BR112014014039B1

BR112014014039B1 - Agente de lavagem ou de limpeza contendo protease e amilase, seu uso e método para a limpeza de têxteis ou superfícies duras

Info

Publication number: BR112014014039B1
Application number: BR112014014039-1A
Authority: BR
Inventors: Nina Mußmann; Thomas Eiting; Thorsten Bastigkeit; Konstantin Benda; Hellmuth Hendrik
Original assignee: Henkel Ag & Co. Kgaa
Priority date: 2011-12-15
Filing date: 2012-12-10
Publication date: 2021-11-30
Also published as: RU2617406C2; KR101929610B1; EP2791331A1; DE102011088751A1; HUE033241T2; US9752102B2; CN103987845A; US20140295522A1; ES2630877T3; MX350254B; KR20140105006A; PL2791331T3; JP2015507033A; EP2791331B1; CN103987845B; MX2014007116A; WO2013087545A1; BR112014014039A2; RU2014128801A; JP6154822B2

Abstract

detergente líquido de armazenamento estável ou agente de limpeza que contêm protease e amilase. a presente invenção refere-se à intenção de melhorar a estabilidade de armazenamento de um agente de limpeza ou de lavagem líquido, que contém uma protease e amilase. isto é conseguido através de uma protease, que compreende uma sequência de aminoácidos que, ao longo de todo o comprimento dos mesmos, é, no mínimo, 70 % idêntica à sequência de aminoácidos indicada na seq id no. 1 e, na numeração de acordo com a seq id no. 1, tem a substituição de um aminoácido r99e ou r99d em combinação com pelo menos mais duas substituições de aminoácidos que são selecionadas a partir do grupo que consiste em s3t, v4i e v199i.

Description

[001] A presente invenção refere-se ao campo de agentes de lavagem e de limpeza líquidos. A presente invenção, em particular, refere-se aos agentes de lavagem e de limpeza que contêm enzima líquida os quais contêm proteases definidas em combinação com uma ami- lase de limpeza e, além disso, propõem métodos em que tais agentes são usados. A presente invenção, além disso, refere-se ao uso de proteases definidas em agentes de lavagem ou limpeza líquidos que contêm uma amilase.

[002] O uso de proteases do tipo subtilisina é preferível para osagentes de lavagem e de limpeza. As proteases usadas nos agentes de lavagem ou limpeza conhecidas da técnica anterior inicialmente originaram tanto a partir de microrganismos, por exemplo, do Bacillus gerado, Streptomyces, Humicola, ou Pseudomonas, e/ou são produzidos por meio dos microrganismos usando os métodos biotecnológicos adequados conhecidos per se, por instância, por meio da expressão transgênica de hospedeiros a partir do gênero Bacillus ou por meio dos fungos filamentosos.

[003] Outras enzimas, em particular, amilases, são cada vez maispresentes em particular em agentes de lavagem líquidos modernos. Uma amilase é uma enzima que catalisa a hidrólise das ligações glico- sídicas, em particular, em : polissacarídeos tais como amido. Entre amilases, α -amilases, as quais hidrolisam as ligações α (1-4) - glicosí- dicas em amilase são muitas vezes usadas nos agentes de limpeza e de lavagem. Dentro da classificação CE de enzimas, o sistema de classificação numérica para as enzimas, α -amilases tem o número EC ("número de Comissão da Enzima") 3.2.1.1 e, consequentemente, per- tence à terceira das seis classes principais de enzimas, as hidrolases (EC 3. -. -. -), em seguida, para as glicosilases (EC 3.2. -. -) e, em vez das glicosidases (EC 3.2.1 -.), isto é, as enzimas que hidrolisam compostos O- e/ou S - glicosila. A repartição de amido por α -amilases dá origem a dextrina e, a partir dos últimos, maltose, glicose e oligossaca- rídeos ramificados. Amilases, consequentemente, atuam de forma direta contra os resíduos que contêm amido em lavandaria e catalisam a hidrólise dos mesmos.

[004] Os pedidos de Patente Internacionais WO95 / 23221 eWO92 / 21760 descrevem as variantes da protease alcalina a partir de Bacillus lentus DSM 5483, que são adequadas paro uso nos agentes de limpeza e de lavagem, bem como os agentes de lavagem e de limpeza contendo tais proteases. O pedido de patente Internacional WO2011 / 032988 descreve, além disso, os agentes de lavagem e de limpeza que contenham do mesmo modo as variantes da protease alcalina de Bacillus lentus DSM 5483. As variantes de protease descritas em tais documentos podem ser modificadas, em adição a outras posições, nas posições 3, 4, 99 e 199 no sistema de numeração para a protease alcalina de Bacillus lentus DSM 5483 e, por exemplo, os ami- noácidos têm 3T, 4I, 99D, 99E ou 199i nas posições demonstradas. Além disso, são descritos os agentes de lavagem que podem conter as enzimas adicionais, incluindo também uma amilase. Os agentes de lavagem podem ser sólidos ou líquidos. O referido documento não descreve, de forma direta e sem ambiguidade, no entanto um agente de lavagem líquido, o qual contém uma amilase, em combinação com uma protease que tem as combinações destas modificações como são descritos a seguir.

[005] Uma desvantagem da técnica anterior dos agentes de limpeza e de lavagem líquidos contendo protease e contendo amilase é que os mesmos têm estabilidade de armazenamento inadequado e, consequentemente, eles perdem um considerável grau de atividade enzimática, particularmente amilalítica e/ou proteolítica, depois de apenas um curto período de tempo. A presença de protease frequentemente conduz à perda de atividade amilalítica, uma vez que a protease inativa a amilase. O agente de lavagem ou limpeza, em seguida, já não apresenta desempenho de limpeza ideal.

[006] É um objetivo da presente invenção superar a desvantageme fornecer dos agentes de limpeza e de lavagem líquidos contendo protease e contendo amilase os quais tenham estabilidade de armazenamento adequada ou melhorado, em particular, no que diz respeito à sua atividade enzimática e de preferência sua atividade amilalítica e/ou proteolítica.

[007] A presente invenção refere-se consequentemente a umagente de limpeza e de lavagem líquido que compreende

[008] uma protease a qual compreende a sequência de aminoá-cidos que, ao longo de todo o comprimento da mesma, é pelo menos 70 % idêntica à sequência de aminoácidos na SEQ ID NO. 1 mencionada e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1, tem a substituição do aminoácido R99E R99D ou em combinação com, pelo menos, duas substituições de aminoácidos adicionais, que são selecionadas a partir do grupo que consiste em S3T, V4I e V199I, e(B) uma amilase.

[009] Foi surpreendentemente descoberto que um agente de limpeza ou de lavagem líquido, que contém a combinação de uma tal protease com uma amilase é vantajosamente estável no armazenamento. Em particular, apresenta melhor desempenho de limpeza, especialmente na melhoria do desempenho de limpeza amilalítica e/ou proteo- lítica, após o armazenamento em comparação com o agente de limpeza ou de lavagem que difere de acordo com a presente invenção, simplesmente por meio da protease presente no respectivo agente, em que o início do armazenamento da protease está presente nos agentes a serem comparados a uma concentração idêntica em relação à enzima ativa. A protease fornecida para os fins da presente invenção conduz à inativação reduzida da amilase e em si também apresenta perda reduzida de desempenho. A inativação reduzida de amilase e/ou protease por meio da protease prevista para as finalidades da presente invenção não é, no entanto, devido à protease de desempenho e/ou a atividade inadequada.

[0010] Um agente de acordo com a presente invenção de preferência exibe, neste respeito, o desempenho de limpeza em sujeiras sensíveis à protease que permanece bom, particularmente vantajoso. Um tal agente, portanto, permite a remoção satisfatória ou a melhoria de pelo menos um, de preferência, de uma pluralidade de tipos sensíveisà protease de sujeira no têxtil e/ou superfícies duras, como por exemplo pratos. Nos desenvolvimentos selecionados da presente invenção, tal desempenho no que diz respeito à limpeza de pelo menos um tipo sensível à protease de sujeira também ocorre, em particular, a baixas temperaturas, por exemplo entre 10 ° C e 50 ° C, entre 10 ° C e 40 ° C ou entre 20 ° C e 40 ° C.

[0011] No que diz respeito aos pedidos de patentes internacionaisWO95/23221, WO92/21760 e WO2011/032988 mencionados na introdução, a presente invenção é, dessa maneira, uma seleção particularmente vantajosa a qual resulta em um detergente líquido que está sendo obtido, que tem um bom desempenho e é estável em armazenagem, em particular, no que diz respeito ao desempenho de limpeza proteolítico e/ou o amilalítico do agente após o armazenamento e/ou em relação à atividade proteolítica e/ou amilalítica do agente após o armazenamento.

[0012] Para os fins da presente invenção, o desempenho de limpezaé usado para significar a capacidade do agente de lavagem ou de limpeza para remover parcialmente ou completamente a sujeira que se encontra presente na aplicação do agente. No caso da sujeira de lavanderia, isto é, de preferência um leve desempenho em relação a um ou mais tipos de sujeira em têxteis. Exemplos da sujeira de lavanderiasão sangue-leite/tinta em algodão, ovo/pigmento em algodão, chocolate-leite/tinta em algodão, óleo de amendoim-pigmento/tinta em poliéster/algodão, algodão ou cacau na grama no algodão. No caso dos agentes de lavagem, o rendimento de limpeza descreve a capacidade do agente de lavar louça para remover a sujeira que se encontra presente a partir de superfícies duras dos pratos. Exemplos da sujeira da louça são leite, a carne picada, gema de ovo, mingau de aveia e amido. Para os fins da presente invenção, tanto o agente de limpeza quanto o agente de lavagem compreendem a protease e a amilase ou o licor de lavagem formado por este agente, e a protease ou amilase por si próprias exibem um respectivo desempenho de limpeza. O desempenho de limpeza das enzimas dessa maneira contribui para o desempenho de limpeza do agente ou do licor de lavagem formado por meio do agente. O desempenho de limpeza amilalítica refere-se ao desempenho de limpeza na sujeira sensível à amilase. O desempenho de limpeza Proteolítica refere-se ao desempenho de limpeza em sujeirasensível à protease. O procedimento de limpeza é determinado no modo como convencional, de preferência como indicado mais abaixo.

[0013] O líquido de lavagem é entendido como sendo o recipientede solução de trabalho contendo o agente de lavagem ou de limpeza, cuja solução age sobre têxteis ou tecidos ou superfícies duras e, dessa maneira, entra em contato com a sujeira presente nos têxteis, tecidos e superfícies duras. O licor de lavagem convencional surge quando o processo de lavagem ou de limpeza começa e o agente de lavagem ou de limpeza é, por exemplo, diluído com água em uma máquina de lavar louça, uma máquina de lavar roupa ou em outro recipiente adequado.

[0014] A estabilidade de armazenamento para efeitos da presenteinvenção é particularmente obtida quando agente de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção apresenta maior capacidade de armazenamento após o desempenho de limpeza em comparação com um controle de composição que difere do agente de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção exclusivamente por meio da composição de protease presente no controle. No início do armazenamento, os dois agentes a serem comparados, portanto,têm a mesma quantidade ou concentração de atividade amilase e/ou amilalítica inicial. Além disso, no início do armazenamento, a protease está presente em ambos os agentes em uma concentração idêntica, em relação à enzima ativa, e os dois agentes são tratados de maneiraidênticas, em particular, no que diz respeito às condições de armazenagem e determinação da atividade da enzima. O armazenamento dura cada vez mais de preferência por pelo menos 24 horas, 48 horas, 72 horas, 5 dias, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas ou 4 semanas. O armazenamento de preferência, além disso, decorre a uma temperatura de 20 ° C, 30 ° C ou 40 ° C, mais de preferência a 40 ° C.

[0015] A atividade da enzima pode ser determinada, a este respeito, particularmente Dependendo do tipo enzima, de modo convencional. Os métodos para determinar a atividade são familiares para uma pessoa que é versada na técnica no campo da tecnologia de enzimas e são usados rotineriamente por Tais pessoas. Os métodos para a determinação da atividade da protease, por exemplo, são descritos em Tenside [Surfactants], volume 7 (1970), páginas 125 a 132. A atividade proteolítica pode ainda ser determinada com base na liberação do cromóforo para - nitroanilina (pNA) do substrato de suc - L-Ala - L-Ala - L - Pro - L - Fe - p - nitroanilida (suc - AAPF - pNA). A protease cliva o substrato e liberta pNA. A libertação de pNA traz um aumento da ab- sorvância a 410 nm, o perfil de tempo o qual é uma medida da ativida-deenzimática (conforme Del Mar et al., 1979). A medição é realizada a uma temperatura de 25 ° C, a um pH de 8,6 e um comprimento de onda de 410 nm. As quantidades de medição de tempo 5 minutos com um intervalo de medição de 20 s para 60 s. A atividade de proteases é preferencialmente mencionada em PU (unidades de protease).

[0016] A atividade da amilase é determinada de uma maneira convencional. A atividade da amilase é preferencialmente determinada a seguir como mencionado na presente invenção. Amilases convertem o amido em glicose. Sob as condições de reação definidas (tampão de tris- maleato de pH 6,5, 50 ° C, 15 min), as amostras a serem investigadas devem ser incubadas com amido a 0,67 % (solúvel, pré-tratado usando o método de Zulkowsky (tratado com glicerol a 190 ° C)). Por meio da adição de ácido dinitrossalicílico e aquecimento a 100 ° C, o referido ácido é reduzido por glicose e outros açúcares redutores sob condições alcalinas com a finalidade de formar um corante vermelho- alaranjado que é determinado fotometricamente a 540 nm, após a conclusão da reação. A quantidade de açúcar libertado corresponden-teà cor que na presente invenção é uma medida da atividade da enzima (conforme Sumner et al., J. Biol Chem, 1921, 47 e 1924, 62).

[0017] A presença de estabilização de enzimas para os fins dapresente invenção é mais de preferência determinada Tal como indicado acima, usando um agente de lavagem ou de limpeza líquido contendo protease e amilase, que é armazenado durante quatro semanas a uma temperatura de 40 ° C, onde a atividade proteolítica é determinadaatravés de libertação do cromóforo para-nitroanilina (pNA) do substrato de suc - AAPF - pNA e atividade amilalítica é determinada como indicado acima.

[0018] A protease presente em um agente de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção compreende uma sequência de aminoácido que, ao longo do todo o seu comprimento, é pelo menos 70 % idêntica à sequência de aminoácidos na SEQ ID NO. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO tendo uma substituição de aminoácido R99E ou R99D ou em combinação com, pelo menos, duas substituições de aminoácidos adicionais, que são selecionadas a partir do grupo que consiste em S3T, V4I e V199I.

[0019] Em uma outra modalidade da invenção, a protease compreende uma sequência de aminoácidos que, ao longo do todo o seu comprimento, é pelo menos 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 90,5 %, 91 %, 91,5 %, 92 %, 92,5 %, 93 %, 93,5 %, 94 %, 94,5 %, 95 %, 95,5 %, 96 %, 96,5 %, 97 %, 97,5 %, 98 %, 98,5 % e 98,8 % idêntica à sequência de aminoácidos Da SEQ ID NO. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1 tendo a substituição do aminoácido R99E em combinação com, pelo menos, duas substituições de aminoácidos adicionais a partir do grupo que consiste em S3T, V4I e V199I.

[0020] Em uma outra modalidade da invenção, a protease compreende uma sequência de aminoácidos que, ao longo do todo o seu comprimento, é pelo menos 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 90,5 %, 91 %, 91,5 %, 92 %, 92,5 %, 93 %, 93,5 %, 94 %, 94,5 %, 95 %, 95,5 %, 96 %, 96,5 %, 97 %, 97,5 %, 98 %, 98,5 % e 98,8 % idêntica à sequência de aminoácidos Da SEQ ID NO. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1 tendo a substituição do aminoácido R99D em combinação com, pelo menos, duas substituições de aminoácidos adicionais a partir do grupo que consiste em S3T, V4I e V199I.

[0021] A SEQ. ID NO 1 é a sequência da protease alcalina madura de Bacillus lentus DSM 5483, Que é descrita no pedido de patente internacional WO92 / 21760, e cuja descrição é feita expressamente por meio de referência.

[0022] As proteases que são mais preferidas, de acordo com apresente invenção são as seguintes:

[0023] uma protease que compreende uma sequência de aminoá-cidos que, ao longo de todo o seu comprimento, é pelo menos 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 90,5 %, 91 %, 91,5 %, 92 %, 92,5 %, 93 %, 93,5 %, 94 %, 94,5 %, 95 %, 95,5 %, 96 %, 96,5 %, 97 %, 97,5 %, 98 %, 98,5 % e 98,8 % idêntica à sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1 tendo a substituição do aminoácido R99E em combinação com as substituições de aminoácidos V4I S3T e, em particular, protease de acordo com a SEQ ID NO. 1, com as substituições de aminoácidos S3T, V4I e R99E.

[0024] uma protease que compreende uma sequência de aminoá-cidos que, ao longo de todo o seu comprimento, é pelo menos 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 90,5 %, 91 %, 91,5 %, 92 %, 92,5 %, 93 %, 93,5 %, 94 %, 94,5 %, 95 %, 95,5 %, 96 %, 96,5 %, 97 %, 97,5 %, 98 %, 98,5 % e 98,8 % idêntica à sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1, tendo uma substituição de aminoácido R99E em combinação com as substituições de aminoácidos S3T e V199I, em particular, uma protease de acordo com a SEQ ID no. 1, com as substituições de aminoácidos S3T, R99E e V199I.

[0025] uma protease que compreende uma sequência de aminoá-cidos que, ao longo de todo o seu comprimento, é pelo menos 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 90,5 %, 91 %, 91,5 %, 92 %, 92,5 %, 93 %, 93,5 %, 94 %, 94,5 %, 95 %, 95,5 %, 96 %, 96,5 %, 97 %, 97,5 %, 98 %, 98,5 % e 98,8 % idêntica à sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1, tendo uma substituição de aminoácido R99E em combinação com as ubstituições de aminoácidos V4I e V199I, em particular, protease de acordo com a SEQ ID no. 1, com as substituições de aminoácidos V4I, R99E e V199I.

[0026] uma protease que compreende uma sequência de aminoá-cidos que, ao longo de todo o seu comprimento, é pelo menos 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 90,5 %, 91 %, 91,5 %, 92 %, 92,5 %, 93 %, 93,5 %, 94 %, 94,5 %, 95 %, 95,5 %, 96 %, 96,5 %, 97 %, 97,5 %, 98 %, 98,5 % e 98,8 % idêntica à sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1 tendo a substituição do aminoácido R99D em combinação com as substituições de aminoácidos V4I e S3T , em particular, protease de acordo com a SEQ ID NO. 1, com as substituições de aminoácidos S3T, V4I e R99D.

[0027] uma protease que compreende uma sequência de aminoá-cidos que, ao longo de todo o seu comprimento, é pelo menos 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 90,5 %, 91 %, 91,5 %, 92 %, 92,5 %, 93 %, 93,5 %, 94 %, 94,5 %, 95 %, 95,5 %, 96 %, 96,5 %, 97 %, 97,5 %, 98 %, 98,5 % e 98,8 % idêntica à sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1 tendo a substituição do aminoácido R99D em combinação com as substituições de aminoácidos V199I e S3T, em particular, protease de acordo com a SEQ ID no. 1, com as substituições de aminoácidos S3T, R99D e V199I.

[0028] uma protease que compreende uma sequência de aminoá- cidos que, ao longo de todo o seu comprimento, é pelo menos 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 90,5 %, 91 %, 91,5 %, 92 %, 92,5 %, 93 %, 93,5 %, 94 %, 94,5 %, 95 %, 95,5 %, 96 %, 96,5 %, 97 %, 97,5 %, 98 %, 98,5 % e 98,8 % idêntica à sequência de aminoácidos mencionada na SEQ ID NO. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1 tendo a substituição do aminoácido R99D em combinação com as substituições de aminoácidos V199I e V4I, em particular, protease de acordo com a SEQ ID no. 1, com as substituições de aminoácidos V4I, R99D e V199I.

[0029] Além disso, as modalidades mais preferidas de acordo comas proteases da presente invenção distinguem-se, de tal forma que possuem a substituição do aminoácido R99D ou R99E em combinação com as três substituições de aminoácidos S3T, V4I e V199I adicionais. As seguintes proteases são particularmente preferidas a este respeito:

[0030] uma protease que compreende uma sequência de aminoá-cidos que, ao longo de todo o seu comprimento, é pelo menos 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 90,5 %, 91 %, 91,5 %, 92 %, 92,5 %, 93 %, 93,5 %, 94 %, 94,5 %, 95 %, 95,5 %, 96 %, 96,5 %, 97 %, 97,5 %, 98 % e 98,5 % idêntica à sequência de aminoá- cidos mencionada na SEQ ID NO. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1, tendo uma substituição de aminoácido R99E em combinação com as substituições de aminoácidos com a S3T, V4I e V199I, em particular, protease de acordo com a SEQ ID no. 1, com as substituições de aminoácidos S3T, V4I, R99E e V199I. Tal protease é indi-cada na SEQ ID NO. 2.

[0031] uma protease que compreende uma sequência de aminoá-cidos que, ao longo de todo o seu comprimento, é pelo menos 71 %, 72 %, 73 %, 74 %, 75 %, 76 %, 77 %, 78 %, 79 %, 80 %, 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 90,5 %, 91 %, 91,5 %, 92 %, 92,5 %, 93 %, 93,5 %, 94 %, 94,5 %, 95 %, 95,5 %, 96 %, 96,5 %, 97 %, 97,5 %, 98 % e 98,5 % idêntica à sequência de aminoá- cidos mencionada na SEQ ID NO. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1 tendo a substituição do aminoácido R99D em combinação com as substituições de aminoácidos S3T, V4I e V199I, em particular protease de acordo com a SEQ ID no. 1, com as substituições de aminoácidos S3T, V4I, R99D e V199I. Tal protease é indicada na SEQ ID NO. 3.

[0032] Outras proteases adicionais preferidas são as proteases, talcomo descrito acima, que têm o aminoácido leucina (L) na posição 211 na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1.

[0033] As posições de aminoácidos são definidas para os fins dapresente invenção por meio de um alinhamento da sequência de ami- noácidos da protease a ser usada com a sequência de aminoácidos da protease de Bacillus lentus, tal como indicado na SEQ ID NO. 1. Uma vez que a protease de Bacillus lentus, na técnica anterior, constitui uma molécula de referência importante para a descrição das proteases e as alterações de aminoácidos, a mesma é vantajosa ao referir-se à numeração da protease de Bacillus lentus (SEQ ID NO. 1) na atribuição da posição de aminoácido. A numeração é, além disso, com base na proteína madura. Esta atribuição deve também ser usada em particular se a sequência de aminoácidos da protease a ser usada com-preender um maior número de resíduos de aminoácidos do que a protease de Bacillus lentus de acordo com a SEQ ID NO. 1. Com base nas posições demonstradas na sequência de aminoácidos da protease de Bacillus lentus, as posições de aminoácidos em uma protease a ser usada de acordo com a presente invenção são aquelas que são atribuídas precisamente a estas posições em um alinhamento.

[0034] Além da posição 99, posições particularmente vantajosas devem ser consequentemente atribuídas às posições 3, 4, 199 e 211, em alinhamento com a SEQ. 1 e Dessa maneira na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1. As posições declaradas são ocupadas por meio dos resíduos de aminoácidos na molécula do tipo selvagem da protease de Bacillus lentus : S3, V4, V199 e L211. Dependendo do número de desvios da sequência da SEQ ID N 1 as quais estão presentes, diferentes valores máximos portanto surgem uma vez que a identidade de protease a ser usada de acordo com a presente invenção na SEQ. ID NO. 1 pode exibir, mesmo que ela venha a corresponder a SEQ. ID NO.1 no que diz respeito a todos os outros aminoáci- dos. Este fator deve ser levado em consideração para todas as combinações possíveis das modificações das sequências propostas em cada caso individualmente e, além disso, depende do comprimento também da sequência de aminoácidos da protease. Por exemplo, com uma, duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou nove modificações da sequência, a identidade máxima corresponde a 98,88 %, 98,51 %,98,14%, 97,77 %, 97,40 %, 97,03 % ou 96,65 %, respectivamente, para uma sequência de aminoácidos de 269 aminoácidos de comprimento, ou a 98,91 %, 98,55%, 98,18 %, 97,82 %, 97,45 %, 97,09 % e 96,73 %, respectivamente, para uma sequência de aminoácido de 275 aminoácidos de comprimento.

[0035] De acordo com a presente invenção, verificou-se que através da adição de uma tal protease para um agente de limpeza ou de lavagem líquido contendo uma amilase, um agente de lavagem particularmenteestável durante a armazenagem de líquido é obtido, em particular no que se refere ao seu desempenho de limpeza residual após o armazenamento, em especial, após um período de armazenamento de aumento, de preferência 24 horas, 48 horas, 72 horas, 5 dias, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas ou 4 semanas.

[0036] A protease contida em um agente de lavagem ou de limpe- za de acordo com a presente invenção exibe uma atividade proteolíti- ca, isto é, a mesma é capaz de hidrolisar as ligações peptídicas de um polipeptídeo ou proteína. Por conseguinte, é uma enzima que catalisa a hidrólise de ligações peptídicas e é, dessa maneira, capaz de clivar os peptídeos ou proteínas. É, em particular, uma subtilase e mais preferencialmente uma subtilisina.

[0037] Uma amilase é uma enzima, tal como descrito na introdução. As amilases podem ser designadas por sinônimos, por exemplo 1,4-alfa-D-glucano glucanohidrolase ou glicogenase. As amilases as quais podem ser formuladas de acordo com a presente invenção são de preferência α -amilases. Se uma enzima é uma α-amilase para os fins da presente invenção é decidida pela sua capacidade de hidrolisar as ligações asα (1-4) - glicosídicas no teor de amilase do amido.

[0038] Exemplos de amilases formuláveis de acordo com a presente invenção são as α -amilases de Bacillus licheniformis, a partir de Bacillus amyloliquefaciens ou a partir de Bacillus stearothermophilus, e, em particular, os desenvolvimentos adicionais dos mesmos melhorados paro uso nos agentes de lavagem ou de limpeza. A enzima de Bacillus licheniformis pode ser obtida na Novozymes, sob o nome Termamyl ® e a partir da Danisco / Genencor, sob o nome ® Purastar ST. Além disso, os produtos desenvolvidos desta α - amilase são obtidos a partir de Novozymes, sob o nome comercial Duramyl ® e Ter- mamyl ® ultra, a partir da Danisco / Genencor, sob o nome Purastar ® OxAm e de Daiwa Seiko Inc., Tóquio, Japão, como Keistase ®. A α - amilase a partir de Bacillus amyloliquefaciensé distribuída pela No- vozymes, sob o nome BAN ®, e as variantes derivadas da α - amilase de Bacillus stearothermophilussão distribuídas sob nomes BSG ® e Novamyl ®, da mesma forma pela Novozymes. Agradecimentos particulares devem ainda ser tomados para este fim da α - amilase de Bacillus sp. A 7-7 (DSM 12368) e a glucanotransferase ciclodextrina (CGTase) de Bacillus agaradherens (DSM 9948). Podem igualmente ser usados os produtos de fusão de todas as moléculas indicadas. Além disso, os novos desenvolvimentos de α - amilase de Aspergillus niger e A. oryzae obtidos sob o nome comercial Fungamyl ® da No- vozymes, também são adequados. Outros produtos comerciais que podem vantajosamente ser usados são, por exemplo, Amilase - LT ® e Stainzyme ® ou Stainzyme ultra ® ou Stainzyme plus ®, a última da mesma forma da Novozymes. Variantes destas enzimas podem ser obtidas por meio das mutações dos pontos que podem também ser usados de acordo com a presente invenção. Amilases mais preferidas são descritas na publicação dos pedidos de patentes internacionais WO00/60060, WO03/002711, WO03/054177 e WO07/079938, para a descrição cuja referência é feita, portanto, explicitamente ou o conteúdo da descrição a qual é, dessa maneira, expressamente incluído no presente pedido de patente.

[0039] As variantes α - amilase de α - amilase AA560 de acordocom a SEQ ID NO. 4 são particularmente adequadas paro uso em agentes de acordo com a presente invenção. As seguintes variantes são particularmente vantajosas:

[0040] (a), variante α - amilase que, em relação à α - amilaseAA560 de acordo com a SEQ ID NO. 4, tem uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das seguintes modificações na sequência de numeração de AA560 α - amilase : R118K, D183 * (supressão), G184 * (supressão), N195F, R320K, R458K. A variante α - amilase mais de preferência tem todas as seis alterações de sequências definidas.

[0041] (b) a v ariante α - amilase que, em relação à α - amilaseAA560 acordo com a SEQ ID NO. 4, tem as seguintes modificações nasequência (na numeração de A - amilase AA560): (1) M9L / M202I, (2) M9L / M202I / M323T, (3) M9L / M202I / M323T / M382Y, (4) M9L / M202I / Y295F / A339S, (5) M9L / M202I / Y295F, (6) M9L / M202I / A339S, (7) M9L / M202I / Y295F / A339S, (8) M9L / M202I / Y295F / A339S / E345R, (9) M9L / G149A / M202I / Y295F / A339S / E345R, (10) M9L / M202L, (11) M9L / M202L / M323T, (12) M9L / M202L / M323T / M382Y, (13) M9L / M202L / Y295F / A339S, (14) M9L / M202L / Y295F, (15) M9L / M202L / A339S, (16) M9L / M202L / Y295F / A339S, (17) M9L / M202L / Y295F / A339S, E345R, (18) M9L / G149A / M202L / Y295F / A339S / E345R, (19) M9L / M202T, (20) M9L / M202T / M323T, (21) M9L / M202T / M323T / M382Y, (22) M9L / M202T / Y295F / A339S, (23) M9L / M202T / Y295F, (24) M9L / M202T / A339S, (25) M9L / M202T / Y295F / A339S, (26) M9L / M202T / Y295F / A339S / E345R, (27) M9L / G149A / M202T / Y295F / A339S / E345R, (28) M9L / G149A / M202I / V214T / Y295F / N299Y / M323T / A339S / E345R, (29) M9L / G149A / M202L / V214I / Y295F / M323T / A339S / E345R / M382Y, (30) M9L / G149A / G182T / G186A / M202I / V214I / Y295F / N299Y / M323T / A339S, (31) M9L / G149A / G182T / G186A / M202L / T257I / Y295F / N299Y / M323T / A339S / E345R, (32) M9L / G149A / M202L / V214T / Y295F / N299Y / M323T / A339S / E345R, (33) M9L / G149A / M202I / V214I / Y295F / M323T / A339S / E345R / M382Y, (34) M9L / G149A / G182T / G186A / M202L / V214I / Y295F / N299Y / M323T / A339S, (35) M9L / G149A / G182T / G186A / M202I / T257I / Y295F / N299Y / M323T / A339S / E345R, (36) M9L / G149A / M202I / V214T / Y295F / N299Y / M323T / A339S / E345R / N471E, (37) M9L / G149A / M202L / V214I / Y295F / M323T / A339S / E345R / M382Y / N471E, (38) M9L / G149A / G182T / G186A / M202I / V214I / Y295F / N299Y / M323T / A339S / N471E, (39) M9L / G149A / G182T / G186A / M202L / T257I / Y295F / N299Y / M323T / A339S / E345R / N471E, (40) M202L / M105F / M208F, (41) G133E / M202L / Q361E, (42) G133E / M202L / R444E, (43) M202L / Y295F, (44) M202L / A339S, (45) M202L / M323T, (46) M202L / M323T / M309L, (47) M202L / M323T / M430I, (48) M202L / V214T / R444Y, (49) M202L / N283D / Q361E, (50) M202L / M382Y / K383R, (51) M202L / K446R / N484Q, (52) M202I / Y295F, (53) M202I / A339S, (54) M202I / M105F / M208F, (55) G133E / M202I / Q361E, (56) G133E / M202I / R444E, (57) M202I / M323T, (58) M202I / M323T / M309L, (59) M202I / M323T / M430I, (60) M202I / V214T / R444Y, (61) M202I / N283D / Q361E, (62) M202I / M382Y / K383R, (63) M202I / K446R / N484Q, (64) M202V / M105F / M208F, (65) G133E / M202V / Q361E, (66) G133E / M202V / R444E, (67) M202V / M323T, (68) M202V / M323T / M309L, (69) M202V / M323T / M430I, (70) M202V / M323T / M9L, (71) M202V / V214T / R444Y, (72) M202V / N283D / Q361E, (73) M202V / M382Y / K383R, (74) M202V / K446R / N484Q, (75) M202T / M105F / M208F, (76) G133E / M202T / Q361E, (77) G133E / M202T / R444E, (78) M202T / Y295F, (79) M202T / A339S, (80) M202T / M323T, (81) M202T / M323T / M309L, (82) M202T / M323T / M430I, (83) M202T / M323T / M9L, (84) M202T / V214T / R444Y, (85) M202T / N283D / Q361E, (86) M202T / A339S, (87) M202T / Y295F (88) M202T / N299F,Y, (89) M202T / M382Y / K383R ou (90) M202T / K446R / N484Q.

[0042] Dentre estes, as seguintes variantes de α-amilase são par ticularmente preferidas: (10) M9L / M202L, (28) M9L / G149A / M202I / V214T / Y295F / N299Y / M323T / A339S / E345R, (31) M9L / G149A / G182T / G186A / M202L / T257I / Y295F / N299Y / M323T / A339S / E345R, (35) M9L / G149A / G182T / G186A / M202I / T257I / Y295F / N299Y / M323T / (38) M9L / G149A / G182T / G186A / M202I / V214I / Y295F / N299Y / M323T / (39) M9L / G149A / G182T / G186A / M202L / T257I / Y295F / N299Y / M323T / A339S / E345R / N471E, (45) M202L / M323T, (46) M202L / M323T / M309L, (62) M202I / M382Y / K383R, (68) M202V / M323T / M309L, (73) M202V / M382Y / K383R (82) M202T / M323T / M430I ou (84) M202T / V214T / R444Y.

[0043] a variante α - amilase de acordo com (b) que, adicionalmente, tem as seis alterações de sequência expressas em (a), particu-larmente de preferência variante 31 com as seis alterações de sequência expressas em (a).

[0044] A variante de α - amilase indicada em (a) e a variante de -amilase α 31 indicada em (c) com as seis alterações de sequência ex-pressas em (a) são particularmente preferidas de acordo com a presente invenção.

[0045] A identidade de sequências de ácidos nucleicos ou de ami-noácidos é determinada por meio de uma comparação de sequências. Tal Comparação procede por meio das sequências semelhantes atribuindo uma a outra nas sequências de nucleotídeos ou sequências de aminoácidos. Esta comparação de sequências é de preferência realizada sobre a base do algoritmo BLAST estabelecido convencionalmente usado na técnica anterior Altschul, SF, Gish, W., Miller, W., Myers, EW & Lipman, DJ (1990) " Basic local alignment search tool " J. Mol. Biol. 215 : 403 a 410, e Altschul, Stephan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller e David J. Lipman (1997): " BLAST Gapped e PSI -BLAST : a new generation of protein database search programs ", Nucleic Acids Res., 25, pp 3389 a 3402) e, em princípio, os rendimentos através da atribuição de sequências similares de nucleotídeos ou de aminoácidos nas sequências de ácidos nucleicos ou de aminoácidos umas as outras . A atribuição tabular das posições em questão é conhecida como um ali- nhamento. Um outro algoritmo disponível na técnica anterior é o algo-ritmo FASTA. A comparação de sequências (alinhamentos), em especial as comparações múltiplas de sequência, são convencionalmente criadas usando o software de computador. O uso é muitas vezes feito por exemplo a partir da série de Clustal (conforme, por exemplo Chen- na et al (2003) : <ultiple sequence alignment com the Clustal series of programs. ucleic Acid Research 31, 3497 a 3500.), T- Coffee (conforme por exemplo Notredame et al (2000) : T- Coffee. A Novel method for multiple sequence aligments J. Mol Biol 302, 205 a 217) ou programas que têm por base estes programas ou algoritmos.. Para os fins da presente invenção, as comparações de sequências e os alinhamentossão de preferência realizados com o programa de computador Vector NTI suite ® 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, Califórnia, EUA) usando os parâmetros-padrão predefinidos.

[0046] Essa comparação permite uma declaração a ser feita sobrea similaridade das sequências comparadas. Isso é convencionalmente indicado em porcentagem de identidade, ou seja, a proporção de nu- cleotídeos idênticos ou resíduos de aminoácido nos mesmso ou em um alinhamento de posições mutuamente correspondentes. O termo " homologia " mais amplamente também inclui a consideração de substi-tuições de aminoácidos conservadas nas sequências de aminoácidos, dessa maneira aminoácidos com características semelhantes, uma vez que eles geralmente têm atividades semelhantes ou funções dentro da proteína. A similaridade das sequências de comparação pode, portanto, também ser expressa em porcentagem de homologia ou em porcentagem de similaridade. As declarações relativas à identidade e/ou homologia podem ser feitas sobre polipeptídeos ou genes inteiros ou apenas sobre os domínios individuais. Os domínios homólogos ou idênticos de várias sequências de ácidos nucléicos ou aminoácidos são, portanto, definidos por meio das partidas nas sequências. Eles muitas vezes têm funções idênticas ou similares. Eles podem ser pe-quenos e compreendem apenas alguns nucleotídeos ou aminoácidos. Muitas vezes, tais domínios pequenos exercem funções que são es-senciais para a atividade global da proteína. Por conseguinte, pode ser significativo no que diz respeito a relacionar a sequência correspondente apenas para, opcionalmente, pequenos domínios individuais. Se não for indicado de uma outra forma, no entanto, as indicações sobre a identidade ou homologia, no presente pedido de patente referem-se a todo o comprimento do ácido nucleico ou sequência de aminoácidos indicada em cada caso.

[0047] Em uma outra modalidade da presente invenção, um agente de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção é, além disso, caracterizado pelo fato de o seu desempenho de limpeza, pelo menos, corresponder a de um agente de limpeza ou de lavagem, que contém uma protease que compreende uma sequência de amino- ácidos que corresponde à sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID no. 2 ou SEQ ID NO. 3, com maior preferência para a indicada na SEQ ID no. 2. O procedimento de limpeza é determinado em um sistema de lavagem que contém um agente de lavagem contendo amila- se, a uma taxa de adição de entre 4,0 e 11,0 gramas por litro de licor de lavagem, e que contém a protease, em que as proteases para serem comparadas são usadas em uma concentração idêntica (em relação à proteína ativa) e o desempenho de limpeza é determinado em relação à sujeira de carne picada e/ou gema de ovo nos pratos por meio da determinação dos resíduos restantes da respectiva sujeira após o processo de lavagem, o processo de lavagem prossegue durante pelo menos 30 minutos, preferencialmente 60 minutos, a uma temperatura de 50 ° C e a água tem uma dureza de água de entre 15,5 e 16,5 ° dH (graus de dureza alemã).

[0048] O agente de lavagem para o sistema de lavagem é de preferência um agente de lavar louça automático líquido bifásico, que é com a seguinte composição (valores indicados em porcentagem em peso):

[0049] A amilase é, de preferência, a preparação de uma varianteda α -amilase que, em relação à α - amilase AA560 de acordo com a SEQ ID NO. 4 tem as modificações seguindo a sequência de numeração de α - amilase AA560: R118K, D183 * (supressão), G184 * (supressão), N195F, R320K, R458K (Novozimas).(b) Fase alcalina:

[0050] A protease está presente no agente em uma concentraçãode 0,01 a 1 % em peso, De preferência de 0,1 a 0,5 % em peso, Em relação à proteína ativa. As duas fases são repartidas em proporções idênticas (em cada caso, de 20 g por fase) para um ciclo de lavagem em uma máquina de lavar louça. A lavagem é realizada em um intervalo de valores de pH entre pH 9 e pH 10, em uma máquina de lavar louça convencional, por exemplo, uma máquina de lavar louça G698SC de Miele. Nem a protease nem a atividade de amilase no líquido de lavagem é igual a zero no início da lavagem.

[0051] O desempenho de limpeza é avaliado visualmente usandoo método IKW padrão em uma escala de 1 a 10, caracterizado por meio de um valor de 10 que representa a melhor classificação (nenhumresíduo visível).

[0052] O desempenho de limpeza é mais preferencialmente determinado em uma máquina de lavar louça em relação à sujeira de carne picada e gema de ovo de em pratos usando um agente líquido de lavagem automática de louça bifásica, tal como descrito acima.

[0053] Em uma outra modalidade da presente invenção, um agente de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção é, além disso, caracterizado pelo fato de a sua estabilidade durante o armazenamento, pelo menos, corresponder à de um agente de limpeza ou de lavagem, que contém uma protease que compreende uma sequência de aminoácidos que corresponde à sequência de aminoáci- dos indicada na SEQ ID no. 2 ou SEQ ID NO. 3, com maior preferência para a indicada na SEQ ID no. 2. Esta estabilidade de armazenamentoestá presente se, após o armazenamento durante quatro sema- nas a 50 ° C, Agente de limpeza ou de lavagem de acordo com a pre-sente invenção tem um desempenho de limpeza idêntico ou maior do que o agente de lavagem ou de limpeza a ser usado a título de comparação, em que o agente de acordo com a presente invenção difere do agente de limpeza ou de lavagem a ser usado a título de comparação apenas por meio da protease nele contido.

[0054] O agente a ser usado a título de comparação mais compreende de preferência um agente de lavar louça automático líquido bifá- sico como indicado acima, em que o desempenho de limpeza é deter-minado como descrito acima.

[0055] No início do armazenamento, os dois agentes a seremcomparados possuem a atividade amilalítica inicial idêntica, contêm a protease em uma concentração idêntica em relação à enzima ativa, e os dois agentes são tratados da mesma maneira. A atividade proteolí- tica nos agentes é, em cada caso, determinada através da libertação do cromóforo para-nitroanilina (pNA) do substrato de suc - AAPF - pNA e a atividade amilalítica do mesmo é, em cada caso, determinada como referido acima. As atividades iniciais para a protease e a amilase no respectivo agente não são iguais a zero.

[0056] Fazer uso da amilase na atividade idêntica e as proteasesem uma concentração idêntica, em relação à proteína ativa, garante que, mesmo em caso de divergência na proporção de substância ativa à proteína total (valores da atividade específica), que é as proprieda-desenzimáticas atualmente presentes as quais são comparadas.

[0057] A menos que seja indicado de outra forma, para os fins dapresente invenção, referência é feita em cada caso ao peso do agente de lavagem líquido, isto é, os valores são indicados em relação ao peso dos mesmos.

[0058] Numerosas proteases e, em particular, subtilisinas são formadas como "pré-proteínas", isto é, acompanhadas por um pró- peptídeo e um peptídeo de sinal, em que a função do peptídeo de sinal convencional consiste em assegurar uma exportação da protease a partir da célula produtora para o periplasma ou é convencionalmente necessário para a correta dobragem da protease do meio que envolve a célula, e o pró-peptídeo. O peptídeo de sinal e o pró-peptídeo são como regra para a parte N-terminal do pré-proteina. O peptídeo de sinalé clivado em condições naturais do resto da protease por meio de uma peptidase de sinal. O dobramento assitido correto,, final do pró- peptídeo da protease, em seguida, ocorre. A protease está, então, na sua forma ativa e cliva-se fora do propeptídeo. Uma vez que o pró- peptídeo foi clivado, a protease madura, então, em particular, a subtili- sina, exerce a sua atividade catalítica sem os presentes originalmente aminoácidos N-terminais. Para aplicações industriais em geral e, em particular, para os fins da presente invenção, as proteases maduras, ou seja, as enzimas transformadas após a sua produção, são preferidas em relação aos pré-proteínas. As proteases podem ser adicionalmente modificadas por meio das células produtoras após a produção da cadeia de polipeptídeo, por exemplo, por meio da ligação de moléculas de açúcar, formilação, aminação, etc. Tais modificações são modificações pós - traducionais e podem, mas não necessariamente, exercerem influência sobre a função da protease.

[0059] A protease madura pode, além disso, também ser truncadana sua extremidade N - terminal e/ou C -terminal, de modo a que uma protease truncada em relação à SEQ ID NO. 1 ou SEQ ID NO. 2 ou SEQ ID NO. 3, ou seja, um fragmento, está presente no agente de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção. Todas as declarações de identidade relacionam-se, neste caso, a esse domínio em que o respectivo fragmento é atribuído em um alinhamento na SEQ ID NO. 1. O respectivo fragmento, no entanto, em qualquer caso, contém as posições que são atribuídas às posições 3, 4, 99 e/ou 199 em um alinhamento com a SEQ. 1, e aqui compreende as modificações correspondentes às previstas de acordo com a presente invenção. Além disso, um tal fragmento é proteoliticamente ativo. Um fragmento que é mais preferido a este respeito compreende uma sequência de aminoácidos que, ao longo de um comprimento de pelo menos 100 ou pelo menos 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 265 ou 266 posições de aminoácidos contíguos, correspondendo a SEQ ID NO. 1 ou SEQ ID NO. 2 ou SEQ ID NO. 3, tendo em conta os aminoácidos acima indicados para a posição 99 e, além disso, para as posições 3 e/ou 4 e/ou 199 e/ou 211. O desempenho de limpeza e/ou a estabilidade de armazenamento de um agente de lavagem ou de limpeza líquido de acordo com a presente invenção, que compreende um tal fragmento de um modo mais preferido corresponde (m), pelo menos, à de um agente de limpeza ou de lavagem, que contém uma protease que compreende uma sequência de aminoácidos que corresponde à sequência de aminoácidos indicada na SEQ ID no. 2 ou SEQ ID NO. 3, em cada caso, determinado tal como indicado acima.

[0060] Um agente de acordo com a presente invenção contém aprotease que aumenta, de preferência, em uma quantidade de 1 x 108 a 5 % em peso, De 0,0001 a 3 % em peso, De 0,0005 a 1 % em peso, De 0,001 a 0,75 % em peso e mais de preferência de 0,005 a 0,5 % em peso, em relação à proteína ativa. Um agente de acordo com a presente invenção contém a amilase que aumenta, de preferência em uma quantidade de 1 x 10-8 a 5 % em peso, De 0,0001a 3 % em peso, De 0,0005 a 1 % em peso, De 0,001 a 0,75 % em peso E mais prefe-rencialmente de 0,005 a 0,5 % em peso, em relação à proteína ativa. A concentração de proteína pode ser determinada com a ajuda de métodos conhecidos, por exemplo, o método de BCA (ácido bicinconínico ; 2,2 ' - biquinolil - 4, 4' - dicarboxílico) ou o método de biureto (AG Gor- nau, CS Bardawill e MM David, J. Biol. Chem., 177 (1948), pp 751 a 766). A concentração de proteínas ativa procede a este respeito através de uma titulação dos centros ativos usando um inibidor irreversível adequado (por exemplo, para proteases de fluoreto de fenilmetilsulfo- nila (PMSF)) e que determinam a atividade residual (conforme M. Bender et al., J. Am. Chem. Chem. Soc. 88., 24 (1966), pp 5890 a 5913).

[0061] A protease e/ou amilase, além disso, pode ser adsorvidasobre as substâncias veiculares e/ou podem ser incorporadas na en- capsulação de substâncias de forma a protegê-las contra a inativação prematura. No líquido de lavagem, ou seja, em condições de uso, a enzima é então liberada e pode realizar sua ação catalítica.

[0062] Em uma outra modalidade da presente invenção, o agentede lavagem ou de limpeza é caracterizado pelo fato de compreender ainda um componente que é selecionado a partir dei. uma substância aniônica e/ou polianiônica, e/ou ii. uma substância catiônica e/ou policatiônica, e/ou iii. uma substância contendo grupo (s) de hidroxila e/ou grupo (s) de poli-hidroxila.

[0063] Verificou-se que a adição de tais substâncias aumenta aindamais o desempenho de limpeza dos agentes de lavagem e de limpeza, em particular de lavagem líquido ou agentes que contêm proteases e amilases de limpeza, em particular aqueles como descrito acima, em particular em temperaturas relativamente baixas, em especial entre 10°C e 50° C, entre 10°C e 40°C, entre 10°C e 30°C e/ou entre 20°C e 40°C. Em particular, em combinação com uma protease para ser usada de acordo com a presente invenção, uma ação sinérgica ocorre, sobretudo no que diz respeito à remoção de pelo menos um tipo de sujeira sensível à protease, em particular, uma como mencionado acima.

[0064] As substâncias indicadas acima, em i. são substâncias aniô- nicas ou polianiônicas, ou seja, estas substâncias suportam pelo menos um e de preferência um número de cargas negativas. As substâncias são, de preferência um polímero com pelo menos um monômero carre-gado negativamente, de preferência, com uma pluralidade de monôme- ros carregados negativamente. De acordo com a presente invenção, este polímero é, portanto, de preferência, um polímero carregado nega-tivamente.É dada preferência, por exemplo, para os polímeros de áci-dosorgânicos ou os sais dos mesmos, em especial os poliacrilatos e/ou ácidos de polissacarídeos e/ou copolímeros de poliacrilato e/ou copolí- meros de polissacarídeos. A este respeito, os compostos preferidos também são os sulfonatos poliacrílicos ou policarboxilatos e os sais dos mesmos, os copolímeros ou sais dos copolímeros.

[0065] Os exemplos de substâncias que são mais de preferência aserem usadas são Acusol 587D (sulfonato poliacrílico ; Rohm & Haas / Dow Chemical), Acusol 445N (sal de policarboxilato de sódio ; Rohm & Haas / Dow Chemical), Acusol 590 (copolímero de poliacrilato ; Rohm & Haas / Dow Chemical), Acusol 916N (sal de policarboxilato de sódio; Rohm & Haas / Dow Chemical), Sokalan CP42 (sal de policarboxilato de sódio modificado; BASF), Sokalan PA 30CL (sal de policarboxilato de sódio; BASF), Dequest P 9000 (ácido polimaléico ; Thermphos), ácido algínico, poli - 1 - 2 - acrilamido - 2 - metil - propanossulfônico, o sal de sódio de ácido láctico-co - maleico poli - 4 - estirenossulfônico, sal de sódio de ácido poli - acrilamido - co-ácido acrílico, sal de sódio de ácido polimetacrílico, poli -metil vinil éter de ácido -alt- maléico ou sal de sódiodo ácido polivinilsulfônico.

[0066] As substâncias indicadas acima em ii. são substâncias ca-tiônicas ou policatiônicas, ou seja, estas substâncias suportam pelo menos uma e de preferência uma pluralidade de cargas positivas. As substâncias são, de preferência um polímero com pelo menos um mo- nômero com carga positiva, de preferência, com uma pluralidade de monômeros carregados positivamente. De acordo com a presente in-venção, este polímero é, portanto, de preferência, um polímero carregado positivamente. Exemplos de compostos preferidos neste contextosão os sais de poliaminas, polietilenoiminas ou os seus copolíme- ros, os sais de polialilaminas, sais de compostos de amônio dimetil po- lidialila ou compostos de poli (acrilamida - co - dialil dimetil amônio).

[0067] As substâncias indicadas em iii. são substâncias que compreendem pelo menos um grupo hidroxila e/ou grupo de poli-hidroxila e de preferência uma pluralidade de grupos de hidroxila e/ou grupos de poli-hidroxila. A este respeito, é dada preferência, por exemplo, aos álcoois polivinílicos, por exemplo, os disponíveis sob o nome comercial de Mowiol (Kremer Pigmente GmbH & Co. KG).

[0068] É expressamente apontado neste ponto que uma substânciaespecífica pode pertencer a um ou mais dos grupos acima indicados em i. a iii.. Por exemplo, pode ser um polímero aniônico, que compreende um ou mais grupo (s) de hidroxila e/ou grupo (s) de poli- hidroxila. Tal substância, então pertence aos grupos i. e iii. Um polímerocatiônico, que compreende um ou mais grupo (s) de hidroxila e/ou grupo (s) de poli-hidroxila também pertencem aos grupos ii. e iii.

[0069] Também é possível, para fins da presente invenção o usode derivados das substâncias mencionadas acima como pertencendo a i., Ii. ou iii.. Para os fins do presente pedido de patente, um derivado é entendido como uma substância a ser quimicamente modificada na base de uma das substâncias acima indicadas, por exemplo, através da conversão de uma cadeia lateral ou por meio da ligação covalente de outro composto com a substância. Tal composto pode ser, por exemplo, os compostos de baixo peso molecular, tais como os lípidos ou mono -, oligo- ou polissacarídeos ou aminas ou compostos de amina. A substância pode ainda ser glicosilada, hidrolisada , oxidada, N - metilada, N - formilada, N - acetilada ou pode conter metila, formila, etila, acetila, t - butila, anisila, benzila, trifluoroacetila, N - hidroxissuc- cinimida, t - butilaxicarbonila, benzoíla, 4-metilbenzila, tioanizila, thio- cresila, benzilaximetila, 4 - nitrofenila, benzilaxicarbonila, 2 - nitroben-zoila, 2 - nitrofenilsulfenila, 4 - toluenossulfonila, pentafluorofenila, di- fenilmetila, 2 - clorobenzilaxicarbonila, 2,4,5 - triclorofenila, 2 - bromo- benzilaxicarbonila, 9 - fluorenilmetilaxicarbonila, trifenilmetila, 2,2,5,7,8 - pentametilcromanil - 6 - sulfonila. Um derivado é também entendido como a ligação covalente ou não covalente da substância a um veículo macromolecular, ou igualmente também a inclusão não-covalente nas estruturas em estruturas macromoleculares adequadas. O acoplamento de reações com outros compostos macromoleculares, tais como, por exemplo, polietileno glicol, pode também ser realizado. Outras mo-dificações químicas preferidas são a modificação de um ou mais dos grupos químicos - COOH, - OH, = NH, - NH 2, SH a - COOR, - OR, - NHR, - NR2, - NHR, - NR, - SR ; em que:

[0070] R é -CH=CH-R2, -C=C-R2, -C(R2)=CH2, -C(R2)=C(R3), -CH=NR2, -C(R2)=N-R3, um sistema de anel C 4 a 7 com ou sem substituição, um heterociclo de nitrogênio 4 a 7 com ou sem substituição, ou uma cadeia C2 a C8 com 1 a 5 ligações duplas ou triplas com substituições selecionadas a partir de R1, R2, ou R3, em que

[0071] -R1 é H, -R, -NO2, -CN, substituinte de haleto, -N3, -C1-8 alquila, -(CH2)nCO2R2, -C2-8-alquenil-CO2R2, -O(CH2)nCO2R2, -C(O)NR2R3, -P(O)(OR2)2, substituída por alquila tetrazol-5-ila, - (CH2)nO(CH2)n-arila, -NR2R3, -(CH2)nOR2, -(CH2)nSR2, -N(R2)C(O)R3, -S(O2)NR2R3, -N(R2)S(O2)R3, -(CHR2)nNR2R3, -C(O)R3,(CH2)nN(R3)C(O)R3, -N(R2)CR2R3, (CH2)n-cicloalquila substituída ou não substituída, (CH2)N-fenila substituída ou não substituída, ou -ciclo ; em que n é um número maior do que 1;

[0072] -R2 é H, substituinte de haleto, alquila, haloalquila, -(CH2)n-fenila, -(CH2)1-3-bifenila, -(CH2)1-4-Ph-N(SO2-C1-2-alkyl)2, -CO(CHR1)n- OR1, -(CHR1)n-heterociclo, -(CHR1)n-NH-CO-R1, -(CHR1)n-NH- SO2R1, -(CHR1)n-Ph-N(SO2-C1-2-alkyl)2, -(CHR1)n-C(O)(CHR1)-NHR1, -(CHR1)n-C(S)(CHR1)-NHR1, -(CH2)nO(CH2)nCH3, -CF3, -C2-5 acila, - (CHR1)nOH, -(CHR1)nCO2R1, -(CHR1)n-O-alquila, -(CHR1)n-O-(CH2)n- O-alquila, -(CHR1)n-S-alquila, -(CHR1)n-S(O)-alquila, -(CHR1)n-S(O2)- alquila, -(CHR1)n-S(O2)-NHR3, -(CHR3)n-N3, -(CHR3)nNHR4, uma cadeia C2 a C8 alqueno com 1 a 5 ligações duplas, uma cadeia C2 a C8 alqueno com 1 a 5 ligações triplas, -(CHR3)n-heterociclo substituído ou não substituído, -(CHR3)n-cicloalquila substituída ou não substituída saturada ou não-saturada ; em que n é um número maior do que 1 e R1 e R3 podem ser idênticos ou diferentes ;

[0073] -R3 é H, -OH, -CN, alquila substituída, -C2 a C8 alquenila,cicloalquila substituída ou não substituída, -N(R1)R2, heterociclo ou heterobiciclo C5 a C7 saturado ou não saturado de 4 a 7 C átomos, - NR1, -NR2, -que consiste em um heterociclo ou heterobiciclo saturado ou não-saturado de 4 a 7 C átomos ;

[0074] -R4 é H, -(CH2)nOH, -C(O)OR5, -C(O)SR5, -(CH2)nC(O)NR6R7, -O-C(O)-O-R6, um aminoácido ou um peptídeo; em que n é um número entre 0 e 4;

[0075] -R5 é H,

[0076] -R6 é -C(R7)-(CH2)n-O-C(O)-R8, -(CH2)n-C(R7)-O-C(O)R8, -(CH2)n-C(R7)-O- C(O)-O-R8, ou -C(R7)-(CH2)n-O-C(O)-O-R8; em que n é um número entre 0 e 4; e

[0077] -R7 e R8 são em cada caso H, alquila, alquila substituída,arila, arila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, al- quinila substituída, heterociclo, heterociclo substituído, alquilarila, al- quilarila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, ou CH2CO2 alquila, em que R7 e R8 podem ser idênticos ou diferentes.

[0078] De acordo com a presente invenção, é adicionalmente possível o uso de todas as combinações possíveis das substâncias men- cionadas acima como pertencendo a i., Ii. ou iii. e/ou os derivados dos mesmos.

[0079] Um agente de limpeza ou de lavagem líquido, de acordocom a presente invenção pode ser usado como tal ou após diluição com água para a limpeza de tecidos e/ou superfícies duras. Tal solução diluída pode ser facilmente produzida por meio da diluição de uma parte do agente de uma quantidade adicional de água em proporções específicas, em peso, de agente : água e, opcionalmente, esta diluição é agitada para assegurar uma distribuição uniforme do agente na água. As possíveis proporções de Peso ou volume das diluições são de 01:00 agente: água para 1:10.000 ou 1:20.000 agente : água, de preferência a partir de 1:10 a 1:2000 agente: água.

[0080] Todas as apresentações de líquidos ou de fluidos podemaqui servir como agentes de lavagem ou limpeza líquidos. "De fluido" para os fins do presente pedido, entende-se como que o agente que pode ser vazado e pode apresentar viscosidades de até várias dezenas de milhares de mPas. A viscosidade pode ser medida através de métodos-padrão convencionais (por exemplo, viscosímetro Brookfield LVT - II a 20 rpm e 20 ° C, fuso 3) e é, de preferência na proporção de 5 a 30.000 mPa s. Os agentes preferidos têm viscosidades de 10 a 15.000 mPas, em valores compreendidos entre os 120 e 8000 mPa- s são mais preferidos. Um agente de limpeza ou de lavagem líquido para efeitos da presente invenção pode, portanto, assumir a forma de um gel ou de uma pasta, que pode estar presente como uma solução homogênea ou uma suspensão, e por exemplo, ser formulada como uma apresentação em spray ou outra convencional. Os agentes de lavagem incluem todos os tipos imagináveis de agente de lavagem, em agentes de lavagem específicos para tecidos, tapetes ou fibras naturais. Eles podem ser fornecidos para o uso manual e/ou também de máquina. Os agentes de lavagem incluem ainda os auxiliares de lava gem, que podem ser adicionados ao presente agente de lavagem para a lavagem manual ou demáquina de têxteis, para conseguir um efeito adicional. Os agentes de limpeza incluem todos os agentes, ocorrendo o mesmo em todas as apresentações declaradas, para limpeza e/ou desinfecção de superfícies duras, agentes de lavagem manual e au-tomático, limpadores de carpetes, produtos abrasivos, limpadores de vidro, rimblocks WC, etc. Finalmente, os agentes de pré- e pós- trata-mentotêxtil são por um lado os agentes com os quais um item de roupaé colocado em contato antes da relavagem, por exemplo, para dissolver parcialmente a sujeira difícil de sair, e, de outro lado, aqueles que em uma etapa a jusante do processo da real lavagem do item lavado apresenta ainda outras características desejáveis, tais como boa srnsação de manuseio, ausência de vincos ou baixa carga estática. Os últimos agentes compreendem, condicionadores de enxaguamento inter alia. Os desinfetantes são, por exemplo, os desinfetantes de mão, desinfetantes de superfícies e desinfetantes de instrumento, que também podem ocorrer nas apresentações indicadas.

[0081] Em uma outra modalidade preferida da presente invenção,o agente de lavagem ou de limpeza é caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos um ingrediente adicional, em particular, um ingrediente que é selecionado a partir do grupo que consiste em fosfo- nato, tensoativo, construtor, solvente não aquoso, ácido, sal solúvel em água, espessante e as combinações dos mesmos.

[0082] Os fosfonatos são os sais e os compostos orgânicos, emespecial ésteres, de ácido fosfônico. Os fosfonatos primários (M'H2PO3 ou HP (O) (OH) (OM ')) e secundários (M'2HPO3 ou HP (O) (OM ') 2) existem como sais, em que M ' representa um metal monovalente. Estes fosfonatos não - orgânicos também são conhecidos como fosfitos primários ou secundários. Os fosfonatos não - orgânicos surgem, por exemplo, por meio da reação de ácido fosfônico HP (O) (OH) 2, em especial, a forma tautomérica estável de ácido fosforoso, com um, dois equivalentes (secundários) de base (primário) ou, por exem-plo,hidróxido de metal alcalino. Para efeitos da presente invenção, os fosfonatos substituídos por P orgânicos que compreendem uma ligação fósforo - carbono são os preferidos (compostos organofosforados). A sua estrutura geral é R1P (O) (OR2) 2, com R1 e/ou R2 = alquila, arila ou H, em que os resíduos alquila ou arila compreendem mais substituições ou podem suportar mais grupos químicos. Fosfonatos substituídos por P orgânicos surgem, por exemplo, como um resultado da reação de Michaelis - Arbusov. Muitos desses fosfonatos são solúveis em água. Alguns fosfonatos industrialmente importantes, adicionalmente, suportam o (s) grupo (s) amino do tipo NR - (CH2) x - PO (OH) 2 (R = alquila, arila ou H). Alguns destes aminofosfonatos têm semelhanças estruturais com os agentes complexantes tais como EDTA, NTA ou DTPA e tem uma função semelhante. Fosfonatos mais preferidos para os fins da presente invenção incluem, em particular, organofosfonatos como, por exemplo, 1- hidroxietano - 1,1 - difosfôni- co (HEDP), aminotri (ácido metilenofosfônico) (ATMP, também conhecido como aminotris (ácido metilenofosfônico) ou nitrilatris (ácido meti- lenofosfônico) (NTMP)), dietilenotriaminapenta (ácido metilenofosfôni- co) (DTPMF ou DETPMP ou DTPNT), etilenodiaminotetra (ácido meti- lenofosfônico) (EDTMP, também conhecido como etilenodiaminotetra (ácido metilenofosfônico)) e 2 - fosfonobutano - 1, 2,4 - ácido tricarbo- xílico (PBS - AM, também conhecido como ácido 2 - fosfonobutano - 1,2,4 - tricarboxílico ou o ácido 3 - carbóxi - 3 - fosfonoadípico), que são normalmente usados na forma de sais de amônio ou de metais alcalinos. Dietilenotriaminapenta (ácido metileno) de sódio é mais preferido. Tal fosfonato é obtido, por exemplo sob o nome comercial de Dequest ® 2066 (Thermphos).

[0083] O fosfonato está de preferência presente no agente de la vagem ou de limpeza em uma quantidade de 0,01 a 2,5 % em peso e cada vez mais, de preferência de 0,02 a 2 % em peso, Entre 0,03 e 1,5 % em peso e em particular de 0,05 a 1 % em peso.

[0084] Os tensoativos, não iônicos, zwitteriônicos e/ou anfotéricospodem ser usados como tensoativo (s). De uma mistura de ponto de vista aplicacional, os tensoativos aniônicos e não iônicos são os prefe-ridos. O teor total de tensoativo do agente de lavagem ou de limpeza líquido é de preferência inferior a 60 p. % E mais preferencialmente abaixo de 45 % em peso, Em relação ao total de agente de limpeza ou de lavagem líquido.

[0085] Os tensoativos não iônicos adequados incluem álcoois al-coxilados, ésteres graxos alcoxilados de alquila de ácidos graxos, amidas de ácidos graxos, amidas de ácidos graxos alcoxilados, ami- das de ácidos graxos polihidróxi, éteres de alquilfenol poliglicol, óxidos de amina, poliglucosídeos de alquila e as misturas dos mesmos.

[0086] Os alcoxilados, vantajosamente etoxilados, em especial álcooisprimários com, de preferência 8 a 18 átomos de C e, em média, 1 a 12 mols de óxido de etileno (EO) por mol de álcool, no qual o resíduo de álcool pode ser linear ou, de preferência metil - ramificado na posição 2, ou pode conter resíduos ramificados lineares de metila na mistura, como eles estão normalmente presentes em resíduos de álcool oxo, são preferencialmente usados como agentes tensoativos não iônicos. Em particular, no entanto, são preferidos os etoxilatos de álcool com resíduos lineares preparados a partir de álcoois de origem natural com 12 a 18 átomos de C, por exemplo a partir de coco, palma, sebo ou álcool oleílico e, em média, 2 a 8 EO por mol de álcool. Os álcoois etoxilados preferidos incluem, por exemplo, C12- 14 álcoois com 3 EO, 4 ou 7 EO EO, C9 -11 álcoois com 7 EO, C13- 15 álcoois com 3, 5 EO EO EO, 7 ou 8 EO, C12- 18 álcoois com 3 EO, 5 EO ou 7 EO e as misturas dos mesmos, como misturas de álcool C12 - 14 com 3 EO e C12 - 18 álcool com 7 EO. Os graus declarados de etoxilação são médias estatísticas que, para um produto específico, podem ser de um número inteiro ou um número fracionário. Etoxilatos de álcool preferidos têm uma distribuição restrita homóloga (etoxilados de proporção estreita, NRE). Em adição a estes agentes tensoativos não iô- nicos, podem também ser usados álcoois graxos com mais de 12 EO. Exemplos destes são o álcool graxo de sebo com 14 EO, 25 EO, 30 EO ou 40 EO. Os tensoativos não iônicos que contêm grupos de óxido de etileno e de PO em conjunto em uma única molécula também podem ser usados de acordo com a presente invenção. Além disso, também é adequada uma mistura de um álcool graxo etoxilado (relativamente altamente) ramificado e um álcool graxo etoxilado não ramificado, tal como por exemplo uma mistura de um álcool graxo C16 - 18 com 7 EO e 2 - propilheptanol com 7 EO. Mais de preferência, o agente de lavagem, limpeza ou de pós - tratamento ou auxiliares de lavagem contém um álcool graxo C12 - 18 com 7 OE ou um álcool oxo em C13 - 15 com 7 EO, como tensoativo não iônico.

[0087] O teor de tensoativos não iônicos, em que o agente de lavagem ou limpeza de um modo preferido em quantidades de 3 a 40 % em peso, Preferencialmente de 5 a 30 % em peso E, em especial, 7 a 20 % em peso, Em cada caso em relação a todo o agente de lavagem ou de limpeza.

[0088] Além dos agentes tensoativos não iônicos, o agente de lavagem ou de limpeza pode também conter tensoativos aniônicos. Sul-fonatos, sulfatos, fosfatos de alquila, sabões, agentes tensoativos aniônicos de silicone e as misturas dos mesmos são de preferência usados como o tensoativo aniônico.

[0089] Os agentes tensoativos do tipo sulfonato que podem, aqui,de preferência, ser considerados são os sulfonatos C9 - 13 alquil ben-zeno, sulfonatos de olefinas, isto é, misturas de alceno e hidroxialca- nossulfonatos e dissulfonatos, como são obtidos, por exemplo, a partir de C12 - 18 mono-olefinas com um terminal ou ligação dupla interna por meio da sulfonação com trióxido de enxofre gasoso e alcalino ou posterior hidrólise ácida dos produtos de sulfonação. C12 - 18 -sulfonatos de alcano e os ésteres de ácidos α - sulfograxo (sulfonatos de éster), por exemplo, os ésteres metílicos α - sulfonadosde coco hi- drogenado, de amêndoa, de palma ou ácidos graxos de sebo, também são adequados.

[0090] Os sulfatos de alqu (en) ila preferidos são de metal alcalinoe, em particular, sais de sódio de ácido semi- ésteres de ácido sulfúri- co de álcoois graxos em C12 - C18, por exemplo, preparado a partir de coco graxo, álcool graxo de sebo, álcool laurílico, miristílico, cetílico ou estearílico ou álcoois oxo em C10- C20 e esses semi -ésteres de álco-oissecundários com estes comprimentos de cadeia. Os sulfatos de C12 - C16 alquila e os sulfatos de C12 - C15 alquila e os sulfatos de C14 - C15 alquila são preferidos devido às suas características de lavagem. Os sulfatos de 2,3 - alquila também são tensoativos aniônicos adequados.

[0091] Os monoésteres de ácido sulfúrico de cadeia linear ou ramificada de álcoois C7 - 21 etoxilados com 1 a 6 mols de óxido de etileno são também adequados, tais como álcoois 2 - metil - ramificados em C9 - 11 com, em média, 3,5 mols de óxido de etileno (EO) ou C12 - 18 álcoois graxos com 1 a 4 EO.

[0092] Os sabões são também agentes tensoativos aniônicos preferidos. Os sabões de ácidos graxos saturados e não saturados, são, em particular, adequados, tal como os sais do ácido láurico, ácido mi- rístico, ácido palmítico, ácido esteárico, (hidrogenado) de ácido erúcico e ácido beénico e misturas de sabão em especial derivados de ácidos graxos naturais, por exemplo, coco, ácidos de semente de palma, óleo de oliva ou graxos de sebo.

[0093] Os agentes tensoativos aniônicos, incluindo os sabões podem estar presentes sob a forma de sais de sódio, potássio, magnésio ou sais de amônio dos mesmos. Os tensoativos aniônicos estão pre-sentes, preferencialmente, sob a forma dos seus sais de sódio. Os contraíons preferidos adicionais para os tensoativos aniônicos são também as formas protonadas de colina, trietilamina ou metilamina.

[0094] O teor de tensoativo aniônico de um agente de lavagem oude limpeza pode elevar-se a 1 para 40 % em peso, Preferencialmente de 5 a 30 % em peso E especialmente de preferência de 10 a 25 % em peso, Em cada caso em relação a todo o agente de lavagem ou de limpeza.

[0095] Os construtores possíveis que podem estar contidos no agente de lavagem ou de limpeza estão em silicatos, em particular silicatos de alumínio (em particular os zeólitos, carbonatos), os sais de ácidos di - e policarboxílicos orgânicos e as misturas dessas substâncias.

[0096] Os construtores orgânicos que podem estar presentes noagente de lavagem ou de limpeza são, por exemplo, os ácidos policar- boxílicos, os quais são utilizáveis sob a forma dos seus sais de sódio, em que os ácidos policarboxilicos são tomados para significar aqueles ácidos carboxílicos que suportam mais do que uma função de ácido. Estes são, por exemplo, ácido cítrico, ácido adípico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido maléico, ácido fu- márico, ácidos sacárico, ácidos aminocarboxílicos, ácido nitrilatriacéti- co (NTA), ácido metilglicinediacético (MGDA) e os derivados e as mis-turas dos mesmos. Os sais preferidos são os sais de ácidos policarbo- xílicos, tais como ácido cítrico, ácido adípico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido tartárico, ácidos sacárico e as misturas dos mesmos.

[0097] Os policarboxilatos poliméricos são, além disso, adequadoscomo construtores. Estes são por exemplo os sais de metais alcalinos do ácido poliacrílico ou do ácido polimetacrílico, por exemplo, aqueles com uma massa molecular relativa de 600 a 750,000 g / mol.

[0098] Os polímeros adequados são em especial os poliacrilatosque têm de preferência uma massa molecular de 1.000 a 15.000 g / mol. Devido à sua solubilidade superior, os poliacrilatos de cadeia curta deste grupo podem, por sua vez serem preferidos, estes com massas molares de 1000 a 10.000 g / mol, e mais de preferência de 1000 e os 5000 g / mol.

[0099] Também são adequados os policarboxilatos poliméricos,em especial, os do ácido acrílico com ácido metacrílico e ácido acrílico ou ácido metacrílico com ácido maléico. A fim de melhorar a solubilidade em água, os polímeros podem também conter ácidos allilsulfôni- cos, tais como ácido metallilsulfônico e ácido alliloxibenzenossulfônico, como um monômero.

[00100] De preferência, contudo, os construtores solúveis, tais como, por exemplo, ácido cítrico, ou polímeros acrílicos, com massas molares de 1000 até 5000 g / mol são preferencialmente usados no agente de lavagem ou de limpeza líquido.

[00101] As massas molares indicadas para os policarboxilatos poli- méricos compreendem para os fins do presente documento a massa molar Mw de peso - médio da forma de ácido respectivo, tendo estas sido, em princípio, determinadas por meio de cromatografia de perme- ação em gel (GPC), em que um detector de UV foi usado. A medição foi feita, na presente invenção, em relação a um padrão externo de ácido poliacrílico, que fornece valores realistas de peso molecular como um resultado da sua relação estrutural com os polímeros sob investigação. Estes valores diferem marcadamente a partir dos valores de peso molecular, em que os ácidos polistirenossulfônicos são usados como padrão. As massas molares medidas em relação aos ácidos poliestirenossulfônicos são geralmente significativamente mais eleva das do que as massas molares indicadas no presente documento.

[00102] Estas substâncias construtoras orgânicas podem, se desejado, estar presentes em quantidades de até 40 % em peso, em especial de até 25 % em peso e de preferência de 1 % em peso, de 8 % em peso. Quantidades perto do limite superior indicado são usadas prefe-rencialmente em agentes pastosos ou líquidos, em particular os que contêm água.

[00103] Os agentes de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção são líquidos e de preferência contém água como o solvente principal. Além disso, os solventes não aquosos podem ser adicionados ao agente de limpeza ou de lavagem. Os solventes não aquosos apropriados incluem álcoois mono- ou polifuncionais, alcano- laminas ou éteres de glicol, desde que sejam miscíveis com a água na proporção de concentração indicada. Os solventes são de preferência selecionados a partir de etanol, n- propanol, i - propanol, butanol, gli- col, propanodiol, butanodiol, glicerol, di-glicol, propil éter de dietileno glicol, éter monobutílico de dietilenoglicol, hexileno -glicol, éter de eti- leno -glicol metílico, etileno glicol éter etílico, éter de etileno glicol pro- pílico, éter de etileno-glicol n- butílico, éter de dietileno glicol metílico, éter de dietileno glicol etílico, éter de propileno glicol metílico, éter de propileno glicol etílico, éter de propileno glicol propílico, éter de dipropi- leno- glycol monometílico, éter de dipropileno monoetílico, éter de di- isopropileno glicol monometílico, éter de di-isopropileno monoetílico, metoxitriglicólico, etoxitriglicol, butoxitriglicol, 1 - butoxietóxi, 2 - propa-nol, 3 - metil - 3 - metoxibutanol, éter de propileno-glicol t - butílico, éter de di -n - octílico e as misturas destes solventes. É, contudo, preferível para os agentes de lavagem ou de limpeza conter um poliol como sol-ventenão aquoso. O poliol pode, em particular, compreender o glice- rol, 1,2- propanodiol, 1,3- propanodiol, etileno glicol, dietileno glicol e/ou dipropileno glicol. Mais preferencialmente, o agente de lavagem ou de limpeza contém uma mistura de um poliol e de um álcool mono- hídrico. Os solventes não aquosos podem ser usados nos agentes de lavagem ou de limpeza em quantidades de entre 0,5 e 15 % em peso, mais de preferência abaixo de 12 % em peso.

[00104] A fim de estabelecer um valor de pH desejado, que não é obtido automaticamente através da mistura dos componentes remanescentes, os agentes podem conter ácidos que são compatíveis com o sistema e que são compatíveis com o ambiente, em particular o ácidocítrico, ácido acético, ácido tartárico, málico, ácido láctico, ácido glicólico, ácido succínico, ácido glutárico e/ou ácido adípico, bem como ácidos minerais, ácido sulfúrico, em particular, ou de bases, em especial, de amônio ou hidróxidos de metais alcalinos. Tais reguladores de pH estão presentes nos agentes em quantidades de preferência não mais do que 20 % em peso, Em particular de 1,2 % em peso a 17 % em peso.

[00105] Um agente de acordo com a presente invenção pode além disso conter um ou mais sais solúveis em água, que servem por exemplo para ajustar a viscosidade. Os sais podem ser não orgânicos e/ou orgânicos. Os sais não orgânicos utilizáveis são aqui preferencialmente selecionados a partir do grupo que compreende halogenetos solúveis em água incolores, sulfatos, sulfitos, carbonatos, hidrogeno- carbonatos, nitratos, nitritos, fosfatos e/ou óxidos de metais alcalinos, de metais alcalino-terrosos, de alumínio e/ou de metais de transição, sais de amônio, além disso, podem ser usados. Halogenetos e sulfatos de metais alcalinos são os mais preferidos, o sal não orgânico é, por conseguinte, de preferência, selecionado a partir do grupo que compreende cloreto de sódio, cloreto de potássio, sulfato de sódio, sulfato de potássio e as misturas dos mesmos. Exemplos de sais orgânicos que podem ser usados são metal alcalino solúvel em água incolor, metal alcalino-terroso, de amônio, de alumínio e/ou sais de metais de transição de ácidos carboxílicos. Os sais são de preferência selecio-nados de entre o grupo que consiste em formiato, acetato, propionato, citrato, malato, tartarato, succinato, malonato, oxalato, lactato e as misturas dos mesmos.

[00106] Para fins de espessamento, um agente de acordo com a presente invenção pode conter um ou mais agentes de espessamento. O agente de espessamento é de preferência selecionado a partir do grupo que compreende xantano, guar, carragenina, ágar - ágar, gela- no, pectina, farinha de semente de alfarroba e as misturas dos mesmos. Estes compostos são agentes de espessamento eficazes, mesmo na presença de sais não orgânicos,. Em mais uma modalidade preferida, o agente de lavagem ou de limpeza contém xantano como agente de espessamento, uma vez que xantana engrossa de forma eficaz mesmo na presença de elevadas concentrações de sal e evita a separação macroscópica da fase contínua. Além disso, o agente de espessamento estabiliza a fase de baixa tensoativo contínua e impede a separação de fase macroscópica.

[00107] Como uma alternativa ou em adição, os (co) polímeros de ácido (met) acrílico podem também ser usados como agentes de es- pessamento. Os (co) polímeros acrílicos e metacrílicos adequados in-cluem, por exemplo, os homopolímeros de elevado peso molecular, reticulados com um poliéter de polialcenila, em particular um éter alí- lico de sacarose, pentaeritritol ou propileno, de ácido acrílico (nome INCI de acordo com "International Dictionary of Cosmetic Ingredients "de" The Cosmetics, Toiletry, and Fragrance Association (CTFA)": Carbômero), que também são conhecidos como polímeros carboxiviní- licos. Esses ácidos poliacrílicos são obtidos, nomeadamente, sob os nomes comerciais Poligel ® e Carbopol ®. Os seguintes copolímeros de ácido acrílico são, além disso, apropriados : (i) copolímeros de dois ou mais monômeros do grupo do ácido acrílico, ácido metacrílico e os ésteres simples dos mesmos, de preferência, formados por acrilatos C1 - 4 alcanóis (INCI), que são por exemplo obteníveis sob os nomes comerciais Aculin ®, Acusol ® ou TEGO ® de polímero, (ii) copolíme- ros de ácido acrílico reticulados de elevado peso molecular, incluindo, por exemplo, os copolímeros de acrilatos de C10 - 30 alquila reticulados com um éter alílico de sacarose ou de pentaeritritol, com um ou mais os monômeros a partir do grupo de ácido acrílico, ácido metacrí- lico e os ésteres simples dos mesmos, de preferência, formado por C1 - 4 alcanóis (INCI Acrilatos / Acrilato de C10-30 Alquila reticulado) e são por exemplo obtidos com o nome comercial Carbopol ®. Além disso, os polímeros adequados são os (co) polímeros de ácido (met) acrílico do tipo Sokalan ®.

[00108] Pode ser preferível para a lavagem ou o agente de limpeza de acordo com a presente invenção conter um (co) polímero de ácido (met) acrílico, em combinação com um outro agente de espessamento, de preferência de xantana. O agente de lavagem ou de limpeza pode conter 0,05 a 1,5 % em peso E de preferência 0,1 a 1 % em peso, Em cada caso, em relação à totalidade do agente de limpeza ou de lavagem, de agente de espessamento. A quantidade de agente de espes- samento usado na presente invenção é dependente do tipo de agente de espessamento e o grau de espessamento desejado.

[00109] Os produtos líquidos ou pastosos de acordo com a presente invenção sob a forma de soluções que contêm dissolventes conven-cionaissão geralmente produzidos por meio da simples mistura dos constituintes, os quais podem ser introduzidos em um misturador au-tomático como um material não dissolvido ou como uma solução.

[00110] Os agentes de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção podem conter apenas uma protease e uma amilase, tal como descrito. Alternativamente, eles podem também conter outras enzimas hidrolíticas ou outras enzimas em uma concentração conve- niente para a eficácia do agente. A presente invenção, portanto, pro-porciona ainda os agentes que compreendem, adicionalmente, uma ou mais outras enzimas, em que, em princípio, todas as enzimas estabe-lecidas para esta finalidade na técnica anterior, podem ser usadas. Além disso, de preferência as enzimas utilizáveis são quaisquer enzimas que possam exercer uma atividade catalítica, em que o agente de acordo com a presente invenção, em particular uma protease, amilase, celulase, hemicelulase, mananase, tanase, xilanase, xanthanase, xila- glucanase, β - glicosidase, pectinase, carragenase, perhidrolase, oxidase, oxidorredutase ou uma lipase, e as misturas dos mesmos. Outras enzimas são, vantajosamente, presentes no agente, em cada caso, em uma quantidade de 1 x 10-8 a 5 por cento em peso em relação à proteína ativa. Cada enzima é cada vez mais, de preferência, os agentes de acordo com a presente invenção em uma quantidade de 1 x 10-7 a 3 % em peso, Em peso de,00001 a 1,5 % em peso de 0,00005 a 1 % em peso, De 0,0001 a 0,75 % em peso e mais preferencialmente, de 0,0005 a 0,5 % em peso, em relação à proteína ativa. Mais preferencialmente, as enzimas exibem um desempenho de limpeza sinérgico no que diz respeito à sua ação em relação à sujeira ou manchas específicas, ou seja, as enzimas contidas na composição de agente auxiliam o desempenho de limpeza uma da outra. Particularmente de preferência, uma tal ação sinérgica está presente entre a protease de acordo com a presente invenção e uma outra enzima de um agente de acordo com a presente invenção, incluindo, em particular, entre a protease indicado e a amilase e/ou lipase e/ou uma mana- nase e/ou uma celulase e/ou pectinase. Os efeitos sinérgicos podem ocorrer não apenas entre as enzimas diferentes, mas também entre uma ou mais enzimas e outros ingredientes de agente de acordo com a presente invenção.

[00111] Em uma outra modalidade da presente invenção, o agente de lavagem ou de limpeza é caracterizado pelo que é um agente de lavar louça automático. Tal como definido no presente pedido, os agentes de lavar louça automáticos são composições que podem ser usadas para a limpeza de louça suja em um método de lavar louça automático. Os agentes de lavar louça automáticos, de acordo com a presente invenção, portanto, sendo diferentes, por exemplo, a partir de aparelhos de lavagem automática, são sempre usados em combinação com os agentes de lavar louça automáticos e não efetuam qualqueração de limpeza. Os requisitos mais rigorosos são frequentemente aplicados a máquina de lavar louças que são aplicados aos pratos lavados à mão. Por exemplo, após a limpeza da máquina, os pratos não só devem ser completamente livres de resíduos de alimentos, mas também não devem, por exemplo, apresentarem quaisquer manchas esbranquiçadas com base na dureza da água ou outros sais minerais que se originam a partir da água seca que cai devido à falta de agentes umectantes. Os agentes de lavar louça automáticos modernos satisfazem essas exigências através da incorporação das substâncias ativas de limpeza e/ou condicionamento e/ou amolecimento de água e/ou lavagem e são, por exemplo conhecidos para o consumidor como agentes para lavar louça " 2-em- 1" ou "3-em-1". Os agentes de lavar louça automáticos contêm construtores como um componente essencial para a limpeza e lavagem de sucesso. Por um lado, estes construtores aumentam a alcalinidade do licor de lavagem, em que as gorduras e óleos são emulsionados e saponificados como aumentos de alcalinidade, e, por outro lado, reduzem a dureza da água do líquido de lavagem através da complexação dos íons de cálcio presentes no licor aquoso. Em um desenvolvimento adicional preferido, o agente de lavar louça automático é encerrado em uma película solúvel em água. A película compreende de preferência um álcool polivinílico (PVA) ou com-posto de álcool polivinílico (PVA).

[00112] A presente invenção proporciona ainda o uso de um agente de limpeza ou de lavagem de acordo com a presente invenção para a remoção de sujeiras, em particular da protease e/ou sujeira sensível à amilase, a partir de tecidos ou de superfícies duras, ou seja, no caso dos têxteis de limpeza ou superfícies duras. Isto é porque os agentes de acordo com a presente invenção podem, em particular, devido à combinação de protease e amilase neles contidps, com vantagem, serem usados para remover a sujeira correspondente de tecidos ou de superfícies duras. As modalidades deste aspecto da presente invenção incluem, por exemplo, a lavagem à mão, a remoção manual de manchas de tecidos ou de superfícies duras ou para o uso em ligação com um método de máquina. Todos os fatores, aspectos e modalidades que foram descritos para os agentes de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção são igualmente aplicáveis a este aspecto da presente invenção. Uma referência expressa é, por conseguinte, realizada neste momento para a descrição em pontos correspondentes, sendo salientado que esta descrição aplica-se também ao uso acima de acordo com a presente invenção.

[00113] A presente invenção proporciona ainda um método para a limpeza de têxteis ou de superfícies duras, em que um agente de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção é usado em, pelo menos, uma das etapas do processo.

[00114] Estes incluem tanto os métodos manuais quanto de máquina, em que são preferidos os métodos de máquina, devido ao fato de fazerem com mais precisão controlável, por exemplo em termos das quantidades usadas e os períodos de exposição. O processo para a limpeza de têxteis, em geral, é distinguido em que em duas ou mais etapas de método de diversas substâncias com uma ação de limpeza são aplicadas no material a ser limpa e, após o período de exposição, são lavadas, ou de que o material a ser limpo é tratado de alguma ou- tra maneira, com um agente de lavagem ou uma solução ou diluição desse agente. O mesmo aplica-se a métodos para a limpeza de todas as outras que não os de materiais têxteis, em especial de superfícies duras. Qualquer lavagem concebível ou métodos de limpeza pode ser aumentada em pelo menos ums dss etapas do método de aplicação de um agente de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção e, em seguida, constituem modalidades da presente invenção. Todos os fatores, aspectos e modalidades que foram descritas para os agentes de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção são igualmente aplicáveis a este aspecto da presente invenção. Uma referência expressa é, por conseguinte, realizada neste momento para a descrição em pontos correspondentes, sendo salientado que esta descrição aplica-se também ao uso acima de acordo com a presente invenção.

[00115] Em uma modalidade preferida, o método é caracterizado pelo fato de a amilase estar presente no licor de lavagem a uma concentração de 1 x 10-10 a 0,2 peso % Em peso, de 0,000001 a 0,12 % em peso, de,000005 a 0,04. % em peso, de 0,00001 a 0,03 % em peso e mais de preferência de 0,00005 a 0,02 % em peso, e/ou em que a protease está presente no licor de lavagem a uma concentração de 1 x 10-10 a 0.2 % em peso, de 000001 a 0,12 % em peso, de 000005 a 0,04 % em peso, de 0,00001 a 0,03 % em peso e mais de preferência de 0,00005 a 0,02 % em peso, em que os valores indicados referem- se a proteína ativa no licor de lavagem. Em uma outra modalidade preferida, o método é caracterizado pelo fato de ser realizado a uma temperatura de entre 10 ° C e 60 ° C, de preferência entre 20 ° C e 50 ° C e mais de preferência de entre 30 ° C e 50 ° C.

[00116] As proteases usadas nos agentes de acordo com a presente invenção podem ser vantajosamente usadas, em conformidade com as explicações acima, em agentes de lavagem e de limpeza de acordo com a presente invenção, assim como em métodos, em particular, os métodos de lavagem e de limpeza. Elas podem, dessa maneira, ser vantajosamente usadas para proporcionar a atividade proteolítica em agentes correspondentes.

[00117] A presente invenção proporciona ainda o uso de uma protease, que compreende uma sequência de aminoácidos que, ao longo do todo o seu comprimento, é pelo menos 70 % idêntica à sequência de aminoácidos indicada na SEQ. 1 e, na numeração de acordo com a SEQ ID NO. 1, tendo a substituição de um aminoácido R99E ou R99D em combinação com pelo menos mais duas substituições de aminoá- cidos que são selecionadas a partir do grupo que consiste em S3T, V4I e V199I, a fim de proporcionar uma atividade proteolítica de um agente de limpeza ou de lavagem líquido que compreende ainda uma amilase.

[00118] Todos os fatores, aspectos e modalidades que foram descritos para os agentes de lavagem ou de limpeza de acordo com a presente invenção, também são aplicáveis aos usos indicados. Uma referência expressa é, por conseguinte, realizada neste momento para a descrição em pontos correspondentes, sendo salientado que esta descrição aplica-se também ao uso acima de acordo com a presente invenção.

[00119] Exemplo: Determinação da estabilidade de armazenamento de um agente de lavar louça líquido automático de acordo com a presente invenção

[00120] A formulação de base era um agente de lavar louça líquido automático bifásico contendo amilase que era da seguinte composição (valores indicado em porcentagem em peso) :

[00121] A presente amilase era uma variante α - amilase, que, emrelação à α - amilase AA560 de acordo com a SEQ ID NO. 4, tem as seguintes modificações na sequência de numeração de AA560 α - amilase : R118K, D183 * (supressão), G184 * (supressão), N195F,R320K, R458K (Novozymes).(b) fase Alcalina:

[00122] A fase de enzima da base de formulação foi combinada para os vários lotes de ensaio, em cada caso, com 3 % em peso das preparações das seguintes proteases (resultantes em cada caso, em 0,5 % em peso de proteína ativa.):

[00123] Lote 1: variante de desempenho melhorado da protease de Bacillus lentus, de acordo com a SEQ ID NO. 2 de WO2011 / 032988 (referência);

[00124] Lote 2: protease de acordo com a SEQ ID NO. 2 (SEQ ID NO. 1 + + S3T V4I + R99E + V199I).

[00125] O desempenho de limpeza foi determinado por meio da repartição das duas fases em proporções idênticas (em cada caso, 20 g por fase). A lavagem foi realizada em um intervalo de valores de pH entre pH 9 e pH 10, em uma máquina de lavar louça de G698SC Miele em um volume de 4 litros para um período de 60 minutos a uma temperatura de 50°C.

[00126] Foram usados Pratos com a seguinte sujeira: leite (A), carne picada (B), gema de ovo (C), mingau de aveia (D) e amido (E).

[00127] O desempenho de limpeza é avaliado visualmente usando o método IKW padrão em uma escala de 1 a 10, caracterizado por um valor de 10 que representa a melhor classificação (nenhum resíduo visível).

[00128] Os agentes de lavagem dos lotes 1 e 2 foram testados no que se refere ao seu desempenho de limpeza, antes e após armazenagem durante quatro semanas a 40 ° C. Os resultados são apresentados na Tabela 1 abaixo:

[00129] Depois de quatro semanas de armazenagem a 40°C, é evidente que a composição de acordo com a presente invenção, graças à protease contida nela, exibe claramente um melhor desempenho de limpeza, em particular nos tipos sensíveis à protease de sujeira B e C (desempenho de limpeza proteolítica). Em particular, o desempenho da limpeza em tipos de sujeira sensível à amilase D e E, é também melhorado (desempenho de limpeza amilalítica).

Claims

1. Agente de lavagem ou de limpeza líquido, caracterizado pelo fato de que compreende(a) uma protease que possui uma sequência de aminoáci- dos de acordo com a SEQ ID NO. 2, e(b) uma amilase que é uma variante α-amilase da α-amilase AA560 de acordo com a SEQ ID NO. 4, que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das seguintes modificações de sequência na numeração de acordo com a α-amilase AA560: R118K, D183* (supressão), G184* (supressão), N195F, R320K, R458K.

2. Agente de lavagem ou de limpeza de acordo com a rei-vindicação 1, caracterizado pelo fato de que a amilase está presente em uma quantidade de 1 x 10-8 a 5 por cento em peso, em relação à proteína ativa, e/ou em que a protease está presente em uma quantidade de 1 x 10-8 a 5 por cento em peso, em relação à proteína ativa.

3. Agente de lavagem ou de limpeza de acordo com a rei-vindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que, além disso, compre-ende pelo menos um componente que é selecionado a partir dei. uma substância aniônica ou polianiônica,ii. uma substância catiônica ou policatiônica, eiii. uma substância contendo pelo menos um dentre um grupo hidroxila e um grupo poli-hidroxila.

4. Agente de lavagem ou de limpeza de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que compreende pelo menos um ingrediente adicional, em particular um ingrediente que é selecionado do grupo que consiste em fosfonato, tensoativo, construtor, solvente não-aquoso, ácido, sal solúvel em água, espessante e combinações dos mesmos.

5. Agente de lavagem ou de limpeza de acordo com qual- quer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que contém pelo menos uma outra enzima, em particular uma protease, amilase, celulase, hemicelulase, mananase, tanase, xilanase, xan- tanase, xiloglucanase, β-glicosidase, pectinase, carragenase, perhi- drolase, oxidase, oxidorredutase ou uma lipase, e misturas das mesmas.

6. Agente de lavagem ou de limpeza de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que se trata de um agente de lavagem de louça automática.

7. Uso de um agente de lavagem ou de limpeza de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de ser para a remoção de sujeira sensível à protease de têxteis ou super-fícies duras.

8. Método para a limpeza de têxteis ou superfícies duras, caracterizado pelo fato de que o agente de lavagem ou de limpeza como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 6 é usado em pelo menos uma etapa do método.

9. Método de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a amilase está presente no licor de lavagem em uma concentração de 1 x io-10a 0,2% em peso, e/ou em que a protease está presente no licor de lavagem em uma concentração de 1 x 1o-10 a 0,2% em peso.

10. Método de acordo com a reivindicação 8 ou 9, caracte-rizado pelo fato de ser realizado a uma temperatura entre 10°C e 60°C, de preferência entre 20°C e 50°C e mais preferencialmente entre 30°C e 50°C.

11. Uso de uma protease que possui uma sequência de aminoácidos de acordo com a SEQ ID NO. 2, caracterizado pelo fato de ser para proporcionar uma atividade proteolítica em um agente de lavagem ou de limpeza líquido que compreende uma amilase que é uma variante α-amilase da α-amilase AA560 de acordo com a SEQ ID NO. 4, que tem uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das seguintes modificações de sequência na numeração de acordo com a α-amilase AA560: R118K, D183* (supressão), G184* (supressão), N195F,R320K, R458K.