CN110903395A - 抗体、偶联物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本申请涉及新的靶向Trop‑2的人源化抗体，以及由其制备的抗体‑药物偶联物，盐或立体异构体，盐或立体异构体的溶剂合物。同时，本申请还涉及由抗体‑药物偶联物，盐或立体异构体，盐或立体异构体的溶剂合物制备的药物组合物，药物制剂。此外，本申请的抗体‑药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者溶剂合物，本申请的药物组合物或药物制剂可用于制备用于抑制癌细胞生长、增殖或迁移，预防或治疗癌症的组合物。

Description

抗体、偶联物及其制备方法和用途

发明领域

本申请属于生物技术领域，涉及生物活性抗体，其片段、衍生物和偶联物，及其在预防和/或治疗与细胞活动异常相关的疾病，包括但不限于在预防和/或治疗肿瘤疾病中的用途。

发明背景

化疗一度是癌症的标准疗法，但高杀伤力的生物活性分子会误杀正常细胞，引起严重的副作用。靶向抗肿瘤药物由于同时具有靶向性和抗肿瘤活性，已成为当今肿瘤研究领域的热点。20世纪以来，生物大分子药物(例如治疗性抗体或抗体片段)和靶向小分子配体用于抗肿瘤药物的开发及肿瘤靶向治疗已取得突破性进展。然而，生物大分子药物虽然靶向性强，但对实体瘤的治疗效果有限；而生物活性分子虽然对癌细胞具有高度的杀伤效力，但往往缺乏靶向性，常常误伤正常细胞，从而引起严重毒副作用。

近年来研究发现，治疗性抗体可以与生物活性分子相连，形成抗体-药物偶联物(ADC)。

抗体是良好的药物靶向性载体。利用药物分子中的特定官能团如羟基、巯基或氨基，可将药物与抗体连接，组成抗体-药物偶联物。抗体的靶向性能将与之相连的药物“精确”地运送到靶细胞，从而有效提高病灶局部的药物浓度，同时极大地降低体内其他组织、器官的药物浓度，从而实现增效减毒。用于这些策略的多克隆抗体和单克隆抗体均已有报导(Rowland等人，1986，Cancer Immunol.Immunother.，21：183-87)。目前临床上所用的ADC中的抗体大多是人源化抗体，例如，PSMA ADC(抗PSMA抗体-MMAE偶联物)、SGN-75(抗CD70抗体-MMAF偶联物)、T-DM1(曲妥珠单抗-DM1偶联物)中所用均为人源化抗体。

ADC融合了抗体的靶向作用和生物活性分子的活性，成为一种“生物导弹”。抗体引导ADC结合到靶细胞，随后被细胞内化，释放药物，治疗疾病。由于抗体对肿瘤细胞相关靶点具有特异性和靶向性，其应用价值不仅体现在治疗方面，同时还成为药物靶向输送的理想载体，降低了药物的副作用。

ADC中作为“弹头”的药物通常为细胞毒性药物，即小分子毒素，它们主要通过抑制细胞DNA或蛋白质合成、抑制细胞有丝分裂等方式来杀伤肿瘤细胞。

由于细胞毒性药物对正常细胞同样具有较大杀伤力，因而其应用和发展受到极大限制。早期的ADC利用常规抗肿瘤药物，但这些ADC临床活性大多低于化学药单体的体外活性。目前的ADC所用的细胞毒性药物主要包括：美登素类(Maytansinoids，参见例如EP0425235、US 5208020、US 5416064、US 7276497、US 7473796、US 7851432、US 2007/0269447、US 2011/0158991、WO 2004/103272、WO 2012/061590)、耳抑素肽类(Auristatins，参见例如US 6884869、US 7498298)、卡奇霉素类(Calicheamicins，参见例如US 5606040、US 5770710)、阿霉素类(Doxorubicins，参见例如Dubowchik等人，2002，Bioconjugate Chem.，13：855-869)、苯并二吡咯类抗生素(duocarmycins和CC-1065，参见例如US 7129261)、伊立替康代谢产物(Irinotecan metabolites，参见例如WO 2015/012904)、吡咯并苯二氮卓类(Pyrrolobenzodiazepines，参见例如Biotechnol.Healthc.2012Winter，9(4)：28-31)以及吡咯并苯二氮卓二聚体类(PBDdimmers，参见例如WO 2005/040170)等。这些细胞毒性药物具有很强的非选择性毒性，会对正常细胞造成伤害，因而本身不能成药。

通常，ADC药物由抗体、生物活性分子及连接体(Linker)组成。生物活性分子通过连接体共价偶联到抗体上；抗体(例如单克隆抗体)能够特异性识别肿瘤细胞表面的特异性靶点，进而能够引导ADC到达癌细胞表面，并使ADC通过细胞内吞效应进入癌细胞；然后生物活性分子在癌细胞内释放，达到专一性杀灭癌细胞而不损伤正常组织细胞的作用。

目前，已经上市的ADC有四种：Mylotarg(Gemtuzumab Ozogamicin，吉妥珠单抗奥唑米星)，Adcetris(Brentuximab Vedotin，CD30单抗-MMAE)，Kadcyla(TrastuzumabEmtansine，曲妥珠单抗-美登素生物碱)和Besponsa(Inotuzumab ozogamicin，CD22单抗-卡奇霉素)。

Trop-2或TROP2含义为人滋养层细胞表面抗原-2(humantrophoblast cell-surface antigens 2)，又称为TACSTD2、M1S1、GA733-1、EGP-1，其是由许多人类肿瘤(如乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌)细胞表达的细胞表面受体，但Trop-2在正常人体组织只有有限的表达。Trop-2是一种分子量为45KD的单次跨膜表面糖蛋白，为细胞膜钙离子通道相关蛋白，与细胞内钙离子浓度调控有关。Trop-2与细胞周期蛋白D1和磷酸激酶C有关，具有调节肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞侵袭和转移的功能。尽管Trop-2的配体及信号转导通路的具体细节尚未明确，但认为其致瘤性和促侵袭转移特性与其促使细胞内钙离子浓度升高有关。

IMMU-132(Sacituzumabgovitecan)是由靶向Trop-2的人源化抗体Sacituzumab(hRS7)和伊立替康活性代谢物SN-38通过抗体的半胱氨酸巯基偶联形成的ADC。

然而，许多抗体药物偶联物具有较高的疏水性，会增加生产和贮藏期间聚合物的形成，给成药性和工艺带来压力。

发明概述

本申请提供了新的靶向Trop-2的单克隆抗体、其片段、衍生物和偶联物，其能够识别并高效结合Trop-2，而同时，与已知抗体，例如Sacituzumab相比，其疏水性明显降低。

另外，本申请提供了新的抗体-药物偶联物，与现有技术已知的由靶向Trop-2的人源化抗体Sacituzumab(hRS7)和伊立替康活性代谢物SN-38通过抗体的半胱氨酸巯基偶联形成的IMMU-132相比，其是由本申请的抗体或者新发现的化合物TL033对抗体-药物偶联物IMMU-132中的抗体和/或药物部分进行替换而得到。与IMMU-132相比，本申请的抗体-药物偶联物具有显著提高的抗肿瘤活性，能更有效地预防和治疗癌症，特别是Trop-2阳性癌症，且疏水性明显降低。

在第一方面，本发明提供抗体，其是靶向Trop-2的抗体，在一个实施方案中，根据Chothia编号，所述抗体CDR相比Sacituzumab抗体CDR包含以下位点的氨基酸的一个或多个突变：重链氨基酸第53、54、97、100A和100B位，轻链氨基酸第31、53、92和93位；优选的，所述抗体为人源化抗体，且具有相比Sacituzumab抗体降低的疏水性。

在一些实施方式中，本发明提供人源化抗体，其是靶向Trop-2的人源化抗体，其中根据Chothia编号，所述人源化抗体包含以下位置的氨基酸的一个或多个突变：重链氨基酸第53、54、97、100A和100B位，轻链氨基酸第31、53、92和93位，且具有相比Sacituzumab抗体降低的疏水性。

在一个实施方案中，本申请的人源化抗体中上述位点的氨基酸突变为亲水性氨基酸。在另一个实施方案中，本申请的人源化抗体中上述位点的氨基酸突变为D、N、R、E、Q、H、K或S。

在一个优选的实施方案中，在本申请的人源化抗体中上述一个或多个突变包括，所述重链氨基酸第53位突变为D、S或N，第54位突变为S、D或N，第97位突变为S、R或D，第100A位突变为S、D或R，第100B位突变为S、D或R，和/或所述轻链氨基酸第31位突变为N、S或K，第53位突变为N、S或K，第92位突变为D、N或S，第93位突变为S、N或D。

在一个优选的实施方案中，所述重链氨基酸第53位突变为D，第54位突变为S。

在一个优选的实施方案中，所述重链氨基酸第53位突变为D，第54位突变为S，所述轻链氨基酸第31位突变为S或第93位突变为S。

在一个优选的实施方案中，所述重链氨基酸第53位突变为D，第54位突变为S，所述轻链氨基酸第31位突变为S，第93位突变为S。

在一个实施方案中，本申请的人源化抗体具有以下的重链CDR和轻链CDR:

1)重链CDR1，以SEQ ID NO:1表示的GYTFTNY；

2)重链CDR2，以SEQ ID NO:2表示的NTDSGE；

3)重链CDR3，以SEQ ID NO:3表示的GGFGSSYWYFDV；

4)轻链CDR1，以SEQ ID NO:4表示的KASQDVSSAVA；

5)轻链CDR2，以SEQ ID NO:5表示的SASYRYT；

6)轻链CDR3，以SEQ ID NO:6表示的QQHYSTPLT。

在另一个实施方案中，本申请的人源化抗体具有以下的重链CDR和轻链CDR:

1)重链CDR1，以SEQ ID NO:1表示的GYTFTNY；

2)重链CDR2，以SEQ ID NO:2表示的NTDSGE；

3)重链CDR3，以SEQ ID NO:3表示的GGFGSSYWYFDV；

4)轻链CDR1，以SEQ ID NO:4表示的KASQDVSSAVA；

5)轻链CDR2，以SEQ ID NO:5表示的SASYRYT；

6)轻链CDR3，以SEQ ID NO:7表示的QQHYITPLT。

在又一个实施方案中，本申请的人源化抗体具有以下的重链CDR和轻链CDR:

1)重链CDR1，以SEQ ID NO:1表示的GYTFTNY；

2)重链CDR2，以SEQ ID NO:2表示的NTDSGE；

3)重链CDR3，以SEQ ID NO:3表示的GGFGSSYWYFDV；

4)轻链CDR1，以SEQ ID NO:8表示的KASQDVSIAVA；

5)轻链CDR2，以SEQ ID NO:5表示的SASYRYT；

6)轻链CDR3，以SEQ ID NO:6表示的QQHYSTPLT。

在另一个实施方案中，本申请的人源化抗体具有SEQ ID NO:11所示的重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO:12所示的轻链可变区的氨基酸序列。

在又一个实施方案中，本申请的人源化抗体具有SEQ ID NO:13所示的重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO:14所示的轻链可变区的氨基酸序列。

在另外的实施方案中，本申请的人源化抗体具有SEQ ID NO:15所示的重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO:16所示的轻链可变区的氨基酸序列。

此外，在一个实施方案中，本申请的人源化抗体具有SEQ ID NO:9所示的轻链恒定区的氨基酸序列和SEQ ID NO:10所示的重链恒定区的氨基酸序列。

在再一个实施方案中，本申请的人源化抗体包括抗体M1、M2和M3，其均具有SEQ IDNO:9所示的轻链恒定区的氨基酸序列和SEQ ID NO:10所示的重链恒定区的氨基酸序列，且M1具有SEQ ID NO:11所示的重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO:12所示的轻链可变区的氨基酸序列，M2具有SEQ ID NO:13所示的重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO:14所示的轻链可变区的氨基酸序列，M3具有SEQ ID NO:15所示的重链可变区的氨基酸序列和SEQID NO:16所示的轻链可变区的氨基酸序列。

在第二方面，本申请涉及抗体-药物偶联物，其药学上可接受的盐或立体异构体，或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物，其中所述抗体为本申请的上述人源化抗体。

在一个实施方案中，在本申请的抗体-药物偶联物中，所述药物为细胞毒性药物。

在一个实施方案中，本申请的抗体-药物偶联物中，所述药物为SN-38、T-030或其活性片段，其中SN-38和T-030分别具有如下结构：

优选的所述活性片段分别为：

在一个优选的实施方案中，所述药物SN-38或T-030通过连接片段偶联至本申请的人源化抗体上，偶联前的药物及连接片段分别为化合物1和TL033，分别具有如下的结构：

在一个实施方案中，本申请的抗体-药物偶联物具有如下的结构：

其中Ab为本申请任一种疏水性降低的人源化抗体，g和γ选自1-10之间的整数或小数；优选的，g和γ选自5-8之间的整数或小数。

在一个实施方案中，在本申请的抗体-药物偶联物中，所述抗体为与M1、M2或M3具有相同的6个CDR的抗体，所述药物为细胞毒性药物，SN-38或T-030。

在又一个实施方案中，在本申请的抗体-药物偶联物中，所述抗体为M3，所述药物为细胞毒性药物SN-38。

在又一个实施方案中，在本申请的抗体-药物偶联物中，所述抗体为M3，所述药物为细胞毒性药物T-030。

在第三方面，本申请涉及药物组合物，其包含本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物，以及药学上可接受的载体。

在第四方面，本申请涉及药物制剂，其包含本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐、立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物；优选地，其为固体制剂、半固体制剂、液体制剂或气体制剂的形式，如冻干粉针剂。

在第五方面，本申请涉及本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物、本申请的药物组合物或本申请的药物制剂在制备用于抑制癌细胞生长、增殖或迁移，预防或治疗癌症的组合物中的用途。

在优选的实施方案中，所述癌症为表达Trop-2的癌症，优选为Trop-2高表达的癌症。

在一些实施方案中，所述癌症选自为实体瘤或非实体瘤，例如选自食管癌(例如食管腺癌和食管鳞状细胞癌)、脑瘤、肺癌(例如小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌)、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经系统肿瘤(例如神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤)、前列腺癌和甲状腺癌。

附图简述

图1.HCC827人非小细胞肺癌移植瘤模型中各组小鼠肿瘤体积的生长变化情况。

图2.HCC827人非小细胞肺癌移植瘤模型中各组小鼠体重的变化情况。

发明详述

本申请提供了新的靶向Trop-2的单克隆抗体、其片段、衍生物和偶联物，其能够识别并高效结合Trop-2，而同时，与已知抗体，例如Sacituzumab相比，其疏水性明显降低。

另外，本申请提供了新的抗体-药物偶联物，与现有技术已知的由靶向Trop-2的人源化抗体Sacituzumab(hRS7)和伊立替康活性代谢物SN-38通过抗体的半胱氨酸巯基偶联形成的IMMU-132相比，其是由用本申请的抗体或新发现的化合物TL033对抗体-药物偶联物IMMU-132中的抗体和/或药物部分进行替换而得到。与IMMU-132相比，本申请的抗体-药物偶联物具有显著提高的抗肿瘤活性，能更有效地预防和治疗癌症，特别是Trop-2阳性癌症，且疏水性明显降低。

本申请所涉及的序列信息如下：

1.SEQ ID NO:1：M1，M2和M3的重链CDR1；

2.SEQ ID NO:2：M1，M2和M3的重链CDR2；

3.SEQ ID NO:3：M1，M2和M3的重链CDR3；

4.SEQ ID NO:4：M1，M2的轻链CDR1；

5.SEQ ID NO:5：M1，M2和M3的轻链CDR2；

6.SEQ ID NO:6：M1和M3的轻链CDR3；

7.SEQ ID NO:7：M2的轻链CDR3；

8.SEQ ID NO:8：M3的轻链CDR1；

9.SEQ ID NO:9：M1，M2，M3轻链恒定区序列；

10.SEQ ID NO:10：M1，M2，M3重链恒定区序列；

11.SEQ ID NO:11：M1重链可变区的氨基酸序列；

12.SEQ ID NO:12：M1轻链可变区的氨基酸序列；

13.SEQ ID NO:13：M2重链可变区的氨基酸序列；

14.SEQ ID NO:14：M2轻链可变区的氨基酸序列；

15.SEQ ID NO:15：M3重链可变区的氨基酸序列；

16.SEQ ID NO:16：M3轻链可变区的氨基酸序列。

在本发明中，除非另有说明，否则本文中所用术语具有本领域技术人员通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。例如可参见Current Protocols in Molecular Biology(Ausubel)。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。

如本文中所使用的，术语“抗体”取其最广义的解释，包括完整的单克隆抗体、多克隆抗体以及由至少两个完整抗体形成的双特异性抗体或多特异性抗体，只要它们具有所需的生物学活性。

如本文中所使用的，术语“单克隆抗体”指抗体来自一群基本均一的抗体，即构成该集群的各抗体完全相同，除了可能存在的少量天然突变。单克隆抗体具有针对抗原的一个决定簇(表位)的高特异性，而与其相对的多克隆抗体则包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体。除了特异性之外，单克隆抗体的优点还在于合成时可以不受其他抗体的污染。此处修饰语“单克隆”表示该抗体的特征在于来自一个基本均一的抗体群，而不应理解成需由特殊方法制得。

如本文中所使用的，单克隆抗体还特别包括嵌合抗体，即重链和/或轻链的一部分与某种、某类或某亚类抗体相同或同源，其余部分则与另一种、另一类或另一亚类抗体相同或同源，只要它们具有所需的生物学活性(参见例如US 4,816,567；和Morrison等人，1984，PNAS，81：6851-6855)。可用于本发明的嵌合抗体包括灵长类化(primatized)抗体，其包含来自非人灵长类(例如古猴、猩猩等)的可变区抗原结合序列和人恒定区序列。

如本文中所使用的，术语“完整抗体”指包含抗原结合可变区和轻链恒定区(CL)、重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的抗体。恒定区可以是天然序列(例如人天然恒定区序列)或其氨基酸序列变体。完整抗体优选是具有一种或多种效应功能的完整抗体。

在现有技术中已知用于定义CDR的边界及长度的对CDR的氨基酸残基编号的方法(以下，也称为“编号法”)。作为这样的编号法，例如Kabat法(Kabat EA,Wu TT,Bilofsky H,Reid-Miller M,Perry H.Sequence of proteins of immunologicalinterest.Bethesda:National Institute of Health；1983.323)、Chothia法(Chothia C,Lesk AM.Canonical structures for the hypervariable regions ofimmunoglobulins.J Mol Biol.1987；196:901 917.)等是公知的。在Kabat方案中，编号采用严格的规范，对于超出特定长度区域，采用插入氨基酸编号方式。例如，在可能非常长的重链CDR3中，插入在残基H100和H101之间编号，字母直至K(即H100，H100A......H100K，H101)。Chothia编号方法与Kabat编号方法基本一致，其区别仅为，Chothia编号方法中，轻链CDR1和重链CDR1的插入氨基酸，采用基于结构的编号方式。此编号方式将拓扑结构上处于相同位置的氨基酸使用同一编号，并按英文字母顺序对插入的氨基酸进行区分。

完整抗体可根据重链恒定区的氨基酸序列分为不同的“类”。主要的五类是IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中几类还可以分为不同的“亚类”(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。抗体不同类的重链恒定区分别称为α、β、ε、γ和μ。免疫球蛋白不同类的亚基结构和三维构型是本领域中公知的。

如本文中所使用的，术语“功能性衍生物”包括氨基酸序列变体以及天然多肽的共价衍生物(例如通过翻译后修饰、焦谷氨酸化等获得的衍生物)，条件是它们保留与天然多肽相当或更高的亲和力和生物活性。氨基酸序列变体与天然多肽氨基酸序列的差异一般在于后者中的一个或多个氨基酸的取代、缺失和/或插入。缺失变体包括天然多肽的片段和N端和/或C端截短变体。通常，氨基酸序列变体与天然多肽应具有至少70％或至少80％或至少90％的同源性。天然多肽的共价衍生物可以是通过改变抗体的翻译后加工，例如改变糖基化位点的数目或位置获得的衍生物。

非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式指包含最少量非人免疫球蛋白序列的嵌合抗体。大多数人源化抗体是人接受者免疫球蛋白的超变区残基被置换成具有所需特异性、亲和力和功能的非人(例如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类)超变区残基(供者抗体)。在某些优选实施方案中，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基也被置换成非人残基。而且，人源化抗体还可以包含受者抗体或供者抗体中没有的残基。这些修饰是为了进一步优化抗体的性能。人源化抗体一般包含至少一个，通常是两个可变区，其中所有或几乎所有超变环(hypervanableloops)与非人免疫球蛋白相对应，而FR则完全或几乎完全是人免疫球蛋白的序列。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区(Fc，通常是人免疫球蛋白Fc)的至少一部分。有关细节参见例如Jones等人，1986，Nature，321：522-525；Riechmann等人，1988，Nature，332：323-329；和Presta，1992，Curr Op Struct Bwl 2：593-596。

本发明所用的单克隆抗体可以由许多方法生产。例如，用于本发明的单克隆抗体可以通过杂交瘤方法，使用许多物种(包括小鼠、仓鼠、大鼠和人的细胞)获得(参见例如Kohler等人，1975，Nature，256：495)，或者通过重组DNA技术制得(参见例如US 4,816,567)，或者从噬菌体抗体库中分离得到(参见例如Clackson等人，1991，Nature，352：624-628；和Marks等人，1991，Journal of Molecular Biology，222：581-597)。

通常通过改变基本的核酸序列来改变氨基酸序列。编码抗体氨基酸序列变体的核酸分子可通过本领域已知的多种方法制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然发生的氨基酸序列变体的情况下)或者通过寡核苷酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变以及对抗体的早先制备的变体或非变异型式所进行的盒式诱变。最感兴趣的取代诱变部位包括高变区，但也可预期FR改变。如CN103319599A实施例2利用常规分子生物学技术对全基因合成编码曲妥珠单抗重链的DNA片段进行定点突变，将曲妥珠单抗突变体重链K30R克隆至抗体重链表达载体上，酶切和连接的操作按商业提供的试剂盒说明书进行。

如本文中所使用的，术语“药学上可接受的盐”是指保留化合物的生物有效性和性质的盐，它们对于用做药物在生物学上或在其它方面是符合需要的。在许多情况下，本发明的ADC凭借其中存在的氨基和/或羧基或类似基团来形成酸加成盐和/或碱加成盐。

药学上可接受的酸加成盐可以是与无机酸或有机酸形成的盐。所述无机酸包括，例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸等。所述有机酸包括，例如，乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸等。

药学上可接受的碱加成盐可以是与无机碱或有机碱形成的盐。所述与无机碱形成的盐包括，例如，钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐和铝盐等，特别优选铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。所述有机碱包括，例如，伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺(包括天然存在的取代的胺)，环胺，碱性离子交换树脂等。有机碱的具体实例为异丙胺、三甲胺、二乙胺、N-乙基乙胺、三丙胺和乙醇胺。

如本文中所使用的，术语“立体异构体”表示由于至少一个不对称中心形成的异构体。在具有一个或多个不对称中心的化合物中，其可产生外消旋体、外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。特定个别分子也可以几何异构体(顺式/反式)存在。除非另外说明，当所公开的化合物的命名或结构中没有明确说明其立体化学并且具有一个或多个不对称中心时，应该理解代表所述化合物的所有可能的立体异构体。

如本文中所使用的，术语“溶剂合物”表示由一个或多个溶剂分子与任一通式I的偶联物或其药学可接受的盐或异构体缔合形成的溶剂合物。术语溶剂合物包括水合物(例如半水合物、一水合物、二水合物、三水合物、四水合物以及类似的水合物)。

术语“代谢物”表示给药后可经体内氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化和/或酶解等而形成的物质。

抗体

本发明中所用的抗体为抗Trop-2抗体或者其活性片段或变体，包括双特异性抗体和抗体功能性衍生物。

在本文中，Trop-2可以与TACSTD2、M1S1、GA733-1、EGP-1互换使用，均表示天然序列的人Trop-2蛋白(UniProt：P09758)及其功能性衍生物，例如氨基酸序列变体。

本发明Trop-2的抗体的实例包括但不限于现有技术中已知的各种来源的抗体，例如可参见WO2018/036438A1中所记载的抗体，所述文献整体援引加入本文。

在本发明的部分实施方案中，所述靶向部分的重链末位Lys是容易缺失的但不影响生物活性，参见Dick,L.W.等人，Biotechnol.Bioeng.，100:1132-1143。例如，所述靶向部分为抗Trop-2的单克隆抗体，例如M1、M2或M3重链末位Lys缺失。

药物

本发明中所用的药物即细胞毒性药物。本文中术语“细胞毒性药物”是指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞破坏的物质。

在某些优选实施方案中，所述细胞毒性药物是耳抑素肽类，如耳抑素E(auristatin E，亦称为海兔毒素(dolastatin)-10衍生物)或其衍生物(例如由耳抑素E和酮酸形成的酯)。举例来说，耳抑素E可与对乙酰基苯甲酸或苯甲酰基戊酸反应，分别产生AEB(耳抑素EB)及AEVB(5-苯甲酰基戊酸耳抑素E酯)。其它典型耳抑素肽类包括AFP(耳抑素F苯二胺)、MMAF(一甲基耳抑素F)及MMAE(一甲基耳抑素E)。

示例性耳抑素肽类的合成和结构描述于US6,884,869、US 7,098,308、US 7,256,257、US 7,423,116、US 7,498,298和US 7,745,394中。其他新的耳抑素肽类的合成和结构描述于WO2013/173393中。这些文献整体援引加入本文。

在某些优选实施方案中，所述细胞毒性药物基团是美登素类。美登素(maytansine)首先由Kupchan等人从东非灌木齿叶美登木(Maytenus serrata)中分离得到，它比传统化疗剂如甲氨碟呤、柔红霉素和长春新碱的细胞毒性强100至1000倍(参见US3,896,111)。随后，发现某些优选微生物也产生美登素类，如美登醇(maytansinol)和美登醇的C-3酯(参见US 4,151,042)。也已报道了合成的美登醇C-3酯及美登醇类似物(参见Kupchan等人，1978，J.Med.Chem.，21：31-37；Higashide等人，1977，Nature，270：721-722；Kawai等人，1984，Chem.Pharm.Bull.，32：3441-3451)。美登醇C-3酯由美登醇制备得来。美登醇类似物的实例包括：在芳环上有修饰(例如，脱氯)的美登醇，在C-9、C-14处有修饰(例如，羟化的甲基)的美登醇，在C-15、C-18、C-20和/或C-4、C-5处有修饰的美登醇。

在某些优选实施方案中，所述细胞毒性药物基团是DNA拓扑异构酶抑制剂，例如拓扑异构酶I抑制剂，喜树碱、羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、SN-38、伊立替康、拓扑替康、贝洛替康、卢比替康，拓扑异构酶II抑制剂，放线菌素D、阿霉素、多柔比星、多卡米星，柔红霉素、米托蒽醌、鬼臼毒素、依托泊苷等。

在一个优选的实施方案中，本申请的抗体-药物偶联物中的药物是伊立替康活性代谢物SN-38或其活性片段。在另一个优选的实施方案中，药物是T-030或其活性片段。其中SN-38和T-030分别具有如下结构：

在一个实施方案中，本申请的抗体-药物偶联物中的抗体选自本申请疏水性降低的人源化抗体，例如以下实施例所制备的M1，M2和M3中的任一种。在一种实施方案中，本申请抗体-药物偶联物的抗体和药物分别是M1和TL033、M2和TL033，或M3和TL033。在另一种实施方案中，本申请抗体-药物偶联物的抗体和药物分别是M1和SN-38、M2和SN-38、或M3和SN-38。

在一个方面，本发明提供药物组合物，其包含本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物，以及药学上可接受的载体。

在某些优选实施方案中，所述药物组合物进一步包含一种或多种抗癌药，如化疗剂和/或抗体。在某些优选实施方案中，所述化疗剂选自烷基化试剂(例如环磷酰胺，异环磷酰胺(ifosfamide)等)，代谢拮抗剂(例如甲氨喋呤，5-氟尿嘧啶等)，抗肿瘤抗生素(例如，丝裂霉素，阿霉素等)，植物来源的抗肿瘤药(例如长春新碱，长春地辛，泰素等)，顺铂，卡铂，依托泊苷和伊立替康。在某些优选实施方案中，所述抗体选自曲妥单抗(特别是当治疗乳腺癌时)和SGN-15(特别是当治疗非小细胞肺癌时)。

本文中所用的术语“药物组合物”指组合在一起以实现特定目的的至少一种活性成分及药学上可接受的载体和/或辅料的组合。在某些优选实施方案中，药物组合物是各组分的混合物的形式，而在另一些优选实施方案中，药物组合物的各组分可以是在时间和/或空间上分开的，只要其能够共同作用以实现本发明的目的。

当药物组合物中含有两种或更多种活性成分时，所述活性成分可以作为混合物同时施用于个体，也可以分开施用于个体。当分开施用时，各活性成分可以同时或依次施用。

药学上可接受的载体的选择取决于药物组合物的剂型，例如用于口服、经鼻、皮内、皮下、肌内或静脉施用的剂型。在某些优选实施方案中，所述载体可以包括水、缓冲液、等渗盐溶液如PBS(磷酸盐缓冲液)、葡萄糖、甘露醇、右旋葡萄糖、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、纤维素、碳酸镁、0.3％甘油、透明质酸、抗坏血酸、乳酸、乙醇、聚亚烷基二醇如聚乙二醇、聚丙二醇、甘油三酯等。

此外，本发明的药物组合物还可根据需要包含各种添加剂，如润湿剂、乳化剂或缓冲剂等等。

在一个方面，本发明提供药物制剂，其包含本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐、立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物。

在某些优选实施方案中，所述药物制剂为固体制剂、半固体制剂、液体制剂或气体制剂的形式。所述药物制剂特别优选为冻干粉针剂，其具有辅料较少，稳定性好，临床使用安全性较高的优点。

在另一方面，本发明提供本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体，或者所述抗体-药物偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物、本申请的药物组合物或药物制剂在制备用于抑制癌细胞的生长、增殖或迁移，预防或治疗癌症的组合物中的用途。

在一个方面，本发明提供本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物、本申请的药物组合物或药物制剂，其用于预防或治疗癌症。

在又一方面，本发明提供一种预防或治疗癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物、本申请的药物组合物或药物制剂。

在一个方面，本发明提供本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物、本申请的药物组合物或药物制剂用于制备组合物中的用途，本申请的药物组合物或药物制剂用于抑制癌细胞的生长、增殖或迁移，预防或治疗癌症。

在某些优选实施方案中，所述组合物用于体内方法中。

在某些优选实施方案中，所述组合物用于体外方法中。

在一个方面，本发明提供本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物、本申请的药物组合物或药物制剂，其用于抑制癌细胞的生长、增殖或迁移。

在某些优选实施方案中，所述抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物用于体内方法中。

在某些优选实施方案中，所述抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物用于体外方法中。

在一个方面，本发明提供一种抑制癌细胞生长、增殖或迁移，预防或治疗癌症的方法，其包括给癌细胞施用有效量的本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物、本申请的药物组合物或药物制剂。

在某些优选实施方案中，所述方法在体内进行。

在某些优选实施方案中，所述方法在体外进行。

在一个方面，本发明提供一种抑制癌细胞生长、增殖或迁移，预防或治疗癌症的组合物，其包括本申请的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物、本申请的药物组合物或药物制剂。

在一些优选实施方案中，所述癌症为实体瘤或非实体瘤，例如选自食管癌(例如食管腺癌和食管鳞状细胞癌)、脑瘤、肺癌(例如小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌)、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经系统肿瘤(例如神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤)、前列腺癌和甲状腺癌。

本申请提供了以下实施例，以帮助理解本发明，在所附权利要求中给出了本发明的真正的范围。应当理解，在不背离本发明精神的情况下，可以对给出的实施方案或实施例进行修改。

实施例

实施例1:抗人TROP-2人源化抗体疏水性改造的序列设计

通过抗体的计算机模型寻找其表面疏水性氨基酸，再将这些氨基酸突变为亲水氨基酸。抗体疏水性改造涉及以下步骤：根据抗体Sacituzumab的氨基酸序列，通过计算机模拟抗体模型；利用算法(Connolly ML.Solvent-accessible surfaces of proteins andnucleic acids.[J].Science,1983,221(4612):709-713.)编写的计算机程序，获得抗体暴露在表面的氨基酸的序号；在这些氨基酸中，将其中疏水性较强的氨基酸(氨基酸的亲水与疏水定义参照Kyte J,Doolittle R F.A simple method for displaying thehydropathic character of a protein[J].Journal of Molecular Biology,1982,157(1):105-132.)突变为亲水氨基酸。

根据以上方法，分别获得了暴露于抗体分子表面疏水性氨基酸的序号以及候选的亲水性氨基酸。

表1.各位点的候选亲水氨基酸

*氨基酸之间的“/”表示“或”的意思。

在以上候选亲水氨基酸，优先选用人源抗体中亲水出现频率的氨基酸进行突变设计。

表2.各位点亲水氨基酸的频率

氨基酸编号	人源抗体中亲水氨基酸的出现频率前三位*
		重链氨基酸53	D/S/N
重链氨基酸54	S/D/N
		重链氨基酸97	S/R/D
重链氨基酸100A	S/D/R
		重链氨基酸100B	S/D/R
轻链氨基酸31	N/S/K
		轻链氨基酸53	N/S/K
轻链氨基酸92	D/N/S
		轻链氨基酸93	S/N/D

*氨基酸之间的“/”表示“或”的意思。

突变位点的氨基酸应该同时考虑其分子的大小(相对分子质量)，以保证不影响抗体的原有结合形式，同时需要参照氨基酸在此位点的出现频率以最大限度减少非人源氨基酸的引入，另外，需要考虑最大限度提升氨基酸的亲水性。

根据大量的计算和筛选工作。分别获得抗体M1、M2、及M3。

表3.抗体M1、M2、及M3的CDR序列

氨基酸在各区域或结构域的分配可遵循Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；Chothia等人(1989)Nature 342:878-883的定义。

1.疏水性改造抗体M1的重链和轻链序列

M1重链可变区的氨基酸序列：(121aa)

QVQLQQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQGLKWMGWINTDSGEPTYTDDFKGRFAFSLDTSVSTAYLQISSLKADDTAVYFCARGGFGSSYWYFDVWGQGSLVTVSS(SEQ ID NO:11)

M1轻链可变区的氨基酸序列：(107aa)

DIQLTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQHYSTPLTFGAGTKVEIK(SEQ ID NO:12)

2.疏水性改造抗体M2的重链和轻链序列

M2重链可变区的氨基酸序列：(121aa)

QVQLQQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQGLKWMGWINTDSGEPTYTDDFKGRFAFSLDTSVSTAYLQISSLKADDTAVYFCARGGFGSSYWYFDVWGQGSLVTVSS(SEQ ID NO:13)

M2轻链可变区的氨基酸序列：(107aa)

DIQLTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSSAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQHYITPLTFGAGTKVEIK(SEQ ID NO:14)

3.疏水性改造抗体M3的重链和轻链序列

M3重链可变区的氨基酸序列：(121aa)

QVQLQQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQGLKWMGWINTDSGEPTYTDDFKGRFAFSLDTSVSTAYLQISSLKADDTAVYFCARGGFGSSYWYFDVWGQGSLVTVSS(SEQ ID NO:15)

M3轻链可变区的氨基酸序列：(107aa)

DIQLTQSPSSLSASVGDRVSITCKASQDVSIAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQHYSTPLTFGAGTKVEIK(SEQ ID NO:16)

M1，M2，M3轻链恒定区序列：(107aa)

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:9)

M1，M2，M3重链链恒定区序列：(330aa)

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:10)

实施例2、疏水性改造TROP-2抗体表达

将带有改造的抗体重链和轻链的序列构建至PTT5载体(购自优宝生物)上作为表达抗体的质粒。

将CHO-S细胞以3×10⁶细胞/mL培养于CHOgro表达培养基中，第二天用PEImax(购自Polysciences Inc)转染质粒(轻重链各0.6μg)，后续培养时加入补料，培养至细胞活率小于70％时离心收集上清。

利用protein A磁珠纯化上清中的蛋白。用缓冲液预平衡磁珠后加入收集的上清中，摇晃孵育1小时后，用磁力架吸附带有目的蛋白的磁珠，弃上清，用缓冲液清洗3次后，用洗脱液洗脱目的蛋白，加入Tris-HCl溶液中和pH值。用NanoDropOne测试纯化后的蛋白浓度。三个候选抗体均能正常表达，M1、M2、M3表达量分别为22.8mg/L,24.5mg/L,26.7mg/L。

实施例3、疏水性改造TROP-2抗体亲和力测定

为了检测疏水改造抗体的活性是否发生改变，采用ELISA方法进行检测。

具体实验操作如下：用PBS缓冲液将Trop-2-mFc(四川科伦博泰医药股份有限公司自产)稀释至1μg/ml，以100μl/孔的体积加于96孔板中，4℃放置16-20h。弃去包被溶液，加入PBS/2％BSA溶液，37℃封闭2h；移去封闭液，PBST(pH7.4，含0.05％吐温20的PBS)缓冲液洗板3次，用PBS/2％BSA溶液稀释纯化后的疏水性改造TROP-2抗体M1、M2、M3以及Sacituzumab抗体，加入一系列浓度梯度的待测抗体，100μl/孔，37℃孵育2h；移去反应体系，PBST洗板3次后，用PBS/2％BSA溶液稀释HRP-anti human IgG(H+L)(购自JacksonImmunoResearch公司)，100μl/孔，37℃孵育1h；加入100μl/孔TMB溶液至对应的孔中，室温显色10min；加入50μl 1M H₂SO₄溶液终止显色，酶标仪450nm读取吸光度。结果表4所示，疏水性改造TROP-2抗体、Sacituzumab抗体与配体Trop-2-mFc的亲和力相当，表明这3个抗体具有与Sacituzumab同等的亲和力。

表4.TROP-2抗体与Trop-2-mFc的结合能力的测定结果

抗体名称	EC<sub>50</sub>(nM)
		M1	9.912
M2	13.88
		M3	10.82
Sacituzumab	13.09

实施例4：使用HPLC比较疏水性改造TROP-2抗体的疏水性差异

为了解疏水性改造抗体其疏水性是否得到改善，我们采用HPLC的方式对这些抗体的疏水性进行了检测。

具体实验操作如下：疏水性比较采用Waters Alliance e2695HPLC结合TOSOHTskgel Buty-NPR(2.5)色谱柱进行分析。为比较Sacituzumab抗体、M1、M2、M3四个抗体疏水性差异，将4个抗体用1.5M(NH4)₂SO₄进行等体积稀释后进行分析。流动相A：1.5M(NH4)₂SO₄；流动相B：25mM Na₂HPO₄(pH＝7.0)+25％IPA。洗脱梯度如表5，抗体性质越疏水其出峰时间越晚。

表5.HPLC洗脱条件

由结果可知：Sacituzumab抗体、M1、M2、M3四个抗体的保留时间(min)分别是17.52，13.59，13.15，12.99，所以4个抗体疏水性大小顺序为：Sacituzumab抗体>M1>M2>M3，故表明疏水性改造成功。

实施例5：TL033的制备

TL033全称为：4-((S)-2-(4-氨基丁基)-35-(4-((6-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-酰胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-4,8-二氧代-6,12,15,18,21,24,27,30,33-九氧杂-3,9-二氮杂三十五烷酰胺基)苄基((S)-4-乙基-11-(2-(N-异丙基甲基磺酰胺基)乙基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-4-基)碳酸酯

按照以下步骤制备TL033

步骤一：6-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-基)-N-(丙-2-炔-1-基)己-5-炔酰胺的合成

25℃下将丙-2-炔-1-胺(189mg,3.4mmol)和化合物3-4(800mg,2.83mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，依次加入N,N-二异丙基乙胺(738mg,5.67mmol)，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(1.63g,4.25mmol),搅拌反应2h。反应液减压浓缩，残余物经快速硅胶柱纯化(乙酸乙酯/石油醚＝3/1)得标题化合物，700mg。ESI-MS(m/z):306.1[M+H]⁺。

步骤二：4-((S)-35-叠氮基-2-(4-(((4-甲氧基苯基)二苯甲基)氨基)丁基)-4,8-二氧代-6,12,15,18,21,24,27,30,33-九氧杂-3,9-二氮杂三十五烷酰氨基)苄基((S)-4-乙基-11-(2-(N-异丙基甲磺酰胺基)乙基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-2H-吡喃并[2,3-b]-1H-吡喃并[3',4'：6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-4-基)碳酸酯的合成

25℃氮气保护下，将T030(250mg,0.49mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，降温至0℃，加入4-二甲氨基吡啶(478mg,3.91mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液，然后缓慢滴加三光气(72mg,0.24mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液，加毕，0℃搅拌反应20min，反应液用氮气吹20min。加入(S)-2-(32-叠氮基-5-氧代-3,9,12,15,18,21,24,27,30-九氧杂-6-氮杂三联乙酰胺基)-N-(4-(羟甲基)苯基)-6(((4-甲氧基苯基)二苯甲基)氨基)乙酰胺(518mg,0.49mmol)的二氯甲烷(7mL)溶液，加毕，0℃搅拌反应1h。反应液减压浓缩，残余物经制备高效液相色谱纯化得标题化合物，500mg。ESI-MS(m/z):1597.5[M+H]⁺。

步骤三：(S)-4-乙基-11-(2-(N-异丙基甲磺酰胺基)乙基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-4-基(4-((S)-2-(4-(((4-甲氧基苯基)二苯基甲基)氨基)丁基)-35-(4-((6-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-酰胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-4,8-二氧代-6,12,15,18,21,24,27,30,33-壬氧基-3,9-二氮杂三十五烷酰胺基)苄基)碳酸酯的合成

室温下，将化合物33-1(14mg，0.05mmol)溶于二甲基亚砜和水(2.0mL：0.5mL)中，加入溴化亚铜(11mg，0.08mmol)，搅拌反应1h。经制备高效液相色谱纯化，得标题化合物，30mg。ESI-MS(m/z):815.9[(M-273)/2+H]⁺。

步骤四：4-((S)-2-(4-氨基丁基)-35-(4-((6-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-基)己-5-酰胺基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-4,8-二氧代-6,12,15,18,21,24,27,30,33-九氧杂-3,9-二氮杂三十五烷酰胺基)苄基((S)-4-乙基-11-(2-(N-异丙基甲基磺酰胺基)乙基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-4-基)碳酸酯(化合物TL033)的合成

将化合物33-2(30mg，0.02mmol)溶于二氯甲烷(1.0mL)反应液中加入三氟乙酸(0.2mL)，室温反应30min。经制备高效液相色谱纯化，得标题化合物的三氟乙酸盐，20.0mg。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.18(s,1H),9.10(s,2H),8.38(t,J＝5.56Hz,1H),8.32(d,J＝8.40Hz,1H),8.22–8.20(m,2H),8.09(t,J＝5.68Hz,1H),7.91–7.87(m,2H),7.82–7.78(m,1H)，7.69(brs,3H),7.61(d,J＝8.56Hz,2H),7.32(d,J＝8.56Hz,2H),7.06(s,1H),5.56(d,J＝16.96Hz,1H),5.51(d,J＝16.96Hz,1H),5.47(d,J＝19.28Hz,1H),5.42(d,J＝19.28Hz,1H),5.14(d,J＝12.20Hz,1H),5.07(d,J＝12.16Hz,1H),4.48(t,J＝5.24Hz,2H),4.46–4.43(m,1H),4.29(d,J＝5.60Hz,2H),4.08–3.95(m,5H),3.79(t,J＝5.28Hz,2H),3.51–3.43(m,32H),3.40(s,3H),3.39–3.35(m,2H),3.30–3.26(m,2H),3.00(s,3H),2.82–2.74(m,2H),2.56(t,J＝7.08Hz,2H),2.29(t,J＝7.36Hz,2H),2.23–2.13(m,2H),1.82(p,J＝7.24Hz,2H),1.78–1.63(m,2H),1.61–1.49(m,2H),1.42–1.27(m,2H),1.15(d,J＝6.80Hz,3H),1.13(d,J＝6.76Hz,3H),0.90(t,J＝7.32Hz,3H).ESI-MS(m/z):816.0[M/2+H]⁺。[α]_D ²⁰-19.55°(c＝1.000g/100mL,CH3CN)。

实施例6.抗体-药物偶联物的制备

6.1BT001021的制备(Sacituzumab和TL033)

取0.3mLSacituzumab抗体(抗Trop-2，33.5mg/mL)，用0.25mL含有20mM PB、150mMNaCl及20mM依地酸钠的溶液(pH7.6)稀释，后加入0.45mL含有20mM PB、150mM NaCl的溶液(pH 7.6)混匀，以1M Na₂HPO₄溶液调pH至7.4，加入10mM TCEP(三(2-羧乙基)膦)溶液混匀，室温放置30min。向上述溶液体系加入10倍物质的量的溶解在二甲基亚砜中的TL033的三氟乙酸盐，混匀，室温静置2h，完毕后加入6.1μl 100mM半胱氨酸终止反应。最后采用G-25凝胶柱将缓冲液置换为pH6.5的PBS缓冲溶液，得到TL033与抗体Sacituzumab偶联的产物，命名为BT001021。

6.2BT001035的制备(M3和TL033)

取0.3mLM3抗体(抗Trop-2，33.5mg/mL)，用0.25mL含有20mM PB、150mM NaCl及20mM依地酸钠的溶液(pH7.6)稀释，后加入0.45mL 20mM PB、150mM NaCl的溶液(pH 7.6)混匀，以1M Na₂HPO₄溶液调pH至7.4，加入10mM TCEP(三(2-羧乙基)膦)溶液混匀，室温放置30min。向上述溶液体系加入10倍物质的量的溶解在二甲基亚砜中的TL033的三氟乙酸盐，混匀，室温静置2h，完毕后加入6.1μl 100mM半胱氨酸终止反应。最后采用G-25凝胶柱将缓冲液置换为pH6.5的PBS缓冲溶液。得到TL033与抗体M3偶联的产物，命名为BT001035。

6.3BT001039的制备(M3和SN-38)

化合物I的制备可以为本领域已知的任何方法，作为示例本实施例参照WO2015/012904A2的FIG.1及其实施例1的方法制备如下结构的化合物I。

取0.3mLM3抗体(抗Trop-2，33.5mg/mL)，用0.25mL含有20mM PB、150mMNaCl及20mM依地酸钠的溶液(pH7.6)稀释，后加入0.45mL含有20mM PB、150mM NaCl的溶液(pH 7.6)混匀，以1M Na₂HPO₄溶液调pH至7.4，加入10mM TCEP(三(2-羧乙基)膦)溶液混匀，室温放置30min。向上述溶液体系加入10倍物质的量的溶解在二甲基亚砜中的化合物I，混匀，室温静置2h，完毕后加入6.1μl 100mM半胱氨酸终止反应。最后采用G-25凝胶柱将缓冲液置换为pH6.5的PBS缓冲溶液，得到化合物I与抗体M3偶联的产物，命名为BT001039。

6.4BT001033的制备(M1和TL033)

采用与6.1类似的方法，将Sacituzumab替换为M1，得到TL033与抗体M1偶联的产物，命名为BT001033。

6.5BT001037的制备(M1和SN-38)

采用与6.3类似的方法，将抗体M3替换为M1，得到化合物I与抗体M1偶联的产物，命名为BT001037。

6.6BT001034的制备(M2和TL033)

采用与6.1类似的方法，将Sacituzumab替换为M2，得到TL033与抗体M2偶联的产物，命名为BT001034。

6.7BT001038的制备(M2和SN-38)

采用与6.3类似的方法，将抗体M3替换为M2，得到化合物I与抗体M2偶联的产物，命名为BT001038。

实施例7.Trop-2抗体-药物偶联物体内药效验证

本实施例以BT001021和BT001035为示例，评价本发明抗体药物偶联物对皮下移植人肿瘤细胞构建荷瘤鼠模型增殖抑制的作用。具体而言，在本发明中，皮下移植人非小细胞肺癌细胞株HCC827构建荷瘤鼠模型，待肿瘤体积生长至100mm³左右后随机分组，分组后静脉给予BT001021和BT001035，每周给药2次，共6次，同时测量肿瘤体积和动物体重变化，计算BT001021和BT001035对荷瘤小鼠的药效(抑瘤疗效)。

实验方法：

用含10％胎牛血清的1640培养液，在37℃，5％CO₂的条件下培养HCC827细胞。收集指数生长期的HCC827细胞，PBS重悬至适合浓度，接种于雌性Balb/c-nu小鼠皮下建立肺癌移植瘤模型。待肿瘤平均体积约80mm³时，根据肿瘤大小随机分组，分为生理盐水组、阳性药IMMU-132(10mg/kg,IV,BIW×3W，参照WO2015/012904A2实施例2制备，DAR为5.4)组、BT001021(10mg/kg,IV,BIW×3W)、BT001035(10mg/kg,IV,BIW×3W)组，分组后尾静脉注射对应药物，每周给药2次，共6次。给药后观察并定期测量小鼠肿瘤体积及体重，具体结果见表6，图1-图2。

实验结论：

本实施例采用皮下移植人非小细胞肺癌细胞株HCC827，构建人非小细胞肺癌皮下移植瘤模型，评价BT001021、BT001035给药在HCC827人非小细胞肺癌荷瘤鼠模型中的药效。

由实验结果可知BT001021(10mg/kg,IV,BIW×3W)、BT001035(10mg/kg,IV,BIW×3W)可以显著抑制HCC827非小细胞肺癌移植瘤模型小鼠肿瘤生长，且给药终点出现肿瘤消退，抗肿瘤活性优于阳性组IMMU-132(10mg/kg,IV,BIW×3W)，所有治疗组在观察期内均无动物死亡及显著动物体重降低，没有表现出明显的药物毒性，治疗期间小鼠对各抗体-药物偶联物耐受性良好。

表6.肺癌HCC827模型

从表6和图1可以看出，BT001021和BT001035在评价周期内均显著抑制肿瘤生长的活性，相同剂量下，其对肿瘤的抑制活性显著优于IMMU-132。给药期间，各组动物无明显体重下降和明显的药物毒性，以上结果表明BT001021和BT001035具有优良的治疗Trop2阳性实体瘤活性。相比IMMU-132在临床上BT001021和BT001035有望使更多患者获益。

SEQUENCE LISTING

<110> 四川科伦博泰生物医药股份有限公司

<120> 抗体、偶联物及其制备方法和用途

<160> 16

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1、M2和M3抗体重链CDR1

<400> 1

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

1 5

<210> 2

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1、M2和M3抗体重链CDR2

<400> 2

Asn Thr Asp Ser Gly Glu

1 5

<210> 3

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1、M2和M3抗体重链CDR3

<400> 3

Gly Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1和M2抗体轻链CDR1

<400> 4

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ser Ala Val Ala

1 5 10

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1、M2和M3抗体轻链CDR2

<400> 5

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1和M3抗体轻链CDR3

<400> 6

Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 7

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M2抗体轻链CDR3

<400> 7

Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 8

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3抗体轻链CDR1

<400> 8

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Ala Val Ala

1 5 10

<210> 9

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1、M2和M3抗体轻链恒定区

<400> 9

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 10

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1、M2和M3抗体重链恒定区

<400> 10

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 11

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1抗体重链可变区

<400> 11

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 12

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M1抗体轻链可变区

<400> 12

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ser Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 13

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M2抗体重链可变区

<400> 13

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 14

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M2抗体轻链可变区

<400> 14

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ser Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ile Thr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 15

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3抗体重链可变区

<400> 15

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Phe Gly Ser Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 16

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3抗体轻链可变区

<400> 16

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

Claims (23)

1.结合Trop-2的抗体，其中根据Chothia编号，所述抗体CDR相比Sacituzumab抗体CDR包含以下位点的氨基酸的一个或多个突变：重链氨基酸第53、54、97、100A和100B位，轻链氨基酸第31、53、92和93位，优选地，所述抗体为人源化抗体，具有相比Sacituzumab抗体降低的疏水性。

2.根据权利要求1的抗体，其为人源化抗体，其中根据Chothia编号，所述人源化抗体相比Sacituzumab抗体包含以下位点的氨基酸的一个或多个突变：重链氨基酸第53、54、97、100A和100B位，轻链氨基酸第31、53、92和93位，且具有相比Sacituzumab抗体降低的疏水性。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的抗体，其中所述位点的氨基酸突变为亲水性氨基酸。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中所述位点的氨基酸突变为D、N、R、E、Q、H、K或S。

5.根据权利要求1-4中任一项的抗体，其中所述一个或多个突变包括：所述重链氨基酸第53位突变为D、S或N，第54位突变为S、D或N，第97位突变为S、R或D，第100A位突变为S、D或R，第100B位突变为S、D或R，和/或所述轻链氨基酸第31位突变为N、S或K，第53位突变为N、S或K，第92位突变为D、N或S，第93位突变为S、N或D；

优选地，所述重链氨基酸第53位突变为D，第54位突变为S；

优选地，所述重链氨基酸第53位突变为D，第54位突变为S，所述轻链氨基酸第31位突变为S或第93位突变为S；

优选地，所述重链氨基酸第53位突变为D，第54位突变为S，所述轻链氨基酸第31位突变为S，第93位突变为S。

6.根据权利要求1-5中任一项的抗体，其包含以下的重链CDR和轻链CDR:

1)重链CDR1，以SEQ ID NO:1表示的GYTFTNY；

2)重链CDR2，以SEQ ID NO:2表示的NTDSGE；

3)重链CDR3，以SEQ ID NO:3表示的GGFGSSYWYFDV；

4)轻链CDR1，以SEQ ID NO:4表示的KASQDVSSAVA；

5)轻链CDR2，以SEQ ID NO:5表示的SASYRYT；

6)轻链CDR3，以SEQ ID NO:6表示的QQHYSTPLT。

7.根据权利要求1-5中任一项的抗体，其包含以下的重链CDR和轻链CDR:

1)重链CDR1，以SEQ ID NO:1表示的GYTFTNY；

2)重链CDR2，以SEQ ID NO:2表示的NTDSGE；

3)重链CDR3，以SEQ ID NO:3表示的GGFGSSYWYFDV；

4)轻链CDR1，以SEQ ID NO:4表示的KASQDVSSAVA；

5)轻链CDR2，以SEQ ID NO:5表示的SASYRYT；

6)轻链CDR3，以SEQ ID NO:7表示的QQHYITPLT。

8.根据权利要求1-5中任一项的抗体，其包含以下的重链CDR和轻链CDR:

1)重链CDR1，以SEQ ID NO:1表示的GYTFTNY；

2)重链CDR2，以SEQ ID NO:2表示的NTDSGE；

3)重链CDR3，以SEQ ID NO:3表示的GGFGSSYWYFDV；

4)轻链CDR1，以SEQ ID NO:8表示的KASQDVSIAVA；

5)轻链CDR2，以SEQ ID NO:5表示的SASYRYT；

6)轻链CDR3，以SEQ ID NO:6表示的QQHYSTPLT。

9.根据权利要求1-6中任一项的抗体，其具有SEQ ID NO:11所示的重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO:12所示的轻链可变区的氨基酸序列。

10.根据权利要求1-5、7中任一项的抗体，其具有SEQ ID NO:13所示的重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO:14所示的轻链可变区的氨基酸序列。

11.根据权利要求1-5、8中任一项的抗体，其具有SEQ ID NO:15所示的重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO:16所示的轻链可变区的氨基酸序列。

12.根据权利要求1-11中任一项的抗体，其具有SEQ ID NO:9所示的轻链恒定区的氨基酸序列和SEQ ID NO:10所示的重链恒定区的氨基酸序列。

13.抗体-药物偶联物，其药学上可接受的盐或立体异构体，或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物，其中所述抗体为权利要求1-12中任一项的抗体。

14.根据权利要求13中的抗体-药物偶联物，其中所述药物为细胞毒性药物。

15.根据权利要求13-14中任一项的抗体-药物偶联物，其中所述药物为SN-38、T-030或其活性片段，其中SN-38和T-030分别具有如下结构：

优选的所述活性片段分别为

16.根据权利要求15的抗体-药物偶联物，所述药物SN-38或T-030通过连接片段偶联至权利要求1-12任一项所述的抗体上，偶联前的药物及连接片段分别具有如下的结构：

17.根据权利要求13-16中任一项的抗体-药物偶联物，其中所述抗体-药物偶联物具有如下的结构：

其中Ab为权利要求1-12中任一项的抗体，g和γ选自1-10之间的整数或小数；优选的，g和γ选自5-8之间的整数或小数。

18.根据权利要求17的抗体-药物偶联物，其中所述抗体为权利要求6-11中任一项所述的抗体；优选地，所述抗体为权利要求8或11所述的抗体。

19.药物组合物，其包含权利要求13-18中任一项的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物，以及药学上可接受的载体。

20.药物制剂，其包含根据权利要求13-18中任一项的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐、立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物；优选地，其为固体制剂、半固体制剂、液体制剂或气体制剂的形式，如冻干粉针剂。

21.根据权利要求13-18中任一项的抗体-药物偶联物或者其药学上可接受的盐或立体异构体或者所述偶联物、盐或立体异构体的溶剂合物、权利要求19的药物组合物或权利要求20的药物制剂在制备用于抑制癌细胞生长、增殖或迁移，预防或治疗癌症的组合物中的用途。

22.根据权利要求21所述的用途，其中所述癌症为表达Trop-2的癌症，优选为Trop-2高表达的癌症。

23.根据权利要求21或22任一所述的用途，其中所述癌症选自为实体瘤或非实体瘤，例如选自食管癌(例如食管腺癌和食管鳞状细胞癌)、脑瘤、肺癌(例如小细胞性肺癌和非小细胞性肺癌)、鳞状上皮细胞癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、腹膜癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、非霍奇金淋巴瘤、中枢神经系统肿瘤(例如神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、胶质瘤或肉瘤)、前列腺癌和甲状腺癌。

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