JP2000506168A

JP2000506168A - Ｃｃ―１０６５及びデュオカマイシンのｍｃｂｉ類似体

Info

Publication number: JP2000506168A
Application number: JP9531987A
Authority: JP
Inventors: デイルエルボガー
Original assignee: Scripps Research Institute
Current assignee: Scripps Research Institute
Priority date: 1996-03-08
Filing date: 1997-03-07
Publication date: 2000-05-23
Also published as: ES2244991T3; CA2246783C; WO1997032850A1; AU711974B2; EP0888301A1; EP0888301B1; DE69733942T2; DE69733942D1; AU1990297A; ATE301639T1; CA2246783A1; EP0888301A4; US5985908A

Abstract

(57)【要約】ＭＣＢＩ（７−メトキシ−１，２，９，９ａ−テトラーヒドロシクロプロパ[ｃ]ベンズ［ｅ］インドール−４−オン）はＤＮＡアルキル化剤として使用することができ、位置選択性ＤＮＡアルキル化剤を構築するためにＣＣ−１０６５及びデュオカマイシンの類似体に組み込むことができる。

Description

【発明の詳細な説明】ＣＣ−１０６５及びデュオカマイシンのＭＣＢＩ類似体発明の属する技術分野本発明は、抗腫瘍性抗生物質に関する。より詳細には、本発明は、抗腫瘍性抗菌活性を有するＣＣ−１０６５及びデュオカマイシンの類似体に関する。従来技術（＋）−ＣＣ−１０６５（１）及びデュオカマイシンは、可逆的な立体電子的に制御された配列選択的ＤＮＡアルキル化を通したその生物学的効果に由来する非常に強力な抗腫瘍性抗菌物質のクラスの初期のメンバーを表している(Boger e t al.J.Org.Chem.1990,55,4499;Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1990,112,8961;Bog er et al.J.Am.Chem.Soc.1991,113,6645;Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1993,115, 9872;Boger et al.Bioorg.Med.Chem.Lett.1992,2,759)。これらの最初の開示に続いて、それらのＤＮＡアルキル化選択性及びその構造的原因を確立するための多数の努力がささげられてきた。ＤＮＡアルキル化選択性とそれに続く生物学的特性との関連を確立するための、例えば構造、化学反応性及び生物学的特性との間の関係の根底にある基本的な原理を定義するための努力もささげられてきた( 図１；１〜３)。ＣＢＩ（１，２，９，９ａ−テトラヒドロシクロプロパ［ｃ］ベンズ［ｅ］インドール−４−オン）は、ＣＣ−１０６５及びデュオカマイシンのアルキル化サブユニットに対応するアルキル化サブユニットとして同定されている(Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1989,111,6461;Boger D.L.;Ishizaki et al.J.Org.Chem.1990 ,55,5823)。ＣＢＩを基礎とする類似体を含む薬剤は、ＤＮＡアルキル化剤として特に有用であることが証明されている。このことは意義深いことである。なぜなら、先行する研究は、天然のアルキル化サブユニットに対する独特の特姓に寄与し、深在性構造変化はいうまでもなく、たとえ小さな構造の変化（pertubatio n）でもその特性に有害な作用を及ぼすという認識を残したからである(Hurley et al.Science1984,226,843;Reynolds et al.Biochemistry1985,24 ,6228;Hurley et al.Biochemistry1988,27,3886;Hurley et al.J.Am.Chem.Soc.1 990,112,4633;Warpehoski et al.Biochemistry1992,31,2502)。不正確に証明されただけではなく、(＋)−ＣＣ−１０６５のＣＢＩを基礎とした類似体の天然の鏡像異性体は、ＣＣ−１０６５の天然ＣＰＩアルキル化サブユニットを組み込んだ対応の薬剤よりも、化学的に安定(４×)、生物学的により強力、かつ合成的にかなり利用しやすいことが証明されている(Boger et al.J.Org.Chem.1990,55,58 23;Boger et al.J.Org.Chem.1992,57,2873;Boger et al.J.Org.Chem.1995,60,12 71)。更に、一連のＣＢＩ類似体のなかから選択された薬剤は、強力な細胞障害性だけではなく、強力かつ効果的なインビボ抗腫瘍活性を示した(Boger et al.B ioorg.Med.Chem.Lett.1991,1,115)。ＣＢＩを基礎とする類似体の天然の鏡像異性体は、上昇した速度下において未変化の配列選択性を有し、かつ対応のＣＰＩ類似体よりもより効果的にＤＮＡをアルキル化することが示された(Boger et al.Bioorg.Med.Chem.Lett.1991,1,115 ;Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1991,113,2779;Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1992, 114,5487)。このことは、単純化されたＣＢＩアルキル化サブユニットは、ＣＣ −１０６５の天然のアルキル化サブユニットに重要な利点を提供することを示している。最近の研究において、ＣＣ−１０６５及びデュオカマイシンのＤＮＡアルキル化反応のモデルが開発された(Boger et al.J.Org.Chem.1990,55,4499;Bog er et al.J.Am.Chem.Soc.1990,112,8961;Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1991,113, 6645;Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1993,115,9872;Boger et al.Bioorg.Med.Chem .Lett.1992,2,759;Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1994,116,1635)。これらのモデルは、鏡像異性薬剤及びそれらの構造類似薬によるＡＴに富むアデニンＮ₃ＤＮＡの逆転かつ相殺されたアルキル化選択性に適応している。非天然の鏡像異性体に由来するジアステレオマー付加物は、天然の鏡像異性体付加物には存在しないアルキル化アデニンに隣接する塩基を有するアルキル化アデニンＣＰＩＣ７中心(ＣＨ₃)又はＣＢＩＣ８中心の間の立体相互作用の有意な不安定化を受けることが見出された。この結果と一致して、天然及び非天然鏡像異性体間の顕著な特徴は、この中心の周囲の固有の立体バルク（steric bulk）が減少又は除去されたとき、減少又は消失した(Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1994,116,7996)。ＣＰＩＣ７又はＣＢＩＣ８中心の周囲の立体相互作用の不安定化に対する非天然鏡像異性体の感受性のために、ＣＢＩを基礎とした類似体の非天然鏡像異性体は、ＤＮＡアルキル化についてより上昇した相対速度及び効率を示す対応のＣＰＩ類似体よりもより効果的である。機能安定性と細胞障害性能力との間には直接の関係がある(Boger et al.J.Am. Chem.Soc.1994,116,6461;Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1994,116,11335;Mohamadi et al.J.Med.Chem.1994,37,232;Boger et al.J.Org.Chem.1994,59,4943;Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1989,111,6461;Boger et al.J.Org.Chem．1990，55，5823 )。アルキル化サブユニットに深在性修飾を含む薬剤を用いて行った、４〜９（図２）を含む現在までの一連の研究の進行において、高い加溶媒分解安定性を有する薬剤は、もっとも強力な細胞障害活性を示すことが見出された。更に、機能安定性と生物学的効力との間の直接の関係は、天然物の単純及び進化した（adva nced）類似体においても見られた。続いてのこの関係の確証は、一連の単純Ｎ² 置換ＣＢＩ誘導体において見られた(Boger et al.J.Am.Chem．Soc.1994,116,552 3)。加溶媒分解安定性(−ｌｏｇｋ)、細胞障害能力（ｌｏｇ１／ＩＣ₅₀、Ｌ１２１０）及びＮ²置換基の電子吸引性（ハメットσ_p定数）との間の予想し得る直線関係が見られた(図２；４〜９)。必要とされるものは、ＣＢＩと比較して改変した反応性を有する代替のアルキル化剤であって、ＣＣ−１０６６５及びデュオカマイシンの類似体に組み込んでもよいものである。発明の概要本発明の１つの態様は、以下に示す構造：又は、のいずれかで示されるアルキル化剤に向けられる。前記の構造において、Ｘは、塩素、臭素、ヨウ素及びＯＴＯＳからなる群より選ばれ、Ｒ₁は、水素、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル及び以下に示す構造：で示される基からなるより選ばれる。前記の基において、Ｒ₂は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）及び第一のＮ置換ピロリジン環からなる群より選ばれ、Ｒ₃は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル(Ｃ１〜Ｃ６)、第一のＮ置換ピロリジン環及び以下に示す構造：で示される基からなる群より選ばれる。Ｒ₄は、水素、ヒドロキシ及びＯ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群より選ばれ、Ｒ₅は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群より選ばれる。Ｖ₁は、Ｒ₂とＲ₃との間の第一のビニレン基を表し、但し、１．Ｒ₂が第一のＮ置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₃も第一のＮ置換ピロリジン環に関与する。２．Ｒ₃が第一のＮ置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₂も第一のＮ置換ピロリジン環に関与する。３．Ｒ₂及びＲ₃が第一のＮ置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₄及びＲ₅は水素である。４．Ｒ₂が水素である場合、Ｒ₄及びＲ₅は水素であり、Ｒ₃は以下に示す構造：により示される基である。この場合、第一のＮ置換ピロリジン環は、Ｒ₂とＲ₃との間の第一のビニレン基に融合しており、以下に示す構造：で示され、Ｖ₁は、Ｒ₂とＲ₃との間の第一のビニレン基を示し、Ｒ₆は、−ＮＨ₂及び以下に示す構造：により示される基により選ばれる。Ｒ₇は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）及び第二のＮ置換ピロリジン環からなる群より選ばれ、Ｒ₈は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）及び第二のＮ置換ピロリジン環からなる群より選ばれ、Ｖ₂は、Ｒ₇ とＲ₈との間の第二のビニレン基を表し、但し、１．Ｒ₇がＮ置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₈もＮ置換ピロリジン環に関与する。２．Ｒ₈がＮ置換ピロリジン環に関与し、更にＲ₇もＮ置換ピロリジン環に関係する。この場合、第二のＮ置換ピロリジン環は、Ｒ₇とＲ₈との間の第二のビニレン基に融合しており、以下に示す構造：（式中、Ｖ₂は、Ｒ₇とＲ₈との間の第二のビニレン基を表す）により示される。本発明の好ましい態様には以下に示す化合物が含まれる。本発明の第二の態様は、前記化合物のＤＮＡアルキル化への使用に向けられる。ＭＣＢＩ（７−メトキシ−１，２，９，９ａ−テトラーヒドロシクロプロパ[ ｃ]ベンズ［ｅ］インドール−４−オン）は、Ｃ４カルボニルに対してパラのＣ７メトキシ基を有する置換ＣＢＩ誘導体である。ＭＣＢＩアルキル化サブユニットのコア構造を、適当に官能基化（functionalize）したナフタレン前駆体（２１０及び２２０）生成のための改変ストッブ縮合−フリーデル・クラフツアシル化、続いての１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール骨格合成完了のための５−ｅｘｏ−ｔｒｉｇアリールラジカル−アルケン環化(２２８〜２３０、２４６〜２４８)、次いで活性化シクロプロパン導入のための最終のＡｒ−３ ’アルキル化により製造した。鍵となる５−ｅｘｏ−ｔｒｉｇ遊離基環化の実行への２つのアプローチについて詳述すると、前者は２２８の閉環を進め２３０を提供するものであり、必要とされる生成物の官能基化が環化の前に導入されているものである。後者は官能基化されていないアルケン基質２４６の環化生成物のテンポトラップ（Tempo trap）により２４８を提供するものである。後者の簡潔なアプローチは、ＭＣＢＩサブユニット及びその直接の前駆体を、１２〜１３工程で、すばらしい全体の転換率（２７〜３０％）で提供した。直接のＭＣＢＩ前駆体の分割並びにそれらの２５７〜２６６の鏡像異性体、ＣＣ−１０６５及びデュオカマイシンの類似体両者への組み込みについて詳述する。Ｎ−ＢＯＣ-ＭＣＢＩ( ２３８)の加溶媒分解反応性及び位置選択性の研究について詳述し、Ｃ７メトキシ基の導入が、加溶媒分解速度をわずか１．６倍加速することを見出した。この驚くべきささやかな効果は、Ｃ４カルボニルのプロトン化は、加溶媒分解又は酸触媒求核付加の律速段階ではないこと及びわずかに異なる電荷の蓄積（buildup ）が遷移状態で起こることを示唆しており、更にシクロプロパン環開環反応は求核試薬の存在及び補助を要求する（ＳＮ２機構）という示唆をサポートする。このことは、このクラスの薬剤のＤＮＡアルキル化選択性に寄与していることは疑いなく、Ｃ₄カルボニルプロトン化ではなく接近しやすい求核試薬（アデニンＮ₃ ）の位置決め（positioning）が律速事象であることを意味しているだろう。加溶媒分解速度に対するこの非常に小さい電子的影響は、加溶媒分解位置選択性に影響を与えず、活性化シクロプロパンの最小置換炭素への立体電子的に制御された求核付加が独占的に見られた。図面の簡単な説明図１は、(＋)ＣＣ−１０６５（１）及びデュオカマイシン２〜３の構造を示している。図２は、アルキル化サブユニットにおける深在性修飾を含む薬剤４〜９の構造を示している。下部のスキームは、ＭＣＢＩとＣＢＩとの直接の比較を示している。図３は、初期の中間体化合物２０４、２０６、２０８及び２１０の合成を示している。図４は、進化したＭＣＢＩ中間体化合物２３８及び２４０の合成を示している。図５は、進化したＭＣＢＩ中間体化合物２３０の合成を示している。図６は、ＭＣＢＩ結合薬剤２５２、２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４及び２６６の合成を示している。図７は、進化したＭＣＢＩ中間体化合物２９の単一の生成化合物４７への加溶媒分解を示している。図８は、試験した薬剤の表を示している。表中、ｋはｐＨ３で測定した加溶媒分解速度定数を示し、ｔ_1/2は、示したＩＣ₅₀値、紫外線及び赤外線吸収データを用いてｐＨ３で測定した薬剤の半減期を示している。示した上付き文字は以下に示すように定義される。(ａ)ｐＨ＝３：５０％ＣＨ₃ＯＨ−緩衝液、緩衝液は４：１：２０（ｖ：ｖ：ｖ）の０．１Ｍクエン酸：０．２ＭＮａ₂ＨＰＯ₄：Ｈ₂ Ｏ。(ｂ)ＣＨ₃ＯＨ。(ｃ)ＫＢｒ。(ｄ)ＴＨＦ。(ｅ)フィルム。(ｆ)ヌジョール (Nujol)。(ｇ)ｐＨ２下においては、ｋ＝１．５３×１０^-5ｓ^-1、ｔ_1/2＝１２．５時間。(ｈ)ｐＨ２下においては、ｋ＝１．６２×１０^-5ｓ^-1、ｔ_1/2＝１１．５時間。図９は、５０％ＣＨ₃ＯＨ−水性緩衝液（ｐＨ３．０、４：１：２０（ｖ／ｖ／ｖ）の０．１Ｍクエン酸：０．２ＭＮａＨ₂ＰＯ₄：Ｈ₂Ｏ）中におけるＮ− ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（２３８、上部）及びＭＣＢＩ（２４０、下部）の加溶媒分解研究（ＵＶスペクトル）を示している。このスペクトルは定期的な間隔で記録し、明確性のために幾つかを示す。上部：１、０時間；２、４時間；３、２７時間；４、７０時間；５、１０５時間；６、１７７時間。下部：１、０時間；２、４時間；３、２７時間；４、７０時間；５、１７７時間；６、７５２時間。図１０は、試験したＭＣＢＩ薬剤のインビトロ細胞障害活性を示しており、ＣＢＩとの比較も示している。図１１は、試験した薬剤は、機能の安定性（−ｌｏｇｋ）と細胞障害能力（− ｌｏｇ(ＩＣ₅₀)）との間の直接の関係に従うことが見出されたことを示している。図１２は、鏡像異性体の特徴（distinction）を示している。図１２は、ＭＣＢＩ−ＴＭＩ鏡像異性体は類似の特徴を示すが、ＣＢＩ−ＴＭＩについて見られたものよりもやや小さいことが見出されたことを明らかにした。図１３は、薬剤−ＤＮＡを３７℃で７２時間インキュベート、続く未結合薬剤の除去、１００℃で３０分間のインキュベート、８％変性ＰＡＧＥ及びオートラジオグラフィーによる２本鎖ＤＮＡ（ＳＶ４０ＤＮＡ断片、ヌクレオチドＮｏ．５２３８−１３８、クローンｗ７９４）の熱誘導鎖開裂を示している。レーン１、対照のＤＮＡ；レーン２〜４、(−)−ＭＣＢＩ−ＴＭＩ(２５４、１×１０^- ⁵ 〜１×１０^-7Ｍ)；レーン５〜７、(−)−デュオカマイシンＳＡ(２、１×１０^- ⁵ 〜１×１０^-7Ｍ)；レーン８〜１１、サンガ−Ｇ、Ｃ、Ａ及びＴ反応；レーン１２〜１４，(−)−ＣＣ−１０６５(１、１×１０^-5〜１×１０^-7Ｍ)；レーン１５〜１７、(−)−ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂(２６６、１×１０^-5〜１×１０^-7Ｍ)；レーン１８〜２０、(−)−ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁(２６２、１×１０^-5〜１×１０^-7 Ｍ)；レーン２１〜２３、(−)−ＭＣＢＩ−インドール₂(２５８、１×１０^-5〜１０×１０^-7Ｍ)。図１４は、ｌｎ［(Ａ_f−Ａ_j)／(Ａ_f−Ａ)］間の直線関係を示している；５０％ＣＨ₃ＯＨ−水性緩衝液（ｐＨ３．０、４：１：２０（ｖ／ｖ／ｖ）の０．１Ｍクエン酸：０．２ＭＮａ₂ＨＰＯ₄：Ｈ₂Ｏ）中のＮ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（２３８、上部）及びＭＣＢＩ（２４０、下部）の加溶媒分解研究（ＵＶスペクトル）が示される。このスペクトルは定期的な間隔で記録し、明確性のために幾つかを示す。上部：１、０時間；２、４時間；３、２７時間；４、７０時間；５、１０５時間；６、１７７時間。下部：１、０時間；２、４時間；３、２７時間；４、７０時間；５、１７７時間；６、７５２時間。図１５は、５’−³²Ｐ及び標識化ＤＮＡのオートラジオグラフィーを通して確立した時間に対する積分光学密度割合（percent integrated optical density）（％ＩＯＤ）のプロットを示しており、１、２５４、２５８、(＋)−ＣＢＩ−ＴＭＩ及び（＋）−ＤＳＡ−インドールについての、５’−ＡＡＴＴＡ高親和性部位におけるｗ７９４アルキル化の相対速度のモニターに使用した。図１６は、５’末端標識化ＤＮＡ（ＳＶ４０ＤＮＡ断片、１４４ｂｐ、ヌクレオチドＮｏ．５２３８−１３８、クローンｗ７９４）の熱誘導鎖開裂を示している。薬剤−ＤＮＡのインキュベートを３７℃で２４〜４８時間行い、続いて未結合薬剤の除去、１００℃で３０分間のインキュベート、８％変性ＰＡＧＥ及びオートラジオグラフィーを行った。図１７は、薬剤−ＤＮＡを２５℃で２４時間インキュベート、続く未結合薬剤の除去、１００℃で３０分間のインキュベート、８％変性ＰＡＧＥ及びオートラジオグラフィー後の２本鎖ＤＮＡ（ＳＶ４０ＤＮＡ断片、ヌクレオチドＮｏ．５２３８−１３８、クローンｗ７９４）の熱誘導鎖開裂を示している。レーン１、対照のＤＮＡ；レーン２〜４、(＋)−デュオカマイシンＳＡ(２、１×１０^-5 〜１×１０^-7Ｍ)；レーン５〜７、(＋)−ＭＣＢＩ−ＴＭＩ(２５４、１×１０^-5 〜１×１０^-7Ｍ)；レーン８〜１１、サンガーＧ、Ｃ、Ａ及びＴ反応；レーン１２〜１４，(＋)−ＣＣ−１０６５(１、１×１０^-5〜１×１０^-7Ｍ)；レーン１５〜１７、(＋)−ＭＣＢＩ−インドール₂(２５８、１×１０^-5〜１×１０^-7Ｍ)；レーン１８〜２０、(＋)−ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂(２６６、１×１０^-5〜１×１０^-7 Ｍ)。図１８は、種々の薬剤についてのＤＮＡアルキル化の相対速度を示している。酸触媒加溶媒分解の相対速度には従わない(ｋ＝それぞれの速度定数)。発明の詳細な説明本発明は、Ｃ４カルボニルに対してパラにＣ７メトキシ置換基を有する置換ＭＣＢＩ誘導体である７−メトキシ−１，２，９，９ａ−テトラーヒドロシクロ− プロパ［ｃ］ベンズ［ｅ］−インドール−４−オン（ＭＣＢＩ）の初めての合成を具体化する。ＭＣＢＩとＣＢＩとの直接の比較により、化学反応性に対するＣ７置換基の電子的影響の規模、最終的には機能反応性と生物学的特性との関係の評価が可能になった(図２；ＭＣＢＩ構造)。ＭＣＢＩ（２４０）及びＮ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（２３８）の合成ｔ−ＢｕＯＫを用いた処理(Johnson et al.Org.React.1951,6，1;Baghos et a l.Helv.Chim.Acta1979,62,90)(２〜４当量、ｔ−ＢｕＯＨ、還流、１〜２時間、７４％)により行った、３−メトキシベンズアルデヒド(２００；図３)とコハク酸ジエチル(３〜６当量)とのストッブ縮合(Stobbe,H.Chem.Ber. 1893,26,2312;Johnson et al.Org.React.1951,6,1)により半エステル２０２の２：１混合物を得、次いでフリーデル・クラフツアシル化（１．０当量ＮａＯＡｃ、Ａｃ₂Ｏ、５時間還流）に付し、２１０、その対応のＯ−アセテート２０８及び大量の異性体のフリーデル・クラフツ反応生成物２０４〜２０６の混合物を得た(図３)。得られた混合物を続いてエタノリシス（Ｋ₂ＣＯ₃、ＥｔＯＨ）によりＯ−アセテート２０４及び２０８を加水分解し、２１０とその異性体２０６との混合物を得た。この混合物はクロマトグラフィーにより容易に分離することができた。このアプローチの使用により、不安定な転換及び最終の異性体生成物の予備分離を受けるが、中間体２０２又は２０８の慎重な精製なしに、２００から２１０を良好な全収率４０〜４５％で得た。最高の転換率は、フリーデル・クラフツアシル化を穏やかな希釈反応条件下（０．１対０．５Ｍ）で行ったときに見られた。部分的に、最初の半エステル２０２の２：１のＥ：Ｚ混合物には、無駄なＺ異性体の異性化及び環化を行うことができる厳しい一連のフリーデル・クラフツアシル化を必要とした。穏やかな反応条件を用いての異性体生成物の割合を改善する試みでは、試験した条件下においてＺ異性体が効率的に環化しないため、２１０への全体の転換率は低下する(図１、上部)。これは、より制御された方法でストッブ縮合を行うことにより著しく改善された。ウォズワース−ホルナー−エモンス試薬２１２(Owten et al.Synth.Commun. 1993,23,2119;Gallagher et al.Tetrahedron Lett.1994,35,289;Hughes et al.J .Chem.Soc.,Perkin Trans.1 1989,449；Comber et al.J.Chem.Soc.,Perkin Tran s.1 1991,2783)(１当量、１．０５当量ＮａＨ、ＴＨＦ、０〜２５℃、１０時間、８１％)を用いた２００の縮合により、所望のＥ異性体が≧２０：１で優勢である２１４を得た(図３)。ｔ−ブチルエステルの選択的な酸触媒脱保護(deprote ction)、続くＡｃ₂Ｏ−ＮａＯＡｃを用いての処理により行ったフリーデル・クラフツアシル化により、２０２〜２１０の混合物を得た。続いてＯ−アセテートの加水分解（Ｋ₂ＣＯ₃、ＥｔＯＨ）により２１０（６８％全体）及び２０６を得た。２０２の純粋なＥ異性体を使用することにより、特に反応時間が著しく減少した。２１０の収率も同様であった。更に、穏やかなフリーデル・クラフツ反応条件（Ａｃ₂Ｏ、１．１当量ＮａＯＡｃ、７０℃、１０時間）の使用を可能にし、この修飾は転換率及び２１０：２０６の割合（８：１）を更に改善した。この手順に続いて、２１０を２０２から、７６％の全収率で分離した。同様に、ＴＦＡＡ−ＮａＯＡｃを用いての２０２の処理(Bonnett-Delpo n et al.J.Org.Chem.1988,53,754)(還流、３０時間、５７％)により、２１０：２０６の９：１混合物として２１０をわずかに低い転換率で得た。２０２から対応の酸塩化物への第一の転換(ＣＯＣｌ₂)、続くルイス酸触媒環化（ＡｌＣｌ₃、３８％；ＦｅＣｌ₃、４６％；ＳｎＣｌ₄、５４％）する代替の努力は、これらの転換率を改善しなかった。ストッブ縮合の修飾の使用は、２００から２１０への全体の転換率を改善しただけでなく、２１０への経路における純粋な中間体の分離及び特徴付ける能力をも改善し、これにより各反応段階の正確な評価及び最適化が可能になった(図３)。ベンジルエーテル２１６としてのフェノール２１０の保護(９８％)、続くエチルエステルの加水分解（９８％）及び得られたカルボン酸２１８のシオイリ−ヤマダ試薬（DPPA;Shioiri et al.J.Am.Chem.Soc.1972,94,6203;Ninomiya et al.T etrahedron 1974,30,2151）を用いてのｔ−ＢｕＯＨ中におけるクルチウス転位により、直接カルバメート２２０を優れた転換率（６９％）で得た(図４)。低温下での２２０の酸触媒Ｃ−４臭素化（１．２当量ＮＢＳ、触媒Ｈ₂ＳＯ₄、ＴＨＦ、−７８℃、５時間、９８％）により２２２を清潔に得た。２２２の構造を、２Ｄ ¹Ｈ−¹ＨＮＭＲスペクトルの診断用Ｃ₃−Ｈ／ＯＣＨ₂ＰｈＮＯＥクロスピークの観察により確認した。１−ブロモ−３−メチル−２−ブテン（３当量、２５℃、８時間、９５％）を用いての２２２のナトリウム塩（１．３当量ＮａＨ、ＤＭＦ、２５℃、３０分間）のアルキル化に続く、注意深くモニターした２２４の低温下オゾン分解、次いで粗オゾニドの還元的ワークアップ(workup)(Ｍｅ₂Ｓ )により２２６（８１％）を得た。オゾン分解反応の最適化においては、過剰量のＯ₃の直接の低温クエンチなしの、より延長した反応時間は、更なる酸化生成物の急速な生成を誘導することが見出された。したがって、反応条件特に詳述した反応時間に対する固執は、２２４から２２６への転換の成功にとって重要である。ビニルエーテル２２８のウィッティヒ導入は、ＴＨＦ中におけるＰｈ₃Ｐ＝ＣＨＯＴＨＰの低温生成(Schlude,H.Tetrahedron1975,31, 89)、続く維持された反応期間におけるＴＨＦ−ＨＭＰＡ中における２２６との反応においてもっとも有効であり、Ｅ：Ｚオレフィン異性体の混合物を優れた収率（８８％）で得た。Ｂｕ₃ＳｎＨ（２当量、Ｃ₆Ｈ₆、触媒ＡＩＢＮ、８０℃、２時間、９５〜９８％）を用いての２２８の処理により５−ｅｘｏ−ｔｒｉｇアリールラジカル−アルケン環化の産物である２３０を優れた収率で得た。続く２３０のＴＨＰ脱保護により遊離のアルコール２３２（９０％）を得、これはＮ− ＢＯＣ脱保護の形跡なしに達成した。２３２の最初の塩化物２３４への転換(２当量Ｐｈ₃Ｐ、６当量ＣＣｌ₄、ＣＨ₂Ｃｌ₂、２５℃、Hooz et al.Can.J.Chem.19 68,46,86)、続いてベンジルエステルのトランスファー水素化分解(transfer hyd rogenolysis)(Beig et al.Synthesis1985,76)(９９〜１００％)、次いでＮａＨ（３当量、ＴＨＦ、０℃、３０分間、８９％）を用いて２３６を処理することによるスピロ環化（spirocyclization）によりＮ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（２３８）を得た。同様に、２３６の酸触媒脱保護(３ＮＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ、２５℃、２０分間)、続いて５％水性ＮａＨＣＯ₃−ＴＨＦ（１：１、２５℃、１．５時間、９３％）に暴露しながらの粗インドリン塩酸塩のスピロ環化により、ＭＣＢＩ（２４０）を清潔に得た(図４)。２３８及び２４０の合成の完了に続いて、鍵となる５−ｅｘｏ−ｔｒｉｇアリールラジカルアルケン環化を行う代替の方法を研究した(Boger et al.J.Org.Che m.1995,60,1271)。本発明者らの初期のアプローチにおいて、エノールエーテル２２８の環化を、閉環速度を加速しかつ５−ｅｘｏ−ｔｒｉｇ環化に対する固有の嗜好性（preference）を強化する活性化受容体アルケンを部分的な使用により、優れた転換率で進めた。更に、ビニルエーテルを、所望の環化生成物において必要な十分な官能基化がされた環化基質に組み込む。しかしながら、このアプローチの固有の制限は、生成物の機能を、遊離基環化基質である受容体アルケンへ組み込むという要求であり、これは、注意深く定義されるオゾン分解反応及び、続く官能基化メチレントリフェニルホスホランを用いてのウィッティヒ反応を必要とする。短時間かつより効率的な２３２の製造を、環化前のアルケン官能基化に対する要求を除外する不活性化アルケンのアリールラジカル−アルケン５−ｅｘｏ−ｔｉｒｇ環化の好結果のテンポトラップ(Boger et al.J.Org.Chem. 1995,60,1271)に基づき達成した。ＮＩＳを用いた低温処理（１．１当量、触媒ＴｓＯＨ、ＴＨＦ−ＣＨ₃ＯＨ、−７８℃、３時間、８９％）により行った２２０の選択的酸触媒Ｃ４ヨウ素化、続いての臭化アリル（３当量、ＤＭＦ、２５℃ 、３時間、９３％）を用いての２４２のナトリウム塩のアルキル化（１．２５当量ＮａＨ、ＤＭＦ、０℃、５０分間）により２４６を得た(図５)。Ｂｕ₃ＳｎＨ（５×１．０当量、７０℃、１時間）を用いてのベンゼン中における２４６及びテンポの混合物（６当量）の処理により、２４８（８２％）を清潔に得た。同様に、（Ｍｅ₃Ｓｉ）₃ＳｉＨ（５×１．０当量、８０℃、１０時間）を用いてのベンゼン中の２４６及びテンポの混合物(６当量)の処理により、２４８(８４％)を得た。この反応は、完了のためにわずかに長い反応時間を必要とした。Ｂｕ₃ＳｎＨ又は（Ｍｅ₃Ｓｉ）₃ＳｉＨ（Ｂｕ₃ＳｎＨ＞（Ｍｅ₃Ｓｉ）₃ＳｉＨ）からのテンポの水素原子の引き抜きは、おそらく２４６からのヨウ素のトリブチルスズラジカル引き抜き反応のカスケード、非常に高速で進行しかつ競合的還元又は分子間テンポトラップを被らない５−ｅｘｏ−ｔｒｉｇアリールラジカル−アルケン環化及びＢｕ₃ＳｎＨからの競合的水素原子引き抜きなしの環化生成物の一次ラジカル（primary radical）の最終のテンポトラップの開始に貢献するだろう。２４６に対する、テンポを用いたトリブチルスズラジカルの競合反応は、おそらく、過剰量のＢｕ₃ＳｎＨ（３〜５当量）及びテンポ（６当量）に対する要求の原因となる。２４８の還元的開裂により２３０を得ることは、Ｚｎを用いた処理（１２当量、３：１：１のＨＯＡｃ−ＴＨＦ−Ｈ₂Ｏ、７０℃、２時間、８６％）により行った(図５)。分割ＭＣＢＩを基礎とする類似体の最後から２番目の中間体である、進化した合成中間体２３６を、分析用又は分離用ダイセルキラルセルＯＤカラム(Daicel Chir alcel OD column)(α＝１.１７)において、直接かつ効率的に分割した(Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1994,116,7996)。ジアステレオマー異性誘導体化、分離及び脱誘導体化（dederivatization）を回避するこの便利な手順は、２３６を用いて最高に行われるが、２３４（α＝１．１２）及びＮ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（２３８、α＝１．１６）もキラルセルＯＤカラム中で直接分離することができる。本発明者らの目的に対して、２３６は、半分離用（semipreparative）１０ μｍ、２×２５ｃｍＯＤＨＰＬＣカラム（２％ｉ−ＰｒＯＨ−ヘキサン、５ｍｌ／分）中で、全サンプルの９０〜１００％の回収率で分離することができるだろう。天然（１Ｓ）−及びｅｎｔ−（１Ｒ）−２３６の、(＋)−及びｅｎｔ −（−）−Ｎ−ＢＯＣ−ＣＢＩ（２３８）並びに（＋）−及びｅｎｔ−（−）− ＣＢＩ（２４０）への転換は、図４に詳述した実験手順にしたがった。絶対配置の割り当ては、当初は、４〜９について見られた結果と一致するより強い活性を示す天然（＋）−及びｅｎｔ−（＋）−Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ並びにその関連する類似体の相対的細胞障害性能力に基づいていた。最終的には、進化した類似体２５７〜２６６の鏡像異性体のＤＮＡアルキル化選択性の予備的な試験により確認した。特に、Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ及びＭＣＢＩ並びに進化した類似体の天然及び非天然鏡像異性体の旋光度の符号は、４〜７及び９並びにそれらの進化した類似体について見られたものと同一であることを見出した。ＭＣＢＩ−ＴＭＩ(２５４)、ＭＣＢＩ−インドール₂(２５８)、ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁（２６２）及びＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂（２６６）図６に詳述するように、ＭＣＢＩアルキル化サブユニットをＣＣ−１０６５及びデュオカマイシン類似体へ組み込んだ。２３６の酸触媒脱保護(４ＭＨＣｌ −ＥｔＯＡｃ、２５℃、３０分間)、続いての不安定なアミン塩酸塩２５０と、５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボン酸(３００、３当量ＥＤＣＩ、ＤＭＦ、２５℃、１０時間、８５％;Boger et al.J.Org.Chem.1990,55,4499 )、５８(３当量ＥＤＣＩ,ＤＭＦ、２５℃、１０時間、７８％;Boger et al.J.Or g.Chem.1984,49,2240)、ＣＤＰＩ₁（３２０、３当量ＥＤＣＩ、ＤＭＦ、２５℃ 、１２時間、７１％;Boger J.Org.Chem.1987,52,1521)及びＣＤＰＩ₂（３４０、３当量ＥＤＣＩ、ＤＭＦ、２５℃、６時間、６８％;Boger et al.J.Org.Chem.19 87,52,1521;Boger et al.J.Org.Chem.1984,49,2240）との直接の結合を、２５０の２４０への競合的閉環を促進する追加の塩基の存在なしに行い、それぞれ２５７、２５６、２６０及び２６４を得た。特に、２５０とカルボン酸３００〜３４０との結合の容易さは、その溶解性が低下（３００、５８＞３２０＞３４０）するにつれて低下し、これは必然的に反応速度を低下させた。続いて結合した薬剤と、ＮａＨ（３．０当量、ＴＨＦ−ＤＭＦ３：１、０℃、３０分間）との反応により、ＭＣＢＩ−ＴＭＩ(２５４、９０％)、ＭＣＢＩ−インドール₂(２５８、８６％)、ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁（２６２、９０％）及びＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂（２６６、９４％）をそれぞれ優れた転換率で得た。スピロ環化反応のワークアップを、低温下(０℃)、水性リン酸緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ７）を用いて行ったとき、最良の転換率が見られた。これらの条件下では、ＭＣＢＩ（２４０）への二次的な加水分解は最小になった(図６)。化学的加溶媒分解：反応性：アルキル化サブユニットの２つの基本的特徴は、４〜９の研究において重要であることが現在までに証明されている。第一は、活性化シクロプロパンの立体電子的に制御された酸触媒開環であり、これは最小置換シクロプロパン炭素への求核試薬の優占的な付加を指示する。第二は、酸触媒加溶媒分解の相対速度であり、これは薬剤の機能的反応性を正確に反映し、加溶媒分解安定性とインビトロ細胞障害性能力との間の基本的かつ直接の関係に従うことが見出された(Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1994,116,6461;Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1994,116,11335) 。ＣＢＩ核のＣ７置換が、酸触媒開環に及ぼす立体電子作用を乱さない場合、Ｃ７メトキシ置換基導入のわずかな構造変化は、加溶媒分解に要求されるＣ４カルボニルのプロトン化の電子的活性化を通して、薬剤の加溶媒分解性の反応性を増加させることが予想される。更に加溶媒分解は、環の拡張及びＣ９ａに対する求核試薬の付加を伴うＣ８ｂ−Ｃ９ａ結合の開裂よりもむしろ、最小置換Ｃ９シクロプロパン炭素に対する求核試薬の付加を伴うＣ８ｂ−Ｃ９結合の限定的な開裂と共に起こることが予想される。特に、後者の開裂は、一次中心(primary cente r)に対して優先的な二次中心（secondary center）における正電荷の発生を引き起こすだろう。先行の薬剤においては、この嗜好性は、固有の立体電子的制御により無効にされた。予想と一致して、Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（２３８、ｔ_1/2＝８０時間、ｋ＝２．４１×１０^-6ｓ^-1）は、ｐＨ３下でＮ−ＢＯＣ−ＣＢＩ（４、ｔ_1/2＝１３３時間）よりも化学的加溶媒分解に対してより反応性が高いことが証明されたが、その差異は予期したものよりも小さく、２３８はＮ−ＢＯＣ−ＣＰＩ（６、ｔ_1/2 ＝３６．７時間）よりも実質的により安定であった(図８)。したがって、Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩは、ｐＨ３下において、親薬剤であるＮＢＯＣ−ＣＢＩ（４）よりもわずか０．６倍の短い半減時間を示した。１〜２週間モニターしたとき、４〜７が加溶媒分解の形跡を示さなかったｐＨ７下（１：１Ｈ₂Ｏ−ＣＨ₃ＯＨ）において、Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（２３８）は同様に加溶媒分解の形跡を示さなかった。加溶媒分解は、ＭＣＢＩ発色団の長波長吸収帯（３２４ｎｍ）の消失及びｓｅｃｏ−Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩに起因する短波長吸収帯（２６６ｎｍ）の出現を伴うＵＶに分光光度的に従った(図９)。ＣＰＩ及びＣＢＩと同様に、ＭＣＢＩ（２４０、ｔ_1/2＝３３４時間、ｋ＝５．７６×１０^-7ｓ^-1）は、Ｎ−ＢＯＣ −ＭＣＢＩ（２３８）よりも、加溶媒分解に対してより安定であることが証明された。これは、おそらく加溶媒分解触媒に要求されるＯ−プロトン化に対して優先的なＮ³プロトン化の結果であろう。４〜９により示された傾向とほぼ一致して、ＭＣＢＩ（２４０、ｔ_1/2＝３３４時間、ｋ＝５．７６×１０^-7ｓ^-1）は、ＣＢＩ（ｔ_1/2＝９３０時間、ｋ＝２．０７×１０^-7ｓ^-1）²⁵よりもわずかに反応性が高く、ＤＳＡ（ｔ_1/2＝２１５０時間、ｋ＝８．９×１０^-8ｓ^-1）¹⁶よりも６〜７倍反応性が高いが、ＣＰＩよりも反応性が低いことが証明された(図８〜９)。したがって、Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（２３８）の酸触媒加溶媒分解速度は、予想された通り、Ｃ７メトキシ置換基による電子的活性化により、Ｎ−ＢＯＣ−ＣＢＩ（４）よりも速かったが、この効果の規模は著しく小さく(１．６×)、意義深いものであった。第一に、Ｃ４カルボニルのプロトン化は、加溶媒分解又は酸触媒求核試薬付加の律速段階ではないことが示唆される。メトキシ置換基についてのα_p+値−０．７８を使用して、酸触媒加溶媒分解反応についての著しく小さいρ値−０．２８を得た。ρについての小さい値は単一比較に基づくものであり、誤差に付されるものであるけれども、多数の比較に由来する類似の低いρ値（ −０．３０）と類似している。多数のρの機構学的解釈が認められるが、そのほとんどは、ρは反応において置換基により見られる電荷の程度であるが、研究中の電子の要求(electron demand)、電子の非局在化、遷移状態の位置、及び反応に対する置換基効果の伝達を含むその他の因子を含んでいると述べている(B radamante,S.;Pagani,G.A.J.Org.Chem.1980,45,10)。これらの因子は独立ではないので、これらの作用を区別することができないことがある。しかしながら、− ０．３という異常に小さい負のρ値は、反応中心においてわずかに異なる正電荷が蓄積することを示し、開環についての厳密なＳＮ２機構を示唆している。定性的には、このことは、２３８及び２４０のＣ７メトキシ置換基は酸触媒加溶媒分解速度にわずか１．６倍の作用を及ぼすということを認識することにより容易に認識される。反応によって示される、驚く程小さいρ値と密接に関連する８の活性化シクロプロパンへの異常な環の拡張性付加に対する明確なＳＮ２加溶媒分解生成物の観察は、わずかに異なる電荷の蓄積が遷移状態で起こること及び反応の観察結果は求核試薬の存在及び援助を必要としていることを示唆している。このことが、このクラスの薬剤のＤＮＡアルキル化選択性に寄与していることは疑いのないことであり、Ｃ４プロトン化ではなく、接近しやすい求核試薬の位置決め（アデニンＮ３）が律速事象であることを暗示している。化学的加溶媒分解：位置選択性：ＣＨ₃ＯＨ中におけるＮ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（２３８）の０．１当量ＣＦ₃ＳＯ₃ Ｈを用いての処理（０℃、３時間）により、清潔な加溶媒分解が起こり、単一の生成物２６８（９５％）を得た(図７)。Ｎ−ＢＯＣ脱保護又はオレフィンは見られず、メタノリシスは立体電子的に制御された位置選択性の変化なしに進行した。最小置換Ｃ９シクロプロパン炭素へのＣＨ₃ＯＨの付加を伴うＣ８ｂ−Ｃ９結合の清潔な開裂により２６８を得ることが見出されたが、環の拡張及びＣ９ａへのＣＨ₃ＯＨの付加を伴うＣ８ｂ−Ｃ９ａ結合の開裂により２７０を得ることはなかった(＞２０：１)。特に、この結果は、異常な環拡張加溶媒分解生成物の有意量が検出されたＣＣ−１０６５、デュオカマイシンＡ及びＣＢＱのより反応性の高いアルキル化サブユニットについての加溶媒分解の研究とははっきりと対照的である。それにもかかわらず、この観察結果は、環拡張加溶媒分解生成物が検出されなかった（＞２０：１）Ｎ−ＢＯＣ−ＣＢＩ（４）についての本発明者らの先行する研究と一致する(Boger et al.J.Org.Chem.1990,55,5823)。現在まで、異常な環拡張加溶媒分解生成物は、化学的により反応性の高い薬剤、すなわち６〜８についてのみ検出され、両方のシクロプロパン結合の立体電子的配置が同じである系、すなわち８である場合でのみ特に有力である(Boger et al .J.Am.Chem.Soc.1994,116,6461;Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1994,116,11335)。重要なことには、ＭＣＢＩを基礎とする薬剤を含むＣＢＩを基本とする薬剤への、立体電子的に制御された酸触媒求核試薬付加は、＞２０：１の位置選択性で進行し、より小さい４：１の選択性を示すことが見出されているＣＣ−１０６５のＣＰＩを基本とする類似体よりも更なる薬剤の利点を与える(Warpehoski et al. J.Am.Chem.Soc.1994,116,7573)。インビトロ細胞障害活性：ＭＣＢＩを基本とする薬剤の天然の鏡像異性体は、対応のＣＢＩを基本とする薬剤よりもわずかに低いか又は区別することができない程度の細胞障害性能力を示すことが見出された(図１０)。反応性の差異の規模は小さすぎ、細胞障害性アッセイにおける変動は大きすぎるため、ＣＢＩとＭＣＢＩ薬剤の決定的な比較は許容されず、定性的傾向は一般的に予期されるものであった。重要なことには、その相対的反応性と一致して、薬剤は、現在までに行われた一連の薬剤に関する先行する研究において見られた機能的安定性と細胞障害性能力との間の十分に確立された直接の関係に従うことが見出された(図１１)。先行する観察結果に類似して、対応のｓｅｃｏ前駆体、２３６、２５２、２５６、２６０及び２６４は、シクロプロパン含有薬剤と区別することができない程度の細胞障害活性を示した。ＤＮＡアルキル化選択性、効率及び相対速度：薬剤のＤＮＡアルキル化特性を、関連する薬剤について比較結果を入手することができる、１５０塩基対のセグメントからなる４種類の２本鎖ＤＮＡを用いて試験した。ファージＭ１３ｍｐ１０の４種のクローンを研究のために選択し、これらはＳＶ４０ヌクレオソームＤＮＡ挿入物（ヌクレオチドＮｏ．５２３８−１３８）及びその相補物ｗ８３６（ヌクレオチドＮｏ．５１８９−９１）並びにｃ９８８（ヌクレオチドＮｏ．４３５９−４２１０）及びその相補物ｃ８２０（ヌクレオチドＮｏ．４２０１−４３５６）を含んでいた。アルキル化部位の同定及び利用することができる部位間の相対的選択性の評価は、薬剤に暴露した後の単独で５’末端を標識化した二本鎖ＤＮＡの熱誘導鎖開裂により得た。一連の薬剤濃度を用いての末端標識化二本鎖ＤＮＡの処理に続いて、ＤＮＡのＥｔＯH沈澱により未結合の薬剤を除去した。水性緩衝液中におけるＤＮＡの再溶解、熱分解（１００℃、３０分間）によるＤＮＡアルキル化部位における鎖開裂の誘導、サンガージデオキシヌクレオチド配列化標準に隣接する高解像度ポリアルキルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）の変性、及びオートラジオグラフィーにより、ＤＮＡ開裂及びアルキル化部位を同定した。この手順の十分な詳細は、開示されており更にほかにおいても検討されている(１０)。本明細書に詳述した薬剤についての２５℃（２４時間）のインキュベーション条件下で見られたＤＮＡアルキル化反応選択性は、短い若しくは長い反応時間で見られたアルキル化選択性又は反応を異なる温度下（３７又は４℃、０．５〜７日間）で行ったときのアルキル化選択性と同一であることが証明された。以下で検討するように、ＤＮＡアルキル化の最終の相対的効率ではなく、速度及び効率が反応温度の変化により変化した。ＭＣＢＩ−ＴＭＩ(２５４)、ＭＣＢＩ−インドール₂(２５８)、ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁（２６２）及びＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂（２６６）の天然鏡像異性体のＤＮＡアルキル化特性：２５４、２５８、２６２及び２６６並びに天然物（＋）−デュオカマイシンＳＡ（２）及び（＋）−ＣＣ−１０６５（１）による、ｗ７９４ＤＮＡ内におけるＤＮＡアルキル化の比較が図１７に示され、これは薬剤について行われた一連の比較の代表的なものである。比較において、(＋)−デュオカマイシンＳＡ（２）及び（＋）−ＭＣＢＩ−ＴＭＩ（２５４）は区別することができず、この２つの薬剤は、ＤＮＡアルキル化について同一の選択性及び効率を示した。このことは、図１７におけるｗ７９４内で十分に説明されている。ここでは、２つの薬剤は共に、１０^-6〜１０^-7Ｍで、５’−ＡＡＴＴＡの同一の高親和性部位を検出可能にアルキル化し、高濃度下でのみ比較することができる程度で３つの追加の重要でない部位（minor site）をアルキル化し、更に試験した濃度範囲を通して同一のアルキル化の程度を示した。これは、デュオカマイシンＳＡ（２）及びＣＢＩ −ＴＭＩについての本発明者らの先行して行われた比較における観察結果と厳密に類似していた(Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1994,116,7996)。同様に、(＋)−ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂及び（＋）−ＣＣ−１０６５（１）は、本発明者らの比較においては本質的に区別することができないことが証明された。このことは、ｗ７９４ＤＮＡを用いた図１７において十分に説明される。ここでは、２つの薬剤は、１０^-7Ｍにおいて、５’−ＡＡＴＴＡの高親和性部位を検出することができる程度にアルキル化し、高い薬剤濃度下では比較することができる程度で追加の重要でない部位をアルキル化し、更に試験した濃度範囲を通して同一のアルキル化の程度を示した。このことは、各反応濃度下において存在する未反応のＤＮＡ量の比較においてもっとも明確になる。同様に、(＋)−ＭＣＢＩ−インドール₂（２５８）も１０^-7ＭにおいてＤＮＡを検出できる程度にアルキル化する。アルキル化選択性におけるわずかな差異が、重要でない部位のアルキル化の相対的効率についてのみ見られたｗ７９４内においては断言されるほどのものではないけれども、デュオカマイシンＳＡ／ＭＣＢＩ−ＴＭＩとＣＣ−１０６５／ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂との間の差異は、試験した追加のＤＮＡセグメントにおいてより明確になった。これらの比較において、デュオカマイシンＳＡ、ＭＣＢＩ− ＴＭＩ及びＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁を含む小さい薬剤は、明確な３．５塩基対のＡＴリッチアルキル化選択性を示し、一方ＣＣ−１０６５及びＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂ を含む長い薬剤は、大きな５塩基対ＡＴリッチアルキル化部位をより強く好んだ。これらの観察結果は、ＣＢＩを基本とする薬剤とＣＣ−１０６５又はデュオカマイシンとの直接の比較においてなされた観察結果と類似しており(Boger et al.J.Am.Chem.Soc.1994,116,7996)、ＭＣＢＩを基本とする薬剤及びＣＢＩを基本とする薬剤の天然の鏡像異性体の挙動を区別する特徴は検出されなかった。これらのアルキル化選択性は、他の文献において証明及び詳述されており(Boger e t al.J.Am.Chem.Soc.1994,116,7996)、検出された各アルキル化部位は、３塩基対中における２つの５’Ａ又はＴ塩基に続くアデニンであり、これは以下に示す嗜好性：５’−ＡＡＡ＞５’−ＴＴＡ＞５’−ＴＡＡ＞５’− ＡＴＡに従う。短い薬剤ＭＣＢＩ−ＴＭＩ及びＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁については、４番目の５’塩基がＡ又はＴ対Ｇ又はＣでなければならないという絶対的要求ではない強い嗜好姓が存在する。この嗜好性は多数の高親和性部位と低い親和性部位とを区別した(例えば、５’−ＡＡＡＡ)。長い薬剤ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂については、４番目の塩基がＡ又はＴであるという強い嗜好世だけでなく、５番目の５’塩基がＡ又はＴ塩基を含むことに拡張している(例えば、５’−ＡＡＡＡＡ )。したがって、先行する薬剤と同様に、ＭＣＢＩを基本とする薬剤は、３’ アデニンＮ３アルキル化部位において、３．５又は５塩基対をカバーする３’− ５’方向の小溝における薬剤結合を開始する、ＡＴリッチアデニンＮ３アルキル化選択性を示した。ｗ７９４の高親和性部位５’−ＡＡＴＴＡにおける（＋）−デュオカマイシンＳＡ（１）及び（＋）−ＣＢＩ−ＴＭＩについて確立されたＤＮＡアルキル化の相対速度に類似して、(＋)デュオカマイシンＳＡ(１)、(＋)−ＣＢＩ−ＴＭＩ及び(＋)−ＭＣＢＩ−ＴＭＩ（２５４）についてのＤＮＡアルキル化の相対速度を測定したところ(４℃、０〜４８時間、１０^-6薬剤濃度)、３つの薬剤はほとんど区別することができないことが証明された。(＋)−ＭＣＢＩ−ＴＭＩは、デュオカマイシンＳＡ又はＣＢＩ−ＴＭＩよりも動力学的に速く４℃下で５’−ＡＡＴＴＡ高親和性部位をアルキル化することが見出された。しかし、その差異はきわめて小さかった(ｋ(２５４)：ｋ(ＣＢＩ−ＴＭＩ)：ｋ（２）＝１．８：１．０：０．９(図１５))。同様の相対速度が、デュオカマイシンＳＡ及びＣＢＩ−ＴＭＩについての先行する比較において見られ、３つの薬剤は非常に類似しているため、ＣＢＩ−ＴＭＩ及びＭＣＢＩ−ＴＭＩ間の正確な差異は容易に達成できない。２５℃においては、差異を見つけることはより困難になり、３つの薬剤は、化学的加溶媒分解研究において確立された薬剤の相対的反応性に一致して、本質的に区別することができない。３つのクラスの薬剤についての区別することができる相対速度を検出することの困難性を代表する、２５℃（０〜２４時間)、１０^-6薬剤濃度において行った（＋）−ＤＳＡ−インドール₂及び（＋）−ＭＣＢＩ−インドール₂（２５８）の類似した速度の比較では、本質的に区別することができない速度：ｋ（ＤＳＡ− インドール₂）／ｋ（ＭＣＢＩ−インドール）₂＝１．０５（図１５）であることが明らかになった。重要なことに、これら２つの比較は、ＤＮＡアルキル化の相対速度において実験的に区別することができるあらゆる差異は、ＤＳＡ−、ＣＢＩ−又はＭＣＢＩを基本とする薬剤においてはほとんど見られないことを示唆している。これとは対照的に、３つの薬剤はすべて対応するＣＰＩを基本とする薬剤よりも非常に速く（１０〜５０×）動力学的にＤＮＡをアルキル化し、この場合差異はより明確になり、実験的に容易に区別された。ＭＣＢＩ−ＴＭＩ(２５４)、ＭＣＢＩ−インドール₂(２５８)、ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁（２６２）及びＭＣＢＩ−ＣＰＰＩ₂（２６６）の非天然鏡像異性体のＤＮＡアルキル化特性：ＤＮＡの同一のｗ７９４セグメントを用いての、ＭＣＢＩを基本とする薬剤の非天然鏡像異性体並びにデュオカマイシンＳＡ（２）及びＣＣ−１０６５（１）の非天然鏡像異性体によるＤＮＡアルキル化の代表的な比較を図１３に示す。ＣＢＩを基本とする薬剤を用いての本発明者らの先行する研究の結果に類似する幾つかの重要な観察結果が、ＭＣＢＩを基本とする薬剤についても見られた。第一に、非天然鏡像異性体によるＤＮＡアルキル化はかなり遅く、非天然鏡像異性体について図１３に示す結果は、天然鏡像異性体についての２５℃におけるインキュベーション（２４時間、図１７）に対して、３７℃におけるインキュベート（７２時間）において得られた。たとえより強力な反応条件を用いても、非天然鏡像異性体によるアルキル化の程度は低く、検出するために高い薬剤濃度を必要とした。３７℃でさえも、２５℃における天然の鏡像異性体について見られるアルキル化と同一の効率を達成するために、長い反応時間を必要とした。ＤＮＡアルキル化速度における区別することができる差異は、小さい薬剤ＭＣＢＩ−ＴＭＩ（２５４）及びデュオカマイシンＳＡ（２）に関してもっとも顕著になり、中間の大きさの薬剤ＭＣＢＩ−ＣＰＤＩ₁（２６２）及びＭＣＢＩ−インドール₂（２５８）については顕著ではないが容易に認知でき、最大の薬剤ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂ （２６６）及びＣＣ−１０６５（１）については顕著ではないが認知できた。この傾向は、鏡像異性体対の相対的細胞障害能について見られたものと類似している。(＋)−ＭＣＢＩ−ＴＭＩは、対応の非天然鏡像異性体よりも５０倍強力であるが、大きい薬剤（２５８、２６２、２６６）の天然の鏡像異性体は、２６２及び２６６の鏡像異性体よりもわずか１〜３倍強力であり、本質的に区別することができない。このことは、図１３におけるｗ７９４ＤＮＡのアルキル化において十分に説明され、ここではＭＣＢＩ−ＴＭＩ及びデュオカマイシンＳＡは１０^-5 Ｍで検出することができるアルキル化を示しているが、ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁ 、ＭＣＢＩ−インドール₂及びＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂のアルキル化は１０^-6〜１０^-7 Ｍにおいて検出された。２５℃（２４時間）の条件下で、天然の鏡像異性体はすべて、１０^-6〜１０^-7Ｍでｗ７９４を検出することができる程度にアルキル化した。（−）−ＭＣＢＩ−ＴＭＩ（２５４）及びｅｎｔ−（−）−デュオカマイシンＳＡ（２）のＤＮＡアルキル化の選択性及び効率は、後者の薬剤がわずかに効率的であった程度でほとんど区別することができなかった。この観察結果は、(−) −ＣＢＩ−ＴＭＩ及びｅｎｔ−（−）デュオカマイシンＳＡ（２）についての本発明者らの先行する比較と、その差異が大きい（×１０）ことを除いて類似している。同様に、(−)−ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂（２６６）及びｅｎｔ−（−）−ＣＣ−１０６５は、(−)−ＭＣＢＩ−インドール₂及び（−）−ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁と同様ほとんど区別することができなかった。このことは、図１３において１０^-5Ｍでの標識化ＤＮＡの消費の相対的な程度を比較することによりほとんど明らかになる。ＭＣＢＩを基本とする薬剤の非天然鏡像異性体及び前記の薬剤のＤＮＡアルキル化選択性の差異は認知されなかった。各アルキル化部位はアデニンであり、その両側はほとんどＡ又はＴ塩基により隣接しており、この３つのＡＴリッチ部位に対する嗜好性は５’−ＡＡＡ＞５’−ＴＡＡ＞５’−ＡＡＴ＞５ ’−ＴＡＴであることが証明された。短い薬剤については、２番目の３’塩基がＡ又はＴであるという強い嗜好性（例えば、５’−ＡＡＡＡ）があり、大きい薬剤については、同様に３番目の塩基へ拡張した(例えば、５’−ＡＡＡＡＡ)。したがって、非天然鏡像異性体についての各アルキル化部位は、アルキル化部位周辺の３．５又は５塩基対のＡＴリッチ部位を横切る５’〜３’逆方向の小溝における薬剤の結合を伴うアデニンＮ₃アルキル化と一致することが証明された。このことは、小溝において５’〜３’逆方向に拡張することを除いて、天然鏡像異性体のアルキル化選択性と類似しており、付加物のジアステレオマー異性のため、天然の鏡像異性体に比例して１塩基対で相殺される。（＋）−及びｅｎｔ−（−）−Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩのＤＮＡアルキル化特性：Ｎ−ＢＯＣ-ＭＣＢＩ（２３８）の両鏡像異性体による、同一のｗ７９４ＤＮＡセグメント内におけるＤＮＡアルキル化特性の代表的な比較を図１６に説明する。２３８の非天然鏡像異性体によるＤＮＡアルキル化の相対的な効率がアッセイ条件下における天然鏡像異性体による相対的効率と本質的に区別することができず、更に（＋）−Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ／ｅｎｔ−（−）−Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（１〜２×）に対してＮ−ＢＯＣ−ＣＢＩの非天然鏡像異性体：(＋)−Ｎ− ＢＯＣ−ＣＢＩ／ｅｎｔ−(−)−Ｎ−ＢＯＣ−ＣＢＩ（５〜１０×）³⁴よりも著しく優れていることを除いて、Ｎ−ＢＯＣ−ＣＢＩ（４）とＮ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（２３８）との間に実質的な差異は検出されなかった。２３８の２つの鏡像異性体は、これは１０^-2〜１０^-3Ｍ（３７℃、２４〜４８時間）において検出することができるアルキル化を提供する２５７〜２６６よりも非常に低い効率でＤＮＡをアルキル化し(１０⁴×、図６)、更に２塩基対のＡＴリッチアルキル化選択性（５’−ＡＡ＞５’−ＴＡ）を示す２５７〜２６６よりも選択性が低く、同一部位をアルキル化した。同一部位をアルキル化する２つの鏡像異性体の異常な挙動は、４〜９について行われた過去の観察結果と類似している。２つの鏡像異性体の逆転した結合方向及び２つの付加物のジアステレオマー異性関係からの当然の結論は、アルキル化アデニンの周囲のまったく同一の結合部位をカバーする２つの鏡像異性体を生じる。Ｎ−ＢＯＣ-ＭＣＢＩ（２３８）は、これらの過去の観察結果及びモデルと十分に一致する。鏡像異性体の差異：過去の研究は、薬剤の鏡像異性体対の混乱している挙動についての興味のある説明を示唆しており、そこで本発明者らは、薬剤の鏡像異性体対の混乱している挙動は、単一の構造の特徴：非天然鏡像異性体が特に感受性である、アルキル化サブユニットにおけるＣＰＩ／ＤＳＡＣ７又はＣＢＩ／ＭＣＢＩＣ８中心の周囲の立体バルク（steric bulk）の程度に起因すると提案している。鏡像異性体の差異は、アルキル化サブユニットの単純な誘導体(すなわち、Ｎ−ＢＯＣ− ＭＣＢＩ)と区別できることが証明され、その差異は二量体を基本とする薬剤（すなわち、ＭＣＢＩ−ＴＭＩ）に関してもっとも顕著であり、大きな三量体又は四量体を基本とする薬剤（すなわち、ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂）については顕著ではないか又は容易に区別することができない。一般的に、生物学的能力及び相対的ＤＮＡアルキル化効率において差異が小さいことは、置換基又は立体バルクを欠いているＣＩ及びデュオカマイシンＳＡの鏡像異性体対について見られた。更に、ピロール環を共に欠いている鏡像異性体異性のＣＩを基本とする薬剤の間の差異は小さく、ＤＳＡを基本とする薬剤について見られる差異ほどはっきりしない(ＤＳＡ＞ＣＩ)。対照的に、ＣＰＩ−、ＣＢＩ−及びＤＡ−を基本とする薬剤は、よりはっきりした差異を示し(ＣＰＩ＞ＤＡ＞ＣＢＩ)、これは相対的立体差異を反映する順番に従う。これらの観察結果と一致して、ＭＣＢＩ−ＴＭＩ鏡像異性体は、ＣＢＩ−ＴＭＩについての観察結果よりも小さい差異を示すのではなく、類似の差異を示すことが見出された(図１２)。非天然鏡像異性体の区別することができる挙動は、非天然鏡像異性体異性５’〜３’結合モデルに存在するアデニンＮ３アルキル化部位に隣接する５’塩基を有するＣＰＩ／ＤＳＡＣ７又はＣＢＩ／ＭＣＢＩＣ８中心の明白な立体相互作用に由来する。重要なことには、ＣＢＩ−及びＭＣＢＩ−を基本とする薬剤間の唯一の大きな差異は、非天然鏡像異性体に関して見られ、ここではＭＣＢＩ誘導体は、対応のＣＢＩ誘導体よりも、細胞障害性アッセイにおいて４〜４０×強力であり、アルキル化ＤＮＡにおいてもより効率的であることが見出された。更に、ＭＣＢＩ− ＣＤＰＩ₁、ＭＣＢＩ−インドール₂及びＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂の非天然鏡像異性体は、細胞障害性アッセイにおいて対応の天然鏡像異性体とほとんど等しい効力を有していた。そのような挙動は、(＋)−ＣＣ−１０６５／ｅｎｔ−（−）−ＣＣ−１０６５及び幾つかのより進化した類似体（例えば、ＣＰＩ−ＣＤＰＩ₂ ）について見られたけれども、種々のアルキル化サブユニットのインドール₂及びＣＤＰＩ₁の非天然鏡像異性体は、天然鏡像異性体よりも強力ではなかった。図１０に詳述したＣＢＩ誘導体の非天然鏡像異性体の細胞障害特性対ＭＣＢＩ− インドール₂、ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁及びＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂の非天然鏡像異性体の細胞障害特性の比較は、過去及び現在の観察結果の代表的なものである。非天然鏡像異性体が、比較することができる効力を示すＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂のわずか２つの鏡像異性体の天然鏡像異性体よりも８〜４００×弱いＣＢＩを基本とする薬剤とは対照的に、ＭＣＢＩ−インドール₂、ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁及びＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂の両鏡像異性体は、細胞障害能力において比較することができ(１〜３×)、その差異は、密接に結合しているＣＤＰＩ₁及びＣＤＰＩ₂誘導体については本質的に存在しなかった。これらの観察結果は、このクラスの可逆的ＤＮＡアルキル化剤の生物学的特性の起源を特徴付けることにおいて重要であるかもしれない。生物学的特性はＤＮＡアルキル化速度又は付加物の熱力学的安定性のいずれかと関連し、ＤＮＡアルキル化の相対効率に影響するということを示唆している２つの提案が進行してきた。種々のＭＣＢＩ天然鏡像異性体間のＤＮＡアルキル化速度が広範囲に変化するだけではなく、鏡像異性体対間のＤＮＡアルキル化速度も大きく変化することは明らかである。一式のＭＣＢＩ天然鏡像異性体間のほぼ同一の細胞障害能力及びほとんどの非天然鏡像異性体の比較することができる細胞障害能力は、ＤＮＡアルキル化速度は細胞障害能力と関連するといる提案とは一致しないが、熱力学的安定性及びその結果としてのＤＮＡアルキル化の効率は直接関係するという提案とは完全に一致した。非天然鏡像異性体は、固有の安定でない付加物を形成し、対応の天然鏡像異性体よりも容易に反転する。天然の鏡像異性体については、単一のＤＮＡアルキル化サブユニットは、機能的に安定な付加物（すなわち、ＴＭＩ、ＣＤＰＩ₁）を供給するのに十分であり、効率的なＤＮＡアルキル化が可能な十分に強力な薬剤を提供する。非天然鏡像異性体については、十分な生物学的特性及び効率的ＤＮＡアルキル化が、通常２つの大きなＤＮＡ結合サブユニット（すなわち、ＣＤＰＩ₂）を含む薬剤を用いることによりのみ達成された。中間の効力は小さな薬剤用いたときに見られ、その大きさを減少させ及び非共有結合親和性を減少させたときには効力は減少した。そのような傾向の代表例は、ＣＢＩを基本とする薬剤の非天然鏡像異性体の挙動である(図１０)。ＭＣＢＩの非天然鏡像異性体は、より強力であり、かつ単純な単一のＤＮＡ結合サブユニット誘導体についての細胞障害能力のプラトー(plateau)に達するという点で、天然鏡像異性体とより類似した挙動を示すことを除いて、同一の傾向に従う。本発明者らにとって、このことは、ＭＣＢＩ非天然鏡像異性体のアルキル化サブユニット上のＣ７メトキシ置換基は、非共有結合の追加の十分な安定化を提供し、非天然鏡像異性体ＤＮＡアルキル化の見かけの効率又は安定性を増強することを示唆している。この提案と一致して、Ｎ−ＢＯＣ-ＭＣＢＩ及びＭＣＢＩ−ＴＭＩ鏡像異性体は、ＣＢＩ−ＴＭＩよりも小さい差異を示すことが見出されている。単一のメトキシ基の影響が推測上のものであるが、(＋)−デュオカマイシンＳＡのＴＭＩサブユニット内の単一のメトキシ置換基の類似の増強作用が観察されている。同様に、デュオカマイシンＳＡのＣ６メトキシカルボニル基は、ＤＳＡ非天然鏡像異性体の増強に貢献するかもしれない。細胞障害能力とＤＮＡアルキル化の効率及び付加物の安定性との解釈及び関係は特に興味深いものである。なぜならば、４〜９の誘導体について見られた細胞障害能力と機能的安定性との間の直接の関係と一致するからである。細胞障害能力を増強するのは、ＤＮＡアルキル化速度及び機能的反応性ではなく、むしろＤＮＡアルキル化過程の正味の効率及び相対的安定性であるという解釈と一致して、細胞内の生物学的標的にもっとも効率的に到達する化学的により安定な薬剤は、機能的に安定な付加物の形成を伴ってＤＮＡをアルキル化する場合、より強力な細胞障害活性を示す。要約：ＭＣＢＩ及びその中間前駆体の短期間かつ効率的（全体で２７〜３０％）な１２〜１３工程からなる合成について詳述し、この方法は開示した第一の置換ＣＢＩ誘導体を構成する。その評価は、薬剤の化学的及び機能的反応性に対する置換基の電子的影響及びその生物学的特性に及ぼす影響の第一の評価を許容する。Ｎ −ＢＯＣ-ＭＣＢＩの加溶媒分解反応性の研究は、強力な電子供与性Ｃ７メトキシ基の導入は加溶媒分解速度をわずか１．２〜１．０６倍加速することを示している。この著しく低い影響は、Ｃ４カルボニルのプロトン化は加溶媒分解又は酸触媒求核試薬付加の律速段階ではないことを示しており、更にシクロプロパン開環反応は求核試薬の存在及び援助（Ｓ_N２機構）を必要とするという提案を支持する。このことがＤＮＡアルキル化選択性に寄与していることは疑いのないところであり、Ｃ４カルボニルのプロトン化又はルイス酸錯体化ではなく接近しやすい求核試薬（アデニンＮ３）の位置決めがＤＮＡアルキル化の配列選択性を制御する律速段階であることを示唆している。加溶媒分解速度に及ぼすこの非常に小さい電子的作用は、加溶媒分解位置選択性に影響を及ぼさず、活性化シクロプロパンの最小置換炭素への立体電子的に制御された求核付加が独占的に見られた。天然鏡像異性体については、機能的反応性に及ぼすこの非常に小さい電子的作用は、対応のＣＢＩを基本とする薬剤と比較したとき、ＤＮＡアルキル化選択性、効率及び相対速度又はその生物学的特世についてはわずか又はまったく影響を及ぼさなかった。非天然鏡像異性体に及ぼすＣ７メトキシ基の認知できる影響が検出され、これは対応のＣＢＩを基本とする非天然鏡像異性体よりも４〜４０×効率的であり、細胞障害能力についても対応のＭＣＢＩ天然鏡像異性体と比較することができることが証明された。非天然鏡像異性体に及ぼす影響は、機能的反応性に対するＣ７メトキシ置換基効果ではなく、むしろＤＮＡアルキル化の効率を増加させ、かつ固有の可逆的ＤＮＡアルキル化反応を更に安定化する追加の非共有結合性相互作用の導入を通してもっとも堅実に理論的に説明される。合成方法：図３に示すエチル１−ヒドロキシ−６−メトキシ−ナフタレン−３−カルボキシレート（２１０）の製造：方法Ａ：ｔ−ブタノール（８１ｍｌ）中のｔ−ブトキシカリウム（２１．０ｇ、０．１９ｍｏｌ、２当量）溶液を、アルドリッチ・カンパニー（Aldrich company）から入手したｍ−アニスアルデヒド２００及びコハク酸ジエチル（４０．２ｍｌ、０．２４２ｍｏｌ、３当量）の溶液に添加し、混合物を４５分間還流しながら加熱した。ｔ−ブタノール（８１ｍｌ）中の追加のコハク酸ジエチル（４０．２ｍｌ、０．２４２ｍｏｌ、３当量）及びｔ−ブトキシカリウム（２１．０ｇ、０．１９ｍｏｌ、２当量）溶液を添加し、混合物を更に４５分間還流しながら加熱した。混合物を冷却し、２５％水性ＨＣＩの添加により酸性化し、次いでＮａ₂ＣＯ₃（６×４０ｍｌ）を用いて抽出した。得られた水性層を２５％水性ＨＣｌを用いて酸性化し、ジエチルエーテル（３×１５ｍｌ）を用いて抽出した。有機層を５％水性Ｎａ₂ＣＯ₃（６×４０ｍｌ）を用いて抽出した。得られた水性層を、２５％水性ＨＣｌを用いて酸性化し、ジエチルエーテル（３×３０ｍｌ）を用いて再抽出した。組み合わせた有機層を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮し、油性生成物を得た。生成物は異性体の半エステル２０２の２：１混合物（１５．０ｇ、理論値２３．２ｇ、７４％）であることが証明された。２０２の混合物（１５．０ｇ、６４ｍｍｏｌ）を、Ａｃ₂Ｏ（３２０ｍｌ）及びＮａＯＡｃ（５．２５ｇ、６４ｍｍｏｌ、１．０等量）を用いて処理し、５時間還流しながら加熱した。減圧下で溶媒を除去し、残渣を１５％水性Ｎａ₂ＣＯ₃ （１００ｍｌ）を用いて処理し、次いで酢酸エチル（３×３０ｍｌ）を用いて抽出した。有機層を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。更なる精製なしに、暗褐色の油をエタノール（１００ｍｌ）に溶解し、Ｋ₂ＣＯ₃（１０ｇ、７２．４ｍｍｏｌ）を用いて処理した。混合物を１８時間還流しながら加熱し、冷却し、濃縮し、Ｈ₂Ｏを用いて希釈し、１０％水性ＨＣｌの添加によりｐＨ６に酸性化し、酢酸エチル（３×２０ｍｌ）を用いて抽出した。有機層を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（５×２０ｃｍＳｉＯ₂、１０〜３０％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離）により２１０（８．９０ｇ、理論値２１，４ｇ、３工程で４２％）を白色固体として得た。融点は１方法Ｂ、２１４から：０℃のＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ−Ｈ₂Ｏの９：１混合物（５０ｍｌ）を２１４（３．１０ｇ、９．６８ｍｍｏｌ）に添加し、反応混合物を２５℃に加熱し、２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、２つに分けたトルエン５０ｍｌを連続的に添加し、減圧下で除去し、２０２（２．５０ｇ、理論値２．５６ｇ、９８％）を無色の油として得た。Ａｃ₂Ｏ５０ｍｌ中の２０２（２．５０ｇ、９．４６ｍｍｏｌ）及びＮａＯＡｃ（０．７５０ｇ、９．５０ｍｍｏｌ）の混合物を７０℃で１０時間加熱した。減圧下で揮発物質を除去し、エタノール３５ｍｌ中の粗生成物溶液及びＫ₂ＣＯ₃ （１．３８ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を４時間還流しながら加熱した。反応混合物を０℃に冷却し、１ＭＨＣｌの添加により酸性化（ｐＨ６）し、ジエチルエーテル（４×３０ｍｌ）を用いて抽出した。有機層を組み合わせ、飽和水性ＮａＣｌ（１×１０ｍｌ）を用いて洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。遠心薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、４ｍｍクロマトトロンプレート(chro matotron plate)、５〜２０％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離）により２１０（１．７９ｇ、理論値２．３３ｇ、７６％）及び２０６（０．２２ｇ、９％）を白色の結晶質固体として得た。以下に示す表は、２１４に由来する２０２の２１０への転換に関する試みの結果の要約である。条件反応時間（時） 210:206の割合分離した210の％ Ac₂O-NaOAc,160℃^a 1 5:1 61 Ac₂O-NaOAc,70℃^a 10 8:1 76 TFAA-NaOAc,40℃^a 30 9:1 57 (COCl)₂;AlCl₃,0℃ 1 11:1 38 (COCl₂);FeCl₃,0℃ 2 10:1 46 (COCl₂);SnCl₄,0℃ 2 11:1 54^a 続いてのＫ₂ＣＯ₃−エタノールを用いての処理ｔｅｒｔ−ブチルＥ−３−エトキシ−カルボニル−４−（３−メトキシフェニル）−３−ブテノエート（２１４）の製造：図３に示す化合物２１４：テトラヒドロフラン２５ｍｌ中のＮａＨ懸濁液（０．６４ｇ、１６ｍｍｏｌ、油中６０％）を、テトラヒドロフラン４０ｍｌ中の２１２の溶液(５．００ｇ、１４．８ｍｍｏｌ)(Owten et.al.Synth.Commun.1993,23,2119を参照のこと)へ0 ℃下で添加し、反応混合物を２５℃に加熱し、１０時間撹拌した。溶液を0℃に冷却し、テトラヒドロフラン２５ｍｌ中のアルドリッチ・ケミカル・カンパニーより入手した２００（２．００ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５ ℃に加熱し、１０時間撹拌した。大部分のテトラヒドロフランを減圧下で除去し、次いで飽和水性ＮａＨＣＯ₃（２０ｍｌ）を添加した。水性層を酢酸エチル（４×３０ｍｌ）を用いて抽出し、有機層を組み合わせ、飽和水性ＮａＣｌを用いて洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、６×１５ｃｍ、５〜１０％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離）により、２１４（３．６５ｇ、理論値４．７４ｇ、７７％）を無色の油とし図４に示すエチル１−ベンジルオキシ−６−メトキシ−ナフタレン−３−カルボキシレート（２１６）の製造：化合物２１６：Ｎ₂下の無水ジメチルホルムアミド（１２．５ｍｌ）中の２１０溶液（９００ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）を、無水Ｋ₂ＣＯ₃(７００ｍｇ、５．１ｍｍｏｌ、１．４当量)、臭化ベンジル（０．５１ｍｌ、４．３ｍｍｏｌ、１．２当量）及びＢｕ₄ＮＩ（０．７ｍｇ）を用いて処理した。混合物を２５℃で５時間撹拌し、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、２〜５％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離）により２１６（１．２０ｇ、理論値１．２３ｇ、９８％）を無色図４に示す１−ベンジルオキシ−６−メトキシ−ナフタレン−３−カルボン酸（２１８）の製造：化合物２１８：テトラヒドロフラン−ＣＨ₃ＯＨ−Ｈ₂Ｏ（４：１：１、５０ｍｌ）中の２１６溶液（２.４９ｇ、７.４０ｍｍｏｌ）を、ＬｉＯＨ-Ｈ₂Ｏ（９３０ｍｇ、２２．２ｍｍｏｌ、３当量）を用いて処理した。懸濁液を２３℃で１８時間撹拌し、Ｈ₂ Ｏ（２０ｍｌ）を添加した。溶液を１０％水性ＨＣＩを用いて酸性化し、白色の沈殿物を集めた。エタノールからの結晶化により２１８（２．１７ｇ、理論値２．２８ｇ、９５％、通常は９５〜９８％）を白色の針昌として得た。融点図４に示すＮ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ−カルボニル）−１−（ベンジルオキシ）−６−メトキシ−３−ナフチルアミン（２２０）の製造：化合物２２０ｔ−ブタノール（７５ｍｌ）中の２１８溶液（１．２０ｇ、３．９１ｍｍｏｌ）を、ジフェニルホスホリルアジド(ＤＰＰＡ、１．２９ｇ、４．６９ｍｍｏｌ、１．２当量、Shioiri et al,J.Am.Chem Soc.1972,94,6203を参照のこと)、トリエチルアミン（０．６７ｍｌ、４．６９ｍｍｏｌ、１．２当量）を用いて連続的に処理し、混合物を還流しながら１０時間撹拌した。混合物を冷却し、減圧下で濃縮した。遠心薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、４ｍｍクロマトトロンプレート、５〜１０％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離により２２０（１．０１ｇ、理論値１．４８ｇ、６８％、通常は６０〜６９％）を白色固体として得た。融点図４に示すＮ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−４−ベンジルオキシ− １−ブロモ−７−メトキシ−２−ナフチルアミン（２２２）の製造：化合物２２２：Ｎ₂下のテトラヒドロフラン（３５ｍｌ）中の２２０溶液（６２０ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を−７８℃に冷却し、濃縮Ｈ₂ＳＯ₄１０μｌ含有テトラヒドロフラン（２ｍｌ）を用いて処理した。５分後、テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）中のＮＢＳ溶液（３２０ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、混合物を−７８℃で２時間撹拌した。混合物をジエチルエーテル（５０ｍｌ）を用いて希釈し、飽和水性ＮａＨＣＯ₃（２×１０ｍｌ）及び飽和水性ＮａＣｌ（２０ｍｌ）を用いて洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。遠心薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、４ｍｍクロマトロンプレート、５〜１０％酢酸エチル−ヘキサン）により２２２（７２０ｍｇ、理論値７４７ｍｇ、９６％、通常は９０〜９８％）を白色固体として得た。融点は１２５〜１２７℃(ヘキサン、図４に示す２−［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−Ｎ−(３−メチル−２−ブテン−１−イル)］アミノ−４−ベンジルオキシ−１−ブロモ−７− メトキシナフタレン（２２４）の製造：化合物２２４：Ａｒ下、２４℃のジメチルホルムアミド（４ｍｌ）中のＮａＨ懸濁液（４４ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ、油中５０％、１．３当量）を、２２２（３１５ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を用いて処理し、反応混合物を３０分間撹拌した。混合物を０ ℃に冷却し、４−ブロモ−２−メチル−２−ブテン（０．２５ｍｌ、２．１ｍｍｏｌ、３当量）をゆっくりと添加した。混合物を２４℃に加熱し、８時間撹拌し、Ｈ₂Ｏ（１５ｍｌ）中に注いだ。混合物を酢酸エチル（３×１０ｍｌ）を用いて抽出し、組み合わせた有機抽出物をＨ₂Ｏ(１０ｍｌ)、飽和水性ＮａＣｌ（５ｍｌ）を用いて洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、５〜７％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離）により２２４（３５７ｍｇ、理論値３７４ｍｇ、９５％）を灰色の固体として得た。融点は１図４に示す２−［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−Ｎ−(ホルミルメチル)］アミノ−４−ベンジルオキシ−１−ブロモ−７−メトキシナフタレン（２２６）の製造：化合物２２６：２０％ＣＨ₃ＯＨ−ＣＨ₂Ｃｌ₂（４５ｍｌ）中の２２４溶液（７５５ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）を−７８℃に冷却し、３％Ｏ₃／Ｏ₂流（１００１／時間）を用いて２．９分間処理した。Ｍｅ₂Ｓ４．５ｍｌ（６１ｍｍｏｌ、４３当量）の添加により反応混合物を直ちにクエンチした。反応混合物を−７８℃で５分間撹拌し、２４℃６時間撹拌し、溶媒を減圧下で除去した。遠心薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、２ｍｍクロマトトロンプレート、１０〜２０％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離）により２２６（５８０ｍｇ、理論値７１８ｍｇ、８１％）を白色固体として得た。融点は１７０℃（分解、酢酸エチル−ヘキサン、白色固体）で図４に示す２−［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル−オキシカルボニル）−Ｎ−(３−テトラヒドロ−ピラニルオキシ−２−プロペン−１−イル)］アミノ−４−ベンジルオキシ−１−ブロモ−７−メトキシナフタレン（２２８）の製造：化合物２２８： −７８℃下のテトラヒドロフラン２ｍｌ中のトリフェニル［(２−テトラ−ヒドロ−ピラニル−オキシ)メチル］−ホスホニウムクロライド懸濁液（３７１ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ、３．０当量、Schlude,H.Tetrahedron 1975,31,89を参照のこと）を、ｎ−ＢｕＬｉ（０．７２７ｍｌ、ヘキサン中１．１８Ｍ、０．８６ｍｍｏｌ、２．８６当量）を滴状に用いて処理した。反応混合物を−７８℃ で５分間撹拌し、次いで２４℃で１０分間加熱した。混合物を−７８℃に再冷却し、テトラヒドロフラン（１ｍｌ）中の２３(１５４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ)、続いてＨＭＰＡ（１．２ｍｌ、２４当量）を滴状に添加した。反応混合物を−７８℃で２０分間、２４℃で５時間撹拌し、リン酸緩衝液（５１ｍｌ、ｐＨ７．４）を用いてクエンチした。混合物を酢酸エチル（３×２０ｍｌ）を用いて抽出し、組み合わせた有機層を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、２％トリエチルアミンを含む５〜３０％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離）により２２８（１５４ｍｇ、理論値１７５ｍｇ、８８％）を油と図４に示す５−（ベンジルオキシ）−３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−８−メトキシ−１−（テトラヒドロピラニルオキシメチル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール（２３０）の製造：化合物２３０：Ａｒ下２4℃のＣ₆Ｈ₆（６０ｍｌ）中の２２８（９５０ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）及びＡＩＢＮ（４．４ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、０．２当量）の溶液を、Ｂｕ₃ＳｎＨ（９２５ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ、２当量）を用いて処理し、反応混合物を還流しながら２時間過熱した。反応混合物を冷却し、溶媒を減圧下で除去した。遠心薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、４ｍｍクロマトトロンプレート、２％トリエチルアミン含有５〜１０％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離）により２３０（７８５ｍｇ、理論値８２６ｍｇ、９５％、通常９５〜９８％）を淡黄図４に示す５−（ベンジルオキシ）−３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−（ヒドロキシメチル）−８−メトキシ−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール（２３２）の製造：化合物２３２：ＣＨ₃ＯＨ（６．５ｍｌ）中の２３０溶液（２０７ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）をアンバーリスト１５(Amberlyst 15)(１２．５ｍｇ)を用いて処理し、反応混合物を４５℃で６時間加熱した。樹脂をろ過により除去し、溶媒を減圧下で淵縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、２０〜４０％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離）により２３２（１７１ｍｇ、理論値１７２．５ｍｇ、９９％）を無色の固体として得た。融点は１５８〜１６０℃（ヘキサン、無色の固体）であった。図４に示す５−（ベンジルオキシ）−３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−（クロロメチル）−８−メトキシ−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール（２３４）の製造：化合物２３４：Ａｒ下、２４℃のＣＨ₂Ｃｌ₂（０．９ｍｌ）中の２３２（１１２ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びＰｈ₃Ｐ（１３５ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ、２当量）の溶液を、ＣＣｌ₄（０．１５ｍｌ、１．５ｍｍｏｌ、６当量）を用いて処理し、反応混合物を２４℃で２０時間撹拌した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、１０％酢酸エチル−ヘキサン）により２３４（１１３ｍｇ、理論値１１３ｍｇ、１００％）図４に示す３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−（クロロメチル） −５−ヒドロキシ−８−メトキシ−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール（２３６）の製造：化合物２３６：アセトン（６ｍｌ）中の２３４(８０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ)、ＨＣＯ₂ＮＨ₄ (７０ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ、６当量)、１０％Ｐｄ−Ｃ（８０ｍｇ）の混合物を還流しながら３０分間加熱した。触媒をろ過により除去し、溶媒を減圧下で蒸発させた。遠心薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、４０％酢酸エチル−ヘキサン）により２３６（６１ｍｇ、理論値６４ｍｇ、９５％、通常は９５〜１２３６の分割２３６の鏡像異性体を、２％ｉ−ＰｒＯＨ−ヘキサン溶離剤（５ｍｌ／分）を用いてＨＰＬＣ半分離用（semipreparative）ダイアセルキラルセルＯＤカラム（１０μｍ、２×２５ｃｍ）中で分割した。保持時間４８．０３分（非天然鏡像異性体）及び４１．０５分（天然鏡像異性体、μ＝１．１７）を用いて鏡像異性体を溶離した。天然(1S)-236:[μ]³-42(c0.25,CH₂Cl₂)．ent-(1R)-236:[μ]³ ＋41(c0.25,CH₂Cl₂). 図４に示すＮ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−７−メトキシ−１，２，９，９ａ−テトラヒドロシクロプロパ［ｃ］ベンズ［ｅ］インドール−４−オン（２３８、Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ）の製造：化合物２３８：Ｎ₂下、０℃のテトラヒドロフラン−ジメチルホルムアミド（３：１、２００ μｌ）中の２３６溶液（１．５ｍｇ、４．１μｍｏｌ）を、ＮａＨ懸濁液（０．５ｍｇ、油分散液中６０％、１２μｍｏｌ、３当量）を用いて処理した。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、その後ｐＨ７リン酸緩衝液（０．２Ｍ、２５０μ ｌ）及びテトラヒドロフラン２ｍｌを添加した。有機層を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、２０〜３０％酢酸エチル −ヘキサン勾配溶離）により２３８（１．２ｍｇ、理論値１．３ｍｇ、８９％）を白色のフォームとして得た。融点は９０〜９２℃（ヘキサン−酢酸エチル、無図４に示す７−メトキシ−１，２，９，９ａ−テトラヒドロシクロプロパ［ｃ］ベンズ［ｅ］インドール−４−オン（２４０）の製造：化合物２４０：フェノール２３６（５ｍｇ、１．３７μｍｏｌ）を、無水３ＮＨＣｌ−酢酸エチル（０．４ｍｌ）を用いて２４℃で２０分間処理した。溶媒を減圧下で除去し、粗い、不安定なアミンハイドロクロライドを得た。残渣を５％水性ＮａＨＣＯ₃（０．４ｍｌ）及びテトラヒドロフラン（０．４ｍｌ）を用いてＮ₂下、２４ ℃で処理し、２層混合物を１．５時間撹拌した(２４℃)。反応混合物を酢酸エチル（３×２ｍｌ）を用いて抽出し、組み合わせた抽出物をＨ₂Ｏ（２ｍｌ）を用いて洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、１０％ＣＨ₃ＯＨ−ＣＨ₂Ｃｌ₂）により２４０（２．９ｍｇ、図５に示すＮ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−４−ベンジルオキシ− １−ヨード−７−メトキシ−２−ナフチルアミン（２４２）の製造：化合物２４２：テトラヒドロフラン−ＣＨ₃ＯＨの１：１混合物４０ｍｌ中の２２０溶液（９８５ｍｇ、２．６０ｍｍｏｌ）を−７８℃に冷却し、テトラヒドロフラン１ｍｌ中のｐ−トルエンスルホン酸-Ｈ₂Ｏの３０ｍｇを添加した。テトラヒドロフラン１０ｍｌ中のＮ−ヨードスクシンイミド（６５２ｍｇ、２．９０ｍｍｏｌ）をカニューレにより５分間かけて導入した。反応完了時(−７８℃で約３時間)、飽和水性ＮａＣＨＯ₃１０ｍｌ及びジエチルエーテル５０ｍｌを添加した。反応物を２５℃に加熱し、固体ＮａＣｌを添加して水性層を飽和させた。有機層を分離し、水性層をジエチルエーテル（３×１０ｍｌ）を用いて抽出した。有機層を組み合わせ、飽和水性ＮａＨＣＯ₃(１×１０ｍｌ)及び飽和水性ＮａＣｌ（２× １０ｍｌ）を用いて洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、２×４ｃｍ、２０％酢酸エチル−ヘキサン）により２４２（１．１７ｇ、理論値１．３１ｇ、８９％、通常は８５〜９５％）を結晶性の白色固体として得た。融点は１３９〜１４１℃（酢酸エチル−ヘキサン、針昌）で図５に示す２−［Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−Ｎ−(２−プロペニル)］アミノ−４−ベンジルオキシ−１−ヨード−７−メトキシ−２−ナフチルアミン（２４６）の製造：化合物２４６：０℃に冷却したジメチルホルムアミド２５ｍｌ中の２４２溶液（８２０ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）を、幾つかの部分に分けたＮａＨ（８０ｍｇ、油中６０％、２．０ｍｍｏｌ）を用いて１０分間かけて処理した。４５分間後、臭化アリル（６０５ｍｇ、５ｍｍｏｌ、を添加し、反応混合物を２５℃に加熱し、３時間撹拌した。反応混合物を、飽和水性ＮａＨＣＯ₃（１５ｍｌ）の添加によりクエンチし、水性層を酢酸エチル（４×１５ｍｌ）を用いて抽出した。有機層を組み合わせ、Ｈ₂Ｏ（２×１０ｍｌ）及び飽和水性ＮａＣｌ（２×１０ｍｌ）を用いて洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、ろ過し、減圧下で濃縮した。遠心薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、４ｍｍクロマトトロンプレート、５〜１５％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離）により２４６（８２２ｍｇ、理論値８８４ｍｇ、９３％、通常は９０〜９５％）を結晶性白色固体（ＣＤＣｌ₃中のアミド回転異性体混合物）と図５に示す５−（ベンジルオキシ）−３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−８−メトキシ−１−（２’，２’，６’，６’−テトラメチル−ピペリジニル−Ｎ−オキシメチル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール（２４８）の製造：化合物２４８：Ｎ₂下、蒸留したてのベンゼン（Ｎａ／ベンゾフェノン）４５ｍｌ中の２４６（７２０ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）及びテンポ（６１９ｍｇ、３．９６ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｂｕ₃ＳｎＨ（３８４ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を用いて処理した。溶液を７０℃で加熱し、追加の３当量のテンポ（３×２０６ｍｇ）を添加し、続いてＢｕ₃ＳｎＨ（４×３８４ｍｇ）を４つの部分に分けて４５分間かけて添加した。１時間後、溶液を２５℃に冷却し、揮発物質を減圧下で除去した。遠心薄層クロマトグラフィー(ＳｉＯ₂、４ｍｍクロマトトロンプレート、０〜１０％酢酸エチル−ヘキサン溶媒溶離)により２４８（６２２ｍｇ、理論値７５８ｍｇ、８２％、通常は７５〜９０％）を白色固体として得た。融点は１２８〜１３０ ℃ 図５に示す３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−１−（ヒドロキシメチル）−５−ヒドロキシ−８−メトキシ−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール（２３０）の製造：方法Ｂ、２４８から：化合物２３０：ＨＯＡｃ−テトラヒドロフラン−Ｈ₂Ｏの３：１：１混合物３０ｍｌ中の２４８（７５０ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）溶液を、亜鉛粉末(１．０５ｇ、１６ｍｍｏｌ)を用いて処理し、得られた混合物を激しく撹拌しながら７０℃に加熱した。２時間後、反応混合物を２５℃に冷却し、亜鉛をろ過により除去した。揮発物質を減圧下で除去し、得られた残渣を酢酸エチル３０ｍｌ中に溶解し、ろ過した。溶液を濃縮し、遠心薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、４ｍｍクロマトトロンプレート、１５〜３５％酢酸エチル−ヘキサン勾配溶離）に付し、真正の物質とあらゆる点で一致する２３０（４８７ｍｇ、理論値５６６ｍｇ、８６％、通常は８０〜９０％）を白色固体として得た。図６に示されるｓｅｃｏ−ＭＣＢＩ−ＴＭＩ（２５２）の製造：化合物２５２：０℃下の４ＭＨＣｌ-酢酸エチル（３００μｌ）中の２３６（３．５ｍｇ、９．６μｍｏｌ）の溶液を３０分間撹拌し、Ｎ₂流により揮発物質を除去し、残渣を減圧下（０．０２ｍｍ）で１５分間乾燥した。得られた粗い２５０をジメチルホルムアミド（２００μｌ）中に溶解し、続いて３００（２．７ｍｇ、１０．６μｍｏｌ、製造については、Boger et.al.,J.Org.Chem.1990,55,,4499を参照のこと）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド(ＥＤＣＩ)(５．５ｍｇ、２９μｍｏｌ、３当量)を用いて処理し、反応混合物を２５℃で１０時間撹拌した。水（０．５ｍｌ）を反応混合物に添加し、水性層を酢酸エチル（４×１ｍｌ）を用いて抽出した。有機層を組み合わせ、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。分離用薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、２０ｃｍ×２０ｃｍ×０．２５ｍｍ、５％ジメチルホルムアミド−トルエン、Ｒ_f＝０．６０）により２５２（４．１ｍｇ、理図６に示すＭＣＢＩ−ＴＭＩ（２５４）の製造：化合物２５４：０℃下のテトラヒドロフラン−ジメチルホルムアミド（３：１、３５０μｌ）中の２５２（３．５ｍｇ、７．０４μｍｏｌ）溶液を、ＮａＨ（０．８５ｍｇ、油中６０％、２１μｍｏｌ、３当量）を用いて処理した。反応混合物を０℃で３０分間撹拌し、ｐＨ７リン酸緩衝液（０．２Ｍ、４００μｌ）及びテトラヒドロフラン３ｍｌを添加した。有機層を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮し、粗生成物を分離用薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、２０ｃｍ×２０ｃｍ×０．２５ｍｍ、５％ジメチルホルムアミド−トルエン、Ｒ_f＝０．５５）により精製して２５４（２．９ｍｇ、理論値３．２ｍｇ、９０％）を白色固体として得た。図６に示すｓｅｃｏ−ＭＣＢＩ−インドール₂（２５６）の製造：化合物２５６：０℃下の４ＭＨＣｌ−酢酸エチル（３５０μｌ）中の２３６（４．３ｍｇ、１１．８μｍｏｌ）溶液を３０分間撹拌し、揮発物質をＮ₂流により除去し、残渣を減圧下（０．０２ｍｍ）で１５分間乾燥した。得られた粗２５０をジメチルホルムアミド（２５０μｌ）中に溶解し、続いて５８（４．２ｍｇ、１３．０μ ｍｏｌ、実施例において製造）及び１−（３−ジエチルアミノプロピル）−３− エチル−カルボジイミドハイドロクロライド(ＥＤＣＩ)(６．８ｍｇ、３５μ ｍｏｌ、３当量)を用いて処理し、混合物を２５℃で１０時間撹拌した。水（０．５ｍｌ）を反応混合物に添加し、水性層を酢酸エチル（４×１ｍｌ）を用いて抽出した。有機層を組み合わせ、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。分離用薄層クロマトグラフィー（２０ｃｍ×２０ｃｍ×０．２５ｍｍ、１５％ジメチルホルムアミド−トルエン、Ｒ_f＝０．４５）により２５６（５．２ｍｇ、図６に示すＭＣＢＩ−インドール₂（２５８）の製造：化合物２５８：０℃下のテトラヒドロフラン−ジメチルホルムアミド（３：１、２５０μｌ）中の２５６（２．８ｍｇ、４．９５μｍｏｌ）溶液を、ＮａＨ（０．５９ｍｇ、油中６０％、１５μｍｏｌ、３当量）を用いて処理し、混合物を０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を、ｐＨ７リン酸緩衝液（０．２Ｍ、２５０μｌ）及びテトラヒドロフラン３ｍｌの添加によりクエンチした。有機溶液を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮し、分離用薄層クロマトグラフィー（２０ｃｍ×２０ｃｍ×０．２５ｍｍ、１５％ジメチルホルムアミド−トルエン、Ｒ_f＝０．４０）により精製して２５８（２．２５ｍｇ、理論値２．６２ｍｇ、８６％）を黄褐色図６に示すｓｅｃｏ−ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁（２６０）の製造：化合物２６０：０℃の４ＭＨＣｌ−酢酸エチル（３００μｌ）中の２３６（３．９ｍｇ、１０．７μｍｏｌ）溶液を３０分間撹拌し、揮発物質をＮ₂流により除去し、残渣を減圧下（０．０２ｍｍ）で１５分間乾燥した。得られた粗２５０をジメチルホルムアミド（２００μｌ）中に溶解し、続いて３２０（２．９ｍｇ、１１．８μ ｍｏｌ、Boger et.al J.Org.Chem.,1987,52,1521に従い製造）及び１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド(ＥＤＣＩ)(６．１ｍｇ、３２μｍｏｌ、３当量)を用いて処理し、混合物を２５℃ で１２時間撹拌した。水（０．５ｍｌ）を反応混合物に添加し、水性層を酢酸エチル（４×１ｍｌ）を用いて抽出した。有機層を組み合わせ、乾燥（Ｎａ₂ ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。分離用薄層クロマトグラフィー（２０ｃｍ×２０ｃｍ×０．２５ｍｍ、３０％ジメチルホルムアミド−トルエン、Ｒ_f＝０．６５）により２６０（３．７ｍｇ、理論値５．２ｍｇ、７１％）を明るい黄色の図６に示すＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₁（２６２）の製造：化合物２６２：０℃のテトラヒドロフラン−ジメチルホルムアミド（３：１、２００μｌ）中の２６０（１．８ｍｇ、３．６７μｍｏｌ）溶液を、ＮａＨ（０．４４ｍｇ、油中６０％、１１μｍｏｌ、３当量）を用いて処理した。混合物を０℃で３０分間撹拌し、反応物をｐＨ７リン酸緩衝液（０．２Ｍ、２００μｌ）及びテトラヒドロフラン３ｍｌの添加によりクエンチした。有機層を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮し、分離用薄層クロマトグラフィー（２０ｃｍ×２０ｃｍ×０．２５ｍｍ、３０％ジメチルホルムアミド−トルエン、Ｒ_f＝０．６５）による精製により２６２（１．５０ｍｇ、理論値１．６７ｍｇ、９０％）を明るい黄色の図６に示すｓｅｃｏ−ＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂（２６４）の製造：化合物２６４：０℃の４ＭＨＣｌ−酢酸エチル（３００μｌ）中の２３６（３．６ｍｇ、９．８μｍｏｌ）溶液を３０分間撹拌し、揮発物をＮ₂流により除去し、残渣を減圧下（０．０２ｍｍ）で１５分間乾燥した。得られた粗２５０をジメチルホルムアミド（２００μｌ）中に溶解し、続いて３４０（４．６ｍｇ、１０．７μｍｏｌ、Boger et.al.,J.Org.Chem.,1984,49,2240に従い製造）及び１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド(ＥＤＣｌ )(５．６ｍｇ、２９μｍｏｌ、３当量)を用いて処理し、混合物を２５℃で６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、水（０．５ｍｌ）を混合物に添加し、不溶性粗生成物を遠心分離により集めた。分離用薄層クロマトグラフィー（２０ｃｍ ×２０ｃｍ×０．２５ｍｍ、３３％ジメチルホルムアミドートルエン、Ｒ_f＝０．５０）により２６４（４．５ｍｇ、理論値６．６ｍｇ、６８％）を明るい図６に示すＭＣＢＩ−ＣＤＰＩ₂（２６６）の製造：化合物２６６：０℃のテトラヒドロフラン−ジメチルホルムアミド（３：１、５０μｌ）中の２６４（０．５７ｍｇ、０．８４μｍｏｌ）溶液を、ＮａＨ（０．１０ｍｇ、２．５μｍｏｌ、３当量）を用いて処理し、混合物を０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を、ｐＨ７リン酸緩衝液（０．２Ｍ、５０μｌ）及びテトラヒドロフラン２ｍｌの添加によりクエンチした。有機層を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、減圧下で濃縮し、分離用薄層クロマトグラフィー（５ｃｍ×２０ｃｍ×０．２５ｍｍ、３３％ジメチルホルムアミド−トルエン、Ｒ_f＝０．４５）により精製し、２６６（０．５１ｍｇ、理論値０．５４ｍｇ、９４％）を明るい黄色の固体として得加溶媒分解反応性：Ｎ−ＢＯＣ−ＭＣＢＩ（２３８、０．１ｍｇ）をＣＨ₃ＯＨ（１．５ｍｌ）中に溶解し、ｐＨ３水性緩衝液（１．５ｍｌ）と混合した。緩衝液は、０．１Ｍクエン酸、０．２ＭＮａ₂ＨＰＯ₄及びＨ₂Ｏをそれぞれ４：１：２０（ｖ：ｖ：ｖ）の割合で含んでいた。加溶媒分解溶液を封止し、２５℃に維持し光から保護した。ＵＶスペクトルを、第一日においては２時間毎の定期的な間隔で測定し、別の週においては１２時間毎、追加の週においては２４時間毎に測定した。３２４ｎｍにおける長波長吸収の減少及び２６６ｎｍにおける短波長吸収の増加をモニターし、図１に示した。加溶媒分解速度定数（ｋ＝２．４１×１０^-6ｓ^-1）及び半減期（ｔ_1/2＝８０時間）を、短波長において記録したデータ及び時間対１ −［(Ａ−Ａ₁)／(Ａ_f−Ａ_i)］のプロットの傾きの最小二乗法（ｒ＝０．９９５）より計算した。同様に、ＭＣＢＩ（２４０、０．１ｍｇ）をＣＨ₃ＯＨ（１．５ｍｌ）中に溶解し、ｐＨ水性緩衝液（１．５ｍｌ）と混合した。加溶媒分解溶液を封止し、暗中２５℃で撹拌した。ＵＶスペクトルを２ヶ月間２４時間毎に記録した。３４０ｎｍの長波長吸収における減少及び２６８ｎｍにおける吸収の上昇をモニターした(図１)。加溶媒分解速度定数（ｋ＝５．７６×１０^-7ｓ^-1）及び半減期（ｔ_1/ ₂ ＝３３４時間）を前記と同様にして（ｒ＝０．９８）決定した。加溶媒分解位置選択性：図７に示す３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−５−ヒドロキシ−８ −メトキシ−１−メトキシメチル−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール（２６８）：化合物２６８：ＣＨ₃ＯＨ２．５ｍｌ中の２３８（１０．１ｍｇ、３０．８μｍｏｌ）溶液を０℃に冷却し、ＣＦ₃ＳＯ₃Ｈ−ＣＨ₃ＯＨ（１８５μｌ、０．０２Ｍ、０．１２当量）を添加した。３時間後、反応をＮａＨＣＯ₃（１０ｍｇ）の添加によりクエンチし、混合物を２５℃に加熱し、ろ過し、溶液を濃縮した。遠心薄層クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、０．３ｍｍクロマトトロンプレート、３０％酢酸エチル−ヘキサン）により２６８（１０．５ｍｇ、理論値１１．１ｍｇ、９５％）を白色固体として得た。融点は１５７〜１５９℃（ヘキサン、白色プリズム）であＤＮＡアルキル化の異常な相対速度：ＤＮＡアルキル化の相対速度は、酸触媒加溶媒分解の相対速度に従わないことが明らかになった(図１８)。このことは、効果の起源が不明確である十分に異なる構造を有する一連の薬剤（１６〜１８）について開示されているけれども、後者のシリーズ（２０及び２５４）は非常に密接に関連しているので、わずかな構造上の差異が、反応性の期待される次数（order）の改変に貢献していない。むしろ、後者の薬剤について見られたＤＮＡアルキル化速度の予期せぬ次数は、触媒作用に密接に関連した未だに認識されていない作用に影響を受けているのかもしれない。後者のシリーズにおいて、Ｃ７置換基（２０及び２５４、Ｒ＝ＯＣＨ₃＞Ｈ）の影響は、その電子的性質（Ｒ＝ＯＣＨ₃＞Ｈ）よりもその単純な存在に関連している。本発明者らは、この影響はアルキル化サブユニットの延長した長さ及びＤＮＡ小溝への結合を伴う結合Ｎ２アミドの固有のねじれの増加によるものであり、それゆえメトキシ基に自明でない役割を与えると示唆している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｄ 487/04 １３７Ｃ０７Ｄ 487/04 １３７ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．以下に示す構造：で示される化合物。式中、Ｒ₁は、水素、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル及び以下に示す構造：で示される基からなる群より選ばれ、Ｒ₂は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）及び第一のＮ置換ピロリジン環からなる群より選ばれ、Ｒ₃は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル(Ｃ１〜Ｃ６)、第一のＮ置換ピロリジン環及び以下に示す構造：で示される基からなる群より選ばれ、Ｒ₄は、水素、ヒドロキシ及びＯ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群より選ばれ、Ｒ₅は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群より選ばれ、Ｖ₁は、Ｒ₂とＲ₃との間の第一のビニレン基を示し、但し、１．Ｒ₂が第一のＮ置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₃も第一のＮ置換ピロリジン環に関与する。２．Ｒ₃が第一のＮ置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₂も第一のＮ置換ピロリジン環に関与する。３．Ｒ₂及びＲ₃が第一のＮ置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₄及びＲ₅は水素である。４．Ｒ₂が水素である場合、Ｒ₄及びＲ₅は水素であり、Ｒ₃は以下に示す構造：により示される基であり、この場合、第一のＮ置換ピロリジン環は、Ｒ₂とＲ₃との間の第一のビニレン基に融合しており、以下に示す構造：で示され、Ｖ₁は、Ｒ₂とＲ₃との間の第一のビニレン基を表し、Ｒ₆は、−ＮＨ₂及び以下に示す構造：により示される基からなる群より選ばれ、Ｒ₇は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）及び第二のＮ置換ピロリジン環からなる群より選ばれ、Ｒ₈は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）及び第二のＮ置換ピロリジン環からなる群より選ばれ、Ｖ₂は、Ｒ₇とＲ₈との間の第二のビニレン基を表し、但し、１．Ｒ₇がＮ置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₈もＮ置換ピロリジン環に関与する。２．Ｒ₈がＮ置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₇もＮ置換ピロリジン環に関与する。この場合、第二のＮ置換ピロリジン環は、Ｒ₇とＲ₈との間の第二のビニレン基に融合しており、以下に示す構造：で示され、Ｖ₂は、Ｒ₇とＲ₈との間の第二のビニレン基を表す。２．式：で示される請求の範囲第１項記載の化合物。３．式：で示される請求の範囲第１項記載の化合物。４．式：で示される請求の範囲第１項記載の化合物。５．式：で示される請求の範囲第１項記載の化合物。６．以下に示す構造：で示される化合物。式中、Ｘは、塩素、臭素、ヨウ素及びＯＴＯＳからなる群より選ばれ、Ｒ₁は、水素、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル及び以下に示す構造：で示される基からなる群より選ばれ、Ｒ₂は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）及び第一のＮ置換ピロリジン環からなる群より選ばれ、Ｒ₃は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル(Ｃ１〜Ｃ６)、第一のＮ置換ピロリジン環及び以下に示す構造：で示される基からなる群より選ばれ、Ｒ₄は、水素、ヒドロキシ及びＯ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群より選ばれ、Ｒ₅は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群より選ばれ、Ｖ₁は、Ｒ₂とＲ₃との間の第一のビニレン基を示し、但し、１．Ｒ₂が第一のＮ置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₃も第一のＮ置換ピロリジン環に関与する。２．Ｒ₃が第一のＮ置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₂も第一のＮ置換ピロリジン環に関与する。３．Ｒ₂及びＲ₃が第一のN置換ピロリジン環に関与する場合、Ｒ₄及びＲ₅は水素である。４．Ｒ₂が水素である場合、Ｒ₄及びＲ₅は水素であり、Ｒ₃は以下に示す構造：により示される基である。この場合、第一のＮ置換ピロリジン環は、Ｒ₂とＲ₃との間の第一のビニレン基に融合しており、以下に示す構造：で示され、Ｖ₁は、Ｒ₂とＲ₃との間の第一のビニレン基を示し、Ｒ₆は、−ＮＨ₂及び以下に示す構造：により示される基により選ばれ、Ｒ₇は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）及び第二のＮ置換ピロリジン環からなる群より選ばれ、Ｒ₈は、水素、ヒドロキシ、Ｏ−アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）及び第二のＮ置換ピロリジン環からなる群より選ばれ、Ｖ₂は、Ｒ₇とＲ₈との間の第二のビニレン基を表し、但し、１．Ｒ₇がＮ置換ピロリジン環に関係する場合、Ｒ₈もＮ置換ピロリジン環に関係する。２．Ｒ₈がＮ置換ピロリジン環に関係し、更にＲ₇もＮ置換ピロリジン環に関係する。この場合、第二のＮ置換ピロリジン環は、Ｒ₇とＲ₈との間の第二のビニレン基に融合しており、以下に示す構造：で示され、Ｖ₂は、Ｒ₇とＲ₈との間の第二のビニレン基を表す。７．式：で示される請求の範囲第６項記載の化合物。８．式：で示される請求の範囲第６項記載の化合物。９．式：で示される請求の範囲第６項記載の化合物。 10．式：で示される請求の範囲第６項記載の化合物。 11．請求の範囲第１項又は第６項に記載の化合物と、ＤＮＡとをアルキル化条件下で接触させる工程を使用することを特徴とするＤＮＡアルキル化方法。