KR20220147721A - 결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용 - Google Patents

결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용 Download PDF

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Abstract

본 발명은 프로피올일, 치환된 아크릴(아크릴로일) 또는 이 치환된 프로파노일의 그룹을 갖는 링커, 및 화합물, 특히 세포 독성제를 세포 결합 분자에 결합하기 위해 그러한 링커를 사용하는 것에 관한 것이다.

Description

결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용{CONJUGATION LINKERS, CELL BINDING MOLECULE-DRUG CONJUGATES CONTAINING THE LIKERS, METHODS OF MAKING AND USES SUCH CONJUGATES WITH THE LINKERS}
본 발명은 프로피올일, 치환된 아크릴(아크릴로일) 또는 이 치환된 프로판오일의 그룹을 갖는 링커에 관한 것으로서, 이는 화합물, 특히 세포 독성제를 세포 결합 분자에 결합하기 위해 사용된다. 본 발명은 또한 이들 링커를 갖는 약물을 먼저 개질시킨 다음, 제조된 세포-결합제와 반응시키거나; 또는 이들 링커를 갖는 세포-결합제를 먼저 개질시킨 다음, 약물과 반응시키거나 합성 링커-약물 어셈블리를 세포-결합 분자에 직접 결합시키는 것을 포함하는 특정 방식으로 세포-결합제-약물(세포 독성제) 결합체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
화학 요법 약물의 주요 과제는 일반적으로 정상 세포와 악성 세포를 구분할 수 없는 것에 기인하 좁은 치료 범위에 있으며, 따라서 내약(tolerated) 투여량을 임상적으로 효과가 있는 양보다 낮게 제한하는 부작용을 야기시킨다. 대조적으로, 단일클론 항체(mAb) 형태의 면역 요법은 악성 세포의 특정 단백질 또는 분자에 특이 적으로 결합하여, 정상 세포를 손상시키지 않으며, 따라서 부작용이 적고, 화학 요법보다 더 넓은 치료 범위를 갖는다. 항체-약물 결합체(ADC)는 암의 표적화 치료를 위해 매우 강력한 세포 독성제의 페이로드(payload)와 결합된 종양 특이적 결합단일클론 항체를 결합시킨 면역 요법의 일종이다. 이러한 접근법은 미국 FDA 승인 의약품인 애드세트리스(Adcetris)(브툭시맙 베도틴)를 이용한 Hodgkin 림프종 치료, 및 미국 FDA 승인 의약품인 카드실라(Kadcyla)(아도-트라스투주맙 엠탄신)을 이용한 HER-2 양성 유방암 치료에서서 유망한 활성을 보여왔다. 지난 20년 동안 학계와 제약 산업 모두는 ADC에 시간과 돈을 투자해 왔다. 50개 이상의 ADC가 임상 시험 중이며, 제약 업계의 기대는 향후 몇 년 내에 또 다른 8-10개의 ADC 약물이 시장에서 승인될 수 있다는 것이다.(Lambert, J. M. Ther. Deliv. 2016, 7, 279-82; Jerjian, T. V. et al. Pharmacotherapy 2016, 36, 99-116; Donaghy, H. MAbs 2016, 8, 659-71; de Goeij, B. E. and Lambert, J. M. Curr Opin Immunol 2016, 40, 14-23; Mehrling, T. Future Oncol, 2015, 11, 549).
임상 사용을 위한 성공적인 항체-약물 결합체 개발을 좌우하는 많은 중요한 매개 변수는 정상 세포에서 제한된 발현을 가지는 종양 표적 항원의 선택, 표적 세포에 대해 높은 선택성을 갖는 항체, 세포를 내재화 및 방출할 때 표적 세포 사멸을 유도하는데 매우 유망한 세포독성 분자, 세포독성 분자와 항체를 연결(bridging)하여 혈액 순환에서 안정적이지만 표적 세포에서 세포 독성제를 방출하는 링커, 및 세포독성 분자를 항체에 부착하기 위해 사용되는 적절한 결합(conjugation) 화학을 포함한다. ADC 개발에 많은 발전이 있었지만, ADC의 목표 외 독성에 대한 메커니즘은 아직 잘 이해되지 않으며, 병원에서의 그 치료 범위으로 인해 임상 시험 단계에서 종료된 상당수의 ADC는 임상전 모델 보다 훨신 더 좁고, 투약 요법은 임상전 데이터에 기초하여 항상 예측할 수 없는 투여량 제한 독성(DLT)에 의해 방해받고 있다(de Goeij, B. E. and Lambert, J. M. Curr Opin Immunol 2016, 40, 14-23). 따라서, ADC 화학 및 설계에 대한 연구 및 개발은 유일한 유력한 페이로드를 넘어서, 링커-페이로드 구획 및 결합 화학의 범위를 현재 확대시키고 있는데, 특히 표적/표적 질환에 대한 ADC의 링커-페이로드의 활성을 다루고 있다(Lambert, J. M. Ther Deliv 2016, 7, 279-82; Zhao, R. Y. et al, 2011, J. Med. Chem. 54, 3606-23). 현재 많은 약물 개발업자 및 학술 기관은 더 긴 순환 반감기, 더 높은 효능, 잠재적으로 감소된 표적 외 독성, 및 좁은 범위의 ADC 생체 내 약물 동력학 특성, ADC 생산에서의 보다 나은 배치-대-배치 일관성을 갖는 사이트(위치)-특이적 ADC 결합을 위한 신뢰할 수 있는 방법의 확립에 집중하고 있다(Hamblett, K. J. et al, Clin. Cancer Res. 2004, 10, 7063-70; Adem, Y. T. et al, Bioconjugate Chem. 2014, 25, 656-664; Boylan, N. J. Bioconjugate Chem. 2013, 24, 1008-1016; Strop, P., et al 2013 Chem. Biol. 20, 161-67; Wakankar, A. mAbs, 2011, 3, 161-172).
최근 몇 년간, 사이트 선택형 ADC 제조를 위해 개발된 몇 가지 접근법이 있다(Panofsky, S, 2014, mAbs 6, 34). 이들은 짝 안 지은(unpaired) 시스테인, 예컨대 Genentech에서 THIOMAB으로 불리는 조작된 반응성 시스테인 잔기(Junutula, J. R., et al 2010 Clin. Cancer Res. 16, 4769; Junutula, J. R., et al 2008 Nat Biotechnol. 26, 925-32; US Patents 8,309,300; 7,855,275; 7,521,541; 7,723,485, WO2008/141044), 스트렙토베르티실리움 모바라엔스 트란스글루타미나제(Strop, P., Bioconjugate Chem.,　2014,　25, 855-862; Strop, P., et al., 2013, Chem. Biol. 20, 161-167; US Patent 8,871,908 for Rinat-Pfizer) 또는 미생물의 트랜스글루타미나 제(MTGase)(Dennler, P., et al, 2014, Bioconjug. Chem. 25, 569-578. US pat appl 20130189287 for Innate Pharma; US Pat 7,893,019 for Bio-Ker S.r.l.　(IT))를 갖는 유전적으로 도입된 글루타민 태크(mTG)의 혼입, 티올푸코스(Okeley, N. M., et al 2013 Bioconjugate Chem. 24, 1650)의 혼입, 돌연변이 유발을 통한 비정상아미노산의 혼입(Axup, J.Y., et al., 2012, Proc. Natl. Acad. Sci. 109, 16101-16106; Zimmerman, E.S., et al., 2014, Bioconjug. Chem. 25, 351-361; Wu, P., et al, 2009 Proc. Natl. Acad. Sci. 106, 3000-5; Rabuka, D., et al, 2012 Nat. Protoc. 7, 1052-67; US Patent 8,778,631 and US Pat Appl. 20100184135, WO2010/081110 for Sutro Biopharma; WO2006/069246, 2007/059312, US Patents 7,332,571, 7,696,312, and 7,638,299 for Ambrx; WO2007/130453, US patents 7,632,492 and 7,829,659 for Allozyne), 항체로의 셀레노시스테인의 혼입(Hofer, T., et al 2009, Biochemistry 48, 12047-12057; US Patent 8,916,159 for US National Cancer Institute), CXPXR 컨센서스 서열에 위치한 시스테인을 포르밀글리신 생성 효소(FGE)로 포르밀글리신(FGly)으로의 변환(Drake, P.M., et al., 2014, Bioconjug. Chem. 25, 1331-1341. Carrico, I. S. et al 7,985,783; 8,097,701; 8,349,910, and US Pat Appl 20140141025, 20100210543 for Redwood Bioscience), 이는 갈락토실- 및 시알리트란스퍼라제를 이용한 시알산의 글리코공학적 도입을 통하는 것(Zhou, Q., et al 2014, Bioconjug.Chem.,25, 510-520, US Pat Appl 20140294867for Sanofi-Genzyme)을 포함한다. 그러나, 상기 방법은 항체-공학 과정과 세포 배양 조건의 재 최적화가 필요하다. 따라서, 간단한 동질 결합 방법이 차세대 말레이미드(NGM)라 불리는 브로모 또는 디브로모-말레이미드를 사용하여 천연 항체의 환원된 사슬 간 디설피드 결합을 재 브리징(rebridging)하거나(Schumacher, F.F., et al 2014, Org. Biomol. Chem. 12, 7261-69; UCL Cancer Institute), 또는 3 탄소-가교를 통해 비스-알킬화 시약을 적용(Badescu, G., et al., 2014, Bioconjug. Chem. 25, 1124-36; WO2013/190272, WO2014/064424 for PolyTherics Ltd)함으로써 실제 사용되었다. 본 발명자들은 브로모 말레이미드 및 디브로모마레이미드 링커(WO2014/009774), 2,3-이치환된 숙신산/2-모노 치환된/2,3-이치환된 푸마릭 또는 말레익 링커(WO2015/155753, WO20160596228), 또는 아세틸렌디카르복시릴 링커(WO2015/151080, WO20160596228) 또는 히드라진 링커(WO2015/151081)를 사용하여, 천연 항체의 환원된 사슬 간 디설피드 결합의 한 쌍의 티올을 재 브리징하는 여러개의 결합 방법을 개시해 왔다. 본 특허 출원에서는 이전의 특허 출원 범위를 확장한다. 보다 중요하게는, 본 특허 출원의 이황화 가교 링커는 보다 높은 DAR(4 이상)의 달성을 위해 링커 당 2개 이상의 약물을 결합하거나, 또는 세포 결합 분자 또는 2개 이상의 세포 결합 분자 상의 2개 이상의 티올 사이트에 결합할 수 있다. 따라서, 면역 결합체를 위한 본 특허의 주요 이점은 다음과 같다: 표적 전달 동안 결합체의 반감기 연장; 특정 약학적 약물 또는 반응성 기(effector)에 노출된 표적 세포의 수를 증가시키기 위해 세포주기의 상이한 단계에서 작용하는 2개 이상의 상이한 기능 분자/약물의 단계적 결합; 증식 세포에서 이중, 삼중 또는 다중 표적화 전략을 위한 2개 이상의 세포 결합 분자의 가능한 결합; 기능 분자의 결합을 통해 비-표적 세포, 조직 또는 장기에 대한 노출 최소화; 동질의 최종 생성물을 유도하는 특정 사이트에서의 약물 페이로드와 약물 비율에 대한 정확한 제어.
본 발명은 표적 전달 동안 결합체의 반감기 연장; 특정 약학적 약물 또는 반응성 기(effector)에 노출된 표적 세포의 수를 증가시키기 위해 세포주기의 상이한 단계에서 작용하는 2개 이상의 상이한 기능 분자/약물의 단계적 결합; 증식 세포에서 이중, 삼중 또는 다중 표적화 전략을 위한 2개 이상의 세포 결합 분자의 가능한 결합; 기능 분자의 결합을 통해 비-표적 세포, 조직 또는 장기에 대한 노출 최소화; 동질의 최종 생성물을 유도하는 특정 사이트에서의 약물 페이로드와 약물 비율에 대한 정확한 제어가 가능한 결합 링커, 그러한 결합 링커를 함유하는 세포 결합 분자-약물 결합체, 링커를 갖는 그러한 결합체의 제조 및 사용를 제공하기 위한 것이다.
본 발명은 약물 및/또는 기능 분자, 및/또는 세포-결합제(예컨대, 항체)를 결합하기 위한 링커 중에서, 인산 아미드, 아민, 히드라진, 트리아졸, 헤테로방향족, 아세틸 아미드, 글리코시드 및 이들의 유사체의 그룹을 선택적으로 갖는, 치환된 아크릴 기 또는 프로피올 기의 티올 반응성 기를 포함하는 링커를 제공한다.
본 발명의 일 양태에서, 링커는 화학식 (I) 및 (II)로 표시되며,
Figure pat00001
여기서,
"
Figure pat00002
" 및 "
Figure pat00003
"은 단일 결합을 나타내고，"
Figure pat00004
"는 단일 또는 이중 결합에 링크될 때 거울상 이성질체 또는 입체 이성질체 결합 일 수 있다.
Figure pat00005
는 단일 결합, 이중 결합 또는 삼중 결합 중 어느 하나를 나타낸다.
Figure pat00006
가 단일 결합을 나타낼 때，Lv1과 Lv2 모두는 H가 아니고;
Figure pat00007
가 이중 결합을 나타낼 때, Lv1 또는 Lv2는 H일 수 있지만, 이들은 동시에 H가 아니고,；
Figure pat00008
가 삼 중 결합을 나타낼 때, Lv1은 부재하고, Lv2는 선택적으로 H일 수 있다.
Lv1 및 Lv2은 티올에 의해 치환될 수 있는 동일하거나 상이한 이탈 기(leaving group)를 나타낸다. 그러한 이탈 기는 할라이드(예컨대, 플루오라이드, 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드), 메탄술포닐(메실), 톨루엔술포닐(토실), 트리플루오로메틸-술포닐(트리플레이트), 트리플루오로메틸술포네이트, 니트로페녹실, N-숙신이미딜옥실(NHS), 페녹실, 디니트로페녹실, 펜타풀루오로페녹실, 테트라플루오로페녹실, 트리플루오로페녹실, 디플루오로페녹실, 모노플루오로페녹실, 펜타클로로페녹실, 1H-이미다졸-1-일, 클로로페녹실, 디클로로페녹실, 트리클로로페녹실, 테트라클로로페녹실, N-(벤조트리아졸-일)옥실, 2-에틸-5-페닐이속사졸리엄-3'-술포닐, 페닐옥사디아졸-술포닐(-설폰-ODA), 2-에틸-5-페닐이속사졸리엄-일, 페닐옥사디아졸-일(ODA), 옥사디아졸-일, 또는 미츠노부 반응을 위한 축합제로 생성된 중간생성물 분자이다.
Y는 세포 독성 약물과 반응하여 이황화물, 에테르, 에스테르, 티오에테르, 티오에스테르, 펩티드, 히드라존, 카바메이트, 카보네이트, 아민(2차, 3차 또는 4차), 이민, 시클로헤테로알킬, 헤테로방향족, 알킬옥심 또는 아미드 결합을 형성할 수 있는 기능 기이고; 바람직하게는 Y는 하기 구조들로부터 선택된다:
Figure pat00009
이황화;
Figure pat00010
할로아세틸;
Figure pat00011
아실 할라이드(산 할로겐화물);
Figure pat00012
N-히드록시숙신이미드 에스테르;
Figure pat00013
말레이미드;
Figure pat00014
단일 치환된 말레이미드;
Figure pat00015
이 치환된 말레이미드;
Figure pat00016
단일 치환된 숙신이미드;
Figure pat00017
이 치환된 숙신이미드;-CHO 알데히드;
Figure pat00018
에텐술포닐;
Figure pat00019
아크릴(아크릴로일);
Figure pat00020
2-(토실옥시)아세틸;
Figure pat00021
2-(메실옥시)아세틸;
Figure pat00022
2-(니트로페녹시)아세틸;
Figure pat00023
2-(디니트로페녹시)아세틸;
Figure pat00024
2-(플루오로페녹시)-아세틸;
Figure pat00025
2-(디플루오로페녹시)-아세틸;
Figure pat00026
2-(((트리플루오로메틸)-술포닐)옥시)아세틸;
Figure pat00027
케톤 또는 알데히드,
Figure pat00028
2-(펜타플루오로페녹시)아세틸;
Figure pat00029
, 메틸 술폰페닐옥사디아졸(ODA);
Figure pat00030
산 무수물,
Figure pat00031
알킬옥시 아미노;
Figure pat00032
아지도,
Figure pat00033
알키닐 또는
Figure pat00034
히드라지드，
여기서, X1'는 F, Cl, Br, I 또는 Lv3이고; X2'는 O, NH, N(R1) 또는 CH2이고; R3및 R5는 독립적으로 H, R1, 방향족, 헤테로 방향족 또는 방향족 그룹이며，여기서 하나 또는 수 개의 H 원자는 -R1, -할로겐, -OR1, -SR1, -NR1R2, -NO2, -S(O)R1, -S(O)2R1 또는 -COOR1에 의해 독립적으로 치환되고; Lv3은 니트로페놀；N-히드록시숙신이미드(NHS); 페놀; 디니트로페놀; 펜타플루오로페놀; 테트라플루오로페놀; 디플루오로페놀; 모노플루오로페놀; 펜타클로로페놀; 트리플레이트; 이미다졸; 디클로로페놀; 테트라클로로페놀; 1-히드록시벤조트리아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐이속사졸리움-3'-술포네이트, 그 자체로 형성된 무수물 또는 다른 무수물과 함께 형성된 무수물, 예컨대 아세틸 무수물, 포르밀 무수물; 또는 펩티드 커플링 반응 또는 미츠노부(Mitsunobu) 반응을 위한 축합제로 생성된 중간생성물 분자로부터 선택된 이탈 기이다.
R1은 부재하거나 또는 알킬의 C1-C8(1-8 탄소 원자); 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8； 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8；또는 에스테르，에테르, 또는 아미드의 C2-C8(2-8 탄소 원자);1-8아미노산을 함유하는 펩티드, 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는(OCH2CH(CH3))p[여기서, p는 1 내지 약 1000의 정수임]의 폴리에틸렌옥시 유닛 또는 상기 그룹의 조합으로부터 선택될 수 있다.
추가로, R1은 C, N, O, S, Si 및 P로부터 선택된 원자의 사슬, 바람직하게는 0 내지 500개의 원자를 가지며, Y 및 L1에 공유 결합된다. R1을 형성하는데 사용되는 원자는 알킬렌, 알케닐렌 및 알키닐렌, 에테르, 폴리옥시알킬렌, 에스테르, 아민, 이민, 폴리아민, 히드라진, 히드라존, 아미드, 우레아, 세미카르바지드, 카바지드, 알콕시아민, 알콕시아민, 우레탄,아미노산, 펩티드, 아실옥실아민, 히드록삼산 또는 이들의 조합을 형성하는 것과 같이, 모든 화학적으로 관련된 방법으로 결합될 수 있다.
T는 CH2, NH, NHNH, N(R3), N(R3)N(R3'), O, S, 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 바람직하게는 아스파트산, 글루탐산, 아르기닌, 히스티딘, 라이신, 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 셀레노시스테인, 티로신, 페닐알라닌, 글리신, 프롤린, 트립토판, 알라닌으로부터 선택되는아미노산을 1 내지 4 유닛 함유하는 펩티드; 또는 다음 구조들 중 하나이다.
Figure pat00035
여기서
Figure pat00036
는 결합(linkage) 사이트이다.
X1, X2, X3, X4, X5, X6, X1', X2' 및 X3'는 NH; NHNH; N(R3); N(R3)N(R3'); O; S; 알킬의 C1-C6；헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C6; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8； 또는 1 내지 8개의아미노산으로부터 독립적으로 선택되고；R3 및 R3'는 독립적으로 H； 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8；아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 또는 에스테르, 에테르 또는 아미드의 1 내지 8개의 탄소 원자; 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는(OCH2CH(CH3))p[여기서, p는 1 내지 약 1000의 정수임]의 폴리에틸렌옥시 유닛 또는 그 조합이다.
L1 및 L2는 동일하거나 상이하며, O, NH, S, NHNH, N(R3), N(R3)N(R3'), 화학식 (OCH2CH2)pOR3 또는 (OCH2CH(CH3))pOR3, 또는 NH(CH2CH2O)pR3, 또는 NH(CH2CH(CH3)O)pR3, 또는 N[(CH2CH2O)pR3][(CH2CH2O)p'R3'], 또는 (OCH2CH2)pC(=O)X1R3, 또는CH2CH2(OCH2CH2)pC(=O)X1R3 [여기서, p 및 p'는 독립적으로 1 내지 약 1000로부터 선택된 정수임]의 폴리에틸렌옥시 유닛, 또는 이들의 조합; 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8로부터 독립적으로 선택되고; R3 및 R3'는 독립적으로 H； 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8；아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 또는 에스테르, 에테르 또는 아미드의 1 내지 8개의 탄소 원자; 또는 1 내지 8개의아미노산; 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p [여기서, p는 1 내지 약 1000의 정수임]의 폴리에틸렌옥시 유닛 또는 그 조합이다.
L1 또는 L2는 6-말레이미도카프로일("MC"), 말레이미도프로판오일("MP"), 발린-시트룰린("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌("ala-phe" 또는 "af"), p-아미노벤질옥시카보닐("PAB"), 4-티펜타노에이트(SPAB), 4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1 카르복실레이트(MCC), (4-아세틸)아미노벤조에이트(SIAB), 4-티오-부티레이트(SPDB), 4-티오-2-히드록시술포닐-부티레이트(2-술포-SPDB), 또는 1 내지 8개의 천연 또는 비천연아미노산 유닛을 갖는 천연 또는 비천연 펩티드의 하나 이상의 링커 성분들로 이루어질 수 있다.
m1, m2, m3, m4 및 m5는 독립적으로 1 내지 10의 정수, 바람직하게는 1 내지 4의 정수이다.
게다가, L1, L2, X1, X2, X3, X1', X2' 및 X3'은 독립적으로 부재일 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 화학식 (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII) 또는 (IX)의 세포-결합제-약물 결합체를 제공하고, 여기서 세포-결합제, Cb 및 약물 "Drug"은 각각 가교 링커의 말단에서 반응한다:
Figure pat00037
Figure pat00038
Figure pat00039
Figure pat00040
여기서,
Cb, Cb', Cb'', Cb'''는 동일 또는 상이한 세포-결합제, 또는 면역치료 단백질, 바람직하게는 항체 또는 항체 단편을 나타낸다.
화학식 (III), (VII), (VIII) 및 (IX)의 오른쪽 괄호(사각형 괄호)내에는 세포-결합제/분자의 티올 쌍에 결합된 링커-약물 성분이 있다. 티올은 디티오트레이 톨(DTT), 디티오에리트리톨(DTE), L-글루타티온(GSH), 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), 2-메르캅토에틸아민(β-MEA) 및/또는 베타메르캅토에탄올(β-ME, 2-ME)로부터 선택된 환원제에 의해 세포-결합제의 사슬 간 디설피드 결합으로부터 환원된 바람직한 쌍들의 황 원자이다.
Drug, Drug',과 Drug"는 동일 또는 상이한 세포 독성제 또는 치료 약물, 또는 면역치료용 단백질, 세포-표면 수용체 결합 리간드 또는 세포-결합제의 결합 또는 안정화를 향상시키는 기능 분자를 나타내고, 이는 알칸의 C1-C8; 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌, 방향족, 에테르, 폴리옥시알킬렌, 에스테르, 아민, 이민, 폴리아민, 히드라진, 히드라존, 아미드, 우레아, 세미카르바지드, 카바지드, 알콕시아민, 우레탄,아미노산, 펩티드, 아실옥시아민, 히드록삼산, 디설피드, 티오에테르, 티오에스테르, 티오에테르, 카르바메이트, 카르보네이트, 헤테로사이클릭 고리, 헤테로알킬, 헤테로방향족 또는 알콕심의 C2-C8; 또는 이들의 조합을 함유하는 R1을 통한 본 특허의 가교 링커를 통하여 상기 세포-결합제에 링크된다. "Drug"는 또한 세포독성 분자, 자가면역치료 화합물, 화학치료 화합물, 항체 또는 항체 단편, siRNA 또는 DNA 분자, 또는 세포 표면 결합 리간드일 수 있다.
"
Figure pat00041
" 단일 결합 또는 이중 결합을 나타낸다.
사각 괄호 안에는 세포 결합 분자 상의 한 쌍의 황 원자를 통해 세포 결합 분자에 결합된 제제가 있다.
m1, m1', m1'', m2, m2', m2'', m3, m4, m5, m4', m5', m4'', m5'', m4''', m5''', m4''''및 m5''''는 독립적으로 1 내지 10의 정수이고, 바람직하게는 1 내지 4이다.
X1, X1', X1'', X1''' 및 X2''''는 NH; NHNH; N(R3); N(R3)N(R3'); O; S; 알킬의 C1-C6; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C6; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 또는 1 내지 8개의아미노산으로부터 독립적으로 선택되고; R3 및 R3'은 독립적으로 H; 알킬의 C1-C8; 헤테로-알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 또는 에스테르, 에테르 또는 아미드의 1 내지 8개의 탄소 원자; 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는(OCH2CH(CH3))p의 폴리에틸렌옥시 유닛[여기서, p는 0 내지 약 1000의 정수임], 또는 이들의 조합이다. 또한, X1, X1', X1'', X1''' 및X2''''는 독립적으로 부재일 수 있다.
R1, R1', 및 R1''는 동일하거나 상이하며, 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 또는 에스테르, 에테르 또는 아미드의 2-8 탄소 원자; 또는 화학식 (OCH2CH2)p또는(OCH2CH(CH3))p의 폴리에틸렌옥시 유닛[여기서, p는 0 내지 약 1000의 정수임], 또는 이들의 조합으로부터 선택된다.
L1, L1', L1'', L1''', L2, L2', L2'' 및 L2'''은 화학식 (I) 및 (II)의 L1 및 L2와 동일하게 정의되며, 이들은 동시에 동일하지 않을 수 있다.
n은 1 내지 20이고; T는 화학식 (I)에서 이전과 동일하게 기재된다. 추가의 양태에서, 본 발명은 화학식(III)의 개질된 세포-결합제를 제공하는데, 여기서 세포-결합제, Cb는 디설피드 결합의 환원으로 생성된 티올 쌍을 통해, 가교 링커와 반응하고, 이는 약물과 반응할 수 있는 작용기인 Y를 갖는다:
Figure pat00042
Figure pat00043
Figure pat00044
Figure pat00045
여기서, "
Figure pat00046
", Z1, Z2, n, R1, R2, m1, m2, X1, 및 X2는 화학식 (I) 및 (II)와 동일하게 정의되고; "
Figure pat00047
" 및 Cb는 화학식 (III) 내지 (IX)와 동일하게 정의된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 (XVII) 및 (XVIII)의 개질된 약물을 제공하는데, 여기서 약물 "Drug"는 화학식 (I) 및 (II)의 링커와 반응하고, 치환된 아크릴 기 또는 프로피올리 기의 티올 반응 그룹을 여전히 포함하여, 세포-결합제의 한 쌍의 티올과 반응할 수 있다:
Figure pat00048
여기서, "
Figure pat00049
", "
Figure pat00050
", L1, L2, R1, T, m1, m2, m3, m4, m5, X1, Lv1 및 Lv2은 화학식 (I)와 동일하게 정의된다. Drug1은 화학식 (II)와 동일하게 정의된다.
또한, 본 발명은 화학식 (III) 내지 (IX)의 세포-결합 분자-약물 결합체를 제조하는 방법에 관한 것으로서, 약물 "Drug"은 가교 링커를 통해 세포-결합제에 링크된다.
본 발명은 또한 화학식 (X) 내지 (XVI)의 개질된 세포-결합 분자의 제조 방법에 관한 것으로서, 여기서 상기 세포-결합 분자는 화학식 (I) 및 (II)의 링커와 반응한다.
또한, 본 발명은 화학식 (XVII) 및 (XVIII)의 개질된 약물의 제조 방법에 관한 것으로서, 여기서 Drug는 화학식 (I) 및 (II)의 가교 링커와 반응한다.
본 발명은 표적 전달 동안 결합체의 반감기 연장; 특정 약학적 약물 또는 반응성 기(effector)에 노출된 표적 세포의 수를 증가시키기 위해 세포주기의 상이한 단계에서 작용하는 2개 이상의 상이한 기능 분자/약물의 단계적 결합; 증식 세포에서 이중, 삼중 또는 다중 표적화 전략을 위한 2개 이상의 세포 결합 분자의 가능한 결합; 기능 분자의 결합을 통해 비-표적 세포, 조직 또는 장기에 대한 노출 최소화; 동질의 최종 생성물을 유도하는 특정 사이트에서의 약물 페이로드와 약물 비율에 대한 정확한 제어의 효과를 갖는다.
도 1은 2 또는 4개의 약물을 함유하는 본 발명의 링커의 합성, 및 한 쌍의 티올에 의해 항체에 결합된 본 발명의 링커를 도시한다.
도 2는 2 또는 4개의 약물을 함유하는 본 발명의 링커의 합성, 및 한 쌍의 티올에 의해 항체에 결합된 본 발명의 링커를 도시한다.
도 3은 약물 및 폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 본 발명의 링커의 합성, 및 한 쌍의 티올에 의해 항체에 결합된 본 발명의 링커를 도시한다.
도 4는 약물을 함유하는 본 발명의 링커의 합성, 및 한 쌍의 티올에 의해 항체에 결합된 본 발명의 링커를 도시한다.
도 5는 약물,아미노산, 및 폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 본 발명의 링커의 합성, 및 한 쌍의 티올에 의해 항체에 결합된 본 발명의 링커를 도시한다.
도 6은 약물, 포스파미드 및 폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 본 발명의 링커의 합성, 및 한 쌍의 티올에 의해 항체에 결합된 본 발명의 링커를 도시한다.
도 7은 약물 및 포스파미드를 함유하는 본 발명의 링커의 합성, 및 한 쌍의 티올에 의해 항체에 결합된 본 발명의 링커를 도시한다.
도 8은 약물 및 포스파미드를 함유하는 본 발명의 링커의 합성, 및 한 쌍의 티올에 의해 항체에 결합된 본 발명의 링커를 도시한다.
도 9는 약물 및 폴리에틸렌 글리콜을 함유하는 본 발명의 링커의 합성, 및 한 쌍의 티올에 의해 항체에 결합된 본 발명의 링커를 도시한다.
도 10은 약물 및 링커 성분 L1 및 L2를 함유하는 본 발명의 링커의 합성, 및 한 쌍의 티올에 의해 항체에 결합된 본 발명의 링커를 도시한다.
도 11은 전립성 표면 항원(PSA) 결합 리간드를 함유하는 본 발명의 링커의 합성을 도시한다.
도 12은 전립성 표면 항원(PSA) 결합 리간드를 함유하는 본 발명의 링커의 합성, 및 한 쌍의 티올에 의해 항체에 결합된 본 발명의 링커를 도시한다.
도 13은 튜불리신 유사체의 중간생성물의 합성을 도시한다.
도 14는 결합가능한 튜불리신 유사체의 중간생성물의 합성, 및 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합을 도시한다.
도 15는 본 특허의 링커를 통한 항체-MMAF 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 16은 본 특허의 링커를 통한 항체-MMAF 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 17은 본 특허의 링커를 통한 항체-MMAF 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 18은 본 특허의 링커를 통한 항체-MMAF 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 19는 튜불리신 유사체 성분의 합성, 및 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합을 도시한다.
도 20은 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 21은 본 특허의 링커들을 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 22는 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 23은 본 특허의 링커들을 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 24는 본 특허의 링커들를 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 25는 본 특허의 링커를 통한 MMAF 유사체와 튜불리신 유사체 모두를 함유하는 결합체 합성을 도시한다.
도 26은 본 특허의 링커를 통한 MMAF 유사체와 PBD 다이머 유사체 모두를 함유하는 결합체 합성을 도시한다.
도 27은 본 특허의 링커를 통한 MMAF 유사체와 PBD 다이머 유사체 모두를 함유하는 결합체 합성을 도시한다.
도 28은 본 특허의 링커를 통한 2개의 MMAF 유사체를 함유하는 결합체 합성을 도시한다.
도 29는 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 30은 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 31은 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 32는 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 33은 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 34는 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체와 결합가능 MMAF 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 35는 본 특허의 링커를 통한 항체-MMAF 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 36은 본 특허의 링커를 통한 항체-아마톡신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 37은 본 특허의 링커를 통한 항체-아마톡신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 38은 본 특허의 링커를 통한 항체-아마톡신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 39는 본 특허의 링커를 통한 항체-아마톡신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 40은 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체와 항체-MMAF 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 41은 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 42는 본 특허의 링커를 통한 항체-튜불리신 유사체, 항체-PBD 다이머 유사체 및 항체-MMAF 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 43은 본 특허의 링커를 통한 PMSA 결합 리간드를 함유하는 항체-튜불리신 유사체와 PEG 사슬을 함유하는 항체-튜불리신 유사체의 결합체 합성을 도시한다.
도 44는 개발 과정에서 환원제 DTT를 함유하는 SDS-PAGE 겔을 도시한다. 레인 1 및 11은 바이오마커이고, 레인 2 및 레인 16은 결합체 232이고, 레인 3 및 레인 15는 결합체 339이고, 레인 4는 결합체 234이고, 레인 5는 결합체 238이고, 레인 6은 결합체 261이고, 레인 7 및 레인 17은 결합체 308이고, 레인 8은 결합체 239이고, 레인 9는 결합체 476이고, 레인 10은 결합체 478이고, 레인 12는 결합체 360이고, 레인 14는 결합체 238이고, 레인 18은 결합체 481이고, 레인 19는 결합체 483이고, 레인 20은 T-DM1이다. 본 특허 출원의 가교 링커를 통한 결합체 232, 234, 238, 261, 308, 339, 354 및 360은 mAb의 중쇄 및 경쇄가 링커와 가교 결합되어 있음을 나타내는 75KD의 주요 밴드를 가졌다. 그러나, 이들 결합체의 두 개의 중쇄 사이의 결합은 DTT의 환원제로 대체될 수 있었고, 희미한 150KD 밴드를 초래하였다. 또한, 결합체 476, 478, 481 및 483의 교차 결합은 SDS-PAGE(가역적 결합) 내에서 DTT로 대체되었으며, 75KD 및 150KD 밴드도 매우 희미했다. 대조적으로, 어떠한 가교 결합된 T-DM1도 75KD 밴드를 갖지 않고, UV 광을 사용하지 않고 제조된 결합체 239는 희미한 75KD 밴드를 가졌지만 결합 조건에서 가교 결합되지 않았음을 나타냈다.
도 45는 인간 위암 N87 세포 모델을 사용하여 T-DM1에 의한 결합체 화합물 232, 308, 327, 339, 476, 485 및 500의 항-종양 효과의 비교를 도시하는데, 결합체 232, 308, 327, 339, 476 및 485에 대해서는 5mg/kg의 투여량으로 주사되었고, 결합체 339 및 500에 대해서는 4mg/kg의 투여량으로 주사되었다. 여기서 시험된 7개의 결합체는 T-DMI 보다 우수한 항-종양 활성을 나타내었다. 화합물들 476, 483, 339 및 500 그룹의 모든 6/6 동물은 14일째 날부터 52일째까지 측정 가능한 종양이 전혀 없었다. 대조적으로 5mg/Kg의 투여량에서의 T-DM1은 종양을 제거할 수 없었고 31일 동안 종양 성장을 억제했을 뿐이다. 결합체 화합물 232, 308 및 327은 5mg/Kg의 투여량으로 종양을 완전히 박멸하지 못했다.
정의
"알킬"은 지방족 탄화수소 그룹 또는 탄소 원자로부터 1 또는 2개의 수소 원자를 제거함으로써 알칸으로부터 유도된 1가 그룹을 의미한다. 이는 사슬 내에 C1-C8(1내지 8개의 탄소 원자)을 갖는 직쇄형 또는 분지형일 수 있다. "분지형"은 메틸, 에틸 또는 프로필과 같은 하나 이상의 저급 C 알킬기가 선형 알킬 사슬에 결합되어 있음을 의미한다. 예시적인 알킬기로는 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, t-부틸, n-펜틸, 3-펜틸, 옥틸, 노닐, 데실, 시클로펜틸, 시클로헥실, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸, 2,2-elapxlfvpsxlf, 2,3-디메틸펜틸, 3,3-디메틸펜틸, 2,3,4-트리메틸펜틸, 3-메틸-헥실, 2,2-디메틸헥실, 2,4-디메틸헥실, 2,5-디메틸헥실, 3,5-디메틸헥실, 2,4-디메티리펜틸, 2-메틸헵틸, 3-메틸헵틸, n-헵틸, 이소헵틸, n-옥틸 및 이소옥틸이다. C1-C8 알킬기는 치환되지 않거나 하나 이상의 기로 치환될 수 있으며, 치환될 수 있는 기로는 여기에 제한되지 않지만, -C1-C8 알킬,-O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN 이고; 여기서, 각각의 R'는 -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자; 바람직하게는 불소 원자 및 염소 원자를 나타낸다.
"헤테로알킬"은 1 내지 4개의 탄소 원자가 O, S 및 N으로 이루어진 그룹으로부터의 헤테로 원자로 대체된 C2-C8 알킬을 지칭한다.
"카보사이클(탄소고리)"은 모노사이클로서 3 내지 8개의 탄소 원자, 또는 바이사이클로서 7 내지 13개의 탄소 원자를 갖는 포화 또는 불포화 고리를 의미한다. 모노사이클릭 카보사이클은 3 내지 6개의 고리 원자, 보다 전형적으로는 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는다. 바이사이클릭 카보사이클은 바이사이클 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로 배열된 7 내지 12개의 고리 원자를 갖거나 또는 바이사이클 [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로 배열된 9 또는 10개의 고리 원자를 갖는다. 대표적인 C3-C8 카보사이클은 -시클로프로필, -시클로부틸, -시클로펜틸, -시클로펜타디에닐, -시클로헥실, -시클로헥세닐, -1,3-시클로헥사디에닐, -1,4-시클로헥사디에닐, -시클로헵틸, -1,3-시클로헵타디에닐, -1,3,5-시클로헵타트리에닐, -시클로옥틸 및 -시클로옥타디에닐이지만, 여기에 제한되지 않는다.
"C3-C8 카르보사이클"은 3-, 4-, 5-, 6-, 7-또는 8-원 포화 또는 불포화 비-방향족 카르보사이클릭 고리를 나타낸다. C3-C8 카로보사이클 기는 치환되지 않거나 또는 하나 이상의 기로 치환될 수 있으며, 치환될 수 있는 기로는 -C1-C8알킬, -O-(C1-C8alkyl), -알킬, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -S(O)R', -S(O)2R', -OH,-할로겐, -N3, -NH2,-NH(R'), -N(R')2 및 -CN이고; 여기서 각각의 R'는 -C1-C8 알킬 및 아릴이다.
"알케닐"은 사슬 내에 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 직쇄형 또는 분지형일 수 있는 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 지방족 탄화수소 그룹을 말한다. 예시적인 알케닐 그룹은 에테닐, 프로페닐, n-부테닐, i-부테닐, 3-메틸부트-2-에닐, n-펜테닐, 헥실레닐, 헵테닐, 옥테닐을 포함한다.
"알키닐"은 사슬 내에 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 직쇄형 또는 분지형일 수 있는 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 지방족 탄화수소 그룹을 말한다. 예시적인 알키닐기로는 에티닐, 프로피닐, n-부티닐, 2-부티닐, 3-메틸부티닐, 5-펜티닐, n-펜티닐, 헥시닐일릴, 헵티닐 및 옥티닐을 포함한다.
"알킬렌"은 1 내지 18개의 탄소 원자를 갖는 포화, 분지쇄 또는 직쇄 또는 고리형 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 모 알칸의 동일하거나 상이한 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알킬렌 라디칼은 메틸렌(-CH2-), 1,2-에틸(-CH2CH2-), 1,3-프로필(-CH2CH2CH2-), 1,4-부틸(-CH2CH2CH2CH2-)등을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
"알케닐렌"은 2 내지 18개의 탄소 원자의 불포화, 분지형 또는 직쇄 또는 고리형 탄화수소 라디칼을 의미하며, 모 알켄의 동일하거나 상이한 2개의 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알케닐렌 라디칼은 1,2-에틸렌(-CH = CH-)를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
"알키닐렌"은 2 내지 18개의 탄소 원자의 불포화, 분지형 또는 직쇄 또는 고리형 탄화수소 라디칼을 지칭하고, 모 알킨의 동일 또는 2개의 상이한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유도된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알키닐렌 라디칼은 아세틸렌, 프로파르길 및 4-펜티닐을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
"아릴" 또는 Ar은 3 내지 14개의 탄소 원자, 바람직하게는 6 내지 10개의 탄소 원자를 포함하는 하나 또는 수 개의 고리로 이루어진 방향족 또는 헤테로 방향족 기를 의미한다. "헤테로 방향족 기"의 용어는 방향족 기 상에 하나 또는 수 개의 탄소를 지칭하고, 바람직하게는 1, 2, 3 또는 4개의 탄소 원자가 O, N, Si, Se, P 또는 S로, 우선적으로 O, S로 치환된다. 아릴 또는 Ar이라는 용어는 또한 방향족 기를 지칭하고, 하나 또는 수 개의 H 원자가 -R', -할로겐, -OR', 또는 -SR', -NR'R'', -N=NR', -N=R', -NR'R'', -NO2,-S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2OR', -OS(O)2OR', -PR'R'', -P(O)R'R'', -P(OR')(OR''), -P(O)(OR')(OR'') 또는 -OP(O)(OR')(OR'')[여기서, R', R''는 독립적으로 H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 아릴, 아릴알킬,카르보닐 또는 약학적 염이다]에 의해 독립적으로 치환된다
"헤테로사이클"은 1 내지 4개의 고리 탄소 원자가 O, N, S, Se, B, Si 및 P 그룹으로부터의 헤테로원자로 치환된 고리 시스템을 나타낸다. 바람직한 헤테로 원자는 O, N 및 S이다. 헤테로사이클은 또한 "The Handbook of Chemistry and Physics, 78th Edition, CRC Press, Inc., 1997-1998, p. 225 to 226"에 기재되고, 그 개시 내용은 본 명세서에 참고 문헌으로 포함된다. 바람직한 비방향족 헤테로사이클릭은 에폭시, 아지리디닐, 티라닐,피롤리디닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리디닐, 옥시라닐, 테트라히드로푸라닐, 디히드로라닐, 테트라히드로피라닐, 피페리딜, 피페라진일, 모르폴리닐, 피라닐, 이미다졸리닐, 테트라히드로피라 닐, 디히드로피라닐, 테트라히드로피리딜, 디히드로피리딜, 테트라히드로피리미디닐, 디히드로티오피라닐, 아제 판닐 뿐만 아니라 페닐기와의 축합으로부터 얻어지는 융합된 시스템을 포함한다.
용어 "헤테로아릴" 또는 방향족 헤테로사이클은 3 내지 14 원, 바람직하게는 5 내지 10 원 방향족 헤테로, 일-, 이- 또는 다중-환 고리를 지칭한다. 예로는 피롤릴, 피리딜, 피라졸릴, 티에닐, 피리미디닐, 피라지닐, 테트라졸일, 인돌일, 퀴노리닐, 푸리닐, 이미다졸릴, 티에닐,티아졸일, 벤조티아졸일, 푸라닐, 벤조푸라닐, 1,2,4-티아디아졸릴, 이소티아졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 이소퀴놀릴, 벤조티에닐, 이소벤조푸릴, 피라졸일, 카르바졸일, 벤지미다졸일, 이속사졸일, 피리딜-N-옥사이드뿐만 아니라 페닐 기와과의 축합으로부터 생성된 융합된 시스템을 포함한다.
"알킬", "시클로알킬", "알케닐", "알키닐", "아릴", "헤테로아릴", "헤테로시클릭"등은 또한 대응하는 "알킬렌", "시클로알킬렌", "알케닐렌", "알키닐렌", "아릴렌", "헤테로아릴렌", "헤테로사이클렌"을 지칭하는데, 이는 2개의 수소 원자의 제거에 의해 형성된다.
"아릴알킬"은 탄소 원자, 전형적으로 말단 또는 sp3 탄소 원자에 결합된 수소 원자 중 하나가 아릴 라디칼로 치환된 비-환상 알킬 라디칼을 나타낸다. 전형적인 아릴알킬 그룹은 벤질, 2-페닐에탄-1-일, 2-페닐에텐-1-일, 나프틸메틸, 2-나프틸 에탄-1-일, 2-나프티일렌-1-일, 나프토벤질, 2-나프토페닐에탄-1-일 등을 포함한다.
"헤테로아릴알킬"은 탄소 원자, 전형적으로 말단 또는 sp3 탄소 원자에 결합 된 수소 원자 중 하나가 헤테로아릴 라디칼로 치환된 비-환상 알킬 라디칼을 나타낸다. 헤테로아릴알킬기의 예는 2-벤지미다졸릴메틸, 2-푸릴에틸을 포함한다.
"히드록실 보호 기"의 예는 메톡시메틸 에테르, 2-메톡시에톡시메틸 에테르, 테트라히드로피라닐 에테르, 벤질 에테르, p-메톡시벤질 에테르, 트리메틸실일 에테르, 트리에틸실일 에테르, 트리이소프로필실일 에테르, t-부틸디메틸실일 에테르, 트리페닐메틸실일 에테르, 아세테이트 에스테르, 치환된 아세테이트 에스테르, 피바로에이트, 벤조에이트, 메탄술포네이트 및 p-톨루엔술포네이트를 포함한다.
"이탈 기"는 다른 작용기로 치환될 수 있는 작용기를 의미한다. 그러한 이탈 기는 당해 분야에 잘 알려져 있으며, 예를 들면, 할라이드(예, 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드), 메탄술포닐(메실), p-톨루엔술포닐(토실), 트리플루오로메틸 술포닐(트리플레이트) 및 트리플루오로메틸설포네이트를 포함한다. 바람직한 이탈 기는 니트로페놀; N-히드록시숙신이미드(NHS); 페놀; 디니트로페놀; 펜타플루오로페놀; 테트라플루오로페놀; 디플루오로페놀; 모노플루오로페놀; 펜타클로로페놀; 트리플레이트; 이미다졸; 디클로로페놀; 테트라클로로페놀; 1-히드록시벤조트리아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐이소옥사졸륨-3'-술포네이트, 그 자체로 형성된 무수물 또는 다른 무수물, 예를 들면, 아세틸 무수물, 포르밀 무수물; 또는 펩티드 커플링 반응 또는 미츠노부(Mitsunobu) 반응을 위한 축합제로 생성된 중간 분자 일 수 있다.
다음의 약어가 본원에서 사용될 수 있으며, 다음의 정의를 갖는다: Boc, tert-부톡시카르보닐; BroP, 브로모트리페닐피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트; CDI, 1,1'-카르보닐디이미다졸; DCC, 디시클로헥실카르보디이미드; DCE, 디클로로에탄; DCM, 디클로로메탄; DIAD, 디이소프로필아조디카복실레이트; DIBAL-H, 디이소 뷰틸-알루미늄하이드라이드; DIPEA, 디이소프로필에틸아민; DEPC, 디에틸 포스포론시아니데이트; DMA, N, N-디메틸아세트아미드; DMAP, 4-(N, N-디메틸아미노)피리딘; DMF, N, N-디메틸포름아미드; DMSO, 디메틸술폭시드; DTT, 디티오트레이톨; EDC, 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드; ESI-MS, 전기분무 질량 분석; HATU, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트; HOBt, 1-하이드록시벤조트리아졸; HPLC, 고압 액체 크로마토그래피; NHS, N-하이드록시숙신이미드; MMP, 4-메틸모르폴린; PAB, p-아미노벤질; PBS, 인산염 완충 식염수(pH 7.0 ~ 7.5); PEG, 폴리에틸렌 글리콜; SEC, 크기-배제 크로마토그래피; TCEP, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀; TFA, 트리플루오로아세트산; THF, 테트라히드로 푸란; Val, 발린.
"아미노산(들)"은 천연 및/또는 비 천연아미노산, 바람직하게는 알파-아미노산 일 수 있다. 천연아미노산은 유전 암호로 인코딩된 것으로서, 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트 산, 시스테인, 글루타민산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소루이신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 티로신, 트립토판 및 발린이다. 비 천연아미노산은 단백질 생성아미노산의 형태로 유도된다. 예를 들면, 히드록시프롤린, 란티오닌, 2-아미노이소부티르산, 데히드로알라닌, 감마-아미노부티르산(신경 전달 물질), 오르니틴, 시트룰린, 베타 알라닌(3-아미노 프로판산), 감마-카르복시 글루타메이트, 셀레노시스테인(대부분의 진핵 생물 및 많은 비-진핵 생물에 존재하지만, DNA에 의해 직접 코드화되지는 않음),피롤리신(일부 고등어와 하나의 박테리아에서만 발견됨), N-포르밀메티오닌(종종 박테리아, 미토콘드리아 및 엽록체에서 단백질의 초기아미노산임), 5-하이드록시트립토판, L-디 히드록시페닐알라닌, 트리요오드티로닌, L-3,4-디히드록시페닐알라닌(DOPA) 및 O-포스포세린을 포함한다. 용어아미노산은 또한아미노산 유사체 및 모방체를 포함한다. 유사체는 R 그룹이 천연아미노산 중에서 발견되지 않는 것을 제외하고는, 천연아미노산의 일반 H2N(R)CHCO2H 구조를 갖는 화합물이다. 유사체의 예는 호모세린, 노르 류신, 메티오닌-술폭시드 및 메티오닌메틸술포늄을 포함한다. 바람직하게는,아미노산 모방체는 알파-아미노산의 일반적인 화학 구조와는 다른 구조를 가지나 하나와 유사한 방식으로 작용하는 화합물이다. 용어 "비 천연아미노산"은 "D" 입체화학적 형태를 나타내며, 천연아미노산은 "L" 형태이다. 본 특허 출원에서 1 내지 8개의아미노산이 사용되는 경우,아미노산 서열은 바람직하게는 프로테아제의 절단 인식 서열이다. 많은 절단 인식 서열이 당 업계에 공지되어 있다. 예를 들어, Matayoshi et al. Science 247: 954(1990); Dunn et al. Meth. Enzymol. 241: 254(1994); Seidah et al. Meth. Enzymol. 244: 175(1994); Thornberry, Meth. Enzymol. 244: 615(1994); Weber et al. Meth. Enzymol. 244: 595(1994); Smith et al. Meth. Enzymol. 244: 412(1994); and Bouvier et al. Meth. Enzymol. 248: 614(1995); 이들의 개시 내용은 본 명세서에 참고로 포함된다. 특히, 서열은 Val-Cit, Ala-Val, Ala-Ala, Val-Val, Val-Ala-Val, Lys-Lys, Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Cit-Cit, Val-Lys, Ala-Ala-Asn, Lys, Cit, Ser, 및 Glu로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다.
"글리코시드"는 설탕 그룹이 글리코시드 결합을 통해 다른 그룹에 그 아노머 탄소를 통해 결합된 분자이다. 글리코시드는 O-(O-글리코시드), N-(글리코 실아민), S-(티오글리코시드) 또는 C-(C-글리코시드) 글리코시드 결합으로 연결될 수 있다. 그 코어 실험식은 Cm(H2O)n(여기서 m은 n과 다를 수 있고 m과 n은 <36)이다. 여기서 글리코시드는 글루코스(덱스트로스), 프룩토스(levulose)알로오스, 알토로오스, 만노오스, 글로스, 요도스, 갈락토오스, 탈로스, 갈락토사민, 글루코사민, 시알산, N-아세틸글루코사민, 설포퀴노보스(6-데옥시-6-설포-D-글루코피라노오스), 리보스, 아라비노즈, 크실로오스, 락토스, 소르비톨, 만니톨, 수크로오스, 락토오스, 말토스, 트레할로스, 말토덱스트린, 라피노스, 글루쿠론산(글루쿠로니드) 및 스타키오스를 포함한다. 이는 D 형 또는 L 형, 5 원자 사이클릭 푸라노즈 형태, 6 원자 사이클릭 피라노즈 형태, 또는 비 고리형, α-이성질체(Haworth 투영의 탄소 원자의 평면 아래의 아노머 탄소의 -OH) 또는 β-이성질체(Haworth 투영면 위의 아노 머탄소의 -OH)일 수 있다. 본원에서 단당류, 이당류, 폴리올 또는 3 내지 6 개의 당 단위를 함유하는 올리고당이 사용된다.
"약학적으로" 또는 "약학적으로 허용 가능한"은 동물, 또는 인간에게 적절하게 투여될 때, 불리한, 알레르기성 또는 다른 부적당한 반응을 일으키지 않는 분자 실체 및 조성물을 지칭한다.
"약학적으로 허용 가능한 용매화물" 또는 "용매화물"은 하나 이상의 용매 분자 및 개시된 화합물의 결합을 의미한다. 약학적으로 허용 가능한 용매화물을 형성하는 용매의 예는 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸 아세테이트, 아세트산 및 에탄올 아민을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다.
"약학적으로 허용되는 부형제"는 보존제 또는 산화 방지제, 충전제, 붕해제, 습윤제, 유화제, 현탁제, 용매, 분산매질, 코팅제, 항박테리아 및 항진균제, 등장 성 약제, 및 흡수지연제 등의 모든 담체, 희석제, 보조제 또는 비히클을 포함한다.약제 활성 물질을 위한 그러한 매질 및 제제의 사용은 당 업계에 잘 알려져 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 제제가 활성 성분과 양립 불가능한 경우를 제외하고, 치료 조성물에서의 그 용도가 고려된다. 보충 활성 성분은 또한 적절한 치료 조합물로서 조성물에 혼입될 수 있다.
본원에서 사용된 "약학적 염"은 모 화합물이 그의 산 또는 염기 염을 제조함으로써 개질된 개시 화합물의 유도체를 의미한다. 약학적으로 허용 가능한 염은 예를들어 비 독성 무기 또는 유기산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 무독성 염 또는 4차 암모늄 염을 포함한다. 예를 들어, 그러한 통상적인 무독성 염은 염산, 브롬산, 황산, 설팜산, 인산, 질산 등과 같은 무기산; 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 톨루엔설폰산, 옥살산, 푸마르산, 말레산, 락트산 등과 같은 유기산으로부터 제조 된 염을 들 수 있다. 추가의 부가염은 트로메타민, 메글루민, 에포라민 등과 같은 암모늄염, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 아연 또는 마그네슘과 같은 금속염을 포함한다.
본 발명의 약학적 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 잔기를 함유하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산성 또는 염기성 형태를 물 또는 유기 용매 중 또는 이들의 혼합물 중의 화학양론적 양의 적절한 염기 또는 산과의 반응을 통해 제조할 수 있다. 일반적으로, 에테르, 에틸아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴과 같은 비 수성 매질이 바람직하다. 적합한 염 목록은 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418에 개시되어 있으며, 그 개시 내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
"투여" 또는 "투약"은 경구 투여, 국소 접촉, 정맥 내, 복강 내, 근육 내, 병변 내, 비강 내, 피하 또는 국소 투여를 포함하는 약제 또는 다른 제제를 전달, 도입 또는 수송하는 임의의 방식을 말한다. 이러한 장치는 능동적 또는 수동적 수송을 이용할 수 있으며, 느린-방출 또는 급속 방출 전달 장치 일 수 있다.
본원에 개시된 신규 결합체는 가교 링커를 사용한다. 몇 가지 적합한 링커 및 그의 합성의 예들이 도 1 내지 34에 도시된다.
가교 링커
본 발명의 세포 결합 분자에 대한 약물의 결합체 제조뿐만 아니라 가교 링커를 생성하는 합성 경로가 도 1 내지 20에 도시되어 있다. 가교 링커는 두 개의 성분: a) 치환된 아크릴 기 또는 프로피올 기의 1개 또는 2개 이상의 티올 반응성 그룹으로서, 한 쌍의 티올과 반응하여 공유 결합된 티오에테르 결합을 형성하는 치환기, 및 b) 여기에 제한되지 않지만, 디설피드, 말레이미드, 할로아세틸, 아데히드, 케톤, 아지드, 아민, 알콕시아민, 히드라지드, 에텐술포닐, 아실 할레이드(산 할라이드), 아크릴(아크릴로일) 및/또는 산 무수물 그룹과 같은 그룹으로서, 약물과 반응할 수 있는 그룹를 가진다. 치환 아크릴 기 또는 프로피올 기를 아민, 알코올 또는 티올 기와 가교 치환함으로써 아미드, 에스테르 또는 티오에스테르 결합을 형성한다. 이러한 가교 링커의 합성 및 항체 결합체에 대한 적용은 도 1 내지 20에 예시되어 있다.
바람직하게는, 가교 링커는 하기 화학식 (I) 및 (II)의 화합물이다:
Figure pat00051
여기서,
"
Figure pat00052
" 및 "
Figure pat00053
"은 단일 결합을 나타내고，"
Figure pat00054
"는 단일 또는 이중 결합에 링크될 때 거울상 이성질체 또는 입체 이성질체 결합 일 수 있다.
Figure pat00055
는 단일 결합, 이중 결합 또는 삼중 결합 중 어느 하나를 나타낸다.
Figure pat00056
가 단일 결합을 나타낼 때，Lv1과 Lv2 모두는 H가 아니고;
Figure pat00057
가 이중 결합을 나타낼 때, Lv1 또는 Lv2는 H일 수 있지만, 이들은 동시에 H가 아니고,；
Figure pat00058
가 삼 중 결합을 나타낼 때, Lv1은 부재하고, Lv2는 선택적으로 H일 수 있다.
Lv1 및 Lv2은 티올에 의해 치환될 수 있는 동일하거나 상이한 이탈 기(leaving group)를 나타낸다. 그러한 이탈 기는 할라이드(예컨대, 플루오라이드, 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드), 메탄술포닐(메실), 톨루엔술포닐(토실), 트리플루오로메틸-술포닐(트리플레이트), 트리플루오로메틸술포네이트, 니트로페녹실, N-숙신이미딜옥실(NHS), 페녹실, 디니트로페녹실, 펜타풀루오로페녹실, 테트라플루오로페녹실, 트리플루오로페녹실, 디플루오로페녹실, 모노플루오로페녹실, 펜타클로로페녹실, 1H-이미다졸-1-일, 클로로페녹실, 디클로로페녹실, 트리클로로페녹실, 테트라클로로페녹실, N-(벤조트리아졸-일)옥실, 2-에틸-5-페닐이속사졸리엄-3'-술포닐, 페닐옥사디아졸-술포닐(-설폰-ODA), 2-에틸-5-페닐이속사졸리엄-일, 페닐옥사디아졸-일(ODA), 옥사디아졸-일, 또는 미츠노부 반응을 위한 축합제로 생성된 중간생성물 분자이다.
Y는 약물 또는 세포 독성제와 반응하여 이황화물, 에테르, 에스테르, 티오에테르, 티오에스테르, 펩티드, 히드라존, 카바메이트, 카보네이트, 아민(2차, 3차 또는 4차), 이민, 시클로헤테로알킬, 헤테로방향족, 알킬옥심 또는 아미드 결합을 형성할 수 있는 기능 기이고; 바람직하게는 Y는 하기 구조들로부터 선택된다:
Figure pat00059
이황화;
Figure pat00060
할로아세틸;
Figure pat00061
아실 할라이드(산할로겐화물);
Figure pat00062
N-히드록시숙신이미드 에스테르;
Figure pat00063
말레이미드;
Figure pat00064
단일 치환된 말레이미드;
Figure pat00065
이 치환된 말레이미드;
Figure pat00066
단일 치환된 숙신이미드;
Figure pat00067
이 치환된 숙신이미드;-CHO 알데히드;
Figure pat00068
에텐술포닐;
Figure pat00069
아크릴(아크릴로일);
Figure pat00070
2-(토실옥시)아세틸;
Figure pat00071
2-(메실옥시)아세틸;
Figure pat00072
2-(니트로페녹시)아세틸;
Figure pat00073
2-(디니트로페녹시)아세틸;
Figure pat00074
2-(플루오로페녹시)-아세틸;
Figure pat00075
2-(디플루오로페녹시)-아세틸;
Figure pat00076
2-(((트리플루오로메틸)-술포닐)옥시)아세틸;
Figure pat00077
케톤 또는 알데히드,
Figure pat00078
2-(펜타플루오로페녹시)아세틸;
Figure pat00079
, 메틸 술폰페닐옥사디아졸(ODA);
Figure pat00080
산 무수물,
Figure pat00081
알킬옥시 아미노;
Figure pat00082
아지도,
Figure pat00083
알키닐 또는
Figure pat00084
히드라지드，
여기서, X1'는 F, Cl, Br, I 또는 Lv3이고; X2'는 O, NH, N(R1) 또는 CH2이고; R3및 R5는 독립적으로 H, R1, 방향족, 헤테로 방향족 또는 방향족 그룹이며，여기서 하나 또는 수 개의 H 원자는 -R1, -할로겐, -OR1, -SR1, -NR1R2, -NO2, -S(O)R1, -S(O)2R1 또는 -COOR1에 의해 독립적으로 치환되고; Lv3은 니트로페놀；N-히드록시숙신이미드(NHS); 페놀; 디니트로페놀; 펜타플루오로페놀; 테트라플루오로페놀; 디플루오로페놀; 모노플루오로페놀; 펜타클로로페놀; 트리플레이트; 이미다졸; 디클로로페놀; 테트라클로로페놀; 1-히드록시벤조트리아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐이속사졸리움-3'-술포네이트, 그 자체로 형성된 무수물 또는 다른 무수물과 함께 형성된 무수물, 예컨대 아세틸 무수물, 포르밀 무수물; 또는 펩티드 커플링 반응 또는 미츠노부(Mitsunobu) 반응을 위한 축합제로 생성된 중간생성물 분자로부터 선택된 이탈 기이다.
R1은 부재하거나 또는 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8；또는 에스테르，에테르, 또는 아미드의 C2-C8(2-8 탄소 원자);1-8아미노산을 함유하는 펩티드, 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는(OCH2CH(CH3))p[여기서, p는 1 내지 약 1000의 정수임]의 폴리에틸렌옥시 유닛 또는 상기 그룹의 조합으로부터 선택될 수 있다.
추가로, R1은 C, N, O, S, Si 및 P로부터 선택된 원자의 사슬, 바람직하게는 0 내지 500개의 원자를 가지며, Y 및 L1에 공유 결합된다. R1을 형성하는데 사용되는 원자는 알킬렌, 알케닐렌 및 알키닐렌, 에테르, 폴리옥시알킬렌, 에스테르, 아민, 이민, 폴리아민, 히드라진, 히드라존, 아미드, 우레아, 세미카르바지드, 카바지드, 알콕시아민, 알콕시아민, 우레탄,아미노산, 펩티드, 아실옥실아민, 히드록삼산 또는 이들의 조합을 형성하는 것과 같이, 모든 화학적으로 관련된 방법으로 결합될 수 있다.
T는 CH2, NH, NHNH, N(R3), N(R3)N(R3'), O, S, 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 바람직하게는 아스파트산, 글루탐산, 아르기닌, 히스티딘, 라이신, 세린, 트레오닌, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 셀레노시스테인, 티로신, 페닐알라닌, 글리신, 프롤린, 트립토판, 알라닌으로부터 선택되는아미노산을 1 내지 4 유닛 함유하는 펩티드; 또는 다음 구조들 중 하나이다.
Figure pat00085
여기서
Figure pat00086
는 결합(linkage) 사이트이다.
X1, X2, X3, X4, X5, X6, X1', X2' 및 X3'는 NH; NHNH; N(R3); N(R3)N(R3'); O; S; 알킬의 C1-C6；헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C6; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8； 또는 1 내지 8개의아미노산으로부터 독립적으로 선택되고；R3 및 R3'는 독립적으로 H； 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8；아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 또는 에스테르, 에테르 또는 아미드의 1 내지 8개의 탄소 원자; 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는(OCH2CH(CH3))p[여기서, p는 1 내지 약 1000의 정수임]의 폴리에틸렌옥시 유닛 또는 그 조합이다.
m, m1, m2, m3, m4 및 m5는 1 내지 10의 정수, 바람직하게는 1 내지 4의 정수이다.
L1 및 L2는 동일하거나 상이하며, O, NH, S, NHNH, N(R3), N(R3)N(R3'), 화학식 (OCH2CH2)pOR3 또는 (OCH2CH(CH3))pOR3, 또는 NH(CH2CH2O)pR3, 또는 NH(CH2CH(CH3)O)pR3, 또는 N[(CH2CH2O)pR3][(CH2CH2O)p'R3'], 또는 (OCH2CH2)pC(=O)X1R3, 또는CH2CH2(OCH2CH2)pC(=O)X1R3 [여기서, p 및 p'는 독립적으로 1 내지 약 1000로부터 선택된 정수임]의 폴리에틸렌옥시 유닛, 또는 이들의 조합; 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8로부터 독립적으로 선택되고; R3 및 R3'는 독립적으로 H； 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8；아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 또는 에스테르, 에테르 또는 아미드의 1 내지 8개의 탄소 원자; 또는 1 내지 8개의아미노산; 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p [여기서, p는 1 내지 약 1000의 정수임]의 폴리에틸렌옥시 유닛 또는 그 조합이다.
L1 또는 L2는 자가-임몰러티브(self-immolative) 또는 비-자가-임몰러티브 성분, 펩티드 유닛, 히드라존 결합, 디설피드, 에스테르, 옥심, 아미드, 또는 티오에테르 결합을 포함할 수 있다. 상기 자가-임몰러티브 유닛은 여기에 제한되지 않지만, 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체, 헤테로사이클릭 PAB 유사체, 베타-글루쿠로니드 및 오르토 또는 파라-아미노벤질아세탈의 그룹과 같이 파라-아미노벤질카바모일(PAB) 그룹에 전자적으로 유사한 방향족 화합물을 포함한다.
바람직하게는, 상기 자가-임몰러티브 유닛은 다음 구조들 중 하나를 가진다:
Figure pat00087
여기서, (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출형(releasable) 링커 유닛, 세포 독성제 및/또는 결합 분자(CBA)의 부착 지점이고; X1, Y1, Z2, 및 Z3은 독립적으로 NH, O, 또는 S이고; Z1은 H, NHR1, OR1, SR1, COX1R1이며, X1 및 R1은 상기 정의된 바와 같고; v는 0 또는 1이고; U1은 H, OH, C1~C6 알킬, (OCH2CH2)n, F, Cl, Br, I, OR5, SR5, NR5R5', N=NR5, N=R5,NR5R5', NO2,SOR5R5', SO2R5, SO3R5, OSO3R5, PR5R5', POR5R5', PO2R5R5', OPO(OR5)(OR5'), 또는 OCH2PO(OR5(OR5')이고; R5 및 R5'는 H, 알킬의 C1~C8; 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬 또는아미노카인의 C2~C8；아릴, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로아랄킬, 알킬카보닐 또는 글리코시드의 C3-C8;또는 약학적 양이온 염으로부터 독립적으로 선택된다.
비-자가 임몰러티브 링커 성분은 다음의 구조들 중 하나이다:
Figure pat00088
Figure pat00089
여기서, (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출형(releasable) 링커, 세포 독성제 및/또는 결합 분자의 부착 지점; X1, Y1, U1, R5, R5'는 상기 정의된 바와 같고; r은 0 내지 100이고; m 및 n은 독립적으로 0 내지 6이다.
더욱 바람직하게는 L1 또는 L2는 하기 도시된 하나 이상의 링커 성분으로 이루어질 수 있다:
Figure pat00090
6-말레이미도카프로일(MC),
Figure pat00091
말레이미도 프로파노일(MP),
Figure pat00092
발린-시트룰린(val-cit),
Figure pat00093
알라닌-페닐알라닌(ala-phe),
Figure pat00094
라이신-페닐알라닌(lys-phe),
*
Figure pat00095
p-아미노벤질옥시카보닐(PAB),
Figure pat00096
4-티오-펜타노에이트(SPP),
Figure pat00097
4-티오-부티레이트(SPDB),
Figure pat00098
4-(N-말레이미도메틸)시클로-헥산-1-카르복실레이트(MCC),
Figure pat00099
말레이미도에틸(ME),
Figure pat00100
4-티오-2-히드록시술포닐-부티레이트(2-Sulfo-SPDB),
Figure pat00101
아릴-티올(PySS),
Figure pat00102
(4-아세틸)아미노벤조에이트(SIAB),
Figure pat00103
, 옥실벤질티오,
Figure pat00104
아미노벤질티오,
Figure pat00105
디 옥실벤질티오,
Figure pat00106
디아미노벤질티오,
Figure pat00107
아미노-옥실벤질 티오,
Figure pat00108
알콕시 아미노(AOA),
Figure pat00109
에틸렌옥시(EO),
Figure pat00110
4-메틸-4-디티오-펜탄산(MPDP),
Figure pat00111
트리아졸,
Figure pat00112
디티오,
Figure pat00113
알킬술포닐,
Figure pat00114
알킬술폰아미드,
Figure pat00115
술폰-비스아마이드,
Figure pat00116
포스 폰디아미드,
Figure pat00117
알킬포스폰아미드,
Figure pat00118
포스핀산,
Figure pat00119
N-메틸포스폰아미드산,
Figure pat00120
N,N'-디메틸포스폰-아미드 산,
Figure pat00121
N,N'-디메틸포스폰디아미드,
Figure pat00122
히드라진,
Figure pat00123
아세티미드아미드;
Figure pat00124
옥심,
Figure pat00125
아세틸아세토히드라지드,
Figure pat00126
아미노에틸-아민,
Figure pat00127
아미노에틸-아미노에틸-아민, 및 1-20의 아미노산을 함유하는 L- 또는 D-, 천연 또는 비천연 펩티드.
보다 바람직하게는, L1 또는 L2는 방출형 링커 일 수 있다. 방출형 링커라는 용어는 pH-불안정, 산-불안정, 염기-불안정, 산화적으로 불안정, 대사적으로 불안정, 생화학적으로 불안정 또는 효소-불안정 결합과 같은 생리학적 조건하에서 파괴될 수 있는 적어도 하나의 결합을 포함하는 링커를 의미한다. 결합 파괴를 야기하는 그러한 생리 조건은 필수적으로 생물학적 또는 대사 과정을 포함하지 않으며, 대신에 표준 화학 반응, 예컨대 가수 분해 또는 치환 반응[예컨대, 세포질 pH보다 낮은 pH를 갖는 엔도좀], 및/또는 악성 세포 내의 글루타티온이 풍부한 밀리몰 범위와 같은 세포 내 티올과의 디설피드 결합 교환 반응을 포함할 수 있다.
방출 형 링커(L, L1 또는 L2)의 예로는 여기에 제한되지 않지만, 하기를 포함한다:
-(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -(Aa)r-(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)r(Aa)t-, -(CR5R6)m-(CR7=CR8)(CR9R10)n(Aa)t(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(Aa)t(NR11CO)(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(CO)(Aa)t-(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m-페닐-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-푸릴-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-옥사졸릴-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-티아졸릴-CO(Aa)t(CCR7R8)n-, -(CR5R6)t-티에닐-CO(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-이미다졸릴-CO-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-모르폴리노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t피페라지노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-N-메틸피페라진-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R)m-(Aa)t페닐-, -(CR5R6)m-(Aa)t푸릴-, -(CR5R6)m-옥사졸릴(Aa)t-,-(CR5R6)m-티아졸릴(Aa)t-, -(CR5R6)m-티에닐-(Aa)t-,-(CR5R6)m-이미다졸릴(Aa)t-,-(CR5R6)m-모르폴리노-(Aa)t-, -(CR5R6)m-피페라지노-(Aa)t-, -(CR5R6)m-N-메틸피페라진-(Aa)t-, -K(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -K(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -K(Aa)r-(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -K(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)r(Aa)t-, -K(CR5R6)m-(CR7=CR8)(CR9R10)n(Aa)t(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(Aa)t(NR11CO)(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(OCO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(CO)(Aa)t-(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K-(CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-페닐-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K-(CR5R6)m-푸릴-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)m-옥사졸릴-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R6)m-티아졸릴-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-티에닐-CO(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t이미다졸릴-CO-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t모르폴리노-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t피페라지노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-N-메틸피페라진CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R)m(Aa)t페닐, -K-(CR5R6)m-(Aa)t푸릴-, -K(CR5R6)m-옥사졸릴(Aa)t-, -K(CR5R6)m-티아졸릴(Aa)t-, -K(CR5R6)m-티에닐-(Aa)t-, -K(CR5R6)m-이미다졸릴(Aa)t-, -K(CR5R6)m-모르폴리노(Aa)t-, -K(CR5R6)m-피페라지노-(Aa)tG, -K(CR5R6)mN-메틸피페라지노(Aa)t-;
여기서, m, Aa, m, n, R3, R4, 및 R5는 제 1 항에 기재되어 있고; t 및 r은 독립적으로 0 내지 100이고; R6, R7, 및 R8는 H; 할라이드; 하나 이상의 할라이드에 의해 선택적으로 치환되는 알킬, 아릴, 알케닐, 알키닐, 에테르, 에스테르, 아민 또는 아미드의 C1~C8, CN, NR1R2, CF3, OR1, 아릴, 헤테로사이클, S(O)R1, SO2R1, -CO2H, -SO3H, -OR1, -CO2R1, -CONR1, -PO2R1R2, -PO3H 또는 P(O)R1R2R3로부터 독립적으로 선택되고; K는 NR1, -SS-, -C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)O-, -C=NH-O-, -C=N-NH-, -C(=O)NH-NH-, O, S, Se, B, Het(C3-C8을 갖는 헤테로시클릭 또는 헤테로 방향족 고리), 또는 1 내지 20의아미노산을 함유하는 펩티드이다.
게다가, L1, L2, X1, X2, X3, X1', X2', X3'는 독립적으로 부재할 수 있다.
화학식 (I) 또는 (II)에서, 치환된 아크릴 기 또는 프로피올 기는 티올, 바람직하게는 세포-결합제의 한 쌍의 티올과 반응할 수 있고; 한쌍의 티올은 디티오트레이톨(DTT), 디티오에리트리톨(DTE), L-글루타티온(GSH), 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), 2-메르캅토에틸아민(β-MEA) 및/또는 베타 메르캅토에탄올(β-ME, 2-ME)와 같은 환원제에 의해 세포 결합제의 사슬 간 디설피드 결합으로부터 환원된 황 원자들의 바람직한 쌍이다.
약물 또는 세포 독성제의 결합을 가능하게 하는 작용기 Y의 예는 디설피드, 티오에테르, 티오에스테르, 펩티드, 히드라존, 에스테르, 카바메이트, 카보네이트, 알콕시 또는 아미드 결합을 통해 결합할 수 있는 기를 포함한다. 이러한 작용기는 티올, 이황화물,아미노, 카르복실, 알데히드, 케톤, 말레이미도, 할로아세틸, 히드라진, 알콕시아미노 및/또는 히드록시를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.
약물/세포 독성제의 아민 말단과 반응할 수 있는 작용기 Y의 예는 N 히드록시 숙신이미드 에스테르, p-니트로페닐 에스테르, 디니트로페닐 에스테르, 펜타플루오로페닐 에스테르, 카르복실산 클로라이드 또는 무수 카르복실산일 수 있지만, 이에 한정되지 않는다; 티올의 말단은 피리딜디설피드, 니트로피리딜디설피드, 말레이미드, 할로아세테이트, 메틸설폰페닐 옥사디아졸(ODA), 카르복실산 클로라이드 및 카르복실산 무수물일 수 있지만, 이에 한정되는 않고; 케톤 또는 알데히드의 말단은 아민, 알콕시아민, 히드라진, 아실옥시아민 또는 히드라지드일 수 있으나, 이에 한정되는 않고; 아지드의 말단은 알킨일 수 있지만, 이에 한정되지 않는다.
바람직한 실시 예에서, R1, L1, 또는 L2는 독립적으로 1-6 탄소 원자를 갖는 선형 알킬, 또는 화학식 (OCH2CH2)p[여기서, p=1-1000]의 폴리에틸렌 옥시 유닛, 또는 1 ~ 4 유닛의아미노산(L 또는 D)을 함유하는 펩티드, 또는 이들의 조합일 수 있다.
바람직한 실시 양태에서, Lv1 및 Lv2은 동일하거나 독립적으로 OH; F; Cl; Br; I; 니트로페놀; N-히드록시숙신이미드(NHS); 페놀; 디니트로페놀; 펜타플루오로페놀; 테트라플루오로페놀; 디플루오로페놀; 모노플루오로페놀; 펜타클로로페놀; 트리플레이트; 이미다졸; 디클로로페놀; 테트라클로로페놀; 1-히드록시벤조트리아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐이소옥사졸륨-3'-술포네이트, 그 자체로 형성된 무수물 또는 다른 무수물, 예를 들면, 아세틸 무수물, 포르밀 무수물; 또는 펩티드 커플링 반응 또는 미츠노부(Mitsunobu) 반응을 위한 축합제로 생성된 중간생성 분자[예컨대, 축합제는: EDC(N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드), DCC(디시클로헥실카르보디이미드), N,N'-디이소프로필카르보디이미드(DIC)，N-시클로헥실-N'-(2-모르폴리노-에틸)카르보디이미드 메토-p-톨루엔술포네이트(CMC, 또는 CME-CDI)，1,1'-카르보닐디이미다졸(CDI), TBTU(O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트), N,N,N',N'-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)유로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리스(디메틸아미노)포스 포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP), 디에틸 시아노포스포네이트(DEPC), 클로로-N,N,N',N'-테트라메틸포름아미디늄헥사플루오로포스페이트, 1-[비스(디메틸아미노) 메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트(HATU), 1-[(디메틸아미노)(모르폴리노)메틸렌]-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-1-이움 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트(HDMA), 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸이디늄 헥사플루오로포스페이트(CIP), 클로로트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyCloP), 플루오로-N,N,N',N'-비스(테트라메틸렌)포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트(BTFFH), N,N,N',N'-테트라메틸-S-(1-옥시도-2-피리딜)티유로늄 헥사플루오로포스페이트, O-(2-옥소-1(2H)피리딜)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라 플루오로보레이트(TPTU), S-(1-옥소-2-피리딜)-N,N,N',N'-테트라메틸티유로늄 테트라플루오로보레이트, O-[(에톡시카르보닐)시아노메틸렌아미노]-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트(HOTU), (1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸이데나미노옥시)디메틸아미노-모르폴리노-카르베늄 헥사플루오로포스페이트(COMU), O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-비스(테트라메틸렌)유로늄 헥사플루오로포스페이트(HBPyU), N-벤질-N'-시클로헥실-카르보디이미드(중합체-결합을 갖거나 또는 갖지 않음), 디피롤리디노(N-숙신이미딜-옥시)카르베늄 헥사플루오로포스페이트(HSPyU), 클로로 디피롤리디노카르베늄 헥사플루오로포스페이트(PyClU), 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸이디늄 테트라플루오로보레이트(CIB), (벤조트리아졸-1-일옥시)디피페리디노-카르베늄 헥사플루오로포스페이트(HBPipU), O-(6-클로로벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트(TCTU), 브로모트리스(디메틸아미노)-포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BroP), 프로필포스포닉 무수물(PPACA, T3P®), 2-모르폴리노에틸 이소시아나이드(MEI), N,N,N',N'-테트라메틸-O-(N-숙신이미딜)유로늄 헥사플루오로포스페이트(HSTU), 2-브로모-1-에틸-피리디늄 테트라플루오로보레이트(BEP), O-[(에톡시카르보닐)시아노-메틸렌아미노]-N,N,N',N'-테트라-메틸유로늄 테트라플루오로보레이트(TOTU), 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄클로라이드((MMTM, DMTMM),N,N,N',N'-테트라메틸-O-(N-숙신이미딜)유로늄 테트라플루오르보레이트(TSTU), O-(3,4-디히드로-4-옥소-1,2,3-벤조트리아진-3-일)-N,N,N',N'-테크라메틸유로늄 테트라플루오로-보레이트(TDBTU),1,1'-(아조디카르보닐)-디피페리 딘(ADD), 디-(4-클로로벤질)아조디카복실레이트(DCAD), 디-tert-부틸 아조디카복실레이트(DBAD), 디이소프로필 아조디카복실레이트(DIAD) 또는 디에틸 아조디카복실레이트(DEAD)임]이다. 또한, Lv1 및 Lv2는 산 자체에 의해 형성되거나 다른 C1~C8 산 무수물과 함께 형성되는 무수물일 수 있다.
바람직한 실시 양태에서, 화학식 (I) 또는 (II)는 하기 구조를 갖는다:
Figure pat00128
Figure pat00129
Figure pat00130
가교 링커의 합성의 상세한 실시 예가 도 1 내지 도 33에 도시되어있다. 일반적으로 프로피올, 또는 치환된 아크릴(아크릴로일) 기, 또는 2 치환된 프로판오일 기의 가교 치환체(substituent)는 목적하는 결합체의 약물에 반응할 수 있는 작용기를 함유하는 링커 성분으로 축합될 수 있다.
세포 결합제-약물 결합체
본 발명의 결합체는 하기 화학식 (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII) 또는 (IX)로 표시될 수 있다：
Figure pat00131
Figure pat00132
Figure pat00133
Figure pat00134
여기서,
n은 1 내지 20이고; T는 이전의 화학식 (I)과 동일하게 기재된다.
Cb, Cb', Cb'', Cb'''는 동일 또는 상이한 세포-결합제, 또는 면역치료 단백질, 바람직하게는 항체 또는 항체 단편을 나타낸다.
화학식 (III), (VII), (VIII) 및 (IX)의 오른쪽 괄호(사각형 괄호)내에는 세포-결합제/분자의 티올 쌍에 결합된 링커-약물 성분이 있다. 티올은 디티오트레이 톨(DTT), 디티오에리트리톨(DTE), 디티올부틸아민(DTBA), L-글루타티온(GSH), 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), 2-메르캅토에틸아민(β-MEA) 및/또는 베타메르캅토에탄올(β-ME, 2-ME)로부터 선택된 환원제에 의해 세포-결합제의 사슬 간 디설피드 결합으로부터 환원된 바람직한 쌍들의 황 원자이다.
Drug, Drug',과 Drug"는 동일 또는 상이한 세포 독성제 또는 치료 약물, 또는 면역치료용 단백질, 세포-표면 수용체 결합 리간드 또는 세포-결합제의 결합 또는 안정화를 향상시키는 기능 분자를 나타내고, 이는 알칸의 C1-C8; 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌, 방향족, 에테르, 폴리옥시알킬렌, 에스테르, 아민, 이민, 폴리아민, 히드라진, 히드라존, 아미드, 우레아, 세미카르바지드, 카바지드, 알콕시아민, 우레탄,아미노산, 펩티드, 아실옥시아민, 히드록삼산, 디설피드, 티오에테르, 티오에스테르, 티오에테르, 카르바메이트, 카르보네이트, 헤테로사이클릭 고리, 헤테로알킬, 헤테로방향족 또는 알콕심의 C2-C8; 또는 이들의 조합을 함유하는 R1을 통한 본 특허의 가교 링커를 통하여 상기 세포-결합제에 링크된다. "Drug'', Drug' 및 Drug"는 또한 자가면역치료 화합물, 화학치료 화합물, 항체 또는 항체 단편, siRNA 또는 DNA 분자, 또는 세포 표면 결합 리간드일 수 있다.
"
Figure pat00135
" 단일 결합 또는 이중 결합을 나타낸다.
사각 괄호 안에는 세포 결합 분자 상의 한 쌍의 황 원자를 통해 세포 결합 분자에 결합된 제제가 있다.
m1, m1', m1'', m2, m2', m2'', m3, m4, m5, m4', m5', m4'', m5'', m4''', m5''', m4''''및 m5''''는 독립적으로 1 내지 10의 정수이고, 바람직하게는 1 내지 4이다.
X1, X1', X1'', X1''' 및 X2''''는 NH; NHNH; N(R3); N(R3)N(R3'); O; S; 알킬의 C1-C6; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C6; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 또는 1 내지 8개의아미노산으로부터 독립적으로 선택되고; R3 및 R3'은 독립적으로 H; 알킬의 C1-C8; 헤테로-알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 또는 에스테르, 에테르 또는 아미드의 1 내지 8개의 탄소 원자; 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는(OCH2CH(CH3))p의 폴리에틸렌옥시 유닛[여기서, p는 0 내지 약 1000의 정수임], 또는 이들의 조합이다. 또한, X1, X1', X1'', X1''' 및X2''''는 독립적으로 부재일 수 있다.
R1, R2, R1', 및 R1''는 동일하거나 상이하며, 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 또는 에스테르, 에테르 또는 아미드의 2-8 탄소 원자; 또는 화학식 (OCH2CH2)p또는(OCH2CH(CH3))p의 폴리에틸렌옥시 유닛[여기서, p는 0 내지 약 1000의 정수임], 또는 이들의 조합으로부터 선택된다.
L1, L1', L1'', L1''', L2, L2', L2'' 및 L2'''은 화학식 (I) 및 (II)의 L1 및 L2와 동일하게 정의되며, 이들은 동일하거나 상이할 수 있다.
L1, L1', L1'', L1''', L2, L2', L2'' 및 L2'''은 하나 이상의 링커 성분들로 구성될 수 있다. 예시적인 링커 성분들은 6-말레이미도카프로일("MC"), 말레이미도프로판오일("MP"), 발린-시트룰린("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌("ala-phe" 또는 "af"), p-아미노벤질옥시카보닐("PAB"), 4-티펜타노에이트(SPAB), 4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1 카르복실레이트(MCC), (4-아세틸)아미노벤조에이트(SIAB), 4-티오-부티레이트(SPDB), 4-티오-2-히드록시술포닐-부티레이트(2-술포-SPDB), 에틸렌옥시-CH2CH2O-로부터 선택된 하나 이상의 링커 성분들을 하나 이상의 반복 유닛("EO" 또는 "PEO")으로 포함할 수 있다. 추가적인 링커 성분은 당 업계에 공지되어 있으며, 일부는 본원에 기재되어있다.
링커 함유 성분의 예시적 구조는 다음과 같다:
Figure pat00136
; (MC,6-말레이미도카프로일 함유)
Figure pat00137
(MP, 말레이미도프로판오일 함유)
Figure pat00138
(PAB, p-아미노벤질옥시카르보닐 함유)
Figure pat00139
(ME, 말레이미도에틸 함유).
Figure pat00140
(발린-시트룰린 함유)
Figure pat00141
(MCC, 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1 카르복실레이트 함유)
Figure pat00142
((4-아세틸)아미노벤조에이트 함유)
Figure pat00143
(4-티오-2-히드록시술포닐-부티레이트, 2-술포-SPDB),(PAB),
Figure pat00144
4-티오-펜타노에이트(SPP),
Figure pat00145
4-티오-부티레이트(SPDB),
Figure pat00146
4-(N-말레이미도메틸)시클로-헥산-1-카르복실레이트(MCC),
Figure pat00147
말레이미도에틸(ME),
Figure pat00148
4-티오-2-히드록시 술포닐-부티레이트(2-술포-SPDB),
Figure pat00149
아릴-티올(PySS),
Figure pat00150
(4-아세틸)아미노-벤조에이트(SIAB),
Figure pat00151
, 옥실벤질티오,
Figure pat00152
아미노벤질티오,
Figure pat00153
디옥시벤질티오,
Figure pat00154
디아미노벤질티오,
Figure pat00155
아미노-옥시벤질티오,
Figure pat00156
알콕시아미노(AOA),
Figure pat00157
에틸렌옥시(EO),
Figure pat00158
디티오,
Figure pat00159
4-메틸-4-디티오펜탄산(MPDP),
Figure pat00160
트리아졸,
Figure pat00161
알킬술포닐,
Figure pat00162
알킬설폰아미드,
Figure pat00163
설폰-비스아미드,
Figure pat00164
포스폰디아미드,
Figure pat00165
알킬포스폰아미드,
Figure pat00166
포스핀산,
Figure pat00167
N-메틸포스폰아미드산,
Figure pat00168
N,N'-디메틸포스폰아미드산,
Figure pat00169
N,N'-디메틸포스폰디아미드,
Figure pat00170
히드라진,
Figure pat00171
아세티미드아미드,
Figure pat00172
옥심,
Figure pat00173
아세틸아세토히드라지드,
Figure pat00174
아미노에틸-아민,
Figure pat00175
아미노에틸-아미노에틸-아민.
아래에서보다 상세히 설명하는 바와 같이, Drug, Drug' 및 Drug"은 여기에 제한되지 않지만, 튜블린신, 칼리케아미신(calicheamicin), 아우리스타틴, 메이탄시 노이드, CC-1065 유사체, 모르폴리노 독소루비신, 탁산, 크립토피신, 아마톡신(아마니틴), 에포틸론, 젤다나마이신, 듀오카르마이신, 다우노마이신, 메토트렉세이트, 빈데신, 빈크리스틴 및 벤조디아제핀 다이머(예: 피롤로벤조디아제핀(PBD), 토마이 마이신, 인돌리노벤조디아제핀, 이미다조벤조티아디아제핀 또는 옥사졸리디노벤조디아제핀)를 포함하는 많은 소 분자 약물의 임의의 것일 수 있다.
일반적으로, 화학식 (III), (IV), (V), (VI), (VIII), (VIII) 및 (IX)는 화학식 (I) 및 (II)로부터 생성되며, 여기서 "Drug" 및 "Cb"는 화학식 (I) 및 (II)에 각각 또는 동시에 반응한다. 2개 이상의 티올이 부가 반응을 통해 치환된 아크릴 기 또는 프로피올 기와 반응하여, 화학식 (III), (IV), (V) 또는 (VI)를 형성할 때, 190-390 nm 범위의 파장, 바람직하게는 340-380 nm, 보다 바람직하게는 365 nm의 UV 광이 반응을 돕는데 사용되는 것이 바람직하다. 따라서, 광화학 반응은 석영 또는 파이렉스(Pyrex) 플라스크, 또는 온도 조절 환경에서 UV 램프를 포함하는 침지 웰 반응성 기에서 수행되며, 연속적인 흐름 석영 튜브 또는 자외선 조사가 최대화되는 파이렉스 튜브에서 수행되는 것이 바람직하며, 동시에 효율적인 냉각을 가능하게 하여 세포 결합 분자의 열 장애를 감소시킨다. 화학식 (VII) 또는 화학식 (IX)의 형성에서, 2개 이상의 티올은 화학식 (I) 및 (II)의 2 이상의 치환된 아크릴 기 또는 프로피올 기와 반응하고, 자외선은 선택적으로 필요하지 않다.
결합체를 합성하기 위해, 약물 또는 세포 독성 분자는 화학 용매 또는 수성 매질에서 먼저 화학식 (I) 또는 (II)의 링커와 반응하여, 화학식 (XVII) 또는 (XVIII)를 형성한다. 이어서, 화학식 (XVII) 또는 (XVIII)는 임의로 분리될(isolated) 수 있거나, 세포 결합 분자의 디설피드 결합의 환원을 통해 생성된 자유 티올 쌍과 25 내지 38℃, pH 5 내지 9의 수성 매질[이 수성 매질에는 DMA, DMF, 에탄올, 메탄올, 아세톤, 아세토니트릴, THF, 이소프로판올, 디옥산, 프로필렌 글리콜 또는 에틸렌 디올과 같은 0 내지 30 %의 물 혼합 가능 유기 용매가 첨가되거나 첨가되지 않을 수 있다]에서 반응하여, 화학식 (III), (IV), (V) 또는 (VI)[여기서 바람직하게는 365 nm의 자외선 빔 광선의 도움이 필요함]을 형성하거나, 또는 화학식 (VII), (VIII) 또는 (IX)[여기서, 자외선 광은 선택적으로 필요하지 않다]를 형성할 수 있다.
대안적으로, 화학식 (Ⅰ), (Ⅳ), (Ⅴ), (Ⅵ), (Ⅶ), (Ⅷ) 및 (Ⅸ)의 결합체는 0 내지 38℃, pH 5 내지 9의 수성 매질[이 수성 매질에는 0 내지 30 %의 물 혼합 가능 유기 용매가 첨가되거나 첨가되지 않을 수 있음]에서 세포 결합제 상의 한 쌍의 티올에 대한 화학식 (I) 또는 (II)의 링커들의 제1 반응을 통해 얻어질 수 있는데, 365 nm의 UV 빔 광선의 도움하에서 화학식 (X), (XI), (XII) 또는 (XIII)의 개질된 세포 결합 분자를 형성할 수 있고, 선택적으로 UV 광의 도움 없이 화학식 (XIV), (XV) 또는 (XVI)의 개질된 세포 결합 분자를 형성할 수 있다. 티올의 쌍은 pH 4~9 수성 매질[이 수성 매질에는 0~30%의 물 혼합 가능 유기 용매가 첨가되거나 첨가되지 않을 수 있음]에서, 디티오트레이톨(DTT), 디티오에리트리톨(DTE), L-글루타티온(GSH), 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), 2-메르캅토에틸아민(β-MEA) 및/또는 베타 메르캅토에탄올(β-ME, 2-ME)로부터 선택된 환원제에 의해 세포 결합제의 사슬 간 디설피드 결합으로부터 환원된 디설피드 결합 쌍들이다. 화학식 (X), (XI), (XII), (XIII), (XIV), (XV) 또는 (XVI) 상의 반응성 기 Y는 디설피드, 말레이미도, 할로아세틸, 아지드, 1-인, 케톤, 알데히드, 알콕시아미노, 트리플레이트,카르보닐이미다졸, 토실레이트, 메실레이트, 2-에틸-5-펜닐이속사졸륨-3'-술포네이트, 또는 니트로페놀의 카르복실산 에스테르, N-히드록시숙신이미드(NHS), 페놀; 디니트로페놀, 펜타플로오로페놀, 테트라플루오로페놀, 디플루오로페놀, 모노플루오로페놀, 펜타클로로페놀, 디클로로페놀, 테트라클로로페놀, 1-히드록시벤조트리아졸, 무수화물, 또는 히드라지드 그룹, 도는 다른 산 에스테르 유도체를 함유할 수 있고, 상기 반응성 기 Y는 15 내지 38℃, pH 4 내지 9.5의 수성 매질[이 수성 매질에는 0 내지 30 %의 물 혼합 가능 유기 용매가 첨가되거나 첨가되지 않을 수 있음]에서 약물/세포 독성제, Drug, Drug' 또는 Drug''와 동시에 또는 순차적으로 반응하여, 정제화 후에 화학식 (III), (IV), (V), (Ⅵ), (VII), (VIII) 및 (IX)를 수득할 수 있다. 약물/세포 독성제의 반응성 기는 개질된 세포-결합 분자와 상이한 방식으로 반응한다. 예를 들어, 디설피드 결합을 통해 연결된 세포-결합제-약물 결합체의 합성은 개질된 세포-결합제의 디설피드 결합과 유리(free) 티올 기를 함유하는 약물 간의 디설피드 교환에 의해 달성된다. 티오 에테르를 통해 연결된 세포-결합제-약물 결합체의 합성은 말레이미도 또는 할로아세틸 또는 에틸술포닐 개질된 세포-결합제와 유리 티올기를 함유하는 약물 간의 반응에 의해 달성된다. 산 불안정 히드라존을 갖는 결합체의 합성은 당 업계에 공지된 방법에 의해카르보닐기와 링커의 히드라지드 부분(moiety)의 반응에 의해 달성될 수 있다(참조, P. Hamann et al., Cancer Res. 53, 3336-34, 1993; B. Laguzza et al., J. Med. Chem., 32; 548-55, 1959; P. Trail et al., Cancer Res., 57; 100-5, 1997). 트리아졸 결합을 갖는 결합체의 합성은 클릭 화학을 통해 약물의 1-yne 기와 링커 내의 아지도 부분의 반응에 의해 달성될 수 있다(Huisgen cycloaddition)(Lutz, J-F. et al, 2008, Adv. Drug Del. Rev. 60, 958-70; Sletten, E. M. et al 2011, AccChem. Research 44, 666-76). 옥심을 통해 연결된 세포-결합제-약물 결합체의 합성은 케톤 또는 알데히드를 함유하는 개질된 세포-결합제와 옥시아민기를 함유하는 약물의 반응에 의해 달성된다. 티올-함유 약물은 pH 5.5 내지 9.0의 수성 완충액에서 말레이미도, 또는 할로아세틸, 또는 에틸술포닐 치환체를 갖는 화학식 (X), (XI), (XII), (XIII), (XIV), (XV) 또는 (XVI)의 개질된 세포 결합 분자 링커와 반응하여, 티오에테르 결합(linkage)을 통해 세포 결합 분자-약물 결합체를 제공한다. 티올-함유 약물은 피리딜디티오 부분을 갖는 화학식 (X), (XI), (XII), (XIII), (XIV), (XV) 또는 (XVI)의 개질된 링커와 디설피드 교환을 수행하여, 디설피드 결합 링키지를 갖는 결합체를 제공한다. 하이드록실 기 또는 티올 기를 갖는 약물은 약한 염기, 예컨대 pH 8.0 ~ 9.5에서 할로겐, 특히 카르복실레이트의 알파 할라이드를 갖는 화학식 (X), (XI), (XII), (XIII), (XIV), (XV) 또는 (XVI)의 개질된 가교 링커와 반응하여, 에테르 또는 티올 에테르 링크를 갖는 개질된 약물을 제공한다. 히드록실 기 함유 약물은 EDC 또는 DCC와 같은 탈수제의 존재하에서, 카르복실기를 갖는 화학식 (I) 또는 (II)의 가교 링커와 축합되어, 에스테르 결합을 형성할 수 있고, 그 다음 약물 개질된 가교 링커는 세포-결합 분자와의 결합을 겪는다.아미노기 함유 약물은 화학식 (X), (XI), (XII), (XIII), (XIV), (XV) 또는 (XVI)의 세포 결합 분자-링커 상에서 NHS, 이미다졸, 니트로페놀의 카르복실 에스테르; N-히드록시숙신이미드(NHS); 페놀; 디니트로페놀; 펜타플루오로페놀; 테트라플루오로페놀; 디플루오로페놀; 모노 플루오로페놀; 펜타클로로페놀; 트리플레이트; 이미다졸; 디클로로페놀; 테트라클로로페놀; 1-히드록시벤조트리아졸; 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐이속사졸리움-3'-술포네이트와 축합되어, 아미드 결합 링키지를 통해 결합체를 제공한다.
결합체는 세파덱스(Sephadex) G25 또는 세파크릴(Sephacryl) S300 컬럼에서의 겔 여과, 흡착 크로마토그래피, 및 이온 교환 또는 투석과 같은 표준 생화학적 수단에 의해 정제될 수 있다. 일부 경우, 작은 분자 약물과 결합된 세포-결합제(예: 엽산, 멜라닌 세포 자극 호르몬, EGF 등)와 같은 작은 분자는 크로마토그래피, 예컨대 HPLC, 중압 칼럼 크로마토그래피 또는 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다.
바람직한 실시 예에서, 화학식 (III), (IV), (V), (VI), (VII), (VIII) 또는 (IX)는 하기 구조들을 갖는다:
Figure pat00176
Figure pat00177
Figure pat00178
Figure pat00179
Figure pat00180
개질된 세포-결합제/분자
본 발명의 링커와의 반응에 의해 개질된 세포-결합제는 바람직하게는 화학식 (X), (XI), (XII), (XIII), (XIV), (XV) 또는 (XVI)로 표시된다:
Figure pat00181
Figure pat00182
여기서, R1, R1', R1'', R2, X1, X1', X1'', L1, L1', L1'', L2, L2', L2'', "
Figure pat00183
", Cb，m1, m1', m1'', m2, m2', m2'', m3, m4, m5, m4', m5', m4'', 및 m5''는 화학식 (III)-(IX)와 동일하게 정의된다.
여기서, Y, Y', 및 Y''는 화학식 (I) 및 (II)의 Y와 동일하게 정의된다.
바람직한 실시 예에서, Y, Y' 및 Y"는 독립적으로 디설피드 치환기, 말레이미도, 할로아세틸, 알콕시아민, 아지도, 케톤, 알데히드, 히드라진, 알킨, N-히드록시숙신이미드 에스테르 또는 페놀로 형성된 카르복시 에스테르, 디니트로 페놀; 펜타 플루오로페놀; 테트라플루오로-페놀; 디플루오로페놀; 모노플루오로페놀; 펜타클로로페놀; 트리플레이트; 이미다졸; 테트라클로로페놀, 1-히드록시벤조트리아졸, 토실레이트; 메실레이트; 2-에틸-5-페닐이속사-졸륨-3'-술포네이트일 수 있고; Y, Y'및 Y "는 디설피드, 티오에테르, 히드라존, 아미드, 알콕시, 카르바메이트, 에스테르, 에테르 결합 또는 헤테로 방향족 고리를 통해 세포 독성제와 독립적으로 반응할 수 있다. 개질된 세포-결합제는 세포-결합제와 상기 화학식 (III)에서 기술된 바와 같이 화학식 (I) 또는 (II)의 링커와의 반응을 통해 제조될 수 있다.
세포 결합 분자, 바람직하게는 항체 상의 한 쌍의 유리 티올과 화학식 (I) 또는 (II)의 치환된 아크릴 기 또는 프포피올 기의 보다 높은 수율의 결합 반응 달성하기 위하여, 유기 공용-용매의 적은 퍼센티지가 수용액에서의 화학식 (III)-(IX)의 용해도를 유지하기 위해 반응 후 용액 뿐만 아니라 반응 혼합물에 첨가될 필요가 있다. 세포-결합제를 개질시키기 위해, 화학식 (I) 또는 (II) 의 가교 시약(링커)는 물과 섞일 수 있는 극성 유기 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 프로판올, 아세톤, 아세토니트릴, 테트라히드로푸란(THF), 1,4-디옥산, 디메틸 포름아미드, 디메틸 아세트아미드(DMA) 또는 디메틸 술폭시드(DMSO)와 같은 상이한 알코올에, 고농도, 예컨대 1-500 mM의 양으로 용해될 수 있다. 한편, pH 4 ~ 9.5, 바람직하게는 pH 6 ~ 8.5의 수성 완충액에 1 ~ 35 mg/ml 농도로 용해된 항체와 같은 세포 결합 분자는 1 ~ 20 당량의 TCEP 또는 DTT로 20 분 내지 48 시간 처리되었다. 환원 후, DTT는 SEC 크로마토그래피 정제에 의해 제거될 수 있다. TCEP는 SEC 크로마토그래피에 의해 선택적으로 제거되거나 추가 정제 없이 다음 단계 반응을 위해 반응 혼합물에 잔류할 수 있다. 또한, TCEP에 의한 항체 또는 다른 세포-결합제의 환원은 화학식 (I) 또는 (II)의 링커로 수행될 수 있으며, 세포 결합 분자에 대한 가교 결합이 TCEP 환원과 함께 동시에 달성될 수 있다. 전술한 바와 같이, 화학식 (X), (XI), (XII) 또는 (XIII)의 개질된 세포 결합 분자의 형성은 340 내지 380 nm의 UV 광선의 도움으로 수행된다. 그리고, 화학식 (XIV), (XV) 또는 (XVI)의 개질된 세포-결합 분자의 형성은 선택적으로 UV 광의 도움없이 수행된다.
세포-결합제의 개질을 위한 수용액은 pH 4 내지 9, 바람직하게는 6.0 내지 7.5로 완충되며, 이들 pH 범위에 유용한 임의의 비-친핵성 완충염을 함유할 수 있다. 전형적인 완충액은 인산염, 아세테이트, 트리에탄올아민 HCl, HEPES 및 MOPS 완충제를 포함하며, 이들은 시클로덱스트린, 수크로스 및 염, 예를 들어 NaCl 및 KCl과 같은 추가적인 성분을 포함할 수 있다. 환원된 세포-결합 분자를 함유하는 용액에 화학식 (I) 또는 (II)의 가교 링커를 첨가한 후, 반응 혼합물을 4 ℃ 내지 45 ℃의 온도, 바람직하게는 15 ℃ 내지 주위 온도에서 인큐베이션시킨다. 반응의 진행은 특정 자외선 파장(예: 254 nm)에서 흡수 감소를 측정하거나 특정 UV 파장(예: 280 nm) 또는 기타 적절한 파장에서 흡수 증가를 측정하여 모니터링 할 수 있다. 반응이 완료된 후에, 개질된 세포-결합제의 분리는 통상적인 방법으로, 예를 들어 겔 여과 크로마토그래피 또는 흡착 크로마토그래피를 사용하여 수행될 수 있다.
개질의 정도는 UV 스펙트럼을 통해 방출되는 니트로피리딘 티온, 디니트로피리딘 디티온, 피리딘티온, 카르복실아미도피리딘 디티온 및 디카르복실-아미도피리딘 디티온 기의 흡광도를 측정함으로써 평가할 수 있다. 크로모포어 기 없는 결합체의 경우, 개질 또는 결합 반응은 LC-MS, 바람직하게는 UPLC-QTOF 질량 분석법, 또는 모세관 전기영동 분석법(CE-MS)에 의해 모니터링할 수 있다. 본원에 기재된 가교 링커는 임의의 약물, 바람직하게는 적절한 치환기를 갖는 세포 독성제와 반응할 수 있는 다양한 작용기를 갖는다. 예를 들어,아미노 또는 하이드록실 치환체를 갖는 개질된 세포-결합 분자는 N-하이드록시숙신이미드(NHS) 에스테르를 갖는 약물과 반응 할 수 있고, 티올 치환체를 갖는 개질된 세포-결합 분자는 말레이미도 또는 할로아세틸기를 갖는 약물과 반응할 수 있다. 또한,카르보닐(케톤 또는 알데히드) 치환기를 갖는 개질된 세포-결합 분자는 히드라지드 또는 알콕시아민을 갖는 약물과 반응 할 수 있다. 당업자는 링커상의 이용 가능한 작용기의 공지된 반응성에 기초하여 어느 링커를 사용할지를 용이하게 결정할 수 있다.
개질된 세포 독성 약물
본 발명의 가교 링커와의 반응에 의해 개질된 세포 독성 약물은 바람직하게는 화학식 (XVII) 및 (XVIII)로 표시되고, 여기서 약물 "Drug"는 세포 결합제의 한 쌍의 티올과 반응할 수 있는 치환된 아크릴 기 또는 프로피올 기의 티올 반응성 기를 여전히 갖는 화학식 (I) 및 (II)의 링커와 반응한다.
Figure pat00184
여기서, "
Figure pat00185
", "
Figure pat00186
", L1, L2, R1, T, m1, m2, m3, m4, m5, X1, Lv1 및 Lv2는 화학식 (I)과 동일하게 정의된다. Drug1은 화학식 (II)에서와 동일하게 정의된다.
개질된 약물은 화학식 (I) 및 (II)의 링커와 약물의 반응을 통해 제조되어, 치환된 아크릴 기 또는 프로피올 기의 작용기를 갖는 화학식 (XVII) 및 (XVIII)의 개질된 약물을 제공할 수 있다. 그러나, 티올을 함유하는 약물, 또는 티오에테르, 티오에스테르 또는 디설피드 결합을 통한 가교 링커를 통해 세포-결합 분자의 결합을 겪는 약물에 있어서, Drug1은 티오에테르, 티오에스테르 또는 이황화 결합의 연결을 통해 성분의 단편에서 R1에 연결되도록 합성하는 것이 바람직하다. 이어서, 합성 된 R1-약물 성분은 치환된 아크릴 기 또는 프로피올 기에 결합되어, 화학식 (XVII) 및 (XVIII)의 가교 링커 개질된 약물을 형성한다.
합성의 예로서, 티올-함유 약물은 수성 완충액 중성 pH에서 말레이미도 치환체를 갖는 성분 R1의 링커와 반응하여, 티오에테르 결합을 갖는 R1-약제 구획을 제공하고, 이어서 치환된 아크릴 기 또는 프로피올 기와의 축합에 의해 티오에테르 결합을 갖는 화학식 (XVII) 또는 (XVIII)의 개질된 약물을 제공할 수 있다. 히드록실 기를 갖는 약물은 약 염기의 존재하에서 할로겐, 토실레이트 또는 메실레이트를 갖는 링커 성분 R1과 반응하여, 에테르 결합을 갖는 R1-약물 구획을 제공하고, 이어서 아크릴 기 또는 치환된 프로피올 기와의 축합에 의해 티오에테르 결합을 갖는 화학식 (XVII) 또는 (XVIII)의 개질된 약물을 제공할 수 있다. 히드록실 기 함유 약물은 EDC 또는 디시클로헥실카르보디이미드(DCC)와 같은 탈수제의 존재하에서 카르복실기를 갖는 화학식 (I)의 링커와 축합되어, 화학식 (XVII) 또는 (XVIII)의 개질된 약물을 에스테르 결합를 통해 제공할 수 있다. 또한, 티올기를 갖는 약물은 말레이미도 또는 비닐술포닐 또는 할로아세틸기를 갖는 성분 R1의 링커와 반응하여, 티오에테르 결합을 갖는 R1-약물 구획을 제공하고, 이어서 아크릴 기 또는 치환된 프로피올 기와의 축합에 의해 티오에테르 결합을 갖는 화학식 (XVII) 또는 (XVIII)의 개질된 약물을 제공할 수 있다.아미노 기 함유 약물은 화학식 (I) 또는 (II)의 가교 링커 상의 카르복실기와 축합을 겪게 되어, 화학식 (XVII) 또는 (XVIII)의 개질된 약물을 제공할 수 있다. 개질된 약물은 실리카 겔 또는 알루미나 상의 컬럼 크로마토그래피, 결정화, 예비 박층 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피 또는 HPLC와 같은 표준 방법에 의해 정제될 수 있다.
바람직한 실시 양태에서, 화학식 (XVII) 또는 (XVIII)는 하기 구조를 갖는다:
Figure pat00187
Figure pat00188
Figure pat00189
여기서,
Figure pat00190
,
Figure pat00191
, Lv1, 및 Lv2는 화학식 (I)에서와 동일하게 정의되고; L1, L2, L3, L4, L5, L6, L7 및 L8는 동일하거나 상이하고, 화학식 (I)의 L1과 동일하게 정의되고; Drug1, Drug2, Drug3, Drug4, Drug5, Drug6, Drug7, 및 Drug8는 동일하거나 상이하고, 화학식 (II)의 Drug1과 동일하게 정의된다.
세포 결합제(binding agent)
본 발명의 결합체 및 개질된 세포-결합제를 포함하는 세포 결합 분자 Cb는 현재 공지된 또는 알려질 수 있는 분자이고, 이는 치료를 추구하거나 또는 그렇지 않다면 생물학적으로 개질되기를 추구하는 세포군의 일부와 결합하거나, 복합체를 형성하거나, 반응한다.
세포-결합제는 여기에 제한되지 않지만, 예컨대 항체, 항체 유사 단백질, 전장 항체(다중클론성 항체, 단일클론성 항체, 이량체, 다량체, 다중 특이성 항체(예: 이중 특이성 항체)와 같은 큰 분자량 단질; 단일 사슬 항체; Fab, Fab', F(ab')2, Fv,[Parham,J.Immunol.131,2895-902(1983)]와 같은 항체 단편, Fab 발현 라이브리에 의해 생성된 단편, 항-유전자형(항-Id) 항체, CDR, 이중체, 삼중체, 사중체, 미니 항체, 작은 면역 단백질(SIP), 및 암세포 항원에 면역 특이적으로 결합하는 상기 중 어느 것의 에피토프 결합 단편, 바이러스 항원, 미생물 항원, 특정 항원에 대한 인식, 결합 또는 원하는 생물학적 활성을 나타내는 면역계에 의해 생성된 단백질(Miller et al(2003) J. of Immunology 170: 4854-61); (I 형, II 형, III 형과 같은) 인터페론; 펩티드; IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10과 같은 림포카인, GM-CSF, 인터페론-감마(IFN-γ); 다음의 호르몬들, 인슐린, TRH(갑상선 호르몬 방출 호르몬), MSH(멜라닌 세포-자극 호르몬), 안드로겐 및 에스트로겐과 같은 스테로이드 호르몬, 멜라닌 세포 자극 호르몬(MSH)과 같은 호르몬; 성장 인자 및 표피 성장 인자(EGF)와 같은 콜로니-자극 인자, 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF), TGFα, TGFβ, TGFβ 등의 형질 전환 성장 인자(TGF)와 같은 콜로니 자극 인자(IGF-I, IGF-II) G-CSF, M-CSF 및 GM CSF [Burgess, Immunology Today, 5, 155-8(1984)]; 백시니아 성장 인자(VGF); 섬유 아세포 성장 인자(FGF); 보다 작은 분자량의 단백질, 폴리펩티드, 펩티드 및 펩티드 호르몬, 예를 들어 봄베신, 가스트린, 가스트린 방출 펩티드; 혈소판 유래 성장 인자; 인터루킨-2(IL-2), 인터루킨-6(IL-6), 백혈병 억제 인자, 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF)와 같은 인터루킨 및 사이토카인; 엽산과 같은 비타민; 아포단백질 및 글리코단백질(예: 트랜스페린) [O'Keefe et al, 260 J. Biol. Chem. 932-7(1985)]; 당 결합 단백질 또는 지질 단백질, 예컨대 렉틴; 세포 영양염 수송 분자; 및 전립선-특이 막 항원(PSMA) 억제제 및 소분자 티로신 키나아제 억제제(TKI)와 같은 소분자 억제제, 비-펩티드 또는 임의의 다른 세포 결합 분자 또는 물질, 예컨대 생체 활성 중합체(Dhar, et al, Proc. Natl. Acad. Sci. 2008, 105, 17356-61); 생체 활성 덴드리머(Lee, et al, Nat. Biotechnol. 2005, 23, 1517-26; Almutairi, et al; Proc. Natl. Acad. Sci. 2009, 106, 685-90); 나노입자(Liong, et al, ACS Nano, 2008, 2, 1309-12; Medarova, et al, Nat. Med. 2007, 13, 372-7; Javier, et al, Bioconjugate Chem. 2008, 19, 1309-12); 리포좀(Medinai, et al, Curr. Phar. Des. 2004, 10, 2981-9); 바이러스성 캡시드(Flenniken, et al, Viruses Nanotechnol. 2009, 327, 71-93)를 포함한다.
일반적으로, 적절한 것이 이용가능하면, 단일클론 항체가 세포 표면 결합제로 선호된다. 그리고, 항체는 쥐, 인간, 인간화형, 키메라형이거나 다른 종에서 유래 한 것일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 항체의 생산은 생체 내 또는 시험관 내 절차 또는 이들의 조합을 포함한다. 다중클론 항-수용체 펩티드 항체를 생산하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있으며, 미국 특허 No. 4,493,795 (to Nestor et al)에 기재된다. 단일클론 항체는 전형적으로 요구되는 항원으로 면역화된 마우스의 비장 세포와 골수종 세포를 융합시킴으로써 제조된다(Kㆆhler, G.; Milstein, C.(1975). Nature 256: 495-7). 상세한 절차는 "항체-실험실 매뉴얼", Harlow and Lane, eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York(1988)에 기술되어 있으며, 이는 본원에 참고로 인용된다. 특히, 단일클론 항체는 손상되지 않은 표적 세포, 표적 세포로부터 분리된 항원, 전체 바이러스, 약독화된 전체 바이러스 및 바이러스성 단백질과 같은 관심 항원으로 마우스, 래트, 햄스터 또는 임의의 다른 포유 동물을 면역화함으로써 생성된다.비장 세포는 전형적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 6000을 사용하여 골수종 세포와 융합된다. 융합된 하이브리드는 HAT(hypoxanthine-aminopterin-thymine)에 대한 민감도에 의해 선택된다. 본 발명을 실시하는데 유용한 단일클론성 항체를 생산하는 하이브리도마는 특정 수용체를 면역 반응하거나 표적 세포에서 수용체 활성을 억제하는 능력에 의해 식별된다.
본 발명에 사용되는 단일클론성 항체는 적절한 항원 특이성의 항체 분자를 분비하는 하이브리도마를 함유하는 영양 배지를 포함하는 단일클론 하이브리도마 배양 물을 개시함으로써 제조될 수 있다. 배양물은 하이브리도마가 항체 분자를 배지에 분비하기에 충분한 시간 및 조건 하에서 유지된다. 이어서, 항체-함유 배지를 수집한다. 이어서, 단백질-A 친화성 크로마토그래피, 음이온, 양이온, 소수성 또는 크기 독점 크로마토그래피(특히 단백질 A 이후의 특정 항원에 대한 친화성 및 사이징 칼럼 크로마토그래피); 원심 분리, 차별화된 용해도, 또는 단백질 정제를 위한 다른 표준 기술과 같은 잘 알려진 기술에 의해 항체 분자를 추가로 분리할 수 있다.
이들 조성물의 제조에 유용한 배지는 당 업계에 널리 공지되어 있고, 상업적으로 입수 가능하며 합성 배양 배지를 포함한다. 예시적인 합성 배지는 둘베코(Dulbecco)의 최소 필수 배지(DMEM; Dulbecco et al., Virol. 8, 396(1959))이며, 이 배지에는 글루코스 4.5 g/l, 글루타민 0 ~ 20mM, 태아 송아지 혈청 0 ~ 20 %, Cu, Mn, Fe, Zn 등의 중금속 수 ppm의 양 또는 기타 중금속을 염 형태로 첨가한 것 및 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 블럭 공중합체와 같은 소포제가 포함된다.
또한, 항체 생성 세포주는 발암 DNA로 B 림프구를 직접 형질 전환하거나 Epstein-Barr 바이러스(EBV, 인간 헤르페스 바이러스 4(HHV-4)라고도 부름) 또는 카포시 육종 관련 포진 바이러스(KSHV)와 같은 온코바이러스(oncovirus)로의 형질 감염과 같은 융합 이외의 기술로 생성될 수 있다. 참조: 미국 특허 4,341,761; 4,399,121; 4,427,783; 4,444,887; 4,451,570; 4,466,917; 4,472,500; 4,491,632; 4,493,890. 단일클론성 항체는 또한 항-수용체 펩티드 또는 당 업계에 공지된 바와 같은 카르복실 말단을 함유하는 펩티드를 통해 생산될 수 있다. 참조: Niman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80 : 4949-53(1983); Geysen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82 : 178-82(1985); Lei et al. Biochemistry 34(20) : 6675-88,(1995)]. 전형적으로, 항-수용체 펩티드 또는 펩티드 유사체는 항-수용체 펩티드 단일클론 항체를 생산하기 위한 면역원으로서 단독으로 또는 면역원성 담체에 결합되어 사용된다.
또한, 본 발명에서 단일클론성 항체를 결합 분자로 만드는 다른 많은 공지된 기술이 있다. 완전한 인간 항체를 제조하는 방법이 특히 유용하다. 하나의 방법은 친화성 강화 방법을 사용하여 항원에 특이적으로 결합하는 인간 항체의 범위를 선택하는데 사용될 수 있는 파지 디스플레이 기술이다. 파지 디스플레이는 문헌에 완전히 기술되어 있으며, 파지 디스플레이 라이브러리의 구성 및 스크리닝은 당 업계에 잘 공지되어있다(Dente et al, Gene. 148(1) : 7-13(1994); Little et al, Biotechnol Adv. 12(3) : 539-55(1994); Clackson et al., Nature 352 : 264-8(1991); Huse 등, Science 246 : 1275-81(1989).
마우스와 같은 인간 이외의 다른 종으로부터의 하이브리도마 기술에 의해 유도된 단일클론 항체는 사람에게 주입될 때, 인간 항-마우스 항체를 피하기 위해 인간화될 수 있다. 항체의 인간화에 대한보다 일반적인 방법에는 상보성 결정 영역 이식 및 표면 치환이 있다. 이러한 방법은 광범위하게 기술되어있다. 참조: 미국 특허. 미국 특허 5,859,205 및 6,797,492; Liu et al., Immunol Rev.222 : 9-27(2008); Almagro et al., Front Biosci. 13 : 1619-33(2008); Lazar et al., Mol Immunol. 44(8) : 1986-98(2007); Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S A. 103(10) : 3557-62(2006)]. 이들 각각은 참조로 본 명세서에 포함된다. 완전 인간 항체는 또한 면역원으로 인간 면역 글로불린 중쇄 및 경쇄의 상당 부분을 운반하는 형질 전환 쥐, 토끼, 원숭이 또는 다른 포유 동물을 면역화함으로써 제조될 수 있다. 이러한 마우스의 예는 다음과 같습니다: Xenomouse(Abgenix/Amgen), HuMAb-Mouse(Medarex/BMS), VelociMouse(Regeneron), 또한 미국 특허 6,596,541, 6,207,418, 6,150,584, 6,111,166, 6,075,181, 5,922,545, 5,661,016, 5,545,806, 5,436,149 및 5,569,825 에 기재되어있다. 인간 치료에서, 쥐의 가변 영역 및 인간 불변 영역은 또한 융합되어, 쥐의 mAb보다 사람에서 면역원성이 훨씬 낮은 "키메라 항체"로 구성될 수 있다(Kipriyanov 등, Mol Biotechnol.26 : 39-60(2004), Houdebine, Curr Opin Biotechnol.13 : 625-9(2002)). 또한, 항체의 가변 영역에서 사이트-특이적 돌연변이 유발(site-directed mutagenesis)은 항원에 대한 친화도 및 특이성이 보다 높은 항체를 생성할 수 있다(Brannigan et al., Nat Rev Mol Cell Biol. 3 : 964-70,(2002)). Adams 등, J Immunol Methods. 231 : 249-60(1999)), mAb의 불변 영역을 교환하는 것은 결합 및 세포 독성의 작동자 기능을 매개하는 능력을 향상시킬 수 있다.
악성 세포 항원에 대해 면역 특이적 항체는 또한 상업적으로 수득되거나 예를 들어 화학적 합성 또는 재조합 발현 기술과 같은 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 악성 세포 항원에 대해 면역 특이적인 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 상업적으로, 예를 들어 유전자 데이터베이스 또는 그것과 유사한 데이터베이스, 문헌 공보 또는 통상적인 클로닝 및 시퀀싱으로부터 얻을 수 있다.
항체와는 별도로, 표적화된 세포상의 에피토프 또는 상응하는 수용체와 결합/차단/표적화하거나 다른 방식으로 상호 작용하는 펩티드 또는 단백질이 결합 분자로서 사용될 수 있다. 이들 펩티드 또는 단백질은 에피토프 또는 상응하는 수용체에 대해 친화성을 갖는 임의의 펩티드 또는 단백질일 수 있으며, 반드시 면역 글로불린 패밀리일 필요는 없다. 이러한 펩티드는 파지 디스플레이 항체와 유사한 기술로 분리할 수 있다(Szardenings, J Recept Signal Transduct Res. 2003, 23(4) : 307-49). 이러한 무작위 펩티드 라이브러리로부터의 펩티드의 사용은 항체 및 항체 단편과 유사할 수 있다. 펩티드 또는 단백질의 결합 분자는 그러한 부착이 펩티드 또는 프로틴이 그 항체 결합 특이성을 유지하도록 허용하는 한, 알부민, 중합체, 리포좀, 나노입자, 덴드리머[이에 제한되지 않음]와 같은 큰 분자 또는 물질 상에 결합 또는 연결될 수 있다.
암, 자가 면역 질환 및/또는 감염성 질환을 치료하기 위해, 상기 예방의 링커를 통한 약물의 결합을 위해 사용되는 항체의 예로는 3F8(항-GD2), 아바고보맙(항-CA-125), 아브시시맙(항 CD41 (인터그린 알파-IIb), 아달리무맙(항-TNF-α), 아데카투무맙(항-EpCAM, CD326), 아펠리모맙(항-TNF-α), 아퓨투즈맙(Anti-CD20), 알라시주 맙 페골(항-VEGFR2), ALT518(항-IL-6), 알렘투즈맙(Campath, MabCampath, 항-CD52), 알트모맙(항-CEA), 아나투모맙(항 TAG-72), 안루킨주맙(IMA-638, 항 IL-13), 아폴리주맙(항-HLA-DR), 아르시투모맙(항-CEA), 아셀리주맙(항-L-셀렉틴(CD62L), 아클리주맙(토실리주맙, 악템라, 로악템라, 항-IL-6 수용체), 아토로리무맙(항-레수스 인자), 바피뉴주맙(항-베타 아밀로이드), 바실릭시맙(Simulect, 항CD25(IL-2 수용체의 α 사슬), 바비툭시맙(항-포스파티딜세린), 벡투모맙(LymphoScan, anti-CD22), 벨리무맙(Benlysta, LymphoStat-B, anti-BAFF), 벤랄리주맙(항-CD125), 베르틸리무맙(항-CCL11(에오탁신-1), 베실레소맙(Scintimun, anti-CEA 관련 항원), 베바시주맙(Avastin, 항 VEGF-A), 비시로맙(FibriScint, 항-피브린 Ⅱ 베타 사슬), 비바투주맙(항-CD44 v6), 블리나투모맙(BiTE, 항-CD19), 브렌툭시맙(cAC10, 항-CD30 TNFRSF8), 브리아키누맙(항 IL-12, IL-23), 카나키누맙(Ilaris, 항-IL-1), 칸투주맙(C242, 항-CanAg), 카프로맙, 카투막소맙(Removab, 항-EpCAM, 항-CD3), CC49(항-TAG-72), 세델리주맙(항-CD4), 세르톨리주맙 페골(Cimzia 항-TNF-알파), 세툭시맙(Erbitux, IMC-C225, 항-EGFR), 시타투주맙 보가톡스(anti-EpCAM), 식수투무맙(anti-IGF-1), 클레놀릭시맙(anti-CD4), 클리바투주맙(anti-MUC1), 코나투무맙(anti-TRAIL-R2), CR6261 (anti-인플루엔자 A 헤마글루티닌), 다세투주맙(anti-CD40), 다클리주맙(Zenapax, anti-CD25 (IL-2 수용체의 α 사슬)), 다라투무맙(anti-CD38(사이클릭 ADP 리보스 히드로라제), 데노수맙(Prolia, 항-RANKL), 데투모맙(항-B-림포마 세포), 도르리모맙, 도르릭시주맙, 에크로멕시맙(항-GD3 강글리오사이드), 에쿨리주맙(Soliris, 항-C5), 에도바코맙(항-엔도톡신), 에드레코로맙(Panorex, MAb17-1A, 항-EpCAM), 에팔리주맙(Raptiva, 항-LFA-1(CD11a), 에풍구맙(Mycograb, 항-Hsp90), 엘로투주맙(항-SLAMF7), 엘실리모맙(항-IL-6), 엔리모맙 페골(항-ICAM-1(CD54)), 에피투모맙(항-에피시알린), 에프라투주맙(항-CD22), 에르리주맙(항-ITGB2(CD18)), 에르투막소맙(Rexomun, 항-HER2/neu, CD3), 에타라시주맙(Abegrin, 항-인터그린 αvβ3), 엑스비비루맙(항-헤파티티스 B 표면 항원), 파놀레소맙(NeutroSpec, 항-CD15), 파라리모맙(항-인터페론 수용체), 파르레투주맙(항-엽산 수용체 1), 펠비주맙(항-호흡기 합병증 바이러스), 페자키누맙(항-IL-22), 피지투무맙(항-IGF-1 수용체), 폰토리주맙(항-IFN-γ), 포아비루맙(항-광견병 바이러스 당 단백질), 프레솔리무맙(항-TGB-베타), 갈릭시맙(항-CD80), 간테네루맙(항-베타 아밀로이드), 가빌리모맙(항-CD147(바시긴)), 젬투주맙(항-CD33), 지렌툭시맙(항-카르보닉 무수물 9), 글렘바투무맙(CR011, 항-GPNMB), 골리무맙(Simponi, 항-TNF-알파), 고밀릭시맙(항-CD23(IgE 수용체)), dlqkfflwnakq(항-CD4), 이브리투모맙(항-Cd20), 이고보맙(Indimacis-125, 항-CA-125), 임시로맙(Myoscint, 항-카르디악 마이오신), 인플릭시맙(Remicade, 항-TNF-알파), 인테투무맙(항-CD51), 인올리모맙(항-CD25(IL-2 수용체의 알파 사슬), 이노투주맙(항-CD22), 이필리무맙(항-CD152), 이라투무맙(항-CD30(TNFRSF8)), 켈릭시맙(항-CD4), 라베투주맙(CEA-Cide, 항-CEA), 레브리키주맙(항-IL-13), 레말레소맙(항-NCA-90(과립구 항원)), 레르델리무맙(항-TGF 베타 2), 렉사투무맙(항-TRAIL-R2), 리비비루맙(항-헤파티티스 B 표면 항원), 린투주맙(항-CD33), 루카투무맙(항-CD40), 루밀릭시맙(항-CD23(IgE 수용체), 마파투무맙(항-TRAIL-R1), 마슬리모맙(항-T-세포 수용체), 마투주맙(항-EGFR), 메폴리주맙(Bosatria, 항-IL-5), 메텔리무맙(항-TGF 베타 1), 밀라투주맙(항-CD74), 민레투모맙(항-TAG-72), 미투모맙(BEC-2, 항-GD3 강글리오사이드), 모롤리무맙(항-레수스 인자), 마타비주맙(Numax, 항-호흡기 합성 바이러스), 무로모납-CD3(오르토클론 OKT3, 항-CD3), 나콜로맙(항-C242), 납투모맙(항-5T4), 나탈리주맙(Tysabri, 항-인터그린 α4), 네바쿠맙(항-엔도톡신), 네시투무맙(항-EGFR), 네릴리모맙(항-TNF-알파), 니모투주맙(테라심, 테라록, 항-EGFR), 노페투모맙, 오크레리주맙(항-CD20), 오둘리모맙(아폴리모맙, 항-LFA-1(CD11a)), 오파투무맙(Arzerra, 항-Cd20), 올라투맙(항-PDGF-Rα), 오말리주맙(Xolair, 항-IgE Fc 영역), 오포르투주맙(항-EpCAM), 오레고보맙(OVaRex, 항-CA-125), 오텔리시주맙(항-CD3), 파기마시맙(항-리포테이초익산), 팔리비주맙(Synagis, 압보시나기스, 항-호흡기 합성 바이러스), 판니누무납(벡티빅스, ABX-EGF, 항-EGFR), 파노바쿠맙(항-슈도모나스 아레루기노사), 파스콜리주맙(항-IL-4), 펨투모맙(테라긴, 항-MUC1), 페르투주맙(Omnitarg, 2C4, 항-HER2/neu), 페섹리주맙(항-C5), 핀투모맙(항-아데노카르시노마 항원), 프리릭시맙(항-CD4), 피투무맙(항-비멘틴), PRO 1240(항-CCR5), 라코투모맙(1E10, 항-(N-글리콜일뉴라미닉 산(NeuGc, NGNA)-강글리오시드 GM3)), 라피비루맙(항-라비에스 바이러스 글리코프로틴), 라무시루맙(항-VEGFR2), 라니비주맙(루센티스, 항-VEGF-A), 락시바쿠맙(항-안트락스 톡신, 보호 항원), 레가비루맙(항-시토메갈로바이러스 글리코단백질 B), 레슬리주맙(항-IL-5), 리로투무맙(항-HGF), 리툭시맙(MabThera, 리툭산맙, 항-CD20), 로바투무맙(항-IGF-1 수용체), 론탈리주맙(항-IFN-알파), 로벨리주맙(LeukArrest, 항-CD11, Cd18), 루플리주맙(안토바, 항-CD154(CD4L)), 사투모맙(항-TAG-72), 세비루맙(항-시토메갈로바이러스), 시브로투주맙(항-FAP), 시팔리무맙(항-IFN-알파), 실툭시맙(항-IL-6), 시플리주맙(항-CD2), (스마트)MI95(항-CD33), 솔라네주맙(항-베타 암일로이드), 소넵시주맙(항-스핀고신-1-포스페이트), 손투주맙(항-에피시알린), 스탐울루맙(항-마이오스타틴), 술레소맙(LeukoScan, (항-NCA-90(그라눌로사이트 항원), 타카투주맙(항-알파-페토프로틴), 타도시주맙(항-인터그린αIIbβ3), 탈리주맙(항-IgE), 타네주맙(항-NGF), 탑리투모맙(항-CD19), 테피바주맙(Aurexis,(항-클럼핑 인자 A), 텔리모맙, 테나투모맙(항-테나신 C), 테넬리시맙(항-Cd40), 테플리주맙(항-Cd3), TGN1412(항-CD28), 티실이무맙(트레멜리무맙,(항-CRLA-4), 티가투주맙(항-TRAIL-R2), TNX-650(항-IL-13), 토실리주맙(아틀리주맙, 악템라, 로악템라, (항-IL-6-수용체),토라리주맙(항-CD154(CD40L)), 토시투모맙(항-CD20), 트라스투주맙(헤르셉틴,(항-HER/neu), 트레멜리무맙(항-CTLA-4), 투코투주맙 셀몰에우킨(항-EpCAM), 투비루맙(항-헵타티티스 B 바이러스), 우르톡사주맙(항-Escherichia coli), 우스테키누맙(스텔아라, 항-IL-12, IL-23), 바팔리시맙(항-AOC3(VAP-1)), 베돌리주맙, (항-인터그린 α4β7), 벨투주맙(항-CD20), 베팔리모맙(항-AOC(VAP-1), 비실리주맙(누비온, 항-CD3), 비탁신(항-바스큘라 인터그린 avb3), 볼로시시맙(항-인터그린 α5β1), 보투무맙(휴마SPECT, 항-종기 항원 CTAA16.88), 잘루투무맙(HuMax-EGFr,(항-EGFR), 자놀리무맙(HuMax_CD4, 항-CD4), 지랄리무맙(항-CD147(바시긴)), 졸리모맙(항-Cd5), 에타네르셉(Enbrel®), 알레파셉(Amevive®), 아바타셉(Orencia®), 릴오나셉(Arcalyst), 14F7[항-IRP-2(철 조절 프로틴)], 14G2a(항-GD2 간글리오시드, 멜라노마 및 솔리드 종양에 대한 국립 암 기관), J591(항-PSMA, 전립선 암에 대한 Weill Cornell Medical School), 225.28S[항-HMW-MAA(고분자량-멜라노마-관련 항원), 소린 라디오파르마시 S.R.L.(밀란, 이태리) for 멜라노마], COL-1(항-CEACAM3, CGM1, 결장 및 위암에 대한 국립 암 기관), CYT-356(Oncoltad®, 전립선암), HNK20(호흡기 합성 바이러스에 대한 OraVax Inc.), 이뮤라이트(NHL에 대한 면역치료제), Lym-1(항-HLA-DR10, 암에 대한 페레그린 팜), MAK-195F(항-TNF(종양 괴사 인자; TNFA, TNF-알파:TNFSF2), from Abbott/Knoll for Sepsis toxic shock], MEDI-500[T10B9, 항-CD3, TRαβ(T 세포 수용체 알파/베타), 복합체, from MedImmune Inc for Graft-versus-host disease], RING SCAN[항-TAG 72(종양 관련 글리코단백질 72), from Neoprobe Corp, for Breast, Colon and Rectal cancers], 아비시딘(항-EPCAM)상피세포 부착 분자), 항-TACSTD1(종양-관련 칼슘 신호 트랜스듀서 1), 항-GA733-2(가스트로인터스티날 종양-관련 단백질 2), 항-EGAP-2(상피 글리코단백질 2); 항-KSA;KS1/4항원;M4S;종양 항원 17-1A; CD326, from NeoRx Corp. for Colon, 난소암, 전립선암 및 NHL]; 림포시드(Immunomedics, NJ), 스마트 ID10(Protein Design Lab), 온코림(Techniclone Inc, CA), 알로무네(Bio Transplant, CA), 항-VEGF(Genentech, CA); CEAcide(Immunomedics, NJ), IMC-1C11(ImClone, NJ) 및 세투시맙(ImClone, NJ).
세포 결합 분자/리간드와 같은 다른 항체들은 여기에 제한되지 않지만, 다음의 항원들에 대항하는 항체이다: 아미노펩티다제 N(CD13), 아넥신 A1, B7-H3(CD276, 다양한 암), CA125(난소), CA15-3(암종), CA19-9(암종), L6(암종), 루이스 Y(암종), 루이스 X(암종), 알파 태아단백질(암종), CA242(대장암), 태반 알칼리성 포스파타 아제(암종), 전립선 특이 항원(전립선암), 전립선산 포스파타아제(전립선암), 상피 성장 인자(암종), CD2(호지킨(Hodgkin) 질병, NHL 림프종, 다발성 골수종), CD3 엡실론(T 세포 림프종, 폐암, 유방암, 위암, 난소암, 자가 면역 질환, 악성 복수 등), CD19(B 세포 악성종양), CD20(비-호지킨 림프종), CD22(백혈병, 림프종, 다발성 골수종, SLE), CD30(호지킨 림프종), CD33(백혈성, 자가면역 질환), CD38(다발성 골수종), CD40(림프종, 다발성 골수종, 백혈병(CLL)), CD51(전이성 흑색종, 육종), CD52(백혈병), CD56(소세포 폐암, 난소암, 메르켈세포 암종 및 액체 종양, 다발성 골수종), CD66e(암), CD70(전이성 신장세포 육종 및 비-호지킨 림프종), CD74(다발성 골수종), CD80(림프종), CD98(암), 뮤신(암종), CD221(고형 종양), CD227(유방암, 난소암), CD262(NSCLC 및 기타 암), CD309(난소암), CD326(고형 종양), CEACAM3(대장암, 위암), CEACAM5(암배아 항원, CEA), CD66e(유방암, 대장암 및 폐암), DLL3 또는 DLL4(델타 유사-3 또는 델타 유사-4), EGFR(표피 성장 인자 수용체, 다양한 암), CTLA4(흑색종), CXCR4(CD184, 헤모-종양, 고형 종양), 엔도그린(CD105, 고형 종양), EPCAM(상피 세포 부착 분자, 방광, 두경부, 목, 결장, NHL 전립선 및 난소암), ERBB2 표피 성장 인자 수용체 2, 폐암, 유방암, 전립선암), FCGR1(자가 면역 질환), FOLR(엽산 수용체, 난소암), GD2 강글리오사이드(암), G-28(세포 표면 항원 글리볼리피드, 흑색종), GD3 이디오타입(암), 열 쇼크 단백질(암), HER1(폐암, 위장암), HER2(유방암, 폐암 및 난소암), HLA-DR10(NHL), HLA-DRB(NHL, B 세포 백혈병), 인간 융모성 생식샘 자극 호르몬(암종), IGF1R(인슐린 유사 성장 인자 1 수용체, 고형 종양, 혈액암), IL-2 수용체(인터루킨 2 수용체, T 세포 백혈병 및 림프종), IL-6R(인터루킨 6 수용체, 다발성 골수종, RA, 캐슬만 병, IL6 의존성 종양), 인테그린(αvβ3, α5β1, α6β4, αllβ3, α5β5, αvβ5, 각종 암), MAGE-1(암종), MAGE-2(암종), MAGE-3(암종), MAGE 4(암종), 항-트랜스페린 수용체(암종), p97(흑색종), MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A 멤버 1, 비-호지킨 B 세포 림프종, 백혈병), MUC1 또는 MUC1-KLH(유방암, 난소암, 자궁 경부암, 기관지암 및 위장암), MUC16(CA125)(난소 암), CEA(결장 직장), gp100(흑색종), MART1(흑색종), MPG(흑색종), MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A, 소세포 폐암,NHL), 뉴클레오린(Nucleolin), Neu 종양학 생성물(암종), P21(암종), 안티-(N-글리콜릴뉴라민산, 유방암, 흑색종 암) 파라토프, PLAP-유사 고환 알칼리성 인산 가수 분해 효소(난소, 고환암), PSMA(전립선 종양), PSA(전립선), ROBO4, TAG 72(종양 관련 당 단백질 72, AML, 위암, 대장암, 난소암), T 세포막 트랜스 막 단백질), 타이(Tie)(CD202b), TNFRSF10B(종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 멤버 10B, 암), TNFRSF13B(종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 멤버 13B, 다발성 골수종, NHL, 기타 암, RA 및 SLE), TPBG(영양 모세포 글리코단백질, 신장 세포 암종), TRAIL-R1(종양 괴사 인자 아포프로시스 유발 리간드 수용체 1, 림프종, NHL, 대장암, 폐암), VCAM-1(CD106, 흑색종), VEGF, VEGF-A, VEGF-2(CD309)(다양한 암), 항체들에 의해 인식되는 일부 다른 종양 관련 항원들이 검토되어 왔다(Gerber, et al, mAbs 1:3, 247-53(2009); Novellino et al, Cancer Immunol Immunother. 54(3), 187-207(2005). Franke, et al, Cancer Biother Radiopharm. 2000, 15, 459-76).
보다 바람직한 항체인 세포-결합제는 종양 세포, 바이러스 감염 세포, 미생물 감염 세포, 기생충 감염 세포, 자가 면역 세포, 활성화 세포, 골수 세포, 활성화 T 세포, B 세포, 멜라닌세포에 대항할 수 있는 임의의 제제일 수 있다. 보다 구체적으로, 세포-결합제는 하기 항원 또는 수용체 중 어느 하나에 대항할 수 있는 임의의 제제/분자일 수 있다:
CD3, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD9, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD12w, CD14, CD15, CD16, CDw17, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD27, CD28, CD29, CD30, CD31, CD32, CD33, CD34, CD35, CD36, CD37, CD38, CD39, CD40, CD41, CD42, CD43, CD44, CD45, CD46, CD47, CD48, CD49b, CD49c, CD51, CD52, CD53, CD54, CD55, CD56, CD58, CD59, CD61, CD62E, CD62L, CD62P, CD63, CD66, CD68, CD69, CD70, CD72, CD74, CD79, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD86, CD87, CD88, CD89, CD90, CD91, CD95, CD96, CD98, CD100, CD103, CD105, CD106, CD109, CD123, CD117, CD120, CD125, CD126, CD127, CD133, CD134, CD135, CD137, CD138, CD141, CD142, CD143, CD144, CD147, CD151, CD147, CD152, CD154, CD156, CD158, CD163, CD166, .CD168, CD174, CD180, CD184, CDw186, CD194, CD195, CD200, CD200a, CD200b, CD209, CD221, CD227, CD235a, CD240, CD262, CD271, CD274, CD276(B7-H3), CD303, CD304, CD309, CD326, 4-1BB, 5AC, 5T4(영양아층 글리코단백질, TPBG, 5T4, Wnt-활성화 억제 인자 1 또는 WAIF1), 선암 항원, AGS-5, AGS-22M6, 액티빈 수용체-유사 키나아제 1, AFP, AKAP-4, ALK, 알파 인터그린, 알파 v 베타 6,아미노-펩티다제 N, 아밀로이드 베타, 안드로겐 수용체, 안지오포이에틴 2, 안지오포이에틴 3, 안넥신 A1, 탄저 독소 방어 항원, 항-트랜스페린 수용체, AOC3(VAP-1), B7-H3, 탄저균, BAFF(B 세포 활성화 인자), BCMA, B-림프종 세포, 브크라블(bcrabl), 봄베신, BORIS, C5, C242 항원, CA125(탄수화물 항원 125, MUC16), CA-IX(또는 CAIX, 탄산 탈수 효소 9), CALLA, CanAg, 카니스 루프스 파밀리아스(Canis lupus familiaris) IL31, 탄산 탈수 효소 IX, 심장 마이오신, CCL11(C-C 모티프 케모카인 11), CCR4(C-C 케모카인 수용체 유형 4, CD194), CCR5, CD3E(엡실론), CEA(암 배아 항원), CEACAM3, CEACAM5(암 배아 항원), CFD(인자D), Ch4D5, 콜레시스토키닌 2(CCK2R), CLDN18(클라우딘-18), 클럼핑(clumping) 인자 A, cMet, CRIPTO, FCSF1R(콜로니 자극 인자 1 수용체, CD115), CSF2(콜로니 자극 인자 2, 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF)), CSP4, CTLA4(세포독성 T-림프구-관련 단백질 4), CTAA16.88 종양 항원, CXCR4(CD184), C-X-C 케모카인 수용체 유형 4, 사이클릭 ADP 리보스 가수 분해 효소, 사이클린 B1, CYP1B1, 시토메갈로바이러스, 시토메갈로바이러스 글리코단백질 B, 다비가트란, DLL3(델타-유사-리간드 3), DLL4(델타-유사-리간드 4), DPP4(디펩티딜-펩티다제 4), DR5(사멸 수용체 5), 대장균 시가(Shiga) 독소 타입-1, 대장균 시가 독소 타입-2, EDB, EGFL7(EGF-유사 도메인-함유 단백질 7), EGFR, EGFRII, EGFRvIII, 엔도글린(CD105), 엔도텔린 B 수용체, 엔도톡신, EpCAM(상피 세포 부착 분자), EphA2, 에피시알린, ERBB2(표피 성장 인자 수용체 2), ERBB3, ERG(TMPRSS2 ETS 융합 유전자), 대장균, ETV6-AML, FAP(섬유 아세포 활성화 단백질 알파 ), FCGR1, 알파-페토프로틴, 피브린 II, 베타 사슬, 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B, FOLR(엽산 수용체), 엽산 수용체 알파, 엽산 가수분해 효소, 호흡기세포융합바이러스의 포스-관련(Fos-related) 항원 1F 단백질, 프리즐드(Frizzled) 수용체, 푸코실(Fucosyl) GM1, GD2 강글리오사이드, G-28(세포 표면 항원 글리볼리피드), GD3 이디오타입, GloboH, 글리피칸 3, N-글리코 릴뉴라민 산, GM3, GMCSF 수용체 α-사슬, 성장 분화 인자 8, GP100, GPNMB(트랜스-막 글리코단백질 NMB), GUCY2C(구아닐산 고리화효소 2C, 구아닐릴 고리화효소 C(GC-C), 장내 구아닐산 고리화효소, 구아닐산 고리화효소-C 수용체, 열-안정 엔테로톡신 수용체(hSTAR), 열충격 단백질, 헤마글루티닌, B 형 간염 표면 항원, B 형 간염 바이러스, HER1(인간 상피 세포 성장 인자 수용체 1), HER2, HER2/neu, HER3(ERBB-3), IgG4, HGF/SF(간세포 성장 인자/산란 인자), HHGFR, HIV-1, 히스톤 복합체, HLA-DR(사람 백혈구 항원), HLA-DR10, HLA-DRB, HMWMAA, 인간 융모성 성선 자극 호르몬, HNGF, 인간 산란 인자 수용체 키나제, HPV E6/E7, Hsp90, hTERT, ICAM-1(세포간 부착 분자 1), 이디오타입(Iiotype), IGF1R(인슐린-유사 성장 인자 1 수용체), IGHE, IFN-γ, 인플루엔자 헤마글루티닌, IgE, IgE Fc 영역, IGHE, IL-1, IL-2 수용체(인터루킨 2 수용체), IL-4, IL-5, IL-6, IL-6R(인터루킨 6 수용체), IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, IL-17A, IL-20, IL-22, IL-23, IL31RA, ILGF2(인슐린-유사 성장 인자 2), 인테그린(α4, αIIbβ3, αvβ3, α4β7, α5β1, α6β4, α7β7, αllβ3, α5β5, αvβ5), 인터페론 감마-유발 단백질, ITGA2, ITGB2, KIR2D, Kappa Ig, LCK, Le, 레구마인(Legumain), 루이스(Lewis)-Y 항원, LFA-1(림프구 기능-관련 항원 1, CD11a), LHRH, LINGO-1, 리포테이코 산, LIV1A, LMP2, LTA, MAD-CT-1, MAD-CT-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE A1, MAGE A3, MAGE 4, MART1, MCP-1, MIF(대식세포 이동 억제 인자, 또는 글리코실화 억제 인자(GIF)), MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A 멤버 1), MSLN(메소텔린), MUC1(뮤신 1, 세포 표면 관련(MUC1) 또는 다형성 상피 점액(PEM)), MUC1-KLH, MUC16(CA125), MCP1(단핵세포 화학주성 단백질 1), MelanA/MART1, ML-IAP, MPG, MS4A1(막-스패닝 4-도메인 서브패밀리 A), MYCN, 미엘린-관련 글리코단백질, 미오스타틴, NA17, NARP-1, NCA-90(과립구 항원), 넥틴-4(ASG-22ME), NGF, 신경 세포자멸-조절 프로테이나제 1, NOGO-A, 노치(Notch) 수용체, 뉴클레오린, Neu 종양유전자 생성물, NY-BR-1, NY-ESO-1, OX-40, OxLDL(산화된 저밀도 지질 단백질), OY-TES1, P21, p53 비돌연변이, P97, Page4, PAP, 항-(N-글리콜릴뉴라민산)의 파라토프, PAX3, PAX5, PCSK9, PDCD1(PD-1, 프로그램된 세포 사멸 단백질 1, CD279), PDGF-Rα(알파 형 혈소판-유도 성장 인자 수용체), PDGFR-β, PDL-1, PLAC1, PLAP-유사 고환 알칼리 포스파타아제, 혈소판-유도 성장 인자 수용체 베타, 인산염-나트륨 공-이송체, PMEL 17, 폴리시알산, 단백질 분해 효소 3(PR1), 전립선 암종, PS(포스파티딜세린), 전립선 암종 세포, 슈도모나스녹농균, PSMA, PSA, PSCA, 광견병 바이러스 글리코단백질, RHD(Rh 폴리펩티드 1(RhPI), CD240), 레수스 인자(Rhesus factor), RANKL, RhoC, 라스(Ras) 돌연변이, RGS5, ROBO4, 호흡기 세포 융합 바이러스, RON, ROR1, 육종 전위(translocation) 브레이크포인트, SART3, 스클레로스틴, SLAMF7(SLAM 패밀리 멤버 7), 셀렉틴 P, SDC1(신데칸 1), sLe(a), 소마토메딘 C, SIP(스핑고신-1-인산), 소마토스타틴, 정자 단백질 17, SSX2, STEAP1(전립선의 6-트랜스막 상피 항원 1), STEAP2, STn, TAG-72(종양 관련 글리코단백질72), 서바이빈(Survivin), T 세포 수용체, T 세포 트랜스막(transmembrane) 단백질, TEM1(종양 내피 마커 1), TENB2, 테나신 C(TN-C), TGF-α, TGF-β(형질 전환 성장 인자 베타), TGF-β1, TGF-β2(형질 전환 성장 인자-베타 2), 타이(Tie)(CD202b), 타이2, TIM-1(CDX-014), Tn, TNF, TNF-α, TNFRSF8, TNFRSF10B(종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 멤버 10B), TNFRSF-13B(종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 멤버 13B), TPBG(영양아층 글리코단백질), TRAIL-R1(종양 괴사 세포사멸 유도 리간드 수용체 1), TRAILR2(사멸 수용체 5(DR5)), 종양-관련 칼슘 시그널 트랜스듀서 2, MUC1의 종양 특이적 글리코실화, TWEAK 수용체, TYRP1(글리코단백질75), TRP-2, 티로시나제, VCAM-1(CD106), VEGF, VEGF-A, VEGF-2(CD309), VEGFR-1, VEGFR2, 또는 비멘틴, WT1, XAGE 1, 또는 임의의 인슐린 성장 인자 수용체 또는 임의의 상피 성장 인자 수용체를 발현하는 세포.
또 다른 특정 실시 양태에서, 본 발명의 가교 링커를 통한 세포-결합 리간드-약물 결합체는 암의 표적화 치료를 위해 사용된다. 표적 암은 여기에 제한되지 않지만, 부신 암, 항문 암, 방광암, 뇌종양(성인, 뇌 줄기 세포종, 유년기, 소뇌 성상 세포종, 대뇌 성상 세포종, 뇌실막종, 수엽 모세포종, 원시 신경 외배엽 및 뇌파 종양, 시각 경로 및 시상하부 신경교종), 난소암, 자궁 경부암, 자궁 내막 암, 식도암, 간외 담관암, 유잉(Ewing) 가족 종양(PNET), 유방암, 유방암, 유방암, 위장관 암, 담낭암, 위암, 위암, 생식 세포 종양, 내장 외상, 임신성 영양 모세포 종양, 두경부 암, 하인 인두 암, 섬 세포 암종, 신장 암(신 세포 암), 대장 암, , 후두암, 백혈병(급성 림프구 종양, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프 구성 백혈병, 만성 림프 구성 백혈병, 만성 골수성 털이 있는 세포), 립 및 구강 공동 암, 간암, 폐암(비소 세포, 소형 세포, 림프종(AIDS 관련, 중추 신경계 시스템, 피부 T 세포, 호 지킨 병, 비호 지킨 병, 악성 중피종, 흑색종, 메셀 세포 암, 오컬트 일차성 다발성 골수종 및 기타 혈장 세포 신 생물을 동반 한 전이성 편평 상피암, 난소암, 경구 암, 골육종, 난소 암(상피 세포, 생식 세포 종양, 저 악성 잠재 종양), 췌장암(외분비, 섬 세포 암종), 부비동 부비강염 및 비강 간세포 암, 간세포 암, 혈소판 암, 혈장 세포 신 생물, 전립선 암 횡문근 육종, 직장암, 신 세포 암(신장암), 신장 골반 및 폐렴(이행 세포), 침샘 암, Sezary 증후군, 피부암, 피부암(피부 T 세포 림프종, 카포시 육종, 흑색종), 소장 암, 연조직 육종, 위암, 고환암, 결장암, 갑상선암, 요도 암, 자궁암(육종) 유년기의 특이한 암, 질암, 불바르(Vulvar) 암, 윌름스(Wilms) 종양을 포함한다.
또 다른 특정 실시 양태에서, 본 발명의 가교 링커를 통한 세포-결합-약물 결합체는 자가 면역 질환의 치료 또는 예방을 위한 조성물 및 방법에 따라 사용된다. 자가 면역 질환은 여기에 제한되지 않지만, 아밀로스 글로불린 혈증, 탈모증, 아테롬성 경화증, 강직성 척추염, 항-GBM/TBM 신염, 항 인지질 증후군, 항생제 증후군, 관절염, 아토피성 피부염, 아토피성 피부염, 아토피성 피부염, 아토피성 피부염, 자가 면역성 빈혈, 자가 면역성 빈혈, 자가 면역성 용혈성 빈혈, 자가 면역성 간염, 자가 면역 내이 병, 자가 면역 림프 증식 증후군, 자가 면역 말초 신경 병증, 자가 면역 포도막염, 자가 면역 포도막염, 자가 면역 포도막염, Balo 병/Balo 동맥 경화증, 베쳇(Bechet) 증후군, 버거(Berger) 병, 비커 스태프뇌염, Blau 증후군, 수포유 천포창, 캐슬맨 병, 자궁 내막 증후군, 샤가스 질병, 만성 피로 면역 증후 증후군, 만성 염증성 탈수 초성 다발성 신경 병증, 만성 재발 성 다발성 골수염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 척 슈트라우스 증후군, 간질성 천포창, 복강경 질환, 코간 증후군, 냉 응집소증, 보체 성분 2 결핍증, 크론병(뇌 동맥염), 크레스트 증후군(CREST증후군), 크론병(크론병)(일명 특발성 염증성 장 질환), 커싱 증후군, 피부 백혈구 파괴성 혈관염, 데고 병, 데쿨 룸 병, 피부 근염, 당뇨병, 1 형 당뇨병, 드레서 증후군, 낭창 성 홍 반성 루푸스, 습진, 자궁 내막증, 유착 성 관절염, 호산 구성 근막염, 표피 박리증, 결절 홍반, 에반 증후군, 섬유 아세포, 섬유 근육통 굿모딘 신염, 그레이브 스 병, 길랑 바레 증후군, 하시 모토 뇌염, 하시 모토 갑상선염, 용혈성 빈혈, 헤 노크 숀 레인 자반병, 헤르페스 임신, 육아종 염 방염제, 휴즈 등의 여러 가지 증상, 특발성 폐 섬유증, 특발성 혈소판 감소 성 자반증(자가 면역 혈소판 감소 자반증 참조), IgA 신 병증(베르거 병), 삽입 체 근육염, 염증성 질환(증후군), 항 염증성 백혈병 증후군(항 인지질 증후군 참조) 탈수 초성 다발성 신경 병증, 간질성 방광염, 과민성 대장 증후군, 청소년 특발성 관절염, 유년기 류마티스 관절염, 가와사키 병, 램버트-이튼 근증 증후군, 백혈구 파괴성 혈관염, 편평 태선, 이화근 경화증, 선형 IgA 병, 루게릭 병(근 위축성 측삭 경화증), 믹서 증후군, 혼합성 결합 조직 질환, 모피아, 뮐러-하버만 병, 맥클-웰즈 증후군, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 근염, 기면증, 만성 고혈압, 고혈압, 파킨슨 증후군, 파손지 터너증후군(파슨 로마 마 증후군, 파 손지 터너 증후군, 파 손지 터너 증후군), 뇌척수막 색소 침착증, 패혈증 성 야간 혈색소증, 패혈증 성 야간 혈색소증, 파 손지 터너증후군, 파니 티스, 천포창, 천포창, 천포창, 페르 니아 증후군, POEMS 증후군, 결절성 다발성 동맥염, 다발성 근염류마티스 관절염, 다발성 근염, 원발성 담즙성 간경변, 진행성 염증성 신경 병증, 건선, 건선 관절염, 피하 증후군, 순수한 적혈구 증식증, 라스무센의 뇌염, 레이노현상, 재발성 다발성 연골염, 라이 타 증후군, 하지 불안 증후군, 후 복막 섬유증, 류마티스 관절염, 류마티스 열, 사루이도 증, 정신 분열병, 슈미트 증후군, 슈니츨러 증후군, 공막염, 경피증, 쇼그렌 증후군, 척추 관절 병증, 끈끈한 혈액 증후군, 스틸 병, 뻣뻣한 사람 증후군, 아 급성 세균성 심내막염, 수삭 증후군, 스위트 증후군, 시 덴햄 코 레아, 교감 신경 안검염, 다카 야수의 동맥염, 일시적인 동맥염, 거대 세포 동맥염, 용이함, 미분화 척추 관절 병증, 혈관염, 창백, 베게너 육아 종증, 윌슨 증후군, 위스 코트-알드리치 증후군을 포함한다.
또 다른 특정 실시 양태에서, 자가 면역 질환의 치료 또는 예방을 위한 본 발명의 가교 링커를 통해 결합체에 사용되는 결합 분자는 여기에 제한되지 않지만, 항-엘라스틴 항체; 상피 세포 항체에 대한 숙주; 항-지하 멤브레인 콜라겐 타입 IV단백질 항체; 항핵 항체; 항-ds DNA; 항-ss DNA, 안티 카디오리핀 항체 IgM, IgG; 항균제 항체; 항 인지질 항체 IgK, IgG; 항 SM 항체; 항 미토콘드리아 항체; 갑상선 항체; 미세 종양 항체, T 세포 항체; 티로글로불린항체, 항 SCL-70; 항-조; 항-U1RNP; 항-La/SSB; 항-SSA; 항-SSB; 항체 세포 항체; 항-히스톤 스; 항-RNP; C-ANCA; P-ANCA; 항-중심지;항-섬유소및 항-GBM항체, 항-갱글리오시드 항체; 항-데스모게인 3 항체; 항-p62 항체; 항-sp100 항체; 항-미토콘드리아(M2) 항체; 류마티스 인자 항체; 항-MCV 항체; 항-토포이소머라제 항체; 항-호중구 세포질(cANCA) 항체를 포함한다.
특정의 바람직한 실시 예에서, 본 발명의 결합체에 대한 결합 분자는 자가 면역 질환과 관련된 활성화된 림프구 상에 발현된 수용체 및 수용체 복합체 모두에 결합할 수 있다. 수용체 또는 수용체 복합체는 면역 글로불린 유전자 수퍼패밀리 멤버(예: CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD28, CD30, CD33, CD37, CD38, CD56, CD70, CD79, CD79b, CD90, CD125, CD137, CD138, CD147, CD152/CTLA-4, PD-1, 또는 ICOS), TNF 수용체 수퍼패밀리 멤버(예:CD27, CD40, CD95/Fas, CD134/OX40, CD137/4-1BB, INF-R1, TNFR-2, RANK, TACI, BCMA, 오스테오프로테제린, Apo2/TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRAIL-R3, TRAIL-R4, 및 APO-3), 인테그린, 사이토카인 수용체, 케모카인 수용체, 주요 조직 적합성 단백질, 렉틴(C-형, S 형 또는 I-형), 또는 보체 대조 단백질을 포함할 수 있다.
또 다른 특정 실시 양태에서, 바이러스 또는 미생물 항원에 대해 면역 특이적인 유용한 세포 결합 리간드는 인간화 또는 인간 단일클론성 항체이다. 본원에 사용 된 용어 "바이러스 항원"은 여기에 제한되지 않지만, 임의의 바이러스 펩티드, 폴리 펩티드 단백질(예: HIV gp120, HIV nef, RSV F 당 단백질, 인플루엔자 바이러스 뉴 라미미다제, 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌, HTLV 택스, 단순 포진 바이러스 당단백(예 : gB, gC, gD 및 gE) 및 B 형 간염 표면 항원)를 포함하고, 이는 면역 반응을 유도 할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "미생물 항원"은 여기에 제한되지 않지만, 임의의 미생물 펩티드, 폴리 펩티드, 단백질, 사카라이드, 다당류 또는 지질 분자(예: 박테리아, 균류, 병원성 원충 또는 효모 폴리펩티드, 예컨대 LPS 및 캡슐 폴리사카라이드 5/8 포함)를 포함하고, 이는 면역 반응을 유도할 수 있다. 바이러스 또는 미생물 감염에 이용 가능한 항체의 예로는 여기에 제한되지 않지만, RSV 감염의 치료를 위한 인간화된 호흡기 융합형 바이러스 단일클론 항체인 팔리비주맙; HIV 감염의 치료를 위한 CD4 융합 항체인 PRO542; B형 간염 바이러스 치료용 인간 항체인 오스타비르(Ostavir); 사이토메갈로 바이러스의 치료를 위한 인간화된 IgG.sub.1 항체인 PROTVIR; 및 항-LPS 항체를 포함한다.
본 발명의 가교 링커를 통한 세포 결합 분자-약물 결합체는 감염성 질환의 치료에 사용될 수 있다. 이러한 감염성 질병은 여기에 제한되지 않지만, 아시네토박테르 감염, 방선균 감염, 아프리카 수면병(아프리카 트리파노소미아시스), 에이즈(후천성 면역 결핍증), 아메바병, 아나플라즈마증, 탄저병, 아르카노-박테리아 해몰리티컴 감염, 아르헨티나 출혈열, 아스카리아시스, 아스페르길루스증, 아스트로바이러스 감염, 바베시아시스, 바실루스 세레우스 감염, 세균성 폐렴, 세균성 질염, 박테로이드 감염, 발란티디아시스(Balantidiasis), 바일이사스카리스(Baylisascaris) 감염, BK 바이러스 감염, 블랙 피에드라(Black piedra), 블라스토시스티스 호미니스(Blastocystis hominis) 감염, 블라토미코시스(Blastomycosis), 볼리비안 출혈열(Bolivian hemorrhagic fever), 보렐리아(Borrelia) 감염, 보툴리즘(및 유아 포툴리즘), 브라질 출혈열, 브루셀로시스(Brucellosis), 버크홀데리아(Burkholderia) 감염, 부룰리(Buruli) 궤양, 칼리시(Calici)바이러스 감염, 노로바이러스 및 사포바이러스), 캄필로박테리아증(Campylobacteriosis), 칸디디아시스(모닐리아시스: Thrush), 캣-스크래치 질병, 셀룰리염, 차가스병(미국 트라파노소미아시스), 샹크로이드(Chancroid), 수두, 클라미디아(Chlamydia), 클라미도필라 진폐증 감염, 콜레라,
크로모블라스토미코시스(Chromoblastomycosis), 클로노치아시스(Clonorchiasis), 클로스트리듐 디피실레(Clostridium difficile) 감염, 콜로라도 진드기증(Coccidioido-mycosis), 콜로라도 틱 열(Colorado tick fever); 일반 감기(급성 바이러스성 비인두염; 급성 코감기), 크루츠펠트-야콥(Creutzfeldt-Jakob) 병, 크리미아-콩고(Crimean-Congo) 출혈열, 크립토코코시스(Cryptococcosis), 크립토스포리디오시스(Cryptosporidiosis), C피부 유층 이주(utaneous larva migrans), 사이클로스포리아시스(Cyclosporiasis), 시스티세르코시스(Cysticercosis),
시토메갈로바이러스 감염, 뎅기열, 디엔타모에비아시스(Dientamoebiasis), 디프테리아(Diphtheria), 디필로보트리아시스(Diphyllobothriasis), 드라큔큘리아시스(Dracunculiasis), 에볼라 출혈열, 에치노코코시시(Echinococcosis), 에르리치오시스(Ehrlichiosis), 엔테로바이아시스(엔테로바이아시스), 핀웜 감염, 엔테로콕쿠스(Enterococcus) 감염, 엔테로바이러스 감염, 유행성 발진티푸스, 홍반 감염(제4 질병), 돌발성 발진, 비대흡충증(Fasciolopsiasis), 간질증(Fasciolosis), 치명적 가족성 불면증, 필라리아병(Filariasis), 클로스트리듐 페르프린젠스에 의한 식중독(Food poisoning by Clostridium perfringens), 자유생활아메바 감염, Fusobacterium 감염, 가스 괴저(클로스트리듐성 근괴사), 지오트리쿰증(Geotrichosis), 저스트만-스트라우셀러-세인커 증후근(Gerstmann-Str
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ussler-Scheinker syndrome), 지아디아시스, 글랜더스, 그나토스토-미아시스(Gnathosto-miasis), 임질(Gonorrhea), 그라눌로마 잉구날레(도노반증)(Granuloma inguinale (Donovanosis)), 그럽 A 연쇄상구균 감염, 그룹 B 연쇄상구균 감염, 해모필루스 인플루엔자 감염, 손, 발 및 구강 병(HFMD), 한타바이러스 폐 증후군, 헬리코박터균 감염, 용혈성-요독성증후군(Hemolytic-uremic syndrome), 유행성 출혈열, A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 단순 포진, 히스토플라스마증(Histoplasmosis), 구충 감염, 인간 보카바이러스 감염, 인간 이윈기(ewingii) 엘리히증(ehrlichiosis), 인간 과립구 아나플즈마증(Human granulocytic anaplasmosis), 인간 메타뉴모바이러스 감염, 인간 단핵구 엘리히증(Human monocytic ehrlichiosis), 인간 파필로마바이러스 감염, 인간 파라인플루엔자 바이러스 감염, 선충증(Hymenolepiasis), 엡스테인-바(Epstein-Barr) 바이러스, 전염성 단핵세포증(Infectious Mononucleosis) (Mono), 인플루엔자, 이소스포리아시스, 가와사키 병, 각막염, 킨젤라 킨가에(Kingella kingae) 감염, 쿠루(Kuru), 라사열(Lassa fever), 레지오넬로시스(Legionnellosis) 병, 레지오넬로시스(폰티악 열), 리슈마니어증(Leishmaniasis), 문둥병(Leprosy), 렙토스피라병(Leptospirosis), 선회병(Listeriosis), 라임병(Lyme disease) (Lyme borreliosis), 림프액 필라리아병(Lymphatic filariasis) (상피병), 림프구성 맥낙 뇌막염(Lymphocytic choriomeningitis), 말라리아, 마르부르크 출혈열(Marburg hemorrhagic fever), 홍역, 멜리오이도시스(Melioidosis) (휘트모어병), 수막염(Meningitis), 수막구균성 질환(Meningococcal disease), 요코가와흡충증(Metagonimiasis), 미포자충증(microsporidiosis), 전염성 연속종(Molluscum contagiosum), 유행성 이하선염, 발진열(Murine typhus) (Endemic typhus), 마이코플라스마폐렴(Mycoplasma pneumonia), 균종(Mycetoma), 구데기증(Myiasis), 신생아 결막염(Neonatal conjunctivitis) (Ophthalmia neonatorum), (신규) 변종 크로이츠펠트-야콥병(Variant Creutzfeldt-Jakob disease) (vCJD, nvCJD), 노카르디아증(Nocardiosis), 사상충증(Onchocerciasis) (River blindness), 파라콕시디오이데스진균증(Paracoccidioidomycosis), 남아메리카분아균증(South American blastomycosis), 폐흡충증(Paragonimiasis), 파스투렐라병(Pasteurellosis), 머리이 기생증(Pediculosis capitis) (머리이), 몸이 기생증(Pediculosis corporis) (이), 치골이 기생증(Pediculosis pubis) (치골이, 사면발이), 골반내 염증 질환(Pelvic inflammatory disease), 백일??(Pertussis) (Whooping cough), 전염병, 폐렴쌍구균 감염, 뉴모시스티스폐렴(Pneumocystis pneumonia), 폐렴, 급성 회백수염(Poliomyelitis), 프레보텔라(Prevotella) 감염, 원발성 아메바성 수막뇌염(Primary amoebic meningoencephalitis), 점진적인 여러개의 백색질뇌병(Progressive multifocal leukoencephalopathy), 앰무새병(Psittacosis), Q 열병, 라비에스(Rabies), 쥐물음열(Rat-bite fever), 호흡기 합성 바이러스 감염, 비육아종(Rhinosporidiosis), 리노바이러스 감염, 리케차(Rickettsial) 감염, 리케차-폭스(Rickettsial-pox), 리프트밸리열(Rift Valley fever), 로키산 홍반열(Rocky mountain spotted fever), 로타바이러스 감염, 루벨라(Rubella), 살모넬라증(Salmonellosis), SARS (급성 호흡기 증후군), 옴(Scabies), 주혈흡충병(Schistosomiasis)), 염증(Sepsis), 적리(Shigellosis) (세균성 이질), 대상포진 (대상포진), 천연두(Variola), 스포로트리코시스(Sporotrichosis), 스타필로콕칼 식중독(Staphylococcal food poisoning), S스타필로콕칼 감염, 간충증(Strongyloidiasis), 매독(Syphilis), 촌충기생(Taeniasis), 파상풍(Tetanus) (Lockjaw), 백선성모창(Tinea barbae) (Barber's itch), 두부백선(Tinea capitis) (Ringworm of the Scalp), 체부백선(Tinea corporis) (Ringworm of the Body), 살색백선(Tinea cruris) (Jock itch), 손 백선(Tinea manuum) (Ringworm of the Hand), 흑백선(Tinea nigra), 족부백선(Tinea pedis) (Athlete's foot), 손톱백선(Tinea unguium) (Onychomycosis), 전풍(Tinea versicolor) (Pityriasis versicolor), 톡소카라증(Toxocariasis) (유충안구이행증(Ocular Larva Migrans)), 톡소카라증 (장기유충이행충(Visceral Larva Migrans)), 톡소플라스마증, 섬모충증(Trichinellosis), 질 트리코모나스증(Trichomoniasis), 편충증(Trichuriasis) (편충 감염), 폐결핵(Tuberculosis), 야토병(Tularemia), 우레아플라즈마 우레알리티쿰(Ureaplasma urealyticum) 감염, 베네수엘라뇌척수염(Venezuelan equine encephalitis), 베네수엘라 출혈열, 바이러스성 폐렴, 서부 나일강 열(West Nile Fever), 백색사모(White piedra) (Tinea blanca), 예르시니아속(Yersinia) 가성 결핵(pseudotuber-culosis) 감염, 황열병, 털곰팡이증(Zygomycosis)을 포함한다.
보다 바람직하게는, 병원성 병 종류에 대항하는 본 특허에 기재된 항체인 세포 결합 분자는 여기에 제한되지 않지만,
아시네토박터 바우마니규(Acinetobacter baumannii), 항엑티노마이세스 이스라엘리(Actinomyces israelii), 악티노미세스속의 방사균 제렌세리애(Actinomyces gerencseriae) 및 프포피온니박테리아 프로피오니큐스(Propionibacterium propionicus), 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), HIV (인간 면연 결핍 바이러스), 이질아메바(Entamoeba histolytica), 안나플라즈마 속(Anaplasma genus), 탄저균(Bacillus anthracis), 용혈성 아카노박테리아균(Arcanobacterium haemolyticum), 후닌 바이러스, 회충(Ascaris lumbricoides), 아스페르길루스 속(Aspergillus genus), 아스트로비리대 과(Astroviridae family), 바베시아 속(Babesia genus), 바실루스 세레우스(Bacillus cereus), 멀티플 박테리아(multiple bacteria), 박테로이드 속(Bacteroides genus), 대장발란티디움(Balantidium coli), 배이리사스카리스 속(Baylisascaris genus), BK 바이러스, 피에드라이아 호르태(Piedraia hortae), 블라스토시스티스 호미니스(Blastocystis hominis), 블라스토마이세스 더마티티드(Blastomyces dermatitides), 마추포(Machupo) 바이러스, 보렐리아 속(Borrelia genus), 클로스트리디움 보툴리늄(Clostridium botulinum), 사비아(Sabia), 브루셀라균 속(Brucella genus), 통상 부르크홀데리아 세파시아(usually Burkholderia cepacia) 및 다른 부르크홀데리아 종, 마이코박테륨 울세란스(Mycobacterium ulcerans), 칼리시비리대 과(Caliciviridae family), 캄필로박터 속(Campylobacter genus), 통상 칸디다 알부칸스(Candida albicans) 및 칸디다 종, 바르토넬라 헨셀래(Bartonella henselae), 그룹 A 연쇄상구균 및 포도상구균, 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 헤모필루스 듀크레이(Haemophilus ducreyi), 바리세포라 조스터(Varicella zoster) 바이러스 (VZV), 클라미디아트라코마티스( Chlamydia trachomatis), 클라미도필라 폐렴(Chlamydophila pneumoniae), 콜레라균(Vibrio cholerae), Fonsecaea pedrosoi, 간흡충(Clonorchis sinensis), 클로스트리듐 디피실(Clostridium difficile), 콕시디오이데스임미티스((Coccidioides immitis) 및 콕시디오이데스 포사다씨(Coccidioides posadasii), 콜로라도 틱 열병(Colorado tick fever) 바이러스, 리노바이러스, 코로나바이러스, CJD 프리온, 크림-콩고 출혈열(Crimean-Congo hemorrhagic fever) 바이러스, 크립토콕쿠스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 크립토스포르디움 속(Cryptosporidium genus), 브라질구충(Ancylostoma braziliense); 멀티플 기생충(multiple parasites), 시클로스포라 카이에넨시스(Cyclospora cayetanensis), 태니아 솔리움(Taenia solium), 시토메갈로바이러스, 덴구에(Dengue) 바이러스 (DEN-1, DEN-2, DEN-3 and DEN-4) - 플라비(Flavi)바이러스, 장관기생아메바(Dientamoeba fragilis), 코리네박테리아 디프테리아균(Corynebacterium diphtheriae), 열두조충(Diphyllobothrium), 메티나선충(Dracunculus medinensis), 에볼라바이러스, 에치노콕쿠스 속(Echinococcus genus), 에를리히아속(Ehrlichia genus), 요충(Enterobius vermicularis), 엔테로콕쿠스 속(Enterococcus genus), 엔테로바이러스 속, 발진티푸스 리케치아(Rickettsia prowazekii), 파르보(Parvo) 바이러스 B19, 인간 헤르페스바이러스 6 및 인간 헤르페스(herpes) 바이러스 7, 비대흡충(Fasciolopsis buski), 간질(Fasciola hepatica) 및 거대 간질(Fasciola gigantica), FFI 프리온(prion), 사상충 상과(Filarioidea superfamily), 클로스트리듐 페르프린젠스(Clostridium perfringens), 푸소박테륨 속(Fusobacterium genus), 클로스트리듐 초과(Clostridium perfringens); 다른 클로스트리듐 종, 게오트리쿰 칸디둠(Geotrichum candidum), GSS 프리온(prion), 장내 편모충(Giardia intestinalis), 부르크홀데리아 말레이(Burkholderia mallei), 유극악근충(Gnathostoma spinigerum) 및 강극악구충(Gnathostoma hispidum), 임균(Neisseria gonorrhoeae), 클레브시엘라 그라눌로마티스(Klebsiella granulomatis), 고름사슬알균(Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스 아갈락티아(Streptococcus agalactiae), 해모필러스 인플루엔자(Haemophilus influenzae), 엔테로바이러스, 주로 톡사키(Coxsackie) A 바이러스 and 엔테로Entero 71, 신 놈브레(Sin Nombre) 바이러스, 헬리코박터 파일로리균(Helicobacter pylori), 대장균(Escherichia coli) O157:H7, 부니아바이러스과(Bunyaviridae family), 간염 A 바이러스, 간염 B 바이러스, 간염 C 바이러스, 간염 D 바이러스, 간염 E 바이러스, 헤르페스 심플렉스 바이러스 1, 헤르페스 심플렉스(Herpes simplex) 바이러스 2, 히스토플라스마 캡슐라툼(Histoplasma capsulatum), 십이지장충(Ancylostoma duodenale) 및 아메리카 구충(Necator americanus), 헤모필루스 인플루엔자(Hemophilus influenzae), 휴먼 보카(Human boca) 바이러스, 에를리히아속 이윙이(Ehrlichia ewingii), 아나플라즈마 파고시토필륨(Anaplasma phagocytophilum), 휴먼 메타뉴모(metapneumo)바이러스, 에를리히아 샤펜시스(Ehrlichia chaffeensis), 휴먼 파필로마바이러스, 인간 파라인플루엔자 바이러스, 소형조충(Hymenolepis nana) 및 쥐조충(Hymenolepis diminuta), 엡스테인-바(Epstein-Barr) 바이러스, 오르토믹소비리대 과(Orthomy-xoviridae family), 이소스포라 벨리(Isospora belli), 킨젤라 킨가에(Kingella kingae), 클레브시엘라 폐렴(Klebsiella pneumoniae), 클레브시엘라 오자에나스(Klebsiella ozaenas), 클레브시엘라 리노스클레로모티스(Klebsiella rhinoscleromotis), 크루 프리온(Kuru prion), 라사(Lassa) 바이러스, 레지오넬라 폐렴(Legionella pneumophila), 레지오넬라 폐렴(Legionella pneumophila), 페이쉬마니아 속(Leishmania genus), 나병균(Mycobacterium leprae) 및 미코박테리움 레프로마토시스(Mycobacterium lepromatosis), 렙토스피라균 속(Leptospira genus), 리스테리아 모노시토제네스(Listeria monocytogenes), 보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi) 및 다른 보렐리아 종(Borrelia species), 반크로프트사상충(Wuchereria bancrofti) 및 말레이사상충(Brugia malayi), 림프구성 맥낙 뇌막염(Lymphocytic choriomeningitis) 바이러스 (LCMV), 말라리아원충 속(Plasmodium genus), 마버그(Marburg) 바이러스, Measles 바이러스, 부르콜데리아 슈도말라이(Burkholderia pseudomallei), 나이세리아 메닝지티드(Neisseria meningitides), 메타고니무스 요카가와이(Metagonimus yokagawai), 마이코플라스마 문(Microsporidia phylum), 전염성 연속종(Molluscum contagiosum) 바이러스 (MCV), 볼거리(Mumps) 바이러스,발진열리케치아(Rickettsia typhi), 미코플라스마 폐렴(Mycoplasma pneumoniae), 다수중의 박테리아(악티노미세토마) 및 균(에우미세토마(Eumycetoma)), 기생충 날개달린 파리 유충(parasitic dipterous fly larvae), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis) 및 임균(Neisseria gonorrhoeae), vCJD 프리온, 노카디아 아스테로이드(Nocardia asteroides) 및 다른 노카르디아 종(Nocardia species), 회선사상충(Onchocerca volvulus), 브라질 파라콕시디오이디즈(Paracoccidioides brasiliensis), 폐흡충(Paragonimus westermani) 및 다른 폐흡충 종, 파스퇴렐라 속(Pasteurella genus), 머리이(Pediculus humanus capitis), 몸이(Pediculus humanus corporis), 사면발이(Phthirus pubis), 백일해균(Bordetella pertussis), 페스트균(Yersinia pestis), 스트렙토콕쿠스 폐렴(Streptococcus pneumoniae), Pneumocystis jirovecii, 폴리오(Polio)바이러스, 프레보텔라 속(Prevotella genus), 파울러 자유아메바(Naegleria fowleri), JC 바이러스, 클라미도필라 프시타시(Chlamydophila psittaci), 콕시엘라 부르네티(Coxiella burnetii), 라비에스(Rabies) 바이러스, 스트렙토바실루스 모닐리포르미스(Streptobacillus moniliformis), 및 스피리룸 미너스(Spirillum minus), 호흡기 합성 바이러스, 리노스포리듐 시베리(Rhinosporidium seeberi), 리노바이러스, 리케치아 속(Rickettsia genus), 리케차 아카리(Rickettsia akari), 리프트 밸리 피버(Rift Valley fever) 바이러스, 리케차 리케시(Rickettsia rickettsii), 로타바이러스, 루벨라바이러스, 살모넬라 속(Salmonella genus), SARS, 코로나바이러스, 사르콥테스 스카비에이(Sarcoptes scabiei), 스치스토소마 속(Schistosoma genus), 시겔라 속(Shigella genus), 바리셀라 조스터(Varicella zoster) 바이러스, 바리올라 메이저(Variola major) 또는 바리올라 마이너(Variola minor), 스포로트릭스 셴키( Sporothrix schenckii), 포도상구균 속(Staphylococcus genus), 연쇄상구균 속(Staphylococcus genus), 황색포도알균(Staphylococcus aureus), 스트렙토콕쿠스 피오제네스(Streptococcus pyogenes), 분선충(Strongyloides stercoralis), 매독트레포네마(Treponema pallidum), 태니아 속(Taenia genus), 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani), 트리코피톤 속(Trichophyton genus), 트리코피톤 토수란스(Trichophyton tonsurans), 에피더모피톤 플록코섬(Epidermophyton floccosum), 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrum), 및 트리코피톤 메타그로피테스(Trichophyton mentagrophytes), 트리코피톤 루브룸(Trichophyton rubrum), 호르태아 웨넥키(Hortaea werneckii), 트리코피톤 속(Trichophyton genus), 말라세지아 속(Malassezia genus), 견회충(Toxocara canis) 또는 or Toxocara cati, 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii), 선모충(Trichinella spiralis), 트리코모나스 바지날리스(Trichomonas vaginalis), 트리처리스 트리치우라(Trichuris trichiura), 미코박테리움 투베르큘로시스(Mycobacterium tuberculosis), 프란시셀라 투라렌시스(Francisella tularensis), 우레아플라즈마 우레알리티쿰(Ureaplasma urealyticum), 베네수엘라형 마뇌염(Venezuelan equine encephalitis) 바이러스, 비브리오 콜레라, 구아나리토(Guanarito) 바이러스, 웨스트 나일(West Nile) 바이러스, 트리초스포론 베이겔리(Trichosporon beigelii), 예러시니아 슈도투벨르큘로시스(Yersinia pseudotuberculosis), 예르시니아 엔테로코리티카(Yersinia enterocolitica), 황열병 바이러스, 무코랄레스 오더(Mucorales order)(Mucormycosis) 및 엔토프토랄레스 오더(Entomophthorales order) (Entomophthora-mycosis), 슈도모나스 아레루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 캄필로박테르(Campylobacter) (비브리오)태아, 아에로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila), 어드워드시엘라 타르다( Edwardsiella tarda), 페스트균(Yersinia pestis), 시겔라 디센테리아(Shigella dysenteriae), 시겔라 플렉스네리(Shigella flexneri), 시겔라 손네이(Shigella sonnei), 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium), 트레포네마 페르테누이(Treponema pertenue), 트레포네마 카르테늄(Treponema carateneum), 보렐리아 빈센티(Borrelia vincentii), 보렐리아 부르고도리페리(Borrelia burgdorferi), 렙토스피라 이시테로헤모르하지애(Leptospira icterohemorrhagiae), 뉴모시스티스 카리니(Pneumocystis carinii), 소유산균(Brucella abortus), 돼지유산균(Brucella suis), 말타열균(Brucella melitensis), 미코플라스마 종(Mycoplasma spp.), 리케차 프로와제키(Rickettsia prowazeki), 리케차 츠츠구무쉬(Rickettsia tsutsugumushi), 클라미디아 종(Clamydia spp.); 병원균(pathogenic fungi) (아스페르질루스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 히스토플라스마 캅술라튬(Histoplasma capsulatum); 프로토조아(protozoa) (엔토모에바 히스톨리티카(Entomoeba histolytica), 트리초모나스 테나스(Trichomonas tenas), 트리초모나스 호미니스(Trichomonas hominis), 트리오아노소마 감비엔스(Tryoanosoma gambiense), 트리파노소마 로데시엔세(Trypanosoma rhodesiense), 도너반리슈만편모충(Leishmania donovani), 리슈만 트로피카(Leishmania tropica), 리슈만 브라질리엔시스(Leishmania braziliensis), 뉴머시스티스성 폐렴(Pneumocystis pneumonia), 삼일열 말라리아 원충(Plasmodium vivax), 악성 말라리아 원충(Plasmodium falciparum), 플라스모듐 말라리아(Plasmodium malaria); 또는 헬미니스(Helminiths), (일본주혈흡충(Schistosoma japonicum), 만손주혈흡충(Schistosoma mansoni), 방광주혈흡충(Schistosoma haematobium), 및 십이지장충(hookworm)를 포함한다.
바이러스성 질환의 치료를 위해 본 발명에서 사용되는 세포 결합 리간드로서의 다른 항체는 병원성 바이러스의 항원에 대항하는 항체이며, 이는 이에 제한되지 않지만, 포옥시리대(Poxyiridae), 헤러페스비리대(Herpesviridae), 아데노비리대(Adenoviridae), 파포바비리대(Papovaviridae), 엔테로비리대(Enteroviridae), 피코르나비리대(Picornaviridae), 파르보비리대(Parvoviridae), 레오비리대(Reoviridae), 레트로비리대(Retroviridae), 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리, 홍역, 호흡기 세포융합 바이러스, 풍진, 아르보비리대(Arboviridae), 라브도비리대(Rhabdoviridae), 아레나비리대(Arenaviridae), 비-A/비-A 간염 바이러스, 리노비리대(Rhinoviridae), 코로나비리대(Coronaviridae), 로토비리대(Rotoviridae), 온코바이러스(Onco바이러스) [예컨대, HBV (간세포 암종), HPV (자궁 경부암, 항문암), 카포시 육종 관련 포진 바이러스(카포시 육종), 엡스타인-바르바이러스(비인두 암종, 버킷 림프종, 원발 중추 신경계 림프종), MCPyV (메르켈 세포 암), SV40 (시마안 바이러스 40), HCV (간세포 암종), HTLV-I (성인 T-세포 백혈병/림프종)], 면역 장래로 인한 바이러스: [예컨대, 인간면역결핍바이러스(AIDS)]; 중추 신경계 바이러스: [예컨대, JCV (진행성 다병성 백혈구증), MeV (아급성 경화성 뇌막염), LCV (림프구성 초리오메닝기티스(choriomeningitis)), 아르보바이러스 뇌염, 오르토미소비리대(Orthomyxoviridae) (가능성) (뇌염), RV (Rabies), 허페스비럴(Herpesviral) 수막염, 램지 헌트 증후군 유형 II; 폴리오 바이러스(소아마비, 소아마비후 증후군), HTLV-I (열대성 경련성 대항 동맥증)]; 사이토메갈로바이러스(Cytomegalovirus) (사이토메갈로 바이러스 망막염, HSV (Herpetic keratitis));심혈관계 바이러스[예컨대, CBV (Pericarditis, Myocarditis)]; 호흡기 계통/급성 바이러스 비인두염/바이러스성 폐렴: [엡스테인-바르 바이러스(Epstein-Barr virus) (EBV 감염/전염성 단핵구증), 시토메갈로바이러스(Cytomegalovirus); SARS 코로나 바이러스(중증 급성 호흡기 증후군), 오르토미시오비리대(Orthomyxoviridae): 인플루엔자 A/B/C (인플루엔자/조류 인플루엔자), 파라미시오바이러스(Paramyxovirus): 인간 파라인플루엔자 바이러스(파라인플루엔자), RSV (인간 호흡기 신티알바이러스(syncytialvirus), hMPV]; 소화계 바이러스[MuV (Mumps), 시토메갈로바이러스((시토메갈로 바이러스 에소파지티스(esophagitis); 아데노바이러스(아데노바이러스 감염); 로타바이러스, 노보바이러스, 아스트로바이러스, 코로나바이러스; HBV (B형 간염바이러스), CBV, HAV (A형 간염바이러스), HCV (C형 간염바이러스), HDV (D형 간염바이러스), HEV (E형 간염바이러스), HGV (G형 간염바이러스)]; 비뇨생식기 바이러스[예컨대, BK 바이러스, MuV (Mumps)]를 포함한다.
또 다른 목적에 따르면, 본 발명은 또한 암, 감염 또는 자가 면역 장애의 치료를 위한 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 함께, 본 발명의 가교 링커를 통한 결합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 암, 감염 및 자가 면역 질환의 치료 방법은 생체 외, 생체 내 또는 체외에서 수행될 수 있다. 시험관 내 사용의 예로는 표적 항원을 발현하지 않는 바람직한 변이체를 제외한 모든 세포를 사멸하거나, 또는 바람직하지 않은 항원을 발현하는 변이체를 사멸하기 위한 세포 배양 처리를 포함한다. 생체 외 사용의 예로는 병에 걸린 세포 또는 악성 세포를 사멸시키기 위해 동일한 환자에게 이식(HSCT)을 수행하기 전에, 조혈 줄기 세포(HSC)를 처리하는 방법을 포함한다. 예를 들어, 암 치료 또는 자가 면역 질환의 치료에서 자가 이식 이전에, 골수에서 종양 세포 또는 림프 세포를 제거하는 생체 외적 처치, 또는 이식편 대 숙주 질환을 방지하기 위해 이전 전에 T 세포 및 다른 림프구 세포를 제거하는 생체 외 처치는 다음과 같이 수행될 수 있다. 골수를 환자 또는 다른 개체로부터 수확한 다음, 약 37 ℃에서 약 30 분 내지 약 48 시간 동안, 약 1 pM 내지 0.1 mM의 농도 범위의 본 발명의 결합체가 첨가된 혈청을 함유하는 배지에서 배양한다. 정확한 농도 및 배양 시간(=투여량)은 숙련된 임상의에 의해 쉽게 결정된다. 배양 후, 골수 세포를 혈청을 함유하는 배지로 세척하고, 공지된 방법에 따라 환자의 정맥내 주입한다. 환자가 골수 수확과 처리된 세포의 재주입 사이에 절제(ablative) 화학 요법 또는 전신 방사선 조사의 과정과 같은 다른 치료를 받는 상황에서, 처리된 골수 세포는 표준 의료 장비를 사용하여 액체 질소에 냉동 보관한다.
임상적 생체 내 사용에 있어서, 본 발명의 링커를 통한 결합체는 용액 또는 주입용 멸균 수에 재용해될 수 있는 동결 건조된 고체로 공급될 것이다. 결합체 투여의 적합한 프로토콜의 예는 다음과 같다. 결합체는 8~20 주 동안 주마다 정맥 내 한회분(i.v. bolus) 제공된다. 한회분 투여량(bolus dose)은 50 내지 500 ml의 생리 식염수로 제공되고, 이러한 생리 식염수에는 인간 혈청 알부민(예컨대, 인간 혈청 알부민의 농축 용액 0.5 내지 1 mL, 100 mg/mL)을 첨가될 수 있다. 투여량은 주당 체중의 약 50 ㎍ 내지 20 mg/kg를 (주사 1 회당 10μg 내지 200mg의 범위) 정맥 내 주사한다. 치료 후 4 ~ 20 주 후에, 환자는 두 번째 치료 과정을 시작할 수 있다. 투여 경로, 부형제, 희석제, 투여량, 시간 등에 관한 특정 임상 프로토콜은 숙련된 임상의에 의해 결정될 수 있다.
선택된 세포군을 죽이는 생체 내 또는 생체 외 방법에 따라 치료할 수 있는 의학적 상태의 예는 모든 유형의 암, 자가 면역 질환, 이식편 거부 및 감염(바이러스성, 세균성 또는 기생충)의 악성도를 포함한다.
원하는 생물학적 효과를 얻기 위해 필요한 결합체의 양은 결합체의 화학적 특성, 효능 및 생체 이용률, 질병의 유형, 환자가 속한 종, 환자의 질병 상태, 투여 경로, 필요한 용량을 지시하는 모든 인자, 투여 및 투여 방법을 포함하여 다수의 인자들에 따라 달라질 것이다.
일반적으로, 본 발명의 링커를 통한 결합체는 비경구 투여를 위한 0.1 내지 10% w/v 결합체를 함유하는 수성 생리학적 완충액으로 제공될 수 있다. 전형적인 투여량 범위는 하루에 체중 기준 1 ㎍/kg 내지 0.1 g/kg이고; 바람직한 투여량 범위는 하루에 하루당 0.01 mg/kg 내지 20 mg/kg 또는 주당 또는 인간 아이의 등가 투여량이다.투여되는 약물의 바람직한 투여량은 질병 또는 질환의 진행 유형 및 정도, 특정 환자의 전반적인 건강 상태, 선택된 화합물의 상대적인 생물학적 효능, 화합물의 제형, 투여 경로(정맥 내, 근육 내 또는 기타), 선택된 전달 경로에 의한 결합체의 약물 동력학적 특성, 및 속도(한회분 또는 연속 주입) 및 투여 계획(주어진 시간에서의 반복 횟수)와 같은 다양한 변수에 의존할 것이다.
본 발명의 링커를 통한 결합체는 또한 단위 투여량 형태로 투여될 수 있다. 용어 "단위 투여량"은 환자에게 투여될 수 있고, 활성 결합체 그 자체 또는 약학적으로 허용 가능한 조성물 중 하나를 포함하는 물리적 및 화학적으로 안정한 단위 투여량으로 유지한 상태로, 용이하게 취급 및 포장될 수 있는 단일 투여량을 의미한다. 따라서, 일일/주간/격주/월간 투여량의 일반적인 범위는 체중 기준 0.01-100 mg/kg 이다. 일반적 지침에 따라, 인간에 대한 단위 투약량은 하루에 1mg에서 3000mg까지 또는 주당, 2주당(격주) 또는 한달에 3000mg까지 다양하다. 바람직하게는, 단위 투여량 범위는 1 내지 500 mg을 1 주일에 1 내지 4 회, 더욱 바람직하게는 1 mg 내지 100 mg을 1 주일에 1 회, 또는 격주로 1 회, 또는 3 주에 1 회, 또는 1 달에 1 회 투여하는 것이다. 본원에서 제공되는 결합체는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제와의 혼합물에 의해 제약 조성물로 제형화될 수 있다. 이러한 단위 투여 조성물은 특히 정제, 단순 캡슐 또는 연질 겔 캡슐의 형태로 경구 투여을 위해 제조될 수 있고; 또는 비강 내 투여를 위해 특히 분말, 점비액 또는 에어로졸 형태로 제조될 수 있고; 또는 피부를 통한 투여를 위해 연고, 크림, 로션, 겔 또는 스프레이, 또는 경피 패치 형태로 제조될 수 있다.
약물/세포 독성제
본 발명에서 세포 결합 분자에 결합될 수 있는 약물은 세포 독성제를 포함하는 소분자 약물이며, 이는 세포-결합제와 결합하기 위해 결합되거나 개질된 후에 결합될 수 있다. "소분자 약물"은 본원에서 예를 들어 100 내지 2500, 보다 적절하게는 120 내지 1500의 분자량을 가질 수 있는 유기, 무기 또는 유기 금속 화합물을 지칭하기 위해 광범위하게 사용된다. 소분자 약물은 WO05058367A2 및 미국 특허 제4,956,303 호에 기재되어 있으며, 이들 모두는 참조를 위해 본 명세서에 포함된다. 약물은 알려진 약물 및 알려진 약물이 될 수 있는 약물을 포함한다.
알려진 약물에는 이에 국한되지는 않지만, 다음을 포함한다:
(1).화학 요법 치료제: a). 알킬화제: 예컨대, 질소 머스타드: 클로람부실, 클로르나파진, 시클로포스파미드, 다카르바진, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 히드로클로라이드, 만노머스틴, 미토브로니톨, 멜팔란, 미토락톨, 피포브로만, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 티오테파, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; CC-1065(그 아데젤레신, 카제레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CBI-TMI 포함); 벤조디아제핀 다이머(피롤로벤조디아제핀(PBD) 또는 토마이마이신, 인돌리노벤조디아제핀, 이미다조벤조티아디아제핀 또는 옥사졸리디논벤조디아제핀의 다이머로부터 선택됨); 니트로소우레아:(카무스틴, 로무스틴, 클로로조토신, 포트무스틴, 니무스틴, 라니무스틴); 알킬술포네이트:(부술판, 트레오술판, 임프로술판 및 피포술판); 트리아젠: (다카르바진), 백금 함유 화합물: (카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴); 아지리딘, 예컨대, 벤조도파, 카르보코언, 메투레도파, 또는 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸올로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸라멜라민으로 구성되는 그룹으로부터 선택됨; b). 식물 알칼로이드: 예컨대, 빈카 알칼로이드: (빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈, 나벨빈); 텍스오이드(Taxoids): (파클리탁셀, 도세탁솔) 및 이들 유사체, 메이탄시노이드(DM1, DM2, DM3, DM4, DM5, DM6, DM7, 메이탄신 및 안사미토 신) 및 이들 유사체, 크립토파이신(특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8) 에포틸론, 엘레우테로빈, 디스코더몰리드, 브리오스타틴, 돌로스타틴, 아우리스타틴, 튜불리신, 세팔로스타틴; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰지스타틴; c). DNA 토포이소머라제 억제제: 예컨대, [에피포도필린스: (9-아미노캄토테신, 캄프토테신, 크리나톨, 다우노마이신, 에토포시드, 에토포시드 포스페이트, 이리노테칸, 미토산트론, 노반트론, 레티놀산(레티놀), 테니포시드, 토포테칸, 9-니트로캄토테신(RFS 2000); 미토마이신: (미토마이신 C)]; d). 항대사제: 예컨대, {[항-엽산: DHFR 억제제:(메토트렉세이트, 트리메트렉세이트, 데노프테린, 프테로프테린, 아미노프테린(4-아미노프테릭 산) 또는 엽산 유사체); IMP 탈수소 효소 억제제: (미코페놀산, 티아조퓨린, 리바비린, EICAR); 리보뉴클레오타이드 환원 효소 억제제: (히드록시우레아, 데페록사민)]; [피리미딘 유사체 :안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카페시타빈(Xeloda), 카모퍼, 시타라빈, 디데옥시 우리딘, 독시퓨리딘, 에노시타빈, 5-플루오로우라실, 플록스우리딘, 래티트렉세드(Tomudex)); 시토신 유사체: (시타라빈, 시토신 아라비노시드, 플루다라빈); 퓨린 유사체: (아자티오프린, 플루다라빈, 메르캅토퓨린, 티아민프린, 티오구아닌)]; 엽산 보충제, 예컨대 프롤린 산}; e). 호르몬 요법: 예컨대, {수용체 길항제: [항-에스트로겐 : (메제스트롤, 랄록시펜, 타목시펜); LHRH 작용제: (고스크크린(goscrclin), 류프롤리드 아세테이트); 항-안드로겐: (비칼루타미드, 플루타미드, 칼루스테론, 드로모스타놀론，프로피오네이트, 에피티오스타놀, 고세렐린, 류프롤리드, 메피티오스탄, 닐루타미드, 테스토락톤, 트리로스탄 및 기타 안드로겐 억제제)]; 레티노이드/델토이드: [비타민 D3 유사체: (CB 1093, EB 1089 KH 1060, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤); 광역학 요법: (베르트포르핀, 프탈로시아닌, 광민감제 Pc4, 데메톡시하이포크렐린 A); 사이토카인: (인터페론-알파, 인터페론-감마, 종양 괴사 인자(TNFs), TNF 도메인을 포함하는 인간 단백질)]}; f). 키나제 억제제, 예컨대, BIBW 2992(항-EGFR/Erb2), 이마티닙, 제피티닙, 페갑타닙, 소라페닙, 다사티닙, 수니티닙, 에를로티닙, 니로티닙, 라파티닙, 액시티닙, 파조파닙, 반데타닙, E7080)(항-VEGFR2), 무브리티닙, 포나티닙(AP24534), 바페티닙(INNO-406), 보스티닙（SKI-606），카보잔티닙, 비스모데집, 이니파립, 루솔리티닙, CYT387, 아시티닙, 티보자닙, 소라페닙, 베바시주맙, 세투시맙, 트라스투주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 이스피네십; g). 폴리(ADP-리보스)폴리메라제(PARP) 억제제, 예컨대, 올라파립, 니라파립, 이니파립, 탈라조파립, 벨리파립, CEP 9722(Cephalon), E7016(Eisai), BGB-2990(BeiGene) 또는 3-아미노벤젠아미드; h). 항생제, 예컨대, 에네다인 항생제(칼리치미신, 칼리치미신 γ1, δ1, α1 또는 β1 [참조, 예컨대, J. Med. Chem. 39(11), 2103-2117(1996), Angew Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186(1994)]; 다이네미신 A 및 데옥시다이네미신을 포함하는 다이네미신; 에스페라미신, 케다르시딘, C-1027, 마두로펩틴 또는 네오카르지노스타틴 크로모포어 및 관련 크로모프로틴 에네다인 항생제 크로모모어), 아크라시노마이신, 액티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵틴노마이신, 카라비신, 카민노마이신, 카르지노필린; 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르루신, 독소루비신, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 니토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 폿퍼로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투버시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; i). 폴리케티드(아세토게닌), 불라타신 및 불라타시논, 겜시타빈, 에폭소미신(카르필조밉 포함), 보르테조밉, 탈리도미드, 레날리도미드, 포말리도미드, 토세도스탓, 지브레스탓, PLX4032, STA-9090, 스티무박스, 알로벡틴-7, 엑세게바(Xegeva), 프로벤지, 에르보이(Yervoy), 단백지질화 억제제(로바스타틴으로부터 선택), 도파민성 신경독(1-메틸-4-페닐피리디늄 이온으로부터 선택), 세포 사이클 억제제(스타우로스포린으로부터 선택), 악티노마이신(악티노마이신 D, 닥티노마이신으로 구성되는 그룹으로부터 선택), 아마니틴, 블레오마이신(블레오마이신 A2, 블레오마이신 B2, 페플로마이신으로 구성되는 그룹으로부터 선택), 안트라사이클린(다우노루비신, 독소루비신(아드리아마이신), 이다루비신, 에피루비신, 피라루비신, 조루비신, 엠톡산트론(mtoxantrone), MDR 억제제 또는 베라파밀, ，Ca2+ ATP아제 억제제 또는 탑시가르긴, 히스톤 데아세틸라아제 억제제(보리노스탓, 로미뎁신, 파노비노스탓, 발프로익 산, 모세티노스탓(MGCD0103), 벨리노스탓, PCT-24781, 엔티노스탓, SB939, 레스미노스탓, 지비노스탓, AR-42, CUDC-101, 술포라판, 트리초스타틴 A로 구성되는 그룹으로부터 선택); 탑시가르긴, 센레콕십, 글리타존, 에피갈로카테킨 갈레이트, 디술피람, 살리노스포라미드 A; 아미노글루트티미드, 미토탄, 트리로스탄으로 구성되는 그룹으로부터 선택된 항-아드레날; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불리닉 산; 암사크린; 아라비노사이드, 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지코언; 에플로니틴(DFMO), 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트, 에토글루시드; 갈륨 니트레이트, 가시토신, 히드록시우레아; 이반드로네이트, 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미토잰트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나멧; 피라루비신; 포도필리닉 산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라조샌; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아조닉 산; 트리아쿠언; 2,2',2''-트리클로로트리에틸아민; 트리초테센(T-2 톡신, 버루카린 A, 로리딘 A 및 안구이딘으로 구성되는 그룹으로부터 선택); 우레탄, siRNA, 안티센스 약물; 핵산분해 효소.
(2). 항-자가면역 질환제: 여기에 제한되지 않지만, 다음을 포함한다: 시클로스포린, 시클로스포린 A, 아미노카프로 산, 아자티오프린, 브로모크립틴, 클로람부실, 클로로퀸, 시클로포스파미드, 코르티코스테로이드(암시노니드, 베타메타손, 부데소니드, 히드로코르티손, 플루니소리드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루코톨론 다나졸, 덱사메타손, 트리암시놀론 아세토니드, 베클로메타손 디프로피오네이트), DHEA, 에나네르셉, 히드록시클로퀸, 인플릭시맙, 메록시캄, 메토트렉세이트, 엠오페틸(mofetil), 마이코페닐레이트, 프레드니손, 시로리무스, 타크롤리무스;
(3). 항-전염성 질환제: 여기에 제한되지 않지만, 다음을 포함한다: a). 아미노글리코시드: 아미카신, 아스트로미신, 겐타미신(네틸미신, 시소미신, 이세파미신), 하이그로마이신 B, 카나마이신(아미카신, 아르베카신, 베카나마이신, 디베카신, 토브라마이신), 네오마이신(프라마이세틴, 파로모마이신, 리보스타마이신), 넷틸미신, 스펙티노마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다미신; b). 암페니콜: 아지다페니콜, 클로람페니콜, 플로페니콜, 티암페니콜; c). 안사마이신: 젤다나마이신, 헤르비마이신; d). 카르바페넴: 비아페넴, 도리페넴, 에르타페넴, 이미페넴/실라스타틴, 메로페넴, 파니페넴; e). 세펨: 카르바세펨(로라카르베프), 세파세트릴, 세파클로, 세파라딘, 세파드록실, 세파로늄, 세파로리딘, 세파로틴 또는 세파로씬, 세파렉신, 세파로글리신, 세파만돌, 세파피린, 세파트리진, 세파자플루, 세파제돈, 세파졸린, 세프부페라존, 세프카펜, 세프달록심, 세페핌, 세프미녹스, 세폭시틴, 세프프로질, 세프록사딘, 세프테졸, 세프록심, 세픽심, 세프디니어, 세프디토렌, 세프핌, 세페타멧, 세프메녹심, 세포디짐, 세포니시드, 세포페라존, 세포라니드, 세포탁심, 세포티암, 세포조프란, 세팔렉신, 세프피미졸, 세프피라미드, 세프피롬, 세프포독심, 세프프로질, 세프뷘놈, 세프술로딘, 세프타지딘, 세프테람, 세프티부텐, 세프티올렌, 세프티족심, 세프토비프롤, 세프트리악손, 세푸록심, 세푸조남, 세파마이신(세폭시틴, 세폭테탄, 세프메타졸), 옥사세펨(플로목세프, 라타목세프); f). 글리코펩티드 : 블레오마이신, 반코마이신(오리타반신, 텔라반신), 테이코플라닌(달바반신), 라모플라닌; g). 글리실사이클린: 티게사이클린; h). β-락타마제 억제제: 페남(술박탐, 타조박탐), 클라밤(클라불란 산); i). 린코사미드: 클린다마이신, 린코마이신; j). 리포펩티드: 답토마이신, A54145, 칼슘-의존 항체(CDA); k). 마크로라이드: 아지트로마이신, 세트로마이신, 클라리트로마이신, 디리스트로마이신, 에리트로마이신, 푸리트로마이신, 요사마이신, 케토리드(텔리트로마이신, 세트로마이신), 미데카마이신, 미오카마이신, 올레안도마이신, 리파마이신(리팜피신, 리팜핀, 리파부틴, 리파펩틴), 로키타마이신, 록시트로마이신, 스펙티노마이신, 스피라마이신, 타크로리무스(FK506), 트로레안도마이신, 텔리트로마이신; l). 모노박탐: 아즈트레오남, 티게모남; m). 옥사졸리디노넨: 리네졸리드; n). 페니실린: 아목시실린, 암피실린(피밤피실린, 헤타실린, 바캄피실린, 메탐피실린, 탈람피실린), 아지도실린, 아즐로실린, 벤질페니실린, 벤자틴 벤질페니실린, 벤자틴 페녹시메틸페니실린, 클로메토실린, 프로카인 벤질페니실린, 카르베니실린(카린다실린), 클록사실린, 디클록사실린, 에피실린, 플루클록사실린, 메실리남(피브메실리남), 메즈로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페나메실린, 페니실린, 페네티실린, 페녹시메틸페니실린, 피페라실린, 프로피실린, 술베니실린, 테모실린, 티카르실린; o). 폴리펩티드 : 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B; p). 퀴놀론 : 알라트로플록사신, 발로프록사신，시프로플록사신, 클리나플록 사신, 다노플록사신, 디플로사신, 에녹사신, 엔로프록사신, 플로신, 가레녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 그레파프록사신, 카노 트로바플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 마보플록사신, 목시플록사신, 나디플록사신, 노르플록사신, 오르비플록사신, 오플록사신, 페플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 시타플록사신, 스파플록사신, 테마플록사신, 토수폴록사신, 트로바플록사신; q). 스트렙토그라민: 프리스티나마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴; r). 술포나미드: 마페니드, 프로토실, 술파세타미드, 술파메티졸, 술파닐이미드, 술파살라진, 술피속사졸, 트리메토프림, 트리메토프림-술파메톡사졸(코-트리목사졸); s). 스테로이드 항균제: 푸시딘산으로부터 선택됨; t). 테트라사이클린: 독시사이클린, 클로르테트라사이클린, 클로모사이클린, 데메클로사이클린, 라임사이클린, 메클로사이클린, 메타사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 펜니메피사이클린, 롤리테트라사이클린, 테트라사이클린, 글리 실사이클린(티기사이클린으로부터 선택); u).다른 항생제: 이는 안노나신, 아스페나민, 박토프레놀 억제제(바시트라신), DADAL/AR 억제제(시클로세린), 딕티오스타틴, 디스코더몰리드, 엘레우테로빈, 에포틸론, 에탐부톨, 에토포사이드, 파로페넴, 푸시딘산, 푸라졸리돈, 이소니아지드, 라우리말리드, 메트로니다졸, 무피로신, 미코락톤, NAM 합성 억제제(포스포마이신), 니트로푸란토인, 파클리탁셀, 플래텐시마이신, 피라진아미드, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 리팜피신(리팜핀), 타조박탐 티니다졸, 우바리신;
(4). 항-바이러스 약물: a). 진입/융합 억제제： 아프라비록, 마라비록, 비크리비록, gp41 (enfuvirtide), PRO 140, CD4(ibalizumab); b). 인테그라제 억제제: 랄테그라비르, 엘비테그라비르, 글로보이드난 A; c). 성숙 억제제: 베비리맛, 비베콘; d). 뉴라미니다아제: 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르; e). 뉴클레오시드 및 뉴클레오타이드: 아바카비르, 아시클로비르, 아데포비르, 암독소비르, 아프리시타빈, 브리부딘, 시도포비르, 클레부딘, 덱셀부시타빈, 디다노신(ddI), 엘부시타빈, 엠트리시타빈(FTC), 엔테카비르, 팜시클로비르, 플루오로우라실(5-FU), 3'-플루오로-치환 2',3'-디데옥시뉴클레오시드 유사체(3'-플루오로-2',3'-디데옥시티미딘(FLT) 및 3'-플루오로-2',3'-디데옥시구아노신(FLG), 포미비르센, 간시클로비르, 이독스우리딘, 라미부딘(3TC), 1-뉴클레오시드(β-1-티미딘 및 β-1,2'-데옥시시티딘으로 구성된 그룹으로부터 선택), 펜시클로비르, 래시비르, 리바비린, 스탬피딘, 스타부딘(d4T), 타리바비린(비라미딘), 텔비부딘, 테노포비어, 트리플루리딘 발라시클로비르, 발간시클로비르, 잘시타빈(ddC), 지도부딘(AZT); f). 비-뉴클레오시드: 아만타딘, 아테비리딘, 캡라비린, 디아릴피리미딘(에트라비린, 릴피비린), 델라비르딘, 도코사놀, 에미비린, 에파비렌즈, 포스카르넷(포스포노포름산), 이미퀴모드, 인터페론 알파, 로이라이드, 로데노신, 메티사존, 네비 라핀, NOV-205, 페그인터페론 알파, 포도필로톡신, 리팜피신, 리만타딘, 레시퀴모드(R-848), 트로만타딘; g). 프로테아제 억제제: 암프레나비르, 아타자나비르, 보세프레비르, 다루나 비르, 포삼프레나비르, 인디나비르, 로피나비르, 넬피나비르, 프레코나릴, 리토나비 르, 사퀴나비르, 텔라프레비르(VX-950), 팁라나비르; h). 다른 유형의 항-바이러스 약물: 아브자임, 아르비돌, 카라놀라이드 a, 세라게닌, 시아노비린-n, 디아릴피리미딘, 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG), 포스카르넷, 그리피쓰신, 타리바비린(비라미딘), 히드록시우레아, KP-1461, 밀테포신, 플레코나릴 , 포트만토 억제제, 리바비린, 셀리시클립;
(5). 본 발명의 가교 링커를 통한 결합체를 위해 사용되는 약물은 또한 방사성 동위원소를 포함한다. 방사성 동위원소(방사성 핵종)는 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 64Cu, 68Ga, 86Y, 99Tc, 111In, 123I, 124I, 125I, 131I, 133Xe, 177Lu, 211At, 또는 213Bi이다. 방사성 동위 원소 표지화 항체는 수용체 표적화 이미징 실험에 유용하거나 또는 본 발명의 항체-약물 결합체(Wu et al(2005) Nature Biotechnology 23(9): 1137-46)와 같은 타겟화 처치에 융용하다. 세포 결합 분자, 예컨대 항체는 Immunology, Volumes 1 and 2, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, Pubs.(1991)의 현재 포로토콜에 기재된 기술을 이용하여, 방사성 동위원소 금속을 결합 및 킬레이트화, 그게 아니면 착화(complex)하는 본 발명의 가교 링커를 통해 리간드 시약으로 표지(labeled)할 수 있다. 금속 이온을 착화시킬 수 있는 킬레이팅 리간드는 DOTA, DOTP, DOTMA, DTPA 및 TETA(Macrocyclics, Dallas, Tex. USA를 포함한다.
(6) 상기 약물들의 임의의 약학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체.
다른 구체 예에서, 화학식 (II) 및/또는 (IV)의 약물은 세포 결합 분자와 표적 세포의 상호 작용의 검출, 모니터링 또는 연구에 사용될 수 있는 크로모포어 분자일 수 있다. 크로모포어 분자는 자외선, 형광등, 적외선, 근적외선, 가시 광선 등 일종의 빛을 흡수하는 능력을 가진 화합물이다. 크로마포포어 분자는 크산토포어, 에리트로포어, 이리도포어, 류코포어, 멜라노포어, 시아노포어의 클래스 또는 서브클래스;, 빛에 의해 빛을 재방출하는 형광 화합물인 플루오로포어 분자의 클래스 도는 서브 클래스;, 시각적 광 변환 분자의 클래스 또는 서브클래스; 포토포어 분자의 클래스 또는 서브클래스;, 발광 분자의 클래스 또는 서브클래스; 루시페린 화합물의 클래스 또는 서브클래스를 포함한다.
클로모포어 분자는 여기에 제한되지 않지만, 다음으로부터 선택될 수 있다: 비-단백질 유기 플루오로포어, 예컨대: 크산텐 유도체(플루오레신, 로다민, 오레곤 그린, 에오신, 텍사스 레드)로부터 선택); 시아닌 유도체: (시아닌, 인도카르보시아닌, 옥사카르보시아닌, 티아카르보시아닌 및 메로시아닌); 스쿠아레인 유도체 및 고리-치환 스쿠아린[세타(Seta), 세타우(SeTau) 및 스퀘어 다이(Square dyes) 포함]; 나프탈렌 유도체(단실 및 프로단 유도체); 쿠마린 유도체; 옥사디아졸 유도체(피리딜옥사졸, 니트로벤족사디아졸 및 벤족사디아졸); 안트라센 유도체(DRAQ5, DRAQ7 및 CyTRAK Orange를 포함하는 안트라퀴논); 피렌 유도체(캐스케이드 블루); 옥사진 유도체(나일 레드, 나일 블루, 크레실 바이올렛, 옥사진 170);아크리딘 유도체(프로플라빈, 아크리딘 오렌지, 아크리딘 옐로우); 아릴메틴 유도체(아우라민, 크리스탈 바이올렛, 말라카이트 그린); 테트라피롤 유도체(포르핀, 프탈로시아닌, 빌리루빈).
또는, 크로모포어 분자는 다음의 형광체 화합물의 유도체 및 유도체로부터 선택 될 수 있다: CF 다이 색(Biotium), DRAQ 및 CyTRAK 프로브(BioStatus), BODIPY(Invitrogen), 알렉사 플로오르(Alexa Fluor(Invitrogen)), 다이라이트 플루오르(Thermo Scientific, Pierce), 아토 및 트레이시(Atto 및 Tracy)(Sigma Aldrich), 플루오프로브(FluoProbes)(Interchim), 압베리오르 다이(Abberior Dyes)(Abberior), DY 및 메가 스토크 다이(Dyomics), 술포 시 다이(Sulfo Cy dyes)(Cyandye), HiLyte Fluor(AnaSpec), Seta, SeTau 및 Square Dyes(SETA BioMedicals), Quasar 및 Cal Fluor dyes(Biosearch Technologies), SureLight Dyes(APC, RPEPerCP, Phycobilisomes)(Columbia Biosciences), APC, APCXL, RPE, BPE(Phyco-Biotech)
본 발명의 링커와 반응성이거나 결합가능한 널리 사용되는 플루오로포어 화합물의 예는 알로피코시아닌(APC), 아미노코우마린, APC-Cy7 접합체, BODIPY-FL, 캐스케이드 블루, Cy2, Cy3, Cy3.5, Cy3B, Cy5, Cy5.5, Cy7, 플루오레신, FluorX, 하이드록시쿠마린, 리사민 로다민 B, 루시퍼 옐로우, 메톡시쿠마린, NBD, 퍼시픽 블루, 퍼시픽 오렌지, PE-Cy5 접합체, PE-Cy7 접합체, PerCP, R-피코에리트린(PE), Red 613, Seta-555-아지드, Seta-555-DBCO, Seta-555-NHS, Seta-580-NHS, Seta-680-NHS, Seta-780-NHS, Seta-APC-780, Seta-PerCP-680, Seta-R-PE-670, SeTau-380-NHS, SeTau-405-말레이미드, SeTau-405-NHS, SeTau-425-NHS, SeTau-647-NHS, 텍사스 레드, TRITC, TruRed, X-로다민이다.
핵산 또는 단백질의 연구를 위해 본 발명의 링커에 결합될 수있는 형광 물질은 다음의 화합물 또는 그 유도체로부터 선택될 수 있다: 7-AAD(7-아미노액티노마이신 D, CG-선택적), 아크리딘 오렌지, 크로모마이신 A3, CyTRAK 오렌지(Biostatus, red excitation dark), DAPI, DRAQ5, DRAQ7, 에티듐 브로미드(Ethidium Bromide), Hoechst33258, Hoechst33342, LDS 751, 미트라마이신(Mithramycin), 프로피듐이오디드(PropidiumIodide(PI)), SYTOX 블루, SYTOX 그린, SYTOX 오렌지, 티아졸 오렌지, TO-PRO: 시아닌 모노머, TOTO-1, TO-PRO-1, TOTO-3, TO-PRO-3, YOSeta-1, YOYO-1]의 유사체 및 유도체의 분류 또는 서브분류이고, 연구 세포에 대한 본 발명의 링커에 연결될 수 있는 플루오로포어 화합물은 하기 화합물 또는 이의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된다: DCFH(2'7'디코로디히드로-플루오레신, 산화 형태), DHR(디히드로로다민 123, 산화된 형태, 광 촉매 산화), Fluo-3(AM 에스테르. pH > 6), Fluo-4(AM 에스테르. pH 7.2), Indo-1(AM 에스테르, 저/고 칼슘(Ca2+)), SNARF(pH 6/9), 알로피코시아닌(APC), AmCyan1(테트라머, Clontech), AsRed2(테트라머, Clontech), 아자미 그린(모노머, MBL), 아주라이트(Azurite), B-피코에리트린(BPE), 세룰레안(Cerulean), CyPet, DsRed 모노머(Clontech), DsRed2("RFP", Clontech), EBFP, EBFP2, ECFP, EGFP(약한 다이머, Clontech), 에메랄드(Emerald)(약한 다이머, Invitrogen), EYFP(약한 다이머, Clontech), GFP(S65A 돌연변이), GFP(S65C 돌연변이), GFP(S65L 돌연변이), GFP(S65T 돌연변이), GFP(Y66F 돌연변이), GFP(Y66H 돌연변이), GFP(Y66W 돌연변이), GFPuv, HcRed1, J-Red, 카투샤(Katusha), 쿠사비라 오렌지(Kusabira Orange(모노머, MBL), mCFP, mCherry, mCitrine, 미도리이쉬 시안(다이머, MBL), mKate(TagFP635, 모노머, Evrogen), mKeima-Red(모노머, MBL), mKO, mOrange, mPlum, mRaspberry, mRFP1(모노머, Tsien lab), mStrawberry, mTFP1, mTurquoise2, P3(phycobilisome complex), 페리디닌 클로로필(Peridinin Chlorophyll) (PerCP), R-피코에리트린(RPE), T-사파이어, TagCFP (다이머, Evrogen), TagGFP(다이머, Evrogen), TagRFP(다이머, Evrogen), TagYFP(다이머, Evrogen), tdTomato(탄뎀 다이머), Topaz, TurboFP602(다이머, Evrogen), TurboFP635(다이머, Evrogen), TurboGFP(다이머, Evrogen), TurboRFP(다이머, Evrogen), TurboYFP (다이머, Evrogen), 비너스(Venus), 와일드 타입(Wild Type) GFP, YPet, ZsGreen1(테트라머, Clontech), ZsYellow1(테트라머, Clontech).
가교 링커를 통한 항체-크로모포어 분자의 결합체의 구조의 예는 다음과 같다: Ac01, Ac02, Ac03, Ac04, Ac05, Ac06, Ac07, Ac08 및 Ac09:
Figure pat00193
Ac01
Figure pat00194
Ac02
Figure pat00195
Ac03
Figure pat00196
Ac04
Figure pat00197
Ac5(FNIR-774 결합체)
Figure pat00198
Ac06
Figure pat00199
Ac07
Figure pat00200
Ac08(IR800CW 결합체)
Figure pat00201
Ac09
여기서, "
Figure pat00202
"는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고; mAb는 항체, 바람직하게는 단일클론 항체이고; n, m1, m2, X1, X2, X3, R1, R2, R3 ,L1, L2 및 L은 화학식 (I) 및 (II)에서 정의한 바와 같다.
또 다른 실시 양태에서, 화학식 (II) 및 (IV)에서의 drug는 포유동물에게 투여될 때, 세포-결합 분자의 반감기를 연장시키는데 사용되는 폴리알킬렌 글리콜일 수 있다. 폴리알킬렌 글리콜은 폴리(에틸렌글리콜)(PEG), 폴리(프로필렌 글리콜) 및 에틸렌옥사이드와 프로필렌 옥사이드의 공중합체를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 특히 바람직한 것은 PEG이고, 더욱 바람직하게는 단일 작용기로 활성화된 히드록시PEG(예컨대, 히드록시PEG-모노카르복실산, 히드록시PEG-모노알데히드, 히드록시PEG-모노아민, 히드록시PEG-모노히드라지드, 히드록시PEG-모노카르바제이트, 히드록실PEG-모노 옥시 아미드, 히드록시 PEG-모노 페닐 카르보네이트, 히드록실PEG-모노요오드아세타미드, 히드록실PEG-모노말레이미드, 히드록실PEG-모노오르토피리딜 디설피드, 히드록시PEG-모노옥심, 히드록실PEG-모노페닐 카르보네이트, 히드록실PEG-모노페닐 글리옥살, 히드록실PEG-모도티아졸리딘-2-티온, 히드록실PEG-모노티오에스테르, 히드록실PEG-모노티올, 히드록실PEG-모노트리아진 및 하이드록실PEG-모노비닐 설폰의 반응성 에스테르를 포함하여, 단일 종단(terminus)에서 활성화되는 히드록실PEG)이다.
이러한 특정 실시 예에서, 폴리알킬렌 글리콜은 약 10 달톤 내지 약 200 kDa, 바람직하게는 약 88 Da 내지 약 40 kDa의 분자량을 가지며; 2개의 분지(branch) 각각은 약 88 Da 내지 약 40 kDa의 분자량을 갖고; 보다 바람직하게는 각각 약 88 Da 내지 약 20 kDa의 분자량을 갖는 2개의 분지를 갖는다. 하나의 특정 실시 예에서, 폴리알킬렌 글리콜은 폴리(에틸렌)글리콜이고, 약 10 kDa, 약 20 kDa, 또는 약 40 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시 양태에서, PEG는 PEG 10 kDa(선형 또는 분지형), PEG 20 kDa(선형 또는 분지형) 또는 PEG 40 kDa(선형 또는 분지형)이다. 다수의 미국 특허는 선형 또는 분지형 "비-항원성 "PEG 중합체 및 그 유도체 또는 그 결합체의 제조를 개시하고 있다(예컨대, 미국 특허 Nos.5,428,128; 5,621,039; 5,622,986; 5,643,575; 5,728,560; 5,730,990; 5,738,846; 5,811,076; 5,824,701; 5,840,900; 5,880,131; 5,900,402; 5,902,588; 5,919,455; 5,951,974; 5,965,119; 5,965,566; 5,969,040; 5,981,709; 6,011,042; 6,042,822; 6,113,906; 6,127,355; 6,132,713; 6,177,087, 및 6,180,095). 가교 링커를 통한 항체-폴리알킬렌 글리콜의 결합체 구조는 다음과 같다: Pg01, Pg02, Pg03, Pg04, Pg05, Pg06 및 Pg07:
Figure pat00203
여기서, mAb는 항체이고; R'는 H 또는 CH3이고; m3는 1~5000의 정수이고; R3은 OH, H, 또는 R1이고; "
Figure pat00204
"는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고; m1, m2, n, L1, L2, X1, X2, R1, R2, 및 R3 은 화학식 (I) 및 (II)에서 정의된 것과 동일하다. 게다가, R1 및 R3은 독립적으로 H, OH, OCH3 또는 OC2H5일 수 있고; p는 1-2000; Drug1은 화학식 (III)에서 정의된 바와 같다.
또 다른 실시 양태에서, 본 특허의 가교 링커를 통해 세포 결합 분자와 결합하는 바람직한 세포 독성제는 튜블린신, 마이탄시노이드, 탁사노이드(탁산), CC-1065 유사체, 다우노루비신 및 독소루비신 화합물, 아마톡신, 벤조디아제핀 다이머((예컨대, 피롤로벤조디아제핀(PBD), 토마이마이신, 안트라마이신, 인돌리노벤조디아제핀, 이미다조벤조티아디아제핀 또는 옥사졸리디노벤조디아제핀의 다이머들), 칼리체아미신 및 에네다인 항생제, 악티노마이신, 아자세린, 블레오마이신, 에피루비신, 타목시펜, 이다루비신, 돌라스타틴/아우리스타틴(예컨대, 모노메틸 아우리스타틴 E, MMAE, MMAF, 아우리스타틴 PYE, 아우리스타틴 TP, 아우리스타틴 2-AQ, 6-AQ, EB(AEB), 및 EFP(AEFP)), 두오카마이신, 젤다나마이신, 메토트렉세이트, 티오테파, 빈데신, 빈크리스틴, 헤미아스테린, 나주마미드, 미크로기닌, 라디오수민, 알테로박틴, 미크로스클레로더민, 테오넬라미드, 에스페라미신, PNU-159682 및 이들의 유사체 및 이들의 유도체이다.
본 발명에서의 결합을 위해 바람직한 튜불리신은 당해 분야에 잘 공지되어 있고, 공지된 방법에 따라 천연 공급원으로부터 분리되거나, 공지된 방법에 따라 합성 제조될 수 있다(예컨대, Balasubramanian, R., et al. J. Med. Chem., 2009, 52, 238-40; Wipf, P., et al. Org. Lett., 2004, 6, 4057-60; Pando, O., et al. J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 7692-5; Reddy, J. A., et al. Mol. Pharmaceutics, 2009, 6, 1518-25; Raghavan, B., et al. J. Med. Chem., 2008, 51, 1530-33; Patterson, A. W., et al. J. Org. Chem., 2008, 73, 4362-9; Pando, O., et al. Org. Lett., 2009, 11(24), 5567-9; Wipf, P., et al. Org. Lett., 2007, 9(8), 1605-7; Friestad, G. K., Org. Lett.,2004, 6, 3249-52; Peltier, H. M., et al. J. Am. Chem. Soc., 2006, 128, 16018-9; Chandrasekhar, S., et al J. Org. Chem., 2009, 74, 9531-4; Liu, Y., et al. Mol. Pharmaceutics, 2012, 9, 168-75; Friestad, G. K., et al. Org. Lett., 2009, 11, 1095-8; Kubicek, K., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2010.49: 4809-12; Chai, Y., et al., Chem Biol, 2010, 17: 296-309; Ullrich, A., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2009, 48, 4422-5; Sani, M., et al. Angew Chem Int Ed Engl, 2007, 46, 3526-9; Domling, A., et al., Angew Chem Int Ed Engl, 2006, 45, 7235-9; Patent applications: Zanda, M., et al, Can. Pat. Appl. CA 2710693(2011); Chai, Y., et al. Eur. Pat. Appl. 2174947(2010), WO 2010034724; Leamon, C. et al, WO2010033733, WO 2009002993; Ellman, J., et al, PCT WO2009134279; WO 2009012958, US appl. 20110263650, 20110021568; Matschiner, G., et al, WO2009095447; Vlahov, I., et al, WO2009055562, WO 2008112873; Low, P., et al, WO2009026177; Richter, W., WO2008138561; Kjems, J., et al, WO 2008125116; Davis, M.; et al, WO2008076333; Diener, J.; et al, U.S. Pat.Appl. 20070041901, WO2006096754; Matschiner, G., et al, WO2006056464; Vaghefi, F., et al, WO2006033913; Doemling, A., Ger. Offen. DE102004030227, WO2004005327, WO2004005326, WO2004005269; Stanton, M., et al, U.S. Pat. Appl. Publ. 20040249130; Hoefle, G., et al, Ger. Offen. DE10254439, DE10241152, DE10008089; Leung, D., et al, WO2002077036; Reichenbach, H., et al, Ger. Offen. DE19638870; Wolfgang, R., US20120129779; Chen, H., US appl. 20110027274). 세포 결합 분자의 결합을 위한 튜불린의 바람직한 구조는 PCT/IB2012/053554의 특허 명세서에 기재된다.
특허의 링커를 통한 항체-튜블린 유사체의 결합체의 구조의 예는 하기와 같이 T01, T02, T03, T04, T05, T06 T07, T08, T09, T10 및 T11이다:
Figure pat00205
Figure pat00206
Figure pat00207
여기서, mAb는 항체 또는 세포 결합 분자이고; n, m1, m2, Drug1, X1, X2, L1, L2, L3, R1, R2, R3, R4, 및 R5는 화학식 (I) 및 (II)에서 정의된 것과 동일하고; 바람직하게는 R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 H, 선형 또는 분지형 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 에스테르, 에테르, 아미드, 아민, 헤테로시클로알킬 또는 아실옥시아민의 C1-C8; 1 내지 8개의아미노산을 함유하는 펩티드, 또는 화학식 (OCH2CH2)p 또는 (OCH2CH(CH3))p의 폴리에틸렌옥시 유닛[여기서, p는 1 내지 약 2000의 정수이다]이다. 두 개의 Rs: R1R2, R2R3, R1R3 또는 R3R4는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬 또는 알킬시클로알킬 기의 3 내지 8 원 사이클릭 고리를 형성할 수 있고; X3은 H, CH3 또는 X1'R1'이고, 여기서 X1'는 NH, N(CH3), NHNH, O, 또는 S이고, R1'은 H 또는 선형 또는 분지형 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 아실옥시아민의 C1-C8이고; R3'은 H 또는 C1-C6 선형 또는 분지형 알킬이고; p는 0-2000이고; Z3는 H, OH，OP(O)(OM1)(OM2), OCH2OP(O)(OM1)(OM2), OSO3M1, R1, 또는 O-글리코시드(글루코시드, 갈락토시드, 만노사이드, 글루쿠로노시드/글루쿠로니드, 알로시드, 프룩토시드 등), NH-글리코시드, S-글리코시드 또는 CH2-글리코시드이고; "
Figure pat00208
"는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고; M1 및 M2는 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1R2R3이고; 또한 R1'은 특허를 통해 기술된 세포 독성제일 수 있다.
이 특허의 세포-결합 분자-약물 결합체에 대해 선호되는 칼리케아미신(Calicheamicin) 및 그의 관련 에네다인 항생제는 다음과 같다:Nicolaou, K. C. et al, Science 1992, 256, 1172-1178; Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1993, 90, 5881-8), U.S. Patent Nos. 4,970,198; 5,053,394; 5,108,912; 5,264,586; 5,384,412; 5,606,040; 5,712,374; 5,714,586; 5,739,116; 5,770,701; 5,770,710; 5,773,001; 5,877,296; 6,015,562; 6,124,310; 8,153,768. 가교 링커를 통한 항체-칼리케아미신 유사체의 결합체 구조의 예는 하기와 같이 C01 및 CO2이다:
Figure pat00209
여기서, mAb는 항체 또는 세포 결합 분자이고; "
Figure pat00210
", n, m1, X1, L1, L2, 및 R1는 화학식 (I) 및 (II)에서와 동일하게 정의되고; R1' 및 R3'는 독립적으로 H 또는 직쇄 또는 분지쇄 알킬의 C1-C6이고; p는 0-2000이다. 게다가, R1'는 본 특허를 통해 기술된 세포 독성제, Drug일 수 있다.
메이탄시놀 및 그의 유사체를 포함하는 본 발명에서 사용되는 것이 바람직한 메이탄시노이드는 미국 특허 번호 4,256,746, 4,361,650, 4,307,016, 4,294,757, 4,294,757, 4,371,533, 4,424,219, 4,331,598, 4,450,254, 4,364,866, 4,313,946, 4,315,929 4,362,663, 4,322,348,4,371,533,4,424,219, 5,208,020, 5,416,064, 5,208,020; 5,416,064; 6,333.410; 6,441,163; 6,716,821, 7,276,497, 7,301,019,7,303,749, 7,368,565, 7,411,063, 7,851,432, 및 8,163,888에 기재된다. 특허의 링커를 통한 항체-메이탄시노이드의 결합체 구조의 예는 다음과 같다: My01, My02 및 My03:
Figure pat00211
Figure pat00212
여기서, mAb는 항체 또는 세포 결합 분자이고; "
Figure pat00213
", n, m1, X1, L1, L2, 및 R1은 화학식 (I) 및 (II)에서 정의된 것과 동일하고; R1' 및 R3'는 독립적으로 H 또는 C1-C6 선형 또는 분지형 알킬이고; p는0-2000이다. 게다가, R1'은 특허를 통해 기술된 세포 독성제, Drug1일 수 있다.
본 특허의 가교 링커를 통한 결합에 바람직한 탁산[이는 세포독성 천연 생성물인 파클리탁셀(Taxol) 및 반-합성 유도체인 도세탁셀(Taxotere), 및 그 유사체를 포함한다]은 다음에서 예시된다: K C. Nicolaou et al., J. Am. Chem. Soc. 117, 2409-20,(1995); Ojima et al, J. Med. Chem. 39:3889-3896(1996); 40:267-78(1997); 45, 5620-3(2002); Ojima et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 96:4256-61(1999); Kim et al., Bull. Korean Chem. Soc., 20, 1389-90(1999); Miller, et al. J. Med. Chem., 47, 4802-5(2004); U.S. Patent No. 5,475,011 5,728,849, 5,811,452; 6,340,701; 6,372,738; 6,391,913, 6.436,931; 6,589,979; 6,596,757; 6,706,708; 7,008,942; 7,186,851; 7,217,819; 7,276,499; 7,598,290; 과 7,667,054.
상기 특허의 링커를 통한 항체-탁산의 결합체 구조의 예는 다음과 같다: Tx01, Tx02 및 Tx03.
Figure pat00214
여기서, mAb는 항체 또는 세포 결합 분자이고; "
Figure pat00215
"는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고; n, m1, X1, L1, L2, 및 R1은 상기 화학식 (I) 및 (II)에서 정의한 바와 같고; R1'및 R3'는 독립적으로 H 또는 C1-C6 선형 또는 분지형 알킬이고; p는 0-2000이다; 게다가, R1'은 특허를 통해 기술된 세포 독성제, Drug1일 수 있다.
CC-1065 유사체 및 듀오카르마이신 유사체는 또한 본 특허의 가교 링커와의 결합에 사용되는 것이 바람직하다. CC-1065 유사체 및 듀오카르마이신 유사체의 예뿐만 아니라 이들의 합성예들은 다음에 기재되어 있다:예 :Warpehoski, et al, J. Med. Chem. 31:590-603(1988); D. Boger et al., J. Org. Chem; 66; 6654-61, 2001; 미국 특허: 4169888, 4391904, 4671958, 4816567, 4912227, 4923990, 4952394, 4975278, 4978757, 4994578, 5037993, 5070092, 5084468, 5101038, 5117006, 5137877, 5138059, 5147786, 5187186, 5223409, 5225539, 5288514, 5324483, 5332740, 5332837, 5334528, 5403484, 5427908, 5475092, 5495009, 5530101, 5545806, 5547667, 5569825, 5571698, 5573922, 5580717, 5585089, 5585499, 5587161, 5595499, 5606017, 5622929, 5625126, 5629430, 5633425, 5641780, 5660829, 5661016, 5686237, 5693762, 5703080, 5712374, 5714586, 5739116, 5739350, 5770429, 5773001, 5773435, 5786377 5786486, 5789650, 5814318, 5846545, 5874299, 5877296, 5877397, 5885793, 5939598, 5962216, 5969108, 5985908, 6060608, 6066742, 6075181, 6103236, 6114598, 6130237, 6132722, 6143901, 6150584, 6162963, 6172197, 6180370, 6194612, 6214345, 6262271, 6281354, 6310209, 6329497, 6342480, 6486326, 6512101, 6521404, 6534660, 6544731, 6548530, 6555313, 6555693, 6566336, 6,586,618, 6593081, 6630579, 6,756,397, 6759509, 6762179, 6884869, 6897034, 6946455, 7,049,316, 7087600, 7091186, 7115573, 7129261, 7214663, 7223837, 7304032, 7329507, 7,329,760, 7,388,026, 7,655,660, 7,655,661, 7,906,545, 및 8,012,978. 특허의 링커를 통한 항체-CC-1065 유사체의 결합체 구조의 예는 하기 CC01, CC02, CC03과 같다.
Figure pat00216
여기서, mAb는 항체이고; Z3는 H, PO(OM1)(OM2), SO3M1, CH2PO(OM1)(OM2), CH3N(CH2CH2)2NC(O)-, O(CH2CH2)2NC(O)-, R1, 또는 글리코시드이고; X3는 O, NH, NHC(O), OC(O), -C(O)O, R1, 또는 부재이고; "
Figure pat00217
"는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고; n, m1, m2, "
Figure pat00218
", X1, X2, R1, R2는 화학식 (I) 및 (II)에서 정의된 것과 동일하고; R1' 및 R3'는 H 또는 C1-C6 선형 또는 분지형 알킬이고; p는 0-2000이다. 게다가, R1'은 특허를 통해 기술된 세포 독성제, Drug1일 수 있다.
다누루비신/독소루비신 유사체는 또한 본 특허의 가교 링커를 통한 결합에 바람직하다. 바람직한 구조와 그 합성 방법은 다음에 예시된다: Hurwitz, E., et al., Cancer Res. 35, 1175-81(1975). Yang, H. M., 과 Reisfeld, R. A., Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 1189-93(1988); Pietersz, C. A., E., et al., E., et al.," Cancer Res. 48, 926-311(1988); Trouet, et al., 79, 626-29(1982); Z. Brich et al., J. Controlled Release, 19, 245-58(1992); Chen et al., Syn. Comm., 33, 2377-90, 2003; King et al., Bioconj. Chem., 10, 279-88, 1999; King et al., J. Med. Chem., 45, 4336-43, 2002; Kratz et al., J Med Chem. 45, 5523-33, 2002; Kratz et al., Biol Pharm Bull. Jan. 21, 56-61, 1998; Lau et al., Bioorg. Med. Chem. 3, 1305-12, 1995; Scott et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 6, 1491-6, 1996; Watanabe et al., Tokai J. Experimental Clin. Med. 15, 327-34, 1990; Zhou et al., J. Am. Chem. Soc. 126, 15656-7, 2004; WO 01/38318; U.S. Patent Nos. 5,106,951;5,122,368;5,146,064; 5,177,016; 5,208,323; 5,824,805; 6,146,658; 6,214,345; 7569358; 7,803,903; 8,084,586; 8,053,205. 특허의 링커를 통한 항체-CC-1065 유사체의 결합체 구조의 예는 다음과 같다: Da01, Da02, Da03 및 Da04.
Figure pat00219
Figure pat00220
여기서, mAb는 항체 또는 세포 결합 분자이고; "
Figure pat00221
"는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고; n, m1, X1, X2, L1, L2, 및 R1는 화학식 (I) 및 (II)에서 정의된 것과 동일하고; R1' 및 R3'는 독립적으로 H 또는 C1-C6 선형 또는 분지형 알킬이고; p는 0-2000이다. 또한, R1'은 특허를 통해 기재된 세포 독성제, Drug1일 수 있다.
아우리스타틴 및 돌라스타틴은 본 특허의 가교 링커를 통한 결합에 바람직하다. 돌라스타틴의 합성 유사체인 아우리스타틴(예컨대, 아우리스타틴 E(AE), 아우리스타틴 EB(AEB), 아우리스타틴 EFP(AEFP), 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸아우리스타틴(MMAF), 아우리스타틴 F 페닐렌 디아민(AFP) 및 MMAE의 페닐알라닌 변이체)는 다음에 기재되어 있다: Int. J. Oncol. 15 : 367-72(1999);Molecular Cancer Therapeutics, vol. 3, No. 8, pp. 921-32(2004); U.S. Application Nos. 11134826, 20060074008, 2006022925. 미국 특허 4414205, 4753894, 4764368, 4816444, 4879278, 4943628, 4978744, 5122368, 5165923, 5169774, 5286637, 5410024, 5521284, 5530097, 5554725, 5585089, 5599902, 5629197, 5635483, 5654399, 5663149, 5665860, 5708146, 5714586, 5741892, 5767236, 5767237, 5780588, 5821337, 5840699, 5965537, 6004934, 6033876, 6034065, 6048720, 6054297, 6054561, 6124431, 6143721, 6162930, 6214345, 6239104, 6323315, 6342219, 6342221, 6407213, 6569834, 6620911, 6639055, 6884869, 6913748, 7090843, 7091186, 7097840, 7098305, 7098308, 7498298, 7375078, 7462352, 7553816, 7659241, 7662387, 7745394, 7754681, 7829531, 7837980, 7837995, 7902338, 7964566, 7964567, 7851437, 7994135. 특허의 링커를 통한 항체-아우리스타틴의 결합체 구조의 예는 다음과 같다: Au01, Au02, Au03, Au04, Au05, Au06, Au07, Au08, Au09, Au10, Au11, Au12 및 Au13.
Figure pat00222
Figure pat00223
Figure pat00224
여기서, "
Figure pat00225
", n, m1, m2, X1, X2, R1, R2, R3, R4 및 R5는 화학식 (I) 또는 (II) 또는 (III)에서 정의된 바와 같고; mAb는 항체, 또는 세포-결합 분자이고; L1, L2, L3, L4, 및 L5는 독립적으로 화학식 (I)에서의 L1과 동일하게 정의되고; Z3'는 H, OP(O)(OM1)(OM2), OOCCH3, OCH2OP(O)(OM1)(OM2), OSO3M1, R1, 또는 O-글리코시드(글루코 시드, 갈락토시드, 만노시드, 글루쿠로노시드, 알로시드, 프룩토시드 등), NH-글리코시드, S-글리코시드 또는 CH2-글리코시드이고 ; 또한, 두 개의 Rs: R1R2, R2R3, R1R3 또는 R3R4는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬 또는 알킬시클로알킬기의 3 내지 8 원 사이클릭 고리를 형성할 수 있고; X3는 H, CH3, 또는 X1'R1'이고, 여기서 X1'은 NH, N(CH3), NHNH, O, 또는 S이고, 과 R1'은 H 또는 선형 또는 분지형 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 아실옥시아민의 C1-C8이고; R3'은 H 또는 직쇄 또는 분지쇄 알킬의 C1-C6이고; p는 0-2000이고; M1 및 M2은 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1R2R3이고; 또한 R1', Drug1 및 Drug2는 특허를 통해 기술된 세포 독성제, Drug1일 수 있다.
본 발명에 따라 바람직한 세포 독성제인 벤조디아제핀 다이머(예컨대, 피롤로벤조디아제핀(PBD) 또는 토마이마이신, 인돌리노벤조디아제핀, 이미다조벤조티아디아제핀 또는 옥사졸리디논벤조디아제핀의 다이머)는 다음 자료에 예시되어 있다.: 미국 특허 8,163,736; 8,153,627; 8,034,808; 7,834,005; 7,741,319; 7,704,924; 7,691,848; 7,678,787; 7,612,062; 7,608,615; 7,557,099; 7,528,128; 7,528,126; 7,511,032; 7,429,658; 7,407,951; 7,326,700; 7,312,210; 7,265,105; 7,202,239; 7,189,710; 7,173,026; 7,109,193; 7,067,511; 7,064,120; 7,056,913; 7,049,311; 7,022,699; 7,015,215; 6,979,684; 6,951,853; 6,884,799; 6,800,622; 6,747,144; 6,660,856; 6,608,192; 6,562,806; 6,977,254; 6,951,853; 6,909,006; 6,344,451; 5,880,122; 4,935,362; 4,764,616; 4,761,412; 4,723,007; 4,723,003; 4,683,230; 4,663,453; 4,508,647; 4,464,467; 4,427,587; 4,000,304; US특허 출원. 20100203007, 20100316656, 20030195196. 가교 링커를 통한 항체-벤조디아제핀 다이머의 결합체 구조의 예는 다음과 같다: PB01, PB02, PB03, PB04, PB05, PB06, PB07, PB08, PB09, PB10 및 PB11.
Figure pat00226
Figure pat00227
Figure pat00228
여기서, mAb는 항체이고; X3는 CH2, O, NH, NHC(O), NHC(O)NH, C(O), OC(O), OC(O)(NR3), R1, NHR1, NR1, C(O)R1 또는 부재이고; X4는 CH2, C(O), C(O)NH, C(O)N(R1), R1, NHR1, NR1, C(O)R1 또는 C(O)O이고; M1 및 M2는 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1R2R3이고; "
Figure pat00229
"는 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고; R1, R2 및 R3은 화학식 (I) 및 (II)에서 정의된 바와 같고; n, m1, m2, X1, X2, L1, L2, R1, R2 및 R3은 H 또는 C1-C6 선형 또는 분지형 알킬을 나타내며; p는 0-2000이고; 또한 R1'은 특허를 통해 기술된 세포 독성제, Drug1일 수 있다.
독성 버섯, 특히 팔로이드버섯(Amanita phalloides) 및 몇몇 다른 버섯 종의 여러 속에서 최초로 발견되는 적어도 10종의 독성 화합물의 하위그룹인 아마톡신은 본 특허의 가교 링커를 통한 결합에 바람직하다.
α-아마니틴, β-아마니틴, γ-아마니틴, ε-아마니틴, 아마눌린, 아마눌린산, 아마닌아미드, 아마닌, 프로아마눌린과 같은 10가지의 아마톡신은 35-아미노산 프로프로테인으로 합성되는 견고한 바이시클릭 펩티드이며, 최종 8개의아미노산은 프롤릴 올리고펩티다아제에 의해 절단(cleave)된다.(Litten, W. 1975 Scientific American232 (3): 90-101;H. E. Hallen, et al 2007 Proc. Nat. Aca. Sci. USA 104, 19097-101; K. Baumann, et al, 1993 Biochemistry 32 (15): 4043-50; Karlson-Stiber C, Persson H. 2003, Toxicon 42 (4): 339-49; Horgen, P. A. et al. 1978 Arch. Microbio. 118 (3): 317-9). 아마톡신은 RNA 중합 효소 II(Pol II)를 억제함으로써 세포를 죽이고, 유전자 전사 및 단백질 생합성을 중단시킨다.(Brodner, O. G. 과 Wieland, T. 1976 ,15(16): 3480-4; Fiume, L., Curr Probl Clin Biochem, 1977, 7: 23-8; Karlson-Stiber C, Persson H. 2003, Toxicon 42(4): 339-49; Wieland(1983) Int. J. Pept. Protein Res. 22(3): 257-76). 아마톡신은 수집된 아마니타 팔라로이드 버섯으로부터 생산될 수 있다(Yocum, R. R. 1978 Biochemistry 17(18): 3786-9; Zhang, P. et al, 2005, FEMS Microbiol. Lett. 252(2), 223-8), 또는 담자균을 이용한 발효로 생산될 수 있다(Muraoka, S. and Shinozawa T., 2000 J. Biosci. Bioeng. 89(1): 73-6), 또는 A. 피사(fissa)를 이용한 발효로 생산될 수 있다(Guo, X. W., et al, 2006 Wei Sheng Wu Xue Bao 46(3): 373-8), 또는 갈레리나 파스시큘라타 또는 갈레리나 헬보리셉, 종에 속하는 균을 배양하여 생산될 수 있다(WO/1990/009799, JP11137291). 그러나, 이러한 단리 및 발효로부터의 수확량은 매우 낮았다(5 mg/L 미만의 배양물). 지난 30 년간 아마톡신과 그 유사체의 여러 가지 제조 방법이 보고 된 바 있다(W. E. Savige, A. Fontana, Chem. Commun. 1976, 600-1; Zanotti, G., et al, Int J Pept Protein Res, 1981. 18(2): 162-8; Wieland, T., et al, Eur. J. Biochem. 1981, 117, 161-4; P. A. Bartlett, et al, Tetrahedron Lett. 1982, 23, 619-22; Zanotti, G., et al., Biochim Biophys Acta, 1986. 870(3): 454-62; Zanotti, G., et al., Int. J. Peptide Protein Res. 1987, 30, 323-9; Zanotti, G., et al., Int. J. Peptide Protein Res. 1987, 30, 450-9; Zanotti, G., et al., Int J Pept Protein Res, 1988. 32(1): 9-20; G. Zanotti, T. et al, Int. J. Peptide Protein Res. 1989, 34, 222-8; Zanotti, G., et al., Int J Pept Protein Res, 1990. 35(3): 263-70; Mullersman, J. E. and J. F. Preston, 3rd, Int J Pept Protein Res, 1991. 37(6): 544-51; Mullersman, J.E., et al, Int J Pept Protein Res, 1991. 38(5): 409-16; Zanotti, G., et al, Int J Pept Protein Res, 1992. 40(6): 551-8; Schmitt, W. et al, J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 4380-7; Anderson, M.O., et al, J. Org. Chem., 2005, 70(12): 4578-84; J. P. May, et al, J. Org. Chem. 2005, 70, 8424-30; F. Brueckner, P. Cramer, Nat. Struct. Mol. Biol. 2008, 15, 811-8; J. P. May, D. M. Perrin, Chem. Eur. J. 2008, 14, 3404-9; J. P. May, et al, Chem. Eur. J. 2008, 14, 3410-17; Q. Wang, et al, Eur. J. Org. Chem. 2002, 834-9; May, J. P. and D. M. Perrin, Biopolymers, 2007. 88(5): 714-24; May, J. P., et al., Chemistry, 2008. 14(11): 3410-7; S. De Lamo Marin, et al, Eur. J. Org. Chem. 2010, 3985-9; Pousse, G., et al., Org Lett, 2010. 12(16): 3582-5; Luo, H., et al., Chem Biol, 2014. 21(12): 1610-7; Zhao, L., et al., Chembiochem, 2015. 16(10): 1420-5), 이들 대부분의 제조방법은 부분 합성에 의한 것이었다. 그들의 극단적인 잠재력 및 세포 독성의 독특한 메카니즘으로 인해, 아마톡신은 결합체의 페이로드로 사용되어왔다(Fiume, L., Lancet, 1969. 2 (7625): 853-4; Barbanti-Brodano, G. and L. Fiume, Nat New Biol, 1973. 243(130): 281-3; Bonetti, E., M. et al, Arch Toxicol, 1976. 35(1): p. 69-73; Davis, M. T., Preston, J. F. Science 1981, 213, 1385-1388; Preston, J.F., et al, Arch Biochem Biophys, 1981. 209(1): 63-71; H. Faulstich, et al, Biochemistry 1981, 20, 6498-504; Barak, L.S., et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 1981. 78(5): 3034-8; Faulstich, H. and L. Fiume, Methods Enzymol, 1985. 112: 225-37; Zhelev, Z., A. et al, Toxicon, 1987. 25(9): 981-7; Khalacheva, K., et al, Eksp Med Morfol, 1990. 29(3): 26-30; U. Bermbach, H. Faulstich, Biochemistry 1990, 29, 6839-45; Mullersman, J. E. and J. F. Preston, Int. J. Peptide Protein Res. 1991, 37, 544-51; Mullersman, J.E. and J.F. Preston, Biochem Cell Biol, 1991. 69(7): 418-27; J. Anderl, H. Echner, H. Faulstich, Beilstein J. Org. Chem. 2012, 8, 2072-84; Moldenhauer, G., et al, J. Natl. Cancer Inst. 2012, 104, 622-34; A. Moshnikova, et al; Biochemistry 2013, 52, 1171-8; Zhao, L., et al., Chembiochem, 2015. 16(10): 1420-5; Zhou, B., et al., Biosens Bioelectron, 2015. 68: 189-96; WO2014/043403, US20150218220, EP 1661584). 우리는 얼마 동안 아마톡신의 결합에 대해 연구해 왔다. 가교 링커를 통한 항체-아마톡신의 결합체 구조의 예는 Am01, Am02, Am03 및 Am04이다.
Figure pat00230
Figure pat00231
여기서, mAb 는 항체이고; X3는 CH2, O, NH, NHC(O), NHC(O)NH, C(O), OC(O), OC(O)(NR3), R1, NHR1, NR1, C(O)R1 또는 부재이고; R7, R8, R9, R10 및 R11은 H, OH, OR1, NH2, NHR1, C1-C6 알킬 또는 부재이고; Y1는 O, O2, S, NH, 또는 부재이고; "
Figure pat00232
" 단일결합 또는 이중 결합을 나타내고; n, m1, m2, X1, X2, L1, L2, R1, R2 및 R3 은 화학식 (I) 및 (II)에서 정의된 것과 동일하고; R1' 및 R3'는 H 또는 C1-C6 선형 또는 분지형 알킬이고; p는 0-2000이고; 또한, R1'은 특허를 통해 기술된 세포 독성제, Drug1일 수 있다.
또 다른 실시 양태에서, 둘 이상의 다른 세포 독성제가 본 특허의 가교 링커를 통해 세포 결합 분자와 결합하는데 바람직하다. 2 종 이상의 상이한 세포 독성제는 튜뷸리신, 메이탄시노이드, 탁사노이드(탁산), CC-1065 유사체, 다우노루비신 및 독소루비신 화합물, 벤조디아제핀 다이머(예: 피롤로벤조디아제핀(PBD), 토마이마이신, 안트라마이신, 인돌리노벤조디아제핀, 이미다졸벤조티아디아제핀, 또는 옥사졸리디노벤조디아제핀의 다이머), 칼리케아미신 및 에네다인 항생제, 악티노마이신, 아마니틴(아마톡신), 아자세린, 블레오마이신, 에피루비신, 탐옥시펜, 이다루비신, 돌라스타틴, 아우리스타틴(예: 모노메틸 아우리스타틴 E, MMAE, MMAF, 아우리스타틴 PYE, 아우리스타틴 TP, 아우리스타틴 2-AQ, 6-AQ, EB(AEB), EFP(AEFP)), 두오카마이신, 티오테파, 빈크리스틴, 헤미아스테린, 나주마미드, 마이크로기닌, 라디오수민, 알테로박틴, 미크스클레로더민, 테오넬라미드, 에스페라미신, PNU-159682 및 이들의 유사체 및 유도체의 임의 조합으로부터 선택될 수 있다. 가교 링커를 통해 2 종 이상의 상이한 세포 독성제를 함유하는 결합체 구조의 예는 다음과 같다: Z01, Z02, Z02, Z04, Z05, Z06, Z07, Z08, Z09, Z10, Z12, Z13, Z14, Z15 , Z16, Z17 및 Z18:
Figure pat00233
Figure pat00234
Figure pat00235
Figure pat00236
Figure pat00237
Figure pat00238
여기서, mAb 는 항체이고; X3 및 X'3는CH2, O, NH, NHC(O), NHC(O)NH, C(O), OC(O), OC(O)(NR3), R1, NHR1, NR1, C(O)R1 또는 부재이고; X4 및 X'4는 독립적으로 H, CH2, OH, O, C(O), C(O)NH, C(O)N(R1), R1, NHR1, NR1, C(O)R1 또는 C(O)O이고; M1 및 M2는 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1R2R3이고; n, m1, m2, "
Figure pat00239
", "
Figure pat00240
", X1, X2, R1, R2 및 R3는 화학식 (I) 및 (II)에서 정의된 것과 동일하고; 또한 R1 및/또는 R2는 독립적으로 부재일 수 있다.
또 다른 실시 양태에서, 면역 독소는 이 특허의 링커를 통해 세포 결합 분자와 결합할 수 있다. 본 명세서에서 면역 독소는 일반적으로 디프테리아 독소(DT), 콜레라 독소(CT), 트리코산틴(TCS), 디안틴, 슈도모나스 외독소 A(ETA'), 에리트로젠 독소, 디프테리아 독소, AB 톡소, 유형 III 독소와 같이, 박테리아 또는 식물 단백질로부터 유도되는 세포독성 단백질인 거대 분자 약물이다. 또한, 활성화를 위해 단백질 분해 처리가 필요한 매우 독성인 포어-형성성(pore-forming) 프로톡신(protoxin, 독소전구물질)일 수 있다. 이 프로톡신의 예는 프로아에로리신 및 그 유전자 개질 형태인 톱살리신이다. 톱살리신은 전립선의 효소에 의해 선택적으로 활성화되도록 조작된 개질된 재조합 단백질로서, 주변 조직과 신경을 손상시키지 않고 국소화된 세포 사멸 및 조직 파괴를 유도한다.
또 다른 실시 양태에서, 세포-결합 리간드 또는 세포 수용체 작용제는 본 특허의 링커를 통해 세포-결합 분자와 결합할 수 있다. 이들 결합된 세포-결합 리간드 또는 세포 수용체 작용제, 특히 항체-수용체 결합체는 결합체를 악성 세포에 접합체를 전달하기 위한 표적 안내자/디렉터로서 작용할뿐만 아니라, 원하는 면역 반응을 조절하거나 공동-자극하거나 또는 시그날링 경로를 변경하는데 사용된다.
면역 요법에서 세포 결합 리간드 또는 수용체 작용제는 TCR(T 세포 수용체) T 세포 또는 CAR(키메라 항원 수용체) T 세포 또는 B 세포 수용체(BCR), 내추럴 킬러(NK) 세포 또는 세포독성 세포의 항체에 결합되는데 바람직하다. 이러한 항체는 바람직하게는 항-CD3, CD4, CD8, CD16(FcγRIII), CD27, CD40, CD40L, CD45RA, CD45RO, CD56, CD57, CD57bright, TNFβ, Fas 리간드, MHC 클래스 I 분자(HLA-A, B, C) 또는 NKR-P1을 포함한다. 세포 결합 리간드 또는 수용체 작용제는 다음으로부터 선택되지만, 이에 제한되지 않는다: 엽산 유도체(엽산 수용체에 결합, 난소암 및 다른 악성 종양에서 과발현되는 단백질)(Low, P. S. et al 2008, Acc. Chem. Res. 41, 120-9); 글루타민산 우레아 유도체(전립선 특이 막 항원에 결합, 전립선암 세포의 지표 마커)(Hillier, S. M.et al, 2009, Cancer Res. 69, 6932-40);소마토스타틴(성장 호르몬-억제 호르몬(GHIH) 또는 성장 호르몬-방출 억제 인자(SRIF) 또는 성장 호르몬 방출-억제 호르몬이라고도 함) 및 옥트레오티드(소마토스타틴) 및 란레오티드(소마툴린)과 같은 그 유사체(특히 신경 내분비 종양, GH 생성 뇌하수체 선종, 파라과 아종, 비-기능 뇌하수체 선종, 갈색 세포종)(Ginj, M., et al, 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 16436-41). 일반적으로, 소마토스타틴 및 그의 수용체 아형(sst1, sst2, sst3, sst4 및 sst5)은 신경 내분비 종양, 특히 GH 분비 뇌하수체 종에서 많은 유형의 종양에서 발견되었다(Reubi J. C., Landolt, A. M. 1984 J. Clin. Endocrinol Metab 59: 1148-51; Reubi J. C., Landolt A. M. 1987 J Clin Endocrinol Metab 65: 65-73; Moyse E, et al, J Clin Endocrinol Metab 61: 98-103), 위장관 종양(Reubi J. C., et al, 1987 J Clin Endocrinol Metab 65: 1127-34; Reubi, J. C, et al, 1990 Cancer Res 50: 5969-77), 갈색 세포종(Epel-baum J, et al 1995 J Clin Endocrinol Metab 80:1837-44; Reubi J. C., et al, 1992 J Clin Endocrinol Metab 74: 1082-9), 신경 모세포종(Prevost G, 1996 Neuroendocrinology 63:188-197; Moertel, C. L, et al 1994 Am J Clin Path 102:752-756), 갑상선 수질암(Reubi, J. C, et al 1991 Lab Invest 64:567-573) 소세포 폐암(Sagman U, et al, 1990 Cancer 66 : 2129-2133), 수막종, 수 모세포종 또는 신경 교종과 같은 뇌종양을 포함한 비내분비계 종양(Reubi J. C., et al 1986 J Clin Endocrinol Metab 63: 433-8; Reubi J. C., et al 1987 Cancer Res 47: 5758-64; Fruhwald, M. C, et al 1999 Pediatr Res 45: 697-708), 유방암종(Reubi J. C., et al 1990 Int J Cancer 46: 416-20; Srkalovic G, et al 1990 J Clin Endocrinol Metab 70: 661-669), 림프종(Reubi JC, et al 1992, Int J Cancer 50 : 895-900), 신장 세포 암(Reubi JC, et al 1992, Cancer Res 52 : 6074-6078), 간엽 종양(Reubi JC, et al 1996 Cancer Res 56 : 1922-31), 전립선(Reubi J. C., et al 1995, J. Clin. Endocrinol Metab 80: 2806-14; et al 1989, Prostate 14:191-208; Halmos G, et al J. Clin. Endocrinol Metab 85: 2564-71), 난소암(Halmos, G 등, 2000 J Clin Endocrinol Metab 85 : 3509-12, Reubi JC 등, 1991 Am J Pathol 138 : 1267-72), 위암(Reubi JC 등, 1999, Int J Cancer 81 : 376-86, Miller, G.V, 1992 Br J Cancer 66 : 391-95), 간세포(Kouroumalis E 등, 1998 Gut 42 : 442-7, Reubi JC 등, 1999 Gut 45 : 66-774) 및 비인두암종(Loh K. S, et al, 2002 Virchows Arch 441: 444-8);탄산 탈수 효소 IX(저산소증 및 신장 세포 암의 표지자)에 특이적인 특정 방향족 설폰아미드(Neri, D., et al., Nat. Rev. Drug Discov. 2011, 10, 767-7); 갈색 세포종 및 부신경절종(paraganglioma)에 대한 뇌하수체 아데닐레이트 사이클라제 활성 펩티드(PACAP)(PAC1); 폐암, 위장암, 결장암, 직장암, 유방암, 전립선암, 췌장암, 간암, 방광암 및 상피 종양의 암에 대한 혈관 활동 장내 펩티드(VIP) 및 이들의 수용체 아형(VPAC1, VPAC2); 다양한 종양에 대한 α-멜라닌세포 자극 호르몬(α-MSH) 수용체; 소세포 폐암, 갑상선 수질 암종, 성상 세포종, 인슐린 종 및 난소암에 대한 콜레시스토키닌(CCK)/가스트린 수용체 및 그 수용체 아형(CCK1(이전에 CCK-A) 및 CCK2, 봄베신(Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2), 신장 세포, 유방암, 폐암, 위암, 및 전립선 암종을 위한 스트린-방출 펩티드(GRP) 및 이의 수용체 아형(BB1, GRP 수용체 아형(BB2), BB3 및 BB4) 및 신경아세포종(Ohlsson, B., et al, 1999, Scand. J. Gastroenterology 34(12): 1224-9; Weber, H. C., 2009, Cur. Opin. Endocri. Diab. Obesity 16(1): 66-71, Gonzalez N, et al, 2008, Cur. Opin. Endocri. Diab. Obesity 15(1), 58-64 ); 소세포 폐암, 신경 세포종, 췌장암, 결장암 및 유잉 육종을 위한 뉴로텐신 수용체 및 이의 수용체 아형(NTR1, NTR2, NTR3); 물질 P 수용체 및 그의 수용체 아형(예컨대, 교세포 종양에 대한 NK1 수용체, Hennig I. M., 등 1995 Int. J. Cancer 61, 786-792); 유방암종에 대한 뉴로펩티드 Y(NPY) 수용체 및 이의 수용체 아형(Y1-Y6); 호밍(Homing) 펩티드는 종양 표면의 수용체(인테그린)를 인식하는 RGD(Arg-Gly-Asp), NGR(Asn-Gly-Arg), 이합체 및 다중합체 사이클릭 RGD 펩티드(예: cRGDfV)(Laakkonen P, Vuorinen K. 2010, Integr Biol(Camb). 2(7-8): 326-337; Chen K, Chen X. 2011, Theranostics. 1:189-200; Garanger E, et al, Anti-Cancer Agents Med Chem. 7(5): 552-558; Kerr, J. S. et al, Anticancer Research, 19(2A), 959-968; Thumshirn, G, et al, 2003 Chem. Eur. J. 9, 2717-2725),및 TAASGVRSMH 또는 LTLRWVGLMS(콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 NG2 수용체) 및 F3 펩티드(세포 표면-발현 뉴클레올린 수용체에 결합하는 31아미노산 펩티드)(Zitzmann, S., 2002 Cancer Res., 62, 18, pp. 5139-5143, Temminga, K., 2005, Drug Resistance Updates, 8, 381-402; P. Laakkonen and K. Vuorinen, 2010 Integrative Biol, 2(7-8), 326-337; M. A. Burg, 1999 Cancer Res., 59(12), 2869-2874; K. Porkka, et al 2002, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 99(11), 7444-9); 세포 침투성 펩티드(CPP)(Nakase I, et al, 2012, J. Control Release 159(2), 181-188); 황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH) 작용제 및 길항제, 및 성선 자극 호르몬 방출 호르몬(GnRH) 작용제와 같은 펩티드 호르몬은 난포 자극 호르몬(FSH) 및 황체 형성 호르몬(LH)을 표적화하여 작용할 뿐만 아니라, 부세렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 고나도렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 고세렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2), 히스트렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-벤질)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 루프로리드(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt), 나파렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 트립토렐린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2),나파렐린, 데스로렐린, 아바렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로-Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-이소프로필Lys-Pro-DAla-NH2), 세트로렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2), 데가렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-4-아미노Phe(L-히드로오로틸)-D-4-아미노Phe(카르 바-모일)-Leu-이소프로필Lys-Pro-D-Ala-NH2), 및 가니렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-클로로Phe-D-3-(3-피리딜)Ala-Ser-Tyr-D-(N9,N10-디에틸)-호모Arg-Leu-(N9,N10-디에틸)-호모Arg-Pro-D-Ala-NH2)(Thundimadathil, J., J. Amino Acids, 2012, 967347, doi:10.1155/2012/967347; Boccon-Gibod, L.; et al, 2011, Therapeutic Advances in Urology 3(3): 127-140; Debruyne, F., 2006, Future Oncology, 2(6), 677-696; Schally A. V; Nagy, A. 1999 Eur J Endocrinol 141:1-14; Koppan M, et al 1999 Prostate 38:151-158); 및 패턴 인식 수용체(PRRs), 예컨대 톨-유사(Toll-like) 수용체(TLRs), C 형 렉틴 및 Nodlike 수용체(NLRs)(Fukata, M., et al, 2009, Semin. Immunol. 21, 242-253; Maisonneuve, C., et al, 2014, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111, 1-6; Botos, I., et al, 2011, Structure 19, 447-459; Means, T. K., et al, 2000, Life Sci. 68, 241-258) 이는 그 크기가 작은 분자(이미키모드, 구아니신 및 아데노신 유사체)부터 거대하고 복잡한 생체 거대 분자(예컨대, 리포폴리사카라이드(LPS), 핵산(CpG DNA, polyI:C) 및 리포펩티드(Pam3CSK4)까지 가짐. (Kasturi, S. P., et al, 2011, Nature 470, 543-547; Lane, T., 2001, J. R. Soc. Med. 94, 316; Hotz, C., and Bourquin, C., 2012, Oncoimmunology 1, 227-228; Dudek, A. Z., et al, 2007, Clin. Cancer Res. 13, 7119-25); 칼시토닌 수용체는 파골 세포와 신장에 미치는 영향을 통해 칼슘 수치 조절에 관여하는 32-아미노산 뉴로펩티드이다(Zaidi M, et al, 1990 Crit Rev Clin Lab Sci 28, 109-174; Gorn, A. H., et al 1995 J Clin Invest 95:2680-91); 그리고 인테그린 수용체와 수용체 아형(예컨대, αVβ1, αVβ3, αVβ5, αVβ6, α6β4, α7β1, αLβ2, αIIbβ3등), 이는 일반적으로 혈관 형성에서 중요한 역할을 하는 세포로서, 다양한 세포, 특히 파골 세포, 내피 세포 및 종양 세포의 표면에 발현된다(Ruoslahti, E. et al, 1994 Cell 77, 477-8; Albelda, S. M. et al, 1990 Cancer Res., 50, 6757-64). 짧은 펩티드, GRGDSPK 및 사이클릭 RGD 펜타펩티드, 예를 들면, 시클로(RGDfV)(L1) 및 그 유도체 [시클로(-N(Me) R-GDfV), 시클로(R-Sar-DfV), 시클로-(RG-N(Me)D-fV), 시클로(RGD-N(Me)f-V), 시클로(RGDf-N(Me)V-)(실렌지티드)]는 인테그린 수용체의 높은 결합 친화력을 보임(Dechantsreiter, M. A. et al, 1999 J. Med. Chem. 42, 3033-40, Goodman, S. L., et al, 2002 J. Med. Chem. 45, 1045-51).
세포 결합 리간드 또는 세포 수용체 작용제는 Ig-기반 및 비 Ig-기반 단백질 스카폴드(scaffold) 분자 일 수 있다. Ig-기반 스카폴드는 여기에 제한되지 않지만, 하기로부터 선택될 수 있다: 나노바디(VHH(camelid Ig)의 유도체)(Muyldermans S., 2013 Annu Rev Biochem. 82, 775-97); 도메인 항체(dAb, VH 또는 VL 도메인의 유도체)(Holt, L. J, et al, 2003, Trends Biotechnol. 21, 484-90); 이중 특이적 T 세포-결합제(BiTE, 이중 특이적 디아바디)(Baeuerle, P. A, et al, 2009, Curr. Opin. Mol. Ther. 11, 22-30); 이중 친화도 재 타겟팅(DART, 이중 특이적 디아바디)(Moore P. A. P, et al. 2011, Blood 117(17), 4542-51); 4가 탠뎀 항체(TandAb, 이합체화된 이중 특이적 디아바디)(Cochlovius, B, et al. 2000, Cancer Res. 60(16):4336-4341). 비 Ig 스카폴드는 여기에 제한되지 않지만, 하기로부터 선택될 수 있다: 안티칼린(리포칼린의 유도체)(Skerra A. 2008, FEBS J., 275(11): 2677-83; Beste G, et al, 1999 Proc. Nat. Acad. USA. 96(5):1898-903; Skerra, A. 2000 Biochim Biophys Acta, 1482(1-2): 337-50; Skerra, A. 2007, Curr Opin Biotechnol. 18(4): 295-304; Skerra, A. 2008, FEBS J. 275(11):2677-83); 아드넥틴(10th FN3(Fibronectin))(Koide, A, et al, 1998 J. Mol. Biol., 284(4):1141-51; Batori V, 2002, Protein Eng. 15(12): 1015-20; Tolcher, A. W, 2011, Clin. Cancer Res. 17(2): 363-71; Hackel, B. J, 2010, Protein Eng. Des. Sel. 23(4): 211-19); 설계된 안키린 반복 단백질(DARPins)(안크린 반복(AR) 단백질의 유도체)(Boersma, Y.L, et al, 2011 Curr Opin Biotechnol. 22(6): 849-57), 예: DARPin C9, DARPin Ec4 및 DARPin E69_LZ3_E01(Winkler J, et al, 2009 Mol Cancer Ther. 8(9), 2674-83; Patricia M-K. M., et al, Clin Cancer Res. 2011; 17(1):100-10; Boersma Y. L, et al, 2011 J. Biol. Chem. 286(48), 41273-85); 아비머(A 도메인/저밀도 지질 단백질(LDL) 수용체)(Boersma Y.L, 2011 J. Biol. Chem. 286(48) : 41273-41285, Silverman J 등, 2005 Nat. Biotechnol., 23(12) : 1556-61).
특허 출원의 링커를 통한 항체-세포-결합 리간드 또는 세포 수용체 작용제의 결합체 구조의 예는 다음과 같다: LB01(엽산 결합체), LB02(PMSA 리간드 결합체), LB03(PMSA 리간드 결합체), LB04(소마토스타틴 결합체), LB05(옥트레오티드, 소마토스타틴 유사체 결합체), LB06(란레오티드, 소마토스타틴 유사체 결합체), LB07(바프레오티드(산바르), 소마토스타틴 유사체 결합체), LB08(CAIX 리간드 결합), LB09(CAIX 리간드 결합), LB10(가스트린 방출 펩티드 수용체(GRPr), MBA 결합체), LB11(황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LH-RH) 리간드 및 GnRH 결합체), LB12(황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LH-RH) 및 GnRH 리간드 결합제), LB13(GnRH 길항제, 아바렐릭스(Abarelix) 결합체), LB14(코발라민, 비타민 B12 유사체 결합체), LB15(코발라민, 비타민 B12 유사체 결합체), LB16(αvβ3 인테그린 수용체, 사이클릭 RGD 펜타펩티드 결합체), LB17(VEGF 수용체에 대한 헤테로 2가 펩티드 리간드 결합체), LB18(뉴로메딘 B 결합체), LB19(G-단백질 결합 수용체에 대한 봄베신 결합체), LB20(톨(Toll)-유사 수용체에 대한 TLR2 결합체), LB21(안드로겐 수용체에 대한), LB22(αv 인테그린 수용체에 대한 실렌지티드/시클로(-RGDfV-) 결합체), LB23(플루드로코르티손 결합체), LB24(덱사메타손 결합체), LB25(플루티카손 프로피오네이트 결합체), LB26(베클로메타손 디프로피오네이트), LB27(트리암시놀론 아세토니드 결합체), LB28(프레드니손 결합체), LB29(프레드니솔론 결합체), LB30(메틸프레드니솔론 결합체), LB31(베타메타손 결합체), LB32(이리노테칸 유사체), LB33(크리조티닙 유사체), LB34(보르테조밉 유사체), LB35(카필조밉 유사체), LB36(카필조밉 유사체), LB37(루 프롤리드 유사체), LB38(트립토렐린 유사체), LB39(리라루티드유사체), LB40(세마글루티드 유사체) 및 LB41(릭시세나티드(Lixisenatide) 유사체), 이들은 하기 구조들로 도시된다:
Figure pat00241
LB01(엽산 결합체),
Figure pat00242
LB02(PMSA 리간드 결합체),
Figure pat00243
LB03(PMSA 리간드 결합체),
Figure pat00244
LB04(소마토스타틴 결합체),
Figure pat00245
LB05(옥트레오티드, 소마토스타틴 유사체 결합체),
Figure pat00246
LB06(란레오티드, 소마토스타틴 유사체 결합체),
Figure pat00247
LB07(바프레오티드(산바르), 소마토스타틴 유사체 결합체),
Figure pat00248
LB08(CAIX 리간드 결합체),
Figure pat00249
LB09(CAIX 리간드 결합체),
Figure pat00250
LB10(가스트린 방출 펩티드 수용체(GRPr), MBA 결합체),
Figure pat00251
LB11(황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LH-RH) 리간드 및 GnRH 결합체),
Figure pat00252
LB12(황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LH-RH) 및 GnRH 리간드 결합체),
Figure pat00253
LB13(GnRH 길항제, 아바렐릭스 결합체),
Figure pat00254
LB14(코발라민, VB12 유사체 결합체),
Figure pat00255
LB15(코발라민, VB12 유사체 결합체),
Figure pat00256
LB16(αvβ3 인테그린 수용체, 사이클릭 RGD 펜타펩티드 결합체),
Figure pat00257
LB17(VEGF 수용체에 대한 헤테로 2가 펩티드 리간드 결합체),
Figure pat00258
LB18(뉴로메딘 B 결합체),
Figure pat00259
LB19(G-단백질 결합 수용체에 대한 봄베신 결합체),
Figure pat00260
LB20(톨-유사 수용체에 대한 TLR2 결합체),
Figure pat00261
LB21(안드로겐 수용체),
Figure pat00262
LB22(αv 인테그린 수용체에 대한 실렌지티드/시클로(-RGDfV-) 결합체)
Figure pat00263
LB23(플루드로코르티손 결합체)
Figure pat00264
LB24(덱사메타손 결합체)
Figure pat00265
LB25(플루티카손 프로피오네이트 결합체)
Figure pat00266
LB26(베클로메타손 디프로피오네이트)
Figure pat00267
LB27(트리암시놀론 아세토니드 결합체)
Figure pat00268
LB28(프레드니손 결합체)
Figure pat00269
LB29(프레드니솔론 결합체)
Figure pat00270
LB30(메틸프레드니솔론 결합체)
Figure pat00271
LB31(베타메타손 결합체)
Figure pat00272
LB32(이리노테칸 유사체),
Figure pat00273
LB33(크리조티닙 유사체),
Figure pat00274
LB35(카필조밉 유사체),
Figure pat00275
LB34(보르테조밉 유사체), Y1, Y2는 N, CH, C(Cl), C(CH3), C(COOR1)이고, R1은 H, 알킬의 C1-C6, Ar의 C3-C8.
Figure pat00276
LB36(카필조밉 유사체),
Figure pat00277
LB37 （루프롤라이드 유사체）,
Figure pat00278
LB38 （트립토렐린 유사체）,
Figure pat00279
LB39(리라루티드 유사체)
Figure pat00280
LB40(세마글루티드 유사체).
Figure pat00281
LB41(릭시세나티드 유사체),
여기서, mAb 는 항체이고; X3는 CH2, O, NH, NHC(O), NHC(O)NH, C(O), OC(O), OC(O)(NR3), R1, NHR1, NR1, C(O)R1 또는 부재이고; X4는 H, CH2, OH, O, C(O), C(O)NH, C(O)N(R1), R1, NHR1, NR1, C(O)R1 또는 C(O)O이고; X5는 H, CH3, F, 또는 Cl이고; M1 및 M2은 독립적으로 H, Na, K, Ca, Mg, NH4, NR1R2R3이고; R6는 5'-데옥시아데노실, Me, OH, 또는 CN이고; "
Figure pat00282
"은 단일 결합 또는 이중 결합을 나타내고; m1, m2, n, "
Figure pat00283
", X1, X2, R1, 및 R2는 화학식 (I)에서 정의된 바와 같고; 또한, R1은 부재하고 R2는 H 일 수 있다.
또 다른 구체 예에서, 하나, 둘 또는 그 이상의 DNA, RNA, mRNA, 소형 간섭 RNA(siRNA), 마이크로 RNA(miRNA) 및 PIWI 상호 작용 RNA(piRNA)는 본 특허의 링커를 통해 세포 결합 분자와 결합하는 것이 바람직하다. 소형 RNA(siRNA, miRNA, piRNA)와 긴 비-코딩 안티센스RNA는 세포 내 후성(epigenetic) 변화에 대한 원인으로 알려져 있다(Goodchild, J (2011), Methods in molecular biology (Clifton, N.J.). 764: 1-15). 본 명세서에서 DNA, RNA, mRNA, siRNA, miRNA 또는 piRNA는 3 내지 100 만개의 뉴클레오티드 단위를 갖는 단일 또는 이중 가닥일 수 있고, 그 뉴클레오티드 중 일부는 포미비르센(Fomivirsen)의 예로서 포스포로티오에이트 결합을 갖는 올리고뉴클레오티드와 같이 비-천연(합성)일 수 있다. 또는, 뉴클레오티드는 천연 RNA 및 DNA의 포스포디에스테르 결합 보다는 포스포로티오에티트 결합으로 연결되고, 당 부분은 분자의 중간 부분에서 데옥시리보오스이고 양 말단에서 2'-O-메톡시에틸-개질 리보스이고, 예를들면 미포메르센, 또는 올리고뉴클레오티드는 펩티드 핵산(PNA), 모르폴리노, 포스포로티오에이트, 티오포스포아미데이트, 또는 2'-O-메톡시에틸(MOE), 2'-O-메틸, 2'-불소, 락된(locked) 핵산(LNA), 또는 리보스 당의 이중고리 핵산(BNA), 또는 핵산으로 만들어지고, 이는 당 고리의 2'-3' 탄소 결합을 제거하도록 개질된다. (Whitehead, K. A.; et al (2011), Annual Review of Chemical and Biomolecular Engineering 2: 77-96; Bennett, C.F.; Swayze, E.E. (2010), Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 50: 259-29). 바람직하게는, 올리고뉴클레오티드의 길이 범위는 약 8 내지 100 개 이상의 뉴클레오티드이다. 결합체 구조의 예는 다음과 같다:
Figure pat00284
Figure pat00285
여기서, mAb, m1, m2, n, X1, X2, X3, X4, R1', R2', L1, L2, L3, L4, "
Figure pat00286
" "
Figure pat00287
"는 화학식 (I)에서 정의된 바와 동일하거나 또는 상기 정의된 바와 같고;
Figure pat00288
는 DNA, RNA, mRNA, siRNA, miRNA 또는 piRNA의 단일 또는 이중 가닥이고; X5는 X1과 동일하게 정의되고; Y 및 Y'는 O, S, NH 또는 CH2이다.
또 다른 실시 양태에서, 하나 또는 둘 또는 그 이상의 상이한 기능 분자 또는 약물과 결합되는 IgG 항체 결합체는 경쇄와 중쇄 사이의 디설피드 결합, 2개의 중쇄 사이의 상부 디설피드 결합, 및 2개의 중쇄 사이의 하부 디설피드 결합의 환원을 통하여 한 쌍의 티올에 특이적으로 결합되고, 이는 다음의 구조들 ST1, ST2, ST3, ST4, ST5, ST6, ST7, ST8, ST9, ST10, ST11, ST12, ST13 또는 ST14로 도시된다.
Figure pat00289
Figure pat00290
여기서, X1, X1 ', X2, X2 ', X3, X3 ', X4, X4 ', L1, L1 ', L2, L2 ', L3, L3 ', L4, L4 ', 및 T는 화학식 (I)의 X1과 동일하게 정의되고; 또한, X1, X1 ', X2, X2 ',X3, X3 ', X4, 및X4 '는 부재일 수 있다.
또 다른 실시 양태에서, 치료 유효량의 화학식 (II)의 결합체 또는 본 특허를 통해 기술된 임의의 결합체를 포함하는 약학 조성물은 암, 또는 자가면역 질환, 또는 감염성 질환의 상승적인 효과적 치료 또는 예방을 위해, 화학 요법제, 방사선 치료, 면역 요법제, 자가면역 질환제, 항-감염제 또는 다른 접합체와 함께 동시에 투여될 수 있다. 바람직하게는, 상승 작용제는 하기의 약물들 중 하나 또는 여러개로부터 선택될 수 있다: 아바타셉트(Orencia), 아비라테론 아세테이트(Zytiga®), 아세타미노펜/히드로코돈, 아두카누맙, 아달리무맙, ADXS31-142(Advaxis), ADXS-HER2(Advaxis), 아파티닙 디말레에이트(Gilotrif®), 알렘투주맙(Campath®), 알리-트레티노인(Panretin®), 아도트라스투주맙 엠탄신(Kadcyla™), 암페타민 혼합 소금(암페타민/덱스트로암페타민, 또는 애더랄 XR), 아나스트로졸(Arimidex®), 아리피프라졸, 아타자나비르, 아테졸리주맙(MPDL3280A), 아토르바스타틴, 악시티닙(Inlyta®), 아벨루맙, 벨리노스탓(BeleodaqTM), 베바시주맙(Avastin®), 카바지탁셀(Jevtana®), 카보잔티닙(Cometriq™), 벡사로텐(bexarotene)(Targretin®), 블리나투모맙(BlincytoTM), 보르테조밉(Velcade®), 보수티닙(Bosulif®), 브렌툭시맙베도틴(Adcetris®), 부데소니드, 부데소니드/포르모테롤, 부프레노핀, 카페시타빈, 카필조밉(Kyprolis®), 셀레콕십, 세리티닙(LDK378/Zykadia), 세툭시맙(Erbitux®), 시클로스포린, 시나칼셋, 크리조티닙(Xalkori®), 코센틱(Cosentyx), CTL019, 다비가트란, 다브라페닙(Tafinlar®), 다라투무맙(Darzalex), 다르베포에틴 알파, 다루나비르, 이마티닙 메실레이트(Gleevec®), 다사티닙(Sprycel®), 데니루킨 디프티녹스(Ontak®), 데노수맙(Xgeva®), 데파코테, 덱스란소프라졸, 덱스메틸페니데이트, 덱사메타손, 디그니타나 디그니캅 쿨링 시스템, 디누툭시맙(UnituxinTM), 독시사이클린, 두록세틴, 두베리십, 엘로투주맙, 엠트리시타빈/릴피비린/테노포비르 디소프록실 vvnakfpdlxm, 엠트리싯빈/테노포비르/에파비렌즈, 엔옥사파린, 엔자루타미드(Xtandi®), 에포에틴 알파, 에르로티닙(Tarceva®), 에소메프라졸, 에스조피클론, 에타네르셉, 에베로리무스(Afinitor®), 엑세메스탄(Aromasin®), 에베로리무스(Afinitor®), 에제티미베, 에제티미베/심바스타틴, 페노피브레이트, 필그라스팀, 핀골리모드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루티카손/살메테롤, 풀베스트란트(Faslodex®), 가지바, 게피티닙(Iressa®), 글라티라메르, 고세렐린 아세테이트(Zoladex), 이코티닙, 이마티닙(Gleevec), 이브리투모맙 티욱세탄(Zevalin®), 이브루티닙(ImbruvicaTM), 이델라리십(Zydelig®), 인플릭시맙, 이니파립, 이술린 아스파르트, 인술린 데테미르, 인술린 글라르긴, 인술린 리스프로, 인터페론 베타 1a, 인터페론 베타 1b, 라파티닙(Tykerb®), 이필리무맙(Yervoy®), 이프라트로피움 브로미드/살부타몰, 익사조미(Ninlaro®), 카누마, 란레오티드 아세테이트(Somatuline® Depot), 레날리도미드, 레날리오미드(Revlimid®), 렌바티닙 메실레이트(LenvimaTM), 레트로졸(Femara®), 레보티록신, 레보티록신, 리도카인, 리네조이드, 리라글루티드, 리스덱삼페타민, LN-144(Lion Biotech.), MEDI4736(AstraZeneca, Celgene), 메만틴, 메틸페니데이트, 메토프롤롤, 메킨니스트, 모달피닐, 모메타손, 닐로티닙(Tasigna®), 니라파립, 니보루맙(Opdivo®), 오파투무맙(Arzerra®), 오비누투주맙(GazyvaTM), 올라파립(LynparzaTM), 올메사르탄, 올메사르탄/히드로클로로티아지드, 오말리주맙, 오메가-3 지방산 에틸 에스테르, 오셀타미비르, 옥시코돈, 팔보시클립(Ibrance®), 팔리비주맙, 파니투무맙(Vectibix®), 파노비노스탯(Farydak®), 파조파닙(Votrient®), 펨브롤리주맙(Keytruda®), 페메트렉시드(Alimta), 페르투주맙(PerjetaTM), 뉴모콕칼 결합체 백신, 포말리도미드(Pomalyst®), 프레가바린, 프로스카박스, 프로프라놀올, 퀘티아파인, 라베프라졸, 라듐 223 클로라이드(Xofigo®), 랄록시펜, 랄테그라비르, 라무시루맙(Cyramza®), 라니비주맙, 레고라페닙(Stivarga®), 리툭시맙(Rituxan®), 리바르옥사반, 로미뎁신(Istodax®), 로수바스타틴, 룩소리티닙 포스페이트(JakafiTM), 살부타몰, 세베라메르, 실데나필, 실툭시맙(SylvantTM), 시타글립틴, 시타글립틴/멧포르민, 솔리페나신, 솔라네주맙, 소라페닙(Nexavar®), 수니티닙(Sutent®), 타달라필, 타목시펜, 타핀라르, 탈라조파립, 텔라프레비르, 템시로리무스(Torisel®), 테노포비르/엠트리시타빈, 테스토스테론 젤, 탈리도미드(Immunoprin, Talidex), 티오트로피움 브로미드, 토레미펜(Fareston®), 트라메티닙(Mekinist®), 트라스투주맙, 트레티노인(Vesanoid®), 우스테키누맙, 발라르탄, 벨리파립, 반데타닙(Caprelsa®), 베무라페닙(Zelboraf®), 베네토클락스, 보리노스탯(Zolinza®), 지브-아플리베르셉(Zaltrap®), 조스타박스, 및 이들의 유사체, 유도체, 약학적으로 허용가능한 염, 담체, 희석제 또는 부형제, 또는 이들의 조합.
본 특허의 가교 링커를 통한 결합에 사용된 약물/세포 독성제는 본 특허에 기재된 약물/분자의 임의의 유사체 및/또는 유도체일 수 있다. 약물/세포 독성제의 기술 분야의 당업자라면, 본원에 기재된 약물/세포 독성제 각각은 생성된 화합물이 여전히 출발 화합물의 특이성 및/또는 활성을 유지하는 방식으로 개질될 수 있음을 쉽게 이해할 것이다. 숙련된 당업자는 또한 많은 화합물이 본원에 기재된 약물/세포 독성제 대신에 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명의 약물/세포 독성제는 본원에 기재된 화합물의 유사체 및 유도체를 포함한다.
본원에 인용된 모든 참고 문헌 및 하기의 실시 예는 그 전체가 참고로서 명백히 포함된다.
실시 예
본 발명은 하기 실시 예에서 추가로 기술되며, 이는 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다. 하기 실시 예에 기재된 세포주는 달리 명시되지 않는 한, 미국균주배양수록보존소(American Type Culture Collection, ATCC) 또는 독일 균주 수입 학회(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany)(DMSZ), 또는 중국 상하이 세포 배양 기관에 의해 특정된 조건에 따라 배양되게 유지되었다. 세포 배양 시약은 달리 명시되지 않는 한, Invitrogen Corp.으로부터 입수 하였다. 모든 무수 용매를 상업적으로 수득하고 질소하에 확실한 밀봉 병에 보관하였다. 다른 모든 시약과 용제는 가장 높은 등급으로 구입하여 추가적인 정제 없이 사용하였다. HPLC 분리는 Varain PreStar HPLC로 수행하였다. NMR 스펙트럼은 Varian Mercury 400 MHz Instrument에서 기록했다. 화학 시프트(δ)는 0.00에서 테트라메틸실란을 기준으로 백만분율(ppm)로 보고되었고, 커플링 상수(J)는 Hz로 보고되었다. 질량 스펙트럼 데이터는 Waters Acquity UPLC 분리 모듈 및 Acquity TUV 검출기가 장착된 Waters Xevo QTOF 질량 스펙트럼에서 수집되었다.
실시 예 1 디-tert-부틸 1,2-비스(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸) 히드라진-1,2-디카르복실레이트(38)의 합성.
Figure pat00291
DMF(150 ml) 중의 디-tert-부틸 히드라진-1,2-디카르복실레이트(37)(8.01 g, 34.4 mmol)에, NaH(오일 중 60 %, 2.76 g, 68.8 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 30 분 동안 교반한 후, tert-부틸 2-브로모아세테이트(14.01 g, 72.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 메탄올(3 ml)의 첨가로 급냉시키고, 농축시키고, EtOAc(100 ml) 및 물(100 ml)로 희석시키고, 분리시키고, 수성층을 EtOAc(2 x 50 ml)로 추출하였다. 유기층을 합하고, MgSO4로 건조하고, 여과하고, 증발시키고, SiO2 컬럼 크로마토그래피(EtOAc/헥산 1 : 5 내지 1 : 3)로 정제하여 표제 화합물(12.98g, 82 % 수율)을 무색의 오일로 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C22H41N2O8 [M+H]+ 461.28, found 461.40.
실시 예 2. 2,2'-(히드라진-1,2-디일)디아세트산(39)의 합성.
Figure pat00292
1,4-디옥산(40 ml) 중의 디-tert-부틸 1,2-비스(2-(tert-부톡시)-2-옥소에틸)히드라진-1,2-디카르복실레이트(6.51 g, 14.14 mmol)의 용액에, HCl(12 M, 10 ml)을 첨가하였다. 혼합물을 30 분 동안 교반하고, 디옥산(20 ml) 및 톨루엔(40 ml)으로 희석하고, 증발시키고, 건조까지 디옥산(20 ml) 및 톨루엔(40 ml)과 함께 증발시켜 다음 단계를 위한 조질의(crude, 미가공) 표제 생성물을 수득하였다(2.15 g, 수율 103 %, 순도 93 %). MS ESI m/z calcd for C4H9N2O4 [M+H]+ 149.05, found 149.40.
실시 예 3. 2,2'-(1,2-비스((E)-3-브로모아크릴로일)히드라진-1,2-디일)디아세트산(36)의 합성.
Figure pat00293
THF(50 ml) 및 NaH2PO4(0.1M,80ml,pH6.0)와 혼합된 2,2'-(히드라진-1,2-디일)디아세트산(1.10 g, 7.43 mmol)의 용액에, (E)-3-브로모아크릴로일 브로마이드(5.01 g, 23.60 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 6 시간 동안 교반하고, 농축하고, 3 % 포름산을 함유하는 H2O/CH3CN(1:9)로 용출시키는 SiO2칼럼 상에서 정제하여 표제 화합물(2.35g, 77 % 수율, 약 93 % 순도)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C10H11Br2N2O6 [M+H]+ 412.89, found 413.50.
실시 예 4. 2,2'-(1,2-비스((E)-3-브로모아크릴로일)히드라진-1,2-디일)디아 세틸 클로라이드(41)의 합성.
Figure pat00294
디클로로에탄(15 ml) 중의 2,2'-(1,2-비스((E)-3-브로모아크릴로일)히드라진-1,2-디일)디아세트산(210 mg, 0.509 mmol)의 용액에, (COCl)2( 505 mg, 4.01 mmol)을 첨가한 다음, 이어서 0.040 ml의 DMF를 첨가하였다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시키고 디클로로에탄(2 x 20 ml) 및 톨루엔(2 x 15 ml)과 함께 증발 건조 시켜서, 다음 단계를 위해 추가적인 정제 없이 표제의 조질 생성물(안정하지 못함)을 수득하였다(245 mg, 107 % 수율). MS ESI m/z calcd for C10H9Br2Cl2N2O4 [M+H]+ 448.82, 450.82, 452.82, 454.82, found 448.60, 450.60, 452.60, 454.60.
실시 예 5. tert-부틸 2,8-디옥소-1,5-옥사조카-5-카복실레이트(47)의 합성.
Figure pat00295
4 ℃에서 1.0 M NaOH(300 ml) 중의 3,3'-아자네디일디프로파노산(42)(10.00 g, 62.08 mmol)의 용액에, 디-tert-부틸 디카보네이트(22.10 g, 101.3 mmol)를 200ml THF로 1 시간에 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 4 ℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0.2M H3PO4로 pH 약 4로 조심스럽게 산성화시키고, 진공 농축시키고, CH2Cl2로 추출하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 증발시키고, AcOH/MeOH/CH2Cl2(0.01:1:5)로 용출시키는 플래시 SiO2 크로마토그래피로 정제하여, 3,3'-((tert-부톡시카르보닐)아자네디일)디프로판산(46)(13.62 g, 84 % 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z C11H19NO6 [M+H] +, cacld. 262.27, found 262.40.
0 ℃에서 CH2Cl2(500ml)중의 3,3'-((tert-부톡시카르보닐)아자네디일)디프로판산(8.0 g, 30.6 mmol)의 용액에, 오산화인(8.70 g, 61.30 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0 ℃에서 2 시간 동안 교반한 후, 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 짧은 SiO2 칼럼을 통해 여과하고, 칼럼을 EtOAc/CH2Cl2(1:6)로 세정하였다. 여과액을 농축시키고 EtOAc/헥산으로 분쇄시켜, 표제 화합물(47)(5.64g, 수율 74 %)을 수득하였다. ESI MS m/z C11H17NO5 [M+H] +, cacld. 244.11, found 244.30.
실시 예 6. 2,5-디옥시피롤리딘-1-일 프로피올레이트(61)의 합성.
Figure pat00296
CH2Cl2(150ml) 및 DIPEA(5 ml, 28.7 mmol) 중의 프로피올산(5.00 g, 71.4 mmol), NHS(9.01 g, 78.3 mmol) 및 EDC(20.0 g, 104.1 mmol)를 밤새 교반하고, SiO2칼럼 크로마토그래피(EtOAc/헥산 1 : 4)로 정제하여 표제 화합물(9.30g, 79 % 수율)을 무색의 오일로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2.68 (s, 1H), 2.61 (s, 4H). MS ESI m/z calcd for C7H5NaNO4 [M+Na]+ 190.02, found 190.20.
실시 예 7. tert-부틸 2-프로피올로일히드라진카르복실레이트(88)의 합성.
Figure pat00297
CH2Cl2(150ml) 및 DIPEA(5 ml, 28.7 mmol) 중의 프로피올산(5.00 g, 71.4 mmol), tert-부틸 하이드라진 카복실레이트 (9.45 g, 71.5 mmol) 및 EDC(20.0 g, 104.1 mmol)를 밤새 교반하고, 증발시키고, SiO2칼럼 크로마토그래피(EtOAc/헥산 1 : 5)로 정제하여, 표제 화합물(7.92g, 84 % 수율)을 무색의 오일로 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.76 (m, 2H), 2.68 (s, 1H), 1.39 (s, 9H). MS ESI m/z calcd for C5H12NaN2O2 [M+Na]+ 155.09, found 155.26.
실시 예 8. 프로피올로히드라지드, HCl 염(89)의 합성.
Figure pat00298
1,4-디옥산(12 mL)에 용해된 tert-부틸 2-프로피올로일히드라진카르복실레이트(4.01 g, 30.35 mmol)를 4 ℃에서 4 ml의 HCl(진한)로 처리하였다. 혼합물을 30 분 동안 교반하고, 디옥산(30 ml) 및 톨루엔(30 ml)으로 희석시키고, 진공하에 농축시켰다. 조질의 혼합물을, 메틸렌 클로라이드 중의 메탄올(5 내지 10 %) 및 1 % 포름산의 혼합물을 용리액으로 사용하여 실리카 겔에서 정제하여, 표제 화합물(2.11 g, 83 % 수율), ESI MS m/z C3H5N2O [M+H]+, cacld. 85.03, found 85.30.
실시 예 9. (S, E)-2-메틸-N-(3-메틸부탄-2-일리덴) 프로판-2-설폰아미드(186)의 합성.
Figure pat00299
1 L THF 중의 (S)-2-메틸프로판-2-설핀아미드(100 g, 0.825 mol, 1.0 eq.)의 용액에, Ti(OEt)4(345mL, 1.82mol, 2.2 eq.) 및 3-메틸-2-부탄온(81 mL, 0.825 mol, 1.0 eq.)을 실온의 N2 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 16 시간 동안 환류시킨 후, 실온으로 냉각시시키고, 얼음물에 부었다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 EtOAc로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 농축하여 잔류물을 수득하고, 이를 진공 증류(15-20 torr, 95 ℃)에 의해 정제하여, 표제 생성물(141 g, 90 % 수율)을 황색 오일로 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2.54 - 2.44 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.17 (s, 9H), 1.06 (dd, J = 6.9, 5.1 Hz, 6H). MS ESI m/z calcd for C9H19NaNOS [M+Na]+ 212.12; found 212.11.
실시 예 10. (2S, 3S)-2-아지도-3-메틸펜탄산(177)의 합성.
Figure pat00300
0 ℃로 냉각시킨 물(50 mL)과 디클로로메탄(80 mL)의 혼합물 중의 NaN3(20.0g,308mmol)의 용액에, Tf2O(10mL,59.2mmol,2.0 eq.)를 천천히 첨가하였다. 첨가 후, 반응물을 0 ℃에서 2 시간 동안 교반한 후, 유기상을 분리하고, 수성상을 디클로로메탄(2 x 40 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 포화 NaHCO3 용액으로 세척하고 그대로 사용하였다.
트리플일아지드의 디클로로메탄 용액을 (L)-이소류신(4.04 g, 30.8 mmol, 1.0 eq.), K2CO3(6.39g,46.2mmol,1.5eq.), CuSO4 . 5H2O(77.4mg,0.31mmol,0.01eq.), 물(100 ml) 및 메탄올(200 ml)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반하였다. 유기 용매를 감압 하에서 제거하고, 수성상을 물(250 mL)로 희석시키고, 농축된 HCl로 pH 6으로 산성화시키고, 인산염 완충액(0.25 M, pH 6.2, 250 mL)으로 희석시켰다. 수성층을 EtOAc(5 x 100 mL)로 세척하여 설폰아미드 부산물을 제거한 후, 농축 HCl로 pH 2로 산성화시키고, EtOAc(3 x 150 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜, 표제 생성물(4.90g, 99 % 수율)을 무색 오일로 수득하였다.1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 12.01 (s, 1H), 3.82 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 2.00 (ddd, J = 10.6, 8.6, 5.5 Hz, 1H), 1.54 (dqd, J = 14.8, 7.5, 4.4 Hz, 1H), 1.36 - 1.24 (m, 1H), 1.08 - 0.99 (m, 3H), 0.97 - 0.87 (m, 3H).
실시 예 11. D-N-메틸 피페리콜린산의 합성.
Figure pat00301
메탄올(100 mL) 중의 D-피페콜린산(10.0 g, 77.4 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, 포름알데히드(37 % 수용액, 30.8 mL, 154.8 mmol, 2.0 eq.)를 첨가하였고, 이어서 Pd/C(10 중량 %, 1.0g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2(1 기압)하에서 밤새 교반한 후, 필터 패드를 메탄올로 세척하면서 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 감압하에 농축시켜 표제 화합물(10.0g, 90 % 수율)을 백색 고체로 수득하였다.
실시 예 12. (R)-퍼플루오로페닐 1-메틸피페리딘-2-카르복실레이트의 합성.
Figure pat00302
EtOAc(50 mL) 중의 D-N-메틸 피페콜린산(2.65 g, 18.5 mmol) 용액에, 펜타플루오로페놀(3.75 g, 20.4 mmol) 및 DCC(4.21 g, 20.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 16 시간 동안 교반한 후, 셀라이트상에서 여과하였다. 필터 패드를 10 mL의 EtOAc로 세척하였다. 여과액을 추가 정제 또는 농축 없이 즉시 사용하였다.
실시 예 13. 2,2-디에톡시에탄티오아미드(180)의 합성.
Figure pat00303
실온에서 2,2-디에톡시아세토니트릴(100 g, 0.774 mol, 1.0 eq.)을 메탄올(1.5 L) 중의 (NH4)2S 수용액(48 %, 143 mL, 1.05 mol, 1.36 eq.)과 혼합하였다. 16 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 포화 NaHCO3 용액 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르 및 디클로로메탄의 용매 혼합물로 분쇄하였다. 여과 후, 목적하는 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다(100 g, 79 % 수율). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.81 (d, J = 71.1 Hz, 2H), 5.03 (s, 1H), 3.73 (dq, J = 9.4, 7.1 Hz, 2H), 3.64 (dq, J = 9.4, 7.0 Hz, 2H), 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 6H).
실시 예 14. 에틸 2-(디에톡시메틸)티아졸-4-카르복실레이트(182)의 합성.
Figure pat00304
1 L EtOH 중의 2,2-디에톡시에탄티오아미드(100 g, 0.61 mol, 1.0 eq.) 및 에틸 브로모피루베이트(142 mL, 1.1 mol, 1.8 eq.)의 혼합물에, 90 g의 분자체(3Å)를 첨가하였다. 혼합물을 1 시간 동안 환류시키고(내부 온도 약 60 ℃), 에탄올을 로토 밥에서 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄에 용해시켰다. 고체를 여과하고 여과액을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피(PE/EtOAc 5 : 1 내지 3 : 1)로 정제하여, 표제(티아졸 카르복실레이트) 화합물(130 g, 82 % 수율)을 황색 오일로 수득하였다.
실시 예 15. 에틸 2-포르밀티아졸-4-카르복실레이트(183)의 합성.
*
Figure pat00305
아세톤(1.3 L) 중의 2-(디에톡시메틸)티아졸-4-카르복실레이트(130 g, 0.50 mol)의 용액에, 2 N HCl(85 mL, 0.165 mol, 0.33 eq.)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류시키고(내부 온도 약 60 ℃), 출발 물질이 완전히 소모될 때까지(약 1-2 시간) TLC 분석에 의해 모니터링하였다. 아세톤을 감압하에 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄(1.3 L)에 용해시키고, 포화 NaHCO3용액, 물 및 염수로 세척한 후, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 용액을 여과하고 감압하에 농축시켰다. 조 생성물을 석유 에테르 및 디에틸 에테르로부터 재결정 화시켜 표제 화합물을 백색 고체로 수득하였다(40 g, 43% 수율).1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.08 - 10.06 (m, 1H), 8.53 - 8.50 (m, 1H), 4.49 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.44 (t, J = 7.1 Hz, 3H). MS ESI m/z calcd for C7H8NO3S [M+H]+ 186.01; found 186.01.
실시 예 16. 에틸 2-((R, E)-3-((S)-tert-부틸설피닐)이미노)-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실레이트(187)의 합성.
Figure pat00306
건조 THF(300 mL) 중의 디이소프로필아민(121 mL, 0.86 mol, 4.0 eq.)의 용액에, N2 하의 -78 ℃에서 n-부틸 리튬(2.5 M, 302 mL, 0.76 mol 3.5 eq.)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30 분에 걸쳐 0 ℃로 가온시킨 후, -78 ℃로 다시 냉각시켰다. THF(200 mL) 중의 (S, E)-2-메틸-N-(3-메틸부탄-2-일리덴)프로판-2-설폰아미드(57 g, 0.3 mol, 1.4 eq.)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반한 후, THF(350 mL) 중의 ClTi(OiPr)3(168.5g, 0.645mol, 3.0eq.)을 드롭 방식으로 첨가하였다. 1 시간 동안 교반한 후, THF(175 mL) 중에 용해된 에틸 2-포르밀티아졸-4-카르복실레이트(40 g, 0.215 mol, 1.0 eq.)를 드롭 방식으로 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 2 시간 동안 교반하였다. 반응의 완결은 TLC 분석에 의해 나타내었다. 반응물을 아세트산 및 THF(v/v 1 : 4, 200 mL)의 혼합물로 켄칭시킨 후, 빙수에 부어 EtOAc(4 x 500 mL)로 추출하였다. 유기상을 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(DCM/EtOAc/PE 2 : 1 : 2)로 정제하여 표제 화합물(60 g, 74 % 수율)을 무색의 오일로 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.13 (s, 1H), 6.63 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.20 - 5.11 (m, 1H), 4.43 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.42 - 3.28 (m, 2H), 2.89 (dt, J = 13.1, 6.5 Hz, 1H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.33 (s, 9H), 1.25 - 1.22 (m, 6H). MS ESI m/z calcd for C16H26NaN2O4S2 [M+Na]+ 397.13, found 397.11.
실시 예 17. 에틸 2-((1R, 3R)-3-((S)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실레이트(188)의 합성.
Figure pat00307
THF(200 mL)에 용해된 에틸 2-((R, E)-3-(((S)-tert-부틸설피닐)이미노)-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실레이트(23.5 g, 62.7 mmol)의 용액을 -45 ℃로 냉각시켰다. Ti(OEt)4(42.9mL,188mmol,3.0eq.)를 천천히 첨가하였다. 첨가 완료 후, 혼합물을 1 시간 동안 교반한 후, NaBH4(4.75g,126mmol,2.0eq.)를 분할하여 첨가하였다. 반응 혼합물을 -45 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. TLC 분석 결과 일부 출발 물질이 여전히 잔존함이 나타났다. 반응물을 HOAc/THF(v/v 1 : 4, 25 mL)로, 이어서 EtOH(25 mL)로 켄칭시켰다. 반응 혼합물을 얼음(100g)에 붓고 실온으로 가온하였다. 셀라이트상에서 여과한 후, 유기상을 분리시키고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(EtOAc/PE 1 : 1)로 정제하여, 표제 생성물(16.7 g, 71 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.10 (s, 1H), 5.51 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.23 - 5.15 (m, 1H), 4.41 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.48 - 3.40 (m, 1H), 3.37 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.29 (t, J = 13.0 Hz, 1H), 1.95 - 1.87 (m, 1H), 1.73 - 1.67 (m, 1H), 1.40 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.29 (s, 9H), 0.93 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 7.2 Hz, 3H). MS ESI m/z calcd for C16H28NaN2O4S2 [M+Na]+ 399.15, found 399.14.
실시 예 18. 에틸 2-((1R, 3R)-3-아미노-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실레이트 히드로클로라이드(189)의 합성.
Figure pat00308
에탄올(40 mL) 중의 에틸 2-((1R, 3R)-3-((S)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실레이트(6.00 g, 16.0 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, 디옥산(40 mL) 중의 4 N HCl을 0 ℃에서 천천히 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시켰다. 2.5 시간 동안 교반한 후, 농축하고 석유 에테르로 분쇄하였다. 백색 고체의 표제 화합물(4.54 g, 92 % 수율)을 수득하고 다음 단계에서 사용하였다.
실시 예 19. 에틸 2-((1R, 3R)-3-((2S, 3S)-2-아지도-3-메틸펜타아미도)-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실레이트(190)의 합성.
Figure pat00309
(2S, 3S)-2-아지도-3-메틸펜탄산(5.03g, 28.8mmol, 2.0 eq.)을 THF(120mL)에 용해시키고, 0 ℃로 냉각시킨 후, NMM(6.2mL, 56.0mmol, 4.0 및 이소부틸클로로포르 메이트(3.7 mL, 28.8 mmol, 2.0 eq.)를 순서대로 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 30 분 동안 교반하고 실온에서 교반하였다. 1.0 시간 후, 다시 0 ℃로 냉각시켰다. 에틸 2-((1R, 3R)-3-아미노-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실레이트 히드로클로라이드(4.54 g, 14.7 mmol, 1.0 eq.)를 나누어 첨가하였다. 0 ℃에서 30 분 동안 교반한 후, 반응물을 실온으로 가온시켰다. 2 시간 동안 교반하였다. 0 ℃에서 물을 첨가하여 반응을 멈추고, 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 3 회 추출하였다. 합쳐진 유기층을 1N HCl, 포화 NaHCO3및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(0-30 % EtOAc/PE)로 정제하여 백색 고체의 표제 화합물(4.55 g, 수율 74 %)을 수득하였다.
실시 예 20. 에틸 2-((1R, 3R)-3-((2S, 3S)-2-아지도-3-메틸펜타아미도)-4-메틸-1-((트리에틸실릴)옥시)펜틸)티아졸-4-카르복실레이트 191)의 합성.
Figure pat00310
CH2Cl2(50 mL) 중의 에틸 2-((1R, 3R)-3-((2S, 3S)-2-아지도-3-메틸펜판아미노)-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실레이트(5.30 g, 12.8 1.0 eq.)의 용액에, 0 ℃에서 이미다졸(1.75 g, 25.6 mmol, 2.0 eq.)을, 이어서 클로로트리에틸 실란(4.3 mL, 25.6 mmol, 2.0 eq.)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1 시간에 걸쳐 실온으로 가온되도록 하고, 추가적인 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 염수를 첨가하고, 유기층을 분리하고, 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축시키고, 석유 에테르 중 15-35 % EtOAc의 구배(gradient)를 갖는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 생성물(6.70g, 99 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 6.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.20 - 5.12 (m, 1H), 4.44 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.06 - 3.97 (m, 1H), 3.87 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 2.14 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 2.01 - 1.91 (m, 3H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.34 - 1.25 (m, 2H), 1.06 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.00 - 0.93 (m, 18H), 0.88 (dd, J = 19.1, 6.8 Hz, 6H). MS ESI m/z calcd for C24H44N5O4SSi [M+H]+ 526.28, found 526.28.
실시 예 21. 에틸 2-((1R, 3R)-3-((2S, 3S)-2-아지도-N,3-디메틸펜탄아미도)-4-메틸-1-((트리에틸실릴)옥시)펜틸)티아졸-4-카르복실레이트(192)의 합성.
Figure pat00311
THF(50 mL) 중의 에틸 2-((1R, 3R)-3-((2S, 3S)-2-아지도-3-메틸펜타아미도)-4-메틸-1-((트리에틸실릴)옥시)펜틸)티아졸-4-카르복실레이트(5.20 g, 9.9 mmol, 1.0 eq.)의 용액을, -45 ℃로 냉각시키고 KHMDS(톨루엔 중 1M, 23.8 mL, 23.8 mmol, 2.4 eq.)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -45 ℃에서 20 분 동안 교반하였다. 메틸 요오다이드(1.85 mL, 29.7 mmol, 3.0 eq.)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 4.5 시간에 걸쳐 반응물을 EtOH(10 mL)로 켄칭시켰다. 조 생성물을 EtOAc(250 mL)로 희석하고 염수(100 mL)로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc(3 x 50 ml)로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 석유 에테르 중 15-35 % EtOAc의 구배를 갖는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 담황색 오일로서 표제 생성물(3.33 g, 63 % 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.09 (s, 1H), 4.95 (d, J = 6.6 Hz, 1H),4.41 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.56 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.27 - 2.06 (m, 4H), 1.83 - 1.70 (m, 2H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.29 (ddd, J = 8.9, 6.8, 1.6 Hz, 3H), 1.01 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.96 (dt, J = 8.0, 2.9 Hz, 15H), 0.92 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.7 Hz,3H). MS ESI m/z calcd for C25H46N5O4SSi [M+H]+ 540.30, found 540.30.
실시 예 22. 에틸 2-((3S, 6R, 8R)-3-((S)-sec-부틸)-10,10-디에틸-6-이소프로필-5-메틸-1-((R)-1-메틸피페리딘-2-일)-1,4-디옥소-9-옥사-2,5-디아자-10-실라도데칸-8-일)티아졸-4-카르복실레이트의 합성.
Figure pat00312
건조된 Pd/C(10 중량 %, 300mg) 및 에틸 2-((1R, 3R)-3-((2S, 3S)-2-아지도-N,3-디메틸펜탄아미도)-4-메틸-1-((트리에틸실릴)옥시)펜틸)티아졸-4-카르복실레이트(3.33 g, 6.61 mmol)를, EtOAc 중의 (R)-퍼플루오로페닐 1-메틸피페리딘-2-카르복실레이트에 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 대기하에 27 시간 동안 교반한 후, 필터 패드를 EtOAc로 세척하면서 셀라이트 플러그를 통해 여과하였다. 합해진 유기 부분을 농축시키고, EtOAc 중 0-5 % 메탄올의 구배를 갖는 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 생성물(3.90 g, 86 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C32H59N4O5SSi [M+H]+ 639.39, found 639.39.
실시 예 23. 에틸 2-((1R, 3R)-3-((2S, 3S)-N, 3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실레이트의 합성.
Figure pat00313
에틸 2-((3S,6R,8R)-3-((S)-sec-부틸)-10,10-디에틸-6-이소프로필-5-메틸-1-((R)-1-메틸피페리딘-2-옥시)-1,4-디옥소-9-옥사-2,5-디아자-10-실라도데칸-8-일)티아졸-4-카르복실레이트(3.90 g, 6.1 mmol)를 탈산소 AcOH/물/THF(v/v/v3 : 1 : 1, 100 mL)에 용해시키고, 실온에서 48 시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(2:98 내지 15:85 MeOH/EtOAc)로 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다(2.50 g, 2 단계에 걸쳐 72 % 수율). MS ESI m/z calcd for C26H45N4O5S [M+H]+ 525.30, found 525.33.
실시 예 24. 2-((1R, 3R)-3-((2S, 3S)-N,3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실산의 합성.
Figure pat00314
0℃에서, 디옥산(47.7 mL) 중의 에틸 2-((1R, 3R)-3-((2S, 3S)-N, 3-디메틸-2-((R)-1-메틸 피페리딘-2-카르복사미도)-펜탄아미도)-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실레이트(2.50 g, 4.76 mmol, 1.0 eq.)의 용액에 LiOH(0.4 N, 47.7 mL, 19.1 mmol, 4.0 eq.)의 수용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피(100% CH2Cl2, 이어서 CH2Cl2/MeOH/NH4OH80:20:1)에 의해 표제 화합물(2.36 g, 99 % 수율)을 비정질 고체로 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C24H41N4O5S [M+H]+ 497.27, found 497.28.
실시 예 25. 2-((1R, 3R)-1-아세톡시-3-((2S, 3S)-N, 3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실산의 합성.
Figure pat00315
0 ℃에서 피리딘(50 mL) 중의 2-((1R, 3R)-3-((2S, 3S)-N,3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-1-하드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실산(2.36 g, 4.75 mmol)의 용액에, 아세트산 무수물(2.25 mL, 24 mmol)을 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 2 시간에 걸쳐 실온으로 가온되도록 두었고, 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시키고 잔류물을 역상 HPLC(C18 컬럼, 10-90 % 아세토니트릴/물)로 정제하여, 비결정질 백색 고체로 표제 화합물(2.25g, 88 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C26H43N4O6S [M+H]+ 539.28, found 539.28.
실시 예 26. (1R, 3R)-3-((2S, 3S)-N,3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸-1-(4-(퍼플루오로벤조일)티아졸-2-일)펜틸 아세테이트(294)의 합성.
Figure pat00316
디클로로메탄(2 mL) 중의 2-((1R, 3R)-1-아세톡시-3-((2S, 3S)-N, 3-디메틸-2-((R)-1-메틸-피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실산(86 mg, 0.16 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, 펜타플루오로페놀(44 mg, 0.24 mmol, 1.5 eq.) 및 N, N'-디이소프로필카르보디이미드(22 mg, 0.175 mmol, 1.1 eq.)를 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거한 후, 반응 혼합물을 EtOAc(2 mL)로 희석한 후, 셀라이트상에서 여과하였다. 여과액을 농축시켜 표제 화합물을 수득하고, 이를 추가 정제없이 직접 사용하였다.
실시 예 27. tert-부틸 3-(2-(2-(2-히드록시에톡시)에톡시)에폭시)프로파노에이트의 합성.
Figure pat00317
무수 THF(200 mL) 중의 2,2'-(에탄-1,2-디일비스(옥시))디에탄올(55.0 mL, 410.75 mmol, 3.0 eq.)의 용액에, 나트륨(0.1 g)을 첨가하였다. Na가 사라질 때까지 혼합물을 교반한 다음, tert-부틸 아크릴레이트(20.0 mL, 137.79 mmol, 1.0 eq.)를 적가(add dropwise)하였다. 혼합물을 밤새 교반한 후, 0 ℃에서 HCl 용액(20.0 mL, 1N)으로 켄칭시켰다. 회전 증발에 의해 THF를 제거하고, 염수(300 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 염수(3 x 300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜, 무색 오일(30.20 g, 79.0 % 수율)을 수득하고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. MS ESI m/z calcd for C13H27O6 [M + H]+ 278.1729, found 278.1730.
실시 예 28. tert- 부틸 3-(2-(2-(2-(토실옥시)에톡시)에톡시)에톡시)프로파노에이트의 합성
Figure pat00318
무수 DCM(220 mL) 중의 tert-부틸 3-(2-(2-(2-히드록시에톡시)에톡시)에톡시) 프로파노에이트(30.20 g, 108.5 mmol, 1.0 eq.) 및 TsCl(41.37 g, 217.0 mmol, 2.0 eq.)의 용액에, 0 ℃에서 TEA(30.0 mL, 217.0 mmol, 2.0 eq.)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후, 물(3 x 300 mL) 및 염수(300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(3 : 1 헥산/EtOAc)로 정제하여, 무색 오일(39.4 g, 수율 84.0 %)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C20H33O8S [M + H]+ 433.1818, found 433.2838.
실시 예 29. tert- 부틸 3-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)프로파노에이트의 합성
Figure pat00319
무수 DMF(100 mL) 중의 tert-부틸3-(2-(2-(2-(토실옥시)에톡시)에톡시)에톡시)프로파노에이트(39.4 g, 91.1 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, NaN3(20.67g, 316.6mmol, 3.5eq.)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물(500 mL)을 첨가하고 EtOAc(3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(3 x 900 mL) 및 염수(900 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 SiO2 칼럼 크로마토그래피(5 : 1 헥산/EtOAc)로 정제하여, 담황색 오일 23.8 g, 85.53 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C13H25O3N5Na [M + Na]+ 326.2, found 326.2.
실시 예 30. tert- 부틸 3-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에톡시)프로파노에이트의 합성
Figure pat00320
라니-니켈(7.5 g, 물 중에 현탁)을 물(3 회) 및 이소프로필 알콜(3 회)로 세척하고, 이소프로필 알콜내에서 화합물 147(5.0 g, 16.5 밀리몰)과 혼합하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 H2 풍선하에 교반하고, 이어서 이소프로필 알코올로 패드를 세척하면서 셀라이트 패드상에서 여과하였다. 여과액을 농축시키고 컬럼 크로마토그래피(5-25 % MeOH/DCM)로 정제하여 담황색 오일(2.60 g, 57 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C13H28NO5 [M+H]+ 279.19; found 279.19.
실시 예 31. 2-(2-(디벤질아미노)에톡시)에탄올(298)의 합성.
Figure pat00321
아세토니트릴(350 mL) 중의 2-(2-아미노에톡시)에탄올(21.00 g, 200 mmol, 1.0 eq.) 및 K2CO3(83.00g, 600mmol, 3.0eq.)의 용액에, BnBr(57.0 mL, 480 mmol, 2.4 eq)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 환류시켰다. 물(1 L)을 첨가하고 EtOAc(3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(1000 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피(4 : 1 헥산/EtOAc)로 정제하여, 무색의 오일을 수득하였다(50.97 g, 89.2 % 수율). MS ESI m/z calcd for C18H23NO2Na [M + Na]+ 309.1729, found 309.1967.
실시 예 32. tert -부틸 3-(2-(2-(디벤질아미노)에폭시)에폭시)프로파노에이트(300)의 합성
Figure pat00322
DCM(560 mL) 중의 2-(2-(디벤질아미노)에톡시)에탄올(47.17 g, 165.3 mmol, 1.0 eq.), tert-부틸 아크릴레이트(72.0 mL, 495.9 mmol, 3.0 eq.) 및 n-Bu4NI(6.10g,16.53mmol,0.1eq.)의 용액에, 수산화나트륨 용액(300 mL, 50 %)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하였다. 유기층을 분리하고, 수성층을 EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 물(3 x 300 mL) 및 염수(300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(7 : 1 헥산/EtOAc)로 정제하여, 무색의 오일(61.08 g , 수율 89.4 %)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C25H36NO4 [M + H]+ 414.2566, found 414.2384.
실시 예 33. tert- 부틸 3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시) 프로파노에이트(301)의 합성.
Figure pat00323
THF(30 mL) 및 MeOH(60 mL) 중의 tert-부틸 3-(2-(2-(디벤질아미노)에톡시)에톡시)프로파노에이트(20.00 g, 48.36 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, 수소첨가 병내의 Pd/C(2.00 g, 10 중량 %, 50 % wet)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 셀라이트(여과 조제)를 통해 여과하고, 여과액을 농축하여 무색 오일(10.58g, 수율 93.8 %)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C11H24NO4 [M + H]+ 234.1627, found 234.1810.
실시 예 34. tert- 부틸 3-(2-(2-히드록시에톡시)에톡시)프로파노에이트의 합성.
Figure pat00324
무수 THF(100 mL) 중의 2,2'-옥시디에탄올(19.7 mL, 206.7 mmol, 3.0 eq.)의 용액에, 나트륨(0.1 g)을 첨가하였다. Na가 사라질 때까지 혼합물을 교반한 다음, tert-부틸 아크릴레이트(10.0 mL, 68.9 mmol, 1.0 eq.)를 적가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 염수(200 mL)를 첨가하고 EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 염수(3 x 300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피(1 : 1 헥산/EtOAc)로 정제하여, 무색 오일(8.10 g, 49.4 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C11H23O5 [M +H]+ 235.1467, found 235.1667.
실시 예 35. tert- 부틸 3-(2-(2-(토실옥시)에톡시)에톡시)프로파노에이트의 합성.
Figure pat00325
무수 DCM(50 mL) 중의 tert-부틸 3-(2-(2-히드록시에톡시)에톡시)프로파노에이트(6.24 g, 26.63 mmol, 1.0 eq.) 및 TsCl(10.15 g, 53.27 mmol, 2.0 eq.)의 용액에, 0 ℃에서 피리딘(4.3 mL, 53.27 mmol, 2.0 eq.)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서 물(100 mL)로 세척하고, 수성층을 DCM(3 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, SiO2칼럼 크로마토그래피(5 : 1 헥산/EtOAc)로 정제하여, 무색 오일(6.33 g, 61.3 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C18H27O7S [M + H]+ 389.1556, found 389.2809.
실시 예 36. tert- 부틸 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노에이트의 합성.
Figure pat00326
무수 DMF(20 mL) 중의 tert-부틸 3-(2-(2-(토실옥시)에톡시)에톡시)프로파노에이트(5.80 g, 14.93 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, NaN3(5.02 g, 77.22 mmol , 5.0 eq.)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물(120 mL)을 첨가하고 EtOAc(3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(3 x 150 mL) 및 염수(150 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피(5 : 1 헥산/EtOAc)로 정제하여, 무색의 오일(3.73g, 수율 69.6 %)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C11H22O3N4Na[M + H]+ 260.1532, found 260.2259.
실시 예 37. tert- 부틸 3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로파노에이트의 합성.
Figure pat00327
tert-부틸 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노에이트(0.18 g, 0.69 mmol)를 MeOH(3.0 mL, 농축 HCl 60 μL)에 용해시키고, H2 풍선하에서 30 분 동안 Pd/C(10 중량 %, 20 mg )로 수소 첨가하였다. 촉매를 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, 패드를 MeOH로 세척하였다. 여과액을 농축하여 무색의 오일을 얻었다(0.15g, 93 % 수율). MS ESI m/z calcd for C11H24NO4 [M+H]+ 234.16; found 234.14.
실시 예 38. 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판산.
Figure pat00328
실온에서 1,4-디옥산(30 mL)에 용해된 tert-부틸 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노에이트(2.51 g, 9.68 mmol)를 10 ml의 HCl(농축)로 처리하였다. 혼합물을 35 분 동안 교반하고, EtOH(30 ml) 및 톨루엔(30 ml)으로 희석시키고, 진공하에 농축시켰다. 조질의 혼합물을 용리액으로서 메틸렌 클로라이드 중의 메탄올(5 내지 10 %) 및 1 % 포름산의 혼합물을 사용하여 실리카 겔에서 정제하여, 표제 화합물(1.63 g, 83 % 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z C7H12N3O4 [M-H]-, cacld. 202.06, found 202.30.
실시 예 39. 2,5-디옥시피롤리딘-1-일 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노에이트.
Figure pat00329
30 mL의 디클로로메탄 중의 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판산(1.60 g, 7.87 mmol)의 용액에, 교반과 함께 NHS(1.08 g, 9.39 mmol) 및 EDC(3.60 g, 18.75 mmol)를 첨가하였다. 8 시간 후, 반응이 완료된 것을 확인한 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 메틸렌 클로라이드 중 에틸 아세테이트(5 내지 10 %)의 혼합물을 용출액으로서 사용하여 실리카겔 상에서 정제하여, 표제 화합물(1.93 g, 82 % 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z C11H17N4O6 [M+H]+, cacld.301.11, found 301.20.
실시 예 40. (S)-15-아지도-5-이소프로필-4,7-디옥소-10,13-디옥사-3,6-디아자펜타데칸-1-옥산(oic acid)의 합성
Figure pat00330
DMA(50 ml)와 0.1 M NaH2PO4(50ml, pH 7.5)의 혼합물 중의 (S)-2-(2-아미노-3-메틸부탄아미도)아세트산(Val-Gly)(1.01 g, 5.80 mmol)의 용액에, 2,5-디옥시피롤리딘-1-일 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노에이트(1.90 g, 6.33)를 첨가하였다. 혼합물을 4 시간 동안 교반하고, 진공하에 증발시키고, 용리액으로서 0.5 % 아세트산을 함유하는 메틸렌 클로라이드 중의 메탄올(5 % 내지 15 %) 혼합물을 사용하여 실리카 겔상에서 정제하여, 표제 화합물(1.52 g, 73 % 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z C14H26N5O6 [M+H]+, cacld.360.18, found 360.40.
실시 예 41. (S)-2,5-디옥시피롤리딘-1-일 15-아지도-5-이소프로필-4,7-디옥소-10,13-디옥사-3,6-디아자펜타데칸-1-오에이트의 합성
Figure pat00331
40 mL의 디클로로메탄 중의 (S)-15-아지도-5-이소프로필-4,7-디옥소-10,13-디옥사-3,6-디아자펜타데칸-1-옥산(1.50 g, 4.17 mmol)의 용액에, NHS(0.88g, 7.65mmol) 및 EDC(2.60g, 13.54mmol)를 교반하면서 첨가하였다. 8 시간 TLC 분석 결과 반응이 완료된 것으로 확인되면, 반응 혼합물을 농축시키고 메틸렌 클로라이드 중 에틸 아세테이트(5 % 내지 20 %)의 혼합물을 용리액으로 사용하여 실리카겔상에서 정제하여, 표제 화합물(1.48 g, 78% 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z C18H29N6O8 [M+H]+, cacld.457.20, found 457.50.
실시 예 42. 4-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부탄산의 합성.
Figure pat00332
H2O(40mL) 중의 4-아미노부티르산(7.5 g, 75 mmol) 및 NaOH(6 g, 150 mmol)의 용액을 0 ℃로 냉각시키고, THF(32 ml) 중의 CbzCl(16.1 g, 95 mmol)의 용액으로 처리하였다. 1 시간 후, 반응물을 실온으로 가온되게 두고, 3 시간 동안 교반하였다. THF를 진공하에 제거하고, 6N HCl을 첨가하여 수용액의 pH를 1.5로 조정하였다. 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 염수로 세척하고, 건조 및 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다(16.4 g, 92% 수율). MS ESI m/z calcd for C12H16NO5 [M+H]+238.10, found 238.08.
실시 예 43. tert- 부틸 4-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부타노에이트의 합성.
Figure pat00333
DCM(100 mL) 중의 4-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부탄산(16.4 g, 69.2 mmol) 및 t-BuOH(15.4 g, 208 mmol)의 용액에, DMAP(0.8 g, 6.56 mmol) 및 DCC(17.1 g, 83 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 여과하고 여과액을 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시키고, 1N HCl, 염수로 세척하고 Na2SO4상에서 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(10 내지 50 % EtOAc/헥 세인)에 의해 농축하고 정제하여, 표제 화합물(7.5 g, 37% 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C16H23NO4Na [M+Na]+ 316.16, found 316.13.
실시 예 44. tert-부틸 4-아미노부타노에이트의 합성.
Figure pat00334
tert-부틸 4-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부타노에이트(560 mg, 1.91 mmol)를 MeOH(50 mL)에 용해시키고, Pd/C 촉매(10 중량 %, 100 mg)와 혼합시킨 다음, 실온에서 3 시간 동안 수소첨가하였다. 촉매를 여과하고, 모든 휘발성 물질을 진공하에 제거하여, 표제 화합물(272 mg, 90 % 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C8H18NO2
실시 예 45. tert-부틸 2-(트리페닐포스포라닐리덴)프로파노에이트(206)의 합성.
Figure pat00335
건조 아세토니트릴(45 mL) 중의 tert-부틸-2-브로모프로파노에이트(15.5 g, 74.1 mmol, 1.0 eq.) 및 트리페닐포스핀(19.4 g, 74.1 mmol, 1.0 eq.)의 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하였다. 아세토니트릴을 감압하에 제거하고, 톨루엔을 첨가하여 백색 침전물을 제거하였다. 그 다음, 톨루엔을 따라 내고, 백색 고체를 디클로로메탄(100 mL)에 용해시키고, 분액 깔대기로 옮겼다. 10 % NaOH(100 mL)를 깔때기에 넣고, 흔들어 준 후 즉시 유기층이 황색으로 변하였다. 유기층을 분리하고, 수성층을 디클로로메탄(30 mL)으로 1 회 추출하였다. 디클로로메탄 층을 합하고, 염수(50 mL)로 1 회 세척한 후, Na2SO4상에서 건조시키고, 여과 및 농축시켜, 일리드를 황색 고체로 수득하였다(16.8 g, 58 %).
실시 예 46. (S)-메틸 3-(4-(벤질옥시)페닐)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노에이트(203)의 합성.
Figure pat00336
아세톤(100 mL) 중의 Boc-L-Tyr-OMe(20.0 g, 67.7 mmol, 1.0 eq.), K2CO3(14.0 g, 101.6 mmol, 1.5 eq.) 및 KI(1.12 g, 6.77 mmol, 0.1 eq.)의 혼합물에, BnBr(10.5 mL, 81.3 mmol, 1.2 eq.)을 천천히 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 밤새 환류시켰다. 물(250 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수(300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피(4 : 1 헥산/EtOAc)로 정제하여, 백색 고체의 표제 화합물(26.12 g, 99% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.44 - 7.41 (m, 2H), 7.41 - 7.36 (m, 2H), 7.35 - 7.30 (m, 1H), 7.04 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.93 - 6.89 (m, 2H), 5.04 (s, 2H), 4.97 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.03 (dd, J = 14.4, 5.7 Hz, 2H), 1.44 (d, J = 18.6 Hz, 10H). MS ESI m/z calcd for C22H27NO5Na [M+Na]+ 408.18, found 408.11.
실시 예 47. (S)-tert-부틸(1-(4-(벤질옥시)페닐)-3-옥소프로판-2-일)카르바메이트(204)의 합성.
Figure pat00337
무수 디클로로메탄(450 mL) 중의 (S)-메틸 3-(4-(벤질옥시)페닐)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-프로파노에이트(26.1 g, 67.8 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, -78 ℃에서 1 시간 동안 DIBAL(헥산 중 1.0 M, 163 mL, 2.2 eq.)을 첨가하였다. 혼합물을-78 ℃에서 3 시간 동안 교반한 다음, 에탄올 50 mL로 켄칭시켰다. 1N HCl을 pH 4에 도달할 때까지 적가하였다. 생성된 혼합물을 0 ℃로 가온되도록 두었다. 층을 분리시키고, 수성 층을 EtOAc(3 x 100 mL)로 추가로 추출하였다. 합한 유기 용액을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. PE/EtOAc로 분쇄하고 여과하여, 백색 고체의 표제 화합물(18.3g, 수율 76 %)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C22H27NO5Na [M+Na]+ 378.11, found 378.11.
실시 예 48. (S, Z)- tert- 부틸 5-(4-(벤질옥시)페닐)-4-(( tert- 부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜트-2-에노에이트(207)의 합성.
Figure pat00338
(S)-tert-부틸(1-(4-(벤질옥시)페닐)-3-옥소프로판-2-일)카르바메이트(0.84 g, 2 mmol, 1.0 eq.)를 건조한 디클로로메탄(50 mL)에 용해시키고, 여기에 tert-부틸 2-(트리페닐-포스포라닐리덴)프로파노에이트(1.6 g, 4 mmol, 2.0 eq.)을 첨가하고, 용액을 실온에서 1.5 시간 동안 교반하였고, TLC에 의해 완료되었다고 결정되었다. 칼럼 크로마토그래피(10-50 % EtOAc/헥산)로 정제하여, 표제 화합물(1.16g, 98% 수율)을 수득하였다.
실시 예 49. (4R)-tert-부틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(4-히드록시페닐)-2-메틸펜타노에이트의 합성.
Figure pat00339
(S, Z)-tert-부틸 5-(4-(벤질옥시)페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜트-2-에노에이트(467 mg, 1 mmol)를 메탄올(30 ㎖)에 용해시키고, Pd/C 촉매(10 중량 %, 250 ㎎)로 실온에서 밤새 수소화(1 atm)하였다. 촉매를 여과하고 여과액을 감압하에 농축시켜 표제 화합물(379mg，99% 수율)을 수득하였다.
실시 예 50. (4R)-tert-부틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(4-히드록시-3-니트로페닐)-2-메틸펜타노에이트의 합성
Figure pat00340
(4R)-tert-부틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(4-히드록시페닐)-2-메틸펜타노에이트(379 mg, 1 mmol, 1.0 eq.)를 THF(20 mL)에 용해시키고, 여기에 THF(2 mL) 중의 tert-부틸니트라이트(315 mg, 3 mmol, 3.0 eq.)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 물에 부어 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하고, 합쳐진 유기상을 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조하고 여과하고 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(10-50 % EtOAc/헥산)로 정제하여 표제 화합물(300 mg, 71% 수율)을 수득하였다.
실시 예 51. (4R)-tert-부틸 5-(3-아미노-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜타노에이트(210)의 합성.
Figure pat00341
(4R)-tert-부틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(4-히드록시-3-니트로페닐)-2-메틸-펜타노에이트(200 mg, 0.47 mmol)를 EtOAc(30 mL)에 용해시키고, 팔라듐 촉매(탄소 상 10 %, 100mg)와 혼합한 후, 실온에서 2 시간 동안 수소화(1 기압)하였다. 촉매를 여과하고, 모든 휘발성 물질을 진공하에 제거하여, 표제 화합물(185 mg, 99%)을 수득하였다.
대안적으로, (4R)-tert-부틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(4-히드록시-3-니트로페닐)-2-메틸펜탄산메틸(56 mg, 0.132 mmol)을 EtOAc(20 mL)에 용해시키고, Pd/C 촉매(10 중량 %, 50mg)와 혼합한 후, 실온에서 3 시간 동안 수소화(1 기압)하였다. 촉매를 여과하고, 모든 휘발성 물질을 진공하에 제거하여, 표제 화합물(52 mg，99% 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C21H35N2O5 [M+H]+ 395.25, found 395.26.
실시 예 52. (4R)-tert-부틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-니트로페닐)-2-메틸펜타노에이트의 합성.
Figure pat00342
DCM(20 mL) 중의 (4R)-tert-부틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(4-히드록시-3-니트로페닐)-2-메틸펜타노에이트(424 mg, 1 mmol)의 용액에, 이미다졸(408 mg, 6 mmol) 및 tert-부틸클로로디메틸실란(602 mg, 4 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 농축시키고 컬럼 크로마토그래피(10 % 내지 30 % EtOAc/헥산)로 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다(344 mg，64% 수율).
실시 예 53. (4R)-tert-부틸 5-(3-아미노-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜타노에이트(215)의 합성.
Figure pat00343
(4R)-tert-부틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-니트로페닐)-2-메틸펜타노에이트(200 mg, 0.37 mmol)를 EtOAc(30 mL)에 용해시키고, 팔라듐 촉매(탄소 상 10 중량 %, 100 mg)와 혼합한 후, 실온에서 2 시간 동안 수소화(1 atm)시켰다. 촉매를 여과하고, 모든 휘발성 물질을 진공하에 제거하여, 표제 화합물(187 mg，99% 수율)을 수득하였다.
실시 예 54. (S)-tert-부틸 2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성.
Figure pat00344
50 mL THF에 용해된 Boc-L-프롤린(10.0 g, 46.4 mmol)을 0 ℃로 냉각시키고, 여기에 THF 중의 BH3(1.0 M, 46.4 mL)를 조심스럽게 첨가하였다. 혼합물을 0 ℃에서 1.5 시간 동안 교반한 다음, 얼음물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시키고, 감압하에 농축시켜, 표제 화합물(8.50 g, 91 % 수율)을 백색 고체로 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 3.94 (dd, J = 4.9, 2.7 Hz, 2H), 3.60 (ddd, J = 18.7, 11.9, 9.3 Hz, 2H), 3.49-3.37 (m, 1H), 3.34-3.23 (m, 1H), 2.06-1.91 (m, 1H), 1.89-1.69 (m, 2H), 1.65-1.51 (m, 1H), 1.49- .40 (m, 9H).
실시 예 55. (S)-tert-부틸 2-포르밀피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성.
Figure pat00345
디메틸 술폭시드(90 mL) 중의 (S)-tert-부틸 2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트(13.0 g, 64.6 mmol)의 용액에, 트리에틸아민(40 mL)을 첨가하고, 15 분 동안 교반을 계속하였다. 혼합물을 얼음 조에서 냉각시키고, 삼산화황-피리딘 복합체(35.98 g, 226 mmol)를 40 주기에 걸쳐 분할하여 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 2.5 시간 동안 교반하였다. 얼음(250g)을 첨가한 후, 혼합물을 디클로로메탄(150mL ㅧ 3)으로 추출하였다. 유기상을 50 % 시트르산 용액(150 mL), 물(150 mL), 포화 중탄산 나트륨 용액(150 mL) 및 염수(150 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4상에서 건조시켰다. 진공하에 용매를 제거하여 표제 알데히드(10.4 g, 수율 81 %)를 농축 오일로 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.45 (s, 1H), 4.04 (s, 1H), 3.53 (dd, J = 14.4, 8.0 Hz, 2H), 2.00 - 1.82 (m, 4H), 1.44 (d, J = 22.6 Hz, 9H).
실시 예 56. (4R, 5S)-4-메틸-5-페닐-3-프로피오닐옥사졸리딘-2-온의 합성.
Figure pat00346
N2하에서, THF(100 mL) 중의 4-메틸-5-페닐옥사졸리딘-2-온(8.0 g, 45.17 mmol)의 교반 된 용액에, 헥산(21.6 mL, 2.2 M, 47.43 mmol) 중의 n-부틸리튬을 -78 ℃에서 적가하였다. 용액을 -78 ℃에서 1 시간 동안 유지시킨 다음, 프로피오닐 클로라이드(4.4 mL, 50.59 mmol)를 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 -50 ℃로 가온하고, 2 시간 동안 교반한 후, 염화암모늄(100 mL)의 포화 용액을 첨가하여 켄칭시켰다. 유기 용매를 진공하에 제거하고, 생성된 용액을 에틸 아세테이트(3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 포화 중탄산나트륨 용액(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(20 % 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여, 표제 화합물을 농축 오일로서 수득하였다(10.5 g, 98% 수율). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.45 - 7.34 (m, 3H), 7.30 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 5.67 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.82 - 4.70 (m, 1H), 2.97 (dd, J = 19.0, 7.4 Hz, 2H), 1.19 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
실시 예 57. (S)-tert-부틸 2-((1R, 2R)-1-히드록시-2-메틸-3-((4R, 5S)-4-메틸-2-옥소-5-페닐옥사졸리딘-3-일)-3-옥소프로필)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성.
Figure pat00347
디클로로메탄(60 mL) 중의 (4R, 5S)-4-메틸-5-페닐-3-프로피오닐옥사졸리딘-2-온(9.40 g, 40.4 mmol)의 용액에, 0 ℃에서 Et3N(6.45 mL, 46.64 mmol)을 첨가하고, 이이서 디클로로메탄(42 mL, 42 mmol) 중의 1M 디부틸보론 트리플레이트를 첨가하였다. 혼합물을 0 ℃에서 45 분 동안 교반하고, -70 ℃로 냉각시킨 후, 디클로로메탄(40 mL) 중의 (S)-tert-부틸 2-포르밀피롤리딘-1-카르복실레이트(4.58 g, 22.97 mmol)을 30 분에 걸쳐 반응물을 천천히 첨가하였다. 반응물은 -70 ℃에서 2 시간, 0 ℃에서 1 시간 동안, 실온에서 15 분 동안 교반한 후, 인산염 완충 용액(pH 7, 38 mL)으로 켄칭시켰다. MeOH-30 % H2O2(2:1,100mL)를 10 ℃ 이하에서 첨가하고, 20 분 동안 교반한 후, 물(100 mL)을 첨가하고 혼합물을 진공 농축시켰다. 추가의 물(200 mL)을 잔류물에 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기층을 1N KHSO4(100mL), 중탄산나트륨 용액(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(10 %-50 % 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다(7.10 g, 71% 수율). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.39 (dt, J = 23.4, 7.1 Hz, 3H), 7.30 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 5.67 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 4.84 - 4.67 (m, 1H), 4.08 - 3.93 (m, 3H), 3.92 - 3.84 (m, 1H), 3.50 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.24 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 2.15 (s, 1H), 1.89 (dd, J = 22.4, 14.8 Hz, 3H), 1.48 (d, J = 21.5 Hz, 9H), 1.33 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
실시 예 58. (S)-tert-부틸 2-((1R, 2R)-1-메톡시-2-메틸-3-((4R, 5S)-4-메틸-2-옥소-5-페닐옥사졸리딘-3-일)-3-옥소프로필)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성.
Figure pat00348
(S)-tert-부틸 2-((1R, 2R)-1-히드록시-2-메틸-3-((4R, 5S)-4-메틸-2-옥소-5-페닐옥사졸리딘-3-옥시)-3-옥소프로필)피롤리딘-1-카르복실레이트(5.1g, 11.9mmol)와 분자체(4Å, 5g)의 혼합물에, N2하에 무수 디클로로에탄(30mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반하고 0 ℃로 냉각시켰다. 양성자 스폰지(6.62 g, 30.9 mmol), 이어서 트리메틸옥소늄 테트라플루오로보레이트(4.40 g, 29.7 mmol)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안, 실온에서 48 시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여과액을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피(20-70 % 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다(1.80 g, 35% 수율). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.46 - 7.27 (m, 5H), 5.65 (s, 1H), 4.69 (s, 1H), 3.92 (s, 1H), 3.83 (s, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.17 (s, 2H), 2.02 - 1.68 (m, 5H), 1.48 (d, J = 22.3 Hz, 9H), 1.32 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 0.91 - 0.84 (m, 3H).
실시 예 59. (2R, 3R)-3-((S)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산의 합성.
Figure pat00349
THF(30 mL) 및 H2O(7.5mL) 중의 (S)-tert-부틸 2((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3((4R,5S)-4-메틸-2-옥소-5-페닐옥사졸리딘-3-일)-3-옥소프로필)피롤리딘-1-카르복실레이트(1.80 g, 4.03 mmol)의 용액에, 30% H2O(1.44 mL, 14.4 mmol)을 0℃에서 5분에 걸쳐 첨가하였고, 이어서 물(5 mL) 중의 LiOH(0.27 g, 6.45 mmol)의 용액을 첨가하였다. 0 ℃에서 3 시간 동안 교반한 후, 1 N 아황산 나트륨(15.7 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온시켰다. 밤새 교반하였다. THF를 진공하에 제거하고, 수성상을 디클로로메탄(3 ㅧ 50 mL)으로 세척하여, 옥사졸리디논 보조물을 제거하였다. 수성상을 1N HCl로 pH 3으로 산성화시키고, 에틸 아세테이트(3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 진공하에 농축시켜, 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(1.15 g, 98% 수율). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 3.99 - 3.74 (m, 2H), 3.44 (d, J = 2.6 Hz, 3H), 3.23 (s, 1H), 2.60 - 2.45 (m, 1H), 1.92 (tt, J = 56.0, 31.5 Hz, 3H), 1.79 - 1.69 (m, 1H), 1.58 - 1.39 (m, 9H), 1.30 - 1.24 (m, 3H).
실시 예 60. (4S, 5S)-에틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-메틸-3-옥소 헵타노에이트의 합성.
Figure pat00350
THF(20 mL) 중의 N-Boc-L-이소류신(4.55 g, 19.67 mmol)의 빙냉 용액에, 1,1'-카르보닐디이미다졸(3.51 g, 21.63 mmol)을 첨가하였다. 기체의 방출이 중단된 후, 생성된 혼합물을 실온에서 3.5 시간 동안 교반하였다.
THF(123 mmol, 30 mL) 중의 새로 제조된 이소프로필마그네슘 브로마이드 용액을, 미리 냉각된(0 ℃) 에틸 수로 말로네이트(6.50 g, 49.2 mmol)의 용액에, 그 내부 온도가 5 ℃ 이하로 유지되는 속도로, 적가하였다 5ㅀC 이하. 혼합물을 실온에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 마그네슘 에놀레이트의 이 용액을 얼음물 욕조에서 냉각시킨 후, 이미다졸리드 용액을 0 ℃에서 양단 바늘을 통해 1 시간에 걸쳐 점진적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0 ℃에서 30 분 동안 교반하고, 이어서 실온에서 64 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 10 % 수성 시트르산(5 mL)을 첨가하여 켄칭시키고, 추가의 10 % 시트르산 수용액(110 mL)으로 pH 3으로 산성화시켰다. 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 150 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 물(50 mL), 포화 수성 탄산 수소(50 mL), 및 포화 수성 염화나트륨(50 mL)으로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 용리액으로서 에틸 아세테이트/헥산(1 : 4)을 사용하여 실리카 겔상에 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물(5.50 g, 93% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 5.04 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.20 (p, J = 7.0 Hz, 3H), 3.52 (t, J = 10.7 Hz, 2H), 1.96 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 1.69 (s, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.28 (dd, J = 7.1, 2.9 Hz, 3H), 0.98 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.92 - 0.86 (m, 3H).
실시 예 61. (3R, 4S, 5S)-에틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-히드록시-5-메틸헵타노에이트의 합성.
Figure pat00351
에탄올(6 mL) 중의 (4S, 5S)-에틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-메틸-3-옥소 헵타노에이트(5.90 g, 19.83 mmol)의 용액에, -60 ℃에서 수소화 붕소 나트륨(3.77 g, 99.2 mmol)을 한번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 -55 ℃에서 5.5 시간 동안 교반한 다음, 10 % 수성 시트르산(100 mL)으로 켄칭시켰다. 생성된 용액을 추가의 10 % 시트르산 수용액으로 pH 2로 산성화시킨 후, 에틸 아세테이트(3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 포화 수성 염화나트륨(100 mL)으로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(10-50 % 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여, 표제 화합물을 부분 입체 이성질체(2.20 g, 수율 37 %) 및 2 개의 부분 입체 이성질체(2.0g, 34% 수율, 약 9 : 1 비율)를 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.41 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.17 (tt, J = 7.1, 3.6 Hz, 2H), 4.00 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 3.55 (dd, J = 11.7, 9.3 Hz, 1H), 2.56 - 2.51 (m, 2H), 2.44 (dd, J = 16.4, 9.0 Hz, 1H), 1.79 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 1.60 - 1.53 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.27 (dd, J = 9.3, 5.0 Hz, 3H), 1.03 - 0.91 (m, 7H).
실시 예 62. (3R, 4S, 5S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-히드록시-5-메틸헵탄산의 합성.
Figure pat00352
에탄올(22 mL) 중의 (3R, 4S, 5S)-에틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-히드록시-5-메틸헵타노에이트(2.20 g, 7.20 밀리몰)의 용액에, 1 N 수성 나트륨 수산화물(7.57 mL, 7.57 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0 ℃에서 30 분 동안 교반한 후, 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 1 N 수성 염산의 첨가에 의해 pH 4로 산성화시킨 다음, 에틸 아세테이트(3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 1 N 수성 황산 수소 칼륨(50 mL), 및 포화 수성 염화나트륨(50 mL)으로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켜 화합물(1.90 g, 95% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 4.50 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 3.59 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.56 - 2.45 (m, 2H), 1.76 - 1.65 (m, 1H), 1.56 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.26 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.93 (dd, J = 14.4, 7.1 Hz, 6H).
실시 예 63. (3R, 4S, 5S)-4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)-3-메톡시-5-메틸헵탄산의 합성.
Figure pat00353
THF(40 mL) 중의 (3R, 4S, 5S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-히드록시-5-메틸헵탄산(1.90 g, 6.9 mmol)의 용액에, 수소화 나트륨(60 % 오일 현탁액, 1.93 g, 48.3 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 1 시간 동안 교반한 후에, 메틸 요오다이드(6.6 mL, 103.5 mmol)를 첨가하였다. 교반을 0 ℃에서 40 시간 동안 계속 한 후에, 포화 수성 탄산수소 나트륨(50 mL)을 첨가한 후, 물(100 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 디에틸 에테르(2 x 50 mL)로 세척하고, 수성층을 1 N 수성 황산칼륨 수용액으로 pH 3으로 산성화시킨 다음, 에틸 아세테이트(3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기 추출물을 5 % 수성 티오황산나트륨(50 mL) 및 포화 수성염화나트륨(50 mL)으로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 진공하에 농축시켜, 표제 화합물(1.00 g, 48% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 3.95 (d, J = 75.4 Hz, 2H), 3.42 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.71 (s, 3H), 2.62 (s, 1H), 2.56 - 2.47 (m, 2H), 1.79 (s, 1H), 1.47 (s, 1H), 1.45 (d, J = 3.3 Hz, 9H), 1.13 - 1.05 (m, 1H), 0.96 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.89 (td, J = 7.2, 2.5 Hz, 3H).
실시 예 64. Boc-N-Me-L-Val-OH의 합성.
Figure pat00354
무수 THF(40 mL) 중의 Boc-L-Val-OH(2.00 g, 9.2 mmol) 및 요오드화 메틸(5.74 mL, 92 mmol)의 용액에, 0 ℃에서 수소화 나트륨(3.68 g, 92 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1.5 시간 동안 교반한 후, 실온으로 가온시켰다. 24 시간 동안 교반하였다. 반응을 얼음물(50 mL)로 켄칭시켰다. 물(100 mL)을 첨가한 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(3 x 50 mL)로 세척하고, 수용액을 산성화하여 pH 3으로 만든 다음, 에틸 아세테이트(3 x 50 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기상을 Na2SO4상에서 건조시키고, 농축시켜 Boc-N-Me-Val-OH(2.00 g, 94 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR(500 MHz, CDCl3)δ 4.10(d, J = 10.0 Hz, 1H), 2.87(s, 3H), 2.37 - 2.13(m, 1H), 1.44(d, J = 26.7 Hz, 9H), 1.02(d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.90(t, J = 8.6 Hz, 3H).
실시 예 65. (S)-tert-부틸 2-((1R, 2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2--메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-카르복실레이트.
Figure pat00355
DMF(5 mL) 중의 (2R, 3R)-3-((S)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산(100 mg, 0.347 mmol)과 L-페닐알라닌 메틸 에스테르 히드로클로라이드(107.8 mg, 0.500 mmol)의 용액에, 디에틸 시아노포스포네이트(75.6 μL, 0.451 mmol), 이어서 Et3N(131 μL, 0.94 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온하였다. 밤새 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(80 mL)로 희석시키고, 1 N 수성 황산 수소 칼륨(40 mL), 물(40 mL), 포화 수성 탄산 수소(40 mL) 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(15-75 % 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여, 표제 화합물(130mg, 수율 83 %)을 백색 고체로서 수득하였다. 1HNMR(500MHz,CDCl3)δ 7.28(dd, J = 7.9, 6.5 Hz, 2H), 7.23(t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.16(s, 2H), 4.81(s, 1H), 3.98 - 3.56(m, 5H), 3.50(s, 1H), 3.37(d, J = 2.9 Hz, 3H), 3.17(dd, J = 13.9, 5.4 Hz, 2H), 3.04(dd, J = 14.0, 7.7 Hz, 1H), 2.34(s, 1H), 1.81 - 1.69(m, 2H), 1.65(s, 3H), 1.51 - 1.40(m, 9H), 1.16(d, J = 7.0 Hz, 3H).
실시 예 66. 트리플루오로아세트산으로 Boc 기능을 제거하기 위한 일반적인 절차.
Figure pat00356
메틸렌 클로라이드(2.5 mL) 중의 N-Boc아미노산(1.0 mmol)의 용액에, 트리플루오로아세트산(1.0 mL)을 첨가하였다. 실온에서 1 내지 3 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 톨루엔과 함께 증발시켜 탈보호 된 생성물을 수득하고, 이를 임의의 추가 정제없이 사용하였다.
실시 예 67. (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)(3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트의 합성.
Figure pat00357
DMF(5 mL) 중의 (S)-tert-부틸 2-((1R, 2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-온)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-카르복실레이트(0.29 밀리몰) 및 (3R, 4S, 5S)-4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)-5-메틸헵탄산(96.6 mg, 0.318 mmol)의 Boc-탈보호된 생성물 용액에, 디에틸 시아노포스포네이트(58 μL, 0.347 mmol), 이어서 Et3N(109 μL, 0.78 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온하였다. 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(80 mL)로 희석시키고, 1N 수성 황산 수소 칼륨(40 mL), 물(40 mL), 포화 수성 탄산 수소(40 mL) 및 포화 수성 염화나트륨로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(15-75 % 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여, 표제 화합물(150mg, 81 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC-MS (ESI) m/z calcd. for C34H55N3O8 [M+H]+: 634.40, found: 634.40.
실시 예 68. (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노))-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트의 합성.
Figure pat00358
DCM(5 mL) 중의 (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4-(tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)-피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(0.118 mmol) 및 Boc-Val-OH(51.8 mg, 0.236 mmol)의 Boc-탈보호된 생성물 용액에, BroP(70.1 mg, 0.184 mmol), 이어서 디이소프로필에틸아민(70 μL, 0.425 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 혼합물을 실드로 빛을 차폐시키고 0 ℃에서 30 분 동안, 그 다음 실온에서 2 일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(80 mL)로 희석시키고, 1N 수성 황산 수소 칼륨(40 mL), 물(40 mL), 포화 수성 탄산 수소(40 mL) 및 포화 수성 염화나트륨)로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(20-100 % 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여, 표제 화합물(67mg, 수율 77 %)을 백색 고체로서 수득하였다. LC-MS (ESI) m/z calcd. for C39H64N4O9 [M+H]+: 733.47, found: 733.46.
실시 예 69. (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((6S, 9S, 12S, 13R)-12-((S)-sec-부틸)-6,9-디이소프로필-13-메톡시-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10-트리옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오일)피롤리딘-2-일)-3-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(221)의 합성.
Figure pat00359
DMF(5 mL) 중의 (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(0.091 mmol) 및 Boc-N-Me-Val-OH(127 mg, 0.548 mmol)의 용액에, 0 ℃에서 디에틸 시아노포스포네이트(18.2 μL, 0.114 mmol), 이어서 N-메틸모르폴린(59 μL, 0.548 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 2 시간 동안 교반한 다음, 실온으로 가온하였다. 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(80 mL)로 희석시키고, 1N 수성 황산 수소 칼륨(40 mL), 물(40 mL), 포화 수성 탄산 수소(40 mL) 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(20-100 % 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여, 표제 화합물(30mg, 39 % 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. LC-MS (ESI) m/z calcd. for C45H75N5O10 [M+H]+: 846.55, found: 846.56.
실시 예 70. (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부탄아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸-헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(222)의 합성.
Figure pat00360
메틸렌 클로라이드(5 mL) 중의 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((6S,9S, 12S,13R)-12-((S)-sec-부틸)-6,9-디이소프로필-13-메톡시-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10-트리옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(75.0 mg, 0.0886 mmol)의 용액에, 트리플루오로아세트산(2 mL)을 실온에서 첨가하였다. 실온에서 1 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 톨루엔과 함께 증발시켜 탈보호된 표제 생성물을 수득하였고, 이를 추가 정제없이 사용하였다.
실시 예 71. 디-tert-부틸 3,3'-(벤질아자네디일)디프로파노에이트(227)의 합성.
Figure pat00361
페닐메탄아민(2.0 mL, 18.29 mmol, 1.0 eq.) 및 tert-부틸 아크릴레이트(13.3 mL, 91.46 mmol, 5.0 eq)의 혼합물을 80 ℃에서 밤새 환류시킨 후, 농축시켰다. 조 생성물을 SiO2칼럼 크로마토그래피(20 : 1 헥산/EtOAc)로 정제하여, 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(5.10g, 77 % 수율). ESI MS m/z: calcd for C21H34NO4 [M+H]+ 364.2, found 364.2. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 - 7.21 (m, 5H), 3.58 (s, 2H), 2.76 (t, J = 7.0 Hz, 4H), 2.38 (t, J = 7.0 Hz, 4H), 1.43 (s, 17H).
실시 예 72. 디-tert-부틸 3,3'-아자네디일디프로파노에이트(228)의 합성.
Figure pat00362
MeOH(10 mL) 중의 디-tert-부틸 3,3'-(벤질아자네디일)디프로파노에이트(1.37 g, 3.77 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, 수소첨가 병내의 Pd/C(0.20 g, 10 % Pd/C, 50 % wet)을 첨가하였다. 혼합물을 H2 분위기 하에 밤새 교반한 후, 셀라이트(Celite) 패드를 통해 여과하였다. 여과액을 농축시켜 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(1.22 g, 89% 수율). ESI MS m/z: calcd for C14H28NO4 [M+H]+ 274.19, found 274.20.
실시 예 73. 디-tert-부틸 3,3'-(프로피올오일아자네디일)디프로파노에이트(229)의 합성.
Figure pat00363
0 ℃에서 무수 DMF(100 mL) 중의 디-tert-부틸 3,3'-아자네디일디프로파노에이트(1.22 g, 4.45 mmol, 1.0 eq.) 및 프로피올산(0.468 g, 6.68 mmol, 1.5 eq.)의 용액에, PyBrop(2.49 g, 5.34 mmol, 1.2 eq.) 및 DIPEA(2.32 mL, 13.4 mmol, 3.0 eq.)를 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 10 분 동안 교반한 후, 실온으로 가온시키고 1.5 시간 동안 교반하였다. 물(500 mL)을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc(6 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(4 x 600 mL) 및 염수(600 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피(4 : 1 석유 에테르/에틸 아세테이트)로 정제하여, 표제 화합물을 연황색 오일(1.00 g, 82% 수율). ESI MS m/z: calcd for C17H28NO5 [M+H]+ 326.18, found 326.208.
실시 예 74. 3,3'-(프로피올오일아자네디일)디프로판산(230)의 합성.
Figure pat00364
실온에서 DCM(3 mL) 중의 디-tert-부틸 3,3'-(프로피올오일아자네디일)디프로파노에이트(0.078 g, 0.240 mmol, 1.0 eq)의 용액에, TFA(1 mL)를 첨가하고, 30 분 동한 반응을 위해 교반한 다음, 무수 톨루엔으로 희석하고 농축시켰다. 이 조작을 3 회 반복하여 표제 화합물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다(0.051 g, 이론적 인수율). ESI MS m/z: calcd for C9H12NO5 [M+H]+ 214.06, found 214.06.
실시 예 75. (3S,4S,7S,10S,13S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-((((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11,13-트리메틸-6,9,12,15-테트라옥소-18-프로피올오일-2-옥사-5,8,11,14,18-펜타아자헤니코산- 21-산(231)의 합성.
Figure pat00365
무수 DMF(3 mL) 중의 3-3'-(프로피올오일아자네디일)디프로판산(0.051 g, 0.240 mmol, 6.5 eq.) 및 (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2)-((S)-2-아미노-N-메틸-프로판아미드)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도(3-메톡시-5-메틸-헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(0.030 g, 0.0368 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, 0 ℃에서 PyBrop(0.021g, 0.0442mmol, 1.2 eq.) 및 DIPEA(0.019mL, 0.110mmol, 3.0 eq.)를 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 10 분 동안 교반한 후, 실온으로 가온시키고 1.0 시간 동안 교반하였다. 2 방울의 물을 첨가하고, 혼합물을 농축시키고 prep-HPLC(C18 컬럼, 이동상 A : 물, 이동상 B : 아세토니트릴, 50 분에서 B의 20 %에서 B의 80 %까지)로 정제하였다. 분획을 모으고 동결 건조하여, 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(21 mg, 57% 수율). ESI MS m/z: calcd for C52H82N7O13 [M+H]+ 1012.58, found 1012.59.
실시 예 76. (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((14S, 17S, 20S, 23S, 24R)-23-((S)-sec-부틸)-17,20-디이소프로필-24-메톡시-14,16,22-트리메틸-6,12,15,18,21-펜타옥소-9-프로피올오일-2-옥사-5,9,13,16,19,22-헥사아자헥사코산-26-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(233)의 합성.
Figure pat00366
0 ℃에서 무수 DMF(2 mL) 중의 (3R, 4S, 7S, 10S, 13S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R, 2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11,13-트리메틸-6,9,12,15-테트라옥소-18-프로피오일-2-옥사-5,8,11,14,18-펜타아자헤니코산-21-옥산(0.008 g, 0.00791 mmol, 1.0 eq.) 및 2-메톡시에탄아민(0.006 g, 0.0791 mmol, 10.0 eq.)의 용액에, PyBrop(0.004 g, 0.00870 mmol, 1.1 eq.) 및 DIPEA(0.004 g, mL, 0.00267 mmol, 3.0 eq.)을 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 10 분 동안 교반한 후, 실온으로 가온시키고 1.0 시간 동안 교반하였다. 2 방울의 물을 첨가하고, 혼합물을 농축시키고 prep-HPLC(C18컬럼, 이동상 A : 물, 이동상 B : 아세토니트릴, 50 분에 B의 20 %에서 B의 80 %까지)로 정제하였다. 분획을 모으고 동결 건조하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(7.0 mg, 83% 수율). ESI MS m/z: calcd for C55H89N8O13 [M+H]+ 1069.64, found 1069.66.
실시 예 77. (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((81S, 84S, 87S, 90S, 91R)-90-((S)-sec-부틸)-1-히드록시-84,87-디이소프로필-91-메톡시-81,83,89-트리메틸-73,79,82,85,88-펜타옥소-76-프로피올오일-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69-트리코사옥사-72,76,80,83,86,89-헥사아자트리논나콘탄-93-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(237)의 합성.
Figure pat00367
0 ℃에서 무수 DMF(3 mL) 중의 (3R, 4S, 7S, 10S, 13S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R, 2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11,13-트리메틸-6,9,12,15-테트라옥소-18-프로피오일-2-옥사-5,8,11,14,18-펜타아자헤니코산-21-옥산(0.021 g, 0.0208 mmol, 1.0 eq.) 및 HO-PEG24-NH2(0.027g,0.0250mmol,1.2eq.)의 용액에, PyBrop(0.010 g, 0.0218 mmol, 1.05 eq.) 및 DIPEA(0.011mL, 0.0624mmol, 3.0 eq.)를 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 10 분 동안 교반한 후, 실온으로 가온시키고 1.0 시간 동안 교반하였다. 2 방울의 물을 첨가하고, 혼합물을 농축시키고 prep-HPLC(C18컬럼, 이동상 A : 물, 이동상 B : 아세토니트릴, 50 %에서 B의 20 %에서 B의 80 %까지)로 정제하였다. 분획을 모으고 동결 건조하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(35 mg, 81% 수율). ESI MS m/z: calcd for C100H179N8O36 [M+H]+ 2068.23, found 2068.25.
실시 예 78. tert-부틸 4-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)프로판아미도)-부타노에이트(251)의 합성.
Figure pat00368
0 ℃에서 무수 DCM(50 mL) 중의 tert-부틸 4-아미노부타노에이트(1.00 g, 6.28 mmol, 1.0 eq.) 및 Z-L-알라닌(2.10 g, 9.42 mmol, 1.5 eq.)의 용액에, HATU(3.10 g, 8.164 mmol, 1.3 eq.) 및 TEA(2.6 mL, 18.8 mmol, 3.0 eq.)를 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 10 분 동안 교반한 후, 실온으로 가온시키고 밤새 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 희석하고 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피(10 : 3 석유 에테르/에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(1.39 g, 61% 수율). ESI MS m/z: calcd for C19H29N2O5Na [M+H]+ 387.2, found 387.2.
실시 예 79. tert-부틸 4-(2-아미노프로판아미도)부타노에이트(252)의 합성.
Figure pat00369
MeOH(12 mL) 중의 tert-부틸 4-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)프로판아미도) 부타노에이트(1.39 g, 3.808 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, 수소 첨가 병내의 Pd/C(0.20 g, 10 중량 %, 10 중량 %)을 첨가하였다. 혼합물을 2 시간 동안 교반한 후, 셀라이트(여과 보조제)를 통해 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다(0.838 g, 95% 수율). ESI MS m/z: calcd. for C11H23N2O3 [M+H]+ 231.16, found 231.15.
실시 예 80. 3-(2-(2-(디벤질아미노)에톡시)에톡시)프로판산(254)의 합성.
Figure pat00370
실온에서 DCM(10 mL) 중의 tert-부틸 3-(2-(2-(디벤질아미노)에톡시)에폭시)프로파노에이트(2.3 g, 5.59 mmol, 1.0eq)의 용액에, TFA(5 mL)를 첨가하였다. 90 분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 무수 톨루엔으로 희석하고 농축시킨 후, 이 조작을 3 회 반복하여 표제 화합물을 연황색 오일(2.0g, 이론 수율)로서 수득하고, 이것을 다음에 직접 사용하였다 단계. ESI MS m/z calcd. for C21H28NO4 [M+H]+ 358.19, found 358.19.
실시 예 81. 퍼플루오로페닐 3-(2-(2-(디벤질아미노)에톡시)에폭시)-프로파노에이트(255)의 합성.
Figure pat00371
0 ℃에서 무수 DCM(30 mL) 중의 3-(2-(2-(디벤질아미노)에톡시)에톡시)프로판 산(2.00 g, 5.59 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, DIPEA를 pH가 중성이 될 때까지 첨가하였고, 이어서 PFP(1.54g, 8.38mmol, 1.5 eq.) 및 DIC(1.04mL, 6.70mmol, 1.2 eq.)를 첨가하였다. 10 분 후. 반응물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 농축시키고, SiO2 칼럼 크로마토그래피(15 : 1 석유 에테르/에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(2.10 g, 72% 수율). ESI MS m/z: calcd. for C27H27F5NO4 [M+H]+ 524.2, found 524.2.
실시 예 82. tert-부틸 2-벤질-13-메틸-11,14-디옥소-1-페닐-5,8-디옥사-2,12,15-트리아자노나데칸-19-옥탄(256)의 합성.
Figure pat00372
0 ℃에서 무수 DMA(20 mL) 중의 tert-부틸 4-(2-아미노프로판아미도)부타노에이트(0.736 g, 3.2 mmol, 1.0 eq.) 및 퍼플루오로페닐 3-(2-(2-(디벤질아미노)에톡시)에톡시) 프로파노에이트(2.01 g, 3.84 mmol , 1.2 eq.)의 용액에, DIPEA(1.7 mL, 9.6 mmol, 3.0 eq.)를 첨가하였다. 0 ℃에서 10 분 동안 교반한 후, 반응물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 물(100 mL)을 첨가하고 혼합물을 EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(3 x 200 mL) 및 염수(200 mL)로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 SiO2 칼럼 크로마토그래피(25 : 2 DCM/MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 무색 기름(1.46 g, 80% 수율)으로 수득하였다. ESI MS m/z: calcd. for C32H48N3O6 [M+H]+ 570.34, found570.33.
실시 예 83. 2-벤질-13-메틸-11,14-디옥소-1-페닐-5,8-디옥사-2,12,15-트리아자노나데칸-19-옥산(257)의 합성.
Figure pat00373
DCM(3 mL) 중의 tert-부틸 2-벤질-13-메틸-11,14-디옥소-1-페닐-5,8-디옥사-2,12,15-트리아자노나데칸-19-옥테이트(oate)(0.057 g, 0.101 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, TFA(1 mL)를 첨가하고 40 분 동안 교반하였다. 반응물을 무수 톨루엔으로 희석시킨 후 농축시켰다. 이 조작을 3 회 반복하여 표제 화합물을 무색 오일(0.052 g, 이론 수율)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다. ESI MS m/z: calcd for C28H40N3O6 [M+H]+ 514.28, found 514.28.
실시 예 84. (2S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((1S, 24S, 27S, 28R)-2-벤질-27-((S)-sec-부틸)-21,24-디이소프로필-28-메톡시-13,20,26-트리메틸-11,14,19,22,25-펜타옥소-1-페닐-5,8-디옥사-2,12,15,20,23,26-헥사아자트리아콘탄-30-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(258)의 합성.
Figure pat00374
0 ℃에서 무수 DCM(5 mL) 중의 2-벤질-13-메틸-11,14-디옥소-1-페닐-5,8-디옥사-2,12,15-트리아자노나데칸-19-인산(0.052 g, 0.101 mmol, 1.5 eq.) 및 (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)-부탄아미도)부탄아미드)-3-메톡시-5-메틸-헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(0.034 g, 0.0872 mmol, 1.3 eq.)의 용액에, BrOP(0.034 g, 0.0872 mmol, 1.3 eq.) 및 DIPEA(0.035 mL, 0.201 mmol, 3.0 eq.)를 첨가하였다. 10 분 동안 0 ℃에서 교반한 후, 반응물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 2 방울의 물을 첨가하고, 혼합물을 농축시키고 HPLC(C18 컬럼, 이동상 A : 물, 이동상 B : 아세토니트릴, 50 분 내에 B 20 % 내지 B 80 %)로 정제하였다. 분획을 모으고 동결 건조하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(60 mg, 72% 수율). ESI MS m/z: calcd for C68H105N8O13 [M+H]+ 1241.77, found 1241.77.
실시 예 85. (2S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((19S,22S,25S,26R)-1-아미노-2-((S)-sec-부틸)-19,22-디이소프로필-26-메톡시-11,18,24-트리메틸-9,12,17,20,23-펜타옥소-3,6-디옥사-10,13,18,21,24-펜타아자옥타코산-피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(259)의 합성.
Figure pat00375
MeOH(3 mL) 중의 (2S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((21S, 24S, 27S, 28R)-2-벤질-27-((S)-부틸)-21,24-디이소프로필-28-메톡시-13,20,26-트리메틸-11,14,19,22,25-펜타옥소-1-페닐-5,8-디옥사-2,12,15,20,23,26-헥사아자트리아콘탄-30-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메티리프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(0.030 g, 0.0288 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, 수소첨가 병 내의 6 N HCl 및 Pd/C(0.050 g, 10 중량 %, 10 % wet)를 첨가하였다. 혼합물을 2 시간 동안 교반시킨 후, 셀라이트(여과 보조제)를 통해 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다(0.030 g, 이론적 인수율). ESI MS m/z: calcd for C54H93N8O13 [M+1]+ 1061.67, found1061.69.
실시 예 86. tert-부틸 4-프로피올아미도부타노에이트의 합성.
Figure pat00376
실온에서 무수 DCM(60 mL) 중의 tert-부틸 4-아미노부타노에이트(0.500 g, 3.14 mmol, 1.0 eq.) 및 프로피올산(0.330 g, 4.71 mmol, 1.5 eq.)의 용액에, DCC(0.972 g, 4.71 mmol, 1.5 eq.)를 첨가하였다. 반응물을 3 시간 동안 교반한 다음, 여과하고, 농축시키고, SiO2칼럼 크로마토그래피(15 : 1 DCM/MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다(0.489 g, 74% 수율). ESI MS m/z: calcd for C11H18NO3Na [M+H]+ 234.1, found 234.1.
실시 예 87. 4-프로피올아미도부탄산의 합성.
Figure pat00377
실온에서 DCM(3 mL) 중의 tert-부틸 4-프로피올아미도부타노에이트(0.498 g, 2.32 mmol, 1.0 eq)의 용액에, TFA(1 mL)를 첨가하고, 반응물을 2 시간 동안 교반한 후, 무수 톨루엔으로 희석시키고, 농축시켰다. 이 조작을 3 회 반복하여 표제 화합물을 연황색 오일(0.051 g, 이론 수율)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다. ESI MS m/z: calcd for C7H10NO3 [M+H]+ 156.1, found 156.1.
실시 예 88. 디-tert-부틸 3,3'-((4-프로피올아미도부탄오일)아자네디일) 디프로파노에이트의 합성.
Figure pat00378
무수 DCM(15 mL) 중의 4-프로피올아미도부탄산(0.360 g, 2.32 mmol, 1.2 eq.) 및 tert-부틸 3,3'-아자네디일디프로파노에이트(0.528 g, 1.93 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, PyBrop(0.990 g, 2.22 mmol, 1.1 eq.) 및 DIPEA(1.0 mL, 5.80 mmol, 3.0 eq.)를 0 ℃에서 첨가하였다. 10 분 후. 반응물을 실온으로 가온하고 밤새 교반하였다. 이어서, 혼합물을 DCM으로 희석시키고 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피(5 : 2 석유 에테르/에틸 아세테이트)로 정제하여, 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다(0.367 g, 46% 수율). ESI MS m/z: calcd for C21H35N2O6 [M+H]+ 411.2, found 411.3.
실시 예 89. 3,3'-((4-프피올아미도부탄오일)아자네디일)디프로판산의 합성.
Figure pat00379
실온에서 DCM(3 mL) 중의 디-tert-부틸 3,3'-((4-프피올아미도부탄오일)아자네디일)디프로파노에이트(0.367 g, 0.895 mmol, 1.0 eq)의 용액에, TFA(1 mL)를 첨가하고, 반응물을 3 시간 동안 교반한 후, 무수 톨루엔으로 희석하고 농축시켰다. 이 조작을 3 회 반복하여 표제 화합물을 연황색 오일(0.266 g, 이론 수율)로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다.ESI MS m/z: calcd for C13H19N2O6 [M+H]+ 299.1, found 299.1.
실시 예 90. (3R, 4S, 7S, 10S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11,18-트리메틸-6,9,12,17,20,30-헥사옥소-33-(4-프로피올아미도부탄오일)-2,23,26-트리옥사-5,8,11,16,19,29,33-헵타아자헥사트리아콘탄-36-옥산(260)의 합성.
Figure pat00380
0 ℃에서 무수 DMF(3 mL) 중의 (2S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((19S, 22S,25S,26R)-부틸)-1-아미노-25-((S)-sec-부틸)-19,22-디이소프로필-26-메톡시-11,18,24-트리메틸-9,12,17,20,23-펜타옥소-3,6-디옥사-10,13,18,21,24-펜타아자옥타코산-28-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(0.030 g, 0.0288 mmol, 1.0 eq.) 및 3,3'-((4-프피올아미도부탄오일)아자네디일)디프로판산(0.026 g, 0.0865 mmol, 3.0 eq.)의 용액에, PyBrop(0.017 g, 0.0374 mmol, 1.3 eq.) 및 DIPEA(0.035 mL, 0.064 mmol, 3.0 eq.)를 첨가하였다. 0 ℃에서 10 분 동안 교반한 후, 반응물을 실온으로 가온시키고, 1 시간 동안 교반하였다. 2 방울의 물을 첨가하고, 혼합물을 농축시키고 HPLC(C18 컬럼, 이동상 A : 물, 이동상 B : 아세토니트릴, 50 분 동안 20 % B 내지 80 % B)로 정제하였다. 분획을 모으고 동결 건조하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(18.1 mg, 47% 수율). ESI MS m/z: calcd for C67H109N10O18 [M+H]+ 1341.784, found 1341.81.
실시 예 91. (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((5S, 8S, 11S, 14S, 15R)-14-((S)-sec-부틸)-8,11-디이소프로필-15-메톡시-5,7,13-트리메틸-3,6,9,12-테트라옥소-1-페닐-2-옥사-4,7,10,13-테트라아자헵타데칸-17-오일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(263)의 합성.
Figure pat00381
0 ℃의 무수 DCM(10 mL) 중의 MMAF-OMe(0.132 g, 0.178 mmol, 1.0 eq.) 및 Z-L-알라닌(0.119 g, 0.533 mmol, 3.0 eq.)의 용액에, HATU(0.135 g, 0.356 mmol, 2.0 eq.) 및 NMM(0.12 mL, 1.07 mmol, 6.0 eq.)을 연속적으로 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 10 분 동안 교반한 후, 실온으로 가온시키고 밤새 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 희석시키고 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피(20 : 1 DCM/MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 발포 고체(0.148 g, 88% 수율)를 수득하였다. ESI MS m/z: calcd for C51H79N6O11　[M+H]+ 951.6, found 951.6.
실시 예 92. (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4-((S)-2-((S)-2-((S)-2-아미노-N-메틸프로판아미도)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵탄오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(264)의 합성.
Figure pat00382
MeOH(5 mL) 중의 (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((5S, 8S, 11S, 14S, 15R)-14-((S)-sec-부틸)-8,11-디이소프로필-15-메톡시-5,7,13-트리메틸-3,6,9,12-테트라옥소-1-페닐-2-옥사-4,7,10,13-테트라아자헵타데칸-17-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐-프로파노에이트(0.148 g, 0.156 mmol, 1.0 eq.)의 용액에, 수소첨가 병의 Pd/C(0.100 g, 10 % 수성) Pd/C, 50 % wet)을 첨가하였다. 혼합물을 5 시간 동안 교반시킨 후, 셀라이트(Celite) 패드를 통해 여과하였다. 여과액을 농축시켜 표제 화합물을 백색 발포체 고체로서 수득하였다(0.122 g, 96% 수율). ESI MS m/z: calcd for C43H73N6O9 [M+H]+ 817.5, found 817.5.
실시 예 93. (E)-tert-부틸 3-(2-(2-(3-브로모아크릴아미도)에톡시)프로파노에이트(302)의 합성.
Figure pat00383
CM(10 ml) 중의 (E)-3-브로모아크릴산(0.15 g, 1 mmol), DMAP(0.15 g, 1.2 mmol) 및 DCC(0.21 g, 1 mmol)의 용액에, tert-부틸 3-2-(2-아미노에톡시)에톡시) 프로파노에이트(0.23g, 1mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 두었다. 밤새 교반하였다. 조 생성물을 농축시키고 EA/DCM의 구배를 가진 SiO2 칼럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다(0.31g, 85% 수율). ESI MS m/z: calcd for C14H25BrNO5 [M+H]+: 366.08, found 366.08.
실시 예 94. (E)-3-(2-(2-(3-브로모아크릴아미도)에톡시)프로판산(303)의 합성.
Figure pat00384
(E)-tert-부틸3-(2-(2-(3-브로모아크릴아미도)에톡시)에톡시)프로파노에이트(0.31 g, 0.84 mmol)를 0 ℃에서 포름산(4 mL) 용해시킨 다음, H2O(2 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 두었다. 밤새 교반하였다. 조 생성물을 농축시키고, 더 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다. ESI MS m/z: calcd for C10H17BrNO5 [M+H]+: 310.02, found 310.03.
실시 예 95. (E)-2,5-디옥시피롤리딘-1-일 3-(2-(2-(3-브로모아크릴아미도)에톡시)에톡시)프로파노에이트(304)의 합성.
Figure pat00385
(E)-3-(2-(2-(3-브로모아크릴아미도)에톡시)에톡시)프로판산(0.12 g, 0.39 mmol), NHS(0.067 g, 0.58 mmol) 및 EDC(0.11 g, 0.58 mmol)을 DCM(10 mL)에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반시키고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(0.13 g, 82% 수율). ESI MS m/z: calcd for C14H20BrN2O7 [M+H]+:407.04, found 407.04.
실시 예 96. (4R)-4-(2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S, 3S)-N, 3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-(3-(2-(2-((E)-3-브로모아크릴아미도)에톡시)에톡시)프로판아미드)-4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(306)의 합성.
Figure pat00386
DMA(3 mL) 중의 (4R)-4-(2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-아미노-4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(305)(Huang Y. et al, Med Chem. #44, 249th ACS National Meeting, Denver, CO, Mar. 22~26, 2015; WO2014009774)(50 mg, 0.066 mmol), (E)-2,5-디옥시피롤리딘-1-일 3-(2-(2-(3-브로모아크릴 아미도)에톡시)에톡시)프로파노에이트(60 mg, 0.148 mmol)의 용액에, NaH2PO4(17.8mg,0.15mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였고, 농축시키고, MeCN/H2O 구배를 갖는 역상 HPLC에 의해 정제하여, 표제 생성물을 수득하였다(22.6 mg, 33% 수율). ESI MS m/z: calcd for C48H73BrN7O12S [M+H]+:1052.41, found 1052.40.
실시 예 97. tert-부틸 3-(2-(2-프로피올아미도에톡시)에톡시)프로파노에이트(320)의 합성.
Figure pat00387
tert-부틸 3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로파노에이트(466 mg, 2 mmol) 및 프로피올산(210 mg, 3 mmol)을 DCM(50 mL)에 용해시키고, 여기에 DCC(618 mg, 3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 3 시간 동안 교반한 후 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(10 % 내지 100 % EtOAc/헥산)로 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다(400 mg, 70%). ESI MS m/z 286.17([M+H]+).
실시 예 98. 3-(2-(2-프로피올아미도에톡시)에톡시)프로판산(321)의 합성.
Figure pat00388
tert-부틸 3-(2-(2-프로피올아미도에톡시)에톡시)프로파노에이트(200 mg, 0.7 mmol)를 DCM(5 mL)에 용해시키고, 포름산(7 mL)을 첨가하였다. 생성된 용액을 38 ℃에서 밤새 교반하였다. 모든 휘발성 물질을 진공 하에서 제거하여, 표제 화합물(160 mg, 이론 수율)을 수득하였다.ESI MS m/z 230.11([M+H]+).
실시 예 99. 2,5-디옥시피롤리딘-1-일 3-(2-(2-프로피올아미도에톡시)-에톡시) 프로파노에이트(322)의 합성.
Figure pat00389
DCM(15 mL) 중의 3-(2-(2-프로피올아미도에톡시)에톡시)프로판산(149 mg, 0.65 mmol)의 용액에, NHS(115 mg, 1 mmol) 및 EDC(192 mg, 1 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 농축시키고 칼럼 크로마토그래피(0 % 내지 10 % MeOH/DCM)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(180 mg, 85%). ESI MS m/z 327.11([M+H]+).
실시 예 100. (4R)-tert-부틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(4-히드록시-3-(2-(2-프로피올아미도에톡시)에톡시)프로판아미도)페닐)-2-메틸펜타노에이트(323)의 합*.
Figure pat00390
EtOH(7.5mL)중의 2,5-디옥시피롤리딘-1-일3-(2-(2-프로피올아미도 에톡시)에톡시)프로파노에이트(90mg, 0.276mmol) 및 (4R)-tert-부틸5-(3-아미노-4-히드록시페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜타노에이트(109 mg, 0.276 mmol)의 용액에, NaH2PO4(0.1M,1.5mL)를 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 모든 휘발성 물질을 진공하에 제거하고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(30 % 내지 100 % EtOAc/헥산)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(160 mg, 96%). ESI MS m/z 606.34([M+H]+).
실시 예 101. (4R)-4-아미노-5-(4-히드록시-3-(3-(2-프로피올아미도에톡시)-에톡시)프로판아미도)페닐)-2-메틸펜탄산(324)의 합성.
Figure pat00391
(4R)-tert-부틸 4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-5-(4-히드록시-3-(2-(2-프로피올아미도-에톡시)에톡시)프로판아미도)페닐)-2-메틸펜타노에이트(40mg, 0.066mmol)을 DCM(3mL)에 용해시키고, 실온에서 2 시간 동안 TFA(3mL)로 처리하였다. 모든 휘발성 물질을 진공하에 제거하여 표제 화합물을 수득하였다(29 mg, 99%). ESI MS m/z 450.23([M+H]+).
실시 예 102. (4R)-4-(2-((6S, 9R, 11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-5-(4-히드록시-3-(3-(2-(2-프로피올아미도에톡시)에톡시)프로판아미도)페닐)-2-메틸펜탄산(325)의 합성..
Figure pat00392
(4R)-4-아미노-5-(4-히드록시-3-(2-(2-프로피올아미도에톡시)-에톡시)프로판아미도)-페닐)-2-메틸펜탄산(30 mg, 0.066 mmol) 및 퍼플루오로페닐 2-((6S, 9R, 11R)-6-((S)-sec-부틸)-9-이소프로필-2,3,3,8-테트라메틸-4,7,13-트리옥소-1,2-옥사-2,5,8-트리아자테트라데칸-11-일)티아졸-4-카르복실레이트(46 mg, 0.066 mmol)를, DMA(3 mL)에 용해시켰다. 이어서, DIPEA(10 mg, 0.078 mmol)를 첨가하고 실온에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 잔류물을 분취용 HPLC(C18 컬럼, 10-90 % MeCN/H2O)상에서 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(15 mg, 24%). ESI MS m/z 958.47([M+H]+).
실시 예 103. (4R)-4-(2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-(3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판아미도)-4-히드록시페닐)-2-메틸페탄산(335)의 합성.
Figure pat00393
DMA(10 mL)와 NaH2PO4 완충액(pH 7.5, 1.0 M, 0.7 ㎖)의 혼합물 중의 (4R)-4-(2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-아미노-4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(305)(Huang Y. et al, Med Chem. #44, 249th ACS National Meeting, Denver, CO, Mar. 22~26, 2015; WO2014009774)(100 mg, 0.131 mmol)의 용액에, 2,5-디옥시피롤리딘-1-일 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노에이트(80.0 mg, 0.266 mmol)를 2시간에 4 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 농축시키고, 45 분 내에 80 % 물/메탄올로부터 10 % 물/메탄올로 용출시키는 C18 예비 HPLC(3.0 x 25cm, 25ml/분)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(101.5 mg, 82% 수율). LC-MS (ESI) m/z calcd.for C45H70N9O11S [M+H]+: 944.48, found: 944.70.
실시 예 104. (4R)-4-(2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-(3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판아미도)-4-히드록시페닐)-2-메틸페탄산(336)의 합성.
Figure pat00394
수소첨가 병에 0.1% HCl을 함유하는 메탄올(25 ml) 중의 (4R)-4-(2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-(3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판아미도)-4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(100.0 mg, 0.106 mmol)의 용액에, Pd/C(25 mg, 10 % Pd, 50 % wet)을 첨가하였다. 공기를 용기에서 진공 제거하고 35 psi H2를 도입한 후, 혼합물을 4 시간 동안 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 45 분 동안 85 % 물/메탄올 내지 15 % 물/메탄올로 용출시키는 C18 예비 HPLC(3.0 x 25cm, 25ml/분)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(77.5 mg, 79% 수율). LC-MS (ESI) m/z calcd.for C45H72N7O11S [M+H]+: 918.49, found: 918.60.
실시 예 105. (4R)-4-(2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S,3S)-N,3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-((3R, 4S, 7S, 10S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R, 2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-(2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11,18-트리메틸-6,9,12,17,20,30,36-헵타옥소-33-(5-옥소헵트-6-이노닐)-2,23,26,40,43-펜타옥사-5,8,11,16,19,29,33,37-옥타아자헥사테트라콘탄아미도)-4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(338)의 합성.
Figure pat00395
디클로로메탄(5 mL) 중의 (3R, 4S, 7S, 10S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-((((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11,18-트리메틸-6,9,12,17,20,30-헥사옥소-33-(4-프로피올아미도부탄오일)-2,23,26-트리옥사-5,8,11,16,19,29,33-헵타아자헥사트리아콘탄-36-옥산(0.018 g, 0.0134 mmol)의 현탁액에, 펜타플루오로페놀(3.7 mg, 0.0201 mmol) 및 DIC(2.0 mg, 0.0161 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4 시간 동안 교반하고, 셀라이트상에서 여과하였다. 여과액을 농축시키고 DMF(1 mL)에 용해시키고, 여기에 무수 DMF(2 mL) 중의 (4R)-4-(2-((1R, 3R)-1-아세톡시-3-((2S, 3S)-N, 3-디에틸-2((R)-1-메틸-피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복사미도)-5-(3-(3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판아미도)-4-히드록시페닐)-2-메틸펜탄산(13.5 mg, 0.0147 mmol) 용액을 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시키고 HPLC(C18컬럼, 이동상 A : 물, 이동상 B : 아세토니트릴, 50 분 동안 B 20 %에서 B 80 %로)로 정제하였다. 분획을 모으고 동결 건조하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(8.9 mg, 30% 수율). ESI MS m/z: calcd for C112H176N16O28S [M+H]+ 2226.26, found 2226.48.
실시 예 106. (2S, 4R)-메틸 4-히드록시피롤리딘-2-카르복실레이트 히드로클로릭의 합성.
Figure pat00396
드라이 메탄올(250 mL) 중의 트랜스-4-히드록시-L-프롤린(15.0 g, 114.3 mmol)의 용액에, 0 내지 4 ℃에서 티오닐 클로라이드(17 mL, 231 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였고, 농축시키고, EtOH/헥산으로 결정화시켜 표제 화합물을 수득하였다(18.0 g, 87% 수율). ESI MS m/z 168.2([M+Na]+).
실시 예 107. (2S, 4R)-1-tert-부틸 2-메틸 4-히드록시피롤리딘-1,2-디카르 복실레이트의 합성.
Figure pat00397
MeOH(150 ml) 및 중탄산나트륨(2.0 M, 350 ml)의 혼합물 중의 트랜스-4-히드록시-L-프롤린 메틸 에스테르(18.0 g, 107.0 mmol)의 용액에, Boc2O(30.0g,137.6mmol)을 4 시간에 3 부분으로 나누어 첨가하였다. 추가로 4 시간 동안 교반한 후, 반응물을 ~350 ml로 농축시키고 EtOAc(4 x 80 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수(100 mL)로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과하고, 농축시키고, SiO2칼럼 크로마토그래피(1 : 1 헥산/EtOAc)로 정제하여 표제 화합물(22.54 g, 86% 수율). ESI MS m/z 268.2([M+Na]+).
실시 예 108. (S)-1- tert -부틸 2-메틸 4-옥소피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성.
Figure pat00398
데스-마틴(Dess-Martin) 산화법를 통해 제조된 표제 화합물은 문헌 [Franco Manfre et al. J. Org. Chem. 1992, 57, 2060-2065]에 기재되어 있다. 대안적으로, Swern 산화 절차는 다음과 같다: -78 ℃로 냉각된 CH2Cl2(350ml) 중의 (COCl)2(13.0ml,74.38mmol) 용액에, 드라이 DMSO(26.0 mL)를 첨가하였다. 용액을-78 ℃에서 15 분 동안 교반한 후, CH2Cl2(100ml)중의 (2S, 4R)-1-tert-부틸 2-메틸 4-히드록시피롤리딘-1,2-디카르복실레이트(8.0 g, 32.63 mmol)를 첨가하였다. -78 ℃에서 2 시간 동안 교반한 후, 트리에틸아민(50 ml, 180.3 mmol)을 적가하고, 반응 용액을 실온으로 가온하였다. 혼합물을 aq. NaH2PO4용액(1.0 M, 400 ml)로 희석하고, 상 분리하였다. 수성층을 CH2Cl2(2x60ml)로 추출하였다. 유기층을 합하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피(7 : 3 헥산/EtOAc)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(6.73 g, 85% 수율). ESI MS m/z 266.2([M+Na]+).
실시 예 109. (S)-1-tert-부틸 2-메틸 4-메틸렌피롤리딘-1,2-디카르복실레이트의 합성.
Figure pat00399
0 ℃에서 THF(150 mL) 중의 메틸트리페닐포스포늄 브로마이드(19.62 g, 55.11 mmol)의 현탁액에, 무수 THF(80 mL) 중의 칼륨-t-부톡시드(6.20 g, 55.30 mmol)를 첨가하였다. 0 ℃에서 2 시간 동안 교반한 후, 생성된 황색 일라이드를, THF(40 mL) 중의(S)-1-tert-부틸 2-메틸 4-옥소피롤리딘-1,2-디카르복실레이트(6.70 g, 27.55 mmol)의 용액에 첨가하였다. 실온에서 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(200 mL)로 희석하고, H2O(150mL), 염수(150 mL)로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피(9 : 1 헥산/EtOAc )로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(5.77 g, 87% 수율). EI MS m/z 264([M+Na]+).
실시 예 110. (S)-메틸 4-메틸렌피롤리딘-2-카르복실레이트 히드로클로라이드의 합성.
Figure pat00400
4 ℃에서 EtOAc(40 ml) 중의 (S)-1-tert-부틸 2-메틸 4-메틸렌피롤리딘-1,2-디카르복실레이트(5.70 g, 23.63 mmol)의 용액에, HCl(12 M, 10 ml)를 첨가하였다. 혼합물을 1 시간 동안 교반하고, 톨루엔(50 ml)으로 희석시키고, 농축시키고, EtOH/헥산으로 결정화시켜 표제 화합물을 HCl 염으로서 수득하였다(3.85 g, 92% 수율). EI MS m/z 142.2([M+H]+).
실시 예 111. 4-(벤질옥시)-3-메톡시벤조산의 합성.
Figure pat00401
에탄올(350 ml) 중의 4-히드록시-3-메톡시벤조산(50.0 g, 297.5 mmol) 및 NaOH 용액(2.0M, 350ml)의 용액에, BnBr(140.0g, 823.5mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 65 ℃에서 8 시간 동안 교반하고, 농축시키고, 물(2 x 400 ml)과 함께 증발시키고 약 400 ml로 농축시키고, 6 N HCl로 pH 3.0으로 산성화시켰다. 고체를 여과로 수집하고, EtOH로 결정화시키고, 진공하에 45 ℃에서 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다(63.6 g, 83% 수율). ESI MS m/z 281.2([M+Na]+).
실시 예 112. 4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조산의 합성,
Figure pat00402
CH2Cl2(400ml) 및 HOAc(100 ml) 중의 4-(벤질옥시)-3-메톡시벤조산(63.5 g, 246.0 mmol)의 용액에, HNO3(발연, 25.0 ml, 528.5 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 6 시간 동안 교반하고, 농축시키고, EtOH로 결정화시키고, 진공하에 40 ℃에서 건조시켜 표제 화합물(63.3 g, 85% 수율). ESI MS m/z 326.1([M+Na]+).
실시 예 113. (S)-메틸 1-(4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조일)-4-메틸렌피롤리딘-2-카르복실레이트의 합성.
Figure pat00403
무수 CH2Cl2 중의 4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조산(2.70 g, 8.91 mmol) 및 옥살릴 클로라이드(2.0 mL, 22.50 mmol)의 용액에, 촉매량의 DMF(30 ㎕) 70 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 과잉 CH2Cl2 및 옥 살릴 클로라이드를 로타밥(rotavap)으로 제거하였다. 아세틸 클로라이드를 새로운 CH2Cl2(70mL)에서 재현탁시키고, 0 ℃의 N2 분위기하에서 (S)-메틸 4-메틸렌피롤리딘-2-카르복실레이트 히드로클로라이드(1.58 g, 8.91 mmol) 및 Et3N(6mL)의 예비 혼합 용액에 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 두었다. 8 시간 동안 교반을 계속하였다. CH2Cl2 및 Et3N을 제거한 후, 잔류물을 H2O 및 EtOAc(70/70 mL) 사이로 분할하였다. 수성층을 EtOAc(2 x 60 mL)로 추가로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 염수(40 mL)로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피(실리카겔, 2 : 8 헥산/EtOAc)로 잔류물을 정제하여 표제 화합물(2.88 g, 76% 수율). EI MS m/z 449.1([M+Na]+).
실시 예 114. (S)-1-(4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조일)-4-메틸렌피롤리딘-2-카르발데히드의 합성.
Figure pat00404
무수 CH2Cl2(60mL)중의 (S)-메틸 1-(4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조일)-4-메틸렌피롤리딘-2-카르복실레이트(2.80 g, 6.57 mmol)의 격렬하게 교반된 용액에, N2 분위기하에서 -78 ℃에서 DIBAL-H(CH2Cl2중 1N, 10 mL)를 적가하였다. 혼합물을 추가로 90 분 동안 교반한 후, 과잉 시약을 2 ml의 메탄올, 이어서 5 % HCl(10 ml)의 첨가에 의해 분해시켰다. 생성된 혼합물을 0 ℃로 가온되도록 두었다. 층을 분리시키고, 수성 층을 CH2Cl2(3x50 mL)로 추가로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 95 : 5 CHCl3/MeOH)로 잔류물을 정제하여 표제 화합물(2.19 g, 84% 수율). EIMS m/z 419.1([M+Na]+).
실시 예 115. (S)-8-(벤질옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]-피롤로[1,2-a]아제핀-5(11aH)-온의 합성.
Figure pat00405
THF(60 ml) 및 H2O(40ml)중의 (S)-1-(4-(벤질옥시)-5-메톡시-2-니트로벤조일)-4-메틸렌피롤리딘-2-카르발데히드(2.18 g, 5.50 mmol) 및 Na2S2O4(8.0g,45.97mmol)의 혼합물을 실온에서 20 시간 동안 교반하였다. 고 진공 하에서 용매를 제거하였다. 잔류물을 MeOH(60 mL)에 재현탁시키고, pH 2에 도달 할 때까지 HCl(6 M)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 교반하였다. 1 시간 동안. 대부분의 MeOH를 제거하여 반응을 후속시키고, EtOAc(100 mL)로 희석시켰다. EtOAc 용액을 sat. NaHCO3, 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 농축시켰다. 플래쉬 크로마토그래피(실리카 겔, 97 : 3 CHCl3/MeOH)로 잔류물을 정제하여 표제 화합물(1.52 g, 80%)을 수득하였다. EIMS m/z 372.1([M+Na]+).
실시 예 116. (S)-8-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]-피롤로[1,2-a]아제핀-5(11aH)-온의 합성.
Figure pat00406
70 ml CH2Cl2 중의 (S)-8-(벤질옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]-피롤로[1,2-a]아제핀-5(11aH)-온(1.50 g, 4.32 mmol)의 용액에, 0 ℃에서 25 ml의 CH3SO3H를 첨가하였다. 혼합물을 0 ℃에서 10 분 동안 교반한 후, 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 2 시간 동안 교반하고, CH2Cl2로 희석하고, 차가운 1.0N NaHCO3로 pH를 4로 조정하고, 여과하였다. 수성 층을 CH2Cl2(3x60ml)로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시키고 SiO2 칼럼 크로마토그래피(CH3OH/CH2Cl2 1:15)상에서 정제하여 811 mg(73 % 수율)의 표제 생성물을 수득하였다. EIMS m/z 281.1([M+Na]+).
실시 예 117. (11aS, 11a'S)-8,8'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5(11aH)-온)의 합성.
Figure pat00407
뷰탄온(8 ml) 중의 Cs2CO3(0.761g,2.33밀리몰)의 교반된 현탁액에, (S)-8-히드록시-7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]-피롤로[1,2-a]아제핀-5(11aH)-온(401 mg, 1.55 mmol) 및 1,5-디요오도펜탄(240 mg, 0.740 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. SiO2 (크로마토그래피(EtOAc/CH2Cl21:10)상에서 정제하여 337 mg(수율 78 %)의 표제 생성물을 수득하였다. EIMS m/z 607.2([M+Na]+).
실시 예 118. (S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5(11aH)-온(340)의 합성.
Figure pat00408
무수 디클로로메탄(1 mL) 및 무스(absolute) 에탄올(1.5 mL) 중의 (11aS, 11a'S)-8,8'-(펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5(11aH)-온)(150 mg, 0.256 mmol)의 용액에, 메톡시에틸 에테르 중의 수소화붕소나트륨(85 μL, 0.5 M, 0.042 mmol)을 0 ℃에서 첨가하였다. 얼음 조를 5 분 후에 제거하고, 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반한 다음, 0 ℃로 냉각시키고, 포화 염화 암모늄으로 켄칭시키고, 디클로로메탄으로 희석시키고, 상을 분리시켰다. 유기층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 셀라이트를 통해 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 역상 HPLC(C18 컬럼, 아세토 나이트 릴/물)로 정제하였다. 상응하는 분획을 디클로로메탄으로 추출하고 농축시켜 표제 화합물(64.7 mg, 43 %)을 수득하였으며[MS m/z 609.2 ([M+Na]+), 625.3 ([M+K]+) 및 627.2 ([M+Na+H2O]+)]; 완전히 환원된 화합물을 수득하였으며(16.5 mg, 11 %)[MS m/z 611.2 ([M+Na]+), 627.2 ([M+K]+), 629.2 ([M+Na+H2O]+)]; 미반응 출발 물질도 회수하였다(10.2 mg, 7%)[MS m/z 607.2([M+Na]+),625.2([M+Na+H2O]+)]
실시 예 119. (S)-8-((5-(((S)-10-(3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노 일)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5(11aH)-온(341)의 합성.
Figure pat00409
디클로로메탄(5 ml) 중의 (S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5(11aH)-온(60.0 mg, 0.102 mmol) 및 2,5-디옥시피롤리딘-1-일 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노에이트(40.5 mg, 0.134 mmol)의 용액에, EDC(100.5 mg, 0.520 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였고, 농축시키고 SiO2컬럼 크로마토그래피(EtOAc/CH2Cl2,1:6)로 정제하여 63.1 mg(수율 81 %)의 표제 생성물을 수득하였다. ESI MS m/z C40H50N7O9 [M+H] +, cacld.772.36, found 772.30.
실시 예 120. (S)-8-((5-(((S)-10-(3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로파노 일)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5(11aH)-온(342)의 합성.
Figure pat00410
THF(1 mL)와 NaH2PO4 완충액(pH 7.5, 1.0 M, 0.7 ml)의 혼합물 중의 (S)-8-((5-(((S)-10-(3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판오일)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5(11aH)-온(60 mg, 0.078 mmol) 5 ml)의 용액에, PPh3(70 mg, 0.267 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였고, 농축시키고, 물/CH3CN(35분 내에 90 % 물에서 35 %의 물로)로 용리시키는 C12 분취 HPLC로 정제하였고, 고 진공하에 건조시킨 후 45.1 mg(수율 79 %)의 표제 화합물을 수득하였다.ESI MS m/z C40H52N5O9 [M+H]+, cacld.746.37, found 746.50.
실시 예 121. (2S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((37S, 40S, 43S, 44R)-43-((S)-sec-부틸)-37,40-디이소프로필-44-메톡시-1-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트로히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10-(5H)-일)-29,36,42-트리메틸-1,11,17,27,30,35,38,41-옥타옥소-14-(4-프로피올아미도부탄오일)-4,7,21,24-테트라옥사-10,14,18,28,31,36,39,42-옥타아자헥사테트라콘탄-46-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(343)의 합성.
Figure pat00411
무수 DMF(3 mL) 중의 (3R,4S,7S,10S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-((((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11,18-트리메틸-6,9,12,17,20,30-헥사옥소-33-(4-프로피올아미도부탄오일)-2,23,26-트리옥사-5,8,11,16,19,29,33-헵타아자헥사트리아콘탄-36-옥산(0.018 g, 0.0134 mmol) 및 (S)-8-((5-(((S)-10-(3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판오일)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-옥시)펜틸)옥시)-7-메톡시-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5(11aH)-온(11.0mg, 0.0145mmol)의 용액에, EDC(0.020g, 0.104mmol)를 첨가하였다. 실온에서 4 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시키고 HPLC(C18 컬럼, 이동상 A : 물, 이동상 B : 아세토니트릴, 50 분 내에 B 20 % 내지 B 80 %)로 정제하였다. 분획을 모으고 동결 건조하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(15.2 mg, 55% 수율). ESI MS m/z: calcd for C107H157N15O26 [M+H]+ 2069.14, found 2069.42.
실시 예 122. (S)-2-(3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판아미도)-N-(2-((S)-7-메톡시-8-((((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-2-옥시에틸)-3-메틸부탄아미드(351)의 합성.
Figure pat00412
디클로로메탄(7 mL) 중의 (S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-2,3-디히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-5(11aH)-온(60.0 mg, 0.102 mmol) 및 (S)-15-아지도-5-이소프로필-4,7-디옥소-10,13-디옥사-3,6-디아자펜타데칸-1-옥산(45.1 ㎎, 0.125 밀리몰)의 용액에, BrOP(120.1 ㎎, 0.309 밀리몰)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였고, 농축시키고 SiO2 컬럼 크로마토그래피(EtOAc/CH2Cl2,1:6)로 정제하여 71.4 mg(77 % 수율)의 표제 생성물을 수득하였다. ESI MS m/z C47H62N9O11 [M+H] +, cacld.928.45, found 928.60.
실시 예 123. (S)-2-(3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판아미드)-N-(2-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-2-옥소에틸)-3-메틸부탄아미드(352)의 합성.
Figure pat00413
THF(5 ml)와 NaH2PO4 완충액(pH 7.5, 1.0 M, 0.7 ml) 혼합물 중의 (S)-2-(3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판아미드)-N-(2-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-2-옥소에틸)-3-메틸부탄아미드(63 mg, 0.068 mmol)의 용액에, PPh3(70 mg, .267 mmol을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였고, 농축시켰고, 물/CH3CN(35분내에 90 % 물 내지 35 % 물로)로 용리되는 C18 분취 HPLC에 의해 정제하고, 고 진공하에 건조시킨 후 표제 생성물 46.5 mg(76 % 수율)을 수득하였다.ESI MS m/z C47H64N7O11 [M+H]+, cacld.902.46, found 902.60.
실시 예 124. (2S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((5S, 43S, 46S, 49S, 50R)-49-((S)-sec-부틸)-5,43,46-트리이소프로필-50-메톡시-1-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)-펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-35,42,48-트리메틸-1,4,7,17,23,33,36,41,44,47-데카옥소-20-(4-프로피올아미도-부탄오일)-10,13,27,30-테트라옥사-3,6,16,20,24,34,37,42,45,48-데카아자펜타콘탄-52-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(353)의 합성.
Figure pat00414
무수 DMF(3 mL) 중의 (3R, 4S, 7S, 10S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)-피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11,18-트리메틸-6,9,12,17,20,30-헥사옥소-33-(4-프로피올아미도-부탄오일)-2,2,3,26-트리옥사-5,8,11,16,19,29,33-헵타아자헥사트리아콘탄-36-옥산((18.0 mg, 0.0134 mmol) 및 (S)-2-(3-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)프로판아미드)-N-(2-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로-[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e](3H)-피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-2-옥소에틸)-3-메틸부탄아미드(13.0 mg, 0.0144 mmol)의 용액에, EDC(0.020 g, 0.104 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 4 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시키고 HPLC(C18 컬럼, 이동상 A : 물, 이동상 B : 아세토니트릴, 50 분 내에 B 20 % 내지 B 80 %)로 정제하였다. 분획을 모으고 동결 건조하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(18.1 mg, 47% 수율). ESI MS m/z: calcd for C114H170N17O28 [M+H]+ 2225.23, found 2226.22.
실시 예 125. (2S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((5S, 37S, 40S, 43S, 44R)-49-((S)-sec-부틸)-5,37,40-트리이소프로필-44-메톡시-1-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)-펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-29,36,42-트리메틸-1,4,7,14,20,27,30,25,28,41-데카옥소-17-(4-프로피올아미도부탄오일)-10,24-디옥사-3,6,13,17,21,28,31,36,39,42-데카아자펜타콘탄-46-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(354)의 항체 결합체의 합성.
Figure pat00415
pH 7.5의 20mg/ml 허셉틴 1.0ml의 혼합물에, 석영 튜브 내의 100mM NaH2PO4, pH 7.5 완충액, TCEP(25μL, 물 20mM)의 1.0mL PBS 완충액을 첨가하였다. 25 ℃에서 30 분 동안 교반하면서 배양 한 후, (2S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((5S, 37S, 40S, 43S, 44R)-43-((S)-sec-부틸)-5,37,40-트리이소프로필-44-메톡시-1-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]-디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-29,36,42-트리메틸-1,4,7,14,20,27,30,35,38,41-데카옥소-17-(4-프로피올아미도부탄오일)-10,24-디옥사-3,6,13,17,21,28,31,36,39,42-데카아자헥사테트라콘탄-46-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(353)(27 μL, DMA 중 20 mM)을 첨가하였다. 혼합물을 15 ℃에서 냉각시키고, 365 nm의 UV 광(100 W, 20 W/m2의 광속(o-니트로벤즈알데하이드, Willett, K. 및 Hites, R., J. Chem. Educ., 2000, 77, 900))을 4 ~ 6 시간 동안 처리한 후, DHAA(135 μL, 50 mM)를 첨가하였다. 석영 관을 냉각기에서 꺼낸 후, 혼합물을 실온에서 밤새도록 연속 배양한 다음, 100 mM NaH2PO4, 50 mM NaCl pH 6.0 ~ 7.5 완충액으로 용출시키는 G-25 컬럼상에서 정제하여, 2.73 ml완충액에서 14.8 mg의 결합체 화합물(74 % 수율)을 수득하였다. UPLC-QTOF 질량 스펙트럼으로 측정한 약물/항체 비(DAR)는 2.60(이중 약물) 또는 5.18(MMAF 및 PBD를 개별적으로 계산했을 때)이었다. SEC HPLC(Tosoh Bioscience, Tskgel G3000SW, 7.8 mm ID x 30 cm, 0.5 ml/min, 100 min)로 분석한 단량체는 94 ~ 99 %이었고, 단일 밴드(band)가 SDS-PAGE gel로 측정되었다.
실시 예 126. (S)-2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부탄아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)-피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산(356)의 합성.
Figure pat00416
HCl(0.3 ml) 및 1,4-디옥산(0.9 ml) 혼합물 중의 (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-)-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부탄아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸-헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(25 mg, 0.030 mmol)를 35 분 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 EtOH(1.0 ml) 및 톨루엔(1.0 ml)으로 희석하고, 농축시키고 EtOH/톨루엔(2 : 1)과 함께 증발시켜, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다(22 mg, ~ 100 % 수율). 이것을 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. LC-MS (ESI) m/z calcd.for C39H66N5O8 [M+H]+: 732.48, found: 732.60.
실시 예 127. (2S)-2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((11S, 14S, 17S)-1-아지도-17-((R)-sec-부틸)-11,14-디이소프로필-18-메톡시-10,16-디메틸-9,12,15-트리옥소-3,6-디옥사-10,13,16-트리아자이-코산-20-일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산(357)의 합성.
Figure pat00417
DMA(0.8 ml)와 NaH2PO4 완충 용액(pH 7.5, 1.0 M, 0.7 ml) 혼합물 중의 조질 (S)-2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부탄아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵탄오일)-프롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산(22 mg , 0.030 mmol)에, 2,5-디옥시피롤리딘-1-일 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노에이트(18.0mg, 0.060mmol)를 2 시간에 걸쳐 4 부분으로 나눠 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 농축시키고 SiO2칼럼 크로마토그래피(CH3OH/CH2Cl2/HOAc1:8:0.01)로 정제하여 표제 화합물(22.5 mg, 82% 수율). LC-MS (ESI) m/z calcd.for C46H77N8O11 [M+H]+: 917.56, found: 917.60.
실시 예 128. (2S)-2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((11S,14S,17S)-1-아미노-17-((R)-sec-부틸)-11,14-디이소프로필-18-메톡시-10,16-디메틸-9,12,15-트리옥소-3,6-디옥사-10,13,16-트리아자이코산-20-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산(358)의 합성.
Figure pat00418
수소첨가 병내의 메탄올(5 ml) 중의 (2S)-2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((11S, 14S,17S)-1-아지도-17-((R)-sec-부틸)-11,14-디이소프로필-18-메톡시-10,16-디메틸-9,12,15-트리옥소-3,6-디옥사-10,13,16-트리아자이-코산-20-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산(22.0 mg, 0.024 mmol)에, Pd/C(5 ㎖, 10 % Pd, 50 % wet)을 첨가하였다. 공기를 제거하여 진공으로 만들고, 25psi의 H2를 도입한 후, 혼합물을 4 시간 동안 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과액을 농축하여 조질의 표제 생성물(약 20 mg, 92 % 수율)을 수득하였으며, 이를 추가 정제없이 다음 단계에서 사용하였다. ESI MS m/z+ C46H79N6O11 (M+H), cacld.891.57, found 891.60.
실시 예 129. (2S)-2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((3R, 4S, 7S, 10S, 48S, 51S, 54S, 55R)-4,54-디((S)-sec-부틸)-7,10,48,51-테트라이소프로필-55-메톡시-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11,18,47,53-펜타메틸-6,9,12,17,20,30,36,46,49,52-데카옥소-33-(4-프로피올아미도부탄오일)-2,23,26,40,43-펜타옥사-5,8,11,16,19,29,33,37,47,50,53-운데카아자헵타펜타콘탄-57-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산(359)의 합성.
Figure pat00419
디클로로메탄(5 mL) 중의 (3R, 4S, 7S, 10S)-4-((S)-sec-부틸)-7,10-디이소프로필-3-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-((((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-2-옥소에틸)-5,11,18-트리메틸-6,9,12,17,20,30-헥사옥소-33-(4-프로피올아미도부탄오일)-2,23,26-트리옥사-5,8,11,16,19,29,33-헵타아자헥사트리아콘탄-36-옥산(0.018 g, 0.0134 mmol)의 현탁액에, 펜타플로오로페놀(3.7 mg, 0.0201 mmol) 및 DIC(2.0 mg, 0.0161 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4 시간 동안 교반하였고 셀라이트상에서 여과하였다. 여과액을 농축하고, DMF(1 mL)에 용시키고, 여기에 무수 DMF(2 mL) 중의 (2S)-2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((11S, 14S,17S)-1-아미노-17-((R)-sec-부틸)-11,14-디이소프로필-18-메톡시-10,16-디메틸-9,12,15-트리옥소-3,6-디옥사-10,13,16-트리아자이코산-20-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산(13.1 mg, 0.0147 mmol)의 용액을 첨가하였다. 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 혼합물을 농축시키고 HPLC(C18 컬럼, 이동상 A : 물, 이동상 B : 아세토니트릴, 50 분 동안 20 % B 내지 80 % B)로 정제하였다. 분획을 모으고 동결 건조하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다(17.8 mg, 60% 수율). ESI MS m/z: calcd for C113H184N16O28 [M+H]+ 2214.35, found 2214.36.
실시 예 130. (S)-2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((6S, 9S, 12S, 13R)-12-((S)-sec-부틸)-6,9-디이소프로필-13-메톡시-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10-트리옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산의 합성.
Figure pat00420
THF(1.0 ml) 중의 (S)-메틸 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((6S, 9S, 12S, 13R)-12-((S) 6,9-디이소프로필-13-메톡시-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10-트리옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자펜타데칸-15-일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트(30 mg, 0.035 mmol)의 용액에, 물 중의 LiOH(1.0 M, 0.8 ml)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 35 분 동안 교반하고, 0.5M H3PO4로 pH 6으로 중화시키고, 농축시키고 SiO2 컬럼 크로마토그래피(CH3OH/CH2Cl2/HOAc1:10:0.01)로 정제하여, 표제 화합물(25.0 mg, 85% 수율). LC-MS (ESI) m/z calcd.for C44H74N5O10 [M+H]+: 832.54, found: 832.60.
실시 예 131. (S)-2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4-((S)-N, 3-디메틸-2-((S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부탄아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)-피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산(356)의 합성.
Figure pat00421
디옥산(2.0 ml) 중의 (S)-2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((6S, 9S, 12S, 13R)-12-((S)-sec-부틸)-6,9-디이소프로필-13-메톡시-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10-트리옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자펜타-데칸-15-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산(25 mg, 0.030 mmol)의 용액에, HCl(12.0 M, 0.6 ml)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 디옥산(4 ml) 및 톨루엔(4 ml)으로 희석하고, 농축시켰다. MeOH 및 물(L200 ㎜ x Φ 20 ㎜, v = 9 ㎖/분, 40 분 내에 5 % 메탄올로부터 40 % 메탄올까지)로 용리되는 C-18 HPLC 컬럼 크로마토그래피에서 정제하여 표제 화합물(20.0 mg, 90% 수율)을 수득하였다. LC-MS (ESI) m/z calcd.for C39H66N5O8 [M+H]+: 732.48, found: 732.90.
실시 예 132. 4-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부탄산의 합성.
Figure pat00422
H2O(40mL)중의 4-아미노부티르산(7.5 g, 75 mmol) 및 NaOH(6 g, 150 mmol)의 용액을 0 ℃로 냉각시키고, THF(32 ml) 중의 CbzCl(16.1 g, 95 mmol) 용액으로 드랍 방식으로 처리하였다. 1 시간 후, 반응물을 실온으로 가온되게 두었다. 3 시간 동안 교반하였다. THF를 진공하에 제거하고, 6N HCl을 첨가하여 수용액의 pH를 1.5로 조정하였다. 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 염수로 세척하고, 건조 및 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다(16.4 g, 92% 수율). MS ESI m/z calcd for C12H16NO5 [M+H]+238.10, found 238.08.
실시 예 133. tert-부틸 4-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부타노에이트의 합성.
Figure pat00423
DCM(100 mL) 중의 4-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부탄산(16.4g, 69.2mmol) 및 t-BuOH(15.4 g, 208 mmol)의 용액에, DMAP(0.8g, 6.56mmol) 및 DCC(17.1g, 83mmol)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 여과하고 여과액을 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시키고, 1N HCl, 염수로 세척하고 Na2SO4상에서 건조시키고 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피(10 내지 50 % EtOAc/헥 세인)에 의해 정제하여 표제 화합물(7.5 g, 37% 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C16H23NO4Na [M+Na]+316.16, found 316.13.
실시 예 134. tert-부틸 4-아미노부타노에이트의 합성.
Figure pat00424
tert-부틸 4-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부타노에이트(560 mg, 1.91 mmol)를 MeOH(50 mL)에 용해시키고, Pd/C 촉매(10 중량 %, 100 mg)와 혼합한 다음 실온에서 3 시간 동안 수소화(1 atm)시켰다. 촉매를 여과하고, 모든 휘발성 물질을 진공하에 제거하여 표제 화합물(272 mg，90% 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C8H18NO2 [M+H]+160.13, found 160.13.
실시 예 135. 2,2-디프로피올아미도아세트산(373)의 합성.
Figure pat00425
EtOH(15 ml) 및 50 mM NaH2PO4 pH7.5 완충액(25 ml)의 혼합물 중의 2,2-디아 미노아세트산(2.0 g, 22.2 mmol)의 용액에, 2,5-디옥시피롤리딘-1-일 프로피올레이트(9.0 g, 53.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 8 시간 동안 교반하고, 농축시키고, 0.1 M HCl로 pH 3.0으로 산성화시키고, EtOAc(3 x 30 ml)로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, MeOH/CH2Cl2(1:10내지 1 : 6)로 용리되는 SiO2칼럼상에서 정제하여 표제 화합물(3.27 g, 76% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (CDCl3) 11.8 (br, 1H), 8.12 (d, 2H), 6.66 (m, 1H), 2.66 (s, 2H). ESI MS m/z: calcd for C8H6N2O4 [M+H]+ 195.03, found 195.20
실시 예 136. 퍼플루오로페닐 2,2-디프로피올아미도아세테이트(421)의 합성.
Figure pat00426
CH2Cl2(100ml) 중의 2,2-디프로피올아미도아세트산(2.01 g, 10.31 mmol), 펜타 플루오로페놀(2.08 g, 11.30 mmol), DIPEA(1.00 ml, 5.73 mmol) 및 EDC(4.01 g, 20.88 mmol)를 실온에서 밤새 교반시켰고, 농축시키고, EtOAc/CH2Cl2(1:15내지 1 : 8)로 용출시키는 SiO2 칼럼상에서 정제하여, 표제 화합물(3.08 g, 83% 수율)을 수득하였다. 1H NMR (CDCl3) 8.10 (d, 2H), 6.61 (m, 1H), 2.67 (s, 2H). ESI MS m/z: calcd for C14H6F5N2O4 [M+H]+ 361.02, found 361.20.
실시 예 137. (S)-2-((S)-2-(2,2-디프로피올아미도아세타미도)프로판아미도)-프로판산(423)의 합성.
Figure pat00427
DMA(18 ml) 및 50 mM NaH2PO4 pH7.5 완충액(30 ml)의 혼합물 중의 (S)-2-((S)-2-아미노프로판아미드)프로판산(422)(1.10 g, 6.87 mmol)의 용액에, 퍼플루오로페닐 2,2-디프로피올아미도아세테이트(3.00 g, 8.33 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 14 시간 동안 교반하고, 농축시키고, 0.1 M HCl로 pH 3.0으로 산성화시키고, EtOAc(3 x 40 ml)로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, MeOH/CH2Cl2(1:10내지 1 : 5)로 용리되는 SiO2칼럼상에서 정제하여, 표제 화합물(1.80 g, 78% 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z: calcd for C14H17N4O6 [M+H]+ 337.11, found 337.30.
실시 예 138. (S)-2,5-디옥소피롤리딘-1-일 2-((S)-2-(2,2-디프로피올아미도-아세트아미도)프로판아미도)프로파노에이트(424)의 합성.
Figure pat00428
CH2Cl2(50 ml) 중의 (S)-2-((S)-2-(2,2-디프로피올아미도아세트아미도)프로판 아미드)-프로판산(1.01 g, 3.00 mmol), NHS(0.41 g, 3.56 mmol), DIPEA(0.40 ml, 2.29 mmol) 및 EDC(1.51 g, 7.86 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 농축시키고, EtOAc/CH2Cl2 (1:15내지 1 : 7)로 용리되는 SiO2칼럼상에서 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다(1.05 g, 81% 수율). ESI MS m/z: calcd for C18H20N5O8 [M+H]+ 434.12, found 434.40.
실시 예 139. (4R)-tert-부틸 5-(4-아세톡시-3-니트로페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜타노에이트의 합성.
Figure pat00429
0 ℃에서 디클로로메탄(4.0 mL) 중의 화합물 190(107.1 mg, 0.252 mmol)의 용액에, 무수 아세트산(0.11 mL, 1.17 mmol) 및 트리에틸아민(0.16 mL)을 순서대로 첨가하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 가온시켰다. 1 시간 동안 교반하고, 디클로로메탄으로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(0-15 % EA/PE)로 정제하여 무색 오일(120.3 mg, 이론적 수율). MS ESI m/z calcd for C23H35N2O8[M+H]+ 467.23, found 467.23.
실시 예 140. (4R)-tert-부틸 5-(4-아세톡시-3-아미노페닐)-4((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜타노에이트의 합성.
Figure pat00430
페닐 니트릴 348(120.3 mg, 0.258 mmol)을 에틸 아세테이트(5 mL) 및 아세트산(0.5 mL)에 용해시켰다. 여기에 Pd/C(10 중량 %, 10mg)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30 분 동안 H2 풍선하에 교반하였다. 패드를 에틸 아세테이트로 세척하면서 셀라이트 패드를 통해 여과시켰다. 여과액을 농축시키고 칼럼 크로마토그래피(0-25 % EA/PE)로 정제하여 황색 오일(120.9 mg, 이론적 수율)을 수득하였다. MS ESI m/z calcd for C23H37N2O6 [M+H]+ 437.26, found 437.28.
실시 예 141. (4R)-에틸 5-(3-(4-((벤질옥시)카르보닐)아미노)부탄아미도)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜타노에이트의 합성.
Figure pat00431
2,5-디옥소피롤리딘-1-일4-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)부타노에이트(0.396 g, 1.2 mmol) 및 (4R)-에틸 5-(3-아미노-4-히드록시페닐)-4-(tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜타노에이트(0.44 g, 1.2 mmol)을 EtOH(10 mL)에 용해시키고, 인산 완충 용액(pH 7.5, 0.1 M, 2 ㎖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후, 용매를 감압하에 제거하고, 잔류물을 SiO2칼럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다(0.485g, 70%). ESI: m/z: calcd for C31H44N3O8 [M+H]+:586.31, found 586.31.
실시 예 142. (4R)-에틸 5-(3-(4-아미노부탄아미도)-4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜타노에이트의 합성.
Figure pat00432
(4R)-에틸 5-(3-(4-((벤질옥시)카르보닐)아미노)부탄아미도)-4-((tert-부틸 디메틸-실릴)옥시)페닐)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸펜타노에이트(0.35 g, 0.5 mmol)을 MeOH(5 ml)에 용해시키고, Pd/C(10 wt %, 35 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2풍선하에 실온에서 밤새 교반한 다음, 셀라이트를 통해 여과하고, 여과액을 감압하에 농축시켜, 표제 화합물을 수득하였다(0.22 g, 79% 수율). ESI MS m/z: calcd for C29H52N3O6Si [M+H]+:566.35, found 566.35.
실시 예 143. 2-((6S, 9S, 12R, 14R)-9-((S)-sec-부틸)-14-히드록시-6,12-디이소프로필-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10-트리옥소-3-옥사-5,8,11-트리아자테트라데칸-14-일)티아졸-4-카르복실산(381)의 합성.
Figure pat00433
EtOAc 중의 Boc-N-Me-L-Val-OH(33 mg, 0.14 mmol)의 용액에, 펜타플루오로페놀(39 mg, 0.21 mmol) 및 DCC(32 mg, 0.154 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반한 후, 패드를 EtOAc로 세척하면서 셀라이트 패드상에서 여과하였다. 여과액을 농축시키고 DMA(2 mL)에 재용해시키고, 이어서 2-((1R, 3R)-3-((2S, 3S)-2-아미노-N, 3-디메틸펜탄아미도)-1-히드록시-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복실산(52 mg, 0.14 mmol) 및 DIPEA(48.5 μL, 0.28 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24 시간 동안 교반한 다음, 농축시키고 역상 HPLC(C18 컬럼, 10-100 % 아세토니트릴/물)에 의해 정제하여, 표제 화합물(40.2 mg, 49% 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z: calcd for C28H49N4O7S [M+H]+: 585.32, found 585.32.
실시 예 144. 2-((6S, 9S, 12R, 14R)-9-((S)-sec-부틸)-6,12-디이소프로필-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10,16-테트라옥소-3,15-디옥사-5,8,11-트리아자헵타데칸-14-일)티아졸-4-카르복실산의 합성.
Figure pat00434
2-((6S, 9S, 12R, 14R)-9-((S)-sec-부틸)-14-히드록시-6,12-디이소프로필-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10-트리옥사-3-옥사-5,8,11-트리아자테트라데칸-14-일)티아졸-4-카르복실산((40 mg, 0.069 mmol)을 피리딘(8 mL)에 용해시키고, 여기에 무수 아세트산(20.4 mg, 0.2 mmol)을 0 ℃에서 첨가하고, 반응물을 실온으로 가온되게 두고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 DCM/MeOH의 구배를 갖는 SiO2칼럼 크로마토그래피로 정제하여, 표제 생성물을 수득하였다(48.1 mg, ~100% 수율). ESI MS m/z: calcd for C30H51N4O8S [M+H]+ 627.33, found 627.33.
실시 예 145. (4R)-4-(2-((6S, 9S, 12R, 14R)-9-((S)-sec-부틸)-6,12-디이소프로필-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10,16-테트라옥소-3,15-디옥사-5,8,11-트리아자헵타데칸-14-일)티아졸-4-카르복사미도)-2-메틸-5-페닐펜탄산의 합성.
Figure pat00435
EtOAc 중의 2-((6S, 9S, 12R, 14R)-9-((S)-sec-부틸)-6,12-디이소프로필-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10,16-테트라옥소-3,15-디옥사-5,8,11-트리아자헵타데칸-14-일)티아졸-4-카르복실산(48.1 mg, 0.077 mmol)의 용액에, 펜타플루오로페놀(21.2 mg, 0.115 mmol) 및 DCC(17.4 mg, 0.085 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 16 시간 동안 실온에서 교반한 후, 패드를 EtOAc로 세척하면서 셀라이트 패드상에서 여과하였다. 여과액을 농축시키고 DMA(4 mL)에 재용해시킨 후, (4R)-4-아미노-2-메틸-5-페닐 펜탄산(20.7 mg, 0.1 mmol) 및 DIPEA(26.8 μL, 0.154 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 24 시간 동안 교반하고, 농축시키고, 역상 HPLC(C18컬럼, 10-100 % 아세토니트릴/물)에 의해 정제하여, 표제 화합물(63 mg, ~100% 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z: calcd for C42H66N5O9S [M+H]+ 816.45, found 816.45.
실시 예 146. (4R)-4-(2-((3S, 6S, 9R, 11R)-6-((S)-sec-부틸)-3,9-디이소프로필-8-메틸-4,7,13-트리옥소-12-옥사-2,5,8-트리아자테라데칸-11-일)티아졸-4-카르복사미도)-2-메틸-5-페닐펜탄산 히드로클로라이드 염(474)의 합성.
Figure pat00436
에틸 아세테이트(3 ml) 중의 (4R)-4-(2-((6S, 9S, 12R, 14R)-9-((S)-sec-부틸)-6,12-디이소프로필-2,2,5,11-테트라메틸-4,7,10,16-테트라옥소-3,15-디옥사-5,8,11-트리아자헵타데칸-14-일)티아졸-4-카르복사미도)-2-메틸-5-페닐펜탄산(60 mg, 0.073 mmol)의 용액에, 염화수소(0.8 ml, 12 M)를 첨가하였다. 혼합물을 30 분 동안 교반하고, 톨루엔(5 ml) 및 디옥산(5 ml)으로 희석시켰다. 혼합물을 증발시키고, 디옥산(5 ml) 및 톨루엔(5 ml)과 함께 증발 건조시켰다. 생성된 조질의 표제 생성물(57.1 mg, 103 % 수율)을 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다. ESI MS m/z: calcd for C37H58N5O7S [M+H]+ 716.40, found 716.60.
실시 예 147. (4R)-4-(2-((4R, 6R, 9S, 12S, 15S, 18S)-9-((S)-sec-부틸)-6,12-디이소프로필-7,13,15,18-테트라메틸-2,8,11,14,17,20,23-헵타옥소-21-프로피올아미도-3-옥사-7,10,13,16,19,22-헥사아자펜타코스-24-인-4-일)티아졸-4-카르복사미도)-2-메틸-5-페닐펜탄산(475)의 합성.
Figure pat00437
DMA(2 ml) 및 0.1 M Na2HPO4, pH 8.0(1 ml)의 혼합물 중 화합물 474(25 mg, 0.034 mmol)에, 3 시간에 걸쳐 3 부분으로 화합물 424(23.1 mg, 0.053 mmol)을 첨가한 다음, 12 시간 동안 더 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 역상 HPLC (200(L)mm x 10(d)mm, C18 컬럼, 40 분에 10-100 % 아세토니트릴/물, v = 8 ml/분)에 의해 정제하여 표제 화합물(30.0 mg, 85% 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z: calcd for C51H71N9O12S [M+H]+ 1034.49, found 1034.90.
실시 예 148.(S)-2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((8S, 11S, 14S, 17S, 20S, 21R)-20-((S)-sec-부틸)-14,17-디이소프로필-21-메톡시-8,11,13,19-테트라메틸-3,6,9,12,15,18-헥사옥소-5-프로피올아미도-4,7,10,13,16,19-헥사아자트리코스-1-인-23-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판 산(477)의 합성.
Figure pat00438
DMA(2 ml) 및 0.1 M Na2HPO4, pH8.0(1ml)의 혼합물 중의 화합물 356(20 mg, 0.027 mmol)에, 3 시간에 3 회에 걸쳐 화합물 424(20.1 mg, 0.046 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 12 시간 동안 더 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 역상 HPLC(200(L)mm x 10(d)mm, C18컬럼, 40 분내 10-100 % 아세토니트릴/물, v = 8 ml/분)에 의해 정제하여, 표제 화합물(22.1 mg, 78% 수율)을 수득하였다. ESI MS m/z: calcd for C53H80N9O13 [M+H]+ 1050.58, found 1050.96.
실시 예 149. (4R)-4-(2-((1R,3R)-1-아세톡시-3-((2S, 3S)-N, 3-디메틸-2-((R)-1-메틸피페리딘-2-카르복사미도)펜탄아미도)-4-메틸펜틸)티아졸-4-카르복사미도)-5-(4-히드록시-3-(3-(2-(2-((비스(2-프로피올히드라지닐)포스포릴)아미노)에톡시)에톡시)-프로판아미도)페닐)-2-메틸펜탄산(480)의 합성.
Figure pat00439
0 ℃에서 THF(5 ml)와 DIPEA(10 μl, 0.057 mmol) 혼합물 중의 화합물 89 HCl 염(16.1 mg, 0.132 mmol)에, POCl3(10.1mg,0.0665mmol)를 첨가하였다. 0 ℃에서 20 분 동안 교반한 후, 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가로 4 시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물에 화합물 336(60 mg, 0.065 mmol) 및 DIPEA(20 μl, 0.114 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 50 ℃에서 밤새 교반하고, 농축시키고, 역상 HPLC(200(L)mm x 10(d)mm, C18컬럼, 40 분에 10-100 % 아세토니트릴/물, v = 8 ml/분)로 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다(23.1 mg, 32% 수율). ESI MS m/z: calcd for C51H76N11O14PS [M+H]+ 1130.50, found 1131.20.
실시 예 150. (2S)-2-((2R, 3R)-3-((2S)-1-((11S, 14S, 17S, 18R)-17-((S)-sec-부틸)-11,14-디이소프로필-18-메톡시-10,16-디메틸-9,12,15-트리옥소-1-((비스(2-프로피올오일히드라지닐)포스포릴)아미노)-3,6-디옥사-10,13,16-트리아자이코산-20-오일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산(482)의합성.
Figure pat00440
0 ℃에서 THF(5 ml)와 DIPEA(10 μl, 0.057 mmol)의 혼합물 중의 화합물 89 HCl 염(16.1 mg, 0.132 mmol)에, POCl3(10.1mg,0.0665mmol)를 첨가하였다. 0 ℃에서 20 분 동안 교반한 후, 혼합물을 실온으로 가온하고 추가로 4 시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물에 화합물 358(60 mg, 0.067 mmol) 및 DIPEA(20 μl, 0.114 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 50 ℃에서 밤새 교반하고, 농축시키고, 역상 HPLC(200(L)mm x 10(d)m, C18컬럼, 40 분에 10-100 % 아세토니트릴/물, v = 8 ml/분)로 정제하여, 표제 화합물을 수득하였다(25.6 mg, 34% 수율). ESI MS m/z: calcd for C52H84N10O14P [M+H]+ 1103.58, found 1104.10.
실시 예 151.(2S, 2'S)-2,2'-((13,14-비스((E)-3-브로모아크릴로일)-11,16-디옥소-4,7,20,23-테트라옥사-10,13,14,17-테트라아자헥사코산-1,26-디오일)비스(아자네디일))비스(N-(2-((S)-7-메톡시-8-((5-(((S)-7-메톡시-2-메틸렌-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로-[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-2-메틸렌-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-일)-2-옥소에틸)-3-메틸부탄아미드)(497)의 합성.
Figure pat00441
DMA(2ml) 중의 화합물 352(25.1mg, 0.0278mmol), 화합물 36(11.50mg, 0.0279mmol) 및 EDC(15mg, 0.078mmol)의 혼합물을 밤새 교반하고, 농축시키고, 역상 HPLC L)mm x 10(d)mm, C18 컬럼, 10-100 % 아세토니트릴/물, v = 8 ml/분)로 정제하여, 표제 화합물(23.8 mg, 39% 수율)을 수득하였다. QTOF ESI MS m/z: calcd for C104H133Br2N16O26 [M+H]+ 2179.79, found 2180.50 [M+H]+, 219780 [M+H2O+H]+, 2215.81 [M+2H2O+H]+.
실시 예 152. 화합물 499의 합성.
Figure pat00442
DMA(2 ml) 중의 화합물 259(26.1 mg, 0.0246 mmol), 화합물 36(10.20 mg, 0.0247 mmol) 및 EDC(15 mg, 0.078 mmol)의 혼합물을 밤새 교반하고, 농축시키고, 역상 HPLC L)mm x 10(d)mm, C18 컬럼, 10-100 % 아세토니트릴/물, v = 8 ml/분)로 정제하여, 표제 화합물(27.6 mg, 45% 수율)을 수득하였다. QTOF ESI MS m/z: calcd for C118H190Br2N18O30 [M+H]+ 2498.23, found 2499.50 [M+H]+.
실시 예 153. 결합체 232, 234, 238, 261, 307, 326, 339, 344 또는 360의 제조.
화합물 231, 233, 237, 260, 306, 325, 338, 343 또는 359로부터의 결합체 232, 234, 238, 261, 308, 327, 339, 344 또는 360의 제조는 각각 실시 예 125에 기술된 바와 같이, 화합물 353으로부터 결합체 354를 제조하는 것과 유사하다.
실시 예 154. 결합체 235, 239, 307, 327, 339, 345, 355, 361, 476, 478, 481, 483, 498 또는 500의 일반적인 제조 방법.
pH 6.0~8.0의 10 mg/ml 허셉틴(Herceptin) 2.0 mL의 혼합물에, 100 mM NaH2PO4, pH 6.5~8.5 완충액의 PBS 완충액 0.70~2.0 mL, TCEP(14-35 μL, 물 20 mM), 및 독립적으로 화합물 231, 233, 237, 306, 325, 343, 353, 359, 475, 477, 480, 482, 497 또는 499(14-28 μL, DMA 중 20 mM)(화합물 497 및 498에 14 내지 28 ㎕를 첨가하였다)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4 ~ 18 시간 동안 배양한 후, DHAA(135 μL, 50 mM)를 첨가하였다. 실온에서 밤새 계속 배양한 후, 혼합물을 100 mM NaH2PO4, 50mM NaCl pH 6.0~7.5 완충액으로 용출하는 G-25 컬럼상에서 정제하여, 12.8~18.1 mg의 결합체 화합물 235, 239, 307, 327, 339, 345, 355, 361, 476, 478, 481, 483, 498 또는 500(수율 60 %~91 %)을 13.4 ~ 15.8 ml 완충액에서 수득하였다. 약물/항체 비(DAR)는 결합체 235, 239, 307, 327, 339, 345, 355, 361, 476, 478, 481 또는 483에 대해 2.1~4.2였고, DAR은 결합체 498 또는 500에서 2.6~5.3이었고, DAR은 UPLC-QTOF 질량 스펙트럼을 통해 결정되었다. SEC HPLC(Tosoh Bioscience, Tskgel G3000SW, 7.8 mm ID x 30 cm, 0.5 ml/min, 100 min)로 분석한 단량체는 94 ~ 99 %이었으며, 단일 밴드가 및 SDS-PAGE 젤에 의해 측정되었다.
실시 예 155 : T-DM1와 비교한, 결합체 232, 234, 235, 238, 239, 261, 307, 308, 326, 327, 339, 344, 345, 354, 355, 360, 361, 476, 478, 481, 483 , 498 또는 500의 체외 세포독성 평가:
세포 독성 분석에 사용된 세포주는 인간 위암 세포주인 NCI-N87이었다. 세포를 10 % FBS가 함유된 RPMI-1640에서 성장시켰다. 분석을 실행하기 위해, 세포(180 μl, 6000 세포)를 96 웰 플레이트의 각 웰에 추가하고, 37 % C에서 5 % CO2와 함께 24 시간 동안 배양하였다. 그 다음, 적절한 세포 배양 배지(총 부피, 0.2 mL)에서 다양한 농도의 시험 화합물(20 μl)로 세포를 처리하였다. 대조군 웰은 세포와 배지를 포함하지만, 시험 화합물이 결핍되게 했다. 플레이트를 5 % CO2와 함께 37 ℃에서 120 시간 동안 배양하였다. 그 후, MTT(5mg/ml)를 웰(20㎕)에 첨가하고, 플레이트를 1.5 시간 동안 37 ℃에서 배양하였다. 배지를 조심스럽게 제거하고, DMSO(180㎕)를 이후에 첨가하였다. 15 분 동안 교반한 후, 620nm의 레퍼런스 필터를 가지고 490nm 및 570nm에서의 흡광도를 측정하였다. 억제 %는 다음 식에 따라 계산되었다.
억제 % = [1-(assay-blank) /(control-blank)] x 100.
IC50의 세포 독성 결과:
DAR(약물 비) N87 세포 (Ag+) IC50 (nM)
결합체 232 3.1 0.112 nM
결합체 234 2.3 0.17 nM
결합체 235 4.1 0.014 nM
결합체 238 2.2 33.83 nM
결합체 239 3.8 2.31 nM
결합체 261 2.6 1.36 nM
결합체 307 3.8 0.83 nM
결합체 308 3.8 0.31 nM
결합체 326 3.6 0.16 nM
결합체 327 3.2 0.65 nM
결합체 339 5.2 0.0013 nM
결합체 344 4.8 0.0012 nM
결합체 345 5.9 0.0013 nM
결합체 354 5.2 0.00082 nM
결합체 355 6.2 0.00012 nM
결합체 360 4.8 0.0016 nM
결합체 361 6.1 0.00041 nM
결합체 476 3.9 0.0123 nM
결합체 478 3.8 0.0081 nM
결합체 481 3.8 0.0132 nM
결합체 483 3.8 0.043 nM
결합체 498 5.6 0.00012 nM
결합체 500 5.6 0.00036 nM
T-DM1 3.5 0.152 nM
실시 예 156. 생체 내 항-종양 활성(NCI-N87 이종 이식 종양을 갖는 BALB/c 누드 마우스).T-DM1과 함께 결합체 232, 308, 327, 339, 476, 483 및 500의 생체 내 효능을 인간 위암 N-87 세포주 종양 이종 이식 모델로 평가하였다. 5 주된 암컷 BALB/c 누드 마우스 54 마리를, 무 혈청 배지 0.1mL의 N-87 암종 세포(5 x 106 세포/마우스)를 우측 어깨 아래 부위에 피하 주사하였다. 종양은 8 일 동안 135mm3의 평균 크기로 자랐다. 그 다음에 동물을 무작위로 9개 그룹으로 나누었다(그룹당 6 마리의 동물). 제 1 그룹의 마우스를 대조군으로 사용하고, 인산 완충 식염수(PBS) 비히클로 치료하였다. 6개 그룹을 정맥 내 투여된 5 mg/kg의 용량으로 각각 결합체 232, 308, 327, 476, 483 및 T-DM1으로 처리하였다. 나머지 2개 그룹은 4㎎/㎏의 용량으로 정맥 내 투여된 결합체 339 및 500으로 각각 처리하였다. 종양의 3개 치수를 4 일마다 측정하고, 종양 부피를 화학식 종양 체적 = 1/2(길이 x 폭 x 높이)를 사용하여 계산하였다. 동물의 무게도 동시에 측정되었다. 다음의 조건들 중 임의의 하나가 충족될 때 마우스를 희생시켰다: (1) 전처리 중량에서 20 % 이상의 체중 감소, (2) 종양 체적이 2000mm3 초과,(3) 병 걸려 음식물 및 물에 도달하지 못하는 경우, 또는 (4) 피부 괴사. 종양이 발견되지 않으면 마우스는 종양이 없는 것으로 간주되었다. 그 결과를 도 45에 도시하였다. 모든 8 개의 결합체는 동물 체중 감소를 일으키지 않았다. 그리고, 대조군의 동물은 종양 체적이 2200 mm3 이상으로 되어 56 일째에 희생되었으며, 그들은 너무 병들었었다. 시험된 7 개의 결합체는 T-DM1보다 우수한 항-종양 활성을 나타냈다. 화합물 476, 483, 339 및 500 그룹의 모든 6/6 동물은 14 일째 날부터 52 일째까지 측정 가능한 종양이 전혀 없었다. 대조적으로, 5mg/Kg의 투여량에서 T-DM1은 종양을 제거할 수 없었고, 31 일 동안 종양 성장을 억제했을 뿐이다. 접합체 화합물 232, 308 및 327은 5 mg/kg의 투여량으로 종양을 완전히 박멸하지 못했다. 종양 성장의 억제는:
결합체 종양 성장 지연
T-DM1 31 일
308 39 일
327 46 일
232 52 일
476 65 일
483 66 일
339 66 일
500 67 일

Claims (11)

  1. 화학식 (XVII) 또는 (XVIII)의 화합물과 세포 결합제 또는 항체의 티올이 반응하여 형성된 결합체:
    Figure pat00443

    Drug는 동일 또는 상이한 세포 독성제 또는 치료약물, 또는 면역치료용 단백질, 항체 또는 항체 단편, 또는 siRNA, miRNA, mRNA, piRNA, 또는 DNA, 또는 세포-결합제 또는 세포-표면 수용체 결합 리간드의 결합 또는 안정화를 향상시키는 기능 분자를 나타내고, 이는 알칸의 C1-C8;　알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌, 방향족, 에테르, 폴리옥시알킬렌, 에스테르, 아민, 이민, 폴리아민, 히드라진, 히드라존, 아미드, 우레아, 세미카르바지드, 카바지드, 알콕시아민, 우레탄, 아미노산, 펩티드, 아실옥시아민, 히드록삼산, 디설피드, 티오에테르, 티오에스테르, 카르바메이트, 카르보네이트, 헤테로사이클릭 고리, 헤테로알킬, 헤테로 방향족 또는 알콕심의 C2-C8; 또는 이들의 조합을 각각 함유하는 R1을 통한 링커를 통하여 상기 세포-결합제에 링크되고;
    "
    Figure pat00444
    " 및 "
    Figure pat00445
    "은 단일 결합을 나타내고，"
    Figure pat00446
    "는 단일 또는 이중 결합에 링크될 때 거울상 이성질체 또는 입체 이성질체 결합일 수 있고,
    Figure pat00447
    는 단일 결합, 이중 결합 또는 삼중 결합 중 어느 하나를 나타내고,
    Figure pat00448
    가 단일 결합을 나타낼 때，Lv1과 Lv2　모두는 H가 아니고;　
    Figure pat00449
    가 이중 결합을 나타낼 때, Lv1　또는 Lv2는 H일 수 있지만, 이들은 동시에 H가 아니고,；
    Figure pat00450
    가 삼중 결합을 나타낼 때, Lv1은 부재하고, Lv2는 선택적으로 H일 수 있고,
    Lv1　및 Lv2은 티올에 의해 치환될 수 있는 동일 또는 상이한 이탈 기(leaving group)를 나타내며, 할라이드(플루오라이드, 클로라이드, 브로마이드 및 요오다이드로부터 선택됨), 메탄술포닐(메실), 톨루엔술포닐(토실), 트리플루오로메틸-술포닐(트리플레이트), 트리플루오로메틸술포네이트, 니트로페녹실, N-숙신이미딜옥시(NHS), 페녹실, 디니트로페녹실, 펜타풀루오로페녹실, 테트라플루오로페녹실, 트리플루오로페녹실, 디플루오로페녹실, 모노플루오로페녹실, 펜타클로로페녹실, 1H-이미다졸-1-일, 클로로페녹실, 디클로로페녹실, 트리클로로페녹실, 테트라클로로페녹실, N-(벤조트리아졸-일)옥실, 2-에틸-5-페닐이속사졸리움-3'-술포닐, 페닐옥사디아졸-술포닐(-술폰-ODA), 2-에틸-5-페닐이속사졸리움-일, 페닐옥사디아졸-일(ODA), 옥사디아졸-일; 또는 EDC(N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드), DCC(디시클로헥실카르보디이미드), N,N'-디이소프로필카르보디이미드(DIC)，N-시클로헥실-N'-(2-모르폴리노-에틸)카르보디이미드 메토-p-톨루엔술포네이트(CMC, 또는 CME-CDI)，1,1'-카르보닐디이미다졸(CDI), TBTU(O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트), N,N,N',N'-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)유로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP), (벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP), 디에틸 시아노포스포네이트(DEPC), 클로로-N,N,N',N'-테트라메틸포름아미디늄헥사플루오로포스페이트, 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트(HATU), 1-[(디메틸아미노)(모르폴리노)메틸렌]-1H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-1-이움 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트(HDMA), 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸이디늄 헥사플루오로포스페이트(CIP), 클로로트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyCloP), 플루오로-N,N,N',N'-비스(테트라메틸렌)포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트(BTFFH), N,N,N',N'-테트라메틸-S-(1-옥시도-2-피리딜)티유로늄헥사플루오로포스페이트, O-(2-옥소-1(2H)피리딜)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트(TPTU), S-(1-옥시도-2-피리딜)-N,N,N',N'-테트라메틸티유로늄 테트라플루오로보레이트, O-[(에톡시카르보닐)시아노메틸렌아미노]-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트(HOTU), (1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸이덴아미노옥시)디메틸아미노-모르폴리노-카르베늄 헥사플루오로포스페이트(COMU), O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-비스(테트라메틸렌)유로늄헥사플루오로포스페이트(HBPyU), N-벤질-N'-시클로헥실-카르보디이미드(중합체-결합을 갖거나 또는 갖지 않음), 디피롤리디노(N-숙신이미딜-옥시)카르베늄 헥사플루오로포스페이트(HSPyU), 클로로디피롤리디노카르베늄 헥사플루오로포스페이트(PyClU), 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸이디늄 테트라플루오로보레이트(CIB), (벤조트리아졸-1-일옥시)디피페리디노-카르베늄 헥사플루오로포스페이트(HBPipU), O-(6-클로로벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트(TCTU), 브로모트리스(디메틸아미노)-포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BroP), 프로필포스포닉 무수물(PPACA, T3P®), 2-모르폴리노에틸 이소시아니드(MEI), N,N,N',N'-테트라메틸-O-(N-숙신이미딜)유로늄 헥사플루오로포스페이트(HSTU), 2-브로모-1-에틸-피리디늄 테트라플루오로보레이트(BEP), O-[(에톡시카르보닐)시아노-메틸렌아미노]-N,N,N',N'-테트라-메틸유로늄 테트라플루오로보레이트(TOTU), 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일)-4-메틸모르폴리늄클로라이드((MMTM, DMTMM),N,N,N',N'-테트라메틸-O-(N-숙신이미딜)유로늄 테트라플루오르보레이트(TSTU), O-(3,4-디히드로-4-옥소-1,2,3-벤조트리아진-3-일)-N,N,N',N'-테크라메틸유로늄 테트라플루오로보레이트(TDBTU),1,1'-(아조디카르보닐)-디피페리딘(ADD), 디-(4-클로로벤질)아조디카복실레이트(DCAD), 디-tert-부틸 아조디카복실레이트(DBAD), 디이소프로필 아조디카복실레이트(DIAD) 또는 디에틸 아조디카복실레이트(DEAD)의 축합제(condensation reagent)로 생성된 중간생성물 분자일 수 있고,
    R1은 부재하거나 또는 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8； 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8；또는 에스테르，에테르, 아미드, 아민, 이민, 폴리아민, 히드라진, 히드라존, 우레아, 세미카르바지드, 카바지드, 알콕시아민, 알콕시아민, 우레탄, 아미노산, 아실옥시아민, 글리코시드 또는 히드록삼산의 C2-C8(2-8 탄소 원자); 또는 1 내지 8개의 아미노산을 함유하는 펩티드, 또는 화학식 (OCH2CH2)p　또는 (OCH2CH(CH3))p[여기서, p는 1 내지 약 1000의 정수임]의 폴리에틸렌옥시 유닛 또는 이들의 조합으로부터 선택되고,
    T는 CH2, NH, NHNH, N(R3), N(R3)N(R3'), O, S, 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 1 내지 4 유닛의 아미노산을 함유하는 펩티드; 또는 다음 구조들 중 하나이고,
    Figure pat00451

    여기서　
    Figure pat00452
    는 결합(linkage) 사이트이고,
    X1,　X2,　X3,　X4,　X5,　X6,　X1',　X2'　및 X3'는 NH; NHNH; N(R3); N(R3)N(R3'); O; S; 알킬의 C1-C6；헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C6; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8； 또는 1 내지 8개의 아미노산으로부터 독립적으로 선택되고；R3　및 R3'는 독립적으로 H； 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8；아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8; 또는 에스테르, 에테르 또는 아미드의 1 내지 8개의 탄소 원자; 또는 1 내지 8개의 아미노산; 또는 화학식 (OCH2CH2)p　또는 (OCH2CH(CH3))p[여기서, p는 1 내지 약 1000의 정수임]의 폴리에틸렌옥시 유닛 또는 이들의 조합이고,
    m, m1,　m2,　m3, m4　및 m5는 독립적으로 1 내지 10의 정수이고,
    L1　및 L2는 동일하거나 상이하며, O, NH, S, NHNH, N(R3), N(R3)N(R3'), 화학식 (OCH2CH2)pOR3　또는 (OCH2CH(CH3))pOR3,　또는 NH(CH2CH2O)pR3,　또는 NH(CH2CH(CH3)O)pR3,　또는 N[(CH2CH2O)pR3][(CH2CH2O)p'R3'], 또는 (OCH2CH2)pC(=O)X1R3, 또는CH2CH2(OCH2CH2)pC(=O)X1R3[여기서, p 및 p'는 독립적으로 1 내지 약 1000로부터 선택된 정수임]의 폴리에틸렌옥시 단위, 또는 이들의 조합; 알킬의 C1-C8; 헤테로알킬, 알킬시클로알킬, 헤테로시클로알킬의 C2-C8; 아릴, Ar-알킬, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로알킬시클로알킬, 알킬카보닐, 헤테로아릴의 C3-C8로부터 독립적으로 선택되고; 여기서 X1,R3　및 R3'은 상기 정의된 바와 같고,
    L1　또는 L2는 자가-임몰러티브(self-immolative) 또는 비-자가-임몰러티브 성분, 펩티드 유닛(1 내지 8개의 천연 또는 비 천연 아미노산), 히드라존 결합, 디설피드, 에스테르, 옥심, 아미드, 또는 티오에테르 결합의 그룹을 함유하고, 상기 자가-임몰러티브 유닛은 파라-아미노벤질카바모일(PAB) 그룹, 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체, 헤테로사이클릭 PAB 유사체, 베타-글루쿠로니드 및 오르토 또는 파라-아미노벤질아세탈의 그룹으로부터 선택된 방향족 화합물을 포함하고; 상기 자가-임몰러티브 유닛은 다음 구조들 중 하나를 가지고:
    Figure pat00453

    여기서, (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출형(releasable) 링커 유닛, 또는 세포 독성제 및/또는 결합 분자(CBA)의 부착 지점이고; X1, Y1, Z2, 및 Z3은 독립적으로 NH, O, 또는 S이고; Z1은 독립적으로 H, NHR1, OR1, SR1,　COX1R1이며, X1　및 R1은 상기 정의된 바와 같고; v는 0 또는 1이고; U1은 H, OH, C1~C6　알킬, (OCH2CH2)n,　F, Cl, Br, I, OR5, SR5, NR5R5', N=NR5, N=R5,NR5R5',　NO2,SOR5R5', SO2R5, SO3R5,　OSO3R5, PR5R5', POR5R5',　PO2R5R5', OPO(OR5)(OR5'), 또는 OCH2PO(OR5(OR5')이고; R5　및 R5'는 H, 알킬의 C1~C8; 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬 또는 아미노카인의 C2~C8；아릴, 헤테로사이클릭, 카보사이클릭, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로아랄킬, 알킬카보닐 또는 글리코시드의 C3-C8;또는 약학적 양이온 염으로부터 독립적으로 선택되고,
    비-자가 임몰러티브 링커 성분은 다음의 구조들 중 하나로부터 선택되고:
    Figure pat00454

    Figure pat00455

    여기서, (*) 원자는 추가의 스페이서 또는 방출형(releasable) 링커, 세포 독성제 및/또는 결합 분자의 부착 지점이고; X1, Y1, U1, R5, R5'는 상기 정의된 바와 같고; r은 0 내지 100이고; m 및 n은 독립적으로 0 내지 6이고,
    대안적으로, L1, L2, X1,　X2,　X3,　X1',　X2'　및 X3'는 독립적으로 부재할 수 있다.
  2. 제 1 항에 있어서, Drug 는 하기로부터 독립적으로 선택되는 결합체:
    (1). 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화학 요법 치료제:
    a). 알킬화제: 이는 질소 머스타드: 클로람부실, 클로르나파진, 시클로포스파미드, 다카르바진, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 히드로클로라이드, 만노머스틴, 미토브로니톨, 멜팔란, 미토락톨, 피포브로만, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 티오테파, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; CC-1065(그 아데젤레신, 카제레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CBI-TMI 포함); 벤조디아제핀 다이머(피롤로벤조디아제핀(PBD) 또는 토마이마이신, 인돌리노벤조디아제핀, 이미다조벤조티아디아제핀 또는 옥사졸리디논벤조디아제핀의 다이머로부터 선택됨); 니트로소우레아:(카무스틴, 로무스틴, 클로로조토신, 포트무스틴, 니무스틴, 라니무스틴); 알킬술포네이트:(부술판, 트레오술판, 임프로술판 및 피포술판); 트리아젠: (다카르바진), 백금 함유 화합물: (카보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴); 아지리딘, 벤조도파, 카르보코언, 메투레도파, 또는 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸올로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸라멜라민으로 구성되는 그룹으로부터 선택됨;
    b). 식물 알칼로이드: 이는 빈카 알칼로이드: (빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈, 나벨빈); 텍스오이드(Taxoids): (파클리탁셀, 도세탁솔) 및 이들 유사체, 메이탄시노이드(DM1, DM2, DM3, DM4, DM5, DM6, DM7, 메이탄신 및 안사미토 신) 및 이들 유사체, 크립토파이신(크립토파이신 1 및 크립토파이신 8로 이루어진 그룹에서 선택함;) 에포틸론, 엘레우테로빈, 디스코더몰리드, 브리오스타틴, 돌로스타틴, 아우리스타틴, 튜불리신, 세팔로스타틴; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰지스타틴으로 구성되는 그룹으로부터 선택됨;
    c). DNA 토포이소머라제 억제제: 이는 [에피포도필린스: (9-아미노캄토테신, 캄프토테신, 크리나톨, 다우노마이신, 에토포시드, 에토포시드 포스페이트, 이리노테칸, 미토산트론, 노반트론, 레티놀산(레티놀), 테니포시드, 토포테칸, 9-니트로캄토테신(RFS 2000); 미토마이신: (미토마이신 C)]으로 구성되는 그룹으로부터 선택됨;
    d). 항대사제: 이는 {[항-엽산: DHFR 억제제:(메토트렉세이트, 트리메트렉세이트, 데노프테린, 프테로프테린, 아미노프테린(4-아미노프테릭 산) 또는 엽산 유사체); IMP 탈수소 효소 억제제: (미코페놀산, 티아조퓨린, 리바비린, EICAR); 리보뉴클레오타이드 환원 효소 억제제: (히드록시우레아, 데페록사민)]; [피리미딘 유사체 :안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카페시타빈(Xeloda), 카모퍼, 시타라빈, 디데옥시 우리딘, 독시퓨리딘, 에노시타빈, 5-플루오로우라실, 플록스우리딘, 래티트렉세드(Tomudex)); 시토신 유사체: (시타라빈, 시토신 아라비노시드, 플루다라빈); 퓨린 유사체: (아자티오프린, 플루다라빈, 메르캅토퓨린, 티아민프린, 티오구아닌)]; 엽산 보충제, 프롤린 산}으로 구성되는 그룹으로부터 선택됨;
    e). 호르몬 요법: 이는 {수용체 길항제: [항-에스트로겐 : (메제스트롤, 랄록시펜, 타목시펜); LHRH 작용제: (고스크크린(goscrclin), 류프롤리드 아세테이트); 항-안드로겐: (비칼루타미드, 플루타미드, 칼루스테론, 드로모스타놀론，프로피오네이트, 에피티오스타놀, 고세렐린, 류프롤리드, 메피티오스탄, 닐루타미드, 테스토락톤, 트리로스탄 및 기타 안드로겐 억제제)]; 레티노이드/델토이드: [비타민 D3 유사체: (CB 1093, EB 1089 KH 1060, 콜레칼시페롤, 에르고칼시페롤); 광역학 요법: (베르트포르핀, 프탈로시아닌, 광민감제 Pc4, 데메톡시하이포크렐린 A); 사이토카인: (인터페론-알파, 인터페론-감마, 종양 괴사 인자(TNFs), TNF 도메인을 포함하는 인간 단백질)]}로 구성되는 그룹으로부터 선택됨;
    f). 키나제 억제제, 이는 BIBW 2992(항-EGFR/Erb2), 이마티닙, 제피티닙, 페갑타닙, 소라페닙, 다사티닙, 수니티닙, 에를로티닙, 니로티닙, 라파티닙, 액시티닙, 파조파닙, 반데타닙, E7080)(항-VEGFR2), 무브리티닙, 포나티닙(AP24534), 바페티닙(INNO-406), 보스티닙（SKI-606），카보잔티닙, 비스모데집, 이니파립, 루솔리티닙, CYT387, 아시티닙, 티보자닙, 소라페닙, 베바시주맙, 세투시맙, 트라스투주맙, 라니비주맙, 파니투무맙, 이스피네십으로 구성되는 그룹으로부터 선택됨;
    g). 폴리(ADP-리보스)폴리메라제(PARP) 억제제, 이는 올라파립, 니라파립, 이니파립, 탈라조파립, 벨리파립, CEP 9722(Cephalon), E7016(Eisai), BGB-2990(BeiGene) 또는 3-아미노벤젠아미드로 구성되는 그룹으로부터 선택됨;
    h). 항생제, 이는 에네다인 항생제(칼리치미신, 칼리치미신 γ1, δ1, α1 또는 β1; 다이네미신 A 및 데옥시다이네미신을 포함하는 다이네미신; 에스페라미신, 케다르시딘, C-1027, 마두로펩틴 또는 네오카르지노스타틴 크로모포어 및 관련 크로모프로틴 에네다인 항생제 크로모모어로 구성되는 그룹으로부터 선택됨), 아크라시노마이신, 액티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵틴노마이신, 카라비신, 카민노마이신, 카르지노필린; 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르루신, 독소루비신, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 니토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 폿퍼로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투버시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신으로 구성되는 그룹으로부터 선택됨;
    i). 폴리케티드(아세토게닌), 불라타신 및 불라타시논, 겜시타빈, 에폭소미신(카르필조밉 포함), 보르테조밉, 탈리도미드, 레날리도미드, 포말리도미드, 토세도스탓, 지브레스탓, PLX4032, STA-9090, 스티무박스, 알로벡틴-7, 엑세게바(Xegeva), 프로벤지, 에르보이(Yervoy), 단백지질화 억제제(로바스타틴으로부터 선택), 도파민성 신경독(1-메틸-4-페닐피리디늄 이온으로부터 선택), 세포 사이클 억제제(스타우로스포린으로부터 선택), 악티노마이신(악티노마이신 D, 닥티노마이신으로 구성되는 그룹으로부터 선택), 아마니틴, 블레오마이신(블레오마이신 A2, 블레오마이신 B2, 페플로마이신으로 구성되는 그룹으로부터 선택), 안트라사이클린(다우노루비신, 독소루비신(아드리아마이신), 이다루비신, 에피루비신, 피라루비신, 조루비신, 엠톡산트론(mtoxantrone), MDR 억제제 또는 베라파밀, ，Ca2+　ATP아제 억제제 또는 탑시가르긴, 히스톤 데아세틸라아제 억제제(보리노스탓, 로미뎁신, 파노비노스탓, 발프로익 산, 모세티노스탓(MGCD0103), 벨리노스탓, PCT-24781, 엔티노스탓, SB939, 레스미노스탓, 지비노스탓, AR-42, CUDC-101, 술포라판, 트리초스타틴 A로 구성되는 그룹으로부터 선택); 탑시가르긴, 센레콕십, 글리타존, 에피갈로카테킨 갈레이트, 디술피람, 살리노스포라미드 A; 아미노글루트티미드, 미토탄, 트리로스탄으로 구성되는 그룹으로부터 선택된 항-아드레날; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불리닉 산; 암사크린; 아라비노사이드, 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지코언; 에플로니틴(DFMO), 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트, 에토글루시드; 갈륨 니트레이트, 가시토신, 히드록시우레아; 이반드로네이트, 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미토잰트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나멧; 피라루비신; 포도필리닉 산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라조샌; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아조닉 산; 트리아쿠언; 2,2',2''-트리클로로트리에틸아민; 트리초테센(T-2 톡신, 버루카린 A, 로리딘 A 및 안구이딘으로 구성되는 그룹으로부터 선택); 우레탄, siRNA, 안티센스 약물;
    (2). 항-자가면역 질환 제: 시클로스포린, 시클로스포린 A, 아미노카프로 산, 아자티오프린, 브로모크립틴, 클로람부실, 클로로퀸, 시클로포스파미드, 코르티코스테로이드(암시노니드, 베타메타손, 부데소니드, 히드로코르티손, 플루니소리드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루코톨론 다나졸, 덱사메타손, 트리암시놀론 아세토니드, 베클로메타손 디프로피오네이트), DHEA, 에나네르셉, 히드록시클로퀸, 인플릭시맙, 메록시캄, 메토트렉세이트, 엠오페틸(mofetil), 마이코페닐레이트, 프레드니손, 시로리무스, 타크롤리무스;
    (3). 항-전염성 질환 제:
    a). 아미노글리코시드: 아미카신, 아스트로미신, 겐타미신(네틸미신, 시소미신, 이세파미신), 하이그로마이신 B, 카나마이신(아미카신, 아르베카신, 베카나마이신, 디베카신, 토브라마이신), 네오마이신(프라마이세틴, 파로모마이신, 리보스타마이신), 넷틸미신, 스펙티노마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 베르다미신;
    b). 암페니콜: 아지다페니콜, 클로람페니콜, 플로페니콜, 티암페니콜;
    c). 안사마이신: 젤다나마이신, 헤르비마이신;
    d). 카르바페넴: 비아페넴, 도리페넴, 에르타페넴, 이미페넴/실라스타틴, 메로페넴, 파니페넴;
    e). 세펨: 카르바세펨(로라카르베프), 세파세트릴, 세파클로, 세파라딘, 세파드록실, 세파로늄, 세파로리딘, 세파로틴 또는 세파로씬, 세파렉신, 세파로글리신, 세파만돌, 세파피린, 세파트리진, 세파자플루, 세파제돈, 세파졸린, 세프부페라존, 세프카펜, 세프달록심, 세페핌, 세프미녹스, 세폭시틴, 세프프로질, 세프록사딘, 세프테졸, 세프록심, 세픽심, 세프디니어, 세프디토렌, 세프핌, 세페타멧, 세프메녹심, 세포디짐, 세포니시드, 세포페라존, 세포라니드, 세포탁심, 세포티암, 세포조프란, 세팔렉신, 세프피미졸, 세프피라미드, 세프피롬, 세프포독심, 세프프로질, 세프뷘놈, 세프술로딘, 세프타지딘, 세프테람, 세프티부텐, 세프티올렌, 세프티족심, 세프토비프롤, 세프트리악손, 세푸록심, 세푸조남, 세파마이신(세폭시틴, 세폭테탄, 세프메타졸), 옥사세펨(플로목세프, 라타목세프);
    f). 글리코펩티드: 블레오마이신, 반코마이신(오리타반신, 텔라반신), 테이코플라닌(달바반신), 라모플라닌;
    g). 글리실사이클린: 티게사이클린;
    h). β-락타마제 억제제: 페남(술박탐, 타조박탐), 클라밤(클라불란 산);
    i). 린코사미드: 클린다마이신, 린코마이신;
    j). 리포펩티드: 답토마이신, A54145, 칼슘-의존 항체(CDA);
    k). 마크로라이드: 아지트로마이신, 세트로마이신, 클라리트로마이신, 디리스트로마이신, 에리트로마이신, 푸리트로마이신, 요사마이신, 케토리드(텔리트로마이신, 세트로마이신), 미데카마이신, 미오카마이신, 올레안도마이신, 리파마이신(리팜피신, 리팜핀, 리파부틴, 리파펩틴), 로키타마이신, 록시트로마이신, 스펙티노마이신, 스피라마이신, 타크로리무스(FK506), 트로레안도마이신, 텔리트로마이신;
    l). 모노박탐: 아즈트레오남, 티게모남;
    m). 옥사졸리디노넨: 리네졸리드;
    n). 페니실린: 아목시실린, 암피실린(피밤피실린, 헤타실린, 바캄피실린, 메탐피실린, 탈람피실린), 아지도실린, 아즐로실린, 벤질페니실린, 벤자틴 벤질페니실린, 벤자틴 페녹시메틸페니실린, 클로메토실린, 프로카인 벤질페니실린, 카르베니실린(카린다실린), 클록사실린, 디클록사실린, 에피실린, 플루클록사실린, 메실리남(피브메실리남), 메즈로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페나메실린, 페니실린, 페네티실린, 페녹시메틸페니실린, 피페라실린, 프로피실린, 술베니실린, 테모실린, 티카르실린;
    o). 폴리펩티드: 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B;
    p). 퀴놀론: 알라트로플록사신, 발로프록사신，시프로플록사신, 클리나플록 사신, 다노플록사신, 디플로사신, 에녹사신, 엔로프록사신, 플로신, 가레녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 그레파프록사신, 카노 트로바플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 마보플록사신, 목시플록사신, 나디플록사신, 노르플록사신, 오르비플록사신, 오플록사신, 페플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 시타플록사신, 스파플록사신, 테마플록사신, 토수폴록사신, 트로바플록사신;
    q). 스트렙토그라민: 프리스티나마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴;
    r). 술포나미드: 마페니드, 프로토실, 술파세타미드, 술파메티졸, 술파닐이미드, 술파살라진, 술피속사졸, 트리메토프림, 트리메토프림-술파메톡사졸(코-트리목사졸);
    s). 스테로이드 항균제: 푸시딘산으로부터 선택됨;
    t). 테트라사이클린: 독시사이클린, 클로르테트라사이클린, 클로모사이클린, 데메클로사이클린, 라임사이클린, 메클로사이클린, 메타사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 펜니메피사이클린, 롤리테트라사이클린, 테트라사이클린, 글리 실사이클린(티기사이클린으로부터 선택);
    u). 다른 항생제: 이는 안노나신, 아스페나민, 박토프레놀 억제제(바시트라신), DADAL/AR 억제제(시클로세린), 딕티오스타틴, 디스코더몰리드, 엘레우테로빈, 에포틸론, 에탐부톨, 에토포사이드, 파로페넴, 푸시딘산, 푸라졸리돈, 이소니아지드, 라우리말리드, 메트로니다졸, 무피로신, 미코락톤, NAM 합성 억제제(포스포마이신), 니트로푸란토인, 파클리탁셀, 플래텐시마이신, 피라진아미드, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 리팜피신(리팜핀), 타조박탐 티니다졸, 우바리신;
    (4). 항-바이러스 약물:
    a).진입/융합 억제제： 아프라비록, 마라비록, 비크리비록,　gp41 (enfuvirtide),　PRO 140,　CD4(ibalizumab);
    b). 인테그라제 억제제: 랄테그라비르, 엘비테그라비르, 글로보이드난 A;
    c). 성숙 억제제: 베비리맛, 비베콘;
    d). 뉴라미니다아제: 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르;
    e). 뉴클레오시드 및 뉴클레오타이드: 아바카비르, 아시클로비르, 아데포비르, 암독소비르, 아프리시타빈, 브리부딘, 시도포비르, 클레부딘, 덱셀부시타빈, 디다노신(ddI), 엘부시타빈, 엠트리시타빈(FTC), 엔테카비르, 팜시클로비르, 플루오로우라실(5-FU), 3'-플루오로-치환 2',3'-디데옥시뉴클레오시드 유사체(3'-플루오로-2',3'-디데옥시티미딘(FLT) 및 3'-플루오로-2',3'-디데옥시구아노신(FLG), 포미비르센, 간시클로비르, 이독스우리딘, 라미부딘(3TC), 1-뉴클레오시드(β-1-티미딘 및 β-1,2'-데옥시시티딘으로 구성된 그룹으로부터 선택), 펜시클로비르, 래시비르, 리바비린, 스탬피딘, 스타부딘(d4T), 타리바비린(비라미딘),텔비부딘, 테노포비어, 트리플루리딘 발라시클로비르, 발간시클로비르, 잘시타빈(ddC), 지도부딘(AZT);
    f). 비-뉴클레오시드: 아만타딘, 아테비리딘, 캡라비린, 디아릴피리미딘(에트라비린, 릴피비린), 델라비르딘, 도코사놀, 에미비린, 에파비렌즈, 포스카르넷(포스포노포름산), 이미퀴모드, 인터페론 알파, 로이라이드, 로데노신, 메티사존, 네비 라핀, NOV-205, 페그인터페론 알파, 포도필로톡신, 리팜피신, 리만타딘, 레시퀴모드(R-848), 트로만타딘;
    g). 프로테아제 억제제: 암프레나비르, 아타자나비르, 보세프레비르, 다루나 비르, 포삼프레나비르, 인디나비르, 로피나비르, 넬피나비르, 프레코나릴, 리토나비 르, 사퀴나비르, 텔라프레비르(VX-950), 팁라나비르;
    h). 다른 유형의 항-바이러스 약물: 아브자임, 아르비돌, 카라놀라이드 a, 세라게닌, 시아노비린-n, 디아릴피리미딘, 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG), 포스카르넷, 그리피쓰신, 타리바비린(비라미딘), 히드록시우레아, KP-1461, 밀테포신, 플레코나릴, 포트만토 억제제, 리바비린, 셀리시클립;
    (5). (방사성 핵종들)　3H,　11C,　14C,　18F,　32P,　35S,　64Cu,　68Ga,　86Y,　99Tc,　111In,　123I,　124I,　125I,　131I,　133Xe,　177Lu,　211At, 또는　213Bi로 구성되는 그룹으로부터 선택될 수 있는 방사성 동위 원소;
    (6). 자외선, 형광 빛, 적외선 빛, 근적외선 빛, 가시광선으로 구성된 그룹으로부터 선택된 일종의 빛을 흡수하는 능력을 갖는 크로모포어(크로모포어) 분자는 크산토포어, 에리트로포어, 이리도포어, 류코포어, 멜라노포어, 시아노포어, 빛에 의해 빛을 재방출하는 형광 화합물인 플루오로포어 분자, 시각적 광 변환 분자, 포토포어 분자, 발광 분자, 루시페린 화합물; 비-단백질 유기 플루오로포어(크산텐 유도체(플루오레신, 로다민, 오레곤 그린, 에오신, 텍사스 레드)로부터 선택); 시아닌 유도체: (시아닌, 인도카르보시아닌, 옥사카르보시아닌, 티아카르보시아닌 및 메로시아닌); 스쿠아레인 유도체 및 고리-치환 스쿠아린[세타(Seta), 세타우(SeTau) 및 스퀘어 다이(Square dyes) 포함]; 나프탈렌 유도체(단실 및 프로단 유도체); 쿠마린 유도체; 옥사디아졸 유도체(피리딜옥사졸, 니트로벤족사디아졸 및 벤족사디아졸); 안트라센 유도체(DRAQ5, DRAQ7 및 CyTRAK Orange를 포함하는 안트라퀴논); 피렌 유도체(캐스케이드 블루); 옥사진 유도체(나일 레드, 나일 블루, 크레실 바이올렛, 옥사진 170);아크리딘 유도체(프로플라빈, 아크리딘 오렌지, 아크리딘 옐로우); 아릴메틴 유도체(아우라민, 크리스탈 바이올렛, 말라카이트 그린); 테트라피롤 유도체(포르핀, 프탈로시아닌, 빌리루빈); 다음의 플루오로포어 화합물들[CF 다이 색(Biotium), DRAQ 및 CyTRAK 프로브(BioStatus), BODIPY(Invitrogen), 알렉사 플로오르(Alexa Fluor(Invitrogen)), 다이라이트 플루오르(Thermo Scientific, Pierce), 아토 및 트레이시(Atto 및 Tracy)(Sigma Aldrich), 플루오프로브(FluoProbes)(Interchim), 압베리오르 다이(Abberior Dyes)(Abberior), DY 및 메가 스토크 다이(Dyomics), 술포 시 다이(Sulfo Cy dyes)(Cyandye), HiLyte Fluor(AnaSpec), Seta, SeTau 및 Square Dyes(SETA BioMedicals), 퀘이사(Quasar) 및 칼 플루오르 다이(Cal Fluor dyes)(Biosearch Technologies), 슈어라이트 다이(SureLight Dyes)(APC, RPEPerCP, Phycobilisomes)(Columbia Biosciences), APC, APCXL, RPE, BPE(Phyco-Biotech), 알로피코시아닌(APC), 아미노코우마린, APC-Cy7 접합체, BODIPY-FL, 캐스케이드 블루, Cy2, Cy3, Cy3.5, Cy3B, Cy5, Cy5.5, Cy7, 플루오레신, FluorX, 하이드록시쿠마린, 리사민 로다민 B, 루시퍼 옐로우, 메톡시쿠마린, NBD, 퍼시픽 블루, 퍼시픽 오렌지, PE-Cy5 접합체, PE-Cy7 접합체, PerCP, R-피코에리트린(PE), Red 613, Seta-555-아지드, Seta-555-DBCO, Seta-555-NHS, Seta-580-NHS, Seta-680-NHS, Seta-780-NHS, Seta-APC-780, Seta-PerCP-680, Seta-R-PE-670, SeTau-380-NHS, SeTau-405-말레이미드, SeTau-405-NHS, SeTau-425-NHS, SeTau-647-NHS, 텍사스 레드, TRITC, TruRed, X-로다민, 7-AAD(7-아미노액티노마이신 D, CG-선택적), 아크리딘 오렌지, 크로모마이신 A3, CyTRAK 오렌지(Biostatus, red excitation dark), DAPI, DRAQ5, DRAQ7, 에티듐 브로미드(Ethidium Bromide), Hoechst33258, Hoechst33342, LDS 751, 미트라마이신(Mithramycin), 프로피듐이오디드(PropidiumIodide(PI)), SYTOX 블루, SYTOX 그린, SYTOX 오렌지, 티아졸 오렌지, TO-PRO: 시아닌 모노머, TOTO-1, TO-PRO-1, TOTO-3, TO-PRO-3, YOSeta-1, YOYO-1]의 유사체 및 유도체의 분류 또는 서브분류이고, 연구 세포에 대한 본 발명의 링커에 연결될 수 있는 플루오로포어 화합물은 하기 화합물 또는 이의 유도체로 이루어진 군으로부터 선택된다: DCFH(2'7'디코로디히드로-플루오레신, 산화 형태), DHR(디히드로로다민 123, 산화된 형태, 광 촉매 산화), Fluo-3(AM 에스테르. pH > 6), Fluo-4(AM 에스테르. pH 7.2), Indo-1(AM 에스테르, 저/고 칼슘(Ca2+)), SNARF(pH 6/9), 알로피코시아닌(APC), AmCyan1(테트라머, Clontech), AsRed2(테트라머, Clontech), 아자미 그린(모노머, MBL), 아주라이트(Azurite), B-피코에리트린(BPE), 세룰레안(Cerulean), CyPet, DsRed 모노머(Clontech), DsRed2("RFP", Clontech), EBFP, EBFP2, ECFP, EGFP(약한 다이머, Clontech), 에메랄드(Emerald)(약한 다이머, Invitrogen), EYFP(약한 다이머, Clontech), GFP(S65A 돌연변이), GFP(S65C 돌연변이), GFP(S65L 돌연변이), GFP(S65T 돌연변이), GFP(Y66F 돌연변이), GFP(Y66H 돌연변이), GFP(Y66W 돌연변이), GFPuv, HcRed1, J-Red, 카투샤(Katusha), 쿠사비라 오렌지(Kusabira Orange(모노머, MBL), mCFP, mCherry, mCitrine, 미도리이쉬 시안(다이머, MBL), mKate(TagFP635, 모노머, Evrogen), mKeima-Red(모노머, MBL), mKO, mOrange, mPlum, mRaspberry, mRFP1(모노머, Tsien lab), mStrawberry, mTFP1, mTurquoise2, P3(phycobilisome complex), 페리디닌 클로로필(Peridinin Chlorophyll) (PerCP), R-피코에리트린(RPE), T-사파이어, TagCFP (다이머, Evrogen), TagGFP(다이머, Evrogen), TagRFP(다이머, Evrogen), TagYFP(다이머, Evrogen), tdTomato(탄뎀 다이머), Topaz, TurboFP602(다이머, Evrogen), TurboFP635(다이머, Evrogen), TurboGFP(다이머, Evrogen), TurboRFP(다이머, Evrogen), TurboYFP (다이머, Evrogen), 비너스(Venus), 와일드 타입(Wild Type) GFP, YPet, ZsGreen1(테트라머, Clontech), ZsYellow1(테트라머, Clontech).
    (7). 세포-결합 리간드 또는 수용체 작용제는 하기로부터 선택될 수 있다: 폴레이트 유도체; 글루탐산 우레아 유도체; 소마토스타틴 및 그 유사체(옥트레오티드(Sandostatin) 및 란레오티드(Somatuline)로 구성된 그룹으로부터 선택); 방향족 술폰아미드; 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제 활성화 펩티드(PACAP)(PAC1); 혈관활성 장 펩티드(VIP/PACAP)(VPAC1, VPAC2); 멜라닌세포-자극 호르몬(α-MSH); 콜레시스토키닌(CCK)/가스트린 수용체 작용제; 봄베신(Pyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2로 구성된 그룹으로부터 선택)/가스트린 분비 펩티드(GRP);뉴로텐신 수용체 리간드(NTR1, NTR2, NTR3); 물질 P(NK1 수용체) 리간드; 뉴로펩티드 Y(Y1-Y6); RGD(Arg-Gly-Asp), NGR(Asn-Gly-Arg), 이합체 및 다중합체 고리형 RGD 펩티드(RGDfV로부터 선택), TAASGVRSMH 및 LTLRWVGLMS(콘드로이틴 술페이트 프로테오글리칸 NG2 수용체 리간드) 및 F3 펩티드를 포함하는 호밍(Homing) 펩티드; 세포 침투성 펩티드(CPP); 황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH) 작용제 및 길항제, 및 성선 자극 호르몬 방출 호르몬(GnRH) 작용제로 구성된 군으로부터 선택된 펩티드 호르몬으로서, 이는 테스토스테론 생산뿐만 아니라 난포 자극 호르몬(FSH) 및 황체 형성 호르몬(LH)을 표적으로 하여 작용하며, 이는 부세레린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 고나도레린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 고세레린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(OtBu)-Leu-Arg-Pro-AzGly-NH2), 히스트레린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-His(N-benzyl)-Leu-Arg-Pro-NHEt), 루프로리드(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt), 나파레린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-2Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 트립토레린(Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2), 나파레린, 데스로레린, 아바렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-(N-Me)Tyr-D-Asn-Leu-isopropylLys-Pro-DAla-NH2), 세트로렉릭스(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2), 데가렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-4-aminoPhe(L-hydroorotyl)-D-4-aminoPhe(카르 바모일)-Leu-isopropylLys-Pro-D-Ala-NH2), 및 가니렐릭스(Ac-D-2Nal-D-4-chloroPhe-D-3-(3-pyridyl)Ala-Ser-Tyr-D-(N9,N10-디에틸)-homoArg-Leu-(N9,N10-디에틸)-homoArg-Pro-D-Ala-NH2); Toll-유사 수용체(TLRs) 리간드, C-형 렉틴 및 노드유사(Nodlike) 수용체(NLRs) 리간드로 구성된 군으로부터 선택된 패턴 인식 수용체(PRRs); 칼시토닌 수용체 작용제; 인테그린 수용체 및 그의 수용체 아형(αVβ1,　αVβ3, αVβ5,　αVβ6,　α6β4,　α7β1,　αLβ2,　αIIbβ3로 구성되는 그룹으로부터 선택) 작용제(GRGDSPK, 시클로(RGDfV)(L1) 및 그 유도체[시클로(-N(Me)R-GDfV), 시클로(R-Sar-DfV), 시클로(RG-N(Me)D-fV), 시클로(RGD-N(Me)f-V), 시클로(RGDf-N(Me)V-)(Cilengitide)]; 나노바디(VHH(camelid Ig)의 유도체)); 도메인 항체(dAb, VH 또는 VL 도메인의 유도체); 이중 특이성 T 세포 결합체(BiTE, 이중 특이 이중체); 이중 친화도 재타겟팅(DART, 이중 특이 이중체); 4가 탠덤 항체(TandAb, 이량체로 된 이중 특이 이중체); 안티칼린(리포칼린의 유도체); 아드넥틴(10번째 FN3(피브로넥틴)); 설계된 안키린 반복 단백질(DARPins); 아비머스(Avimers); EGF 수용체 및 VEGF 수용체 작용제로 구성되는 그룹으로부터 선택되고,
    (8). 상기 약물 중 임의의 약학 적으로 허용 가능한 염, 산 또는 유도체.
  3. 제 1항에 있어서, Drug는 튜블린신, 칼리체아미신, 아우리스타틴, 마이탄시노이드, CC-1065 유사체, 다우노루비신 및 독소루비신 화합물, 탁사노이드(탁산), 크립토피신, 에포틸론, 벤조디아제핀 다이머(피롤로벤조디아제핀(PBD), 토마이마이신, 안트라마이신, 인돌리노벤조디아제핀, 이미다조벤조티아디아제핀 또는 옥사졸리디노벤조디아제핀의 다이머들로 구성되는 그룹으로부터 선택됨), 칼리체아미신 및 에네다인 항생제, 악티노마이신, 아마니틴, 아자세린, 블레오마이신, 에피루비신, 타목시펜, 이다루비신, 돌라스타틴/아우리스타틴(모노메틸 아우리스타틴 E, MMAE, MMAF, 아우리스타틴 PYE, 아우리스타틴 TP, 아우리스타틴 2-AQ, 6-AQ, EB(AEB), 및 EFP(AEFP)로 구성되는 그룹으로부터 선택됨), 두오카마이신, 젤다나마이신, 메토트렉세이트, 티오테파, 빈데신, 빈크리스틴, 헤미아스테린, 나주마미드, 미크로기닌, 라디오수민, 알테로박틴, 미크로스클레로더민, 테오넬라미드, 에스페라미신, siRNA, miRNA, piRNA, 핵 분해 효소 및/또는 상기 분자 중 임의의 약학적으로 허용가능한 염, 산 및/또는 이들의 유사 유도체로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 결합체.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 링커 성분, L1, L2 는 하기 구조의 성분들의 하나 이상의 또는 이들의 반복 또는 조합으로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택되는 결합체:
    Figure pat00456
    　6-말레이미도카프로일(MC),　
    Figure pat00457

    말레이미도 프로파노일(MP),　
    Figure pat00458
    　발린-시트룰린(val-cit),　
    Figure pat00459
    　알라닌-페닐알라닌(ala-phe),　
    Figure pat00460
    리신-페닐알라닌(lys-phe),
    Figure pat00461
    　p-아미노벤질옥시카보닐(PAB),　
    Figure pat00462
    4-티오-펜타노에이트(SPP),　
    Figure pat00463
    　4-티오-부티레이트(SPDB),　
    Figure pat00464
    　4-(N-말레이미도메틸)시클로-헥산-1-카르복실레이트(MCC),　
    Figure pat00465
    　말레이미도에틸(ME),　
    Figure pat00466
    4-티오-2-히드록시술포닐-부티레이트(2-Sulfo-SPDB),　
    Figure pat00467
    아릴-티올(PySS),　
    Figure pat00468
    (4-아세틸)아미노벤조에이트(SIAB),　
    Figure pat00469
    , 옥실벤질티오,
    Figure pat00470
    아미노벤질티오,　
    Figure pat00471
    디 옥실벤질티오,　
    Figure pat00472
    　디아미노벤질티오,
    Figure pat00473
    　아미노-옥실벤질티오,　
    Figure pat00474
    알콕시 아미노(AOA),　
    Figure pat00475
    　에틸렌옥시(EO),　
    Figure pat00476
    4-메틸-4-디티오-펜타노익(MPDP),　
    Figure pat00477
    트리아졸,　
    Figure pat00478
    　디티오,　
    Figure pat00479
    　알킬술포닐,
    Figure pat00480
    알킬술폰아미드,　
    Figure pat00481
    술폰-비스아마이드,　
    Figure pat00482
    포스폰디아미드,
    Figure pat00483
    알킬포스폰아미드,　
    Figure pat00484
    포스핀산,
    Figure pat00485
    　N-메틸포스폰아미드산,
    Figure pat00486
    N,N'-디메틸포스폰-아미드 산,
    Figure pat00487
    N,N'-디메틸포스폰디아미드,
    Figure pat00488
    　히드라진,　
    Figure pat00489
    　아세티미드아미드;
    Figure pat00490
    옥심,
    Figure pat00491
    아세틸아세토히드라지드,
    Figure pat00492
    　아미노에틸-아민,
    Figure pat00493
    아미노에틸-아미노에틸-아민, 및 1-20의 아미노산을 함유하는 L- 또는 D-, 천연 또는 비천연 펩티드.
    여기서, "
    Figure pat00494
    "는 결합(또는 연결) 위치이다.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 링커 성분, L1, L2 는 하기 구조의 성분들의 하나 이상의 또는 이들의 반복 또는 조합으로 이루어진 그룹으로부터 독립적으로 선택되는 결합체: -(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -(Aa)r-(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)r(Aa)t-, -(CR5R6)m-(CR7=CR8)(CR9R10)n(Aa)t(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(Aa)t(NR11CO)(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(CO)(Aa)t-(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -(CR5R6)m-페닐-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-푸릴-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-옥사졸릴-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -(CR5R6)m-티아졸릴-CO(Aa)t(CCR7R8)n-, -(CR5R6)t-티에닐-CO(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-이미다졸릴-CO-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-모르폴리노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t피페라지노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R6)t-N-메틸피페라진-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -(CR5R)m-(Aa)t페닐-, -(CR5R6)m-(Aa)t푸릴-, -(CR5R6)m-옥사졸릴(Aa)t-,-(CR5R6)m-티아졸릴(Aa)t-, -(CR5R6)m-티에닐-(Aa)t-,-(CR5R6)m-이미다졸릴(Aa)t-,-(CR5R6)m-모르폴리노-(Aa)t-, -(CR5R6)m-피페라지노-(Aa)t-, -(CR5R6)m-N-메틸피페라진-(Aa)t-, -K(CR5R6)m(Aa)r(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -K(CR5R6)m(CR7R8)n(Aa)r(OCH2CH2)t-, -K(Aa)r-(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)t-, -K(CR5R6)m(CR7R8)n(OCH2CH2)r(Aa)t-, -K(CR5R6)m-(CR7=CR8)(CR9R10)n(Aa)t(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(Aa)t(NR11CO)(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(OCO)(Aa)t(CR9R10)n-(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(CO)(Aa)t-(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(NR11CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-(OCO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m(OCNR7)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K-(CR5R6)m(CO)(Aa)t(CR9R10)n(OCH2CH2)r-, -K(CR5R6)m-페닐??CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K-(CR5R6)m-푸릴??CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)m-옥사졸릴-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R6)m-티아졸릴-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-티에닐-CO(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t이미다졸릴-CO-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t모르폴리노-CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t피페라지노-CO(Aa)t-(CR7R8)n-, -K(CR5R6)t-N-메틸피페라진CO(Aa)t(CR7R8)n-, -K(CR5R)m(Aa)t페닐, -K-(CR5R6)m-(Aa)t푸릴-, -K(CR5R6)m-옥사졸릴(Aa)t-, -K(CR5R6)m-티아졸릴(Aa)t-, -K(CR5R6)m-티에닐-(Aa)t-, -K(CR5R6)m-이미다졸릴(Aa)t-, -K(CR5R6)m-모르폴리노(Aa)t-, -K(CR5R6)m-피페라지노-(Aa)tG, -K(CR5R6)mN-메틸피페라지노(Aa)t-; 여기서, m, Aa, m, n, R3, R4, 및 R5는 제 1 항에 기재된 것과 동일하고; t 및 r은 독립적으로 0 내지 100이고; R6, R7, 및 R8는 H; 할라이드; 하나 이상의 할라이드에 의해 선택적으로 치환되는 알킬, 아릴, 알케닐, 알키닐, 에테르, 에스테르, 아민 또는 아미드의 C1~C8, CN, NR1R2, CF3, OR1, 아릴, 헤테로사이클, S(O)R1, SO2R1,　-CO2H, -SO3H, -OR1, -CO2R1, -CONR1, -PO2R1R2, -PO3H 또는 P(O)R1R2R3로부터 독립적으로 선택되고; K는 NR1, -SS-, -C(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)O-, -C=NH-O-, -C=N-NH-, -C(=O)NH-NH-, O, S, Se, B, C3-C8을 갖는 헤테로시클릭 또는 헤테로 방향족 고리, 또는 1 내지 20의 아미노산을 함유하는 펩티드이다.
  6. 제1항에 있어서, 2-1, 2-3, 2-5, 2-7, 2-12, 2-13, 2-14, 2-18, 103, 116, 235, 239, 307, 326, 345, 355, 361의 결합체:
    Figure pat00495

    Figure pat00496

    Figure pat00497

    Figure pat00498

    Figure pat00499

    Figure pat00500

    mAb는 단일 클론 항체, n은 제 1 항과 동일하게 정의되고; L1, L2은 독립적으로 제 1 항의 L1으로 정의된다.
  7. 암, 자가 면역 질환 또는 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위해, 제 1 항의 결합체의 치료 효과적인 양 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 담체, 희석제 또는 부형제, 또는 이들의 조합을 포함하는 약학 조성물,
  8. 제 1 항에 있어서, 체내, 체외 또는 생체외 세포 사멸 활성을 갖는 결합체.
  9. 제 1 항에 있어서, 링커 성분들 R1, L1, L2는 프로테아제에 의해 독립적으로 절단 가능한 접합체.
  10. 제 1 항의 결합체의 치료 효과적인 양을 포함하는 약학 조성물로서, 이는 암, 또는 자가면역 질환, 또는 감염성 질환의 상승적인 효과적 치료 또는 예방을 위해, 화학 요법제, 방사선 치료, 면역 요법제, 자가면역 질환제, 항-감염제 또는 다른 접합체와 함께 동시에 투여되는 약학 조성물.
  11. 제 10 항에 있어서, 상승 작용제는 하기의 약물들 중 하나 또는 여러개로부터 선택되는 약학 조성물: 아바타셉트(Orencia), 아비라테론 아세테이트(Zytiga®), 아세타미노펜/히드로코돈, 아두카누맙, 아달리무맙, ADXS31-142(Advaxis), ADXS-HER2(Advaxis), 아파티닙 디말레에이트(Gilotrif®알렘투주맙(Campath®알리-트레티노인(Panretin®아도트라스투주맙 엠탄신(Kadcyla™), 암페타민 혼합 소금(암페타민/덱스트로암페타민, 또는 애더랄 XR), 아나스트로졸(Arimidex®아리피프라졸, 아타자나비르, 아테졸리주맙(MPDL3280A), 아토르바스타틴, 악시티닙(Inlyta®아벨루맙, 벨리노스탓(BeleodaqTM), 베바시주맙(Avastin®카바지탁셀(Jevtana®카보잔티닙(Cometriq™), 벡사로텐(bexarotene)(Targretin®블리나투모맙(BlincytoTM), 보르테조밉(Velcade®보수티닙(Bosulif®브렌툭시맙베도틴(Adcetris®부데소니드, 부데소니드/포르모테롤, 부프레노핀, 카페시타빈, 카필조밉(Kyprolis®셀레콕십, 세리티닙(LDK378/Zykadia), 세툭시맙(Erbitux®시클로스포린, 시나칼셋, 크리조티닙(Xalkori®코센틱(Cosentyx), CTL019, 다비가트란, 다브라페닙(Tafinlar®다라투무맙(Darzalex), 다르베포에틴 알파, 다루나비르, 이마티닙 메실레이트(Gleevec®다사티닙(Sprycel®데니루킨 디프티녹스(Ontak®데노수맙(Xgeva®데파코테, 덱스란소프라졸, 덱스메틸페니데이트, 덱사메타손, 디그니타나 디그니캅 쿨링 시스템, 디누툭시맙(UnituxinTM), 독시사이클린, 두록세틴, 두베리십, 엘로투주맙, 엠트리시타빈/릴피비린/테노포비르 디소프록실 vvnakfpdlxm, 엠트리싯빈/테노포비르/에파비렌즈, 엔옥사파린, 엔자루타미드(Xtandi®에포에틴 알파, 에르로티닙(Tarceva®에소메프라졸, 에스조피클론, 에타네르셉, 에베로리무스(Afinitor®엑세메스탄(Aromasin®에베로리무스(Afinitor®에제티미베, 에제티미베/심바스타틴, 페노피브레이트, 필그라스팀, 핀골리모드, 플루티카손 프로피오네이트, 플루티카손/살메테롤, 풀베스트란트(Faslodex®가지바, 게피티닙(Iressa®글라티라메르, 고세렐린 아세테이트(Zoladex), 이코티닙, 이마티닙(Gleevec), 이브리투모맙 티욱세탄(Zevalin®이브루티닙(ImbruvicaTM), 이델라리십(Zydelig®인플릭시맙, 이니파립, 이술린 아스파르트, 인술린 데테미르, 인술린 글라르긴, 인술린 리스프로, 인터페론 베타 1a, 인터페론 베타 1b, 라파티닙(Tykerb®이필리무맙(Yervoy®이프라트로피움 브로미드/살부타몰, 익사조미(Ninlaro®카누마, 란레오티드 아세테이트(Somatuline®Depot), 레날리도미드, 레날리오미드(Revlimid®렌바티닙 메실레이트(LenvimaTM), 레트로졸(Femara®레보티록신, 레보티록신, 리도카인, 리네조이드, 리라글루티드, 리스덱삼페타민, LN-144(Lion Biotech.), MEDI4736(AstraZeneca, Celgene), 메만틴, 메틸페니데이트, 메토프롤롤, 메킨니스트, 모달피닐, 모메타손, 닐로티닙(Tasigna®니라파립, 니보루맙(Opdivo®오파투무맙(Arzerra®오비누투주맙(GazyvaTM), 올라파립(LynparzaTM), 올메사르탄, 올메사르탄/히드로클로로티아지드, 오말리주맙, 오메가-3 지방산 에틸 에스테르, 오셀타미비르, 옥시코돈, 팔보시클립(Ibrance®팔리비주맙, 파니투무맙(Vectibix®파노비노스탯(Farydak®파조파닙(Votrient®펨브롤리주맙(Keytruda®페메트렉시드(Alimta), 페르투주맙(PerjetaTM), 뉴모콕칼 결합체 백신, 포말리도미드(Pomalyst®프레가바린, 프로스카박스, 프로프라놀올, 퀘티아파인, 라베프라졸, 라듐 223 클로라이드(Xofigo®랄록시펜, 랄테그라비르, 라무시루맙(Cyramza®라니비주맙, 레고라페닙(Stivarga®리툭시맙(Rituxan®리바르옥사반, 로미뎁신(Istodax®로수바스타틴, 룩소리티닙 포스페이트(JakafiTM), 살부타몰, 세베라메르, 실데나필, 실툭시맙(SylvantTM), 시타글립틴, 시타글립틴/멧포르민, 솔리페나신, 솔라네주맙, 소라페닙(Nexavar®수니티닙(Sutent®타달라필, 타목시펜, 타핀라르, 탈라조파립, 텔라프레비르, 템시로리무스(Torisel®테노포비르/엠트리시타빈, 테스토스테론 젤, 탈리도미드(Immunoprin, Talidex), 티오트로피움 브로미드, 토레미펜(Fareston®트라메티닙(Mekinist®트라스투주맙, 트레티노인(Vesanoid®우스테키누맙, 발라르탄, 벨리파립, 반데타닙(Caprelsa®베무라페닙(Zelboraf®베네토클락스, 보리노스탯(Zolinza®지브-아플리베르셉(Zaltrap®조스타박스, 및 이들의 유사체, 유도체, 약학적으로 허용가능한 염, 담체, 희석제 또는 부형제, 또는 이들의 조합.
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