CN107029244B - 抗her2抗体-药物偶联物及其应用 - Google Patents

抗her2抗体-药物偶联物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了抗HER2抗体‑药物偶联物及其应用。具体地，本发明提供了一种抗HER2抗体‑药物偶联物，实验结果表明，所述抗体‑药物偶联物具有显著的抗肿瘤效果。本发明还公开了所述抗HER2抗体‑药物偶联物的制药用途，及其在抑制或预防肿瘤中的作用。

Description

抗HER2抗体-药物偶联物及其应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体地说，本发明涉及抗HER2抗体-药物偶联物。
背景技术
受体酪氨酸激酶的HER家族是细胞生长、分化和生存的重要介体。该受体家族包括四个不同的成员：HER1(EGFR或ErbB1)、HER2(ErbB2或p185neu)、HER3(ErbB3)和HER4(ErbB4或tyro2)。
除HER2本身外，特异性配体结合到EGFR、HER3和HER4的外功能区都会导致同二聚体或异二聚体激酶活性的复合物形成，在此复合物中HER2是首选的一部分。尽管HER2不能直接与HER激活性配体相互作用，但很确定的是，它的激酶能够使包含HER2的异二聚体传递信号，并且增加配体结合至EGFR或HER3的亲和性。HER2二聚体的形成触发了一系列细胞中的进程，最终导致细胞运动、细胞生存率和增殖、以及抗凋亡活性的增加。
在癌症靶向治疗的发展过程中，一个成功的策略是利用单克隆抗体(monoclonalantibodies，mAb)定位肿瘤细胞表面的抗原决定簇，从而靶向杀死癌细胞。按此原理，可以利用抗体来靶向肿瘤细胞表面的HER2抗原来杀死癌细胞。曲妥珠单抗(Trastuzumab，Herceptin)是一种人源化的抗HER2单克隆抗体，结合HER2细胞表面区域的区域Ⅳ，与化疗药物联合用于治疗HER2阳性的乳腺癌。然而，临床上包含曲妥珠单抗的治疗方法非常受限，尤其是当HER2阳性的癌细胞对曲妥珠单抗应答失效或者应答较差时。这就驱使人们开始寻找新的针对HER2阳性恶性肿瘤的治疗方式。
一个新的针对癌细胞抗原的特异性治疗方法是利用抗体作为载体，将毒性小分子携带进入癌细胞，然后利用解离下来的小分子来杀死癌细胞。T-DM1(Trastuzumab-MCC-DM1)是首个用于实体瘤的抗体-药物偶联物(Antibody-drug conjugates，ADC)，也是针对HER2阳性转移性乳腺癌的新治疗方法。T-DM1是由具有抗微管蛋白形成的美登醇(maytansinoid，DM1)通过一小段连接子MCC偶联至曲妥珠单抗上的。T-DM1能够抑制对曲妥珠单抗敏感以及不敏感的HER2阳性肿瘤，并在临床前的毒理实验中表现出较好的安全性。
除曲妥珠单抗外，帕妥珠单抗(Pertuzumab，Perjeta)也是一种人源化的HER2特异性的单克隆抗体。与曲妥珠单抗不同的是，帕妥珠单抗结合的是HER2细胞表面区域的区域Ⅱ，从而阻止HER2与HER家族的其它成员结合。帕妥珠单抗作为单独使用的药物以及与化疗、曲妥珠单抗和T-DM1联用都在临床上表现出了抗卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌和胃癌的作用。
以传统抗体二硫键还原或者赖氨酸侧链胺基将药物模块连接至抗体一般产生不均一的抗体药物混合物，因为药物模块会连接到抗体上的许多位点。例如，上述 的T-DM1，一个抗体通常连接0-8个数量不等的药物模块。此外，即使相同偶联数量的偶联物，各亚组分也可能是不均一的混合物，其中药物模块连接至抗体上的各种位点。分析和制备方法可能难以分离和表征由偶联反应产生的不均一性的抗体药物偶联混合物。
本领域技术人员致力于开发新的、更有效的抗体药物偶联物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗HER2抗体-药物偶联物及其应用。
本发明的第一方面，提供了一种抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，所述抗体-药物偶联物结构如式I所示：
Ab－(L-D)n，I
其中，Ab为所述抗体；
L为无或连接所述抗体和所述药物的接头；
D为抑制肿瘤细胞的小分子药物；
n为偶联于所述抗体的所述药物的数量
“－”为键或接头。
在另一优选例中，所述抗体-药物偶联物的轻链恒定区偶联有至少1个药物分子(优选为每条轻链恒定区偶联1个药物分子)，并且所述药物分子连接于所述轻链恒定区的赖氨酸位点。
在另一优选例中，所述抗体的轻链恒定区包含EKH基序,并且所述所述药物分子连接于所述基序的赖氨酸(K)位点。
在另一优选例中，所述抗体的轻链恒定区包含YEKHK基序,并且所述药物分子连接于所述基序的第一个赖氨酸(K)位点。
在另一优选例中，所述抗体的轻链恒定区包含ADYEKHK基序,并且所述药物分子连接于所述基序的第一个赖氨酸(K)位点。
在另一优选例中，所述药物分子为抑制肿瘤细胞的小分子药物。
在另一优选例中，n为所述抗体-药物偶联物中的药物平均偶联数量，较佳地n为1～4，优选为1.5～3.5，更优选为1.8～2。
在另一优选例中，所述抗体选自：单克隆抗体、抗体片段(包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段)、双抗体、单域抗体、嵌合抗体、人源化抗体、和单链抗体。
在另一优选例中，所述抗体为抗HER2抗体。
在另一优选例中，所述抗体为帕妥株单抗。
在另一优选例中，所述抗体的重链可变区序列选自SEQ ID NO.:30-57。
在另一优选例中，所述抗体的重链恒定区序列如SEQ ID NO.:58所示。
在另一优选例中，所述抗体的轻链可变区序列选自SEQ ID NO.:1-28。
在另一优选例中，所述抗体的轻链恒定区序列如SEQ ID NO.:29所示。
在另一优选例中，所述药物为海兔毒素或其衍生物。
在另一优选例中，所述轻链恒定区包括SEQ ID NO.:29所示的氨基酸序列，并且所述药物分子连接于SEQ ID NO.:29所示氨基酸序列的第81位赖氨酸位点。
在另一优选例中，D的结构如式III所示，
Figure BDA0000922779150000031
式II中，Y为O,或NH，
波浪线表示与L的连接位置，
X为CH2N3或
Figure BDA0000922779150000032
在另一优选例中，所述抗体-药物偶联物结构如式III所示：
Figure BDA0000922779150000033
式III中，所述L1-L2的结构选自下组的L-1、L-2、和L-3：
Figure BDA0000922779150000034
其中，L21、L22、L23为独立地选自下组的接头-(CH2)n-,-(CH2CH2O)n-,Val-Cit,Ala-Ala-Asn,或其组合；
Ab、D、n如上所述；
波浪线表示与抗体的连接位置。
在另一优选例中，所述抗体-药物偶联物选自下组：
ZV0201、ZV0202、ZV0203、ZV0204、ZV0205、ZV0230、ZV0207、ZV0231、ZV0232
其中，偶联物ZV0203的结构如下：
Figure BDA0000922779150000035
偶联物ZV0230的结构如下：
Figure BDA0000922779150000036
偶联物ZV0201的结构如下：
Figure BDA0000922779150000041
偶联物ZV0207的结构如下：
Figure BDA0000922779150000042
偶联物ZV0231的结构如下：
Figure BDA0000922779150000043
偶联物ZV0232的结构如下：
Figure BDA0000922779150000044
偶联物ZV0202的结构如下：
Figure BDA0000922779150000045
偶联物ZV0204的结构如下：
Figure BDA0000922779150000051
偶联物ZV0205的结构如下：
Figure BDA0000922779150000052
本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本发明第一方面所述的抗体-药物偶联物，以及药学上可接受的载体。
本发明的第三方面，提供了如本发明第一方面所述的抗体-药物偶联物的用途，用于制备抗肿瘤的药物。
在另一优选例中，所述肿瘤包括乳腺癌、胃癌、卵巢癌、肺癌等癌种。
本发明的第四方面，提供了一种治疗或预防肿瘤的方法，所述方法包括步骤给需要的对象施用本发明第一方面所述的抗体-药物偶联物；
或本发明第二方面所述的药物组合物。
在另一优选例中，所述对象为哺乳动物，包括人。
本发明的第五方面，提供了一种制备本发明第一方面所述的抗体-药物偶联物的方法，所述方法包括步骤：
配置反应体系，所述反应体系中包括抗体和游离的药物分子，然后进行偶联反应，从而制得所述抗体-药物偶联物，
其中，所述药物分子包括接头。
在另一优选例中，所述反应体系的pH为6.5～8.0；优选地pH为6.8～7.8；更优选地pH为7.0～7.5，如7.1、7.2、7.3、7.4。
在另一优选例中，所述药物分子连接于所述抗体的轻链恒定区的赖氨酸位点。
在另一优选例中，反应时间为3h-16h。
在另一优选例中，所述抗体与药物分子的摩尔比为1-2：3-20；优选为1：6-10。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施 例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了本发明的抗体药物偶联物的分析结果。图1A显示了未偶联的抗体的HIC分析结果；图1B显示了ZV0201的HIC分析结果；图1C显示了ZV0223的HIC分析结果，图1D显示了ZV0201的肽图分析结果。
图2显示了亲和性检测结果。
图3显示了细胞周期抑制实验的结果。
图4显示了ADC治疗小鼠体内N87胃癌移植瘤的疗效。
图5显示了ADC治疗小鼠体内OE19胃癌移植瘤的疗效。
图6显示了ADC治疗小鼠体内SKOV-3卵巢癌移植瘤的疗效。
图7显示了ADC治疗小鼠体内BT474乳腺癌移植瘤的疗效。
图8显示了ADC治疗小鼠体内Calu-3肺癌移植瘤的疗效。
图9显示了本发明的ADC对肿瘤体积的抑制效果。
具体实施方式
本发明人通过广泛而深入的研究，获得一种抗HER2抗体-药物偶联物，实验结果表明，所述抗体-药物偶联物具有显著的抗肿瘤效果。本发明还提供了所述抗HER2抗体-药物偶联物的制药用途，及其在抑制或预防肿瘤中的作用。
本发明一般涉及抗体-药物偶联物，更具体的说，本发明涉及具有治疗应用的抗体药物偶联物。可以通过连接子将抗HER2抗体与化疗药或者毒素偶联。本发明还涉及使用抗HER2抗体-药物偶联物治疗哺乳动物细胞或相关病理性情况的方法。
本发明采用接头(L)部分，使之能够偶联至抗体恒定区的特定赖氨酸位置，或者偶联至二硫键还原的半胱氨酸上，经过一步疏水纯化(HIC)获得定点定量偶联的抗体偶联药物。
抗体(Ab)通过二硫键还原的半胱氨酸或者恒定区的一个活性赖氨酸经由接头(L，包括L1或者L2)偶联药物模块(D)以形成抗体-药物偶联物：Ab-(L-D)n，其中n为1-4。本发明公开了抗体药物偶联物的偶联方法和治疗用途。
在描述本发明之前，应当理解本发明不限于所述的具体方法和实验条件，因为这类方法和条件可以变动。还应当理解本文所用的术语其目的仅在于描述具体实施方案，并且不意图是限制性的，本发明的范围将仅由所附的权利要求书限制。
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
虽然在本发明的实施或测试中可以使用与本发明中所述相似或等价的任何方法和材料，本文在此处例举优选的方法和材料。
本发明提供了两类偶联方法，将毒素小分子通过特定连接物偶联到抗体 上，在不改变抗体亲和性的基础上大幅提高抗体对肿瘤细胞的杀伤力。
如本文所用，术语“抗体”或“免疫球蛋白”是有相同结构特征的约150000道尔顿的异四聚糖蛋白，其由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键数目不同。每条重链和轻链也有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一端有可变区(VH)，其后是多个恒定区。每条轻链的一端有可变区(VL)，另一端有恒定区；轻链的恒定区与重链的第一个恒定区相对，轻链的可变区与重链的可变区相对。特殊的氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形成界面。
如本文所用，术语“可变”表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形成了各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性并不均匀地分布在整个抗体可变区中。它集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区(CDR)或超变区中的三个片段中。可变区中较保守的部分称为构架区(FR)。天然重链和轻链的可变区中各自包含四个FR区，它们大致上呈β-折叠构型，由形成连接环的三个CDR相连，在某些情况下可形成部分β折叠结构。每条链中的CDR通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的CDR一起形成了抗体的抗原结合部位(参见Kabat等,NIH Publ.No.91-3242,卷I，647-669页(1991))。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖于抗体的细胞毒性。
脊椎动物抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可根据其恒定区的氨基酸序列归为明显不同的两类(称为κ和λ)中的一类。根据其重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可以分为不同的种类。主要有5类免疫球蛋白：IgA,IgD,IgE,IgG和IgM，其中一些还可进一步分成亚类(同种型)，如IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgA和IgA2。对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ、和μ。不同类免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是本领域人员所熟知的。
一般，抗体的抗原结合特性可由位于重链和轻链可变区的3个特定的区域来描述，称为可变区域(CDR)，将该段间隔成4个框架区域(FR)，4个FR的氨基酸序列相对比较保守，不直接参与结合反应。这些CDR形成环状结构，通过其间的FR形成的β折叠在空间结构上相互靠近，重链上的CDR和相应轻链上的CDR构成了抗体的抗原结合位点。可以通过比较同类型的抗体的氨基酸序列来确定是哪些氨基酸构成了FR或CDR区域。
本发明不仅包括完整的抗体，还包括具有免疫活性的抗体的片段或抗体与其他序列形成的融合蛋白。因此，本发明还包括所述抗体的片段、衍生物和类似物。
如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明抗体相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列，或与6His标签形成的融合蛋白)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟 练技术人员公知的范围。
在本发明中，本发明的抗体还包括其保守性变异体，指与本发明抗体的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个，最佳地至多3个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表A进行氨基酸替换而产生。
表A
Figure BDA0000922779150000081
本发明抗体或其片段的DNA分子的序列可以用常规技术，比如利用PCR扩增或基因组文库筛选等方法获得。此外，还可将轻链和重链的编码序列融合在一起，形成单链抗体。
一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。
目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码所述的本发明的抗体(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子(或如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
本发明还涉及包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体。这些载体可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。
宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。
例如，可通过以下方法来制备本发明的抗体。
首先，提供含有编码本发明抗体的核苷酸序列以及与该序列操作性相连的表达调控序列的表达载体。
本文所用的术语“表达调控序列”通常指参与控制核苷酸序列表达的序列。表达调控序列包括与目标核苷酸序列操作性相连的启动子和终止信号。它们通常还包括核苷酸序列适当翻译所需的序列。“操作性相连”是指线性DNA序列的某些部分能够影响同一线性DNA序列其他部分的活性。例如，如果启动子或增强子增加了编码序列的转录，则它与编码序列是操作性相连的。
编码本发明单克隆抗体的DNA序列可用本领域技术人员熟知的常规手段来制得。例如，可根据本发明公开的序列人工合成或用PCR法扩增得到编码该单克隆抗体重链可变区和轻链可变区的核苷酸序列。然后，用本领域熟知的各种方法通过选择合适的酶切位点将这些核苷酸序列插入合适的表达载体中，使它们分别在表达载体所携带的重链恒定区编码序列和轻链恒定区编码序列之前，并使它们在同一阅读框内。本发明中所用的表达载体是本领域技术人员已知的各种市售的表达载体，例如pPIC9K。
随后，用上述获得的表达载体转化合适的宿主细胞。“宿主细胞”一般包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞，昆虫细胞、和哺乳动物细胞。在本发明中，优选哺乳动物细胞。通常用哺乳动物细胞系来作为表达真核细胞衍生多肽的宿主细胞。哺乳动物细胞在培养物中的繁殖是本领域熟知的。见《组织培养》，Academic Press,Kruse and Patterson编辑(1973)，该文纳入本文作为参考。较佳的哺乳动物细胞是许多可购得的无限增殖细胞系。这些无限增殖细胞系包括但不局限于，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、Vero细胞、海拉细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(如Hep G2)和其它许多细胞系。它们为蛋白质分子提供了翻译后修饰，包括正确的折叠、正确的二硫键形成以及正确位点的糖基化。尽管在下文实施例中，本发明仅列举了以CHO细胞作为宿主细胞的例子，但是本领域技术人员在阅读了本发明的详细描述和具体实施例可以知道，本发明也能采用上述这些细胞系。
用表达载体转化宿主细胞的方法有很多种，所用的转化程序取决于待转化的宿主。将异源多核苷酸导入哺乳动物细胞中的方法是本领域所知的，其包括葡聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、Polybrene(1,5-二甲基-1,5-二氮十一亚甲基聚甲溴化物)介导转染、原生质体融合、电穿孔、脂质体介导转染以及将DNA直接显微注射到胞核中。在本发明中，较佳的方法是电穿孔法或脂质体介导法等。例如可采用Invitrogen公司的脂质体法试剂盒来转染诸如CHO细胞等宿主细胞。
然后，在适合本发明抗体表达的条件下，培养转化所得的宿主细胞。然后用常规的免疫球蛋白纯化步骤，如蛋白A-Sepharose、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析、离子交换层析、疏水层析、分子筛层析或亲和层析等本领域技术人员熟知的常规分离纯化手段纯化得到本发明的抗体。
所得单克隆抗体可用常规手段来鉴定。比如，单克隆抗体的结合特异性可 用免疫沉淀或体外结合试验(如放射性免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA))来测定。单克隆抗体的结合亲和力例如可用Munson等,Anal.Biochem.,107:220(1980)的Scatchard分析来测定。
本发明的抗体可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超声处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
在本发明的一个优选地实施方式中，根据本发明的抗体-药物偶联物中的抗体为抗HER2抗体。
在本发明的一个优选地实施方式中，所述抗HER2抗体的轻链可变区氨基酸序列选自下组：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:1)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLLYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGGGTKLEIKRT(SEQ ID NO.:2)；
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCKASQDVSIGVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYYIYPYTFGGGTKLEIKRT(SEQ ID NO.:3)；
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQDVSIGVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYYIYPYTFGGGTKLEIKRT(SEQ ID NO.:4)；
EIVMTQSPPTLSLSPGERVTLSCKASQDVSIGVAWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYTSIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQYYIYPYTFGGGTKLEIKRT(SEQ ID NO.:5)；
AIRMTQSPSSFSASTGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISCLQSEDFATYYCQQYYIYPYTFGGGTKLEIKRT(SEQ ID NO.:6)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYYIYPYTFGGGTKLEIKRT(SEQ ID NO.:7)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKVPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYYIYPYTFGGGTKLEIKRT(SEQ ID NO.:8)；
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGGGTKLEIKRT(SEQ ID NO.:9)；
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYYIYPYTFGGGTKLEIKRT(SEQ ID NO.:10)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:11)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:12)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:13)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:14)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:15)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:16)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLT ISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:17)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:18)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:19)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:20)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:21)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:22)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:23)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:24)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:25)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:26)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:27)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.:28)。
在本发明的一个优选地实施方式中，所述抗HER2抗体的轻链恒定区氨基酸序列如下：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY
EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO.:29)。
其中，下划线的K为本发明优选地连接药物分子的赖氨酸残基。
在本发明的一个优选地实施方式中，所述抗HER2抗体的重链可变区氨基酸序列选自下组：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.:30)；
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.:31)；
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.:32)；
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.:33)；
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在本发明的一个优选地实施方式中，所述抗HER2抗体的重链恒定区氨基酸序列如下：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO.:58)。
在本发明的一个优选地实施方式中，所述抗体-药物偶联物结构如式II所示：
Ab-(L-D)n，II
其中，Ab为抗体；
D为抑制肿瘤细胞的小分子药物；
L为连接所述抗体和所述药物的接头。
在另一优选例中，n为1～8,优选为整数。
在另一优选例中，D的结构如式III所示，
Figure BDA0000922779150000131
式III中，Y为O,或NH，
波浪线表示与L的连接位置，
X为CH2N3或
Figure BDA0000922779150000132
在本发明的一个优选地实施方式中，所述抗体-药物偶联物结构如式IV所示(即，L包括L1-L2)：
Figure BDA0000922779150000133
式IV中，所述L1-L2的结构选自下组：
Figure BDA0000922779150000134
其中，L2为选自下组的接头-(CH2)n-,-(CH2CH2O)n-,Val-Cit,Ala-Ala-Asn,或其组合；
Ab、D、n如上所述；
波浪线表示与抗体的连接位置。
在另一优选例中，所述抗体-药物偶联物选自下组：
ZV0201、ZV0202、ZV0203、ZV0204、ZV0205、ZV0230、ZV0207、ZV0231、ZV0232
其中，偶联物ZV0203的结构如下：
Figure BDA0000922779150000135
偶联物ZV0230的结构如下：
Figure BDA0000922779150000141
偶联物ZV0201的结构如下：
Figure BDA0000922779150000142
偶联物ZV0207的结构如下：
Figure BDA0000922779150000143
偶联物ZV0231的结构如下：
Figure BDA0000922779150000144
偶联物ZV0232的结构如下：
Figure BDA0000922779150000145
偶联物ZV0202的结构如下：
Figure BDA0000922779150000151
偶联物ZV0204的结构如下：
Figure BDA0000922779150000152
偶联物ZV0205的结构如下：
Figure BDA0000922779150000153
在本发明的一个优选地实施方式中，所述抗HER2抗体为帕妥株单抗。
本发明的制备所述抗体-药物偶联物的偶联方式，有K-Lock和C-Lock两种偶联方式。在K-Lock偶联方式中，药物分子偶联于抗体序列中赖氨酸(K)残基，在C-Lock偶联方式中，药物分子偶联于抗体序列中的半胱氨酸残基(C)以下概述本发明的抗体-药物偶联物的偶联方法。
K-Lock方法：抗体可以在温和的溶液体系中直接和L1-D连接。例如，在室温用6-10倍过量的L1-D和抗体反应3-16h，超滤去掉过量的小分子L1-D。将抗体-药物偶联物加载至疏水层析柱(HIC)，纯化获得偶联数量为2的抗HER2抗体-药物偶联物。
C-Lock方法：抗体经过TCEP还原后在温和的溶液体系中直接和L2-D连接。例如，抗体在室温用5-10倍过量的TCEP还原，超滤去掉过量的TCEP。将5-10倍的L2-D加入到还原后的抗体溶液中反应，超滤去掉过量的小分子L2-D。将抗体-药物偶联物加载至疏水层析柱(HIC)，纯化获得偶联数量为4的抗HER2抗体-药物偶联物。
本发明提供了多种抗体-K-Lock-海兔毒素衍生物和抗体-C-Lock-海兔毒素衍生物偶联物，由海兔毒素衍生物通过K-Lock或者C-Lock偶联到抗体上构成。优选地，所述抗体-药物偶联物中的药物可以包括本发明实施例中所制备的一种或多种化合物。
本发明还提供了所述抗体-药物偶联物在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述抗肿瘤药物包括有效量的根据本发明的抗体-药物偶联物，以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。制备时，通常将活性成分与赋形剂混合，或用赋形剂稀释，或包在可以胶囊或药囊形式存在的载体中。当赋形剂起稀释剂作用时，它可采用固体、半固体或液体材料作为赋形剂、载体或活性成分的介质。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、溶液剂、糖浆剂、灭菌注射溶液等。
合适的赋形剂包括：乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水等；制剂还可包括：湿润剂、乳化剂、防腐剂(如羟基苯甲酸甲酯和丙酯)、甜味剂等。所述抗肿瘤药物可制成单元或多元剂型，各剂型包含为了产生所期望的疗效而计算出预定量的所述抗her2抗体-海兔毒素偶联物，以及合适的药剂学赋形剂。
所述的抗肿瘤药物可以通过常规途径进行给药，包括(但并不限于)：肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、局部给药等。
使用该药物时，是将安全有效量的所述抗体-药物偶联物施用于人，其中该安全有效量的范围优选为0.5～50毫克/千克体重，更优选为1～10毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是在熟练医师技能范围之内的。
此外，本发明的偶联物还可与其他治疗药物联用，其中包括(但并不限于)：各种细胞因子，如TNF、IFN、IL-2等；各种肿瘤化疗药物，如5-FU、氨甲喋呤等影响核酸生物合成的药物；氮芥、环磷酰胺等烷化剂类药物；阿霉素、放线菌素D等干扰转录过程阻止RNA合成的药物；长春新碱、喜树碱类等影响蛋白质合成的药物及某些激素类药物，等等。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明能够在不改变抗体表达细胞株的基础上，通过简单的化学和纯化步骤实现抗体与药物的定点定量偶联；
(2)根据本发明的抗体-药物偶联物，当药物偶联于抗体轻链恒定区时，具有显著更佳的活性，且易于制备，收率高，适用于规模化生产；
(3)本发明偶联物具有抗her2抗体和海兔毒素两者的生物学功能，既具有抗her2抗体对肿瘤细胞的杀伤能力，又具有海兔毒素在细胞内抑制微管蛋白从而诱导凋亡的能力，在二者的协同下，抗肿瘤效果得到显著增强；
(4)本发明偶联物通过抗her2抗体与肿瘤细胞表面的her2受体特异结合，将海兔毒素定向转运到肿瘤细胞，并在肿瘤细胞内释放发挥作用，既可杀伤her2阳性肿瘤细胞，也减少毒素分子单独给药产生的毒副作用。
(5)使用本发明的方法所制备的抗体-药物偶联物，平均偶联药物分子数量约为2个，且工艺稳定，能够节省所偶联药物的用量，从而节约制备成本。
(6)使用本发明中筛选出的特定接头连接抗her2抗体和药物，不仅使得抗体-药物偶联物易于制备，具有较高的得率，而且仍然保留了抗体的靶向活性。
下面结合具体实施例，进一步详陈本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明详细条件的实验方 法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
通用合成步骤从一种带羧基的化合物合成其活性酯的方法(比如NHS)
将羧基化合物溶解于二氯甲烷或N,N-二甲基甲酰胺中，加入1.5当量的N-羟基琥珀酰亚胺，1.5当量的EDCI。反应液在室温搅拌1个小时，直到羧基化合物消耗完毕。反应过程由RP-HPLC监控。用二氯甲烷稀释反应液，并用柠檬酸(aq.10％)和饱和食盐水洗有机相。分离并干燥有机相，用HPLC或者中压正相硅胶色谱纯化，得到相应的活性酯。
实施例1化合物7的合成
Figure BDA0000922779150000171
化合物3的合成：
将化合物2(261mg,0.52mmol)溶解于6mL的DMF中，再加入HATU(217mg,0.57mmol),DIEA(362μL,2.08mmol),和胺基化合物1(213mg,0.52mmol)。搅拌30分钟,再加入400μL的哌啶，继续搅拌10分钟。反应液浓缩直接用HPLC纯化得到化合物3(171mg,60％)。MS m/z548.3(M+H)。
化合物5：
将化合物4(37mg,0.15mmol)溶解于4mL的DMF中，再加入HATU(59mg,0.15mmol),DIEA(108μL,0.6mmol),和胺基化合物3(102mg,0.15mmol)。反应液搅拌30分钟后减压蒸干，然后溶解于2mL的二氯甲烷中,加入1mL的TFA并搅拌10分钟。反应液减压蒸干并用HPLC纯化得到化合物5(94mg,78％)。MS m/z 673.4(M+H)。
化合物7的合成：
化合物6(85mg,0.12mmol)溶解于2mL的DMF中，加入HATU(48mg,0.12mmol),DIEA(83μL,0.48mmol)和胺基化合物5(94mg,0.12mmol)。反应液继续搅拌30分钟,然后再加入90mg of NaOH 1mL水溶液搅拌30分钟。反应液旋干后，直接用HPLC纯化得到化合物7(86mg,58％)。MS m/z 1239.7(M+H)。
实施例2化合物11的合成
Figure BDA0000922779150000181
将化合物2(130mg,0.26mmol)溶解于3mL的DMF中，加入HATU(110mg,0.29mmol),DIEA(175μL,1mmol),和胺基化合物1(110mg,0.27mmol)。反应液继续搅拌30分钟，旋蒸至干，残余物溶解于TFA/二氯甲烷(1/4,v/v,5mL)中并搅拌30分钟。反应液减压蒸干并用HPLC纯化得到化合物8(108mg,65％)。MS m/z 670.5(M+H)。
将化合物6(85mg,0.12mmol)溶解于2mL的DMF中，加入HATU(48mg,0.12mmol),DIEA(83μL,0.48mmol),和胺基化合物8(94mg,0.12mmol)。反应液搅拌30分钟,然后加入哌啶(0.2mL)搅拌30分钟。浓缩反应液并用HPLC纯化得到化合物9(87mg,63％)。MS m/z 1028。7(M+H)。
向化合物9(57mg,0.05mmol)和羧基化合物10(27mg)的二氯甲烷/DMF(3/1,v/v,4mL)溶液中，加入PyBrop(0.055mmol)和DIEA(35μL)。反应液继续搅拌30分钟并浓缩，残余物用HPLC纯化得到化合物11(41mg)。MS m/z 1529.7(M+H)。
实施例3化合物16的合成
Figure BDA0000922779150000191
化合物13：
将化合物6(1000mg,1.67mmol)溶解于20mL的DMF中，加入HATU(640mg,1.68mmol),DIEA(870μL,5.00mmol),和胺基化合物12(535mg,1.67mmol)。反应液搅拌30分钟,反应液浓缩至干后用HPLC纯化得到化合物13(1140mg,70％)。MS m/z 865.5(M+H)。
化合物14：
将化合物13(500mg,0.57mmol)溶解于10mL的DMA中，加入二(对硝基苯)碳酸酯(210mg,0.69mmol),和DIEA(35μL,0.2mmol)。反应液搅拌18小时,加入100mL的乙醚，沉淀析出，收集沉淀，干燥后得到化合物14(500mg,85％)。MS m/z 1030.6(M+H)。
化合物16
将化合物14(0.1mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液中加入was added a solution of化合物15(0.15mmol,67mg)的乙腈/水(1/1,v/v,1mL)溶液,再加入DIEA(50μL)。反应液搅拌30分钟后,酸化并浓缩，残余物用HPLC纯化得到化合物16，白色固体(87mg)。MS m/z 1243.6[M+H]+。
实施例4化合物18的合成
Figure BDA0000922779150000192
将化合物14(0.1mmol)溶解在四氢呋喃(3mL)中，加入哌啶-4-甲酸 (60mg)和饱和NaHCO3水溶液(1mL)。反应液在室温搅拌30分钟,然后用1N HCl至pH＝4-5。浓缩并用HPLC纯化得到化合物18(68mg)。MS m/z1020.7(M+H)。
实施例5化合物23的合成
Figure BDA0000922779150000201
化合物21的合成：
将化合物19的TFA盐(1mmol),化合物20(1eq。),HOAt(3eq。),二氯甲烷(20mL),DIEA(6eq。),和DIC(2eq。)加入到圆底烧瓶中，搅拌16小时后用20mL的二氯甲烷稀释反应液，用水洗涤，干燥有机层旋干后得到化合物3，直接用于下一步。MS m/z 1496。5(M+H)。
化合物22的合成：
将化合物21(1mmol),20mL的乙醇和10mL的2M NaOH水溶液加入到圆底烧瓶中，搅拌3小时。用醋酸调中性后用HPLC纯化得到化合物22。MS m/z 1482.3(M+H)。
化合物23的合成：
将化合物22(0.5mmol)溶解于10mL的二氯甲烷,10mL的TFA和1mL三异丙基硅烷并搅拌一小时。浓缩反应液并用HPLC纯化得到化合物23。MS m/z 1239.8(M+H)。
实施例6化合物27的合成
Figure BDA0000922779150000211
化合物5的合成：
向圆底烧瓶中加入化合物19的TFA盐(1mmol),化合物24(1eq。),HOAt(3eq。),二氯甲烷(20mL),DIEA(6eq。),和DIC(2eq。)。反应液搅拌16小时后用After 16h of 20mL的二氯甲烷稀释,用20mL的水洗，减压蒸干得到玻璃状固体直接用于下一步。将得到的固体溶解于10mL的二氯甲烷,10mL的TFA和1mL的三异丙基硅烷中并搅拌1小时。将反应液减压蒸干并用HPLC纯化得到化合物6。MS m/z 1351.5(M+H)。
化合物26的合成：
化合物25(0.5mmol),20mL的乙腈,5mL的水和10mL的饱和NaHCO3水溶液。然后加入Na2S2O4(4eq.)搅拌20分钟。反应液浓缩并用by HPLC纯化得到化合物7。MS m/z 1321.7(M+H)。
化合物27的合成：
将化合物26(0.4mmol)溶剂在10mL乙腈中并加入1,4-二溴-2,3-丁二酮(3eq.)。反应液搅拌20分钟后用HPLC纯化得到化合物27。MS m/z 1527.6(M+H)。
实施例7.化合物30的制备
Figure BDA0000922779150000221
式中化合物29采用与化合物14的相同方法由化合物28(0.2mmol)制备。采用合成化合物18的方法，化合物29与piperidine 4-carboxylic acid反应，经由HPLC纯化获得白色粉状化合物30(117毫克)。MS m/z 956.7(M+H).
实施例8.化合物33的制备
Figure BDA0000922779150000222
式中化合物32采用与化合物14的相同方法由化合物31(0.2mmol)制备。采用合成化合物18的方法，化合物29与piperidine 4-carboxylic acid反应，经由HPLC纯化获得白色粉状化合物33(109毫克)。MS m/z 928.6(M+H)。
实施例9.化合物37的制备
Figure BDA0000922779150000231
化合物35的制备
HATU(110毫克,0.29mmol)，DIEA(181uL,1.04mmol)和化合物34(83毫克,0.26mmol)依次加入到化合物2(131毫克,0.26mmol，溶于4ml DMF)的溶液中。经30分钟搅拌，真空条件下除去溶液。残留物溶于2毫升DCM后加入1毫升TFA并搅拌10分钟。在真空条件下除去溶液后经由HPLC纯化获得化合物35(118毫克，67％)。MS m/z 698.4(M+H)。
化合物36的制备
HATU(68毫克,0.17mmol)，DIEA(118uL,0.68mmol)和化合物35(118毫克,0.17mmol)依次加入到化合物6(125毫克,0.17mmol，溶于4ml DMF)的溶液中。经30分钟搅拌，加入400L哌啶，继续搅拌10分钟。在真空条件下除去溶液后经由HPLC纯化获得化合物36(196毫克，87％)。MS m/z 1056.6(M+H)。
化合物37的制备
HATU(27毫克,0.072mmol)，DIEA(50uL,0.288mmol)和化合物36(85毫克,0.067mmol)依次加入到化合物4(17毫克,0.072mmol，溶于2ml DMF)的溶液中。经30分钟搅拌，加入1mL氢氧化钠水溶液(1M)，继续搅拌60分钟。经由HPLC纯化获得化合物37(76毫克，91％)。MS m/z 1267.7(M+H)。
实施例10抗HER2抗体-药物偶联物制备
K-Lock方法以ZV0201为例：抗体(如具有SEQ ID NO.:1所示的轻链可变区和SEQID NO.:29所示的轻链恒定区以及SEQ ID NO.:58所示的重链可变区 和SEQ ID NO.:4所示的重链恒定区的抗体)可以在温和的溶液体系中直接和L-D连接。在室温25℃(范围可以是4-37℃)，10mg/ml抗体(溶于磷酸盐缓冲液PBS，浓度范围5-30mg/ml)中加入6-10倍摩尔量于抗体的L-D(溶于DMA，体积不超过PBS的10％)反应3-16h，超滤去掉过量的小分子L-D。将抗体-药物偶联物加载至疏水层析柱(HIC)，用0.75-1M的硫酸铵溶液平衡后再用25mM的硫酸铵溶液洗脱，合并偶联数量为2的洗脱液并用PBS置换，获得偶联数量为2的抗HER2抗体-药物偶联物。
本发明人发现，在偶联抗体和药物的过程中，pH对偶联反应具有显著影响，较佳的偶联pH为6.5～8.0；优选地偶联pH为6.8～7.8；更优选地偶联pH为7.0～7.5，如7.1、7.2、7.3、7.4。
实验结果表明，在pH6以下抗体几乎不和药物分子发生偶联反应，在PH7.8时原抗体还有部分剩余，DAR数量为1的占很大比例，而pH在约7.0的时候DAR2的占主要部分，因此pH为约7.0时反应效率更好。
C-Lock方法以：抗体经过TCEP还原后在温和的溶液体系中直接和L-D连接。例如，抗体在室温用5-10倍过量的TCEP还原，超滤去掉过量的TCEP。将5-10倍的L-D加入到还原后的抗体溶液中反应，超滤去掉过量的小分子L-D。将抗体-药物偶联物加载至疏水层析柱(HIC)，纯化获得偶联数量为4的抗HER2抗体-药物偶联物。
本实施中制备的ZV0201、ZV0202、ZV0203、ZV0223、ZV0230偶联物的结构如下表所示。
表1抗体-药物偶联物结构
Figure BDA0000922779150000241
取代表性的1个K-Lock和1个C-Lock方式抗体偶联药物进行HIC分析，操作步骤如下：
使用TSKgel Butyl-NPR柱(4.6mmIDx3.5cm,2.5mm,Tosoh Bioscience,Montgomeryville,PA)，流动相分别为1.5M硫酸铵加0.025M磷酸钠缓冲液(pH7)和75％0.025M磷酸钠缓冲加25％异丙醇(PH7.0)，梯度洗脱：10％B-70％B，10min；70％B-100％B，5min；100％B-10％B,2min。
图1显示了根据本发明的抗体药物偶联物的HIC分析结果；其中图1A显示了未偶联的抗体的HIC分析结果；图1B显示了ZV0201的HIC分析结果，可以看出平均偶联数量(DAR)为2的偶联物纯度在90％以上，含有少量平均偶联数量(DAR)1的ADC；图1C显示了C-Lock(ZV0223，制备方法如上所述)的HIC分析结果，可以看出平均偶联数量4的ADC占主要，纯度大于90％。
对本发明的ADC(如ZV0201)进行肽谱分析，分析参数如下：
样品用胰蛋白酶酶切后，进行液质分析(柱子型号BEH 300 C181.7um x 2.1 x150mm，温度40度，流动性为0.1％甲酸/水和0.1％甲酸/乙腈)。
结果如图1D所示，分析表明本发明中K-lock方式偶联的ADC，药物主要偶联于抗体轻链恒定区的第81位赖氨酸。
实施例11亲和性检测
亲和性检测的实验步骤如下：
将ZV0201和ZV0223稀释至3.3μg/ml，然后按3倍的梯度稀释，浓度分别为3.3、1.1、0.33、0.11μg/ml，分别加入至含有3.0×105个BT474细胞的EP管中，4℃条件下孵育30min。离心沉淀细胞，加PBS洗一次。然后加入600μl FITC标记的二抗稀释液，4℃条件下避光孵育30min。离心沉淀细胞，PBS洗两次，最后加入500μl PBS悬匀细胞，用流式细胞仪检测平均荧光强度值。检测结果如下：
抗HER2抗体偶联前后亲和性比较，K-Lock以ZV0201为代表，C-Lock以ZV0223为代表，亲和性检测结果如图2所示，从图中可以看出偶联前后抗体亲和性基本未改变。
实施例12肿瘤细胞抑制实验
本实施例检测了本发明的抗体-药物偶联物对HER2阳性细胞的抑制活性。本实施例中的肿瘤细胞株均购自美国ATCC。
实验步骤如下：
细胞消化，离心收集后，进行计数，并将细胞液稀释至0.4-2.0×105个/ml，96孔板中每孔加入100μl该细胞悬液。37℃细胞培养箱中过夜培养，第二天加入相应浓度的ADC药物。药物的起始浓度1-15μg/ml，等梯度3倍稀释，共9个浓度梯度，最后设一组零浓度的细胞对照。加药后，培养3天，吸净含药物的培养基，每孔加入100μl 10％的CCK-8溶液，在37℃下孵育1-2小时，然后用酶标仪在490nm下检测各孔的吸光强度。将数据导入至作图软件中，拟合曲线，计算IC50值。
实验结果如下表所示。本发明的ADC的细胞活性显著优于已经上市的T-DM1。
表2抗HER2抗体-药物偶联物对HER2表达肿瘤细胞的IC50值(nM)
Figure BDA0000922779150000251
Figure BDA0000922779150000261
细胞周期检测方法：6孔板中，每孔分别加入3.0×105个NCI-N87细胞和终浓度为5μl胞和终浓的ZV0201。37℃培养60h后，收集孔中所有细胞，离心沉淀，加1ml冰浴预冷的70％乙醇在4℃固定过夜。固定完，加PBS洗一遍，加入PI染色液，在37℃条件下，避光孵育30min，然后用流式细胞仪检测。
实验结果表明，在药物作用下大于70％的N87肿瘤细胞细胞周期停止在了G2/M期，结果如图3所示，图3中ZV02为没有偶联药物的抗体对照。
实施例13体内抗肿瘤活性
抗HER2抗体-药物偶联物的体内抗肿瘤活性检测步骤如下：
肿瘤细胞接种于裸鼠或Scid鼠腋下，等肿瘤体积长到100-300mm3时开始尾静脉给药，OE19分三次给药，三天一次，其余模型都为单次给药，给药后定时测量肿瘤大小，测量瘤块的长径(a)、短径(b)，肿瘤体积(tumor volume，TV)计算公式为：TV＝1/2×a×b2。
实验结果表明，本发明的抗HER2抗体-药物偶联物，对体内肿瘤具有显著的抑制作用，体内肿瘤抑制活性高于T-DM1三倍以上。
图4显示了ADC治疗小鼠体内N87胃癌移植瘤的疗效。本发明的ADC均有效抑制N87肿瘤的生长，而且本发明的K-Lock偶联物能使肿瘤完全抑制数十天不复发，疗效显著优于已经上市的T-DM1。
图5显示了ADC治疗小鼠体内OE19胃癌移植瘤的疗效。本发明的ADC均有效抑制OE19肿瘤的生长，而且本发明的ADC能使肿瘤完全抑制数十天不复发，疗效优于已经上市的T-DM1。
图6显示了ADC治疗小鼠体内SKOV-3卵巢癌移植瘤的疗效。本发明的ADC均有效抑制OE19肿瘤的生长，而且发本发明的ADC疗效优于已经上市的T-DM1。
图7显示了ADC治疗小鼠体内BT474乳腺癌移植瘤的疗效。本发明的ADC均有效抑制BT474肿瘤的生长，昭华ADC疗效优于已经上市的T-DM1。
图8显示了ADC治疗小鼠体内Calu-3肺癌移植瘤的疗效。本发明的ADC均有效抑制Calu-3肿瘤的生长，而且本发明疗效优于已经上市的T-DM1。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
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Figure IDA0000922779220000021
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Figure IDA0000922779220000211
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Figure IDA0000922779220000241

Claims (11)

1.一种抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述抗体-药物偶联物结构如式I所示：
Ab－(L-D)n， I
其中，Ab为所述抗体；
L为连接所述抗体和所述药物的接头，其结构如L-1所示：
Figure FDA0002938573590000011
其中，L21为独立地选自下组的接头Val-Cit、Ala-Ala-Asn，或其组合，并且式L-1中的波浪线表示与抗体的连接位置；
D为抑制肿瘤细胞的小分子药物；
n为所述抗体-药物偶联物中的药物平均偶联数量，且n为1～4；
“－”为键；
其中，所述抗体的轻链恒定区包含EKH基序,并且所述药物分子连接于所述基序的赖氨酸K位点；
并且，所述抗体为帕妥珠单抗；
并且，D的结构如式II所示，
Figure FDA0002938573590000012
式II中，Y为O,或NH，
并且，式II中的波浪线表示与L的连接位置，
X为CH2N3或
Figure FDA0002938573590000013
2.如权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗体-药物偶联物的轻链恒定区偶联有至少1个药物分子，并且所述药物分子连接于所述轻链恒定区的赖氨酸位点。
3.如权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗体-药物偶联物的每条轻链恒定区偶联1个药物分子。
4.如权利要求1所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，n为1.5～3.5。
5.如权利要求1-4中任一所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，n为1.8～2。
6.一种抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗体-药物偶联物选自下组：
ZV0201、ZV0202、ZV0203、ZV0204、ZV0205、ZV0230；
其中，偶联物ZV0203的结构如下：
Figure FDA0002938573590000021
偶联物ZV0230的结构如下：
Figure FDA0002938573590000022
偶联物ZV0201的结构如下：
Figure FDA0002938573590000023
偶联物ZV0202的结构如下：
Figure FDA0002938573590000024
偶联物ZV0204的结构如下：
Figure FDA0002938573590000031
偶联物ZV0205的结构如下：
Figure FDA0002938573590000032
7.如权利要求6所述的抗体-药物偶联物，其特征在于，所述抗体-药物偶联物选自下组：ZV0201、ZV0203、ZV0204、ZV0205、ZV0230。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1-7中任一所述的抗体-药物偶联物，以及药学上可接受的载体。
9.如权利要求1-7中任一所述的抗体-药物偶联物的用途，其特征在于，用于制备抗肿瘤的药物。
10.一种制备权利要求1-7中任一所述的抗体-药物偶联物的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
配置反应体系，所述反应体系中包括抗体和游离的药物分子，然后进行偶联反应，从而制得所述抗体-药物偶联物，
其中，所述药物分子包括接头。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述反应体系的pH为7.0～7.5。
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106729743B (zh) 2015-11-23 2021-09-21 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗ErbB2抗体-药物偶联物及其组合物、制备方法和应用
CN107857798B (zh) * 2016-09-22 2021-03-23 联宁（苏州）生物制药有限公司 一种用于抗体药物偶联物的毒素及其制备方法
CN110312730A (zh) 2017-04-19 2019-10-08 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 细胞毒素和偶联物、 其用途和制备方法
WO2020042941A1 (zh) * 2018-08-29 2020-03-05 荣昌生物制药烟台有限公司 抗her2抗体药物偶联物在治疗尿路上皮癌中的用途
KR20240000575A (ko) * 2021-04-26 2024-01-02 수안주 바이오파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 이중특이성 항체약물접합체
CN116997363A (zh) * 2021-05-07 2023-11-03 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗体药物偶联物治疗癌症的方法及用途
CN117362440A (zh) * 2022-06-30 2024-01-09 复旦大学 Her2纳米抗体及偶联物的制备方法和用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104379168A (zh) * 2012-05-15 2015-02-25 索伦托医疗有限公司 药物偶联物,偶联方法,及其用途
CN105051032A (zh) * 2013-01-03 2015-11-11 赛特瑞恩股份有限公司 抗体-连接子-药物偶联物、其制法及包含其的抗癌药物组合物

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT2489364E (pt) * 2003-11-06 2015-04-16 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina conjugados com anticorpos
SG186451A1 (en) * 2010-07-12 2013-01-30 Covx Technologies Ireland Ltd Multifunctional antibody conjugates
RU2016134258A (ru) * 2013-10-15 2018-02-28 Сорренто Терапьютикс Инк. Конъюгат лекарственного средства с направляющей молекулой и двумя различными лекарственными средствами
CA2937561A1 (en) * 2014-01-29 2015-08-06 Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd. Ligand-cytotoxic drug conjugate, preparation method thereof, and uses thereof
MX2016017117A (es) * 2014-06-20 2018-01-12 Abgenomics Int Inc Conjugados de anticuerpo her2-farmaco.
CN107849090A (zh) * 2015-01-28 2018-03-27 索伦托医疗有限公司 抗体药物偶联物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104379168A (zh) * 2012-05-15 2015-02-25 索伦托医疗有限公司 药物偶联物,偶联方法,及其用途
CN104662000A (zh) * 2012-05-15 2015-05-27 索伦托医疗有限公司 药物偶联物及其偶联方法和用途
CN105051032A (zh) * 2013-01-03 2015-11-11 赛特瑞恩股份有限公司 抗体-连接子-药物偶联物、其制法及包含其的抗癌药物组合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Site-specific antibody drug conjugates for cancer therapy";Siler Panowski等;《mABs》;20131101;第6卷(第1期);第38页左栏第1段，图5 *

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