CN117479834A

CN117479834A - 基于脂质结合蛋白的复合物在器官保存溶液中的用途

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Publication number: CN117479834A
Application number: CN202280028908.6A
Authority: CN
Inventors: C·图宾; R·巴巴拉斯; L·杰苏阿尔多; R·弗兰津; A·斯塔西
Original assignee: Abionix Pharmaceuticals
Current assignee: Abionix Pharmaceuticals
Priority date: 2021-04-15
Filing date: 2022-04-14
Publication date: 2024-01-30
Also published as: WO2022219413A1; JP2024514154A; CA3216226A1; AU2022258815A1; EP4322746A1; KR20240018430A; MX2023012223A; IL307670A

Abstract

本申请涉及用于器官保存溶液的基于脂质结合蛋白的复合物、包含基于脂质结合蛋白的复合物的器官保存溶液、用于制备器官保存溶液的试剂盒、使用器官保存溶液保存器官的方法、由此保存的器官、包含器官保存溶液的用于保存器官的系统，以及移植通过器官保存方法获得的器官的方法。

Description

基于脂质结合蛋白的复合物在器官保存溶液中的用途

1.相关申请的交叉引用

本申请要求于2021年4月15日提交的美国临时申请号63/175,330的优先权，其内容通过引用整体并入本文。

2.序列表

本申请含有序列表，其已经以ASCII格式以电子方式提交，并且在此通过引用将其整体并入。所述ASCII副本于2022年4月11日创建，命名为CRN-043WO_SL.txt，并且大小为4,326字节。

3.背景技术

肾移植是终末期肾病(ESRD)患者的救命治疗方法。终末期肾病约占那些患有慢性肾病患者的全球人口的10％，并且预计到2030年将增加到764万人(Liyanage et al.,2015,Lancet,385(9981):1975–82；Levin et al.,2017,Lancet,390(10105):1888–917)。然而，尽管肾移植可以极大地影响生活质量并节省昂贵的透析费用，但仍然存在未解决的问题。首先，可用的供体肾脏数量不足，并且每天有超过20人在等待移植器官时死亡。这种器官短缺迫使移植专业人员接受来自心源性死亡或年龄较大(年龄≥60岁)供体的“边缘”器官，即DCD(循环死亡后捐献)和ECD(扩展标准供体)供体。然而，使用这些肾脏与较差的生存率、排斥反应发生率和移植物功能延迟(DGF)相关。其次，无论使用的供体，储存、运输以及移植手术本身，不可避免的缺血/再灌注损伤(IRI)风险都会严重影响器官质量。除了肾脏之外，其他器官例如心脏和肺也容易发生IRI(Fernandez et al.,2020,Int.J.Mol.Sci.21:8549)。

已经开发了器官保存溶液，以减少在储存和运输期间对供体器官造成的损伤，并改善器官移植后移植物的存活率。与静态冷藏(CS)相比，使用这些用机械灌注的器官保存溶液已经证明在早期同种异体移植功能障碍方面具有优异的效果。最近的研究表明，离体常温机械灌注(NMP)导致更低的DGF率、改善的肾脏代谢以及降低的肾脏IRI(Kataria etal.,2019,Curr Opin Organ Transplant.24(4):378-384)。当与CS相比时，NMP作为保存方法似乎更优越(Hosgood et al.,2018,Br J Surg 105(4),388–394)，因此，通过改善来自扩展标准供体(ECD)以及来自循环死亡后捐献(DCD)的移植物的移植结果，有可能增加供体库。通过NMP保存的肾移植物在热缺血后保持了较少的缺血再灌注损伤(Kaths et al.,2017,Transplantation 101(4),754–763)，即使与立即移植的非保存肾脏相比也是如此。除了允许保留功能外，NMP还可用于使器官保持在受控状态，以允许密切观察和活力评估，从而实现成功移植(Hamar et al.,2018,Transplantation 102(8),1262–1270)。尽管已经开发出各种器官保存溶液来减少移植前的供体器官损伤，但移植前的器官损伤仍然是一个问题。

因此，迫切需要开发新的器官保存方法。

4.发明概述

本公开在各个方面提供了用于器官保存溶液的基于脂质结合蛋白的复合物、包含基于脂质结合蛋白的复合物的器官保存溶液、包含基于脂质结合蛋白的复合物和器官保存溶液的一种或多种组分的试剂盒、用于制备包含基于脂质结合蛋白的复合物的器官保存溶液的方法、包含本公开的器官保存溶液和灌注机和/或器官的系统、用于离体器官保存的方法、通过本公开的器官保存方法获得的器官，以及将本公开的器官移植到有需要的受试者体内的方法。本文描述的器官保存溶液可用于保存器官和组织(例如角膜)。因此，在各个方面，本公开提供了包含本公开的器官保存溶液和灌注机和/或组织的系统、用于离体组织保存的方法、通过本公开的组织保存方法获得的组织、以及将本公开的组织移植到有需要的受试者体内的方法。

多项研究表明，高密度脂蛋白(HDL)颗粒(胆固醇从外周组织到肝脏的中枢转运蛋白)参与重要的细胞保护功能。HDL复合物发挥抗炎、抗动脉粥样硬化和抗纤维化功能、防止LDL被ROS氧化并具有血管保护作用、并抑制凝血和血小板聚集。HDL颗粒可以携带抗氧化酶(例如血清对氧磷酯酶/芳基酯酶1(PON1)、卵磷脂-胆固醇酰基转移酶LCAT和脂蛋白相关磷脂酶A2 LpPLA2)，并且能够防止脂质过氧化(Rysz et al.,2020,Int J Mol Sci.21(2):601)。

在肾IRI大鼠模型中的HDL或ApoA-I施用可显著改善肾功能，减少肾和肾小管功能障碍，并减少在再灌注期间渗入肾组织的多形核白细胞(PMN)的数量，这反映在I/R引起的肾髓过氧化物酶活性增加的减弱(Kaths et al.,2017,Transplantation 101(4),754–763；Rysz et al.,2020,Int J Mol Sci.21(2):601)。此外，HDL在再灌注期间显著降低粘附分子、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和P-选择素的表达(Thiemermann et al.,2003,J AmSoc Nephrol.14(7):1833-1843；Lee et al.,2005,Atherosclerosis.183(2):251-258)。特别地，与IRI对照相比，ApoA-I的施用显著降低了血清肌酐水平、血清TNF-α和IL-1β水平以及组织髓过氧化物酶(MPO)活性。此外，ApoA-I治疗抑制内皮上的细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和P-选择素的表达，从而减少中性粒细胞粘附和随后的组织损伤(Shi.,2008,JBiomed Sci.15(5):577-583)。

考虑到HDL的保护功能及其减少全身炎症和氧化应激、保护肾功能并抵抗内皮功能障碍和肾小管损伤的能力，在不受理论约束的情况下，认为基于脂质结合蛋白的复合物，例如HDL模拟药物CER-001可以有利地在器官保存溶液中离体使用。再次在不受理论约束的情况下，认为基于脂质结合蛋白的复合物例如CER-001的离体使用可以通过减少控制潜在有害的促炎单核细胞募集到移植物中的粘附分子来保护移植物内皮细胞并改善肾功能，从而导致DGF和供体肾脏的急性排斥的风险降低。进一步认为，基于脂质结合蛋白的复合物(例如HDL模拟药物CER-001)可以在储存和运输期间类似地保护其他器官，例如心脏和肺。

因此，一方面，本公开提供了用于器官保存溶液的基于脂质结合蛋白的复合物(例如，CER-001)。基于脂质结合蛋白的复合物的示例性特征描述于下文第6.1节和具体的实施方案1至21和24至43中。

在另一个方面，本公开提供了包含基于脂质结合蛋白的复合物(例如，CER-001)的器官保存溶液。器官保存溶液的示例性特征在下文第6.2节和具体的实施方案22至63中描述。

另一方面，本公开提供了包含基于脂质结合蛋白的复合物和器官保存溶液的一种或多种组分的试剂盒。试剂盒的示例性特征在下文第6.3节和具体的实施方案64至78中描述。

在某些方面，本公开提供了用于制备器官保存溶液的方法以及由此制备的器官保存溶液。用于制备本公开的器官保存溶液的方法和通过这样的方法制备的器官保存溶液的示例性特征在下文第6.2节和具体的实施方案79至95中描述。

在某些方面，本公开提供了包含器官保存溶液、灌注机和/或器官的系统。在某些方面，本公开提供了包含器官保存溶液和组织的系统。本公开的系统的示例性特征在第6.3节和下文的具体的实施方案96至112中描述。

在某些方面，本公开提供了用于离体器官保存的方法和由此获得的器官。在某些方面，本公开提供了用于离体组织保存的方法和由此获得的组织。离体器官和组织保存方法以及由此获得的器官和组织的示例性特征在下文第6.4节和具体的实施方案113至154和156至179中描述。

在进一步的方面，本公开提供了将器官移植到有需要的受试者体内的方法。在进一步的方面，本公开提供了将组织移植至有需要的受试者的方法。本公开的移植方法的示例性特征在下文第6.4节和编号的实施方案155和180-186中描述。

5.附图简述

图1A-1B：用溶液(圆圈)或用CER-001补充的/>溶液(方形)HMP灌注四小时的猪肾的血管阻力(图1A)和流量(图1B)(实施例4)。每组n＝5。

图2A-2E：通过高碘酸-希夫(PAS)染色进行的组织学分析(图2A)；肾小管损伤评分(图2B)；灌注液中MCP-1的水平(图2C)；灌注液中TNF-α的水平(图2D)；以及来自用溶液(对照)或用CER-001补充的/>溶液(CER-001)HMP灌注的猪肾的灌注液中天冬氨酸转氨酶的水平(图2E)(实施例4)。在图2C-2E中，对照数据用圆圈表示；CER-001数据用方块显示。

图3A-3C：用溶液(对照)或用CER-001补充的/>溶液(CER-001)灌注或保持在静态冷藏(SCS)中的肾脏中的CCL2(MCP-1)(图3A)、IL-6(图3B)和ET-1(图3C)的基因表达(实施例4)。结果为平均值±SD，n＝5。在图3B-3C中*p<0.05，SCS数据用三角形示出，对照数据用圆形示出，并且CER-001数据用正方形示出。

图4：FACS分析显示在内皮细胞中的Ser 1177-eNOS磷酸化(实施例5)。

图5A-5E：用常规保存溶液(对照)或用CER-001补充的常规保存溶液NMP灌注的肾脏的肾灌注参数(实施例6)。图5A-5C：血管阻力；图5D：流量；图5E：尿排出量。在图5A-5E中，对照数据用圆圈示出并且CER-001数据用正方形示出。

6.发明详述

本公开在各个方面提供了用于器官保存溶液的基于脂质结合蛋白的复合物、包含基于脂质结合蛋白的复合物的器官保存溶液、包含基于脂质结合蛋白的复合物和器官保存溶液的一种或多种组分的试剂盒、用于制备包含基于脂质结合蛋白的复合物的器官保存溶液的方法、包含本发明的器官保存溶液和灌注机和/或器官的系统、用于离体器官保存的方法、通过本公开的方法获得的器官，以及将本公开的器官移植到有需要的受试者体内的方法。本公开的器官保存溶液可用于保存器官和组织(例如眼睛(例如，角膜或巩膜)、皮肤、脂肪、肌肉、骨、软骨、胎儿胸腺和神经组织)。因此，本公开进一步提供了包含本公开的器官保存溶液和组织的系统、用于离体组织保存的方法、通过本公开的方法获得的组织、以及将本公开的组织移植至有需要的受试者的方法。

基于脂质结合蛋白的复合物的示例性特征在第6.1节中描述。器官保存溶液及其生产过程的示例性特征在第6.2节中描述。试剂盒和系统的示例性特征在第6.3节中描述。离体器官和组织保存方法、由此获得的器官和组织以及移植方法的示例性特征在第6.4节中描述。

6.1.基于脂质结合蛋白的复合物

6.1.1.基于HDL和HDL模拟物的复合物

一方面，基于脂质结合蛋白的复合物包括基于HDL或HDL模拟物的复合物。例如，复合物可包括脂蛋白复合物，如在美国专利号8,206,750、PCT公开WO 2012/109162、PCT公开WO 2015/173633 A2(例如CER-001)或US2004/0229794 A1中描述的，它们中的每一个均通过引用整体并入本文。术语“脂蛋白”和“载脂蛋白”在本文中可互换使用，并且除非上下文另有要求，否则术语“脂蛋白”包含脂蛋白模拟物。术语“脂质结合蛋白”和“脂质结合多肽”在本文中也可以互换使用，并且除非上下文另有要求，否则这些术语并不意味着特定长度的氨基酸序列。

脂蛋白复合物可包含蛋白质级分(例如载脂蛋白级分)和脂质级分(例如磷脂级分)。蛋白质级分包含一种或多种脂质结合蛋白分子，例如载脂蛋白、肽或载脂蛋白肽类似物或模拟物，例如一种或多种脂质结合蛋白分子在第6.1.4节中描述。

脂质级分通常包括一种或多种磷脂，其可以是中性的、带负电的、带正电的或其组合。可以包含在脂质级分中的示例性磷脂和其他两亲性分子在第6.1.5节中描述。

在某些实施方案中，脂质级分含有至少一种中性磷脂(例如，鞘磷脂(SM))和任选的一种或多种带负电的磷脂。在包含中性磷脂和带负电磷脂的脂蛋白复合物中，中性磷脂和带负电磷脂可具有脂肪酸链，其具有相同或不同的碳数以及相同或不同的饱和度。在一些情况下，中性和带负电的磷脂将具有相同的酰基尾部，例如C16:0或棕榈酰基、酰基链。在具体的实施方案中，特别是使用蛋SM(egg SM)作为中性脂质的那些实施方案中，载脂蛋白级分：脂质级分的重量比范围为从约1:2.7至约1:3(例如1:2.7)。

任何在生理pH至少带有部分负电荷的磷脂均可用作带负电荷的磷脂。非限制性实例包括磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酸的带负电荷形式，例如盐。在一个具体的实施方案中，带负电的磷脂是1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-[磷酰-外消旋-(1-甘油)]、或DPPG、磷脂酰甘油。优选的盐包括钾盐和钠盐。

在一些实施方案中，在本公开的组合物和方法中使用的脂蛋白复合物是如美国专利号8,206,750或WO 2012/109162(及其美国对应物US 2012/0232005)中描述的脂蛋白复合物，其每个的全部内容通过引用并入本文。在具体的实施方案中，脂蛋白复合物的蛋白质组分如WO 2012/109162(和US2012/0232005)的第6.1节且优选地第6.1.1节中所述，脂质组分如WO 2012/109162(和US2012/0232005)的第6.2节中所述，其可以任选地以WO 2012/109162(和US2012/0232005)的第6.3节中描述的量络合在一起。这些部分的每个内容均通过引用并入本文。在某些方面，本公开的脂蛋白复合物在复合物群体中是至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同质的，如WO 2012/109162(和US2012/0232005)的第6.4节中所述，其内容通过引用并入本文。

在具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物包含2-4个ApoA-I等价物、2分子带电磷脂、50-80分子卵磷脂和20-50分子SM。

在另一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物包含2-4个ApoA-I等价物、2分子带电磷脂、50分子卵磷脂和50分子SM。

在又一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物包含2-4个ApoA-I等价物、2分子带电磷脂、80分子卵磷脂和20分子SM。

在又一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物包含2-4个ApoA-I等价物、2分子带电磷脂、70分子卵磷脂和30分子SM。

在又一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物包含2-4个ApoA-I等价物、2分子带电磷脂、60分子卵磷脂和40分子SM。

在具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物基本上由2-4个ApoA-I等价物、2分子带电磷脂、50-80分子卵磷脂和20-50分子SM组成。

在另一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物基本上由2-4个ApoA-I等价物、2分子带电磷脂、50分子卵磷脂和50分子SM组成。

在又一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物基本上由2-4个ApoA-I等价物、2分子带电磷脂、80分子卵磷脂和20分子SM组成。

在又一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物基本上由2-4个ApoA-I等价物、2分子带电磷脂、70分子卵磷脂和30分子SM组成。

在又一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物基本上由2-4个ApoA-I等价物、2分子带电磷脂、60分子卵磷脂和40分子SM组成。

在具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物包含脂质组分，该脂质组分包含约90至99.8wt％的SM和约0.2至10wt％的带负电的磷脂，例如约0.2-1wt％、0.2-2wt％、0.2-3wt％、0.2-4wt％、0.2-5wt％、0.2-6wt％、0.2-7wt％、0.2-8wt％、0.2-9wt％或0.2-10wt％的总的带负电荷的一种或多种磷脂。在另一个具体的实施方案中，可用于本公开的方法中的脂蛋白复合物包含约90至99.8wt％的卵磷脂和约0.2至10wt％的带负电的磷脂，例如约0.2-1wt％、0.2-2wt％、0.2-3wt％、0.2-4wt％、0.2-5wt％、0.2-6wt％、0.2-7wt％、0.2-8wt％、0.2-9wt％或0.2-10wt％的总的带负电荷的一种或多种磷脂。

在一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物包含基本上由约90至99.8wt％的SM和约0.2至10wt％的带负电的磷脂，例如，约0.2-1wt％、0.2-2wt％、0.2-3wt％、0.2-4wt％、0.2-5wt％、0.2-6wt％、0.2-7wt％、0.2-8wt％、0.2-9wt％，或0.2-10wt％的总的带负电荷的一种或多种磷脂组成的脂质组分。在另一个具体的实施方案中，可用于本公开的方法中的脂蛋白复合物基本上由约90至99.8wt％的卵磷脂和约0.2至10wt％的带负电的磷脂，例如约0.2-1wt％、0.2-2wt％、0.2-3wt％、0.2-4wt％、0.2-5wt％、0.2-6wt％、0.2-7wt％、0.2-8wt％、0.2-9wt％或0.2-10wt％的总的带负电荷的一种或多种磷脂组成。

在又一具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物包含脂质级分，该脂质级分包含约9.8至90wt％的SM、约9.8至90wt％的卵磷脂和约0.2-10wt％的带负电的磷脂，例如约0.2-1wt％、0.2-2wt％、0.2-3wt％、0.2-4wt％、0.2-5wt％、0.2-6wt％、0.2-7wt％、0.2-8wt％、0.2-9wt％、至0.2-10wt％的总的带负电荷的一种或多种磷脂。

在另一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物包含基本上由约9.8至90wt％的SM、约9.8至90wt％的卵磷脂和约0.2-10wt％的带负电的磷脂，例如约0.2-1wt％、0.2-2wt％、0.2-3wt％、0.2-4wt％、0.2-5wt％、0.2-6wt％、0.2-7wt％％、0.2-8wt％、0.2-9wt％、至0.2-10wt％的总的带负电荷的一种或多种磷脂组成的脂质级分。

在另一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物包含ApoA-I载脂蛋白和脂质级分，其中脂质级分包含鞘磷脂和约3wt％的带负电的磷脂，其中脂质级分与ApoA-I载脂蛋白的摩尔比为约2:1至200:1，并且其中所述复合物是含有2-4个ApoA-I等价物的小或大盘状颗粒。

在另一个具体的实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的脂蛋白复合物包含ApoA-I载脂蛋白和脂质级分，其中脂质级分基本上由鞘磷脂和约3wt％的带负电的磷脂组成，其中脂质级分与ApoA-I载脂蛋白的摩尔比为约2:1至200:1，并且其中所述复合物是含有2-4个ApoA-I等价物的小或大盘状颗粒。

基于HDL或基于HDL模拟物的复合物可以包含单一类型的脂质结合蛋白，或两种或更多种不同的脂质结合蛋白的混合物，其可以源自相同或不同的物种。尽管不是必需的，但复合物优选地包含脂质结合蛋白，该脂质结合蛋白源自或在氨基酸序列上对应于所治疗的动物物种或所保存的器官物种，以避免诱导对治疗的免疫反应。因此，为了治疗人类患者和/或保存人类器官，优选地使用人类来源的脂质结合蛋白。使用肽模拟的载脂蛋白也可以减少或避免免疫反应。

在一些实施方案中，脂质组分包含两种类型的磷脂：鞘磷脂(SM)和带负电的磷脂。示例性SM和带负电荷的脂质在第6.1.5.1节中描述。

包含SM的脂质组分可以任选地包含少量的额外脂质。实际上可以使用任何类型的脂质，包括但不限于溶血磷脂、半乳糖脑苷脂、神经节苷脂、脑苷脂、甘油酯、甘油三酯和胆固醇及其衍生物。

当包含时，此类任选的脂质通常包含小于约15wt％的脂质级分，但在一些情况下可包含更多任选的脂质。在一些实施方案中，任选的脂质包括小于约10wt％、小于约5wt％、或小于约2wt％。在一些实施方案中，脂质级分不包含任选的脂质。

在具体的实施方案中，磷脂级分含有蛋SM或棕榈酰SM或植物鞘磷脂和DPPG，其重量比(SM：带负电的磷脂)范围为从90:10至99:1，更优选范围为从95:5至98:2。在一个实施方案中，重量比为97:3。

本公开的复合物的脂质组分与蛋白质组分的摩尔比可以变化，并且将取决于(以及其他因素)包含蛋白质组分的载脂蛋白的特性、包含脂质成分的脂质的特性和数量，以及复合物的所需大小。因为载脂蛋白例如ApoA-I的生物活性被认为是由包含载脂蛋白的两亲性螺旋介导的，所以使用ApoA-I蛋白等价物可以方便地表示脂质:载脂蛋白摩尔比中的载脂蛋白级分。人们普遍认为ApoA-I含有6-10个两亲性螺旋，其取决于用于计算螺旋的方法。其他载脂蛋白可以基于它们含有的两亲性螺旋的数量以ApoA-I等价物表示。例如，通常以二硫桥接二聚体形式存在的ApoA-I_M可以表示为2个ApoA-I等价物，因为每个ApoA-I_M分子含有的两亲性螺旋是ApoA-I分子的两倍。相反，含有单个两亲性螺旋的肽载脂蛋白可以表示为1/10-1/6个ApoA-I等价物，因为每个分子含有的两亲性螺旋为ApoA-I分子的1/10-1/6。一般而言，脂蛋白复合物的脂质:ApoA-I等价物摩尔比(本文定义为“Ri”)将在约105:1至110:1的范围内。在一些实施方案中，Ri为约108:1。对于磷脂，可以使用大约650-800的MW来获得重量比。

在一些实施方案中，脂质:ApoA-I等价物(“RSM”)的摩尔比范围为从约80:1至约110:1，例如约80:1至约100:1。在具体的实例中，复合物的RSM可以是约82:1。

在一些实施方案中，本公开的组合物和方法中使用的脂蛋白复合物是带负电荷的复合物，其包含优选成熟的、全长的ApoA-I的蛋白质级分和包含中性磷脂、鞘磷脂(SM)的脂质级分，和带负电的磷脂。

在具体的实施方案中，脂质组分含有SM(例如，蛋SM、棕榈酰SM、植物SM、或其组合)和带负电的磷脂(例如，DPPG)，其重量比(SM:带负电的磷脂)范围为从90:10至99:1，更优选地95:5至98:2，例如97:3。

在具体的实施方案中，蛋白质组分与脂质组分的比值可以在约1:2.7至约1:3的范围内，优选1:2.7。这对应于ApoA-I蛋白与脂质的摩尔比范围为从约1:90至1:140。在一些实施方案中，复合物中蛋白质与脂质的摩尔比为约1:90至约1:120、约1:100至约1:140、或约1:95至约1:125。

在具体的实施方案中，复合物包含CER-001、CSL-111、CSL-112、CER-522或ETC-216。在优选的实施方案中，复合物是CER-001。

在文献和以下实施例中使用的CER-001是指在WO 2012/109162的实施例4中描述的复合物。WO 2012/109162提及作为复合物的CER-001，其具有1:2.7的脂蛋白重量:总磷脂重量比，SM:DPPG重量:重量比为97:3。WO 2012/109162的实施例4也描述了其制造方法。

当在本公开的CER-001给药方案或组合物的背景下使用时，CER-001是指脂蛋白复合物，其各个成分可与WO 2012/109162的实施例4中所述的CER-001相差高达20％。在某些实施方案中，脂蛋白复合物的成分与WO2012/109162的实施例4中描述的CER-001相差高达10％。优选地，脂蛋白复合物的成分是WO 2012/109162的实施例4中描述的那些(加上/减去可接受的制造容差变化)。CER-001中的SM可以是天然的或合成的。在一些实施方案中，SM是天然SM，例如在WO 2012/109162中描述的天然SM，例如鸡蛋SM。在一些实施方案中，SM是合成SM，例如在WO 2012/109162中描述的合成SM，例如合成棕榈酰鞘磷脂，例如在WO 2012/109162中描述的。用于合成棕榈酰鞘磷脂的方法是本领域已知的，例如在WO 2014/140787中所描述的。CER-001中的脂蛋白，载脂蛋白A-I(ApoA-I)，优选地具有对应于WO 2012/109162的SEQ ID NO:1的氨基酸25至267的氨基酸序列(所述WO 2012/109162的SEQ ID NO:1在本文中公开为SEQ ID NO:2)。ApoA-I可以通过动物来源(特别是来自人类来源)纯化或重组产生。在优选的实施方案中，CER-001中的ApoA-I是重组ApoA-I。在本公开的给药方案中使用的CER-001优选是高度同质的，例如至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％同质的，如凝胶渗透色谱中的单峰所反映的。参见例如WO 2012/109162的第6.4节。

CSL-111是从与大豆磷脂酰胆碱(SBPC)复合的血浆中纯化的重组人ApoA-I(Tardif et al.,2007,JAMA 297:1675-1682)。

CSL-112是ApoA-I制剂，其从血浆中纯化并重构以形成适合静脉输注的HDL(Diditchenko et al.,2013,DOI 10.1161/ATVBAHA.113.301981)。

ETC-216(也称为MDCO-216)是去脂形式的HDL，其含有重组ApoA-I_Milano。参见Nicholls et al.,2011,Expert Opin Biol Ther.11(3):387-94.doi:10.1517/14712598.2011.557061。

在另一个实施方案中，可用于本公开的组合物和方法中的复合物是CER-522。CER-522是脂蛋白复合物，其包含三种磷脂和22个氨基酸肽的组合，CT80522：

CT80522

CER-522的磷脂组分由蛋鞘磷脂、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(二棕榈酰磷脂酰胆碱，DPPC)和1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-[磷酰-外消旋-(1-甘油)](二棕榈酰磷脂酰-甘油，DPPG)，重量比为48.5:48.5:3。CER-522复合物中肽与总磷脂的比例为1:2.5(w/w)。

在一些实施方案中，脂蛋白复合物是脱脂(delipidated)HDL。血浆中的大多数HDL富含胆固醇。HDL中的脂质可以被耗尽，例如部分和/或选择性地耗尽，例如以降低其胆固醇含量。在一些实施方案中，脱脂HDL可以类似于HDL的小α、preβ-1和其他preβ形式。在Sackset al.,2009,J Lipid Res.50(5):894–907中描述了选择性耗尽HDL的方法。

在某些实施方案中，脂蛋白复合物包含如在US2004/0229794中描述的生物活性剂递送颗粒。

生物活性剂递送颗粒可以包含脂质结合多肽(例如，如本节先前或第6.1.4节中所述的载脂蛋白)、脂质双层(例如，包含如在本节先前或第6.1.5.1节中描述的一种或多种磷脂)，和生物活性剂(例如，抗癌剂)，其中脂质双层的内部包含疏水性区域，并且其中生物活性剂与脂质双层的疏水性区域结合。在一些实施方案中，生物活性剂递送颗粒如在US2004/0229794中描述。

在一些实施方案中，生物活性剂递送颗粒不包含亲水性核心。

在一些实施方案中，生物活性剂递送颗粒是圆盘形的(例如，具有约7至约29nm的直径)。

生物活性剂递送颗粒包含形成双层的脂质，例如磷脂(例如，如本节之前或第6.1.5.1节中所述)。在一些实施方案中，生物活性剂递送颗粒包含双层形成脂质和非双层形成脂质。在一些实施方案中，生物活性剂递送颗粒的脂质双层包含磷脂。在一个实施方案中，掺入递送颗粒中的磷脂包括二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)和二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)。在一个实施方案中，脂质双层包含7:3摩尔比的DMPC和DMPG。

在一些实施方案中，脂质结合多肽是载脂蛋白(例如，如本节之前或第6.1.4节中所述)。脂质结合多肽(例如载脂蛋白分子)和脂质双层之间的主要相互作用通常是两亲性结构(例如脂质结合多肽的α-螺旋)的疏水面上的残基与颗粒周边的外表面上的脂质的脂肪酰基链之间的疏水相互作用。生物活性剂递送颗粒可包含可交换的和/或不可交换的载脂蛋白。在一个实施方案中，脂质结合多肽是ApoA-I。

在一些实施方案中，生物活性剂递送颗粒包含脂质结合多肽分子，例如载脂蛋白分子，其已被修饰以增加颗粒的稳定性。在一个实施方案中，修饰包括引入半胱氨酸残基以形成分子内和/或分子间二硫键。

在另一个实施方案中，生物活性剂递送颗粒包含嵌合脂质结合多肽分子(例如嵌合载脂蛋白分子)，其具有一个或多个结合的功能部分，例如一个或多个靶向部分和/或一个或多个具有所需生物活性的部分(例如抗微生物活性)，其可以增强或与掺入递送颗粒中的生物活性剂的活性协同作用。

6.1.2.基于Apomer的复合物

一方面，可用于本公开的方法和组合物中的基于脂质结合蛋白的复合物包含Apomer。可包含在基于Apomer的复合物中的Apomer的特征描述于WO/2019/030575中，其内容通过引用整体并入本文。

Apomer通常包含与两亲性分子复合的单体或多聚体形式的载脂蛋白。一般而言，Apomer包含一种或多种载脂蛋白分子，每种载脂蛋白分子与一种或多种两亲性分子复合。在某些方面，两亲性分子一起为Apomer中的每个载脂蛋白分子贡献至少+1或-1的净电荷。可以在Apomers中使用的示例性载脂蛋白在第6.1.4.1节中描述。示例性两亲性分子在第6.1.5节中描述。

6.1.3.基于Cargomer的复合物

一方面，可用于本公开的方法和组合物中的基于脂质结合蛋白的复合物包含Cargomer，其是具有一个或多个货物(cargo)部分的基于脂质结合蛋白的复合物。可包含在基于Cargomer的复合物中的Cargomer的特征描述于WO/2019/030574中，其内容通过引用整体并入本文。

Cargomer通常包含单体或多聚形式的载脂蛋白(例如2、4或8个载脂蛋白分子)和一个或多个货物部分。货物部分可以是两亲性或非两亲性的。两亲性货物部分可以溶解载脂蛋白并防止其聚集。当货物部分不是两亲性的或不足以溶解载脂蛋白分子时，Cargomer还可以包含一种或多种另外的两亲性分子以溶解载脂蛋白。因此，在上下文中的Cargomer提及的两亲性分子包括作为货物部分的两亲性分子、不是货物部分的两亲性分子或其一些组合。优选地，Cargomer不是盘状的，例如使用NMR波谱法测定的。

货物部分可以包含生物活性分子(例如药物、生物制品和/或免疫原)或其他试剂，例如用于诊断的试剂。如本文所用，术语“分子”和“试剂”还包括复合物和缀合物(例如，抗体-药物缀合物)。术语“生物活性”、“诊断有用”等不限于具有直接药理学或生物活性的物质，并且可以包括在施用后变得有活性的物质，例如由于前药的代谢或连接基的裂解。因此，术语“生物活性”和“诊断有用”还包括在施用后通过产生或代谢产物或其他发挥药理或生物学作用和/或在诊断测试中可检测的裂解产物而变得具有生物活性或诊断有用的物质。

Cargomer中的两亲性分子可以溶解载脂蛋白和/或减少或最小化载脂蛋白聚集，并且还可以在Cargomer中具有其他功能。例如，两亲性分子可以具有治疗效用，并因此可以是旨在在施用于受试者时由Cargomer递送的货物部分。此外，如下文第6.1.5节所述，两亲性分子可用于将非两亲性货物部分锚定到Cargomer中的载脂蛋白上。因此，在一些实施方案中，Cargomer中的货物部分和两亲性分子是相同的。在其他实施方案中，Cargomer中的锚定部分和两亲性分子是相同的。在又一其他实施方案中，Cargomer中的货物部分、锚定部分和两亲性分子是相同的(例如，其中两亲性分子具有治疗活性并且还将另一种生物活性分子锚定至一种或多种载脂蛋白分子)。

锚定物和/或连接基部分对于具有非两亲性分子的货物部分的Cargomer特别有用。

在一些实施方案中，本公开的Cargomer中的至少一个货物部分、大部分货物部分或所有货物部分通过锚定物偶联至Cargomer。在一些实施方案中，Cargomer中的至少一个货物部分通过锚定物与Cargomer偶联。在一些实施方案中，Cargomer中的大部分货物部分通过锚定物与Cargomer偶联。在一些实施方案中，Cargomer中的所有货物部分均通过锚定物与Cargomer偶联。Cargomer中的每个锚定物可以是相同的或(二者择一地)不同类型的锚定物，其可以包含在单个Cargomer中(例如，一种类型的货物部分可以通过一种类型的锚定物与Cargomer偶联并且第二种类型的货物部分可以通过第二种类型的锚定物与Cargomer偶联)。

在某些方面，两亲性分子、货物和(如果存在)锚定物和/或连接基一起在Cargomer中为每个载脂蛋白分子贡献至少+1或-1的净电荷(例如，+1、+2、+3、-1、-2或-3)。在一些实施方案中，净电荷是负电荷。在其他实施方案中，净电荷是正电荷。除非上下文另有要求，电荷是在生理pH值测量的。

Cargomer中的载脂蛋白分子与两亲性分子的摩尔比可以但不一定必须是整数或反映载脂蛋白与两亲性分子之间的一对一关系。作为示例而非限制，Cargomer可以具有2:5、8:7、3:2或4:7的载脂蛋白与两亲性分子摩尔比。

在一些实施方案中，Cargomer包含与两亲性分子复合的载脂蛋白分子，载脂蛋白:两亲性分子摩尔比的范围为从8:1至1:15(例如，从8:1至1:15、从7:1至1:15、从6:1至1:15、从5:1至1:15、从4:1至1:15、从3:1至1:15、从2:1至1:15、从1:1至1:15、从8:1至1:14、从7:1至1:14、从6:1至1:14、从5:1至1:14、从4:1至1:14、从3:1至1:14、从2:1至1:14、从1:1至1:14、从8:1至1:13、从7:1至1:13、从6:1至1:13、从5:1至1:13、从4:1至1:13、从3:1至1:13、从2:1至1:13、从1:1至1:13、从8:1至1:12、从7:1至1:12、从6:1至1:12、从5:1至1:12、从4:1至1:12、从3:1至1:12、从2:1至1:12、从1:1至1:12、从8:1至1:11、从7:1至1:11、从6:1至1:11、从5:1至1:11、从4:1至1:11、从3:1至1:11、从2:1至1:11、从1:1至1:11、从8:1至1:10、从7:1至1:10、从6:1至1:10、从5:1至1:10、从4:1至1:10、从3:1至1:10、从2:1至1:10、从1:1至1:10、从8:1至1:9、从7:1至1:9、从6:1至1:9、从5:1至1:9、从4:1至1:9、从3:1至1:9、从2:1至1:9、从1:1至1:9、从8:1至1:8、从7:1至1:8、从6:1至1:8、从5:1至1:8、从4:1至1:8、从3:1至1:8、从2:1至1:8、从1:1至1:8、从8:1至1:7、从7:1至1:7、从6:1至1:7、从5:1至1:7、从4:1至1:7、从3:1至1:7、从2:1至1:7、从1:1至1:7、从8:1至1:6、从7:1至1:6、从6:1至1:6、从5:1至1:6、从4:1至1:6、从3:1至1:6、从2:1至1:6、从1:1至1:6、从8:1至1:5、从7:1至1:5、从6:1至1:5、从5:1至1:5、从4:1至1:5、从3:1至1:5、从2:1至1:5、从1:1至1:5、从8:1至1:4、从7:1至1:4、从6:1至1:4、从5:1至1:4、从4:1至1:4、从3:1至1:4、从2:1至1:4、从1:1至1:4、从8:1至1:3、从7:1至1:3、从6:1至1:3、从5:1至1:3、从4:1至1:3、从3:1至1:3、从2:1至1:3、从1:1至1:3、从8:1至1:2、从7:1至1:2、从6:1至1:2、从5:1至1:2、从4:1至1:2、从3:1至1:2、从2:1至1:2、从1:1至1:2、从8:1至1:1、从7:1至1:1、从6:1至1:1、从5:1至1:1、从4:1至1:1、从3:1至1:1、或从2:1至1:1)。

在一些实施方案中，Cargomer中的载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从6:1至1:6。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从5:1至1:6。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从4:1至1:6。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从3:1至1:6。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从2:1至1:6。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从5:1至1:5。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从4:1至1:5。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从3:1至1:5。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从2:1至1:5。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从5:1至1:4。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从4:1至1:4。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从3:1至1:4。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从2:1至1:4。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从5:1至1:3。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从4:1至1:3。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从3:1至1:3。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从2:1至1:3。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从5:1至1:2。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从4:1至1:2。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从3:1至1:2。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从2:1至1:2。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从5:1至1:1。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从4:1至1:1。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从3:1至1:1。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从2:1至1:1。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:1至1:6。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:1至1:5。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:1至1:4。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:1至1:3。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:1至1:2。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:2至1:6。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:2至1:5。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:2至1:4。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:2至1:3。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:3至1:6。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:3至1:5。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:3至1:4。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:4至1:6。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:4至1:5。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1:5至1:6。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从1.5:1至1:2。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从5:4至4:5。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从5:3至3:5。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从5:2至2:5。在一些实施方案中，载脂蛋白与两亲性分子的摩尔比范围为从3:2至2:3。

在一些实施方案中，载脂蛋白分子与两亲性分子的比率为约1:1。在其他实施方案中，载脂蛋白分子与两亲性分子的比率为约1:2。在又一其他实施方案中，载脂蛋白分子与两亲性分子的比率为约1:3。在又一其他实施方案中，载脂蛋白分子与两亲性分子的比率为约1:4。在又一其他实施方案中，载脂蛋白分子与两亲性分子的比率为约1:5。在又一其他实施方案中，载脂蛋白分子与两亲性分子的比率为约1:6。

在一些实施方案中，Cargomer包含1个载脂蛋白分子。

在其他实施方案中，Cargomer包含2个载脂蛋白分子。包含2个载脂蛋白分子的Cargomer优选地具有3nm或更小的斯托克斯(Stokes)半径。在一些实施方案中，Cargomer可包含2个载脂蛋白分子和每个载脂蛋白分子1、2或3个带负电的两亲性分子(例如，带负电的磷脂分子)。

在其他实施方案中，Cargomer包含4个载脂蛋白分子。包含4个载脂蛋白分子的Cargomer优选地具有4nm或更小的斯托克斯半径。在一些实施方案中，Cargomer可包含4个载脂蛋白分子和每个载脂蛋白分子1、2或3个带负电的两亲性分子(例如，带负电的磷脂分子)。

在其他实施方案中，Cargomer包含8个载脂蛋白分子。包含8个载脂蛋白分子的Cargomer优选地具有5nm或更小的斯托克斯半径。在一些实施方案中，Cargomer可包含8个载脂蛋白分子和每个载脂蛋白分子1、2或3个带负电的两亲性分子(例如，带负电的磷脂分子)。在某些实施方案中，本公开的Cargomer不含有胆固醇和/或胆固醇衍生物(例如胆固醇酯)。

在一些实施方案中，Cargomer包含按重量计在约1:2至约1:3范围内的载脂蛋白与磷脂比例。

在一些实施方案中，Cargomer包含按重量计1:2.7的载脂蛋白与磷脂比例。

Cargomer可溶于生物流体，例如淋巴液、脑脊液、玻璃体液、房水和血液或血液级分(例如血清或血浆)中的一种或多种。

Cargomer可以包括靶向功能，例如将Cargomer靶向特定细胞或组织类型。在一些实施方案中，Cargomer包含连接至载脂蛋白分子或两亲性分子的靶向部分。在一些实施方案中，并入到Cargomer中的一个或多个货物部分具有靶向能力。

6.1.4.脂质结合蛋白分子

可用于本文描述的复合物中的脂质结合蛋白分子包括载脂蛋白例如在第6.1.4.1节中描述的那些和载脂蛋白模拟肽例如第6.1.4.2节中描述的那些。在一些实施方案中，复合物包含脂质结合蛋白分子的混合物。在一些实施方案中，复合物包含一种或多种脂质结合蛋白分子和一种或多种载脂蛋白模拟肽的混合物。

在一些实施方案中，复合物包含1至8个ApoA-I等价物(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、1至2、2至8、2至6、2至4、4至6或4至8个ApoA-I等价物)。脂质结合蛋白可以基于它们含有的两亲性螺旋的数量以ApoA-I等价物表达。例如，通常以二硫桥接二聚体形式存在的ApoA-I_M可以表示为2个ApoA-I等价物，因为每个ApoA-I_M分子含有的两亲性螺旋是ApoA-I分子的两倍。相反，含有单个两亲性螺旋的肽模拟物可以表示为1/10-1/6个ApoA-I等价物，因为每个分子含有的两亲性螺旋数量为-ApoA-I分子的1/10-1/6。

6.1.1.1.载脂蛋白

可以包含在基于脂质结合蛋白的复合物中的合适的载脂蛋白包括载脂蛋白ApoA-I、ApoA-II、ApoA-IV、ApoA-V、ApoB、ApoC-I、ApoC-II、ApoC-III、ApoD、ApoE、ApoJ、ApoH以及上述两种或更多种的任意组合。上述载脂蛋白的多态形式、同工型、变体和突变体以及缩短形式，其中最常见的是载脂蛋白A-I_Milano(ApoA-I_M)、载脂蛋白A-I_Paris(ApoA-I_P)以及载脂蛋白A-I_Zaragoza(ApoA-I_Z)也可以使用。含有半胱氨酸残基的载脂蛋白突变体也是已知的，并且也可以使用(参见例如美国公开号2003/0181372)。载脂蛋白可以是单体或二聚体的形式，其可以是同二聚体或异二聚体。例如，ApoA-I(Duverger et al.,1996,Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.16(12):1424-29)、ApoA-I_M(Franceschini et al.,1985,J.Biol.Chem.260:1632-35)、ApoA-I_P(Daum et al.,1999,J.Mol.Med.77:614-22)、ApoA-II(Shelness et al.,1985,J.Biol.Chem.260(14):8637-46；Shelness etal.,1984,J.Biol.Chem.259(15):9929-35)、ApoA-IV(Duverger et al.,1991,Euro.J.Biochem.201(2):373-83)、ApoE(McLean et al.,1983,J.Biol.Chem.258(14):8993-9000)、ApoJ和ApoH的同二聚体和异二聚体(如果可行)可以使用。

可以修饰载脂蛋白的一级序列以使它们不易被氧化，例如，如在美国公开号2008/0234192和2013/0137628以及美国专利号8,143,224和8,541,236中所述。载脂蛋白可包含相应的促进其分离的元件的残基，例如His标签，或设计用于其他目的的其他元件。优选地，复合物中的载脂蛋白可溶于生物流体(例如，淋巴液、脑脊液、玻璃体液、房水、血液或血液级分(例如，血清或血浆))。

在一些实施方案中，复合物包含共价结合的脂质结合蛋白单体，例如二聚的载脂蛋白A-I_Milano，其是含有半胱氨酸的ApoA-I的突变形式。半胱氨酸允许形成二硫桥，这可导致同二聚体或异二聚体(例如，ApoA-IMilano-ApoA-II)的形成。

在一些实施方案中，载脂蛋白分子包含ApoA-I、ApoA-II、ApoA-IV、ApoA-V、ApoB、ApoC-I、ApoC-II、ApoC-III、ApoD、ApoE、ApoJ或ApoH分子或其组合。

在一些实施方案中，载脂蛋白分子包含ApoA-I分子或由ApoA-I分子组成。在一些实施方案中，所述ApoA-I分子是人ApoA-I分子。在一些实施方案中，所述ApoA-I分子是重组的。在一些实施方案中，该ApoA-I分子不是ApoA-I_Milano。

在一些实施方案中，ApoA-I分子是载脂蛋白A-I_Milano(ApoA-IM)、载脂蛋白A-I_Paris(ApoA-IP)或载脂蛋白A-I_Zaragoza(ApoA-IZ)分子。

载脂蛋白可以从如本领域众所周知的动物来源(并且特别是从人类来源)纯化或重组产生，参见例如Chung et al.,1980,J.Lipid Res.21(3):284-91；Cheung et al.,1987,J.Lipid Res.28(8):913-29。还参见美国专利号5,059,528、5,128,318、6,617,134；美国公开号2002/0156007、2004/0067873、2004/0077541和2004/0266660；以及PCT公开号WO 2008/104890和WO 2007/023476。其他纯化方法也是可能的，例如如PCT公开号WO 2012/109162中所描述的，其公开内容通过引用整体并入本文。

载脂蛋白可以是前原(prepro-)形式、原(pro-)形式或成熟形式。例如，复合物可包含ApoA-I(例如人ApoA-I)，其中ApoA-I是前原ApoA-I、原ApoA-I或成熟ApoA-I。在一些实施方案中，复合物包含与以下SEQ ID NO:1具有至少90％序列同一性的ApoA-I：

PPQSPWDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQFEGSALGKQLNLKLLDNWDSVTSTFSKLREQLGPVTQEFWDNLEKETEGLRQEMSKDLEEVKAKVQPYLDDFQKKWQEEMELYRQKVEPLRAELQEGARQKLHELQEKLSPLGEEMRDRARAHVDALRTHLAPYSDELRQRLAARLEALKENGGARLAEY(SEQ ID NO:1)

在其他实施方案中，复合物包含与SEQ ID NO:1具有至少95％序列同一性的ApoA-I。在其他实施方案中，复合物包含与SEQ ID NO:1具有至少98％序列同一性的ApoA-I。在其他实施方案中，复合物包含与SEQ ID NO:1具有至少99％序列同一性的ApoA-I。在其他实施方案中，复合物包含与SEQ ID NO:1具有100％序列同一性的ApoA-I。

在其他实施方案中，复合物包含与SEQ ID NO:2的氨基酸25至267具有至少95％序列同一性的ApoA-I。在其他实施方案中，复合物包含与SEQ ID NO:2的氨基酸25至267具有至少98％序列同一性的ApoA-I。在其他实施方案中，复合物包含与SEQ ID NO:2的氨基酸25至267具有至少99％序列同一性的ApoA-I。在其他实施方案中，复合物包含与SEQ ID NO:2的氨基酸25至267具有100％序列同一性的ApoA-I。

在一些实施方案中，复合物包含1至8个载脂蛋白分子(例如，1至6、1至4、1至2、2至8、2至6、2至4、4至8、4至6或6至8个载脂蛋白分子)。在一些实施方案中，复合物包含1个载脂蛋白分子。在一些实施方案中，复合物包含2个载脂蛋白分子。在一些实施方案中，复合物包含3个载脂蛋白分子。在一些实施方案中，复合物包含4个载脂蛋白分子。在一些实施方案中，复合物包含5个载脂蛋白分子。在一些实施方案中，复合物包含6个载脂蛋白分子。在一些实施方案中，复合物包含7个载脂蛋白分子。在一些实施方案中，复合物包含8个载脂蛋白分子。

一个或多个载脂蛋白分子可以包含嵌合载脂蛋白，该嵌合载脂蛋白包含载脂蛋白和一个或多个连接的功能部分，例如一种或多种CRN-001复合物、一种或多种靶向部分、具有所需生物学活性的部分、协助纯化的亲和标记物和/或用于表征或定位研究的报告分子。具有生物活性的连接部分可具有能够增强掺入本公开的复合物中的化合物或货物部分的生物活性和/或与掺入本公开复合物中的化合物或货物部分的生物活性起协同作用的活性。例如，具有生物活性的部分可以具有抗微生物(例如，抗真菌、抗细菌、抗原虫、抑制细菌、抑制真菌或抗病毒)活性。在一个实施方案中，嵌合载脂蛋白的连接的功能部分不与复合物的疏水表面接触。在另一个实施方案中，连接的功能部分与复合物的疏水表面接触。在一些实施方案中，嵌合载脂蛋白的功能部分可以是天然蛋白质固有的。在一些实施方案中，嵌合载脂蛋白包括被细胞表面受体或其他细胞表面部分识别或能够与细胞表面受体或其他细胞表面部分相互作用的配体或序列。

在一个实施方案中，嵌合载脂蛋白包含非天然载脂蛋白固有的靶向部分，例如酿酒酵母(S.cerevisiae)α-交配因子肽、叶酸、转铁蛋白或乳铁蛋白。在另一个实施方案中，嵌合载脂蛋白包含具有所需生物活性的部分，该部分增强本公开复合物中的化合物或货物部分的活性和/或与掺入本公开复合物中的化合物或货物部分的活性起协同作用。在一个实施方案中，嵌合载脂蛋白可以包含载脂蛋白固有的功能部分。载脂蛋白内在功能部分的一个实例是大约由人ApoE的氨基酸130-150形成的内在靶向部分，其包含被低密度脂蛋白受体家族成员识别的受体结合区。载脂蛋白内在功能部分的其他实例包括与低密度脂蛋白受体相互作用的ApoB-100区域以及与B1型清道夫受体相互作用的ApoA-I区域。在其他实施方案中，功能部分可以合成或重组添加以产生嵌合载脂蛋白。另一个实例是具有来自另一前原载脂蛋白的前原或原序列的载脂蛋白(例如，来自前原ApoA-II的前原序列取代了前原ApoA-I的前原序列)。另一个实例是载脂蛋白，其中一些两亲性序列片段已被来自另一载脂蛋白的其他两亲性序列片段取代。

如本文所用，“嵌合”是指能够单独存在并连接在一起形成具有其所有组成分子的所需功能性的单个分子的两个或更多个分子。嵌合分子的组成分子可以通过化学缀合合成地连接，或者当组成分子都是多肽或其类似物时，编码多肽的多核苷酸可以重组地融合在一起，从而表达单个连续的多肽。这种嵌合分子称为融合蛋白。“融合蛋白”是嵌合分子，其中组成分子都是多肽并且彼此连接(融合)，使得嵌合分子形成连续的单链。各种组分可以彼此直接连接或者可以通过一个或多个连接基偶联。各种组分的一个或多个片段可以例如插入到载脂蛋白的序列中，或者(作为另一个实例)可以添加到载脂蛋白的序列的N端或C端。例如，融合蛋白可包含抗体轻链、抗体片段、重链抗体或单结构域抗体。

在一些实施方案中，嵌合载脂蛋白通过化学缀合载脂蛋白和待连接的功能部分来制备。化学缀合分子的方法是本领域技术人员众所周知的。此类方法将根据待连接部分的结构而变化，但对于本领域技术人员来说是容易确定的。多肽通常含有多种官能团，例如，羧酸(-COOH)、游离氨基(-NH2)或巯基(-SH)基团，它们可用于与功能部分上或连接基上的合适官能团反应以将该部分结合到其上。功能部分可以连接在载脂蛋白分子的N末端、C末端或内部残基(即，位于N末端和C末端之间的中间位置的残基)上的官能团。或者，可以将载脂蛋白和/或待标记的部分衍生化以暴露或连接另外的反应性官能团。

在一些实施方案中，使用重组表达系统合成包含多肽功能部分的融合蛋白。通常，这涉及产生编码载脂蛋白和功能部分的核酸(例如DNA)序列，使得两种多肽在表达时处于框架内，将DNA置于启动子的控制下，在宿主细胞中表达蛋白质，并分离表达的蛋白质。

编码嵌合载脂蛋白的核酸可以以适合于在宿主细胞中表达的形式掺入重组表达载体中。如本文所用，“表达载体”是当引入合适的宿主细胞时可以转录并翻译成多肽的核酸。载体还可以包含调控序列，例如启动子、增强子或其他表达控制元件(例如，聚腺苷酸化信号)。此类调控序列是本领域技术人员已知的(参见例如Goeddel,1990,Gene ExpressionTechnology:Meth.Enzymol.185,Academic Press,San Diego,Calif.；Berger andKimmel,Guide to Molecular Cloning Techniques,Methods in Enzymology152Academic Press,Inc.,San Diego,Calif.；Sambrook et al.,1989,MolecularCloning--A Laboratory Manual(2nd ed.)Vol.1-3,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor Press,NY,etc.)。

在一些实施方案中，载脂蛋白已被修饰，使得当载脂蛋白掺入本公开的复合物中时，修饰将增加复合物的稳定性、赋予靶向能力或增加容量。在一个实施方案中，修饰包括将半胱氨酸残基引入载脂蛋白分子中以允许形成分子内或分子间二硫键，例如通过定点诱变。在另一个实施方案中，化学交联剂用于在载脂蛋白分子之间形成分子间连接以增强复合物的稳定性。分子间交联防止或减少载脂蛋白分子从复合物解离和/或防止被施用复合物的个体内的内源载脂蛋白分子位移。在其他实施方案中，载脂蛋白通过一个或多个氨基酸残基的化学衍生化或通过定点诱变进行修饰，以赋予细胞表面受体的靶向能力或被细胞表面受体识别。

复合物可以通过将受体识别特性设计到载脂蛋白中，来靶向特定的细胞表面受体。例如，复合物可以靶向已知携带特定类型感染剂的特定细胞类型，例如通过修饰载脂蛋白以使其能够与被靶向的细胞类型表面上的受体相互作用。例如，复合物可以通过改变载脂蛋白以赋予巨噬细胞内吞A类清道夫受体(SR-A)的识别而靶向巨噬细胞。SR-A结合能力可以通过定点诱变修饰载脂蛋白以用中性或带负电的氨基酸替换一个或多个带正电的氨基酸来赋予复合物。SR-A识别还可以通过制备嵌合载脂蛋白来赋予，该嵌合载脂蛋白包含具有被SR-A识别的配体的N-末端或C-末端延伸或具有高浓度的带负电残基的氨基酸序列。包含载脂蛋白的复合物还可与载脂蛋白受体(例如，但不限于ABCA1受体、ABCG1受体、巨蛋白(Megalin)、Cubulin和HDL受体例如SR-B1)相互作用。

复合物可包含将货物部分锚定至Cargomer的脂质结合蛋白(例如，载脂蛋白分子)。在一些实施方案中，载脂蛋白分子通过直接键偶联至货物部分。在其他实施方案中，载脂蛋白分子通过连接基偶联至货物部分，例如，如第6.1.7节中所述。

6.1.4.2.载脂蛋白模拟物

模拟载脂蛋白活性的肽、肽类似物和激动剂(本文统称为“载脂蛋白肽模拟物”)也可以单独或与一种或多种其他脂质结合蛋白组合用于本文所述的复合物中。适合包含在本文描述的复合物和组合物中的对应于载脂蛋白的肽和肽类似物以及模拟ApoA-I、ApoA-I_M、ApoA-II、ApoA-IV和ApoE活性的激动剂的非限制性实例公开于美国专利号6,004,925、6,037,323和6,046,166(颁发给Dasseux等人)、美国专利号5,840,688(颁发给Tso)、美国专利号6,743,778(颁发给Kohno)、美国公开号2004/0266671、2004/0254120、2003/0171277和2003/0045460(Fogelman)、美国公开号2006/0069030(Bachovchin)、美国公开号2003/0087819(Bielicki)、美国公开号2009/0081293(Murase等人)，以及PCT公开号WO/2010/093918(颁发给Dasseux等人)，其公开内容通过引用整体并入本文。这些肽和肽类似物可以由L-氨基酸或D-氨基酸或L-和D-氨基酸的混合物组成。它们还可以包含一种或多种非肽或酰胺键，例如一种或多种众所周知的肽/酰胺电子等排体。这种载脂蛋白肽模拟物可以使用本领域已知的用于肽合成的任何技术来合成或制造，包括例如在美国专利号6,004,925、6,037,323和6,046,166中描述的技术。

在一些实施方案中，脂质结合蛋白分子包含载脂蛋白肽模拟分子和任选的一种或多种载脂蛋白分子例如上述的那些。

在一些实施方案中，载脂蛋白肽模拟物分子包含ApoA-I肽模拟物、ApoA-II肽模拟物、ApoA-IV肽模拟物或ApoE肽模拟物或其组合。

本公开的复合物可以包含将货物部分锚定至复合物的载脂蛋白肽模拟分子。在一些实施方案中，载脂蛋白肽模拟分子通过直接键偶联至货物部分。在其他实施方案中，载脂蛋白肽模拟分子通过连接基偶联至货物部分，例如，如第6.1.7节中所述。

6.1.5.两亲性分子

两亲性分子是同时具有疏水性(非极性)和亲水性(极性)元素的分子。可用于本文描述的复合物中的两亲性分子包括脂质(例如，如第6.1.5.1节中所述)、洗涤剂(例如，如第6.1.5.2节中所述)、脂肪酸(例如，如第6.1.5.3节中所述)，以及共价连接至极性分子(例如但不限于糖或核酸)的非极性分子和甾醇(例如，如第6.1.5.4节中所述)。

复合物可包含单一类别的两亲性分子(例如，单一种类的磷脂或磷脂的混合物)，或可含有两亲性分子类别的组合(例如，磷脂和洗涤剂)。该复合物可以含有一种两亲性分子或两亲性分子的组合，其被配置为促进一种或多种脂质结合蛋白分子的溶解。

在一些实施方案中，基于Apomer和/或Cargomer的复合物仅包含足以溶解脂质结合蛋白分子的量的两亲性分子。换句话说，基于Apomer和/或Cargomer的复合物可以包含溶解脂质结合蛋白分子所需的最少量的一种或多种两亲性分子。

在一些实施方案中，所包含的两亲性分子包括磷脂、洗涤剂、脂肪酸、共价连接至糖的非极性部分或甾醇、或其组合(例如，选自上文讨论的两亲性分子类型)。

在一些实施方案中，两亲性分子包含磷脂分子或由磷脂分子组成。在一些实施方案中，磷脂分子包含带负电的磷脂、中性磷脂、带正电的磷脂或其组合。在一些实施方案中，磷脂分子为复合物中的每个载脂蛋白分子贡献1-3个净电荷。在一些实施方案中，净电荷是负净电荷。在一些实施方案中，净电荷是正净电荷。在一些实施方案中，磷脂分子由带负电的磷脂和中性磷脂的组合组成。在一些实施方案中，带负电荷的磷脂与中性磷脂的摩尔比的范围为从1:1至1:3。在一些实施方案中，带负电的磷脂与中性磷脂的摩尔比为约1:1或约1:2。

在一些实施方案中，复合物包含至少一种是锚定物的两亲性分子。

在一些实施方案中，两亲性分子包含重量比为95:5至99:1的中性磷脂和带负电的磷脂。

6.1.5.1.脂质

基于脂质结合蛋白的复合物可以包含一种或多种脂质。在各种实施方案中，一种或多种脂质可以是饱和的和/或不饱和的、天然的和/或合成的、带电的或不带电的、两性离子的或非两性离子的。在一些实施方案中，脂质分子(例如，磷脂分子)可以共同贡献复合物中每个脂质结合蛋白分子1-3(例如，1-3、1-2、2-3、1、2或3)的净电荷。在一些实施方案中，净电荷是负的。在其他实施方案中，净电荷是正的。

在一些实施方案中，脂质包含磷脂。磷脂可以具有两个相同或不同的酰基链(例如，具有不同碳原子数的链、酰基链之间不同的饱和度、酰基链的不同支化或其组合)。脂质还可以被修饰以含有荧光探针(例如，如在avantilipids.com/product-category/products/fluorescent-lipids/中所述)。优选地，脂质包含至少一种磷脂。

磷脂可具有范围为从约6至约24个碳原子(例如6-20、6-16、6-12、12-24、12-20、12-16、16-24、16-20或20-24)的不饱和或饱和酰基链。在一些实施方案中，本公开的复合物中使用的磷脂具有一个或两个12、14、16、18、20、22或24个碳的酰基链(例如，两个相同长度的酰基链或两个不同长度的酰基链)。

下表1中提供了可包含在磷脂中的在常见脂肪酸中存在的酰基链的非限制性实例：

可存在于本公开的复合物中的脂质包括但不限于小烷基链磷脂、蛋磷脂酰胆碱、大豆磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱二油酰磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰甘油磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油例如二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺，二棕榈酰磷脂酰乙醇胺，二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸，二棕榈酰磷脂酰丝氨酸，脑磷脂酰丝氨酸，脑鞘磷脂，棕榈酰鞘磷脂，二棕榈酰鞘磷脂，蛋鞘磷脂，乳鞘磷脂，植物鞘磷脂，二硬脂酰鞘磷脂、二棕榈酰磷脂酰甘油盐、磷脂酸、半乳糖脑苷脂、神经节苷脂、脑苷脂、二月桂基磷脂酰胆碱、(1,3)-D-甘露糖基-(1,3)甘油二酯、氨基苯糖苷、3-胆甾醇基-6'-(糖基硫基)己基醚糖脂和胆固醇及其衍生物。合成脂质，例如合成棕榈酰鞘磷脂或N-棕榈酰-4-羟基鞘氨醇-1-磷酸胆碱(植物鞘磷脂的形式)可用于最小化脂质氧化。

在一些实施方案中，基于脂质结合蛋白的复合物包含两种类型的磷脂：中性脂质，例如卵磷脂和/或鞘磷脂(缩写为SM)，和带电磷脂(例如带负电的磷脂)。“中性”磷脂在生理pH值的净电荷约为零。在许多实施方案中，中性磷脂是两性离子，但其他类型的净中性磷脂是已知的并且可以使用。在一些实施方案中，带电磷脂(例如，带负电的磷脂)与中性磷脂的摩尔比范围为从1:1至1:3，例如约1:1、约1:2或约1:3。

中性磷脂可包含例如卵磷脂和/或SM中的一种或两种，并且可任选地包含其他中性磷脂。在一些实施方案中，中性磷脂包含卵磷脂，但不包含SM。在其他实施方案中，中性磷脂包含SM，但不包含卵磷脂。在又一其他实施方案中，中性磷脂包含卵磷脂和SM。所有这些具体的示例性实施方案除了卵磷脂和/或SM之外可包括中性磷脂，但在许多实施方案中不包括此类另外的中性磷脂。

如本文所用，表述“SM”包括衍生自或获得自天然来源的鞘磷脂，以及不受LCAT水解影响的天然存在的SM的类似物和衍生物，如天然存在的SM。SM是结构与卵磷脂非常相似的磷脂，但与卵磷脂不同，它不具有甘油骨架，并因此不具有连接酰基链的酯键。相反，SM具有神经酰胺骨架，通过酰胺键连接酰基链。SM可以从例如乳、蛋或脑中获得。也可以使用SM类似物或衍生物。有用的SM类似物和衍生物的非限制性实例包括但不限于棕榈酰鞘磷脂、N-棕榈酰-4-羟基鞘氨醇-1-磷酸胆碱(植物鞘磷脂的形式)、棕榈酰鞘磷脂、硬脂酰鞘磷脂、D-赤型-N-16:0-鞘磷脂及其二氢异构体，D-赤型-N-16:0-二氢-鞘磷脂。可以使用合成的SM(例如合成的棕榈酰鞘磷脂或N-棕榈酰-4-羟基鞘氨醇-1-磷酸胆碱(植物鞘磷脂))以比动物来源的鞘脂产生更多的同质复合物以及更少的污染物和/或氧化产物。用于合成SM的方法描述于美国公开号2016/0075634中。

从天然来源分离的鞘磷脂可以人工富集在一种特定的饱和或不饱和的酰基链中。例如，乳鞘磷脂(Avanti Phospholipid,Alabaster,Ala.)的特征在于长饱和酰基链(即，具有20个或更多个碳原子的酰基链)。相反，蛋鞘磷脂的特征在于短饱和酰基链(即，具有少于20个碳原子的酰基链)。例如，虽然仅约20％的乳鞘磷脂包含C16:0(16个碳，饱和)酰基链，但约80％的蛋鞘磷脂包含C16:0酰基链。使用溶剂萃取，可以富集组合物的乳鞘磷脂，使其具有与蛋鞘磷脂相当的酰基链组成，反之亦然。

SM可以是半合成的，因此它具有特定的酰基链。例如，可以首先从乳中纯化乳鞘磷脂，然后可以切割一个特定的酰基链，例如C16:0酰基链，并用另一酰基链替代。SM还可以通过例如大规模合成来完全合成。参见，例如，Dong et al.,U.S.Pat.No.5,220,043,entitled Synthesis of D-erythro-sphingomyelins,issued Jun.15,1993；Weis,1999,Chem.Phys.Lipids 102(1-2):3-12。SM可以是完全合成的，例如，如美国公开号2014/0275590中所描述的。

包含半合成或合成SM的酰基链的长度和饱和度可以选择性地改变。酰基链可以是饱和的或不饱和的，并且可以含有约6至约24个碳原子。每条链可含有相同数量的碳原子，或者每条链可含有不同数量的碳原子。在一些实施方案中，半合成或合成SM包含混合的酰基链，使得一条链是饱和的而一条链是不饱和的。在此类混合的酰基链SM中，链长可以相同或不同。在其他实施方案中，半合成或合成SM的酰基链要么都是饱和的，要么都是不饱和的。同样，链可以含有相同或不同数量的碳原子。在一些实施方案中，构成半合成或合成SM的两条酰基链是相同的。在一个具体的实施方案中，该链对应于天然存在的脂肪酸例如油酸、棕榈酸或硬脂酸的酰基链。在另一个实施方案中，使用具有饱和或不饱和官能化链的SM。在另一个具体的实施方案中，两个酰基链都是饱和的并且含有6至24个碳原子。上表1中提供了可包含在半合成和合成SM中的常见脂肪酸中存在的酰基链的非限制性实例。

在一些实施方案中，SM是棕榈酰SM，例如具有C16:0酰基链的合成棕榈酰SM，或者是包含棕榈酰SM作为主要成分的蛋SM。

在具体的实施方案中，使用官能化的SM，例如植物鞘磷脂。

卵磷脂可以从天然来源衍生或分离，也可以通过合成获得。从天然来源分离的合适的卵磷脂的实例包括但不限于蛋磷脂酰胆碱和大豆磷脂酰胆碱。合适的卵磷脂的另外的非限制性实例包括二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱1-肉豆蔻酰1-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰1-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰1-2-硬脂酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰1-2-棕榈酰磷脂酰胆碱，1-棕榈酰1-2-油酰磷脂酰胆碱、1-油酰1-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱及其醚衍生物或类似物。

从天然来源衍生或分离的卵磷脂可以被富集以包含特定的酰基链。在采用半合成或合成卵磷脂的实施方案中，酰基链的特性(一个或多个)可以选择性地改变，如上面结合SM所讨论的。在本文描述的复合物的一些实施方案中，卵磷脂上的两条酰基链是相同的。在包含SM和卵磷脂的复合物的一些实施方案中，SM和卵磷脂的酰基链全部相同。在具体的实施方案中，酰基链对应于肉豆蔻酸、棕榈酸、油酸或硬脂酸的酰基链。

本公开的复合物可以包含一种或多种带负电的磷脂(例如，单独或与一种或多种中性磷脂组合)。如本文所用，“带负电荷的磷脂”是在生理pH具有净负电荷的磷脂。带负电的磷脂可包括单一类型的带负电的磷脂，或两种或更多种不同的带负电的磷脂的混合物。在一些实施方案中，带电荷的磷脂是带负电荷的甘油磷脂。合适的带负电荷的磷脂的具体实例包括但不限于1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-[磷酰-外消旋-(1-甘油)]、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸及其盐(例如钠盐或钾盐)。在一些实施方案中，带负电的磷脂包含磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油和/或磷脂酸中的一种或多种。在具体的实施方案中，带负电的磷脂包含磷脂酰甘油的盐或磷脂酰肌醇的盐或由磷脂酰甘油的盐或磷脂酰肌醇的盐组成。在另一个具体的实施方案中，带负电的磷脂包含1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-[磷酰-外消旋-(1-甘油)]或DPPG或其盐或由1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-[磷酰-外消旋-(1-甘油)]或DPPG或其盐组成。

带负电荷的磷脂可以从天然来源获得或通过化学合成制备。在采用合成带负电荷的磷脂的实施方案中，酰基链的特性可以选择性地改变，如上面结合SM所讨论的。在本公开的复合物的一些实施方案中，带负电的磷脂上的两条酰基链是相同的。在一些实施方案中，本公开的复合物中包含的所有类型的磷脂的酰基链都是相同的。在具体的实施方案中，复合物包含带负电荷的磷脂(一种或多种带负电荷的磷脂)和/或SM，其均具有C16:0或C16:1酰基链。在具体的实施方案中，SM的脂肪酸部分主要是C16:1棕榈酰基。在又一个具体的实施方案中，带电磷脂(一种或多种带电磷脂)、卵磷脂和/或SM的酰基链对应于棕榈酸的酰基链。在又一个具体的实施方案中，带电磷脂(一种或多种带电磷脂)、卵磷脂和/或SM的酰基链对应于油酸的酰基链。

可包含在本公开的复合物中的带正电荷的磷脂的实例包括N1-[2-((1S)-1-[(3-氨基丙基)氨基]-4-[二(3-氨基丙基)氨基]丁基甲酰氨基)乙基]-3,4-二[油酰氧基]-苯甲酰胺、1,2-二-O-十八碳烯基-3-三甲基铵丙烷、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱、1,2-二油酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱、1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱、1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱、1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱、1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱、1,2-二油酰基-3-二甲基铵-丙烷1,2-二肉豆蔻酰基-3-二甲基铵-丙烷、1,2-二棕榈酰基-3-二甲基铵-丙烷、N-(4-羧基苄基)-N,N-二甲基-2,3-双(油酰氧基)丙-1-铵、1,2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷、1,2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷、1,2-硬脂酰-3-三甲基铵-丙烷、1,2-二棕榈酰-3-三甲基铵-丙烷，1,2-二肉豆蔻酰基-3-三甲基铵-丙烷，N-[1-(2,3-二肉豆蔻氧基)丙基]-N,N-二甲基-N-(2-羟基乙基)溴化铵，N,N,N-三甲基-2-双[(1-氧代-9-十八碳烯基)氧基]-(Z,Z)-1丙铵甲基硫酸盐及其盐(例如氯化物或溴化物盐)。

所使用的脂质优选是至少95％纯的，和/或具有降低水平的氧化剂(例如但不限于过氧化物)。从天然来源获得的脂质优选具有较少的多不饱和脂肪酸部分和/或不易氧化的脂肪酸部分。样品中的氧化水平可以使用碘量法确定，该方法提供过氧化值，以每千克样品中分离的碘的毫当量数表示，缩写为meq O/kg。参见，例如，Gray,1978,Measurement ofLipid Oxidation:AReview,Journal of the American Oil Chemists Society 55:539-545；Heaton,F.W.and Ur,Improved Iodometric Methods for the Determination ofLipid Peroxides,1958,Journal of the Science of Food and Agriculture 9:781-786。优选地，氧化水平或过氧化物水平较低，例如小于5meq O/kg、小于4meq O/kg、小于3meq O/kg或小于2meq O/kg。

在一些实施方案中，复合物可以包含少量的额外脂质。实际上可以使用任何类型的脂质，包括但不限于溶血磷脂、半乳糖脑苷脂、神经节苷脂、脑苷脂、甘油酯、甘油三酯、以及甾醇和甾醇衍生物(例如，植物甾醇、动物甾醇，例如胆固醇，或甾醇衍生物，例如胆固醇衍生物)。例如，本公开的复合物可以含有胆固醇或胆固醇衍生物，例如胆固醇酯。胆固醇衍生物还可以是取代的胆固醇或取代的胆固醇酯。本公开的复合物还可以含有氧化甾醇，例如但不限于氧化胆固醇或氧化甾醇衍生物(例如但不限于氧化胆固醇酯)。在一些实施方案中，复合物不包括胆固醇和/或其衍生物(例如胆固醇酯或氧化胆固醇酯)。

6.1.5.2.洗涤剂

复合物可以含有一种或多种洗涤剂。洗涤剂可以是两性离子的、非离子的、阳离子的、阴离子的、或其组合。示例性两性离子洗涤剂包括3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵]-1-丙磺酸盐(CHAPS)、3-[(3-胆酰氨基丙基)二甲基铵]-2-羟基-1-丙磺酸盐(CHAPSO)和N,N-二甲基十二胺N-氧化物(LDAO)。示例性的非离子洗涤剂包括D-(+)-海藻糖6-单油酸酯、N-辛酰基-N-甲基葡糖胺、N-壬酰基-N-甲基葡糖胺、N-癸酰基-N-甲基葡糖胺、1-(7Z-十六烯酰基)-外消旋-甘油、1-(8Z-十六烯酰基)-外消旋-甘油、1-(8Z-十七烯酰基)-外消旋-甘油、1-(9Z-十六烯酰基)-外消旋-甘油、1-癸酰基-外消旋-甘油。示例性的阳离子洗涤剂包括(S)-O-甲基-丝氨酸十二烷基酰胺盐酸盐、十二烷基氯化铵、癸基三甲基溴化铵和十六烷基三甲基硫酸铵。示例性阴离子洗涤剂包括胆甾醇半琥珀酸酯、胆酸盐、烷基硫酸盐和烷基磺酸盐。

6.1.5.3.脂肪酸

复合物可以含有一种或多种脂肪酸。一种或多种脂肪酸可包括具有5个或更少碳的脂肪族尾部的短链脂肪酸(例如丁酸、异丁酸、戊酸或异戊酸)、具有6至12个碳的脂肪族尾部的中链脂肪酸(例如，己酸、辛酸、癸酸或月桂酸)，具有13至21个碳的脂肪族尾部的长链脂肪酸(例如，肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸或花生酸)，具有22个或更多个碳的脂族尾部的极长链脂肪酸(例如山嵛酸、木蜡酸或蜡酸)或其组合。一种或多种脂肪酸可以是饱和的(例如，辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸、木蜡酸或蜡酸)、不饱和的(例如，肉豆蔻脑酸、棕榈烯酸、sapienic acid、油酸、反油酸、异油酸、亚油酸、亚油反油酸(linoelaidic acid)、α-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸或二十二碳六烯酸)或其组合。不饱和脂肪酸可以是顺式或反式脂肪酸。在一些实施方案中，本公开的复合物中使用的不饱和脂肪酸是顺式脂肪酸。

6.1.5.4.附着在糖上的非极性分子和甾醇

复合物可以含有一种或多种两亲性分子，其包含连接到糖(例如，单糖，例如，如葡萄糖或半乳糖，或二糖如麦芽糖或海藻糖)的非极性分子或部分例如，烃链、酰基或二酰基链)或甾醇(例如，胆固醇)。糖可以是修饰的糖或取代的糖。包含连接至糖的非极性分子的示例性两亲性分子包括十二烷-2-基氧基-β-D-麦芽糖苷、十三烷-3-基氧基-β-D-麦芽糖苷、十三烷-2-基氧基-β-D-麦芽糖苷、正十二烷基-β-D-麦芽糖苷(DDM)、正辛基-β-D-葡萄糖苷、正壬基-β-D-葡萄糖苷、正癸基-β-D-麦芽糖苷、正十二烷基-β-D-吡喃麦芽糖苷、4-正十二烷基-α,α-海藻糖、6-正十二烷基-α,α-海藻糖和3-正十二烷基-α,α-海藻糖。

在一些实施方案中，非极性部分是酰基或二酰基链。

在一些实施方案中，糖是修饰的糖或取代的糖。

6.1.6.锚定物

货物部分可以共价结合至两亲性或非极性部分以促进货物部分与基于脂质结合蛋白的复合物的偶联。两亲性和非极性部分可以与基于脂质结合蛋白的复合物中的非极性区域相互作用，从而将附着于两亲性和非极性部分的货物部分锚定到复合物。

可用作锚定物的两亲性部分包括脂质(例如，如第6.1.5.1节中所述)和脂肪酸(例如，如第6.1.5.3节中所述)。在一些实施方案中，锚定物包含甾醇或甾醇衍生物，例如植物甾醇、动物甾醇或甾醇衍生物(例如维生素)。例如，甾醇(例如胆固醇)可以共价结合至货物部分(例如，通过在甾醇A环3位的羟基基团)并用于将货物部分锚定至复合物。可用作锚定物的非极性部分包括烷基链、酰基链和二酰基链。货物部分可以通过连接基直接或间接地共价结合至锚定部分(例如，通过双功能肽或第6.1.7节中描述的其他连接基)。具有生物活性的货物部分可以在共价结合至锚定物(或连接至锚定物的连接基)时保留其生物活性，而其他部分可能需要裂解(例如，通过水解)将货物部分连接至锚定物的共价键(或连接至锚定物的连接基)以恢复生物活性。

在一些实施方案中，至少一个货物部分与锚定物偶联。在一些实施方案中，锚定物包含两亲性和/或非极性部分。在一些实施方案中，锚定物包含两亲性部分。在一些实施方案中，两亲性部分包含复合物中的两亲性分子之一。在一些实施方案中，两亲性部分包含脂质、洗涤剂、脂肪酸、连接至糖的非极性分子或连接至糖的甾醇。

在一些实施方案中，两亲性部分包含甾醇。在一些实施方案中，甾醇包括动物甾醇或植物甾醇。在一些实施方案中，甾醇包含胆固醇。

在其他实施方案中，锚定物包含非极性部分。在一些实施方案中，非极性部分包含烷基链、酰基链或二酰基链。

在一些实施方案中，货物部分通过直接键偶联至锚定物。

在一些实施方案中，货物部分通过连接基偶联至锚定物。

6.1.7.连接基

连接基包含原子链，该原子链将货物部分共价连接到货物携带复合物(例如Cargomer)中的其他部分，例如连接至载脂蛋白分子、两亲性分子和锚定物。许多连接基分子是可商购的，例如来自ThermoFisher Scientific。合适的连接基是本领域技术人员众所周知的，并且包括但不限于直链或支链碳连接基、杂环碳连接基和肽连接基。连接基可以是双功能连接基，其可以是同双功能的或异双功能的。

合适的连接基包括可裂解的和不可裂解的连接基。

连接基可以是可裂解的连接基，促进货物部分在体内的释放。可裂解连接基包括酸不稳定连接基(例如，包含肼或顺式乌头酰基)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)连接基、光不稳定连接基或含二硫键的连接基(Chari et al.,1992,Cancer Research 52:127-131；U.S.Patent No.5,208,020)。可裂解连接基通常在细胞内条件下易于裂解。合适的可裂解连接基包括例如可被细胞内蛋白酶(例如溶酶体蛋白酶或核内体蛋白酶)裂解的肽连接基。在示例性的实施方案中，连接基可以是二肽连接基，例如缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)或苯丙氨酸-赖氨酸(phe-lys)连接基。

可裂解连接基可以是pH敏感的，即在某些pH值对水解敏感。通常，pH敏感连接基在酸性条件下可水解。例如，可以使用在溶酶体中可水解的酸不稳定连接基(例如腙、缩氨基脲、缩胺基硫脲、顺乌头酰胺、原酸酯、缩醛、缩酮等)。(参见，例如，美国专利号5,122,368；5,824,805；5,622,929；Dubowchik and Walker,1999,Pharm.Therapeutics 83:67-123；Neville et al.,1989,Biol.Chem.264:14653-14661)。此类连接基在中性pH条件下(例如血液中的pH条件)相对稳定，但在pH低于5.5或5.0(溶酶体的大致pH值)时不稳定。在某些实施方案中，可水解连接基是硫醚连接基(例如，通过酰腙键连接至货物部分的硫醚(参见例如美国专利号5,622,929)。

在一些实施方案中，连接基在还原条件下是可裂解的(例如，二硫键连接基)。多种二硫键连接基是本领域已知的，包括例如可以使用SATA(N-琥珀酰亚胺基-5-乙酰硫代乙酸酯)、SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯)、SPDB(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丁酸酯)和SMPT(N-琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫基)甲苯)、SPDB和SMPT形成的那些(参见，例如，Thorpe et al.,1987,Cancer Res.47:5924-5931；Wawrzynczak et al.,In Immunoconjugates:Antibody Conjugates inRadioimagery and Therapy ofCancer(C.W.Vogeled.,Oxford U.Press,1987。另参见，美国专利号4,880,935)。

在一些实施方案中，连接基可被细胞内环境中(例如，在溶酶体或核内体或小窝(caveolea)内)中存在的切割剂(例如酶)切割。连接基可以是例如被细胞内肽酶或蛋白酶(包括但不限于溶酶体或核内体蛋白酶)切割的肽基连接基。在一些实施方案中，肽基连接基的长度为至少两个氨基酸或至少三个氨基酸。切割剂可包括组织蛋白酶B和D以及纤溶酶，已知它们全部水解二肽药物衍生物，导致活性药物在靶细胞内释放(参见，例如，Dubowchik and Walker,1999,Pharm.Therapeutics 83:67-123)。在一些实施方案中，可被细胞内蛋白酶切割的肽基连接基是Val-Cit连接基或Phe-Lys连接基。

在一些实施方案中，连接基是丙二酸酯连接基(Johnson et al.,1995,Anticancer Res.15:1387-93)、马来酰亚胺苯甲酰基连接基(Lau et al.,1995,Bioorg-Med-Chem.3(10):1299-1304)，或3'-N-酰胺类似物(Lau et al.,1995,Bioorg-Med-Chem.3(10):1305-12)。

在其他实施方案中，连接基单元不可裂解并且货物部分例如通过复合物降解而释放。示例性的不可裂解连接基包括马来酰亚胺己酰基(maleimidocaproyl)、N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺甲基)环己烷甲酸酯(SMCC)和N-琥珀酰亚胺基-4-(碘乙酰基)-氨基苯甲酸酯(SIAB)。

在一些实施方案中，货物部分通过连接基偶联至锚定物(例如，如第6.1.6节中所描述的)。在一些实施方案中，将货物部分偶联至锚定物的连接基是双功能连接基。在一些实施方案中，将货物部分偶联至锚定物的连接基是可裂解的连接基。在一些实施方案中，可裂解连接基是二肽连接基，例如缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)或苯丙氨酸-赖氨酸(phe-lys)连接基。在一些实施方案中，将货物部分偶联至锚定物的连接基是不可裂解的连接基。示例性的不可裂解连接基包括马来酰亚胺己酰基、N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺甲基)环己烷甲酸酯(SMCC)和N-琥珀酰亚胺基-4-(碘乙酰基)-氨基苯甲酸酯(SIAB)。

6.2.器官保存溶液

有许多市售的器官保存溶液。许多这些器官保存溶液含有可最大程度地减少储存和运输期间对移植器官和组织造成的损害的组分。器官保存溶液也经过专门设计，以减少移植物排斥的可能性。器官保存溶液可包含各种组分，例如选自胶体、不可渗透剂(impermeant)、气体、电解质、抗氧化剂、营养物和/或代谢底物、缓冲剂及其组合的组分。

一些市售的肾脏保存溶液包括Collins溶液、EC溶液、威斯康星大学溶液(UW溶液)、组氨酸-色氨酸-酮戊二酸溶液(HTK溶液)、溶液、高渗柠檬酸盐腺嘌呤溶液(HC-A溶液和HC-A II溶液)、磷酸盐缓冲蔗糖(PBS)140、HP16、HBS、B2、Lifor、Ecosol、Biolasol、肾脏保存溶液2(RPS-2)、F-M、AQIXRS-I、WMO-II、Institute Georges Lopez-1和CZ-1溶液(Chen et al.,2019,Cell Transplantation,28(12):1472-1489)。器官保存溶液中可以包含各种组分，以最大限度地减少缺血/缺氧损伤并最大限度地提高移植后的器官功能。

下表2提供了市售器官保存溶液的示例性组分：

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本公开的器官保存溶液可包含例如基于脂质结合蛋白的复合物和表2中列出的一种或多种组分。例如，器官保存溶液可包含基于脂质结合蛋白的复合物(例如，CER-001)和溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液中的一种或多种组分。在一些实施方案中，本公开的器官保存溶液包含基于脂质结合蛋白的复合物(例如，CER-001)和Celsior/>EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分，任选地/>溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分以表2中所示的浓度或以表2中所示的浓度±20％、±15％、±10％或±5％存在。在一些实施方案中，本公开的器官保存溶液包含CER-001和/>溶液的组分。在一些实施方案中，CER-001在蛋白质基础上以0.1mg/ml至5mg/ml的浓度存在(例如，0.3mg/ml至0.5mg/ml、0.2mg/ml至0.6mg/ml、0.1mg/ml至1mg/ml、1mg/ml至2mg/ml或2mg/ml至5mg/ml)。在一些实施方案中，CER-001在蛋白质基础上以0.4mg/ml的浓度存在。如本文所用，表述“蛋白质基础”是指基于脂质结合蛋白的复合物(例如，CER-001)的量是根据在基于脂质结合蛋白的复合物(例如，CER-001)中的脂质结合蛋白(例如，ApoA-I)的量计算的。

可以使用的另一种示例性器官保存溶液是溶液，其包含0.5mM的氯化钙(二水合物)、10mM的HEPES(游离酸)、25mM的磷酸钾(单碱)、30mM的甘露醇、10mM葡萄糖(无水)、80mM葡萄糖酸钠、5mM葡萄糖酸镁、5mM D-核糖、50g/L五级分(HES)、3mM谷胱甘肽(还原型)、3mM腺嘌呤(游离碱)。在一些实施方案中，本公开的器官保存溶液包含基于脂质结合蛋白的复合物(例如，CER-001)和/>溶液的组分。在一些实施方案中，溶液的组分以本段中列出或者±20％、±15％、±10％或±5％的浓度存在。

含有硫酸软骨素和葡聚糖的溶液(例如Optisol^TM、Optisol GS^TM)可用于保存角膜组织的溶液中。也可以使用McCarey-Kaufman(MK)培养基、Chen培养基和Cornisol。例如，市售的角膜保存溶液可以补充有基于脂质结合蛋白的复合物(例如，CER-001)。在一些实施方案中，用于保存角膜组织的溶液包含基于脂质结合蛋白的复合物(例如，CER-001)和一种或多种(例如，任何一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种或八种)以下物质：硫酸软骨素、葡聚糖、碳酸氢钠、抗生素(例如庆大霉素和/或链霉素)、氨基酸混合物、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺和2-巯基乙醇。

例如，可以通过将基于脂质结合蛋白的复合物与溶液的其他组分组合来制备本公开的器官保存溶液。例如，基于脂质结合蛋白的复合物可以与预制的(例如，市售的)器官保存溶液组合。或者，器官保存溶液的组分可以以任何其他方式组合，例如顺序添加并混合。

在一些方面，本公开提供了器官保存溶液产品。此类产品可包含在密封容器(例如袋子(例如，含有1L溶液)或瓶子(例如，含有1L溶液))中的本公开的器官保存溶液。

6.2.1.胶体

胶体(特别是高分子量胶体)可以包含在器官保存溶液中。在器官保存溶液中，添加高分子量胶体可以维持血管内胶体渗透压，并防止间质水肿。可以包含在器官保存溶液中的示例性胶体包括但不限于羟乙基淀粉(HES)(例如50kDa)、葡聚糖(例如40kDa)、聚乙二醇(PEG)例如PEG 35(35kDa)或PEG 20(20kDa)及其组合。

6.2.2.不可渗透剂

器官保存溶液中可以包含不可渗透剂以限制细胞水肿。不可渗透剂防止细胞肿胀的有效性通常由其分子量决定。一般来说，较大的分子能够更好地防止细胞肿胀。不可渗透剂的实例包括但不限于单糖，例如葡萄糖(分子量180kDa)、甘露醇(分子量182kDa)、蔗糖(分子量342kDa)、棉子糖(分子量504kDa)、乳糖醛酸盐及其组合。

6.2.3.气体

一些气体已被使用以减少器官移植中的缺血/缺氧损伤，包括氧气(O₂)、氢气(H₂)、一氧化碳(CO)、一氧化氮(NO)、硫化氢(H₂S)和氩气(Ar)。可以将气体添加到器官保存溶液中。

6.2.4.电解质

器官保存溶液中可以包含电解质(例如来自盐的电解质)以帮助维持供体器官中的电解质稳态。示例性电解质包括但不限于Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、Cl^-、SO₄ ^2-、PO₄ ^3-、HCO^3-、柠檬酸盐及其组合。

6.2.5.抗氧化剂

器官保存溶液可包含抗氧化剂和/或自由基清除剂，以帮助限制移植器官的缺血/缺氧损伤。中断ROS生成途径并清除现有ROS的添加剂可以帮助预防或减少器官保存期间的缺血/缺氧损伤。示例性的抗氧化剂和/或自由基清除剂包括：别嘌呤醇(黄嘌呤氧化酶抑制剂)、还原型谷胱甘肽(含有硫醇的氨基酸)、ROS清除氨基酸例如色氨酸或L-精氨酸和组氨酸、卵磷脂化超氧化物歧化酶(lec-SOD)、H₂S、N-乙酰半胱氨酸、异丙酚、TMZ、rh-BMP-7、trolox、依达拉奉、硒、烟拉文、前列腺素E1、丹参酮IIA及其组合。

6.2.6.营养物和/或代谢底物

在器官保存溶液中可以包含氨基酸以提供营养物和/或充当代谢底物。在一些实施方案中，氨基酸选自色氨酸、谷氨酸、组氨酸、L-精氨酸、N-乙酰半胱氨酸和D-半胱氨酸中的一种或多种。在一些实施方案中，在器官保存溶液中包含的营养物包括但不限于环螺旋B肽营养因子，例如牛中性粒细胞肽-1(BNP-1)、P物质(SP)、神经生长因子-β(NGF-β)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、表皮样生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)、重组人骨形态发生蛋白-7(rh BMP-7)、卵磷脂化超氧化物歧化酶(lec-SOD)、TNF-受体融合蛋白(TNF-RFP)及其组合

6.2.7.缓冲剂

器官保存溶液中可包含缓冲剂以控制细胞pH值。在一些实施方案中，本公开的器官保存溶液的pH在约7.0至约7.4之间。在一些实施方案中，缓冲剂选自硼酸盐、硼酸盐-多元醇复合物、琥珀酸盐、磷酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、碳酸盐缓冲剂、有机缓冲剂、氨基酸缓冲剂(例如组氨酸)及其组合。

6.2.8.其他组分

线粒体功能障碍是缺血期间的关键事件，其可导致ATP合成受损并可能导致ATP耗竭。维持线粒体完整性和保护线粒体功能是器官保存溶液的重要要求。在一些实施方案中，本公开的器官保存溶液含有一种或多种线粒体保护试剂。合适的线粒体保护试剂包括但不限于H₂S、MitoQ、奎纳克林、TMZ和AP39。

在器官再灌注期间可以激活多种炎症途径和因子，从而导致缺血后损伤。在一些实施方案中，器官保存溶液中可包含特异性抗体或途径抑制剂以调节炎症反应并减轻缺血后损伤。合适的化合物包括内皮受体拮抗剂、TNF-受体融合蛋白(TNF-RFP)、ICAM-1反义脱氧核苷酸、内皮受体拮抗剂、p38MAPK抑制剂例如FR167653、外源CO或CO释放分子、H₂S、O₂、Ar、美拉加群、环状螺旋B肽、TMZ、lec-SOD、Rho激酶抑制剂HA1077、凝血酶抑制剂例如美拉加群、血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂、蛋白酶体抑制剂及其组合。

缺血/缺氧和随后的再灌注损伤导致细胞死亡程序(例如凋亡、坏死和自噬相关的细胞死亡)的激活。在一些实施方案中，器官保存溶液含有阻断细胞死亡程序的激活的添加剂，例如糖皮质激素例如地塞米松、裸胱天蛋白酶-3siRNA、基质金属蛋白酶(MMP)-2siRNA、AMP激活的蛋白激酶(AMPK)活化剂及其组合

在一些实施方案中，可以将诸如腺苷的能量基质添加到器官保存溶液中以允许在保存期间快速的ATP再生。

器官保存溶液的其他有用的添加剂包括有助于Ca²⁺稳态的试剂，例如钙通道阻滞剂如维拉帕米或可以防止钙过载的其他药理学试剂，例如H₂S，其可以通过PI3K/Akt/PKG依赖性途径抑制Na⁺/H⁺交换活性。

在某些实施方案中，器官保存溶液中包含一种或多种另外的添加剂，包括但不限于前列腺素E1、牛磺酸、雷诺嗪及其组合。

6.3.试剂盒和系统

在某些方面，本公开提供了包含基于脂质结合蛋白的复合物(例如，如第6.1节中所述)和器官保存溶液的一种或多种组分(例如，如第6.2节中所述)的试剂盒。在某些实施方案中，基于脂质结合蛋白的复合物在试剂盒中以溶液的形式提供。在某些实施方案中，基于脂质结合蛋白的复合物在试剂盒中以冻干的形式提供。

在某些实施方案中，试剂盒的一种或多种组分在密封容器中提供。在一些实施方案中，密封容器是袋子。

在某些实施方案中，器官保存溶液的一种或多种组分在试剂盒中是溶液的形式。

在某些实施方案中，器官保存溶液复合物的一种或多种组分是在密封容器中。在一些实施方案中，密封容器是袋子。

在一些实施方案中，试剂盒包含在一个容器中的基于脂质结合蛋白的复合物(例如，CER-001)，以及在一个或多个另外的容器中的器官保存溶液的其余组分。例如，试剂盒可包含在一个容器中的基于脂质结合蛋白的复合物(例如，CER-001)以及在第二个容器中的溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液。在一些实施方案中，试剂盒包含在一个容器中的CER-001和在另一容器中的/>溶液。通过将基于脂质结合蛋白的复合物与其他组分组合，可以由此类试剂盒制备成品器官保存溶液。

另一方面，本公开提供了系统，其包含(a)本公开的器官保存溶液或器官保存溶液产品和(b)灌注机和/或器官(例如肾、肝、心脏、肺、胰腺、肠或气管，其可以来自例如哺乳动物(例如人或猪))。在一些实施方案中，该系统包含灌注机。在其他实施方案中，该系统包含器官。在又一其他实施方案中，该系统包含灌注机和器官。示例性灌注机包括但不限于心肺机、常温灌注机和亚常温灌注机。

在另一个方面，本公开提供了系统，其包含(a)本公开的器官保存溶液或器官保存溶液产品和(b)组织(例如，眼睛(例如，角膜或巩膜)、皮肤、脂肪、肌肉、骨、软骨、胎儿胸腺或神经组织)，其可以来自例如哺乳动物(例如人或猪))。在一些实施方案中，该系统进一步包含灌注机。

6.4.器官、组织、器官和组织保存方法以及移植方法

在一些方面，本公开提供了使用本公开的器官保存溶液进行离体器官保存的方法。该器官可以是例如哺乳动物器官，例如人或猪的器官。示例性器官包括但不限于肾、肝、心脏、肺、胰腺、肠和气管。在一些实施方案中，该器官是肾。在一些实施方案中，该器官是眼睛。

该方法可以包括，例如，使用本公开的器官保存溶液进行器官的机械灌注。在一些实施方案中，器官保存溶液可以用血液(例如全血)稀释。例如，可以以器官保存溶液与全血的体积:体积比例1:1至1:3用全血稀释器官保存溶液。在一些实施方案中，该比例是1:1。在其他实施方案中，该比例为1:3。或者，器官保存溶液可以不经稀释而使用。

机械灌注可以是例如常温的(例如从30℃至38℃)，或亚常温的(例如从2℃至8℃)。在一些实施方案中，机械灌注是从30℃至38℃进行的。在其他实施方案中，机械灌注是从2℃至8℃进行的。在其他实施方案中，机械灌注在8℃至30℃(例如20℃至25℃)之间的温度进行。在一些实施方案中，机械灌注可以在用器官保存溶液(例如用冷器官保存溶液(例如，2℃至8℃))冲洗器官之前进行。

还提供了使用冷藏(CS)保存器官的方法。在一些实施方案中，冷藏包括在没有机械灌注的情况下将器官储存在器官保存溶液中，例如在2℃至6℃。在一些实施方案中，冷藏可以在用器官保存溶液(例如用冷器官保存溶液(例如，2℃至8℃))冲洗器官的步骤之前进行。

机械灌注和冷藏可以进行任何合适的时间长度，例如从供体采集器官时(或此后不久)到移植到受体中(或之前不久)。在一些实施方案中，对器官进行机械灌注或冷藏至少1小时、至少2小时、至少4小时、至少6小时和/或长达1周、长达5天、长达4天、长达3天、长达2天、长达36小时、长达1天、长达12小时、或由前述值中的任何两个界定的任何范围，例如2至4小时、2至6小时、4至6小时、6小时至12小时、12小时至1天、1天至2天等。

在一些实施方案中，肾脏经受机械灌注或冷藏长达24小时或长达36小时。

在一些实施方案中，肝脏经受机械灌注或冷藏长达12小时。

在一些实施方案中，肺经受机械灌注或冷藏长达6小时或长达8小时。

在一些实施方案中，心脏经受机械灌注或冷藏长达4小时或长达6小时。

在一些实施方案中，胰腺经受机械灌注或冷藏长达12小时或长达1天。

在一些实施方案中，肠经受机械灌注或冷藏长达12小时或长达1天。

在一些实施方案中，气管经受机械灌注或冷藏长达12小时或长达1天。

器官保存的方法可以进一步包括从器官供体移除器官的步骤。在一些实施方案中，器官供体是活体供体(例如，肾脏供体)。在其他实施方案中，供体已故。

本公开进一步提供了器官移植的方法，包括将通过本公开的器官保存方法保存的器官移植到需要器官移植的受试者体内。可以根据本文描述的方法治疗的受试者优选是哺乳动物，最优选人类。

在一些方面，本公开提供了使用本公开的器官保存溶液进行离体组织保存的方法。该组织可以是例如哺乳动物组织，例如人或猪组织。示例性组织包括但不限于眼睛(例如角膜或巩膜)、皮肤、脂肪、肌肉、骨、软骨、胎儿胸腺和神经组织。在一些实施方案中，组织是角膜组织。

该方法可以包括，例如，将组织储存(例如，冷储存(CS))在本公开的器官保存溶液中。在一些实施方案中，冷藏包括将组织储存在器官保存溶液中，例如在2℃至6℃。

组织在器官保存溶液中的储存可以进行任何合适的时间长度，例如从供体采集组织(或此后不久)到移植到受体(或之前不久)的时间。在一些实施方案中，储存进行至少1小时、至少2小时、至少4小时、至少6小时和/或长达4周、长达2周、长达1周、长达5天、长达4天、长达3天、长达2天、长达36小时、长达1天、长达12小时、或由前述值中的任意两个限定的任何范围，例如2至4小时、2至6小时、4至6小时、6小时至12小时、12小时至1天、1天至2天、1天至1周、1周至2周、2周至4周等。在一些实施方案中，角膜组织在器官保存溶液中保存长达4周。

器官保存的方法可以进一步包括从组织供体移除组织的步骤。在一些实施方案中，组织供体是活体供体。在其他实施方案中，供体已故。

本公开进一步提供了组织移植的方法，其包括将通过本公开的器官保存方法保存的组织移植至需要器官移植的受试者。可以根据本文描述的方法治疗的受试者优选是哺乳动物，最优选人类。

7.实施例

尽管近年来在免疫抑制疗法和在移植手术技术领域取得了进步，但缺血/再灌注损伤仍然是移植器官功能丧失的主要原因之一。

近几十年来，由于器官保存所需的灌注机技术不断进步，人们对能够限制IRI损伤的新策略的兴趣受到了巨大的推动。此外，作为在受体的运输或准备过程中保持器官质量的绝佳机会，灌注机允许器官在移植前进行药理学处理。在肾IRI损伤的背景下，已经在小鼠模型中尝试了几种药理学方法，例如能够调节氧化应激的单克隆抗体αCD47Ab、可溶性补体受体因子sCR1和具有抗凝血作用的重组蛋白血栓调节蛋白(rTM)。然而，这些药物中的许多在转化为临床环境时无效(Hameed et al.,2020,Sci Rep.10(1):6930)。在不受理论约束的情况下，据信HDL和HDL模拟物例如CER-001能够通过作用于相同的氧化应激、炎症和凝血机制来限制在器官保存溶液中的离体IRI损伤。此外，HDL和HDL模拟物(例如CER-001)包含内源蛋白，其预计不会引起与单克隆抗体相同的二次效应。

实施例1描述了在IRI肾损伤猪模型中的器官保存研究。IRI猪模型是人类肾移植系统中所发生情况的良好动物模型，因为它模拟了血清肌酐降低、间质纤维化、肾小管萎缩、循环白细胞浸润(Delpech et al 2016,J Transl Med 14,277)。

猪模型的另一个优点是能够控制以肾动脉夹紧为特征的整个过程，从热缺血和冷缺血到再灌注，从而可以清楚地突出药物调节的过程。在线粒体水平，细胞内ATP减少、乳酸增加、细胞内Ca⁺⁺积累和O₂自由基形成的代谢变化可以在模型中精确研究。

猪和人的肾脏在解剖学上相似(其特征是多小叶结构，与啮齿动物和单叶小鼠的肾脏相反)。猪的体型大小允许进行类似于人类的外科手术，重复收集外周血或肾活检以评估和优化临床前灌注技术。最后，与免疫系统生理学的密切相似性允许评估HDL和HDL模拟物(例如CER-001)在器官保存溶液中的有效性。

7.1.实施例1：评估CER-001在猪离体灌注模型中减少缺血/再灌注损伤的功效

本研究总共使用了28头猪。体重45-60公斤的猪在研究前禁食24小时。所有动物均预先肌内注射阿扎哌隆(8mg kg^-1)和阿托品(0.03mg kg^-1)的混合物，以减少咽部和气管分泌并预防插管后心动过缓。在股静脉插管后，将用于肾脏离体灌注的600mL静脉血抽入每个填充5,000IU肝素的无菌血袋中(直到480秒的活化凝血时间，ACT)。麻醉后，通过腹部中线切口接近两个肾脏。然后，分离肾动脉和静脉，并用直角夹将血管环定位在肾动脉周围。通过拉动血管环诱导热缺血60分钟，然后再灌注3小时。然后通过IV施用1mL/kg BW戊巴比妥对动物实施安乐死。器官移植后，对肾脏进行称重，并用在4℃的Celsior溶液冲洗。对于每头猪，一个肾脏静态储存在4℃(冷静态储存，CS)，而另一个肾脏则插入机械灌注系统中。对于灌注的肾脏，对肾动脉(逆行心麻痹导管)以及肾静脉(1/4”管连接器、1/4”管)和输尿管(14Fr.导管)进行插管。连续监测并自动记录心率、氧血红蛋白饱和度、呼吸气体组分、呼吸频率、潮气量、气道压、收缩压和中心静脉压(Ohmeda Modulus CD；Datex Ohmeda,Helsinki,Finland)。

7.1.1.研究设计

器官移植后，肾脏被随机分为以下几组：

第1组：肾脏用作为保存溶液在4℃冷藏6h，(CS)N＝7。

第2组：肾脏用补充有CER-001(CS+CER-001)，(0.4mg/ml)的作为保存溶液在4℃冷藏6h，N＝7。

第3组：肾脏用常温灌注机用溶液+全血(1:1比例)(NMP)在32℃灌注6h，N＝7。

第4组：肾脏用常温灌注机用补充有CER-001(0.4mg/ml)的溶液+全血(1:1比例)(NMP+CER-001)在32℃灌注6h。

用溶液通过肾动脉冲洗所有肾脏后，对每个肾脏进行插管。NMP由配备3T加热器-冷却器装置(Stockert GmbH,Germany)(其允许精确的温度控制)的S3心肺机(HLM)(Stockert GmbH,Germany)进行。此外，S3 HLM还配备了Sechrist 3500CP-G型低流量气体混合器(Sechrist,USA)，可确保在吹扫流量和吸入氧分数(FiO2)方面的精确的气体输送。灌注回路包括几个一次性用品：带有磷酰胆碱(PC)涂层的儿科氧合器Lilliput2(LivaNova,Italy)；离心泵(LivaNova,Italy)，心脏切开术(LivaNova,Italy)，PVC1/4管(LivaNova,Italy)。通过调节定制设计的泵控制器手动维持75mmHg的目标平均动脉压(MAP)并进行连续监测。通过超声波流量传感器监测肾血流量(RBF)。

7.1.2.灌注液和尿液取样和分析

在不同的时间点收集动脉和静脉灌注液和尿液样本。使用血气分析仪测量动脉和静脉的pO2和pH水平。通过使用动脉和静脉氧含量、动脉和静脉SO2和pO2值以及血红蛋白浓度(ca/vO2＝Sa/vO2*1.34*c(Hb)+pa/vO2*0.0031)计算耗氧量((caO2-cvO2)*RBF/肾脏重量)来估计肾代谢活动。单独收集尿液，并记录尿排出量。

灌注液血浆样本和尿液样本储存在-80℃以供后续分析。分析灌注液样品的钠和肌酐水平。测定尿样中的蛋白质、钠和肌酐浓度。使用动脉灌注液和尿液水平，计算肌酐清除率(尿肌酐*尿流量/血浆肌酐/肾脏重量)和钠排泄分数(尿钠*血浆肌酐/血浆钠/尿肌酐)。

灌注参数

·灌注溶液：溶液+全血(根据血细胞比容HCT为1:1/1:3比例)；

·Hb：9-11mg/dL(如果低于此参数，则添加在回收过程期间通过细胞保存装置获得的去白细胞、无血浆的血液)；

·普通肝素(unfractionated heparin，UFH)的U.I.；

·灌注持续时间：6小时；

·灌注压：>75mmHg；

·肾静脉压：0-3mmHg；

·流量：根据代谢参数和血管阻力进行调整；

·灌注温度：32℃。

监测

·流量(mL/min)：持续监测；

·压力(mmHg)：持续监测；

·肾内阻力(mmHg/mL/min)：10分钟检查；

·血气分析(酸碱稳态、电解质、Hb、PaO2、PaCO2等)：30分钟检查；

·代谢参数(DO2、VO2、O2ER)：30分钟检查；

·灌注温度：持续监测。

分析

灌注前和灌注后：

·重量

血气测量：

·动脉：pH、pOs、pCO2、HCO3-、碱剩余(base excess)、乳酸、Na+、K+、Cl-、Ca²⁺

·静脉：pH、pOs、pCO2、HCO3-、碱剩余、乳酸、Na+、K+、Cl-、Ca²⁺

肾功能：

·尿排出量(ml/h)

·血清肌酐水平(umol/l)

·肌酐清除率(ml/min/100g)

·肾耗氧量(ml/min/g(pO2动脉–pO2静脉)x(流速)/重量)，钠排泄分数(FENa＝[Na+]尿液x血浆肌酐浓度/[Na+]血浆x尿肌酐浓度)

损坏标记：

·AST

·LDH

·细胞因子：IL-6、MCP-1、CRP、IL-8、TNF-α、CXCL-10、PAI-1

在手术的T₀和T_结束进行肾活检，并测量以下内容：

·ATP

·补体

·组织学

·H&E形态染色、PMN浸润、ICAM-1、P-选择素、MPO

7.1.3.结果

在初步结果中，与用未补充CER-001的溶液保存的移植肾脏相比，在用补充了CER-001的/>溶液保存的移植肾脏中观察到肾流体动力学、炎性细胞因子水平和组织学的改善。

7.2.实施例2：CER-001保护人内皮和肾小管上皮细胞功效的体外评价

体外研究的目的是评估CER-001对内皮和肾小管上皮细胞保护的分子机制。在C5a和H2O2刺激后暴露于CER-001后，体外评估了CER-001(50μg/ml和500μg/ml)对人内皮和肾小管上皮细胞的影响。C5a补体组分是最强大的补体过敏毒素，能够在细胞培养中诱导强烈炎症，并用于模拟缺血/再灌注相关的免疫激活(Peng et al.,2012,J Am Soc Nephrol.23(9):1474-1485；Curci et al.,2014,Nephrol Dial Transplant.29(4):799-808；Franzinet al.,2020,Front Immunol.11:734)。还评估了CER-001预处理以及随后的C5a和H2O2刺激。

进行以下分析：

·活力测试(MTT、膜联蛋白V/PI)

·细胞因子ELISA检测(如IL-6、MCP-1)

·氧化应激分析测试(即AOPP ASSAY KIT Oxiselect)

·VCAM、ICAM-1

·在eNOS蛋白中Ser 1177磷酸化的蛋白质印迹，以检测内皮细胞中的信号通路分析以及通过SR-BI的HDL介导的信号传导(Uittenbogaard et al.,2000,J Biol Chem,275:11278–11283；Adelheid Kratzer et al.,2014,Cardiovascular Research,Vol.103(3):350–361)。

CER-001降低C5a和H2O2刺激后的免疫激活。

7.3.实施例3：在离体常温机械灌注中使用CER-001来改善来自ECD和DCD供体的废弃肾脏质量

本实施例的目的是比较在基于用CER-001补充的溶液的新亚常温保存策略的设置中肾功能、内皮功能障碍、细胞因子释放和组织学损伤的水平。评估了废弃的DCD和ECD肾脏在离体灌注期间的肾功能、炎症、细胞凋亡、内皮功能障碍和移植血管病变。这项研究的一个目标是通过递送CER-001来优化市售的器官移植灌注系统，以提高移植物的存活率。

7.3.1.研究设计

该研究有两组。在两组中，肾脏均来自循环死亡后不受控制的捐献(uDCD)供体和/或扩展标准供体(ECDs)，或者根据组织学评分(Karpinsky评分)和能够预测移植结果的指标(例如肾脏供体风险指数(KDRI)和肾脏供体概况指数(KDPI))被宣布为不可移植的器官。

KDRI是利用供体因素(包括年龄、高血压和糖尿病的患病率、死亡原因和血清肌酐(sCr)水平)为移植物评估和决策而开发的。在KDRI之后，KDPI已广泛用于术后移植物功能的预测和分配过程。

KDRI和KDPI的评分基于多种临床因素。然而，年龄是计算这些评分的最重要因素。

这两组是：

·对照组，其用原位冷冲洗进行标准肾脏采集，然后用常规的溶液进行6小时常温机械灌注。

·CER-001组，其用原位冷冲洗进行标准肾脏采集，然后用补充有0.4mg/ml CER-001的常规溶液进行6小时常温机械灌注。

7.3.2.分析

分析的主要输出是包括尿液产生量的肾功能：

肾功能：

·尿排出量(ml/h)

·血清肌酐水平(umol/l)

·肌酐清除率(ml/min/100g)

灌注前和灌注后：

·重量

血气测量：

·动脉：pH、pOs、pCO2、HCO3-、碱剩余、乳酸、Na+、K+、CL-、Ca2+

·静脉：pH、pOs、pCO2、HCO3-、碱剩余、乳酸、Na+、K+、CL-、Ca2+

在T₀和T_结束进行肾活检，并测量以下内容：

·ATP

·补体

·组织学

·H&E形态染色、PMN浸润

·ICAM-1、P-选择素、MPO

灌注参数：

·灌注液：溶液+全血(根据血细胞比容HCT为1:1/1:3比例)

·Hb：>7mg/dL(如果低于，则添加在回收过程期间通过细胞保存装置获得的去白细胞、无血浆的血液)

·普通肝素(UFH)的U.I.

·灌注压：>75mmHg

·肾静脉压：0-3mmHg

·流量：根据代谢参数和血管阻力调整

·灌注温度：32℃

监测

·流量(mL/min)：持续监测

·压力(mmHg)：持续监测

·肾内阻力(mmHg/mL/min)：10分钟检查

·血气分析(酸碱稳态、电解质、Hb、PaO2、PaCO2等)：30分钟检查

·代谢参数(DO2、VO2、O2ER)：30分钟检查

·灌注温度：持续监测

损坏标记：

·AST

·LDH

·细胞因子：IL-6、MCP-1、CRP、IL-8、TNF-α、CXCL-10、PAI-1

7.3.3.结果

与在不存在CER-001时经受NMP的肾脏相比，在存在CER-001时经受NMP的肾脏显示肾损伤减少。在不受理论约束的情况下，据信当用于本文所述的器官保存溶液中时，CER-001以及其他基于脂质结合蛋白的复合物可以帮助保存器官功能并限制器官损伤，例如在肾、肝、心、肺、胰腺、肠和气管中。

7.4.实施例4：评估CER-001在猪离体灌注模型中减少缺血/再灌注损伤的功效

7.4.1.材料和方法

总共10头猪被双颞电击击昏，并随后根据正常屠宰场程序(UNI En ISO 9001)放血。在热缺血60分钟后，用500ml乳酸林格氏液在4℃冲洗并冷却肾脏，这标志着冷缺血(T-1)的开始。然后将肾脏冷藏过夜以增加损伤程度。第二天，暴露来自器官的血管并连接到肾脏灌注机装置(T0)。使用补充有CER-001的溶液，未补充CER-001的溶液，在25mmHg的平均动脉压进行含氧脉动低温机械灌注(HMP)四小时(T4或T结束)。

通过高碘酸-希夫(PAS)染色在T0、T2和T结束进行组织学分析。使用Aperio扫描示波器CS2设备(Aperio,Vista,CA,USA)采集和分析数字载玻片。通过Aperio扫描示波器软件进行肾小管损伤评分测量。由两名不知情的观察者对肾小管损伤进行半定量评分。每只动物的评分指数表示为获得的所有评分的平均值，并表示为中位数±IQR。

在T-1、T0、T2和T结束测量灌注液中的CCL2(MCP-1)和TNF-α水平以及天冬氨酸转氨酶水平。

在T0和T结束通过qRT-PCR测量肾活检中的CCL2(MCP-1)、IL-6和内皮素-1(ET-1)基因表达水平。

7.4.2.结果

相对于用未补充CER-001的溶液保存的移植肾脏，在用补充了CER-001的/>溶液保存的移植肾脏中观察到肾血管阻力参数的改善(图1A-1B)。

组织学分析显示在心源性死亡后猪肾脏的肾脏形态发生典型变化。这些变化包括肾小管刷状缘的丧失、肾小管细胞空泡化和扩张，并且在过夜静态冷藏(SCS)后变得更加明显(图2A，T0)。用常规溶液的HMP处理部分地保留了肾脏的生理形态并减少了损伤(图2A，对照)。然而，用CER-001补充溶液进行的HMP处理显著改善了肾组织，减少了肿胀和肾小管上皮细胞坏死/凋亡，减少了扁平上皮，减少了水肿，并整体改善了肾组织(图2A，“CER001”)。

相对于用未补充CER-001的溶液保存的外植肾，在用补充了CER-001的/>溶液保存的肾脏中，肾小管损伤减少(图2B)。炎性细胞因子的灌注液分析揭示，与未补充的溶液相比，在补充了CER-001的保存溶液中经HMP处理后MCP-1和TNF-α水平降低(图2C-2D)。相对于用未补充CER-001的/>溶液保存的移植肾脏，用补充了CER-001的/>溶液保存的肾脏在T2和T结束时天冬氨酸转氨酶水平(作为肾损伤的标志物进行评估)降低(图2E)。

与用未补充的溶液灌注的肾脏相比，用补充了CER-001的溶液灌注的肾脏中的CCL2(MCP-1)、IL-6和ET-1基因表达降低(图3A-3C)。/>

7.5.实施例5：CER-001保护人内皮细胞功效的体外评估

这个体外研究的目的是评估CER-001对内皮细胞保护的分子机制。

在内皮细胞中，eNOS在Ser-1177的磷酸化可调节体内NO生成、改变酶的Ca2+敏感性和NO形成速率，具有保护性抗凋亡、抗氧化和抗炎作用。通常，血管内皮生长因子(VEGF)会刺激eNOS在Ser-1177的磷酸化。Thr-495的磷酸化通过调节钙调蛋白和小窝蛋白相互作用间接影响该过程(Chen etal.,2008,J Biol Chem.283(40):27038-27047)。

在本研究中，人内皮细胞(HUVEC)在EndoGro培养基中生长，然后与(i)10^-7nM C5a孵育60分钟，(ii)4μg/ml LPS孵育60分钟(iii)CER-001(范围5-100μg/ml)孵育60分钟，或(iv)10^-7nM C5a孵育30分钟并然后与CER-001孵育30分钟。将HUVEC细胞与50ng/ml VEGF孵育60分钟，用作eNOS在Ser-1177磷酸化的阳性对照。通过FACS分析Ser 1177-eNOS磷酸化。

CER-001减少C5a刺激后的内皮细胞功能障碍(图4)。与未处理条件(基础)相比，C5a和LPS均诱导了磷酸Ser1177-eNOS显著减少，而CER-001增加磷酸Ser1177-eNOS水平。与C5a条件相比，暴露于C5a 30分钟，然后暴露于CER-001 30分钟的内皮细胞显示出恢复的磷酸Ser1177-eNOS水平，表明CER-001的保护作用。

7.6.实施例6：CER-001在离体常温机械灌注中的应用以改善肾脏质量

用常规器官保存溶液或用补充有CER-001的常规器官保存溶液对肾脏进行常温机械灌注(NMP)。

结果显示在图5A-5E中。与用未补充有CER-001的常规溶液灌注的NMP灌注肾脏相比，观察到用补充有CER-001的常规溶液灌注的NMP灌注肾脏的血管肾阻力(图5A-5C)和肾流量(图5D)显著改善。在用CER-001补充的溶液灌注的肾脏中，尿排出量显示增加的水平(图5E)。

8.具体实施方案

在以下编号的段落中阐述的实施方案中描述了本公开的各个方面。

1.基于脂质结合蛋白的复合物，其用于器官保存溶液。

2.根据实施方案1使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其是重构的HDL或HDL模拟物。

3.根据实施方案1或实施方案2使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其包含鞘磷脂。

4.根据实施方案1至3中任一项使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其包含带负电荷的脂质。

5.根据实施方案4使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中该带负电荷的脂质是1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-[磷酰-外消旋-(1-甘油)(DPPG)或其盐。

6.根据实施方案2使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其是CER-001、CSL-111、CSL-112、CER-522或ETC-216。

7.根据实施方案6使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其是CER-001。

8.根据实施方案7使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中CER-001是脂蛋白复合物，其包含ApoA-I重量:总磷脂重量比为1:2.7+/-20％的ApoA-I和磷脂以及鞘磷脂:DPPG重量:重量比为97:3+/-20％的磷脂鞘磷脂和DPPG。

9.根据实施方案7使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中CER-001是脂蛋白复合物，其包含ApoA-I重量:总磷脂重量比为1:2.7+/-10％的ApoA-I和磷脂以及鞘磷脂:DPPG重量:重量比为97:3+/-10％的磷脂鞘磷脂和DPPG。

10.根据实施方案7使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中CER-001是脂蛋白复合物，其包含ApoA-I重量:总磷脂重量比为1:2.7的ApoA-I和磷脂以及鞘磷脂:DPPG重量:重量比为97:3的磷脂鞘磷脂和DPPG。

11.根据实施方案7至10中任一项使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中该ApoA-I具有WO 2012/109162的SEQ ID NO:1的氨基酸25-267的氨基酸序列。

12.根据实施方案7至11中任一项使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中该ApoA-I是重组表达的。

13.根据实施方案7至12中任一项使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中该CER-001包含天然鞘磷脂。

14.根据实施方案13使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中该天然鞘磷脂是鸡蛋鞘磷脂。

15.根据实施方案7至14中任一项使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中该CER-001包含合成鞘磷脂。

16.根据实施方案15使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中该合成鞘磷脂是棕榈酰鞘磷脂。

17.根据实施方案7至16中任一项使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中CER-001是至少95％同质的。

18.根据实施方案7至17中任一项使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中CER-001是至少97％同质的。

19.根据实施方案7至18中任一项使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中CER-001是至少98％同质的。

20.根据实施方案7至19中任一项使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中CER-001是至少99％同质的。

21.根据实施方案1至5中任一项使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其是Apomer或Cargomer。

22.器官保存溶液，其包含根据实施方案1至21中任一项的基于脂质结合蛋白的复合物。

23.器官保存溶液，其包含基于脂质结合蛋白的复合物。

24.实施方案23的器官保存溶液，其中基于脂质结合蛋白的复合物是重构的HDL或HDL模拟物。

25.实施方案23或实施方案24的器官保存溶液，其中基于脂质结合蛋白的复合物包含鞘磷脂。

26.实施方案23至25中任一项的器官保存溶液，其中基于脂质结合蛋白的复合物包含带负电的脂质。

27.实施方案26的器官保存溶液，其中带负电荷的脂质是1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-[磷酰-外消旋-(1-甘油)(DPPG)或其盐。

28.实施方案24的器官保存溶液，其中基于脂质结合蛋白的复合物是CER-001、CSL-111、CSL-112、CER-522或ETC-216。

29.实施方案28的器官保存溶液，其中基于脂质结合蛋白的复合物是CER-001。

30.实施方案29的器官保存溶液，其中CER-001是脂蛋白复合物，其包含ApoA-I重量:总磷脂重量比为1:2.7+/-20％的ApoA-I和磷脂以及鞘磷脂:DPPG重量:重量比为97:3+/-20％的磷脂鞘磷脂和DPPG。

31.实施方案29的器官保存溶液，其中CER-001是脂蛋白复合物，其包含ApoA-I重量:总磷脂重量比为1:2.7+/-10％的ApoA-I和磷脂以及鞘磷脂:DPPG重量:重量比为97:3+/-10％的磷脂鞘磷脂和DPPG。

32.实施方案29的器官保存溶液，其中CER-001是脂蛋白复合物，其包含ApoA-I重量:总磷脂重量比为1:2.7的ApoA-I和磷脂以及鞘磷脂:DPPG重量:重量比为97:3的磷脂鞘磷脂和DPPG。

33.实施方案29至32中任一项的器官保存溶液，其中ApoA-I具有WO 2012/109162的SEQ ID NO:1的氨基酸25-267的氨基酸序列。

34.实施方案29至33中任一项的器官保存溶液，其中ApoA-I是重组表达的。

35.实施方案29至34中任一项的器官保存溶液，其中CER-001包含天然鞘磷脂。

36.实施方案35的器官保存溶液，其中天然鞘磷脂是鸡蛋鞘磷脂。

37.实施方案29至36中任一项的器官保存溶液，其中CER-001包含合成鞘磷脂。

38.实施方案37的器官保存溶液，其中合成鞘磷脂是棕榈酰鞘磷脂。

39.实施方案29至38中任一项的器官保存溶液，其中CER-001是至少95％同质的。

40.实施方案29至39中任一项的器官保存溶液，其中CER-001是至少97％同质的。

41.实施方案29至40中任一项的器官保存溶液，其中CER-001是至少98％同质的。

42.实施方案29至41中任一项的器官保存溶液，其中CER-001是至少99％同质的。

43.实施方案23至27中任一项的器官保存溶液，其中基于脂质结合蛋白的复合物是Apomer或Cargomer。

44.实施方案22至43中任一项的器官保存溶液，其包含缓冲剂、抗氧化剂、营养物和/或代谢底物、电解质、胶体、不可渗透剂、气体或其组合。

45.实施方案44的器官保存溶液，其包含缓冲剂，任选地其中该缓冲剂包括硼酸盐、硼酸盐-多元醇复合物、琥珀酸盐、磷酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、碳酸盐缓冲剂、有机缓冲剂、氨基酸缓冲剂例如组氨酸或其组合。

46.实施方案44或实施方案45的器官保存溶液，其包含抗氧化剂，任选地其中该抗氧化剂包括别嘌呤醇、还原型谷胱甘肽、ROS清除氨基酸例如色氨酸或L-精氨酸或组氨酸、卵磷脂化超氧化物歧化酶(lec-SOD)、H₂S、N-乙酰半胱氨酸、异丙酚、TMZ、rh-BMP-7、trolox、依达拉奉、硒、烟拉文、前列腺素E1、丹参酮IIA或其组合。

47.实施方案44至46中任一项的器官保存溶液，其包含营养物和/或代谢底物，任选地其中该营养物和/或代谢底物包括氨基酸，例如色氨酸、谷氨酸、组氨酸、L-精氨酸、N-乙酰半胱氨酸、d-半胱氨酸或其组合。

48.实施方案44至47中任一项的器官保存溶液，其包含电解质，任选地其中该电解质包括Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Ca²⁺、Cl^-、SO₄ ^2-、PO₄ ^3-、HCO^3-、柠檬酸盐或其组合。

49.实施方案44至48中任一项的器官保存溶液，其包含胶体，任选地其中该胶体是羟乙基淀粉(HES)(例如，50kDa)、葡聚糖(例如，40kDa)、聚乙二醇(PEG)例如PEG 35(35kDa)或PEG 20(20kDa)或其组合。

50.实施方案44至49中任一项的器官保存溶液，其包含不可渗透剂，任选地其中该不可渗透剂是单糖，例如葡萄糖、甘露醇、蔗糖、棉子糖、乳糖醛酸盐或其组合。

51.实施方案44至50中任一项的器官保存溶液，其包含气体，任选地其中该气体为氧气(O₂)、氢气(H₂)、一氧化碳(CO)、一氧化氮(NO)、硫化氢(H₂S)、氩气(Ar)或其组合。

52.实施方案44的器官保存溶液，其包含溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、溶液或HC-A溶液中的一种或多种组分(如表2中所示)。

53.实施方案45的器官保存溶液，其包含溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分(如表2中所示)。

54.实施方案53的器官保存溶液，其包含在表2中所示的浓度±20％的溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分(如表2中所示)。

55.实施方案53的器官保存溶液，其包含在表2中所示的浓度±15％的溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分(如表2中所示)。

56.实施方案53的器官保存溶液，其包含在表2中所示的浓度±10％的溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分(如表2中所示)。

57.实施方案53的器官保存溶液，其包含在表2中所示的浓度±5％的溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分(如表2中所示)。

58.实施方案53至57中任一项的器官保存溶液，其包含溶液的组分(如表2中所述)。

59.实施方案44的器官保存溶液，其包含溶液的一种或多种组分(如第6.2节中所述)。

60.实施方案59的器官保存溶液，其包含溶液的组分(如第6.2节中所述)。

61.实施方案60的器官保存溶液，其包含在第6.2节中所示的浓度±20％、±15％、±10％或±5％的溶液的组分(如第6.2节中所述)。

62.实施方案22-61中任一项的器官保存溶液，其包含浓度为0.1mg/ml至5mg/ml(例如，0.3mg/ml至0.5mg/ml、0.2mg/ml至0.6mg/ml、0.1mg/ml至1mg/ml、1mg/ml至2mg/ml或2mg/ml至5mg/ml)的基于脂质结合蛋白的复合物。

63.实施方案22至61中任一项的器官保存溶液，其包含浓度为0.4mg/ml的基于脂质结合蛋白的复合物。

64.试剂盒，其包含基于脂质结合蛋白的复合物和器官保存溶液的一种或多种组分，任选地其中该基于脂质结合蛋白的复合物如实施方案1至21中任一项所定义。

65.实施方案64的试剂盒，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括缓冲剂、抗氧化剂、营养物和/或代谢底物、电解质、胶体、不可渗透剂、气体或其组合。

66.实施方案65的试剂盒，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液中的一种或多种组分(如表2中所示)。

67.实施方案66的试剂盒，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分(如表2中所示)。

68.实施方案67的试剂盒，其包含在表2中所示的浓度±20％的溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分(如表2中所示)。

69.实施方案67的试剂盒，其包含在表2中所示的浓度±15％的溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分(如表2中所示)。

70.实施方案67的试剂盒，其包含在表2中所示的浓度±10％的溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分(如表2中所示)。

71.实施方案67的试剂盒，其包含在表2中所示的浓度±5％的溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分(如表2中所示)。

72.实施方案67至71中任一项的试剂盒，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括溶液的组分(如表2中所述)。

73.实施方案65的试剂盒，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括溶液的一种或多种组分(如第6.2节中所述)。

74.实施方案73的试剂盒，其包含溶液的组分(如第6.2节中所述)。

75.实施方案74的试剂盒，其包含在第6.2节中所述的浓度±20％、±15％、±10％或±5％的溶液(如第6.2节中所述)的组分。

76.根据实施方案64至75中任一项所述的试剂盒，其中该试剂盒包含含有器官保存溶液的一种或多种组分的溶液。

77.实施方案64至76中任一项的试剂盒，其中该试剂盒包含基于脂质结合蛋白的复合物的溶液。

78.实施方案64至76中任一项的试剂盒，其中该试剂盒包含冻干形式的基于脂质结合蛋白的复合物。

79.用于从实施方案64至78中任一项的试剂盒制备器官保存溶液的方法，其包括将基于脂质结合蛋白的复合物与器官保存溶液的一种或多种组分组合。

80.用于制备器官保存溶液的方法，其包括将基于脂质结合蛋白的复合物与器官保存溶液的一种或多种组分组合，任选地其中该基于脂质结合蛋白的复合物如实施方案1至21中任一项所定义。

81.实施方案80的方法，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括缓冲剂、抗氧化剂、营养物和/或代谢底物、电解质、胶体、不可渗透剂、气体或其组合。

82.实施方案81的方法，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液中的一种或多种组分(如表2中所述)。/>

83.实施方案82的方法，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液的组分(如表2中所述)。

84.实施方案83的方法，其中溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液(如表2中所述)的组分为表2中所述的浓度±20％。

85.实施方案83的方法，其中溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液(如表2中所述)的组分为表2中所述的浓度±15％。

86.实施方案83的方法，其中溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液(如表2中所述)的组分为表2中所述的浓度±10％。

87.实施方案83的方法，其中溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液(如表2中所述)的组分为表2中所述的浓度±5％。

88.实施方案83至87中任一项的方法，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括溶液的组分(如表2中所述)。

89.实施方案81的方法，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括溶液的一种或多种组分(如第6.2节中所述)。

90.实施方案89的方法，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括溶液的组分(如第6.2节中所述)。

91.实施方案90的方法，其中器官保存溶液的一种或多种组分包括在第6.2节中所述的浓度±20％、±15％、±10％或±5％的溶液(如第6.2节中规定)的组分。

92.器官保存溶液，其通过实施方案80至91中任一项所述的方法生产。

93.器官保存溶液产品，其包含在密封容器中的实施方案22至63和92中任一项的器官保存溶液。

94.实施方案93的器官保存溶液产品，其中该容器是袋子。

95.实施方案93或实施方案94的器官保存溶液产品，其中该容器包含1L的器官保存溶液。

96.系统，其包含(a)实施方案22至63和92中任一项的器官保存溶液或实施方案93至95中任一项的器官保存溶液产品和(b)灌注机和/或器官。

97.实施方案96的系统，其包含灌注机。

98.实施方案97的系统，其中该灌注机是心肺机。

99.实施方案96至98中任一项的系统，其包括器官。

100.实施方案99的系统，其中该器官是肾、肝、心脏、肺、胰腺、肠或气管。

101.实施方案100的系统，其中该器官是肾。

102.实施方案96至101中任一项的系统，其中该器官来自哺乳动物。

103.实施方案102的系统，其中该哺乳动物是人或猪。

104.实施方案103的系统，其中该哺乳动物是人。

105.实施方案103的系统，其中该哺乳动物是猪。

106.系统，其包含(a)实施方案22至63和92中任一项的器官保存溶液或实施方案93至95中任一项的器官保存溶液产品和(b)组织。

107.实施方案106的系统，其中该组织是眼睛、皮肤、脂肪、肌肉、骨、软骨、胎儿胸腺或神经组织。

108.实施方案107的系统，其中该组织是角膜组织。

109.实施方案106至108中任一项的系统，其中所述组织来自哺乳动物。

110.实施方案109的系统，其中该哺乳动物是人或猪。

111.实施方案110的系统，其中该哺乳动物是人。

112.实施方案110的系统，其中该哺乳动物是猪。

113.用于离体器官保存的方法，包括使供体器官与实施方案22至63和92中任一项所述的器官保存溶液接触。

114.实施方案113的方法，其包括用器官保存溶液对器官进行机械灌注。

115.实施方案114的方法，其包括用器官保存溶液对器官进行机械灌注长达两天。

116.实施方案114的方法，其包括用器官保存溶液对器官进行机械灌注长达36小时。

117.实施方案114的方法，其包括用器官保存溶液对器官进行机械灌注长达一天。

118.实施方案114的方法，其包括用器官保存溶液对器官进行机械灌注长达12小时。

119.实施方案114至118中任一项的方法，其包括用器官保存溶液对器官进行机械灌注至少一小时。

120.实施方案114至118中任一项的方法，其包括用器官保存溶液对器官进行机械灌注至少两小时。

121.实施方案114至118中任一项的方法，其包括用器官保存溶液对器官进行机械灌注至少四小时。

122.实施方案114至118中任一项的方法，其包括用器官保存溶液对器官进行机械灌注至少六小时。

123.实施方案114至122中任一项的方法，其中使用实施方案96至105中任一项的系统进行机械灌注。

124.实施方案113至123中任一项的方法，其中器官保存溶液用全血稀释。

125.实施方案124的方法，其中器官保存溶液与全血的体积:体积比为1:1至1:3。

126.实施方案113至123中任一项的方法，其中器官保存溶液未被稀释。

127.实施方案114至126中任一项的方法，其中机械灌注是常温的，任选地从30℃至38℃。

128.实施方案114至126中任一项的方法，其中机械灌注为从8℃至25℃，任选地从20℃至25℃。

129.实施方案114至126中任一项的方法，其中机械灌注是亚常温的，任选地从2℃至8℃。

130.实施方案114至129中任一项的方法，其包括在机械灌注之前用器官保存溶液冲洗器官，任选地其中在冲洗器官之前器官保存溶液为2℃至8℃。

131.实施方案114至130中任一项的方法，其进一步包括在机械灌注之前和/或之后冷藏器官，任选地在2℃至6℃。

132.实施方案113的方法，其包括在没有机械灌注的情况下冷藏器官，任选地在2℃至6℃。

133.实施方案131或132的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏长达一周。

134.实施方案131或132的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏长达五天。

135.实施方案131或132的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏长达四天。

136.实施方案131或132的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏长达三天。

137.实施方案131或132的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏长达两天。

138.实施方案131或132的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏长达36小时。

139.实施方案131或132的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏长达一天。

140.实施方案131或132的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏长达12小时。

141.实施方案131至140中任一项的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏至少一小时。

142.实施方案131至140中任一项的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏至少两小时。

143.实施方案131至140中任一项的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏至少四小时。

144.实施方案131至140中任一项的方法，其包括将器官在器官保存溶液中冷藏至少六小时。

145.实施方案113至144中任一项的方法，其包括在从供体移除器官之前和/或之后用器官保存溶液冲洗器官，该器官保存溶液任选地在2℃至8℃或2℃至6℃。

146.实施方案145的方法，其中器官保存溶液在低温储存和/或运输期间留在器官脉管系统中。

147.实施方案113至146中任一项的方法，其中该器官是肾、肝、心脏、肺、胰腺、肠或气管。

148.实施方案147的方法，其中该器官是肾。

149.实施方案113至148中任一项的方法，其中该器官来自哺乳动物。

150.实施方案149的方法，其中该哺乳动物是人或猪。

151.实施方案150的方法，其中该哺乳动物是人。

152.实施方案150的方法，其中该哺乳动物是猪。

153.实施方案113至152中任一项的方法，其进一步包括从器官供体移除器官。

154.通过实施方案113至153中任一项的方法获得的器官。

155.用于移植器官的方法，其包括将实施方案154的器官移植到有需要的受试者体内。

156.用于离体组织保存的方法，其包括使供体组织与实施方案22至63和92中任一项的器官保存溶液接触。

157.实施方案156的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中。

158.实施方案156的方法，其包括将组织常温储存在器官保存溶液中，任选地从30℃至38℃。

159.实施方案156的方法，其包括将组织冷藏在器官保存溶液中，任选地在2℃至6℃。

160.实施方案157至159中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中长达4周。

161.实施方案157至159中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中长达2周。

162.实施方案157至159中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中长达1周。

163.实施方案157至159中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中长达四天。

164.实施方案157至159中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中长达两天。

165.实施方案157至159中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中长达36小时。

166.实施方案157至159中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中长达一天。

167.实施方案157至159中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中长达12小时。

168.实施方案157至167中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中至少一小时。

169.实施方案157至167中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中至少两小时。

170.实施方案157至167中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中至少四小时。

171.实施方案157至167中任一项的方法，其包括将组织储存在器官保存溶液中至少六小时。

172.实施方案156至171中任一项的方法，其中该组织是眼、皮肤、脂肪、肌肉、骨、软骨、胎儿胸腺或神经组织。

173.实施方案172的方法，其中该组织是角膜组织。

174.实施方案156至173中任一项的方法，其中该组织来自哺乳动物。

175.实施方案174的方法，其中该哺乳动物是人或猪。

176.实施方案175的方法，其中该哺乳动物是人。

177.实施方案175的方法，其中该哺乳动物是猪。

178.实施方案156至177中任一项的方法，其进一步包括从组织供体移除组织。

179.通过实施方案156至179中任一项的方法获得的组织。

180.用于移植组织的方法，其包括将实施方案179的组织移植至有需要的受试者。

181.移植方法，其包括：

a.获得供体器官；

b.将供体器官与实施方案22至63和92中任一项的器官保存溶液接触，其中该接触包括：

i.将器官用器官保存溶液机械灌注；或者

ii.将器官冷藏在器官保存溶液中；以及

c.将器官移植到需要器官移植的受试者中。

182.实施方案181的方法，其中供体器官是肾、肝、心脏、肺、胰腺、肠或气管。

183.实施方案181或实施方案182的方法，其中接触包括用器官保存溶液机械灌注器官或冷藏器官至少1小时和/或长达1周。

184.移植方法，其包括：

a.获得供体组织；

b.将供体组织储存在实施方案22至63和92中任一项的器官保存溶液中，并且

c.将组织移植给需要组织移植的受试者。

185.实施方案184的方法，其中供体组织是眼睛、皮肤、脂肪、肌肉、骨、软骨、胎儿胸腺或神经组织。

186.实施方案184或实施方案185的方法，其中储存包括用器官保存溶液储存组织至少一小时和/或长达4周。

尽管已经示出和描述了各种具体实施方案，但是应当理解，在不脱离本公开的精神和范围的情况下可以做出各种改变

9.通过引用并入

本申请中引用的所有出版物、专利、专利申请和其他文件均用于所有目的，通过引用全部并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利和专利申请或其他文件单独表示用于所有目的，以通过引用并入。

已包括在本说明书中的对文档、行为、材料、装置、文章等的任何讨论仅是用于提供本公开的上下文的目的。不应将其视为承认任何或所有这些事项构成现有技术基础的一部分或者是与本公开相关的领域中的公知常识，因为其在本申请的优先权日期之前存在于任何地方。

序列表

<110> 阿比奥尼克斯制药公司

<120> 基于脂质结合蛋白的复合物在器官保存溶液中的用途

<130> CRN-043WO

<150> 63/175,330

<151> 2021-04-15

<160> 2

<170> PatentIn 第3.5版

<210> 1

<211> 190

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> ApoA-I

<400> 1

Pro Pro Gln Ser Pro Trp Asp Arg Val Lys Asp Leu Ala Thr Val Tyr

1 5 10 15

Val Asp Val Leu Lys Asp Ser Gly Arg Asp Tyr Val Ser Gln Phe Glu

20 25 30

Gly Ser Ala Leu Gly Lys Gln Leu Asn Leu Lys Leu Leu Asp Asn Trp

35 40 45

Asp Ser Val Thr Ser Thr Phe Ser Lys Leu Arg Glu Gln Leu Gly Pro

50 55 60

Val Thr Gln Glu Phe Trp Asp Asn Leu Glu Lys Glu Thr Glu Gly Leu

65 70 75 80

Arg Gln Glu Met Ser Lys Asp Leu Glu Glu Val Lys Ala Lys Val Gln

85 90 95

Pro Tyr Leu Asp Asp Phe Gln Lys Lys Trp Gln Glu Glu Met Glu Leu

100 105 110

Tyr Arg Gln Lys Val Glu Pro Leu Arg Ala Glu Leu Gln Glu Gly Ala

115 120 125

Arg Gln Lys Leu His Glu Leu Gln Glu Lys Leu Ser Pro Leu Gly Glu

130 135 140

Glu Met Arg Asp Arg Ala Arg Ala His Val Asp Ala Leu Arg Thr His

145 150 155 160

Leu Ala Pro Tyr Ser Asp Glu Leu Arg Gln Arg Leu Ala Ala Arg Leu

165 170 175

Glu Ala Leu Lys Glu Asn Gly Gly Ala Arg Leu Ala Glu Tyr

180 185 190

<210> 2

<211> 267

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Met Lys Ala Ala Val Leu Thr Leu Ala Val Leu Phe Leu Thr Gly Ser

1 5 10 15

Gln Ala Arg His Phe Trp Gln Gln Asp Glu Pro Pro Gln Ser Pro Trp

20 25 30

Asp Arg Val Lys Asp Leu Ala Thr Val Tyr Val Asp Val Leu Lys Asp

35 40 45

Ser Gly Arg Asp Tyr Val Ser Gln Phe Glu Gly Ser Ala Leu Gly Lys

50 55 60

Gln Leu Asn Leu Lys Leu Leu Asp Asn Trp Asp Ser Val Thr Ser Thr

65 70 75 80

Phe Ser Lys Leu Arg Glu Gln Leu Gly Pro Val Thr Gln Glu Phe Trp

85 90 95

Asp Asn Leu Glu Lys Glu Thr Glu Gly Leu Arg Gln Glu Met Ser Lys

100 105 110

Asp Leu Glu Glu Val Lys Ala Lys Val Gln Pro Tyr Leu Asp Asp Phe

115 120 125

Gln Lys Lys Trp Gln Glu Glu Met Glu Leu Tyr Arg Gln Lys Val Glu

130 135 140

Pro Leu Arg Ala Glu Leu Gln Glu Gly Ala Arg Gln Lys Leu His Glu

145 150 155 160

Leu Gln Glu Lys Leu Ser Pro Leu Gly Glu Glu Met Arg Asp Arg Ala

165 170 175

Arg Ala His Val Asp Ala Leu Arg Thr His Leu Ala Pro Tyr Ser Asp

180 185 190

Glu Leu Arg Gln Arg Leu Ala Ala Arg Leu Glu Ala Leu Lys Glu Asn

195 200 205

Gly Gly Ala Arg Leu Ala Glu Tyr His Ala Lys Ala Thr Glu His Leu

210 215 220

Ser Thr Leu Ser Glu Lys Ala Lys Pro Ala Leu Glu Asp Leu Arg Gln

225 230 235 240

Gly Leu Leu Pro Val Leu Glu Ser Phe Lys Val Ser Phe Leu Ser Ala

245 250 255

Leu Glu Glu Tyr Thr Lys Lys Leu Asn Thr Gln

260 265

Claims

1.基于脂质结合蛋白的复合物，其用于器官保存溶液。

2.根据权利要求1所述的使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其是重构的HDL或HDL模拟物。

3.根据权利要求1或2所述的使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其包含鞘磷脂。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其包含带负电荷的脂质。

5.根据权利要求4所述的使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其中所述带负电荷的脂质是1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-[磷酰-外消旋-(1-甘油)(DPPG)或其盐。

6.根据权利要求2所述的使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其是CER-001、CSL-111、CSL-112、CER-522或ETC-216。

7.根据权利要求6所述的使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其是CER-001。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的使用的基于脂质结合蛋白的复合物，其是Apomer或Cargomer。

9.器官保存溶液，其包含权利要求1至8中任一项所述的基于脂质结合蛋白的复合物。

10.器官保存溶液，其包含基于脂质结合蛋白的复合物。

11.权利要求10所述的器官保存溶液，其中所述基于脂质结合蛋白的复合物是重构的HDL或HDL模拟物。

12.权利要求10或权利要求11所述的器官保存溶液，其中所述基于脂质结合蛋白的复合物包含鞘磷脂。

13.权利要求10至12中任一项所述的器官保存溶液，其中所述基于脂质结合蛋白的复合物包含带负电荷的脂质。

14.权利要求13所述的器官保存溶液，其中所述带负电荷的脂质是1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-[磷酰-外消旋-(1-甘油)(DPPG)或其盐。

15.权利要求11所述的器官保存溶液，其中所述基于脂质结合蛋白的复合物是CER-001、CSL-111、CSL-112、CER-522或ETC-216。

16.权利要求15所述的器官保存溶液，其中所述基于脂质结合蛋白的复合物是CER-001。

17.权利要求10至14中任一项所述的器官保存溶液，其中所述基于脂质结合蛋白的复合物是Apomer或Cargomer。

18.权利要求9至17中任一项所述的器官保存溶液，其包含缓冲剂、抗氧化剂、营养物和/或代谢底物、电解质、胶体、不可渗透剂、气体或其组合。

19.权利要求18所述的器官保存溶液，其包含溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、溶液或HC-A溶液中的一种或多种组分(如表2中所示)。

20.权利要求19所述的器官保存溶液，其包含溶液的组分(如表2中所示)。

21.权利要求9至20中任一项所述的器官保存溶液，其包含在0.1mg/ml至5mg/ml的浓度的所述基于脂质结合蛋白的复合物。

22.权利要求9至20中任一项所述的器官保存溶液，其包含在0.4mg/ml的浓度的所述基于脂质结合蛋白的复合物。

23.试剂盒，其包含基于脂质结合蛋白的复合物和器官保存溶液的一种或多种组分，任选地其中所述基于脂质结合蛋白的复合物如权利要求1至8中任一项所定义。

24.权利要求23所述的试剂盒，其中所述器官保存溶液的一种或多种组分包括缓冲剂、抗氧化剂、营养物和/或代谢底物、电解质、胶体、不可渗透剂、气体或其组合。

25.权利要求24所述的试剂盒，其中所述器官保存溶液的一种或多种组分包括溶液、EC溶液、UW溶液、HTK溶液、/>溶液或HC-A溶液中的一种或多种组分(如表2中所述)。

26.由权利要求23至25中任一项所述的试剂盒制备器官保存溶液的方法，其包括将所述基于脂质结合蛋白的复合物与所述器官保存溶液的一种或多种组分组合。

27.制备器官保存溶液的方法，其包括将基于脂质结合蛋白的复合物与器官保存溶液的一种或多种组分组合，任选地其中所述基于脂质结合蛋白的复合物如权利要求1至8中任一项所定义。

28.权利要求27的方法，其中所述器官保存溶液的一种或多种组分包括缓冲剂、抗氧化剂、营养物和/或代谢底物、电解质、胶体、不可渗透剂、气体或其组合。

29.器官保存溶液，其通过权利要求26至28中任一项所述的方法生产。

30.器官保存溶液产品，其包含在密封容器中的权利要求9至21和29中任一项所述的器官保存溶液。

31.权利要求30所述的器官保存溶液产品，其中所述容器是袋子。

32.权利要求30或权利要求31所述的器官保存溶液产品，其中所述容器包含1L的所述器官保存溶液。

33.系统，其包含(a)权利要求9至21和29中任一项所述的器官保存溶液或权利要求30至32中任一项所述的器官保存溶液产品和(b)灌注机和/或器官。

34.权利要求33所述的系统，其包含灌注机。

35.权利要求34所述的系统，其中所述灌注机是心肺机。

36.权利要求33至35中任一项所述的系统，其包含器官。

37.权利要求36所述的系统，其中所述器官是肾、肝、心脏、肺、胰腺、肠或气管。

38.权利要求37所述的系统，其中所述器官是肾。

39.权利要求33至38中任一项所述的系统，其中所述器官来自哺乳动物，任选地来自人或猪。

40.用于离体器官保存的方法，其包括使供体器官与权利要求9至21和29中任一项所述的器官保存溶液接触。

41.权利要求40所述的方法，其包括用所述器官保存溶液对所述器官进行机械灌注，任选地持续至少1小时和/或长达1周。

42.权利要求40所述的方法，其包括在没有机械灌注的情况下冷藏所述器官，任选地在2℃至6℃。

43.权利要求40至42中任一项所述的方法，其中所述器官是肾、肝、心脏、肺、胰腺、肠或气管。

44.权利要求43所述的方法，其中所述器官是肾。

45.权利要求40至44中任一项所述的方法，其中所述器官来自哺乳动物，任选地来自人或猪。

46.通过权利要求40至45中任一项所述的方法获得的器官。

47.移植器官的方法，其包括将权利要求46所述的器官移植到有需要的受试者体内。

48.用于离体组织保存的方法，其包括使供体组织与权利要求9至21和29中任一项所述的器官保存溶液接触，任选地其中所述供体组织在所述器官保存溶液中保存至少1小时和/或长达4周。

49.权利要求48所述的方法，其中所述组织是眼、皮肤、脂肪、肌肉、骨、软骨、胎儿胸腺或神经组织。

50.权利要求49所述的方法，其中所述组织是角膜组织。

51.通过权利要求48至50中任一项所述的方法获得的组织。

52.移植组织的方法，其包括将权利要求51所述的组织移植至有需要的受试者。

53.移植方法，其包括：

a.获得供体器官；

b.使所述供体器官与权利要求9至21和29中任一项所述的器官保存溶液接触，其中所述接触包括：

i.将所述器官用所述器官保存溶液机械灌注；或者

ii.将所述器官在所述器官保存溶液中冷藏；以及

c.将所述器官移植到需要器官移植的受试者体内。

54.权利要求53所述的方法，其中所述供体器官是肾、肝、心脏、肺、胰腺、肠或气管。

55.权利要求53或权利要求54所述的方法，其中所述接触包括用所述器官保存溶液对所述器官进行机械灌注或冷藏至少1小时和/或长达1周。

56.移植方法，其包括：

a.获得供体组织；

b.将所述供体组织储存在权利要求9至21和29中任一项所述的器官保存溶液中，并且

c.将所述组织移植到需要组织移植的受试者。

57.权利要求56所述的方法，其中所述供体组织是眼、皮肤、脂肪、肌肉、骨、软骨、胎儿胸腺或神经组织。

58.权利要求56或权利要求57所述的方法，其中所述储存包括用所述器官保存溶液储存所述组织器官保存溶液至少一小时和/或长达4周。