TW202214674A - 一種放射性核種標記化合物及其應用 - Google Patents

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TW202214674A TW110123806A TW110123806A TW202214674A TW 202214674 A TW202214674 A TW 202214674A TW 110123806 A TW110123806 A TW 110123806A TW 110123806 A TW110123806 A TW 110123806A TW 202214674 A TW202214674 A TW 202214674A
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Abstract

本公開提供一種放射性核種標記化合物及其應用。具體而言，本公開提供一種式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物；
Figure 110123806-A0202-11-0001-1
該化合物藉由與放射性核種錯合，可以與腫瘤中高度表現的生長抑制劑受體(SSTR)結合，能夠高選擇性地定位到SSTR陽性的腫瘤組織中，達到靶向疾病之診斷和治療的目的。

Description

一種放射性核種標記化合物及其應用
本公開屬於放射性藥物標記和核醫學領域，具體涉及一種靶向的核種標記的多肽類放射性藥物。
生長抑制劑(somatostatin,SST)全稱為生長激素抑制劑，是一種在哺乳動物體內廣泛分佈的環狀多肽，主要存在於胃腸道及中樞神經系統。天然生長抑制劑在體內有SST-14和SST-28兩種活性形式，分別含有14個28個胺基酸殘基，發揮著重要的生物學功能，包括抑制生長激素、抑制胰腺激素分泌、抑制胃泌素的產生和腫瘤細胞的分化增殖等等。生長抑制劑藉由5種生長抑制劑受體(SSTR)發揮作用(即SSTR1-5)。它們屬於G蛋白偶聯受體家族，是具有7個跨膜區段的糖蛋白。天然SST的半衰期短，只有2至3分鐘，對5種受體均具有較強的親和力，實際應用價值低，因此人們設計並合成多種SST類似物。其中，具有代表性的為奧曲肽(Octreotide)、蘭瑞肽(Lanreotide)、伐普肽(Vapreotide)和帕瑞肽(pasireotide)等，半衰期可達到1.5至2個小時，其對受體也表現出一定的選擇性，例如奧曲肽對SSTR2、SSTR3和SSTR5的親和力明顯優於SSTR1和SSTR4，對SSTR2的親和力最強。許多正常細胞和腫瘤細胞都能表現SSTR，尤其 是在多種可被SST抑制的腫瘤細胞表面均存在一種或多種高表現的SSTR，以SSTR2最為常見。大多數神經內分泌腫瘤已被證明高表現的SSTR2，可以作為生長抑制劑類似物治療的靶標。
神經內分泌腫瘤(Neuroendocrine tumor，NET)是一組具有高度異質性的罕見腫瘤，神經內分泌細胞遍佈全身各處，因此神經內分泌腫瘤可以發生在體內任何部位，但最常見的是胃、腸、胰腺等消化系統神經內分泌腫瘤，約占所有神經內分泌腫瘤的2/3左右。神經內分泌瘤分為非功能性(約占80%)和功能性(約占20%)兩大類。功能性胃腸胰神經內分泌腫瘤主要表現為腫瘤分泌有生物學活性的激素引起的相關臨床症狀，如皮膚潮紅、出汗、哮喘、腹瀉、低血糖、難治性消化道潰瘍、糖尿病等。功能性胃腸胰神經內分泌腫瘤主要以胰腺神經內分泌腫瘤居多，包括胰島素瘤、生長抑制劑瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤等。
對非轉移性NET最有效的方式還是手術療法，但是大部分NET都存在肝轉移，因此只能採取姑息療法。非手術治療NET的現有療法主要有3種：1)生長抑制劑類似物(somatostatin analogue,SSA)，如長效奧曲肽和蘭瑞肽具有控制症狀腫瘤增殖的作用；2)分子靶向藥物，依維莫司(mTOR抑制劑)和舒尼替尼(多靶點血管生成抑制劑)等，可單獨或與SSA聯合用藥，對疾病的發展具有一定的控制作用。然而，上述兩種療法的有效率都不高，SSA不超過5%，分子靶向藥物也只能達到10%，即使起初有效，一段時間後就會出現耐藥性，出現症狀復發或腫瘤發展。3)肽受體放射性核種治療(peptide receptor radionuclide therapies,PRRT)，是近年所發展對NET具有良好療效的療法。PRRT基於SSA與NET腫瘤表面高表現之SSTR的特異性結合，將螯合有放射性核種的SSA運輸到細胞內部或吸附在細胞表面，藉由核種衰變釋放出的α射線或β射線對腫瘤細 胞造成損傷。Lutathera(177Lu-DOTA-TATE)是2018年首款獲得FDA批准的PRRT，已在美國和歐洲多個國家用於治療不能手術切除或轉移性的NET。在此之前，核種標記的SSA已被廣泛用於NET的診斷與成像。1994年，111In-DTPA-奧曲肽(OctreoScan®)被FDA批准用於NET的SPECT成像示蹤劑，特徵為短路徑長度和伽馬射線釋放。為了進一步提高腫瘤敏感度，68Ga-DOTA-octreotate(DOTA-TATE)(Netspot)被FDA批准用於NET的PET成像，成為傳統的OctreoScan的更安全有效的替代方法。
Lutathera對於神經內分泌腫瘤的治療具有極高的腫瘤靶向性，限制其對正常組織的放射損傷。然而，由於其在血液中的快速清除(主要是藉由腎清除)，使得進入到腫瘤組織的劑量大大減少，同時也增加腎臟的毒性。因此，需要藉由結構改造改善其藥物代謝動力學性質以延長其半衰期，以提高PRRT療法的有效性和安全性。腎臟通常濾出低於60kDa的分子，降低清除率最直接的方法就是增大分子尺寸，可以藉由糖基化、聚乙二醇(PEG)化或是與免疫球蛋白G(IgG)的Fc結構域融合來實現。對於多肽分子，延長其體內半衰期更常用的方法利用一種配體(ligand)將多肽錨定到具有更長壽命的血清蛋白上，尤其是白蛋白(albumin)。白蛋白是血漿中含量最多的蛋白質，分子量為66.5kDa，占血漿總蛋白的40%至60%，在血漿中的半衰期約為15至19天。Nilantha Bandara等公開一種長效生長抑制劑類似物177Lu-EB-TATE，在Lutathera基礎上改良，在側鏈引入與白蛋白具有高親和性的偶氮染料(截短的EB)，其半衰期可達到9.47小時，比Lutathera提高約4倍，其II期臨床實驗正在中國開展。但是，EB作為一種外源性的偶氮染料，在臨床使用中存在一定風險，例如，在體內降解時產生的芳香胺類有致癌的可能，在後期評價中需要加以注意。
本公開提供一種式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，
Figure 110123806-A0202-12-0004-6
 其中，
X1、X2和X3獨立地選自天然的胺基酸或非天然胺基酸或由其組成的肽段；
R1是
{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f-[NH-CH2-(CH2)g-(CO)]h；
該R1中的-CH2-視需要被選自-O-、-NH-、-NH(CO)-或者3至12員的環烷基取代；
a選自0至4之間的整數；
b選自0至15之間的整數；
c選自0至5之間的整數；
d選自0至5之間的整數；
e選自0至3之間的整數；
f選自0至3之間的整數；
g選自1至8之間的整數；
h選自0至3之間的整數；
R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}；或者{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}；
{Y-[(Glu)y-(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{Y-[Glu)y-(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}；
其中Y選自Lys、D-Lys、Orn、Dap、Dab或Cys殘基；
k選自0、1、2或3；
y選自0、1、2或3；
m選自6至30之間的整數；
n選自6至30之間的整數；
R3是螯合基團，視需要與放射性核種錯合。
本公開提供一種式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，
Figure 110123806-A0202-12-0005-8
 其中，
X1、X2和X3獨立地選自天然的胺基酸或非天然胺基酸或由其組成的肽段；
R1是
{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f-[NH-CH2-(CH2)g-(CO)]h；
該R1中的-CH2-視需要被選自-O-、-NH-、-NH(CO)-或者3至12員的環烷基取代；
a選自0至4之間的整數；
b選自0至15之間的整數；
c選自0至5之間的整數；
d選自0至5之間的整數；
e選自0至3之間的整數；
f選自0至3之間的整數；
g選自1至8之間的整數；
h選自0至3之間的整數；
R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}；或者{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}；
其中Y選自Lys、D-Lys、Orn、Dap、Dab或Cys殘基；
k選自0、1、2或3；
m選自6至30之間的整數；
n選自6至30之間的整數；
R3是螯合基團，視需要與放射性核種錯合。
可選的實施方案中，該R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，該m選自8至20之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，該m選自9至16之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自8至20之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自9至16之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該R1是
{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f-[NH-CH2-(CH2)g-(CO)]h；
a選自0、1或2；
b選自0、1、2、3、4、5、6或8；
c選自1、2或3；
d選自0或1；
e選自0、1、2或3；
f選自0、1或2；
g選自1、2、3或4；
h選自0或1。
可選的實施方案中，該R1中的-CH2-視需要被選自5至8員的環烷基取代，較佳為環己基。
可選的實施方案中，該R1是
{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f-[NH-CH2-(CH2)g-(CO)]h；
該h選自0。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr或Phe的胺基酸殘基；X2選自Trp或D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-ol、Thr-OH或Thr-NH2。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr或Phe的胺基酸殘基；X2選自Trp或D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH。
可選的實施方案中，該Y選自Lys或D-Lys。
可選的實施方案中，該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，m選自8至20之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，m選自9至16之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自0、1或2；
b選自0、1、2、3、4、5、6或8；
c選自1、2或3；
d選自0或1；
e選自0、1、2或3；
f選自0、1或2；
該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，m選自8至20之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自0、1或2；
b選自0、1、2、3、4、5、6或8；
c選自1、2或3；
d選自0或1；
e選自0、1、2或3；
f選自0、1或2；
該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，m選自9至16之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自1；
b選自0、1或2；
c選自1或2；
d選自0；
e選自0；
f選自0、1或2；
該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，m選自8至20之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自1；
b選自0、1或2；
c選自1或2；
d選自0；
e選自0；
f選自0、1或2；
該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，m選自9至16之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自1；
b選自1；
c選自1；
d選自0；
e選自0；
f選自1或2；
該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，m選自8至20之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自1；
b選自1；
c選自1；
d選自0；
e選自0；
f選自1或2；
該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，m選自9至16之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自8至20之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自9至16之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自0、1或2；
b選自0、1、2、3、4、5、6或8；
c選自1、2或3；
d選自0或1；
e選自0、1、2或3；
f選自0、1或2；
該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自8至20之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自0、1或2；
b選自0、1、2、3、4、5、6或8；
c選自1、2或3；
d選自0或1；
e選自0、1、2或3；
f選自0、1或2；
該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自9至16之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自1；
b選自0、1或2；
c選自1或2；
d選自0；
e選自0；
f選自0、1或2；
R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自8至20之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自1；
b選自0、1或2；
c選自1或2；
d選自0；
e選自0；
f選自0、1或2；
該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自9至16之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自1；
b選自1；
c選自1；
d選自0；
e選自0；
f選自1或2；
R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自8至20之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該R2是{Y-[(Glu)y-(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{Y-[Glu)y-(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，
該m和n各自獨立地選自8至20之間的整數，y或k相同或不同，各自獨立地選自0或1。
可選的實施方案中，該R2是{Y-[(Glu)y-(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{Y-[Glu)y-(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，
該m和n各自獨立地選自9至16之間的整數，y或k相同或不同，各自獨立地選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自1；
b選自1；
c選自1；
d選自0；
e選自0；
f選自1或2；
該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自9至16之間的整數，k選自0或1。
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；該R1是選自1、2、3、4、5個以下結構共價結合的結構，
Figure 110123806-A0202-12-0014-9
Figure 110123806-A0202-12-0015-10
可選的實施方案中，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
a選自1；
b選自1；
c選自1；
d選自0；
e選自0；
f選自1或2。
R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}；或者{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}；
其中Y選自Lys、D-Lys、Orn、Dap、Dab或Cys殘基；
k選自0、1、2或3；
m選自6至30之間的整數，m較佳選自8至20之間的整數；
n選自6至30之間的整數，n較佳選自8至20之間的整數
可選的實施方案中，式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，其中R1-R2結構如下所示，
Figure 110123806-A0202-12-0016-11
Figure 110123806-A0202-12-0017-12
Figure 110123806-A0202-12-0017-13
Figure 110123806-A0202-12-0017-14
Figure 110123806-A0202-12-0017-15
Figure 110123806-A0202-12-0017-16
Figure 110123806-A0202-12-0017-17
Figure 110123806-A0202-12-0017-18
Figure 110123806-A0202-12-0018-19
Figure 110123806-A0202-12-0018-20
Figure 110123806-A0202-12-0018-21
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Figure 110123806-A0202-12-0018-23
可選的實施方案中，式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，其中R1-R2結構如下所示，
Figure 110123806-A0202-12-0018-24
Figure 110123806-A0202-12-0019-25
Figure 110123806-A0202-12-0019-26
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Figure 110123806-A0202-12-0021-42
可選的實施方案中，式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R3選自環糊精、冠醚或下列分子結構：
Figure 110123806-A0202-12-0022-44
可選的實施方案中，式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R3選自
Figure 110123806-A0202-12-0022-43
可選的實施方案中，式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R3選自
Figure 110123806-A0202-12-0023-45
本公開提供的式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，如下所示：
Figure 110123806-A0202-12-0023-46
可選的實施方案中，本公開提供的式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該放射性核種與R3錯合，該放射性核種選自18F、76Br、124I、125I、64Cu、67Cu、86Y、90Y、67Ga、68Ga、89Zr、44Sc、99mTc、111In、177Lu、186Re、188Re、169Er、121Sn、127Te、142Pr、143Pr、198Au、153Sm、109Pd、165Dy、212Pb、213Bi、169Yb、或225Ac。
可選的實施方案中，本公開提供的式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該放射性核種與R3錯合，該放射性核種選自177Lu。
本公開提供一種醫藥組成物，包含上述式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物及一種或多種醫藥上可接受的賦形劑或藥物載體。
本公開中所述的醫藥上可接受的賦形劑或藥物載體包括填充劑、崩解劑、黏著劑、穩定劑、滲透壓調節劑、pH調節劑等。
可選的實施方案中，本公開提供的醫藥組成物適用於靜脈給藥。
本公開提供一種式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物或包含式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物的醫藥組成物，在製備用於腫瘤的診斷試劑的藥物中的用途。
本公開提供一種式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物或 包含式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物的醫藥組成物，在製備用於治療腫瘤的藥物中的用途。
本公開中所述的腫瘤選自神經內分泌性腫瘤，該神經內分泌性腫瘤選自胃腸道胰腺神經內分泌腫瘤、類癌、嗜鉻細胞瘤、副神經節瘤、甲狀腺髓質癌、肺神經內分泌腫瘤、胸腺神經內分泌腫瘤、類癌或胰腺神經內分泌腫瘤、垂體腺瘤、血管活性腸肽瘤、腎上腺腫瘤、梅克爾細胞癌、乳腺癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、頭頸部腫瘤、尿路上皮癌(膀胱)、腎細胞癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胃腸道間質瘤、神經母細胞瘤、膽管腫瘤、子宮頸腫瘤、尤因肉瘤、骨肉瘤、小細胞肺癌、前列腺癌、黑色素瘤、腦膜瘤、神經膠質瘤、髓母細胞瘤、胃泌素瘤、血清素瘤、組織胺瘤、甲狀腺癌、血管母細胞瘤、生長抑制劑瘤、幕上原始細胞、神經外胚層腫瘤和感覺神經母細胞瘤。
可選的實施方案中，該腫瘤為生長抑制劑受體陽性的腫瘤。
本公開另一方面提供一種製備式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物的方法，包括式(II)所示化合物生成二硫鍵的步驟，
Figure 110123806-A0202-12-0025-47
該X1、X2、X3、R1、R2及R3如式(I)所示的化合物中定義。
可選的實施方案中，該方法進一步包括放射性核種與R3錯合的步驟，該放射性核種選自18F、76Br、124I、125I、64Cu、67Cu、86Y、90Y、67Ga、68Ga、 89Zr、44Sc、99mTc、111In、177Lu、186Re、188Re、169Er、121Sn、127Te、142Pr、143Pr、198Au、153Sm、109Pd、165Dy、212Pb、213Bi、169Yb、或225Ac。
可選的實施方案中，該方法進一步包括放射性核種與R3錯合的步驟，該放射性核種為177Lu。
本公開另一方面提供一種式(I)所示的化合物的放射性核種標記化合物的方法，該放射性核種與R3錯合，該放射性核種選自177Lu，包含式(I)所示的化合物與前體17LuCl3在溫度選自60至120℃的條件下反應的步驟。
在一些實施方案中，反應溫度選自70至100℃。
在一些實施方案中，反應溫度選自85至95℃。
在一些實施方案中，反應體系的pH值選自3.5至7。
在一些實施方案中，反應體系的pH值選自4至6.5。
在一些實施方案中，反應體系的pH值選自5至6。
在一些實施方案中，本公開提供的製備式(I)所示的化合物的放射性核種標記化合物的方法在醋酸銨或醋酸鈉緩衝溶液中發生。
本公開的放射性核種標記化合物，半衰期更長，可以減少給藥劑量和給藥次數，提高反應率，降低毒性，提高患者依從性，有望成為新一代PRRT治療藥物。
本公開提供的多肽化合物及其衍生物採用固相合成的方法，合成載體為Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂，合成過程中使用的胺基酸衍生物的α-胺基由Fmoc基團(芴甲醯羰基)保護，胺基酸的側鏈根據官能團的不同選取以下保護基團：半胱胺酸側鏈巰基由Trt(三苯甲基)保護、D-色胺酸側鏈吲哚基、賴胺酸側鏈胺基由Boc(三級丁氧羰基)保護，酪胺酸側鏈苯酚基、谷胺酸側鏈羧基 或主鏈羧基、蘇胺酸側鏈羥基由t-Bu(三級丁基)保護。為了實現正交保護，賴胺酸側鏈胺基由Mtt(4-甲基-三苯甲基)保護。合成過程中，首先將Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂在二氯甲烷(DCM)中充分溶脹，用含20% 4-甲基哌啶的N,N-二甲基甲醯胺(DMF)溶液脫去α-胺基上的Fmoc保護基團，然後將C-末端胺基酸殘基的羧基以醯胺鍵的形式縮合至高分子不溶性樹脂上。接著該固相載體與序列中下一個胺基酸衍生物在過量情況下進行縮合形成醯胺鍵以接長肽鏈。重複縮合→洗滌→去保護→洗滌→下一輪胺基酸縮合的操作以達到所要合成的多肽鏈長度，最後用三氟乙酸：水：三異丙基矽烷：2-巰基乙醇：苯甲醚(90：3：2.5：2：2.5：，v：v：v：v)的混合溶液與樹脂反應將多肽從固相載體上裂解下來，再由冷凍甲基三級丁基醚沉降後得到還原型多肽衍生物的固體粗製物。所得還原型粗製物凍乾，用30%DMSO(二甲基亞碸)水溶液氧化後，直接用0.1%三氟乙酸的乙腈/水的體系由C-18反相製備色譜管柱純化分離後得到多肽及其衍生物的純品。所得裸肽純品經過放射性核種標記得到目標核種肽分子。
[發明的詳細說明]
除非有相反陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的術語具有下述含義。
本公開的胺基酸序列含有二十種胺基酸的標準單字母或三字母代碼，除非明確說明，否則本公開中所有胺基酸殘基較佳構型為L-型。另外，D-Phe和D-Trp是D-型胺基酸。
術語生長抑制劑受體陽性定義為受體高表現：
「天然的胺基酸」是指20種常見胺基酸(即丙胺酸(A)，半胱胺酸(C)，天冬胺酸(D)，谷胺酸(E)，苯丙胺酸(F)，甘胺酸(G)，組胺酸(H)， 異亮胺酸(I)，賴胺酸(K)，亮胺酸(L)，甲硫胺酸(M)，天冬醯胺(N)，脯胺酸(P)，穀胺醯胺(Q)，精胺酸(R)，絲胺酸(S)，蘇胺酸(T)，纈胺酸(V)，色胺酸(W)和酪胺酸(Y)。
「非天然胺基酸」是指不是天然編碼的或在任何生物體的遺傳密碼中發現的胺基酸。它們可以是例如純合成的化合物。非天然胺基酸的實例包括但不限於，羥基脯胺酸，γ-羧基谷胺酸，O-磷酸絲胺酸，氮雜環丁烷羧酸，2-胺基己二酸，3-胺基己二酸，β-丙胺酸，胺基丙酸，2-胺基丁酸，4-胺基丁酸，6-胺基己酸，2-胺基庚酸，2-胺基異丁酸，3-胺基異丁酸，2-胺基庚二酸，三級丁基甘胺酸，2，4-二胺基異丁酸(Dap)，鎖鏈素(desmosine)，2，2’-二胺基庚二酸，2，3-二胺基丙酸(Dab)，N-乙基甘胺酸，N-甲基甘胺酸，N-乙基天冬醯胺，高脯胺酸，羥基賴胺酸，別羥基賴胺酸(allo-hydroxylysine)，3-羥基脯胺酸，4-羥基脯胺酸，異鎖鏈素(isodesmosine)，別異亮胺酸，N-甲基丙胺酸，N-甲基甘胺酸，N-甲基異亮胺酸，N-甲基戊基甘胺酸，N-甲基纈胺酸，萘基丙胺酸(naphthalanine)，正纈胺酸，正亮胺酸，鳥胺酸(Orn)，D-鳥胺酸，D-精胺酸，對胺基苯丙胺酸，戊基甘胺酸，哌啶酸(pipecolic acid)和硫代脯胺酸。此外，還包括天然胺基酸或非天然胺基酸的C-末端羧基，N-末端胺基和/或其側鏈官能團被化學修飾。
「X選自A、B、或C」、「X選自A、B和C」、「X為A、B或C」、「X為A、B和C」等不同用語均表達相同的意義，即表示X可以是A、B、C中的任意一種或幾種。
本專利所述的胺基酸的「修飾」是指胺基酸的取代、添加或缺失，包括取代或添加20種天然胺基酸中的任一種。
本專利所述的胺基酸「取代」是指一個胺基酸殘基被不同的胺基酸殘基所取代。
「視需要」或「視需要地」意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。例如，「視需要被烷基取代的雜環基團」意味著烷基可以但不必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。
「取代的」指基團中的一個或多個氫原子，較佳為最多5個，更佳為1至3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，所屬技術領域中具有通常知識者能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
「醫藥組成物」表示含有一種或多種本文該化合物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
「醫藥上可接受的鹽」是指本公開化合物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，且具有應有的生物活性。
本公開中，以
Figure 110123806-A0202-12-0029-49
示例，連 接鍵是指分子內兩個半胱胺酸之間藉由二硫鍵連接。
圖1示出溶血活性測試結果(小鼠血液樣本)；
圖2示出溶血活性測試結果(人類血液樣本)；
圖3-1示出177Lu-DOTA-TATE在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-1h)；
圖3-2示出177Lu-DOTA-TATE在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-4h)；
圖3-3示出177Lu-DOTA-TATE在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-8h)；
圖3-4示出177Lu-DOTA-TATE在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-24h)；
圖3-5示出177Lu-DOTA-TATE在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-48h)；
圖4-1示出177Lu-DOTA-TATE在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-1h)；
圖4-2示出177Lu-DOTA-TATE在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-4h)；
圖4-3示出177Lu-DOTA-TATE在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-8h)；
圖4-4示出177Lu-DOTA-TATE在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-24h)；
圖4-5示出177Lu-DOTA-TATE在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-48h)；
圖5-1示出177Lu-18標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-1h)；
圖5-2示出177Lu-18標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-4h)；
圖5-3示出177Lu-18標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-4h-block)；
圖5-4示出177Lu-18標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-8h)；
圖5-5示出177Lu-18標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-24h)；
圖5-6示出177Lu-18標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-48h)；
圖6-1示出177Lu-18標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-1h)；
圖6-2示出177Lu-18標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-4h)；
圖6-3示出177Lu-18標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-8h)；
圖6-4示出177Lu-18標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-24h)；
圖6-5示出177Lu-18標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-48h)；
圖7-1示出177Lu-20標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-1h)；
圖7-2示出177Lu-20標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-4h)；
圖7-3示出177Lu-20標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-4h-block)；
圖7-4示出177Lu-20標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-8h)；
圖7-5示出177Lu-20標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-24h)；
圖7-6示出177Lu-20標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-48h)；
圖8-1示出177Lu-20標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-1h)；
圖8-2示出177Lu-20標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-4h)；
圖8-3示出177Lu-20標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-8h)；
圖8-4示出177Lu-20標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-24h)；
圖8-5示出177Lu-20標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-48h)；
圖9-1示出177Lu-21標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-1h)；
圖9-2示出177Lu-21標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-4h)；
圖9-3示出177Lu-21標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-4h-block)；
圖9-4示出177Lu-21標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-8h)；
圖9-5示出177Lu-21標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-24h)；
圖9-6示出177Lu-21標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(1-48h)；
圖10-1示出177Lu-21標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-1h)；
圖10-2示出177Lu-21標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-4h)；
圖10-3示出177Lu-21標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-8h)；
圖10-4示出177Lu-21標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-24h)；
圖10-5示出177Lu-21標記化合物在AR42J荷瘤小鼠中的SPECT成像圖(2-48h)；
圖11示出AR42J腫瘤模型單次給藥腫瘤生長曲線圖。
為了更詳細的說明本公開，本說明書提供下列具體實施方案，但本公開的方案並非僅限於此。
本公開中所述的實驗試劑見表1
Figure 110123806-A0202-12-0035-50
Figure 110123806-A0202-12-0036-51
Figure 110123806-A0202-12-0037-52
實施例1：多肽骨架化合物1的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0037-53
Figure 110123806-A0202-12-0038-54
步驟一：Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂脫除Fmoc保護基團
向裝有Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂(180mg,0.1mmol,loading：0.553mmol/g)的固相反應管加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除，再加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除。反應結束後用DMF(10mL)洗滌樹脂4次。
步驟二：肽鏈序列的偶聯
依照化合物1的肽鏈序列按照從羧基端到胺基端的順序合成。首先稱取Fmoc-Cys(Trt)-OH(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後將上述溶液加入步驟一所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂2次，最後用DMF洗滌3次。然後重複步驟一脫保護和上述胺基酸衍生物的縮合過程，依次縮合：Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-D-Phe-OH，Fmoc-Lys(Mtt)-OH和DOTA-tris(tBu)酯得到全保護的多肽分子。
步驟三：Mtt脫保護與賴胺酸側鏈的脂肪酸修飾
在步驟二的連有多肽分子的樹脂中加入六氟異丙醇/二氯甲烷混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，再加入六氟異丙醇/二氯甲烷的混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，反應結束後用DMF洗滌樹脂6次。稱取棕櫚酸(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後加入樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂各3次。
步驟四：樹脂裂解與保護基全脫除
將新鮮配製的裂解液(10mL)(三氟乙酸：水：三異丙基矽烷：2-巰基乙醇：苯甲醚(90：3：2.5：2：2.5：，v：v：v：v)加入到步驟三所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時。反應結束後過濾，用三氟乙酸洗滌樹脂2次，合併濾液後加入大量冷凍甲基三級丁基醚析出固體，離心後除去上清液得到還原型多肽粗製物。
步驟五：二硫鍵生成與反相液相色譜純化
步驟四所得還原型粗製物凍乾，溶於DMSO/水(30%v/v，濃度：1.5mg/mL)中，在室溫下攪拌24小時(h)後，在其中加入幾滴三氟乙酸，經過0.22um膜過濾後用WATERS Prep150製備型高效液相色譜系統進行分離，流動相為A(0.1%三氟乙酸，10%乙腈/水溶液)和B(0.1%三氟乙酸，90%乙腈/水溶液)。其中，色譜管柱為X-SELECT OBD C-18(WATERS，19×250mm)反相色譜管柱，純化過程中色譜儀檢測波長設定為220nm，流速為15mL/min。收集產物相關餾分凍乾後得到化合物編號1的多肽純品，收率20%。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1 ×150mm)檢測化合物純度，其純度為94.54%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：1801.75[M+H]+。
實施例2：多肽骨架化合物2的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0040-55
參照上述化合物1的合成步驟進行化合物2的合成，不同點在於胺基酸衍生物的縮合順序為：Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-D-Phe-OH，Fmoc-mini-PEG，Fmoc-Lys(Mtt)-OH和DOTA-tris(tBu)酯。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為93.06%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：1946.84[M+H]+。
實施例3：多肽骨架化合物3的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0040-56
Figure 110123806-A0202-12-0041-57
步驟一：Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂脫除Fmoc保護基團
向裝有Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂(180mg,0.1mmol,loading：0.553mmol/g)的固相反應管加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除，再加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除。反應結束後用DMF(10mL)洗滌樹脂4次。
步驟二：肽鏈序列的偶聯
依照化合物3的肽鏈序列按照從羧基端到胺基端的順序合成。首先稱取Fmoc-Cys(Trt)-OH(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後將上述溶液加入步驟一所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂2次，最後用DMF洗滌3次。然後重複步驟一脫保護和上述胺基酸衍生物的縮合過程，依次縮合：Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-D-Phe-OH，Fmoc-miniPEG，Fmoc-miniPEG，Fmoc-Lys(Mtt)-OH和DOTA-tris(tBu)酯得到全保護的多肽分子。
步驟三：Mtt脫保護與賴胺酸側鏈的脂肪酸修飾
在步驟二的連有多肽分子的樹脂中加入六氟異丙醇/二氯甲烷混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，再加入六氟異丙醇/二氯甲烷的混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，反應結束後用DMF洗滌樹脂6次。稱取棕櫚酸(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後加入樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂各3次。
步驟四：樹脂裂解與保護基全脫除
將新鮮配製的裂解液(10mL)(三氟乙酸：水：三異丙基矽烷：2-巰基乙醇：苯甲醚(90：3：2.5：2：2.5：，v：v：v：v)加入到步驟三所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時。反應結束後過濾，用三氟乙酸洗滌樹脂2次，合併濾液後加入大量冷凍甲基三級丁基醚析出固體，離心後除去上清液得到還原型多肽粗製物。
步驟五：二硫鍵生成與反相液相色譜純化
步驟四所得還原型粗製物凍乾，溶於DMSO/水(30%v/v，濃度：1.5mg/mL)中，在室溫下攪拌24h後，在其中加入幾滴三氟乙酸，經過0.22um膜過濾後用WATERS Prep150製備型高效液相色譜系統進行分離，流動相為A(0.1%三氟乙酸，10%乙腈/水溶液)和B(0.1%三氟乙酸，90%乙腈/水溶液)。其中，色譜管柱為X-SELECT OBD C-18(WATERS，19×250mm)反相色譜管柱，純化過程中色譜儀檢測波長設定為220nm，流速為15mL/min。收集產物相關餾分凍乾後得到化合物編號3的多肽純品，收率17%。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm) 檢測化合物純度，其純度為91.88%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2092.09[M+H]+。
實施例4：多肽骨架化合物4的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0043-59
參照上述化合物1的合成步驟進行化合物4的合成與純化，不同點在於胺基酸衍生物的縮合順序為：Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-D-Phe-OH，反-4-(Fmoc-胺甲基)環己烷甲酸，Fmoc-mini-PEG，Fmoc-Lys(Mtt)-OH和DOTA-tris(tBu)酯。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為92.06%。
實施例5：多肽骨架化合物5的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0043-60
步驟一：Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂脫除Fmoc保護基團
向裝有Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂(180mg,0.1mmol,loading：0.553mmol/g)的固相反應管加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除，再加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除。反應結束後用DMF(10mL)洗滌樹脂4次。
步驟二：肽鏈序列的偶聯
依照化合物5的肽鏈序列按照從羧基端到胺基端的順序合成。首先稱取Fmoc-Cys(Trt)-OH(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後將上述溶液加入步驟一所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂2次，最後用DMF洗滌3次。然後重複步驟一脫保護和上述胺基酸衍生物的縮合過程，依次縮合：Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-D-Phe-OH，Fmoc-miniPEG，Fmoc-miniPEG，Fmoc-D-Lys(Mtt)-OH和DOTA-tris(tBu)酯得到全保護的多肽分子。
步驟三：Mtt脫保護與賴胺酸側鏈的脂肪酸修飾
在步驟二連有多肽分子的樹脂中加入六氟異丙醇/二氯甲烷混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，再加入六氟異丙醇/二氯甲烷的混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，反應結束後用DMF洗滌樹脂6次。稱取棕櫚酸(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)， 用DMF(6mL)溶解後加入樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂各3次。
步驟四：樹脂裂解與保護基全脫除
將新鮮配製的裂解液(10mL)(三氟乙酸：水：三異丙基矽烷：2-巰基乙醇：苯甲醚(90：3：2.5：2：2.5：，v：v：v：v)加入到步驟三所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時。反應結束後過濾，用三氟乙酸洗滌樹脂2次，合併濾液後加入大量冷凍甲基三級丁基醚析出固體，離心後除去上清液得到還原型多肽粗製物。
步驟五：二硫鍵生成與反相液相色譜純化
步驟四所得還原型粗製物凍乾，溶於DMSO/水(30%v/v，濃度：1.5mg/mL)中，在室溫下攪拌24h後，在其中加入幾滴三氟乙酸，經過0.22um膜過濾後用WATERS Prep150製備型高效液相色譜系統進行分離，流動相為A(0.1%三氟乙酸，10%乙腈/水溶液)和B(0.1%三氟乙酸，90%乙腈/水溶液)。其中，色譜管柱為X-SELECT OBD C-18(WATERS，19×250mm)反相色譜管柱，純化過程中色譜儀檢測波長設定為220nm，流速為15mL/min。收集產物相關餾分凍乾後得到化合物編號5的多肽純品，收率19%。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為92.84%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2092.08[M+H]+。
實施例6：多肽骨架化合物6的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0045-61
參照上述化合物3的合成步驟進行化合物6的合成與純化，不同點在於賴胺酸側鏈脂肪酸修飾為含有11個碳的十一烷酸。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為90.51%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2021.99[M+H]+。
實施例7：多肽骨架化合物7的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0046-170
參照上述化合物3的合成步驟進行化合物7的合成與純化，不同點在於賴胺酸側鏈脂肪酸修飾為含有12個碳的月桂酸。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為90.55%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2036.01[M+H]+。
實施例8：多肽骨架化合物8的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0046-62
步驟一：Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂脫除Fmoc保護基團
向裝有Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂(180mg,0.1mmol,loading：0.553mmol/g)的固相反應管加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除，再加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除。反應結束後用DMF(10mL)洗滌樹脂4次。
步驟二：肽鏈序列的偶聯
依照化合物8的肽鏈序列按照從羧基端到胺基端的順序合成。首先稱取Fmoc-Cys(Trt)-OH(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後將上述溶液加入步驟一所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂2次，最後用DMF洗滌3次。然後重複步驟一脫保護和上述胺基酸衍生物的縮合過程，依次縮合：Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-D-Phe-OH，Fmoc-miniPEG，Fmoc-miniPEG，Fmoc-Lys(Mtt)-OH和DOTA-tris(tBu)酯得到全保護的多肽分子。
步驟三：Mtt脫保護與賴胺酸側鏈的脂肪酸修飾
在步驟二連有多肽分子的樹脂中加入六氟異丙醇/二氯甲烷混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，再加入六氟異丙醇/二氯甲烷的混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，反應結束後用DMF洗滌樹脂6次。稱取十二烷二酸氫三級丁酯(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後加入樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂各3次。
步驟四：樹脂裂解與保護基全脫除
將新鮮配製的裂解液(10mL)(三氟乙酸：水：三異丙基矽烷：2-巰基乙醇：苯甲醚(90：3：2.5：2：2.5：，v：v：v：v)加入到步驟三所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時。反應結束後過濾，用三氟乙酸洗滌樹脂2次，合併濾液後加入大量冷凍甲基三級丁基醚析出固體，離心後除去上清液得到還原型多肽粗製物。
步驟五：二硫鍵生成與反相液相色譜純化
步驟四所得還原型粗製物凍乾，溶於DMSO/水(30%v/v，濃度：1.5mg/mL)中，在室溫下攪拌24h後，在其中加入幾滴三氟乙酸，經過0.22um膜過濾後用WATERS Prep150製備型高效液相色譜系統進行分離，流動相為A(0.1%三氟乙酸，10%乙腈/水溶液)和B(0.1%三氟乙酸，90%乙腈/水溶液)。其中，色譜管柱為X-SELECT OBD C-18(WATERS，19×250mm)反相色譜管柱，純化過程中色譜儀檢測波長設定為220nm，流速為15mL/min。收集產物相關餾分凍乾後得到化合物編號8的多肽純品，收率21%。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為90.88%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2065.99[M+H]+。
實施例9：多肽骨架化合物9的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0048-63
參照上述化合物3的合成步驟進行化合物9的合成與純化，不同點在於賴胺酸側鏈脂肪酸修飾為含有14個碳的肉豆蔻酸。多肽純品藉由 WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為91.79%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2064.05[M+H]+。
實施例10：多肽骨架化合物10的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0049-64
參照上述化合物8的合成步驟進行化合物10的合成與純化，不同點在於賴胺酸側鏈脂肪酸修飾為含有14個碳的十四烷二酸氫三級丁酯。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為90.84%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2094.02[M+H]+。
實施例11：多肽骨架化合物11的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0049-65
參照上述化合物8的合成步驟進行化合物11的合成與純化，不同點在於賴胺酸側鏈脂肪酸修飾為含有16個碳的十六烷二酸氫三級丁酯。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為91.58%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2122.05[M+H]+。
實施例12：多肽骨架化合物12的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0049-66
參照上述化合物3的合成步驟進行化合物12的合成與純化，不同點在於賴胺酸側鏈脂肪酸修飾為含有18個碳的硬脂酸。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為90.34%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2120.15[M+H]+。
實施例13：多肽骨架化合物13的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0050-67
參照上述化合物8的合成步驟進行化合物13的合成與純化，不同點在於賴胺酸側鏈脂肪酸修飾為含有18個碳的十八烷二酸氫三級丁酯。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量。
實施例14：多肽骨架化合物14的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0050-68
步驟一：Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂脫除Fmoc保護基團
向裝有Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂(180mg,0.1mmol,loading：0.553mmol/g)的固相反應管加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分 鐘後抽除，再加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除。反應結束後用DMF(10mL)洗滌樹脂4次。
步驟二：肽鏈序列的偶聯
依照化合物14的肽鏈序列按照從羧基端到胺基端的順序合成。首先稱取Fmoc-Cys(Trt)-OH(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後將上述溶液加入步驟一所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂2次，最後用DMF洗滌3次。然後重複步驟一脫保護和上述胺基酸衍生物的縮合過程，依次縮合：Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-D-Phe-OH，Fmoc-miniPEG，Fmoc-miniPEG，Fmoc-Lys(Mtt)-OH和DOTA-tris(tBu)酯得到全保護的多肽分子。
步驟三：Mtt脫保護，賴胺酸側鏈的谷胺酸偶聯與脂肪酸修飾
在步驟二連有多肽分子的樹脂中加入六氟異丙醇/二氯甲烷混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，再加入六氟異丙醇/二氯甲烷的混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，反應結束後用DMF洗滌樹脂6次。稱取Fmoc-Glu-OtBu(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後加入樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，洗滌樹脂5次。向固相反應管加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除，再加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除。反應結束後用DMF(10mL)洗滌 樹脂4次。稱取月桂酸(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後加入樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂各3次。
步驟四：樹脂裂解與保護基全脫除
將新鮮配製的裂解液(10mL)(三氟乙酸：水：三異丙基矽烷：2-巰基乙醇：苯甲醚(90：3：2.5：2：2.5：，v：v：v：v)加入到步驟三所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時。反應結束後過濾，用三氟乙酸洗滌樹脂2次，合併濾液後加入大量冷凍甲基三級丁基醚析出固體，離心後除去上清液得到還原型多肽粗製物。
步驟五：二硫鍵生成與反相液相色譜純化
步驟四所得還原型粗製物凍乾，溶於DMSO/水(30%v/v，濃度：1.5mg/mL)中，在室溫下攪拌24h後，在其中加入幾滴三氟乙酸，經過0.22um膜過濾後用WATERS Prep150製備型高效液相色譜系統進行分離，流動相為A(0.1%三氟乙酸，10%乙腈/水溶液)和B(0.1%三氟乙酸，90%乙腈/水溶液)。其中，色譜管柱為X-SELECT OBD C-18(WATERS，19×250mm)反相色譜管柱，純化過程中色譜儀檢測波長設定為220nm，流速為15mL/min。收集產物相關餾分凍乾後得到化合物編號14的多肽純品。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量質譜圖中所示質譜為：2165.07[M+H]+。
實施例15：多肽骨架化合物15的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0053-69
參照上述化合物14的合成步驟進行化合物15的合成與純化，不同點在於與谷胺酸偶聯的脂肪酸為含有14個碳的肉豆蔻酸。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2193.04[M+H]+。
實施例16：多肽骨架化合物16的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0053-70
參照上述化合物14的合成步驟進行化合物16的合成與純化，不同點在於與谷胺酸偶聯的脂肪酸為含有16個碳的棕櫚酸。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2221.12[M+H]+。
實施例17：多肽骨架化合物17的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0053-71
參照上述化合物14的合成步驟進行化合物17的合成與純化，不同點在於步驟三中的脂肪酸修飾使用的是十二烷二酸氫三級丁酯。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為98.24%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2195.04[M+H]+。
實施例18：多肽骨架化合物18的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0054-72
步驟一：Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂脫除Fmoc保護基團
向裝有Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂(180mg,0.1mmol,loading：0.553mmol/g)的固相反應管加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除，再加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除。反應結束後用DMF(10mL)洗滌樹脂4次。
步驟二：肽鏈序列的偶聯
依照化合物18的肽鏈序列按照從羧基端到胺基端的順序合成。首先稱取Fmoc-Cys(Trt)-OH(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後將上述溶液加入步驟一所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂2次，最後用DMF洗滌3次。然後重複步驟一脫保護和上述胺基酸衍生物的縮合過程，依次縮合：Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Cys(Trt)- OH，Fmoc-D-Phe-OH，Fmoc-miniPEG，Fmoc-miniPEG，Fmoc-Lys(Mtt)-OH和DOTA-tris(tBu)酯得到全保護的多肽分子。
步驟三：Mtt脫保護，賴胺酸側鏈的谷胺酸偶聯與脂肪酸修飾
在步驟二連有多肽分子的樹脂中加入六氟異丙醇/二氯甲烷混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，再加入六氟異丙醇/二氯甲烷的混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，反應結束後用DMF洗滌樹脂6次。稱取Fmoc-Glu-OtBu(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後加入樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，洗滌樹脂5次。向固相反應管加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除，再加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除。反應結束後用DMF(10mL)洗滌樹脂4次。稱取十四烷二酸氫三級丁酯(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後加入樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂各3次。
步驟四：樹脂裂解與保護基全脫除
將新鮮配製的裂解液(10mL)(三氟乙酸：水：三異丙基矽烷：2-巰基乙醇：苯甲醚(90：3：2.5：2：2.5：，v：v：v：v)加入到步驟三所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時。反應結束後過濾，用三氟乙酸洗滌樹脂2次，合併濾液後加入大量冷凍甲基三級丁基醚析出固體，離心後除去上清液得到還原型多肽粗製物。
步驟五：二硫鍵生成與反相液相色譜純化
步驟四所得還原型粗製物凍乾，溶於DMSO/水(30%v/v，濃度：1.5mg/mL)中，在室溫下攪拌24h後，在其中加入幾滴三氟乙酸，經過0.22um膜過濾後用WATERS Prep150製備型高效液相色譜系統進行分離，流動相為A(0.1%三氟乙酸，10%乙腈/水溶液)和B(0.1%三氟乙酸，90%乙腈/水溶液)。其中，色譜管柱為X-SELECT OBD C-18(WATERS，19×250mm)反相色譜管柱，純化過程中色譜儀檢測波長設定為220nm，流速為15mL/min。收集產物相關餾分凍乾得到化合物編號18的多肽純品。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為98.81%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2223.07[M+H]+。
實施例19：多肽骨架化合物19的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0056-73
參照上述化合物18的合成步驟進行化合物19的合成與純化，不同點在於步驟三中的脂肪酸修飾使用的是十六烷二酸氫三級丁酯。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為97.35%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2251.09[M+H]+。
實施例20：多肽骨架化合物20的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0056-74
參照上述化合物18的合成步驟進行化合物20的合成與純化，不同點在於步驟三中賴胺酸側鏈依次與Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Glu-OtBu和十四烷二酸氫三級丁酯偶聯。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為98.05%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：1176.56{[M+2H]2+/2}。
實施例21：多肽骨架化合物21的合成：
Figure 110123806-A0202-12-0057-75
步驟一：Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂脫除Fmoc保護基團
向裝有Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂(180mg,0.1mmol,loading：0.553mmol/g)的固相反應管加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除，再加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除。反應結束後用DMF(10mL)洗滌樹脂4次。
步驟二：肽鏈序列的偶聯
依照化合物21的肽鏈序列按照從羧基端到胺基端的順序合成。首先稱取Fmoc-Cys(Trt)-OH(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU) (1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後將上述溶液加入步驟一所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂2次，最後用DMF洗滌3次。然後重複步驟一脫保護和上述胺基酸衍生物的縮合過程，依次縮合：Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-D-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-D-Phe-OH，Fmoc-miniPEG，Fmoc-miniPEG，Fmoc-Lys(Mtt)-OH和DOTA-tris(tBu)酯得到全保護的多肽分子。
步驟三：Mtt脫保護，賴胺酸側鏈的谷胺酸偶聯與脂肪酸修飾
在步驟二連有多肽分子的樹脂中加入六氟異丙醇/二氯甲烷混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，再加入六氟異丙醇/二氯甲烷的混合溶液(30%v/v，10mL)，室溫下震盪反應45分鐘後抽除，反應結束後用DMF洗滌樹脂6次。稱取Fmoc-Glu(OtBu)-OH(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和N,N-二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後加入樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，洗滌樹脂5次。向固相反應管加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除，再加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除。反應結束後用DMF(10mL)洗滌樹脂4次。稱取Fmoc-Glu-OtBu(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後加入樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，洗滌樹脂5次。向固相反應管加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震盪反應10分鐘後抽除，再加入4-甲基哌啶/DMF(20%v/v，10mL)，室溫下震 盪反應10分鐘後抽除。反應結束後用DMF(10mL)洗滌樹脂4次。稱取十六烷二酸氫三級丁酯(1mmol)，6-氯苯并三唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)(1mmol)和二異丙基乙胺(DIEA，2mmol)，用DMF(6mL)溶解後加入樹脂中，在室溫下震盪反應2小時，反應結束後用DMF，二氯甲烷(DCM)交替洗滌樹脂各3次。
步驟四：樹脂裂解與保護基全脫除
將新鮮配製的裂解液(10mL)(三氟乙酸：水：三異丙基矽烷：2-巰基乙醇：苯甲醚(90：3：2.5：2：2.5：，v：v：v：v)加入到步驟三所得樹脂中，在室溫下震盪反應2小時。反應結束後過濾，用三氟乙酸洗滌樹脂2次，合併濾液後加入大量冷凍甲基三級丁基醚析出固體，離心後除去上清液得到還原型多肽粗製物。
步驟五：二硫鍵生成與反相液相色譜純化
步驟四所得還原型粗製物凍乾，溶於DMSO/水(30%v/v，濃度：1.5mg/mL)中，在室溫下攪拌24h後，在其中加入幾滴三氟乙酸，經過0.22um膜過濾後用WATERS Prep150製備型高效液相色譜系統進行分離，流動相為A(0.1%三氟乙酸，10%乙腈/水溶液)和B(0.1%三氟乙酸，90%乙腈/水溶液)。其中，色譜管柱為X-SELECT OBD C-18(WATERS，19×250mm)反相色譜管柱，純化過程中色譜儀檢測波長設定為220nm，流速為15mL/min。收集產物相關餾分凍乾得到化合物編號21的多肽純品。多肽純品藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)檢測化合物純度，其純度為99.64%。藉由安捷倫Q-TOF 6530體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)確認化合物分子量，質譜圖中所示質譜為：2380.15[M+H]+。
實驗例1：多肽骨架測試評價方案
1：多肽骨架化合物對生長抑制劑受體的親和力
應用放射性配體-受體競爭結合的方法測試多肽骨架化合物對SSTR2受體的親和力(Eurofins Panlabs)。收集穩定表現SSTR2受體的CHO-K1細胞製備細胞膜，與0.3nM放射性125I-Somatostatin 14配體和3倍梯度稀釋的待測生長抑制劑類似物多肽混合，起始測試濃度為10μM。25℃孵育4小時，孵育完成後將細胞膜混合物過濾洗滌3次，並測定細胞膜上的放射性125I特異性標記水平。使用MathIQTM進行競爭結合曲線擬合併計算IC50。其中以Somatostatin 14作為測試對照物，Lutathera多肽骨架(DOTA-TATE)作為陽性對照物。
實驗結果見表3，由表3可知，比較化合物3和4發現多肽骨架與脂肪酸的連接基團的類型對親和力影響較大，帶親水性連接基團的3親和力高於帶疏水基團的4；連接基團的長度對其也有影響，帶有兩個親水性PEG基團的3的親和力高於帶有一個PEG基團的2。帶有脂肪酸修飾的2和3親和力均高於已上市PRRT藥物Lutathera的多肽骨架。
Figure 110123806-A0202-12-0061-76
2：多肽骨架化合物2和3的溶解性測試
測試化合物2和3在核種標記緩衝液0.1M NaOAc-HOAc(pH 4.6)中溶解性。將化合物2和3分三個濃度溶於上述醋酸緩衝溶液中，肉眼觀察其溶解性。
實驗結果見表4，由表4可知化合物3的溶解性明顯優於化合物2，在1mg/mL的濃度下表現出良好的溶解性。
Figure 110123806-A0202-12-0061-77
3：多肽骨架化合物3的穩定性測試
測試化合物3在0.5mg/mL和1mg/mL兩個濃度中，在4℃和25℃條件下，在上述醋酸緩衝液中的化學穩定性。藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相 色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)監測其化學純度，每隔24小時監測一次，共監測96小時。
實驗結果見表5，化合物3在兩個濃度中，在4℃和25℃條件下，化學純度(%)基本保持不變，具有很高的化學穩定性。
Figure 110123806-A0202-12-0062-78
4：多肽骨架化合物3的溶血效應測試
在BALB/c小鼠和人類全血樣本中，測試生長抑制劑類似物化合物3在醋酸緩衝液中的溶血效應。將全血樣本100μL/sample，與900μL PBS(pH=7.2-7.4)混勻，於4℃以2,000g離心10min，輕輕丟棄上清液。再用900μL PBS重新懸浮血紅細胞，於4℃以2,000g離心10min，輕輕丟棄上清液，重複洗滌2次。使用500μL PBS/0.1% Triton X-100/待測多肽溶液/多肽溶劑對照重新懸浮血紅細胞，37℃水浴條件下孵育1小時後，於4℃以2,000g離心10min。轉移上清液100μL/孔至96孔板中，用SpectraMax M5酶標儀在540nm測定96孔板的吸光度。多肽起始測試濃度為300ug/mL，3倍梯度稀釋。Lutathera多肽骨架(DOTA-TATE)作為陽性對照物。
測試結果見圖1及圖2，結果顯示在BALB/c小鼠和人類全血樣本中，300ug/mL濃度及以下的多肽溶液均未有溶血效應。
5：多肽骨架化合物3的受體內化實驗
應用PathHunter® Activated GPCR Internalization Assays方法測試生長抑制劑類似物多肽對SSTR2受體的內化水平(Eurofins DiscoverX)。該方法基於Eurofins DiscoverX建立的β-半乳糖苷酶片段互補機制，將β-半乳糖苷酶分為融合受體EA和融合配體ED，EA和ED接近並組合可形成有活性的β-半乳糖苷酶。具體測試步驟如下：測試前一天將穩定細胞系接種到384孔板，每孔20uL，37℃培養過夜。待測化合物以500nM為起始測試濃度，3倍梯度稀釋，每孔5uL加入細胞中，37℃混合培養3小時。每孔中加入12uL檢測受質，室溫孵育1小時後置於PerkinElmer EnvisionTM讀取化學發光值。其中以Somatostatin 28作為測試對照物，Lutathera多肽骨架(DOTA-TATE)作為陽性對照物。
Figure 110123806-A0202-12-0063-80
實驗結果見表6，與天然Somatostatin 28相比，化合物3的內化效率提高約2.16倍。
6：多肽骨架化合物3的血漿穩定性實驗
在大鼠和人類血漿樣本中分別研究化合物3的血漿穩定性。將37℃水浴中融化的血漿樣本10,000g離心5分鐘，取上清並檢測pH在7.2-8.0範圍內。將2uL 1mM多肽溶液加入至398uL血漿樣本中(雙複孔)，37℃水浴中60rpm震盪孵育。在0、15、30、60、120分鐘時分別取50uL樣品，加入400uL含有內標物的甲醇中止反應，渦旋混勻10分鐘後3,220g室溫離心30分鐘。取上清用超純水稀釋並進行LC/MS/MS檢測。血漿中剩餘化合物百分比計算公式為：剩餘化合物百分比(%)=化合物-內標峰面積比/t0化合物-內標峰面積比×100。Lutathera多肽骨架(DOTA-TATE)作為陽性對照物，丙胺太林作為人類血漿測試對照物，洛伐他汀作為大鼠血漿測試對照物。
實驗結果見表7，在所測試的2小時內，在大鼠血漿中，DOTA-TATE和化合物3均表現出很好的穩定性；在人類血漿中，化合物3的穩定性略低於DOTA-TATE，但仍處於LC/MS/MS的誤差範圍內，因此化合物3還是穩定性比較高的分子。
Figure 110123806-A0202-12-0064-81
7、多肽骨架化合物3在大鼠中的藥物代謝動力學研究
在大鼠模型中研究多肽的血漿藥物代謝動力學。對成年雄性SD大鼠施用單次1mg/kg靜脈注射給藥(n=3)，在給藥0、2、5、15、30、45、60、120、240、480、1440分鐘分別取血，分離血漿樣本，藉由LC/MS/MS測定血漿中的藥物濃度，繪製血漿藥物濃度-時間曲線，並使用WinNonlin(PhoenixTM,version 8.2)軟體計算相應的藥物動力學參數。Lutathera多肽骨架(DOTA-TATE)作為陽性對照物。
實驗結果見表8，與對照物DOTA-TATE相比，多肽骨架化合物3的血漿半衰期延長至其4.7倍，具有良好的藥物代謝動力學性質。
Figure 110123806-A0202-12-0065-82
實驗例2：多肽骨架測試評價方案
1：多肽骨架化合物對生長抑制劑受體的親和力
應用放射性配體-受體競爭結合的方法測試多肽骨架化合物對SSTR2受體的親和力(Eurofins Panlabs)。收集穩定表現SSTR2受體的CHO-K1細胞製備細胞膜，與0.3nM放射性125I-Somatostatin 14配體和3倍梯度稀釋的待測生長抑制劑類似物多肽混合，起始測試濃度為10μM。25℃孵育4小時，孵育完成後將細胞膜混合物過濾洗滌3次，並測定細胞膜上的放射性125I特異性標記水平。使用MathIQTM進行競爭結合曲線擬合併計算IC50。其中以Somatostatin 14作為測試對照物，Lutathera多肽骨架(DOTA-TATE)和DOTA-EB-TATE(Bioconjugate Chem.,2018,29,7,2448-2454，CN109153641)作為陽性對照物。EB分子被報導可以藉由與血漿中的白蛋白結合來延長多肽分子半衰期。
Figure 110123806-A0202-12-0066-83
實驗結果見表9，由表9可知，多肽骨架上偶聯白蛋白結合基團(EB或脂肪酸)後，其受體親和力都下降，考慮跟測試體系中存在的0.1%牛血清(BSA)相關。由於白蛋白結合基團跟BSA的可逆結合，阻礙多肽分子與受體的作用。含有C16脂肪二酸的化合物19和21，親和力降低的程度大於含有C14脂肪二酸的化合物18和20，進一步說明隨著脂肪酸與BSA的結合能力增強，多肽分子對受體的親和力隨之降低。
2：多肽骨架化合物18、19、20和21的溶解性測試
測試化合物18、19、20和21在核種標記緩衝液0.05M NaOAc-HOAc(pH 5.5)中溶解性。將兩個濃度的化合物18、19、20和21溶於上述醋酸緩衝溶液中，肉眼觀察其溶解性，實驗結果見表10。
Figure 110123806-A0202-12-0067-85
3：多肽骨架化合物18、19、20和21的化學穩定性測試
測試化合物18、19、20和21在1mg/mL的濃度中，在4℃和25℃條件下，在上述醋酸緩衝液中的化學穩定性。藉由WATERS H-CLASS分析型超高效液相色譜體系(色譜管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 2.1×150mm)監測其化學純度，每週監測一次，共監測4週。
實驗結果見表11，四個化合物在4℃和25℃條件下，化學純度基本保持不變，具有很高的化學穩定性。
Figure 110123806-A0202-12-0068-86
4：多肽骨架化合物17、18、20和21在大鼠中的藥物代謝動力學研究
在大鼠模型中研究多肽的血漿藥物代謝動力學。對成年雄性SD大鼠施用單次1mg/kg靜脈注射給藥(n=3)，在給藥0、2、5、15、30、45、60、120、240、480、1440分鐘分別取血，分離血漿樣本，藉由LC/MS/MS測定血漿中的藥物濃度，繪製血漿藥物濃度-時間曲線，並使用WinNonlin(PhoenixTM,version 8.2)軟體計算相應的藥物動力學參數。Lutathera多肽骨架(DOTA-TATE)以及DOTA-EB-TATE作為陽性對照物。
實驗結果見表12，與對照物DOTA-TATE(表8)相比，多肽骨架化合物18和化合物20的血漿半衰期延長至其2至4倍，具有良好的藥物代謝動力學性質。
Figure 110123806-A0202-12-0069-87
實施例22：化合物的標記及鑑定
化合物15、18、19、20及21各50μg分別加入200μL醋酸銨緩衝液(pH=5.5)，震盪使之完全溶解，加入一定活度的177LuCl3。混合物搖勻後95℃加熱反應30min。反應結束後冷卻至室溫，記錄反應條件。在鉛玻璃遮蔽下目測性狀。用pH試紙測定pH值。採用HPLC及iTLC兩種方法測定放射化學純度。
實驗結果見表13，所測試的5個化合物經177Lu標記後均澄清透明，pH值測定結果範圍在5.4至5.8，使用HPLC及iTLC兩種方法對製備得到的177Lu標記化合物放射化學純度的檢測結果均大於99%。
Figure 110123806-A0202-12-0070-88
實施例23：標記化合物體外穩定性研究
將實施例22中177Lu標記化合物約9.25MBq(250μCi)分別加入生理鹽水中，存放於具鹵化丁基橡膠塞的10mL管制玻璃瓶中。置於鉛防護罐中密閉、室溫放置。24h後取10μL樣品，分別取樣品，用HPLC/iTLC檢測標記化合物的放射化學純度。
實驗結果見表14，所測試的5個177Lu標記化合物與生理鹽水中，室溫放置24h後，其放射化學純度在穩定性考察期間未觀察到明顯下降，均大於99%；其中177Lu離子含量未見明顯增加，均小於1%。
Figure 110123806-A0202-12-0071-89
實施例24：標記化合物的脂水分佈係數測定
將實施例22中177Lu標記化合物100μL(約有0.74MBq活度)加入到含有1mL PBS(0.05mol/L,pH=7.4)和0.9mL正辛醇混合液的1號離心管中，渦旋震盪3min之後，10000rpm離心3min，使兩相明顯分層，從PBS相及正辛醇相中各取100μL液體並藉由γ-counter測量放射性計數。藉由公式P=(Ia-I)/(Ib-I)計算脂水分佈係數(log P)；其中Ia代表油相中測定的放射性計數、Ib代表水相中測定的放射性計數、I代表背景計數。
實驗結果見表15，所測試標記化合物都呈現水溶性性質，水溶性強弱排序為177Lu-20>177Lu-18>177Lu-19>177Lu-21>177Lu-15。
Figure 110123806-A0202-12-0072-90
實施例25：小鼠血液藥物代謝動力學研究
藉由小鼠的單次尾靜脈注射給藥，對15、18、19、20及21五個標記化合物與陽性藥Lutathera(177-Lu-DOTA-TATE)及DOTA-EB-TATE(Bioconjugate Chem.,2018,29,7,2448-2454，CN109153641)標記化合物進行血液藥物代謝動力學比較，每個化合物分配18隻小鼠，每個時間點3隻。每隻小鼠給藥20μCi/100μL，在給藥後2min、10min、1h、4h、24h、48h藉由眼眶及尾靜脈取血，收集於預先稱重的樣品管內，稱重並記錄血液樣品重量，再採用γ-計數儀進行放射性計數。同時將受試樣品準確稀釋100倍，取0.1mL於計數管中，作為標準的1%ID(即給藥劑量的百分之一)，於γ-計數器上同時測定1%ID標準和生物樣品的放射性計數。血液的數據表達為每克血液的放射性計數占總給藥劑量(放射性計數)的百分比(%ID/g)。根據血藥濃度數據進行藥物代謝動力學參數計算，各標記化合物在正常小鼠血液中的攝取結果見表16。
Figure 110123806-A0202-12-0073-91
實施例26：AR42J異種腫瘤模型SPECT掃描成像
藉由文獻公認高表現SSTR2的AR42J細胞進行荷瘤鼠腫瘤模型建立，待腫瘤平均直徑達到0.5cm時用於成像，每隻動物單次尾靜脈給予1mCi/200μL的18、20、21三個標記化合物(n=2)，分別於給藥後1h、4h、8h、24h及48h進行SPECT靜態圖像採集。獲得每隻實驗動物給藥後不同時間點的SPECT顯像圖。選擇並勾畫感興趣的器官，具體包括心肌、腫瘤、肌肉、肝臟和腎臟等部位。觀察標記化合物在荷瘤小鼠體內的腫瘤和非靶組織：肌肉、肝臟、肺和腎中的放射性濃聚及清除情況。另設已上市藥物Lutathera(177-Lu-DOTA-TATE，01號)作為陽性藥進行對比，並藉由阻斷抑制實驗驗證候選探針的特異性(給藥10min前注射100μg Lutathera化合物)。
各標記化合物在荷瘤小鼠中的成像結果詳見圖3-1到圖10-5，選擇並勾畫各器官的ROI值，並以此計算靶與非靶(T/NT)比值，結果詳見表17。結果表明18、20、21號標記化合物在AR42J腫瘤中均有較高攝取，且在注射後1h即可達到較好的靶向/非靶向比值，尤其18號化合物腫瘤攝取明顯高於陽性藥Lutathera(01)。
Figure 110123806-A0202-12-0075-92
Figure 110123806-A0202-12-0076-93
實施例27：AR42J腫瘤模型單次給藥藥效治療學初步評價
AR42J荷瘤小鼠29隻，共分為5組，分別為18號化合物低、高劑量組、Control陰性對照組及Lutathera(DOTA-TATE)陽性藥組、DOTA-EB-TATE標記化合物陽性藥組，每組5至7隻動物。當腫瘤體積約達100mm3時開始進行單次尾靜脈注射放射性核種治療，除18號低劑量組給予0.5mCi外，其它給藥組給藥劑量為1mCi。治療開始後每2天監測一次荷瘤裸鼠體重及腫瘤大小。腫瘤大 小藉由電子遊標卡尺測量，腫瘤體積的計算公式為1/2×長徑×短徑2，腫瘤體積生長曲線圖見附圖11。
結果表明，與Control對照組相比，18號化合物低高劑量組及陽性藥Lutathera、DOTA-EB-TATE標記化合物均對腫瘤體積增長有明顯的抑制作用。其中，DOTA-EB-TATE標記化合物毒性較大，截至第15天小鼠全部死亡；18號化合物1.0mCi與同劑量下陽性藥Lutathera相比在前18天內治療效果相當，18天後逐漸顯示出治療優勢；說明18號化合物藉由延長半衰期能明顯延長腫瘤內治療效果，具有節省核種用量而達到陽性藥同等治療效果的潛力。
Figure 110123806-A0202-11-0002-5

Claims (33)

  1. 一種式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，
    Figure 110123806-A0202-13-0001-94
    其中，
    X1、X2和X3獨立地選自天然的胺基酸或非天然胺基酸或由其組成的肽段；
    R1是
    {NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f-[NH-CH2-(CH2)g-(CO)]h；
    該R1中的-CH2-視需要被選自-O-、-NH-、-NH(CO)-或者3至12員的環烷基取代；
    a選自0至4之間的整數；
    b選自0至15之間的整數；
    c選自0至5之間的整數；
    d選自0至5之間的整數；
    e選自0至3之間的整數；
    f選自0至3之間的整數；
    g選自1至8之間的整數；
    h選自0至3之間的整數；
    R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}；或者{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}； {Y-[(Glu)y-(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{Y-[Glu)y-(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}；
    其中Y選自Lys、D-Lys、Orn、Dap、Dab或Cys殘基；
    k選自0、1、2或3；
    y選自0、1、2或3；
    m選自6至30之間的整數；
    n選自6至30之間的整數；
    R3是螯合基團，視需要與放射性核種錯合。
  2. 如請求項1所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}；或者{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}。
  3. 如請求項2所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，該m選自8至20之間的整數，m較佳為9至16之間的整數，k選自0或1。
  4. 如請求項2所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自8至20之間的整數，n較佳為9至16之間的整數，k選自0或1。
  5. 如請求項1、3或4中任一項所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R1是
    {NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f-[NH-CH2-(CH2)g-(CO)]h；
    a選自0、1或2；
    b選自0、1、2、3、4、5、6或8；
    c選自1、2或3；
    d選自0或1；
    e選自0、1、2或3；
    f選自0、1或2；
    g選自1、2、3或4；
    h選自0或1。
  6. 如請求項5所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R1中的-CH2-視需要被選自5至8員的環烷基取代，較佳為環己基。
  7. 如請求項5所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f-[NH-CH2-(CH2)g-(CO)]h；
    該h選自0。
  8. 如請求項1至7中任一項所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該X1選自Tyr或Phe的胺基酸殘基；X2選自Trp或D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-ol、Thr-OH或Thr-NH2，X3較佳為Thr-OH。
  9. 如請求項8所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，其中X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH。
  10. 如請求項1至9中任一項所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該Y選自Lys或D-Lys。
  11. 如請求項10所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}，m選自8至20之間的整數，m較佳為9至16之間的整數，k選自0或1。
  12. 如請求項11所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
    R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
    a選自0、1或2；
    b選自0、1、2、3、4、5、6或8；
    c選自1、2或3；
    d選自0或1；
    e選自0、1、2或3；
    f選自0、1或2。
  13. 如請求項12所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，
    a選自1；
    b選自0、1或2；較佳為1；
    c選自1或2；較佳為1；
    d選自0；
    e選自0；
    f選自0、1或2；較佳為1或2。
  14. 如請求項10所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R2是{Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}或{D-Lys-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，該n選自8至20之間的整數，n較佳為9至16之間的整數，k選自0或1。
  15. 如請求項14所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
    R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
    a選自0、1或2；
    b選自0、1、2、3、4、5、6或8；
    c選自1、2或3；
    d選自0或1；
    e選自0、1、2或3；
    f選自0、1或2。
  16. 如請求項15所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，
    a選自1；
    b選自0、1或2；較佳為1；
    c選自1或2；較佳為1；
    d選自0；
    e選自0；
    f選自0、1或2，較佳為1或2。
  17. 如請求項1、5至10中任一項所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R2是{Y-[(Glu)y-(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}或{Y-[Glu)y-(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}，
    該m或n各自獨立地選自8至20之間的整數，m或n各自獨立地較佳為9至16之間的整數，y或k相同或不同，各自獨立地選自0或1。
  18. 如請求項1或2所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；該R1是選自1、2、3、4、5個以下結構共價結合的結構，
    Figure 110123806-A0202-13-0006-95
    Figure 110123806-A0202-13-0007-172
  19. 如請求項1或2所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該X1選自Tyr的胺基酸殘基；X2選自D-Trp的胺基酸殘基；X3選自Thr-OH；
    R1是{NH-(CH2)aCH2O-(CH2CH2O)b-(CH2)c-[NH(CO)]d-(CH2)e-(CO)}f；
    a選自1；
    b選自1；
    c選自1；
    d選自0；
    e選自0；
    f選自1或2；
    R2是{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)mCH3]}；或者{Y-[(γGlu)k-CO-(CH2)nCOOH]}；
    其中Y選自Lys、D-Lys、Orn、Dap、Dab或Cys殘基；
    k選自0、1、2或3；
    m選自6至30之間的整數，m較佳選自8至20之間的整數；
    n選自6至30之間的整數，n較佳選自8至20之間的整數。
  20. 如請求項1至19中任一項所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，其中R1-R2結構如下所示，
    Figure 110123806-A0202-13-0008-97
    Figure 110123806-A0202-13-0009-98
    Figure 110123806-A0202-13-0009-100
    Figure 110123806-A0202-13-0009-101
    Figure 110123806-A0202-13-0009-102
    Figure 110123806-A0202-13-0009-103
    Figure 110123806-A0202-13-0009-104
    Figure 110123806-A0202-13-0009-105
    Figure 110123806-A0202-13-0010-106
    Figure 110123806-A0202-13-0010-107
    Figure 110123806-A0202-13-0010-108
    Figure 110123806-A0202-13-0010-109
    Figure 110123806-A0202-13-0010-110
  21. 如請求項1至20任一項所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該R3選自環糊精、冠醚或如下分子結構：
    Figure 110123806-A0202-13-0011-111
    Figure 110123806-A0202-13-0011-113
    ，較佳為
    Figure 110123806-A0202-13-0011-118
    或
    Figure 110123806-A0202-13-0011-117
    ，最佳為
    Figure 110123806-A0202-13-0011-112
  22. 如請求項1所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，選自如下的化合物：
    Figure 110123806-A0202-13-0012-119
  23. 如請求項1至22中任一項所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該放射性核種與R3錯合，該放射性核種選自18F、76Br、124I、125I、64Cu、67Cu、86Y、90Y、67Ga、68Ga、89Zr、44Sc、99mTc、111In、177Lu、186Re、188Re、169Er、121Sn、127Te、142Pr、143Pr、198Au、153Sm、109Pd、165Dy、212Pb、213Bi、169Yb、或225Ac，較佳為177Lu。
  24. 如請求項23所述的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物，該放射性核種與R3錯合，該放射性核種選自177Lu。
  25. 一種醫藥組成物，包含請求項1至24中任一項所述的式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物及一種或多種醫藥上可接受的賦形劑或藥物載體。
  26. 一種如請求項1至24中任一項所述的式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物或如請求項25所述的醫藥組成物，在製備用於腫瘤的診斷試劑的藥物中的用途。
  27. 一種如請求項1至24中任一項所述的式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物或如請求項25所述的醫藥組成物，在製備用於治療腫瘤的藥物中的用途。
  28. 如請求項26或27所述的用途，其中，該腫瘤選自神經內分泌性腫瘤，該神經內分泌性腫瘤選自胃腸道胰腺神經內分泌腫瘤、類癌、嗜鉻細胞瘤、副神經節瘤、甲狀腺髓質癌、肺神經內分泌腫瘤、胸腺神經內分泌腫瘤、類癌或胰腺神經內分泌腫瘤、垂體腺瘤、血管活性腸肽瘤、腎上腺腫瘤、梅克爾細胞癌、乳腺癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、頭頸部腫瘤、尿路上皮癌(膀胱)、腎細胞癌、小細胞肺癌、肝細胞癌、胃腸道間質瘤、神經母細胞瘤、膽管腫瘤、子宮頸腫瘤、尤因肉瘤、骨肉瘤、小細胞肺癌、前列腺癌、黑色素瘤、腦膜瘤、神經膠質瘤、髓母細胞瘤、胃泌素瘤、血清素瘤、組織胺瘤、甲狀腺癌、血管母細胞瘤、生長抑制劑瘤、幕上原始細胞、神經外胚層腫瘤和感覺神經母細胞瘤。
  29. 如請求項26至28中任一項所述的用途，其中該腫瘤為生長抑制劑受體陽性的腫瘤。
  30. 一種製備請求項1至24中任一項所述的式(I)所示的化合物，或其醫藥上可接受的鹽，或其對映異構體、非對映異構體或其氘元素取代物或其放射性核種標記化合物的方法，包括式(II)所示化合物生成二硫鍵的步驟，
    Figure 110123806-A0202-13-0014-121
    該X1、X2、X3、R1、R2及R3分別如請求項1至24所述。
  31. 如請求項30所述的方法，進一步包括放射性核種與R3錯合的步驟，該放射性核種選自18F、76Br、124I、125I、64Cu、67Cu、86Y、90Y、67Ga、68Ga、89Zr、44Sc、99mTc、111In、177Lu、186Re、188Re、169Er、121Sn、127Te、142Pr、143Pr、198Au、153Sm、109Pd、165Dy、212Pb、213Bi、169Yb、或225Ac，較佳為177Lu。
  32. 一種製備請求項1至24中任一項所示的式(I)所示的化合物的放射性核種標記化合物的方法，該放射性核種與R3錯合，該放射性核種選自177Lu，包含式(I)所示的化合物與前體17LuCl3在溫度選自60至120℃的條件下反應的步驟，溫度較佳為70至100℃，最佳為85至95℃。
  33. 如請求項32所述的方法，反應體系之pH值選自3.5至7，較佳為4至6.5，最佳為5至6。
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