RO112618B1 - Medicamente conjugate continand tioeteri, procedeu de preparare a acestora, compus intermediar si compozitie farmaceutica pe baza de acesti compusi - Google Patents

Medicamente conjugate continand tioeteri, procedeu de preparare a acestora, compus intermediar si compozitie farmaceutica pe baza de acesti compusi Download PDF

Info

Publication number
RO112618B1
RO112618B1 RO93-00069A RO9300069A RO112618B1 RO 112618 B1 RO112618 B1 RO 112618B1 RO 9300069 A RO9300069 A RO 9300069A RO 112618 B1 RO112618 B1 RO 112618B1
Authority
RO
Romania
Prior art keywords
chimeric
conjugated
relaxed
adriamycin
ligand
Prior art date
Application number
RO93-00069A
Other languages
English (en)
Inventor
David Willner
Pamela A Trail
Dalton H King
Sandra J Hofstead
Robert S Greenfield
Gary R Braslawsky
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Squibb Co filed Critical Bristol Myers Squibb Co
Publication of RO112618B1 publication Critical patent/RO112618B1/ro

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6881—Cluster-antibody conjugates, i.e. the modifying agent consists of a plurality of antibodies covalently linked to each other or of different antigen-binding fragments covalently linked to each other
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Lubricants (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

Invenția de față se referă la medicamente conjugate conținând tioeteri, precum și la procedeul de preparare a acestora. De asemenea invenția se mai referă la compuși intermediari utilizați la prepararea medicamentelor conjugate și la o compoziție farmaceutică pe baza acestor medicamente.
Compușii biofuncționali care leagă reactivii citotoxici la anticorpi sunt cunoscuți. Acești compuși au fost utilizați în special pentru formarea de imunoconjugate direcționate către antigeni asociați cu tumori. Astfel de imunoconjugate permit o eliberare selectivă a medicamentelor toxice în celulele tumorale. (De exemplu Hermentin și Seiler în “Investigations with Monoclonal Antibody Drug Conjugates” Behring Insti.MitL 82 : 197215 (1988); Gallego et al. “Preparation of Four Daunomycin-Monoclonal Antibody 791T/36 Conjugates with Anti-Tumor Activity”., \nt.J.Cancer 33; 737-44 (1984); Aron et al. “In Vitro and In Vivo Efficacy of Conjugates of Daunomycin with Anti-Tumor Antibodies “Immunological RteiĂ 62 : 5-27 (1982), Greenfield et al. Au descris recent formarea imunoconjugatelor sensibile la acid conținând compusul acilhidrazină, 3-(2-piridilditio] propionil hidrazida conjugată printr-o legătură de acilhidrazonă în poziția 13ceto a unei molecule de antraciclină și conjugarea acestui derivat de antraciclină la molecula de anticorp (Greenfield et al. European Patent, Publication EP 0328147, published August 16, 1989, corespunzător la U.S. Serial No. 07/270509, field November 16, 1988 and U.S. Serial No.
07/155181, field February 11, 1988 în prezent abandonate). Această ultimă referință descrie așadar conjugatele și legăturile specifice conținând tioeteri, incluzând imunoconjugatele conținând tioeter hidrazonă.
Kaneko et al. (U.S. Serial No. 07/522966, field May 14, 1990, care este echivalent cu European Patent Publication Ep A O 457250, published November 21, 1991) au descris de asemenea formarea conjugatelor conținând antibiotice antracicline atașate la un element de legătură bifuncțional printr-o legătură de acilhidrazonă în poziția C-13 a unei molecule de antraciclină. în descriere se arată că, elementele de legătură conțin o grupare reactivă piridinilditio - sau o grupare ortonitrofenilditio, prin care elementul de legătură reacționează cu o grupare convenabilă atașată la un ligand celular, pentru a forma conjugatul complet.
Ar fi de dorit să se obțină compuși adiționali care conțin o legătură acid-senzitivă între moleculele prevăzute și moleculele reactive pentru utilizare în terapie in vivo. Astfel, invenția de față se referă la o nouă chimie a legăturii între o moleculă de medicament terapeutic activ și ligandul capabil de recunoaștere a populației celulare prevăzute, selectate. Această chimie de legătură este apoi utilizată pentru prepararea conjugatelor active terapeutic. De asemenea, invenția de față se mai referă la formulările care conțin conjugatele, la procedeul pentru prepararea unui conjugat conform prezentei invenții, la metoda de tratare sau prevenire a unei stări de boală selectate, care cuprinde administrarea la pacient a conjugatului conform prezentei invenții și a unei noi metode de preparare a anticorpului redus, care este utilizat ca ligand, prevăzut pentru prepararea conjugatului conform prezentei invenții.
Conform prezentei invenții, fiecare moleculă de medicament este legată de ligand cu ajutorul unui braț de legătură care conține tioeterul. Medicamentul este atașat la acest braț de legătură printr-o acilhidrazonă. Legătura de tioeter se realizează prin reacția unei grupări de sulfhidril de pe ligand sau de pe jumătatea de “distanțare” scurtă atașată la ligand, cu un “Receptor de Adiție Michael” care devine după reacție un “Aduct de Adiție Michaer. într-un mod preferat, ligandul prevăzut este atașat direct la brațul de legătură printr-o legătură covalentă tioeterică.
Noul medicament conjugat astfel format are formula structurală generală (I):
RO 112618 Bl
în care D este un rest de moleculă de medicament; n este un număr întreg de 10 la 1 la 10; p este un număr întreg de la 1 la 6; Y este O sau NH2 +Cl·; z este zero sau 1; q eate de la aproximativ 1 la aproximativ 1Q; X este un ligand și A este un rest de Aduct de Adiție Michael. 15 într-o realizare a invenției, restul de moleculă de medicament este un antibiotic de antraciclină și ligandul este un anticorp.
în mod preferat, antraciclina este 20 legată la o porțiune din elementul de legătură al conjugatului printr-o legătură de acilhidrazonă în poziția 13-ceto a compusului antraciclină. Anticorpul este apoi legat printr-un element de legătură 25 la compusul de antraciclină. De preferință, această legătură are loc printr-o grupare disulfurică redusă (de exemplu o grupare sulfhidril (-SH) liberă, pe un anticorp). 30
Cel mai preferat, restul de moleculă de medicament de antraciclină este adriamicina, Receptorul de Adiție Michael, din care este derivat Aductul de Adiție Michael, este o grupare male- 35 imido- și restul de anticorp este un anticorp chimeric.
Conjugatele conform prezentei invenții rețin atât specificitatea, cât și activitatea terapeutică a medicamentului 40 pentru tratamentul unei populații celulare selectate prevăzute. Aceste conjugate pot fi utilizate într-o compoziție farmaceutică, cum ar fi una care conține o cantitate efectiv farmaceutică a unui 45 compus cu formula (I) asociat cu un vehicol, diluant sau excipient, acceptabil din punct de vedere farmaceutic.
în figurile menționate mai jos, se redă schematic prepararea anticorpilor 50 și a imunoconjugatelor. Astfel:
- fig. 1 (a) reprezintă o schemă sintetică pentru prepararea unui anticorp tiolat, utilizând SPDP ca agent de tiolare;
- fig. 1 (b) reprezintă o schemă sintetică pentru prepararea unui imunoconjugat conform prezentei invenții, în care ligandul este un anticorp SPDPtiolat;
- fig. 1 (c) reprezintă o schemă sintetică pentru prepararea unui imunoconjugat conform prezentei invenții, în care ligandul este un anticorp iminotiolan-tiolat;
-fig. 2 prezintă un procedeu pentru reducerea cu DTT a unui anticorp pentru prepararea unui anticorp “relaxat” și sintetizarea unui imunoconjugat conform prezentei invenții.
Deci, prezenta invenție prevede noi medicamente conjugate, constând dintr-un ligand capabil să desemneze o populație celulară selectată, un medicament și un element de legătură conținând un tioeter, care unește ligandul și medicamentul. Medicamentul este unit de elementul de legătură printr-o legătură de acilhidrazonă. De preferință, ligandul este unit direct la elementul de legătură prin legătura tioeterică. în mod normal, această legătură va fi creată prin reacția dintre o grupare sulfhidril reactivă (-SH) de pe un ligand sau un rest de distanțare” (de exemplu, unul derivat de la chimia SPDP sau chimia iminotiolanului, descrisă mai jos) cu un Receptor de Adiție Michael.
Invenția de față reprezintă așadar metodele de preparare a acestor medicamente conjugate și a compozițiilor farmaceutice și metodele pentru eliberarea conjugatelor în celulele desemnate în care este dorită a se produce o modificare în procesul biologic, cum ar, fi de exemplu, în tratamentul bolilor, ca de exemplu cancer, infecții virale sau alte infecții patogene, în tulburări de autoimunizare sau alte stări de boală.
Conjugatele conțin cel puțin o moleculă de medicament conectată printrun element de legătură, conform prezentei invenții, la o moleculă ligand deRO 112618 Bl semnată, care este reactivă cu populația celulară desemnată, dorită. Molecula de ligand poate fi o proteină imunoreactivă, ca de exemplu, un anticorp sau un fragment al acestuia, o proteină nonimuno- 5 reactivă sau o peptidă-ligand, cum ar fi bombezina sau un ligand de legătură care se recunoaște ca receptor asociat celular, cum ar fi lectina sau o moleculă de steroid. 10
Așa cum s-a notat mai sus, un conjugat conform prezentei invenții este reprezentat prin formula generală I:
în care D este o moleculă de medicament; n este un număr întreg de la 1 la 1Q; p este un număr întreg de la 1 la 6; Y este O sau NHP +Cl·; z este zero 25 sau 1; q este de la aproximativ 1 la aproximativ 1Q; X este un ligand și A este un Aduct de Adiție Michael.
Pentru a înțelege mai bine prezenta invenție, medicamentele și liganzii 30 vor fi discutați individual. Compușii intermediari utilizați pentru prepararea conjugatelor și sinteza conjugatelor vor fi explicați pe parcurs.
Medicamentul 35
Prezenta invenție descrie un medicament și un ligand care să se unească cu ajutorul unei legături de acilhidrazonă, printr-un Aduct de Adiție Michael și un element de legătură con- 40 ținând un tioeter. Nici medicamentul specific și nici ligandul specific nu vor fi descriși ca o limitare a prezentei invenții. Elementele de legătură ale prezentei invenții pot fi utilizate cu orice medi- 45 cament având orice modificare dorită a activității terapeutice sau a activității biologice sau cu scop profilactic, care să se limiteze numai la aceea că medicamentul utilizat la prepararea conjugatului este 50 capabil de a forma o legătură hidrazonică. De preferință, pentru a prepara hidrazona, medicamentul trebuie să aibă o grupare carbonil convenabilă, reactivă, cum ar fi, de exemplu, o aldehidă reactivă sau un rest de cetonă (reprezentată aici ca “[D-(C=0)”], care este capabilă să formeze hidrazona (de exemplu o legătură-C=N-NH-J. Legătura hidrazonică a medicamentului este reprezentată aici “(D]= N-NH-’’. în plus, reacția acestei grupări convenabile, reactive cu elementul de legătură de preferință, nu trebuie să distrugă activitatea terapeutică de bază a conjugatului, dacă acea activitate este rezultatul eliberării medicamentului în porțiunea dorită de acțiune sau dacă conjugatul intact el însuși este responsabil pentru o astfel de activitate.
Din referatele de specialitate se înțelege că pentru acele medicamente la care lipsește o grupare carbonil convenabilă ca reactivitate, un derivat conținând o astfel de grupare carbonil se poate prepara utilizând procedeele cunoscute în literatura de specialitate. Așa cum este de apreciat, conjugatul preparat din astfel de medicamente derivate trebuie să rețină activitatea terapeutică atunci când este prezent la partea activă, dacă aceasta se datorează conjugatului intact sau altfel. în mod alternativ, medicamentul derivat sau de exemplu un precursor al medicamentului trebuie să fie eliberat într-o astfel de formă, ca forma activă terapeutică a medicamentului să fie prezentă la partea activă.
Elementul de legătură conform prezentei invenții poate fi utilizat la medicamentele aparținând substanțial tuturor claselor terapeutice, incluzând, de exemplu, medicamentele antibacteriene, antivirale, antifungice, medicamentele anticanceroase, antiimicoplasmatice și altele asemănătoare. Conjugatele de medicamente astfel construite sunt eficiente pentru scopuri uzuale pentru care medicamentele corespunzătoare sunt eficiente și au o eficacitate superioară datorită abilității ligandului inert pentru a transporta medicamentul la celulele dorite, unde acesta este de un real folos.
RO 112618 Bl
În continuare, deoarece conjugatele prezentei invenții pot fi utilizate pentru modificarea unui răspuns biologic dat, restul de medicament nu trebuie construit ca fiind limitat la agenții terapeutici chimici clasici. De exemplu, restul de moleculă de medicament poate fi o proteină sau o polipeptidă care posedă o activitate biologică dorită. Astfel de proteine pot include, de exemplu, o toxină, ca de exemplu abrina, ricina, exotoxina pseudomonas sau toxina difterică; o proteină, cum ar fi factorul de necroză a tumorii, a/fa-interferonul, beta-interferonul, factorul de dezvoltare a nervului, factorul de dezvoltare plachetar, activatorul plasminogen de țesut sau modificatori ai răspunsului biologic, cum ar fi, de exemplu, limfokinele, interleukina-1 (“IL-1), interleukina-2 (“IL-2), interleukina-6 (“IL-6), factorul de stimulare a coloniei de granulocite macrofage (“GMCSF”), factorul de stimulare al coloniei de granulocite (“G-CSF”) sau alți factori de dezvoltare. Medicamentele preferate pentru utilizare în prezenta descriere de invenție sunt medicamentele citotoxice, în special cele utilizate pentru terapia cancerului. Astfel de medicamente includ, în general, agenții de alchilare, agenții antiproliferativi, agenții de legare a tubulinei și alți compuși asemănători. Clasele preferate de agenți citotoxici includ, de exemplu, medicamentele din familia antraciclinei, medicamentele din vinca, mitomicinele, bleomicinele, nucleozidele citotoxice, medicamentele din familia pteridinei, diynenes și podofilotoxinele. Compușii utilizați în special din aceste clase includ, de exemplu, adriamicina, daunorubicina, aminopterina, metotrexatul, metopterinul, diclormetotrexatul, mitomicina C, porfiromicina, 5fluorouracilul, 6-mercaptopurina, citozin arabinozida, podofilotoxina sau derivați de podofilotoxină, cum ar fi, de exemplu, etopozidul sau etopozid fosfatul, melfalanul, vinblastina, vincristina, leurozidina, vindezina, leurozina și alți compuși asemănători. Așa cum s-a notat mai sus, conform experiențelor în domeniu, se pot face modificări chimice la compusul dorit în vederea efectuării de astfel de reacții pentru ca acest compus să fie mult mai convenabil pentru scopurile de preparare a medicamentelor conjugate conform prezentei invenții.
grupă foarte preferată de agenți citotoxici pentru utilizare ca medicamente în descrierea prezentei invenții include medicamente cu următoarele formule:
Grupa metotrexatului cu formula
(2) în care R12 este amino sau hidroxi; R7 este hidrogen sau metil; R8 este hidrogen, fluor, clor, brom sau iod; R9 este hidroxi sau un rest care completează o sare a acidului carboxilic;
Grupa mitomicinei cu formula (3)
în care R10 este hidrogen sau un radical metil;
Grupa bleomicinei cu formula (4)
în care R11 este hidroxi, amino, C^Cgalchilamino, di(C1-C3-alchil)amino, C4-C6 polimetilen amino,
RO 112618 Bl
NH + I
-nhch2ch2ch2s-ch3 ; Sau -nhch2ch2ch2ch2nh-c-nh2 ;
Melfalan cu formula (5) ho2c-ch-ch2—// Ά—ncch2chzco2 nh2 \--/ (5)
Mercaptopurina cu formula (6)
(9) în care R15 este hidrogen, CH3 sau CHO; când R17 și R1B sunt luați singuri, R13 este H și unul din radicalii R1S și R17 este etil și celălalt este H sau OH; când radicalii R17 și R1Q sunt luați împreună cu atomii de carbon la care aceștia sunt atașați, formează un ciclu oxiranic în care radicalul R10 este etil; R19 este hidrogen, (C^Cg alchil,) -CO, sau clorsubstituit (Οπ-C3 alchiIRCO.
Difluornucleozide cu formula [10]
Citozina arabionozida cu formula
Podofilotoxinele cu formula [8]
în care R13 este hidrogen sau un radical metil; R14 este un radical metil sau tienil; sau o sare fosfat a acestui compus.
Medicamente din grupa alcaloizilor Vi nea, cu formula [9]
în care R21 este o bază cu una din formulele:
O O R23
în care R22 este hidrogen, metil, brom, fluor, clor sau iod; R23 este -OH sau NH2; R24 este hidrogen, brom, clor sau iod sau
Antracicline antiobiotice cu for-
(11)
RO 112618 Bl în care R1 este -CH3, -CH20H, -CH20C0 (CH2)3CH3 sau -CH20C0CH(0-C2H5)2; R3 este -0CH3, -OH sau -H; R4 este -NH2, NHCOCFg, 4-morfolinil, 3-ciano-4-morfolinil, 1-piperidinil, 4-metoxi-1-piper idinil, 5 benzilamina, dibenzilamina, cianometilamina sau 1-ciano-2-metoxietilamina; R5 este -OH, -QTHP sau -H și RB este -OH sau -H, cu condiția că RB să nu fie -OH când R5 este -OH sau -OTHP . 10
Cele mai preferate medicamente sunt agenții antibiotici ai antraciclinei cu formula (11) descriși mai sus. Conform datelor din literatură, se înțelege că această formulă structurală include compușii care sunt medicamente sau sunt derivați ai medicamentelor, care au primit în acest domeniu diferite denumiri generice sau obișnuite.Tabelul 1 care urmează reprezintă un număr de medicamente antraciclinice și denumirile lor generice sau obișnuite și care sunt în special preferate pentru utilizare în prezenta invenție.
Compusul Rq r3 R< r5 rb
Daunorubicină® ch3 och3 nh2 OH H
Adriamicină6 ch2oh och3 nh2 OH H
Detorubicină CH2OCOCH(OC2H5)2 och3 nh2 OH H
Carminomicină ch3 OH nh2 OH H
Idarubicină ch3 H nh2 OH H
Epirubicină ch2oh och3 nh2 H OH
Esorubicină ch2oh och3 nh2 H H
THP ch2oh och3 nh2 PTHP H
AD-32 CH2OCO(CH2)3 och3 nhcocf3 OH H
aDaunomicina este o denumire alternativă pentru daunorubicină bDoxorubicină este o denumire alternativă pentru adriamicină.
Dintre compușii prezentanți în ta- 40 belul I, cel mai preferat medicament este adriamicina. Adriamicina (la care se referă aici ca ADM) este acea antraciclină cu formula (11) în care R1 este OH2OH, R3este -0CH3, R4 este -NH2, R5 45 este -OH și RB este -H.
Liganzi.
Un specialist în domeniu înțelege prin ligand orice moleculă care se leagă în mod specific sau se asociază re- 50 activ sau formează complecși cu un receptor sau alte resturi de molecule receptive asociate cu o populație de celule țintă alese.
Această moleculă reactivă celulară, la care reactivul din medicament este legat în conjugat prin brațul de legătură, poate fi orice moleculă care se leagă la acest conjugat, formează complecși cu, sau reacționează cu populația celulară, prevăzută a fi modificată oricum
RO 112618 Bl terapeutic sau biologic și are o grupare liberă reactivă de sulfhidril (-SH).sau poate fi modificată pentru a conține o astfel de grupare sulfhidril. Molecula celulară acționează pentru eliberarea resturi de moleculă de medicament activ terapeutic la populația celulară prevăzută în special cu care reacționează ligandul. Astfel de molecule includ, dar nu se limitează la acestea, proteine cu greutate moleculară mare (în general mai mare de 1OOOO daltoni), cum ar fi de exemplu anticorpi, proteine cu greutate moleculară mai mică (în general mai mică de 10000 daltoni), liganzi polipeptide sau liganzi peptide și liganzi nonpeptidil.
Proteinele non-imunoreactive, polipeptidele sau liganzii de peptide care pot fi utilizați pentru a forma conjugatele conform prezentei invenții pot include, dar fără a se limita la acestea, transferina, factorii de dezvoltare epidermală (EGF”), bombezina, gastrina, peptidă care eliberează gastrina, factorul de dezvoltare derivat din plachete, IL-2, IL-6, factori de dezvoltare a tumorilor C'TGF), cum ar fi TGF-a/fa și TGF-beta, factorul de dezvoltare a vaccinurilor (VGF), insulina și factori de dezvoltare I și II asemănători insulinei. Liganzii non-peptidil pot include de exemplu steroizi, carbohidrați și lectine.
Liganzii imunoreactivi cuprind imunoglobulina pentru identificare de antigen (se referă așadar la anticorp) sau fragmente din antigenul identificat al acestei imunoglobuline. Imunoglobuline preferate în special sunt acele imunoglobuline care pot identifica un antigen asociat la tumoră. Așa cum este utilizat, Imunoglobulina se poate referi la orice clasă de identificare sau subclasă de identificare pentru imunoglobuline cum ar fi de exemplu, IgC, IgA, IgM, IgD sau IgE. Preferate sunt acele imunoglobuline care sunt în clasa IgG a imunoglobulinelor. Imunoglobulinele pot fi derivate din orice specie. Se preferă, cu toate acestea, imunoglobulina de origine umană, murină sau de iepure. Mai mult decât atât, imunoglobulina poate fi poli clonală sau monoclonală.
După cum s-a notat în referatele de specialitate, se apreciază că prezenta invenție cuprinde așadar utilizarea antigenului de identificare a fragmentelor de imunoglobuline. Astfel de fragmente de imunoglobuline pot include, de exemplu, fragmentele Fab', F (ab')2, Fv sau Fab, sau alți antigeni de identificare a fragmentelor de imunoglobulină. Astfel de fragmente de imunoglobulină pot fi preparate, de exemplu, prin digestia proteolitică a enzimei, de exemplu prin digestia pepsinei sau papainei, alchilare reductivă sau alte tehnici recombinate. Materialele și metodele pentru prepararea unor astfel de fragmente de imunoglobuline sunt bine cunoscute în literatura de specialitate. A se vedea în general Parham, J.lmmunolagy 131, 2895 (1983); Parham id 53, 133 (1982) ; and Matthew et al. id. 50, 239 (1982). Imunoglobulina poate fi un “anticorp himeric, acest termen fiind recunoscut în literatura de specialitate. Așadar, imunoglobulina poate fi un anticorp bifuncțional sau hibrid, adică un anticorp care poate avea un braț având o specificitate pentru o parte antigenică, ca de exemplu, un antigen cu o tumoră, în timp ce celălalt braț este prevăzut a fi diferit, de exemplu un hapten, care este, sau la care este legat, un agent letal la celulele tumorale care poartă antigenul. In mod alternativ, anticorpul bifuncțional poate fi unul în care fiecare braț are o specificitate pentru un epitop diferit al antigenului asociat la tumoră al celulei care trebuie modificată terapeutic sau biologic. In orice caz, anticorpii hibrizi au o specificitate duală, de preferință cu una sau mai multe porțiuni de legătură specifice pentru haptenul ales, sau una sau mai multe porțiuni specifice pentru antigenul prevăzut, de exemplu, un antigen asociat cu o tumoră, un organism infecțios sau alte stări de boală.
Anticorpii bifuncționali biologici sunt descriși de exemplu în EPA 0105360 la care se referă literatura de specialitate. Astfel de anticorpi hibrizi sau bifuncționali pot fi derivați, așa cum
RO 112618 Bl este notat, fie biologic, prin tehnici de fuziune celulară, sau chimic, în special cu agenți de legături încrucișate sau cu agenți de formare a punților bisulfurice, și aceștia pot fi conținuți în anticorpii întregi și/sau în fragmentele acestora. Metodele pentru obținerea unor astfel de anticorpi sunt descriși de exemplu în cererea PCT WO 83/03679 publicată în octombrie 27, 1983 și în EPA 0217 577, publicat în 8 aprilie, 1987, ambele fiind încorporate în prezenta invenție. Anticorpii bifuncționali preferați în special sunt acei anticorpi preparați biologic din polidoma sau quadroma sau cei care sunt preparați pe cale sintetică cu agenți de reticulare, cum ar fi de exemplu, bis(maleimido)-metil eter (BMME) sau cu alți agenți de reticulare din aceeași familie cu cei descriși în literatura de specialitate. In plus, imunoglobulina poate fi un anticorp cu o singură catenă (SCA). Aceștia pot consta din fragmente Fv cu o singură catenă (SCFV) în care domeniile cu variabile ușoare (VL) și cu variabile grele (VH) sunt unite printr-o punte peptidică sau prin legături de disulfuri. Așadar, imunoglobulina poate consta dintr-un singur domeniu VH(dAbs) care posedă o activitate de legare a antigenului. Vezi de exemplu G.Winter and C. Wilstein, Nature, 349295 [1991]·, R.GIockshuber et al. Biochemistry 29, 1362 (1990) and E.S. Ward et al. Nature 341, 544 (1989).
Se preferă în special pentru utilizare în prezenta invenție anticorpii monoclonali himerici, de preferință acei anticorpi himerici având specificitate către antigenul asociat la tumori. Așa cum se utilizează în prezenta invenție, termenul de anticorp himeric se referă la un anticorp monoclonal care cuprinde o regiune variabilă, de exemplu o regiune de legătură de la o sursă sau specii și de la cel puțin o porțiune a unei regiuni constante derivată de la diferite surse sau specii, preparate de obicei prin tehnici ale acidului dezoxiribinucleic DNA recombinat. Anticorpii himerici cuprinzând o regiune variabilă murinică și o regiune constantă umană sunt preferați în special în anumite aplicații ale invenției, în special în terapia umană, deoarece astfel de anticorpi sunt în mod real preparați și pot fi mai puțin imunogenici decât anticorpii monoclonali murinici puri. Astfel de anticorpi himerici murinici/umani sunt produsul genelor imunoglobulinei astfel exprimate cuprinzând segmente de acid dezoxiribonucleic ADN, codificând regiunile variabile ale imunoglobulinei murinice și segmente de acid dezoxiribonucleic ADN, codificând regiunile constante ale imunoglobulinei umane. Alte forme de anticorpi himerici incluși în prezenta invenție sunt cei în care clasa sau subclasa a fost modificată sau schimbată din cea a anticorpului original. Astfel de anticorpi himerici se referă așadar la anticorpii din clasele modificate. Metodele de producere a anticorpilor himerici includ tehnici convenționale ale acidului dezoxiribonucleic ADN recombinat și tehnici de transfecție genetică, bine cunoscute în prezent în literatura de specialitate. Vezi de exemplu Morrison, S.L. et al., Proc.Nat'1 Acad.ScLQI, 6851 (1984).
In termenul deanticorp himeric este cuprins conceptul de anticorp umanizat care reprezintă acei anticorpi în care cadrul sau “regiunile de determinare a complementarității (CDR) au fost modificate pentru a cuprinde CDR-ul unei imunoglobuline cu specificitate diferită în comparație cu cea a imunoglobulinei originale.
De preferință, un CDR murinic este grefat într- o regiune cadru a anticorpului uman pentru a prepara anticorpul umanizat. Vezi de exemplu L.Riechmann et al. Nature 332, 323 (1988); M.S. Neuberger etal., Nature 314,268 (1985).
CDR'S în special preferați corespund la acele secvențe de reprezentare de recunoaștere a antigenului notat mai sus pentru anticorpii bifuncționali și himerici, conform EPA 0239400 (publicat în 30 septembrie, 1987) care sunt încorporați în prezenta descriere de invenție pentru instruire în cazul anticorpilor CDR modificați.De asemenea,
RO 112618 Bl din referatele de specialitate se poate recunoaște că anticorpul himeric-bifuncțional poate fi preparat astfel ca să fie folositor într-o imunogenitate mai scăzută a anticorpului umanizat sau himeric, ca și pentru flexibilitatea în special pentru tratamentul terapeutic al anticorpilor chimerici-bifuncționali descriși mai sus. Astfel de anticorpi himericibifuncționali pot fi sintetizați, de exemplu, prin sinteză chimică utilizând agenți de reticulare și/sau metode recombinate de tipul celor descrise mai sus. In orice caz, prezenta invenție nu va fi limitată la scopul acesteia, prin orice metodă specială de producere a anticorpului bifuncțional, himeric, himeric-bifuncțional, umanizat sau a fragmentelor de recunoaștere a antigenului sau a derivatului acestuia.
In plus, invenția cuprinde în scopul acesteia, imunoglobuline (așa cum s-au definit mai înainte] sau fragmente de imunoglobuline la care sunt fuzionate proteinele active de exemplu o enzimă de tipul descris în Neuberger et al., PCT application, WO 86/01533, publicată în 13 martie, 1986. Descrierea unor astfel de produse este inclusă prin referințe în prezenta invenție.
Așa cum s-a notat, construirea de anticorpi bifuncționali fuzionați, himerici (incluzând anticorpii umanizați) și himericibifuncționali (incluzând anticorpii umanizați), include așadar în cadrul contextelor individuale, construcții cuprinzând fragmente de identificare a antigenului. După cum se menționează în referatele de specialitate, prin identificarea unor astfel de fragmente, acestea ar putea fi preparate prin fragmentarea enzimatică tradițională a anticorpilor bifuncționali, himerici, umanizați sau himerici-bifuncționali intacți. Dacă totuși anticorpii intacți nu sunt sus ceptibili la o astfel de fragmentare datorită naturii construcției incluse, construcțiile notate pot fi preparate cu fragmente de imunoglobulină ca materie primă sau dacă se utilizează tehnici recombinate, secvențele de acid dezoxiribonucleic ADN, ele însele pot fi fragmente în segmentul dorit codificat, care, atunci când este formulat, poate fi combinat in vitro sau in vivo, prin mijloace biologice sau chimice, pentru prepararea fragmentului de imunoglobulină intact dorit, finit. In acest context deci se poate utiliza termenul de segment.
Mai mult decât atât, așa cum s-a notat mai sus imunoglobulină (anticorp) sau fragmentul acesteia, utilizată în prezenta invenție, poate fi de natură policlonală sau monoclonală.Totuși, imunoglobulinele preferate sunt anticorpi monoclonali. Prepararea acestor anticorpi monoclonali sau policlonali este bine cunoscută în prezent în referatele de specialitate, aceștia fiind complet capabili de producere a imunoglobulinelor care pot fi utilizate în prezenta invenție. Vezi de exemplu G. Kohler și C.Milstein Nature 256.495 (1975). In plus, hybridomas și/sau anticorpii monoclonali care sunt produși de astfel de hybridomas și care sunt folosiți în mod convenabil în prezenta invenție, au ca sursă The American Type Culture Collection (ATCC) 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852 sau comercial, de exemplu BeohringerMannheim Biochemocals, P.O.Box 50816, Indianapolis, Indiana 46250.
Anticorpii monoclonali preferați în special pentru utilizare în prezenta descriere de invenție sunt cei care identifică antigenii asociați cu tumori. Astfel de anticorpi monoclonali, nefiind limitați la aceștia, pot include de exemplu următorii:
RO 112618 Bl
19 Partea de antigen identificată Anticorpi monoclonali 20 Referințe
Tumori pulmonare KS1/4 N.M.Varki, et al., Cancer Res.44:681, 1984
534,F8;6O4A9 F.Cuttitta, et al.,in:G.L.Wright [ed] Monoclonal Antibodies and Cancer, Marcel Dekker,lnc.,NY.,p.161, 1984
Squamous Lung GI,LuCa2, Kyoizumi et al.,Cancer
LuCa3, LuCa4 Res.,45:3274,1985
Cancer pulmonar cu celule mici TFS-20 Okabe et al., Cancer Res.45:1930, 1985
Cancer de colon 11.285.14 G.Rowland, et al., Cancer Immunol.
14.95.55 Irmcninother, 19:1,1985
NS-3a-22,N5-10 Z.Steplewski, et.al., Cancer Res.,
NS-19-9,NS-33a NS-52a,17-IA 41:2723,1981
Cancer embrionic MoAb 359 sau Acolla, R.S. et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.
ZCEO2S (USA),77:563,1980
Melanom 9.2.27 T.F. Bumol and R.A.Reisfeld, Proc.Natl. Acad.Sci.,79:1245,1982
p97 96,5 K.E.Hellstrom, et al.,Monoclonal Antibodies and Cancer,loc.cit.p.31
Antigen T65 T1O1 Boehringer-Mannheim, P.O.Box 50816 Indianapolis, IN 46250
Ferritin Antiferrin Boehringer-Mannheim, P.O.Box 50816, Indianapolis, IN 46250
R24 W.G.Dippold, et al..Proc.Natl.Acad. Sci.(USA),77:6114,1980
Neuroblastomă P1153/3 R.H.Kennet and F.Gilbert, Science, 203:1120,1979
MIN 1 J.T.Kemshead in Monoclonal Antibodies and Cancer,loc.cit.p.49
UJ13A Goldman et al., Pediatrics, 105:252,1984
Glioma BF7.GE2.CGI2 N.de Tribolet, et al., in Monoclonal Antibodies and Cancer, 1 oc.cit.p.81
Gangliozida L6 I.Hellstrom etal.Proc.Natl. Acad.Sci. (USA)83: 7059(1 986); US Pat.Nos.4.9O6.562,issued March 6, 1990 and 4.935.495,issued June 19, 1990
Chimeric L6 U.S.Ser.No.07/923.244, filed Oct.27,1986 equivalent to PCT Patent Publication, WO 88/03145, published May 5, 1988
Lewis Y BR64 U.S.Ser.Nos.07/289,635, filed December 22,1988, and. U.S.Ser.No.0,7/443,696, filed Nov.29, 1989, equivalent to European Patent Publication, EP A 0 375 562,
RO 112618 Bl
Lewis Y fucosilat BR96,Chimeric BR96
Cancer de sân B6.2.872.3
Sarcoma osteogenică 791T/48, 791T/36
Leucemie CALL2 anti-iotip
Cancer ovarian OC 125
Cancer de prostată D83.21.P6.2, Turp-27
Cancer renal A6H, DSD
Cel mai preferat este ligandul con- 25 ținând conjugatul care este derivat de la un anticorp himeric 8R96, ChiBR96 descris în U.S.Ser.No.07/544.246, filed June 26, 1990 și care este echivalent cu cererea PCT WO 91/00295 30 publicată în 10 ianuarie, 1991. ChiBR96 este un anticorp himeric murinic/uman de internalizare și este reactiv, așa cum s-a notat, cu antigenul Lewis Y fucosilat exprimat, prin celulele umane car- 35 cinome, cum ar fi de exemplu celulele derivate de la cancerul la sân, plămân, colon și ovar. Hybridoma este exprimată ca BR96 himeric și identificată, ca ChiBRB6, depozitată în Mai 23, 1990, 40 sub termenul de la Budapest Treaty, cu American Type Culture Collection (ATCC), 12301 Parklawn Drive,
Rockville Maryland 20852. Mostrele din acest Hybridoma sunt accesibile sub 45 numărul ATCC HB 10460. ChiBR96 este derivat din sursa de origine BR96. Hibridoma exprimată ca BR96 este depozitată la 21 februarie 1989 la ATCC sub termenul de la Budapest Treaty și 50 este convenabil sub numărul HB 10036. Hybridoma dorită este cultivată și anticorpii rezultați sunt izolați din supernatantul culturii celulare utilizându-se teh22
Tabel [continuare) published June 27,1990
U.S. Ser.Nos.07/374,947,filed June 30,
1989, and, U.S. Ser.No.07 /544, 246, filed June 26,1990, equivalent to PCT Patent Publication, WO 91/ OO295,published January 10,1991. D.Colcher, et al., in Monoclonal Antibodies and Cancer,1oc.cit.p.121 M.J.Embleton.ibid, p.181
C.T.Teng, et al.,Lancet, 1:01, 1982 R.A.MilIer, et al.,N. Eng. J. Med, 306:517, 1982
R.C.Bast, etal.,J.CIin.lnvest.,68:1331, 1981
J.J.Starling, et al., in Monoclonal Antibodies and Cancer, loc.cit.p.253 P.H.Lange, et al., Surgery,98:143, 1985.
nici standard bine cunoscute în prezent în literatura de specialitate. Vezi de exemplu Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications Hurell (ed) (CRC Press, 1982).
De preferat este ca imunoconjugatul să fie derivat de la anticorpul BR64 monoclonal murinic descris în U.S. Ser.Nos. 07/289, 635 filed Dec. 22, 1988 și în U.S.Ser.Nos.O7/ 443, 696,filed November 29, 1989 echivalent cu EP A O 375 562, publicat în 27 iunie 1990. Așa cum s-a notat mai sus, acest anticorp este intrinsec și este reactiv cu antigenul Lewis Y exprimat prin celulele canceroase derivate de la celulele canceroase de la colonul, sânul, ovarul sau plămânul uman. Hybridoma este exprimat ca anticorp BR64 și este identificat ca BR64 fiind depozitat la 3 noiembrie 1988 dub denumirea de la Budapest Traty, cu ATCC și este convenabil sub numărul HB 9895.
Hybridoma este cultivată și anticorpul dorit este izolat utilizându-se tehnici standard bine cunoscute în literatura de specialitate, așa cum sunt referatele prezentate mai sus.
într-o a treia preferință, un imunoconjugat al prezentei invenții este derivat
RO 112618 Bl de la anticorpul monoclonal L6 murinic descris în US 4906562 din 6 martie 1990 și US 4935495 din 19 iunie 1990. L6 este un anticorp neintrinsec activ față de antigenul gangliozidei exprimat prin celule canceroase mai însemnate umane derivate din celulele canceroase umane de plămân, sân, colon sau ovar. Hybridoma exprimată ca L6 și identificată ca L6 este depozitată sub termenul Budapest Treaty la 6 decembrie 1984 la ATCC și este convenabilă sub numărul HB 8677. Hybridoma este cultivată și anticorpul este izolat utilizându-se tehnicile standard din referințele menționate mai sus. Dacă se dorește, o formă himerică a anticorpului L6, aceasta este descrisă în U.S.Serial No.O7/ 923,244 echivalent cu cererea PCT W088/03145 publicată in 5 mai 1988, Astfel așa cum s-a utilizat, termenul de imunoglobulină sau anticorp cuprinde în toate sensurile acestuia formele de imunoglobulină/ anticorp sau construcțiile de imunoglobulină/anticorp arătate mai sus.
Compușii intermediari și conjugatele
Invenția de față se referă la compușii intermediari Receptorul de Adiție Michael și acilhidrazona conținând medicamentul derivat din formula ll-a;
[ D ]=N-NHCO ( CH2 )n - R (ll-a) în care D este un rest de moleculă de medicament, n este un număr întreg de la 1 la 10 și R este Receptorul de Adiție Michael, acestea fiind în totalitate definite mai sus.
Așa cum se preferă în mod special, compusul intermediar conținut în formula ll-a și care este utilizat pentru prepararea conjugatului conform prezentei invenții, este compusul definit prin formula llb:
(ll-b) în care radicalul R, este -CH3, -CH20H, CH2OCO(CH2)3 CH3 sau -CH2OCOCH [OC2H5)2; R3 este -DCH3, -OH sau hidrogen; R4 este -NH2, NHC0F3, 4- morfolinil, 3-ciano-4-morfolinil, 1-piperidinil, 4metoxi-piperidinil, benzilamină, dibenzilamină, cianometil amină sau 1-ciano-2metoxietil amina; R5 este -DH, -OHTP sau hidrogen; R6 este -OH sau hidrogen, cu condiția ca atunci când R6 nu este -OH, R5 este -OH sau -OTHP; n este un număr întreg de la 1 la 10; și R este un rest de moleculă de receptor de Adiție Michael. Cel mai preferat compus intermediar pentru utilizare în prezența invenție este definit prin formula llc:
în care radicalii R,, R3, R4, R5 și R6 sunt definiți mai sus pentru formula llb.
Așadar, utilizat ca un compus intermediar în prezenta invenție este un ligand desemnat care conține o grupare sulfhidril reactivă, liberă. Gruparea sulfhidril poate fi conținută în ligandul activ desemnat sau poate fi derivată direct de la ligand, sau de la forma derivatizată a ligandului. Intr-o metodă preferată pentru prepararea conjugatelor conform prezentei invenții, o grupare sulfhidril poate fi conținută în ligandul desemnat, nativ sau poate fi derivată direct de la ligand sau de la forma derivatizată a ligandului. Intr-o metodă preferată pentru prepararea conjugatelor conform prezentei invenții, o grupare sulfhidril de pe ligand sau de pe ligandul modificat reacționează direct cu Receptorul de Adiție Michael sau cu compusul intermediar cu formula lla pentru a forma conjugatul final. Utilizând acest procedeu, în general aproximativ una până la aproximativ zece molecule
RO 112618 Bl de medicament se pot lega la fiecare ligand. Astfel, in formula I, q este de la aproximativ 1 la aproximativ 10.
Când conjugatul este format, porțiunea de Receptor de Adiție Michael 5 devine un Aduct de Adiție Michael” așa cum este utilizat în prezenta invenție. Astfel, de exemplu, așa cum este apreciat in literatura de specialitate, dacă un rest de moleculă Receptor de Adiție 10 Michael în formula ll-a a compusului este un rest de moleculă maleimido, atunci porțiunea corespunzătoare a Adductului de Adiție Michael a conjugatului final cu formula I va fi un rest de moleculă 15 succinimidă. Astfel, Adductul de Adiție Michael se referă la o jumătate de moleculă care ar fi fost obținută ca Receptor de Adiție Michael, așa cum s-a definit în continuare cu mai multe detalii 20 în cadrul reacției de adiție Michael. De asemenea, în prezenta invenție, se face referire la un procedeu de preparare a compusului cu formula I, așa cum s-a definit mai sus, care cuprinde reacția 25 compusului cu formula Ila, așa cun s-a definit mai sus, cu un ligand care conține, sau este modificat sau derivat, o grupare sulfhidril reactivă și dacă se dorește în final izolarea produsului. A- 30 ceasta este o metodă preferată pentru prepararea compușilor cu formula I. în mod alternativ compușii, cu formula I ar putea fi preparați prin reacția directă a medicamentului sau a medicamentului 35 modificat, cu o porțiune a acilhidrazidei ca element de legătură, deja convenabil legat la ligand, la ligandul modificat sau ligandul derivat. In special, se tratează un procedeu de preparare a compusului 40 cu formula I:
care cuprinde (a) reacția compusului cu formula Ila:
[D^=N-NHCOCCH2)n-R (ll-a) cu compusul cu formula III:
u -iq (III) sau (b) reacția compusului cu formula. [D - ( C - O )], cu compusul cu formula:
γ
în care D, η, p, Y, z, q, X, R și A sunt definiți ca mai sus și dacă se dorește, produsul se izolează.
Din referatele din literatura de specialitate se înțelege că, în sinteza compușilor conform prezentei invenții, poate să fie necesară protecția sau blocarea diferitelor funcționalități reactive la compușii inițiali sau la compușii intermediari, în timp ce reacția dorită este efectuată pe alte porțiuni ale moleculei. După ce reacțiile dorite sunt complete sau la orice timp dorit, în mod normal astfel de grupări de protecție vor fi îndepărtate, de exemplu prin hidroliză sau hidrogenoliză. Astfel de faze de protecție și faze de deprotecție sunt convenționale în chimia organică. Datele din literatura de specialitate se referă la Protective Groups in Organic Chemistry, McOmie, ed.Plenum Press, N.Y., N.Y. (1973) și Protective Groups in Organic Synthesis, Greene, ed.John Wiley and Sons, New York, N.Y. (1981) pentru descrierea grupărilor de protecție care pot fi folosite la prepararea compușilor conform prezentei invenții.
Se pot exemplifica în acest sens, grupările de protecție amino care pot include, de exemplu, grupările C1 - C10 alcanoil, cum ar fi formil, acetil, dicloracetil, propionil, hexanoil, 3,3-dietilhexa
RO 112618 Bl noii, γ-clorbutiril și alți compuși asemănători; grupări CȚ - C10 alcoxicarbonil și grupări C5- C25 ariloxicarbonil, cum ar fi de exemplu, butoxicarbonil terțiar, benziloxicarbonil, aliloxicarbonil, 4-nitroben- 5 ziloxicarbonil și cinamoiloxicarbonil; halo(C., - C10) - alcoxicarbonil, cum ar fi de exemplu, 2,2,2-tricloretoxicarbonil și grupări CȚ - C15 arilalchil și alchenil, ca de exemplu, benzii, fenetil, alil, tritil și 10 alte grupări asemănătoare. Alte grupări de protecție amino utilizate de obicei sunt cele sub formă de enzime preparate cu beta-ceto-esteri, ca de exemplu, metilacetoacetat sau etilacetoace- 15 tat.
Grupările carboxi de protecție folositoare includ, de exemplu, grupări Cq-C.jQ alchil cum ar fi metil, butii terțiar, decil, halo C3 - C10 alchil, cum ar fi 20 2,2,2-tricloretil și 2-iodetil; C5 - C15 arilalchil, cum ar fi de exemplu, benzii,4metoxibenzil, 4-nitrobenzil, trifenilmetil, difenilmetil; C10 alcanoiloximetil, cum ar fi de exemplu, acetoximetil, propio- 25 noximetil și alți compuși asemănători și grupări, cum ar fi de exemplu, fenacil, 4 halofenacil, alil, dimetilalil, tri-fC., - C3 alchil) silii, ca de exemplu, trimetilsilil, beta-paratoluensulfoniletil, beta-para-nitrofenil-tioetil, 2,4,6-trimetilbenzil, betametiltioetil, ftalimidometil, 2,4-dinitrofenil sulfonil, 2-nitrobenzhidril și alte grupări asemănătoare.
în mod similar, grupările de pro- tecție hidroxi utilizate pot include, de exemplu, gruparea formil, gruparea cloracetil, gruparea benzii, gruparea benzhidril, gruparea tritil, gruparea 4-nitrobenzil, gruparea trimetilsilil, gruparea fenacil,gruparea butii terțiar, gruparea metoximetil, gruparea tetrahidropiranil și alte grupări asemănătoare.
în general, Receptorul de Adiție Michael conținând medicamentul derivat de hidrazonă cu formulele lla, llb, sau llc se poate prepara dependent de restul de moleculă de Receptor de Adiție Michael utilizată, prin reacția medicamentului (sau a derivatului acestui medicament] cu o hidrazidă conținând Receptorul de Adiție Michael, în general în maniera descrisă în metoda A ;
Metoda A [D - ( C = O ) ] +H2N - NHCO - ( CH2 ] n - R [D=]= N - NHCO - (CH2]n - R (lla]
Așa cum este notat mai departe, 30 Metoda A este o metodă preferată atunci când Receptorul de Adiție Michael este un rest de moleculă maleimido. Alternativ, formula lla reprezintă compusul care poate fi preparat prin reacția 35 medicamentului cu o hidrazidă, pentru a se forma un compus intermediar, derivatul medicamentului hidrazonă, după care urmează reacția acestui compus cu Receptorul de Adiție Michael conținând un rest de moleculă, conform procedeului general descris în Metoda B:
Metoda B
R-C [D - (C = O]]+H 2N-NHC0(CH2)n-L-, [ D ] N-NHC0(CH2Ț-L — [ D ] N - NH CO (CH^ - R (lla]
In metoda A și metoda B, D, n și 45 R au semnificațiile notate mai sus. In metoda B, L reprezintă o grupare mobilă, cum ar fi de exemplu, halogen, mesilat sau tosilat, capabili de a trece printr-o substituție nucleofilică, iar C 50 reprezintă o grupare care redă Recep torul de Adiție Michael, R este un reactiv nucleofilic bun. Grupele utilizate în special, reprezentate prin C, pot include, de exemplu, ioni de metale alcaline, cum ar fi de exemplu, Na+, K+ sau Li*.
Un Receptor de Adiție Michael, așa cum se înțelege din referatele de
RO 112618 Bl specialitate, este un rest de moleculă capabilă să reacționeze cu un reactiv nucleofilic care trece printr-o reacție de adiție nucleofilică, caracteristică reacției de Adiție Michael. Așa cum este notat, după ce se produce adiția nucleofilică, restul de moleculă a Receptorului de Adiție Michael se referă la Adductul de Aditție Michael.
Receptorii de Adiție Michael utilizați în general în metoda A a procedeului, pot include de exemplu, alfa, beta-acizi cu legătură etilenică sau alfa, beta-tioacizi cum ar fi de exemplu, cei care conțin o jumătate de moleculă -C= C - COOH, -C= C - C (O)SH, -C=C-C(S)SH sau -C=C-C(S)OH; esterii sau tioesterii alfa, beta-etilenici, atunci când restul de moleculă alchil este diferită de o grupare metil sau grupare etil, de exemplu grupările care conțin un rest de moleculă C=C -COOR, -C=C-C (S) OR, -C=C-C (S)SR sau -C=C-C (□) - SR, în care R este o grupare formatoare de ester diferită de etil sau metil; amide alfa, beta-etilenice, imide, tioamide și tioimide (fie ciclice sau aciclice), de exemplu cele care conțin o jumătate de moleculă, cum ar fi de exemplu, cele care conțin grupările -C=CC0NR2, -C=OCONHCO -, -C=C-CSNR2, C=C-CSNHCO- sau -C=C-CSNHCS-, dacă sunt ciclice sau aciclice și în care grupările -C0NR2 sau -CSNR2 reprezintă o amidă primară, secundară sau terțiară sau un rest de tioamidă; acizi alfa, betaacetilenici sau tioacizi alfa, beta-acetilenici, ca de exemplu, cei care conțin un rest de moleculă, cum ar fi de exemplu, -OC-COOH, -ChC- C (S) OH sau -C=C C(S)-SH sau -OC-C(0)-SH; esteri alfa, beta-acetilenici, ca de exemplu, cei care conțin un rest de moleculă, cum ar fi OC-CQOR, -OC(S)OR, -OC - C(S)SR, sau -C=C-C (O) -SR, în care R este o grupare formatoare de ester diferită de metil sau etil; nitrili alfa, beta-etilenici, de exemplu cei care conțin un rest de moleculă, cum ar fi de exemplu, -C=CC^N; derivații ciclopropan, reactivi de Adiție Michael, de exemplu 1-ciano-1etoxicarbonil ciclopropan oLs.
EtOOCT\ (
bromură de vinii dimetil-sulfoniu, de exemplu cea care conține un rest de moleculă -C=C-S+(Me)2Br ; o sulfonă alfa, beta-etilenică, ca de exemplu, cea care conține un rest de moleculă o li
-c=c-s=o I ch3 compuși nitro alfa, beta-etilenici, ca de exemplu, cel care conține un rest de moleculă -C = C - N02 ; compuși de fosfoniu alfa, beta-etilenici, de exemplu cel care conține gruparea: 0
I!
-C=C-P-R
R compusul care conține o grupare, ca de exemplu, C=C-C=N, care ar putea fi de exemplu într-un heterociclu aromatic cum ar fi 2- sau 4-vinil piridina sau un compus conținând un rest de ion de tioniu alfa, beta-nesaturat, ca de exemplu:
Receptorii de Adiție Michael utilizați în metoda B pot include aldehidele alfa, beta-etilenice, ca de exemplu compușii, care conțin un rest de -C=C-CHO; cetonele alfa, beta-etilenice, ca de exemplu, acei compuși care conțin un rest de O
II -C=C-Cesteri alfa, beta-etilenici sau tioesteri, cum ar fi de exemplu, compușii care conțin -C=C-COOR, -C=C-C(S)OR’, -C=CC(S]SR sau -C=C-C(O)-SR ca jumătăți de molecule, în care R este o jumătate de moleculă formatoare de ester, care este metil sau etil, de exemplu O
-OC-C-OR aldehide sau cetone alfa, beta-acetilenice, ca de exemplu, compușii care conțin resturi de -C ξ C-CHO sau -C = CC0-; esteri alfa, beta-acetilenici sau esteri tio-, care au grupări metil sau etil ca resturi de grupări alchil, ca de exemplu,
RO 112618 Bl un compus conținând o grupare -C s C COOR, -C = C-C(S)OR, -C = C-C(D)SR sau o grupare -C = C-CSSR, în care R este un rest de grupare formatoare de ester,care este metil sau etil.
Așa cum se menționează în literatura de specialitate,Receptorii de Adiție Michael pot face parte din familii de receptori care pot fi utilizați în prezenta descriere de invenție. Pentru o descriere generală a Reacției de Adiție Michael, sunt referințele: E.D.Bergman, D. Ginsberg and R.Pappo, Org.React.IO 179-555 (1959); and D.A.Oare and C.H.Heathock, Topics in Stereochemistry vo1.2O eds.E.L.EIiel and S.H. Wilen, John Wiley and Sons, Inc. (1991), precum și referințele citate în prezenta invenție.
Condițiile de reacție precise utilizate pentru prepararea compușilor intermediari cu formulele lla, llb sau llc vor depinde de natura medicamentului și de Receptorul de Adiție Michael utilizat în reacție. Cel mai preferat compus intermediar al prezentei invenții este reprezentat prin formula llc de mai sus, în care restul de moleculă de medicament este un medicament antraciclinic și Receptorul de Adiție Michael este o grupare maleimido. Pentru această reacție se utilizează Metoda A descrisă mai sus, Conform reacției cu ligandul (tiolat, modificat sau altceva), receptorul de Adiție Michael al compusului intermediar devine o grupare succinimido în conjugatul final (Adductul de Adiție Michael).
Liganzii conținând gruparea sulfhidril există în mod natural (de exemplu, ligandul nu a fost modificat) sau poate fi produs, de exemplu, prin (a) tiolarea ligandului prin reacția cu un reactiv de tiolare, cum ar fi de exemplu, SMCC sau Nsuccinimid-il-3-(2-piridilditio) propionatul (SPDP) urmată de reducerea produsului ; (b) tiolarea ligandului nativ prin reacția cu iminotiolanul (IMT”); (c) adiția unui rest de amino acid care conține sulfhidril, de exemplu o porțiune de rest de cisteină, la un ligand, cum ar fi de exemplu, o proteină, peptidă sau o polipeptidă, fără ca să aibă un rest de sul fhidril corespunzător sau reactiv, sau (d) reducerea unei legături disulfurice în molecula nativă utilizând agentul de reducere pentru astfel de scopuri, de exemplu, ditiotreitolul (DTT). Metoda (d) este metoda cea mai preferată pentru producerea grupărilor sulfhidril în moleculele de anticorpi utilizate în conjugatele pre- zentei invenții.
Dacă un reactiv de tiolare, cum ar fi de exemplu, SPDP sau iminotiolanul se utilizează la prepararea conjugatului prezentei invenții în referatele de specialitate, se apreciază că o porțiune din distanțarea scurtă va fi inserată între restul de Receptor de Adiție Michael și ligand în conjugatul cu formula I. Intr-un astfel de caz, z va fi 1 în formula (i) a compusului. In situația în care o grupare sulfhidril liberă de pe ligand este uitilizată direct, de exemplu prin utilizarea unui ligand redus DTT (în special un anticorp relaxat preparat prin utilizarea de exemplu a DTT), sau în care partea reactivă, de exemplu cisteină, este inserată în porțiunea ligand a moleculei, z este zero în formula I și o legătură directă tioeterică va exista între ligandul de legătură și porțiunea de adiție Michael a moleculei.
Pentru formarea conjugatului, ligandul tiolat sau ligandul care are o grupare sulfhidril reactivă liberă reacționează cu Receptorul de Adiție Michael conținând hidrazona cu formula lla. In general, condițiile de reacție trebuie să fie alese ținând cont de stabilitatea ligandului, medicamentul și numărul dorit de resturi de molecule de medicament care trebuie unite la ligand. De exemplu, se apreciază în unele referate că numărul mediu al moleculelor de medicament unite la ligand poate fi variat prin (1) modificarea cantității de compus intermediar medicamentul-hidrazonă cu formula lla referitor la numărul de grupări sulfhidril reactive pe restul de ligand al conjugatului; sau (2) (a) modificarea numărului de grupări sulfhidril reactive de pe ligand prin, de exemplu, numai reducerea parțială a ligandului (în cazul proteinei, peptidei sau polipeptidei), (b) prin
RO 112618 Bl inserarea unui număr limitat, de exemplu, de porțiuni reactive de cisteină la o proteină, peptidă sau polipetidă sau (c) prin limitarea gradului de tiolare utilizând mai puțin decât cantitățile maximale de agenți de tiolare, de exemplu SPDP sau iminotiolanul. Așadar, numărul de grupe de -SH poate fi variat, nivelul preferat de grupări sulfhidril libere, îm special pentru un anticorp relaxat, este maxim când se utilizează reactivi speciali în domeniu. Gradul variației numărului de grupe -SH este ușor de controlat în procedeul anticorpilor relaxați. De exemplu, fig. 14 prezintă efectul asupra numărului de grupe -SH pentru anticorpii BR64 și anticorpii himerici BR96 dependent de raportul molar al DTT față de ligand, la 37°C timp de 1,5 ore de reacție. Referatele de specialitate apreciază că diferitele clase sau subclase de imunoglobuline pot avea numere diferite de legături disulfurice susceptibile pentru reducerea de reactivi, ca de exemplu DTT. Astfel, o altă considerație în determinarea nivelului dorit de conjugare a unui anticorp sau a unui fragment de anticorp este numărul de grupări disulfurice convenabil pentru reducerea grupărilor -SH libere. In general, totuși, conjugatul preferat cu formula I va avea în medie, după o reacție dată, de la aproximativ 1 la aproximativ 10 molecule de medicament per moleculă de ligand. Un raport molar preferat în special între medicament și ligand, în medie (MR), este de la aproximativ 4 la aproximativ 8.
După ce reacția conjugatului este completă, conjugatul poate fi izolat și purificat utilizându-se dializa cunoscută de obicei, ca și metode de cromatografie și/sau filtrare cunoscute. O soluție finală conținând conjugatul, în mod obișnuit poate fi liofilizată pentru a se obține conjugatul în formă uscată, stabilă, care poate fi conservată cu siguranță și transportată. Produsul liofilizat poate fi eventual reconstituit cu apă sterilă sau cu un alt diluant convenabil pentru administrare. In mod alternativ, produsul finit poate fi congelat de exemplu în mediu lichid de azot, apoi decongelat și menți nut la temperatura camerei înainte de administrare.
De preferat este în primul rând obținerea hidrazonei antraciclice cu formula lla prin reacția antraciclinei cu maleimido(C1-C1D) alchil hidrazidă sau cu o sare a acesteia. Această reacție este menționată în Metoda A descrisă mai sus. Reacția este în general efectuată în două faze. Mai întâi se prepară hidrazida maleimido-tC^C^) alchilică sau o sare a acesteia.După purificare, de exemplu prin cromatografie și/sau cristalizare, intră în reacție cu antraciclina dorită, sau cu o sare de antraciclină, fie baza liberă a hidrazidei, fie sarea acesteia. După concentrarea soluției de reacție, produsul de reacție conținând maleimido hidrazona cu formula lla este colectat și dacă se dorește este purificat prin tehnici standard de purificare.
Hidrazona cu formula lla reacționează apoi cu un anticorp conținând sulfhidril, așa cum s-a descris mai sus. Dacă anticorpul este tiolat, utilizându-se de exemplu N-succinimidol-3-(2-piridilditio) propionat (SPD), reacția de tiolare în general este realizată în două faze: (1) reacția unei grupări amino libere de pe anticorp cu SPDP ; și (2) reducerea DTT din disulfura SPDP pentru a se obține o grupare liberă -SH. Intr-un procedeu preferat, în reacția de tiolare în faza I raportul molar între SPDP și un anticorp este cuprins între aproximativ 7,5:1 la aproximativ 60:1, dependent de numărul de ’ grupări sulfhidril dorit, la un raport molar preferat de la aproximativ 7,5:1 la aproximativ 30:1, în special pentru BR64 și de preferință de la aproximativ 20:1 pentru BR96. Reacția este efectuată între aproximativ 0°C și aproximativ 5CPC, cea mai preferată temperatură fiind de aproximativ 3D°C. Reacția poate fi efectuată la un pH de ordinul cuprins între aproximativ 6 și aproximativ 8, cel mai preferat pH fiind de aproximativ 7,4. Reducerea în faza (2), utilizând de preferință DTT, este efectuată într-un raport molar DTT/SPDP cuprins între aproximativ 2,5:1 până la aproximativ 10:1. Cel mai preferat raport molar DTT/SPDP este
RO 112618 Bl de aproximativ 5:1 și numărul de moli de SPDP este același cu cel adăugat în faza (1) de reacție. Reacția este efectuată în general la aproximativ D°C până la aproximativ 40°C, de preferință la O°C și este de obicei completă după aproximativ 20 minute. După dializă și concentrarea soluției de ligand tiolat (un anticorp de preferință), concentrația molară a grupărilor de sulfhidril este determinată, iar ligandul tiolat reacționează cu derivatul de hidrazonă cu formula lla în raportul molar dorit față de cantitatea molară a grupărilor de sulfhidril reactive de pe ligand. De preferință, raportul este de cel puțin aproximativ 1:1. Această reacție este în general efectuată la o temperatură de la aproximativ 0°C la aproximativ 25°C, de preferință de aproximativ 4°C. Conjugatul care rezultă poate fi purificat prin metode standard. Această schemă de reacție este menționată în fig. 1a și 1b. Intr-un alt mod preferat, hidrazona cu formula lla este obținută așa cum s-a descris mai sus. Hidrazona reacționează apoi, așa cum este menționat în fig. 1c, cu un anticorp care mai sus a fost tiolatul cu iminotiolan (IMT). Tiolarea ligandului (de preferință un anticorp) cu iminotiolan decurge în general într-o singură fază de reacție. Raportul molar iminotiolan/anticorp este de ordinul cuprins între aproximativ 30:1 la aproximativ 80:1, de preferință aproximativ 50:1. Reacția este realizată timp de aproximativ 30 de minute până la aproximativ 2 ore, de preferință aproximativ 30 minute, la un pH de la aproximativ 7 la aproximativ 9,5, de preferință la un pH de aprox.9, la o temperatură de la aproximativ 20°C la aproximativ 40°C, de preferință la aproximativ 30°C. Produsul de reacție reacționează apoi cu hidrazona având formula lla la o temperatură de la aproximativ 0°C la aproximativ 25°C, de preferință la aproximativ 4°C și la un pH de la aproximativ 7 la aproximativ 9,5, de preferință la aproximativ 7,4. Conjugatul este apoi purificat, utilizându-se metode standard din domeniu, de exemplu dializa, filtrarea sau cromatografia. Conform unui al trei lea mod preferat, compusul intermediar de hidrazonă cu formula lla este preparat așa cum este descris mai sus. Hidrazona reacționează apoi cu un ligand, mult mai preferabil un anticorp, în care cel puțin o grupare disulfurică a fost redusă pentru a forma cel puțin o grupare sulfihidril. Un ligand în special preferat este un anticorp relaxat, așa cum se va descrie mai departe. Agentul de reducere preferat, pentru prepararea grupării sulfhidril libere este DTT, iar după datele din literatura de specialitate se va înțelege că și alți agenți de reducere pot fi convenabili pentru acest scop.
Un anticorp relaxat este un anticorp în care una sau mai multe, de preferință trei sau mai multe, punți disulfurice au fost reduse. Mult mai preferabil, un anticorp relaxat este un anticorp în care cel puțin patru punți disulfurice au fost reduse. Intr-un procedeu preferat pentru prepararea anticorpului relaxat (de exemplu redus), reducerea în special cu DTT și purificarea produsului de reacție se efectuează în absența oxigenului, într-o atmosferă inertă, de exemplu în atmosferă de azot sau argon. Acest procedeu, așa cum este descris în detaliu în continuare, permite un control atent al gradului de reducere. Astfel, acest procedeu permite, așa cum se menționează în referatele de specialitate să se reproducă, în orice timp la nivelul de reducere dorit al ligandului și de aceea, numărul de grupări libere -SH pentru prepararea conjugatului conform prezentei invenții este obținut după dorință.
Intr-un procedeu alternativ, reacția este efectuată în condiții ambiante; cu toate acestea, se utilizează o cantitate suficient de mare din agentul de reducere, de preferință DTT, pentru a îndepărta orice reoxidare a legăturilor disulfurice reduse, care se poate produce. In orice caz, purificarea produsului este efectuată cât mai repede posibil după ce reacția este completă și mult mai preferabil într-o atmosferă inertă, cum ar fi de exemplu, sub un strat de argon sau de azot. □ metodă preferată
RO 112618 Bl de preparare a grupării libere de sulfhidril în ligand, este procedeul în care atmosfera de oxigen este exclusă din reacție. Un anticorp produs prin orice metodă se referă la anticorpul relaxat. Produsul, deși preparat, este utilizat pentru o reacție secundară cât mai repede posibil sau este conservat în condițiile în care se evită expunerea la oxigen, de preferință într-o atmosferă inertă.
In procedeul în care oxigenul este exclus din reacție (de exemplu atunci când reacția este efectuată într-o atmosferă inertă], ligandul este menținut în reacție o perioadă de la aproximativ 30 minute la aproximativ 4 ore, de preferință aproximativ 3 ore, cu un exces molar de DTT. Raportul dintre VDTT și ligand este de ordinul cuprins între aproximativ 1:1 la aproximativ 20:1, de preferință aproximativ 1:1 la aproximativ 10:1, mult mai preferabil aproximativ 7:1 la aproximativ 10:1, în funcție de numărul de grupări sulfhidrilice dorit. Pentru o reducere realizată în prezență de oxigen, raportul molar de DTT față de ligand este cuprins de la aproximativ 50:1 la aproximativ 400 :1, de preferință de la aproximativ 200:1 la aproximativ 300:1. Această ultimă reacție este efectuată timp de aproximativ 1 la aproximativ 4 ore, de preferință 1,5 ore, la o temperatură între aproximativ 20°C și aproximativ 50°C, temperatura preferată fiind de aproximativ 37°C. Reacția este efectuată la un pH cuprins între aproximativ 7 și aproximativ 8, de preferință între aproximativ 7 la aproximativ 7,5. Produsul este apoi purificat utilizându-se tehnici de purificare standard, cum ar fi de exemplu, dializa, filtrarea și/sau cromatografia. O metodă de purificare preferată este diafiltrarea. Pentru prevenirea reoxidării grupărilor de -SH în timpul purificării și conservării, produsul este de preferință menținut într-o atmosferă inertă, excluzând expunerea la oxigen. în unele referate de specialitate se apreciază că liganzii diferiți, în special un anticorp, poate poseda diferite grade de susceptibilitate la reducere și/sau reoxidare. In consecință, condițiile de redu cere descrise mai sus pot fi necesare pentru a fi modificate în vederea obținerii unui ligand în anumite condiții de reducere așa cum s-a descris mai sus. Mai mult decât atât, mijloace alternative de preparare a unui anticorp redus utilizabil în procedeul de obținere a conjugatului vor fi menționate în referate de specialitate. Astfel, deși preparat, un ligand redus utilizat în prepararea conjugatului cu formula I poate fi inclus în prezenta invenție. Pentru prepararea conjugatului cu formula I, așa cum s-a notat mai sus, produsul de reacție, anticorpul redus, reacționează cu compusul intermediar hidrazona, având formula llc. De preferință, reacția este realizată într-o atmosferă inertă la o temperatură de la aproximativ D°C la aproximativ 10°C, de preferință la aproximativ 4°C și la un pH de la aproximativ 6 la aproximativ 8, de preferință aproximativ 7,4. Imunoconjugatul este purificat utilizându-se tehnici standard, cum ar fi de exemplu, dializa, filtrarea sau cromatografia.
Conform invenției, o antraciclină cu formula II este legată la un ligand la care se adaugă un rest de moleculă care conține o grupare sulfhidril liberă. Asemănător, ligandul este un ligand nonanticorp, de exemplu bombezină. Gruparea sulfhidril poate fi de exemplu o parte a unui rest de cisteină adăugat la molecula de bombezină nativă. Antraciclina este unită printr-un rest de hidrazonă la Receptorul de Adiție Michael conținând un rest de moleculă, care apoi reacționează cu bombezină modificată, pentru a forma conjugatul cu formula I. Produsul este apoi purificat prin tehnici standard, cum ar fi de exemplu, dializa, centrifugarea sau cromatografia.
Invenția de față mai conține o metodă de tratament a unei boli sau modificarea unei funcții biologice, care cuprinde administrarea la animale cu sânge cald atunci când este nevoie, a unei cantități terapeutice efective sau de modificare a funcției biologice a conjugatului cu formula I. Așa cum se poate aprecia, conjugatul special utilizat va depinde de starea bolii care trebuie tratată
RO 112618 Bl sau de sistemul biologic care trebuie modificat. In special, literatura de specialitate va avea posibilitatea să selecteze un ligand special și un medicament special pentru prepararea conjugatului cu formula I, care are specificitate pentru tratamentul bolilor, sau este capabil de a modifica funcția biologică dorită.
De preferință, invenția de față se referă la o metodă de tratament a bolii neoplazice care cuprinde administrarea la animalul cu sânge cald, la nevoie, a unei cantități efective terapeutic din conjugatul citotoxic cu formula I. Un conjugat preferat în special pentru acest scop este un imunoconjugat cu formula la:
(l-a) în care n, p, q, z, X, R3, R4, R5 și R6 sunt definiți ca mai sus.
Cel mai preferat este un imunoconjugat cu formula la în care restul de medicament este adriamicină și porțiunea de ligand este selectată dintr-o grupare care constă din BR64, BR96, L6, BR64 himeric, BR96 himeric, L6 himeric și fragmentele de identificare ale antigenului. Cel mai preferat ligand este BR96 himeric, în special BR96 himeric relaxat și fragmentele acestuia pentru identificarea antigenului.
Conjugatele conform prezentei invenții sunt administrate la pacient sub formă de compoziție farmaceutică, care cuprinde conjugatul cu formula I și un vehicol, excipientsau diluant al acestuia, acceptabil din punct de vedere farmaceutic. Așa cum se utilizează, termenul de acceptabil din punct de vedere farmaceutic se referă la acei agenți care sunt folositori în tratamentul sau dia gnoza animalelor cu sânge cald incluzând de exemplu omul, cabalinele, porcinele, bovinele, murine, canine, feline sau alte animale, ca și păsări sau alte animale cu sânge cald. Modul preferat de administrare este parenteral, în special pe cale intravenoasă, intramusculară, subcutanată, intraperitoneală sau intralimfatică. Astfel de compoziții pot fi preparate utilizându-se vehicole, diluanți sau excipienți comuni în domeniu. (Vezi de exemplu Reminton's Pharmaceutical Sciences, 16 th.ed. 1980, Mack Publishing Company, edited by Osol et al.). Astfel de compoziții pot include proteine, cum ar fi de exemplu, proteine serice, albumină serică umană, substanțe tampon sau amestecuri tampon, ca de exemplu fosfați, alte săruri sau electroliți și alții. Diluanții convenabili pot include de exemplu apa sterilă, soluție izotonică salină, soluție apoasă diluată de dextroză, un alcool polihidric sau amestecuri de astfel de alcooli, ca de exemplu glicerină, propilen glicol, polietilenglicol și mulți compuși asemănători. Formulele pot conține conservanți, ca de exemplu fenetilalcoolul, parabeni metilici și propilici, timerosalul și alții. Dacă se dorește, formula poate include de la 0,05 la aproximativ 0,20 procente în greutate de antioxidant, cum ar fi de exemplu, metabisulfitul de sodiu sau bisulfitul de sodiu. Pentru administrarea intravenoasă, compoziția va fi de preferință preparată astfel încât, cantitatea administrată la pacient să fie de la aproximativ 0,01 la aproximativ 1 gram din conjugatul dorit. De preferință, cantitatea administrată va fi de la aproximativ 2 grame la aproximativ 1 gram de conjugat. Conjugatele conform prezentei invenții sunt într-o gamă largă de dozare dependent de anumiți factori, ca de exemplu starea de boală care trebuie tratată, sau efectul biologic care trebuie modificat, modul de administrare a conjugatului, vârsta, greutatea și starea pacientului, ca și alți factori care trebuie determinați prin intermediul medicului care face tratamentul. Astfel, cantitatea administrată la orice pacient trebuie să
RO 112618 Bl fie determinată pe o bază individuală. In literatura de specialitate se apreciază că reactivii specifici, cât și condițiile de reacție sunt conturate mai jos în următoarele exemple și preparări, modificările putând fi făcute astfel ca să fie cuprinse în spiritul și scopul prezentei invenții.
Invenția de față prezintă avantajul obținerii unor medicamente conjugate având o selectivitate mărită pentru celulele tumorale.
Se dau în continuare exemple de realizare a invenției:
Prepararea 1. Acidul 2,5-dihidro2,5-dioxo-1 H-pirolo-1 -hexanaic. Hidrazida și sarea acesteia cu acidul trifluoracetic. [hidrazida maleimidocaproil),
Acidul maleimidocaproic (2,11 grame, 10 milimoli] (vezi de exemplu D.Rich et al.,J.Med.Chem.18,1004 (1975); and O.Keller et al., Helv. Chim. Acta 58 531 (1975)), se dizolvă în tetrahidrofuran uscat (200 mililitri). Soluția obținută se agită sub azot, se răcește la 4 C și se tratează cu N-metilmorfolină (1,01 grame, 10 mmoli), urmând adiția sub formă de picături a unei soluții de izobutil cloroformiat (1,36 grame, 10 mmoli), în 10 ml de tetrahidrofuran. După 5 minute, se adaugă, sub formă de picături, o soluție de t-butil carbazat (1,32 g, 10 mmoli) în 10 ml de tetrahidrofuran. Amestecul de reacție este menținut la temperatura de 4°C timp de o jumătate de oră și la temperatura camerei timp de o oră. Solventul este evaporat și reziduul este extras cu acetat de etil și apă. Stratul organic este spălat cu o soluție diluată de HCI, apă și o soluție diluată de bicarbonat, uscat pe sulfat de sodiu anhidru și apoi solventul este evaporat. Produsul obținut este purificat pe o coloană cromatografică utilizând un gradient în sistem de solvenți de clorură de metilen; metanol (100:1-2). Hidrazida protejată este obținută în proporție de 70% (2,24 g).
Acest compus (545 mg, 2,4 mmoli) se dizolvă și se agită în acid trifluoracetic .la o temperatură de 0°C- 4°C timp de 8 minute.Acidul este îndepărtat în vacuum ridicat la temperatura came rei. Reziduul este triturat cu eter pentru a produce o sare cristalină a acidului trifluoracetic cu hidrazida maleimidocaproil (70 %, 384 mg). O probă analitică este preparată prin cristalizare din amestec de metanol-eter, pentru prepararea produsului, cu un punct de topire la temperatura de 1O2-1O5°C. Analiza spectroscopică de rezonanță magnetică nucleară și analiza spectroscopică de masă sunt compatibile cu structura.Rezultatele analitice calculate pentru compusul cu formula brută CioH5N3O3. 0.8CF3C00H sunt următoarele: C, 44,02; H, 4,99; N, 13,28. Rezultatele găsite (analizele duplicat) sunt următoarele: C,44,16; 44,13; H, 4,97 5,00 ; N 12,74, 12,75.
Sarea (220 mg) este transformată în bază liberă prin cromatografie pe silice utilizându-se un sistem solvent de clorură de metilen: metanol: NHd0H concentrat (100:5:0,5). Produsul obținut (124 mg, 80%) este cristalizat din clorură de metilen-eter, pentru prepararea produsului finit, având punctul de topire la temperatura de 92 - 93°C. Analizele spectroscopice de rezonanță magnetică nucleară și de masă sunt compatibile cu structura. Analiza are ca rezultate calculate pentru produsul cu formula brută C1QH15N3O5. C, 53,33; H, 6,67; N, 18,67, iar valorile găsite sunt următoarele: C, 53,12; H, 6,67 si
N, 18,44.
Prepararea 2. Maleimidocaproilhidrazona adriamicinei.
Un amestec de clorhidrat de adriamicină (44 mg, 0,075 mmoli), hidrazidă maleimidocaproil [23 mg, 0,102 mmoli), preparat conform procedeului menționat la prepararea 1, și 2-3 picături de acid trifluoracetic în metanol absolut (25 ml), se agită timp de 15 ore în atmosferă de azot și protejat de lumină. La sfârșitul acestei perioade, nu este detectată prin cromatografie lichidă de înaltă performanță HPLC, adriamicina liberă (faza mobilă, acetat de amoniu
O, 01 molar: acetonitril (70:30), Soluția este concentrată la temperatura camerei sub vacuum până la 10 ml și apoi
RO 112618 Bl este diluată cu acetonitril. Soluția clară este concentrată la un volum mic, partea solidă este colectată prin centrifugare și produsul este uscat în vacuum ridicat pentru a se produce compusul din titlu. Analiza spectroscopică de rezonanță magnetică nucleară este compatibilă cu structura. Prin analiza spectroscopică de masă de rezoluție înaltă se obțin valorile calculate pentru produsul cu formula brută C31 H42 N4013, valorile 751,2827, față de cele găsite 751, 2804.
Hidrazona este așadar formată prin utilizarea adriamicinei și a sării acidului trifluoracetic cu hidrazida. Astfel, sarea (40 mg, 0,12 mmoli], preparată conform procedeului menționat în procedeul 1, și clorhidratul de adriamicină (50 mg, 0,086 mmoli] se agită în metanol (30 ml) timp de 15 ore. Soluția este concentrată la 2 ml și diluată cu acetonitril. Produsul solid roșu este colectat prin centrifugare și uscat sub vacuum. Produsul (28 mg, 43 %) este identic prin analizele de spectroscopie de rezonanță magnetică nucleară și cromatografie în strat subțire, cu produsul descris mai sus. Prin analiza spectroscopică de masă de înaltă rezoluție, valorile calculate pentru produsul cu formula brută C31H42N4 013, sunt 751, 2827 față de valoarea găsită 751, 2819.
Exemplul 1A. Conjugatul anticorpului monoclonal tiolat BR64 SPDP, cu maleimidocaproilhidrazona adriamicinei.
O soluție de anticorp BR64 (25 ml, 10,37 mg per ml; determinat prin radiații ultraviolete la 280 nm, 1,4 unități de absorbție egale cu 1 miligram de proteină) este tratată cu o soluție de SPDP în etanol absolut (1,3 ml de soluție, 10 ml). Soluția este menținută timp 1 oră la temperatura de 31- 32°C, apoi este răcită în gheață și tratată cu o soluție de DTT într-o soluție de sare de fosfat tamponată (PBS) (1,3 ml în 50 ml soluție). Soluția este menținută pe gheață timp de 1 oră apoi este transferată într-un tub de dializă și dializată de trei ori față de PBS (2 litri per dializă] pentru o perioadă de cel puțin 8 ore. După dializă, concentrația de proteine este măsurată, așa cum s-a arătat mai sus, după care urmează determinarea concentrației molare a grupărilor sulfhidril libere prin metoda Ellman.
Proteina tiolată (3 ml) este tratată cu un echivalent tiol al cantității molare de maleimidocaproilhidrazonă de adriamicină, care se prepară ca în prepararea 2, dizolvată în dimetilformamidă (DMF) (5 mg/ml, 0,131 ml], și amestecul este menținut la temperatura de 4°C timp de 24 ore. Soluția este apoi dializată de trei ori cu PBS (1000 ml) timp de cel puțin 8 ore. Soluția este centrifugată și supernatantul este agitat timp de câteva ore cu Bio-beads™ SM-2 (non-polar neutral macroporous polystryrene polymer beads, Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) și în final se filtrează prin filtru Millex-GV (Millipore Corporation, Bedford, MA01730), 0,22 micromoli unități de filtrare. în general, media numărului de molecule de adriamicină per moleculă de anticorp (MR) este determinată prin măsurarea cantității de adriamicină de la absorbție de 495 nm ( e = 8030 cm' 1M’1) și cantitatea de proteină de la absorbția de 280 nm, după corectarea pentru absorbția adriamicinei la 280 nm, conform formulei următoare:
Λ Awn ~ ( 0,724 x )
Anticorp (mg/ml) = -32°—L—---Raportul molar găsit pentru produs este de 5,38; adriamicina liberă 0,14 %, randamentul în proteine 60 %.
Exemplul 1B. Conjugatul SPDP tiolat BRB4 cu maleimidocaproilhidrazona adriamicinei
O soluție de anticorp BR64 (405 ml, 11,29 mg/ml) se agită și se tratează cu o soluție de SPDP în etanol absolut (22,3 ml de soluție 50 mmoli). Soluția este menținută timp de 1 oră la 31 - 32°C, în timp ce se agită ușor, apoi se răcește pe gheață la 4°C, se agită și se tratează cu o soluție de DTT în PBS (22,2 ml de soluție 50 mmoli). Soluția
RO 112618 Bl este menținută în gheață timp de 1 oră, apoi este împărțită în 2 părți egale, fiecare fiind transferată într-un tub de dializă și este dializată de șase ori cu PBS (6 litri per dializă), o perioadă de cel puțin 8 ore. După aceea, conținutul flacoanelor se combină (400 ml) și se determină concentrația de proteine și de grupări tiol libere (raportul molar de grupări -SH fată de proteine este de 8,5).
Soluția de proteină tiolată este agitată și tratată cu o cantitate de un echivalent molar de tiol de maleimidocaproil hidrazonă a adriamicinei dizolvată în dimetilformamidă DMF (5 mg/ml, 35,7 ml) și amestecul este menținut închis la temperatura de 4°C timp de 24 ore. Soluția este dizolvată în două părți egale, transferată în tuburile de dializă și dializată timp de cel puțin 8 ore, de cinci ori cu PBS (6 litri per dializă). Conținuturile tuburilor de dializă sunt combinate, filtrate printr-un filtru de acetat de celuloză 0,22 μ, iar filtratul este agitat timp de 24 ore cu Bio-beads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804). Soluția este filtrată printr-un filtru de celuloză acetat de 0,22 μ. Concentrația proteinei și adriamicinei este determinată (6,26 mg/ml și respectiv 162,4 micrograme per mililitru), obținând un raport molar de 7,18. Randamentul în proteine este de 77 %. Adriamicina neconjugată prezentă este de 0,07 %.
Exemplul 2. Conjugatul SPDP tiolat SN 7 cu maleimidocaproilhidrazona adriamicinei într-o manieră analogă cu cea descrisă în exemplele 1A și 1B, anticorpul monoclonal SN 7, un anticorp care nu este legat la BR64 de identificare a antigenului, este tiolat cu SPDP și se supune reacției cu maleimidocaproilhidrazona adriamicinei, pentru a se obține un conjugat cu raportul molar de 4. Randamentul de proteine este de 51 %. Adriamicina neconjugată prezentă este de 0,36 %.
Exemplul 3. Conjugatul SPDP tiolat hiBR96 cu maleimidocaproilhidra zona adriamicinei
O soluție de anticorp BR96 himeric, hiBR96 (27,5 ml, 12,53 mg/ ml), se tratează cu o soluție de 10 mM de SPDP în etanol absolut (1,7 ml). Soluția este incubată la 31°C timp de 35 minute, apoi se răcește în gheață și se tratează cu o soluție de 0,50 mM de DTT în PBS (1,7 ml) timp de 15 minute la 4°C. Soluția este transferată într-un tub de dializă și este dializată de 4 ori în PBS - tampon de histidină 0,1 M (4,5 litri per dializă) o perioadă de cel puțin opt ore. Se determină cantitatea de proteină și concentrația molară a grupărilor tiol (9,29 miligrame per mililitri și respectiv 2,06 x 10 4 M). Soluția este tratată (17 mililitri) cu o cantitate molară echivalentă de maleimidocaproilhidrazona adriamicinei în dimetilformamidă DMF (5 miligrame per mililitru, 0,59 mililitri) și amestecul de reacție este menținut închis la 4°C timp de 24 ore. Amestecul de reacție este dializat de trei ori, în același tampon [4,5 litri per dializă), timp de cel puțin 8 ore. Soluția dializată este centrifugată și supernatantul este agitat ușor cu Biobeads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) câteva ore la temperatura de 4°C. Soluția este centrifugată și apoi se determină concentrația de proteină și adriamicină în supernatant (19 mililitri) (6,5 miligrame per mililitri și respectiv 67,86 pg/mililitru). Raportul molar de medicament față de proteină este de 2,9. Randamentul de proteină este de 72 %; adriamicina neconjugată prezentă este de 1,2 %.
Exemplul 4. Conjugarea bombezinei modificate cu maleimidocaproilhidrazona adriamicinei.
Bombezina nu conține o grupare sulfhidril reactivă liberă, care să poată fi utilizată pentru legarea medicamentului la elementul de legare care conține Receptorul de Adiție Michael. Astfel, se prepară o bombezină modificată care conține un reziduu de cisteină adițional la porțiunea terminală amino a bombezinei native. In plus, reziduul-3 al bombezinei native a fost transformat într-un reziduu
RO 112618 Bl de lizină.Bombezina modificată este de aceea desemnată Cis°-lis3-bombezină. Cis°-lis3-bombezina (11,3 miligrame) este dizolvată în 1,1 mililitri de apă deionizată și pH-ul este ajustat la valoarea de 7 7,5 cu 1Q microlitri de 1,5 M Tris-HCI, apoi la pH 8,8 și apoi reacționează cu 0,45 mililitri de maleimidocaproil adriamicin hidrazonă (15 miligrame per mililitru în apă deionizată] la temperatura ambiantă timp de mai multe ore. Amestecul de reacție este apoi dializat față de apă până a doua zi în tuburi de dializă (greutatea moleculară separată este de 1000). Precipitatul este îndepărtat prin centrifugare (12000 x g] și supernatantul este recuperat. Conținutul de adriamicină (ADM) al conjugatului de bombezin-adriamicină este măsurat prin diluarea 1:50 în tampon acetat, la pH 6,0. Conținutul de adriamicină (ADM) este calculat utilizându-se formula următoare: (O.D.495/8030) x 50 = ADM (M).
Pentru această preparare O.D.4g5 = 0,116 astfel, conținutul de adriamicină este de 7,2 x 10-4 M.
Produsul este cromatografiat prin cromatografie lichidă de înaltă performanță HPLC utilizând o coloană C 18 (Beckman Instruments, Ultransphere 5 p, 4,6 milimetri x 25 centrimetri), Amestecul tampon A: 10 mM NH40Ac pH 4,5; tamponul B: 90 % acetonitril/10 % tampon A. Coloana este echilibrată cu 90 % tampon A/10 % tampon B și condițiile de cromatografiere sunt următoarele: 90 % tampon A/10 % tampon B la 60 % tampon A/60 % tampon B timp de 2 minute, gradientul la 50 % tampon A/50 % tampon B timp de 15 minute. Produsul are un timp de retenție de 9,3 minute în aceste condiții.
Exemplul 5. Conjugat de iminotiolan tiolat himeric BR96 si maleimidocaproilhidrazona adriamicinei
BR96 chimeric este dializat (15 mililitri, 9,05 miligrame per mililitru] de două ori față de 4 litri de 0,1 M carbonat de sodiu/bicarbonat amestec tampon, la pH 9,1. Soluția de anticorp este apoi încălzită cu iminotiolan (0,75 mililitri, 20 mM), la 32°C timp de 45 mi nute. Soluția este apoi dializată față de 4 litri de carbonat de sodiu/bicarbonat amestec tampon, la pH 9,1, după care urmează dializa față de 0,0095 M PBS0,1 M L-histidină, la pH 7,4. Soluția are un raport molar de -SH/proteină de 1,35. Proteina este apoi tratată din nou cu tiol, așa cum s-a descris mai sus, pentru a se produce o soluție cu un raport molar de -SH proteină, de 5,0. Maleimidocaproil hidrazona adriamicinei (3,2 miligrame în 0,640 mililitri de dimetilformamidă DMF) se adaugă cu agitare la temperatura de 4°C la soluția de proteină tiolată. Conjugatul este incubat la 4°C timp de 16 ore, apoi este dializat față de 4 litri de 0,0095 M PBS0,1 M L-histidină la pH 7,4. Conjugatul dializat este filtrat printr-o membrană de acetat de celuloză de 0,22 μ într-un tub steril, la care se adaugă o cantitate mică de (>5 % (v/v)) de Biobeads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804). După 24de ore de agitare lentă, granulele sunt filtrate și conjugatul este congelat în azot lichid și se conservă la temperatura de -80°C. Conjugatul astfel rezultat are un raport molar de 3,4 molecule adriamicină la o moleculă de proteină și este obținut cu un randament de 24 % din BR96 himeric.
Exemplul 6. Conjugatul de maleimidocaproilhidrazonă al adriamicinei cu IgG uman redus cu DTT (IgG uman relaxat)
IgC uman (obținut de la Rockland, Gilbertsville, PA) este diluat cu 0,0095 M PBS la o concentrație de proteină de 10,98 miligrame /mililitru. Această soluție (350 mililitri) este încălzită la temperatura de 37°C într-o baie de apă în atmosferă de azot. Se adaugă ditiotreitol (16,8 mililitri, 10 mM) în PBS și soluția este agitată timp de 3 ore la temperatura de 37°C. Soluția este divizată egal între doi Amicon (Amicon Division of W.R.Grace and Co., Beverly, MA 01915) Model 8400 Stirred Ultrafiltration Ce.lls), fiecare corespunzând la un Amicon YM 30 membrană de ultrafiltrare (MW greutate moleculară până la 30.000,76 milimetri diametru) și se
RO 112618 Bl conectează printr-un Amicon model CD51O de selector de concentrație/ dializă, la un Amicon Model RC8OO minirezervor. Fiecare rezervor conține 700 mililitri de 0,0085 M PBS- 0,1 M Lhistidină. Soluțiile de proteină sunt dializate până ce concentrația tiolului liber în filtrat este de 41 pM. Raportul molar de -SH/ proteină în materialul rămas este determinat a fi 8,13. Acest material este transferat de la celule la containerul steril menținut în atmosferă de azot și soluția de maleimidocaproil hidrazonă a adriamicinei (36,7 mililitri, 5 miligrame per mililitru în apă) se adaugă cu agitare. Conjugatul este incubat la 4°C timp de 48 de ore, după care se filtrează prin membrana de acetat de celuloză de 0,22 μ. O coloană Bio-Rad Econocolum™ (2,5 x 50 centimetri, Bio-Rad Laboratories, Richmond,CA 84804) este încărcată cu o pastă de 100 grame de Biobeads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) în 0,00095 M 0,1 M L-histidină tampon. Granulele sunt spălate prin spălare în metanol, apoi prin spălare în apă și apoi cu câteva volume de soluție tampon. Conjugatul filtrat este percolat prin această coloană la un debit de 2 mililitri pe minut. După cromatografierea conjugatului, acesta este filtrat printr-o membrană de acetat de celuloză și apoi este congelat în azot lichid și conservat la -80°C. Conjugatul obținut are un raport molar mediu de 7,45 molecule de adriamicină per moleculă de proteină și se obține cu un randament de 99 % din IgG uman.
Exemplul 7. Conjugatul BR64 relaxat cu maleimidocaproilhidrazona adriamicinei
O soluție de BR64 (435 mililitri ; 11,31 miligrame per mililitru 7,07 x 10 5 M) se tratează cu DTT (947 miligrame) și se încălzesc la 42°C - 43°C cu agitare ușoară timp de 2 ore. Soluția este apoi răcită pe gheață, transferată în două tuburi de dializă și fiecare tub este dializat de cinci ori cu PBS (14 litri per dializă) timp de 8 ore la 4°C. Conținuturile tuburilor sunt combinate (400 mililitri) și se determină conținutul de pro teine și de -SH [10,54 miligrame per mililitru și 6,58 x 10 5 M și respectiv 5,14 x 104 M). Raportul molar de -SH față de proteine este de 7,8. O soluție de maleimidocaproil hidrazonă a adriamicinei în dimetilformamidă DMF (5 miligrame per mililitru, 32,6 mililitri) se adaugă la soluția de anticorp,cu ușoară agitare și apoi este incubată la 4° C timp de 24 ore. Soluția este filtrată printr-un filtru de acetat de celuloză 0,22 μ și apoi este transferată în două tuburi de dializă și dializată, așa cum s-a descris mai sus. După dializă, conținuturile tuburilor se combină, se filtrează și se agită cu BiobeadsTM SM.2 (Bic-Red Laboratories, Richmond, CA 94804) timp de 24 ore la 4°C. Granulele sunt apoi filtrate, utilizându-se un filtru de acetat de celuloză pentru a se obține soluția de conjugat. Se determină apoi concentrația de proteină și adriamicină (8,66 miligrame per mililitru, 5,42 x 10 5 M ; 168 pg per mililitru și respectiv 2,89 x 104 M). Randamentul în proteină este de 97 %. Raportul molar de adriamicină față de proteină este de 5,33 și adriamicina neconjugată este de 0,5 %.
Exemplul 8. Procedeul general pentru conjugarea maleimidocaproilhidrazonei adriamicinei la anticorpul relaxat
1) O soluție (300 militri) de anticorp (3 grame, 10 miligrame per mililitru] într-un amestec PBS tampon (nota
1) este continuu menținută în atmosferă de azot, imersată la 37°C într-o baie de apă și agitată ușor cu un agitator magnetic. Soluția este tratată cu 7 echivalenți molari de DTT (notele 2,3) timp de 3 ore.
Raportul molar al grupării -SH (MR) față de proteină este determinat inițial și apoi în fiecare oră și pentru produsul conjugat maximal va rămâne constant la aproximativ 14 (notele 2,4],
2] Soluția este transferată cât mai repede posibil într-o celulă de diafiltrare Amicon (Amicon, Division of W.R. Grace and Co. Beverly, MA 01915) (nota 5] menținându-se la aproximativ 4°C până la aproximativ 7°C. Sistemul este presurizat cu argon sau azot și dia
RO 112618 Bl filtrarea este începută utilizând tamponul de PBS care conține 0,1 M histidină și care este percolat la aproximativ 4°C până la aproximativ 7°C. Temperatura inițială a efluentului imediat după înce- 5 perea diafiltrării este de 16- 18°C și aceasta scade până la 8°C - 9°C în timp de aproximativ 90 minute. Efluentul este monitorizat pentru raportul molar al -SH față de proteine și când această valoare 10 este <1, diafiltrarea este completă (nota 6).
3) Soluția este transferată înapoi în balonul cu fund rotund prevăzut cu un agitator magnetic și este menținută pe gheață. Soluția este continuu barbotată cu azot. Se notează volumul soluției. Se iau din soluție părți alicote de câte 0,1 mililitri și se diluează cu soluție tampon PBS până la 1 ,□ mililitri pentru determinarea cantității de proteine în miligrame per mililitru (ca și echivalentul molar al proteinei și molaritatea grupărilor de -SH și prin urmare raportul molar al -SH față de proteine). Se prepară apoi o soluție de maleimidocaproilhidrazona adriamicinei în apă distilată (5 miligrame per mililitru, 6,3 x 103 M) (notele 7,8). Cantitatea (în mililitri) de soluție, necesară pentru reacția de conjugare este determinată prin formula următoare:
(molaritatea - SH x (volumul soluției de proteină) x 1,05
6,3 x 10~3 (nota 9] și această cantitate este adău- 20 gată lent la soluția de proteină care este agitată lent. Soluția este menținută la 4°C timp de 30 minute.
4) O coloană de Bio-Beads™ SM-
2, cu 20 - 50 mesh (BioRad Laborato- 25 ries, Richmond, CA 94804) este prevăzută (nota 10) la 4°C. Soluția roșie de proteine este filtrată printr-un filtru de acetat de celuloză, apoi este trecută pe o coloană într-un debit de 2,5 mililitri pe 30 minut și efluentul roșu este colectat. In final, tamponul de PBS-O.1 M histidină este turnat la partea superioară a coloanei și efluentul este colectat până ce acesta este incolor. Volumul de soluție 35 roșie este colectat și notat. O parte alicotă de 0,1 mililitri este diluată la 1 mililitru cu PBS tampon și apoi este măsurată cantitatea de proteină și adriamicină. Cantitatea de adriamicină con- 40 jugată este determinată prin absorbția la 495 nm ( e =8030 cm '1M ’1) și este exprimată în micromoli și micrograme per mililitru. Cantitatea de proteine, exprimată în miligrame per mililitru și mi- 45 cromoli, este determinată ca mai sus prin citirea absorbanței la 280 nm cu o corecție pentru absorbanța adriamicinei la aceeași lungime de undă conform formulei generale de mai jos: 50
A?fm - ( 0,724 x A.qq ) Anticorp (mg/ml) = ~----~ unde A reprezintă absorbanța observată la lungimea de undă notată. Raportul molar al adriamicinei față de proteină este apoi calculat.
5) □ parte alicotă de 5 ml de conjugat este trecută peste o coloană Econo-Pac™ SM- 2 ((o coloană preîncărcată Bio-Beads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804), cu un volum de 10 ml, coloana fiind spălată și echilibrată cu PBS-0,1 M histidină tampon)) în maniera descrisă mai sus. Cantitatea de proteină, adriamicina conjugată și valoarea raportului molar sunt apoi determinate. Această valoare poate fi aceeași cu cea din soluția umană (nota 11).
6) Conjugatul este congelat în azot lichid și menținut la temperatura de -80°C. Se pot lua porțiuni pentru determinarea citotoxicității, pentru determinarea legăturilor și prezenței adriamicinei libere (nota 12).
Notări pentru procedeul general ] Concentrația de anticorpi este de obicei de 7 - 10 mg/ml (-6,25 x 10' 5M) și este concentrația preferată. Dacă concentrația este mult mai ridicată,
RO 112618 Bl atunci soluția poate fi diluată cu amestecul tampon. Dacă concentrația este mai mică decât 10 miligrame per mililitru, aceasta se utilizează ca atare. Concentrația este determinată prin absor- 5 bția în ultraviolet la 280 nm. 1 miligram per mililitru = 1,4 unități de absorbanță.
2) Compusul DTT utilizat este produsul firmei Boeringer Mannheim Biochemicals, Indianapolis, Indiana 46250, 10 cu punctul de topire la 42- 43°C. DTT poate fi recristalizat (de exemplu din amestec de eter și hexan) atunci când cresc problemele de calitate. Puritatea este determinată prin valoarea: punctul 15 de topire, prin analiza spectroscopică de rezonanță magnetică nucleară și prin conținutul de grupe -SH. Titrarea grupărilor de -SH sulfhidril este efectuată conform metodei Ellman [Anal.Biochem. 94, 75-81, 1979), după cum urmează: o porțiune de probă de 0,1 mililitri este diluată la 1 mililitru cu PBS și apoi este tratată cu 0,05 ml de reactiv (soluția 50 nmolară a ditiobis (acid 2-nitrobenzoic) (DTNB) în 100 nmolari de Na2HP04; valoarea pH-ului este de 7,04). O porțiune totală de 1 ml PBS este tratată cu DTNB în aceeași manieră. După S minute se măsoară la 412 nm absorbanța (A) a probei și a porțiunii și concentrația molară a grupelor -SH (MCSH) este determinată formulei următoare:
MCsh (Aprobă cantitate totală) x
1,415 x 104
3) Compusul DTT poate fi adăugat 25 ca substanță solidă sau ca soluție. De preferință, se utilizează o soluție tampon proaspăt separată de 10 ml în tampon. Pentru scopurile prevăzute pe scala de reacție, se utilizează în general 13,13 30 ml.
4) Raportul molar MR al grupelor -SH față de proteină este determinat prin măsurarea concentrației molare a grupelor -SH conform metodei Ellman 35 (vezi nota 2) și prin divizarea acestei concentrații la concentrația molară de proteine. Această valoare va fi mai mică decât 14 în timpul reacției la adăugarea unei cantități corespunzătoare de DTT. 40
5) Pe scala de 3 grame per 300 mililitri, se utilizează două celule Amicon de 350 ml fiecare, împărțind soluția în două părți a câte 150 ml per celulă.
6) Pe scala de reacție de reacție 45 prevăzută, de obicei diafiltrarea durează de la 2 la 4 ore. Durata va depinde de factori, cum ar fi de exemplu, vârsta membranei, gradul de agitare a soluției și presiunea în celule. 50
7) Hidrazona nu este foarte solubilă în PBS și precipitatul este format într-un timp scurt.
8) Funcționarea pe perioade scurte ale unui sonicator va facilita dizolvarea în apă distilată. Soluția care rezultă este stabilă.
9) Această cantitate se referă la 5 % exces de hidrazonă. Procedeul descris durează în general 15-20 minute.
10) Bio-Beads™ (bio-granulele) se prepară în general pentru cromatografie prin gonflarea lor în metanol cel puțin o oră, de preferință peste noapte, spălându-le au apă distilată și în final echilibrându-le cu PBS-0,1 M histidină tampon. Pentru 3 grame de proteine se utilizează 10 g de granule pentru a forma o coloană de 2,5 cm x 30 cm.
11) Datorită unor erori inerente în metodele de spectroscopie utilizate, este acceptată, ca un rezultat satisfăcător, o variație de o unitate de raport molar. In general, totuși, raportul molar variază mai puțin de 0,5 unități de raport molar.
12) Valorile de adriamicină liberă în conjugat sunt în general mult mai mici de 1%.
Exemplul 9. Conjugatul BR96 himeric relaxat cu maleimidocaproilhidrazona adriamicinei
RO 112618 Bl
BR9B himeric preparat de maniera descrisă mai sus este diluat cu □,□095 M PBS la o concentrație de proteină de 10,49 mililitri per mililitru. Această soluție (500 ml) este încălzită până la 37°C în atmosferă de azot, într-o baie de apă. Se adaugă ditiotreitol (26,2 ml, 10 mM) în PBS și soluția este agitată timp de 3 ore la 37°C. Soluția se divizează apoi egal în două modele Amicon 8400 celule de ultrafiltrare sub agitare, fiecare fiind prevăzut cu un ultrafiltru ΥΜ3ϋ (greutatea moleculară este până la 30000 și 76 milimetri diametru) și printr-un selector de concentrație/dializă Model CDSIO este conectat la mini-rezervorul model RC800 (Amicon, Division of W.R. Grece and Co. Beverly MA 01915 - 9843). Fiecare rezervor conține 800 ml de 0,0095 M PBS-0,1 M L-histidină. Soluțiile de proteină sunt dializate până ce concentrația de tioli liberi în filtrat este de 63 μΜ. Raportul molar de grupe SH/proteină în ceea ce rămâne este determinat ca având valoarea 8,16. Acest produs este transferat apoi din celule într-un container steril în atmosferă de azot și se adaugă apoi o soluție de maleimido caproil hidrazona adriamicinei (42,6 ml, 5 miligrame/ mililitru în apă). Conjugatul este incubat la 4°C timp de 48 ore, după care acesta este filtrat printr-o membrană de acetat de celuloză 0,22 μ. O coloană Bio-Rad Econocolumn de 2,5 centimetru x 50 centimetri este încărcată cu o suspensie de 100 g de Biogranule™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, California, 94804) în 0,00095 M -0,1 M L-histidină tampon. Granulele au fost preparate prin spălare în metanol, apoi cu apă în mai multe volume și apoi cu soluție tampon. Conjugatul filtrat este percolat prin această coloană la un debit de 2 mililitri per minut. După cromatografierea conjugatului acesta este filtrat printro membrană de acetat de celuloză 0,22 p.i, apoi este congelat în azot lichid și conservat la -8O°C. Conjugatul obținut are un raport molar de 6,77 adriamicină față de proteină și randamentul de obți nere este de 95 % de BR96 himeric.
Exemplul 10. Conjugatul anticorpului murinic relaxat L6 cu maleimidocaproil hidrazona adriamicinei
Anticorpul murinic L6 preparat, așa cum s-a definit mai sus, este diluat cu 0,0095 M PBS la o concentrație în proteine de 11,87 miligrame per mililitru. Această soluție (350 mililitri) este încălzită la 37°C în atmosferă de azot într-o baie de apă. Se adaugă ditiotreitol (18,2 ml, 10 mM) în PBS și soluția este agitată timp de 3 ore la 37°C. Soluția este apoi divizată egal în două celule Amicon Model 8400 de ultrafiltrare sub agitare (greutate moleculară MW este de 30.000 și diametrul de 76 milimetri) fiecare fiind prevăzută cu un ultrafiltru YM 30 și se conectează prin modelul CD510 de selector de concentrație/ dializă la minirezervorul model RC800 (Amicon, Division of W.R. grace and Co Beverly MA 01915 - 9843). Fiecare rezervor conține 800 mililitri de 0,0095 M PBS - 0,1 M L-histidină. Soluțiile de proteină sunt dializate până ce concentrația de tioli liberi în filtrat este de 14 μΜ. Raportul molar de grupe -SH/ proteine în retentat care rămâne este determinat a fi 9,8. Acest retentat este transferat apoi din celule în containerul steril în atmosferă de azot și se adaugă o soluție de maleimidocaproil hidrazonă adriamicină, (40,4 mililitri, 5 miligrame per mililitru de apă) sub agitare. Conjugatul este incubat la 4°C timp de 48 ore, după care se filtrează printr-o membrană de acetat de celuloză 0,22 μ. Se încarcă o coloană Bio-Rad Econocolum de 2,5 centimetri x 50 centimetri, cu o suspensie de 100 grame de Biogranule™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, California 94804) în tampon de 0,00095 M-0,1 M L-histidină. Granulele sunt preparate prin spălare în metanol, apoi cu apă și apoi cu mai multe volume de soluție tampon. Filtratul conținând conjugatul este percolat printro coloană cu debitul de 2 mililitri pe minut. După cromatografiere, conjugatul este filtrat printr-o membrană de acetat de celuloză 0,22 μ, apoi este congelat în
RO 112618 Bl atmosferă de azot și conservat la -8O°C.
Conjugatul obținut conține un raport molar de 7,39 adriamicină față de proteină și se obține cu un randament de 1OO % din L6 murinic.
Activitatea Biologică
Conjugatele reprezentative ale prezentei invenții sunt testate atât in vitro cât și in vivo ca sisteme de determinare a activității biologice. în aceste teste, activitatea conjugatelor medicamentelor citotoxice este determinată prin măsurarea conjugatelor față de celulele umane de origine canceroasă. în cele ce urmează sunt descrise testele reprezentative utilizate și rezultatele obținute. Peste tot în datele prezentate, conjugatele se referă la utilizarea formei de ligand-medicament în raportul molar al ligandului față de medicament. Astfel, de exemplu, BR64-ADM-5,33 se referă la conjugatul dintre anticorpul BR64 și adriamicină și raportul molar al medicamentului față de anticorp care este de 5,33. Potrivit referatelor de specialitate, este recunoscut că orice linie tumorală care exprimă un antigen dorit ar putea fi utilizată în substituirea liniilor tumorale specifice utilizate în următoarele analize. Se dau în continuare teste privind activitatea medicamentelor conjugate, în legătură cu fig. 3+14 care reprezintă:
-fig. 3, reprezintă date privind activitatea citotoxică in vitro pentru conjugatele BR64-adriamicină conform, prezentei invenții, față de tumorile L 2987;
-fig. 4, reprezintă date privind activitatea citotoxică in vivo pentru conjugatele BR64-adriamicină, conform prezentei invenții, față de tumorile L 2987;
- fig. 5, reprezintă date comparative privind citotoxicitatea in vivo pentru o terapie combinată utilizând BR64 conjugat, conjugatul adriamicină și conjugatul fără legătură (SN7-adriamicină);
-fig. 6, reprezintă date privind activitatea citotoxică in vivo pentru conjugatele bombezin-adriamicină, conform prezentei invenții, fată de tumorile H 345;
- fig. 7 reprezintă date privind activitatea citotoxică in vitro pentru con jugatele de adriamicină ale compușilor himerici BR96 relaxați și ale compușilor himerici BR96 SPDP -tiolați;
- fig. 8, reprezintă date privind activitatea citotoxică in vivo pentru conjugatele de adriamicină ale compușilor himerici BR64 relaxat și L6 relaxat față de tumorile L 2987;
- fig. 9 la 11, reprezintă date privind activitatea citotoxică in vivo față de tumorile L 2987 pentru conjugatele de adriamicină ale compușilor himerici relaxați BR96, comparativ cu conjugatele libere de adriamicină și conjugatele fără legături;
- fig. 12, reprezintă date privind activitatea citotoxică in vivo pentru conjugatele de adriamicină ale compusului himeric BR96 relaxat față de tumorile umane de sân, de tipul MCF 7;
- fig. 13, reprezintă date privind activitatea citotoxică in vivo pentru conjugatele de adriamicină ale compusului himeric relaxat BR96 față de tumorile umane de colon RCA;
- fig. 14, reprezintă un grafic al efectului -SH titrat ca funcție de raportul molar al DTT față de anticorp la prepararea anticorpului relaxat în atmosferă inertă.
TESTUL I. Activitatea in vitro a conjugatelor BR64-adriamicină
Imunoconjugatele din exemplele 1B și 2 sunt testate in vitro pe partea canceroasă a plămânului uman, L 2987 (obținută de la I.Helltrom, Bristol-Meyers Squibb Seattle; vezi l-Hellstrom et al., Cancer Research 50:2183 (1990) ), care exprimă antigenii recunoscuți prin anticorpii BR64 monoclonali, LB și BR96. Culturile în monostraturi de celule L 2987 sunt recoltate utilizându-se tripsină - acid etilendiaminotetraacetic EDTA (GIBCO, Grand Island, NY); celulele sunt numărate și resuspendate la 1 x 105 per mililitru în RPMI - 1640 conținând 1 % ser de vițel fetal inactivat cald (RPMI 10 % FCS). Celulele (0,1 mililitri per cavitate) se adaugă la fiecare cavitate din cele 96 cavități plate inferioare ale discurilor de microtitrare și se incubează până a doua zi la 37°C într-o atmosferă
RO 112618 Bl umedă conținând 5 % C02. Mediile se îndepărtează de pe aceste discuri și în aceste cavități se adaugă diluții în serie de adriamicină sau conjugați de anticorpi ai adriamicinei. Toate diluțiile sunt efec- 5 tuate în cuadruplicat. După două ore de expunere a medicamentului sau conjugatului, discurile sunt centrifugate (100 x grame,5 minute), medicamentul sau conjugatul se îndepărtează și discurile 10 sunt spălate de 3 ori cu RPMI - 10 % FCS. Celulele sunt cultivate în RPMI 10 % FCS timp de 48 de ore. în acest timp celulele sunt pulsate timp de 2 ore cu 1,0 μ /cavitate, de 3H-tiamidină 15 (New England Nuclear, Boston, MA). Discurile sunt cultivate și numărate per minut pentru determinare (CPM). Inhibarea proliferării a fost determinată prin compararea CPM principal pentru pro- 20 bele tratate cu probe de control netratate. Datele prezentate în fig. 3 demonstrează citotoxicitatea față de celulele pulmonare L 2987 ale imunoconjugatului de legătură (raportul molar al adriami- 25 cinei față de BR64 este egal cu 7,18, desemnat BR64 - THADMHZN -7,18), în comparație cu un imunoconjugat nelegat al SN 7 și adriamicină (raportul molar al adriamicinei față de SN 7 este egal 30 cu 4, desemnat SN 7 - THDrtZN - 4). Conjugatele BR64 preparate prin metoda descrisă în exemplul 18 sunt active și demonstrează citotoxicitatea specifică față de antigen în acest test in vitro. 35 TESTUL II. Activitatea in vivo a conjugatelor BR64 - adriamicină
Imunoconjugatele din exemplele 1B si 2 au fost evaluate in vivo, pentru activitatea antitumorală antigen - speci- 40 fică. în aceste studii au fost utilizate ca animale experimentale șoarecele femelă eongenital atimic al BALB/c de bază (BALB/c, nu/nu; Harlan Sprague Dawley Indianapolis, IN). Șoarecele este 45 menținut în unități Thoren sub formă de cuști pe straturi sterile cu o temperatură și o umiditate controlată. Animalul primește hrană sterilă și apă ad libitum. In aceste studii se utilizează linia tumorală 50 din plămânul uman L 2987 descrisă mai sus. S-a arătat că această linie menține exprimarea antigenilor BR64, BR96 și L6 urmând treceri repetate in vivo. Liniile tumorale sunt menținute printr-o trecere serială în șoarecele atimic, așa cum s-a descris mai sus (P.A. Trail et al., in vivo 3: 319-24 (1989)). Tumorile sunt măsurate utilizând șublere, în două direcții perpendiculare la intervale săptămânale sau bisăptămânale. Volumul tumorilor este calculat conform ecuației următoare:
V (mm3) (L x W2) în care V = volumul (în milimetri cubi) ; L = măsurătoarea axei celei mai lungi (milimetri) și W = măsurătoarea (în milimetri) a axei perpendiculare la L.
Datele sunt prezentate ca o măsură a tumorii mediane pentru grupele de control și pentru grupele tratate. Fiecare grupă de tratatment sau de control conține 8 - 1Q animale. Terapia este inițiată când tumorile au ajuns la o dimensiune medie de 5 - 100 mm3. Așa cum este menționat, terapia este realizată prin administrare pe cale intraperitoneală sau intravenoasă pe diferite scheme de tratament. Adriamicină este diluată în soluție salină normală și anticorpul nativ și conjugatele de adriamicină sunt diluate în fosfat tamponat salin pentru administrare ('PBS). Toate dozajele sunt administrate pe bază de greutate (miligrame per kilogram) și sunt calculate pentru fiecare animal. In aceste studii, activitatea antitumorală a imunoconjugatelor de legătură BR64 este comparată cu cea a dozajelor de optimizate a adriamicinei, cu amestecurile de BR64 nativ și adriamicină și cu conjugatele nelegate. Adriamicină neconjugată este administrată conform unei scheme de administrare, dozare care este demonstrată a fi optimală pentru modelul de xenografic uman L 2987. Adriamicină neconjugată este așadar administrată într-o doză de 8 miligrame per kilogram pe cale intravenoasă la fiecare a patra zi cu un total de 3 injecții (se va nota 8 miligrame per kilogram, q 4 d x 3, i.v.J. Imunoconjugatele legate (BR64) și nelegate (SN 7) sunt administrate la
RO 112618 Bl diferite doze pe cale intraperitoneală la fiecare 4 zile cu un total de 3 injecții (se va nota 8 mg/kg, q 4 d x 3, i.v.). Așa cum se arată în fig. 4 activitatea antitumorală semnificativă a fost observată după administrarea dozelor tolerate (injecții cu 10 și 15 miligrame per kilogram) de conjugat BR64 - adriamicină. Activitatea antitumorală a fost observată după terapia cu conjugatul BR64, fiind semnificativ mai bună decât cea observată în cazul terapiei cu adriamicina optimizată și decât dozele egale de conjugat nelegat (SN 7) folosite. In acest experiment, regresiile tumorale complete sunt observate la 66 % din animale după tratamentul cu injecții a 15 miligrame per kilogram de conjugat BR64 și regresiile tumorale complete de 50 % s-au observat după tratamentul cu 10 mg /kg în injecții cu conjugatul BR64. Regresiile parțiale sau complete ale tumorilor stabilite L 2987 au fost observate după terapie cu adriamicină optimizată, după utilizarea amestecurilor de BR64 nativ și adriamicină, sau doze echivalente de conjugate nelegate.
Pentru a demonstra că activitatea observată necesită cuplarea covalentă a anticorpului la adriamicină,au fost efectuate diferite experimente de control utilizând aceste amestecuri de BR64 nativ și adriamicină. Date reprezentative pentru diferite tipuri de terapie combinată sunt arătate în fig. 5a-c. Activitatea antitumorală observată pentru diferite moduri ale terapiei combinate cu MAb și adriamicină nu au fost semnificativ diferite de cele observate pentru terapia numai cu adriamicina optimizată. Ținând cont de toate aceste date, se indică faptul că cuplarea covalentă a BR64 la adriamicină este suficientă pentru a observa activitatea antitumorală descrisă în fig. 4.
TESTUL III. Activitatea - in vivo a conjugatelor de bombezină.
Conjugatul din exemplul 4 a fost evaluat in vivo pentru activitatea antitumorală. Șoarecilor nuzi BALB/c atimici li se implantează bucăți mici de tumori canceroase din plămânul uman având celule mici H345 (obținute de la Dr.D.Chan University of Colorado Medical School, CO), subcutanat, utilizând trocari. Tumorile sunt lăsate să se dezvolte la 50 - 100 mm3, înainte de inițierea tratamentului. Șoarecii sunt tratați intravenos la intervale de 23, 26, 28 și 30 zile de la implantare, numai cu adria-micină (1,6 mg/kg) sau cu conjugații de bombezin-adriamicină (”BN-ADM(TH)’), într-o cantitate echivalentă cu 1,6 mg/ kg de adriamicină) sau conjugatul de P77-adriamicină ('P77-ADM(TH)”), într-o cantitate echivalentă cu 1,6 mg/kg de adriamicină. P77 este o peptidă de 12amino acid cu un rest de cisteină internă (secvența KKLTCVQTRLKIJ care nu se leagă la celulele H345 și este conjugată la maleimidocaproilhidrazona adriamicinei, conform procedeului menționat în exemplul 4. Astfel, conjugatul reprezintă un conjugat nelegat pentru celulele H 345. Tumorile sunt măsurate cu șublerul, iar volumul este calculat utilizând următoarea formulă:
V (mm3) = în care V, L și W sunt definiți ca în testul II.
Volumele tumorale mediane sunt determinate și rezultatele observate sunt arătate în fig. 6.
TESTUL IV. Datele citotoxice in vitro pentru conjugatele anticorpului Chi Br96 relaxat
Imunoconjugatele de adriamicină și anticorp ChiBR96 sunt preparate utilizând metoda generală de preparare a anticorpilor relaxați, așa cum s-a descris în exemplul 8. Conjugatele au fost testate utilizându-se modul de lucru de mai jos pentru citotoxicitatea in vitro și citotoxicitatea lor este comparată cu cea a adriamicinei libere. Imunoconjugații SPDP-tiolați sunt preparați prin metoda descrisă în exemplul 1B. Re zultatele acestor teste sunt prezentate în fig. 7. Culturile în monostraturi de celule de plămâni umani L 2987 sunt menținute în medii RPMI-1640 conținând serul de
RO 112618 Bl vițel fetal inactivat la cald 10 % (RPMI10 % FCS]. Celulele sunt recoltate utilizând un amestec de tripsină și acid etilendiaminotetraacetic EDTA (GIBCO, Grand Island, NY). Celulele sunt apoi numărate și resuspendate la 1 x 105/mililitru in RPNII - 10 % FCS. Celulele sunt adăugate (0,1 mililitru pe cavitate) la fiecare cavitate din cele 96 cavități ale discurilor de microtitrare și sunt incubate până a doua zi la 37°C într-o atmosferă umedă de 5 % C02. Mediile sunt îndepărtate de pe discuri și apoi se adaugă în aceste cavități diluții în serie de adriamicină sau anticorp/ conjugate ADM. Toate diluțiile sunt efectuate în cuadruplicat. După o expunere a medicamentului sau conjugatului de două ore,.discurile sunt centrifugate (200 x gram, 5 minute), medicamentul sau conjugatul este îndepărtat și discurile sunt spălate de 3 ori cu RPMI - 10 % FCS. Celulele sunt cultivate în RPMI - 10 % FCS un timp de 48 de ore. In acest timp, celulele sunt pulsate timp de două ore cu 1,0 pCi/ cavitate de 3H-tiamidină (New England Nuclear, Boston, MA). Discurile sunt adunate și se determină apoi numerele de celule pe minut (CPM). Inhibarea proliferării este determinată prin compararea CPM mediu pentru celulele tratate cu cele ale probelor de control, netratate. Valorile ICSO sunt raportate ca μΜ echivalenți de adriamicină.
TESTUL V. Activitatea antitumorală - in vivo - a conjugatelor BR64 și L6 murinici
A fost evaluată activitatea antitumorală - in vivo - a imunoconjugatelor de adriamicină și a BR64 relaxat sau L6 relaxat. Datele observate sunt menționate în fig. 8.
Se utilizează șoarecele femelă atimic congenital al BALB/c de bază (BALB/c nu/nu; Harlan Sprague-Dawley, Indianapolis, IN). Șoarecii sunt ținuți în cuști unitare de tip Thoren pe straturi sterile, având temperatura și umiditatea controlate. Animalele primesc hrană sterilă și apă ad libituen.
Linia tumorală umană L Z987 este stabilită ca modele de xenografe de tumori la șoarecele atimic. Linia tumorală este menținută prin treceri seriale in vivo. Tumorile sunt măsurate în două direcții perpendiculare la intervale săptămânale sau bisăptămânale, utilizând șublere. Volumul tumorii este calculat conform următoarei ecuații:
,, . 3. (L x W2)
V (mm3) = 1 în care V = volumul (mm3) ; L = măsura axei celei mai lungi (mm ) ; W = măsura axei perpendiculare față de L.
în general, sunt 8-10 șoareci pentru control sau pe o grupă de tratament. Datele sunt prezentate ca dimensiuni tumorale medii pentru grupele de control sau grupele tratate. Activitatea antitumorală este exprimată în termeni de mărimea logaritmului celulelor moarte (LCK), în care:
LCK = —^—2—
3,3 x TVDT
T - C este definit ca timp mediu (zile) pentru tumorile tratate pentru creșterea dimensiunii desemnate, minus timpul mediu pentru tumorile de control pentru creșterea dimensiunii desemnate, și TVDT este timpul (zile) pentru tumorile de control pentru dublarea lor în volum (250 - 500 mm3). Regresia tumorală parțială (PR) se referă la scăderea în volum a tumorii la 50 % din volumul inițial al tumorii; regresia tumorală completă (CR) se referă la o tumoră care nu este palpabilă pentru o perioadă de timp și cura este definită ca o tumoră stabilizată care nu este palpabilă pentru o perioadă de timp >10 TVDTS.
Pentru animalele care poartă tumoră pulmonară L 2987, terapia este inițiată în mod tipic, când mărimea medie a tumorii este de 75 mm (12 - 14 zile după implantul de tumoră). Media TVDT este de 4,8 + 0,9 zile și activitatea antitumorală este stabilită la o dimensiune a tumorii de 500 mm3. în diferite experimente (descrise mai departe in Testul VI) terapia este inițiată când tumorile L 2987 au mărimea de 225
RO 112618 Bl mm3 în mărime.
Materialele sub investigație sunt administrate pe cale intravenoasă sau pe cale intraperitoneală. Adriamicina este diluată în soluție salină normală; conjugatele de anticorpi / adriamicină și anticorpii sunt diluați în soluție salină de fosfat tampon. Compușii sunt administrați pe baza raportului miligram/kilogram, calculat pentru fiecare animal, și dozele sunt prezentate ca injecții în miligrame per kilogram al echivalentului de adriamicină. Imunoconjugatele sunt administrate conform schemei q 4 d x 3. Doza maximă tolerată (MTD”) pentru regimul de tratament este definită ca doza cea mai ridicată de pe schema dată care rezultă în doza letală 20 %. In datele prezentate în fig. 8, injecția dozelor optimizate de adriamicină produce o activitate antitumorală echivalentă la 1,1 LCK și regresiile tumorale nu sunt observate. Conjugatul BR64-ADM produce activitatea antitumorală echivalentă cu >10 LCK la toate dozele testate și curele de 89 %, 78 % și 100 % au fost observate la doze de 5 mg/kg și la 8 mg/kg și .respectiv, la 10 mg/kg de BR64ADM. La dozele de 8 mg/kg sau 10 mg/kg, conjugatul L6-ADM produce o activitate antitumorală (1,8 și, respectiv, 3,5 LCK), care este semnificativ mai bună decât cea a dozelor echivalente ale conjugatelor de internalizare BR64-ADM. Astfel, datele arată că activitatea antitumorală a conjugatelor L6-ADM de legătură de neinternalizare este superioară celei a adriamicinei neconjugate. Tratamentul cu conjugatul L6-adriamicină rezultă în activitatea antitumorală mai scăzută decât cea observată cu dozele ajustate de conjugat de internalizare BR64- adriamicină.
TESTUL VI. Activitatea antitumo66 rală -in vivo- a conjugatelor hiBR96-ADM
Activitatea antitumorală a conjugatelor hiBR96-ADM a fost evaluată față de produsul stabilit fL 2987) pulmonar uman ('MCF 7) din sân, care se poate obține din ATCC sub numărul de acces ATCC HTB 22; vezi I, Hellstrom et al., Cancer Research 50: 2183 (1990)) și colon (RCA de la Baylor University M. Brattain; vezi I.Hellstrom et al.,Cancer Research Tumors 50: 2183 (1990). Animalele sunt menținute și modelele de xenogrefe pentru tumori sunt stabilite pentru MCF 7 și RCA, iar liniile tumorale umane L 2987 sunt descrise ca pentru L 2987 în testul V. Materialele sunt administrate conform descrierii din testul V.
Pentru animalele care poartă tumorile pulmonare umane, o terapie tipică este inițiată atunci când dimensiunea tumorii mediane este de 75 mm3 (12 - 14 zile după implantarea tumorii). Media pentru TVTD este de 4,8 + 0,9 zile și activitatea antitumorală este evaluată la o dimensiune a tumorii de 500 mm3. In diferite experimente terapia a fost inițiată când tumorile au o dimensiune de 225 mm3. Tumora MCF 7 este o linie tumorală de sân umană estrogen dependentă. Șoarecii atimici sunt implantați cu 0,65 mg (65 zile proporția de eliberare) pelete estradiol [Innovative Research of America, Toledo, Ohio,) în ziua implantării tumorii. Terapia a fost inițiată când dimensiunea medie a tumorii este de 100 mm3 (tipic la 13 zile după implantarea tumorii). Tumora MCF 7 are o medie ΊΛ/DT de 6,4 ± 2,0 zile și activitatea antitumorală este evaluată la 500 mm3. Pentru animalele care poartă tumorile de colon RCA, terapia a fost inițiată la 15 zile după implantarea tumorii, când dimensiunea medie a tumorii
RO 112618 Bl este de 75 mm3. Media TVDT pentru xenogrefele tumorale RCA este de 9,5 ± 1,5 zile și activitatea antitumorală este evaluată la 400 mm3. Datele pentru activitatea antitumorală a adriamicinei optimizate în modelele de xenogrefe L 2987, MCF 7 și RCA sunt date în tabelele următoare și figurile referitoare la aceasta.Activitatea antitumorală a conjugatelor hiBR96-ADM este comparată cu cea a adriamicinei optimizate și cu dozele echivalente ale imunoconjugatelor nelegate (IgG). In fiecare model, regresiile complete de tumori și/sau curele tumorilor stabilite au fost observate după administrarea dozelor tolerate de conjugatul hiBR96-ADM.
Datele reprezentative care demonstrează activitatea antitumorală specifică antigenică a hiBR96-ADM conjugatelor sunt prezentate în fig. 9 și 10. Așa cum s-a arătat în fig. 9, administrarea intraperitoneală a conjugatului hiBR96-ADM (MR = 4,19) la o doză de 10 mg/kg echivalent de adriamicină produce o activitate antitumorală echivalentă cu >10 LCK. La această doză a conjugatului hiBR96-ADM, 78 % din șoareci sunt tratați de tumori și un procent în plus de 11 % din șoareci demonstrează o regresie completă a tumorii. Administrarea a 5 mg/kg de conjugat hiBR96-ADM produce așadar o activitate antitumorală echivalentă cu cea de >10 LCK cu tratamente de 80 % și regresii tumorale complete de 12%. Activitatea antitumorală observată după administratea conjugatelor hiBR96-ADM (>10 LCK) este substanțial mai bună decât cea observată pentru adriamicina optimizată (1,0 LCK). Conjugatul hiBR96
ADM este așadar mult mai activ decât adriamicina optimizată, adică o activitate antitumorală a conjugatului ChiBR96 testat la o doză de 5 mg/kg. echivalenți de adriamicină este superioară celei a adriamicinei testate la o doză de 8 mg/ kg. Conjugatul IgG uman nelegat (MR = 7,16) nu a fost activ față de xenogrefele L 2987 când s-a testat la o doză de 10 mg/kg echivalent de adriamicină, indicând faptul că activitatea superioară a conjugatului hiBR96-ADM se datorează legării antigenice specifice a imunoconjugatului la celulele tumorale L 2987.
Datele similare sunt prezentate în fig. 10. Așa cum s-a arătat mai sus, conjugatul hiBR96-ADM (MR = 5,8) testat la o doză echivalentă de 10 mg/kg de adriamicină are ca rezultat o activitate antitumorală echivalentă cu >10 LCK. La această doză, au fost observate tumorile 90 % și regresiile complete ale tumorilor de 10 %. Administrarea a 5 mg/kg de conjugat hiBR96 are ca rezultat 4,8 LCK cu 10 % tumori și regresii complete de 50 % și parțiale de 10 %. Activitatea antitumorală a conjugatului hiBR96-ADM depășește cu mult pe cea a adriamicinei optimizate (1,6 LCK) și asa cum se descrie mai sus, conjugatul hiBR96-ADM este mult mai activ decât adriamicina neconjugată. Conjugatul IgG-ADM nelegat (MR = 7,16) nu este activ la o doză de 10 mg/kg.
Activitatea antitumorală pentru diferite preparate de conjugate hiBR96ADM obținute prin tehnici de anticorpi relaxați și care au fost evaluate față de xenogrefele tumorilor de plămâni stabilite L 2987, este prezentată în tabelul 2.
cu 'δ -Q
CD Ό
O CD c_ co □ CD
CD CD
CD
CD CD
CD
CD
CD CD CD
CD CD
CD
CD co
O rx
CD CD
ox _ω co ΙΟ E o
4-5
CD CD i_
CT CD
IX
co
N O =5 u o
co
CD x
CD
CD CD
CD
X
X
CD
X
CD CO
O CD cx CJ oc Q_
IZ o co CD co
CJ
Οι, o o c <
Π 4J CO cn □ ‘c o ω cu cu
CU CU
O V—
Λ
Φ
c
E
CO
CL
Q.
O r-
Λ oo Λ oo Λ
CL
Q_
Q.
Q- Q. Q.
ΙΩ
CD
O rst cu CD
ΙΩ Q CU □
St cu 00
ΙΩ
C\J slin CD
IX C\J 00
St in CD
X cu 00 o o in
in in in cu in
CD st i
Σ Q <C CD CD (X CD 'jz
O in ϋ> o < CD CD (X 00
CU (X
cu
RO 112618 Bl „g o
o CD CD CD CD o O CD CD O CD CD CD 55
O 55 O O 56 o 30 - O O rx O □ O □
o LD cu cu 33 CU CU - o <r* O O O 20 33 O O
o cu ΓΊ o n O cu o CO
cu CD CD LJ cu •Γ- CO
CO o LD o CO CO CD CD CD UD CD co
sf Λ Λ CD cu ID Λ 'd7 CU o LD Λ CU □ 'Τι
CL > > > Q. Q. CL CL CL > > > > >
250 204 CU CO O O O O CU O O 50 25 o o cu 100 O UD 25 1
UD LO cu - O ΙΌ 2,5 1,25 cu CD □ UD UD cu 1,25 0,62 00
cu cu
CO CO
CO CD
Q Q >co
<c <c c ‘o
CD CD
CD CD E
□C □C CU
CU m c_
-C JZ Ό <
co
X
Ό cr
E
Ό (0
D O >co
CO (D
4-9 CJ ω M— Φ
QJ ω (D
E (D _C
O ω
RO 112618 Bl
Așa cum s-a arătat, activitatea antitumorală a conjugatelor de hiBR96ADM este superioară celei a adriamicinei optimizate și conjugate la hiBR96-ADM sunt de 6 - 8 ori mai active decât adri- 5 amicina neconjugată. Activitatea antitumorală a conjugatelor hiBR96-ADM a fost așadar evaluată față de tumorile mari stabilite L 2987 (225 mm3] (așa cum este descris în fig. 11). Adminis- 10 trarea conjugatului hiBR96-ADM (MR = 6,85] la o doză de 10 mg/kg echivalent de adriamicină are ca rezultat activitatea antitumorală echivalentă >10 LCK fiind observate curele de 70 % și regresiile 15 tumorale parțiale de 30 %. Activitatea antitumorală a anticorpului neconjugat hiBR96 este evaluată utilizând xenogrefele tumorale de plămâni umani stabilite L 2987 (50 - 100 mm3]. Așa cum s-a 20 arătat în tabelul 3, anticorpul hiBR96 administrat la dozele de 100, 200 sau 400 mg/kg n-a fost activ față de tumorile stabilite L 2987. Activitatea antitumorală a amestecurilor de hiBR96 și 25 adriamicină nu este diferită de cea a adriamicinei administrată singură. De aceea, activitatea antitumorală a conjugatelor de ChiBR96-ADM reflectă eficacitatea a însuși conjugatului mai degrabă 30 decât efectul antitumoral sinergetic al anticorpului si adriamicinei (vezi tabelul 3) în concluzie, conjugatele hiBR96ADM demonstrează activitatea antitumorală specific antigenică, când este evaluată față de tumorile de plămân uman stabilite L 2987. Activitatea antitumorală a conjugatelor hiBR96-ADM a fost superioară față de adriamicina optimizată și față de amestecurile hiBR96 și adriamicină și dozele echivalente ale conjugatelor nelegate. Conjugatele hiBR96ADM sunt aproximativ de 6 ori mai active decât adriamicina neconjugată. Curele sau regresele complete ale tumorilor stabilite sunt observate la 50 % din animalele tratate cu doze >2,5 mg/kg de conjugat hiBR96-ADM. Așa cum s-a arătat în fig. 12, conjugatele hiBR96ADM (MR = 7,88] demonstrează activitatea antitumorală specific antigenică față de tumorile MCF 7 stabilite (75 125 mm3). Activitatea conjugatului CiB R96-ADM administrat la doza de 5 mg/kg pe cale ip sau iv (4,2 LCK] este superioară celei a adriamicinei optimizate (1,4 LCK) sau dozelor echivalente pentru conjugatul nelegat IgG (1,2 LCK], Activitatea antitumorală a hiBR96-ADM și a conjugatelor nelegate IgG-ADM este rezumată în tabelul 4. Conjugatele MTD ale hiBR96-ADM la fel cu cele ale adriamicinei sunt mai mici în modelul MCF 7 datorită suplimentării de estradiol necesară dezvoltării tumorii.
Tabelul 3
Activitatea antitumorală a adriamicinei, HIBR96 și a amestecurilor de hiBR96 și adriamicinei față de xenogrefele tumorilor de plămân uman L 3987 stabilite
Doza (mq/kq]a % Tumori în reqresie
Tratament ADM ChiBR96 Log.celule moarte PR CR Cură Nr.de șoareci
Adriamicină 8 1,5 □ 0 □ 9
ChiBR96 - 400 0 0 □ □ 8
- 200 0 □ □ 0 8
- 100 □ O 0 □ 8
Adriamicină + ChiBR96 8 400 1,8 11 □ □ 9
8 200 1,6 0 0 0 9
8 100 1,9 □ 0 0 8
a = Tratament cu administrare intravenoasă conform schemei q 4 d x 3
RO 112618 Bl
In concluzie, conjugatele hiBR 96ADM demonstrează activitatea antitumorală specific antigenică atunci când este evaluată față de tumorile de plămân uman stabilite L 2987. Activitatea anti- 5 tumorală a conjugatelor hiBR96-ADM este superioară celei pentru adriamicina optimizată, față de amestecurile de hiBR96 și adriamicină și dozele echivalente ale conjugatelor nelegate. Conju- 10 gatele hiBR96-ADM sunt aproximativ de ori mai active decât adriamicina conjugată. Curele sau regresiile complete ale tumorilor stabilite sunt observate la 50 % din animalele tratate cu doze >2,5 15 mg/kg de conjugat hiBR96-ADM.
Așa cum s-a arătat în fig. 12, conjugatele hiBR96-ADM (MR = 7,88) demonstrează activitatea antitumorală specific antigenică față de tumorile MCF 20 stabilite (75-125 mm3). Activitatea conjugatului de hiBR96-ADM administrat la o doză de 5 mg/kg fie pe cale intraperitoneală, fie pe cale intravenoasă {4,2 LCK) este superioară facă de cea a 25 adriamicinei optimizate (1,4 LCK) sau dozelor echivalente ale conjugatului IgG nelegat {1,2 LCK). Activitatea antitumorală a hiBR96-ADM și a conjugatelor nelegate IgG-ADM este arătată în tabelul 30 4. MTD ale conjugatelor hiBR96-ADM la fel cu cea a adriamicinei este mai mică în modelul MCF 7, datorită suplimentării de estradiol necesară pentru dezvoltarea tumorii (vezi Tabelul 4). 35
Activitatea antitumorală specific antigenică și răspunsul la doza de conjugate hiBR96-ADM a fost așadar evaluată în modelul canceros de colon uman RCA. Tumorile RCA sunt mai puțin senzitive la adriamicina neconjugată decât sunt tumorile L 2987 și MCF 7. In plus, așa cum s-a descris mai sus, tumorile RCA au un volum al tumorii mai mare într-un timp dublu decât pentru tumorile L 2987 sau MCF 7. care sunt mult mai sărace în vascularizarea și localizarea anticorpilor BR64 radiomarcați este mai slabă în cazul tumorilor RCA decât la tumorile L 2987. Așa cum s-a arătat în fig. 13 activitatea antitumorală a conjugatului hiBR96-ADM (MR = 7,88), administrată la o doză de 10 mg/kg, este superioară față de cea a adriamicinei și dozei echivalente a conjugatului nelegat IgG (MR = 7,16). Așa cum s-a arătat în tabelul 5, conjugatul ChiBR96ADM testat la o doză de 10 mg/kg produce o activitate antitumorală echivalentă cu cea de >3LCK. La această doză de conjugat hiBR96-ADM, s-au produs cure de 89 % și 11 % regresii ale tumorii parțiale. în acest experiment, adriamicina neconjugată prezintă activitate antitumorală echivalentă cu 0,4 LCK.
Astfel, în acest experiment, conjugatul BR96-ADM produce cure în proporție de 89 % din tumorile stabilite, în timp ce adriamicina neconjugată este inactivată.
Tabelul 4
Activitatea antitumorală a conjugatelor CHIBR96-ADM tioeterice evaluate față de xenogrefele tumorale stabilite de MCF 7 de sân uman
Doza (mg/kg)a Regresii tumorale %
Conjugatul ADM ChiBR96 Calea de administrare Log. celule moarte PR CR Cură Nr.de șoareci
ChiBr96-ADM-7,88 10 350 ip -b - - - 10
5 175 iv 4,2 30 0 0 10
5 175 iv 4,2 50 10 0 10
RO 112618 Bl
78
Tabelul 4 (continuare)
lgG-ADM-7,16 5 225 ÎP 1,1 0 0 0 10
2,5 112 ip 0,6 0 ; x 0 0 10
Adriamicină 2,5 112 iv 0,8 0 0 0 10
6 0 iv 1,4 0 0 0 10
a] Toate tratamentele sunt cu administrare conform schemei q 4 d x 3
b] 40 % letalitate are loc la această doză a imunoconjugatului.
Tabelul 5
Activitatea antitumorală a conjugatelor CHIBR96-ADM tioeterice evaluate față de xenogrefele de colon uman RCA stabilite
Doza (mg/kg)a % Regresii tumorale
Conjugatul ADM ChiBR96 Calea de administrare Log. celule moarte PR CR Cure Nr.de șoareci
ChiBr96-ADM-7,88 10 350 ip >3 11 0 89 9
5 175 ip 4,2 30 0 0 9
2,5 85 ip 4,2 50 10 0 9
lgG-ADM-7,16 2,5 85 iv 0,6 11 0 0 9
Adriamicină 10 405 ip 0 0 0 0 9
8 0 iv 0,4 0 0 0 9
a) Toate tratamentele sunt cu administrare conform schemei q 4 d x 3
In concluzie, conjugatul ChiBR96 30 demonstrează activitatea antitumorală specific antigenică în modelul tumoral al colonului uman RCA. Curele și regresiile complete ale tumorilor stabilite RCA au fost observate după administrarea conju- 35 gatului ChiBR96 la doze de 5 - 10 mg/ kg.

Claims (75)

  1. Revendicări
    1. Medicamente conjugate conținând tioeteri, caracterizate prin aceea că au formula generală structurală (!) 50 în care D este un rest de moleculă de medicament; n este un număr întreg de la 1 la 10; p este un număr întreg de la 1 la 6; Y este 0 sau NH2 +Cf ; z este zero sau 1; q este de la aproximativ 1 la aproximativ 10; X este un ligand și A este Aductul de Adiție Michael.
  2. 2. Medicamente conjugate, conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că, D este un medicament citotoxic.
  3. 3. Medicamente conjugate, conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că, D este un antibiotic antraciclinic, un alcaloid Vinca, o mitomicină, o bleomicină, o nucleozidă citotoxică, o pteridină sau o pedofilotoxină.
  4. 4. Medicamente conjugate, conform revendicării 1, caracterizate prin aceea că, D este un antibiotic antraciclinic.
  5. 5. Medicamente conjugate, conform uneia din revendicările 1-=-4, caracterizate prin aceea că, n este 5.
    RO 112618 Bl
  6. 6. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 1 și 5, caracterizate prin aceea că, A este un rest de moleculă de succinimidă.
  7. 7. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 1 și 6, caracterizate prin aceea că, X este o imunoglobulină sau un fragment din aceasta.
  8. 8. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 1 și 7, caracterizate prin aceea că, X este o imunoglobulină selectată dintr-o grupă care constă din BR96, BR64, L6, BR96 relaxat, BRB4 relaxat, L6 relaxat BR96 himeric, BR64 himeric, L6 himeric, BR96 himeric relaxat, BR64 himeric relaxat, L6 himeric relaxat și fragmentele acestora.
  9. 9. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 1 și 8, caracterizate prin aceea că, X este BR96 himeric, BR96 himeric relaxat sau un fragment din acesta.
  10. 10. Medicamente conjugate, conform uneia din revendicările de la 1 la 6, caracterizate prin aceea că, X este un ligand selectat dintr-o grupă care constă din bombezină, EGF, transferin, gastrin, peptide cu eliberare de gastrin, factor de dezvoltare derivat din platelete, IL-2, IL-6, TGF-a/fa, TGF-beta, VGF, insulină și factorii de dezvoltare I și II asemănători insulinei.
  11. 11. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 1 și 10, caracterizate prin aceea că, X este bombezină.
  12. 12. Medicamente conjugate, conform uneia din revendicările de la 1 până la 6, caracterizate prin aceea că, X este un ligand selectat dintr-o grupă care constă din carbohidrați, steroizi și lectine.
  13. 13. Medicamente conjugate conținând tioeteri, caracterizate prin aceea că, au formula generală structurală la:
    (l-a) în care R^ este -CH3, -CH20H, -CH20C0 (CH2)3CH3 sau -CH2OCO-CH(OC2H5]2; R3 este -0CH3, -OH sau hidrogen; R4 este NH2, -NHC0CF3, 4-morfolinil, 3-ciano-4morfolinil, 1-piperidinil, 4-metoxi-1 -piperidinil, benzilamină, dibenzilamină, cianometilamină sau 1-ciano-2-metoxietil amină; R5 este -OH, -OTHP sau hidrogen;. R6 este -OH sau hidrogen, cu condiția ca R6 fie diferit de -OH, atunci când R5 este -OH sau OTHP; n este un număr întreg de la 1 la 10; p este un număr întreg de la 1 la 6; Y este O sau NH2 +Cî; z este zero sau 1 ; q este aproximativ 1 până la aproximativ 10 și X este un ligand.
  14. 14. Medicamente conjugate, conform revendicării 13, caracterizate prin aceea că, Y este O, p este 2 și z este 1.
  15. 15. Medicamente conjugate, conform revendicării 13, caracterizate prin aceea că, Y este ΝΗ2 +0Γ, p este 3 și z este 1.
  16. 16. Medicamente conjugate, conform revendicării 13, caracterizate prin aceea că, z este zero.
  17. 17. Medicamente conjugate, conform uneia din revendicările 13 la 16, caracterizate prin aceea că, restul de antibiotic antraciclinic este selectat din grupul care constă din adriamicină, daunomicină, detorubicină, carminomicină, idarubicină, epirubicină, AD-32, 4-morfolinil-adriamicină și 3'-deamino-3’ (3ciano-4-morfolinil)-deoxirubicină.
  18. 18. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 13 și 17, caracterizate prin aceea că, restul de moleculă de antraciclină este adriamicină.
  19. 19. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 13 și 17, caracterizate prin aceea că, X este o imunoglobulină sau un fragment al acesteia.
  20. 20. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 13 și 19, caracterizate prin aceea că, X este o imunoglobulină selectată din grupul care constă din BR96, BR64, L6, BR96 relaxat, BR64 relaxat, L6 relaxat, BR96 himeric, BR64 himeric, L6 himeric, BR96 himeric relaxat, BR64 himeric relaxat,
    RO 112618 Bl
    L6 himeric relaxat și fragmentele acestora.
  21. 21. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 13 și 20, caracterizate prin aceea că, X este BR96 himeric, BR96 himeric relaxat sau un fragment al acestora.
  22. 22. Medicamente conjugate, conform uneia din revendicările de la 13 la 16, caracterizate prin aceea că, X este un ligand selectat din grupul care constă din bombezină, EGF, transferin, gastrin, peptidă care eliberează gastrin, factor de dezvoltare derivat din platelete, IL-2, IL-6, TGF-a/fe, TGF-beta, VGF, insulină și factorii I și II de dezvoltare, asemănători insulinei.
  23. 23. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 13 și 22, caracterizate prin aceea că, X este bombezină.
  24. 24. Medicamente conjugate, conform revendicărilor de la 13 la 16, caracterizate prin aceea că, X este un ligand selectat din grupul care constă din carbohidrați, steroizi și lectine.
  25. 25. Medicamente conjugate conținând tioeteri, caracterizate prin aceea că, au formula generală structurală lb:
    (l-b) în care n este un număr întreg de la 1 la 10; q este de la aproximativ 1 la aproximativ 10 și X este un ligand.
  26. 26. Medicamente conjugate, conform revendicării 25, caracterizate prin aceea că, X este o imunoglobulină sau un fragment al acesteia
  27. 27. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 25 si 26, caracterizate prin aceea că, X este imunoglobulină selectată din grupul care con stă din BR96, BR64, L6, BR96 relaxat, BR64 relaxat, L6 relaxat, BR96 himeric, BR64 himeric, L6 himeric, BR64 himeric relaxat, BR64 himeric relaxat, L6 himeric relaxat și fragmentele acestora.
  28. 28. Medicamente conjugate conform revendicărilor 25 și 27, caracterizate prin aceea că, X este BA96 himeric, BR96 himeric relaxat sau un fragment al acestuia.
  29. 29. Medicamente conjugate, conform revendicării 25, caracterizate prin aceea că, X este o proteină sau un ligand peptidic.
  30. 30. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 25 și 29, caracterizate prin aceea că, X este selectat din grupul care constă din bombezină, EGF, transferin, gastrin, peptidă care eliberează gastrinul.
  31. 31. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 25 și 30, caracterizate prin aceea că, X este bombezină.
  32. 32. Medicamente conjugate, conform revendicării 25, caracterizate prin aceea că, X este un ligand selectat din grupul care constă din carbohidrați, steroizi și lectine.
  33. 33. Medicamente conjugate conținând tioeteri, caracterizate prin aceea că, au formula structurală generală Ic:
    (l-C) în care q este aproximativ 4 la aproximativ 8 și X este un ligand.
  34. 34. Medicamente conjugate, conform revendicării 33, caracterizate prin aceea că, X este o imunoglobulină sau un fragment al acesteia.
  35. 35. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 33 și 34, carac
    RO 112618 Bl terizate prin aceea că, X este o imunoglobulină selectată din grupul care constă din BR96, BR64, L6, BR96 himeric, BR64 himeric, L6 himeric, BR96 relaxat, BR64 relaxat, L6 relaxat, BR96 hi- 5 meric relaxat, BR64 himeric relaxat. L6 himeric relaxat și fragmentele acestora.
  36. 36. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 33 și 35, caracterizate prin aceea că, X este BR96hi- 10 meric, BR96 himeric relaxat sau fragmentul acestora.
  37. 37. Medicamente conjugate, conform revendicării 33, caracterizate prin aceea că, ligandul X este o proteină 15 sau o peptidă.
  38. 38. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 33 și 37, caracterizate prin aceea că, X este selectat din grupul care constă din bombezină, 20 EGF, transferin, gastrin,peptidă care eliberează gastrin.
  39. 39. Medicamente conjugate, conform revendicărilor 33 și 38, caracterizate prin aceea că, X este bombezină. 25
  40. 40. Medicamente conjugate, con- form revendicării 33, caracterizate prin aceea că, X este un ligand selectat din grupul care constă din carbohidrați, steroizi și lectine. 30
  41. 41. Medicamente conjugate conținând tioeteri, caracterizate prin aceea că, au formula generală structurală ld:
    (l-d) în care q este de la aproximativ 4 la aproximativ 8 și Ig este un anticorp BR96 himeric relaxat sau un fragment al 50 acestuia.
  42. 42. Procedeu de preparare a medicamentelor conjugate conținând tioeteri, având formula generală I:
    γ
    Γ o i=N-NHCOt CH2) n—A—S p_ c- Mh)2 - - X caracterizat prin aceea că, se supune reacției compusul cu formula lla:
    [d^=m- nhcoc ch25 n- R (ll-a) cu compusul cu formula III:
    HS
    II A p-C-nh)z *- ->q (III) în care D este un rest de medicament; n este un număr întreg de Ia1 la 10; p este un număr întreg de la 1 la 6; Y este O sau ΝΗ/ΟΓ; z este zero sau 1; q este de la aproximativ 1 la aproximativ 10; X este un ligand; R este Receptorul de Adiție Michael; A este Aductul de Adiție Michael și dacă se dorește produsul se izolează.
  43. 43. Procedeu de preparare a medicamentelor conjugate având formula generală I:
    caracterizat prin aceea că, se supune reacției compusul cu formula [D - (C = 0)] cu compusul cu formula:
    RO 112618 Bl _____ γ ___
    HjN-NH-COțCH^- A-S ^CHI^-C-NH^
    -X q
    în care D este un rest de medicament; n este un număr întreg de la 1 la 10; p este un număr întreg de la 1 la 6; Y este □ sau NH2 +Cî; z este zero sau 1; q este de la aproximativ 1 la aproximativ 10; X este un ligand; R este Receptorul de Adiție Michael; A este Aductul de Adiție Michael și dacă se dorește produsul este izolat.
  44. 44. Procedeu conform revendicărilor 42 și 43, caracterizat prin aceea că, X este o imunoglobulină sau un fragment al acesteia.
  45. 45. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 și 44, caracterizat prin aceea că este o imunoglobulină selectată din grupul care constă din BR96, BR64, L6, BR96 himeric, BR64 himeric, L6 himeric, BR96 relaxat. BR64 relaxat, L6 relaxat, BR96 himeric relaxat. BR64 himeric relaxat, L6 himeric relaxat și fragmentele acestora.
  46. 46. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 și 45, caracterizat prin aceea că, imunoglobulină este BR96 himeric, BR96 himeric relaxat sau un fragment al acestora.
  47. 47. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 si 46, caracterizat prin aceea că, D este un antibiotic antraciclinic selectat din grupul care constă din adriamicină, daunomicină, detorubicină, carminomicină, idarubicină, epirubicină, AD-32, 4-morfolinil-adriamicină și 3'-deamino-3'-(3-ciano-4-morfolinil)-doxorubicină.
  48. 48. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 și 47, caracterizat prin aceea că, antibioticul antraciclinic este adriamicina.
  49. 49. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 și 48, caracterizat prin aceea că, n este 5.
  50. 50. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 și 49, caracterizat prin aceea că, z este zero.
  51. 51. Procedeu conform revendi cărilor 42, 43 și 50, caracterizat prin aceea că, q este de la aproximativ 4 la aproximativ 8.
  52. 52. Procedeu conform revendi-
    5 cărilor 42 și 43. caracterizat prin aceea că, se supune reducerii proteina care conține o legătură disulfurică, în atmosferă inertă, cu un agent de reducere DTT, la un raport molar DTT față de 10 ligand 1/1...10/1, la un pH de la aproximativ 6 până la aproximativ 8, după care produsul se purifică prin diafiltrare și apoi proteina astfel redusă se supune reacției cu un compus cu formula Ila:
    [o 1=N- NHCOC ch/) n- R (ll-a) în care D este un rest de moleculă de
    20 medicament, n este un număr întreg cuprins între 1 și 10 și R este Receptorul de Adiție Michael.
  53. 53. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 și 52, caracterizat
    25 prin aceea că, proteina este o imunoglobulină sau framentul acesteia.
  54. 54. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 și 53, caracterizat prin aceea că, imunoglobulină este selectată
    30 din grupul care constă din BR64, himeric BR64, BR96, himeric BR96, L6, L6 himeric și fragmentele acestora.
  55. 55. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 și 52, caracterizat prin
    35 aceea că, raportul molar DTT față de ligand este de aproximativ 6 : 1 până la aproximativ 10:1.
  56. 56. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 și 52, caracterizat prin
    40 aceea că, pH-ul în faza de reducere este de la aproximativ 7,0 la aproximativ 7,5.
  57. 57. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 și 52, caracterizat prin aceea că, restul de moleculă de mediaș cament este un antibiotic antraciclinic, R < este un rest maleimido și n este 5.
  58. 58. Procedeu conform revendicărilor 42, 43 și 57, caracterizat prin aceea că, antibioticul antraciclinic este 50 adriamicina.
  59. 59. Procedeu conform revendiRO 112618 Bl cărilor 42, 43 și 52, caracterizat prin aceea că, proteina redusă este o imunoglobulină redusă.
  60. 60. Compus intermediar, caracterizat prin aceea că, are formula Ila:
    [o Ț=N- NHCOC CH2^ n- R (ll-a) în care D este un rest de medicament; n este un număr de la 1 la 10 și R este un Receptor de Adiție Michael.
  61. 61. Compus intermediar conform revendicării 60, caracterizat prin aceea că, D este un medicament citotoxic.
  62. 62. Compus intermediar conform revendicărilor 60 și 61, caracterizat prin aceea că, D este un antibiotic antraciclinic, un alcaloid Vinca, o mitomicină, o bleomicină, o nucleosidă citotoxică, o pteridină sau o podofilotoxină.
  63. 63. Compus intermediar conform revendicărilor 60 și 62, caracterizat prin aceea că, D este un antibiotic antraciclinic.
  64. 64. Compus intermediar conform revendicăirilor 60 la 63,caracterizat prin aceea că, radicalul R este un rest de moleculă maleimido.
  65. 65. Compus intermediar, caracterizat prin aceea că, are formula llb:
    în care n este un număr de la 1 la 10; R, este -CH3, -CH20H, -CH20C0 (CH2)3 CH3 sau -CH2OCO-CH(OC2H5)2; R3 este 0CH3, -OH sau hidrogen; R4 este -NH2, NHC0CF3, 4-morfolinil, 3-ciano-4-morfolinil, 1 -piperidinil, 4-metoxi-1-piperidinil, benzilamină, dibenzilamină, cianometilamină sau 1-ciano-2-metoxietil amină; R5 este -OH, -OTHP sau hidrogen; Re este
    OH sau hidrogen, cu condiția ca R6 să nu fie -OH atunci când R5 este o grupare OH sau -OTHP și R este un rest de Receptor de Adiție Michael.
  66. 66. Compus intermediar conform revendicării 65, caracterizat prin aceea că, n este 5.
  67. 67. Compus intermediar conform revendicărilor 65 și 66, caracterizat prin aceea că, R este un rest de moleculă maleimido.
  68. 68. Compus intermediar, caracterizat prin aceea că, are formula llc:
    în care R-, este -CH3, -CH20H, -CH2OCO (CH2)3CH3 sau -CH2OCO-CH(OC2H5)2; R3 este -0CH3, -OH sau hidrogen; R4 este NH2, -NHC0CF3, 4-morfolinil, 3-ciano-4morfolinil, 1-piperidinil, 4-metoxi-1 -piperidinil, benzilamină, dibenzilamină, cianometilamină sau 1-ciano-2-metoxietil amină; R5 este -OH, -OTHP sau hidrogen; Re este -OH sau hidrogen, cu condiția ca R6 să nu fie -OH atunci când R5 este o grupare -OH sau -OTHP și n este un număr întreg de la 1 la 10.
  69. 69. Compus intermediar conform revendicărilor 65 la 68, caracterizat prin aceea că, restul de moleculă de antraciclină este selectat din grupul care constă din adriamicină, daunomicină, detorubicină, carminomicină, idarubicină, epirubicină, AD-32, 4-morfolinil-adriamicină și 3'-deamino-3'(3-ciano-4-morfolinil]-doxorubicină.
  70. 70. Compus intermediar conform revendicărilor 65 la 69, caracterizat prin aceea că, antraciclina este adriamicină.
  71. 71. Compoziție farmaceutică, ca
    RO 112618 Bl racterizată prin aceea că, conține aproximativ 0,01 - aproximativ 1, gram ca ingredient activ, ca doză totală per pacient, compusul cu formula la în care în care Fh este -CH3, -CH2OH, -CH2OCQ (CH2)3CH3 sau -CH2OCO-CH(OC2H5)2; R3 este -0CH3, -OH sau hidrogen; R4 este NH2, -NHC0CF3, 4-morfolinil, 3-ciano-4morfolinil, 1 -piperidinil, 4-metoxi-1-piperidinil, benzilamină, dibenzilamină, cianometilamină sau 1-ciano-2-metoxietil amină; R5 este -OH, -OTHP sau hidrogen; Rb este -OH sau hidrogen, cu condiția ca R6 să nu fie -OH, atunci când R5 este o grupare -OH sau -OTHP, și n este un număr întreg de la 1 la 10; p este un număr întreg de la 1 la 6; Y este □ sau o grupare ΝΗ2 +0Γ; z este zero sau 1; q este aproximativ 1 până la aproximativ 10 și X este un ligand, asociat cu un vehicul, diluant sau excipient acceptabil din punct de vedere farmaceutic.
    (l-a)
  72. 72. Compoziție farmaceutică, caracterizată prin aceea că, conține aproximativ 0,01 ... 1 gram drept ingredient activ ca doză totală per pacient, compusul cu formula Ib:
    (l-b) în care n este de la 1 la 10; q este aproximativ 1 la aproximativ 10 și X este un ligand, asociat cu un vehicul, diluant sau excipient al acestui compus, acceptabil din punct de vedere farmaceutic.
  73. 73. Compoziție farmaceutică conform revendicării 72, caracterizată prin aceea că, n este 5, X este un anticorp BR996 himeric relaxat și q este de la aproximativ 4 la aproximativ 8.
  74. 74. Compoziție farmaceutică, caracterizată prin aceea că, conține aproximativ 0,01 la 1 gram drept ingredient activ ca doză totală per pacient, compusul cu formula ld, în care q este de la aproximativ 4 la aproximativ 8 și Ig este un anticorp BR96 himeric relaxat sau un fragment al acestuia asociat cu un vehicul, diluant sau excipient al acestuia acceptabil din punct de vedere far- (l-d)
  75. 75. Compus conform uneia din revendicările 1 la 41, caracterizat prin aceea că, se utilizează în terapie.
RO93-00069A 1992-01-23 1993-01-21 Medicamente conjugate continand tioeteri, procedeu de preparare a acestora, compus intermediar si compozitie farmaceutica pe baza de acesti compusi RO112618B1 (ro)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/824,951 US5622929A (en) 1992-01-23 1992-01-23 Thioether conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RO112618B1 true RO112618B1 (ro) 1997-11-28

Family

ID=25242736

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RO93-00069A RO112618B1 (ro) 1992-01-23 1993-01-21 Medicamente conjugate continand tioeteri, procedeu de preparare a acestora, compus intermediar si compozitie farmaceutica pe baza de acesti compusi

Country Status (26)

Country Link
US (3) US5622929A (ro)
EP (1) EP0554708B9 (ro)
JP (1) JPH0625012A (ro)
CN (3) CN1040540C (ro)
AT (1) ATE294592T1 (ro)
AU (1) AU666903B2 (ro)
BG (1) BG61899B1 (ro)
CA (1) CA2087286C (ro)
CZ (1) CZ297409B6 (ro)
DE (1) DE69333800T2 (ro)
DK (1) DK0554708T3 (ro)
EG (1) EG20406A (ro)
ES (1) ES2240959T3 (ro)
FI (1) FI930240L (ro)
HU (1) HUT68345A (ro)
IL (1) IL104475A0 (ro)
MX (1) MX9300298A (ro)
MY (1) MY110526A (ro)
NO (1) NO930189L (ro)
NZ (1) NZ245725A (ro)
OA (1) OA09859A (ro)
PL (6) PL172827B1 (ro)
RO (1) RO112618B1 (ro)
TW (1) TW213921B (ro)
UY (1) UY23541A1 (ro)
ZA (1) ZA93444B (ro)

Families Citing this family (551)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5637616A (en) * 1993-06-18 1997-06-10 Arcturus Pharmaceutical Corporation Method for treating diseases mediated by proteases
AU1140495A (en) * 1994-01-27 1995-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Method for preparing thioether conjugates
US6303120B1 (en) * 1994-03-15 2001-10-16 Memorial Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of glycoconjugates of the lewis y epitope and uses thereof
US6544952B1 (en) 1994-03-15 2003-04-08 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of glycoconjugates of the globo-H epitope and uses thereof
US5708163A (en) * 1994-03-15 1998-01-13 Sloan-Kettering Institute Of Cancer Research Synthesis of the breast tumor-associated antigen defined by monoclonalantibody MBRL and uses thereof
US6143864A (en) * 1994-06-28 2000-11-07 Merck & Co., Inc. Peptides
US5866679A (en) * 1994-06-28 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Peptides
US5599686A (en) * 1994-06-28 1997-02-04 Merck & Co., Inc. Peptides
US7597886B2 (en) * 1994-11-07 2009-10-06 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US7820798B2 (en) * 1994-11-07 2010-10-26 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US5907030A (en) * 1995-01-25 1999-05-25 University Of Southern California Method and compositions for lipidization of hydrophilic molecules
US7429646B1 (en) 1995-06-05 2008-09-30 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to human tumor necrosis factor receptor-like 2
US20030119724A1 (en) * 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
DE69626849T2 (de) * 1995-12-22 2003-12-24 Bristol-Myers Squibb Co., Princeton Verzweigte hydrazongruppen enthaltende kuppler
US7888466B2 (en) 1996-01-11 2011-02-15 Human Genome Sciences, Inc. Human G-protein chemokine receptor HSATU68
SE9601158D0 (sv) * 1996-03-26 1996-03-26 Stefan Svenson Method of producing immunogenic products and vaccines
DE19636889A1 (de) 1996-09-11 1998-03-12 Felix Dr Kratz Antineoplastisch wirkende Transferrin- und Albuminkonjugate zytostatischer Verbindungen aus der Gruppe der Anthrazykline, Alkylantien, Antimetabolite und Cisplatin-Analoga und diese enthaltende Arzneimittel
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
AU5159798A (en) * 1996-11-05 1998-05-29 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
FR2766826B1 (fr) * 1997-08-04 2001-05-18 Pasteur Institut Vecteurs derives d'anticorps pour le transfert de substances dans les cellules
US6093692A (en) * 1997-09-25 2000-07-25 The University Of Southern California Method and compositions for lipidization of hydrophilic molecules
DE69943022D1 (de) 1998-03-19 2011-01-20 Human Genome Sciences Rockville Der gemeinsamen gamma-kette ähnlicher zytokinrezeptor
JP2002520369A (ja) * 1998-07-17 2002-07-09 アメリカ合衆国 水溶性薬剤およびその製造方法
EP1161451A4 (en) 1999-02-26 2006-05-17 Human Genome Sciences Inc HUMAN ALPHA ENDOKIN AND METHOD FOR ITS USE
US6322980B1 (en) * 1999-04-30 2001-11-27 Aclara Biosciences, Inc. Single nucleotide detection using degradation of a fluorescent sequence
US6673550B2 (en) 1999-04-30 2004-01-06 Aclara Biosciences, Inc. Electrophoretic tag reagents comprising fluorescent compounds
US7001725B2 (en) 1999-04-30 2006-02-21 Aclara Biosciences, Inc. Kits employing generalized target-binding e-tag probes
US6649351B2 (en) 1999-04-30 2003-11-18 Aclara Biosciences, Inc. Methods for detecting a plurality of analytes by mass spectrometry
DE19926154A1 (de) 1999-06-09 2000-12-14 Ktb Tumorforschungs Gmbh Verfahren zur Herstellung einer injizierbaren Arzneimittelzubereitung
US6706892B1 (en) 1999-09-07 2004-03-16 Conjuchem, Inc. Pulmonary delivery for bioconjugation
EP2266607A3 (en) 1999-10-01 2011-04-20 Immunogen, Inc. Immunoconjugates for treating cancer
US7160735B2 (en) * 2000-04-28 2007-01-09 Monogram Biosciences, Inc. Tagged microparticle compositions and methods
US7771929B2 (en) * 2000-04-28 2010-08-10 Monogram Biosciences, Inc. Tag library compounds, compositions, kits and methods of use
US20030031675A1 (en) 2000-06-06 2003-02-13 Mikesell Glen E. B7-related nucleic acids and polypeptides useful for immunomodulation
EP1294949A4 (en) 2000-06-15 2004-08-25 Human Genome Sciences Inc HUMAN TUMORNESCROSE FACTOR DELTA AND EPSILON
KR20120053525A (ko) 2000-06-16 2012-05-25 캠브리지 안티바디 테크놀로지 리미티드 면역특이적으로 ＢＬｙＳ에 결합하는 항체
WO2002032400A1 (en) * 2000-10-16 2002-04-25 Neopharm, Inc. Liposomal formulation of mitoxantrone
AU1994402A (en) 2000-11-28 2002-06-11 Mediummune Inc Methods of administering/dosing anti-rsv antibodies for prophylaxis and treatment
JP2004536027A (ja) 2000-12-01 2004-12-02 ジョーンズ・ホプキンス・ユニーバーシティー グリコシル化／ガラクトシル化ペプチドの接合体、二官能性リンカー、およびヌクレオチドのモノマー／ポリマー、および関連する組成物および使用方法
AU2002248184C1 (en) 2000-12-12 2018-01-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
EP1683865A3 (en) 2001-02-02 2006-10-25 Eli Lilly &amp; Company Mammalian proteins and in particular CD200
WO2002069904A2 (en) * 2001-03-02 2002-09-12 Medimmune, Inc. Cd2 antagonists for treatment of autoimmune or inflammatory disease
EP1385864B1 (en) 2001-04-13 2010-06-09 Human Genome Sciences, Inc. Anti-VEGF-2 antibodies
US20030003048A1 (en) * 2001-04-26 2003-01-02 Chun Li Diagnostic imaging compositions, their methods of synthesis and use
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
EP1392359B2 (en) 2001-05-11 2013-03-13 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Specific binding proteins and uses thereof
ES2437992T3 (es) 2001-05-25 2014-01-15 Human Genome Sciences, Inc. Anticuerpos que se unen inmunoespecíficamente a los receptores de TRAIL
MXPA03011094A (es) * 2001-05-31 2004-12-06 Medarex Inc Citotoxinas, profarmacos, ligadores, y estabilizadores utiles para ello.
US6867189B2 (en) * 2001-07-26 2005-03-15 Genset S.A. Use of adipsin/complement factor D in the treatment of metabolic related disorders
RU2196604C1 (ru) * 2001-12-21 2003-01-20 Северин Евгений Сергеевич Полипептид, являющийся аналогом рецепторсвязывающего фрагмента эпидермального фактора роста с 21-й по 31-ю аминокислоту, его конъюгат с доксорубицином и фармацевтическая композиция на его основе
US7261875B2 (en) 2001-12-21 2007-08-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Dendritic poly (amino acid) carriers and methods of use
JP2005523688A (ja) * 2002-01-18 2005-08-11 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー タンパク質チロシンキナーゼおよび／またはタンパク質チロシンキナーゼ経路と相互作用する化合物の活性を予測するためのポリヌクレオチドおよびポリペプチドの同定
US8877901B2 (en) * 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8435529B2 (en) 2002-06-14 2013-05-07 Immunomedics, Inc. Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy
US7591994B2 (en) 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US9770517B2 (en) 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
US8361464B2 (en) 2002-03-01 2013-01-29 Immunomedics, Inc. Anthracycline-Antibody Conjugates for Cancer Therapy
US6949347B2 (en) * 2002-03-05 2005-09-27 Aclara Biosciences, Inc. Multiplex analysis using membrane-bound sensitizers
EP1497445A2 (en) * 2002-04-01 2005-01-19 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that specifically bind to gmad
AU2003226065B2 (en) 2002-04-12 2009-02-26 Ludwig Institute For Cancer Research, Ltd Recombinant anti-interleukin-9 antibodies
WO2004014292A2 (en) 2002-05-10 2004-02-19 Purdue Research Foundation EphA2 AGONISTIC MONOCLONAL ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
US20040229380A1 (en) * 2002-05-21 2004-11-18 Po-Ying Chan-Hui ErbB heterodimers as biomarkers
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
US7425618B2 (en) 2002-06-14 2008-09-16 Medimmune, Inc. Stabilized anti-respiratory syncytial virus (RSV) antibody formulations
PL374875A1 (en) * 2002-07-25 2005-11-14 Aclara Biosciences, Inc. Detecting receptor oligomerization
AU2003249050A1 (en) * 2002-07-26 2004-02-16 Monogram Biosciences, Inc. Lipophilic electrophoretic probes
DK2357006T3 (en) 2002-07-31 2015-12-21 Seattle Genetics Inc Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
AU2003262650B2 (en) 2002-08-14 2009-10-29 Macrogenics, Inc. FcgammaRIIB-specific antibodies and methods of use thereof
JP4596916B2 (ja) * 2002-09-05 2010-12-15 メディミューン，エルエルシー Ｃｄ２拮抗薬を投与することによりｔ細胞悪性腫瘍を予防または治療する方法
ES2641525T3 (es) 2002-10-16 2017-11-10 Purdue Pharma L.P. Anticuerpos que se unen a CA 125/0722P asociado a células y métodos de uso de los mismos
US20040091850A1 (en) * 2002-11-08 2004-05-13 Travis Boone Single cell analysis of membrane molecules
EP1572242B1 (en) * 2002-12-13 2014-04-16 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
US8420086B2 (en) 2002-12-13 2013-04-16 Immunomedics, Inc. Camptothecin conjugates of anti-CD22 antibodies for treatment of B cell diseases
AU2004206250B8 (en) * 2003-01-21 2009-09-17 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotide encoding a novel acyl coenzyme a, monoacylglycerol acyltransferase-3 (MGAT3), and uses thereof
EP2289559B1 (en) 2003-02-20 2014-02-12 Seattle Genetics, Inc. Anit-CD70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
WO2004091510A2 (en) 2003-04-11 2004-10-28 Medimmune, Inc. Recombinant il-9 antibodies and uses thereof
US7402398B2 (en) * 2003-07-17 2008-07-22 Monogram Biosciences, Inc. Measuring receptor homodimerization
US20060228350A1 (en) * 2003-08-18 2006-10-12 Medimmune, Inc. Framework-shuffling of antibodies
CA2536238C (en) 2003-08-18 2015-04-07 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
WO2005045058A2 (en) * 2003-10-27 2005-05-19 Monogram Biosciences, Inc. Detecting human anti-therapeutic antibodies
NZ583292A (en) 2003-11-06 2012-03-30 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
US7371381B2 (en) * 2003-12-12 2008-05-13 Amgen Inc. Anti-galanin antibodies and uses thereof
GB0401008D0 (en) * 2004-01-17 2004-02-18 Univ Manchester Drug delivery system
US20050175619A1 (en) * 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
EP1786463A4 (en) * 2004-03-26 2009-05-20 Human Genome Sciences Inc ANTIBODY AGAINST NOGO RECEPTOR
US7691962B2 (en) * 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
NZ550934A (en) * 2004-05-19 2010-05-28 Medarex Inc Chemical linkers and conjugates thereof
US7541330B2 (en) * 2004-06-15 2009-06-02 Kosan Biosciences Incorporated Conjugates with reduced adverse systemic effects
EP3073267A1 (en) 2004-09-21 2016-09-28 Medimmune, Inc. Antibodies against and methods for producing vaccines for respiratory syncytial virus
CA2585717A1 (en) 2004-10-27 2006-05-04 Medimmune Inc. Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens
US7939267B2 (en) * 2004-11-04 2011-05-10 Laboratory Corporation Of America Holdings Detection of activation of endothelial cells as surrogate marker for angiogenesis
AU2005322410B2 (en) 2004-11-30 2011-11-10 Amgen Fremont Inc. Antibodies directed to GPNMB and uses thereof
HRP20120709T1 (hr) * 2005-02-18 2012-10-31 Medarex, Inc. Humano monoklonsko protutijelo za prostata-specifiäśni membranski antigen (psma)
US9707302B2 (en) 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
US10058621B2 (en) 2015-06-25 2018-08-28 Immunomedics, Inc. Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers
EP1869192B1 (en) 2005-03-18 2016-01-20 MedImmune, LLC Framework-shuffling of antibodies
EP1864129B1 (en) * 2005-03-30 2010-08-04 Saladax Biomedical Inc. Doxorubicin immunoassay
US7714016B2 (en) * 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
JP5065253B2 (ja) 2005-05-06 2012-10-31 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド Ｉｌ−３１モノクローナル抗体とその使用法
AU2006261920A1 (en) 2005-06-23 2007-01-04 Medimmune, Llc Antibody formulations having optimized aggregation and fragmentation profiles
WO2007008604A2 (en) * 2005-07-08 2007-01-18 Bristol-Myers Squibb Company Single nucleotide polymorphisms associated with dose-dependent edema and methods of use thereof
US20070202512A1 (en) * 2005-08-19 2007-08-30 Bristol-Myers Squibb Company Human single nucleotide polymorphisms associated with dose-dependent weight gain and methods of use thereof
CA2623652C (en) * 2005-09-26 2013-11-26 Medarex, Inc. Antibody-drug conjugates and methods of use
AU2006305842B2 (en) 2005-10-26 2011-11-03 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Methods and compounds for preparing CC-1065 analogs
CA2628238A1 (en) 2005-11-07 2007-05-18 The Scripps Research Institute Compositions and methods for controlling tissue factor signaling specificity
CA2627190A1 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
US8575319B2 (en) * 2006-03-10 2013-11-05 The Regents Of The University Of California Cleavable vaccine compositions and uses thereof and methods of making and using the same
AU2007244683A1 (en) 2006-04-27 2007-11-08 Pikamab, Inc. Methods and compositions for antibody therapy
LT2029173T (lt) 2006-06-26 2016-11-10 Macrogenics, Inc. Fc riib specifiniai antikūnai ir jų panaudojimo būdai
US7572618B2 (en) 2006-06-30 2009-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotides encoding novel PCSK9 variants
JP5209625B2 (ja) 2006-08-28 2013-06-12 協和発酵キリン株式会社 アンタゴニストのヒトｌｉｇｈｔ特異的ヒトモノクローナル抗体
CN103044550A (zh) 2006-09-01 2013-04-17 津莫吉尼蒂克斯公司 Il-31单克隆抗体的可变区序列和使用方法
WO2008048545A2 (en) 2006-10-16 2008-04-24 Medimmune, Llc. Molecules with reduced half-lives, compositions and uses thereof
EP2099823B2 (en) 2006-12-01 2022-02-09 Seagen Inc. Variant target binding agents and uses thereof
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
US9090693B2 (en) * 2007-01-25 2015-07-28 Dana-Farber Cancer Institute Use of anti-EGFR antibodies in treatment of EGFR mutant mediated disease
CN101616911A (zh) 2007-02-21 2009-12-30 梅达莱克斯公司 具有单个氨基酸的化学连接物及其偶联物
CN101688229B (zh) * 2007-03-15 2013-06-12 路德维格癌症研究所 包含egfr抗体和src抑制剂的组合物及其在制备用于治疗哺乳动物癌症的药物中的用途
JP5779350B2 (ja) 2007-03-27 2015-09-16 シー レーン バイオテクノロジーズ， エルエルシー 抗体代替軽鎖配列を含む構築物およびライブラリー
BRPI0809674A2 (pt) 2007-03-30 2014-10-07 Medimmune Llc Formulação aquosa estéril, estável, forma de dosagem unitária farmacêutica, recipiente selado, kit, método para prevenir, controlar, tratar ou melhorar uma doença ou distúrbio inflamatório, composição, processo para a preparação de uma composição, e, método para estabilizar um anticorpo 13h5
JP5791895B2 (ja) 2007-05-04 2015-10-07 テクノファージ， インベスティガサン エ デセンボルビメント エム ビオテクノロジア，エスエー 遺伝子操作されたウサギ抗体可変ドメイン及びその使用
CA2685222C (en) 2007-05-14 2017-12-19 Medimmune, Llc Methods of reducing eosinophil levels
WO2008138646A1 (en) * 2007-05-16 2008-11-20 Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh Low-viscous anthracycline formulation
US9845355B2 (en) 2007-07-16 2017-12-19 Genentech, Inc. Humanized anti-CD79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
RU2511410C3 (ru) 2007-07-16 2021-06-15 Дженентек, Инк. АНТИ-CD79b АНТИТЕЛА И ИММУНОКОНЪЮГАТЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
ES2609915T3 (es) 2007-08-14 2017-04-25 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Anticuerpo monoclonal 175 direccionado al receptor de EGF y derivados y usos del mismo
ES2908934T3 (es) 2007-10-04 2022-05-04 Zymogenetics Inc ZB7H6 miembro de la familia B7 y composiciones y métodos relacionados
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
EP2215120A2 (en) 2007-12-07 2010-08-11 ZymoGenetics, Inc. Humanized antibody molecules specific for il-31
WO2009086197A1 (en) * 2007-12-20 2009-07-09 Monogram Biosciences, Inc. Her-2 diagnostic methods
US20110033378A1 (en) 2008-01-18 2011-02-10 Medlmmune, Llc. Cysteine Engineered Antibodies For Site-Specific Conjugation
CA2713504A1 (en) 2008-01-31 2009-08-13 Genentech, Inc. Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use
PY09026846A (es) 2008-08-05 2015-09-01 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos que se dirigen a la proteína de complemento c5
US8470542B2 (en) 2008-12-01 2013-06-25 Laboratory Corporation Of America Holdings Methods and assays for measuring p95 and/or p95 complexes in a sample and antibodies specific for p95
US20120295259A1 (en) 2011-05-19 2012-11-22 Laboratory Corporation Of America Holdings Methods for Determining the Likelihood of Survival and for Predicting Likelihood of Metastasis in Cancer Patients
CA2749846C (en) 2009-01-15 2018-08-07 Laboratory Corporation Of America Holdings Methods of determining patient response by measurement of her-3
WO2010087927A2 (en) 2009-02-02 2010-08-05 Medimmune, Llc Antibodies against and methods for producing vaccines for respiratory syncytial virus
WO2010093993A2 (en) 2009-02-12 2010-08-19 Human Genome Sciences, Inc. Use of b lymphocyte stimulator protein antagonists to promote transplantation tolerance
PT3903829T (pt) 2009-02-13 2023-06-02 Immunomedics Inc Imunoconjugados com uma ligação intracelular clivável
EP2430047B1 (en) 2009-05-13 2018-03-28 i2 Pharmaceuticals, Inc. Neutralizing molecules to influenza viruses
US20120134984A1 (en) 2009-06-01 2012-05-31 Olga Lubman Molecules with extended half-lives and uses thereof
WO2011005481A1 (en) 2009-06-22 2011-01-13 Medimmune, Llc ENGINEERED Fc REGIONS FOR SITE-SPECIFIC CONJUGATION
AU2009350151B2 (en) 2009-07-20 2015-07-16 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-CTLA4 antibody with diverse therapeutic regimens for the synergistic treatment of proliferative diseases
EP2464657B1 (en) 2009-08-10 2015-04-01 MorphoSys AG Novel screening strategies for the identification of antibodies or fragments thereof which bind an antigen that has an enzymatic activity
JP5883384B2 (ja) 2009-08-13 2016-03-15 ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティー 免疫機能を調節する方法
US8568719B2 (en) 2009-08-13 2013-10-29 Crucell Holland B.V. Antibodies against human respiratory syncytial virus (RSV) and methods of use
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
US20110189183A1 (en) 2009-09-18 2011-08-04 Robert Anthony Williamson Antibodies against candida, collections thereof and methods of use
US20110076232A1 (en) * 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
US8785600B2 (en) 2009-10-23 2014-07-22 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Anti-GCC antibody molecules and related compositions and methods
DK2510011T3 (en) 2009-12-09 2014-12-01 Inst Nat Santé Et De La Rech Médicale MONOCLONAL ANTIBODIES BINDING B7H6 AND APPLICATIONS THEREOF
MX2012008884A (es) 2010-02-08 2012-08-31 Agensys Inc Conjugados de anticuerpo y farmaco (adc) que se unen a proteinas 161p2f10b.
EP4450523A3 (en) 2010-04-02 2025-03-12 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
WO2011138392A1 (en) 2010-05-06 2011-11-10 Novartis Ag Compositions and methods of use for therapeutic low density lipoprotein -related protein 6 (lrp6) antibodies
MA34287B1 (fr) 2010-05-06 2013-06-01 Novartis Ag Compositions et méthodes d'utilisation d'anticorps multivalents thérapeutiques de faible densité de la protéine apparentée à la lipoprotéine 6 (lrp6)
JP5744196B2 (ja) 2010-07-09 2015-07-08 クルセル ホランド ベー ヴェー 抗ヒト呼吸器多核体ウイルス（ｒｓｖ）抗体および使用の方法
KR20230156435A (ko) 2010-07-09 2023-11-14 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 인자 iｘ 폴리펩티드 및 이들의 사용 방법
US8871744B2 (en) 2010-07-21 2014-10-28 B & G Partyers, LLC Compounds and methods for selectively targeting tumor-associated mucins
US8637641B2 (en) 2010-07-29 2014-01-28 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
WO2012019061A2 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stem Centrx, Inc. Novel effectors and methods of use
AU2011290672B2 (en) 2010-08-20 2015-07-09 Novartis Ag Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (HER3)
SG10201506782XA (en) 2010-08-27 2015-10-29 Stem Centrx Inc Notum protein modulators and methods of use
WO2012031273A2 (en) 2010-09-03 2012-03-08 Stem Centrx, Inc. Novel modulators and methods of use
US8637642B2 (en) 2010-09-29 2014-01-28 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugates (ADC) that bind to 191P4D12 proteins
US9228023B2 (en) 2010-10-01 2016-01-05 Oxford Biotherapeutics Ltd. Anti-ROR1 antibodies and methods of use for treatment of cancer
CA2815266C (en) 2010-11-05 2023-09-05 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
US20130245233A1 (en) 2010-11-24 2013-09-19 Ming Lei Multispecific Molecules
BR112013013781A2 (pt) 2010-12-06 2016-09-13 Seattle Genetics Inc anticorpos humanizados para liv-1 e uso dos mesmos para tratar câncer
SG10201601792UA (en) 2010-12-08 2016-04-28 Stemcentrx Inc Novel modulators and methods of use
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
AR085091A1 (es) 2011-01-26 2013-09-11 Kolltan Pharmaceuticals Inc Anticuerpos anti-kit y sus usos
SA112330278B1 (ar) 2011-02-18 2015-10-09 ستيم سينتركس، انك. مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام
FI3415531T3 (fi) 2011-05-27 2023-09-07 Glaxo Group Ltd Bcma:aa (cd269/tnfrsf17) sitovia proteiineja
WO2012170740A2 (en) 2011-06-07 2012-12-13 University Of Hawaii Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma
WO2012170742A2 (en) 2011-06-07 2012-12-13 University Of Hawaii Treatment and prevention of cancer with hmgb1 antagonists
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
US10300140B2 (en) 2011-07-28 2019-05-28 I2 Pharmaceuticals, Inc. Sur-binding proteins against ERBB3
WO2013022855A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
UY34317A (es) 2011-09-12 2013-02-28 Genzyme Corp Anticuerpo antireceptor de célula T (alfa)/ß
CA2849705A1 (en) 2011-09-23 2013-03-28 Technophage, Investigacao E Desenvolvimento Em Biotecnologia, Sa Modified albumin-binding domains and uses thereof to improve pharmacokinetics
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
DK2766392T3 (da) 2011-10-10 2019-10-07 Xencor Inc Fremgangsmåde til oprensning af antistoffer
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
CN103071159B (zh) * 2011-10-25 2014-10-15 天津药物研究院 一种阿霉素-多肽复合物、药物组合物的制备方法和应用
AU2012332590B2 (en) 2011-11-01 2016-10-20 Bionomics, Inc. Anti-GPR49 antibodies
WO2013067060A1 (en) 2011-11-01 2013-05-10 Bionomics, Inc. Anti-gpr49 antibodies
ES2697674T3 (es) 2011-11-01 2019-01-25 Bionomics Inc Procedimientos para bloquear el crecimiento de células madre cancerosas
JP2014533247A (ja) 2011-11-01 2014-12-11 バイオノミクス インコーポレイテッド 抗体および癌を治療する方法
CN109897103B (zh) 2011-11-04 2024-05-17 酵活英属哥伦比亚有限公司 在Fc结构域中具有突变的稳定异源二聚的抗体设计
WO2013067355A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Novartis Ag Low density lipoprotein-related protein 6 (lrp6) - half life extender constructs
WO2013081993A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Eli Lilly And Company Anti-glucagon antibodies and uses thereof
US9192663B2 (en) 2011-12-05 2015-11-24 Novartis Ag Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (HER3)
CA2857601A1 (en) 2011-12-05 2013-06-13 Novartis Ag Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (her3) directed to domain ii of her3
SG10201703249PA (en) 2011-12-21 2017-05-30 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting factor p
EP2793940B1 (en) 2011-12-22 2018-11-14 i2 Pharmaceuticals, Inc. Surrogate binding proteins
CA3111357A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
WO2013109994A1 (en) 2012-01-20 2013-07-25 Sea Lane Biotechnologies, Llc Surrobody cojugates
CA2865404C (en) 2012-02-24 2019-08-27 Stem Centrx, Inc. Dll3-binding antibodies and drug conjugates thereof to treat cancer
US9676850B2 (en) 2012-02-24 2017-06-13 Abbvie Stemcentrx Llc Anti SEZ6 antibodies and methods of use
CN104302408B (zh) 2012-02-27 2016-12-14 阿穆尼克斯运营公司 Xten缀合组合物和制造其的方法
US9156915B2 (en) 2012-04-26 2015-10-13 Thomas Jefferson University Anti-GCC antibody molecules
WO2013166594A1 (en) 2012-05-10 2013-11-14 Zymeworks Inc. Heteromultimer constructs of immunoglobulin heavy chains with mutations in the fc domain
WO2013173337A2 (en) 2012-05-15 2013-11-21 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
CN112587658A (zh) 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
EP3381943B1 (en) 2012-07-25 2022-03-16 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-kit antibodies and uses thereof
US9382329B2 (en) 2012-08-14 2016-07-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells
UA118251C2 (uk) 2012-08-23 2018-12-26 Ейдженсіс, Інк. Кон'югат антитіло-лікарський засіб (adc), який зв'язується з білком 158p1d7
US9790268B2 (en) 2012-09-12 2017-10-17 Genzyme Corporation Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function
WO2014053479A1 (en) 2012-10-02 2014-04-10 Roche Diagnostics Gmbh Methods of specifically releasing a sub-group of objects
WO2014059028A1 (en) 2012-10-09 2014-04-17 Igenica, Inc. Anti-c16orf54 antibodies and methods of use thereof
CN105849086B (zh) 2012-11-24 2018-07-31 杭州多禧生物科技有限公司 亲水性链接体及其在药物分子和细胞结合分子共轭反应上的应用
WO2014084859A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Novartis Ag Molecules and methods for modulating tmem16a activities
SI2928921T1 (sl) 2012-12-05 2021-05-31 Novartis Ag Sestavki in postopki za protitelesa, ki ciljajo epo
US9492566B2 (en) 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US10413539B2 (en) 2012-12-13 2019-09-17 Immunomedics, Inc. Therapy for metastatic urothelial cancer with the antibody-drug conjugate, sacituzumab govitecan (IMMU-132)
US10137196B2 (en) 2012-12-13 2018-11-27 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US20240139324A1 (en) 2012-12-13 2024-05-02 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and sn-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US10744129B2 (en) 2012-12-13 2020-08-18 Immunomedics, Inc. Therapy of small-cell lung cancer (SCLC) with a topoisomerase-I inhibiting antibody-drug conjugate (ADC) targeting Trop-2
ES2819573T3 (es) 2012-12-13 2021-04-16 Immunomedics Inc Método para producir inmunoconjugados de anticuerpo-SN-38 con un enlazador CL2A
US9931417B2 (en) 2012-12-13 2018-04-03 Immunomedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
US12310958B2 (en) 2012-12-13 2025-05-27 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
CA3177936A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and sn-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US10206918B2 (en) 2012-12-13 2019-02-19 Immunomedics, Inc. Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers
TW201427989A (zh) 2012-12-18 2014-07-16 Novartis Ag 長效性蛋白質之組合物及方法
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
LT2943511T (lt) 2013-01-14 2019-11-11 Xencor Inc Nauji heterodimeriniai baltymai
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP2945969A1 (en) 2013-01-15 2015-11-25 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
JP2016513098A (ja) 2013-02-07 2016-05-12 イミューノメディクス、インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ， Ｉｎｃ． 癌の標的治療用抗体と抱合した極めて強力なプロドラック形態の２−ピロリノドキソルビシン（ｐ２ｐｄｏｘ）
MX2015010682A (es) 2013-02-22 2016-05-31 Stemcentrx Inc Nuevos conjugados de anticuerpos y usos de los mismos.
EP3424956A1 (en) * 2013-03-11 2019-01-09 Genzyme Corporation Hyperglycosylated binding polypeptides
ES2812208T3 (es) 2013-03-14 2021-03-16 Bristol Myers Squibb Co Combinación de un agonista de DR5 y un antagonista de anti-PD-1 y métodos de uso
WO2014159239A2 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Novartis Ag Antibodies against notch 3
US10201614B2 (en) 2013-03-15 2019-02-12 Zymeworks Inc. Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP3936521B1 (en) 2013-03-15 2026-02-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10544187B2 (en) 2013-03-15 2020-01-28 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
AR095527A1 (es) 2013-03-15 2015-10-21 Biogen Idec Inc Formulaciones de polipéptido fc-factor ix
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
EP2981828A1 (en) 2013-04-05 2016-02-10 Laboratory Corporation of America Holdings Systems and methods for facilitating diagnosis, prognosis and treatment of cancer based on detection of her3 activation
WO2014197849A2 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof
US9562101B2 (en) 2013-06-21 2017-02-07 Novartis Ag Lectin-like oxidized LDL receptor 1 antibodies and methods of use
AR096601A1 (es) 2013-06-21 2016-01-20 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
US11253606B2 (en) 2013-07-23 2022-02-22 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
EP3027220A1 (en) 2013-08-01 2016-06-08 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to cd37 proteins
HRP20211129T1 (hr) 2013-08-26 2021-10-15 Biontech Research And Development, Inc. Nukleinske kiseline koje kodiraju humana antitijela na sialyl-lewis a
JP2016531915A (ja) 2013-08-28 2016-10-13 ステムセントリックス， インコーポレイテッド 部位特異的抗体コンジュゲーション方法および組成物
EP3038634A4 (en) 2013-08-28 2017-10-11 AbbVie Stemcentrx LLC Novel sez6 modulators and methods of use
CU24320B1 (es) 2013-10-11 2018-02-08 Berlin Chemie Ag Anticuerpos conjugados contra antígeno linfocitario 75 para el tratamiento del cáncer
EP3054987B1 (en) 2013-10-11 2019-10-09 The United States of America, represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Tem8 antibodies and their use
EP3057585B1 (en) 2013-10-15 2020-07-22 Seattle Genetics, Inc. Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
EP3065780A1 (en) 2013-11-04 2016-09-14 Pfizer Inc. Anti-efna4 antibody-drug conjugates
EP3066118B1 (en) 2013-11-06 2020-01-08 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Alk antibodies, conjugates, and chimeric antigen receptors, and their use
KR102306493B1 (ko) 2013-11-25 2021-09-28 씨젠 인크. 접합을 위한 ｃｈｏ 세포 배양물로부터의 항체 제조
EP3086815B1 (en) 2013-12-27 2022-02-09 Zymeworks Inc. Sulfonamide-containing linkage systems for drug conjugates
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
JP2017503803A (ja) 2014-01-10 2017-02-02 シャンハイ バーディー バイオテック インコーポレイテッド Ｅｇｆｒ発現腫瘍を処置するための化合物及び組成物
HUE050279T2 (hu) 2014-01-24 2020-11-30 Ngm Biopharmaceuticals Inc Béta-klotho 2-es doménjéhez kötõdõ antitestek és azok alkalmazási módszerei
WO2015127407A1 (en) 2014-02-21 2015-08-27 Stemcentrx, Inc. Anti-dll3 antibodies and drug conjugates for use in melanoma
DK3122757T3 (da) 2014-02-28 2023-10-09 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Ladede linkere og anvendelse deraf til konjugering
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
US9738702B2 (en) 2014-03-14 2017-08-22 Janssen Biotech, Inc. Antibodies with improved half-life in ferrets
HUE061339T2 (hu) 2014-03-19 2023-06-28 Genzyme Corp Targetáló csoportok helyspecifikus glikotechnikai átalakítása
TW202330606A (zh) 2014-03-21 2023-08-01 美商艾伯維有限公司 抗-egfr抗體及抗體藥物結合物
EP3122376A4 (en) 2014-03-27 2017-12-20 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Metabolically-activated drug conjugates to overcome resistance in cancer therapy
AU2015237184B2 (en) 2014-03-28 2020-11-26 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind to CD38 and CD3
KR102352573B1 (ko) 2014-04-04 2022-01-18 바이오노믹스 인코포레이티드 Ｌｇｒ５에 결합하는 인간화된 항체들
US10329556B2 (en) 2014-05-13 2019-06-25 Bioatla, Llc Conditionally active biological proteins
WO2015175874A2 (en) 2014-05-16 2015-11-19 Medimmune, Llc Molecules with altered neonate fc receptor binding having enhanced therapeutic and diagnostic properties
US9856324B2 (en) 2014-06-04 2018-01-02 MabVax Therapeutics, Inc. Human monoclonal antibodies to ganglioside GD2
CA2953350C (en) 2014-06-23 2019-11-26 Placon Therapeutics, Inc. Platinum compounds, compositions, and uses thereof
US20170290876A1 (en) 2014-06-25 2017-10-12 Novartis Ag Compositions and methods for long acting proteins
EP3160991A2 (en) 2014-06-25 2017-05-03 Novartis AG Compositions and methods for long acting proteins
US20170291939A1 (en) 2014-06-25 2017-10-12 Novartis Ag Antibodies specific for il-17a fused to hyaluronan binding peptide tags
SG10202102467RA (en) * 2014-07-24 2021-04-29 Genentech Inc Methods of conjugating an agent to a thiol moiety in a protein that contains at least one trisulfide bond
US20160060360A1 (en) 2014-07-24 2016-03-03 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
EP3194437B1 (en) 2014-08-07 2021-01-20 Novartis AG Angiopoietin-like 4 (angptl4) antibodies and methods of use
BR112017002173B1 (pt) 2014-08-07 2023-11-21 Novartis Ag Anticorpo isolado anti-angptl4, ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, seu uso, e composição farmacêutica
CN112546238A (zh) 2014-09-01 2021-03-26 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-pd-l1结合物
US10513699B2 (en) 2014-09-03 2019-12-24 Bioatla, Llc Discovering and producing conditionally active biologic proteins in the same eukaryotic cell production hosts
KR102609034B1 (ko) 2014-09-17 2023-12-01 자임워크스 비씨 인코포레이티드 세포독성 및 항유사분열성 화합물, 그리고 이를 이용하는 방법
WO2016049214A1 (en) 2014-09-23 2016-03-31 Genentech, Inc. METHOD OF USING ANTI-CD79b IMMUNOCONJUGATES
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
WO2016057769A2 (en) 2014-10-09 2016-04-14 Genzyme Corporation Glycoengineered antibody drug conjugates
RU2730668C2 (ru) 2014-11-19 2020-08-24 Аксон Ньюросайенс Се Гуманизированные тау-антитела при болезни альцгеймера
KR102689285B1 (ko) 2014-11-26 2024-07-31 젠코어 인코포레이티드 Ｃｄ3 및 종양 항원과 결합하는 이종이량체 항체
MA41019A (fr) 2014-11-26 2021-05-05 Xencor Inc Anticorps hétérodimériques se liant aux antigènes cd3 et cd38
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
DK3229838T3 (da) 2014-12-11 2020-10-19 Pf Medicament Anti-C10orf54-antistoffer og anvendelser deraf
UY36449A (es) 2014-12-19 2016-07-29 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos a bmp6
US10428155B2 (en) 2014-12-22 2019-10-01 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
KR20210096326A (ko) 2015-02-24 2021-08-04 바이오아트라, 인코퍼레이티드 조건부 활성 생체 단백질
FI3265123T3 (fi) 2015-03-03 2023-01-31 Vasta-aineita, käyttöjä & menetelmiä
WO2016141230A1 (en) 2015-03-05 2016-09-09 Sirenas Llc Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
CA2978631C (en) 2015-03-09 2023-06-27 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to flt3 proteins
WO2016172427A1 (en) 2015-04-22 2016-10-27 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating trop-2-positive cancer cells
EP3091033A1 (en) 2015-05-06 2016-11-09 Gamamabs Pharma Anti-human-her3 antibodies and uses thereof
WO2016179518A2 (en) 2015-05-06 2016-11-10 Janssen Biotech, Inc. Prostate specific membrane antigen (psma) bispecific binding agents and uses thereof
BR112017021484A2 (pt) 2015-06-05 2018-07-03 Novartis Ag anticorpos de direcionamento à proteína morfogenética óssea 9 (bmp9) e métodos para os mesmos
ES2961346T3 (es) 2015-06-12 2024-03-11 Lentigen Tech Inc Procedimiento para tratar cáncer con células T modificadas genéticamente
CN108026123B (zh) 2015-06-15 2021-02-05 杭州多禧生物科技有限公司 用于偶联的亲水链接体
US10195175B2 (en) 2015-06-25 2019-02-05 Immunomedics, Inc. Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors
UY36751A (es) 2015-06-26 2017-01-31 Novartis Ag Anticuerpos de factor xi y métodos de uso
PL3316909T3 (pl) 2015-06-30 2023-11-20 Seagen Inc. Przeciwciała anty-ntb-a i powiązane kompozycje i sposoby
SI3316885T1 (sl) 2015-07-01 2021-09-30 Immunomedics, Inc. Imunokonjugati protitelo-SN-38 z linkerjem CL2A
FI3319936T3 (fi) 2015-07-12 2026-03-12 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Silloituslinkkereitä soluun sitoutuvien molekyylien konjugoimiseksi
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
CA2994516C (en) 2015-08-03 2025-12-09 Novartis Ag Methods of treating fgf21-associated disorders
US10000561B2 (en) 2015-09-09 2018-06-19 Novartis Ag Thymic stromal lymphopoietin (TSLP)-binding molecules and methods of using the molecules
CA2996635A1 (en) 2015-09-09 2017-03-16 Novartis Ag Thymic stromal lymphopoietin (tslp)-binding molecules and methods of using the molecules
US10799580B2 (en) 2015-09-09 2020-10-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Expression vector delivery system and use thereof for inducing an immune response
US10428145B2 (en) 2015-09-29 2019-10-01 Celgene Corporation PD-1 binding proteins and methods of use thereof
AU2016335750B2 (en) 2015-10-07 2023-05-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services IL-7R-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
CN108779162B (zh) 2015-10-09 2021-12-07 美天施生物科技有限公司 嵌合抗原受体和使用方法
WO2017066714A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Compugen Ltd. Anti-vsig1 antibodies and drug conjugates
KR102714709B1 (ko) 2015-11-02 2024-10-07 바이오아트라, 인코퍼레이티드 조건부 활성 폴리펩티드
CA3006477A1 (en) 2015-12-04 2017-06-08 Novartis Ag Antibody cytokine engrafted compositions and methods of use for immunoregulation
WO2017100372A1 (en) 2015-12-07 2017-06-15 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and psma
US20170198040A1 (en) 2015-12-18 2017-07-13 Novartis Ag ANTIBODIES TARGETING CD32b AND METHODS OF USE THEREOF
MA55746A (fr) 2016-01-21 2022-03-02 Novartis Ag Molécules multispécifiques ciblant cll-1
US20170224837A1 (en) 2016-02-10 2017-08-10 Immunomedics, Inc. Combination of abcg2 inhibitors with sacituzumab govitecan (immu-132) overcomes resistance to sn-38 in trop-2 expressing cancers
US11191821B2 (en) 2016-02-27 2021-12-07 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Peptide vaccine formulations and use thereof for inducing an immune response
DK3423105T3 (da) 2016-03-02 2021-07-26 Eisai R&D Man Co Ltd Antistof-lægemiddelkonjugater på basis af eribulin og fremgangsmåder til anvendelse heraf
CA3016914C (en) 2016-03-15 2019-08-27 Laboratory Corporation Of America Holdings Methods of assessing protein interactions between cells
CA3016485A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Seattle Genetics, Inc. Combination therapy using a liv1-adc and a chemotherapeutic
AU2017239038B2 (en) 2016-03-22 2024-06-27 Bionomics Inc Administration of an anti-LGR5 monoclonal antibody
JP7073266B2 (ja) 2016-03-25 2022-05-23 シージェン インコーポレイテッド Ｐｅｇ化薬物リンカー及びその中間体を調製するためのプロセス
EP3454864A4 (en) 2016-04-21 2021-01-13 Abbvie Stemcentrx LLC Novel anti-bmpr1b antibodies and methods of use
WO2017189483A1 (en) 2016-04-25 2017-11-02 The Johns Hopkins University Znt8 assays for drug development and pharmaceutical compositions
JP7138567B2 (ja) 2016-04-27 2022-09-16 ノバルティス アーゲー 成長分化因子１５に対する抗体およびそれらの使用
RU2725292C2 (ru) 2016-04-27 2020-06-30 Иммьюномедикс, Инк. Эффективность конъюгатов антитела против trop-2 с лекарственным средством sn-38 для терапии рецидивирующих/рефрактерных к ингибиторам контрольной точки опухолей
TW201802121A (zh) 2016-05-25 2018-01-16 諾華公司 抗因子XI/XIa抗體之逆轉結合劑及其用途
CN109563167A (zh) 2016-06-08 2019-04-02 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
MX2018015285A (es) 2016-06-08 2019-09-18 Abbvie Inc Anticuerpos anti-b7-h3 y conjugados de anticuerpo y farmaco.
MX2018015274A (es) 2016-06-08 2019-10-07 Abbvie Inc Anticuerpos anti-cd98 y conjugados de anticuerpo y farmaco.
PL3458479T4 (pl) 2016-06-08 2021-07-26 Abbvie Inc. Przeciwciała anty-b7-h3 i koniugaty przeciwciało-lek
BR112018075644A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. anticorpos anti-cd98 e conjugados de anticorpo e fármaco
KR102838691B1 (ko) 2016-06-14 2025-07-25 젠코어 인코포레이티드 이중특이적 체크포인트 억제제 항체
CA3027651A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Novartis Ag Methods for treating disease using inhibitors of bone morphogenetic protein 6 (bmp6)
CN116063545A (zh) 2016-06-28 2023-05-05 Xencor股份有限公司 结合生长抑素受体2的异源二聚抗体
US11560356B2 (en) 2016-06-29 2023-01-24 The Regents Of The University Of California Compounds and compositions for the treatment of cancer
WO2018005697A1 (en) 2016-06-29 2018-01-04 The Regents Of The University Of California Antibodies specific to sonic hedgehog and method of use thereof
WO2018009507A1 (en) 2016-07-06 2018-01-11 Bristol-Myers Squibb Company Combination of tim-4 antagonist and methods of use
TW202500191A (zh) 2016-08-09 2025-01-01 美商思進公司 具有改善之生理化學性質之具自我穩定連接子之藥物結合物
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
WO2018045325A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with duocars
US11254705B2 (en) 2016-09-02 2022-02-22 Sirenas Llc Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
KR102257154B1 (ko) 2016-09-19 2021-05-28 셀진 코포레이션 Pd-1 결합 단백질을 사용하는 면역 질환의 치료 방법
EP3515943A4 (en) 2016-09-19 2020-05-06 Celgene Corporation METHODS OF TREATING VITILIGO WITH PD-1 BINDING PROTEINS
US10550185B2 (en) 2016-10-14 2020-02-04 Xencor, Inc. Bispecific heterodimeric fusion proteins containing IL-15-IL-15Rα Fc-fusion proteins and PD-1 antibody fragments
EP3534947A1 (en) 2016-11-03 2019-09-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
KR20220147721A (ko) 2016-11-14 2022-11-03 항저우 디에이씨 바이오테크 씨오, 엘티디 결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용
JP7350313B2 (ja) 2016-12-16 2023-09-26 ブルーフィン バイオメディシン， インコーポレイテッド 抗ｃｕｂドメイン含有タンパク質１（ｃｄｃｐ１）抗体、抗体薬物コンジュゲート、およびその使用方法
WO2018116255A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Novartis Ag Factor xi antibodies and methods of use
KR102918597B1 (ko) 2016-12-23 2026-01-28 노파르티스 아게 항-인자 XI/XIa 항체를 사용한 치료 방법
ES2936803T3 (es) 2017-01-09 2023-03-22 Lentigen Tech Inc Composiciones y métodos para tratar el cáncer con inmunoterapia antimesotelina
US11377492B2 (en) 2017-01-24 2022-07-05 Innate Pharma NKp46 binding agents
WO2018141959A1 (en) 2017-02-06 2018-08-09 Innate Pharma Immunomodulatory antibody drug conjugates binding to a human mica polypeptide
DK3580237T3 (da) 2017-02-08 2025-06-30 Novartis Ag Fgf21-mimetiske antistoffer og anvendelser deraf
EP3589654A1 (en) 2017-03-02 2020-01-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to nectin-4 and uses thereof
GB201703876D0 (en) 2017-03-10 2017-04-26 Berlin-Chemie Ag Pharmaceutical combinations
US10426797B2 (en) 2017-03-24 2019-10-01 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD33 immunotherapy
WO2018175994A1 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Seattle Genetics, Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
RU2758234C2 (ru) 2017-03-27 2021-10-26 Иммьюномедикс, Инк. ЛЕЧЕНИЕ ТРИЖДЫ НЕГАТИВНОГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩЕГОСЯ ЭКСПРЕССИЕЙ Trop-2, С ПОМОЩЬЮ САЦИТУЗУМАБА ГОВИТЕКАНА И ИНГИБИТОРА Rad51
CN110352201A (zh) 2017-04-03 2019-10-18 免疫医疗公司 用于癌症疗法的抗体药物缀合物的皮下施用
US12370255B2 (en) 2017-04-04 2025-07-29 Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. Peptide-based vaccines, methods of manufacturing, and uses thereof for inducing an immune response
WO2018187791A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Juno Therapeutics, Inc Engineered cells expressing prostate-specific membrane antigen (psma) or a modified form thereof and related methods
WO2018195302A1 (en) 2017-04-19 2018-10-25 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-vtcn1 antibodies and antibody drug conjugates
JP7222347B2 (ja) 2017-04-28 2023-02-15 味の素株式会社 可溶性タンパク質に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩
CN111107868A (zh) 2017-05-24 2020-05-05 诺华股份有限公司 抗体细胞因子移植蛋白及使用方法
JOP20190271A1 (ar) 2017-05-24 2019-11-21 Novartis Ag بروتينات مطعّمة بسيتوكين- الجسم المضاد وطرق الاستخدام للاضطرابات المتعلقة بالمناعة
WO2018215937A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Novartis Ag Interleukin-7 antibody cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
JP7791642B2 (ja) 2017-05-24 2025-12-24 ノバルティス アーゲー 抗体－サイトカイングラフト化タンパク質及び癌の治療における使用方法
JP7657440B2 (ja) 2017-06-12 2025-04-07 ブルーフィン バイオメディシン， インコーポレイテッド 抗－ｉｌ１ｒａｐ抗体および抗体薬物コンジュゲート
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
JP2020529832A (ja) 2017-06-30 2020-10-15 ゼンコア インコーポレイテッド ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαおよび抗原結合ドメインを含む標的化ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質
EP3652540A4 (en) 2017-07-12 2021-04-07 The Johns Hopkins University PROTEOLIPOSOME-BASED ZNT8 SELF-ANTIGEN FOR DIAGNOSIS OF TYPE 1 DIABETES
CA3071624A1 (en) 2017-07-31 2019-02-07 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19/cd20 immunotherapy
WO2019030574A1 (en) 2017-08-10 2019-02-14 Cerenis Therapeutics Holding Cargomers
EP4279086A3 (en) 2017-09-15 2024-02-28 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19 immunotherapy
EP3694889A1 (en) 2017-10-13 2020-08-19 Boehringer Ingelheim International GmbH Human antibodies to thomsen-nouvelle (tn) antigen
EP4279584A3 (en) 2017-10-16 2024-03-06 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd22 immunotherapy
WO2019081455A1 (en) 2017-10-23 2019-05-02 Mablink Bioscience LIGAND-MEDICINAL CONJUGATE COMPRISING A UNIQUE MOLECULAR WEIGHT POLYSARCOSIN
WO2019081983A1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Novartis Ag CD32B TARGETING ANTIBODIES AND METHODS OF USE
EP3703711A4 (en) 2017-11-03 2021-01-13 Lentigen Technology, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF CANCER WITH ANTI-MMR1 IMMUNOTHERAPY
US11312770B2 (en) 2017-11-08 2022-04-26 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-PD-1 sequences
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
CN119857155A (zh) 2017-11-29 2025-04-22 海德堡医药研究有限责任公司 用于耗尽cd5+细胞的组合物和方法
MX2020005640A (es) 2017-12-01 2020-08-20 Seattle Genetics Inc Anticuerpos anti-liv1 humanizados para el tratamiento de cancer de mama.
MX2020005463A (es) 2017-12-01 2020-09-07 Seattle Genetics Inc Anticuerpos anti grupo de diferenciacion 47 (anti-cd47) y sus usos para tratar cancer.
IL275426B2 (en) 2017-12-19 2025-03-01 Xencor Inc Engineered il-2 fc fusion proteins
CN111954677A (zh) 2017-12-20 2020-11-17 莱蒂恩技术公司 用于用免疫治疗来治疗hiv/aids的组合物和方法
WO2019129054A1 (zh) 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 三链抗体、其制备方法及其用途
TWI860665B (zh) 2018-02-01 2024-11-01 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 全人源的抗ｂ細胞成熟抗原（ｂｃｍａ）單鏈抗體及其應用
CA3093422A1 (en) 2018-03-19 2019-09-26 Bioventures, Llc Periostin antibodies and methods of using the same
US20210024628A1 (en) 2018-03-22 2021-01-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for modulating innate lymphoid cell activity, antibody drug conjugates and uses in therapy
MX2020009842A (es) 2018-03-23 2020-10-15 Seattle Genetics Inc Uso de conjugados de anticuerpo-farmaco que comprenden agentes interruptores de tubulina para tratar tumor solido.
WO2019184909A1 (zh) 2018-03-27 2019-10-03 信达生物制药(苏州)有限公司 新型抗体分子、其制备方法及其用途
EP3774887A2 (en) 2018-03-28 2021-02-17 Axon Neuroscience SE Antibody-based methods of detecting and treating alzheimer's disease
EP3773911A2 (en) 2018-04-04 2021-02-17 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
US11505595B2 (en) 2018-04-18 2022-11-22 Xencor, Inc. TIM-3 targeted heterodimeric fusion proteins containing IL-15/IL-15RA Fc-fusion proteins and TIM-3 antigen binding domains
WO2019204665A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Xencor, Inc. Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
CN112566672A (zh) 2018-05-22 2021-03-26 阿维迪科技公司 制造基于肽的疫苗的改进方法
TWI869346B (zh) 2018-05-30 2025-01-11 瑞士商諾華公司 Ｅｎｔｐｄ２抗體、組合療法、及使用該等抗體和組合療法之方法
UY38251A (es) 2018-06-01 2019-12-31 Novartis Ag Moléculas de unión contra bcma y usos de las mismas
CN119405832A (zh) 2018-06-01 2025-02-11 卫材R&D管理有限公司 剪接调节抗体-药物缀合物及其使用方法
KR102921757B1 (ko) 2018-06-14 2026-02-03 아지노모토 가부시키가이샤 항체에 대한 친화성 물질, 절단성 부분 및 반응성기를 갖는 화합물 또는 이의 염
CN120665147A (zh) 2018-06-14 2025-09-19 味之素株式会社 具有针对抗体的亲和性物质和生物正交性官能团的化合物或其盐
GB201809746D0 (en) 2018-06-14 2018-08-01 Berlin Chemie Ag Pharmaceutical combinations
CR20210047A (es) 2018-07-02 2021-05-21 Amgen Inc Proteína de unión al antígeno anti-steap1
IL280199B2 (en) 2018-07-20 2025-08-01 Pf Medicament Receptor for vista
WO2020023561A1 (en) 2018-07-23 2020-01-30 Magenta Therapeutics, Inc. Use of anti-cd5 antibody drug conjugate (adc) in allogeneic cell therapy
US12103968B2 (en) 2018-08-16 2024-10-01 The Johns Hopkins University Antibodies to human ZnT8
CA3113058A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd123 immunotherapy
CN113286607B (zh) 2018-09-26 2024-07-12 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd19/cd22免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
TW202028237A (zh) 2018-09-27 2020-08-01 美商西建公司 SIRPα結合蛋白及其使用方法
US20210393523A1 (en) 2018-10-03 2021-12-23 Avldea Technologies, Inc. Aromatic ring substituted amphiphilic polymers as drug delivery systems
JP7612571B2 (ja) 2018-10-03 2025-01-14 ゼンコア インコーポレイテッド Ｉｌ－１２ヘテロ二量体ｆｃ－融合タンパク質
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
CN113227124B (zh) 2018-10-31 2025-04-08 味之素株式会社 具有针对抗体的亲和性物质、切割性部分及反应性基团的化合物或其盐
JP7583720B2 (ja) 2018-11-30 2024-11-14 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド 抗ｃｄ３８免疫療法によりがんを処置するための組成物および方法
SG11202105689XA (en) 2018-12-03 2021-06-29 Agensys Inc Pharmaceutical compositions comprising anti-191p4d12 antibody drug conjugates and methods of use thereof
CA3114931A1 (en) 2018-12-13 2020-06-18 Eisai R&D Management Co., Ltd. Herboxidiene antibody-drug conjugates and methods of use
WO2020163225A1 (en) 2019-02-05 2020-08-13 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd228 antibodies and antibody-drug conjugates
BR112021016955A2 (pt) 2019-03-01 2021-11-23 Xencor Inc Composição, composição de ácido nucleico, composição de vetor de expressão, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de produção de um domínio de ligação de membro de família 3 de pirofosfatase/fosfodiesterase de ectonucleotídeo e de tratamento de um câncer, anticorpo anti-enpp3, e, anticorpo heterodimérico
CN113924103B (zh) 2019-03-06 2025-02-14 莱蒂恩技术公司 用于用自驱动的嵌合抗原受体来治疗癌症的组合物和方法
FI3941946T3 (fi) 2019-03-20 2025-03-28 Univ California Klaudiini-6-vasta-aineita ja klaudiini-6-vasta-ainelääkekonjugaatteja
JP7682797B2 (ja) 2019-03-20 2025-05-26 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア クローディン６二重特異性抗体
WO2020198731A2 (en) 2019-03-28 2020-10-01 Danisco Us Inc Engineered antibodies
JP7575401B2 (ja) 2019-04-03 2024-10-29 ジェンザイム・コーポレーション 断片化が低減した抗アルファベータｔｃｒ結合ポリペプチド
KR20220025705A (ko) 2019-04-17 2022-03-03 아비디아 테크놀로지스, 인크. 리간드 디스플레이 및/또는 약물 전달을 위한 성상 중합체의 조성물 및 제조 방법
SG11202110287QA (en) 2019-04-24 2021-10-28 Heidelberg Pharma Res Gmbh Amatoxin antibody-drug conjugates and uses thereof
TWI905099B (zh) 2019-05-21 2025-11-21 瑞士商諾華公司 Cd19 結合分子及其用途
EP3972993A1 (en) 2019-05-21 2022-03-30 Novartis AG Variant cd58 domains and uses thereof
US11052112B2 (en) 2019-05-30 2021-07-06 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-BCMA immunotherapy
TW202112354A (zh) 2019-06-05 2021-04-01 美商西雅圖遺傳學公司 遮蔽抗體調配物
AR119097A1 (es) 2019-06-05 2021-11-24 Seattle Genetics Inc Métodos de purificación de anticuerpos enmascarados
MX2022000174A (es) 2019-07-02 2022-05-20 Us Health Anticuerpos monoclonales que se enlazan a egfrviii y sus usos.
CA3147750A1 (en) 2019-07-22 2021-01-28 Seagen Inc. Humanized anti-liv1 antibodies for the treatment of cancer
WO2021053559A1 (en) 2019-09-18 2021-03-25 Novartis Ag Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
US12366570B2 (en) 2019-10-01 2025-07-22 The Johns Hopkins University Cell-based ZNT8 assay
KR20220075351A (ko) 2019-10-04 2022-06-08 씨젠 인크. 항-pd-l1 항체 및 항체-약물 접합체
EP4017542A1 (en) 2019-10-04 2022-06-29 Tae Life Sciences Antibody compositions comprising fc mutations and site-specific conjugation properties
EP3812008A1 (en) 2019-10-23 2021-04-28 Gamamabs Pharma Amh-competitive antagonist antibody
US12577324B2 (en) 2019-12-09 2026-03-17 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Antibodies having specificity to HER4 and uses thereof
EP4087657A1 (en) 2020-01-08 2022-11-16 Synthis Therapeutics, Inc. Alk5 inhibitor conjugates and uses thereof
US20230203191A1 (en) 2020-03-30 2023-06-29 Danisco Us Inc Engineered antibodies
US20230167193A1 (en) 2020-05-01 2023-06-01 Novartis Ag Immunoglobulin variants
EP4143236A1 (en) 2020-05-01 2023-03-08 Novartis AG Engineered immunoglobulins
WO2021224186A1 (en) 2020-05-04 2021-11-11 Institut Curie New pyridine derivatives as radiosensitizers
EP4149558A1 (en) 2020-05-12 2023-03-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New method to treat cutaneous t-cell lymphomas and tfh derived lymphomas
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
AR122546A1 (es) 2020-06-05 2022-09-21 Eisai R&D Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo anti bcma-fármaco y métodos de uso
EP4163294A4 (en) 2020-06-09 2024-07-24 Ajinomoto Co., Inc. MODIFIED FERRITIN AND METHOD FOR PRODUCING SAME
US11497770B2 (en) 2020-06-22 2022-11-15 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with TSLPR-CD19 or TSLPR-CD22 immunotherapy
EP4188960A4 (en) 2020-08-03 2024-09-11 Janssen Biotech, Inc. MATERIALS AND METHODS FOR MULTIDIRECTIONAL BIOTRANSPORTATION IN VIROTHERAPEUTIC PRODUCTS
IL300176A (en) 2020-08-04 2023-03-01 Seagen Inc Anti-CD228 antibodies and antibody-drug conjugates
EP3970752A1 (en) 2020-09-17 2022-03-23 Merck Patent GmbH Molecules with solubility tag and related methods
US20230381112A1 (en) 2020-09-22 2023-11-30 Vaccitech North America, Inc. Compositions and Methods of Manufacturing Amphiphilic Block Copolymers that Form Nanoparticles in Situ
IL301404A (en) 2020-09-28 2023-05-01 Seagen Inc Humanized anti-liv1 antibodies for the treatment of cancer
WO2022069942A2 (en) 2020-10-01 2022-04-07 Abionyx Pharma Sa Methods for treating eye diseases using lipid binding protein-based complexes
US20230390406A1 (en) 2020-10-19 2023-12-07 Vaccitech North America, Inc. Star Polymer Drug Conjugates
CA3196243A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Angela Marinetti Metallic trans-(n-heterocyclic carbene)-amine-platinum complexes and uses thereof for treating cancer
JP2023548555A (ja) 2020-11-05 2023-11-17 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド 抗ｃｄ１９／ｃｄ２２免疫療法によりがんを処置するための組成物および方法
JP2023548529A (ja) 2020-11-06 2023-11-17 ノバルティス アーゲー Ｃｄ１９結合分子及びその使用
US20250199010A1 (en) 2020-12-31 2025-06-19 Alamar Biosciences, Inc. Binder molecules with high affinity and/ or specificity and methods of making and use thereof
WO2022154127A1 (ja) 2021-01-18 2022-07-21 味の素株式会社 化合物またはその塩、およびそれらにより得られる抗体
AU2022208654B2 (en) 2021-01-18 2026-01-22 Ajinomoto Co., Inc. Compound or salt thereof, and antibody produced using same
UY39610A (es) 2021-01-20 2022-08-31 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
EP4294431A4 (en) 2021-02-16 2025-05-07 Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. Self-assembling nanoparticles based on amphiphilic peptides
JP2024511319A (ja) 2021-03-09 2024-03-13 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｃｌｄｎ６に結合するヘテロ二量体抗体
JP2024509274A (ja) 2021-03-10 2024-02-29 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｇｐｃ３に結合するヘテロ二量体抗体
JP7605290B2 (ja) 2021-03-11 2024-12-24 味の素株式会社 化合物またはその塩、およびそれらにより得られる抗体
WO2022189618A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Institut Curie Nitrogen-containing heterocycles as radiosensitizers
JPWO2022196675A1 (ro) 2021-03-16 2022-09-22
US12036286B2 (en) 2021-03-18 2024-07-16 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
JP2024512478A (ja) 2021-03-19 2024-03-19 ハイデルベルク ファルマ リサーチ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｂリンパ球特異的アマトキシン抗体コンジュゲート
WO2022211508A1 (ko) 2021-03-30 2022-10-06 주식회사 레고켐바이오사이언스 인간 cldn18.2에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
WO2022217022A1 (en) 2021-04-10 2022-10-13 Profoundbio Us Co. Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2022219413A1 (en) 2021-04-15 2022-10-20 Abionyx Pharma Sa Use of lipid binding protein-based complexes in organ preservation solutions
US20250066490A1 (en) 2021-04-23 2025-02-27 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
EP4370211A1 (en) 2021-07-14 2024-05-22 Seagen Inc. Antibody masking domains
EP4387666A4 (en) 2021-08-20 2025-07-16 Univ Johns Hopkins CELL SURFACE ANTIBODY FOR A PANCREATIC BETA CELL SPECIFIC BIOMARKER
WO2023049825A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Seagen Inc. Improved antibody masking domains
EP4410830A1 (en) 2021-09-30 2024-08-07 Ajinomoto Co., Inc. Conjugate of antibody and functional substance or salt thereof, and antibody derivative and compound or salts thereof to be used in producing conjugate or salt thereof
JP2024541058A (ja) 2021-11-03 2024-11-06 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ． 抗体の特異的共役
EP4433170A1 (en) 2021-11-18 2024-09-25 Oxford BioTherapeutics Ltd Pharmaceutical combinations
US20250090680A1 (en) 2021-11-19 2025-03-20 Ardeagen Corporation Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
US20250034268A1 (en) 2021-12-07 2025-01-30 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Antibody binding to bcma and use thereof
UY40097A (es) 2022-01-07 2023-07-14 Johnson & Johnson Entpr Innovation Inc Materiales y métodos de proteínas de unión a il-1b
US20230338424A1 (en) 2022-03-02 2023-10-26 Lentigen Technology, Inc. Compositions and Methods for Treating Cancer with Anti-CD123 Immunotherapy
US11590169B1 (en) 2022-03-02 2023-02-28 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD123 immunotherapy
CR20240415A (es) 2022-03-09 2024-11-07 Astrazeneca Ab MOLÉCULAS DE UNIÓN CONTRA FRa
EP4490517A1 (en) 2022-03-11 2025-01-15 Astrazeneca AB A scoring method for an anti-fr alpha antibody-drug conjugate therapy
WO2023194797A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Abionyx Pharma Sa Methods for treating eye diseases using lipid binding protein-based complexes
CN119156231A (zh) 2022-04-07 2024-12-17 海德堡医药研究有限责任公司 提高鹅膏蕈毒素-抗体缀合物的治疗指数的方法
CN120289645A (zh) 2022-04-26 2025-07-11 诺华股份有限公司 靶向il-13和il-18的多特异性抗体
EP4554619A1 (en) 2022-07-15 2025-05-21 Danisco US Inc. Methods for producing monoclonal antibodies
CN119948051A (zh) 2022-07-15 2025-05-06 詹森生物科技公司 用于改善抗原结合可变区的生物工程化配对的材料和方法
AU2023314413A1 (en) 2022-07-28 2025-02-13 Lentigen Technology, Inc. Chimeric antigen receptor therapies for treating solid tumors
CA3265857A1 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Lentigen Technology, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS OF CANCER TREATMENT BY ALL-HUMAN ANTI-CD20/CD19 IMMUNOTHERAPY
WO2024052503A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof
AU2023347922A1 (en) 2022-09-21 2025-03-20 Seagen Inc. Antibodies that bind cd228
JP2026504767A (ja) 2022-10-25 2026-02-10 バリンサス バイオセラピューティクス ノース アメリカ， インコーポレイテッド 自己組織化ナノ粒子
EP4608437A2 (en) 2022-10-25 2025-09-03 Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. Combination treatment regimes for treating cancer
CN120187759A (zh) 2022-11-01 2025-06-20 海德堡医药研究有限责任公司 抗gucy2c抗体及其用途
CN120435319A (zh) 2022-11-03 2025-08-05 思进公司 抗-avb6抗体和抗体-药物缀合物及其在癌症治疗中的用途
EP4382120A1 (en) 2022-12-05 2024-06-12 Institut Regional du Cancer de Montpellier Anti-slc1a4 monoclonal antibodies and uses thereof
WO2024121632A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Crispr Therapeutics Ag Use of anti-cd117 antibody drug conjugate (adc)
WO2024130158A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles and polynucleotides encoding extended serum half-life interleukin-22 for the treatment of metabolic disease
WO2024170660A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Astrazeneca Ab Combination therapies for treatment of cancer with therapeutic binding molecules
CN120936385A (zh) 2023-03-13 2025-11-11 海德堡医药研究有限责任公司 用于在癌症治疗中使用的皮下施用的抗体-药物缀合物
CN118725113A (zh) 2023-03-28 2024-10-01 三优生物医药(上海)有限公司 一种靶向cd3的抗体或其抗原结合片段及其用途
WO2024210154A1 (ja) 2023-04-04 2024-10-10 味の素株式会社 抗体および機能性物質のコンジュゲート、抗体誘導体ならびに化合物、またはそれらの塩
EP4692104A1 (en) 2023-04-05 2026-02-11 Ajinomoto Co., Inc. Conjugate of antibody and functional substance or salt of said conjugate, and antibody intermediate having thiol group or salt of said antibody intermediate
AU2024269443A1 (en) 2023-05-09 2025-12-11 Shanghai Henlius Biologics Co., Ltd. Anti-epidermal growth factor receptor (egfr) antibody-drug conjugate and use thereof
KR20260007619A (ko) 2023-05-09 2026-01-14 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항-pdl1 항체-약물 접합체 및 응용
WO2024236156A1 (en) 2023-05-17 2024-11-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-cathepsin-d antibodies
WO2024258967A1 (en) 2023-06-13 2024-12-19 Synthis Therapeutics, Inc. Anti-cd5 antibodies and their uses
KR20260026054A (ko) 2023-06-13 2026-02-25 애드센트릭스 테라퓨틱스 잉크. 넥틴-4 단백질에 결합하는 항체 및 항체 약물 접합체 (adc)와 관련된 방법 및 조성물
WO2025014896A1 (en) 2023-07-07 2025-01-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Humanized 40h3 antibody
AU2024300060A1 (en) 2023-07-25 2026-03-12 Merck Patent Gmbh Iduronidase-cleavable compounds
WO2025027529A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Advesya Anti-il-1rap antibody drug conjugates and methods of use thereof
EP4509142A1 (en) 2023-08-16 2025-02-19 Ona Therapeutics S.L. Fgfr4 as target in cancer treatment
EP4512427A1 (en) 2023-08-25 2025-02-26 Mablink Bioscience Antibody-drug conjugates based on molecular glue degraders and uses thereof
US20250115680A1 (en) 2023-09-26 2025-04-10 Profoundbio Us Co. Ptk7 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2025104604A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Anti-respiratory syncytial virus antibodies and uses thereof
WO2025109097A2 (en) 2023-11-24 2025-05-30 Heidelberg Pharma Research Gmbh Novel nicotinamide phosphoribosyltransferase inhibitors and uses thereof
TW202530255A (zh) 2023-12-15 2025-08-01 法商亞維西亞有限公司 抗ｉｌ－１ｒａｐ結合結構域及其抗體－藥物偶聯物
TW202547866A (zh) 2024-01-10 2025-12-16 丹麥商珍美寶股份有限公司 Ｓｌｉｔｒｋ６結合劑、其共軛物及使用彼之方法
TW202545567A (zh) 2024-01-30 2025-12-01 美商思進公司 抗ｐｄ－ｌ１抗體和抗體－藥物共軛體及彼等在治療癌症的用途
US20250381289A1 (en) 2024-02-29 2025-12-18 Genmab A/S Egfr and c-met bispecific binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
US20250295801A1 (en) 2024-03-21 2025-09-25 Seagen Inc. Cd25 antibodies, antibody drug conjugates, and uses thereof
WO2025224297A1 (en) 2024-04-26 2025-10-30 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to tgfbi and uses thereof
WO2025248097A2 (en) 2024-05-31 2025-12-04 Gamamabs Pharma Humanized anti-human her3 antibodies and uses thereof
WO2025264533A1 (en) 2024-06-17 2025-12-26 Adcentrx Therapeutics Inc. Methods and compositions related to antibody drug conjugates (adcs) that bind steap-1 proteins
US20260000765A1 (en) 2024-06-27 2026-01-01 Lentigen Technology, Inc. CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR THERAPIES FOR TREATING CANCER WITH IL7Fc ARMORED CAR-T CELLS
WO2026039642A1 (en) 2024-08-16 2026-02-19 Ardeagen Corporation Anti-mesothelin antibody conjugates and methods of use thereof
WO2026042013A1 (en) 2024-08-19 2026-02-26 Institute Of Molecular And Clinical Ophthalmology Basel (Iob) Mitochondrial therapy
WO2026058155A1 (en) 2024-09-11 2026-03-19 Novartis Ag Antibodies targeting il-31
WO2026057740A1 (en) 2024-09-12 2026-03-19 Astrazeneca Ab Treatment of cancer with therapeutic binding molecules

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2566271B1 (fr) * 1984-06-20 1986-11-07 Sanofi Sa Nouveaux conjugues cytotoxiques utilisables en therapeutique et procede d'obtention
US5055561A (en) * 1985-11-19 1991-10-08 The Johns Hopkins University Protein label and drug delivery system
US4981979A (en) * 1987-09-10 1991-01-01 Neorx Corporation Immunoconjugates joined by thioether bonds having reduced toxicity and improved selectivity
US5002883A (en) * 1987-10-30 1991-03-26 Abbott Laboratories Covalent attachment of antibodies and antigens to solid phases using extended length heterobifunctional coupling agents
IL89220A (en) * 1988-02-11 1994-02-27 Bristol Myers Squibb Co Anthracycline immunoconjugates, their production and pharmaceutical compositions containing them
US5066490A (en) * 1988-06-01 1991-11-19 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health & Human Services Protein crosslinking reagents cleavable within acidified intracellular vesicles
US5024834A (en) * 1988-07-12 1991-06-18 Cetus Corporation Thioether linked immunotoxin conjugates
CA2016584C (en) * 1989-05-17 1999-06-29 Robert S. Greenfield Anthracycline conjugates having a novel linker and methods for their production
US5208323A (en) * 1989-08-10 1993-05-04 Universite Laval Coupling of an anti-tumor to an antibody using glutaraldehyde preactivated anti-tumor agent
AU656518B2 (en) * 1990-02-20 1995-02-09 Coulter Corporation Improved antibody-enzyme direct conjugates and method of making same
US5137877B1 (en) * 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
US5196522A (en) * 1990-11-01 1993-03-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Anthracycline analogues bearing latent alkylating substituents

Also Published As

Publication number Publication date
CN1207946A (zh) 1999-02-17
BG61899B1 (bg) 1998-09-30
US5622929A (en) 1997-04-22
US5708146A (en) 1998-01-13
PL297514A1 (en) 1993-08-23
FI930240A7 (fi) 1993-07-24
MX9300298A (es) 1993-12-01
HU9300156D0 (en) 1993-04-28
PL172827B1 (pl) 1997-12-31
DE69333800D1 (de) 2005-06-09
PL172715B1 (pl) 1997-11-28
CN1040540C (zh) 1998-11-04
CA2087286A1 (en) 1993-07-24
ATE294592T1 (de) 2005-05-15
OA09859A (en) 1994-08-15
EP0554708B9 (en) 2005-07-27
CZ5793A3 (en) 1994-01-19
CZ297409B6 (cs) 2006-12-13
JPH0625012A (ja) 1994-02-01
DK0554708T3 (da) 2005-07-18
PL172718B1 (pl) 1997-11-28
NO930189L (no) 1993-07-26
MY110526A (en) 1998-07-31
FI930240A0 (fi) 1993-01-21
TW213921B (ro) 1993-10-01
CN1155620C (zh) 2004-06-30
AU3188193A (en) 1993-07-29
PL172837B1 (pl) 1997-12-31
CN1180711A (zh) 1998-05-06
DE69333800T2 (de) 2006-03-02
NO930189D0 (no) 1993-01-21
ES2240959T3 (es) 2005-10-16
BG97335A (bg) 1993-12-24
UY23541A1 (es) 1993-06-28
HUT68345A (en) 1995-06-28
EG20406A (en) 1999-02-28
US5606017A (en) 1997-02-25
IL104475A0 (en) 1993-05-13
EP0554708B1 (en) 2005-05-04
NZ245725A (en) 1995-08-28
PL172824B1 (pl) 1997-12-31
EP0554708A1 (en) 1993-08-11
PL172828B1 (pl) 1997-12-31
CN1074684A (zh) 1993-07-28
CA2087286C (en) 2004-04-06
ZA93444B (en) 1993-07-21
AU666903B2 (en) 1996-02-29
FI930240L (fi) 1993-07-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RO112618B1 (ro) Medicamente conjugate continand tioeteri, procedeu de preparare a acestora, compus intermediar si compozitie farmaceutica pe baza de acesti compusi
US6512101B1 (en) Branched hydrazone linkers
AU687795B2 (en) Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
JP3234980B2 (ja) 新規な二官能性化合物を含むコンジュゲートの製法
RU2753416C2 (ru) Новые конъюгаты аманитина
EP0328147B1 (en) Anthracycline immunoconjugates having a novel linker and methods for their production
EP0398305B1 (en) Anthracycline conjugates having a novel linker and methods for their production
HK1005018B (en) Anthracycline conjugates having a novel linker and methods for their production
US20250186606A1 (en) Modular linker compound for target-binding drug conjugates
CA2239183C (en) Branched hydrazone linkers