TWI504410B - 結合至１６１ｐ２ｆ１０ｂ蛋白之抗體藥物結合物（ａｄｃ） - Google Patents

結合至１６１ｐ２ｆ１０ｂ蛋白之抗體藥物結合物（ａｄｃ） Download PDF

Info

Publication number
TWI504410B
TWI504410B TW100104156A TW100104156A TWI504410B TW I504410 B TWI504410 B TW I504410B TW 100104156 A TW100104156 A TW 100104156A TW 100104156 A TW100104156 A TW 100104156A TW I504410 B TWI504410 B TW I504410B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
161p2f10b
cancer
drug conjugate
binding
Prior art date
Application number
TW100104156A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201138818A (en
Inventor
Michael Torgov
Robert Kendall Morrison
Aya Jakobovits
Jean Gudas
Zili An
Original Assignee
Agensys Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agensys Inc filed Critical Agensys Inc
Publication of TW201138818A publication Critical patent/TW201138818A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI504410B publication Critical patent/TWI504410B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6861—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from kidney or bladder cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3038—Kidney, bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

結合至161P2F10B蛋白之抗體藥物結合物(ADC)
本文所描述之本發明係關於結合稱為161P2F10B之蛋白質的抗體藥物結合物(ADC)。本發明另外係關於適用於治療癌症之預後性、預防性及治療性方法及組合物。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張於2010年2月8日申請之美國臨時申請案第61/302,489號之權益。該申請案之內容係以全文引用的方式併入本文中。
在聯邦資助研究下進行之發明的權利聲明
不適用。
對經由EFS-WEB提交之序列表之引用
如MPEP §730 II.B.2(a)(C)中所授權及闡述，以下經由USPTO EFS-WEB伺服器電子提交之序列表的全部內容係出於所有目的，以全文引用的方式併入本文中。根據如下以電子方式提交之正文檔案鑑別序列表：
癌症為人類死亡之第二大原因，僅次於冠心病。在全世界範圍內，每年有數百萬人死於癌症。據美國癌症協會(American Cancer Society)報導，僅在美國每年因癌症死亡的人數遠遠超過50萬，其中每年新診斷超過120萬例。雖然因心臟病所致之死亡已顯著減少，但癌症所致之死亡大體上呈上升態勢。預計在下個世紀初期，癌症將成為主要死亡原因。
在全世界範圍內，若干癌症由於為主要致死癌症而引人注目。除極少數例外情況，癌轉移性疾病為致命的。此外，即使對於最初自其原發性癌症倖存的癌症患者，普遍經驗顯示其生活亦發生顯著變化。許多癌症患者受知悉復發或治療失敗之可能性驅使而經歷嚴重焦慮。許多癌症患者在治療後身體虛弱。此外，許多癌症患者會復發。
雖然先前鑑別之標記物(諸如PSA、PSM、PCTA及161P2F10B)有助於診斷及治療前列腺癌，但為進一步改良診斷及治療，仍需要鑑別有關前列腺癌及相關癌症之其他標記物及治療標靶。
在美國，腎細胞癌(RCC)目前居於癌症死亡主要原因之第十位。估計美國每年診斷51,190人患上腎細胞癌，且2007年約12,890人死於此疾病(美國癌症協會)。歷史上，治療主要集中於腎切除術，接著為非特異性免疫療法，且有時為輻射療法(Hauke,2006)。非特異性免疫療法包括用細胞激素介白素-2或干擾素-α以單一藥劑或組合形式進行治療。外科手術切除後，20%至30%患者將在1至3年內出現轉移性疾病，通常在肺中(Motzer等人，2006)。轉移性疾病患者之中位存活時間為約13個月(Cohen及McGovern,2005)。
自2005年起，FDA已批准六(6)種藥劑用於治療晚期腎細胞癌。此等進步包括若干種靶向與腎細胞癌相關之特異性路徑的藥劑。此等藥劑包括索拉非尼(sorafenib)(Nexavar，FDA於2005年12月批准)、舒尼替尼(sunitinib)(Sutent，FDA於2006年1月批准)、西羅莫司(temsirolimus)(Torisel，FDA於2007年5月批准)、依維莫司(everolimus)(Affinitor，FDA於2009年3月批准)、貝伐單抗(bevacizumab)(Avastin與干擾素α組合，FDA於2009年8月批准)及帕佐泮尼(pazopanib)(Votrient，FDA於2009年10月批准)。然而，儘管在治療中取得進步，但轉移性腎細胞癌仍無法治癒，且僅西羅莫司基於總存活率之優勢而獲得批准。
此外，肝細胞癌(亦即肝癌)佔所有肝癌之80%至90%。與女性相比，此類型肝癌更常發生於男性中。通常在50至60歲的人中發現其。一般而言，肝癌之治療為侵襲性手術或肝移植，若在早期診斷出，則可成功地治療小腫瘤或緩慢生長之腫瘤。然而，極少患者在早期診斷出。化學療法及輻射治療通常無效。然而，此等療法可用於縮小腫瘤以使手術有更大機會獲得成功。甲苯磺酸索拉非尼(Nexavar)現可用於肝癌患者。肝癌患者之預後通常不良，此係因為使用外科手術僅可移除10%至20%肝細胞癌。因此，需要研發用於治療肝癌之藥劑。
正在實現單株抗體(mAb)之治療效用(G. Kohler及C. Milstein,Nature 256:495-497(1975))。現已獲准單株抗體作為移植、癌症、傳染性疾病、心血管疾病及炎症之療法。不同同型具有不同效應功能。該等功能差異體現在各種免疫球蛋白同型之不同三維結構上(P.M. Alzari等人，Annual Rev. Immunol. ,6:555-580(1988))。
由於小鼠方便進行免疫且可將大部分人類抗原識別為外來抗原，因此，具有治療潛力之針對人類標靶之mAb通常具有鼠類起源。然而，鼠類mAb作為人類治療劑具有內在缺陷。由於mAb在人體中的循環半衰期比人類抗體短，因此需要更頻繁地給藥。更重要地，向人類免疫系統重複投與鼠類抗體會使人類免疫系統起反應，其將小鼠蛋白質識別為外來蛋白質且產生人類抗小鼠抗體(HAMA)反應。此類HAMA反應可能引起過敏反應及鼠類抗體自系統中快速清除，從而使鼠類抗體治療無效。為避免該等影響，已試圖在小鼠內建立人類免疫系統。
最初之嘗試希望產生能夠以具有人類序列之抗體對抗原起反應的轉殖基因小鼠(參看Bruggemann等人，Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 86:6709-6713(1989))，但因可用選殖媒劑可穩定維持之DNA量而受限制。酵母人工染色體(YAC)選殖載體之使用將路引向將人類Ig基因座之大生殖系片段引入轉殖基因哺乳動物中。在人類基因體及人類恆定區中發現之以相同間隔排列之大部分人類V、D及J區基因基本上係使用YAC引入小鼠中。一個此類轉殖基因小鼠品系稱為XenoMouse小鼠，且可購自Amgen Fremont,Inc.(Fremont CA)。
本發明提供結合至161P2F10B蛋白之抗體藥物結合物(ADC)。在一些實施例中，本發明包含與治療劑結合之完全人類抗體。
本發明另外提供各種免疫原性或治療性組合物，諸如抗體藥物結合物，以及用於治療癌症，諸如表I中所列之組織之癌症的策略。
本發明係關於：
[1]一種抗體藥物結合物，其包含特異性結合至包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之161P2F10B蛋白的抗體或其抗原結合片段，且其中該抗體包含SEQ ID NO: 7之VH 區之20至142及SEQ ID NO: 8之VL 區之20至127的胺基酸序列，且其中該抗體結合至單甲基阿瑞他汀F(monomethyl auristatin F；MMAF)。
[2]如[1]之抗體藥物結合物，其中該抗原結合片段為Fab、F(ab')2 或Fv片段。
[3]如[1]之抗體藥物結合物，其中該抗體為完全人類抗體。
[4]如[1]之抗體藥物結合物，其係以重組方式產生。
[5]一種醫藥組合物，其包含呈人類單位劑型之如[1]之抗體藥物結合物。
[6]如[5]之醫藥組合物，其中該組合物係用於癌症治療。
[7]如[6]之醫藥組合物，其中該癌症為腎癌或肝癌。
[8]一種抑制個體之癌細胞生長的方法，其包含：向該個體投與如[1]之抗體藥物結合物。
[9]一種向細胞遞送細胞毒性劑或診斷劑之方法，其包含：提供結合至抗體或其抗原結合片段的MMAF，該抗體或其抗原結合片段特異性結合至包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的161P2F10B蛋白且其中該抗體包含SEQ ID NO: 7之VH 區之20至142及SEQ ID NO: 8之VL 區之20至127的胺基酸序列，以形成抗體藥物結合物；及使該細胞曝露於抗體藥物結合物或片段藥物結合物。
[10]一種用於治療哺乳動物之腫瘤的方法，其包含用有效量之如[1]之抗體藥物結合物治療該哺乳動物。
[11]一種用於減弱哺乳動物之腫瘤生長的方法，其包含用有效量的如[1]之抗體藥物結合物與輻射之組合治療該哺乳動物。
[12]一種用於減弱哺乳動物之腫瘤生長的方法，其包含用有效量的如[1]之抗體藥物結合物與化學治療劑之組合治療該哺乳動物。
[13]一種用於減弱哺乳動物之腫瘤生長的方法，其包含用有效量的如[1]之抗體藥物結合物與藥物或生物活性療法之組合治療該哺乳動物。
[14]一種用於治療哺乳動物之癌症的方法，其包含用有效量的如[1]之抗體藥物結合物與化學治療劑之組合治療該哺乳動物。
[15]一種抗體藥物結合物(ADC)，其中該ADC具有式L-(LU-D)p，其中：(a)L為抗體，其包含特異性結合至包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之161P2F10B蛋白的抗體或其抗原結合片段，且其中該抗體包含SEQ ID NO: 7之VH 區之20至142及SEQ ID NO: 8之VL 區之20至127的胺基酸序列；(b)LU為連接子；(c)D為藥物部分，其中藥物為單甲基阿瑞他汀F(MMAF)；(d)p為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。
[16]一種抗體藥物結合物(ADC)，其中該ADC具有下式，其中Ab-S為抗體，其包含特異性結合至包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之161P2F10B蛋白的抗體或其抗原結合片段，且其中該抗體包含SEQ ID NO: 7之VH 區之20至142及SEQ ID NO: 8之VL 區之20至127的胺基酸序列；p為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。
[17]一種抗體藥物結合物，其包含特異性結合至包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之161P2F10B蛋白的抗體，且其中該抗體包含SEQ ID NO: 7之重鏈之20至468及SEQ ID NO: 8之輕鏈之20至233的胺基酸序列，且其中該抗體結合至單甲基阿瑞他汀F(MMAF)。
[18]一種抗體藥物結合物(ADC)，其中該ADC具有式L-(LU-D)p，其中：(a)L為抗體，其包含特異性結合至包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之161P2F10B蛋白的抗體，且其中該抗體包含SEQ ID NO: 7之重鏈之20至468及SEQ ID NO: 8之輕鏈之20至233的胺基酸序列；(b)LU為連接子；(c)D為藥物部分，其中藥物為單甲基阿瑞他汀F(MMAF)；(d)p為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。
[19]一種抗體藥物結合物(ADC)，其中該ADC具有下式，其中Ab-S為抗體，其包含特異性結合至包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之161P2F10B蛋白的抗體，且其中該抗體包含SEQ ID NO: 7之重鏈之20至468及SEQ ID NO: 8之輕鏈之20至233的胺基酸序列；p為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。
 各部分之概述
I.)　定義
II.)　161P2F10B抗體
III.)　抗體藥物結合物概述
III(A).阿瑞他汀及海兔毒素(Dolostatin)
IV.)　結合161P2F10B之抗體藥物結合物
V.)　連接子單元
VI.)　延伸子單元
VII.)　胺基酸單元
VIII.)　間隔基單元
IX.)　藥物單元
X.)　藥物負載
XI.)　測定ADC之細胞毒性效應的方法
XII.)　癌症之治療
XIII.)　161P2F10B作為基於抗體之療法之標靶
XIV.)　161P2F10B ADC混合物
XV.)　組合療法
XVI.)　套組/製品
I.)　定義：
除非另外定義，否則本文中所用之所有技術術語、註釋及其他科學術語意欲具有熟習本發明所屬技術者通常所瞭解之含義。在一些情況下，本文中定義具有通常所瞭解之含義的術語以使含義清晰及/或以備參考，且本文中所包括之該等定義不必要視為表示與此項技術中一般瞭解之含義有實質差異。熟習此項技術者非常瞭解本文中所描述或引用之許多技術及程序且通常使用習知方法加以採用，例如廣泛利用之Sambrook等人，MoIecular Cloning: A Laboratory Manual 第2版(1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.中所描述之分子選殖法。除非另外說明，否則適當時，涉及使用市售套組及試劑之程序一般將根據製造商規定之方案及/或參數執行。
除非上下文中另外指示，否則當本文中使用商標名時，提及商標名亦指商標名產品之產品調配物、通用名藥及活性醫藥成分。
術語「晚期癌症」、「局部晚期癌症」、「晚期疾病」及「局部晚期疾病」意謂已擴散穿過相關組織囊之癌症，且意欲包括根據美國泌尿學學會(American Urological Association；AUA)系統之C期疾病；根據惠特莫耳-朱厄特系統(Whitmore-Jewett system)之C1-C2期疾病；及根據TNM(腫瘤、結節、轉移)系統之T3-T4期及N+疾病。一般而言，對於患有局部晚期疾病之患者，不推薦手術，且此等患者與患有臨床局部化(侷限於器官)癌症之患者相比具有實質上不太有利之結果。
縮寫「AFP」係指二甲基纈胺酸-纈胺酸-多拉異白胺酸-多拉脯胺酸-苯丙胺酸-對苯二胺(dimethylvaline-valine-dolaisoleuine-dolaproine-phenylalanine-p-phenylenediamine)(參看下文之式XVI)。
縮寫「MMAE」係指單甲基阿瑞他汀E(參看下文之式XI)。
縮寫「AEB」係指由阿瑞他汀E與對乙醯基苯甲酸反應產生之酯(參看下文之式XX)。
縮寫「AEVB」係指由阿瑞他汀E與苯甲醯基戊酸反應產生之酯(參看下文之式XXI)。
縮寫「MMAF」係指多纈胺酸-纈胺酸-多拉異白胺酸-多拉脯胺酸-苯丙胺酸(dovaline-valine-dolaisoleuine-dolaproine-phenylalanine)(參看下文之式XVIV)。
除非另外說明，否則術語「烷基」係指具有約1至約20個碳原子(以及其中碳原子範圍及特定數目的所有組合及亞組合)、較佳具有約1至約8個碳原子之飽和直鏈或分支鏈烴。烷基之實例為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基及3,3-二甲基-2-丁基。
烷基，無論單獨或是作為另一基團之一部分，均可視情況經一或多個、較佳1至3個基團(及選自鹵素之任何其他取代基)取代，包括但不限於-鹵素、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2 、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2 、-NHC(O)R'、-SR'、-SO3 R'、-S(O)2 R'、-S(O)R'、-OH、=O、-N3 、-NH2 、-NH(R')、-N(R')2 及-CN，其中各R'係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或-芳基，且其中該-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基及-C2 -C8 炔基可視情況進一步經一或多個基團取代，包括但不限於-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、-鹵素、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R"、-O C(O)R"、-C(O)OR"、-C(O)NH2 、-C(O)NHR"、-C(O)N(R")2 、-NHC(O)R"、-SR"、-SO3 R"、-S(O)2 R"、-S(O)R"、-OH、-N3 、-NH2 、-NH(R")、-N(R")2 及-CN，其中各R"係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或-芳基。
除非另外說明，否則術語「烯基」及「炔基」係指具有約2至約20個碳原子(以及其中碳原子範圍及特定數目的所有組合及亞組合)、較佳具有約2至約8個碳原子之直鏈及分支碳鏈。烯基鏈在鏈中具有至少一個雙鍵且炔基鏈在鏈中具有至少一個參鍵。烯基之實例包括但不限於乙烯基、烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基及-2,3-二甲基-2-丁烯基。炔基之實例包括但不限於乙炔基(acetylenic)、炔丙基、乙炔基(acetylenyl)、丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基、-2-戊炔基及-3-甲基-1-丁炔基。
烯基及炔基，無論單獨或是作為另一基團之一部分，均可視情況經一或多個、較佳1至3個基團(及選自鹵素之任何其他取代基)取代，包括但不限於-鹵素、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2 、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2 、-NHC(O)R'、-SR'、-SO3 R'、-S(O)2 R'、-S(O)R'、-OH、=O、-N3 、-NH2 、-NH(R')、-N(R')2 及-CN，其中各R'係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或芳基，且其中該-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、芳基、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基及-C2 -C8 炔基可視情況進一步經一或多個取代基取代，包括但不限於-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、-鹵素、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R"、-OC(O)R"、-C(O)OR"、-C(O)NH2 、-C(O)NHR"、-C(O)N(R")2 、-NHC(O)R"、-SR"、-SO3 R"、-S(O)2 R"、-S(O)R"、-OH、-N3 、-NH2 、-NH(R")、-N(R")2 及-CN，其中各R"係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或芳基。
除非另外說明，否則術語「伸烷基」係指具有約1至約20個碳原子(以及其中碳原子範圍及特定數目的所有組合及亞組合)、較佳具有約1至約8個碳原子且具有兩個自母烷烴之同一碳原子或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而獲得之單價基團中心的飽和分支鏈或直鏈烴。典型伸烷基包括但不限於亞甲基、伸乙基、伸丙基、伸丁基、伸戊基、伸己基、伸庚基、伸辛基、伸壬基、伸癸基、1,4-伸環己基及其類似基團。伸烷基，無論單獨或是作為另一基團之一部分，均可視情況經一或多個、較佳1至3個基團(及選自鹵素之任何其他取代基)取代，包括但不限於-鹵素、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2 、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2 、-NHC(O)R'、-SR'、-SO3 R'、-S(O)2 R'、-S(O)R'、-OH、=O、-N3 、-NH2 、-NH(R')、-N(R')2 及-CN，其中各R'係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或-芳基，且其中該-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基及-C2 -C8 炔基可視情況進一步經一或多個取代基取代，包括但不限於-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、-鹵素、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R"、-O C(O)R"、-C(O)OR"、-C(O)NH2 、-C(O)NHR"、-C(O)N(R")2 、-NHC(O)R"、-SR"、-SO3 R"、-S(O)2 R"、-S(O)R"、-OH、-N3 、-NH2 、-NH(R")、-N(R")2 及-CN，其中各R"係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或-芳基。
除非另外說明，否則術語「伸烯基」係指含有至少一個碳碳雙鍵之視情況經取代之伸烷基。例示性伸烯基包括但不限於例如伸乙烯基(-CH=CH-)及伸丙烯基(-CH=CHCH2 -)。
除非另外說明，否則術語「伸炔基」係指含有至少一個碳碳參鍵之視情況經取代之伸烷基。例示性伸炔基包括例如伸乙炔基(-C≡C-)、炔丙基(-CH2 C≡C-)及4-戊炔基(-CH2 CH2 CH2 C≡CH-)。
除非另外說明，否則術語「芳基」係指具有6至20個碳原子(以及其中碳原子範圍及特定數目的所有組合及亞組合)且自母芳族環系統之單個碳原子移除一個氫原子而獲得之單價芳族烴基。一些芳基在例示性結構中表示為「Ar」。典型芳基包括但不限於衍生自苯、經取代之苯、苯基、萘、蒽、聯苯及其類似物之基團。
芳基，無論單獨或是作為另一基團之一部分，均可視情況經一或多個、較佳1至5個或甚至1至2個基團取代，包括但不限於-鹵素、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2 、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2 、-NHC(O)R'、-SR'、-SO3 R'、-S(O)2 R'、-S(O)R'、-OH、-NO2 、-N3 、-NH2 、-NH(R')、-N(R')2 及-CN，其中各R'係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或-芳基，且其中該-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)及-芳基可視情況進一步經一或多個取代基取代，包括但不限於-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、-鹵素、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R"、-OC(O)R"、-C(O)OR"、-C(O)NH2 、-C(O)NHR"、-C(O)N(R")2 、-NHC(O)R"、-SR"、-SO3 R"、-S(O)2 R"、-S(O)R"、-OH、-N3 、-NH2 、-NH(R")、-N(R")2 及-CN，其中各R"係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或-芳基。
除非另外說明，否則術語「伸芳基」係指二價(亦即自母芳族環系統之同一碳原子或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而獲得)且可能呈鄰、間或對構型之視情況經取代之芳基，如以下結構所示，其中苯基為例示性芳基。
典型「-(C1 -C8 伸烷基)芳基」、「-(C2 -C8 伸烯基)芳基」及「-(C2 -C8 伸炔基)芳基」包括但不限於苯甲基、2-苯基乙-1-基、2-苯基-乙烯-1-基、萘甲基、2-萘基乙-1-基、2-萘基乙烯-1-基、萘并苯甲基、2-萘并苯基乙-1-基及其類似基團。
除非另外說明，否則術語「雜環」係指具有3至14個環原子(亦稱為環成員)且至少一個環中之至少一個環原子為選自N、O、P或S之雜原子(以及其中碳原子及雜原子範圍及特定數目的所有組合及亞組合)的單環、雙環或多環系統。雜環可具有1至4個獨立地選自N、O、P或S之環雜原子。雜環中之一或多個N、C或S原子可經氧化。單環雜環較佳具有3至7個環成員(例如2至6個碳原子及1至3個獨立地選自N、O、P或S之雜原子)，且雙環雜環較佳具有5至10個環成員(例如4至9個碳原子及1至3個獨立地選自N、O、P或S之雜原子)。包括雜原子之環可為芳族或非芳族。除非另外說明，否則雜環係在任何雜原子或碳原子處連接至其側基，從而可產生穩定結構。
雜環描述於以下文獻中：Paquette,「Principles of Modern Heterocyclic Chemistry 」(W.A. Benjamin,New York,1968)，尤其第1章、第3章、第4章、第6章、第7章及第9章；「The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs」(John Wiley & Sons，New York，1950至今)，尤其第13卷、第14卷、第16卷、第19卷及第28卷；及J .Am .Chem .Soc . 82:5566(1960)。
「雜環」基之實例包括例如且不限於吡啶基、二氫吡啶基、四氫吡啶基(哌啶基)、噻唑基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、噻萘基、吲哚基、吲哚啉基(indolenyl)、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯啶基、2-吡咯啶酮基、吡咯啉基、四氫呋喃基、雙-四氫呋喃基、四氫哌喃基、雙-四氫哌喃基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、八氫異喹啉基、吖辛因基、三嗪基、6H-1,2,5-噻二嗪基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、噻吩基、噻嗯基、哌喃基、異苯并呋喃基、烯基、基、啡噁噻基、2H-吡咯基、異噻唑基、異噁唑基、吡嗪基、噠嗪基、吲嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、酞嗪基、啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、啉基、喋啶基、4H-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、啡啶基、吖啶基、嘧啶基、啡啉基、啡嗪基、啡噻嗪基、呋呫基、啡噁嗪基、異烷基、烷基、咪唑啶基、咪唑啉基、吡唑啶基、吡唑啉基、哌嗪基、吲哚啉基、異吲哚啉基、啶基、嗎啉基、噁唑啶基、苯并三唑基、苯并異噁唑基、羥吲哚基、苯并噁唑啉基及靛紅醯基。較佳「雜環」基包括但不限於苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并吡唑基、香豆素基、異喹啉基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、喹啉基、嘧啶基、吡啶基、吡啶酮基、吡嗪基、噠嗪基、異噻唑基、異噁唑基及四唑基。
雜環基，無論單獨或是作為另一基團之一部分，均可視情況經一或多個、較佳1至2個基團取代，包括但不限於-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、-鹵素、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2 、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2 、-NHC(O)R'、-SR'、-SO3 R'、-S(O)2 R'、-S(O)R'、-OH、-N3 、-NH2 、-NH(R')、-N(R')2 及-CN，其中各R'係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或-芳基，且其中該-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基及-芳基可視情況進一步經一或多個取代基取代，包括但不限於-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、-鹵素、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R"、-OC(O)R"、-C(O)OR"、-C(O)NH2 、-C(O)NHR"、-C(O)N(R")2 、-NHC(O)R"、-SR"、-SO3 R"、-S(O)2 R"、-S(O)R"、-OH、-N3 、-NH2 、-NH(R")、-N(R")2 及-CN，其中各R"係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或芳基。
經碳鍵結之雜環係在例如而不限於以下位置處鍵結：吡啶之位置2、3、4、5或6；噠嗪之位置3、4、5或6；嘧啶之位置2、4、5或6，吡嗪之位置2、3、5或6；呋喃、四氫呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯之位置2、3、4或5；噁唑、咪唑或噻唑之位置2、4或5；異噁唑、吡唑或異噻唑之位置3、4或5；氮丙啶之位置2或3；氮雜環丁烷之位置2、3或4；喹啉之位置2、3、4、5、6、7或8；或異喹啉之位置1、3、4、5、6、7或8。更通常，經碳鍵結之雜環包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-噠嗪基、4-噠嗪基、5-噠嗪基、6-噠嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
經氮鍵結之雜環可在例如而不限於以下位置處鍵結：氮丙啶、氮雜環丁烷、吡咯、吡咯啶、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啶、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉或1H-吲唑之位置1；異吲哚或異吲哚啉之位置2；嗎啉之位置4；及咔唑或β-咔啉之位置9。更通常，經氮鍵結之雜環包括1-氮丙啶基、1-氮雜環丁基、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基及1-哌啶基。
除非另外說明，否則術語「碳環」係指具有3至14個環原子(以及其中碳原子範圍及特定數目的所有組合及亞組合)且所有環原子均為碳原子的飽和或不飽和非芳族單環、雙環或多環系統。單環碳環較佳具有3至6個環原子，更佳具有5或6個環原子。雙環碳環較佳具有例如以雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統形式排列之7至12個環原子，或以雙環[5,6]或[6,6]系統形式排列之9或10個環原子。術語「碳環」包括例如稠合至芳基之單環碳環(例如稠合至苯環之單環碳環)。碳環較佳具有3至8個碳環原子。
碳環基，無論單獨或是作為另一基團之一部分，均可視情況經例如一或多個基團、較佳1或2個基團(及選自鹵素之任何其他取代基)取代，包括但不限於-鹵素、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2 、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2 、-NHC(O)R'、-SR'、-SO3 R'、-S(O)2 R'、-S(O)R'、-OH、=O、-N3 、-NH2 、-NH(R')、-N(R')2 及-CN，其中各R'係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或-芳基，且其中該-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)及-芳基可視情況進一步經一或多個取代基取代，包括但不限於-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、-鹵素、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C2 -C8 烯基)、-O-(C2 -C8 炔基)、-芳基、-C(O)R"、-O C(O)R"、-C(O)OR"、-C(O)NH2 、-C(O)NHR"、-C(O)N(R")2 、-NHC(O)R"、-SR"、-SO3 R"、-S(O)2 R"、-S(O)R"、-OH、-N3 、-NH2 、-NH(R")、-N(R")2 及-CN，其中各R"係獨立地選自-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基或-芳基。
單環碳環取代基之實例包括-環丙基、-環丁基、-環戊基、-1-環戊-1-烯基、-1-環戊-2-烯基、-1-環戊-3-烯基、環己基、-1-環己-1-烯基、-1-環己-2-烯基、-1-環己-3-烯基、-環庚基、-環辛基、-1,3-環已二烯基、-1,4-環已二烯基、-1,3-環庚二烯基、-1,3,5-環庚三烯基及-環辛二烯基。
「碳環基」，無論單獨使用或是作為另一基團之一部分，均係指視情況經取代之二價(亦即自母碳環系統之同一碳原子或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而獲得)如上文所定義之碳環基。
除非上下文另外指出，否則連字符(-)表示與側位分子之連接點。因此，術語「-(C1 -C8 伸烷基)芳基」或「-C1 -C8 伸烷基(芳基)」係指如本文所定義之C1 -C8 伸烷基，其中伸烷基係在伸烷基之任何碳原子處連接至側位分子，且鍵結至伸烷基之碳原子的氫原子之一經如本文所定義之芳基置換。
當特定基團「經取代」時，該基團可具有一或多個取代基，較佳具有1至5個取代基，更佳具有1至3個取代基，最佳具有1至2個取代基，該等取代基係獨立地選自取代基清單。然而，該基團一般可具有任何數目之選自鹵素之取代基。以此方式指示經取代之基團。
意欲在分子中之特定位置處之任何取代基或變數的定義與其在該分子中之其他位置處之定義無關。應理解，本發明化合物上之取代基及取代型式可由一般技術者選擇，以便提供化學上穩定且可藉由此項技術中已知之技術以及本文中所述之方法容易地合成的化合物。
如本文所使用之保護基係指暫時或永久地選擇性阻斷多官能化合物中之一個反應位點的基團。適用於本發明之羥基保護基在醫藥學上可接受且在投與個體後可能需要或不需要自母體化合物裂解以使該化合物具有活性。裂解係藉由體內正常代謝過程實現。羥基保護基為此項技術中所熟知，參看T. W. Greene及P. G. M. Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis (John Wiley & sons，第3版)，該文獻係以全文引用的方式且出於所有目的併入本文中，且包括例如醚(例如烷基醚及矽烷基醚，包括例如二烷基矽烷基醚、三烷基矽烷基醚、二烷基烷氧基矽烷基醚)、酯、碳酸酯、胺基甲酸酯、磺酸酯及磷酸酯保護基。羥基保護基之實例包括但不限於甲醚；甲氧基甲醚、甲硫基甲醚、(苯基二甲基矽烷基)甲氧基甲醚、苯甲氧基甲醚、對甲氧基苯甲基氧基甲醚、對硝基苯甲氧基甲醚、鄰硝基苯甲氧基甲醚、(4-甲氧基苯氧基)甲醚、愈創木酚甲醚、第三丁氧基甲醚、4-戊烯氧基甲醚、矽氧基甲醚、2-甲氧基乙氧基甲醚、2,2,2-三氯乙氧基甲醚、雙(2-氯乙氧基)甲醚、2-(三甲基矽烷基)乙氧基甲醚、甲氧基甲醚、四氫哌喃醚、1-甲氧基環己醚、4-甲氧基四氫硫代哌喃醚、4-甲氧基四氫硫代哌喃醚S,S-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基醚、1-(2-氟苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基醚、1,4-二噁烷-2-基醚、四氫呋喃基醚、四氫硫代呋喃基醚；經取代之乙醚，諸如1-乙氧基乙醚、1-(2-氯乙氧基)乙醚、1-[2-(三甲基矽烷基)乙氧基]乙醚、1-甲基-1-甲氧基乙醚、1-甲基-1-苯甲氧基乙醚、1-甲基-1-苯甲氧基-2-氟乙醚、1-甲基-1-苯氧基乙醚、2-三甲基矽烷醚、第三丁基醚、烯丙醚、炔丙醚、對氯苯基醚、對甲氧苯基醚、苯甲基醚、對甲氧基苯甲基醚、3,4-二甲氧基苯甲基醚、三甲基矽烷醚、三乙基矽烷醚、三丙基矽烷醚、二甲基異丙基矽烷醚、二乙基異丙基矽烷醚、二甲基己基矽烷醚、第三丁基二甲基矽烷醚、二苯基甲基矽烷醚、苯甲醯基甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、苯乙酸酯、苯甲酸酯、烷基甲基碳酸酯、烷基9-茀基甲基碳酸酯、烷基乙基碳酸酯、烷基2,2,2,-三氯乙基碳酸酯、1,1-二甲基-2,2,2-三氯乙基碳酸酯、烷基磺酸酯、甲烷磺酸酯、苯甲基磺酸酯、亞甲基縮醛、亞乙基縮醛及第三丁基亞甲基縮酮。較佳保護基係由以下各式表示：-Ra 、-Si(Ra )(Ra )(Ra )、-C(O)Ra 、-C(O)ORa 、-C(O)NH(Ra )、-S(O)2 Ra 、-S(O)2 OH、P(O)(OH)2 及-P(O)(OH)ORa ，其中Ra 為C1 -C20 烷基、C2 -C20 烯基、C2 -C20 炔基、-C1 -C20 伸烷基(碳環)、-C2 -C20 伸烯基(碳環)、-C2 -C20 伸炔基(碳環)、-C6 -C10 芳基、-C1 -C20 伸烷基(芳基)、-C2 -C20 伸烯基(芳基)、-C2 -C20 伸炔基(芳基)、-C1 -C20 伸烷基(雜環)、-C2 -C20 伸烯基(雜環)或-C2 -C20 伸炔基(雜環)，其中該烷基、烯基、炔基、伸烷基、伸烯基、伸炔基、芳基、碳環基及雜環基不論單獨或是作為另一基團之一部分均視情況經取代。
出於本文之目的，「改變天然糖基化模式」意謂天然序列161P2F10B中所發現之一或多個碳水化合物部分缺失(藉由移除潛在糖基化位點，或藉由用化學及/或酶促方式使糖基化作用缺失)，及/或添加天然序列161P2F10B中不存在之一或多個糖基化位點。此外，該片語包括天然蛋白質之糖基化的定性變化，包括所包含各種碳水化合物部分之性質及比例變化。
術語「類似物」係指與另一分子(例如161P2F10B相關蛋白)結構相似或者共有相似或對應屬性的分子。舉例而言，特異性結合至161P2F10B之抗體或T細胞可特異性結合161P2F10B蛋白之類似物。
除非另外明確指示，否則術語「抗體」係以最廣泛之意義使用。因此，「抗體」可為天然存在之抗體或人造抗體，諸如由習知融合瘤技術產生之單株抗體。161P2F10B抗體包含單株及多株抗體，以及含有此等抗體之抗原結合域及/或一或多個互補決定區之片段。如本文中所使用，術語「抗體」係指特異性結合161P2F10B及/或展現所要生物活性之任何形式之抗體或其片段，且特別涵蓋單株抗體(包括全長單株抗體)、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其特異性結合161P2F10B及/或展現所要生物活性即可。任何特異性抗體均可用於本文所提供之方法及組合物中。因而，在一實施例中，術語「抗體」涵蓋包含至少一個來自輕鏈免疫球蛋白分子之可變區與至少一個來自重鏈分子之可變區組合形成標靶抗原之特異性結合位點的分子。在一實施例中，抗體為IgG抗體。舉例而言，抗體為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。適用於本發明方法及組合物中之抗體可於細胞培養物、噬菌體或各種動物中產生，包括但不限於牛、兔、山羊、小鼠、大鼠、倉鼠、天竺鼠、綿羊、狗、貓、猴、黑猩猩、猿。因此，在一實施例中，本發明之抗體為哺乳動物抗體。可使用噬菌體技術分離初始抗體或產生具有改變之特異性或親合力特徵的變異體。該等技術為常規技術且為此項技術中所熟知。在一實施例中，該抗體係由此項技術中已知之重組方式產生。舉例而言，可藉由用包含編碼該抗體之DNA序列之載體轉染宿主細胞來產生重組抗體。可使用一或多種載體，將表現至少一個VL及至少一個VH區之DNA序列轉染於宿主細胞中。抗體產生及製造之重組方式之例示性描述包括DeIves,Antibody Production: Essential Techniques (Wiley,1997)；Shephard等人，Monoclonal Antibodies (Oxford University Press,2000)；Goding,Monoclonal Antibodies: Principles And Practice (Academic Press,1993)；Current Protocols ln Immunology (John Wiley & Sons，最新版本)。可藉由重組方式修飾本發明之抗體以增強抗體介導所要功能時之功效。因而，使用重組方式藉由取代來修飾抗體在本發明之範疇內。取代通常將為保守取代。舉例而言，抗體恆定區中之至少一個胺基酸可用不同殘基置換。參看例如美國專利第5,624,821號、美國專利第6,194,551號、申請案第WO 9958572號；及Angal等人，Mol. Immunol. 30: 105-08(1993)。胺基酸之修飾包括胺基酸之缺失、添加及取代。在一些情況下，進行該等改變以降低不需要之活性，例如補體依賴性細胞毒性。通常藉由與提供可偵測信號之物質共價或非共價接合來標記抗體。已知多種標記及結合技術且廣泛報導於科學及專利文獻中。可針對與正常或缺陷性161P2F10B之結合情況，篩檢此等抗體。參看例如Antibody Engineering: A Practical Approach (Oxford University Press,1996)。可用以下活體外檢定，包括但不限於：增殖、遷移、黏著、軟瓊脂生長、血管生成、細胞間通訊、細胞凋亡、轉運、信號轉導、內化、抗體介導之二次殺死，及以下活體內檢定，諸如抑制腫瘤生長，來鑑別具有所要生物活性之適合抗體。本文所提供之抗體可用作ADC之中間物。本文所提供之抗體亦可用於診斷性應用。作為捕捉抗體或非中和抗體時，可針對結合至特異性抗原而不抑制抗原之受體結合活性或生物活性的能力來篩檢其。作為中和抗體時，該等抗體可用於競爭性結合檢定。其亦可用於定量161P2F10B或其受體。
如本文所使用之術語抗體之「抗原結合部分」或「抗體片段」(或單純「抗體部分」)係指161P2F10B抗體之保留特異性結合至抗原(例如161P2F10B；圖1)之能力的一或多個片段。已展示抗體之抗原結合功能可由全長抗體之片段來執行。術語抗體之「抗原結合部分」內所涵蓋之結合片段之實例包括(i) Fab片段，即由VL 、VH 、CL 及CH1 結構域組成之單價片段；(ii) F(ab' )2 片段，即包含兩個在鉸鏈區處由雙硫橋連接之Fab片段的二價片段；(iii)由VH 及CH1 結構域組成之Fd片段；(iv)由抗體單臂之VL 及VH 結構域組成之Fv片段；(v) dAb片段(Ward等人(1989) Nature 341:544-546)，其係由VH 結構域組成；及(vi)分離之互補決定區(CDR)。此外，儘管Fv片段之兩個結構域VL 及VH 係由各別基因編碼，但其可使用重組法由使其能夠形成其中VL 與VH 區配對形成單價分子之單一蛋白質鏈(稱為單鏈Fv(scFv)；參看例如Bird等人(1988)Science 242:423-426；及Huston等人(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)的合成連接子接合。該等單鏈抗體亦意欲涵蓋於術語抗體之」抗原結合部分」內。此等抗體片段係使用熟習此項技術者已知之習知技術獲得，且以與完整抗體相同之方式針對效用來篩選該等片段。
如本文所使用，任何形式之「抗原」均可用於產生對161P2F10B具有特異性之抗體。因而，該引發抗原可為單一抗原決定基、多抗原決定基或者單獨或與此項技術中已知之一或多種免疫原性增強劑組合之完整蛋白質。該引發抗原可為分離之全長蛋白質、細胞表面蛋白質(例如用經該抗原之至少一部分轉染之細胞免疫)或可溶性蛋白質(例如僅用該蛋白質之細胞外域部分免疫)。抗原可產生於遺傳修飾之細胞中。編碼該抗原之DNA可為基因體DNA或非基因體DNA(例如cDNA)且編碼胞外域之至少一部分。如本文中所使用，術語「部分」係指視情況組成相關抗原之免疫原性抗原決定基的最少數目之胺基酸或核酸。可採用適合轉型相關細胞之任何遺傳載體，包括但不限於腺病毒載體、質體及非病毒載體，諸如陽離子脂質。在一實施例中，本文之方法及組合物之抗體特異性結合相關161P2F10B細胞外域之至少一部分。
本文所提供之抗體或其抗原結合片段可結合至「生物活性劑」。如本文中所使用，術語「生物活性劑」係指結合抗原及/或增強或介導所要生物效應以增強殺死細胞之毒素的任何合成或天然存在之化合物。在一實施例中，適用於本發明之結合片段為生物活性片段。如本文中所使用，術語「生物活性」係指抗體或抗體片段能夠結合所要抗原決定基且直接或間接發揮生物效應。直接效應包括但不限於：調節、刺激及/或抑制生長信號；調節、刺激及/或抑制抗細胞凋亡信號；調節、刺激及/或抑制細胞凋亡或壞死信號；調節、刺激及/或抑制ADCC級聯；及調節、刺激及/或抑制CDC級聯。
本文之單株抗體特定包括「嵌合」抗體，其中一部分重鏈及/或輕鏈與來源於特定物種或屬於特定抗體類別或亞類之抗體中的相應序列一致或同源，而該(等)鏈之其餘部分與來源於另一物種或屬於另一抗體類別或亞類之抗體中的相應序列一致或同源；以及該等抗體之片段，只要其特異性結合標靶抗原及/或展現所要生物活性即可(美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855(1984))。
術語「化學治療劑」係指可有效抑制腫瘤生長之所有化合物。化學治療劑之非限制性實例包括烷基化劑，例如氮芥類、伸乙亞胺化合物及烷基磺酸酯；抗代謝物，例如葉酸、嘌呤或嘧啶拮抗劑；有絲分裂抑制劑，例如抗微管蛋白劑，諸如長春花生物鹼、阿瑞他汀及鬼臼黴素(podophyllotoxin)衍生物；細胞毒性抗生素；損傷或干擾DNA表現或複製之化合物，例如DNA小溝結合劑；及生長因子受體拮抗劑。此外，化學治療劑包括細胞毒性劑(如本文中所定義)、抗體、生物分子及小分子。
術語「化合物」係指且涵蓋化合物自身以及以下(無論是否明確陳述，且除非上下文明確闡述不包括以下)：化合物之非晶形及結晶形式，包括多晶形式，其中此等形式可為混合物之一部分或呈分離形式；化合物之游離酸及游離鹼形式，其通常為本文所提供之結構中所示之形式；化合物之異構體，其係指光學異構體及互變異構體，其中光學異構體包括對映異構體及非對映異構體、對掌性異構體及非對掌性異構體，且光學異構體包括分離之光學異構體以及光學異構體之混合物，包括外消旋混合物及非外消旋混合物；其中異構體可呈分離形式或呈與一或多種其他異構體之混合物形式；化合物之同位素，包括含有氘及氚之化合物，且包括含有放射性同位素之化合物，包括治療有效及診斷有效之放射性同位素；化合物之多聚體形式，包括二聚體、三聚體等形式；化合物之鹽，較佳為醫藥學上可接受之鹽，包括酸加成鹽及鹼加成鹽，包括具有有機相對離子及無機相對離子之鹽，且包括兩性離子形式，其中若化合物與兩個或兩個以上相對離子締合，則該兩個或兩個以上相對離子可能相同或不同；及化合物之溶劑合物，包括半溶劑合物、單溶劑合物、二溶劑合物等等，包括有機溶劑合物及無機溶劑合物，該等無機溶劑合物包括水合物；其中若化合物與兩個或兩個以上溶劑分子締合，則該兩個或兩個以上溶劑分子可能相同或不同。在一些情況下，本文提及本發明化合物將包括明確提及一或多種以上形式，例如鹽及/或溶劑合物，然而此提及僅用於強調，且不應視為排除上文所確定之以上形式之其他形式。
術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞之表現活性、細胞功能及/或導致破壞細胞的物質。該術語意欲包括放射性同位素、化學治療劑及毒素，諸如細菌、真菌、植物或動物來源之小分子毒素或酶促活性毒素，包括其片段及/或變異體。細胞毒性劑之實例包括但不限於阿瑞他汀(例如阿瑞他汀e、阿瑞他汀f、MMAE及MMAF)、金黴素(auromycin)、類美登素(maytansinoid)、篦麻毒素、篦麻毒素A-鏈、康柏斯達汀(combretastatin)、多卡米新(duocarmycin)、海兔毒素(dolastatin)、小紅莓(doxorubicin)、道諾黴素(daunorubicin)、紫杉醇(taxol)、順鉑(cisplatin)、cc1065、溴化乙錠、絲裂黴素(mitomycin)、依託泊苷(etoposide)、特諾波賽(tenoposide)、長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、秋水仙鹼(colchicine)、二羥基炭疽菌素二酮、放線菌素(actinomycin)、白喉毒素(diphtheria toxin)、假單胞菌外毒素(PE)A、PE40、相思豆毒素、相思豆毒素A鏈、莫迪素A鏈、α-帚麴菌素(alpha-sarcin)、白樹素(gelonin)、有絲分裂素、侷限麴菌素(restrictocin)、酚黴素、伊諾黴素(enomycin)、麻風樹毒素(curicin)、巴豆毒素、卡奇黴素(calicheamicin)、肥皂草抑制劑(Saponaria officinalis inhibitor)及糖皮質激素及其他化學治療劑，以及放射性同位素，諸如At211 、I131 、I125 、Y90 、Re186 、Re188 、Sm153 、Bi212 或Bi213 、P32 ，及Lu之放射性同位素，包括Lu177 。抗體亦可結合至能夠將前藥轉化為其活性形式的抗癌前藥活化酶。
在161P2F10B結合劑對161P2F10B表現細胞之效應的內容中，術語「缺失」係指161P2F10B表現細胞之數目減少或消除161P2F10B表現細胞。
「基因產物」在本文中用於指示肽/蛋白質或mRNA。舉例而言，「本發明之基因產物」在本文中有時稱為「癌症胺基酸序列」、「癌症蛋白質」、「表I中所列癌症之蛋白質」、「癌症mRNA」、「表I中所列癌症之mRNA」等。在一實施例中，癌症蛋白質係由圖1之核酸編碼。癌症蛋白質可為片段，或為圖1之核酸所編碼之全長蛋白質。在一實施例中，癌症胺基酸序列係用於確定序列一致性或相似性。在另一實施例中，該等序列為圖1之核酸所編碼之蛋白質的天然存在之對偶基因變異體。在另一實施例中，該等序列為如本文中進一步描述之序列變異體。
「異結合」抗體可用於本發明之方法及組合物中。如本文中所使用，術語「異結合抗體」係指兩個共價接合之抗體。該等抗體可使用合成蛋白質化學中之已知方法，包括使用交聯劑來製備。參看例如美國專利第4,676,980號。
術語「同源物」係指展現與另一種分子之同源性的分子，例如在相應位置處具有相同或相似之化學殘基序列。
在一實施例中，本文所提供之抗體為「人類抗體」。如本文中所使用，術語「人類抗體」係指輕鏈與重鏈序列之整個序列(包括互補決定區(CDR))基本上來自人類基因的抗體。在一實施例中，人類單株抗體係藉由三體雜交瘤技術、人類B細胞技術(參看例如Kozbor等人，Immunol. Today 4:72(1983))、EBV轉型技術(參看例如Cole等人Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy 77-96(1985))或使用噬菌體呈現(參看例如Marks等人，J. Mol. Biol. 222:581(1991))來製備。在一特定實施例中，在轉殖基因小鼠中產生人類抗體。製造該等部分至完全人類抗體之技術為此項技術中所知且可使用任何該等技術。根據一尤其較佳之實施例，在經工程改造以表現人類重鏈及輕鏈抗體基因之轉殖基因小鼠中製造完全人類抗體序列。製備產生人類抗體之轉殖基因小鼠及其後代之例示性描述可在申請案第WO02/43478號及美國專利6,657,103(Abgenix)中找到。接著可融合來自產生所要抗體之轉殖基因小鼠的B細胞以製造融合瘤細胞株，以便連續產生抗體。參看例如美國專利第5,569,825號、第5,625,126號、第5,633,425號、第5,661,016號及第5,545,806號；及Jakobovit,，Adv. Drug Del. Rev. 31:33-42(1998)；Green等人，J. Exp. Med. 188:483-95(1998)。
如本文所使用之術語「抑制」意謂可量測量之減少或完全阻止。
適合「標記」包括放射性核素、酶、受質、輔因子、抑制劑、螢光部分、化學發光部分、磁性顆粒及其類似物。教示該等標記之使用的專利包括美國專利第3,817,837號、第3,850,752號、第3,939,350號、第3,996,345號、第4,277,437號、第4,275,149號及第4,366,241號。此外，本文所提供之抗體可用作螢光體(fluorobody)之抗原結合組分。參看例如Zeytun等人，Nat. Biotechnol. 21:1473-79(2003)。
術語「轉移性癌症」及「轉移性疾病」意謂已擴散至區域性淋巴結或遠端部位之癌症，且意欲包括AUA系統下之D期疾病及TNM系統下之TxNxM+期疾病。
如本文所使用之術語「調節劑」或「測試化合物」或「候選藥物」或語法上之等效物描述將測試直接或間接地改變癌症表型或癌症序列(例如核酸或蛋白質序列)之表現、或癌症序列之效應(例如信號傳導、基因表現、蛋白質相互作用等)之能力的任何分子，例如蛋白質、寡肽、小有機分子、多醣、聚核苷酸等。在一態樣中，調節劑將中和本發明癌症蛋白質之效應。「中和」意謂抑制或阻斷蛋白質之活性以及隨後對細胞之影響。在另一態樣中，調節劑將藉由校正蛋白質含量來中和本發明基因及其相應蛋白質之效應。在較佳實施例中，調節劑改變表現型態，或本文所提供之核酸或蛋白質之表現型態，或下游效應路徑。在一實施例中，調節劑將癌症表型抑制為例如正常組織指紋。在另一實施例中，調節劑誘導癌症表型。一般而言，以不同藥劑濃度對複數種檢定混合物進行平行試驗，以獲得對各種濃度之差異性反應。此等濃度中之一者通常充當陰性對照，亦即零濃度或低於偵測含量。
調節劑、候選藥物或測試化合物涵蓋許多化學類別，不過其通常為有機分子，較佳為分子量大於100道爾頓(Dalton)且小於約2,500道爾頓之小有機化合物。較佳小分子小於2000 D或小於1500 D或小於1000 D或小於500 D。候選藥劑包含與蛋白質進行結構相互作用(尤其氫鍵結)所必需之官能基，且通常包括至少一個胺基、羰基、羥基或羧基，較佳包括該等化學官能基中之至少兩個。候選藥劑通常包含經一或多個上述官能基取代之環狀碳結構或雜環結構及/或芳族或多芳族結構。調節劑亦包含生物分子，諸如肽、醣、脂肪酸、類固醇、嘌呤、嘧啶、其衍生物、結構類似物或組合。肽尤其較佳。一類調節劑為例如具有約5至約35個胺基酸、較佳約5至約20個胺基酸且尤其較佳約7至約15個胺基酸之肽。癌症調節性蛋白質較佳為可溶的，包括非跨膜區及/或具有有助於溶解之N端Cys。在一實施例中，保持該片段之C端為游離酸且N端為游離胺以有助於偶合，亦即與半胱胺酸偶合。在一實施例中，本發明之癌症蛋白質與如本文所論述之免疫原性藥劑結合。在一實施例中，癌症蛋白質與BSA結合。例如具有較佳長度之本發明肽可彼此連接或與其他胺基酸連接以產生更長之肽/蛋白質。調節性肽可為如上文所概述之天然存在之蛋白質的消化物、隨機肽或「偏向性」隨機肽。在一較佳實施例中，基於肽/蛋白質之調節劑為如本文所定義之抗體及其片段。
如本文所用之術語「單株抗體」係指自一群實質上均質之抗體獲得的抗體，亦即，構成該群之個別抗體除了可以微量存在之可能天然存在之突變外均為一致的。單株抗體高度特異性地針對單一抗原決定基。相比之下，習知(多株)抗體製劑通常包括針對(或特異性針對)不同抗原決定基之多種抗體。在一實施例中，多株抗體含有複數種單株抗體，在含有多個抗原決定基的單一抗原內，該等單株抗體具有不同的抗原決定基特異性、親和力或親合力。修飾語「單株」指示抗體係自一群實質上均質之抗體獲得的特徵，且不應視為需要藉由任何特定方法來產生抗體。舉例而言，將根據本發明使用之單株抗體可藉由首先由Kohler等人，Nature 256:495(1975)所描述之融合瘤法來製造，或可藉由重組DNA法(參看例如美國專利第4,816,567號)來製造。舉例而言，亦可使用Clackson等人，Nature 352:624-628(1991)及Marks等人，J. Mol. Biol. 222:581-597(1991)中所描述之技術自噬菌體抗體庫分離「單株抗體」。此等單株抗體通常將以通常由ELISA所測定，至少約1 μM、更通常至少約300 nM、通常至少約30 nM、較佳至少約10 nM、更佳至少約3 nM或更佳之Kd結合。
「醫藥賦形劑」包含諸如佐劑、載劑、pH值調節劑及緩衝劑、張力調節劑、濕潤劑、防腐劑及其類似藥劑之物質。
「醫藥學上可接受」係指無毒、惰性及/或在生理上與人類或其他哺乳動物相容的組合物。
術語「聚核苷酸」意謂長度為至少10個鹼基或鹼基對之核苷酸(核糖核苷酸或去氧核苷酸或任一類型之核苷酸之經修飾形式)的聚合形式，且意欲包括DNA及/或RNA之單股形式及雙股形式。在此項技術中，此術語通常可與「寡核苷酸」互換使用。聚核苷酸可包含本文所揭示之核苷酸序列，其中例如圖1所示之胸苷(T)亦可為尿嘧啶(U)；此定義與DNA與RNA之化學結構之間的差異有關，尤其與以下觀察結果有關：RNA中之4個主要鹼基之一為尿嘧啶(U)而非胸苷(T)。
術語「多肽」意謂具有至少約4、5、6、7或8個胺基酸之聚合物。在本說明書中，使用胺基酸之標準三字母或單字母名稱。在此項技術中，此術語通常可與「肽」或「蛋白質」互換使用。
「重組」DNA或RNA分子為已進行活體外分子操作之DNA或RNA分子。
如本文所使用，術語「特異性」及「特異性結合」係指抗體選擇性地結合至標靶抗原決定基。藉由在一組給定條件下將抗體與適當抗原之結合同與無關抗原或抗原混合物之結合相比較來測試抗體之結合特異性。若抗體與適當抗原之結合為抗體與無關抗原或抗原混合物之結合的至少2倍、5倍、7倍及較佳10倍，則其視為具有特異性。在一實施例中，特異性抗體為結合161P2F10B相關抗原(尤其為161P2F10B)但不結合無關抗原的抗體。
如本文中所使用，「治療」或「治療性」及語法上相關之術語係指任何疾病後果之任何改良，諸如存活時間延長、發病率降低及/或作為替代治療形式之副產物的副作用減輕；如此項技術中容易地瞭解，完全消除疾病雖然不為治療行為所要求，但為較佳結果。
「161P2F10B相關蛋白」包括本文所特定鑑別之蛋白質(參看圖1)以及可在不過度實驗下按照本文所概述之方法或此項技術中易於獲得之方法來分離/產生且表徵之對偶基因變異體、保守取代變異體、類似物及相似物。亦包括組合不同161P2F10B蛋白或其片段之部分的融合蛋白以及161P2F10B蛋白與異源多肽之融合蛋白。該等161P2F10B蛋白統稱為161P2F10B相關蛋白、本發明蛋白質或161P2F10B。術語「161P2F10B相關蛋白」係指具有4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或25個以上胺基酸；或至少30、35、40、45、50、55、60、65、70、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、225、250、275、300、325、330、335、339或339個以上胺基酸之多肽片段或161P2F10B蛋白序列。
II.)　161P2F10B抗體
用於本發明ADC之抗體在生理條件下特異性結合至161P2F10B蛋白且不結合(或微弱結合)至非161P2F10B相關蛋白之肽或蛋白質。
用於製備抗體、特別是單株抗體之各種方法為此項技術中所熟知。舉例而言，可藉由使用呈分離或免疫結合形式之161P2F10B相關蛋白、肽或其片段免疫適合哺乳動物宿主來製備抗體(Antibodies:A Laboratory Manual ,CSH Press,Harlow及Lane編(1988)；Harlow,Antibodies ,Cold Spring Harbor Press,NY(1989))。此外，亦可使用161P2F10B之融合蛋白，諸如161P2F10B GST融合蛋白。在一特定實施例中，產生包含圖1之所有或大部分胺基酸序列的GST融合蛋白，接著將其用作免疫原來產生適當抗體。在另一實施例中，合成161P2F10B相關蛋白且將其用作免疫原。
此外，使用此項技術中已知之裸DNA免疫技術(在存在或不存在經純化之161P2F10B相關蛋白或161P2F10B表現細胞的情況下)，對所編碼之免疫原產生免疫反應(關於綜述，參看Donnelly等人，1997,Ann. Rev. Immunol. 15: 617-648)。
可分析如圖1中所示之161P2F10B蛋白之胺基酸序列，以選擇161P2F10B蛋白之特異性區域來產生抗體。舉例而言，使用161P2F10B胺基酸序列之疏水性及親水性分析來鑑別161P2F10B結構中之親水性區域。161P2F10B蛋白之顯示免疫原性結構之區域以及其他區域及結構域可使用此項技術中已知之各種其他方法容易地鑑別，諸如周-法斯曼(Chou-Fasman)、卡尼爾-羅布森(Garnier-Robson)、凱特-杜立德(Kyte-Doolittle)、伊詩貝格(Eisenberg)、卡普拉斯-舒爾茨(Karplus-Schultz)或詹姆森-沃爾夫(Jameson-Wolf)分析。可使用Hopp,T.P.及Woods,K.R.,1981,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78:3824-3828之方法產生親水性型態。可使用Kyte,J.及Doolittle,R.F.,1982,J. Mol. Biol .157：105-132之方法產生疏水性型態。可使用JaninJ.,1979,Nature 277:491-492之方法產生可及殘基之百分比(%)型態。可使用Bhaskaran R.,Ponnuswamy P.K.,1988,Int. J. Pept. Protein Res .32:242-255之方法產生平均可撓性型態。可使用Deleage,G.,Roux B.,1987,Protein Engineering 1:289-294之方法產生β-轉角型態。因而，藉由任何此等程式或方法鑑別之各區域均在本發明之範疇內。藉由本文所提供之實例進一步說明產生161P2F10B抗體之較佳方法。製備蛋白質或多肽供用作免疫原之方法為此項技術中所熟知。製備蛋白質與載體(諸如BSA、KLH或其他載體蛋白質)之免疫原性結合物的方法亦為此項技術中所熟知。在一些情況下，使用利用例如碳化二亞胺試劑之直接接合；在其他情況下，連接試劑(諸如Pierce Chemical Co.(Rockford,IL)供應之連接試劑)為有效的。投與161P2F10B免疫原通常係藉由經適合時段注射且使用適合佐劑來進行，如此項技術中所瞭解。在免疫時程期間，可獲得抗體之力價以確定抗體形成之適當性。
在一較佳實施例中，用於本發明ADC之161P2F10B MAb包含名為H16-7.8之抗體的重鏈及輕鏈可變區(參看圖3)或者胺基酸序列與H16-7.8之重鏈及輕鏈可變區之胺基酸序列同源之重鏈及輕鏈可變區，且其中該等抗體保留本發明161P2F10B Mab之所要功能特性(尤其與161P2F10B之結合活性)。H16-7.8之重鏈可變區係由介於SEQ ID NO: 7之第20個Q殘基至第142個S殘基範圍內的胺基酸序列組成，且H16-7.8之輕鏈可變區係由介於SEQ ID NO: 8之第20個E殘基至第127個R殘基範圍內的胺基酸序列組成。可選擇恆定區之任何亞類，作為本發明抗體之恆定區。較佳可使用人類IgG2恆定區作為重鏈恆定區且使用人類Ig κ恆定區作為輕鏈恆定區。161P2F10B Mab與161P2F10B蛋白之反應性(結合活性)可藉由許多熟知方式，包括西方墨點法、免疫沈澱、ELISA及FACS分析，使用161P2F10B蛋白、161P2F10B表現細胞或其提取物確定。
在一實施例中，CH1鉸鏈區經修飾，以改變該鉸鏈區中半胱胺酸殘基之數目，例如增加或減少。此方法進一步描述於Bodmer等人之美國專利第5,677,425號中。改變CH1鉸鏈區中半胱胺酸殘基之數目以例如有利於輕鏈及重鏈之組裝或者增加或降低161P2F10B Mab之穩定性。
在另一實施例中，使抗體之Fc鉸鏈區突變以降低161P2F10B Mab之生物半衰期。更特定言之，將一或多個胺基酸突變引入Fc鉸鏈片段之CH2-CH3域界面區中，以使該抗體之葡萄球菌蛋白A(SpA)結合相對於天然Fc鉸鏈域SpA結合削弱。此方法進一步詳細描述於Ward等人之美國專利第6,165,745號中。
在另一實施例中，161P2F10B Mab經修飾以增加其生物半衰期。可使用多種方法。舉例而言，可引入突變，如Ward之美國專利第6,277,375號中所描述。或者，為增加生物半衰期，抗體可在CH1或CL區內改變，以使其含有自IgG之Fc區之CH2域的兩個環獲得之救助受體結合抗原決定基，如Presta等人之美國專利第5,869,046號及第6,121,022號中所描述。
在其他實施例中，藉由用不同胺基酸殘基置換至少一個胺基酸殘基來改變Fc區，以改變161P2F10B Mab之效應功能。舉例而言，可用不同胺基酸殘基置換一或多個選自胺基酸特異性殘基之胺基酸，以改變抗體對效應配位體之親和力但保留親本抗體之抗原結合能力。親和力改變之效應配位體可為例如Fc受體或補體之C1組分。此方法進一步詳細描述於Winter等人之美國專利第5,624,821號及第5,648,260號中。
在一實施例中，用於本發明ADC之抗體係藉由此項技術中已知之重組方式產生。舉例而言，可藉由用包含編碼該抗體之DNA序列之載體轉染宿主細胞來產生重組抗體。可使用一或多種載體將表現至少一個VL及至少一個VH區之DNA序列轉染於宿主細胞中。抗體產生及製造之重組方式之例示性描述包括Delves,ANTIBODY PRODUCTION: ESSENTIAL TECHNIQUES(Wiley,1997)；Shephard等人，Monoclonal Antibodies (Oxford University Press,2000)；Goding,Monoclonal Antibodies: Principles And Practice (Academic Press,1993)；Current Protocols In Immunology (John Wiley & Sons，最新版本)。
熟習此項技術者可基於本文所揭示之有關重鏈可變區及輕鏈可變區之序列資訊，使用此項技術中通常已知之方法容易地製備用於本發明ADC之抗體。明確言之，製備具有編碼本發明ADC之抗體之重鏈可變區胺基酸的鹼基序列之重鏈可變區基因片段(SEQ ID NO: 7，20至142)及具有編碼本發明ADC之抗體之輕鏈可變區胺基酸的鹼基序列之輕鏈可變區基因片段(SEQ ID NO: 8，20至127)。接著，使可變區基因接合至適當類別之人類抗體中的恆定區基因以製備抗體基因。接著，使此抗體基因接合至適當表現載體，且引入培養之細胞中。最後，培養所培養之細胞，藉此可自培養物上清液獲得抗體。
編碼本發明抗體之重鏈及輕鏈可變區胺基酸(SEQ ID NO: 7之20至142，及SEQ ID NO: 8之20至127)之各上述可變區基因片段可藉由基於根據重鏈及輕鏈可變區之胺基酸序列(SEQ ID NO: 7之20至142，及SEQ ID NO: 8之20至127)設計之鹼基序列或基於本發明抗體之重鏈及輕鏈可變區之鹼基序列(以SEQ ID NO: 4之91至459及SEQ ID NO: 6之100至423顯示)，使用此項技術中通常已知之基因合成方法來製備。可使用熟習此項技術者顯而易知之各種方法，諸如WO 90/07861中所描述之抗體基因合成法，作為此類基因合成法。接著，使上述可變區基因片段與人類抗體之恆定區基因接合以製備抗體基因。雖然恆定區之任何子類均可選作所使用之人類抗體之恆定區，但較佳可使用人類Ig[γ]2作為重鏈恆定區且使用人類Ig[κ]作為輕鏈恆定區。
作為藉由接合SEQ ID NO: 7之20至142所示之重鏈可變區基因與人類Ig[γ]2重鏈恆定區基因所獲得的本發明ADC之抗體之較佳抗體重鏈基因，可提及包含編碼SEQ ID NO: 7之20至468所示之胺基酸序列的鹼基序列之基因，更佳為包含SEQ ID NO: 4之91至1437所示之鹼基序列的基因。作為藉由接合SEQ ID NO: 8之20至127所示之輕鏈可變區基因與人類Ig[κ]輕鏈恆定區基因所獲得的本發明ADC之抗體之較佳抗體輕鏈基因，可提及包含編碼SEQ ID NO: 8之20至233所示之胺基酸序列的鹼基序列之基因，更佳為包含SEQ ID NO: 6之100至741所示之鹼基序列的基因。作為由包含SEQ ID NO: 4之91至1437所示之鹼基序列的重鏈基因及包含SEQ ID NO: 6之100至741所示之鹼基序列的輕鏈基因編碼之本發明ADC之抗體，可提及以下實例中所描述之H16-7.8。
在製備此抗體基因後，將該抗體基因引入表現載體中，將該表現載體引入培養之細胞中，培養所培養之細胞，純化抗體及其類似操作可藉由使用此項技術中通常已知之各種方法來執行。表現載體不受限制，只要其能夠表現抗體基因即可。較佳利用已具有人類Ig恆定區基因之表現載體，諸如AG-[γ]2或AG-[κ]，此係因為在抗體可變區基因插入該表現載體中時其將變成僅具有抗體基因之表現載體。
藉由例如磷酸鈣法及其類似方法將上述表現載體引入培養之細胞中。作為引入表現載體之所培養之細胞的實例，可使用諸如CHO細胞之培養細胞，且其可用習知方法培養。上述培養後，可藉由例如各種層析，使用蛋白質A管柱來純化培養物上清液中所積聚之抗體。
由此用161P2F10B蛋白獲得之161P2F10B抗體之反應性(結合活性)可藉由許多熟知方式，包括西方墨點法、免疫沈澱、ELISA及FACS分析，適當時使用161P2F10B蛋白、161P2F10B表現細胞或其提取物來確定。由此獲得之抗體或保留該抗體之活性的抗體片段在按要求進一步純化後可製備成ADC之抗體。161P2F10B抗體或其片段可用可偵測標記物標記或結合至第二分子。適合之可偵測標記包括但不限於放射性同位素、螢光化合物、生物發光化合物、化學發光化合物、金屬螯合劑或酶。此外，對兩個或兩個以上161P2F10B抗原決定基具有特異性之雙特異性抗體係使用此項技術中一般已知之方法產生。亦可藉由此項技術中已知之交聯技術產生均二聚抗體(例如Wolff等人，Cancer Res . 53: 2560-2565)。
在另一較佳實施例中，本發明ADC之161P2F10B Mab為包含名為H16-7.8之抗體之重鏈及輕鏈的抗體。H16-7.8之重鏈係由介於SEQ ID NO: 7之第20個Q殘基至第468個K殘基範圍內的胺基酸序列組成，且H16-7.8之輕鏈係由介於SEQ ID NO: 8序列之第20個E殘基至第233個C殘基範圍內的胺基酸序列組成。其序列闡述於圖2及圖3中。在一較佳實施例中，H16-7.8結合至細胞毒性劑。
III.)　抗體藥物結合物概述
在另一態樣中，本發明提供抗體藥物結合物(ADC)，其包含抗體結合至諸如MMAF之細胞毒性劑。在另一態樣中，本發明進一步提供使用ADC之方法。在一態樣中，ADC包含任何上述161P2F10B MAb共價連接至細胞毒性劑。
使用抗體藥物結合物局部遞送細胞毒性劑或細胞抑制劑(亦即在治療癌症時殺死或抑制腫瘤細胞之藥物)(Syrigos及Epenetos(1999)Anticancer Research 19:605-614；Niculescu-Duvaz及Springer(1997)Adv. Drg Del. Rev. 26:151-172；美國專利4,975,278)使藥物部分靶向遞送至腫瘤及細胞內積聚於其中，而此等未結合藥物藥劑之全身性投藥可能造成對正常細胞以及設法消除之腫瘤細胞而言不可接受之毒性程度(Baldwin等人，(1986)Lancet (1986年3月15日)第603-05頁；Thorpe,(1985)「Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review」,Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications ,A. Pinchera等人(編)，第475-506頁)。因此設法使功效最大而毒性最小。已報導多株抗體與單株抗體均可用於此等策略中(Rowland等人(1986)Cancer Immunol. Immunother .,21:183-87)。此等方法中所使用之藥物包括道諾黴素、小紅莓、甲胺喋呤(methotrexate)及長春地辛(vindesine)(Rowland等人，(1986)同上)。用於抗體-毒素結合物中之毒素包括細菌毒素，諸如白喉毒素；植物毒素，諸如蓖麻毒素；小分子毒素，諸如格爾德黴素(geldanamycin)(Mandler等人(2000)Jour. of the Nat. Cancer Inst. 92(19):1573-1581；Mandler等人(2000)Bioorganic & Med .Chem .Letters 10:1025-1028；Mandler等人(2002)Bioconjugate Chem . 13:786-791)、類美登素(EP 1391213；Liu等人(1996)Proc .Natl .Acad .Sci .USA 93:8618-8623)及卡奇黴素(Lode等人(1998)Cancer Res . 58:2928；Hinman等人(1993)Cancer Res .53:3336-3342)。毒素可藉由包括微管蛋白結合、DNA結合或拓撲異構酶抑制之機制來實現其細胞毒性及細胞抑制效應。一些細胞毒性藥物在結合至大抗體或蛋白質受體配位體時傾向於無活性或具有弱活性。
抗體藥物結合物之實例為ZEVALIN(替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)，Biogen/Idec)，其為由針對在正常及惡性B淋巴細胞表面上發現之CD20抗原之鼠類IgG1 κ單株抗體與111 In或90 Y放射性同位素以硫脲連接子螯合劑結合所構成的抗體-放射性同位素結合物(Wiseman等人(2000)Eur .Jour .Nucl .Med . 27(7):766-77；Wiseman等人(2002) Blood 99(12):4336-42；Witzig等人(2002)J .Clin .Onco l. 20(10):2453-63；Witzig等人(2002)J .Clin .Oncol . 20(15):3262-69)。
此外，MYLOTARGTM (吉妥珠單抗奧唑米星(gemtuzumab ozogamicin)，Wyeth Pharmaceuticals)，一種由hu CD33抗體連接至卡奇黴素所構成之抗體藥物結合物，於2000年獲准用於藉由注射來治療急性骨髓性白血病(Drugs of the Future(2000) 25(7):686；美國專利第4970198號、第5079233號、第5585089號、第5606040號、第5693762號、第5739116號、第5767285號及第5773001號)。
此外，康圖單抗美坦辛(Cantuzumab mertansine)(Immunogen,Inc.)，一種由huC242抗體經由二硫化物連接子SPP連接至類美登素藥物部分DM1所構成之抗體藥物結合物，正進入治療表現CanAg之癌症(諸如結腸癌、胰腺癌、胃癌及其他癌症)之II期試驗。
此外，MLN-2704(Millennium Pharm.,BZL Biologics,Immunogen Inc.)，一種由抗前列腺特異性膜抗原(PSMA)單株抗體連接至類美登素藥物部分DM1所構成之抗體藥物結合物，正處於用於潛在治療前列腺腫瘤之研發中。
最後，海兔毒素之合成類似物阿瑞他汀肽、阿瑞他汀E(AE)及單甲基阿瑞他汀(MMAE)結合至嵌合單株抗體cBR96(特異性針對癌瘤上之LeWis Y)及cAC10(特異性針對惡性血液病上之CD30)(Doronin等人(2003)Nature Biotechnology 21(7): 778-784)且正處於治療研發中。
III(A).阿瑞他汀及海兔毒素
海兔毒素及阿瑞他汀已展示會干擾微管動力學、GTP水解以及核及細胞分裂(Woyke等人(2001)Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584)且具有抗癌活性(US 5663149)及抗真菌活性(Pettit等人(1998)Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965)。海兔毒素或阿瑞他汀藥物部分可經由肽藥物部分之N(胺基)端或C(羧基)端連接至抗體(WO 02/088172)。
例示性阿瑞他汀實施例包括Senter等人，「Proceedings of the American Association for Cancer Research」，第45卷，摘要號623中所揭示且於2004年3月28日呈現之N端連接之單甲基阿瑞他汀藥物部分DE及DF，該文獻之揭示內容係以全文引用的方式明確併入本文中。
一個例示性阿瑞他汀實施例為MMAE(其中波狀線指示共價連接至抗體藥物結合物之連接子(L))。
另一例示性阿瑞他汀實施例為MMAF，其中波狀線指示共價連接至抗體藥物結合物之連接子(US 2005/0238649)：
包含MMAE或MMAF及各種連接子組分(進一步描述於本文中)之其他例示性實施例具有以下結構及縮寫(其中Ab意謂抗體且p為1至約12)：
本發明之ADC包括MMAF。本發明ADC之較佳實施例包括馬來醯亞胺基己醯基(mc)作為連接子且包括MMAF作為藥物。
IV.)　結合161P2F10B之抗體藥物結合物化合物
本發明尤其提供用於靶向遞送藥物之抗體-藥物結合物化合物。本發明者已發現，該等抗體-藥物結合物化合物對表現161P2F10B之細胞具有有效的細胞毒性及/或細胞抑制活性。該等抗體-藥物結合物化合物包含抗體單元共價連接至少一個藥物單元。藥物單元可直接或經由連接子單元(-LU-)共價連接。
在一些實施例中，抗體藥物結合物化合物具有下式：
L-(LU-D)p 　(I)
或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物；其中L為抗體單元，例如本發明之161P2F10B MAb；且(LU-D)為連接子單元-藥物單元部分，其中：LU-為連接子單元；且-D為對標靶細胞具有細胞抑制活性或細胞毒性活性的藥物單元；且p為1至20之整數。
在一些實施例中，p在1至12、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2之範圍內。在一些實施例中，p在2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3之範圍內。在其他實施例中，p為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中，p為2或4。
在一些實施例中，抗體藥物結合物化合物具有下式：
L-(Aa -Ww -Yy -D)p 　(II)
或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，其中：L為抗體單元，例如161P2F10B MAb；且-Aa -Ww -Yy -為連接子單元(LU)，其中：-A-為延伸子單元；a為0或1；各-W-獨立地為胺基酸單元；w為0至12範圍內之整數；-Y-為自脫落型間隔基單元；y為0、1或2；-D為對標靶細胞具有細胞抑制活性或細胞毒性活性的藥物單元；且p為1至20之整數。
在一些實施例中，a為0或1，w為0或1，且y為0、1或2。在一些實施例中，a為0或1，w為0或1，且y為0或1。在一些實施例中，p在1至12、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2之範圍內。在一些實施例中，p在2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3之範圍內。在其他實施例中，p為1、2、3、4、5或6。在一些實施例中，p為2或4。在一些實施例中，當w不為0時，y為1或2。在一些實施例中，當w為1至12時，y為1或2。在一些實施例中，w為2至12且y為1或2。在一些實施例中，a為1且w及y為0。
對於包含複數個抗體之組合物，藥物負載係以每個抗體之藥物分子之平均數目p來表示。藥物負載可在每個抗體1至12個藥物(D)範圍內。在由結合反應製備時，每個抗體之藥物平均數目可藉由習知方法表徵，諸如質譜分析、ELISA檢定及HPLC。亦可測定抗體-藥物結合物中p之定量分佈。在一些情況下，可藉由諸如逆相HPLC或電泳之方式，來實現p為某一值之均質抗體-藥物結合物自具有其他藥物負載之抗體-藥物結合物的分離、純化及表徵。在例示性實施例中，p為2至8。
可藉由熟習此項技術者已知之任何技術產生抗體-藥物結合物化合物。簡而言之，抗體-藥物結合物化合物包含作為抗體單元之161P2F10B MAb、藥物及視情況存在之接合該藥物與結合劑之連接子。在一較佳實施例中，抗體為包含上文所述名為H16-7.8之抗體之重鏈及輕鏈可變區的161P2F10B MAb。在更佳實施例中，抗體為包含上文所述名為H16-7.8之抗體之重鏈及輕鏈的161P2F10B MAb。許多不同反應可用於將藥物及/或連接子共價連接至結合劑。此舉通常藉由結合劑(例如抗體分子)之胺基酸殘基，包括離胺酸之胺基、麩胺酸及天冬胺酸之游離羧酸基、半胱胺酸之巰基及芳族胺基酸之各種部分的反應來實現。一種最常用之非特定共價連接法為使化合物之羧基(或胺基)連接至抗體之胺基(或羧基)的碳化二亞胺反應。此外，已使用諸如二醛或醯亞胺酯之雙官能劑將化合物之胺基連接至抗體分子之胺基。希夫鹼反應(Schiff base reaction)亦可用於連接藥物與結合劑。此方法包括用過碘酸鹽氧化含有二醇或羥基之藥物，因而形成醛，接著使醛與結合劑反應。經由形成具有結合劑之胺基的希夫鹼來實現連接。異硫氰酸酯亦可用作將藥物共價連接至結合劑之偶合劑。其他技術為熟習此項技術者已知且在本發明之範疇內。
在某些實施例中，使作為連接子之前驅體的中間物與藥物在適當條件下反應。在某些實施例中，使用藥物及/或中間物上之反應性基團。藥物與中間物之反應產物或所獲得之藥物隨後在適當條件下與161P2F10B MAb反應。
本文更詳細地描述抗體-藥物結合物化合物之各特定單元。例示性連接子單元、延伸子單元、胺基酸單元、自脫落型間隔基單元及藥物單元之合成及結構亦描述於美國專利申請公開案第2003-0083263號、第2005-0238649號及第2005-0009751號中，各公開案係以全文引用的方式且出於所有目的而併入本文中。
V.)　連接子單元
抗體-藥物結合物化合物通常包含介於藥物單元與抗體單元之間的連接區。在一些實施例中，連接子可在細胞內條件下裂解，從而在細胞內環境中連接子之裂解使藥物單元自抗體釋放。在其他實施例中，連接子單元不可裂解，且藥物例如藉由抗體降解而釋放。
在一些實施例中，連接子可由細胞內環境中(例如溶酶體或核內體或細胞膜穴樣內陷內)所存在之裂解劑裂解。連接子可為例如肽基連接子，其係由細胞內肽酶或蛋白酶(包括但不限於溶酶體或核內體蛋白酶)裂解。在一些實施例中，肽基連接子為至少2個胺基酸長或至少3個胺基酸長。裂解劑可包括組織蛋白酶B及D以及纖維蛋白溶酶，已知所有該等酶均水解二肽藥物衍生物，從而在標靶細胞內釋放活性藥物(參看例如Dubowchik及Walker,1999,Pharm. Therapeutics 83:67-123)。最典型為可由161P2F10B表現細胞中所存在之酶裂解的肽基連接子。舉例而言，可使用由高度表現於癌組織中之硫醇依賴性蛋白酶組織蛋白酶B可裂解的肽基連接子(例如Phe-Leu或Gly-Phe-Leu-Gly連接子(SEQ ID NO: 9))。該等連接子之其他實例描述於例如美國專利第6,214,345號中，該專利係以全文引用的方式且出於所有目的而併入本文中。在一特定實施例中，細胞內蛋白酶可裂解之肽基連接子為Val-Cit連接子或Phe-Lys連接子(參看例如美國專利6,214,345，其描述用val-cit連接子合成小紅莓)。使用細胞內蛋白水解釋放治療劑之一個優勢在於，藥劑在結合時通常減毒且結合物之血清穩定性通常較高。
在其他實施例中，可裂解連接子具有pH值敏感性，亦即在某些pH值下對水解敏感。pH值敏感性連接子通常可在酸性條件下水解。舉例而言，可使用在溶酶體中可水解之酸不穩定連接子(例如腙、縮胺基脲、硫縮胺基脲、順-烏頭醯胺、原酸酯、縮醛、縮酮或其類似物)。(參看美國專利第5,122,368號、第5,824,805號、第5,622,929號；Dubowchik及Walker,1999,Pharm. Therapeutics 83:67-123；Neville等人，1989,Biol. Chem. 264:14653-14661)。該等連接子在中性pH值條件下相對穩定，諸如在血液中，但在低於pH 5.5或pH 5.0(接近溶酶體之pH值)下不穩定。在某些實施例中，可水解連接子為硫醚連接子(諸如經由醯腙鍵連接至治療劑之硫醚(參看例如美國專利第5,622,929號))。
在其他實施例中，連接子可在還原條件下裂解(例如二硫化物連接子)。多種二硫化物連接子為此項技術中已知，包括例如可使用SATA(N-丁二醯亞胺基-S-乙醯基硫乙酸酯)、SPDP(N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯)、SPDB(N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丁酸酯)及SMPT(N-丁二醯亞胺基-氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫基)甲苯)、SPDB及SMPT形成之二硫化物連接子(參看例如Thorpe等人，1987,Cancer Res. 47:5924-5931；Wawrzynczak 等人，Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel編),Oxford U. Press,1987。亦參看美國專利第4,880,935號)。
在其他特定實施例中，連接子為丙二酸酯連接子(Johnson等人，1995，Anticancer Res. 15:1387-93)、馬來醯亞胺基苯甲醯基連接子(Lau等人，1995,Bioorg-Med-Chem. 3(10): 1299-1304)或3'-N-醯胺類似物(Lau等人，1995,Bioorg-Med-Chem . 3(10):1305-12)。
在其他實施例中，連接子單元不可裂解，且藥物係藉由抗體降解而釋放。(參看美國公開案第2005/0238649號，該案係以全文引用的方式且出於所有目的而併入本文中)。在較佳實施例中，連接子單元為馬來醯亞胺基己醯基(mc)。
連接子通常實質上對細胞外環境不敏感。如本文所使用，在連接子之情形下，「實質上對細胞外環境不敏感」意謂在抗體-藥物結合物化合物之樣品中，當抗體-藥物結合物化合物存在於細胞外環境中(例如在血漿中)時，不超過約20%、通常不超過約15%、更通常不超過約10%且甚至更通常不超過約5%、不超過約3%或不超過約1%之連接子裂解。連接子是否實質上對細胞外環境不敏感可例如藉由以下方式確定：用血漿培育抗體-藥物結合物化合物，持續預定時段(例如2、4、8、16或24小時)，接著定量血漿中所存在之游離藥物之量。
在其他非互斥性實施例中，連接子有助於細胞內化。在某些實施例中，連接子在結合至治療劑時(亦即在如本文所描述之抗體-藥物結合物化合物之連接子-治療劑部分的環境中)有助於細胞內化。在其他實施例中，連接子在結合至阿瑞他汀化合物與161P2F10B MAb時有助於細胞內化。
可用於本發明組合物及方法中之多種例示性連接子描述於WO2004-010957、美國公開案第20060074008號、美國公開案第20050238649號及美國公開案第20060024317號中(各案係以全文引用的方式且出於所有目的而併入本文中)。
「連接子單元」(LU)為可用於連接藥物單元與抗體單元以形成抗體-藥物結合物化合物之雙官能化合物。在一些實施例中，連接子單元具有下式：
-Aa -Ww -Yy -
其中：-A-為延伸子單元；a為0或1；各-W-獨立地為胺基酸單元；w為0至12範圍內之整數；-Y-為自脫落型間隔基單元；且y為0、1或2。
在一些實施例中，a為0或1，w為0或1，且y為0、1或2。在一些實施例中，a為0或1，w為0或1，且y為0或1。在一些實施例中，當w為1至12時，y為1或2。在一些實施例中，w為2至12且y為1或2。在一些實施例中，a為1且w及y為0。
VI.)　延伸子單元
延伸子單元(A)在存在時能夠將抗體單元連接至胺基酸單元(-W-)(若存在)，連接至間隔基單元(-Y-)(若存在)，或連接至藥物單元(-D)。可天然或經由化學操作而存在於161P2F10B MAb(例如H16-7.8)上之適用官能基包括但不限於巰基、胺基、羥基、碳水化合物之變旋異構羥基、及羧基。適合官能基為巰基及胺基。在一實例中，巰基可藉由還原161P2F10B MAb之分子內雙硫鍵而產生。在另一實施例中，巰基可藉由使161P2F10B MAb之離胺酸部分之胺基與2-亞胺基硫雜環戊烷(泰奧特試劑(Traut's reagent))或其他巰基產生試劑反應而產生。在某些實施例中，161P2F10B MAb為重組抗體且經工程改造以運載一或多個離胺酸。在某些其他實施例中，重組161P2F10B MAb經工程改造以運載其他巰基，例如其他半胱胺酸。
在一實施例中，延伸子單元與抗體單元之硫原子形成一鍵。硫原子可來源於抗體之巰基。此實施例之代表性延伸子單元描述於式IIIa及式IIIb之方括號內，其中L-、-W-、-Y-、-D、w及y係如上文所定義，且R17 係選自-C1 -C10 伸烷基、-C1 -C10 伸烯基、-C1 -C10 伸炔基、碳環基-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-、O-(C1 -C8 伸烯基)-、-O-(C1 -C8 伸炔基)-、-伸芳基-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-、-C2 -C10 伸烯基-伸芳基、-C2 -C10 伸炔基-伸芳基、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-、-伸芳基-C2 -C10 伸烯基-、-伸芳基-C2 -C10 伸炔基-、-C1 -C10 伸烷基-(碳環基)-、-C2 -C10 伸烯基-(碳環基)-、-C2 -C10 伸炔基-(碳環基)-、-(碳環基)-C1 -C10 伸烷基-、-(碳環基)-C2 -C10 伸烯基-、-(碳環基)-C2 -C10 伸炔基、-雜環基-、-C1 -C10 伸烷基-(雜環基)-、-C2 -C10 伸烯基-(雜環基)-、-C2 -C10 伸炔基-(雜環基)-、-(雜環基)-C1 -C10 伸烷基-、-(雜環基)-C2 -C10 伸烯基-、-(雜環基)-C1 -C10 伸炔基-、-(CH2 CH2 O)r -或-(CH2 CH2 O)r -CH2 -，且r為1至10範圍內之整數，其中該烷基、烯基、炔基、伸烷基、伸烯基、伸炔基、芳基、碳環、碳環基、雜環基及伸芳基無論單獨或是作為另一基團之一部分均視情況經取代。在一些實施例中，該烷基、烯基、炔基、伸烷基、伸烯基、伸炔基、芳基、碳環、碳環基、雜環基及伸芳基無論單獨或是作為另一基團之一部分均未經取代。在一些實施例中，R17 係選自-C1 -C10 伸烷基-、-碳環基-、-O-(C1 -C8 伸烷基)-、-伸芳基-、-C1 -C10 伸烷基-伸芳基-、-伸芳基-C1 -C10 伸烷基-、-C1 -C10 伸烷基-(碳環基)-、-(碳環基)-C1 -C10 伸烷基-、-C3 -C8 雜環基-、-C1 -C10 伸烷基-(雜環基)-、-(雜環基)-C1 -C10 伸烷基-、-(CH2 CH2 O)r -及-(CH2 CH2 O)r -CH2 -；且r為1至10範圍內之整數，其中該伸烷基未經取代且其餘基團視情況經取代。
自所有例示性實施例可瞭解，甚至在未明確表示之情況下，1至12個藥物部分亦可連接至抗體(p=1至12)。
一說明性延伸子單元為式IIIa之延伸子單元，其中R17 為-(CH2 )5 -：
另一說明性延伸子單元為式IIIa之延伸子單元，其中R17 為-(CH2 CH2 O)r -CH2 -；且r為2：
一說明性延伸子單元為式IIIa之延伸子單元，其中R17 為-伸芳基-或伸芳基-C1 -C10 伸烷基-。在一些實施例中，芳基為未經取代之苯基。
另一說明性延伸子單元為式IIIb之延伸子單元，其中R17 為-(CH2 )5 -：
在某些實施例中，延伸子單元係經由抗體單元之硫原子與延伸子單元之硫原子之間的雙硫鍵連接至抗體單元。此實施例之一代表性延伸子單元描述於式IV之方括號內，其中R17 、L-、-W-、-Y-、-D、w及y如上所定義。
應注意，在本申請案中，除非上下文另外指出，否則下式中之S部分係指抗體單元之硫原子。
在其他實施例中，延伸子含有可與抗體之一級或二級胺基形成一鍵的反應位點。此等反應位點之實例包括但不限於活性酯，諸如丁二醯亞胺酯、4-硝基苯基酯、五氟苯基酯、四氟苯基酯、酸酐、酸氯化物、磺醯氯、異氰酸酯及異硫氰酸酯。此實施例之代表性延伸子單元描述於式Va及式Vb之方括號內，其中-R17 、L-、-W-、-Y-、-D、w及y如上所定義：
在一些實施例中，延伸子含有對可能存在於抗體上之改質碳水化合物(-CHO)基團具有反應性的反應位點。舉例而言，碳水化合物可使用諸如過碘酸鈉之試劑輕度氧化，且所得氧化碳水化合物之(-CHO)單元可與含有諸如以下官能基之延伸子縮合：醯肼、肟、一級或二級胺、肼、硫縮胺基脲、肼羧酸酯及芳基醯肼，諸如Kaneko等人，1991,Bioconjugate Chem. 2:133-41所描述。此實施例之代表性延伸子單元描述於式VIa、式VIb及式VIc之方括號內，其中-R17 -、L-、-W-、-Y-、-D、w及y如上所定義：
VII.)　胺基酸單元
胺基酸單元(-W-)當存在時將延伸子單元連接至間隔基單元(若存在間隔基單元)，將延伸子單元連接至藥物部分(若不存在間隔基單元)，且將抗體單元連接至藥物單元(若不存在延伸子單元及間隔基單元)。
Ww -可為例如單肽、二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽單元。各-W-單元獨立地具有以下方括號中所表示之式，且w為0至12範圍內之整數：
其中R19 為氫、甲基、異丙基、異丁基、第二丁基、苯甲基、對羥基苯甲基、-CH2 OH、-CH(OH)CH3 、-CH2 CH2 SCH3 、-CH2 CONH2 、-CH2 COOH、-CH2 CH2 CONH2 、-CH2 CH2 COOH、-(CH2 )3 NHC(=NH)NH2 、-(CH2 )3 NH2 、-(CH2 )3 NHCOCH3 、-(CH2 )3 NHCHO、-(CH2 )4 NHC(=NH)NH2 、-(CH2 )4 NH2 、-(CH2 )4 NHCOCH3 、-(CH2 )4 NHCHO、-(CH2 )3 NHCONH2 、-(CH2 )4 NHCONH2 、-CH2 CH2 CH(OH)CH2 NH2 、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲基-、4-吡啶基甲基-、苯基、環己基、
在一些實施例中，胺基酸單元可由一或多種酶酶促裂解，包括癌症或腫瘤相關蛋白酶，以釋放藥物單元(-D)，在一實施例中，藥物單元(-D)在釋放後即在活體內質子化以提供藥物(D)。
在某些實施例中，胺基酸單元可包含天然胺基酸。在其他實施例中，胺基酸單元可包含非天然胺基酸。說明性Ww 單元係由式(VII)至式(IX)表示：
其中R20 及R21 如下：
其中R20 、R21 及R22 如下：
其中R20 、R21 、R22 及R23 如下：
例示性胺基酸單元包括但不限於式VII之單元，其中：R20 為苯甲基且R21 為-(CH2 )4 NH2 ；R20 為異丙基且R21 為-(CH2 )4 NH2 ；或R20 為異丙基且R21 為-(CH2 )3 NHCONH2 。另一例示性胺基酸單元為式VIII之單元，其中：R20 為苯甲基，R21 為苯甲基且R22 為-(CH2 )4 NH2 。
可設計適用-Ww -單元，且優化特定酶(例如腫瘤相關蛋白酶)酶促裂解其之選擇性。在一實施例中，-Ww -單元為可藉由組織蛋白酶B、C及D或纖維蛋白溶酶蛋白酶催化裂解之單元。
在一實施例中，-Ww -為二肽、三肽、四肽或五肽。當R19 、R20 、R21 、R22 或R23 不為氫時，R19 、R20 、R21 、R22 或R23 所連接之碳原子為對掌性的。
R19 、R20 、R21 、R22 或R23 所連接之各碳原子獨立地呈(S)或(R)構型。
在胺基酸單元之一態樣中，胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸(vc或val-cit)。在另一態樣中，胺基酸單元為苯丙胺酸-離胺酸(亦即fk)。在胺基酸單元之另一態樣中，胺基酸單元為N-甲基纈氨酸-瓜胺酸。在另一態樣中，胺基酸單元為5-胺基戊酸、高苯丙胺酸離胺酸、四異喹啉甲酸離胺酸、環己基丙胺酸離胺酸、異哌啶甲酸離胺酸、β-丙胺酸離胺酸、甘胺酸絲胺酸纈胺酸麩醯胺酸及異哌啶甲酸。
VIII.)　間隔基單元
間隔基單元(-Y-)當存在時將胺基酸單元連接至藥物單元(當存在胺基酸單元時)。或者，間隔基單元將延伸子單元連接至藥物單元(當胺基酸單元不存在時)。間隔基單元亦將藥物單元連接至抗體單元(當胺基酸單元與延伸子單元均不存在時)。
間隔基單元具有兩種一般類型：非自脫落型及自脫落型。非自脫落型間隔基單元為胺基酸單元自抗體-藥物結合物裂解(尤其酶促裂解)後部分或所有間隔基單元仍結合至藥物部分的間隔基單元。非自脫落型間隔基單元之實例包括但不限於(甘胺酸-甘胺酸)間隔基單元及甘胺酸間隔基單元(均描述於流程1中)(下文)。當含有甘胺酸-甘胺酸間隔基單元或甘胺酸間隔基單元之結合物經由酶(例如腫瘤細胞相關蛋白酶、癌細胞相關蛋白酶或淋巴細胞相關蛋白酶)進行酶促裂解時，甘胺酸-甘胺酸-藥物部分或甘胺酸-藥物部分自L-Aa -Ww -裂解。在一實施例中，在標靶細胞內進行獨立水解反應，從而裂解甘胺酸-藥物部分之鍵且釋放藥物。
在一些實施例中，非自脫落型間隔基單元(-Y-)為-Gly-。在一些實施例中，非自脫落型間隔基單元(-Y-)為-Gly-Gly-。
在一實施例中，提供間隔基單元不存在(y=0)之藥物-連接子結合物，或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。
或者，含有自脫落型間隔基單元之結合物可釋放-D。如本文所使用，術語「自脫落型間隔基」係指能夠將兩個間隔化學部分共價連接在一起形成穩定三聯分子的雙官能化學部分。若其與第一部分之鍵裂解，則其將自發地自第二化學部分分離。
在一些實施例中，-Yy -為伸苯基部分經Qm 取代之對胺基苯甲醇(PAB)單元(參看流程2及3)，其中Q為-C1 -C8 烷基、-C1 -C8 烯基、-C1 -C8 炔基、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C1 -C8 烯基)、-O-(C1 -C8 炔基)、-鹵素、-硝基或氰基；且m為0至4範圍內之整數。烷基、烯基及炔基無論單獨或是作為另一基團之一部分均可視情況經取代。
在一些實施例中，-Y-為經由PAB基團之胺基氮原子連接至-Ww -且經由碳酸酯基、胺基甲酸酯基或醚基直接連接至-D的PAB基團。不受任何特定理論或機制束縛，流程2描述經由胺基甲酸酯基或碳酸酯基直接連接至-D之PAB基團之藥物釋放的可能機制，如Toki等人，2002,J. Org. Chem. 67:1866-1872所描述。
在流程2中，Q為-C1 -C8 烷基、-C1 -C8 烯基、-C1 -C8 炔基、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C1 -C8 烯基)、-O-(C1 -C8 炔基)、-鹵素、-硝基或氰基；m為0至4範圍內之整數；且p在1至約12範圍內。烷基、烯基及炔基無論單獨或是作為另一基團之一部分均可視情況經取代。
不受任何特定理論或機制束縛，流程3描述經由醚鍵或胺鍵直接連接至-D之PAB基團之藥物釋放的可能機制，其中D包括作為藥物單元之一部分的氧基或氮基。
在流程3中，Q為-C1 -C8 烷基、-C1 -C8 烯基、-C1 -C8 炔基、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C1 -C8 烯基)、-O-(C1 -C8 炔基)、-鹵素、-硝基或氰基；m為0至4範圍內之整數；且p在1至約12範圍內。烷基、烯基及炔基無論單獨或是作為另一基團之一部分均可視情況經取代。
自脫落型間隔基之其他實例包括但不限於電子學上類似於PAB基團之芳族化合物，諸如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物(Hay等人，1999,Bioorg. Med. Chem. Lett . 9:2237)及鄰或對胺基苯甲基縮醛。可使用在醯胺鍵水解後即進行環化之間隔基，諸如經取代及未經取代之4-胺基丁醯胺(Rodrigues等人，1995,Chemistry Biology 2:223)、經適當取代之雙環[2.2.1]及雙環[2.2.2]環系統(Storm等人，1972,J. Amer. Chem. Soc . 94:5815)及2-胺基苯基丙醯胺(Amsberry等人，1990,J. Org. Chem . 55:5867)。在甘胺酸之α位經取代之含有胺之藥物的消除(Kingsbury等人，1984,J. Med. Chem . 27:1447)亦為自脫落型間隔基之實例。
在一實施例中，間隔基單元為分支鏈雙(羥甲基)-苯乙烯(BHMS)單元，如流程4中所述，其可用於併入及釋放多個藥物。
在流程4中，Q為-C1 -C8 烷基、-C1 -C8 烯基、-C1 -C8 炔基、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C1 -C8 烯基)、-O-(C1 -C8 炔基)、-鹵素、-硝基或氰基；m為0至4範圍內之整數；n為0或1；且p在1至約12範圍內。烷基、烯基及炔基無論單獨或是作為另一基團之一部分均可視情況經取代。
在一些實施例中，-D部分相同。在又一實施例中，-D部分不同。
在一態樣中，間隔基單元(-Yy -)係由式(X) 至式(XII) 表示：
其中Q為-C1 -C8 烷基、-C1 -C8 烯基、-C1 -C8 炔基、-O-(C1 -C8 烷基)、-O-(C1 -C8 烯基)、-O-(C1 -C8 炔基)、-鹵素、-硝基或氰基；且m為0至4範圍內之整數。烷基、烯基及炔基無論單獨或是作為另一基團之一部分均可視情況經取代。
及
包含式I及式II之抗體-藥物結合物化合物之實施例可包括：
其中w及y各自為0、1或2；及
其中w及y各自為0；
IX.)　藥物單元
藥物部分(D)可為任何細胞毒性劑、細胞抑制劑或免疫調節劑(例如免疫抑制劑)或藥物。D為具有可與間隔基單元、胺基酸單元、延伸子單元或抗體單元形成一鍵之原子的藥物單元(部分)。在一些實施例中，藥物單元D具有可與間隔基單元形成一鍵的氮原子。如本文所使用，術語「藥物單元」與「藥物部分」同義且可互換使用。
適用類別之細胞毒性劑或免疫調節劑包括例如抗微管蛋白劑、DNA小溝結合劑、DNA複製抑制劑及烷基化劑。
在一些實施例中，藥物為阿瑞他汀，諸如阿瑞他汀E(在此項技術中亦稱為海兔毒素-10之衍生物)或其衍生物。阿瑞他汀可為例如阿瑞他汀E與酮酸形成之酯。舉例而言，阿瑞他汀E可與對乙醯基苯甲酸或苯甲醯基戊酸反應，分別產生AEB及AEVB。其他典型阿瑞他汀包括AFP、MMAF及MMAE。例示性阿瑞他汀之合成及結構描述於美國專利申請公開案第2003-0083263號、第2005-0238649號及第2005-0009751號；國際專利公開案第WO 04/010957號、國際專利公開案第WO 02/088172號及美國專利第6,323,315號、第6,239,104號、第6,034,065號、第5,780,588號、第5,665,860號、第5,663,149號、第5,635,483號、第5,599,902號、第5,554,725號、第5,530,097號、第5,521,284號、第5,504,191號、第5,410,024號、第5,138,036號、第5,076,973號、第4,986,988號、第4,978,744號、第4,879,278號、第4,816,444號及第4,486,414號，各案係以全文引用的方式且出於所有目的而併入本文中。
阿瑞他汀已顯示可干擾微管動力學以及核及細胞分裂且具有抗癌活性。MMAF結合微管蛋白且可對161P2F10B表現細胞發揮細胞毒性或細胞抑制效應。此項技術中已知許多不同的檢定，該等檢定可用於確定阿瑞他汀或所得抗體-藥物結合物是否對所要細胞株發揮細胞抑制或細胞毒性效應。
用於確定化合物是否結合微管蛋白之方法為此項技術中已知。參看例如Muller等人，Anal .Chem 2006,78,4390-4397；Hamel等人，Molecular Pharmacology, 1995 47:965-976；及Hamel等人，The Journal of Biological Chemistry ,1990 265:28,17141-17149。出於本發明之目的，可測定化合物對微管蛋白之相對親和力。本發明之一些較佳阿瑞他汀結合微管蛋白之親和力介於MMAE對微管蛋白之結合親和力的1/10(較低親和力)至MMAE對微管蛋白之結合親和力的10倍、20倍或甚至100倍(較高親和力)的範圍內。
在一些實施例中，-D為式D E 或式D F 之阿瑞他汀：
或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物形式；其中，獨立地在各位置處：波狀線指示一鍵；R 2 為-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基或-C2 -C20 炔基；R 3 為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基、-碳環、-C1 -C20 伸烷基(碳環)、-C2 -C20 伸烯基(碳環)、-C2 -C20 伸炔基(碳環)、-芳基、-C1 -C20 伸烷基(芳基)、-C2 -C20 伸烯基(芳基)、-C2 -C20 伸炔基(芳基)、雜環、-C1 -C20 伸烷基(雜環)、-C2 -C20 伸烯基(雜環)或-C2 -C20 伸炔基(雜環)；R 4 為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基、碳環、-C1 -C20 伸烷基(碳環)、-C2 -C20 伸烯基(碳環)、-C2 -C20 伸炔基(碳環)、芳基、-C1 -C20 伸烷基(芳基)、-C2 -C20 伸烯基(芳基)、-C2 -C20 伸炔基(芳基)、-雜環、-C1 -C20 伸烷基(雜環)、-C2 -C20 伸烯基(雜環)或-C2 -C20 伸炔基(雜環)；R 5 為-H或-C1 -C8 烷基；或R 4 與R 5 接合形成碳環且具有式-(CRa Rb )s -，其中Ra 及Rb 獨立地為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基或-碳環且s為2、3、4、5或6；R 6 為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基或-C2 -C20 炔基；R 7 為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基、碳環、-C1 -C20 伸烷基(碳環)、-C2 -C20 伸烯基(碳環)、-C2 -C20 伸炔基(碳環)、-芳基、-C1 -C20 伸烷基(芳基)、-C2 -C20 伸烯基(芳基)、-C2 -C20 伸炔基(芳基)、雜環、-C1 -C20 伸烷基(雜環)、-C2 -C20 伸烯基(雜環)或-C2 -C20 伸炔基(雜環)；各R 8 獨立地為-H、-OH、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基、-O-(C1 -C20 烷基)、-O-(C2 -C20 烯基)、-O-(C1 -C20 炔基)或-碳環；R 9 為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基或-C2 -C20 炔基；R 24 為-芳基、-雜環或-碳環；R 25 為-H、C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基、-碳環、-O-(C1 -C20 烷基)、-O-(C2 -C20 烯基)、-O-(C2 -C20 炔基)或OR 18 ，其中R 18 為-H、羥基保護基或直接鍵，其中OR 18 表示=O；R 26 為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基或-C2 -C20 炔基、-芳基、-雜環或-碳環；R 10 為-芳基或-雜環；Z 為-O、-S、-NH或-NR12 ，其中R 12 為-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基或-C2 -C20 炔基；R 11 為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基、-芳基、-雜環、-(R13 O)m -R14 或-(R13 O)m -CH(R15 )2 ；m 為1至1000範圍內之整數；R 13 為-C2 -C20 伸烷基、-C2 -C20 伸烯基或-C2 -C20 伸炔基；R 14 為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基或-C2 -C20 炔基；R 15 在各次出現時均獨立地為-H、-COOH、-(CH2 )n -N(R16 )2 、-(CH2 )n -SO3 H、-(CH2 )n -SO3 -C1 -C20 烷基、-(CH2 )n -SO3 -C2 -C20 烯基或-(CH2 )n -SO3 -C2 -C20 炔基；R 16 在各次出現時均獨立地為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基或-(CH2 )n -COOH；且n 為0至6範圍內之整數。
其中該烷基、烯基、炔基、伸烷基、伸烯基、伸炔基、芳基、碳環及雜環無論單獨或是作為另一基團之一部分均視情況經取代。
式D E 之阿瑞他汀包括該烷基、烯基、炔基、伸烷基、伸烯基、伸炔基、芳基、碳環及雜環未經取代之阿瑞他汀。
式D E 之阿瑞他汀包括基團R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 、R8 及R9 未經取代且基團R19 、R20 及R21 如本文所述視情況經取代的阿瑞他汀。
式D E 之阿瑞他汀包括以下阿瑞他汀，其中：R 2 為C1 -C8 烷基；R 3 、R 4 及R 7 係獨立地選自-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基、單環C3 -C6 碳環、-C1 -C20 伸烷基(單環C3 -C6 碳環)、-C2 -C20 伸烯基(單環C3 -C6 碳環)、-C2 -C20 伸炔基(單環C3 -C6 碳環)、C6 -C10 芳基、-C1 -C20 伸烷基(C6 -C10 芳基)、-C2 -C20 伸烯基(C6 -C10 芳基)、-C2 -C20 伸炔基(C6 -C10 芳基)、雜環、-C1 -C20 伸烷基(雜環)、-C2 -C20 伸烯基(雜環)或-C2 -C20 伸炔基(雜環)；其中該烷基、烯基、炔基、伸烷基、伸烯基、伸炔基、碳環、芳基及雜環視情況經取代；R 5 為-H；R 6 為-C1 -C8 烷基；各R 8 係獨立地選自-OH、-O-(C1 -C20 烷基)、-O-(C2 -C20 烯基)或-O-(C2 -C20 炔基)，其中該烷基、烯基及炔基視情況經取代；R 9 為-H或-C1 -C8 烷基；R 2 4 為視情況經取代之苯基；R 25 為-OR 18 ；其中R 18 為H、羥基保護基或直接鍵，其中OR 18 表示=O；R 26 係選自-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基或-碳環；其中該烷基、烯基、炔基及碳環基視情況經取代；或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物形式。
式D E 之阿瑞他汀包括以下阿瑞他汀，其中：R 2 為甲基；R 3 為-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基或C2 -C8 炔基，其中該烷基、烯基及炔基視情況經取代；R4 為-H、-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基、-C2 -C8 炔基、單環C3 -C6 碳環、-C6 -C10 芳基、-C1 -C8 伸烷基(C6 -C10 芳基)、-C2 -C8 伸烯基(C6 -C10 芳基)、-C2 -C8 伸炔基(C6 -C10 芳基)、-C1 -C8 伸烷基(單環C3 -C6 碳環)、-C2 -C8 伸烯基(單環C3 -C6 碳環)、-C2 -C8 伸炔基(單環C3 -C6 碳環)；其中該烷基、烯基、炔基、伸烷基、伸烯基、伸炔基、芳基及碳環基無論單獨或是作為另一基團之一部分均視情況經取代；R 5 為-H；R 6 為甲基；R 7 為-C1 -C8 烷基、-C2 -C8 烯基或-C2 -C8 炔基；各R 8 為甲氧基；R 9 為-H或-C1 -C8 烷基；R 24 為-苯基；R 25 為-OR 18 ；其中R 18 為H、羥基保護基或直接鍵，其中OR 18 表示=O；R 26 為甲基；或其醫藥學上可接受之鹽形式。
式D E 之阿瑞他汀包括以下阿瑞他汀，其中：R 2 為甲基；R 3 為-H或-C1 -C3 烷基；R 4 為-C1 -C5 烷基；R 5 為H；R 6 為甲基；R 7 為異丙基或第二丁基；R 8 為甲氧基；R 9 為-H或-C1 -C8 烷基；R 24 為苯基；R 25 為-OR 18 ；其中R 18 為-H、羥基保護基或直接鍵，其中OR18 表示=O；且R 26 為甲基；或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物形式。
式D E 之阿瑞他汀包括以下阿瑞他汀，其中：R 2 為甲基或C1 -C3 烷基；R 3 為-H或-C1 -C3 烷基；R 4 為-C1 -C5 烷基；R 5 為H；R 6 為C1 -C3 烷基；R 7 為-C1 -C5 烷基；R 8 為-C1 -C3 烷氧基；R 9 為-H或-C1 -C8 烷基；R 24 為苯基；R 25 為-OR 18 ；其中R 18 為-H、羥基保護基或直接鍵，其中OR 18 表示=O；且R 26 為C1 -C3 烷基；或其醫藥學上可接受之鹽形式。
式D F 之阿瑞他汀包括以下阿瑞他汀，其中：R 2 為甲基；R 3 、R 4 及R 7 係獨立地選自-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基、單環C3 -C6 碳環、-C1 -C20 伸烷基(單環C3 -C6 碳環)、-C2 -C20 伸烯基(單環C3 -C6 碳環)、-C2 -C20 伸炔基(單環C3 -C6 碳環)、-C6 -C10 芳基、-C1 -C20 伸烷基(C6 -C10 芳基)、-C2 -C20 伸烯基(C6 -C10 芳基)、-C2 -C20 伸炔基(C6 -C10 芳基)、雜環、-C1 -C20 伸烷基(雜環)、-C2 -C20 伸烯基(雜環)或-C2 -C20 伸炔基(雜環)；其中該烷基、烯基、炔基、伸烷基、伸烯基、伸炔基、碳環、芳基及雜環無論單獨或是作為另一基團之一部分均視情況經取代；R 5 為-H；R 6 為甲基；各R 8 為甲氧基；R 9 為-H、C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基或-C2 -C20 炔基；其中該烷基、烯基及炔基視情況經取代；R 10 為視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜環；Z 為-O-、-S-、-NH-或-NR12 ，其中R 12 為-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基或-C2 -C20 炔基，各自視情況經取代；R 11 為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基、-芳基、-雜環、-(R13 O)m -R14 或-(R13 O)m -CH(R15 )2 ，其中該烷基、烯基、炔基、芳基及雜環視情況經取代；m 為1至1000範圍內之整數或m=0；R 13 為-C2 -C20 伸烷基、-C2 -C20 伸烯基或-C2 -C20 伸炔基，各自視情況經取代；R 14 為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基或-C2 -C20 炔基，其中該烷基、烯基及炔基視情況經取代；R 15 在各次出現時均獨立地為-H、-COOH、-(CH2 )n -N(R16 )2 、-(CH2 )n -SO3 H、-(CH2 )n -SO3 -C1 -C20 烷基、-(CH2 )n-SO3 -C2 -C20 烯基或-(CH2 )n-SO3 -C2 -C20 炔基，其中該烷基、烯基及炔基視情況經取代；R 16 在各次出現時均獨立地為-H、-C1 -C20 烷基、-C2 -C20 烯基、-C2 -C20 炔基或-(CH2 )n -COOH，其中該烷基、烯基及炔基視情況經取代；n 為0至6範圍內之整數；或其醫藥學上可接受之鹽。
在某些此等實施例中，R 10 為視情況經取代之苯基。
式D F 之阿瑞他汀包括基團R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 、R8 及R9 未經取代且基團R10 及R11 如本文中所描述之阿瑞他汀。
式D F 之阿瑞他汀包括該烷基、烯基、炔基、伸烷基、伸烯基、伸炔基、芳基、碳環及雜環未經取代之阿瑞他汀。
式D F 之阿瑞他汀包括以下阿瑞他汀，其中：R 2 為-C1 -C3 烷基；R 3 為-H或-C1 -C3 烷基；R 4 為-C1 -C5 烷基；R 5 為-H；R 6 為-C1 -C3 烷基；R 7 為-C1 -C5 烷基；R 8 為-C1 -C3 烷氧基；R 9 為-H或-C1 -C8 烷基；R 10 為視情況經取代之苯基；Z 為-O-、-S-或-NH-；R 11 如本文所定義；或其醫藥學上可接受之鹽。
式D F 之阿瑞他汀包括以下阿瑞他汀，其中：R 2 為甲基；R 3 為-H或-C1 -C3 烷基；R 4 為C1 -C5 烷基；R 5 為-H；R 6 為甲基；R 7 為異丙基或第二丁基；R 8 為甲氧基；R 9 為-H或-C1 -C8 烷基；R 10 為視情況經取代之苯基；Z 為-O-、-S-或-NH-；且R 11 如本文所定義；或其醫藥學上可接受之鹽。
式D F 之阿瑞他汀包括以下阿瑞他汀，其中：R 2 為甲基；R 3 為-H或-C1 -C3 烷基；R 4 為-C1 -C5 烷基；R 5 為-H；R 6 為甲基；R 7 為異丙基或第二丁基；R 8 為甲氧基；R 9 為-H或C1 -C8 烷基；R 10 為苯基；且Z為-O-或-NH-；且R11 如本文所定義，較佳為氫；或其醫藥學上可接受之鹽形式。
式D F 之阿瑞他汀包括以下阿瑞他汀，其中：R 2 為-C1 -C3 烷基；R 3 為-H或-C1 -C3 烷基；R 4 為-C1 -C5 烷基；R 5 為-H；R 6 為-C1 -C3 烷基；R 7 為-C1 -C5 烷基；R 8 為-C1 -C3 烷氧基；R 9 為-H或-C1 -C8 烷基；R 10 為苯基且Z 為-O-或-NH-；且R11 如本文所定義，較佳為氫；或其醫藥學上可接受之鹽形式。
式D E 或式D F 之阿瑞他汀包括R3 、R4 及R7 獨立地為異丙基或第二丁基且R5 為-H之阿瑞他汀。在一例示性實施例中，R3 及R4 各自為異丙基，R5 為H，且R7 為第二丁基。其餘取代基如本文所定義。
式D E 或式D F 之阿瑞他汀包括R2 及R6 各自為甲基且R9 為H之阿瑞他汀。其餘取代基如本文所定義。
式D E 或式D F 之阿瑞他汀包括R8 在各次出現時均為-OCH3 之阿瑞他汀。其餘取代基如本文所定義。
式D E 或式D F 之阿瑞他汀包括R3 及R4 各自為異丙基、R2 及R6 各自為甲基、R5 為H、R7 為第二丁基、R8 在各次出現時均為-OCH3 且R9 為H之阿瑞他汀。其餘取代基如本文所定義。
式D F 之阿瑞他汀包括Z為-O-或-NH-之阿瑞他汀。其餘取代基如本文所定義。
式D F 之阿瑞他汀包括R10 為芳基之阿瑞他汀。其餘取代基如本文所定義。
式D F 之阿瑞他汀包括R10 為-苯基之阿瑞他汀。其餘取代基如本文所定義。
式D F 之阿瑞他汀包括Z為-O-且R11 為H、甲基或第三丁基之阿瑞他汀。其餘取代基如本文所定義。
式D F 之阿瑞他汀包括當Z為-NH-時R11 為-(R13 O)m -CH(R15 )2 之阿瑞他汀，其中R15 為-(CH2 )n -N(R16 )2 且R16 為-C1 -C8 烷基或-(CH2 )n -COOH。其餘取代基如本文所定義。
式D F 之阿瑞他汀包括當Z為-NH-時R11 為-(R13 O)m -CH(R15 )2 之阿瑞他汀，其中R15 為-(CH2 )n -SO3 H。其餘取代基如本文所定義。
在較佳實施例中，當D為式D E 之阿瑞他汀時，w為1至12範圍內之整數，較佳為2至12；y為1或2；且a較佳為1。
在D為式D F 之阿瑞他汀的一些實施例中，a為1且w及y為0。
說明性藥物單元(-D)包括具有以下結構之藥物單元：
或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。
在一態樣中，諸如但不限於三乙二醇酯(TEG)之親水性基團可在R11 處連接至藥物單元。不受理論束縛，親水性基團有助於藥物單元之內化及不聚集。
在一些實施例中，藥物單元不為TZT-1027。在一些實施例中，藥物單元不為阿瑞他汀E、海兔毒素10或阿瑞他汀PE。
在較佳實施例中，抗體-藥物結合物化合物具有以下結構，其中「L」或「mAb-s-」表示本文所述之名為H16-7.8之161P2F10B MAb：
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，藥物單元為卡奇黴素、喜樹鹼、類美登素或蒽環黴素(anthracycline)。在一些實施例中，藥物為紫杉烷(taxane)、拓撲異構酶抑制劑、長春花生物鹼或其類似物。
在一些典型實施例中，適合細胞毒性劑包括例如DNA小溝結合劑(例如烯二炔類及來曲素(lexitropsin)類CBI化合物；亦參看美國專利第6,130,237號)、多卡米新(duocarmycin)、紫杉烷(例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)及多烯紫杉醇(docetaxel))、嘌呤黴素及長春花生物鹼。其他細胞毒性劑包括例如CC-1065、SN-38、拓朴替康(topotecan)、N-嗎啉基-小紅莓、根瘤菌素(rhizoxin)、氰基(N-嗎啉基)-小紅莓、棘黴素(echinomycin)、康柏斯達汀、紡錘菌素(netropsin)、埃博黴素(epothilone)A及埃博黴素B、雌莫司汀(estramustine)、克托費新(cryptophysin)、西馬多丁(cemadotin)、類美登素、迪斯德莫來(discodermolide)、艾榴塞洛素(eleutherobin)及米托蒽醌(mitoxantrone)。
在一些實施例中，藥物為抗微管蛋白劑。抗微管蛋白劑之實例包括阿瑞他汀、紫杉烷(例如Taxol(太平洋紫杉醇)、Taxotere(多烯紫杉醇))、T67(Tularik)及長春花生物鹼(例如長春新鹼、長春鹼、長春地辛及長春瑞濱(vinorelbine))。其他抗微管蛋白劑包括例如巴卡亭(baccatin)衍生物、紫杉烷類似物(例如埃博黴素A及B)、諾考達唑(nocodazole)、秋水仙鹼及秋水仙醯胺、雌莫司汀、自念珠藻環肽、西馬多丁、類美登素、康柏斯達汀、迪斯德莫來及艾榴塞洛素。
在某些實施例中，細胞毒性劑為類美登素，另一組抗微管蛋白劑。舉例而言，在特定實施例中，類美登素為美登素(maytansine)或DM-1(ImmunoGen,Inc.；亦參看Chari等人，1992,Cancer Res. 52:127-131)。
在某些實施例中，細胞毒性劑或細胞抑制劑為海兔毒素。在某些實施例中，細胞毒性劑或細胞抑制劑屬於阿瑞他汀類。因而，在一特定實施例中，細胞毒性劑或細胞抑制劑為MMAE(式XI )。在另一特定實施例中，細胞毒性劑或細胞抑制劑為AFP(式XVI )。
在某些實施例中，細胞毒性劑或細胞抑制劑為式XII 至式XXI 之化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
p為1至12。在更佳實施例中，抗體-藥物結合物化合物具有以下結構，其中「mAb-s-」表示本文所述之名為H16-7.8之161P2F10B MAb且p為4：
在一特定實施例中，細胞毒性劑或細胞抑制劑為MMAF(式XVIV )。
X.)　藥物負載
藥物負載係由p表示且為分子中每個抗體之藥物部分的平均數目。藥物負載可介於每抗體1至20個藥物部分(D)範圍內。本發明之ADC包括多種與1至20個範圍內之藥物部分結合的抗體。在由結合反應製備ADC時，每個抗體之藥物部分之平均數目可藉由習知方法分析其特徵，諸如質譜分析及ELISA檢定。亦可測定ADC中p之定量分佈。在一些情況下，可藉由諸如電泳之方式，自具有其他藥物負載之ADC中達成分離、純化及分析p為某指定數值之均質ADC之特徵。
對於一些抗體-藥物結合物，p可能受抗體上之連接位點數目限制。舉例而言，若連接半胱胺酸硫醇，如以上例示性實施例中，則抗體可能僅具有一個或數個半胱胺酸硫醇基，或可能僅具有一個或數個具有足夠反應性之硫醇基，經由此基團連接該連接子。在某些實施例中，更高藥物負載(例如p>5)可能致使某些抗體-藥物結合物聚集、不溶、具毒性或喪失細胞滲透性。在某些實施例中，本發明ADC之藥物負載係介於1至約12、1至約8、約2至約6、約3至約5、約3至約4、約3.1至約3.9、約3.2至約3.8、約3.2至約3.7、約3.2至約3.6、約3.3至約3.8或約3.3至約3.7範圍內。實際上，已顯示對於某些ADC，藥物部分/抗體之最佳比率可小於8，且可為約2至約5。參看US 2005-0238649 A1(該案係以全文引用的方式併入本文中)。
在某些實施例中，在結合反應期間結合至抗體之藥物部分少於理論最大值。抗體可含有例如不與藥物-連接子中間物或連接子試劑反應之離胺酸殘基，如下文所論述。一般而言，抗體不含有許多可連接至藥物部分的游離及反應性半胱胺酸硫醇基；實際上抗體中之大部分半胱胺酸硫醇殘基係以雙硫橋形式存在。在某些實施例中，可在部分或總體還原條件下，用諸如二硫蘇糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)之還原劑還原抗體，以產生反應性半胱胺酸硫醇基。在某些實施例中，抗體經歷變性條件，以顯露反應性親核基團，諸如離胺酸或半胱胺酸。
可依不同方式控制ADC之負載(藥物/抗體比率)，例如藉由：(i)相對於抗體，限制藥物-連接子中間物或連接試劑之莫耳過量；(ii)限制結合反應時間或溫度；(iii)對於半胱胺酸硫醇之修飾作用，施加部分或限制性還原條件；(iv)藉由重組技術工程改造抗體之胺基酸序列，以改變半胱胺酸殘基數目及位置，從而控制連接子-藥物連接之數目及位置(諸如如本文及WO 2006/034488(其係以全文引用的方式併入本文中)中所揭示而製備之thioMab或thioFab)。
應瞭解，若超過一個親核基團與藥物-連接子中間物或連接試劑反應，接著與藥物部分試劑反應，則所得產物為具有一或多個藥物部分連接至一個抗體之分配的ADC化合物之混合物。可藉由對抗體具特異性且對藥物具特異性之雙重ELISA抗體檢定，計算該混合物中每個抗體之藥物平均數目。可藉由質譜分析鑑別混合物中之個別ADC分子且藉由HPLC加以分離，例如疏水性相互作用層析(參看例如Hamblett,K.J.等人「Effect of drug loading on the pharmacology,pharmacokinetics,and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate」，摘要號624,American Association for Cancer Research,2004 Annual Meeting,2004年3月27-31日,Proceedings of the AACR ，第45卷，2004年3月；Alley,S.C.等人「Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates」，摘要號627,American Association for Cancer Research,2004 Annual Meeting,2004年3月27-31日,Proceedings of the AACR ，第45卷，2004年3月)。在某些實施例中，可藉由電泳或層析自結合混合物分離具有單一負載值之均質ADC。
XI.)　確定ADC之細胞毒性效應的方法
確定藥物或抗體-藥物結合物是否對細胞發揮細胞抑制及/或細胞毒性效應的方法為已知的。一般而言，可藉由以下方式量測抗體藥物結合物之細胞毒性或細胞抑制活性：將表現抗體藥物結合物之標靶蛋白之哺乳動物細胞曝露於細胞培養基中；培養該等細胞約6小時至約5天之時段；及測量細胞生存力。基於細胞之活體外檢定可用於量測抗體藥物結合物之生存力(增殖)、細胞毒性及細胞凋亡之誘發(卡斯蛋白酶活化)。
為確定抗體藥物結合物是否發揮細胞抑制效應，可使用胸苷併入檢定。舉例而言，可培養以5,000個細胞/孔之密度塗於96孔盤的表現標靶抗原之癌細胞72小時之時段，且在該72小時時段之最後8小時期間曝露於0.5 μCi3 H-胸苷。在存在及不存在抗體藥物結合物的情況下量測細胞培養物中3 H-胸苷之併入。
為確定細胞毒性，可量測壞死或細胞凋亡(漸進式細胞死亡)。壞死通常伴隨質膜滲透性增加、細胞膨脹及質膜破裂。細胞凋亡之特徵通常在於細胞膜起泡、細胞質凝結及內源性核酸內切酶活化。測到任何此等對癌細胞之效應均指示抗體藥物結合物適用於治療癌症。
可藉由測定細胞中染料(諸如中性紅、錐蟲藍或ALAMARTM 藍)之吸收來量測細胞生存力(參看例如Page等人，1993,Intl. J. Oncology 3:473-476)。在此類檢定中，在含有染料之培養基中培育細胞，洗滌細胞，且以分光光度法量測體現染料為細胞所吸收的剩餘染料。蛋白結合染料磺醯若丹明B(sulforhodamine B，SRB)亦可用於量測細胞毒性(Skehan等人，1990,J. Natl. Cancer Inst. 82:1107-12)。
或者，在定量比色檢定中，使用諸如MTT之四唑鎓鹽，藉由偵測活細胞而非死細胞，來檢定哺乳動物細胞之存活及增殖(參看例如Mosmann,1983,J. Immunol. Methods 65:55-63)。
可藉由量測例如DNA斷裂來定量細胞凋亡。可利用用於活體外定量測定DNA斷裂之市售光測定法。該等檢定之實例包括基於TUNEL(其偵測斷裂DNA中之標記核苷酸之併入)及ELISA之檢定，描述於Biochemica ,1999，第2期，第34-37頁(Roche Molecular Biochemicals)。
亦可藉由量測細胞之形態變化來測定細胞凋亡。舉例而言，如同壞死，可藉由量測某些染料(例如螢光染料，諸如吖啶橙或溴化乙錠)之吸收來測定質膜完整性之喪失。Duke及Cohen,Current Protocols in Immunology (Coligan等人編,1992，第3.17.1-3.17.16頁)已描述一種量測凋亡細胞數目之方法。亦可用DNA染料(例如吖啶橙、溴化乙錠或碘化丙啶)標記細胞，且觀察細胞中沿內核膜之染色質凝結及著邊。可進行量測以測定細胞凋亡之其他形態變化包括例如細胞質凝結、細胞膜起泡增加及細胞收縮。
可量測培養物之連接及「浮動」隔層中凋亡細胞之存在。舉例而言，可藉由在進行離心洗滌步驟(例如10分鐘，2000 rpm)後，移除上清液，以胰蛋白酶處理連接之細胞，組合該等製劑來收集兩個隔層，且偵測細胞凋亡(例如藉由量測DNA斷裂)。(參看例如Piazza等人，1995,Cancer Research 55:3110-16)。
可在適合動物模型中評估161P2F10B治療組合物之活體內效應。舉例而言，可使用異種癌症模型，其中將癌症外植體或繼代異種移植組織引入免疫功能不全之動物中，諸如裸小鼠或SCID小鼠(Klein等人，1997,Nature Medicine 3: 402-408)。例如PCT專利申請案WO 98/16628及美國專利6,107,540描述人類前列腺癌之多種異種移植模型，該等模型能夠重演原發腫瘤之出現、微轉移、及晚期疾病之成骨性轉移特徵之形成。可使用量測腫瘤形成之抑制、腫瘤消退或轉移及其類似過程的檢定來預測功效。
評估對細胞凋亡之促進情況的活體內檢定適用於評估治療性組合物。在一實施例中，可檢查經治療性組合物治療之帶有腫瘤之小鼠的異種移植物中是否存在細胞凋亡病灶且與未經治療之帶有異種移植物之對照小鼠比較。在經治療之小鼠之腫瘤中發現細胞凋亡病灶所達到的程度指示組合物之治療功效。
用於實施上述方法之治療性組合物可調配成包含適於所要遞送方法之載劑的醫藥組合物。適合載劑包括在與治療性組合物組合時保留該治療性組合物之抗腫瘤功能且一般對患者之免疫系統無反應性的任何物質。實例包括但不限於許多標準醫藥載劑中之任一種，諸如無菌磷酸鹽緩衝鹽水溶液、抑菌水及其類似物(一般參看Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，A. Osal.編，1980)。
可溶解治療性調配物且經由能夠將治療性組合物遞送至腫瘤部位之任何途徑投與。潛在有效投藥途徑包括但不限於靜脈內、非經腸、腹膜內、肌肉內、腫瘤內、皮內、器官內、正位及其類似途徑。用於靜脈內注射之較佳調配物包含治療性組合物於經防腐處理之抑菌水溶液、未經防腐處理之無菌水溶液中及/或稀釋於含有0.9%注射用無菌氯化鈉(USP)之聚氯乙烯或聚乙烯袋中。可凍乾治療性蛋白質製劑，且以無菌粉末之形式較佳在真空下儲存，接著在抑菌水(含有例如苯甲醇防腐劑)或在無菌水中復原後注射。
使用上述方法治療癌症之劑量及投藥方案將隨方法及目標癌症而變化，且一般將視此項技術中所瞭解之許多其他因素而定。
XII.)　癌症之治療
鑑別出161P2F10B為正常表現於一組有限組織中，但亦表現於癌症(諸如表I中所列之癌症)中之蛋白質，為治療該等癌症提供許多治療方法。
值得注意地，即使當標靶蛋白表現於正常組織、甚至正常生命器官組織上時，靶向抗腫瘤療法亦適用。生命器官為維持生命所必需之器官，諸如心臟或結腸。非生命器官為可移除且之後個體仍能存活的器官。非生命器官之實例為卵巢、乳房及前列腺。
標靶蛋白在正常組織、甚至正常生命組織中之表現無法阻撓該蛋白質之靶向劑用作其中蛋白質亦過度表現之某些腫瘤的治療劑。舉例而言，在生命器官中之表現在本質上且自行並不有害。此外，可移除被視為非必需之器官(諸如前列腺及卵巢)而不影響死亡率。最後，一些生命器官因免疫赦免而不受正常器官表現之影響。免疫赦免器官為受血液-器官障壁保護而避開血液，因此免疫療法無法到達的器官。免疫赦免器官之實例為腦及睪丸。
因此，抑制161P2F10B蛋白之活性的治療方法適用於罹患表現161P2F10B之癌症的患者。該等治療方法一般分為三類。第一類方法調節與腫瘤細胞生長有關之161P2F10B功能，從而抑制或延緩腫瘤細胞生長或誘導殺死腫瘤細胞。第二類方法包含抑制161P2F10B蛋白與其結合搭配物或其他蛋白質結合或締合的各種方法。第三類方法包含抑制161P2F10B基因轉錄或161P2F10B mRNA轉譯的各種方法。
因此，可較佳使用腫瘤組織之免疫組織化學評估、定量161P2F10B成像、或可靠地指示161P2F10B表現之存在及程度的其他技術，評估癌症患者中161P2F10B表現之存在及程度。腫瘤活組織檢查或手術樣本之免疫組織化學分析較佳用於達成此目的。腫瘤組織之免疫組織化學分析方法為此項技術中所熟知。
XIII.) 161P2F10B作為基於抗體之療法的標靶
161P2F10B為一種對基於抗體之治療策略而言具有吸引力之標靶。在此項技術中已知許多用於靶向細胞外分子與細胞內分子的抗體策略(參看例如補體及ADCC介導之殺死以及胞內抗體之使用)。由於各種譜系之癌細胞相對於相應正常細胞表現161P2F10B，所以準備全身性投與161P2F10B免疫反應性組合物，該等組合物展現優良敏感性而不存在因免疫反應性組合物結合至非標靶器官及組織所致之毒性、非特異性及/或非標靶效應。與161P2F10B結構域特異性反應之抗體適用於較佳呈抗體藥物結合物(亦即ADC)形式全身性治療癌症(較佳為表I之癌症，更佳為腎癌及/或肝癌)，其中該結合物具有毒素或治療劑。
熟習此項技術者應瞭解，抗體可用於特異性靶向並結合免疫原性分子，諸如圖1中所示之161P2F10B序列之免疫原性區域。此外，熟習此項技術者應瞭解，通常抗體結合至細胞毒性劑(參看例如Slevers等人，Blood 93:11 3678-3684(1999年6月1日))。當細胞毒性劑及/或治療劑諸如藉由結合至對細胞所表現之分子(例如161P2F10B)具有特異性之抗體來直接遞送至細胞時，細胞毒性劑對彼等細胞發揮其已知之生物效應(亦即細胞毒性)。
在此項技術中已知使用抗體-細胞毒性劑結合物殺死細胞之多種組合物及方法。在癌症之情形下，典型方法需要向具有腫瘤之哺乳動物投與生物有效量之結合物，該結合物包含所選細胞毒性劑及/或治療劑連接至與所表現之抗原(例如161P2F10B)結合之靶向劑(例如161P2F10B MAb，較佳為H16-7.8)，以結合或定位於細胞表面上。一典型實施例為向表現161P2F10B之細胞遞送細胞毒性劑及/或治療劑的方法，該方法包含使細胞毒性劑結合至與161P2F10B抗原決定基免疫特異性結合之抗體，且使該細胞曝露於該抗體藥物結合物(ADC)。另一說明性實施例為治療懷疑罹患轉移癌症之個體的方法，該方法包含向該個體非經腸投與包含治療有效量之抗體結合至細胞毒性劑及/或治療劑之醫藥組合物的步驟。
使用161P2F10B抗體之癌症免疫療法可根據已成功用於治療其他類型癌症之各種方法來進行，該等其他類型癌症包括但不限於結腸癌(Arlen等人，1998,Crit. Rev. Immunol. 18:133-138)、多發性骨髓瘤(Ozaki等人，1997,Blood 90:3179-3186：Tsunenari等人，1997,Blood 90:2437-2444)、胃癌(Kasprzyk等人，1992Cancer Res. 52:2771-2776)、B細胞淋巴瘤(Funakoshi等人，1996,J. Immunother. Emphasis Tumor Immunol. 19:93-101)、白血病(Zhong等人，1996,Leuk. Res. 20:581-589)、結腸直腸癌(Moun等人，1994,Cancer Res. 54:6160-6166；Velders等人，1995,Cancer Res. 55:4398-4403)及乳癌(Shepard等人，1991,J. Clin. Immunol. 11:117-127)。一些治療方法包括使裸抗體結合至毒素或放射性同位素，諸如分別使Y91 或I131 結合至抗CD20抗體(例如IDEC Pharmaceuticals Corp.之ZevalinTM 或Coulter Pharmaceuticals之BexxarTM )，而其他方法包括共同投與抗體與其他治療劑，諸如HerceptinTM (曲妥珠單抗(trastuzumab))與太平洋紫杉醇(Genentech,Inc.)。
在一較佳實施例中，抗體結合上述細胞毒性劑，較佳名為MMAF(Seattle Genetics)之阿瑞他汀衍生物。
用於本發明治療方法中之較佳單株抗體為以高親和力特異性結合至161P2F10B標靶抗原之完全人類抗體。
XIV.)　161P2F10B ADC混合物
本發明之治療方法涵蓋投與單一161P2F10B ADC以及不同MAb(亦即161P2F10B MAb或結合另一蛋白質之Mab)之組合或混合物。該等MAb混合物由於含有靶向不同抗原決定基之MAb、利用不同效應機制或直接組合細胞毒性MAb與依賴於免疫效應功能之MAb而具有一定優勢。該等呈組合形式之MAb可展現協同治療效應。此外，161P2F10B MAb可附隨其他治療形式投與，該等治療形式包括但不限於各種化學治療劑及生物劑、雄激素阻斷劑、免疫調節劑(例如IL-2、GM-CSF)、手術或輻射。在一較佳實施例中，161P2F10B MAb係以結合形式投與。
161P2F10B ADC調配物係經由能夠遞送抗體至腫瘤細胞之任何途徑投與。投藥途徑包括但不限於靜脈內、腹膜內、肌肉內、腫瘤內、皮內及其類似途徑。治療一般包括經由可接受之投藥途徑(諸如靜脈內注射(IV))重複投與161P2F10B ADC製劑，劑量通常在包括但不限於每公斤體重0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或25毫克之範圍內。一般而言，每週10至1000毫克MAb範圍內之劑量為有效的且耐受性良好。
基於用Herceptin(曲妥珠單抗)治療轉移性乳癌之臨床經驗，每公斤患者體重約4毫克之初始負載劑量(IV)、接著每週約2毫克/公斤劑量(IV)之MAb製劑代表一種可接受之給藥方案。初始負載劑量較佳以90分鐘或90分鐘以上之輸注形式投與。定期維持劑量係以30分鐘或30分鐘以上之輸注形式投與，其限制性條件為初始劑量之耐受性良好。如熟習此項技術者所瞭解，在特定情況下，多種因素可影響理想給藥方案。該等因素包括例如所用MAb之結合親和力及半衰期、患者中161P2F10B之表現程度、循環排出161P2F10B抗原之程度、所要穩態抗體濃度、治療頻率、及與本發明治療方法組合使用之化學治療劑或其他藥劑的影響，以及特定患者之健康狀況。
視情況應評估患者之指定樣品中161P2F10B之含量(例如循環161P2F10B抗原及/或161P2F10B表現細胞之含量)以便有助於確定最有效之給藥方案等。該等評估亦用於在治療中達成監測之目的，且適用於與其他參數之評估(例如膀胱癌療法中之尿細胞學及/或ImmunoCyt程度，或以此類推，前列腺癌療法中之血清PSA含量)組合來估量治療成功性。
本發明之一個目標為提供抑制或延遲腫瘤細胞，較佳表I之腫瘤細胞生長的161P2F10B ADC。本發明之另一目標為提供抑制血管生成及其他生物功能且藉此減弱哺乳動物(較佳為人類)之腫瘤生長的方法，該方法係使用該等161P2F10B ADC，且尤其使用該等161P2F10B ADC與其他藥物或免疫活性治療組合。
XV.)　組合療法
在一實施例中，當用161P2F10B ADC連同化學治療劑或輻射或其組合治療腫瘤(包括人類腫瘤)時，產生協同作用。換言之，161P2F10B ADC對腫瘤生長之抑制程度超過在與化學治療劑或輻射或其組合進行組合時所預期之抑制程度。舉例而言，協同作用可由組合治療對腫瘤生長之抑制程度大於僅用161P2F10B ADC治療所預期之抑制程度或用161P2F10B ADC及化學治療劑或輻射治療之相加效應所顯示。協同作用較佳由癌症減輕所證明，其中在用161P2F10B ADC治療或用161P2F10B ADC與化學治療劑或輻射之相加組合治療時不期望減輕。
使用161P2F10B ADC與化學療法或輻射或兩者之組合抑制腫瘤細胞生長的方法包含在開始化學療法或輻射療法之前、期間或之後以及其任何組合(亦即，在開始化學療法及/或輻射療法之前與期間、之前與之後、期間與之後、或之前、期間及之後)投與161P2F10B ADC。舉例而言，161P2F10B ADC通常在開始輻射療法及/或化學療法之前的1至60天之間，較佳在3至40天之間，更佳在5至12天之間投與。然而，視治療方案及特定患者需要，以提供最有效治療且最終延長患者生命之方式執行該方法。
化學治療劑之投藥可以多種方式實現，包括藉由非經腸及經腸途徑全身性投與。在一實施例中，161P2F10B ADC及化學治療劑係以各別分子投與。化學治療劑或化學療法之特定實例包括順鉑、達卡巴嗪(dacarbazine，DTIC)、放線菌素D、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)(氮芥)、鏈脲黴素(streptozocin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、卡莫司汀(carmustine，BCNU)、洛莫司汀(lomustine，CCNU)、小紅莓(阿德力黴素(adriamycin))、道諾黴素、丙卡巴肼(procarbazine)、絲裂黴素、阿糖胞苷(cytarabine)、依託泊苷、甲胺喋呤、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、長春鹼、長春新鹼、博萊黴素(bleomycin)、太平洋紫杉醇(紫杉醇)、多烯紫杉醇(紫杉德)、阿地白介素(aldesleukin)、天冬醯胺酶、白消安(busulfan)、卡鉑(carboplatin)、克拉屈濱(cladribine)、達卡巴嗪、氟尿苷(floxuridine)、氟達拉濱(fludarabine)、羥基脲、異環磷醯胺(ifosfamide)、干擾素α、亮丙瑞林(leuprolide)、甲地孕酮(megestrol)、美法侖(melphalan)、巰嘌呤(mercaptopurine)、普卡黴素(plicamycin)、米托坦(mitotane)、培門冬酶(pegaspargase)、噴司他丁(pentostatin)、雙溴丙基哌嗪(pipobroman)、普卡黴素、鏈脲黴素、他莫昔芬(tamoxifen)、替尼泊苷(teniposide)、睪內酯(testolactone)、硫鳥嘌呤、噻替派(thiotepa)、烏拉莫司汀(uracil mustard)、長春瑞濱、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、紫杉醇及其組合。
與161P2F10B ADC組合使用之輻射源可處於所治療之患者之外部或內部。當該來源處於患者外部時，該療法稱為體外光束輻射療法(EBRT)。當輻射源處於患者內部時，該治療稱為近接療法(BT)。
上述治療方案可進一步與其他癌症治療劑及/或方案組合，例如其他化學療法、癌症疫苗、信號轉導抑制劑、適用於治療異常細胞生長或癌症之藥劑、抗體(例如WO 2005/092380(Pfizer)中所描述之抗CTLA-4抗體)，或藉由結合至IGF-1R及細胞激素來抑制腫瘤生長的其他配位體。
當哺乳動物進行其他化學療法時，可使用上述化學治療劑。此外，可使用生長因子抑制劑、生物反應調節劑、抗激素療法、選擇性雌激素受體調節劑(SERM)、血管生成抑制劑及抗雄激素劑。舉例而言，可使用抗激素劑，例如抗雌激素劑，諸如諾瓦得士(Nolvadex)(他莫昔芬)；或抗雄激素劑，諸如康士德(Casodex)(4'-氰基-3-(4-氟苯磺醯基)-2-羥基-2-甲基-3'-(三氟甲基)丙醯苯胺)。
可將上述治療方法與多種手術、化學療法或輻射療法方案中之任一種組合。本發明之治療方法可容許使用降低劑量之化學療法(或其他療法)及/或更低頻率之投藥，此對於所有患者且尤其對於不能良好耐受化學治療劑毒性之患者而言為有利的。
XVI.)　套組/製品
用於本文所述之實驗室、預後、預防、診斷及治療應用的套組在本發明之範疇內。該等套組可包含：經劃分以容納一或多個容器(諸如小瓶、管及其類似物)的承載器、封裝或容器，各容器包含將用於該方法中之各別元件之一，以及包含使用說明(諸如本文所述之用途)之標籤或插頁。舉例而言，容器可包含經標記或可偵測地標記之抗體。套組可包含含有藥物單元之容器。套組可包括圖2或圖3中之所有或部分胺基酸序列或其類似物，或編碼該等胺基酸序列之核酸分子。
本發明之套組通常將包含上述容器及一或多個與其相關之其他容器，該一或多個容器包含自商業及使用者之角度而言合乎需要之物質，包括緩衝液、稀釋劑、過濾器、針、注射器；列有含量及/或使用說明之承載器、封裝、容器、小瓶及/或管標籤；及具有使用說明之封裝插頁。
標籤可存在於容器上或隨容器存在，以指示組合物係用於特定療法或是非治療性應用，諸如預後、預防、診斷或實驗室應用，且亦可指示活體內或活體外使用說明，諸如本文所描述之使用說明。隨套組存在或包括於套組上之插頁或標籤上亦可包括說明及/或其他資訊。標籤可在容器上或與容器相關聯。當形成標籤之字母、數字或其他字符模製或蝕刻於容器自身內時，標籤可在容器上；當標籤存在於亦容納容器之貯器或承載器內時，其可與該容器相關聯，例如呈封裝插頁形式。標籤可指示組合物用於診斷、治療、預防或預後病狀，諸如表I中所闡述之組織之癌症。
術語「套組」與「製品」可作同義語使用。
在本發明之另一實施例中，提供含有諸如抗體藥物結合物(ADC)(例如適用於診斷、預後、預防及/或治療諸如表I中所闡述之組織之癌症的物質)之組合物的製品。該製品通常包含至少一個容器及至少一個標籤。適合之容器包括例如瓶子、小瓶、注射器及試管。該等容器可由多種材料(諸如玻璃、金屬或塑膠)形成。該容器可容納胺基酸序列、小分子、核酸序列、細胞群體及/或抗體。在另一實施例中，容器亦包含用於評估細胞及組織中161P2F10B之蛋白質表現或用於相關實驗室、預後、診斷、預防及治療目的之抗體、其結合片段或特異性結合蛋白；關於該等用途之指示及/或說明可包括於該容器上或隨該容器存在，如同用於達成此等目的之試劑及其他組合物或工具。
或者容器可容納有效治療、診斷、預後或預防病狀之組合物且可具有無菌入孔(例如容器可為具有可由皮下注射針刺穿之塞子的靜脈內溶液袋或小瓶)。組合物中之活性劑可為特異性結合至161P2F10B之抗體藥物結合物。
該製品可進一步包含第二容器，該第二容器包含醫藥學上可接受之緩衝液，諸如磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及/或右旋糖溶液。其可進一步包括自商業及使用者之角度而言合乎需要的其他物質，包括其他緩衝液、稀釋劑、過濾器、攪拌器、針、注射器，及/或具有使用指示及/或說明之封裝插頁。
實例：
藉由以下數個實例進一步描述並說明本發明之各種態樣，該等實例不意欲限制本發明之範疇。
實例1 161P2F10B抗原
使用此項技術中已知之抑制性差減雜交(Suppression Subtractive Hybridization；SSH)法來發現161P2F10B基因序列。使用標準方法，自來源於腎癌患者之cDNA鑑別具有182個鹼基對之161P2F10B SSH序列。自腎癌患者樣本中分離出161P2F10B之全長cDNA純系。該cDNA為3858 bp長且編碼具有875個胺基酸之ORF(參看圖1)。161P2F10B顯示與ENPP3之同源性(參看Buhring等人，Blood 97:3303-3305(2001))。使用此項技術中已知之標準方法使161P2F10B定位於染色體6q22。關於其他參考文獻，參看美國專利第7,279,556號(Agensys,Inc.,Santa Monica,CA)、美國專利第7,405,290號(Agensys,Inc.,Santa Monica,CA)、美國專利第7,067,130號(Agensys,Inc.,Santa Monica,CA)及美國專利第7,226,594號(Agensys,Inc.,Santa Monica,CA)。
實例2 產生161P2F10B單株抗體(MAb)
在一實施例中，161P2F10B之治療性單株抗體(「MAb」)包含與對會結合、內化161P2F10B、破壞或調節其生物功能的蛋白質(例如會破壞與配位體、受質及結合搭配物之相互作用的蛋白質)具有特異性之抗原決定基反應的單株抗體。產生該等MAb之免疫原包括經設計以編碼或含有161P2F10B蛋白質序列之細胞外域或整個161P2F10B蛋白質序列以及預計含有自胺基酸序列之電腦分析預期具有抗原性之功能基元的區域之免疫原。免疫原包括肽及重組蛋白質，諸如tag5-161P2F10B，一種來源於哺乳動物細胞之經純化之His標記蛋白質。此外，使用藉由反轉錄病毒轉導進行工程改造以表現高含量之161P2F10B的細胞(諸如RAT1-161P2F10B)對小鼠免疫。
161P2F10B之MAb係使用技術(Amgen Fremont)產生，其中已使鼠類重鏈及κ輕鏈基因座失活且已插入大部分人類重鏈及κ輕鏈免疫球蛋白基因座。名為H16-7.8 之MAb係藉由用Tag5-161P2F10B細胞免疫產生人類γ2之XenoMice而產生。
161P2F10B MAbH16-7.8 特異性結合至表現重組161P2F10B(SEQ ID NO: 2)之細胞及表現於癌症異種移植細胞中之內源性細胞表面161P2F10B。
在用試劑(Life Technologies,Gibco BRL)自各別融合瘤細胞分離mRNA後，測定161P2F10B MAbH16-7.8 之DNA編碼序列。
使用以下方案，定序融合瘤細胞之抗161P2F10B H16-7.8重鏈及輕鏈可變核酸序列。用試劑(Life Technologies,Gibco BRL)溶解分泌H16-7.8之融合瘤細胞。純化並定量全部RNA。使用BRL Superscript Preamplification系統，以oIigo(dT) 12-18作引子，自全部RNA產生第一股cDNA。使用人類免疫球蛋白可變重鏈引子及人類免疫球蛋白可變輕鏈引子擴增第一股cDNA。定序PCR產物且確定可變重鏈區及輕鏈區。
可變重鏈區及輕鏈區之核酸及胺基酸序列列於圖2及圖3中。H16-7.8之重鏈可變區係由介於SEQ ID NO: 7之第20個Q殘基至第142個S殘基範圍內的胺基酸序列組成，且H16-7.8之輕鏈可變區係由介於SEQ ID NO: 8之第20個E殘基至第127個R殘基範圍內的胺基酸序列組成。H16-7.8之重鏈係由介於SEQ ID NO: 7之第20個Q殘基至第468個K殘基範圍內的胺基酸序列組成，且H16-7.8之輕鏈係由介於SEQ ID NO: 8之第20個E殘基至第233個C殘基範圍內的胺基酸序列組成。H16-7.8與人類VH4-31/D5-12/JH6生殖系及人類A26/JK1生殖系之比對闡述於圖4A至圖4B中。
實例3 使用重組DNA法表現H16-7.8
為在經轉染之細胞中重組表現H16-7.8，將H16-7.8重鏈及輕鏈序列(SEQ ID NO: 7之20至468，及輕鏈SEQ ID NO:8之20至233)選殖至表現載體中。完整H16-7.8人類重鏈及輕鏈卡匣選殖於選殖載體中之CMV啟動子/增強子之下游。MAb編碼序列之下游包括聚腺苷酸化位點。將表現重組H16-7.8之構築體轉染至CHO細胞中，且重組H16-7.8自CHO細胞中分泌。藉由ELISA量測IgG力價。結果證實IgG及表現以及重鏈及輕鏈之良好共同表現。藉由流動式細胞測量術評估重組H16-7.8與細胞表面161P2F10B之結合(圖5)。用來自經H16-7.8重鏈及輕鏈載體構築體轉染之融合瘤或CHO細胞之重組H16-7.8對3T3-對照及3T3-161P2F10B細胞進行染色。
藉由流動式細胞測量術偵測結合。結果顯示CHO細胞中分泌重組表現之H16-7.8且該H16-7.8特異性結合至細胞表面161P2F10B。(圖5)。
在肽序列方面，表徵重組H16-7.8。H16-7.8之肽圖分析證實相對於使用Lys-C消化藉由LC-MS/MS、使用Asp-N消化藉由LC-MS/MS及使用N端序列藉由埃德曼降解(Edman degradation)所測定之序列，H16-7.8之推斷胺基酸序列為正確的。
實例4 H16-7.8之抗體藥物結合物
H16-7.8(圖2)係使用以下所述之馬來醯亞胺基己醯基(mc)不可裂解連接子結合至名為MMAF(式XVIV；單甲基阿瑞他汀F)之多拉纈胺酸-纈胺酸-多拉異白胺酸-多拉脯胺酸-苯丙胺酸(dolavaline-valine-dolaisoleucine-dolaproine-phenylalanine)(阿瑞他汀衍生物)：
使用表VI中所述之合成方法來合成MMAF(Seattle Genetics,Seattle,WA)之馬來醯亞胺基己醯基(mc)不可裂解連接子(SAFC,Madison,WI)，以產生細胞毒性mcMMAF。
接著，使用以下方案製造名為H16-7.8mcMMAF之本發明抗體藥物結合物(ADC)。
簡言之，H16-7.8於10 mM丁二酸鹽中之10 mg/mL溶液藉由透濾進行緩衝液交換。緩衝液交換之目的在於移除H16-7.8調配物之緩衝液組分且用最適於隨後「還原」步驟之更相容緩衝液替代。抗體針對6倍體積(DV)之硼酸鈉緩衝液進行透濾，且濃縮至10±1 mg/ml，自系統中沖洗出，稀釋至7.5 mg/ml且進行0.2 μm過濾。
隨後，向反應混合物中添加EDTA直至5 mM最終濃度。接著，用參-(2-羧乙基)-膦鹽酸鹽(TCEP)部分還原H16-7.8之雙硫鍵，形成游離硫醇(SH)。此過程係在37℃下執行。在此反應期間EDTA以5 mM濃度存在，以螯合可能導致不欲之SH再氧化的任何二價金屬陽離子。在還原步驟結束時，使反應溶液之溫度降至20℃並加以分析，以確定游離SH之莫耳比且確保已產生每一MAb之SH3.9。對於結合，稱出分離器中之藥物-連接子mcMMAF，且使其溶解於DMSO中，直至濃度為5.5 mg/ml。
經部分還原之H16-7.8上之SH基團與藥物-連接子mcMMAF反應，形成結合物H16-7.8mcMMAF。以固定藥物：抗體莫耳當量添加含mcMMAF之DMSO。此步驟係在20℃下執行。1小時培育時段後，用N-乙醯基-半胱胺酸淬滅該反應中之任何過量藥物-連接子，因而消除任何反應性藥物-連接子且使其變成更易於移除及藉由分析方法偵測的加合物。接著再攪拌混合物十五(15)分鐘，接著添加相對於mcMMAF一(1)莫耳當量之N-乙醯基-半胱胺酸。
接著，執行超濾/透濾以移除DMSO，處理雜質，且將ADC緩衝液交換成調配緩衝液。
因而藉由用8倍體積之20 mM組胺酸(pH 5.2)調配緩衝液超濾/透濾抗體藥物結合物(ADC)來移除經淬滅之過量mcMMAF。第8倍體積完畢後，使溶液再循環且檢定蛋白質濃度。
用20 mM組胺酸、10%海藻糖(pH 5.2)緩衝液將結合物調節至(6)±0.5 mg/ml。接著添加聚山梨醇酯20，混合至均質，且經由0.2 μm過濾器無菌過濾。
所得抗體藥物結合物(ADC)名為H16-7.8mcMMAF，且具有下式：
其中MAb為H16-7.8(圖2及圖3)且p為1至12。
實例5 表徵H16-7.8及H16-7.8mcMMAF
使用標題為實例2「產生161P2F10B單株抗體(MAb)」之實例中所述之程序產生H16-7.8。此外，使用標題為「H16-7.8之抗體藥物結合物」之實例中所述之程序產生結合161P2F10B之抗體藥物結合物。使用此項技術中已知之檢定組合篩檢、鑑別且表徵H16-7.8及H16-7.8mcMMAF ADC。
A.藉由FACS測定細胞結合及親和力
測試H16-7.8及H16-7.8mcMMAF與內源性表現於Ku812細胞上之161P2F10B的結合親和力。簡言之，在4℃下將十一(11)個最終濃度為160 nM至0.0001 nM之H16-7.8或H16-7.8mcMMAF之稀釋液與Ku812細胞(50,000個細胞/孔)一起培育隔夜。在培育結束時，洗滌細胞且在4℃下與抗hIgG-PE偵測抗體一起培育45分鐘。洗滌未結合之偵測抗體後，藉由FACS分析細胞。獲得平均螢光強度(MFI)值(參看表IV)。將MFI值輸入Graphpad Prisim軟體中，且使用一位點結合(雙曲線)等式Y=Bmax *X/(Kd +X)加以分析，產生圖6中所示之H16-7.8或H16-7.8mcMMAF飽和曲線。Bmax 為H16-7.8或H16-7.8mcMMAF與161P2F10B最大結合時的MFI值；Kd 為H16-7.8或H16-7.8mcMMAF之結合親和力，其為達到半最大結合所需之H16-7.8或H16-7.8mcMMAF濃度。
H16-7.8及H16-7.8mcMMAF對內源性表現於Ku812細胞表面上之161P2F10B相關蛋白之計算親和力(Kd )分別為0.06 nM及0.19 nM。
為測定H16-7.8及H16-7.8mcMMAF與表現於腎癌細胞表面上之內源性161P2F10B相關蛋白之結合，用10 μg/ml天然H16-7.8、H16-7.8mcMMAF或同型對照人類IgG2對人類UGK-3細胞(來源於患者之透明細胞腎癌)及RXF-393細胞(透明細胞腎癌)進行染色，且藉由FACS加以評估。
圖7(左圖)中之結果顯示，H16-7.8(灰線)對兩種不同腎腫瘤細胞之染色較強，而對照MAb(實心直方圖)則不然。右圖顯示H16-7.8mcMMAF(灰線)對相同腎腫瘤細胞之染色強度相似。(圖7；右圖)。此等結果顯示，H16-7.8與H16-7.8mcMMAF均結合表現於人類癌細胞表面上之天然161P2F10B抗原。產生H16-7.8mcMMAF之天然H16-7.8結合不改變其與表現於人類癌細胞上之天然161P2F10B抗原之細胞表面結合。
實例6 H16-7.8mcMMAF介導之細胞毒性
在經工程改造以表現161P2F10B之KU812細胞中評估H16-7.8mcMMAF介導161P2F10B依賴性細胞毒性之能力。對於此檢定，在第0天將2000個活KU812細胞塗於培養板上一式三份且使之恢復隔夜。第二天，添加1:4連續稀釋的不同批次之H16-7.8mcMMAF或與mcMMAF結合之對照MAb，以產生圖8中所指示之最終濃度。培育該等細胞六(6)天，此時向各孔添加20 μl阿拉馬藍(Alamar blue)。再培育培養板四(4)小時，且在螢光板式讀數器上使用540 nM之激發波長及620 nM之發射波長讀取螢光強度。
圖8中之結果顯示，兩批H16-7.8mcMMAF均有效抑制KU812細胞增殖。測得批次(1)及批次(2)之IC50 分別為0.2 nM及0.1 nM。使未結合KU812細胞之完全人類對照MAb與mcMMAF結合，產生3.9(+/-0.2)之DAR。對照ADC不抑制KU812細胞增殖，進一步證實細胞毒性之特異性。因而，此等結果指示H16-7.8mcMMAF可將細胞毒性藥物選擇性地遞送至161P2F10B表現細胞，從而將其殺死。
實例7 H16-7.8mcMMAF抑制活體內腫瘤生長
161P2F10B在腫瘤組織細胞表面上之顯著表現以及其在正常組織中之限制性表現使得161P2F10B成為抗體療法及經由ADC之類似療法的良好標靶。因而，評估H16-7.8mcMMAF在人類腎癌異種移植小鼠模型中之治療功效。
在小鼠癌症異種移植模型(例如皮下移植及正位移植)中研究抗體藥物結合物對腫瘤生長及轉移形成之功效。
藉由在雄性SCID小鼠之右腹脅注射以1:1稀釋與基質膠(Collaborative Research)混合之5×104 -106 個癌細胞來產生皮下(s.c.)腫瘤。為測試ADC對腫瘤形成之功效，亦即在同一天以腫瘤細胞注射方式開始ADC注射。作為對照，對小鼠注射經純化之人類IgG或PBS；或識別不表現於人類細胞中之無關抗原的經純化之MAb。在初步研究中，未發現對照IgG或PBS在腫瘤生長方面之差異。藉由測徑規量測來測定腫瘤大小，且以長×寬×高計算腫瘤體積。處死皮下腫瘤之直徑大於1.5 cm的小鼠。
藉由向雄性SCID小鼠注射150萬至200萬經皮下植入之細胞，使腎腫瘤在小鼠中生長。監測小鼠之一般健康狀況、身體活動及外表，直至其瀕臨死亡。處死時，可檢查小鼠以確定腫瘤負荷且收集其他器官以評估對遠端部位之轉移。或者，可使用死亡作為終點。接著將小鼠分組進行適當治療，其中經由靜脈內注射投與161P2F10B或對照MAb。
異種移植癌症模型之優勢在於能夠研究新血管生成及血管生成。腫瘤生長部分地取決於新血管發育。雖然毛細系統及發育血液網路源於宿主，但新生血管之起始及架構係由異種移植腫瘤調節(Davidoff等人，Clin Cancer Res .(2001) 7:2870；Solesvik等人，Eur J Cancer Clin Oncol .(1984) 20:1295)。根據此項技術中已知之程序研究抗體及小分子對新血管生成之作用，諸如藉由腫瘤組織及其周圍微環境之IHC分析。
H16-7.8mcMMAF抑制腎癌異種移植物之形成。此等結果指示H16-7.8mcMMAF適用於治療局部及晚期癌症且較佳治療表I中所述之癌症。
161P2F10B ADC：
如標題為「產生161P2F10B單株抗體(MAb)」之實例中所述，產生針對161P2F10B之單株抗體。此外，如標題為「H16-7.8之抗體藥物結合物」之實例中所述，使MAb結合至毒素，形成H16-7.8mcMMAF。藉由FACS及此項技術中已知之其他方法來表徵H16-7.8mcMMAF，以測定其結合161P2F10B之能力。
細胞株及異種移植物：
將RFX-393細胞維持於補充有L-麩醯胺酸及10% FBS之RPMI中。藉由連續增殖，將UG-K3及SKRC-01異種移植物維持於SCID小鼠中。
H16-7.8mcMMAF在SCID小鼠中皮下建立之人類腎癌異種移植物UG-K3中之功效
在此實驗中，藉由連續繼代，將來源於患者之人類腎癌異種移植物UG-K3維持於SCID小鼠中。無菌收集儲備腫瘤，且切成小片。使用Liberase Blendzyme(Roche Applied Science,Indianapolis,IN)將腫瘤片經酶消化成單細胞懸浮液。將1.5×106 個細胞注射至個別SCID小鼠之腹脅部，且使腫瘤在未處理下生長，直至其達到約100 mm3 之體積。將動物隨機分配至以下群組：H16-7.8mcMMAF處理組、H16-7.8對照及5%右旋糖對照。第0天，藉由靜脈內快速注射來給與10 mg/kg H16-7.8mcMMAF及H16-7.8一次。H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之投藥量係基於即將給藥前所獲得之各動物之個別體重。以每隻動物150 μL給與5%右旋糖對照。每3至4天使用測徑規量測法監測腫瘤生長，直至研究結束。腫瘤體積計算為寬2 ×長/2，其中寬為最小尺寸，而長為最大尺寸。當腫瘤達到約1000 mm3 時，人道地將對照組中之動物處以安樂死。再監測H16-7.8mcMMAF處理組中之動物兩週，接著處死。在可獲得兩個對照組之資料的最後一個時間點，使用克魯斯凱-沃利斯檢驗(Kruskal-Wallis test)執行統計分析，α=0.05。
結果顯示，在所有研究劑量及時程下用H16-7.8mcMMAF處理UG-K3腎透明細胞異種移植腫瘤均顯著抑制SCID小鼠中之腫瘤生長。(圖9)。
H16-7.8mcMMAF對所建立之正位UG-K3異種移植物之生長抑制
在此實驗中，使用來源於患者之UG-K3腫瘤異種移植物評估H16-7.8mcMMAF抑制所建立之正位生長之腎腫瘤生長的能力。簡言之，用酶消化UG-K3腫瘤之儲備物，且第0天，將150萬個活細胞以手術方式植入雄性SCID小鼠之腎中。使腫瘤生長7天，此時將動物隨機分至4個不同處理組(n=10隻/組)中。隨機分至A組中之動物接收5 mpk之對照ADC；B組接收3 mg/kg H16-7.8mcMMAF；且C組接收每4天投與之5 mg/kg H16-7.8mcMMAF，總共給藥4次。D組接收10 mg/kg H16-7.8mcMMAF一次。在研究結束時(第41天)，處死動物且在電子天平上稱量右腎及左腎。圖上所繪之腫瘤重量係由自帶腫瘤之右腎的重量減去無腫瘤之對側腎的重量來確定。
結果顯示，在所有研究劑量及時程下用H16-7.8mcMMAF處理UG-K3腎透明細胞異種移植腫瘤均顯著抑制腫瘤生長(圖10)。所有H16-7.8mcMMAF處理組(B、C及D)中之腫瘤重量均不足對照處理組中之腫瘤重量的1%。此等差異具有高統計顯著性(p<0.0001，ANOVA)。
H16-7.8mcMMAF在SCID小鼠中皮下建立之人類腎癌異種移植物RXF-393中之功效
在此實驗中，將人類腎癌細胞RXF-393(0.5×106 個細胞/小鼠)注射至個別小鼠之腹脅部，且使腫瘤在無處理下生長，直至其達到約100 mm3 之體積。接著，將動物隨機分配至以下群組：H16-7.8mcMMAF處理組、H16-7.8處理組及5%右旋糖對照。一週藉由靜脈內快速注射給與10 mg/kgH16-7.8mcMMAF及H16-7.8一次，總共給藥兩次。H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之投藥量係基於即將給藥前所獲得之各動物之個別體重。以每隻動物150 μL給與5%右旋糖對照。每3至4天使用測徑規量測法監測腫瘤生長，直至研究結束。腫瘤體積計算為寬2×長/2，其中寬為最小尺寸，而長為最大尺寸。當腫瘤達到約1000 mm3 時，人道地將對照組中之動物處以安樂死。再監測H16-7.8mcMMAF處理組中之動物兩週，接著處死。
結果顯示，在所有研究劑量及時程(包括單次劑量)下用H16-7.8mcMMAF處理RFX-393人類腎癌異種移植腫瘤均顯著抑制SCID小鼠中之腫瘤生長。在可獲得兩個對照組之資料的最後一個時間點，使用克魯斯凱-沃利斯檢驗執行統計分析，α=0.05。(圖11)。
H16-7.8相較於H16-7.8mcMMAF在SCID小鼠中皮下建立之人類腎癌SKRC-01中之功效研究
在另一實驗中，將人類腎癌細胞SKRC-01(0.8×106 個細胞/小鼠)注射至個別小鼠之腹脅部。使腫瘤在無處理下生長，直至其達到約100 mm3 之體積。第0天，當腫瘤達到100 mm3 時，將動物隨機分配至以下群組：H16-7.8mcMMAF處理組、H16-7.8處理組及5%右旋糖對照。每四天藉由靜脈內快速注射給與4 mg/kg H16-7.8mcMMAF及H16-7.8，總共給藥4次。H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之投藥量係基於即將給藥前所獲得之各動物之個別體重。以每隻動物150 μL給與5%右旋糖對照。每3至4天使用測徑規量測法監測腫瘤生長。腫瘤體積計算為寬2×長/2，其中寬為最小尺寸，而長為最大尺寸。
結果顯示，在所有劑量(包括單次劑量)下ADC H16-7.8mcMMAF均顯著抑制SKRC-01腫瘤形成之生長，而裸MAb H16-7.8則無作用。因而，ADC H16-7.8mcMMAF與裸抗體H16-7.8相比具有顯著更突出之作用。(圖12)。
H16-7.8mcM MAF相較於其他161P2F10B抗體藥物結合物(ADC)在SCID小鼠中皮下建立之UG-K3中之功效研究
在另一實驗中，將人類腎癌細胞UG-K3(1.5×106 個細胞/小鼠)注射至個別小鼠之腹脅部。使腫瘤在無處理下生長，直至其達到約100 mm3 之體積。第0天，當腫瘤達到100 mm3 時，將動物隨機分配至以下群組：H16-7.8mcMMAF、H16-7.8vcMMAE及H16-1.11mcMMAF及H16-1.11vcMMAE、PBS對照、及對照MAb-vcMMAE處理組。第0天，以10 mg/kg給與所有抗體藥物結合物(ADC)一次。各ADC之投藥量係基於即將給藥前所獲得之各動物之個別體重。以每隻動物150 μL投與PBS對照。每3至4天使用測徑規量測法監測腫瘤生長。腫瘤體積計算為寬2 ×長/2，其中寬為最小尺寸，而長為最大尺寸。
結果顯示，ADC H16-7.8vcMMAE及H16-1.11vcMMAE不抑制腫瘤形成生長。此外，H16-7.8mcMMAF與H16-1.11mcMMAF在前三十(30)天期間均顯著抑制UG-K3腫瘤形成之生長。第30天後，H16-7.8mcMMAF與H16-1.11mcMMAF相比具有顯著更突出之作用。(圖13)。
實例8 使用161P2F10B ADC治療及診斷人類癌瘤之人類臨床試驗
161P2F10B ADC係根據本發明使用，其特異性結合至161P2F10B，且用於治療某些腫瘤，較佳為表I中所列之腫瘤。結合此等適應症中之每一者，成功進行兩種臨床方法。
I.)輔助療法：在輔助療法中，用161P2F10B ADC組合化學治療劑或抗贅生物劑及/或輻射療法或其組合來治療患者。根據標準方案，藉由向標準一線及二線療法中添加161P2F10B ADC來治療諸如表I中所列之原發癌標靶。方案設計提出如以下實例所評定之效力，包括但不限於原發性或轉移性病變之腫瘤質量降低、無進展存活時間增加、總體存活率增加、患者健康狀況改善、疾病穩定，以及能夠減少標準化學治療劑及其他生物劑之常用劑量。此等劑量降低藉由降低化學治療劑或生物劑之劑量相關毒性，允許進行額外療法及/或長期治療。在若干輔助臨床試驗中使用161P2F10B ADC與化學治療劑或抗贅生物劑組合。
II.)單一療法：關於在腫瘤單一療法中使用161P2F10B ADC，在無化學治療劑或抗贅生物劑之情況下向患者投與161P2F10B ADC。在一實施例中，臨床上對疾病廣泛轉移的末期癌症患者進行單一療法。方案設計提出如以下實例所評定之效力，包括但不限於原發性或轉移性病變之腫瘤質量降低、無進展存活時間增加、總體存活率增加、患者健康狀況改善、疾病穩定，以及能夠減少標準化學治療劑及其他生物劑之常用劑量。
劑量
可調節給藥方案以提供最佳所要反應。舉例而言，可投與單次劑量；可隨時間投與若干分次劑量；或可根據治療情況之緊急程度所指示按比例降低或增加劑量。尤其宜將非經腸組合物調配成單位劑型，以易於投藥及使劑量均一。如本文中所使用之單位劑型係指適合作為單位劑量用於待治療之哺乳動物個體的物理個別單元；各單元含有經計算將產生所要治療效果之預定量的活性化合物與所需醫藥載劑締合。本發明單位劑型之規格係規定為且直接取決於：(a)抗體之獨特特徵及待實現之特定治療或預防效果；及(b)混配此類用於治療個體敏感性之活性化合物之技術中所固有之限制。
根據本發明組合投與之161P2F10B ADC之治療有效量的一個例示性非限制性範圍為約0.5至約10 mg/kg、約1至約5mg/kg、至少1 mg/kg、至少2 mg/kg、至少3 mg/kg或至少4 mg/kg。其他例示性非限制性範圍為例如約0.5至約5 mg/kg或例如約0.8至約5 mg/kg，或例如約1至約7.5 mg/kg。本發明之高劑量實施例係指大於10 mg/kg之劑量。應注意，劑量值可隨待減輕之病狀的類型及嚴重程度而變化，且可包括單劑量或多劑量。應進一步瞭解，對於任何特定個體而言，特定劑量方案應根據個體需要及投藥或監督組合物投藥之人士的專業判斷而隨時間加以調整，且本文所述之劑量範圍僅為例示性的，而不意欲限制所主張之組合物的範疇或實施。
臨床研發計劃(CDP)
CDP遵循且研發有關輔助療法或單一療法的161P2F10B ADC治療。最初，在非人類個體(例如小鼠、猴等)中使用此項技術中已知之標準方案執行臨床前毒物學研究。在非人類毒物學研究中證實H16-7.8mcMMAF耐受性良好。人類臨床試驗初步顯示安全性且此後以重複劑量證實效力。試驗為比較標準化學療法與標準療法加161P2F10B ADC之開放性標記。應瞭解，關於招募患者可利用之一個非限制性準則為如活組織檢查所測定之其腫瘤中之161P2F10B表現量。
如同基於蛋白質或抗體輸注之任何療法，安全性問題主要關於以下：(i)細胞激素釋放症候群，亦即低血壓、發燒、發抖、寒戰；(ii)對該物質產生免疫原性反應(亦即，患者對抗體療法產生人類抗體，或HAHA反應)；及(iii)對表現161P2F10B之正常細胞之毒性。利用標準測試及跟訪來監測此等安全性問題中之每一者。發現161P2F10B MAb對人類投藥安全。
實例9 H16-7.8 MAb之抗體藥物結合表徵
I)藉由質譜分析進行肽圖分析
進行肽圖分析。此方法係用於證實H16-7.8mcMMAF之身分及區別天然抗體(H16-7.8)。用二硫蘇糖醇(DTT)處理所獲得之H16-7.8mcMMAF及H16-7.8以還原雙硫鍵，接著將所得游離半胱胺酸烷基化。此步驟中使用胍來確保蛋白質完全變性。透析移除胍後，用特異性胞內蛋白酶Lys-C消化樣品。Lys-C裂解離胺酸殘基之C端側上的肽鍵。藉由逆相層析偶合質譜分析來分析所得肽。比較H16-7.8mcMMAF與H16-7.8的逆相滯留時間及所觀察之各峰質荷比。使用WATERS Acquity UPLC偶合WATERS Q-TOFp質譜儀進行LC-MS(液相層析-質譜分析)分析。將經消化之樣品塗覆至YMC C18管柱且用含有三氟乙酸之乙腈梯度溶離。H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之代表性肽圖展示於圖14 中。
圖14 中之所有3個層析圖看似一致，除了星號及箭頭所指示之峰。如圖中可見，與天然抗體相比，結合抗體中星號所指示之峰強度降低。以箭頭標記之峰表示結合抗體肽圖上出現之新峰。特定言之，咸信以星號或箭頭標記之峰分別為預定用於結合之肽及所得結合肽。圖15 展示以星號標記之峰之質譜的一部分。結合期間改變之信號之質量值係由符號「+」指示。具有約970.4(+3電荷狀態)之m/z的此肽鑑別為來源於重鏈鉸鏈區之C225-K250且含有預期結合位點。
為鑑別據信為上圖14中之結合肽的新出現之峰，使用高能量(MSE)資料獲取技術進行LC-MS分析。圖16 展示使用m/z 619.4之H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之肽圖的萃取離子層析圖(XIC)。此離子對應於藥物部分之碎片離子。XIC中在619.4下觀察之峰幾乎與圖14中以箭頭標記之峰一致。此外，在天然抗體之層析圖中未偵測到該等峰。此等觀察表明，XIC中在m/z 619.4下所偵測之峰顯然為藥物結合肽且係由其完整質量值鑑別。結果概述於表V 中。此等結果表明在結合物情況下，主要肽為在重鏈鉸鏈區上結合至2個藥物的肽。此等資料與其他正交分析(諸如DAR分析)所獲得之資料一致。
II)藉由LC-MS進行完整質量分析
脫糖基化H16-7.8mcMMAF之完整質量係藉由電噴霧電離飛行時間(ESI-TOF)質譜分析來測定。此技術提供關於藥物：抗體比(DAR)值之直接資訊。用250 mM磷酸鈉緩衝液(pH 7.5)稀釋測試樣品，接著在37℃下與醣肽酶F一起培育隔夜。將樣品注射至PLRPTM管柱(Varian Technology)上，在90℃下平衡，且用乙腈/水梯度溶離。藉由Acquity UPLC系統偶合WATERS Synapt質譜儀(Waters)分析樣品峰，且藉由MaxEnt1軟體根據原始數據重建質量。脫糖基化H16-7.8mcMMAF之一實例質譜型態展示於圖17 中。主要藥物結合抗體為藥物負載為4之物質。包括H16-7.8mcMMAF中大量未結合抗體之此觀察與藉由其他正交方法(諸如藉由RP-HPLC之DAR、肽圖分析及HIC檢定)所獲得之結果一致。
III)藉由RP-HPLC進行藥物：抗體比(DAR)分析
進行藥物：抗體比(DAR)分析以對各輕鏈及重鏈中之藥物負載之相對量進行定量HPLC測定。使用PLRP-S分析管柱(2.1 mm×50 mm)，用由2.0%甲酸組成之移動相A及由2.0%甲酸加90%乙腈組成之移動相B進行DAR分析。對於樣品製備，藉由DTT完全還原藥物結合抗體，接著基於藥物負載量分離成輕鏈、藥物結合輕鏈、重鏈及藥物結合重鏈。使用0.5 ml/min之流速溶離50 μg樣品，在280 nm下偵測。藥物：抗體比(DAR)之莫耳比係由以下等式定義。
其中DAR -藥物與抗體之莫耳比；n -每個抗體鏈之mcMMAF藥物數目；AUC Light,n 、AUC Heavy,n -分別為具有n 個藥物之抗體輕鏈及抗體重鏈之曲線下面積；AUC Total 、AUC L ight(Heavy) -輕鏈或重鏈之曲線下峰面積。
此方法已使用來自H16-7.8mcMMAF之物質驗證。所評估之參數包括特異性、準確度、可重複性、中間精確度。H16-7.8mcMMAF之代表性DAR型態展示於圖18 中。DAR值為4.0。使用與此方法相同之HPLC條件對樣品進行LC-MS分析以鑑別所觀察之峰。結果概述於表VI 中。已藉由LC-MS正交地證實此方法之定量期間所獲得之DAR結果的峰鑑別。
IV)結合親和力
測試H16-7.8及H16-7.8mcMMAF與表現於KU812細胞(人類慢性骨髓性白血病細胞，ATCC)上之161P2F10B的結合親和力。簡言之，將十二(12)個最終濃度為160 nM至0.004 nM之H16-7.8或H16-7.8mcMMAF之稀釋液與KU812細胞(50,000個細胞/孔)一起在4℃下培育隔夜。在培育結束時，洗滌細胞且在4℃下與抗hIgG-PE偵測抗體一起培育45分鐘。洗滌未結合之偵測抗體後，藉由FACS分析細胞。
將MFI值輸入Graphpad Prisim軟體中，且使用一位點結合(雙曲線)等式Y=Bmax *X/(Kd +X)加以分析，產生H16-7.8及H16-7.8mcMMAF飽和曲線。Bmax 為H16-7.8或H16-7.8mcMMAF與KU812最大結合時的MFI值；Kd 為H16-7.8或H16-7.8mcMMAF之結合親和力，其為達到半最大結合所需之H16-7.8或H16-7.8mcMMAF之濃度。H16-7.8及H16-7.8mcMMAF對表現於KU812細胞表面上之161P2F10B之計算親和力(Kd )分別為0.08 nM及0.25 nM。(n=4)。
V)細胞毒性
各別連續稀釋H16-7.8、H16-7.8mcMMAF及陰性對照ADC，且添加至含有在細胞表面上內源性表現161P2F10B之KU812細胞的96孔板中。培育6天後，向抗體-細胞混合物中添加Alamar Blue試劑。Alamar Blue為細胞生存力指示劑，其使用活細胞之天然還原能力將刃天青(resazurin)轉變成螢光分子試鹵靈(resorufin)。刃天青還原成試鹵靈，產生極明亮之紅色螢光。活細胞不斷將刃天青轉變成試鹵靈，藉此產生生存力及細胞毒性之定量量度。利用使用Synergy 4混合多模微定量板式讀數器(540/35、620/40 nm)以分光光度法獲得之螢光單位來評估H16-7.8mcMMAF之細胞毒性百分比。該檢定之線性範圍為約3.9至1000 ng/ml。在標準曲線中存在9個點：H16-7.8mcMMAF之最高濃度為1000 ng/ml，接著為8次1至2倍連續稀釋及空白(0)。
使用以下公式計算%存活率：
%存活率=(X-空白)/(未經處理-空白)×100
H16-7.8mcMMAF對KU812細胞之特異性細胞毒性活性：IC50 為0.15 nM。
H16-7.8及ADC對照(抗體(非抗161P2F10B抗體)-mcMMAF)對KU812細胞不具有細胞毒性活性。
在本申請案中，參考多個網站資料內容、公開案、專利申請案及專利。(藉由網站之統一資源定位器(Uniform Resource Locator)或URL、在全球資訊網上之位址來參考網站)。此等參考文獻中之每一者之揭示內容均係以全文引用的方式併入本文中。
本發明之範疇不侷限於本文中所揭示之實施例，該等實施例意欲單獨說明本發明之個別態樣，且任何功能等效物均在本發明範疇內。除本文所描述外，根據以上描述及教示，熟習此項技術者將顯而易知對本發明模型及方法之各種修改，且同樣意欲該等修改在本發明之範疇內。可在不背離本發明之真實範疇及精神的情況下實施該等修改或其他實施例。
表
<110>　美商艾澤西公司
<120>　結合至161P2F10B蛋白之抗體藥物結合物(ADC)
<130>　511582006274
<140>　100104156
<141>　2011-02-08
<150>　US 61/302,489
<151>　2010-02-08
<160>　12
<170>　FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>　1
<211>　3858
<212>　DNA
<213>　智人
<220>
<221>　misc_feature
<222>　(1)...(3858)
<223>　161P2F10B變異體2
<220>
<221>　CDS
<222>　(44)..(2671)
<400>　1
<210>　2
<211>　875
<212>　PRT
<213>　智人
<220>
<221>　misc_feature
<222>　(1)...(875)
<223>　161P2F10B變異體2
<400>　2
<210>　3
<211>　1440
<212>　DNA
<213>　智人
<220>
<221>　misc_feature
<222>　(1)...(1440)
<223>　H16-7.8重鏈
<220>
<221>　CDS
<222>　(34)...(1440)
<400>　3
<210>　4
<211>　468
<212>　PRT
<213>　智人
<220>
<221>　misc_feature
<222>　(1)...(468)
<223>　H16-7.8重鏈
<400>　4
<210>　5
<211>　744
<212>　DNA
<213>　智人
<220>
<221>　misc_feature
<222>　(1)...(744)
<223>　H16-7.8輕鏈
<220>
<221>　CDS
<222>　(43)...(744)
<400>　5
<210>　6
<211>　233
<212>　PRT
<213>　智人
<220>
<221>　misc_feature
<222>　(1)...(233)
<223>　H16-7.8輕鏈
<400>　6
<210>　7
<211>　468
<212>　PRT
<213>　智人
<220>
<221>　misc_feature
<222>　(1)...(468)
<223>　H16-7.8重鏈
<400>　7
<210>　8
<211>　233
<212>　PRT
<213>　智人
<220>
<221>　misc_feature
<222>　(1)...(233)
<223>　H16-7.8輕鏈
<400>　8
<210>　9
<211>　7
<212>　PRT
<213>　人工序列
<220>
<223>　合成構築之輕鏈肽
<400>　9
<210>　10
<211>　25
<212>　PRT
<213>　人工序列
<220>
<223>　合成構築之重鏈肽
<400>　10
<210>　11
<211>　369
<212>　DNA
<213>　智人
<220>
<221>　misc_feature
<222>　(1)...(369)
<223>　H16-7.8重鏈可變區
<400>　11
<210>　12
<211>　452
<212>　DNA
<213>　智人
<220>
<221>　misc_feature
<222>　(1)...(452)
<223>　H16-7.8輕鏈可變區
<400>　12
圖1 .　161P2F10B之cDNA(SEQ ID NO：1)及胺基酸序列(SEQ ID NO：2)展示於圖1中。顯示161P2F10B變異體2之3858核苷酸序列。開放閱讀框架自核酸44延伸至2671，包括終止密碼子。
圖2. 161P2F10B抗體之核酸及胺基酸序列。
圖2A. H16-7.8重鏈之cDNA(SEQ ID NO：3)及胺基酸序列(SEQ ID NO：4)。加下劃線者為前導序列，且加雙下劃線者為重鏈可變區。虛下劃線展示人類IgG2恆定區。
圖2B. H16-7.8輕鏈之cDNA(SEQ ID NO：5)及胺基酸序列(SEQ ID NO：6)。加下劃線者為前導序列，且加雙下劃線者為輕鏈可變區。虛下劃線展示人類Ig κ恆定區。
圖3. 161P2F10B抗體之胺基酸序列。
圖3A. H16-7.8重鏈之胺基酸序列(SEQ ID NO：7)。加下劃線者為前導序列，且加雙下劃線者為重鏈可變區。虛下劃線展示人類IgG2恆定區。
圖3B. H16-7.8輕鏈之胺基酸序列(SEQ ID NO：8)。加下劃線者為前導序列，且加雙下劃線者為輕鏈可變區。虛下劃線展示人類Ig κ恆定區。
圖4. H16-7.8抗體與人類生殖系之比對。
圖4A. H16-7.8重鏈可變區(SEQ ID NO：11)與人類生殖系VH4-31/D5-12/JH6之比對。
圖4B. H16-7.8輕鏈可變區(SEQ ID NO：12)與人類生殖系A26/JK1之比對。
圖5. CHO細胞中之H16-7.8重組表現。 將H16-7.8重鏈及輕鏈序列選殖至表現載體中。將載體轉染至CHO細胞中。用來自融合瘤或CHO細胞之H16-7.8將3T3-對照及3T3-161P2F10B細胞染色。藉由流式細胞測量術偵測結合。結果顯示CHO細胞中分泌重組表現之H16-7.8且該H16-7.8特異性結合至細胞表面161P2F10B。
圖6.　H16-7.8及H16-7.8mcMMAF之細胞結合及親和力。 測試H16-7.8及H16-7.8mcMMAF與內源性表現於Ku812細胞上之161P2F10B的結合親和力。簡言之，11個最終濃度為160 nM至0.0001 nM之H16-7.8或H16-7.8mcMMAF稀釋液與Ku812細胞(50,000個細胞/孔)一起在4℃下培育隔夜。在培育結束時，洗滌細胞且在4℃下與抗hIgG-PE偵測抗體一起培育45分鐘。洗滌未結合之偵測抗體後，藉由FACS分析細胞。獲得平均螢光強度(MFI)值(參看表IV)。將MFI值輸入Graphpad Prisim軟體中，且使用一位點結合(雙曲線)等式Y=Bmax *X/(Kd +X)加以分析，產生圖6中所示之H16-7.8或H16-7.8mcMMAF飽和曲線。Bmax 為H16-7.8或H16-7.8mcMMAF與161P2F10B最大結合時的MFI值；Kd 為H16-7.8或H16-7.8mcMMAF之結合親和力，其為達到半最大結合所需之H16-7.8或H16-7.8mcMMAF之濃度。H16-7.8及H16-7.8mcMMAF對內源性表現於Ku812細胞表面上之161P2F10B的計算親和力(Kd )分別為0.06 nM及0.19 nM。
圖7.　H16-7.8及H16-7.8mcMMAF與腎癌細胞之結合。 用10 μg/ml天然H16-7.8、H16-7.8mcMMAF或同型對照人類IgG2對人類UGK-3細胞(來源於患者之透明細胞腎癌)及RXF-393細胞(透明細胞腎癌)進行染色且藉由FACS加以評估。圖7(左圖)中之結果顯示，H16-7.8(灰線)對兩種不同腎腫瘤細胞之染色較強，而對照MAb(實心直方圖)則不然。右圖顯示H16-7.8mcMMAF(灰線)對相同腎腫瘤細胞之染色強度相似。(圖7；右圖)。此等結果顯示，H16-7.8與H16-7.8mcMMAF均結合在人類癌細胞表面上表現之天然161P2F10B抗原。產生H16-7.8mcMMAF之天然H16-7.8結合不改變其與在人類癌細胞上表現之天然161P2F10B抗原之細胞表面結合。
圖8.　H16-7.8mcMMAF對KU812細胞之細胞毒性。 第0天將2000個活KU812細胞塗於培養板上一式三份且使之恢復隔夜。第二天，添加不同批次H16-7.8mcMMAF或與mcMMAF結合之對照MAb的連續1:4稀釋液，得到最終濃度。使細胞培育6天，此時向各孔中添加20 μl阿拉馬藍。再培育培養板4小時，且在螢光板式讀數器上使用540 nM之激發波長及620 nM之發射波長讀取螢光強度。結果顯示，兩批H16-7.8mcMMAF均有效抑制KU812細胞增殖。測得批次(1)及批次(2)之IC50 分別為0.2 nM及0.1 nM。使不結合KU812細胞之完全人類對照MAb與mcMMAF結合，產生3.9(+/-0.2)之DAR。對照ADC(對照mcF)不抑制KU812細胞增殖，進一步顯示細胞毒性之特異性。因而，此等結果指示，H16-7.8mcMMAF可將細胞毒性藥物選擇性地遞送至表現161P2F10B之細胞，從而將其殺死。
圖9.　H16-7.8mcMMAF在SCID小鼠中皮下建立之人類腎癌異種移植物UG-K3中之效力。 在此實驗中，藉由連續繼代，將來源於患者之人類腎癌異種移植物UG-K3維持於SCID小鼠中。無菌收集儲備腫瘤，且切成小片。使用Liberase Blendzyme(Roche Applied Science，Indianapolis，IN)將腫瘤片用酶消化成單細胞懸浮液。將1.5×106 個細胞注射至個別SCID小鼠之腹脅部，且使腫瘤在未處理下生長，直至其達到約100 mm3 之體積。將動物隨機分配至以下群組：經H16-7.8mcMMAF處理之組、H16-7.8對照及5%右旋糖對照。第0天，藉由靜脈內快速注射給與10 mg/kg H16-7.8mcMMAF及H16-7.8一次。H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之投藥量係基於即將給藥前所獲得之各動物之個別體重。以每隻動物150 μL給與5%右旋糖對照。每3至4天使用測徑規量測法監測腫瘤生長，直至研究結束。腫瘤體積計算為寬2 ×長/2，其中寬為最小尺寸，而長為最大尺寸。當腫瘤達到約1000 mm3 時，人道地將對照組中之動物處以安樂死。再監測H16-7.8mcMMAF處理組中之動物兩週，接著處死。在可獲得兩個對照組之資料的最後一個時間點，使用克魯斯凱-沃利斯檢驗執行統計分析，α=0.05。
結果顯示，在所有研究劑量及時程下用H16-7.8mcMMAF處理UG-K3腎透明細胞異種移植腫瘤均顯著抑制SCID小鼠中之腫瘤生長。
圖10.　H16-7.8mcMMAF之不同劑量及療程對所建立之正位腎癌UG-K3異種移植物之強力生長抑制。 使用來源於患者之UG-K3腫瘤異種移植物評估H16-7.8mcMMAF抑制所建立之正位生長之腎腫瘤生長的能力。簡言之，用酶消化UG-K3腫瘤之儲備物，且第0天，將150萬個活細胞以手術方式植入雄性SCID小鼠之腎中。使腫瘤生長7天，此時將動物隨機分至4個不同處理組(n=10隻/組)中。隨機分至A組中之動物接收5 mpk之對照ADC；B組接收3 mg/kg H16-7.8mcMMAF；且C組接收每4天投與5 mg/kg之H16-7.8mcMMAF，總共4次給藥。D組一次接收10 mg/kg H16-7.8mcMMAF。在研究結束時(第41天)，處死動物且在電子天平上稱量右腎及左腎。圖上所繪之腫瘤重量係由帶腫瘤之右腎的重量減去無腫瘤之對側腎的重量來確定。
結果顯示，在所有研究劑量及時程下用H16-7.8mcMMAF處理UG-K3腎透明細胞異種移植腫瘤均顯著抑制腫瘤生長。所有H16-7.8mcMMAF處理組(B、C及D)中之腫瘤重量均小於對照處理組中之腫瘤重量的1%。此等差異具有高統計顯著性(p<0.0001，ANOVA)。
圖11.　H16-7.8mcMMAF在SCID小鼠中皮下建立之人類腎癌異種移植物RXF-393中之效力。 在此實驗中，將人類腎癌細胞RXF-393(0.5×106 個細胞/小鼠)注射至個別小鼠之腹脅部且使腫瘤在未處理下生長，直至其達到約100 mm3 之體積。接著，將動物隨機分配至以下群組：H16-7.8mcMMAF處理組、H16-7.8處理組及5%右旋糖對照。每週藉由靜脈內快速注射投與10 mg/kg H16-7.8mcMMAF及H16-7.8一次，總共兩次給藥。H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之投藥量係基於即將給藥前所獲得之各動物之個別體重。以每隻動物150 μL給與5%右旋糖對照。每3至4天使用測徑規量測法監測腫瘤生長，直至研究結束。腫瘤體積計算為寬2 ×長/2，其中寬為最小尺寸，而長為最大尺寸。當腫瘤達到約1000 mm3 時，人道地將對照組中之動物處以安樂死。再監測H16-7.8mcMMAF處理組中之動物兩週，接著處死。
結果顯示，在所有研究劑量及時程下用H16-7.8mcMMAF處理RFX-393人類腎癌異種移植腫瘤均顯著抑制SCID小鼠中之腫瘤生長。在可獲得兩個對照組之資料的最後一個時間點，使用克魯斯凱-沃利斯檢驗執行統計分析，α=0.05。
圖12.　H16-7.8相較於H16-7.8mcMMAF在SCID小鼠中皮下建立之人類腎癌SKRC-01中之效力研究。 將人類腎癌細胞SKRC-01(0.8×106 個細胞/小鼠)注射至個別小鼠之腹脅部。使腫瘤在未處理下生長，直至其達到約100 mm3 之體積。第0天，當腫瘤達到100 mm3 時，將動物隨機分配至以下群組：H16-7.8mcMMAF處理組、H16-7.8處理組及5%右旋糖對照。每四天藉由靜脈內快速注射投與4 mg/kg H16-7.8mcMMAF及H16-7.8，總共4次給藥。H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之投藥量係基於即將給藥前所獲得之各動物之個別體重。以每隻動物150 μL給與5%右旋糖對照。每3至4天使用測徑規量測法監測腫瘤生長。腫瘤體積計算為寬2 ×長/2，其中寬為最小尺寸，而長為最大尺寸。
結果顯示ADC H16-7.8mcMMAF顯著抑制SKRC-01腫瘤形成之生長，而裸MAb H16-7.8則無作用。因而，ADC H16-7.8mcMMAF與裸抗體H16-7.8相比具有顯著更突出之作用。
圖13. 　H16-7.8mcMMAF相較於其他161P2F10B抗體藥物結合物(ADC)在SCID小鼠中皮下建立之UG-K3中之效力研究。在另一實驗中，將人類腎癌細胞UG-K3(1.5×106 個細胞/小鼠)注射至個別小鼠之腹脅部。使腫瘤在未處理下生長，直至其達到約100 mm3 之體積。第0天，當腫瘤達到100 mm3 時，將動物隨機分配至以下群組：H16-7.8mcMMAF、H16-7.8vcMMAE及H16-1.11mcMMAF及H16-1.11vcMMAE、PBS對照、及對照MAb-vcMMAE處理組。第0天，以10 mg/kg投與所有抗體藥物結合物(ADC)一次。各ADC之投藥量係基於即將給藥前所獲得之各動物之個別體重。以每隻動物150 μ/L投與PBS對照。每3至4天使用測徑規量測法監測腫瘤生長。腫瘤體積計算為寬2 ×長/2，其中寬為最小尺寸，而長為最大尺寸。
結果顯示ADC H16-7.8vcMMAE及H16-1.11vcMMAE不抑制腫瘤形成生長。此外，H16-7.8mcMMAF與H16-1.11mcMMAF二者在前三十(30)天期間均顯著抑制UG-K3腫瘤形成之生長。第三十(30)天後，H16-7.8mcMMAF與H16-1.11mcMMAF相比具有顯著更突出之作用。
圖14.　H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之肽圖。 用二硫蘇糖醇(DTT)處理所獲得之H16-7.8mcMMAF及H16-7.8以還原雙硫鍵，接著將所得游離半胱胺酸烷基化。此步驟中使用胍來確保該蛋白質完全變性。透析移除胍後，用特異性胞內蛋白酶Lys-C消化樣品。Lys-C裂解離胺酸殘基之C末端側上的肽鍵。藉由逆相層析偶合質譜分析來分析所得肽。比較H16-7.8mcMMAF與H16-7.8的逆相滯留時間及所觀察之各峰質荷比。使用WATERS Acquity UPLC偶合WATERS Q-TOFp質譜儀進行LC-MS(液相層析-質譜)分析。將經消化之樣品施加至YMC C18管柱且用含有三氟乙酸之乙腈梯度溶離。結果顯示，與天然抗體相比，結合抗體中星號所指示之峰強度降低。以箭頭標記之峰表示結合抗體肽圖上出現之新峰。特定言之，咸信以星號或箭頭標記之峰分別為預定用於結合之肽及所得結合肽。
圖15.　H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之(*)峰之質譜 。結果顯示圖14中以星號標記之峰之質譜的一部分。結合期間變化之信號之質量值係由符號「+」指示。具有約970.4(+3電荷狀態)之m/z的此肽鑑別為來源於重鏈鉸鏈區之C225-K250且含有預期結合位點。
圖16.　H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之肽圖上之MSE在619.4 m/z下的萃取離子層析圖(XIC) 。為鑑別咸信為上圖14中之結合肽的新出現之峰，使用高能量(MSE)資料獲取技術進行LC-MS分析。此圖展示使用m/z 619.4之H16-7.8mcMMAF及H16-7.8之肽圖的萃取離子層析圖(XIC)。此離子對應於藥物部分之碎片離子。XIC中在619.4下觀測到之峰幾乎與圖14中以箭頭標記之峰一致。此外，在天然抗體之層析圖中未偵測到該等峰。此等觀測表明，XIC中在m/z 619.4下所偵測之峰顯然為藥物結合肽且係由其完整質量值鑑別。結果概述於表V 中。此等結果表明在結合物情況下，主要肽為在重鏈鉸鏈區上結合至2個藥物的肽。此等資料與其他正交分析(諸如DAR分析)所獲得之資料一致。
圖17.　展示脫糖基化H16-7.8mcMMAF ADC之質量型態的實例譜圖。 脫糖基化H16-7.8mcMMAF之全部質量係藉由電噴霧電離飛行時間(ESI-TOF)質譜來測定。用250 mM磷酸鈉緩衝液(pH 7.5)稀釋測試樣品，接著在37℃下與醣肽酶F一起培育隔夜。將樣品注射至PLRPTM管柱(Varian Technology)上，在90℃下平衡，且用乙腈/水梯度溶離。藉由Acquity UPLC系統偶合WATERS Synapt質譜儀(Waters)分析樣品峰，且藉由MaxEnt1軟體根據原始數據重建質量。展示脫糖基化H16-7.8mcMMAF之實例質譜型態。主要藥物結合抗體為藥物負載為4之物質。包括H16-7.8mcMMAF中之大量未結合抗體之此觀測與藉由其他正交方法(諸如藉由RP-HPLC之DAR、肽圖分析及HIC檢定)所獲得之結果一致。
圖18.　H16-7.8mcMMAF之藥物抗體比(DAR)型態。 進行DAR分析以對各輕鏈及重鏈中之藥物負載之相對量進行定量HPLC測定。使用PLRP-S分析管柱(2.1 mm×50 mm)，以由2.0%甲酸組成之移動相A及由2.0%甲酸加90%乙腈組成之移動相B進行DAR分析。展示H16-7.8mcMMAF之代表性DAR型態。DAR值為4.0。使用與此方法相同之HPLC條件對樣品進行LC-MS分析以鑑別所觀測之峰。結果概述於表VI 中。已藉由LC-MS正交地證實此方法之定量期間所獲得之DAR結果的峰鑑別。
(無元件符號說明)

Claims (33)

  1. 一種抗161P2F10B抗體藥物結合物，其包含特異性結合至包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列之161P2F10B蛋白的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含由SEQ ID NO：7之第20至142個殘基組成之VH 區及由SEQ ID NO：8之第20至127個殘基組成之VL 區的胺基酸序列，且其中該抗體結合至單甲基阿瑞他汀F(monomethyl auristatin F，MMAF)。
  2. 如請求項1之抗體藥物結合物，其中該抗原結合片段為Fab、F(ab')2 或Fv片段。
  3. 如請求項1之抗體藥物結合物，其中該抗體為完全人類抗體。
  4. 如請求項1之抗體藥物結合物，其係以重組方式產生。
  5. 一種醫藥組合物，其包含呈人類單位劑型之如請求項1之抗體藥物結合物。
  6. 如請求項5之醫藥組合物，其中該組合物係用於癌症治療。
  7. 如請求項6之醫藥組合物，其中該癌症為腎癌或肝癌。
  8. 一種以如請求項1之抗體藥物結合物於製造醫藥上之用途，供抑制個體之癌細胞生長。
  9. 一種以如請求項1之抗體藥物結合物於製造醫藥上之用途，供治療哺乳動物之腫瘤。
  10. 一種以如請求項1之抗體藥物結合物於製造醫藥上之用途，供降低哺乳動物之腫瘤生長，其中該醫藥係與輻射 組合投與。
  11. 一種以如請求項1之抗體藥物結合物於製造醫藥上之用途，供降低哺乳動物之腫瘤生長，其中該醫藥係與化學治療劑組合投與。
  12. 一種以如請求項1之抗體藥物結合物於製造醫藥上之用途，供降低哺乳動物之腫瘤生長，其中該醫藥係與藥物或生物活性療法組合投與。
  13. 一種以如請求項1之抗體藥物結合物於製造醫藥上之用途，供治療哺乳動物之癌症，其中該醫藥係與化學治療劑組合投與。
  14. 一種抗161P2F10B抗體藥物結合物，其係藉包含將抗體或其抗原結合片段結合至MMAF之步驟之方法獲得，該抗體或其抗原結合片段係由宿主細胞所表現，其包含編碼由SEQ ID NO：7之第20至142個殘基組成之VH 區胺基酸序列之核酸序列，及編碼由SEQ ID NO：8之第20至127個殘基組成之VL 區胺基酸序列之核酸序列，藉此產生該抗體藥物結合物。
  15. 如請求項14之抗體藥物結合物，其中該抗體或其抗原結合片段為抗原結合片段，其為Fab、F(ab')2 或Fv片段。
  16. 如請求項14之抗體藥物結合物，其中該抗體為完全人類抗體。
  17. 一種醫藥組合物，其包含呈人類單位劑型之如請求項14之抗體藥物結合物。
  18. 如請求項17之醫藥組合物，其中該組合物係用於癌症治 療。
  19. 如請求項18之醫藥組合物，其中該癌症為腎癌或肝癌。
  20. 一種抗161P2F10B抗體藥物結合物，其係藉包含以下步驟之方法獲得：(a)培養包含編碼包含VH 區及VL 區之抗體或其抗原結合片段之胺基酸序列的核酸序列之宿主細胞，其中該VH 區包含由SEQ ID NO：7之第20至142個殘基組成，且該VL 區包含由SEQ ID NO：8之第20至127個殘基組成，以使該抗體或其抗原結合片段表現；(b)使步驟(a)中表現的該抗體或其片段結合至MMAF；及(c)分離步驟(b)中與MMAF結合之該抗體或其片段，藉此產生該抗體藥物結合物。
  21. 如請求項20之抗體藥物結合物，其中該抗體或其抗原結合片段為抗原結合片段，其為Fab、F(ab')2 或Fv片段。
  22. 如請求項20之抗體藥物結合物，其中該抗體為完全人類抗體。
  23. 如請求項20之抗體藥物結合物，其中該方法進一步包含於步驟(b)之結合步驟之前純化步驟(a)中表現的該抗體或片段之步驟。
  24. 一種醫藥組合物，其包含呈人類單位劑型之如請求項20之抗體藥物結合物。
  25. 如請求項24之醫藥組合物，其中該組合物係用於癌症治療。
  26. 如請求項25之醫藥組合物，其中該癌症為腎癌或肝癌。
  27. 一種抗161P2F10B抗體藥物結合物，其係藉包含以下步驟之方法獲得：(a)以編碼包含VH 區及VL 區之抗體或其抗原結合片段之胺基酸序列的核酸序列轉染宿主細胞，其中該VH 區由SEQ ID NO：7之第20至142個殘基組成，且該VL 區由SEQ ID NO：8之第20至127個殘基組成；(b)培養該宿主細胞並表現該抗體或其抗原結合片段；(c)將步驟(b)中表現的該抗體或其抗原結合片段結合至MMAF；及(d)分離步驟(c)中與MMAF結合之該抗體或片段，藉此產生該抗體藥物結合物。
  28. 如請求項27之抗體藥物結合物，其中該抗體或其抗原結合片段為抗原結合片段，其為Fab、F(ab')2 或Fv片段。
  29. 如請求項27之抗體藥物結合物，其中該抗體為完全人類抗體。
  30. 如請求項27之抗體藥物結合物，其中該方法進一步包含於步驟(c)之結合步驟之前純化步驟(b)中表現的該抗體或片段之步驟。
  31. 一種醫藥組合物，其包含呈人類單位劑型之如請求項27之抗體藥物結合物。
  32. 如請求項31之醫藥組合物，其中該組合物係用於癌症治療。
  33. 如請求項32之醫藥組合物，其中該癌症為腎癌或肝癌。
TW100104156A 2010-02-08 2011-02-08 結合至１６１ｐ２ｆ１０ｂ蛋白之抗體藥物結合物（ａｄｃ） TWI504410B (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US30248910P 2010-02-08 2010-02-08

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201138818A TW201138818A (en) 2011-11-16
TWI504410B true TWI504410B (zh) 2015-10-21

Family

ID=44355840

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW100104156A TWI504410B (zh) 2010-02-08 2011-02-08 結合至１６１ｐ２ｆ１０ｂ蛋白之抗體藥物結合物（ａｄｃ）

Country Status (15)

Country Link
US (4) US8609092B2 (zh)
EP (2) EP3395361A1 (zh)
JP (3) JP6046494B2 (zh)
KR (1) KR101510413B1 (zh)
CN (2) CN106975082A (zh)
AU (3) AU2011213609B2 (zh)
BR (1) BR112012019780A2 (zh)
CA (1) CA2789230C (zh)
EA (1) EA201201120A1 (zh)
ES (1) ES2668645T3 (zh)
IL (1) IL221205A (zh)
MX (1) MX2012008884A (zh)
TW (1) TWI504410B (zh)
UA (1) UA115517C2 (zh)
WO (1) WO2011097627A1 (zh)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2789230C (en) * 2010-02-08 2019-04-02 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to 161p2f10b proteins
US20130116404A1 (en) 2011-11-08 2013-05-09 Case Western Reserve University Targeted non-invasive imaging probes of egfr expressing cells
CA2866612C (en) 2012-03-08 2018-01-16 Halozyme, Inc. Conditionally active ph-dependent cetuximab variant anti-epidermal growth factor receptor antibodies and method of use thereof
EP2849790B1 (en) 2012-05-15 2019-04-10 Concortis Biosystems, Corp Drug-conjugates, conjugation methods, and uses thereof
KR102355959B1 (ko) * 2012-08-23 2022-01-27 어젠시스 인코포레이티드 158p1d7 단백질에 결합하는 항체 약물 컨쥬게이트(ａｄｃ)
EA201600252A1 (ru) 2013-09-12 2017-05-31 Галозим, Инк. Модифицированные антитела к рецепторам антиэпидермального фактора роста и способы их использования
SG11201600954XA (en) 2013-10-15 2016-03-30 Seattle Genetics Inc Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
CA2934030A1 (en) 2013-10-15 2015-04-23 Sorrento Therapeutics Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
AU2014346792A1 (en) * 2013-11-06 2016-06-02 Abbvie Stemcentrx Llc Novel anti-claudin antibodies and methods of use
US9239324B2 (en) * 2013-12-06 2016-01-19 Gang Chen Antibody-binding protein-drug conjugate and methods of use
CN107849090A (zh) 2015-01-28 2018-03-27 索伦托医疗有限公司 抗体药物偶联物
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
JP2019501131A (ja) 2015-12-04 2019-01-17 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 四級化チューブリシン化合物の複合体
WO2017161206A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Halozyme, Inc. Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use
KR20180134351A (ko) 2016-03-25 2018-12-18 시애틀 지네틱스, 인크. 페길화된 약물-링커 및 그의 중간체의 제조를 위한 공정
WO2018119314A1 (en) * 2016-12-22 2018-06-28 Ardeagen Corporation Anti-ror1 antibody and conjugates thereof
WO2018175994A1 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Seattle Genetics, Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
WO2018192407A1 (zh) 2017-04-19 2018-10-25 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 细胞毒素和偶联物、其用途和制备方法
US12006356B2 (en) 2017-12-15 2024-06-11 Juno Therapeutics, Inc. Anti-CCT5 binding molecules and chimeric antigen receptors comprising the same
CN111295389B (zh) 2017-12-15 2021-10-22 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 生物活性物偶联物及其制备方法和用途
WO2019183633A1 (en) 2018-03-23 2019-09-26 Case Western Reserve Univeristy Psma targeted conjugate compounds and uses thereof
CA3126654A1 (en) 2019-01-15 2020-07-23 Janssen Biotech, Inc. Anti-tnf antibody compositions and methods for the treatment of juvenile idiopathic arthritis
CN116761635A (zh) 2020-11-24 2023-09-15 诺华股份有限公司 Bcl-xl抑制剂抗体药物缀合物及其使用方法
WO2023086833A1 (en) 2021-11-09 2023-05-19 Case Western Reserve University Psma targeted conjugate compounds and uses thereof
TW202408588A (zh) 2022-05-20 2024-03-01 瑞士商諾華公司 抗體-藥物結合物抗腫瘤化合物及其使用方法
WO2023223097A1 (en) 2022-05-20 2023-11-23 Novartis Ag Antibody drug conjugates

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006105488A2 (en) * 2005-03-31 2006-10-05 Agensys, Inc. Antibodies and related molecules that bind to 161p2f10b proteins
US20060233794A1 (en) * 2003-02-20 2006-10-19 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders

Family Cites Families (90)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US3939350A (en) 1974-04-29 1976-02-17 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4277437A (en) 1978-04-05 1981-07-07 Syva Company Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
US4486414A (en) 1983-03-21 1984-12-04 Arizona Board Of Reagents Dolastatins A and B cell growth inhibitory substances
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4970198A (en) 1985-10-17 1990-11-13 American Cyanamid Company Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
US5001225A (en) 1986-12-08 1991-03-19 Georgetown University Monoclonal antibodies to a pan-malarial antigen
US5079233A (en) 1987-01-30 1992-01-07 American Cyanamid Company N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US4816444A (en) 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
IL106992A (en) 1988-02-11 1994-06-24 Bristol Myers Squibb Co Noble hydrazonic history of anthracycline and methods for their preparation
US5076973A (en) 1988-10-24 1991-12-31 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 3
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US4978744A (en) 1989-01-27 1990-12-18 Arizona Board Of Regents Synthesis of dolastatin 10
US4879278A (en) 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
US4986988A (en) 1989-05-18 1991-01-22 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptides dolastatin 13 and dehydrodolastatin 13
US5138036A (en) 1989-11-13 1992-08-11 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Isolation and structural elucidation of the cytostatic cyclodepsipeptide dolastatin 14
US6657103B1 (en) 1990-01-12 2003-12-02 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
DE69133476T2 (de) 1990-08-29 2006-01-05 GenPharm International, Inc., Palo Alto Transgene Mäuse fähig zur Produktion heterologer Antikörper
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
AU4116793A (en) 1992-04-24 1993-11-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US6034065A (en) 1992-12-03 2000-03-07 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide phenethylamides of dolastatin 10
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5410024A (en) 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5504191A (en) 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5521284A (en) 1994-08-01 1996-05-28 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides and esters
US5530097A (en) 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides
US5554725A (en) 1994-09-14 1996-09-10 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Synthesis of dolastatin 15
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
PT871490E (pt) 1995-12-22 2003-07-31 Bristol Myers Squibb Co Ligantes de hidrazona ramificada
US6130237A (en) 1996-09-12 2000-10-10 Cancer Research Campaign Technology Limited Condensed N-aclyindoles as antitumor agents
JP2001502537A (ja) 1996-10-15 2001-02-27 ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・カリフォルニア ヒト前立腺ガンの進行の動物モデル
JP2002513402A (ja) 1997-02-25 2002-05-08 アリゾナ ボード オブ リーゼンツ 細胞増殖抑制性の鎖状および環状デプシペプチドであるドラスタチン１６、ドラスタチン１７およびドラスタチン１８の単離と構造決定
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US6323321B1 (en) 1997-03-05 2001-11-27 Eberhard-Karls-Universitat Tubingen Universitatsklinikum Antibody 97A6
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
JP2002535956A (ja) 1998-05-15 2002-10-29 クォーク バイオテック インコーポレイテッド 物理的ストレスにより誘発される遺伝子、その発現産物およびその使用方法
AU1208100A (en) 1998-10-15 2000-05-01 Genetics Institute Inc. Secreted expressed sequence tags (sests)
US20020137139A1 (en) 1999-01-12 2002-09-26 Byatt John C Nucleic acid and other molecules associated with lactation and muscle and fat deposition
EP1179541B1 (en) 1999-04-28 2004-06-16 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for cancer treatment by selectively inhibiting VEGF
EP1179179B1 (de) 1999-05-19 2004-10-20 Eberhard-Karls-Universität Tübingen Universitätsklinikum Verwendung eines antikörpers zur detektion von basophilen und/oder mastzellen
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
GB2373500B (en) 2000-02-04 2004-12-15 Aeomica Inc Methods and apparatus for predicting, confirming, and displaying functional information derived from genomic sequence
WO2001060860A2 (en) 2000-02-17 2001-08-23 Millennium Predictive Medicine, Inc. Genes differentially expressed in human prostate cancer and their use
US6436703B1 (en) 2000-03-31 2002-08-20 Hyseq, Inc. Nucleic acids and polypeptides
US7041870B2 (en) 2000-11-30 2006-05-09 Medarex, Inc. Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
US20060088823A1 (en) 2001-03-29 2006-04-27 Brian Haab Microarray gene expression profiling in clear cell renal cell carcinoma : prognosis and drug target identification
US20030191073A1 (en) 2001-11-07 2003-10-09 Challita-Eid Pia M. Nucleic acid and corresponding protein entitled 161P2F10B useful in treatment and detection of cancer
EP2280030A3 (en) 2001-04-10 2011-06-15 Agensys, Inc. Nucleic acids and corresponding proteins useful in the detection and treatment of various cancers
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US20030083263A1 (en) 2001-04-30 2003-05-01 Svetlana Doronina Pentapeptide compounds and uses related thereto
WO2003004514A1 (en) 2001-07-06 2003-01-16 Origene Technologies, Inc Small intestine and colon genes
US20070015145A1 (en) 2001-08-14 2007-01-18 Clifford Woolf Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
EP1537140B1 (en) * 2001-11-07 2013-01-02 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled 161p2f10b useful in treatment and detection of cancer
DE10160921B4 (de) 2001-12-06 2005-09-22 Eberhard-Karls-Universität Tübingen Universitätsklinikum Verfahren zum Nachweis von Allergien und Verwendung eines Antikörpers zum Nachweis von Allergien
DK1545613T3 (da) 2002-07-31 2011-11-14 Seattle Genetics Inc Auristatinkonjugater og deres anvendelse til behandling af cancer, en autoimmun sygdom eller en infektiøs sygdom
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
NZ583292A (en) 2003-11-06 2012-03-30 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
AU2005225227A1 (en) 2004-03-26 2005-10-06 Pfizer Products Inc. Uses of anti-CTLA-4 antibodies
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
BRPI0516284A (pt) 2004-09-23 2008-09-02 Genentech Inc anticorpo construìdo com cisteìna, método de selecionar anticorpos, compostos conjugados de droga-anticorpo, composição farmacêutica, método para matar ou inibir a proliferação de células de tumor, métodos de inibir a proliferação celular e o crescimento de células de tumor, artigo manufaturado e método para produzir um composto
CN101500590A (zh) * 2005-03-31 2009-08-05 阿根西斯公司 与161p2f10b蛋白结合的抗体和相关分子
US8350009B2 (en) 2005-03-31 2013-01-08 Agensys, Inc. Antibodies and related molecules that bind to 161P2F10B proteins
PT1912677E (pt) * 2005-06-20 2013-12-23 Psma Dev Company L L C Conjugados de anticorpos contra psma-fármaco
JP2009506790A (ja) * 2005-09-07 2009-02-19 メディミューン，エルエルシー 毒素とコンジュゲートしたｅｐｈ受容体抗体
US7834154B2 (en) 2007-02-09 2010-11-16 Genentech, Inc. Anti-ROBO4 antibodies and uses therefor
AU2008310908B2 (en) * 2007-10-12 2014-01-09 Seagen Inc. Combination therapy with antibody-drug conjugates
EP2211904B1 (en) * 2007-10-19 2016-08-17 Seattle Genetics, Inc. Cd19 binding agents and uses thereof
CA2789230C (en) * 2010-02-08 2019-04-02 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to 161p2f10b proteins

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060233794A1 (en) * 2003-02-20 2006-10-19 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd70 antibody-drug conjugates and their use for the treatment of cancer and immune disorders
WO2006105488A2 (en) * 2005-03-31 2006-10-05 Agensys, Inc. Antibodies and related molecules that bind to 161p2f10b proteins

Also Published As

Publication number Publication date
JP6529478B2 (ja) 2019-06-12
EP2533804A4 (en) 2013-11-13
CN102844045A (zh) 2012-12-26
IL221205A0 (en) 2012-10-31
US9308278B2 (en) 2016-04-12
WO2011097627A1 (en) 2011-08-11
JP2013518912A (ja) 2013-05-23
IL221205A (en) 2017-06-29
AU2018271337A1 (en) 2018-12-20
US20140194601A1 (en) 2014-07-10
EP2533804A1 (en) 2012-12-19
US20110217321A1 (en) 2011-09-08
KR101510413B1 (ko) 2015-04-08
AU2011213609A2 (en) 2012-09-06
JP2017095459A (ja) 2017-06-01
CA2789230C (en) 2019-04-02
TW201138818A (en) 2011-11-16
US20190328898A1 (en) 2019-10-31
EA201201120A1 (ru) 2013-03-29
KR20120125643A (ko) 2012-11-16
BR112012019780A2 (pt) 2020-09-01
US8609092B2 (en) 2013-12-17
AU2011213609A1 (en) 2012-08-16
AU2011213609B2 (en) 2016-11-03
ES2668645T3 (es) 2018-05-21
EP2533804B1 (en) 2018-04-11
UA115517C2 (uk) 2017-11-27
CN106975082A (zh) 2017-07-25
AU2017200600B2 (en) 2018-11-08
EP3395361A1 (en) 2018-10-31
AU2017200600A1 (en) 2017-02-16
CA2789230A1 (en) 2011-08-11
MX2012008884A (es) 2012-08-31
JP6046494B2 (ja) 2016-12-14
US20160256563A1 (en) 2016-09-08
JP2019131616A (ja) 2019-08-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230346968A1 (en) Antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins
TWI504410B (zh) 結合至１６１ｐ２ｆ１０ｂ蛋白之抗體藥物結合物（ａｄｃ）
US8309093B2 (en) Antibody drug conjugates (ADC) that bind to 24P4C12 proteins
TWI606063B (zh) 結合至１５８ｐ１ｄ７蛋白之抗體藥物結合物（ａｄｃ）
TW201536803A (zh) 結合至ｃｄ３７蛋白質之抗體藥物結合物（ａｄｃ）