WO2018192407A1 - 细胞毒素和偶联物、其用途和制备方法 - Google Patents

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薛彤彤
宋帅
汪静
田强
肖亮
邓汉文
刘立平
唐祖建
曾宏
龙蓉蓉
宋宏梅
张强
钟国庆
刘登念
黄海涛
胡瑞斌
王利春
王晶翼
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Definitions

  • the invention belongs to the field of medical technology, relates to cytotoxins, linkers and conjugates, a method for preparing the cytotoxins and conjugates, and the use of the cytotoxins and conjugates for preventing and/or treating tumor diseases .
  • Chemotherapy was once the standard treatment for cancer, but high-killing small molecule drugs can kill normal cells and cause serious side effects.
  • Targeted anti-tumor drugs have become a hot spot in the field of cancer research due to their simultaneous targeting and anti-tumor activity.
  • biomacromolecules such as therapeutic antibodies or antibody fragments
  • biomacromolecules although highly targeted, have limited therapeutic effects on solid tumors; while cytotoxic drugs have a high killing effect on cancer cells, but lack of targeting, often accidentally injuring normal cells, causing serious toxicity. side effect.
  • ADC antibody-drug conjugates
  • the ADC combines the targeting of antibodies with the cytotoxicity of small molecule cytotoxic drugs to become a "bio-missile".
  • the antibody directs the ADC to bind to the target cell, which is then internalized by the cell, releasing the drug, and treating the disease. Because the antibody has specificity and targeting to tumor cell related targets, its application value is not only reflected in the treatment, but also becomes an ideal carrier for drug targeted delivery, which reduces the side effects of the drug.
  • an ADC consists of an antibody, a cytotoxic drug, and a linker.
  • Cytotoxic drugs are covalently coupled to the mAb via a linker; antibodies (eg, monoclonal antibodies) specifically recognize specific targets on the surface of the tumor cell, thereby directing the ADC to the surface of the cancer cell and allowing the ADC to pass through the cell
  • the swallowing effect enters the cancer cells; then, the cytotoxic drugs can be released intracellularly, thereby achieving the specific effect of killing the cancer cells without damaging the normal tissue cells.
  • Some ADCs specifically release toxins in the tumor microenvironment, and toxins enter the cells in various ways to exert a killing effect.
  • ADCs already on the market: Mylotarg (Gemtuzumab Ozogamicin, gemtuzumab oxazoic acid), Adcetris (Brentuximab Vedotin, CD30 mAb-MMAE), Kadcyla (Trastuzumab Emtansine, trastuzumab- ⁇ Tertibulin alkaloids) and Besponsa (Inotuzumab ozogamicin, CD22 mAb-caccimycin). Due to its high toxic side effects and limited efficacy, Pfizer has taken the initiative to withdraw from the market.
  • the term "conjugate” refers to a substance obtained by linking a small molecule drug to a targeting moiety.
  • the small molecule drug is linked to the targeting moiety via a linker.
  • the linker can be cleaved in a specific environment (eg, an intracellular low pH environment, a slightly acidic tumor microenvironment) or a specific action (eg, the action of a lysosomal protease) to separate the small molecule drug from the targeting moiety .
  • the linker comprises a cleavable or non-cleavable unit, such as a peptide or a disulfide bond.
  • the small molecule drug is linked directly to the targeting moiety by a covalent bond that is capable of cleavage under a particular environment or action, thereby separating the small molecule drug from the targeting moiety.
  • the small molecule drug in the conjugate is a cytotoxic agent.
  • cytotoxic agent refers to a substance which inhibits or prevents the function of a cell and/or causes cell death or destruction, for example, a radioisotope such as At 211 , I 131 , I 125 , Y 90 , Re 186 , Re 188 .
  • radioactive isotopes of Sm 153 , Bi 212 , P 32 , Pb 212 and Lu radioactive isotopes of Sm 153 , Bi 212 , P 32 , Pb 212 and Lu
  • chemotherapeutic agents such as methotrexate, adriamycin, vincaalkaloids, vincristine ( Vincristine), vinblastine, etoposide, doxorubicin, melphalan, mitomycin C, chlorambucil, Daunorubicin or other intercalating agents
  • antibiotics and toxins, such as small molecule toxins or enzymatically active toxins of bacterial, fungal, plant or animal origin, including fragments thereof and/or Or a variant; a growth inhibitor; a drug moiety; and a compound of the formula (I) of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystal
  • a "small molecule” is defined herein as a small molecule drug having cytotoxic activity.
  • linker refers to a fragment that links a small molecule drug to a targeting moiety.
  • targeting moiety refers to a moiety in a conjugate that is capable of specifically binding to a target (or a portion of a target) of a cell surface.
  • the conjugate can be delivered to a particular cell population by interaction of the targeting moiety with the target.
  • the conjugate when the targeting moiety in the conjugate is an antibody, the conjugate may be referred to as a "drug-antibody conjugate.”
  • drug-antibody conjugate and “immunoconjugate” are used interchangeably.
  • antibody is used in its broadest sense and includes intact monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, and multispecific antibodies (eg, bispecific antibodies) formed from at least two intact antibodies, as long as they have The biological activity required.
  • antibody and “immunoglobulin” are used interchangeably.
  • the term "monoclonal antibody” refers to an antibody from a population of substantially homogeneous antibodies, ie, the individual antibodies comprising the cluster are identical except for a small number of natural mutations that may be present. Monoclonal antibodies have high specificity for one determinant (epitope) of the antigen, while polyclonal antibodies relative thereto contain different antibodies for different determinants (epitopes). In addition to specificity, monoclonal antibodies have the advantage of being free from contamination by other antibodies during synthesis.
  • the modifier "monoclonal” as used herein means that the antibody is characterized by a substantially homogeneous population of antibodies and is not to be construed as being prepared by a particular method.
  • the monoclonal antibody also specifically includes a chimeric antibody, ie, a portion of the heavy and/or light chain is identical or homologous to a certain, certain or a subset of antibodies, and the remainder is One, another or another subclass of antibodies are identical or homologous as long as they have the desired biological activity (see, for example, US 4,816,567; and Morrison et al., 1984, PNAS, 81:6851-6855).
  • Chimeric antibodies useful in the present invention include primatized antibodies comprising variable region antigen binding sequences from human non-human primates (e.g., ancient monkeys, orangutans, etc.) and human constant region sequences.
  • antibody fragment refers to a portion of an antibody, preferably an antigen binding or variable region.
  • antibody fragments include Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb and complementarity determining region fragments, diabodies, linear antibodies and single chain antibody molecules.
  • bispecific antibody is also referred to as "bifunctional antibody conjugate” and refers to a conjugate formed by a first antibody (fragment) and a second antibody (fragment) by a coupling arm, the conjugate The activity of the respective antibodies is retained, so they are bifunctional and bispecific.
  • multispecific antibody includes, for example, trispecific antibodies and tetraspecific antibodies, the former being antibodies having three different antigen binding specificities and the latter being antibodies having four different antigen binding specificities.
  • the term "intact antibody” refers to an antibody comprising an antigen binding variable region and a light chain constant region (CL), a heavy chain constant region (CH1, CH2, and CH3).
  • the constant region can be a native sequence (eg, a human native constant region sequence) or an amino acid sequence variant thereof.
  • An intact antibody is preferably an intact antibody having one or more effector functions.
  • the term "Probody” is a modified antibody comprising an antibody or an antibody fragment that specifically binds to its target and is capable of coupling to a masking group, wherein the masking group refers to an antibody or antibody fragment thereof
  • the cleavage constant of the binding ability of the target is at least 100-fold or 1000-fold, or 10,000-fold greater than the cleavage constant of the binding ability of the antibody or antibody fragment without the coupling masking group to its target.
  • a "humanized" form of a non-human (eg, murine) antibody refers to a chimeric antibody comprising a minimal amount of non-human immunoglobulin sequences.
  • Most humanized antibodies are human receptors.
  • the hypervariable region residues of immunoglobulins are replaced by non-humans (eg, mice, rats, rabbits, or non-human primates) with the desired specificity, affinity, and function. Hypervariable region residues (donor antibodies).
  • the framework region (FR) residues of the human immunoglobulin are also replaced with non-human residues.
  • the humanized antibody may also comprise residues that are not found in the recipient antibody or in the donor antibody. These modifications are intended to further optimize the performance of the antibody.
  • Humanized antibodies generally comprise at least one, usually two variable regions, wherein all or nearly all of the hypervanable loops correspond to non-human immunoglobulins, while FR is completely or almost entirely human immunoglobulin.
  • a humanized antibody can also comprise at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc, typically a human immunoglobulin Fc).
  • Fc immunoglobulin constant region
  • Intact antibodies can be divided into different "classes” based on the amino acid sequence of the heavy chain constant region.
  • the main five classes are IgA, IgD, IgE, IgG and IgM, several of which can also be divided into different "subclasses” (isotypes), such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 and IgA2.
  • the heavy chain constant regions of different classes of antibodies are called ⁇ , ⁇ , ⁇ , ⁇ , and ⁇ , respectively.
  • Subunit structures and three-dimensional configurations of different classes of immunoglobulins are well known in the art.
  • the amino acid substitution in the antibody is substituted by the L-amino acid in most cases, it is not limited thereto.
  • one or more D-amino acids can be included in the antibody peptide chain. It is believed that peptides comprising D-amino acids are more stable in the oral, intestinal or plasma than peptides comprising only L-amino acids and are not readily degradable.
  • the monoclonal antibodies used in the present invention can be produced by a number of methods.
  • monoclonal antibodies for use in the present invention can be obtained by hybridoma methods using a variety of species including cells of mice, hamsters, rats, and humans (see, for example, Kohler et al., 1975, Nature, 256:495).
  • Alternatively by recombinant DNA techniques see, for example, US 4,816,567), or isolated from phage antibody libraries (see, for example, Clackson et al, 1991, Nature, 352: 624-628; and Marks et al, 1991, Journal of Molecular Biology , 222: 581-597).
  • Monoclonal antibodies useful in the present invention include, but are not limited to, monoclonal antibodies against Her 2 such as trastuzumab, Pertuzumab, or monoclonal antibodies against Trop-2, such as Sacituzumab (That is, Isactuzumab or hRS7 antibody,).
  • the targeting moiety is trastuzumab or pertuzumab.
  • Trastuzumab is a monoclonal antibody against Her 2 whose amino acid sequence is known to those skilled in the art, the schematic sequence of which can be seen, for example, CN103319599, the last Lys is easily deleted but does not affect biological activity, see Dick, LW, et al, Biotechnol. Bioeng., 100: 1132-1143.
  • Exemplary heavy and light chain sequences for trastuzumab can be found, for example, in SED ID NO: 1 and SED ID NO: 2.
  • the heavy chain sequence and the light chain sequence of trastuzumab they are described using the sequences shown by SED ID NO: 1 and SED ID NO: 2, respectively.
  • Exemplary heavy chain and light chain sequences of pertuzumab can be found in SEQ ID No. 16 and SEQ ID No. 15 of US7560111.
  • the targeting moiety anti-Trop-2 antibody is RS7 (i.e., Sacituzumab of the present invention) as described in U.S. Patent No. 7,517,964; and hRS7 (i.e., Sacituzumab of the present invention) as described in US 2012/0237518.
  • Anti-Trop-2 antibodies useful in the present invention can also be screened by methods for designing, constructing, and constructing antibody libraries displaying antibodies, as disclosed in CN103476941A, or by Sorrento Medical Corporation (Sorrento Therapeutics, Inc.). The library was obtained by screening.
  • ErbB2 and Her2 are used interchangeably, both of which represent the human HER2 protein of the native sequence (Genebank accession number: X03363, see, for example, Semba et al., 1985, PNAS, 82: 6497-6501; and Yamamoto et al. , 1986, Nature, 319: 230-234) and functional derivatives thereof, such as amino acid sequence variants.
  • erbB2 represents the gene encoding human Her2
  • neu represents the gene encoding rat pl85neu.
  • the compounds or conjugates of the invention are capable of inhibiting or killing cells expressing the ErbB2 receptor, such as breast cancer cells, ovarian cancer cells, gastric cancer cells, endometrial cancer cells, salivary gland cancer cells, lung cancer cells, Renal cancer cells, colon cancer cells, thyroid cancer cells, pancreatic cancer cells, bladder cancer cells or liver cancer cells.
  • cells expressing the ErbB2 receptor such as breast cancer cells, ovarian cancer cells, gastric cancer cells, endometrial cancer cells, salivary gland cancer cells, lung cancer cells, Renal cancer cells, colon cancer cells, thyroid cancer cells, pancreatic cancer cells, bladder cancer cells or liver cancer cells.
  • Trop-2 or TROP2 refers to human trophoblast cell surface antigens 2, also known as TACSTD2, M1S1, GA733-1, EGP-1, which are composed of many human tumors.
  • Cell surface receptors expressed by cells such as breast cancer, colorectal cancer, lung cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, prostate cancer, cervical cancer.
  • the compounds or conjugates of the invention are capable of inhibiting or killing cells expressing the TROP2 receptor, such as breast cancer, colorectal cancer, lung cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, prostate cancer, cervical cancer.
  • C 1-6 alkyl means a straight or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, and includes, for example, "C 1-4 alkyl", "C 1-3 alkyl”. Etc. Specific examples include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, 2-methyl Butyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, isohexyl, 3-methylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 3,3-dimethylbutyl Base, 2,2-dimethylbutyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl Base, 2-e
  • C 2-6 alkenyl refers to a straight-chain, branched or cyclic alkenyl group containing at least one double bond and having 2 to 6 carbon atoms, including, for example, "C 2-4 alkenyl”. "Wait.
  • Examples thereof include, but are not limited to, vinyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 1,3-butadienyl, 1-pentenyl, 2-pentyl Alkenyl, 3-pentenyl, 1,3-pentadienyl, 1,4-pentadienyl, 1-hexenyl, 2-hexenyl, 3-hexenyl, 1,4-hexyl Dienyl, cyclopentenyl, 1,3-cyclopentadienyl, cyclohexenyl, 1,4-cyclohexadienyl and the like.
  • C 2-6 alkynyl refers to a straight or branched alkynyl group containing at least one triple bond and having 2 to 6 carbon atoms, including, for example, "C 2-4 alkynyl” and the like. Examples thereof include, but are not limited to, ethynyl, propynyl, 2-butynyl, 2-pentynyl, 3-pentynyl, 4-methyl-2-pentynyl, 2-hexynyl, 3 - hexynyl, 5-methyl-2-hexynyl and the like.
  • halogen includes fluoro, chloro, bromo, iodo.
  • 3-8 membered cycloalkyl or “C 3-8 cycloalkyl” refers to a saturated cyclic alkyl group containing from 3 to 8 carbon atoms, including, for example, “3-6 membered cycloalkyl”", 4-6 membered cycloalkyl", “5-7 membered cycloalkyl” or “5-6 membered cycloalkyl” and the like. Specific examples include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutane, cyclopentyl, cyclohexane, cycloheptyl, cyclooctyl, and the like.
  • the term "3-7 membered heteroheterocyclyl” refers to a cyclic group containing from 3 to 7 ring atoms, at least one of which is a hetero atom such as a nitrogen atom, an oxygen atom or a sulfur atom.
  • a ring atom eg, a carbon atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom
  • the "3-7 membered heterocyclic group” includes, for example, “3-7 membered nitrogen-containing heterocyclic group", “3-7 membered oxygen-containing heterocyclic group", "3-6 membered heterocyclic group", and "3-6 member”.
  • Oxygen-containing heterocyclic group including but not limited to oxiranyl, oxocyclobutane, pyrrolidinyl, tetrahydrofuranyl, piperidinyl, piperazinyl, tetrahydropyranyl, homopiperazine Base.
  • the term "6-12 membered spirocyclic group” means a cyclic structure having 6 to 12 ring carbon atoms formed by two or more cyclic structures sharing one carbon atom with each other.
  • the carbon atoms in the cyclic structure can be replaced by oxo.
  • the "6-12 membered spiro group” includes, for example, “6-11 membered spiro group”, “6-10 membered spiro group”, “7-10 membered spiro group”, and “7-9 membered spiro group”", 7-8 yuan spiro ring base”, “9-10 yuan spiro ring base”, “3-10 yuan spiro ring base” and so on. Specific examples include, but are not limited to: Wait.
  • 6-12 membered bridged ring group refers to a ring of 6 to 12 ring carbon atoms formed by two or more ring structures sharing two non-adjacent carbon atoms with each other. structure.
  • the carbon atoms in the cyclic structure can be replaced by oxo.
  • "6-12 Yuan Bridged Ring Group” includes, for example, “6-11 Yuan Bridged Ring Group”, “5-10 Yuan Bridged Ring Group”, “7-10 Yuan Bridged Ring Group”, “7-9 Yuan Bridged Ring Group” , "7-8 yuan bridge ring base”, “9-10 yuan bridge ring base”, “3-10 yuan bridge ring base” and so on. Specific examples include, but are not limited to: Wait.
  • 6-12 membered fused ring group refers to a cyclic structure having 6 to 12 ring carbon atoms formed by two or more ring structures sharing two adjacent atoms with each other. , including “6-11 membered fused ring group”, “6-10 membered fused ring group”, “6-8 membered fused ring group”, “10-12 membered fused ring group”, “7-10 membered fused ring group””. Examples include, but are not limited to: Wait.
  • the term "6-12 membered spiroheterocyclyl” refers to a ring atom formed by the sharing of one ring atom with two or more cyclic structures, wherein at least one of the ring atoms is A cyclic structure of a hetero atom such as a nitrogen atom, an oxygen atom or a sulfur atom.
  • a ring atom eg, a carbon atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom
  • oxo e.g, a carbon atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom
  • the "6-12 membered spiroheterocyclyl” includes, for example, “6-11 membered spiroheterocyclyl", “5-10 membered spiroheterocyclyl”, “7-11 membered spiroheterocyclyl”, and “7-10"Spiroheterocyclyl”,”7-9 membered spiroheterocyclyl", “7-8 membered spiroheterocyclyl”, “9-10 membered spiroheterocyclyl", “3-10 membered spiroheterocyclyl”, etc. . Specific examples include, but are not limited to: Wait.
  • the term "6-12 membered bridged heterocyclyl” refers to a group of 6 to 12 ring atoms formed by two or more ring structures sharing two non-adjacent ring atoms with each other (wherein The ring structure in which at least one ring atom is a hetero atom such as a nitrogen atom, an oxygen atom or a sulfur atom.
  • a ring atom eg, a carbon atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom
  • oxo e.g, a carbon atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom
  • the "6-12 membered bridged heterocyclic group” includes, for example, "6-11 membered bridged heterocyclic group", “6-9 membered bridged heterocyclic group”, “6-10 membered bridged heterocyclic group”, and “7-10 member” Bridged heterocyclic group”, “7-9 membered bridged heterocyclic group”, “7-8 membered bridged heterocyclic group”, “8-membered bridged heterocyclic group”, “9-10 membered bridged heterocyclic group", "3 -10-membered bridge heterocyclic group” and the like. Specific examples include, but are not limited to: Wait.
  • the term "6-12 membered fused heterocyclyl” refers to a group of 6 to 12 ring atoms formed by two or more ring structures sharing two adjacent atoms with each other (at least one of which The ring atom is a cyclic structure of a hetero atom such as a nitrogen atom, an oxygen atom or a sulfur atom.
  • a ring atom eg, a carbon atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom
  • oxo e.g, a carbon atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom
  • the "6-12 membered fused heterocyclic group” includes, for example, "6-11 membered fused heterocyclic group", “5-10 membered fused heterocyclic group”, “7-10 membered fused heterocyclic group”, and "3-10 member”. "Heteroheterocyclic group”, “3-10 membered nitrogen-containing fused heterocyclic group”, “9-10 membered fused heterocyclic group”, “9-10 membered nitrogen-containing fused heterocyclic group”, "6-12 yuan oxygenated” A fused heterocyclic group” and the like.
  • Specific examples include, but are not limited to, tetrahydroimidazo[4,5-c]pyridyl, 3,4-dihydroquinazolinyl, 1,2-dihydroquinoxalinyl, benzo[d][1 , 3]dioxolyl, 1,3-dihydroisobenzofuranyl, 4H-1,3-benzoxazinyl, 4,6-dihydro-1H-furo[3,4 -d]imidazolyl, 3a,4,6,6a-tetrahydro-1H-furo[3,4-d]imidazolyl, 4,6-dihydro-1H-thieno[3,4-d]imidazole , 4,6-dihydro-1H-pyrrolo[3,4-d]imidazolyl, benzimidazolylalkyl, octahydro-benzo[d]imidazolyl, decahydroquinolyl, hexahydr
  • aryl refers to a monocyclic or polycyclic hydrocarbon group having an aromatic character, such as a 6-20 membered aryl group, a 6-10 membered aryl group, a 5-8 membered aryl group, and the like. Specific examples include, but are not limited to, phenyl, naphthyl, anthracenyl, phenanthryl, and the like.
  • the "6-20 membered aryl group” means an aryl group having 6 to 20 ring atoms.
  • heteroaryl refers to a cyclic group having an aromatic character wherein at least one of the ring atoms is a hetero atom such as a nitrogen atom, an oxygen atom or a sulfur atom.
  • a ring atom eg, a carbon atom, a nitrogen atom, or a sulfur atom
  • oxo a ring atom in the cyclic structure
  • Specific examples include, but are not limited to, a 5-10 membered heteroaryl group, a 5-10 membered nitrogen-containing heteroaryl group, a 6-10 membered oxygen-containing heteroaryl group, a 6-8 membered nitrogen-containing heteroaryl group, and a 5-8 membered oxygen group.
  • a heteroaryl group or the like such as furyl, thienyl, pyrrolyl, thiazolyl, isothiazolyl, thiadiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, 1, 2,3-Triazolyl, 1,2,4-triazolyl, 1,2,3-oxadiazolyl, 1,2,4-oxadiazolyl, 1,2,5-oxadiazolyl 1,3,4-oxadiazolyl, pyridyl, 2-pyridinone, 4-pyridinone, pyrimidinyl, 1,4-dioxadienyl, 2H-1,2-oxa Azinyl, 4H-1,2-oxazinyl, 6H-1,2-oxazinyl, 4H-1,3-oxazinyl, 6H-1,3-oxazinyl, 4H-1,4- Azinyl,
  • the hydrogen in the groups involved in the present invention may be substituted by deuterium.
  • reactive group refers to a group capable of being converted or derivatized or bonded to other functional groups.
  • the group mentioned in the present invention is obtained by substituting 1, 2 or 3 hydrogen atoms in the compound corresponding to the group with other atoms, and the number of the substituted hydrogen atoms may be as described
  • the group is determined by the number of valence bonds formed in the compounds or conjugates of the invention.
  • an alkyl group is a group obtained by substituting one hydrogen atom in an alkane
  • an alkylene group is a group obtained by substituting two hydrogen atoms in an alkane
  • the methyl group and the ethyl group are respectively one of methane and ethane.
  • the group obtained by substituting a hydrogen atom, a methylene group and an ethylene group are respectively a group obtained by substituting two hydrogen atoms in methane and ethane.
  • solvate refers to a substance formed by association of a compound with a solvent molecule.
  • the solvent may be an organic solvent (for example, methanol, ethanol, propanol, acetonitrile, etc.) or the like.
  • the compounds of the invention may form an ethanolate with ethanol.
  • hydrate refers to a substance formed by association of a compound with a water molecule.
  • the invention includes isomers formed based on any stereo configuration of the chiral carbon, for example including racemates or any of the mirror image isomers. . Moreover, the invention includes all other stereoisomers that may be present. That is, the compounds of the present invention include all enantiomers, diastereomers, cis and trans isomers, racemates and the like.
  • toxin molecule which has obvious in vitro cytotoxic activity, good stability, and simple preparation method, and can be efficiently coupled with an antibody by different coupling methods.
  • a linker has also been discovered which efficiently couples toxin molecules to antibodies, and a drug-antibody conjugate has been discovered which can smoothly release toxin molecules in cells and has good inhibitory ability against tumor cells.
  • the application provides a compound of formula (I), or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystalline form or racemate thereof,
  • Y is absent or selected from the following groups optionally substituted by M 2 : C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, 3-7 membered heteroheterocyclyl, C 2 - 6 alkynyl, 6 a -12-membered bridged ring group, a 6-12 membered spirocyclic group, a 6-12 membered fused ring group, a 6-12 membered bridged heterocyclic group, a 6-12 membered spiroheterocyclyl group, and a 6-12 membered fused heterocyclic group;
  • Z is absent or selected from the following groups optionally substituted by M 3 : C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, 3-7 membered heteroheterocyclyl, aryl, heteroaryl, 6 a -12-membered bridged ring group, a 6-12 membered spirocyclic group, a 6-12 membered fused ring group, a 6-12 membered bridged heterocyclic group, a 6-12 membered spiroheterocyclyl group, and a 6-12 membered fused heterocyclic group;
  • n 0, 1, 2 or 3;
  • n 0, 1, 2 or 3;
  • r 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
  • R 1 is selected from the group consisting of: H (hydrogen), D ( ⁇ ), N 3 , CN, NHR a , N(R a ) 2 , OR a , SR a , S(O)R a , S(O) 2 R a
  • M 4 C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, C 3-6 cycloalkyl, 3-7-membered heterocyclic, 6-12 bridged ring , 6-12 membered spiro group, 6-12 membered fused ring group, 6-12 membered bridged heterocyclic group, 6-12 membered spiroheterocyclyl, 6-12 membered fused heterocyclic group, C 2-6 alkyne Base, aryl, heteroaryl;
  • R 2 is selected from the group consisting of H (hydrogen), D (hydrazine), and the following groups optionally substituted by M 5 : C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, 6-12 membered bridged ring, 6 -12-membered spiro group, 6-12 membered fused ring group, -(CH 2 CH 2 O) j1 -(CH 2 ) j2 R a ;
  • R a is independently selected from the group consisting of H (hydrogen), D (oxime), C 1-6 alkyl optionally substituted by M 5 , N 3 , OH, CN, NR b R c ;
  • R b and R c are each independently selected from the group consisting of H (hydrogen), D (oxime), and the following groups optionally substituted by M 5 : C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, 3-7 Aromatic heterocyclic group, 6-12 membered bridged ring group, 6-12 membered spirocyclic group, 6-12 membered fused ring group, 6-12 membered bridged heterocyclic group, 6-12 membered spiroheterocyclic group, 6- 12-membered fused heterocyclic group;
  • J1 and j2 are each independently selected from 0, 1, 2, 3;
  • R 3 is selected from the group consisting of H (hydrogen), D (oxime), and the following groups optionally substituted by M 6 : C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3- 8 -cycloalkyl, 3-7 membered heteroheterocyclyl, 6-12 membered bridged ring, 6-12 membered spiro group, 6-12 membered fused ring group, 6-12 membered bridged heterocyclic group, 6-12 Monospiroheterocyclyl, 6-12 membered fused heterocyclyl, -(CH 2 CH 2 O) q1 -(CH 2 ) q2 -R d , aryl, heteroaryl;
  • R 4 -R 20 are each independently selected from the group consisting of H (hydrogen), D (oxime), halogen, the following groups optionally substituted by M 7 : C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, 3-7 membered heteroheterocyclyl, 6-12 membered bridged ring, 6-12 membered spiro group, 6-12 member a fused ring group, a 6-12 membered bridged heterocyclic group, a 6-12 membered spiroheterocyclyl group, a 6-12 membered fused heterocyclic group, -(CH 2 CH 2 O) q3 -(CH 2 ) q4 -R e , Aryl, heteroaryl;
  • R 3 and R 5 together with the atom to which they are attached form a 5-7 membered ring optionally substituted by J;
  • R 4 and R 5 together with the atom to which they are attached form a 3-6 membered ring optionally substituted by J;
  • R 4 and R 6 together with the atom to which they are attached form a 5-7 membered ring optionally substituted by J;
  • R 6 and R 7 together with the atom to which they are attached form a 3-6 membered ring optionally substituted by J;
  • R 7 and R 8 together with the atom to which they are attached form a 3-6 membered ring optionally substituted by J;
  • R 7 and R 9 together with the atom to which they are attached form a 5-7 membered ring optionally substituted by J;
  • R 9 and R 10 together with the atom to which they are attached form a 3-6 membered ring optionally substituted by J;
  • R 9 and R 12 together with the atom to which they are attached form a 5-7 membered ring optionally substituted by J;
  • R 10 and R 11 together with the atom to which they are attached form a 3-6 membered ring optionally substituted by J;
  • R 10 and R 12 together with the atom to which they are attached form a 5-7 membered ring optionally substituted by J;
  • R 12 and R 13 together with the atom to which they are attached form a 3-6 membered ring optionally substituted by J;
  • R 12 and R 14 together with the atom to which they are attached form a 5-7 membered ring optionally substituted by J;
  • R 14 and R 15 together with the atom to which they are attached form a 3-6 membered ring optionally substituted by J;
  • R 16 and R 18 together with the atom to which they are attached form a 5-7 membered ring optionally substituted by J;
  • R 16 and R 17 together with the atom to which they are attached form a 3-6 membered ring optionally substituted by J;
  • R 18 and R 19 together with the atom to which they are attached form a 3-6 membered ring optionally substituted by J;
  • R 18 and R 20 together with the atom to which they are attached form a 5-7 membered ring optionally substituted by J;
  • R d and R e are each independently selected from the group consisting of: H (hydrogen), D ( ⁇ ), N 3 , OH, CN, NR f R g ;
  • R f and R g are each independently selected from the group consisting of: H (hydrogen), D ( ⁇ ), C 1-6 alkyl;
  • Q1, q2, q3, q4 are each independently selected from 0, 1, 2, 3, 4, 5 or 6;
  • a reactive group is selected from M 8-substituted aryl, reactive group M 8-substituted heteroaryl;
  • Q is selected from the group consisting of H (hydrogen), D (oxime), and optionally substituted by M 9 : C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 ring Alkyl, 3-7 membered alicyclic, aryl, heteroaryl, 6-12 membered bridged ring, 6-12 membered spiro group, 6-12 membered fused ring group, 6-12 membered bridged heterocyclic ring a 6-12 membered spiroheterocyclyl group, a 6-12 membered fused heterocyclic group, or Q and R 3 together with the atom to which they are attached form a 5 to 7 membered ring optionally substituted with M 9 ;
  • Q is substituted with a reactive group M 10 ;
  • the M 1 -M 7 , M 9 , J are each independently selected from the group consisting of: H (hydrogen), D (oxime), hydroxyl, methylsulfonyl, amino, carboxyl, halogen, CF 3 , CN, C 1-6 An alkyl group, a C 1-6 alkoxy group, a C 2-10 alkynyl group;
  • the M 8 and M 10 are each independently selected from a hydroxyl group, an amino group, a decyl group or a hydroxylamine group substituted with a substituent selected from H (hydrogen), D ( ⁇ ), C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, hydroxy substituted C 1-6 alkyl, cyano substituted C 1-6 alkyl, N 3 substituted C 1- 6 alkyl, halogen substituted C 1-6 alkyl, 3-7 membered aliphatic heterocyclic 5-7 membered heteroaryl, OH.
  • a substituent selected from H (hydrogen), D ( ⁇ ), C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, hydroxy substituted C 1-6 alkyl, cyano substituted C 1-6 alkyl, N 3 substituted C 1- 6 alkyl, halogen substituted C 1-6 alky
  • the compound of Formula (I), or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystalline form or racemate thereof has one or more of the following characteristics One:
  • X is CH 2 ;
  • Y is absent or is selected from a C 1-6 alkylene group, a deuterated C 1-6 alkyl group;
  • Z is absent or is selected from a C 1-6 alkyl group optionally substituted by hydrazine, C 1-4 alkyl, hydroxy or methoxy (eg methyl or ethyl, deuterated methyl or ethyl) a hydroxy-substituted methyl or ethyl group, a methoxy-substituted methyl or ethyl group, a hydrazine and a hydroxy group substituted methyl or ethyl);
  • a C 1-6 alkyl group optionally substituted by hydrazine, C 1-4 alkyl, hydroxy or methoxy (eg methyl or ethyl, deuterated methyl or ethyl) a hydroxy-substituted methyl or ethyl group, a methoxy-substituted methyl or ethyl group, a hydrazine and a hydroxy group substituted methyl or ethyl);
  • R 2 is selected from the group consisting of H (hydrogen), D ( ⁇ ), and C 1-6 alkyl (eg, methyl);
  • R 3 is selected from the group consisting of H (hydrogen), D ( ⁇ ), and C 1-6 alkyl (eg, methyl);
  • R 4 - R 20 are each independently selected from H (hydrogen), D (oxime), C 1-6 alkyl optionally substituted by deuterium (eg methyl, ethyl, isopropyl, sec-butyl) , deuterated methyl, deuterated ethyl, deuterated isopropyl, deuterated sec-butyl), optionally substituted by deuterium C 1-6 alkoxy (eg methoxy, deuterated methoxy) ;
  • the compound has (1), (4), (5), (8), and (9) of the above characteristics.
  • the compound has (1), (4), (5), (8), (9), and (10) of the above features.
  • the compound has one or more of (2), (3), (6), and (7) of the above features.
  • the compound has (1), (2), (3), (4), (5), (6), (7), (8), (9) of the above characteristics. And (10).
  • X is CH 2 ;
  • Y does not exist, or is methylene or ethylene
  • Z is absent or is selected from a C 1-6 alkyl group optionally substituted by deuterium, hydroxy, C 1-4 alkyl or methoxy (eg methyl or ethyl, deuterated methyl or ethyl, hydroxy substituted Methyl or ethyl, methoxy substituted methyl or ethyl, hydrazine and hydroxy substituted methyl or ethyl);
  • n 1;
  • R 2 is H (hydrogen), D ( ⁇ ), or methyl
  • R 3 is a methyl group
  • R 4 -R 20 are each independently selected from the group consisting of H (hydrogen), D (oxime), methyl, ethyl, isopropyl, sec-butyl, methoxy;
  • Q is a methyl group.
  • R 1 is selected from the group consisting of H (hydrogen), D (oxime), N 3 , CN, S(O) 2 R a , the following groups optionally substituted by M4: C 1-6 alkyl, C 3-6 ring Alkyl, C 2-6 alkynyl, aryl, heteroaryl.
  • R a is selected from C 1-6 alkyl.
  • R 1 is selected from: H (hydrogen), D (deuterium), N 3, CN, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, cyclopropyl, ethynyl, methylsulfonyl , M 4 is optionally substituted phenyl, optionally substituted by M 4 5-7 membered heteroaryl, M 4 is optionally substituted 5-7 membered aliphatic heterocyclic group.
  • M 4 is selected from the group consisting of H (hydrogen), D (oxime), hydroxy, methylsulfonyl, C 1-6 alkyl (eg, methyl).
  • R 1 is selected from the group consisting of: H (hydrogen), D (oxime), N 3 , CN, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, cyclopropyl, ethynyl, methylsulfonate
  • An acyl group a phenyl group, a p-hydroxyphenyl group, a p-(methylsulfonyl)phenyl group, a 5-membered nitrogen-containing heteroaryl group, a 6-membered nitrogen-containing heterocyclic group, and a 6-membered nitrogen-containing heteroaryl group.
  • the 5-membered nitrogen-containing heteroaryl group, the 6-membered nitrogen-containing aliphatic heterocyclic group or the 6-membered nitrogen-containing heteroaryl group further contains a sulfur atom and/or an oxygen atom.
  • the 5-membered nitrogen-containing heteroaryl is selected from the group consisting of
  • the 6 membered nitrogen-containing aliphatic heterocyclic group is selected from the group consisting of
  • the 6 membered nitrogen-containing heteroaryl is selected from the group consisting of
  • the 6 membered nitrogen-containing heteroaryl is selected from the group consisting of
  • a M 8 is selected from substituted 6-10 membered aryl, 8 M 5-6 membered substituted heteroaryl.
  • A is selected from substituted phenyl. 8 M, M. 8 is substituted 5-6 membered nitrogen-containing aromatic group, M is an oxygen-containing. 8 membered heteroaryl substituted with 5-6 aryl, M 8- substituted 5-6 membered sulfur-containing heteroaryl group.
  • the 5-6 membered nitrogen-containing heteroaryl group further contains a sulfur atom and/or an oxygen atom.
  • the 5-6 membered nitrogen-containing heteroaryl is selected from the group consisting of
  • the 5-6 membered nitrogen-containing heteroaryl is selected from the group consisting of
  • M 8 is hydroxy, amino, decyl or hydroxylamine substituted with a substituent selected from H (hydrogen), D ( ⁇ ), C 1-6 alkyl, C 2 -6 alkenyl, C 2-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl, hydroxy substituted C 1-6 alkyl, cyano substituted C 1-6 alkyl, N 3 substituted C 1-6 alkane A halogen-substituted C 1-6 alkyl group, a C 3-7 aliphatic heterocyclic group, a C 5-7 heteroaryl group, or an OH group.
  • A is selected from the group consisting of
  • A is substituted with 1-4 substituents R h, R h is independently selected from D (deuterium), halogen, CF 3, CN, C 1-6 alkyl, fluorinated C 1-4 alkyl C 1-6 alkoxy, C 3-6 cycloalkyl, C 2-10 alkenyl, C 2-10 alkynyl.
  • A is phenyl substituted with an amino group.
  • A is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-phenyl
  • the compound has the structure shown by formula (II), (II') or (II");
  • Y does not exist or is methylene
  • Z is absent, or is methylene or ethylene
  • R 2 is H (hydrogen), D (oxime) or methyl.
  • the compound has the structure shown by formula (III), (III') or (III")
  • the compound is selected from the group consisting of
  • the present application also encompasses a conjugate comprising one or more compounds as described above, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystalline form or racemate thereof, and One or more linkers, wherein the compound or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystal form or racemate thereof, passes through a reactive group and the linker connection.
  • the linker is also covalently linked to the targeting moiety.
  • the compound, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystalline form or racemate thereof is passed through M 8 and any The selected M 10 is connected to the connector.
  • the conjugates of the present application have the structure
  • G is a compound as described above, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystal form or racemate thereof, which passes through M 8 and optionally M 10 and B Connected
  • B is a linker. In certain embodiments, it has the structure:
  • L 2 is selected from the group consisting of: -(CH 2 ) y -, -(CH 2 CH 2 O) y -(CH 2 ) y -,
  • R k , R l , R m , R n are each independently selected from H (hydrogen), D ( ⁇ ), halogen, CF 3 , CN, CH 2 CN, C 1-6 alkyl, C 1 6 alkoxy a group, a C 2-10 alkenyl group, a C 2-10 alkynyl group, a C 3-6 cycloalkyl group;
  • y are each independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10;
  • L 3 is selected from the group consisting of:
  • R j are independently selected from H (hydrogen), D (oxime), C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 1-6 alkoxy, cyano C 1-2 alkyl.
  • the conjugates of the present application have the structure
  • G is a compound as described above, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystal form or racemate thereof, which passes through M 8 and optionally M 10 and B Connected
  • B is a linker. In certain embodiments, it has the structure:
  • L 2 is selected from the group consisting of: -(CH 2 ) y -, -(CH 2 CH 2 O) y -(CH 2 ) y -,
  • R k , R l , R m , R n are each independently selected from H (hydrogen), D ( ⁇ ), halogen, CF 3 , CN, CH 2 CN, C 1-6 alkyl, C 1 6 alkoxy a group, a C 2-10 alkenyl group, a C 2-10 alkynyl group, a C 3-6 cycloalkyl group;
  • y are each independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10;
  • L 3 is selected from the group consisting of:
  • L 4 , L 5 are absent or are each independently selected from a C 1-6 alkylene group (eg, a methylene group);
  • F is selected from:
  • s, w are each independently selected from 1 or 2 (eg, both s and w are 1);
  • R j are independently selected from H (hydrogen), D ( ⁇ ), C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 1-6 alkoxy, cyano C 1-2 alkyl;
  • E is a targeting moiety
  • ⁇ is a number between 1-20 (eg, 1-10, 1-5, 1-4, or 1-3) (eg, a positive integer), such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20.
  • the heteroaryl, 3-8 membered heteroheterocyclyl, 6-12 membered bridged heterocyclyl, 6-12 membered spiroheterocyclyl or 6-12 membered fused heterocyclyl contains one Or a plurality of nitrogen atoms.
  • the heteroaryl, 3-8 membered heteroheterocyclyl, 6-12 membered bridged heterocyclyl, 6-12 membered spiroheterocyclyl or 6-12 membered fused heterocyclyl contains one Or a plurality of quaternized nitrogen atoms.
  • the linker conjugate, L 1 is selected from peptides, oligosaccharides, Val-Cit, Val-Ala , Val-Lys (Ac), Phe-Lys, Phe-Lys (Ac ), D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn.
  • L 1 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • L 2 is selected from:
  • the linker in the conjugate, L 3 is selected from:
  • L 3 is
  • D is selected from the group consisting of: 5-7 membered cycloalkyl, 5-7 membered alicyclic, optionally substituted with one or more R i , 8-11 membered bridged heterocyclic group, 8-11 membered spiroheterocyclyl, 8-11 membered fused heterocyclic group, phenyl group, 5-6 membered heteroaryl group, 5-6 membered cycloalkyl group-W-
  • the 8-11 membered bridged heterocyclic group, 8-11 membered spiroheterocyclyl, 8-11 membered fused heterocyclic group or 5-6 membered heteroaryl group contains a nitrogen atom and/or an oxygen atom.
  • the aryl group contains one or more nitrogen atoms.
  • the aryl group contains one or more quaternized nitrogen atoms.
  • D is selected from the group consisting of: 5-7 membered cycloalkyl, 5-7 membered alicyclic, 5-6 membered heteroaryl, optionally substituted with one or more R i , 8-membered bridge heterocyclic group, 11-membered spiroheterocyclyl group, 8-11 membered fused heterocyclic group, phenyl group, 5-6 membered cycloalkyl-W-; said 5-7 membered aliphatic heterocyclic group, 5- The 6-membered heteroaryl group, the 8-membered bridged heterocyclic group, the 11-membered spiroheterocyclyl group or the 8-11-membered fused heterocyclic group contains a nitrogen atom and/or an oxygen atom.
  • the 5-7 membered alicyclic, 5-6 membered heteroaryl, 8 membered bridged heterocyclyl, 11 membered spiroheterocyclyl or 8-11 membered fused heterocyclyl contains one Or a plurality of nitrogen atoms.
  • the 5-7 membered alicyclic, 5-6 membered heteroaryl, 8 membered bridged heterocyclyl, 11 membered spiroheterocyclyl or 8-11 membered fused heterocyclyl contains one Or a plurality of quaternized nitrogen atoms.
  • D is selected from the group consisting of: cyclohexyl, 5-7 membered nitrogen-containing heterocyclic, 5-7 membered oxyaliphatic heterocycle, optionally substituted with one or more R i a 6-membered nitrogen-containing heteroaryl group, an 8-membered nitrogen-containing bridged heterocyclic group, an 11-membered oxygen-containing spiroheterocyclyl group, an 8-membered nitrogen-containing fused heterocyclic group, a phenyl group, and a cyclohexyl-W- group.
  • the fused heterocyclic group contains one or more quaternized nitrogen atoms.
  • D is selected from the group consisting of the following: optionally substituted by one or more R i :
  • D is selected from the group consisting of
  • D is selected from the group consisting of
  • D is selected from
  • R q is independently selected from C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 3-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl;
  • R j is selected from H (hydrogen) And D( ⁇ ), CH 2 CN or CH 2 CH 2 CN;
  • V. is a counter ion, preferably a halogen anion, more preferably a chloride ion, a bromide ion or an iodide ion.
  • D is selected from
  • R q is independently selected from C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 3-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl;
  • ⁇ 0, 1 or 2;
  • ⁇ 1, 2 or 3.
  • D is selected from the group consisting of
  • D is selected from the group consisting of
  • V. is a counter ion, preferably a halogen anion, more preferably a chloride ion, a bromide ion or an iodide ion.
  • D is selected from
  • W is NR j and R j is selected from H (hydrogen), D ( ⁇ ), CH 2 CN or CH 2 CH 2 CN.
  • D is selected from the group consisting of one or more R i substituted groups: a 3-8 membered cycloalkyl group, a 3-8 membered heteroheterocyclyl group, 6-12-membered bridged heterocyclic group, 6-12-membered spiroheterocyclyl, 6-12-membered fused heterocyclic group, aryl group, heteroaryl group, 3-8 membered cycloalkyl-W-.
  • D is selected from the group consisting of substituted by one or more R i : 5-6 membered cycloalkyl, 5-6 membered heteroheterocyclyl, 8-11 membered nitrogen or oxygenated bridge Heterocyclyl, 8-11 membered nitrogen or oxyspirocyclyl, 8-11 membered nitrogen or oxygen-containing fused heterocyclic group, phenyl group, 5-6 membered nitrogen-containing heteroaryl group, 5-6 membered ring Alkyl-W-.
  • D is selected from the group consisting of substituted by one or more R i : 5-6 membered cycloalkyl, 5-6 membered nitrogen or oxygenated heterocyclic, 5-6 membered Azaheteroaryl, 8-membered nitrogen or oxygen-containing bridged heterocyclic group, 11-membered nitrogen-containing or oxygen-containing spiroheterocyclyl group, 8-11 membered nitrogen-containing or oxygen-containing fused heterocyclic group, phenyl group, 5-6 member Cycloalkyl-W-.
  • D is selected from the group consisting of substituted by one or more R i : cyclohexane, 5-6 membered nitrogen or oxygenated heterocyclic, 6-membered nitrogen-containing heteroaryl, 8 membered nitrogen-containing bridged heterocyclic group, 11-membered oxyspiroheterocyclic group, 8-membered nitrogen-containing fused heterocyclic group, phenyl group, cyclohexyl-W-.
  • D is selected from the group consisting of: substituted by one or more R i :
  • D is selected from the group consisting of
  • W is NR j and R j is selected from the group consisting of H (hydrogen), D ( ⁇ ), CH 2 CN, or CH 2 CH 2 CN.
  • D is selected from the group consisting of
  • W is NR j and R j is selected from the group consisting of H (hydrogen), D ( ⁇ ), CH 2 CN, or CH 2 CH 2 CN.
  • D is selected from the group consisting of a group optionally substituted with one or more R i : a 3-8 membered nitrogen-containing heterocyclic group, 6-12 members.
  • R i a group optionally substituted with one or more R i : a 3-8 membered nitrogen-containing heterocyclic group, 6-12 members.
  • the 12-membered nitrogen-containing fused heterocyclic group contains one or more quaternized nitrogen atoms.
  • D is selected from the group consisting of: 5-6 membered nitrogen-containing aliphatic heterocyclic group, 8-11 membered nitrogen-containing bridged heterocyclic group, 8-11, optionally substituted with one or more R i A nitrogen-containing spiroheterocyclyl group, a 8-11 membered nitrogen-containing fused heterocyclic group, and a 5-6 membered nitrogen-containing heteroaryl group.
  • the 5-6 membered nitrogen-containing aliphatic heterocyclic group, the 8-11 membered nitrogen-containing bridged heterocyclic group, the 8-11 membered nitrogen-containing spiroheterocyclyl group, and the 8-11 membered nitrogen-containing heterocyclic group are independently selected from the group consisting of:
  • the cyclic group or the 5-6 membered nitrogen-containing heteroaryl group contains one or more quaternized nitrogen atoms; preferably, D is selected from the group consisting of the following groups optionally substituted by one or more R i : 5-6 a nitrogen-containing heterocyclic heterocyclic group, a 5-6 membered nitrogen-containing heteroaryl group (for example, pyridyl group), an 8-membered nitrogen-containing bridged heterocyclic group, a 11-membered nitrogen-containing spiroheterocyclic group, and a 8-11 membered nitrogen-containing fused heterocyclic ring. base.
  • the cyclic group or the 8-11 membered nitrogen-containing fused heterocyclic group contains one or more quaternized nitrogen atoms.
  • D is selected from the group consisting of: 5-6 membered nitrogen-containing aliphatic heterocyclic group, 6-membered nitrogen-containing heteroaryl group, 8-membered nitrogen-containing bridge, optionally substituted with one or more R i a cyclic group, a 11-membered nitrogen-containing spiroheterocyclyl group, and an 8-membered nitrogen-containing fused heterocyclic group.
  • the 5-6 membered nitrogen-containing aliphatic heterocyclic group contains one or more quaternized nitrogen atoms.
  • D is selected from the group consisting of: substituted by one or more R i :
  • D is selected from the group consisting of: substituted by one or more R i :
  • V. is a counter ion, preferably a halogen anion, more preferably a chloride ion, a bromide ion or an iodide ion.
  • R q is independently selected from C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 3-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl.
  • ⁇ 0, 1 or 2;
  • ⁇ 1, 2 or 3.
  • D is selected from the group consisting of:
  • the above group is attached to L 2 by one of the two positions marked by 1 or 2, and is linked to L 3 by another position; preferably, the above group is linked to L 2 by the position of 1 mark, and is labeled by 2 Position connected to L 3 ;
  • V. is a counter ion, preferably a halogen anion, more preferably a chloride ion, a bromide ion or an iodide ion.
  • L 2 is selected from:
  • y 1
  • R k , R l , R m , R n are all hydrogen.
  • the application provides a connector having the following structure:
  • s is selected from 1 or 2;
  • L 2 is selected from the group consisting of: -(CH 2 ) y -, -(CH 2 CH 2 O) y -(CH 2 ) y -,
  • R k , R l , R m , R n are each independently selected from H (hydrogen), D ( ⁇ ), halogen, CF 3 , CN, CH 2 CN, C 1-6 alkyl, C 1 6 alkoxy a group, a C 2-10 alkenyl group, a C 2-10 alkynyl group, a C 3-6 cycloalkyl group;
  • y are each independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10;
  • w is selected from 1 or 2;
  • L 3 is selected from the group consisting of:
  • L 4 , L 5 are absent or are each independently selected from a C 1-6 alkylene group (eg, a methylene group);
  • F is selected from:
  • D is selected from the group consisting of one or more of R i substituted: a 3-8 membered cycloalkyl group, a 3-8 membered heteroheterocyclyl group, a 6-12 membered bridged heterocyclic group, and a 6-12 membered spiroheterocyclyl group. , 6-12 membered fused heterocyclic group, aryl group, heteroaryl group, 3-8 membered cycloalkyl-W-;
  • W is oxygen or NR j , and R j is independently selected from H (hydrogen), D ( ⁇ ), C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 1-6 alkoxy, cyano C 1 - 2 alkyl;
  • L 1 is selected from the group consisting of a peptide, an oligosaccharide, Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys (Ac), Phe-Lys, Phe-Lys (Ac), D-Val-Leu-Lvs, Glv-Glv-Arg, Ala-Ala-Asn.
  • L 1 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • the group is linked to G through the position of the 1 mark, and is linked to L 2 by the position of the 2 mark.
  • L 2 is selected from the group consisting of
  • L 2 is selected from the group consisting of
  • the group is linked to L 1 by the position of the 1 mark, and is connected to D by the position of the 2 mark.
  • L 3 is selected from the group consisting of
  • L 3 is selected from the group consisting of Wherein the group is linked to D by the position of the 1 mark, and is connected to E by the position of the 2 mark.
  • L 3 is
  • L 3 is Wherein the group is linked to D by the position of the 1 mark, and is connected to E by the position of the 2 mark.
  • D is selected from the group consisting of substituted by one or more R i : 5-6 membered cycloalkyl, 5-6 membered heteroheterocyclyl, 8-11 membered nitrogen or oxygenated bridge Heterocyclyl, 8-11 membered nitrogen or oxyspirocyclyl, 8-11 membered nitrogen or oxygen-containing fused heterocyclic group, phenyl group, 5-6 membered nitrogen-containing heteroaryl group, 5-6 membered ring Alkyl-W-.
  • D is selected from the group consisting of substituted by one or more R i : 5-6 membered cycloalkyl, 5-6 membered nitrogen or oxygenated heterocyclic, 5-6 membered Azaheteroaryl, 8-membered nitrogen or oxygen-containing bridged heterocyclic group, 11-membered nitrogen-containing or oxygen-containing spiroheterocyclyl group, 8-11 membered nitrogen-containing or oxygen-containing fused heterocyclic group, phenyl group, 5-6 member Cycloalkyl-W-.
  • D is selected from the group consisting of substituted by one or more R i : cyclohexane, 5-6 membered nitrogen or oxygenated heterocyclic, 6-membered nitrogen-containing heteroaryl, 8 membered nitrogen-containing bridged heterocyclic group, 11-membered oxyspiroheterocyclic group, 8-membered nitrogen-containing fused heterocyclic group, phenyl group, cyclohexyl-W-.
  • D is selected from the group consisting of: substituted by one or more R i :
  • D is selected from the group consisting of
  • W is NR j and R j is selected from the group consisting of H (hydrogen), D ( ⁇ ), CH 2 CN, or CH 2 CH 2 CN.
  • D is selected from the group consisting of
  • W is NR j and R j is selected from the group consisting of H (hydrogen), D ( ⁇ ), CH 2 CN, or CH 2 CH 2 CN.
  • the application provides a connector having the following structure:
  • L 2 is selected from the group consisting of: -(CH 2 ) y -, -(CH 2 CH 2 O) y -(CH 2 ) y -,
  • R k , R l , R m , R n are each independently selected from H (hydrogen), D ( ⁇ ), halogen, CF 3 , CN, CH 2 CN, C 1-6 alkyl, C 1 6 alkoxy a group, a C 2-10 alkenyl group, a C 2-10 alkynyl group, a C 3-6 cycloalkyl group;
  • y are each independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10;
  • L 3 is selected from the group consisting of:
  • L 4 , L 5 are absent or are each independently selected from a C 1-6 alkylene group (eg, a methylene group);
  • F is selected from:
  • s, w are each independently selected from 1 or 2 (eg, both s and w are 1);
  • D is selected from the group consisting of optionally substituted by one or more R i : a 3-8 membered nitrogen-containing heterocyclic group, a 6-12 membered nitrogen-containing bridged heterocyclic group, and a 6-12 membered nitrogen-containing spiroheterocyclyl group. , 6-12 yuan nitrogen-containing fused heterocyclic group, nitrogen-containing heteroaryl group, 3-8 membered cycloalkyl-W-;
  • W is oxygen or NR j , and R j is independently selected from H (hydrogen), D ( ⁇ ), C 1-6 alkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 1-6 alkoxy, cyano C 1 - 2 alkyl;
  • L 1 is selected from the group consisting of a peptide, an oligosaccharide, Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys (Ac), Phe-Lys, Phe-Lys (Ac), D-Val-Leu-Lys, Gly-Gly-Arg, Ala-Ala-Asn.
  • L 1 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • L 2 is selected from the group consisting of
  • L 3 is selected from the group consisting of
  • L 3 is
  • the 12-membered nitrogen-containing fused heterocyclic group contains one or more quaternized nitrogen atoms.
  • D is selected from the group consisting of: 5-6 membered nitrogen-containing aliphatic heterocyclic group, 8-11 membered nitrogen-containing bridged heterocyclic group, 8-11, optionally substituted with one or more R i A nitrogen-containing spiroheterocyclyl group, a 8-11 membered nitrogen-containing fused heterocyclic group, and a 5-6 membered nitrogen-containing heteroaryl group.
  • the 5-6 membered nitrogen-containing aliphatic heterocyclic group, the 8-11 membered nitrogen-containing bridged heterocyclic group, the 8-11 membered nitrogen-containing spiroheterocyclyl group, and the 8-11 membered nitrogen-containing heterocyclic group are independently selected from the group consisting of:
  • the cyclic group or the 5-6 membered nitrogen-containing heteroaryl group contains one or more quaternized nitrogen atoms; preferably, D is selected from the group consisting of the following groups optionally substituted by one or more R i : 5-6 a nitrogen-containing heterocyclic heterocyclic group, a 5-6 membered nitrogen-containing heteroaryl group (for example, pyridyl group), an 8-membered nitrogen-containing bridged heterocyclic group, a 11-membered nitrogen-containing spiroheterocyclic group, and a 8-11 membered nitrogen-containing fused heterocyclic ring. base.
  • the cyclic group or the 8-11 membered nitrogen-containing fused heterocyclic group contains one or more quaternized nitrogen atoms.
  • D is selected from the group consisting of: 5-6 membered nitrogen-containing aliphatic heterocyclic group, 6-membered nitrogen-containing heteroaryl group, 8-membered nitrogen-containing bridge, optionally substituted with one or more R i a cyclic group, a 11-membered nitrogen-containing spiroheterocyclyl group, and an 8-membered nitrogen-containing fused heterocyclic group.
  • the 5-6 membered nitrogen-containing aliphatic heterocyclic group contains one or more quaternized nitrogen atoms.
  • D is selected from the group consisting of: substituted by one or more R i :
  • D is selected from the group consisting of: substituted by one or more R i :
  • V. is a counter ion, preferably a halogen anion, more preferably a chloride ion, a bromide ion or an iodide ion;
  • R q is independently selected from C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 3-6 alkynyl, C 3-8 cycloalkyl;
  • ⁇ 0, 1 or 2;
  • ⁇ 1, 2 or 3.
  • the application provides a connector having the following structure:
  • L 2 is selected from:
  • R k , R l , R m , R n are all hydrogen
  • L 3 is selected from the group consisting of:
  • L 4 , L 5 are absent or are each independently selected from a C 1-6 alkylene group (eg, a methylene group);
  • F is selected from:
  • s, w are each independently selected from 1 or 2 (eg, both s and w are 1);
  • R j is independently selected from C 1-6 Alkyl, C 3-6 cycloalkyl, C 1-6 alkoxy, cyano C 1-2 alkyl.
  • L 1 is selected from the group consisting of a peptide, an oligosaccharide, Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys (Ac), Phe-Lys, Phe-Lys (Ac), D-Val-Leu-Lvs, Glv-Glv-Arg, Ala-Ala-Asn.
  • L 1 is N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl-N-(2-aminoethyl)-2-aminoethyl
  • L 3 is selected from the group consisting of
  • L 3 is
  • the heteroaryl, 3-8 membered heteroheterocyclyl, 6-12 membered bridged heterocyclyl, 6-12 membered spiroheterocyclyl or 6-12 membered fused heterocyclyl contains one Or a plurality of nitrogen atoms.
  • the heteroaryl, 3-8 membered heteroheterocyclyl, 6-12 membered bridged heterocyclyl, 6-12 membered spiroheterocyclyl or 6-12 membered fused heterocyclyl contains one Or a plurality of quaternized nitrogen atoms.
  • the application also provides a conjugate comprising a drug and a linker, and optionally a targeting moiety, as defined above.
  • the drug is selected from a compound as defined above, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystalline form or racemate thereof.
  • the targeting moiety (E) of the conjugate of the present application is a substance capable of specifically binding to a site on the cell surface, and the targeting moiety (E) may be selected from a small molecule ligand, a protein, Polypeptides, as well as non-proteinaceous agents such as sugars, RNA or DNA.
  • the targeting moiety (E) is an antibody, such as a monoclonal antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein the monoclonal antibody or antigen-binding fragment thereof comprises Fab, Fab', F ( Ab')2, Fd, Fv, dAb, complementarity determining region fragment, single chain antibody (eg, scFv), non-human antibody, humanized antibody, chimeric antibody, fully human antibody, probody, bispecific Sexual antibodies or multispecific antibodies.
  • the targeting moiety (E) may be an arginine-glycine-aspartate ("RGD") peptide that recognizes a cell surface integrin receptor; a cell surface growth factor receptor is recognized Growth factors such as EGF, PDGF, VEGF; peptides that recognize functional cell surface plasminogen activator, bombesin, bradykinin, somatostatin or prostate specific membrane antigen receptors.
  • RGD arginine-glycine-aspartate
  • Suitable targeting moieties include: CD40 ligand, CD30 ligand, CD40 ligand, OX40 ligand, PD-1 ligand, ErbB ligand, Her2 ligand, TACSTD2 ligand, DR5 ligand, linkage two Aliphatic polyene, cyanine dye, IR-783 or its derivative (CN102099059B).
  • the targeting moiety (E) is directed to a target selected from the group consisting of: epidermal growth factor, CD37, HER2, CD70, EGFRvIII, Mesothelin, Folate eceoptor1, Mucin 1, CD138, CD20, CD19, CD30, SLTRK6 , Nectin 4, Tissue factor, Mucin16, Endothelinreceoptor, STEAP1, SLC39A6, Guanylylcyclase C, PSMA, CCD79b, CD22, Sodium phosphate cotransporter 2B, GPNMB, Trophoblast glycoprotein, AGS-16, EGFR, CD33, CD66e, CD74, CD56, PD- L1, TACSTD2, DR5, BMPR1B, E16, STEAP1, 0772P, MPF, Napi3b, Sema 5b, PSCA hlg, ETBR, MSG783, STEAP2, TrpM4, CRIPTO, CD79b
  • a target selected from
  • NM_001203 E16 (LAT1, SLC7A5, G Enbank accession number NM_003486), STEAP1 (prostate six transmembrane epithelial antigen, Genbank accession number NM_012449), 0772P (CA125, MUC16, Genbank accession number AF 3 61486), MPF (MPF, MSLN, SMR, megakaryocyte potentiating factor, mesothelin , Genbank accession number NM_005823), Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, solute carrier family 34 (sodium phosphate), member 2, type II sodium-dependent phosphate transporter 3b, Genbank accession number NM 006424), Sema 5b ( FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, brain signaling protein 5b Hlog, sema domain, seven thrombospondin repeats (type 1 and type 1), transmembrane
  • the targeting moiety (E) is a monoclonal antibody against Her 2 , such as trastuzumab, pertuzumab, or the targeting moiety (E) It is divided into a monoclonal antibody against Trop-2, such as Sacituzumab (i.e., Isactuzumab or hRS7 antibody).
  • the targeting moiety (E) is selected from the group consisting of: somatostatin, a folic acid derivative, such as a folic acid derivative having the structure
  • the conjugate comprises a targeting moiety (E), wherein the targeting moiety (E) comprises a lysine residue or a cysteine residue and is lysine-reduced The base or cysteine residue is linked to the linker.
  • the conjugate of the present application is selected from the group consisting of:
  • the ratio of attachment between the drug to the mAb (DAR) in the conjugate is an integer or fraction between 1-10; the mAb is trastuzumab or Sacituzumab.
  • the ratio of attachment between the drug to the mAb (DAR) in the conjugate is an integer or fraction between 1 and 10; the mAb is trastuzumab or Sacituzumab, or, mAb is pertuzumab.
  • connection ratio (DAR) is represented by ⁇ in the conjugate structure formula
  • the trastuzumab, Sacituzumab or pertuzumab can be understood as trastuzumab, Sacituzumab or Patuxin.
  • DAR is an integer or fraction between 1-4 (eg, 1, 2, 3, 4).
  • the ratio of DAR between the drug and the mAb is 1, 2 or 3 in the conjugate; the mAb is trastuzumab or Sacituzumab.
  • the ratio of DAR between the drug and the mAb is 1, 2 or 3 in the conjugate; the mAb is removed from trastuzumab, Sacituzumab or pertuzumab a group obtained after 1, 2 or 3 amino groups.
  • the DAR is 1, and the mAb is the group obtained after removal of one amino group from trastuzumab.
  • the DAR is 1, and the mAb is the group obtained after removal of one amino group in pertuzumab.
  • the DAR is 1, and the mAb is the group obtained after removal of one amino group in Sacituzumab.
  • the DAR is 2 and the mAb is the group obtained after removal of the 2 amino groups in trastuzumab.
  • the DAR is 2 and the mAb is the group obtained after removal of the 2 amino groups in pertuzumab.
  • the DAR is 2 and the mAb is the group obtained after removal of the 2 amino groups in Sacituzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A1 is a group obtained by removing two amino groups from trastuzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A2 is a group obtained by removing the two amino groups of pertuzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A3 is a group obtained by removing two amino groups from Sacituzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A1' is a group obtained by removing one amino group from trastuzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A2' is a group obtained by removing one amino group of pertuzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A3' is a group obtained by removing one amino group from Sacituzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • ⁇ is an integer of 1, 2, 3 or 4; and A is a group obtained by removing ⁇ amino groups from trastuzumab, pertuzumab or Sacituzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A1 is a group obtained by removing two amino groups from trastuzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A2 is a group obtained by removing two amino groups in pertuzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A3 is a group obtained by removing two amino groups in Sacituzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A1' is a group obtained by removing one amino group from trastuzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A2' is a group obtained by removing one amino group from pertuzumab.
  • the conjugate is selected from the group consisting of
  • A3' is a group obtained by removing one amino group in Sacituzumab.
  • a group Interchangeable, and corresponding examples eg, a compound or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer, crystal form, racemate thereof, or a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvent thereof
  • Compounds, hydrates, isomers, crystal forms, and conjugates of racemates are all included in the scope of the present invention.
  • the present application also provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound as described above, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystalline form or racemate thereof, or as described above Conjugates, as well as one or more pharmaceutical excipients.
  • the present application also provides a compound as described above, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystal form or racemate thereof, or a conjugate as described above for inhibiting tumor Use in cell proliferation.
  • the tumor cell is selected from the group consisting of an esophageal cancer cell (eg, esophageal adenocarcinoma and esophageal squamous cell carcinoma), a brain tumor cell, a lung cancer cell (eg, a small cell lung cancer cell and a non-small cell lung cancer) Cells), squamous cell carcinoma cells, bladder cancer cells, gastric cancer cells, ovarian cancer cells, peritoneal cancer cells, pancreatic cancer cells, breast cancer cells, head and neck cancer cells, cervical cancer cells, endometrial cancer cells, colorectal cells Cancer cells, liver cancer cells, renal cancer cells, solid tumor cells, non-Hodgkin's lymphoma cells, central nervous system tumor cells (eg glioma cells, glioblastoma multiforme cells, glioma cells or Sarcoma cells, prostate cancer cells, and thyroid cancer cells.
  • an esophageal cancer cell eg, esophageal adenocar
  • the conjugate comprises a targeting moiety (E);
  • the targeting moiety (E) is a monoclonal antibody against Her 2 , such as trastuzumab, pertuzumab ( Pertuzumab), or the targeting moiety (E) is a monoclonal antibody against Trop-2, such as Sacituzumab;
  • the tumor cell is selected from the group consisting of breast cancer cells, ovarian cancer cells, gastric cancer cells, endometrial cancer cells, salivary glands Cancer cells, lung cancer cells, renal cancer cells, colon cancer cells, thyroid cancer cells, pancreatic cancer cells, bladder cancer cells, liver cancer cells, colorectal cancer cells, prostate cancer cells, cervical cancer cells.
  • the targeting moiety (E) is a monoclonal antibody against Her 2 , such as trastuzumab, Pertuzumab;
  • the tumor cells are selected from breast cancer cells, Ovarian cancer cells, gastric cancer cells, endometrial cancer cells, salivary gland cancer cells, lung cancer cells, renal cancer cells, colon cancer cells, thyroid cancer cells, pancreatic cancer cells, bladder cancer cells or liver cancer cells.
  • the targeting moiety (E) is a monoclonal antibody against Trop-2, such as Sacituzumab
  • the tumor cells are selected from the group consisting of breast cancer cells, colorectal cancer cells, lung cancer cells, pancreatic cancer cells, Ovarian cancer cells, prostate cancer cells, cervical cancer cells.
  • the compound, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystalline form or racemate thereof, or a conjugate as described above is administered to An in vitro cell or a cell in a subject; for example, applied to a subject (eg, a mammal; for example, a bovine, an equine, a sheep, a porcine, a canine, a feline, a rodent, a spirit) A long-lived animal; for example, a human) to inhibit proliferation of tumor cells in a subject; or, applied to an in vitro tumor cell (for example, a cell line or a cell derived from a subject) to inhibit proliferation of tumor cells in vitro.
  • a subject eg, a mammal; for example, a bovine, an equine, a sheep, a porcine, a canine, a feline, a rodent, a spirit
  • a long-lived animal for example, a human
  • the present application also provides a compound as described above, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystal form or racemate thereof, or a conjugate as described above, in the preparation Use in medicines for treating cancer diseases.
  • the cancer disease is selected from the group consisting of esophageal cancer (eg, esophageal adenocarcinoma and esophageal squamous cell carcinoma), brain tumor, lung cancer (eg, small cell lung cancer and non-small cell lung cancer), squamous epithelial cells Cancer, bladder cancer, stomach cancer, ovarian cancer, peritoneal cancer, pancreatic cancer, breast cancer, head and neck cancer, cervical cancer, endometrial cancer, colorectal cancer, liver cancer, kidney cancer, solid tumor, non-Hodgkin's lymphoma, Central nervous system tumors (eg, glioma, glioblastoma multiforme, glioma or sarcoma), prostate cancer, and thyroid cancer.
  • esophageal cancer eg, esophageal adenocarcinoma and esophageal squamous cell carcinoma
  • lung cancer eg, small cell lung cancer and non-small cell
  • the targeting moiety (E) is a monoclonal antibody against Trop-2, such as Sacituzumab;
  • the cancer disease is selected from the group consisting of breast cancer, ovarian cancer, gastric cancer, endometrial cancer, salivary gland cancer, lung cancer, kidney Cancer, colon cancer, thyroid cancer, pancreatic cancer, bladder cancer, liver cancer, colorectal cancer, prostate cancer, cervical cancer.
  • the targeting moiety (E) is a monoclonal antibody against Her2, such as trastuzumab, Pertuzumab;
  • the cancer disease is selected from the group consisting of breast cancer, ovarian cancer , gastric cancer, endometrial cancer, salivary gland cancer, lung cancer, kidney cancer, colon cancer, thyroid cancer, pancreatic cancer, bladder cancer or liver cancer.
  • the targeting moiety (E) is a monoclonal antibody against Trop-2, such as Sacituzumab
  • the cancer disease is selected from the group consisting of breast cancer, colorectal cancer, lung cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, prostate Cancer, cervical cancer.
  • the present application also provides a process for the preparation of a compound as described above, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, isomer thereof, or any crystal form or racemate thereof, as shown in the following scheme :
  • R 1 - R 20 , Q, X, Y, A, m, n are as defined in any one of the above, and PG is a protecting group such as a benzyl group, a substituted benzyl group or a tert-butyl group.
  • the method includes the following steps:
  • Step 1 reacting compound a with compound b in the presence of a base and/or a condensation reagent to obtain compound c;
  • Step 2 removing PG from compound c in the presence of hydrogen and a catalyst to obtain Compound d;
  • Step 3 Reaction of compound d with compound e in the presence of a base and/or a condensing reagent to give a compound of formula (I).
  • the base is an organic or inorganic base.
  • the organic base is selected from the group consisting of triethylamine, DIPEA, pyridine, NMM, or DMAP.
  • the inorganic base is selected from the group consisting of NaH, NaOH, Na 2 CO 3 or K 2 CO 3 .
  • the condensation reagent is selected from the group consisting of HATU, HBTU, EEDQ, DEPC, DCC, DIC, EDC, BOP, PyAOP, or PyBOP.
  • the step 1 is carried out at a temperature of from -10 °C to 60 °C, preferably from -5 °C to 25 °C.
  • the molar ratio of compound a to compound b in step 1 is 1: (0.5-2), preferably 1: (0.8-2), more preferably 1: (1-1.5).
  • the molar ratio of compound a, compound b to base is 1: (0.5-2): (0.5-4), preferably 1: (0.8-2): (0.8- 3), more preferably 1: (1-1.5): (1-2).
  • the molar ratio of compound a to condensing agent in step 1 is 1: (1-3), preferably 1: (1.2-2.0).
  • the pressure of hydrogen is 1-4 atm, preferably 1-2 atm.
  • the catalyst is selected from the group consisting of Pd/C, Pt 2 O, Pd(OH) 2 .
  • the mass ratio of the compound of formula c to the catalyst is 1: (0.05-2), preferably 1:0.1.
  • the step 2 is carried out at a temperature of from 0 °C to 100 °C, preferably from 10 °C to 25 °C.
  • the step 3 is carried out at a temperature of from -10 °C to 60 °C, preferably from -5 °C to 25 °C.
  • the molar ratio of compound d to compound e in step 3 is 1: (0.5-2), preferably 1: (0.8-2), more preferably 1: (1-1.5).
  • the molar ratio of compound d, compound e to base is 1: (0.5-2): (0.5-4), preferably 1: (0.8-2): (0.8- 3), more preferably 1: (1-1.5): (1-2).
  • the molar ratio of compound d to condensing agent in step 3 is 1: (1-3), preferably 1: (1.2-2.0).
  • step 1, step 2, and/or step 3 are carried out in an organic solvent.
  • the organic solvent is selected from the group consisting of N,N-dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, N-methylpyrrolidone, saturated hydrocarbons (eg, cyclohexane, hexane), halogenated Hydrocarbons (eg dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane), ethers (eg tetrahydrofuran, diethyl ether, dioxane, 1,2-dimethoxyethane), nitriles (eg acetonitrile) , alcohols (such as methanol, ethanol) and any combination thereof.
  • saturated hydrocarbons eg, cyclohexane, hexane
  • halogenated Hydrocarbons eg dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane
  • ethers eg tetrahydrofuran, diethyl ether, dioxane, 1,2-dimethoxyethan
  • the process yields a mixture of diastereomers of a compound of formula (I).
  • the method further comprises: separating the diastereomeric mixture of formula (I) by preparative high performance liquid chromatography to yield the pure isomer.
  • the conditions of the separation include one or more of the following:
  • the column temperature of the column is 30 ° C ⁇ 50 ° C;
  • the detection wavelength of the detector is 200 to 400 nm
  • an organic solvent for example, n-hexane, isopropanol, and/or methanol.
  • two mobile phases are used, including mobile phase A (eg, n-hexane) and mobile phase B (eg, methanol or isopropanol).
  • mobile phase A eg, n-hexane
  • mobile phase B eg, methanol or isopropanol
  • the separating comprises performing a linear gradient elution in the presence of (1)-(5).
  • the present application also provides a method of preparing a conjugate as described above (Method I), which is illustrated by the following scheme:
  • R 1 - R 20 , Q, X, Y, L 1 , L 2 , L 3 , M 8 , A, D, m, n, r, s, w are as defined above.
  • the method includes the following steps:
  • Step 1 In a base and / or the presence of a condensing agent, Compound I-1 and the compound L 2 'reaction to produce compound I-2, the compound L 2' is CH 2 Br 2, CH 2 I 2, CH 2 BrI, Br-(CH 2 CH 2 O) y -(CH 2 ) y -Br, Br-(CH 2 CH 2 O) y -(CH 2 ) y -I, I-(CH 2 CH 2 O y -(CH 2 ) y -Br, I-(CH 2 CH 2 O) y -(CH 2 ) y -I, or
  • R k R l , R m , R n are each independently selected from H (hydrogen), D (oxime), halogen, CF 3 , CN, CH 2 CN, C 1-6 alkyl, C 1 6 alkoxy , C 2-10 alkynyl, C 3-6 cycloalkyl;
  • y are each independently 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10;
  • Step 2 reacting compound 1-2 with compound I-3 in the presence of a base and/or a condensation reagent to form compound I-4;
  • Step 3 Compound I-4 is reacted with compound d in the presence of a base and/or a condensing reagent to give compound I-5.
  • the base is an inorganic or organic base.
  • the organic base is selected from the group consisting of triethylamine, DIPEA, pyridine, NMM, or DMAP.
  • the inorganic base is selected from the group consisting of NaH, NaOH, Na 2 CO 3 , NaHCO 3 , K 2 CO 3 .
  • the condensation reagent is selected from the group consisting of HATU, HBTU, EEDQ, DEPC, DCC, DIC, EDC, BOP, PyAOP, or PyBOP.
  • step 1 is carried out at a temperature of from -20 °C to 150 °C, preferably from -5 °C to 130 °C.
  • step 1 the molar ratio of compound 1-1 to compound L 2 ' is 1: (0.5-5), preferably 1: (0.8-3), more preferably 1: (1- 2.5).
  • the molar ratio of the compound I-1, the compound L 2 ' to the base is 1: (0.5-2): (0.5-20), preferably 1: (0.8-2) : (0.8-3), more preferably 1: (1-1.5): (1-2).
  • step 1 the molar ratio of compound 1-1 to condensing agent is 1: (1-3), preferably 1: (1.2-2).
  • the step 2 is carried out at a temperature of from -10 °C to 60 °C, preferably from -5 °C to 25 °C.
  • the molar ratio of compound 1-2 to compound 1-3 is 1: (0.5-2), preferably 1: (0.8-2), more preferably 1: (1- 1.5).
  • the molar ratio of compound 1-2, compound 1-3 to base is 1: (0.5-2): (0.5-4), preferably 1: (0.8-2) : (0.8-3), more preferably 1: (1-1.5): (1-2).
  • step 2 the molar ratio of compound 1-2 to condensing agent is 1: (1-3), preferably 1: (1.2-2.0).
  • the step 3 is carried out at a temperature of from -10 °C to 60 °C, preferably from -5 °C to 25 °C.
  • step 3 the molar ratio of compound I-4 to compound d is 1: (0.5-2), preferably 1: (0.8-2), more preferably 1: (1-1.5) .
  • step 3 the molar ratio of compound I-4, compound d to base is 1: (0.5-2): (0.5-4), preferably 1: (0.8-2): ( 0.8-3), more preferably 1: (1-1.5): (1-2).
  • step 3 the molar ratio of compound 1-4 to the condensing agent is 1: (1-3), preferably 1: (1.2-2.0).
  • the method further comprises the step of: coupling compound 1-5 to the targeting moiety (E).
  • Sacituzumab or an active fragment or variant thereof.
  • the step 4 comprises mixing the targeting moiety (E) with the compound I-5.
  • the ratio of the amount of the targeting moiety (E) to the compound I-5 is 1: (1-20).
  • the step 4 comprises mixing a solution comprising the targeting moiety (E) with the compound I-5.
  • step 1, step 2, step 3, and/or step 4 are carried out in water or an organic solvent.
  • the organic solvent is selected from the group consisting of N,N-dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, N-methylpyrrolidone, saturated hydrocarbons (eg, cyclohexane, hexane), halogenated Hydrocarbons (eg dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane), ethers (eg tetrahydrofuran, diethyl ether, dioxane, 1,2-dimethoxyethane), nitriles (eg acetonitrile) , alcohols (such as methanol, ethanol) and any combination thereof.
  • saturated hydrocarbons eg, cyclohexane, hexane
  • halogenated Hydrocarbons eg dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane
  • ethers eg tetrahydrofuran, diethyl ether, dioxane, 1,2-dimethoxyethan
  • the method further comprises a step 5 comprising: one or more of a chromatographic method (eg, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, reversed phase chromatography, and affinity chromatography)
  • a chromatographic method eg, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, reversed phase chromatography, and affinity chromatography
  • the product of step 4 is purified.
  • the present application also provides a method of preparing a conjugate as described above (Method II), which is illustrated by the following scheme:
  • R 1 - R 20 , Q, X, Y, L 1 , L 2 , L 3 , M 8 , A, D, m, n, r, s, w are as defined in any one of the above;
  • the method comprises the steps of:
  • Step 1 reacting compound II-1 with compound II-2 in the presence of a base and/or a condensation reagent to form compound II-3;
  • Step 2 reacting compound II-3 with compound d in the presence of a base and/or a condensation reagent to form compound II-4;
  • Step 3 Compound II-4 is reacted with compound 1-2 in the presence of a base and/or a condensing reagent to give compound II-5.
  • the base is an organic or inorganic base.
  • the organic base is selected from the group consisting of triethylamine, DIPEA, pyridine, NMM, or DMAP.
  • the inorganic base is selected from the group consisting of NaH, NaOH, Na 2 CO 3 , NaHCO 3 or K 2 CO 3 .
  • the condensation reagent is selected from the group consisting of HATU, HBTU, EEDQ, DEPC, DCC, DIC, EDC, BOP, PyAOP, or PyBOP.
  • step 1 is carried out at a temperature of from 20 °C to 120 °C, preferably from 30 °C to 80 °C.
  • the molar ratio of compound II-1 to compound II-2 is 1: (0.5-5), preferably 1: (0.8-3), more preferably 1: (1- 2.5).
  • the molar ratio of compound II-1, compound II-2 to base is 1: (0.5-2): (0.5-20), preferably 1: (0.8-2) : (0.8-3), more preferably 1: (1-1.5): (1-2).
  • step 1 the molar ratio of compound II-1 to condensing agent is 1: (1-3), preferably 1: (1.2-2.0).
  • the step 2 is carried out at a temperature of from -20 ° C to 50 ° C (preferably from -5 ° C to 25 ° C).
  • the molar ratio of compound II-3 to compound d in step 2 is 1: (0.5-5), preferably 1: (0.8-3), more preferably 1: (1-2.5) .
  • the molar ratio of compound II-3, compound d to base is 1: (0.5-2): (0.5-20), preferably 1: (0.8-2): ( 0.8-3), more preferably 1: (1-1.5): (1-2).
  • step 2 the molar ratio of compound II-3 to condensing agent is 1: (1-3), preferably 1: (1.2-2.0).
  • the step 3 is carried out at a temperature of from -20 ° C to 50 ° C (preferably from -5 ° C to 25 ° C).
  • step 3 the molar ratio of compound II-4 to compound 1-2 is 1: (0.5-5), preferably 1: (0.8-3), more preferably 1: (1- 2.5).
  • the molar ratio of compound II-4, compound 1-2 to base is 1: (0.5-2): (0.5-20), preferably 1: (0.8-2) : (0.8-3), more preferably 1: (1-1.5): (1-2).
  • the molar ratio of compound II-4 to the condensing agent in step 3 is 1: (1-3), preferably 1: (1.2-2.0).
  • the method further comprises the step of: coupling Compound II-5 to the targeting moiety (E).
  • Sacituzumab or an active fragment or variant thereof.
  • the step 4 comprises mixing the targeting moiety (E) with the compound II-5.
  • the ratio of the amount of the targeting moiety (E) to the compound II-5 is 1: (1-20).
  • the step 4 comprises mixing a solution comprising the targeting moiety (E) with the compound II-5.
  • step 1, step 2, step 3, and/or step 4 are carried out in water or an organic solvent.
  • the organic solvent is selected from the group consisting of N,N-dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, N-methylpyrrolidone, saturated hydrocarbons (eg, cyclohexane, hexane), halogenated Hydrocarbons (eg dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane), ethers (eg tetrahydrofuran, diethyl ether, dioxane, 1,2-dimethoxyethane), nitriles (eg acetonitrile) , alcohols (such as methanol, ethanol) and any combination thereof.
  • saturated hydrocarbons eg, cyclohexane, hexane
  • halogenated Hydrocarbons eg dichloromethane, chloroform, 1,2-dichloroethane
  • ethers eg tetrahydrofuran, diethyl ether, dioxane, 1,2-dimethoxyethan
  • the method further comprises a step 5 comprising: one or more of a chromatographic method (eg, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, reversed phase chromatography, and affinity chromatography)
  • a chromatographic method eg, ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, reversed phase chromatography, and affinity chromatography
  • the product of step 4 is purified.
  • the toxin molecule of the invention has obvious in vitro cytotoxic activity, good stability, and simple preparation method, and can be efficiently coupled with the antibody by different coupling methods.
  • the linker of the present invention can efficiently couple a toxin molecule to an antibody, and it can be confirmed by a coupling pattern that the coupling efficiency is high and the remaining antibody is small.
  • the drug-antibody conjugate of the invention can release the toxin molecule smoothly in the cell, and has strong inhibition ability to the tumor cell, and is expected to have an excellent antitumor effect.
  • Figure 1 shows the HIC spectrum of naked anti-(M141105Y).
  • Figure 2 shows the HIC spectrum of TL004-T-ADC.
  • Figure 3 shows the HIC spectrum of TL006-T-ADC.
  • Figure 4 shows the HIC spectrum of TL007-T-ADC.
  • Figure 5 is a HIC map of TL008-T-ADC.
  • Figure 6 is a HIC map of TL009-T-ADC.
  • Figure 7 is a HIC map of TL010-T-ADC.
  • Figure 8 is a HIC map of TL011-T-ADC.
  • Figure 9 is a HIC map of TL012-T-ADC.
  • Figure 10 is a HIC map of the TL007-S-ADC.
  • Figure 11 is a HIC map of TL008-S-ADC.
  • Figure 12 is a mass spectrometry test result of BT001063 showing the molecular weight of the component corresponding to the HIC map Peak2 of TL007-T-ADC.
  • Figure 13 is a mass spectrometric test result of BT001064 showing the molecular weight of the component corresponding to the HIC map Peak2 of TL008-T-ADC.
  • Figure 14 is a mass spectrometry test result of BT001007 showing the molecular weight of the component corresponding to the HIC map Peak3 of TL008-T-ADC.
  • Figure 15 shows the mass spectrometric test results of BT001008, showing the molecular weight determination of the components corresponding to the HIC map Peak3 of TL009-T-ADC.
  • Figure 16 is a mass spectrometry test result of BT001009 showing the molecular weight of the component corresponding to the HIC map Peak3 of TL010-T-ADC.
  • Figure 17 is a mass spectrometry test result of BT001086 showing the molecular weight of the component corresponding to the HIC map Peak4 of TL010-T-ADC.
  • Figure 18 shows the mass spectrometric test results of BT001071.
  • Figure 19 is a graph showing the inhibition of tumor cells BxPC-3 by BT001014 and BT001015.
  • Figure 20 is a graph showing tumor volume as a function of time in Example 53.
  • Figure 21 shows the mass spectrometric test results of BT001020.
  • Figure 22 is a HIC map of TL042-T-ADC.
  • Figure 23 shows the mass spectrometric test results of BT001019.
  • Figure 24 shows the mass spectrometric test results of BT001014.
  • Figure 25 shows the mass spectrometric test results of BT001015.
  • the nuclear magnetic resonance ( 1 H NMR) measuring instrument was performed using a Bruker 400 MHz nuclear magnetic resonance apparatus; the solvent was determined to be deuterated methanol (CD 3 OD), deuterated chloroform (CDCl 3 ) or hexamethyl dimethyl sulfoxide (DMSO-d 6). ); the internal standard substance is tetramethylsilane (TMS).
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • MS mass spectrometer
  • ESI Agilent 6120B
  • Lithium hydroxide monohydrate (21 mg, 0.51 mmol) was dissolved in water (1 mL) and added to (S)-(4-((2-((9))))) A solution of tert-butyl carbonyl)amino)-3-phenylpropionamido)methyl)phenyl)carbamate (102 mg, 0.17 mmol) in tetrahydrofuran (2 mL). The raw materials disappeared by LCMS. Water (20 mL) was added to the mixture and the mixture was evaporated. The organic phase was combined and the organic layer was washed with brine (30 mL? The desiccating agent was filtered off, and the solvent was evaporated evaporated. ESI-MS (m/z): 370.2 [M+H] + .
  • Lithium hydroxide monohydrate (42 mg, 1.0 mmol) was dissolved in water (2 mL) and added to (R)-(4-((2-((9))))) A solution of tert-butyl carbonyl)amino)-3-phenylpropionamido)methyl)phenyl)carbamate (200 mg, 0.34 mmol) in tetrahydrofuran (3 mL) The raw materials disappeared by LCMS. Water (20 mL) was added to the reaction mixture, and ethyl acetate (30 mL, 4). The organic phase was combined and the organic layer was washed with brine (30 mL? The desiccating agent was filtered off, and the solvent was evaporated. ESI-MS (m/z): 370.2 [M+H] + .
  • Example 18 1-(4-((S)-1-(((S)-1-((4R,3R)-3-((S))) -1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimethyl) Benzyl)-3-methylbutyryl)-N,3-dimethylbutyrylamino)-3-methoxy-5-methylheptanoyl)pyrrolidin-2-yl)-3-A Oxy-2- Methylpropionamide)-3-phenylpropionamide)methyl)phenyl)amino)-1-oxo-5-ureidopentyl-2-yl)amino)-3-methyl-1-oxo Butyl-2- (amino)-4-oxobutyramide) piperidine-4-carboxylic acid pentafluorophenol ester (TL006)
  • Example 19 cis-1-(4-((())(((()))((((())) S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(two) Methylamino)-3-methylbutyryl)-N,3-dimethylbutyryl)-3-methoxy-5-methylheptanoyl)pyrrolidin-2-yl)-3-A Oxyl -2-methylpropionamide)-3-phenylpropionamide)methyl)phenyl)amino)-1-oxo-5-ureidopentyl-2-yl)amino)-3-methyl-1 -oxobutyl Synthesis of pentafluorophenol ester of 2-yl)amino)-4-oxobutyramide)-2-methylpiperidine-4-carboxylate (TL007)
  • Methyl cis-2-trifluoromethyl-piperidine-4-carboxylate (100 mg, 0.47 mmol), benzyl 4-bromocrotonate (242 mg, 0.94 mmol), potassium carbonate (130 mg, 0.94 mmol) Add into a 20 mL single-mouth bottle, stir well, and heat up to 100 ° C for 6 h. The reaction was monitored by high performance liquid chromatography-mass chromatography. The title compound was obtained as a pale yellow oily liquid. ESI-MS (m/z): 386.1 [M+H] + .

Abstract

属于医药技术领域，涉及细胞毒素、连接体和偶联物，制备所述细胞毒素和偶联物的方法，以及所述细胞毒素和偶联物在预防和/或治疗肿瘤疾病中的用途。

Description

细胞毒素和偶联物、其用途和制备方法 技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及细胞毒素、连接体和偶联物，制备所述细胞毒素和偶联物的方法，以及所述细胞毒素和偶联物在预防和/或治疗肿瘤疾病中的用途。
背景技术
化疗一度是癌症的标准疗法，但高杀伤力的小分子药物会误杀正常细胞，引起严重的副作用。靶向抗肿瘤药物由于同时具有靶向性和抗肿瘤活性，已成为当今肿瘤研究领域的热点。20世纪以来，生物大分子药物(例如治疗性抗体或抗体片段)用于肿瘤的靶向治疗已取得突破性进展。然而，生物大分子药物虽然靶向性强，但对实体瘤的治疗效果有限；而细胞毒药物虽然对癌细胞具备高度的杀伤效力，但缺乏靶向性，常常误伤正常细胞，从而引起严重毒副作用。
近年来研究发现，治疗性抗体可以与细胞毒药物相连，形成抗体-药物偶联物(ADC)。ADC融合了抗体的靶向作用和小分子细胞毒药物的细胞毒性，成为一种“生物导弹”。抗体引导ADC结合到靶细胞，随后被细胞内化，释放药物，治疗疾病。由于抗体对肿瘤细胞相关靶点具有特异性和靶向性，其应用价值不仅体现在治疗方面，同时还成为药物靶向输送的理想载体，降低了药物的副作用。
通常，ADC由抗体、细胞毒性药物及连接体(Linker)组成。细胞毒药物通过连接体共价偶联到单抗上；抗体(例如单克隆抗体)能够特异性识别肿瘤细胞表面的特异性靶点，进而能够引导ADC到达癌细胞表面，并使ADC通过细胞内吞效应进入癌细胞；然后，细胞毒性药物可在胞内被释放，从而达到专一性杀灭癌细胞而不损伤正常组织细胞的作用。部分ADC在肿瘤微环境中会特异性释放出毒素，毒素通过各种方式进入细胞发挥杀伤作用。
目前，已经上市的ADC有四种：Mylotarg(Gemtuzumab Ozogamicin，吉妥珠单抗奥唑米星)，Adcetris(Brentuximab Vedotin，CD30单抗-MMAE)、Kadcyla(Trastuzumab Emtansine，曲妥珠单抗-美登木素生物碱)和Besponsa(Inotuzumab ozogamicin，CD22单抗-卡奇霉素)。Mylotarg由于其毒副作用较高且疗效有限，辉瑞公司将其主动撤市。
发明内容
在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。
本发明中，术语“偶联物”是指小分子药物与靶向部分连接得到的物质。在本发明的部分实施方案中，小分子药物与靶向部分通过连接体相连。所述连接体在特定环境(例如胞内低pH值环境、偏酸性的肿瘤微环境)中或特定作用(例如溶酶体蛋白酶的作用)下能够断裂，从而使小分子药物与靶向部分分离。在本发明的部分实施方案中，所述连接体包含可切割或不可切割的单元，例如肽或二硫键。在本发明的部分实施方案中，小分子药物与靶向部分直接通过共价键相连，所述共价键在特定环境或作用下能够断裂，从而使小分子药物与靶向部分分离。
在本发明的部分实施方案中，偶联物中的小分子药物为细胞毒剂。
本发明中，术语“细胞毒剂”指抑制或防止细胞的功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质，例如：放射性同位素，例如At 211、I 131、I 125、Y 90、Re 186、Re 188、Sm 153、Bi 212、P 32、Pb 212和Lu的放射性同位素；化疗剂，例如甲氨蝶呤(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)、长春花生物碱类(vincaalkaloids)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、依托泊苷(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法仑(melphalan)、丝裂霉素(mitomycin)C、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔红霉素(daunorubicin)或其它嵌入剂；酶及其片段，诸如核溶酶；抗生素；和毒素，诸如小分子毒素或者细菌、真菌、植物或动物起源的酶活性毒素，包括其片段和/或变体；生长抑制剂；药物模块；以及本发明的如式(I)所示的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物。术语“毒素”指能够对细胞的生长或增殖产生有害效果的物质。
“小分子”在本文中定义为具有细胞毒活性的小分子药物。
本发明中，术语“连接体”是指将小分子药物与靶向部分连接起来的片段。
本发明中，术语“靶向部分”指偶联物中能够与细胞表面的靶标(或靶标的部分)特异性结合的部分。通过靶向部分与靶标的相互作用，偶联物可以被递送至特定的细胞群。
本发明中，当偶联物中的靶向部分为抗体时，偶联物可被称为“药物-抗体偶联物”。本发明中，“药物-抗体偶联物”与“免疫偶联物”可以互换使用。
在本文中，术语“抗体”取其最广义的解释，包括完整的单克隆抗体、多克隆抗体以及由至少两个完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)，只要它们具有所需的生物学活性。在本文中，“抗体”和“免疫球蛋白”可以互换使用。
在本文中，术语“单克隆抗体”指抗体来自一群基本均一的抗体，即构成该集群的各抗体完全相同，除了可能存在的少量天然突变。单克隆抗体具有针对抗原的一个决定簇(表位)的高特异性，而与其相对的多克隆抗体则包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体。除了特异性之外，单克隆抗体的优点还在于合成时可以不受其他抗体的污染。此处修饰语“单克隆”表示该抗体的特征在于来自一个基本均一的抗体群，而不应理解成需由特殊方法制得。
在本发明的部分实施方案中，单克隆抗体还特别包括嵌合抗体，即重链和/或轻链的一部分与某种、某类或某亚类抗体相同或同源，其余部分则与另一种、另一类或另一亚类抗体相同或同源，只要它们具有所需的生物学活性(参见例如US 4,816,567；和Morrison等人，1984，PNAS，81：6851-6855)。可用于本发明的嵌合抗体包括灵长类化(primatized)抗体，其包含来自非人灵长类(例如古猴、猩猩等)的可变区抗原结合序列和人恒定区序列。
术语“抗体片段”是指抗体的一部分，优选是抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fd、Fv、dAb和互补决定区片段，二抗体(diabody)，线性抗体和单链抗体分子。
术语“双特异性抗体”亦称为“双功能抗体偶联物”，是指由第一抗体(片段)和第二抗体(片段)通过偶联臂所形成的偶联物，该偶联物保留了各自抗体的活性，故具有双功能和双特异性。
术语“多特异性抗体”包括例如三特异性抗体和四特异性抗体，前者是具有三种不同抗原结合特异性的抗体，而后者是具有四种不同抗原结合特异性的抗体。
术语“完整抗体”指包含抗原结合可变区和轻链恒定区(CL)、重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的抗体。恒定区可以是天然序列(例如人天然恒定区序列)或其氨基酸序列变体。完整抗体优选是具有一种或多种效应功能的完整抗体。
术语“前抗(Probody)”是一种修饰的抗体，包括一种抗体或一种抗体片段，能专门与其靶点结合，能够与掩蔽基团耦合，其中掩蔽基团指对抗体或抗体片段与其靶点的结合能力的裂解常数，比没有耦合掩蔽基团的抗体或抗体片段与其靶点的结合能力的裂解常数至少大100倍或1000倍、或者10000倍。
在本发明中，非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式指包含最少量非人免疫球蛋白序列的嵌合抗体。大多数人源化抗体是人接受者免疫球蛋白的超变区残基被置换成具有所需特异性、亲和力和功能的非人(例如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类)超变区残基(供者抗体)。在一些实施方案中，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基也被置换成非人残基。而且，人源化抗体还可以包含受者抗体或供者抗体中没有的残基。这些修饰是为了进一步优化抗体的性能。人源化抗体一般包含至少一个，通常是两个可变区，其中所有或几乎所有超变环(hypervanable loops)与非人免疫球蛋白的相对应，而FR则完全或几乎完全是人免疫球蛋白的序列。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区(Fc，通常是人免疫球蛋白Fc)的至少一部分。有关细节参见例如Jones等人，1986，Nature，321：522-525；Riechmann等人，1988，Nature，332：323-329；和Presta，1992，Curr Op Struct Bwl 2：593-596。
完整抗体可根据重链恒定区的氨基酸序列分为不同的“类”。主要的五类是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中几类还可以分为不同的“亚类”(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。抗体不同类的重链恒定区分别称为α、β、ε、γ和μ。免疫球蛋白不同类的亚基结构和三维构型是本领域中公知的。
在本发明中，尽管大多数情况下抗体中的氨基酸取代是被L-氨基酸取代，但也不限于此。在一些实施方案中，抗体肽链中可以包括一个或多个D-氨基酸。认为包含D-氨基酸的肽在口腔、肠道或血浆中比仅包含L-氨基酸的肽更加稳定而不易降解。
本发明所用的单克隆抗体可以由许多方法生产。例如，用于本发明的单克隆抗体可以通过杂交瘤方法，使用许多物种(包括小鼠、仓鼠、大鼠和人的细胞)获得(参见例如Kohler等人，1975，Nature，256：495)，或者通过重组DNA技术制得(参见例如US 4,816,567)，或者从噬菌体抗体库中分离得到(参见例如Clackson等人，1991，Nature，352：624-628；和Marks等人，1991，Journal of Molecular Biology，222：581-597)。可用于本发明的单克隆抗体包括但不限于：抗Her 2的单克隆抗体、例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab)，或抗Trop-2的单克隆抗体，例如Sacituzumab(即Isactuzumab或hRS7抗体，)。
在本发明的部分实施方案中，靶向部分为曲妥珠单抗或帕妥珠单抗(Pertuzumab)。曲妥珠单抗是抗Her 2的单克隆抗体，其氨基酸序列是本领域技术人员已知的，其示意性序列可参见，例如 CN103319599，末位Lys是容易缺失的但不影响生物活性，参见Dick，L.W.等人，Biotechnol.Bioeng.，100：1132-1143。
曲妥珠单抗的示例性的重链序列和轻链序列可参见例如SED ID NO：1和SED ID NO：2。在本发明中，当提及或涉及曲妥珠单抗的重链序列和轻链序列时，其分别使用SED ID NO：1和SED ID NO：2所示的序列来进行描述。帕妥珠单抗的示例性的重链序列和轻链序列可参见US7560111的SEQ ID No.16和SEQ ID No.15。
在本发明的部分实施方案中，靶向部分抗Trop-2抗体为记载于美国专利第7,517,964号中的RS7(即本发明Sacituzumab)；以及记载于US2012/0237518中的hRS7(即本发明Sacituzumab)。可用于本发明的抗Trop-2抗体还可以通过CN103476941A中公开的载体设计、构建和构建展示抗体的抗体库的方法筛选获得，也可以索伦托医疗公司(Sorrento Therapeutics，Inc.)的
Figure PCTCN2018082809-appb-000001
文库进行筛选获得。
在本发明中，ErbB2和Her2可互换使用，二者均表示天然序列的人Her2蛋白(Genebank登录号：X03363，参见例如Semba等人，1985，PNAS，82：6497-6501；和Yamamoto等人，1986，Nature，319：230-234)及其功能性衍生物，例如氨基酸序列变体。erbB2表示编码人Her2的基因，neu表示编码大鼠p185neu的基因。在部分实施方案中，本发明的化合物或偶联物能够抑制或杀伤表达ErbB2受体的细胞，例如乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、胃癌细胞、子宫内膜癌细胞、唾液腺癌细胞、肺癌细胞、肾癌细胞、结肠癌细胞、甲状腺癌细胞、胰腺癌细胞、膀胱癌细胞或肝癌细胞。
在本发明中Trop-2或TROP2是指人滋养层细胞表面抗原-2(human trophoblast cell-surface antigens 2)，又称为TACSTD2、M1S1、GA733-1、EGP-1，其是由许多人类肿瘤(如乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌)细胞表达的细胞表面受体。在部分实施方案中，本发明的化合物或偶联物能够抑制或杀伤表达TROP2受体的细胞，例如乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌。
在本文中，术语“C 1-6烷基”表示直链或支链的含有1-6个碳原子的烷基，包括例如“C 1-4烷基”、“C 1-3烷基”等，具体实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1，2-二甲基丙基等。
在本文中，术语“C 2-6烯基”是指含有至少一个双键且碳原子数为2-6的直链、支链或环状的烯基，包括例如“C 2-4烯基”等。其实例包括但不限于：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1，3-丁二烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、1，3-戊二烯基、1，4-戊二烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1，4-己二烯基、环戊烯基、1，3-环戊二烯基、环己烯基、1，4-环己二烯基等。
在本文中，术语“C 2-6炔基”是指含有至少一个三键且碳原子数为2-6的直链或支链的炔基，包括例如“C 2-4炔基”等。其实例包括但不限于：乙炔基、丙炔基、2-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-甲基-2-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、5-甲基-2-己炔基等。
在本文中，术语“卤素”包括氟、氯、溴、碘。
在本文中，术语“3-8元环烷基”或“C 3-8环烷基”是指含有3-8个碳原子的饱和环状烷基，包括例如“3-6元环烷基”、“4-6元环烷基”、“5-7元环烷基”或“5-6元环烷基”等。具体实例包括但不限于：环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、环庚烷基、环辛烷基等。
在本文中，术语“3-7元脂杂环基”是指含有3-7个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环状基团。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“3-7元杂环基”包括例如“3-7元含氮杂环基”、“3-7元含氧杂环基”、“3-6元杂环基”、“3-6元含氧杂环基”、“4-7元杂环基”、“4-6元杂环基”、“5-7元杂环基”、“5-6元杂环基”、“5-6元含氮杂环基”，包括但不限于环氧乙烷基、氧代环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、高哌嗪基等。
在本文中，术语“6-12元螺环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用一个碳原子所形成的、含有6-12个环碳原子的环状结构。任选地，环状结构中的碳原子可以被氧代。“6-12元螺环基”包括例如、“6-11元螺环基”、“6-10元螺环基”、“7-10元螺环基”、“7-9元螺环基”、“7-8元螺环基”、“9-10元螺环基”、“3-10元螺环基”等。具体实例包括但不仅限于：
Figure PCTCN2018082809-appb-000002
Figure PCTCN2018082809-appb-000003
Figure PCTCN2018082809-appb-000004
等。
在本文中，术语“6-12元桥环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个非相邻碳原子所形成的、含有6-12个环碳原子的环状结构。任选地，环状结构中的碳原子可以被氧代。“6-12元桥环基”包括例如“6-11元桥环基”、“5-10元桥环基”、“7-10元桥环基”、“7-9元桥环基”、“7-8元桥环基”、“9-10元桥环基”、“3-10元桥环基”等。具体实例包括但不仅限于：
Figure PCTCN2018082809-appb-000005
Figure PCTCN2018082809-appb-000006
Figure PCTCN2018082809-appb-000007
等。
在本文中，术语“6-12元稠环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的、含有6-12个环碳原子的环状结构，包括“6-11元稠环基”、“6-10元稠环基”、“6-8元稠环基”、“10-12元稠环基”、“7-10元稠环基”。其实例包括但不限于：
Figure PCTCN2018082809-appb-000008
Figure PCTCN2018082809-appb-000009
Figure PCTCN2018082809-appb-000010
等。
在本文中，术语“6-12元螺杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用一个环原子所形成的、含有6-12个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环状结构。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“6-12元螺杂环基”包括例如“6-11元螺杂环基”、“5-10元螺杂环基”、“7-11元螺杂环基”、“7-10元螺杂环基”、“7-9元螺杂环基”、“7-8元螺杂环基”、“9-10元螺杂环基”、“3-10元螺杂环基”等。具体实例包括但不仅限于：
Figure PCTCN2018082809-appb-000011
Figure PCTCN2018082809-appb-000012
等。
在本文中，术语“6-12元桥杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个非相邻的环原子所形成的、含有6-12个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环状结构。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“6-12元桥杂环基”包括例如“6-11元桥杂环基”、“6-9元桥杂环基”、“6-10元桥杂环基”、“7-10元桥杂环基”、“7-9元桥杂环基”、“7-8元桥杂环基”、“8元桥杂环基”、“9-10元桥杂环基”、“3-10元桥杂环基”等。具体实例包括但不仅限于：
Figure PCTCN2018082809-appb-000013
Figure PCTCN2018082809-appb-000014
Figure PCTCN2018082809-appb-000015
等。
在本文中，术语“6-12元稠杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的、含有6-12个环原子(其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的环状结构。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。“6-12元稠杂环基”包括例如“6-11元稠杂环基”、“5-10元稠杂环基”、“7-10元稠杂环基”、“3-10元稠杂环基”、“3-10元含氮稠杂环基”、“9-10元稠杂环基”、“9-10元含氮稠杂环基”、“6-12元含氧稠杂环基”等。具体实例包括但不仅限于：四氢咪唑并[4，5-c]吡啶基、3，4-二氢喹唑啉基、1，2-二氢喹喔啉基、苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯基、1，3-二氢异苯并呋喃基、4H-1，3-苯并噁嗪基、4，6-二氢-1H-呋喃并[3，4-d]咪唑基、3a，4，6，6a-四氢-1H-呋喃并[3，4-d]咪唑基、4，6-二氢-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑基、4，6-二氢-1H-吡咯并[3，4-d]咪唑基、苯并咪唑烷基、八氢-苯并[d]咪唑基、十氢喹啉基、六氢噻吩并咪唑基、六氢呋喃并咪唑基、4，5，6，7-四氢-1H-苯并[d]咪唑基、八氢环戊烯并[c]吡咯基、二氢吲哚基、二氢异吲哚基、苯并噁唑烷基、苯并噻唑烷基、1，2，3，4-四氢异喹啉基、1，2，3，4-四氢喹啉基、4H-1，3-苯并噁嗪基等。
在本文中，术语“芳基”是指具有芳香性的单环或多环烃基，例如6-20元芳基、6-10元芳基、5-8元芳基等。具体的实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基、菲基等。所述“6-20元芳基”是指含有6-20个环原子的芳基。
在本文中，术语“杂芳基”是指具有芳香性的环状基团，其中至少一个环原子为杂原子，例如氮原子、氧原子或硫原子。任选地，环状结构中的环原子(例如碳原子、氮原子或硫原子)可以被氧代。具体实例包括但不限于5-10元杂芳基、5-10元含氮杂芳基、6-10元含氧杂芳基、6-8元含氮杂芳基、5-8元含氧杂芳基等，例如呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮基、4-吡啶酮基、嘧啶基、1，4-二氧杂环己二烯基、2H-1，2-噁嗪基、4H-1，2-噁嗪基、6H-1，2-噁嗪基、4H-1，3-噁嗪基、6H-1，3-噁嗪基、4H-1，4-噁嗪基、哒嗪基、吡嗪基、1，2，3-三嗪基、1，3，5-三嗪基、1，2，4，5-四嗪基、氮杂环庚三烯基、1，3-二氮杂环庚三烯基、氮杂环辛四烯基等。
任选地，本发明中涉及到的基团中的氢可以被氘取代。
在本文中，术语“反应性基团”指能够被转化或衍生化或与其他官能团成键的基团。
本发明中提到的基团，是由所述基团对应的化合物中1、2或3个氢原子被其它原子取代所得到的，所述被取代的的氢原子的个数可以根据所述基团在本发明化合物或偶联物中形成的价键数所确定。例如，烷基是由烷烃中一个氢原子被取代得到的基团，亚烷基是由烷烃中两个氢原子被取代得到的基团，甲基和乙基分别是由甲烷和乙烷中一个氢原子被取代得到的基团，亚甲基和亚乙基分别是由甲烷和乙烷中两个氢原子被取代得到的基团。
在本文中，术语“溶剂化物”是指化合物与溶剂分子缔合形成的物质。所述溶剂可以是有机溶剂(例如甲醇、乙醇、丙醇、乙腈等)等。例如，本发明化合物可以与乙醇形成乙醇化物。
在本文中，术语“水合物”是指化合物与水分子缔合形成的物质。
在本发明的实施方案中，如果所述化合物存在手性碳，则本发明包括基于该手性碳的任何立体构型形成的异构体，例如包括消旋体或任何一种镜像异构体。而且，本发明包括全部可能出现的其他立体异构体。也就是说，本发明的化合物包括所有对映异构体、非对映异构体、顺反异构体、消旋体等。
经过深入地研究，本发明人意外地发现了一种毒素分子，其具有明显的体外细胞毒活性，稳定性好，并且制备方法简单，通过不同的偶联方式可高效地与抗体进行偶联，还发现了一种连接体，其可以将毒素分子与抗体高效地偶联，还发现了一种药物-抗体偶联物，其可在细胞内顺利释放毒素分子，对肿瘤细胞具有良好的抑制能力，由此提供了下述发明。
在一个方面，本申请提供了如式(I)所示的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，
Figure PCTCN2018082809-appb-000016
其中，
X选自：CH 2、S、S＝(O)、S(O) 2、C＝(O)、CHF、CHCN、CHN 3、CH-OH、CH-ONHR w或CHOR w，其中，R w为H(氢)、D(氘)或任选被M 1取代的C 1-6烷基；
Y不存在，或选自任选被M 2取代的下列基团：C 1-6烷基、C 3-6环烷基、3-7元脂杂环基、C 2- 6炔基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基；
Z不存在，或选自任选被M 3取代的下列基团：C 1-6烷基、C 3-6环烷基、3-7元脂杂环基、芳基、杂芳基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基；
m＝0、1、2或3；
n＝0、1、2或3；
r＝1、2、3、4、5或6；
R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、NHR a、N(R a) 2、OR a、SR a、S(O)R a、S(O) 2R a、任选被M 4取代的下列基团：C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 3-6环烷基、3-7元脂杂环基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、C 2-6炔基、芳基、杂芳基；
R 2选自：H(氢)、D(氘)、任选被M 5取代的下列基团：C 1-6烷基、C 3-6环烷基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、-(CH 2CH 2O) j1-(CH 2) j2R a；
R a独立地选自：H(氢)、D(氘)、任选被M 5取代的C 1-6烷基、N 3、OH、CN、NR bR c；
R b和R c各自独立地选自：H(氢)、D(氘)、任选被M 5取代的下列基团：C 1-6烷基、C 3-6环烷基、3-7元脂杂环基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基；
j1和j2各自独立地选自0、1、2、3；
R 3选自：H(氢)、D(氘)、任选被M 6取代的下列基团：C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-7元脂杂环基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、-(CH 2CH 2O) q1-(CH 2) q2-R d、芳基、杂芳基；
R 4-R 20各自独立地选自：H(氢)、D(氘)、卤素、任选被M 7取代的下列基团：C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-7元脂杂环基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、-(CH 2CH 2O) q3-(CH 2) q4-R e、芳基、杂芳基；
任选地，R 3和R 5与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
任选地，R 4和R 5与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
任选地，R 4和R 6与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
任选地，R 6和R 7与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
任选地，R 7和R 8与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
任选地，R 7和R 9与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
任选地，R 9和R 10与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
任选地，R 9和R 12与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
任选地，R 10和R 11与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
任选地，R 10和R 12与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
任选地，R 12和R 13与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
任选地，R 12和R 14与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
任选地，R 14和R 15与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
任选地，R 16和R 18与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
任选地，R 16和R 17与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
任选地，R 18和R 19与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
任选地，R 18和R 20与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
R d、R e各自独立地选自：H(氢)、D(氘)、N 3、OH、CN、NR fR g；
R f和R g各自独立地选自：H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基；
q1、q2、q3、q4各自独立地选自0、1、2、3、4、5或6；
A选自被反应性基团M 8取代的芳基、被反应性基团M 8取代的杂芳基；
Q选自H(氢)、D(氘)、任选被M 9取代的下列基团：C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-7元脂杂环基、芳基、杂芳基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基，或者，Q和R 3与它们所连接的原子一起形成任选被M 9取代的5至7元环；
任选地，Q被反应性基团M 10取代；
所述M 1-M 7、M 9、J各自独立地选自：H(氢)、D(氘)、羟基、甲基磺酰基、氨基、羧基、卤素、CF 3、CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-10炔基；
所述M 8和M 10各自独立地选自被取代基取代的羟基、氨基、肼基或羟胺基，所述取代基选自H(氢)，D(氘)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、羟基取代的C 1-6烷基、氰基取代的C 1-6烷基、N 3取代的C 1-6烷基、卤素取代的C 1-6烷基、3-7元脂杂环基5-7元杂芳基、OH。
在某些实施方案中，所述式(I)化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物具有以下特征中的一个或多个：
(1)X为CH 2；
(2)Y不存在，或选自C 1-6亚烷基、氘代的C 1-6烷基；
(3)Z不存在，或选自任选被氘、C 1-4烷基、羟基或甲氧基取代的C 1-6烷基(例如甲基或乙基、氘代甲基或乙基、羟基取代的甲基或乙基、甲氧基取代的甲基或乙基、氘和羟基取代的甲基或乙基)；
(4)m＝1；
(5)n＝1；
(6)r＝1，r＝2或r＝3；优选地，r＝1；
(7)R 2选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基(例如甲基)；
(8)R 3选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基(例如甲基)；
(9)R 4-R 20各自独立地选自H(氢)、D(氘)、任选被氘取代的C 1-6烷基(例如甲基、乙基、异丙基、仲丁基，氘代甲基、氘代乙基、氘代异丙基、氘代仲丁基)、任选被氘取代的C 1-6烷氧基(例如甲氧基、氘代的甲氧基)；
(10)Q为甲基。
在某些实施方案中，所述化合物具有上述特征中的(1)、(4)、(5)、(8)和(9)。
在某些实施方案中，所述化合物具有上述特征中的(1)、(4)、(5)、(8)、(9)和(10)。
在某些实施方案中，所述化合物具有上述特征中的(2)、(3)、(6)和(7)中的一个或多个。
在某些实施方案中，所述化合物具有上述特征中的(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)和(10)。
在某些实施方案中，所述式(I)化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物中，
X为CH 2；
Y不存在，或为亚甲基或亚乙基；
Z不存在，或选自任选被氘、羟基、C 1-4烷基或甲氧基取代的C 1-6烷基(例如甲基或乙基、氘代甲基或乙基、羟基取代的甲基或乙基、甲氧基取代的甲基或乙基、氘和羟基取代的甲基或乙基)；
m＝1；
n＝1；
r＝1，r＝2或r＝3(优选地，r＝1)；
R 2为H(氢)、D(氘)、或甲基；
R 3为甲基；
R 4-R 20各自独立地选自H(氢)、D(氘)、甲基、乙基、异丙基、仲丁基、甲氧基；
Q为甲基。
在某些实施方案中，所述式(I)化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物中，
R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、S(O) 2R a、任选被M4取代的下列基团：C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 2-6炔基、芳基、杂芳基。
在某些实施方案中，R a选自C 1-6烷基。
在某些实施方案中，R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙烷基、乙炔基、甲磺酰基、任选被M 4取代的苯基、任选被M 4取代的5-7元杂芳基、任选被M 4取代的5-7元脂杂环基。
在某些实施方案中，M 4选自H(氢)、D(氘)、羟基、甲基磺酰基、C 1-6烷基(例如甲基)。
在某些实施方案中，R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙烷基、乙炔基、甲基磺酰基、苯基、对羟基苯基、对(甲基磺酰基)苯基、5元含氮杂芳基、6元含氮脂杂环基、6元含氮杂芳基。
任选地，所述5元含氮杂芳基、6元含氮脂杂环基或6元含氮杂芳基还含有硫原子和/或氧原子。
在某些实施方案中，所述5元含氮杂芳基选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000017
在某些实施方案中，所述5元含氮杂芳基为
Figure PCTCN2018082809-appb-000018
在某些实施方案中，所述6元含氮脂杂环基选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000019
在某些实施方案中，所述6元含氮杂芳基选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000020
在某些实施方案中，所述6元含氮杂芳基选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000021
在某些实施方案中，所述式(I)化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物中，
A选自被M 8取代的6-10元芳基、被M 8取代的5-6元杂芳基。
在某些实施方案中，A选自被M 8取代的苯基、被M 8取代的5-6元含氮杂芳基、被M 8取代的5-6元含氧杂芳基、被M 8取代的5-6元含硫杂芳基。
任选地，所述5-6元含氮杂芳基还含有硫原子和/或氧原子。
在某些实施方案中，所述5-6元含氮杂芳基选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000022
在某些实施方案中，所述5-6元含氮杂芳基选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000023
在某些实施方案中，M 8为被取代基取代的羟基、氨基、肼基或羟胺基，所述取代基选自H(氢)，D(氘)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、羟基取代的C 1-6烷基、氰基取代的C 1-6烷基、N 3取代的C 1-6烷基、卤素取代的C 1-6烷基、C 3-7脂杂环基、C 5-7杂芳基、OH。
在某些实施方案中，A选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000024
任选地，A被1-4个取代基R h所取代，R h独立地选自D(氘)、卤素、CF 3、CN、C 1-6烷基、氟代C 1-4烷基、C 1-6烷氧基、C 3-6环烷基、C 2-10烯基、C 2-10炔基。
在某些实施方案中，A为被氨基取代的苯基。
在某些实施方案中，A为
Figure PCTCN2018082809-appb-000025
在某些实施方案中，所述化合物具有式(II)、(II’)或(II”)所示的结构；
Figure PCTCN2018082809-appb-000026
Figure PCTCN2018082809-appb-000027
其中，
Y不存在，或为亚甲基；
Z不存在，或为亚甲基或亚乙基；
R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙烷基、乙炔基、甲基磺酰基、苯基、对羟基苯基、对(甲基磺酰基)苯基、
Figure PCTCN2018082809-appb-000028
噁唑基、异噁唑基、三氮唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、任选被＝O取代的吗啉基、任选被＝O和/或C 1-6烷基(例如甲基)取代的哌嗪基、任选被＝O取代的硫代吗啉基。
优选地，R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙烷基、乙炔基、甲基磺酰基、苯基、对羟基苯基、对(甲基磺酰基)苯基、
Figure PCTCN2018082809-appb-000029
噁唑基、异噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、任选被＝O取代的吗啉基、任选被＝O和/或C 1-6烷基(例如甲基)取代的哌嗪基、任选被＝O取代的硫代吗啉基；
R 2为H(氢)、D(氘)或甲基。
在某些实施方案中，所述化合物具有式(III)、(III’)或(III”)所示的结构
Figure PCTCN2018082809-appb-000030
在某些实施方案中，所述化合物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000031
Figure PCTCN2018082809-appb-000032
Figure PCTCN2018082809-appb-000033
Figure PCTCN2018082809-appb-000034
Figure PCTCN2018082809-appb-000035
Figure PCTCN2018082809-appb-000036
Figure PCTCN2018082809-appb-000037
本申请还包含一种偶联物，包含一个或多个如上所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，以及一个或多个连接体，其中，所述化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物通过反应性基团与所述连接体连接。
任选地，所述连接体还与靶向部分共价连接。
在某些实施方案中，所述偶联物中，所述化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物通过M 8和任选的M 10与连接体连接。
在某些实施方案中，本申请的偶联物具有如下结构，
G-B
其中，G为如上所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其通过M 8和任选的M 10与B相连；
B为连接体。在某些实施方案中，其具有如下结构：
Figure PCTCN2018082809-appb-000038
其中
L 1选自：肽、寡糖、-(CH 2) t-、-(CH 2CH 2O) t-(CH 2) t-、Val、Cit、Phe、Lys、D-Val、Leu、Lys、Gly、Ala、Asn、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn，t＝1、2、3、4、5或6；
L 2选自：-(CH 2) y-、-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-、
Figure PCTCN2018082809-appb-000039
其中，
R k、R l、R m、R n各自独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1- 6烷氧基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、C 3-6环烷基；
y各自独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
L 3选自下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000040
D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、芳基、杂芳基、3-8元环烷基-W-，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、＝O、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、COOH、SO 3H；W为氧或NR j，R j独立地选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 1-6烷氧基、氰基C 1-2烷基。
在某些实施方案中，本申请的偶联物具有如下结构，
G-B或(G-B) α-E，
其中，G为如上所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其通过M 8和任选的M 10与B相连；
B为连接体。在某些实施方案中，其具有如下结构：
Figure PCTCN2018082809-appb-000041
其中
L 1选自：肽、寡糖、-(CH 2) t-、-(CH 2CH 2O) t-(CH 2) t-、Val、Cit、Phe、Lys、D-Val、Leu、Lys、Gly、Ala、Asn、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn，t＝1、2、3、4、5或6；
L 2选自：-(CH 2) y-、-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-、
Figure PCTCN2018082809-appb-000042
其中，
R k、R l、R m、R n各自独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1- 6烷氧基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、C 3-6环烷基；
y各自独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
L 3选自下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000043
其中，
L 4、L 5不存在或各自独立地选自C 1-6亚烷基(例如亚甲基)；
F选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000044
s、w各自独立地选自1或2(例如，s和w均为1)；
D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、芳基、杂芳基、3-8元环烷基-W-，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、＝O、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、COOH、SO 3H；W为氧或NR j，R j独立地选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 1-6烷氧基、氰基C 1-2烷基；
E为靶向部分；
α为1-20(例如1-10、1-5、1-4或1-3)之间的数(例如正整数)，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20。
在某些实施方案中，所述杂芳基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基或6-12元稠杂环基含有一个或多个氮原子。
在某些实施方案中，所述杂芳基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基或6-12元稠杂环基含有一个或多个季铵化的氮原子。
在某些实施方案中，所述杂芳基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基或6-12元稠杂环基含有一个或多个氮原子，其中，至少一个氮原子被＝O取代。
在某些实施方案中，所述偶联物的连接体中，L 1选自肽、寡糖、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn。
在某些实施方案中，L 1为
Figure PCTCN2018082809-appb-000045
在某些实施方案中，所述偶联物的连接体中，L 2选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000046
在某些实施方案中，所述偶联物的连接体中，L 3选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000047
在某些实施方案中，L 3为
Figure PCTCN2018082809-appb-000048
在某些实施方案中，所述偶联物的连接体中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-7元环烷基、5-7元脂杂环基、8-11元桥杂环基、8-11元螺杂环基、8-11元稠杂环基、苯基、5-6元杂芳基、5-6元环烷基-W-；所述8-11元桥杂环基、8-11元螺杂环基、8-11元稠杂环基或5-6元杂芳基含有氮原子和/或氧原子。
在某些实施方案中，所述5-7元脂杂环基、8-11元桥杂环基、8-11元螺杂环基、8-11元稠杂环基或5-6元杂芳基含有一个或多个氮原子。
在某些实施方案中，所述5-7元脂杂环基、8-11元桥杂环基、8-11元螺杂环基、8-11元稠杂环基或5-6元杂芳基含有一个或多个季铵化的氮原子。
在某些实施方案中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-7元环烷基、5-7元脂杂环基、5-6元杂芳基、8元桥杂环基、11元螺杂环基、8-11元稠杂环基、苯基、5-6元环烷基-W-；所述5-7元脂杂环基、5-6元杂芳基、8元桥杂环基、11元螺杂环基或8-11元稠杂环基含有氮原子和/或氧原子。
在某些实施方案中，所述5-7元脂杂环基、5-6元杂芳基、8元桥杂环基、11元螺杂环基或8-11元稠杂环基含有一个或多个氮原子。
在某些实施方案中，所述5-7元脂杂环基、5-6元杂芳基、8元桥杂环基、11元螺杂环基或8-11元稠杂环基含有一个或多个季铵化的氮原子。
在某些实施方案中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：环己烷基、5-7元含氮脂杂环基、5-7元含氧脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氧螺杂环基、8元含氮稠杂环基、苯基、环己基-W-。
在某些实施方案中，所述5-7元含氮脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氧螺杂环基或8元含氮稠杂环基含有一个或多个季铵化的氮原子。
在某些实施方案中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000049
在某些实施方案中，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、＝O、CN、CH 2CN、甲基、CF 3。在某些实施方案中，D选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000050
在某些实施方案中，D选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000051
在某些实施方案中，D选自
Figure PCTCN2018082809-appb-000052
在某些实施方案中，R q独立地选自C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 3-6炔基、C 3-8环烷基；R j选自H(氢)、D(氘)、CH 2CN或CH 2CH 2CN；V.为平衡离子，优选为卤素阴离子，更优选为氯离子、溴离子或碘离子。
在某些实施方案中，D选自
Figure PCTCN2018082809-appb-000053
在某些实施方案中，R q独立地选自C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 3-6炔基、C 3-8环烷基；
β＝0、1或2；
γ＝1、2或3。
在某些实施方案中，D选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000054
在某些实施方案中，D选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000055
V.为平衡离子，优选为卤素阴离子，更优选为氯离子、溴离子或碘离子。
在某些实施方案中，D选自
Figure PCTCN2018082809-appb-000056
W为NR j，R j选自H(氢)、D(氘)、CH 2CN或CH 2CH 2CN。
在某些实施方案中，所述偶联物的连接体中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、芳基、杂芳基、3-8元环烷基-W-。
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元环烷基、5-6元脂杂环基、8-11元含氮或含氧桥杂环基、8-11元含氮或含氧螺杂环基、8-11元含氮或含氧稠杂环基、苯基、5-6元含氮杂芳基、5-6元环烷基-W-。
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元环烷基、5-6元含氮或含氧脂杂环基、5-6元含氮杂芳基、8元含氮或含氧桥杂环基、11元含氮或含氧螺杂环基、8-11元含氮或含氧稠杂环基、苯基、5-6元环烷基-W-。
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：环己烷基、5-6元含氮或含氧脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氧螺杂环基、8元含氮稠杂环基、苯基、环己基-W-。
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000057
在某些实施方案中，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、＝O、CN、CH 2CN、甲基、CF 3。
在某些实施方案中，D选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000058
在某些实施方案中，W为NR j，R j选自H(氢)、D(氘)、CH 2CN或CH 2CH 2CN。
在某些实施方案中，D选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000059
在某些实施方案中，W为NR j，R j选自H(氢)、D(氘)、CH 2CN或CH 2CH 2CN。
在某些实施方案中，所述偶联物的连接体中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：3-8元含氮脂杂环基、6-12元含氮桥杂环基、6-12元含氮螺杂环基、6-12元含氮稠杂环基、含氮杂芳基、3-8元环烷基-W-。
在某些实施方案中，所述含氮杂芳基、3-8元含氮脂杂环基、6-12元含氮桥杂环基、6-12元含氧螺杂环基或6-12元含氮稠杂环基含有一个或多个季铵化的氮原子。
在某些实施方案中，所述3-8元含氮脂杂环基中，至少一个氮原子被＝O取代。
在某些实施方案中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元含氮脂杂环基、8-11元含氮桥杂环基、8-11元含氮螺杂环基、8-11元含氮稠杂环基、5-6元含氮杂芳基。
在某些实施方案中，所述5-6元含氮脂杂环基、8-11元含氮桥杂环基、8-11元含氮螺杂环基、8-11元含氮稠杂环基或5-6元含氮杂芳基中，含有一个或多个季铵化的氮原子；优选地，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元含氮脂杂环基、5-6元含氮杂芳基(例如吡啶基)、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基、8-11元含氮稠杂环基。
在某些实施方案中，所述5-6元含氮脂杂环基、5-6元含氮杂芳基(例如吡啶基)、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基或8-11元含氮稠杂环基中，含有一个或多个季铵化的氮原子。
在某些实施方案中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元含氮脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基、8元含氮稠杂环基。
在某些实施方案中，所述5-6元含氮脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基、8元含氮稠杂环基中，含有一个或多个季铵化的氮原子。
在某些实施方案中，所述5-6元含氮脂杂环基中，至少一个氮原子被＝O取代。
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000060
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000061
V.为平衡离子，优选为卤素阴离子，更优选为氯离子、溴离子或碘离子。
在某些实施方案中，R q独立地选自C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 3-6炔基、C 3-8环烷基。
β＝0、1或2；
γ＝1、2或3。
在某些实施方案中，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、＝O、CN、CH 2CN、甲基、CF 3。
在某些实施方案中，所述偶联物的连接体中，D选自下列基团：
[根据细则91更正 18.04.2018]　
Figure PCTCN2018082809-appb-0000620
其中，
Figure PCTCN2018082809-appb-000063
任选地进一步选自
Figure PCTCN2018082809-appb-000064
Figure PCTCN2018082809-appb-000065
任选地进一步选自
Figure PCTCN2018082809-appb-000066
以上基团通过1或2标记的两个位置之一与L 2连接，并且通过另一位置与L 3连接；优选地，以上基团通过1标记的位置与L 2连接，并且通过2标记的位置与L 3连接；
V.为平衡离子，优选为卤素阴离子，更优选为氯离子、溴离子或碘离子。
在某些实施方案中，所述偶联物的连接体中，L 2选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000067
在某些实施方案中，y＝1。
在某些实施方案中，R k、R l、R m、R n均为氢。
在一个方面，本申请提供了一种连接体，其具有如下结构：
Figure PCTCN2018082809-appb-000068
其中，L 1选自：肽、寡糖、-(CH 2) t-、-(CH 2CH 2O) t-(CH 2) t-、Val、Cit、Phe、Lys、D-Val、Leu、Lys、Gly、Ala、Asn、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn，t＝1、2、3、4、5或6；
s选自1或2；
L 2选自：-(CH 2) y-、-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-、
Figure PCTCN2018082809-appb-000069
R k、R l、R m、R n各自独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1- 6烷氧基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、C 3-6环烷基；
y各自独立地为0，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
w选自1或2；
L 3选自下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000070
其中，
L 4、L 5不存在或各自独立地选自C 1-6亚烷基(例如亚甲基)；
F选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000071
D选自被一个或多个R i取代的下列基团：3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、芳基、杂芳基、3-8元环烷基-W-；
W为氧或NR j，R j独立地选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 1-6烷氧基、氰基C 1- 2烷基；
R i独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、＝O、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-10炔基、COOH、SO 3H。
在某些实施方案中，L 1选自肽、寡糖、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lvs、Glv-Glv-Arg、Ala-Ala-Asn。
在某些实施方案中，L 1为
Figure PCTCN2018082809-appb-000072
在某些实施方案中，L 1为
Figure PCTCN2018082809-appb-000073
且s＝1；
其中，该基团通过1标记的位置与G连接，并且通过2标记的位置与L 2连接。
在某些实施方案中，L 2选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000074
在某些实施方案中，L 2选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000075
且w＝1；
其中，该基团通过1标记的位置与L 1连接，并且通过2标记的位置与D连接。
在某些实施方案中，L 3选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000076
在某些实施方案中，L 3选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000077
其中，该基团通过1标记的位置与D连接，并且通过2标记的位置与E连接。
在某些实施方案中，L 3为
Figure PCTCN2018082809-appb-000078
在某些实施方案中，L 3为
Figure PCTCN2018082809-appb-000079
其中，该基团通过1标记的位置与D连接，并且通过2标记的位置与E连接。
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元环烷基、5-6元脂杂环基、8-11元含氮或含氧桥杂环基、8-11元含氮或含氧螺杂环基、8-11元含氮或含氧稠杂环基、苯基、5-6元含氮杂芳基、5-6元环烷基-W-。
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元环烷基、5-6元含氮或含氧脂杂环基、5-6元含氮杂芳基、8元含氮或含氧桥杂环基、11元含氮或含氧螺杂环基、8-11元含氮或含氧稠杂环基、苯基、5-6元环烷基-W-。
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：环己烷基、5-6元含氮或含氧脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氧螺杂环基、8元含氮稠杂环基、苯基、环己基-W-。
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000080
在某些实施方案中，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、＝O、CN、CH 2CN、甲基、CF 3。
在某些实施方案中，D选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000081
在某些实施方案中，W为NR j，R j选自H(氢)、D(氘)、CH 2CN或CH 2CH 2CN。
在某些实施方案中，D选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000082
在某些实施方案中，W为NR j，R j选自H(氢)、D(氘)、CH 2CN或CH 2CH 2CN。
在一个方面，本申请提供了一种连接体，其具有如下结构：
Figure PCTCN2018082809-appb-000083
其中，L1选自：肽、寡糖、-(CH 2) t-、-(CH 2CH 2O) t-(CH 2) t-、Val、Cit、Phe、Lys、D-Val、Leu、Lys、Gly、Ala、Asn、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn，t＝1、2、3、4、5或6；
L 2选自：-(CH 2) y-、-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-、
Figure PCTCN2018082809-appb-000084
其中，
R k、R l、R m、R n各自独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1- 6烷氧基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、C 3-6环烷基；
y各自独立地为0，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
L 3选自下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000085
其中，
L 4、L 5不存在或各自独立地选自C 1-6亚烷基(例如亚甲基)；
F选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000086
s、w各自独立地选自1或2(例如，s和w均为1)；
D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：3-8元含氮脂杂环基、6-12元含氮桥杂环基、6-12元含氮螺杂环基、6-12元含氮稠杂环基、含氮杂芳基、3-8元环烷基-W-；
W为氧或NR j，R j独立地选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 1-6烷氧基、氰基C 1- 2烷基；
R i独立地选自D(氘)、卤素、＝O、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-10炔基、COOH、SO 3H。
在某些实施方案中，L 1选自肽、寡糖、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn。
在某些实施方案中，L 1为
Figure PCTCN2018082809-appb-000087
在某些实施方案中，L 2选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000088
在某些实施方案中，L 3选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000089
在某些实施方案中，L 3为
Figure PCTCN2018082809-appb-000090
在某些实施方案中，所述含氮杂芳基、3-8元含氮脂杂环基、6-12元含氮桥杂环基、6-12元含氧螺杂环基或6-12元含氮稠杂环基含有一个或多个季铵化的氮原子。
在某些实施方案中，所述3-8元含氮脂杂环基中，至少一个氮原子被＝O取代。
在某些实施方案中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元含氮脂杂环基、8-11元含氮桥杂环基、8-11元含氮螺杂环基、8-11元含氮稠杂环基、5-6元含氮杂芳基。
在某些实施方案中，所述5-6元含氮脂杂环基、8-11元含氮桥杂环基、8-11元含氮螺杂环基、8-11元含氮稠杂环基或5-6元含氮杂芳基中，含有一个或多个季铵化的氮原子；优选地，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元含氮脂杂环基、5-6元含氮杂芳基(例如吡啶基)、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基、8-11元含氮稠杂环基。
在某些实施方案中，所述5-6元含氮脂杂环基、5-6元含氮杂芳基(例如吡啶基)、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基或8-11元含氮稠杂环基中，含有一个或多个季铵化的氮原子。
在某些实施方案中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元含氮脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基、8元含氮稠杂环基。
在某些实施方案中，所述5-6元含氮脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基、8元含氮稠杂环基中，含有一个或多个季铵化的氮原子。
在某些实施方案中，所述5-6元含氮脂杂环基中，至少一个氮原子被＝O取代。
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000091
在某些实施方案中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000092
V.为平衡离子，优选为卤素阴离子，更优选为氯离子、溴离子或碘离子；
在某些实施方案中，R q独立地选自C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 3-6炔基、C 3-8环烷基；
β＝0、1或2；
γ＝1、2或3。
在某些实施方案中，R i独立地选自D(氘)、＝O、CN、CH 2CN、甲基、CF 3。
在一个方面，本申请提供了一种连接体，其具有如下结构：
Figure PCTCN2018082809-appb-000093
其中，L 1选自：肽、寡糖、-(CH 2) t-、-(CH 2CH 2O) t-(CH 2) t-、Val、Cit、Phe、Lys、D-Val、Leu、Lys、Gly、Ala、Asn、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn，t＝1、2、3、4、5或6；
L 2选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000094
y＝1；
R k、R l、R m、R n均为氢；
L 3选自下列基团：
Figure PCTCN2018082809-appb-000095
其中，
L 4、L 5不存在或各自独立地选自C 1-6亚烷基(例如亚甲基)；
F选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000096
s、w各自独立地选自1或2(例如，s和w均为1)；
D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、芳基、杂芳基、3-8元环烷基-W-，R i独立地选自D(氘)、卤素、＝O、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-10炔基、COOH、SO 3H；W为氧或NR j，R j独立地选自C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 1-6烷氧基、氰基C 1-2烷基。
在某些实施方案中，L 1选自肽、寡糖、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lvs、Glv-Glv-Arg、Ala-Ala-Asn。
在某些实施方案中，L 1为
Figure PCTCN2018082809-appb-000097
在某些实施方案中，L 3选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000098
在某些实施方案中，L 3为
Figure PCTCN2018082809-appb-000099
在某些实施方案中，所述杂芳基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基或6-12元稠杂环基含有一个或多个氮原子。
在某些实施方案中，所述杂芳基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基或6-12元稠杂环基含有一个或多个季铵化的氮原子。
在某些实施方案中，所述杂芳基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基或6-12元稠杂环基含有一个或多个氮原子，其中，至少一个氮原子被＝O取代。
本申请还提供了一种偶联物，包含药物和连接体，以及任选的靶向部分，所述连接体如上所定义。
在某些实施方案中，所述药物选自如上所定义的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物。
在某些实施方案中，本申请的偶联物的靶向部分(E)为能够与细胞表面的位点特异性结合的物质，靶向部分(E)可以选自小分子配体、蛋白质、多肽，以及非蛋白质试剂如糖、RNA或DNA等。
在本发明的部分实施方案中，所述靶向部分(E)为抗体，例如单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体(例如，scFv)、非人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、全人抗体、前抗(Probody)、双特异性抗体或多特异性抗体。
本发明的部分实施方案中，靶向部分(E)可以是识别细胞表面整联蛋白受体的精氨酸-甘氨酸-门冬氨酸(“RGD”)肽；识别细胞表面生长因子受体的生长因子例如EGF、PDGF、VEGF；能识别功能性细胞表面纤溶酶原活化因子、蛙皮素、缓激肽、生长抑素或前列腺特异性膜抗原受体的肽。合适的靶向部分(E)包括：CD40配体、CD30配体、CD40配体、OX40配体、PD-1配体、ErbB配体、Her2配体、TACSTD2配体、DR5配体、连接两个脂肪族吲哚的多烯、花青染料、IR-783或其衍生物(CN102099059B)。
本发明的部分实施方案中，靶向部分(E)所针对的靶标选自：表皮生长因子、CD37、HER2、CD70、EGFRvIII、Mesothelin、Folate eceoptor1、Mucin 1、CD138、CD20、CD19、CD30、SLTRK6、Nectin 4、Tissue factor、Mucin16、Endothelinreceoptor、STEAP1、SLC39A6、Guanylylcyclase C、PSMA、CCD79b、CD22、Sodium phosphate cotransporter 2B、GPNMB、Trophoblast glycoprotein、AGS-16、EGFR、CD33、CD66e、CD74、CD56、PD-L1、TACSTD2、DR5、BMPR1B、E16、STEAP1、0772P、MPF、Napi3b、Sema 5b、PSCA hlg、ETBR、MSG783、STEAP2、TrpM4、CRIPTO、CD79b、FcRH2、NCA、MDP、IL20Rα、Brevican、EphB2R、ASLG659、PSCA、GEDA、BAFF-R、CD22、CD79a、CXCR5、HLA-DOB、P2X5、CD72、LY64、FcRH1、IRTA2、TENB2、整合素α5β6、α4β7、FGF2、FGFR2、Her3、CD70、CA6、DLL3、EpCAM、pCAD、CD223、LYPD3、LY6E、EFNA4、ROR1、SLITRK6、5T4、ENPP3、SLC39A6、BMPR1B(骨形态发生蛋白受体-IB型，Genbank登录号NM_001203)、E16(LAT1、SLC7A5，Genbank登录号NM_003486)、STEAP1(前列腺六次跨膜上皮抗原，Genbank登录号NM_012449)、0772P(CA125、MUC16、Genbank登录号AF 361486)、MPF(MPF、MSLN、SMR，巨核细胞强化因子，mesothelin，Genbank登录号NM_005823)、Napi3b(NAPI-3B、NPTIIb、SLC34A2，溶质载体家族34(磷酸钠)，成员2，II型钠依赖的磷酸盐转运蛋白3b，Genbank登录号NM 006424)、Sema 5b(FLJ10372、KIAA1445、Mm.42015、SEMA5B、SEMAG、脑信号蛋白5b Hlog，sema结构域，七个血小板反应蛋白重复(1型和类1型的)，跨膜结构域(TM)和短的细胞质结构域，(脑信号蛋白)5B，Genbank登录号AB040878)、PSCA hlg(2700050C12Rik、C530008O16Rik、RIKEN cDNA 2700050C12、RIKEN cDNA 2700050C12基因，Genbank登录号AY358628)、ETBR(内皮素B型受体，Genbank登录号AY275463)、MSG783(RNF124，假想蛋白FLJ20315，Genbank登录号NM_017763)、STEAP2(HGNC_8639、IPCA-1、PCANAP1、STAMP1、STEAP2、STMP、前列腺癌相关基因1、前列腺癌相关蛋白1、前列腺的六次跨膜上皮抗原2、六次跨膜前列腺蛋白，Genbank登录号AF455138)、TrpM4(BR22450、FLJ20041、TRPM4、TRPM4B、瞬时受体潜在阳离子通道，亚家族M，成员4，Genbank登录号NM_017636)、CRIPTO(CR、CR1、CRGF、CRIPTO、TDGF1，畸胎癌衍生生长因子，Genbank登录号NP_003203或NM_003212)、CD21(CR2(补体受体2)或C3DR(C3d/埃巴病毒受体)或Hs.73792Genbank登录号M26004)、CD79b(CD79B、CD79β、IGb(免疫球蛋白相关beta)、B29，Genbank登录号NM_000626)、FcRH2(IFGP4、IRTA4、SPAP1A(含SH 2结构域的磷酸酶锚定蛋白1a)、SPAP1B、SPAP1C，Genbank登录号NM_030764)、NCA(Genbank登录号M18728)、MDP(Genbank登录号BC017023)、IL20Rα(Genbank登录号AF184971)、Brevican(Genbank登录号AF229053)、EphB2R(Genbank登录号NM_004442)、ASLG659(Genbank登录号AX092328)、PSCA(Genbank登录号AJ297436)、GEDA(Genbank登录号AY260763、BAFF-R(B细胞活化因子受体，BlyS受体3，BR3，NP_443177.1)、CD22(B细胞受体CD22-B同种型，NP-001762.1)、CD79a(CD79A，CD79α，免疫球蛋白相关alpha，与Ig beta(CD79B)共价相互作用并在表面上与Ig M分子形成复合体、转导涉及B细胞分化的信号的B细胞特异性蛋白，Genbank登录号NP_001774.1)、CXCR5(伯基特淋巴瘤受体1，被CXCL13趋化因子活化的G蛋白偶联受体，在淋巴细胞迁移和体液防御中发挥作用，在HIV-2感染以及可能在AIDS、淋巴瘤、骨髓瘤、和白血病的发生中发挥作用，Genbank登录号NP_001707.1)、HLA-DOB(MHC II类分子的Beta亚基(Ia抗原)，其结合肽并将其呈递到CD4+T淋巴细胞，Genbank登录号NP_002111.1)、P2X5(嘌呤受体P2X配体 门控离子通道5，由胞外ATP门控的离子通道，可能涉及突触传递和神经发生，其缺陷可能导致特发性逼尿肌不稳定的病理生理状况，Genbank登录号NP_002552.2)、CD72(B细胞分化抗原CD72，Lyb-2，Genbank登录号NP_001773.1)、LY64(淋巴细胞抗原64(RP105)，富含亮氨酸重复(LRR)的I型膜蛋白家族，调节B细胞活化和凋亡，功能的丧失与系统性红斑狼疮患者疾病活动增强有关，Genbank登录号NP_005573.1)、FcRH1(Fc受体样蛋白1，免疫球蛋白Fc结构域的推定受体，包含C2型Ig样和ITAM结构域，可能在B淋巴细胞分化中起作用，Genbank登录号NP_443170.1)、IRTA2(易位相关免疫球蛋白超家族受体2，推定的免疫受体，可能在B细胞发育和淋巴瘤发生中起作用；由易位导致的基因失调发生于一些B细胞恶性病中，Genbank登录号NP_112571.1)，以及TENB2(推定的跨膜蛋白聚糖，与生长因子的EGF/生长因子的调蛋白家族和卵泡抑素相关，Genbank登录号AF179274等。
本发明的部分实施方式中，所述靶向部分(E)为抗Her 2的单克隆抗体，例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab)，或所述靶向部(E)分为抗Trop-2的单克隆抗体，例如Sacituzumab(即Isactuzumab或hRS7抗体)。
本发明的部分实施方式中，所述靶向部分(E)选自：生长抑素、叶酸衍生物，例如具有如下结构的叶酸衍生物
Figure PCTCN2018082809-appb-000100
在某些实施方案中，所述偶联物包含靶向部分(E)，其中，所述靶向部分(E)包含赖氨酸残基或半胱氨酸残基，并通过赖氨酸残基或半胱氨酸残基与连接体相连接。在某些实施方案中，本申请的偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000101
Figure PCTCN2018082809-appb-000102
Figure PCTCN2018082809-appb-000103
Figure PCTCN2018082809-appb-000104
Figure PCTCN2018082809-appb-000105
Figure PCTCN2018082809-appb-000106
Figure PCTCN2018082809-appb-000107
Figure PCTCN2018082809-appb-000108
Figure PCTCN2018082809-appb-000109
Figure PCTCN2018082809-appb-000110
Figure PCTCN2018082809-appb-000111
Figure PCTCN2018082809-appb-000112
Figure PCTCN2018082809-appb-000113
Figure PCTCN2018082809-appb-000114
Figure PCTCN2018082809-appb-000115
在某些实施方案中，偶联物中，药物与mAb之间的连接比率(DAR)为1-10之间的整数或小数；所述mAb为曲妥珠单抗或Sacituzumab。
在某些实施方案中，偶联物中，药物与mAb之间的连接比率(DAR)为1-10之间的整数或小数；所述mAb为曲妥珠单抗或Sacituzumab，或者，所述mAb为帕妥珠单抗。
在上述实施方案中，连接比率(DAR)在偶联物结构式中用α表示，所述曲妥珠单抗、Sacituzumab或帕妥珠单抗可被理解为曲妥珠单抗、Sacituzumab或帕妥珠单抗中移除α个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，DAR为1-4之间的整数或小数(例如1、2、3、4)。
在某些实施方案中，偶联物中，药物与mAb之间的连接比率(DAR)为1、2或3；所述mAb为曲妥珠单抗或Sacituzumab。
在某些实施方案中，偶联物中，药物与mAb之间的连接比率(DAR)为1、2或3；所述mAb为曲妥珠单抗、Sacituzumab或帕妥珠单抗中移除1、2或3个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，DAR为1，并且mAb为曲妥珠单抗中移除1个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，DAR为1，并且mAb为帕妥珠单抗中移除1个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，DAR为1，并且mAb为Sacituzumab中移除1个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，DAR为2，并且mAb为曲妥珠单抗中移除2个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，DAR为2，并且mAb为帕妥珠单抗中移除2个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，DAR为2，并且mAb为Sacituzumab中移除2个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000116
Figure PCTCN2018082809-appb-000117
Figure PCTCN2018082809-appb-000118
Figure PCTCN2018082809-appb-000119
Figure PCTCN2018082809-appb-000120
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000121
Figure PCTCN2018082809-appb-000122
Figure PCTCN2018082809-appb-000123
Figure PCTCN2018082809-appb-000124
Figure PCTCN2018082809-appb-000125
其中A2为帕妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000126
Figure PCTCN2018082809-appb-000127
Figure PCTCN2018082809-appb-000128
Figure PCTCN2018082809-appb-000129
Figure PCTCN2018082809-appb-000130
其中A3为Sacituzumab移除2个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000131
Figure PCTCN2018082809-appb-000132
Figure PCTCN2018082809-appb-000133
Figure PCTCN2018082809-appb-000134
Figure PCTCN2018082809-appb-000135
其中，A1’为曲妥珠单抗中移除1个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000136
Figure PCTCN2018082809-appb-000137
Figure PCTCN2018082809-appb-000138
Figure PCTCN2018082809-appb-000139
Figure PCTCN2018082809-appb-000140
其中A2’为帕妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000141
Figure PCTCN2018082809-appb-000142
Figure PCTCN2018082809-appb-000143
Figure PCTCN2018082809-appb-000144
Figure PCTCN2018082809-appb-000145
其中A3’为Sacituzumab移除1个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000146
Figure PCTCN2018082809-appb-000147
其中，α为1、2、3或4的整数；并且A为曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或Sacituzumab中移除α个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000148
Figure PCTCN2018082809-appb-000149
其中，A1为曲妥珠单抗中移除2个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000150
Figure PCTCN2018082809-appb-000151
其中，A2为帕妥珠单抗中移除2个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000152
Figure PCTCN2018082809-appb-000153
其中，A3为Sacituzumab中移除2个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000154
Figure PCTCN2018082809-appb-000155
其中，A1′为曲妥珠单抗中移除1个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000156
Figure PCTCN2018082809-appb-000157
其中，A2′为帕妥珠单抗中移除1个氨基后所得的基团。
在某些实施方案中，所述偶联物选自：
Figure PCTCN2018082809-appb-000158
Figure PCTCN2018082809-appb-000159
其中，A3′为Sacituzumab中移除1个氨基后所得的基团。
本发明所涉及的化合物的结构中，基团
Figure PCTCN2018082809-appb-000160
可以互换，且相应的实例(例如化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、晶型、消旋物，或包含所述化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体、晶型、消旋物的偶联物)均包含在本发明的范围内。
本申请还提供了一种药物组合物，包含如上所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，或如上所述的的偶联物，以及一种或多种药用辅料。
本申请还提供了如上所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，或如上所述的偶联物在抑制肿瘤细胞增殖中的用途。
在某些实施方案中，所述肿瘤细胞选自食管癌细胞(例如食管腺癌细胞和食管鳞状细胞癌细胞)、脑瘤细胞、肺癌细胞(例如小细胞性肺癌细胞和非小细胞性肺癌细胞)、鳞状上皮细胞癌细胞、膀胱癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、腹膜癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、头颈癌细胞、子宫颈癌细胞、子宫内膜癌细胞、结直肠癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、实体瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、中枢神经系统肿瘤细胞(例如神经胶质瘤细胞、多形性胶质母细胞瘤细胞、胶质瘤细胞或肉瘤细胞)、前列腺癌细胞和甲状腺癌细胞。
在某些实施方案中，所述偶联物包含靶向部分(E)；所述靶向部分(E)为抗Her 2的单克隆抗体，例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab)，或者，所述靶向部分(E)为抗Trop-2的单克隆抗 体，例如Sacituzumab；所述肿瘤细胞选自乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、胃癌细胞、子宫内膜癌细胞、唾液腺癌细胞、肺癌细胞、肾癌细胞、结肠癌细胞、甲状腺癌细胞、胰腺癌细胞、膀胱癌细胞、肝癌细胞、结直肠癌细胞、前列腺癌细胞、宫颈癌细胞。
在某些实施方案中，所述靶向部分(E)为抗Her 2的单克隆抗体，例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab)；所述肿瘤细胞选自乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、胃癌细胞、子宫内膜癌细胞、唾液腺癌细胞、肺癌细胞、肾癌细胞、结肠癌细胞、甲状腺癌细胞、胰腺癌细胞、膀胱癌细胞或肝癌细胞。
在某些实施方案中，所述靶向部分(E)为抗Trop-2的单克隆抗体，例如Sacituzumab，所述肿瘤细胞选自乳腺癌细胞、结直肠癌细胞、肺癌细胞、胰腺癌细胞、卵巢癌细胞、前列腺癌细胞、宫颈癌细胞。
在某些实施方案中，所述化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，或如上所述的偶联物被施用于体外细胞或受试者体内细胞；例如应用于受试者(例如哺乳动物；例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；例如，人)体内，以抑制受试者体内肿瘤细胞的增殖；或者，应用于体外肿瘤细胞(例如细胞系或者来自受试者的细胞)，以抑制体外肿瘤细胞的增殖。
本申请还提供了如上所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，或如上所述的偶联物，在制备治疗癌症疾病的药物中的用途。
在某些实施方案中，所述癌症疾病选自食管癌(例如食管腺癌和食管鳞状细胞癌)、脑瘤、肺癌(例如小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌)、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、实体瘤、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经系统肿瘤(例如神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤)、前列腺癌和甲状腺癌。
在某些实施方案中，所述偶联物包含靶向部分(E)；所述靶向部分(E)为抗Her2的单克隆抗体，例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab)，或者，所述靶向部分(E)为抗Trop-2的单克隆抗体，例如Sacituzumab；所述癌症疾病选自乳腺癌、卵巢癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肺癌、肾癌、结肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、膀胱癌、肝癌、结直肠癌、前列腺癌、宫颈癌。
在某些实施方案中，所述靶向部分(E)为抗Her2的单克隆抗体，例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab)；所述癌症疾病选自乳腺癌、卵巢癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肺癌、肾癌、结肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、膀胱癌或肝癌。
在某些实施方案中，所述靶向部分(E)为抗Trop-2的单克隆抗体，例如Sacituzumab，所述癌症疾病选自乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌。
本申请还提供了制备如上所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物的方法，所述方法如下述路线所示：
Figure PCTCN2018082809-appb-000161
其中，R 1-R 20、Q、X、Y、A、m、n如上任一项所定义，PG为保护基，例如苄基、取代苄基或叔丁基。
所述方法包括以下步骤：
步骤1：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物a与化合物b进行反应，得到化合物c；步骤2：在氢气和催化剂存在的条件下，将化合物c中的PG脱除，得到化合物d；
步骤3：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物d与化合物e反应，得到式(I)化合物。
在某些实施方案中，所述碱为有机碱或无机碱。
在某些实施方案中，所述有机碱选自三乙胺、DIPEA、吡啶、NMM或DMAP。
在某些实施方案中，所述无机碱选自NaH、NaOH、Na 2CO 3或K 2CO 3。
在某些实施方案中，所述缩合试剂选自HATU、HBTU、EEDQ、DEPC、DCC、DIC、EDC、BOP、PyAOP或PyBOP。
在某些实施方案中，所述步骤1是在-10℃-60℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的。
在某些实施方案中，所述步骤1中，化合物a与化合物b的摩尔比为1∶(0.5-2)，优选1∶(0.8-2)，更优选1∶(1-1.5)。
在某些实施方案中，所述步骤1中，化合物a、化合物b与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-4)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)。
在某些实施方案中，所述步骤1中，化合物a与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)。
在某些实施方案中，所述步骤2中，氢气的压力为1-4atm，优选1-2atm。
在某些实施方案中，所述催化剂选自Pd/C，Pt 2O，Pd(OH) 2。
在某些实施方案中，式c化合物与催化剂的质量比为1∶(0.05-2)，优选1∶0.1。
在某些实施方案中，所述步骤2是在0℃-100℃(优选10℃-25℃)的温度下进行的。
在某些实施方案中，所述步骤3是在-10℃-60℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的。
在某些实施方案中，所述步骤3中，化合物d与化合物e的摩尔比为1∶(0.5-2)，优选1∶(0.8-2)，更优选1∶(1-1.5)。
在某些实施方案中，所述步骤3中，化合物d、化合物e与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-4)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)。
在某些实施方案中，所述步骤3中，化合物d与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)。
在某些实施方案中，所述步骤1、步骤2和/或步骤3在有机溶剂中进行。
在某些实施方案中，所述有机溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、饱和烃类(例如环己烷、己烷)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷)、醚类(例如四氢呋喃、乙醚、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷)、腈类(例如乙腈)、醇类(例如甲醇、乙醇)及其任意组合。
在某些实施方案中，所述方法得到式(I)化合物的非对映异构体混合物。
在某些实施方案中，所述方法还包括：通过制备高效液相色谱对式(I)的非对映异构体混合物进行分离，得到纯的异构体。
在某些实施方案中，所述分离的条件包括以下一种或多种：
(1)以纤维素-三[3，5-二甲苯基氨基甲酸酯键合硅胶为填充剂；
(2)色谱柱的柱温为30℃～50℃；
(3)洗脱剂的流速为5.0～20.0mL/min；
(4)检测器的检测波长为200～400nm；
(5)使用有机溶剂作为流动相(例如正己烷、异丙醇和/或甲醇)。
某些实施方案中，使用两种流动相，包括流动相A(例如正己烷)和流动相B(例如甲醇或异丙醇)。
在某些实施方案中，所述分离包括在(1)-(5)并存在条件下进行线性梯度洗脱。
本申请还提供了制备如上所述的偶联物的方法(方法I)，所述方法如下述路线所示：
Figure PCTCN2018082809-appb-000162
其中，R 1-R 20、Q、X、Y、L 1、L 2、L 3、M 8、A、D、m、n、r、s、w如上任一项所定义。
所述方法包括以下步骤：
步骤1：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物I-1与化合物L 2’反应，生成化合物I-2，所述化合物L 2’为CH 2Br 2、CH 2I 2、CH 2BrI、Br-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-Br、Br-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-I、I-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-Br、I-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-I，或者
Figure PCTCN2018082809-appb-000163
其中，
R kR l、R m、R n各自独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1- 6烷氧基、C 2-10炔基、C 3-6环烷基；
y各自独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
步骤2：在有碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物I-2与化合物I-3反应，生成化合物I-4；
步骤3：在有碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物I-4与化合物d反应，生成化合物I-5。
在某些实施方案中，所述碱为无机碱或有机碱。
在某些实施方案中，所述有机碱选自三乙胺、DIPEA、吡啶、NMM或DMAP。
在某些实施方案中，所述无机碱选自NaH、NaOH、Na 2CO 3、NaHCO 3、K 2CO 3。
在某些实施方案中，所述缩合试剂选自HATU、HBTU、EEDQ、DEPC、DCC、DIC、EDC、BOP、PyAOP或PyBOP。
在某些实施方案中，步骤1是在-20℃-150℃(优选-5℃-130℃)的温度下进行的。
在某些实施方案中，所述步骤1中，化合物I-1与化合物L 2’的摩尔比为1∶(0.5-5)，优选1∶(0.8-3)，更优选1∶(1-2.5)。
在某些实施方案中，所述步骤1中，化合物I-1、化合物L 2’与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-20)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)。
在某些实施方案中，所述步骤1中，化合物I-1与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2)。
在某些实施方案中，所述步骤2是在-10℃-60℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的。
在某些实施方案中，所述步骤2中，化合物I-2与化合物I-3的摩尔比为1∶(0.5-2)，优选1∶(0.8-2)，更优选1∶(1-1.5)。
在某些实施方案中，所述步骤2中，化合物I-2、化合物I-3与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-4)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)。
在某些实施方案中，所述步骤2中，化合物I-2与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)。
在某些实施方案中，所述步骤3是在-10℃-60℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的。
在某些实施方案中，所述步骤3中，化合物I-4与化合物d的摩尔比为1∶(0.5-2)，优选1∶(0.8-2)，更优选1∶(1-1.5)。
在某些实施方案中，所述步骤3中，化合物I-4、化合物d与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-4)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)。
在某些实施方案中，所述步骤3中，化合物I-4、与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)。
在某些实施方案中，所述方法还包括步骤4：将化合物1-5与靶向部分(E)偶联。
在某些实施方案中，所述靶向部分(E)为抗Her 2的单克隆抗体(例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab))或抗Trop-2的单克隆抗体(例如Sacituzumab)，或其活性片段或变体。
在某些实施方案中，所述步骤4包括：将靶向部分(E)与化合物I-5混合。
在某些实施方案中，所述靶向部分(E)与化合物I-5的物质的量之比为1∶(1-20)。
在某些实施方案中，所述步骤4包括：将包含靶向部分(E)的溶液与化合物I-5混合。
在某些实施方案中，所述步骤1、步骤2、步骤3和/或步骤4在水或有机溶剂中进行。
在某些实施方案中，所述有机溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、饱和烃类(例如环己烷、己烷)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷)、醚类(例如四氢呋喃、乙醚、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷)、腈类(例如乙腈)、醇类(例如甲醇、乙醇)及其任意组合。
在某些实施方案中，所述方法还包括步骤5，所述步骤5包括：通过层析方法(例如离子交换层析、疏水层析、反相层析和亲和层析中的一种或多种)对步骤4的产物进行纯化。
本申请还提供了制备如上所述的偶联物的方法(方法II)，所述方法如下述路线所示：
Figure PCTCN2018082809-appb-000164
其中，R 1-R 20、Q、X、Y、L 1、L 2、L 3、M 8、A、D、m、n、r、s、w如上任一项所定义；
所述方法包含以下步骤：
步骤1：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物II-1与化合物II-2反应，生成化合物II-3；
步骤2：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物II-3与化合物d反应，生成化合物II-4；
步骤3：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物II-4与化合物I-2反应，生成化合物II-5。
在某些实施方案中，所述碱为有机碱或无机碱。
在某些实施方案中，所述有机碱选自三乙胺、DIPEA、吡啶、NMM或DMAP。
在某些实施方案中，所述无机碱选自NaH、NaOH、Na 2CO 3、NaHCO 3或K 2CO 3。
在某些实施方案中，所述缩合试剂选自HATU、HBTU、EEDQ、DEPC、DCC、DIC、EDC、BOP、PyAOP或PyBOP。
在某些实施方案中，步骤1是在20℃-120℃(优选30℃-80℃)的温度下进行的。
在某些实施方案中，所述步骤1中，化合物II-1与化合物II-2的摩尔比为1∶(0.5-5)，优选1∶(0.8-3)，更优选1∶(1-2.5)。
在某些实施方案中，所述步骤1中，化合物II-1、化合物II-2与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-20)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)。
在某些实施方案中，所述步骤1中，化合物II-1与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)。
在某些实施方案中，所述步骤2是在-20℃-50℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的。
在某些实施方案中，所述步骤2中，化合物II-3与化合物d的摩尔比为1∶(0.5-5)，优选1∶(0.8-3)，更优选1∶(1-2.5)。
在某些实施方案中，所述步骤2中，化合物II-3、化合物d与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-20)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)。
在某些实施方案中，所述步骤2中，化合物II-3与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)。
在某些实施方案中，所述步骤3是在-20℃-50℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的。
在某些实施方案中，所述步骤3中，化合物II-4与化合物I-2的摩尔比为1∶(0.5-5)，优选1∶(0.8-3)，更优选1∶(1-2.5)。
在某些实施方案中，所述步骤3中，化合物II-4、化合物I-2与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-20)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)。
在某些实施方案中，所述步骤3中，化合物II-4与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)。
在某些实施方案中，所述方法还包括步骤4：将化合物II-5与靶向部分(E)偶联。
在某些实施方案中，所述靶向部分(E)为抗Her 2的单克隆抗体(例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab))或抗Trop-2的单克隆抗体(例如Sacituzumab)，或其活性片段或变体。
在某些实施方案中，所述步骤4包括：将靶向部分(E)与化合物II-5混合。
在某些实施方案中，所述靶向部分(E)与化合物II-5的物质的量之比为1∶(1-20)。
在某些实施方案中，所述步骤4包括：将包含靶向部分(E)的溶液与化合物II-5混合。
在某些实施方案中，所述步骤1、步骤2、步骤3和/或步骤4在水或有机溶剂中进行。
在某些实施方案中，所述有机溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、饱和烃类(例如环己烷、己烷)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷)、醚类(例如四氢呋喃、乙醚、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷)、腈类(例如乙腈)、醇类(例如甲醇、乙醇)及其任意组合。
在某些实施方案中，所述方法还包括步骤5，所述步骤5包括：通过层析方法(例如离子交换层析、疏水层析、反相层析和亲和层析中的一种或多种)对步骤4的产物进行纯化。
有益效果
本发明的毒素分子具有明显的体外细胞毒活性，稳定性好，并且制备方法简单，通过不同的偶联方式可高效地与抗体进行偶联。本发明的连接体可以将毒素分子与抗体高效地偶联，通过偶联图谱可以证明，偶联效率高，剩余的抗体少。本发明的药物-抗体偶联物可在细胞内顺利释放毒素分子，对肿瘤细胞具有极强的抑制能力，预计其具有优异的抗肿瘤作用。
附图说明
图1为裸抗(M141105Y)的HIC图谱。
图2为TL004-T-ADC的HIC图谱。
图3为TL006-T-ADC的HIC图谱。
图4为TL007-T-ADC的HIC图谱。
图5为TL008-T-ADC的HIC图谱。
图6为TL009-T-ADC的HIC图谱。
图7为TL010-T-ADC的HIC图谱。
图8为TL011-T-ADC的HIC图谱。
图9为TL012-T-ADC的HIC图谱。
图10为TL007-S-ADC的HIC图谱。
图11为TL008-S-ADC的HIC图谱。
图12为BT001063的质谱测试结果，显示了TL007-T-ADC的HIC图Peak2所对应组分的分子量。
图13为BT001064的质谱测试结果，显示了TL008-T-ADC的HIC图Peak2所对应组分的分子量。
图14为BT001007的质谱测试结果，显示了TL008-T-ADC的HIC图Peak3所对应组分的分子量。
图15为BT001008的质谱测试结果，显示了TL009-T-ADC的HIC图Peak3所对应组分的分子量测定
图16为BT001009的质谱测试结果，显示了TL010-T-ADC的HIC图Peak3所对应组分的分子量。
图17为BT001086的质谱测试结果，显示了TL010-T-ADC的HIC图Peak4所对应组分的分子量。
图18为BT001071的质谱测试结果。
图19为BT001014、BT001015对肿瘤细胞BxPC-3的抑制曲线。
图20为实施例五十三中，肿瘤体积随时间变化的曲线。
图21为BT001020的质谱测试结果。
图22为TL042-T-ADC的HIC图谱。
图23为BT001019的质谱测试结果。
图24为BT001014的质谱测试结果。
图25为BT001015的质谱测试结果。
序列信息
本发明涉及的序列的信息提供于下表中。
Figure PCTCN2018082809-appb-000165
SEQ ID NO：1
Figure PCTCN2018082809-appb-000166
SEQ ID NO：2
Figure PCTCN2018082809-appb-000167
具体实施方式
以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制。本领域技术人员根据本发明的教导，可以做出各种修改或改进，而不脱离本发明的基本思想和范围。
制备方案
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
以下的实施例中记载的化合物的结构通过核磁共振( 1H NMR)或质谱(MS)来确定。
核磁共振( 1H NMR)的测定仪器使用Bruker 400MHz核磁共振仪；测定溶剂为氘代甲醇(CD 3OD)、氘代氯仿(CDCl 3)或六氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6)；内标物质为四甲基硅烷(TMS)。
实施例中使用的核磁共振(NMR)图谱中的缩写示于以下。
s：单峰(singlet)、d：二重峰(doublet)、t：三重峰(triplet)、q：四重峰(quartet)、dd：双二重峰(double doublet)、qd：四二重峰(quartet doublet)、ddd：双双二重峰(double double doublet)、ddt：双双三重峰(double double triplet)、dddd：双双双二重峰(double double double doublet)、m：多重峰(multiplet)、br：宽峰(broad)、J：偶合常数、Hz：赫兹、DMSO-d6：氘化二甲基亚砜。
将全部δ值用ppm值表示。
质谱(MS)的测定仪器使用Agilent(ESI)质谱仪，型号为Agilent 6120B。
一、细胞毒剂的合成
实施例一(2S)-N-((3R，4S，5S)-1-((2S)-2-((1R，2R)-3-((1-((4-氨基苄基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷 -2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-丙酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-庚酰基-4-基)-2-((S)-2-(二 甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T001)
Figure PCTCN2018082809-appb-000168
步骤一
(4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(2.0mg，14.74μmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中，降温至0℃，依次加入(4-甲氨基苄基)-氨基甲酸叔丁酯(4.0mg，16.1μmol)，DIEA(8.5mg，66.8μmol)，((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-L-苯丙氨酸(10.0mg，13.5μmol，商购)，搅拌5min，加入1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐(10.0mg，20.1μmol)，加毕0℃搅拌反应1h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，反应液经制备液相色谱纯化得标题化合物，为白色固体9.0mg。ESI-MS(m/z)：950.5[M+H] +。
步骤二：
(2S)-N-((3R，4S，5S)-1-((2S)-2-((1R，2R)-3-((1-((4-氨基苄基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-丙酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-庚酰基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
室温下，将(4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(9.0mg，0.02mmol)溶于1，4-二氧六环(0.5mL)中，降温至0℃，加入盐酸-二氧六环溶液(1mL，4.0M)，加毕室温搅拌反应3h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，减压蒸除溶剂，粗品经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体5.0mg。ESI-MS(m/z)：850.5[M+H] +。
实施例二(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((R)-1-((4-氨基苄基)(甲基)氨基)-1-氧代-3- 苯基丙烷-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-丙酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-庚酰基-4-基)-2- ((S)-2-(二甲基氧基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T002)
Figure PCTCN2018082809-appb-000169
步骤一：
(4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-N-甲基-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(2.0mg，14.74μmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，降温至0℃，依次加入(4-甲氨基苄基)-氨基甲酸叔丁酯(2.0mg，8.04μmol)，DIEA(4.3mg，33.5μmol)，((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-L-苯丙氨酸(5.0mg，6.7μmol，商购)，搅拌5min，加入1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐(5.0mg，10.05μmol)，加毕0℃搅拌反应1h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，反应液经制备液相色谱纯化得标题化合物，为白色固体4.0mg。ESI-MS(m/z)：964.5[M+H] +。
步骤二：
(2S)-N-((3R，4S，5S)-1-((2S)-2-((1R，2R)-3-((1-((4-氨基苄基)(甲基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-丙酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-庚酰基-4-基)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
室温下，将(4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-N-甲基-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(20mg，0.02mmol)溶于1，4-二氧六环(1mL)中，降温至0℃，加入盐酸-二氧六环溶液(1mL，4.0M)，加毕，室温搅拌反应3h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，减压蒸除溶剂，粗品经制备液相色谱纯化得标题化合物，为白色固体10mg。ESI-MS(m/z)：864.5[M+H] +。
步骤三：
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((R)-1-((4-氨基苄基)(甲基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-丙酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-庚酰基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
将(2S)-N-((3R，4S，5S)-1-((2S)-2-((1R，2R)-3-((1-((4-氨基苄基)(甲基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-丙酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-庚酰基-4-基)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺进行手性分离，条件如下：
Figure PCTCN2018082809-appb-000170
得标题化合物，为白色固体3.6mg。ee％＝95.9％，R t＝4.355min，ESI-MS(m/z)：864.5[M+H] +。
实施例三(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((S)-1-((4-氨基苄基)(甲基)氧基)-1-氧代-3- 苯基丙烷-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-丙酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-庚酰基-4-基)-2- ((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T003)
Figure PCTCN2018082809-appb-000171
步 骤一
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((S)-1-((4-氨基苄基)(甲基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2- 基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-丙酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-庚酰基-4-基)-2-((S)-2-(二甲 基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
将(2S)-N-((3R，4S，5S)-1-((2S)-2-((1R，2R)-3-((1-((4-氨基苄基)(甲基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-丙酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-庚酰基-4-基)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺进行手性拆分(分离条件同实施例二，步骤三)，得标题化合物，为白色固体5.2mg。ee％＝97.8％，Rt＝5.554min，ESI-MS(m/z)：864.5[M+H] +。
实施例四(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((S)-1-((4-氨基苄基)氨基)1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T011)
Figure PCTCN2018082809-appb-000172
步骤一：
(S)-2-((1R，2R)-3-(苄氧基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的合成
将碳酸铯(2.5g，7.5mmol)、(2R，3R)-3-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(1.8g，6.3mmol)加入到N，N-二甲基甲酰胺(25mL)的溶液中，室温搅拌0.5h，加入溴化苄(1.6g，9.3mmol)，室温搅拌过夜。反应液加水(150mL)，乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(50mL×3)，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析纯化，得标题化合物，为无色油状物2.3g。ESI-MS(m/z)：322.1[M-56+H] +。
步骤二：
(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-((S)-吡咯烷-2-基)-丙酸苄酯的合成
将(S)-2-((1R，2R)-3-(苄氧基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.3g，6.1mmol)溶于三氟乙酸(8mL)的二氯甲烷(24mL)溶液中，室温条件下反应4h。减压蒸除溶剂，得标题化合物的三氟乙酸盐2.4g。产品不经纯化直接进行下一步反应。ESI-MS(m/z)：278.2[M+H] +。
步骤三：
(3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺)-N，3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酸的合成
将(3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁胺基)-N，3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酸叔丁酯(2.4g，4.9mmol)溶于三氟乙酸(10mL)的二氯甲烷(30mL)溶液中，室温条件下反应3.5h。减压蒸除溶剂，得标题化合物2.5g。产物不经纯化直接进行下一步反应。ESI-MS(m/z)： 430.3[M+H] +。
步骤四：
(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺)-N，3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸苄酯的合成
将(2R，3R)-3-甲氧基-2-甲基-3-((S)-吡咯烷-2-基)-丙酸苄酯(2.2g，4.4mmol)和(3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺)-N，3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酸(2.1g，4.4mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中，依次加入二异丙基乙胺(1.14g，8.8mmol)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(2.5g，6.6mmol)，室温条件下反应过夜。加水(150mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(50mL×4)，合并有机相，饱和食盐水洗(30mL×4)，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，减压蒸除溶剂，残余物经制备液相纯化，得标题化合物，为无色油状物2.3g。ESI-MS(m/z)：689.4[M+H] +。
步骤五：
(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺)-N，3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸的合成
将(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺)-N，3-二甲基丁酰胺)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸苄酯(2.0g，3.0mmol)溶于甲醇(100mL)和二氯甲烷(5mL)的混合溶液中，再将钯碳(200mg)加入反应液中，在氢气氛下反应2h。滤除不溶物，滤饼用甲醇(30mL×3)洗涤，减压蒸除溶剂，得标题化合物，为类白色固体1.8g。ESI-MS(m/z)：599.4[M+H] +。
步骤六：
(S)-(4-((2-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨) -3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
在0℃下，将4-氨基苄氨(222mg，1.0mmol)和N-甲基吗啉(306mg，1.5mmol)加入(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酸(387mg，1.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)的溶液中，依次加入HOBT(203mg，1.5mmol)、EDCI(288mg，1.5mmol)。0℃反应过夜，LCMS检测，原料消失。将反应液倒入水(50mL)中，有白色固体析出，过滤，水洗滤饼(20mL×3)，固体经硅胶柱层析纯化，得标题化合物，为白色固体380mg。ESI-MS(m/z)：592.3[M+H] +。
步骤七：
(S)-(4-((2-氨基-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将一水合氢氧化锂(21mg，0.51mmol)溶于水(1mL)中，并加入至(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(102mg，0.17mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液中，室温反应2h。LCMS检测，原料消失。向反应液中加水(20mL)，并用乙酸乙酯萃取(30mL×4)。合并有机相，有机相用饱和食盐水洗(30mL×2)，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂，残余物经制备液相纯化，得标题化合物，为白色固体65mg。ESI-MS(m/z)：370.2[M+H] +。
步骤八：
(4-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸酯的合成
在0℃下，将(S)-(4-((2-氨基-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(15mg，0.04mmol)和N-甲基吗啉(12mg，0.12mmol)加入(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基-3-甲氧基-2-甲基丙酸(24mg，0.04mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)的溶液中，依次加入HOBT(8mg，0.06mmol)、EDCI(12mg，0.06mmol)。0℃下反应过夜，LCMS检测，原料消失。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体24mg。ESI-MS(m/z)：950.6[M+H] +。
步骤九：
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((S)-1-((4-氨基苄基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
将三氟乙酸(0.5mL)加入(4-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-(3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸酯(14.0mg，0.015mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中，室温反应1h，LCMS检测，原料完全消失。减压蒸除溶剂，残余物经制备液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，为白色固体4.2mg。ESI-MS(m/z)：850.6[M+H] +。
实施例五(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((R)-1-((4-氨基苄基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T012)
Figure PCTCN2018082809-appb-000173
步骤一：
(R)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
在0℃下，将4-氨基苄氨(445mg，2.0mmol)和N-甲基吗啉(300mg，3.0mmol)加入(R)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酸(775mg，2.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(12mL)的溶液中，依次加入HOBT(405mg，3.0mmol)、EDCI(575mg，3.0mmol)。0℃反应过夜，LCMS检测，原料消失。将反应液倒入水(50mL)中，有白色固体析出，水洗滤饼(20mL×3)，干燥，得标题化合物，为白色固体880mg。ESI-MS(m/z)：592.3[M+H] +。
步骤二：
(R)-(4-((2-氨基-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将一水合氢氧化锂(42mg，1.0mmol)溶于水(2mL)中，并加入至(R)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.34mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液中，室温反应2h。LCMS检测，原料消失。向反应液中加入水(20mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×4)。合并有机相，有机相用饱和食盐水洗(30mL×2)，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂，残余物经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体120mg。ESI-MS(m/z)：370.2[M+H] +。
步骤三：
(4-((R)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
在0℃下，将(R)-(4-((2-氨基-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.04mmol)和N-甲基吗啉(24mg，0.24mmol)加入(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基-3-甲氧基-2-甲基丙酸(50mg，0.08mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)的溶液中，依次加入HOBT(16mg，0.12mmol)、EDCI(23mg，0.12mmol)。0℃反应过夜，LCMS检测，原料消失。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体32mg。ESI-MS(m/z)：950.6[M+H] +。
步骤四：
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((R)-1-((4-氨基苄基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
将三氟乙酸(1mL)加入(4-((R)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(32.0mg，0.03mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中，室温反应1h，LCMS检测，原料完全消失。减压蒸除溶剂，残余物经制备液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，为浅黄色固体13.3mg。ESI-MS(m/z)：850.6[M+H] +。
实施例六(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((S)-4-((4-氨基苄基)氨基)-4-氧代-1-苯基丁-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T013)
Figure PCTCN2018082809-appb-000174
步骤一：
(S)-(4-((3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-苯基丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将4-氨基苄氨(111mg，0.5mmol)和N-甲基吗啉(150mg，1.5mmol)加入(S)-3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-苯基丁酸(200mg，0.5mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)的溶液中，依次加入HOBT(101mg，0.75mmol)、EDCI(150mg，0.75mmol)。0℃反应过夜，LCMS检测，原料消失。将反应液倒入水(50mL)中，有白色固体析出，过滤，滤饼水洗(20mL×3)，滤饼经硅胶柱层析纯化，得标题化合物，为白色固体310mg。ESI-MS(m/z)：606.3[M+H] +。
步骤二：
(S)-(4-((3-氨基-4-苯基丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将哌啶(0.5mL)加入(S)-(4-((3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-苯基丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.66mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)溶液中，室温反应过夜。LCMS检测，原料消失。减压蒸除溶剂，得白色固体，石油醚洗涤(20mL×5)，残余物经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体106mg。ESI-MS(m/z)：384.2[M+H] +。
步骤三：
(4-(((S)-3-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-4-苯基丁酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将(S)-(4-((3-氨基-4-苯基丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.08mmol)和N-甲基吗啉(24mg，0.24mmol)加入(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基-3-甲氧基-2-甲基丙酸(50mg，0.08mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)的溶液中，依次加入HOBT(16mg，0.12mmol)、EDCI(24mg，0.12mmol)。0℃下反应过夜，LCMS检测，原料消失。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体24mg。ESI-MS(m/z)：964.6[M+H] +。
步骤四：
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((S)-4-((4-氨基苄基)氨基)-4-氧代-1-苯基丁-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
将三氟乙酸(0.5mL)加入(4-(((S)-3-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-4-苯基丁酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(24.0mg，0.025mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中，室温下反应1h。LCMS检测，原料完全消失。减压蒸除溶剂，残余物经制备液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，为白色固体14.0mg。ESI-MS(m/z)：864.6[M+H] +。
实施例七(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((R)-4-((4-氨基苄基)氨基)-4-氧代-1-苯基丁-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T014)
Figure PCTCN2018082809-appb-000175
步骤一
(R)-(4-((3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-苯基丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将4-氨基苄氨(111mg，0.5mmol)和N-甲基吗啉(150mg，1.5mmol)加入(R)-3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-苯基丁酸(200mg，0.5mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)的溶液中，依次加入HOBT(101mg，0.75mmol)、EDCI(150mg，0.75mmol)。0℃反应过夜，LCMS检测，原料消失。将反应液倒入水(50mL)中，有白色固体析出，过滤，滤饼水洗(20mL×3)，滤饼经硅胶柱层析纯化，得标题化合物，为白色固体316mg。ESI-MS(m/z)：606.3[M+H] +。
步骤二：
(R)-(4-((3-氨基-4-苯基丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将哌啶(0.5mL)加入(R)-(4-((3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-苯基丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.66mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)溶液中，室温反应过夜。LCMS检测，原料消失。减压蒸除溶剂，得到白色固体，石油醚洗涤(20mL×5)，经制备液相色谱纯化，得到标题化合物，为白色固体120mg。ESI-MS(m/z)：384.2[M+H] +。
步骤三：
(4-((R)-3-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-4-苯基丁酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将(R)-(4-((3-氨基-4-苯基丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.08mmol)和N-甲基吗啉(24mg，0.24mmol)加入(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基-3-甲氧基-2-甲基丙酸(50mg，0.08mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)的溶液中，依次加入HOBT(16mg，0.12mmol)、EDCI(24mg，0.12mmol)。0℃下反应过夜，通过LCMS检测，原料消失。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体44mg。ESI-MS(m/z)：964.6[M+H] +。
步骤四
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((R)-4-((4-氨基苄基)氨基)-4-氧代-1-苯基丁-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
将三氟乙酸(0.5mL)加入(4-((R)-3-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-4-苯基丁酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(44.0mg，0.045mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中，室温反应1h。LCMS检测，原料完全消失。减压蒸除溶剂，残余物经制备液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，为白色固体24.4mg。ESI-MS(m/z)：864.6[M+H] +。
实施例八(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((2-((4-氨基苄基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T015)
Figure PCTCN2018082809-appb-000176
步骤一：
(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将4-氨基苄氨(222mg，1.0mmol)和N-甲基吗啉(306mg，1.5mmol)加入2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酸(300mg，1.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)的溶液中，依次加入HOBT(203mg，1.5mmol)、EDCI(288mg，1.5mmol)。0℃下反应过夜，LCMS检测，原料消失。将反应液倒入水(50mL)中，有白色固体析出，过滤，滤饼水洗(20mL×3)，滤饼经硅胶柱层析纯化，得标题化合物，为白色固体498mg。ESI-MS(m/z)：502.2[M+H] +。
步骤二：
(4-((2-氨基乙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将哌啶(0.5mL)加入(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)乙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(498mg，0.99mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)溶液中，室温反应过夜。LCMS检测，原料消失。减压蒸除溶剂，得到白色固体，石油醚洗涤(20mL×5)，经制备液相色谱纯化，得到标题化合物，为白色固体260mg。ESI-MS(m/z)：280.2[M+H] +。
步骤三：
(4-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰氨基)乙酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将(4-((2-氨基乙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.11mmol)和N-甲基吗啉(30mg，0.33mmol)加入(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N-3-三甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(66mg，0.11mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2ml)的溶液中，依次加入HOBT(25mg，0.17mmol)、EDCI(30mg，0.17mmol)。0℃下反应过夜，LCMS检测，原料消失。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体62mg。ESI-MS(m/z)：860.6[M+H] +。
步骤四：
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((2-((4-氨基苄基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
将三氟乙酸(0.5mL)加入(4-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰氨基)乙酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(62mg，0.072mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中，室温下反应1h。LCMS检测，原料完全消失。减压蒸除溶剂，经制备液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，为白色固体41.0mg。ESI-MS(m/z)：760.5[M+H] +。
实施例九(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((S)-1-((4-氨基苄基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T016)
Figure PCTCN2018082809-appb-000177
步骤一：
(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将4-氨基苄氨(222mg，1.0mmol)和N-甲基吗啉(306mg，1.5mmol)加入(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酸(311mg，1.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)的溶液中，依次加入HOBT(203mg，1.5mmol)、EDCI(288mg，1.5mmol)。0℃反应过夜，LCMS检测，原料消失。将反应液倒入水(50mL)中，有白色固体析出，过滤，滤饼水洗(20mL×3)，滤饼经硅胶柱层析纯化，得标题化合物，为白色固体510mg。ESI-MS(m/z)：516.2[M+H] +。
步骤二：
(S)-(4-((2-氨基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将哌啶(0.5mL)加入(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(510mg，0.99mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)溶液中，室温反应过夜。LCMS检测，原料消失。减压蒸除溶剂，得白色固体，石油醚洗涤(20mL×5)，经制备液相色谱纯化，得到标题化合物，为白色固体256mg。ESI-MS(m/z)：294.2[M+H] +。
步骤三：
(4-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)丙酰氨基)甲基)苯基)-氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将(S)-(4-((2-氨基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.11mmol)和N-甲基吗啉(30mg，0.33mmol)加入(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基-3-甲氧基-2-甲基丙酸(66mg，0.11mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)的溶液中，依次加入HOBT(25mg，0.17mmol)、EDCI(30mg，0.17mmol)。0℃下反应过夜，LCMS检测，原料消失。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体58mg。ESI-MS(m/z)：874.6[M+H] +。
步骤四：
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((S)-1-((4-氨基苄基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
将三氟乙酸(0.5mL)加入(4-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)丙酰氨基)甲基)苯基)-氨基甲酸叔丁酯(58mg，0.066mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中，室温反应1h。LCMS检测，原料完全消失。减压蒸除溶剂，经制备液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，为白色固体49.0mg。ESI-MS(m/z)：774.5[M+H] +。
实施例十(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((S)-1-((4-氨基苄基)氨基)3-环丙基-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T029)
Figure PCTCN2018082809-appb-000178
步骤一：
(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-环丙基丙酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将4-氨基苄氨(222mg，1.0mmol)和N-甲基吗啉(306mg，1.5mmol)加入(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-环丙基丙酸(351mg，1.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)的溶液中，依次加入HOBT(203mg，1.5mmol)、EDCI(288mg，1.5mmol)。0℃反应过夜，LCMS检测，原料消失。将反应液倒入水(50mL)中，有白色固体析出，过滤，滤饼水洗(20mL×3)，滤饼经硅胶柱层析纯化，得标题化合物，为白色固体556mg。ESI-MS(m/z)：556.35[M+H] +。
步骤二：
(S)-(4-((2-氨基-3-环丙基丙酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将哌啶(0.5mL)加入(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-环丙基丙酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，0.90mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)溶液中，室温反应过夜。LCMS检测，原料消失。减压蒸除溶剂，得到白色固体，石油醚洗涤(20mL×5)，经制备液相色谱纯化，得到标题化合物，为白色固体230mg。ESI-MS(m/z)：334.2[M+H] +。
步骤三：
(4-(((S)-3-环丙基-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将(S)-(4-((2-氨基-3-环丙基丙酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(33mg，0.11mmol)和N-甲基吗啉(30mg，0.33mmol)加入(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基-3-甲氧基-2-甲基丙酸(66mg，0.11mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)的溶液中。依次加入HOBT(25mg，0.17mmol)、EDCI(30mg，0.17mmol)。0℃下反应过夜，LCMS检测，原料消失。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体70mg。ESI-MS(m/z)：914.6[M+H] +。
步骤四：
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((S)-1-((4-氨基苄基)氨基)3-环丙基-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
将三氟乙酸(0.5mL)加入(4-(((S)-3-环丙基-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.076mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中，室温下反应1h。LCMS检测，原料完全消失。减压蒸除溶剂，经制备液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，为白色固体45.0mg。ESI-MS(m/z)：814.6[M+H] +。
实施例十一(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((S)-1-((4-氨基苄基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T019)
Figure PCTCN2018082809-appb-000179
步骤一：
(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将4-氨基苄氨(222mg，1.0mmol)和N-甲基吗啉(306mg，1.5mmol)加入(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酸(340mg，1.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)的溶液中。依次加入HOBT(203mg，1.5mmol)、EDCI(288mg，1.5mmol)。0℃反应过夜，LCMS检测，原料消失。将反应液倒入水(50mL)中，有白色固体析出，过滤，滤饼水洗(20mL×3)，滤饼经硅胶柱层析纯化，得标题化合物，为白色固体545mg。ESI-MS(m/z)：544.3[M+H] +。
步骤二：
(S)-(4-((2-氨基-3-甲基丁酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将哌啶(0.5mL)加入(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(545mg，1.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)溶液中，室温下反应过夜。LCMS检测，原料消失。减压蒸除溶剂，得到白色固体，石油醚洗涤(20mL×5)，经制备液相色谱纯化，得到标题化合物，为白色固体251mg。ESI-MS(m/z)：322.2[M+H] +。
步骤三：
(4-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-甲基丁酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将(S)-(4-((2-氨基-3-甲基丁酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(33mg，0.11mmol)和N-甲基吗啉(30mg，0.30mmol)加入(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基-3-甲氧基-2-甲基丙酸(60mg，0.11mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)的溶液中。依次加入HOBT(20mg，0.15mmol)、EDCI(29mg，0.15mmol)。0℃下反应过夜，LCMS检测，原料消失。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体65mg。ESI-MS(m/z)：902.6[M+H] +。
步骤四：
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-((S)-1-((4-氨基苄基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚基-4-基)-2((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
将三氟乙酸(0.5mL)加入(4-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-甲基丁酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(65mg，0.072mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中，室温下反应1h。LCMS检测，原料完全消失。减压蒸除溶剂，经制备液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，为白色固体17.0mg。ESI-MS(m/z)：802.6[M+H] +。
实施例十二(S-N-(4-氨基苄基)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-(S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-4-甲基戊酰胺的合成(T018)
Figure PCTCN2018082809-appb-000180
步骤一：
(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-甲基戊酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将4-氨基苄氨(222mg，1.0mmol)和N-甲基吗啉(306mg，1.5mmol)加入(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-甲基戊酸(352mg，1.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)的溶液中。依次加入HOBT(203mg，1.5mmol)、EDCI(288mg，1.5mmol)。0℃反应过夜，LCMS检测，原料消失。将反应液倒入水(50mL)中，有白色固体析出，过滤，滤饼水洗(20mL×3)，滤饼经硅胶柱层析纯化，得标题化合物，为白色固体562mg。ESI-MS(m/z)：558.3[M+H] +。
步骤二：
(S)-(4-((2-氨基-4-甲基戊酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将哌啶(0.5mL)加入(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-甲基戊酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(562mg，1.00mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)溶液中，室温反应过夜。LCMS检测，原料消失。减压蒸除溶剂，得到白色固体，石油醚洗涤(20mL×5)，经制备液相色谱纯化，得到标题化合物，为白色固体251mg。ESI-MS(m/z)：336.2[M+H] +。
步骤三：
(4-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将(S)-(4-((2-氨基-4-甲基戊酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(34mg，0.11mmol)和N-甲基吗啉(30mg，0.33mmol)加入(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基-3-甲氧基-2-甲基丙酸(60mg，0.11mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)的溶液中。依次加入HOBT(25mg，0.17mmol)、EDCI(30mg，0.17mmol)。0℃下反应过夜，LCMS检测，原料消失。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体67mg。ESI-MS(m/z)：916.6[M+H] +。
步骤四：
(S)-N-(4-氨基苄基)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-(S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-4-甲基戊酰胺的合成
将三氟乙酸(0.5mL)加入(4-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(62mg，0.068mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中，室温下反应1h。LCMS检测，原料完全消失。减压蒸除溶剂，经制备液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，为白色固体51.0mg。ESI-MS(m/z)：816.6[M+H] +。
实施例十三(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((S)-1-((4-氨基苄基)氨基)-4-(甲磺酰基)-1-氧代-2-丁基-)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代-4-戊基)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成(T020)
Figure PCTCN2018082809-appb-000181
步骤一：
(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(甲硫基)丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将4-氨基苄氨(222mg，1.0mmol)和N-甲基吗啉(306mg，1.5mmol)加入(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(甲硫基)丁酸(372mg，1.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)的溶液中。依次加入HOBT(203mg，1.5mmol)、EDCI(288mg，1.5mmol)。0℃反应过夜，LCMS检测，原料消失。将反应液倒入水(50mL)中，有白色固体析出，过滤，滤饼水洗(20mL×3)，滤饼经硅胶柱层析纯化，得标题化合物，为白色固体570mg。ESI-MS(m/z)：576.2[M+H] +。
步骤二：
(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(甲基磺酰基)丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
室温条件下，将间氯过氧苯甲酸(173mg，1.0mmol)加入(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(甲硫基)丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(288mg，0.5mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中，室温反应过夜。LCMS检测，原料消失。用5％Na2SO 3水溶液洗涤反应液(20mL×3)，二氯甲烷萃取水相(20ml×4)。减压蒸除溶剂，残余物经硅胶柱层析纯化，得到标题化合物，为白色固体286mg。ESI-MS(m/z)：608.23[M+H] +。
步骤三：
(S)-(4-((2-氨基-4-(甲基磺酰基)丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
将哌啶(0.5mL)加入(S)-(4-((2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(甲基磺酰基)丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.25mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.5mL)溶液中，室温反应过夜。LCMS检测，原料消失。减压蒸除溶剂，得到白色固体，石油醚洗涤(20mL×5)，经制备液相色谱纯化，得到标题化合物，为白色固体100mg。ESI-MS(m/z)：386.2[M+H] +。
步骤四：
(4-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-4-(甲基磺酰基)丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯的合成
0℃下，将(S)-(4-((2-氨基-4-(甲基磺酰基)丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(39mg，0.10mmol)和N-甲基吗啉(30mg，0.30mmol)加入(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(60mg，0.11mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2mL)的溶液中。依次加入HOBT(20mg，0.15mmol)、EDCI(30mg，0.15mmol)。0℃反应过夜，LCMS检测，原料消失。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体70mg。ESI-MS(m/z)：966.63[M+H] +。
步骤五：
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((S)-1-((4-氨基苄基)氨基))-4-(甲磺酰基)-1-氧代-2-丁基-)氨 基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代-4-戊基)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺的合成
将三氟乙酸(0.5mL)加入(4-((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-3-(甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-4-(甲基磺酰基)丁酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.072mmol)的二氯甲烷(1.5mL)溶液中，室温反应1h。LCMS检测，原料完全消失。减压蒸除溶剂，经制备液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，为白色固体40.8mg。ESI-MS(m/z)：866.6[M+H] +。
实施例十四(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((S)-1-((4-苯氨基)氨基)-1-氧代-3-(吡啶-2-基)丙-2-基氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-丙酰基)吡咯-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-庚酰-4-基)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰基)-N，3-二甲丁酰胺的合成(T025)
Figure PCTCN2018082809-appb-000182
步骤一：
(9氢-芴-9-基)甲基(S)-1-((4-((叔丁氧羰基)氨基)苯基)氨基)-1-氧代-3-(吡啶-2-基)丙-2-基)氨基甲酸酯的合成
将(S)-2-((((9氢-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(吡啶-2-基)丙酸(200mg，0.505mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中，冷至0℃。依次加入叔丁基(4-(甲氨基)苯基)氨基甲酸酯(116mg，0.505mmol)和N-甲基吗啡啉(0.08mL，0.758mmol)。再依次加入1-羟基苯并三唑(103mg，0.758mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(147mg，0.758mmol)。0℃下反应3h后，LC-MS检测反应完成，停止反应。将反应液滴入水(30mL)中，有灰色固体析出。抽滤，得到标题化合物，为紫色化合物：1.5g。ESI-MS(m/z)：593.3[M+H] +。
步骤二：
叔丁基(S)-(4-((2-氨基-3-(吡啶-2-基)丙酰胺)甲基)苯基)氨基甲酸酯的合成
将实施例四中步骤一的粗产品(9氢-芴-9-基)甲基(S)-1-((4-((叔丁氧羰基)氨基)苯基)氨基)-1-氧代-3-(吡啶-2-基)丙-2-基)氨基甲酸酯(1.5g)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中。加入哌啶(0.46mL，5.05mmol)，室温搅拌3h后，LC-MS检测反应完成，停止反应。经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为浅黄色固体：60mg。ESI-MS(m/z)：371.2[M+H] +。
步骤三：
叔丁基(4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰基)-N，3-二甲基丁酰基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-(吡啶-2-基)丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸酯的合成
将叔丁基(S)-(4-((2-氨基-3-(吡啶-2-基)丙酰胺)甲基)苯基)氨基甲酸酯(60mg，0.162mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中，再加入N-甲基吗啡啉(0.05mL，0.486mmol)和(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(90mg，0.162mmol)，冷至0℃。依次加入1-羟基苯并三唑(34mg，0.243mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(47mg，0.243mmol)。0℃下反应22h后，LC-MS检测反应完成，停止反应。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体110mg。ESI-MS(m/z)：951.6[M+H] +。
步骤四：
(S)-N-((3R，4S，5S)-1-((S)-2-((1R，2R)-3-(((S)-1-((4-苯氨基)氨基)-1-氧代-3-(吡啶-2-基)丙-2-基氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-丙酰基)吡咯-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-庚酰-4-基)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰基)-N，3-二甲丁酰胺的合成
将叔丁基(4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰基)-N，3-二甲基丁酰基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-(吡啶-2-基)丙酰胺基)甲基)苯基)氨基甲酸酯(110mg，0.116mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，室温搅拌下加入三氟乙酸(1.0mL)。室温反应1h后，LC-MS检测反应完成，停止反应。制备液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，为白色固体90mg。ESI-MS(m/z)：851.6[M+H] +。
二、包含细胞毒素和连接体的偶联物的合成
实施例十五1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲 基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2- 甲基丙酰胺)-N-甲基-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代 丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成(TL001)
Figure PCTCN2018082809-appb-000183
步骤一：
4-(4-甲基-4-甲氧羰基-哌啶-1-基)-4-氧代丁酸的合成
室温下，将4-甲基-4-哌啶甲酸甲酯(0.7g，4.46mmol)，丁二酸酐(0.45g，4.46mmol)，乙腈(20ml)加入三颈瓶中，室温搅拌下加入碳酸氢钠(0.38g，4.46mmol)，氮气置换三次，升温至50℃，保温反应4.0h，LC-MS检测反应完成。滤除不溶物，减压蒸除溶剂得标题化合物，为浅黄色油状物1.12g。ESI-MS(m/z)：258.1[M+H] +。
步骤二：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基))哌啶-4-甲基-4-甲酸甲酯的合成
将(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺)-N-(4-(羟甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(0.5g，1.32mmol)，4-(4-甲基-4-甲氧羰基-哌啶-1-基)-4-氧代丁酸(0.34g，1.32mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL) 中，体系降至0℃，加入N，N-二异丙基乙胺(0.34g，2.64mmol)，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(1.03g，1.98mmol)，15min加毕，自然升至室温，反应2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体0.52g。ESI-MS(m/z)：619.3[M+H] +。
步骤三：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲基-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲基-4-甲酸甲酯(507mg，0.82mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，向其中滴入33％HBr in HOAc(2.5mL)，15min滴毕，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。向反应液中加入水(20mL)，饱和碳酸氢钠调pH＝7～8，二氯甲烷(20mL×3)洗，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物粗品，白色固体0.58g。ESI-MS(m/z)：681.1[M+H] +。
步骤四：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(甲氨基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲基-4-甲酸甲酯的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲基-4-甲酸甲酯粗品(0.58g，0.82mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，将其滴入CH 3NH 2in THF(10mL，2mol/L)中，室温反应0.5h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体347mg。ESI-MS(m/z)：632.4[M+H] +。
步骤五：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-N-甲基-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲基-4-甲酸甲酯(即TL002)的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(68mg，0.50mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，向体系中依次加入(S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酸(215mg，0.25mmol)，1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲基-4-甲酸甲酯(155mg，0.25mmol)，N，N-二异丙基乙胺(162mg，1.25mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(195mg，0.38mmol)，10min加毕，保温反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体209mg。ESI-MS(m/z)：1359.8[M+H] +。
步骤六：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-N-甲基-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲基-4-甲酸的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲基-4-甲酸甲酯(50mg，0.037mmol)溶于四氢呋喃(5mL)与水(5mL)混合溶剂中，加入氢氧化锂(50mg，1.20mmol)，室温搅拌2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调pH＝3～4，减压蒸除溶剂，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z)：1345.8[M+H] +。
步骤七：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-N-甲基-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸(50mg，0.037mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向其中依次加入五氟苯酚(34mg，0.185mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(36mg，0.185mmol)，4-二甲氨基吡啶(14mg，0.111mmol)，升温至50℃，反应过夜，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体10.3mg。ESI-MS(m/z)：1511.8[M+H] +。
实施例十六1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲 基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2- 甲基丙酰胺)-N-甲基-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代 丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成(TL004)
Figure PCTCN2018082809-appb-000184
步骤一：
4-(4-(乙氧羰基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸的合成
室温下，将4-哌啶甲酸乙酯(7.0g，44.6mmol)，丁二酸酐(4.46g，44.6mmol)，乙腈(100ml)加入三颈瓶中，接着室温搅拌下加入碳酸氢钠(3.76g，44.6mmol)，氮气置换三次，升温至50℃，保温反应4.0h，LC-MS检测反应完成。降至室温，减压蒸除溶剂，加入水(50mL)，乙酸乙酯(30mL×3)洗，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物，为浅黄色油状物11.36g。ESI-MS(m/z)：258.1[M+H] +。
步骤二：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基 -2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲酸乙酯的合成
将(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺)-N-(4-(羟甲基)苯基-5-脲基戊酰胺(2.0g，5.27mmol)，4-(4-(乙氧羰基)哌啶-1-基)-4-氧代丁酸(1.35g，5.27mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(40mL)中，体系降至0℃，加入N，N-二异丙基乙胺(1.36g，10.54mmol)，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(4.11g，7.91mmol)，15min加毕，自然升至室温，反应2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体2.1g。ESI-MS(m/z)：619.3[M+H] +。
步骤三：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲酸乙酯的合成
室温下，将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲酸乙酯(507mg，0.82mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，向其中滴入33％HBr in HOAc(2.5ml)，15min滴毕，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。向反应液中加入水(20mL)，饱和碳酸氢钠调pH＝7～8，二氯甲烷(20mL×3)洗，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物，固体粗品585mg。ESI-MS(m/z)：681.1[M+H] +。
步骤四：
1-(4-(((S)-3-甲基-(((S)-1-((4-(氨甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲酸乙酯的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲酸乙酯粗品(585mg，0.82mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，将其滴入CH 3NH 2in THF(10mL，2mol/L)中，室温反应0.5h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体163mg。ESI-MS(m/z)：632.4[M+H] +。
步骤五：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-N-甲基-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸乙酯的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(68mg，0.50mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，向体系中依次加入(S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酸(215mg，0.25mmol)，1-(4-(((S)-3-甲基-(((S)-1-((4-(氨甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲酸乙酯(163mg，0.25mmol)，N，N-二异丙基乙胺(162mg，1.25mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(195mg，0.38mmol)，10min加毕，保温反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体259mg。ESI-MS(m/z)：1359.8[M+H] +。
步骤六：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-N-甲基-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-N-甲基-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸乙酯(50mg，0.037mmol)溶于四氢呋喃(5mL)与水(5mL)混合溶剂中，加入氢氧化锂(50mg，1.20mmol)，室温搅拌2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调pH＝3～4，减压蒸除溶剂，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z)：1331.8[M+H] +。
步骤七：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲 基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-N-甲基-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-N-甲基-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸(50mg，0.037mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向其中依次加入五氟苯酚(34mg，0.185mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(36mg，0.185mmol)，4-二甲氨基吡啶(14mg，0.111mmol)，升温至50℃，反应过夜，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体4.2mg。ESI-MS(m/z)：1497.8[M+H] +。
实施例十七8-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲 基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2- 甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2- 基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸五氟苯酚酯的合成(TL005)
Figure PCTCN2018082809-appb-000185
步骤一：
4-(3-甲氧羰基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-4-氧代丁酸的合成
室温下，将8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸甲酯(0.75g，4.46mmol)，丁二酸酐(0.45g，4.46mmol)，乙腈(20ml)加入三颈瓶中，接着室温搅拌下加入碳酸氢钠(0.38g，4.46mmol)，氮气置换三次，升温至50℃，保温反应4.0h，LC-MS检测反应完成。滤除不溶物，减压蒸除溶剂得 标题化合物，为浅黄色油状物1.18g。ESI-MS(m/z)：270.1[M+H] +。
步骤二：
8-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸甲酯的合成
将(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺)-N-(4-(羟甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(0.5g，1.32mmol)，4-(4-甲基-4-甲氧羰基-哌啶-1-基)-4-氧代丁酸(0.36g，1.32mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，体系降至0℃，加入N，N-二异丙基乙胺(0.34g，2.64mmol)，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(1.03g，1.98mmol)，15min加毕，自然升至室温，反应2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体0.51g。ESI-MS(m/z)：631.3[M+H] +。
步骤三：
8-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸甲酯的合成
室温下，将8-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸甲酯(517mg，0.82mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，向其中滴入33％HBr in HOAc(2.5mL)，15min滴毕，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。向反应液中加入水(20mL)，饱和碳酸氢钠调pH＝7～8，二氯甲烷(20mL×3)洗，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物粗品，白色固体536mg。ESI-MS(m/z)：693.2[M+H] +。
步骤四：
8-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-氨基-苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸甲酯的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲基-4-甲酸甲酯粗品(536mg，0.77mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，将其滴入NH 3in CH 3OH(10mL，7mol/L)中，室温反应0.5h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体407mg。ESI-MS(m/z)：630.3[M+H] +。
步骤五：
8-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸甲酯的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(68mg，0.50mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，向体系中依次加入(S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酸(215mg，0.25mmol)，8-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-氨基-苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸甲酯(157mg，0.25mmol)，N，N-二异丙基乙胺(162mg，1.25mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(195mg，0.38mmol)，10min加毕，保温反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体196mg。ESI-MS(m/z)：1357.8[M+H] +。
步骤六：
8-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸的合成
将8-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸甲酯(50mg，0.037mmol)溶于四氢呋喃(5mL)与水(5mL)混合溶剂中，加入氢氧化锂(50mg，1.20mmol)，室温搅拌2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调pH＝3～4，减压蒸除溶剂，直接用于下一步 反应。ESI-MS(m/z)：1343.8[M+H] +。
步骤七：
8-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸五氟苯酚酯的合成
将8-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-甲酸(50mg，0.037mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向其中依次加入五氟苯酚(34mg，0.185mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(36mg，0.185mmol)，4-二甲氨基吡啶(14mg，0.111mmol)，升温至50℃，反应过夜，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体3.2mg。ESI-MS(m/z)：1509.8[M+H] +。
实施例十八1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲 基氧基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2- 甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2- 基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯(TL006)
Figure PCTCN2018082809-appb-000186
步骤一：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(氨甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲酸乙酯的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲酸乙酯粗品(585mg，0.82mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，将其滴入NH 3in CH 3OH(10mL，7mol/L)中，室温反应0.5h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体158mg。ESI-MS (m/z)：618.1[M+H] +。
步骤二：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸乙酯的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(68mg，0.50mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，向体系中依次加入(S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酸(215mg，0.25mmol)，1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲酸乙酯(155mg，0.25mmol)，N，N-二异丙基乙胺(162mg，1.25mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(195mg，0.38mmol)，10min加毕，保温反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体254mg。ESI-MS(m/z)：1345.6[M+H] +。
步骤三：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸乙酯(50mg，0.037mmol)溶于四氢呋喃(5mL)与水(5mL)混合溶剂中，加入氢氧化锂(50mg，1.20mmol)，室温搅拌2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调pH＝3～4，减压蒸除部分溶剂，冷冻干燥得粗品，待下一步反应。ESI-MS(m/z)：1317.8[M+H] +。
步骤四：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)哌啶-4-甲酸(50mg，0.037mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向其中依次加入五氟苯酚(34mg，0.185mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(36mg，0.185mmol)，4-二甲氨基吡啶(14mg，0.111mmol)，升温至50℃，反应过夜，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体14mg。ESI-MS(m/z)：1482.8[M+H] +。
实施例十九cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二 甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基 -2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基 -2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成(TL007)
步骤一：
cis-4-(4-(甲氧基羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-4-氧代丁酸的合成
室温下，将cis-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯盐酸盐(200mg，1.04mmol)，丁二酸酐(104mg，1.04mmol)，乙腈(5ml)加入三颈瓶中，接着室温搅拌下加入碳酸氢钠(87.4mg，1.04mmol)，氮气置换三次，升温至50℃，保温反应4.0h，LC-MS检测反应完成。降至室温，减压蒸除溶剂，加入水(10mL)，乙酸乙酯(30mL×3)洗，饱和食盐水(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得目标化合物，为浅黄色油状物250mg。ESI-MS(m/z)：258.1[M+H] +
Figure PCTCN2018082809-appb-000187
步骤二：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
将(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺)-N-(4-(羟甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(370mg，0.97mmol)，cis-4-(4-(甲氧基羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-4-氧代丁酸(250mg，0.97mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中，体系降至0℃，加入N，N-二异丙基乙胺(375mg，2.91mmol)，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(757mg，1.46mmol)，15min加毕，自然升至室温，反应2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得目标化合物，为白色固体360mg。ESI-MS(m/z)：619.3[M+H] +。
步骤三：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲酸甲酯(200mg，0.32mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，向其中滴入33％HBr in HOAc(2.5ml)，15min滴毕，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。向反应液中加入水(20mL)，饱和碳酸氢钠调pH＝7～8，二氯甲烷(30mL×3) 萃取，饱和食盐水(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物，固体粗品220mg。ESI-MS(m/z)：681.3[M+H] +。
步骤四：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(氨甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-2甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
将cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)哌啶-4-甲酸甲酯粗品(220mg，0.32mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，将其滴入NH3in CH3OH(10ml，7mol/L)中，室温反应0.5h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得目标化合物，为白色固体110mg。ESI-MS(m/z)：618.3[M+H] +。
步骤五：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(44mg，0.32mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，向体系中依次加入(S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酸(138mg，0.16mmol)，cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(100mg，0.16mmol)，N，N-二异丙基乙胺(103mg，0.8mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(125mg，0.24mmol)，10min加毕，保温反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得目标化合物，为白色固体167mg。ESI-MS(m/z)：1345.8[M+H] +。
步骤六：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸的合成
将cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(50mg，0.037mmol)溶于四氢呋喃(2mL)与水(4mL)混合溶剂中，加入氢氧化锂(15mg，0.37mmol)，室温搅拌2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调pH＝3～4，减压蒸除溶剂，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z)：1331.8[M+H] +。
步骤七：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成
将cis 1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸(50mg，0.037mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，降温至0度，依次向其中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(11mg，0.056mmol)，4-二甲氨基吡啶(14mg，0.111mmol)，保温搅拌5分钟，再向其中加入五氟苯酚(68mg，0.37mmol)，反应6h，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得目标化合物，为白色固体30mg。ESI-MS(m/z)：1497.8[M+H] +。
实施例二十cis-1-(4-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二 甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2- 甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁 基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-五氟苯酚羧酸酯的合成CTL008)
步骤一：
cis-(E)-1-(4-(苄氧基)-4-氧代丁基-2-烯-1-基)-2-三氟甲基-哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将cis-2-三氟甲基-哌啶-4-甲酸甲酯(100mg，0.47mmol)，4-溴巴豆酸苄酯(242mg，0.94mmol)，碳酸钾(130mg，0.94mmol)加入20mL单口瓶中，搅拌均匀，升温至100℃反应6h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，快速硅胶柱纯化得标题化合物，为淡黄色油状液体80mg。ESI-MS(m/z)：386.1[M+H] +。
Figure PCTCN2018082809-appb-000188
步骤二：
cis-4-(4-(甲氧羰基)-2-(三氟甲基)哌啶-1-基)-丁酸的合成
室温下，将cis-(E)-1-(4-(苄氧基)-4-氧代丁基-2-烯-1-基)-2-三氟甲基-哌啶-4-甲酸甲酯(20mg，0.05mmol)溶于乙醇(4mL)中，氮气保护下加入二氧化铂(5mg)，用氢气置换反应体系三次，氢气环境下室温反应20min。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，滤除不溶物，滤液减压浓缩得标题化合物，为无色油状液体15mg。ESI-MS(m/z)：298.1[M+H] +。
步骤三：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸甲酯的合成
将(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)-N-(4-(羟甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(50mg，0.13mmol)，cis-4-(4-(甲氧羰基)-2-(三氟甲基)哌啶-1-基)丁酸(39mg，0.13mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，降温至0℃，依次加入N，N-二异丙基乙胺(34mg，0.26mmol)，1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐(101mg，0.195mmol)加毕室温搅拌反应2h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，反应液经制备液相色谱色谱纯化得标题化合物，为白色固体20mg。ESI-MS(m/z)：659.3[M+H] +。
步骤四：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(苄基叠氮)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸甲酯的合成
将cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸甲酯(20mg，0.03mmol)溶于四氢呋喃(2mL)中，依次加入1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(15mg，0.09mmol)、叠氮磷酸二苯酯(42mg，0.15mmol)，加毕室温搅拌反应4h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，反应液经制备液相色谱色谱纯化得标题化合物，为白色固体15mg。ESI-MS(m/z)：684.3[M+H] +。
步骤五：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(氨甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸甲酯的合成
将cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(苄基叠氮)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸甲酯(100mg，0.15mmol)溶于四氢呋喃与水的混合溶剂中(v∶v＝10∶15.5mL)，搅拌下加入三苯基膦(77mg，0.29mmol)加毕室温搅拌反应4h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，反应液经制备液相色谱色谱纯化得标题化合物，为白色固体80mg。ESI-MS(m/z)：658.3[M+H] +。
步骤六：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸甲酯的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(27mg，0.20mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，降温至0℃，依次加入(S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙氨酸(68mg，0.09mmol)，DIEA(59mg，0.46mmol)，cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(氨甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸甲酯(60mg，0.09mmol)，搅拌5min，加入1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐(71mg，0.14mmol)，加毕室温搅拌反应2h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，将反应液经制备液相色谱色谱纯化得标题化合物，为白色固体80mg。ESI-MS(m/z)：693.4[M/2+H] +。
步骤七：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸的合成
将cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸甲酯(80mg，0.06mmol)溶于四氢呋喃(2mL)，水(4mL)中，搅拌下加入一水氢氧化锂(25mg，0.06mmol)，加毕室温搅拌反应2h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，反应液用稀盐酸(1N)调pH＝3-4，冻干得标题化合物，为白色固体80mg。ESI-MS(m/z)：686.5[M/2+H] +。
步骤八：
cis-1-(4-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-五氟苯酚羧酸酯的合成
室温下，将cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸(70mg，0.05mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中，降温至0℃，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(15mg，0.08mmol)，4-二甲氨基吡啶(19mg，0.15mmol)，然后一次性加入五氟苯酚(94mg，0.51mmol)，加毕室温搅拌反应3h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，将反应液直接用制备高效液相色谱纯化得标题化合物，为白色固体60mg。ESI-MS(m/z)：1537.6[M+H] +。
实施例二十一cis-1-((6S，9S)-1-氧基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2- ((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2- 基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代- 13，16-二氧-2，7，10-三氮杂十八烷-18-基)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成(TL009)
Figure PCTCN2018082809-appb-000189
步骤一：
2-(2-(2-(苄氧基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙酸的合成
室温下，将2，2′-(乙烷-1，2-二基双(氧基))-二乙酸(3.0g，16.8mmol)，三乙胺(3.0g，29.7 mmol)，加入到N，N-二甲基甲酰胺(150mL)中，降温至0℃，缓慢滴加苄溴，滴毕，0℃搅拌4h后，升至室温反应15h，LC-MS检测反应完全。将反应液倒入用氯化钠饱和的1N的盐酸中，加入乙酸乙酯萃取(100mL×6)，合并乙酸乙酯相，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得粗品。粗品经硅胶柱纯化(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得标题化合物，为无色油状物680mg。ESI-MS(m/z)：269.1[M+H] +。
步骤二：
cis-1-(2-(2-(2-(苄氧基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙酰基)-2-甲基哌啶-4-羧酸甲酯的合成
将2-(2-(2-(苄氧基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙酸(660mg，2.5mmol)、cis-2-甲基哌啶-4-羧酸甲酯盐酸盐(400mg，2.0mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(1.6g，4.2mmol)、N，N-二异丙基乙胺(588mg，4.6mmol)加入到N，N-二甲基甲酰胺(60mL)中，室温搅拌2h，LC-MS检测反应完全。将反应液倒入水中，加乙酸乙酯萃取(100mL×2)合并乙酸乙酯相，饱和食盐水洗(100mL×3)无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物，为无色油状物600mg。ESI-MS(m/z)：408.2[M+H] +。
步骤三：
2-(2-(2-((cis-(-4-(甲氧基羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙酸的合成
室温下，将cis-1-(2-(2-(2-(苄氧基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙酰基)-2-甲基哌啶-4-羧酸甲酯(600mg，1.4mmol)加入到甲醇(6mL)中，再加入钯碳(60mg，10％)，用氢气置换三次后，通氢气室温搅拌16h，LC-MS检测反应完全。垫硅藻土过滤，母液减压浓缩至干。得标题化合物，为无色油状物460mg。ESI-MS(m/z)：318.2[M+H] +。
步骤四：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(羟甲基)苯基)氨基甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16-二氧杂-2，7，10-三氮杂十八烷-18-基)-2-甲基哌啶-4-羧酸乙酯的合成
将2-(2-(2-((cis-(-4-(甲氧基羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙酸(320mg，1.0mmol)，(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)-N-(4-(羟甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(382mg，1.0mmol)，N，N-二异丙基乙胺(260mg，2.5mmol)加入到N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中，降温至0℃。分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(787mg，1.5mmol)。5min加毕，移至室温搅拌3h。LC-MS检测反应完全，直接制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体500mg。ESI-MS(m/z)：679.4[M+H] +。
步骤五：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(溴甲基)苯基)氨基甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16-二氧杂-2，7，10-三氮杂十八烷-18-基)-2-甲基哌啶-4-羧酸乙酯的合成
室温下，将将cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(羟甲基)苯基)氨基甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16-二氧杂-2，7，10-三氮杂十八烷-18-基)-2-甲基哌啶-4-羧酸乙酯(300mg，0.44mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，向其中滴入33％HBrin HOAc(1.5mL)的二氯甲烷(6mL)溶液，10min滴毕，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。向反应液中加入水(20mL)，饱和碳酸氢钠调pH＝7～8，二氯甲烷(20mL×3)洗，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物，固体粗品380mg。ESI-MS(m/z)：741.2[M+H] +。
步骤六：
cis-1-(6S，9S)-1-氨基-6-((4-(氨基甲基)苯基)氨基甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16-二氧杂-2，7，10-三氮杂十八烷-18-基)-2-甲基哌啶-4-羧酸乙酯的合成
将cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(溴甲基)苯基)氨基甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16-二氧杂-2，7，10-三氮杂十八烷-18-基)-2-甲基哌啶-4-羧酸乙酯粗品(380mg，0.51mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，将其滴入NH3in CH3OH(25mL，7mol/L)中，室温反应10min滴毕，反应0.5h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体150mg。ESI-MS(m/z)：678.3[M+H] +。
步骤七：
cis-甲基-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16-二氧-2，7，10-三氮杂十八烷-18-基)-2-甲基哌啶-4-羧酸乙酯的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(30mg，0.22mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，向体系中依次加入(S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)- N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酸(95mg，0.11mmol)，cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(氨甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(80mg，0.11mmol)，N，N-二异丙基乙胺(71mg，55mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(88mg，0.17mmol)，10min加毕，保温反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体125mg。ESI-MS(m/z)：703.4[M/2+H] +。
步骤八：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16-二氧杂-2，7，10-三氮杂十八烷-18-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸的合成
将cis-甲基-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰氨基)甲基)苯基)氨基甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16-二氧-2，7，10-三氮杂十八烷-18-基)-2-甲基哌啶-4-羧酸乙酯(50mg，0.035mmol)溶于四氢呋喃(1mL)与水(2mL)混合溶剂中，加入氢氧化锂(46mg，1.11mmol)，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入稀盐酸(0.5mol/L)调pH＝3～4，冷冻干燥得50mg粗品，待下一步反应。696.4[M/2+H] +。
步骤九：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16-二氧-2，7，10-三氮杂十八烷-18-基)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成
将cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16-二氧杂-2，7，10-三氮杂十八烷-18-基)-2-甲基哌啶-4-甲酸粗品(50mg，0.035mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，向其中依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(10mg，0.053mmol)，4-二甲氨基吡啶(13mg，0.101mmol)，降温至0℃，五氟苯酚(65mg，0.350mmol)，自然升温至室温，反应过夜，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体29mg。ESI-MS(m/z)：779.6[M/2+H] +。
实施例二十二
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨 基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基 丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10- 三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成(TL010)
Figure PCTCN2018082809-appb-000190
步骤一：
3-氧代-1-苯基-2，5，8，11-四氧杂十三烷-13-羧酸的合成
将3，6，9三噁十一(碳)烷二酸(5.0g，22.50mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(250mL)中，降温至-2℃，向其中滴入溴化苄(3.16g，18.49mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(250mL)溶液，2.5h滴毕，升温至0℃，保温反应4.0h，接着自然升至室温，搅拌过夜，LC-MS检测反应完成。将反应液倒入用氯化钠饱和的盐酸(1mol/L)中，乙酸乙酯(50mL×6)洗，合并有机相，减压蒸除溶剂，经快速柱层析得标题化合物，为浅黄色油状物800mg。ESI-MS(m/z)：313.1[M+H] +。
步骤二：
cis-2-甲基-1-(3-氧代-1-苯基-2，5，8，11-四氧杂十三烷-13-酰基)哌啶-4-甲酸甲酯的合成
将3-氧代-1-苯基-2，5，8，11-四氧杂十三烷-13-羧酸(710mg，2.28mmol)，cis-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯盐酸盐(400mg，2.07mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(1.573g，4.14mmol)，N，N-二异丙基乙胺(587mg，4.55mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，室温反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液中加入水(30mL)，乙酸乙酯(20mL×3)洗，合并有机相，有机相再次用水(20mL×2)洗，饱和碳酸氢钠(20mL)洗一次，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂。蒸除溶剂，得标题化合物，为无色油状物882mg。ESI-MS(m/z)：452.2[M+H] +。
步骤三：
2-(2-(2-(2-(cis-4-(甲氧羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-2-甲酰甲氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸的合成
室温下，将cis-2-甲基-1-(3-氧代-1-苯基-2，5，8，11-四氧杂十三烷-13-酰基)哌啶-4-甲酸甲酯(220mg，0.49mmol)溶于无水甲醇(6mL)中，向其中加入钯碳(40mg，10％)，氢气球置换三次， 室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。滤除不溶物，并用无水甲醇多次洗涤钯碳，减压蒸除溶剂，得标题化合物粗品181mg，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z)：362.2[M+H] +。
步骤四：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(羟甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
将(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺)-N-(4-(羟甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(186mg，0.49mmol)，2-(2-(2-(2-(cis-4-(甲氧羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-2-甲酰甲氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸(177mg，0.49mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中，体系降至0℃，加入N，N-二异丙基乙胺(127mg，0.98mmol)，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(382mg，0.74mmol)，5min加毕，自然升至室温，反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体230mg。ESI-MS(m/z)：723.3[M+H] +。
步骤五：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(溴甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(羟甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(200mg，0.28mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，向其中滴入33％HBr in HOAc(1.0ml)的二氯甲烷(6mL)溶液，10min滴毕，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。向反应液中加入水(20mL)，饱和碳酸氢钠调PH＝7～8，二氯甲烷(20mL×3)洗，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物，固体粗品230mg。ESI-MS(m/z)：785.2[M+H] +。
步骤六：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(氨甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
将cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(溴甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯粗品(230mg，0.28mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，将其滴入NH 3in CH 3OH(25ml，7mol/L)中，室温反应10min滴毕，反应0.5h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体80mg。ESI-MS(m/z)：722.3[M+H] +。
步骤七：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(30mg，0.22mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，向体系中依次加入(S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酸(95mg，0.11mmol)，cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(氨甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(80mg，0.11mmol)，N，N-二异丙基乙胺(71mg，55mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(88mg，0.17mmol)，10min加毕，保温反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体125mg。ESI-MS(m/z)：725.5[M/2+H] +。
步骤八：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸的合成
将cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三 氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(50mg，0.034mmol)溶于四氢呋喃(1mL)与水(2mL)混合溶剂中，加入氢氧化锂(46mg，1.11mmol)，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调pH＝3～4，冷冻干燥得50mg粗品，待下一步反应。718.5[M/2+H] +。
步骤九：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成
将cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基甲酰)-9-异丙基-1，8，11-三氧代-13，16，19-三氧杂-2，7，10-三氮杂二十一烷-21-酰基)-2-甲基哌啶-4-甲酸粗品(50mg，0.034mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，向其中依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(10mg，0.053mmol)，4-二甲氨基吡啶(13mg，0.101mmol)，降温至0℃，五氟苯酚(65mg，0.350mmol)，自然升温至室温，反应过夜，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体25mg。ESI-MS(m/z)：801.5[M/2+H] 1+。
实施例二十三
(3R，4R)-1-(4-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氢 基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基 丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氧基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基) 氨基)-4-氧代丁酰胺)-3-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成(TL011 )
步骤一：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-3-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-N-(4-(羟甲基)苯基)-5-脲丙酰胺(300mg，0.79mmol)和4-(cis-4-(甲氧羰基)-3-甲基哌啶-1-基)-4-氧代丁酸(207mg，0.79mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中，降温到0℃，依次加入N，N-二异丙基乙胺(204mg，1.58mmol)和1H-苯并三唑-1-氧三吡咯啉嗡六氟磷酸(616mg，1.19mmol)，加毕，反应体系室温搅拌3h。制备液相色谱纯化，得标题化合物300mg，为白色固体。ESI-MS(m/z)：619.2[M+H] +。
Figure PCTCN2018082809-appb-000191
步骤二：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-3-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(羟甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-3-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(200mg，0.32mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，向其中滴入33％HBrin HOAc(0.7ml)，15min滴毕，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。向反应液中加入水(20mL)，饱和碳酸氢钠调PH＝7～8，二氯甲烷(20mL×3)洗，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物粗品，白色固体220mg。ESI-MS(m/z)：681.1[M+H] +。
步骤三：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(氨甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-3-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
将cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(溴甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-3-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(220mg，0.32mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，将其滴入NH3in CH3OH(10ml，7mol/L)中，室温反应0.5h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体70mg。ESI-MS(m/z)：618.1[M+H] +。
步骤四：
cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-3-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(22mg，0.162mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中，向体系中依次加入(S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酸(70mg，0.081mmol)，cis-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(氨甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰基)-3-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(50mg，0.081mmol)，N，N-二异丙基乙胺(52mg，0.405mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(63mg，0.12mmol)，10min加毕，保温反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体88mg。ESI-MS(m/z)：1345.6[M+H] +。
步骤五：
cis-1-(4-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-3-甲基哌啶-4-甲酸的合成
将cis-1-(4-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-3-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(50mg，0.037mmol)溶于四氢呋喃(5mL)与水(5mL)混合溶剂中，加入氢氧化锂(50mg，1.20mmol)，室温搅拌2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调pH＝3～4，减压蒸除溶剂，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z)：1331.8[M+H] +。
步骤六：
cis-1-(4-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-3-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成
将cis-1-(4-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-3-甲基哌啶-4-甲酸(50mg，0.037mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，氮气保护，向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(11mg，0.056mmol)， 4-二甲氨基吡啶(14mg，0.113mmol)，降温到0℃，向其中加入五氟苯酚(69mg，0.376mmol)，升温至室温，反应过夜，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物34mg，为白色固体。ESI-MS(m/z)：1497.8[M+H] +。
实施例二十四
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨 基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基 丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10- 三氮杂二十六烷-26-氧基)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成(TL012)
Figure PCTCN2018082809-appb-000192
步骤一：
3-氧基-1-苯基-2，6，9，12，15-五氧杂十八烷-18-羧酸的合成
室温下，将4，7，10，13-四氧杂十六烷二酸(1.0g，3.4mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中，向反应液中加三乙胺(1.3g，10.2mmol)。向其中滴入苄溴(580mg，0.34mmol)，15min滴毕，室温搅拌过夜。制备纯化得到目标化合物356mg，为无色油状物。ESI-MS(m/z)：385.2[M+H] +。
步骤二：
cis-2-甲基-1-(3-氧基-1-苯基-2，6，9，12，15-五氧杂十八烷-18-基)哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将3-氧基-1-苯基-2，6，9，12，15-五氧杂十八烷-18-羧酸(200mg，0.52mmol)、cis-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯盐酸盐(100mg，0.52mmol)、N，N，N′，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(395mg，1.04mmol)、N，N-二异丙基乙胺(168mg，1.3mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中，反应液室温搅拌3h。向反应液中加入水(30mL)，乙酸乙酯(20mL×3)萃取， 饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物330mg，为无色油状物。ESI-MS(m/z)：534.1[M+H] +。
步骤三：
16-(cis-4-(甲氧羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-16-氧-4，7，10，13-四氧杂十六烷酸的合成
室温下，将cis-2-甲基-1-(3-氧基-1-苯基-2，6，9，12，15-五氧杂十八烷-18-基)哌啶-4-甲酸甲酯(330mg，0.69mmol)溶于甲醇(5mL)中，加钯碳(10％，30mg)。反应体系氢气置换，体系在氢气环境中室温搅拌3h。滤去不溶物，减压蒸除溶剂得标题化合物270mg，为无色油状物。ESI-MS(m/z)：434.2[M+H] +。
步骤四：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(羟甲基)苯基)胺甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10-三氮杂二十六烷-26-氧基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将16-(cis-4-(甲氧羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-16-氧-4，7，10，13-四氧杂十六烷酸(270mg，0.69mmol)和(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-N-(4-(羟甲基)苯基)-5-脲丙酰胺(262mg，0.69mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中，降温到0℃，依次加入N，N-二异丙基乙胺(178mg，1.38mmol)和1H-苯并三唑-1-氧三吡咯啉嗡六氟磷酸(540mg，1.04mmol)，加毕，反应体系室温搅拌3h。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体160mg。ESI-MS(m/z)：795.2[M+H] +。
步骤五：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(溴甲基)苯基)胺甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10-三氮杂二十六烷-26-氧基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(羟甲基)苯基)胺甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10-三氮杂二十六烷-26-羟基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(160mg，0.2mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，向其中滴入33％HBr in HOAc(0.4ml)，15min滴毕，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。向反应液中加入水(20mL)，饱和碳酸氢钠调pH＝7～8，二氯甲烷(20mL×3)洗，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物，固体粗品190mg。ESI-MS(m/z)：857.2[M+H] +。
步骤六：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(胺甲基)苯基)胺甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10-三氮杂二十六烷-26-氧基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
将cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(溴甲基)苯基)胺甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10-三氮杂二十六烷-26-羟基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(190mg，0.22mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，将其滴入NH 3in CH 3OH(10ml，7mol/L)中，室温反应0.5h，LC-MS检测反应完成，停止反应，反应液浓缩得粗品。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体100mg。ESI-MS(m/z)：794.2[M+H] +。
步骤七：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10-三氮杂二十六烷-26-氧基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将1-羟基苯并三唑(34mg，0.252mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中，向体系中依次加入(S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酸(108mg，0.126mmol)，cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(胺甲基)苯基)胺甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10-三氮杂二十六烷-26-氧基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(100mg，0.126mmol)，N，N-二异丙基乙胺(81mg，0.63mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(98mg，0.19mmol)，10min加毕，保温反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体148mg。ESI-MS(m/z)：1522.6[M+H] +。
步骤八：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10- 三氮杂二十六烷-26-氧基)-2-甲基哌啶-4-甲酸的合成
将cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10-三氮杂二十六烷-26-氧基)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯(60mg，0.04mmol)溶于四氢呋喃(5mL)与水(5mL)混合溶剂中，加入氢氧化锂(60mg，1.43mmol)，室温搅拌2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调pH＝3～4，减压蒸除溶剂，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z)：1508.5[M+H] +。
步骤九：
cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10-三氮杂二十六烷-26-氧基)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成
将cis-1-((6S，9S)-1-氨基-6-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨甲酰基)-9-异丙基-1，8，11-三氧基-14，17，20，23-四氧杂-2，7，10-三氮杂二十六烷-26-氧基)-2-甲基哌啶-4-甲酸(58mg，0.04mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，氮气保护，向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(11mg，0.06mmol)，4-二甲氨基吡啶(15mg，0.12mmol)，降温到0℃，向其中加入五氟苯酚(74mg，0.4mmol)，升温至室温，反应过夜，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体7mg。ESI-MS(m/z)：1674.5[M+H] +。
实施例二十五
(2R，4R)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-(S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯(TL030)及(2S，4S)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-(S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯(TL031)的合成
Figure PCTCN2018082809-appb-000193
Figure PCTCN2018082809-appb-000194
步骤一：
(2R，4R)-1-苄氧羰基-2-甲基哌啶-4-羟酸甲酯及(2S，4S)-1-苄氧羰基-2-甲基哌啶-4-羧酸甲酯的合成将化合物cis-1-苄氧羰基-2-甲基哌啶-4-羟酸甲酯(1.88g)通过手性色谱法分离，分离条件如下：
Figure PCTCN2018082809-appb-000195
Figure PCTCN2018082809-appb-000196
分离得到上述2种标题化合物(即异构体30-1a和异构体30-1b)，
异构体30-1a为白色固体752mg，ee％＝99.4％，Rt＝6.018min。ESI-MS(m/z)：292.2[M+H] +。
异构体30-1b为白色固体797mg，ee％＝98.9％，Rt＝7.367min。ESI-MS(m/z)：292.2[M+H] +。
步骤二：
(2R，4R)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯及(2S，4S)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将30-1a(400mg，1.37mmol)，四氢呋喃(10mL)加入50mL单口瓶中，接着室温搅拌下加入钯碳(150mg，10％Pd)，氮气置换三次，氢气置换3次，氢气加压反应1h，LC-MS检测反应完成。处理直接抽滤，四氢呋喃(10mL)洗滤饼，滤液减压蒸除得目标化合物(30-2a)，为浅黄色油状物200mg。ESI-MS(m/z)：158.1[M+H] +。
室温下，将30-1b(330mg，1.1mmol)，四氢呋喃(10mL)加入50mL单口瓶中，接着室温搅拌下加入钯碳(100mg，10％Pd)，氮气置换三次，氢气置换3次，氢气加压反应1h，LC-MS检测反应完成。处理直接抽滤，四氢呋喃(10mL)洗滤饼，滤液减压蒸除得目标化合物(30-2b)，为浅黄色油状物160mg。ESI-MS(m/z)：158.1[M+H] +。
步骤三：
4-((2R，4R)-4-(甲氧基羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-4-氧代丁酸及4-((2S，4S)-4-(甲氧基羰基)-2-甲基哌啶-1-基)-4-氧代丁酸的合成
室温下，将30-2a(200mg，1.27mmol)，丁二酸酐(127mg，1.27mmol)，乙腈(10ml)加入三颈瓶中，接着室温搅拌下加入碳酸氢钠(160mg，1.91mmol)，氮气置换三次，升温至50℃，保温反应4.0h，LC-MS检测反应完成。降至室温，减压蒸除溶剂，加入水(30mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得目标化合物(30-3a)，为浅黄色油状物260mg。ESI-MS(m/z)：258.1[M+H] +。
室温下，将30-2b(160mg，1.0mmol)，丁二酸酐(100mg，1.0mmol)，乙腈(10ml)加入三颈瓶中，接着室温搅拌下加入碳酸氢钠(126mg，1.5mmol)，氮气置换三次，升温至50℃，保温反应4.0h，LC-MS检测反应完成。降至室温，减压蒸除溶剂，加入水(30mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，有机相用饱和食盐水(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得目标化合物(30-3b)，为浅黄色油状物250mg。ESI-MS(m/z)：258.1[M+H] +。
步骤四：
(9H-芴-9-基)-甲基-((S)-1-(((S)-1-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)-氨基甲酸酯的合成
室温下，将4-(N-Boc-氨甲基)-苯胺(6.0g，27mmol)、(S)-2-((S)-2-((((9H-芴-9-基)-甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰胺基)-5-脲基戊酸(3.35g，6.75mmol)、2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1，2-二氢喹啉(3.34g，13.5mmol)溶于二氯甲烷(140mL)与甲醇(70mL)的混合溶剂中，升温到45℃，反应体系保温搅拌8.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。冷却至室温，有大量固体析出，抽滤得标题化合物，为类白色固体3.65g。ESI-MS(m/z)：701.4[M+H] +。
步骤五：
(9H-芴-9-基)-甲基-((S)-1-(((S)-1-((4-(氨甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)-氨基甲酸酯的合成
室温下，将三氟乙酸(15mL)加入(9H-芴-9-基)-甲基-((S)-1-(((S)-1-((4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)-氨基甲酸酯(3.0g，4.29mmol)中，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。减压蒸除溶剂得黄色油状物，加入无水乙醚(20mL)，有大量固体析出，剧烈搅拌0.5h，抽滤，得浅黄色固体，为标题化合物的三氟乙酸盐，为类白色固体3.06g。ESI-MS(m/z)：601.3[M+H] +。
步骤六：
(9H-芴-9-基)-甲基-((S)-1-(((S)-1-((4-(((R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)-氨基甲酸酯的合成
室温下，将Boc-D-苯丙氨酸(1.1g，4.2mmol)、(9H-芴-9-基)-甲基-((S)-1-(((S)-1-((4-(氨甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)-氨基甲酸酯的三氟乙酸盐(3.0g，4.2mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(40mL)中，降温至0℃，然后依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳 二亚胺盐酸盐(1.2g，6.3mmol)、1-羟基苯并三唑(0.9g，6.3mmol)、N-甲基吗啡啉(1.7g，16.8mmol)，反应体系保温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。将反应液逐滴滴入冰水浴(400mL)，剧烈搅拌0.5h，有大量固体析出，抽滤，得标题化合物，为黄色固体3.3g。ESI-MS(m/z)：848.4[M+H] +。
步骤七：
(9H-芴-9-基)-甲基-((S)-1-(((S)-1-((4-(((R)-2-氨基-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)-氨基甲酸酯的合成
室温下，将(9H-芴-9-基)-甲基-((S)-1-(((S)-1-((4-(((R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)-氨基甲酸酯(3.0g，3.3mmol)溶于三氟乙酸(30mL)中，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。减压蒸除溶剂得黄色油状物，加入无水乙醚(100mL)，剧烈搅拌0.5h，有大量固体析出，抽滤，得标题化合物的三氟乙酸盐，为浅黄色固体2.1g。ESI-MS(m/z)：748.4[M+H] +。
步骤八：((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基-(9H-芴基)甲基-甲酸酯的合成
室温下，将(2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(1.3g，2.17mmol)和((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-氨基-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基-(9H-芴基)甲基-甲酸酯三氟乙酸盐(1.8g，2.17mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中，降温到0℃，依次加入1-羟基苯并三唑(440mg，3.26mmol)和N-甲基吗啉(658mg，6.51mmol)最后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(624mg，1.38mmol)，加毕，反应液0℃搅拌5h。制备液相色谱纯化，得标题化合物1.8g，为白色固体。ESI-MS(m/z)：1329.2[M+H] +。
步骤九：
(S)-2-((S)-2-氨基-3-丁酰胺基)-N-(4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺的合成
室温下，将((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基-(9H-芴基)甲基-甲酸酯(500mg，0.38mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加哌啶(324mg，3.8mmol)，反应液室温搅拌3h。制备纯化得到目标化合物，为白色固体350mg。ESI-MS(m/z)：1107.2[M+H] +。
步骤十：
(2R，4R)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯及(2S，4S)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸甲酯的合成
室温下，将30-3a(14mg，0.054)，(S)-2-((S)-2-氨基-3-丁酰胺基)-N-(4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(60mg，0.054mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中，向其中加入N，N-二异丙基乙胺(21mg，0.16mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(42mg，0.08)，加毕，缓慢回至室温反应2.0h，LC-MS检测反应完成。处理，直接制备液相色谱纯化，得目标化合物(30-4a)，为白色固体50mg。ESI-MS(m/z)：1345.8[M+H] +。
室温下，将30-3b(12mg，0.045)，(2S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)-N-(4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(50mg，0.045mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，向其中加入N，N-二异丙基乙胺(18mg，0.14mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(36mg，0.07)，加毕，缓慢回至室温反应2.0h，LC-MS检测反应完成。处理，直接制备液相色谱纯化，得目标化合物(30- 4b)，为白色固体45mg。ESI-MS(m/z)：1345.8[M+H] +。
步骤十一：
(2R，4R)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸及((2S，4S)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷基-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸的合成
将30-4a(30mg，0.022mmol)溶于四氢呋喃(1mL)与水(2mL)混合溶剂中，加入一水合氢氧化锂(10mg，0.24mmol)，室温搅拌4.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调PH＝3～4，减压蒸除部分溶剂，冷冻干燥得粗品(30-5a)，待下一步反应。ESI-MS(m/z)：1331.8[M+H] +。
将30-4b(30mg，0.022mmol)溶于四氢呋喃(1mL)与水(2mL)混合溶剂中，加入一水合氢氧化锂(10mg，0.24mmol)，室温搅拌4.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调PH＝3～4，减压蒸除部分溶剂，冷冻干燥得粗品(30-5b)，待下一步反应。ESI-MS(m/z)：1331.8[M+H] +。
步骤十二：
(2R，4R)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯及(2S，4S)-1-(4-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺)-3-苯基丙酰胺)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁酰胺)-2-甲基哌啶-4-甲酸五氟苯酚酯的合成
将30-5a(30mg，0.023mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，降温至0度，依次向其中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(7mg，0.034mmol)，4-二甲氨基吡啶(8mg，0.069mmol)，0度搅拌5分钟，再向其中加入五氟苯酚(42mg，0.23mmol)，反应16h，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得目标化合物(30-6a)，为白色固体13mg。ESI-MS(m/z)：1497.8[M+H] +。
将30-5b(30mg，0.023mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，降温至0度，依次向其中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(7mg，0.034mmol)，4-二甲氨基吡啶(8mg，0.069mmol)，0度搅拌5分钟，再向其中加入五氟苯酚(42mg，0.23mmol)，反应16h，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得目标化合物(30-6b)，为白色固体13mg。ESI-MS(m/z)：1497.8[M+H] +。
实施例二十七
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-(S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-1-甲基-4-((五氟苯酚酯基)羰基)哌啶碘化物的合成(TL033)
Figure PCTCN2018082809-appb-000197
步骤一：
1-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁基)哌啶-4-甲酸乙酯合成
室温下，将4-哌啶甲酸乙酯(1.0g，6.4mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，向反应液中加4-溴丁酸叔丁酯(1.7g，7.6mmol)、碳酸钾(1.77g，12.8mmol)和碘化钾(0.53g，3.2mmol)。加毕，室温搅拌5h，将反应液倒入水中，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，滤除干燥剂，减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/2)。得到目标化合物1.5g，为淡黄色油状物。ESI-MS(m/z)：300.2[M+H] +。
步骤二：
1-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁基)-4-(乙氧羰基)-1-甲基哌啶碘化物的合成
室温下，将1-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁基)哌啶-4-甲酸乙酯(500mg，1.7mmol)和碘甲烷(2413mg，17.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，反应液室温搅拌1h。减压蒸除溶剂得标题化合物530mg，为淡黄色油状物。ESI-MS(m/z)：314.2[M] +。
步骤三：
1-(3-羧丙基)-4-(乙氧羰基)-1-甲基哌啶碘化物的合成
室温下，将1-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁基)-4-(乙氧羰基)-1-甲基哌啶碘化物(530mg，1.7mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，向反应液中加入三氟乙酸(5mL)反应液室温搅拌2h。减压蒸除溶剂得标题化合物500mg，为淡黄色油状物。ESI-MS(m/z)：258.2[M] +。
步骤四：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-4-(乙氧羰基)-1-甲基哌啶碘化物的合成
室温下，将(S)-2-((S)-2-氨基-3-丁酰胺基)-N-(4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(300mg，0.27mmol)和1-(3-羟丙基)-4-(乙氧羰基)-1-甲基哌啶碘化物(127mg，0.33mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中，降温到0℃，依次加入N，N-二异丙基乙胺(105mg，0.81mmol)和1H-苯并三唑-1-氧三吡咯啉嗡六氟磷酸盐(281mg，0.54mmol)，加毕，反应体系室温搅拌3h。制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体200mg。ESI-MS(m/z)：1346.2[M] +。
步骤五：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-4-氧代丁基-4-(羧基)-1-甲基哌啶碘化物的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-4-(乙氧羰基)-1-甲基哌啶碘化物(200mg，0.15mmol)溶于四氢呋喃(5mL)与水(5mL)混合溶剂中，加入氢氧化锂(36mg，1.5mmol)，室温搅拌2.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调PH＝3～4，减压蒸除部分溶剂，制备纯化得到目标化合物150mg，为白色固体。ESI-MS(m/z)：1318.2[M] +。
步骤六：
1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-1-甲基-4-((五氟苯酚酯基)羰基)哌啶碘化物的合成
将1-(4-(((S)-1-(((S)-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-4-(羧基)-1-甲基哌啶碘化物(50mg，0.04mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，氮气保护，向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(11mg，0.06mmol)，4-二甲氨基吡啶(15mg，0.12mmol)，降温到0℃，向其中加入五氟苯酚(74mg，0.4mmol)，升温至室温，反应过夜，LC-MS检测反应完成，停止反应。经纯化，得标题化合物。ESI-MS(m/z)：1484.2[M] +。
实施例二十八
(2R，4S)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-五氟苯酚羧酸酯(TL034)及(2S，4R)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-五氟苯酚羧酸酯(TL035)的合成
Figure PCTCN2018082809-appb-000198
Figure PCTCN2018082809-appb-000199
步骤一：
(2R，4S)-1-((E)-4-(苄氧基)-4-氧代丁基-2-烯-1-基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-甲酸甲酯及(2S，4R)-1-((E)-4-(苄氧基)-4-氧代丁基-2-烯-1-基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-甲酸甲酯的合成
将化合物cis-1-((E)-4-(苄氧基)-4-氧代丁基-2-烯-1-基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-甲酸甲酯(950mg)通过手性色谱法分离，分离条件如下：
Figure PCTCN2018082809-appb-000200
Figure PCTCN2018082809-appb-000201
分离得到2种标题化合物，分别为：
35-1a：其为白色固体428mg，ee％＝99.9％，Rt＝7.825min。ESI-MS(m/z)：386.1[M+H] +；
35-1b：其为白色固体420mg，ee％＝99.6％，Rt＝10.728min。ESI-MS(m/z)：386.1[M+H] +。
步骤二：
4-((2R，4S)-4-(甲氧羰基)-2-(三氟甲基)哌啶-1-基)丁酸及4-((2S，4R)-4-(甲氧羰基)-2-(三氟甲基)哌啶-1-基)丁酸的合成
室温下，将
Figure PCTCN2018082809-appb-000202
(50mg，0.13mmol)溶于乙醇(5mL)中，氮气保护下加入二氧化铂(5mg)，用氢气置换反应体系三次，氢气环境下室温反应2h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，反应液过滤，滤液减压蒸干得标题化合物，为无色油状液体38mg(35-2a)。ESI-MS(m/z)：298.1[M+H] +。
室温下，将35-1b(50mg，0.13mmol)溶于乙醇(5mL)中，氮气保护下加入二氧化铂(5mg)，用氢气置换反应体系三次，氢气环境下室温反应2h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，反应液过滤，滤液减压蒸干得标题化合物，为无色油状液体38mg(35-2b)。ESI-MS(m/z)：298.1[M+H] +。
步骤三：
(2R，4S)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸甲酯及(2S，4R)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羟酸甲酯的合成
室温下，将(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)-N-(4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰基)甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(30mg，0.027mmol)和35-2a(10mg，0.033mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，降温至0℃，依次DIEA(10mg，0.081mmol)，1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐(28mg，0.054mmol)，加毕室温搅拌反应2h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，将反应液直接用制备高效液相色谱纯化得标题化合物，为白色固体(35-3a)30mg。ESI-MS(m/z)：693.6[M/2+H] +。
室温下，将(S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)-N-(4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰基)甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(30mg，0.027mmol)和35-2b(10mg，0.033mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，降温至0℃，依次DIEA(10mg，0.081mmol)，1H-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐(28mg，0.054mmol)，加毕室温搅拌反应2h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，将反应液直接用制备高效液相色谱纯化得标题化合物(35-3b)，为白色固体30mg。ESI-MS(m/z)：693.6[M/2+H] +。
步骤四：
(2R，4S)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羧酸及(2S，4R)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代 丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-羟酸的合成
将35-3a(30mg，0.02mmol)溶于四氢呋喃(2mL)，水(4mL)中，搅拌下加入一水氢氧化锂(9mg，0.2mmol)，加毕室温搅拌反应3h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，反应液用1N.HCl调pH＝3-4，冻干得标题化合物，为白色固体(35-4a)40mg。ES1-MS(m/z)：686.6[M/2+H] +。
将35-3b(30mg，0.02mmol)溶于四氢呋喃(2mL)，水(4mL)中，搅拌下加入一水氢氧化锂(9mg，0.2mmol)，加毕室温搅拌反应3h。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，反应液用1N.HCl调pH＝3-4，冻干得标题化合物，为白色固体(35-4b)40mg。ES1-MS(m/z)：686.6[M/2+H] +。
步骤五：
(2R，4S)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-五氟苯酚羧酸酯及(2S，4R)-1-(4-(((S)-1-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲酰基戊基-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁基-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-2-(三氟甲基)哌啶-4-五氟苯酚羧酸酯的合成
室温下，将35-4a(30mg，0.02mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(6.0mg，0.03mmol)，4-二甲氨基吡啶(8.0mg，0.06mmol)，然后一次性加入五氟苯酚(10mg，0.2mmol)，加毕室温搅拌反应过夜。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，将反应液直接用制备高效液相色谱纯化得标题化合物，为白色固体(35-5a)10mg。ESI-MS(m/z)：769.6[M/2+H] +。
室温下，将35-4b(30mg，0.02mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(6.0mg，0.03mmol)，4-二甲氨基吡啶(8.0mg，0.06mmol)，然后一次性加入五氟苯酚(10mg，0.2mmol)，加毕室温搅拌反应过夜。用高效液相-质谱联用色谱监测原料反应完全，将反应液直接用制备高效液相色谱纯化得标题化合物，为白色固体(35-5b)8.0mg。ESI-MS(m/z)：769.6[M/2+H] +。
实施例二十九
1-(4-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-4-(((2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基)羰基)-1-甲基哌啶碘化物的合成(TL036)
Figure PCTCN2018082809-appb-000203
步骤一：
1-(4-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-4-(((2，5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基)羰基)-1-甲基哌啶碘化物的合成
将1-(4-(((S)-1-((4-(((S)-2-((2R，3R)-3-((S)-1-((3R，4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-丁酰胺基)-N，3- 二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-戊基脲-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-4-(羧基)-1-甲基哌啶碘化物(50mg，0.04mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，氮气保护，向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(11mg，0.06mmol)，4-二甲氨基吡啶(15mg，0.12mmol)，降温到0℃，向其中加入N-羟基丁二酰亚胺(46mg，0.4mmol)，升温至室温，反应过夜，LC-MS检测反应完成，停止反应。经纯化，得标题化合物。ESI-MS(m/z)：1415.2[M+H] +。
实施例三十2-(4-((2S)-1-(((2S)-1-((4-(((2S)-2-((2R，3R)-3-(4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-吖丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-1，3-二恶烷-5-羟酸五氟苯酯的合成(TL037)
Figure PCTCN2018082809-appb-000204
步骤一：
5-(苄氧基)-5-氧代戊酸的合成
将戌二酸酐(5.0g，43.8mmol)加入到N，N-二甲基甲酰胺(20mL)中，降温至0℃，加入苄溴(4.7mL，39.4mmol)，再滴加N，N-二异丙基乙胺(10mL，48.2mmol)，滴毕，移至室温搅拌16h，LC-MS检测反应完全。浓缩至干，加入乙酸乙酯(200mL)溶解，饱和碳酸氢钠溶液洗(200mL)，分出水相，用2N盐酸溶液调pH＝4左右，再加入乙酸乙酯萃取(100mL×3)，合并乙酸乙酯相，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得标题化合物，为无色油状物7.8g。ESI-MS(m/z)：223.1[M+H] +。
步骤二：
5-羟基戊酸苄酯的合成
将5-(苄氧基)-5-氧代戊酸(7.8g，35.1mmol)、加入到四氢呋喃中(60mL)，降温至0℃，滴加硼烷四氢呋喃溶液(70mL，70.2mmol)，滴毕，移至室温搅拌16h，LC-MS检测反应完全。降温至0℃，缓慢滴加水淬灭反应，加二氯甲烷萃取(100mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗(100mL)，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，减压蒸除溶剂得粗品，硅胶柱层析纯化得标题化合物，为无色油状物2.85g。ESI-MS(m/z)：209.1[M+H] +。
步骤三：
5-甲酰基戊酸苄酯的合成
室温下，将5-羟基戊酸苄酯(2.85g，13.7mmol)加入到二氯甲烷(80mL)中，降温至0℃，加入重铬酸吡啶鎓盐(7.7g，20.5mmol)和乙酸钠(600mg，6.85mmol)，加毕，移至室温搅拌16h，LC-MS检测反应完全。硅藻土过滤，滤液浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化得标题化合物，为无色油状物1.3g。ESI-MS(m/z)：207.1[M+H] +。
步骤四：
2-(4-(苄氧基)-4-氧代丁基)-1，3-二恶烷-5-羟酸乙酯的合成
将5-甲酰基戊酸苄酯(1.2g，5.8mmol)，2，2-二甲基-1，3-二恶烷-5-羟酸乙酯(1.32g，7.0mmol)，对甲苯磺酸(1.0g，5.8mmol)加入到正己烷(25mL)中，升温至68℃搅拌16h。LC-MS检测反应完全，反应液浓缩至干，残余物经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为无色油状物120mg。ESI-MS(m/z)：337.1[M+H] +。
步骤五：
4-(5-(乙氧羰基)-1，3-二恶烷-2-基)丁酸的合成
室温下，将乙基2-(4-(苄氧基)-4-氧代丁基)-1，3-二恶烷-5-羟酸乙酯(120mg，0.36mmol)加入到甲醇(3ml)中，再加入钯碳(12mg，10％)，用氢气置换三次后，通氢气室温搅拌16h，LC-MS检测反应完全。硅藻土过滤，滤液浓缩至干，残余物经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为无色油状物24mg。ESI-MS(m/z)：247.1[M+H] +。
步骤六：
2-(4-((2S)-1-(((2S)-1-((4-(((2S)-2-((2R，3R)-3-(1-4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-吖丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-1，3-二恶烷-5-羟酸乙酯的合成
室温下，将(2S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)-N-(4-((2S)-2-((2R，3R)-3-(1，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)-5-脲基戊酰胺(30mg，0.027mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，向体系中依次加入4-(5-(乙氧羰基)-1，3-二恶烷-2-基)-丁酸(8mg，0.033mmol)，N，N-二异丙基乙胺(14mg，0.108mmol)，降温至0℃，搅拌10min，分批加入六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(28mg，0.054mmol)，2min加毕，保温反应1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体125mg。ESI-MS(m/z)：668.2[M/2+H] +。
步骤七：
2-(4-((2S)-1-(((2S)-1-((4-(((2S)-2-((2R，3R)-3-(1，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰氨基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-吖丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-1，3-二恶烷-5-羧酸的合成
将2-(4-((2S)-1-(((2S)-1-((4-(((2S)-2-((2R，3R)-3-(1-4S，SS)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-吖丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-1，3-二恶烷-5-羟酸乙酯(18mg，0.013mmol)溶于四氢呋喃(1mL)与水(2mL)混合溶剂中，加入氢氧化锂(46mg，1.11mmol)，室温搅拌1.0h，LC-MS检测反应完成，停止反应。加入盐酸溶液(0.5mol/L)调pH＝3～4，冷冻干燥得标题化合物，为白色固体18mg。产物不经纯化，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z)：653.8[M/2+H] +。
步骤八：
2-(4-((2S)-1-(((2S)-1-((4-(((2S)-2-((2R，3R)-3-(4S，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰胺基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-吖丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-1，3-二恶烷-5-羧酸五氟苯酯的合成
将2-(4-((2S)-1-(((2S)-1-((4-(((2S)-2-((2R，3R)-3-(1，5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲基氨基)-3-甲基丁酰氨基)-N，3-二甲基丁酰胺基)-3-甲氧基-5-甲基庚酰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)-3-苯基丙酰氨基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-吖丁烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-4-氧代丁基)-1，3-二恶烷-5-羧酸(18mg，0.013mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL)中，降温至0℃，反应液依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(4mg，0.026mmol)、4-二甲氨基吡啶(5mg，0.040mmol)、五氟苯酚(25mg，0.130mmol)，加毕自然升温至室温，反应过夜，LC-MS检测反应完成。反应液经制备液相色谱纯化，得标题化合物，为白色固体0.89mg。ESI-MS(m/z)：737.0[M/2+H] +。
参考实施例十五至实施例三十的合成方法，可合成以下化合物：
Figure PCTCN2018082809-appb-000205
三、包含细胞毒剂、连接体和单克隆抗体的偶联物的制备
实施例三十一TL004-T-ADC的制备
向1mL pH 7.6、浓度为10mg/ml的曲妥珠单抗溶液中加入5倍物质的量的溶解在DMA中的化合物TL004。在室温下温和搅拌12小时。通过HIC-HPLC对不同出峰时间组分进行富集，得到DAR值为1、2、3的具体偶联物，分别命名为BT001061、BT001003、BT001081。
Figure PCTCN2018082809-appb-000206
具体偶联物分别为：
Figure PCTCN2018082809-appb-000207
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000208
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000209
其中A1”为曲妥珠单抗移除3个氨基后所得的基团。
实施例三十二TL006-T-ADC的制备
向1mLpH 7.2、浓度为15mg/ml的曲妥珠单抗溶液中加入10倍物质的量的溶解在DMA中的化合物TL006。在室温下温和搅拌12小时。通过HIC-HPLC对不同出峰时间组分进行富集，得到DAR值为1、2、3的具体偶联物，分别命名为BT001062、BT001005、BT001082。
Figure PCTCN2018082809-appb-000210
具体偶联物分别为：
Figure PCTCN2018082809-appb-000211
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000212
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000213
其中A1”为曲妥珠单抗移除3个氨基后所得的基团。
实施例三十三TL007-T-ADC的制备
向1mL pH 7.4、浓度为20mg/ml的曲妥珠单抗溶液中加入6倍物质的量的溶解在DMA中的化合物TL007。在室温下温和搅拌12小时。通过HIC-HPLC对不同出峰时间组分进行富集，得到DAR 值为1、2、3的具体偶联物，分别命名为BT001063、BT001006、BT001083。
Figure PCTCN2018082809-appb-000214
具体偶联物分别为：
Figure PCTCN2018082809-appb-000215
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000216
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000217
其中A1”为曲妥珠单抗移除3个氨基后所得的基团。
实施例三十四TL008-T-ADC的制备
向1mlpH 7.0、浓度为20mg/ml的曲妥珠单抗溶液中加入6倍物质的量的溶解在DMA中的化合物TL008。在室温下温和搅拌12小时。通过HIC-HPLC对不同出峰时间组分进行富集，得到DAR值为1、2、3的具体偶联物，分别命名为BT001064、BT001007、BT001084。
Figure PCTCN2018082809-appb-000218
具体偶联物分别为：
Figure PCTCN2018082809-appb-000219
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000220
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000221
其中A1”为曲妥珠单抗移除3个氨基后所得的基团。
实施例三十五TL009-T-ADC的制备
向1ml pH 7.4、浓度为20mg/ml的曲妥珠单抗溶液中加入8倍物质的量的溶解在DMA中的化合物TL009。在室温下温和搅拌12小时。通过HIC-HPLC对不同出峰时间组分进行富集，得到DAR值为1、2、3的具体偶联物，分别命名为BT001065、BT001008、BT001085。
Figure PCTCN2018082809-appb-000222
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团。
Figure PCTCN2018082809-appb-000223
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000224
其中A1”为曲妥珠单抗移除3个氨基后所得的基团。
实施例三十六TL010-T-ADC的制备
向1mL pH 7.2、浓度为15mg/ml的曲妥珠单抗溶液中加入8倍物质的量的溶解在DMA中的化合物TL010。在室温下温和搅拌12小时。通过HIC-HPLC对不同出峰时间组分进行富集，得到DAR值为1、2、3的具体偶联物，分别命名为BT001066、BT001009、BT001086。
Figure PCTCN2018082809-appb-000225
具体偶联物分别为：
Figure PCTCN2018082809-appb-000226
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000227
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000228
其中A1”为曲妥珠单抗移除3个氨基后所得的基团。
实施例三十七TL011-T-ADC的制备
向1mL pH 7.5、浓度为18mg/ml的曲妥珠单抗溶液中加入4倍物质的量的溶解在DMA中的化合物TL011。在室温下温和搅拌12小时。通过HIC-HPLC对不同出峰时间组分进行富集，得到DAR值为1、2、3的具体偶联物，分别命名为BT001067、BT001010、BT001087。
Figure PCTCN2018082809-appb-000229
其中，具体偶联物分别为：
Figure PCTCN2018082809-appb-000230
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000231
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000232
其中A1”为曲妥珠单抗移除3个氨基后所得的基团。
实施例三十八TL012-T-ADC的制备
向1ml pH 7.5、浓度为20mg/ml的曲妥珠单抗溶液中加入5倍物质的量的溶解在DMA中的化合物TL012。在室温下温和搅拌12小时。通过HIC-HPLC对不同出峰时间组分进行富集，得到DAR值为1、2、3的具体偶联物，分别命名为BT001068、BT001011、BT001088。
Figure PCTCN2018082809-appb-000233
其中，具体偶联物分别为：
Figure PCTCN2018082809-appb-000234
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000235
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000236
其中A1”为曲妥珠单抗移除3个氨基后所得的基团。
实施例三十九TL007-S-ADC的制备
向0.4ml pH 7.4、浓度为6.8mg/ml的Anti-Trop2抗体Sacituzumab溶液中加入6倍物质的量的溶解在DMA中的化合物TL007。在室温下温和搅拌12小时。通过HIC-HPLC对不同出峰时间组分进行富集，得到DAR值为1、2、3的具体偶联物，分别命名为BT001069、BT001014、BT001089。
Figure PCTCN2018082809-appb-000237
其中，具体偶联物为：
Figure PCTCN2018082809-appb-000238
其中A3’为Sacituzumab移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000239
其中A3为Sacituzumab移除2个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000240
其中A3”为Sacituzumab移除3个氨基后所得的基团。
实施例四十TL008-S-ADC
向0.4ml pH 7.4、浓度为6.8mg/ml的Anti-Trop2抗体Sacituzumab溶液中加入6倍物质的量的溶解在DMA中的化合物TL008。在室温下温和搅拌12小时。通过HIC-HPLC对不同出峰时间组分进行富集，得到DAR值为1、2、3的具体偶联物，分别命名为BT001070、BT001015、BT001090。
Figure PCTCN2018082809-appb-000241
其中，具体偶联物分别为：
Figure PCTCN2018082809-appb-000242
其中A3’为Sacituzumab移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000243
其中A3为Sacituzumab移除2个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000244
其中A3”为Sacituzumab移除3个氨基后所得的基团。
实施例四十一TL033-T-ADC的制备
向1mL pH 7.5、浓度为18mg/ml的曲妥珠单抗溶液中加入4倍物质的量的溶解在DMF中的化合物TL033。在室温下温和搅拌12小时。通过HIC-HPLC对不同出峰时间组分进行富集，得到DAR值为1、2、3的具体偶联物，分别命名为BT001071、BT001020、BT001091。
Figure PCTCN2018082809-appb-000245
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000246
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000247
其中A1”为曲妥珠单抗移除3个氨基后所得的基团。
实施例四十二TL030-T-ADC的制备
采用与实施例三十二类似的方法，将TL004替换为TL030，得到DAR值为1、2的具体偶联物，分别命名为BT001072、BT001012。
Figure PCTCN2018082809-appb-000248
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000249
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团。
实施例四十三TL031-T-ADC的制备
采用与实施例三十二类似的方法，将TL004替换为TL031，得到DAR值为1、2的具体偶联物，分别命名为BT001073、BT001013。
Figure PCTCN2018082809-appb-000250
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000251
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团。
实施例四十四TL034-T-ADC的制备
采用与实施例三十二类似的方法，将TL004替换为TL034，得到DAR值为1、2的具体偶联物，分别命名为BT001075、BT001017。
Figure PCTCN2018082809-appb-000252
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000253
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团；
实施例四十五TL035-T-ADC的制备
采用与实施例三十二类似的方法，将TL004替换为TL035，得到DAR值为1、2的具体偶联物，分别命名为BT001074、BT001016。
Figure PCTCN2018082809-appb-000254
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000255
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团。
实施例四十六TL042-T-ADC的制备
采用与实施例三十二类似的方法，将TL004替换为TL042，得到DAR值为1、2的具体偶联物，分别命名为BT001077、BT001019。
Figure PCTCN2018082809-appb-000256
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；和
Figure PCTCN2018082809-appb-000257
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团。
实施例四十七TL059-T-ADC的制备
采用与实施例三十二类似的方法，将TL004替换为TL059，得到DAR值为1、2的具体偶联物，分别命名为BT001078、BT001021。
Figure PCTCN2018082809-appb-000258
其中A1’为曲妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团；
Figure PCTCN2018082809-appb-000259
其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团。
实施例四十八利用疏水色谱对偶联物进行表征
通过HIC-HPLC监测反应，对偶联物进行HIC检测。
HIC条件如下：
液相色谱柱：TOSOH TSKgel Butyl-NPR，4.6x100mm
流动相A：1.5M硫酸铵
流动相B：25mM Na 2HPO 4，pH7.0，25％异丙醇
流速：0.5ml/min
检测波长：280nm
柱温：30℃
样品室温度：8℃
洗脱条件：
时间(分钟) 0 3 25 30 30.1 35
流动相A(体积％) 70 70 55 15 70 70
流动相B(体积％) 30 30 45 85 30 30
图1为裸抗(M141105Y)的HIC图谱，如图所示。裸抗保留时间为8.00min左右。图2-11分别为TL004-T-ADC、TL006-T-ADC、TL007-T-ADC、TL008-T-ADC、TL009-T-ADC、TL010-T-ADC、TL011-T-ADC、TL012-T-ADC、TL007-S-ADC、TL008-S-ADC的HIC图谱、图22为TL042-T-ADC的HIC图。对图2-11和图22整体进行分析可知，偶联后体系中裸抗剩余较少，在裸抗出峰之后出现了多个偶联物峰，证明小分子与抗体发生了高效偶联，通过计算可知其偶联比率(DAR，即ADC中抗体与小分子摩尔比)为多种，DAR在1-4之间。
实施例四十九分子量的测定
对HIC检测图谱中的色谱峰浓度最高部分进行富集后，对分子量进行测定。
测定条件：
液相色谱柱：
Figure PCTCN2018082809-appb-000260
Protein BEH C4 1.7μm
2.1mm x 100mm
流动相A：0.1％FA/98％H 2O/2％ACN
流动相B：0.1％FA/2％H 2O/98％ACN
流速：0.25ml/min
样品室温度：8℃
时间(分钟) 1 7 8 9 13
流动相A(体积％) 90 20 20 90 90
流动相B(体积％) 10 80 80 10 10
质谱：Triple TOF 5600+
GS160；GS260；CUR30；TEM600；ISVF5000；DP300；CE10
m/z600-5000
结果如下：
对于TL007-T-ADC，根据裸抗和毒素-连接体的分子量计算ADC的理论分子量，如下：
Figure PCTCN2018082809-appb-000261
表中，ADC-DAR1表示包含一个毒素和一个抗体的偶联物，ADC-DAR2表示包含两个毒素和一个抗体的偶联物，糖型表示两重链上的糖链结构，G0F岩藻糖化无半乳糖，G1F岩藻糖化单半乳糖，G2F岩藻糖化二半乳糖。
HIC图(图4)Peak2(RT13.092)所对应组分的分子量测定结果如图12所示，与理论分子量比对，确认该峰对应的是BT001063。
对于TL008-T-ADC，根据裸抗和毒素-连接子的分子量计算ADC理论分子量如下：
Figure PCTCN2018082809-appb-000262
HIC图(图5)Peak2(RT13.830)所对应组分的分子量测定结果如图13所示，与理论分子量比对，确认该峰对应的是ADC-DAR1，即BT001064。
HIC图Peak3(RT18.753)所对应组分的分子量测定结果如图14所示，与理论分子量比对，确认该峰对应的是ADC-DAR2，即BT001007。
对于TL009-T-ADC，根据裸抗和毒素-连接子的分子量计算ADC理论分子量如下：
Figure PCTCN2018082809-appb-000263
HIC图(图6)Peak3(RT17.289)所对应组分的分子量测定结果如图15所示，与理论分子量比对，确认该峰对应的是ADC-DAR2，即BT001008。
对于TL010-T-ADC，根据裸抗和毒素-连接子的分子量计算ADC理论分子量如下：
Figure PCTCN2018082809-appb-000264
HIC图(图7)Peak3(RT17.194)所对应组分的分子量测定结果如图16所示，与理论分子量比对，确认该峰对应的是ADC-DAR2，即BT001009。
HIC图Peak4(RT19.573及19.979)所对应组分的分子量测定结果如图17所示，与理论分子量比对，确认该峰对应的是ADC-DAR3，即BT001086。
对于TL033-T-ADC，根据裸抗和毒素-连接子的分子量计算偶联后ADC-DAR1、ADC-DAR2理论分子量及实测分子量如下表所示：
Figure PCTCN2018082809-appb-000265
经质谱检测，测定值与理论值匹配(如图18和21所示)，表明偶联成功。其中ADC-DAR1即为BT001071，ADC-DAR2即为BT001020。
对于TL042-T-ADC，根据裸抗和毒素-连接子的分子量计算ADC理论分子量如下：
Figure PCTCN2018082809-appb-000266
HIC图(图22)Peak1(RT11.567)所对应组分的分子量测定结果如图23所示，与理论分子量比对，确认该峰对应的是ADC-DAR2，即BT001019。
对于TL007-S-ADC，根据裸抗和毒素-连接子的分子量计算ADC理论分子量如下：
Figure PCTCN2018082809-appb-000267
HIC图(图10)Peak3(RT19.269)所对应组分的分子量测定结果如图24所示，与理论分子量比对，确认该峰对应的是ADC-DAR2，即BT001014。
对于TL008-S-ADC，根据裸抗和毒素-连接子的分子量计算ADC理论分子量如下：
Figure PCTCN2018082809-appb-000268
HIC图(图11)Peak3(RT19.811)所对应组分的分子量测定结果如图25所示，与理论分子量比对，确认该峰对应的是ADC-DAR2，即BT001015。
采用与TL007-T-ADC类似的分析方法，可得如下结果：
对于TL011-T-ADC，BT001067为DAR值等于1的ADC分子，BT001010为DAR值等于2的ADC分子。
对于TL012-T-ADC，BT001068为DAR值等于1的ADC分子，BT001011为DAR值等于2的ADC分子。
对于TL030-T-ADC，BT001072为DAR值等于1的ADC分子，BT001012为DAR值等于2的ADC分子。
对于TL031-T-ADC，BT001073为DAR值等于1的ADC分子，BT001013为DAR值等于2的ADC分子。
对于TL035-T-ADC，BT001074为DAR值等于1的ADC分子，BT001016为DAR值等于2的ADC分子。
对于TL034-T-ADC，BT001075为DAR值等于1的ADC分子，BT001017为DAR值等于2的ADC分子。
对于TL059-T-ADC，BT001078为DAR值等于1的ADC分子，BT001021为DAR值等于2的ADC分子。
实施例五十检测小分子毒素的释放
本实施例通过在体外用溶酶体内的蛋白酶酶切TL002，对偶连体中小分子毒素的释放进行验证。
实验过程：取适量TL002于37℃下与组织蛋白酶B(CathepsinB)共孵育；相同条件下不加酶为空白，作用一定时间后RP-HPLC-MS分析。检测发现与空白相比，TIC分析中新产生两个峰(TM1，TM2)，TM1保留时间是5.9min，TM2保留时间是7.9min。经质谱检定，TM1的TIC峰为分子量是513.28的片段；TM2的TIC峰为分子量是863.59片段。
Figure PCTCN2018082809-appb-000269
实验证明，本发明的偶联物在溶酶体内的蛋白酶的作用下，能顺利释放毒素小分子，发挥生物学 作用。
实施例五十一检测小分子毒素对体外细胞活性的抑制作用
首先培养肿瘤细胞MDA-MB-468和NCI-H322M；分别将本发明的小分子毒素，美登素衍生物(DM1，南京联宁)，单甲基奥瑞他汀F(MMAF，南京联宁)与肿瘤细胞进行共培养。然后添加CCK8试剂(东仁化学科技有限公司)，用酶标仪(厂家：Molecular Devices，型号：SpectraMax M2)读数(检测波长为450nm)，检测线粒体内的脱氢酶的活性，以评价小分子毒素对细胞增值的抑制作用。
具体步骤如下：
肿瘤细胞的培养：肿瘤细胞来源以及对应培养基成份见表1。
表1
细胞名称 肿瘤类型 来源 生长培养基成份
MDA-MB-468 乳腺癌 康诺泰 DMEM/F12+10％FBS
NCI-H322M 非小细胞肺癌 康诺泰 RPMI1640+10％FBS
体外细胞活性检测：用对应检测培养基(含2％FBS)稀释毒素(10个浓度梯度)。使用胰酶通过常规方法对肿瘤细胞进行消化，收集管细胞数，用对应的检测培养基(含2％FBS)重悬。将稀释的毒素加入96孔板中，再加入细胞。然后每孔加入CCK8试剂20μL，反应至4小时，酶标仪读数(检测波长为450nm)。实验条件和检测结果如表2和表3所示。
表2
Figure PCTCN2018082809-appb-000270
Figure PCTCN2018082809-appb-000271
表3
Figure PCTCN2018082809-appb-000272
实施例五十二检测抗体药物偶联物对体外细胞活性的抑制作用
首先培养肿瘤细胞HCC1954，培养基RPMI1640+10％FBS。HCC1954是Her2阳性的细胞，对偶联物(例如抗Her2抗体赫赛汀药物偶联物)存在内吞作用。用对应检测培养基(含2％FBS)稀释偶联物(1μg/mL起始，2倍稀释，10个浓度梯度)，使用胰酶通过常规方法对肿瘤细胞进行消化，收集管细胞数，用对应的检测培养基(含2％FBS)重悬。将稀释后的偶联物加入到96孔板中，将重悬后的细胞加入到包含偶联物的对应孔中(10000细胞/孔)，共培养3天。然后每孔加入CCK8试剂20μL(东仁化学科技有限公司)，反应1.5小时，酶标仪450nm读数(厂家：Molecular Devices，型号：SpectraMax M2)，通过检测线粒体内的脱氢酶的活性，评价抗体药物偶联物对细胞增值的抑制作用。根据WO2016123412，利用曲妥珠单抗偶联其中的化合物19，制备偶联物T-ADC-19，并作为对照进行活性检测。
实验结果如表4所示。根据文献记载，T-DM1(Kadcyla，即曲妥珠-DM1偶联物，已上市产品)的EC 50为43ng/mL(Howard A.Burris III etal，Clinical Breast Cancer，Vol.11，No.5，275-82)，T-ADC-19的EC 50为20.5ng/mL，而本发明的偶联物对细胞增殖的抑制活性均强于上述对照。
表4
ADC EC 50(ng/mL)
T-ADC-19 20.5
BT001005 10.7
BT001006 10.8
BT001007 14.5
BT001008 7.4
BT001009 7.8
BT001010 6.3
BT001011 8.9
BT001020 13.5
用本发明中制备的BT001014、BT001015与肿瘤细胞BxPC-3(ATCC，胰腺癌，生长培养基：RPMI1640+10％FBS)进行共培养。然后添加CCK8试剂(东仁化学科技有限公司)，酶标仪(厂家：MolecularDevices，型号：SpectraMax M2)读数(检测波长：450nm)，通过检测线粒体内的脱氢酶的活性，反映出抗体对细胞增值的抑制作用。
具体步骤如下：
用对应检测培养基(含2％FBS)稀释本发明偶联物(10ug/mL起始，3倍梯度稀释，12个浓度梯度)。采用常规胰酶消化方法，消化上述的肿瘤细胞，收集管细胞数，用对应检测培养基(含2％FBS) 重悬。将稀释后的偶联物加入到96孔板中，将重悬后的细胞加入到包含偶联物的对应孔中(5000细胞/孔)，共培养3天。然后每孔加入CCK8试剂20μL，反应至4小时，酶标仪读数(检测波长：450nm)。根据WO2016123412，利用Anti-Trop2抗体Sacituzumab偶联其中的化合物19，制备偶联物S-ADC-19，并作为对照进行活性检测。
实验结果：
名称 EC 50(ng/ml)
BT001014 5.7
BT001015 10.4
S-ADC-19 16.0
BT001014、BT001015对肿瘤细胞BxPC-3的生长抑制曲线见图19。从图中可以看出，本发明的偶联物对胰腺癌细胞具有生长抑制活性，并有良好的量效关系，本发明的毒素与连接子具有优于现有技术的肿瘤抑制活性。
实施例五十三体内活性测试
本实施例对本发明的偶联物对皮下移植了人肿瘤细胞的小鼠的肿瘤增殖的抑制作用进行评价，并对本发明的偶联物在体内使用时的安全性进行评价。具体而言，在本实施例中，将偶联物以单次尾静脉注射给予皮下移植人乳腺癌细胞株JIMT-1的小鼠，测定肿瘤体积，以表征偶联物对荷瘤小鼠的药效(抑瘤疗效)。
实验过程：
JIMT-1荷瘤鼠模型构建
在小鼠右侧肩胛处皮下接种5×10 6个JIMT-1肿瘤细胞(悬浮于0.1ml PBS)。接种后预计7-10天肿瘤生长范围100-200mm 3时，剔除瘤体积过小(小于100mm 3)或过大(大于200mm 3)的小鼠。
体内药效测试
称取适量本发明的偶联物(BT001006、BT001007、BT001009)，分别用无菌超纯水配制成一定浓度的母液，轻柔摇匀后，分装，于-80℃保存。使用时用生理盐水根据剂量稀释，得到处理品溶液，并采用相同浓度的生理盐水作为溶剂对照。
选择随机分组(根据样品数量决定分组数)的肿瘤体积在100～200mm 3的荷瘤鼠，7只/组。给药量为3mg/kg。给药途径为单次尾静脉注射。给药后观察4周，每4天用游标卡尺测量肿瘤直径，并按如下计算公式计算肿瘤体积：V＝0.5a 2×b，其中a和b分别表示肿瘤的长径和短径。每天观察记录动物死亡情况。
肿瘤体积随时间变化的曲线如图20所示。从图20中可知，本发明的偶联物BT001006、BT001007和BT001009在评价周期内，对乳腺癌具有明显抑制活性。评价周期内，给药剂量组(3mg/kg)抗肿瘤药效显著，动物体重成增长趋势，并且未发生死亡情况，给药期间耐受良好。单次给药后，抗肿瘤药效可以持续至23天，说明本发明偶联物在动物外周血循环中较为稳定。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，但本领域技术人员将理解：根据已经公开的所有教导，可以对细节进行各种修改和变动，并且这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (82)

  1. 如式(I)所示的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，
    Figure PCTCN2018082809-appb-100001
    其中，
    X选自：CH 2、S、S＝(O)、S(O) 2、C＝(O)、CHF、CHCN、CHN 3、CH-OH、CH-ONHR w或CHOR w，其中，R w为H(氢)、D(氘)或任选被M 1取代的C 1-6烷基；
    Y不存在，或选自任选被M 2取代的下列基团：C 1-6烷基、C 3-6环烷基、3-7元脂杂环基、C 2- 6炔基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基；
    Z不存在，或选自任选被M 3取代的下列基团：C 1-6烷基、C 3-6环烷基、3-7元脂杂环基、芳基、杂芳基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基；
    m＝0、1、2或3；
    n＝0、1、2或3；
    r＝1、2、3、4、5或6；
    R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、NHR a、N(R a) 2、OR a、SR a、S(O)R a、S(O) 2R a、任选被M 4取代的下列基团：C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 3-6环烷基、3-7元脂杂环基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、C 2-6炔基、芳基、杂芳基；
    R 2选自：H(氢)、D(氘)、任选被M 5取代的下列基团：C 1-6烷基、C 3-6环烷基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、-(CH 2CH 2O) j1-(CH 2) j2R a；
    R a独立地选自：H(氢)、D(氘)、任选被M 5取代的C 1-6烷基、N 3、OH、CN、NR bR c；
    R b和R c各自独立地选自：H(氢)、D(氘)、任选被M 5取代的下列基团：C 1-6烷基、C 3-6环烷基、3-7元脂杂环基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基；
    j1和j2各自独立地选自0、1、2、3；
    R 3选自：H(氢)、D(氘)、任选被M 6取代的下列基团：C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-7元脂杂环基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、-(CH 2CH 2O) q1-(CH 2) q2-R d、芳基、杂芳基；
    R 4-R 20各自独立地选自：H(氢)、D(氘)、卤素、任选被M 7取代的下列基团：C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-7元脂杂环基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、-(CH 2CH 2O) q3-(CH 2) q4-R e、芳基、杂芳基；
    任选地，R 3和R 5与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
    任选地，R 4和R 5与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
    任选地，R 4和R 6与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
    任选地，R 6和R 7与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
    任选地，R 7和R 8与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
    任选地，R 7和R 9与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
    任选地，R 9和R 10与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
    任选地，R 9和R 12与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
    任选地，R 10和R 11与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
    任选地，R 10和R 12与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
    任选地，R 12和R 13与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
    任选地，R 12和R 14与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
    任选地，R 14和R 15与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
    任选地，R 16和R 18与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
    任选地，R 16和R 17与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
    任选地，R 18和R 19与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的3-6元环；
    任选地，R 18和R 20与它们所连接的原子一起形成任选被J取代的5-7元环；
    R d、R e各自独立地选自：H(氢)、D(氘)、N 3、OH、CN、NR fR g；
    R f和R g各自独立地选自：H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基；
    q1、q2、q3、q4各自独立地选自0、1、2、3、4、5或6；
    A选自被反应性基团M 8取代的芳基、被反应性基团M 8取代的杂芳基；
    Q选自H(氢)、D(氘)、任选被M 9取代的下列基团：C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、3-7元脂杂环基、芳基、杂芳基、6-12元桥环基、6-12元螺环基、6-12元稠环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基，或者，Q和R 3与它们所连接的原子一起形成任选被M 9取代的5至7元环；
    任选地，Q被反应性基团M 10取代；
    所述M 1-M 7、M 9、J各自独立地选自：H(氢)、D(氘)、羟基、甲基磺酰基、氨基、羧基、卤素、CF 3、CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-10炔基；
    所述M 8和M 10各自独立地选自被取代基取代的羟基、氨基、肼基或羟胺基，所述取代基选自H(氢)，D(氘)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、羟基取代的C 1-6烷基、氰基取代的C 1-6烷基、N 3取代的C 1-6烷基、卤素取代的C 1-6烷基、3-7元脂杂环基、5-7元杂芳基、OH。
  2. 权利要求1的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其中，所述化合物具有以下特征中的一个或多个：
    (1)X为CH 2；
    (2)Y不存在，或选自C 1-6亚烷基、氘代的C 1-6亚烷基；
    (3)Z不存在，或选自任选被氘、C1-4烷基、羟基或甲氧基取代的C 1-6烷基(例如甲基或乙基、氘代甲基或乙基、羟基取代的甲基或乙基、甲氧基取代的甲基或乙基、氘和羟基取代的甲基或乙基)；
    (4)m＝1；
    (5)n＝1；
    (6)r＝1，r＝2或r＝3(优选地，r＝1)；
    (7)R 2选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基(例如甲基)；
    (8)R 3选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基(例如甲基)；
    (9)R 4-R 20各自独立地选自H(氢)、D(氘)、任选被氘取代的C 1-6烷基(例如甲基、乙基、异丙基、仲丁基，氘代甲基、氘代乙基、氘代异丙基、氘代仲丁基)、任选被氘取代的C 1-6烷氧基(例如甲氧基、氘代的甲氧基)；
    (10)Q为甲基；
    优选地，所述化合物具有上述特征中的(1)、(4)、(5)、(8)和(9)；
    优选地，所述化合物具有上述特征中的(1)、(4)、(5)、(8)、(9)和(10)；
    优选地，所述化合物具有上述特征中的(2)、(3)、(6)和(7)中的一个或多个；
    优选地，所述化合物具有上述特征中的(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)和(10)。
  3. 权利要求1或2的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其中，
    X为CH 2；
    Y不存在，或为亚甲基或亚乙基；
    Z不存在，或选自任选被氘、羟基、C1-4烷基或甲氧基取代的C 1-6烷基(例如甲基或乙基、氘代甲基或乙基、羟基取代的甲基或乙基、甲氧基取代的甲基或乙基、氘和羟基取代的甲基或乙 基)；
    m＝1；
    n＝1；
    r＝1，r＝2或r＝3(优选地，r＝1)；
    R 2为H(氢)、D(氘)、或甲基；
    R 3为甲基；
    R 4-R 20各自独立地选自H(氢)、D(氘)、甲基、乙基、异丙基、仲丁基、甲氧基；
    Q为甲基。
  4. 权利要求1-3任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其中，
    R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、S(O) 2R a、任选被M 4取代的下列基团：C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 2-6炔基、芳基、杂芳基；
    优选地，R a选自C 1-6烷基。
  5. 权利要求1-4任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其中，
    R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙烷基、乙炔基、甲磺酰基、任选被M 4取代的苯基、任选被M 4取代的5-7元杂芳基、任选被M 4取代的5-7元脂杂环基；
    优选地，M 4选自H(氢)、D(氘)、羟基、甲基磺酰基、C 1-6烷基(例如甲基)。
  6. 权利要求1-5任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其中，
    R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙烷基、乙炔基、甲基磺酰基、苯基、对羟基苯基、对(甲基磺酰基)苯基、5元含氮杂芳基、6元含氮脂杂环基、6元含氮杂芳基；
    任选地，所述5元含氮杂芳基、6元含氮脂杂环基或6元含氮杂芳基还含有硫原子和/或氧原子；优选地，所述5元含氮杂芳基选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100002
    优选地，所述5元含氮杂芳基为
    Figure PCTCN2018082809-appb-100003
    优选地，所述6元含氮脂杂环基选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100004
    优选地，所述6元含氮杂芳基选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100005
    优选地，所述6元含氮杂芳基选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100006
  7. 权利要求1-6任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其中，
    A选自被M 8取代的6-10元芳基、被M 8取代的5-6元杂芳基；优选地，A选自被M 8取代的苯基、被M 8取代的5-6元含氮杂芳基、被M 8取代的5-6元含氧杂芳基、被M 8取代的5-6元含硫杂芳基；
    任选地，所述5-6元含氮杂芳基还含有硫原子和/或氧原子；
    优选地，所述5-6元含氮杂芳基选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100007
    优选地，所述5-6元含氮杂芳基选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100008
    优选地，M 8为被取代基取代的羟基、氨基、肼基或羟胺基，所述取代基选自H(氢)，D(氘)、C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8环烷基、羟基取代的C 1-6烷基、氰基取代的C 1-6烷基、N 3取代的C 1-6烷基、卤素取代的C 1-6烷基、C 3-7脂杂环基、C 5-7杂芳基、OH。
  8. 权利要求1-7任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其中，
    A选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100009
    任选地，A被1-4个取代基R h所取代，R h独立地选自D(氘)、卤素、CF 3、CN、C 1-6烷基、氟代C 1-4烷基、C 1-6烷氧基、3-6元环烷基、C 2-10烯基、C 2-10炔基。
  9. 权利要求1-8任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其中，A为被氨基取代的苯基。
  10. 权利要求1-9任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其中，A为
    Figure PCTCN2018082809-appb-100010
  11. 权利要求1-10任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其中，所述化合物具有式(II)、(II’)或(II”)所示的结构
    Figure PCTCN2018082809-appb-100011
    Figure PCTCN2018082809-appb-100012
    其中，
    Y不存在，或为亚甲基；
    Z不存在，或为亚甲基或亚乙基；
    R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙烷基、乙炔基、甲基磺酰基、苯基、对羟基苯基、对(甲基磺酰基)苯基、
    Figure PCTCN2018082809-appb-100013
    噁唑基、异噁唑基、三氮唑基、噁二唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、任选被＝O取代的吗啉基、任选被＝O和/或C 1-6烷基(例如甲基)取代的哌嗪基、任选被＝O取代的硫代吗啉基；
    优选地，R 1选自：H(氢)、D(氘)、N 3、CN、甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙烷基、乙炔基、甲基磺酰基、苯基、对羟基苯基、对(甲基磺酰基)苯基、
    Figure PCTCN2018082809-appb-100014
    噁唑基、异噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、任选被＝O取代的吗啉基、任选被＝O和/或C 1-6烷基(例如甲基)取代的哌嗪基、任选被＝O取代的硫代吗啉基；
    R 2为H(氢)、D(氘)或甲基；
    优选地，所述化合物具有式(III)、(III’)或(III”)所示的结构
    Figure PCTCN2018082809-appb-100015
    Figure PCTCN2018082809-appb-100016
  12. 权利要求1-11任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其中，所述化合物选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100017
    Figure PCTCN2018082809-appb-100018
    Figure PCTCN2018082809-appb-100019
    Figure PCTCN2018082809-appb-100020
    Figure PCTCN2018082809-appb-100021
    Figure PCTCN2018082809-appb-100022
    Figure PCTCN2018082809-appb-100023
  13. 一种偶联物，包含一个或多个权利要求1-12任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，以及一个或多个连接体，其中，所述权利要求1-12任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物通过反应性基团与所述连接体连接；
    任选地，所述连接体还与靶向部分共价连接；
    优选地，所述偶联物中，权利要求1-12任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物通过M 8和任选的M 10与连接体连接。
  14. 权利要求13的偶联物，其具有如下结构，
    G-B
    其中，G为如上所述的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其通过M 8和任选的M 10与B相连；
    B为连接体，其具有如下结构：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100024
    其中
    L 1选自：肽、寡糖、-(CH 2) t-、-(CH 2CH 2O) t-(CH 2) t-、Val、Cit、Phe、Lys、D-Val、Leu、Lys、Gly、Ala、Asn、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn，t＝1、2、3、4、5或6；
    L 2选自：-(CH 2) y-、-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-、
    Figure PCTCN2018082809-appb-100025
    其中，
    R k、R l、R m、R n各自独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1- 6烷氧基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、C 3-6环烷基；
    y各自独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
    L 3选自下列基团：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100026
    D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、芳基、杂芳基、3-8元环烷基-W-，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、＝O、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、COOH、SO 3H；W为氧或NR j，R j独立地选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 1-6烷氧基、氰基C 1-2烷基。
  15. 权利要求13的偶联物，其具有如下结构，
    G-B或(G-B) α-E，
    其中，G为权利要求1-12任一项定义的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，其通过M 8和任选的M 10与B相连；
    B为连接体，优选地，其具有如下结构：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100027
    L 1选自：肽、寡糖、-(CH 2) t-、-(CH 2CH 2O) t-(CH 2) t-、Val、Cit、Phe、Lys、D-Val、Leu、Lys、Gly、Ala、Asn、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn，t＝1、2、3、4、5或6；
    L 2选自：-(CH 2) y-、-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-、
    Figure PCTCN2018082809-appb-100028
    其中，
    R k、R l、R m、R n各自独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1- 6烷氧基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、C 3-6环烷基；
    y各自独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
    L 3选自下列基团：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100029
    其中，
    L 4、L 5不存在或各自独立地选自C 1-6亚烷基(例如亚甲基)；
    F选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100030
    s、w各自独立地选自1或2(例如，s和w均为1)；
    D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、芳基、杂芳基、3-8元环烷基-W-，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、＝O、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、COOH、SO 3H；W为氧或NR j，R j独立地选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 1-6烷氧基、氰基C 1-2烷基；
    E为靶向部分；
    α为1-20(例如1-10、1-5、1-4或1-3)之间的数(例如正整数)，例如1、2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20；
    优选地，所述杂芳基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基或6-12元稠杂环基含有一个或多个氮原子；
    优选地，所述杂芳基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基或6-12元稠杂环基含有一个或多个季铵化的氮原子；
    优选地，所述杂芳基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基或6-12元稠杂环基含有一个或多个氮原子，其中，至少一个氮原子被＝O取代。
  16. 权利要求14-15任一项的偶联物，所述连接体中，L 1选自肽、寡糖、Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys(Ac)、Phe-Lys、Phe-Lys(Ac)、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn。
  17. 权利要求14-16的偶联物，所述连接体中，L 1为
    Figure PCTCN2018082809-appb-100031
  18. 权利要求14-17任一项的偶联物，所述连接体中，L 1为
    Figure PCTCN2018082809-appb-100032
    且s＝1；
    其中，该基团通过1标记的位置与G连接，并且通过2标记的位置与L 2连接。
  19. 权利要求14-18任一项的偶联物，所述连接体中，L 2选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100033
  20. 权利要求14-19任一项的偶联物，所述连接体中，L 2选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100034
    且w＝1；
    其中，该基团通过1标记的位置与L 1连接，并且通过2标记的位置与D连接。
  21. 权利要求15-20任一项的偶联物，所述连接体中，L 3选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100035
  22. 权利要求15-21任一项的偶联物，所述连接体中，L 3为
    Figure PCTCN2018082809-appb-100036
  23. 权利要求15-22任一项的偶联物，所述连接体中，L 3选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100037
    其中，该基团通过1标记的位置与D连接，并且通过2标记的位置与E连接。
  24. 权利要求14-23任一项的偶联物，所述连接体中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-7元环烷基、5-7元脂杂环基、8-11元桥杂环基、8-11元螺杂环基、8-11元稠杂环基、苯基、5-6元杂芳基、5-6元环烷基-W-；所述8-11元桥杂环基、8-11元螺杂环基、8-11元稠杂环基或5-6元杂芳基含有氮原子和/或氧原子；
    优选地，所述5-7元脂杂环基、8-11元桥杂环基、8-11元螺杂环基、8-11元稠杂环基或5-6元杂芳基含有一个或多个氮原子；
    优选地，所述5-7元脂杂环基、8-11元桥杂环基、8-11元螺杂环基、8-11元稠杂环基或5-6元杂芳基含有一个或多个季铵化的氮原子；
    R i独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、＝O、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1-6烷氧基、C 2-10烯基、C 2-10炔基、COOH、SO 3H；W为氧或NR j，R j独立地选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 1-6烷氧基、氰基C 1-2烷基。
  25. 权利要求14-24任一项的偶联物，所述连接体中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-7元环烷基、5-7元脂杂环基、5-6元杂芳基、8元桥杂环基、11元螺杂环基、8-11元稠杂环基、苯基、5-6元环烷基-W-；所述5-7元脂杂环基、5-6元杂芳基、8元桥杂环基、11元螺杂环基或8-11元稠杂环基含有氮原子和/或氧原子；
    优选地，所述5-7元脂杂环基、5-6元杂芳基、8元桥杂环基、11元螺杂环基或8-11元稠杂环基含有一个或多个氮原子；
    优选地，所述5-7元脂杂环基、5-6元杂芳基、8元桥杂环基、11元螺杂环基或8-11元稠杂环基含有一个或多个季铵化的氮原子。
  26. 权利要求14-25任一项的偶联物，所述连接体中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：环己烷基、5-7元含氮脂杂环基、5-7元含氧脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氧螺杂环基、8元含氮稠杂环基、苯基、环己基-W-；
    优选地，所述5-7元含氮脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氧螺杂环基或8元含氮稠杂环基含有一个或多个季铵化的氮原子。
  27. 权利要求14-26任一项的偶联物，所述连接体中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100038
    优选地，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、＝O、CN、CH 2CN、甲基、CF 3。
  28. 权利要求14-27任一项的偶联物，所述连接体中，D选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100039
    任选地，D选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100040
  29. 权利要求14-28任一项的偶联物，所述连接体中，D选自
    Figure PCTCN2018082809-appb-100041
    优选地，R q独立地选自C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 3-6炔基、C 3-8环烷基；
    R j独立地选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 1-6烷氧基、氰基C 1-2烷基；β＝0、1或2；
    γ＝1、2或3。
  30. 权利要求14-29任一项的偶联物，所述连接体中，D选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100042
    任选地，D选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100043
  31. 权利要求14-30任一项的偶联物，所述连接体中，D选自
    Figure PCTCN2018082809-appb-100044
    W为NR j，R j选自H(氢)、D(氘)、CH 2CN或CH 2CH 2CN。
  32. 权利要求14-31任一项的偶联物，所述连接体中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：3-8元环烷基、3-8元脂杂环基、6-12元桥杂环基、6-12元螺杂环基、6-12元稠杂环基、芳基、杂芳基、3-8元环烷基-W-；
    优选地，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、＝O、CN、CH 2CN、甲基、CF 3；
    优选地，W为NR j，R j选自H(氢)、D(氘)、CH 2CN或CH 2CH 2CN。
  33. 权利要求14-32任一项的偶联物，所述连接体中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元环烷基、5-6元脂杂环基、8-11元含氮或含氧桥杂环基、8-11元含氮或含氧螺杂环基、8-11元含氮或含氧稠杂环基、苯基、5-6元含氮杂芳基、5-6元环烷基-W-。
  34. 权利要求14-33任一项的偶联物，所述连接体中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元环烷基、5-6元含氮或含氧脂杂环基、5-6元含氮杂芳基、8元含氮或含氧桥杂环基、11元含氮或含氧螺杂环基、8-11元含氮或含氧稠杂环基、苯基、5-6元环烷基-W-。
  35. 权利要求14-34任一项的偶联物，所述连接体中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：环己烷基、5-6元含氮或含氧脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氧螺杂环基、8元含氮稠杂环基、苯基、环己基-W-。
  36. 权利要求14-35任一项的偶联物，所述连接体中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100045
    优选地，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、＝O、CN、CH 2CN、甲基、CF 3。
  37. 权利要求14-36任一项的偶联物，所述连接体中，D选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100046
    任选地，D选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100047
    优选地，W为NR j，R j选自H(氢)、D(氘)、CH 2CN或CH 2CH 2CN。
  38. 权利要求14-37任一项的偶联物，所述连接体中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：3-8元含氮脂杂环基、6-12元含氮桥杂环基、6-12元含氮螺杂环基、6-12元含氮稠杂环基、含氮杂芳基、3-8元环烷基-W-；
    优选地，所述含氮杂芳基、3-8元含氮脂杂环基、6-12元含氮桥杂环基、6-12元含氧螺杂环基或6-12元含氮稠杂环基含有一个或多个季铵化的氮原子；
    优选地，所述3-8元含氮脂杂环基中，至少一个氮原子被＝O取代；
    优选地，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、＝O、CN、CH 2CN、甲基、CF 3。
  39. 权利要求14-38任一项的偶联物，所述连接体中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元含氮脂杂环基、8-11元含氮桥杂环基、8-11元含氮螺杂环基、8-11元含氮稠杂环基、5-6元含氮杂芳基；
    优选地，所述5-6元含氮脂杂环基、8-11元含氮桥杂环基、8-11元含氮螺杂环基、8-11元含氮稠杂环基或5-6元含氮杂芳基中，含有一个或多个季铵化的氮原子；优选地，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元含氮脂杂环基、5-6元含氮杂芳基(例如吡啶基)、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基、8-11元含氮稠杂环基；
    优选地，所述5-6元含氮脂杂环基、5-6元含氮杂芳基(例如吡啶基)、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基或8-11元含氮稠杂环基中，含有一个或多个季铵化的氮原子。
  40. 权利要求14-39任一项的偶联物，所述连接体中，D选自任选被一个或多个R i取代的下列基团：5-6元含氮脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基、8元含氮稠杂环基；
    优选地，所述5-6元含氮脂杂环基、6元含氮杂芳基、8元含氮桥杂环基、11元含氮螺杂环基、8元含氮稠杂环基中，含有一个或多个季铵化的氮原子；
    优选地，所述5-6元含氮脂杂环基中，至少一个氮原子被＝O取代。
  41. 权利要求14-40任一项的偶联物，所述连接体中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100048
    优选地，R q独立地选自C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 3-6炔基、C 3-8环烷基；
    R j独立地选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 1-6烷氧基、氰基C 1-2烷基；
    β＝0、1或2；
    γ＝1、2或3；
    优选地，R i独立地选自H(氢)、D(氘)、＝O、CN、CH 2CN、甲基、CF 3。
  42. 权利要求14-41任一项的偶联物，所述连接体中，D选自被一个或多个R i取代的下列基团：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100049
    V.为平衡离子，优选为卤素阴离子，更优选为氯离子、溴离子或碘离子；
    R i独立地选自H(氢)、D(氘)、＝O、CN、CH 2CN、甲基、CF 3；
    R j独立地选自H(氢)、D(氘)、C 1-6烷基、C 3-6环烷基、C 1-6烷氧基、氰基C 1-2烷基；
    R q独立地选自C 1-6烷基、C 2-6烯基、C 3-6炔基、C 3-8环烷基。
    β＝0、1或2；
    γ＝1、2或3。
  43. [根据细则91更正 18.04.2018]　
    权利要求14-42任一项的偶联物，所述连接体中，D选自下列基团：
    Figure PCTCN2018082809-appb-1000500

    其中，
    Figure PCTCN2018082809-appb-100051
    任选地进一步选自
    Figure PCTCN2018082809-appb-100052

    Figure PCTCN2018082809-appb-100053
    任选地进一步选自
    Figure PCTCN2018082809-appb-100054

    以上基团通过1或2标记的两个位置之一与L 2连接，并且通过另一位置与L 3连接；优选地，以上基团通过1标记的位置与L 2连接，并且通过2标记的位置与L 3连接；
    V.为平衡离子，优选为卤素阴离子，更优选为氯离子、溴离子或碘离子。
  44. 权利要求14-43任一项的偶联物，所述连接体中，L 2选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100055
    优选地，y＝1；
    优选地，R k、R l、R m、R n均为氢。
  45. 一种偶联物，包含药物和连接体，以及任选的靶向部分，所述连接体如权利要求14-44任一项所定义；
    优选的，所述药物选自权利要求1-12任一项所定义的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、 水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物。
  46. 权利要求13-45任一项的偶联物，所述靶向部分(E)为能够与细胞表面的位点特异性结合的物质，例如小分子配体、蛋白质、多肽、非蛋白质试剂如糖、RNA或DNA。
  47. 权利要求13-46任一项的偶联物，所述靶向部分(E)为抗体，如单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体(例如，scFv)、非人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、全人抗体、前抗(Probody)、双特异性抗体或多特异性抗体。
  48. 权利要求13-47任一项的偶联物，所述靶向部分(E)为抗Her 2的单克隆抗体，例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab)；或所述靶向部分(E)为抗Trop-2的单克隆抗体，例如Sacituzumab。
  49. 权利要求13-48任一项的偶联物，所述靶向部分(E)的靶标选自：表皮生长因子、CD37、HER2、CD70、EGFRvIII、Mesothelin、Folate eceoptor1、Mucin 1、CD138、CD20、CD19、CD30、SLTRK6、Nectin 4、Tissue factor、Mucin16、Endothelinreceoptor、STEAP1、SLC39A6、Guanylylcyclase C、PSMA、CCD79b、CD22、Sodium phosphate cotransporter2B、GPNMB、Trophoblast glycoprotein、AGS-16、EGFR、CD33、CD66e、CD74、CD56、PD-L1、TACSTD2、DR5、BMPR1B、E16、STEAP1、0772P、MPF、Napi3b、Sema 5b、PSCA hlg、ETBR、MSG783、STEAP2、TrpM4、CRIPTO、CD21、CD79b、FcRH2、NCA、MDP、IL20Rα、Brevican、EphB2R、ASLG659、PSCA、GEDA、BAFF-R、CD22、CD79a、CXCR5、HLA-DOB、P2X5、CD72、LY64、FcRH1、IRTA2、TENB2、整合素α5β6，α4β7、FGF2、FGFR2、Her3、CD70、CA6、DLL3、EpCAM、pCAD、CD223、LYPD3、LY6E、EFNA4、ROR1、SLITRK6、5T4、ENPP3、SLC39A6、Claudin18.2、BMPR1B、E16、STEAP1、0772P、MPF、Napi3b、Sema 5b、PSCA hlg、ETBR、MSG783、STEAP2、TrpM4、CRIPTO、CD21、CD79b、FcRH2、NCA、MDP、IL20Rα、Brevican、EphB2R、ASLG659、PSCA、GEDA、CD22、CD79a、CXCR5、HLA-DOB、P2X5、CD72、LY64、FcRH1、IRTA2，以及TENB2。
  50. 权利要求13-49任一项的偶联物，所述靶向部分(E)选自：识别细胞表面整联蛋白受体的RGD肽；识别细胞表面生长因子受体的生长因子例如EGF、PDGF、VEGF；能识别功能性细胞表面纤溶酶原活化因子、蛙皮素、缓激肽、生长抑素或前列腺特异性膜抗原受体的肽。
  51. 权利要求13-50任一项的偶联物，所述靶向部分(E)选自：CD40配体、CD30配体、OX40配体、PD-1配体，ErbB配体，Her2配体，TACSTD2配体，DR5配体，连接两个脂肪族吲哚的多烯，花青染料，IR-783或其衍生物。
  52. 权利要求13-51任一项的偶联物，所述靶向部分(E)选自：生长抑素、叶酸衍生物，例如具有如下结构的叶酸衍生物
    Figure PCTCN2018082809-appb-100056
  53. 权利要求13-52任一项的偶联物，所述偶联物包含靶向部分(E)，其中，所述靶向部分(E)包含赖氨酸残基或半胱氨酸残基，并通过赖氨酸残基或半胱氨酸残基与连接体相连接。
  54. 权利要求13-53任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100057
    Figure PCTCN2018082809-appb-100058
    Figure PCTCN2018082809-appb-100059
    Figure PCTCN2018082809-appb-100060
    Figure PCTCN2018082809-appb-100061
    Figure PCTCN2018082809-appb-100062
    Figure PCTCN2018082809-appb-100063
  55. 权利要求13-53任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100064
    Figure PCTCN2018082809-appb-100065
    Figure PCTCN2018082809-appb-100066
    Figure PCTCN2018082809-appb-100067
    Figure PCTCN2018082809-appb-100068
    Figure PCTCN2018082809-appb-100069
    Figure PCTCN2018082809-appb-100070
    Figure PCTCN2018082809-appb-100071
    Figure PCTCN2018082809-appb-100072
  56. 权利要求55的偶联物，其中，药物与mAb之间的连接比率(DAR)为1-10之间的整数或小数，优选为1-4之间的整数或小数(例如1、2、3、4)；所述mAb为曲妥珠单抗或Sacituzumab，或者，所述mAb为帕妥珠单抗；
    优选地，药物与mAb之间的连接比率(DAR)为1、2或3；所述mAb为曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或Sacituzumab；
    优选地，所述偶联物具有以下特征之一：
    (1)DAR为1，并且mAb为曲妥珠单抗中移除1个氨基后所得的基团；
    (2)DAR为1，并且mAb为帕妥珠单抗中移除1个氨基后所得的基团；
    (3)DAR为1，并且mAb为Sacituzumab中移除1个氨基后所得的基团；
    (4)DAR为2，并且mAb为曲妥珠单抗中移除2个氨基后所得的基团；
    (5)DAR为2，并且mAb为帕妥珠单抗中移除2个氨基后所得的基团；和
    (6)DAR为2，并且mAb为Sacituzumab中移除2个氨基后所得的基团。
  57. 权利要求13-56任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100073
    Figure PCTCN2018082809-appb-100074
    Figure PCTCN2018082809-appb-100075
    Figure PCTCN2018082809-appb-100076
    Figure PCTCN2018082809-appb-100077
    其中A1为曲妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团。
  58. 权利要求13-56任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100078
    Figure PCTCN2018082809-appb-100079
    Figure PCTCN2018082809-appb-100080
    Figure PCTCN2018082809-appb-100081
    Figure PCTCN2018082809-appb-100082
    其中A2为帕妥珠单抗移除2个氨基后所得的基团。
  59. 权利要求13-56任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100083
    Figure PCTCN2018082809-appb-100084
    Figure PCTCN2018082809-appb-100085
    Figure PCTCN2018082809-appb-100086
    其中A3为Sacituzumab移除2个氨基后所得的基团。
  60. 权利要求13-56任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100087
    Figure PCTCN2018082809-appb-100088
    Figure PCTCN2018082809-appb-100089
    Figure PCTCN2018082809-appb-100090
    其中，A1’为曲妥珠单抗中移除1个氨基后所得的基团。
  61. 权利要求13-56任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100091
    Figure PCTCN2018082809-appb-100092
    Figure PCTCN2018082809-appb-100093
    Figure PCTCN2018082809-appb-100094
    Figure PCTCN2018082809-appb-100095
    其中A2’为帕妥珠单抗移除1个氨基后所得的基团。
  62. 权利要求13-56任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100096
    Figure PCTCN2018082809-appb-100097
    Figure PCTCN2018082809-appb-100098
    Figure PCTCN2018082809-appb-100099
    Figure PCTCN2018082809-appb-100100
    其中A3’为Sacituzumab移除1个氨基后所得的基团。
  63. 权利要求13-62任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100101
    Figure PCTCN2018082809-appb-100102
    其中，α为1、2、3或4的整数；并且A为曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或Sacituzumab中移除α个氨基后所得的基团。
  64. 权利要求13-63任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100103
    Figure PCTCN2018082809-appb-100104
    其中，A1为曲妥珠单抗中移除2个氨基后所得的基团。
  65. 权利要求13-63任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100105
    Figure PCTCN2018082809-appb-100106
    其中，A2为帕妥珠单抗中移除2个氨基后所得的基团。
  66. 权利要求13-63任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100107
    Figure PCTCN2018082809-appb-100108
    其中，A3为Sacituzumab中移除2个氨基后所得的基团。
  67. 权利要求13-63任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100109
    Figure PCTCN2018082809-appb-100110
    其中，A1′为曲妥珠单抗中移除1个氨基后所得的基团。
  68. 权利要求13-63任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100111
    Figure PCTCN2018082809-appb-100112
    其中，A2′为帕妥珠单抗中移除1个氨基后所得的基团。
  69. 权利要求13-63任一项的偶联物，其选自：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100113
    Figure PCTCN2018082809-appb-100114
    其中，A3′为Sacituzumab中移除1个氨基后所得的基团。
  70. 药物组合物，包含权利要求1-12任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，或权利要求13-69任一项的偶联物，以及一种或多种药用辅料。
  71. 权利要求1-12任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物，或权利要求13-69任一项的偶联物，在制备治疗癌症疾病的药物中的用途；
    优选地，所述癌症疾病选自食管癌(例如食管腺癌和食管鳞状细胞癌)、脑瘤、肺癌(例如小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌)、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、实体瘤、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经系统肿瘤(例如神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤)、前列腺癌和甲状腺癌。
  72. 权利要求71的用途，其中，所述靶向部分(E)为抗Her2的单克隆抗体，例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab)，或者，所述靶向部分(E)为抗Trop-2的单克隆抗体，例如Sacituzumab；所述癌症疾病选自乳腺癌、卵巢癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肺癌、肾癌、结肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、膀胱癌、肝癌、结直肠癌、前列腺癌、宫颈癌。
  73. 权利要求71或72的用途，其中，所述靶向部分(E)为抗Her 2的单克隆抗体，例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab)；所述癌症疾病选自乳腺癌、卵巢癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肺癌、肾癌、结肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、膀胱癌或肝癌。
  74. 权利要求71-73任一项的用途，其中，所述靶向部分(E)为抗Trop-2的单克隆抗体，例如 Sacituzumab，所述癌症疾病选自乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌。
  75. 制备权利要求1-12任一项的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、水合物、异构体，或它们的任意晶型或消旋物的方法，所述方法如下述路线所示：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100115
    其中，R 1-R 20、Q、X、Y、A、m、n如权利要求1-12任一项所定义，PG为保护基，例如苄基、取代苄基或叔丁基；
    所述方法包括以下步骤：
    步骤1：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物a与化合物b进行反应，得到化合物c；
    步骤2：在氢气和催化剂存在的条件下，将化合物c中的PG脱除，得到化合物d；
    步骤3：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物d与化合物e反应，得到式(I)化合物；
    优选地，所述碱为有机碱或无机碱；
    优选地，所述有机碱选自三乙胺、DIPEA、吡啶、NMM或DMAP；
    优选地，所述无机碱选自NaH、NaOH、Na 2CO 3或K 2CO 3；
    优选地，所述缩合试剂选自HATU、HBTU、EEDQ、DEPC、DCC、DIC、EDC、BOP、PyAOP或PyBOP。
  76. 权利要求75的方法，所述步骤1是在-10℃-60℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的；
    优选地，所述步骤1中，化合物a与化合物b的摩尔比为1∶(0.5-2)，优选1∶(0.8-2)，更优选1∶(1-1.5)；
    优选地，所述步骤1中，化合物a、化合物b与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-4)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)；
    优选地，所述步骤1中，化合物a与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)；
    优选地，所述步骤2中，氢气的压力为1-4atm，优选1-2atm；
    优选地，所述催化剂选自Pd/C，Pt 2O，Pd(OH) 2；
    优选地，式c化合物与催化剂的质量比为1∶(0.05-2)，优选1∶0.1；
    优选地，所述步骤2是在0℃-100℃(优选10℃-25℃)的温度下进行的；
    优选地，所述步骤3是在-10℃-60℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的；
    优选地，所述步骤3中，化合物d与化合物e的摩尔比为1∶(0.5-2)，优选1∶(0.8-2)，更优选1∶(1-1.5)；
    优选地，所述步骤3中，化合物d、化合物e与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-4)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)；
    优选地，所述步骤3中，化合物d与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)；
    优选地，所述步骤1、步骤2和/或步骤3在有机溶剂中进行；
    优选地，所述有机溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、饱和烃类(例如环己烷、己烷)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷)、醚类(例如四氢呋喃、乙醚、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷)、腈类(例如乙腈)、醇类(例如甲醇、乙醇)及其任意组合；
    优选地，所述方法得到式(I)化合物的非对映异构体混合物；
    优选地，所述方法还包括：通过制备高效液相色谱对式(I)的非对映异构体混合物进行分离，得到纯的异构体；
    优选地，所述分离的条件包括以下一种或多种：
    (1)以纤维素-三[3，5-二甲苯基氨基甲酸酯键合硅胶为填充剂；
    (2)色谱柱的柱温为30℃～50℃；
    (3)洗脱剂的流速为5.0～20.0mL/min；
    (4)检测器的检测波长为200～400nm；
    (5)使用有机溶剂作为流动相(例如正己烷、异丙醇和/或甲醇)；优选地，使用两种流动相，包括流动相A(例如正己烷)和流动相B(例如甲醇或异丙醇)；
    优选地，所述分离包括在(1)-(5)并存在条件下进行线性梯度洗脱。
  77. 制备权利要求13-69任一项的偶联物的方法，所述方法如下述路线所示：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100116
    其中，R 1-R 20、Q、X、Y、L 1、L 2、L 3、M 8、A、D、m、n、r、s、w如权利要求1-69任一项所定义；
    所述方法包括以下步骤：
    步骤1：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物I-1与化合物L 2’反应，生成化合物I-2，所述化合物L 2’为CH 2Br 2、CH 2I 2、CH 2BrI、Br-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-Br、Br-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-I、I-(CH 2CH 2O) y-(CH2) y-Br、I-(CH 2CH 2O) y-(CH 2) y-I，或者
    Figure PCTCN2018082809-appb-100117
    Figure PCTCN2018082809-appb-100118
    其中，
    R k、R l、R m、R n各自独立地选自H(氢)、D(氘)、卤素、CF 3、CN、CH 2CN、C 1-6烷基、C 1- 6烷氧基、C 2-10炔基、C 3-6环烷基；
    y各自独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
    步骤2：
    在有碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物I-2与化合物I-3反应，生成化合物I-4；
    步骤3：在有碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物I-4与化合物d反应，生成化合物I-5；
    优选地，所述碱为无机碱或有机碱；
    优选地，所述有机碱选自三乙胺、DIPEA、吡啶、NMM或DMAP；
    优选地，所述无机碱选自NaH、NaOH、Na 2CO 3、NaHCO 3、K 2CO 3；
    优选地，所述缩合试剂选自HATU、HBTU、EEDQ、DEPC、DCC、DIC、EDC、BOP、PyAOP或PyBOP。
  78. 权利要求76的方法，其中，步骤1是在-20℃-150℃(优选-5℃-130℃)的温度下进行的；
    优选地，所述步骤1中，化合物I-1与化合物L 2’的摩尔比为1∶(0.5-5)，优选1∶(0.8-3)，更优选1∶(1-2.5)；
    优选地，所述步骤1中，化合物I-1、化合物L 2’与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-20)，优选1∶(0.8- 2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)；
    优选地，所述步骤1中，化合物I-1与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2)；
    优选地，所述步骤2是在-10℃-60℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的；
    优选地，所述步骤2中，化合物I-2与化合物I-3的摩尔比为1∶(0.5-2)，优选1∶(0.8-2)，更优选1∶(1-1.5)；
    优选地，所述步骤2中，化合物I-2、化合物I-3与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-4)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)；
    优选地，所述步骤2中，化合物I-2与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)；
    优选地，所述步骤3是在-10℃-60℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的；
    优选地，所述步骤3中，化合物I-4与化合物d的摩尔比为1∶(0.5-2)，优选1∶(0.8-2)，更优选1∶(1-1.5)；
    优选地，所述步骤3中，化合物I-4、化合物d与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-4)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)；
    优选地，所述步骤3中，化合物I-4、与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)。
  79. 权利要求75-78任一项的方法，所述方法还包括步骤4：将化合物1-5与靶向部分(E)偶联；
    优选地，所述靶向部分(E)为抗Her2的单克隆抗体(例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab))或抗Trop-2的单克隆抗体(例如Sacituzumab)，或其活性片段或变体；
    优选地，所述步骤4包括：将靶向部分(E)与化合物I-5混合；
    优选地，所述靶向部分(E)与化合物I-5的物质的量之比为1∶(1-20)；
    优选地，所述步骤4包括：将包含靶向部分(E)的溶液与化合物I-5混合；
    优选地，所述步骤1、步骤2、步骤3和/或步骤4在水或有机溶剂中进行；
    优选地，所述有机溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、饱和烃类(例如环己烷、己烷)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷)、醚类(例如四氢呋喃、乙醚、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷)、腈类(例如乙腈)、醇类(例如甲醇、乙醇)及其任意组合；
    优选地，所述方法还包括步骤5，所述步骤5包括：通过层析方法(例如离子交换层析、疏水层析、反相层析和亲和层析中的一种或多种)对步骤4的产物进行纯化。
  80. 制备权利要求13-69任一项的偶联物的方法，所述方法如下述路线所示：
    Figure PCTCN2018082809-appb-100119
    其中，R 1-R 20、Q、X、Y、L 1、L 2、L 3、M 8、A、D、m、n、r、s、w如如权利要求1-67任一项所定义；
    所述方法包含以下步骤：
    步骤1：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物II-1与化合物II-2反应，生成化合物II-3；
    步骤2：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物II-3与化合物d反应，生成化合物II-4；
    步骤3：在碱和/或缩合试剂存在的条件下，使化合物II-4与化合物I-2反应，生成化合物II-5；
    优选地，所述碱为有机碱或无机碱；
    优选地，所述有机碱选自三乙胺、DIPEA、吡啶、NMM或DMAP；
    优选地，所述无机碱选自NaH、NaOH、Na 2CO 3、NaHCO 3或K 2CO 3；
    优选地，所述缩合试剂选自HATU、HBTU、EEDQ、DEPC、DCC、DIC、EDC、BOP、PyAOP或PyBOP。
  81. 权利要求80的方法，其中，步骤1是在20℃-120℃(优选30℃-80℃)的温度下进行的；
    优选地，所述步骤1中，化合物II-1与化合物II-2的摩尔比为1∶(0.5-5)，优选1∶(0.8-3)，更优选1∶(1-2.5)；
    优选地，所述步骤1中，化合物II-1、化合物II-2与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-20)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)；
    优选地，所述步骤1中，化合物II-1与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)；
    优选地，所述步骤2是在-20℃-50℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的；
    优选地，所述步骤2中，化合物II-3与化合物d的摩尔比为1∶(0.5-5)，优选1∶(0.8-3)，更优选1∶(1-2.5)；
    优选地，所述步骤2中，化合物II-3、化合物d与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-20)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)；
    优选地，所述步骤2中，化合物II-3与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)；
    优选地，所述步骤3是在-20℃-50℃(优选-5℃-25℃)的温度下进行的；
    优选地，所述步骤3中，化合物II-4与化合物I-2的摩尔比为1∶(0.5-5)，优选1∶(0.8-3)，更优选 1∶(1-2.5)；
    优选地，所述步骤3中，化合物II-4、化合物I-2与碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-20)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-3)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-2)；
    优选地，所述步骤3中，化合物II-4与缩合剂的摩尔比为1∶(1-3)，优选1∶(1.2-2.0)。
  82. 权利要求80-81任一项的方法，所述方法还包括步骤4：将化合物II-5与靶向部分(E)偶联；
    优选地，所述靶向部分(E)为抗Her2的单克隆抗体(例如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗(Pertuzumab))或抗Trop-2的单克隆抗体(例如Sacituzumab)，或其活性片段或变体；
    优选地，所述步骤4包括：将靶向部分(E)与化合物II-5混合；
    优选地，所述靶向部分(E)与化合物II-5的物质的量之比为1∶(1-20)；
    优选地，所述步骤4包括：将包含靶向部分(E)的溶液与化合物II-5混合；
    优选地，所述步骤1、步骤2、步骤3和/或步骤4在水或有机溶剂中进行；
    优选地，所述有机溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、饱和烃类(例如环己烷、己烷)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷)、醚类(例如四氢呋喃、乙醚、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷)、腈类(例如乙腈)、醇类(例如甲醇、乙醇)及其任意组合；
    优选地，所述方法还包括步骤5，所述步骤5包括：通过层析方法(例如离子交换层析、疏水层析、反相层析和亲和层析中的一种或多种)对步骤4的产物进行纯化。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114728077A (zh) * 2019-05-20 2022-07-08 诺华股份有限公司 Mcl-1抑制剂抗体-药物缀合物及使用方法
CN117430660A (zh) * 2023-09-04 2024-01-23 诺灵生物医药科技(北京)有限公司 奥瑞他汀f类似物及其抗体药物偶联物与应用

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110090308B (zh) * 2018-01-30 2023-03-24 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 制备偶联物的方法

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5410024A (en) * 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
US5767237A (en) * 1993-10-01 1998-06-16 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Peptide derivatives
CN1938046A (zh) * 2003-11-06 2007-03-28 西雅图基因公司 能够与配体偶联的单甲基缬氨酸化合物
US7517964B2 (en) 2002-03-01 2009-04-14 Immunomedics, Inc. RS7 antibodies
US7560111B2 (en) 2004-07-22 2009-07-14 Genentech, Inc. HER2 antibody composition
US20110020343A1 (en) * 2008-03-18 2011-01-27 Seattle Genetics, Inc. Auristatin drug linker conjugates
CN102099059A (zh) 2008-06-13 2011-06-15 西塞医疗中心 用于癌症靶向治疗的小分子配体-药物轭合物
US20120237518A1 (en) 2010-06-10 2012-09-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Anti-trop-2 antibody
CN103319599A (zh) 2013-05-27 2013-09-25 上海交联药物研发有限公司 一种抗人ErbB2抗体—美登木素偶联物及其应用
CN103476941A (zh) 2010-04-12 2013-12-25 索伦托治疗有限公司 展示抗体的方法
US20140017265A1 (en) * 2012-07-05 2014-01-16 Mersana Therapeutics, Inc. Terminally Modified Polymers and Conjugates Thereof
WO2016123412A1 (en) 2015-01-28 2016-08-04 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates
CN106729743A (zh) * 2015-11-23 2017-05-31 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗ErbB2抗体-药物偶联物及其组合物、制备方法和应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6046494B2 (ja) 2010-02-08 2016-12-14 アジェンシス，インコーポレイテッド １６１ｐ２ｆ１０ｂタンパク質に結合する抗体薬物コンジュゲート（ａｄｃ）
AR088694A1 (es) 2011-11-17 2014-06-25 Pfizer Peptidos citotoxicos y conjugados de anticuerpo-farmaco de los mismos
CN104662000B (zh) 2012-05-15 2018-08-17 索伦托医疗有限公司 药物偶联物及其偶联方法和用途
WO2014144878A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 The Scripps Research Institute Novel thiol & amino modifying reagents for protein chemistry and methods of use thereof
KR20180019113A (ko) 2015-06-19 2018-02-23 싸이트알엑스 코포레이션 제어된 약물 방출을 위한 전달 시스템
EP3316885B1 (en) 2015-07-01 2021-06-23 Immunomedics, Inc. Antibody-sn-38 immunoconjugates with a cl2a linker
CN107029244B (zh) 2016-02-04 2021-04-27 浙江昭华生物医药有限公司 抗her2抗体-药物偶联物及其应用
EP3600283A4 (en) 2017-03-27 2020-12-16 Immunomedics, Inc. TREATMENT OF TROP-2 EXPRESSIVE TRIPLE NEGATIVE BREAST CANCER WITH SACITUZUMAB GOVITECAN AND A RAD51 INHIBITOR
CN113683622A (zh) 2017-12-15 2021-11-23 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 生物活性物偶联物及其制备方法和用途
CN110903395A (zh) 2018-09-14 2020-03-24 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗体、偶联物及其制备方法和用途

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5410024A (en) * 1993-01-21 1995-04-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide amides
US5767237A (en) * 1993-10-01 1998-06-16 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Peptide derivatives
US7517964B2 (en) 2002-03-01 2009-04-14 Immunomedics, Inc. RS7 antibodies
CN1938046A (zh) * 2003-11-06 2007-03-28 西雅图基因公司 能够与配体偶联的单甲基缬氨酸化合物
US7560111B2 (en) 2004-07-22 2009-07-14 Genentech, Inc. HER2 antibody composition
US20110020343A1 (en) * 2008-03-18 2011-01-27 Seattle Genetics, Inc. Auristatin drug linker conjugates
CN102099059A (zh) 2008-06-13 2011-06-15 西塞医疗中心 用于癌症靶向治疗的小分子配体-药物轭合物
CN103476941A (zh) 2010-04-12 2013-12-25 索伦托治疗有限公司 展示抗体的方法
US20120237518A1 (en) 2010-06-10 2012-09-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Anti-trop-2 antibody
US20140017265A1 (en) * 2012-07-05 2014-01-16 Mersana Therapeutics, Inc. Terminally Modified Polymers and Conjugates Thereof
CN103319599A (zh) 2013-05-27 2013-09-25 上海交联药物研发有限公司 一种抗人ErbB2抗体—美登木素偶联物及其应用
WO2016123412A1 (en) 2015-01-28 2016-08-04 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates
CN106729743A (zh) * 2015-11-23 2017-05-31 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗ErbB2抗体-药物偶联物及其组合物、制备方法和应用

Non-Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Genbank", Database accession no. NP _443170.1
"Genebank", Database accession no. X03363
CLACKSON ET AL., NATURE, vol. 352, 1991, pages 624 - 628
DICK, L. W. ET AL., BIOTECHNOL. BIOENG., vol. 100, pages 1132 - 1143
HOWARD A. BURRIS III ET AL., CLINICAL BREAST CANCER, vol. 11, no. 5, pages 275 - 82
KOHLER ET AL., NATURE, vol. 256, 1975, pages 495
MARKS ET AL., JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY, vol. 222, 1991, pages 581 - 597
MORRISON ET AL., PNAS, vol. 81, 1984, pages 6851 - 6855
PRESTA, CURR OP STRUCT BWL, vol. 2, 1992, pages 593 - 596
RIECHMANN ET AL., NATURE, vol. 332, 1988, pages 323 - 329
See also references of EP3617221A4
SEMBA ET AL., PNAS, vol. 82, 1985, pages 6497 - 6501
YAMAMOTO ET AL., NATURE, vol. 319, 1986, pages 230 - 234

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114728077A (zh) * 2019-05-20 2022-07-08 诺华股份有限公司 Mcl-1抑制剂抗体-药物缀合物及使用方法
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