PL172718B1 - Sposób wytwarzania nowych koniugatów tioeterowych PL PL PL PL PL - Google Patents

Sposób wytwarzania nowych koniugatów tioeterowych PL PL PL PL PL

Info

Publication number
PL172718B1
PL172718B1 PL93317516A PL31751693A PL172718B1 PL 172718 B1 PL172718 B1 PL 172718B1 PL 93317516 A PL93317516 A PL 93317516A PL 31751693 A PL31751693 A PL 31751693A PL 172718 B1 PL172718 B1 PL 172718B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
adriamycin
formula
conjugate
antibody
adm
Prior art date
Application number
PL93317516A
Other languages
English (en)
Inventor
David Willner
Pamela A Trail
H Dalton King
Sandra J Hofstead
Robert S Greenfield
Gary R Braslawsky
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Squibb Co filed Critical Bristol Myers Squibb Co
Publication of PL172718B1 publication Critical patent/PL172718B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6881—Cluster-antibody conjugates, i.e. the modifying agent consists of a plurality of antibodies covalently linked to each other or of different antigen-binding fragments covalently linked to each other
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Lubricants (AREA)

Abstract

1. Sposób wytwarzania nowych koniu- gatów tioeterowych o wzorze 1, w którym D oznacza ugrupowanie leku, n jest liczba calkowita 1-10, p jest liczba calkowita 1 -6 , Y oznacza O lub NH2+ Cl-, z jest równe 0 lub 1, q wynosi od okolo 1 do okolo 10, X ozna- cza ligand, A oznacza ugrupowanie adduktu Michaela, znam ienny tym, ze zwiazek o wzorze 2a, w którym D i n maja wyzej poda- ne znaczenie, a R oznacza receptor addycji Michaela poddaje sie reakcji ze zwiazkiem o wzorze 3, w którym p, Y, z, q i X maja wyzej podane znaczenie, i ewentualnie wyodrebnia sie produkt. Wzór 1 PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych koniugatów tioeterowych. Związki te znajdują zastosowanie w leczeniu nowotworów.
Bifunkcjonalne związki, łączące reagenty cytotoksyczne z przeciwciałami są znane. Związki te są szczególnie użyteczne w tworzeniu immunokoniugatów skierowanych przeciwko antygenom nowotworowym. Takie immunokoniugaty pozwalająna selektywne dostarczanie toksycznych leków do komórek nowotworowych. (Hermentin i Seiler, “Investigations with Monoclonal Antibody Drug Coniugates”, Behring. Insti. Mitl. 82: 197-215 (1988); Gallego i wsp., “Preparation of Four Daunomycin-Monoclonal Antibody 791T/36 Conjugates with Anti-Tumour Activity”. Int. J. Cancer 33: 737-44 (1984); Amon i wsp., “In Vitro and In Vivo Efficacy of Conjugates of Daunomycin with Anti-Tumour Antibodies”, Immunological Rev. 62: 5-27 (1982).
172 718
Greenfield i wsp. opisali ostatnio tworzenie wrażliwych na kwas immunokoniugatów zawierających związek acylohydrazynowy, 3-(2-pirydyloditio)propionylohydrazyd, sprzężony poprzez wiązanie acylohydrazynowe z 13-keto pozycją cząsteczki antracykliny, oraz sprzęganie tych pochodnych antracykliny z cząsteczką przeciwciała (Greenfield i wsp., publikacja patentu europejskiego nr 328147, odpowiadająca zgłoszeniu patentowemu Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 07/270509 i zgłoszenie patentowe Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 07/155181). Ostatnia publikacja ujawnia również specyficzne łączniki oraz koniugaty zawierające ugrupowanie tioeterowe, w tym immunokoniugaty zawierające ugrupowanie hydrazonotioeterowe.
Kaneko i wsp. (zgłoszenie patentowe Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 07/522996, będące równoważnikiem europejskiego zgłoszenia patentowego nr 457250) opisali również tworzenie koniugatów zawierających antybiotyki antracyklinowe przyłączone do bifunkcjonalnego łącznika poprzez wiązanie acylohydrazonowe w pozycji C-13 cząsteczki antracykliny. W ich wynalazku łączniki zawierająreaktywmigrupę pirydynyloditio- lub ortonitrofenyloditio, poprzez którąłącznik reaguj e z odpowiednią grupaprzyłączoną do ligandu reaguj ącego z komórkami, tworząc gotowy koniugat.
Użyteczne byłby uzyskanie dodatkowych związków, zawierających wrażliwe na działanie kwasu połączenie między cząsteczkami kierującą i reaktywną, do stosowania w terapii in vivo. Zatem wynalazek niniejszy dostarcza nowej chemii do łączenia aktywnych terapeutycznie cząsteczek leku z ligandem zdolnym do rozpoznawania wybranej populacji komórek celowych. Ta chemia łącznika stosowana jest następnie do wytworzenia aktywnych terapeutycznie koniugatów.
Zgodnie z wynalazkiem wytwarza się koniugat tioeterowy w którym każda cząsteczka leku jest połączona z ligandem poprzez zawierające ugrupowanie tioeterowe ramię łącznika. Lek jest przyłączony do tego łącznika poprzez wiązanie acylohydrazonowe. Wiązanie tioeterowe tworzy się przez reakcję grupy sulfhydrylowej z ligandu lub krótkiego ugrupowania “przedłużacza” przyłączonego do ligandu, z receptorem addycji Michaela, który po reakcji staje się adduktem Michaela. W korzystnej postaci ligand kierujący jest przyłączony bezpośrednio do łącznika poprzez kowalencyjne wiązanie tioeterowe.
Wytworzony sposobem według wynalazku nowy koniugat ma ogólną strukturę przedstawionąwzorem 1, w którym D oznacza ugrupowanie leku; n jest równe 1 -10, p jest równe 1- 6; Y oznacza O lub NH2+Cl';zjest równe 0 lub 1; q wynosi od około 1 do około 10; X oznacza ligand; a A oznacza ugrupowanie adduktu Michaela.
Sposób według wynalazku polega na tym, że związek o wzorze 2a, w którym D, n mająwyżej podane znaczenie, a R oznacza receptor addycji Michaela poddaje się reakcji ze związkiem o wzorze 3, w którymp, Y, z, q i X mająwyżej podane znaczenie, i ewentualnie wyodrębnia się produkt.
Sposób według wynalazku polega korzystnie na tym, że stosuje się związek o wzorze 3, w którym X oznacza immunoglobulinę lub j ej fragment, a p, Y, z i q mająwyżej podane znaczenie.
Korzystnie, sposób według wynalazku polega na tym, że stosuje się związek o wzorze 3, w którym X oznacza immunoglobulinę, wybraną z grupy składającej się z BR96, BR64, L6, zrelaksowanego BR96, zrelaksowanego BR64, zrelaksowanego L6, chimerycznego BR96, chimerycznego BR64, chimerycznego L6, zrelaksowanego chimerycznego BR96, zrelaksowanego chimerycznego BR64, zrelaksowanego chimerycznego L6 i ich fragmentów, ap, Y, z i q mająwyżej podane znaczenie.
W sposobie według wynalazku korzystnie stosuje się związek o wzorze 3, w którym X oznacza chimeryczne BR96, zrelaksowane chimeryczne BR96 lub ich fragment, a p, Y, z i q mają wyżej podane znaczenie.
Korzystnie, sposób według wynalazku polega na tym, że stosuje się związek o wzorze 2a, w którym D oznacza antybiotyk antracyklinowy wybrany z grupy składającej się z adriamycyny, daunomycyny, detorubicyny, karminomycyny, idarubicyny, epirubicyny, AD-32, 4-morfolinylo-adriamycyny i 3'-deamino-3'-(3-cyjano-4-morfolinylo)-deoksorubicyny, a n i R mają wyżej podane znaczenie.
172 718
Sposób według wynalazku polega na tym, że stosuje się związek o wzorze 2a, w którym D oznacza antybiotyk antracyklinowy, korzystnie adriamycynę, a n i R maj ąwyżej podane znaczenie.
W sposobie według wynalazku korzystnie stosuje się związek o wzorze 2a, w którym n jest równe 5.
Sposób według wynalazku, korzystnie, polega na tym, że stosuje się związek o wzorze 3, w którym z jest równe 0, a p, Y, q i X mają wyżej podane znaczenie.
Sposób według wynalazku, korzystnie, polega na tym, że stosuje się związek o wzorze 3, w którym q jest równe od około 4 do około 8.
W jednej z postaci wynalazku ugrupowaniem leku jest antybiotyk antracyklinowy, a ligandem jest przeciwciało.
W korzystnej postaci antracyklina jest związana z częścią łącznikową koniugatu poprzez wiązanie acylohydrazonowe w pozycji 13-keto związku antracyklinowego. Następnie do związku antracyklinowego jest przyłączone poprzez łącznik przeciwciało. W szczególnie korzystnej postaci łączenie to odbywa się poprzez zredukowaną grupę disiarczkową(tó jest wolną grupę sulfhydrylową (-SH)) przeciwciała.
W najbardziej korzystnej postaci antracyklinowym ugrupowaniem leku jest adriamycyna, receptorem addycj i Michaela, z którego otrzymuj e się addukt Michaela, jest grupa maleimidowa, a przeciwciałem jest przeciwciało chimeryczne.
Nowe koniugaty zatrzymują zarówno specyficzność jak i aktywność leku terapeutycznego w działaniu na wybraną populację komórek celowych. Mogą być one stosowane w środkach farmaceutycznych, takich jak środki zawierające efektywną farmaceutycznie ilość związku o wzorze 1 w połączeniu z dopuszczalnym farmaceutycznie nośnikiem, rozcieńczalnikiem lub rozczynnikiem.
Wynalazek bliżej objaśniono na rysunku, na którym:
fig. 1(a) przedstawia schemat syntetyczny wytwarzania tiolowanego przeciwciała przy użyciu SDPP jako środka tiolującego;
fig. 1 (b) przedstawia schemat syntetyczny wytwarzania nowego immunokoniugatu, w którym ligandem jest przeciwciało tiolowane przy użyciu SDPP;
fig. 1 (c) przedstawia schemat syntetyczny wytwarzania nowego immunokoniugatu, w którym ligandem jest przeciwciało tiolowane iminotiolanem;
fig. 2 przedstawia sposób redukowania przeciwciała przy użyciu DTT w celu otrzymania przeciwciała “zrelaksowanego” i syntezę nowego immunokoniugatu;
fig. 3 przedstawia dane o aktywności cytotoksycznej in vitro nowych koniugatów adrimycyna-BR64 przeciwko nowotworom L2987;
fig. 4 przedstawia dane o aktywności cytotoksycznej in vivo nowych koniugatów adriamycyna-BR64 przeciwko nowotworom L2987;
fig. 5 przedstawia porównawcze dane o aktywności cytotoksycznej in vivo dla terapii łączonej przy użyciu BR64, adriamycyny i koniugatu niewiążącego (SN7-adriamycyna);
fig. 6 przedstawia dane o aktywności cytotoksycznej in vivo dla nowych koniugatów bombezyna-adriamycyna przeciwko nowotworom H345;
fig. 7 przedstawia dane o aktywności cytotoksycznej in vitro dla koniugatów adriamycyny ze zrelaksowanych chimerycznym BR96 i chimerycznym BR96 tiolowanym SDPP;
fig. 8 przedstawia dane o aktywności cytotoksycznej in vivo dla koniugatów adriamycyny ze zrelaksowanym BR64 i zrelaksowanym chimerycznym L6 przeciwko nowotworom L2987;
fig. 9 do 11 przedstawiają dane o aktywności cytotoksycznej in vivo przeciwko nowotworom L2987 dla koniugatów adriamycyny ze zrelaksowanym chimerycznym BR96 w porównaniu z wolną adriamycyną i koniugatami niewiążącymi;
fig. 12 przedstawia dane o aktywności cytotoksycznej in vivo dla koniugatów adriamycyny ze zrelaksowanym chimerycznym BR96 przeciwko ludzkiemu rakowi sutka MCF7;
fig. 13 przedstawia dane o aktywności cytotoksycznej in vivo dla koniugatów adriamycyny ze zrelaksowanym chimerycznym BR96 przeciwko ludzkiemu rakowi okrężnicy RCA;
172 718 fig. 14 przedstawia wykres miana -SH jako funkcji stosunku molowego DTT do przeciwciała w preparacie w atmosferze obojętnej, dla przeciwciała zrelaksowanego.
Dla pełniejszego zrozumienia wynalazku zamieszczono poniższy szczegółowy opis.
Sposobem według wynalazku wytwarza się nowe koniugaty leków, złożone z ligandu zdolnego do kierowania do wybranej populacji komórek, leku i łącznika zawierającego wiązanie tioeterowe, który łączy ligand z lekiem. Lek jest związany z łącznikiem poprzez wiązanie acylohydrazonowe. W korzystnej postaci ligand jest związany bezpośrednio z łącznikiem poprzez wiązanie tioeterowe. Zwykle wiązanie to tworzy się w reakcji reaktywnej grupy sulfhydrylowej (-SH) w ligandzie lub w ugrupowaniu przedłużacza (na przykład ugrupowaniu otrzymanym przy zastosowaniu opisanej poniżej chemii SDPP lub iminotiolanu) z receptorem addycji Michaela.
Koniugaty leków znajdujązastosowanie w leczeniu chorób takich jak rak, infekcje wirusowe lub inne infekcje patogenne, zaburzenia autoimmunologiczne lub inne stany chorobowe.
Koniugaty zawierają co najmniej jedną cząsteczkę leku, połączoną przez łącznik z cząsteczką ligandu ukierunkowującego, któryjest zdolny do reakcji z pożądanąpopulacjąkomórek celowych. Cząsteczką ligandu może być białko immunoreaktywne, takie jak przeciwciało lub jego fragment, białko immunoniereaktywne lub ligand peptydowy, taki jak bombezyna, lub ligand wiążący, rozpoznający receptor komórkowy, taki jak lektyna lub cząsteczka sterydu.
Dla lepszego zrozumienia wynalazku leki i ligandy zostanąprzedyskutowane indywidualnie. Następnie zostaną objaśnione związki pośrednie, stosowane w sposobie według wynalazku.
Jest zrozumiałe dla specjalisty, że wynalazek niniejszy wymaga połączenia leku i ligandu za pomocą wiązania acylohydrazonowego poprzez łącznik zawierający addukt Michaela i ugrupowanie tioeterowe. Ograniczeniem wynalazku nie jest ani szczególny lek ani szczególny ligand. Łączniki według wynalazku mogą być stosowane z dowolnym lekiem dla dowolnego żądanego celu terapeutycznego, modyfikacji aktywności biologicznej lub profilaktycznej, a jednym ograniczeniem jest to, aby lek stosowany do wytworzenia koniugatu był zdolny do tworzenia wiązania hydrazyno wego. Dla wytworzenia hydrazonu, lek korzystnie powinien posiadać dostępną do reakcji grupę karbonylową, takąjak na przykład reaktywne ugrupowanie aldehydowe lub ketonowe (przedstawiane tu jako “[D-(C=O)]”), zdolne do tworzenia hydrazonu (to jest połączenia -C=N=NH-). Hydrazonowe połączenie leku jest przedstawiane tu jako “[D=]N-NH”. Ponadto korzystnie reakcja tej dostępnej dla reakcji grupy z łącznikiem me może zniszczyć końcowej aktywności terapeutycznej koniugatu, zarówno gdy aktywność ta jest wynikiem uwolnienia leku w pożądanym miej scu działaniajak i gdy za taka aktywność odpowiedzialny jest sam nienaruszony koniugat.
Dla specjalisty zrozumiałe jest, że dla tych leków, które nie posiadają dostępnej dla reakcji grupy karbonylowej może być otrzymana pochodna zawierająca taką grupę karbonylową przy zastosowaniu procedur znanych w stanie techniki. Należy wziąć pod uwagę, że koniugat otrzymany z takiego derywatyzowanego leku musi zatrzymywać aktywność terapeutyczną w miejscu aktywnym, zarówno gdy jest za nią odpowiedzialny nietknięty koniugat jak i w innych przypadkach. Alternatywnie, derywatyzowany lek lub na przykład prolek musi być uwalniany w takiej formie, że przy miejscu aktywnym obecna jest aktywna terapeutycznie forma leku.
Łącznik może być zgodnie z wynalazkiem stosowany w połączeniu z lekami z zasadniczo wszystkich klas terapeutycznych, w tym na przykład z lekami przeciwbakteryjnymi, przeciwwirusami, przeciwgrzybicznymi, przeciwmikoplazmowymi i podobnych. Tak skonstruowane koniugaty leków są skuteczne dla zwykłych celów, dla których są skuteczne odpowiednie leki, a ich efektywność jest lepsza dzięki właściwej dla ligandu zdolności transportowania leku do żądanej komórki, gdzie jest on szczególnie korzystny.
Następnie, ponieważ nowe koniugaty mogąbyć stosowane do modyfikowania danej odpowiedzi biologicznej, ugrupowanie leku nie jest zaprojektowane jako ograniczone do klasycznych chemicznych środków terapeutycznych. Ugrupowanie leku może być na przykład białkiem lub polipeptydem posiadającym żądaną aktywność biologiczną. Do takich białek należą na przykład toksyny takie jak abryna, rycyna A, egzotoksyna pseudomonas lub toksyna dyfterytu; białka takie jak czynnik martwiczy nowotworu, α-interferon, β-interferon, czynnik wzrostu nerwu, czyn6
172 718 nik wzrostu pochodzenia płytkowego, aktywator plazminogenu tkankowego lub modyfikatory odpowiedzi biologicznej, takie:, jak na przykład limfokiny, interleukina-1, (“IL-1“), interleukina-2 (“IL-2“), interleukina-6 (“IL-6“), czynnik stymulujący kolonizację granulocytów i makrofagów (“GM-CSF“), czynnik stymulujący kolonizację granulocytów (“G-CSF“) lub inne czynniki wzrostu.
Korzystnymi lekami do stosowania w niniejszym wynalazku są leki cytotoksyczne, szczególnie leki stosowane w terapii nowotworów. Do leków takich należą generalnie środki alkilujące, środki antyproliferacyjne, środki wiążące etubulinę i podobne. Do korzystnych klas środków cytotoksycznych należą na przykład rodzina leków antracyklinowych, leki winka, mitomycyny, bleomycyny, cytotoksyczne nukleozydy, rodzina leków pterydynowych, diyneny i podofilotoksyny. W szczególności do użytecznych członków tych klas należą na przykład adriamycyna, karminomycyna, daunorubicyna, aminopteryna, metotreksat, metopteryna, dichlorometotreksat, mitomycyna C, porfiromycyna, 5-fluorouracyl, 6-merkaptopuryna, arabinozyd cytozyny, podofilotoksyna lub pochodne podofilotoksyny takie jak etopozyd lub fosforan etopozydu, melfalan, winblastyna, winkrystyna, leurozydyna, windezyna, leurozyna i podobne. Jak wspomniano poprzednio, specjalista może dokonać modyfikacji chemicznych żądanego związku tak, aby reakcje tego związku były bardziej dogodne dla celów wytwarzania nowych.
Grupa środków cytotoksycznych szczególnie korzystnych do stosowania zgodnie z wynalazkiem jako leki obejmuje następujące leki: pochodne metotreksatu o wzorze 10, w którym R)2 oznacza grupę aminową lub hydroksylową; R7 oznacza wodór lub grupę metylową; R8 oznacza wodór, fluor, chlor, brom lub jod; R9 oznacza grupę hydroksylową lub ugrupowanie uzupełniające dla soli kwasu karboksylowego; pochodne mitomycyny o wzorze 11, w którym R10 oznacza wodór lub metyl; pochodne bleomycyny o wzorze 12, w którym R11 oznacza grupę hydroksylową, aminową, Cj^alkiloaminową, di(Cr3alkilo)aminową, C4-C6polimetylenoaminową, grupę o wzorze 13 lub grupę o wzorze 14; melfalanu o wzorze 15; 6-merkaptopurynę o wzorze 16; cytozynoarabizyd o wzorze 17; podofilotoksyny o wzorze 18, w którym R13 oznacza wodór lub metyl; Ru oznacza metyl lub tienyl lub ich sole fosforanowe; pochodne leków alkaloidów winka o wzorze 19, w którym R15 oznacza H, CH3 lub CHO; gdy Rn i Rw są wzięte pojedynczo to R18 oznacza H, ajeden z podstawników R16 i Rn oznacza etyl, zaś drugi oznacza H lub OH; gdy R17 i R18 są wzięte razem z atomami węgla, do których sąprzyłączone, tworząpierścień oksiranowy, w którym to przypadku R1fi oznacza etyl; Rw oznacza wodór, grupę (C1-C3 alkilo)-CO-, lub chloropodstawioną grupę (C-C3 alkilo)-CO-; difluoronukleozydy o wzorze 2θ, w którym R21 oznacza zasadę przedstawioną wzorem 21, wzorem 22, wzorem 23, wzorem 24 lub wzorem
25, w których to wzorach R22 oznacza wodór, metyl, brom, fluor, chlor lub jod; R23 oznacza -OH lub -Nity R24 oznacza wodór, brom, chlor lub jod; lub antybiotyki antracyklinowe o wzorze 26, w którym R1 oznacza -CH3, CH2OH, -CH2OCO(CH2)3CH3 lub -CH2OCOCH(OC2H5)2, R3 oznacza -OCH3, -OH lub -H, R4 oznacza -NH2, -NHCOCF3, 4-morfolinyl, 3-cyjano-4-morfolinyl, ^|3ij^<ei-ydynyl, 4-metoksy-1-piperydyny! benzyloaminę, dibenzyloaminę, cyjanometyloaminę lub 1-cyjano-2-metoksyetyloaminę, R5 oznacza -OH, -OTHP, lub -H; a R6 oznacza -OH lub -H, pod warunkiem, że gdy R5 oznacza -OH lub -OTHP, to R6 ma inne znaczenie niż -OH.
Najkorzystniejszymi lekami są opisane uprzednio antybiotyki antracyklinowe o wzorze
26. Dla specjalisty zrozumiałe jest, że ten wzór strukturalny obejmuje związki będące lekami lub pochodnymi leków, które uzyskały różne nazwy generyczne lub pospolite. Poniższa tabela 1 przedstawia pewną liczbę leków antracyklinowych, które są szczególnie korzystne do stosowania w sposobie według wynalazku oraz ich nazwy generyczne lub pospolite.
Ze związków przedstawionych w tabeli 1 najbardziej korzystnym lekiem jest adriamycyna. Adriamycyna (określana również jako “ADM“) jest antracykliną o wzorze 26, w której R1 oznacza -CH2OH, R2 oznacza -OCH3, R4 oznacza -NH2, R5 oznacza -OH a R6 oznacza -H.
172 718
Tabela 1
Związek Ri R3 R4 R5 R6
Daunorubicyna ch3 OCH3 nh2 OH H
Adriamycyna ch2oh och3 nh2 OH H
Detorubicyna CH2OCOH(OC2H5)2 och3 nh2 OH H
Karminomycyna ch3 OH nh2 OH H
Idarubicyna ch3 H nh2 OH H
Epirubicyna CH2OH och3 nh2 H OH
Esorubicyna ch2oh och3 nh2 H H
THP ch2oh och3 nh2 OTHP H
AD-32 CH2OCO(CH2)3CH3 och3 NHCOCF3 OH H
aDaunorubicyna jest alternatywną nazwą daunorubicyny Doksorubicyna jest alternatywną nazwą adriamycyny
Dla specjalisty zrozumiałe jest, że zakres określenia “ligand“ obejmuje dowolną cząsteczkę wiążącą się specyficznie albo reagującą z utworzeniem asocjatu lub kompleksu z receptorem lub innym ugrupowaniem receptorowym związanym z daną populacją komórek celowych. Tą cząsteczkąreagującąz komórką, do której reagent lekowy jest przyłączony z koniugacie poprzez łącznik może być dowolna cząsteczka, która wiąże się, kompleksuje lub reaguje z populacjąkomórek, którą staramy się zmodyfikować terapeutycznie lub w jakikolwiek inny sposób biologicznie i która posiada wolną reaktywną grupę sulfydtr/l<^o^£ą(-SH) lub może być zmodyfikowana w taki sposób, aby zawierać taką grupę sulfydrylową. Cząsteczka reagująca z komórką działa dostarczając terapeutycznie czynne ugrupowanie leku do szczególnej populacji komórek celowych, z którą ligand reaguje. Do takich cząsteczek należą, bez ograniczania się do nich, białka o dużym ciężarze cząsteczkowym (generalnie wyższym niż 10000 daltonów) takie jak na przykład przeciwciała, białka o niższym ciężarze cząsteczkowym (generalnie niższym niż 10000 daltonów), polipeptydy lub ligandy peptydowe i ligandy niepeptydowe.
Do immunoniereaktywnych białek, polipeptydów lub ligandów peptydowych, które mogą być stosowane w sposobie według wynalazku należą, bez ograniczania się do nich, transferyna, czynniki wzrostu naskórka (“EGF“), bombenzyna, peptyd uwalniający gastrynę, czynnik wzrostu pochodzenia płytkowego, IL-2, IL-6, czynniki wzrostu nowotworu (“TGF“), takie jak TGF-α i TGF-β, czynnik wzrostu krowianki (“VGF“), insulina i insulino-podobne czynniki wzrostu I i II. Do ligandów niepeptydowych należą na przykład sterydy, węglowodany i lektyny.
Ligandami immunoreaktywnymi są immunoglobuliny rozpoznające przeciwciała (określane również jako “przeciwciała“) lub ich fragmenty rozpoznające przeciwciała. Szczególnie preferowane są immunoglobuliny, które są zdolne do rozpoznawania antygenów nowotworowych. Stosowane tu określenie “immunoglubulina“ odnosi się do dowolnej znanej klasy lub podklasy immunoglobulin, takiej jak IgG, IgA, IgM, IgD lub IgE. Preferowane są immunoglobuliny należące do klasy immunoglobulin IgG. Immunoglobulina może pochodzić od dowolnej istoty. Korzystnie jednakże immunoglobulina jest pochodzenia ludzkiego, mysiego, szczurzego lub króliczego. Ponadto immunoglobuliny mogą być poliklonalne lub monoklonalne, korzystnie monoklonalne.
Wynalazek obejmuje również zastosowanie fragmentów immunoglobulin rozpoznających antygen. Do takich fragmentów immunoglobulin należą na przykład fragmenty Fab’, F(ab’)2, F lub Fab, lub inne fragmenty immunoglobulin rozpoznające antygen. Takie fragmenty immunoglobulin mogą być wytwarzane na przykład przez trawienie enzymami proteolitycznymi, na przykład trawienie pepsyną lub papainą, przez reduktywne alkilowanie lub technikami rekom8
172 718 binacyjnymi. Materiały i metody wytwarzania takich fragmentów są dobrze znane specjalistom. Patrz generalnie Parham, J. Immunology, 131, 2895 (1983); Lamoyi i wsp., J. Immunological Methods, 56, 235 (1983); Parham, id., 53, 133 (1982); iMatthews i wsp., id., 50, 239 (1982).
Immunoglobulinamoże być “przeciwciałem chimerycznym© jako że termin ten jest uznawany w stanie techniki. Immunoglobulina może być również przeciwciałem “^funkcjonalnym41 lub “hybrydowym© tojest przeciwciałem mającymjedno ramię specyficzne dlajednego miejsca antygenowego, takiego jak antygen nowotworowy, podczas gdy drugie ramię rozpoznaje inny cel, na przykład hapten, który jest czynnikiem śmiertelnym dla niosącej antygen komórki nowotworowej lub który jest związany z takim czynnikiem. Alternatywnie przeciwciałem bifunkcjonalnym może być przeciwciało, w którym każde z ramion ma specyficzność w stosunku do różnych epitopów antygenu nowotworowego komórki, która ma być modyfikowana terapeutycznie lub biologicznie. W każdym z przypadków przeciwciała hybrydowe mająpodwójną specyficzność, korzystnie w stosunku do jednego lub więcej miejsc wiążących specyficznych dla haptenu z wyrobu albo jednego lub więcej miejsc wiążących dla antygenu celowego, na przykład antygenu nowotworowego, antygenu organizmu infekującego lub innego stanu chorobowego.
Biologicznie ^funkcjonalne przeciwciała są opisane na przykład w europejskim opisie patentowym nr 105360. Takie hybrydy lub przeciwciała bifunkcjonalne mogą być otrzymane, jak wspomniano, zarówno na drodze biologicznej, przy użyciu technik fuzji komórkowej, jak i na drodze chemicznej, zwłaszcza przy użyciu czynników sieciujących lub reagentów tworzących mostki disiarczkowe, i mogą składać się z całych przeciwciał i/lub ich fragmentów. Metody otrzymywania takich przeciwciał hybrydowych są ujawnione na przykład w zgłoszeniu PCT W083/03679 i europejskim zgłoszeniu patentowym nr 217577. Szczególnie korzystnymi przeciwciałami bifunkcjonalnymi sąprzeciwciała otrzymane na drodze biologicznej z “polidom“ lub “kwadrom© lub przeciwciała otrzymane syntetycznie przy zastosowaniu czynników sieciujących, takich jak eter bis(maleimido)metylowy (“BMME“) lub innych czynników sieciujących, znanych specjalistom.
Ponadto immunoglobulina może być przeciwciałem o pojedynczym łańcuchu (“SCA“). Takie przeciwciała mogą składać się z fragmentów pojedynczych łańcucha Fv (“SCFV“), w których domena zmienna lekka (“VL“) i domena zmienna ciężka (“VH“) są połączone mostkiem peptydowym lub wiązaniami disiarczkowymi. Immunoglobulina może również składać się z pojedynczych domen Vh (dAbs), które posiadają czynność antywiążącą. Patrz na przykład G. Winter i C. Mikstein, Naturę, 349, 295 (1991); R. Glockshuber i wsp., Biochemistry 29, 1362 (1990); i E. S. Ward i wsp., Naturę 341, 544 (1989). ,
Szczególnie korzystne do stosowania w niniejszym wynalazku sąmonoklonalne przeciwciała chimeryczne, zwłaszcza te przeciwciała chimeryczne, które wykazują specyficzność w stosunku do antygenów nowotworowych. Stosowane tu określenie “przeciwciało chimeryczne44 odnosi się do przeciwciała monoklonalnego, zwykle otrzymanego technikami rekombinacji DNA, posiadającego region zmienny, tojest region wiążący, z jednego źródła oraz co najmniej część regionu stałego, pochodzącego z różnych źródeł lub gatunków. Szczególnie korzystne w niektórych zastosowaniach wynalazku, zwłaszcza w terapii ludzi, sąprzeciwciała chimeryczne, posiadające mysi region zmienny i ludzki region stały, ponieważ takie przeciwciała łatwo się otrzymuje i mogą one być mniej immunogenne niż czysto mysie przeciwciała monoklonalne. Takie chimeryczne przeciwciała ludzkie/mysie są produktem ekspresji genów immunoglobuliny, zawierających segmenty DNA kodujące zmienne regiony immunoglobuliny mysiej i segmenty DNA kodujące stałe regiony immunoglobuliny ludzkiej. Innymi formami przeciwciał chimerycznych objętymi przez wynalazek są takie przeciwciała, w których zmodyfikowano lub zmieniono klasę lub podklasę przeciwciała oryginalnego. Takie “chimeryczne44 przeciwciała są również określane jako “przeciwciała z przesuniętą klasą“. Do metod wytwarzania takich przeciwciał należą konwencjonalne techniki rekombinacji DNA i transfekcji genów, obecnie bardzo
172 718 dobrze znane w stanie techniki. Patrz na przykład Morrison S. L. i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci., 81, 6851 (1884).
Określenie “przeciwciało chimeryczne11 obejmuje koncepcję “przeciwciała humanizowanego“, to jest takiego przeciwciała, w którym szkielet lub “regiony określające komplementarność“ (“CDR“) zostały zmodyfikowane tak, że zawierają CDR immunoglobuliny o innej specyficzności w porównaniu z immunoglobuliną macierzystą. W korzystnej postaci CDR mysi jest szczepiony na regionie szkieletowym przeciwciała ludzkiego w celu otrzymania “przeciwciała humanizowanego© Patrz na przykład L. Riechmann i wsp., Nature 332,323 (1988); M. S. Neuberger i wsp., Nature 314,268 (1985). Szczególnie korzystne CDR odpowiadającą CDR reprezentującym sekwencje rozpoczynające antygeny wymienione powyżej dla przeciwciał chimerycznych i bifirnkcjonalnych. Przeciwciała ze zmodyfikowanymi CDR opisane są w europejskim zgłoszeniu patentowym nr 239400 (opublikowanym 30 września 1987).
Można otrzymać przeciwciało bifi.mkcjonalno-chimeryczne, które posiadałoby korzystne cechy niższej immunogeniczności przeciwciała chimerycznego lub humanizowanego, jak również elastyczność, zwłaszcza w działaniu terapeutycznym, opisanych powyżej przeciwciał bifunkcjonalnych. Takie przeciwciała bifunkcjonalno-chimeryczne mogą być zsyntetyzowane na przykład poprzez syntezę chemiczną przy użyciu czynników sieciujących i/lub metod rekombinacyjnych w rodzaju opisanych powyżej. Zakres wynalazku nie jest w żadnym wypadku ograniczony jakąkolwiek szczególną metodą wytwarzania przeciwciała, czy to bifunkcjonalnego, chimerycznego, bifunkcjonalno-chimerycznego, humanizowanego, lub też jego fragmentu rozpoznającego antygen lub jego pochodnej.
Ponadto zakres wynalazku obejmuje immunoglobuliny (określone powyżej) lub fragmenty immunoglobulin, z którymi skondensowane są aktywne białka, na przykład enzym rodzaju ujawnionego przez Neubergera i wsp., w zgłoszeniu PCT nr W086/01533.
Jak wspomniano, konstrukcje przeciwciał “bifunkcjonalnych“, “skondensowanych^, “chimerycznych (w tym humanizowanych) i “bifunkcjonalno-chimerycznych“ (w tym humanizowanych) obejmują konstrukcje zawierają fragmenty rozpoznające antygen. Takie fragmenty mogą być otrzymane poprzez tradycyjne enzymatyczne rozszczepienie całych przeciwciał bifunkcjonalnych, chimerycznych, humanizowanych lub chimeryczno-bifunkcjonalnych. Jeśli jednakże niezmienione przeciwciała nie są podatne na takie rozszczepienie ze względu na naturę konstrukcji przeciwciała, wspomniane konstrukcje mogą być otrzymane przy użyciu fragmentów immunoglobulin jako materiałów wyjściowych; lub jeśli stosuje się techniki rekombinacyjne, sekwencje DNA mogąbyć dopasowywane w celu zakodowania żądanego “fragmentu“, który po ekspresji może być łączony in vivo lub in vitro, środkami chemicznymi lub biologicznymi, w celu otrzymania końcowego fragmentu · niezmienionej immunoglobuliny. W tym kontekście zatem stosowane jest określenie “fragment©
Ponadto, jak wspomniano powyżej, immunoglobuliną (przeciwciało) lub jej fragment stosowane w niniejszym sposobie według wynalazku mogą być z natury poliklonalne lub monoklonalne. Jednakże korzystnymi immunoglobulinami są przeciwciała monoklonalne. Wytwarzanie takich przeciwciał poliklonalnych lub monoklonalnych jest obecnie dobrze znane tym specjalistom, którzy sąw pełni zdolni do wytworzenia użytecznych immunoglobulin, mogących znaleźć zastosowanie w wynalazku. Patrz na przykład G. Kohler i C. Milstein, Nature 256, 495 (1975). Ponadto hybrydy i/lub przeciwciała monoklonalne wytwarzane przez takie hybrydy, które są użyteczne w praktycznej realizacji wynalazku są powszechnie dostępne z takich źródeł jak American Type Culture Collection (“ATCC“) 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852 lub dostępne w handlu na przykład z firmy Boehringer-Mannheim Biochemicals, P.O Box 50816, Indianapolis, Indiana 46250.
172 718
Szczególnie korzystnymi przeciwciałami monoklonalnymi do stosowania w mniejszym wynalazku są przeciwciała rozpoznające antygeny nowotworowe. Do takich przeciwciał należą, bez ograniczania się do nich, na przykład następujące przeciwciała:
Rozpoznawane miejsce antygenowe Przeciwciała monoklonalne Odnośniki
Nowotwory płuc KS1/4 534,F8; 604A9 N. M. Varki i wsp., Cancer Res. 44:681, 1984 F. Cuttitta i wsp., w: G. L. Wright (ed) Monoclonal Antibodies and Cancer, Marcel Dekker, Inc., NY. str. 161, 1984.
Rak płaskokomórkowy płuc G1, LuCa2, LuCa3, LuCa4 Kyoizumi et al., Cancer Res. 45:3274,1985
Rak drobnokomórkowy płuc TFS-2 Okabe et al., Cancer Res. 45:1930,1985
Rak okrężnicy 11.285.14 14.95.55 NS-3a-22„NS-10 NS-19-9„NS-33a NS-52a„17-1A G Rowland et al., Cancer Immunol. Immunother , 19:1,1985 Z. Stemplewski i wsp., Cancer Res., 41: 2723, 1981
Rak zarodkowy MoAb 35 lub ZCE025 Acolla R. S. i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci., (USA), 77:563, 1980
Czerniak 9 2.27 T. F Bumol i R. A. Reisfeld, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79.1245,1982
p97 96,5 K. E. Hellstrom i wsp., Monoclonal Antibodies and Cancer, loc. cit. str. 31
Antygen T65 T101 Boehringer-Mannheim, P.O.Box 50816, Indianapolis, IN 46250
Ferrytyna Antyferryna R24 Boehringer-Mannheim, P.O. Box 50816, Indianapolis, IN 46250 W. G. Dippold i wsp., Proc Natl. Acad. Sci. USA, 77:6114,1980
Nerwiak niedojrzały P1 153/3 MIN 1 UJ13A R. H. Kennet i F. Gilbert, Science, 203:1120, 1979 J. T. Kemshead w Monoclonal Antibodies and Cancer, loc. cit. str. 49 Goldman i wsp., Pediatrics, 105:252, 1984
Glejak BF7, GE2, CG 12 N. de Tribolet et al., w Monoclonal Antibodies and Cancer, loc. cit. str. 81
Gangliozyd L6 I. Hellstrom et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83- 7059(1986); Patenty USA nr 4906562, udzielony 6 marca 1990 i nr 4935495, udzielony 19 czerwca 1990.
Chimeryczne L6 Zgłoszenie patentowe USA nr 07/923244, zgłoszone 27 października 1986, odpowiednik publikacji PCT W088/03145, opublikowanej 5 maja 1988.
Lewis Y BR64 Zgłoszenia patentowe USA nr 07/289635, zgłoszone 22 grudnia 1988 i nr 07/443696, zgłoszone 29 listopada 1989, odpowiednik europejskiego zgłoszenia patentowego nr 375562, opublikowanego 27 czerwca 1990.
Fukozylowany Lewis Y BR96, chimeryczne BR96 Zgłoszenie patentowe USA nr 07/374947, zgłoszone 30 czerwca 1989 i nr 07/544246, zgłoszone 26 lipca 1990, odpowiednik zgłoszenia PCT nr WO 91/00295, opublikowanego 10 stycznia 1991.
Rak sutka B6.2,B72.3 D. Colcher i wsp , w Monoclonal Antibodies and Cancer, loc. cit. str. 121.
172 718 cd. ze strony 10
Kostniakomięsak 791T/48, 791T/36 M. J. Embleton, ibid, str. 181
Białaczka CALL 2 antyidiotypowe C. T. Teng i wsp., Lancet, 101, 1982 R. A. Miller i wsp., N. Eng. J. Med., 306.517, 1982
Rak jajnika OC 125 R C. Bast i wsp., J. Clin. Invest., 68.1331, 1981.
Rak prostaty D83.21, P6.2 Turp-27 J. J. Starling i wsp., w Monoclonal Antibodies and Cancer, loc. cit., str. 253.
Rak nerek A6H, D5D P H. Lange i wsp., Surgery, 98.143,1985
W najbardziej korzystnej postaci koniugat zawierający ligand otrzymuje się z chimerycznego przeciwciała BR96, “ChiBR96“, ujawnionego w zgłoszeniu patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 07/544246, które jest odpowiednikiem opublikowanego zgłoszenia PCT nr WO 91/00295, opublikowanego 10 stycznia 1991. ChiBR96 jest internalizującym chimerycznym przeciwciałem mysim/ludzkim i reaguje, jak wspomniano, z fukozylowanym antygenem Lewis Y, powstającym w wyniku ekspresji w ludzkich rakowych, takichjak komórki pochodzące z raka sutka, płuc, okrężnicy i jajnika. Hybryda odpowiedzialna za ekspresję chimerycznego BR96, zidentyfikowana jako ChiBR96 została złożona do depozytu na mocy Porozumienia Budapeszteńskiego 23 maja 1990 w American Type Culture Collection (“ATCC“), 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852. Próbki tej hybrydy sądostępne pod numerem akcesyjnym ATCC HB 10460. ChiBR96 jest otrzymany częściowo z macierzystego źródła BR96. Hybryda odpowiedzialna za ekspresję BR96 została oddana do depozytu 21 lutego 1989 w ATCC na mocy Porozumienia Budapeszteńskiego i jest dostępna pod numerem akcesyjnym HB 10036. Żądanąhybrydę namnaża się, a uzyskane przeciwciała izoluje z supematanta hodowli komórkowej stosując standartowe techniki, obecnie dobrze znane w stanie techniki. Patrz na przykład “Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications“, Hurell (ed.) (CRC Press, 1982).
W drugiej wysoce korzystnej postaci wynalazku immunokoniugat otrzymuj e się z mysiego przeciwciała monoklonalnego BR64, ujawnionego w zgłoszeniu patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 07/289635 i zgłoszeniu patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 07/443696, którego odpowiednikiem jest europejskie zgłoszenie patentowe nr 375562. Jak wspomniano powyżej, przeciwciało to jest również internalizujące i reaguje z antygenem Lewis Y, powstającym w wyniku ekspresji w komórkach rakowych otrzymanych z ludzkiej okrężnicy, sutka, jajnika i płuc. Hybryda odpowiedzialna za ekspresję przeciwciała BR64, zidentyfikowana jako BR64 została zdeponowana 3 listopada 1988 na mocy Porozumienia Budapeszteńskiego w ATCC i jest dostępna pod numerem akcesyjnym HB 9895. Hybryda jest namnażana, a żądane przeciwciało izolowane przy użyciu standartowych technik dobrze znanych w stanie techniki, takich jak opisane powyżej.
W trzeciej wysoce korzystnej postaci wynalazku immunokoniugat według wynalazku jest otrzymywany z przeciwciała mysiego L6, ujawnionego w patentach USA nr 4906562, udzielonym 6 marca 1990 i nr 4935495, udzielonym 19 czerwca 1990. L6 jest przeciwciałem nieinternalizującym, czynnym przeciwko antygenowi gangliozydowemu, uzyskiwanemu w wyniku ekspresji w ludzkich komórkach rakowych otrzymanych z ludzkiego raka niedrobnokomórkowego płuc, raka sutka, okrężnicy lub jajnika. Hybryda odpowiedzialna za ekspresję L6 i zidentyfikowana jako L6 została zdeponowana na mocy Porozumienia Budapeszteńskiego 6 grudnia 1984 w ATCC i jest dostępna pod numerem akcesyjnym 8677. Hybryda jest namnażana i żądane przeciwciało izolowane przy użyciu standartowych technik, na które powołano się powyżej. Cimeryczna postać przeciwciała L6 jest w razie potrzeby opisana w zgłoszeniu patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 07/923244, będącym odpowiednikiem opublikowanego zgłoszenia PCT o numerze WO 88/03145.
Zatem znaczenie stosowanych tu określeń “immunoglobulina“ i “przeciwciało“ obejmuje wszystkie wspomniane powyżej formy lub konstrukcje immunoglobulin/przeciwciał.
172 718
W sposobie według wynalazku jako związki pośrednie zawierające receptor addycji Michaela i acylohydrazon pochodne leku o wzorze 2, w którym D jest ugrupowaniem leku, n jest liczbą całkowitą od 1do 10 a R jest receptorem addycji Michaela, a ich znaczenia są zdefiniowane powyżej.
Szczególnie korzystnym związkiem pośrednim objętym wzorem 2a, mającym zastosowanie do wytwarzania koniugatu według wynalazku jest związek zdefiniowany wzorem 2b, w którym R, oznacza -CH3, -CH2OH, -CH2OCO(CH2)3CH3 lub -CH2OCOCH(OC2H5)2; R3 oznacza -OCH3, -OH lub wodór; R oznacza -NH2, -NHCOCF3, 4-morfolinyl, 3-cyjano-4-morfolinyl, 1-piperydynyl, 4-metoksy-1-piperydynyl, benzyloaminę, dibenzyloaminę, cyjanometyloaminę lub 1-cyjano-2-metoksyetyloaminę. R5 oznacza -OH, -OTHP lub wodór; R6 oznacza -OH lub wodór, pod warunkiem że gdy R5 oznacza -OH lub -OTHP to R6 ma inne znaczenie niż -OH; n jest liczbą całkowitą od 1 do 10; a R jest ugrupowaniem receptora addycji Michaela.
Najbardziej korzystny związek pośredni według wynalazkujest zdefiniowany wzorem 2c, w którym Rb R3, R4, R5 i R6 mają znaczenia takie jak zdefiniowane dla wzoru 2b.
Jako związek pośredni stosowany jest również w wynalazku ligand ukierunkowujący, zawierający swobodnie reagującą grupę sulfhydrylową. Grupa sulfhydrylowa może być zawarta w natywnym ligandzie ukierunkowującym lub może być otrzymywana bezpośrednio z ligandu lub z derywatyzowanej pochodnej ligandu. W korzystnym sposobie wytwarzania koniugatów według wynalazku grupa sulfhydrylową w ligandzie lub zmodyfikowany ligand reaguje bezpośrednio z receptorem addycji Michaela w związku pośrednim o wzorze 2a z utworzeniem koniugatu końcowego. Przy zastosowaniu tego sposobu do każdego ligandu można na ogół przyłączyć od około jednej do około dziesięciu cząsteczek leku. Zatem we wzorze 1 q może być równe od około 1 do około 10.
Po utworzeniu koniugatu część określana jako receptor addycji Michaela staje się adduktem Michaela. Zatemjeśli na przykład ugrupowanie receptora Michaela w związku o wzorze 2a lub 2b jest ugrupowaniem maleimidowym, to odpowiadająca część końcowego koniugatu o wzorze 1 określana jako addukt Michaela będzie ugrupowaniem sukcynoimidowym. Zatem określenie “addukt Michaela“ odnosi się do ugrupowania, które otrzymuje się, gdy receptor addycji Michaela, szczegółowo zdefiniowany poniżej, ulega reakcji addycji Michaela.
Sposób wytwarzania związku o wzorze 1 zdefiniowanego powyżej, polegający na tym, że zdefiniowany powyżej związek o wzorze 2a poddaje się reakcji z ligandem, który zawiera reaktywną grupę sulfhydrylową lub jest zmodyfikowany albo derywatyzowany tak, że zawiera reaktywną grupę sulfhydrową i ewentualnie otrzymany produkt wyodrębnia się. Jest to korzystny sposób wytwarzania związków o wzorze 1. Sposób wytwarzania związku o wzorze 1, polega na tym, że związek o wzorze 2a poddaje się reakcji ze związkiem o wzorze 3 i ewentualnie wyodrębnia się otrzymany produkt.
Jest zrozumiałe dla specjalisty, że w sposobie wytwarzania według wynalazku konieczne może być zabezpieczenie lub zablokowanie różnych reaktywnych grup funkcyjnych w związkach wyjściowych i związkach pośrednich gdy reakcja pożądana jest prowadzona na innych częściach cząsteczki. Po zakończeniu pożądanych reakcji lub w każdym dowolnym czasie takie grupy zabezpieczające zwykle usuwa się na przykład przez hydrolizę lub hydrogenolizę. Takie etapy zabezpieczania i odbezpieczania są powszechnie stosowane w chemii organicznej. Wiadomości o grupach zabezpieczających, które mogą być użyteczne w wytwarzaniu nowych związków sązamieszczone w książkach “Protective Groups in Organic Chemistry, McOmie, ed., Plenum Press, N. Y., N. Y., (1973); i “Protective Groups in Organie Synthesis“, Greene, ed., John Wiley & Sons, New York, New York (1981).
Przykładowo do użytecznych grup zabezpieczających grupy aminowe należą grupy alkanoilowe C1-C1 takie jak formylowa, acetylowa, dichloroacetylowa, propionylowa, heksanoilowa, 3,3-dietyloheksanoilowa, γ-chlorobutyrylowa i podobne; grupy alkoksykarbonylowe CrC10 i aryloksykarbonylowe Ck-C^, takie jak tert-butoksykarbonylowa, benzyloksykarbonylowa, alliloksykarbonylowa, 4-nitrobenzyloksykarbonylowa i cynnamoiloksykarbonylowa; chlorowco-(CrC1o)-alkoksykarbonylowe, takie jak 2,2,2-trichloroetoksykarbonylowa; i grupy aryloal172 718 kilowe i alkenylowe CrCn, takie jak benzylowa, fenetylowa, allilowa, tritylowa i podobne. Do innych grup powszechnie stosowanychjako grupy zabezpieczające grupy aminowe należągrupy o postaci enamin, otrzymanych z β-ketoestrów, takich jak acetooctan metylu lub etylu.
Do użytecznych grup zabezpieczających grupy karboksylowe należą na przykład grupy CrC10alkilowe, takie jak metylowa, tert-butylowa, decylowa; chlorowco-C1-CK)alkilowe, takie jak 2,2,2-trichloroetylowa i 2-jodoetylowa; C5-C|5aryloalkilowe takie jak benzylowa, 4-metoksybenzylowa, 4-nitrobenzylowa, trifenylometylowa, difenylometylowa; ©C^lkanoiloksymetylowe takie jak acetoksymetylowa, propionoksymetylowa i podobne; oraz grupy takie jak fenacylowa, 4-chlorowcofenacylowa, allilowa, dimetyloallilowa, tri(CrC3-alkilo)sililowe takie jak trimetylosililowa, β-p-toluenosulfonyloetylowa, β-p-nitrofenylotioetylowa, 2,4,6-trimetylobenzylowa, β-metylotioetylowa, ftalimidometylowa, 2,4-di-nitrofenylosulfenylowa, 2-nitrobenzhydrylowa i grupy pokrewne.
Podobnie do użytecznych grup zabezpieczających grupy hydroksylowe należą na przykład grupa formylowa, grupa chloroacetylowa, grupa benzylowa, grupa benzhydrylowa, grupa tritylowa, grupa 4-nitrobenzylowa, grupa trimetylosililowa, grupa fenacylowa, grupa tert-butylowa, grupa metoksymetylowa, grupa tetrahydropiranylowa i podobne.
Generalnie pośredniąpochodnąhydrazonowąleku o wzorze 2a, 2b lub 2c, zawierającą receptor addycji Michaela można otrzymać, zależnie od ugrupowania receptora addycji Michaela, przez reakcję leku (lub leku derywatyzowanego) z hydrazydem zawierającym receptor addycji Michaela sposobem ogólnie przedstawionym na schemacie 1 (metoda A). Jak wspomniano poniżej, metoda A przedstawiona na schemacie 1 jest korzystna gdy receptor addycji Michaela jest ugrupowaniem maleimidowym.
Alternatywnie, związek o wzorze 2a może być otrzymany przez reakcję leku z hydrazydem z utworzeniem pośredniej hydrazonowej pochodnej leku, a następnie reakcję tego związku z ugrupowaniem zawierającym receptor addycji Michaela zgodnie z ogólnym sposobem przedstawionym na schemacie 2 (metoda B).
W metodach A i B, przedstawionych na schematach 1 i 2 D, n i R mają znaczenia podane poprzednio. W metodzie B przedstawionej na schemacie 2, L oznacza grupę odszczepialną, taką jak na przykład chlorowiec, grupa mezylanowa lub tozylanowa, zdolną do ulegania wymianie nukleofilowej, natomiast C oznacza grupę nadającąreceptorowi addycji Michaela R właściwości dobranego reagenta nukleofilowego. Do szczególnie użytecznych grup przedstawionych przez C należą przykładowo jony metali alkalicznych, takie jak Na+, K+ lub Li+.
Receptor addycji Michaela oznacza ugrupowanie, które jest zdolne do reagowania z reagentem nukleofilowym tak, aby zachodziła reakcja addycji nukleofilowej, charakterystyczna dla reakcji addycji Michaela. Jak wspomniano po zajściu addycji nukleofilowej ugrupowanie receptora addycji Michaela jest określane jako “addukt Michaela“.
Do receptorów Michaela stosowanych w sposobie przedstawionym na schemacie 1 należą na przykład kwasy cęieetylenowe lub α,β-tiokwasy, takie jak kwasy zawierające ugrupowania -C=C-COOH, -C=C-C(O)SH lub -C=C-C(S)OH; estry lub tioestry α,β-etylenowe, w których ugrupowanie alkilowe jest inne niż metyl lub etyl, na przykład zawierające ugrupowanie -C=C-COOR, -C=C-C(S)OR, -C=C-C(S)R lub -C=C-C(O)-SR, w których R oznacza grupę tworzącą ester inną niż metyl lub etyl; amidy, imidy, tioamidy i tioamidy α,β-etylenowe (cykliczne albo acykliczne), na przykład zawierające takie ugrupowania jak -C=C-CONR2, -C=C-CONHCO-, -O C-CSNR2, -C=C-CSNHO- lub -C=C-CSNHCS-, albo cykliczne albo acykliczne, w których -CONR2 lub -CSNR2 oznacza amid pierwszorzędowy, drugorzędowy lub trzeciorzędowy; kwasy lub tiokwasy α,β-acetylenowe, na przykład zawierające takie ugrupowania jak -CcC-COOH, -C=C(S)OH, -Cs=C-(S)SH lub -CcC-C(O)-SH; estry α,β-acetylenowe, na przykład zawierające ugrupowanie takie jak -C=C-COOR, -C-sC-C(S)OR, -C=C(S)SR lub -C=C-C(O)-SR, gdzie R oznacza grupę tworzącą ester inną niż metyl lub etyl; nitryle α,β-etylenowe, na przykład zawierające ugrupowanie takie jak -CC-CN; pochodne cyklopropanu reaktywne w addycji Michaela, na przykład 1-cyjano-1-etoksykarbonylocyklopropan o wzorze 4;
172 718 bromek winylodimetylosulfoniowy, na przykład zawierający ugrupowanie -C=C-C+(Me)2Br’; sulfon ο,β-etyłenowy, na przykład zawierający ugrupowanie o wzorze 5; nitrozwiązki α, β-etylenowe, na przykład zawierające ugrupowanie -C=C-NO2; fosfoniowe związki α,β-etylenowe, na przykład zawierające grupę o wzorze 6; związek zawierający grupę taką jak C-C-CON, którą można znaleźć na przykład w heterocyklach aromatycznych, takich jak 2- lub 4-winylopirydyna; lub związek zawierający ugrupowanie α,β-nienasyconego jonu tionowego, takie jak ugrupowanie o wzorze 7.
Do receptorów addycji Michaela stosowanych w metodzie B przedstawionej na schemacie 2 należą aldehydy α,β-etylenowe, na przykład związki zawierające ugrupowanie -C-C-CHO; ketony α,β-etylenowe, na przykład związki zawierające ugrupowanie o wzorze 8; estry lub tioestry α,β-etylenowe, takie jak związki zawierające ugrupowania -C-C-COOR, -C-C-C(S)OR, -C-C-C(S)SR lub -C=C-C(O)-SR, w których R oznacza ugrupowanie tworzące ester, którym j est metyl lub etyl, na przykład ugrupowanie o wzorze 9 aldehydy lub ketony α,β-acetylenowe, na przykład związki zawierające ugrupowanie -OC-CHO lub -C^C-CO-; estry lub tioestry α,β-acetylenowe, które jako ugrupowanie alkilowe posiadająmetyl lub etyl, na przykład związki zawierające grupę -CsC-COOR, -C^C-C(S)OR, -COC(0)SR lub -CsC-CSSR, w których R oznacza ugrupowanie tworzące ester, którym jest metyl lub etyl.
Specjalista może znać inne receptory Michaela, które mogą być stosowane w wynalazku. Ogólne omówienie reakcji addycji Michaela zamieszczone jest w książkach E. D. Bergman, D. Ginsberg i R. Pappo, Org. React. 10,179-555 (1959); oraz do D. A. Oare i C. H. Heathcock, Topics in Stereochemistry, tom. 20, wyd., E. L. Eliel i S. H. Wilen, John Wiley and Sons, Inc. (1991) oraz w pozycjach literaturowych tam cytowanych.
Dokładne warunki reakcji stosowane do wytworzenia związków pośrednich o wzorach 2a, 2b i 2c zależą od rodzaju leku i receptora Michaela zastosowanych do reakcji. Najbardziej korzystnym związkiem pośrednim według wynalazku jest związek przedstawiony powyżej wzorem 2c, w którym ugrupowaniem leku jest lek antracyklinowy, a receptorem addycji Michaela jest grupa maleimidowa. Jak wspomniano powyżej, w tej reakcji stosuje się opisaną powyżej metodę A, przedstawioną na schemacie 1. Po reakcji z ligandem (holowanym, modyfikowanym lub innym) maleimidowy receptor addycji Michaela staje się grupąsukcynoimidową(“addukt Michaela“) w końcowym koniugacie.
Ligandy zawierające grupy sulfhydrylowe występują naturalnie (to jest ligand nie jest modyfikowany) lub mogą być wytwarzane na przykład przez (a) tiolowanie ligandu przez reakcję z reagentem tiolującym, takim jak SMCC lub N-sukcynoimidylo-3-(2-pirydylotio)propionian (“SPDP“) a następnie redukcję produktu; (b) tiolowanie natywnego ligandu przez reakcję z iminotiolanem (“IMT“); (c) addycję reszty aminokwasowej zawierającej grupę sulfhydrylową, na przykład reszty cysteinowej do ligandu, na przykład białka, peptydu lub polipeptydu nie posiadającego reaktywnego i dostępnego ugrupowania sulfhydrylowego; lub (d) redukcję wiązania disiarczkowego w natywnej cząsteczce przy użyciu stosowanego do takich celów środka redukującego, na przykład ditiotreitolu (“DTT“). Sposób (d) jest najbardziej korzystnym sposobem wytwarzania grup sulfhydrylowych w cząsteczkach przeciwciał stosowanych w koniugatach według wynalazku.
Jeśli do wytwarzania koniugatu według wynalazku stosuje się reagent holujący, taki jak SDPP lub iminotiolan, w koniugacie o wzorze 1 zostanie wprowadzona krótka reszta “przedłużacza“ między ugrupowaniem receptora addycji Michaela a ligandem. W takim przypadku w związku o wzorze 1 z będzie równe 1. W sytuacji, w której stosuje się bezpośrednio wolnągrupę sulfhydrylową w ligandzie, na przykład poprzez zastosowanie ligandu zredukowanego za pomocą DTT (w szczególności przeciwciała “zrelaksowanego otrzymanego z zastosowaniem na przykład DTT) lub gdy w część ligandową cząsteczki wprowadzona jest reaktywna reszta, na przykład cysteina, z we wzorze 1 będzie równe 0, a między ligandem wiążącym a częścią adduktu Michaela w cząsteczce istnieć będzie bezpośrednie wiązanie tioeterowe. W celu utworzenia koniugatu ligand holowany lub ligand mający wolną, reaktywną grupę sulfhydrylową poddaje się
172 718 reakcji z hydrazonem o wzorze 2a zawierającym receptor addycji Michaela. Na ogół warunki reakcji powinny być dobrane z uwzględnieniem stabilności ligandu, leku oraz żądanej liczby ugrupowań leku, które mają być przyłączone do ligandu. Średnia liczba cząsteczek leku połączonych z ligandem może być zmieniana na przez (1) modyfikowanie ilości pośrednich związków lek-hydrazon o wzorze 2a w stosunku do liczby reaktywnych grup sulfhydrylowych ugrupowania ligandu w immunokoniugacie; lub (2) (a) modyfikowanie liczby reaktywnych grup sulfhydrylowych w ligandzie przez na przykład jedynie częściowe zredukowanie ligandu (w przypadku białka, peptydu lub polipeptydu), (b) przez włączenie ograniczonej liczby ugrupowań na przykład cysteiny do białka, peptydu lub polipeptydu, lub (c) przez ograniczenie stopnia holowania przez użycie mniej szych niż maksymalne ilości czynników tioluj ących, na przykład SDPP lub iminotiolanu. Chociaż miano -SH może się zmieniać, korzystnym poziomem wolnych grup sulfhydrylowych, zwłaszcza dla przeciwciała zrelaksowanego, jest maksimum które może być uzyskane przy użyciu wchodzących w grę szczególnych reagentów. Stopień zmienności miana -SH w sposobie z wykorzystaniem przeciwciała zrelaksowanego jest łatwo kontrolowany. Na przykład fig. 14 przedstawia wpływ miana -SH dla przeciwciał BR64 i chimerycznego BR96 zależnie od stosunku molowego DTT do ligandu, w 37°C dla reakcji trwającej 1,5 h. Różne klasy lub podklasy immunoglobulin mogą mieć różne liczby mostków disiarczkowych podatnych na redukcję takimi reagentami jak DTT. Zatem następnym względem branym pod uwagę przy oznaczaniu żądanego poziomu koniugacji przeciwciała lub fragmentu przeciwciała jest liczba grup disiarczkowych dostępnych dla redukcji do wolnych grup -SH. Generalnie jednakże korzystny koniugat o wzorze 1 ma średnio w danej reakcji od około 1 do około 10 cząsteczek leku na cząsteczkę ligandu. Szczególnie korzystnyjest średni stosunek molowy leku do ligandu (“MR“) równy od około 4 do około 8.
Po zakończeniu reakcji koniugat może być wyodrębniany i oczyszczony przy użyciu powszechnie znanych metod dializy, metod chromatograficznych i/lub filtracyjnych. Roztwór końcowy, zawierający koniugat na życzenie może być liofilizowany w celu uzyskania koniugatu w suchej, trwałej postaci, która może być bezpiecznie przechowywania i transportowana. Produkt liofilizowany może być przed podaniem rozpuszczany w jałowej wodzie lub innym odpowiednim rozcieńczalniku. Alternatywnie końcowy produkt może być zamrażany, na przykład w ciekłym azocie, a przed podaniem rozmrażany i doprowadzany do temperatury pokojowej.
W pierwszej korzystnej postaci wynalazku hydrazon antracyklinowy o wzorze 2a wytwarza się przez reakcję antracykliny z hydrazynem maieimido-(Cl-Cl0)-aikiiowym lub jego solą. Reakcja ta jest przedstawiona w opisanej wcześniej metodzie A ze schematu 1. Reakcję generalnie prowadzi się w dwóch etapach. W etapie pierwszym wytwarza się hydrazyd maleimido-(CrC10)-alkilowy lub jego sól. Po oczyszczeniu, na przykład przez chromatografię i/lub krystalizację, wolnązasadę hydrazydu lub jego sól poddaje się reakcji z żądaną antracykliną lub solą antracykliny. Po zatężeniu roztworu poreakcyjnego hydrazonowy produkt reakcji o wzorze 2a zawierający maleimid zbiera się i ewentualnie oczyszcza za pomocą standartowych technik oczyszczania.
Następnie hydrazon o wzorze 2a poddaje się reakcji z przeciwciałem zawierającym grupę sulfhydrylową w sposób wcześniej opisany. Jeśli przeciwciało jest tiolowane, na przykład przy użyciu N-sukcynoimidylo-3-(2-pirydyloditio)propionianu (“SDPP“), reakcję tiolowania generalnie przeprowadza się w dwóch etapach: (1) reakcja wolnej grupy aminowej przeciwciała z SDPP; i (2) redukcja disiarczku SDPP za pomocą DTT z otrzymaniem wolnej grupy -SH. W korzystnej procedurze w etapie (1) reakcji tiolowania stosunek molowy SDPP/przeciwciało zawarty jest w zakresie między około 7,5:1 do około 60:1, zależnie od liczby żądanych grup sulfhydrylowych, przy czym korzystny jest zakres od około 7,5 :1 do około 30:1, zwłaszcza dla BR64, a korzystnie około 20:1 dla BR96. Reakcję prowadzi się w,temperaturze między około 0°C a około 50°C, przy czym najbardziej korzystna jest temperatura - około 30°C. Reakcję można prowadzić w zakresie pH między około 6 a około 8, a najbardziej korzystnie, pH wynosi około 7,4. Redukcję w etapie (2) przy użyciu korzystnie DTT prowadzi się stosując stosunek molowy DTT/sDpP między około 2,5:1 do około 10:1. Najbardziej korzystnie stosunek molowy
172 718
DTT/SDPP wynosi około 5:1, a ilość moli SDPP jest taka, jaką wprowadzono w etapie (1) reakcji. Reakcję generalnie prowadzi się w temperaturze od około 0°C do około 40°C, korzystnie 0°C i zwykle jest ona zakończona po około 20 minutach. Po dializie i zatężeniu roztworu tiolowanego ligandu (w najbardziej korzystnej postaci przeciwciała) oznacza się stężenie molowe grup sulfhydrylowych w ligandzie i tiolowany ligand poddaje się reakcji z pochodną hydrazonową o wzorze 2a w żądanym stosunku molowym względem ilości reaktywnych grup sulfhydrylowych w ligandzie. Korzystnie stosunek ten wynosi co najmniej około 1:1. Reakcj ę tę generalnie prowadzi się w· temperaturze od około 0°C do około 25°C, korzystnie około 4°C. Uzyskany koniugat może być następnie oczyszczony za pomocą standartowych metod. Ten schemat reakcji jest przedstawiony na fig. 1a i 1b.
W drugiej· korzystnej postaci wytwarza się hydrazon o wzorze 2a w sposób opisany powyżej. Następnie hydrazon poddaje się reakcji z przeciwciałem uprzednio tiolowanym iminotiolanem (“IMT“), jak przedstawiono na fig. 1c. Tiolowanie ligandu (korzystnie przeciwciała) przy użyciu IMTjest na ogółjednym etapem reakcji. Stosunek IMT/przeciwciało może zawierać się w zakresie od około 30:1 do około 80:1, korzystnie około 50:1. Reakcję prowadzi się przez około 30 minut do około 2 godzin, korzystnie około 30 minut, przy pH równym od około 7 do około 9,5, korzystnie przy pH około 9, w temperaturze około 20°C do około 40°C, korzystnie około 30°C. Następnie produkt reakcji poddaje się reakcji z hydrazonem o wzorze 2a w temperaturze około 0°C do około 25°C, korzystnie około 4°C i przy pH równym około 7 do około 9,5, korzystnie około 7,4. Następnie koniugat oczyszcza się, stosując znane metody, na przykład dializę, filtrację lub chromatografię.
W trzeciej szczególnie korzystnej postaci wytwarza się w sposób opisany powyżej pośredni hydrazon o wzorze 2a. Następnie hydrazon poddaje się reakcji z ligandem, najbardziej korzystnie z przeciwciałem, w którym co najmniej jedną grupę disiarczkową zredukowano z utworzeniem co najmniej jednej grupy sulfhydrylowej. Szczególnie korzystnym ligandem jest “zrelaksowane przeciwciało“ opisane powyżej. Korzystnym środkiem redukującym do wytwarzania wolnej grupy sulfhydrylowej jest DTt, jakkolwiek zrozumiałe jest dla specjalistów, że do tego celu· mogą być odpowiednie inne środki redukujące.
“Przeciwciało zrelaksowane“ jest przeciwciałem, w którym zredukowano jeden lub więcej mostków disiarczkowych, korzystnie trzy lub więcej. Najbardziej korzystnie przeciwciałem zrelaksowanym jest przeciwciało, w którym zredukowano co najmniej cztery mostki disiarczkowe. W korzystnym sposobie wytwarzania przeciwciała zrelaksowanego (tojest zredukowanego) redukcję, korzystnie przy użyciu DTT, oraz oczyszczanie produktu reakcji prowadzi się w nieobecności tlenu, w atmosferze obojętnej, na przykład pod azotem lub argonem. Sposób ten, opisany szczegółowo poniżej, umożliwia ostrożną regulację stopnia zredukowania. Zatem sposób ten pozwala specjaliście na odtworzenie w dowolnym czasie żądanego stopnia zredukowania ligandu, a w związku z tym liczby wolnych grup -SH, dostępnych dla wytwarzania koniugatu według wynalazku.
W alternatywnej procedurze reakcję prowadzi się w warunkach otoczenia, jednakże stosuje się wystarczająco dużą ilość środka redukującego, korzystnie DTT, dla zrównoważenia ewentualnego ponownego utlenienia zredukowanych wiązań disiarczkowych, które może przebiegać. W każdym przypadku oczyszczanie produktu prowadzi się jak najszybciej po zakończeniu reakcji, a najbardziej korzystnie w atmosferze obojętnej, takiej jak na przykład płaszcz argonowy lub azotowy. Korzystnym sposobem wytwarzania ligandu zawierającego wolne grupy sulfhydrylowe jestjednakże sposób, w którym ze środowiska reakcji usuwa się tlen atmosferyczny. Przeciwciało wytworzone przy użyciu któregokolwiek ze sposobów określane jest jako przeciwciało “zrelaksowane© Produkt, niezależnie od sposobu wytworzenia, powinien być użyty do następnego etapu reakcji jak najszybciej lub przechowywany w warunkach pozwalających na uniknięcie ekspozycji na tlen, korzystnie w atmosferze obojętnej.
W sposobie, w którym tlen usuwa się ze środowiska reakcji (tojest reakcję prowadzi się w atmosferze obojętnej) ligand inkubuje się przez okres od około 30 minut do około 4 godzin, korzystnie przez 3 godziny, z nadmiarem molowym DTT. Stosunki molowe DTT/ligand mogą być
172 718 zawarte w zakresie między około 1:1 do około 20:1, korzystnie około 1:1 do około 10:1, najbardziej korzystnie około 7:1 do około 10:1, zależnie od żądanej liczby grup sulfhydrylowych. Przy prowadzeniu redukcji w obecności tlenu stosunek molowy DTT do ligandu zawarty jest w zakresie od około 50:1 do około 400:1, korzystnie od około 200:1 do około 300:1. W tym przypadku reakcję prowadzi się przez około 1 do około 4 godzin, korzystnie przez około 1,5 godziny, w temperaturze między około 20°C a około 50°C, korzystnie w temperaturze około 37°C. Reakcję prowadzi się przy pH między około 7 a 7,5. Następnie produkt oczyszcza się stosując standartowe techniki oczyszczania, takie jak dializa, filtracja i/lub chromatografia. Korzystną metodą oczyszczania jest diafiltracja. W celu zapobieżenia ponownemu utlenianiu grup -SH podczas oczyszczania i przechowywania produkt korzystnie utrzymuje się w atmosferze obojętnej, aby zapobiec eksponowaniu na działanie1 tlenu.
Różne ligandy, w szczególności przeciwciała, może charakteryzować różny stopień podatności na redukcję i/lub ponowne utlenienie. W konsekwencji może zaistnieć potrzeba modyfikacji opisanych powyżej warunków redukcji w celu uzyskania danego zredukowanego ligandu, takiego jak ligand opisany powyżej. Ponadto dla specjalisty ewidentne są alternatywne środki wytwarzania zredukowanego przeciwciała, użytecznego w sposobie wytwarzania koniugatu. Zatem koniugat o wzorze 1 jest objęty niniejszym wynalazkiem niezależnie od sposobu wytworzenia.
Jak wspomniano wcześniej, w celu wytworzenia koniugatu o wzorze 1 zredukowane przeciwciało poddaje się reakcji z hydrazonowym związkiem pośrednim o wzorze 2c. Korzystnie reakcję prowadzi się w atmosferze obojętnej w temperaturze od około 0°C do około 10°C, korzystnie w temperaturze około 4°C i przy pH od około 6 do około 8, korzystnie około 7,4. Immunokoniugat oczyszcza się stosując standartowe techniki takie jak dializa, filtracja lub chromatografia.
W następnej postaci wynalazku antracyklinę o wzorze 10 łączy się z ligandem, do którego przyłączono ugrupowanie zawierające wolną grupę sulfhydrylową. W jednej z takich postaci ligand nie jest przeciwciałem, jak na przykład bombezyna. Grupa sulfhydrylową może być na przykład częścią reszty cysteinowej, przyłączonej do natywnej cząsteczki bombezyny. Antracyklinę przyłącza się poprzez ugrupowanie hydrazonowe do ugrupowania zawierającego receptor addycji Michaela, które następnie reaguje ze zmodyfikowaną bombezyną, tworząc koniugat o wzorze 1. Następnie produkt oczyszcza się za pomocą standartowych technik jak dializa, wirowanie lub chromatografia.
Nowe koniugaty znajdują zastosowanie w metodzie leczenia choroby lub modyfikacji funkcji biologicznej, przy czym metoda ta polega na podawaniu zwierzęciu ciepłokrwistemu potrzebującemu tego koniugatu o wzorze 1 w ilości terapeutycznie skutecznej lub modyfikującej funkcję biologiczną. Rodzaj zastosowanego koniugatu zależeć będzie od leczonego stanu chorobowego lub rodzaju systemu biologicznego, który ma być modyfikowany. W szczególności specjalista będzie umiał dobrać szczególny ligand oraz lek do wytworzenia koniugatu o wzorze 1, posiadającego specyficzność leczenia choroby oraz zdolność modyfikowania żądanej funkcji biologicznej.
Nowe koniugaty nadają się szczególnie do leczenia choroby nowotworowej, polegającej na podawaniu potrzebującemu tego leczenia zwierzęciu ciepłokrwistemu cytotoksycznego koniugatu o wzorze 1 w ilości terapeutycznie skutecznej. Szczególnie korzystnym koniugatem do tego celujest immunokoniugat o wzorze 1 a, w którym n, pi, q, z, X, Rb R,, R4, R^-i R(, mająznaczenia podane poprzednio.
Szczególnie korzystny jest immunokoniugat o wzorze 1a, który jako ugrupowanie leku zawiera adriamycynę, a część stanowiąca ligand jest wybrana z grupy składającej się z BR64, BR96, L6, chimerycznego BR96, chimerycznego L6 oraz ich fragmentów rozpoznających antygen. Najbardziej korzystnym ligandem dla tej postaci wynalazku jest chimeryczny BR96, zwłaszcza zrelaksowany chimeryczny BR96 oraz jego fragmenty rozpoznające antygen.
Nowe koniugaty podawane sąpacjentowi w postaci preparatu farmaceutycznego, który zawiera koniugat o wzorze 1 i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, wypełniacz lub rozcieńczal18
172 718 nik koniugatu. Stosowane tu określenie “farmaceutycznie dopuszczalny“ odnosi się do tych środków, które są użyteczne w leczeniu lub diagnostyce zwierząt ciepłokrwistych, w tym na przykład człowieka, koni, świń, bydła, gryzoni, psów, kotów i innych ssaków, jak również ptaków i innych zwierząt ciepłokrwistych. Korzystnym sposobem podawania jest podawanie pozajelitowe, w szczególności dożylne, domięśniowe, podskórne, dootrzewnowe lub dolimfatyczne. Takie preparaty mogąbyć wytworzone przy zastosowaniu nośników, rozcieńczalników lub zarobek znanych specjalistom. Patrz na przykład Remington's Pharmaceutical Sciences, wyd. 16, 1980, Mack Publishing Company, edytor Osol i wsp. Środki takie mogą zawierać białka, takie jak białka osocza krwi, na przykład ludzką albuminę osocza, bufory lub substancje buforujące takie jak fosforany, inne sole lub elektrolity i podobne. Do odpowiednich rozcieńczalników należą na przykład jałowa woda, izotoniczna solanka, rozcieńczony wodny roztwór dekstrozy, alkohol wielowodorotlenowy lub mieszaniny takich alkoholi, na przykład gliceryna, glikol propylenowy, glikol polietylenowy i podobne. Preparaty mogązawierać środki konserwujące, takie jak alkohol fenetylowy, parabeny metylowy i propylowy, timerosal i podobne. W razie potrzeby preparat może zawierać 0,05 do około 0,20 procent wagowych przeciwutleniacza, takiego jak pirosiarczyn sodowy lub wodorosiarczyn sodowy.
Preparat do podawania dożylnego korzystnie wytwarza się tak, że ilość podawana pacjentowi wynosi około 0,01 do około 1 g żądanego koniugatu. Koniugaty korzystnie podaje się w ilości zawartej w zakresie od około 0,2 g do około 1 g. Nowe koniugaty są efektywne w szerokim zakresie dawkowania, zależnie od czynników takich jak leczony stan chorobowy lub modyfikowany efekt biologiczny, sposób podawania koniugatu, wiek, waga i stan pacjenta, jak również inne czynniki, które ustala lekarz prowadzący. Zatem ilość podawana jakiemukolwiek danemu pacjentowi musi być ustalana indywidualnie.
Chociaż w poniższych przykładach preparatywnych i przykładach przedstawiono specyficzne reagenty i warunki reakcji, to można dokonać modyfikacji, które są objęte istotąi zakresem wynalazku. Poniższe przykłady preparatywne i przykłady przedstawiono zatem w celu dodatkowego zilustrowania wynalazku.
Przykładl (preparatywny). Hydrazyd kwasu 2,5-dihydro-2,5-diokso-1 H-piorolo-1 -heksanowego i jego sól z kwasem trifuorooctowym (“Hydrazyd maleimidokaproilowy“).
Kwas maleimidokapronowy (2,11 g, 10 mmoli) [Patrz na przykład D. Rich et al., J. Med. Chem., 18,1004, (1975); i O. Keller et al., Helv. Chim. Acta, 58 531 (1975)] rozpuszczono w suchym tetrahydrofuranie (200 ml). Roztwór mieszano pod azotem, ochłodzono do 4°C i podziałano N-metylomor fo llną(1,01 g, 10 mmoli), po czym wkroplono roztwór chloromrówczanu izobutylu (1,36 g, 10 mmoli) w THF (10 ml). Po 5 min. wkroplono roztwór karbazanu t-butylu (1,32 g, 10 mmoli) w THF (10 ml). Mieszaninę reakcyjną trzymano w 4°C przez pół godziny i w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Rozpuszczalnik odparowano, a pozostałość podzielono między octan etylu i wodę. Warstwę organiczną przemyto rozcieńczonym roztworem HCl, wodą i rozcieńczonym roztworem wodorowęglanu, wysuszono nad bezwodnym siarczanem sodu i odparowano rozpuszczalnik. Materiał oczyszczono przez chromatografię podziałową przy użyciu gradientowego układu rozpuszczalników chlorek metylenu:metanol (100:1-2). Otrzymano zabezpieczony hydrazyd z wydajnością 70% (2,24 g).
Materiał ten (545 mg, 2,4 mmola) rozpuszczono i mieszano w kwasie trifluorooctowym w 0-4°C przez 8 min. Kwas usunięto pod wysoką próżnią w temperaturze pokojowej. Pozostałość roztarto z eterem, otrzymując krystaliczną sól hydrazydu maleimidokaproilowego z kwasem trifluorooctowym (384 mg, 70%). Próbkę analityczną przygotowano przez krystalizację z układu metanol-eter, otrzymując produkt o tt. 102-105°C. NMR i MS były zgodne ze strukturą.
Analiza:
obliczono dla C10H15N3O3 · 0,8CF3COOH: C, 44,02; H, 4,99; N, 13,28. znaleziono (analiza dwukrotna): C, 44,16, 44,13; H, 4,97, 5,00; N, 12,74, 12,75.
Sól (220 mg) przekształcono w wolną zasadę przez chromatografię na żelu krzemionkowym przy użyciu układu rozpuszczalnikowego chlorek metylenu:metanol:stężony NH4OH
172 718 (100:5:0,5). Otrzymany materiał (124 mg, 80%) krystalizowano z układu chlorek metylenu-eter, otrzymując produkt końcowy o tt. 92-93°C. nMr i MS były zgodne ze strukturą.
Analiza:
obliczono dla C10H15N3O3: C, 53,33; H, 6,67; N, 18,67. znaleziono: C, 53,12; H, 6,67; N, 18,44.
Przykład II (preparatywny). Maleimidokaproilohydrazon adriamycyny
Mieszaninę chlorowodorku adriamycyny (44 mg, 0,075 mmola), hydrazydu maleimidokaproilowego (23 mg, 0,102 mmola), otrzymanego zgodnie z procedurąprzedstawioną w przykładzie preparatywnym I i 2-3 krople kwasu trifluorooctowego w absolutnym metanolu (25 ml) mieszano przez 15 godzin pod azotem i zabezpieczono przed światłem. Pod koniec tego okresu nie wykrywano wolnej adriamycyny za pomocą HPLC (faza ruchoma 0,01 molowy roztwór octanu amonu:acetonitryl (70:30). Roztwór zatężono w temperaturze pokojowej pod próżnią do 10 ml i rozcieńczono acetonitrylem. Przezroczysty roztwór zatężono do małej objętości, substancję stałą zebrano przez wirowanie, a produkt wysuszono pod wysoką próżnią, otrzymując związek tytułowy. NMR był zgodny ze strukturą. MS wysokiej rozdzielczości, wyliczono dla C31H42N4O13: 751, 2827; znaleziono 751, 2804.
Hydrazon otrzymano również stosując adriamycynę i sól hydrazydu z kwasem trifluorooctowym. Zatem sól (40 mg, 0,12 mmola), otrzymaną zgodnie ze sposobem przedstawionym w procedurze 1 i chlorowodorek adriamycyny (50 mg, 0,086 mmola) mieszano w metanolu (30 ml) przez 15 godzin. Roztwór zatężono do 2 ml i rozcieńczono acetonitrylem. Czerwoną substancję stałą zebrano przez wirowanie i wysuszono pod próżnią. NMR i tLc produktu (28 mg, 43%) były identyczne jak dla produktu opisanego powyżej. MS wysokiej rozdzielczości, wyliczono dla C31H42N4O13: 751, 2827; znaleziono 751, 2819.
Przykład III. Koniugat przeciwciała monoklonalnego BR64 tiolowanego SDPP z maleimidokaproilohydrazonem adriamycyny.
Na roztwór przeciwciała BR64 (25 ml, 10,37 mg/ml; oznaczone za pomocą UV przy 280 nm, 1,4 jednostki absorbancji odpowiada 1 mg białka) podziałano roztworem SDPP w absolutnym etanolu (1,3 ml roztworu o stężeniu 10 mmoli). Roztwór inkubowano przez 1 godzinę w 31-32°C, następnie ochłodzono w lodzie i podziałano roztworem DTT w solance buforowanej fosforanem (“PBS“) (1,3 ml roztworu o stężeniu 50 mmoli). Roztwór trzymano w lodzie przez 1 godzinę, po czym przeniesiono do węża dializacyjnego i dializowano trzy razy przeciwko PBS (21 na dializę) przez okres co najmniej 8 godzin. Po dializie zmierzono stężenie białka takjak powyżej, a następnie oznaczono wolne grupy sulfhydrylowe metodą Ellmana.
Na tiolowane białko (3 ml) podziałano równoważną molowo w stosunku do tiolu ilością maleimidokaproilohydrazonu adriamycyny, otrzymanego w sposób opisany w przykładzie preparatywnym II, rozpuszczonego w dimetyloformamidzie (DMF) (5 mg/ml, 0,131 ml) i mieszaninę inkubowano w 4°C przez 24 godziny. Roztwór dializowano trzy razy przeciwko PBS (1000 ml) przez okres co najmniej 8 godzin. Roztwór wirowano, a supernatant wytrząsano przez kilka godzin z Bio-beads™ SM-2 (niepolarne, obojętne perełki z makroporowatego polistyrenu, BioRad Laboratories, Richmond, CA 94804) i na końcu przesączono przez filtr Millex-GV o gęstości 0,22 pm (Millipore Corporation, Bedford, MA 01730). Średnią łączną liczbę cząsteczek adriamycyny na cząsteczkę przeciwciała (“MR“) oznaczono mierząc ilość adriamycyny z absorpcji przy 495 nm (ε=8030 cmAM4), a gość białka z absorpcji przy 280 nm, po skorygowaniu o absorpcję adriamycyny przy 280 nm zgodnie z następującym równaniem:
Pizeciwciało (Mg/ml) = A280 ( 0°2424 A-95)1.4
1,4
MR znalezione dla produktu było równe 5,38; dla wolnej adriamycyny 0,14%; wydajność białka 60%.
Przykład IV. Koniugat przeciwciała monoklonalnego BR64 tiolowanego SDPP z maleimidokaproilohydrazonem adriamycyny
172 718
Na roztwór przeciwciała BR64 (405 ml, 11,29 mg/ml) działano mieszając roztworem SDPP w absolutnym etanolu (22,3 ml roztworu o stężeniu 10 mmoli). Roztwór inkubowano przez 1 godzinę w 31-32°C wstrząsając łagodnie, po czym ochłodzono w lodzie do 4°C, podziałano mieszając roztworem DTT w PBS (22,3 ml roztworu o stężeniu 50 mmoli). Roztwór trzymano w lodzie przez 1 godzinę, po czym podzielono na 2 równe części, obie części przeniesiono do węży dializacyjnych i dializowano sześć razy przeciwko PBS (61 na dializę) przez okres co najmniej 8 godzin. Następnie zawartości węży połączono (400 ml) i oznaczono stężenie białka oraz wolnych grup tiolowych (stosunek molowy grup -SH do białka wyniósł ' 8,5).
Na roztwór holowanego białka podziałano mieszając równoważną molowo ilością maleimidokaproilohydrazonu adriamycyny, rozpuszczonego w DMF (5 mg/ml, 35,7 ml) i inkubowano mieszaninę w 4°C przez 24- godziny. Roztwór podzielono na 2 równe części, przeniesiono do węży dializacyjnych i dializowano pięć razy przeciwko PBS (61 na dializę) przez okres co najmniej 8 godzin Zawartości węży dializacyjnych połączono, przesączono przez filtr z octanu celulozy o gęstości 0,22 pm, a przesącz wytrząsano przez 24 godziny z Bio-beads™ SM-2 (BioRad Laboratories, Richmond, CA 94804). Roztwór przesączono przez filtr z octanu celulozy o gęstości 0,22 pm. Oznaczono stężenie białka i adriamycyny (odpowiednio 6,26 mg/ml i 162,4 pm/ml), otrzymując stosunek molowy (MR) równy 7,18. Wydajność białka wyniosła 77%. Zawartość adriamycyny nieskoniugowanej wynosiła 0,07%.
PrzykładV. Koniugat SN7 tiolowanego SDPP z maleimidokaproilohydrazonem adriamycyny
W sposób -analogiczny do sposobu opisanego w przykładach I i II przeciwciało monoklonalne SN7, przeciwciało niewiążące się z antygenem rozpoznawanym przez BR64, tiolowano przy użyciu SDPP i poddano reakcji z maleimidokaproilohydrazonem adriamycyny, otrzymując koniugat o stosunku molowym (MR) równym 4. Wydajność białka wyniosła 51 %. Zawartość adriamycyny nieskoniugowanej wyniosła 0,36%.
Przykład VI. Koniugat ChiBR96 tiolowanego SDPP z maleimidokaproilohydrazonem adriamycyny
Na roztwór chimerycznego przeciwciała BR96, ChiBR96 (27,5 ml, 12,53 mg/ml) podziałano roztworem SDPP w absolutnym etanolu o stężeniu 10 mM (1,7 ml). Roztwór inkubowano w 31°C przez 35 minut, ochłodzono w lodzie i podziałano roztworem DTT w PBS o stężeniu 0,50 mM (1,7 ml) przez 15 minut w 4°C. Roztwór przeniesiono do węża dializacyjnego i dializowano cztery razy w buforze PBS-0,1 M histydyny (4,51 na dializę) przez okres co najmniej 8 godzin. Oznaczono ilość białka i stężenie molowe grup tiolowych (odpowiednio 9,29 mg/ml i 2,06 x 10'4M). Na roztwór (17 ml) podziałano równoważną molowo ilością maleimidokaproilohydrazonu adriamycyny w DMF (5 mg/ml, 0,59 ml) i mieszaninę reakcyjną inkubowano w 4°C przez 24 godziny. Mieszaninę reakcyjną dializowano trzy razy w tym samym buforze (4,5 l na dializę) przez co najmniej 8 godzin. Roztwór po dializie wirowano, a supernatant wytrząsano łagodnie w Bio-beads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) przez kilka godzin w 4°C. Roztwór odwirowano i oznaczono stężenie białka i adriamycyny w supernatancie (19 ml) (odpowiednio 6,5 mg/ml i 67,86 pg/ml). Stosunek molowy leku do białka wyniósł 2,9. Wydajność białka wyniosła 72%; zawartość adriamycyny nieskoniugowanej wynosi 1,2%.
Przykład VII. Koniugowanie modyfikowanej bombezyny z maleimidokaproilohydrazonem adriamycyny
Bombezyna nie zawiera wolnych, reaktywnych grup sulfhydrylowych, które mogą być wykorzystane do połączenia leku poprzez łącznik zawierający addycji receptor Michaela. W związku z tym przygotowano bombezynę modyfikowaną, która zawiera dodatkową resztę cysternową przy aminowym końcu bombezyny natywnej. Ponadto resztę 3 bombezyny natywnej zamieniono na lizynę. Modyfikowana bombezyna jest zatem oznaczona jako “Cys0-lys3-bombezyna“.
Cys0-lys3-bombezynę (11,3 mg) rozpuszczono w 1,1 ml wody dejonizowanej i ustawiono pH na 7-7,5 za pomocą 10 pl 1,5 M Tris-HCl, pH 8,8, po czym poddano reakcji z 0,45 ml maleimidokaproilohydrazonu adriamycyny (15 mg/ml w wodzie dejonizowanej) w temperaturze poko172 718 jowej przez kilka godzin. Mieszaninę reakcyjną dializowano w wężach dializacyjnych przeciwko wodzie przez noc (obcięcie ciężaru cząsteczkowego: 1000). Precypitat oddzielono przez odwirowanie (12000 x g), zachowując supernatant. Zawartość adriamycyny (“ADM“) w koniugacie bombezyna-adriamycyna zmierzono przez rozcieńczanie 1:50 w buforze octanowym, pH 6,0. Zawartość adriamycyny wyliczono stosując wzór:
[O.D.495/8030] x 50 = ADM (M)
Dla tego preparatu O.D.^ = 0,116, a zatem zawartość adriamycynyj est równa 7,2 x 1 Cb4M.
Produkt chromatografowano za pomocą HPLC, stosując kolumnę C18 (Beckman Instruments, Ultrasphere 5 μ, 4,6 mm x 25 cm). Bufor A: 10 mMNH4OAc, pH 4,5; Bufor B: 90% acetonitryl/10% bufor A. Kolumnę równowagowano mieszanką 90% buforu A/10% buforu B, a warunki chromatografowania były następujące: 90% buforu A/10% buforu B do 60% buforu A/40% buforu B przez 2 minuty, gradient do 50% buforu A/50% buforu B przez 15 minut. W tych warunkach czas retencji produktu wynosił 9,3 minuty.
Przykład VIII. Koniugat przeciwciała chimerycznego BR96 tiolowanego iminotiolanem z maleimidokaproilohydrazonem adriamycyny
Przeciwciało chimeryczne BR96 (15 ml, 9,05 mg/ml) dializowano dwa razy przeciwko 4 litrom buforu węglan/wodorowęglan sodu o stężeniu 0,1M, pH 9,1. Roztwór przeciwciała następnie ogrzewano z iminotiolanem (0,75 ml, 20 mM) w 32°C przez 45 minut. Roztwór następnie dializowano przeciwko 4 litrom buforu węglan/wodorowęglan sodu o pH 9,1, a następnie dializowano przeciwko 4 litrom buforu 0,0095 M PBS-0,1 M L-histydyny, pH 7,4. Roztwór ten miał stosunek molowy -SH/białko równy 1,35. Następnie białko ponownie tiolowano w sposób opisany powyżej, otrzymując roztwór o stosunku molowym -SH/białko równym 5,0.
Mieszając do roztworu tiolowanego białka dodano w 4°C maleimidokaproilohydrazon adriamycyny (3,2 mg w 0,640 ml DMF). Koniugat inkubowano w 4°C przez 16 godzin, po czym dializowano przeciwko 4 litrom 0,0095 M PBS-0,1 M L-histydyny, pH 7,4. Dializowany koniugat przesączono przez membranę z octanu celulozy do sterylnego węża, do którego dodano małą ilość (>5% v/v) Bio-beads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804). Po 24 godzinach łagodnego mieszania perełki odsączono, a koniugat zamrożono w ciekłym azocie i przechowywano w -80°C. Z chimerycznego BR96 uzyskano z wydajnością 24% koniugat, który miał stosunek molowy 3,4 cząsteczek adriamycyny na 1 cząsteczkę białka.
Przykład IX. Koniugat maleimidokaproilohydrazonu adriamycyny z ludzką IgG zredukowaną DTT (“zrelaksowana ludzka IgG“)
LudzkąIgG (otrzymanąz Rockland, Gilbertsville, PA) rozcieńczono 0,0095 M PBS do stężenia białka 10,98 mg/ml. Roztwór ten (350 ml) ogrzano do 37°C w łaźni wodnej w atmosferze azotu. Dodano ditiotreitol (16,8 ml, 10 mM) w PBS i mieszano roztwór przez 3 godziny w 37°C. Roztwór podzielono równo pomiędzy dwie komory do ultrafiltracji z mieszaniem Amicon model 8400 (Amicon Division of W. R. Grace and Co., Beverly, MA 01915), zaopatrzone każda w membranę do ultrafiltracji Amicon YM 30 (obcięcie MW 30000, średnica 76 mm) i połączone poprzez selektor stężenie/dializa Amicon model CDS 10 do minizbiornika Amicon Model rC800. Każdy zbiornik zawierał 700 ml 0,0095 M PBS-0,1M L-histydyny. Roztwory białek dializowano aż do osiągnięcia stężenia wolnego tiolu w filtracie równego 41 μM. Stosunek molowy -SH/białko w retentacie wyniósł 8,13.
Retentat przeniesiono z komór do sterylnego zbiornika utrzymywanego w atmosferze azotu i dodano mieszając roztwór maleimidokaproilohydrazonu adriamycyny (36,7 ml, 5 mg/ml w wodzie). Koniugat inkubowano w 4°C przez 48 godzin, po czym przesączono poprzez błonę z octanu celulozy o gęstości 0,22 μιη. Bio-Rad Econocolumn™ (2,5 x 50 cm, Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) zapakowano zawiesiną 100 g Bio-beads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) w buforze 0,00095 M-0,1 M L-histydyny. Perełki przygotowano przez przemycie w metanolu a następnie w wodzie, po czym kilka razy w buforze. Przesączony koniugat filtrowano przez tę kolumnę z szybkością 2 ml/min. Po chromatografii koniugat przesączono przez membranę z octanu celulozy o gęstości 0,22 pm i zamrożono w ciekłym azo22
172 718 cie i przechowywano w -80°C. Koniugat otrzymany z ludzkiej IgG z wydajnością99% miał średni stosunek molowy 7,45 cząsteczek adriamycyny na cząsteczkę białka.
Przykład X. Koniugat zrelaksowanego BR64 z maleimidokaproilohydrazonem adriamycyny.
Na roztwór BR64 (435 ml; 11,31 mg/ml, 7,07 x 105M) podziałano DTT (947 mg) i łagodnie mieszając ogrzewano do 42 - 43°C przez 2 godziny. Roztwór ochłodzono w lodzie, przeniesienio do 2 węży dializacyjnych i każdy wąż dializowano 5 razy przeciwko PBS (141 na dializę) przez 8 godzin w 4°C. Zawartości węży połączono (400 ml) i oznaczono zawartość białka i -SH (odpowiednio 10,54 mg/ml, 6,58 x 105 M; 5,14 x W^M). Stosunek molowy -SH do białka wynosił 7,8.
Do roztworu przeciwciała dodano delikatnie mieszając roztwór maleimidokaproilohydrazonu adriamycyny w DMF (5 mg/ml, 32,6 ml), po czym inkubowano w 4°C przez 24 godziny. Roztwór przesączono przez filtr z octanu celulozy o gęstości 0,22 pm, a następnie przeniesiono do dwóch węży dializacyjnych i dializowano w sposób opisany powyżej. Po dializie zawartości węży połączono, przefiltrowano i wytrząsano przez 24 godziny z Bio-beads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) w 4°C. Perełki odsączono stosując filtr z octanu celulozy, otrzymując roztwór koniugatu. Oznaczono stężenia białka i adriamycyny (odpowiednio 8,66 mg/ml; 5,42 x 10‘5M; 168 pg/ml; 2,89 x 10* 4 M). Wydajność białka wynosiła 97%. Stosunek molowy adriamycyny do białka wyniósł 5,33, a zawartość nieskoniugowanej adriamycyny 0,5%.
Przykład XI. Ogólna procedura koniugowania maleimidokaproilohydrazonu adriamycyny ze zrelaksowanym przeciwciałem 1.
1. Roztwór (300 ml) przeciwciała (3 g, 10 mg/ml) w buforze PBS (uwaga 1) trzymany w sposób ciągły pod płaszczem azotowym, zanurza się w łaźni wodnej o temperaturze 37°C i miesza łagodnie mieszadłem magnetycznym. Na roztwór działa się 7 równoważnikami molowymi DTT (uwagi 2,3) przez 3 godziny. Stosunek molowy grup -SH do białka (“MR“) oznacza się na początku i następnie co godzinę, i powinien on dla produktu maksymalnie skoniugowanego pozostawać stały na poziomie około 14 (uwagi 2, 4).
2. Roztwór przenosi się jak najszybciej do komory diafiltracyjnej Amicon (Amicon, Division ofW. R. Grace and Co., Beverly, Ma, 01915) (uwaga 5), w której utrzymuj e się temperaturę około 4°C do 7°C. Układ utrzymuje się pod ciśnieniem azotu lub argonu i rozpoczyna diafiltrację, stosując bufor PBS, zawierający 0,1 M histydyny, wstępnie ochłodzony do temperatury około 4°C do 7°C. Początkowa temperatura odcieku bezpośrednio po rozpoczęciu diafiltracji wynosi 16 - 18°C i spada do 8 - 9°C w ciągu 90 minut. Wyciek monitoruje się na wartość MR -SH do białka, a gdy wartość ta jest < 1, diafiltrację kończy się (uwaga 6).
3. Roztwór przenosi się z powrotem do kolby okrągłodennej, wyposażonej w mieszadło magnetyczne i trzyma w lodzie. Roztwór utrzymuje się w sposób ciągły pod płaszczem azotowym. Notuje się objętość roztworu. W celu oznaczenia ilości białka w mg/ml (i również równoważnika molowego białka oraz stężenia molowego grup -SH (i przez to MR -SH do białka)) pobiera się próbki 0,1 ml i rozcieńcza buforem PBS do 1,0 ml. Przygotowuje się roztwór maleimidokaproilohydrazonu adriamycyny w wodzie destylowanej (5 mg/ml, 6,3 x 10'3M) (uwaga 6). Ilość (w ml) tego roztworu, potrzebną do koniugowania oznacza się ze wzoru:
(stężenie molowe - SH) x (objętość roztworu białka) x 1,05
6,3 x 10’3 (uwaga 9) i ilość tę dodaje się powoli do mieszanego delikatnie roztworu białka. Roztwór utrzymuje się w 4°C przez 30 minut.
4. Przygotowuje się kolumnę Bio-beads™ SM-2,20-50 mesh (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804) (uwaga 10) w 4°C. Czerwony roztwór białka filtruje się przez filtr z octanu celulozy o gęstości 0,22 pm, a następnie przepuszcza przez kolumnę z szybkością 2,5 ml/min i zbiera czerwony odciek. Na końcu na szczyt kolumny wylewa się bufor PBS- 0,1 M histydyny i zbiera odciek do momentu, gdy stanie się on bezbarwny. Notuje się objętość zebranego czerwonego roztworu. Próbkę 0,1 ml rozcieńcza się do 1 ml buforem PBS i mierzy ilość białka i adriamycyny. Ilość skoniugowanej adriamycyny oznacza się na podstawie absorbancji przy 495 nm
172 718 (ε-8030 cm^M'1) i wyraża w mikromolach i mikrogramach na ml. Ilość białka, wyrażoną w mg na ml i mikromolach oznacza się jak powyżej na podstawie absorbancji przy 280 nm z poprawką na absorbancję adriamycyny przy tej samej długości fali, zgodnie z następującym wzorem:
. . , . . A,80 -(0,724 x A495 )
Przeciwciało (mg/ml) -gdzie A jest obserwowaną absorbancjąprzy wspomnianej długości fali. Następnie oblicza się MR adriamycyny do białka.
5. Próbkę 5 ml koniugatu przepuszcza się przez kolumnę Econo-Pac™ 10 SM-2 (zapakowana kolumna Bio-beads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, CA 94804), objętość 10 ml, przemyta i równowagowana buforem PBS-0,1M histydyny) w sposób opisany powyżej. Oznacza się ilość białka i skoniugowanej adriamycyny oraz oznacza Mr. Wartość ta powinna być taka sama jak dla całości roztworu (uwaga 11).
6. Koniugat zamraża się w ciekłym azocie i przechowuje w -80°C. Pobiera się próbki w celu oznaczenia cytotoksyczności, wiązania i obecności wolnej adriamycyny (uwaga 12).
Uwagi do ogólnej procedury
1. Stężenie przeciwciała wynosi zwykle 7-10 mg/ml (6,25 x 10’5M) i j est to stężenie korzystne. Jeśli stężenie jest znacznie wyższe, roztwór może być rozcieńczony buforem. Jeśli stężenie jest mniejsze niż 10 mg/ml, roztwór jest stosowany bez zmian. Stężenie oznacza się na podstawie absorpcji UV przy 280 nm: 1 mg/ml - 1,4 jednostek absorbancji.
2. Stosuje się DTT pochodzący z Boehringer Mannheim Biochemicals, Indianapolis, Indiana 46250, o tt. 42 - 43°C. Jeśli zaistnieją wątpliwości co do jakości, DTT powinien być rekrystalizowany (na przykład z mieszaniny eter-heksan). Czystość oznacza się na podstawie tt., NMR i zawartości -SH. Miareczkowanie grup sulfhydrylowych prowadzi się zgodnie z metodą Ellmana (Anal. Biochem. 94,75-81,1979) w sposób następujący: próbkę 0,1 ml rozcieńcza się do 1 ml PBS i działa 0,05 ml reagenta (50 nmolowy roztwór kwasu ditio-bis-(2-nitrobenzoesowego) w 100 nmolowym roztworze Na2HPO4; pH 7,04). W taki sam sposób działa się na ślepąpróbę 1 ml PBS. Po 5 minutach mierzy się absorbancję (A) próbki i ślepej próby przy 412 nm i oznacza stężenie molowe -SH (“MCSH“) zgodnie z następującym równaniem:
(A· próbC ~ Ή ś—( próby ) b 10 r ,xi5x 10 4
MCsh =
3. DTT może być dodany w postaci stałej lub w postaci roztworu. Korzystnie stosuje się świeżo sporządzony roztwór o stężeniu 10 mM. Dla celów reakcji w opisywanej skali stosuje się na ogół 13,13 ml.
4. MR -SH do białka oznacza się mierząc stężenie molowe SH zgodnie z metodą Ellmana (patrz uwaga 2) i dzieląc to stężenie przez stężenie molowe białka. Dla utrzymania tej wartości poniżej 14 podczas reakcji dodaje się dodatkową ilość DTT.
5. W skali 3 g/300 ml stosuje się dwie komory Amicon po 350 ml każda dzieląc roztwór na dwie części po 150 ml na komorę.
6. Dla podanej skali reakcji diafiltracja trwa zwykle 2-4 godziny. Czas trwania zależy od takich czynników jak wiek membrany, szybkość mieszania roztworu i ciśnienie w komorze.
7. Hydrazon nie jest dobrze rozpuszczalny w wodzie i szybko wytrąca się osad.
8. Zastosowanie przez krótki okres czasu źródła ultradźwięków ułatwia rozpuszczanie w wodzie destylowanej. Uzyskany roztwór jest stabilny.
9. Ilość ta zapewnia 5% nadmiar hydrazonu. Opisany proces trwa na ogół 15-20 minut.
10. Bio-Beads™ przygotowuje się do chromatografii przez spęcznienie ich w metanolu przez co najmniej jedną godzinę, korzystnie przez noc, przemycie wodą destylowaną i na końcu równowagowanie buforem PBS zawierającym 0,1 M histydyny. Na 3 g białka do utworzenia kolumny 2,5 cm x 30 cm stosuje się 100 g perełek.
11. Ze względu na 'błąd właściwy dla zastosowanych metod spektroskopowych zmienność MR w granicach jednej jednostki uznaje się za wynik zadowalający. Na ogół jednakże MR zmienia się o mniej niż o 0,5 jednostki.
172 718
12. Zawartości wolnej adriamycyny w koniugacie są na ogół mniejsze niż 1%.
Przykład IX. Koniugat zrelaksowanego chimerycznego przeciwciała BR96 z maleimidokaproilohydrazonem adriamycyny
Chimeryczne przeciwciało BR96, przygotowane w sposób poprzednio opisany rozcieńczono buforem PBS o stężeniu 0,0095 M do stężenia białka 10,49 mg/ml. Roztwór ten (500 ml) ogrzewano do 37°C w atmosferze azotu w łaźni wodnej. Dodano ditiotreitol (26,2 ml, 10 mM) w PBS, i mieszano roztwór przez 3 godziny w 37°C. Roztwór podzielono równo między dwie komory do ultrafiltracji z mieszaniem Amicon model 8400, zaopatrzone w ultrafiltr YM 30 (obcięcie Mw 30000, średnica 76 mm) i połączono poprzez selektor stężenie/dializa Model CDS 10 z minizbiomikiem Model RC800 (Amicon, Division of W. R. Grace and Co., Beverly MA 01915-9843). Każdy zbiornik zawierał 800 ml buforu PBS o stężeniu 0,0095 M z dodatkiem 0,1 M L-histydyny. Roztwory białek dializowano do osiągnięcia stężenia wolnego tiolu w dializacie 63 pm. Stosunek molowy -SH/białko oznaczony w retentacie wyniósł 8,16. Retentat przeniesiono z komór do sterylnego pojemnika pod azotem i dodano mieszając roztwór maleimidokaproilohydrazonu adriamycyny (42,6 ml, 5 mg/ml w wodzie). Koniugat inkubowano w 4°C przez 48 godzin, po czym przefiltrowano przez membranę z octanu celulozy o gęstości 0,22 pm. BioRad Econocolum 2,5 cm x 50 cm zapakowano zawiesiną 100 g Bio-Beads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond California 94804) w buforze PBS o stężeniu 0,0095 M z dodatkiem 0,1M L-histydyny. Perełki przygotowano przez przemycie metanolem, a następnie wodąi kilkoma objętościami buforu. Przesączony koniugat perkolowano przez tę kolumnę z szybkością 2 ml/min. Po chromatografii koniugat przefiltrowano przez membranę octanową o gęstości 0,22 μ, zamrożono w ciekłym azocie i przechowywano w -80°C. Otrzymano z przeciwciała chimerycznego BR96 z wydajnością 95% koniugat, mający stosunek molowy adriamycyny do białka równy 6,77.
Przykład XIII. Koniugat zrelaksowanego przeciwciała mysiego L6 z maleimidokaproilohydrazonem adriamycyny
Przeciwciało mysie L6, przygotowane w sposób opisany wcześniej, rozcieńczono buforem PBS o stężeniu 0,0095 M do stężenia białka 11,87 mg/ml. Roztwór ten (350 ml) ogrzewano do 37°C w atmosferze azotu w łaźni wodnej. Dodano ditiotreitol (18,2 ml, 10 mM) w PBS i mieszano roztwór przez 3 godziny w 37°C. Roztwór podzielono równo między dwie komory do ultrafiltracji z mieszaniem Amicon model 8400, zaopatrzone w ultrafiltry YM 30 (obcięcie Mw 30000, średnica 76 mm) i połączone poprzez selektor stężenie/dializa Model CDS 10 z minizbiornikiem Model RC800 (Amicon, Division of W. R. Grace and Co., Beverly MA 01915-9843). Każdy zbiornik zawierał 800 ml buforu PBS o stężeniu 0,0095 M z dodatkiem 0,1 M L-histydyny. Roztwory białek dializowano do osiągnięcia stężenia wolnego tiolu w filtracie 14 μιη. Stosunek molowy -SH/białko oznaczony w retentacie wyniósł 9,8. Retentat przeniesiono z komór do sterylnego pojemnika pod azotem i dodano mieszając roztwór maleimidokaproilohydrazonu adriamycyny (40,4 ml, 5 mg/ml w wodzie). Koniugat inkubowano w 4°C przez 48 godzin, po czym przefiltrowano przez membranę z octanu celulozy o gęstości 0,22 μιη. BioRad Econocolum 2,5 cm x 50 cm zapakowano zawiesiną 100 g Bio-Beads™ SM-2 (Bio-Rad Laboratories; Richmond California 94804) w buforze PBS o stężeniu 0,0095 M z dodatkiem 0,1 M L-histydyny. Perełki przygotowano przez przemycie metanolem, a następnie wodą i kilkoma objętościami buforu. Przesączony koniugat perkolowano przez tę kolumnę z szybkością 2 ml/min. Po chromatografii koniugat przefiltrowano przez membranę z octanu celulozy o gęstości 0,22 μ, zamrożono w ciekłym azocie i przechowywano w -80°C. Otrzymano z przeciwciała mysiego L6 z wydajnością 100% koniugat, mający stosunek molowy adriamycyny do białka równy 7,39.
W celu oznaczenia czynności biologicznej reprezentatywne koniugaty, otrzymane sposobem według wynalazku, przetestowano zarówno w układach in vitro i in vivo. W testach tych oznaczano siłę działania koniugatów leków cytotoksycznych mierząc cytotoksyczność koniugatów przeciwko komórkom rakowym pochodzenia ludzkiego. Poniżej opisano reprezentatywne stosowane testy oraz uzyskane wyniki. W zaprezentowanych danych koniugaty są określane przez podanie ligandu, leku i stosunku molowego ligandu do leku. Zatem na przykład “BR64-ADM-5,33“ odnosi się do koniugatu przeciwciała BR64 i adriamycyny w stosunku mo172 718 lowym 5,33. Zamiast szczególnych linii komórek nowotworowych zastosowanych w poniższych analizach może być użyta dowolna linia komórek rakowych, w której zachodzi ekspresja żądanego antygenu.
Test I
Czynność koniugatów BR64-adriamycyna in vitro
Immunokoniugaty z przykładów III i VI przetestowano in vitro przeciwko linii komórkowej ludzkiego raka płuc L2987 (otrzymanej odl. Hellstrom, Bristol-Myers Squibb Seattle; patrz również I. Hellstrom et al., Cancer Research 50:2183 (1990)], w której zachodzi ekspresja antygenów rozpoznawanych przez przeciwciała monoklonalne BR64, L6 i BR96. Jednowarstwowe hodowle komórek L2987 ścinano, stosując trypsynę-EDTA (GIBCO, Grand Island, NY), zliczano komórki i ponownie zawieszano je do stężenia 1 x 105/ml w RPMI-1640, zawierającym 10% inaktywowaną termicznie cielęcą surowicę płodową. (“RPMI-10%FCS“). Komórki (0,1 ml/dołek) dodano do każdego dołka 96-dołkowej płaskiej płytki do mikromiareczkowań i inkubowano przez noc w 37°C w nawilgoconej atmosferze zawierającej 5% CO2. Pożywkę usunięto z płytek i do dołków dodawano kolejne rozcieńczenia adriamycyny lub koniugatów adriamycyny z przeciwciałem. Wszystkie rozcieńczenia przeprowadzano czterokrotnie. Po 2 godzinach ekspozycji leku lub koniugatu płytki wirowano (100 g, 5 minut), lek lub koniugat usuwano, a płytki przemywano trzy razy RPMI-10%FCS. Komórki hodowano w RPMI-10%FCS przez następne 48 godzin. Po tym czasie komórki przepłukiwano pulsowo 3H-tymidyną(New England Nuclear, Boston, MA) o aktywności 1,0 pCi/dołek. Komórki zebrano z płytek i mierzono liczbę zliczeń na minutę (“CPM“). Hamowanie proliferacji oznaczono przez porównanie średniej CPM dla prób badanych z próbkami kontrolnymi. Dane przedstawione na fig. 3 pokazują cytotoksyczność immunokoniugatu wiążącego (MR adriamycyny do BR64 równe 7,18, oznaczony “BR64-THADMHZN-7,18“) przeciwko komórkom raka płuc L2987 w porównaniu z niewiążącym immunokoniugatem SN7 i adriamycyny (MR adriamycyny do SN7 równe 4, oznaczony “SN7-THADMHZN-4“). Koniugaty BR64 otrzymane metodą opisaną w przykładzie III są czynne i wykazują w tym badaniu in vitro cytotoksyczność antygenospecyficzną.
Test II
Czynność koniugatów BR64-adriamycyna in vivo
Immunokoniugaty z przykładów III i IV zbadano na ich antygeno-specyficzną czynność przeciwnowotworową in vivo. W badaniach tych wykorzystano myszy samice z wrodzonym brakiem grasicy ze szczepu BALB/c (NBALB/c nu/nu; Harlan-Spraque-Dawley, Indianapolis, IN). Myszy hodowano w klatkach typu Thoren na sterylnej podściółce w kontrolowanej temperaturze i wilgotności. Zwierzęta otrzymywałyjałowe pożywienie i wodę do woli. W badaniach wykorzystano linię komórkową ludzkiego raka płuc L287. Wykazano, że w linii tej po wielokrotnych pasażach in vivo zachodzi ekspresja antygenów BR64, BR96 i L6. Linie komórek rakowych utrzymywano przez kolejne pasaże w myszy pozbawionej grasicy jak opisano poprzednio (P. A. Trail, et al., in vivo 3:319 - 24 (1989)). Nowotwory mierzono stosując cyrkiel kalibrowy w 2 prostopadłych kierunkach w przedziałach tygodniowych lub dwutygodniowych.
Objętości nowotoworów obliczano według równania:
. (L x W2)
V(mm3)= 2 w którym V = objętość (mm3)
L = pomiar w najdłuższej osi (mm)
W = pomiar (mm) osi prostopadłej do L.
Dane są przedstawione jako średnia wielkość nowotworu dla grup badanych i kontrolnych. Każda grupa badana lub kontrolna składała się z 8 -10 zwierząt. Terapię rozpoczynano, gdy nowotwory osiągnęły średnią wielkość 50-100 cm3. Lekpodawano drogą dootrzewnowąlub dożylną zgodnie z różnymi schematami, jak podano. Adriamycynę do podawania rozcieńczano w normalnej solance, a natywne przeciwciało i koniugaty adriamycyny rozcieńczano w solance bu26
172 718 forowanej fosforanem (“PBS“). Wszystkie dawki podawano w przeliczeniu na wagę ciała (mg/kg) i były obliczane dla każdego zwierzęcia. W badaniach tych czynność przeciwnowotworowąwiążących immunokoniugatów BR64 porównywano z czynnością zoptymalizowanych dawek adriamycyny, mieszanek natywnego przeciwciała i adriamycyny oraz koniugatów niewiążących. Adriamycynę nieskoniugowaną podawano zgodnie ze schematem, który okazał się optymalny w modelu ksenograftu ludzkiego L2987. Nieskoniugowaną. adriamycynę podawano zatem w dawce 8 mg/kg wagi ciała drogą dożylną co cztery dni, podając w sumie trzy iniekcje (oznaczono “8 mg/kg, q4dx3, iv“). Immunokoniugaty wiążące (BR64) i niewiążące (SN7) podawano w kilku dawkach drogą dootrzewnową co cztery dni, podając w sumie trzy iniekcje (oznaczono “q4xd3“, ip“). Jak pokazano na figurze 4, znaczącą czynność przeciwnowotworową. obserwowano po podaniu tolerowanych dawek (10 i 15 mg/kg/iniekcję) koniugatu BR64-adriamycyna. Czynność przeciwnowotworowa obserwowana po terapii koniugatem BR64 była znacznie lepsza niż czynność w zoptymalizowanej terapii adriamycynąi w terapii odpowiadającymi dawkami koniugatu niewiążącego (SN7).
W eksperymencie tym całkowite regresje nowotworu obserwowano u 66% zwierząt po leczeniu koniugatem BR64 w ilości 15 mg/kg/iniekcję i u 50% zwierząt po leczeniu koniugatem BR64 w ilości 10 mg/kg/iniekcję. Częściowych lub całkowitych regresji ustalonych nowotworów L2987 nie obserwowano po zoptymalizowanym leczeniu adriamycyną, leczeniu mieszankami natywnego BR64 i adriamycyny, lub równoważnymi dawkami koniugatów niewiążących.
W celu wykazania, że obserwowana czynność wymaga kowalencyjnego sprzężenia przeciwciała z adriamycyną, przeprowadzono kilka eksperymentów kontrolnych stosując mieszanki natywnego BR64 i adriamycyny. Reprezentatywne dane dla kilku rodzajów terapii łączonej przedstawiono na fig. 5a - c. Czynność przeciwnowotworową, obserwowana dla różnych rodzajów terapii łączonej z przeciwciałem monoklonalnym i adriamycyną nie różniła się istotnie od czynności obserwowanej w zoptymalizowanej terapii samą adriamycyną. Dane te wzięte razem wykazują, że kowalencyjne sprzężenie BR64 z adriamycynąjest wymagane dla zaistnienia czynności przeciwnowotworowej opisanej na figurze 4.
Test III
Czynność koniugatów bombezyny in vivo
Zbadano czynność przeciwnowotworową koniugatu z przykładu VII in vivo. Nagim myszom BALB/c z wrodzonym brakiem grasicy implantowano podskórnie cząstki ludzkiego raka drobnokomórkowego płuc H345 (otrzymane od dr D. Chan, University of Colorado Medical School, CO), stosując trokary. Pozwolono na wyrośnięcie nowotworów do wielkości 50 100 mm3 przed rozpoczęciem leczenia. Na myszy działano w dniach 23,26,28 i 30 po implantacji i dożylnie samą adriamycynę (1,6 mg/kg) lub koniugatami bombezyna-adriamycyna (“BN-ADM(TH)“, w ilości równoważnej 1,6 mg/kg adriamycyny lub koniugatem P77=adriamycyna (“P77-ADM(TH)“, w ilości równoważnej 1,6 mg/kg adriamycyny). P77 jest peptydem złożonym z 12 aminokwasów, posiadającym wewnętrzną resztę cysteinową (sekwencja = KKLTCVQTRLKI), który nie wiąże się z komórkami H345 i został skoniugowany z maleimidokaproilohydrazonem adriamycyny zgodnie z procedurą przedstawioną w przykładzie IV. Zatem koniugat reprezentuje koniugat niewiążący w odniesieniu do komórek H345. Nowotwory mierzono cyrklami kalibrowanymi, a objętość nowotworów obliczano stosując wzór:
V(mm3) = (LxW2) w którym V, L i W są zdefiniowane w teście II.
Oznaczono średnie objętości nowotworów, a uzyskane wyniki przedstawiono na fig. 6. Test IV
Dane cytotoksyczności in vitro dla koniugatów zrelaksowanego przeciwciała ChiBR96 Immunokoniugaty adrimycyny i przeciwciała ChBR96 przygotowano stosując ogólną metodę przygotowywania zrelaksowanych przeciwciał opisaną w przykładzie XI. Koniugaty badano stosując poniższy protokół na cytotoksyczność in vitro i porównano ich cytotoksyczność z
172 718 cytotoksycznością wolnej adriamycyny i immunokoniugatów tiolowanych SDPP, sporządzonych metodą opisaną w przykładzie Ib. Wyniki tych badań przedstawiono na fig. 7.
Monowarstwowe hodowle ludzkich komórek L2987 utrzymywano w pożywce RPMI-1640, zawierającej 10% inaktywowanej termicznie cielęcej surowicy płodowej (RPMI-10% FCS). Komórki zebrano stosując trypsynę-EDTA (GIBCO, Grand Island, NY), zliczono je i zawieszono ponownie w RPMI-10%fCs. Komórki dodano do każdego z dołków 96-dołkowych płytek do mikromiareczkowań w ilości 0,1 ml/dołek i inkubowano przez noc w 37°C w wilgotnej atmosferze zawierającej 5% CO2. Pożywkę usunięto z płytek i do dołków dodawano kolejne rozieńczenia adriamycyny i koniugatów przeciwciało/adriamycyna. Wszystkie rozcieńczenia przeprowadzano czterokrotnie. Po 2 godzinach ekspozycji na lek lub koniugat płytki odwirowano (200 g, 5 minut), lek lub koniugat usunięto i płytki przemyto 3 x RPMI-10%FCS. Komórki namnażano w RPMI-10%FCS przez następne 48 godzin. Po tym czasie komórki przepłukiwano impulsowo przez 2 godziny 3H-tymidyną (New England Nuclear, Boston, MA) o aktywności 1,0 pCi/dołek. Komórki z płytek zebrano i oznaczono ilość zliczeń na minutę (“CPM“). Hamowanie proleferacji oznaczano przez porównanie średniej CPM dla próbek badanych z CPM dla próbek kontrolnych. Wartości IC^ podano jako pM równoważnika adriamycyny.
Test V
Czynność przeciwnowotworową in vivo konigatów BR64 i mysiego L6
Zbadano czynność przeciwnowotworową in vivo immunokoniugatów adriamycyny i zrelaksowanego BR64 lub zrelaksowanego L6. Uzyskane wyniki przedstawiono na fig. 8.
Użyto myszy samicy BALB/c z wrodzonym brakiem grasicy (BALB/c nu/nu; Harlan Sprague-Dawley, Indianapolis, IN). Myszy hodowano w klatkach typu Thoren na jałowej podściółce w kontrolowanej wilgotności i temperaturze. Zwierzęta otrzymywałyjałowy pokarm i wodę do woli.
Linię ludzkiego nowotworu L2987 ustalono w postaci modeli ludzkich ksenograftów na myszach z wrodzonym brakiem grasicy. Linię nowotworu utrzymywano przez kolejne pasaże in vivo. Nowotwory mierzono w 2 prostopadłych kierunkach w odstępach tygodniowych lub dwutygodniowych, stosując cyrkiel kalibrowy. Objętość nowotworów obliczano stosując równanie:
V(mm’) = (LxW2) w którym:
V = objętość (mm3)
L = pomiar w najdłuższej osi (mm) W = pomiar w osi prostopadłej do L.
Na ogół w grupie kontrolnej lub badanej było 8-10 myszy. Dane przedstawiono jako średnią wielkość nowotworu w grupie kontrolnej lub badanej. Czynność przeciwnowotworową jest wyrażona jako współczynnik LCK (log cell kill), gdzie:
3,3 x XVDT
T-C jest zdefiniowane jako średni czas (w dniach), po którym nowotwory leczone osiągają celowąwielkość minus średni czas, po którym nowotwory kontrolne osiągąjącelową wielkość, a VVDT oznacza czas (w dniach), w którym nowotwory kontrolne zwiększają dwukrotnie objętość. Częściowa regresja nowotworu (“PR“) dotyczy zmniejszenia objętości nowotworu do <50% początkowej objętości nowotworu; całkowita regresja nowotworu (“CR“) dotyczy nowotworu, który nie jest wyczuwalny badaniem palpacyjnym przez pewien okres czasu; a wyleczenie jest zdefiniowane jako ustabilizowany nowotwór, który nie ·jest wyczuwalny w badaniu palpacyjnym przez okres czasu >TVDT.
Dla zwierząt noszących ludzki nowotwór płuc L2987 terapię rozpoczynano zwykle, gdy średnia wielkość guza wynosiła 75 mm3 (12 - 14 dni po implantacji nowotworu). Średni VVDT wynosił 4,8 + 0,9 dnia, a czynność przeciwnowotworową oceniano przy wielkości nowotworu
172 718
500 mm3. W kilku eksperymentach (opisanych poniżej w teście VI) terapię rozpoczynano gdy nowotwory L2987 miały wielkość 225 mm3.
Badane materiały podawano drogą dootrzewnową (ip) lub dożylną (iv). Adriamycynę rozcieńczano w zwykłej solance; przeciwciało oraz koniugaty adriamycyna/przeciwciało rozcieńczano w solance buforowanej fosforanem. Związki podawano w mg/kg wagi, obliczanych dla każdego zwierzęcia, a dawki podano w mg/kg równoważnika adriamycyny na iniekcję. Immunokoniugaty podawano zgodnie ze schematem q4dx3. Maksymalna dopuszczalna dawka (“MTD“) dla regulaminu leczenia jest określona jako najwyższa dawka w danym schemacie leczenia, która powoduje śmiertelność < 20%.
W danych przedstawionych na fig. 8 iniekcja zoptymalizowanej dawki adriamycyny wykazywała czynność przeciwnowotworową równoważną 1,1 LCK i nie obserwowano regresji nowotworu. Koniugat BR64-ADM wykazał czynność przeciwnowotworową równoważną >10 LCK we wszystkich badanych dawkach i obserwowano 89%, 78% i 100% wyleczeń odpowiednio dla dawek BR64 5 mg/kg, 8 mg/kg i 10 mg/kg. W dawkach 8 mg/kg lub 10 mg/kg koniugat L6-LCK wykazywał czynność przeciwnowotworową (odpowiednio 1,8 i 3,5 LCK), która była znacznie wyższa niż czynność zoptymalizowanej adriamycyny, ale niższa niż czynność równoważnych dawek koniugatów przeciwciała internalizującego 8R64 z ADM. Zatem dane pokazują, że czynność przeciwnowotworową wiążących, nieinternalizujących koniugatów L6-ADM jest lepsza od czynności nieskoniugowanej adriamycyny. Koniugat L6-adriamycyna wykazuje słabszą czynność przeciwnowotworową niż równoważne dawki internalizującego koniugatu przeciwciało BR64-adriamycyna.
Test VI
Czynność przeciwnowotworową in vivo koniugatów ChiBR96-ADM
Badano czynność przeciwnowotworową koniugatów ChiBR96-ADM przeciwko ustalonym liniom ludzkiego raka płuc (“L2987“) i sutka (“MCF7“), dostępnym z ATCC pod numerem akcesyjnym ATCC HTB 22; patrz również I. Hellstrom et al., Cancer Research 50:2183 (1990)), oraz raka okrężnicy (“RCA“ od M. Brattain, Baylor University; patrz również I. Hellstrom et al., Cancer Research 50:2183 (1990)).
Zwierzęta utrzymywano i ustalono modele ksenograftów nowotworów dla linii komórkowych ludzkich nowotworów MCF7, RCA i L2987 w sposób opisany dla L2987 w teście V.
Dla zwierząt noszących ludzki nowotwór płuc L2987 terapię rozpoczynano zwykle, gdy średnia wielkość guza wynosiła 75 mm3 (12 -14 dni po implantacji nowotworu). Średni TVDT wynosił 4,8 ± 0,9 dnia, a czynność przeciwnowotworową oceniano przy wielkości nowotworu 500 mm?3 W kilku eksperymentach terapię rozpoczynano, gdy nowotwory L2987 miały wielkość 225 mm).
Nowotwór MCF7 jest linią komórkową ludzkiego estrogeno-zależnego raka sutka. W dniu implantowania nowotworu myszom pozbawionym grasicy implantowano peletki estradiolu 0,65 mg (współczynnik uwalniania 65) (Innovative Research of America, Toledo, Ohio). Terapię rozpoczynano, gdy wielkość nowotworu wynosiła średnio 100 mm3 (typowo 13 dni po implantacji nowotworu). Nowotwór MCF7 miał średni TVDT 6,4 ± 2,0 dnia, a czynność przeciwnowotworową oceniano przy wielkości 500 mm3.
Dla zwierząt noszących nowotwór okrężnicy RCA terapię rozpoczynano 15 dni po implantacji nowotworu, gdy wielkość nowotworu wynosiła 75 mm3. Średni TVDT dla ksenograftów nowotworu RCA wynosił 9,5 ±1,5 dnia, a czynność przeciwnowotworową oceniano przy wielkości 400 mm3. Dane o czynności przeciwnowotworowej zoptymalizowanej adriamycyny w modelach ksenograftów L2987, MCF7 i RCA zebrano w poniższych tabelach i odnośnych figurach.
Czynność przeciwnowotworową koniugatów ChiBR96-ADM porównano z czynnością zoptymalizowanej adriamycyny oraz równoważnych dawek immunokoniugatów niewiążących (IgG). W każdym z modeli po podaniu tolerowanych dawek koniugatu ChiBR96-ADM obserwowano całkowite regresje nowotworu i/lub wyleczenia ustalonych nowotworów.
Reprezentatywne dane wykazujące antygeno-specyficzną czynność przeciwnowotworową koniugatów ChiBR96-ADM przedstawiono na fig. 9 i 10. Jak pokazano na fig. 9, podawanie (ip) koniugatu ChiBR96-ADM (MR = 4,19) w dawce 10 mg/kg równoważnika adriamycyny
172 718 wywoływało czynność przeciwnowotworową równoważną > 10 LCK. Przy tej dawce koniugatu ChiBR96-ADM 78% myszy wykazywało wyleczenie z nowotworu, a następnie 11% myszy całkowitą regresję nowotworu. Podawanie 5 mg/kg koniugatu ChiBR96-ADM również wywoływało czynność przeciwnowotworową równoważną >10 LCK przy 88% wyleczeń nowotworu i 12% całkowitych regresji. Czynność przeciwnowotworową obserwowana po podaniu koniugatów ChiBR96-ADM (>10 LCK) była znacznie wyższa niż dla zoptymalizowanej adriamycyny (1,0 LCK). Koniugat ChiBR96-ADM miał również, silniejsze działanie niż zoptymalizowana adriamycyna; to jest czynność przeciwnowotworową koniugatu ChiBR96-ADM, badana w dawce 5 mg/kg równoważnika adriamycyny była lepsza niż adriamycyny, badanej w dawce 8 mg/kg. Niewiążący koniugat ludzkiej IgG (MR = 7,16) w dawce 10 mg/kg równoważnika adriamycyny nie był aktywny przeciwko ksenogarftom L2987 co wskazuje, że doskonała czynność koniugatu ChiBR96-ADM była spowodowana antygeno-specyficznym wiązaniem immunokoniugatu do komórek nowotworu L2987.
Podobne dane przedstawiono na fig. 10. Jak pokazano, koniugat ChiBR96 (MR = 5,8) badany w dawce równoważnej 10 mg/kg adriamycyny wykazywał czynność przeciwnowotworową równoważną > 10 LCK. W dawce tej obserwowano 90% wyleczeń nowotworu i 10% całkowitych regresji nowotworu. Przy podawaniu 5 mg/kg koniugatu ChiBR96-ADM uzyskano czynność przeciwnowotworową równoważną 4,8 LCK przy 10% wyleczeń, 50% całkowitych regresji i 10% częściowych regresji. Czynność przeciwnowotworową koniugatu ChiBR96-ADM znacznie przewyższała czynność zoptymalizowanej adriamycyny (1,6 LCK) i, jak opisano powyżej, koniugat CHiBR96-ADM wykazywał silniejsze działanie niż adriamycyna nieskoniugowana. Niewiążący koniugat IgG-ADM (MR = 7,16) nie był czynny w dawce 10 mg/kg.
Czynność przeciwnowotworową różnych preparatów koniugatów ChiBR96-ADM, otrzymanych przy zastosowaniu techniki “zrelaksowanego przeciwciała i ocenianych przeciwko ustalonym ksenograftom ludzkiego nowotwora L2987 jest przedstawiona w tabeli 2.
Tabela 2
Czynność przeciwnowotworową koniugatów ChiBR96-ADM przeciwko ksenograftom ustalonego ludzkiego raka płuc
Koniugat Dawka (mg/kg) Droga LCK % regresji guza Liczba myszy
ADM Przeciw- ciało PR CR Wyle- czenie
1 2 3 4 5 6 7 8 9
ChiBR96-ADM-6,85 15 615 ip >10 10 0 80 10
10 410 ip >10 0 0 89 9
8 328 iv >10 0 0 100 9
5 205 iv >10 0 22 78 9
ChiBR96-ADM-4,19 15 980 ip >10 0 11 89 9
10 654 ip >10 11 11 66 9
5 327 iv >10 0 11 89 9
2,5 164 iv >10 0 22 78 9
ChiBR96-ADM-6,85 10 410 ip >10 11 11 78 9
8 328 iv >10 0 0 100 9
5 205 iv >10 0 11 89 9
ChiBR96-ADM 4,19 10 654 ip >10 0 0 100 9
5 327 iv >10 0 0 100 9
ChiBR96-ADM 4,19 10 654 ip >8 0 22 78 9
5 327 ip >8 0 11 89 9
ChiBR96-ADM 5,80 10 500 ip >10 0 10 90 10
5 200 ip > 4,8 10 50 10 10
172 718 cd. tabeli 2
1 2 3 4 5 6 7 8 9
ChiBR96-.APM-6,82 5 204 iv >10 22 22 55 9
2 82 ip 3,5 44 33 0 9
1 41 ip 2,0 0 22 0 9
ChiBR96-ADM-6,82 10 400 ip >5,3 11 11 56 9
5 200 ip 4,8 30 10 40 10
2,5 100 ip 2,9 30 0 30 10
1,25 50 ip 1,1 11 0 11 9
0,62 25 ip 0 0 0 0 9
5 200 iv >5,3 10 20 70 10
2,5 100 iv 2,9 22 33 0 9
1,25 50 iv 1,5 11 11 0 9
0,62 25 iv 0,6 0 0 0 9
Adriamycyna 8 - iv 1-1,8 3,6 0 0 55
Wszystkie środki podawano zgodnie ze schematem q4dx3
Jak pokazano, czynność przeciwnowotworowa koniugatów ChiBR96-ADM jest lepsza niż z optymalizowanej adriamycyny i koniugaty ChiBR96-ADM mają6 - 8 razy silniejsze działanie od nieskoniugowanej adriamycyny.
Badano również czynność przeciwnowotworową koniugatów ChiBR96-ADM przeciwko dużym (225 mm3), ustalonym nowotworom L2987 (fig. 11). Przy podawaniu koniugatu ChiBR96-ADM (MR = 6,85) w dawce 10 mg/kg równoważnika adriamycyny uzyskano czynność przeciwnowotworową równoważną >10 LCK oraz 70% wyleczeń i 30% częściowych regresji nowotworu.
Czynność przeciwnowotworową nieskoniugowanego przeciwciała ChiBR96 badano stosując ustalone (50 -100 imrf) ksenografty ludzkiego nowotworu płuc L2987. Jak pokazano w tabeli 3, przeciwciało ChiBR96 podawane w dawkach 100, 200 lub 400 mg/kg me wykazywało czynności przeciwko ustalonym nowotworom L2987. Czynność przeciwnowotworową mieszanin ChiBR961 adriamycyny nie różnihi się od czynności podawanej pojedyrczo adriamycyny. Zatem, czynność przeciwnowotworową koniugatów ChiBR96-ADM jest odbiciem skuteczności samego koniugatu a nie synergistycznego efektu przeciwnowotworowego przeciwciała i adriamccyny
Tabela 3
Czynność przeciwnowotworowa adriamycyny, ChiBR96 oraz mieszanin ChiBR96 i adriamycyny przeciwko ksenograftom ustalonego ludzkiego raka płuc L2987
Leczenie Dawka (mg/kg)a Współ- czynnik LCK % regresji nowotworu Liczba myszy
ADM ChiBR96 PR CR Wyle- czenie
Adriamycyna 8 - 1,5 0 0 0 9
ChiBR96 - 400 0 0 0 0 8
- 200 0 0 0 0 8
- 100 0 0 0 0 8
Adriamycyna + 8 400 1,8 11 0 0 9
ChiBR96 8 200 1,6 0 0 0 9
8 100 1,9 0 0 0 8
aLeki podawano droga iv zgodnie ze schematem q4dx3
Podsumowując, koniugaty ChiBR96-ADM badane przeciwko ustalonym ludzkim nowotworom płuc L2987 wykazują antygeno-specyficzną czynność przeciwnowotworową. Czyn172 718 ność przeciwnowotworową koniugatów ChiBR96-ADM była lepsza niż czynność zoptymalizowanej adriamycyny, mieszanin ChBR96 i adriamycyny oraz równoważnych dawek koniugatów niewiążących. Koniugaty ChiBR96-ADM działały w przybliżeniu 6 razy silniej niż nieskoniugowana adriamycyna. Wyleczenia lub całkowite regresje ustalonych nowotworów zaobserwowano u 50% zwierząt leczonych >2,5 mg/kg koniugatu ChiBR96-ADM.
Jak pokazano na fig. 12, koniugaty ChiBR96-ADM (MR = 7,88) wykazywały antygenospecyficrnączynnośćprzeciwnowotworowąprzeciwko ustalonym (75 -125 mm3) nowotworom MCF7. Czynność koniugatu ChiBR96-ADM podawanego w dawce 5 mg/kg drogą ip lub iv (4,2 LCK) była lepsza niż czynność zoptymalizowanej adriamycyny (1,4 LCK) lub równoważnych dawek niewiążącego koniugatu IgG (1,2 LCK). Czynność przeciwnowotworową ChiBR96-ADM i niewiążących koniugatów IgG-ADM jest zestawiona w tabeli 4. MTD koniugatów ChiBR96-ADM, podobnie jak wolnej adriamycyny jest niższa w modelu MCF7 z powodu suplementacji estradiolem, wymaganej dla wzrostu nowotworu.
Tabela 4
Czynność przeciwnowotworową koniugatów tioeterowych ChiBR96-ADM przeciwko ksenograftom ustalonego ludzkiego raka sutka MCF7
Leczenie Dawka (mg/kg)a Droga Współ- czynnik LCK % regresji nowotworu Liczba myszy
ADM ChiBR96 PR CR Wyle- czenie
ChiBR96-ADM-7,88 10 350 ip b 10
5 175 ip 4,2 30 0 0 10
5 175 iv 4,2 50 10 0 10
IgG-ADM-7,16 5 225 ip 1,1 0 0 0 10
2,5 112 ip 0,6 0 0 0 10
Adriamycyna 2,5 112 iv 0,8 0 0 0 10
6 0 iv 1,4 0 0 0 10
aLeki podawano drogą iv zgodnie ze schematem q4dx3 Przy tej dawce immunokoniugatu wystąpiła śmiertelność 40%
Antygeno-specy ficznączyrmość przec-iwnowotworową i zależność dawka-odpowiedź dla koniugatów ChiBR96-ADM badano również w modelu ludzkiego raka okrężnicy RCA. Nowotwory RCA sąmniej wrażliwe na nieskoniugowanaadriamycynę niż nowotwory L2987 i MCF7. Ponadto, jak opisano poprzednio, nowotwory RCA mają dłuższy czas podwojenia objętości nowotworu niż L2987 i RCA, sąsłabiej unaczynione, i lokalizacja radioznakowanego przeciwciała BR64 w nowotworach RCA jest niższa niż w nowotworach L2987. Jak pokazano na fig. 13, czynność przeciwnowotworową koniugatu ChiBR96-ADM (MR = 7,88), podawanego w dawce 10 mg/kg była lepsza niż czynność adriamycyny i równoważnej dawki niewiążącego koniugatu IgG (MR = 7,16). Jak pokazano w tabeli 5, koniugat ChiBR96-ADM badany w dawce 10 mg/kg wykazywał czynność przeciwnowotworową równoważną > 3 LCK. Przy tej dawce koniugatu ChiBR96-ADM wystąpiło 89% wyleczeń i 11% częściowych regresji nowotworu. W eksperymencie tym nieskoniugowana adriamycyna wykazywała czynność przeciwnowotworową równoważną 0,4 LCK. Zatem w eksperymencie tym koniugat ChiBR96-ADM powodował 89% wyleczeń ustalonego nowotworu, natomiast adriamycyna nieskoniugowana była nieczynna.
172 718
Tabela 5
Czynność przeciwnowotworową koniugatów tioeterowych ChiBR96-ADM przeciwko ksenograftom ustalonego ludzkiego raka okrężnicy RCA
Leczenie Dawka (mg/kg/ Droga Współ- czynnik LCK % regresji nowotworu Liczba myszy
ADM ChiBR96 PR CR Wyle- czenie-
ChiBR96-ADM-7,88 10 350 ip >3 11 0 89 9
5 175 ip 0,6 11 22 11 9
2,5 85 ip 0,2 0 0 0 9
2,5 85 iv 0,6 11 0 0
IgG-ADM-7,16
Adriamycyna 10 405 ip 0 0 0 0 9
8 0 iv 0,4 0 0 0 9
aLeki podawano drogą iv zgodnie ze schematem q4dx3
Podsumowując, koniugat ChiBR96-ADM wykazywał antygeno-specyficzną czynność przeciwnowotworową w modelu ludzkiego nowotworu okrężnicy RCA. Po opadaniu koniugatu ChiBR96-ADM w dawkach 5-10 mg/kg obserwowano wyleczenia i całkowite regresje nowotworu.
Wynalazek opisano w odniesieniu do specyficznych przykładów, materiałów i danych. Jak przyzna specjalista, dostępne są alternatywne środki realizacji i stosowania różnych postaci wynalazku. Takie alternatywne środki wchodzą również w zakres istoty wynalazku.
172 718 [DjhN-NHCOCCH^- A-S((CI-9p-Ć-NH);
Wzór 1
Wzór 1a
172 718
s
Wzór 1c
172 718
Cd}n-nhco(ch^-r
Wzór 2a o OH t^-NHCO(CH^R
Ił I Λ
ΛίΤρ R1 YVyVoh r3 O OHÓ © Ri
Wzór 2b
172 718 ο OH N-NHOO(Cf^-tQ
Wzór 2c
HS((CH^p-Ć-NH):
Wzór- 3
172 718
NC 0 g 0
EtOOĆ>|> -c-c-s-o I -C-C-P-R |
Wzór 4 ch3 R
Wzór 5 Wzór 6
Α-Ί Ή 0 (1 -c-c-c- 0 -C-C-Ć-OR
o— + Wzór 7 Wzór 8 Wzór 9
Wzór 11
172 718
CM
172 718
Wzór 18
172 718
Wzór 23
Wzór 24
172 718 hH2
D- (O0)J+ hyj-NHCCKCF^ń R-[C^NHCO(CI^P Schemat 1 Wzór 2a [0(00)] - h[N -NHC0(Cl·^- L— [D}N-NHCO(C^)ńL
R-C [D>N-NHCO(CH^-R Wzór 2a
Schemat 2
172 718
172 718
MAb+ {j^NH2 łCl—MAb- NH
NH/Cl
Jq iDł=N-NHC0(CH2)n-A-S (CH2)3CNH (l) [DfN-NHCO(CH2)n-R MAb
MAb 7 DTT
FIG.1C ash
MAb + VSH
NH,łcr
Jq zrelaksowane MAb ^S-A-(CH2)n-CONH-N4D] [Dł= N-NHCO(CH2)n-R (Ila)
MAb
S-A-(CH2)n-CONH-N4D] (l) FIG.2
172 718
.—β AORIAMYCYNA .—α----BR64-THA0MHZN-7.18 .—Δ---SN7-THA0MHZN-4
FIG.3
-O-KONTROLA
-a ADRIAMYCYNA 8mg/kg q4d»3, iv
--BR64-THADNHZN-7d8 15mg/kg adria 583mg/kg BR64 q4dK 3, in —-a— -BR64-THAONHZN-7.18 10mg/kg adria 389mg/kg BR64 ip
-i SN7-THADMHZN-4 15mg/kg adria 1020mg/kg SN7 q4d«3, ip
----o—SN7-THADMHZN-4 lOmg/kg adria 680mg/kg SN7 q4d«3,ip
FIG. 4
172 718
WIELKOŚĆ NOWOTWORU (mm3) WIELKOŚĆ NOWOTWORU (mm3)
KONTROLA
AORIAMYCYNA 8mg/kg q4d*3, iv
MAD BR 64 ZODOmg/ko q4d«3, ip
MAD BR64 2000mg/kg q4d>3, ip+ADRIAMYCYNA 8mg/kg q4d«3, iv
FIG.5a
-·-KONTROLA
-β-AORIAMYCYNA 8mq/kg qW»3, iv
-*--MAD BR64 500mg/kg q4d*3, iv
-9-MAD BR 64 500mg/kg + AORIAMYCYNA 8mg/kg q4d«3, iv
FIG.5b
172 718
WIELKOŚĆ NOWOTWORU W)
800 i
600
400200
-1-1-1—i-1-1-1-1-1-1
20 30 40 50 60 70 80 90 „n ILOSC DNI PO IMPLANTACH
KONTROLA
-ADRIAMYCYNA 4mg/kg q4d*3, ip -MAb BR64 1000mg/kg q4d«3, ip
-MAb BR64 1Q00mg/kg* ADRIAMYCYNA 4mg/kg q4d«3, ip
FIG.5c
-·-KONTROLA
-«-ADM
P77-ADMITH) .—a---BN-ADM (TH)
1.6mg/kg ADM iv q2d»5 1.6mg/kg ADM iv q2d«5 1.6mg/kg ADM iv q2d«5
FIG. 6
172 718
ADRIAMYCYNA (gM)
-°-ADRIAMYCYNA
-a-CH96-ADM-5.6 (SPDP)
----o---CH96-ADM-6.0 (ZRELAKSOWANE)
FIG. 7
-O-KONTROLA . „ .
-— ADRIAMYCYNA Bmg/kg, iv
-i-BR64-ADM-5-33 10mg/kg, ip
-4-BR64-A0M-5.33 8mg/kg, ip .—a.— BR66-A0M-5.33 5mg/kg, iv
-»-L6-ADM-f»,89 lOmg/kg, ip
-’-L6-ADM-L.89 8mg/kg, ip
----T---L6-ADM-4.89 5mg/kg, iv
FIG. 8
172 718
---KONTROLA
--AORIAMYCYNA 6 mg/kg, i v
-a-Chi BR96-ADM-4.19 10mg/kg AOM 666 mg/kg ChiBR96, ip —ChiBR96-ADM-W9 Smfl/kg ADM 333mg/kg ChiBR96, ip
-·-lgG-ĄOM-7.16 1Omg/kg ADM 226mg/kg IgG, ip
----«----|gG-ADM-7.16 5mg/kg ADM 113mg/kg lgu,ip
FIG. 9
WIELKOŚĆ NOWOTWORU (mm^)
--KONTROLA •a-ADRIAMYCYNA 8mg/kg q4d»3, iv a-ChiBR96-ADM-5.80 TOmg/kg ADM 500mg/kg CHiBR96 q4d« 3, ip —ChiBR96-ADM-5.80 5mg/kg ADM 250mg/kg CHiBR96 q4d-3, ip
-<-lgG-ADM-7.16 10mg/kg ADM 380mg/kg q4d« 3, ip
FIG. 10
172 718
·<=-KONTROLA
-«-ADRIAMYCYNA 8mg/kg, iv
-a-ChjBR96-AOM-6.85 10mg/kg, ip
FIG. 11
-0-AORIAMYCYNA 6mg/kg, iv _—4_—ChiBR96-ADM-7.88 Smg/kg, ip
-A-ChiBR96~ADM-7.88 Smg/kg, iv
-v-IgG-ADM-7.16 Smg/kg, ip
FIG. 12
172 718
WIELKOŚĆ NOWOTWORU (mm3)
* -ADRIAMYCYNA β mg/kg, ql»d»3, iv * -ChiBR96-AOM-7.e8 10mg/kg ADM 350mg/kg ChiBR96, ip •4-lgG-ADM-7.16 lOmg/kg ADM feOOmg/kg IgG, ip
FIG. 13
a-ChiBR96
FIG. 4
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz. Cena 6,00 zł

Claims (9)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Sposób wytwarzania nowych koniugatów tioeterowych o wzorze 1, w którym D oznacza ugrupowanie leku, n jest liczbą całkowitą 1 -10, p jest liczbą całkowitą 1 - 6, Y oznacza O lub NH2 +Ci', z jest równe 0 lub 1, q wynosi od około 1 do około 10, X oznacza ligand, A oznacza ugrupowanie adduktu Michaela, znamienny tym, że związek o wzorze 2a, w którym D i n mają wyżej podane znaczenie, a R oznacza receptor addycji Michaela poddaje się reakcji ze związkiem o wzorze 3, w którym p, Y, z, q i X mają wyżej podane znaczenie, i ewentualnie wyodrębnia się produkt.
  2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się związek o wzorze 3, w którym X oznacza immunoglobulinę lub jej fragment, a p, Y, z i q mają zdefiniowane w zastrz. 1 znaczenie.
  3. 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że stosuj e się związek o wzorze 3, w którym X oznacza immunoglobulinę, wybraną z grupy składającej się z BR96, BR64, L6, zrelaksowanego BR96, zrelaksowanego BR64, zrelaksowanego Ló, chimerycznego BR96, chimerycznego BR64, chimerycznego L6, zrelaksowanego chimerycznego BR96, zrelaksowanego chimerycznego BR64, zrelaksowanego chimerycznego L6 i ich fragmentów, a p, Y, z i q mają zdefiniowane w zastrz. 1 znaczenie.
  4. 4. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że stosuje się związek o wzorze 3, w którym X oznacza chimeryczne BR96, zrelaksowane chimeryczne BR96 lub ich fragment, a p, Y, z i q mają zdefiniowane w zastrz. 1 znaczenie.
  5. 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuj e się związek o wzorze 2a, w którym D oznacza antybiotyk antracyklinowy wybrany z grupy składającej się z adriamycyny, daunomycyny, detorubicyny, karminomycyny, idarubicyny, epirubicyny, AD-32, 4-morfolinylo-adriamycyny i 3'-deammo-3'-(3-cyjano-4-morfoimylo)-deoksorubicyny, a n i R majązdefiniowane w zastrz. 1 znaczenie.
  6. 6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że stosuje się związek o wzorze 2a, w którym D oznacza antybiotyk antracyklinowy, korzystnie adriamycynę, a n i R mają zdefiniowane w zastrz. 1 znaczenie.
  7. 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że stosuje się związek o wzorze 2a, w którym n jest równe 5.
  8. 8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się związek o wzorze 3, w którym z jest równe 0, a p, Y, q i X majązdefiniowane w zastrz. 1 znaczenie.
  9. 9. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że stosuje się związek o wzorze 3, w którym q jest równe od około 4 do około 8.
PL93317516A 1992-01-23 1993-01-22 Sposób wytwarzania nowych koniugatów tioeterowych PL PL PL PL PL PL172718B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/824,951 US5622929A (en) 1992-01-23 1992-01-23 Thioether conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PL172718B1 true PL172718B1 (pl) 1997-11-28

Family

ID=25242736

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL93317518A PL172827B1 (pl) 1992-01-23 1993-01-22 Nowe koniugaty tioeterowe PL PL PL PL PL
PL93317517A PL172837B1 (pl) 1992-01-23 1993-01-22 Preparat farmaceutyczny zawierajacy koniugaty tioeterowe PL PL PL PL PL
PL93317519A PL172715B1 (pl) 1992-01-23 1993-01-22 Sposób wytwarzania nowych koniugatów tioeterowych PL PL PL PL PL
PL93297514A PL172828B1 (pl) 1992-01-23 1993-01-22 Nowe zwiazki, pochodne hydrazonu PL PL PL PL PL
PL93317516A PL172718B1 (pl) 1992-01-23 1993-01-22 Sposób wytwarzania nowych koniugatów tioeterowych PL PL PL PL PL
PL93317715A PL172824B1 (pl) 1992-01-23 1993-01-22 Nowe koniugaty tioeterowe PL PL PL PL PL

Family Applications Before (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL93317518A PL172827B1 (pl) 1992-01-23 1993-01-22 Nowe koniugaty tioeterowe PL PL PL PL PL
PL93317517A PL172837B1 (pl) 1992-01-23 1993-01-22 Preparat farmaceutyczny zawierajacy koniugaty tioeterowe PL PL PL PL PL
PL93317519A PL172715B1 (pl) 1992-01-23 1993-01-22 Sposób wytwarzania nowych koniugatów tioeterowych PL PL PL PL PL
PL93297514A PL172828B1 (pl) 1992-01-23 1993-01-22 Nowe zwiazki, pochodne hydrazonu PL PL PL PL PL

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL93317715A PL172824B1 (pl) 1992-01-23 1993-01-22 Nowe koniugaty tioeterowe PL PL PL PL PL

Country Status (26)

Country Link
US (3) US5622929A (pl)
EP (1) EP0554708B9 (pl)
JP (1) JPH0625012A (pl)
CN (3) CN1040540C (pl)
AT (1) ATE294592T1 (pl)
AU (1) AU666903B2 (pl)
BG (1) BG61899B1 (pl)
CA (1) CA2087286C (pl)
CZ (1) CZ297409B6 (pl)
DE (1) DE69333800T2 (pl)
DK (1) DK0554708T3 (pl)
EG (1) EG20406A (pl)
ES (1) ES2240959T3 (pl)
FI (1) FI930240A7 (pl)
HU (1) HUT68345A (pl)
IL (1) IL104475A0 (pl)
MX (1) MX9300298A (pl)
MY (1) MY110526A (pl)
NO (1) NO930189L (pl)
NZ (1) NZ245725A (pl)
OA (1) OA09859A (pl)
PL (6) PL172827B1 (pl)
RO (1) RO112618B1 (pl)
TW (1) TW213921B (pl)
UY (1) UY23541A1 (pl)
ZA (1) ZA93444B (pl)

Families Citing this family (552)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5637616A (en) * 1993-06-18 1997-06-10 Arcturus Pharmaceutical Corporation Method for treating diseases mediated by proteases
AU1140495A (en) * 1994-01-27 1995-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Method for preparing thioether conjugates
US6303120B1 (en) * 1994-03-15 2001-10-16 Memorial Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of glycoconjugates of the lewis y epitope and uses thereof
US5708163A (en) * 1994-03-15 1998-01-13 Sloan-Kettering Institute Of Cancer Research Synthesis of the breast tumor-associated antigen defined by monoclonalantibody MBRL and uses thereof
US6544952B1 (en) 1994-03-15 2003-04-08 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of glycoconjugates of the globo-H epitope and uses thereof
US5599686A (en) * 1994-06-28 1997-02-04 Merck & Co., Inc. Peptides
US5866679A (en) * 1994-06-28 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Peptides
US6143864A (en) * 1994-06-28 2000-11-07 Merck & Co., Inc. Peptides
US7820798B2 (en) * 1994-11-07 2010-10-26 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US7597886B2 (en) * 1994-11-07 2009-10-06 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US5907030A (en) * 1995-01-25 1999-05-25 University Of Southern California Method and compositions for lipidization of hydrophilic molecules
US7429646B1 (en) 1995-06-05 2008-09-30 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to human tumor necrosis factor receptor-like 2
US20030119724A1 (en) * 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
EP0871490B1 (en) * 1995-12-22 2003-03-19 Bristol-Myers Squibb Company Branched hydrazone linkers
US7888466B2 (en) 1996-01-11 2011-02-15 Human Genome Sciences, Inc. Human G-protein chemokine receptor HSATU68
SE9601158D0 (sv) * 1996-03-26 1996-03-26 Stefan Svenson Method of producing immunogenic products and vaccines
DE19636889A1 (de) * 1996-09-11 1998-03-12 Felix Dr Kratz Antineoplastisch wirkende Transferrin- und Albuminkonjugate zytostatischer Verbindungen aus der Gruppe der Anthrazykline, Alkylantien, Antimetabolite und Cisplatin-Analoga und diese enthaltende Arzneimittel
WO1998019705A1 (en) * 1996-11-05 1998-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
FR2766826B1 (fr) 1997-08-04 2001-05-18 Pasteur Institut Vecteurs derives d'anticorps pour le transfert de substances dans les cellules
US6093692A (en) * 1997-09-25 2000-07-25 The University Of Southern California Method and compositions for lipidization of hydrophilic molecules
EP1093457B8 (en) 1998-03-19 2011-02-02 Human Genome Sciences, Inc. Cytokine receptor common gamma chain like
WO2000003737A2 (en) * 1998-07-17 2000-01-27 The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Water-soluble drugs and methods for their production
EP2357192A1 (en) 1999-02-26 2011-08-17 Human Genome Sciences, Inc. Human endokine alpha and methods of use
US6322980B1 (en) * 1999-04-30 2001-11-27 Aclara Biosciences, Inc. Single nucleotide detection using degradation of a fluorescent sequence
US6649351B2 (en) 1999-04-30 2003-11-18 Aclara Biosciences, Inc. Methods for detecting a plurality of analytes by mass spectrometry
US7001725B2 (en) 1999-04-30 2006-02-21 Aclara Biosciences, Inc. Kits employing generalized target-binding e-tag probes
US6673550B2 (en) 1999-04-30 2004-01-06 Aclara Biosciences, Inc. Electrophoretic tag reagents comprising fluorescent compounds
DE19926154A1 (de) 1999-06-09 2000-12-14 Ktb Tumorforschungs Gmbh Verfahren zur Herstellung einer injizierbaren Arzneimittelzubereitung
US6706892B1 (en) 1999-09-07 2004-03-16 Conjuchem, Inc. Pulmonary delivery for bioconjugation
CA2385528C (en) 1999-10-01 2013-12-10 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US7771929B2 (en) * 2000-04-28 2010-08-10 Monogram Biosciences, Inc. Tag library compounds, compositions, kits and methods of use
US7160735B2 (en) * 2000-04-28 2007-01-09 Monogram Biosciences, Inc. Tagged microparticle compositions and methods
US20030031675A1 (en) 2000-06-06 2003-02-13 Mikesell Glen E. B7-related nucleic acids and polypeptides useful for immunomodulation
WO2001096528A2 (en) 2000-06-15 2001-12-20 Human Genome Sciences, Inc. Human tumor necrosis factor delta and epsilon
AU2001268427B2 (en) 2000-06-16 2007-03-29 Glaxosmithkline Intellectual Property Limited Antibodies that immunospecifically bind to blys
CZ20031262A3 (en) * 2000-10-16 2004-03-17 Neopharm, Inc. Liposomal formulation of mitoxantrone
AU1994402A (en) 2000-11-28 2002-06-11 Mediummune Inc Methods of administering/dosing anti-rsv antibodies for prophylaxis and treatment
WO2002043771A2 (en) 2000-12-01 2002-06-06 Cell Works Inc. Conjugates of glycosylated/galactosylated peptide
JP4336498B2 (ja) 2000-12-12 2009-09-30 メディミューン，エルエルシー 延長した半減期を有する分子ならびにその組成物および用途
EP1683865A3 (en) 2001-02-02 2006-10-25 Eli Lilly &amp; Company Mammalian proteins and in particular CD200
WO2002098370A2 (en) * 2001-03-02 2002-12-12 Medimmune, Inc. Methods of administering/dosing cd2 antagonists for the prevention and treatment of autoimmune disorders or inflammatory disorders
DE60236646D1 (de) 2001-04-13 2010-07-22 Human Genome Sciences Inc Anti-VEGF-2 Antikörper
CA2444483A1 (en) * 2001-04-26 2002-11-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Diagnostic imaging compositions, their methods of synthesis and use
US7589180B2 (en) 2001-05-11 2009-09-15 Abbott Laboratories Inc. Specific binding proteins and uses thereof
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
CN100594935C (zh) 2001-05-25 2010-03-24 人体基因组科学有限公司 免疫特异性结合trail受体的抗体
US7087600B2 (en) * 2001-05-31 2006-08-08 Medarex, Inc. Peptidyl prodrugs and linkers and stabilizers useful therefor
US6867189B2 (en) * 2001-07-26 2005-03-15 Genset S.A. Use of adipsin/complement factor D in the treatment of metabolic related disorders
US7261875B2 (en) 2001-12-21 2007-08-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Dendritic poly (amino acid) carriers and methods of use
RU2196604C1 (ru) * 2001-12-21 2003-01-20 Северин Евгений Сергеевич Полипептид, являющийся аналогом рецепторсвязывающего фрагмента эпидермального фактора роста с 21-й по 31-ю аминокислоту, его конъюгат с доксорубицином и фармацевтическая композиция на его основе
JP2005523688A (ja) * 2002-01-18 2005-08-11 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー タンパク質チロシンキナーゼおよび／またはタンパク質チロシンキナーゼ経路と相互作用する化合物の活性を予測するためのポリヌクレオチドおよびポリペプチドの同定
US8435529B2 (en) 2002-06-14 2013-05-07 Immunomedics, Inc. Combining radioimmunotherapy and antibody-drug conjugates for improved cancer therapy
US7591994B2 (en) * 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8877901B2 (en) 2002-12-13 2014-11-04 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
US8361464B2 (en) 2002-03-01 2013-01-29 Immunomedics, Inc. Anthracycline-Antibody Conjugates for Cancer Therapy
US9770517B2 (en) 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2003076649A1 (en) * 2002-03-05 2003-09-18 Aclara Biosciences, Inc. Multiplex analysis using membrane-bound sensitizers
WO2003085093A2 (en) * 2002-04-01 2003-10-16 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that specifically bind to gmad
JP2005535572A (ja) 2002-04-12 2005-11-24 メディミューン，インコーポレーテッド 組換え抗インターロイキン−９抗体
EP1575509B1 (en) 2002-05-10 2011-10-26 Purdue Research Foundation Epha2 agonistic monoclonal antibodies and methods of use thereof
US20040229380A1 (en) * 2002-05-21 2004-11-18 Po-Ying Chan-Hui ErbB heterodimers as biomarkers
US7425618B2 (en) 2002-06-14 2008-09-16 Medimmune, Inc. Stabilized anti-respiratory syncytial virus (RSV) antibody formulations
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
JP4443407B2 (ja) * 2002-07-25 2010-03-31 アクララ バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド レセプターオリゴマー形成の検出
JP2006508907A (ja) * 2002-07-26 2006-03-16 アクララ バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド 親油性電気泳動プローブ
ES2544527T3 (es) 2002-07-31 2015-09-01 Seattle Genetics, Inc. Conjugados de fármacos y su uso para tratar el cáncer, una enfermedad autoinmune o una enfermedad infecciosa
WO2004016750A2 (en) 2002-08-14 2004-02-26 Macrogenics, Inc. FcϜRIIB-SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
CA2497628A1 (en) * 2002-09-05 2004-03-18 Medimmune, Inc. Methods of preventing or treating cell malignancies by administering cd2 antagonists
SI1551876T1 (sl) 2002-10-16 2011-07-29 Purdue Pharma Lp Protitelesa, ki se vežejo na celično povezan CA 125/0722P, in postopki za njihovo uporabo
US20040091850A1 (en) * 2002-11-08 2004-05-13 Travis Boone Single cell analysis of membrane molecules
JP4959136B2 (ja) 2002-12-13 2012-06-20 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 細胞内で開裂可能な結合を有する免疫接合体
US8420086B2 (en) 2002-12-13 2013-04-16 Immunomedics, Inc. Camptothecin conjugates of anti-CD22 antibodies for treatment of B cell diseases
MXPA05007615A (es) * 2003-01-21 2005-09-30 Bristol Myers Squibb Co Polinucleotido que codifica una novedosa acil coenzima a, monoacilglicerol aciltransferasa-3 (mgat3), y usos del mismo.
DK1594542T3 (da) 2003-02-20 2010-10-11 Seattle Genetics Inc Anti-CD70 antistof-lægemiddelkonjugater og deres anvendelse ved behandling af cancer
KR20110094361A (ko) 2003-04-11 2011-08-23 메디뮨 엘엘씨 재조합 ｉｌ­９ 항체 및 그의 용도
US7402398B2 (en) * 2003-07-17 2008-07-22 Monogram Biosciences, Inc. Measuring receptor homodimerization
US20050048617A1 (en) 2003-08-18 2005-03-03 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
US20060228350A1 (en) * 2003-08-18 2006-10-12 Medimmune, Inc. Framework-shuffling of antibodies
WO2005045058A2 (en) * 2003-10-27 2005-05-19 Monogram Biosciences, Inc. Detecting human anti-therapeutic antibodies
EP3434275A1 (en) 2003-11-06 2019-01-30 Seattle Genetics, Inc. Assay for cancer cells based on the use of auristatin conjugates with antibodies
WO2005058961A2 (en) * 2003-12-12 2005-06-30 Amgen Inc. Antibodies specific for human galanin, and uses thereof
GB0401008D0 (en) * 2004-01-17 2004-02-18 Univ Manchester Drug delivery system
US20050175619A1 (en) * 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
EP1786463A4 (en) * 2004-03-26 2009-05-20 Human Genome Sciences Inc ANTIBODY AGAINST NOGO RECEPTOR
US7517903B2 (en) * 2004-05-19 2009-04-14 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates
US7691962B2 (en) * 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
US7541330B2 (en) * 2004-06-15 2009-06-02 Kosan Biosciences Incorporated Conjugates with reduced adverse systemic effects
AU2005286770A1 (en) 2004-09-21 2006-03-30 Medimmune, Llc Antibodies against and methods for producing vaccines for respiratory syncytial virus
WO2006047639A2 (en) 2004-10-27 2006-05-04 Medimmune, Inc. Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens
US7939267B2 (en) * 2004-11-04 2011-05-10 Laboratory Corporation Of America Holdings Detection of activation of endothelial cells as surrogate marker for angiogenesis
WO2006071441A2 (en) 2004-11-30 2006-07-06 Curagen Corporation Antibodies directed to gpnmb and uses thereof
MX2007009878A (es) * 2005-02-18 2007-10-03 Medarex Inc Anticuerpos monoclonales para antigeno de membrana especifica para prostata (amep).
US9707302B2 (en) 2013-07-23 2017-07-18 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
US10058621B2 (en) 2015-06-25 2018-08-28 Immunomedics, Inc. Combination therapy with anti-HLA-DR antibodies and kinase inhibitors in hematopoietic cancers
EP1869192B1 (en) 2005-03-18 2016-01-20 MedImmune, LLC Framework-shuffling of antibodies
EP2239573A3 (en) * 2005-03-30 2011-02-08 Saladax Biomedical Inc. Doxorubicin derivatives and conjugates for doxorubicin immunoassay
US7714016B2 (en) * 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
BRPI0611069A2 (pt) 2005-05-06 2010-11-09 Zymogenetics Inc anticorpo monoclonal, anticorpo humanizado, fragmento de anticorpo, uso de um antagonista, e, hibridoma
KR20080025174A (ko) 2005-06-23 2008-03-19 메디뮨 인코포레이티드 응집 및 단편화 프로파일이 최적화된 항체 제제
EP1904652A2 (en) * 2005-07-08 2008-04-02 Brystol-Myers Squibb Company Single nucleotide polymorphisms associated with dose-dependent edema and methods of use thereof
US20070202512A1 (en) * 2005-08-19 2007-08-30 Bristol-Myers Squibb Company Human single nucleotide polymorphisms associated with dose-dependent weight gain and methods of use thereof
AU2006294554B2 (en) * 2005-09-26 2013-03-21 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Antibody-drug conjugates and methods of use
CN101365679B (zh) 2005-10-26 2012-11-14 梅达莱克斯公司 制备cc-1065类似物的方法和化合物
ZA200804082B (en) 2005-11-07 2010-02-24 Scripps Research Inst Compositions and methods for controlling tissue factor signaling specificity
CA2627190A1 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
US8575319B2 (en) * 2006-03-10 2013-11-05 The Regents Of The University Of California Cleavable vaccine compositions and uses thereof and methods of making and using the same
WO2007127936A2 (en) 2006-04-27 2007-11-08 Pikamab, Inc. Methods and compositions for antibody therapy
AU2007281876B2 (en) 2006-06-26 2013-09-05 Macrogenics, Inc. FcgammaRIIB-specific antibodies and methods of use thereof
US7572618B2 (en) 2006-06-30 2009-08-11 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotides encoding novel PCSK9 variants
EA021255B1 (ru) 2006-08-28 2015-05-29 Киова Хакко Кирин Ко., Лимитед Антагонистические моноклональные антитела человека, специфичные в отношении light человека
CN103044550A (zh) 2006-09-01 2013-04-17 津莫吉尼蒂克斯公司 Il-31单克隆抗体的可变区序列和使用方法
EP2064335A4 (en) 2006-10-16 2011-03-30 Medimmune Llc MOLECULES WITH REDUCED HALF TIME, COMPOSITIONS AND ITS USE
DK2099823T4 (da) 2006-12-01 2022-05-09 Seagen Inc Målbindingsmiddelvarianter og anvendelser deraf
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 梅達雷克斯有限責任公司 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
EP2126127B1 (en) * 2007-01-25 2016-09-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Use of anti-egfr antibodies in treatment of egfr mutant mediated disease
KR20090122439A (ko) 2007-02-21 2009-11-30 메다렉스, 인코포레이티드 단일 아미노산을 갖는 화학적 링커 및 이의 접합체
CA2680854C (en) * 2007-03-15 2017-02-14 Ludwig Institute For Cancer Research Treatment method using egfr antibodies and src inhibitors and related formulations
BRPI0809435A2 (pt) 2007-03-27 2014-09-09 Sea Lane Biotechnologies, Llc Constructos e bibliotecas que compreendem sequências de cadeia leve substituida de anticorpos
US20100209434A1 (en) 2007-03-30 2010-08-19 Medimmune, Llc Antibody formulation
EP2164868B1 (en) 2007-05-04 2015-03-25 Technophage, Investigação E Desenvolvimento Em Biotecnologia, SA Engineered rabbit antibody variable domains and uses thereof
DK3072525T3 (en) 2007-05-14 2018-04-30 Astrazeneca Ab PROCEDURES FOR REDUCING BASOFILE CELL LEVELS
JP5634862B2 (ja) * 2007-05-16 2014-12-03 カーテーベー トゥモーアフォルシュングス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 低粘度アントラサイクリン製剤
ATE543835T1 (de) 2007-07-16 2012-02-15 Genentech Inc Anti-cd79b-antikörper und immunkonjugate und anwendungsverfahren
ES2528922T3 (es) 2007-07-16 2015-02-13 Genentech, Inc. Anticuerpos anti-CD79b humanizados e inmunoconjugados y métodos de uso
US9283276B2 (en) 2007-08-14 2016-03-15 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Monoclonal antibody 175 targeting the EGF receptor and derivatives and uses thereof
WO2009046407A2 (en) 2007-10-04 2009-04-09 Zymogenetics, Inc. B7 FAMILY MEMBER zB7H6 AND RELATED COMPOSITIONS AND METHODS
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
KR101603109B1 (ko) 2007-12-07 2016-03-25 지모제넥틱스, 인코포레이티드 Ｉｌ-31에 특이적인 인간화된 항체 분자
EP2235536A4 (en) * 2007-12-20 2011-05-04 Lab Corp America Holdings HER-2-DIAGNOSTIC PROCEDURE
ES2613963T3 (es) 2008-01-18 2017-05-29 Medimmune, Llc Anticuerpos manipulados con cisteína para conjugación específica de sitio
PT2247620T (pt) 2008-01-31 2016-08-23 Genentech Inc Anticorpos e imunoconjugados anti-cd79b e métodos de utilização
PY09026846A (es) 2008-08-05 2015-09-01 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos que se dirigen a la proteína de complemento c5
US20120295259A1 (en) 2011-05-19 2012-11-22 Laboratory Corporation Of America Holdings Methods for Determining the Likelihood of Survival and for Predicting Likelihood of Metastasis in Cancer Patients
SG177252A1 (en) 2008-12-01 2012-03-29 Lab Corp America Holdings METHODS AND ASSAYS FOR MEASURING p95 AND/OR p95 IN A SAMPLE AND ANTIBODIES SPECIFIC FOR p95
SG172983A1 (en) 2009-01-15 2011-08-29 Lab Corp America Holdings Methods of determining patient response by measurement of her-3
WO2010087927A2 (en) 2009-02-02 2010-08-05 Medimmune, Llc Antibodies against and methods for producing vaccines for respiratory syncytial virus
WO2010093993A2 (en) 2009-02-12 2010-08-19 Human Genome Sciences, Inc. Use of b lymphocyte stimulator protein antagonists to promote transplantation tolerance
EP3243527B1 (en) 2009-02-13 2019-06-05 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
JP2012526839A (ja) 2009-05-13 2012-11-01 シー レーン バイオテクノロジーズ， エルエルシー インフルエンザウイルスに対する中和分子
WO2010141329A1 (en) 2009-06-01 2010-12-09 Medimmune, Llc Molecules with extended half-lives and uses thereof
CA2766405A1 (en) 2009-06-22 2011-01-13 Medimmune, Llc Engineered fc regions for site-specific conjugation
LT2769737T (lt) 2009-07-20 2017-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ctla4 antikūno derinys su etopozidu, skirtas sinerginiam proliferacinių ligų gydymui
US9133500B2 (en) 2009-08-10 2015-09-15 MorphoSys A6 Screening strategies for the identification of binders
AU2010282340B2 (en) 2009-08-13 2016-12-22 The Johns Hopkins University Methods of modulating immune function
DK2464664T3 (da) 2009-08-13 2016-01-18 Crucell Holland Bv Antistoffer mod humant respiratorisk syncytialvirus (rsv) og fremgangsmåder til anvendelse deraf
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
US20110189183A1 (en) 2009-09-18 2011-08-04 Robert Anthony Williamson Antibodies against candida, collections thereof and methods of use
US20110076232A1 (en) * 2009-09-29 2011-03-31 Ludwig Institute For Cancer Research Specific binding proteins and uses thereof
MX366890B (es) 2009-10-23 2019-07-30 Millennium Pharm Inc Moléculas de anticuerpo anti - gcc y composiciones y métodos relacionados.
IN2012DN04908A (pl) 2009-12-09 2015-09-25 Inst Nat Sante Rech Med
TWI504410B (zh) 2010-02-08 2015-10-21 Agensys Inc 結合至１６１ｐ２ｆ１０ｂ蛋白之抗體藥物結合物（ａｄｃ）
EP4450523A3 (en) 2010-04-02 2025-03-12 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
EA201291181A1 (ru) 2010-05-06 2013-05-30 Новартис Аг Композиции и способы применения терапевтических поливалентных антител против белка, родственного рецептору липопротеинов низкой плотности 6 (lrp6)
CA2798432A1 (en) 2010-05-06 2011-11-10 Novartis Ag Compositions and methods of use for therapeutic low density lipoprotein -related protein 6 (lrp6) antibodies
PT3552619T (pt) 2010-07-09 2025-10-23 Bioverativ Therapeutics Inc Polipéptidos de fator ix e métodos de uso dos mesmos
EP2591000B1 (en) 2010-07-09 2017-05-17 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Anti-human respiratory syncytial virus (rsv) antibodies and methods of use
US8871744B2 (en) 2010-07-21 2014-10-28 B & G Partyers, LLC Compounds and methods for selectively targeting tumor-associated mucins
CA2806252C (en) 2010-07-29 2019-05-14 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
WO2012019061A2 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stem Centrx, Inc. Novel effectors and methods of use
SG187908A1 (en) 2010-08-20 2013-03-28 Novartis Ag Antibodies for epidermal growth factor receptor 3 (her3)
US20130224191A1 (en) 2010-08-27 2013-08-29 Robert A. Stull Notum protein modulators and methods of use
WO2012031273A2 (en) 2010-09-03 2012-03-08 Stem Centrx, Inc. Novel modulators and methods of use
EP2621526B1 (en) 2010-09-29 2018-06-06 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins
EP3219731A1 (en) 2010-10-01 2017-09-20 Oxford BioTherapeutics Ltd Anti-ror1 antibodies
PL2635607T3 (pl) 2010-11-05 2020-05-18 Zymeworks Inc. Projekt stabilnego przeciwciała heterodimerowego z mutacjami w domenie FC
US20130245233A1 (en) 2010-11-24 2013-09-19 Ming Lei Multispecific Molecules
EP3786185A1 (en) 2010-12-06 2021-03-03 Seagen Inc. Humanized antibodies to liv-1 and use of same to treat cancer
TWI655210B (zh) 2010-12-08 2019-04-01 艾伯維史坦森特瑞斯有限責任公司 新穎調節劑及其使用方法
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
EP3763740A1 (en) 2011-01-26 2021-01-13 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-kit antibodies and uses thereof
SA112330278B1 (ar) 2011-02-18 2015-10-09 ستيم سينتركس، انك. مواد ضابطة جديدة وطرق للاستخدام
SI3415531T1 (sl) 2011-05-27 2023-12-29 Glaxo Group Limited Bcma (cd269/tnfrsf17) - vezni proteini
WO2012170742A2 (en) 2011-06-07 2012-12-13 University Of Hawaii Treatment and prevention of cancer with hmgb1 antagonists
US9244074B2 (en) 2011-06-07 2016-01-26 University Of Hawaii Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
EP2736928B1 (en) 2011-07-28 2019-01-09 i2 Pharmaceuticals, Inc. Sur-binding proteins against erbb3
WO2013022855A1 (en) 2011-08-05 2013-02-14 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points and immunofiltering
US20130058947A1 (en) 2011-09-02 2013-03-07 Stem Centrx, Inc Novel Modulators and Methods of Use
UY34317A (es) 2011-09-12 2013-02-28 Genzyme Corp Anticuerpo antireceptor de célula T (alfa)/ß
EP2758422A1 (en) 2011-09-23 2014-07-30 Technophage, Investigação E Desenvolvimento Em Biotecnologia, SA Modified albumin-binding domains and uses thereof to improve pharmacokinetics
US12466897B2 (en) 2011-10-10 2025-11-11 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
US10851178B2 (en) 2011-10-10 2020-12-01 Xencor, Inc. Heterodimeric human IgG1 polypeptides with isoelectric point modifications
CA3182462A1 (en) 2011-10-10 2013-04-18 Xencor, Inc. A method for purifying antibodies
CN103071159B (zh) * 2011-10-25 2014-10-15 天津药物研究院 一种阿霉素-多肽复合物、药物组合物的制备方法和应用
EP2773664A1 (en) 2011-11-01 2014-09-10 Bionomics, Inc. Anti-gpr49 antibodies
AU2012332593B2 (en) 2011-11-01 2016-11-17 Bionomics, Inc. Anti-GPR49 antibodies
JP2014533247A (ja) 2011-11-01 2014-12-11 バイオノミクス インコーポレイテッド 抗体および癌を治療する方法
EP2773373B1 (en) 2011-11-01 2018-08-22 Bionomics, Inc. Methods of blocking cancer stem cell growth
PL2773671T3 (pl) 2011-11-04 2022-01-24 Zymeworks Inc. Projekt stabilnego przeciwciała heterodimerycznego z mutacjami w domenie fc
KR20140091031A (ko) 2011-11-04 2014-07-18 노파르티스 아게 저밀도 지단백질-관련 단백질 6 (lrp6) - 반감기 연장제 구축물
US9453073B2 (en) 2011-12-02 2016-09-27 Eli Lilly And Company Anti-glucagon antibodies and uses thereof
JP2015500829A (ja) 2011-12-05 2015-01-08 ノバルティス アーゲー 上皮細胞増殖因子受容体３（ｈｅｒ３）のドメインｉｉに対するｈｅｒ３の抗体
KR102083957B1 (ko) 2011-12-05 2020-03-04 노파르티스 아게 표피 성장 인자 수용체 3 (her3)에 대한 항체
ES2728278T3 (es) 2011-12-21 2019-10-23 Novartis Ag Composiciones que comprenden anticuerpos dirigidos al factor P y C5
EP2793940B1 (en) 2011-12-22 2018-11-14 i2 Pharmaceuticals, Inc. Surrogate binding proteins
EP3539982B1 (en) 2011-12-23 2025-02-19 Pfizer Inc. Engineered antibody constant regions for site-specific conjugation and methods and uses therefor
HK1204445A1 (en) 2012-01-20 2015-11-20 Sea Lane Biotechnologies, Llc Surrobody cojugates
RU2014138474A (ru) 2012-02-24 2016-04-10 СтемСентРкс, Инк. Новые модуляторы и способы применения
SG10201801444WA (en) 2012-02-24 2018-04-27 Abbvie Stemcentrx Llc Anti sez6 antibodies and methods of use
CA2865578C (en) 2012-02-27 2023-01-17 Amunix Operating Inc. Xten conjugate compositions and methods of making same
US9156915B2 (en) 2012-04-26 2015-10-13 Thomas Jefferson University Anti-GCC antibody molecules
JP6351572B2 (ja) 2012-05-10 2018-07-04 ザイムワークス，インコーポレイテッド Ｆｃドメインに突然変異を有する免疫グロブリン重鎖のヘテロ多量体構築物
AU2013263002C1 (en) 2012-05-15 2018-05-31 Seagen Inc. Self-stabilizing linker conjugates
CN103566377A (zh) 2012-07-18 2014-02-12 上海博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
CN104812775B (zh) 2012-07-25 2019-05-03 塞尔德克斯医疗公司 抗kit抗体及其用途
US9382329B2 (en) 2012-08-14 2016-07-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells
SG10201912773TA (en) 2012-08-23 2020-02-27 Agensys Inc Antibody drug conjugates (adc) that bind to 158p1d7 proteins
US9790268B2 (en) 2012-09-12 2017-10-17 Genzyme Corporation Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function
EP2904390B1 (en) 2012-10-02 2016-11-16 Roche Diagnostics GmbH Methods of specifically releasing a sub-group of objects
JP2015533832A (ja) 2012-10-09 2015-11-26 アイジェニカ バイオセラピューティクス インコーポレイテッド 抗Ｃ１６ｏｒｆ５４抗体およびその使用方法
AU2012395148B2 (en) 2012-11-24 2016-10-27 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
WO2014084859A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Novartis Ag Molecules and methods for modulating tmem16a activities
WO2014089111A1 (en) 2012-12-05 2014-06-12 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting epo
AU2013360335B2 (en) 2012-12-13 2017-12-07 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US20240148873A1 (en) 2012-12-13 2024-05-09 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and sn-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US10206918B2 (en) 2012-12-13 2019-02-19 Immunomedics, Inc. Efficacy of anti-HLA-DR antiboddy drug conjugate IMMU-140 (hL243-CL2A-SN-38) in HLA-DR positive cancers
US12310958B2 (en) 2012-12-13 2025-05-27 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
US9107960B2 (en) 2012-12-13 2015-08-18 Immunimedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
US10744129B2 (en) 2012-12-13 2020-08-18 Immunomedics, Inc. Therapy of small-cell lung cancer (SCLC) with a topoisomerase-I inhibiting antibody-drug conjugate (ADC) targeting Trop-2
US10413539B2 (en) 2012-12-13 2019-09-17 Immunomedics, Inc. Therapy for metastatic urothelial cancer with the antibody-drug conjugate, sacituzumab govitecan (IMMU-132)
WO2017004144A1 (en) 2015-07-01 2017-01-05 Immunomedics, Inc. Antibody-sn-38 immunoconjugates with a cl2a linker
US10137196B2 (en) 2012-12-13 2018-11-27 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
US9931417B2 (en) 2012-12-13 2018-04-03 Immunomedics, Inc. Antibody-SN-38 immunoconjugates with a CL2A linker
US9492566B2 (en) 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
CA2891686A1 (en) 2012-12-18 2014-06-26 Novartis Ag Compositions and methods that utilize a peptide tag that binds to hyaluronan
US10968276B2 (en) 2013-03-12 2021-04-06 Xencor, Inc. Optimized anti-CD3 variable regions
US10131710B2 (en) 2013-01-14 2018-11-20 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US9605084B2 (en) 2013-03-15 2017-03-28 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US11053316B2 (en) 2013-01-14 2021-07-06 Xencor, Inc. Optimized antibody variable regions
US10487155B2 (en) 2013-01-14 2019-11-26 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US9701759B2 (en) 2013-01-14 2017-07-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
CA2898100C (en) 2013-01-14 2023-10-10 Xencor, Inc. Novel heterodimeric proteins
CA2897987A1 (en) 2013-01-15 2014-07-24 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
JP2016513098A (ja) 2013-02-07 2016-05-12 イミューノメディクス、インコーポレイテッドＩｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ， Ｉｎｃ． 癌の標的治療用抗体と抱合した極めて強力なプロドラック形態の２−ピロリノドキソルビシン（ｐ２ｐｄｏｘ）
MX2015010682A (es) 2013-02-22 2016-05-31 Stemcentrx Inc Nuevos conjugados de anticuerpos y usos de los mismos.
RU2711935C2 (ru) 2013-03-11 2020-01-23 Джензим Корпорейшн Сайт-специфическая конъюгация антитело-лекарственное средство посредством гликоинженерии
PT2970473T (pt) 2013-03-14 2017-10-26 Bristol Myers Squibb Co Combinação de agonista de dr5 e antagonista anti-pd-1 e métodos de utilização
JP2016514130A (ja) 2013-03-14 2016-05-19 ノバルティス アーゲー Ｎｏｔｃｈ３に対する抗体
EP3936521B1 (en) 2013-03-15 2026-02-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
TWI828269B (zh) 2013-03-15 2024-01-01 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ix多肽調配物
US10519242B2 (en) 2013-03-15 2019-12-31 Xencor, Inc. Targeting regulatory T cells with heterodimeric proteins
US9522876B2 (en) 2013-03-15 2016-12-20 Zymeworks Inc. Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
EP2970486B1 (en) 2013-03-15 2018-05-16 Xencor, Inc. Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions
US10106624B2 (en) 2013-03-15 2018-10-23 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
US10858417B2 (en) 2013-03-15 2020-12-08 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
CA2908515A1 (en) 2013-04-05 2014-10-09 Laboratory Corporation Of America Holdings Systems and methods for facilitating diagnosis, prognosis and treatment of cancer based on detection of her3 activation
SG10201708143QA (en) 2013-06-06 2017-11-29 Pf Medicament Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof
UY35620A (es) 2013-06-21 2015-01-30 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
AR096601A1 (es) 2013-06-21 2016-01-20 Novartis Ag Anticuerpos del receptor 1 de ldl oxidado similar a lectina y métodos de uso
US11253606B2 (en) 2013-07-23 2022-02-22 Immunomedics, Inc. Combining anti-HLA-DR or anti-Trop-2 antibodies with microtubule inhibitors, PARP inhibitors, Bruton kinase inhibitors or phosphoinositide 3-kinase inhibitors significantly improves therapeutic outcome in cancer
HK1225621A1 (zh) 2013-08-01 2017-09-15 Agensys, Inc. 结合cd37蛋白的抗体药物偶联物(adc)
WO2015053871A2 (en) 2013-08-26 2015-04-16 MabVax Therapeutics, Inc. NUCLEIC ACIDS ENCODING HUMAN ANTIBODIES TO SIALYL-LEWISa
PE20160674A1 (es) 2013-08-28 2016-07-21 Stemcentrx Inc Metodos de conjugacion de anticuerpos especificos de sitio y composiciones
CA2922529A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Stemcentrx, Inc. Novel sez6 modulators and methods of use
ES2764833T3 (es) 2013-10-11 2020-06-04 The United States Of America Represented By The Sec Dep Of Health And Human Services Anticuerpos contra TEM8 y su uso
SG11201602460QA (en) 2013-10-11 2016-04-28 Oxford Biotherapeutics Ltd Conjugated antibodies against ly75 for the treatment of cancer
AU2014337555C1 (en) 2013-10-15 2021-01-28 Seagen Inc. PEGylated drug-linkers for improved Ligand-Drug Conjugate pharmacokinetics
BR112016010051A2 (pt) 2013-11-04 2017-12-05 Pfizer ?conjugados de anticorpo-fármaco anti-efna4?
EP3066118B1 (en) 2013-11-06 2020-01-08 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Alk antibodies, conjugates, and chimeric antigen receptors, and their use
EP3074036B1 (en) 2013-11-25 2019-09-18 Seattle Genetics, Inc. Preparing antibodies from cho cell cultures for conjugation
ES2916722T3 (es) 2013-12-27 2022-07-05 Zymeworks Inc Sistemas de enlace que contienen sulfonamida para conjugados de fármacos
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
EP3092255A4 (en) 2014-01-10 2017-09-20 Birdie Biopharmaceuticals Inc. Compounds and compositions for treating egfr expressing tumors
PL3097122T3 (pl) 2014-01-24 2020-10-19 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Przeciwciała wiążące domenę 2 beta klotho oraz sposoby ich stosowania
WO2015127407A1 (en) 2014-02-21 2015-08-27 Stemcentrx, Inc. Anti-dll3 antibodies and drug conjugates for use in melanoma
FI3122757T3 (fi) 2014-02-28 2023-10-10 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Varautuneita linkkereitä ja niiden konjugointikäyttötapoja
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
US9738702B2 (en) 2014-03-14 2017-08-22 Janssen Biotech, Inc. Antibodies with improved half-life in ferrets
PL3129067T3 (pl) 2014-03-19 2023-05-08 Genzyme Corporation Specyficzne dla miejsca glikomodyfikowanie ugrupowań celujących
TW202214691A (zh) 2014-03-21 2022-04-16 美商艾伯維有限公司 抗-egfr抗體及抗體藥物結合物
WO2015149001A1 (en) 2014-03-27 2015-10-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Metabolically-activated drug conjugates to overcome resistance in cancer therapy
JP6775422B2 (ja) 2014-03-28 2020-10-28 ゼンコー・インコーポレイテッドＸｅｎｃｏｒ、 Ｉｎｃ． Ｃｄ３８及びｃｄ３に結合する二重特異性抗体
AU2015240599B2 (en) 2014-04-04 2020-11-19 Bionomics, Inc. Humanized antibodies that bind LGR5
ES2913205T3 (es) 2014-05-13 2022-06-01 Bioatla Inc Proteínas biológicas activas condicionalmente
EP3142700B1 (en) 2014-05-16 2021-03-03 Medimmune, LLC Molecules with altered neonate fc receptor binding having enhanced therapeutic and diagnostic properties
KR102226248B1 (ko) 2014-06-04 2021-03-12 바이오엔테크 리서치 앤드 디벨롭먼트 인코포레이티드 강글리오사이드 ｇｄ２에 대한 사람 단클론 항체
CA2953350C (en) 2014-06-23 2019-11-26 Placon Therapeutics, Inc. Platinum compounds, compositions, and uses thereof
EP3160990A2 (en) 2014-06-25 2017-05-03 Novartis AG Compositions and methods for long acting proteins
US20170327553A1 (en) 2014-06-25 2017-11-16 Novartis Ag Compositions and methods for long acting proteins
US20170291939A1 (en) 2014-06-25 2017-10-12 Novartis Ag Antibodies specific for il-17a fused to hyaluronan binding peptide tags
KR102463267B1 (ko) * 2014-07-24 2022-11-03 제넨테크, 인크. 적어도 하나의 트리설파이드 결합을 함유하는 단백질에서 티올 모이어티에 제제의 접합 방법
AU2015292326A1 (en) 2014-07-24 2017-02-23 Xencor, Inc. Rapid clearance of antigen complexes using novel antibodies
WO2016020882A2 (en) 2014-08-07 2016-02-11 Novartis Ag Angiopoetin-like 4 (angptl4) antibodies and methods of use
SG10201805646WA (en) 2014-08-07 2018-08-30 Novartis Ag Angiopoietin-like 4 antibodies and methods of use
CN112546238A (zh) 2014-09-01 2021-03-26 博笛生物科技有限公司 用于治疗肿瘤的抗-pd-l1结合物
EP3189152A4 (en) 2014-09-03 2018-04-04 BioAtla LLC Discovering and producing conditionally active biologic proteins in the same eukaryotic cell production hosts
EP3194421B1 (en) 2014-09-17 2021-11-03 Zymeworks Inc. Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
DK3262071T3 (da) 2014-09-23 2020-06-15 Hoffmann La Roche Fremgangsmåde til anvendelse af anti-CD79b-immunkonjugater
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
SG10202002153PA (en) 2014-10-09 2020-05-28 Genzyme Corp Glycoengineered antibody drug conjugates
HRP20210124T1 (hr) 2014-11-19 2021-03-19 Axon Neuroscience Se Humanizirana tau antitijela u alzheimerovoj bolesti
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
SG11201704283PA (en) 2014-11-26 2017-06-29 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind cd3 and tumor antigens
JP2017536830A (ja) 2014-11-26 2017-12-14 ゼンコー・インコーポレイテッドＸｅｎｃｏｒ、 Ｉｎｃ． Ｃｄ３及びｃｄ３８に結合するヘテロ二量体抗体
WO2016094837A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Igenica Biotherapeutics, Inc. Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof
UY36449A (es) 2014-12-19 2016-07-29 Novartis Ag Composiciones y métodos para anticuerpos dirigidos a bmp6
WO2016105450A2 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Xencor, Inc. Trispecific antibodies
CA2977687C (en) 2015-02-24 2024-02-13 Hwai Wen Chang Conditionally active proteins
KR102740384B1 (ko) 2015-03-03 2024-12-06 키맵 리미티드 항체, 용도 및 방법
EP3265474A1 (en) 2015-03-05 2018-01-10 Sirenas LLC Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
US10227411B2 (en) 2015-03-05 2019-03-12 Xencor, Inc. Modulation of T cells with bispecific antibodies and FC fusions
WO2016145099A1 (en) 2015-03-09 2016-09-15 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to flt3 proteins
US9797907B2 (en) 2015-04-22 2017-10-24 Immunomedics, Inc. Isolation, detection, diagnosis and/or characterization of circulating Trop-2-positive cancer cells
WO2016179518A2 (en) 2015-05-06 2016-11-10 Janssen Biotech, Inc. Prostate specific membrane antigen (psma) bispecific binding agents and uses thereof
EP3091033A1 (en) 2015-05-06 2016-11-09 Gamamabs Pharma Anti-human-her3 antibodies and uses thereof
EA201792561A1 (ru) 2015-06-05 2018-04-30 Новартис Аг Антитела, нацеленные на морфогенетический белок кости 9 (bmp9), и способы их применения
JP7269733B2 (ja) 2015-06-12 2023-05-09 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド 操作されたｔ細胞を用いて癌を処置するための方法
CA2989269C (en) 2015-06-15 2020-09-22 Robert Yongxin Zhao Hydrophilic linkers for conjugation of a cytotoxic agent or chromophore molecule to a cell-binding molecule
US10195175B2 (en) 2015-06-25 2019-02-05 Immunomedics, Inc. Synergistic effect of anti-Trop-2 antibody-drug conjugate in combination therapy for triple-negative breast cancer when used with microtubule inhibitors or PARP inhibitors
UY36751A (es) 2015-06-26 2017-01-31 Novartis Ag Anticuerpos de factor xi y métodos de uso
CN116063502A (zh) 2015-06-30 2023-05-05 西雅图基因公司 抗ntb-a抗体和相关组合物以及方法
EP3319936B1 (en) 2015-07-12 2025-12-17 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Bridge linkers for conjugation of cell-binding molecules
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
WO2017021893A1 (en) 2015-08-03 2017-02-09 Novartis Ag Methods of treating fgf21-associated disorders
US10000561B2 (en) 2015-09-09 2018-06-19 Novartis Ag Thymic stromal lymphopoietin (TSLP)-binding molecules and methods of using the molecules
US10799580B2 (en) 2015-09-09 2020-10-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Expression vector delivery system and use thereof for inducing an immune response
KR20180042433A (ko) 2015-09-09 2018-04-25 노파르티스 아게 흉선 기질 림포포이에틴 (tslp)-결합 항체 및 항체의 사용 방법
EP3355920A4 (en) 2015-09-29 2019-05-15 Celgene Corporation PD-1 BINDING PROTEINS AND METHOD OF USE THEREOF
CA2997809A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Il-7r-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
AU2016335848B2 (en) 2015-10-09 2020-12-17 Miltenyi Biotec Technology, Inc. Chimeric antigen receptors and methods of use
WO2017066714A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Compugen Ltd. Anti-vsig1 antibodies and drug conjugates
EP3371349A4 (en) 2015-11-02 2018-09-12 Bioatla, LLC Conditionally active polypeptides
AU2016362777B2 (en) 2015-12-04 2020-01-30 Novartis Ag Antibody cytokine engrafted compositions and methods of use for immunoregulation
JP7058219B2 (ja) 2015-12-07 2022-04-21 ゼンコア インコーポレイテッド Ｃｄ３及びｐｓｍａに結合するヘテロ二量体抗体
CA3008102A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
EP3405492B1 (en) 2016-01-21 2020-10-21 Novartis AG Multispecific molecules targeting cll-1
WO2017139623A1 (en) 2016-02-10 2017-08-17 Immunomedics, Inc. Combination of abcg2 inhibitors with sacituzumab govitecan (immu-132) overcomes resistance to sn-38 in trop-2 expressing cancers
US11191821B2 (en) 2016-02-27 2021-12-07 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Peptide vaccine formulations and use thereof for inducing an immune response
MA45280B1 (fr) 2016-03-02 2021-08-31 Eisai R&D Man Co Ltd Conjugués anticorps-médicament à base d'éribuline et leurs procédés d'utilisation
AU2017235545A1 (en) 2016-03-15 2018-10-25 Seagen Inc. Combination therapy using a LIV1-ADC and a chemotherapeutic
WO2017161030A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Laboratory Corporation Of America Holdings Methods of assessing protein interactions between cells
KR20180138205A (ko) 2016-03-22 2018-12-28 바이오노믹스 리미티드 항-lgr5 단클론성 항체의 투여
KR102626498B1 (ko) 2016-03-25 2024-01-19 씨젠 인크. 페길화된 약물-링커 및 그의 중간체의 제조를 위한 공정
EP3454864A4 (en) 2016-04-21 2021-01-13 Abbvie Stemcentrx LLC Novel anti-bmpr1b antibodies and methods of use
US11016085B2 (en) 2016-04-25 2021-05-25 The Johns Hopkins University ZNT8 assays for drug development and pharmaceutical compositions
EP3448260A4 (en) 2016-04-27 2019-10-09 Immunomedics, Inc. EFFICACY OF ANTI-TROP-2 SN-38 ANTIBODY CONJUGATES FOR THE THERAPY OF REZIDIVATED / REFRACTORY TUMORS AGAINST CHECKPOINT INHIBITORS
CN109071647B (zh) 2016-04-27 2022-11-22 诺华股份有限公司 抗生长分化因子15的抗体及其用途
TW201802121A (zh) 2016-05-25 2018-01-16 諾華公司 抗因子XI/XIa抗體之逆轉結合劑及其用途
BR112018075649A2 (pt) 2016-06-08 2019-04-09 Abbvie Inc. anticorpos anti-b7-h3 e conjugados de fármaco de anticorpo
CA3027044A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
TWI762487B (zh) 2016-06-08 2022-05-01 美商艾伯維有限公司 抗-b7-h3抗體及抗體藥物結合物
WO2017214458A2 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
EP3468598A1 (en) 2016-06-08 2019-04-17 AbbVie Inc. Anti-cd98 antibodies and antibody drug conjugates
MA45255A (fr) 2016-06-14 2019-04-17 Xencor Inc Anticorps inhibiteurs de points de contrôle bispécifiques
CA3027651A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Novartis Ag Methods for treating disease using inhibitors of bone morphogenetic protein 6 (bmp6)
KR20190020341A (ko) 2016-06-28 2019-02-28 젠코어 인코포레이티드 소마토스타틴 수용체 2에 결합하는 이종이량체 항체
PT3478284T (pt) 2016-06-29 2023-12-18 Univ California Compostos e composições para o tratamento do cancro
WO2018005697A1 (en) 2016-06-29 2018-01-04 The Regents Of The University Of California Antibodies specific to sonic hedgehog and method of use thereof
ES2992868T3 (en) 2016-07-06 2024-12-19 Bristol Myers Squibb Co Combination of tim-4 antagonist and pd-1 antagonist and methods of use
MX2019001302A (es) 2016-08-09 2019-06-12 Seattle Genetics Inc Conjugados de farmaco con enlazadores autoestabilizantes que tienen propiedades fisioquimicas mejoradas.
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
WO2018045245A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Sirenas Llc Cyclic peptide analogs and conjugates thereof
CA3035615A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with duocars
WO2018053405A1 (en) 2016-09-19 2018-03-22 Celgene Corporation Methods of treating immune disorders using pd-1 binding proteins
EP3515943A4 (en) 2016-09-19 2020-05-06 Celgene Corporation METHODS OF TREATING VITILIGO WITH PD-1 BINDING PROTEINS
BR112019007281A2 (pt) 2016-10-14 2019-07-09 Xencor Inc proteína heterodimérica, composições de ácido nucleico e de vetor de expressão, vetor de expressão, célula hospedeira, e, métodos para produzir proteína heterodimérica e para tratar câncer em um paciente
US11779604B2 (en) 2016-11-03 2023-10-10 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods
AU2016429272A1 (en) 2016-11-14 2019-05-02 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Conjugation linkers, cell binding molecule-drug conjugates containing the likers, methods of making and uses such conjugates with the linkers
JP7350313B2 (ja) 2016-12-16 2023-09-26 ブルーフィン バイオメディシン， インコーポレイテッド 抗ｃｕｂドメイン含有タンパク質１（ｃｄｃｐ１）抗体、抗体薬物コンジュゲート、およびその使用方法
BR112019012667A2 (pt) 2016-12-23 2020-02-11 Novartis Ag Anticorpos do fator xi e métodos de uso
US20200231701A1 (en) 2016-12-23 2020-07-23 Novartis Ag Methods of treatment with anti-factor xi/xia antibodies
CA3096798C (en) 2017-01-09 2026-02-24 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Compositions and methods for treating cancer with anti-mesothelin immunotherapy
WO2018138032A2 (en) 2017-01-24 2018-08-02 Innate Pharma NKp46 BINDING AGENTS
WO2018141959A1 (en) 2017-02-06 2018-08-09 Innate Pharma Immunomodulatory antibody drug conjugates binding to a human mica polypeptide
EP3580237B1 (en) 2017-02-08 2025-05-14 Novartis AG Fgf21 mimetic antibodies and uses thereof
EP3589654A1 (en) 2017-03-02 2020-01-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to nectin-4 and uses thereof
GB201703876D0 (en) 2017-03-10 2017-04-26 Berlin-Chemie Ag Pharmaceutical combinations
US11730822B2 (en) 2017-03-24 2023-08-22 Seagen Inc. Process for the preparation of glucuronide drug-linkers and intermediates thereof
CN112695050B (zh) 2017-03-24 2025-08-08 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd33免疫疗法治疗癌症的组合物和方法
US10918734B2 (en) 2017-03-27 2021-02-16 Immunomedics, Inc. Treatment of high Trop-2 expressing triple negative breast cancer (TNBC) with sacituzumab govitecan (IMMU-132) overcomes homologous recombination repair (HRR) rescue mediated by Rad51
CN110352201A (zh) 2017-04-03 2019-10-18 免疫医疗公司 用于癌症疗法的抗体药物缀合物的皮下施用
CA3057715A1 (en) 2017-04-04 2018-10-11 Avidea Technologies, Inc. Peptide-based vaccines, methods of manufacturing, and uses thereof for inducing an immune response
CA3056261A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Juno Therapeutics, Inc. Engineered cells expressing prostate-specific membrane antigen (psma) or a modified form thereof and related methods
WO2018195302A1 (en) 2017-04-19 2018-10-25 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-vtcn1 antibodies and antibody drug conjugates
ES3066090T3 (en) 2017-04-28 2026-05-11 Ajinomoto Co Inc Compound having substance that has affinity for soluble protein, cleavable moiety, and reactive group, or salt thereof
JOP20190271A1 (ar) 2017-05-24 2019-11-21 Novartis Ag بروتينات مطعّمة بسيتوكين- الجسم المضاد وطرق الاستخدام للاضطرابات المتعلقة بالمناعة
WO2018215937A1 (en) 2017-05-24 2018-11-29 Novartis Ag Interleukin-7 antibody cytokine engrafted proteins and methods of use in the treatment of cancer
CN110662762A (zh) 2017-05-24 2020-01-07 诺华股份有限公司 抗体细胞因子移植蛋白和用于治疗癌症的方法
JP2020520671A (ja) 2017-05-24 2020-07-16 ノバルティス アーゲー 抗体−サイトカイングラフト化タンパク質及び使用方法
CA3066918A1 (en) 2017-06-12 2018-12-20 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-il1rap antibodies and antibody drug conjugates
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
AU2018291497A1 (en) 2017-06-30 2020-01-16 Xencor, Inc. Targeted heterodimeric Fc fusion proteins containing IL-15/IL-15Ra and antigen binding domains
EP3652540A4 (en) 2017-07-12 2021-04-07 The Johns Hopkins University PROTEOLIPOSOME BASED ZNT-8 SELF-ANTIGENT FOR THE DIAGNOSIS OF TYPE 1 DIABETES
WO2019028051A1 (en) 2017-07-31 2019-02-07 Lentigen Technology, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CANCER BY ANTI-CD19 / CD20 IMMUNOTHERAPY
WO2019030574A1 (en) 2017-08-10 2019-02-14 Cerenis Therapeutics Holding Cargomers
CA3075915A1 (en) 2017-09-15 2019-03-21 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19 immunotherapy
CN111630069B (zh) 2017-10-13 2024-05-31 勃林格殷格翰国际有限公司 针对Thomsen-nouvelle(Tn)抗原的人抗体
WO2019079249A1 (en) 2017-10-16 2019-04-25 Lentigen Technology, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF CANCER WITH ANTI-CD22 IMMUNOTHERAPY
US20200345863A1 (en) 2017-10-23 2020-11-05 Mablink Bioscience Ligand-drug-conjugate comprising a single molecular weight polysarcosine
WO2019081983A1 (en) 2017-10-25 2019-05-02 Novartis Ag CD32B TARGETING ANTIBODIES AND METHODS OF USE
JP7448903B2 (ja) 2017-11-03 2024-03-13 レンティジェン・テクノロジー・インコーポレイテッド 抗ｒｏｒ１免疫療法によってがんを処置するための組成物および方法
AU2018366199A1 (en) 2017-11-08 2020-05-28 Xencor, Inc. Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-PD-1 sequences
US10981992B2 (en) 2017-11-08 2021-04-20 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
CN119857155A (zh) 2017-11-29 2025-04-22 海德堡医药研究有限责任公司 用于耗尽cd5+细胞的组合物和方法
MX2020005640A (es) 2017-12-01 2020-08-20 Seattle Genetics Inc Anticuerpos anti-liv1 humanizados para el tratamiento de cancer de mama.
TWI831759B (zh) 2017-12-01 2024-02-11 美商思進公司 Cd47抗體及其用於治療癌症之用途
AU2018390418B2 (en) 2017-12-19 2023-12-21 Xencor, Inc. Engineered IL-2 Fc fusion proteins
WO2019126464A2 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating hiv/aids with immunotherapy
WO2019129054A1 (zh) 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 三链抗体、其制备方法及其用途
TWI860665B (zh) 2018-02-01 2024-11-01 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 全人源的抗ｂ細胞成熟抗原（ｂｃｍａ）單鏈抗體及其應用
US12281171B2 (en) 2018-03-19 2025-04-22 Bio Ventures, Llc Periostin antibodies and methods of using the same
EP3768324B1 (en) 2018-03-22 2025-11-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for modulating innate lymphoid cell activity, antibody drug conjugates and uses in therapy
MX2020009842A (es) 2018-03-23 2020-10-15 Seattle Genetics Inc Uso de conjugados de anticuerpo-farmaco que comprenden agentes interruptores de tubulina para tratar tumor solido.
WO2019184909A1 (zh) 2018-03-27 2019-10-03 信达生物制药(苏州)有限公司 新型抗体分子、其制备方法及其用途
WO2019186276A2 (en) 2018-03-28 2019-10-03 Axon Neuroscience Se Antibody-based methods of detecting and treating alzheimer's disease
AU2019247415A1 (en) 2018-04-04 2020-10-22 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
CA3097593A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Xencor, Inc. Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
JP2021520829A (ja) 2018-04-18 2021-08-26 ゼンコア インコーポレイテッド ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲＡ Ｆｃ融合タンパク質およびＴＩＭ−３抗原結合ドメインを含む、ＴＩＭ−３標的化ヘテロ二量体融合タンパク質
EP3796943A2 (en) 2018-05-22 2021-03-31 Avidea Technologies, Inc. Improved methods of manufacturing peptide-based vaccines
UY38247A (es) 2018-05-30 2019-12-31 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
AU2019277029C1 (en) 2018-06-01 2024-01-04 Novartis Ag Binding molecules against BCMA and uses thereof
US12172986B2 (en) 2018-06-01 2024-12-24 Eisai R&D Management Co., Ltd Splicing modulator antibody-drug conjugates and methods of use
GB201809746D0 (en) 2018-06-14 2018-08-01 Berlin Chemie Ag Pharmaceutical combinations
CA3103143A1 (en) 2018-06-14 2019-12-19 Ajinomoto Co., Inc. Compound having affinity substance to antibody, cleavable portion, and reactive group, or salt thereof
JPWO2019240288A1 (ja) 2018-06-14 2021-07-26 味の素株式会社 抗体に対する親和性物質、および生体直交性官能基を有する化合物またはその塩
MY208638A (en) 2018-07-02 2025-05-21 Amgen Inc Anti-steap1 antigen-binding protein
IL280199B2 (en) 2018-07-20 2025-08-01 Pf Medicament Receptor for vista
CN112739340B (zh) 2018-07-23 2025-05-13 海德堡医药研究有限责任公司 抗cd5抗体药物缀合物(adc)在同种异体细胞疗法中的用途
WO2020037174A1 (en) 2018-08-16 2020-02-20 The Johns Hopkins University Antibodies to human znt8
WO2020061498A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd123 immunotherapy
CN118581122A (zh) 2018-09-26 2024-09-03 莱蒂恩技术公司 用于用抗cd19/cd22免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
TW202028237A (zh) 2018-09-27 2020-08-01 美商西建公司 SIRPα結合蛋白及其使用方法
US20210393523A1 (en) 2018-10-03 2021-12-23 Avldea Technologies, Inc. Aromatic ring substituted amphiphilic polymers as drug delivery systems
SG11202103192RA (en) 2018-10-03 2021-04-29 Xencor Inc Il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
WO2020090979A1 (ja) 2018-10-31 2020-05-07 味の素株式会社 抗体に対する親和性物質、切断性部分および反応性基を有する化合物またはその塩
EP3886895A1 (en) 2018-11-30 2021-10-06 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd38 immunotherapy
US12257340B2 (en) 2018-12-03 2025-03-25 Agensys, Inc. Pharmaceutical compositions comprising anti-191P4D12 antibody drug conjugates and methods of use thereof
PE20211473A1 (es) 2018-12-13 2021-08-05 Eisai Randd Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo-farmaco de herboxidieno y metodos de uso
WO2020163225A1 (en) 2019-02-05 2020-08-13 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd228 antibodies and antibody-drug conjugates
WO2020180726A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind enpp3 and cd3
US11969443B2 (en) 2019-03-06 2024-04-30 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with self-driving chimeric antigen receptors
SG11202109986TA (en) 2019-03-20 2021-10-28 Univ California Claudin-6 antibodies and drug conjugates
WO2020191344A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 The Regents Of The University Of California Claudin-6 bispecific antibodies
US20220169706A1 (en) 2019-03-28 2022-06-02 Danisco Us Inc Engineered antibodies
MA55529A (fr) 2019-04-03 2022-02-09 Genzyme Corp Polypeptides de liaison anti-alpha bêta tcr à fragmentation réduite
WO2020214858A1 (en) 2019-04-17 2020-10-22 Avidea Technologies, Inc. Compositions and methods of manufacturing star polymers for ligand display and/or drug delivery
MX2021012961A (es) 2019-04-24 2021-11-25 Heidelberg Pharma Res Gmbh Conjugados de anticuerpo y farmaco de amatoxina y usos de los mismos.
WO2020236797A1 (en) 2019-05-21 2020-11-26 Novartis Ag Variant cd58 domains and uses thereof
UY38701A (es) 2019-05-21 2020-12-31 Novartis Ag Moléculas de unión a cd19, conjugados, composiciones que las comprenden y usos de las mismas
CN114364801B (zh) 2019-05-30 2024-04-19 莱蒂恩技术公司 用于用抗bcma免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
WO2020247574A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Seattle Genetics, Inc. Methods of purifying masked antibodies
WO2020247572A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Seattle Genetics, Inc. Masked antibody formulations
AU2020299382A1 (en) 2019-07-02 2022-01-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind EGFRvIII and their use
CA3147750A1 (en) 2019-07-22 2021-01-28 Seagen Inc. Humanized anti-liv1 antibodies for the treatment of cancer
JP2022548881A (ja) 2019-09-18 2022-11-22 ノバルティス アーゲー Ｅｎｔｐｄ２抗体、組合せ療法並びに抗体及び組合せ療法を使用する方法
TW202124446A (zh) 2019-09-18 2021-07-01 瑞士商諾華公司 與ｅｎｔｐｄ２抗體之組合療法
US12366570B2 (en) 2019-10-01 2025-07-22 The Johns Hopkins University Cell-based ZNT8 assay
KR20220075351A (ko) 2019-10-04 2022-06-08 씨젠 인크. 항-pd-l1 항체 및 항체-약물 접합체
KR20220079590A (ko) 2019-10-04 2022-06-13 티에이이 라이프 사이언시스 Fc 돌연변이 및 부위-특이적인 접합 성질을 포함하는 항체 조성물
EP3812008A1 (en) 2019-10-23 2021-04-28 Gamamabs Pharma Amh-competitive antagonist antibody
US12577324B2 (en) 2019-12-09 2026-03-17 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Antibodies having specificity to HER4 and uses thereof
EP4087657A1 (en) 2020-01-08 2022-11-16 Synthis Therapeutics, Inc. Alk5 inhibitor conjugates and uses thereof
US20230203191A1 (en) 2020-03-30 2023-06-29 Danisco Us Inc Engineered antibodies
US20230167193A1 (en) 2020-05-01 2023-06-01 Novartis Ag Immunoglobulin variants
US20230242647A1 (en) 2020-05-01 2023-08-03 Novartis Ag Engineered immunoglobulins
WO2021224186A1 (en) 2020-05-04 2021-11-11 Institut Curie New pyridine derivatives as radiosensitizers
KR20230008751A (ko) 2020-05-12 2023-01-16 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) 피부 t-세포 림프종 및 tfh 유래된 림프종을 치료하는 신규한 방법
WO2021231976A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind prostate specific membrane antigen (psma) and cd3
AU2021284401A1 (en) 2020-06-05 2023-01-05 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-BCMA antibody-drug conjugates and methods of use
EP4163294A4 (en) 2020-06-09 2024-07-24 Ajinomoto Co., Inc. MODIFIED FERRITIN AND METHOD FOR PRODUCING SAME
CA3171101A1 (en) 2020-06-22 2021-12-30 Dina SCHNEIDER Compositions and methods for treating cancer with tslpr-cd19 or tslpr-cd22 immunotherapy
WO2022012680A1 (en) 2020-07-16 2022-01-20 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Cd20 binding molecules and uses thereof
WO2022031576A1 (en) 2020-08-03 2022-02-10 Janssen Biotech, Inc. Materials and methods for multidirectional biotransportation in virotherapeutics
US20230295330A1 (en) 2020-08-04 2023-09-21 Seagen Inc. Anti-cd228 antibodies and antibody-drug conjugates
EP3970752A1 (en) 2020-09-17 2022-03-23 Merck Patent GmbH Molecules with solubility tag and related methods
CA3193244A1 (en) 2020-09-22 2022-03-31 Geoffrey Martin Lynn Compositions and methods of manufacturing amphiphilic block copolymers that form nanoparticles in situ
MX2023003404A (es) 2020-09-28 2023-03-31 Seagen Inc Anticuerpos anti-l1vi humanizados para el tratamiento del cancer.
KR20230079132A (ko) 2020-10-01 2023-06-05 아비오닉스 파마 에스에이 안질환을 치료하는 데 사용하기 위한 지질 결합 단백질-기반 복합체를 포함하는 조성물
AU2021364709A1 (en) 2020-10-19 2023-06-01 Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. Star polymer drug conjugates
CA3196243A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Angela Marinetti Metallic trans-(n-heterocyclic carbene)-amine-platinum complexes and uses thereof for treating cancer
EP4240397A1 (en) 2020-11-05 2023-09-13 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-cd19/cd22 immunotherapy
EP4240491A1 (en) 2020-11-06 2023-09-13 Novartis AG Cd19 binding molecules and uses thereof
JP2024502832A (ja) 2020-12-31 2024-01-23 アラマー バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド 高親和性及び／または特異性を有する結合剤分子ならびにその製造及び使用方法
KR20230133289A (ko) 2021-01-18 2023-09-19 아지노모토 가부시키가이샤 화합물 또는 이의 염, 및 이들에 의해 얻어지는 항체
AU2022208654B2 (en) 2021-01-18 2026-01-22 Ajinomoto Co., Inc. Compound or salt thereof, and antibody produced using same
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
AU2022224567A1 (en) 2021-02-16 2023-08-24 Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. Self-assembling nanoparticles based on amphiphilic peptides
KR20230156079A (ko) 2021-03-09 2023-11-13 젠코어 인코포레이티드 Cd3과 cldn6에 결합하는 이종이량체 항체
US11859012B2 (en) 2021-03-10 2024-01-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and GPC3
CN116964076A (zh) 2021-03-11 2023-10-27 味之素株式会社 化合物或其盐、以及由它们得到的抗体
WO2022189618A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Institut Curie Nitrogen-containing heterocycles as radiosensitizers
WO2022196675A1 (ja) 2021-03-16 2022-09-22 味の素株式会社 複合体またはその塩、およびその製造方法
CA3213636A1 (en) 2021-03-18 2022-09-22 Seagen Inc. Selective drug release from internalized conjugates of biologically active compounds
WO2022194988A2 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Heidelberg Pharma Research Gmbh B-lymphocyte specific amatoxin antibody conjugates
US20240131178A1 (en) 2021-03-30 2024-04-25 Legochem Biosciences, Inc. Antibody-drug conjugate including antibody against human cldn18.2, and use thereof
EP4319820A1 (en) 2021-04-10 2024-02-14 Profoundbio Us Co. Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
AU2022258815A1 (en) 2021-04-15 2023-10-19 Abionyx Pharma Sa Use of lipid binding protein-based complexes in organ preservation solutions
JP7742892B2 (ja) 2021-04-23 2025-09-22 ジェンマブ エー／エス 抗ｃｄ７０抗体、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
WO2023288236A1 (en) 2021-07-14 2023-01-19 Seagen Inc. Antibody masking domains
US20250129153A1 (en) 2021-08-20 2025-04-24 The Johns Hopkins University Cell-surface antibody to a specific biomarker of pancreatic beta-cells
WO2023049825A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Seagen Inc. Improved antibody masking domains
KR20240073035A (ko) 2021-09-30 2024-05-24 아지노모토 가부시키가이샤 항체 및 기능성 물질의 컨쥬게이트 또는 그 염, 및 그 제조에 사용되는 항체 유도체 및 화합물 또는 그 염
CN117980327A (zh) 2021-11-03 2024-05-03 杭州多禧生物科技有限公司 抗体的特异性偶联
WO2023089314A1 (en) 2021-11-18 2023-05-25 Oxford Biotherapeutics Limited Pharmaceutical combinations
CA3238167A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Maria Leia Smith Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
CN118339185A (zh) 2021-12-07 2024-07-12 信达生物制药(苏州)有限公司 结合bcma的抗体及其用途
UY40097A (es) 2022-01-07 2023-07-14 Johnson & Johnson Entpr Innovation Inc Materiales y métodos de proteínas de unión a il-1b
US11590169B1 (en) 2022-03-02 2023-02-28 Lentigen Technology, Inc. Compositions and methods for treating cancer with anti-CD123 immunotherapy
US20230338424A1 (en) 2022-03-02 2023-10-26 Lentigen Technology, Inc. Compositions and Methods for Treating Cancer with Anti-CD123 Immunotherapy
AU2023229884A1 (en) 2022-03-09 2024-10-10 Astrazeneca Ab BINDING MOLECULES AGAINST FRα
CN119234152A (zh) 2022-03-11 2024-12-31 阿斯利康(瑞典)有限公司 用于抗FRα抗体-药物缀合物疗法的评分方法
KR20240167701A (ko) 2022-04-06 2024-11-27 아비오닉스 파마 에스에이 지질 결합 단백질-기반 복합체를 사용하여 안질환을 치료하는 방법
EP4504270A1 (en) 2022-04-07 2025-02-12 Heidelberg Pharma Research GmbH Methods of improving the therapeutic index of amatoxin-antibody conjugates
WO2023209568A1 (en) 2022-04-26 2023-11-02 Novartis Ag Multispecific antibodies targeting il-13 and il-18
CN119546339A (zh) 2022-07-15 2025-02-28 丹尼斯科美国公司 用于产生单克隆抗体的方法
EP4554969A1 (en) 2022-07-15 2025-05-21 Janssen Biotech, Inc. Material and methods for improved bioengineered pairing of antigen-binding variable regions
WO2024026107A2 (en) 2022-07-28 2024-02-01 Lentigen Technology, Inc. Chimeric antigen receptor therapies for treating solid tumors
CN119907810A (zh) 2022-08-26 2025-04-29 莱蒂恩技术公司 用于用全人抗cd20/cd19免疫治疗来治疗癌症的组合物和方法
JP2025531832A (ja) 2022-09-08 2025-09-25 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル ＬＴＢＰ２（潜在的形質転換増殖因子β結合タンパク質２）に対する特異性を有する抗体及びその使用
PE20251282A1 (es) 2022-09-21 2025-05-14 Seagen Inc Anticuerpos que unen cd228
AU2023367778A1 (en) 2022-10-25 2025-05-01 Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. Combination treatment regimes for treating cancer
EP4608455A1 (en) 2022-10-25 2025-09-03 Barinthus Biotherapeutics North America, Inc. Self-assembling nanoparticles
US20240165257A1 (en) 2022-11-01 2024-05-23 Heidelberg Pharma Research Gmbh Anti-gucy2c antibody and uses thereof
AU2023372538A1 (en) 2022-11-03 2025-05-01 Seagen Inc. Anti-avb6 antibodies and antibody-drug conjugates and their use in the treatment of cancer
EP4382120A1 (en) 2022-12-05 2024-06-12 Institut Regional du Cancer de Montpellier Anti-slc1a4 monoclonal antibodies and uses thereof
WO2024121632A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Crispr Therapeutics Ag Use of anti-cd117 antibody drug conjugate (adc)
WO2024130158A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticles and polynucleotides encoding extended serum half-life interleukin-22 for the treatment of metabolic disease
JP2026506049A (ja) 2023-02-16 2026-02-20 アストラゼネカ・アクチエボラーグ 治療用結合分子を用いた癌の治療のための併用療法
KR20250152101A (ko) 2023-03-13 2025-10-22 하이델베르크 파마 리서치 게엠베하 암 치료에의 사용을 위한 피하 투여 항체-약물 접합체
CN118725113A (zh) 2023-03-28 2024-10-01 三优生物医药(上海)有限公司 一种靶向cd3的抗体或其抗原结合片段及其用途
JPWO2024210154A1 (pl) 2023-04-04 2024-10-10
KR20250167673A (ko) 2023-04-05 2025-12-01 아지노모토 가부시키가이샤 항체 및 기능성 물질의 컨쥬게이트 또는 그 염, 및 티올기를 갖는 항체 중간체 또는 그 염
KR20260007618A (ko) 2023-05-09 2026-01-14 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항-표피 성장 인자 수용체(egfr) 항체-약물 접합체 및 이의 응용
CN121285392A (zh) 2023-05-09 2026-01-06 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 一种抗pdl1抗体-药物偶联物及应用
WO2024236156A1 (en) 2023-05-17 2024-11-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Anti-cathepsin-d antibodies
KR20260026054A (ko) 2023-06-13 2026-02-25 애드센트릭스 테라퓨틱스 잉크. 넥틴-4 단백질에 결합하는 항체 및 항체 약물 접합체 (adc)와 관련된 방법 및 조성물
EP4727586A1 (en) 2023-06-13 2026-04-22 Synthis Therapeutics, Inc. Anti-cd5 antibodies and their uses
CN121986113A (zh) 2023-07-07 2026-05-05 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 人源化40h3抗体
AU2024300060A1 (en) 2023-07-25 2026-03-12 Merck Patent Gmbh Iduronidase-cleavable compounds
WO2025027529A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Advesya Anti-il-1rap antibody drug conjugates and methods of use thereof
EP4509142A1 (en) 2023-08-16 2025-02-19 Ona Therapeutics S.L. Fgfr4 as target in cancer treatment
EP4512427A1 (en) 2023-08-25 2025-02-26 Mablink Bioscience Antibody-drug conjugates based on molecular glue degraders and uses thereof
WO2025072406A1 (en) 2023-09-26 2025-04-03 Profoundbio Us Co. Ptk7 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2025104604A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Anti-respiratory syncytial virus antibodies and uses thereof
WO2025109097A2 (en) 2023-11-24 2025-05-30 Heidelberg Pharma Research Gmbh Novel nicotinamide phosphoribosyltransferase inhibitors and uses thereof
WO2025126157A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 Advesya Anti-il-1rap binding domains and antibody-drug conjugates thereof
TW202547866A (zh) 2024-01-10 2025-12-16 丹麥商珍美寶股份有限公司 Ｓｌｉｔｒｋ６結合劑、其共軛物及使用彼之方法
TW202545567A (zh) 2024-01-30 2025-12-01 美商思進公司 抗ｐｄ－ｌ１抗體和抗體－藥物共軛體及彼等在治療癌症的用途
US20250381289A1 (en) 2024-02-29 2025-12-18 Genmab A/S Egfr and c-met bispecific binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
TW202602929A (zh) 2024-03-21 2026-01-16 美商思進公司 Ｃｄ２５抗體、抗體-藥物共軛體及彼等之用途
WO2025224297A1 (en) 2024-04-26 2025-10-30 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to tgfbi and uses thereof
WO2025248097A2 (en) 2024-05-31 2025-12-04 Gamamabs Pharma Humanized anti-human her3 antibodies and uses thereof
WO2025264533A1 (en) 2024-06-17 2025-12-26 Adcentrx Therapeutics Inc. Methods and compositions related to antibody drug conjugates (adcs) that bind steap-1 proteins
US20260000765A1 (en) 2024-06-27 2026-01-01 Lentigen Technology, Inc. CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR THERAPIES FOR TREATING CANCER WITH IL7Fc ARMORED CAR-T CELLS
US20260048137A1 (en) 2024-08-16 2026-02-19 Ardeagen Corporation Anti-mesothelin antibody conjugates and methods of use thereof
WO2026042013A1 (en) 2024-08-19 2026-02-26 Institute Of Molecular And Clinical Ophthalmology Basel (Iob) Mitochondrial therapy
WO2026058155A1 (en) 2024-09-11 2026-03-19 Novartis Ag Antibodies targeting il-31
WO2026057740A1 (en) 2024-09-12 2026-03-19 Astrazeneca Ab Treatment of cancer with therapeutic binding molecules

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2566271B1 (fr) * 1984-06-20 1986-11-07 Sanofi Sa Nouveaux conjugues cytotoxiques utilisables en therapeutique et procede d'obtention
US5055561A (en) * 1985-11-19 1991-10-08 The Johns Hopkins University Protein label and drug delivery system
US4981979A (en) * 1987-09-10 1991-01-01 Neorx Corporation Immunoconjugates joined by thioether bonds having reduced toxicity and improved selectivity
US5002883A (en) * 1987-10-30 1991-03-26 Abbott Laboratories Covalent attachment of antibodies and antigens to solid phases using extended length heterobifunctional coupling agents
FI102355B1 (fi) * 1988-02-11 1998-11-30 Bristol Myers Squibb Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistamiseksi
US5066490A (en) * 1988-06-01 1991-11-19 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health & Human Services Protein crosslinking reagents cleavable within acidified intracellular vesicles
US5024834A (en) * 1988-07-12 1991-06-18 Cetus Corporation Thioether linked immunotoxin conjugates
CA2016584C (en) * 1989-05-17 1999-06-29 Robert S. Greenfield Anthracycline conjugates having a novel linker and methods for their production
US5208323A (en) * 1989-08-10 1993-05-04 Universite Laval Coupling of an anti-tumor to an antibody using glutaraldehyde preactivated anti-tumor agent
JPH05504481A (ja) * 1990-02-20 1993-07-15 クールター　コーポレイション 改良された抗体―酵素直接接合体及びその製造方法
US5137877B1 (en) * 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
US5196522A (en) * 1990-11-01 1993-03-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Anthracycline analogues bearing latent alkylating substituents

Also Published As

Publication number Publication date
EP0554708B9 (en) 2005-07-27
PL172827B1 (pl) 1997-12-31
ES2240959T3 (es) 2005-10-16
NO930189D0 (no) 1993-01-21
FI930240L (fi) 1993-07-24
DE69333800T2 (de) 2006-03-02
NZ245725A (en) 1995-08-28
PL172837B1 (pl) 1997-12-31
PL297514A1 (en) 1993-08-23
CZ5793A3 (en) 1994-01-19
HU9300156D0 (en) 1993-04-28
FI930240A7 (fi) 1993-07-24
AU3188193A (en) 1993-07-29
EG20406A (en) 1999-02-28
PL172824B1 (pl) 1997-12-31
AU666903B2 (en) 1996-02-29
DK0554708T3 (da) 2005-07-18
IL104475A0 (en) 1993-05-13
CN1074684A (zh) 1993-07-28
CZ297409B6 (cs) 2006-12-13
ZA93444B (en) 1993-07-21
MX9300298A (es) 1993-12-01
CN1155620C (zh) 2004-06-30
US5708146A (en) 1998-01-13
EP0554708A1 (en) 1993-08-11
NO930189L (no) 1993-07-26
MY110526A (en) 1998-07-31
US5622929A (en) 1997-04-22
CN1040540C (zh) 1998-11-04
EP0554708B1 (en) 2005-05-04
CN1207946A (zh) 1999-02-17
OA09859A (en) 1994-08-15
ATE294592T1 (de) 2005-05-15
CN1180711A (zh) 1998-05-06
FI930240A0 (fi) 1993-01-21
US5606017A (en) 1997-02-25
BG61899B1 (bg) 1998-09-30
CA2087286C (en) 2004-04-06
UY23541A1 (es) 1993-06-28
HUT68345A (en) 1995-06-28
CA2087286A1 (en) 1993-07-24
BG97335A (bg) 1993-12-24
DE69333800D1 (de) 2005-06-09
JPH0625012A (ja) 1994-02-01
RO112618B1 (ro) 1997-11-28
PL172715B1 (pl) 1997-11-28
PL172828B1 (pl) 1997-12-31
TW213921B (pl) 1993-10-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5606017A (en) Thioether conjugates
US6512101B1 (en) Branched hydrazone linkers
DE69131435T2 (de) Bifunktionale Kupplungsverbindungen, Konjugate und Verfahren zu ihrer Herstellung
AU617380B2 (en) Drug-monoclonal antibody conjugates
RU2753416C2 (ru) Новые конъюгаты аманитина
AU687795B2 (en) Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
CN1764478B (zh) 蒽环霉素-抗体偶联物
EP0328147B1 (en) Anthracycline immunoconjugates having a novel linker and methods for their production
CN107614488B (zh) 新型亲水连接体和其在配体-药物共轭偶联物上的应用
AU1954988A (en) Amine derivatives of anthracycline antibiotics and antibody conjugates thereof
CA2239183C (en) Branched hydrazone linkers

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20090122