 이해된다. 그와 같은 화합물은 예를 들어 지질 또는 모노사카라이드, 올리고사카라이드 또는 폴리사카라이드 또는 아민 또는 아민 화합물과 같은 저분자량 화합물일 수 있다. 상기 물질은 또한 글리코실화, 가수분해, 산화, N-메틸화, N-포르밀화, N-아세틸화된 것일 수 있거나, 또는 메틸, 포르밀, 에틸, 아세틸, t-부틸, 아니실, 벤질, 트리플루오로아세틸, N-히드록시숙신이미드, t-부틸옥시카르보닐, 벤조일, 4-메틸벤질, 티오아니질, 티오크레실, 벤질옥시메틸, 4-니트로페닐, 벤질옥시카르보닐, 2-니트로벤조일, 2-니트로페닐술페닐, 4-톨루엔술포닐, 펜타플루오로페닐, 디페닐메틸, 2-클로로벤질옥시카르보닐, 2,4,5-트리클로로페닐, 2-브로모벤질옥시카르보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐, 트리페닐메틸, 2,2,5,7,8-펜타메틸크로마닐-6-술포닐을 함유할 수 있다. 마찬가지로, 유도체는 거대분자 담체에 대한 물질의 공유 또는 비-공유 결합, 또는 적합한 거대분자 케이지 구조에의 비-공유 포함도 동일하게 의미하는 것으로 이해된다. 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜과 같은 다른 거대분자 화합물과의 커플링 반응 역시 고려될 수 있다. 다른 바람직한 화학적 변형은 화학 기 -COOH, -OH, =NH, -NH₂, -SH 중 1종 이상의 -COOR, -OR, -NHR, -NR2, -NHR, -NR, -SR로의 변형이며, 여기서

R은 -CH=CH-R2, -C=C-R2, -C(R2)=CH₂, -C(R2)=C(R3), -CH=NR2, -C(R2)=N-R3, 치환이 있거나 없는 4-7 C 고리계, 치환이 있거나 없는 4-7 질소 헤테로사이클, 또는 1 내지 5개의 이중 또는 삼중 결합을 가지며 R1, R2 또는 R3에서 선택되는 치환이 있는 C₂ 내지 C₈ 쇄이고, 여기서

-R1은 H, -R, -NO₂, -CN, 할라이드 치환기, -N₃, -C₁ _-8 알킬, -(CH₂)_nCO₂R2, -C_2-8-알케닐-CO₂R2, -O(CH₂)_nCO₂R2, -C(O)NR2R3, -P(O)(OR2)₂, 알킬-치환된 테트라졸-5-일, -(CH₂)_nO(CH₂)_n-아릴, -NR2R3, -(CH₂)_nOR2, -(CH₂)_nSR2, -N(R2)C(O)R3, -S(O₂)NR2R3, -N(R2)S(O₂)R3, -(CHR2)_nNR2R3, -C(O)R3, (CH₂)_nN(R3)C(O)R3, -N(R2)CR2R3, 치환 또는 비치환된 (CH₂)_n-시클로알킬, 치환 또는 비치환된 (CH₂)N-페닐 또는 -사이클이고, 여기서 n은 1을 초과하는 수이고;

-R2는 H, 할라이드 치환기, 알킬, 할로알킬, -(CH₂)_n-페닐, -(CH₂)_1-3-비페닐, -(CH₂)_1-4-Ph-N(SO₂-C_1-2-알킬)₂, -CO(CHR1)_n-OR1, -(CHR1)_n-헤테로사이클, -(CHR1)_n-NH-CO-R1, -(CHR1)_n-NH-SO₂R1, -(CHR1)_n-Ph-N(SO₂-C₁ _-2-알킬)₂, -(CHR1)_n-C(O)(CHR1)-NHR1, -(CHR1)_n-C(S)(CHR1)-NHR1, -(CH₂)_nO(CH₂)_nCH₃, -CF₃, -C₂ _-5 아실, -(CHR1)_nOH, -(CHR1)_nCO₂R1, -(CHR1)_n-O-알킬, -(CHR1)_n-O-(CH₂)_n-O-알킬, -(CHR1)_n-S-알킬, -(CHR1)_n-S(O)-알킬, -(CHR1)_n-S(O₂)-알킬, -(CHR1)_n-S(O₂)-NHR3, -(CHR3)_n-N₃, -(CHR3)_nNHR4, 1 내지 5개의 이중 결합을 가지는 C₂ 내지 C₈ 알켄 쇄, 1 내지 5개의 삼중 결합을 가지는 C₂ 내지 C₈ 알킨 쇄, 치환 또는 비치환된 -(CHR3)_n-헤테로사이클, 치환 또는 비치환된 포화 또는 불포화 -(CHR3)_n-시클로알킬이고, 여기서 n은 1을 초과하는 수이고, R1 및 R3은 동일하거나 상이할 수 있고;

-R3은 H, -OH, -CN, 치환된 알킬, -C₂ 내지 C₈ 알케닐, 치환 또는 비치환된 시클로알킬, -N(R1)R2, 포화 또는 불포화 C₅ 내지 C₇ 헤테로사이클 또는 4 내지 7개 C 원자의 헤테로비사이클, -NR1, -NR2, 4 내지 7개 C 원자의 포화 또는 불포화 헤테로사이클 또는 헤테로비사이클로 이루어진 -NR1R2이고;

-R4는 H, -(CH₂)_nOH, -C(O)OR5, -C(O)SR5, -(CH₂)_nC(O)NR6R7, -O-C(O)-O-R6, 아미노산 또는 펩티드이고, 여기서 n은 0 내지 4의 수이고;

-R5는 H이고;

-R6은 -C(R7)-(CH₂)_n-O-C(O)-R8, -(CH₂)_n-C(R7)-O-C(O)R8, -(CH₂)_n-C(R7)-O-C(O)-O-R8 또는 -C(R7)-(CH₂)_n-O-C(O)-O-R8이고, 여기서 n은 0 내지 4의 수이고;

-R7 및 R8은 각 경우 H, 알킬, 치환된 알킬, 아릴, 치환된 아릴, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 알킬아릴, 치환된 알킬아릴, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬 또는 CH₂CO₂ 알킬이고, 여기서 R7 및 R8은 동일하거나 상이할 수 있다.

본 발명에 있어서는, i, ii 및 iii에 속하는 것으로 상기에서 언급된 물질들 및/또는 그의 유도체들의 모든 가능한 조합을 사용하는 것이 추가로 가능하다.

본 발명에 따른 액체 세척제 또는 세정제는 그대로, 또는 물을 사용한 희석 후에 텍스타일 및/또는 경질 표면을 세정하는 데에 사용될 수 있다. 그와 같은 희석 용액은 특정 작용제:물 중량비로 추가량의 물에 작용제의 일부를 희석하는 것에 의해 용이하게 제조될 수 있는데, 임의로 이와 같은 희석액은 물에서의 작용제의 균일한 분포를 확보하기 위하여 진탕된다. 가능한 중량 또는 부피 희석 비는 1:0의 작용제:물 내지 1:10,000 또는 1:20,000의 작용제:물, 바람직하게는 1:10 내지 1:2000 작용제:물이다.

본원에서는, 모든 액체 또는 유동성의 실시양태가 액체 세척제 또는 세정제로 사용될 수 있다. 본 출원의 목적상 "유동성"이라는 것은 부어질 수 있으며 수만 mPaㆍs까지의 점도를 나타낼 수 있는 작용제를 의미한다. 점도는 통상적인 표준의 방법을 사용하여 (예를 들어 브룩필드(Brookfield) LVT-II 점도계에서 20 rpm, 20℃, 스핀들(spindle) 3으로) 측정될 수 있는데, 바람직하게는 5 내지 30,000 mPaㆍs의 범위이다. 바람직한 작용제는 10 내지 15,000 mPaㆍs의 점도를 가지며, 120 내지 8000 mPaㆍs의 값이 더욱 바람직하다. 이에 따라 본 발명의 목적상, 액체 세척제 또는 세정제는 겔 또는 페이스트의 형태를 취할 수도 있으며, 균질한 용액 또는 현탁액으로 그것이 제시될 수도 있고, 예를 들어 분무가능한 것 또는 다른 통상적인 실시양태로 제제화될 수도 있다. 세척제에는 생각할 수 있는 모든 유형의 세척제, 특히 텍스타일, 카펫 또는 천연 섬유용 세척제가 포함된다. 그것은 수동용으로 및/또는 기계용으로도 제공될 수 있다. 세척제는 또한 추가의 효과를 달성하기 위하여 텍스타일의 수동 또는 기계 세척을 위한 실제 세척제에 첨가될 수 있는 세척 보조제들을 추가로 포함한다. 세정제에는 경질 표면을 세정 및/또는 소독하기 위한 모든 언급된 실시양태에서 출현하는 것과 같은 모든 작용제들, 수동 및 자동 식기세척제, 카펫 세정제, 연마제, 유리 세정제, WC 림블록(rimblock) 등이 포함된다. 마지막으로, 텍스타일 전-처리제 및 후-처리제는 한편으로는 예컨대 단단한 오염물을 부분적으로 용해시키기 위하여 세탁물 품목이 실제 세척 전에 접촉되는 작용제이며, 다른 한편으로는 실제 세척 과정의 하류 단계에서 즐거운 조작감, 주름의 부재 또는 낮은 정전기 전하와 같은 추가의 바람직한 특징들을 세척 품목에 부여하는 작용제이다. 후자의 작용제에는 특히 린스 컨디셔너가 포함된다. 소독제는 예를 들어 손 소독제, 표면 소독제 및 기기 소독제로써, 역시 언급된 실시양태로 나타날 수 있다.

본 발명의 추가의 바람직한 실시양태에서, 세척제 또는 세정제는 그것이 1종 이상의 추가의 성분, 특히 포스포네이트, 계면활성제, 빌더, 비수성 용매, 산, 수용성 염, 증점제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 성분을 포함하는 것을 특징으로 한다.

포스포네이트는 포스폰산의 염 및 유기 화합물, 특히 에스테르이다. 1급 (M'H₂PO₃ 또는 HP(O)(OH)(OM')) 및 2급 (M'₂HPO₃ 또는 HP(O)(OM')₂) 포스포네이트가 염으로 존재하는데, 여기서 M'는 1가 금속을 나타낸다. 이러한 무기 포스포테이트는 1급 또는 2급 포스파이트로도 알려져 있다. 무기 포스포네이트는 예를 들어 포스폰산 HP(O)(OH)₂, 특히 아인산의 안정한 호변이성질체 형태를 1 (1급) 또는 2 (2급) 당량의 염기, 예를 들어 알칼리 금속 히드록시드와 반응시키는 것에 의해 생성된다. 본 발명의 목적상, 인-탄소 결합을 포함하는 유기 P-치환 포스포네이트가 바람직하다 (유기인 화합물). 그의 일반적인 구조는 R1P(O)(OR2)₂로써, R1 및/또는 R2 = 알킬, 아릴 또는 H이며, 여기서 알킬 또는 아릴 잔기는 추가의 치환을 포함하거나, 또는 추가의 화학 기를 보유할 수 있다. 유기 P-치환 포스포네이트는 예를 들어 미카엘리스-아르부소프(Michaelis-Arbusov) 반응의 결과로서 생성된다. 많은 이러한 포스포네이트들이 물에 가용성이다. 일부 산업적으로 중요한 포스포네이트들이 또한 NR-(CH₂)_x-PO(OH)₂(R = 알킬, 아릴 또는 H) 유형의 아미노 기(들)를 보유하고 있다. 이러한 아미노포스포네이트들 중 일부는 EDTA, NTA 또는 DTPA와 같은 착화제들과 구조적 유사성을 가지며, 유사한 기능을 가지고 있다. 본 발명의 목적상 더욱 바람직한 포스포네이트에는 구체적으로 유기포스포네이트 예를 들자면 1-히드록시에탄-1,1-디포스폰산 (HEDP), 아미노트리(메틸렌포스폰산) (ATMP, 아미노트리스(메틸렌포스폰산) 또는 니트릴로트리스(메틸렌포스폰산) (NTMP)로도 알려져 있음), 디에틸렌트리아민펜타(메틸렌포스폰산) (DTPMP 또는 DETPMP 또는 DTPNT), 에틸렌디아민테트라(메틸렌포스폰산) (EDTMP, 에틸렌디아민테트라(메틸렌포스폰산)으로도 알려져 있음) 및 2-포스포노부탄-1,2,4-트리카르복실산 (PBS-AM, 2-포스포노부탄-1,2,4-트리카르복실산 또는 3-카르복시-3-포스포노아디프산으로도 알려져 있음)이 포함되는데, 보통 그의 암모늄 또는 알칼리 금속염의 형태로 사용된다. 디에틸렌트리아민펜타(메틸렌포스폰산) 나트륨이 더욱 바람직하다. 그와 같은 포스포네이트는 예를 들어 데퀘스트® 2066 (썸포스)이라는 상표명으로 입수가능하다.

포스포네이트는 바람직하게는 0.01 내지 2.5 중량%, 더욱 바람직하게는 0.02 내지 2 중량%, 0.03 내지 1.5 중량%, 특히 0.05 내지 1 중량%의 양으로 세척제 또는 세정제 중에 존재한다.

음이온성, 비이온성, 쯔비터이온성 및/또는 양쪽성 계면활성제가 계면활성제(들)로서 사용될 수 있다. 적용 면에서, 음이온성 및 비이온성 계면활성제의 혼합물이 바람직하다. 액체 세척제 또는 세정제 중 총 계면활성제 함량은 바람직하게는 총 액체 세척제 또는 세정제 대비 60 중량% 미만, 더욱 바람직하게는 45 중량% 미만이다.

적합한 비이온성 계면활성제에는 알콕실화 지방 알콜, 알콕실화 지방산 알킬 에스테르, 지방산 아미드, 알콕실화 지방산 아미드, 폴리히드록시지방산 아미드, 알킬페놀 폴리글리콜 에테르, 아민 옥시드, 알킬 폴리글루코시드 및 이들의 혼합물이 포함된다.

바람직하게는 8 내지 18개의 C 원자 및 알콜 mol 당 평균 1 내지 12 mol의 에틸렌 옥시드(EO)를 가지고, 여기서 알콜 잔기는 옥소 알콜 잔기에 보통 존재하는 바와 같이 선형 또는 바람직하게는 위치 2에서의 메틸-분지형일 수 있거나 또는 혼합물 중에 선형 및 메틸-분지형 잔기를 함유할 수 있는 것인 알콕실화, 유리하게는 에톡실화 1급 알콜이 비이온성 계면활성제로서 특히 바람직하게 사용된다. 그러나, 예를 들어 코코넛, 팜, 탈로우 지방 또는 올레일 알콜 유래의 천연 기원 알콜로부터 제조되며 12 내지 18개 C 원자를 가지는 선형 잔기를 가지고, 알콜 mol 당 평균 2 내지 8 EO를 가지는 알콜 에톡실화물이 특히 바람직하다. 바람직한 에톡실화 알콜에는 예를 들어 3 EO, 4 EO 또는 7 EO를 가지는 C₁₂ _-14 알콜, 7 EO를 가지는 C₉ _-11 알콜, 3 EO, 5 EO, 7 EO 또는 8 EO를 가지는 C₁₃ _-15 알콜, 3 EO, 5 EO 또는 7 EO를 가지는 C₁₂ _-18 알콜, 및 이들의 혼합물, 예컨대 3 EO를 가지는 C₁₂ _-14 알콜과 7 EO를 가지는 C₁₂ _-18 알콜의 혼합물이 포함된다. 언급된 에톡실화도는 특정 생성물에 대한 정수 또는 분수일 수 있는 통계적 평균이다. 바람직한 알콜 에톡실화물은 좁은 동족체 분포를 가진다 (좁은 범위의 에톡실화물, NRE). 이러한 비이온성 계면활성제 이외에, 12를 초과하는 EO를 가지는 지방 알콜이 사용될 수도 있다. 그의 예는 14 EO, 25 EO, 30 EO 또는 40 EO를 가지는 탈로우 지방 알콜이다. 하나의 분자에 EO 및 PO 기를 함께 함유하는 비이온성 계면활성제 역시 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 추가로 적합한 것은 또한 (비교적 고도인) 분지형 에톡실화 지방 알콜과 비분지형 에톡실화 지방 알콜의 혼합물, 예를 들자면 7 EO를 가지는 C₁₆ _-18 지방 알콜과 7 EO를 가지는 2-프로필헵탄올의 혼합물이다. 더욱 바람직하게는, 세척제, 세정제 또는 후-처리제 또는 세척 보조제는 7 EO를 가지는 C₁₂ _-18 지방 알콜 또는 7 EO를 가지는 C₁₃ _-15 옥소 알콜을 비이온성 계면활성제로서 함유한다.

세척제 또는 세정제 중 비이온성 계면활성제의 함량은 바람직하게는 각 경우 전체 세척제 또는 세정제 대비 3 내지 40 중량%, 바람직하게는 5 내지 30 중량%, 특히 7 내지 20 중량%에 달한다.

비이온성 계면활성제 이외에, 세척제 또는 세정제는 음이온성 계면활성제를 함유할 수도 있다. 술포네이트, 술페이트, 비누, 알킬 포스페이트, 음이온성 실리콘 계면활성제 및 이들의 혼합물이 음이온성 계면활성제로서 바람직하게 사용된다.

본원에서 바람직하게 고려될 수 있는 술포네이트 유형의 계면활성제는 C₉ _-13 알킬 벤젠 술포네이트, 올레핀 술포네이트, 즉 알켄과 히드록시알칸 술포네이트의 혼합물, 및 예를 들어 말단 또는 내부 이중 결합을 가지는 C₁₂ _-18 모노올레핀으로부터 기체상 황 트리옥시드를 사용한 술폰화 후 술폰화 생성물의 알칼리성 또는 산성 가수분해에 의해 수득되는 바와 같은 디술포네이트이다. C₁₂ _-18 알칸 술포네이트 및 α-술포지방산의 에스테르 (에스테르 술포네이트), 예를 들어 수소화된 코코넛, 팜핵 또는 탈로우 지방산의 α-술폰화 메틸 에스테르 역시 적합하다.

바람직한 알킬(알케닐) 술페이트는 예를 들어 코코 지방 알콜, 탈로우 지방 알콜, 라우릴, 미리스틸, 세틸 또는 스테아릴 알콜로부터 제조된 C₁₂-C₁₈ 지방 알콜 또는 C₁₀-C₂₀ 옥소 알콜의 황산 세미-에스테르, 및 이러한 쇄 길이를 가지는 2급 알콜의 황산 세미-에스테르의 알칼리 금속 특히 나트륨염이다. C₁₂-C₁₆ 알킬 술페이트 및 C₁₂-C₁₅ 알킬 술페이트 및 C₁₄-C₁₅ 알킬 술페이트가 그의 세척 특징으로 인하여 바람직하다. 2,3-알킬 술페이트 역시 적합한 음이온성 계면활성제이다.

1 내지 6 mol의 에틸렌 옥시드에 의해 에톡실화된 직쇄 또는 분지형 C₇ _-21 알콜의 황산 모노에스테르, 예컨대 평균 3.5 mol의 에틸렌 옥시드 (EO)를 가지는 2-메틸-분지형 C₉ _-11 알콜 또는 1 내지 4 EO를 가지는 C₁₂ _-18 지방 알콜 역시 적합하다.

비누 역시 바람직한 음이온성 계면활성제이다. 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, (수소화) 에루스산 및 베헨산의 염과 같은 포화 및 불포화 지방산 비누, 특히 천연 지방산, 예를 들어 코코넛, 팜핵, 올리브 오일 또는 탈로우 지방산으로부터 유래하는 비누 혼합물이 특히 적합하다.

비누를 포함하는 음이온성 계면활성제는 그의 나트륨, 칼륨, 마그네슘 또는 암모늄 염의 형태로 존재할 수 있다. 음이온성 계면활성제는 바람직하게는 그의 나트륨염 형태로 존재한다. 음이온성 계면활성제를 위한 다른 바람직한 반대이온으로는 콜린, 트리에틸아민 또는 메틸에틸아민의 양성자화된 형태도 있다.

세척제 또는 세정제 중 음이온성 계면활성제 함량은 각 경우 전체 세척제 또는 세정제 대비 1 내지 40 중량%, 바람직하게는 5 내지 30 중량%, 특히 바람직하게는 10 내지 25 중량%에 달할 수 있다.

세척제 또는 세정제에 함유될 수 있는 가능한 빌더는 구체적으로 실리케이트, 알루미늄 실리케이트 (특히 제올라이트), 카르보네이트, 유기 디- 및 폴리카르복실산의 염, 및 이러한 물질들의 혼합물이다.

세척제 또는 세정제에 존재할 수 있는 유기 빌더는 예를 들어 나트륨염의 형태로 사용될 수 있는 폴리카르복실산이며, 여기서 폴리카르복실산은 1개를 초과하는 산 관능기를 보유하는 카르복실산을 의미하는 것으로 이해된다. 이들은 예를 들어 시트르산, 아디프산, 숙신산, 글루타르산, 말산, 타르타르산, 말레산, 푸마르산, 사카르산, 아미노카르복실산, 니트릴로트리아세트산 (NTA), 메틸글리신디아세트산 (MGDA), 및 이들의 유도체 및 이들의 혼합물이다. 바람직한 염은 시트르산, 아디프산, 숙신산, 글루타르산, 타르타르산, 사카르산 및 이들의 혼합물과 같은 폴리카르복실산의 염이다.

중합체 폴리카르복실레이트 또한 빌더로서 적합하다. 이들은 예를 들어 폴리아크릴산 또는 폴리메타크릴산의 알칼리 금속염, 예를 들어 600 내지 750,000 g/mol의 상대 분자량을 가지는 것들이다.

적합한 중합체는 특히 바람직하게는 1,000 내지 15,000 g/mol의 분자량을 가지는 폴리아크릴레이트이다. 그의 탁월한 용해도로 인하여, 이와 같은 군에 속하는 단쇄 폴리아크릴레이트가 더욱 바람직할 수 있는데, 이들은 1000 내지 10,000 g/mol, 더욱 바람직하게는 1000 내지 5000 g/mol의 분자량을 가진다.

역시 적합한 것은 공중합체 폴리카르복실레이트, 특히 아크릴산과 메타크릴산의 것, 및 아크릴산 또는 메타크릴산과 말레산의 것이다. 수용성을 향상시키기 위하여, 중합체는 단량체로서 알릴옥시벤젠술폰산 및 메탈릴술폰산과 같은 알릴술폰산을 함유할 수도 있다.

그러나, 바람직하게는 예를 들어 시트르산, 또는 1000 내지 5000 g/mol의 분자량을 가지는 아크릴 중합체와 같은 가용성 빌더가 액체 세척제 또는 세정제에 바람직하게 사용된다.

본 문헌의 목적상, 중합체 폴리카르복실레이트에 대하여 표시되는 분자량은 각 산 형태의 중량-평균 분자량 M_w를 포함하는데, 이것은 원칙적으로 UV 검출기가 사용되는 겔 투과 크로마토그래피 (GPC)에 의해 측정된다. 본원에서, 측정은 조사되는 중합체에 대한 그의 구조적 관계의 결과로서 실제 분자량 값을 제공하는 외부 폴리아크릴산 표준에 대비하여 이루어졌다. 이러한 값은 폴리스티렌술폰산이 표준으로 사용되는 분자량 값과 현저하게 다르다. 폴리스티렌술폰산에 대비하여 측정된 분자량은 일반적으로 본 문헌에 표시되어 있는 분자량에 비해 현저하게 더 높다.

그와 같은 유기 빌더 물질은 원할 경우 40 중량% 이하, 특히 25 중량% 이하, 바람직하게는 1 중량% 내지 8 중량%의 양으로 존재할 수 있다. 페이스트형 또는 액체, 특히 물-함유 작용제에서는 언급된 상위 한계에 가까운 양이 바람직하게 사용된다.

본 발명에 따른 세척제 또는 세정제는 액체이며, 바람직하게는 주 용매로 물을 함유한다. 또한, 비수성 용매가 세척제 또는 세정제에 첨가될 수도 있다. 언급된 농도 범위에서 수-혼화성이라는 전제하에, 적합한 비수성 용매에는 1가 또는 다가 알콜, 알칸올아민 또는 글리콜 에테르가 포함된다. 용매는 바람직하게는 에탄올, n-프로판올, i-프로판올, 부탄올, 글리콜, 프로판디올, 부탄디올, 글리세롤, 디글리콜, 디에틸렌 글리콜 프로필 에테르, 디에틸렌 글리콜 모노부틸 에테르, 헥실렌 글리콜, 에틸렌 글리콜 메틸 에테르, 에틸렌 글리콜 에틸 에테르, 에틸렌 글리콜 프로필 에테르, 에틸렌 글리콜 n-부틸 에테르, 디에틸렌 글리콜 메틸 에테르, 디에틸렌 글리콜 에틸 에테르, 프로필렌 글리콜 메틸 에테르, 프로필렌 글리콜 에틸 에테르, 프로필렌 글리콜 프로필 에테르, 디프로필렌 글리콜 모노메틸 에테르, 디프로필렌 글리콜 모노에틸 에테르, 디이소프로필렌 글리콜 모노메틸 에테르, 디이소프로필렌 글리콜 모노에틸 에테르, 메톡시트리글리콜, 에톡시트리글리콜, 부톡시트리글리콜, 1-부톡시에톡시-2-프로판올, 3-메틸-3-메톡시부탄올, 프로필렌 글리콜 t-부틸 에테르, 디-n-옥틸 에테르 및 이들 용매의 혼합물에서 선택된다. 그러나, 세척제 또는 세정제는 비수성 용매로 폴리올을 함유하는 것이 바람직하다. 폴리올에는 구체적으로 글리세롤, 1,2-프로판디올, 1,3-프로판디올, 에틸렌 글리콜, 디에틸렌 글리콜 및/또는 디프로필렌 글리콜이 포함될 수 있다. 더욱 바람직하게는, 세척제 또는 세정제는 폴리올과 1가 알콜의 혼합물을 함유한다. 비수성 용매는 0.5 내지 15 중량%, 그러나 바람직하게는 12 중량% 미만의 양으로 세척제 또는 세정제에 사용될 수 있다.

나머지 성분들을 혼합하는 것에 의해 자동으로 수득되지는 않는 원하는 pH 값을 설정하기 위하여, 작용제는 시스템과 상용성이며 환경적으로 적합한 산, 특히 시트르산, 아세트산, 타르타르산, 말산, 락트산, 글리콜산, 숙신산, 글루타르산 및/또는 아디프산은 물론, 무기 산, 특히 황산, 또는 염기, 특히 암모늄 또는 알칼리 금속 히드록시드를 함유할 수 있다. 이와 같은 pH 조절제는 바람직하게는 20 중량% 이하, 특히 1.2 중량% 내지 17 중량%의 양으로 작용제 중에 존재한다.

본 발명에 따른 작용제는 또한 예를 들어 점도를 조정하기 위하여 사용되는 1종 이상의 수용성 염을 함유할 수 있다. 상기 염은 무기 및/또는 유기의 것일 수 있다. 본원에서 사용가능한 무기 염은 바람직하게는 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 알루미늄 및/또는 전이 금속의, 무색의 수용성 할라이드, 술페이트, 술파이트, 카르보네이트, 히드로겐카르보네이트, 니트레이트, 니트라이트, 포스페이트 및/또는 옥시드를 포함하는 군에서 선택되며; 암모늄염 또한 사용될 수 있다. 알칼리 금속의 할라이드 및 술페이트가 더욱 바람직한데; 이에 따라 무기 염은 바람직하게는 나트륨 클로라이드, 칼륨 클로라이드, 나트륨 술페이트, 칼륨 술페이트 및 이들의 혼합물을 포함하는 군에서 선택된다. 사용될 수 있는 유기 염의 예는 카르복실산의 무색 수용성 알칼리 금속, 알칼리 토금속, 암모늄, 알루미늄 및/또는 전이 금속 염이다. 상기 염은 바람직하게는 포르메이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 시트레이트, 말레이트, 타르트레이트, 숙시네이트, 말로네이트, 옥살레이트, 락테이트 및 이들의 혼합물을 포함하는 군에서 선택된다.

증점 목적으로, 본 발명에 따른 작용제는 1종 이상의 증점제를 함유할 수 있다. 증점제는 바람직하게는 크산탄, 구아, 카라기난, 한천-한천, 겔란, 펙틴, 로커스트 빈 분말 및 이들의 혼합물을 포함하는 군에서 선택된다. 이들 화합물은 무기 염의 존재하에서도 효과적인 증점제이다. 하나의 더욱 바람직한 실시양태에서, 세척제 또는 세정제는 증점제로서 크산탄을 함유하는데, 크산탄 증점제가 상승된 염 농도 존재하에서도 효과적이며 연속 상의 거시적 분리를 방지하기 때문이다. 또한, 증점제는 연속적인 저-계면활성제 상을 안정화하며, 거시적 상 분리를 방지한다.

대안으로서 또는 더하여, (메트)아크릴산 (공)중합체가 증점제로 사용될 수도 있다. 적합한 아크릴 및 메타크릴 (공)중합체에는 예를 들어 카르복시비닐 중합체로도 알려져 있는, 아크릴산의 폴리알케닐 폴리에테르, 특히 수크로스, 펜타에리트리톨 또는 프로필렌의 알릴 에테르와 가교된 고분자량 단독중합체 (문헌 ["International Dictionary of Cosmetic Ingredients" of "The Cosmetic, Toiletry, and Fragrance Association (CTFA)"]에 따른 INCI 명칭: 카르보머)가 포함된다. 그와 같은 폴리아크릴산은 특히 폴리겔(Polygel)® 및 카르보폴(Carbopol)®이라는 상표명으로 입수가능하다. 하기의 아크릴산 공중합체들 또한 적합하다: (i) 예를 들어 아쿨린(Aculyn)®, 아쿠솔(Acusol)® 또는 테고(Tego)® 중합체라는 상표명으로 입수가능한, 아크릴산, 메타크릴산 및 이들의 단순 에스테르의 군에 속하는 2종 이상 단량체의, 바람직하게는 C₁ _-4 알칸올과 함께 형성된 공중합체 (INCI 아크릴레이트 공중합체); (ii) 예를 들어 바람직하게는 C₁ _-4 알칸올과 함께 형성되며 예를 들어 카르보폴®이라는 상표명으로 입수가능한, 수크로스 또는 펜타에리트리톨의 알릴 에테르와 가교된 C₁₀ _-30 알킬 아크릴레이트의, 아크릴산, 메타크릴산 및 이들의 단순 에스테르의 군에 속하는 1종 이상 단량체와의 공중합체 (INCI 아크릴레이트/C10-30 알킬 아크릴레이트 가교중합체)를 포함한 가교 고분자량 아크릴산 공중합체. 다른 적합한 중합체로는 소칼란® 유형의 (메트)아크릴산 (공)중합체가 있다.

본 발명에 따른 세척제 또는 세정제는 추가의 증점제, 바람직하게는 크산탄과 조합하여 (메트)아크릴산 (공)중합체를 함유하는 것이 바람직할 수 있다. 세척제 또는 세정제는 각 경우 전체 세척제 또는 세정제 대비 0.05 내지 1.5 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 1 중량%의 증점제를 함유할 수 있다. 본원에서 사용되는 증점제의 양은 증점제의 유형 및 원하는 증점 정도에 따라 달라진다.

통상적인 용매를 함유하는 용액 형태의 본 발명에 따른 액체 또는 페이스트형 생성물은 일반적으로 단순히 성분들을 혼합하는 것에 의해 제조되는데, 미용해 재료 또는 용액으로서 자동 혼합기에 도입될 수도 있다.

본 발명에 따른 세척제 또는 세정제는 기술된 바와 같은 프로테아제 및 아밀라제만을 함유할 수 있다. 다르게는, 그것은 작용제의 효능에 알맞은 농도로 추가의 가수분해 효소 또는 다른 효소를 함유할 수도 있다. 따라서, 본 발명은 추가로 1종 이상의 다른 효소를 추가로 포함하는 작용제를 제공하는데, 여기에는 원칙적으로 선행 기술에 이와 같은 목적으로 확립되어 있는 모든 효소가 사용될 수 있다. 추가로 사용가능한 바람직한 효소는 본 발명에 따른 작용제에서 촉매 활성을 수행할 수 있는 소정의 효소, 구체적으로는 프로테아제, 아밀라제, 셀룰라제, 헤미셀룰라제, 만난아제, 탄나제, 크실라나제, 크산타나제, 크실로글루카나제, β-글루코시다제, 펙티나제, 카라기나제, 퍼히드롤라제, 옥시다제, 옥시도리덕타제 또는 리파제 및 이들의 혼합물이다. 추가의 효소는 유리하게는 각 경우 활성 단백질 대비 1×10^-8 내지 5 중량%의 양으로 작용제 중에 존재한다. 각 추가 효소는 더욱 바람직하게는 활성 단백질 대비 1×10^-7 내지 3 중량%, 0.00001 내지 1.5　중량%, 0.00005 내지 1　중량%, 0.0001 내지 0.75　중량%, 더욱 바람직하게는 0.0005 내지 0.5　중량%의 양으로 본 발명에 따른 작용제 중에 존재한다. 더욱 바람직하게는, 효소는 특정 오염물 또는 오염에 대비한 그의 작용과 관련하여 상승작용적 세정 성능을 나타내는데, 다시 말하자면 작용제 조성물에 함유되어 있는 효소들이 서로의 세정 성능을 돕는다. 특히 바람직하게는, 그와 같은 상승작용은 구체적으로 언급된 프로테아제와 아밀라제 및/또는 리파제 및/또는 만난아제 및/또는 셀룰라제 및/또는 펙티나제를 포함하여, 본 발명에 따른 프로테아제와 본 발명에 따른 작용제의 추가 효소 사이에 존재한다. 상승작용적 효과는 상이한 효소들 사이뿐만 아니라, 본 발명에 따른 작용제의 1종 이상 효소와 추가 성분 사이에서도 발생할 수 있다.

본 발명의 추가의 실시양태에서, 세척제 또는 세정제는 그것이 자동 식기세척제인 것을 특징으로 한다. 본 출원에서 정의될 때, 자동 식기세척제는 자동 식기세척 방법에서 오염된 접시를 세정하는 데에 사용될 수 있는 조성물이다. 따라서, 본 발명에 따른 식기세척제는 예를 들어 항상 자동 식기세척제와 조합되어 사용되며 그 자체는 어떠한 세정 작용도 수행하지 않는 자동 세정 조제와는 다르다. 종종, 기계 세척 접시에는 수동 세척 접시에 적용되는 것에 비해 더욱 엄격한 요건이 적용된다. 예를 들어, 기계 세정 후, 접시에는 음식 잔류물이 완전히 없어야 할 뿐만 아니라, 예를 들어 습윤제의 결핍으로 인한 건조된 액적으로부터 기원하는 물 경도 또는 기타 무기 염 바탕의 어떠한 백색을 띤 오점도 나타내지 않아야 한다. 현행 자동 식기세척제는 세정 및/또는 컨디셔닝 및/또는 물 연화 및/또는 세정 활성 물질을 도입하는 것에 의해 이러한 요건들을 만족시키는데, 소비자들에게는 예를 들어 "2-인-1" 또는 "3-인-1" 식기세척제로 알려져 있다. 자동 식기세척제는 성공적인 세정 및 헹굼을 위한 필수 성분으로서 빌더를 함유한다. 한편으로, 이러한 빌더는 세척액의 알칼리성을 증가시키며 (알칼리성이 상승함에 따라 지방 및 오일이 유화되고 비누화됨), 다른 한편으로는 수성 액 중에 존재하는 칼슘 이온을 착화함으로써 세척액의 물 경도를 감소시킨다. 바람직한 하나의 추가 실시양태에서, 자동 식기세척제는 수용성 필름에 봉입되어 있다. 상기 필름은 바람직하게는 폴리비닐 알콜 (PVA)을 포함하거나, 또는 폴리비닐 알콜 (PVA)로 이루어진다.

본 발명은 추가로 텍스타일 또는 경질 표면으로부터 오염물, 특히 프로테아제- 및/또는 아밀라제-감수성 오염물을 제거하기 위한, 다시 말하자면 텍스타일 또는 경질 표면을 세정하기 위한 본 발명에 따른 세척제 또는 세정제의 용도를 제공한다. 이는 본 발명에 따른 작용제가 특히 그 내부에 함유되어 있는 프로테아제와 아밀라제의 조합으로 인하여 텍스타일 또는 경질 표면으로부터 상응하는 오염물을 제거하는 데에 유리하게 사용될 수 있기 때문이다. 이와 같은 본 발명 측면의 실시양태에는 예를 들어 손세탁, 텍스타일 또는 경질 표면으로부터의 오염의 수동 제거, 또는 기계 방법과 연계된 사용이 포함된다. 본 발명에 따른 세척제 또는 세정제에 대하여 기술된 모든 인자, 측면 및 실시양태들은 본 발명의 이와 같은 측면에도 적용가능하다. 따라서, 이와 같은 면에서, 상응하는 부문에서의 개시내용을 명시적으로 참조하면, 본 개시내용이 본 발명에 따른 상기 용도에도 적용된다는 것이 드러난다.

본 발명은 추가로 방법 단계들 중 하나 이상에서 본 발명에 따른 세척제 또는 세정제를 사용하는, 텍스타일 또는 경질 표면의 세정 방법을 제공한다.

여기에는 수동적 방법 및 기계적 방법 모두가 포함되며, 기계적 방법이 바람직한데, 그것이 예를 들어 사용되는 양 및 노출 기간 면에서 더 정밀하게 조절가능하기 때문이다. 텍스타일의 세정 방법은 일반적으로 2개 이상의 방법 단계에서 세정 작용을 가지는 다양한 물질들이 세정될 재료 상에 적용되고, 노출 기간 후 세척 제거되거나, 또는 세정될 재료가 세척제 또는 이와 같은 작용제의 용액 또는 희석액을 사용하여 소정의 다른 방식으로 처리된다는 점에서 구별된다. 텍스타일이 아닌 다른 모든 재료, 특히 경질 표면의 세정 방법에도 동일한 것이 적용된다. 생각할 수 있는 임의의 세척 또는 세정 방법이 본 발명에 따른 세척제 또는 세정제의 적용에 의해 하나 이상의 방법 단계에서 향상될 수 있으며, 그에 따라 본 발명의 실시양태를 구성한다. 본 발명에 따른 세척제 또는 세정제에 대하여 기술된 모든 인자, 측면 및 실시양태들은 본 발명의 이와 같은 측면에도 적용가능하다. 따라서, 이와 같은 면에서, 상응하는 부문에서의 개시내용을 명시적으로 참조하면, 본 개시내용이 본 발명에 따른 상기 방법에도 적용된다는 것이 드러난다.

바람직한 실시양태에서, 상기 방법은 아밀라제가 1×10^-10 내지 0.2 중량%, 0.000001 내지 0.12　중량%, 0.000005 내지 0.04　중량%, 0.00001 내지 0.03　중량%, 더욱 바람직하게는 0.00005 내지 0.02　중량%의 농도로 세척액 중에 존재하고/거나 프로테아제가 1×10^-10 내지 0.2　중량%, 0.000001 내지 0.12　중량%, 0.000005 내지 0.04　중량%, 0.00001 내지 0.03　중량%, 더욱 바람직하게는 0.00005 내지 0.02　중량%의 농도로 세척액 중에 존재하며, 여기서 언급된 값은 세척액 중 활성 단백질에 관한 것임을 특징으로 한다. 더욱 바람직한 실시양태에서, 상기 방법은 그것이 10℃ 내지 60℃, 바람직하게는 20℃ 내지 50℃, 더욱 바람직하게는 30℃ 내지 50℃의 온도에서 수행된다는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 작용제에서 사용되는 프로테아제는 본 발명에 따른 세척제 및 세정제에서는 물론, 방법, 특히 세척 방법 및 세정 방법에서, 상기 설명에 따라 유리하게 사용될 수 있다. 따라서, 그것은 상응하는 작용제에서 단백질분해 활성을 제공하는 데에 유리하게 사용될 수 있다.

본 발명은 추가로, 아밀라제를 추가로 포함하는 액체 세척제 또는 세정제에서 단백질분해 활성을 제공하기 위한, 전체 길이에 걸쳐 서열 1에 기재된 아미노산 서열과 70% 이상 동일하며, 서열 1에 따른 넘버링에서 S3T, V4I 및 V199I로 이루어진 군으로부터 선택되는 2개 이상의 추가의 아미노산 치환과 조합하여 아미노산 치환 R99E 또는 R99D를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 프로테아제의 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 세척제 또는 세정제에 대하여 기술된 모든 인자, 측면 및 실시양태들은 언급된 용도에도 적용가능하다. 따라서, 이와 같은 면에서, 상응하는 부문에서의 개시내용을 명시적으로 참조하면, 본 개시내용이 본 발명에 따른 상기 용도에도 적용된다는 것이 드러난다.

실시예: 본 발명에 따른 액체 자동 식기세척제의 저장 안정성 측정

기본 제제는 하기의 조성 (모든 값은 중량%로 언급되었음)을 가지는 아밀라제-함유 2상 액체 자동 식기세척제이었다:

(a) 효소 상:

빌더 18.0

당 알콜 12.0

비이온성 계면활성제 (22 EO로

에톡실화된 C₈-C₁₀ 지방 알콜) 5.0

알칼리 화합물 (염기) 3.5

붕산 3.0

포스포네이트 (HEDP) 1.5

아밀라제 1.2

Ca 염 1.2

Zn 염 0.2

증점제 1.0

염료, 퍼퓸, 보존제 0.3

물 97로 맞춤

제시된 상기 아밀라제는 서열 4에 따른 α-아밀라제 AA560과 비교할 때, α-아밀라제 AA560의 넘버링에서 하기의 서열 변형들을 가지는 α-아밀라제 변이체이었다: R118K, D183^* (결실), G184^* (결실), N195F, R320K, R458K (노보자임스).

(b) 알칼리성 상:

빌더 12.0

탄산나트륨 10.0

술포중합체 7.0

알칼리 화합물 (염기) 4.0

모노에탄올아민 3.5

포스포네이트 (HEDP) 4.0

증점제 1.0

염료, 퍼퓸, 보존제 0.3

물 100으로 맞춤

다양한 시험 배치용으로, 기본 제제의 효소 상을 각 경우 하기 프로테아제의 제제 3 중량%와 조합하였다 (각 경우 0.5 중량%의 활성 단백질 산출):

배치 1: WO2011/032988의 서열 2에 따른 바실루스 렌투스 유래 프로테아제의 성능 향상 변이체 (참조);

배치 2: 서열 2에 따른 프로테아제 (서열 1 + S3T + V4I + R99E + V199I).

2개의 상을 동일한 비율 (각 경우 상 당 20 g)로 분배함으로써 세정 성능을 측정하였다. 세척은 4 리터의 부피로 50℃의 온도에서 60분의 기간 동안, 미엘레의 G698SC 식기세척기에서 pH 9 내지 pH 10의 pH 값 범위로 수행하였다.

하기의 오염물을 가지는 접시들을 사용하였다: 우유 (A), 저민 고기 (B), 난황 (C), 포리지 오트 (D) 및 전분 (E).

40℃에서 4주 동안 저장 전 및 후의 세정 성능과 관련하여 배치 1 및 2의 세척제를 시험하였다. 결과를 하기 표 1에 나타내었다:

40℃에서의 4주 저장 후, 본 발명에 따른 조성물은 그 내부에 함유되어 있는 프로테아제로 인하여 특히 프로테아제-감수성 유형의 오염물 B 및 C에 대하여 현저하게 향상된 세정 성능을 나타내는 것이 분명하였다 (단백질분해 세정 성능). 특히, 아밀라제-감수성 유형의 오염물 D 및 E에 대한 세정 성능 역시 향상된다 (전분분해 세정 성능).

SEQUENCE LISTING <110> Henkel AG & Co. KGaA <120> Lagerstabiles fl?siges Wasch- oder Reinigungsmittel enthaltend Protease und Amylase <130> PT019382 PCT <150> DE 102011088751.2 <151> 2011-12-15 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 269 <212> PRT <213> Bacillus lentus <400> 1 Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala 1 5 10 15 His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp 20 25 30 Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser 35 40 45 Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr 50 55 60 His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu 65 70 75 80 Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala 85 90 95 Asp Gly Arg Gly Ala Ile Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala 100 105 110 Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser 115 120 125 Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly 130 135 140 Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Ser Ser Ile Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln 165 170 175 Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile 180 185 190 Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr 195 200 205 Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala 210 215 220 Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile 225 230 235 240 Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu 245 250 255 Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg 260 265 <210> 2 <211> 269 <212> PRT <213> Bacillus lentus <400> 2 Ala Gln Thr Ile Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala 1 5 10 15 His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp 20 25 30 Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser 35 40 45 Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr 50 55 60 His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu 65 70 75 80 Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala 85 90 95 Asp Gly Glu Gly Ala Ile Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala 100 105 110 Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser 115 120 125 Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly 130 135 140 Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Ser Ser Ile Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln 165 170 175 Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile 180 185 190 Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr 195 200 205 Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala 210 215 220 Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile 225 230 235 240 Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu 245 250 255 Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg 260 265 <210> 3 <211> 269 <212> PRT <213> Bacillus lentus <400> 3 Ala Gln Thr Ile Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala 1 5 10 15 His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp 20 25 30 Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser 35 40 45 Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr 50 55 60 His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu 65 70 75 80 Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala 85 90 95 Asp Gly Asp Gly Ala Ile Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala 100 105 110 Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser 115 120 125 Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly 130 135 140 Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Ser Ser Ile Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln 165 170 175 Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile 180 185 190 Val Ala Pro Gly Val Asn Ile Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr 195 200 205 Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala 210 215 220 Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile 225 230 235 240 Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu 245 250 255 Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg 260 265 <210> 4 <211> 485 <212> PRT <213> Bacillus sp. <400> 4 His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr 1 5 10 15 Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser 20 25 30 Asn Leu Lys Asp Lys Gly Ile Ser Ala Val Trp Ile Pro Pro Ala Trp 35 40 45 Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr 50 55 60 Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly 65 70 75 80 Thr Arg Asn Gln Leu Gln Ala Ala Val Asn Ala Leu Lys Ser Asn Gly 85 90 95 Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp 100 105 110 Ala Thr Glu Met Val Arg Ala Val Glu Val Asn Pro Asn Asn Arg Asn 115 120 125 Gln Glu Val Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp 130 135 140 Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr 145 150 155 160 His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg 165 170 175 Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp 180 185 190 Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met 195 200 205 Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr 210 215 220 Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His 225 230 235 240 Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala 245 250 255 Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu 260 265 270 Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val 275 280 285 Phe Asp Val Pro Leu His Tyr Asn Leu Tyr Asn Ala Ser Lys Ser Gly 290 295 300 Gly Asn Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg 305 310 315 320 His Pro Met His Ala Val Thr Phe Val Asp Asn His Asp Ser Gln Pro 325 330 335 Glu Glu Ala Leu Glu Ser Phe Val Glu Glu Trp Phe Lys Pro Leu Ala 340 345 350 Tyr Ala Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr 355 360 365 Gly Asp Tyr Tyr Gly Ile Pro Thr His Gly Val Pro Ala Met Lys Ser 370 375 380 Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Arg 385 390 395 400 Gln Asn Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu 405 410 415 Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp 420 425 430 Gly Ala Gly Gly Asn Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly 435 440 445 Gln Val Trp Thr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ala Gly Thr Val Thr Ile 450 455 460 Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser 465 470 475 480 Ile Trp Val Asn Lys 485

Claims

(a) 서열 2에 따른 아미노산 서열을 가지는 프로테아제, 및
(b) 아밀라제
를 포함하는 액체 세정 또는 세척 제품.
제1항에 있어서, 아밀라제가 서열 4에 따른 α-아밀라제 AA560의 α-아밀라제 변이체이며, 상기 변이체는 α-아밀라제 AA560에 따른 넘버링에서 하기의 서열 변형들: R118K, D183^* (결실), G184^* (결실), N195F, R320K, R458K 중 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개를 가지는 것을 특징으로 하는 액체 세정 또는 세척 제품.
제1항에 있어서, 아밀라제가 활성 단백질 대비 1×10^-8 내지 5 중량%의 양으로 존재하고/거나 프로테아제가 활성 단백질 대비 1×10^-8 내지 5 중량%의 양으로 존재하는 것을 특징으로 하는 액체 세정 또는 세척 제품.
제1항에 있어서,
i. 음이온성 및/또는 다가음이온성 물질, 및/또는
ii. 양이온성 및/또는 다가양이온성 물질, 및/또는
iii. 히드록실 및/또는 폴리히드록실 기(들)을 포함하는 물질
로부터 선택되는 성분을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 액체 세정 또는 세척 제품.
제1항에 있어서, 포스포네이트, 계면활성제, 빌더, 비수성 용매, 산, 수용성 염, 증점제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추가의 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 액체 세정 또는 세척 제품.
제1항에 있어서, 프로테아제, 아밀라제, 셀룰라제, 헤미셀룰라제, 만난아제, 탄나제, 크실라나제, 크산타나제, 크실로글루카나제, β-글루코시다제, 펙티나제, 카라기나제, 퍼히드롤라제, 옥시다제, 옥시도리덕타제 또는 리파제 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추가의 효소를 함유하는 것을 특징으로 하는 액체 세정 또는 세척 제품.
제1항에 있어서, 자동 식기세척제인 것을 특징으로 하는 액체 세정 또는 세척 제품.
제1항에 있어서, 텍스타일 또는 경질 표면으로부터 프로테아제-감수성 오염물을 제거하기 위한 액체 세정 또는 세척 제품.
제1항에 따른 액체 세정 또는 세척 제품을 하나 이상의 방법 단계에서 사용하는 것을 특징으로 하는, 텍스타일 또는 경질 표면의 세정 방법.
제9항에 있어서, 아밀라제가 1×10^-10 내지 0.2 중량%의 농도로 세척액 중에 존재하고/거나 프로테아제가 1×10^-10 내지 0.2 중량%의 농도로 세척액 중에 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제9항에 있어서, 10℃ 내지 60℃의 온도에서 수행하는 것을 특징으로 하는 방법.
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