HUT68345A - Compounds of pharmaceutical activity containing thioether-bridge-bond and process for producing them - Google Patents

Compounds of pharmaceutical activity containing thioether-bridge-bond and process for producing them Download PDF

Info

Publication number
HUT68345A
HUT68345A HU9300156A HU9300156A HUT68345A HU T68345 A HUT68345 A HU T68345A HU 9300156 A HU9300156 A HU 9300156A HU 9300156 A HU9300156 A HU 9300156A HU T68345 A HUT68345 A HU T68345A
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
relaxed
chimeric
compound
approx
adriamycin
Prior art date
Application number
HU9300156A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9300156D0 (en
Inventor
Sandra June Hofstead
David Willner
Pamela A Trail
Dalton H King
Robert S Greenfield
Gary R Braslawsky
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Squibb Co filed Critical Bristol Myers Squibb Co
Publication of HU9300156D0 publication Critical patent/HU9300156D0/hu
Publication of HUT68345A publication Critical patent/HUT68345A/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6881—Cluster-antibody conjugates, i.e. the modifying agent consists of a plurality of antibodies covalently linked to each other or of different antigen-binding fragments covalently linked to each other
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Lubricants (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

Ismeretesek olyan bifunkciós vegyületek, amelyekben egy citotoxikus reagens antitesthez kapcsolódik. Ezek a vegyületek különösen hasznosak daganatokkal kapcsolatos antigének elleni immunkonjugátumok képzésében. Az ilyen immunkonjugátumok lehetővé teszik, hogy a toxikus szerek szelektíven a daganatos sejtekhez jussanak. [Ld. például Hermentin és Seiler, Investigátions With Monoclonal Antibody Drug Conjugates, Behring Insti. Mitl. 82:197-215 (1988); Gallego és munkatársai, Preparation of Four Daunomycin-Monoclonal Antibody 791T/36 Conjugates With Anti-Tumor Activity, Int. J. Cancer 33:737-44 (1984); Arnon és munkatársai, In Vitro and In Vivő Efficacy of Conjugates of Daunomycin with AntiTumor Antibodies, Immunological Rév. 62:5-27 (1982)].
Greenfield és munkatársai nemrégiben olyan savérzékeny immunkonjugátumokat írtak le, amelyek az acil-hidrazin vegyületet, a 3-(2-piridil-ditio)-propionil-hidrazidot egy aci1-hidrazon kötésen át egy antraciklin molekula 13helyzetú ketocsoportjához kapcsolva tartalmazzák, és ezt az antraciklin-származékot egy antitest molekulához kötötték (Greenfield és munkatársai, 0 328 147 számon 1989. augusztus 16-án nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentés, amely megfelel a 07/270,509 számú, 1988. november 16-án és a 07/155,181 számú, 1988. február 11-én tett amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésnek). Ez utóbbi bejelentés szintén speciális tioétert tartalmazó kapcsolóelemeket és konjugátumokat ismertet, amelyek között hidrazon-tioéter szerkezetet magábafoglalő immunkonjugátumok is vannak.
Kaneko és munkatársai (07/522,996 számú, 1990. május
14-én tett amerikai egyesült államokbeli szabadalmi beje-3 lentés, amely megfelel az 1991. november 21-én EP A 0457 250 számon nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentésnek) szintén olyan konjugátumokat írnak le, amelyekben az antraciklin antibiotikumok a C-13 helyzetben kialakított acil-hidrazon szerkezeti részen át kötődnek egy bifunkciós kapcsolóelemhez. E szerzők találmánya szerint a kapcsolóelemek reakcióképes piridinil-ditio- vagy orto-nitro-fenilditio-csoportot tartalmaznak, amelynek révén a kapcsolóelem a sejttel szemben reakcióképes ligandumhoz kapcsolódó megfelelő csoporttal reagál, és így jön létre a teljes konjugátum.
Az in vivő terápia szempontjából olyan további vegyületek előállítása lenne hasznos, amelyekben a cél és reagens molekula közötti kötés savérzékeny. így a jelen találmány olyan új kémiai eljárást bocsát rendelkezésre, amely a gyógyászatilag hatásos molekulának a kiválasztott cél sejtpopuláció felismerésére képes ligandumhoz való kapcsolására alkalmas. Ezen kapcsolási módszer segítségével gyógyászatilag hatásos konjugátumokat állítunk elő. A jelen találmány kiterjed a konjugátumokat tartalmazó készítményekre, a találmány szerinti konjugátumok előállítási eljárására, a kiválasztott betegállapotok kezelési vagy megelőzési eljárására, amely abban áll, hogy a betegnek a találmány szerinti valamely konjugátumot beadjuk, és egy új, redukált antitest előállítására alkalmas eljárásra, amely antitest a találmány szerinti konjugátumok előállításánál cél ligandumként használható.
A találmány szerint minden gyógyhatású molekula egy tioéterrészt tartalmazó kapcsolóelemen (linkeren) keresztül • · · i ««* · · • · · • · ·« · ··
-4kötödik a ligandumhoz. A gyógyhatású molekula ehhez a kapcsolóelemhez acil-hidrazon szerkezeti részen át kötődik. A tioéter kötést a ligandumon vagy egy rövid, a ligandumhoz kapcsolódó molekularészen (spaceren) levő szulfhidrilcsoport és egy Michael addíciós receptor reakciójával alakítjuk ki, amely a reakcióban Michael addíciós adduktum-má alakul. Előnyös esetben a cél ligandum a linkerhez közvetlenül, egy kovalens tioéter kötésen át kapcsolódik.
Az ily módon előállított új konjugátumok az (I) általános képletnek megfelelő szerkezetűek, a képletben
D gyógyászatilag hatásos molekularész;
n értéke1-10;
p értéke1-6;
Y oxigénatom vagy -NH2+C1“ csoport;
z értéke 0 vagy 1;
q értéke kb. 1 - kb.10;
X egy ligandum; és
A Michael addíciós adduktum molekularész.
A találmány egyik megvalósítása szerint a gyógyászatilag hatásos molekularész egy antraciklin antibiotikum és a ligandum egy antitest.
Az egyik előnyös foganatosításnak megfelelően az antraciklin a konjugátum linker részéhez az adriamicin 13ketocsoportjával kialakított acil-hidrazon kötésen át kapcsolódik. Az antitestet aztán a linkeren keresztül kapcsoljuk az antraciklin vegyülethez. Egy különösen előnyös megvalósítás szerint az antitesten levő redukált diszulfidcsoport [azaz szabad szulfhidrilcsoport (-SH csoport)] révén jön létre a kapcsolódás.
-5A legelőnyösebb esetben az antraciklinek közé tartozó gyógyászatilag hatásos molekularész az adriamicin, a Michael addíciós receptor, amelyből a Michael addíciós adduktum alakítható ki, maleimidocsoport, és az antitest rész egy kimérés antitest.
A találmány szerinti konjugátumok megtartják mind a specifitásukat, mind a gyógyászati hatásukat a kiválasztott cél sejtpopuláció kezelésekor. A konjugátumok gyógyászati készítmények formájában használhatók, amelyek az (I) általános képletű vegyület hatásos mennyiségét gyógyászatilag elfogadható hordozó-, hígító- vagy segédanyagokkal együtt tartalmazzák.
A mellékelt ábrákon a következők láthatók:
Az l(a) ábra szulfhidrilcsoportot tartalmazó antitest SPDP reagenssel való előállítását szemlélteti.
Az l(b) ábra olyan találmány szerinti immunkonjugátum előállításának reakcióvázlatát mutatja, amelyhez ligandumként SPDP reagenssel bevitt szulfhidrilcsoportot tartalmazó antitestet használunk.
Az l(c) ábrán olyan találmány szerinti immunkonjugátum előállítása látható, amelyben a ligandum iminotiolánnal bevitt szulfhidrilcsoportot tartalmazó antitest.
A 2.ábra relaxált antitest DTT reagenssel végzett előállítását és a találmány szerinti immunkonjugátum szintézisét szemlélteti.
A 3.ábra a találmány szerinti BR64-adriamicin konjugátumnak az L2987 daganattal szemben mutatott in vitro citotoxicitási adatait tartalmazza.
A 4.ábrán a találmány szerinti BR64-adriamicin konju• · · · • * · · • · · · · ··
-6gátumnak az L2987 daganattal szemben mutatott in vívó citotoxicitási adatai láthatók.
Az 5.ábra BR64, adriamicin és egy nem-kötődő konjugátum (SN7-adriamicin) alkalmazásával végzett kombinációs terápia összehasonlító in vivő citotoxicitási adatait mutatja.
A 6.ábrán a találmány szerinti bombezin-adriamicin konjugátum H345 daganattal szemben mutatott in vivő citotoxicitási adatai láthatók.
A 7.ábra adriamicin relaxált kimérés BR96 és SPDP reagenssel bevitt szulfhidrilcsoportokat tartalmazó kimérés BR96 antitestekkel alkotott konjugátumainak in vitro citotoxicitási adatait tartalmazza.
A 9-11.ábrákon az adriamicin és a relaxált kimérés BR96 antitest konjugátuma, a szabad adriamicin és egy nem-kötődő konjugátum L2987 daganattal szemben mutatott in vivő hatásának összehasonlítása látható.
A 12.ábra az adriamicin és a relaxált kimérés BR96 antitest konjugátumának az MCF7 humán melldaganattal szemben kifejtett in vivő citotoxicitási adatait mutatja.
A 13.ábrán az adriamicin és a relaxált kimérés BR96 antitest konjugátumának az RCA humán vastagbéldaganattal szemben kifejtett in vivő toxicitási adatai láthatók.
A 14.ábra azt mutatja, hogyan függ a DTT és antitest mólarányától az -SH titer egy relaxált antitest közömbös atmoszférában való előállítása során.
A most következő részletes leírás a találmány még teljesebb mértékben való megértését kívánja elősegíteni.
A jelen találmány olyan új gyógyhatású konjugátumokat bocsát rendelkezésre, amelyek egy, a kiválasztott sejtpo-7 puláció felismerésére képes ligandumból, egy gyógyhatású anyagból és egy tioétert tartalmazó linkerböl állnak, amely a ligandumot a gyógyhatású anyaghoz köti. A gyógyhatású anyag a linkerhez egy acil-hidrazon kötésen át kapcsolódik. Egyik előnyös megvalósítás szerint a ligandum a linkerhez közvetlenül, egy tioéter kötéssel kapcsolódik. Ezt a kötést általában egy, a ligandumon vagy például az SPDP reagensből vagy iminotiolánból származtatható, a következőkben ismertetett spacer-részen levő reakcióképes szulfhidril (-SH) csoport és egy Michael addíciós receptor reakciója révén alakítjuk ki.
A találmány kiterjed ezen gyógyászatilag hatásos konjugátumok és gyógyászati készítmények előállítási eljárásaira és magába foglal alkalmas módszereket a konjugátumok célsejtekhez juttatására is, amely sejtekben a biológiai folyamat módosítása kívánatos, például rákos betegségek, vírus által okozott vagy más patogén fertőzések, autoimmun rendellenességek vagy más betegállapotok kezelésében.
A konjugátumok legalább egy gyógyászatilag hatásos molekulát tartalmaznak, amely egy találmány szerinti linkerrel kapcsolódik a felismerésre képes ligandum molekulához, amely a kívánt célsejt-populációval lép reakcióba. A ligandum molekula lehet immunológiailag reakcióképes fehérje, például antitest vagy annak részlete (fragmentuma), immunológiailag nem reakcióképes fehérje vagy peptid ligandum, így például bombezin vagy egy kötő ligandum, amely a sejttel kapcsolatos receptort felismeri, ilyen a lektin, vagy egy szteroid molekula.
Mint az előzőekben említettük, a találmány szerinti konjugátumok (I) általános képlettel jellemezhetőek, ahol a képletben
D gyógyászatilag hatásos molekularész;
n értéke 1-10;
p értéke 1-6;
Y oxigénatom vagy -NHg+ci- csoport;
z értéke 0 vagy 1;
q értéke kb. 1 - kb. 10;
X egy ligandum; és
A Michael addíciós adduktum molekularész.
A találmány jobb megértése érdekében a gyógyászati hatású anyagokat és a ligandumokat külön tárgyaljuk. A konjugátumok előállítására használt közbenső termékeket és a konjugátumok szintézisét azt követően ismertetjük.
A szakember számára világos, hogy a jelen találmánynak megfelelően a gyógyászatilag hatásos molekula és a ligandum egy acil-hidrazon kötéssel kapcsolódik össze, egy Michael addíciós adduktumon és egy tioéter-tartalmú linkeren keresztül. A jelen találmány szerinti linkereket bármely kívánt gyógyászati hatású, biológiai hatást módosító vagy megelőzés céljára alkalmas molekulával együtt alkalmazhatjuk, az egyetlen korlátozás, hogy a konjugátum előállítására használt gyógyhatású anyag képes legyen hidrazon-kötés képzésére. Előnyösen, a hidrazon előállításához a gyógyhatású molekulának egy reakcióba vihető karbonilcsoportot, így például reakcióképes aldehid- vagy ketoncsoportot {itt [D(C=O)] csoport formájában ábrázoljuk} kell tartalmaznia, amely alkalmas hidrazon, azaz -C=N-NH- kötés létesítésére. A gyógyhatású molekula hidrazonkötését a képletben [D=N-NH molekularészként jelöljük. Emellett a reakcióba vihető csoport és a linker reakciójának előnyösen nem szabad rontania a végtermék konjugátum terápiás hatását, akár az eredményezi a hatást, hogy a gyógyhatású anyag a hatás kiváltása szempontjából kívánatos helyen felszabadul, akár maga az érintetlen konjugátom felelős a hatásért.
A szakemberek számára ismert, hogy olyan gyógyhatású vegyületekben, amelyekből a reakcióba vihető karbonilcsoport hiányzik, a szakterületen ismert módszerekkel ez a csoport kialakítható. Nyilvánvaló, hogy az ilyen származékból készült konjugátumnak meg kell tartania a terápiás hatást, amikor az aktív helyre kerül, akár az érintetlen konjugátumnak köszönhető a hatás, akár másnak. Más esetben viszont a származékká alakított gyógyhatású anyagnak vagy, például a gyógyhatású anyaggá alakítható származéknak (prodrug-nak) kell olyan formában felszabadulnia, hogy a hatás kifejtésének helyén a gyógyhatású anyag terápiásán aktív formában legyen jelen.
A jelen találmány szerinti linkerek lényegében a gyógyhatású anyagok minden csoportja, például bakteriumellenes, vírusellenes, gombaellenes, rákellenes mikopolazmaellenes és hasonló hatású vegyűletek esetében használhatók. A gyógyhatású anyagok ily módon előállított konjugátumai ugyanazon célokra használhatók, mint maguk a megfelelő gyógyhatású anyagok, és a konjugátumok hatékonysága a kindulási hatóanyagokét a ligandumban rejlő azon képesség miatt múlják felül, amely a gyógyhatású anyagot ahhoz a kívánt sejthez szállítja, ahol annak jelenléte különösen hasznos.
Továbbá, mivel a találmány szerinti konjugátumokat egy • ·
-10adott biológiai válasz módosítására lehet alkalmazni, a hatóanyag-rész nem korlátozódik a klasszikus kémiai terápiái szerekre. Például a hatóanyagrész lehet fehérje vagy polipeptid is, amely a kívánt biológiai hatással rendelkezik, így például fehérjeként toxinok, többek között az abrin , a ricin A, a pseudomonas exotoxin vagy diphtheria toxin; fehérjék, például a tumor necrosis factor, alfa-interferon, béta-interferőn, ideg növekedési faktor, vérlemezkéböl származó növekedési faktor, szövet plazminogén aktivátor; vagy biológiai válasz módosítók, például limfokinek, interleukin-1 (IL-1), interleukin-2 (IL-2), interleukin-6 (IL-6), granulocita makrofág telep stimuláló faktor (granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF), granulocita telep stimuláló faktor (granulocyte colony stimulatin factor, G-CSF) vagy más növekedési faktorok jöhetnek számításba.
A jelen találmányban alkalmazott előnyös gyógyhatású anyagok citotoxikus szerek, különösen olyanok, amelyeket a rákterápiában használnak. Ilyen anyagok többek között, általában az alkilezőszerek, burjánzásellenes szerek, tubulinkötő anyagok és hasonlók. A citotoxikus anyagok előnyös csoportjába például az antraciklin hatóanyagcsalád, a vinkaalkaloidok, a mitomicinek, bleomicinek, citotoxikus nukleozidok, a pteridinek családja, diinenek és a podofillotoxinok tartoznak. Ezen csoportok különösen hasznos tagjai például az adriamicin, karminomicin, daunorubicin, aminopterin, metotrexát, metopterin, diklór-metotrexát, mitomicin C, porfiromicin, 5-fluor-uracil, 6-merkapto-purin , citozinarabinozid, podofillotoxin vagy podofillotoxin-származékok, β· ··· * , • ··· · ··* például az etopozid vagy etopozid-foszfát, melfalan, vinblasztin, vinkrisztin, leurozidin, vindezin, leurozin és hasonlók. Mint az előzőekben említettük, a szakember a kívánt vegyületet kémiailag módosíthatja annak érdekében, hogy a találmány szerinti konjugátumok előállítására szolgáló reakció könnyebben elvégezhető legyen.
A jelen találmány szerint gyógyhatású anyagként használható citotoxikus szerek különösen előnyös csoportjába az alábbi hatóanyagok tartoznak:
a (2) általános képletű metotrexátok, ahol a képletben aminocsoport vagy hidroxicsoport;
R? hidrogénatom vagy metilcsoport;
r8 hidrogénatom, fluor-, klór-, bróm- vagy jódatom; hidroxicsoport vagy olyan molekularész, amely a karbonilcsoportot egy karbonsav sóvá egészíti ki;
a (3) általános képletű mitomicinek, ahol a képletben R^hidrogénatom vagy metilcsoport;
a (4) általános képletű bleomicinek, ahol a képletben RXX hidroxicsoport, aminocsoport, 1-3 szénatomos alkilamino-csoport, di(l-3 szénatomos)alkil-amino-csoport,
4-6 szénatomos polimetilén-amino-csoport, -NHCH2CH2CH2S(+)(CH3)2; vagy
-NHCH2CH2CH2CH2NH-C(=NH)-NH2 képletű csoport;
az (5) képletű melfalan;
a (6) képletű 6-merkapto-purin;
a (7) képletű citozin-arabinozid;
a (8) általános képletű podofilotoxinok, ahol a képletben r!3 hidrogénatom vagy metilcsoport;
metilcsoport vagy tienilcsoport;
vagy e vegyületek foszfátsói;
a (9) általános képletű vinkaalkaloidok, ahol a képletben
R±o hidrogénatom, metilcsoport vagy formilcsoport;
amikor R1? és R18 külön jelentéssel bír,
R^8 hidrogénatom és R18 és egyike etilcsoport, és a másik hidrogénatom vagy hidroxicsoport;
amikor R1? és R18 a szénatommal, amelyhez kapcsolódnak oxirángyúrüt alkot, akkor R18 etilcsoport;
R18 hidrogénatom, (1-3 szénatomos)alkil-CO-csoport vagy klóratommal helyettesített (1-3 szénatomos)alkil-COcsoport;
a (10) általános képletű difluor-nukleozidok, ahol a képletben (a), (c)vagy (d) általános képletű vagy (b) vagy (e) képletű csoport, és ezekben a képletekben hidrogénatom, metilcsoport, bróm-, fluor-, klórvagy jódatom;
hidroxicsoport vagy aminocsoport;
r24 hidrogénatom, bróm-, klór- vagy jódatom;
a (11) általános képletű antraciklin antibiotikumok, ahol a képletben
-CH3, -CH2OH, -CH2OCO(CH2 )3CH3 vagy -CH2OCOCH(OC2H5 )2 csoport;
R3 -OCH3, -OH vagy -H;
R4 -NH2, -NHCOCF3, 4-morfolinil-, 3-ciano-4-morfolinil-, 1-piperidinil-, 4-metoxi-l-piperidinil-, benzil-amino-, dibenzil-amino-, ciano-metil-amino- vagy l-ciano-2metoxi-etil-amino-csoport;
Rg -OH, -OTHP vagy -H; és
-13Rg -OH vagy -H, feltéve, hogy
Rg nem -OH, amikor Rg -OH vagy OTHP csoport.
A fentebb említett (11) általános képletű antraciklin antibiotikumok a találmány szerinti legelőnyösebb gyógyhatású anyagok. A szakember számára nyilvánvaló, hogy ez az általános képlet magába foglal olyan vegyületeket, amelyek gyógyszerek vagy olyan gyógyhatású származékok, amelyek a szakterületen generikus vagy triviális nevükön ismertek. Az alábbi I. Táblázatban néhány olyan antraciklin gyógyszert említünk, amelyeket különösen előnyösen használhatunk fel a jelen találmány szerint, és megadjuk generikus vagy triviális nevüket.
I.Táblázat
Vegyület Rj R 3 r4 r5 Rg
Daunorubicin3, 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 i co 1 W 1 o och3 nh2 OH H
Adriamicinb ch2oh och3 nh2 OH H
Detorubicin ch2ococh(oc2h5)2 och3 nh2 OH H
Karminomicin ch3 oh nh2 OH H
Idarubicin ch3 H nh2 OH H
Epirubicin ch2oh och3 nh2 H OH
Eszorubicin ch2oh och3 nh2 H H
THP ch2oh och3 nh2 OTHP H
AD-3 2 ch2oco(ch2)3ch3 och3 nhcocf3 OH H
aDaunomicin a daunorubicin másik neve a Doxorubicin az adriamicin másik neve
Az I.Táblázatban szereplő vegyületek közül az adriami• · ·
-14cin a legelőnyösebb. Az adriamicin, amelyre a leírásban az ADM rövidítés formájában is utalunk, olyan (11) általános képletű antraciklin, amelyben Rj -CHgOH, Rg -OCHg, R4 -NHg, Rg -OH csoport és Rg -H.
A szakemberek tudják, hogy a ligandum magába foglal bármely olyan molekulát, amely specifikusan kötődik vagy reakcióképesen kapcsolódik vagy komplexet képez egy receptorral vagy más ilyen tulajdonságú, egy adott célsejt-populációval társuló molekularésszel. Ez a sejttel reakcióba lépni képes molekula, amelyhez a konjugátumban a gyógyhatású anyag a linkeren keresztül kapcsolódik, bármely olyan molekula lehet, amely a gyógyászatilag vagy más biológiai úton módosítani kívánt sejtpopulációhoz képes kötődni, vele komplexet képezni vagy reakcióba lépni, és szabad reakcióképes szulfhidrilcsoportot (-SH csoportot) tartalmaz vagy rajta ilyen csoport kialakítható. A sejttel reakcióba lépni képes molekula a terápiásán hatásos molekularészt a célsejt-populációhoz szállítja, amellyel a ligandum reagál.
Ilyen molekulák lehetnek többek között, de nem kizárólag, nagy (általában 10 000 daltonnál nagyobb) molekulatömegű fehérjék, például antitestek, kisebb (általában 10 000 daltonnái kisebb) molekulatömegű fehérjék, polipeptid vagy peptid ligandumok és nem-peptid ligandumok.
Az olyan, immunológiailag nem reakcióképes fehérje, polipeptid vagy peptid ligandumok közül, amelyek a jelen találmány szerinti konjugátumok előállítására használhatók, a korlátozás szándéka nélkül a transzferrint, az epidermális növekedési faktorokat (epidermal growth factor, EGF), bombezint, gasztrint, gasztrint felszabadító peptidet, vérle···
-15mezkéböl származó növekedési faktort, az IL-2-t, IL-6-ot, a tumor növekedési faktorokat (tumor growth factor, TGF) , például a TGF-alfa-t és TGF-bétát, vakcinia növekedési faktort (vaccinia growth factor, VGF), inzulint és az inzulinszerü növekedési faktor I-et és ΙΙ-t említhetjük. A nempeptid ligandumok lehetnek például szteroidok, szénhidrátok és lektinek is.
Az immunológiailag reakcióképes ligandumok antigénfelismerő immunglobulinok (amelyeket antitest-eknek is nevezünk) vagy azok antigén-felismerő fragmentumai. Különösen előnyös immunglobulinok azok, amelyek a daganattal társuló antigént felismerik. Az immunglobulin meghatározás az immunglobulinok bármely osztályára vagy alosztályára, így IgG-re, IgA-ra, IgM-re, IgD-re vagy IgE-re vonatkozhat. Előnyösek azok az immunglobulinok, amelyek az IgG osztályba tartoznak. Az immunglobulinok származhatnak bármely fajtól, előnyösek azonban a humán-, egér- vagy nyúleredetűek. Az immunglobulinok emellett lehetnek poliklonálisak vagy monoklonálisak, az utóbbiak az előnyösek.
Mint már említettük, a szakember számára természetes, hogy a találmány kiterjed az antigént felismerő immunglobulin fragmentumok alkalmazására is. Ilyenek például a Fab’, F(ab’)2> Fv vagy Fab fragmentumok vagy más antigént felismerő immunglobulin fragmentumok. Ezeket a fragmentumokat például proteolitikus enzimekkel, például pepszinnel vagy papainnal végzett emésztéssel, reduktív alkilezéssel vagy rekombinás technikákkal állíthatjuk elő. Az ilyen immunglobulin fragmentumok előállításához szükséges anyagok és módszerek a szakterületen jól ismertek [ld. például Parham,
-16·♦· · · ♦ · · ·«· · ··
J. Immunology, 131, 2895 (1983); Lamoyi és munkatársai, J.
Immunological Methods, .56., 235 (1983); Parham, J. Immunological Methods, 53, 133 ( 1982); és Matthew és munkatársai,
J. Immunological Methods, .50., 239 (1982)].
Az immunglobulin lehet kimérás antitest, amely fogalom a szakterületen ismert, vagy bifunkciós vagy hibrid antitest is, amely egyrészt például egy tumorantigénre specifikus, másrészt egy másik cél, például egy olyan haptén felismerésére képes helyet tartalmaz, amely maga letális az antigént hordozó daganatsejtre nézve vagy amelyhez ilyen hatású reagens kapcsolódik. Más esetben a bifunkciós antitest a terápiásán vagy biológiailag módosítandó sejt tumorantigénjének különböző epitópjaira (determináns csoportjaira) lehet specifikus. Mindenesetre, a hibrid antitestek kettős specifitásúak, előnyösen egy vagy több olyan kötőhellyel rendelkeznek, amely a kiválasztott hapténre specifikus, és egy vagy több olyannal, amely a cél antigénre, például tumorantigénre, fertőző szervezetre vagy más betegállapotra jellemző antigénre specifikus.
Biológiailag bifunkciós antitesteket ismertetnek például az EP-A-0 105 360 számon nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentésben, amelyre ezúton hívjuk fel a szakemberek figyelmét. Ilyen hibrid vagy bifunkciós antitesteket biológiai úton, például sejtfúziós módszerrel vagy kémiailag, különösen térhálósító vagy diszulfid hidat képző reagensekkel állíthatunk elő, és ehhez a teljes antitesteket és/vagy azok fragmentumait használhatjuk. Az ilyen hibrid antitestek előállítását például a WO83/03679 számon (1983. október 27-én) nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi
-\Ί bejelentéseben és a 0 217 577 számon (1987. április 8-án) nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentésben ismertetik, amely iratokra ezúton is utalunk. Különösen előnyösek azok a bifunkciós antitestek, amelyeket biológiai úton polidomából vagy kvadrómából, vagy szintetikusan, térhálósító reagensekkel, például bisz(maleimido)-metil-éterrel (BMME) vagy más, a szakember számára ismert reagenssel állíthatók elő.
Emellett az immunglobulin lehet egyetlen láncból álló antitest (single chain antibody, SCA) is, amely például egyetlen láncot tartalmazó Fv fragmentum (scFv), és benne a variábilis könnyű doméneket (V^) és a variábilis nehéz (Vjj) doméneket egy peptid híd vagy diszulfid kötések kapcsolják össze. Az immunoglobulin állhat egyetlen VH doménből is (dAbs), amely antigén megkötésére képes [ld. például G. Winter és C. Milstein, Natúré, 349, 295 (1991); T. Glockshuber és munkatársai, Biochemistry, 29., 1362 (1990); és E. S. Ward és munkatársai, Natúré, 341. 544 (1989)].
A jelen találmányban különösen előnyösen használhatók a kimérás monoklonális antitestek, előnyösen azok amelyek tumorantigénekre specifikusak. A jelen leírásban a kimérás antitest olyan monoklonális antitestet jelent, amely egy variábilis régiót, például egy bizonyos forrásból vagy fajból származó kötörégiót és legalább egy, másik forrásból vagy fajból származó konstans régiórészletet tartalmaz; előállításuk általában rekombináns DNS technikákkal történik. A találmány szerinti bizonyos alkalmazási területeken, különösen a humán terápiában egérből származó variábilis régiót és emberből származó konstans régiót tartalmazó • 4·4
-18kimérás antitesteket részesítünk előnyben, mivel az ilyen antitestek könnyen előállíthatok, és kevésbé immunogének, mint a tisztán egéreredetű monoklonális antitestek. Ilyen egér/humán kimérás antitesteket kapunk termékként egér immunglobulin variábilis régiókat kódoló DNA szegmensekből és humán immunglobulin konstans régiókat kódoló DNS szegmensekből álló immunglobulin gének kifejezésével. További, a találmány körében alkalmazható kimérás antitestek azok, amelyekben az osztály vagy az alosztály módosult vagy megváltozott az eredeti antitesthez képest. Az ilyen kimérás antitesteket osztályt-váltott antitestekének is nevezik. Ilyen kimérás antitestek előállítására a szokásos rekombináns DNS és géntranszfekciós módszerek alkalmazhatók, [ld. például Morrison, S. L. és munkatársai, Proc. Nat’l Acad. Sci., 81, 6851 (1984)].
A kimérás antitest meghatározás körébe tartozik a humanizált antitest fogalma is, amely olyan antitesteket jelent, amelyekben a szerkezetet vagy a komplement determináns régiót (complementarity determining regions, CDR) módosították, és ennek eredményeként az eredeti immunglobulinétól eltérő specifitású immunglobulin komplement determináns régiót tartalmaz. Előnyös esetben úgy állítunk elő humanizált antitestet, hogy egér CDR-t oltunk egy humán antitest keretrégiójába [ld, például L. Riechmann és munkatársai, Natúré, 332, 323 ( 1988); M. S. Neuberger és munkatársai, Natúré, 314, 268 (1985)]. Különösen előnyösek azok a komplement determináns régiók, amelyek a fentebb, a kimérás és bifunkciós antitestekkel kapcsolatban említett antigéneket felismerő szekvenciával rendelkeznek. A módosí-
-19tott CDR-t tartalmazó antitestekkel kapcsolatban az olvasó figyelmébe a 0 239 400 számon (1987. szeptember 30-án) nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentésben foglaltakat ajánljuk, amelyekre ezúton is utalunk.
A szakember számára nyilvánvaló, hogy előállítható olyan bifunkciós kimérés antitest, amely a kimérás vagy humanizált antitest alacsony immunogenitásának valamint a fentebb leírt bifunkciós antitestek, különösen a gyógyászati kezelés során megmutatkozó flexibilitásának előnyeivel rendelkezik. Ilyen bifunkciós kimérás antitesteket szintetizálhatunk például kémiai úton, térhálósító reagensek felhasználásával és/vagy a fentebb említett típusú rekombináns módszerekkel. A jelen találmány semmiképpen nem korlátozódik az antitestek előállításának egyetlen speciális módszerére, bármilyen antitestről, így bifunkciós, kimérás, bifunkcióskimérás, humanizált antitestről vagy azok egy antigént felismerő fragmentumáról vagy valamely származékáról legyen is szó.
A fentiek mellett a találmány magába foglalja azokat az immunoglobulinokat (ahogy azt az előzőekben meghatároztuk) vagy immunoglobulin fragmentumokat is, amelyekhez aktív fehérje, például Neuberger és munkatársai által a W086/01533 számon (1986. március 13-án) nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi bejelentésben leírt típusú enzim kapcsolódik. A ilyen termékek ismertetésére ezúton utalunk.
A bifunkciós, fúziós, kimérás (ezen belül humanizált) és bifunkciós-kimérás (ezen belül humanizált) antitest konstrukciók antigénfelismerő fragmentumokat is tartalmaznak. Az ilyen fragmentumok érintetlen bifunkcionális, kimérás, humanizált vagy kimérás-bifunkciós antitestek hagyományos, enzimatikus hasításával állíthatók elő. Ha azonban az érintetlen antitestek szerkezetük természete miatt ily módon nem hasíthatok, az említett konstrukciók immunglobulin fragmentumokból kiindulva készíthetők el; vagy, ha rekombináns technikát alkalmazunk, a DNS szekvenciát magát úgy alakíthatjuk, hogy a kívánt fragmentumot kódolja, amelyet kifejezés után in vivő vagy in vitro kombinálhatunk kémiai vagy biológiai úton, és így kapjuk meg az érintetlen immunglobulin kívánt fragmentumát. A fenti összefüggés következtében használjuk ez esetben is a fragmentum kifejezést.
Mint már említettük, az immunglobulin (antitest) vagy annak fragmentuma természetét illetően poliklonális vagy monoklonális lehet. A monoklonális antitestek az előnyös immunglobulinok. Az ilyen poliklonális vagy monoklonális antitestek előállítása az olyan szakemberek számára jól ismert, akik természetesen képesek a találmány szerint használható immunglobulinok előállítására [ld. például G. Kohler és C. Milstein, Natúré, 256, 495 (1975)]. Emellett hibridómák és/vagy az ilyen hibridómákkal előállítható monoklonális antitestek, amelyek a jelen találmány körében használhatók, nyilvánosan hozzáférhetők az ATCC (American Type Culture Collection) gyűjteményben (12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852) vagy a kereskedelemben, például a Boehringer-Mannheim Biochemicals cégtől (P.O.Box 50816, Indianapolis, Indiana 46250) beszerezhetők.
A találmány megvalósításához használható különösen előnyös monoklonális antitestek a tumorantigéneket felismerő
-21* *1 ···· ···· A * * ♦ ··· V <
· • ··« · ·» antitestek. Ezek közül, a korlátozás szándéka nélkül, példaként a következőket említjük:
A felismert Monoklonális Irodalmi hivatkozás antigén-hely antitestek
Tüdődaganatok KS1/4 N.M.Varki és munkatársai,
534,F8;604A9 Cancer Rés. 44:681,1984 F. Cuttitta és munkatársai,
Pikkelyes tüdő Gl, LuCa2, a G. L. Wright által szerkesztett Monoclonal Antibodies and Cancer című kézikönyvben (Marcel Dekker, Inc., NY., 161, 1984). Kyoizumi és munkatársai,
LuCa3, LuCa4 Cancer Rés., 45:3274,1985.
Kis sejtes TFS-2 Okabe és munkatársai,
tüdőrák Vastagbélrák 11.285.14 Cancer Rés., 45:1930,1985. G.Rowland és munkatársai,
14.905.55 Cancer Immunoi. Immunother.
NS-3a-22,NS-10 19:1, 1985 Z. Steplkewski és munkatár-
NS-19-9, NS-33a sai, Cancer Rés., 41:2723,
NS-52a, 17-1A 1981.
Karcinoembrio- MoAb 35 vagy Acolla, R. S. és munkatár-
nál is ZCEO25 sai, Proc. Natl. Acad. Sci.,
Melanoma 9.2.27 (USA), 77:563, 1980. T. F. Bumol és R. A. Reis-
féld, Proc. Natl. Acad
• ··· ···'
-22(a táblázat folytatása) p97
96.5
Antigén T65
T101
Ferritin
Antiferrin
R24
Neuroblasztóma
Pl 153/3
MIN 1
UJ13A
Sci., (USA), 79:1245, 1982. K. E. Hellstrom és munkatársai, Monoclonal Antibodies and Cancer, loc. cit. 31.oldal
Boehringer-Mannheim
P. O. Box 50816, Indianapolis, IN 46250 Boehringer-Mannheim,
P. O. Box 50816, Indianapolis, IN 46250
W. G. Dippold és munkatársai, Proc. Natl. Acad.
Sci., (USA), 77:6114, 1980 R. H. Kennet és F. Gilbert, Science, 203:1120, 1979.
J. T. Kemshead a Monoclonal Antibodies and Cancer című kézikönyvben, loc.cit. 49.oldal.
Goldman és munkatársai, Pediatrics, 105:252, 1984.
Glioma
BF7, GE2, CGI2
N. de Tribolet és munkatársai, a Monoclonal Antibodies and Cancer című kézikönyvben, loc. cit. 18.
oldal
Gangliozid L6
I.Hellstrom és munkatársai, • ·: :···
-23(a táblázat folytatása) kimérás L6
Lewis Y
BR64
Fukozilezett
BR96,
Proc. Natl. Acad. Sci., (USA), 83:7059 (1986); a 4,906,562 számú (1990. március 6.) és 4,935,495 számú (1990.június 19.) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások.
1986.október 27-én tett, 07/923,244 sorozatszámú, a a WO 88/03145 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi bejelentésnek megfelelő amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés.
1988. december 22-én tett, 07/289,635 számú, és az
1989. november 29-én tett, 07/443,696 számú, az 1990. június 27-én 0 375 562 számon nyilvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentésnek megfelelő amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés.
1989. június 30-án tett,
Lewis Y kimérás BR96
07/374,947 számú és az
1990. június 26-án tett, v r
-24: «··· • ··· * 4 • ··· (a táblázat folytatása)
Mellrák B6.2, B72.3
Oszteogén 791T/48
szarkóma 791T/36
Leukémia CALL 2
anti-idiotípusú
Méhrák OC 125
Prosztatarák D83.21, P6.2,
Turp-27
Veserák A6H, D5D
07/544,246 számú, az 1991. január 10-én WO 91/00295 számon nyilvánosságra hotott nemzetközi szabadalmi bejelentésnek megfelelő amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés.
D. Colcher és munkatársai, a Monoclonal Antibodies and Cancer című kézikönyvben, loc.cit. 121 oldal.
M. J. Embleton, ugyanott, 181.oldal
C. T. Teng és munkatársai, Láncét, 1:01, 1982
R.A. Miller és munkatársai,
N. Eng. J. Med., 306:517, 1982.
R. C. Bast és munkatársai, J. Clin. Invest., 68:1331, 1981.
J. J. Starting és munkatársai a Monoclonal Antibodies and Cancer, loc. cit. 253.oldal
P. H. Lángé és munkatársai,
Surgery, 98:143, 1985.
-25A legelőnyösebb megvalósítás esetében a konjugátumot tartalmazó ligandum a BR96 kimérás antitestből, a ChiBR96ból származik, amelyet az 1990. június 26-án tett 07/544,246 számú és az 1991. január 10-én WO 91/00295 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi bejelentésnek megfelelő amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés ismertet. A ChiBR96 egy internálódó egér/humán kimérás antitest, és mint említettük, humán karcinóma sejtek, így mell-, tüdő-, vastagbél- és méhrák sejtek által kifejezett fukozilezett Lewis Y antigénnel reakcióba lép. A kimérás BR96 és ChiBR96-ként azonosított antigént kifejező hibridómát 1990. május 23-án a Budapesti Egyezmény előírásainak megfelelően az ATCC gyűjteményben (American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852) deponáltuk. E hibridóma mintái az ATCC HB 10460 azonosítási számon férhetők hozzá. A ChiBR96 részben a forrását képező BR96-ból származik. A BR96-ot kifejező hibridómát 1989. február 21-én deponáltuk a Budapesti Egyezmény előírásai szerint az ATCC gyűjteményben, azonosítási száma HB 10036. A kívánt hibridómát tenyésztjük, és a kapott antitesteket a sejttenyészet felülúszójából standard eljárások alkalmazásával különítjük el (ld. például Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications című kézikönyvet, amelyet Hurell szerkesztett, CRC Press, 1982).
Egy másik nagyon előnyös esetben az immunkonjugátum a BR64 egér monoklonális antitestből származik, amelyet az 1988. december 22-én tett, 07/289,635 számú, és az 1989. november 29-én tett, 07/443,696 számú és az 1990. június 27-én, 0 375 562 számon nyilvánosságra hozott európai szaba• · ·
dalmi bejelentéssel ekvivalens amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben ismertetnek. Ez az antitest is internálódik, és a humán vastagbélből, mellből, méhből és tüdőből származó karcinómás sejtek által kifejezett Lewis Y antigénnel reakcióba lép. A BR64 antitestet kifejező és BR64-ként azonosított hibridóma 1988. november 3-án, a Budapesti Egyezmnény előírásainak megfelelően az ATCC gyűjteményben került deponálásra, és a HB 9895 azonosítási számon hozzáférhető. A hibridómát tenyésztjük és a kívánt antitestet a szakterületen jól ismert standard módszerekkel különítjük el; ezekre a módszerekre már korábban utaltunk.
Egy harmadik nagyon előnyös megvalósítás szerint az L6 egér monoklonális antitestből származik az immunkonjugátum, amely antitestet a 4,906,562 számú (1990. március 6.) és a 4,935,495 számú (1990. június 19.) amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások ismertetik. Az L6 egy neminternálódó antitest, amely a humán nem kissejtes tüdő-, mell-, vastagbél- vagy méhdaganatokból származó sejtek által kifejezett gangliozid antigénnel szemben reakcióképes. Az L6 antitestet kifejező és L6-ként azonosított hibridóma 1984. december 6-án a Budapesti Egyezmény előírásai szerint az ATCC gyűjteményben lett deponálva a HB 8677 azonosítási szám alatt. A hibridómát tenyésztjük, és a kívánt antitestet a fentebb említett standard módszerek segítségével elkülönítjük. Az L6 antitest kimérás formáját a 07/923,244 számú és az 1988. május 5-én a WO 88/03145 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi bejelentéssel ekvivalens amerikai egyesült államokbel szabadalmi leírás ismerteti.
-27Igy az immunglobulin vagy antitest kifejezés az immunglobuil/antitest vagy a fentebb említett szerkezetek minden formáját magába foglalja.
A találmány közbenső termékként egy gyógyhatású anyag Michael addíciós receptort és acil-hidrazont tartalmazó, (Ha) általános képletű származékát bocsátja rendelkezésre, amely képletben
D a gyógyhatású anyagból álló molekularész, n értéke 1 és 10 közötti egész szám, és
R egy Michael addíciós receptor, amelyeket az előzőekben már meghatároztunk.
A (Ha) általános képletű közbenső termékek közül különösen előnyösek és a találmány szerinti konjugátumok előállítása szempontjából értékesek a (Ilb) általános képletúek, a képletben
R! -CH3, -CH2OH, -CH2OCO(CH2)3CH3 vagy -CHgOCOCH(OCgHg)2 csoport;
R3 -OCH3 vagy -OH csoport vagy hidrogénatom;
R4 -NH2, -NHCOCFg, 4-morfolinil-, 3-ciano-4-morfolinil-,
1-piperidinil-, benzil-amino-, 4-metoxi-benzil-amino-, dibenzil-amino-, ciano-metil-amino- vagy l-ciano-2metoxi-etil-amino-csoport;
Rg -OH vagy -OTHP csoport vagy hidrogénatom;
Rg -OH csoport vagy hidrogénatom, feltéve, hogy Rg nem -OH csoport, amikor Rg -OH vagy -OTHP csoport;
n értéke 1 és 10 közötti egész szám; és
R Michael addíciós receptor molekularész.
A jelen találmányban használható legelőnyösebb közbenső termékek a (IIc) általános képlettel jellemezhetők, a képletben R^ , Rg, R4, Rg és Rg jelentése a (Ilb) képletnél megadott.
A találmányban közbenső termékként egy célzó ligandumot is haszálunk, amely szabad reakcióképes szulfhidrilcsoportot tartalmaz. A szulfhidrilcsoport lehet a természetes (natív) célzó ligandum része vagy közvetlenül a ligandumon vagy annak származékán kialakítható. A találmány szerinti konjugátumok előállításának előnyös módszere szerint a ligandumon vagy a módosított ligandumon levő szulfhidrilcsoport a (Ila) általános képletű közbenső termék Michael addíciós receptorával közvetlenül reagál a végső konjugátum keletkezése közben. Ezzel az eljárással általában kb. 1 és kb. 10 hatóanyagmolekula kapcsolható minden ligandumhoz. így az (I) általános képletben q értéke kb. 1 és kb. 10 között változhat .
Amikor a konjugátum kialakul, a Michael addíciós receptor-részből Michael addíciós adduktum lesz, ahogy ezt a részt a leírásban nevezzük. A szakember számára könnyen érthető, hogy például ha a (Ha) vagy (Ilb) általános képletű vegyületben a Michael addíciós receptor-rész egy maleinimido-molekularész, az (I) általános képletű végső konjugátum megfelelő Michael addíciós adduktum-része egy szukcinimido-molekularész lesz. így a Michael addíciós adduktum olyan molekularészre utal, amelyet akkor kapunnk, amikor az alábbiakban részletesebben meghatározott Michael addíciós receptoron egy Michael addíciós reakció megy végbe.
igy a találmány egy további megvalósításaként a fentebb meghatározott (I) általános képletű vegyületek előállítására szolgáltat eljárást, amely abból áll, hogy egy (Ha) általá-29 nos képletű vegyületet, amelyet az előzőekben már meghatároztunk, egy olyan ligandummal reagáltatunk, amely reakcióképes szulfhidrilcsoportot tartalmaz, vagy úgy módosítjuk vagy alakítjuk át, hogy ilyen csoportot tartalmazzon, majd kívánt esetben a terméket elkülönítjük. Az (I) általános képletű vegyületek előállításának ez az előnyös módja. Az (I) általános képletű vegyületek úgy is előállíthatok, hogy a gyógyhatású anyagot vagy annak módosított származékát a ligandumhoz, a módosított vagy származékává alakított ligandumhoz már kovalensen hozzákapcsolt acil-hidrazid-linker résszel közvetlenül reagáltatunk. Közelebbről,az (I) általános képletű vegyületek előállítására olyan eljárást bocsátunk rendelkezésre, amely szerint
a) egy (Ha) általános képletű vegyületet egy (III) általános képletű vegyülettel reagáltatunk; vagy
b) egy (IV) általános képletű vegyületet egy (V) általános képletű vegyülettel reagáltatunk, a képletekben D, η, p, Y, z, q, X, R és A jelentése a fenti, és kívánt esetben a terméket elkülönítjük.
A szakemberek számára nyilvánvaló, hogy a találmány szerinti vegyületek előállítása során a kiindulási vegyületek és közbenső termékek különbüző reakcióképes csoportjait védeni vagy blokkolni szükséges, mialatt a molekula más részein a kívánt reakciókat végrehajtjuk. Miután ezeket a reakciókat elvégeztük, vagy bármely kívánt időpontban, az ilyen védőcsoportokat rendszerint eltávolítjuk, például hidrolitikus vagy hidrogenolitikus módszerekkel. Az ilyen védőcsoportok bevitelére és későbbi eltávolítására alkalmas lépések szokásosak a szerves kémiában. A szakemberek fi• * ·
-30gyelmébe a Protective Groups in Organic Chemistry (szerk. McOmie, Plenum Press, N. Y., N. Y. (1973) és a Protective Groups in Organic Synthesis (szerk. Green, John Wiley and Sons, New York, New York, 1981) című munkákat ajánljuk, amelyek védőcsoportokra vonatkozó ismeretei hasznosak lehetnek a jelen találmány szerinti vegyületek előállításánál.
A használható aminó-védócsoportok közül az 1-10 szénatomos alkanoilcsoportokat, így a formil-, acetil-, diklór-acetil-, propionil-, hexanoil-, 3,3-dietil-hexanoil-, gamma-klór-butiril-csoportot; az (1-10 szénatomos)alkoxikarbonil- és (5-15 szénatomos)aril-oxi-karbonil-csoportokat, plldául a terc-butoxi-karbonil-, benzil-oxi-karbonil-, allil-oxi-karbonil-, 4-nitro-benzil-oxi-karbonil-és cinnamoil-oxi-karbonilcsoportot; a halogén-(1-10 szénatomos)alkoxi-karbonil-csoportokat, így a 2,2,2-triklór-etoxi-karbonil-csoportot és az 1-15 szénatomos aril-alkil- és alkenil-csoportokat, például a benzil-, fenetil-, allil- és tritilcsoportot említjük. Más, általánosan használt aminóvédőcsoportok azok az enaminok, amelyeket béta-ketoészterekkel, így metil- vagy etil-aceto-acetáttal állítunk 1A
o.
A karboxicsoportok védelmére használható csoportok többek között az 1-10 szénatomos alkilcsoportok, így a metil-, terc-butil- vagy decilcsoport; a halogén-(1-10 szénatomos)alkil-csoportok, így a 2,2,2-triklór-etil- és 2jód-etil-csoport; az 5-15 szénatomos aril-alkil-csoportok, így a benzil-, 4-metoxi-benzil-, 4-nitro-benzil-, trifenilmetil-, difenil-metil-csoport; az 1-10 szénatomos alkanoiloxi-metil-csoportok, például az acetoxi-metil- vagy propio• ο
-31noxi-metil-csoport; és a fenacil-, 4-halogén-fenacil-, allil-, dimetil-allil-, tri(l-3 szénatomos)alkil-szilil-, például a trimetil-szilil-csoport, béta-(p-toluolszulfonil)etil-, béta-(p-nitro-feni)l-tioetil-, 2,4,6-trimetil-benzil-, béta-(metil-tio)-etil-, ftalimido-metil-, 2,4-dinitrofenil-szulfenil-, 2-nitro-benzhidril- és hasonló csoportok.
Alkalmas hidroxi-védőcsoportok többek között például a formil-, klór-acetil-, benzil-, benzhidril-, tritil-, 4nitro-benzil-, trimetil-szilil-, fenacil-, terc-butil-, metoxi-metil- és tetrahidropiranilcsoport.
Általában a (Ha), (Ilb) vagy (IIc) általános képletű , a gyógyhatású anyag hidrazonját tartalmazó Michael addíciós receptor közbenső termék az alkalmazott Michael addíciós receptortól függően úgy állítható elő, hogy a gyógyhatású anyagot (vagy származékát) Michael addíciós receptort tartalmazó hidraziddal reagáltatunk az A) eljárásban leírt általános módszerrel (ld. A) reakcióvázlat). Az A) eljárás előnyös, ha a Michael addíciós receptor maleimido-molekularész.
A (Ila) általános képletű vegyület előállításánál eljárhatunk úgy is, hogy a gyógyhatású anyagot először egy hidraziddal reagáltatjuk a megfelelő hidrazonszármazék közbenső termékké, majd ezt a vegyületet egy Michael addíciós receptort tartalmazó molekulával visszük reakcióba a B) eljárásnak megfelelően (ld. B) reakcióvázlat).
Az A) és B) eljárásban D, n és R jelentése a fenti. A B) eljárásban L kilépőcsoport, például halogénatom, mezilát vagy tozilát, amely nukleofil szubsztitúciós reakcióra képes, ugyanakkor C olyan csoport, amely a Michael addíciós ·
-32receptort jó nukleofil reagenssé teszi. Különösen hasznos C csoportok például az alkálifém-ionok, így a N+, K+ vagy Li+.
A Michael addíciós receptor, mint azt a szakemberek tudják, olyan molekularész, amely képes egy nukleofil reagenssel reagálni, és egy, a Michael addíciós reakcióra jellemző nukleofil addíciós reakcióban résztvenni. Mint említettük, miután az addíciós reakció végbement, a Michael addíciós receptorra Michael addíciós aduktumként utalunk.
Az A) eljárásban általánosan használt Michael addíciós receptorok például alfa,béta-etilén-savak vagy alfa,bétatiosavak, azaz olyanok, amelyek -C=C-COOH, -C=C-C(O)SH, -C=C-C(S)SH vagy -C=C-C(S)OH molekularészt tartalmaznak; alfa,béta-etilén-észterek vagy tioészterek, amelyekben az alkilcsoport metil- vagy etilcsoporttól eltérő, ezek például -C=C-COOR, -C=C-C(S)OR, -C=C-C(S)SR vagy -C=C-C(O)-SR molekularészt tartalmaznak, ahol a képletekben R egy metil- vagy etilcsoporttól eltérő észterképző csoport; alfa,béta- etilén-amidok, -imidek, -tioamidok és -tioimidek (ezek lehetnek gyűrűsek vagy nyiltláncúak), ezek például -C=C-CONR2, -C=C-CONHCO-, -C=C-CSNR2, -C=C-CSNHCO- vagy -C=C-CSNHCSképletű molekularészeket tartalmaznak, attól függően, hogy a csoport nyiltláncú vagy gyűrűs, és amelyekben a CONR2 vagy -CSNR2 általános képletű csoportok primer, szekunder vagy tercier amid- vagy tioamidcsoportot jelentenek; alfa,bétaacetilén-savak vagy tiosavak, például azok amelyek -C=C-COOH, -C=C-C(S)OH, -C=C-C(S)SH vagy -C=C-C(O)-SH molekularészt tartalmaznak; alfa,béta-acetilén-észterek, például a -C=C-COOR, -C=C-C(S)OR, -C=C-C(S)SR vagy -CsC-C(O)-SR általános képletű molekularészt tartalmazók, ahol R egy metil- vagy etilcsoporttól eltérő észterképző csoport; alfa,béta-etilén-nitrilek, például a -C=C-C=N molekularésszel rendelkezők; a Michael addíciós reakció szempontjából reakcióképes ciklopropánszármazékok, például az 1-ciano-l-(etoxi-karbonil)-ciklopropán; valamely vinildimetil-szulfónium-bromid, például egy -C=C-S+(Me)2Br“ csoportot tartalmazó vegyület; alfa,béta-eti1én-szulfon, például egy -C=C-S(=0)2CH3 csoportot tartalmazó; alfa.bétaetilén-nitro-vegyületek, például amelyek -C=C-NC>2 csoportot tartalmaznak; alfa,béta-etilén-foszfónium-vegyületek, például amelyekben egy -C=C-P(=0)(R)
R általános képletű csoport van; olyan vegyület, amelyben -C=C-C=N molekularész található, ilyenek lehetnek aromás heterogyűrűs vegyületek, például a 2- vagy 4-vinil-piridin; vagy alfa,béta-helyzetben telítetlen tiónium-iont tartalmazó vegyületek, mint amilyen például a (12) képletű.
A B) eljárásban alkalmazott Michael addíciós receptorok például alfa,béta-etilén-aldehidek, így többek között a -C=C-CHO molekularészt tartalmazók; alfa,béta-etilén-ketonok, például a -C=C-C(=O)- molkeularészt tartalmazók; alfa,béta-etilén-észterek vagy -tioészterek, például amelyekben -C=C-COOR, -C=C-C(S)OR, -C=C-C(S)SR vagy -C=C-C(O=)-SR általános képletű csoport található, ezekben R egy észterképző metil- vagy etilcsoport; alfa,béta-acetilén-aldehidek vagy ketonok, például a -C=_C-CHO vagy -C5C-CO- molekularészt tartalmazók; alfa,béta-acetilén-észterek vagy -tioészterek, amelyekben például -C=C-COOR, -C=C-C(S)OR, -C=C-C(O)SR vagy -C=C-CSSR általános képletű csoport található, ahol R észterképzó metil- vagy etilcsoport .
A szakemberek nyilván ismernek más Michael addíciós receptorokat is, amelyek a jelen találmányban alkalmazhatók. A Michael addíciós reakcióval kapcsolatban az E. D. Bergman, D. Ginsberg és R. Pappo, Org. React. 10, 179-555 (1959) és D. A. Oare és C. H. Heathcock, Topics in Stereochemistry, Vol. 20 (szerk. E. L. Eliel és S. H. Wilen, John Wiley and
Sons, Inc. 1991) és az ezekben hivatkozott irodalmi helyeken publikált ismereteket ajánljuk az olvasó figyelmébe.
A (Ha), (Ilb) vagy (IIc) közbenső termékek előállításánál használt pontos reakciókörülmények a reakcióban alkalmazott gyógyhatású anyag és Michael addíciós receptor természetétől függően változnak. A találmány szerinti legelőnyösebb közbenső termék a (IIc) általános képlettel jellemezhető, amelyben a gyógyhatású anyagrész egy antraciklin és a Michael addíciós receptor maleimidocsoport. Mint már utaltunk rá, ezt a reakciót az A) eljárás szerint végezzük. A (tiolcsoporttal helyettesített, módosított vagy más) ligandummal végbemenő reakció során a Michael addíciós receptorként jelenlevő maleimidocsoport a végső konjugátumban szukcinimidocsoportként (mint Michael addíciós adduktumként) van jelen.
A szulfhidrilcsoportot tartalmazó ligandumok előfordulnak a természetben (azaz a ligandum nincs módosítva) vagy előállíthatók, például a) oly módon, hogy a ligandumot tiolcsoport bevitelére alkalmas reagenssel, így SMCC-vel vagy N-szukcinimidil-3-(2-piridil-ditio)-propionáttal (SPDPvel) reagáltatjuk, majd a terméket redukáljuk; b) a termé-35szetes ligandumοn iminotiolánnal (IMT-nal) végzett reakcióban alakítjuk ki a szulfhidrilcsoportot; c) egy szulfhidrilcsoportot tartalmazó aminosavmaradékot, például ciszteincsoportot addicionáltatunk a ligandumra, amennyiben az olyan fehérje-peptid vagy polipeptid, amelynek nincs reakcióképes és hozzáférhető szulfhidrilcsoportja; vagy d) egy természetes molekulában egy diszulfid-kötést redukálunk az ilyen célre alkalmas redukálószerek valamelyikével, például ditiotreittel (DTT-tel). A jelen találmány szerinti konjugátumokban használt antitestek szulfhidrilcsoportjának kialakítására ez utóbbi, (d) módszer a legelőnyösebb.
Amennyiben a szulfhidrilcsoport bevitelére SPDP vagy iminotiolán reagenst használunk, a szakember számára nyilvánvaló, hogy egy rövid csoportot (spacer-t) még be kell iktatnunk a Michael addíciós receptorrész és a ligandum közzé az (I) általános képletű konjugátumba. Ilyen esetben z értéke 1 az (I) általános képletű vegyületben. Amikor a ligandumon található szabad szulfhidrilcsoportot közvetlenül használjuk, például DTT-tel redukált ligandumot alkalmazunk, vagy reakcióképes maradékot, például ciszteint iktatunk be a molekula ligandum részébe, az (I) általános képletben z értéke 0 lesz, és a ligandumot és a Michael addíciós részt egy közvetlen tioéter-kötés kapcsolja össze a molekulában.
A konjugátum előállítására a ligandumot, amelybe tiolcsoportot vittünk be vagy amely szabad reakcióképes szulfhidrilcsoportot tartalmaz, egy (Ha) általános képletű, Michael addíciós receptort tartalmazó hidrazonnal reagáltatjuk. Általában a reakciókörülményeket a ligandum, a gyógy-36 hatású anyag stabilitásától és a ligandumhoz kapcsolandó gyógyhatású molekularészek számától függően választjuk meg. A ligandumhoz kapcsolt gyógyhatású molekulák átlagos számát úgy változtathatjuk, hogy (1) a konjugátum ligandumrészén levő reakcióképes szulfhidrilcsoportok számához viszonyítva módosítjuk a (Ha) általános képletű gyógyhatású anyaghidrazon közbenső termék mennyiségét; vagy (2) a ligandumon levő reakcióképes szulfhidrilcsoportok számát módosítjuk oly módon, hogy (a) a fehérje, peptid vagy polipeptid ligandumot csak részlegesen redukáljuk, (b) a fehérjéhez, peptidhez vagy polipeptidhez csak korlátozott számban kapcsolunk például ciszteincsoportot, vagy (c) a kialakított tiolcsoportok számát korlátozzuk a tiolcsoport bevitelére használt reagens, például az SPDP vagy iminotiolán maximálisnál kisebb mennyiségének alkalmazásával. Noha az -SH titer változtatható, a szabad szulfhidrilcsoportok előnyös szintje, különösen egy relaxált antitest esetében a szóbanforgó reagensekkel kapható maximális érték. Az -SH titer változtatásának mértékét könnyen szabályozhatjuk a relaxált antitest eljárásban. Például a 14. ábra azt mutatja, hogy a BR64 és kimérás BR64 antitestek -SH titere hogyan változik a DTT-nek a ligandumra vonatkoztatott mólarányától függően 37°C-on, 1,5 órás reakcióidőt alkalmazva. A szakember számára természetes, hogy az immunglobulinok különböző osztályai és alosztályai eltérő számú olyan diszulfid-hidat tartalmaznak, amelyek például DTT reagenssel redukálhatok. Ily módon, amikor az antitestek vagy antitest-fragmentumok konjugációjának szintjét meg kívánjuk határozni, figyelembe kell venni a szabad -SH csoportokká redukálható diszulfid··· csoportok számát is. Általában azonban az előnyös (I) általános képletű konjugátum átlagosan kb. 1 és kb. 10 közötti számú gyógyhatású anyag molekulát tartalmaz ligandummolekulánként. A különösen előnyös átlagos gyógyhatású anyag/ligandum mólarány (MR) kb. 4 és kb. 8 között van.
Amikor a konjugátum reakciója befejeződött, a konjugátumot elkülöníthetjük és az általánosan ismert módszerekkel, dialízissel, kromatográfiásan és/vagy szűréssel tisztíthatjuk. A végeredményként kapott, konjugátumot tartalmazó oldatot a forgalombahozatal előtt liofilizálhatjuk hogy száraz, stabil formájú konjugátumot kapjunk, amelyet biztonságosan tárolhatunk és szállíthatunk. A liofilizált termékből steril vízzel vagy más, az adagolásra megfelelő hígítószerrel ismét oldatot készíthetünk. Eljárhatunk úgy is, hogy a végterméket például folyékony nitrogén alatt megfagyasztjuk, és felhasználás előtt felolvasztjuk és környezeti hőmérsékletre melegítjük.
A találmány egyik előnyös megvalósítása szerint a (Ha) általános képletű antraciklin-hidrazont úgy állítjuk elő, hogy az antraciklint maleimido-(1-10 szénatomos)alkilhidraziddal vagy sójával reagáltatjuk. Ezt a reakciót korábban, az A) eljárásnál vázoltuk. A reakciót általában két lépésben végezzük. Először a maleimido-(1-10 szén-atomos )alkil-hidrazidot vagy sóját állítjuk elő. Kromatográfiás és/vagy kristályosítás útján való tisztítás után a hidrazidot szabad bázis vagy sója formájában reagáltatjuk a kívánt antraciklinnel vagy antraciklinsóval. A reakcióoldat betöményítése után a maleimidocsoportot tartalmazó (Ha) általános képletű hidrazont összegyűjtjük, és kívánt esetben • ·
-38a szokásos módszerekkel tisztítjuk.
A (Ha) általános képletű hidrazont aztán egy szulfhidrilcsoportot tartalmazó antitesttel visszük reakcióba, amint azt korábban már leírtuk. Ha az antitestbe tiolcsoportot viszünk be például N-szukcinimidil-3-(2-piridil-ditio)-propionát (SPDP) reagens segítségével, a reakciót általában két lépésben végezzük: (1) az antitesten levő szabad aminocsoportot SPDP-tal reagáltatjuk; és (2) aztán az SPDP diszulfidot DTT reagenssel redukálva kapjuk a szabad -SH csoportot. Előnyösen a szulfhidrilcsoport bevitelének (1) lépésében a szulfhidrilcsoportok kívánt számától függően az SPDP/antitest mólarány kb. 7,5:1 és kb. 60:1, még előnyösebben kb. 7,5:1 és kb.30:l között változik, különösen a
BR64 esetében, és kb. 20:1 a BR96 esetében. A reakciót kb. O’C és kb. 50°C közötti hőmérsékleten, legelőnyösebben kb. 30-on végezzük. A reakciót kb. 6 és kb. 8 közötti pH-tartományban játszathatjuk le, a pH legelőnyösebb értéke kb. 7,4. A (2) redukciós lépésben előnyösen DTT reagenst használunk, és a DTT/SPDP mólaránya kb. 2,5:1 és kb. 10:1 között van. Legelőnyösebben a DTT/SPDP mólaránya kb. 5:1, és az SPDP móljainak száma annyi, amennyit az (1) reakciólépésben alkalmaztunk. A reakciót általában kb. 0°C és kb. 40°C közötti hőmérsékleten, előnyösen O’C-on végezzük, és általában kb. 20 perc alatt teljessé válik. A mostmár tiolcsoporttal rendelkező ligandum (a legelőnyösebb esetben antitest) oldatának dializálása és bepárlása után meghatározzuk a ligandumon a szulfhidrilcsoportok moláris koncentrációját, és a tiolcsoportot tartalmazó ligandumot a rajta levő reakcióképes szulfhidrilcsoportokat figyelembevéve a (Ha) • ·· általános képletű hidrazonal a kívánt mólarányban reagáltatjuk. Előnyösen az arány legalább kb. 1:1. Ezt a reakciót általában kb. O’C és kb. 25’C közötti hőmérsékleten, előnyösen kb. 4°C-on végezzük. A kapott konjugátumot aztán standard módszerekkel tisztíthatjuk. Ez a reakcióvázlat az la) és lb) ábrán látható.
Egy másik előnyös kiviteli módnak megfelelően a (Ha) általános képletű hidrazont a fentebb leírt módon állítjuk elő, majd az le) ábrán bemutatott módon egy olyan antitesttel reagáltatjuk, amelybe előzőleg iminotiolánnal (IMT) tiolcsoportot vittünk be. A ligandumon (előnyösen antitesten) a szulfhidrilcsoport IMT reagenssel való kialakítása egylépéses reakcióban történik. Az IMT/antitest arány kb. 30:1 és kb. 80:1 között változhat, előnyösen kb. 50:1. A reakciópartnereket kb. 30 perc és kb. 2 óra közötti ideig, előnyösen kb. 30 percig reagáltatjuk kb. 7 és kb. 9,5 közötti pH-tartományban, előnyösen kb. 9-es pH-η, és kb. 20’C és kb. 40°C közötti hőmérsékleten, előnyösen kb. 30’Con dolgozunk. A reakc ió terméket aztán a (Ha) általános képletű hidrazonnal kb. 0eC és kb. 25’C közötti hőmérsékleten, előnyösen kb. 4’C-on és kb. 7 és kb. 9,5 közötti pHértéken, előnyösen kb. 7,4-es pH-η reagáltatjuk. A konjugátumot aztán a szakterületen ismert standard módszerekkel, például dialízissel, szűréssel vagy kromatográfiás úton tisztítjuk.
Egy harmadik, különösen előnyös megvalósítási változat szerint a (Ha) általános képletű közbenső termék hidrazont a fentebb leírt módon állítjuk elő, majd egy olyan ligandummal, előnyösen antitesttel reagáltatjuk, amelyen legalább
-40·»:......: —· • *·· · · • · · •·· · *· egy diszulfidcsoportot legalább egy szulfhidrilcsoporttá redukáltunk. Egy különösen előnyös ligandum az alábbiakban ismertetett relaxált antitest. A szabad szulfhidrilcsoport előállítására használt előnyös redukálószer a DTT, noha a szakember tudja, hogy más redukálószerek is alkalmasak lehetnek erre a célra.
A relaxált antitestben egy vagy több, vagy előnyösen három vagy több diszulfidhíd van redukálva. Legelőnyösebben a relaxált antitest legalább négy redukált diszulfidhídat tartalmaz. A relaxált, azaz redukált antitest egyik előnyös előállítási eljárásában a redukciót, különösen ditiotreit alkalmazásakor, és a reakciótermék tisztítását oxigén távollétében, közömbös, például nitrogén- vagy argonatmoszférában végezzük. Ez az eljárás, mint ahogy azt az alábbiakban részletesen leírjuk, lehetővé teszi, hogy a redukció mértékét gondosan szabályozzuk. így ez az eljárás módot ad arra, hogy a szakember a ligandum kívánt redukciós szintjét, és így a találmány szerinti konjugátum előállításához rendelkezésre álló szabad -SH csoportok számát bármikor reprodukálja.
Eljárhatunk úgy is, hogy a reakciót környezeti körülmények között végezzük, azonban ilyenkor meglehetősen nagy mennyiségű redukálószert, előnyösen ditiotreitet kell használni a már redukált diszulfidkötések esetleges ujraoxidálódásának elkerülésére. Mindegyik esetben a termék tisztítá-sát a reakció végbemenetele után a lehető leghamarabb és legelőnyösebben közömbös gáz, így argon vagy nitrogén alatt végezzük el. A szabad szulfhidrilcsoportot tartalmazó ligán- dum előállításának előnyös módszere az, moszférikus oxigént kizárjuk a reakcióból. Bármelyik módszerrel előállított antitestet relaxált antitestnek nevezzük. Az így készült terméket azonban a reakciót követően a lehető leggyorsabban fel kell használni, vagy oxigén hatását kizáró körülmények között, előnyösen közömbös atmoszférában tárolni.
Abban az eljárásban, amelyben az oxigént a reakcióból kizárjuk (azaz a reakciót közömbös atmoszférában végezzük), a ligandumot 30 perc és 4 óra közötti ideig, előnyösen kb. 3 órán át inkubáljuk a ditiotreit moláris feleslegével. A DTT/ligandum aránya kb. 1:1 és kb. 20:1 között, előnyösen kb. 1:1 és kb. 10:1 között, legelőnyösebben kb. 7:1 és kb. 10:1 között változik, a szulfhidrilcsoportok kívánt számától függően. Az oxigén jelenlétében végzett redukció esetében a DTT/ligandum mólarány kb. 50:1 és kb. 400:1 között, előnyösen kb. 200:1 és kb. 300:1 között változik. Ez utóbbi reakciót kb. 1 és kb. 4 óra közötti ideig, előnyösen 1,5 órán át, kb. 20’C és kb. 50’C közötti hőmérsékleten, előnyösen kb. 37’C-on végezzük. A reakciót kb. 6 és kb. 8 közötti, előnyösen kb. 7 és 7,5 közötti pH alkalmazásával játszatjuk le. A terméket aztán a standard eljárásokkal, így dialízissel, szűréssel és/vagy kromatográfiás módszerrel tisztítjuk. Az előnyös tisztítási módszer a diaszűrés. Az -SH csoportok újraoxidálódásának elkerülésére a terméket a tisztítás és tárolás alatt előnyösen közömbös atmoszférában tartjuk.
A szakember számára magától értetődik, hogy a különböző ligandumok, különösen antitestek, eltérő mértékben lehetnek hajlamosak a redukcióra és/vagy újraoxidációra. Következésképpen előfordulhat, hogy a fentebb leírt redukciós körül-42ményeket módosítani szükséges ahhoz, hogy egy adott redukált ligandumot kapjunk. Továbbá, a kapcsoláshoz használható redukált antitest előállításának más módszerei is nyilvánvalóak a szakember számára. így, az (I) általános képletű konjugátum előállításához használt redukált ligandum, bármilyen módon is készült, a jelen találmány körébe tartozik.
Az (I) általános képletű konjugátum előállítására az antitest redukciójával kapott terméket egy (IIc) általános képletű közbenső termék hidrazonnal reagáltatjuk. A reakciót előnyösen közömbös atmoszférában, kb. O’C és kb. 10°C közötti, előnyösen 4’C-on, és kb. 6 és kb. 8 közötti pH-η, előnyösen kb. 7,4-es pH-η végezzük. Az immunkonjugátumot standard eljárásokkal, így dialízissel, szűréssel vagy kromatográfiásan tisztítjuk.
A találmány egy másik megvalósítása szerint egy (11) általános képletű antraciklin olyan ligandumhoz kötődik, amelyhez szabad szulfhidrilcsoportot hordozó molekularészt kapcsoltunk. Egy ilyen eljárásban a ligandum nem-antitest ligandum, például bombezin. A szülfhidrilcsoport például egy ciszteinmaradék része lehet, amelyet a természetes bombezinmolekulához kapcsolunk. Az antraciklin egy hidrazon molekularészen keresztül kötődik a Michael addíciós receptorhoz, amely aztán a módosított bombezinnel reagálva (I) általános képletű konjugátumot képez. A terméket aztán a szokásos módon, dialízissel, centrifugálással vagy kromatográfiásan tisztítjuk.
A jelen találmány kiterjed valamely betegség kezelésére vagy valamely biológiai funkció módosítására alkalmas eljárásra is, amely abban áll, hogy az arra rászoruló melegvérű
I
-43állatnak az (I) általános képletű konjugátum gyógyászatilag hatásos vagy a biológiai funkciót módosító mennyiségét beadjuk. Természetesen az alkalmazandó konjugátumot a kezelendő betegállapottól és a módosítandó biológiai rendszertől függően választjuk meg. A szakember képes a megfelelő ligandumot és gyógyhatású anyagot kiválasztani az olyan (I) általános képletű konjugátum előállításához, amely a betegség kezelésére speciálisan alkalmas vagy képes a biológiai funkció kívánt módosítására.
Egy előnyös megvalósítási mód szerint daganatos betegség kezelésére alkalmas eljárást bocsátunk rendelkezésre, amely abban áll, hogy az arra rászoruló melegvérű állatnak az (I) általános képletű citotoxikus konjugátum gyógyászatilag hatásos mennyiségét beajuk. Erre a célra különösen előnyös az (la) általános képletű immunkonjugátum, amelyben n, p, q, ζ, X, R|, Rg, R4, Rg és Rg jelentése a fenti.
A találmány ez utóbbi tárgyával kapcsolatban legelőnyösebb az az (la) általános képletű immunkonjugátum, amelyben a gyógyhatású anyag adriamicin, és a ligandum-részt a BR64, BR96, L6, kimérás BR64, kimérás BR96, kimérás L6 antitestek és ezek antigént felismerő fragmentumai közül választjuk. Ebben a vonatkozásban a legelőnyösebb ligandum a kimérás BR96, különösen a relaxált kimérás BR96 és ezek antigént felismerő fragmentumai.
A találmány szerinti konjugátumokat a betegnek gyógyászati készítmények formájában adjuk be, amelyek egy (I) általános képletű konjugátumot és gyógyászatilag elfogadható hordozó-, segéd- vagy hígítóanyagot tartalmaznak. A gyógyászatilag elfogadható kifejezés olyan szerekre utal,
-44• ·| ί··· ··*· ···· • ··* · · • · · · • ··· · ·.
amelyek a melegvérű állatok, például az ember, ló, sertés, borjú, egér, nyúl, macska vagy más emlős valamint madár vagy más melegvérű állat kezelésére vagy diagnózisának megállapítására használhatók. Az adagolás előnyösen parenterálisan, így intravénásán, intramuszkulárisan, szubkután, intraperitoneálisan vagy intralimfatikusan történik. Az ilyen készítmények előállításához a szakember számára ismert hordozó-, hígító- vagy segédanyagokat használunk. Ezzel kapcsolatban a Remington’s Pharmaceutical Sciences (16. kiadás, 1980, Mack Publishing Company, szerk. Osol és munkatársai) című munkára utalunk. Az ilyen készítmények tartalmazhatnak fehérjéket, például szérumfehérjéket, így humán szérumalbumint, puffereket vagy pufferelő anyagokat, például foszfátokat, más sókat vagy elektrolitokat és hasonló anyagokat. Alkalmas hígítószerek például a steril víz, izotóniás sóoldat, híg vizes dextrózoldat, poliolok vagy ezek elegyei, például glicerin, propilénglikol, polietilénglikol és hasonlók. A készítményekhez konzerválószereket, például fenetil-alkoholt, metil- és propil-parabént, timerozalt is adhatunk. Kívánt esetben a készítmény 0,05-0,20 tömeg% antioxidánst, például nátrium-metabiszulfitot vagy nátriumhidrogén-szulfitot tartalmazhat.
Az intravénás adagolásra alkalmas készítményeket előnyösen úgy állítjuk elő, hogy a betegnek beadandó dózis kb. 0,01 és kb. 1 g közötti mennyiségű kívánt konjugátumot tartalmazzon. Előnyösen a beadandó konjugátum mennyisége kb. 0,2 g és kb. 1 g között változik. A találmány szerinti konjugátumok széles dózistartományban hatásosak, többek között a kezelendő betegállapot vagy módosítandó biológiai hatás, a
-45konjugátum adagolási módja, a beteg kora, tömege és állapota valamint más, a kezelőorvos által meghatározott tényezőktől függően. így az egyes betegeknek beadandó mennyiséget egyénenként kell meghatározni.
A szakember számára nyilvánvaló, hogy noha a következő előállításokban és példákban speciális reagenseket és reakciókörülményeket határozunk meg, számos módosításra van lehetőség, amely a találmány szelleme és körébe tartozik. A következő előállítások és példák ezért a találmány további bemutatására szolgálnak.
1.Előállítás
2,5-Dihidro-2,5-dioxi-lH-pirrolo-l-hexánsav-hidrazid és trifluor-ecetsavas sója (Maleimidokaproil-hidrazid)
2,11 g (10 mmol) maleimido-kapronsavat [ld. például D. Rich és munkatársai, J. Med. Chem. 18., 1004 (1975); és O.
Keller és munkatársai, Helv. Chim. Acta, .58, 531 (1975)] 200 ml száraz tetrahidrofuránban feloldunk. Az oldatot nitrogén alatt keverjük, 4’C-ra hütjük és először 1,01 g (10 mmol) N-metil-morfolint, majd cseppenként 1,36 g (10 mmol) izobutil-klór-formiát 10 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát adjuk hozzá. 5 perccel később 1,32 g (10 mmol) terc-butilkarbazát 10 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát csepegtetjük a fenti elegyhez. A reakcióelegyet ezután egy fél órán át 4’C-on és 1 órán át szobahőmérsékleten tartjuk. Az oldószert lepároljuk, és a maradékot etil-acetát és víz között megosztjuk. A szerves réteget híg savoldattal, vízzel és híg • ρ..
* ··* • Λ
-46nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, és aztán az oldószert lepároljuk. Az anyagot gyors kromatográfiás eljárással tisztítjuk, eluálószerként metilén-klorid és metanol 100:l-töl 100:2-ig változó térfogatarányú gradienselegyét használjuk. Ily módon
2,24 g (70%) védett hidrazidot kapunk.
545 mg (2,4 mmol) ilyen anyagot 0-4°C hőmérsékleten trifluor-ecetsavban oldunk és az oldatot 8 percig keverjük. A savat nagy vákuumban, szobahőmérsékleten eltávolítjuk. A maradékot dietil-éterrel eldolgozzuk, így 334 mg (70%) maleimido-kaproil-hidrazid-trifluor-acetát-sót kapunk. Analízis céljára egy mintát metanol és dietil-éter elegyéből átkristályosítunk, így 102-105’C-on olvadó termékhez jutunk. Az NMR- és tömegspektrum adatok a szerkezetnek megfelelnek.
Elemanalízis a számított: C: 44,02%; talált: C: 44,16%
44,13%;
220 mg sót szilikagélen szabad bázissá, eluálószerként C10Hl5N3°3·0’8CF3COOH
H: 4,99%;
H: 4,97%
5,00%;
összegképlet alapján:
N: 13,28%;
N: 12,74%
12,75%.
kromatografálva alakítunk metilén-klorid:metanol:tömény ammónium-hidroxid = 100:5:0,5 térfogatarányú elegyét használjuk. A kapott 124 mg (80%) anyagot metilén-klorid és dietil-éter elegyéből kristályosítjuk, így 92-93eC-on olvadó végterméket kapunk. Az NMR- és tömegspektrum a szerkezetnek megfelel.
Elemanalízis a C10H15N3O3 összegképletre: számított: C: 53,33%; H: 6,67%; N: 18,67%;
talált:
C: 53,12%;
H: 6,67%;
N: 18,44%.
-47‘ *t t··· ***t ···· • «·· · .
• ·..· : ..·
2.Előállítás
Adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazon mg (0,075 mmol) adriamicin-hidroklorid, 23 mg (0,102 mmol) maleimido-kaproil-hidrazid, amely az 1.előállítás szerint készült, és 2-3 csepp trifluor-ecetsav 25 ml abszolút metanollal készült elegyét 15 órán át nitrogén alatt és fénytol elzárva keverjük. Ezen idő eltelte után a HPLC alapján (a mobil fázis 0,01 mólos ammónium-acetát:acetonitril 70:30 térfogatarányú elegye) szabad adriamicin már nincs jelen az elegyben. Az elegyet szobahőmérsékleten, vákuumban 10 ml-re bepároljuk és acetonitrillel hígítjuk. A tiszta oldatot kis térfogatra bepároljuk, a szilárd anyagot centrifugálással összegyűjtjük, és a terméket nagy vákuumban szárítva a cím szerinti vegyületet kapjuk. Az NMR-spektrum a szerkezettel összhangban van. Nagyfelbontású tömegspektrum a C31H42N4O13 összegképlet alapján: számított: 751,2827; talált: 751,2804.
A hidrazont adriamicinből és a hidrazid trifluorecetsavas sójából is előállítjuk. így az 1.előállításban leírt módon előállított 40 mg (0,12 mmol) sót és 50 mg (0,086 mmol) adriamicin-hidrokloridot 30 ml metanolban 15 órán át keverünk. Az oldatot 2 ml-re bepároljuk, majd acetonitrillel hígítjuk. A vörös szilárd anyagot centrifugálásssal összegyűjtjük, és vákuumban szárítjuk. 28 mg (43%) terméket kapunk, amely az NMR-spektrum és vékonyréteg-kromatogramm alapján azonos a fentebb leírttal. Nagyfelbontású tömegspektrum a C31H42N4O13 összegképlet alapján: számított: 751,2827; talált: 751,2819.
···· ♦ .........:
• ··« · • · · • ··· ·
-48IA) példa
SPDP reagenssel bevitt szulfhidrilcsoportot tartalmazó BR64 monoklonális antitest és adriamicin-maleimido-kaproilhidrazon kon.iugátuma ml, 10,37 mg/ml koncentrációjú (amit 280 nm-es UVfényben határozunk meg, 1,4 abszorbancia egység 1 mg fehérjével ekvivalens) BR64 antitest-oldathoz 1,3 ml 10 mmól koncentrációjú abszolút etanolos SPDP-oldatot adunk. A kapott oldatot 1 órán át 31-32“C-on inkubáljuk, majd jégben lehűtjük, és 1,3 ml, 50 mmol koncentrációjú, foszfáttal puffereit nátrium-klorid-oldattal (PBS) készült DTT oldatot adunk hozzá. A reakcióoldatot 1 órán át jégben tartjuk, majd dializáló csőbe visszük, és három alkalommal, 2-2 liter PBS-oldattal szemben dializáljuk legalább 8 órán át. A dialízis után a fehérje koncentrációját a fenti módon megmérjük, majd Ellman módszerével a szabad szulfhidrilcsoportok moláris koncentrációját meghatározzuk.
ml fenti fehérje-oldathoz 0,131 ml, 5 mg/ml koncentrációjú, a 2.előállításban leírt módon kapott adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazon dimetil-formamidos oldatát adjuk, és az elegyet 4’C-on 24 órán át inkubáljuk. Az oldatot három alkalommal (1000 ml) PBS-oldattal szemben dializáljuk legalább 8 órán át. Az oldatot centrifugáljuk, és a felülúszót Bio-beads™ SM-2 márkanevű nem-poláris semleges makropórusos polistirol polimer gyöngyökkel (Bio-Rad Labo ratories, Richmon, CA 94804) rázzuk egy pár órán át, majd Millex-GV márkanevű (Millipore Corporation, Bedford, MA 01730) 0,22 mikrométeres szűrőn szűrjük. Az antitest molekulákra eső adriamicin molekulák átlagos számát (MR) az • «0 ··· · ··*
-49adriamicin mennyiségének a 495 nm-en mutatott abszorpció alapján (epszilon =8030 cm-^M-^) és a fehérje mennyiségének a 280 nm-en mutatott, és az adriamicin 280 nm-en mért abszorpciójával korrigált abszorpciója alapján meghatározott értékéből számítjuk a következő képlet szerint:
A280(°’724 x a495>
antitest (mg/ml) = -------------------1,4
A termék MR értéke 5,38; szabad adriamicin 0,14%; fehérje hozam 60%.
1B) példa
SPDP reagenssel bevitt szulfhidrilcsoportot tartalmazó BR64 és adriamicin-maleimidokaproil-hidrazon konjugátuma
405 ml, 11,29 mg/ml koncentrációjú BR64 antitest-oldathoz keverés közben 22,3 ml abszolút etanollal készült, 10 mmólos SPDP oldatot adunk. Az elegyet 1 órán át 31-32C-on inkubáljuk, miközben gyengéden rázzuk, majd jégben 4’C-ra hútjük, és keverés közben 22,3 ml, 50 mmólos, PBS-oldattal készült DTT oldatot adunk hozzá. A reakcióoldatot 1 órán át jégben tartjuk, majd két egyenlő részre osztjuk, mindegyiket dializálócsőbe visszük, és hat alkalommal 6-6 liter PBS oldattal szemben dializáljuk legalább 8 órán át. Ezután a csövek tartalmát egyesítjük, és a fehérje és a szabad szulfhidrilcsoportok koncentrációját meghatározzuk (az -SH csoportok és fehérje mólaránya 8,5).
A mostmár -SH csoportot tartalmazó fehérje oldatához keverés közben az -SH csoportokéval ekvivalens moláris mennyiségű adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazint adunk
35,7 ml, 5 mg/ml koncentrációjú dimetil-formamiddal készült oldat formájában, majd az elegyet 4’C-on 24 órán át inkubáljuk. Az oldatot két egyenlő részre osztjuk, dialíziscsöbe visszük, és öt alkalommal , 6-6 liter PBS-oldattal szemben dializáljuk, legalább 8 órán át. A dialíziscsövek tartalmát egyesítjük, 0,22 mikronos cellulóz-acetát szűrőn átszűrjük, és a szúrletet 24 órán át Biobeads™ SM-2 (BioRAd laboratories, Richmond, CA 94804) márkanevű gyöngyökkel rázatjuk. Az oldatot 0,22 mikronos cellulóz-acetát szűrőn szűrjük, és meghatározzuk a fehérje (6,25 mg/ml) és az adriamicin (162,4 mikrogramm/ml) koncentrációját, amelyből a mólarány (MR) 7,18-nak adódik. A fehérje hozam 77%, a szabad, nem konjugált adriamicin 0,07%.
2. példa
SPDP reagenssel bevitt szulfhidrilcsoportot tartalmazó SN7 és adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazon konjugátuma
Az 1A) és IB) példákban leírt módon járunk el, a monoklonális SN7 antitesten, amely nem kötődik a BR64 által felismert antigénhez, SPDP reagenssel szulfhidrilcsoportokat alakítunk ki, és aztán adriamicin-maleimido-kaproilhidrazonnal reagáltatjuk, így olyan konjugátumot kapunk, amelyben a mólarány 4. A fehérje hozam 51%. A jelenlevő nem konjugált adriamicin mennyisége 0,36%.
3, példa
SPDP reagenssel bevitt szulfhidrilcsoportokat tartalmazó kimérés BR96 és adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazon konjugátuma
Kimérés BR96 (ChiBR96) antitest 27,5 ml, 12,53 mg/ml koncentrációjú oldatához 1,7 ml 10 mmólos abszolút etanollal készült SPDP-oldatot adunk, az elegyet 31’C-on 35 • · · · ·
-51·' percig inkubáljuk, majd jégben hűtjük és 1,7 ml 0,50 mmólos PBS-oldattal készült DTT-oldatot adunk hozzá. A reakcióoldatot 15 percig 4’C-on tartjuk, majd dialíziscsőbe visszük, és négy alkalommal 4,5-4,5 liter, 0,1 M hisztidinpuffért tartalmazó PBS-oldattal szemben dializáljuk, legalább 8 órán át. Ezután meghatározzuk a fehérje mennyiségét (9,29 mg/ml) és az -SH csoportok koncentrációját (2,06xl0“^M). 17 ml ilyen oldathoz ekvimoláris mennyiségű adriamicin-maleimidokaproil-hidrazont adunk 0,59 ml, 5 mg/ml koncentrációjú dimetil-formamidos oldat formájában. A reakcióelegyet három alkalommal, 4,5-4,5 fenti pufferrel szemben dializáljuk, legalább 8 órán át. A dializált oldatot centrifugáljuk, és a felülúszót 4‘C-on Biobeads^^ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) márkanevű gyöngyökkel rázzuk néhány órán át. Az oldatot centrifugáljuk, és a 19 ml felülúszóban meghatározzuk a fehérje (6,5 mg/ml) és az adriamicin (67,86 mikrogramm/ml) koncentrációját. A gyógyhatású anyag/fehérje mólarány 2,9. A fehérjehozam 72%; a jelenlevő nem konjugált adriamicin 1,2%.
4.példa
Módosított bombezin konjugálása adriamicin-maleimido-kaproil- hidrazonnal
A bombezin nem tartalmaz szabad reakcióképes szulfhidrilcsoportot, amely alkalmas lenne a Michael addíciós receptort tartalmazó linkerhez való kapcsolásra. így, olyan módosított bombezint állítunk elő, amely a természetes bombezin N-termninálisán még egy ciszteincsoportot tartalmaz. Emellett a természetes bombezin 3-helyzetú csoportját lizinre cseréljük. Az így módosított bombezin neve cisz^-lys^-52bombezin. λ q
11,3 g cysu-lys -bombezint 1,1 ml ionmentes vízben oldunk, és az oldat pH-ját 10 mikroliter 1,5 mólos, 8,8 pHjú trisz-HCl pufferrel 7-7,5-re állítjuk. Ezután 0,45 ml, 15 mg/ml koncentrációjú, ionmentes vízben készült adriamicinmaleimido-kaproil-hidrazon-oldatot adunk hozzá, és a komponenseket környezeti hőmérsékleten néhány órán át reagáltatjuk. A reakcióelegyet egy éjszakán át dialíziscsőben vízzel szemben dializáljuk (móltömeghatár: 1000). A csapadékot 12
000 x g-n végzett centrifugálással eltávolítjuk, és a felülúszót megőrizzük. Az adriamicin-bombezin konjugátum adriamicin tartalmát úgy határozzuk meg, hogy az oldatból 6,0-os pH-jú acetát-pufferrel l:50-es hígítást készítünk. Az adriamicin-tartalmat (ADM) a következő képlet alapján számítjuk:
[O.D.495/8031] X 50 = ADM (M)
A fenti preparátum esetében az O.D.4gg = 0,116, így az adriamicintartalom 7,2 X 10-4 M.
A terméket HPLC technikával Cjg oszlopon (Beckman Instruments, Ultrasphere 5 mikron, 4,6 mm X 25 cm) kromatografáljuk. A puffer: 10 mmólos NH40Ac, pH 4,5; B puffer: 90% acetonitril/10% A puffer. Az oszlopot 90% A puffer/10% B puffer eleggyel hoztuk egyensúlyba, és a kromatografálást a következő gradienseleggyel végezzük: 90% A puffer/10% B puffer —*· 60% A puffer/60% B puffer 2 percig, 50% A puffer/50% B puffer 15 percig. A termék retenciós ideje ilyen körülmények között 9,3 perc.
• ·
-535.példa
Iminotiolánnal bevitt szulfhidrilcsoportokat tartalmazó kimérés BR96 és adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazon konjugátuma ml, 9,05 mg/ml koncentrációjú kimérés BR96-ot két alkalommal 4 liter 0,1 mólos, 9,1 pH-jú nátrium-karbonát/nátrium-hidrogén-karbonát pufferrel szemben dializálunk. Az antitest-oldatot aztán 0,75 ml (20 mmol) iminotiolánnal melegítjük 32°C-on 45 percig. Az oldatot ezt követően 4 liter, 9,1-es pH-jú nátrium-karbonát/nátriumhidrogén-karbonát pufferrel szemben, majd 4 liter 7,4 pH-jú, 0,1 mól L-hisztidint tartalmazó 0,0095 mólos PBS-oldattal szemben dializáljuk. Az így előállított oldatban az -SH/fehérje mólarány 1,35. A fehérjét aztán iminotiolánnal a fenti módon ismételten reagáltatjuk, így olyan oldatot kapunk, amelyben az -SH/fehérje mólarány 5,0.
Ezután 4‘C-on 3,2 mg adriamicin-maleimido-kaproilhidrazont 0,640 ml dimetil-formamidban oldva, keverés közben adunk a fenti fehérjeoldathoz. A konjugátumot 4C-on 16 órán át inkubáljuk, majd 4 liter 7,4 pH-jú, 0,1 mól L-hisztidint tartalmazó 0,0095 mólos PBS-oldattal szemben dializáljuk. A dializált konjugátumot 0,22 mikronos ce1lulóz-acetát membránon át steril csőbe szűrjük, és kis mennyiségű (>5 térfogat%) BioBeads™ SM-2 márkanevű (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) gyöngyöt adunk hozzá. 24 órás enyhe rázogatás után a gyöngyöket kiszűrjük, a konjugátumot folyékony nitrogénben megfagyasztjuk, és -80’C-on tároljuk. A keletkezett konjugátumban 3,4 az adriamicin/protein mólarány, és a hozam a kimérés BR96-ra számítva 24%.
-546.példa
Adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazon és DTT reagenssel redukált humán IgG (relaxált humán IgG) konjugátuma Rocklandból (Gilbertsville, PA) kapott humán IgG-t 0,0095 mólos PBS-oldattal hígítva 10,98 mg/ml koncentrációjú oldatot készítünk. 350 ml ilyen oldatot vízfürdőben 37°C-ra melegítünk nitrogén alatt. Ezután ditiotreit PBS-oldattal készült 10 mmólos oldatából 16,8 ml-t adunk hozzá, és a kapott oldatot 3 órán át 37‘C-on keverjük. Az oldatot két egyenlő részre osztva Amicon YM 30 ultraszűrő membránnal (móltömeg-határ 30 000, átmérő 76 mm) ellátott kevert ultraszűrő cellába (Amicon Model 8400, Amicon Division, W. E. Grace and Co., Beverly, MA 01915) visszük, és egy Amicon Model CDSIO-es típusú koncentráló/dializáló szelektoron keresztül egy Amicon Model RC800 minitartályhoz kapcsoljuk. Mindegyik tartály L-hisztidinre 0,1 mólos és PBS-re 0,0095 mólos oldatot tartalmaz. A fehérjeoldatot addig dializáljuk, amíg a szűrletben a szabad tiol koncentrációja 41 mikromól. A visszatartott részben az -SH/fehérje mólkoncentráció 8,13.
Ezt a visszatartott részt a cellákból egy nitrogénatmoszférában levő steril tartályba visszük, és 36,7 ml, 5 mg/ml koncentrációjú vizes adriamicin-maleimido-kaproilhidrazon-oldatot adunk hozzá keverés közben. A konjugátumot 48 órán át 4°C-on inkubáljuk,majd 0,22 mikronos cellulózacetát membránon át szűrjük. Egy Bio-Rad Econocolumn™ márkanevű (2,5 X 50 cm, Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) oszlopot 100 g BioBeads1*^ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) gyönggyel töltünk meg L-hisztidinre 0,1 • · · · • · · · · · · mólos és PBS-re 0,0095 mólos pufferoldattal készült zagy formájában. A gyöngyöket úgy készítjük eló, hogy először metanollal, majd vízzel és végül néhány térfogat pufferrel mossuk. A megszűrt konjugátumot ezen az oszlopon perkoláljuk 2ml/perc sebességgel. A kromatografálás után a konjugátumot 0,22 mikronos cellulóz-acetát membránon át szűrjük és cseppfolyós nitrogénben fagyasztjuk, majd -80’C-on tároljuk. A kapott konjugátumban az adriamicin/fehérje mólarány 7,45, és a hozam a humán IgG-re számolva 99%.
7.példa
Relaxált BR64 és adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazon konjugátuma
435 ml, 11,31 mg/ml koncentrációjú (7,07 X 10® mól) BR64-oldathoz 947 mg DTT reagenst adunk, és az elegyet enyhe keverés közben 42-43’C-on melegítjük 2 órán át. Ezután az oldatot jégben lehűtjük, 2 dializálócsőbe töltjük, és öt alkalommal 14-14 liter PBS-oldattal szemben dializáljuk 8 órán át, 4’C-on. A csövek tartalmát egyesítjük (400 ml) és a fehérje és -SH tartalmat meghatározzuk, ez a fehérje esetében 10,54 mg/ml, azaz 6,58 X 10~^ mól, az -SH csoportra vonatkozóan 5,14 X 10“^ mól). Az -SH/fehérje mólarány 7,8.
Az antitest-oldathoz enyhe keverés közben 32,6 ml, 5 mg/ml koncentrációjú dimetil-formamidos adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazon-oldatot adunk, és az elegyet 4’C-on 24 órán át inkubáljuk. Ezután az oldatot 0,22 mikronos cellulóz-acetát szűrön át szűrjük, és aztán két dializáló csőbe visszük, majd a fenti módon dializáljuk. A dialízis befejezése után a csövek tartalmát egyesítjük, szűrjük, és BioBeads™ SM-2 márkanevű (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA
-5694804) gyönggyel 4’C-on rázzuk 24 órán át. A gyöngyöket cellulóz-acetát szűröt alkalmazva kiszűrjük, így szűrletként a konjugátum oldatát kapjuk. A fehérje és adriamicin koncentrációját meghatározzuk, ez a fehérje esetében 8,66 mg/ml, azaz 5,42 χ 10-® mól, az adriamicin esetében 168 mikrogramm/ml, azaz 2,89 x 10“^ mól. A fehérje hozama 97%. Az adriamicin/fehérje mólarány 5,33; a nem-konjugált adriamicin 0,5%.
8.példa
Általános eljárás adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazon relaxált antitesttel való konjugálására
1. 3 g antitest PBS-pufferrel (1.megjegyzés) készült 10 mg/ml töménységű oldatából 300 ml-t állandóan nitrogén alatt tartva 37°C-os vízfürdőbe merítünk, és mágneses keverövel enyhén keverünk. Az oldatot 7 mólekvivalens DTT reagenssel (2. és 3. megjegyzés) reagáltatjuk 3 órán át. Az -SH csoport fehérjére vonatkoztatott mólarányát kezdetben és aztán óránként meghatározzuk, amely a maximálisan konjugált termékre kb. 14-nél állandósul (2. és 4.megjegyzés).
2. Az oldatot a lehető leggyorsabban egy Amicon diaszűrő cellába (Amicon Division, W. R. Grace and Co. , Beverly, MA 01915 (5. meg j egyzés) visszük, és kb. 4’C és kb. 7C között tartjuk. A rendszert argonnal vagy nitrogénnel nyomás alá helyezzük, és megkezdjük a diaszűrést hisztidinre 0,1 mólos PBS pufferoldattal, amelyet kb. 4’C és kb, 7C közötti hőmérsékletre előhűtöttünk. A kifolyó oldat hőmérséklete közvetlenül a diaszűrés megkezdése után 16-18°C és 90 perc alatt 8-9’C-ra esik. A kifolyó oldtban az -SH/fehérje mólarány változását követjük, és amikor ez az értéke <1, a • ··· diaszűrés teljes (6.megjegyzés).
3. Az oldatot mágneses keveróvel ellátott gömblombikba visszük át, és jégben tartjuk. Az oldatot állandóan nitrogénnel fedjük. Az oldat térfogatát feljegyezzük. 0,1 ml-es részleteket veszünk ki belőle, ezeket PBS pufferrel 1,0 mire hígítjuk a fehérje mg/ml-ben mért mennyiségének (és a fehérje mólekvivalensének), az -SH csoportok molaritásának, és ezáltal az -SH/fehérje mólarányának meghatározására. Adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazonból desztillált vízzel 5 mg/ml koncentrációjú, 6,3 x 10~3 mólos oldatot készítünk (7. és 8.megjegyzés). Ezen oldat ml-ben megadott, a konjugátum előállításához szükséges mennyiségét az alábbi képlet segítségével határozzuk meg:
(az-SH molaritása) x (a fehérjeoldat térfogata) X 1,05
6,3 x 103 (9.megjegyzés), és ezt a mennyiséget lassan, enyhe keverés közben a fehérjeoldathoz adjuk. A reakcióoldatot 30 percig 4C-on tartjuk.
4. Bio-Beads™ SM-2 márkanevű (Bio-Rad Laboratories,
Richmond, CA 94804) 20-50 mesh szemcseméretű gyöngyökből (10.megjegyzés) 4’C-on oszlopot készítünk. A vörös fehérjeoldatot 0,22 mikronos cellulóz-acetát szűrőn szűrjük, majd az oszlopon 2,5 ml/perc sebességgel átengedjük, és a vörös eluátumot összegyűjtjük. Végül hisztidinre 0,1 mólos PBS pufferoldatot töltünk az oszlop tetejére, és az eluátumot addig gyűjtjük, amig színtelenné válik. Az összegyűjtött vörös oldat térfogatát feljegyezzük. Ennek az oldatnak 0,1 ml-es részletét PBS pufferoldattal 1 ml-re hígítjuk, és a • · · • ’J
-58fehérje és adriamicin mennyiségét meghatározzuk. A konjugált adriamicin mennyiségét a 495 nm-en mutatott abszorbancia alapján (epszilon = 8030 cm'^M”^) meghatározzuk, és mikromólokban és mg/ml-ben fejezzzük ki. A fehérje mg/mlben és mikromólokban megadott mennyiségét a 280 nm-nél mért abszorpció alapján, a fenti módon határozzuk meg, és ezt az értéket az adriamicinnek ugyanezen a hullámhosszon mért abszorbciójával korrigáljuk a következő általános képletnek megfelelően:
a280 “(°>724 x Α49δ) antitest (mg/ml) = --------------------,
1,4 ahol A a megadott hullámhossznál mért abszorpció.
5. A konjugátum 5 ml-es részletét egy Econo-Pac7^ 10 SM-2 oszlopon [10 ml térfogatú, Bio-Beads^ SM-2 márkanevű gyöngyökkel töltött kész oszlop (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804), amelyet hisztidinre nézve 0,1 mólos PBS puffer-oldattal hozunk egyensúlyba] az előzőekben leírtak szerint engedjük keresztül. A fehérje és a konjugált adriamicin mennyiségét valamint a mólarányt meghatározzuk. Ennek az értéknek azonosnak kell lennie az oldat esetében mérttel (11.megjegyzés).
6. A konjugátumot folyékony nitrogénben megfagyasztjuk és -80°C-on tároljuk. Ebből részleteket vehetünk ki a citotoxicitás, kötődés és a jelenlevő szabad adriamicin meghatározásához (12.megjegyzés).
Megjegyzések az általános eljáráshoz
1. Az antitest koncentrációja általában 7-10 mg/ml (kb.
6,25xl0_5 mól), és ez az előnyös koncentráció. Ha a kon* · «
-59centráció sokkal nagyobb, az oldatot pufferrel lehet hígítani. Ha a koncentráció 10 mg/ml-nél kisebb, az oldatot változatlan formában használhatjuk. A koncentráció meghatározását 280 nm hullámhosszú UV-fényben végezzük, 1 mg/ml =
1,4 abszorpciós egység.
2. A DDT reagenst a Boehringer Mannheim Biochemicals cégtol (Indianapolis, Indiana 46250) szerezzük be, olvadáspontja 42-43°C. Amennyiben a minőség kérdéses, a DTT reagenst például dietil-éter és hexán elegyéből át kell kristályosítani. A tisztaság ellenőrzésére az olvasápontot, az NMR-spektrumot és az -SH tartalmat használjuk. A szulfhidril-titrálást Ellman módszere szerint [Anal. Biochem. 94, 75-81 (1979)], a következőképpen végezzük: egy 0,1 ml-es részletet PBS-oldattal 1,0 ml-re egészítünk ki, és 0,05 ml reagenst (50 nmólos ditio-bisz(2-nitro-benzoesav), DTNB 100 nmólos Νβ2ΗΡ04 oldatban; pH = 7,04) adunk hozzá. Vakpróbaként 1 ml PBS-oldathoz a fentihez hasonlóan szintén adunk DTNB-oldatot. 5 perc elteltével a minta és a vakpróba elnyelését 412 nm-en megmérjük, és az -SH moláris koncentrációját (MCSH)a következő képlet alapján számítjuk ki:
(Aminta-Avakpróba) x mcSH =
1,415 χ 104
3. A DTT reagenst szilárd alakban vagy oldat formájában használhatjuk. Előnyösen frissen készített, 10 mmólos oldatként alkalmazzuk.
4. Az -SH/fehérje mólarányt úgy határozzuk meg, hogy Ellman módszere szerint mérjük az -SH moláris koncentrációját (ld. 2.megjegyzés) és ezt osztjuk a fehérje moláris « ♦ • ··· · · * · · · • · · · · · ·
-60koncentrációjával. Amennyiben ez az érték a reakció során 14-nél kisebb, megfelelő mennyiségben további DTT reagenst adunk az elegyhez.
5. 3 g/300 ml anyagmennyiség esetén két 350 ml-es Amicon cellát használunk, és az oldatot kettéosztva, 150 ml-es részletben visszük a cellákba.
6. A fenti méretek mellett a diaszűrés 2-4 órát vesz igénybe. Az időtartam olyan tényezőktől függ, mint a membrán kora, az oldat keverésének sebessége és a cellában levő nyomás.
7. A hidrazon nem nagyon oldódik a PBS-oldatban, és rövid időn belül csapadék képződik.
8. Rövid ideig tartó szonikálás elősegíti a desztillált vízben való oldódást. A kapott oldat stabil.
9. Ez a mennyiség 5%-os hidrazon felesleget biztosít. A leírt eljáráshoz általában kb. 15-20 perc szükséges.
10. A Bio-Beads^M gyöngyöket úgy készítjük elő, hogy metanolban legalább 1 órán át, előnyösen egy éjszakán át duzzasztjuk, majd desztillált vízzel mossuk és végül hisztidinre 0,1 mólos PBS-oldattal hozzuk egyensúlyba. 3 g fehérjéhez 100 g gyöngyöt használunk egy 2,5 cm x 30 cm-es oszlopban.
11. Az alkalmazott spektroszkópiás módszerek hibája miatt a mólarányban mutatkozó 1 egységnyi eltérés esetén az eredmény még jónak mondható. Általában azonban a mólarány 0,5-nél kisebb értékkel változik.
12. A konjugátumban jelenlevő szabad adriamicin mennyisége általában 1%-nál kisebb.
9. példa
Relaxált kimérás BR96 és adriamicin-maleimido-kaproilhidrazon kon.iugátuma
Az előzőekben leírt módon előállított kimérás BR96 antitestet 0,0095 mólos PBS-oldattal 10,49 mg/ml cióig hígítunk. 500 ml ilyen oldatot 37’C-ra koncentrámelegítünk nitrogénatmoszférában, vízfürdőben, és 26,2 ml, mmólos
PBS-oldattal készült ditiotreit-oldatot adunk hozzá.
Az így kapott oldatot két egyenlő részre osztjuk,
Amicon
YM 30 ultraszűrő membránnal (móltömeg-határ 30
000, átmérő
6 mm) ellátott Amicon Model 8400-as kevert [Amicon Division, W. E. Grace and Co., ultraszűrő cellába
Beverly, MA 019159843] visszük, és egy Amicon Model CDSIO-es típusú koncent ráló/dializáló szelektoron keresztül egy Amicon Model RC800 minitartályhoz kapcsoljuk. Mindegyik tartály 800 ml, L hisztidinre 0,1 mólos, PBS-re 0,0095 mólos oldatot tartalmaz. A fehérjeoldatot addig dializáljuk, amíg a szűrletben a szabad tiol koncentrációja 63 mikromól. A visszatartott részben az -SH/fehérje mólkoncentráció 8,16. A visszamaradt oldatot a cellákból steril tartályba visszük át nitrogén alatt, és 42,6 ml, 5 mg/ml koncentrációjú vizes adriamicinmaleimido-kaproil-hidrazon-oldatot adunk hozzá keverés közben. A konjugátumot 4’C-on 48 órán át inkubáljuk, majd 0,22 mikronos cellulóz-acetát membránon át szűrjük. Egy 2,5
TM cm x 50 cm-es Bio-Rad Econocolumn oszlopot 100 g BioBeads
SM-2 márkanevű (Bio-Rad Laboratories, Richmond California
94804) gyöngypolimerből L-hisztidinre 0,1 mólos, PBS-re
0,00095 mólos oldattal készült zaggyal megtöltünk. A gyöngyöket úgy készítjük elő, hogy metanollal, vízzel, majd • ·· ···« ·«·« ···· • « · • »·· · « • · · · • ··« · ·« néhány térfogat pufferrel mossuk. A szűrt konjugátumot ezen az oszlopon 2ml/perc sebességgel perkoláljuk. Kromatografálás után a konjugátumot 0,22 mikronos cellulóz-acetát membránon át szűrjük, cseppfolyós nitrogénben fagyasztjuk, és -80’C-on tároljuk. A kapott konjugátumban az adriamicin/fehérje mólarány 6,77, és a hozam a kimérás BR96 antitestre számítva 95%.
10.példa
Relaxált egér L6 antitest és adriamicin-maleimido-kaproilhidrazon konjugátuma
A korábban leírt módon készült L6 egér antitestet
0,0095 mólos PBS-oldattal 11,87 mg/ml fehérjekoncentrációig hígítunk. 350 ml ilyen oldatot 37’C-on melegítünk nitrogén-atmoszférában, vízfürdőben. 18,2 ml, PBS-oldattal készült 10 mmólos ditiotreit-oldatot adunk hozzá, és az elegyet 3 órán át 37’C-on keverjük. Ezután az oldatot két egyenlő részre osztjuk, és YM 30 ultraszűró membránnal (móltömeghatár 30 000, átmérő 76 mm) ellátott kevert ultraszűrő cellába (Amicon Model 8400), Amicon Division, W. E. Grace and Co., Beverly, MA 01915-9843) visszük, és egy Amicon Model CDSIO-es típusú koncentráló/dializáló szelektoron keresztül egy Amicon Model RC800 minitartályhoz kapcsoljuk. Mindegyik tartály 800 ml, L-hisztidinre 0,1 mólos, PBS-re 0,0095 mólos oldatot tartalmaz. A fehérjeoldatot addig dializáljuk, amíg a szűrletben a szabad tiol koncentrációja 14 mikromól. A visszatartott részben az -SH/fehérje mólkoncentráció 9,8.Ezt a visszatartott részt a cellákból egy nitrogénatmoszférában levő steril tartályba visszük, és 40,4 ml, 5 mg/ml koncentrációjú vizes adriamicin-maleimido-kap• ·** · · · * « • ··* · ·* roil-hidrazon-oldatot adunk hozzá keverés közben. A konjugátumot 48 órán át 4C-on inkubáljuk, majd 0,22 mikronos cellulóz-acetát membránon át szűrjük. Egy Bio-Rad Econocolumn^ márkajelű (2,5 x 50 cm, Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) oszlopot 100 g BioBeads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) gyönggyel töltünk meg Lhisztidinre 0,1 mólos, PBS-re 0,0095 mólos pufferoldattal készült zagy formájában. A gyöngyöket úgy készítjük elő, hogy először metanollal, majd vízzel és végül néhány térfogat pufferrel mossuk. A megszűrt konjugátumot ezen az oszlopon perkoláljuk 2 ml/perc sebességgel. A kromatograf álás után a konjugátumot 0,22 mikronos cellulóz-acetát membránon át szűrjük és cseppfolyós nitrogénben megfagyasztjuk, majd -80°C-on tároljuk. A kapott konjugátumban az adriamicin/fehérje mólarány 7,39, és a hozam az egér L6 antitestre számítva 100%.
Biológiai hatás
A jelen találmány szerinti konjugátumok képviselőinek biológiai hatását mind in vitro mind in vivő rendszerekben vizsgáltuk. Ezekben a vizsgálatokban a citotoxikus anyagok konjugátumainak hatékonyságát a konjugátumok humán rákos sejtekkel szembeni citotoxicitásának mérésével határoztuk meg. A következőkben az alkalmazott vizsgálatokat és a kapott eredményeket ismertetjük. Az eredményeknél a konjugátumokra a ligandum, a gyógyhatású anyag és a ligandum/gyógyhatású anyag mólarányának megadásával hivatkozunk, így például a BR64-ADM-5,33 a BR64 antitest és adriamicin konjugátumára utal, és ebben a gyógyhatású anyag/antitest mólarány 5,33. A szakember számára nyilvánvaló, hogy bármi-64 lyen, a kívánt antigént kifejező tumorvonal alkalmazható a következő analízisben felhasznált speciális tumorvonalak helyett.
I.hatásvizsgálati példa
A BR64-adriamicin konjugátumok in vitro hatása
Az 1B) és 2.példa szerinti immunkonjugátumokat in vitro L2987 humán tüdőkarcinóma vonallal [I. Hellströmtől kapott, Bristol-Myers Squibb Seattle: ld. I. Hellström és munkatársai, Cancer Research 50:2183 (1990)] szemben vizsgáltuk, amely a BR64, L6 és BR96 monoklonális antitestek által felismert antigéneket fejez ki. L2987 egyrétegű tenyészetét tripszin-EDTA (GIBCO, Grand Island, NY) reagenssel mostuk, a sejteket megszámoltuk, és 1 x 10^/ml koncentrációban 10%, hővel inaktivált fötális borjúszérumot tartalmazó RPMI-1640-ben (RPMI-10% FOS) szuszpendáltuk. Egy 96 mérőhelyes laposfenekú mikrotiter lemez üregeibe 0,1 ml sejtszuszpenziót mértünk, és a lemezeket egy éjszakán át 37’C-on nedves, 5% CC^-t tartalmazó atmoszférában inkubáltuk. A közeget eltávolítottuk a lemezekből, és adriamicin vagy az adriamicin antitest konjugátumainak hígítási sorozatát helyeztük az üregekbe. Minden hígítást négyszeres ismétlésben vizsgáltunk. A gyógyhatású anyag vagy konjugátum 2 órás expozíciója után a lemezeket 100 x g-n 5 percig centrifugáltuk, a gyógyhatású anyagot vagy konjugátumot eltávolítottuk, és a lemezeket három alkalommal RPMI-10%FCS- mai mostuk. A sejteket RPMI-10% FCS közegben további 48 órán át tenyésztettük. Ezután a sejteket 2 órán át, üregenként 1,0 mikroCi ^H-timidinnel (New England Nuclear, Boston, MA) rezegtettük. A lemezekről a sejteket összegyűjtöttük, és a percenkénti • · ♦ · · · • · · · • · · · · · ·
-65beütéseket (CPM) mértük. A sejtburjánzás gátlását úgy határoztuk meg, hogy a kezelt mintákra kapott átlagos CPM értéket a kezeletlen kontrollokra kapottal hasonlítottuk össze. A 3.ábrán látható adatok egy kötődő immunokonjugátum (az adriamicin/BR64 mólarány 7,18, a minta jele BR64THADMHZN-7,18) egy nem-kötődő SN7 immunkonju- gátum (az adriamicin/SN7 mólarány 4, a minta jele SN7-THADNHZN-4) és az adriamicin L2987 tüdősejtekkel szembeni citotoxicitását mutatják. Az IB) példában leírt módon elő-állított BR64 konjugátumok hatásosak, és ebben az in vitro vizsgálatban antigén-specifikus citotoxitást mutatnak.
II.hatásvizsgálati példa
A BR64-adriamicin konjugátum in vivő hatása
Az IB) és 2.példák szerinti immunokonjugátumok antigén-specifikus daganaellenes hatását in vivő vizsgáltuk. Ezekhez a vizsgálatokhoz öröklött thymushiányos BALB/c hátterű nőstény egereket (BALB/c nu/nu; Harlan SpragueDawley, Indianapolis, IN) használtunk. Az egereket Thoren ketrecekben,steril almon helyeztük el szabályzott hőmérséklet és nedvességtartalom mellett. Az állatok steril élelmet és vizet tetszés szerinti mennyiségben fogyasztottak. Ezeket a vizsgálatokat L2987 jelű humán tüdődaganat vonallal végeztük. Ez a vonal ismételt in vivő passzázs után fenntartotta a BR64, BR96 és L6 antigének kifejezését. A tumorvonalakat thymushiányos egerekbe való sorozatos átoltással tartottuk fenn, ahogy azt korábban már leírták [P.A. Trail és munkatársai, in vivő 3:319-24 (1989)]. A daganatokat mérőkörzővel, 2 egymásra merőleges irányban mértük hetenként vagy kéthetes időközönként.
-66• · · • · · · · · • · · • · ♦ · · · ·
A tumor térfogatát a következő egyenlet szerint számítottuk :
(L x W2)
V (mm3) = --------- ahol V = térfogat (mm3)
L = a leghosszabb tengely mérete (mm)
W = az L-re merőleges tengely mérete (mm).
A feltüntetett értékek a kezelt és kontroll csoportok átlagos daganatméretét adják meg. Minden kezelt vagy kontroll csoport 8-10 állatból állt. A gyógyszeres kezelést akkor kezdtük, amikor a daganatok közepes mérete elérte az 50-100 mm3-t. A gyógyszert intraperitoneálisan vagy intravénásán adtuk be a feltüntetett időpontokban. Az adriamicint normál sóoldattal és a természetes antitestet és adriamicin konjugátumokat foszfáttal puffereit sóoldattal (PBS) hígítottuk beadás előtt. A dózisokat a tömeg figyelembevételével (mg/kg) adagoltuk, és minden állatra külön kiszámítottuk. Ezekben a vizsgálatokban a kötődő BR64 immunkonjugátum daganatellenes hatását az adriamicin optimalizált dózisainak, a természetes BR64 és adriamicin keverékének és nemkötődő konjugátumok hatásához hasonlítottuk. A nem-konjugált adriamicint az L2987 humán xenograft modellnek megfelelő módon, mennyiségben és időben adagoltuk. A nem-konjugált adriamicint ezért 8 mg/kg dózisban, intravénásán, minden negyedik nap, összesen 3 injekcióban adtuk be (ennek jelölése: 8 mg/kg, q4dx3, iv). A kötődő (BR64) és nem-kötődő (SN7) immunkonjugátumokat néhány dózisban intraperitoneálisan adtuk be összesen 3 injekcióban (ennek jelö-67 lése: qd4x3, ip.). Mint az a 4 . ábrán látható, a BR64adriamicin konjugátum tolerált dózisának (10 és 15 mg/kg/injekció) beadását követően szignifikáns daganatellenes hatást figyeltünk meg. A BR64 konjugátummal végzett kezelést követően fellépő daganatellenes hatás szignifikánsan jobb volt, mint az optimalizált adriamicinnel és a nemkötődő SN7 konjugátum megfelelő dózisaival végzett kezelés után észlelt hatás.
Ebben a kísérletben a BR64 konjugátum 15 mg/kg/injekció dózisával végzett kezelés esetében az állatok 66%-ánál, míg a BR64 konjugátum 10 mg/kg/injekció dózisával végzett kezelés esetében az állatok 50%-ánál figyeltünk meg teljes daganatvisszafejlődést. A létrehozott L2987 daganatok részleges vagy teljes regressziója nem volt megfigyelhető az optimalizált adriamicin, a természetes BR64 és adriamicin keverékének vagy a nem-kötődő konjugátumok ekvivalens dózisainak beadása után.
Annak a szemléltetésére, hogy a megfigyelt hatás fellépéséhez az antitest és adriamicin kovalens kapcsolódása szükséges, számos kontroll kísérletet végeztünk a természetes BR64 és adriamicin keverékeivel. A kombinált terápia néhány típusára vonatkozó jellemző adat az 5a-c) ábrákon látható. Az MAb és adriamicin kombinált terápiájának különféle módjai esetében megfigyelt daganatellenes hatás nem különbözött szignifikánsan az optimalizált adriamicint egyedül alkalmazó kezelést követő hatástól. Ezek az adatok együttesen azt mutatják, hogy a BR64 és adriamicin kovalens kapcsolódása szükséges ahhoz, hogy a 4.ábrán felüntetett daganatellenes hatás létrejöjjön.
III.hatásvizsgálati példa Bombezin-kon.iugátumok in vivő hatása
A 4.példa szerinti konjugátum daganatellenes hatását in vivő vizsgáltuk. BALB/c thymushiányos szőrtelen egerekbe H345 jelű humán kissejtes tüdőrák daganatdarabokat ültettünk be (amelyeket Dr. D. Chan-tól kaptunk, University of Colorado Medical School, CO) szubkután, trokar segítségéQ vei. A daganatokat hagytuk 50-100 mm0 térfogatúra nőni, a kezelést azután kezdtük. Az egereknek intravénásán, a beültetést követően 23, 26, 28 és 30 nappal 1,6 mg/kg adriamicint egyedül vagy bombezin-adriamicin konjugátumot [BNADM(TH)] 1,6 mg/kg adriamicinnek megfelelő mennyiségben vagy P77-adriamicin konjugátumot [P77-ADM(TH)] 1,6 mg/kg adriamicinnel ekvivalens mennyiségben adtunk be. A P77 egy 12 aminosavból álló peptid, amely belső ciszteinmaradékot tartalmaz (a szekvencia = KKLTCVQTRLKI), és nem kötődik a H345 sejtekhez. A peptidet a 4.példában leírtak szerint adriamicin-maleimido-kaproil-hidrazonnal konjugáltuk. így a kapott konjugátum egy H345 sejtekhez nem kötődő konjugátum. A daganatokat mérőkörzővel mértük és a daganat térfogatát a következő képlet alapján számítottuk:
(L x W2)
V (mm3) = --------2 ahol V, L és W jelentése a II.hatásvizsgálati példában megadott.
Meghatároztuk a közepes daganattérfogatokat és az eredményeket a 6.ábrán mutatjuk be.
-70genként 1,0 mikroCi θΗ-timidinnel (New England Nuclear, Boston, MA) rezegtettük. A lemezekről a sejteket összegyűjtöttük, és a percenkénti beütéseket (CPM) mértük. A sejtburjánzás gátlását úgy határoztuk meg, hogy a kezelt mintákra kapott átlagos CPM értéket a kezeletlen kontrollokra kapottal hasonlítottuk össze. Az ICqq értékeket az adriamicin mikromól ekvivalensében adjuk meg.
V.hatásvizsgálati példa
BR64 és egér L6 konjugátumok in vivő daganatellenes hatása Az adriamicin relaxált BR64 vagy relaxált L6 antitesttel alkotott immunkonjugátumainak in vivő daganatellenes hatását vizsgáltuk. A megfigyelt adatokat a 8.ábrán szemléltetjük.
Ezekhez a vizsgálatokhoz öröklött thymushiányos BALB/c hátterű nőstény egereket (BALB/c nu/nu; Harlan SpragueDawley, Indianapolis, IN) használtunk. Az egereket Thoren ketrecekben, steril almon helyeztük el szabályzott hőmérséklet és nedvességtartalom mellett. Az állatok steril élelmet és vizet tetszés szerinti mennyiségben fogyasztottak .
Az L2987 jelű humán tüdődaganat vonalat tumor xenograft modell szerint hoztuk létre thymushiányos egerekben. Ezt a vonalat sorozatos in vivő passzázzsal tartottuk fenn. A daganatokat mérőkörzővel, 2 egymásra merőleges irányban mértük hetenként vagy kéthetes időközönként. A tumor térfogatát a következő egyenlet szerint számítottuk:
(L x W2)
V (mm3 ) =---------,
-71ahol V = térfogat (mm^)
L = a leghosszabb tengely mérete (mm)
W = az L-re merőleges tengely mérete (mm).
Általában 8-10 egeret használtunk a kontroll és kezelt csoportokban. A megadott adatok a kontroll és kezelt csoportokban mért közepes daganatméreteknek felelnek meg. A daganatellenes hatást a log-fázisban levő sejtek pusztításának mértéke (gross lóg cell kill, LCK) formájában fejezzük ki a következő képlet szerint:
T-C
LCK =---------- ,
3,3 x TVDT ahol T-C az az átlagos idő, napokban megadva, amelyet úgy kapunk, hogy a kezelt daganatok esetében a célméret eléréséhez szükséges időből levonjuk a célméret eléréséhez a kontroll daganatok esetében szükséges időt; a TVDT az az idő, amely a kontroll daganatok térfogatának duplájára, 250-500 mnr-re való növekedéséhez szükséges. A részleges daganatregresszió (CR) a daganattérfogatnak a kezdeti daganattérfogat £50%-os csökkenésére utal; a teljes daganatregresszió (CE) olyan daganatra utal, amely egy bizonyos ideig nem tapintható; és a gyógyulás azt jelenti, hogy a létrehozott daganat 10 TVDT-nek megfelelő vagy annál hosszabb ideig nem tapintható.
Az L2987 humán tüdődaganatos állatoknál a gyógyszeres kezelést akkor kezdtük, amikor a daganatok közepes mérete elérte a 75 mm^-t, ami a daganat beültetése után 12-14 nappal következett be. Az átlagos TVDT 4,8±0,9 nap volt, és a daganatellenes hatást 500 mm3 daganatméretre vonatkozóan »»»
-72becsültük. Néhány kísérletben (ld. a VI. hatásvizsgálati példát) a gyógyszeres kezelést akkor kezdtük, amikor az L2987 daganatok mérete 225 mm volt.
Az anyagokat intraperitoneálisan vagy intravénásán adtuk be. Az adriamicint normál sóoldattal és az antitestet és az antitest/adriamicin konjugátumokat foszfáttal puffereit sóoldattal (PBS) hígítottuk beadás előtt. A dózisokat a tömeg figyelembevételével (mg/kg), minden állatra külön kiszámítva adagoltuk, és mg/kg adriamicin/injekció ekvivalensben adjuk meg. Az immunkonjugátumot a q4dx3 időrend szerint adagoltuk. A maximális eltűrt dózis (MTD) egy kezelési periódusra vonatkozóan az a legnagyobb dózis, amely egy adott szakaszban <.20% letalitást okoz.
A 8.ábrán látható adatok szerint az adriamicin optimalizált dózisának injekció útján való beadása 1.1 LCK-val ekvivalens daganatellenes hatást eredményezett, és daganatregresszót nem figyeltünk meg. A BR64-ADM konjugátum minden vizsgált dózisban 10 LCK-nál nagyobb daganatellenes hatást fejtett ki, és az 5 mg/kg, 8 mg/kg és 10 mg/kg BR64-ADM dózisok esetében 89%-os, 78%-os illetve 100%-os gyógyulást figyeltünk meg. Az L6-ADM konjugátum 8 mg/kg és 10 mg/kg dózisai esetében 1,8 illetve 3,5 LCK-nak megfelelő daganatellenes hatást figyeltünk meg, amely szignifikánsan jobb az optimalizált adriamicinénél, de kisebb, mint az internálódó BR64-ADM konjugátum ekvivalens dózisai által kifejtett hatás. így az adatok azt mutatják, hogy a kötődó neminternálódó L6-ADM konjugátum daganatellenes hatása felülmúlja a nem-konjugált adriamicinét. Az L6-adriamicin konjugátummal való kezelés kisebb daganatellenes hatást eredmé-73 nyez, mint amely az internálódó BR64-adriamicin konjugátum megfelelő dózisainál volt megfigyelhető.
VI.hatásvizsgálati példa
A ChiBR96 és adriamicin konjugátumának in vivő daganatellenes hatása
A ChiBR96-ADM konjugátumok daganatellenes hatását kifejlődött humán tüdő- (L2987), mell- [MCF7, az ATCC-ben az ATCC HTB 22 azonosítási számon hozzáférhető; ld. még I. Hellström és munkatársai, Cancer Research 50:2183 (1990)] és vastagbél (RCA, amely M. Brattaintól, Baylor University származott, és ld még I. Hellström és munkatársai, Cancer Research 50:2183 (1990)] daganatok esetében vizsgáltuk.
Az állatokat az V.hatásvizsgálati példában leírtak szerint tartottuk és daganat xenograft modelleket hoztunk létre az MCF7 és RCA és az L2987 humán tumor vonalakkal, ahogy azt az L2987 daganatvonal esetében az előző példában leírtuk. Az anyagokat is az V.hatásvizsgálati példában megadott módon adagoltuk.
Az L2987 humán tüdődaganatos állatok kezelését általáQ bán akkor kezdtük, amikor a közepes daganatméret a 75 mm térfogatot elérte, ami az implantáció után 12-14 nappal következett be. Az átlagos TVDT 4,8+0,9 nap volt, és a daganatellenes hatást 500 mn? daganatméretnél becsültük. Néhány kísérletben a kezelést akkor kezdtük, amikor a daganatok térfogata elérte a 225 mm^-t.
Az MCF7 daganat egy ösztrogénfüggő humán melldaganatvonal. Thymushiányos egerekbe 0,65 mg-os (65 nap felszabadulási idő) ösztradiol pasztillát (Innovative Research of America, Toledo, Ohio) ültettünk be a daganat implantálásá-74 nak napján. A gyógyszeres kezelést akkor kezdtük, amikor a daganat térfogata a 100 mm°-t elérte, ehhez általában az implantációtól számítva 13 nap volt szükséges. Az MCF7 daganat átlagos TVDT érték 6,4±2,0 nap volt és a daganatellenes hatást 500 mm^-nél becsültük.
Az RCA vastagbéldaganatos egereknél a gyógykezelést a daganat beültetése után 15 nappal kezdtük, amikor az átlagos o daganatméret 75 mm volt. Az RCA daganat xenograft esetében az átlagos TVDT 9,5±1,5 napnak adódott, és a daganatellenes hatást 400 mm° térfogatnál értékeltük. Az optimalizált adriamicinnek az L2987, MCF7 és RCA xenograft modellek esetében kapott daganatellenes hatásadatait a következő táblázatokban foglaljuk össze, és a hivatkozott ábrákon szemléltetjük.
A ChiBR96-ADM konjugátum daganatellenes hatását az optimalizált adriamicin és a nem-kötődő (IgG) immunkonjugátum ekvivalens dózisai által mutatott hatásokhoz hasonlítjuk. Minden modellben teljes daganatregressziót és/vagy a létrehozott daganat gyógyulását figyeltük meg a ChiBR96-ADM konjugátum tolerált dózisainak beadása után.
A ChiBR96-ADM konjugátum antigénspecifikus daganatellenes hatását szemléltető adatokat a 9. és 10.ábrán tüntettük fel. Amint az a 9.ábrán látható, a ChiBR96-ADM konjugátum (MR = 4,19) 10 mg/kg adriamicinnel ekvivalens dózisban intraperitoneálisan adagolva 10 LCK ekvivalensnél nagyobb daganatellenes hatást fejtett ki. Ennél a ChiBr96ADM konjugátum dózisnál az egerek 78%-ánál gyógyulás következett be és emellett 11%-ánál teljes daganatregresszió volt megfigyelhető. 5 mg/kg ChiBR96-ADM adagolását követően szintén 10-nél nagyobb LCK-nak megfelelő daganatellenes hatás volt tapasztalható, ekkor a daganatok 88%-a esetében következett be gyógyulás és 12%-a esetében teljes regreszszió. A ChiBR96-ADM konjugátum adagolását követően lényegesen jobb daganatéilenes hatást (nagyobb mint 10 LCK) figyeltünk meg, mint az optimalizált adriamicin esetében (1,0 LCK). A ChiBR96-ADM konjugátum az optimalizált adiramicinnél is hatásosabb volt; azaz, a ChiBR96-ADM konjugátum daganatellenes hatása 5 mg/kg adriamicinnel ekvivalens dózisban felülmúlta a 8 mg/kg dózisban adagolt adriamicin hatását. A nem-kötődő humán IgG konjugátum (MR = 7,16) nem volt hatásos 10 mg/kg adriamicinnek megfelelő dózisban az L2987 xenograft esetében, ami arra utal, hogy a ChiBR96-ADM konjugátum kiváló hatása az immunkonjugátum L2987 daganatsejtekhez való antigén-specifikus kötődésének köszönhető.
Hasonló adatok láthatók a 10.ábrán is. Megfigyelhető, hogy a ChiBR96-ADM konjugátum (MR = 5,8) 10 mg/kg adriamicinnel ekvivalens dózisban 10 LCK-nál nagyobb daganatellenes hatást fejt ki. Ilyen dózis hatására a daganatok 90%-a gyógyul és 10%-ánál regresszió következik be. A ChiBR96-ADM konjugátum 5 mg/kg dózisa esetében az LCK értéke 4,8, a daganatok 10%-a gyógyul, 50%-a teljesen és 10%-a részlegesen visszafejlődik. A ChiBR96-ADM konjugátum nagy mértékben felülmúlta az optimalizált adriamicin hatását (1,6 LCK), és mint fentebb leírtuk, a ChBR96-ADM konjugátum hatásosabb volt, mint a nem-konjugált adriamicin. A nem-kötődő IgG-ADM konjugátum (MR = 7,16) nem volt hatásos 10 mg/kg dózisban.
-76A különböző, a relaxált antitest technikával készült ChiBR96-ADM konjugátumok L2987 humán tüdódaganat xenografttal szemben kifejtett daganatellenes hatásadatait a
II.táblázatban foglaljuk össze.
r-* co σχ CM
:θ “Ο *Ο
Φ C ύ- φ Ή J3 Ξ Φ Φ Ν φ φ 4-J 'Φ
CÜ 4J Γ-Η
Ν ΦΦ 'Φ-C
I _Q ΦΟ 'Φ Φ4->
I— Cύφ φ • ι—Ηί-4 ►Ή r—|CT*
ΗΗ φΟ
4~) C Φ Φ C X φ cn φ “□ ο Ε □
4-> 'Φ cn □
••Ό
C
Ο -X α <
\ο σχ cr m _c ω φ Ε >Φ
Ν
2Κ
Φ ί-π φ Οι LJ
οχ οχ οχ οχ σχ σχ σχ σχ σχ σχ σχ σχ σχ σχ οο ιη ιη
ΟΟ οο rH rH co σ* ο ο ιη . r-co σ·τ-< ιη^^
ΦΟΟΗηΟ ιη μ* m «η γ*
ΟΟΟ rH rH ι-4 CN ΗηΗ QQ OOUCN rH rH rH CM rH^rH
CN rH OO cMmcN CM rH rH in CM m CN m2oo°
ΟΠΗ CN m rH θοοο 0^00 d ο o OO OO o2 2-0 rH r-1 rH rH CN >T
HOOr-1 —. O CN rH rH m CO rH r-í CN rH
kO m
CU Λ > > CUCU>> Ch> > CX> ΟηΛ ΛΟι > > > ΡηΟηΡηΡ<Ο4>>>> > Ό ·Ή ·Η Ή ·Η ·Ή ·»-4 -Ή Ή ·Ή Ή ·Ή ·<Η Ή ·<-4 ·<Η ·Η ·Ή ·*4 ·Η ·*4 ·<Η ·<Η ·»Η Ή ««-4 ·»Η ·»Η Ή Ή -«-4 Ό X σ ^4 σ Ε
Φ Φ 4J •Ή Χ> C C mocom ο<τ-9τ ocom^r· ^roo^ Η rH (NO CDinCNXO rH CN O m CN in CN Ο in O m 4T rncN οχ m m rH m cn m m mm in cn cm
CM rH 00*?
-6.85 σχ rH M· in 00 m cn »—I σχ rH *? o oo in CN 00 m CN CO m 1
1 s 2 1 X l X X X X X
C Q o o Q Q Q Q Q L— .—1
C- D < I < < 1 < < < < | < 1 rí o
4-> 'Λ 1 m m 1 m m m m m m •r- Ξ
cn cn σχ σχ σχ σχ σχ σχ σχ (X
3 ct α ez cc ez cc α ez • r·
’*“3 ω CQ m co o co CQ CQ C-l
c •<H -*H ή •H •«4 ♦*4 ••H •H C
o £ X x x X X X X
o o o u o o o o
Φ 'Φ r-H o cn φ TJ φ
N
Φ
C
Φ JO Xü 4J
Φ Φ
Φ
Φ 'Φ r—|
Φ fM
Φ _y c φ O c •H
-78Mint látható, a ChiBR96-ADM konjugátum daganatellenes hatása felülmúlja az optimalizált adriamicinét és a ChiBR96-ADM konjugátumok 6-8-szor hatásosabbak, mint a nemkonjugált adriamicin.
A ChiBR96-ADM konjugátum daganatellenes hatását nagy (225 mra^) kifejlődött L2987 daganatokkal szemben is értékeltük (11.ábra). A ChiBR96-ADM konjugátum (MR =6,85) 10 mg/kg adriamicinnel ekvivalens dózisban való adagolása 10 LCK-nak megfelelő daganatellenes hatást idéz elő, 70%-ban gyógyulás és 30%-ban részleges daganatregresszió figyelhető meg.
A nem-konjugált ChiBR96 antitest daganatellenes hatását 50-100 mm3 térfogatú L2987 humán tüdődaganat xenograft segítségével állapítottuk meg. Mint az a III.táblázatban látható, a ChBR96 antitest 100, 200 vagy 400 mg/kg dózisban adagolva nem hatásos a transzplantációval létrehozott L2987 daganattal szemben. A ChiBR96 és adramicin keverékeinek hatása nem különbözik az adriamicinnek magának a daganatellenes hatásától, ezért a ChiBR96-ADM konjugátumok daganatellenes hatása ezért arra utal, hogy a hatás inkább a konjugátumnak magának köszönhető, és nem az antitest és adriamicin szinergizmusának következménye.
* · · • · · ♦ · · • · · * ··· · ··
III.Táblázat
Adriamicin, ChiBR96 valamint ChiBR96 és adriamicin keverékek daganatellenes hatása kifejlődött L2987 humán daganat xenograftokkal szemben
Dózis (mg/kg) a Daganatregresszió (%)
Kezelés ADM ChiBR96 LCK PR CR Gyógyulás Egerek száma
Adriamicin 8 - 1,5 0 0 0 9
ChiBR96 - 400 0 0 0 0 8
- 200 0 0 0 0 8
- 100 0 0 0 0 8
Adriamicin + 8 400 1,8 11 0 0 9
ChiBR96 8 200 1,6 0 0 0 9
8 100 1,9 0 0 0 8
a Az adagolás intravénásán, a q4dx3 program szerint történt, összefoglalva tehát, a ChiBR96-ADM konjugátumok a kifejlődött L2987 humán tüdődaganatokkal szemben antigénspecifikus daganatellenes hatást mutattak. A ChiBR96-ADM konjugátumok daganatellenes hatása felülmúlta az optimalizált adriamicinét, a ChiBR96 és adriamicin keverékéét, és a nem-kötődő konjugátumok ekvivalens dózisáét. A ChiBR96-ADM konjugátumok megközelítőleg hatszor hatékonyabbak voltak a nem-konjugált adriamicinnél. Gyógyulás vagy a létrehozott daganatok teljes regressziója volt megfigyelhető a kezelt állatok 50%-ánál a ChiBR96-ADM konjugátumok 2,5 mg/kg vagy ennél nagyobb dózisainál.
Mint az a 12.ábrán látható, a ChiBR96-ADM konjugátumok (MR = 7,88) antigénspecifikus daganatellenes hatást mutattak kifejlődött ( 75-125 mm^ ) MFC7 daganatokkal szemben. A ChiBR96-ADM konjugátum 5 mg/kg dózisban intraperitoneálisan vagy intravénásán adagolva jobb (4,2 LCK) hatásfejtett ki, mint az optimalizált adramicin (1,4 LCK) vagy a nem-kötödö IgG konjugátum ekvivalens dózisa (1,2 LCK). A ChiBR96-ADM és a nem-kötódó IgG-ADM konjugátumok daganatellenes hatásadatait a IV.táblázatban foglaltuk össze. A ChiBR96-ADM konjugátumok MTD értéke ugyanúgy, mint a szabad adriamiciné, alacsonyabb az MCF7 modellben, mivel a tumornövekedéshez ösztradiol-utánpótlásra van szükség.
IV.Táblázat
A ChiBR96-ADM tioéter konjugátumok kifejlődött MCF7 humán melldaganat xenograftok esetében mért daganatellenes hatásadatainak összefoglalása
Dózis (mg/kg)a Daganatregresszió (%)
Konjugátum ADM ChiBR96 Mód LCK PR CR Gyógyulás Egerek száma
ChiBR96- ADM-7,88 10 350 ip _b 10
5 175 ip 4,2 30 0 0 10
5 175 iv 4,2 50 10 0 10
IgG-ADM- 7,16 5 225 ip 1,1 0 0 0 10
2,5 112 ip 0,6 0 0 0 10
Adriamicin 2,5 112 iv 0,8 0 0 0 10
6 0 iv 1,4 0 0 0 10
a Minden adagolás q4dx3 program szerint történt.
b Az immunkonjugátum ezen dózisánál a letalitás 40%-os volt.
A ChiBR96-ADM konjugátumok antigén-specifikus daganatellenes hatását RCA humán vastagbél karcinóma modellben is értékeltük. Az RCA daganatok kevésbé érzékenyek a nemkonjugált adriamicinre, mint az L2987 és MCF7 daganatok. Emellett, mint már korábban leírták, az RCA daganatok megkettőződéséhez hosszabb idő szükséges, mint az L2987 vagy MCF7 daganatokéhoz, rosszabbul ereződnek, és a jelzett BR64 • · ··
-82antitestek lokalizációja is alacsonyabb az RCA daganatokban, mint az L2987 daganatokban. Amint azt a 13.ábra mutatja, a ChiBR96-ADM konjugátum (MR = 7,88) daganatellenes hatása 10 mg/kg dózis esetén felülmúlja az adriamicinét és a nemkötodö IgG konjugátum (MR = 7,16) ekvivalens dózisáét. Az
V.táblázatból látható, hogy a ChiBR96-ADM konjugátum 10 mg/kg dózisban vizsgálva 3 LCK-val ekvivalens daganatellenes hatást fejtett ki. A ChiBR96-ADM konjugátum ezen dózisa esetén 89%-ban gyógyulás és 11%-ban részleges daganatregresszió következett be. Ebben a kísérletben a nem-konjugált adriamicin 0,4 LCK-val ekvivalens daganatellenes hatást mutatott. így, ebben a kísérletben a BR96-ADM konjugátum 89%-ban gyógyította a kifejlett daganatokat, míg a nemkonjugált adriamicin inaktívnak bizonyult.
V.Táblázat
A ChiBR96-ADM tioéter konjugátumok kifejlődött RCA humán vastagbél daganat xenograftokkal szembeni daganatellenes hatásadatainak összefoglalása
Dózis (mg/kg)a Daganatregresszió (%)
Konjugátum ADM ChiBR96 Mód LCK PR CR Gyógyulás Egerek száma
ChiBR96-
ADM-7,88 10 350 ip 3 11 0 89 9
5 175 ip 0,6 11 22 11 9
2,5 85 ip 0,2 0 0 0 9
2,5 85 iv 0,6 11 0 0 9
• « ·
-83(az V.táblázat folytatása)
IgG-ADM-7,16
Adriamicin 10 405 ip 0 0 0 0 9
8 0 iv 0,4 0 0 0 9
a Az adagolás minden esetben a q4dx3 program szerint történt.
összefoglalva, a ChiBR96-ADM konjugátum antigén-specifikus daganatellenes hatást mutatott az RCA humán vastagbéldaganat modellben. A ChiBR96-ADM konjugátum 5-10 mg/kg dózisai esetében a kifejlődött RCA daganat gyógyulását vagy teljes regresszióját figyeltük meg.
A találmányt speciális példákra, anyagokra és adatokra való utalással írtuk le. A szakember számára nyilvánvaló, hogy a találmány eltérő eszközökkel és módon is megvalósítható. Az ilyen eltérő eszközök és módok is a jelen találmány szándékához és szelleméhez tartoznak, amint azt a következő igénypontok meghatározzák.

Claims (75)

  1. Szabadalmi igénypontok:
    1. (Ha) általános képletű vegyületek, amelyekben
    D gyógyászatilag hatásos molekularész;
    η 1 és 10 közötti egész szám; és
    R egy Michael addíciós receptor.
  2. 2. Az 1.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben D egy citotoxikus hatású molekularész.
  3. 3. A 2.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben D egy antraciklin antibiotikum, vinkaalkaloid, mitomicin, bleomicin, citotoxikus nukleozid, pteridin vagy egy podofillotoxin.
  4. 4. A 3.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben D egy antraciklin antibiotikum.
  5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti olyan vegyületek, amelyekben R maleimidocsoport.
  6. 6. (Ilb) általános képletű vegyületek, amelyekben
    R! -CH3, -CH2OH, -CH2OCO(CH2)3CH3 vagy -CH2OCOCH(OC2H5)2 csoport;
    R3 -OCH3 vagy -OH csoport vagy hidrogénatom;
    R4 -NH2, -NHCOCF3, 4-morfolinil-, 3-ciano-4-morfolinil-,
    1-piperidinil-, 4-metoxi-l-piperidinil-, benzil-amino-, dibenzil-amino-, ciano-metil-amino- vagy l-ciano-2metoxi-etil-amino-csoport;
    Rg -OH vagy -OTHP csoport vagy hidrogénatom;
    Rg -OH csoport vagy hidrogénatom, feltéve, hogy Rg nem -OH csoport, amikor Rg -OH vagy -OTHP csoport;
    η 1 és 10 közötti egész szám; és
    R Michael addíciós receptor molekularész.
    -85* 99 9999 9999 ···· ί 9 9 • ··« 9 · • · · » * ··« · *«
  7. 7. Α 6.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben n értéke 5.
  8. 8. A 7.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben R maleimidocsoport.
  9. 9. (IIc) általános képletű vegyületek, amelyekben
    Rt -CH3, -CH2OH, -CH2OCO(CH2)3CH3 vagy -CH2OCOCH(OC2H5)2 csoport;
    R3 -OCH3 vagy -OH csoport vagy hidrogénatom;
    R4 -NH2, -NHCOCF3, 4-morfolinil-, 3-ciano-4-morfolinil-, 1-piperidinil-, 4-metoxi-l-piperidinil-, benzil-amino-, dibenzil-amino-, ciano-metil-amino- vagy l-ciano-2metoxi-etil-amino-csoport;
    Rg -OH vagy -OTHP csoport vagy hidrogénatom;
    Rg -OH csoport vagy hidrogénatom, feltéve, hogy Rg nem -OH csoport, amikor Rg -OH vagy -OTHP csoport; és η 1 és 10 közötti egész szám.
  10. 10. A 6-9.igénypontok bármelyike szerinti olyan vegyületek, amelyekben az antraciklin molekularész adriamicin, daunomicin, detorubicin, karminomicin, idarubicin, epirubicin, AD32, 4-morfolinil-adriamicin vagy 3’-deamino-3’-(3-ciano-4morfolinil)-doxorubicin.
  11. 11. A 10.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben az antraciklin molekularész adriamicin.
  12. 12. (I) általános képletú olyan vegyületek, amelyekben
    D gyógyászatilag hatásos molekularész;
    η 1 és 10 közötti egész szám;
    p 1 és 6 közötti egész szám;
    Y oxigénatom vagy -NH2 +C1“ csoport;
    z értéke 0 vagy 1;
    ♦ ··** ♦··· * ·«· * « • * · · * ··* · ··
    -86q értéke kb. 1 - kb. 10;
    X egy ligandum; és
    A Michael addíciós adduktum molekularész.
  13. 13. A 12.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben D egy citotoxikus hatású anyag.
  14. 14. A 12.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben D egy antraciklin antibiotikum, vinkaalkaloid, mitomicin, bleomicin, citotoxikus nukleozid, pteridin vagy egy podof illotoxin.
  15. 15. A 12. igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben D antraciklin antibiotikum.
  16. 16. A 12-15.igényontok szerinti olyan vegyületek, amelyekben n értéke 5.
  17. 17. A 16. igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben jelentése szukcinimidocsoport.
  18. 18. A 17.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben immunglobulin vagy annak fragmentuma.
  19. 19. A 18.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben
    BR96, BR64, L6, relaxált BR96, relaxált BR64, relaxált L6, kimérás BR96, kimérás BR64, kimérás L6, relaxált kimérás BR96, relaxált kimérás BR64, relaxált kimérás L6 immunglobulin vagy ezek fragmentje.
  20. 20. A 19. igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben X kimérás BR96, relaxált kimérás BR96 vagy ezek fragmentuma.
  21. 21. A 12-17.igénypontok bármelyike szerinti olyan vegyületek, amelyekben X bombezin, EGF, transzferrin, gasztrin, gasztrint felszabadító peptid, vérlemezkéből származó növe kedési faktor, IL-2, IL-6, TGF-alfa, TGF-béta, VGF, inzulin és inzulinszerű növekedési faktor I vagy II.
  22. 22. A 21.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben X bombezin.
  23. 23. A 12-17.igénypontok bármelyike szerinti olyan vegyületek, amelyekben X szénhidrát, szteroid vagy lektin.
  24. 24. (Ia) általános képletű vegyületek, amelyekben
    Rj -CH3, -CH2OH, -CH2OCO(CH2)3CH3 vagy -CH2OCOCH(OC2H5)2 csoport;
    Rg -OCH3 vagy -OH csoport vagy hidrogénatom;
    R4 -NH2, -NHCOCF3, 4-morfolinil-, 3-ciano-4-morfolinil-, 1-piperidinil-, 4-metoxi-l-piperidinil-, benzil-amino-, dibenzil-amino-, ciano-metil-amino- vagy l-ciano-2metoxi-etil-amino-csoport;
    Rg -OH vagy -OTHP csoport vagy hidrogénatom;
    Λ
    Rg -OH csoport vagy hidrogénatom, feltéve, hogy Rg nem -OH csoport, amikor Rg -OH vagy -OTHP csoport;
    η 1 és 10 közötti egész szám;
    p 1 és 6 közötti egész szám;
    Y oxigénatom vagy -NH2 +C1- csoport;
    z értéke 0 vagy 1;
    q értéke kb. 1 - kb. 10;
    X egy ligandum.
  25. 25. A 24.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben Y oxigénatom, p értéke 2 és z értéke 1.
  26. 26. A 24. igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben Y =NH2 +C1“ csoport, p értéke 3 és z értéke 1.
  27. 27. 24.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben z értéke 0.
  28. 28. A 24-27.igénypontok bármelyike szerinti olyan vegyületek, amelyekben az antraciklin antibiotikum molekularész adriamicin, daunomicin, detorubicin, karminomicin, idarubucin, epirubicin, AD-32, 4-morfolinil-adriamicin vagy 3’deamino-3’-(3-ciano-4-morfolinil)-doxorubicin.
  29. 29. A 28.igénypont szerinti olyan vegyűletek, amelyekben az antraciklin molekularész adramicin.
  30. 30. a 28.igéypont szerinti olyan vegyűletek, amelyekben X immunglobulin vagy annak fragmentuma.
  31. 31. A 30.igénypont szerinti olyan vegyűletek, amelyekben X
    BR96, BR64, L6, relaxált BR96, relaxált BR64, relaxált kimérés BR96, relaxált kimérés BR64, relaxált kimérés L6 immunglobulin vagy ezek fragmentuma.
  32. 32. A 31.igénypont szerinti olyan vegyűletek, amelyekben X kimérés BR96, relaxált kimérés BR96 vagy ezek fragmentuma.
  33. 33. A 24-27.igénypontok bármelyike szerinti olyan vegyületek, amelyekben X bombezin, EGF, transzferrin, gasztrin, gasztrint felszabadító peptid, vérlemezkéből származó növekedési faktor, IL-2, IL-6, TGF-alfa, TGF-béta, VGF, inzulin és inzulinszeru növekedési faktor I vagy II.
  34. 34. A 33.igénypont szerinti olyan vegyűletek, amelyekben X bombezin.
  35. 35. A 24-27.igénypontok bármelyike szerinti olyan vegyületek, amelyekben X szénhidrát, szteroid vagy lektin.
  36. 36. (Ib) általános képletű vegyűletek, amelyekben η 1 és 10 közötti egész szám;
    q kb. 1 - kb. 10; és
    X egy ligandum.
  37. 37. A 36.igénypont szerinti olyan vegyűletek, amelyekben X immunglobulin vagy annak fragmentuma.
  38. 38. A 37.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben X
    BR96, BR64, L6, relaxált BR96, relaxált BR64, relaxált L6, kimérás BR96, kimérás BR64 , kimérás L6, relaxált kimérás
    BR96, relaxált kimérás BR64, relaxált kimérás L6 immunglobul in vagy ezek fragmentuma.
  39. 39. A
    38.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben kimérás BR96, relaxált kimérás BR96 vagy ezek fragmentuma.
  40. 40. A 36.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben fehérje vagy peptid.
  41. 41. A 40.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben bombezin, EGF, transzferrin, gasztrin vagy gasztrint felszabadító peptid.
  42. 42. A 41.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben bombezin.
  43. 43. A 36.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben szénhidrát, szteroid vagy lektin.
  44. 44. (Ic) általános képletű vegyületek, amelyekben q értéke kb. 4-kb.
    X egy ligandum.
  45. 45.
    A 44.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben egy immunglobulin vagy annak fragmentuma.
  46. 46.
    A 45.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben
    BR96, BR64, L6, relaxált BR96, relaxált BR64, relaxált L6, kimérás BR96, kimérás BR64, kimérás L6, relaxált kimérás
    BR96, relaxált kimérás BR64, relaxált kimérás L6 immunglo bulin vagy ezek fragmentuma.
    48. A 44.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben X
  47. 47. A 46.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben X kimérás BR96, relaxált kimérás BR96 vagy ezek fragmentuma.
    fehérje vagy peptid.
  48. 49. A 48.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben X bombezin, EGF , transzferrin, gasztrin vagy gasztrint felszabadító peptid.
  49. 50. A 49.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben X bombezin.
  50. 51. A 44.igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben X szénhidrát, szteroid vagy lektin.
  51. 52. (Id) általános képletű vegyületek, amelyekben q értéke kb. 4 - kb. 8, és lg relaxált kimérás BR96 antitest vagy annak fragmentuma.
  52. 53. Eljárás diszulfidhidat tartalmazó fehérje redukálására, azzal jellemezve, hogy (a) a fenti fehérjét közömbös atmoszférában redukáljuk; és (b) a terméket kinyerjük.
  53. 54. Az 53.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy redukálószerként DTT-t használunk.
  54. 55. Az 54,igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fehérje egy immunglobulin vagy annak fragmentuma.
  55. 56. Az 55.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az immunglobulin BR64, kimérás BR64, BR96, kimérás BR96, L6, kimérás L6 vagy ezek fragmentuma.
  56. 57. Az 56.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a DTT és ligandum mólaránya kb. 1:1 és 10:1 közötti.
  57. 58. Az 57.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a DTT és ligandum mólaránya kb. 6:1 és kb. 10:1 közötti.
  58. 59. Az 58.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a redukciós lépést kb. 6,0 és kb. 8,0 közötti pH-η végezzük.
  59. 60. Az 59.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy
    -91• «· · · • · · · « a redukciós lépést kb. 7,0 és kb. 7,5 közöti pH-η végezzük.
  60. 61. A 60.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a terméket diaszűréssel tisztítjuk.
  61. 62. A 61.igénypont szerinti eljárás, amelyet az is jellemez, hogy a redukált immunglobulint egy (Ha) általános képletú vegyülettel, a képletben D egy gyógyhatású anyag molekularész, η 1 és 10 közötti egész szám, és R egy Michael addíciós receptor.
  62. 63. A 62.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a gyógyhatású anyag molekularész egy antraciklin antibiotikum, R maleimidocsoport és n értéke 5.
  63. 64. A 63.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antraciklin antibiotikum adriamicin.
  64. 65. Redukált immunglobulin az 53.igénypont szerinti eljárással előállítva.
  65. 66. Készítmény, amely hatóanyagként (la) általános képletű vegyületet, a képletben
    Rx -CH3, -CH2OH, -CH2OCO(CH2)3CH3 vagy -CH2OCOCH(OC2Hg)2 csoport;
    R3 -OCH3 vagy -OH csoport vagy hidrogénatom;
    R4 -NH2, -NHCOCF3, 4-morfolinil-, 3-ciano-4-morfolinil-,
    1-piperidinil-, 4-metoxi-l-piperidinil-, benzil-amino-, dibenzil-amino-, ciano-metil-amino- vagy l-ciano-2metoxi-etil-amino-csoport;
    Rg -OH vagy -OTHP csoport vagy hidrogénatom;
    Rg -OH csoport vagy hidrogénatom, feltéve, hogy Rg nem -OH csoport, amikor Rg -OH vagy -OTHP csoport;
    η 1 és 10 közötti egész szám;
    p 1 és 6 közötti egész szám;
    -92• · ·· · • · · « · ·· ·
    Y oxigénatom vagy -NH2+C1“ csoport;
    z értéke 0 vagy 1;
    q értéke kb. 1 - kb. 10;
    X egy ligandum, és gyógyászatilag elfogadható hordozó-, hígító- vagy segédanyagot tartalmaz.
  66. 67. Készítmény, amely hatóanyagként (Ib) általános képletű vegyületet, a képletben n értéke 1-10;
    q kb. 1 - kb. 10; és
    X egy ligandum, és gyógyászatilag elfogadható hordozó-, hígító- vagy segédanyagot tartalmaz.
  67. 68. A 67.igénypont szerinti készítmény, amelyben n értéke 5, X relaxált kimérás BR96 antitest és q értéke kb. 4 és kb. 8 közötti.
  68. 69. Készítmény, amely hatóanyagként (ld) általános képletű vegyületet, a képletben q értéke kb. 4 és kb. 8 közötti, és lg egy relaxált kimérás BR96 antitest vagy annak fragmentuma, és gyógyászatilag elfogadható hordozó-, hígító- vagy segédanyagot tartalmaz.
  69. 70. A 12-52.igénypontok szerinti vegyületek alkalmazása a gyógyászatban.
  70. 71. Eljárás (I) általános képletű vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy
    a) egy (Ha) általános képletű vegyületet egy (III) általános képletű vegyülettel reagáltatunk; vagy
    b) egy (IV) általános képletű vegyületet egy (V) általános képletű vegyülettel reagáltatunk, a képletekben
    I ♦ ··
    D gyógyászatilag hatásos molekularész; n 1 és 10 közötti egész szám; P 1 és 6 közötti egész szám; Y oxigénatom vagy -NH2+C1“ csoport; z értéke 0 vagy 1; q értéke kb. 1 - kb. 10; X egy ligandum; R Michael addíciós receptor és A Michael addíciós adduktum molekularész, és kívánt esetben a terméket elkülönítjük.
  71. 72. A 71.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy X immunglobulin vagy annak fragmentuma.
  72. 73. A 72.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az X immunglobulin BR96, Br64, L6, kimérás BR96, kimérás BR64, kimérás L6, relaxált BR96, relaxált BR64, relaxált L6, relaxált kimérás BR96, relaxált kimérás BR64, vagy relaxált kimérás L6 vagy ezek fragmentuma.
    74. . A 73.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az immunglobulin kimérás BR96, relaxált kimérás BR96 vagy
    ezek fragmentuma.
  73. 75. A 74.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy D antraciklin antibiotikumként adriamicint, daunomicint, detorubicint, karminomicint, idarubicint, epirubicint, AD-32-t, 4-morfolinil-adriamicint vagy 3’-deamino-3’-( 3ciano-4-morfolinil)-doxorubicint jelent.
    76. . A 75.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antraciklin antibiotikum adriamicin. 77, > A 76.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy
    n értéke 5.
    -94I i
  74. 78. A 77.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy z értéke 0.
  75. 79. A 78.igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy q értéke kb. 4 és kb. 8 közötti.
HU9300156A 1992-01-23 1993-01-21 Compounds of pharmaceutical activity containing thioether-bridge-bond and process for producing them HUT68345A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/824,951 US5622929A (en) 1992-01-23 1992-01-23 Thioether conjugates

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HU9300156D0 HU9300156D0 (en) 1993-04-28
HUT68345A true HUT68345A (en) 1995-06-28

Family

ID=25242736

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9300156A HUT68345A (en) 1992-01-23 1993-01-21 Compounds of pharmaceutical activity containing thioether-bridge-bond and process for producing them

Country Status (26)

Country Link
US (3) US5622929A (hu)
EP (1) EP0554708B9 (hu)
JP (1) JPH0625012A (hu)
CN (3) CN1040540C (hu)
AT (1) ATE294592T1 (hu)
AU (1) AU666903B2 (hu)
BG (1) BG61899B1 (hu)
CA (1) CA2087286C (hu)
CZ (1) CZ297409B6 (hu)
DE (1) DE69333800T2 (hu)
DK (1) DK0554708T3 (hu)
EG (1) EG20406A (hu)
ES (1) ES2240959T3 (hu)
FI (1) FI930240A (hu)
HU (1) HUT68345A (hu)
IL (1) IL104475A0 (hu)
MX (1) MX9300298A (hu)
MY (1) MY110526A (hu)
NO (1) NO930189L (hu)
NZ (1) NZ245725A (hu)
OA (1) OA09859A (hu)
PL (6) PL172715B1 (hu)
RO (1) RO112618B1 (hu)
TW (1) TW213921B (hu)
UY (1) UY23541A1 (hu)
ZA (1) ZA93444B (hu)

Families Citing this family (505)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5637616A (en) * 1993-06-18 1997-06-10 Arcturus Pharmaceutical Corporation Method for treating diseases mediated by proteases
AU1140495A (en) * 1994-01-27 1995-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Method for preparing thioether conjugates
US6303120B1 (en) * 1994-03-15 2001-10-16 Memorial Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of glycoconjugates of the lewis y epitope and uses thereof
US5708163A (en) * 1994-03-15 1998-01-13 Sloan-Kettering Institute Of Cancer Research Synthesis of the breast tumor-associated antigen defined by monoclonalantibody MBRL and uses thereof
US6544952B1 (en) 1994-03-15 2003-04-08 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of glycoconjugates of the globo-H epitope and uses thereof
US5866679A (en) * 1994-06-28 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Peptides
US6143864A (en) * 1994-06-28 2000-11-07 Merck & Co., Inc. Peptides
US5599686A (en) * 1994-06-28 1997-02-04 Merck & Co., Inc. Peptides
US7820798B2 (en) * 1994-11-07 2010-10-26 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US7597886B2 (en) * 1994-11-07 2009-10-06 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US5907030A (en) * 1995-01-25 1999-05-25 University Of Southern California Method and compositions for lipidization of hydrophilic molecules
US7429646B1 (en) 1995-06-05 2008-09-30 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to human tumor necrosis factor receptor-like 2
US20030119724A1 (en) * 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
JP2000503639A (ja) * 1995-12-22 2000-03-28 ブリストル―マイヤーズ スクイブ カンパニー 分枝ヒドラゾンのリンカー類
US7888466B2 (en) 1996-01-11 2011-02-15 Human Genome Sciences, Inc. Human G-protein chemokine receptor HSATU68
SE9601158D0 (sv) * 1996-03-26 1996-03-26 Stefan Svenson Method of producing immunogenic products and vaccines
DE19636889A1 (de) 1996-09-11 1998-03-12 Felix Dr Kratz Antineoplastisch wirkende Transferrin- und Albuminkonjugate zytostatischer Verbindungen aus der Gruppe der Anthrazykline, Alkylantien, Antimetabolite und Cisplatin-Analoga und diese enthaltende Arzneimittel
JP2001505194A (ja) * 1996-11-05 2001-04-17 ブリストル―マイヤーズ・スクイブ・カンパニー 分枝ペプチド・リンカー
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
FR2766826B1 (fr) 1997-08-04 2001-05-18 Pasteur Institut Vecteurs derives d'anticorps pour le transfert de substances dans les cellules
US6093692A (en) * 1997-09-25 2000-07-25 The University Of Southern California Method and compositions for lipidization of hydrophilic molecules
CA2323776C (en) 1998-03-19 2010-04-27 Human Genome Sciences, Inc. Cytokine receptor common gamma chain like
CA2338000C (en) * 1998-07-17 2009-12-15 The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Water-soluble 4-thio-maleimido derivatives and methods for their production
EP1161451A4 (en) 1999-02-26 2006-05-17 Human Genome Sciences Inc HUMAN ALPHA ENDOKIN AND METHOD FOR ITS USE
US6322980B1 (en) 1999-04-30 2001-11-27 Aclara Biosciences, Inc. Single nucleotide detection using degradation of a fluorescent sequence
US6649351B2 (en) 1999-04-30 2003-11-18 Aclara Biosciences, Inc. Methods for detecting a plurality of analytes by mass spectrometry
US6673550B2 (en) 1999-04-30 2004-01-06 Aclara Biosciences, Inc. Electrophoretic tag reagents comprising fluorescent compounds
US7001725B2 (en) 1999-04-30 2006-02-21 Aclara Biosciences, Inc. Kits employing generalized target-binding e-tag probes
DE19926154A1 (de) * 1999-06-09 2000-12-14 Ktb Tumorforschungs Gmbh Verfahren zur Herstellung einer injizierbaren Arzneimittelzubereitung
US6706892B1 (en) 1999-09-07 2004-03-16 Conjuchem, Inc. Pulmonary delivery for bioconjugation
AU775373B2 (en) 1999-10-01 2004-07-29 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US7771929B2 (en) * 2000-04-28 2010-08-10 Monogram Biosciences, Inc. Tag library compounds, compositions, kits and methods of use
US7160735B2 (en) * 2000-04-28 2007-01-09 Monogram Biosciences, Inc. Tagged microparticle compositions and methods
US20030031675A1 (en) 2000-06-06 2003-02-13 Mikesell Glen E. B7-related nucleic acids and polypeptides useful for immunomodulation
EP2431054A3 (en) 2000-06-15 2013-03-06 Human Genome Sciences, Inc. Human tumor necrosis factor delta and epsilon
KR101155294B1 (ko) 2000-06-16 2013-03-07 캠브리지 안티바디 테크놀로지 리미티드 면역특이적으로 ＢＬｙＳ에 결합하는 항체
AU2002214649A1 (en) * 2000-10-16 2002-04-29 Neopharm, Inc. Liposomal formulation of mitoxantrone
TWI327600B (en) 2000-11-28 2010-07-21 Medimmune Llc Methods of administering/dosing anti-rsv antibodies for prophylaxis and treatment
CN100406065C (zh) 2000-12-01 2008-07-30 细胞工厂治疗公司 糖基化/半乳糖基化肽、双官能接头和核苷酸单体/多聚体的缀合物以及相关的组合物和使用方法
ATE489395T1 (de) 2000-12-12 2010-12-15 Medimmune Llc Moleküle mit längeren halbwertszeiten, zusammensetzungen und deren verwendung
EP1683865A3 (en) 2001-02-02 2006-10-25 Eli Lilly &amp; Company Mammalian proteins and in particular CD200
WO2002098370A2 (en) * 2001-03-02 2002-12-12 Medimmune, Inc. Methods of administering/dosing cd2 antagonists for the prevention and treatment of autoimmune disorders or inflammatory disorders
EP2228389B1 (en) 2001-04-13 2015-07-08 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies against vascular endothelial growth factor 2
US20030003048A1 (en) * 2001-04-26 2003-01-02 Chun Li Diagnostic imaging compositions, their methods of synthesis and use
CA2447139C (en) 2001-05-11 2013-11-19 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
US7064189B2 (en) 2001-05-25 2006-06-20 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that immunospecifically bind to trail receptors
AU2002303929B9 (en) * 2001-05-31 2007-01-25 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Cytotoxins, prodrugs, linkers and stabilizers useful therefor
US6867189B2 (en) * 2001-07-26 2005-03-15 Genset S.A. Use of adipsin/complement factor D in the treatment of metabolic related disorders
RU2196604C1 (ru) * 2001-12-21 2003-01-20 Северин Евгений Сергеевич Полипептид, являющийся аналогом рецепторсвязывающего фрагмента эпидермального фактора роста с 21-й по 31-ю аминокислоту, его конъюгат с доксорубицином и фармацевтическая композиция на его основе
US7261875B2 (en) 2001-12-21 2007-08-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Dendritic poly (amino acid) carriers and methods of use
AU2003209340A1 (en) * 2002-01-18 2003-09-02 Bristol-Myers Squibb Company Predictor sets for tyrosine kinase pathways
US8435529B2 (en) 2002-06-14 2013-05-07 Immunomedics, Inc. Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy
US8877901B2 (en) * 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US7591994B2 (en) * 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8361464B2 (en) 2002-03-01 2013-01-29 Immunomedics, Inc. Anthracycline-Antibody Conjugates for Cancer Therapy
US9770517B2 (en) 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
KR20040108655A (ko) * 2002-03-05 2004-12-24 아클라라 바이오사이언시스 인코퍼레이티드 막-결합된 민감제를 사용하는 복합 분석법
CA2480052A1 (en) * 2002-04-01 2003-10-16 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that specifically bind to gmad
JP2005535572A (ja) 2002-04-12 2005-11-24 メディミューン，インコーポレーテッド 組換え抗インターロイキン−９抗体
CA2485548A1 (en) 2002-05-10 2004-02-19 Purdue Research Foundation Epha2 agonistic monoclonal antibodies and methods of use thereof
US7105308B2 (en) * 2002-07-25 2006-09-12 Monogram Biosciences, Inc. Detecting receptor oligomerization
US20040229380A1 (en) * 2002-05-21 2004-11-18 Po-Ying Chan-Hui ErbB heterodimers as biomarkers
US7425618B2 (en) 2002-06-14 2008-09-16 Medimmune, Inc. Stabilized anti-respiratory syncytial virus (RSV) antibody formulations
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
WO2004010842A2 (en) * 2002-07-26 2004-02-05 Aclara Biosciences, Inc. Lipophilic electrophoretic probes
US7659241B2 (en) 2002-07-31 2010-02-09 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
DK1534335T4 (en) 2002-08-14 2015-10-05 Macrogenics Inc FCGAMMARIIB-SPECIFIC ANTIBODIES AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
CA2497628A1 (en) * 2002-09-05 2004-03-18 Medimmune, Inc. Methods of preventing or treating cell malignancies by administering cd2 antagonists
PT2891666T (pt) 2002-10-16 2017-09-22 Purdue Pharma Lp Anticorpos que se ligam ca 125/0722p associado a células e métodos para a sua utilização
US20040091850A1 (en) * 2002-11-08 2004-05-13 Travis Boone Single cell analysis of membrane molecules
US8420086B2 (en) 2002-12-13 2013-04-16 Immunomedics, Inc. Camptothecin conjugates of anti-CD22 antibodies for treatment of B cell diseases
WO2004054622A1 (en) * 2002-12-13 2004-07-01 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
MXPA05007615A (es) * 2003-01-21 2005-09-30 Bristol Myers Squibb Co Polinucleotido que codifica una novedosa acil coenzima a, monoacilglicerol aciltransferasa-3 (mgat3), y usos del mismo.
CA2516455C (en) 2003-02-20 2012-05-01 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
EP2316487B1 (en) 2003-04-11 2014-06-11 MedImmune, LLC Recombinant IL-9 antibodies & uses thereof
US7402398B2 (en) * 2003-07-17 2008-07-22 Monogram Biosciences, Inc. Measuring receptor homodimerization
US20060228350A1 (en) * 2003-08-18 2006-10-12 Medimmune, Inc. Framework-shuffling of antibodies
WO2005042743A2 (en) 2003-08-18 2005-05-12 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
US20050130246A1 (en) * 2003-10-27 2005-06-16 Hossein Salimi-Moosavi Detecting human anti-therapeutic antibodies
BR122018071808B8 (pt) 2003-11-06 2020-06-30 Seattle Genetics Inc conjugado
WO2005058961A2 (en) * 2003-12-12 2005-06-30 Amgen Inc. Antibodies specific for human galanin, and uses thereof
GB0401008D0 (en) * 2004-01-17 2004-02-18 Univ Manchester Drug delivery system
US20050175619A1 (en) * 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
US7973139B2 (en) * 2004-03-26 2011-07-05 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies against nogo receptor
US7691962B2 (en) * 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
JP4806680B2 (ja) * 2004-05-19 2011-11-02 メダレックス インコーポレイテッド 自己犠牲リンカー及び薬剤複合体
US7541330B2 (en) * 2004-06-15 2009-06-02 Kosan Biosciences Incorporated Conjugates with reduced adverse systemic effects
WO2006034292A2 (en) 2004-09-21 2006-03-30 Medimmune, Inc. Antibodies against and methods for producing vaccines for respiratory syncytial virus
US20060121042A1 (en) 2004-10-27 2006-06-08 Medimmune, Inc. Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens
US7939267B2 (en) * 2004-11-04 2011-05-10 Laboratory Corporation Of America Holdings Detection of activation of endothelial cells as surrogate marker for angiogenesis
DK1827492T3 (da) 2004-11-30 2010-11-22 Curagen Corp Antistoffer rettet mod GPNMB og anvendelser deraf
DK1851250T3 (da) * 2005-02-18 2012-07-09 Medarex Inc Humant monoklonalt antistof mod prostataspecifikt membranantigen (psma)
US9707302B2 (en) 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
US10058621B2 (en) 2015-06-25 2018-08-28 Immunomedics, Inc. Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers
AU2006227377B2 (en) 2005-03-18 2013-01-31 Medimmune, Llc Framework-shuffling of antibodies
ES2353212T3 (es) * 2005-03-30 2011-02-28 Saladax Biomedical Inc. Inmunoensayo de doxorrubicina.
US7714016B2 (en) * 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
EP2301969B1 (en) 2005-05-06 2015-12-23 ZymoGenetics, Inc. IL-31 monoclonal antibodies and methods of use
WO2007002543A2 (en) 2005-06-23 2007-01-04 Medimmune, Inc. Antibody formulations having optimized aggregation and fragmentation profiles
WO2007008604A2 (en) * 2005-07-08 2007-01-18 Bristol-Myers Squibb Company Single nucleotide polymorphisms associated with dose-dependent edema and methods of use thereof
US20070202512A1 (en) * 2005-08-19 2007-08-30 Bristol-Myers Squibb Company Human single nucleotide polymorphisms associated with dose-dependent weight gain and methods of use thereof
AU2006294554B2 (en) * 2005-09-26 2013-03-21 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Antibody-drug conjugates and methods of use
JP5116686B2 (ja) 2005-10-26 2013-01-09 メダレックス インコーポレイテッド Ｃｃ−１０６５類似体の調製方法及び調製用化合物
CA2628238A1 (en) 2005-11-07 2007-05-18 The Scripps Research Institute Compositions and methods for controlling tissue factor signaling specificity
CA2627190A1 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
WO2007106435A2 (en) * 2006-03-10 2007-09-20 University Of California Cleavable vaccines compositions and methods of making and using the same
AU2007244683A1 (en) 2006-04-27 2007-11-08 Pikamab, Inc. Methods and compositions for antibody therapy
JP5764290B2 (ja) 2006-06-26 2015-08-19 マクロジェニクス，インコーポレーテッド ＦｃγＲＩＩＢ特異的抗体およびその使用法
US7572618B2 (en) 2006-06-30 2009-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotides encoding novel PCSK9 variants
NZ575163A (en) 2006-08-28 2011-12-22 Jolla Inst Allergy Immunolog Antagonistic human light-specific human monoclonal antibodies
EP2759549B1 (en) 2006-09-01 2015-08-19 ZymoGenetics, Inc. IL-31 monoclonal antibodies and methods of use
US20100143254A1 (en) 2006-10-16 2010-06-10 Medimmune, Llc Molecules with reduced half-lives, compositions and uses thereof
PT2099823E (pt) 2006-12-01 2014-12-22 Seattle Genetics Inc Agentes de ligação ao alvo variantes e suas utilizações
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
CN104013956B (zh) * 2007-01-25 2018-12-18 达娜-法勃肿瘤研究所公司 抗egfr抗体在治疗egfr突变体介导的疾病中的用途
EP2121667B1 (en) 2007-02-21 2016-06-08 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof
JP5618549B2 (ja) * 2007-03-15 2014-11-05 ルードヴィッヒ インスティテュート フォー キャンサーリサーチ リミテッド Ｅｇｆｒ抗体及びｓｒｃ阻害剤を用いる治療方法及び関連製剤
WO2008118970A2 (en) 2007-03-27 2008-10-02 Sea Lane Biotechnologies, Llc Constructs and libraries comprising antibody surrogate light chain sequences
MX2009010389A (es) 2007-03-30 2010-01-20 Medimmune Llc Formulacion de anticuerpos.
AU2008246442B2 (en) 2007-05-04 2014-07-03 Technophage, Investigacao E Desenvolvimento Em Biotecnologia, Sa Engineered rabbit antibody variable domains and uses thereof
BRPI0811526A2 (pt) 2007-05-14 2017-05-16 Biowa Inc uso de um anticorpo monoclonal, quimérico, humanizado ou humano que liga o il-5r, anticorpo anti-il-5r isolado, e, epítopo isolado de il-5r alfa
CA2687291A1 (en) * 2007-05-16 2008-11-20 Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh Low-viscous anthracycline formulation
ES2579323T3 (es) 2007-07-16 2016-08-09 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-CD79B e inmunoconjugados y métodos de uso
AU2008276128B2 (en) 2007-07-16 2013-10-10 Genentech, Inc. Humanized anti-CD79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
ES2609915T3 (es) 2007-08-14 2017-04-25 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Anticuerpo monoclonal 175 direccionado al receptor de EGF y derivados y usos del mismo
EP3241846B1 (en) 2007-10-04 2022-02-23 ZymoGenetics, Inc. B7 family member zb7h6 and related compositions and methods
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
WO2009071696A2 (en) 2007-12-07 2009-06-11 Zymogenetics, Inc. Humanized antibody molecules specific for il-31
CA2711843C (en) * 2007-12-20 2018-11-13 Laboratory Corporation Of America Holdings Her-2 diagnostic methods
BRPI0907046A2 (pt) 2008-01-18 2015-07-28 Medimmune Llc Anticorpo de cisteína engenheirada, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, conjugado de anticorpo, composição farmacêutica, métodos de detecção de câncer, doenças ou distúrbios autoimunes, inflamatórios ou infecciosos em um indivíduo e de inibição de proliferação de uma célula alvo
CL2009000062A1 (es) 2008-01-31 2010-05-14 Genentech Inc Anticuerpo humanizado anti cd79b; con modificaciones de cisterna libre; inmunoconjugado que contiene dicho anticuerpo y una droga; polinucleotido que codifica el anticuerpo; vector, celula huesped; composicion farmaceutica y uso de dicha composicion para tratar cancer, preferentemente linfomas.
WO2010015608A1 (en) 2008-08-05 2010-02-11 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting complement protein c5
SG177252A1 (en) 2008-12-01 2012-03-29 Lab Corp America Holdings METHODS AND ASSAYS FOR MEASURING p95 AND/OR p95 IN A SAMPLE AND ANTIBODIES SPECIFIC FOR p95
CA2749846C (en) 2009-01-15 2018-08-07 Laboratory Corporation Of America Holdings Methods of determining patient response by measurement of her-3
WO2010087927A2 (en) 2009-02-02 2010-08-05 Medimmune, Llc Antibodies against and methods for producing vaccines for respiratory syncytial virus
EP2396035A4 (en) 2009-02-12 2012-09-12 Human Genome Sciences Inc USE OF ANTAGONISTS OF PROTEIN STIMULATING LYMPHOCYTES B TO PROMOTE GRAFT TOLERANCE
PL3903829T3 (pl) 2009-02-13 2023-08-14 Immunomedics, Inc. Immunokoniugaty z połączeniem rozszczepialnym wewnątrzkomórkowo
CN102482345A (zh) 2009-05-13 2012-05-30 航道生物技术有限责任公司 针对流感病毒的中和分子
ES2548030T3 (es) 2009-06-01 2015-10-13 Medimmune, Llc Moléculas con semividas prolongadas y usos de las mismas
WO2011005481A1 (en) 2009-06-22 2011-01-13 Medimmune, Llc ENGINEERED Fc REGIONS FOR SITE-SPECIFIC CONJUGATION
DK2769737T3 (en) 2009-07-20 2017-07-24 Bristol Myers Squibb Co COMBINATION OF ANTI-CTLA4 ANTIBODY WITH ETOPOSIDE FOR SYNERGISTIC TREATMENT OF PROLIFERATIVE DISEASES
US9133500B2 (en) 2009-08-10 2015-09-15 MorphoSys A6 Screening strategies for the identification of binders
IN2012DN01328A (hu) * 2009-08-13 2015-06-05 Crucell Holland Bv
WO2011020024A2 (en) 2009-08-13 2011-02-17 The Johns Hopkins University Methods of modulating immune function
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
WO2011035205A2 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Calmune Corporation Antibodies against candida, collections thereof and methods of use
US20110076232A1 (en) * 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
CA2774032C (en) 2009-10-23 2019-03-26 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Anti-gcc antibody molecules and related compositions and methods
CA2783740C (en) 2009-12-09 2020-03-10 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Monoclonal antibodies that bind b7h6 and uses thereof
TWI504410B (zh) 2010-02-08 2015-10-21 Agensys Inc 結合至１６１ｐ２ｆ１０ｂ蛋白之抗體藥物結合物（ａｄｃ）
WO2011123813A2 (en) 2010-04-02 2011-10-06 Amunix Operating Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
CN103038258B (zh) 2010-05-06 2017-02-15 诺华股份有限公司 用于治疗低密度脂蛋白相关蛋白质6(lrp6)的抗体的组合物及使用方法
AU2011249782B2 (en) 2010-05-06 2014-10-02 Novartis Ag Compositions and methods of use for therapeutic low density lipoprotein - related protein 6 (LRP6) multivalent antibodies
EA037095B1 (ru) 2010-07-09 2021-02-05 Биовератив Терапьютикс Инк. Способ лечения гемофилии в и эпизодов кровотечения
CN103097412B (zh) 2010-07-09 2016-08-10 克鲁塞尔荷兰公司 抗人呼吸道合胞病毒(rsv)抗体以及使用方法
US8871744B2 (en) 2010-07-21 2014-10-28 B & G Partyers, LLC Compounds and methods for selectively targeting tumor-associated mucins
AU2011283694B2 (en) 2010-07-29 2017-04-13 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
WO2012019061A2 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stem Centrx, Inc. Novel effectors and methods of use
BR112013004012B1 (pt) 2010-08-20 2021-03-23 Novartis Ag Anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ao receptor her3, seu uso e composição farmacêutica
EP2608807A1 (en) 2010-08-27 2013-07-03 Stem Centrx, Inc. Notum protein modulators and methods of use
NZ608814A (en) 2010-09-03 2015-06-26 Stem Centrx Inc Novel modulators and methods of use
MX337873B (es) 2010-09-29 2016-03-23 Agensys Inc Conjugados de anticuerpo farmaco (adc) que enlazan a proteinas 191p4d12.
WO2012045085A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Oxford Biotherapeutics Ltd. Anti-rori antibodies
RS59589B1 (sr) 2010-11-05 2019-12-31 Zymeworks Inc Dizajniranje stabilnog heterodimernog antitela sa mutacijama u fc domenu
WO2012069466A1 (en) 2010-11-24 2012-05-31 Novartis Ag Multispecific molecules
LT2648752T (lt) 2010-12-06 2017-04-10 Seattle Genetics, Inc. Humanizuoti antikūnai prieš liv-1 ir jų panaudojimas vėžio gydymui
SG10201601792UA (en) 2010-12-08 2016-04-28 Stemcentrx Inc Novel modulators and methods of use
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
EP2668210B1 (en) 2011-01-26 2020-06-17 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-kit antibodies and uses thereof
SA112330278B1 (ar) 2011-02-18 2015-10-09 ستيم سينتركس، انك. مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام
JP6468838B2 (ja) 2011-05-19 2019-02-13 ラボラトリー コーポレイション オブ アメリカ ホールディングス 癌患者の生存可能性を決定するためおよび癌患者における転移可能性を予測するための方法
US20140105915A1 (en) 2011-05-27 2014-04-17 Glaxo Group Limited Bcma (cd269/tnfrsf17) - binding proteins
WO2012170742A2 (en) 2011-06-07 2012-12-13 University Of Hawaii Treatment and prevention of cancer with hmgb1 antagonists
WO2012170740A2 (en) 2011-06-07 2012-12-13 University Of Hawaii Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
CA2842860A1 (en) 2011-07-28 2013-01-31 Sea Lane Biotechnologies, Llc Sur-binding proteins
WO2013022855A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
UY34317A (es) 2011-09-12 2013-02-28 Genzyme Corp Anticuerpo antireceptor de célula T (alfa)/ß
EP2758422A1 (en) 2011-09-23 2014-07-30 Technophage, Investigação E Desenvolvimento Em Biotecnologia, SA Modified albumin-binding domains and uses thereof to improve pharmacokinetics
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
AU2012323287B2 (en) 2011-10-10 2018-02-01 Xencor, Inc. A method for purifying antibodies
CN103071159B (zh) * 2011-10-25 2014-10-15 天津药物研究院 一种阿霉素-多肽复合物、药物组合物的制备方法和应用
EP2773373B1 (en) 2011-11-01 2018-08-22 Bionomics, Inc. Methods of blocking cancer stem cell growth
EP2773667A1 (en) 2011-11-01 2014-09-10 Bionomics, Inc. Anti-gpr49 antibodies
EP2773665A1 (en) 2011-11-01 2014-09-10 Bionomics, Inc. Antibodies and methods of treating cancer
US9220774B2 (en) 2011-11-01 2015-12-29 Bionomics Inc. Methods of treating cancer by administering anti-GPR49 antibodies
CN104039830A (zh) 2011-11-04 2014-09-10 诺华股份有限公司 低密度脂蛋白相关蛋白6(lrp6)-半寿期延长物构建体
JP6326371B2 (ja) 2011-11-04 2018-05-16 ザイムワークス，インコーポレイテッド Ｆｃドメインにおける変異を有する安定なヘテロ二量体抗体デザイン
WO2013081993A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Eli Lilly And Company Anti-glucagon antibodies and uses thereof
SG11201402739YA (en) 2011-12-05 2014-06-27 Novartis Ag Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (her3) directed to domain ii of her3
EP3590538A1 (en) 2011-12-05 2020-01-08 Novartis AG Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (her3)
EP3330288A1 (en) 2011-12-21 2018-06-06 Novartis AG Compositions and methods for antibodies targeting factor p
EP2793940B1 (en) 2011-12-22 2018-11-14 i2 Pharmaceuticals, Inc. Surrogate binding proteins
JP2015502397A (ja) 2011-12-23 2015-01-22 ファイザー・インク 部位特異的コンジュゲーションのための操作された抗体定常領域、ならびにそのための方法および使用
EP2804631B1 (en) 2012-01-20 2021-03-17 i2 Pharmaceuticals, Inc. Surrobody conjugates
CN104520324A (zh) 2012-02-24 2015-04-15 施特姆森特Rx股份有限公司 Dll3调节剂及其使用方法
PE20150091A1 (es) 2012-02-24 2015-02-16 Stem Centrx Inc Anticuerpos anti-sez6 y metodos de empleo
CA2865578C (en) 2012-02-27 2023-01-17 Amunix Operating Inc. Xten conjugate compositions and methods of making same
US9156915B2 (en) 2012-04-26 2015-10-13 Thomas Jefferson University Anti-GCC antibody molecules
JP6351572B2 (ja) 2012-05-10 2018-07-04 ザイムワークス，インコーポレイテッド Ｆｃドメインに突然変異を有する免疫グロブリン重鎖のヘテロ多量体構築物
EA037203B1 (ru) 2012-05-15 2021-02-18 Сиэтл Джинетикс, Инк. Конъюгаты антитело-лекарственное средство с самостабилизирующимися линкерами
CN112587658A (zh) 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
SG11201500489YA (en) 2012-07-25 2015-02-27 Kolltan Pharmaceuticals Inc Anti-kit antibodies and uses thereof
US9382329B2 (en) 2012-08-14 2016-07-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells
IL282082B (en) 2012-08-23 2022-08-01 Seagen Inc Antibody-drug conjugates (adc) binding to 158p1d7 proteins
US9790268B2 (en) 2012-09-12 2017-10-17 Genzyme Corporation Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function
WO2014053479A1 (en) 2012-10-02 2014-04-10 Roche Diagnostics Gmbh Methods of specifically releasing a sub-group of objects
AU2013329311A1 (en) 2012-10-09 2015-04-30 Igenica Biotherapeutics, Inc. Anti-C16orf54 antibodies and methods of use thereof
WO2014080251A1 (en) 2012-11-24 2014-05-30 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
WO2014084859A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Novartis Ag Molecules and methods for modulating tmem16a activities
AP2015008365A0 (en) 2012-12-05 2015-04-30 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting epo
US9492566B2 (en) 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US10413539B2 (en) 2012-12-13 2019-09-17 Immunomedics, Inc. Therapy for metastatic urothelial cancer with the antibody-drug conjugate, sacituzumab govitecan (IMMU-132)
US9931417B2 (en) 2012-12-13 2018-04-03 Immunomedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
AU2013360335B2 (en) 2012-12-13 2017-12-07 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US10206918B2 (en) 2012-12-13 2019-02-19 Immunomedics, Inc. Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers
US9107960B2 (en) 2012-12-13 2015-08-18 Immunimedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
WO2017004144A1 (en) 2015-07-01 2017-01-05 Immunomedics, Inc. Antibody-sn-38 immunoconjugates with a cl2a linker
US10137196B2 (en) 2012-12-13 2018-11-27 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US10744129B2 (en) 2012-12-13 2020-08-18 Immunomedics, Inc. Therapy of small-cell lung cancer (SCLC) with a topoisomerase-I inhibiting antibody-drug conjugate (ADC) targeting Trop-2
CA2891686A1 (en) 2012-12-18 2014-06-26 Novartis Ag Compositions and methods that utilize a peptide tag that binds to hyaluronan
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10738132B2 (en) 2013-01-14 2020-08-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
WO2014113510A1 (en) 2013-01-15 2014-07-24 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
EP2953645A4 (en) 2013-02-07 2016-12-28 Immunomedics Inc PRO-MEDICINE FORM (P2PDOX) OF HIGHLY POWERFUL 2-PYRROLINODOXORUBICIN CONJUGATED TO ANTIBODIES FOR TARGETED CANCER THERAPY
HUE043851T2 (hu) 2013-02-22 2019-09-30 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-DLL3-antitest-PBD konjugátumok és alkalmazásuk
SG11201506088RA (en) * 2013-03-11 2015-09-29 Genzyme Corp Hyperglycosylated binding polypeptides
WO2014159239A2 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Novartis Ag Antibodies against notch 3
ES2644022T3 (es) 2013-03-14 2017-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Combinación de un agonista de DR5 y un antagonista de anti-PD-1 y métodos de uso
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
EP3421495A3 (en) 2013-03-15 2019-05-15 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
CN105377889B (zh) 2013-03-15 2020-07-17 Xencor股份有限公司 异二聚体蛋白
MX368258B (es) 2013-03-15 2019-09-25 Zymeworks Inc Compuestos citotoxicos y antimitoticos y metodos de uso de los mismos.
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
TWI683666B (zh) 2013-03-15 2020-02-01 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ｉｘ多肽調配物
JP6402173B2 (ja) 2013-04-05 2018-10-10 ラボラトリー コーポレイション オブ アメリカ ホールディングス Ｈｅｒ３の検出に基づく癌の診断、予後予測、および処置を容易にするためのシステムおよび方法
ES2891755T3 (es) 2013-06-06 2022-01-31 Pf Medicament Anticuerpos anti-C10orf54 y utilizaciones de los mismos
AR096601A1 (es) 2013-06-21 2016-01-20 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
UY35620A (es) 2013-06-21 2015-01-30 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
US11253606B2 (en) 2013-07-23 2022-02-22 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
JP6510518B2 (ja) 2013-08-01 2019-05-08 アジェンシス，インコーポレイテッド Ｃｄ３７タンパク質に結合する抗体薬物結合体（ａｄｃ）
KR102553717B1 (ko) 2013-08-26 2023-07-11 바이오엔테크 리서치 앤드 디벨롭먼트 인코포레이티드 시알릴-루이스 ａ에 대한 사람 항체 코드화 핵산
JP2016538318A (ja) 2013-08-28 2016-12-08 ステムセントリックス， インコーポレイテッド 新規ｓｅｚ６モジュレーターおよび使用方法
EP3892294A1 (en) 2013-08-28 2021-10-13 AbbVie Stemcentrx LLC Site-specific antibody conjugation methods and compositions
PT3055331T (pt) 2013-10-11 2021-04-05 Oxford Bio Therapeutics Ltd Anticorpos conjugados contra ly75 para o tratamento de cancro
WO2015054691A2 (en) 2013-10-11 2015-04-16 The United States Of America, As Pepresented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Tem8 antibodies and their use
EA201690780A1 (ru) 2013-10-15 2016-08-31 Сиэтл Дженетикс, Инк. Пегилированные лекарственные средства-линкеры для улучшенной фармакокинетики конъюгатов лиганд-лекарственное средство
AU2014342610A1 (en) 2013-11-04 2016-06-02 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-EFNA4 antibody-drug conjugates
WO2015069922A2 (en) 2013-11-06 2015-05-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Alk antibodies, conjugates, and chimeric antigen receptors, and their use
MX2016006551A (es) 2013-11-25 2016-09-06 Seattle Genetics Inc Preparacion de anticuerpos de cultivos de celula de ovario de hamster chino para conjugacion.
CN106255513B (zh) 2013-12-27 2022-01-14 酵活有限公司 用于药物偶联物的含磺酰胺连接系统
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
CN105899539B (zh) 2014-01-10 2021-11-09 博笛生物科技有限公司 用于免疫疗法的化合物和组合物
EP3097122B9 (en) 2014-01-24 2020-11-11 NGM Biopharmaceuticals, Inc. Antibodies binding beta klotho domain 2 and methods of use thereof
US10308721B2 (en) 2014-02-21 2019-06-04 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-DLL3 antibodies and drug conjugates for use in melanoma
ES2960619T3 (es) 2014-02-28 2024-03-05 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Enlazadores cargados y sus usos para la conjugación
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
US9738702B2 (en) 2014-03-14 2017-08-22 Janssen Biotech, Inc. Antibodies with improved half-life in ferrets
HUE061339T2 (hu) 2014-03-19 2023-06-28 Genzyme Corp Targetáló csoportok helyspecifikus glikotechnikai átalakítása
KR20160138177A (ko) 2014-03-21 2016-12-02 애브비 인코포레이티드 항-ｅｇｆｒ 항체 및 항체 약물 접합체
AU2015237200A1 (en) 2014-03-27 2016-10-06 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Metabolically-activated drug conjugates to overcome resistance in cancer therapy
BR112016022385A2 (pt) 2014-03-28 2018-06-19 Xencor, Inc anticorpos específicos que se ligam a cd38 e cd3
MX2016012873A (es) 2014-04-04 2017-03-07 Bionomics Inc Anticuerpos humanizados que se unen al receptor 5 acoplado a proteina g que contiene repeticion rica en leucina (lgr5).
KR102246800B1 (ko) 2014-05-13 2021-04-30 바이오아트라, 인코퍼레이티드 조건부 활성 생체 단백질
JP6832709B2 (ja) 2014-05-16 2021-02-24 メディミューン，エルエルシー 新生児Ｆｃ受容体結合が改変されて治療および診断特性が強化された分子
JP6626461B2 (ja) 2014-06-04 2019-12-25 バイオエヌテック リサーチ アンド デベロップメント， インコーポレイテッド ガングリオシドｇｄ２に対するヒトモノクローナル抗体
CN106659706B (zh) 2014-06-23 2020-03-20 普莱康治疗有限公司 铂化合物、组合物及其用途
WO2015198240A2 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Novartis Ag Compositions and methods for long acting proteins
WO2015198243A2 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Novartis Ag Compositions and methods for long acting proteins
EP3161001A2 (en) 2014-06-25 2017-05-03 Novartis AG Antibodies specific for il-17a fused to hyaluronan binding peptide tags
CN105440135A (zh) 2014-09-01 2016-03-30 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-pd-l1结合物
CN106536540A (zh) 2014-07-24 2017-03-22 基因泰克公司 将试剂缀合至含有至少一个三硫键的蛋白质中的巯基部分的方法
US20160060360A1 (en) 2014-07-24 2016-03-03 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
TW201613977A (en) 2014-08-07 2016-04-16 Novartis Ag Angiopoetin-like 4 (ANGPTL4) antibodies and methods of use
WO2016020880A2 (en) 2014-08-07 2016-02-11 Novartis Ag Angiopoietin-like 4 antibodies and methods of use
AU2015311911B2 (en) 2014-09-03 2019-01-24 Bioatla, Llc Discovering and producing conditionally active biologic proteins in the same eukaryotic cell production hosts
IL287645B2 (en) 2014-09-17 2024-04-01 Zymeworks Bc Inc Cytotoxic and anti-mitotic compounds and methods for their use
EP3689910A3 (en) 2014-09-23 2020-12-02 F. Hoffmann-La Roche AG Method of using anti-cd79b immunoconjugates
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
AU2015330869B2 (en) 2014-10-09 2021-07-08 Genzyme Corporation Glycoengineered antibody drug conjugates
RS61431B1 (sr) 2014-11-19 2021-03-31 Axon Neuroscience Se Humanizovana antitela na tau u alchajmerovoj bolesti
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
AU2015353416C1 (en) 2014-11-26 2022-01-27 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and CD38
CN110894240B (zh) 2014-11-26 2022-04-15 森科股份有限公司 结合cd3和肿瘤抗原的异二聚体抗体
WO2016094837A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Igenica Biotherapeutics, Inc. Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof
UY36449A (es) 2014-12-19 2016-07-29 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos a bmp6
WO2016105450A2 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
BR112017015880A2 (pt) 2015-03-03 2018-07-31 Kymab Ltd anticorpos, usos e métodos
WO2016141387A1 (en) 2015-03-05 2016-09-09 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
EP3265474A1 (en) 2015-03-05 2018-01-10 Sirenas LLC Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
SG11201707195SA (en) 2015-03-09 2017-10-30 Agensys Inc Antibody drug conjugates (adc) that bind to flt3 proteins
CN107428837A (zh) 2015-04-22 2017-12-01 免疫医疗公司 循环trop‑2阳性癌细胞的分离、检测、诊断和/或鉴定
EP3091033A1 (en) 2015-05-06 2016-11-09 Gamamabs Pharma Anti-human-her3 antibodies and uses thereof
AU2016258115A1 (en) 2015-05-06 2017-11-23 Janssen Biotech, Inc. Prostate specific membrane antigen (PSMA) bispecific binding agents and uses thereof
EA201792561A1 (ru) 2015-06-05 2018-04-30 Новартис Аг Антитела, нацеленные на морфогенетический белок кости 9 (bmp9), и способы их применения
CA3172801A1 (en) 2015-06-12 2016-12-15 Lentigen Technology, Inc. Method to treat cancer with engineered t-cells
US10195175B2 (en) 2015-06-25 2019-02-05 Immunomedics, Inc. Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors
JOP20200312A1 (ar) 2015-06-26 2017-06-16 Novartis Ag الأجسام المضادة للعامل xi وطرق الاستخدام
EP4302784A3 (en) 2015-06-30 2024-03-13 Seagen Inc. Anti-ntb-a antibodies and related compositions and methods
CA2991973C (en) 2015-07-12 2021-12-07 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Bridge linkers for conjugation of a cell-binding molecule
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
KR20180035852A (ko) 2015-08-03 2018-04-06 노파르티스 아게 Fgf21-연관 장애를 치료하는 방법
MY186352A (en) 2015-09-09 2021-07-15 Novartis Ag Thymic stromal lymphopoietin (tslp)-binding antibodies and methods of using the antibodies
EP3347047A1 (en) 2015-09-09 2018-07-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Expression vector delivery system and use thereof for inducing an immune response
PE20181368A1 (es) 2015-09-09 2018-08-27 Novartis Ag Moleculas de union a linfopoyetina estromal timica (tslp) y metodos de uso de las moleculas
KR20180054824A (ko) 2015-09-29 2018-05-24 셀진 코포레이션 Pd-1 결합 단백질 및 이의 사용 방법
WO2017062748A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Il-7r-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
US10421810B2 (en) 2015-10-09 2019-09-24 Lentigen Technology, Inc. Chimeric antigen receptors and methods of use
WO2017066714A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Compugen Ltd. Anti-vsig1 antibodies and drug conjugates
WO2017078839A1 (en) 2015-11-02 2017-05-11 Bioatla, Llc Conditionally active polypeptides
RU2018124307A (ru) 2015-12-04 2020-01-14 Новартис Аг Антительно-цитокиновые привитые композиции и способы применения для иммунорегуляции
JP7058219B2 (ja) 2015-12-07 2022-04-21 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｐｓｍａに結合するヘテロ二量体抗体
KR20180089510A (ko) 2015-12-18 2018-08-08 노파르티스 아게 CD32b를 표적화하는 항체 및 그의 사용 방법
US20210198368A1 (en) 2016-01-21 2021-07-01 Novartis Ag Multispecific molecules targeting cll-1
US20170224837A1 (en) 2016-02-10 2017-08-10 Immunomedics, Inc. Combination of abcg2 inhibitors with sacituzumab govitecan (immu-132) overcomes resistance to sn-38 in trop-2 expressing cancers
US11191821B2 (en) 2016-02-27 2021-12-07 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Peptide vaccine formulations and use thereof for inducing an immune response
PE20231050A1 (es) 2016-03-02 2023-07-11 Eisai Randd Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo y farmaco basados en eribulina y metodos para su uso
JP2019515252A (ja) 2016-03-15 2019-06-06 ラボラトリー コーポレイション オブ アメリカ ホールディングス 細胞間のタンパク質相互作用を評価する方法
MA45324A (fr) 2016-03-15 2019-01-23 Seattle Genetics Inc Polythérapie utilisant un adc-liv1 et un agent chimiothérapeutique
US10745487B2 (en) 2016-03-22 2020-08-18 Bionomics Limited Method of treating cancer by administering an anti-LGR5 monoclonal antibody
EA201892040A1 (ru) 2016-03-25 2019-04-30 Сиэтл Дженетикс, Инк. Способ получения пегилированных соединений лекарственный препарат - линкер и их промежуточных соединений
JP2019522960A (ja) 2016-04-21 2019-08-22 アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー 新規の抗ｂｍｐｒ１ｂ抗体及び使用方法
WO2017189483A1 (en) 2016-04-25 2017-11-02 The Johns Hopkins University Znt8 assays for drug development and pharmaceutical compositions
JP7138567B2 (ja) 2016-04-27 2022-09-16 ノバルティス アーゲー 成長分化因子１５に対する抗体およびそれらの使用
JP7379795B2 (ja) 2016-04-27 2023-11-15 イミューノメディクス、インコーポレイテッド チェックポイント阻害薬に再発／耐性を示す腫瘍を治療するための抗Ｔｒｏｐ－２－ＳＮ－３８抗体薬物複合体の効果
TW201802121A (zh) 2016-05-25 2018-01-16 諾華公司 抗因子XI/XIa抗體之逆轉結合劑及其用途
CA3027045A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
JP2019522643A (ja) 2016-06-08 2019-08-15 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｃｄ９８抗体及び抗体薬物コンジュゲート
AU2017277914A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-CD98 antibodies and antibody drug conjugates
JP2019526529A (ja) 2016-06-08 2019-09-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
CA3027103A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
CA3026151A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
EP3471759A1 (en) 2016-06-15 2019-04-24 Novartis AG Methods for treating disease using inhibitors of bone morphogenetic protein 6 (bmp6)
EP3475304B1 (en) 2016-06-28 2022-03-23 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
WO2018005697A1 (en) 2016-06-29 2018-01-04 The Regents Of The University Of California Antibodies specific to sonic hedgehog and method of use thereof
US11560356B2 (en) 2016-06-29 2023-01-24 The Regents Of The University Of California Compounds and compositions for the treatment of cancer
EP3481866B1 (en) 2016-07-06 2024-07-24 Bristol-Myers Squibb Company Combination of tim-4 antagonist and pd-1 antagonist and methods of use
CN109562152B (zh) 2016-08-09 2024-04-02 西雅图基因公司 含有具有改善的生理化学性质的自稳定性接头的药物缀合物
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
JP7160482B2 (ja) 2016-09-02 2022-10-25 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド Ｄｕｏｃａｒを用いてがんを処置するための組成物および方法
WO2018045245A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Sirenas Llc Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
BR112019004733A2 (pt) 2016-09-19 2019-05-28 Celgene Corp métodos de tratamento de distúrbios imunes usando proteínas de ligação a pd-1
US10766958B2 (en) 2016-09-19 2020-09-08 Celgene Corporation Methods of treating vitiligo using PD-1 binding antibodies
PE20191034A1 (es) 2016-10-14 2019-08-05 Xencor Inc Proteinas de fusion heterodimericas biespecificas que contienen proteinas de fusion fc il-15/il-15r y fragmentos de anticuerpo pd-1
EP3534947A1 (en) 2016-11-03 2019-09-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
CN110099682B (zh) 2016-11-14 2023-03-31 杭州多禧生物科技有限公司 偶联连接体，含有此连接体的细胞结合分子-药物偶联物及其制备和应用
CN118320078A (zh) 2016-12-23 2024-07-12 诺华股份有限公司 采用抗因子XI/XIa抗体治疗的方法
IL308980A (en) 2016-12-23 2024-01-01 Novartis Ag Antibodies against factor XI and methods of their use
ES2880010T3 (es) 2017-01-09 2021-11-23 Lentigen Tech Inc Composiciones y métodos para tratar el cáncer con inmunoterapia antimesotelina
EP3574016A2 (en) 2017-01-24 2019-12-04 Innate Pharma NKp46 BINDING AGENTS
WO2018141959A1 (en) 2017-02-06 2018-08-09 Innate Pharma Immunomodulatory antibody drug conjugates binding to a human mica polypeptide
WO2018146594A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Novartis Ag Fgf21 mimetic antibodies and uses thereof
US11274160B2 (en) 2017-03-02 2022-03-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to Nectin-4 and uses thereof
GB201703876D0 (en) 2017-03-10 2017-04-26 Berlin-Chemie Ag Pharmaceutical combinations
WO2018175988A1 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd33 immunotherapy
CA3056134A1 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Seattle Genetics, Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
WO2018183041A1 (en) 2017-03-27 2018-10-04 Immunomedics, Inc. Treatment of trop-2 expressing triple negative breast cancer with sacituzumab govitecan and a rad51 inhibitor
WO2018187074A1 (en) 2017-04-03 2018-10-11 Immunomedics, Inc. Subcutaneous administration of antibody-drug conjugates for cancer therapy
IL302880A (en) 2017-04-04 2023-07-01 Avidea Tech Inc Peptide-based ingredients, production methods, and their uses for inducing an immune response
EP3607319A1 (en) 2017-04-07 2020-02-12 Juno Therapeutics, Inc. Engineered cells expressing prostate-specific membrane antigen (psma) or a modified form thereof and related methods
US11932694B2 (en) 2017-04-19 2024-03-19 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-VTCN1 antibodies and antibody drug conjugates
EP3617235A4 (en) 2017-04-28 2020-12-16 Ajinomoto Co., Inc. ASSOCIATION WITH A SUBSTANCE WITH AFFINITY TO SOLUBLE PROTEIN, FITTABLE PART AND REACTIVE GROUP OR SALT THEREOF
JOP20190271A1 (ar) 2017-05-24 2019-11-21 Novartis Ag بروتينات مطعّمة بسيتوكين- الجسم المضاد وطرق الاستخدام للاضطرابات المتعلقة بالمناعة
EP3630162A1 (en) 2017-05-24 2020-04-08 Novartis AG Antibody-cytokine engrafted proteins and methods of use
AU2018274216A1 (en) 2017-05-24 2019-12-12 Novartis Ag Antibody-cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
WO2018215937A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Novartis Ag Interleukin-7 antibody cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
AU2018291497A1 (en) 2017-06-30 2020-01-16 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric Fc fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra and antigen binding domains
WO2019014044A1 (en) 2017-07-12 2019-01-17 The Johns Hopkins University ZNT8 AUTO-ANTIGEN BASED ON PROTEOLIPOSOMES FOR THE DIAGNOSIS OF TYPE 1 DIABETES
CN111183156A (zh) 2017-07-31 2020-05-19 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd19/cd20免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
TW201919712A (zh) 2017-08-10 2019-06-01 法商塞勒尼斯醫療控股公司 運送子(cargomers)
JP7035170B2 (ja) 2017-09-15 2022-03-14 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド 抗ｃｄ１９免疫療法によりがんを処置するための組成物および方法
EP3694889A1 (en) 2017-10-13 2020-08-19 Boehringer Ingelheim International GmbH Human antibodies to thomsen-nouvelle (tn) antigen
EP4279584A3 (en) 2017-10-16 2024-03-06 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd22 immunotherapy
EP3700577A1 (en) 2017-10-23 2020-09-02 Mablink Bioscience Ligand-drug-conjugate comprising a single molecular weight polysarcosine
US20210040205A1 (en) 2017-10-25 2021-02-11 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
EP3706793A1 (en) 2017-11-08 2020-09-16 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-pd-1 sequences
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
EA202091339A1 (ru) 2017-12-01 2020-10-21 Сиэтл Дженетикс, Инк. Антитела против cd47 и их применение для лечения онкологических заболеваний
JP2021505540A (ja) 2017-12-01 2021-02-18 シアトル ジェネティクス インコーポレーテッド 乳がんの処置のためのヒト化抗ｌｉｖ１抗体
JP2021506291A (ja) 2017-12-19 2021-02-22 ゼンコア インコーポレイテッド 改変されたｉｌ−２ ｆｃ融合タンパク質
CA3086612A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating hiv/aids with immunotherapy
WO2019129054A1 (zh) 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 三链抗体、其制备方法及其用途
WO2019149269A1 (zh) 2018-02-01 2019-08-08 信达生物制药(苏州)有限公司 全人源的抗b细胞成熟抗原(bcma)单链抗体及其应用
EP3768324A1 (en) 2018-03-22 2021-01-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for modulating innate lymphoid cell activity, antibody drug conjugates and uses in therapy
AU2019240403A1 (en) 2018-03-23 2020-10-08 Seagen Inc. Use of antibody drug conjugates comprising tubulin disrupting agents to treat solid tumor
WO2019184909A1 (zh) 2018-03-27 2019-10-03 信达生物制药(苏州)有限公司 新型抗体分子、其制备方法及其用途
SG11202008098TA (en) 2018-03-28 2020-10-29 Axon Neuroscience Se Antibody-based methods of detecting and treating alzheimer's disease
CA3096052A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
US11524991B2 (en) 2018-04-18 2022-12-13 Xencor, Inc. PD-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra Fc-fusion proteins and PD-1 antigen binding domains and uses thereof
CA3097741A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Xencor, Inc. Tim-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and tim-3 antigen binding domains
CN112566672A (zh) 2018-05-22 2021-03-26 阿维迪科技公司 制造基于肽的疫苗的改进方法
AR126019A1 (es) 2018-05-30 2023-09-06 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
US11492409B2 (en) 2018-06-01 2022-11-08 Novartis Ag Binding molecules against BCMA and uses thereof
NZ771328A (en) 2018-06-01 2024-08-30 Eisai R&D Man Co Ltd Splicing modulator antibody-drug conjugates and methods of use
AU2019285353B2 (en) 2018-06-14 2024-08-22 Ajinomoto Co., Inc. Compound comprising substance having affinity for antibody, cleavage site and reactive group, or salt thereof
EP4406975A2 (en) 2018-06-14 2024-07-31 Ajinomoto Co., Inc. Compound having affinity substance to antibody and bioorthogonal functional group, or salt thereof
GB201809746D0 (en) 2018-06-14 2018-08-01 Berlin Chemie Ag Pharmaceutical combinations
MA53094A (fr) 2018-07-02 2021-05-12 Amgen Inc Protéine de liaison à l'antigène anti-steap1
CA3106418A1 (en) 2018-07-20 2020-01-23 Pierre Fabre Medicament Receptor for vista
CN112739340A (zh) 2018-07-23 2021-04-30 美真达治疗公司 抗cd5抗体药物缀合物(adc)在同种异体细胞疗法中的用途
EP3837286A4 (en) 2018-08-16 2022-08-10 The Johns Hopkins University ANTIBODIES TO HUMAN ZNT8
EP3853254A1 (en) 2018-09-20 2021-07-28 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd123 immunotherapy
WO2020069184A2 (en) 2018-09-26 2020-04-02 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19/cd22 immunotherapy
US20210393523A1 (en) 2018-10-03 2021-12-23 Avldea Technologies, Inc. Aromatic ring substituted amphiphilic polymers as drug delivery systems
SG11202103192RA (en) 2018-10-03 2021-04-29 Xencor Inc Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
JPWO2020090979A1 (ja) 2018-10-31 2021-09-24 味の素株式会社 抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩
CN113412119A (zh) 2018-11-30 2021-09-17 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd38免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
EP3893937A2 (en) 2018-12-13 2021-10-20 Eisai R&D Management Co., Ltd. Herboxidiene antibody-drug conjugates and methods of use
JP2022519273A (ja) 2019-02-05 2022-03-22 シージェン インコーポレイテッド 抗ｃｄ２２８抗体及び抗体薬物コンジュゲート
JP2022523946A (ja) 2019-03-01 2022-04-27 ゼンコア インコーポレイテッド Ｅｎｐｐ３およびｃｄ３に結合するヘテロ二量体抗体
US11969443B2 (en) 2019-03-06 2024-04-30 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with self-driving chimeric antigen receptors
WO2020191342A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 The Regents Of The University Of California Claudin-6 antibodies and drug conjugates
CA3134056A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 The Regents Of The University Of California Claudin-6 bispecific antibodies
US20220169706A1 (en) 2019-03-28 2022-06-02 Danisco Us Inc Engineered antibodies
JP2022529183A (ja) 2019-04-17 2022-06-17 アヴィディア テクノロジーズ， インコーポレイテッド リガンド提示および／または薬物送達のためのスターポリマーを製造する組成物および方法
KR20220003572A (ko) 2019-04-24 2022-01-10 하이델베르크 파마 리서치 게엠베하 아마톡신 항체-약물 결합체 및 이의 용도
WO2020236797A1 (en) 2019-05-21 2020-11-26 Novartis Ag Variant cd58 domains and uses thereof
WO2020236792A1 (en) 2019-05-21 2020-11-26 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
JP2022535005A (ja) 2019-05-30 2022-08-04 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド 抗ｂｃｍａ免疫療法によりがんを処置するための組成物および方法
WO2020247574A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Seattle Genetics, Inc. Methods of purifying masked antibodies
US20220233709A1 (en) 2019-06-05 2022-07-28 Seagen Inc. Masked Antibody Formulations
CA3142833A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind egfrviii and their use
WO2021016233A1 (en) 2019-07-22 2021-01-28 Seagen Inc. Humanized anti-liv1 antibodies for the treatment of cancer
EP4031578A1 (en) 2019-09-18 2022-07-27 Novartis AG Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
WO2021067776A2 (en) 2019-10-04 2021-04-08 Seagen Inc. Anti-pd-l1 antibodies and antibody-drug conjugates
AU2020357550A1 (en) 2019-10-04 2022-05-05 Tae Life Sciences, Llc Antibody compositions comprising Fc mutations and site-specific conjugation properties
EP3812008A1 (en) 2019-10-23 2021-04-28 Gamamabs Pharma Amh-competitive antagonist antibody
US20230040928A1 (en) 2019-12-09 2023-02-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to her4 and uses thereof
JP2023509760A (ja) 2020-01-08 2023-03-09 シンシス セラピューティクス，インコーポレイテッド Ａｌｋ５阻害剤複合体およびその使用
WO2021202473A2 (en) 2020-03-30 2021-10-07 Danisco Us Inc Engineered antibodies
WO2021220215A1 (en) 2020-05-01 2021-11-04 Novartis Ag Engineered immunoglobulins
EP4143224A1 (en) 2020-05-01 2023-03-08 Novartis AG Immunoglobulin variants
WO2021224186A1 (en) 2020-05-04 2021-11-11 Institut Curie New pyridine derivatives as radiosensitizers
CN115551553A (zh) 2020-05-12 2022-12-30 Inserm(法国国家健康医学研究院) 治疗皮肤t细胞淋巴瘤和tfh起源淋巴瘤的新方法
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
KR20230020441A (ko) 2020-06-05 2023-02-10 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 항-bcma 항체-약물 컨쥬게이트 및 이용 방법
WO2021251358A1 (ja) 2020-06-09 2021-12-16 味の素株式会社 修飾フェリチンおよびその製造方法
JP2023532448A (ja) 2020-06-22 2023-07-28 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド Ｔｓｌｐｒ－ｃｄ１９またはｔｓｌｐｒ－ｃｄ２２免疫療法によりがんを処置するための組成物および方法
KR20230042518A (ko) 2020-08-04 2023-03-28 씨젠 인크. 항-cd228 항체 및 항체-약물 컨쥬게이트
EP3970752A1 (en) 2020-09-17 2022-03-23 Merck Patent GmbH Molecules with solubility tag and related methods
AU2021347147A1 (en) 2020-09-22 2023-05-18 Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. Compositions and methods of manufacturing amphiphilic block copolymers that form nanoparticles in situ
CA3197158A1 (en) 2020-09-28 2022-03-31 Seagen Inc. Humanized anti-liv1 antibodies for the treatment of cancer
US20240000948A1 (en) 2020-10-01 2024-01-04 Abionyx Pharma Sa Methods for treating eye diseases using lipid binding protein-based complexes
US20230390406A1 (en) 2020-10-19 2023-12-07 Vaccitech North America, Inc. Star Polymer Drug Conjugates
WO2022084325A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Institut Curie Metallic trans-(n-heterocyclic carbene)-amine-platinum complexes and uses thereof for treating cancer
CN116801898A (zh) 2020-11-05 2023-09-22 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd19/cd22免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
WO2022097060A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
JP2024502832A (ja) 2020-12-31 2024-01-23 アラマー バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド 高親和性及び／または特異性を有する結合剤分子ならびにその製造及び使用方法
JPWO2022154116A1 (hu) 2021-01-18 2022-07-21
WO2022154127A1 (ja) 2021-01-18 2022-07-21 味の素株式会社 化合物またはその塩、およびそれらにより得られる抗体
UY39610A (es) 2021-01-20 2022-08-31 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
CA3207998A1 (en) 2021-02-16 2022-08-25 Geoffrey M. Lynn Self-assembling nanoparticles based on amphiphilic peptides
AU2022232375A1 (en) 2021-03-09 2023-09-21 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cldn6
KR20230154311A (ko) 2021-03-10 2023-11-07 젠코어 인코포레이티드 Cd3 및 gpc3에 결합하는 이종이량체 항체
WO2022191283A1 (ja) 2021-03-11 2022-09-15 味の素株式会社 化合物またはその塩、およびそれらにより得られる抗体
WO2022189618A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Institut Curie Nitrogen-containing heterocycles as radiosensitizers
JPWO2022196675A1 (hu) 2021-03-16 2022-09-22
EP4308170A1 (en) 2021-03-18 2024-01-24 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
AR125130A1 (es) 2021-03-19 2023-06-14 Heidelberg Pharma Res Gmbh Conjugados de amatoxina y anticuerpo específicos de linfocitos b
WO2022211508A1 (ko) 2021-03-30 2022-10-06 주식회사 레고켐바이오사이언스 인간 cldn18.2에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
TW202304524A (zh) 2021-04-10 2023-02-01 美商普方生物製藥美國公司 Folr1結合劑、其結合物及使用方法
MX2023012223A (es) 2021-04-15 2023-10-26 Abionyx Pharma Sa Uso de complejos a base de proteinas de union a lipidos en soluciones de conservacion de organos.
CA3216459A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
WO2023288236A1 (en) 2021-07-14 2023-01-19 Seagen Inc. Antibody masking domains
WO2023049825A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Seagen Inc. Improved antibody masking domains
EP4410830A1 (en) 2021-09-30 2024-08-07 Ajinomoto Co., Inc. Conjugate of antibody and functional substance or salt thereof, and antibody derivative and compound or salts thereof to be used in producing conjugate or salt thereof
EP4433170A1 (en) 2021-11-18 2024-09-25 Oxford BioTherapeutics Ltd Pharmaceutical combinations
WO2023092099A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
CN116284385A (zh) 2021-12-07 2023-06-23 信达细胞制药(苏州)有限公司 靶向bcma的p329g抗体及其与嵌合抗原受体细胞的组合和应用
KR20240130138A (ko) 2022-01-07 2024-08-28 존슨 앤드 존슨 엔터프라이즈 이노베이션 인코포레이티드 Il-1 베타 결합 단백질의 재료 및 방법
US11590169B1 (en) 2022-03-02 2023-02-28 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD123 immunotherapy
US20230338424A1 (en) 2022-03-02 2023-10-26 Lentigen Technology, Inc. Compositions and Methods for Treating Cancer with Anti-CD123 Immunotherapy
WO2023169896A1 (en) 2022-03-09 2023-09-14 Astrazeneca Ab BINDING MOLECULES AGAINST FRα
AU2023229967A1 (en) 2022-03-11 2024-08-08 Astrazeneca Ab A SCORING METHOD FOR AN ANTI-FRα ANTIBODY-DRUG CONJUGATE THERAPY
WO2023194797A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Abionyx Pharma Sa Methods for treating eye diseases using lipid binding protein-based complexes
WO2023194539A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Heidelberg Pharma Research Gmbh Methods of improving the therapeutic index of amatoxin-antibody conjugates
AR129136A1 (es) 2022-04-26 2024-07-17 Novartis Ag Anticuerpos multiespecíficos que se dirigen a il-13 e il-18
WO2024013727A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Janssen Biotech, Inc. Material and methods for improved bioengineered pairing of antigen-binding variable regions
WO2024015953A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Danisco Us Inc. Methods for producing monoclonal antibodies
WO2024026107A2 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Lentigen Technology, Inc. Chimeric antigen receptor therapies for treating solid tumors
WO2024044743A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with fully human anti-cd20/cd19 immunotherapy
WO2024052503A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof
WO2024064714A2 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Seagen Inc. Antibodies that bind cd228
US20240269269A1 (en) 2022-10-25 2024-08-15 Vaccitech North America, Inc. Self-Assembling Nanoparticles
WO2024092028A2 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Vaccitech North America, Inc. Combination treatment regimes for treating cancer
WO2024094688A1 (en) 2022-11-01 2024-05-10 Heidelberg Pharma Research Gmbh Anti-gucy2c antibody and uses thereof
WO2024097816A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 Seagen Inc. Anti-avb6 antibodies and antibody-drug conjugates and their use in the treatment of cancer
EP4382120A1 (en) 2022-12-05 2024-06-12 Institut Regional du Cancer de Montpellier Anti-slc1a4 monoclonal antibodies and uses thereof
WO2024121632A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Crispr Therapeutics Ag Use of anti-cd117 antibody drug conjugate (adc)
WO2024130158A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles and polynucleotides encoding extended serum half-life interleukin-22 for the treatment of metabolic disease
WO2024170660A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Astrazeneca Ab Combination therapies for treatment of cancer with therapeutic binding molecules
WO2024189048A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 Heidelberg Pharma Research Gmbh Subcutaneously administered antibody-drug conjugates for use in cancer treatment

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2566271B1 (fr) * 1984-06-20 1986-11-07 Sanofi Sa Nouveaux conjugues cytotoxiques utilisables en therapeutique et procede d'obtention
US5055561A (en) * 1985-11-19 1991-10-08 The Johns Hopkins University Protein label and drug delivery system
US4981979A (en) * 1987-09-10 1991-01-01 Neorx Corporation Immunoconjugates joined by thioether bonds having reduced toxicity and improved selectivity
US5002883A (en) * 1987-10-30 1991-03-26 Abbott Laboratories Covalent attachment of antibodies and antigens to solid phases using extended length heterobifunctional coupling agents
FI102355B1 (fi) * 1988-02-11 1998-11-30 Bristol Myers Squibb Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistamiseksi
US5066490A (en) * 1988-06-01 1991-11-19 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health & Human Services Protein crosslinking reagents cleavable within acidified intracellular vesicles
US5024834A (en) * 1988-07-12 1991-06-18 Cetus Corporation Thioether linked immunotoxin conjugates
CA2016584C (en) * 1989-05-17 1999-06-29 Robert S. Greenfield Anthracycline conjugates having a novel linker and methods for their production
US5208323A (en) * 1989-08-10 1993-05-04 Universite Laval Coupling of an anti-tumor to an antibody using glutaraldehyde preactivated anti-tumor agent
JPH05504481A (ja) * 1990-02-20 1993-07-15 クールター　コーポレイション 改良された抗体―酵素直接接合体及びその製造方法
US5137877B1 (en) * 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
US5196522A (en) * 1990-11-01 1993-03-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Anthracycline analogues bearing latent alkylating substituents

Also Published As

Publication number Publication date
AU3188193A (en) 1993-07-29
CN1040540C (zh) 1998-11-04
CZ297409B6 (cs) 2006-12-13
BG97335A (bg) 1993-12-24
EP0554708B9 (en) 2005-07-27
PL172715B1 (pl) 1997-11-28
OA09859A (en) 1994-08-15
RO112618B1 (ro) 1997-11-28
NO930189L (no) 1993-07-26
CA2087286A1 (en) 1993-07-24
DK0554708T3 (da) 2005-07-18
CN1074684A (zh) 1993-07-28
US5708146A (en) 1998-01-13
IL104475A0 (en) 1993-05-13
EP0554708A1 (en) 1993-08-11
DE69333800D1 (de) 2005-06-09
FI930240A0 (fi) 1993-01-21
CN1180711A (zh) 1998-05-06
AU666903B2 (en) 1996-02-29
ATE294592T1 (de) 2005-05-15
US5622929A (en) 1997-04-22
PL172824B1 (pl) 1997-12-31
MY110526A (en) 1998-07-31
PL172827B1 (pl) 1997-12-31
ES2240959T3 (es) 2005-10-16
ZA93444B (en) 1993-07-21
NO930189D0 (no) 1993-01-21
PL172828B1 (pl) 1997-12-31
CN1207946A (zh) 1999-02-17
CZ5793A3 (en) 1994-01-19
PL297514A1 (en) 1993-08-23
BG61899B1 (bg) 1998-09-30
TW213921B (hu) 1993-10-01
NZ245725A (en) 1995-08-28
PL172837B1 (pl) 1997-12-31
EP0554708B1 (en) 2005-05-04
US5606017A (en) 1997-02-25
UY23541A1 (es) 1993-06-28
MX9300298A (es) 1993-12-01
CA2087286C (en) 2004-04-06
FI930240A (fi) 1993-07-24
EG20406A (en) 1999-02-28
DE69333800T2 (de) 2006-03-02
JPH0625012A (ja) 1994-02-01
HU9300156D0 (en) 1993-04-28
PL172718B1 (pl) 1997-11-28
CN1155620C (zh) 2004-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUT68345A (en) Compounds of pharmaceutical activity containing thioether-bridge-bond and process for producing them
EP0871490B1 (en) Branched hydrazone linkers
AU2009212806B2 (en) Anthracycline-antibody conjugates
US6214345B1 (en) Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
EP0328147B1 (en) Anthracycline immunoconjugates having a novel linker and methods for their production
DE69131435T2 (de) Bifunktionale Kupplungsverbindungen, Konjugate und Verfahren zu ihrer Herstellung
CN107469089B (zh) 一种peg连接子及配基药物偶联物
AU2011236095B2 (en) Anthracycline-antibody conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
DFC4 Cancellation of temporary protection due to refusal